JP3327070B2 - 非特異反応吸収試薬及びそれを用いる測定法 - Google Patents
非特異反応吸収試薬及びそれを用いる測定法Info
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- JP3327070B2 JP3327070B2 JP26483495A JP26483495A JP3327070B2 JP 3327070 B2 JP3327070 B2 JP 3327070B2 JP 26483495 A JP26483495 A JP 26483495A JP 26483495 A JP26483495 A JP 26483495A JP 3327070 B2 JP3327070 B2 JP 3327070B2
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Description
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、デキストランの少
なくとも60%の水酸基が硫酸エステル基で置換された
デキストラン化合物又はその塩からなる、赤血球を担体
とする間接凝集免疫測定用の非特異反応吸収試薬、及び
抗原又は抗体が結合した赤血球と抗体又は抗原を含む検
体とを溶液中で反応させる測定法において、デキストラ
ンの少なくとも60%の水酸基が硫酸エステル基で置換
されたデキストラン化合物又はその塩からなる非特異反
応吸収試薬を溶液中に添加して反応を行う間接凝集免疫
測定法に関する。
なくとも60%の水酸基が硫酸エステル基で置換された
デキストラン化合物又はその塩からなる、赤血球を担体
とする間接凝集免疫測定用の非特異反応吸収試薬、及び
抗原又は抗体が結合した赤血球と抗体又は抗原を含む検
体とを溶液中で反応させる測定法において、デキストラ
ンの少なくとも60%の水酸基が硫酸エステル基で置換
されたデキストラン化合物又はその塩からなる非特異反
応吸収試薬を溶液中に添加して反応を行う間接凝集免疫
測定法に関する。
【0002】
【従来の技術】従来、間接凝集免疫測定法は、抗原又は
抗体を結合させた粒子を試薬として用い、判定には特殊
な検出装置を使用しない多量検体の簡易測定法として実
用化されてきた。この測定法では、検体中の抗原又は抗
体と試薬との間で起こる免疫反応以外に検体中に含まれ
る非特異吸着物質が試薬の粒子と非特異反応を起こして
結合し、凝集することが知られていた。そこで検体から
カラムクロマトグラフィー処理、抽出等により非特異吸
着物質を除くことが行われてきたが、これに代わる測定
溶液中に添加するだけで吸着物質を除去又は吸着を阻害
する試薬として動物赤血球膜成分(特公昭50−103
74号参照)、水酸化アルミニウム及びリン酸カルシウ
ム(特開昭55−111839号参照)、カオリン等が
見出された。
抗体を結合させた粒子を試薬として用い、判定には特殊
な検出装置を使用しない多量検体の簡易測定法として実
用化されてきた。この測定法では、検体中の抗原又は抗
体と試薬との間で起こる免疫反応以外に検体中に含まれ
る非特異吸着物質が試薬の粒子と非特異反応を起こして
結合し、凝集することが知られていた。そこで検体から
カラムクロマトグラフィー処理、抽出等により非特異吸
着物質を除くことが行われてきたが、これに代わる測定
溶液中に添加するだけで吸着物質を除去又は吸着を阻害
する試薬として動物赤血球膜成分(特公昭50−103
74号参照)、水酸化アルミニウム及びリン酸カルシウ
ム(特開昭55−111839号参照)、カオリン等が
見出された。
【0003】間接凝集免疫測定法では、検体中に含まれ
る複数の蛋白質が非特異反応の原因物質であると考えら
れている。この原因物質の一つとして検体の血清、血漿
中に存在するマイクロフィブリン等の血液凝固因子があ
るが、前記試薬を用いて除去を試みると作用が弱く多量
の原因物質を除去するには充分な効果を示すものではな
かった。また、水酸化アルミニウム及びリン酸カルシウ
ム、カオリン等の試薬は、反応後この試薬を濾過又は遠
心分離で除去することが必要であり、簡便な操作で行う
ことが難しかった。
