JP2689128B2 - 抗アレルギー作用を有する物質とその製造方法 - Google Patents
抗アレルギー作用を有する物質とその製造方法Info
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- JP2689128B2 JP2689128B2 JP63082791A JP8279188A JP2689128B2 JP 2689128 B2 JP2689128 B2 JP 2689128B2 JP 63082791 A JP63082791 A JP 63082791A JP 8279188 A JP8279188 A JP 8279188A JP 2689128 B2 JP2689128 B2 JP 2689128B2
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- Japan
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- polysaccharide
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- fractions
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、特願昭62−134378の対象である抗アレルギ
ー作用物質コウスチンSFから可及的にペプチド構成成分
を除去したコウスチンSF1及びその製造法に関する。
ー作用物質コウスチンSFから可及的にペプチド構成成分
を除去したコウスチンSF1及びその製造法に関する。
従来技術 コウタケ（Sarcodon aspratus（Berk）,S.Ito）が、
じんましん等の皮膚アレルギー症状に著効を奏するとの
民間伝承に着目し、既に、コウスチン、及びコウスチン
S2、P2、C4（特開昭61−200923）が、抗アレルギー剤と
して使用出来ることを明らかにした。更に、特願昭62−
134378により、コウスチンSFを単離した。
じんましん等の皮膚アレルギー症状に著効を奏するとの
民間伝承に着目し、既に、コウスチン、及びコウスチン
S2、P2、C4（特開昭61−200923）が、抗アレルギー剤と
して使用出来ることを明らかにした。更に、特願昭62−
134378により、コウスチンSFを単離した。
発明が解決しようとする課題 本発明の課題は、従来公知のコウスチン、及びコウス
チンS2、P2、C4、SFの製造法に付加的に用いることも出
来る、ペプチド含量が低く、より安全な抗アレルギー剤
の製造法、及びその方法により取得される物質コウスチ
ンSF1を提供するに存する。
チンS2、P2、C4、SFの製造法に付加的に用いることも出
来る、ペプチド含量が低く、より安全な抗アレルギー剤
の製造法、及びその方法により取得される物質コウスチ
ンSF1を提供するに存する。
発明が解決するための手段 本発明では明らかにコウタケと認められるキノコを研
究の対照として使用した。即ち野生株、栽培株のコウタ
ケの子実体、またはその人工培養菌糸体を原料に用い
た。まずコウタメ子実体、またはその人工培養菌糸体を
熱水で充分に抽出して抽出液を得る。
究の対照として使用した。即ち野生株、栽培株のコウタ
ケの子実体、またはその人工培養菌糸体を原料に用い
た。まずコウタメ子実体、またはその人工培養菌糸体を
熱水で充分に抽出して抽出液を得る。
この熱水抽出に先立ち、コウタケに含まれる低分子化
合物、例えば単糖類、脂肪分等を予め取り除くため低級
アルコール等により前処理することも望ましい。その際
の溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノー
ル等の低級アルコールの他に、ピリジン、アセトンのよ
うな極性有機溶媒、ベンゼン、トルエン、キシレン、ｎ
−ヘキサン、クロロホルム、四塩化炭素、酢酸エチルの
ような非極性溶媒、常温の水が用いられる。
合物、例えば単糖類、脂肪分等を予め取り除くため低級
