JP3206311B2 - 抗体検出用試薬の非特異反応吸収剤 - Google Patents
抗体検出用試薬の非特異反応吸収剤Info
- Publication number
- JP3206311B2 JP3206311B2 JP17813394A JP17813394A JP3206311B2 JP 3206311 B2 JP3206311 B2 JP 3206311B2 JP 17813394 A JP17813394 A JP 17813394A JP 17813394 A JP17813394 A JP 17813394A JP 3206311 B2 JP3206311 B2 JP 3206311B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antigen
- absorbent
- specific reaction
- cells
- component
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
異反応吸収剤に関する。さらに詳しくは、遺伝子組換え
技術における宿主となり得る細胞による抗原産生に用い
られたベクターと同種であって、且つ上記抗原をコード
する遺伝子を含まないベクターが組み込まれている上記
宿主となり得る細胞と同種の細胞の培養成分を含む、上
記抗原に対する抗体検出用試薬の非特異反応吸収剤に関
する。
抗体検出用試薬には、動物組織や動物血液等の生体成分
から精製した抗原が用いられてきた。このような生体成
分由来の精製抗原は、その元となる生体成分を円滑に供
給することが困難で抗原量を確保しにくく、また、感染
性のある抗原を直接扱うという危険が伴うものであっ
た。その後、近年の遺伝子組換え技術の発展により、こ
れら抗原は組換え遺伝子を組み込んだ宿主細胞から産生
させることができるようになった。遺伝子組換え技術
は、安全に大量の抗原を入手することを可能にし、ま
た、これまで生体成分からは充分量入手できなかったよ
うな抗原を産生させることも可能にしたため、抗体検出
用試薬の発展に大いに役立った。
生された抗原は、遺伝子組換えの宿主となった細胞に対
して精製ロット毎に異なる非特異反応を生じ、そのため
偽陽性が出現した。該非特異反応を抑制するために、遺
伝子組換えに用いたと同種の、遺伝子組換え操作が行わ
れていない宿主細菌成分を用いることが考案され(特公
平3−59382号)相当な効果を示した。しかしなが
ら、これを用いる方法は、遺伝子組換え技術により産生
された抗原を用いる抗体測定試薬を、偽陽性が大きな問
題となる感染症の診断補助薬として実用化するために
は、非特異反応抑制効果は充分ではなかった。
換え技術により産生された抗原を用いる抗体検出用試薬
を実用化するために鋭意研究を重ねた結果、抗原をコー
ドする遺伝子を含まない、抗原産生に用いたと同種のベ
クターを組み込んだ培養細胞の成分が、該非特異反応を
吸収することを見出し、本発明を完成するに至ったもの
である。
となり得る細胞による抗原産生に用いられたベクターと
同種であって、且つ上記抗原をコードする遺伝子を含ま
ないベクターが組み込まれている上記宿主となり得る細
胞と同種の細胞の培養成分を含む、上記抗原に対する抗
体検出用試薬の非特異反応吸収剤である。
は、通常遺伝子組換えに用いられる細胞であり、例え
ば、大腸菌又は枯草菌等の細菌、酵母等の菌類、アフリ
カツメガエル、カイコ、マウス、ウサギ、サル又はヒト
等の動物培養細胞、及びタバコ、ニンジン、コムギ、イ
ネ又はトマト等の植物培養細胞等の病原性を持たない細
胞等を挙げることができる。また、本発明において、抗
原をコードする遺伝子を含まないベクターとは、ウイル
スDNA又はプラスミドDNA等、細胞において複製増
殖し得るベクターで、抗原をコードする遺伝子によって
遺伝子組換えが行われていないベクターを挙げることが
できる。
り得る細胞に組み込む方法としては、例えば、ハナハン
の方法又はエレクトロポレーション法等の通常用いられ
ている遺伝子組換え方法を用いることができる。
産生に用いたと同種のベクターを組み込んだ細胞は、培
養後、超音波処理又は酵素処理等の通常の細胞破砕手法
にて細胞成分を分散又は溶解させ、遠心分離又は濾過等
の操作により、抗体検出用試薬に適した非特異反応吸収
剤とすることができる。保存寿命をのばすためには、遠
心分離又は濾過等により清澄にした液に、例えばプロテ
アーゼインヒビターの添加、又はオートクレーブ処理等
の加熱処理を施して、細胞由来の各種酵素等を抑制又は
失活させることが好ましい。
検出用試薬の使用時に生じる非特異反応の強さに応じて
変えてもよく、該非特異反応を吸収するに充分な非特異
反応吸収剤の使用量を適宜設定することができる。ま
た、本発明の非特異反応吸収剤を使用するにあたって
は、測定検体に本発明の非特異反応吸収剤を添加し、抗
体検出前に非特異反応を吸収することもでき、また、抗
体検出用試薬に本発明の非特異反応吸収剤を添加し、抗
体検出中に非特異反応を同時吸収することもできる。
説明する。
抗原感作粒子の調製 発現のためT7RNAポリメラーゼがlacのプロモー
ターで制御されている大腸菌JM109(DE3)株
に、HIV−1(gp41, p24)抗原及びHIV−2(gp3
6)抗原をコードする遺伝子をトランスフォームし、T
