JP3164922B2 - ヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物の測定法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺
伝子産物に対して特異性を有するモノクローナル抗体を
用いる測定法に関する。さらに詳しくは、本発明はヒト
ｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物に対して特異性を有し２種類
の異なる抗原決定基（以下、エピト−プという）を認識
するモノクローナル抗体を用いて、未標識のモノクロー
ナル抗体を一次抗体とし、ヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産
物の異なるエピト−プを認識する抗体を標識した後これ
を二次抗体として、体液中の可溶性ｃ−ｋｉｔ癌原遺伝
子産物を検出定量することを特徴とする測定法に関す
る。さらに、本発明は、白血病細胞株の細胞培養上清中
に可溶性ｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物が存在することを新
たに見いだし、これを標準物質として使用することを特
徴とする体液中の可溶性ｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物の測
定法に関する。

【０００２】ヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物は、そのｍ
ＲＮＡの有無を調べた研究等から、未分化な造血幹細胞
に多く発現することが知られており、ｃ−ｋｉｔ癌原遺
伝子産物の発現異常は、造血幹細胞レベルでの腫瘍化、
造血器腫瘍に影響を及ぼすと考えられている。また、各
種の造血サイトカインの受容体は血清中に可溶性型で存
在することが知られており、これらを検出定量すること
は各種造血系疾患の診断、および治療に有用である。よ
って、本測定法は白血病等の造血器腫瘍、その他の造血
系疾患等の診断薬としての用途を有する。

【０００３】

【従来の技術】ｖ−ｋｉｔはネコの線維肉腫から得られ
たレトロウイルスの癌遺伝子である。ｖ−ｋｉｔに対応
するｃ−ｋｉｔのコードするタンパク質（ｃ−ｋｉｔ癌
原遺伝子産物）は受容体型のチロシンキナーゼで最近そ
のリガンド分子が固定され、ステムセルファクター（Ｓ
ＣＦ）などと呼ばれている。このｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子
に異常のあるＷマウスは貧血、色素異常のモデルとして
古くより研究されていたが、最近の研究によりこの異常
がｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物とステムセルファクターに
よるシグナル伝達に関わる異常であることが明らかにさ
れている。これまでマウスｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物に
対する抗体であるＡＣＫ２（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，ｖ
ｏｌ．１７４，ｐ．６３，１９９１）を用いて、ヒトｃ
−ｋｉｔ癌原遺伝子産物を白血細胞株上に検出した例が
報告されているが、ヒト生体試料（たとえばヒト骨髄細
胞）上の該産物を直接に検出することはできなかった。

【０００４】また、造血器腫瘍である白血病やリンパ腫
は、未分化な段階の細胞が腫瘍化した疾患であると言え
るが、その腫瘍化した血球の増殖にもいくつかのサイト
カインが関与していることが明かになっている。ｃ−ｋ
ｉｔ癌原遺伝子産物のリガンドであるステムセルファク
ターも一部の急性骨髄性白血病の細胞の増殖を刺激する
ことが報告されている。

【０００５】このように造血機構においてｃ−ｋｉｔ癌
原遺伝子産物とそのリガンドであるステムセルファクタ
ーは重要な役割を果たしており、そのシグナル伝達系に
関わる異常は少なからず正常な造血機構に影響するもの
と考えられる。しかるに現在までに、造血器腫瘍におけ
るｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物の発現とその病態との相
関、あるいは血清中あるいは体液中に存在するｃ−ｋｉ
ｔ癌原遺伝子産物の測定、定量と疾患との相関等につい
て詳細に検討されることはなかった。わずかに造血器腫
瘍細胞におけるｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子ｍＲＮＡの有無を
調ベた研究等があるのみである。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、簡便に血清
あるいは体液中の可溶性ｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物を再
現性よく測定する方法を提供することを目的としたもの
である。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記目的を達
成するためになされたものであって、各方面から検討の
結果、ヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物に特異性を有する
抗体、特にモノクローナル抗体にはじめて着目するに至
った。そして更に検討を行い、該モノクローナル抗体を
産生することのできる融合細胞（ハイブリドーマ）の創
製に成功しただけでなく、効率的に該モノクローナル抗
体を産生せしめ、そして該モノクローナル抗体を用いる
ことによって、体液中に可溶性の該産物が存在すること
を新に発見し、この新知見を利用して可溶性の該産物の
簡便にして正測な測定法を開発するのに成功し、遂に本
発明の完成に至ったものである。

【０００８】すなわち、本発明は、抗ｃ−ｋｉｔ癌原遺
伝子産物抗体を用いて生体試料中の可溶性ｃ−ｋｉｔ癌
原遺伝子産物を測定する方法に関するものである。

【０００９】本発明を実施するには、目的とする新規な
モノクローナル抗体を創製する必要がある。そして目的
とするモノクローナル抗体を新たに創製するには、該抗
体産生能を有するハイブリドーマの創製が不可欠であ
る。

【００１０】このような観点から、目的とするモノクロ
ーナル抗体を産生する能力を有するハイブリドーマを創
製することとし、そのため、本発明においては、免疫原
としてヒト巨核芽球性細胞株（ＵＴ−７）に着目しただ
けでなく、更に効率化を図るためにドナーのｃＤＮＡか
ら目的とする遺伝子のｃＤＮＡを単離し、これをレシピ
エントに形質導入してなる形質導入株を使用することと
した。すなわち、本発明者らは先ず、ヒトｃ−ｋｉｔ癌
原遺伝子産物を高発現する白血病細胞株ＵＴ−７のｃＤ
ＮＡライブラリーより単離したｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子の
ｃＤＮＡをマウス繊維芽細胞Ｌ−ｃｅｌｌ、およびＢａ
ｌｂ／３Ｔ３ｃｅｌｌに、それぞれ、形質導入した形質
導入細胞（トランスフェクタント）を作製した（ＨＣＫ
／Ｌ，ＨＣＫ／３Ｔ３）。

【００１１】次いで、このようにして得た安定発現株
を、それぞれ、免疫原として例えばマウスに免疫し、そ
の脾細胞、リンパ節細胞あるいは、Ｂリンパ球を抗体産
生細胞として得る。この抗体産生細胞はマウス、ヒトあ
るいはラットの骨髄腫細胞をいわゆる細胞融合法を用い
て融合細胞（ハイブリドーマ）を形成させ、上記Ｌ−ｃ
ｅｌｌと同様にｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子を導入したマウス
由来繊維芽細胞株Ｂａｌｂ／３Ｔ３ｃｅｌｌに特異的に
反応する抗体をそれぞれ産生するクローンを選択する。
このようにして得られた抗体産生細胞（ハイブリドー
マ）を、Ｌ６、Ｌ１５と命名した。これらは、いずれ
も、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されている
（Ｌ−６：微工研菌寄第１３２２４号；Ｌ−１５：微工
研菌寄第１３２２５号）。

【００１２】これらのクローンをそれぞれ常法にしたが
って培養し、モノクローナル抗体Ｌ６及びＬ１５を分離
採取する。得られたモノクローナル抗体は、免疫沈降
法、ウエスタン−ブロッティング法等により目的とする
抗ｃ−ｋｉｔ蛋白抗体であることが確認された。

【００１３】こうして得られる抗ヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺
伝子産物モノクローナル抗体は、これらを直接蛍光色素
標識する方法あるいは、あらかじめ蛍光色素標識された
二次抗体を用いる方法などによって、フローサイトメト
リーを用いた細胞表面に発現されたｃ−ｋｉｔ癌原遺伝
子産物の測定に用いることができる。また、本モノクロ
ーナル抗体は、標識としてＦＩＴＣやローダミンといっ
た蛍光物質を用いて直接法、間接法、サンドイッチ法等
によって該産物を測定するのに使用できるほか、フェリ
チン抗体法、酵素を標識として用いるエンザイムイムノ
アッセイ（ＥＩＡ）、ラジオアイソトープでラベルした
抗原ないし抗体を用いるラジオイムノアッセイ（ＲＩ
Ａ）等、各種のイムノアッセイに本モノクローナル抗体
は広範に使用することができ、効率的に該産物の測定、
検出をすることができる。

【００１４】さらにエピトープの異なる２種のモノクロ
ーナル抗体を用いてサンドイッチエライザ（ＥＬＩＳ
Ａ）法等を適用することによって血清中あるいは体液中
の可溶性ｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物を測定することがで
きる。また、白血病細胞株の細胞培養上清中に可溶性ｃ
−ｋｉｔ癌原遺伝子産物が存在することを新たに見いだ
し、これを標準物質として使用することにより、安定的
にｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物を検出することが可能とな
り、このことによって、検体の測定値の再現性を高める
ことができる。

【００１５】

【実施例】以下に実施例を示し、本発明をより具体的に
説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるもので
はない。

