JP3252295B2 - L−ガラクトースの製造方法 - Google Patents
L−ガラクトースの製造方法Info
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Description
造方法に関するものであり、さらに詳細には、L−タガ
トースを含有する溶液にD−アラビノース・イソメラー
ゼを作用させてL−ガラクトースを生成せしめ、これを
採取することを特徴とするL−ガラクトースの製造方法
に関する。
物ゴム中にわずかに含まれているにすぎない希少糖質で
ある。その製造方法としては、寒天や植物ゴム中の多糖
を加水分解し、酵母などにより分解できる糖質を除去
し、さらにL−ガラクトースを精製分離するといった非
常に煩雑な方法であった。従って多量のL−ガラクトー
スを得ることは非常に困難であった。
速に発達し、糖質化学の分野においても、新たな糖質の
開発が望まれている。L−ガラクトースは、その大量製
造方法が確立されておらず、入手は困難であり、未だ、
食品工業、医薬品工業、化学工業などの工業原料として
使用されるに至っていない。
クトースを生化学的手段により大量、安価に製造するこ
とを目的に鋭意研究した。
ース・イソメラーゼが作用し40%を超える高変換率で
L−ガラクトースを生成することを見いだした。このL
−ガラクトースを採取することによりL−ガラクトース
が容易に製造しうることを見いだし、本発明を完成し
た。原料のL−タガトースは、本発明者等が、先に、特
願平4−159972号明細書で記載したように、ガラ
クチトールから生物学的手段によって容易に得られる糖
質である。従って、本発明により、原料としてL−タガ
トースを用い、D−アラビノース・イソメラーゼによる
異性化反応によってL−ガラクトースを容易に製造する
ことができる。
ガラクトースの生産に用いるD−アラビノース・イソメ
ラーゼ(EC 5.3.1.3)は、既によく知られて
おり、例えば、メソッズ・イン・エンザイモロジー(M
ethods in Enzymology) 第41
巻462乃至465頁(Academic Press
Inc、1975年)に記載されている酵素である。
しかし、本酵素がL−タガトースに作用し40%を超え
る高変換率でL−ガラクトースを生成することは、従来
知られておらず本発明をもって嚆矢とする。
常、D−アラビノース・イソメラーゼ産生能を有する微
生物を培養して得ることができる。例えば、クレブジェ
ラ・ニューモニアエ(Klebsiella pneu
moniae)を栄養源、例えば、窒素源、無機塩およ
び炭素源としてD−アラビノースあるいはL−フコース
を含む培地、望ましくは、微酸性乃至微アルカリ性の液
体培地に植菌し、温度約20℃乃至35℃で、1乃至1
0日間好気的条件下で培養する。酵素を構成的に産生す
る変異株を用いることは、D−アラビノース、あるいは
L−フコースなどの高価な炭素源を必要としないので特
に有利である。通常、得られた培養菌体からD−アラビ
ノース・イソメラーゼを抽出し、そのまま、あるいは固
定化して反応に用いる。
・イソメラーゼをL−タガトースを含む溶液、望ましく
は、濃度5w/v%以上、更に好ましくは、10w/v
%以上の高濃度溶液に作用させることによって、L−タ
ガトースがL−ガラクトースに容易に高変換率で変換
し、L−ガラクトースが固形物当り20%を超える高収
率で採取できる。また、本酵素を固定化して用いる場合
には、L−タガトースからL−ガラクトースへの変換
に、繰り返し利用でき、また連続反応に利用することも
有利に実施できる。
ースとL−ガラクトースとを含有する水溶液は、必要に
より、例えば、活性炭吸着による脱色、H型、OH型イ
オン交換樹脂による脱塩などの方法で精製し、濃縮して
シラップ状のL−タガトースとL−ガラクトースとを含
む製品を採取する。更に、アルカリ金属型またはアルカ
リ土類金属型などの塩型強酸性イオン交換樹脂を用いる
カラムクロマトグラフィー、例えばダウケミカル社製造
の商品名ダウエックス50W−X4、ダウエックスWG
R、東京有機化学工業株式会社製造の商品名アンバーラ
イトET−1008、アンバーライトIRA47、三菱
化成工業株式会社製造の商品名ダイヤイオンSK10
6、ダイヤイオンWA11などを用いるカラムクロマト
グラフィーにかけ分画、精製し、L−ガラクトース高含
有物を採取し濃縮することにより、シラップ状の製品
を、更に晶出、分密して高純度の結晶L−ガラクトース
製品も容易に得ることができる。生産物であるL−ガラ
クトースを分離したL−タガトースは、再び原料として
L−ガラクトースの製造に利用できる。このように本発
明によれば、従来入手が極めて困難であったL−ガラク
トースを大量、安価に供給することが容易となり、L−
ガラクトースの工業的製造方法として好適である。従っ
て、L−ガラクトースは、食品工業、医薬品工業、化学
工業などの原料、中間体などとして有利に利用できる。
イソメラーゼの調製例を参考例で、本発明のL−タガト
ースからのL−ガラクトースの製造例を実施例で述べ
る。
0.24w/v%、リン酸二カリウム0.56w/v
%、硫酸マグネシウム・7水塩0.01w/v%、酵母
エキス0.5w/v%、D−アラビノース2w/v%及
び脱イオン水からなる培養液20Lを30L容ジャーフ
ァーメンターにとり、120℃、20分間オートクレー
ブした後、冷却し、クレブジエラ ニューモニアIFO
13541の種培養液を1v/v%加えて、30℃で3
日間培養した。
生菌体約200gを常法に従って破砕、抽出し、遠心分
離して上清を得、次いでポリエチレングリコール600
0を用いた分画沈殿法により精製し、透析して、粗酵素
液約50mlを得た。本酵素は、ml当り約200単位
のD−アラビノース・イソメラーゼ活性を有していた。
D−アラビノース・イソメラーゼ活性測定は次のように
行った。すなわち、反応液組成は、50mM グリシン
緩衝液(pH9.3)0.5ml、1mM 塩化マンガ
ン0.01ml、0.1M D−アラビノース0.05
mlおよび酵素液0.1mlに水を加えて計1.0ml