7プロモーターの制御下で50μg/mlアンピシリンを含
むM9CA培地で37℃16時間培養後、イソプロピル
−1−チオ−β−D−ガラクトシド(IPTG)を1mM
加え、さらに7時間培養し、目的とする蛋白を発現誘導
した。発現誘導した培養液を遠心分離して大腸菌を回収
し、50mMトリス、pH8.0、100mMNaCl、1mM
EDTA溶液を加えて浮遊させた後、リゾチームを40
0mg/l、DNaseを0.005%になるように加え、
菌体を溶菌した。遠心分離により沈査を回収し、8M 尿
素で溶解した。ハイドロキシアパタイトカラム(BioRad
社製)で精製後、ゲル濾過法により脱塩し、精製リコン
ビナント抗原を得た。精製リコンビナント抗原は、特開
昭58−113754号公報の実施例1に従いゼラチン
を主成分にした粒子(以下ゼラチン粒子)に感作し、リ
コンビナントHIV−1/2抗原感作ゼラチン粒子の凍
結乾燥品を得た。
15時間培養後、遠心分離により大腸菌を回収し、50
mMトリス、pH8.0、100mMNaCl、1mMEDTA
溶液に浮遊させた後、リゾチームを400mg/l、DNa
seを0.005%になるように加え、菌体を溶菌し
た。日立高速遠心機(himac CR20B3、PR14
A、155ローター)を用い、10,000rpm 30分
間遠心し、水溶性抽出物を得た。この水溶性抽出物にド
デシル硫酸ナトリウムを0.1%になるように添加し、
岩城社製オートクレーブ、ACV−3167にて110
℃10分間オートクレーブ処理した。オートクレーブ処
理により不溶化した成分を遠心除去し、大腸菌成分吸収
剤を得た。
p24)抗原をコードする遺伝子及びHIV−2(gp36)抗
原をコードする遺伝子を組み込むのに使用したプラスミ
ドpWA50(市販のプラスミドpGEMEX−1をN
heIとSacIで消化した後、T4DNAポリメラー
ゼで処理し、gene10領域を除いて作成した)を用
いて大腸菌JM109(DE3)株をトランスフォーム
して得られた、大腸菌JM109(DE3)/pWA5
0株を用いた。参考例2と同様に、JM109(DE
3)/pWA50株を、50μg/mlアンピシリンを含む
M9CA培地で37℃15時間培養後、IPTGを1mM
加え、さらに7時間培養した。次いで、参考例2と同様
に、遠心分離により大腸菌を回収し、50mMトリス、pH
8.0、100mMNaCl、1mMEDTA溶液に浮遊さ
せた後、リゾチームを400mg/l、DNaseを0.0
05%になるように加え、菌体を溶菌した。日立高速遠
心機(himac CR20B3、PR14A、155ロータ
ー)を用い、10,000rpm 30分間遠心し、水溶性
抽出物を得た。この水溶性抽出物にドデシル硫酸ナトリ
ウムを0.1%になるように添加し、岩城社製オートク
レーブ、ACV−3167にて110℃10分間オート
クレーブ処理した。オートクレーブ処理により不溶化し
た成分を遠心除去し、プラスミド成分吸収剤を得た。
例1で調製したリコンビナントHIV−1/2抗原感作
粒子と健常人血清の反応性をマイクロプレート法で調べ
た。健常人血清1000例は、予め富士レビオ社製セロ
ディア・HIV−1/2により抗HIV−1,2抗体が
陰性であることを確認した。リコンビナントHIV−1
/2抗原感作粒子を用いると、10例の偽陽性反応が認
められ、検体により反応の程度が異なったが、陽性を示
す最終希釈倍率で概ね16〜64倍の反応性を示した。
その中の2例の偽陽性血清を用いてプラスミド成分吸収
剤の吸収効果を調べた。プラスミド成分吸収剤は、1%
正常家兎血清を含む0.15M リン酸塩生理食塩緩衝液
(以下、血清希釈用液と略記する)に2〜10%になる
ように加えた。結果を表−1に示した。
子の偽陽性反応は、プラスミド成分吸収剤を血清希釈用
液に5〜10%添加することで陰性化した。
感作粒子を用い、富士レビオ社製セロディア・HIV−
1/2により抗HIV−1,2抗体が陰性であることを
予め確認した健常人血清7898例から、希釈率32倍
で±以上の反応性を示す偽陽性血清38例を得た。この
リコンビナントHIV−1/2抗原感作粒子で偽陽性を
示す血清38例を用い、参考例2で調製した大腸菌成分
吸収剤、及び実施例1で調製したプラスミド成分吸収剤
の吸収効果を調べた。大腸菌成分吸収剤又はプラスミド
成分吸収剤を各々5%になるように含む血清希釈用液に
て試験したところ、大腸菌成分吸収剤添加では12例
が、プラスミド成分吸収剤添加では28例が陰性化し
た。結果を表−2に示した。
剤添加で陰性化した12例をすべて陰性化した。プラス
ミド成分吸収剤で陰性化するが、大腸菌成分吸収剤で陰
性化しない検体16例については、大腸菌成分吸収剤の
濃度を10%まで上げたが、反応は陰性化しなかった。
すなわち、プラスミド成分吸収剤は、大腸菌成分吸収剤
で陰性化できない16例を含む28例の偽陽性検体を陰
性化した。
感作粒子を用い、富士レビオ社製セロディア・HIV−
1/2により抗HIV−1,2抗体が陽性であることを
予め確認した人血清10例と、参考例2で調製した大腸
菌成分吸収剤又は実施例1で調製したプラスミド成分吸
収剤を添加した血清希釈用液との反応性を調べた。大腸
菌成分吸収剤又はプラスミド成分吸収剤を添加した血清
希釈用液は、ともに、10例全例の抗体価が吸収剤を添