る複数の蛋白質が非特異反応の原因物質であると考えら
れている。この原因物質の一つとして検体の血清、血漿
中に存在するマイクロフィブリン等の血液凝固因子があ
るが、前記試薬を用いて除去を試みると作用が弱く多量
の原因物質を除去するには充分な効果を示すものではな
かった。また、水酸化アルミニウム及びリン酸カルシウ
ム、カオリン等の試薬は、反応後この試薬を濾過又は遠
心分離で除去することが必要であり、簡便な操作で行う
ことが難しかった。
【0004】この欠点を克服して非特異反応を低下さ
せ、測定対象の抗体及び抗原の正確な測定値を得るため
に測定溶液中に加えて用いるデキストラン硫酸、ヘパリ
ン、ポリスチレンスルホン酸、フタル酸酢酸セルロース
等のポリアニオンが見い出された(特公昭63−678
64号参照)。
せ、測定対象の抗体及び抗原の正確な測定値を得るため
に測定溶液中に加えて用いるデキストラン硫酸、ヘパリ
ン、ポリスチレンスルホン酸、フタル酸酢酸セルロース
等のポリアニオンが見い出された(特公昭63−678
64号参照)。
【0005】
【発明が解決しようとする課題】前記ポリアニオンは、
検体溶液に添加されて非特異反応を低下させるが、血漿
等の非特異反応の原因物質を多く含む検体では未だ充分
な効果を示すものではなかった。本発明は、デキストラ
ンの水酸基が硫酸エステル基を形成したデキストラン化
合物を有効成分とし、検体中の非特異反応の原因物質を
除去する効果の高い非特異反応吸収試薬を提供すること
を目的とする。
検体溶液に添加されて非特異反応を低下させるが、血漿
等の非特異反応の原因物質を多く含む検体では未だ充分
な効果を示すものではなかった。本発明は、デキストラ
ンの水酸基が硫酸エステル基を形成したデキストラン化
合物を有効成分とし、検体中の非特異反応の原因物質を
除去する効果の高い非特異反応吸収試薬を提供すること
を目的とする。
【0006】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、間接凝集
免疫測定における非特異反応の吸収試薬について鋭意研
究した結果、デキストランの少なくとも60%の水酸基
が硫酸エステル基で置換されたデキストラン化合物又は
その塩を、赤血球を担体とする間接凝集免疫測定用の非
特異反応吸収試薬として用いることを見出し、本発明を
完成した。
免疫測定における非特異反応の吸収試薬について鋭意研
究した結果、デキストランの少なくとも60%の水酸基
が硫酸エステル基で置換されたデキストラン化合物又は
その塩を、赤血球を担体とする間接凝集免疫測定用の非
特異反応吸収試薬として用いることを見出し、本発明を
完成した。
【0007】 本発明の非特異反応吸収試薬は、デキス
トランの少なくとも60%の水酸基が硫酸エステル基で
置換されたデキストラン化合物である。さらにこの化合
物は例えばナトリウム、カリウム等のアルカリ金属、カ
ルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩を
形成させて用いることもできる。
トランの少なくとも60%の水酸基が硫酸エステル基で
置換されたデキストラン化合物である。さらにこの化合
物は例えばナトリウム、カリウム等のアルカリ金属、カ
ルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩を
形成させて用いることもできる。
【0008】 デキストラン化合物は、デキストラン硫
酸としてデキストランの水酸基が硫酸エステル基で置換
された各種分子量(約1000〜約10万)の化合物が
市販されているが、例えば公知のピペリジン硫酸を用い
る硫酸化エステル法等によりデキストランからも容易に
製造することができる化合物である(米国特許2,71
5,091号、特開昭61−130301号、同61−
130302号公報、K. Hatanaka et al., J. Med. C
hem., 1987,30,810−814参照)。本発明
のデキストラン化合物はデキストランの少なくとも60
%の水酸基が硫酸エステル基で置換されたデキストラン
化合物であり、硫酸エステル基の置換量は、例えばデキ
ストラン化合物の硫黄含有量を測定する方法、滴定法等
