JP3239905B2 - Ｌ−フェニルアラニンの製造法 - Google Patents
Ｌ−フェニルアラニンの製造法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は微生物を用いたＬ−フェ
ニルアラニン（以下、Ｐｈｅと記す）の製造法に関す
る。Ｐｈｅは、医薬品・甘味料・化成品等の原料として
広く利用されている。
ニルアラニン（以下、Ｐｈｅと記す）の製造法に関す
る。Ｐｈｅは、医薬品・甘味料・化成品等の原料として
広く利用されている。
【０００２】
【従来技術】従来から知られている微生物を用いたＰｈ
ｅの製造法は、Ｐｈｅ生産能を有する微生物を液体栄養
培地で培養するかまたは反応液中で原料物質に作用させ
ることにより培養液もしくは反応液中にＰｈｅを生成蓄
積させ、これを採取するものである。
ｅの製造法は、Ｐｈｅ生産能を有する微生物を液体栄養
培地で培養するかまたは反応液中で原料物質に作用させ
ることにより培養液もしくは反応液中にＰｈｅを生成蓄
積させ、これを採取するものである。
【０００３】Ｐｈｅの結晶形にはα晶（無水物晶、以
下、Ｐｈｅ・α晶と記す）とβ晶（一水和物晶、以下、
Ｐｈｅ・β晶と記す）の２種類が知られている。その結
晶形状は、Ｐｈｅ・α晶が平板あるいはりん片状である
のに対して、Ｐｈｅ・β晶は極微細な針状晶である。微
生物を用いたＰｈｅの生産において、Ｐｈｅが培養液中
に過飽和溶解度以上の濃度に生成蓄積することにより析
出してくる結晶は、何も手だてを加えないで析出させた
場合は、Ｐｈｅ・β晶である。培養途中にＰｈｅ・β晶
が析出すると、培養液の粘度上昇や発泡性の増加等が起
こり培養の継続が困難になる。更に培養の継続を試みる
ならば、培養装置の系外に培養液が飛散するなどの事態
が生じ、以後のＰｈｅの生産は実質上不可能となる。よ
って、Ｐｈｅを過飽和溶解度以上に生成蓄積しない微生
物を用いて培養を行うか、あるいは高生産能を有する微
生物を用いた場合は蓄積量を溶解度以下に抑制する目的
で原料投入量や培養液量のコントロ−ルを行う等の必要
があった。このため、従来の方法ではＰｈｅの生産性が
低く、製造コストの低減化のための抜本的な方法の開発
が望まれていた。
下、Ｐｈｅ・α晶と記す）とβ晶（一水和物晶、以下、
Ｐｈｅ・β晶と記す）の２種類が知られている。その結
晶形状は、Ｐｈｅ・α晶が平板あるいはりん片状である
のに対して、Ｐｈｅ・β晶は極微細な針状晶である。微
生物を用いたＰｈｅの生産において、Ｐｈｅが培養液中
に過飽和溶解度以上の濃度に生成蓄積することにより析
出してくる結晶は、何も手だてを加えないで析出させた
場合は、Ｐｈｅ・β晶である。培養途中にＰｈｅ・β晶
が析出すると、培養液の粘度上昇や発泡性の増加等が起
こり培養の継続が困難になる。更に培養の継続を試みる
ならば、培養装置の系外に培養液が飛散するなどの事態
が生じ、以後のＰｈｅの生産は実質上不可能となる。よ
って、Ｐｈｅを過飽和溶解度以上に生成蓄積しない微生
物を用いて培養を行うか、あるいは高生産能を有する微
生物を用いた場合は蓄積量を溶解度以下に抑制する目的
で原料投入量や培養液量のコントロ−ルを行う等の必要
があった。このため、従来の方法ではＰｈｅの生産性が
低く、製造コストの低減化のための抜本的な方法の開発
が望まれていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、微生
物を用いたＰｈｅ発酵生産において、従来の方法より更
に安価かつ効率的なＰｈｅの製造法を提供することであ
る。
物を用いたＰｈｅ発酵生産において、従来の方法より更
に安価かつ効率的なＰｈｅの製造法を提供することであ
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、従来から
知られている微生物を用いた製造法より更に安価かつ効
率的なＰｈｅの製造法を開発すべく鋭意研究を重ねた結
果、培養液中のＰｈｅ濃度が溶解度（飽和溶解度）以上
の条件下で該培養液中にＰｈｅ・α晶を添加するかまた