加していない対照群の抗体価と一致した。結果を表−3
に示した。
ミド成分吸収剤の添加は、抗HIV−1,2抗体が陽性
の検体の反応性には影響しなかった。
吸収剤は、遺伝子組換え技術により産生された抗原を用
いる抗体検出用試薬において、従来抑制できなかった非
特異反応を抑制することができるという効果が得られ
る。
Claims (1)
- 【請求項1】 遺伝子組換え技術における宿主となり得
る細胞による抗原産生に用いられたベクターと同種であ
って、且つ上記抗原をコードする遺伝子を含まないベク
ターが組み込まれている上記宿主となり得る細胞と同種
の細胞の培養成分を含む、上記抗原に対する抗体検出用
試薬の非特異反応吸収剤。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP17813394A JP3206311B2 (ja) | 1994-07-29 | 1994-07-29 | 抗体検出用試薬の非特異反応吸収剤 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP17813394A JP3206311B2 (ja) | 1994-07-29 | 1994-07-29 | 抗体検出用試薬の非特異反応吸収剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0843392A JPH0843392A (ja) | 1996-02-16 |
JP3206311B2 true JP3206311B2 (ja) | 2001-09-10 |
Family
ID=16043232
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP17813394A Expired - Fee Related JP3206311B2 (ja) | 1994-07-29 | 1994-07-29 | 抗体検出用試薬の非特異反応吸収剤 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3206311B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102439446A (zh) * | 2009-03-31 | 2012-05-02 | 日本烟草产业株式会社 | 检测生物学样品中的物质的方法 |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8431352B2 (en) | 2007-09-27 | 2013-04-30 | Virus Ikagaku Kenkyusho Inc. | Diagnosis of mood disorders by detecting latent infection with human herpesvirus-6 |
CN102439447A (zh) | 2009-03-02 | 2012-05-02 | 日本烟草产业株式会社 | 对生物学样品中的物质进行检测的方法 |
SG174938A1 (en) | 2009-03-31 | 2011-11-28 | Japan Tobacco Inc | Method for detecting antibody against sith-1 in biological sample |
JP6641387B2 (ja) | 2015-12-28 | 2020-02-05 | 日本たばこ産業株式会社 | 融合タンパク質及びその利用 |
-
1994
- 1994-07-29 JP JP17813394A patent/JP3206311B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102439446A (zh) * | 2009-03-31 | 2012-05-02 | 日本烟草产业株式会社 | 检测生物学样品中的物质的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0843392A (ja) | 1996-02-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Brown et al. | Diagnosis of fastidious enteric adenoviruses 40 and 41 in stool specimens | |
Welch et al. | Bacteremia due to Rochalimaea henselae in a child: practical identification of isolates in the clinical laboratory | |
Nishi et al. | Polymerase chain reaction for the detection of the varicella-zoster genome in ocular samples from patients with acute retinal necrosis | |
JPH08501208A (ja) | 血液から核酸の製造 | |
CN111929433A (zh) | 一种非洲猪瘟病毒抗体elisa检测试剂盒及其制备方法 | |
