JP3500384B2 - ヒトにおけるリンパ球結合を仲介する新規な内皮細胞分子 - Google Patents
ヒトにおけるリンパ球結合を仲介する新規な内皮細胞分子Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ＶＡＰ−１と名づ
けられた新規なヒト内皮細胞接着抗原、およびＶＡＰ−
１抗原を認識するモノクローナル抗体、１Ｂ２に向けら
れ、ならびにリンパ球移動で特徴づけられる慢性的な炎
症性のおよび感染の状態の治療におけるかかる分子の用
途に向けられる。
けられた新規なヒト内皮細胞接着抗原、およびＶＡＰ−
１抗原を認識するモノクローナル抗体、１Ｂ２に向けら
れ、ならびにリンパ球移動で特徴づけられる慢性的な炎
症性のおよび感染の状態の治療におけるかかる分子の用
途に向けられる。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】ほと
んどの成熟したリンパ球はたえず血液とリンパ系器官と
のあいだを再循環している（ブッチャー、イー・シー
（Butcher,E.C.）、カレント・トピックス・イン・マイ
クロバイオロジー・アンド・イムノロジー（Curr.Top.M
icrobiol.Immunol.）１２８巻、８５頁（1986年））。
リンパ球は血管内皮細胞を認識しそこに結合することに
よって血液から出ていく。そののち、リンパ球は内皮細
胞間を通って周辺の組織の中へ移動する。リンパ球の往
来（trafficking）により、リンパ球の特性のすべての
もの（repertoire）が身体のいたるところでの免疫反応
に用いられるようになり、また免疫応答の発生および制
御に必要とされる細胞−細胞の相互作用が促進される。
内皮細胞とのリンパ球の接着は、両方の細胞の型上で発
現される相補的な接着分子間の相互作用に依存する（ス
プリンガー、ティー・エー（Springer,T.A.）、ネイチ
ャー（Nature）３４６巻、４２５頁（1990年）；ストー
ルマン、エル・エム（Stoolman,L.M.）、セル（Cell）
５６巻、９０７頁（1989年）；オズボーン、エル（Osbo
rn,L.）、セル６２巻、３頁（1990年）；ポバー（Pobe
r）およびコトラン（Cotran）、トランスプランテーシ
ョン（Transplantation）５０巻、５３７頁（1990
年）；ブッチャー、イー・シー（Butcher,E.C.）、セル
６７巻、１０３３頁（1991年））。正常な状態では、リ
ンパ球は主に高内皮細静脈（high endothelial venule
s）（ＨＥＶ）と呼ばれる、専門化された後毛細管の細
静脈（specialized postcapillary venules）に結合す
る。器官に特異的な方法での末梢リンパ節、粘膜のリン
パ様器官、滑膜および皮膚へのリンパ球の移動を仲介す
る、機能的に別個なリンパ球−ＨＥＶ認識システムが記
載されている（ブッチャー、イー・シーら、ヨーロピア
ン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（Eur.J.Immuno
l.）１０巻、２１０頁（1980年）；ヤルカネン、エス
（Jalkanen,S.）ら、サイエンス（Science）２３３巻、
５５６頁（1986年）；ピッカー、エル・ジェイ（Picke
r,L.J.）ら、ネイチャー３４９巻、７９６頁（１９９１
年））。炎症では内皮細胞が活性化するとその接着分子
の状況が変化し、その活性化は影響される組織への白血
球の流入（leukocyte influx）の規模と型をほぼ決定す
る。このように、内皮細胞分子は局所免疫応答の特徴を
制御するのに重要な要素であり、明らかにリンパ球の往
来および白血球の血管外移動を調節する機構の詳しい理
解は炎症反応を臨床的に操るための新しい手段を提供す
ることができる。
んどの成熟したリンパ球はたえず血液とリンパ系器官と
のあいだを再循環している（ブッチャー、イー・シー
（Butcher,E.C.）、カレント・トピックス・イン・マイ
クロバイオロジー・アンド・イムノロジー（Curr.Top.M
icrobiol.Immunol.）１２８巻、８５頁（1986年））。
リンパ球は血管内皮細胞を認識しそこに結合することに
よって血液から出ていく。そののち、リンパ球は内皮細
胞間を通って周辺の組織の中へ移動する。リンパ球の往
来（trafficking）により、リンパ球の特性のすべての
もの（repertoire）が身体のいたるところでの免疫反応
に用いられるようになり、また免疫応答の発生および制
御に必要とされる細胞−細胞の相互作用が促進される。
内皮細胞とのリンパ球の接着は、両方の細胞の型上で発
現される相補的な接着分子間の相互作用に依存する（ス
プリンガー、ティー・エー（Springer,T.A.）、ネイチ
ャー（Nature）３４６巻、４２５頁（1990年）；ストー
ルマン、エル・エム（Stoolman,L.M.）、セル（Cell）
５６巻、９０７頁（1989年）；オズボーン、エル（Osbo
rn,L.）、セル６２巻、３頁（1990年）；ポバー（Pobe
r）およびコトラン（Cotran）、トランスプランテーシ
ョン（Transplantation）５０巻、５３７頁（1990
年）；ブッチャー、イー・シー（Butcher,E.C.）、セル
６７巻、１０３３頁（1991年））。正常な状態では、リ
ンパ球は主に高内皮細静脈（high endothelial venule
s）（ＨＥＶ）と呼ばれる、専門化された後毛細管の細
静脈（specialized postcapillary venules）に結合す
る。器官に特異的な方法での末梢リンパ節、粘膜のリン
パ様器官、滑膜および皮膚へのリンパ球の移動を仲介す
る、機能的に別個なリンパ球−ＨＥＶ認識システムが記
載されている（ブッチャー、イー・シーら、ヨーロピア
ン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（Eur.J.Immuno
l.）１０巻、２１０頁（1980年）；ヤルカネン、エス
（Jalkanen,S.）ら、サイエンス（Science）２３３巻、
５５６頁（1986年）；ピッカー、エル・ジェイ（Picke
r,L.J.）ら、ネイチャー３４９巻、７９６頁（１９９１
年））。炎症では内皮細胞が活性化するとその接着分子
の状況が変化し、その活性化は影響される組織への白血
球の流入（leukocyte influx）の規模と型をほぼ決定す
る。このように、内皮細胞分子は局所免疫応答の特徴を
制御するのに重要な要素であり、明らかにリンパ球の往
来および白血球の血管外移動を調節する機構の詳しい理
解は炎症反応を臨床的に操るための新しい手段を提供す
ることができる。
【０００３】ヒトにおいて組織選択的リンパ球ホーミン
グ（homing）を仲介する内皮細胞リガンドはほとんど知
られていないので、かかる分子を同定する必要がある。
グ（homing）を仲介する内皮細胞リガンドはほとんど知
られていないので、かかる分子を同定する必要がある。
【０００４】本発明者らは１９９１年６月のヨーロピア
ン・フェデレーション・オブ・イムノロジカル・ソサイ
エティズ（European Federation of Immunological Soc
ieties）のミーティングでの要約に、高内皮細静脈との
リンパ球結合に関係する、以前に知られていない内皮細
胞抗原の存在を示すいくつかの予備の知見を紹介した
（サルミ（Salmi）ら、ＥＦＩＳ 第１１回 ミーティ
ング・アブストラクツ（EFIS 11th Meeting Abstract
s）、２１〜１２頁；１９９１年）。
ン・フェデレーション・オブ・イムノロジカル・ソサイ
エティズ（European Federation of Immunological Soc
ieties）のミーティングでの要約に、高内皮細静脈との
リンパ球結合に関係する、以前に知られていない内皮細
胞抗原の存在を示すいくつかの予備の知見を紹介した
（サルミ（Salmi）ら、ＥＦＩＳ 第１１回 ミーティ
ング・アブストラクツ（EFIS 11th Meeting Abstract
s）、２１〜１２頁；１９９１年）。
【０００５】
【課題を解決するための手段】炎症を抑制することの重
要性を認識し、組織選択性リンパ球ホーミングを仲介す
る内皮細胞リガンドを理解することの必要性を認識し
て、本発明者らはヒト滑膜管（synovial vessel）によ
り発現されるような分子を同定しようと試みた。これら
の研究により、ヒトにおけるリンパ球結合を仲介する新
規な内皮細胞分子、ＶＡＰ−１を同定し、それに対する
モノクローナル抗体を産生した。これらの抗体は、ＶＡ
Ｐ−１レベルの量的および質的な評価の分析において、
およびその治療が必要な患者でのＶＡＰ−１の作用と拮
抗するように計画された臨床的な治療において有用であ
る。
要性を認識し、組織選択性リンパ球ホーミングを仲介す
る内皮細胞リガンドを理解することの必要性を認識し
て、本発明者らはヒト滑膜管（synovial vessel）によ
り発現されるような分子を同定しようと試みた。これら
の研究により、ヒトにおけるリンパ球結合を仲介する新
規な内皮細胞分子、ＶＡＰ−１を同定し、それに対する
モノクローナル抗体を産生した。これらの抗体は、ＶＡ
Ｐ−１レベルの量的および質的な評価の分析において、
およびその治療が必要な患者でのＶＡＰ−１の作用と拮
抗するように計画された臨床的な治療において有用であ
る。
【０００６】したがって、本発明は第一に、ヒトまたは
動物の宿主におけるＶＡＰ−１タンパク質と結びつく天
然夾雑物を本質的に含まない、ＶＡＰ−１タンパク質に
向けられる。
動物の宿主におけるＶＡＰ−１タンパク質と結びつく天
然夾雑物を本質的に含まない、ＶＡＰ−１タンパク質に
向けられる。
【０００７】さらに本発明は単離されたＶＡＰ−１タン
パク質に向けられる。
パク質に向けられる。
【０００８】さらに本発明は、ＶＡＰ−１タンパク質に
対する抗体、とくにモノクローナル抗体、およびかかる
抗体を含む組成物に向けられる。モノクローナル抗体１
Ｂ２は、この抗体を産生するハイブリドーマ細胞系（Ｄ
ＳＭ ＡＣＣ２０４１）と同様に、本発明によってえら
れる。
対する抗体、とくにモノクローナル抗体、およびかかる
抗体を含む組成物に向けられる。モノクローナル抗体１
Ｂ２は、この抗体を産生するハイブリドーマ細胞系（Ｄ
ＳＭ ＡＣＣ２０４１）と同様に、本発明によってえら
れる。
【０００９】さらに本発明は、ＶＡＰ−１が仲介する内
皮細胞のリンパ球との結合に拮抗させる方法に向けられ
る。この方法は、ＶＡＰ−１が仲介するリンパ球−内皮
細胞接着反応を、かかる反応に関与するＶＡＰ−１内皮
細胞部位をブロックするのに充分な量のＶＡＰ−１結合
合成物（VAP-1 binding compound）を提供することによ
って阻害することからなり、とくにその部位ではリンパ
球−内皮細胞接着反応が、炎症（慢性または急性）、関
節炎、リウマチ様関節炎、感染症、皮膚疾患、炎症性腸
疾患および自己免疫疾患などの疾患と結びつく。
皮細胞のリンパ球との結合に拮抗させる方法に向けられ
る。この方法は、ＶＡＰ−１が仲介するリンパ球−内皮
細胞接着反応を、かかる反応に関与するＶＡＰ−１内皮
細胞部位をブロックするのに充分な量のＶＡＰ−１結合
合成物（VAP-1 binding compound）を提供することによ
って阻害することからなり、とくにその部位ではリンパ
球−内皮細胞接着反応が、炎症（慢性または急性）、関
節炎、リウマチ様関節炎、感染症、皮膚疾患、炎症性腸
疾患および自己免疫疾患などの疾患と結びつく。
【００１０】
【発明の実施の形態】白血球表面の受容体と血管内皮細
胞上のそれらのリガンドとの相互作用は、炎症部位への
白血球の血管外遊出と同様、白血球の血液と種々のリン
パ器官とのあいだの往来を臨界的に制御する。我々はこ
こに、モノクローナル抗体１Ｂ２で定義される新規な９
０ｋＤヒト内皮細胞接着分子（ＶＡＰ−１）について記
載する。ＶＡＰ−１は滑膜、末梢リンパ節および扁桃の
高内皮細静脈（ＨＥＶ）上に優先的に発現され、１Ｂ２
は粘膜部位でのＨＥＶとは対照的に、これらの組織のＨ
ＥＶへのリンパ球結合を著しく阻害する。さらに、リン
パ球は１Ｂ２を阻害しうる方法でイムノアフィニティー
で単離されたＶＡＰ−１と結合する。発現パターン、分
子量および機能的性質によってリンパ球に対する新規な
内皮リガンドとしてＶＡＰ−１が定義される。我々はＶ
ＡＰ−１はヒトにおけるリンパ球往来に直接関係する新
規な血管分子であると断定する。
胞上のそれらのリガンドとの相互作用は、炎症部位への
白血球の血管外遊出と同様、白血球の血液と種々のリン
パ器官とのあいだの往来を臨界的に制御する。我々はこ
こに、モノクローナル抗体１Ｂ２で定義される新規な９
０ｋＤヒト内皮細胞接着分子（ＶＡＰ−１）について記
載する。ＶＡＰ−１は滑膜、末梢リンパ節および扁桃の
高内皮細静脈（ＨＥＶ）上に優先的に発現され、１Ｂ２
は粘膜部位でのＨＥＶとは対照的に、これらの組織のＨ
ＥＶへのリンパ球結合を著しく阻害する。さらに、リン
パ球は１Ｂ２を阻害しうる方法でイムノアフィニティー
で単離されたＶＡＰ−１と結合する。発現パターン、分
子量および機能的性質によってリンパ球に対する新規な
内皮リガンドとしてＶＡＰ−１が定義される。我々はＶ
ＡＰ−１はヒトにおけるリンパ球往来に直接関係する新
規な血管分子であると断定する。
【００１１】抗体の産生
ＶＡＰ−１タンパク質の初期の同定のために、滑膜管に
対するモノクローナル抗体を、ネズミなどの適当な動物
をヒト滑膜の間質要素で免疫することによって産生し
た。かかるヒト滑膜の間質要素は当該技術分野において
知られている方法を用いてえることができる。滑膜の間
質は滑膜組織からリンパ球を除去することによって単離
することができる。滑膜組織を細かく刻み、刻んだ組織
をステンレススチールのスクリーンによって押しつけ
た。間質要素はスクリーンの上表部から集めた。
対するモノクローナル抗体を、ネズミなどの適当な動物
をヒト滑膜の間質要素で免疫することによって産生し
た。かかるヒト滑膜の間質要素は当該技術分野において
知られている方法を用いてえることができる。滑膜の間
質は滑膜組織からリンパ球を除去することによって単離
することができる。滑膜組織を細かく刻み、刻んだ組織
をステンレススチールのスクリーンによって押しつけ
た。間質要素はスクリーンの上表部から集めた。
【００１２】好ましくは免疫原は、たとえば不完全フロ
イントアジュバントなどのアジュバントと一緒に投与す
るが、いかなる適当なアジュバントを用いてもよい。免
