JP3315142B2 - 有害生物の制御のための病原性菌類調製物の製造工程および製造方法および使用法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は一般的に、病原性菌類の
菌糸体からなる生物学的殺虫剤の新規な製造法に関す
る。これら生物学的殺虫剤は、植物に顕著な量の損害を
与える有害生物（例えば、土壌および植物の有害生物、
特に昆虫）の制御に特に有用な安定製剤を供給する。好
ましい昆虫体内性菌類はペシロミセスフモソロゼウス
（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕ
ｓ）ＡＴＣＣ２０８７４である。

【０００２】本発明は、生育法および生物学的殺虫剤の
効果的な保存法、そのような生物学的殺虫剤調製物を調
製および応用することにより、別の土壌有害生物、植物
有害生物、蚊および土壌線虫の制御において最大の効果
を得るための方法も提供する。また、効果的な質の制御
法を提供する。

【０００３】

【従来の技術】化学的な殺虫剤は有害生物を制御するた
めに長年広範囲に使用されてきた。殺虫剤の使用におい
て最近気づいた問題、そしてヒトおよびヒトの環境に対
する逆効果の問題により、代わってより商業的な注意が
生物学的な制御にはらわれるようになった。特定の昆虫
体内性菌類が、別の有害生物に対して病原性であること
が研究者により認識されてきた。特に、昆虫体内性菌類
の使用法がソビエト連邦共和国およびヨーロッパにおい
て生物学的な制御剤として広く研究されている。別々の
病原性菌類およびそれらの使用法および現状に関する今
日の見解がカルロ（Ｃａｒｌｏ）、Ｍ、イグノーフォ
（Ｉｇｎｏｆｆｏ）とＢ．ハンダバ（Ｈａｎｄａｖ
ａ）、「天然殺虫剤のハンドブック」、５巻、パート
Ａ、マッコイ（Ｃ．Ｗ．ＭｃＣｏｙ）ら、「微生物学的
殺虫剤」、ＣＲＣ出版、１９８８年、およびブルーゲ
（Ｍ．Ｎ．Ｂｕｒｇｅ）、「生物学的制御系における菌
類」、マンチェスター大学出版、１９８８年において見
いだされる。昆虫の病原性バクテリアまたは他の微生物
（例えばウイルスまたはプロトゾア）は昆虫により摂取
されることにより疾患を引き起こすにちがいないのとは
違って、昆虫体内性菌類は通常宿主のクチクラを通って
侵入する。

【０００４】昆虫体内性菌類は寄生虫の疾患機構により
有害生物、通常は昆虫に感染する。感染工程の移行は以
下の段階からなると信じられている。

【０００５】１．付着 昆虫体内性菌類の胞子の分生胞
子が昆虫のクチクラに付着する。

【０００６】２．発芽 分生胞子が昆虫のクチクラ内で
発芽して発芽管を形成する。

【０００７】３．貫入 発芽管が直接クチクラに貫入す
る。クチクラの侵入は酵素的な活性および生理的な活性
の両方を含むと信じられている。

【０００８】４．生育 菌類は菌糸体または分芽胞子の
ような血体腔中で生育する。菌類は器官の挿入により宿
主を征服する。

【０００９】５．腐生性生育 菌類は昆虫の外部におい
て生育し、そして空中の分生胞子を生産する。

【００１０】幾つかの昆虫体内性菌類は器官の広範囲な
挿入前に、推定上毒物の生産により宿主を征服する。毒
性化合物は幾つかの昆虫体内性菌類（例えば、ペシロミ
セスフモソロゼウスは毒物ビューベリシンを生産するこ
とが示されている（フェロン（Ｆｅｒｒｏｎ）、Ａｎｎ
ｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｙ２
３：４０９−４４２（１９７８））、そしてデストラキ
シンＡとして知られているペプチド毒物はメタリジウム
アニソプリア（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐ
ｌｉａ）の培養液から単離された（コダイラ（Ｙ．Ｋｏ
ｄａｉｒａ）、Ａｇｒ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｃｈｅ
ｍ．２６−３６（１９６２））。）の菌糸体の培養濾過
物からの報告があるが、昆虫体内性菌類に感染した昆虫
から毒物が検出されたという報告はほんのわずかしかな
かった（スズキ（Ｓｕｚｕｋｉ）ら、Ａｇｒｉｃ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．３５：１６４１−１６４３（１９７
１））。

【００１１】別の有害生物の制御のための昆虫体内性菌
類の使用は、それ自体新規な発想ではない。昆虫体内性
菌類、例えばメタリジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕ
ｍ）、ビューベリア（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）、ヒルステ
ル（Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌ）、バーミシリウム（Ｖｅｒｍ
ｉｃｉｌｌｉｕｍ）またはペシロミセス（Ｐａｅｃｉｌ
ｏｍｙｃｅｓ）は、有害生物の制御剤としての開発のた
めに研究されてきた。固形状態での発酵が広く試験され
てきたが、それはこの方法により昆虫体内性菌類の感染
体、例えば分生胞子が生産されるからである。しかしな
がら、昆虫体内性菌類の分生胞子は乾燥の工程に対して
極めて感受性であり、分生胞子はすぐに生存能力を失う
ことが見いだされた。

【００１２】結果として、水中の発酵は大量生産に対し
て大きな可能性を有すると思われる。しかしながら、克
服すべき顕著な問題を有するとも思われる。水中培養で
生育した昆虫体内性菌類のほとんどは菌糸体をもつ分芽
胞子を生産する。分芽胞子は保存または乾燥の工程にお
いて不安定である。分芽胞子を製剤化しようとするとマ
イナスの効果をもたらし、そして効能および安定性が低
下する。

【００１３】分生胞子および分芽胞子の調製に関連した
上記安定性の問題を克服するために、幾つかの方法が生
物制御剤の製造のための文献において開示されている
が、それらは水中培養発酵から得られたバイオマスに基
づいている。これらの技術は菌類を液体培地中で生育さ
せ、そして分生胞子が生産される固形培地または不活性
キャリアー、例えばバーミキュライトに接種する。例え
ばキボル（Ｋｙｂａｌ）（１９７６）は、菌糸体、分芽
胞子および他の菌類の早期のステージを含むバイオマス
を、好気性容器中でインキュベートすることによりコー
トされた容器の表面上に直接分生胞子を生産する方法を
開示している。しかしながらこの方法は、大変な労力を
要し、得られた分生胞子は容器の表面上にのみ存在す
る。見かけの体積あたりの表面領域は小さくなりがち
で、効率は低い。マッカベ（ＭａＣａｂｅ）らの他の方
法（米国特許第４，５３０，８３４号）は、休眠分生胞
子の生産のための水中培養において生産されたハエカビ
属の菌糸体の使用を開示している。この方法は二相性シ
ステムであり、胞子または分芽胞子の生産が別経路にな
っている。最初に、液体発酵により生産されたバイオマ
スを保護剤を用いて乾燥し、そして得られた乾燥バイオ
マスマットを粉砕して乾燥粉状にする。次に、乾燥粉調
製物を再度湿らせ、そして標的物の有害生物にぬる。し
かしながら、この方法はまだ以下の問題を有する。粉状
製造物はその生存能力を保持するために４℃以下で保存
する必要がある。この保存条件下においてさえも、製造
物はたった６４日しか安定でない。粉から再生した分生
胞子の寿命は短く、虚弱である。

【００１４】別々の昆虫体内性菌類の液体培養から得ら
れた乾燥菌糸体粒子は、別の研究者による同様の方法に
より生産された。例えば、マクダーノルド（ＭｃＤｏｎ
ａｌｄ）ら（無脊椎動物の病原性および微生物の制御の
第１０回国際コロキューム、Ａｄｅｌａｉｄｅ、オース
トラリア、ｐ．１４７）は、蚊の制御のための昆虫体内
性菌類クリシノミセスクラビスポラス（Ｃｕｌｉｃｉｎ
ｏｍｙｃｅｓ ｃｌａｖｉｓｐｏｒｏｕｓ）の同様な基
礎的方法を開示している。この方法は、菌類を液体培地
で６日間生育させ、濾過した懸濁液を回収し、そして蔗
糖を添加して空気乾燥させることを含む。そして乾燥菌
糸体マットをハンマーミルにより挽いて３．５μｍの篩
を通した。これら菌糸体粒子を水に添加して乾燥粒子の
ｍｇあたり約５×１０⁶分生胞子にした。乾燥菌糸体粒
子は、活性を失わずに４℃において約１−５週間保存で
きる。同様なアプローチはロバーツ（Ｒｏｂｅｒｔｓ）
ら（無脊椎動物の病原性および微生物の制御、第１０回
国際コロキューム、Ａｄｅｌａｉｄｅ、オーストラリ
ア、ｐ．３３６）により用いられ、メタリジウムアニソ
プリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａ
ｅ）の単離体ＡＲＳＥＦ２４５７を使用することによ
り、日本の甲虫および他の有害生物を制御した。ロバー
ツらの結果に基づいて、凍結乾燥したメタリジウムの菌
糸体は土壌中において分生胞子よりも長い棚持ちを有す
ることが見いだされた。

【００１５】ベイヤー（Ｂａｙｅｒ Ａ．Ｇ．）（欧州
特許出願０２６８１１７Ａ２、１９８７年）は、メタリ
ジウムアニソプリエの菌糸体および分芽胞子を発酵器中
で製造することに基づいた、同様な方法を報告してい
る。発酵の間に菌糸体／分芽胞子の集合体は直径約０．
１ｍｍから約１．５ｍｍの大きさの顆粒を形成する。水
中培養発酵の終りに、菌糸体／分芽胞子集合体を回収
し、そして液体化ベッド乾燥器中で乾燥することにより
直径０．５ｍｍから１．５ｍｍの菌糸体／分芽胞子の乾
燥顆粒からなる最終産物を生成する。顆粒は、感染性分
生胞子を形成できる土壌にぬることができる。しかしな
がら、この方法は幾つかの問題を含む。第一に、発酵器
中で形成された菌類の顆粒は極めて低収率のバイオマス
しかもたらさない。したがって、そのような発酵法は経
済的でない。また、得られた最終顆粒産物は真空および
低温において保存されなければならない。土壌における
活性化後に形成された分生胞子の寿命は短いとも思われ
る。これはおそらく顆粒の生育を刺激または促進できる
養分を何も含まないことによる。

