JP3667753B2 - 5(6)−メチル置換のフルオレスセイン誘導体 - Google Patents
5(6)−メチル置換のフルオレスセイン誘導体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP3667753B2 JP3667753B2 JP51759393A JP51759393A JP3667753B2 JP 3667753 B2 JP3667753 B2 JP 3667753B2 JP 51759393 A JP51759393 A JP 51759393A JP 51759393 A JP51759393 A JP 51759393A JP 3667753 B2 JP3667753 B2 JP 3667753B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- formula
- anion
- compound
- alkyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical class O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 54
- 150000001875 compounds Chemical group 0.000 claims description 64
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 47
- -1 thiocarbonates Chemical class 0.000 claims description 40
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 35
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 33
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 27
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 24
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 21
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 19
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 18
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 18
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 16
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 16
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims description 15
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 14
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 12
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 12
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 claims description 10
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 9
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 9
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 9
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 8
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 7
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 claims description 5
- 108020004518 RNA Probes Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003391 RNA probe Substances 0.000 claims description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 5
- 150000003071 polychlorinated biphenyls Chemical class 0.000 claims description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 5
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 5
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 5
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 5
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 5
- NEAQRZUHTPSBBM-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,3-dimethyl-7-nitro-4h-isoquinolin-1-one Chemical class C1=C([N+]([O-])=O)C=C2C(=O)N(O)C(C)(C)CC2=C1 NEAQRZUHTPSBBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M phosphonate Chemical compound [O-]P(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 claims description 4
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N Azide Chemical compound [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical class OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000008378 aryl ethers Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 3
- KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N disiloxane Chemical class [SiH3]O[SiH3] KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims description 3
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 3
- NUTBUHYTTNKZOR-UHFFFAOYSA-M sodium;n,n-dimethylcarbamothioate Chemical compound [Na+].CN(C)C([O-])=S NUTBUHYTTNKZOR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 125000001273 sulfonato group Chemical class [O-]S(*)(=O)=O 0.000 claims description 3
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 claims 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 claims 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 claims 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 1
- 150000003558 thiocarbamic acid derivatives Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 27
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 24
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 21
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 18
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 15
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 15
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 15
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 13
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 0 C*C(*)=C(N)[N+](C)[O-] Chemical compound C*C(*)=C(N)[N+](C)[O-] 0.000 description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 7
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 7
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- FAMRKDQNMBBFBR-BQYQJAHWSA-N diethyl azodicarboxylate Substances CCOC(=O)\N=N\C(=O)OCC FAMRKDQNMBBFBR-BQYQJAHWSA-N 0.000 description 6
- FAMRKDQNMBBFBR-UHFFFAOYSA-N ethyl n-ethoxycarbonyliminocarbamate Chemical compound CCOC(=O)N=NC(=O)OCC FAMRKDQNMBBFBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 5
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 5
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 5
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 5
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical class CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 3
- XKJCHHZQLQNZHY-UHFFFAOYSA-N phthalimide Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NC(=O)C2=C1 XKJCHHZQLQNZHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 3
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- YOAWSYSKQHLFPM-UHFFFAOYSA-N 5-amino-3',6'-dihydroxyspiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-1-one Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(N)C=C21 YOAWSYSKQHLFPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GZAJOEGTZDUSKS-UHFFFAOYSA-N 5-aminofluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(N)=CC=C21 GZAJOEGTZDUSKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 2
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 2
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N Phosgene Chemical compound ClC(Cl)=O YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GNVMUORYQLCPJZ-UHFFFAOYSA-M Thiocarbamate Chemical compound NC([S-])=O GNVMUORYQLCPJZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N boron;methylsulfanylmethane Chemical compound [B].CSC MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 2
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005935 nucleophilic addition reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 125000000612 phthaloyl group Chemical group C(C=1C(C(=O)*)=CC=CC1)(=O)* 0.000 description 2
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 150000003459 sulfonic acid esters Chemical class 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- KYWMCFOWDYFYLV-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-2-carboxylic acid Chemical class OC(=O)C1=NC=CN1 KYWMCFOWDYFYLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 3-(2-methoxyethoxy)benzohydrazide Chemical compound COCCOC1=CC=CC(C(=O)NN)=C1 GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 1
- NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 5-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C21 NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IPJDHSYCSQAODE-UHFFFAOYSA-N 5-chloromethylfluorescein diacetate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(CCl)=CC=C2C21C1=CC=C(OC(C)=O)C=C1OC1=CC(OC(=O)C)=CC=C21 IPJDHSYCSQAODE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQHKPJAZGYJYTB-UHFFFAOYSA-N 6-(bromomethyl)-3',6'-dihydroxyspiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-1-one Chemical compound O1C(=O)C2=CC(CBr)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 OQHKPJAZGYJYTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- YGYLYUIRSJSFJS-QMMMGPOBSA-N C[C@@H](C(OCc1ccccc1)=O)N Chemical compound C[C@@H](C(OCc1ccccc1)=O)N YGYLYUIRSJSFJS-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006683 Mannich reaction Methods 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000006957 Michael reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006751 Mitsunobu reaction Methods 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- UEYIHJSCOYHPCS-UHFFFAOYSA-N Oc1cc(Oc2cc(O)ccc2C2(c3cc(CCN(C(C=C4)=O)C4=O)ccc33)OC3=O)c2cc1 Chemical compound Oc1cc(Oc2cc(O)ccc2C2(c3cc(CCN(C(C=C4)=O)C4=O)ccc33)OC3=O)c2cc1 UEYIHJSCOYHPCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGRSOFNTOIJCID-UHFFFAOYSA-N Oc1ccc(C(c2cc(CN(C(OCc3ccccc3)=O)C(OCc3ccccc3)=O)ccc22)(c(ccc(O)c3)c3O3)OC2=O)c3c1 Chemical compound Oc1ccc(C(c2cc(CN(C(OCc3ccccc3)=O)C(OCc3ccccc3)=O)ccc22)(c(ccc(O)c3)c3O3)OC2=O)c3c1 PGRSOFNTOIJCID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000695274 Processa Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 150000001266 acyl halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007929 acylimidazolides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001745 anti-biotin effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) carbonate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- UORVGPXVDQYIDP-UHFFFAOYSA-N borane Chemical class B UORVGPXVDQYIDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000085 borane Inorganic materials 0.000 description 1
