JP3256318B2 - 藍藻含有色素の分離法 - Google Patents
藍藻含有色素の分離法Info
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- JP3256318B2 JP3256318B2 JP06033393A JP6033393A JP3256318B2 JP 3256318 B2 JP3256318 B2 JP 3256318B2 JP 06033393 A JP06033393 A JP 06033393A JP 6033393 A JP6033393 A JP 6033393A JP 3256318 B2 JP3256318 B2 JP 3256318B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、藍藻に含まれるフィコ
シアニン、クロロフィル及びカロチノイドの色素の分離
法に関する。
シアニン、クロロフィル及びカロチノイドの色素の分離
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】藍藻は、分類学的には藍藻綱(Cyanophyc
eae)の中でスピルリナ属(Spirulina)に属し、もっとも
原始的な植物であり、乾燥スピルリナには、１０〜２０
重量％のフィコシアニン、０．２〜０．４重量％のカロ
チノイド、０．８〜２重量％のクロロフィルを含有して
いる。
eae)の中でスピルリナ属(Spirulina)に属し、もっとも
原始的な植物であり、乾燥スピルリナには、１０〜２０
重量％のフィコシアニン、０．２〜０．４重量％のカロ
チノイド、０．８〜２重量％のクロロフィルを含有して
いる。
【０００３】フィコシアニンは、フィコシアノビリン(P
hycocyanobilin) と呼ばれる色素部位とタンパク質と
が、チオエーテル結合で結ばれた色素タンパク質であ
り、色調がスカイブルーで、主に、冷菓、ガム、粉末ジ
ュース、ゼリー等に用いられている。
hycocyanobilin) と呼ばれる色素部位とタンパク質と
が、チオエーテル結合で結ばれた色素タンパク質であ
り、色調がスカイブルーで、主に、冷菓、ガム、粉末ジ
ュース、ゼリー等に用いられている。
【０００４】フィコシアニンをスピルリナ細胞から単離
する方法としては、スピルリナから直接抽出する方法
（特開昭５２−１３４０５８号公報）、限外濾過法によ
り色素タンパク質を分離する方法（特開昭５４−１０１
８３３号公報）、スピルリナ細胞を破壊し、１００〜１
７０℃で熱処理する方法（特開昭６３−１２０７６２号
公報）、１，０００〜１００，０００ルクスの光を照射
する方法（特開昭６３−１２０７６２号公報）、生の藍
藻にカルシウムイオンを含む水溶液を接触させて、イオ
ン差により色素を分離する方法（特開昭５５−１４４８
６８号公報）等が知られている。
する方法としては、スピルリナから直接抽出する方法
（特開昭５２−１３４０５８号公報）、限外濾過法によ
り色素タンパク質を分離する方法（特開昭５４−１０１
８３３号公報）、スピルリナ細胞を破壊し、１００〜１
７０℃で熱処理する方法（特開昭６３−１２０７６２号
公報）、１，０００〜１００，０００ルクスの光を照射
する方法（特開昭６３−１２０７６２号公報）、生の藍
藻にカルシウムイオンを含む水溶液を接触させて、イオ
ン差により色素を分離する方法（特開昭５５−１４４８
６８号公報）等が知られている。
【０００５】しかしながら、これらの方法では、得られ
たフィコシアニン中にクロロフィル等の他の色素も混入
し、純度が良好なフィコシアニンを得ることが困難であ
った。また、上記の方法では、培養したスピルリナのロ
ットの別、或は原料が乾燥試料か、或は生試料かによっ
てもフィコシアニンの収量が大きく異なるという欠点が
あった。
たフィコシアニン中にクロロフィル等の他の色素も混入
し、純度が良好なフィコシアニンを得ることが困難であ
った。また、上記の方法では、培養したスピルリナのロ
ットの別、或は原料が乾燥試料か、或は生試料かによっ
てもフィコシアニンの収量が大きく異なるという欠点が
あった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、藍藻
類に含まれるフィコシアニン、クロロフィル及びカロチ
ノイドのそれぞれの色素を純度よく、かつ安定して効率
よく単離することができる分離精製法を提供することに
ある。
類に含まれるフィコシアニン、クロロフィル及びカロチ
ノイドのそれぞれの色素を純度よく、かつ安定して効率
