CN117965322A - 一种防治斜纹夜蛾的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种防治斜纹夜蛾的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种防治斜纹夜蛾的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬剂及其制备方法和应用，莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株为莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi，保藏名称为莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi；保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2023年9月22日；保藏编号：CGMCC No.40833。本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株，产孢量高，制备的孢子乳悬剂，对斜纹夜蛾的防治效果好，对环境安全、不易使害虫产生抗药性的特点。

Description

一种防治斜纹夜蛾的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬剂及其制备 方法和应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种防治斜纹夜蛾的莱氏绿僵菌Mrztsl2308孢子乳悬剂及其制备方法和应用。
背景技术
斜纹夜蛾Spodoptera litura Fabricius属鳞翅目（Lepidoptera）夜蛾科（Noctuidae），其寄主丰富、分布广泛、迁飞能力强，是一种世界性的农业害虫，在我国广泛分布，危害玉米、小麦、大豆Glycine max、甘薯 Ipomoea batata、茄子Solanum melongena、葡萄 Vitis vinifera和香蕉 Musa nana等粮食作物和经济作物等。斜纹夜蛾能以幼虫取食为害植物叶片、花蕾和果实，是严重影响农业生产安全的重要因素。近年来，随着种植结构的调整及全球环境气候的变化，斜纹夜蛾的发生危害日趋严重。
目前对斜纹夜蛾的防治主要采取以化学农药防治为主的防治措施，化学农药虽然具有见效快，但化学农药的施用不仅会造成农产品农药残留及严重的环境污染，而且易杀死自然天敌，并使目标害虫产生抗药性，因而不符合害虫治理的可持续性及生态控制的要求。生物防治措施具有生态、持续控制的特点，因而生物防治则是斜纹夜蛾生态、持续控制的重要途径。目前，防治斜纹夜蛾的生物防治主要采用天敌和生防细菌苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis，而有报道斜纹夜蛾对苏云金杆菌的 δ-内毒素产生了抗性。昆虫病原真菌因其具有自然流行性强、不染污环境、对人、畜、植物安全，害虫极少或不产生抗性，有利于环境保护的特点，成为害虫生物防治的重要措施。因此，研究斜纹夜蛾的生防真菌，为斜纹夜蛾的生物防治提供依据，也为减少化学防治所带来的抗药性及环境污染提供保障。
莱氏绿僵菌(Metarhizium rileyi)属于子囊菌亚门（Ascomycota）粪壳菌纲（Sordariomycetes）肉座菌目（Hypocreales）麦角菌科 （Clavicipitacea）绿僵菌属(Metarhizium)真菌，莱氏绿僵菌的寄主为鳞翅目夜蛾科害虫。据报道，莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi 对斜纹夜蛾也具有一定的致病力，但从罹病斜纹夜蛾虫体上分离到的莱氏绿僵菌原始菌株还未见报道。对于虫生致病菌来说，分离自原寄主上的病原真菌对寄主昆虫的防治效果要比从其他寄主了分离得到的病原真菌更具有寄生专一性，杀虫效果也更好，因此从自然染菌的僵虫体表分离纯化来获取高毒力昆虫病原菌是害虫生防真菌菌株筛选的重要方式。
目前，缺乏一种防治斜纹夜蛾的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬剂及其制备方法和应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种防治斜纹夜蛾的莱氏绿僵菌Mrztsl2308孢子乳悬剂及其制备方法和应用。
为了解决现有技术的问题，本发明提供了如下技术方案：第一方面，本申请提供一种莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株；
第二方面，本申请提供一种莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株制备的莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂。
第三方面，本申请提供一种莱氏绿僵菌Mrztsl2308在制备斜纹夜蛾(Spodoptera litura Fabricius) 分生孢子乳悬剂中的应用。
