JP3327070B2 - 非特異反応吸収試薬及びそれを用いる測定法 - Google Patents
非特異反応吸収試薬及びそれを用いる測定法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、デキストランの少
なくとも６０％の水酸基が硫酸エステル基で置換された
デキストラン化合物又はその塩からなる、赤血球を担体
とする間接凝集免疫測定用の非特異反応吸収試薬、及び
抗原又は抗体が結合した赤血球と抗体又は抗原を含む検
体とを溶液中で反応させる測定法において、デキストラ
ンの少なくとも６０％の水酸基が硫酸エステル基で置換
されたデキストラン化合物又はその塩からなる非特異反
応吸収試薬を溶液中に添加して反応を行う間接凝集免疫
測定法に関する。
なくとも６０％の水酸基が硫酸エステル基で置換された
デキストラン化合物又はその塩からなる、赤血球を担体
とする間接凝集免疫測定用の非特異反応吸収試薬、及び
抗原又は抗体が結合した赤血球と抗体又は抗原を含む検
体とを溶液中で反応させる測定法において、デキストラ
ンの少なくとも６０％の水酸基が硫酸エステル基で置換
されたデキストラン化合物又はその塩からなる非特異反
応吸収試薬を溶液中に添加して反応を行う間接凝集免疫
測定法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、間接凝集免疫測定法は、抗原又は
抗体を結合させた粒子を試薬として用い、判定には特殊
な検出装置を使用しない多量検体の簡易測定法として実
用化されてきた。この測定法では、検体中の抗原又は抗
体と試薬との間で起こる免疫反応以外に検体中に含まれ
る非特異吸着物質が試薬の粒子と非特異反応を起こして
結合し、凝集することが知られていた。そこで検体から
カラムクロマトグラフィー処理、抽出等により非特異吸
着物質を除くことが行われてきたが、これに代わる測定
溶液中に添加するだけで吸着物質を除去又は吸着を阻害
する試薬として動物赤血球膜成分（特公昭５０−１０３
７４号参照）、水酸化アルミニウム及びリン酸カルシウ
ム（特開昭５５−１１１８３９号参照）、カオリン等が
見出された。
抗体を結合させた粒子を試薬として用い、判定には特殊
な検出装置を使用しない多量検体の簡易測定法として実
用化されてきた。この測定法では、検体中の抗原又は抗
体と試薬との間で起こる免疫反応以外に検体中に含まれ
る非特異吸着物質が試薬の粒子と非特異反応を起こして
結合し、凝集することが知られていた。そこで検体から
カラムクロマトグラフィー処理、抽出等により非特異吸
着物質を除くことが行われてきたが、これに代わる測定
溶液中に添加するだけで吸着物質を除去又は吸着を阻害
する試薬として動物赤血球膜成分（特公昭５０−１０３
７４号参照）、水酸化アルミニウム及びリン酸カルシウ
ム（特開昭５５−１１１８３９号参照）、カオリン等が
見出された。
【０００３】間接凝集免疫測定法では、検体中に含まれ
る複数の蛋白質が非特異反応の原因物質であると考えら
れている。この原因物質の一つとして検体の血清、血漿
中に存在するマイクロフィブリン等の血液凝固因子があ
るが、前記試薬を用いて除去を試みると作用が弱く多量
の原因物質を除去するには充分な効果を示すものではな
かった。また、水酸化アルミニウム及びリン酸カルシウ
ム、カオリン等の試薬は、反応後この試薬を濾過又は遠
心分離で除去することが必要であり、簡便な操作で行う
ことが難しかった。
る複数の蛋白質が非特異反応の原因物質であると考えら
れている。この原因物質の一つとして検体の血清、血漿
中に存在するマイクロフィブリン等の血液凝固因子があ
るが、前記試薬を用いて除去を試みると作用が弱く多量
の原因物質を除去するには充分な効果を示すものではな
かった。また、水酸化アルミニウム及びリン酸カルシウ
ム、カオリン等の試薬は、反応後この試薬を濾過又は遠