アルコール等により前処理することも望ましい。その際
の溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノー
ル等の低級アルコールの他に、ピリジン、アセトンのよ
うな極性有機溶媒、ベンゼン、トルエン、キシレン、ｎ
−ヘキサン、クロロホルム、四塩化炭素、酢酸エチルの
ような非極性溶媒、常温の水が用いられる。
次に熱水抽出液に以下のような工程を施す。
a.有機溶媒を添加し、沈澱を得る。有機溶媒としては、
メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタ
ノールの低級アルコールの他、アセトン等が用いられ
る。
メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタ
ノールの低級アルコールの他、アセトン等が用いられ
る。
b.セルロース膜を用い透析し、分子量7000以上の画分を
採取する。
採取する。
c.イオン交換体処理し、多糖体画分を採取する。
d.タンパク質分解酵素にて処理し、タンパク質を切断、
分解する。この操作は、多糖体精製に先立ち行い、不用
なタンパク質を除きやすくするために行う。タンパク質
分解酵素としては、アクチナーゼ、プロナーゼ、プロテ
アーゼ等を用いることができる。
分解する。この操作は、多糖体精製に先立ち行い、不用
なタンパク質を除きやすくするために行う。タンパク質
分解酵素としては、アクチナーゼ、プロナーゼ、プロテ
アーゼ等を用いることができる。
以上のａ−ｄの工程は、任意の順で行うことができ、
重複、省略することができる。
重複、省略することができる。
最後に逆相クロマトグラフィーにて多糖体を分画、精
製する。この際カラム充填剤は、ODSをもつポアサイズ
の大きなものを用いると良好である。
製する。この際カラム充填剤は、ODSをもつポアサイズ
の大きなものを用いると良好である。
次に、実施例により、本発明の製造方法を具体的に説
明する。
明する。
実施例 １ コウタケの子実体乾燥品100gをワーリングブレンダー
で破砕し、21の90％メタノールを加え、70℃以上の温度
で２時間還流抽出を行った。残渣を濾取し、更に21の90
％メタノールを加え、同様に抽出した。もう一度これを
繰り返し、抽出残渣を得た。こうして得られた残渣に80
0mlの水を加え、90℃以上の温度で１時間還流抽出し
た。濾過し抽出液を得る、更に抽出残渣に800mlの水を
加え、同様に再抽出する。濾過して得た抽出液を１回目
の抽出液と合わせ、ロータリーエバポレーターで濃縮
し、約300mlとした。これに４倍量のアセトンを加え、
生じた沈澱（Ppt80A画分）を遠心分離法（5000prm,30
分）によって採取した。
で破砕し、21の90％メタノールを加え、70℃以上の温度
で２時間還流抽出を行った。残渣を濾取し、更に21の90
％メタノールを加え、同様に抽出した。もう一度これを
繰り返し、抽出残渣を得た。こうして得られた残渣に80
0mlの水を加え、90℃以上の温度で１時間還流抽出し
た。濾過し抽出液を得る、更に抽出残渣に800mlの水を
加え、同様に再抽出する。濾過して得た抽出液を１回目
の抽出液と合わせ、ロータリーエバポレーターで濃縮
し、約300mlとした。これに４倍量のアセトンを加え、
生じた沈澱（Ppt80A画分）を遠心分離法（5000prm,30
分）によって採取した。
沈澱物質を水250mlに加熱溶解し、冷却後、透析膜に
入れて脱イオン水に対して24時間透析した。透析内液を
遠心分離（2500prm,30分）し、上澄液（SupDIA画分）を
得た。SupDIA画分に対し、エタノールを終濃度30％とな
るように加え、生じた沈澱（Ppt30E画分）を遠心分離に
より得た。次いで、Ppt30E画分100mgをpH7.8 0.05M硼
酸塩緩衝液（1mM CaCl2）20mlに溶解し、プロナーゼ（B
oehringer Mannheim Co.Ltd）20mgを加え、ゆっくり撹
拌しながら37％で48時間保温した。こうして得られたPp