- UWTDFICHZKXYAC-UHFFFAOYSA-N boron;oxolane Chemical compound [B].C1CCOC1 UWTDFICHZKXYAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001642 boronic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N chlorocarbonic acid Chemical compound OC(Cl)=O AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- UOUJSJZBMCDAEU-UHFFFAOYSA-N chromium(3+);oxygen(2-) Chemical group [O-2].[O-2].[O-2].[Cr+3].[Cr+3] UOUJSJZBMCDAEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000006193 diazotization reaction Methods 0.000 description 1
- ZFTFAPZRGNKQPU-UHFFFAOYSA-N dicarbonic acid Chemical compound OC(=O)OC(O)=O ZFTFAPZRGNKQPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- ZMZIEZHJTIVGGP-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanone;potassium Chemical compound [K].C=1C=CC=CC=1C(=O)C1=CC=CC=C1 ZMZIEZHJTIVGGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCUYBXPSSCRKRF-UHFFFAOYSA-N diphosgene Chemical compound ClC(=O)OC(Cl)(Cl)Cl HCUYBXPSSCRKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- VYGQIHJTEWUIJY-UHFFFAOYSA-N ethyl carbamate;1-hydroxypyrrolidine-2,5-dione Chemical class CCOC(N)=O.ON1C(=O)CCC1=O VYGQIHJTEWUIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N formamide Substances NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 229920001002 functional polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 description 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 1
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940029329 intrinsic factor Drugs 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N iron oxide Inorganic materials [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- GRWIABMEEKERFV-UHFFFAOYSA-N methanol;oxolane Chemical compound OC.C1CCOC1 GRWIABMEEKERFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000007344 nucleophilic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- NDLPOXTZKUMGOV-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoferriooxy)iron hydrate Chemical compound O.O=[Fe]O[Fe]=O NDLPOXTZKUMGOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000005543 phthalimide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005956 quaternization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 208000007442 rickets Diseases 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000006884 silylation reaction Methods 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N triphosgene Chemical compound ClC(Cl)(Cl)OC(=O)OC(Cl)(Cl)Cl UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- 125000001834 xanthenyl group Chemical class C1=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3C(C12)* 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D493/10—Spiro-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B11/00—Diaryl- or thriarylmethane dyes
- C09B11/04—Diaryl- or thriarylmethane dyes derived from triarylmethanes, i.e. central C-atom is substituted by amino, cyano, alkyl
- C09B11/06—Hydroxy derivatives of triarylmethanes in which at least one OH group is bound to an aryl nucleus and their ethers or esters
- C09B11/08—Phthaleins; Phenolphthaleins; Fluorescein
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/78—Thyroid gland hormones, e.g. T3, T4, TBH, TBG or their receptors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/80—Fluorescent dyes, e.g. rhodamine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/807—Hapten conjugated with peptide or protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は一般にフルオレスセイン誘導体に関し、より詳細には5(6)−メチル置換のフルオレスセイン誘導体および5(6)−カルボキシフルオレスセインから5(6)−メチル置換フルオレスセインへの還元によるその製造に関するものである。
他の分子との反応に適する官能基を持った多くのフルオレスセイン誘導体が存在する。これら誘導体の多くは、細胞機能の検査から生理学的試験試料における1種もしくはそれ以上の薬物レベルの監視に至る範囲の分析用途につきトレーサを製造すべく産業的に使用されている[たとえばC.タイプ等、モレキュラ・アンド・セルラー・プローブス、第2巻、第31頁(1988);M.L.グラバー等、アナリチカル・バイオケミストリー、第156巻、第202頁(1986);P.J.ブリネス等、米国特許第4,869,132号;およびN.Y.ワング等、ヨーロッパ特許出願公開EP 264797号(1988)参照]。この種の用途の例は、たとえばアボットADx(登録商標)装置およびアボットTDx(登録商標)装置[アボット・ラボラトリース社、アボット・パーク、ILから入手しうる]のような市販の装置で使用するフルオレッセンス・ポラリゼーション・イミュノアッセー(FPIA)を包含する。これら誘導体は5−および6−カルボキシフルオレスセイン、5−および6−アミノフルオレスセイン、並びに4′−アミノメチルフルオレスセインを包含する[M.T.シップチャンドラ等、アナリチカル・バイオケミストリー、第162巻、第89頁(1987)]。これらのうち5−および6−アミノフルオレスセイン化合物は、アミノ基が殆ど求核性でないため操作するのが最も困難である。この困難性は、アミノ基が失活性芳香族環に直接結合すると言う予想の結果である。化合物4′−アミノメチルフルオレスセイン(4′−AMF)は、アミノ基と芳香族環との間にメチレン基を付加することにより上記問題を解決する初期の試みであった。この付加は、4′−AMFの通常のアミノ基反応性を回復することに成功した。しかしながら、或る種の4′−AMF誘導体は、水性緩衝液における長期貯蔵の条件下にて不安定であることが判明した。恐らく、この不安定性はレトロ−マンニッヒ反応またはその後のアミノ基の除去に起因する[H.O.ハウス、モダーン・シンセチック・リアクションス、第2版(1972)、第654〜660頁]。さらに、4′−AMFの製造および精製は面倒である。
マーチン等[サイトメトリー、第12巻、第184〜187頁(1991)]は、5−メチルフルオレスセインジアセテートのハロゲン化による5−クロルメチルフルオレスセインジアセテートの製造につき報告しているが、何ら実験の詳細を含んでいない。さらに、ピアス等[ジャーナル・バイオロジカル・ケミストリー、第260(10)巻、第6026〜31頁(1985)]は、次の構造式:
を有するメチル置換フルオレスセイン誘導体を報告している。しかしながら、ピアス等により報告された実験手順は、化合物が実際には次の構造式:
を有することを示す。
カーナ等(米国特許第4,439,365号)は次の構造式を有するキサンテン化合物を開示しているが、この場合も実験の詳細を与えていない:
5(6)−カルボキシフルオレスセイン誘導体の還元については知られていない。しかしながら、一般にカルボン酸誘導体(すなわち遊離酸、金属塩、アミド、エステル、酸ハロゲン化物など)は各種の方法により還元することができる。これらの方法は文献中で広範に検討されている[たとえばH.C.ブラウン、「有機化学におけるボラン類」、コーネル大学プレス(1972);およびC.F.レイン、「ジボランによる有機化合物の還元」、ケミカル・レビュー、第76巻、第773〜799頁(1976)参照]。さらに、活性化されたカルボン酸からアルコールへの水素化ホウ素ナトリウムによる還元についても記載されている[K.ラマサミー等、シンセシス、第42巻(1982)]。
本発明は、5−もしくは6−位置におけるアミノ反応性の問題を、その位置と芳香族環との間にメチレン基を付加することにより解決する。さらに、用いる新規な方法はトレーサ合成における使用および分析における使用を可能にする新規かつ有用な誘導体の入手性をもたらす。
発明の要点
本発明は、次式:
[式中、Rはヒドロキシ(−OH)および保護ヒドロキシ(−OZ)よりなる群から選択され;
Xはヒドロキシ(−OH)、保護ヒドロキシ(−OZ)、アミノ(−NH2)、保護アミノ(−NHmZ′2-m)、チオール(−SH)、保護チオール(−SZ″)、離脱基、ミハエルアクセプタ、ホスホルアミダイト、ホスホネートおよび結合基(linking group)よりなる群から選択される]
のフルオレスセイン誘導体を提供する。
ヒドロキシル基はアルキルもしくはアリールエーテル(Z=アルキル、アリール、アルケニル)、シリルエーテル(Z=シリル)、エステル(Z=アシル)、カーボネート(Z=−C(=O)−O−アルキル)、−C(=O)−O−アリール、−C(=O)−O−アルケニル)およびカルバメート(Z=−C(=O)−NH−アルキル、−C(=O)−NH−アリール、−C(=O)−NH−アルケニル)として慣例的に保護される。アミノ基はカルバメート(Z′=−C(=O)−O−アルキル、−C(=O)−O−アリール、−C(=O)−O−アルケニル)、ビスカルバメート(m=0;Z′=−C(=O)−O−アルキル、−C(=O)−O−アリール、−C(=O)−O−アルケニル)、アミド(Z′=−C(=O)−アルキル、−C(=O)−アリール、−C(=O)−アルケニル)、環式イミド(m=0;Z′=フタロイル)、N−ベンジル誘導体(Z′=−CH(n)アリール(3-n)、n=1〜3)、イミン誘導体(Z′=CH(n)アルキル(2-n)、=CH(n)アリール(2-n)、n=0〜2)、シリル誘導体(Z′=シリル)、N−スルフェニル誘導体(Z′=−S−アリール、−S−CH(n)アリール(3-n)、n=0〜3)およびN−スルホニル誘導体(Z′=−SO2−アリール、−SO2−アルキル)として慣例的に保護される。チオール基はチオエーテル(Z″=−CH(n)アリール(3-n)、n=1〜3、アルキル)、チオエステル(Z″=アシル)、チオカーボネート(Z=−C(O)−O−アルキル、−C(=O)−O−アリール、−C(=O)−O−アルケニル)、チオカルバメート(Z=−C(=O)−NH−アルキル、−C(=O)−NH−アリール、−C(=O)−NH−アルケニル)およびジスルフィド(Z″=−S−アルキル、アリール)として慣例的に保護される。
さらに本発明は、上記式のXが「離脱基」であるものを包含する。すなわちXが本発明にて離脱基であれば、これはハライド(X=−Cl、−Br、−I)、スルホネートエステル(X=−OS(=O)2−アルキル、−OS(=O)2−アリール)、活性アミノ(X=−N(アルキル)3+、N2)よりなる群から選択することができる。
さらに本発明は、上記式のXが「ミハエルアクセプタ」である化合物をも包含する。すなわち本発明においてXは式−O−「MA」もしくは−N(H)n−「MA」[式中、「MA」は、式
のミハエルアクセプタであり;
a、bおよびcは独立して水素、アルキルおよびアリールとすることができ;さらに
Uは−CH(=O)、−C(=O)R、−C(=O)NH2、−CN−、−NO2、−S(=O)R、−S(=O)2Rから選択され、nは0もしくは1である]の置換基よりなる群から選択することができる。好適ミハエルアクセプタはX=
のものである。
Xが結合基であれば、これは式−O−A−Bもしくは−N(H)n−A−B
[式中、n=0もしくは1であって窒素の原子価を満たす;
Aは飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分枝鎖にて配置する0〜50個の炭素原子および10個以下の異原子を含む異原子よりなるスペーサ基であり、ただし2個以下の異原子は配列−O−A−Bもしくは−N(H)n−A−Bに直接結合することができ、配列−O−A−Bもしくは−N(H)n−A−Bは−O−O−を含むことができず、さらに配列−N(H)n−A−Bにおいてn=0であればN−Aは一緒になって6個以下の原子の環で構成することができ、さらに分枝鎖は炭素原子にのみ存在することができ;
Bは−C(=O)OH、−NH2、−CH(=O)、ハロ(−Cl、−Br、−I)、スルホン酸エステル(OS(=O)2−アルキル、−OS(=O)2−アリール)、ミハエルアクセプタ、ホスホルアミダイトおよびホスホネートから選択される反応性官能基である]
を有する。
さらに本発明は5(6)−メチル置換フルオレスセイン誘導体の製造方法をも提供し、この方法は
(a)別々に、又は混合物として、次式IIIおよびIV:
の化合物の3′−および6′−位置におけるヒドロキシルを保護して次式VおよびVI:
の化合物を生成させ;
(b)式VおよびVIの化合物のカルボン酸基を還元して次式VIIおよびVIII;
の化合物を生成させ;
(c)混合物として製造される場合は式VIIおよびVIIIの異性体をクロマトグラフ分離して式VIIおよびVIIIの純異性体を得;
(d)式VIIおよびVIIIの化合物のヒドロキシル部分を別個にまたは混合物として離脱基に変換することにより、式IXもしくはX:
の化合物を生成させ;
(e)離脱基Xを求核性「プロ」アミノ、「プロ」チオールもしくはナトリウムスルフヒドリド基で置換して、式XIおよびXII:
[式中、X″=「プロ」アミノ、「プロ」チオール基もしくはチオールである]
の化合物を得;
(f)式XIもしくはXIIの化合物におけるX″基を変換して、式XIIIもしくはXIV:
の化合物を生成させ;
(g)式XIIIおよびXIVの化合物の位置3′および6′におけるヒドロキシ基を保護解除して式XVもしくはXVI:
の化合物を生成させることを特徴とする。さらに本発明は、上記工程(a)〜(e)と工程(f)および(g)とを逆順序にしてなる5(6)−メチル置換フルオレスセイン誘導体の製造方法をも提供する。
さらに本発明は、上記工程(a)〜(c)および(g)からなり、式XVIIもしくはXVIII:
の化合物を生成させる5(6)−メチル置換フルオレスセイン誘導体の製造方法をも提供する。
求核性の「プロアミノ」および「プロチオール」と言う用語は窒素および硫黄含有の求核性物質を包含し、これらはアミノ基もしくはチオール基まで容易に変換される。求核性「プロ」アミノ基はジカルボキシイミド陰イオン、たとえばフタルイミド陰イオン
イミノジカーボネート陰イオン、たとえばジベンジルイミノジカーボネート陰イオン
スルホンアミド陰イオン:−N(H)n(アルキル、アリール、アルケニル、アシル)2-nS(=O)2(アルキル、アリール、アルケニル)、n=0〜2;スルホンイミド陰イオン:−N(S(=O)2(アルキル、アリール、アルケニル))2;O−置換ヒドロキシルアミン:NH2O(アルキル、アリール、アシル);O−置換ヒドロオキサミン酸陰イオン:N(アシル)O(アルキル、アリール、アシル);アジド陰イオン:N3−;シアニド陰イオン:−CN;イソシアネート陰イオン:−N=C=O;およびイソチオシアネート陰イオン:−N=C=Sよりなる群から選択される。
「プロ」チオール基はチオ尿素:H2NC(=S)NH2;ナトリウムN,N−ジメチルチオカルバメート;チオサルフェート陰イオン:S2O3 2-;ジスルフィド陰イオン:S2 2-を包含する。
さらに本発明は、式XIVもしくはXX:
[式中、Rは上記の意味を有し、Xは−N(H)n−、−O−もしくは−S−よりなる群から選択され;
n=0もしくは1であって窒素原子価を満たし;
Aは飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分枝鎖にて配置される0〜50個の炭素原子および10個以下の異原子よりなるスペーサ基であり、ただし2個以下の異原子は配列−X−A−M−Qにて直接結合し、配列−X−A−M−Qは−O−O−を有することができず、n=0である際に配列−X−A−M−QにてX=−N(H)n−であればN−Aは一緒になって6個以下の原子の環を構成することができ、さらに分枝鎖は炭素原子にのみ存在することができ;
Mは>C(=O)、−NH−、−O−C(=O)−、−N(H)−C(=O)−、−N(H)−C(=S)−、−S−、−P(=O)(O−)−および
から選択される結合基であり;
Qは結合相手である]
のフルオレスセイン結合体をも提供する。
さらに本発明は試験試料における分析物(analyte)の存在の検出方法をも提供し、この方法は試験試料を式XIXもしくはXXの化合物からなる指示薬と接触させることを特徴とする。
さらに本発明は、式XIXもしくはXXの化合物からなる指示薬を含んだ試験キットを提供する。
【図面の簡単な説明】
第1図は本発明による方法の略工程図である。
発明の詳細な説明
本発明は、次式:
[式中、Rはヒドロキシ(OH)および保護ヒドロキシ(−OZ)よりなる群から選択され;
Xはヒドロキシ(−OH)、保護ヒドロキシ(−OZ)、アミノ(−NH2)、保護アミノ(−NHmZ′2-m)、チオール(−SH)、保護チオール(−SZ″)、離脱基、ミハエルアクセプタ、ホスホルアミダイト、ホスホネートおよび結合基よりなる群から選択される]
のフルオレスセイン誘導体を提供する。
ヒドロキシル、アミノおよびチオール官能基の保護基は当業界で周知されている[T.W.グリーン、有機合成における保護基、ジョーン・ウィリー・アンド・サンズ社、NY、1981]。ヒドロキシル基はアルキルもしくはアリールエーテル(Z=アルキル、アリール、アルケニル)、シリルエーテル(Z=シリル)、エステル(Z=アシル)、カーボネート(Z=−C(=O)−O−アルキル、−C(=O)−O−アリール、−C(=O)−O−アルケニル)およびカルバメート(Z=−C(=O)−NH−アルキル、−C(=O)−NH−アリール、−C(=O)−NH−アルケニル)として慣例的に保護される。アミノ基はカルバメート(Z′=−C(=O)−O−アルキル、−C(=O)−O−アリール、−C(=O)−O−アルケニル)、ビスカルバメート(m=0;Z′=−C(=O)−O−アルキル、−C(=O)−O−アリール、−C(=O)−O−アルケニル)、アミド(Z′=−C(=O)−アルキル、−C(=O)−アリール、−C(=O)−アルケニル)、環式イミド(Z′=フタロイル)、N−ベンジル誘導体(Z′=−CH(n)アリール(3-n)、n=1〜3)、イミン誘導体(Z′=CH(n)アルキル(2-n)、CH(n)アリール(2-n)、n=0〜2)、シリル誘導体(Z′=シリル)、N−スルフェニル誘導体(Z′=−S−アリール、−S−CH(n)アリール(3-n)、n=0〜3)およびN−スルホニル誘導体(Z′=−SO2−アリール、−SO2−アルキル)により慣例的に保護される。チオール基はチオエーテル(Z″=−CH(n)アリール(3-n)、n=1〜3、アルキル)、チオエステル(Z″=アシル)、チオカーボネート(Z=−C(=O)−O−アルキル、−C(=O)−O−アリール、−C(=O)−O−アルケニル)、チオカルバメート(Z=−C(=O)−NH−アルキル、−C(=O)−NH−アリール、−C(=O)−NH−アルケニル)およびジスルフィド(Z″=−S−アルキル、アリール)により慣例的に保護される。
さらに本発明は、上記式のXが「離脱基」である化合物を包含する。「離脱基」は当業界にて次のように規定されている:「基質分子が切断される反応において、その部分(炭素を含まない部分)は一般に離脱基と呼ばれる」[J.マーチ、アドバンスト・オーガニック・ケミストリー、第2版、マックグロー・ヒル社、NY(1977)、第187頁]。
最も一般的には、求核性反応にて最も有用な離脱基はハロゲンである一方、反応の前にアルコール、アミンおよびチオールを活性化せねばならない。アルコールはスルホン酸エステルもしくはハロゲン化物への変換により最も一般的に活性化され、或いはミツノブ反応によりその場で発生する。アミンは4級化もしくはジアゾ化により発生する。たとえばXが本発明にて離脱基である場合、これはハロゲン(X=−Cl、−Br、−I)、スルホン酸エステル(X=−SO(=O)2−アルキル、−OS(=O)2−アリール)、活性化アミノ(X=−N(アルキル)3+、N2)よりなる群から選択することができる。当業者は同様に本発明の新規な方法で用いうる他の離脱基を決定しうることが了解されよう。
さらに本発明は、上記式のXが「ミハエルアクセプタ」である化合物をも包含する。「ミハエルアクセプタ」は当業界で次のように規定されている:
「a,b−不飽和ケトン、アルデヒド、ニトリルもしくはカルボン酸誘導体の炭素−炭素二重結合に対するエノラート(もしくは同族)陰イオンの求核性付加はミハエル反応として知られる過程である。しばしばミハエルアクセプタと呼ばれる反応における不飽和化合物は、カルバニオン中間体を安定化させうる官能基を持った任意の不飽和系を包含しうる。さらにミハエルアクセプタはたとえばアルコール、チオールおよびアミンのような各種の求核性物質を付加させることができる」[H.O.ハウス、モダーン・シンセチック・リアクションス、W.A.ベンジャーミン・インコーポレーション社、メンロパーク、CA、1972、第595〜96頁]。
この種の求核性付加に対し二重結合を活性化させうる一般的官能基は−CH(=O)、−C(=O)R、−C(=O)NH2、−CN、−NO2、−S(=O)R、−S(=O)2Rを包含する。たとえば本発明においてXは式−O−「MA」もしくは−N(H)n「MA」[式中、「MA」は式
のミハエルアクセプタであり、ここでa、bおよびcは独立して水素、アルキルおよびアリールとすることができ、Uは−CH(=O)、−C(=O)R、−C(=O)NH2、−CN、−NO2、−S(=O)R、−S(=O)2Rから選択され、nは0もしくは1である]
よりなる群から選択することができる。
好適ミハエルアクセプタはX=
である。
Xが結合基である場合、これは式−O−A−Bもしくは−N(H)n−A−Bを有し、ここでn=0もしくは1であって窒素の原子価を満たし;
Aは飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分枝鎖にて配置される0〜50個の炭素原子および10個以下の異原子を含む異原子よりなるスペーサ基であり、ただし2個以下の異原子は配列−O−A−Bもしくは−N(H)n−A−Bにて直接結合することができ、配列−O−A−Bもしくは−N(H)n−A−Bは−O−O−を含むことができず、配列−N(H)n−A−Bにおいてn=0であればN−Aは一緒になって6個以下の原子の環を構成することができ、さらに分枝鎖は炭素原子にのみ存在し;Bは−C(=O)OH、−NH2、−CH(=O)、ハロ(−Cl、−Br、−I)、スルホン酸エステル(OS(=O)2−アルキル、−OS(=O)2−アリール)、ミハエルアクセプタ、ホスホルアミダイトおよびホスホネートよりなる群から選択される反応性の官能基である。
さらに本発明は5(6)−メチル置換フルオレスセイン誘導体の製造方法をも提供し、この方法は
(工程a)独立してまたは混合物として次式IIIおよびIV:
の化合物の3′−および6′−位置におけるヒドロキシルを保護して次式VおよびVI:
の化合物を生成させ;
(工程b)式VおよびVIの化合物のカルボン酸基を還元して次式VIIおよびVIII:
の化合物を生成させ;
(工程c)混合物として作成される場合は式VIIおよびVIIIの異性体をクロマトグラフ分離して式VIIおよびVIIIの純異性体を得;
(工程d)式VIIおよびVIIIの化合物のヒドキシル部分を別々に或いは混合物として離脱基に変換させて、式IXもしくはX:
の化合物を得;
(工程e)離脱基Xを求核性「プロ」アミノ、「プロ」チオールもしくはナトリウムスルフヒドリド基により置換して式:
[式中、X″=「プロ」アミノ、「プロ」チオール基もしくはチオールである]
の化合物を得;
(工程f)式XIもしくはXIIの化合物におけるX″基を変換させて式XIIIもしくはXIV:
の化合物を得;
(工程g)式XIIIおよびXIVの化合物における位置3′および6′のヒドロキシル基を保護解除して式XVおよびXVI:
の化合物を得ることを特徴とする。
さらに本発明は、上記工程a〜e並びに工程fおよびgをその逆順序で含む5(6)−メチル置換フルオレスセイン誘導体の製造方法をも提供する。
さらに本発明は、上記工程a〜cおよびgからなり、式XVIIおよびXVIII:
の化合物を製造する5(6)−メチル置換フルオレスセイン誘導体の製造方法をも提供する。
求核性[プロアミノ」および「プロチオール」と言う用語は、ここでは当業界で知られた窒素および硫黄含有の求核性物質であってアミノもしくはチオール基まで容易に変換されるものとして規定される。求核性「プロ」アミノ基は一般にジカルボキシイミド陰イオン、たとえばフタルイミド陰イオン、
イミノジカーボネート陰イオン、たとえばジベンジルイミノジカーボネート陰イオン、
スルホンアミド陰イオン:−N(H)n(アルキル、アリール、アルケニル、アシル)2-nS(=O)2(アルキル、アリール、アルキケル)、n=0〜2;スルホンイミド陰イオン:−N(S(=O)2(アルキル、アリール、アルケニ))2;O−置換ヒドロキシルアミン:NH2O(アルキル、アリール、アシル);O−置換ヒドロオキサミン酸陰イオン:−N(アシル)O(アルキル、アリール、アシル);アジド陰イオン:N3−;シアン陰イオン:−CN;イソシアネート陰イオン:−N=C=O;およびイソチオシアネート陰イオン:−N=C=Sよりなる群から選択される。
一般的に使用される「プロ」チオール基はチオ尿素:H2NC(=S)NH2;ナトリウムN,N−ジメチルチオカルバメート;チオサルフェート陰イオン:S2O3 2-;ジスルフィド陰イオン:S2 2-を包含する。当業者は本発明の新規な方法にて同様に作用しうる他の「プロ」アミノおよび「プロ」チオール基を決定しうることが了解されよう。
さらに本発明は、次式XIXもしくはXX:
[式中、Rは上記の意味を有し、Xは−N(H)n−、
−O−もしくは−S−よりなる群から選択され;
n=0もしくは1であって窒素原子価を満たし;
Aは飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分枝鎖にて配置される0〜50個の炭素原子および10個以下の異原子よりなるスペーサ基であり、ただし2個以下の異原子は配列−X−A−M−Qにて直接結合し、配列−X−A−M−Qは−O−O−を有することができず、n=0である際に配列−X−A−M−QにてX=−N(H)n−であればN−Aは一緒になって6個以下の原子の環を構成することができ、さらに分枝鎖は炭素原子にのみ存在することができ;
Mは>C(=O)、−NH−、−O−C(=O)−、
−N(H)−C(=O)−、−N(H)−C(=S)−、−S−、−P(=O)(O)−および
から選択される結合基であり;
Qは結合相手である]
のフルオレスセイン結合体をも提供する。
さらに本発明は試験試料における分析物の検出方法をも提供し、この方法は試験試料を式XIXもしくはXXの化合物からなる指示薬と接触させることを特徴とする。
出発物質5(6)−カルボキシルフルオレスセインはイーストマン・コダック社、ロチェスター、NYから入手できる。3′,6′−ジアセチル−5(6)−カルボキシルフルオレスセインの製造は純異性体3′,6′−ジアセチル−6−カルボキシルフルオレスセインとして間違って従来記載されており、化合物の特徴を何も示していない[J.W.ブルニング等、ジャーナル・イミュノロジカル・メソッズ、第33巻、第33〜44頁(1980)参照]。化合物5−アミノメチルおよび5−ブロモメチルフルオレスセインはモレキュラ・プローブス・インコーポレーション社、ユーゲン、OR 97492から最近市販入手しうるようになった。
開放型および閉鎖型の両者にて存在する5(6)−カルボキシフルオレスセインの約40:60混合物を無水酢酸での処理により改変して、その有機溶剤に対する溶解度を増大させると共に2個のカルボキシル基を区別した。この溶解性を達成する他の手段は当業者に公知であり、種々異なる無水物、酸ハロゲン化物もしくは活性エステルによるヒドロキシルのアシル化、または多数のシリルハロゲン化物によるシリル化、または適する誘導体を生ぜしめるアルキル化を包含する。処理した後、5(6)−カルボキシフルオレスセイン誘導体は、カルボン酸誘導体の還元に一般的に使用される有機溶剤に対し可溶性となる。
たとえば5(6)−カルボキシフルオレスセインからジアセチル化物質まで変換する手順は未置換フルオレスセインのそれに従った[W.R.オルンドルフおよびA.J.ヘンマー、「フルオレスセインおよびその誘導体」、ジャーナル・アメリカン・ケミカル・ソサエティ、第49巻、第1272〜1280頁(1927)に記載されている]。要するに、この手順は5(6)−カルボキシフルオレスセインを無水酢酸中で還流下に酢酸ナトリウムと反応させ;水中で仕上処理し;生成混合物3′6′−ジアセチル−5(6)−カルボキシフルオレスセインをシリカ上でのカラムクロマトグラフィーにより精製することを含む。
残留するカルボン酸は、カルボン酸につき選択されるボラン−テトラヒドロフラン複合体、ボラン−ジメチルスルフィド複合体もしくは他の任意の還元剤でのエステルの存在下における1〜2日間にわたる処理により、アルコールまで還元することができる。好適な還元剤はボラン−ジメチルスルフィド複合体である。
或いは、カルボン酸はクロル蟻酸エチルもしくは他の活性エステルにより混合無水炭酸まで変換することができ、硼水素化ナトリウム(NaBH4)により緩衝メタノールTHF(pH6.0)中で0℃にて約5分間でアルコールまで還元することができる。
たとえば3′,6′−ジアセチル−5(6)−カルボキシフルオレスセインを、上記の両方法により3′,6′−ジアセチル−5(6)−ヒドロキシメチルフルオレスセインまで変換させた。
このように生成したアルコールの混合物はこの段階でシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーにより便利に分離することができ、これには当業者に知られた方法を用いる。たとえば3′,6′−ジアセチル−5(6)−ヒドロキシメチルフルオレスセインは純異性体3′,6′−ジアセチル−5−ヒドロキシメチルフルオレスセインと3′,6′−ジアセチル−6−ヒドロキシメチルフルオレスセインとに分離される。
この段階におけるアルコールは、当業界で周知されているように数種の他の誘導体まで変換することができる。好適誘導体は、アルコールをアミンまで変換することにより得られた。これは、ヒドロキシルを離脱基まで変換すると共に求核性「プロ」アミノ基で置換して達成された。好適「プロ」アミノ基はジベンジルイミノジカーボネートおよびフタルイミドである。これは、便利にはO.ミツノブ、「天然生産物の合成および転移におけるジエチルアゾジカルボキシレートおよびトリフェニルホスフィンの使用」、シンセシス、第1巻(1981)、に記載されたミツノブ条件の下で行われる。
要するに、この方法は3′,6′−ジアセチル−5−ヒドロキシメチルフルオレスセインもしくは3′,6′−ジアセチル−6−ヒドロキシメチルフルオレスセインとジエチルアゾジカルボキシレート、トリフェニルホスフィンおよびジベンジルイミノジカーボネートもしくはフタルイミドとのテトラヒドロフラン中における不活性雰囲気下での室温における反応;それに続くシリカゲル上でのクロマトグラフィーによる精製を含む。触媒ジメチルアミノピリジンを含有する塩基性メタノールによるアセチル基の保護解除(除去)と、それに続くフタルイミド基のヒドラジン分解もしくはHBr/酢酸でのイミノジカーボネート基の酸処理により、5−もしく6−アミノメチルフルオレスセインを遊離塩基として或いは臭化水素酸塩としてそれぞれ得た。