【００１６】他のアプローチ、即ち植物の病気に対する
別の菌類の病原性（主に分生胞子および厚膜胞子）の受
け渡しに広く使用されてきたアプローチは、アルギン酸
塩プリル内への菌類の胞子の被包である（レビス（Ｌｅ
ｗｉｓ）ら、Ｐｒｏｃｅｅｄ．Ｉｍｔｅｒｎ．Ｓｙｍ
ｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｃｓ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔ
ｅｒ，１２：３４１−３（１９８５）、フラベル（Ｆｒ
ａｖｅｌ）ら、Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２７：
３３４１−８（１９８２）、およびモロイス（Ｊ．Ｊ．
Ｍｏｒｏｉｓ）米国特許第４，７２４，１４７号）。こ
の方法は昆虫および他の有害生物の制御のための昆虫体
内性菌類の受け渡しについては、一般的に顧みられてい
ない。昆虫体内性菌類の受け渡しのためのアルギン酸塩
プリルの使用の公表はほとんど知られていない。例えば
エンリク（Ｅｎｒｉｑｕｅ Ａ．Ｃａｂａｎｉｌｌａ
ｒ）（博士論文）「バイオコントロールにおけるペシロ
ミセスリラシナス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｌｉｌ
ａｃｉｎｕｓ）の効能に影響する因子」、１９８７年、
ノースカロライナ州立大学、は、ネコブセンチュウに対
する、固形培地で生産されるペシロミセスリラシナスの
分生胞子の受け渡し法（固形状態の発酵）を記述してい
る。ロバーツ（Ｒｏｂｅｒｔｓ）ら（昆虫体内性病原性
菌類：Ｒｅｃｅｎｔ Ｂａｓｉｃ ＆ Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ；マーサ（Ｍａｔｈａ，Ｖ．）編
集、ＢｉｏｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓＴｈｅｏｒｙ ＆ Ｐ
ｒａｃｔｉｃｅ Ｐｒｏｃ．Ｃｏｎｆ．，９月、２５−
２８、１９８９年、Ｃｅｓｋｅ，Ｂｕｄｅｊｏｖｉｃ
ｅ，チェコスロバキア １１−３０ｐｐ）は、塩基性窒
素源として予めゼラチン化したデンプンを用いてビーベ
リアバシアナ（Ｂｅａｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ）
およびメタリジウムアニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉ
ｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）の菌糸体のバイオマスを
取り込むアルギン酸塩顆粒の使用法を開示している。土
壌伝染性有害生物の制御のため、または土壌有害生物ま
たは植物有害生物の制御のためのプリルキャリアー製剤
から直接分生胞子を培養するための活性化プリルの使用
法は、上記公表物のどれにも開示されていない。

【００１７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、昆虫体内性
菌類の菌糸体からなる生物学的殺虫剤の製造のための方
法および製剤を提供する。この方法は、土壌有害生物並
びに植物有害生物、ネマトーダ、および蚊の制御におけ
る昆虫体内性菌類の使用の新規な機会を提供する。この
方法は、特に昆虫体内性菌類ペシロミセスフモソロゼウ
ス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅ
ｕｓ）ＡＴＣＣ ２０８７４（米国特許第４，９４２，
０３０号）の使用法を開発した。しかしながら、この方
法および製剤はさまざまな有害生物の制御のために他の
菌類を用いて使用できる。

【００１８】本発明は、有害生物の発生の制御または予
防に有用な生物学的殺虫剤の製造法を提供する。この方
法は、水中発酵により液体培地中の有害生物を制御する
ために有効な菌類１種以上を発酵させることにより、少
なくとも約８０％、好ましくは９０％さらに好ましくは
９５％以上のバイオマスを菌糸体の形にするようなバイ
オマスを生産することを含む。そして菌糸体を回収し、
キャリアーと混合する。バイオマス／キャリアー混合物
はプリルの形で生成し、乾燥する。プリルは直接製剤の
形で使用するか、またはプリルを分生胞子の胞子化のた
めのキャリアーとして使用するか（反応性プリル）、ま
たは回収した分生胞子を使用するか、または回収した分
生胞子を予め発芽させてから使用しうる。

【００１９】一般的に、この方法は、昆虫体内性菌類の
菌糸体プリルの製造からなる。プリルの生成法は以下の
３つの段階に分割される： 段階Ｉ： 発酵器中でフィラメント状の菌糸体の形で極
めて高い収率で菌類のバイオマスを生産する。

【００２０】段階II： フィラメント状の菌糸体を回収
し、湿った菌糸体を製剤化し、そしてアルギン酸カルシ
ウムプリルに製剤化した湿った菌糸体を詰める。

【００２１】段階III： 製剤化したプリルを乾燥し、そ
して製品にパッケージングする。

【００２２】この方法は、さらに以下の段階からなりう
る。

【００２３】段階IV： プリルを活性化および培養す
る。

【００２４】段階Ｖ： 反応性プリルから感染性分生胞
子を回収し、使用する。

【００２５】この方法は、さらに以下の段階からなりう
る。

【００２６】段階VI： 反応性プリルから感染性分生胞
子を予め発芽させ、使用する。

【００２７】この議論の目的のために、「生物学的殺虫
剤」という単語はキャリアー中に製剤化できる病原性菌
類の菌糸体の使用を意味し、標的有害生物、特に昆虫の
存在または生育に逆に影響することにより、植物有害生
物、土壌有害生物または水生有害生物の発生を制御また
は予防するために使用できる。そのような制御は、完全
な殺傷作用、根絶、生育の阻止、数の減少化、植物耐性
の誘導またはフィトアレキシンの生産またはこれらの作
用のあらゆる混合からなりうる。本発明の明細書および
特許請求の範囲において使用されている「昆虫体内性」
という単語は、昆虫に対する病原性を意味するが、特に
有害生物の病原性を意味するように広く用いることもで
きる。本発明の明細書および特許請求の範囲において使
用されている「制御」または「生物学的制御」という単
語は、植物、土壌または水を有害生物、特に昆虫からの
保護、即ち本発明の生物学的殺虫剤による損傷の意味に
使用される。「殺虫効果量」または「効果量」は、有害
生物、特に昆虫の制御に十分な生物学的殺虫剤のプリル
の量を意味する。

【００２８】従来の技術において記述されたとおり、昆
虫体内性殺虫剤に利用できる効果的で安定な受け渡しシ
ステムは現在ない。

【００２９】本発明の第一の目的は、経済的な生物学的
殺虫剤製品の生産法を提供することである。該方法は、
簡単に使用でき、そして園芸または農芸の植え付けに応
用される生物学的材料の生産を意図している。ここに記
述したように生産された乾燥産物は容易に生産され、扱
われ、保存され、運ばれ、そして植物、土壌または水の
有害生物の制御に応用される。該生産物は、室温、好ま
しくは１０℃から２５℃において保存でき、保存期間を
延長できる（分生胞子の活性およびプリル／胞子の生存
能力を失うことなく１年以上）。

【００３０】この方法のさらなる目的は、盛んに生育す
る昆虫体内性菌類の培養液を、より容易に扱え、そして
容易にぬることができる製剤化生物学的殺虫剤に変換す
ることである。製剤化プリルを使用することにより、ぬ
るときまでの生産物の生物学的活性が容易に保持され
る。プリルの製剤化なしには、菌糸体はそのような条件
において生存できない。土壌、種または根にぬり、湿気
を取り戻したと同時に、乾燥プリルは再び生物学的に活
性化された形になり、湿気を取り戻してから４８時間未
満にプリルからの菌糸体の分芽が起こる。菌糸体の分芽
により、プリル製剤から提供された栄養の消費が始ま
り、分生胞子化が始まることにより分生胞子が生産され
る。分生胞子は、有害生物に病原性のある、生物学的に
活性のある形である。

【００３１】本発明の他の目的は、現在知られている方
法よりも高い濃度で分生胞子を生産する昆虫体内性菌類
の培養液を効果的に胞子形成させるための活性化キャリ
アーを提供する。活性化キャリアーから生産された分生
胞子は高い生存能力と感染性を有する。回収したとき
に、ほとんどの活性化プリルは胞子を含む。分生胞子は
製剤物質を用いても用いなくても直接植物、土壌、種ま
たは根にぬることができる。活性化されたかまたは活性
化されていないプリルは土壌にぬることができる。さら
に、活性化プリルから回収された分生胞子は水性懸濁液
に移し変えることができ、そして土壌または植物の葉全
体にぬることができる。

【００３２】他の目的は、プリルから回収した活性化分
生胞子を予め発芽させ、そして製剤物質を用いるかまた
は用いずに、予め発芽させた胞子を直接植物、土壌、種
または根にぬる方法を提供することである。

【００３３】他の目的は、限定されないが、植物および
土壌で産まれた昆虫およびネマトーダおよび水中有害生
物、例えば蚊を含む有害生物の発生の予防または制御に
有用な生物学的殺虫剤製剤／キャリアーを提供すること
である。本発明のさらなる目的は、化学的な殺虫剤をも
提供することである。

【００３４】さらに本発明の目的は、別の植物有害生物
に高いレベルの感染性を有する昆虫体内性菌類、ペシロ
ミセスフモソロゼウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｆ
ｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ）ＡＴＣＣ ２０８７４（ＰＦ
Ｒ）の選択株を生物学的殺虫剤として利用するための方
法を提供することである。また本発明は、園芸および農
芸の応用に要求される大量の産物を容易に生産できる菌
類の，特定のＰＦＲの選択株を含む生物学的殺虫剤を提
供する。