疫原およびアジュバントは抗体合成を誘導するであろう
いかなる方式またはプロトコルによっても注射しうる。
たとえば、免疫原（注射あたり約１μｇのＶＡＰ−１抗
原を含有する滑膜間質要素）を１週間おきに３回、特異
性病原体（specific-pathogen）のないＢａｌｂ／ｃマ
ウスの足蹠に注射することによって免疫応答を誘導する
であろう。
イントアジュバントなどのアジュバントと一緒に投与す
るが、いかなる適当なアジュバントを用いてもよい。免
疫原およびアジュバントは抗体合成を誘導するであろう
いかなる方式またはプロトコルによっても注射しうる。
たとえば、免疫原（注射あたり約１μｇのＶＡＰ−１抗
原を含有する滑膜間質要素）を１週間おきに３回、特異
性病原体（specific-pathogen）のないＢａｌｂ／ｃマ
ウスの足蹠に注射することによって免疫応答を誘導する
であろう。
【００１３】膝窩リンパ節からのリンパ球を、細かく刻
んだリンパ節をステンレススチールのスクリーンにより
押しつけ、放出されたリンパ球をフローから集めること
により、前述のように当該技術分野で知られている方法
を用いることによって単離するが、ついで標準のプロト
コルを用いて非分泌のＮＳ−１マウスメラノーマ細胞
（ＡＴＣＣより入手可能、Ｎｏ．ＴＩＢ １８）と融合
する。ハイブリドーマは凍結切片のイムノパーオキシダ
ーゼ染色などのいかなる適当な方法を用いてスクリーニ
ングしてもよい。滑膜の血管内皮と反応する抗体を産生
する１つのハイブリドーマ（１Ｂ２、サブクラスＩｇＧ
１）を、限界希釈で２回クローン化し、さらなる分析の
ために選択した。ｍＡｂ １Ｂ２によって認識された抗
原はＶＡＰ−１（血管接着タンパク質（Vascular Adhes
ion Protein）−１として）と名づけた。
んだリンパ節をステンレススチールのスクリーンにより
押しつけ、放出されたリンパ球をフローから集めること
により、前述のように当該技術分野で知られている方法
を用いることによって単離するが、ついで標準のプロト
コルを用いて非分泌のＮＳ−１マウスメラノーマ細胞
（ＡＴＣＣより入手可能、Ｎｏ．ＴＩＢ １８）と融合
する。ハイブリドーマは凍結切片のイムノパーオキシダ
ーゼ染色などのいかなる適当な方法を用いてスクリーニ
ングしてもよい。滑膜の血管内皮と反応する抗体を産生
する１つのハイブリドーマ（１Ｂ２、サブクラスＩｇＧ
１）を、限界希釈で２回クローン化し、さらなる分析の
ために選択した。ｍＡｂ １Ｂ２によって認識された抗
原はＶＡＰ−１（血管接着タンパク質（Vascular Adhes
ion Protein）−１として）と名づけた。
【００１４】ＶＡＰ−１結合タンパク質として本発明の
方法に用いられる抗体は、好ましくは単一特異性抗体、
すなわちＶＡＰ−１のみ、またはその抗原性断片に対し
て特異性を有する抗体ある。単一特異性抗体はポリクロ
ーナルであってもモノクローナルであってもよい。
方法に用いられる抗体は、好ましくは単一特異性抗体、
すなわちＶＡＰ−１のみ、またはその抗原性断片に対し
て特異性を有する抗体ある。単一特異性抗体はポリクロ
ーナルであってもモノクローナルであってもよい。
【００１５】ポリクローナル抗体は適当な動物にＶＡＰ
−１の実質的に純粋な調製物を注射し、適当な間隔で１
回またはそれ以上のブースター注射によって調製するこ
とができる。
−１の実質的に純粋な調製物を注射し、適当な間隔で１
回またはそれ以上のブースター注射によって調製するこ
とができる。
【００１６】しかしながら、本発明の方法においてはＶ
ＡＰ−１抗原に対して作成されたモノクローナル抗体
（またはＦａｂ′、Ｆ（ａｂ′）2もしくはＦｖ断片な
どの生物学的に活性なそれらの誘導体）を用いることが
好ましい。モノクローナル抗体はいかなる適当なソース
のものでもよく、したがってたとえばネズミまたはヒト
モノクローナル抗体から選択することができる。
ＡＰ−１抗原に対して作成されたモノクローナル抗体
（またはＦａｂ′、Ｆ（ａｂ′）2もしくはＦｖ断片な
どの生物学的に活性なそれらの誘導体）を用いることが
好ましい。モノクローナル抗体はいかなる適当なソース
のものでもよく、したがってたとえばネズミまたはヒト
モノクローナル抗体から選択することができる。
【００１７】抗体は、その抗体または生物学的に活性な
その誘導体をコードするＤＮＡ配列を適当な細胞、たと
えば微生物の、植物の、動物のまたはヒトの細胞でクロ
ーン化し、問題の抗体または生物学的に活性なその誘導
体の産生を導く状況下で細胞を培養し、培養物から抗体
または生物学的に活性なその誘導体を回収することによ
っても産生することができる。
その誘導体をコードするＤＮＡ配列を適当な細胞、たと
えば微生物の、植物の、動物のまたはヒトの細胞でクロ
ーン化し、問題の抗体または生物学的に活性なその誘導
体の産生を導く状況下で細胞を培養し、培養物から抗体
または生物学的に活性なその誘導体を回収することによ
っても産生することができる。
【００１８】試薬に用いられる抗体は、方法の精度を向
上させるために好ましくは実質的に純粋な形であるべき
である。
上させるために好ましくは実質的に純粋な形であるべき
である。
【００１９】ＶＡＰ−１の特性
単離されたＶＡＰ−１は還元条件下で９０ｋＤ、非還元
条件下では１００ｋＤの分子量を有する。
条件下では１００ｋＤの分子量を有する。
【００２０】ＶＡＰ−１抗原を単離するために、リンパ
球を除去した扁桃抽出物がＶＡＰ−１タンパク質の好ま
しいソースである。これらの抽出物は細かく刻んだ組織
をステンレススチールのスクリーンにより押しつけるこ
とによって扁桃組織からリンパ球を除去することによっ
て調製される。間質要素はスクリーンの上表部から集め
られる。しかしながら、例示した手順が最終的な単離の
ためＶＡＰ−１の１Ｂ２ ｍＡｂへのアフィニティーに
依存するので、ＶＡＰ−１を発現するいかなる細胞の型
でも以下の手順に用いることができる。
球を除去した扁桃抽出物がＶＡＰ−１タンパク質の好ま
しいソースである。これらの抽出物は細かく刻んだ組織
をステンレススチールのスクリーンにより押しつけるこ
とによって扁桃組織からリンパ球を除去することによっ
て調製される。間質要素はスクリーンの上表部から集め
られる。しかしながら、例示した手順が最終的な単離の
ためＶＡＰ−１の１Ｂ２ ｍＡｂへのアフィニティーに
依存するので、ＶＡＰ−１を発現するいかなる細胞の型
でも以下の手順に用いることができる。
【００２１】すべての工程は冷却温度（約４℃）で行な
われるべきである。細胞は１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０
ｍＭ トリス塩基、０．１５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１％Ｎ
Ｐ４０、１ｍＭ ＰＭＳＦおよび１％アプロチニンを含
む緩衝液などのタンパク質分解を阻害するための薬剤を
含む緩衝液中でゆるやかに（たとえば４℃で１晩かけ
て）溶解させる。ついでこのような抽出物は好ましく
は、たとえば、１００００ｇで３０分間、穏やかに遠心
することにより細胞溶解デブリ（cell lysis debris）
が取り除かれる。つぎに上清はアフィニティー薬剤とし
て、連続して、（１）正常マウス血清、（２）非特異的
ＩｇＧ１ ｍＡｂ（１Ｅ１２または市販されている非特
異的ＩｇＧ１ ｍＡｂのいずれかなど）および（３）１
Ｂ２ ｍＡｂを備える一連のアフィニティーカラムに付
される。１Ｂ２ ｍＡｂカラムに結合した材料は５０ｍ
Ｍトリエタノールアミンを用いて溶出され、さらに凍結
乾燥される。このアプローチを用いてＶＡＰ−１は扁桃
間質から単離される。当該技術分野において知られてい
る他の同等の方法を用いてもよい。
われるべきである。細胞は１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０
ｍＭ トリス塩基、０．１５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１％Ｎ
Ｐ４０、１ｍＭ ＰＭＳＦおよび１％アプロチニンを含
む緩衝液などのタンパク質分解を阻害するための薬剤を
含む緩衝液中でゆるやかに（たとえば４℃で１晩かけ
て）溶解させる。ついでこのような抽出物は好ましく
は、たとえば、１００００ｇで３０分間、穏やかに遠心
することにより細胞溶解デブリ（cell lysis debris）
が取り除かれる。つぎに上清はアフィニティー薬剤とし
て、連続して、（１）正常マウス血清、（２）非特異的
ＩｇＧ１ ｍＡｂ（１Ｅ１２または市販されている非特
異的ＩｇＧ１ ｍＡｂのいずれかなど）および（３）１
Ｂ２ ｍＡｂを備える一連のアフィニティーカラムに付
される。１Ｂ２ ｍＡｂカラムに結合した材料は５０ｍ
Ｍトリエタノールアミンを用いて溶出され、さらに凍結
乾燥される。このアプローチを用いてＶＡＰ−１は扁桃
間質から単離される。当該技術分野において知られてい
る他の同等の方法を用いてもよい。
【００２２】モノクローナル抗体１Ｂ２を用いて検出す
ると、細胞内において、ＶＡＰ−１は炎症をおこした滑
膜のＨＥＶ様細静脈に豊富に存在する。ＶＡＰ−１は浸
潤白血球やいずれの滑膜間質の結合組織成分にも存在し
ない。末梢リンパ節および扁桃においてはＶＡＰ−１は
ＨＥＶの大部分に存在しているようである。ＶＡＰ−１
は内皮細胞の内腔側に多く局在する。内皮細胞の細胞質
中ならびに非内腔表面においてもＶＡＰ−１の顆粒染色
が見られる。
ると、細胞内において、ＶＡＰ−１は炎症をおこした滑
膜のＨＥＶ様細静脈に豊富に存在する。ＶＡＰ−１は浸
潤白血球やいずれの滑膜間質の結合組織成分にも存在し
ない。末梢リンパ節および扁桃においてはＶＡＰ−１は
ＨＥＶの大部分に存在しているようである。ＶＡＰ−１
は内皮細胞の内腔側に多く局在する。内皮細胞の細胞質
中ならびに非内腔表面においてもＶＡＰ−１の顆粒染色
が見られる。
【００２３】とくに扁桃においては、異なるＨＥＶ間で
ＶＡＰ−１レベルは大きく変動し、個々のＨＥＶ（典型
的な丸みを帯びた形態を伴う）で完全にＶＡＰ−１を欠
くものはほとんどない。消化管の虫垂および固有層にお
いてはかすかに染色される細静脈さえもほとんど存在し
ないようであった。上胚中心における樹状様細胞上なら
びに動脈、静脈および腸壁の平滑筋細胞上に、ＶＡＰ−
１の微弱な発現が見出される。
ＶＡＰ−１レベルは大きく変動し、個々のＨＥＶ（典型
的な丸みを帯びた形態を伴う）で完全にＶＡＰ−１を欠
くものはほとんどない。消化管の虫垂および固有層にお
いてはかすかに染色される細静脈さえもほとんど存在し
ないようであった。上胚中心における樹状様細胞上なら
びに動脈、静脈および腸壁の平滑筋細胞上に、ＶＡＰ−
１の微弱な発現が見出される。
【００２４】対照的に、ＶＡＰ−１はより大きい血管の
内腔表面には実際上存在しない。組織切片中の白血球に
加えて、以下の細胞はＶＡＰ−１を発現していないよう
である：末梢血リンパ球、単球、ＮＫ細胞、顆粒球およ
び単離された扁桃白血球、Ｔ−リンパ芽球様細胞系ＣＣ
ＲＦ−ＣＥＭ（ＣＣＬ１１９、ＡＴＣＣ）；Ｂ−リンパ
芽球様細胞系ＫＣＡおよびＩＢＷ−４（スタンフォード
大学、イー・エングレマン（E.Engleman）からもとは入
手した、ＥＢＶで形質転換されたＢ細胞系）、単球性細
胞系Ｕ９３７（ＣＲＬ１５９３、ＡＴＣＣ）；ならびに
白血病細胞系ＫＧ−１（ＣＣＬ２４６、ＡＴＣＣ）；Ｋ
Ｇ−１ａ（ＣＣＬ２４６．１、ＡＴＣＣ）およびＫ５６
２（ＣＣＬ２４３、ＡＴＣＣ）；内皮細胞系ＥａＨｙ−
９２６（カルシノーマと内皮細胞との間のハイブリドー
マ細胞系、エジェル（Edgell）ら、プロシーディングズ
・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・
ユー・エス・エー（Proc.Natl.Acad.Sci.USA）８０巻：
３７２４頁（1983年）；ならびに平滑筋細胞、線維芽細
胞および角化細胞の初代培養、および上皮様ＨｅＬａ細
胞系（ＣＣＬ２、ＡＴＣＣ）。ジャフェ（Jaffe）（ジ
ャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション
（J.Clin.Invest.）５２巻、２７４５頁（1973年））の
方法によって単離されたヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥ
Ｃ）は基礎的にもＩＬ−１（２０、１００Ｕ／ｍｌ）、
ＴＮＦ（２００Ｕ／ｍｌ）またはＬＰＳ（０．１、１．
０μｇ／ｍｌ）を用いる４時間または２０時間処理後で
もＶＡＰ−１を発現しなかった。
内腔表面には実際上存在しない。組織切片中の白血球に
加えて、以下の細胞はＶＡＰ−１を発現していないよう
である：末梢血リンパ球、単球、ＮＫ細胞、顆粒球およ
び単離された扁桃白血球、Ｔ−リンパ芽球様細胞系ＣＣ
ＲＦ−ＣＥＭ（ＣＣＬ１１９、ＡＴＣＣ）；Ｂ−リンパ
芽球様細胞系ＫＣＡおよびＩＢＷ−４（スタンフォード
大学、イー・エングレマン（E.Engleman）からもとは入
手した、ＥＢＶで形質転換されたＢ細胞系）、単球性細
胞系Ｕ９３７（ＣＲＬ１５９３、ＡＴＣＣ）；ならびに
白血病細胞系ＫＧ−１（ＣＣＬ２４６、ＡＴＣＣ）；Ｋ
Ｇ−１ａ（ＣＣＬ２４６．１、ＡＴＣＣ）およびＫ５６
２（ＣＣＬ２４３、ＡＴＣＣ）；内皮細胞系ＥａＨｙ−
９２６（カルシノーマと内皮細胞との間のハイブリドー
マ細胞系、エジェル（Edgell）ら、プロシーディングズ
・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・
ユー・エス・エー（Proc.Natl.Acad.Sci.USA）８０巻：
３７２４頁（1983年）；ならびに平滑筋細胞、線維芽細
胞および角化細胞の初代培養、および上皮様ＨｅＬａ細
胞系（ＣＣＬ２、ＡＴＣＣ）。ジャフェ（Jaffe）（ジ
ャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション
（J.Clin.Invest.）５２巻、２７４５頁（1973年））の
方法によって単離されたヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥ
Ｃ）は基礎的にもＩＬ−１（２０、１００Ｕ／ｍｌ）、
ＴＮＦ（２００Ｕ／ｍｌ）またはＬＰＳ（０．１、１．
０μｇ／ｍｌ）を用いる４時間または２０時間処理後で
もＶＡＰ−１を発現しなかった。
【００２５】ＶＡＰ−１と、白血球結合を仲介する既知
の内皮細胞分子とを比較することにより、数種の相違が
明らかになっている。細胞間接着分子−１および−２
（ＩＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−２）、血管細胞接着分
子−１（ＶＣＡＭ−１）、Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ−
１）およびＰ−セレクチン（ＣＤ６２、ＰＡＤＧＥＭ、
ＧＭＰ１４０）は、基礎的にもまたは炎症性メディエー
タによって誘導したあとでもすべてＨＵＶＥＣ上で発現
する（スプリンガー、ティー・エー、ネイチャー３４６
巻、４２５頁（1990年）；ストールマン、エル・エム、
セル５６巻、９０７頁（1989年）；オズボーン、エル、
セル６２巻、３頁（1990年）；ポバーおよびコトラン、
トランスプランテーション５０巻、５３７頁（1990
年）；ブッチャー、イー・シー、セル６７巻、１０３３
頁（1991年）；デ・フォーゲロールス、エー・アール
（de Fougerolles,A.R.）ら、ジャーナル・オブ・エク
スペリメンタル・メディシン（J.Exp.Med.）、１７４
巻、２５３頁（1991年）；オズボーン、エルら、セル５
９巻、１２０３頁（1989年）；ベビラクア、エム・ピー
（Bevilacqua,M.P.）ら、プロシーディングス・オブ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス８４巻、９
２３８頁（1987年）；マックエバー、アール・ピー（Mc
Ever,R.P.）ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・イン
ベスティゲーション（J.Clin.Invet.）８４巻、９２頁
（1989年）；ハットリ、アール（Hattori,R.）ら、ジャ
ーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスリー（J.Biol.C
hem.）２６４巻、７７６８頁（1989年）；ウェリコム、
エス・エム（Wellicome,S.M.）ら、ジャーナル・オブ・
イムノロジー（J.Immunol.）１４４巻、２５５８頁（19
90年）；ポバー、ジェイ・エス（Pober,J.S.）ら、ジャ
ーナル・オブ・イムノロジー１３７巻、１８９３頁（19
86年）；ダスティン、エム・エル（Dustin,M.L.）ら、
ジャーナル・オブ・イムノロジー１３７巻、２４５頁
（1986年））。対照的にＶＡＰ−１はＨＵＶＥＣの表面
上または細胞質中に、内在的に発現しておらずまたＩＬ
−１、ＴＮＦａまたはＬＰＳ処理により誘導されること
もない。これらの分子の組織分布は明瞭に異なり、さら
に扁桃の平行切片（parallel sections）について分析
したばあいも分布は異なる（データは示さない）。ＩＣ
ＡＭはほとんどの大血管および小血管ならびにある白血
球の内腔表面を染色する（デ・フォーゲロールス、エー
・アールら、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メディシン、１７４巻、２５３頁（1991年）；ダスティ
ン、エム・エルら、ジャーナル・オブ・イムノロジー１
３７巻、２４５頁（1986年））。他方、ＶＣＡＭ−１お
よびＥＬＡＭ−１は炎症をおこした組織内のいくらかの
細静脈を染色するのみである（ライス、ジー・イー（Ri
ce,G.E.）ら、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル
・メディシン１７１巻、１３６９頁（1990年）；ライ
ス、ジー・イーら、アメリカン・ジャーナル・オブ・パ
ソロジー（Am.J.Pathol.）１３８巻、３８５頁（1991
年）；コトラン、アール・エス（Cotram,R.S.）ら、ジ
ャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン１６
４巻、６６１頁（1986年））。これらとは異なり、ＶＡ
Ｐ−１は大半のＨＥＶの非粘膜部位で強く発現してお
り、すべての調べられた白血球および細胞系には存在し
ない。既知の接着分子の分子量もまた、ＩＣＡＭ−１を
例外としてＶＡＰ−１のものと明瞭に異なる（ＩＣＡＭ
−２は６０ｋＤ、ＶＣＡＭ−１は１１０ｋＤ、Ｅ−セレ
クチンは１１５ｋＤならびにＰ−セレクチンは１４０ｋ
Ｄの分子である、ストールマン、エル・エム、セル５６
巻：９０７頁（1989年）；オズボーン、エル、セル６２
巻：３頁（1990年）；ならびにデ・フォーゲロールス、
エー・アールら、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタ
ル・メディシン１７４巻、２５３頁（1991年））。さら
に、ＶＡＰ−１は主としてリンパ球結合に関係し、一方
ＩＣＡＭ、Ｅ−およびＰ−セレクチンは多形核白血球の
接着をも効率よく仲介する（スプリンガー、ティー・エ
ー、ネイチャー３４６巻、４２５頁（1990年）；ストー
ルマン、エル・エム、セル５６巻、９０７頁（1989
年）；オズボーン、エル、セル６２巻、３頁（1990
年）；ポバーおよびコトラン、トランスプランテーショ
ン５０巻、５３７頁（1990年）；ブッチャー、イー・シ
ー、セル６７巻、１０３３頁（1991年））。
の内皮細胞分子とを比較することにより、数種の相違が
明らかになっている。細胞間接着分子−１および−２
（ＩＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−２）、血管細胞接着分
子−１（ＶＣＡＭ−１）、Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ−
１）およびＰ−セレクチン（ＣＤ６２、ＰＡＤＧＥＭ、
ＧＭＰ１４０）は、基礎的にもまたは炎症性メディエー
タによって誘導したあとでもすべてＨＵＶＥＣ上で発現
する（スプリンガー、ティー・エー、ネイチャー３４６
巻、４２５頁（1990年）；ストールマン、エル・エム、
セル５６巻、９０７頁（1989年）；オズボーン、エル、
セル６２巻、３頁（1990年）；ポバーおよびコトラン、
トランスプランテーション５０巻、５３７頁（1990
年）；ブッチャー、イー・シー、セル６７巻、１０３３
頁（1991年）；デ・フォーゲロールス、エー・アール
（de Fougerolles,A.R.）ら、ジャーナル・オブ・エク
スペリメンタル・メディシン（J.Exp.Med.）、１７４
巻、２５３頁（1991年）；オズボーン、エルら、セル５
９巻、１２０３頁（1989年）；ベビラクア、エム・ピー
（Bevilacqua,M.P.）ら、プロシーディングス・オブ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス８４巻、９
２３８頁（1987年）；マックエバー、アール・ピー（Mc
Ever,R.P.）ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・イン
ベスティゲーション（J.Clin.Invet.）８４巻、９２頁
（1989年）；ハットリ、アール（Hattori,R.）ら、ジャ
ーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスリー（J.Biol.C
hem.）２６４巻、７７６８頁（1989年）；ウェリコム、
エス・エム（Wellicome,S.M.）ら、ジャーナル・オブ・
イムノロジー（J.Immunol.）１４４巻、２５５８頁（19
90年）；ポバー、ジェイ・エス（Pober,J.S.）ら、ジャ
ーナル・オブ・イムノロジー１３７巻、１８９３頁（19
86年）；ダスティン、エム・エル（Dustin,M.L.）ら、
ジャーナル・オブ・イムノロジー１３７巻、２４５頁
（1986年））。対照的にＶＡＰ−１はＨＵＶＥＣの表面
上または細胞質中に、内在的に発現しておらずまたＩＬ
−１、ＴＮＦａまたはＬＰＳ処理により誘導されること
もない。これらの分子の組織分布は明瞭に異なり、さら
に扁桃の平行切片（parallel sections）について分析
したばあいも分布は異なる（データは示さない）。ＩＣ
ＡＭはほとんどの大血管および小血管ならびにある白血
球の内腔表面を染色する（デ・フォーゲロールス、エー
・アールら、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メディシン、１７４巻、２５３頁（1991年）；ダスティ
ン、エム・エルら、ジャーナル・オブ・イムノロジー１
３７巻、２４５頁（1986年））。他方、ＶＣＡＭ−１お
よびＥＬＡＭ−１は炎症をおこした組織内のいくらかの
細静脈を染色するのみである（ライス、ジー・イー（Ri
ce,G.E.）ら、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル
・メディシン１７１巻、１３６９頁（1990年）；ライ
ス、ジー・イーら、アメリカン・ジャーナル・オブ・パ
ソロジー（Am.J.Pathol.）１３８巻、３８５頁（1991
年）；コトラン、アール・エス（Cotram,R.S.）ら、ジ
ャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン１６
４巻、６６１頁（1986年））。これらとは異なり、ＶＡ
Ｐ−１は大半のＨＥＶの非粘膜部位で強く発現してお
り、すべての調べられた白血球および細胞系には存在し
ない。既知の接着分子の分子量もまた、ＩＣＡＭ−１を
例外としてＶＡＰ−１のものと明瞭に異なる（ＩＣＡＭ
−２は６０ｋＤ、ＶＣＡＭ−１は１１０ｋＤ、Ｅ−セレ
クチンは１１５ｋＤならびにＰ−セレクチンは１４０ｋ
Ｄの分子である、ストールマン、エル・エム、セル５６
巻：９０７頁（1989年）；オズボーン、エル、セル６２
巻：３頁（1990年）；ならびにデ・フォーゲロールス、
エー・アールら、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタ
ル・メディシン１７４巻、２５３頁（1991年））。さら
に、ＶＡＰ−１は主としてリンパ球結合に関係し、一方
ＩＣＡＭ、Ｅ−およびＰ−セレクチンは多形核白血球の
接着をも効率よく仲介する（スプリンガー、ティー・エ
ー、ネイチャー３４６巻、４２５頁（1990年）；ストー
ルマン、エル・エム、セル５６巻、９０７頁（1989
年）；オズボーン、エル、セル６２巻、３頁（1990
年）；ポバーおよびコトラン、トランスプランテーショ
ン５０巻、５３７頁（1990年）；ブッチャー、イー・シ
ー、セル６７巻、１０３３頁（1991年））。
【００２６】ヒトにおいてリンパ球結合に関係しかつＨ
ＵＶＥＣ上で発現されない、これまでに記載された唯一
の内皮接着分子は、ＭＥＣＡ−７９として定義された抗
原である（バーグ、イー・エル（Berg,E.L.）ら、ジャ
ーナル・オブ・セル・バイオロジー（J.Cell Biol.）１
１４巻、３４３頁（1991年））。しかしながらそれは、
末梢リンパ節の組織特異的なアドレッシン（addressi
n）である。さらにＶＡＰ−１は、すべてのＭＥＣＡ−
７９陽性細静脈で共発現（co-express）されておらず、
またｍＡｂ １Ｂ２は精製されたＭＥＣＡ−７９抗原を
認識しない。
ＵＶＥＣ上で発現されない、これまでに記載された唯一
の内皮接着分子は、ＭＥＣＡ−７９として定義された抗
原である（バーグ、イー・エル（Berg,E.L.）ら、ジャ
ーナル・オブ・セル・バイオロジー（J.Cell Biol.）１
１４巻、３４３頁（1991年））。しかしながらそれは、
末梢リンパ節の組織特異的なアドレッシン（addressi
n）である。さらにＶＡＰ−１は、すべてのＭＥＣＡ−
７９陽性細静脈で共発現（co-express）されておらず、
またｍＡｂ １Ｂ２は精製されたＭＥＣＡ−７９抗原を
認識しない。
【００２７】したがって、ＶＡＰ−１の発現パターン、
機能および分子量から、ＶＡＰ−１がこれまでに定義さ
れたリンパ球結合に関係する内皮性分子のいずれとも同
一ではないことならびにインビボでのＶＡＰ−１発現の
レベルが炎症の程度に相関することが示される。これら
の結果は、ＶＡＰ−１がヒトにおける生理的なリンパ球
の再循環を理解する上で意味があり、また組織選択的な
リンパ球のホーミングの分子機構を詳細に分析するため
にとりわけ価値がある。
機能および分子量から、ＶＡＰ−１がこれまでに定義さ
れたリンパ球結合に関係する内皮性分子のいずれとも同
一ではないことならびにインビボでのＶＡＰ−１発現の
レベルが炎症の程度に相関することが示される。これら
の結果は、ＶＡＰ−１がヒトにおける生理的なリンパ球
の再循環を理解する上で意味があり、また組織選択的な
リンパ球のホーミングの分子機構を詳細に分析するため
にとりわけ価値がある。
【００２８】ＶＡＰ−１およびＶＡＰ−１結合合成物の
用途 本発明は、人体または動物体からとった試料中のＶＡＰ
−１タンパク質およびＶＡＰ−１陽性細胞を検出するた
めの診断用試薬に適用してもよい。このような試薬は、
ＶＡＰ−１タンパク質と反応する抗体または該抗体のＶ
ＡＰ−１と反応する断片であってよく、ラベルされたも
の、所望により単離されたＶＡＰ−１または表面上にＶ
ＡＰ−１を発現する細胞との抗体の結合を検出すること
を可能とする物質を用いてラベルされたものであってよ
い。このような診断用組成物はキットに備えられていて
もよく、このようなキットは独立した容器に、（ａ）Ｖ
ＡＰ−１と反応する抗体、または該抗体の生物学的に活
性な誘導体、好ましくはＶＡＰ−１抗原との抗体の結合
を検出することを可能とする物質を用いてラベルされた
もの：および（ｂ）分析結果を評価するための標準を提
供するための、精製されたＶＡＰ−１タンパク質を備え
ていてもよい。
用途 本発明は、人体または動物体からとった試料中のＶＡＰ
−１タンパク質およびＶＡＰ−１陽性細胞を検出するた
めの診断用試薬に適用してもよい。このような試薬は、
ＶＡＰ−１タンパク質と反応する抗体または該抗体のＶ
ＡＰ−１と反応する断片であってよく、ラベルされたも
の、所望により単離されたＶＡＰ−１または表面上にＶ
ＡＰ−１を発現する細胞との抗体の結合を検出すること
を可能とする物質を用いてラベルされたものであってよ
い。このような診断用組成物はキットに備えられていて
もよく、このようなキットは独立した容器に、（ａ）Ｖ
ＡＰ−１と反応する抗体、または該抗体の生物学的に活
性な誘導体、好ましくはＶＡＰ−１抗原との抗体の結合
を検出することを可能とする物質を用いてラベルされた
もの：および（ｂ）分析結果を評価するための標準を提
供するための、精製されたＶＡＰ−１タンパク質を備え
ていてもよい。
【００２９】別の局面において、本発明はインビボで、