よく単離することができる分離精製法を提供することに
ある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明の第一は、藍藻の
抽出液から残渣を除いた上澄液を、凍結後、融解して残
渣を除き、この上澄液に含まれるフィコシアニンを等電
点沈殿させて採取することを特徴とする藍藻含有色素の
分離法である。
抽出液から残渣を除いた上澄液を、凍結後、融解して残
渣を除き、この上澄液に含まれるフィコシアニンを等電
点沈殿させて採取することを特徴とする藍藻含有色素の
分離法である。
【０００８】本発明の第二は、藍藻の抽出液から分離し
た残渣を有機溶媒で抽出し、これを０℃以下に冷却後、
融解し、その沈殿よりクロロフィルを、上澄液よりカロ
チノイドを分離することを特徴とする藍藻含有色素の分
離精製法である。
た残渣を有機溶媒で抽出し、これを０℃以下に冷却後、
融解し、その沈殿よりクロロフィルを、上澄液よりカロ
チノイドを分離することを特徴とする藍藻含有色素の分
離精製法である。
【０００９】以下、本発明を詳細に説明する。本発明に
用いる藍藻としては、藍藻綱スピルリナ属に属するもの
であれば、乾燥試料でも生試料でも用いることができ
る。
用いる藍藻としては、藍藻綱スピルリナ属に属するもの
であれば、乾燥試料でも生試料でも用いることができ
る。
【００１０】藍藻から含有色素を抽出するには、公知の
方法を使用することができるが、中でも、藍藻をリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）で抽出する方法が好ましい。得ら
れた抽出液は、遠心分離し、上澄液はフィコシアニンの
分離に、残渣はクロロフィル及びカロチノイドの分離に
用いられる。
方法を使用することができるが、中でも、藍藻をリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）で抽出する方法が好ましい。得ら
れた抽出液は、遠心分離し、上澄液はフィコシアニンの
分離に、残渣はクロロフィル及びカロチノイドの分離に
用いられる。
【００１１】上記上澄液からフィコシアニンを分離する
には、先ず上澄液を冷凍する。冷凍温度は、−５〜−８
０℃、好ましくは−２０℃以下である。冷凍時間は、３
時間以上が好ましい。
には、先ず上澄液を冷凍する。冷凍温度は、−５〜−８
０℃、好ましくは−２０℃以下である。冷凍時間は、３
時間以上が好ましい。
【００１２】次に、これを融解するとクロロフィルタン
パク質は沈殿するので、遠心分離してこの沈殿を除き、
この上澄液のｐＨを約５．０〜４．５に調節し、上澄液
中に含まれる微量のクロロフィルタンパク質を沈殿させ
て分離除去する。次に、この溶液のｐＨをフィコシアニ
ンの等電点である４．３〜３．３に調節することによ
り、フィコシアニンを沈殿させることができる。
パク質は沈殿するので、遠心分離してこの沈殿を除き、
この上澄液のｐＨを約５．０〜４．５に調節し、上澄液
中に含まれる微量のクロロフィルタンパク質を沈殿させ
て分離除去する。次に、この溶液のｐＨをフィコシアニ
ンの等電点である４．３〜３．３に調節することによ
り、フィコシアニンを沈殿させることができる。
【００１３】上記ｐＨ調節に用いる試薬としては、特に
制限はなく、例えば、クエン酸、酢酸等の有機酸；硫
酸、塩酸、リン酸等の無機酸を挙げることができ、好ま
しくはクエン酸、リン酸である。
制限はなく、例えば、クエン酸、酢酸等の有機酸；硫
酸、塩酸、リン酸等の無機酸を挙げることができ、好ま
しくはクエン酸、リン酸である。
【００１４】一方、藍藻の抽出液から、カロチノイド及
びクロロフィルを分離するには、上記残渣にアセトンの
ような有機溶媒を加え、これをソニケータ等を用いて粉
砕した後、遠心分離し、この上澄液にジオキサンのよう
な有機溶媒を加えて、０℃以下に冷凍した後、融解し、
クロロフィルタンパク質を沈殿物として得、カロチノイ
ドを上澄液中に得る冷凍温度は、０〜−８０℃、好まし
くは−２０℃以下である。冷凍時間は、３時間以上が好
ましい。
びクロロフィルを分離するには、上記残渣にアセトンの
ような有機溶媒を加え、これをソニケータ等を用いて粉
砕した後、遠心分離し、この上澄液にジオキサンのよう
な有機溶媒を加えて、０℃以下に冷凍した後、融解し、
クロロフィルタンパク質を沈殿物として得、カロチノイ
ドを上澄液中に得る冷凍温度は、０〜−８０℃、好まし
くは−２０℃以下である。冷凍時間は、３時間以上が好
ましい。
【００１５】
実施例１ 生のスピルリナ細胞５００g （乾燥重量１００g ）に、