【００３５】さらに本発明の他の側面は、液体培養液に
おいて生産されるペシロミセスフモソロゼウス菌類の菌
糸体調製物からなる生物学的調製物を提供する。そして
菌糸体を新規な製剤に混合し、良質の制御、高い安定
性、貯蔵寿命、高い感染性、そして特にさまざまな植物
有害生物への特異的な感染性を提供する。

【００３６】さらに本発明の他の側面は、畑またはグリ
ーンハウスにおいて効率よく胞子を培養するための経済
的な方法を提供する。この方法により、簡単に使用で
き、そして便利な生物学的殺虫剤を大量に生産できる。

【００３７】

【課題を解決するための手段】ここで開示された本発明
は、植物有害生物、特に昆虫の制御のために植物に、ま
たは土壌に、または蚊のような有害生物を制御するため
に水の表面にぬることができる生物学的殺虫剤の製造工
程および製造法である。本発明の目的に有用な病原性有
害生物は、アインスワース（Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ）ら、
「菌類」、４巻ａ，ｂ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓ
ｓ（１９７３）に記述されている分類学的クラスの菌類
の種が好ましい。昆虫体内性菌類の種を含む主要な分類
群は以下の細別である：ジゴミコチナ（Ｚｙｇｏｍｙｃ
ｏｔｉｎａ）、マスチゴミコチンス（Ｍａｓｔｉｇｏｍ
ｙｃｏｔｉｎｓ）、アスコミコチナ（Ａｓｃｏｍｙｃｏ
ｔｉｎａ）、バシジオミコチナ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃ
ｏｔｉｎａ）、およびデューテロミコチナ（Ｄｅｕｔｅ
ｒｏｍｙｃｏｔｉｎａ）。これら別々の細別は別のクラ
スによっても表される：キトリジオミセテス（Ｃｈｙｔ
ｒｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）、オオミセテス（Ｏｏｍｙ
ｃｅｔｅｓ）、ジゴミセテス（Ｚｙｇｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ）、プレクトミセテス（Ｐｌｅｃｔｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ）、ピレノミセテス（Ｐｙｒｅｎｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ）、ロクロアスコミセテス（Ｌｏｃｕｌｏａｓｃｏｍ
ｙｃｅｔｅｓ）、テリオミセテス（Ｔｅｌｉｏｍｙｃｅ
ｔｅｓ）、コエロミセテス（Ｃｏｅｌｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ）、およびハイフォミセテス（Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔ
ｅｓ）。

【００３８】有害生物に感染性の病原性胞子を生産する
これらクラスの菌類が使用できる。例えば以下の昆虫体
内性菌類が有害生物の制御に最も有用であると考えられ
ている：アスペルギラス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、
アシェルソニア（Ａｓｃｈｅｒｓｏｎｉａ）、マソスポ
ラ（Ｍａｓｓｏｓｐｏｒａ）、ビューベリア（Ｂｅａｕ
ｖｅｒｉａ）、メタリジウム（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕ
ｍ）、バーティシリウム（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕ
ｍ）、ペシロミセス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）、ヒ
ルステラ（Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ）、ノムレア（Ｎｏｍ
ｕｒａｅａ）、ヒメノスティルベ（Ｈｙｍｅｎｏｓｔｉ
ｌｂｅ）、コルディセプス（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ）、コ
エロモマイセス（Ｃｏｅｌｏｍｏｍｙｃｅｓ）、ラゲニ
ジウム（Ｌａｇｅｎｉｄｉｕｍ）、レプトレグニア（Ｌ
ｅｐｔｏｌｅｇｎｉａ）、コニジオボラス（Ｃｏｎｉｄ
ｉｏｂｏｌｕｓ）、ズーフソーラ（Ｚｏｏｐｈｔｈｏｒ
ａ）、クリシノマイセス（Ｃｕｌｉｃｉｎｏｍｙｃｅ
ｓ）、およびトリポクラジウム（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄ
ｉｕｍ）。これら昆虫体内性菌類の株の多くは、植物有
害生物、蚊、および他の動物有害生物に対して病原活性
を示す。最も好ましいのは昆虫体内性菌類ペシロミセ
ス、特に好ましいのは、ペシロミセスフモソロゼウスＡ
ＴＣＣ ２０８７４である。この特定の株は、本発明の
生物学的殺虫剤としての使用に適している。

【００３９】発酵 本発明により、選択株、特定すれば好ましくはペシロミ
セスフモソロゼウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｆｕ
ｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ）ＡＴＣＣ ２０８７４を液体培
地中で生育することにより、受け渡しのための生物学的
殺虫剤が調製される。この記述は単一の菌類の調製を意
味するが、特定の応用のためには属または種の混合もで
きる。好ましいひとつまたは複数の菌類の接種材料は標
準的な表面培養法により調製され、好ましい株を寒天ス
ラント上で生育させ、そして寒天内容物を使用して標準
条件下において寒天の栄養を含む撹拌フラスコに接種す
る。４８時間インキュベート後、撹拌フラスコは主に分
芽胞子を含む。この接種材料を使用することにり、標準
的な方法を使用して発酵器に接種する。他の接種法を使
用してもよい。

【００４０】発酵器中のバイオマスが、実質的にフィラ
メント状の菌糸体、少なくとも約８０％の菌糸体、好ま
しくは少なくとも約９０％の菌糸体、最も好ましくは約
９５の菌糸体からなるような方法で発酵器を制御する。
これは、過剰料の複合炭素源および複合窒素源を供給す
ることにより達成できる。複合炭素源は糖みつのような
混合物を自然に生じ、そして複合窒素源は穀物浸漬液お
よび／または綿の種子の粉末でありうる。他の知られた
複合炭素源および複合窒素源も使用できる。純粋な糖、
例えばシュークロース、デキストロース、グルコースま
たは他の糖源の供給は主に分芽胞子の形成をもたらすの
で好ましくない。栄養培地の組成は、広範囲に変更でき
る。しかしながら、好ましい栄養溶液は約４重量％から
約８重量％の複合炭素源および約０．５重量％から約５
重量％の複合窒素源を含む。菌糸体の生産も、発酵工程
における糖みつの一定供給（供給バッチ添加）により強
められる。発酵はバッチまたは供給バッチの様式におい
て実施できる。

【００４１】発酵器中のフィラメント状の菌糸体の収量
を増加させるために刺激栄養物を培養液に添加すること
は有益である。そのような刺激栄養物は脂肪、油、界面
活性剤、および多酸、例えばリノレン酸、シリコン油、
水乳濁液、等々を含む。

【００４２】供給バッチ発酵法は、発酵器のｐＨを酸性
条件にシフトするときに使用すると有益である。糖みつ
または他の有用な複合炭素源を添加することにより、大
量の塩基を使用してｐＨを調整することなしに発酵器の
条件を一定に保持できる。糖みつの供給バッチ添加は、
例えば発酵器の緩衝制御に用いることができる。発酵中
の糖みつの添加は、２４時間あたり約１％の糖みつの比
が好ましい。糖みつの添加は約４８時間後、またはｐＨ
を酸性条件にシフトする（ｐＨ約５．０以下）ときに始
めるのが好ましい。

【００４３】発酵は、撹拌および通気を最高にして行っ
た方がよい。撹拌および通気のためにはあらゆる手段が
使用できる。撹拌が弱ければ、菌糸体が凝集する。した
がって、約０．８ｖｖｍから約１ｖｖｍの通気を伴っ
た、最低約４００ｒｐｍから約６００ｒｐｍの撹拌が好
ましい。発酵工程は約２８℃から約３０℃の温度の範囲
で実施した方が好ましい。

【００４４】ｐＨ値の調整は菌糸体の形成のために必要
である。好ましいｐＨは約４．０から約６．０であり、
好ましくは５．０である。ｐＨ値の調整および制御は、
有機塩基または無機塩基、好ましくは水酸化ナトリウ
ム、水酸化アンモニウムまたはあらゆるトリエチルアミ
ン溶液を添加することにより達成できる。

【００４５】発酵中の不所望量の泡の発生を防止するた
めに、標準的な化学的消泡剤を添加できる。標準的な化
学的消泡剤はシリコン油、ポリプロピレンまたはグリコ
ール化合物、または他の合成消泡剤を含む。培養の終了
は、バイオマス測定の標準的な方法（例えば乾量の測
定）により容易に測定できる。９６時間の培養は、通常
３０−５０ｇ／リットルの乾燥菌糸体を生じるのに十分
である。この収率は本発明の製剤化段階における使用に
十分である。

【００４６】発酵培地からのフィラメント状菌糸体バイ
オマスの分離は、標準的な方法、例えば濾過、遠心分離
または分離のための他の便利な手段により実施できる。
菌糸体が不所望な微生物で汚染されるのを防ぐために、
菌糸体の回収は無菌条件において行った方がよい。

【００４７】製剤化 本発明の生物学的製剤化キャリアーを製造するために、
菌類の生育を維持することができ、迅速な胞子形成を促
進するキャリアー物質を使用する。適切なキャリアー
は、不活性重点化合物、例えばクレイ、ベントナイト、
タルク、パーライト、ピートモス、ケイ藻土、カオリ
ン、バーミキュライト、もみがら、ドライミルク、およ
びミネラルを含む。バーミキュライトが好ましいが、そ
れは安定な生物学的殺虫剤産物を提供し、また産物の密
度が低いために菌糸体の分生胞子化が速いためである。
バーミキュライト（または他のキャリアー物質）を予め
処理することにより微生物の汚染レベルを低下させるこ
とが最も好ましい。これは加熱（即ち、１００℃または
それ以上で少なくとも約１時間以上）または照射による
のが好ましい。微生物の汚染の予防も化学的に実施さ
れ、菌類の生存能力および生育に対する化学的な妨害を
しない。好ましい態様によれば、それからフィラメント
状の菌糸体バイオマスをバーミキュライトまたは他のキ
ャリアー化合物に添加して混合する。