心分離で除去することが必要であり、簡便な操作で行う
ことが難しかった。
【０００４】この欠点を克服して非特異反応を低下さ
せ、測定対象の抗体及び抗原の正確な測定値を得るため
に測定溶液中に加えて用いるデキストラン硫酸、ヘパリ
ン、ポリスチレンスルホン酸、フタル酸酢酸セルロース
等のポリアニオンが見い出された（特公昭６３−６７８
６４号参照）。
せ、測定対象の抗体及び抗原の正確な測定値を得るため
に測定溶液中に加えて用いるデキストラン硫酸、ヘパリ
ン、ポリスチレンスルホン酸、フタル酸酢酸セルロース
等のポリアニオンが見い出された（特公昭６３−６７８
６４号参照）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】前記ポリアニオンは、
検体溶液に添加されて非特異反応を低下させるが、血漿
等の非特異反応の原因物質を多く含む検体では未だ充分
な効果を示すものではなかった。本発明は、デキストラ
ンの水酸基が硫酸エステル基を形成したデキストラン化
合物を有効成分とし、検体中の非特異反応の原因物質を
除去する効果の高い非特異反応吸収試薬を提供すること
を目的とする。
検体溶液に添加されて非特異反応を低下させるが、血漿
等の非特異反応の原因物質を多く含む検体では未だ充分
な効果を示すものではなかった。本発明は、デキストラ
ンの水酸基が硫酸エステル基を形成したデキストラン化
合物を有効成分とし、検体中の非特異反応の原因物質を
除去する効果の高い非特異反応吸収試薬を提供すること
を目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、間接凝集
免疫測定における非特異反応の吸収試薬について鋭意研
究した結果、デキストランの少なくとも６０％の水酸基
が硫酸エステル基で置換されたデキストラン化合物又は
その塩を、赤血球を担体とする間接凝集免疫測定用の非
特異反応吸収試薬として用いることを見出し、本発明を
完成した。
免疫測定における非特異反応の吸収試薬について鋭意研
究した結果、デキストランの少なくとも６０％の水酸基
が硫酸エステル基で置換されたデキストラン化合物又は
その塩を、赤血球を担体とする間接凝集免疫測定用の非
特異反応吸収試薬として用いることを見出し、本発明を
完成した。
【０００７】 本発明の非特異反応吸収試薬は、デキス
トランの少なくとも６０％の水酸基が硫酸エステル基で
置換されたデキストラン化合物である。さらにこの化合
物は例えばナトリウム、カリウム等のアルカリ金属、カ
ルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩を
形成させて用いることもできる。
トランの少なくとも６０％の水酸基が硫酸エステル基で
置換されたデキストラン化合物である。さらにこの化合
物は例えばナトリウム、カリウム等のアルカリ金属、カ
ルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩を
形成させて用いることもできる。
【０００８】 デキストラン化合物は、デキストラン硫
酸としてデキストランの水酸基が硫酸エステル基で置換
された各種分子量（約１０００〜約１０万）の化合物が
市販されているが、例えば公知のピペリジン硫酸を用い
る硫酸化エステル法等によりデキストランからも容易に
製造することができる化合物である（米国特許２，７１
５，０９１号、特開昭６１−１３０３０１号、同６１−
１３０３０２号公報、K. Hatanaka et al., J. Med. C
hem., １９８７，３０，８１０−８１４参照）。本発明
のデキストラン化合物はデキストランの少なくとも６０
％の水酸基が硫酸エステル基で置換されたデキストラン
化合物であり、硫酸エステル基の置換量は、例えばデキ
ストラン化合物の硫黄含有量を測定する方法、滴定法等
により行うことがきる。
