CN111568818A - 一种含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜组合物及其制备方法 - Google Patents
一种含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜组合物及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜组合物及其制备方法和应用。按照质量百分数计，该冻干面膜组合物是由如下的组分组成：水解藻提取物(藻蓝蛋白提取物)30.0％～40.0％、甘露醇3.0％～8.0％、甘油4.0％～9.0％、水解蚕丝亮肤肽3.0％～8.0％、脱色龙胆抗刺激因子0.3％～3.0％、秋葵水解糖蛋白0.06％～0.1％、神经酰胺组合物0.1％～2.0％、余量为去离子水。本发明的冻干面膜组合物能吸收蓝光起到高效抗氧化、日常光保护的效果，长效益肤，能够保护肌肤、保护胶原蛋白，增强肌肤弹性，且能够修复UV/蓝光诱导的晒伤细胞，减少60％的灼伤细胞。其制备方法包括：粉碎、提取、过滤、纯化以及配制。本发明不仅操作简单方便，而且还具有稳定性好、成本低廉、效果突出、应用简单的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种冻干面膜组合物及其制备方法，属于化妆品技术领域，特别涉及一种含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜组合物及其制备方法。
背景技术
蓝藻又名蓝绿藻(blue-green algae)，是一类进化历史悠久、革兰氏染色阴性、无鞭毛、含叶绿素a，但不含叶绿体(区别于真核生物的藻类)、能进行产氧性光合作用的大型单细胞原核生物。蓝藻广泛分布于自然界，包括各种水体、土壤中和部分生物体内外，甚至在岩石表面和其他恶劣环境(高温、低温、盐湖、荒漠和冰原等)中都可找到它们的踪迹。蓝藻是最早的光合放氧生物，对地球表面从无氧的大气环境变为有氧环境起了巨大的作用。有不少蓝藻(如鱼腥藻)可以直接固定大气中的氮，以提高土壤肥力，使作物增产。还有的蓝藻为人们的食品，如著名的发菜和普通念珠藻(地木耳)、螺旋藻等。
蓝藻中含有有效物质包括氨基酸、多糖、藻蓝蛋白、藻毒素。藻蓝蛋白是存在于蓝藻、红藻、隐藻中的一类水溶性捕光色素蛋白。在欧美、日本等发达国家，藻蓝蛋白已被广泛用作食品和化妆品的高级天然色素。近年来的研究表明，藻蓝蛋白还具有抗癌、促进血细胞再生、抗氧化和消炎等功效。此外，藻蓝蛋白的荧光量子产率高，强度比常用的荧光素强30倍，可作为标记物与生物素、亲和素、DNA分子和各种单克隆抗体结合制成荧光探针。因此，藻蓝蛋白是一种在食品、药物、科研等相关领域中有着重要应用价值的天然蛋白质。
目前，藻蓝蛋白作为一类水溶性捕光色素蛋白应用于护肤品行业仍较为少见，如何利用其进行创新应用，得到全新的护肤品、面膜产品，是当前领域技术人员需要解决的技术难题。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明目的是提供一种含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜组合物，其能吸收蓝光起到高效抗氧化、日常光保护的效果，长效益肤，能够保护肌肤、保护胶原蛋白，增强肌肤弹性，且能够修复UV/蓝光诱导的晒伤细胞。
本发明的另一目的是提供一种上述含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜组合物的制备方法，通过超声粉碎、提取、过滤、纯化及配制工艺，不仅操作简单方便，还具有稳定性好、成本低廉、应用简单的优点。
本发明的另一目的是提供一种上述含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜的制备方法，通过冻干技术做面膜，可以不添加防腐剂，做出安全无刺激，无防腐剂的产品。为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供一种含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜组合物，按照组合物总的质量百分数计，所述冻干面膜组合物是由如下的组分组成：
水解藻提取物(藻蓝萃)30.0％～40.0％；所述水解藻提取物(藻蓝萃)为藻蓝蛋白提取物；
甘露醇3.0％～8.0％；
甘油4.0％～9.0％
水解蚕丝亮肤肽(雪芙)3.0％～8.0％；
脱色龙胆抗刺激因子0.3～3.0％
秋葵水解糖蛋白(SILKY-WSP)0.06％～0.1％；
神经酰胺组合物0.1％～2.0％
余量为去离子水。
进一步地，按照组合物总的质量百分数计，所述冻干面膜组合物是由如下的组分组成：
水解藻提取物(藻蓝萃)35.0％～40.0％；所述水解藻提取物(藻蓝萃)为藻蓝蛋白提取物；
甘露醇3.0％～5.0％；
甘油5.0％～7.0％
水解蚕丝亮肤肽(雪芙)3.0％～6.0％；
脱色龙胆抗刺激因子0.5～2.0％
秋葵水解糖蛋白(SILKY-WSP)0.08％～0.1％；
神经酰胺组合物0.5％～2.0％
余量为去离子水。
更进一步地，按照组合物总的质量百分数计，所述冻干面膜组合物是由如下的组分组成：
水解藻提取物(藻蓝萃)36.0％；所述水解藻提取物(藻蓝萃)为藻蓝蛋白提取物；
甘露醇5.0％；
甘油6.0％
水解蚕丝亮肤肽(雪芙)5.0％；
脱色龙胆抗刺激因子1.0％
秋葵水解糖蛋白(SILKY-WSP)0.08％；
神经酰胺组合物2.0％
余量为去离子水。
进一步地，所述水解蚕丝亮肤肽(雪芙)通过萃取得到，具体为将蚕丝采用凝胶柱层析技术进行分离提纯，以20％的乙醇/水作梯度洗脱，并结合液相色谱分离纯化得到水解蚕丝亮肤肽(雪芙)。
进一步地，所述神经酰胺组合物包含以下组分：神经酰胺1 0.2％～0.5％、神经酰胺20.2％～0.5％、神经酰胺3 0.5％～1.0％、神经酰胺6II 0.2％～0.5％的一种或多种。
进一步地，所述水解藻提取物(藻蓝萃)是通过以下步骤制得的：
1)粉碎：取蓝藻藻液进行超声粉碎，离心分离，去除细胞碎片，过滤，得到过滤液；
2)提取：在过滤液中加入去离子水，加入柠檬酸钠、十二烷基硫酸钠、磷酸二氢钠进行搅拌提取操作，去除残渣后得到粗提液；
3)过滤：粗提液沉降后过滤得到滤液；
4)微滤：滤液经微滤操作得到渗出液，然后加水继续微滤，直至渗出液的总量等于滤液在步骤3)中得到的初始量；
5)纯化：将滤液与吸附填料混合搅拌后，固液分离，用磷酸钠缓冲溶液洗脱固形物，收集洗脱液。
6)超滤：将步骤5)得到的洗脱液经超滤操作，除去清液，留下浓液；
7)配制：将上述步骤中的浓液，用去离子水配成相当于生药重量比40％的药液。
更进一步地，步骤2)中，所述柠檬酸钠、十二烷基硫酸钠、磷酸二氢钠的质量百分比分别为：0.5％-2％，1％-2％，0.1％-0.5％；提取时间为3-4h。
更进一步地，步骤4)中，过滤膜的孔径为30nm，微滤控制的压力为3-4bar，在50-80℃温度下，微滤操作至渗出液不再渗出为止。
更进一步地，步骤6)中，过滤膜的截留分子量控制在50000D，超滤控制的压力10-15bar，在50-90℃温度下进行超滤操作。
更进一步地，步骤7)中，还进行灭菌处理，在90℃灭菌30min。
本发明提供如上所述的含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜的制备方法，包括以下步骤：
1)将甘露醇加入水相锅中，开启搅拌，依次加入水解蚕丝亮肤肽(雪芙)、使用甘油预分散好秋葵水解糖蛋白(SILKY-WSP)、脱色龙胆抗刺激因子和神经酰胺组合物，升温至80-85℃，保温，直到完全溶解；
2)乳化锅的搅拌速度保持在300-500转/分钟，将上述步骤1)的组份通过真空吸入，低速均质，开始降温；降到50-55℃时，将水解藻提取物(藻蓝萃)加入乳化锅中，开启搅拌，搅拌均匀；
3)搅拌降温至40-45℃以下时，搅拌15-30分钟直至均匀；降至35-38℃时过滤，检验合格，出料；
4)将制品浸润至面膜布上，降温至-40～-65℃进行预冻，在此温度下停留1-2小时，使制品彻底冻结；
5)抽真空，进行冷冻干燥，温度控制至-40～-68℃，气压控制在12.88～0.34Pa，以提供水升华所需热量，真空泵抽气至样品外观基本干燥，继续延长干燥0.5-1小时，以彻底消除制品中的残留冰晶及制品干燥的不均衡性；
6)将制品温度迅速上升到-10～-20℃，进行解吸干燥，去除物料中的结合水和吸附于干燥层中的水，并在该温度下保持2小时，即可结束冻干装袋封口，得所述面膜。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明含有的水解藻提取物(藻蓝萃)为冰川雪藻中天然蛋白成分藻蓝蛋白的萃取物，安全，能吸收蓝光起到高效抗氧化、日常光保护的效果，长效益肤，能够保护肌肤、保护胶原蛋白，增强肌肤弹性，且能够修复UV/蓝光诱导的晒伤细胞，减少60％的灼伤细胞。本品水溶，化妆品任何配方均可使用。本配方是：其原材料包括水解藻提取物(藻蓝萃)100％，余量为水。
该冻干面膜组合物的制备方法包括：粉碎、提取、过滤、纯化以及配制。本发明不仅操作简单方便，而且还具有稳定性好、成本低廉、应用简单的优点。使用水解藻提取物(藻蓝萃)制备的冻干面膜对水解藻提取物(藻蓝萃)的剂型和使用范围进行了创新。
本发明使用的蓝藻，是从200多种微藻中筛选出含有高产油脂基因的微藻——冰川雪藻。将冰川雪藻进行平板培养，筛选长势良好的单菌落，验证其油脂产量及藻蓝蛋白含量，最终选定的油脂产量及藻蓝蛋白含量均高的优势藻种。我们将其所产油脂用作生物燃料，而去油的藻体进行藻蓝蛋白提取，应用于护肤产品的制作，对微藻进行充分利用。
附图说明
图1为效果试验例1中含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜的吸收光谱图谱；
图2为效果试验例2中水解藻提取物(藻蓝萃)蓝光吸收实验照片；
图3为效果试验例3中含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜修复晒伤细胞效果图。
具体实施方式
本发明使用的蓝藻，是从200多种微藻中筛选出含有高产油脂基因的微藻——冰川雪藻。将冰川雪藻进行平板培养，筛选长势良好的单菌落，验证其油脂产量及藻蓝蛋白含量，最终选定的油脂产量及藻蓝蛋白含量均高的优势藻种。我们将其所产油脂用作生物燃料，而去油的藻体进行藻蓝蛋白提取，应用于护肤产品的制作，对微藻进行充分利用。
本发明公开了一种含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜组合物及其制备方法。按照组合物总的质量百分数计，该冻干面膜组合物包含的原料组分有：水解藻提取物(藻蓝萃)(藻蓝蛋白提取物)30.0％～40.0％、甘露醇3.0％～8.0％、甘油4.0％～9.0％、水解蚕丝亮肤肽(雪芙)3.0％～8.0％、脱色龙胆抗刺激因子0.3～3.0％、秋葵水解糖蛋白(SILKY-WSP)0.06％～0.1％、神经酰胺组合物0.1％～2.0％、余量为去离子水。
所述神经酰胺组合物包含以下组分：神经酰胺1 0.2％～0.5％、神经酰胺2 0.2％～0.5％、神经酰胺3 0.5％～1.0％、神经酰胺6II 0.2％～0.5％的一种或多种。
所述水解蚕丝亮肤肽(雪芙)通过萃取得到，具体为将蚕丝采用凝胶柱层析技术进行分离提纯，以20％的乙醇/水作梯度洗脱，并结合液相色谱分离纯化得到水解蚕丝亮肤肽(雪芙)。
本发明含有的水解藻提取物(藻蓝萃)为冰川雪藻中天然蛋白成分藻蓝蛋白的萃取物，安全，能吸收蓝光起到高效抗氧化、日常光保护的效果，长效益肤，能够保护肌肤、保护胶原蛋白，增强肌肤弹性，且能够修复UV/蓝光诱导的晒伤细胞，减少60％的灼伤细胞。本品水溶，化妆品任何配方均可使用。本配方是：其原材料包括水解藻提取物(藻蓝萃)100％，余量为水。
水解蚕丝亮肤肽(雪芙)是一种抗氧化能力超强的天然氧化剂，采用电子顺磁共振(ESR)、化学发光(BCL)和分光光度法(SPM)检测的不同体系中水解蚕丝亮肤肽(雪芙)能大大清除超氧阴离子。水解蚕丝亮肤肽(雪芙)还能抑制皮肤线粒体中脂氧合酶和脂质过氧化作用，以清除体内过量自由基，从而起衰老效应，延缓衰老的生成。
神经酰胺在化妆品中作皮肤调理剂、抗氧化剂和保湿剂的作用，它能在完善皮脂膜的同时抑制活跃的皮脂腺分泌，使肌肤水油平衡，增强肌肤的自我保护机能。该成分对肌肤保湿修护有良好作用，是角质层中重要的活肤成分，能增强皮肤屏障，重建细胞。