【００４８】栄養は菌糸体の形成に必要である。そのよ
うな栄養源は炭素源および窒素源、例えば糖みつ、乳
漿、粉ミルク、綿の種子の粉末、別の自己分解ペプト
ン、もみがら、小麦、モルト抽出物、酵母抽出物を含
む。製剤に安定剤および／または保護剤、例えばポリア
ルコール、グリセリンまたは糖を添加することが必要で
ある。必要であれば、酸化防止剤、例えばアスコルビン
酸または没食酸プロピルエステルも添加される。

【００４９】そして当業者に知られている方法により製
剤化菌糸体混合物をプリル化する。プリル化工程はプリ
ル化剤、例えばアルギン酸ナトリウムまたはアルギン酸
カリウムをバイオマス／キャリアー混合物に添加し、そ
して塩化カルシウムまたはグルコン酸カルシウムを含む
凝固剤バスに該混合物を添加することにより実施でき
る。胎芽混合物中のアルギン酸ナトリウム濃度は使用さ
れる製剤、および必要とされる胎芽の程度に依存して約
０．２％から約３％の範囲内で変更できる。凝固のため
の塩化カルシウムまたはグルコン酸カルシウム濃度は適
切なプリル製剤に必要なように約１％ｗ／ｖから約１５
％ｗ／ｖの範囲内で変更できる。凝固剤中の塩濃度が増
加すると凝固は速くなる。この方法により形成されたプ
リルは、あらゆる便利な乾燥法、例えば空気乾燥または
オーブンによる乾燥により直ちに乾燥できる。しかしな
がら、液体かベッド工程は均一な物理的特徴（形、機械
的な強度、大きさ、および密度）のある浮遊性プリルを
得ることが好ましい。

【００５０】プリルの分生胞子化能力を増加させるため
に、プリルの分生胞子化を促進する栄養を添加すること
が臨まれる。そのような促進剤は天然食物内容物、例え
ば糖みつ、ペプトン、綿の種子の粉末、グルコース溶
液、等々を含みうる。栄養の添加は乾燥前、または乾燥
工程中でよい。乾燥前の栄養の添加は濃縮栄養溶液中で
完全に拡散するまでプリルを湿潤し、そして処理したプ
リルを乾燥することにより実施できる。乾燥工程中の栄
養の添加は液体化ベッド中での運動中にプリルをコーテ
ィングすることにより実施できる。そのようなコーティ
ング法はよく知られている。プリルを乾燥して、湿気ま
たは総揮発性含有量を約２％（ｗ／ｗ）かた約１２％
（ｗ／ｗ）にしたほうがよい。しかしながら、総揮発性
含有量は約６−８％が好ましい。湿気含有量は湿気バラ
ンスを用いた標準的な方法により、容易に決定できる。
不所望な微生物の汚染を防ぐために乾燥工程は滅菌空気
中で、例えば空気フィルターを使用して行ったほうがよ
い。

【００５１】本発明によって生産されたプリルは、約４
℃から約２５℃の温度で乾燥条件下において保存でき
る。プリルの生存能力を１２カ月間保つために、プリル
を真空において、または不活性気体、例えばアルゴン、
窒素または他の不活性ガス中で保存することが勧められ
る。

【００５２】不活性化および回収 製剤化プリルは必要であれば使用前に再活性化できる。
安定なプリル製剤は使用前に再活性化することにより、
高い活性の、新鮮な分生胞子濃縮物を提供できる。製剤
化プリルは活性化後短時間に多数の胞子の形成および生
産を促進する最良の栄養を含む。各プリル（直径１ｍｍ
未満）はプリルあたり１０⁷−１０⁸ほどの分生胞子を生
産でき、そして分生胞子は有害生物の制御に対する高い
殺虫効果を有する。再活性化は、プリルに湿気、好まし
くは水を添加することにより実施でき、菌糸体の生育お
よび分生胞子の生産を促す。最良の生育条件は約２０−
２８℃、好ましくは約２５℃において、約７日間未満、
好ましくは約３日から約５日間である。再活性化はあら
ゆる適切な密閉滅菌コンテナー、例えばペトリ皿または
トレイ中で生じうる。プリルはコンテナー中で単層にす
ることにより、胞子形成および胞子の発芽の為に最大の
表面領域を生じるようにしたほうがよい。再活性化され
たプリルは約６カ月間、好ましくは０から約３カ月間、
約４℃の低温において保存できる。

【００５３】分生胞子は界面活性剤を含む水で洗浄する
ことにより、再活性化プリルから回収できる。あらゆる
適切な界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ８０またはＴｗｅｅｎ
２０界面活性剤を０．０１％から０．１％の濃度で含ま
せて使用できる。回収した分生胞子を直ちに使用する
か、またはぬるまえに好ましくは約４℃の低温において
保存できる。回収した分生胞子は約４カ月間まで、好ま
しくは約２週間４℃において保存できる。プリルの培養
により得られた分生胞子の量は、プリルあたり約１０⁷
−１０⁸の胞子である。

【００５４】標的物にぬる前に、再活性化プリルから回
収した分生胞子に栄養を添加することができる。そのよ
うな栄養は有害生物上で分生胞子の発芽を促進できる。
別法として、ぬる前に分生胞子を予め発芽させることも
便利である。そのような予めの発芽は、回収した分生胞
子を約４−８時間、水通気コンテナーまたはあらゆる他
の適切な手段により撹拌することにより容易に実施でき
る。

【００５５】使用法 本発明により生産されたプリル、再活性化プリル、回収
した胞子または予め発芽させた胞子の塗布は、制御され
る有害生物の性質および特定の応用（農業、園芸、森林
または蚊の制御）に依存する。標的有害生物が植物有害
生物であれば、プリル、再活性化プリルまたは胞子を植
物の近辺または植物にぬることができる。標的物が土壌
有害生物であれば、プリル、再活性化プリルまたは胞子
をぬるか、または土壌に混入させることができる。標的
物が蚊であれば、プリル、再活性化プリルまたは胞子を
水面にぬることができる。

【００５６】有害生物を制御するために別の昆虫体内性
菌類を本発明の生物学的殺虫剤に使用できる。本発明の
生物学的殺虫剤により制御できる有害生物は節足動物お
よびネマトーダを含む。とくに好ましい有害生物は蚊お
よびブユのような昆虫、およびダニおよびクモガタに属
する有害生物を含む。生物学的殺虫剤は、通常感受性
で、慣用的な殺虫剤に耐性の有害生物に対して効果的で
ある。それらはすべてまたは個々の有害生物の発生段階
に効果的である。生物学的殺虫剤は以下の有害生物に効
果的に使用できる：等脚目、ミズムシ科、アルマジロ科
（Ａｒｍａｄｉｌｌｉｄｕｍ）、倍脚鋼、唇脚鋼、コム
カデ鋼（Ｓｙｍｐｈｙｌａ）、総尾目、トビムシ目、直
翅目、革翅目、等翅目、シラミ目、食毛目、総翅目、異
翅亜目、同翅亜目、蝶蛾類鱗翅目、鞘翅目、膜翅目、双
翅目、隠翅目、クモガタ鋼、ダニ目。

【００５７】また、生物学的殺虫剤は、メロイドジン
（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ）種、プラチレンカス（Ｐｒ
ａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ）種、ラドフォラス シミレス
（Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ ｓｉｍｉｌｅｓ）、ジチラン
カス ジプサチ（Ｄｉｔｙｌａｎｃｈｕｓ ｄｉｐｓａ
ｃｉ）、ヘテロデラ（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ）種、キシ
フェネマ（Ｘｉｐｈｅｎｅｍａ）種、グロボデラ（Ｇｌ
ｏｂｏｄｅｒａ）種、およびホプロレマス（Ｈｏｐｌｏ
ｌａｅｍｕｓ）種を含む植物に寄生するネマトーダに対
して使用できる。

【００５８】本発明の生物学的殺虫剤に好ましい、第一
の標的昆虫グループは、クリシデ（Ｃｕｌｉｃｉｄａ
ｅ）（蚊）および他の双翅目、アフィデ（Ａｐｈｉｄａ
ｅ）（アブラムシ）、ダルファシダル（Ｄａｌｐｈａｃ
ｉｄａｌ）（プラントホッパー）、シカデリダエ（Ｃｉ
ｃａｄｅｌｌｉｄａｅ）（リーフホッパー）、セルコピ
ダエ（Ｃｅｒｃｏｐｉｄａｅ）（アワフキムシ）、アレ
ヨジダエ（Ａｌｅｙｏｄｉｄａｅ）（コナジラミ）、コ
コイデア（Ｃｏｃｃｏｉｄｅａ）（スケール）、チサオ
プテラ（Ｔｈｙｓａｏｐｔｅｒａ）（アザミウマ）、コ
レオプテラ（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）（甲虫）、および
レピドプテラ（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）（キャタピ
ラ）である。

【００５９】プリルの薬剤量はぬるものに依存して広範
囲に変更される。考慮すべき因子は、用いる薬剤プリル
の種類（例えば、バーミキュライトプリルはもみがらプ
リルよりも蚊の幼虫の制御により効果的であるが、それ
はバーミキュライトプリルの浮遊特性による）、有害生
物の種類、有害生物の発生した実の状態、天気状況の影
響、および農業の領域の種類（例えば、農芸、園芸、森
林の状態またはあたの状態）を含む。通常、植物昆虫を
制御するための塗布量は約１０⁷分生胞子／ｍｌが望ま
しい。そのような薬剤量は以下の比率を基に得られる。
即ち、１グラムのプリルは１リットル中で１０⁷分生胞
子／ｍｌの懸濁液を生じる。土壌有害生物を制御するた
めの塗布量は約１−１０ｋｇ、好ましくはヘクタールあ
たり約５ｋｇの不活性化および／または活性化プリルが
望ましい。生物学的殺虫剤は土壌、植物、または土壌と
の混合物に撒いて広げる、あらゆる便利な塗布方法によ
りぬることができる。

【００６０】実施例は例示的な目的のために提供され、
ここに記述された本発明を限定するものではない。以下
の略語は本発明の記述を通して使用される。

【００６１】ＣＦＵ − コロニー形成ユニット ＣＰＵ − プリルユニットあたりの分生胞子 ℃ − 摂氏温度 ｇ − グラム ｈｒ − 時間 ｌ − リットル μ − マイクロ ％ − パーセント ｌｂ − パウンド ｆｔ² − 平方フィート Ｍ − モラー ｍｌ − ミリリットル Ｎ − 正常 ＰＤＡ − ペプトン デキストロース アガー ＲＨ − 相対湿度 ｒｐｍ − １分あたりの回転数 ｗ − 重量 ｖｖｍ − １分あたりの体積あたりの体積 ＡＩＳ − インデックス スケールの査定 ＧＩ − 成長インデックス

【００６２】

【実施例】実施例 １ ２０リットルバッチ発酵器におけるペシロミセスフモソ
ロゼウス （Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｆｕｍｏｓｏｒ
ｏｓｅｏｕｓ）の 菌糸体の生産 菌類ペシロミセスフモソロゼウス（ＡＴＣＣ ２０８７
４）を、２０ｇ／ｌモルト、２０ｇ／ｌグルコース、１
ｇ／ｌペプトン、および１０ｇ／ｌアガーを含むスラン
トアガーで維持した。スラントを４℃において保存し
た。

【００６３】滅菌条件下において、３０ｇ／ｌグルコー
ス、２０ｇ／ｌ酵母抽出物、および２０ｇ／ｌ穀物浸漬
液を含む撹拌フラスコにスラントを移した。滅菌前に溶
液をｐＨ６に調整した。スラントの菌類を接種後、菌類
を含む撹拌フラスコを３０℃において２４時間、３００
ｒｐｍで回転撹拌機で維持した。主に分芽胞子からなる
撹拌フラスコ産物を使用して、６０−８０ｇ／ｌの糖み
つ、２０ｇ／ｌ綿の種の粉末、および２０ｇ／ｌ穀物浸
漬液からなる生産培地１６リットルを含む２０リットル
の発酵器に接種した。塩基（２Ｍ ＮａＯＨ）を添加す
ることにより、発酵器のｐＨを５．３に調節した。通気
は０．８−１．０ｖｖｍの範囲に維持し、そして撹拌は
４００−６００ｒｐｍの範囲に維持した。泡の形成を防
止するために、１．５ｍｌのＭａｃｏｌ Ｐ−２０００
消泡剤［マツアーケミカルズ社（Ｍａｚｅｒ ｃｈｅｍ
ｉｃａｌｓ）］を発酵溶液に添加した。発酵は９６−１
００時間後に終了し、フィラメント状の菌糸体を遠心分
離により回収した。得られたフィラメント状の菌糸体の
収率は３０ｇ／ｌ（乾燥重量）であった。ここでバイオ
マスの８０％以上が菌糸体の形状であった。

【００６４】実施例 ２ 生物学的殺虫剤の製造 実施例１において得られたペシロミセスフモソロゼウス
の菌糸体を使用して、表１に記載されている製剤を製造
した。簡単に言えば、ペシロミセスの菌糸体（２５％の
湿気含有量の３００ｇ）を上述の量のキャリアーと混合
した。キャリアーは１リットルの水と共に１時間、１２
１℃において予めオートクレーブした。アルギン酸ナト
リウムを添加して、各混合物を総体積３リットルにし、
１ＮＮａＯＨを添加することにより指示されたｐＨにし
た。各混合物のプリルの製剤のために、１３−２７％
（ｐＨ６．３５−７．００）の濃度範囲の塩化カルシウ
ム溶液５リットルを含むバスを使用した。菌糸体／多孔
性キャリアー混合物をプリルしたカラムにのせ、混合物
を凝固剤に滴下し、アルギン酸化プリルを生成した。プ
リルを１時間またはそれ以上凝固剤に浸した。プリルは
金属スクリーンを通してスクリーニングすることにより
バスから容易に除去できる。８０−８５％ほどの湿気を
含む湿ったプリルを液体化ベッド乾燥機にのせ、３０℃
以下の空気温度において乾燥した。プリルは含水量６％
から１０％ｗ／ｗに乾燥した。

【００６５】 表 １ 製 剤 多孔性キャリアー 量 アルギン酸塩量 ｐＨ Ａ もみがら ３００ｇ ６０ ｇ ６．０ 粉ミルク ８０ｇ Ｂ ベントナイト ５００ｇ ３５ ｇ ８．５ Ｃ バ−ミキュライト ４００ｇ ７０ ｇ ５．９ Ｄ ピートモス ３５０ｇ ３５ ｇ ８．５ Ｅ バ−ミキュライト ２００ｇ ６０ ｇ ８．５ もみがら ２００ｇ 綿の種の粉末 １００ｇ Ｆ バーミキュライト ３００ｇ ４５ ｇ ５．３ もみがら １００ｇ Ｇ バーミキュライト ３００ｇ ４５ ｇ ９．０ もみがら １００ｇ 実施例 ３ プリルおよび分生胞子の生存能力のインビトロにおける
評価 実施例２により製造された生物学的殺虫剤のプリルのバ
ッチの生存能力、保存後の発芽および状態について評価
した。

【００６６】プリルの菌糸体の生存能力 ３６のプリルについて水に３０分間浸して水化した。再
活性化プリルをアガープレートまたは空のプラスティッ
クウエルの表面に置き、室温において４８時間インキュ
ベートした。プリルの生存能力のパーセントはプリル表
面に現れる菌糸体の観察および追跡により評価した。表
２は、別の温度で１２カ月まで保存した別のバッチのプ
リルの生存能力のパーセントを表す。

【００６７】分生胞子のインビトロ試験 上述のように寒天プレートまたは空のプラスティックウ
エルで４８時間胞子形成した、別のプラスティックウエ
ル製剤の分生胞子は、１０ｍｌの０．０１％Ｔｗｅｅｎ
８０界面活性剤溶液を含む、滅菌スクリューキャップ
チューブに３つの胞子形成プリルを移すことにより試験
した。チューブを激しく２０秒間振盪し、血球計数盤に
より分生胞子を計数した。表３は、違う温度で１年まで
保存したプリルの胞子数を表す。図１は、違う温度で２
カ月以上保存した、別々のプリル製剤の胞子数を表す。
すべての分生胞子が１００％発芽した。

【００６８】 表 ２ 製 剤 保存温度 保存時間（月） プリルの生存能力 Ｄ ４℃ ６ １００％ Ｄ ２５℃ ６ ９９％ Ａ ４℃ ６ １００％ Ａ ２５℃ ６ ９９％ Ａ ４℃ ５ ９８％ Ａ ２５℃ ９ ９５％ Ａ ２５℃ １２ ９５％ Ａ ４℃ １２ ９５％ Ｂ ４℃ １１ １００％ Ｃ ４℃ １２ １００％ Ｆ ４℃ ６ １００％ Ｇ ４℃ ６ １００％ 表 ３ 製 剤 保存温度 保存時間（月） 分生胞子（プリルあたりの胞子） Ａ ４℃ １０ １．９５×１０⁷ Ａ ２５℃ １０ １．０７×１０⁷ Ａ ２５℃ １１ １．３３×１０⁷ Ｃ ２５℃ ６ ５．０ ×１０⁷ Ｆ ２５℃ ６ １．８７×１０⁷ 分生胞子の発芽のインビトロ試験 胞子形成したプリルにより、前述のセクションにおいて
生産した分生胞子を集め、ｍｌ溶液あたり１×１０⁵の
胞子が生産された。滅菌サブローデキストロース培地を
２列の９６ウエルプレート（コーニング社２５８６０ポ
リスチレン）に添加した。胞子懸濁液（１００μｌ）を
各プレートの１６ウエルすべてに添加した。胞子を２８
℃において２４時間インキュベートし、発芽の試験（発
芽管の形成）をした。表２はその結果を示し、さまざま
な保存条件および保存時間において、試験されたすべて
のプリル製剤が分生胞子を発芽できることが示唆され
た。実施例 ４ 効能の試験 実施例２で製造されたもみがら／ミルク生物学的プリル
製剤の効能は、コナジラミの制御のめのグリーンハウス
において評価された。各試験は、ブルーサルビアにコナ
ジラミを発生させることにより実施された。２４時間昆
虫に卵を生みつけさせ、すべての成虫を除去した。未成
熟のコナジラミが発生するようなグリーンハウスの条件
の下でサルビアを生育させた。幾つかの、前期から中期
以前の大きさの形態を除き、そして１００％相対湿度に
おいてインキュベートすることにより、生存可能なペシ
ロミセスフモソロゼウスがグリーンハウスに存在しない
ことが証明された。そして寄生した植物を以下の処理に
供した：処理Ａ−植物あたり１ｇのプリルを直接湿った
土壌の表面にまいた。

【００６９】処理Ｂ−植物あたり１ｇのプリルを脱イオ
ン水中に１時間浸した。１枚の湿らせたＷｈａｔｍａｎ
^TM５フィルターをのせたペトリ皿にプリルをおき、そし
て２４時間インキュベートした。そしてプリルを直接土
壌の表面にまいた。

【００７０】処理Ｃ−１０プリルを１２時間の光周期の
下２５℃において７日間ＰＤＡ寒天プレート上でインキ
ュベートした。プレートを滅菌器具でこすった。この溶
液５ｍｌを、５００ｍｌの２％蔗糖溶液に入れた。植物
をこの溶液に浸した。

【００７１】処理Ｄ−植物を５００ｍｌの脱イオン水に
浸した（プリル無添加）。

【００７２】各処理において８つの植物を使用した。生
存体、死体、および感染体の大きさを毎週植物あたり３
枚の葉で計数した。各週、各処理において２４齢の大き
さを葉から除去し、そして１００％ＲＨにおいてインキ
ュベートすることにより、死亡率を測定した。表４は死
亡率および効能の結果を示す。

【００７３】 表 ４ 感染したコナジラミのパーセント 処理 ３日 ７日 処理Ａ ６０％ ９４％ 処理Ｂ ４８％ ５８％ 処理Ｃ ４０％ ６０％ 処理Ｄ １８％ １８％ 実施例 ５ プリルから生産された分生胞子の生存能力および感染性
を評価するための標準インビボバイオアッセイを開発し
た。該方法は、０．０５％Ｔｗｅｅｎ^TM８０中に２００
のプリルを浸すことにより活性化プリルから分生胞子を
回収し、そして回収した分生胞子を１ｍｌあたり１．０
×１０⁷の濃度に希釈することからなる。

【００７４】発芽（生存能力）アッセイ 滅菌接種ループにより、水性寒天（２．０％Ｄｉｆｃｏ
ａｇａｒ）の薄層でコートした顕微鏡用滅菌スライド
グラスの上に分生胞子の懸濁液を広げた。そしてスライ
ドを湿ったチェンバー（フィルターペーパーを有するペ
トリ皿）内に入れ、そして０．２ｍｌの滅菌蒸留水をフ
ィルターペーパーに添加した。分生胞子を１６時間イン
キュベーター内でインキュベートし（２５℃）、光学顕
微鏡により発芽を評価した。あらゆる大きさの発芽管を
有するすべての分生胞子を発芽したものとして計数し
た。

【００７５】感染性 宿主昆虫としてスイートポテトコナジラミＢ．ｔａｂａ
ｃｉを感染性の測定に使用した。平らな針を用いて、前
期４齢のＢ．ｔａｂａｃｉのニンフ（ハイビスカス種に
発生する未同調集団）を葉から集め、そして顕微鏡用滅
菌スライドの表面においた。上述のように調製した分生
胞子懸濁液は、濃度の分かっているドロップを顕微鏡用
滅菌スライドの表面におくことにより使用した（スライ
ドあたり２０ドロップ、各スライドのんがさを走る２列
に１０ずつ）。予め集めたＢ．ｔａｂａｃｉのニンフを
各小滴上および湿ったチェンバー内におき、そして０．
２ｍｌの蒸留水をフィルターペーパーに添加した。試料
を７日間インキュベーター（２５℃）内に維持した。２
つのチェンバー（全部で４０ニンフ）を各試験試料に使
用した。対照として、ニンフのみのスライドを上述の同
じ方法により調製したが、Ｔｗｅｅｎ８０溶液に添加し
た分生胞子はない。栄養源なしに菌類の生育を評価する
ために、分生胞子懸濁液のみのドロップを有するスライ
ド（ニンフなし）も調製した。

【００７６】各ニンフまたは分生胞子のドロップを光学
顕微鏡下で観察し、以下のインデックスにしたがって評
価した（評価インデックススケール）： ０．０ 変化なし（分生胞子は発芽せず、目に見える変
化はドロップの領域のどこにもない） ０．５ 分生胞子が発芽（発芽の始まり、ひとつまたは
複数の発芽管を有する分生胞子がドロップ領域のどこか
に存在するかまたは未分化の菌糸が存在する） １．０ 菌糸体の生育の始まり（ドロップ領域のどこか
に分化した菌糸の存在が観察され、宿主上で菌類の生育
がまったく観察されない） １．５ 宿主上の菌類の菌糸の最初の出現（宿主表面の
どこかに菌類の菌糸が存在する） ２．０ 宿主上の菌糸体の規則性成長（宿主体の表面ま
たは側面に菌糸体の肥大成長が観察される） ２．５ 新たに形成された分生胞子の最初の出現（宿主
の表面または宿主体の側面のどこかに、最初の分生子柄
および新たに形成された鎖状の分生胞子が存在する） ３．０ 規則性胞子形成（完全に胞子形成した菌糸体が
感染した宿主のほとんどの表面をおおうかまたは宿主の
側面に生じる） すべての試料を１，３，５，および７日後に評価した。
結果は各試料（４０ニンフ）からのＡＩＳの１日の平均
として表現された。対照のニンフをニンフの発生段階と
共に評価し、あらゆる感染の存在が記録された。対照の
ドロップ（Ｂ．ｔａｂａｃｉのニンフをドロップに入れ
なかった）が観察され、そして菌類の発生段階が記録さ
れた（分生胞子の発芽、菌糸体の成長、または胞子形
成）。

【００７７】実験に使用された、別々の種類のアルギン
酸塩プリルの基本的な物理特性を以下の表に示す。

【００７８】 表 ５ 製 剤 プリル１個の平均重量 (g) プリル１gあたりの平均量 プリルの形 Ｇ ０．００２７ ３７０ 均一 Ｄ ０．００２５ ４００ 均一 Ｃ ０．００３５ ２８６ 分散 Ｅ ０．００３７ ２７０ 均一 Ｅ ０．００３０ ３３３ 均一 Ｅ ０．００１７ ５９０ 均一 Ｅ ０．００１４ ７１４ 均一 ＊Ｅ製剤は製造日が違う。

【００７９】活性化中に生じた可視または物理変化を表
６に示す。

【００８０】 表 ６ 製 剤 最初の重量 １日 ２日 ７日 (g) 重量(g) 変化(%) 重量(g) 変化(%) 重量(g) 変化(%) Ｆ 0.0027 0.0039 + 44.4 0.0042 + 55.6 0.0046 + 70.4 Ｇ 0.0025 0.0040 + 60.0 0.0044 + 76.0 0.0050 +100.0 Ｄ 0.0035 0.0048 + 37.1 0.0056 + 60.0 0.0065 + 85.7 Ｃ 0.0037 0.0053 + 43.2 0.0055 + 48.6 0.0046 + 24.3 Ｅ 0.0030 0.0047 + 56.7 0.0050 + 66.7 0.0063 +110.0 Ｅ 0.0017 0.0033 + 94.1 0.0035 +105.9 0.0032 + 88.2 Ｅ 0.0014 0.0027 + 92.9 0.0029 +107.1 0.0026 + 85.7 表７は、昆虫体内性菌類ペシロミセスフモソロゼウス単
離体ＰＦＲ９７の取り込み菌糸体を有するアルギン酸塩
プリルそれぞれの種類の比較−実験室の条件におけるプ
リルの活性化中の平均成長インデックスである（２０プ
リルのＧＩの平均として計数された）。

【００８１】 表 ７ 製 剤 ＧＩ−１日 ＧＩ−３日 ＧＩ−５日 ＧＩ−７日 Ｆ １．８ ３．４ ４．６ ５．０ Ｇ １．１ ３．３ ４．４ ５．０ Ｄ １．４ ３．６ ４．１ ５．０ Ｃ ０．８ １．８ ３．８ ５．０ Ｅ ２．０ ３．６ ４．４ ５．０ Ｅ １．８ ３．０ ４．２ ５．０ Ｅ １．７ ３．２ ４．４ ５．０ ＊成長インデックススケール： ０−プリルに変化が観察されない １−膨潤段階（大きさ、形態および色の変化が観察さ
れ、菌類の成長が観察されなかった） ２−プリル表面での最初の菌糸の成長 ３−規則性肥大成長、菌糸体がプリルの表面のほとんど
を覆う） ４−胞子形成の始まり（最初の分生子柄および分生胞子
の鎖） ５−完全な胞子形成（プリル表面のほとんどが胞子形成
菌糸体により覆われた） 活性化後７日目以降の製剤Ｅの分生胞子の生産および発
芽を表８に示す。

【００８２】 表 ８ 活性化の時間 １プリルあたりの 発芽試験 分生胞子の平均量 発芽率（％） 優位な発芽分生胞子の形 ２日 １．４２×１０⁶ ９３．７ ２つの発芽管 ３日 １．２９×１０⁷ ９８．８ ２つの発芽管 ４日 １．５０×１０⁷ １００ ２つの発芽管 ５日 ２．９７×１０⁷ １００ ２つの発芽管 ７日 ３．３１×１０⁷ １００ ２つの発芽管 10日 ３．３７×１０⁷ ９９．２ ２つの発芽管 別々の種類のプリルの発芽の比較を表９に示す。

【００８３】 表 ９ 製 剤 発芽率（％） 優位な発芽分生胞子の形 Ｆ ９９．８ ２つの長い発芽管（＊） Ｇ ９９．２ １つの長い発芽管 Ｄ ９３．３ ２つの短い発芽管 Ｃ ８１．６ １つの短い発芽管 Ｅ ９９．６ ２つの長い発芽管（＊） Ｅ ９９．７ ２つの長い発芽管（＊） Ｅ ９９．０ ２つの長い発芽管（＊） （＊）は最初の分枝を表す 活性化後の各時間における製剤Ｅから生産される分生胞
子の感染性を表１０に示す。

【００８４】 表 １０ プリルの活性化時間 平均ＡＩＳ 平均ＡＩＳ 平均ＡＩＳ 平均ＡＩＳ １日 ３日 ５日 ７日 ２日 ０．７５ ０．９０ １．２０ １．８５ ３日 ０．８０ １．３５ １．７５ ２．１５ ４日 ０．８５ ２．１５ ３．００ ３．００ ５日 ０．９０ ２．３０ ３．００ ３．００ ７日 ０．８０ ２．１５ ３．００ ３．００ 10日 ０．６５ １．９０ ２．７０ ３．００ ＊評価インデックススケール−ＡＩＳ ０．０ 変化なし（分生胞子は発芽せず、目に見える変
化はドロップの領域のどこにもない） ０．５ 分生胞子が発芽（発芽の始まり、ひとつまたは
複数の発芽管を有する分生胞子がドロップ領域のどこか
に存在するかまたは未分化の菌糸が存在する） １．０ 菌糸体の生育の始まり（ドロップ領域のどこか
に分化した菌糸の存在が観察され、宿主上で菌類の生育
がまったく観察されない） １．５ 宿主上の菌類の菌糸の最初の出現（宿主表面の
どこかに菌類の菌糸が存在する） ２．０ 宿主上の菌糸体の規則性成長（宿主体の表面ま
たは側面に菌糸体の肥大成長が観察される） ２．５ 新たに形成された分生胞子の最初の出現（宿主
の表面または宿主体の側面のどこかに、最初の分生子柄
および新たに形成された鎖状の分生胞子が存在する） ３．０ 規則性胞子形成（完全に胞子形成した菌糸体が
感染した宿主のほとんどの表面をおおうかまたは宿主の
側面に生じる） 別々の種類のプリルの発芽の比較を表１１に示す。

