JP3226325B2 - 血行促進剤 - Google Patents

血行促進剤

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JP3226325B2 JP12923592A JP12923592A JP3226325B2 JP 3226325 B2 JP3226325 B2 JP 3226325B2 JP 12923592 A JP12923592 A JP 12923592A JP 12923592 A JP12923592 A JP 12923592A JP 3226325 B2 JP3226325 B2 JP 3226325B2
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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】本発明は血行促進のために使用する新規な
医薬に関するものであり、さらに詳しく言えば、トリカ
ブトの根より得られる非アコニチン型アルカロイド成分
を含有する画分、即ち、トリカブトの根のエキスからア
コニチン型アルカロイドを除去した画分を用いることを
特徴とする血行促進のために使用する医薬に関するもの
である。
【０００２】
【背景技術】血行不良は人体において、末梢臓器の機能
低下、機能不全、壊死化の基因ともなり、また、四肢の
冷え、疼痛、皮膚のうるおいの低下などをもたらすもの
であり、中枢神経系においては記憶力や思考力の低下等
の原因ともなるものである。血行不良を起すその原因と
しては、慢性心不全による血液のうっ血、動脈硬化によ
る血管内腔の硬化、狭窄、血栓の形成、内因性又は外因
性の交感神経興奮に基づく血管の収縮等があげられてい
る。種々の原因に基づく、血行不良の状態を緩解するた
めに血行促進剤は有用な役割を果す。
【０００３】本発明者は、血行促進作用を有する有用な
薬物の探索を行ったところ、トリカブトの根より得られ
る非アコニチン型アルカロイド成分を含有する画分が顕
著な末梢血流増大作用を有することを見出した。本発明
はかかる知見に基づくものである。
【０００４】従来、トリカブトの根の非アコニチン型ア
ルカロイド成分が、血流増大作用を有することは知られ
ていない。本発明はトリカブトの根の非アコニチン型ア
ルカロイド成分を含有する画分を有効成分として用いる
ことを特徴とする新規な末梢血流の血行促進のために使
用する医薬を提供するものである。
【０００５】
【発明の開示】本発明は、トリカブトの根のエキスを含
む末梢血流の血行促進剤の製造方法であって、トリカブ
トの根を水又はアルコールで抽出処理し、得られた水エ
キス又はアルコールエキスから、固相−液相間又は液相
−液相間の物質分配による分離操作によってアコニチン
型アルカロイド成分を除去し、得られた非アコニチン型
アルカロイド成分を含有する画分を有効成分として用い
ることを特徴とする、前記方法に関する。また本発明
は、分離操作をポリアミド、活性炭、活性シリカゲル、
活性アルミナ及びセファデックスからなる群から選択さ
れる担体を用いて行うことを特徴とする、前記方法に関
する。さらに本発明は、トリカブトの根のエキスの非ア
コニチン型アルカロイド成分を有効成分として含み、ア
コニチン型アルカロイド成分を実質的に含まない末梢血
流の血行促進剤であって、前記の方法によって製造され
ることを特徴とする、前記促進剤に関する。以下に、本
発明を詳細に説明する。本発明で用いる原料のトリカブ
トはキンポウゲ科(Ranunclaceae)トリカブト属植物(Aco
nitum ) であり、主な種としては、オクトリカブト（Ac
onitum japonicumTHUNB., Aconitum subcuneatum
NAKAI) 、ヤマトリカブト（Aconitum japonicumTHUNB.
var.montanum ) 、ハナトリカブト(Aconitum carmicha
eli DEBX.) 、エゾトリカブト(Aconitum yesoense N
AKAI) などがあげられる。
【０００６】本発明に係る血行促進剤において、有効成
分として使用する上記の画分を製造する方法としては、
前記のトリカブトの根を、好ましくは細切し、これに、
水又はアルコール、例えばメタノール又はエタノールを
加え、室温で、又は加熱下に、抽出処理し、得られた水
エキス又はアルコールエキスを固相−液相間又は液相−
液相間の物質分配による分離操作により処理し、アコニ
チン型アルカロイド成分を除去して、非アコニチン型ア
ルカロイド成分を含有する画分を得るという方法が用い
られる。
【０００７】一般に、トリカブトの根は猛毒性アルカロ
イドを含んでいるため、その水又はアルコールの抽出物
は特に取り扱いに注意を要する。その点から見た場合、
トリカブトの根に加熱等の処理を施し、減毒したものを
用いるのが好ましい。そのような処理の例としては、
（１）トリカブトの根をオートクレーブにて加圧・加熱
処理する、（２）蒸籠で蒸す、（３）鍋で煮るなどをあ
げることができる。
【０００８】前記のトリカブトの根の抽出を行う場合に
は、抽出溶媒として水とアルコールの混合溶媒を用いて
もよい。アルコールを用いて加熱抽出する場合は、還流
により行うことが好ましい。抽出操作は、撹拌機を用い
て撹拌しながら行ってもよく、また、超音波を用いて行
ってもよい。
【０００９】前記の固相−液相、液相−液相等の二相間
の物質の分配又は吸着性の差を利用した分離操作として
は、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラ
フィー、分配クロマトグラフィー等の各種のクロマトグ
ラフィーを用いることができる。また、この分離操作と
しては、分子の大きさの相違により物質を分離する方法
であるゲルろ過等を用いることができる。これらの方法
を用いて、前記の水エキス又はアルコールエキスを処理
し、アコニチン型アルカロイド成分を除去することによ
り、非アコニチン型アルカロイド成分を含有する画分を
得ることができる。
【００１０】前記の吸着クロマトグラフィーは、通常カ
ラムクロマトグラフィーで用いられる吸着剤、例えばポ
リアミド、活性炭、活性シリカゲル、活性アルミナ等の
担体を用いて行うことができる。担体としてポリアミド
を用いる場合は、トリカブトの根を水又はアルコールで
抽出処理し、得られた抽出物について、水抽出物の場合
は、そのまま、アルコール抽出物の場合は、それを濃縮
乾固して得られたアルコールエキスを一旦、水に懸濁し
て、その水抽出物又はアルコール抽出物の水懸濁液をそ
れぞれポリアミドを充填したカラムに通し、水にて洗浄
し、アコニチン型アルカロイド成分を除去した後、適当
な溶媒、例えばアンモニアアルカリ性のエタノールを用
いて溶出することにより、非アコニチン型アルカロイド
成分を含有する画分を得ることができる。
【００１１】担体として活性炭を用いる場合は、トリカ
ブトの根を水又はアルコールで抽出処理し、得られた抽
出物について、水抽出物の場合は、そのまま、アルコー
ル抽出物の場合は、それを濃縮乾固して得られたアルコ
ールエキスを水に懸濁して、その水抽出物又はアルコー
ル抽出物の水懸濁液をそれぞれ活性炭を充填したカラム
に通し、適当な溶媒、例えば２０％メタノールにて洗浄
した後、適当な溶媒、例えばアンモニアアルカリ性のメ
タノールを用いて溶出することにより、非アコニチン型
アルカロイド成分を含有する画分を得ることができる。
【００１２】担体としてシリカゲルを用いる場合は、ト
リカブトの根を水又はアルコールで抽出処理し、得られ
た抽出物を濃縮乾固して得られる水エキス又はアルコー
ルエキスを少量のメタノールに懸濁し、それぞれシリカ
ゲルを充填したカラムに通し、適当な混合溶媒、例えば
クロロホルム・メタノール・アンモニア水（５０：１
０：１）にて洗浄し、アコニチン型アルカロイド成分を
除去した後、適当な混合溶媒、例えばクロロホルム・メ
タノール・水（６：４：１）にて溶出することにより、
非アコニチン型アルカロイド成分を含有する画分を得る
ことができる。
【００１３】担体としてアルミナを用いる場合は、トリ
カブトの根を水又はアルコールで抽出処理し、得られた
抽出物を濃縮乾固して得られる水エキス又はアルコール
エキスを少量のメタノールに懸濁し、それぞれアルミナ
を充填したカラムに通し、適当な混合溶媒、例えばクロ
ロホルム・メタノール（４：１）にて洗浄し、アコニチ
ン型アルカロイド成分を除去した後、適当な混合溶媒、
例えばクロロホルム・メタノール・水（１２：１０：
３）にて溶出することにより、非アコニチン型アルカロ
イド成分を含有する画分を得ることができる。
【００１４】前記のイオン交換クロマトグラフィーは、
交換体として、例えばイオン交換樹脂、イオン交換セル
ロース、イオン交換デキストラン等を用いて行うことが
できる。例えば、イオン交換デキストランのＣＭ−セフ
ァデックスＣ−２５を用いる場合は、トリカブトの根を
水又はアルコールで抽出処理し、得られた抽出物につい
て、水抽出物の場合は、そのまま、アルコール抽出物の
場合は、それを濃縮乾固して得られたアルコールエキス
を水に懸濁して、その水抽出物又はアルコール抽出物の
水懸濁液をそれぞれＣＭ−セファデックスＣ−２５を充
填したカラムに通し、水にて溶出することにより非アコ
ニチン型アルカロイド成分を含有する画分を得ることが
できる。
【００１５】前記の分配クロマトグラフィーでは、カラ
ムクロマトグラフィーを用いる場合、固定相を保持する
物質として、シリカゲル、セファデックス等を用いるこ
とができる。例えば、固定相を保持する物質としてＣＭ
−セファデックスＣ−２５を用いる場合は、トリカブト
の根を水又はアルコールで抽出処理し、得られた抽出物
について、水抽出物の場合は、そのまま、アルコール抽
出物の場合は、それを濃縮乾固して得られたアルコール
エキスを水に懸濁して、その水抽出物又はアルコールエ
キスの水懸濁液をそれぞれＣＭ−セファデックスＣ−２
５を充填したカラムに通し、水にて溶出することにより
非アコニチン型アルカロイド成分を含有する画分を得る
ことができる。水−有機溶媒系の分配を用いる場合は、
水系の溶媒として、例えば酸性又はアルカリ性の水溶液
を、有機系の溶媒として、例えばエーテル及びｎ−ブタ
ノール等を用いることができる。 例えば、トリカブト
の根を水又はアルコールで抽出処理し、得られた抽出物
を濃縮乾固して得られる水エキス又はアルコールエキス
を１Ｎアンモニア水に溶解し、エーテルを用いて洗浄
し、水層に塩酸を加えて酸性にした後、水層をｎ−ブタ