は該培養液のｐＨを７．８ないし８．３の範囲へ変更す
ることにより、培養液中へＰｈｅ・α晶が析出し、Ｐｈ
ｅがその過飽和溶解度以上に蓄積した後も培養の円滑な
継続が可能となり効率的にＰｈｅを製造できることを見
いだし、本発明を完成するに至った。
知られている微生物を用いた製造法より更に安価かつ効
率的なＰｈｅの製造法を開発すべく鋭意研究を重ねた結
果、培養液中のＰｈｅ濃度が溶解度（飽和溶解度）以上
の条件下で該培養液中にＰｈｅ・α晶を添加するかまた
は該培養液のｐＨを７．８ないし８．３の範囲へ変更す
ることにより、培養液中へＰｈｅ・α晶が析出し、Ｐｈ
ｅがその過飽和溶解度以上に蓄積した後も培養の円滑な
継続が可能となり効率的にＰｈｅを製造できることを見
いだし、本発明を完成するに至った。
【０００６】すなわち、本発明は、Ｐｈｅ生産能を有す
る微生物を用いたＰｈｅの発酵生産において、培養液中
のＰｈｅ濃度が溶解度以上の条件下で該培養液中にＰｈ
ｅ・α晶を添加することを特徴とするＰｈｅの製造法を
提供するものである。また、本発明は、Ｐｈｅ生産能を
有する微生物を用いたＰｈｅの発酵生産において、培養
液中のＰｈｅ濃度が溶解度以上の条件下で該培養液のｐ
Ｈを７．８ないし８．３の範囲へ変更することを特徴と
するＰｈｅの製造法を提供するものである。
る微生物を用いたＰｈｅの発酵生産において、培養液中
のＰｈｅ濃度が溶解度以上の条件下で該培養液中にＰｈ
ｅ・α晶を添加することを特徴とするＰｈｅの製造法を
提供するものである。また、本発明は、Ｐｈｅ生産能を
有する微生物を用いたＰｈｅの発酵生産において、培養
液中のＰｈｅ濃度が溶解度以上の条件下で該培養液のｐ
Ｈを７．８ないし８．３の範囲へ変更することを特徴と
するＰｈｅの製造法を提供するものである。
【０００７】本発明に使用する微生物は、ブレビバクテ
リウム属、コリネバクテリウム属、バチルス属、エシェ
リヒア属等に属し、Ｐｈｅ生産能を有する微生物であれ
ばいずれでも使用できる。具体的に例示すると以下の微
生物が挙げられる。 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＪ１２
６３７（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１６０、特願平３−２１１
０５２号） コリネバクテリウム・アセトアシドフィラム ＡＪ１１
７６１（ＦＥＲＭ Ｐ−６２８６、特公平２−１１２３
５号） バチルス・ズブチリス ＡＪ１２０９７（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−６０９、特公平３−４７８２０号）
リウム属、コリネバクテリウム属、バチルス属、エシェ
リヒア属等に属し、Ｐｈｅ生産能を有する微生物であれ
ばいずれでも使用できる。具体的に例示すると以下の微
生物が挙げられる。 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＪ１２
６３７（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１６０、特願平３−２１１
０５２号） コリネバクテリウム・アセトアシドフィラム ＡＪ１１
７６１（ＦＥＲＭ Ｐ−６２８６、特公平２−１１２３
５号） バチルス・ズブチリス ＡＪ１２０９７（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−６０９、特公平３−４７８２０号）
【０００８】これらの微生物を用いて本発明の方法によ
りＰｈｅを発酵生産するには、炭素源、窒素源、無機塩
類、その他必要により有機微量栄養素及び使用する微生
物が要求する栄養物質を含有する液体培地で培養を行
う。炭素源としては、グルコ−ス、シュクロ−ス、糖
蜜、デンプン加水分解液などの糖類、酢酸、プロピオン
酸等の有機酸類、エタノ−ル、プロパノ−ル等のアルコ
−ル類等が使用できる。窒素源としては、硫安、硝安、
塩安、尿素、アンモニア等を使用できる。また、有機微
量栄養素としては、アミノ酸、ビタミン、脂肪酸、核
酸、更にこれらのものを含有する酵母エキス、ペプト
ン、カザミノ酸、大豆蛋白加水分解物等が使用される。
また、フェニルピルビン酸や桂皮酸等のＰｈｅの前駆体
を原料として用いることもできる。培地中の炭素源、窒
素源等の原料は培養の初発に全て入れることもできる
し、途中より連続的もしくは断続的に添加してもよい。
りＰｈｅを発酵生産するには、炭素源、窒素源、無機塩
類、その他必要により有機微量栄養素及び使用する微生
物が要求する栄養物質を含有する液体培地で培養を行
う。炭素源としては、グルコ−ス、シュクロ−ス、糖
蜜、デンプン加水分解液などの糖類、酢酸、プロピオン
酸等の有機酸類、エタノ−ル、プロパノ−ル等のアルコ
−ル類等が使用できる。窒素源としては、硫安、硝安、
塩安、尿素、アンモニア等を使用できる。また、有機微
量栄養素としては、アミノ酸、ビタミン、脂肪酸、核
酸、更にこれらのものを含有する酵母エキス、ペプト
ン、カザミノ酸、大豆蛋白加水分解物等が使用される。
また、フェニルピルビン酸や桂皮酸等のＰｈｅの前駆体
を原料として用いることもできる。培地中の炭素源、窒
素源等の原料は培養の初発に全て入れることもできる
し、途中より連続的もしくは断続的に添加してもよい。
【０００９】培養の温度は１０〜５０℃、好ましくは３
０〜４０℃であり、ｐＨは４．０〜９．０、好ましくは
５．５〜８．０がよく、ｐＨの調整には無機あるいは有
機の酸性あるいはアルカリ性物質、更には尿素、炭酸カ
ルシウム、アンモニアガス等を使用することができる。
０〜４０℃であり、ｐＨは４．０〜９．０、好ましくは
５．５〜８．０がよく、ｐＨの調整には無機あるいは有
機の酸性あるいはアルカリ性物質、更には尿素、炭酸カ
ルシウム、アンモニアガス等を使用することができる。
【００１０】本発明において最も重要な部分は、培養液
中のＰｈｅ濃度が溶解度以上過飽和溶解度以下の条件下
で、適当な方法により培養液中にＰｈｅ・α晶を析出さ
せることである。Ｐｈｅの蓄積濃度が溶解度以上になっ
た時点で、Ｐｈｅ・α晶はＰｈｅ・β晶と比べ著しくエ
ネルギ−的に不安定な形にある、すなわちＰｈｅ・α晶
の溶解度がＰｈｅ・β晶より著しく大きいために、何も
手だてを加えないとＰｈｅ・β晶が自然起晶し、その後
の培養の継続を困難にするためである。
中のＰｈｅ濃度が溶解度以上過飽和溶解度以下の条件下
で、適当な方法により培養液中にＰｈｅ・α晶を析出さ
せることである。Ｐｈｅの蓄積濃度が溶解度以上になっ
た時点で、Ｐｈｅ・α晶はＰｈｅ・β晶と比べ著しくエ
ネルギ−的に不安定な形にある、すなわちＰｈｅ・α晶
の溶解度がＰｈｅ・β晶より著しく大きいために、何も
手だてを加えないとＰｈｅ・β晶が自然起晶し、その後
の培養の継続を困難にするためである。
【００１１】培養液中のＰｈｅ濃度が溶解度以上の条件
下で培養液中にＰｈｅ・α晶を析出させるための方法と
しては、培養液にＰｈｅ・α晶の種結晶を添加する方
法、培養液のｐＨの変更する方法、またはこれらの組合
せがある。
下で培養液中にＰｈｅ・α晶を析出させるための方法と
しては、培養液にＰｈｅ・α晶の種結晶を添加する方
法、培養液のｐＨの変更する方法、またはこれらの組合
せがある。
【００１２】Ｐｈｅ・α晶の種結晶を添加する方法によ
りＰｈｅ・α晶を析出させる場合、種結晶の添加時期
は、培養を開始した後Ｐｈｅの蓄積濃度が溶解度以上に
達した時点がよいが、培養液のＰｈｅ濃度が未飽和の状
態で添加してもＰｈｅの飽和溶解度まで添加した結晶は
溶解し、その後更に過飽和状態でα晶を添加することに
よって溶解しているＰｈｅがα晶の形で析出を始める。
通常、培養液中のＰｈｅの蓄積濃度に対して１％程度の
α晶が系内に存在すれば、引き続き生産されるＰｈｅは
α晶の形で析出される。従って、Ｐｈｅ・α晶の添加量
は随意であるが、Ｐｈｅ蓄積濃度が溶解度にまで達して
いる場合は、溶解しているＰｈｅの濃度の１〜５％量を
通常添加する。Ｐｈｅ・α晶の添加方法は、結晶をその