t30E酵素分解物を逆相HPLCにて分画精製した。カラム
は、Inertsil3000C8（GASUKURO KOGYO INC）を２本つな
げて用いた。
入れて脱イオン水に対して24時間透析した。透析内液を
遠心分離（2500prm,30分）し、上澄液（SupDIA画分）を
得た。SupDIA画分に対し、エタノールを終濃度30％とな
るように加え、生じた沈澱（Ppt30E画分）を遠心分離に
より得た。次いで、Ppt30E画分100mgをpH7.8 0.05M硼
酸塩緩衝液（1mM CaCl2）20mlに溶解し、プロナーゼ（B
oehringer Mannheim Co.Ltd）20mgを加え、ゆっくり撹
拌しながら37％で48時間保温した。こうして得られたPp
t30E酵素分解物を逆相HPLCにて分画精製した。カラム
は、Inertsil3000C8（GASUKURO KOGYO INC）を２本つな
げて用いた。
溶離液は、Ａ（トリエチルアミン1.5mlに精製水を加
え、トリフルオロ酢酸にてpH5−７に調整し、精製水に
て31とする）とＢ（トリエチルアミン0.5mlに精製水を
加え、トリフルオロ酢酸にてpH5−７に調整し、精製水
にて200mlとした後、アセトニトリル800mlを添加）を用
いた。検出波長は、UV220nmとした。溶離液の流速は、1
ml/分とし、溶離液Ａ、Ｂの割合は、第１表、第１図に
示したとおりである。分画は、ピークパターンに従い行
った。即ち、第２図に示すとおりに行い、フラクション
１−５に分画した。なお、第２表にはコウスチンSF1の
収率を示し、糖、及びタンパク質含量の分析は、フェノ
ール硫酸法、色素結合法（血清ムコ蛋白測定用試薬「フ
ジモト」呈色試液、（株）フジモト．ダイアグノスティ
ックス）にて行った。
え、トリフルオロ酢酸にてpH5−７に調整し、精製水に
て31とする）とＢ（トリエチルアミン0.5mlに精製水を
加え、トリフルオロ酢酸にてpH5−７に調整し、精製水
にて200mlとした後、アセトニトリル800mlを添加）を用
いた。検出波長は、UV220nmとした。溶離液の流速は、1
ml/分とし、溶離液Ａ、Ｂの割合は、第１表、第１図に
示したとおりである。分画は、ピークパターンに従い行
った。即ち、第２図に示すとおりに行い、フラクション
１−５に分画した。なお、第２表にはコウスチンSF1の
収率を示し、糖、及びタンパク質含量の分析は、フェノ
ール硫酸法、色素結合法（血清ムコ蛋白測定用試薬「フ
ジモト」呈色試液、（株）フジモト．ダイアグノスティ
ックス）にて行った。
発明の効果 こうして抽出、分画した物質について抗アレルギー作
用の薬理実験を行った。即ち、Ｉ型アレルギーのモデル
として繁用されているPCA反応に対し、抑制効果を示す
ことにより、本発明物質の抗アレルギー作用を確認し
た。モルモット、Heterologous4時間PCA反応は、Ovary,
Zの方法（Progr.Allergy5,459−508,1958）に準じて行
った。試験系に用いる血清は、牛乳β−ラクトグロブリ
ンを抗原とし、日本白色種雄性ウサギに免疫することに
より作成した。
用の薬理実験を行った。即ち、Ｉ型アレルギーのモデル
として繁用されているPCA反応に対し、抑制効果を示す
ことにより、本発明物質の抗アレルギー作用を確認し
た。モルモット、Heterologous4時間PCA反応は、Ovary,
Zの方法（Progr.Allergy5,459−508,1958）に準じて行
った。試験系に用いる血清は、牛乳β−ラクトグロブリ
ンを抗原とし、日本白色種雄性ウサギに免疫することに
より作成した。
先ず、モルモットの除毛背部皮内に、隣あうように４
ヶ所ずつ計８ヶ所に薬理処理抗血清と未処理抗血清を0.
1mlずつ注射した（第３図）。薬物処理血清は、1/2048
希釈抗血清と生理食塩水にて所定濃度とした薬物溶液と
を等量混合し、37℃で30分間保温したものとする。薬物
濃度は、４段階、50、25、５、1mg/ml設けた。
ヶ所ずつ計８ヶ所に薬理処理抗血清と未処理抗血清を0.
1mlずつ注射した（第３図）。薬物処理血清は、1/2048
希釈抗血清と生理食塩水にて所定濃度とした薬物溶液と
を等量混合し、37℃で30分間保温したものとする。薬物
濃度は、４段階、50、25、５、1mg/ml設けた。
未処理抗血清は、1/2048希釈抗血清と生理食塩水とを
等量混合し、同様に37℃、30分間保温したものとする。
尚、皮内注射部位は、正中骨と肩胛骨と尾骨上はさけて
行った。皮内注射から４時間後に0.5％エバンスブルー
を含むβ−ラクトグロブリン抗原液（2mg/ml）0.5ml/モ
ルモットを足蹠静脈より注射した。30分後に、モルモッ
トを放血致死させ、背部皮膚を剥離し、色素漏出面積を
測定した。未処理抗血清に対する薬物処理抗血清注射部
の色素漏出面積を比をもってPCA反応抑制率とした。
等量混合し、同様に37℃、30分間保温したものとする。
尚、皮内注射部位は、正中骨と肩胛骨と尾骨上はさけて
行った。皮内注射から４時間後に0.5％エバンスブルー
を含むβ−ラクトグロブリン抗原液（2mg/ml）0.5ml/モ
ルモットを足蹠静脈より注射した。30分後に、モルモッ
トを放血致死させ、背部皮膚を剥離し、色素漏出面積を
測定した。未処理抗血清に対する薬物処理抗血清注射部
の色素漏出面積を比をもってPCA反応抑制率とした。
その結果を第４表に示す。各画分に活性が認められた
が、糖の含有率の高いFr.1、Fr.4（コウスチンSF1）で
は、他の画分よりも高い活性が認められた。
が、糖の含有率の高いFr.1、Fr.4（コウスチンSF1）で
は、他の画分よりも高い活性が認められた。
第１図に逆相HPLCの溶離液Ａ、Ｂの割合を示す。第２図
には、Ppt30E酵素分解物の逆相HPLC溶離パターンを、第
３図には、モルモット背部皮内注射部位を、第４図に
は、薬理試験の結果を、第５図にはコウスチンSF1の分
析結果をそれぞれ示す。
には、Ppt30E酵素分解物の逆相HPLC溶離パターンを、第
３図には、モルモット背部皮内注射部位を、第４図に
は、薬理試験の結果を、第５図にはコウスチンSF1の分
析結果をそれぞれ示す。
Claims (2)
- 【請求項１】コウタケの子実体またはその人工培養菌糸
体を、熱水抽出し、得られた抽出液に a.有機溶媒を添加し、沈澱画分を採取する工程、 b.透析を行い分子量7000以上の画分を採取する工程c.イ
オン交換体処理を行い、高分子多糖体含有画分を採取す
る工程、 d.タンパク質分解酵素処理を行い、多糖体に結合してい
るタンパク質部分を切断する工程、 の一部又は全部を、任意の順序で実施し、最後に e.逆相モードにより多糖体を精製分画して得られた多糖
体を含有する抗アレルギー作用物質コウスチンSF1. - 【請求項２】コウタケの子実体またはその人工培養菌糸
体を、熱水抽出し、得られた抽出液に a.有機溶媒を添加し、沈澱画分を採取する工程、 b.透析を行い分子量7000以上の画分を採取する工程c.イ
オン交換体処理を行い、高分子多糖体含有画分を採取す
る工程、 d.タンパク質分解酵素処理を行い、多糖体に結合してい
るタンパク質部分を切断する工程、 の一部又は全部を、任意の順序で実施し、最後に e.逆相モードにより多糖体を精製分画することを特徴と
する多糖体を含有する抗アレルギー作用物質コウスチン
SF1.の製造方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63082791A JP2689128B2 (ja) | 1988-04-04 | 1988-04-04 | 抗アレルギー作用を有する物質とその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63082791A JP2689128B2 (ja) | 1988-04-04 | 1988-04-04 | 抗アレルギー作用を有する物質とその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01254702A JPH01254702A (ja) | 1989-10-11 |
| JP2689128B2 true JP2689128B2 (ja) | 1997-12-10 |
Family
ID=13784228
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63082791A Expired - Lifetime JP2689128B2 (ja) | 1988-04-04 | 1988-04-04 | 抗アレルギー作用を有する物質とその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2689128B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001151689A (ja) * | 1999-11-29 | 2001-06-05 | Naris Cosmetics Co Ltd | 皮膚外用剤 |
-
1988
- 1988-04-04 JP JP63082791A patent/JP2689128B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001151689A (ja) * | 1999-11-29 | 2001-06-05 | Naris Cosmetics Co Ltd | 皮膚外用剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01254702A (ja) | 1989-10-11 |
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