本発明のフルオレスセイン誘導体は、たとえば蛋白、ペプチド、アミノ酸、DNAもしくはRNAプローブ配列、ホルモン、ステロイド、ビタミン、薬物、官能価ポリマー(可溶性および不溶性の両者)、ハプテン、並びにたとえばポリ塩素化ビフェニルのような他の薬品など各種の結合相手と反応させることができる。本発明の結合体は、次の式XIXもしくはXX:
[式中、Rは上記の意味を有し、Xは−N(H)n−、
−O−もしくは−S−よりなる群から選択され;
n=0もしくは1であって窒素原子価を満たし;
Aは飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分枝鎖にて配置される0〜50個の炭素原子および10個以下の異原子を含む異原子よりなるスペーサ基であり、ただし2個以下の異原子は配列−X−A−M−Qにて直接結合し、配列−X−A−M−Qは−O−O−を有することができず、n=0である際に配列−X−A−M−QにてX=−N(H)nであればN−Aは一緒になって6個以下の原子の環を構成することができ、さらに分枝鎖は炭素原子にのみ存在することができ;
Mは>C(=O)、−NH−、−O−C(=O)−、
−N(H)−C(=O)−、−N(H)−C(=S)−、−S−、−P(=O)(O)−および
から選択される結合基であり;
Qは結合相手である]
の一般構造の1つを有する。
本発明の結合体において、フルオレスセイン誘導体における反応性官能基と結合相手との間の化学結合は多数の方法により形成させることができる。しばしばアミド結合を生成させることが好ましい。たとえば式IもしくはII(X=−O−A−BもしくはN(H)n−A−B)のフルオレスセイン誘導体において、Bがカルボキシル基であれば、結合相手におけるアミノとの結合を形成するには当業界で知られた各種の方法を用いる数種の方法が存在する。
たとえばアミド結合は、先ず最初にフルオレスセイン誘導体のカルボン酸部分をたとえば1,3−ジシクロヘキシルカルボジイミドのような活性化剤およびたとえばN−ヒドロキシスクシンイミドのような添加剤との反応により活性化して形成される。次いで活性化型のフルオレスセイン誘導体を結合相手と反応させる。或いは、カルボン酸含有のフルオレスセイン誘導体を単離して或いは単離なしに高反応性の混合無水物、アシルハロゲン化物、アシルイミダゾリドまたは混合カーボネートまで変換することができ、次いで結合相手と合することができる。
これら任意の方法は、M=−C(=O)−NH−である式XIXもしくはXX(−X−A−M−Q)の誘導体をもたらし、−C(=O)−はフルオレスセイン誘導体から生ずる一方−NH−は結合相手から生ずる。当業者は、ここに挙げたもの以外のアミド結合を形成すべく使用しうる多くの試薬が存在することを認識するであろう。
末端アミン官能性を有するフルオレスセイン誘導体は、たとえばアセトニトリルもしくはジメチルホルムアミドのような適する溶剤中でのN,N′−ジスクシニミジルカーボネートとの反応により高反応性のN−ヒドロキシスクシンイミドウレタンまで変換することができる。得られるウレタンを次いで結合相手におけるアミノ基と反応させる。
末端アルデヒド官能性を有するフルオレスセイン誘導体は、シアノ硼水素化ナトリウムの存在下にて当業界で知られた方法にしたがい還元アミノ化により結合相手におけるアミノもしくはヒドラジド基にカップリングさせることができる。
或いは、末端アルコール基を有するフルオレスセイン誘導体は、先ず最初にこれをホスゲンもしくはホスゲン均等物(たとえばジ−もしくはトリ−ホスゲンまたはカルボニルジイミダゾール)と反応させて高反応性クロル蟻酸もしくはイミダゾール蟻酸誘導体を生成させることにより(一般に単離なし)結合相手にカップリングさせることができる。次いで、得られた活性蟻酸エステルを結合相手と反応させる。
或いは、末端チオール基を有するフルオレスセイン誘導体をミハエルアクセプタを有する結合相手にカップリングさせることもでき、またはミハエルアクセプタを有するフルオレスセイン誘導体をチオール基を持った結合相手と反応させることもできる。
或いは、末端ホスホルアミダイトもしくはホスホネート基を有するフルオレスセイン誘導体は、ヒドロキシル、アミノもしくはチオール基を有する結合相手とカップリングさせることもできる。
このように生成した誘導体は、分析物を検出するための各種の免疫分析で指示薬として用いることができる。ここで用いる「分析物(Analyte)」は試験試料中に存在しうる検出すべき物質である。分析物F、天然産の特異的結合成分(たとえば抗体)が存在する或いは特異的結合成分を作成しうる任意の物質とすることができる。たとえば分析物は、分析にて1種もしくはそれ以上の特異性結合成分に結合しうる物質である。さらに「分析物」は、たとえばウィルス、細菌、真菌類、リケッチャもしくは他の抗原のような感染病抗原、並びにたとえばCEAのような癌マーカーを包含する任意の抗原物質質、さらに巨大分子、ハプテンおよび/またはその代謝物、抗体、並びにその組合物を包含する。特異的結合対の成分として、分析物は天然産の特異的結合相手(対)により、たとえばビタミンB12を測定するための特異的結合対の成分として固有ファクタ蛋白を用い或いは炭水化物を測定するための特異的結合対の成分としてレクチンを用いることにより検出することができる。分析物は蛋白、ペプチド、アミノ酸、DNAもしくはRNAプローブ配列、ホルモン、ステロイド、ビタミン、治療目的および不法目的で投与されるものを包含する薬物、またはたとえばポリ塩素化ビフェニル、細菌、ウィルス、その代謝物または上記物質に対する抗体を包含することができる。この種の抗体を作成するための詳細、および特異的結合成分として使用するための適性については当業者に周知されている。
ここに説明した本発明のトレーサを用いて試験しうる試験試料は、たとえばヒトおよび動物の体液のような生物学的液体および非生物学的液体を包含する。生物学的液体の例は全血、血清、血漿、牛乳、脳髄液、尿、血清および体液滲出物、並びに細胞培養上澄液などを包含する。非生物学的液体の例は水、スレッジなどを包含する。試験しうる他の物質の例は、固定および非固定の外科組織試料を含む細胞、血球、骨髄、組織培養細胞などを包含する。
ここで用いる「捕獲試薬」という用語は、サンドイッチ分析におけるような分析物、競合分析におけるような指示薬もしくは分析物、または間接的分析におけるようなそれ自身で分析物に対し特異性である補助特異性結合成分に対し特異性である未標識の特異性結合成分を意味する。捕獲試薬は、分析を実施する前または分析を実施する間に固相物質に直接的または間接的に結合することにより、固定化複合体を試験試料から分離することを可能にする。
「指示薬」は信号発生化合物、すなわち本発明のトレーサからなり、これは分析物の特異性結合成分に結合した外部手段により検出しうる測定可能な信号を発生することができる。ここで用いる「特異性結合成分」とは、特異性結合対の成分を意味する。すなわち、2種の分子の一方が化学的もしくは物理的手段により他方の分子に特異的に結合する2種の異なる分子である。分析物に対する特異性結合対の抗体成分である他、指示薬はさらにたとえばビオチンもしくは抗−ビオチンのようなハプテン−抗−ハプテン系、アビジンもしくはビオチン、炭水化物もしくはレクチン、相補性ヌクレオチド配列、イフェクタ分子もしくはリセプタ分子、酵素コファクタおよび酵素、酵素抑制剤または酵素などを含め任意の特異性結合対の成分とすることができる。免疫反応性の特異性結合成分は抗体、抗原または抗体/抗原複合体とすることができ、サンドイッチ分析におけるような分析物、競合分析におけるような捕獲試薬、または間接的分析におけるような補助特異性結合成分に結合することができる。
使用しうる固相は磁性および非磁性の微小粒子または磁性化しうる高分子微小粒子と化学的もしくは物理的結合の抗原もしくは抗体との混合物を包含する。化学的もしくは物理的に結合した抗原もしくは抗体を有する高分子微小粒子は、本発明により結合反応で捕獲相として用いることにより、溶液におけるこれら粒子の急速な拡散速度を利用して急速な結果を得ることができる。本発明により使用しうる微小粒子はポリスチレン、カルボキシル化ポリスチレン、ポリメタアクリレートまたは約0.1〜20μmの範囲の直径を有する粒子を包含する。使用しうる磁性化可能な微小粒子は好ましくは酸化第二鉄または酸化クロムコアとポリスチレン、カルボキシル化ポリスチレン、ポリメタアクリレート被覆とを有する。これら粒子の好適な分離法は一定もしくはパルスの磁石を使用し、前記粒子を洗浄し、次いで分離された粒子を容器に懸濁させて信号を発生させると共に検出することである。さらに他の固体支持体も当業者に知られ、反応トレーサの穴、試験管、ポリスチレンビーズ、ニトロセルロースストリップ、膜、ガラスなどの壁部を包含する。
分析に用いる試薬はたとえば小瓶もしくは瓶のような1個もしくはそれ以上の容器を備えるキットとして提供することが考えられ、各容器は本発明のトレーサを信号発生化合物として含むたとえば指示薬のような分離した試薬を含有する。
信号発生化合物として指示薬の1部をトレーサとして用いる分析手段も使用することができる。分析手段の種々の例につきここに説明するが、これらは全て本発明のトレーサを検出可能な信号を発生しうる指示薬の部分として用いる。たとえば興味ある分析物、ここに説明したような標識した分析物のプローブの混合物、および分析物のための捕獲相の混合物を含有しうる試験試料を、分析物の最適な免疫化学的結合反応を生ぜしめるのに充分な時間および条件にて培養する。次いで、捕獲相を分離すると共に洗浄する。次いで本発明のトレーサに対し特異的な基質を添加する。酵素/基質の反応が終点に達した後、分離した反応混合物を停止させる。分析物の存在は、捕獲相から発生した信号を検出すると共に得られた結果を既知の陽性および陰性試料と比較して決定される。陰帯電したポリマーとの固定化可能な反応複合体を固定化するためのイオン捕獲法を本発明により用いて、迅速な溶液相の免疫化学反応を行うことができる。固定化可能な免疫複合体を、陰帯電のポリアニオン/免疫複合体と上記のように処理した陽帯電の多孔質マトリックスとの間のイオン相互作用により反応混合物の残部から分離すると共に、本発明のトレーサを用いて検出することにより信号測定を行う。
本発明の指示薬は非固相の分析系にも使用しうることが考えられる。たとえば、興味ある分析物を含有すると思われる試験試料を標識トレーサと混合し、分析物およびトレーサに対し特異的な抗体を反応を生ぜしめるのに適する時間および条件にて培養する。試験試料中に存在しうる分析物とトレーサとは、抗体における限られた個数の結合部位につき競合して、分析物−抗体およびトレーサ抗体の複合体を形成する。トレーサ−および抗体の濃度を一定に維持することにより、分析物−抗体複合体とトレーサ−抗体複合体との生成比は試験試料中に存在する分析物の量に正比例する。
蛍光−ポラリゼーション検出法をここに説明したように用いることができる。すなわち、試料中の分析物の量は、混合物を偏光で励起させると共に遊離トレーサおよびトレーサ−抗体複合体により発する蛍光の偏光を測定して決定される。抗体に複合化されないトレーサは、吸着および蛍光の再放出に要する時間以内で自由に回転する。その結果、再放出された光は比較的ランダムに配向して、抗体に複合化されてないトレーサの蛍光偏光が低くなり0に達する。特異性抗体に複合化すると形成されたトレーサ−抗体複合体は抗体分子を回転させ、この回転は比較的小さいトレーサ分子の回転よりも遅く、これにより観察される偏光を増大させる。したがって、分析物が抗体部位につきトレーサと競合する場合、トレーサ−抗体の観察される蛍光の偏光は遊離トレーサとトレーサ−抗体複合体との間の数値となる。試料が高濃度の分析物を含有すれば、観察される偏光値は遊離トレーサの数値に近くなり、すなわち低くなる。試料が低濃度の分析物を含有すれば、偏光値は結合トレーサの数値に近くなり、すなわち高くなる。免疫分析の反応混合物を垂直の偏光および次いで水平の偏光により順次に励起させると共に発生した光の垂直成分のみを分析することにより、反応混合物における蛍光の偏光を正確に測定することができる。測定すべき分析物の偏光と濃度との間の正確な関係は、既知濃度を有する検量線の偏光値を測定して確定される。分析物の濃度は、このように作成された標準曲線から内挿することができる。この分析は均質分析と呼ばれ、結合トレーサが遊離トレーサから分離されない溶液から最終的な偏光測定値を得ることを意味する。
蛍光ポラリゼーションを用いる場合、その結果は「ミリ偏光単位」「スパン」(ミリ偏光単位における)および「相対強度」として定量することができる。ミリ偏光単位の測定値は、トレーサの最大量が試験試料における分析物の不存在下で抗体に結合する際の最大偏光を示す。正味の偏光単位が高いほど、抗体に対するトレーサの結合が良好となる。「スパン」は、正味のミリ偏光と抗体に結合したトレーサの最少量との間の差を示す尺度である。スパンが大きいほど、より良好なデータの数値分析が得られる。「相対強度」は、バックグランドの蛍光よりも高い蛍光信号の強度を示す尺度である。すなわち、強度が高いほど、より正確な測定値を与える。強度は、垂直偏光強度と水平偏光強度の2倍との合計として決定される。強度は、トレーサの濃度および他の分析変数に応じ、バックグランドノイズの約3倍〜約30倍の範囲の信号とすることができる。さらに、この方法を実施するpHは、トレーサのフルオレスセイン部分をその開放型で存在させるのに充分とせねばならない。このpHは約4〜9、好ましくは6〜8、特に好ましくは約7〜7.5の範囲とすることができる。種々の緩衝剤を用いて、この分析過程に際しそのpHを得ると共に維持することができる。代表的な緩衝剤は硼酸塩、燐酸塩、炭酸塩、トリス、バルビタールなどを包含する。特定緩衝剤の選択はこの方法の実施に臨界的でない。しかしながら、一般にトリスおよび燐酸塩緩衝剤が好適である。
上記した分析法は、限定はしないがたとえばアボットTDX(登録商標)治療剤監視システム、アボットADX(登録商標)乱用薬物システム、およびアボットIMX(登録商標)蛍光ポラリゼーション分析器(これらは全てアボット・ラボラトリース社、アボット・パーク、IL60064から入手しうる)のような自動化システムで行うのに適する。
以下、限定はしないが本発明の思想および範囲を例示するため本発明を実施例によりさらに説明する。
実施例
実施例1
工程a:5(6)−カルボキシフルオレスセインのアセチル化
5(6)−カルボキシフルオレスセイン(10g、27ミリモル)を、酢酸ナトリウム(4.4g、54ミリモル)を含有する無水酢酸(200ml)に溶解させた。この溶液を2時間にわたり加熱還流させ、室温まで冷却し、次いで1リットルの水に注ぎ入れた。混合物を室温にて1晩撹拌し、次いで得られた沈殿物を濾過により集め、フィルタ上で室温にて14時間にわたり風乾して暗褐色の固体生成物を得た。この生成物を酢酸エチルで溶出させるシリカゲル上でのクロマトグラフィーによりさらに精製した。純生成物を含有する得られたフラクションを合し、減圧下で蒸発乾固させた。得られた固体残留物をエーテル/ヘキサンから再結晶化させて7.8gの3′,6′−ジアセチル5(6)−カルボキシフルオレスセインを得た。
実施例2
工程b,c:3′,6′−ジアセチル5(6)−カルボキシフルオレスセインの還元
3′,6′−ジアセチル5(6)−カルボキシフルオレスセイン(0.5g、1.1ミリモル)をテトラヒドロフラン(THF)(5ml)に溶解させ、0〜5℃まで冷却し、次いでトリエチルアミン(153ml、1.1ミリモル)およびクロル蟻酸エチル(103ml、1.1ミリモル)により窒素雰囲気下で処理して反応混合物を得た。この反応混合物を1時間撹拌し、次いで反応混合物を濾過した。得られた濾液を冷燐酸ナトリウム緩衝液(pH6.0、3ml、1M)に添加し、次いで水(1ml)中の水素化ホウ素ナトリウム(83mg、2.2ミリモル)で処理した。5分間の後、反応混合物を水(50ml)で希釈し、酢酸エチル(50ml)で抽出した。この抽出工程を2回行った。抽出物を合して硫酸ナトリウムで脱水し、次いで蒸発乾固させて0.4gの3′,6′−ジアセチル5(6)−ヒドロキシメチルフルオレスセインを得た。これら異性体の混合物をさらにシリカゲル(60g)で精製すると共に、塩化メチレンとメチルt−ブチルエーテルとの9:1の比における混液で溶出し、分離させた。第1の溶出する化合物は3′,6′−ジアセチル−6−ヒドロキシメチルフルオレスセインであった。C25H19O8の計算値:447.1080;実測値:447.1075。第2の溶出する化合物は3′,6′−ジアセチル−5−ヒドロキシメチルフルオレスセインであった。
C25H19O8の計算値:447.1080;実測値:447.1075。実施例3
工程d:3′,6′−ジアセチル5(6)−ヒドロキシメチルフルオレスセインから5(6)−フタルイミドメチルフルオレスセインへの変換
3′,6′−ジアセチル5(6)−ヒドロキシメチルフルオレスセイン(90mg、0.2ミリモル)の混合物をTHFに溶解させ、フタルイミド(30mg、0.2ミリモル)とトリフェニルホスフィン(53mg、0.2ミリモル)とジエチルアゾジカルボキシレート(DEAD)(32ml、0.2ミリモル)とで窒素雰囲気下に処理して反応混合物を生成させた。この反応混合物を30分間撹拌し、次いで反応混合物を蒸発乾固させた。残留物をシリカ上でのクロマトグラフにかけた[(クロマトトロン(登録商標)、ハリソン・リサーチ社、パロ・アルト、CA)2mmプレート、酢酸エチルおよびヘキサン[1:1]、10ml/minの速度]。さらに得られた生成物の精製をクロマトグラフィーにより行い、この場合も塩化メチレンとエーテルとの混液(9:1)で行って3′,6′−ジアセチル5(6)−フタルイミドメチルフルオレスセイン(90mg)を得た。
工程e〜g:3′,6′−ジアセチル5(6)−フタルイミドメチルフルオレスセインから5(6)−アミノメチルフルオレスセインへの変換
実施例4
工程e〜g:3′,6′−ジアセチル5(6)−フタルイミドメチルフルオレスセインから5(6)−アミノメチルフルオレスセインへの変換
3′,6′−ジアセチル5(6)−フタルイミドメチルフルオレスセイン(90mg)を、水酸化ナトリウム水溶液(0.1N)を含有するメタノール(1ml)に溶解させた。2時間の後、ヒドラジン水和物(100ml)を添加し、得られた反応混合物をさらに2時間撹拌した。この時間の後、反応混合物を実施例1および2に上記したように蒸発乾固させた。残留物を、3滴のメタノール性HCl(3N)を含有するメタノール(5ml)に溶解させた。エーテル(50ml)を添加し、次いで冷却すると5(6)−アミノメチルフルオレスセインが塩酸塩として沈澱し、これを濾過により回収した。