５０mMリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２０００mlを加え、
４℃で１０時間静置して、スピルリナに含まれる色素を
抽出した。この抽出液を５０００rpm で１０分間遠心分
離し、主としてフィコシアニンを含む上澄液と、主とし
てクロロフィルを含む残渣に分離した。次に、この上澄
液を、−２０℃で一夜凍結した後、融解した。この融解
液を９０００rpm で３０分間遠心分離し、緑色の沈殿物
を除去した。なお、この沈殿物から緑色の色素をアセト
ンで抽出し、その吸収スペクトルを測定したところ、該
色素は、６６４nmに最大波長を示し、クロロフィルであ
ることが確認された。
５０mMリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２０００mlを加え、
４℃で１０時間静置して、スピルリナに含まれる色素を
抽出した。この抽出液を５０００rpm で１０分間遠心分
離し、主としてフィコシアニンを含む上澄液と、主とし
てクロロフィルを含む残渣に分離した。次に、この上澄
液を、−２０℃で一夜凍結した後、融解した。この融解
液を９０００rpm で３０分間遠心分離し、緑色の沈殿物
を除去した。なお、この沈殿物から緑色の色素をアセト
ンで抽出し、その吸収スペクトルを測定したところ、該
色素は、６６４nmに最大波長を示し、クロロフィルであ
ることが確認された。
【００１６】次に、上澄液と、融解液から沈殿物を除去
した上澄液のそれぞれについて、クロロフィルの吸光度
Ｅ680 （波長：６８０nm）に対するフィコシアニンの吸
光度Ｅ620 （波長：６２０nm）の比（Ｅ620 ／Ｅ680 ）
を測定した。その結果、前者のＥ620 ／Ｅ680 は４．５
であるのに対し、後者のＥ620 ／Ｅ680 は６．１であ
り、上澄液を凍結後、融解することにより、クロロフィ
ルタンパク質を沈殿物として分離できることが認められ
た。
した上澄液のそれぞれについて、クロロフィルの吸光度
Ｅ680 （波長：６８０nm）に対するフィコシアニンの吸
光度Ｅ620 （波長：６２０nm）の比（Ｅ620 ／Ｅ680 ）
を測定した。その結果、前者のＥ620 ／Ｅ680 は４．５
であるのに対し、後者のＥ620 ／Ｅ680 は６．１であ
り、上澄液を凍結後、融解することにより、クロロフィ
ルタンパク質を沈殿物として分離できることが認められ
た。
【００１７】実施例２ 実施例１の、融解液から沈殿物を除去した液に、１M ク
エン酸を、ｐＨが４．５になるまで滴下し、残存するク
ロロフィルタンパク質の沈殿物を析出させた。この沈殿
物を９０００rpm で１０分間遠心分離して除去した後、
１M クエン酸を滴下してｐＨが４．０になるように調整
してフィコシアニンを等電点沈殿させた。これを９００
０rpm で３０分間遠心分離し、この沈殿物を５０mMリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）５００mlに溶解し、これを透析
した後、凍結乾燥して粉末状のフィコシアニン６．９g
を得た。
エン酸を、ｐＨが４．５になるまで滴下し、残存するク
ロロフィルタンパク質の沈殿物を析出させた。この沈殿
物を９０００rpm で１０分間遠心分離して除去した後、
１M クエン酸を滴下してｐＨが４．０になるように調整
してフィコシアニンを等電点沈殿させた。これを９００
０rpm で３０分間遠心分離し、この沈殿物を５０mMリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）５００mlに溶解し、これを透析
した後、凍結乾燥して粉末状のフィコシアニン６．９g
を得た。
【００１８】得られたフィコシアニンの０．１％水溶液
について吸光度を測定した。吸収スペクトルのチャート
を図１に示す。吸光度は、波長６２１nmで２．８５であ
った。これに対し、同様にして測定したリナブルーＡ
（大日本インキ（株）製、フィコシアニン）の吸光度
は、０．６であり、本実施例で得られたフィコシアニン
の吸光度は、リナブルーＡの４．７倍であった。
について吸光度を測定した。吸収スペクトルのチャート
を図１に示す。吸光度は、波長６２１nmで２．８５であ
った。これに対し、同様にして測定したリナブルーＡ
（大日本インキ（株）製、フィコシアニン）の吸光度
は、０．６であり、本実施例で得られたフィコシアニン
の吸光度は、リナブルーＡの４．７倍であった。
【００１９】また、実施例１の藍藻抽出液を遠心分離し
て得られた上澄液と、本実施例で得られたフィコシアニ
