JP3217180B2 - 物質の測定法 - Google Patents
物質の測定法Info
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- JP3217180B2 JP3217180B2 JP06010593A JP6010593A JP3217180B2 JP 3217180 B2 JP3217180 B2 JP 3217180B2 JP 06010593 A JP06010593 A JP 06010593A JP 6010593 A JP6010593 A JP 6010593A JP 3217180 B2 JP3217180 B2 JP 3217180B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は試料中のグルコースを消
去した後、試料中の特定の成分、例えば１，５−アンヒ
ドログルシトール等を酵素反応を利用して定量する方法
に関する。
去した後、試料中の特定の成分、例えば１，５−アンヒ
ドログルシトール等を酵素反応を利用して定量する方法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】生体試料中にはグルコースが存在し、成
分を分析する際に試料中のグルコースが成分の測定結果
に影響を与える場合がある。かかる場合目的成分の定量
に先だってグルコースを分解あるいは当該定量に影響し
ない物質に変換した後定量が行われる。
分を分析する際に試料中のグルコースが成分の測定結果
に影響を与える場合がある。かかる場合目的成分の定量
に先だってグルコースを分解あるいは当該定量に影響し
ない物質に変換した後定量が行われる。
【０００３】試料中のグルコースの消去方法としては、
(i) イオン交換カラムクロマトグラフィーでグルコース
を分離する方法（特開昭６３−１８５３０７号公報、特
開昭６４−６７５６号公報）、(ii)ヘキソキナーゼ タ
イプＩＶ（グルコース−６−ホスフォトランスフェラー
ゼ）、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼを用い
てグルコースを酸化酵素の作用を受けない物質に変える
方法（特開平１−３２０９９８号公報）および(iii) ヘ
キソキナーゼ タイプＩＶ、ピルベートキナーゼを用い
てグルコースを酸化酵素の作用を受けない物質に変える
方法（特開平２−１０４２９８号公報）が知られてい
る。しかし(i) のカラムを用いる方法は操作が煩雑であ
り、また、(ii)および(iii) に示された方法は精度上、
必ずしも満足できるものではない。
(i) イオン交換カラムクロマトグラフィーでグルコース
を分離する方法（特開昭６３−１８５３０７号公報、特
開昭６４−６７５６号公報）、(ii)ヘキソキナーゼ タ
イプＩＶ（グルコース−６−ホスフォトランスフェラー
ゼ）、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼを用い
てグルコースを酸化酵素の作用を受けない物質に変える
方法（特開平１−３２０９９８号公報）および(iii) ヘ
キソキナーゼ タイプＩＶ、ピルベートキナーゼを用い
てグルコースを酸化酵素の作用を受けない物質に変える
方法（特開平２−１０４２９８号公報）が知られてい
る。しかし(i) のカラムを用いる方法は操作が煩雑であ
り、また、(ii)および(iii) に示された方法は精度上、
必ずしも満足できるものではない。
【０００４】１，５−アンヒドログルシトールは糖尿病
の診断マーカーとして知られている。１，５−アンヒド
ログルシトールの定量法としては該物質に酸化酵素を作
用させた後、酸素の消費量、過酸化水素の生成量または
電子受容体の還元体の生成量を測定する方法が知られて
いる（特公平３−２４２００号公報）。しかし、１，５
−アンヒドログルシトールを基質とする酸化酵素はいず
れも基質特異性が弱く、試料中に共存するグルコースに
も作用するため、多量のグルコースが共存する試料での
該方法の使用には問題がある。
の診断マーカーとして知られている。１，５−アンヒド
ログルシトールの定量法としては該物質に酸化酵素を作
用させた後、酸素の消費量、過酸化水素の生成量または
電子受容体の還元体の生成量を測定する方法が知られて
いる（特公平３−２４２００号公報）。しかし、１，５
−アンヒドログルシトールを基質とする酸化酵素はいず
れも基質特異性が弱く、試料中に共存するグルコースに
も作用するため、多量のグルコースが共存する試料での
該方法の使用には問題がある。
【０００５】
【 発明が解決しようとする課題】試料中のグルコース
を目的の成分の分析に影響を与えない物質に効率よく変
換することによって目的の成分を正確に定量する方法の
開発が求められている。
を目的の成分の分析に影響を与えない物質に効率よく変
換することによって目的の成分を正確に定量する方法の
開発が求められている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は試料中のグルコ
ースにアデノシン三リン酸の存在下、グルコ−スイソメ
ラーゼ、フラクトキナ−ゼおよび６−ホスホフラクトキ
ナーゼを作用させてグルコースをフラクトース−１，６
−二リン酸に変換し、ついで目的の成分を酵素反応を利
用して定量する方法に関する。
ースにアデノシン三リン酸の存在下、グルコ−スイソメ
ラーゼ、フラクトキナ−ゼおよび６−ホスホフラクトキ
ナーゼを作用させてグルコースをフラクトース−１，６
−二リン酸に変換し、ついで目的の成分を酵素反応を利
用して定量する方法に関する。
【０００７】この方法を１，５−アンヒドログルシトー
ルの定量に適用することによって１，５−アンヒドログ
ルシトールを正確に定量することができる。グルコース
消去はグルコースを下記反応に従ってフラクトース−
１，６−二リン酸に変えることにより行われる。
ルの定量に適用することによって１，５−アンヒドログ
ルシトールを正確に定量することができる。グルコース
消去はグルコースを下記反応に従ってフラクトース−
１，６−二リン酸に変えることにより行われる。
【０００８】
【化１】
【０００９】この反応においてグルコースをフラクト−
スに変換しただけではフラクト−スが可逆反応によりグ
ルコ−スに戻るので、さらにフラクト−スをフラクトー
ス−６−リン酸を経由してフラクトース−１，６−二リ
ン酸に変換することによりグルコースへの変換反応が進
行しないということが見出された。本発明はこの発見に
基づいて完成された。
スに変換しただけではフラクト−スが可逆反応によりグ
ルコ−スに戻るので、さらにフラクト−スをフラクトー
ス−６−リン酸を経由してフラクトース−１，６−二リ
ン酸に変換することによりグルコースへの変換反応が進
行しないということが見出された。本発明はこの発見に
基づいて完成された。
【００１０】本発明は目的の成分の分析において、試料
中に存在するグルコースが目的の分析を阻害する場合に
適用することによって大きな効果を期待することができ
る。本発明は目的の成分を分析する際に用いられる酵素
がグルコースにも作用する場合のみならず、目的の成分
をグルコースを経由して定量する際にも適用できる。た
とえばグルコースと類似構造を有する１，５−アンヒド
ログルシトールの定量、あるいはグルコースを経由して
定量するアミラーゼの定量等に適用すると効果が著し
い。
中に存在するグルコースが目的の分析を阻害する場合に
適用することによって大きな効果を期待することができ
る。本発明は目的の成分を分析する際に用いられる酵素
がグルコースにも作用する場合のみならず、目的の成分
をグルコースを経由して定量する際にも適用できる。た
とえばグルコースと類似構造を有する１，５−アンヒド
ログルシトールの定量、あるいはグルコースを経由して
定量するアミラーゼの定量等に適用すると効果が著し
い。
【００１１】本発明を実施するに際しては、グルコース
が共存する試料にアデノシン三リン酸、グルコ−スイソ
メラ−ゼ、フラクトキナ−ゼおよび６−ホスホフラクト
キナーゼを加え、好ましくはマグネシウム塩の存在下、
必要によりＳＨ化合物を加え、１５−５０℃で１−３０
分間、好ましくは３−１０分間反応させる。
が共存する試料にアデノシン三リン酸、グルコ−スイソ
メラ−ゼ、フラクトキナ−ゼおよび６−ホスホフラクト
キナーゼを加え、好ましくはマグネシウム塩の存在下、
必要によりＳＨ化合物を加え、１５−５０℃で１−３０
分間、好ましくは３−１０分間反応させる。
【００１２】本反応においては、グルコ−スイソメラ−
ゼ（ＥＣ．５．３．１．１８）０．５−５０Ｕ／ｍｌ、
フラクトキナ−ゼ（ＥＣ．２．７．１．４）を１−１０
０Ｕ／ｍｌ，６−ホスホフラクトキナーゼ〔ホスホヘキ
ソキナーゼ〕（ＥＣ．２．７．１．１１）１−１００Ｕ
／ｍｌが用いられ、各酵素とも市販品が容易に入手可能
である。
ゼ（ＥＣ．５．３．１．１８）０．５−５０Ｕ／ｍｌ、
フラクトキナ−ゼ（ＥＣ．２．７．１．４）を１−１０
０Ｕ／ｍｌ，６−ホスホフラクトキナーゼ〔ホスホヘキ
ソキナーゼ〕（ＥＣ．２．７．１．１１）１−１００Ｕ
／ｍｌが用いられ、各酵素とも市販品が容易に入手可能
である。
【００１３】アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）は０．１−
１０ｍｇ／ｍｌの濃度で用いられる。ＡＴＰの代わりに
ピルベートキナーゼ（０．５−５０Ｕ／ｍｌ）とホスホ
エノールピルベート（０．１−１０ｍｇ／ｍｌ）〔特開
平２−１０４２９８号公報〕またはクレアチンキナーゼ
（１−１００Ｕ／ｍｌ）とクレアチンホスフェート
（０．１−１０ｍｇ／ｍｌ）等アデノシン三リン酸の生
成系を用いて反応液中にＡＴＰを生成させることができ
る。マグネシウム塩としては例えば、１μＭ〜１００ｍ
Ｍ濃度の、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム等があ
げられる。ＳＨ化合物としては、例えばメルカプトエタ
ノール、システイン等があげられる。反応により生成し
たフラクトース−１，６−二リン酸は安定で逆反応によ
りグルコースに変換されない。
１０ｍｇ／ｍｌの濃度で用いられる。ＡＴＰの代わりに
ピルベートキナーゼ（０．５−５０Ｕ／ｍｌ）とホスホ
エノールピルベート（０．１−１０ｍｇ／ｍｌ）〔特開
平２−１０４２９８号公報〕またはクレアチンキナーゼ
（１−１００Ｕ／ｍｌ）とクレアチンホスフェート
（０．１−１０ｍｇ／ｍｌ）等アデノシン三リン酸の生
成系を用いて反応液中にＡＴＰを生成させることができ
る。マグネシウム塩としては例えば、１μＭ〜１００ｍ
Ｍ濃度の、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム等があ
げられる。ＳＨ化合物としては、例えばメルカプトエタ
ノール、システイン等があげられる。反応により生成し
たフラクトース−１，６−二リン酸は安定で逆反応によ
りグルコースに変換されない。
【００１４】該反応によりグルコースを消去した後、試
料中の定量すべき成分の定量に必要な試薬を加えて、生
成した成分を定量するか、反応前試料中に存在した成分
の変化を定量することによって目的の成分を定量でき
る。
料中の定量すべき成分の定量に必要な試薬を加えて、生
成した成分を定量するか、反応前試料中に存在した成分
の変化を定量することによって目的の成分を定量でき
る。
【００１５】つぎに試料中の１，５−アンヒドログルシ
トールの定量について説明する。１，５−アンヒドログ
ルシトールの定量はそれ自体公知の方法が何れも適用で
きる。例えば１，５−アンヒドログルシトールに酸化酵
素を作用させて生成する過酸化水素と色源体とをペルオ
キシダーゼの存在下に反応させ、生成する色素により呈
色する反応液の可視部の吸収を測定することにより、
１，５−アンヒドログルシトールを定量することができ
る。
トールの定量について説明する。１，５−アンヒドログ
ルシトールの定量はそれ自体公知の方法が何れも適用で
きる。例えば１，５−アンヒドログルシトールに酸化酵
素を作用させて生成する過酸化水素と色源体とをペルオ
キシダーゼの存在下に反応させ、生成する色素により呈
色する反応液の可視部の吸収を測定することにより、
１，５−アンヒドログルシトールを定量することができ
る。
【００１６】本反応において用いられる酸化酵素（その
使用量）としては、例えばソルボースオキシダーゼ（Ｅ
Ｃ．１．１．３．１１）（１０−１０００Ｕ／ｍｌ）、
ピラノースオキシダーゼ（ＥＣ．１．１．３．１０）
（１−１００Ｕ／ｍｌ）が用いられる。ペルオキシダー
ゼ（ＥＣ．１．１１．１．７）は１−１００Ｕ／ｍｌの
濃度で用いられる。
使用量）としては、例えばソルボースオキシダーゼ（Ｅ
Ｃ．１．１．３．１１）（１０−１０００Ｕ／ｍｌ）、
ピラノースオキシダーゼ（ＥＣ．１．１．３．１０）
（１−１００Ｕ／ｍｌ）が用いられる。ペルオキシダー
ゼ（ＥＣ．１．１１．１．７）は１−１００Ｕ／ｍｌの
濃度で用いられる。
【００１７】色源体はペルオキシダーゼの存在下に酸化
されて発色する化合物であれば何れも用いることができ
る。例えば、４−アミノアンチピリンまたは３−メチル
−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾンとフェノールもし
くはその誘導体またはアニリンもしくはその誘導体のカ
ップリング系が使用できる。好ましくは生成する色素の
感度の高いものが良く、例えば２，２’−アジノ−ビス
（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）、ビ
ス〔３−ビス（４−クロロフェニル）メチル−４−ジメ
チルアミノフェニル〕アミン（以下ＢＣＭＡと略す）
〔特開昭５９−１８２３６１号公報〕、ビス〔３−ビス
（４−クロロフェニル）メチル−４−カルボキシエチル
アミノフェニル〕アミン〔特開昭５９−１８２３６１号
公報〕、１０−Ｎ−メチルカルバモイル−３，７−ジメ
チルアミノ−１０Ｈ−フェノチアジン（以下ＭＣＤＰと
略す）〔特開昭５６−１４５３５２号公報〕、１０−Ｎ
−カルボキシメチルカルバモイル−３，７−ジメチルア
ミノ−１０Ｈ−フェノチアジン（以下ＣＣＡＰと略す）
〔特開昭５６−１４５３５２号公報〕が使用できる。使
用する色源体の量は過酸化水素と等モル量−１０００倍
モル量を用いる。
されて発色する化合物であれば何れも用いることができ
る。例えば、４−アミノアンチピリンまたは３−メチル
−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾンとフェノールもし
くはその誘導体またはアニリンもしくはその誘導体のカ
ップリング系が使用できる。好ましくは生成する色素の
感度の高いものが良く、例えば２，２’−アジノ−ビス
（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）、ビ
ス〔３−ビス（４−クロロフェニル）メチル−４−ジメ
チルアミノフェニル〕アミン（以下ＢＣＭＡと略す）
〔特開昭５９−１８２３６１号公報〕、ビス〔３−ビス
（４−クロロフェニル）メチル−４−カルボキシエチル
アミノフェニル〕アミン〔特開昭５９−１８２３６１号
公報〕、１０−Ｎ−メチルカルバモイル−３，７−ジメ
チルアミノ−１０Ｈ−フェノチアジン（以下ＭＣＤＰと
略す）〔特開昭５６−１４５３５２号公報〕、１０−Ｎ
−カルボキシメチルカルバモイル−３，７−ジメチルア
ミノ−１０Ｈ−フェノチアジン（以下ＣＣＡＰと略す）
〔特開昭５６−１４５３５２号公報〕が使用できる。使
用する色源体の量は過酸化水素と等モル量−１０００倍
モル量を用いる。
【００１８】反応温度は１５−５０℃で、反応時間は３
−３０分間、好ましくは５−１０分間である。以下に具
体的な実施例を挙げる。
−３０分間、好ましくは５−１０分間である。以下に具
体的な実施例を挙げる。
【００１９】
実施例１．１，５−アンヒドログルシトールの測定に必
要な以下のような組成の試薬１および２を調製した。 試薬１ リン酸緩衝液（PH7.5 ） 25 mM 塩化ナトリウム 50 mM グルコ−スイソメラ−ゼ 5 U/ml アデノシン三リン酸 5 mg/ml フラクトキナ−ゼ 20 U/ml ６−ホスホフラクトキナーゼ 20 U/ml 塩化マグネシウム 4.9 mM ペルオキシダーゼ 10 U/ml 試薬２ リン酸緩衝液（PH6.0 ） 200 mM フェノール 0.1 mg/ml ピラノースオキシダーゼ 100 U/ml ＢＣＭＡ 0.1 mg/ml
要な以下のような組成の試薬１および２を調製した。 試薬１ リン酸緩衝液（PH7.5 ） 25 mM 塩化ナトリウム 50 mM グルコ−スイソメラ−ゼ 5 U/ml アデノシン三リン酸 5 mg/ml フラクトキナ−ゼ 20 U/ml ６−ホスホフラクトキナーゼ 20 U/ml 塩化マグネシウム 4.9 mM ペルオキシダーゼ 10 U/ml 試薬２ リン酸緩衝液（PH6.0 ） 200 mM フェノール 0.1 mg/ml ピラノースオキシダーゼ 100 U/ml ＢＣＭＡ 0.1 mg/ml
【００２０】１，５−アンヒドログルシトール５ｍｇ／
ｄｌの標準液を５段階（各５、２、１、０．５、０．２
５ｍｇ／ｄｌ）に希釈して作成した試料または精製水
０．０５ｍｌに試薬１を２．２５ｍｌ加え、３７℃で１
０分間加温し、その後、試薬２を０．７５ｍｌ添加して
さらに５分間反応させ、７５５ｎｍでの吸光度を測定し
た。得られた結果を図１に示した。
ｄｌの標準液を５段階（各５、２、１、０．５、０．２
５ｍｇ／ｄｌ）に希釈して作成した試料または精製水
０．０５ｍｌに試薬１を２．２５ｍｌ加え、３７℃で１
０分間加温し、その後、試薬２を０．７５ｍｌ添加して
さらに５分間反応させ、７５５ｎｍでの吸光度を測定し
た。得られた結果を図１に示した。
【００２１】実施例２．１，５−アンヒドログルシトー
ル２．５５ｍｇ／ｄｌ（カラム法により定量）を含むヒ
ト血清を試料として、実施例１の方法に従い試料中の
１，５−アンヒドログルシトール量を測定したところ
２．５７ｍｇ／ｄｌであった。
ル２．５５ｍｇ／ｄｌ（カラム法により定量）を含むヒ
ト血清を試料として、実施例１の方法に従い試料中の
１，５−アンヒドログルシトール量を測定したところ
２．５７ｍｇ／ｄｌであった。
【００２２】実施例３．実施例２に用いた１，５−アン
ヒドログルシトール２．５５ｍｇ／ｄｌを含むヒト血清
を試料として、ＢＣＭＡの代わりにＭＣＤＰを用いる以
外は、実施例２と同様の方法に従い試料中の１，５−ア
ンヒドログルシトール量を測定したところ２．５６ｍｇ
／ｄｌであった。
ヒドログルシトール２．５５ｍｇ／ｄｌを含むヒト血清
を試料として、ＢＣＭＡの代わりにＭＣＤＰを用いる以
外は、実施例２と同様の方法に従い試料中の１，５−ア
ンヒドログルシトール量を測定したところ２．５６ｍｇ
／ｄｌであった。
【００２３】実施例４．ＢＣＭＡの代わりにＣＣＡＰを
用いる以外は、実施例２の方法を繰り返した結果試料中
の１，５−アンヒドログルシトール量は２．５８ｍｇ／
ｄｌであった。
用いる以外は、実施例２の方法を繰り返した結果試料中
の１，５−アンヒドログルシトール量は２．５８ｍｇ／
ｄｌであった。
【００２４】実施例５．アデノシン三リン酸を０．２ｍ
ｇ／ｍｌに減らし、クレアチンキナーゼ１０Ｕ／ｍｌお
よびクレアチンホスフェート５ｍｇ／ｍｌを加える以外
は実施例２の方法を繰り返した結果、試料中の１，５−
アンヒドログルシトール量は２．５５ｍｇ／ｄｌであっ
た。
ｇ／ｍｌに減らし、クレアチンキナーゼ１０Ｕ／ｍｌお
よびクレアチンホスフェート５ｍｇ／ｍｌを加える以外
は実施例２の方法を繰り返した結果、試料中の１，５−
アンヒドログルシトール量は２．５５ｍｇ／ｄｌであっ
た。
【００２５】実施例６．実施例５において、クレアチン
キナーゼおよびクレアチンホスフェートの代わりにピル
べートキナーゼ５Ｕ／ｍｌおよびホスホエノールホスフ
ェイト１ｍｇ／ｍｌを用いる以外は実施例２の方法を繰
り返した結果、試料中の１，５−アンヒドログルシトー
ル量は２．５４ｍｇ／ｄｌであった。
キナーゼおよびクレアチンホスフェートの代わりにピル
べートキナーゼ５Ｕ／ｍｌおよびホスホエノールホスフ
ェイト１ｍｇ／ｍｌを用いる以外は実施例２の方法を繰
り返した結果、試料中の１，５−アンヒドログルシトー
ル量は２．５４ｍｇ／ｄｌであった。
【００２６】実施例７．１，５−アンヒドログルシトー
ル５ｍｇ／ｄｌおよびグルコース２０００ｍｇ／ｄｌの
共存する試料において、実施例１の方法により試料中の
１，５−アンヒドログルシトール量を測定したところ５
ｍｇ／ｄｌであった。
ル５ｍｇ／ｄｌおよびグルコース２０００ｍｇ／ｄｌの
共存する試料において、実施例１の方法により試料中の
１，５−アンヒドログルシトール量を測定したところ５
ｍｇ／ｄｌであった。
【００２７】実施例８．１，５−アンヒドログルシトー
ル５ｍｇ／ｄｌおよびグルコース２０００ｍｇ／ｄｌの
共存する試料において、実施例５の方法により試料中の
１，５−アンヒドログルシトール量を測定したところ５
ｍｇ／ｄｌであった。
ル５ｍｇ／ｄｌおよびグルコース２０００ｍｇ／ｄｌの
共存する試料において、実施例５の方法により試料中の
１，５−アンヒドログルシトール量を測定したところ５
ｍｇ／ｄｌであった。
【００２８】比較例１．フラクトキナ−ゼおよび６−ホ
スホフラクトキナーゼを無添加にする以外は、実施例７
と同様の測定を行ったところ、試料中の１，５−アンヒ
ドログルシトール量は９．８ｍｇ／ｄｌであった。
スホフラクトキナーゼを無添加にする以外は、実施例７
と同様の測定を行ったところ、試料中の１，５−アンヒ
ドログルシトール量は９．８ｍｇ／ｄｌであった。
【００２９】比較例２．６−ホスホフラクトキナーゼを
無添加にする以外は、実施例７と同様の測定を行ったと
ころ、試料中の１，５−アンヒドログルシトール量は
９．０ｍｇ／ｄｌであった。
無添加にする以外は、実施例７と同様の測定を行ったと
ころ、試料中の１，５−アンヒドログルシトール量は