により行うことがきる。
酸としてデキストランの水酸基が硫酸エステル基で置換
された各種分子量(約1000〜約10万)の化合物が
市販されているが、例えば公知のピペリジン硫酸を用い
る硫酸化エステル法等によりデキストランからも容易に
製造することができる化合物である(米国特許2,71
5,091号、特開昭61−130301号、同61−
130302号公報、K. Hatanaka et al., J. Med. C
hem., 1987,30,810−814参照)。本発明
のデキストラン化合物はデキストランの少なくとも60
%の水酸基が硫酸エステル基で置換されたデキストラン
化合物であり、硫酸エステル基の置換量は、例えばデキ
ストラン化合物の硫黄含有量を測定する方法、滴定法等
により行うことがきる。
【0009】本発明の非特異反応吸収試薬は、抗原又は
抗体の結合した間接凝集免疫測定用の粒子を含む溶液中
に添加して用いることができる。この吸収試薬は、粒子
に対して0.03〜8重量%用いることができるが、
0.1〜1.0%用いることが経済的にも有利である。
非特異反応吸収試薬は、測定溶液中に存在すればよく通
常検体希釈液に添加して使用することができる。またこ
の間接凝集免疫測定溶液中には前記吸収試薬の他、安定
剤、防腐剤、キレート剤、界面活性剤等の添加物を含ん
でいてもよい。本発明の非特異反応吸収試薬を用いる免
疫測定の検体としては特に制限はなく、通常の血清、
尿、リンパ液、髄液の他、血液凝固因子を大量に含む血
漿も用いることができる。
抗体の結合した間接凝集免疫測定用の粒子を含む溶液中
に添加して用いることができる。この吸収試薬は、粒子
に対して0.03〜8重量%用いることができるが、
0.1〜1.0%用いることが経済的にも有利である。
非特異反応吸収試薬は、測定溶液中に存在すればよく通
常検体希釈液に添加して使用することができる。またこ
の間接凝集免疫測定溶液中には前記吸収試薬の他、安定
剤、防腐剤、キレート剤、界面活性剤等の添加物を含ん
でいてもよい。本発明の非特異反応吸収試薬を用いる免
疫測定の検体としては特に制限はなく、通常の血清、
尿、リンパ液、髄液の他、血液凝固因子を大量に含む血
漿も用いることができる。
【0010】 本発明の非特異反応吸収試薬は、公知の
各種間接凝集免疫測定用粒子と抗原又は抗体とを架橋剤
を用いて結合させて製造した試薬を用いる測定法に採用
することができる。この粒子は、鳥類例えばニワトリ、
七面鳥等の赤血球、哺乳動物例えば羊、牛、豚、山羊、
ウサギ、ヒト等の赤血球等を挙げることができる。さら
に粒子に結合する抗原又は抗体は、測定対象物により選
ばれ、例えば、α−フェトプロティン(AFP)、癌胎
児性抗原(CEA)、アルブミン、フェリチン等の血漿
蛋白質、トレポネーマ・パリダム(TP)抗原、HBS
抗原、C型肝炎ウイルス(HCV)、ヒト免疫不全ウ
イルス(HIV)、ヒトT細胞白血病ウイルス(HTL
V−1)、サイトメガロウイルス(CMV)、ヘルペス
ウイルス等のウイルス抗原、フィブリン分解生成物、プ
ロスタグランジン、テストステロン、プロゲステロン、
サイロキシン等のホルモン、ジゴキシン、テオフィリ
ン、フェノパルビタール、フェニトイン、ペニシリン、
アミカシン等の薬物等の各種臓器、血中あるいは尿中等
に存在する抗原又はこれらに対する各種抗体等である。
各種間接凝集免疫測定用粒子と抗原又は抗体とを架橋剤
を用いて結合させて製造した試薬を用いる測定法に採用
することができる。この粒子は、鳥類例えばニワトリ、
七面鳥等の赤血球、哺乳動物例えば羊、牛、豚、山羊、
ウサギ、ヒト等の赤血球等を挙げることができる。さら
に粒子に結合する抗原又は抗体は、測定対象物により選
ばれ、例えば、α−フェトプロティン(AFP)、癌胎
児性抗原(CEA)、アルブミン、フェリチン等の血漿
蛋白質、トレポネーマ・パリダム(TP)抗原、HBS
抗原、C型肝炎ウイルス(HCV)、ヒト免疫不全ウ
イルス(HIV)、ヒトT細胞白血病ウイルス(HTL
V−1)、サイトメガロウイルス(CMV)、ヘルペス
ウイルス等のウイルス抗原、フィブリン分解生成物、プ
ロスタグランジン、テストステロン、プロゲステロン、
