JP3366933B2 - キシラナーゼ遺伝子、該遺伝子を含むベクター及び形質転換体 - Google Patents
キシラナーゼ遺伝子、該遺伝子を含むベクター及び形質転換体Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、キシラナーゼ遺伝
子、該遺伝子を含むプラスミドベクター及び形質転換体
に関する。キシラナーゼは、植物ヘミセルロースの主要
成分であるβ−１，４−Ｄ−キシランをランダムに分解
する酵素であり、正式な名称はエンド−１，４−β−キ
シラナーゼ（EC 3.2.1.8) である。
子、該遺伝子を含むプラスミドベクター及び形質転換体
に関する。キシラナーゼは、植物ヘミセルロースの主要
成分であるβ−１，４−Ｄ−キシランをランダムに分解
する酵素であり、正式な名称はエンド−１，４−β−キ
シラナーゼ（EC 3.2.1.8) である。
【０００２】
【従来の技術】キシラナーゼは、木材、稲ワラ等に含ま
れるキシランを分解する作用を有することから、広葉樹
キシランからキシロオリゴ糖を生産する技術で活用され
ている他、パルプの漂白に用いる塩素の消費量を減らす
ためのパルプ漂白用酵素としての利用が期待されてい
る。
れるキシランを分解する作用を有することから、広葉樹
キシランからキシロオリゴ糖を生産する技術で活用され
ている他、パルプの漂白に用いる塩素の消費量を減らす
ためのパルプ漂白用酵素としての利用が期待されてい
る。
【０００３】キシラナーゼの工業的生産には、キシラナ
ーゼ生産能を有する微生物が用いられている。キシラナ
ーゼ生産能を有する微生物としては、主にストレプトマ
イセス属に属する微生物が知られている。しかしなが
ら、これら微生物が有するキシラナーゼ遺伝子の塩基配
列については、未解明であった。
ーゼ生産能を有する微生物が用いられている。キシラナ
ーゼ生産能を有する微生物としては、主にストレプトマ
イセス属に属する微生物が知られている。しかしなが
ら、これら微生物が有するキシラナーゼ遺伝子の塩基配
列については、未解明であった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、キシ
ラナーゼ生産能を有する微生物からキシラナーゼ遺伝子
をクローニングし、該酵素に関する遺伝子の構造を解明
し、該酵素の工業的生産に寄与することである。
ラナーゼ生産能を有する微生物からキシラナーゼ遺伝子
をクローニングし、該酵素に関する遺伝子の構造を解明
し、該酵素の工業的生産に寄与することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために、まず、ストレプトマイセス オリバ
セオビリディスから抽出したキシラナーゼのＮ末端塩基
配列を決定した。このＮ末端塩基配列をもとにして作製
したプライマーを用い、該微生物から抽出したゲノムＤ
ＮＡを鋳型としてＰＣＲ反応を行った。得られたＰＣＲ
産物（配列表の配列番号６参照）をプローブとして、イ
ンバースＰＣＲ（Nucleic Acid Research １６号，８１
８６頁，１９８８年）を実施してキシラナーゼ前駆体の
遺伝子のＤＮＡ配列を決定した（配列表の配列番号１参
照）。
を解決するために、まず、ストレプトマイセス オリバ
セオビリディスから抽出したキシラナーゼのＮ末端塩基
配列を決定した。このＮ末端塩基配列をもとにして作製
したプライマーを用い、該微生物から抽出したゲノムＤ
ＮＡを鋳型としてＰＣＲ反応を行った。得られたＰＣＲ
産物（配列表の配列番号６参照）をプローブとして、イ
ンバースＰＣＲ（Nucleic Acid Research １６号，８１
８６頁，１９８８年）を実施してキシラナーゼ前駆体の
遺伝子のＤＮＡ配列を決定した（配列表の配列番号１参
照）。
【０００６】さらに、このキシラナーゼ前駆体の遺伝子
のＤＮＡ配列とキシラナーゼのＮ末端アミノ酸配列をも
とに、キシラナーゼ遺伝子を構成し、そのＤＮＡ配列を
決定した（配列表の配列番号２参照）。また、このキシ
ラナーゼ遺伝子をプラスミドへのクローニングを実施
し、該プラスミドを大腸菌に形質転換した。このように
して、本発明を完成したのである。
のＤＮＡ配列とキシラナーゼのＮ末端アミノ酸配列をも
とに、キシラナーゼ遺伝子を構成し、そのＤＮＡ配列を
決定した（配列表の配列番号２参照）。また、このキシ
ラナーゼ遺伝子をプラスミドへのクローニングを実施
し、該プラスミドを大腸菌に形質転換した。このように
して、本発明を完成したのである。
【０００７】請求項１記載の本発明は、配列表の配列番
号１記載の塩基配列を有するストレプトマイセス オリ
バセオビリディス由来のキシラナーゼ前駆体の遺伝子で
ある。請求項２記載の本発明は、請求項１記載のキシラ
ナーゼ前駆体の遺伝子を含むプラスミドである。請求項
３記載の本発明は、請求項２記載のプラスミドで形質転
換された大腸菌（ＦＥＲＭ Ｐ−１６７１３）である。
請求項４記載の本発明は、配列表の配列番号２記載の塩
基配列を有するストレプトマイセス オリバセオビリデ
ィス由来のキシラナーゼの遺伝子である。請求項５記載
の本発明は、請求項４記載のキシラナーゼの遺伝子を含
むプラスミドである。請求項６記載の本発明は、請求項
５記載のプラスミドで形質転換された大腸菌である。
号１記載の塩基配列を有するストレプトマイセス オリ
バセオビリディス由来のキシラナーゼ前駆体の遺伝子で
ある。請求項２記載の本発明は、請求項１記載のキシラ
ナーゼ前駆体の遺伝子を含むプラスミドである。請求項
３記載の本発明は、請求項２記載のプラスミドで形質転
換された大腸菌（ＦＥＲＭ Ｐ−１６７１３）である。
請求項４記載の本発明は、配列表の配列番号２記載の塩
基配列を有するストレプトマイセス オリバセオビリデ
ィス由来のキシラナーゼの遺伝子である。請求項５記載
の本発明は、請求項４記載のキシラナーゼの遺伝子を含
むプラスミドである。請求項６記載の本発明は、請求項
５記載のプラスミドで形質転換された大腸菌である。
【０００８】
【発明の実施の形態】以下に、本発明を詳しく説明す
る。前記したように、本発明のキシラナーゼ遺伝子は、
ストレプトマイセス属微生物に属し、キシラナーゼ生産
能を有する微生物に由来するものである。この微生物と
しては各種のものがあるが、特にストレプトマイセス
オリバセオビリディス（Streptomyces olivaceoviridi
s)が好適であり、中でも、得られるキシラナーゼの酵素
活性を考慮すると、ストレプトマイセス オリバセオビ
リデスＥ−８６株を用いることが好ましい。
る。前記したように、本発明のキシラナーゼ遺伝子は、
ストレプトマイセス属微生物に属し、キシラナーゼ生産
能を有する微生物に由来するものである。この微生物と
しては各種のものがあるが、特にストレプトマイセス
オリバセオビリディス（Streptomyces olivaceoviridi
s)が好適であり、中でも、得られるキシラナーゼの酵素
活性を考慮すると、ストレプトマイセス オリバセオビ
リデスＥ−８６株を用いることが好ましい。
【０００９】本発明のキシラナーゼ遺伝子は、上記スト
レプトマイセス属微生物から、以下のようにして入手す
ることができる。まず、上記ストレプトマイセス属微生
物菌株を該微生物が十分に生育し、目的とする酵素を生
成するような条件にて培養し、得られる培養物から菌体
を除去してキシラナーゼを抽出する。キシラナーゼは、
さらに遠心分離、クロマトグラフィー等の手段により精
製しておくのが、以下の処理をスムーズに行う点から望
ましい。この精製キシラナーゼについて、Ｎ末端のアミ
ノ酸配列を解読した結果、配列表の配列番号３に示す通
りのものであった。
レプトマイセス属微生物から、以下のようにして入手す
ることができる。まず、上記ストレプトマイセス属微生
物菌株を該微生物が十分に生育し、目的とする酵素を生
成するような条件にて培養し、得られる培養物から菌体
を除去してキシラナーゼを抽出する。キシラナーゼは、
さらに遠心分離、クロマトグラフィー等の手段により精
製しておくのが、以下の処理をスムーズに行う点から望
ましい。この精製キシラナーゼについて、Ｎ末端のアミ
ノ酸配列を解読した結果、配列表の配列番号３に示す通
りのものであった。
【００１０】このキシラナーゼのＮ末端のアミノ酸配列
（配列表の配列番号３参照）から塩基配列を解読し、該
配列を基にしてプライマー（配列表の配列番号４）を作
成する。また、この配列のホモロジー検索の結果から、
データベースを活用してアミノ酸配列のアラインメント
を作成し、保存されているアミノ酸配列領域の情報を参
考にしてプライマー（配列表の配列番号５）を作製す
る。これら１組のプライマーを用い、キシラナーゼ生産
菌株から抽出したゲノムＤＮＡを鋳型として、常法に従
いポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ法）を行う。その結
果、５００ｂｐの明瞭なバンドを得ることができる。
（配列表の配列番号３参照）から塩基配列を解読し、該
配列を基にしてプライマー（配列表の配列番号４）を作
成する。また、この配列のホモロジー検索の結果から、
データベースを活用してアミノ酸配列のアラインメント
を作成し、保存されているアミノ酸配列領域の情報を参
考にしてプライマー（配列表の配列番号５）を作製す
る。これら１組のプライマーを用い、キシラナーゼ生産
菌株から抽出したゲノムＤＮＡを鋳型として、常法に従
いポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ法）を行う。その結
果、５００ｂｐの明瞭なバンドを得ることができる。
【００１１】本発明者らは、この５００ｂｐのバンド
（ＰＣＲ産物）をクローニングし、そのＤＮＡ塩基配列
を解読した結果、配列表の配列番号６に示す配列を有す
ることを見出した。さらに、該ＤＮＡ塩基配列（配列表
の配列番号６）をアミノ酸に翻訳したところ、先に得ら
れたペプチドフラグメントのアミノ酸配列（配列表の配