【００８５】 表 １１ 製 剤 平均ＡＩＳ 平均ＡＩＳ 平均ＡＩＳ 平均ＡＩＳ １日 ３日 ５日 ７日 Ｆ ０．９５ ２．３０ ３．００ ３．００ Ｇ ０．８５ ２．００ ２．６０ ３．００ Ｄ ０．７０ １．９０ ２．３０ ２．８０ Ｃ ０．４５ １．６０ ２．２０ ２．７０ Ｅ ０．８０ ２．１５ ２．５５ ３．００ Ｅ ０．８５ ２．３５ ３．００ ３．００ Ｅ ０．９０ ２．４０ ３．００ ３．００ 実施例 ６ プリルから生産された分生胞子の発芽および感染性と、
違う基質で分生胞子を生育させるための標準的で慣用的
な方法とを比較するために、以下の実験が実施された。
３つの分生胞子の試料を３つの別々の源から得た： １）プリルから（製剤Ｅ） ２）寒天ペトリ皿から（ＰＤＡ−ポテトデキストロース
アガーＤｉｆｃｏ）、および ３）ＰＦＲに感染したコナジラミのニンフから。

【００８６】すべての実験において、ＰＦＲ ＡＴＣＣ
２０８７４株の分生胞子を使用した。

【００８７】前述のようにしてプリルからの分生胞子を
回収した。ＰＤＡ−分生胞子は固形人口培地の表面培養
液から得た。ＰＤＡプレートに１ｍｌの分生胞子懸濁液
を接種し（１．０×１０⁷／ｍｌ）、プレート表面全体
に広げ、そしてインキュベーターないで維持した（２５
℃）。２０日後に回収したときは培養液表面からの分生
胞子を滅菌０．０５％Ｔｗｅｅｎ８０界面活性剤で洗浄
し、そしてこの懸濁液を１ｍｌあたり１．０×１０⁷の
濃度に希釈した。表面培養液（ＰＤＡプレート）から生
産された分生胞子の総量は活性化プリルからの方法によ
る場合と同様である。同じ実験において、感染宿主
（Ｂ．ｔａｂａｃｉの前期４齢ニンフ）から回収された
分生胞子が使用された。標準バイオアッセイと同じ方法
（以下に記述）を使用することにより、感染ニンフを得
た。菌類を胞子形成させて感染したニンフを集めてプラ
スティックアンプルに入れ、そして１ｍｌの滅菌０．０
５％Ｔｗｅｅｎ８０溶液に浸した。この方法により得ら
れた分生胞子の懸濁液を、１ｍｌあたり１．０×１０⁷
分生胞子の濃度に希釈した。少なくとも２５０の分生胞
子の全長（存在すれば、発芽管の端から他方の端まで）
を接眼マイクロメーターにより測定した。以下の表は別
々の栄養源から得られたＰＦＲ株ＡＴＣＣ２０８７４か
ら得られた分生胞子の生存能力および毒性を示す。

【００８８】表１２から明らかな通り、プラスティック
アンプルから得られた分生胞子はＰＤＡ培養液濃度に表
面から生産されたものよりも良質である。ＰＤＡ培養液
から分生胞子を得るための時間はプラスティックアンプ
ルから分生胞子を得るための時間の２倍である。

【００８９】 表 １２ 栄養源 発芽率(%) 優位な発芽分生胞子 ＡＩＳ ＡＩＳ ＡＩＳ ＡＩＳ の形および発芽分生 １日 ３日 ５日 ７日 胞子の長さ 製剤Ｅ 99.3 ２つの発芽管 0.90 2.10 3.00 3.00 (4.4-5.8μm) ＰＤＡ 93.8 １つの発芽管 0.75 1.85 2.60 3.00 (3.0-3.8μm) B.tabaci 99.8 ２つの発芽管 0.95 2.20 2.90 3.00E4 ニンフ (8.2-11.2μm) 実施例 ７ ＰＦＲプラスティックアンプルが土壌内で胞子形成およ
び発芽する能力を評価するために、以下の実験を実施し
た。８つの２５０ｍｌエレンマイヤーガラスフラスコを
１５ｇのＲｅｄｉ ｌｉｔｅ土壌混合物（Ｔｅｒｒａ−
Ｌｉｔｅ）で満たした。フラスコおよび土壌を１２１℃
において２０分間高圧滅菌した。土壌を室温まで冷却
後、２０のバーミキュライトプリル（実施例２において
調製され、そして記述されたように）をフラスコ中の土
壌混合物に添加した。土壌とプリルをよく撹拌して、５
０ｍｌの脱イオン水を添加して湿気を高めた。土壌プリ
ル混合物を２５℃および３０℃においてインキュベート
した。１カ月後、土壌中の胞子の数を数えた。胞子の計
数は以下の方法により測定した：ＣＦＵ測定 １．滅菌スプーニュラを使用してフラスコ内容物を無菌
的に完全に混合する。

【００９０】２．注意深く１ｇの湿った土壌混合物を除
去する。

【００９１】３．５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．０を使
用して１：１０の連続希釈液を作る。

【００９２】４．ローズベンガルを加えた１００ｍｇク
ロラムフェニコールプレートに１０μｌの試料を添加す
ることにより試料をプレートし、そして散らしプレート
を作る。

【００９３】５．プレートを２８℃においてインキュベ
ートする。

【００９４】６．５から６日後に、存在する菌類のコロ
ニーを計数する。

【００９５】表１３は、この試験の結果を示す。

【００９６】 表 １３ フラスコ ３０日後のＣＦＵ／ｇ インキュベート温度 ２５℃ ３０℃ フラスコ１，２ ２．４８×１０⁶ ２．２×１０⁶ フラスコ３．４ ２．０ ×１０⁵ ２．６×１０⁵ フラスコ５ ２．６×１０⁶ 実施例 ８ コナジラミに対するハイビスカスの大規模な保護 再活性化プリルから回収したＰＦＲ分生胞子を試験する
ことにより、ハイビスカス種をコナジラミ（Ｂｅｍｉｓ
ｉａ ｔａｂａｃｉ）から保護する能力を評価した。実
施例５において記述した再活性化プリルを使用すること
により、Ａｐｏｐｋａ（フロリダ）で市販されているグ
リーンハウスで生育したハイビスカス種を保護した。大
量の（１００ｇ）乾燥プリルを大きなプラスティックボ
ックス（４５０×２５０×１００ｍｍ）において活性化
した。実施例５において記述したのと同じ、プリルの評
価法および培養法を使用した。簡単に言えば、２５℃に
おいて７日間インキュベートした後、生産された分生胞
子を４℃において保存した。ぬる約３−６時間前に、１
０ｇの胞子を再活性化プリルから回収し、０．０５％の
Ｔｗｅｅｎ２０界面活性剤を含む２リットルの水に入れ
た。この濃度における分生胞子の濃度は、ノイバウエル
計数盤を使用して計数した。ぬる前に、分生胞子の濃度
を水で希釈し、最終濃度１．０−１．５×１０⁷分生胞
子／ｍｌになるようにした。背負って運ぶスプレー（Ｂ
ｉｒｃｈｍｅｉｅｒ）を使用して、５０リットルの最終
分生胞子懸濁液を１回の処理で８００のハイビスカス
に、特に注意深く葉の裏側までぬった。生物学的殺虫剤
を１カ月間毎週ぬった。対照として、ハイビスカスを別
の化学的試薬（化学的な応用の表を参照）で処理した。
植物は週に１回調査し、化学的処理およびＰＦＲ処理さ
れた葉をランダムに試験した。図２−４は、ＰＦＲ処理
した植物と化学的処理した対照領域の比較である。図か
ら明らかな通り、ＰＦＲは化学的処理よりもよく作用す
る。規制された大きさは主に化学的処理部分において見
いだされ、ＰＦＲ部分には見いだされなかったことは、
注意に値する重要なことである。しかしながら、ＰＦＲ
に感染した寄生虫は見いだされなかった。したがって、
ＰＦＲ処理部分のコナジラミの死亡率はほとんど菌類に
よる。

【００９７】実施例 ９ 予めの発芽 実施例５において記述された再活性化プリル（製剤Ｅ）
から回収された分生胞子を評価することにより、予めの
発芽か、分生胞子への刺激栄養物の添加のいずれが分生
胞子の感染性を高めるのかを決定した。コナジラミに感
染した植物に分生胞子をぬった。

【００９８】表１４に示された結果から、予め発芽した
分生胞子が短時間（１２−２４時間）にコナジラミを制
御する効果が高いことが示唆された。

【００９９】 表 １４ 死んだコナジラミのパーセント 塗布直後の１００ 水中の製剤Ｅ 栄養を含む製剤Ｅ 予め発芽させた製剤Ｅ ％湿度の時間* １２ ６４ ７２ ８４ ２４ ５６ ７７ ８２ ４８ ４７ ９１ ８９ ７２ ６８ ９４ ９０ ＊続いて７５％湿度にスイッチした 実施例１０ 耐性の誘導 本発明の分生胞子を試験することにより、宿主植物の集
落化および耐性の誘導への昆虫体内性菌類ペシロミセス
フモソロゼウスの影響を測定した。同じ大きさ、形態で
（１個体あたり平均６枚の葉）小さな植木鉢で生育し
た、総数６０の未被害のポインセチアを使用した。成虫
のスイートポテトコナジラミをプラスティックチューブ
から捕まえ、処理した植物に放した。アルギン酸塩沈殿
物（実施例５において記述されたように活性化した製剤
Ｅ）から回収したペシロミセスフモソロゼウスＰＦＲ９
７で植物を処理した。使用した分生胞子懸濁液は１．０
×１０⁷分生胞子／ｍｌの力価に調整した０．０５％Ｔ
ｗｅｅｎ溶液であった。

【０１００】用いた処理は： Ａ−予防処理（成虫のコナジラミに暴露する１週間前に
植物を分生胞子懸濁液で処理する。成虫のコナジラミを
放す前に、処理した植物をナイロンケージに保護するこ
とにより、あらゆる不所望な発生を予防する。） Ｂ−成虫のコナジラミを放つ前の処理（植物を分生胞子
懸濁液で処理し、そして処理した植物の表面が乾燥した
ら成虫のコナジラミを放つ。） Ｃ−対照植物（植物を０．０５％Ｔｗｅｅｎ溶液で処理
し、そして処理した植物の表面が乾燥したら成虫のコナ
ジラミを放つ。） すべての処理植物は、無作為に四角く仕切ったグリーン
ハウスに入れた。各々（Ａ−Ｂ−Ｃ）から１２の植物を
無作為に仕切った平方に入れ、コナジラミの成虫を５点
に放った（平方の中央、および二番目の列の各コーナ
ー）。

【０１０１】植物あたりの成虫の数の測定は２４時間お
きに１週間行われた。数えるとき、以下のデータに注意
した： ａ）成虫の生存数（各グループのすべての植物あたりの
総数） ｂ）成虫の死亡数（各グループのすべての植物あたりの
総数） ｃ）感染した成虫（各グループのすべての植物あたりの
総数） プリルから回収したペシロミセスフモソロゼウスＡＴＣ
Ｃ２０８７４の植物への処理は、暴露直前の処理または
無処理よりも暴露１週間前の処理において寄生虫の数の
著しい減少をもたらした。暴露直前の処理は何もしない
よりはよかった。表１５に示されたこれらの結果はプリ
ルから回収されたペシロミセスフモソロゼウスＡＴＣＣ
２０８７４の分生胞子が植物による免疫応答（耐性の誘
導）を押さえたことが示唆される。

【０１０２】 表 １５ 日 総生存成虫数 変異体Ａの数／％ 変異体Ｂの数／％ 変異体Ｃの数／％ 1. １１５７ ２３８／２０．６ ３３６／２９．０ ５８３／５０．４ 2. １１４６ １７０／１４．８ ３７９／３３．１ ５９７／５２．１ 3. ９６７ １３０／１３．４ ２９８／３０．８ ５３９／５５．８ 4. ６９７ ７１／１０．２ １８６／２６．７ ４４０／６３．１ 5. ４４７ ３４／ ７．６ ９３／２０．８ ３２０／７１．６ 6. ３１５ １９／ ６．０ ７０／２２．２ ２２６／７１．８ 7. ２７０ ２３／ ８．５ ６３／２３．３ １８４／６８．２14. ６８ １０／１４．７ ２２／３２．４ ３６／５２．９

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、別々の温度において保存した別々のプ
リル（＝ビーズ）製剤の胞子数を示す。

【図２】図２は、化学的処理に対する、本発明の製剤を
使用したコナジラミの成虫の生物学的対照の比較であ
る。

【図３】図３は、コナジラミの大きさに作用する、本発
明の製剤の能力と化学的処理の能力の比較である。

【図４】図４は、コナジラミの卵に作用する、本発明の
製剤の能力と化学的処理の能力の比較である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (73)特許権者 597066223 81 Ｗｙｍａｎ Ｓｔｒｅｅｔ，Ｗａｌ ｔｈａｍ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ 02254−9046，ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔ ｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ (74)上記１名の代理人 100089705 弁理士 社本 一夫 （外４名） (72)発明者 ヤコブ・アイアル アメリカ合衆国メリーランド州21209, ボルチモア，オータム・フロスト・レー ン 1803 (72)発明者 ジェームズ・フレデリック・ウォルター アメリカ合衆国メリーランド州20861, アシュトン，アシュランド・ドライヴ 1008 (72)発明者 ランス・オズボーン アメリカ合衆国フロリダ州32779，ロン グウッド，オークレイ・コート 112 (72)発明者 ズデネク・ランダ チェッコスロヴァキア，370 05 ツェ スケーブデヨビツェ，シドリステ・ヴル タヴァ，ピセカ 15 審査官 河野 直樹 (56)参考文献 特開 平３−112910（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−95105（ＪＰ，Ａ) 米国特許4668512（ＵＳ，Ａ) 米国特許4718935（ＵＳ，Ａ) 米国特許4942030（ＵＳ，Ａ) Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ, （1985）34，ｐｐ571−577 Ｗｅｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，1983，Ｖ ｏｌｕｍｅ 31：ｐｐ333−338 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A01N 63/04 ＣＡ（ＳＴＮ)

Claims (18)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】（ａ）培養培地中で菌類ペシロミセスフモ
   ソロゼウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｆｕｍｏｓｏ
   ｒｏｓｅｕｓ）単離体ＡＴＣＣ番号２０８７４を液体発
   酵させて、８０％以上が菌糸体であるバイオマスを調製
   し、 （ｂ）該バイオマスを回収し、 （ｃ）回収したバイオマスをキャリアーと混合し、 （ｄ）できたバイオマスとキャリアーとの混合物からプ
   リルを形成し、 （ｅ）所望により、該プリルを乾燥し、 （ｆ）プリルを処理して病原性分生胞子を生産し、そし
   て （ｇ）上記処理されたプリルから病原性分生胞子を回収
   することことからなる、昆虫侵襲の制御のための改善さ
   れた真菌性生物学的殺虫剤の製造法。
2. 【請求項２】さらに以下の段階： （ｈ）回収した分生胞子を予め発芽させておくことから
   なる請求項１の方法。
3. 【請求項３】バイオマスの９０％以上が菌糸体である請
   求項１の方法。
4. 【請求項４】菌糸体がフィラメント状である請求項１の
   方法。
5. 【請求項５】処理されたプリルを表面活性剤を含む水で
   洗うことによって分生胞子を回収する請求項１の方法。
6. 【請求項６】請求項１，２または５の方法によって製造
   された真菌性生物学的殺虫剤。
7. 【請求項７】昆虫の侵襲を制御するのに有効である請求
   項６の生物学的殺虫剤。
8. 【請求項８】コナジラミ、蚊、アブラムシ、プラントホ
   ッパー（planthoppers）、オオヨコバイ、アワフキム
   シ、スケール（scales）、アザミウマ、甲虫または毛虫
   による侵襲を制御するのに有効である請求項７の生物学
   的殺虫剤。。
9. 【請求項９】殺虫効果量の請求項６の生物学的殺虫剤を
   処理領域にぬることからなる、処理領域の昆虫の侵襲を
   制御する方法。
10. 【請求項１０】菌類の生育を支持でき分生胞子形成を促
    進できる不活性キャリアーならびに菌類ペシロミセスフ
    モソロゼウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｆｕｍｏｓ
    ｏｒｏｓｅｕｓ）単離体ＡＴＣＣ番号２０８７４を液体
    発酵することにより調製される８０％以上が菌糸体であ
    る中生菌類のバイオマスを含有する改善された安定した
    乾燥されたプリル化生物学的殺虫剤組成物。
11. 【請求項１１】菌類が分生胞子を生成するように処理さ
    れている請求項１０の生物学的殺虫剤組成物。
12. 【請求項１２】バイオマスの９０％以上が菌糸体である
    請求項１０または１１の生物学的殺虫剤組成物。
13. 【請求項１３】菌糸体がフィラメント状である請求項１
    ０または１１の生物学的殺虫剤組成物。
14. 【請求項１４】さらに栄養素を含む請求項１０または１
    １の生物学的殺虫剤組成物。
15. 【請求項１５】菌類ペシロミセスフモソロゼウス（Ｐａ
    ｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｆｕｍｏｓｏｒｏｓｅｕｓ）単
    離体ＡＴＣＣ番号２０８７４の分生胞子からなる害虫を
    制御するための改善された生物学的殺虫配合物であっ
    て、該分生胞子は、菌類の生育および分生胞子形成を支
    持でき促進できる不活性キャリアーを含む８０％以上が
    菌糸体である中生菌類のバイオマスを含有する改善され
    た安定した乾燥されたプリル化生物学的殺虫剤組成物か
    ら製造された配合物。
16. 【請求項１６】分生胞子を予め発芽させて発芽管を形成
    しておく請求項１５の生物学的殺虫配合物。
17. 【請求項１７】下記段階からなる、真菌性生物学的殺虫
    剤の感染力および生存率をアッセイして昆虫の侵襲を制
    御する方法： (a) プリルを活性化して分生胞子を生成するが、ここ
    で、該プリルは、菌類の生育を支持でき分生胞子形成を
    促進できる不活性キャリアーならびに菌類ペシロミセス
    フモソロゼウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｆｕｍｏ
    ｓｏｒｏｓｅｕｓ）単離体ＡＴＣＣ番号２０８７４を液
    体発酵することにより調製される８０％以上が菌糸体で
    ある真菌性バイオマスを含有し； (b) 上記プリルから分生胞子を回収し； (c) 回収した分生胞子を水溶液と接触させて真菌性分
    生胞子の水性懸濁液を得； (d) アッセイしようとする昆虫の若虫を、該昆虫を感
    染させるに充分量の真菌の水性懸濁液と接触させ； (e) 上記処理された若虫をインキュベートして分生胞
    子を発芽させ；そして (f) 上記昆虫若虫の上での真菌の生育を測定する。
18. 【請求項１８】水性懸濁液が水溶液ml当たり１．０ｘ１
    ０⁷個の分生胞子を含有する請求項１７の方法。