本发明的一种莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株，所述莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株的保藏名称为莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi；分类命名为Metarhizium rileyi ，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2023年9月22日；保藏编号：CGMCC No.40833。
进一步地，所述莱氏绿僵菌Mrcscm2308菌株的ITS核苷酸序列为SEQ ID No.1所示。
本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株制备的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬液。
本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株制备的莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂。
本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬液的制备方法，包括如下步骤：取液体吐温-80和十二烷基苯磺酸钠，分别按0.05%和0.1%的比例加入清水中，搅拌均匀，制得莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬液。
本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂的制备方法，包括如下步骤：取莱氏绿僵菌Mrztsl2308新鲜分生孢子，加入制得的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬液中，配制浓度为1.65×108孢子/mL的孢子乳悬液，制得莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂。
本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株在制备防治斜纹夜蛾生物制剂中的应用。
有益效果：本发明提供的莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂是一种能用于防治斜纹夜蛾Spodoptera litura Fabricius的生防真菌菌剂，具有对斜纹夜蛾防治效果好、对环境安全、不易使害虫产生抗药性的特点，可以用于生物防治斜纹夜蛾。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
（1）本发明是初次从罹病斜纹夜蛾幼虫上分离得到的菌株莱氏绿僵菌Mrztsl2308，培养较简单，生长速度较快，产孢量大。且具有强感染致病性，在1.26×107和1.26×108个/mL处理后第5天，斜纹夜蛾的累积死亡率即能达到100%；在1.0×107和1.0×108个孢子/mL时，对斜纹夜蛾幼虫感染致死的LT50分别为2.0和1.5天；第1、2、3、4、5和第6天对斜纹夜蛾幼虫致死的LC50分别为5.67×109、2.36×107、4.45×105、3.55×104、3.85×103和3.41×103个孢子/mL。表明该菌株对斜纹夜蛾幼虫的致病力强。该菌株为分离于田间自然被感染的斜纹夜蛾，为有益微生物，环保无污染、不易产生抗药性，可以广泛用于斜纹夜蛾的防治。
（2）本发明该菌株是我们首次从斜纹夜蛾幼虫上分离纯化获得的莱氏绿僵菌Mrztsl2308，CGMCC No.40833，该菌株在温度为26℃、相对湿度80%以上在SDAY培养基上生长快速，产孢量大，孢子萌发率高。其分生孢子乳悬液对斜纹夜蛾幼虫防治效果好，可以广泛地用于斜纹夜蛾幼虫的防治。同时，该悬乳剂培养原料来源广泛，价格便宜，培养方法简单，易大量进行生产，具有较大的开发应用潜力，用该菌株防治斜纹夜蛾，即为典型的生物防治，可避免化学农药所带来的抗药及环境污染等问题，将为斜纹夜蛾绿色防控提供依据。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子、产孢结构图；
图2为本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌落形态图；
图3为本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308感染斜纹夜蛾的症状图。
具体实施方式
为了使本申请要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。
本申请中，术语“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B的情况。其中A，B可以是单数或者复数。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