【００１６】

【実施例１ モノクローナル抗体の作製】

【００１７】（１）免疫原の作製 ｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物を高発現することが知られて
いる白血病細胞株ＵＴ−７のｃＤＮＡライブラリーより
単離したｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子のｃＤＮＡを動物細胞発
現用ベクターＢＣＭＧＳＮｅｏに組み込んだ後、マウス
繊維芽細胞Ｌ−ｃｅｌｌ、およびＢａｌｂ／３Ｔ３ ｃ
ｅｌｌに、それぞれ、形質導入した形質導入細胞（トラ
ンスフェクタント）を作製し（ＨＣＫ／Ｌ、ＨＣＫ／３
Ｔ３）、これを免疫原とした。

【００１８】（２）融合細胞の作製

【００１９】（ａ）免疫 ８週令のＢａｌｂ／ｃマウス（雌）３匹に、ＨＣＫ／３
Ｔ３、ＨＣＫ／Ｌ、ＣＤ３４／Ｌトランスフェクタント
をそれぞれ２週間隔で腹腔内投与した。免疫終了後、マ
ウス尾静脈より採血した血清を用いてＨＣＫ／３Ｔ３、
ＨＣＫ／Ｌ、ＣＤ３４／Ｌトランスフェクタント、白血
病細胞株ＵＴ−７ｃｅｌｌに対する反応性をチェックし
た。免疫原とは異なるトランスフェクタントとの反応性
に有意差が得られたことを確認し、最終免疫、細胞融合
を行った。

【００２０】（ｂ）細胞融合 最終免疫から４日後、ＨＣＫ／３Ｔ３、ＨＣＫ／Ｌトラ
ンスフェクタントを免疫したマウスの脾臓細胞と、マウ
ス骨髄腫由来細胞Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８−Ｕ１（Ｐ３Ｕ
１）細胞を用いて、常法に従って細胞融合を行った。

【００２１】（ｃ）ハイブリドーマのスクリーニング

【００２２】白血病細胞株との反応性 ハイブリドーマの１次スクリーニングとして、白血病細
胞株ＵＴ−７ｃｅｌｌを抗原とした間接蛍光抗体法によ
って、ハイブリドーマ培養上清の反応性により陽性クロ
ーンを選択した。ハイブリドーマ培養上清とＵＴ−７細
胞浮遊液を氷冷で３０分反応、洗浄後、ＦＩＴＣ標識抗
マウスＩｇＧ抗体溶液を添加した（氷冷、３０分）。洗
浄後、フローサイトメーターによって蛍光強度の測定を
行った。

【００２３】形質導入細胞との反応性 ２次スクリーニングとして、生細胞を抗原とした間接蛍
光抗体法を用い、形質導入細胞（トランスフェクタン
ト）に対するハイブリドーマ培養上清の反応性により陽
性クローンを選択した。

【００２４】ＨＣＫ／３Ｔ３トランスフェクタントで免
疫して得られたハイブリドーマ培養上清は、ＨＣＫ／
Ｌ、ＣＤ３４／Ｌトランスフェクタントを用いてスクリ
ーニングし、ＨＣＫ／Ｌトランスフェクタントで免疫し
て得られたハイブリドーマ培養上清は、ＨＣＫ／３Ｔ３
トランスフェクタント、Ｂａｌｂ／３Ｔ３を用いてスク
リーニングした。ハイブリドーマ培養上清のスクリーニ
ングは、ＨＣＫ／３Ｔ３、ＨＣＫ／Ｌトランスフェクタ
ントを免疫したものそれぞれ９４５ｗｅｌｌ、７０７ｗ
ｅｌｌについて行った。判定は、ＨＣＫ／Ｌ、ＣＤ３４
／Ｌに対する反応性がそれぞれ陽性、陰性のクローン
を、また、ＨＣＫ／３Ｔ３、Ｂａｌｂ／３Ｔ３に対する
反応性がそれぞれ陽性、陰性のクローンを選択した。

【００２５】スクリーニングの結果、２クローン（Ｌ
６、Ｌ１５）を得た。これらのハイブリドーマは、それ
ぞれ微生物工業技術研究所に寄託されている（Ｌ−６：
ＦＥＲＭ Ｐ−１３２２４；Ｌ−１５：ＦＥＲＭ Ｐ−
１３２２５）。

【００２６】（ｄ）抗体の精製 培養上清を限外ろ過濃縮した後、結合緩衝液（Ｂｉｏｒ
ａｄ、ＰｒｏｔｅｉｎＡ ＭＡＰＳII Ｂｕｆｆｅｒ）
と等量混合しサンプルとする。ＰｒｏｔｅｉｎＡ−Ｓｅ
ｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ−４Ｂカラム（ファルマシア）を
結合緩衝液で平衡化し、サンプルをカラムに流して抗体
を結合させた後、結合緩衝液でカラムを洗浄した。０．
２Ｍ Ｇｌｙ−ＨＣｌ（ｐＨ３．０）で溶出し、モノク
ローナル抗体Ｌ６及びモノクローナル抗体Ｌ１５の分画
をそれぞれ得た。