ノールを用いて抽出し、ｎ−ブタノール抽出液を塩酸に
て洗浄することにより、非アコニチン型アルカロイド成
分を含有する画分を得ることができる。
【００１６】前記のゲルろ過では、網目構造を有する適
当なゲル粒子を担体として用いることができる。例え
ば、市販のトヨパールＨＷ４０Ｆを用いる場合は、トリ
カブトの根を水又はアルコールで抽出処理し、得られた
抽出物を濃縮乾固して得られる水エキス又はアルコール
エキスを、適当な溶媒、例えば５０％メタノールに懸濁
し、それぞれトヨパールＨＷ４０Ｆを充填したカラムに
通し、適当量の５０％メタノールで洗浄後、５０％メタ
ノールにて溶出することにより非アコニチン型アルカロ
イド成分を含有する画分を得ることができる。
【００１７】本発明において用いられるトリカブトの根
から得られる非アコニチン型アルカロイド成分を含有す
る画分は、液状のまま、あるいは濃縮乾固して、適当な
基剤を使用して、その基剤に対し希釈して使用する。基
剤としては、化粧品、医薬品等の業界で通常用いられる
任意所要の担体、乳化剤、懸濁化剤、芳香剤等の添加剤
が用いられ、慣用の方法で製剤化する。局所適用のため
の製剤としては、軟膏剤用組成物あるいは硬膏剤用組成
物あるいはハップ剤用組成物あるいは化粧水あるいはク
リーム等の形で提供され、当該技術分野において周知の
製剤用担体、例えばワセリン、パラフィン、加水ラノリ
ン、プラスチベース、カオリン、ベントナイト、タル
ク、ケイ酸アルミニウム、プロピレングリコール、ソル
ビトール、親水ワセリン、マクロゴール類、ロウ、樹
脂、精製ラノリン、ゴム、グリセリン、ゼラチン、ポリ
アクリル酸、ポリアクリル酸塩、ポリビニルアルコー
ル、ポリビニルピロリドン、ポリエチレンオキサイド、
ミツロウ、カカオ脂、カルナバロウ、ステアリルアルコ
ール、オリブ油、ヒマシ油、エタノール、オレイン酸、
セチルアルコール、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウ
ム、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロースな
どを含有していてもよい。これ等外用剤に含有させるト
リカブトの根の非アコニチン型アルカロイド成分を含有
する画分は、その画分の濃縮乾固物として、含量は約
０．０５〜１０％、好ましくは０．１〜５％である。
【００１８】本発明に係る血行促進剤の剤形は、また、
経口投与用の錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤あるいは
直腸内投与用製剤であっても良い。この場合の臨床投与
量は、トリカブトの根の非アコニチン型アルカロイド成
分を含有する画分の濃縮乾固物の含量として、成人１０
〜１０００ｍｇ／日、好ましくは、１００〜６００ｍｇ
／日である。経口投与用の錠剤、散剤、顆粒剤、カプセ
ル剤等は慣用の賦形剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸マ
グネシウム、リン酸カルシウム、とうもろこしでんぷ
ん、ばれいしょでんぷん、砂糖、ラクトース、タルク、
ステアリン酸マグネシウム、アラビアゴム等を含有して
いてもよい。錠剤は周知の方法でコーティングしてもよ
い。経口用液体製剤は水性または油性の懸濁液、溶液、
シロップ、エリキシル剤などであってもよい。
【００１９】直腸内投与のための製剤としては、坐剤用
組成物の形で提供することができ、この場合、当該技術
分野において周知の製剤用担体、例えばポリエチレング
リコール、ラノリン、ココナット油等を含有させること
ができる。
【００２０】注射用製剤は、懸濁化剤、安定剤または分
散剤のような各種の処方剤を含有させることができ、滅
菌蒸留水、精油、例えばピーナッツ油、とうもろこし油
あるいは非水溶媒、ポリエチレングリコール、ポリプロ
ピレングリコール等を含有させることができる。
【００２１】以下に、本発明に用いるトリカブトの根の
非アコニチン型アルカロイド成分を含有する画分の製造
例、純度試験（アコニチン型アルカロイドの確認）、薬
理作用試験、安全性試験及び本発明に係る血行促進剤の
処方例について述べる。
【００２２】
【実施例】
〔実施例１〕 トリカブトの根をオートクレーブにて１１０℃で４
０分間処理し、乾燥後粉砕する。 得られた粉砕物１ｋｇにメタノール４リットルを加
え、水浴上３０分間加熱還流抽出を行う。抽出後、静置
し、上澄液をろ過する。残留物にメタノール４リットル
を加え、さらに同様に加熱還流抽出の操作を繰返し行
い、得られたろ液を前のろ液と合わせ、減圧下に濃縮乾
固し、メタノールエキス１００ｇを得る。 上記のメタノールエキス１６ｇを水１０ｍｌに懸濁
した後、この懸濁液をポリアミド７５ｇを充填したカラ
ムに吸着させ、水１リットルにて洗浄後、３％アンモニ
アアルカリ性エタノール１リットルにて溶出する。溶出
液を減圧下に濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド
成分含有画分１．８ｇを得る。 ［純度試験］前記の操作により得られた非アコニチン型
アルカロイド成分含有画分１０ｍｇをメタノール１ｍｌ
に溶解し、ポリアミド０．５ｇを加え、よくかき混ぜた