列番号３参照）に相当する配列の存在が認められた。こ
のことから、この５００ｂｐのＤＮＡ配列（配列表の配
列番号６）は、キシラナーゼ遺伝子の一部であることが
確認された。
（ＰＣＲ産物）をクローニングし、そのＤＮＡ塩基配列
を解読した結果、配列表の配列番号６に示す配列を有す
ることを見出した。さらに、該ＤＮＡ塩基配列（配列表
の配列番号６）をアミノ酸に翻訳したところ、先に得ら
れたペプチドフラグメントのアミノ酸配列（配列表の配
列番号３参照）に相当する配列の存在が認められた。こ
のことから、この５００ｂｐのＤＮＡ配列（配列表の配
列番号６）は、キシラナーゼ遺伝子の一部であることが
確認された。
【００１２】続いて、このＤＮＡ塩基配列（配列表の配
列番号６）をプローブとして、インバースＰＣＲ（Nucl
eic Acid Research １６号，８１８６頁，１９８８年）
を行う。まず、ＤＮＡ塩基配列（配列表の配列番号６）
のＮ末端側の情報を基にして、１組のプライマー（配列
表の配列番号７及び８）を化学合成する。同様にＣ末端
側の情報を基にして、もう一組のプライマー（配列表の
配列番号９及び１０）を化学合成する。
列番号６）をプローブとして、インバースＰＣＲ（Nucl
eic Acid Research １６号，８１８６頁，１９８８年）
を行う。まず、ＤＮＡ塩基配列（配列表の配列番号６）
のＮ末端側の情報を基にして、１組のプライマー（配列
表の配列番号７及び８）を化学合成する。同様にＣ末端
側の情報を基にして、もう一組のプライマー（配列表の
配列番号９及び１０）を化学合成する。
【００１３】一方、ストレプトマイセス属微生物から抽
出したゲノムＤＮＡに制限酵素を作用させ、得られる分
解物をセルフライゲーションし、環状構造とする。この
環状ＤＮＡを鋳型とし、まず、先に化学合成したＮ末端
由来のプライマー（配列表の配列番号７及び８）を用い
てＰＣＲ法によりＤＮＡ断片を増幅する。同様に、環状
構造のＤＮＡを鋳型とし、プライマーとしてＣ末端由来
のプライマー（配列表の配列番号９及び１０）を用い、
ＰＣＲ法によりＤＮＡ断片を増幅する。上記２回のＰＣ
Ｒ反応から得られる２つのＤＮＡ断片をつなぎ合わせる
ことにより、請求項１記載の本発明のキシラナーゼ前駆
体の遺伝子を得ることができる（配列表の配列番号１参
照）。
出したゲノムＤＮＡに制限酵素を作用させ、得られる分
解物をセルフライゲーションし、環状構造とする。この
環状ＤＮＡを鋳型とし、まず、先に化学合成したＮ末端
由来のプライマー（配列表の配列番号７及び８）を用い
てＰＣＲ法によりＤＮＡ断片を増幅する。同様に、環状
構造のＤＮＡを鋳型とし、プライマーとしてＣ末端由来
のプライマー（配列表の配列番号９及び１０）を用い、
ＰＣＲ法によりＤＮＡ断片を増幅する。上記２回のＰＣ
Ｒ反応から得られる２つのＤＮＡ断片をつなぎ合わせる
ことにより、請求項１記載の本発明のキシラナーゼ前駆
体の遺伝子を得ることができる（配列表の配列番号１参
照）。
【００１４】本発明者らは、このキシラナーゼ前駆体の
遺伝子のＤＮＡ配列から翻訳したアミノ酸配列（配列表
の配列番号１）を、最初に判明したキシラナーゼのＮ末
端のアミノ酸配列（配列表の配列番号３参照）と比較し
たところ、前駆体遺伝子のアミノ酸配列（配列表の配列
番号１）の３１〜７０番目が、キシラナーゼのＮ末端の
アミノ酸配列（配列表の配列番号３参照）と一致するこ
とを見出した。このことから、キシラナーゼ前駆体遺伝
子の塩基配列中の９１番目以降がキシラナーゼ遺伝子で
あることを確認した。
遺伝子のＤＮＡ配列から翻訳したアミノ酸配列（配列表
の配列番号１）を、最初に判明したキシラナーゼのＮ末
端のアミノ酸配列（配列表の配列番号３参照）と比較し
たところ、前駆体遺伝子のアミノ酸配列（配列表の配列
番号１）の３１〜７０番目が、キシラナーゼのＮ末端の
アミノ酸配列（配列表の配列番号３参照）と一致するこ
とを見出した。このことから、キシラナーゼ前駆体遺伝
子の塩基配列中の９１番目以降がキシラナーゼ遺伝子で
あることを確認した。
【００１５】次に、キシラナーゼの遺伝子を、キシラナ
ーゼのＮ末端アミノ酸配列（配列表の配列番号３参照）
を基にして、キシラナーゼ前駆体遺伝子（配列表の配列
番号１参照）から構築した。その結果、請求項４記載の
本発明のキシラナーゼ遺伝子を得ることができる（配列
表の配列番号２参照）。本発明のキシラナーゼ遺伝子の
アミノ酸配列のホモロジー検索の結果、ストレプトマイ
セス リビダンス由来のものにホモロジーの高いものが
存在するが、これを本発明に係る酵素と酵素活性を比較
すると、後述するように、著しく劣っており、産業上の
利用性が低いものである。その他には、６０％以上のア
ミノ酸配列のホモロジーを有する放線菌由来の酵素の特
性は明らかでない。
ーゼのＮ末端アミノ酸配列（配列表の配列番号３参照）
を基にして、キシラナーゼ前駆体遺伝子（配列表の配列
番号１参照）から構築した。その結果、請求項４記載の
本発明のキシラナーゼ遺伝子を得ることができる（配列
表の配列番号２参照）。本発明のキシラナーゼ遺伝子の
アミノ酸配列のホモロジー検索の結果、ストレプトマイ
セス リビダンス由来のものにホモロジーの高いものが
存在するが、これを本発明に係る酵素と酵素活性を比較
すると、後述するように、著しく劣っており、産業上の
利用性が低いものである。その他には、６０％以上のア
ミノ酸配列のホモロジーを有する放線菌由来の酵素の特
性は明らかでない。
【００１６】本発明のキシラナーゼ遺伝子を含むプラス
ミドは、上記のキシラナーゼ遺伝子を常法によりプラス
ミドに導入することによって得ることができるが、その
１例を以下に示す。
ミドは、上記のキシラナーゼ遺伝子を常法によりプラス
ミドに導入することによって得ることができるが、その
１例を以下に示す。
【００１７】プラスミドｐＱＥ６０を予め制限酵素分解
する。この制限酵素切断プラスミドとＤＮＡの塩基配列
が合致するよう、本発明のキシラナーゼ遺伝子の塩基配
列を基に、１組のプライマーＰ（配列表の配列番号１１
及び１２）を化学合成する。ストレプトマイセス属微生
物のゲノムＤＮＡを鋳型とし、上記両プライマーを用い
て、ＰＣＲ法によりキシラナーゼ遺伝子の全長をコード
するＤＮＡを増幅する。得られた増幅産物に制限酵素を
作用させて制限酵素切断ＤＮＡ断片とし、これに、先の
制限酵素切断プラスミドｐＱＥ６０を接合することによ
り、プラスミドｐＱＥ６０／ＸｙｎＧを調製する。
する。この制限酵素切断プラスミドとＤＮＡの塩基配列
が合致するよう、本発明のキシラナーゼ遺伝子の塩基配
列を基に、１組のプライマーＰ（配列表の配列番号１１
及び１２）を化学合成する。ストレプトマイセス属微生
物のゲノムＤＮＡを鋳型とし、上記両プライマーを用い
て、ＰＣＲ法によりキシラナーゼ遺伝子の全長をコード
するＤＮＡを増幅する。得られた増幅産物に制限酵素を
作用させて制限酵素切断ＤＮＡ断片とし、これに、先の
制限酵素切断プラスミドｐＱＥ６０を接合することによ
り、プラスミドｐＱＥ６０／ＸｙｎＧを調製する。
【００１８】このプラスミドを用いて、常法により大腸
菌に形質転換することにより形質転換体を得ることがで
きる。このようにして形質転換された大腸菌（請求項３
記載のもの）は、工業技術院生命工学工業技術研究所に
寄託されている。その受託番号は、ＦＥＲＭ Ｐ−１６
７１３である。
菌に形質転換することにより形質転換体を得ることがで
きる。このようにして形質転換された大腸菌（請求項３
記載のもの）は、工業技術院生命工学工業技術研究所に
寄託されている。その受託番号は、ＦＥＲＭ Ｐ−１６
７１３である。
【００１９】キシラナーゼ遺伝子の発現は、上述の形質
転換体である大腸菌を培養し、該大腸菌及び培養上清中
の酵素を測定して確認することができる。また、この形
質転換体を栄養培地で培養し、得られた菌体を破砕した
のち、固液分離して得られる上清を常法によって精製す
ることにより、キシラナーゼを得ることができる。
転換体である大腸菌を培養し、該大腸菌及び培養上清中
の酵素を測定して確認することができる。また、この形
質転換体を栄養培地で培養し、得られた菌体を破砕した
のち、固液分離して得られる上清を常法によって精製す
ることにより、キシラナーゼを得ることができる。
【００２０】なお、既に述べたとおり、本発明において
はキシラナーゼ生産菌であるストレプトマイセス オリ
バセオビリデス Ｅ−８６株由来のキシラナーゼを用い
ることが望ましい。その理由は、該微生物由来のキシラ
ナーゼは高い酵素活性を有しているからである。すなわ
ち、この酵素はオートスペルト麦由来のキシラン（不溶
性）あるいは樺由来のキシラン（可溶性）に対し、それ
ぞれ１４９単位／ｍｇ酵素、１０４単位／ｍｇ酵素と高
い活性を示す。
はキシラナーゼ生産菌であるストレプトマイセス オリ
バセオビリデス Ｅ−８６株由来のキシラナーゼを用い
ることが望ましい。その理由は、該微生物由来のキシラ
ナーゼは高い酵素活性を有しているからである。すなわ
ち、この酵素はオートスペルト麦由来のキシラン（不溶
性）あるいは樺由来のキシラン（可溶性）に対し、それ
ぞれ１４９単位／ｍｇ酵素、１０４単位／ｍｇ酵素と高
い活性を示す。
【００２１】一方、同じストレプトマイセス属の微生物
であるストレプトマイセス リビダンス由来のキシラナ
ーゼＣ（本発明酵素とアミノ酸配列のホモロジーが８２
％）の活性は、上記の不溶性あるいは可溶性キシランに
対し、それぞれ４５単位／ｍｇ酵素、３２単位／ｍｇ酵
素である。また、ストレプトマイセス リビダンス由来
のキシラナーゼＢ（本発明酵素とアミノ酸配列のホモロ
ジーが７９％）の活性は、上記いずれのキシランに対し
ても５単位／ｍｇ酵素にすぎない。これらの数値を比較
すれば、ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ
−８６株の生産するキシラナーゼが、いかに高い活性を
示し、産業上利用する上で優れた特性を有しているかが
明らかである。