まま添加してもよいし、適当量の水に懸濁したスラリー
の状態で添加してもよい。
りＰｈｅ・α晶を析出させる場合、種結晶の添加時期
は、培養を開始した後Ｐｈｅの蓄積濃度が溶解度以上に
達した時点がよいが、培養液のＰｈｅ濃度が未飽和の状
態で添加してもＰｈｅの飽和溶解度まで添加した結晶は
溶解し、その後更に過飽和状態でα晶を添加することに
よって溶解しているＰｈｅがα晶の形で析出を始める。
通常、培養液中のＰｈｅの蓄積濃度に対して１％程度の
α晶が系内に存在すれば、引き続き生産されるＰｈｅは
α晶の形で析出される。従って、Ｐｈｅ・α晶の添加量
は随意であるが、Ｐｈｅ蓄積濃度が溶解度にまで達して
いる場合は、溶解しているＰｈｅの濃度の１〜５％量を
通常添加する。Ｐｈｅ・α晶の添加方法は、結晶をその
まま添加してもよいし、適当量の水に懸濁したスラリー
の状態で添加してもよい。
【００１３】培養液のｐＨを変更する方法によりＰｈｅ
・α晶を析出させる場合、培養を開始した後Ｐｈｅの蓄
積濃度が溶解度以上に達した時点で、通常Ｐｈｅ発酵を
行うｐＨ７．０付近からｐＨ７．８ないし８．３にシフ
トさせればよい。ｐＨの変更はアンモニアガス、水酸化
カリウム等のアルカリ性物質の添加により行われる。
・α晶を析出させる場合、培養を開始した後Ｐｈｅの蓄
積濃度が溶解度以上に達した時点で、通常Ｐｈｅ発酵を
行うｐＨ７．０付近からｐＨ７．８ないし８．３にシフ
トさせればよい。ｐＨの変更はアンモニアガス、水酸化
カリウム等のアルカリ性物質の添加により行われる。
【００１４】かくしてＰｈｅ・α晶を析出させた後その
まま培養を継続しても、以後生成されるＰｈｅはα晶の
形で析出されていくため、培養液の粘度の上昇あるいは
発泡性の増加が見られることなく円滑に培養を継続する
ことができる。
まま培養を継続しても、以後生成されるＰｈｅはα晶の
形で析出されていくため、培養液の粘度の上昇あるいは
発泡性の増加が見られることなく円滑に培養を継続する
ことができる。
【００１５】培養終了後は、得られた培養液を濃縮晶析
し、結晶を分離して更に溶解晶析を適宜繰り返すことに
より容易に高純度のＰｈｅ結晶を得ることができる。
し、結晶を分離して更に溶解晶析を適宜繰り返すことに
より容易に高純度のＰｈｅ結晶を得ることができる。
【００１６】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。
する。
【００１７】実施例１ 栄養寒天培地上に生育したブレビバクテリウム・ラクト
フェルメンタム ＡＪ１２６３７の菌体を、シュクロー
ス２％、燐酸カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．
０４％、硫酸第一鉄０．００１％、硫酸マンガン０．０
０１％、酢安０．４％、大豆蛋白加水分解物（全窒素と
して）０．２％、Ｌ−チロシン０．０４％、ビオチン１
００μｇ／ｌ及びビタミンＢ1 １００μｇ／ｌからなる
滅菌されたシード培地（５００ｍｌ容振とうフラスコに
５０ｍｌ張り込んである）に接種し、３１℃で２４時間
振とう培養した。２０ｌ容ジャーファーメンターに、グ
ルコース１３％、硫安１％、燐酸カリウム０．１５％、
硫酸マグネシウム０．０４％、硫酸マンガン０．００１
％、大豆蛋白加水分解物（全窒素として）０．２％、Ｌ
−チロシン０．０４％、ＤＬ−メチオニン０．０４％、
フマル酸１．２％、ビオチン５０μｇ／ｌ及びビタミン
Ｂ1 ２００μｇ／ｌからなる主培地１０ｌをいれ、加熱
殺菌後上記シード培養液を添加し、培養温度３１℃、制
御ｐＨ７．０、通気量１／３ｖｖｍ、攪拌数４００ｒｐ
ｍ、内圧０．１ｋｇ／ｃｍ2 の条件で培養を開始した。
培養液中のグルコースが消費し尽くされる直前にグルコ
ースを６０％含む溶液（滅菌済み）を培養槽に連続的に
添加し、常に培養液中のグルコース濃度を１．０〜２．
５％に制御した。培養開始５５時間後、Ｐｈｅ蓄積濃度
がその溶解度に達した時点でＰｈｅの溶解濃度の１．０
％量のＰｈｅ・α晶を添加し培養液中にＰｈｅ・α晶を