本申请中，“至少一个”是指一个或者多个，“多个”是指两个或两个以上。“以下至少一项(个)”或其类似表达，是指的这些项中的任意组合，包括单项（个）或复数项（个）的任意组合。例如，“ a，b，或c中的至少一项（个）”，或，“a，b，和c中的至少一项（个）”，均可以表示：a，b，c，a-b（即a和b），a-c，b-c，或a-b-c，其中a，b，c分别可以是单个，也可以是多个。
应理解，在本申请的各种实施例中，上述各过程的序号的大小并不意味着执行顺序的先后，部分或全部步骤可以并行执行或先后执行，各过程的执行顺序应以其功能和内在逻辑确定，而不应对本申请实施例的实施过程构成任何限定。
在本申请实施例中使用的术语是仅仅出于描述特定实施例的目的，而非旨在限制本申请。在本申请实施例和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”、“所述”和“该”也旨在包括多数形式，除非上下文清楚地表示其他含义。
本申请实施例说明书中所提到的相关成分的重量不仅仅可以指代各组分的具体含量，也可以表示各组分间重量的比例关系，因此，只要是按照本申请实施例说明书相关组分的含量按比例放大或缩小均在本申请实施例说明书公开的范围之内。具体地，本申请实施例说明书中所述质量可以是µg、mg、g、kg等化工领域公知的质量单位。
术语“第一“、“第二”仅用于描述目的，用来将目的如物质彼此区分开，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。例如，在不脱离本申请实施例范围的情况下，第一XX也可以被称为第二XX，类似地，第二XX也可以被称为第一XX 。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。
实施例
本发明的一种莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株，所述莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株的保藏名称为莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi；分类命名为Metarhizium rileyi，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2023年9月22日；保藏编号：CGMCC No.40833。
所述莱氏绿僵菌Mrcscm2308菌株的ITS核苷酸序列为SEQ ID No.1所示。
本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株制备的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬液。
本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株制备的莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂。
本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬液的制备方法，包括如下步骤：取液体吐温-80和十二烷基苯磺酸钠，分别按0.05%和0.1%的比例加入清水中，搅拌均匀，制得莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬液。
本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂的制备方法，包括如下步骤：取莱氏绿僵菌Mrztsl2308新鲜分生孢子，加入制得的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬液中，配制浓度为1.65×108孢子/mL的孢子乳悬液，制得莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂。
本发明的莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株在制备防治斜纹夜蛾生物制剂中的应用。
试验例1
病原菌的分离、鉴定
1.1 材料与方法
1.1.1 材料
在云南省普洱市澜沧县竹塘乡旱作稻田采集到被一种虫生真菌侵染致死的斜纹夜蛾幼虫。
萨氏培养基（SDAY）：1%蛋白胨+1%酵母粉+4%葡萄糖+1.5-2%琼脂粉+1000 ml水。
无菌操作条件：所有的器皿和用具均经高温灭菌锅（121℃，30 min），接种等操作均在超净工作台内进行。
培养条件：置于28℃光照（12L：12D）恒温箱中培养，待菌落形成后，转移到试管SDAY斜面，培养2-3天，转入4℃冰箱储存。
1.1.2 病原菌的分离和纯化
分离：从罹病斜纹夜蛾幼虫尸体上分离病原菌。将斜纹夜蛾幼虫罹病虫体带回实验室，将罹病斜纹夜蛾幼虫尸按顺序依次经过70%酒精浸泡30 秒、再经过0.1%升汞溶液浸泡3分钟（彻底消毒）、最后用无菌水冲洗三次，再用接种针取斜纹夜蛾幼虫体上长出的分生孢子或菌丝，置于SDAY培养基上，在26℃条件下培养，长出大量菌丝后按常规方法进行单孢分离、培养得到纯的、产孢能力强的菌株莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi，转移到SDAY斜面上生长3-5天，长好后置于4℃冰箱储存。