であるストレプトマイセス リビダンス由来のキシラナ
ーゼＣ（本発明酵素とアミノ酸配列のホモロジーが８２
％）の活性は、上記の不溶性あるいは可溶性キシランに
対し、それぞれ４５単位／ｍｇ酵素、３２単位／ｍｇ酵
素である。また、ストレプトマイセス リビダンス由来
のキシラナーゼＢ（本発明酵素とアミノ酸配列のホモロ
ジーが７９％）の活性は、上記いずれのキシランに対し
ても５単位／ｍｇ酵素にすぎない。これらの数値を比較
すれば、ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ
−８６株の生産するキシラナーゼが、いかに高い活性を
示し、産業上利用する上で優れた特性を有しているかが
明らかである。
【００２２】
【実施例】次に、本発明を実施例により詳しく説明す
る。 実施例１ ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
を、キシラン２％、ペプトン１．４％、酵母エキス０．
１％、コーンスティープリカー０．５％、ＫＨ2 ＰＯ4
１％、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．０５％を含む培地
で培養したのち、菌体を除去し得られた培養上清から、
イオン交換クロマトグラフィーを活用して高度に精製し
たキシラナーゼを得た。この精製酵素を用いて、プロテ
インシーケンサーＧ１００５Ａ型（ヒューレットパッカ
ード社製）により、そのＮ末端のアミノ酸配列（配列表
の配列番号３参照）を決定した。
る。 実施例１ ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
を、キシラン２％、ペプトン１．４％、酵母エキス０．
１％、コーンスティープリカー０．５％、ＫＨ2 ＰＯ4
１％、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．０５％を含む培地
で培養したのち、菌体を除去し得られた培養上清から、
イオン交換クロマトグラフィーを活用して高度に精製し
たキシラナーゼを得た。この精製酵素を用いて、プロテ
インシーケンサーＧ１００５Ａ型（ヒューレットパッカ
ード社製）により、そのＮ末端のアミノ酸配列（配列表
の配列番号３参照）を決定した。
【００２３】Ｎ末端のアミノ酸配列（配列表の配列番号
３参照）の中から、コドンの縮重の少ない領域を１箇所
選びだし、フォーワードプライマー（配列表の配列番号
４）を化学合成した。一方、Ｎ末端のアミノ酸配列（配
列表の配列番号３参照）のホモロジー検索を行い、その
結果に基づいてデータベースを活用して作成したアミノ
酸配列のアラインメントの中から、保存されているアミ
ノ酸配列領域を見出し、該領域の情報を基に、リバース
プライマー（配列表の配列番号５）を作成した。
３参照）の中から、コドンの縮重の少ない領域を１箇所
選びだし、フォーワードプライマー（配列表の配列番号
４）を化学合成した。一方、Ｎ末端のアミノ酸配列（配
列表の配列番号３参照）のホモロジー検索を行い、その
結果に基づいてデータベースを活用して作成したアミノ
酸配列のアラインメントの中から、保存されているアミ
ノ酸配列領域を見出し、該領域の情報を基に、リバース
プライマー（配列表の配列番号５）を作成した。
【００２４】ストレプトマイセス オリバセオビリデス
Ｅ−８６株から、斉藤の方法（蛋白質核酸酵素，１１
巻，４４６頁）によりゲノムＤＮＡを抽出した。このゲ
ノムＤＮＡを鋳型とし、上記二つのプライマー（配列表
の配列番号４及び５）を用いてＰＣＲ反応により増幅さ
せた。その結果、５００ｂｐの明瞭なバンドが得られ
た。
Ｅ−８６株から、斉藤の方法（蛋白質核酸酵素，１１
巻，４４６頁）によりゲノムＤＮＡを抽出した。このゲ
ノムＤＮＡを鋳型とし、上記二つのプライマー（配列表
の配列番号４及び５）を用いてＰＣＲ反応により増幅さ
せた。その結果、５００ｂｐの明瞭なバンドが得られ
た。
【００２５】得られたバンドをクローニングし、ｄロー
ダミン・ターミネーター・サイクルシークエンシング・
キット（パーキンエルマー社製）を用いてＤＮＡ塩基配
列を解読した。解読した塩基配列の情報をつなぎ合わせ
ると、ＤＮＡ塩基配列（配列表の配列番号６）が得られ
た。このＤＮＡ塩基配列をアミノ酸に翻訳したところ、
先に得られたＮ末端アミノ酸配列（配列表の配列番号
３）に相当する配列が認められることから、該配列はキ
シラナーゼ遺伝子の一部であることが判明した。
ダミン・ターミネーター・サイクルシークエンシング・
キット（パーキンエルマー社製）を用いてＤＮＡ塩基配
列を解読した。解読した塩基配列の情報をつなぎ合わせ
ると、ＤＮＡ塩基配列（配列表の配列番号６）が得られ
た。このＤＮＡ塩基配列をアミノ酸に翻訳したところ、
先に得られたＮ末端アミノ酸配列（配列表の配列番号
３）に相当する配列が認められることから、該配列はキ
シラナーゼ遺伝子の一部であることが判明した。
【００２６】そこで、このＰＣＲ産物、すなわち５００
ｂｐのＤＮＡ塩基配列（配列表の配列番号６）を、ディ
ゴキシゲニン化学発光核酸検出システム（ベーリンガー
・マンハイム社製）で標識し、全長のキシラナーゼ遺伝
子クローニングのためのプローブとして用いることとし
た。この５００ｂｐのＤＮＡ塩基配列（配列表の配列番
号６）のＮ末端側の情報をもとに、フォーワードプライ
マーＮ（配列表の配列番号７）とリバースプライマーＮ
（配列表の配列番号８）を作製した。同様に、Ｃ末端側
の情報をもとに、フォーワードプライマーＣ（配列表の
配列番号９）とリバースプライマーＣ（配列表の配列番
号１０）を化学合成した。
ｂｐのＤＮＡ塩基配列（配列表の配列番号６）を、ディ
ゴキシゲニン化学発光核酸検出システム（ベーリンガー
・マンハイム社製）で標識し、全長のキシラナーゼ遺伝
子クローニングのためのプローブとして用いることとし
た。この５００ｂｐのＤＮＡ塩基配列（配列表の配列番
号６）のＮ末端側の情報をもとに、フォーワードプライ
マーＮ（配列表の配列番号７）とリバースプライマーＮ
（配列表の配列番号８）を作製した。同様に、Ｃ末端側
の情報をもとに、フォーワードプライマーＣ（配列表の
配列番号９）とリバースプライマーＣ（配列表の配列番
号１０）を化学合成した。
【００２７】一方、先のＰＣＲで鋳型として用いたスト
レプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株のゲ
ノムＤＮＡを、制限酵素ＡｐａＩで完全分解した。得ら
れた制限酵素分解物をアガロース電気泳動で分離後、先
に標識したプローブを用いてサザンハイブリダイゼーシ
ョン（「クローニングとシーケンス」渡辺監修，農村文
化社，１９８９年，１５７頁）を実施した。その結果、
１．５ｋｂｐと３．０ｋｂｐの２つのＤＮＡ断片に強く
ハイブリダイズした。このことは、目的とするキシラナ
ーゼ遺伝子が、１．５ｋｂｐと３．０ｋｂｐの２つのＤ
ＮＡ断片に分断されていることを示唆するものである。
レプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株のゲ
ノムＤＮＡを、制限酵素ＡｐａＩで完全分解した。得ら
れた制限酵素分解物をアガロース電気泳動で分離後、先
に標識したプローブを用いてサザンハイブリダイゼーシ
ョン（「クローニングとシーケンス」渡辺監修，農村文
化社，１９８９年，１５７頁）を実施した。その結果、
１．５ｋｂｐと３．０ｋｂｐの２つのＤＮＡ断片に強く
ハイブリダイズした。このことは、目的とするキシラナ
ーゼ遺伝子が、１．５ｋｂｐと３．０ｋｂｐの２つのＤ
ＮＡ断片に分断されていることを示唆するものである。
【００２８】次に、インバースＰＣＲ（Nucleic Acid R
esearch,１６号，８１８６頁，１９８８年）を実施する
ために、上述のストレプトマイセス オリバセオビリデ
スＥ−８６株のゲノムＤＮＡの制限酵素ＡｐａＩ分解物
を、ＤＮＡライゲーションキット（宝酒造株式会社製）
を用いて、セルフライゲーションし、環状構造とした。
次に、この環状ＤＮＡを鋳型とし、先述のフォーワード
プライマーＮ（配列表の配列番号７）及びリバースプラ
イマーＮ（配列表の配列番号８）を用いて、ＰＣＲによ
りＤＮＡ断片を増幅し、得られたＤＮＡ塩基配列を解読
した。
esearch,１６号，８１８６頁，１９８８年）を実施する
ために、上述のストレプトマイセス オリバセオビリデ
スＥ−８６株のゲノムＤＮＡの制限酵素ＡｐａＩ分解物
を、ＤＮＡライゲーションキット（宝酒造株式会社製）
を用いて、セルフライゲーションし、環状構造とした。
次に、この環状ＤＮＡを鋳型とし、先述のフォーワード
プライマーＮ（配列表の配列番号７）及びリバースプラ
イマーＮ（配列表の配列番号８）を用いて、ＰＣＲによ
りＤＮＡ断片を増幅し、得られたＤＮＡ塩基配列を解読
した。
【００２９】また、同様に、環状構造としたＤＮＡを鋳
型とし、先に化学合成したフォーワードプライマーＣ
（配列表の配列番号９）及びリバースプライマーＣ（配
列表の配列番号１０）を用い、ＰＣＲによりＤＮＡ断片
を増幅し、得られたＤＮＡ塩基配列を解読した。
型とし、先に化学合成したフォーワードプライマーＣ
（配列表の配列番号９）及びリバースプライマーＣ（配
列表の配列番号１０）を用い、ＰＣＲによりＤＮＡ断片
を増幅し、得られたＤＮＡ塩基配列を解読した。
【００３０】ここで得られた２つのＤＮＡ断片の塩基配
列をつなぎ合わせることにより、最終的にキシラナーゼ
前駆体の遺伝子のＤＮＡ配列を決定した（配列表の配列
番号１参照）。
列をつなぎ合わせることにより、最終的にキシラナーゼ
前駆体の遺伝子のＤＮＡ配列を決定した（配列表の配列
番号１参照）。
【００３１】このキシラナーゼ前駆体の遺伝子のＤＮＡ
配列（配列表の配列番号１）から翻訳したアミノ酸配列
（配列表の配列番号１）を、既に判明しているキシラナ
ーゼのＮ末端のアミノ酸配列（配列表の配列番号３）と
比較した。その結果、キシラナーゼのＮ末端のアミノ酸