後、メタノールを留去する。残留物をポリアミド２ｇを
充填したカラムに付し、水４０ｍｌにて溶出する。溶出
液を減圧下に濃縮乾固し、得られた残留物をメタノール
１ｍｌに溶解し、試料溶液とする。試料溶液の３μｌを
薄層クロマトグラフ用シリカゲルを用いて調製した薄層
板にスポツ卜する。次に、アンモニア飽和クロロホルム
・メタノール混液（１５：１）を展開溶媒として展開し
た後、薄層板を風乾する。これにドラーゲンドルフ試液
（注１）を均一に噴霧する。橙色のスポットを認めな
い。 （注１）次硝酸ビスマス０．８５ｇを氷酢酸１０ｍｌに
溶かした溶液２ｍｌに、ヨウ化カリウム８ｇを水２０ｍ
ｌに溶かした溶液２ｍｌ及び２０％酢酸溶液２０ｍｌを
加えて調製する。
【００２３】［前記純度試験における標品添加回収実
験］ （実験１）本試験：アコニチン約３ｍｇを精密に量り
（ａ）、メタノール１ｍｌに溶解し、ポリアミド０．５
ｇを加え、よくかき混ぜた後、メタノールを留去し、ポ
リアミド２ｇを充填したカラムに付す。次に、水４０ｍ
ｌにて溶出し、溶出液を濃縮乾固した後、残留物の重量
（ｂ）を測定した。空試験：前記本試験のアコニチンの
メタノール溶液１ｍｌの代わりに、メタノール１ｍｌを
用い、他は前記と同様の操作を行い、残留物の重量
（ｃ）を測定した。尚、メサコニチン、ヒパコニチン、
ジェサコニチンのそれぞれについて、アコニチンの場合
と同様の試験を行った。各標品につき、それぞれ３回試
験を繰り返した。結果を下記の表１に示す。表１中の
「回収した標品の重量」及び「回収率」は、下記の式に
より求めた。 （回収した標品の重量）＝ｂ−ｃ （回収率）＝（ｂ−ｃ）×１００／ａ
【００２４】
【表１】
【００２５】（実験２）本試験：前記の実施例１で得ら
れた非アコニチン型アルカロイド成分含有画分２０ｍｇ
をメタノール２ｍｌに溶解し、その１ｍｌをＡ液、残り
の１ｍｌをＢ液とする。アコニチン約３ｍｇを精密に量
り（ａ）、Ａ液に溶解し、ポリアミド０．５ｇを加え、
よくかき混ぜた後、メタノールを留去し、ポリアミド２
ｇを充填したカラムに付す。次に、水４０ｍｌにて溶出
し、溶出液を濃縮乾固した後、残留物の重量（ｂ）を測
定した。 空試験：前記本試験のアコニチンを溶解したＡ液の代わ
りにＢ液を用い、他は前記本試験と同様の操作をするこ
とにより行い、残留物の重量（ｃ）を測定した。尚、メ
サコニチン、ヒパコニチン、ジェサコニチンのそれぞれ
について、アコニチンの場合と同様の試験を行った。各
標品につき、それぞれ３回試験を繰り返した。結果を下
記の表２に示す。表２中の「回収した標品の重量」及び
「回収率」は、下記の式により求めた。 （回収した標品の重量）＝ｂ−ｃ （回収率）＝
（ｂ−ｃ）×１００／ａ
【００２６】
【表２】
【００２７】以上、（実験１）及び（実験２）の結果か
らこの純度試験は、アコニチン型アルカロイドの高い回
収率が得られており、また相対標準偏差の値から判断し
て、再現性の高い純度試験であることが確認された。以
下の実施例での純度試験は上記の純度試験法と同様にし
て行ったものである。
【００２８】〔実施例２〕実施例１に記載した及び
と同様の操作を行い、メタノールエキスを得る。メタノ
ールエキス４ｇを水１０ｍｌに懸濁した後、活性炭２０
ｇを充填したカラムに吸着させる。次に、２０％メタノ
ール６００ｍｌにて洗浄後、３％アンモニアアルカリ性
メタノール６００ｍｌにて溶出する。溶出液を濃縮乾固
し、非アコニチン型アルカロイド成分含有画分７６６ｍ
ｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポツトは認められなかった。
【００２９】〔実施例３〕実施例１に記載した及び
と同様の操作を行い、メタノールエキスを得る。メタノ
ールエキス４ｇを１Ｎアンモニア水１００ｍｌに懸濁し
た後、エーテル１００ｍｌにて５回洗浄した後、水層に
１０Ｎ塩酸１７ｍｌを加え、ｎ−ブタノール１００ｍｌ
にて２回抽出し、抽出液を１Ｎ塩酸２０ｍｌにて５回洗
浄後、濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分含
有画分４２４ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００３０】〔実施例４〕実施例１に記載した及び
と同様の操作を行い、メタノールエキスを得る。メタノ
ールエキス０．９ｇを水５ｍｌに懸濁した後、ＣＭ−セ
ファデックスｃ−２５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ
Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）４５ｇを充填したカラムに吸着
させる。次に水４５０ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固
し、非アコニチン型アルカロイド成分含有画分６３０ｍ
ｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００３１】〔実施例５〕実施例１に記載した及び
と同様の操作を行い、メタノールエキスを得る。メタノ
ールエキス１ｇをメタノール１ｍｌに懸濁し、アルミナ
１００ｇを充填したカラムに吸着させる。次にクロロホ