ンの０．１％水溶液のそれぞれについて、クロロフィル
の吸光度Ｅ680 （波長：６８０nm）に対するフィコシア
ニンの吸光度Ｅ620 （波長：６２０nm）の比（Ｅ620 ／
Ｅ680 ）を測定した。その結果、前者のＥ620 ／Ｅ680
は４．５であるのに対し、後者のＥ620 ／Ｅ680 は１
６．２であり、劇的にフィコシアニンとクロロフィルと
を分離できることが認められた。
て得られた上澄液と、本実施例で得られたフィコシアニ
ンの０．１％水溶液のそれぞれについて、クロロフィル
の吸光度Ｅ680 （波長：６８０nm）に対するフィコシア
ニンの吸光度Ｅ620 （波長：６２０nm）の比（Ｅ620 ／
Ｅ680 ）を測定した。その結果、前者のＥ620 ／Ｅ680
は４．５であるのに対し、後者のＥ620 ／Ｅ680 は１
６．２であり、劇的にフィコシアニンとクロロフィルと
を分離できることが認められた。
【００２０】実施例３ 実施例１の藍藻抽出液から分離した残渣に、アセトン９
００mlを加え、ソニケータで２０分間スピルリナ細胞を
破壊し、細胞に含まれるクロロフィル及びカロチノイド
を抽出した。この抽出液を６０００rpm で１０分間遠心
分離し、得られた上澄液にジオキサン１４４mlを加え、
−２０℃に冷却後、遠心し、沈殿物と上澄液に分離し
た。沈殿物を好ましくはエタノールで洗浄後、真空乾燥
してクロロフィル３９８mgを得た。また上澄液からはカ
ロチノイド２４５mgを得た。本実施例で得られたクロロ
フィルのエタノール溶液の吸収スペクトルのチャートを
図２に、カロチノイドのチャートを図３に示す。
００mlを加え、ソニケータで２０分間スピルリナ細胞を
破壊し、細胞に含まれるクロロフィル及びカロチノイド
を抽出した。この抽出液を６０００rpm で１０分間遠心
分離し、得られた上澄液にジオキサン１４４mlを加え、
−２０℃に冷却後、遠心し、沈殿物と上澄液に分離し
た。沈殿物を好ましくはエタノールで洗浄後、真空乾燥
してクロロフィル３９８mgを得た。また上澄液からはカ
ロチノイド２４５mgを得た。本実施例で得られたクロロ
フィルのエタノール溶液の吸収スペクトルのチャートを
図２に、カロチノイドのチャートを図３に示す。
【００２１】
【発明の効果】本発明の分離法は、藻類に含まれるフィ
コシアニン、クロロフィル及びカロチノイドのそれぞれ
の色素を純度よく、かつ安定して効率よく単離すること
ができる。
コシアニン、クロロフィル及びカロチノイドのそれぞれ
の色素を純度よく、かつ安定して効率よく単離すること
ができる。
【図１】フィコシアニンの吸収スペクトルのチャートで
ある。
ある。
【図２】クロロフィルの吸収スペクトルのチャートであ
る。
る。
【図３】カロチノイドの吸収スペクトルのチャートであ
る。
る。
フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭59−213767（ＪＰ，Ａ) 特開 昭64−27446（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−109787（ＪＰ，Ａ) 特開 昭55−144868（ＪＰ，Ａ) 特開 昭52−134058（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−120762（ＪＰ，Ａ) 特開 昭54−101833（ＪＰ，Ａ) 特開 昭55−157659（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−68070（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−146961（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−207567（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−232463（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C09B 61/00
Claims (1)
- 【請求項１】藍藻の抽出液から残渣１を除いた上澄液２
を、凍結後、融解して、さらに残渣を除いた後の上澄液
２に含まれるフィコシアニンを等電点沈殿させて分離採
取し、一方、前記抽出液から分離した残渣１を有機溶媒
で抽出し、これを０℃以下に冷却後、融解し、その沈殿
３よりクロロフィルを、その上澄液４よりカロチノイド
を分離することを特徴とする、藍藻からフィコシアニ
ン、クロロフィル及びカロチノイドを分離する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06033393A JP3256318B2 (ja) | 1993-03-19 | 1993-03-19 | 藍藻含有色素の分離法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06033393A JP3256318B2 (ja) | 1993-03-19 | 1993-03-19 | 藍藻含有色素の分離法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06271783A JPH06271783A (ja) | 1994-09-27 |
| JP3256318B2 true JP3256318B2 (ja) | 2002-02-12 |
Family
ID=13139145
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP06033393A Expired - Fee Related JP3256318B2 (ja) | 1993-03-19 | 1993-03-19 | 藍藻含有色素の分離法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3256318B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3460006A4 (en) * | 2016-06-28 | 2019-06-19 | DIC Corporation | COLORING MATERIAL AND METHOD FOR PRODUCING COLORING MATERIAL |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3914519B2 (ja) * | 2003-06-06 | 2007-05-16 | 株式会社スピルリナ研究所 | グリセロ糖脂質化合物を含有してなるリパーゼ活性阻害剤 |
| JP4677250B2 (ja) * | 2005-02-24 | 2011-04-27 | Ｄｉｃライフテック株式会社 | 藍藻類からのフィコシアニンの抽出方法 |
| EP3351596A1 (en) * | 2011-06-30 | 2018-07-25 | E. & J. Gallo Winery | Natural crystalline colorant and process for production |
| FR3025202A1 (fr) * | 2014-08-28 | 2016-03-04 | Algobiotech | Procede d'obtention d'un precipite stable enrichi en phycobili proteines |
| FR3064635B1 (fr) * | 2017-03-30 | 2021-07-23 | Fermentalg | Purification des phycobiliproteines |
| CN111417315B (zh) * | 2017-12-08 | 2024-03-22 | Dic株式会社 | 色素材料水溶液、色素材料水溶液的制造方法和蓝色着色饮料 |
| FR3091703B1 (fr) * | 2019-01-11 | 2021-02-12 | Fermentalg | Procédé d’extraction de phycocyanines |
-
1993
- 1993-03-19 JP JP06033393A patent/JP3256318B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3460006A4 (en) * | 2016-06-28 | 2019-06-19 | DIC Corporation | COLORING MATERIAL AND METHOD FOR PRODUCING COLORING MATERIAL |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06271783A (ja) | 1994-09-27 |
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Legal Events
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