とした。反応は、35℃で10分間行い、生成物である
D−リブロースをシステイン・カルバゾール法で測定
し、1分間に1μmolのD−リブロースを生成する酵
素量を1単位とした。
9.3)1Lに、参考例の方法で調製したD−アラビノ
ース・イソメラーゼをL−タガトース グラム当り約1
00単位の割合で加え、40℃で20時間反応した。
用いて脱色し、次いで、ダイヤイオンSK1B(H型、
三菱化成工業株式会社製造の商品名)およびダイヤイオ
ンWA30(OH型、三菱化成工業株式会社製造の商品
名)を用いて脱塩し、減圧濃縮してL−タガトースとL
−ガラクトースとを含む濃度約60%の透明なシラップ
を得た。ダウエックス50W−X4(カルシウム型のカ
チオン交換樹脂、ダウケミカル社製造の商品名)を用い
るカラムクロマトグラフィーにより分離、精製し、得ら
れるL−ガラクトース画分を濃縮し、晶出、分密して結
晶L−ガラクトースを採取した。結晶L−ガラクトース
のL−タガトースに対する収率は、固形物当たり約30
%であった。
めに、実験により理化学的性質を調べ、その性質を文献
値と比較、または、シグマ(Sigma)社が市販して
いる試薬D−ガラクトースを標準物質としてその測定値
と比較した。
製880−PU:カラム、日立製作所GL−C611;
溶離液、10−4M 水酸化ナトリウム、60℃;流
速、1ml/min;検出、島津製作所RID−6A)
で分析したところ、その溶出位置は、標準物質としての
試薬D−グルコース、D−マンノースなどのヘキソース
とは異なり、標準物質としての試薬D−ガラクトースと
同一の17.1分であった。
を図1に示した。このスペクトルは、図2に示した標準
のD−ガラクトースの赤外線吸収スペクルとよく一致し
た。
が、高速液体クロマトグラフィー、赤外線吸収スペクト
ルについては、標準のD−ガラクトースの値とよく一致
し、比旋光度については、D−ガラクトースの値とほぼ
一致するものの+、−逆であり、L−ガラクトースの文
献値とよく一致したことから、本発明の方法で得られた
製品は、L−ガラクトースであると判断される。本製品
は、希少物質としての試薬用途のみならず、食品工業、
医薬品、化学工業などの原料、中間体などとしても有利
に利用できる。
ゼを用いるL−タガトースからのL−ガラクトースの製
造方法は、従来、希少糖類として入手の困難であったL
−ガラクトースの大量生産の道を拓くものである。従っ
て、本発明のL−ガラクトースの製造方法の確立は、製
糖産業のみならず、これに関連する食品、化粧品、医薬
品産業における工業的意義が極めて大きい。
吸収スペクトルを示す図である。
ルを示す図である。
Claims (3)
- 【請求項1】 L−タガトースを含有する溶液中のL−
タガトースにD−アラビノース・イソメラーゼを作用さ
せてL−ガラクトースを生成せしめ、これを採取するこ
とを特徴とするL−ガラクトースの製造方法。 - 【請求項2】 L−タガトースを含有する溶液が、L−
タガトース濃度5w/v%以上の高濃度溶液を用いるこ
とを特徴とする請求項1記載のL−ガラクトースの製造
方法。 - 【請求項3】 L−タガトースを含有する溶液中のL−
タガトースにD−アラビノース・イソメラーゼを作用さ
せてL−ガラクトースを生成せしめ、得られる溶液を塩
型強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラ
フィーにかけ、L−ガラクトース高含有画分を採取する
ことを特徴とするL−ガラクトースの製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP31257992A JP3252295B2 (ja) | 1992-10-08 | 1992-10-08 | L−ガラクトースの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP31257992A JP3252295B2 (ja) | 1992-10-08 | 1992-10-08 | L−ガラクトースの製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
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JPH06113875A JPH06113875A (ja) | 1994-04-26 |
JP3252295B2 true JP3252295B2 (ja) | 2002-02-04 |
Family
ID=18030908
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP31257992A Expired - Lifetime JP3252295B2 (ja) | 1992-10-08 | 1992-10-08 | L−ガラクトースの製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3252295B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100309327B1 (ko) * | 1999-05-06 | 2001-09-29 | 담철근 | 아라비노스 이성화효소를 포함한 재조합 대장균주와 이를 이용한타가토스의 생산방법 |
US6991923B2 (en) | 2001-07-16 | 2006-01-31 | Arla Foods Amba | Process for manufacturing of tagatose |
PT1407037E (pt) * | 2001-07-16 | 2006-05-31 | Arla Foods Amba | Processo para a producao de tagatose |
-
1992
- 1992-10-08 JP JP31257992A patent/JP3252295B2/ja not_active Expired - Lifetime
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