実施例5
3′,6′−ジアセチル−6−[(N−ジCbz−アミノ)メチルフルオレスセインの製造
3′,6′−ジアセチル−6−ヒドロキシメチルフルオレスセイン(1g、2.2ミリモル)とトリフェニルホスィン(690mg、2.6ミリモル)とジベンジルイミノジカーボネート(640mg、2.2ミリモル)とをTHF(50ml、ベンゾフェノンカリウムケチルから)中で窒素雰囲気下に撹拌した。この溶液にTHF(25ml)におけるジエチルアゾジカルボキシレート(415ml、2.6ミリモル)を30分間かけて滴下した。さらに1時間にわたり撹拌した後、溶液を蒸発させ、残留物を塩化メチレン/エーテル(9:1)で溶出させるシリカゲルでの濾過により精製して3′,6′−ジアセチル−6−[(N−ジCbz−アミノ)メチル]フルオレスセイ(923mg、1.3ミリモル、59%)を得た。C41H32NO11の計算値:714.1975;実測値:714.1977。
実施例6
3′,6′−ジアセチル−5−[(N−ジCbz−アミノ)メチル]フルオレスセインの製造
3′,6′−ジアセチル−5−[(N−ジCbz−アミノ)メチル]フルオレスセインを、実施例5と同様に3′,6′−ジアセチル−5−ヒドロキシメチルフルオレスセインから製造した(1g、1.4ミリモル、61%)。
C41H32NO11の計算値:714.1975;実測値:714.1977。
実施例7
3′,6′−ジアセチル−6−[(N−ジCbz−アミノ)メチル]フルオレスセイから6−アミノメチルフルオレスセインへの変換
(A)実施例5からの3′,6′−ジアセチル−6−[(N−ジCbz−アミノ)メチル]フルオレスセイン(675mg、0.95ミリモル)を、ジメチルアミノピリジン(10mg)を含有するメタノール(50ml)中にて24時間にわたり還流下で撹拌した。溶剤を蒸発させて6−[(N−ジCbz−アミノ)メチル]フルオレスセインを得た。
C37H28NO9の計算値:630.1764;実測値:630.1763。
(B)さらに精製することなく、6−[(N−ジCbz−アミノ)メチル]フルオレスセインを塩化メチレン(50ml、P2O5から)に溶解させ、次いでHBr/HOAc(31%、5ml)で処理した。4時間撹拌した後、反応混合物を濾過し、沈殿物を12時間にわたり減圧乾燥して6−アミノメチルフルオレスセイン(410mg、0.93ミリモル、98%)を臭化水素酸塩として得た。
C21H16NO5の計算値:362.1028;実測値:362.1027。
実施例8
3′,6′−ジアセチル−5−[(N−ジCbz−アミノ)メチル]フルオレスセインから5−アミノメチルフルオレスセインへの変換
(A)5−[(N−ジCbz−アミノ)メチル]フルオレスセインを実施例6の3′,6′−ジアセチル−5−[(N−ジCbz−アミノ)メチル]フルオレスセイン(1g、1.4ミリモル)から実施例7Aで用いた手順により製造した。
C37H28NO9の計算値:630.1764;実測値:630.1763。
(B)5−アミノメチルフルオレスセイン(600mg、1.36ミリモル、98%)を実施例7Bにおけると同様に5−[(N−ジCbz−アミノ)メチル]フルオレスセインから製造した。
C21H16NO5の計算値:352.1028;実測値:362.1027。
実施例9
5(6)−(マレイミド)メチルフルオレスセインの製造
(A)3′,6′−ジアセチル−5(6)−ヒドロキシメチルフルオレスセイン(100mg、0.2ミリモル)とマレイミド(20mg、0.2ミリモル)とトリフェニルホスフィン(57mg、0.2ミリモル)とをTHF(10ml)に溶解させた。ジエチルアゾジカルボキシレート(40μl、0.2ミリモル)を添加した。反応物を窒素雰囲気下で24時間撹拌した。この反応混合物を減圧下に蒸発乾固させ、次いでクロマトグラフィー[(クロマトトロン(登録商標)、ハリソン・リサーチ社、パロアルト、CA)2mmプレート、塩化メチレンおよびメチルt−ブチルエーテル(9:1)、10ml/minの速度]により精製して3′,6′−ジアセチル−5(6)−(マレイミド)メチルフルオレスセインを得た。
(B)3′,6′−ジアセチル−5(6)−(マレイミド)メチル]フルオレスセインを実施例7Aの手順により処理して5(6)−(マレイミド)メチル]フルオレスセインを得た。
本発明をフルオレスセイン標識されたハプテン、蛋白、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリマー、固相などの作成に使用することが考えられる。5−および6−アミノメチルフルオレスセインは分析に有用な数種のFPIAトレーサの成分である。上記フルオレスセイン誘導体および方法を種々の条件下で用いて最適感度および速度が得られることを当業者は了解するであろう。
Claims (14)
- 次式:
Xはヒドロキシ、保護ヒドロキシ、チオール、保護チオール、離脱基、ミハエルアクセプタ、ホスホルアミダイト、ホスホネート及び結合基よりなる群から選択され;
X及び/又はRが保護ヒドロキシル基である場合は、該保護ヒドロキシル基はアルキルエステル、アリールエーテル、シリルエーテル、エステル、カーボネート及びカルバメートよりなる群から選択され;
Xが保護チオール基である場合は、該保護チオール基はチオエーテル、チオエステル、チオカーボネート、チオカルバメート及びジスルフィドよりなる群から選択され;
Xが離脱基である場合は、該離脱基はハライド(X=−Cl、−Br、−I)、スルホネートエステル(X=−OS(=O)2−アルキル、−OS(=O)2−アリール)、活性アミノ(X=−N(アルキル)3 +、N2)よりなる群から選択され;
Xが結合基である場合は、これは式−O−A−Bであり、式中Aは0〜50個の炭素原子及び10個以下の異原子よりなる飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分枝鎖状のスペーサ基であり、ただし
(a)配列−O−A−B中において2個の異原子同士が直接結合することができ、
(b)配列−O−A−Bは−O−O−を有することができず;
(c)分枝鎖は炭素原子にのみ存在することができ;
Bは−C(=O)OH、−NH2、−CH(=O)、ハロ(−Cl、−Br、−I)、スルホネートエステル(−OS(=O)2−アルキル、−OS(=O)2−アリール)、
Xがミハエルアクセプタである場合は、該ミハエルアクセプタは
[式中、「MA」は式
a、b及びcは独立して水素、アルキル又はアリールであり;
Uは−CH(=O)、−C(=O)R、−C(=O)NH2、−CN、−NO2、−S(=O)R、−S(=O)2Rから選択され、nは0若しくは1である]
で表されるフルオレスセイン誘導体。 - 式VII及びVIIIの化合物が両者の混合物として得られる場合に、式VII及びVIIIの異性体を工程(b)の後にクロマトグラフ分離して前記式VII及びVIIIの精製異性体を得る、請求の範囲第2項に記載の方法。
- (a)独立して次式III及びIV:
の化合物を生成させ;
(b)式V及びVIの化合物のカルボン酸基を還元して次式VII及びVIII:
(c)式VII及びVIIIの化合物のヒドロキシル部分を独立して又は混合物として離脱基に変換させて式IX若しくはX:
(d)離脱基Xを求核性「プロ」アミノ、「プロ」チオール及びナトリウムスルフヒドリド基よりなる群から選択される置換基で置換して、式XI及びXII
の化合物を生成させ;
(e)式XI若しくはXIIの化合物におけるX″基を変換させて式XIII若しくはXIV:
の化合物を生成させ;
(f)式XIII及びXIVの化合物の位置3′及び6′におけるヒドロキシル基を保護解除して式XV若しくはXVI:
の化合物を生成させる工程を行なって、式XV又は式XVIの化合物を生成させることを含む、請求項1に記載の5(6)−メチル−置換フルオレスセイン誘導体の製造方法。 - 式VII及びVIIIの化合物が両者の混合物として得られる場合に、式VII及びVIIIの異性体を工程(b)の後にクロマトグラフ分離して前記式VII及びVIIIの精製異性体を得る工程を更に含む、請求の範囲第4項に記載の方法。
- 前記求核性「プロ」アミノ基がジカルボキシイミド陰イオン、イミノジカーボネート陰イオン、スルホンアミド陰イオン、スルホンイミド陰イオン、O−置換ヒドロキシルアミン、O−置換ヒドロキサム酸陰イオン、アジド陰イオン、シアニド陰イオン、イソシアネート陰イオン及びイソチオシアネート陰イオンよりなる群から選択される、請求の範囲第4項又は第5項に記載の方法。
- 前記スルホンアミド陰イオンが−N(H)n(アルキル、アリール、アルケニル、アシル)2-nS(=O)2(アルキル、アリール、アルケニル)よりなる群から選択され、ここでn=0〜2であり;
前記スルホンイミド陰イオンが−N(S(=O)2(アルキル、アリール及びアルケニル))2よりなる群から選択され;
前記O−置換ヒドロキシルアミンがNH2O(アルキル、アリール及びアシル)よりなる群から選択され;
前記O−置換ヒドロキサム酸陰イオンが−N(アシル)O(アルキル、アリール及びアシル)よりなる群から選択される、請求の範囲第6項に記載の方法。 - 前記「プロ」チオール基がチオ尿素、ナトリウムN,N−ジメチルチオカルバメート、チオサルフェート陰イオン及びジスルフィド陰イオンよりなる群から選択される、請求の範囲第4項又は第5項に記載の方法。
- 次式XIX若しくはXX:
Aは0〜50個の炭素原子及び10個以下の異原子よりなる飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分枝鎖状のスペーサ基であり、ただし配列−X−A−M−Q中において2個の異原子同士が直接結合し得、配列−X−A−M−Qは−O−O−を有することができず、さらに分枝鎖は炭素原子にのみ存在することができ;
Mは>C(=O)、−NH−、−O−C(=O)−、−N(H)−C(=O)−、−N(H)−C−(=S)−、−S−、−P(=O)(O−)−及び
Qはタンパク質、ペプチド、アミノ酸、DNAもしくはRNAプローブ配列、ホルモン、ステロイド、ビタミン、薬物、官能化ポリマー(可溶性及び不溶性の両者)、ハプテン、及びポリ塩素化ビフェニルからなる群より選択される]
のフルオレスセイン結合体。 - 試験試料を、式XIX若しくはXX:
Aは0〜50個の炭素原子及び10個以下の異原子よりなる飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分枝鎖状のスペーサ基であり、ただし配列−X−A−M−Qにおいて2個の異原子同士が直接結合し得、配列−X−A−M−Qは−O−O−を有することができず、さらに分枝鎖は炭素原子にのみ存在することができ;
Mは>C(=O)、−NH−、−O−C(=O)−、−N(H)−C(=O)−、−N(H)−C(=S)−、−S−、−P(=O)(O−)−及び
Qはタンパク質、ペプチド、アミノ酸、DNAもしくはRNAプローブ配列、ホルモン、ステロイド、ビタミン、薬物、官能化ポリマー(可溶性及び不溶性の両者)、ハプテン、及びポリ塩素化ビフェニルからなる群より選択される]
の化合物を含んでなる指示薬と接触させることを特徴とする、試験試料における分析物の存在の検出方法。 - 式XIX若しくはXX:
Aは0〜50個の炭素原子及び10個以下の異原子よりなる飽和もしくは不飽和の直鎖もしくは分枝鎖状のスペーサ基であり、ただし
(a)配列−O−A−Bにおいて2個の異原子同士が直接結合することができ、
(b)配列−O−A−Bは−O−O−を有することができず;
(c)分枝鎖は炭素原子にのみ存在することができ;
Bは−C(=O)OH、−NH2、−CH(=O)、ハロ(−Cl、−Br、−I)、スルホネートエステル(−OS(=O)2−アルキル、−OS(=O)2−アリール)、
Mは>C(=O)、−NH−、−O−C(=O)−、−N(H)−C(=O)−、−N(H)−C(=S)−、−S−、−P(=O)(O−)−及び
Qはタンパク質、ペプチド、アミノ酸、DNAもしくはRNAプローブ配列、ホルモン、ステロイド、ビタミン、薬物、官能化ポリマー(可溶性及び不溶性の両者)、ハプテン、及びポリ塩素化ビフェニルからなる群より選択される]
の化合物を含んでなる指示薬を含有した容器を備えることを特徴とする、試験試料における少なくとも1種の分析物の存在を検出する試験キット。 - 請求項11に記載のフルオレスセイン結合体を含む、試験試料に存在しうる分析物の存在を検出するのに有用な指示薬。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US07/859,775 US5352803A (en) | 1992-03-30 | 1992-03-30 | 5(6)-methyl substituted fluorescein derivatives |
US859,775 | 1992-03-30 | ||
PCT/US1993/002905 WO1993020060A1 (en) | 1992-03-30 | 1993-03-29 | 5(6)-methyl substituted fluorescein derivatives |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH07505627A JPH07505627A (ja) | 1995-06-22 |
JP3667753B2 true JP3667753B2 (ja) | 2005-07-06 |
Family
ID=25331682
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP51759393A Expired - Lifetime JP3667753B2 (ja) | 1992-03-30 | 1993-03-29 | 5(6)−メチル置換のフルオレスセイン誘導体 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (7) | US5352803A (ja) |
EP (2) | EP0635020A1 (ja) |
JP (1) | JP3667753B2 (ja) |
CA (1) | CA2130197A1 (ja) |
WO (1) | WO1993020060A1 (ja) |
Families Citing this family (129)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5352803A (en) * | 1992-03-30 | 1994-10-04 | Abbott Laboratories | 5(6)-methyl substituted fluorescein derivatives |
US5491071A (en) * | 1993-08-03 | 1996-02-13 | Abbott Laboratories | Reagents and methods for the detection and quantification of testosterone in fluid samples |
US5639875A (en) * | 1995-02-01 | 1997-06-17 | Hybridon, Inc. | Methods for H-phosphonate syntheis of oligonucleotides using triphosgene |
US6797479B2 (en) * | 1995-04-04 | 2004-09-28 | Abbott Laboratories | Reagents and methods for the detection and quantification of vancomycin in biological fluids |
EP0819254A1 (en) * | 1995-04-04 | 1998-01-21 | Abbott Laboratories | Reagents and methods for the detection and quantification of vancomycin in biological fluids |
US6162931A (en) | 1996-04-12 | 2000-12-19 | Molecular Probes, Inc. | Fluorinated xanthene derivatives |
US20030036106A1 (en) * | 1996-10-28 | 2003-02-20 | Burke Thomas J. | Kinase and phosphatase activity measurement using fluorescence polarization |
US6424702B1 (en) * | 1999-01-28 | 2002-07-23 | Ameritech Corporation | Method and system for termination blocking of message delivery service |
US7047190B1 (en) * | 1999-04-19 | 2006-05-16 | At&Tcorp. | Method and apparatus for performing packet loss or frame erasure concealment |
US6811998B2 (en) * | 1999-06-25 | 2004-11-02 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Conjugates of uncompetitive inhibitors of inosine monophosphate dehydrogenase |
US7198924B2 (en) | 2000-12-11 | 2007-04-03 | Invitrogen Corporation | Methods and compositions for synthesis of nucleic acid molecules using multiple recognition sites |
US7163918B2 (en) * | 2000-08-22 | 2007-01-16 | New River Pharmaceuticals Inc. | Iodothyronine compositions |
US8394813B2 (en) | 2000-11-14 | 2013-03-12 | Shire Llc | Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents |
ES2390425T3 (es) | 2000-12-22 | 2012-11-12 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Uso de moléculas de orientación repulsivas (RGM) y sus moduladores |
US6423549B1 (en) * | 2001-03-14 | 2002-07-23 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Phycoerythrin labeled thyronine analogues and assays using labeled analogues |
US7563618B2 (en) | 2001-03-23 | 2009-07-21 | Geron Corporation | Oligonucleotide conjugates |
AU2002245717A1 (en) * | 2001-03-23 | 2002-10-08 | Geron Corporation | Oligonucleotide conjugates |
AU2002305019A1 (en) * | 2001-05-25 | 2002-12-09 | University Of British Columbia | Diagnostic methods for cardiovascular disease, low hdl-cholesterol levels, and high triglyceride levels |
US7026166B2 (en) * | 2002-01-22 | 2006-04-11 | Chiron Corporation | Fluorogenic dyes |
WO2003072047A2 (en) * | 2002-02-22 | 2003-09-04 | New River Pharmaceuticals Inc. | Idothyronine compositions |
US7485298B2 (en) * | 2002-05-23 | 2009-02-03 | Michael Powell | Diagnosis and treatment of human dormancy-related sequellae |
US7288257B2 (en) * | 2002-05-23 | 2007-10-30 | Michael Powell | Diagnosis and treatment of human dormancy syndrome |
AU2003270619A1 (en) | 2002-09-12 | 2004-04-30 | Molecular Probes, Inc. | Site-specific labeling of affinity tags in fusion proteins |
US7704756B2 (en) * | 2003-01-21 | 2010-04-27 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Fluorogenic dyes |
US7727752B2 (en) | 2003-07-29 | 2010-06-01 | Life Technologies Corporation | Kinase and phosphatase assays |
US7619059B2 (en) | 2003-07-29 | 2009-11-17 | Life Technologies Corporation | Bimolecular optical probes |
CA2445420A1 (en) | 2003-07-29 | 2005-01-29 | Invitrogen Corporation | Kinase and phosphatase assays |
WO2005012579A2 (en) * | 2003-07-31 | 2005-02-10 | Molecular Probes, Inc. | Homodimeric cyanine dye dimer comprising aromatic, heteroaromatic, cyclic or heterocyclic linker moiety in nucleic acid reporter molecules |
US7271265B2 (en) | 2003-08-11 | 2007-09-18 | Invitrogen Corporation | Cyanine compounds and their application as quenching compounds |
WO2005042504A1 (en) | 2003-10-31 | 2005-05-12 | Molecular Probes, Inc. | Fluorinated resorufin compounds and their application in detecting hydrogen peroxide |
US20050214807A1 (en) * | 2003-11-19 | 2005-09-29 | Iain Johnson | Environmental sensitive fluorogenic compounds and their application for singlet oxygen and protein detection |
EP2287341B1 (en) | 2003-12-01 | 2013-02-13 | Life Technologies Corporation | Nucleic acid molecules containing recombination sites and methods of using the same |
EP2610315B1 (en) | 2003-12-05 | 2016-08-31 | Life Technologies Corporation | Methine-substituted cyanine dye compounds |
EP2607431B1 (en) * | 2003-12-05 | 2016-08-24 | Life Technologies Corporation | Cyanine dye compounds |
US7776529B2 (en) | 2003-12-05 | 2010-08-17 | Life Technologies Corporation | Methine-substituted cyanine dye compounds |
EP1711504A2 (en) | 2004-01-21 | 2006-10-18 | Molecular Probes Inc. | Derivatives of cephalosporin and clavulanic acid for detecting beta-lactamase in a sample |
WO2005088307A1 (en) * | 2004-03-10 | 2005-09-22 | Seradyn Inc. | Immunoassays for everolimus |
US20060024833A1 (en) | 2004-07-27 | 2006-02-02 | Molecular Probes, Inc. | Fluorescent metal ion indicators with large stokes shift |
JP5306811B2 (ja) | 2005-05-11 | 2013-10-02 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | 2本鎖dnaへの高い選択性を有する蛍光化学物質及びそれらの使用 |
WO2007030521A1 (en) * | 2005-09-06 | 2007-03-15 | Invitrogen Corporation | Control of chemical modification |
WO2007038659A1 (en) | 2005-09-26 | 2007-04-05 | Invitrogen Corporation | Violet laser excitable dyes and their method of use |
EP1928905B1 (de) | 2005-09-30 | 2015-04-15 | AbbVie Deutschland GmbH & Co KG | Bindungsdomänen von proteinen der repulsive guidance molecule (rgm) proteinfamilie und funktionale fragmente davon sowie deren verwendung |
US7521577B2 (en) | 2006-01-12 | 2009-04-21 | Molecular Probes, Inc. | Heavy metal binding compounds and their method of use |
EP2727965B1 (en) | 2006-10-27 | 2019-03-06 | Life Technologies Corporation | FLUOROGENIC pH SENSITIVE DYES AND THEIR METHOD OF USE |
US20080102535A1 (en) * | 2006-11-01 | 2008-05-01 | Chace Donald H | Measuring thyroxine levels from dried blood samples using mass spectrometry |
EP2033971A1 (de) * | 2007-09-06 | 2009-03-11 | Abbott GmbH & Co. KG | Bone Morphogenetic Protein (BMP)-bindende Domänen von Proteinen der Repulsive Guidance Molecule (RGM) Proteinfamilie und funktionale Fragmente davon sowie deren Verwendung |
WO2009094536A1 (en) | 2008-01-24 | 2009-07-30 | Life Technologies Corporation | Fluorogenic hydrazine-substituted compounds |
US8962803B2 (en) | 2008-02-29 | 2015-02-24 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Antibodies against the RGM A protein and uses thereof |
JP5646457B2 (ja) | 2008-04-29 | 2014-12-24 | アッヴィ・インコーポレイテッド | 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用 |
US20090286329A1 (en) * | 2008-05-19 | 2009-11-19 | Abbott Laboratoires | Isolated human autoantibodies to natriuretic peptides and methods and kits for detecting human autoantibodies to natriuretic peptides |
US20090286256A1 (en) * | 2008-05-19 | 2009-11-19 | Abbott Laboratories | Isolated human autoantibodies to natriuretic peptides and methods and kits for detecting human autoantibodies to natriuretic peptides |
BRPI0913366A8 (pt) | 2008-06-03 | 2017-07-11 | Abbott Lab | Imunoglobulinas de domínio variável duplo e seus usos |
KR20110016958A (ko) | 2008-06-03 | 2011-02-18 | 아보트 러보러터리즈 | 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도 |
US20100105150A1 (en) * | 2008-10-24 | 2010-04-29 | Abbott Laboratories | Isolated human autoantibodies to neutrophil gelatinase-associated lipocalin (ngal) and methods and kits for the detection of human autoantibodies to ngal |
US8349325B2 (en) | 2008-12-23 | 2013-01-08 | Abbott Laboratories | Soluble FMS-like tyrosine kinase-1 (sFLT-1) antibody and related composition, kit, methods of using, and materials and method for making |
KR101579771B1 (ko) * | 2009-03-05 | 2015-12-28 | 애브비 인코포레이티드 | Il-17 결합 단백질 |
EP4374790A2 (en) | 2009-04-30 | 2024-05-29 | DexCom, Inc. | Performance reports associated with continuous sensor data from multiple analysis time periods |
EP2473852B1 (en) * | 2009-08-31 | 2016-03-30 | Abbott Laboratories | Biomarkers for prediction of major adverse cardiac events and uses thereof |
MX2012006560A (es) | 2009-12-08 | 2012-10-05 | Abbott Gmbh & Co Kg | Anticuerpos monoclonales contra la proteina rgm a para utilizarse en el tratamiento de degeneracion de capa de fibra de nervio retinal. |
US20110229921A1 (en) * | 2010-03-18 | 2011-09-22 | Abbott Laboratories | METHODS OF ASSAYING URINARY NEUTROPHIL GELATINASE-ASSOCIATED LIPOCALIN (uNGAL) IN THE PROGNOSIS OF CADAVERIC KIDNEY TRANSPLANT FUNCTION IN A PATIENT, INCLUDING A PATIENT DIAGNOSED WITH DELAYED GRAFT FUNCTION (DGF), A METHOD OF ASSAYING uNGAL IN THE ASSESSMENT OF RISK OF DGF IN A PATIENT DIAGNOSED WITH EARLY GRAFT FUNCTION (EGF), AND RELATED KITS |
WO2011129382A1 (en) | 2010-04-16 | 2011-10-20 | Abbott Japan Co. Ltd. | Methods and reagents for diagnosing rheumatoid arthritis |
TWI615405B (zh) | 2010-05-14 | 2018-02-21 | 艾伯維有限公司 | Il-1結合蛋白 |
US9551714B2 (en) | 2010-06-25 | 2017-01-24 | Abbott Laboratories | Materials and methods for assay of anti-hepatitis C virus (HCV) antibodies |
WO2012006500A2 (en) | 2010-07-08 | 2012-01-12 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein |
UY33492A (es) | 2010-07-09 | 2012-01-31 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
CA2807014A1 (en) | 2010-08-03 | 2012-02-09 | Abbvie Inc. | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
US20120115244A1 (en) | 2010-11-09 | 2012-05-10 | Abbott Laboratories | Materials and methods for immunoassay of pterins |
AU2011361720B2 (en) | 2010-12-21 | 2017-04-27 | Abbvie Inc. | IL-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use |
TW201323440A (zh) | 2011-10-24 | 2013-06-16 | Abbvie Inc | 抗骨硬化素(sclerostin)之免疫結合物 |
CN104136462B (zh) | 2011-12-14 | 2017-06-09 | 艾伯维德国有限责任两合公司 | 用于诊断和治疗铁相关病症的组合物和方法 |
AU2012352168C1 (en) | 2011-12-14 | 2018-01-25 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders |
US8993248B2 (en) | 2011-12-31 | 2015-03-31 | Abbott Laboratories | Truncated human vitamin D binding protein and mutation and fusion thereof and related materials and methods of use |
MX352772B (es) | 2012-01-27 | 2017-12-07 | Abbvie Deutschland | Composición y método para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades asociadas con la degeneración de neuritas. |
CN104303060A (zh) | 2012-03-13 | 2015-01-21 | 艾伯维公司 | 选择或鉴别用于v1B拮抗剂治疗的受试者的方法 |
US9599622B2 (en) | 2012-05-30 | 2017-03-21 | Life Technologies Corporation | Fluorogenic pH-sensitive dyes and their methods of use (II) |
TW201402608A (zh) | 2012-07-12 | 2014-01-16 | Abbvie Inc | Il-1結合蛋白質 |
CN105102978B (zh) | 2013-02-02 | 2018-11-02 | 杜克大学 | 分离循环肿瘤细胞的方法 |
CN113549148A (zh) | 2013-03-14 | 2021-10-26 | 雅培制药有限公司 | Hcv核心脂质结合结构域单克隆抗体 |
CN105209616A (zh) | 2013-03-14 | 2015-12-30 | 雅培制药有限公司 | 用于改进的抗体检测的hcv ns3重组抗原及其突变体 |
EP2968526A4 (en) | 2013-03-14 | 2016-11-09 | Abbott Lab | ANTIGEN-ANTIBODY COMBINATION ASSAY OF HEPATITIS C VIRUS AND METHODS AND COMPOSITIONS FOR USE THEREWITH |
US9005901B2 (en) | 2013-03-15 | 2015-04-14 | Abbott Laboratories | Assay with internal calibration |
US9157910B2 (en) | 2013-03-15 | 2015-10-13 | Abbott Laboratories | Assay with increased dynamic range |
US9469686B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-10-18 | Abbott Laboratories | Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same |
WO2015031626A1 (en) | 2013-08-28 | 2015-03-05 | Abbvie Inc. | Soluble cmet assay |
WO2015175873A1 (en) | 2014-05-16 | 2015-11-19 | Life Technologies Corporation | Cell tracking reagents and their methods of use |
EP3143022B1 (en) | 2014-05-16 | 2021-12-22 | Life Technologies Corporation | Carbopyronone compounds useful as diagnostic adjuvants |
EP3594684A1 (en) | 2014-06-27 | 2020-01-15 | Abbott Laboratories | Compositions and methods for detecting human pegivirus 2 (hpgv-2) |
CN107110868B (zh) | 2014-10-29 | 2020-08-21 | 雅培制药有限公司 | 采用ns3捕获肽的受试者抗hcv抗体检测测定 |
EP3227264B1 (en) | 2014-12-03 | 2020-10-21 | Life Technologies Corporation | Hydrazinyl and aminooxy compounds and their methods of use |
CA2981515A1 (en) | 2015-04-03 | 2016-10-06 | Abbott Laboratories | Devices and methods for sample analysis |
RU2712610C2 (ru) | 2015-04-03 | 2020-01-29 | Эбботт Лэборетриз | Устройства и способы для анализа образца |
US20180196033A1 (en) | 2015-06-26 | 2018-07-12 | Life Technologies Corporation | Cell tracking reagents and their methods of use |
US20170089905A1 (en) | 2015-09-28 | 2017-03-30 | Abbott Japan Co., Ltd. | Methods of diagnosing hepatocellular carcinoma and pancreatic cancer |
EP3475443A1 (en) | 2016-06-23 | 2019-05-01 | Life Technologies Corporation | Methods and compositions for detecting or measuring caspases or apoptosis |
CN110249226B (zh) | 2016-10-03 | 2023-08-25 | 雅培实验室 | 评估患者样品中gfap状态的改进方法 |
BR112019006927A2 (pt) | 2016-10-05 | 2019-07-02 | Abbott Lab | dispositivos e métodos para análise de amostra |
CA3052513A1 (en) | 2017-03-23 | 2018-09-27 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 |
BR112019021612A2 (pt) | 2017-04-15 | 2020-05-12 | Abbott Laboratories | Métodos para auxiliar o diagnóstico hiperagudo e determinação de traumatismo crânioencefálico em um indivíduo humano com o uso de biomarcadores precoces |
BR112019022476A2 (pt) | 2017-04-28 | 2020-05-12 | Abbott Laboratories | Métodos para o auxílio no diagnóstico e determinação hiperagudos de lesão cerebral traumática usando biomarcadores iniciais em pelo menos duas amostras a partir do mesmo ser humano |
JP7416625B2 (ja) | 2017-05-25 | 2024-01-17 | アボット・ラボラトリーズ | 早期バイオマーカーを使用する、頭部への損傷を負ったヒト対象又は負った可能性があるヒト対象に対して、イメージングを実施するかどうかの決定の一助となるための方法 |
JP7269183B2 (ja) | 2017-05-30 | 2023-05-08 | アボット・ラボラトリーズ | 心臓トロポニンiを使用する、ヒト対象における軽度外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法 |
CA3068041A1 (en) | 2017-07-03 | 2019-01-10 | Abbott Laboratories | Improved methods for measuring ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 levels in blood |
WO2019028336A1 (en) | 2017-08-03 | 2019-02-07 | The Cleveland Clinic Foundation | IMPROVED PEPTIDE EXPRESSION AND ANTIBODY DETECTION OF APO-H SPECIFIC SUBJECT |
JP7379165B2 (ja) | 2017-12-09 | 2023-11-14 | アボット・ラボラトリーズ | Gfapとuch-l1との組合せを使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法 |
EP3721233A2 (en) | 2017-12-09 | 2020-10-14 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in the diagnosis and evaluation of a subject who has sustained an orthopedic injury and that has or may have sustained an injury to the head, such as mild traumatic brain injury (tbi), using glial fibrillary acidic protein (gfap) and/or ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 (uch-l1) |
BR112020010430A2 (pt) | 2017-12-29 | 2020-11-24 | Abbott Laboratories | biomarcadores e métodos inovadores para diagnosticar e avaliar lesão cerebral traumática |
US11249091B2 (en) | 2018-02-22 | 2022-02-15 | The Cleveland Clinic Foundation | Detection of glucuronidated and 3-bromotyrosine |
WO2019213583A1 (en) | 2018-05-04 | 2019-11-07 | Abbott Laboratories | Sequential sampling method for improving immunoassay sensitivity and kinetics of small volume samples |
CA3107758A1 (en) | 2018-08-10 | 2020-02-13 | Life Technologies Corporation | Silicon-substituted rhodamine dyes and dye conjugates |
US11079395B2 (en) | 2019-03-01 | 2021-08-03 | Abbott Laboratories | Methods for predicting major adverse cardiovascular events in subjects with coronary artery disease |
EP4136459A1 (en) | 2020-04-13 | 2023-02-22 | Abbott Laboratories | Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a ss-coronavirus antibody in a sample |
CA3188349A1 (en) | 2020-08-04 | 2022-02-10 | A. Scott Muerhoff | Improved methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample |
CN112625049A (zh) * | 2020-11-06 | 2021-04-09 | 上海应用技术大学 | 一种叠氮基团修饰荧光素类化合物及其制备方法和应用 |
CA3198161A1 (en) | 2020-12-01 | 2022-06-09 | Beth MCQUISTON | Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi |
WO2023102384A1 (en) | 2021-11-30 | 2023-06-08 | Abbott Laboratories | Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi |
WO2022147147A1 (en) | 2020-12-30 | 2022-07-07 | Abbott Laboratories | Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample |
CA3218082A1 (en) | 2021-04-29 | 2022-11-03 | Abbott Laboratories | High throughput nucleic acid testing of biological samples |
BR112023024169A2 (pt) | 2021-05-18 | 2024-02-06 | Abbott Lab | Métodos para avaliar lesão cerebral em um indivíduo pediátrico |
AU2022293389A1 (en) | 2021-06-14 | 2024-01-04 | Abbott Laboratories | Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind |
WO2023028186A1 (en) | 2021-08-27 | 2023-03-02 | Abbott Laboratories | Methods for detecting immunoglobulin g, subclass 4 (igg4) in a biological sample |
CA3230038A1 (en) | 2021-08-31 | 2023-03-09 | Hongwei Zhang | Methods and systems of diagnosing brain injury |
WO2023056268A1 (en) | 2021-09-30 | 2023-04-06 | Abbott Laboratories | Methods and systems of diagnosing brain injury |
WO2023083723A1 (en) * | 2021-11-11 | 2023-05-19 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Novel monoclonal antibodies directed against l-thyroxine and diagnostic uses thereof |
WO2023114978A1 (en) | 2021-12-17 | 2023-06-22 | Abbott Laboratories | Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples |
US20230213536A1 (en) | 2021-12-28 | 2023-07-06 | Abbott Laboratories | Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan |
CN114853779B (zh) * | 2022-06-09 | 2023-11-10 | 南京工业大学 | 细胞及生物体内生物硫醇检测与特异性快速标记巯基蛋白质的荧光探针、制备方法及应用 |
WO2024006876A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Abbott Laboratories | Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples |
WO2024059708A1 (en) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | Abbott Laboratories | Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury |
WO2024107430A1 (en) | 2022-11-17 | 2024-05-23 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for assaying enzyme activity |
Family Cites Families (33)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3714344A (en) * | 1969-05-01 | 1973-01-30 | Mallinckrodt Chemical Works | Method for determining thyroxine in blood serum and reagent therefor |
CA1050425A (en) * | 1975-06-26 | 1979-03-13 | Mallinckrodt | Radioimmunoassay methods for the determination of l-triiodothyronine and thyroxine |
US4307071A (en) * | 1977-08-02 | 1981-12-22 | Kallestad Laboratories, Inc. | Analytical reagent and method |
US4430263A (en) * | 1978-09-18 | 1984-02-07 | Abbott Laboratories | Hapten-inhibitor immunoassay |
US4366143A (en) * | 1979-09-24 | 1982-12-28 | Amersham International Public Limited Company | Assay for the free portion of substances in biological fluids |
JPH025764B2 (ja) * | 1979-10-29 | 1990-02-05 | American Cyanamid Co | |
US4329461A (en) * | 1980-01-11 | 1982-05-11 | Syva Company | Fluorescent thyroid hormone conjugates and their uses |
JPS56121039A (en) * | 1980-02-27 | 1981-09-22 | Hitachi Ltd | Composite type electrophotographic plate |
US4391795A (en) * | 1980-03-21 | 1983-07-05 | Becton Dickinson And Company | Assay for free thyroid hormone |
US4341865A (en) * | 1980-07-21 | 1982-07-27 | Abbott Laboratories | Determination of thyroxine binding globulin |
DE3173632D1 (en) * | 1981-09-11 | 1986-03-13 | Amersham Int Plc | Derivatives of iodothyronine compounds and their use in an assay for the free iodothyronine compounds |
US4433051A (en) * | 1981-10-14 | 1984-02-21 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Derivatives of α-difluoromethylornithine useful in analysis |
US4668640A (en) * | 1981-12-11 | 1987-05-26 | Abbott Laboratories | Fluorescence polarization immunoassay utilizing substituted carboxyfluoresceins |
US4476228A (en) * | 1982-11-08 | 1984-10-09 | Abbott Laboratories | Determination of unsaturated thyroxine binding protein sites using fluorescence polarization techniques |
US4614823A (en) * | 1982-11-08 | 1986-09-30 | Abbott Laboratories | Aminomethylfluorescein derivatives |
US4476229A (en) * | 1982-11-08 | 1984-10-09 | Abbott Laboratories | Substituted carboxyfluoresceins |
CA1195995A (en) * | 1982-11-08 | 1985-10-29 | Curtis L. Kirkemo | Substituted carboxyfluoresceins |
US4510251A (en) * | 1982-11-08 | 1985-04-09 | Abbott Laboratories | Fluorescent polarization assay for ligands using aminomethylfluorescein derivatives as tracers |
US4489165A (en) * | 1983-01-24 | 1984-12-18 | Becton Dickinson And Company | Chromogenic tracers for use in an assay |
US4640893A (en) * | 1983-10-28 | 1987-02-03 | University Of Illinois | Novel rhodamine derivatives as fluorogenic substrates for proteinases |
US4888296A (en) * | 1984-07-16 | 1989-12-19 | Becton, Dickinson And Company | Monoclonal antibodies recognizing L-thyroxine |
US4636478A (en) * | 1984-07-16 | 1987-01-13 | Becton, Dickinson And Company | Monoclonal antibodies recognizing L-thyroxine |
ES2084577T3 (es) * | 1986-10-24 | 1996-05-16 | Abbott Lab | Ensayo, trazadores, inmunogenos y anticuerpos para benzodiazepinas. |
US4868132A (en) * | 1987-02-03 | 1989-09-19 | Abbott Laboratories | Fluorescence polarization immunoassay for amphetamine/methamphetamine |
US4912208A (en) * | 1987-06-29 | 1990-03-27 | Abbott Laboratories | Fluorophores for encapsulation into liposomes |
US4894348A (en) * | 1987-07-01 | 1990-01-16 | Ronald Robert C | Fluorescein-conjugated proteins with enhanced fluorescence |
US5002883A (en) * | 1987-10-30 | 1991-03-26 | Abbott Laboratories | Covalent attachment of antibodies and antigens to solid phases using extended length heterobifunctional coupling agents |
US5099020A (en) * | 1989-11-27 | 1992-03-24 | Abbott Laboratories | Barbiturate assay compositions and methods |
US5145790A (en) * | 1990-05-04 | 1992-09-08 | Abbott Laboratories | Reagents and method for detecting polychlorinated biphenyls |
DE69116034T2 (de) * | 1990-08-15 | 1996-06-20 | Abbott Lab | Immunotestreagenzien und Verfahren zur Bestimmung von Cyclosporin |
WO1993004192A1 (en) * | 1991-08-23 | 1993-03-04 | Molecular Probes, Inc. | Use of haloalkyl derivatives of reporter molecules to analyze metabolic activity in cells |
US5296599A (en) * | 1991-09-19 | 1994-03-22 | Millipore Corporation | Activated carbamates compounds |
US5352803A (en) * | 1992-03-30 | 1994-10-04 | Abbott Laboratories | 5(6)-methyl substituted fluorescein derivatives |
-
1992
- 1992-03-30 US US07/859,775 patent/US5352803A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-11-06 US US07/973,140 patent/US5359093A/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-03-29 EP EP93908636A patent/EP0635020A1/en not_active Withdrawn
- 1993-03-29 WO PCT/US1993/002905 patent/WO1993020060A1/en not_active Application Discontinuation
- 1993-03-29 CA CA002130197A patent/CA2130197A1/en not_active Abandoned
- 1993-03-29 EP EP99115138A patent/EP0959355B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-29 JP JP51759393A patent/JP3667753B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-04-13 US US08/421,143 patent/US5496925A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-18 US US08/443,834 patent/US5688921A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-18 US US08/444,128 patent/US5691456A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-22 US US08/445,978 patent/US5573904A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-22 US US08/445,962 patent/US5616298A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US5359093A (en) | 1994-10-25 |
EP0635020A4 (en) | 1994-12-06 |
US5691456A (en) | 1997-11-25 |
EP0959355A1 (en) | 1999-11-24 |
JPH07505627A (ja) | 1995-06-22 |
EP0635020A1 (en) | 1995-01-25 |
WO1993020060A1 (en) | 1993-10-14 |
EP0959355B1 (en) | 2003-05-14 |
US5688921A (en) | 1997-11-18 |
US5496925A (en) | 1996-03-05 |
US5616298A (en) | 1997-04-01 |
US5352803A (en) | 1994-10-04 |
US5573904A (en) | 1996-11-12 |
CA2130197A1 (en) | 1993-10-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP3667753B2 (ja) | 5(6)−メチル置換のフルオレスセイン誘導体 | |
US5501987A (en) | Dual analyte immunoassay for methamphetamine and amphetamine | |
US4668640A (en) | Fluorescence polarization immunoassay utilizing substituted carboxyfluoresceins | |
US5391740A (en) | Fluoresence polarization immunoassay | |
US5798276A (en) | Reactive derivatives of sulforhodamine 101 with enhanced hydrolytic stability | |
US4150033A (en) | Reagent suitable for enzyme immuno assay | |
US4510251A (en) | Fluorescent polarization assay for ligands using aminomethylfluorescein derivatives as tracers | |
US5994143A (en) | Polymeric fluorophores enhanced by moieties providing a hydrophobic and conformationally restrictive microenvironment | |
JPS6240662B2 (ja) | ||
JP4990785B2 (ja) | トピラメートに関する免疫アッセイ | |
JP2002516252A (ja) | 特異的結合アッセイのためのビス−ビオチン化合物 | |
JPH0145026B2 (ja) | ||
EP0108399A2 (en) | Substituted carboxyfluoresceins | |
GB2111476A (en) | Substituted carboxy- fluoresceins and their use in fluorescence polarization immunoassay | |
JP4068137B2 (ja) | ビオチニル化した化学発光性標識、結合体、測定法及び測定法キット | |
US5756771A (en) | 5(6)-methyl substituted fluorescein derivatives | |
US5066426A (en) | Fluorescence polarization immunoassay utilizing substituted carboxyfluoresceins | |
US4952691A (en) | Fluorescence polarization immunoassay | |
US20170362579A1 (en) | Conjugates for assays for oxycodone and oxymorphone | |
NZ202613A (en) | N-substituted aminofluorescein derivatives;method for determining ligands by fluorescence polarisation immunoassay | |
CA1340635C (en) | Attachment of compounds to polymeric particles using dication ethers and a kit containing same | |
EP1224467B1 (en) | Protecting alkylating reagents used for quantifying homocysteine | |
JP3022942B2 (ja) | 新規標識カルバマゼピン類似体 | |
CA2031109C (en) | Ligand analogs for immunoassays derived from dicarboxylic acid oxidation products | |
JPH06316599A (ja) | ジフェンヒドラミンおよびその代謝産物の免疫学的測定のための組成物および方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20050301 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20050407 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080415 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090415 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100415 Year of fee payment: 5 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100415 Year of fee payment: 5 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110415 Year of fee payment: 6 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120415 Year of fee payment: 7 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130415 Year of fee payment: 8 |