配列は、前駆体遺伝子のアミノ酸配列中の３１〜７０番
目の配列と一致したことから、前駆体遺伝子の塩基配列
中の９１番目以降にキシラナーゼ遺伝子の存在を見出し
た。
配列（配列表の配列番号１）から翻訳したアミノ酸配列
（配列表の配列番号１）を、既に判明しているキシラナ
ーゼのＮ末端のアミノ酸配列（配列表の配列番号３）と
比較した。その結果、キシラナーゼのＮ末端のアミノ酸
配列は、前駆体遺伝子のアミノ酸配列中の３１〜７０番
目の配列と一致したことから、前駆体遺伝子の塩基配列
中の９１番目以降にキシラナーゼ遺伝子の存在を見出し
た。
【００３２】そこで、活性型キシラナーゼの遺伝子を、
キシラナーゼのＮ末端アミノ酸配列を基に、キシラナー
ゼ前駆体遺伝子から構成した（配列表の配列番号２参
照）。また、活性型キシラナーゼの分子量を、島津製作
所製、レーザーイオン化ＴＯＦ−ＭＳ ＫＯＭＰＡＣＴ
ＭＡＬＤＩ III型で測定したところ、２１，０００ダル
トンであり、本遺伝子でコードされる蛋白の分子量２
０，８５１と良く一致していた。
キシラナーゼのＮ末端アミノ酸配列を基に、キシラナー
ゼ前駆体遺伝子から構成した（配列表の配列番号２参
照）。また、活性型キシラナーゼの分子量を、島津製作
所製、レーザーイオン化ＴＯＦ−ＭＳ ＫＯＭＰＡＣＴ
ＭＡＬＤＩ III型で測定したところ、２１，０００ダル
トンであり、本遺伝子でコードされる蛋白の分子量２
０，８５１と良く一致していた。
【００３３】次に、キシラナーゼ遺伝子のプラスミドへ
のクローニングを実施した。まず、プラスミドｐＱＥ６
０を制限酵素ＮｃｏＩとＢａｍＨＩで分解した。その
後、この制限酵素切断プラスミドとＤＮＡの塩基配列が
合致するように、キシラナーゼをコードする全長のＤＮ
Ａ配列を基にして、フォーワードプライマーＰ（配列表
の配列番号１１）とリバースプライマーＰ（配列表の配
列番号１２）を化学合成した。次いで、ストレプトマイ
セス オリバセオビリデス Ｅ−８６株のゲノムＤＮＡ
を鋳型とし、両プライマーを用いて、ＰＣＲ法により、
キシラナーゼ遺伝子の全長をコードするＤＮＡを増幅し
た。増幅されたＤＮＡ断片を、さらに制限酵素ＮｃｏＩ
とＢａｍＨＩで分解した。この制限酵素切断ＤＮＡ断片
を、ＤＮＡライゲーションキット（宝酒造株式会社製）
を用いて、先の制限酵素切断プラスミドと接合し、プラ
スミドｐＱＥ６０／ＸｙｎＧを調製した。
のクローニングを実施した。まず、プラスミドｐＱＥ６
０を制限酵素ＮｃｏＩとＢａｍＨＩで分解した。その
後、この制限酵素切断プラスミドとＤＮＡの塩基配列が
合致するように、キシラナーゼをコードする全長のＤＮ
Ａ配列を基にして、フォーワードプライマーＰ（配列表
の配列番号１１）とリバースプライマーＰ（配列表の配
列番号１２）を化学合成した。次いで、ストレプトマイ
セス オリバセオビリデス Ｅ−８６株のゲノムＤＮＡ
を鋳型とし、両プライマーを用いて、ＰＣＲ法により、
キシラナーゼ遺伝子の全長をコードするＤＮＡを増幅し
た。増幅されたＤＮＡ断片を、さらに制限酵素ＮｃｏＩ
とＢａｍＨＩで分解した。この制限酵素切断ＤＮＡ断片
を、ＤＮＡライゲーションキット（宝酒造株式会社製）
を用いて、先の制限酵素切断プラスミドと接合し、プラ
スミドｐＱＥ６０／ＸｙｎＧを調製した。
【００３４】さらに、このプラスミドｐＱＥ６０／Ｘｙ
ｎＧを用いてSambrook, J., Fritsch, E. F. and Mania
tis, T. "Molecular Cloning, A Laboratory Manual",
第２版１．７４章，Vol. 1（１９８９）に記載された方
法に従い、大腸菌に形質転換した。形質転換された大腸
菌は、工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託されて
おり、その受託番号は、ＦＥＲＭ Ｐ−１６７１３であ
る。なお、プラスミドｐＱＥ６０／ＸｙｎＧにはキシラ
ナーゼ遺伝子が含まれている。請求項６記載の形質転換
体も同様の方法で得ることができる。
ｎＧを用いてSambrook, J., Fritsch, E. F. and Mania
tis, T. "Molecular Cloning, A Laboratory Manual",
第２版１．７４章，Vol. 1（１９８９）に記載された方
法に従い、大腸菌に形質転換した。形質転換された大腸
菌は、工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託されて
おり、その受託番号は、ＦＥＲＭ Ｐ−１６７１３であ
る。なお、プラスミドｐＱＥ６０／ＸｙｎＧにはキシラ
ナーゼ遺伝子が含まれている。請求項６記載の形質転換
体も同様の方法で得ることができる。
【００３５】
【発明の効果】本発明によれば、キシランに作用して分
解する酵素であるキシラナーゼの遺伝子が提供される。
この遺伝子を発現させて得られるキシラナーゼは、キシ
ランからのキシロオリゴ糖の生産、パルプの漂白用酵素
等として、食品産業をはじめとして様々な分野において
有用である。
解する酵素であるキシラナーゼの遺伝子が提供される。
この遺伝子を発現させて得られるキシラナーゼは、キシ
ランからのキシロオリゴ糖の生産、パルプの漂白用酵素
等として、食品産業をはじめとして様々な分野において
有用である。
【００３６】
配列番号：１
配列の長さ：１１９５
配列の型：核酸
鎖の数：２本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ
起源：
生物名：ストレプトマイセス オリバセオビリデス（St
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 プラスミド名：ｐＱＥ６０／ＸｙｎＧ 配列の特徴 特徴を示す記号：ＣＤＳ 存在位置：２９８．．９９３ 特徴を決定した方法：Ｐ 配列 GGAATCGAAA GTTTCGTATT GCCTGACGAG CGTTGCGTCA CGCTAAGCAG GCGCCAATTC 60 CGCGTCAACC ATCGTGTCGA CAGTCTTTTC GGCCACCCCT TCCAGCAGCT TCGAAAGTYG 120 CGGCTCTACA CGCCGGAGTT CACCGTCAAG TTTCGATGAA GTTTCGGAAA CAGACGCATT 180 GACCGCCCTT TCGAACCCGC CCCATACTCT CCAGCAATCG AGCCCTCCCT CCCACGGGAA 240 CGGCCCGGCC ATGGCGTATG GCGCGAACAT GACAACCCAC CTCATCCAGG AGGCACG 297 ATG GAC ATG GAG CAC GCC CTC ACC CGC CCG ATG AGC CGC AGG GGC TTC 345 Met Asp Met Glu His Ala Leu Thr Arg Pro Met Ser Arg Arg Gly Phe 1 5 10 15 ATC AAC CGT GCC GGC GCG CTC GCG CTG GCC ACC ACC GCG TCC GGG CTG 393 Ile Asn Arg Ala Gly Ala Leu Ala Leu Ala Thr Thr Ala Ser Gly Leu 20 25 30 CTG CTG CCC GAC ACC GCT CAG GCC GCC ACG GTC ATC ACC ACC AAC CAG 441 Leu Leu Pro Asp Thr Ala Gln Ala Ala Thr Val Ile Thr Thr Asn Gln 35 40 45 ACC GGC ACC AAC AAC GGG TTC TAC TAC TCC TTC TGG ACC GAC GGC GGC 489 Thr Gly Thr Asn Asn Gly Phe Tyr Tyr Ser Phe Trp Thr Asp Gly Gly 50 55 60 GGT TCG GTC TCG ATG ACC CTG AAC TCC GGC GGC AAC TAC AGC ACC TCG 537 Gly Ser Val Ser Met Thr Leu Asn Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Thr Ser 65 70 75 80 TGG ACG AAC TGC GGG AAC TTC GTC GCC GGC AAG GGC TGG AGC AAC GGC 585 Trp Thr Asn Cys Gly Asn Phe Val Ala Gly Lys Gly Trp Ser Asn Gly 85 90 95 GGA CGC AGG AAC GTG CAG TAC TCG GGC AGC TTC TAC CCG TCC GGC AAC 633 Gly Arg Arg Asn Val Gln Tyr Ser Gly Ser Phe Tyr Pro Ser Gly Asn 100 105 110 GGC TAC CTG GCG CTG TAC GGG TGG ACC TCG AAC CCG CTC GTC GAG TAC 681 Gly Tyr Leu Ala Leu Tyr Gly Trp Thr Ser Asn Pro Leu Val Glu Tyr 115 120 125 TAC ATC GTC GAC AAC TGG GGC AAC TAC CGG CCC ACC GGA ACG TAC AAG 729 Tyr Ile Val Asp Asn Trp Gly Asn Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys 130 135 140 GGC ACG GTC ACC AGC GAC GGC GGC ACG TAC GAC GTC TAC CAG ACG ACG 777 Gly Thr Val Thr Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Val Tyr Gln Thr Thr 145 150 155 160 CGG TAC AAC GCC CCC TCC GTG GAA GGC ACC AAG ACC TTC AAC CAG TAC 825 Arg Tyr Asn Ala Pro Ser Val Glu Gly Thr Lys Thr Phe Asn Gln Tyr 165 170 175 TGG AGC GTC CGG CAG TCC AAG CGG ACC GGC GGC ACC ATC ACC ACC GGC 873 Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg Thr Gly Gly Thr Ile Thr Thr Gly 180 185 190 AAC CAC TTC GAC GCC TGG GCC CGC TAC GGC ATG CAA CTG GGC AGC TTC 921 Asn His Phe Asp Ala Trp Ala Arg Tyr Gly Met Gln Leu Gly Ser Phe 195 200 205 AGC TAC TAC ATG ATC ATG GCC ACC GAG GGC TAC CAG AGC AGC GGC TCC 969 Ser Tyr Tyr Met Ile Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser 210 215 220 TCC AAC CTC ACG GTG AGC GGC TGACCCTCCC CGTCCCGTCC CATCCCCCAC 1020 Ser Asn Leu Thr Val Ser Gly 225 230 GGAGGTCACG CCGCCCACCC GAGGAGGACG CACCCGCATG CGTGCCGCAC CCCGCTCCCT 1080 GCTGACCGGA CTGGCCCTCG CGGCGACCGC CGTGGCCGGC ACGGTCACCG CCGTCACCGA 1140 CGCCGCCCCG GCGCACGCCG CCGCCTGCTC CGGGTACGTC GGGCTCACCT TCGAC 1195
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 プラスミド名：ｐＱＥ６０／ＸｙｎＧ 配列の特徴 特徴を示す記号：ＣＤＳ 存在位置：２９８．．９９３ 特徴を決定した方法：Ｐ 配列 GGAATCGAAA GTTTCGTATT GCCTGACGAG CGTTGCGTCA CGCTAAGCAG GCGCCAATTC 60 CGCGTCAACC ATCGTGTCGA CAGTCTTTTC GGCCACCCCT TCCAGCAGCT TCGAAAGTYG 120 CGGCTCTACA CGCCGGAGTT CACCGTCAAG TTTCGATGAA GTTTCGGAAA CAGACGCATT 180 GACCGCCCTT TCGAACCCGC CCCATACTCT CCAGCAATCG AGCCCTCCCT CCCACGGGAA 240 CGGCCCGGCC ATGGCGTATG GCGCGAACAT GACAACCCAC CTCATCCAGG AGGCACG 297 ATG GAC ATG GAG CAC GCC CTC ACC CGC CCG ATG AGC CGC AGG GGC TTC 345 Met Asp Met Glu His Ala Leu Thr Arg Pro Met Ser Arg Arg Gly Phe 1 5 10 15 ATC AAC CGT GCC GGC GCG CTC GCG CTG GCC ACC ACC GCG TCC GGG CTG 393 Ile Asn Arg Ala Gly Ala Leu Ala Leu Ala Thr Thr Ala Ser Gly Leu 20 25 30 CTG CTG CCC GAC ACC GCT CAG GCC GCC ACG GTC ATC ACC ACC AAC CAG 441 Leu Leu Pro Asp Thr Ala Gln Ala Ala Thr Val Ile Thr Thr Asn Gln 35 40 45 ACC GGC ACC AAC AAC GGG TTC TAC TAC TCC TTC TGG ACC GAC GGC GGC 489 Thr Gly Thr Asn Asn Gly Phe Tyr Tyr Ser Phe Trp Thr Asp Gly Gly 50 55 60 GGT TCG GTC TCG ATG ACC CTG AAC TCC GGC GGC AAC TAC AGC ACC TCG 537 Gly Ser Val Ser Met Thr Leu Asn Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Thr Ser 65 70 75 80 TGG ACG AAC TGC GGG AAC TTC GTC GCC GGC AAG GGC TGG AGC AAC GGC 585 Trp Thr Asn Cys Gly Asn Phe Val Ala Gly Lys Gly Trp Ser Asn Gly 85 90 95 GGA CGC AGG AAC GTG CAG TAC TCG GGC AGC TTC TAC CCG TCC GGC AAC 633 Gly Arg Arg Asn Val Gln Tyr Ser Gly Ser Phe Tyr Pro Ser Gly Asn 100 105 110 GGC TAC CTG GCG CTG TAC GGG TGG ACC TCG AAC CCG CTC GTC GAG TAC 681 Gly Tyr Leu Ala Leu Tyr Gly Trp Thr Ser Asn Pro Leu Val Glu Tyr 115 120 125 TAC ATC GTC GAC AAC TGG GGC AAC TAC CGG CCC ACC GGA ACG TAC AAG 729 Tyr Ile Val Asp Asn Trp Gly Asn Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys 130 135 140 GGC ACG GTC ACC AGC GAC GGC GGC ACG TAC GAC GTC TAC CAG ACG ACG 777 Gly Thr Val Thr Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Val Tyr Gln Thr Thr 145 150 155 160 CGG TAC AAC GCC CCC TCC GTG GAA GGC ACC AAG ACC TTC AAC CAG TAC 825 Arg Tyr Asn Ala Pro Ser Val Glu Gly Thr Lys Thr Phe Asn Gln Tyr 165 170 175 TGG AGC GTC CGG CAG TCC AAG CGG ACC GGC GGC ACC ATC ACC ACC GGC 873 Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg Thr Gly Gly Thr Ile Thr Thr Gly 180 185 190 AAC CAC TTC GAC GCC TGG GCC CGC TAC GGC ATG CAA CTG GGC AGC TTC 921 Asn His Phe Asp Ala Trp Ala Arg Tyr Gly Met Gln Leu Gly Ser Phe 195 200 205 AGC TAC TAC ATG ATC ATG GCC ACC GAG GGC TAC CAG AGC AGC GGC TCC 969 Ser Tyr Tyr Met Ile Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser 210 215 220 TCC AAC CTC ACG GTG AGC GGC TGACCCTCCC CGTCCCGTCC CATCCCCCAC 1020 Ser Asn Leu Thr Val Ser Gly 225 230 GGAGGTCACG CCGCCCACCC GAGGAGGACG CACCCGCATG CGTGCCGCAC CCCGCTCCCT 1080 GCTGACCGGA CTGGCCCTCG CGGCGACCGC CGTGGCCGGC ACGGTCACCG CCGTCACCGA 1140 CGCCGCCCCG GCGCACGCCG CCGCCTGCTC CGGGTACGTC GGGCTCACCT TCGAC 1195
【００３７】配列番号：２
配列の長さ：１１９５
配列の型：核酸
鎖の数：２本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ
起源：
生物名：ストレプトマイセス オリバセオビリデス（St
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 プラスミド名：ｐＱＥ６０／ＸｙｎＧ 配列の特徴 特徴を示す記号： ｍａｔ ｐｅｐｔｉｄｅ 存在位置：４１８．．９９３ 特徴を決定した方法：Ｐ 配列 GGAATCGAAA GTTTCGTATT GCCTGACGAG CGTTGCGTCA CGCTAAGCAG GCGCCAATTC 60 CGCGTCAACC ATCGTGTCGA CAGTCTTTTC GGCCACCCCT TCCAGCAGCT TCGAAAGTTG 120 CGGCTCTACA CGCCGGAGTT CACCGTCAAG TTTCGATGAA GTTTCGGAAA CAGACGCATT 180 GACCGCCCTT TCGAACCCGC CCCATACTCT CCAGCAATCG AGCCCTCCCT CCCACGGGAA 240 CGGCCCGGCC ATGGCGTATG GCGCGAACAT GACAACCCAC CTCATCCAGG AGGCACGATG 300 GACATGGAGC ACGCCCTCAC CCGCCCGATG AGCCGCAGGG GCTTCATCAA CCGTGCCGGC 360 GCGCTCGCGC TGGCCACCAC CGCGTCCGGG CTGCTGCTGC CCGACACCGC TCAGGCC 417 GCC ACG GTC ATC ACC ACC AAC CAG ACC GGC ACC AAC AAC GGG TTC TAC 465 Ala Thr Val Ile Thr Thr Asn Gln Thr Gly Thr Asn Asn Gly Phe Tyr 1 5 10 15 TAC TCC TTC TGG ACC GAC GGC GGC GGT TCG GTC TCG ATG ACC CTG AAC 513 Tyr Ser Phe Trp Thr Asp Gly Gly Gly Ser Val Ser Met Thr Leu Asn 20 25 30 TCC GGC GGC AAC TAC AGC ACC TCG TGG ACG AAC TGC GGG AAC TTC GTC 561 Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Thr Ser Trp Thr Asn Cys Gly Asn Phe Val 35 40 45 GCC GGC AAG GGC TGG AGC AAC GGC GGA CGC AGG AAC GTG CAG TAC TCG 609 Ala Gly Lys Gly Trp Ser Asn Gly Gly Arg Arg Asn Val Gln Tyr Ser 50 55 60 GGC AGC TTC TAC CCG TCC GGC AAC GGC TAC CTG GCG CTG TAC GGG TGG 657 Gly Ser Phe Tyr Pro Ser Gly Asn Gly Tyr Leu Ala Leu Tyr Gly Trp 65 70 75 80 ACC TCG AAC CCG CTC GTC GAG TAC TAC ATC GTC GAC AAC TGG GGC AAC 705 Thr Ser Asn Pro Leu Val Glu Tyr Tyr Ile Val Asp Asn Trp Gly Asn 85 90 95 TAC CGG CCC ACC GGA ACG TAC AAG GGC ACG GTC ACC AGC GAC GGC GGC 753 Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys Gly Thr Val Thr Ser Asp Gly Gly 100 105 110 ACG TAC GAC GTC TAC CAG ACG ACG CGG TAC AAC GCC CCC TCC GTG GAA 801 Thr Tyr Asp Val Tyr Gln Thr Thr Arg Tyr Asn Ala Pro Ser Val Glu 115 120 125 GGC ACC AAG ACC TTC AAC CAG TAC TGG AGC GTC CGG CAG TCC AAG CGG 849 Gly Thr Lys Thr Phe Asn Gln Tyr Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg 130 135 140 ACC GGC GGC ACC ATC ACC ACC GGC AAC CAC TTC GAC GCC TGG GCC CGC 897 Thr Gly Gly Thr Ile Thr Thr Gly Asn His Phe Asp Ala Trp Ala Arg 145 150 155 160 TAC GGC ATG CAA CTG GGC AGC TTC AGC TAC TAC ATG ATC ATG GCC ACC 945 Tyr Gly Met Gln Leu Gly Ser Phe Ser Tyr Tyr Met Ile Met Ala Thr 165 170 175 GAG GGC TAC CAG AGC AGC GGC TCC TCC AAC CTC ACG GTG AGC GGC TGAC 994 Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser Ser Asn Leu Thr Val Ser Gly 180 185 190 CCTCCCCGTC CCGTCCCATC CCCCACGGAG GTCACGCCGC CCACCCGAGG AGGACGCACC 1054 CGCATGCGTG CCGCACCCCG CTCCCTGCTG ACCGGACTGG CCCTCGCGGC GACCGCCGTG 1114 GCCGGCACGG TCACCGCCGT CACCGACGCC GCCCCGGCGC ACGCCGCCGC CTGCTCCGGG 1174 TACGTCGGGC TCACCTTCGA C 1195
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 プラスミド名：ｐＱＥ６０／ＸｙｎＧ 配列の特徴 特徴を示す記号： ｍａｔ ｐｅｐｔｉｄｅ 存在位置：４１８．．９９３ 特徴を決定した方法：Ｐ 配列 GGAATCGAAA GTTTCGTATT GCCTGACGAG CGTTGCGTCA CGCTAAGCAG GCGCCAATTC 60 CGCGTCAACC ATCGTGTCGA CAGTCTTTTC GGCCACCCCT TCCAGCAGCT TCGAAAGTTG 120 CGGCTCTACA CGCCGGAGTT CACCGTCAAG TTTCGATGAA GTTTCGGAAA CAGACGCATT 180 GACCGCCCTT TCGAACCCGC CCCATACTCT CCAGCAATCG AGCCCTCCCT CCCACGGGAA 240 CGGCCCGGCC ATGGCGTATG GCGCGAACAT GACAACCCAC CTCATCCAGG AGGCACGATG 300 GACATGGAGC ACGCCCTCAC CCGCCCGATG AGCCGCAGGG GCTTCATCAA CCGTGCCGGC 360 GCGCTCGCGC TGGCCACCAC CGCGTCCGGG CTGCTGCTGC CCGACACCGC TCAGGCC 417 GCC ACG GTC ATC ACC ACC AAC CAG ACC GGC ACC AAC AAC GGG TTC TAC 465 Ala Thr Val Ile Thr Thr Asn Gln Thr Gly Thr Asn Asn Gly Phe Tyr 1 5 10 15 TAC TCC TTC TGG ACC GAC GGC GGC GGT TCG GTC TCG ATG ACC CTG AAC 513 Tyr Ser Phe Trp Thr Asp Gly Gly Gly Ser Val Ser Met Thr Leu Asn 20 25 30 TCC GGC GGC AAC TAC AGC ACC TCG TGG ACG AAC TGC GGG AAC TTC GTC 561 Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Thr Ser Trp Thr Asn Cys Gly Asn Phe Val 35 40 45 GCC GGC AAG GGC TGG AGC AAC GGC GGA CGC AGG AAC GTG CAG TAC TCG 609 Ala Gly Lys Gly Trp Ser Asn Gly Gly Arg Arg Asn Val Gln Tyr Ser 50 55 60 GGC AGC TTC TAC CCG TCC GGC AAC GGC TAC CTG GCG CTG TAC GGG TGG 657 Gly Ser Phe Tyr Pro Ser Gly Asn Gly Tyr Leu Ala Leu Tyr Gly Trp 65 70 75 80 ACC TCG AAC CCG CTC GTC GAG TAC TAC ATC GTC GAC AAC TGG GGC AAC 705 Thr Ser Asn Pro Leu Val Glu Tyr Tyr Ile Val Asp Asn Trp Gly Asn 85 90 95 TAC CGG CCC ACC GGA ACG TAC AAG GGC ACG GTC ACC AGC GAC GGC GGC 753 Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys Gly Thr Val Thr Ser Asp Gly Gly 100 105 110 ACG TAC GAC GTC TAC CAG ACG ACG CGG TAC AAC GCC CCC TCC GTG GAA 801 Thr Tyr Asp Val Tyr Gln Thr Thr Arg Tyr Asn Ala Pro Ser Val Glu 115 120 125 GGC ACC AAG ACC TTC AAC CAG TAC TGG AGC GTC CGG CAG TCC AAG CGG 849 Gly Thr Lys Thr Phe Asn Gln Tyr Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg 130 135 140 ACC GGC GGC ACC ATC ACC ACC GGC AAC CAC TTC GAC GCC TGG GCC CGC 897 Thr Gly Gly Thr Ile Thr Thr Gly Asn His Phe Asp Ala Trp Ala Arg 145 150 155 160 TAC GGC ATG CAA CTG GGC AGC TTC AGC TAC TAC ATG ATC ATG GCC ACC 945 Tyr Gly Met Gln Leu Gly Ser Phe Ser Tyr Tyr Met Ile Met Ala Thr 165 170 175 GAG GGC TAC CAG AGC AGC GGC TCC TCC AAC CTC ACG GTG AGC GGC TGAC 994 Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser Ser Asn Leu Thr Val Ser Gly 180 185 190 CCTCCCCGTC CCGTCCCATC CCCCACGGAG GTCACGCCGC CCACCCGAGG AGGACGCACC 1054 CGCATGCGTG CCGCACCCCG CTCCCTGCTG ACCGGACTGG CCCTCGCGGC GACCGCCGTG 1114 GCCGGCACGG TCACCGCCGT CACCGACGCC GCCCCGGCGC ACGCCGCCGC CTGCTCCGGG 1174 TACGTCGGGC TCACCTTCGA C 1195
【００３８】配列番号：３
配列の長さ：４０
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
フラグメント型：Ｎ末端フラグメント
起源：
生物名：ストレプトマイセス オリバセオビリデス（St
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 Ala Thr Val Ile Thr Thr Asn Gln Thr Gly Thr Asn Asn Gly Phe Tyr 1 5 10 15 Tyr Ser Phe Trp Thr Asp Gly Gly Gly Ser Val Ser Met Thr Leu Asn 20 25 30 Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Thr Ser 35 40
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 Ala Thr Val Ile Thr Thr Asn Gln Thr Gly Thr Asn Asn Gly Phe Tyr 1 5 10 15 Tyr Ser Phe Trp Thr Asp Gly Gly Gly Ser Val Ser Met Thr Leu Asn 20 25 30 Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Thr Ser 35 40
【００３９】配列番号：４
配列の長さ：２４
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸（アミノ酸配列から作成）
起源：
生物名：ストレプトマイセス オリバセオビリデス（St
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 GGSACSAACA ACGGSTTCTA CTAC ２４
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 GGSACSAACA ACGGSTTCTA CTAC ２４
【００４０】配列番号：５
配列の長さ：２２
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸（アミノ酸配列から作成）
起源：
生物名：ストレプトマイセス オリバセオビリデス（St
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 WCTGGTASCC CTCSGTSGCC AT 22
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 WCTGGTASCC CTCSGTSGCC AT 22
【００４１】配列番号：６
配列の長さ：５１４
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸
起源：
生物名：ストレプトマイセス オリバセオビリデス（St
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ＰＣＲ反応物 配列 GGC ACC AAC AAC GGG TTC TAC TAC TCC TTC TGG ACC GAC GGC GGC GGT 48 Gly Thr Asn Asn Gly Phe Tyr Tyr Ser Phe Trp Thr Asp Gly Gly Gly 1 5 10 15 TCG GTC TCG ATG ACC CTG AAC TCC GGC GGC AAC TAC AGC ACC TCG TGG 96 Ser Val Ser Met Thr Leu Asn Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Thr Ser Trp 20 25 30 ACG AAC TGC GGG AAC TTC GTC GCC GGC AAG GGC TGG AGC AAC GGC GGA 144 Thr Asn Cys Gly Asn Phe Val Ala Gly Lys Gly Trp Ser Asn Gly Gly 35 40 45 CGC AGG AAC GTG CAG TAC TCG GGC AGC TTC TAC CCG TCC GGC AAC GGC 192 Arg Arg Asn Val Gln Tyr Ser Gly Ser Phe Tyr Pro Ser Gly Asn Gly 50 55 60 TAC CTG GCG CTG TAC GGG TGG ACC TCG AAC CCG CTC GTC GAG TAC TAC 240 Tyr Leu Ala Leu Tyr Gly Trp Thr Ser Asn Pro Leu Val Glu Tyr Tyr 65 70 75 80 ATC GTC GAC AAC TGG GGC AAC TAC CGG CCC ACC GGA ACG TAC AAG GGC 288 Ile Val Asp Asn Trp Gly Asn Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys Gly 85 90 95 ACG GTC ACC AGC GAC GGC GGC ACG TAC GAC GTC TAC CAG ACG ACG CGG 336 Thr Val Thr Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Val Tyr Gln Thr Thr Arg 100 105 110 TAC AAC GCC CCC TCC GTG GAA GGC ACC AAG ACC TTC AAC CAG TAC TGG 384 Tyr Asn Ala Pro Ser Val Glu Gly Thr Lys Thr Phe Asn Gln Tyr Trp 115 120 125 AGC GTC CGG CAG TCC AAG CGG ACC GGC GGC ACC ATC ACC ACC GGC AAC 432 Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg Thr Gly Gly Thr Ile Thr Thr Gly Asn 130 135 140 CAC TTC GAC GCC TGG GCC CGC TAC GGC ATG CAA CTG GGC AGC TTC AGC 480 His Phe Asp Ala Trp Ala Arg Tyr Gly Met Gln Leu Gly Ser Phe Ser 145 150 155 160 TAC TAC ATG ATC ATG GCC ACC GAG GGC TAC CAG T 514 Tyr Tyr Met Ile Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln 165 170
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ＰＣＲ反応物 配列 GGC ACC AAC AAC GGG TTC TAC TAC TCC TTC TGG ACC GAC GGC GGC GGT 48 Gly Thr Asn Asn Gly Phe Tyr Tyr Ser Phe Trp Thr Asp Gly Gly Gly 1 5 10 15 TCG GTC TCG ATG ACC CTG AAC TCC GGC GGC AAC TAC AGC ACC TCG TGG 96 Ser Val Ser Met Thr Leu Asn Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Thr Ser Trp 20 25 30 ACG AAC TGC GGG AAC TTC GTC GCC GGC AAG GGC TGG AGC AAC GGC GGA 144 Thr Asn Cys Gly Asn Phe Val Ala Gly Lys Gly Trp Ser Asn Gly Gly 35 40 45 CGC AGG AAC GTG CAG TAC TCG GGC AGC TTC TAC CCG TCC GGC AAC GGC 192 Arg Arg Asn Val Gln Tyr Ser Gly Ser Phe Tyr Pro Ser Gly Asn Gly 50 55 60 TAC CTG GCG CTG TAC GGG TGG ACC TCG AAC CCG CTC GTC GAG TAC TAC 240 Tyr Leu Ala Leu Tyr Gly Trp Thr Ser Asn Pro Leu Val Glu Tyr Tyr 65 70 75 80 ATC GTC GAC AAC TGG GGC AAC TAC CGG CCC ACC GGA ACG TAC AAG GGC 288 Ile Val Asp Asn Trp Gly Asn Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys Gly 85 90 95 ACG GTC ACC AGC GAC GGC GGC ACG TAC GAC GTC TAC CAG ACG ACG CGG 336 Thr Val Thr Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Val Tyr Gln Thr Thr Arg 100 105 110 TAC AAC GCC CCC TCC GTG GAA GGC ACC AAG ACC TTC AAC CAG TAC TGG 384 Tyr Asn Ala Pro Ser Val Glu Gly Thr Lys Thr Phe Asn Gln Tyr Trp 115 120 125 AGC GTC CGG CAG TCC AAG CGG ACC GGC GGC ACC ATC ACC ACC GGC AAC 432 Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg Thr Gly Gly Thr Ile Thr Thr Gly Asn 130 135 140 CAC TTC GAC GCC TGG GCC CGC TAC GGC ATG CAA CTG GGC AGC TTC AGC 480 His Phe Asp Ala Trp Ala Arg Tyr Gly Met Gln Leu Gly Ser Phe Ser 145 150 155 160 TAC TAC ATG ATC ATG GCC ACC GAG GGC TAC CAG T 514 Tyr Tyr Met Ile Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln 165 170
【００４２】配列番号：７
配列の長さ：２７
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸（アミノ酸配列から作成）
起源：
生物名：ストレプトマイセス オリバセオビリデス（St
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 TAGTTGCCGC CGGAGTTCAG GGTCATC 27
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 TAGTTGCCGC CGGAGTTCAG GGTCATC 27
【００４３】配列番号：８
配列の長さ：２７
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸（アミノ酸配列から作成）
起源：
生物名：ストレプトマイセス オリバセオビリデス（St
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 CATCGTCGAC AACTGGGGCA ACTACCG 27
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 CATCGTCGAC AACTGGGGCA ACTACCG 27
【００４４】配列番号：９
配列の長さ：２７
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸（アミノ酸配列から作成）
起源：
生物名：ストレプトマイセス オリバセオビリデス（St
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 TGAAGCTGCC CAGTTGCATG CCGTAGC 27
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 TGAAGCTGCC CAGTTGCATG CCGTAGC 27
【００４５】配列番号：１０
配列の長さ：２７
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸（アミノ酸配列から作成）
起源：
生物名：ストレプトマイセス オリバセオビリデス（St
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 TGATCATGGC CACCGAGGGC TACCAGA 27
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 TGATCATGGC CACCGAGGGC TACCAGA 27
【００４６】
配列番号：１１
配列の長さ：３２
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸（アミノ酸配列から作成）
起源：
生物名：ストレプトマイセス オリバセオビリデス（St
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 CCATGGACAT GGAGCACGCC CTCACCCGCC CG 32
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 CCATGGACAT GGAGCACGCC CTCACCCGCC CG 32
【００４７】配列番号：１２
配列の長さ：３２
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸（アミノ酸配列から作成）
起源：
生物名：ストレプトマイセス オリバセオビリデス（St
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 GGATCCGCCG CTCACCGTGA GGTTGGAGGA GC 32
reptomyces olivaceoviridis ） 株名：Ｅ−８６株 直接の起源 ストレプトマイセス オリバセオビリデス Ｅ−８６株
が生産した酵素 配列 GGATCCGCCG CTCACCGTGA GGTTGGAGGA GC 32
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(56)参考文献 Ｂｉｏｓｉｃ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．58，Ｎｏ．６,
ｐ．1041−1044（1994)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／Ｇ
ｅｎｅＳｅｑ
ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (6)
- 【請求項１】 配列表の配列番号１記載の塩基配列を有
するストレプトマイセス オリバセオビリディス由来の
キシラナーゼ前駆体の遺伝子。 - 【請求項２】 請求項１記載のキシラナーゼ前駆体の遺
伝子を含むプラスミド。 - 【請求項３】 請求項２記載のプラスミドで形質転換さ
れた大腸菌（ＦＥＲＭＰ−１６７１３）。 - 【請求項４】 配列表の配列番号２記載の塩基配列を有
するストレプトマイセス オリバセオビリディス由来の
キシラナーゼの遺伝子。 - 【請求項５】 請求項４記載のキシラナーゼの遺伝子を
含むプラスミド。 - 【請求項６】 請求項５記載のプラスミドで形質転換さ
れた大腸菌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09070298A JP3366933B2 (ja) | 1998-03-20 | 1998-03-20 | キシラナーゼ遺伝子、該遺伝子を含むベクター及び形質転換体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09070298A JP3366933B2 (ja) | 1998-03-20 | 1998-03-20 | キシラナーゼ遺伝子、該遺伝子を含むベクター及び形質転換体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11266873A JPH11266873A (ja) | 1999-10-05 |
| JP3366933B2 true JP3366933B2 (ja) | 2003-01-14 |
Family
ID=14005870
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP09070298A Expired - Lifetime JP3366933B2 (ja) | 1998-03-20 | 1998-03-20 | キシラナーゼ遺伝子、該遺伝子を含むベクター及び形質転換体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3366933B2 (ja) |
-
1998
- 1998-03-20 JP JP09070298A patent/JP3366933B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｂｉｏｓｉｃ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．５８，Ｎｏ．６，ｐ．１０４１−１０４４（１９９４） |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH11266873A (ja) | 1999-10-05 |
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