复壮：将分离到的菌株在SDAY培养上培养2-3天后，产生大量分生孢子，再将该分生孢子挑入含1%吐温-80 的无菌水，用玻璃棒搅拌均匀，得到适当浓度（108孢子/ml）的孢子悬浮液，用小型喷雾器均匀喷于斜纹夜蛾幼虫体表（以虫体表面湿润为度），保持相对湿度80%以上。收集死亡虫体并保湿，再将得到的死亡虫尸再按以上方法分离得到致病力更强的菌株。
纯化：挑取培养基上分生孢子粉，再次接种在新的培养基上。如此培养2~3代，菌株就被纯化。
1.1.3 病原菌的鉴定
根据病原菌的培养性状、菌丝和分生孢子的形态进行鉴定。利用40×10倍显光学微镜，镜检菌丝、分生孢子和分生孢子梗的形态。
1.2 结果
从被虫生真菌自然侵染的斜纹夜蛾幼虫体上分离获得野生菌株，在SDAY（萨氏琼脂培养基）上培养，并回接于斜纹夜蛾幼虫复壮获得一菌株，对该菌株进行单菌丝分离获得纯化的菌株，即莱氏绿僵菌Mrztsl2308。
在SDAY培养基上，莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株的菌落较为平展，分生孢子梗直立，着生于基质菌丝，具分隔。分生孢子梗长130～140μm，粗1.8～2.2μm，形成浓密的分支簇，其上着生2～3个瓶梗，圆柱形，其一端较为膨大，一端尖细，大小为（4.5～6）μm×(2～3) μm；分生孢子成链珠状，长椭圆形，表面光滑，大小为(3～4) μm×(2～3) μm。
根据田间感染症状、采集罹病虫体室内分离观察，并根据莱氏绿僵菌感染症状、分生孢子及菌丝的形态特征进行鉴定，确定为莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi。
所述的莱氏绿僵菌Mrcscm2308菌株的ITS的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示（如下）：
TTCCTTCCCCCTTTTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATTCCTACCTGATTCGAGGTCAACTCTTGGAGAAGTTTGTGCGTTTTACGGCAGTGGCCGCGCCGCGCTCCTGTTGCGAGGTTGTGCTACTACGCAGAGGAGGCCGCGACGGGGCCGCCAATTCATTTCGGGGGCGGCGCCGCAGGGAACCGCCTGAGCGGCCCAGCTGACAATCGCCGGCCCCCAACACCAAACCGCGGGGGCTTGAGGGTTGAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCGCCAGAATACTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGATTCATTTTTGTATGATTCCACTCAGACGTGCCAAAGGCTAAGAGATACAGAGTTTCGGTCCCGCGGCGGGCGCCTGTTTCCGGGCGGGCTCTGGACGAGCCCGGTCCGGGGCAAATGACCCGCCGAGGCAACAGGAAAAGGGTATAAGTTCACATGGGGTTTGGGAGTTGTAAACTCGGTAATGATCCCTCCGCAGGCCCCCCCTCACGGAA
试验例2
莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株生物学特性
2.1 材料与方法
2.1.1供试菌株
选择纯化后生长旺盛、生长均匀的一皿作为供试菌株。取菌丝再次接种到SDAY上，于26℃的恒温光照（12L:12 D）培养箱中培养。
2.1.2菌落生长速率和产孢量的测定
将事先培养好的莱氏绿僵菌取一皿用8mm的打孔器打孔，接种于另外一个培养基上，做3个重复，置于26℃的恒温光照（12L:12D）培养箱中培养，每天定时测定其直径并记录，直到菌落长满培养基为止。用直径为8 mm的打孔器在培养基相同的位置取菌饼，再接入SDAY培养基表面，恒温箱中培养7天，每天测量和记录一次菌落直径，以测定菌落生长情况。
2.2结果
2.2.1菌落生长量
在SDAY培养上，于26℃条件下生长良好，表1结果表明，莱氏绿僵菌Mrztsl2308在培养基上生长较快，培养1-3d，其菌落直径平均日增长量较低，培养第5d开始，菌落生长较快，培养至第5-7天菌落直径日增长量最大，第5天和7天菌落直径日增长量分别为2.36±0.05cm/d和2.21±0.18cm/d；培养至第9d时，其菌落直径日增长量降低，为1.77±0.01cm/d。培养至第11d时，其菌落直径日增长量仅为0.26±0.04cm/d。莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌落生长速度测定结果如表1所示：
表1
2.2.2菌落产孢量
由表2可以看出，莱氏绿僵菌Mrztsl2308在培养后第5天开始大量产孢，从第7天开始产孢量就可以达到1.72×107孢子/cm2，产孢速度快，产孢量较高。第9天时产孢量达2.49×109孢子/cm2。由此表明，莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株在室内培养条件下，产孢量高。莱氏绿僵菌Mrztsl2308产孢量测定结果如表2所示：
表2
2.2.3孢子萌发率
经对孢子萌发情况进行测定，结果表明，莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子萌发速度快，在培养至24小时，莱氏绿僵菌Mrztsl2308孢子萌发率达到90.23%，到48小时时孢子萌发率达到98.96%。表明该菌株孢子活性强，对感染防虫具有良好作用。
试验例3
莱氏绿僵菌Mrztsl2308对斜纹夜蛾的室内毒力测定
3.1材料与方法
3.1.1供试虫源
斜纹夜蛾 (Spodoptera litura Fabricius)幼虫，由本实验室，温度（26±1）℃，湿度（80±5）%，光周期（12L:12 D）光照培养箱中，用水稻叶饲养。获得健康、大小一致的3龄幼虫作为试虫。
3.1.2孢子悬浮液的制备
取长势良好的纯化莱氏绿僵菌用无菌水将分生孢子洗下并过滤配置成108孢子/ml分生孢子菌悬液，用无菌毛细滴管取滤液一滴滴于血细胞计数板上，在显微镜下数孢子并记录数据，用含0.5%吐温80的无菌水依次稀释为108、107、106、105、104 五个浓度梯度的孢子悬浮液，以含0.5%吐温80的无菌水为空白对照，用于毒力测定。
3.1.3 浸渍法
采用浸渍法对斜纹夜蛾3龄幼虫进行处理。即将试虫分别浸泡在浓度为1.0×108 孢子/mL 的孢子悬浮液中，轻轻摇动，30 s 后将试虫取出晾干，选取活动性较强的试虫进行试验。将试虫置于八角瓶（4.5cm×4.5cm×19.5cm）中，并在八角瓶底铺一层厚1cm灭菌灭菌土，用甘蔗作为饲料，用小喷壶喷水对幼虫进行保湿，（26±1）℃恒温培养箱中饲养。以0.05%吐温-80 的无菌水处理的斜纹夜蛾2龄幼虫为对照，每个处理设3 个重复，每个重复30 头试虫，连续观察10d。每天记录试虫的死亡数及虫体表面出现绿色绿僵菌孢子的僵虫数量，计算平均死亡率和僵虫率。数据用DPS 14.0 软件进行线性回归统计分析。
3.2结果
由表1可知，在莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株1.26×104个/mL~1.26×108个/mL孢子浓度接种处理，对斜纹夜蛾幼虫均具有感染致死作用，1.26×104、1.26×105、1.26×106、1.26×107和1.26×108个/mL处理后，第3天时斜纹夜蛾幼虫的累计死亡率分别为6.67%、13.33%、23.33%、36.67和43.33%；处理后第5天，33.33%、53.33%、73.33%、100和100%；处理后第7天时，斜纹夜蛾2龄幼虫的死亡率分别为60.00%、76.67%、90.00%、10%0和100%。由此可以看出，莱氏绿僵菌Mrztsl2308对斜纹夜蛾幼虫具有很强的致死作用。莱氏绿僵菌Mrztsl2308对斜纹夜蛾幼虫的累积死亡率（%）如表3所示：
表3
2.2莱氏绿僵菌Mrztsl2308对斜纹夜蛾的致死时间效应
对斜纹夜蛾2龄幼虫的致病性测定结果表明，该菌株对斜纹夜蛾的致病力符合时间-剂量死亡率模型，LT50随孢子悬浮液浓度的增加而缩短，在浓度为1.0×104、1.0×105、1.0×106、1.0×107和1.0×108个孢子/mL时，对斜纹夜蛾幼虫感染致死的LT50分别为4.8、3.7、3.0、2.0和1.5天；由此表明，莱氏绿僵菌Mrztsl2308对斜纹夜蛾幼虫感染致死的时间随着处理浓度的增加而缩短（表2）。
斜纹夜蛾2龄幼虫被莱氏绿僵菌Mrztsl2308感染致死后，体色逐渐变深，之后虫体变僵硬；将死亡虫体在26℃进行保湿培养，第3天时斜纹夜蛾幼虫气门以及节间部位开始长出微量菌丝；第5天时虫体腹节部分基本被菌丝覆盖；培养第7天后，除头部外，虫体胸腹部均长满白色菌丝；第8天开始有橄榄色分生孢子产生；第10天时，整个虫体胸部和腹部都长满分生孢子，呈深绿色。莱氏绿僵菌Mrztsl2308对斜纹夜蛾的致死时间效应如表4所示：
表4
2.3莱氏绿僵菌Mrztsl2308对斜纹夜蛾的致死剂量效应
根据莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株孢子悬浮液对斜纹夜蛾幼虫的感染致死率，计算获得莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株对斜纹夜蛾幼虫的致死中浓度LC50，如表3所示，在接种后分别在第1、2、3、4、5和第6天时斜纹夜蛾幼虫致死的LC50分别为5.67×109、2.36×107、4.45×105、3.55×104、3.85×103和3.41×103个孢子/mL。莱氏绿僵菌Mrztsl2308对斜纹夜蛾的致死中浓度如表5所示：
表5
综合以上毒力测定结果，莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株对斜纹夜蛾幼虫具有较高的毒力，该菌株可用于开发控制斜纹夜蛾的微生物农药。
试验例4
莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂对斜纹夜蛾的田间防治效果
防治试验在开远市中和营旱种稻田进行，水稻处于抽穗期。
首先，取液体吐温-80和十二烷基苯磺酸钠，分别按0.05%和0.1%的比例加入清水中，搅拌均匀，配制成乳悬液。再取莱氏绿僵菌Mrztsl2308新鲜分生孢子，加入该乳悬液中，配制浓度为1.65×108孢子/mL的孢子乳悬液，即为莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂。其次，进行田间防治试验，以1.65×108孢子/mL的孢子悬浮液为试验处理，以喷施按0.05%加入吐温80的清水作为空白对照，每个处理设置3个小区，每个小区200 m2。第三，进行防治效果的调查。喷施莱氏绿僵菌Mrztsl2308孢子悬浮液之前，采用五点取样法调查斜纹夜蛾的虫口基数，每点选择5丛水稻，目测调查水稻叶片上斜纹夜蛾的虫口数量。用手持式喷雾器喷施莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌剂后3、5、7、10、15和30天，采用五点取样法，每点选择20丛水稻，目测调查百丛水稻上斜纹夜蛾活虫数量。最后，根据虫口数量，按照正式公式计算田间防治效果。
防治效果(%)= (莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌剂处理区虫口减退率-空白对照区虫口减退率)/(1-对照区虫口减退率)×100。
防治效果：结果表明，施用莱氏绿僵菌分生孢子悬浮液后，田间斜纹夜蛾的防治作用明显，在施用后第3、5、7、10、15和30天时，防治效果分别为8.95、47.76、73.54、80.69、90.36和92.01%。莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子悬悬剂对斜纹夜蛾的田间防治效果如表6所示：
表6
上述实施例的结果可知，本发明提供的莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂可显著降低田间斜纹夜蛾的虫口数量，表明该发明提供的莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂对斜纹夜蛾具有很好的防治作用，可用于田间防治斜纹夜蛾。
该菌株是我们首次从斜纹夜蛾幼虫上分离纯化获得的莱氏绿僵菌Mrztsl2308，CGMCC No.40833，该菌株在温度为26℃、相对湿度80%以上在SDAY培养基上生长快速，产孢量大，孢子萌发率高。其孢子悬浮液对斜纹夜蛾幼虫致病力较好，可以广泛地用于斜纹夜蛾幼虫的防治。同时，该菌株培养原料来源广泛，价格便宜，培养方法简单，易大量进行生产，具有较大的开发应用潜力，用该菌株防治斜纹夜蛾，即为典型的生物防治，可避免化学农药所带来的抗药及环境污染等问题，将为斜纹夜蛾绿色防控提供依据。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，本发明要求保护范围由所附的权利要求书、说明书及其等效物界定。

Claims (7)

1.一种莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株，其特征在于：所述莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株的保藏名称为莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi；分类命名为Metarhizium rileyi，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2023年9月22日；保藏编号：CGMCC No.40833。
2.根据权利要求1所述的莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株，其特征在于：所述莱氏绿僵菌Mrcscm2308菌株的ITS核苷酸序列为SEQ ID No.1所示。
3.权利要求1所述的莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株制备的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬液。
4.权利要求1所述的莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株制备的莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂。
5.权利要求4所述的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬液的制备方法，其特征在于包括如下步骤：取液体吐温-80和十二烷基苯磺酸钠，分别按0.05%和0.1%的比例加入清水中，搅拌均匀，制得莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬液。
6.权利要求5所述的莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：取莱氏绿僵菌Mrztsl2308新鲜分生孢子，加入权利要求4制得的莱氏绿僵菌Mrztsl2308乳悬液中，配制浓度为1.65×108孢子/mL的孢子乳悬液，制得莱氏绿僵菌Mrztsl2308分生孢子乳悬剂。