人体内または動物体内において炎症を低減させるかまた
は処置する方法であって、このような処置を必要とする
ヒトまたは動物の患者に対して効果を生じうるレベルの
ＶＡＰ−１結合合成物（ＶＡＰ−１と反応する抗体、ま
たはこのような抗体の生物学的に活性な誘導体、もしく
はＶＡＰ−１の可溶性リガンドなど）を投与することに
よる処置方法に向けられる。
人体内または動物体内において炎症を低減させるかまた
は処置する方法であって、このような処置を必要とする
ヒトまたは動物の患者に対して効果を生じうるレベルの
ＶＡＰ−１結合合成物（ＶＡＰ−１と反応する抗体、ま
たはこのような抗体の生物学的に活性な誘導体、もしく
はＶＡＰ−１の可溶性リガンドなど）を投与することに
よる処置方法に向けられる。
【００３０】「処置」または「処置する」の語は、ＶＡ
Ｐ−１の接着が生じることによって仲介される障害の予
防、回復、防止または治療を含みうる目的のため被験者
にＶＡＰ−１結合合成物を投与することを含むことを意
図する。本発明の方法の主体である特定のＶＡＰ−１結
合分子は、精製された天然のおよび組換えＶＡＰ−１結
合タンパク質（抗体または他の分子など）である。
Ｐ−１の接着が生じることによって仲介される障害の予
防、回復、防止または治療を含みうる目的のため被験者
にＶＡＰ−１結合合成物を投与することを含むことを意
図する。本発明の方法の主体である特定のＶＡＰ−１結
合分子は、精製された天然のおよび組換えＶＡＰ−１結
合タンパク質（抗体または他の分子など）である。
【００３１】患者に投与するばあい、試薬は腸管外、
鼻、腸または直腸への投与に好適となるよういかなる方
法で製剤化されてもよい。したがって、試薬はたとえば
注射可能な剤形、エアゾル剤形、懸濁剤、溶液、浣腸剤
などの形態であってよい。試薬は通例の医薬のプラクテ
ィスにしたがって、たとえば等張の生理食塩水などの医
薬的に許容しうる賦形剤またはビヒクルとともに製剤化
されうる。試薬の投与量レベルは、患者におけるＶＡＰ
−１の接着の発生をブロックすることにより抗炎症効果
を提供するに充分な量であろう。
鼻、腸または直腸への投与に好適となるよういかなる方
法で製剤化されてもよい。したがって、試薬はたとえば
注射可能な剤形、エアゾル剤形、懸濁剤、溶液、浣腸剤
などの形態であってよい。試薬は通例の医薬のプラクテ
ィスにしたがって、たとえば等張の生理食塩水などの医
薬的に許容しうる賦形剤またはビヒクルとともに製剤化
されうる。試薬の投与量レベルは、患者におけるＶＡＰ
−１の接着の発生をブロックすることにより抗炎症効果
を提供するに充分な量であろう。
【００３２】試薬は、ＶＡＰ−１の接着によって仲介さ
れる増大した炎症反応に関係するいかなる状態をも診断
または処置するために好適である。したがって、試薬は
関節炎、局所感染症、皮膚硬化症、炎症性腸疾患、自己
免疫疾患などのような状態を診断するのに有用である。
れる増大した炎症反応に関係するいかなる状態をも診断
または処置するために好適である。したがって、試薬は
関節炎、局所感染症、皮膚硬化症、炎症性腸疾患、自己
免疫疾患などのような状態を診断するのに有用である。
【００３３】１の実施態様において、炎症の第２次傷害
性の炎症作用に対する治療上の利益を提供するために効
果を生ずるレベルのＶＡＰ−１結合合成物が投与され
る。ＶＡＰ−１結合合成物の「効果を生ずるレベル」と
はＶＡＰ−１が仲介して発生する毒性作用が最小で改善
されるレベルを意味する。「過度の」宿主でのＶＡＰ−
１が仲介する発生とは被験者の健康な医療状態の標準を
超える、被験者におけるＶＡＰ−１が仲介する接着の発
生のレベルを意味する。「第２次」組織損傷または毒性
作用とは、体内のどこか他の場所の「第１次」刺激の結
果を含めてＶＡＰ−１が仲介する接着の過度の発生があ
るために、その他の健康な組織、器官およびその中の細
胞に惹起こされる組織損傷または毒性作用を意味する。
性の炎症作用に対する治療上の利益を提供するために効
果を生ずるレベルのＶＡＰ−１結合合成物が投与され
る。ＶＡＰ−１結合合成物の「効果を生ずるレベル」と
はＶＡＰ−１が仲介して発生する毒性作用が最小で改善
されるレベルを意味する。「過度の」宿主でのＶＡＰ−
１が仲介する発生とは被験者の健康な医療状態の標準を
超える、被験者におけるＶＡＰ−１が仲介する接着の発
生のレベルを意味する。「第２次」組織損傷または毒性
作用とは、体内のどこか他の場所の「第１次」刺激の結
果を含めてＶＡＰ−１が仲介する接着の過度の発生があ
るために、その他の健康な組織、器官およびその中の細
胞に惹起こされる組織損傷または毒性作用を意味する。
【００３４】本発明の方法において、たとえばＶＡＰ−
１抗体などのＶＡＰ−１結合合成物の患者への注入の結
果、滑膜ＨＥＶ、末梢リンパ節ＨＥＶおよび扁桃ＨＥＶ
などのその表面上にＶＡＰ−１を発現する患者の細胞に
かかる抗体が結合し、ＶＡＰ−１結合によってこれらの
細胞が他の細胞に付着することが妨げられ、かくしてか
かる組織および細胞にリンパ球が接着することが妨げら
れるかまたは阻害され、よって接着をうけた組織または
細胞への望ましくないリンパ球の往来または流入が妨げ
られ、したがってＶＡＰ−１が司る白血球の往来および
白血球の遊出から起こる望ましくない炎症反応が妨げら
れる。
１抗体などのＶＡＰ−１結合合成物の患者への注入の結
果、滑膜ＨＥＶ、末梢リンパ節ＨＥＶおよび扁桃ＨＥＶ
などのその表面上にＶＡＰ−１を発現する患者の細胞に
かかる抗体が結合し、ＶＡＰ−１結合によってこれらの
細胞が他の細胞に付着することが妨げられ、かくしてか
かる組織および細胞にリンパ球が接着することが妨げら
れるかまたは阻害され、よって接着をうけた組織または
細胞への望ましくないリンパ球の往来または流入が妨げ
られ、したがってＶＡＰ−１が司る白血球の往来および
白血球の遊出から起こる望ましくない炎症反応が妨げら
れる。
【００３５】したがって、本発明の医薬組成物は患者に
おけるＶＡＰ−１の生物学的ターゲットへのかかる患者
に生来あるＶＡＰ−１結合およびとくに内皮細胞との結
合に（完全にまたは部分的に）拮抗するのに充分な量で
ＶＡＰ−１結合合成物を含有する組成物を提供する。
おけるＶＡＰ−１の生物学的ターゲットへのかかる患者
に生来あるＶＡＰ−１結合およびとくに内皮細胞との結
合に（完全にまたは部分的に）拮抗するのに充分な量で
ＶＡＰ−１結合合成物を含有する組成物を提供する。
【００３６】ＶＡＰ−１結合合成物は、かかるＶＡＰ−
１結合合成物の所望の作用部位へのターゲッティングを
提供する他の薬剤の断片に、化学的にまたは遺伝子工学
によって接合されてもよい。代わりになるべきものとし
て、かかるＶＡＰ−１結合合成物に付加的な特性、とく
にＶＡＰ−１接着が仲介する毒性作用の軽減を促進する
合成物の能力を増強する特性を増強または提供するため
に、ＶＡＰ−１結合合成物に、化学的にまたは遺伝子工
学によって他の合成物が接合されてもよい。
１結合合成物の所望の作用部位へのターゲッティングを
提供する他の薬剤の断片に、化学的にまたは遺伝子工学
によって接合されてもよい。代わりになるべきものとし
て、かかるＶＡＰ−１結合合成物に付加的な特性、とく
にＶＡＰ−１接着が仲介する毒性作用の軽減を促進する
合成物の能力を増強する特性を増強または提供するため
に、ＶＡＰ−１結合合成物に、化学的にまたは遺伝子工
学によって他の合成物が接合されてもよい。
【００３７】ＶＡＰ−１結合合成物の投与量および投与
方式は、関節炎および組織傷害などの炎症に関連した障
害を処置する臨床分野における当業者によって容易に決
定されうる。一般的にＶＡＰ−１結合合成物による処置
の投与量は以下の点を考慮することに依存して変動する
であろう：用いられるＶＡＰ−１結合合成物の型；年
齢；健康状態；処置をうけている医療状態；あれば、同
時に行なわれる処置の種類、処置の頻度および所望の効
果の本質；組織損傷の度合い；性；症状のあった期間；
ならびにあれば禁忌および、個々の医師によって調整さ
れるべき他の変動要素（variables)。所望の結果をうる
ために1または複数の適用で所望の投与量を投与するこ
とができる。抗ＶＡＰ−１抗体などの本発明のＶＡＰ−
１結合合成物を含有する医薬組成物は単位投与量の形で
提供されてもよい。
方式は、関節炎および組織傷害などの炎症に関連した障
害を処置する臨床分野における当業者によって容易に決
定されうる。一般的にＶＡＰ−１結合合成物による処置
の投与量は以下の点を考慮することに依存して変動する
であろう：用いられるＶＡＰ−１結合合成物の型；年
齢；健康状態；処置をうけている医療状態；あれば、同
時に行なわれる処置の種類、処置の頻度および所望の効
果の本質；組織損傷の度合い；性；症状のあった期間；
ならびにあれば禁忌および、個々の医師によって調整さ
れるべき他の変動要素（variables)。所望の結果をうる
ために1または複数の適用で所望の投与量を投与するこ
とができる。抗ＶＡＰ−１抗体などの本発明のＶＡＰ−
１結合合成物を含有する医薬組成物は単位投与量の形で
提供されてもよい。
【００３８】本発明のＶＡＰ−１結合合成物を含有する
医薬組成物は、投与のためのいかなる適切な薬学的担体
中でも投与することができる。ヒトおよび動物における
ＶＡＰ−１が仲介して発生する状態の予防、緩和、防止
または治療に効を奏するいかなる剤形で投与されてもよ
い。限定の目的のため、明細書およびクレーム全体にわ
たる、疾患の「処置の方法」という表現や同様の表現は
かかる疾患の防止のための方法を含むと解釈されること
を意図している。
医薬組成物は、投与のためのいかなる適切な薬学的担体
中でも投与することができる。ヒトおよび動物における
ＶＡＰ−１が仲介して発生する状態の予防、緩和、防止
または治療に効を奏するいかなる剤形で投与されてもよ
い。限定の目的のため、明細書およびクレーム全体にわ
たる、疾患の「処置の方法」という表現や同様の表現は
かかる疾患の防止のための方法を含むと解釈されること
を意図している。
【００３９】非経口投与のための本発明のＶＡＰ−１結
合タンパク質の調製物は滅菌した水性または非水性溶
媒、懸濁液および乳濁液を含む。非水性溶媒の例はプロ
ピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、
魚油、および注射可能な有機エステル類である。水性担
体には塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース溶
液、デキストロース・プラス・塩化ナトリウム溶液、ラ
クトース、または固定油（fixed oils）を含有するリン
ゲル溶液を含む、生理食塩水および緩衝性医療用非経口
用のビヒクルを含んだ、水、水−アルコール溶液、乳濁
液または懸濁液を含む。静脈内ビヒクルにはリンゲルデ
キストロースなどにもとづいたもののような、流体（fl
uid）および栄養補液、電解質補液が含まれる。
合タンパク質の調製物は滅菌した水性または非水性溶
媒、懸濁液および乳濁液を含む。非水性溶媒の例はプロ
ピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、
魚油、および注射可能な有機エステル類である。水性担
体には塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース溶
液、デキストロース・プラス・塩化ナトリウム溶液、ラ
クトース、または固定油（fixed oils）を含有するリン
ゲル溶液を含む、生理食塩水および緩衝性医療用非経口
用のビヒクルを含んだ、水、水−アルコール溶液、乳濁
液または懸濁液を含む。静脈内ビヒクルにはリンゲルデ
キストロースなどにもとづいたもののような、流体（fl
uid）および栄養補液、電解質補液が含まれる。
【００４０】また、本発明のＶＡＰ−１結合合成物はと
くに第１次傷害が急性よりも持続または遅延するばあ
い、ポンプによってまたは、徐放性形態でも投与されて
もよい。第１次傷害が急性よりもしばしば持続または遅
延するような例は、感染または捻挫で組織または筋肉へ
の損傷が第１次感染または損傷から数日後まであらわれ
ない（または存続する）ばあいである。本発明のＶＡＰ
−１結合分子はまた、好適に挿入されたカテーテルによ
って、または特定の器官にターゲッティングするよう設
計されたキメラ分子（または複合体）の一部などのよう
な分子を提供することによって特定の器官に高濃度に送
達されてもよい。
くに第１次傷害が急性よりも持続または遅延するばあ
い、ポンプによってまたは、徐放性形態でも投与されて
もよい。第１次傷害が急性よりもしばしば持続または遅
延するような例は、感染または捻挫で組織または筋肉へ
の損傷が第１次感染または損傷から数日後まであらわれ
ない（または存続する）ばあいである。本発明のＶＡＰ
−１結合分子はまた、好適に挿入されたカテーテルによ
って、または特定の器官にターゲッティングするよう設
計されたキメラ分子（または複合体）の一部などのよう
な分子を提供することによって特定の器官に高濃度に送
達されてもよい。
【００４１】長期間にわたる反復注射が指示されるばあ
い、徐放性形態での投与が患者にとってより好都合であ
る。たとえば本発明の方法がＶＡＰ−１に関連した障害
にもとづく遺伝的または慢性的な炎症性疾患を処置する
のに用いられるものであるばあい、患者の快適さを最大
限とするために本発明のＶＡＰ−１結合タンパク質を徐
放性形態で投与することが望ましい。
い、徐放性形態での投与が患者にとってより好都合であ
る。たとえば本発明の方法がＶＡＰ−１に関連した障害
にもとづく遺伝的または慢性的な炎症性疾患を処置する
のに用いられるものであるばあい、患者の快適さを最大
限とするために本発明のＶＡＰ−１結合タンパク質を徐
放性形態で投与することが望ましい。
【００４２】本発明のＶＡＰ−１結合合成物は、ＶＡＰ
−１結合合成物の生物学的活性が消化プロセスによって
破壊されなければ、さらに前記合成物が可能とする特質
が小腸組織を経て吸収されるものであれば、錠剤、カプ
セル、粉末パケット（powderpackets）、または経口投
与用の液体溶液などの投与形態で用いることができる。
−１結合合成物の生物学的活性が消化プロセスによって
破壊されなければ、さらに前記合成物が可能とする特質
が小腸組織を経て吸収されるものであれば、錠剤、カプ
セル、粉末パケット（powderpackets）、または経口投
与用の液体溶液などの投与形態で用いることができる。
【００４３】本発明の医薬組成物は本来知られている方
法、たとえば通例の混合、顆粒化、糖衣剤作製、溶解、
凍結乾燥または同様のプロセスによって製造される。本
発明の組成物は、慢性のものでも急性のものでも、ＶＡ
Ｐ−１で誘導される生理的損傷を制御する上で、それら
自身においておよびそれら自身の有用性が見出される。
本発明の組成物はＶＡＰ−１接着を認識するための生体
自身の機構の作動を最大限の可能性にまで抑える。
法、たとえば通例の混合、顆粒化、糖衣剤作製、溶解、
凍結乾燥または同様のプロセスによって製造される。本
発明の組成物は、慢性のものでも急性のものでも、ＶＡ
Ｐ−１で誘導される生理的損傷を制御する上で、それら
自身においておよびそれら自身の有用性が見出される。
本発明の組成物はＶＡＰ−１接着を認識するための生体
自身の機構の作動を最大限の可能性にまで抑える。
【００４４】静脈注射の投与形態においては、本発明の
組成物は充分に迅速に作用が開始され、ありうる組織損
傷の速やかな処理（management）に有用である。
組成物は充分に迅速に作用が開始され、ありうる組織損
傷の速やかな処理（management）に有用である。
【００４５】加えて、穏やかなまたは慢性のＶＡＰ−１
が関連した障害の処理においては低い能力のバージョン
が有用である。
が関連した障害の処理においては低い能力のバージョン
が有用である。
【００４６】加うるに、本発明の組成物はヒトのまたは
動物の血流または細胞外組織におけるＶＡＰ−１レベル
の実験室での分析のために不可欠な試薬を提供する。
動物の血流または細胞外組織におけるＶＡＰ−１レベル
の実験室での分析のために不可欠な試薬を提供する。
【００４７】天然のまたは組換えのソースから、抽出、
沈殿、クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグ
ラフィー、電気泳動などの、かかるタンパク質を単離す
るのに当該技術分野において従来から用いられる通例の
条件および技術にしたがって、天然の夾雑物を実質的に
含まないＶＡＰ−１結合タンパク質を単離および精製す
ることができる。
沈殿、クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグ
ラフィー、電気泳動などの、かかるタンパク質を単離す
るのに当該技術分野において従来から用いられる通例の
条件および技術にしたがって、天然の夾雑物を実質的に
含まないＶＡＰ−１結合タンパク質を単離および精製す
ることができる。
【００４８】以下の実施例は単に本発明を説明すること
を意図したものであり、いかようにもその範囲を限定す
るものではない。
を意図したものであり、いかようにもその範囲を限定す
るものではない。
【００４９】
【実施例】実施例１ＶＡＰ−１の組織分布
ＶＡＰ−１の組織分布はクリオスタット切片のイムノパ
ーオキシダーゼ染色によって調べた。前記切片は第一抗
体（１Ｂ２および３Ｇ６、ニワトリＴ細胞に対するコン
トロールマウスＩｇＧ1 ｍＡｂ）とともに３０分間イ
ンキュベートした。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、８
ｇ ＮａＣｌ、１．２１ｇ Ｋ2ＨＰＯ4および０．３４
ｇ ＫＨ2ＰＯ4／リットル、ｐＨ７．２）における２回
の洗浄ののち、５％ＡＢ−血清を含有するＰＢＳ中のパ
ーオキシダーゼ接合ヒツジ抗マウスＩｇＧ（ダコパット
（Dakopatt）、デンマーク）を３０分加えた。ついで、
０．０３％過酸化水素を含有するＰＢＳ中の３′３′−
ジアミノベンジジン塩酸塩を色素原として用いた。染色
後、切片をヘマトキシリンで後染色した。免疫蛍光染色
のために、３μｍのクリオスタット切片を第一抗体でお
おい、ＦＩＴＣ接合ヒツジ抗マウスＩｇＧ（シグマ、セ
ントルイス）を第二段階の試薬として用いた。
ーオキシダーゼ染色によって調べた。前記切片は第一抗
体（１Ｂ２および３Ｇ６、ニワトリＴ細胞に対するコン
トロールマウスＩｇＧ1 ｍＡｂ）とともに３０分間イ
ンキュベートした。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、８
ｇ ＮａＣｌ、１．２１ｇ Ｋ2ＨＰＯ4および０．３４
ｇ ＫＨ2ＰＯ4／リットル、ｐＨ７．２）における２回
の洗浄ののち、５％ＡＢ−血清を含有するＰＢＳ中のパ
ーオキシダーゼ接合ヒツジ抗マウスＩｇＧ（ダコパット
（Dakopatt）、デンマーク）を３０分加えた。ついで、
０．０３％過酸化水素を含有するＰＢＳ中の３′３′−
ジアミノベンジジン塩酸塩を色素原として用いた。染色
後、切片をヘマトキシリンで後染色した。免疫蛍光染色
のために、３μｍのクリオスタット切片を第一抗体でお
おい、ＦＩＴＣ接合ヒツジ抗マウスＩｇＧ（シグマ、セ
ントルイス）を第二段階の試薬として用いた。
【００５０】免疫組織染色によってモノクローナル抗体
１Ｂ２が炎症をおこした滑膜におけるＨＥＶ様細静脈を
強く染色したことが示された（図１Ａ）。浸潤白血球に
も滑膜の間質のいかなる結合組織成分にも染色はみられ
なかった。ｍＡｂ １Ｂ２によって認識される抗原はＶ
ＡＰ−１（血管接着タンパク−１として）と名づけられ
た。末梢リンパ節および扁桃において、ｍＡｂ １Ｂ２
はＨＥＶの大部分と反応した（図１Ｂ）。ＶＡＰ−１は
内皮細胞の内腔側で強く発現された（図１Ｃ）。顆粒染
色は内皮細胞の細胞質においてみられ、また非内腔表面
はｍＡｂ １Ｂ２陽性であった。とくに扁桃において、
異なるＨＥＶ間で染色強度は顕著に変化し、典型的な丸
みを帯びた形態の個々のＨＥＶはほとんど１Ｂ２陰性で
はなかった（図１Ｄ）。消化管の虫垂においておよび固
有層において、わずかに弱く染まっている細静脈のみが
検出できた。ＶＡＰ−１の弱い発現はまた上胚中枢にお
ける樹状様細胞においてならびに動脈、静脈および腸壁
の平滑筋細胞においてみられた。対照的に、ＶＡＰ−１
はより大きな血管の内腔表面には実際に存在しなかっ
た。組織切片における白血球のように、末梢血リンパ
球、単球、ＮＫ細胞、顆粒球および単離された扁桃白血
球はＦＡＣＳ分析においてすべて完全に１Ｂ２陰性であ
った。Ｔ−リンパ芽球様細胞系（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ）、
Ｂ−リンパ芽球様細胞系（ＫＣＡ、ＩＢＷ−４）、単球
細胞系（Ｕ９３７）および白血球細胞系（ＫＧ−１、Ｋ
Ｇ−１ａ、Ｋ５６２）はすべてＶＡＰ−１を欠いてい
た。さらに、ＶＡＰ−１は基本的にはヒト臍静脈内皮細
胞（ＨＵＶＥＣ）には存在せず；さらにＩＬ−１（２
０、１００Ｕ／ｍｌ）、ＴＮＦ−μ（２００Ｕ／ｍｌ）
またはＬＰＳ（０．１、１．０μｇ／ｍｌ）を用いた４
時間または２０時間の処理によってもＶＡＰ−１の合成
を誘導できなかった。内皮細胞系（ＥａＨｙ−９２６）
もまた１Ｂ２陰性であった。平滑筋細胞、線維芽細胞お
よび角化細胞の初代培養ならびに上皮様（ＨｅＬａ）細
胞系はＶＡＰ−１を発現しなかった。
１Ｂ２が炎症をおこした滑膜におけるＨＥＶ様細静脈を
強く染色したことが示された（図１Ａ）。浸潤白血球に
も滑膜の間質のいかなる結合組織成分にも染色はみられ
なかった。ｍＡｂ １Ｂ２によって認識される抗原はＶ
ＡＰ−１（血管接着タンパク−１として）と名づけられ
た。末梢リンパ節および扁桃において、ｍＡｂ １Ｂ２
はＨＥＶの大部分と反応した（図１Ｂ）。ＶＡＰ−１は
内皮細胞の内腔側で強く発現された（図１Ｃ）。顆粒染
色は内皮細胞の細胞質においてみられ、また非内腔表面
はｍＡｂ １Ｂ２陽性であった。とくに扁桃において、
異なるＨＥＶ間で染色強度は顕著に変化し、典型的な丸
みを帯びた形態の個々のＨＥＶはほとんど１Ｂ２陰性で
はなかった（図１Ｄ）。消化管の虫垂においておよび固
有層において、わずかに弱く染まっている細静脈のみが
検出できた。ＶＡＰ−１の弱い発現はまた上胚中枢にお
ける樹状様細胞においてならびに動脈、静脈および腸壁
の平滑筋細胞においてみられた。対照的に、ＶＡＰ−１
はより大きな血管の内腔表面には実際に存在しなかっ
た。組織切片における白血球のように、末梢血リンパ
球、単球、ＮＫ細胞、顆粒球および単離された扁桃白血
球はＦＡＣＳ分析においてすべて完全に１Ｂ２陰性であ
った。Ｔ−リンパ芽球様細胞系（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ）、
Ｂ−リンパ芽球様細胞系（ＫＣＡ、ＩＢＷ−４）、単球
細胞系（Ｕ９３７）および白血球細胞系（ＫＧ−１、Ｋ
Ｇ−１ａ、Ｋ５６２）はすべてＶＡＰ−１を欠いてい
た。さらに、ＶＡＰ−１は基本的にはヒト臍静脈内皮細
胞（ＨＵＶＥＣ）には存在せず；さらにＩＬ−１（２
０、１００Ｕ／ｍｌ）、ＴＮＦ−μ（２００Ｕ／ｍｌ）
またはＬＰＳ（０．１、１．０μｇ／ｍｌ）を用いた４
時間または２０時間の処理によってもＶＡＰ−１の合成
を誘導できなかった。内皮細胞系（ＥａＨｙ−９２６）
もまた１Ｂ２陰性であった。平滑筋細胞、線維芽細胞お
よび角化細胞の初代培養ならびに上皮様（ＨｅＬａ）細
胞系はＶＡＰ−１を発現しなかった。
【００５１】実施例２ＶＡＰ−１の細胞内の局在性
実施例１に記載された組織局在性実験に加えて、ＶＡＰ
−１の細胞内の局在性をさらに扁桃から切断された厚い
切片（１５μｍ）を共焦点顕微鏡（confocal microscop
y）によって調べた。切片をｍＡｂ １Ｂ２または３Ｇ
６とともに１５分間インキュベートし、ＰＢＳで２回洗
浄し、ＦＩＴＣ接合ヒツジ抗マウスＩｇでさらに１５分
間おおった。そののち、共焦点顕微鏡による分析の前に
試料を１０％ＰＢＳおよび抗退色剤（anti-fadeing age
nt）としてフェニレンジアミンを含有するグリセロール
中にマウントした。顕微鏡検査によって細胞質内の独立
性の顆粒におけると同様にＨＥＶの内腔表面上にＶＡＰ
−１が存在することは容易に理解できた。これらの顆粒
の同一性は現在は不明であるが、ｍＡｂ １Ｂ２および
第・因子に対する抗体を用いる２色免疫蛍光染色におい
て、顆粒は共に局在（co-localize）しなかった。した
がって、ＶＡＰ−１陽性顆粒は内皮細胞接着分子、Ｐ−
セレクチンが存在することが知られている、内皮細胞の
ワィベル−パラド体（Weibel-Palade bodies）ではなか
った。
−１の細胞内の局在性をさらに扁桃から切断された厚い
切片（１５μｍ）を共焦点顕微鏡（confocal microscop
y）によって調べた。切片をｍＡｂ １Ｂ２または３Ｇ
６とともに１５分間インキュベートし、ＰＢＳで２回洗
浄し、ＦＩＴＣ接合ヒツジ抗マウスＩｇでさらに１５分
間おおった。そののち、共焦点顕微鏡による分析の前に
試料を１０％ＰＢＳおよび抗退色剤（anti-fadeing age
nt）としてフェニレンジアミンを含有するグリセロール
中にマウントした。顕微鏡検査によって細胞質内の独立
性の顆粒におけると同様にＨＥＶの内腔表面上にＶＡＰ
−１が存在することは容易に理解できた。これらの顆粒
の同一性は現在は不明であるが、ｍＡｂ １Ｂ２および
第・因子に対する抗体を用いる２色免疫蛍光染色におい
て、顆粒は共に局在（co-localize）しなかった。した
がって、ＶＡＰ−１陽性顆粒は内皮細胞接着分子、Ｐ−
セレクチンが存在することが知られている、内皮細胞の
ワィベル−パラド体（Weibel-Palade bodies）ではなか
った。
【００５２】実施例３ＶＡＰ−１の分子量の決定
リンパ球を除去した扁桃抽出物を細胞溶解緩衝液（１５
０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ トリス塩基、０．１５ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ2、１％ ＮＰ４Ｏ、１ｍＭ ＰＭＳＦお
よび１％アプロチニン）中で一晩４℃で溶解した。溶解
物を１００００ｇで３０分間４℃で遠心分離した。溶解
物をセファロース ＣＬ−４Ｂ（ファルマシア、スウェ
ーデン）カラムに通過させることによって上清を事前に
浄化した。ついで正常マウス血清、関連がないＩｇＧ１
ｍＡｂおよび１Ｂ２ ｍＡｂ（５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｌ
カラム容積）を用いてえられた３つのＣｎＢｒで活性化
されたセファロース−４Ｂ（ファルマシア）カラムに連
続して付した。カラムを前記細胞溶解緩衝液を用いて充
分に洗浄した。そののち、１Ｂ２カラムに結合した材料
を５０ｍＭトリエタノールアミンで溶出し、凍結乾燥
し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（７．５％、還元）において分離
し銀染色を用いて視覚化した。
０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ トリス塩基、０．１５ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ2、１％ ＮＰ４Ｏ、１ｍＭ ＰＭＳＦお
よび１％アプロチニン）中で一晩４℃で溶解した。溶解
物を１００００ｇで３０分間４℃で遠心分離した。溶解
物をセファロース ＣＬ−４Ｂ（ファルマシア、スウェ
ーデン）カラムに通過させることによって上清を事前に
浄化した。ついで正常マウス血清、関連がないＩｇＧ１
ｍＡｂおよび１Ｂ２ ｍＡｂ（５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｌ
カラム容積）を用いてえられた３つのＣｎＢｒで活性化
されたセファロース−４Ｂ（ファルマシア）カラムに連
続して付した。カラムを前記細胞溶解緩衝液を用いて充
分に洗浄した。そののち、１Ｂ２カラムに結合した材料
を５０ｍＭトリエタノールアミンで溶出し、凍結乾燥
し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（７．５％、還元）において分離
し銀染色を用いて視覚化した。
【００５３】ヨウ素ラベリングのためにリンパ球を除去
した扁桃抽出物を１００Ｕ／ｍｌコラゲナーゼ（ヒスト
リチクス菌（Clostridium histolyticum）由来の・型、
シグマ）、１０％胎児ウシ血清（ＦＣＳ）、抗生物質、
および１０ｍＭ ヘペスを含有するＲＰＭＩ １６４０
中で１時間３７℃で穏やかに撹拌しながら消化した。コ
ラゲナーゼ消化ののち、細胞をＨＢＳＳ中で洗浄し、ラ
クトペルオキシダーゼ法をもちいて１２５Ｉで表面をラ
ベルした。ヨウ素化された細胞を前記細胞溶解緩衝液で
溶解し、溶解物を１００００ｇで１５分間遠心分離によ
り浄化した。溶解物を正常マウス血清とカップルしたＣ
ｎＢｒで活性化されたセファロースをもちいて１６時間
４℃で事前に浄化した。免疫沈殿をｍＡｂ １Ｂ２また
は３Ｇ６と接合したＣｎＢｒで活性化されたセファロー
ス４Ｂビーズを用いて行った。試料を還元（２−メルカ
プトエタノール）条件下で７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥを
用いて分析した。
した扁桃抽出物を１００Ｕ／ｍｌコラゲナーゼ（ヒスト
リチクス菌（Clostridium histolyticum）由来の・型、
シグマ）、１０％胎児ウシ血清（ＦＣＳ）、抗生物質、
および１０ｍＭ ヘペスを含有するＲＰＭＩ １６４０
中で１時間３７℃で穏やかに撹拌しながら消化した。コ
ラゲナーゼ消化ののち、細胞をＨＢＳＳ中で洗浄し、ラ
クトペルオキシダーゼ法をもちいて１２５Ｉで表面をラ
ベルした。ヨウ素化された細胞を前記細胞溶解緩衝液で
溶解し、溶解物を１００００ｇで１５分間遠心分離によ
り浄化した。溶解物を正常マウス血清とカップルしたＣ
ｎＢｒで活性化されたセファロースをもちいて１６時間
４℃で事前に浄化した。免疫沈殿をｍＡｂ １Ｂ２また
は３Ｇ６と接合したＣｎＢｒで活性化されたセファロー
ス４Ｂビーズを用いて行った。試料を還元（２−メルカ
プトエタノール）条件下で７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥを
用いて分析した。
【００５４】ＶＡＰ−１の分子量を決定するために、扁
桃の間質からのアフィニティーで単離された分子をＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥに供した。ゲルの銀染色によって還元条件
下で見かけの分子量が９０ｋＤの主要バンドが示された
（図２）。ＶＡＰ−１は非還元条件下ではわずかにゆっ
くりと移動した（Ｍｒ１００ｋＤ）。扁桃のヨウ素化さ
れた間質細胞からの免疫沈殿の分析によって９０ｋＤの
分子（およびわずかにより小さい分解産物）とのｍＡｂ
１Ｂ２の反応性を確認した（図２）。また、１８０〜
２００ｋＤのバンドは目視できることもあった。
桃の間質からのアフィニティーで単離された分子をＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥに供した。ゲルの銀染色によって還元条件
下で見かけの分子量が９０ｋＤの主要バンドが示された
（図２）。ＶＡＰ−１は非還元条件下ではわずかにゆっ
くりと移動した（Ｍｒ１００ｋＤ）。扁桃のヨウ素化さ
れた間質細胞からの免疫沈殿の分析によって９０ｋＤの
分子（およびわずかにより小さい分解産物）とのｍＡｂ
１Ｂ２の反応性を確認した（図２）。また、１８０〜
２００ｋＤのバンドは目視できることもあった。
【００５５】実施例４
扁桃、末梢リンパ節（ＰＬＮ）、滑膜、および虫垂ＨＥ
Ｖとのリンパ球の結合ならびに扁桃ＨＥＶとの顆粒球の
結合 この技術の詳細はすでに記載されている（ヤルカネンお
よびブッチャー、ブラッド（Blood）６６巻、５７７頁
（1985年））。簡潔には、ヒト扁桃、滑膜、虫垂および
末梢リンパ節からの新たに切断され凍結された切片を１
Ｂ２または３Ｇ６の上清とともに３０分間７℃で穏やか
に回転させながらインキュベートした。ついで５％ＦＣ
Ｓおよび１０ｍＭ ヘペスを含有するＨＢＳＳ中のフィ
コールで単離されたリンパ球（３×１０6／切片）を添
加し、インキュベーションを３０分間継続した。インキ
ュベーションののち、非接着細胞を穏やかに傾けて除き
（tipped off）、接着細胞を１％グルタルアルデヒドを
含有する冷ＰＢＳ中で一晩固定した。１試料当たり１組
織当たり４〜６切片上においてＨＥＶに結合した細胞を
シングルブラインドで計測した（最小１００ＨＥＶ）。
顆粒球結合を調べるばあいは、顆粒球（ヒストパク（Hi
stopaque）１１１９、シグマを用いて単離された）を、
切片に適用する直前まで、Ｃａ2+およびＭｇ2+を含まな
いＨＢＳＳに保持したこと以外は同様に分析を行った。
Ｖとのリンパ球の結合ならびに扁桃ＨＥＶとの顆粒球の
結合 この技術の詳細はすでに記載されている（ヤルカネンお
よびブッチャー、ブラッド（Blood）６６巻、５７７頁
（1985年））。簡潔には、ヒト扁桃、滑膜、虫垂および
末梢リンパ節からの新たに切断され凍結された切片を１
Ｂ２または３Ｇ６の上清とともに３０分間７℃で穏やか
に回転させながらインキュベートした。ついで５％ＦＣ
Ｓおよび１０ｍＭ ヘペスを含有するＨＢＳＳ中のフィ
コールで単離されたリンパ球（３×１０6／切片）を添
加し、インキュベーションを３０分間継続した。インキ
ュベーションののち、非接着細胞を穏やかに傾けて除き
（tipped off）、接着細胞を１％グルタルアルデヒドを
含有する冷ＰＢＳ中で一晩固定した。１試料当たり１組
織当たり４〜６切片上においてＨＥＶに結合した細胞を
シングルブラインドで計測した（最小１００ＨＥＶ）。
顆粒球結合を調べるばあいは、顆粒球（ヒストパク（Hi
stopaque）１１１９、シグマを用いて単離された）を、
切片に適用する直前まで、Ｃａ2+およびＭｇ2+を含まな
いＨＢＳＳに保持したこと以外は同様に分析を行った。
【００５６】インビボの内皮細胞上におけるＶＡＰ−１
の組織分布によって、ＶＡＰ−１が白血球のための特異
的な認識要素として機能しうるであろうことが示唆され
た。したがって、ＨＥＶ結合におけるＶＡＰ−１の機能
的役割を、修飾したスタンパー−ウッドラフ・イン・ビ
トロ・アッセイ（Stamper-Woodruff in vitro assay）
（ヤルカネンおよびブッチャー、ブラッド６６巻、５７
７頁（1985年））を用いて検討した。ｍＡｂ １Ｂ２と
の凍結された切片の前処理はＨＥＶとのリンパ球結合を
阻害した（図３）。阻害効果は扁桃および末梢リンパ節
において最も示されたが、滑膜ＨＥＶとの結合もまた著
しく減少した。虫垂ＨＥＶとのリンパ球結合および扁桃
ＨＥＶとの顆粒球結合はほとんど影響を受けなかった
（図３）。これらの知見からＶＡＰ−１は末梢リンパ
節、扁桃および滑膜ＨＥＶのリンパ球認識を仲介する内
皮細胞要素を、仲介するか前記要素と親密に結びつくか
であることが示される。リンパ球−内皮細胞相互作用に
おけるＶＡＰ−１のかかわりあいを直接的に評価するた
めに、アフィニティーで単離されたＶＡＰ−１とのリン
パ球の結合を分析した（図４）。リンパ球はプレート結
合ＶＡＰ−１に効果的に接着した。ＶＡＰ−１とのリン
パ球結合は特異的にｍＡｂ １Ｂ２で阻害されたが、コ
ントロールのｍＡｂ ３Ｇ６では阻害されなかった。ｍ
Ａｂ １Ｂ２は別の関連のない内皮細胞分子とのリンパ
球結合を妨害しなかった（図４）。
の組織分布によって、ＶＡＰ−１が白血球のための特異
的な認識要素として機能しうるであろうことが示唆され
た。したがって、ＨＥＶ結合におけるＶＡＰ−１の機能
的役割を、修飾したスタンパー−ウッドラフ・イン・ビ
トロ・アッセイ（Stamper-Woodruff in vitro assay）
（ヤルカネンおよびブッチャー、ブラッド６６巻、５７
７頁（1985年））を用いて検討した。ｍＡｂ １Ｂ２と
の凍結された切片の前処理はＨＥＶとのリンパ球結合を
阻害した（図３）。阻害効果は扁桃および末梢リンパ節
において最も示されたが、滑膜ＨＥＶとの結合もまた著
しく減少した。虫垂ＨＥＶとのリンパ球結合および扁桃
ＨＥＶとの顆粒球結合はほとんど影響を受けなかった
（図３）。これらの知見からＶＡＰ−１は末梢リンパ
節、扁桃および滑膜ＨＥＶのリンパ球認識を仲介する内
皮細胞要素を、仲介するか前記要素と親密に結びつくか
であることが示される。リンパ球−内皮細胞相互作用に
おけるＶＡＰ−１のかかわりあいを直接的に評価するた
めに、アフィニティーで単離されたＶＡＰ−１とのリン
パ球の結合を分析した（図４）。リンパ球はプレート結
合ＶＡＰ−１に効果的に接着した。ＶＡＰ−１とのリン
パ球結合は特異的にｍＡｂ １Ｂ２で阻害されたが、コ
ントロールのｍＡｂ ３Ｇ６では阻害されなかった。ｍ
Ａｂ １Ｂ２は別の関連のない内皮細胞分子とのリンパ
球結合を妨害しなかった（図４）。
【００５７】組織分布およびＨＥＶ結合の結果はＶＡＰ
−１は主に末梢リンパ節、扁桃および滑膜とのリンパ球
の往来に関係することが示唆される。興味深いことに、
扁桃におけるＶＡＰ−１発現の欠如したものは、１Ｂ２
陽性のものとは形態的には区別できない、後毛細血管細
静脈のマイナーサブセットと定義される。扁桃は胃腸管
と親密に結びつけられているので、それらは粘膜（ＶＡ
Ｐ−１陰性）型および末梢リンパ節（ＶＡＰ−１陽性）
型の両方のＨＥＶ特異性を含みうる。ＶＡＰ−１発現に
おける表現型の違いが各々の個々のＨＥＶのリンパ球結
合能とどのように相互に関係するかは依然決定すべきで
ある。粘膜のリンパ系器官におけるＶＡＰ−１の欠乏は
この内皮抗原が異なったリンパ球認識システムにおいて
相違して調節されるかもしれないことを暗示する。さら
に、炎症の程度はインビボのＶＡＰ−１発現のレベルと
相互に関係する。
−１は主に末梢リンパ節、扁桃および滑膜とのリンパ球
の往来に関係することが示唆される。興味深いことに、
扁桃におけるＶＡＰ−１発現の欠如したものは、１Ｂ２
陽性のものとは形態的には区別できない、後毛細血管細
静脈のマイナーサブセットと定義される。扁桃は胃腸管
と親密に結びつけられているので、それらは粘膜（ＶＡ
Ｐ−１陰性）型および末梢リンパ節（ＶＡＰ−１陽性）
型の両方のＨＥＶ特異性を含みうる。ＶＡＰ−１発現に
おける表現型の違いが各々の個々のＨＥＶのリンパ球結
合能とどのように相互に関係するかは依然決定すべきで
ある。粘膜のリンパ系器官におけるＶＡＰ−１の欠乏は
この内皮抗原が異なったリンパ球認識システムにおいて
相違して調節されるかもしれないことを暗示する。さら
に、炎症の程度はインビボのＶＡＰ−１発現のレベルと
相互に関係する。
【００５８】実施例５ＶＡＰ−１との細胞の結合についての１Ｂ２の効果のた
めの分析 ＶＡＰ−１および１Ｅ１２を実施例２に記載されたよう
に扁桃抽出物からアフィニティー精製した。精製された
ＶＡＰ−１、１Ｅ１２および熱不活性化されたＢＳＡ
を、０．０１％β−オクチルグルコピラノシドを界面活
性剤として用いた２０ｍＭ トリス塩酸、ｐＨ７．４、
１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＭｇＣｌ 2、２ｍＭ
ＣａＣｌ2中に希釈した。タンパク質をガラスウェル
（ラブ−テックチャンバースライド、ヌンク）上に１６
時間＋４℃で吸収した。１ｍｇ／ｍｌＢＳＡを含有する
ＰＢＳ中で３０分間室温でブロックしたのち、１Ｂ２ま
たは３Ｇ６上清をウェルに添加し、３０分間室温でイン
キュベーションを続けた。一方、新たに単離された末梢
血単球を組織培養ボトルにおいて１０％ＦＣＳおよび１
０ｍＭ ヘペスを含有するＲＰＭＩ １６４０中で１時
間３７℃でインキュベートしてプラスチック接着単球を
除去した。１００μｌのＲＰＭＩ １６４０中の非接着
リンパ球（１．８×１０6細胞／ウェル）を各ウェルに
適用した。３７℃での３０分間のインキュベーションの
のち、非接着細胞を軽くたたくことによってはずした。
ウェルの上表部を除去し、スライドをＰＢＳのゆるやか
な流れによって洗浄し、１％グルタルアルデヒドを含有
する冷ＰＢＳ中で固定した。そののち、ディフ−クイッ
ク染色を用いて細胞を染色した。結合した細胞を各ウェ
ルにおける細胞の数を視覚的に評価して分類することに
よって定量化した（総面積５０ｍｍ2／試料）。
めの分析 ＶＡＰ−１および１Ｅ１２を実施例２に記載されたよう
に扁桃抽出物からアフィニティー精製した。精製された
ＶＡＰ−１、１Ｅ１２および熱不活性化されたＢＳＡ
を、０．０１％β−オクチルグルコピラノシドを界面活
性剤として用いた２０ｍＭ トリス塩酸、ｐＨ７．４、
１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＭｇＣｌ 2、２ｍＭ
ＣａＣｌ2中に希釈した。タンパク質をガラスウェル
（ラブ−テックチャンバースライド、ヌンク）上に１６
時間＋４℃で吸収した。１ｍｇ／ｍｌＢＳＡを含有する
ＰＢＳ中で３０分間室温でブロックしたのち、１Ｂ２ま
たは３Ｇ６上清をウェルに添加し、３０分間室温でイン
キュベーションを続けた。一方、新たに単離された末梢
血単球を組織培養ボトルにおいて１０％ＦＣＳおよび１
０ｍＭ ヘペスを含有するＲＰＭＩ １６４０中で１時
間３７℃でインキュベートしてプラスチック接着単球を
除去した。１００μｌのＲＰＭＩ １６４０中の非接着
リンパ球（１．８×１０6細胞／ウェル）を各ウェルに
適用した。３７℃での３０分間のインキュベーションの
のち、非接着細胞を軽くたたくことによってはずした。
ウェルの上表部を除去し、スライドをＰＢＳのゆるやか
な流れによって洗浄し、１％グルタルアルデヒドを含有
する冷ＰＢＳ中で固定した。そののち、ディフ−クイッ
ク染色を用いて細胞を染色した。結合した細胞を各ウェ
ルにおける細胞の数を視覚的に評価して分類することに
よって定量化した（総面積５０ｍｍ2／試料）。
【００５９】実施例６ＶＡＰ−１の部分アミノ酸配列
９０ｋＤのＶＡＰ−１抗原の部分アミノ酸配列を決定し
た。部分アミノ酸配列はＴＥＤＧＤＭＸＬＶＮＧＡＳＡ
ＮＥＧＸＶＥ［配列番号：１］である２０アミノ酸長で
ある。タンパク質およびＤＮＡ配列のデータベースのサ
ーチではこの配列がいかなる他の既知の配列であること
も明らかにしなかった。
た。部分アミノ酸配列はＴＥＤＧＤＭＸＬＶＮＧＡＳＡ
ＮＥＧＸＶＥ［配列番号：１］である２０アミノ酸長で
ある。タンパク質およびＤＮＡ配列のデータベースのサ
ーチではこの配列がいかなる他の既知の配列であること
も明らかにしなかった。
【００６０】参考例１炎症反応を示す臨床試料におけるＶＡＰ−１の測定
正常の扁桃、末梢リンパ節、消化管、および心臓試料を
外科手術から新たにえ、器官提供者から腎臓試料をえ
た。他の組織は剖検試料に由来した。これらすべての標
本は組織病理学的に非炎症性であると決定された。炎症
性標本は慢性皮膚疾患（乾癬、アトピー性湿疹、偏平紅
色苔癬）にかかっている患者の皮膚のパンチ生検材料か
らえた。また、同一の患者の肉眼的に関係のない範囲か
らコントロールの生検材料をえた。炎症をおこした消化
管標本は治療目的で手術を行った炎症性腸疾患（クロー
ン病（Crohn's disease）、潰瘍性大腸炎）にかかった
患者由来であった。滑膜標本は滑膜切除物由来であっ
た。
外科手術から新たにえ、器官提供者から腎臓試料をえ
た。他の組織は剖検試料に由来した。これらすべての標
本は組織病理学的に非炎症性であると決定された。炎症
性標本は慢性皮膚疾患（乾癬、アトピー性湿疹、偏平紅
色苔癬）にかかっている患者の皮膚のパンチ生検材料か
らえた。また、同一の患者の肉眼的に関係のない範囲か
らコントロールの生検材料をえた。炎症をおこした消化
管標本は治療目的で手術を行った炎症性腸疾患（クロー
ン病（Crohn's disease）、潰瘍性大腸炎）にかかった
患者由来であった。滑膜標本は滑膜切除物由来であっ
た。
【００６１】試料は実施例１に記載されたようにイムノ
パーオキシダーゼを用いて染色した。簡潔には、アセト
ンで固定した凍結切片を順次第一抗体（培養上清または
５０μｇ／ｍｌ 精製免疫グロブリン）とおよび適した
パーオキシダーゼ接合第二段階試薬とインキュベート
し、呈色反応はＨ2Ｏ2および基質としてジアミノベンジ
ジンを用いて行なった。腸および皮膚試料（正常および
炎症性）におけるＶＡＰ−１発現を診断の知識なしにコ
ードされた試料から２つの独立した読取装置によって分
析した。
パーオキシダーゼを用いて染色した。簡潔には、アセト
ンで固定した凍結切片を順次第一抗体（培養上清または
５０μｇ／ｍｌ 精製免疫グロブリン）とおよび適した
パーオキシダーゼ接合第二段階試薬とインキュベート
し、呈色反応はＨ2Ｏ2および基質としてジアミノベンジ
ジンを用いて行なった。腸および皮膚試料（正常および
炎症性）におけるＶＡＰ−１発現を診断の知識なしにコ
ードされた試料から２つの独立した読取装置によって分
析した。
【００６２】実施例１に述べたように、ＶＡＰ−１は正
常の炎症をおこしていない消化管のいくつかの細静脈に
おいて低いレベルでのみ発現される（図５Ａ）。対照的
に、炎症性腸疾患の患者からの消化管標本は著しく増加
したＶＡＰ−１の発現を示した（図５Ｂおよび５Ｃなら
びに表１）。ＶＡＰ−１は固有層の平滑な壁で囲まれた
細静脈（flat-walled venules of the lamina propri
a）においておよび組織化されたリンパ小節（パイエル
板）におけるＨＥＶ様細静脈においての両方で誘導され
た。皮膚においても、慢性炎症はＶＡＰ−１の増加した
合成に伴って起こった（図６ＡおよびＢ）。結果におけ
る個人間の変動のいかなる効果をも排除するために、皮
膚疾患領域からの１試料および同一患者の関係のない皮
膚範囲からのコントロール試料を同時にバイオプシーし
染色した。これらの標本においても、上方真皮における
ＶＡＰ−１陽性細静脈の数はコントロール範囲からの試
料におけるよりは炎症性試料においてより高かった。さ
らに、目だった脈管周囲のリンパ球浸潤物はつねにＶＡ
Ｐ−１陽性血管と結びついていた。
常の炎症をおこしていない消化管のいくつかの細静脈に
おいて低いレベルでのみ発現される（図５Ａ）。対照的
に、炎症性腸疾患の患者からの消化管標本は著しく増加
したＶＡＰ−１の発現を示した（図５Ｂおよび５Ｃなら
びに表１）。ＶＡＰ−１は固有層の平滑な壁で囲まれた
細静脈（flat-walled venules of the lamina propri
a）においておよび組織化されたリンパ小節（パイエル
板）におけるＨＥＶ様細静脈においての両方で誘導され
た。皮膚においても、慢性炎症はＶＡＰ−１の増加した
合成に伴って起こった（図６ＡおよびＢ）。結果におけ
る個人間の変動のいかなる効果をも排除するために、皮
膚疾患領域からの１試料および同一患者の関係のない皮
膚範囲からのコントロール試料を同時にバイオプシーし
染色した。これらの標本においても、上方真皮における
ＶＡＰ−１陽性細静脈の数はコントロール範囲からの試
料におけるよりは炎症性試料においてより高かった。さ
らに、目だった脈管周囲のリンパ球浸潤物はつねにＶＡ
Ｐ−１陽性血管と結びついていた。
【００６３】
【表１】
【００６４】腸標本はクローン病、潰瘍性大腸炎および
腫瘍について手術した患者由来であった（腫瘍試料の関
係のない範囲は「正常」試料を示す）。材料および方法
に記載されたように各試料におけるＶＡＰ−１陽性細静
脈の数は−から＋＋＋＋で評価した。
腫瘍について手術した患者由来であった（腫瘍試料の関
係のない範囲は「正常」試料を示す）。材料および方法
に記載されたように各試料におけるＶＡＰ−１陽性細静
脈の数は−から＋＋＋＋で評価した。
【００６５】実施例７ＶＡＰ−１は炎症をおこした粘膜との結合を仲介する
インビトロの凍結切片分析は実施例３に記載されたよう
に行なった。モノクローナル抗体１Ｂ２は豊富にＶＡＰ
−１を発現した２つの消化管試料においておおよそ６０
％まで固有層の小さい血管とのリンパ球結合を阻害した
（図７）。
に行なった。モノクローナル抗体１Ｂ２は豊富にＶＡＰ
−１を発現した２つの消化管試料においておおよそ６０
％まで固有層の小さい血管とのリンパ球結合を阻害した
（図７）。
【００６６】本発明はその特定の実施態様に関連して記
載されているが、さらなる修飾が可能であり、一般に本
発明の原理にしたがい、本発明が関係する技術分野にお
ける既知または通例の実施において含まれるような、お
よび先に述べた本質的な特徴に適用されうるような、お
よび添付した請求の範囲にしたがうような本明細書開示
からのこのような離脱を含む、本発明のいかなる変異、
用途、または適用を本願がカバーすることが意図される
ことが理解されるであろう。
載されているが、さらなる修飾が可能であり、一般に本
発明の原理にしたがい、本発明が関係する技術分野にお
ける既知または通例の実施において含まれるような、お
よび先に述べた本質的な特徴に適用されうるような、お
よび添付した請求の範囲にしたがうような本明細書開示
からのこのような離脱を含む、本発明のいかなる変異、
用途、または適用を本願がカバーすることが意図される
ことが理解されるであろう。
【００６７】
【発明の効果】本発明により、ヒトにおいてリンパ球結
合を仲介する、新規な内皮細胞分子ＶＡＰ−１を提供し
た。また、抗ＶＡＰ−１抗体、該抗体を産生するハイブ
リドーマ細胞系をも提供した。本発明はさらに、抗ＶＡ
Ｐ−１抗体などのＶＡＰ−１結合合成物を含有する医薬
組成物をも提供した。該医薬組成物を投与することによ
り、炎症性疾患および自己免疫疾患を治療することがで
きる。
合を仲介する、新規な内皮細胞分子ＶＡＰ−１を提供し
た。また、抗ＶＡＰ−１抗体、該抗体を産生するハイブ
リドーマ細胞系をも提供した。本発明はさらに、抗ＶＡ
Ｐ−１抗体などのＶＡＰ−１結合合成物を含有する医薬
組成物をも提供した。該医薬組成物を投与することによ
り、炎症性疾患および自己免疫疾患を治療することがで
きる。
【００６８】
（１）一般情報：
（ｉ）出願人：
（Ａ）：氏名：ヤルカネン、シルパ
（Ｂ）：通り：ラウボランチエ
（Ｃ）：市：ピースパンリスチ
（Ｅ）：国：フィンランド共和国
（Ｆ）：郵便番号（ＺＩＰ）：エスエフ−２０７６０
（ｉ）出願人：
（Ａ）：氏名：サルミ、マルコ
（Ｂ）：通り：ベヘ−ヘメーンカツ １２ア−
（Ｃ）：市：ツルク
（Ｅ）：国：フィンランド共和国
（Ｆ）：郵便番号（ＺＩＰ）：エスエフ−２０５００
（ii）発明の名称：ヒトにおけるリンパ球結合を仲介す
る新規な内皮細胞分子 （iii）配列の数：１ （iv）連絡先住所： （Ａ）受信人：オリオンコーポレーション、オリオン−
ファルモス ファーマシューティカルズ、特許部 （Ｂ）通り：オリオニンチエ １ （Ｃ）市：エスポー （Ｅ）国：フィンランド共和国 （Ｆ）ＺＩＰ：エスエフ−０２２００ （ｖ）コンピュータリーダブルフォーム： （Ａ）メディアタイプ：フロッピー（登録商標）ディス
ク （Ｂ）コンピュータ：ＩＢＭ ＰＣ コンパチブル （Ｃ）オペレーティングシステム：ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ
−ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：ＡＳＣＩＩ−フォーマット （ｖｉ）先行出願データ： （Ａ）出願番号：ＵＳ８９５３５４ （Ｂ）出願日：１９９２年６月６日 （２）配列番号：１に対する情報： （ｉ）配列の性質： （Ａ）長さ：２０アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：両形態 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：１：
る新規な内皮細胞分子 （iii）配列の数：１ （iv）連絡先住所： （Ａ）受信人：オリオンコーポレーション、オリオン−
ファルモス ファーマシューティカルズ、特許部 （Ｂ）通り：オリオニンチエ １ （Ｃ）市：エスポー （Ｅ）国：フィンランド共和国 （Ｆ）ＺＩＰ：エスエフ−０２２００ （ｖ）コンピュータリーダブルフォーム： （Ａ）メディアタイプ：フロッピー（登録商標）ディス
ク （Ｂ）コンピュータ：ＩＢＭ ＰＣ コンパチブル （Ｃ）オペレーティングシステム：ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ
−ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：ＡＳＣＩＩ−フォーマット （ｖｉ）先行出願データ： （Ａ）出願番号：ＵＳ８９５３５４ （Ｂ）出願日：１９９２年６月６日 （２）配列番号：１に対する情報： （ｉ）配列の性質： （Ａ）長さ：２０アミノ酸 （Ｂ）型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：両形態 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：ペプチド （xi）配列：配列番号：１：
【図１】図１は、ヒト組織におけるＶＡＰ−１の分布を
示す。（Ａ）炎症をおこしている（inflamed）滑膜で
は、ｍＡｂ １Ｂ２はＨＥＶ様血管を強く染色する。
（Ｂ）扁桃（tonsil）では、ＨＥＶにおけるＶＡＰ−１
の発現は、強いもの（矢じり）からきわめて弱いもの
（矢印）または陰性のものまで様々である。（Ｃ）扁桃
の免疫蛍光染色は、血管の内腔表面上のＶＡＰ−１の顕
著な発現（矢印）を示す。（Ｄ）虫垂では、わずかに弱
く染まっているＨＥＶが見えるだけである（矢じり）。
倍率：Ａは１００倍、Ｂは２５０倍、ＣおよびＤは４０
０倍である。
示す。（Ａ）炎症をおこしている（inflamed）滑膜で
は、ｍＡｂ １Ｂ２はＨＥＶ様血管を強く染色する。
（Ｂ）扁桃（tonsil）では、ＨＥＶにおけるＶＡＰ−１
の発現は、強いもの（矢じり）からきわめて弱いもの
（矢印）または陰性のものまで様々である。（Ｃ）扁桃
の免疫蛍光染色は、血管の内腔表面上のＶＡＰ−１の顕
著な発現（矢印）を示す。（Ｄ）虫垂では、わずかに弱
く染まっているＨＥＶが見えるだけである（矢じり）。
倍率：Ａは１００倍、Ｂは２５０倍、ＣおよびＤは４０
０倍である。
【図２】図２は、ＶＡＰ−１が９０ｋＤのタンパク質で
あることを示す。レーン１：免疫精製されたＶＡＰ−１
の銀染色。レーン２および３：扁桃の１２５Ｉでラベル
された間質細胞はｍＡｂ １Ｂ２で（レーン２）または
コントロールのｍＡｂ３Ｇ６で（レーン３）免疫沈降し
た。１８０〜２００ｋＤの範囲のバンドは必ずしも存在
するわけではない。分子量標準は左に示されている。白
血球を除去した（depleted）扁桃抽出物を、細胞溶解緩
衝液（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭトリス塩基、
０．１５ｍＭ ＭｇＣｌ2、１％ＮＰ−４０、１ｍＭ
ＰＭＳＦおよび１％アプロチニン）に４℃にて一晩溶解
させた。細胞溶解物を４℃にて１００００ｇで３０分間
遠心分離した。細胞溶解物をセファロース（Sepharos
e）ＣＬ−４Ｂ（ファルマシア（Pharmacia）、スウェー
デン）カラムを通すことによって上清をあらかじめ浄化
した。つぎに正常なマウス血清を、関係のないＩｇＧ１
ｍＡｂを、および１Ｂ２ ｍＡｂを用いてえられた、
３つのＣＮＢｒ活性化セファロース−４Ｂ（ファルマシ
ア）カラム（５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｌのカラム容積）にそ
の上清を連続して適用した。カラムを細胞溶解緩衝液で
充分に洗浄した。そののち、１Ｂ２カラムに結合した材
料を５０ｍＭ トリエタノールアミンで溶出し、凍結乾
燥し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し（７．５％、還元）、
銀染色を用いて視覚化した。
あることを示す。レーン１：免疫精製されたＶＡＰ−１
の銀染色。レーン２および３：扁桃の１２５Ｉでラベル
された間質細胞はｍＡｂ １Ｂ２で（レーン２）または
コントロールのｍＡｂ３Ｇ６で（レーン３）免疫沈降し
た。１８０〜２００ｋＤの範囲のバンドは必ずしも存在
するわけではない。分子量標準は左に示されている。白
血球を除去した（depleted）扁桃抽出物を、細胞溶解緩
衝液（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭトリス塩基、
０．１５ｍＭ ＭｇＣｌ2、１％ＮＰ−４０、１ｍＭ
ＰＭＳＦおよび１％アプロチニン）に４℃にて一晩溶解
させた。細胞溶解物を４℃にて１００００ｇで３０分間
遠心分離した。細胞溶解物をセファロース（Sepharos
e）ＣＬ−４Ｂ（ファルマシア（Pharmacia）、スウェー
デン）カラムを通すことによって上清をあらかじめ浄化
した。つぎに正常なマウス血清を、関係のないＩｇＧ１
ｍＡｂを、および１Ｂ２ ｍＡｂを用いてえられた、
３つのＣＮＢｒ活性化セファロース−４Ｂ（ファルマシ
ア）カラム（５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｌのカラム容積）にそ
の上清を連続して適用した。カラムを細胞溶解緩衝液で
充分に洗浄した。そののち、１Ｂ２カラムに結合した材
料を５０ｍＭ トリエタノールアミンで溶出し、凍結乾
燥し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し（７．５％、還元）、
銀染色を用いて視覚化した。
【図３】図３は、ＶＡＰ−１がＨＥＶとのリンパ球結合
に関係することを示す。扁桃、末梢リンパ節（ＰＬ
Ｎ）、滑膜および虫垂のＨＥＶとのリンパ球の結合、お
よび扁桃のＨＥＶとの顆粒球の結合を、インビトロの凍
結切片分析を用いてｍＡｂ１Ｂ２の存在下および非存在
下で評価した。３つの独立した実験の結果を標準誤差と
ともにコントロールの結合の百分率として示す（１００
％＝３Ｇ６処理切片上の結合細胞の数）。
に関係することを示す。扁桃、末梢リンパ節（ＰＬ
Ｎ）、滑膜および虫垂のＨＥＶとのリンパ球の結合、お
よび扁桃のＨＥＶとの顆粒球の結合を、インビトロの凍
結切片分析を用いてｍＡｂ１Ｂ２の存在下および非存在
下で評価した。３つの独立した実験の結果を標準誤差と
ともにコントロールの結合の百分率として示す（１００
％＝３Ｇ６処理切片上の結合細胞の数）。
【図４】図４は、単離したＶＡＰ−１がリンパ球結合を
サポートすることを示す。免疫精製されたＶＡＰ−１お
よびコントロールのタンパク質（１Ｅ１２；リンパ球結
合をサポートする関連のない内皮細胞分子、およびＢＳ
Ａ）をガラス上に吸収させ、リンパ球結合を調べた。
（Ａ）２つの独立した実験の結果をコントロールの結合
から百分率で示す（１００％＝ｍＡｂ ３Ｇ６処理後
の、プレート結合ＶＡＰ−１または１Ｅ１２に結合した
細胞の数）。（ＢＳＡに結合している）非特異的なバッ
クグラウンドをすべての分析結果から引算する。（Ｂ）
ｍＡｂ ３Ｇ６の存在下でＶＡＰ−１で被覆されたウェ
ルとのリンパ球結合。（Ｃ）ｍＡｂ １Ｂ２の存在下で
ＶＡＰ−１で被覆されたウェルとのリンパ球結合。ＶＡ
Ｐ−１および１Ｅ１２を図２に示すように扁桃抽出物か
らアフィニティー精製した。精製されたＶＡＰ−１、１
Ｅ１２および熱不活性化したＢＳＡを、０．０１％β−
オクチルグルコピラノシドを界面活性剤（detergent）
として用いた２０ｍＭ トリス塩酸、ｐＨ７．４、１５
０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＭｇＣｌ2、２ｍＭＣａＣ
ｌ2中に希釈した。タンパク質をガラスウェル（ラブ−
テック（Ｌａｂ−Ｔｅｋ）チャンバースライド、ヌンク
（Nunc））上に１６時間＋４℃で吸収した。１ｍｇ／ｍ
ｌ ＢＳＡを含有するＰＢＳ中で３０分間室温でブロッ
クしたのち、１Ｂ２または３Ｇ６上清をウェルに添加
し、３０分間室温でインキュベーションを続けた。一
方、新たに単離された末梢血単球を組織培養ボトルにお
いて１０％ＦＣＳおよび１０ｍＭ ヘペスを含有するＲ
ＰＭＩ １６４０中で１時間３７℃でインキュベートし
てプラスチック接着単球を除去した。１００μｌのＲＰ
ＭＩ １６４０中の非接着リンパ球（１．８×１０6細
胞／ウェル）を各ウェルに適用した。３７℃での３０分
間のインキュベーションののち、非接着細胞を軽くたた
くことによってはずした。ウェルの上表部（tops）を除
去し、スライドをＰＢＳのおだやかな流れによって洗浄
し、１％グルタルアルデヒドを含有する冷ＰＢＳ中で固
定した。そののち、ディフ−クイック染色（Diff-Quick
stains）を用いて細胞を染色した。結合した細胞を、
各ウェルにおける細胞の数を視覚的に評価して点数をつ
けることによって定量化した（総面積５０ｍｍ2／試
料）。
サポートすることを示す。免疫精製されたＶＡＰ−１お
よびコントロールのタンパク質（１Ｅ１２；リンパ球結
合をサポートする関連のない内皮細胞分子、およびＢＳ
Ａ）をガラス上に吸収させ、リンパ球結合を調べた。
（Ａ）２つの独立した実験の結果をコントロールの結合
から百分率で示す（１００％＝ｍＡｂ ３Ｇ６処理後
の、プレート結合ＶＡＰ−１または１Ｅ１２に結合した
細胞の数）。（ＢＳＡに結合している）非特異的なバッ
クグラウンドをすべての分析結果から引算する。（Ｂ）
ｍＡｂ ３Ｇ６の存在下でＶＡＰ−１で被覆されたウェ
ルとのリンパ球結合。（Ｃ）ｍＡｂ １Ｂ２の存在下で
ＶＡＰ−１で被覆されたウェルとのリンパ球結合。ＶＡ
Ｐ−１および１Ｅ１２を図２に示すように扁桃抽出物か
らアフィニティー精製した。精製されたＶＡＰ−１、１
Ｅ１２および熱不活性化したＢＳＡを、０．０１％β−
オクチルグルコピラノシドを界面活性剤（detergent）
として用いた２０ｍＭ トリス塩酸、ｐＨ７．４、１５
０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＭｇＣｌ2、２ｍＭＣａＣ
ｌ2中に希釈した。タンパク質をガラスウェル（ラブ−
テック（Ｌａｂ−Ｔｅｋ）チャンバースライド、ヌンク
（Nunc））上に１６時間＋４℃で吸収した。１ｍｇ／ｍ
ｌ ＢＳＡを含有するＰＢＳ中で３０分間室温でブロッ
クしたのち、１Ｂ２または３Ｇ６上清をウェルに添加
し、３０分間室温でインキュベーションを続けた。一
方、新たに単離された末梢血単球を組織培養ボトルにお
いて１０％ＦＣＳおよび１０ｍＭ ヘペスを含有するＲ
ＰＭＩ １６４０中で１時間３７℃でインキュベートし
てプラスチック接着単球を除去した。１００μｌのＲＰ
ＭＩ １６４０中の非接着リンパ球（１．８×１０6細
胞／ウェル）を各ウェルに適用した。３７℃での３０分
間のインキュベーションののち、非接着細胞を軽くたた
くことによってはずした。ウェルの上表部（tops）を除
去し、スライドをＰＢＳのおだやかな流れによって洗浄
し、１％グルタルアルデヒドを含有する冷ＰＢＳ中で固
定した。そののち、ディフ−クイック染色（Diff-Quick
stains）を用いて細胞を染色した。結合した細胞を、
各ウェルにおける細胞の数を視覚的に評価して点数をつ
けることによって定量化した（総面積５０ｍｍ2／試
料）。
【図５】図５は、ＶＡＰ−１は炎症をおこした消化管
（gut）で正の調節をうけることを示す。正常な消化管
では、固有層（lamina propria）におけるごくわずかの
かすかに陽性の血管が観察される（Ａ、この範囲では細
静脈はＶＡＰ−１に対してはほとんど陰性である）。炎
症をおこした消化管（潰瘍性大腸炎）では、多数のＶＡ
Ｐ−１陽性細静脈（矢印）が、Ｂ）固有層でもＣ）組織
化されたリンパ小胞でも見られる。内因性パーオキシダ
ーゼを含有する細胞（肥満細胞）は非特異的な反応性を
示す。ｅ、消化管の上皮細胞；ｌｐ、固有層。倍率２５
０倍。
（gut）で正の調節をうけることを示す。正常な消化管
では、固有層（lamina propria）におけるごくわずかの
かすかに陽性の血管が観察される（Ａ、この範囲では細
静脈はＶＡＰ−１に対してはほとんど陰性である）。炎
症をおこした消化管（潰瘍性大腸炎）では、多数のＶＡ
Ｐ−１陽性細静脈（矢印）が、Ｂ）固有層でもＣ）組織
化されたリンパ小胞でも見られる。内因性パーオキシダ
ーゼを含有する細胞（肥満細胞）は非特異的な反応性を
示す。ｅ、消化管の上皮細胞；ｌｐ、固有層。倍率２５
０倍。
【図６】図６は、慢性皮膚疾患でのＶＡＰ−１誘導を示
す。同じ患者の正常な範囲（Ａ）および乾癬の病変
（Ｂ）からの皮膚生検材料は炎症の部位の皮膚の血管
（矢じり）でＶＡＰ−１の誘導を示す。血管周囲の白血
球浸潤物はＶＡＰ−１陽性細静脈の周辺にみられうる。
ｅ、表皮。倍率２００倍。Ｃ）正常なおよび疾患のある
皮膚におけるＶＡＰ−１の発現（＋〜＋＋＋＋で評価し
た）は同一患者からの対の生検材料（関係のないものお
よび関係するもの）について調べた。丸かっこ内に各群
に属する患者数を示す。
す。同じ患者の正常な範囲（Ａ）および乾癬の病変
（Ｂ）からの皮膚生検材料は炎症の部位の皮膚の血管
（矢じり）でＶＡＰ−１の誘導を示す。血管周囲の白血
球浸潤物はＶＡＰ−１陽性細静脈の周辺にみられうる。
ｅ、表皮。倍率２００倍。Ｃ）正常なおよび疾患のある
皮膚におけるＶＡＰ−１の発現（＋〜＋＋＋＋で評価し
た）は同一患者からの対の生検材料（関係のないものお
よび関係するもの）について調べた。丸かっこ内に各群
に属する患者数を示す。
【図７】図７は、炎症で誘導されたＶＡＰ−１がリンパ
球結合を仲介することを示す。凍結切片結合分析を行な
い、前記分析では炎症をおこした固有層の第VII因子陽
性細静脈へのＰＢＬの結合を分析した。阻害分析は組織
切片をｍＡｂ １Ｂ２および３Ｇ６でプレインキュベー
トすることによって行なった。結果を標準誤差とともに
コントロールの結合の百分率として示す（すなわち、ｍ
Ａｂ ３Ｇ６の存在下でのＰＢＬの結合を１００％の結
合と定義する）。
球結合を仲介することを示す。凍結切片結合分析を行な
い、前記分析では炎症をおこした固有層の第VII因子陽
性細静脈へのＰＢＬの結合を分析した。阻害分析は組織
切片をｍＡｂ １Ｂ２および３Ｇ６でプレインキュベー
トすることによって行なった。結果を標準誤差とともに
コントロールの結合の百分率として示す（すなわち、ｍ
Ａｂ ３Ｇ６の存在下でのＰＢＬの結合を１００％の結
合と定義する）。
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ａ６１Ｐ 19/02 Ａ６１Ｐ 29/00
29/00 １０１
１０１ Ｃ０７Ｋ 14/47
Ｃ０７Ｋ 14/47 16/18
16/18 Ｃ１２Ｐ 21/08
Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＣ
// Ｃ１２Ｐ 21/08 5/00 Ｂ
(56)参考文献 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌ
ａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｓｕ
ｐｐｌ．Ｖｏｌ．０，Ｎｏ．16Ｆ
（1992），ｐ．107，Ｗ610Ａ
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C12N 15/00
A61K 39/395
C07K 14/47 - 14/78
C07K 16/18
ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (9)
- 【請求項１】 リンパ球を除去した滑膜から得ることが
でき、受託番号がＤＳＭ ＡＣＣ２０４１であるハイブ
リドーマ細胞系によって産生されるモノクローナル抗体
により検出されることができ、かつ還元条件下でのＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥにより９０ｋＤａの分子量を有するものと
して特徴づけられる、実質的に精製され単離されたヒト
内皮血管接着タンパク質−１（ＶＡＰ−１）。 - 【請求項２】 前記ＶＡＰ−１が、リンパ球に結合する
ＶＡＰ−１である請求項１記載のＶＡＰ−１。 - 【請求項３】 前記ＶＡＰ−１が、抗ＶＡＰ−１抗体に
ＶＡＰ−１を結合させることからなる方法により得られ
るＶＡＰ−１である請求項１または２記載のＶＡＰ−
１。 - 【請求項４】 請求項１、２または３記載のＶＡＰ−１
に特異的な抗ＶＡＰ−１抗体を産生するハイブリドーマ
細胞系。 - 【請求項５】 受託番号がＤＳＭ ＡＣＣ２０４１であ
る請求項４記載のハイブリドーマ細胞系。 - 【請求項６】 請求項１、２または３記載のヒト内皮Ｖ
ＡＰ−１に特異的な抗ＶＡＰ−１抗体またはそのＶＡＰ
−１結合断片であって、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥ
Ｃ）表面タンパクと結合しない抗ＶＡＰ−１抗体または
そのＶＡＰ−１結合断片。 - 【請求項７】 請求項４または５記載のハイブリドーマ
細胞系によって産生されるモノクローナル抗体。 - 【請求項８】 炎症（慢性または急性）、関節炎、リウ
マチ様関節炎、乾癬、アトピー性湿疹、偏平紅色苔癬お
よび炎症性腸疾患からなる群から選択される疾患の予防
ないし治療のための医薬組成物であって、有効量の請求
項６または７記載の抗ＶＡＰ−１抗体を含有し、注射に
適する剤形である医薬組成物。 - 【請求項９】 単位投与量の形である請求項８記載の医
薬組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP50115594A Division JP3431922B2 (ja) | 1992-06-09 | 1993-06-09 | 炎症性疾患および自己免疫疾患の診断用組成物および診断方法 |
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|---|---|
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| JP3500384B2 true JP3500384B2 (ja) | 2004-02-23 |
Family
ID=25404388
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP50115594A Expired - Lifetime JP3431922B2 (ja) | 1992-06-09 | 1993-06-09 | 炎症性疾患および自己免疫疾患の診断用組成物および診断方法 |
| JP2002289280A Expired - Lifetime JP3500384B2 (ja) | 1992-06-09 | 2002-10-01 | ヒトにおけるリンパ球結合を仲介する新規な内皮細胞分子 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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| FI20020807A0 (fi) * | 2002-04-29 | 2002-04-29 | Biotie Therapies Oyj | Uusia humanisoituja anti-VAP-1 monoklonaalisia vasta-aineita |
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| FI20075278A0 (fi) * | 2007-04-20 | 2007-04-20 | Biotie Therapies Corp | Uudet täysin ihmisperäiset anti-VAP-1 monoklonaaliset vasta-aineet |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69406664T2 (de) * | 1993-06-18 | 1998-06-04 | Biotie Therapies Oy | Zusammensetzungen und diagnostische verfahren unter verwendung von monoklonalen antikoerpern gegen cd44v6 |
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1993
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-
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-
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|---|
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