JPH11237381A (ja) | ヒトまたは動物の移植用組織をそのレシピエントに 適合させる方法及びヒトまたは動物において 腫瘍抗原を検出する方法 | |
JP2001505778A (ja) | HIV感染の初期の検出のための未変性の(non―dentured)HIV抗原を使用する新規のEIA試験 | |
Bai et al. | Development of a new recombinant p24 ELISA system for diagnosis of bovine leukemia virus in serum and milk | |
JP3206311B2 (ja) | 抗体検出用試薬の非特異反応吸収剤 | |
CN109402069A (zh) | 一种假病毒颗粒及其制备方法和应用 | |
NO871862L (no) | Fremgangsmaate for paavisning av aids-virusinfeksjon. | |
CN112680550A (zh) | 一种dcas9介导检测SARS-CoV-2N基因的免疫层析方法 | |
CN111518225B (zh) | 羊种布鲁氏菌疫苗株m5提取的脂多糖在制备诊断人布鲁氏菌病的产品中的应用 | |
JPH08510004A (ja) | 直接溶解緩衝液およびhiv−1血漿ウィルス血症の検出 | |
CN117110616A (zh) | 一种新型冠状病毒感染疫苗免疫后抗体区分检测试剂盒 | |
CN104232797A (zh) | 一种鼠肝炎病毒的复合型检测试剂盒、检测方法及应用 | |
CN112779346A (zh) | 一种dcas9介导检测结核杆菌的免疫层析方法 | |
RU2441666C1 (ru) | Комплексный антиген вируса кори, используемый в качестве компонента иммуноферментной тест-системы для диагностики антител к вирусу кори | |
CN114966011B (zh) | 一种胶体金法检测尿液中hiv-1和hiv-2抗体的试纸条 | |
RU2813324C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО АНТИГЕНА MBP_RBD_6His ВИРУСА SARS-CoV-2 с C-КОНЦЕВОЙ АФФИННОЙ МЕТКОЙ 6xHIS-tag, ПРЕДНАЗНАЧЕННОГО ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯЧ В КАЧЕСТВЕ КОМПОНЕНТА НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ COVID-19 | |
JP5211041B2 (ja) | プロテインgとアビジン類との融合タンパク質 | |
JP2803020B2 (ja) | Hiv関連抗体測定法 | |
RU2421517C1 (ru) | Штамм 02_ag.ru.09ru2308 вируса иммунодефицита человека 1 типа рекомбинантного субтипа 02_ag, используемый для диагностики и изучения эффективности лечебно-профилактических и вакцинных препаратов | |
JP2525054B2 (ja) | 成人t細胞白血病ウィルス感染診断薬 | |
KR20170101655A (ko) | 효소면역기법을 이용한 일본뇌염바이러스에 대한 항체 검출 방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
R371 | Transfer withdrawn |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R371 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080706 Year of fee payment: 7 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080706 Year of fee payment: 7 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090706 Year of fee payment: 8 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090706 Year of fee payment: 8 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100706 Year of fee payment: 9 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110706 Year of fee payment: 10 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |