JP3408317B2 - 新規なしみ及びそばかすを軽減するために使用する外皮用剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【技術分野】本発明は、しみ及びそばかすを軽減するた
めに使用する新規な外皮用剤に関するものであり、さら
に詳しく言えば、本発明は、トリカブトの根より得られ
る非アコニチン型アルカロイド成分を含有する画分を有
効成分として含有するしみ及びそばかすを軽減するため
に使用する外皮用剤に関するものである。

【０００２】

【背景技術】従来より、しみ及びそばかすは、表皮基底
細胞層に分布するメラノサイトの機能亢進により顔面に
色素が沈着して生ずるとされており、そばかすは直径数
ミリ位の色素斑で顔面中心部に多発する色素沈着であ
り、しみは多くは女性で、顔面の左右対称に発生する色
素沈着であるとされている。これまで、しみ及びそばか
すを軽減するためには、真皮メラニンの増加を刺激する
とされている直射日光を避けること等の手段がとられて
いるが、いまだ決定的に有効な薬剤は知られていない。

【０００３】本発明者は、しみ及びそばかすを軽減する
作用を有する有用な薬物の探索を行ったところ、トリカ
ブトの根より得られる非アコニチン型アルカロイド成分
を含有する画分が顕著なしみ及びそばかすを軽減する作
用を有することを見出した。本発明はかかる知見に基づ
くものである。

【０００４】

【発明の開示】本発明は、トリカブトの根を水又はアル
コールで抽出処理し、得られた水エキス又はアルコール
エキスを固相−液相間又は液相−液相間の物質分配によ
る分離操作を用いてアコニチン型アルカロイド成分を除
去して得られた非アコニチン型アルカロイド成分を含有
する画分を有効成分として含有することを特徴とするし
み及びそばかすを軽減するために使用する外皮用剤を提
供するものである。以下に、本発明を詳細に説明する。
本発明の外皮用剤の有効成分の調製に用いる原料のトリ
カブトとしてはキンポウゲ科（Ｒａｎｕｎｃｌａｃｅａ
ｅ）トリカブト属植物（Ａｃｏｎｉｔｕｍ）であり、主
な種の例としては、オクトリカブト（Ａｃｏｎｉｔｕｍ
ｊａｐｏｎｉｃｕｍ Ｔ_{ＨＵＮＢ．}，Ａｃｏｎｉｔｕ
ｍ ｓｕｂｃｕｎｅａｕｍ Ｎ_ＡＸＡＩ）、ヤマトリカ
ブト（Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ Ｔ
_{ＨＵＮＢ．}ｖａｒ．ｍｏｎｔａｎｕｍ），ハナトリカブ
ト（Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｃａｒｍｉｃｈａｅｌｉ Ｄ
_ＥＢＸ．）、エゾトリカブト（Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｙｅ
ｓｏｅｎｓｅ Ｎ_ＡＫＡＩ）などがあげられる。

【０００５】本発明に係るしみ及びそばかすを軽減する
ために使用する外皮用剤において有効成分として非アコ
ニチン型アルカロイド成分を含有する画分を製造する方
法としては、前記のトリカブトの根を、好ましくは細切
し、これに、水又はアルコール、例えばメタノール又は
エタノールを加え、室温で、又は加熱下に、抽出処理
し、得られた水エキス又はアルコールエキスを固相−液
相間又は液相−液相間の物質分配による分離操作を用い
てアコニチン型アルカロイド成分を除去し、非アコニチ
ン型アルカロイド成分を含有する画分を得るという方法
が用いられる。

【０００６】一般に、トリカブトの根は猛毒性アルカロ
イドを含んでいるため、その水又はアルコールの抽出物
は特に取り扱いに注意を要する。その点から見た場合、
トリカブトの根に加熱等の前処理を施し、減毒したもの
を用いるのが好ましい。そのような前処理の例として
は、（１）トリカブトの根をオートクレーブにて加圧・
加熱処理する、（２）蒸籠で蒸す、（３）鍋で煮るなど
をあげることができる。

【０００７】前記のトリカブトの根の抽出処理を行う場
合には、抽出溶媒として水とアルコールとの混合溶媒を
用いて行ってもよい。アルコールを用いて加熱抽出する
場合は、還流により行うことが好ましい。抽出操作は、
撹拌機を用いて撹拌しながら行ってもよく、又、超音波
を用いて行ってもよい。

【０００８】前記の固相−液相、液相−液相等の二相間
の物質の分配又は吸着性の差を利用した分離操作として
は、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラ
フィー、分配クロマトグラフィー等の各種のクロマトグ
ラフィーを用いることができる。又、この分離操作とし
ては、分子の大きさの相違により物質を分離する方法で
あるゲルろ過等を用いることができる。これらの方法を
用いて、前記の水エキス又はアルコールエキスを処理
し、アコニチン型アルカロイド成分を除去することによ
り、非アコニチン型アルカロイド成分を含有する画分を
得ることができる。

【０００９】前記の吸着クロマトグラフィーは、通常カ
ラムクロマトグラフィーで用いられる吸着剤、例えばポ
リアミド、活性炭、活性シリカゲル、活性アルミナ等の
担体を用いて行うことができる。担体としてポリアミド
を用いる場合は、トリカブトの根を水又はアルコールで
抽出処理し、得られた抽出物について、水抽出物の場合
は、そのまま、アルコール抽出物の場合は、それを濃縮
乾固して得られたアルコールエキスを一旦、水に懸濁し
て、その水抽出物又はアルコール抽出物の水懸濁液をそ
れぞれポリアミドを充填したカラムに通し、水にて洗浄
し、アコニチン型アルカロイド成分を除去した後、適当
な溶媒、例えばアンモニアアルカリ性のエタノールを用
いて溶出することにより、非アコニチン型アルカロイド
成分を含有する画分を得ることができる。

【００１０】担体として活性炭を用いる場合は、トリカ
ブトの根を水又はアルコールで抽出処理し、得られた抽
出物について、水抽出物の場合は、そのまま、アルコー
ル抽出物の場合は、それを濃縮乾固して得られたアルコ
ールエキスを一旦、水に懇濁して、その水抽出物又はア
ルコール抽出物の水懸濁液をそれぞれ活性炭を充填した
カラムに通し、適当な溶媒、例えば２０％メタノールに
て洗浄した後、適当な溶媒、例えばアンモニアアルカリ
性のメタノールを用いて溶出することにより、非アコニ
チン型アルカロイド成分を含有する画分を得ることがで
きる。

【００１１】担体としてシリカゲルを用いる場合は、ト
リカブトの根を水又はアルコールで抽出処理し、得られ
た抽出物を濃縮乾固して得られる水エキス又はアルコー
ルエキスを少量のメタノールに懸濁し、それぞれシリカ
ゲルを充填したカラムに通し、適当な混合溶媒、例えば
クロロホルム・メタノール・アンモニア水（５０：１
０：１）にて洗浄し、アコニチン型アルカロイド成分を
除去した後、適当な混合溶媒、例えばクロロホルム・メ
タノール・水（６：４：１）にて溶出することにより、
非アコニチン型アルカロイド成分を含有する画分を得る
ことができる。

【００１２】担体としてアルミナを用いる場合は、トリ
カブトの根を水又はアルコールで抽出処理し、得られた
抽出物を濃縮乾固して得られる水エキス又はアルコール
エキスを少量のメタノールに懸濁し、それぞれアルミナ
を充填したカラムに通し、適当な混合溶媒、例えばクロ
ロホルム・メタノール（４：１）にて洗浄し、アコニチ
ン型アルカロイド成分を除去した後、適当な混合溶媒、
例えばクロロホルム・メタノール・水（１２：１０：
３）にて溶出することにより、非アコニチン型アルカロ
イド成分を含有する画分を得ることができる。

【００１３】前記のイオン交換クロマトグラフィーは、
交換体として、例えばイオン交換樹脂、イオン交換セル
ロース、イオン交換デキストラン等を用いて行うことが
できる。例えば、イオン交換デキストランのＣＭ−セフ
ァデックスＣ−２５を用いる場合は、トリカブトの根を
水又はアルコールで抽出処理し、得られた抽出物につい
て、水抽出物の場合は、そのまま、アルコール抽出物の
場合は、それを濃縮乾固して得られたアルコールエキス
を一旦、水に懸濁して、その水抽出物又はアルコール抽
出物の水懸濁液をそれぞれＣＭ−セファデックスＣ−２
５を充填したカラムに通し、水にて溶出することにより
非アコニチン型アルカロイド成分を含有する画分を得る
ことができる。

【００１４】前記の分配クロマトグラフィーでは、カラ
ムクロマトグラフィーを用いる場合、固定相を保持する
物質として、シリカゲル、セファデックス等を用いるこ
とができる。例えば、固定相を保持する物質としてＣＭ
−セファデックスＣ−２５を用いる場合は、トリカブト
の根を水又はアルコールで抽出処理し、得られた抽出物
について、水抽出物の場合は、そのまま、アルコール抽
出物の場合は、それを濃縮乾固して得られたアルコール
エキスを一旦、水に懸濁して、その水抽出物又はアルコ
ールエキスの水懸濁液をそれぞれＣＭ−セファデックス
Ｃ−２５を充填したカラムに通し、水にて溶出すること
により非アコニチン型アルカロイド成分を含有する画分
を得ることができる。水−有機溶媒系の分配を用いる場
合は、水系の溶媒として、例えば酸性又はアルカリ性の
水溶液を、有機系の溶媒として、例えばエーテル及びｎ
−ブタノール等を用いることができる。例えば、トリカ
ブトの根を水又はアルコールで抽出処理し、得られた抽
出物を濃縮乾固して得られる水エキス又はアルコールエ
キスを１Ｎアンモニア水に溶解し、エーテルを用いて洗
浄し、水層に塩酸を加えて酸性にした後、水層をｎ−ブ
タノールを用いて抽出し、ｎ−ブタノール抽出液を塩酸
にて洗浄することにより、非アコニチン型アルカロイド
成分を含有する画分を得ることができる。

【００１５】前記のゲルろ過では、網目構造を有する適
当なゲル粒子を担体として用いることができる。例え
ば、市販のトヨパールＨＷ４０Ｆを用いる場合は、トリ
カブトの根を水又はアルコールで抽出処理し、得られた
抽出物を濃縮乾固して得られる水エキス又はアルコール
エキスを、適当な溶媒、例えば５０％メタノールに懸濁
し、それぞれトヨパールＨＷ４０Ｆを充填したカラムに
通し、適当量の５０％メタノールで洗浄後、５０％メタ
ノールにて溶出することにより非アコニチン型アルカロ
イド成分を含有する画分を得ることができる。

【００１６】本発明において用いられるトリカブトの根
から得られる非アコニチン型アルカロイド成分を含有す
る画分は、液状のまま、あるいは濃縮乾固して、適当な
基剤を使用して、その基剤に対し希釈して使用する。基
剤としては、化粧品、医薬品等の業界で通常用いられる
任意所要の担体、乳化剤、懸濁化剤、芳香剤等の添加剤
が用いられ、慣用の方法で製剤化する。これらの材料の
例としては、オレイン酸、トリエタノールアミン、サラ
シミツロウ、カルナウバロウ、木ロウ、カカオ脂、トラ
ガント、アラビアゴム、ベントナイト、ワセリン、流動
パラフィン、固形パラフィン、ソルビット、ペクチン、
ゼラチン、カオリン、タルク、ポリビニルピロリドン、
酸化チタン、スクワラン、酸化亜鉛、炭酸マグネシウ
ム、炭酸カリウム、無水ケイ酸、オリブ油、ヒマシ油、
ツバキ油、ホホバ油、ラノリン、シリコンオイル、カル
ボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロー
ス、グリセリン、プロピレングリコール、エタノール、
イソプロパノール、ジプロピレングリコール、１，３−
ブチレングリコール、ポリビニルアルコール、オレイル
アルコール、ステアリルアルコール、ポリエチレングリ
コール、セチルアルコール、ラウリル硫酸ナトリウム、
セトステアリルアルコール、ソルビタンモノステアレー
ト、ステアリン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、ポリオキ
シエチレンオレイルエーテル、糖類、アミノ酸等があげ
られ、剤形は、化粧水、乳液、クリーム、パック等、そ
の他種々の形で提供することができる。又、軟膏用組成
物、あるいは硬膏用組成物の形でも提供することがで
き、これら各製剤は周知の製剤用担体、例えば、ワセリ
ン、パラフィン、加水ラノリン、プラスチベース、親水
ワセリン、マクロゴール類、ロウ、樹脂、精製ラノリ
ン、ゴム等を含有していてもよい。これ等外用剤に含有
されるトリカブトの根の非アコニチン型アルカロイド成
分を含する画分の含量は約０．０５〜１０％、好ましく
は０．１〜５％である。

【００１７】以下に、本発明に用いるトリカブトの根の
非アコニチン型アルカロイド成分を含有する画分の製造
例、純度試験（アコニチン型アルカロイドの確認）、薬
理作用試験、安全性試験及び本発明に係るしみ及びそば
かすを軽減するために使用する外皮用剤の処方例につい
て述べる。

【００１８】

【実施例】

〔実施例１〕 トリカブトの根をオートクレーブにて１１０℃で４
０分間処理し、乾燥後粉砕する。 得られた粉砕物１ｋｇにメタノール４リットルを加
え、水浴上３０分間加熱還流抽出を行う。抽出後、静置
し、上澄液をろ過する。残留物にメタノール４リットル
を加え、さらに同様に加熱還流抽出の操作を繰返し行
い、得られたろ液を前のろ液と合わせ、減圧下に濃縮乾
固し、メタノールエキス１００ｇを得る。 上記のメタノールエキス１６ｇを水１０ｍｌに懸濁
した後、この懸濁液をポリアミド７５ｇを充填したカラ
ムに吸着させ、水１リットルにて洗浄後、３％アンモニ
アアルカリ性エタノール１リットルにて溶出する。溶出
液を減圧下に濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド
成分含有画分１．８ｇを得る。 ［純度試験］前記の操作により得られた非アコニチン型
アルカロイド成分含有画分１０ｍｇをメタノール１ｍｌ
に溶解し、ポリアミド０．５ｇを加え、よくかき混ぜた
後、メタノールを留去する。残留物をポリアミド２ｇを
充填したカラムに付し、水４０ｍｌにて溶出する。溶出
液を減圧下に濃縮乾固し、得られた残留物をメタノール
１ｍｌに溶解し、試料溶液とする。試料溶液の３μｌを
薄層クロマトグラフ用シリカゲルを用いて調製した薄層
板にスポットする。次に、アンモニア飽和クロロホルム
・メタノール混液（１５：１）を展開溶媒として展開し
た後、薄層板を風乾する。これにドラーゲンドルフ試液
（注１）を均一に噴霧する。橙色のスポットを認めな
い。 （注１）次硝酸ビスマス０．８５ｇを氷酢酸１０ｍｌに
溶かした溶液２ｍｌに、ヨウ化カリウム８ｇを水２０ｍ
ｌに溶かした溶液２ｍｌ及び２０％酢酸溶液２０ｍｌを
加えて調製する。

【００１９】［前記純度試験における標品添加回収実
験］ （実験１）本試験：アコニチン約３ｍｇを精密に量り
（ａ）、メタノール１ｍｌに溶解し、ポリアミド０．５
ｇを加え、よくかき混ぜた後、メタノールを留去し、ポ
リアミド２ｇを充填したカラムに付す。次に、水４０ｍ
ｌにて溶出し、溶出液を濃縮乾固した後、残留物の重量
（ｂ）を測定した。 空試験：前記本試験のアコニチンのメタノール溶液１ｍ
ｌの代わりに、メタノール１ｍｌを用い、他は前記と同
様の操作を行い、残留物の重量（ｃ）を測定した。 尚、メサコニチン、ヒパコニチン、ジェサコニチンのそ
れぞれについて、アコニチンの場合と同様の試験を行っ
た。各標品につき、それぞれ３回試験を繰り返した。結
果を下記の表１に示す。表１中の「回収した標品の重
量」及び回収率」は、下記の式により求めた。 （回収した標品の重量）＝ｂ−ｃ （回収率）＝（ｂ−ｃ）×１００／ａ

【００２０】

【表１】

【００２１】（実験２）本試験：前記の実施例１で得ら
れた非アコニチン型アルカロイド成分含有画分２０ｍｇ
をメタノール２ｍｌに溶解し、その１ｍｌをＡ液、残り
の１ｍｌをＢ液とする。アコニチン約３ｍｇを精密に量
り（ａ）、Ａ液に溶解し、ポリアミド０．５ｇを加え、
よくかき混ぜた後、メタノールを留去し、ポリアミド２
ｇを充填したカラムに付す。次に、水４０ｍｌにて溶出
し、溶出液を濃縮乾固した後、残留物の重量（ｂ）を測
定した。 空試験：前記本試験のアコニチンを溶解したＡ液の代わ
りにＢ液を用い、他は前記本試験と同様の操作をするこ
とにより行い、残留物の重量（ｃ）を測定した。 尚、メサコニチン、ヒパコニチン、ジェサコニチンのそ
れぞれについて、アコニチンの場合と同様の試験を行っ
た。各標品につき、それぞれ３回試験を繰り返した。結
果を下記の表２に示す。表２中の「回収した標品の重
量」及び回収率」は、下記の式により求めた。 （回収した標品の重量）＝ｂ−ｃ （回収率）＝（ｂ−ｃ）×１００／ａ

【００２２】

【表２】

【００２３】以上、（実験１）及び（実験２）の結果か
ら、前記の純度試験では、アコニチン型アルカロイド
は、高い回収率で検出され、又、相対標準偏差の値から
判断して、再現性が高く、高い精度でアコニチン型アル
カロイドが検出される試験法であることが示された。従
って、以下の実施例での純度試験は上記の純度試験法と
同様にして行ったものである。

【００２４】〔実施例２〕実施例１に記載した及び
と同様の操作を行い、メタノールエキスを得る。メタノ
ールエキス４ｇを水１０ｍｌに懸濁した後、活性炭２０
ｇを充填したカラムに吸着させる。次に、２０％メタノ
ール６００ｍｌにて洗浄後、３％アンモニアアルカリ性
メタノール６００ｍｌにて溶出する。溶出液を濃縮乾固
し、非アコニチン型アルカロイド成分含有画分７６６ｍ
ｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００２５】〔実施例３〕実施例１に記載した及び
と同様の操作を行い、メタノールエキスを得る。メタノ
ールエキス４ｇを１Ｎアンモニア水１００ｍｌに験濁し
た後、エーテル１００ｍｌにて５回洗浄した後、水層に
１０Ｎ塩酸１７ｍｌを加え、ｎ−ブタノール１００ｍｌ
にて２回抽出し、抽出液を１Ｎ塩酸２０ｍｌにて５回洗
浄後、濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分含
有画分４２４ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００２６】〔実施例４〕実施例１に記載した及び
と同様の操作を行い、メタノールエキスを得る。メタノ
ールエキス０．９ｇを水５ｍｌに懸濁した後、ＣＭ−セ
ファデックスＣ−２５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ
Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）４５ｇを充填したカラムに吸着
させる。次に水４５０ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固
し、非アコニチン型アルカロイド成分含有画分６３０ｍ
ｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００２７】〔実施例５〕実施例１に記載した及び
と同様の操作を行い、メタノールエキスを得る。メタノ
ールエキス１ｇをメタノール１ｍｌに験濁し、アルミナ
１００ｇを充填したカラムに吸着させる。次にクロロホ
ルム・メタノール混液（４：１）４００ｍｌにて洗浄
後、クロロホルム・メタノール・水混液（１２：１０：
３）３００ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固し、非アコ
ニチン型アルカロイド成分含有画分６０ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００２８】〔実施例６〕実施例１に記載した及び
と同様の操作を行い、メタノールエキスを得る。メタノ
ールエキス０．２ｇをメタノール０．５ｍｌに懸濁した
後、シリカゲル２０ｇを充填したカラムに吸着させる。
次にクロロホルム・メタノール・アンモニア水混液（５
０：１０：１）３００ｍｌにて洗浄後、クロロホルム・
メタノール・水混液（６：４：１）１５０ｍｌにて溶出
した画分を濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成
分含有画分４２ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００２９】〔実施例７〕実施例１に記載した及び
と同様の操作を行い、メタノールエキスを得る。メタノ
ールエキス０．３８ｇを５０％メタノール０．５ｍｌに
験濁した後、トヨパールＨＷ４０Ｆ７０ｍｌを充填した
カラムに吸着させる。次に５０％メタノール４５ｍｌに
て洗浄後、，５０％メタノール１２０ｍｌにて溶出した
画分を濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分含
有画分２２８ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００３０】〔実施例８〕 トリカブトの根を細切したもの１ｋｇにメタノール
４リットルを加え、水浴上３０分間加熱還流抽出を行
う。抽出後、静置し、上澄液をろ過する。残留物にメタ
ノール４リットルを加え、上記の抽出の操作を繰返し行
い、ろ液を前記のろ過のろ液と合わせ、減圧下に濃縮乾
固し、メタノールエキス１５０ｇを得る。 得られたメタノールエキス１６ｇを水１０ｍｌに懸
濁した後、この懸濁液をポリアミド７５ｇを充填したカ
ラムに吸着させ、水１リットルにて洗浄後、３％アンモ
ニアアルカリ性エタノール１リットルにて溶出する。溶
出液を減圧下に濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイ
ド成分含有画分１．８ｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００３１】〔実施例９〕実施例８と同様の抽出操作
により、メタノールエキスを得る。そのメタノールエキ
ス４ｇを水１０ｍｌに懸濁した後、活性炭２０ｇを充填
したカラムに吸着させる。次に、２０％メタノール６０
０ｍｌにて洗浄後、３％アンモニアアルカリ性メタノー
ル６００ｍｌにて溶出する。溶出液を濃縮乾固し、非ア
コニチン型アルカロイド成分含有画分７７０ｍｇを得
る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００３２】〔実施例１０〕実施例８と同様の抽出操
作により、メタノールエキスを得る。そのメタノールエ
キス４ｇを１Ｎアンモニア水１００ｍｌに懸濁した後、
エーテル１００ｍｌにて５回洗浄した後、水層に１０Ｎ
塩酸１７ｍｌを加え、ｎ−ブタノール１００ｍｌにて２
回抽出し、抽出液を１Ｎ塩酸２０ｍｌにて５回洗浄後、
濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分含有画分
４２１ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００３３】〔実施例１１〕実施例８と同様の抽出操
作により、メタノールエキスを得る。そのメタノールエ
キス０．９ｇを水５ｍｌに懸濁し、ＣＮ−セファデック
スＣ−２５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌｓ）４５ｇを充填したカラムに吸着させる。次
に水４５０ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固し、非アコ
ニチン型アルカロイド成分含有画分６２５ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００３４】〔実施例１２〕実施例８と同様の抽出操
作により、メタノールエキスを得る。そのメタノールエ
キス１ｇをメタノール１ｍｌに懸濁し、アルミナ１００
ｇを充填したカラムに吸着させる。次にクロロホルム・
メタノール混液（４：１）４００ｍｌにて洗浄後、クロ
ロホルム・メタノール・水混液（１２：１０：３）３０
０ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固し、非アコニチン型
アルカロイド成分含有画分６２ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００３５】〔実施例１３〕実施例８と同様の抽出操
作により、メタノールエキスを得る。そのメタノールエ
キス０．２ｇをメタノール０．５ｍｌに溶解した後、シ
リカゲル２０ｇを充填したカラムに吸着させる。次にク
ロロホルム・メタノール・アンモニア水混液（５０；１
０：１）３００ｍｌにて洗浄後、クロロホルム・メタノ
ール・水混液（６：４：１）１５０ｍｌにて溶出した画
分を濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分含有
画分４４ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００３６】〔実施例１４〕実施例８と同様の抽出操
作により、メタノールエキスを得る。そのメタノールエ
キス０．３８ｇを５０％メタノール０．５ｍｌに懸濁し
た後、トヨパールＨＷ４０Ｆ７０ｍｌを充填したカラム
に吸着させる。次に５０％メタノール４５ｍｌにて洗浄
後、５０％メタノール１２０ｍｌにて溶出した画分を濃
縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分含有画分２
３０ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００３７】〔実施例１５〕トリカブトの根をオートク
レーブにて１１０℃で４０分間処理し、乾燥後粉砕す
る。得られた粉砕物１００ｇに水１リットル加え、約１
００℃で１．５時間加熱抽出する。得られた抽出液を室
温にて放冷した後、遠心分離し、上清をポリアミド１５
０ｇを充填したカラムに吸着させ、水２リットルにて洗
浄後、３％アンモニアアルカリ性エタノール２リットル
にて溶出する。溶出液を減圧下に濃縮乾固し、非アコニ
チン型アルカロイド成分含有画分１．５ｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００３８】〔実施例１６〕トリカブトの根をオートク
レーブにて１１０℃で４０分間処理し、乾燥後粉砕す
る。得られた粉砕物１００ｇに水１リットルを加え、約
１００℃で１．５時間加熱抽出する。抽出液を室温にて
放冷した後、遠心分離し、上清を活性炭１５０ｇを充填
したカラムに吸着させる。次に、２０％メタノール５リ
ットルにて洗浄後、３％アンモニアアルカリ性メタノー
ル４．５リットルにて溶出する。溶出液を濃縮乾固し、
非アコニチン型アルカロイド成分含有画分２．８ｇを得
る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００３９】〔実施例１７〕 トリカブトの根をオートクレーブにて１１０℃で４
０分間処理し、乾燥後粉砕する。得られた粉砕物１００
ｇに水１リットルを加え、約１００℃で１．５時間加熱
抽出する。抽出液を室温にて放冷した後、遠心分離し、
上清を減圧下に濃縮乾固し、水エキスを得る。 水エキス４ｇを１Ｎアンモニア水１００ｍｌに懸濁
した後、エーテル１００ｍｌにて５回洗浄した後、水層
に１０Ｎ塩酸１７ｍｌを加え、ｎ−ブタノール１００ｍ
ｌにて２回抽出し、抽出液を１Ｎ塩酸２０ｍｌにて５回
洗浄後、濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分
含有画分２００ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００４０】〔実施例１８〕トリカブトの根をオートク
レーブにて１１０℃で４０分間処理し、乾燥後粉砕す
る。得られた粉砕物１００ｇに水１リットルを加え、約
１００℃で１．５時間加熱抽出する。抽出液を室温にて
放冷した後、遠心分離し、上清を水にて１リットルに調
製し、その１００ｍｌをＣＮ−セファデックスＣ−２５
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓ）８０ｇを充填したカラムに吸着させる。次に水８０
０ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固し、非アコニチン型
アルカロイド成分含有画分８００ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００４１】〔実施例１９〕実施例１７のと同様の抽
出操作により、水エキスを得る。その水エキス１ｇをエ
タノール１ｍｌに懸濁し、アルミナ１００ｇを充填した
カラムに吸着させる。次にクロロホルム・メタノール混
液（４：１）４００ｍｌにて洗浄後、クロロホルム・メ
タノール・水混液（１２：１０：３）３００ｍｌにて溶
出した画分を濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド
成分含有画分２５ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００４２】〔実施例２０〕実施例１７のと同様の抽
出操作処理により、水エキスを得る。その水エキス０．
２ｇをメタノール０．５ｍｌに懸濁した後、シリカゲル
２０ｇを充填したカラムに吸着させる。次にクロロホル
ム・メタノール・アンモニア水混液（５０：１０：１）
３００ｍｌにて洗浄後、クロロホルム・メタノール・水
混液（６：４：１）１５０ｍｌにて溶出した画分を濃縮
乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分含有画分１９
ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００４３】〔実施例２１〕実施例１７と同様の抽出
操作により、水エキスを得る。その水エキス０．４ｇを
５０％メタノール０．５ｍｌに懸濁した後、トヨパール
ＨＷ４０Ｆ７０ｍｌを充填したカラムに吸着させる。次
に５０％メタノール４５ｍｌにて洗浄後、５０％メタノ
ール１２０ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固し、非アコ
ニチン型アルカロイド成分含有画分１００ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００４４】〔実施例２２〕トリカブトの根を細切した
もの１００ｇに水１リットルを加え、約１００℃で１．
５時間加熱抽出する。抽出液を室温にて放冷した後、遠
心分離し、上清をポリアミド１５０ｇを充填したカラム
に吸着させ、水２リットルにて洗浄後、３％アンモニア
アルカリ性エタノール２リットルにて溶出する。溶出液
を減圧下に濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成
分含有画分１．６ｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００４５】〔実施例２３〕トリカブトの根を細切した
もの１００ｇに水１リットルを加え、約１００℃で１．
５時間加熱抽出する。抽出液を室温にて放冷した後、遠
心分離し、上清を活性炭１５０ｇを充填したカラムに吸
着させる。次に、２０％メタノール５リットルにて洗浄
後、３％アンモニアアルカリ性メタノール４．５リット
ルにて溶出する。溶出液を濃縮乾固し、非アコニチン型
アルカロイド成分含有画分２．９ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００４６】〔実施例２４〕 トリカブトの根を細切したもの１００ｇに水１リッ
トルを加え、約１００℃で１．５時間加熱抽出する。抽
出液を室温にて放冷した後、遠心分離し、上清を減圧下
に濃縮乾固し水エキスを得る。 水エキス４ｇを１Ｎアンモニア水１００ｍｌに懸濁
した後、エーテル１００ｍｌにて５回洗浄した後、水層
に１０Ｎ塩酸１７ｍｌを加え、ｎ−ブタノール１００ｍ
ｌにて２回抽出し、抽出液を１Ｎ塩酸２０ｍｌにて５回
洗浄後、濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成分
含有画分１９７ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００４７】〔実施例２５〕トリカブトの根を細切した
もの１００ｇに水１リットルを加え、約１００℃で１．
５時間加熱抽出する。抽出液を室温にて放冷した後、遠
心分離し、上清をＣＭ−セファデックスＣ−２５（Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）８０
ｇを充填したカラムに吸着させる。次に水８００ｍｌに
て溶出した画分を濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロ
イド成分含有画分７９５ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００４８】〔実施例２６〕実施例２４と同様の抽出
操作により、水エキスを得る。その水エキス１ｇをメタ
ノール１ｍｌに懸濁し、アルミナ１００ｇを充填したカ
ラムに吸着させる。次にクロロホルム・メタノール混液
（４：１）４００ｍｌにて洗浄後、クロロホルム・メタ
ノール・水混液（１２：１０：３）３００ｍｌにて溶出
した画分を濃縮乾固し、非アコニチン型アルカロイド成
分含有画分２５ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００４９】〔実施例２７〕実施例２４と同様の抽出
操作により、水エキスを得る。その水エキス０．２ｇを
メタノール０．５ｍｌに溶解した後、シリカゲル２０ｇ
を充填したカラムに吸着させる。次にクロロホルム・メ
タノール・アンモニア水混液（５０：１０：１）３００
ｍｌにて洗浄後、クロロホルム・メタノール・水混液
（６：４：１）１５０ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固
し、非アコニチン型アルカロイド成分含有画分２０ｍｇ
を得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００５０】〔実施例２８〕実施例２４と同様の抽出
操作により、水エキスを得る。その水エキス０．４ｇを
５０％メタノール０．５ｍｌに懸濁した後、トヨパール
ＨＷ４０Ｆ７０ｍｌを充填したカラムに吸着させる。次
に５０％メタノール４５ｍｌにて洗浄後、５０％メタノ
ール１２０ｍｌにて溶出した画分を濃縮乾固し、非アコ
ニチン型アルカロイド成分含有画分１０５ｍｇを得る。 ［純度試験］実施例１の純度試験と同様の操作を行い、
橙色のスポットは認められなかった。

【００５１】以下に、本発明に係るしみ及びそばかすを
軽減するために使用する外皮用剤に用いられるトリカブ
トの根の非アコニチン型アルカロイド成分含有画分の薬
理作用、急性毒性及び安全性についての実験例を示す。

【００５２】

【実験例】

〔実験例１〕実施例１，２，６，１０，１８，１９及び
２８で得られたトリカブトの根の非アコニチン型アルカ
ロイド成分を含有する画分を用い、それぞれ処方例１に
基づく軟膏を作成し、このものを実験に使用した。実験
は、しみやそばかすのある成人男子及び成人女子を選び
被試験者として行った。被試験者は、毎日朝及び夜の２
回、洗顔した後に上記の軟膏を顔面全体に塗布し、これ
を３０日間継続した。判定は、軟膏塗布開始前と３０日
間の軟膏塗布終了後の顔面の色素斑の数及び色調の比較
に基づき、下記の表の判定基準に従って総合的に行っ
た。 結果を表３に示す。表３に見られるように、上記のトリ
カブトの根の非アコニチン型アルカロイド成分含有画分
は、しみ及びそばかすを軽減する作用のあることが明ら
かとなった。又、試験中、副作用は特に認められなかっ
た。

【００５３】

【表３】

【００５４】〔実験例２〕（急性毒性） この実験においては、Ｓｔｄ：ｄｄＹ系雄性マウス（２
０〜２５ｇ）を使用した。各試料はそれぞれ適量を用い
て水に懸濁し、表４に示す投与量で被検動物に経口投与
し、投与後７２時間の致死数を求めた。その結果を表４
に示す。表４に見られるように、本発明のしみ及びそば
かすを軽減するために使用する外皮用剤で用いるトリカ
ブトの根の非アコニチン型アルカロイド成分含有画分
は、３ｇ／ｋｇの経口投与で死亡例は認められず、低毒
性であることが認められた。

【００５５】

【表４】

【００５６】

【表５】

【００５７】〔実験例３〕（安全性） 試験方法は２４時間人体前腕クローズドバッチテストを
用いた。被試験者は成人男子３名、成人女子１名であ
る。判定は下記の基準に従った。試料は、実施例１で得
られた非アコニチン型アルカロイド成分含有画分を用
い、処方例１に従って調製したものを用いた。 ＋＋：強紅斑 ± ：微かな紅斑 ＋ ：紅斑 − ：陰性 結果を表５に示す。表５に見られるように、この試料溶
液には皮膚刺激性、アレルギー性は全く認められず、皮
膚に対する安全性は極めて高いものであった。又、被試
験者において、試験中、副作用は特に認められなかっ
た。

【００５８】

【表６】

【００５９】以下に本発明に係るしみ及びそばかすを軽
減するために使用する外皮用剤の処方例を示す。 〔処方例１〕軟膏 グリセリン １０．０ｇ 白色ワセリン ２５．０ｇ プロピレングリコール ５．０ｇ ステアリルアルコール ２０．０ｇ ラウリル硫酸ナトリウム １．５ｇ 実施例１で得られた非アコニチン型アルカロイド成分含有画分 ３．０ｇ精製水 適 量 全 量 １００ ｇ

【００６０】 〔処方例２〕クリーム （Ａ）成分 ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート ０．４ｇ ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート ３．０ｇ ミリスチン酸イソプロピル ２．５ｇ パルミチン酸イソステアリル ３．５ｇ 鯨ロウ ２．０ｇ セタノール ２．０ｇ パラフィンワックス ２．６ｇ 実施例２で得られた非アコニチン型アルカロイド成分含有画分 １．０ｇ （Ｂ）成分 ホウ砂 ０．５ｇ プロピレングリコール ５．０ｇ 水 ７８．５ｇ （Ａ）成分を約８０℃にて、（Ｂ）成分を約８２℃にて
それぞれ加熱し、均一に溶解し、（Ａ）成分を撹拌しな
がら、これに（Ｂ）成分を加え、よく撹拌して乳化す
る。

【００６１】 〔処方例３〕化粧水 （Ａ）成分 ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．０．） １．０ｇ エタノール １５．０ｇ 実施例６で得られた非アコニチン型アルカロイド成分含有画分 １．０ｇ （Ｂ）成分 クエン酸 ０．１ｇ クエン酸ナトリウム ０．３ｇ １，３−ブチレングリコール ４．０ｇ 精製水 ５０．０ｇ 精製水で全量１００ｇとする。（Ａ）成分及び（Ｂ）成
分をそれぞれ加熱しながら、均一に溶解させた後、
（Ａ）成分を撹拌しながら、これに（Ｂ）成分を加え、
さらに精製水を加えて、全量１００ｇとする。

【００６２】 〔処方例４） 乳液 ステアリン酸 ０．２ｇ セタノール １．５ｇ ワセリン ３．０ｇ ラノリンアルコール ２．０ｇ 流動パラフィン １０．０ｇ ポリオキシエチレンモノオレイン酸エステル ２．０ｇ グリセリン ３．０ｇ プロピレングリコール ５．０ｇ トリエタノールアミン １．０ｇ 実施例１０で得られた非アコニチン型アルカロイド成分含有画分 １．０ｇ精製水 ７０．０ｇ 精製水にプロピレングリコール、トリエタノールアミン
及び実施例１０で得られた非アコニチン型アルカロイド
成分含有画分を加え、加熱混合し、水層部とする。別
に、他の成分を混合し、約７０℃に加熱して均一にした
ものを油層部とする。油層部を水層部に加え、ホモミキ
サーにて均一に乳化して調製した。

【００６３】 〔処方例５〕パック ポリビニルアルコール １５．０ｇ カルボキシメチルセルロースナトリウム ５．０ｇ プロピレングリコール ３．０ｇ エタノール １０．０ｇ 実施例１８で得られた非アコニチン型アルカロイド成分含有画分 １．０ｇ精製水 ６６．５ｇ 精製水にプロピレングリコール及び実施例１８で得られ
た非アコニチン型アルカロイド成分含有画分を加え溶解
し、Ａ液とする。別に、ポリビニルアルコール及びカル
ボキシメチルセルロースナトリウムをエタノールに潤
し、これを約７０℃の条件にてＡ液に加え、よくかき混
ぜて調製した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平５−255099（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−122209（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−10006（ＪＰ，Ａ) 特開 平６−145041（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−234014（ＪＰ，Ａ) 特開 昭55−167226（ＪＰ，Ａ) 特開 昭49−61315（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 7/00 - 7/50 A61K 35/78

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 トリカブトの根のエキスを含むしみ及び
   そばかすを軽減するために使用する外皮用剤の製造方法
   であって、トリカブトの根を水又はアルコールで抽出処
   理し、得られた水エキス又はアルコールエキスから、固
   相−液相間又は液相−液相間の物質分配による分離操作
   によってアコニチン型アルカロイド成分を除去し、得ら
   れた非アコニチン型アルカロイド成分を含有する画分を
   有効成分として用いることを特徴とする、前記方法。
2. 【請求項２】 分離操作をポリアミド、活性炭、活性シ
   リカゲル、活性アルミナ及びセファデックスからなる群
   から選択される担体を用いて行うことを特徴とする、請
   求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 トリカブトの根のエキスの非アコニチン
   型アルカロイド成分を有効成分として含み、アコニチン
   型アルカロイド成分を実質的に含まないしみ及びそばか
   すを軽減するために使用する外皮用剤であって、請求項
   １又は２に記載の方法によって製造されることを特徴と
   する、前記外皮用剤。