析出させつつ培養を継続した。この方法で８０時間の培
養した結果、Ｐｈｅを４．８％含有（添加Ｐｈｅ・α晶
を除く）した培養液１６ｌを得た。得られた培養液は濃
縮晶析し、結晶を分離し、更に溶解晶析を４回繰り返す
方法により、純度９９．５％のＰｈｅ結晶を０．４７ｋ
ｇ得た。一方、比較のため培養途中にＰｈｅ・α晶を添
加しないこと及び添加糖量以外は同一条件にて８０時間
培養を行った結果、Ｐｈｅを４．３％含有した培養液１
５ｌを得た。これを先の方法で精製した結果、Ｐｈｅ結
晶を０．４２ｋｇ得た。上記のそれぞれの方法で培養を
行った成績を表１に示した。
フェルメンタム ＡＪ１２６３７の菌体を、シュクロー
ス２％、燐酸カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．
０４％、硫酸第一鉄０．００１％、硫酸マンガン０．０
０１％、酢安０．４％、大豆蛋白加水分解物（全窒素と
して）０．２％、Ｌ−チロシン０．０４％、ビオチン１
００μｇ／ｌ及びビタミンＢ1 １００μｇ／ｌからなる
滅菌されたシード培地（５００ｍｌ容振とうフラスコに
５０ｍｌ張り込んである）に接種し、３１℃で２４時間
振とう培養した。２０ｌ容ジャーファーメンターに、グ
ルコース１３％、硫安１％、燐酸カリウム０．１５％、
硫酸マグネシウム０．０４％、硫酸マンガン０．００１
％、大豆蛋白加水分解物（全窒素として）０．２％、Ｌ
−チロシン０．０４％、ＤＬ−メチオニン０．０４％、
フマル酸１．２％、ビオチン５０μｇ／ｌ及びビタミン
Ｂ1 ２００μｇ／ｌからなる主培地１０ｌをいれ、加熱
殺菌後上記シード培養液を添加し、培養温度３１℃、制
御ｐＨ７．０、通気量１／３ｖｖｍ、攪拌数４００ｒｐ
ｍ、内圧０．１ｋｇ／ｃｍ2 の条件で培養を開始した。
培養液中のグルコースが消費し尽くされる直前にグルコ
ースを６０％含む溶液（滅菌済み）を培養槽に連続的に
添加し、常に培養液中のグルコース濃度を１．０〜２．
５％に制御した。培養開始５５時間後、Ｐｈｅ蓄積濃度
がその溶解度に達した時点でＰｈｅの溶解濃度の１．０
％量のＰｈｅ・α晶を添加し培養液中にＰｈｅ・α晶を
析出させつつ培養を継続した。この方法で８０時間の培
養した結果、Ｐｈｅを４．８％含有（添加Ｐｈｅ・α晶
を除く）した培養液１６ｌを得た。得られた培養液は濃
縮晶析し、結晶を分離し、更に溶解晶析を４回繰り返す
方法により、純度９９．５％のＰｈｅ結晶を０．４７ｋ
ｇ得た。一方、比較のため培養途中にＰｈｅ・α晶を添
加しないこと及び添加糖量以外は同一条件にて８０時間
培養を行った結果、Ｐｈｅを４．３％含有した培養液１
５ｌを得た。これを先の方法で精製した結果、Ｐｈｅ結
晶を０．４２ｋｇ得た。上記のそれぞれの方法で培養を
行った成績を表１に示した。
【００１８】
【表１】
【００１９】この結果から、Ｐｈｅ・α晶の種結晶を添
加することによって培養液中にＰｈｅ・α晶を析出させ
つつ培養を継続させることにより、Ｐｈｅの生産性及び
収率の向上が認められるのは明らかである。
加することによって培養液中にＰｈｅ・α晶を析出させ
つつ培養を継続させることにより、Ｐｈｅの生産性及び
収率の向上が認められるのは明らかである。
【００２０】実施例２ 栄養寒天培地上に生育させたバチルス・ズブチリスＡＪ
１２０９７の菌体をグルコース３％、塩安１％、塩化カ
リウム０．２％、燐酸カリウム０．１％、硫酸マグネシ
ウム０．０４％、硫酸第一鉄０．００２％、硫酸マンガ
ン０．００２％、大豆蛋白加水分解物（全窒素として）
０．２％、Ｌ−チロシン０．０２％及びＬ−トリプトフ
ァン０．０２％からなる滅菌されたシード培地（５００
ｍｌ容振とうフラスコに５０ｍｌ張り込んである）に接
種し、３０℃で２４時間振とう培養した。２０ｌ容ジャ
ーファーメンターに、グルコース１３％、塩安２％、塩
化カリウム０．２％、燐酸カリウム０．１５％、硫酸マ
グネシウム０．０４％、硫酸第一鉄０．００２％、硫酸
マンガン０．００２％、大豆蛋白加水分解物（全窒素と
して）０．２％、Ｌ−チロシン０．０４％及びＬ−トリ