秋葵水解糖蛋白是一种天然水解糖蛋白成分，大分子，它和构成皮肤角质层的物质结构相近，能很快渗透进皮肤，帮助皮肤天然保护层的更新，能促进自然水合作用的平衡，和角质层中的水结合，形成一种网状结构，锁住水分。同时带来丝滑肤感。
受刺激的皮肤需要龙胆抗刺激因子，有研究表明，擦含有龙胆抗刺激因子成分的产品能减少红肿和炎症，起到增强皮肤屏障并帮助受损肌肤缓解干燥状态的作用。
该冻干面膜组合物的制备方法包括：粉碎、提取、过滤、纯化以及配制。本发明不仅操作简单方便，而且还具有稳定性好、成本低廉、应用简单的优点。使用水解藻提取物(藻蓝萃)制备的冻干面膜对水解藻提取物(藻蓝萃)的剂型和使用范围进行了创新。
以下通过具体较佳实施例结合效果试验例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不仅限于以下的实施例。
实施例1水解藻提取物(藻蓝萃)的制备
一种水解藻提取物(藻蓝萃)的制备方法，包括如下操作步骤：
1、粉碎：在型号为WF-180的万能粉碎机小型粉碎机(厂家为江阴盟创机械设备有限公司)内加入培育的原材料蓝藻藻液进行超声粉碎操作，离心分离，去除细胞碎片，过滤，得到过滤液。
2、提取：将50kg的原材料(即50kg粉碎后的蓝藻滤液)加入到500kg的去离子水中，然后再加入4kg柠檬酸钠、1kg磷酸二氢钠，搅拌提取3h，得到粗提液。具体生产过程中需要的设备也可以采用专利号为CN201620115696.7的一种植物提取装置。
3、过滤：将步骤2中的粗提液静置30min，此时粗提液中物质沉降后经2μm滤膜进行过滤，得滤液。
4、微滤：将上述滤液用截留孔径30nm的过滤膜，操作压力为4bar，温度保持在60℃，微滤至渗出液不再渗出为止，随后补充等量的水继续微滤，直至渗出液的量等于起始滤液的量。
5、纯化：将滤液与吸附填料按照1：1.2的质量比，于50℃条件下混合搅拌10min后，固液分离，用浓度为0.01mol/L的磷酸钠缓冲溶液洗脱固形物，收集洗脱液。
6、超滤：把步骤5中得到的洗脱液，采用截留分子量为50000D的过滤膜，操作压力为12bar，温度在60℃下进行超滤操作，除去过滤下来的清液，留下浓液。
7、配制：将上述步骤中的浓液，用去离子水配成相当于生药的40％，并在90℃灭菌30min。
实施例2水解藻提取物(藻蓝萃)的制备
一种水解藻提取物(藻蓝萃)的制备方法，包括如下操作步骤：
1、粉碎：在型号为WF-180的万能粉碎机小型粉碎机(厂家为江阴盟创机械设备有限公司)内加入培育的原材料蓝藻藻液进行超声粉碎操作，离心分离，去除细胞碎片，过滤，得到过滤液。
2、提取：将50kg的原材料(即50kg粉碎后的蓝藻滤液)加入到400kg的去离子水中，然后再加入3kg柠檬酸钠、2kg磷酸二氢钠，搅拌提取3h，得到粗提液。具体生产过程中需要的设备也可以采用专利号为CN201620115696.7的一种植物提取装置。
3、过滤：将步骤2中的粗提液静置30min，此时粗提液中物质沉降后经2μm滤膜进行过滤，得滤液。
4、微滤：将上述滤液用截留孔径30nm的过滤膜，操作压力为4bar，温度保持在70℃，微滤至渗出液不再渗出为止，随后补充等量的水继续微滤，直至渗出液的量等于起始滤液的量。
5、纯化：将滤液与吸附填料按照1：1.2的质量比，于50℃条件下混合搅拌10min后，固液分离，用浓度为0.01mol/L的磷酸钠缓冲溶液洗脱固形物，收集洗脱液。
6、超滤：把步骤5中得到的洗脱液，采用截留分子量为50000D的过滤膜，操作压力为12bar，温度在70℃下进行超滤操作，除去过滤下来的清液，留下浓液。
7、配制：将上述步骤中的浓液，用去离子水配成相当于生药的40％，并在90℃灭菌30min。
实施例3水解藻提取物(藻蓝萃)的制备
一种水解藻提取物(藻蓝萃)的制备方法，包括如下操作步骤：
1、粉碎：在型号为WF-180的万能粉碎机小型粉碎机(厂家为江阴盟创机械设备有限公司)内加入培育的原材料蓝藻藻液进行超声粉碎操作，离心分离，去除细胞碎片，过滤，得到过滤液。
2、提取：将60kg的原材料(即60kg粉碎后的蓝藻滤液)加入到500kg的去离子水中，然后再加入5kg柠檬酸钠、2kg磷酸二氢钠，搅拌提取3h，得到粗提液。具体生产过程中需要的设备也可以采用专利号为CN201620115696.7的一种植物提取装置。
3、过滤：将步骤2中的粗提液静置30min，此时粗提液中物质沉降后经2μm滤膜进行过滤，得滤液。
4、微滤：将上述滤液用截留孔径30nm的过滤膜，操作压力为4bar，温度保持在55℃，微滤至渗出液不再渗出为止，随后补充等量的水继续微滤，直至渗出液的量等于起始滤液的量。
5、纯化：将滤液与吸附填料按照1：1.2的质量比，于50℃条件下混合搅拌10min后，固液分离，用浓度为0.01mol/L的磷酸钠缓冲溶液洗脱固形物，收集洗脱液。
6、超滤：把步骤5中得到的洗脱液，采用截留分子量为50000D的过滤膜，操作压力为12bar，温度在55℃下进行超滤操作，除去过滤下来的清液，留下浓液。
7、配制：将上述步骤中的浓液，用去离子水配成相当于生药的40％，并在90℃灭菌30min。
实施例4含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜的制备
一种含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜，按照组合物总的质量百分数计，该冻干面膜组合物包含的原料组分有：
实施例1的水解藻提取物(藻蓝萃)(藻蓝蛋白提取物)35.0％、甘露醇3.0％、甘油5.0％、秋葵水解糖蛋白(SILKY-WSP)0.08％、水解蚕丝亮肤肽(雪芙)3.0％、脱色龙胆抗刺激因子1.5％、神经酰胺组合物2.0％(神经酰胺1 0.5％、神经酰胺2 0.5％、神经酰胺30.5％、神经酰胺6II 0.5％)、余量为去离子水。
含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜的制备方法，包括以下步骤：
1)将甘露醇加入水相锅中，开启搅拌，依次加入水解蚕丝亮肤肽(雪芙)、使用甘油预分散秋葵水解糖蛋白(SILKY-WSP)和脱色龙胆抗刺激因子，升温至82℃，保温，直到完全溶解；
2)乳化锅的搅拌速度保持在350转/分钟，将上述步骤1)的组份通过真空吸入，低速均质，开始降温；降到55℃时，将水解藻提取物(藻蓝萃)加入乳化锅中，开启搅拌，搅拌均匀；
3)搅拌降温至45℃以下时，依次加入防腐剂，搅拌15分钟直至均匀；降至37℃时过滤，检验合格，出料；
4)将制品浸润至面膜布上，降温至-40℃进行预冻，在此温度下停留1～2小时，使制品彻底冻结；
5)抽真空，进行冷冻干燥，温度控制至-40℃，气压控制在12.88Pa，以提供水升华所需热量，真空泵抽气至样品外观基本干燥，继续延长干燥0.5-1小时，以彻底消除制品中的残留冰晶及制品干燥的不均衡性；
6)将制品温度迅速上升到-10℃，进行解吸干燥，去除物料中的结合水和吸附于干燥层中的水，并在该温度下保持3小时，即可结束冻干装袋封口，得所述面膜。
实施例5含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜的制备
一种含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜，按照组合物总的质量百分数计，该冻干面膜组合物包含的原料组分有：
实施例2的水解藻提取物(藻蓝萃)(藻蓝蛋白提取物)38.0％、甘露醇5.0％、甘油6.0％、水解蚕丝亮肤肽(雪芙)5.0％、脱色龙胆抗刺激因子2.0％、秋葵水解糖蛋白(SILKY-WSP)0.1％、神经酰胺组合物1.5％(神经酰胺1 0.4％、神经酰胺2 0.4％、神经酰胺30.3％、神经酰胺6II 0.4％)、余量为去离子水。
含有水解藻提取物(藻蓝萃)的冻干面膜的制备方法，包括以下步骤：
1)将甘露醇加入水相锅中，开启搅拌，依次加入水解蚕丝亮肤肽(雪芙)、使用甘油预分散秋葵水解糖蛋白(SILKY-WSP)和脱色龙胆抗刺激因子，升温至82℃，保温，直到完全溶解；
2)乳化锅的搅拌速度保持在450转/分钟，将上述步骤1)的组份通过真空吸入，低速均质，开始降温；降到50℃时，将榆树皮萃取物加入乳化锅中，开启搅拌，搅拌均匀；
3)搅拌降温至40℃以下时，依次加入防腐剂，搅拌15分钟直至均匀；降至38℃时过滤，检验合格，出料；
4)将制品浸润至面膜布上，降温至-55℃进行预冻，在此温度下停留1～2小时，使制品彻底冻结；
5)抽真空，进行冷冻干燥，加热至-45℃、气压控制在2.98Pa以提供水升华所需热量，真空泵抽气至样品外观基本干燥，继续延长干燥0.5～1小时，以彻底消除制品中的残留冰晶及制品干燥的不均衡性；
6)将制品温度迅速上升到-18℃，进行解吸干燥，去除物料中的结合水和吸附于干燥层中的水，并在该温度下保持2小时，即可结束冻干装袋封口，得所述面膜。
实施例6含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜的制备
一种含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜，按照组合物总的质量百分数计，该冻干面膜组合物包含的原料组分有：
实施例3的水解藻提取物(藻蓝萃)(藻蓝蛋白提取物)40.0％、甘露醇8.0％、甘油7％、水解蚕丝亮肤肽(雪芙)6.0％、脱色龙胆抗刺激因子0.8％、秋葵水解糖蛋白(SILKY-WSP)0.06％、神经酰胺组合物2.0％(神经酰胺1 0.4％、神经酰胺2 0.4％、神经酰胺30.8％、神经酰胺6II 0.4％)、余量为去离子水。
含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜的制备方法，包括以下步骤：
1)将甘露醇加入水相锅中，开启搅拌，依次加入水解蚕丝亮肤肽(雪芙)、使用甘油预分散秋葵水解糖蛋白(SILKY-WSP)和脱色龙胆抗刺激因子，升温至82℃，保温，直到完全溶解；
2)乳化锅的搅拌速度保持在500转/分钟，将上述步骤1)的组份通过真空吸入，低速均质，开始降温；降到53℃时，将榆树皮萃取物加入乳化锅中，开启搅拌，搅拌均匀；
3)搅拌降温至42℃以下时，依次加入防腐剂，搅拌15分钟直至均匀；降至35℃时过滤，检验合格，出料；
4)将制品浸润至面膜布上，降温至-65℃进行预冻，在此温度下停留1～2小时，使制品彻底冻结；
5)抽真空，进行冷冻干燥，加热至-60℃气压控制在1.08Pa以提供水升华所需热量，真空泵抽气至样品外观基本干燥，继续延长干燥0.5～1小时，以彻底消除制品中的残留冰晶及制品干燥的不均衡性；
6)将制品温度迅速上升到-20℃，进行解吸干燥，去除物料中的结合水和吸附于干燥层中的水，并在该温度下保持2小时，即可结束冻干装袋封口，得所述面膜。
以下为效果应用试验例部分的内容。
效果试验例1吸收光谱实验
使用光谱仪(紫外可见光分光光度计，上海光谱仪器有限公司)，调节实验需要的参数，即波长范围为200～780nm，间隔采样0.5nm。使用空白样品(去离子水)进行基线校准；使用标准品进行标准曲线测定。
将试样实施例4-6所得产品移入比色皿(加量约2/3)，放到比色槽中，扫描保存图谱。
检测实施例4-6所得产品的吸收光谱，平均值如下图1所示。由图1可见，含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜吸收光谱在蓝光范围，最高值位于455nm，刚好在可见光区间内。
效果试验例2蓝光吸收实验
使用防蓝光测试笔(义务百千泓电子有限公司)将蓝色光束射向水解藻提取物(藻蓝萃)，水解藻提取物(藻蓝萃)后放置色素溶液(0.01％柠檬黄，武汉祥迪食品配料有限公司)作为检验，水解藻提取物(藻蓝萃)直接使用纯净水稀释至0.1％，对照组设为水，如下图2所示。
由图2可见，含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜能够有效吸收蓝光。
效果试验例3晒后修复实验
在vivo小鼠上进行实验，使用UV/蓝光剂量为剂量：20J/m2。设立2个实验组、1个对照组，第1组小鼠为对照实验，不进行UV/蓝光照射，第2组小鼠进行3h UV/蓝光照射，第3组小鼠在3h UV/蓝光照射后使用本发明的含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜。使用KOSTER UMC 800TFL UMC 800TFL生物正置荧光显微镜拍摄，结果见图3小鼠切片照片。
小鼠皮肤免疫组化染色实验步骤：
1.新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片(也可-80℃保存)，厚度为5～6μm。
2.载玻片可不打底，裱片后，立即用电吹风吹干。
3.如不马上染色，可密封后-20℃保存。
4.染色前用冷丙酮在4℃固定10-20分钟。
5.PBS洗2次，每次5分钟，(必要时应用0.1％柠檬酸钠+0.1％triton打孔)。
6.3％H2O2灭活内源性过氧化物酶，20分钟，避光。
7.用PBS洗2次，每次5分钟。
8.正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分(保持组织呈湿润状态)，滴加正常山羊或兔血清(与第二抗体同源动物血清)处理，37℃，15分钟。附：正常血清配制(或按试剂盒规定的浓度配制)：按1:20比例，用PBS配制，每张切片需要量按50μ+5μl(10％抛洒量)计算。
9.滴加第一抗体：用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加第一抗体，37℃2小时(也可置于4℃冰箱过夜)。
10.PBS：5分钟，2次(置于摇床)。
11.滴加生物素化的二抗，37℃，40分钟。
12.PBS：5分钟，2次(置于摇床)。
13.滴加三抗(SAB复合物)，37℃，40分钟。
14.PBS：5分钟，2次(置于摇床)。
15.DAB显色，镜下观察，适时终止(自来水冲终止)。附：DAB的配制①储备液(DAB25mg/ml)的配制：DAB 250mg+PBS 10ml，待完全溶解后分装成1ml，100μl，50μl，20μl等，-20℃，冻存。②工作液：DAB储备液20μl+PBS 1000μl+3％H2O2 5μl。
16.自来水(细水)充分冲洗。
17.苏木素复染，室温，30秒，自来水冲洗。
18.自来水冲洗返蓝，15分钟。
19.梯度酒精脱水：80％，2分钟95％，2分钟100％，2次，5分钟。
20.二甲苯透明：I，II(二甲苯)各5分钟，
21.封片：加拿大树胶(或中性树胶)封片。
结果由图3可见，使用0.5％的含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜便可减少60％的灼伤细胞，证明含有水解藻提取物(藻蓝萃)的抗蓝光冻干面膜真实有效。
本发明并不局限于上述实施方式，如果对本发明的各种改动或变型不脱离本发明的精神和范围，倘若这些改动和变型属于本发明的权利要求和等同技术范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变动。
Claims (10)
1.一种含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜组合物，其特征在于：按照组合物总的质量百分数计，所述冻干面膜组合物是由如下的组分组成：
水解藻提取物30.0％～40.0％；所述水解藻提取物为藻蓝蛋白提取物；
甘露醇3.0％～8.0％；
甘油4.0％～9.0％
水解蚕丝亮肤肽3.0％～8.0％；
脱色龙胆抗刺激因子0.3～3.0％
秋葵水解糖蛋白0.06％～0.1％；
神经酰胺组合物0.1％～2.0％
余量为去离子水。
2.如权利要求1所述的含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜组合物，其特征在于：按照组合物总的质量百分数计，所述冻干面膜组合物是由如下的组分组成：
水解藻提取物35.0％～40.0％；所述水解藻提取物为藻蓝蛋白提取物；
甘露醇3.0％～5.0％；
甘油5.0％～7.0％
水解蚕丝亮肤肽3.0％～6.0％；
脱色龙胆抗刺激因子0.5～2.0％
秋葵水解糖蛋白0.08％～0.1％；
神经酰胺组合物0.5％～2.0％
余量为去离子水。
3.如权利要求1所述的含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜组合物，其特征在于：按照组合物总的质量百分数计，所述冻干面膜组合物是由如下的组分组成：
水解藻提取物36.0％；所述水解藻提取物为藻蓝蛋白提取物；
甘露醇5.0％；
甘油6.0％
水解蚕丝亮肤肽5.0％；
脱色龙胆抗刺激因子1.0％
秋葵水解糖蛋白0.08％；
神经酰胺组合物2.0％
余量为去离子水。
4.如权利要求1-3中任一项所述的含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜组合物，其特征在于：所述神经酰胺组合物包含以下组分：神经酰胺1 0.2％～0.5％、神经酰胺2 0.2％～0.5％、神经酰胺3 0.5％～1.0％、神经酰胺6II 0.2％～0.5％的一种或多种。
5.如权利要求1-3中任一项所述的含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜组合物，其特征在于：所述水解藻提取物是通过以下步骤制得的：
1)粉碎：取蓝藻藻液进行超声粉碎，离心分离，去除细胞碎片，过滤，得到过滤液；
2)提取：在过滤液中加入去离子水，加入柠檬酸钠、十二烷基硫酸钠、磷酸二氢钠进行搅拌提取操作，去除残渣后得到粗提液；
3)过滤：粗提液沉降后过滤得到滤液；
4)微滤：滤液经微滤操作得到渗出液，然后加水继续微滤，直至渗出液的总量等于滤液在步骤3)中得到的初始量；
5)纯化：将滤液与吸附填料混合搅拌后，固液分离，用磷酸钠缓冲溶液洗脱固形物，收集洗脱液；
6)超滤：将步骤5)得到的洗脱液经超滤操作，除去清液，留下浓液；
7)配制：将上述步骤中的浓液，用去离子水配成相当于生药重量比40％的药液。
6.如权利要求5所述的含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜组合物，其特征在于：步骤2)中，所述柠檬酸钠、十二烷基硫酸钠、磷酸二氢钠的质量百分比分别为：0.5％-2％，1％-2％，0.1％-0.5％；提取时间为3-4h。
7.如权利要求5所述的含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜组合物，其特征在于：步骤4)中，过滤膜的孔径为30nm，微滤控制的压力为3-4bar，在50-80℃温度下，微滤操作至渗出液不再渗出为止。
8.如权利要求5所述的含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜组合物，其特征在于：步骤6)中，过滤膜的截留分子量控制在50000D，超滤控制的压力10-15bar，在50-90℃温度下进行超滤操作。
9.如权利要求5所述的含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜组合物，其特征在于：步骤7)中，还进行灭菌处理，在90℃灭菌30min。
10.权利要求1-9中任一项所述的含有水解藻提取物的抗蓝光冻干面膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将甘露醇加入水相锅中，开启搅拌，依次加入水解蚕丝亮肤肽、使用甘油预分散好秋葵水解糖蛋白，脱色龙胆抗刺激因子和神经酰胺组合物，升温至80-85℃，保温，直到完全溶解；
2)乳化锅的搅拌速度保持在300-500转/分钟，将上述步骤1)的组份通过真空吸入，低速均质，开始降温；降到50-55℃时，将水解藻提取物加入乳化锅中，开启搅拌，搅拌均匀；
3)搅拌降温至40-45℃以下时，搅拌15-30分钟直至均匀；降至35-38℃时过滤，检验合格，出料；
4)将制品浸润至面膜布上，降温至-40～-65℃进行预冻，在此温度下停留1～2小时，使制品彻底冻结；
5)抽真空，进行冷冻干燥，温度控制至-40～-68℃，气压控制在12.88～0.34Pa，以提供水升华所需热量，真空泵抽气至样品外观基本干燥，继续延长干燥0.5～1小时，以彻底消除制品中的残留冰晶及制品干燥的不均衡性；
6)将制品温度迅速上升到-10～-20℃，进行解吸干燥，去除物料中的结合水和吸附于干燥层中的水，并在该温度下保持2小时，即可结束冻干装袋封口，得所述面膜。
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