ルム・メタノール混液（４：１）４００ｍｌにて洗浄
後、クロロホルム・メタノール・水混液（１２：１０：
３）３００ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固し、非アコ
ニチン型アルカロイド成分含有画分６０ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００３２】〔実施例６〕実施例１に記載した及び
と同様の操作を行い、メタノールエキスを得る。メタノ
ールエキス０．２ｇをメタノール０．５ｍｌに懸濁した
後、シリカゲル２０ｇを充填したカラムに吸着させる。
次にクロロホルム・メタノール・アンモニア水混液 （５０：１０：１）３００ｍｌにて洗浄後、クロロホル
ム・メタノール・水混液（６：４：１）１５０ｍｌにて
溶出した画分を濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイ
ド成分含有画分４２ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００３３】〔実施例７〕実施例１に記載した及び
と同様の操作を行い、メタノールエキスを得る。メタノ
ールエキス０．３８ｇを５０％メタノール０．５ｍｌに
懸濁した後、トヨパールＨＷ４０Ｆ ７０ｍｌを充填し
たカラムに吸着させる。次に５０％メタノール４５ｍｌ
にて洗浄後、５０％メタノール１２０ｍｌにて溶出した
画分を濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分含
有画分２２８ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００３４】〔実施例８〕 トリカブトの根を細切したもの１ｋｇにメタノール
４リットルを加え、水浴上３０分間加熱還流抽出を行
う。抽出後、静置し、上澄液をろ過する。残留物にメタ
ノール４リットルを加え、上記の抽出の操作を繰返し行
い、ろ液を前記のろ過のろ液と合わせ、減圧下に濃縮乾
固し、メタノールエキス１５０ｇを得る。 得られたメタノールエキス１６ｇを水１０ｍｌに懸
濁した後、この懸濁液をポリアミド７５ｇを充填したカ
ラムに吸着させ、水１リットルにて洗浄後、３％アンモ
ニアアルカリ性エタノール１リットルにて溶出する。溶
出液を減圧下に濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイ
ド成分含有画分１．８ｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポツトは認められなかった。
【００３５】〔実施例９〕実施例８と同様の抽出操作
により、メタノールエキスを得る。そのメタノールエキ
ス４ｇを水１０ｍｌに懸濁した後、活性炭２０ｇを充填
したカラムに吸着させる。次に、２０％メタノール６０
０ｍｌにて洗浄後、３％アンモニアアルカリ性メタノー
ル６００ｍｌにて溶出する。溶出液を濃縮乾固し、非ア
コニチン型アルカロイド成分含有画分７７０ｍｇを得
る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００３６】〔実施例１０〕実施例８と同様の抽出操
作により、メタノールエキスを得る。そのメタノールエ
キス４ｇを１Ｎアンモニア水１００ｍｌに懸濁した後、
エーテル１００ｍｌにて５回洗浄した後、水層に１０Ｎ
塩酸１７ｍｌを加え、ｎ−ブタノール１００ｍｌにて２
回抽出し、抽出液を１Ｎ塩酸２０ｍｌにて５回洗浄後、
濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分含有画分
４２１ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００３７】〔実施例１１〕実施例８と同様の抽出操
作により、メタノールエキスを得る。そのメタノールエ
キス０．９ｇを水５ｍｌに懸濁し、ＣＭ−セファデック
スＣ−２５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌｓ）４５ｇを充填したカラムに吸着させる。次
に水４５０ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固し、非アコ
ニチン型アルカロイド成分含有画分６２５ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００３８】〔実施例１２〕実施例８と同様の抽出操
作により、メタノールエキスを得る。そのメタノールエ
キス１ｇをメタノール１ｍｌに懸濁し、アルミナ１００
ｇを充填したカラムに吸着させる。次にクロロホルム・
メタノール混液（４：１）４００ｍｌにて洗浄後、クロ
ロホルム・メタノール・水混液（１２：１０：３）３０
０ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固し、非アコニチン型
アルカロイド成分含有画分６２ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００３９】〔実施例１３〕実施例８と同様の抽出操
作により、メタノールエキスを得る。そのメタノールエ
キス０．２ｇをメタノール０．５ｍｌに溶解した後、シ
リカゲル２０ｇを充填したカラムに吸着させる。次にク
ロロホルム・メタノール・アンモニア水混液（５０：１
０：１）３００ｍｌにて洗浄後、クロロホルム・メタノ
ール・水混液（６：４：１）１５０ｍｌにて溶出した画
分を濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分含有
画分４４ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００４０】〔実施例１４〕実施例８と同様の抽出操
作により、メタノールエキスを得る。そのメタノールエ
キス０．３８ｇを５０％メタノール０．５ｍｌに懸濁し
た後、トヨパールＨＷ４０Ｆ ７０ｍｌを充填したカラ
ムに吸着させる。次に５０％メタノール４５ｍｌにて洗
浄後、５０％メタノール１２０ｍｌにて溶出した画分を
濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分含有画分
２３０ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００４１】〔実施例１５〕トリカブトの根をオートク
レーブにて１１０℃で４０分間処理し、乾燥後粉砕す
る。得られた粉砕物１００ｇに水１リットルを加え、約
１００℃で１．５時間加熱抽出する。得られた抽出液を
室温にて放冷した後、遠心分離し、上清をポリアミド１
５０ｇ充填したカラムに吸着させ、水２リツトルにて洗
浄後、３％アンモニアアルカリ性エタノール２リットル
にて溶出する。溶出液を減圧下に濃縮乾固し、非アコニ
チン型アルカロイド成分含有画分１．５ｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００４２】〔実施例１６〕トリカブトの根をオートク
レーブにて１１０℃で４０分間処理し、乾燥後粉砕す
る。得られた粉砕物１００ｇに水１リットルを加え、約
１００℃で１．５時間加熱抽出する。抽出液を室温にて
放冷した後、遠心分離し、上清を活性炭１５０ｇを充填
したカラムに吸着させる。次に、２０％メタノール５リ
ットルにて洗浄後、３％アンモニアアルカリ性メタノー
ル４．５リットルにて溶出する。溶出液を濃縮乾固し、
非アコニチン型アルカロイド成分含有画分２．８ｇを得
る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００４３】〔実施例１７〕 トリカブトの根をオートクレーブにて１１０℃で４
０分間処理し、乾燥後粉砕する。得られた粉砕物１００
ｇに水１リットルを加え、約１００℃で１．５時間加熱
抽出する。抽出液を室温にて放冷した後、遠心分離し、
上清を減圧下に濃縮乾固し、水エキスを得る。 水エキス４ｇを１Ｎアンモニア水１００ｍｌに懸濁
した後、エーテル１００ｍｌにて５回洗浄した後、水層
に１０Ｎ塩酸１７ｍｌを加え、ｎ−ブタノール１００ｍ
ｌにて２回抽出し、抽出液を１Ｎ塩酸２０ｍｌにて５回
洗浄後、濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分
含有画分２００ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００４４】〔実施例１８〕トリカブトの根をオートク
レーブにて１１０℃で４０分間処理し、乾燥後粉砕す
る。得られた粉砕物１００ｇに水１リットルを加え、約
１００℃で１．５時間加熱抽出する。抽出液を室温にて
放冷した後、遠心分離し、上清を水にて１リットルに調
製し、その１００ｍｌをＣＭ−セファデックスＣ−２５
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓ）８０ｇを充填したカラムに吸着させる。次に水８０
０ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固し、非アコニチン型
アルカロイド成分含有画分８００ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００４５】〔実施例１９〕実施例１７のと同様の抽
出操作により、水エキスを得る。その水エキス１ｇをメ
タノール１ｍｌに懸濁し、アルミナ１００ｇを充填した
カラムに吸着させる。次にクロロホルム・メタノール混
液（４：１）４００ｍｌにて洗浄後、クロロホルム・メ
タノール・水混液（１２：１０：３）３００ｍｌにて溶
出した画分を濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド
成分含有画分２５ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００４６】〔実施例２０〕実施例１７のと同様の抽
出操作処理により、水エキスを得る。その水エキス０．
２ｇをメタノール０．５ｍｌに懸濁した後、シリカゲル
２０ｇを充填したカラムに吸着させる。次にクロロホル
ム・メタノール・アンモニア水混液（５０：１０：１）
３００ｍｌにて洗浄後、クロロホルム・メタノール・水
混液（６：４：１）１５０ｍｌにて溶出した画分を濃縮
乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分含有画分１９
ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００４７】〔実施例２１〕実施例１７と同様の抽出
操作により、水エキスを得る。その水エキス０．４ｇを
５０％メタノール０．５ｍｌに懸濁した後、トヨパール
ＨＷ４０Ｆ７０ｍｌを充填したカラムに吸着させる。次
に５０％メタノール４５ｍｌにて洗浄後、５０％メタノ
ール１２０ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固し、非アコ
ニチン型アルカロイド成分含有画分１００ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００４８】〔実施例２２〕トリカブトの根を細切した
もの１００ｇに水１リットルを加え、約１００℃で１．
５時間加熱抽出する。抽出液を室温にて放冷した後、遠
心分離し、上清をポリアミド１５０ｇを充填したカラム
に吸着させ、水２リットルにて洗浄後、３％アンモニア
アルカリ性エタノール２リットルにて溶出する。溶出液
を減圧下に濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成
分含有画分１．６ｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００４９】〔実施例２３〕 トリカブトの根を細切したもの１００ｇに水１リットル
を加え、約１００℃で１．５時間加熱抽出する。抽出液
を室温にて放冷した後、遠心分離し、上清を活性炭１５
０ｇを充填したカラムに吸着させる。次に、２０％メタ
ノール５リットルにて洗浄後、３％アンモニアアルカリ
性メタノール４．５リットルにて溶出する。溶出液を濃
縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分含有画分
２．９ｇを得る。 ［純度試験］ 実施例１の純度試験と同様の操作を行い、橙色のスポッ
トは認められなかった。
【００５０】〔実施例２４〕 トリカブトの根を細切したもの１００ｇに水１リッ
トルを加え、約１００℃で１．５時間加熱抽出する。抽
出液を室温にて放冷した後、遠心分離し、上清を減圧下
に濃縮乾固し水エキスを得る。 水エキス４ｇを１Ｎアンモニア水１００ｍｌに懸濁
した後、エーテル１００ｍｌにて５回洗浄した後、水層
に１０Ｎ塩酸１７ｍｌを加え、ｎ−ブタノール１００ｍ
ｌにて２回抽出し、抽出液を１Ｎ塩酸２０ｍｌにて５回
洗浄後、濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分
含有画分１９７ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００５１】〔実施例２５〕トリカブトの根を細切した
もの１００ｇに水１リットルを加え、約１００℃で１．
５時間加熱抽出する。抽出液を室温にて放冷した後、遠
心分離し、上清をＣＭ−セファデックスＣ−２５（Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）８０
ｇを充填したカラムに吸着させる。次に水８００ｍｌに
て溶出した画分を濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロ
イド成分含有画分７９５ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００５２】〔実施例２６〕実施例２４と同様の抽出
操作により、水エキスを得る。その水エキス１ｇをメタ
ノール１ｍｌに懸濁し、アルミナ１００ｇを充填したカ
ラムに吸着させる。次にクロロホルム・メタノール混液
（４：１）４００ｍｌにて洗浄後、クロロホルム・メタ
ノール・水混液（１２：１０：３）３００ｍｌにて溶出
した画分を濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成
分含有画分２５ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００５３】〔実施例２７〕 実施例２４と同様の抽出操作により、水エキスを得
る。その水エキス０．２ｇをメタノール０．５ｍｌに懸
濁した後、シリカゲル２０ｇを充填したカラムに吸着さ
せる。次にクロロホルム・メタノール・アンモニア水混
液（５０：１０：１）３００ｍｌにて洗浄後、クロロホ
ルム・メタノール・水混液（６：４：１）１５０ｍｌに
て溶出した画分を濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロ
イド成分含有画分２０ｍｇを得る。 ［純度試験］ 実施例１の純度試験と同様の操作を行い、橙色のスポッ
トは認められなかった。
【００５４】〔実施例２８〕実施例２４と同様の抽出
操作により、水エキスを得る。その水エキス０．４ｇを
５０％メタノール０．５ｍｌに懸濁した後、トヨパール
ＨＷ４０Ｆ７０ｍｌを充填したカラムに吸着させる。次
に５０％メタノール４５ｍｌにて洗浄後、５０％メタノ
ール１２０ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固し、非アコ
ニチン型アルカロイド成分含有画分１０５ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。
【００５５】以下に、本発明に係る血行促進剤に使用す
るトリカブトの根の非アコニチン型アルカロイド成分含
有画分の薬理作用、急性毒性及び安全性についての実験
例を示す。
【００５６】〔実験例１〕（血流増大作用） この実験においては、Ｓｔｄ：ｄｄＹ系雄性マウス（２
０〜２５ｇ）を１群５匹として使用した。動物は室温２
４〜２５℃、自由な摂食、摂水および１２時間周期の明
暗条件下で飼育した。各試料はそれぞれ適量を用いてジ
メチルスルホキシドに溶解して用いた。マウスは、試験
実施の前日、背部を脱毛クリームにて除毛したものを用
いた。マウスをウレタンにて麻酔した後、除毛した背部
にレーザードップラー血流計（ＡＬＦ２１，アドバンス
社製）のプローブを貼付し、試料溶液投与前の血流量を
測定した。次に、試料溶液０．０５ｍｌをマウスの尾静
脈内に投与し、その１０分後から２５分間の血流量（ｍ
ｌ／分／１００ｇ）を測定した。結果は、試料溶液投与
前の血流量に対して、試料溶液投与後１０分から２５分
間に増大した累積血流量にて示した。陰性対照群ではジ
メチルスルホキシド液のみを投与した。群間比較による
薬物投与群の有意差検定は、ステューデントのｔ−検定
により行った。結果を表３に示す。表３に見られるよう
に、上記のトリカブトの根の非アコニチン型アルカロイ
ド成分含有画分は、陰性対照群に対してＰ＜０．０１の
有意な血流促進作用を示すことが認められた。
【００５７】
【表３】
【００５８】〔実験例２〕（血流増大作用） 実施例１で得られるトリカブトの根の非アコニチン型ア
ルカロイド成分を含有する画分を用いて、処方例１に基
づく軟膏を製造し、成人男子を被検者として血流を測定
した。試験条件を以下に示す。
【００５９】被検者を仰臥位に寝かせ、手の甲にレーザ
ードップラー血流計（ＡＬＦ２１，アドバンス社製）の
プローブを貼付し、軟膏塗布前の血流量を約３０分間測
定した。次に、貼付したプローブの周囲に、前記に示し
た軟膏を塗布し、約１時間血流量を測定した。結果は、
軟膏塗布前３０分間及び塗布後１５分から１時間までの
それぞれの最小血流量及び最大血流量で示した。結果を
表４に示す。表４に見られるように、上記のトリカブト
の根の非アコニチン型アルカロイド成分含有画分を含む
軟膏の塗布により、格別の血流の増大が認められた。
【００６０】
【表４】
【００６１】〔実験例３〕（急性毒性） この実験においては、Ｓｔｄ：ｄｄＹ系雄性マウス（２
０〜２５ｇ）を使用した。各試料はそれぞれ適量を用い
て水に懸濁し、表５に示す投与量で被検動物に経口投与
し、投与後７２時間の致死数を求めた。その結果を表５
に示す。表５に見られるように、本発明の血行促進剤に
使用するトリカブトの根の非アコニチン型アルカロイド
成分含有画分は、３ｇ／ｋｇの経口投与で死亡例は認め
られず、低毒性であることが認められた。
【００６２】
【表５】
【００６３】〔実験例４〕（安全性） 試験方法は２４時間人体前腕クローズドバッチテストを
用いた。被試験者は成人男子３名、成人女子１名であ
る。判定は下記の基準に従った。試料は、実施例１で得
られた非アコニチン型アルカロイド成分含有画分を用
い、処方例１に従って調製したものを用いた。 ＋＋：強紅斑 ± ：微かな紅斑 ＋ ：紅斑 − ：陰性 結果を表６に示す。表６に見られるように、この試料溶
液には皮膚刺激性、アレルギー性は全く認められず、皮
膚に対する安全性は極めて高いものであった。また、被
検者において、試験中、副作用は特に認められなかっ
た。
【００６４】
【表６】
【００６５】以下に本発明に係る血行促進剤の処方例を
示す。
【００６６】
【００６７】
【００６８】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 35/78 F A61P 9/00 A61P 9/08

Claims (3)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 トリカブトの根のエキスを含む末梢血流
    の血行促進剤の製造方法であって、トリカブトの根を水
    又はアルコールで抽出処理し、得られた水エキス又はア
    ルコールエキスから、固相−液相間又は液相−液相間の
    物質分配による分離操作によってアコニチン型アルカロ
    イド成分を除去し、得られた非アコニチン型アルカロイ
    ド成分を含有する画分を有効成分として用いることを特
    徴とする、前記方法。
  2. 【請求項２】 分離操作をポリアミド、活性炭、活性シ
    リカゲル、活性アルミナ及びセファデックスからなる群
    から選択される担体を用いて行うことを特徴とする、請
    求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 トリカブトの根のエキスの非アコニチン
    型アルカロイド成分を有効成分として含み、アコニチン
    型アルカロイド成分を実質的に含まない末梢血流の血行
    促進剤であって、請求項１又は２に記載の方法によって
    製造されることを特徴とする、前記促進剤。
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