サイロキシン等のホルモン、ジゴキシン、テオフィリ
ン、フェノパルビタール、フェニトイン、ペニシリン、
アミカシン等の薬物等の各種臓器、血中あるいは尿中等
に存在する抗原又はこれらに対する各種抗体等である。
【0011】これらの抗体は、ポリクローナル抗体又は
モノクローナル抗体であり、Fab、Fab′、F(a
b′)2等の抗体クラグメントであってもよい。
モノクローナル抗体であり、Fab、Fab′、F(a
b′)2等の抗体クラグメントであってもよい。
【0012】 さらに抗原又は抗体と粒子とを結合させ
る架橋剤は、例えばタンニン酸、ホルムアルデヒド、グ
ルタルアルデヒド、ピクリックアルデヒド、ビス−ジア
ゾ化ベンジジン、ジフルオロジニトロベンゼン、トルエ
ン−2,4−ジイソシアネート、水溶性カルボジイミ
ド、塩化クロム、塩化シアヌル、テトラゾ化−o−ジア
ニシジン等を用いることができる。間接凝集免疫測定試
薬は、動物赤血球と前記架橋剤とを緩衝液中で反応させ
た後、前記抗原又は抗体を加え反応させることにより製
造することができる。得られた試薬は、凍結乾燥されて
保存後、使用時に復元液を加えて測定に用いることがで
きる。
る架橋剤は、例えばタンニン酸、ホルムアルデヒド、グ
ルタルアルデヒド、ピクリックアルデヒド、ビス−ジア
ゾ化ベンジジン、ジフルオロジニトロベンゼン、トルエ
ン−2,4−ジイソシアネート、水溶性カルボジイミ
ド、塩化クロム、塩化シアヌル、テトラゾ化−o−ジア
ニシジン等を用いることができる。間接凝集免疫測定試
薬は、動物赤血球と前記架橋剤とを緩衝液中で反応させ
た後、前記抗原又は抗体を加え反応させることにより製
造することができる。得られた試薬は、凍結乾燥されて
保存後、使用時に復元液を加えて測定に用いることがで
きる。
【0013】
【実施例】以下実施例により本発明を更に詳細に説明す
る。
る。
【0014】実施例1 TP抗体測定試薬の調整 (TP抗原の調製)家兎睾丸にTP(Nichols
株)を接種し12日間培養後、ミラー(Miller)
らの方法(J.Immunol.,10,1062−1
974)に従ってTP抗原を得た。
株)を接種し12日間培養後、ミラー(Miller)
らの方法(J.Immunol.,10,1062−1
974)に従ってTP抗原を得た。
【0015】(TP抗原感作血球の調製)リン酸緩衝生
理食塩水PBS(pH7.2)に浮遊した2.5(V/
V)%ホルマリン固定ニワトリ赤血球20mlと10p
pmタンニン酸PBS(pH7.2)溶液20mlと
を、37℃10分間インキュベートした。この血球を生
理食塩水で1回洗浄したあとPBS(pH6.4)で全
量を20mlとしタンニン酸処理血球PBS溶液を得
た。超音波により破砕処理した前記TP抗原を原液に対
して約80倍にPBS(pH6.4)で希釈したものを
20ml準備し、前記タンニン酸処理血球PBS(pH
6.4)20mlと等量混合し37℃で40分間インキ
ュベートした。この血球を生理食塩水40mlで1回洗
浄後、1%NRS(健康家兎血清)を含む10mlのP
BS(pH7.2)に浮遊し、バイアル瓶に0.3ml
ずつ分注し凍結乾燥を行った。
理食塩水PBS(pH7.2)に浮遊した2.5(V/
V)%ホルマリン固定ニワトリ赤血球20mlと10p
pmタンニン酸PBS(pH7.2)溶液20mlと
を、37℃10分間インキュベートした。この血球を生
理食塩水で1回洗浄したあとPBS(pH6.4)で全
量を20mlとしタンニン酸処理血球PBS溶液を得
た。超音波により破砕処理した前記TP抗原を原液に対
して約80倍にPBS(pH6.4)で希釈したものを
20ml準備し、前記タンニン酸処理血球PBS(pH
6.4)20mlと等量混合し37℃で40分間インキ
ュベートした。この血球を生理食塩水40mlで1回洗
浄後、1%NRS(健康家兎血清)を含む10mlのP
BS(pH7.2)に浮遊し、バイアル瓶に0.3ml
ずつ分注し凍結乾燥を行った。
【0016】(未感作粒子の調製)20mlの2.5
(V/V)%タンニン酸処理血球を1%NRSを含む1
0mlのPBS(pH7.2)に浮遊し、感作血球と同
様に凍結乾燥を行った。 (血清希釈液の調製)0.15M PBS(pH7.
2)に1% NRS及び0.1%T.phageden
is,Biotype Reiterの菌体破砕物と抗
菌剤として0.1%アジ化ナトリウムを加えた溶液を検
体希釈液として用いた。T.phagedenis,b
iotype Reiterはルサー(LUTHER)
らの方法(Zhl.Bakt.274,214−22
6,1990)により10%牛血清を含むスピロプロス
中で培養し集菌したものをPBS(pH7.2)に浮遊
後、超音波により破砕したものを用いた。
(V/V)%タンニン酸処理血球を1%NRSを含む1
0mlのPBS(pH7.2)に浮遊し、感作血球と同
様に凍結乾燥を行った。 (血清希釈液の調製)0.15M PBS(pH7.
2)に1% NRS及び0.1%T.phageden
is,Biotype Reiterの菌体破砕物と抗
菌剤として0.1%アジ化ナトリウムを加えた溶液を検
体希釈液として用いた。T.phagedenis,b
iotype Reiterはルサー(LUTHER)
らの方法(Zhl.Bakt.274,214−22
6,1990)により10%牛血清を含むスピロプロス
中で培養し集菌したものをPBS(pH7.2)に浮遊
後、超音波により破砕したものを用いた。
【0017】(溶解用液の調製)PBS(pH7.2)
に0.6%NRSを添加したものを調製した。
に0.6%NRSを添加したものを調製した。
【0018】(硫酸エステル基の置換量の異なるデキス
トラン化合物の調製)硫酸エステル基の置換されたデキ
ストラン化合物は、米国特許2,715,091に記載
のデキストランを硫酸化し水酸化ナトリウムで中和後、
アセトンによりデキストランとデキストラン硫酸を分離
する方法に従い製造した。硫酸化の条件を変化させるこ
とにより硫酸エステル基の置換量の異なるデキストラン
化合物のナトリウム塩を得た。硫酸エステル基の置換量
の確認は、フラスコ燃焼−ジメチルスルホナゾIII 法で
イオウを定量することより確認した。イオウ含有量1
5.7、16.1、17.4又は18.0(wt/wt )%
(硫酸エステル基として、52、56、66及び71
%)平均分子量5,000の化合物(以下デキストラン
硫酸ナトリウムという)が得られた。
トラン化合物の調製)硫酸エステル基の置換されたデキ
ストラン化合物は、米国特許2,715,091に記載
のデキストランを硫酸化し水酸化ナトリウムで中和後、
アセトンによりデキストランとデキストラン硫酸を分離
する方法に従い製造した。硫酸化の条件を変化させるこ
とにより硫酸エステル基の置換量の異なるデキストラン
化合物のナトリウム塩を得た。硫酸エステル基の置換量
の確認は、フラスコ燃焼−ジメチルスルホナゾIII 法で
イオウを定量することより確認した。イオウ含有量1
5.7、16.1、17.4又は18.0(wt/wt )%
(硫酸エステル基として、52、56、66及び71
%)平均分子量5,000の化合物(以下デキストラン
硫酸ナトリウムという)が得られた。
【0019】(デキストラン硫酸ナトリウム添加血清希
釈液の調製)上記硫酸エステル基の置換量の異なる0.
1%デキストラン硫酸ナトリウム溶液を調製した。さら
に血清希釈液に0.008〜8(wt/vol)%デキ
ストラン硫酸ナトリウム(分子量5,000;硫酸エス
テル基66%)を溶解し希釈液を調製した。
釈液の調製)上記硫酸エステル基の置換量の異なる0.
1%デキストラン硫酸ナトリウム溶液を調製した。さら
に血清希釈液に0.008〜8(wt/vol)%デキ
ストラン硫酸ナトリウム(分子量5,000;硫酸エス
テル基66%)を溶解し希釈液を調製した。
【0020】実施例2 TP抗体測定試験 実施例1で調製した凍結乾燥品のTP感作血球、未感作
血球は溶解用液をそれぞれに4ml加え復元をして用い
た。96ウェルU底のマイクロプレートの第1穴目にド
ロッパーなどを用い血清希釈液を100μl滴下し、第
2穴から第3穴(定量試験の場合は第12穴まで)に2
5μlずつ血清希釈液を滴下する。第1穴目に検体25
μlをマイクロピペットで加え、25μl用ダイリュー
タで攪拌しながら順に次穴に25μlずつ液を送り連続
した2N希釈系列を作る。第2穴目に未感作血球を75
μl滴下し、第3穴目(定量試験の場合は第3穴から第
12穴まで)に感作血球を75μl滴下し混合後、蓋を
かぶせ室温で2時間静置し反応像を形成させた。陽性、
陰性又は非特異凝集検体について、実施例1で調製した
0.008〜8(wt/vol)%デキストラン硫酸ナ
トリウム添加希釈用溶液を用いて測定を行った。その測
定結果を表1に示す。また、比較として蛍光抗体法によ
る同一検体についての測定結果を表1に示す。
血球は溶解用液をそれぞれに4ml加え復元をして用い
た。96ウェルU底のマイクロプレートの第1穴目にド
ロッパーなどを用い血清希釈液を100μl滴下し、第
2穴から第3穴(定量試験の場合は第12穴まで)に2
5μlずつ血清希釈液を滴下する。第1穴目に検体25
μlをマイクロピペットで加え、25μl用ダイリュー
タで攪拌しながら順に次穴に25μlずつ液を送り連続
した2N希釈系列を作る。第2穴目に未感作血球を75
μl滴下し、第3穴目(定量試験の場合は第3穴から第
12穴まで)に感作血球を75μl滴下し混合後、蓋を
かぶせ室温で2時間静置し反応像を形成させた。陽性、
陰性又は非特異凝集検体について、実施例1で調製した
0.008〜8(wt/vol)%デキストラン硫酸ナ
トリウム添加希釈用溶液を用いて測定を行った。その測
定結果を表1に示す。また、比較として蛍光抗体法によ
る同一検体についての測定結果を表1に示す。
【0021】
【表1】
【0022】実施例3 硫酸エステル基置換量の異なる
デキストラン硫酸ナトリウム溶液を添加した測定試験 実施例1で得られた硫酸エステル基置換量の異なるデキ
ストラン硫酸ナトリウムを血清希釈用液に0.1(wt/v
ol)%添加し、実施例2の方法に従い赤血球に対する非
特異凝集を起こす検体について測定を行い図1に示す結
果を得た。
デキストラン硫酸ナトリウム溶液を添加した測定試験 実施例1で得られた硫酸エステル基置換量の異なるデキ
ストラン硫酸ナトリウムを血清希釈用液に0.1(wt/v
ol)%添加し、実施例2の方法に従い赤血球に対する非
特異凝集を起こす検体について測定を行い図1に示す結
果を得た。
【0023】実施例4 未感作粒子による吸収試験 陽性、陰性及び非特異凝集検体について、各検体50μ
lに対して未感作粒子を450μl(検体が1:10に
希釈された状態)で室温2時間吸収後、2000rpm
で遠心しその上清を1:10希釈検体として試験に用い
た。この場合の方法は第2穴にこの1:10希釈検体を
50μl加え、第3穴(定量試験の場合は第4穴から第
12穴まで)に25μlずつ血清希釈液を滴下する。第
2穴から2N希釈後、第2穴に未感作血球を75μl滴
下し、第3穴目(定量試験の場合は第3穴から第12穴
まで)に感作血球を75μl滴下し混合後、蓋をかぶせ
室温で2時間静置し反応像を形成させて測定を行った。
更に0.1%デキストラン硫酸ナトリウム(分子量5,
000;硫酸エステル基66%)添加血清希釈液を用い
て各検体のTP抗体の測定を行い、その結果を表2に示
す。また、未感作粒子による吸収試験前の検体につい
て、デキストラン硫酸ナトリウムを添加しない間接凝集
法及び蛍光抗体法による測定を行いその結果を併せて表
2に示す。
lに対して未感作粒子を450μl(検体が1:10に
希釈された状態)で室温2時間吸収後、2000rpm
で遠心しその上清を1:10希釈検体として試験に用い
た。この場合の方法は第2穴にこの1:10希釈検体を
50μl加え、第3穴(定量試験の場合は第4穴から第
12穴まで)に25μlずつ血清希釈液を滴下する。第
2穴から2N希釈後、第2穴に未感作血球を75μl滴
下し、第3穴目(定量試験の場合は第3穴から第12穴
まで)に感作血球を75μl滴下し混合後、蓋をかぶせ
室温で2時間静置し反応像を形成させて測定を行った。
更に0.1%デキストラン硫酸ナトリウム(分子量5,
000;硫酸エステル基66%)添加血清希釈液を用い
て各検体のTP抗体の測定を行い、その結果を表2に示
す。また、未感作粒子による吸収試験前の検体につい
て、デキストラン硫酸ナトリウムを添加しない間接凝集
法及び蛍光抗体法による測定を行いその結果を併せて表
2に示す。
【0024】
【表2】
【0025】実施例5 血清及び血漿中のTP抗体の測
定 TP抗体陰性の同一人物より採血した血清、EDTA血
漿及びクエン酸血漿について、実施例4と同じ測定を行
いその結果を表3に示す。
定 TP抗体陰性の同一人物より採血した血清、EDTA血
漿及びクエン酸血漿について、実施例4と同じ測定を行
いその結果を表3に示す。
【0026】
【表3】
【0027】
【発明の効果】本発明の非特異反応吸収試薬を使用する
ことによって、従来の吸収試薬で除くことができなかっ
た非特異反応物質が除去された。また、検体として非特
異反応の原因物質を含む血漿を用いることができるた
め、測定検体の種類によらず簡便な操作で正確な間接凝
集免疫測定結果を得ることができる。
ことによって、従来の吸収試薬で除くことができなかっ
た非特異反応物質が除去された。また、検体として非特
異反応の原因物質を含む血漿を用いることができるた
め、測定検体の種類によらず簡便な操作で正確な間接凝
集免疫測定結果を得ることができる。
【図1】硫酸エステル基の含有量の異なるデキストラン
硫酸ナトリウムを添加した時の非特異凝集検体の測定結
果を示す図である。
硫酸ナトリウムを添加した時の非特異凝集検体の測定結
果を示す図である。
Claims (6)
- 【請求項1】 デキストランの少なくとも60%の水酸
基が硫酸エステル基で置換されたデキストラン化合物又
はその塩からなる、赤血球を担体とする間接凝集免疫測
定用の非特異反応吸収試薬。 - 【請求項2】 塩がアルカリ金属塩又はアルカリ土類金
属塩である請求項1記載の試薬 - 【請求項3】 アルカリ金属がナトリウムである請求項
2記載の試薬。 - 【請求項4】 抗原又は抗体が結合した赤血球と抗体又
は抗原を含む検体とを溶液中で反応させる測定法におい
て、デキストランの少なくとも60%の水酸基が硫酸エ
ステル基で置換されたデキストラン化合物又はその塩か
らなる非特異反応吸収試薬を溶液中に添加して反応を行
うことを特徴とする間接凝集免疫測定法。 - 【請求項5】 塩がアルカリ金属塩又はアルカリ土類金
属塩である請求項4記載の測定方法。 - 【請求項6】 アルカリ金属がナトリウムである請求項
5記載の測定法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP26483495A JP3327070B2 (ja) | 1995-09-19 | 1995-09-19 | 非特異反応吸収試薬及びそれを用いる測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP26483495A JP3327070B2 (ja) | 1995-09-19 | 1995-09-19 | 非特異反応吸収試薬及びそれを用いる測定法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0989893A JPH0989893A (ja) | 1997-04-04 |
JP3327070B2 true JP3327070B2 (ja) | 2002-09-24 |
Family
ID=17408861
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP26483495A Expired - Fee Related JP3327070B2 (ja) | 1995-09-19 | 1995-09-19 | 非特異反応吸収試薬及びそれを用いる測定法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3327070B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017078119A1 (ja) * | 2015-11-05 | 2017-05-11 | 富士レビオ株式会社 | 心筋トロポニンi測定試薬及び方法 |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005036173A1 (ja) * | 2003-10-14 | 2005-04-21 | Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd. | 非特異的物質の除去方法 |
-
1995
- 1995-09-19 JP JP26483495A patent/JP3327070B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017078119A1 (ja) * | 2015-11-05 | 2017-05-11 | 富士レビオ株式会社 | 心筋トロポニンi測定試薬及び方法 |
JP2017090132A (ja) * | 2015-11-05 | 2017-05-25 | 富士レビオ株式会社 | 心筋トロポニンi測定試薬及び方法 |
CN108291906A (zh) * | 2015-11-05 | 2018-07-17 | 富士瑞必欧株式会社 | 心肌肌钙蛋白i测定试剂以及方法 |
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Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0989893A (ja) | 1997-04-04 |
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