プトファン０．０４％からなる主培地１０ｌをいれ、加
熱殺菌後上記シード培養液を添加し、実施例１の培養方
法に従い培養を開始した。培養液中のグルコースが消費
し尽くされる直前にグルコースを６０％含む溶液（滅菌
済み）を培養槽に連続的に添加し、常に培養液中のグル
コース濃度を１．０〜２．５％に制御した。培養開始４
０時間後にアンモニアガスにより培養液の制御ｐＨをｐ
Ｈ７．０からｐＨ７．８にシフトさせ、以後この状態を
維持しながら培養液中にＰｈｅ・α晶を析出させつつ培
養を継続した。この方法で１００時間の培養した結果、
Ｐｈｅを４．６％含有する培養液１６ｌを得た。これを
実施例１と同様の方法で精製した結果、純度９９．５％
のＰｈｅ結晶０．４５ｋｇを得た。一方、比較のため、
培養途中制御ｐＨをシフトしない方法で１００時間培養
を行った結果、Ｐｈｅを４．１％含有する培養液１５ｌ
を得た。これを先の方法で精製した結果、Ｐｈｅ結晶を
０．４ｋｇ得た。それぞれの方法での培養結果を表２に
示した。
１２０９７の菌体をグルコース３％、塩安１％、塩化カ
リウム０．２％、燐酸カリウム０．１％、硫酸マグネシ
ウム０．０４％、硫酸第一鉄０．００２％、硫酸マンガ
ン０．００２％、大豆蛋白加水分解物（全窒素として）
０．２％、Ｌ−チロシン０．０２％及びＬ−トリプトフ
ァン０．０２％からなる滅菌されたシード培地（５００
ｍｌ容振とうフラスコに５０ｍｌ張り込んである）に接
種し、３０℃で２４時間振とう培養した。２０ｌ容ジャ
ーファーメンターに、グルコース１３％、塩安２％、塩
化カリウム０．２％、燐酸カリウム０．１５％、硫酸マ
グネシウム０．０４％、硫酸第一鉄０．００２％、硫酸
マンガン０．００２％、大豆蛋白加水分解物（全窒素と
して）０．２％、Ｌ−チロシン０．０４％及びＬ−トリ
プトファン０．０４％からなる主培地１０ｌをいれ、加
熱殺菌後上記シード培養液を添加し、実施例１の培養方
法に従い培養を開始した。培養液中のグルコースが消費
し尽くされる直前にグルコースを６０％含む溶液（滅菌
済み）を培養槽に連続的に添加し、常に培養液中のグル
コース濃度を１．０〜２．５％に制御した。培養開始４
０時間後にアンモニアガスにより培養液の制御ｐＨをｐ
Ｈ７．０からｐＨ７．８にシフトさせ、以後この状態を
維持しながら培養液中にＰｈｅ・α晶を析出させつつ培
養を継続した。この方法で１００時間の培養した結果、
Ｐｈｅを４．６％含有する培養液１６ｌを得た。これを
実施例１と同様の方法で精製した結果、純度９９．５％
のＰｈｅ結晶０．４５ｋｇを得た。一方、比較のため、
培養途中制御ｐＨをシフトしない方法で１００時間培養
を行った結果、Ｐｈｅを４．１％含有する培養液１５ｌ
を得た。これを先の方法で精製した結果、Ｐｈｅ結晶を
０．４ｋｇ得た。それぞれの方法での培養結果を表２に
示した。
【００２１】
【表２】
【００２２】この結果から、培養液のｐＨを変更するこ
とによって培養液中にＰｈｅ・α晶を析出させつつ培養
を継続させることにより、Ｐｈｅの生産性及び収率の向
上が認められるのは明らかである。
とによって培養液中にＰｈｅ・α晶を析出させつつ培養
を継続させることにより、Ｐｈｅの生産性及び収率の向
上が認められるのは明らかである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 13/22 (Ｃ１２Ｐ 13/22 Ｃ１２Ｒ 1:125） Ｃ１２Ｒ 1:125） (72)発明者 久連山 峯彦 神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味 の素株式会社 川崎工場内 審査官 本間 夏子 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 13/22 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (2)
- 【請求項１】 Ｌ−フェニルアラニン生産能を有する微
生物を用いたＬ−フェニルアラニンの発酵生産におい
て、培養液中のＬ−フェニルアラニン濃度が溶解度に達
した時以後、Ｌ−フェニルアラニンの結晶が自然に析出
する前に該培養液中にＬ−フェニルアラニンのα晶を添
加し、Ｌ−フェニルアラニンのα晶を析出させつつ発酵
生産を行うことを特徴とするＬ−フェニルアラニンの製
造法。 - 【請求項２】 Ｌ−フェニルアラニン生産能を有する微
生物を用いたＬ−フェニルアラニンの発酵生産におい
て、培養液中のＬ−フェニルアラニン濃度が溶解度に達
した時以後、Ｌ−フェニルアラニンの結晶が自然に析出
する前に該培養液のｐＨを７．８ないし８．３の範囲へ
変更し、Ｌ−フェニルアラニンのα晶を析出させつつ発
酵生産を行うことを特徴とするＬ−フェニルアラニンの
製造法。
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|---|---|---|---|
| JP1487293A JP3239905B2 (ja) | 1992-01-30 | 1993-02-01 | Ｌ−フェニルアラニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1513792 | 1992-01-30 | ||
| JP4-15137 | 1992-01-30 | ||
| JP1487293A JP3239905B2 (ja) | 1992-01-30 | 1993-02-01 | Ｌ−フェニルアラニンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05304971A JPH05304971A (ja) | 1993-11-19 |
| JP3239905B2 true JP3239905B2 (ja) | 2001-12-17 |
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ID=26350898
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1487293A Expired - Fee Related JP3239905B2 (ja) | 1992-01-30 | 1993-02-01 | Ｌ−フェニルアラニンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3239905B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USRE45723E1 (en) | 2005-04-12 | 2015-10-06 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | Process for producing amino acids |
Families Citing this family (3)
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-
1993
- 1993-02-01 JP JP1487293A patent/JP3239905B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USRE45723E1 (en) | 2005-04-12 | 2015-10-06 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | Process for producing amino acids |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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| JPH05304971A (ja) | 1993-11-19 |
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