酸としてデキストランの水酸基が硫酸エステル基で置換
された各種分子量（約１０００〜約１０万）の化合物が
市販されているが、例えば公知のピペリジン硫酸を用い
る硫酸化エステル法等によりデキストランからも容易に
製造することができる化合物である（米国特許２，７１
５，０９１号、特開昭６１−１３０３０１号、同６１−
１３０３０２号公報、K. Hatanaka et al., J. Med. C
hem., １９８７，３０，８１０−８１４参照）。本発明
のデキストラン化合物はデキストランの少なくとも６０
％の水酸基が硫酸エステル基で置換されたデキストラン
化合物であり、硫酸エステル基の置換量は、例えばデキ
ストラン化合物の硫黄含有量を測定する方法、滴定法等
により行うことがきる。
【０００９】本発明の非特異反応吸収試薬は、抗原又は
抗体の結合した間接凝集免疫測定用の粒子を含む溶液中
に添加して用いることができる。この吸収試薬は、粒子
に対して０．０３〜８重量％用いることができるが、
０．１〜１．０％用いることが経済的にも有利である。
非特異反応吸収試薬は、測定溶液中に存在すればよく通
常検体希釈液に添加して使用することができる。またこ
の間接凝集免疫測定溶液中には前記吸収試薬の他、安定
剤、防腐剤、キレート剤、界面活性剤等の添加物を含ん
でいてもよい。本発明の非特異反応吸収試薬を用いる免
疫測定の検体としては特に制限はなく、通常の血清、
尿、リンパ液、髄液の他、血液凝固因子を大量に含む血
漿も用いることができる。
抗体の結合した間接凝集免疫測定用の粒子を含む溶液中
に添加して用いることができる。この吸収試薬は、粒子
に対して０．０３〜８重量％用いることができるが、
０．１〜１．０％用いることが経済的にも有利である。
非特異反応吸収試薬は、測定溶液中に存在すればよく通
常検体希釈液に添加して使用することができる。またこ
の間接凝集免疫測定溶液中には前記吸収試薬の他、安定
剤、防腐剤、キレート剤、界面活性剤等の添加物を含ん
でいてもよい。本発明の非特異反応吸収試薬を用いる免
疫測定の検体としては特に制限はなく、通常の血清、
尿、リンパ液、髄液の他、血液凝固因子を大量に含む血
漿も用いることができる。
【００１０】 本発明の非特異反応吸収試薬は、公知の
各種間接凝集免疫測定用粒子と抗原又は抗体とを架橋剤
を用いて結合させて製造した試薬を用いる測定法に採用
することができる。この粒子は、鳥類例えばニワトリ、
七面鳥等の赤血球、哺乳動物例えば羊、牛、豚、山羊、
ウサギ、ヒト等の赤血球等を挙げることができる。さら
に粒子に結合する抗原又は抗体は、測定対象物により選
ばれ、例えば、α−フェトプロティン（ＡＦＰ）、癌胎
児性抗原（ＣＥＡ）、アルブミン、フェリチン等の血漿
蛋白質、トレポネーマ・パリダム（ＴＰ）抗原、ＨＢＳ
抗原、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウ
イルス（ＨＩＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬ
Ｖ−１）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペス
ウイルス等のウイルス抗原、フィブリン分解生成物、プ
ロスタグランジン、テストステロン、プロゲステロン、
サイロキシン等のホルモン、ジゴキシン、テオフィリ
ン、フェノパルビタール、フェニトイン、ペニシリン、
アミカシン等の薬物等の各種臓器、血中あるいは尿中等
に存在する抗原又はこれらに対する各種抗体等である。
各種間接凝集免疫測定用粒子と抗原又は抗体とを架橋剤
を用いて結合させて製造した試薬を用いる測定法に採用
することができる。この粒子は、鳥類例えばニワトリ、
七面鳥等の赤血球、哺乳動物例えば羊、牛、豚、山羊、
ウサギ、ヒト等の赤血球等を挙げることができる。さら
に粒子に結合する抗原又は抗体は、測定対象物により選
ばれ、例えば、α−フェトプロティン（ＡＦＰ）、癌胎
児性抗原（ＣＥＡ）、アルブミン、フェリチン等の血漿
蛋白質、トレポネーマ・パリダム（ＴＰ）抗原、ＨＢＳ
抗原、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウ
イルス（ＨＩＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬ
Ｖ−１）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペス
ウイルス等のウイルス抗原、フィブリン分解生成物、プ
ロスタグランジン、テストステロン、プロゲステロン、
サイロキシン等のホルモン、ジゴキシン、テオフィリ
ン、フェノパルビタール、フェニトイン、ペニシリン、
アミカシン等の薬物等の各種臓器、血中あるいは尿中等
に存在する抗原又はこれらに対する各種抗体等である。
【００１１】これらの抗体は、ポリクローナル抗体又は
モノクローナル抗体であり、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａ
ｂ′)2等の抗体クラグメントであってもよい。
モノクローナル抗体であり、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａ
ｂ′)2等の抗体クラグメントであってもよい。
【００１２】 さらに抗原又は抗体と粒子とを結合させ
る架橋剤は、例えばタンニン酸、ホルムアルデヒド、グ
ルタルアルデヒド、ピクリックアルデヒド、ビス−ジア
ゾ化ベンジジン、ジフルオロジニトロベンゼン、トルエ
ン−２，４−ジイソシアネート、水溶性カルボジイミ
ド、塩化クロム、塩化シアヌル、テトラゾ化−ｏ−ジア
ニシジン等を用いることができる。間接凝集免疫測定試
薬は、動物赤血球と前記架橋剤とを緩衝液中で反応させ
た後、前記抗原又は抗体を加え反応させることにより製
造することができる。得られた試薬は、凍結乾燥されて
保存後、使用時に復元液を加えて測定に用いることがで
きる。
る架橋剤は、例えばタンニン酸、ホルムアルデヒド、グ
ルタルアルデヒド、ピクリックアルデヒド、ビス−ジア
ゾ化ベンジジン、ジフルオロジニトロベンゼン、トルエ
ン−２，４−ジイソシアネート、水溶性カルボジイミ
ド、塩化クロム、塩化シアヌル、テトラゾ化−ｏ−ジア
ニシジン等を用いることができる。間接凝集免疫測定試
薬は、動物赤血球と前記架橋剤とを緩衝液中で反応させ
た後、前記抗原又は抗体を加え反応させることにより製
造することができる。得られた試薬は、凍結乾燥されて
保存後、使用時に復元液を加えて測定に用いることがで
きる。
【００１３】
【実施例】以下実施例により本発明を更に詳細に説明す
る。
る。
【００１４】実施例１ ＴＰ抗体測定試薬の調整 （ＴＰ抗原の調製）家兎睾丸にＴＰ（Ｎｉｃｈｏｌｓ
株）を接種し１２日間培養後、ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）
らの方法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０，１０６２−１
９７４）に従ってＴＰ抗原を得た。
株）を接種し１２日間培養後、ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）
らの方法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０，１０６２−１
９７４）に従ってＴＰ抗原を得た。
【００１５】（ＴＰ抗原感作血球の調製）リン酸緩衝生
理食塩水ＰＢＳ（ｐＨ７．２）に浮遊した２．５（Ｖ／
Ｖ）％ホルマリン固定ニワトリ赤血球２０ｍｌと１０ｐ
ｐｍタンニン酸ＰＢＳ（ｐＨ７．２）溶液２０ｍｌと
を、３７℃１０分間インキュベートした。この血球を生
理食塩水で１回洗浄したあとＰＢＳ（ｐＨ６．４）で全
量を２０ｍｌとしタンニン酸処理血球ＰＢＳ溶液を得
た。超音波により破砕処理した前記ＴＰ抗原を原液に対
して約８０倍にＰＢＳ（ｐＨ６．４）で希釈したものを
２０ｍｌ準備し、前記タンニン酸処理血球ＰＢＳ（ｐＨ
６．４）２０ｍｌと等量混合し３７℃で４０分間インキ
ュベートした。この血球を生理食塩水４０ｍｌで１回洗
浄後、１％ＮＲＳ（健康家兎血清）を含む１０ｍｌのＰ
ＢＳ（ｐＨ７．２）に浮遊し、バイアル瓶に０．３ｍｌ
ずつ分注し凍結乾燥を行った。
理食塩水ＰＢＳ（ｐＨ７．２）に浮遊した２．５（Ｖ／
Ｖ）％ホルマリン固定ニワトリ赤血球２０ｍｌと１０ｐ
ｐｍタンニン酸ＰＢＳ（ｐＨ７．２）溶液２０ｍｌと
を、３７℃１０分間インキュベートした。この血球を生
理食塩水で１回洗浄したあとＰＢＳ（ｐＨ６．４）で全
量を２０ｍｌとしタンニン酸処理血球ＰＢＳ溶液を得
た。超音波により破砕処理した前記ＴＰ抗原を原液に対
して約８０倍にＰＢＳ（ｐＨ６．４）で希釈したものを
２０ｍｌ準備し、前記タンニン酸処理血球ＰＢＳ（ｐＨ
６．４）２０ｍｌと等量混合し３７℃で４０分間インキ
ュベートした。この血球を生理食塩水４０ｍｌで１回洗
浄後、１％ＮＲＳ（健康家兎血清）を含む１０ｍｌのＰ
ＢＳ（ｐＨ７．２）に浮遊し、バイアル瓶に０．３ｍｌ
ずつ分注し凍結乾燥を行った。
【００１６】（未感作粒子の調製）２０ｍｌの２．５
（Ｖ／Ｖ）％タンニン酸処理血球を１％ＮＲＳを含む１
０ｍｌのＰＢＳ（ｐＨ７．２）に浮遊し、感作血球と同
様に凍結乾燥を行った。 （血清希釈液の調製）０．１５Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７．
２）に１％ ＮＲＳ及び０．１％Ｔ．ｐｈａｇｅｄｅｎ
ｉｓ，Ｂｉｏｔｙｐｅ Ｒｅｉｔｅｒの菌体破砕物と抗
菌剤として０．１％アジ化ナトリウムを加えた溶液を検
体希釈液として用いた。Ｔ．ｐｈａｇｅｄｅｎｉｓ，ｂ
ｉｏｔｙｐｅ Ｒｅｉｔｅｒはルサー（ＬＵＴＨＥＲ）
らの方法（Ｚｈｌ．Ｂａｋｔ．２７４，２１４−２２
６，１９９０）により１０％牛血清を含むスピロプロス
中で培養し集菌したものをＰＢＳ（ｐＨ７．２）に浮遊
後、超音波により破砕したものを用いた。
（Ｖ／Ｖ）％タンニン酸処理血球を１％ＮＲＳを含む１
０ｍｌのＰＢＳ（ｐＨ７．２）に浮遊し、感作血球と同
様に凍結乾燥を行った。 （血清希釈液の調製）０．１５Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７．
２）に１％ ＮＲＳ及び０．１％Ｔ．ｐｈａｇｅｄｅｎ
ｉｓ，Ｂｉｏｔｙｐｅ Ｒｅｉｔｅｒの菌体破砕物と抗
菌剤として０．１％アジ化ナトリウムを加えた溶液を検
体希釈液として用いた。Ｔ．ｐｈａｇｅｄｅｎｉｓ，ｂ
ｉｏｔｙｐｅ Ｒｅｉｔｅｒはルサー（ＬＵＴＨＥＲ）
らの方法（Ｚｈｌ．Ｂａｋｔ．２７４，２１４−２２
６，１９９０）により１０％牛血清を含むスピロプロス
中で培養し集菌したものをＰＢＳ（ｐＨ７．２）に浮遊
後、超音波により破砕したものを用いた。
【００１７】（溶解用液の調製）ＰＢＳ（ｐＨ７．２）
に０．６％ＮＲＳを添加したものを調製した。
に０．６％ＮＲＳを添加したものを調製した。
【００１８】（硫酸エステル基の置換量の異なるデキス
トラン化合物の調製）硫酸エステル基の置換されたデキ
ストラン化合物は、米国特許２，７１５，０９１に記載
のデキストランを硫酸化し水酸化ナトリウムで中和後、
アセトンによりデキストランとデキストラン硫酸を分離
する方法に従い製造した。硫酸化の条件を変化させるこ
とにより硫酸エステル基の置換量の異なるデキストラン
化合物のナトリウム塩を得た。硫酸エステル基の置換量
の確認は、フラスコ燃焼−ジメチルスルホナゾIII 法で
イオウを定量することより確認した。イオウ含有量１
５．７、１６．１、１７．４又は１８．０（wt/wt ）％
（硫酸エステル基として、５２、５６、６６及び７１
％）平均分子量５，０００の化合物（以下デキストラン
硫酸ナトリウムという）が得られた。
トラン化合物の調製）硫酸エステル基の置換されたデキ
ストラン化合物は、米国特許２，７１５，０９１に記載
のデキストランを硫酸化し水酸化ナトリウムで中和後、
アセトンによりデキストランとデキストラン硫酸を分離
する方法に従い製造した。硫酸化の条件を変化させるこ
とにより硫酸エステル基の置換量の異なるデキストラン
化合物のナトリウム塩を得た。硫酸エステル基の置換量
の確認は、フラスコ燃焼−ジメチルスルホナゾIII 法で
イオウを定量することより確認した。イオウ含有量１
５．７、１６．１、１７．４又は１８．０（wt/wt ）％
（硫酸エステル基として、５２、５６、６６及び７１
％）平均分子量５，０００の化合物（以下デキストラン
硫酸ナトリウムという）が得られた。
【００１９】（デキストラン硫酸ナトリウム添加血清希
釈液の調製）上記硫酸エステル基の置換量の異なる０．
１％デキストラン硫酸ナトリウム溶液を調製した。さら
に血清希釈液に０．００８〜８（ｗｔ／ｖｏｌ）％デキ
ストラン硫酸ナトリウム（分子量５，０００；硫酸エス
テル基６６％）を溶解し希釈液を調製した。
釈液の調製）上記硫酸エステル基の置換量の異なる０．
１％デキストラン硫酸ナトリウム溶液を調製した。さら
に血清希釈液に０．００８〜８（ｗｔ／ｖｏｌ）％デキ
ストラン硫酸ナトリウム（分子量５，０００；硫酸エス
テル基６６％）を溶解し希釈液を調製した。
【００２０】実施例２ ＴＰ抗体測定試験 実施例１で調製した凍結乾燥品のＴＰ感作血球、未感作
血球は溶解用液をそれぞれに４ｍｌ加え復元をして用い
た。９６ウェルＵ底のマイクロプレートの第１穴目にド
ロッパーなどを用い血清希釈液を１００μｌ滴下し、第
２穴から第３穴（定量試験の場合は第１２穴まで）に２
５μｌずつ血清希釈液を滴下する。第１穴目に検体２５
μｌをマイクロピペットで加え、２５μｌ用ダイリュー
タで攪拌しながら順に次穴に２５μｌずつ液を送り連続
した２Ｎ希釈系列を作る。第２穴目に未感作血球を７５
μｌ滴下し、第３穴目（定量試験の場合は第３穴から第
１２穴まで）に感作血球を７５μｌ滴下し混合後、蓋を
かぶせ室温で２時間静置し反応像を形成させた。陽性、
陰性又は非特異凝集検体について、実施例１で調製した
０．００８〜８（ｗｔ／ｖｏｌ）％デキストラン硫酸ナ
トリウム添加希釈用溶液を用いて測定を行った。その測
定結果を表１に示す。また、比較として蛍光抗体法によ
る同一検体についての測定結果を表１に示す。
血球は溶解用液をそれぞれに４ｍｌ加え復元をして用い
た。９６ウェルＵ底のマイクロプレートの第１穴目にド
ロッパーなどを用い血清希釈液を１００μｌ滴下し、第
２穴から第３穴（定量試験の場合は第１２穴まで）に２
５μｌずつ血清希釈液を滴下する。第１穴目に検体２５
μｌをマイクロピペットで加え、２５μｌ用ダイリュー
タで攪拌しながら順に次穴に２５μｌずつ液を送り連続
した２Ｎ希釈系列を作る。第２穴目に未感作血球を７５
μｌ滴下し、第３穴目（定量試験の場合は第３穴から第
１２穴まで）に感作血球を７５μｌ滴下し混合後、蓋を
かぶせ室温で２時間静置し反応像を形成させた。陽性、
陰性又は非特異凝集検体について、実施例１で調製した
０．００８〜８（ｗｔ／ｖｏｌ）％デキストラン硫酸ナ
トリウム添加希釈用溶液を用いて測定を行った。その測
定結果を表１に示す。また、比較として蛍光抗体法によ
る同一検体についての測定結果を表１に示す。
【００２１】
【表１】
【００２２】実施例３ 硫酸エステル基置換量の異なる
デキストラン硫酸ナトリウム溶液を添加した測定試験 実施例１で得られた硫酸エステル基置換量の異なるデキ
ストラン硫酸ナトリウムを血清希釈用液に０．１（wt/v
ol）％添加し、実施例２の方法に従い赤血球に対する非
特異凝集を起こす検体について測定を行い図１に示す結
果を得た。
デキストラン硫酸ナトリウム溶液を添加した測定試験 実施例１で得られた硫酸エステル基置換量の異なるデキ
ストラン硫酸ナトリウムを血清希釈用液に０．１（wt/v
ol）％添加し、実施例２の方法に従い赤血球に対する非
特異凝集を起こす検体について測定を行い図１に示す結
果を得た。
【００２３】実施例４ 未感作粒子による吸収試験 陽性、陰性及び非特異凝集検体について、各検体５０μ
ｌに対して未感作粒子を４５０μｌ（検体が１：１０に
希釈された状態）で室温２時間吸収後、２０００ｒｐｍ
で遠心しその上清を１：１０希釈検体として試験に用い
た。この場合の方法は第２穴にこの１：１０希釈検体を
５０μｌ加え、第３穴（定量試験の場合は第４穴から第
１２穴まで）に２５μｌずつ血清希釈液を滴下する。第
２穴から２Ｎ希釈後、第２穴に未感作血球を７５μｌ滴
下し、第３穴目（定量試験の場合は第３穴から第１２穴
まで）に感作血球を７５μｌ滴下し混合後、蓋をかぶせ
室温で２時間静置し反応像を形成させて測定を行った。
更に０．１％デキストラン硫酸ナトリウム（分子量５，
０００；硫酸エステル基６６％）添加血清希釈液を用い
て各検体のＴＰ抗体の測定を行い、その結果を表２に示
す。また、未感作粒子による吸収試験前の検体につい
て、デキストラン硫酸ナトリウムを添加しない間接凝集
法及び蛍光抗体法による測定を行いその結果を併せて表
２に示す。
ｌに対して未感作粒子を４５０μｌ（検体が１：１０に
希釈された状態）で室温２時間吸収後、２０００ｒｐｍ
で遠心しその上清を１：１０希釈検体として試験に用い
た。この場合の方法は第２穴にこの１：１０希釈検体を
５０μｌ加え、第３穴（定量試験の場合は第４穴から第
１２穴まで）に２５μｌずつ血清希釈液を滴下する。第
２穴から２Ｎ希釈後、第２穴に未感作血球を７５μｌ滴
下し、第３穴目（定量試験の場合は第３穴から第１２穴
まで）に感作血球を７５μｌ滴下し混合後、蓋をかぶせ
室温で２時間静置し反応像を形成させて測定を行った。
更に０．１％デキストラン硫酸ナトリウム（分子量５，
０００；硫酸エステル基６６％）添加血清希釈液を用い
て各検体のＴＰ抗体の測定を行い、その結果を表２に示
す。また、未感作粒子による吸収試験前の検体につい
て、デキストラン硫酸ナトリウムを添加しない間接凝集
法及び蛍光抗体法による測定を行いその結果を併せて表
２に示す。
【００２４】
【表２】
【００２５】実施例５ 血清及び血漿中のＴＰ抗体の測
定 ＴＰ抗体陰性の同一人物より採血した血清、ＥＤＴＡ血
漿及びクエン酸血漿について、実施例４と同じ測定を行
いその結果を表３に示す。
定 ＴＰ抗体陰性の同一人物より採血した血清、ＥＤＴＡ血
漿及びクエン酸血漿について、実施例４と同じ測定を行
いその結果を表３に示す。
【００２６】
【表３】
【００２７】
【発明の効果】本発明の非特異反応吸収試薬を使用する
ことによって、従来の吸収試薬で除くことができなかっ
た非特異反応物質が除去された。また、検体として非特
異反応の原因物質を含む血漿を用いることができるた
め、測定検体の種類によらず簡便な操作で正確な間接凝
集免疫測定結果を得ることができる。
ことによって、従来の吸収試薬で除くことができなかっ
た非特異反応物質が除去された。また、検体として非特
異反応の原因物質を含む血漿を用いることができるた
め、測定検体の種類によらず簡便な操作で正確な間接凝
集免疫測定結果を得ることができる。
【図１】硫酸エステル基の含有量の異なるデキストラン
硫酸ナトリウムを添加した時の非特異凝集検体の測定結
果を示す図である。
硫酸ナトリウムを添加した時の非特異凝集検体の測定結
果を示す図である。
Claims (6)
- 【請求項１】 デキストランの少なくとも６０％の水酸
基が硫酸エステル基で置換されたデキストラン化合物又
はその塩からなる、赤血球を担体とする間接凝集免疫測
定用の非特異反応吸収試薬。 - 【請求項２】 塩がアルカリ金属塩又はアルカリ土類金
属塩である請求項１記載の試薬 - 【請求項３】 アルカリ金属がナトリウムである請求項
２記載の試薬。 - 【請求項４】 抗原又は抗体が結合した赤血球と抗体又
は抗原を含む検体とを溶液中で反応させる測定法におい
て、デキストランの少なくとも６０％の水酸基が硫酸エ
ステル基で置換されたデキストラン化合物又はその塩か
らなる非特異反応吸収試薬を溶液中に添加して反応を行
うことを特徴とする間接凝集免疫測定法。 - 【請求項５】 塩がアルカリ金属塩又はアルカリ土類金
属塩である請求項４記載の測定方法。 - 【請求項６】 アルカリ金属がナトリウムである請求項
５記載の測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26483495A JP3327070B2 (ja) | 1995-09-19 | 1995-09-19 | 非特異反応吸収試薬及びそれを用いる測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26483495A JP3327070B2 (ja) | 1995-09-19 | 1995-09-19 | 非特異反応吸収試薬及びそれを用いる測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0989893A JPH0989893A (ja) | 1997-04-04 |
| JP3327070B2 true JP3327070B2 (ja) | 2002-09-24 |
Family
ID=17408861
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26483495A Expired - Fee Related JP3327070B2 (ja) | 1995-09-19 | 1995-09-19 | 非特異反応吸収試薬及びそれを用いる測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3327070B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017078119A1 (ja) * | 2015-11-05 | 2017-05-11 | 富士レビオ株式会社 | 心筋トロポニンｉ測定試薬及び方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4491419B2 (ja) * | 2003-10-14 | 2010-06-30 | 株式会社リバース・プロテオミクス研究所 | 非特異的物質の除去方法 |
-
1995
- 1995-09-19 JP JP26483495A patent/JP3327070B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017078119A1 (ja) * | 2015-11-05 | 2017-05-11 | 富士レビオ株式会社 | 心筋トロポニンｉ測定試薬及び方法 |
| JP2017090132A (ja) * | 2015-11-05 | 2017-05-25 | 富士レビオ株式会社 | 心筋トロポニンｉ測定試薬及び方法 |
| CN108291906A (zh) * | 2015-11-05 | 2018-07-17 | 富士瑞必欧株式会社 | 心肌肌钙蛋白i测定试剂以及方法 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0989893A (ja) | 1997-04-04 |
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