９．０ｍｇ／ｄｌであった。
【００３０】比較例３．特開平１−３２０９９８号公報
の方法に準じて、グルコ−スイソメラ−ゼ、フラクトキ
ナ−ゼおよび６−ホスホフラクトキナ−ゼの代わりにヘ
キソキナ−ゼタイプＩＶ ５Ｕ／ｍｌ、グルコ−ス−６
−リン酸デヒドロゲナ−ゼ５Ｕ／ｍｌ、フェナジンメゾ
サルフェイト（ＮＡＤＰからの水素受容体として）０．
２ｍｇ／ｍｌおよびＮＡＤＰ０．２ｍｇ／ｍｌを用いる
以外は、実施例７と同様の測定を行ったところ、試料中
の１，５−アンヒドログルシト−ル量は６．５ｍｇ／ｄ
ｌであった。
の方法に準じて、グルコ−スイソメラ−ゼ、フラクトキ
ナ−ゼおよび６−ホスホフラクトキナ−ゼの代わりにヘ
キソキナ−ゼタイプＩＶ ５Ｕ／ｍｌ、グルコ−ス−６
−リン酸デヒドロゲナ−ゼ５Ｕ／ｍｌ、フェナジンメゾ
サルフェイト（ＮＡＤＰからの水素受容体として）０．
２ｍｇ／ｍｌおよびＮＡＤＰ０．２ｍｇ／ｍｌを用いる
以外は、実施例７と同様の測定を行ったところ、試料中
の１，５−アンヒドログルシト−ル量は６．５ｍｇ／ｄ
ｌであった。
【００３１】比較例４．特開平２−１０４２９８号公報
の方法に準じて、グルコ−スイソメラ−ゼ、フラクトキ
ナ−ゼおよび６−ホスホフラクトキナーゼの代わりにヘ
キソキナ−ゼ５Ｕ／ｍｌ、ピルベートキナーゼ３Ｕ／ｍ
ｌおよびホスホエノールピルビン酸０．１ｍｇ／ｍｌを
用いる以外は、実施例７と同様の測定を行ったところ、
試料中の１，５−アンヒドログルシトール量は９．５ｍ
ｇ／ｄｌであった。
の方法に準じて、グルコ−スイソメラ−ゼ、フラクトキ
ナ−ゼおよび６−ホスホフラクトキナーゼの代わりにヘ
キソキナ−ゼ５Ｕ／ｍｌ、ピルベートキナーゼ３Ｕ／ｍ
ｌおよびホスホエノールピルビン酸０．１ｍｇ／ｍｌを
用いる以外は、実施例７と同様の測定を行ったところ、
試料中の１，５−アンヒドログルシトール量は９．５ｍ
ｇ／ｄｌであった。
【００３２】以上、実施例７および８、比較例１〜４で
得られた１，５−アンヒドログルシトール量の測定値お
よび添加した１，５−アンヒドログルシトール量と測定
値との誤差を第１表に示す。
得られた１，５−アンヒドログルシトール量の測定値お
よび添加した１，５−アンヒドログルシトール量と測定
値との誤差を第１表に示す。
【００３３】
【表１】
【００３４】第１表によれば、実施例７および８では、
添加した１，５−アンヒドログルシトール量（５ｍｇ／
ｄｌ）を誤差無く定量できた。
添加した１，５−アンヒドログルシトール量（５ｍｇ／
ｄｌ）を誤差無く定量できた。
【００３５】
【発明の効果】本発明によれば、煩雑なカラム操作が不
用で簡便でありかつ正確な１，５−アンヒドログルシト
ールの測定法が提供される。
用で簡便でありかつ正確な１，５−アンヒドログルシト
ールの測定法が提供される。
【図１】 １，５−アンヒドログルシトールの検量線。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12Q 1/00 - 1/66
Claims (5)
- 【請求項１】 試料中のグルコースにアデノシン三リン
酸の存在下、グルコ−スイソメラ−ゼ、フラクトキナ−
ゼ、および６−ホスホフラクトキナーゼを作用させてグ
ルコースをフラクトース−１，６−二リン酸に変換した
後、試料中の１，５−アンヒドログルシトールを酵素反
応を利用して定量する方法。 - 【請求項２】 １，５−アンヒドログルシトールの定量
が１，５−アンヒドログルシトールに酸化酵素を作用さ
せて生成する物質の変化を定量することによって行われ
る請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 １，５−アンヒドログルシトール酸化酵
素がソルボースオキシダーゼまたはピラノースオキシダ
ーゼである請求項２記載の方法。 - 【請求項４】 １，５−アンヒドログルシトール酸化酵
素、グルコ−スイソメラ−ゼ、アデノシン三リン酸、フ
ラクトキナーゼおよび６−ホスホフラクトキナーゼを含
有することを特徴とする１，５−アンヒドログルシトー
ルの測定用試薬。 - 【請求項５】 １，５−アンヒドログルシトール酸化酵
素がソルボースオキシダーゼまたはピラノースオキシダ
ーゼである請求項４記載の測定用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06010593A JP3217180B2 (ja) | 1993-03-19 | 1993-03-19 | 物質の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06010593A JP3217180B2 (ja) | 1993-03-19 | 1993-03-19 | 物質の測定法 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06269299A JPH06269299A (ja) | 1994-09-27 |
| JP3217180B2 true JP3217180B2 (ja) | 2001-10-09 |
Family
ID=13132497
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP06010593A Expired - Fee Related JP3217180B2 (ja) | 1993-03-19 | 1993-03-19 | 物質の測定法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3217180B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006134870A1 (ja) | 2005-06-13 | 2006-12-21 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | 全血を用いる血液成分測定方法及び測定キット |
| WO2008072702A1 (ja) | 2006-12-14 | 2008-06-19 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | 全血中の１，５－アンヒドログルシトールの測定方法、それに用いるセンサーチップ及び測定キット |
| WO2010010881A1 (ja) | 2008-07-23 | 2010-01-28 | 日本化薬株式会社 | 溶血させた全血を用いる血中成分の測定方法及びそのキット |
-
1993
- 1993-03-19 JP JP06010593A patent/JP3217180B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006134870A1 (ja) | 2005-06-13 | 2006-12-21 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | 全血を用いる血液成分測定方法及び測定キット |
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| WO2008072702A1 (ja) | 2006-12-14 | 2008-06-19 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | 全血中の１，５－アンヒドログルシトールの測定方法、それに用いるセンサーチップ及び測定キット |
| JPWO2008072702A1 (ja) * | 2006-12-14 | 2010-04-02 | 日本化薬株式会社 | 全血中の１，５−アンヒドログルシトールの測定方法、それに用いるセンサーチップ及び測定キット |
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| US8465940B2 (en) | 2006-12-14 | 2013-06-18 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Method for electrochemically measuring 1,5-anhydroglucitol in whole blood |
| WO2010010881A1 (ja) | 2008-07-23 | 2010-01-28 | 日本化薬株式会社 | 溶血させた全血を用いる血中成分の測定方法及びそのキット |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06269299A (ja) | 1994-09-27 |
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