7.权利要求1所述的莱氏绿僵菌Mrztsl2308菌株在制备防治斜纹夜蛾生物制剂中的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117925420A (zh) * 2024-03-14 2024-04-26 云南农业大学 一种莱氏绿僵菌Mryscm2308菌株及其培养方法和应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103087924A (zh) * 2012-11-27 2013-05-08 河南省农业科学院 虫生真菌莱氏野村菌及其培养方法与应用
CN110669676A (zh) * 2019-10-25 2020-01-10 云南农业大学 莱氏绿僵菌mrjcbt190808及其在草地贪夜蛾防治方面的应用
CN112812976A (zh) * 2021-02-02 2021-05-18 广西壮族自治区农业科学院植物保护研究所 一种莱氏绿僵菌cdtlj1及其应用
CN113025505A (zh) * 2021-05-11 2021-06-25 福建省农业科学院植物保护研究所 一种莱氏绿僵菌及其在草地贪夜蛾蛹期的生物防治方法与应用
CN114181839A (zh) * 2021-12-08 2022-03-15 云南农业大学 一种莱氏野村菌NrSfadult202104菌株及其制备方法和应用
JP2023064110A (ja) * 2023-03-10 2023-05-10 住友化学株式会社 有害生物防除方法
CN116656507A (zh) * 2023-05-19 2023-08-29 吉林省农业科学院 一株莱氏绿僵菌MrS1Gz1-1及其在植物抗病虫中的应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103087924A (zh) * 2012-11-27 2013-05-08 河南省农业科学院 虫生真菌莱氏野村菌及其培养方法与应用
CN110669676A (zh) * 2019-10-25 2020-01-10 云南农业大学 莱氏绿僵菌mrjcbt190808及其在草地贪夜蛾防治方面的应用
CN112812976A (zh) * 2021-02-02 2021-05-18 广西壮族自治区农业科学院植物保护研究所 一种莱氏绿僵菌cdtlj1及其应用
CN113025505A (zh) * 2021-05-11 2021-06-25 福建省农业科学院植物保护研究所 一种莱氏绿僵菌及其在草地贪夜蛾蛹期的生物防治方法与应用
CN114181839A (zh) * 2021-12-08 2022-03-15 云南农业大学 一种莱氏野村菌NrSfadult202104菌株及其制备方法和应用
JP2023064110A (ja) * 2023-03-10 2023-05-10 住友化学株式会社 有害生物防除方法
CN116656507A (zh) * 2023-05-19 2023-08-29 吉林省农业科学院 一株莱氏绿僵菌MrS1Gz1-1及其在植物抗病虫中的应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHOUZHU LIU等: "Pathogenicity and in vivo Development of Metarhizium rileyi Against Spodoptera litura (Lepidoptera: Noctuidae) Larvae", BIOLOGICAL AND MICROBIAL CONTROL, vol. 112, no. 4, 26 April 2019 (2019-04-26), pages 1599 - 1601 *
YUEJIN PENG等: "Genetic Diversity and Virulence Variation of Metarhizium rileyi from Infected Spodoptera frugiperda in Corn Fields", MICROORGANISMS, 26 January 2024 (2024-01-26), pages 1 - 14 *
陶新娉 等: "莱氏绿僵菌对斜纹夜蛾的致病力及生理效应", 微生物学通报, vol. 44, no. 6, 20 June 2017 (2017-06-20), pages 1351 - 1355 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117925420A (zh) * 2024-03-14 2024-04-26 云南农业大学 一种莱氏绿僵菌Mryscm2308菌株及其培养方法和应用
CN117925420B (zh) * 2024-03-14 2024-06-07 云南农业大学 一种莱氏绿僵菌Mryscm2308菌株及其培养方法和应用

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