【００２７】（ｅ）抗体の標識 精製した各抗体について、ビオチン標識及びＦＩＴＣ
（フルオレッセイン イソチアシアナート アイソマ
ー）標識を行った。

【００２８】ビオチン標識（ＢｉｏｒａｄのＢｉｏｔｉ
ｎｙｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用） 抗体溶液を０．０５Ｍほう酸バッファー（ｐＨ８．６）
に交換し１ｍｇ／ｍｌに調製後、ビオチン化試薬（アマ
シャム、Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ）を加
え、室温で１時間攪拌した。反応液をＳｅｐｈａｄｅｘ
Ｇ−２５カラムにかけ、未反応ビオチンを除去した
後、ビオチン化抗体をそれぞれ得た。

【００２９】ＦＩＴＣ標識 抗体溶液を０．０５Ｍ炭酸バッファー（ｐＨ９．５）に
交換し１ｍｇ／ｍｌに調製後、ＦＩＴＣ（Ｂｅｃｔｏｎ
Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ Ｉｓ
ｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ Ｉｓｏｍｅｒ）をＤＭＳＯ
に溶解（１〜２ｍｇ／ｍｌ）し、抗体溶液にゆるやかに
攪拌しながら添加した。４℃で１晩攪拌（遮光下）した
後、反応液をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラムにかけ
未反応ＦＩＴＣを除去し、ＦＩＴＣ標識抗体をそれぞれ
得た。これらの点から、そしてまた後記するところから
も明らかなように、本モノクローナル抗体は、いずれ
も、化学物質、蛍光物質、酵素その他各種の標識と容易
に結合できるだけでなく、正確にして簡便且つ迅速な測
定を可能にするものである。

【００３０】

【実施例２ 白血病細胞株培養上清中のｃ−ｋｉｔ癌原
遺伝子産物の検出】白血病細胞株培養上清、及び培養細
胞溶解物をＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動で分離
し、ナイロンメンブレンに転写した後、実施例１で製造
したヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物に対するモノクロー
ナル抗体Ｌ６を用いたウエスタンブロッティング法によ
って検出したところ、白血病細胞株培養上清中には培養
細胞の１２０〜１４０ＫＤａより分子量の小さい可溶性
ヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物に対応する分子量９５Ｋ
Ｄａのバンドが検出された（図１）。

【００３１】上記のことから、白血病細胞株培養上清中
にｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物が存在することが明らかに
なった。

【００３２】

【実施例３ モノクローナル抗体を用いたサンドイッチ
エライザ法による白血病細胞株培養上清中のｃ−ｋｉｔ
癌原遺伝子産物の測定】

【００３３】抗体固相化マイクロプレートの調製 実施例１で製造したヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物に対
するモノクローナル抗体Ｌ６を９６ウェルマイクロプレ
ートにまき、４℃で一晩放置し、固定後、洗浄し、ウシ
血清アルブミン溶液でブロッキングし、抗体固相化マイ
クロプレートとした。

【００３４】標識抗体の調製 精製した抗体のアルカリフォスファターゼ標識を行っ
た。すなわち、５０ｍＭカリウム一リン酸緩衝液、アル
カリフォスファターゼ溶液、グルタールジアルデヒド溶
液を混合し反応後、ヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物に対
するモノクローナル抗体Ｌ１５（Ｌ６とはエピトープが
異なる）を加えさらに反応後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−
２５にかけた後、標識抗体を得た。

【００３５】測 定 白血病細胞株の培養上清から、上記ヒトｃ−ｋｉｔ癌原
遺伝子産物に対するモノクローナル抗体Ｌ１５を固定化
したアフィニティーカラムによって精製したｃ−ｋｉｔ
癌原遺伝子産物を連続希釈したものを標準溶液として使
用した。

【００３６】上記、抗体固相化マイクロプレートにこの
標準溶液を加え室温で２時間反応させた。プレートを洗
浄後、上記、アルカリホスファターゼ標識した抗ｃ−ｋ
ｉｔ抗体Ｌ１５を加え室温で２時間反応させた。プレー
トを洗浄後、発色基質剤（０．１ｍＭ ４−メチル−ウ
ンベリフェリルホスフェート）を加え正確に３０分後、
反応停止剤（１０ｍＭエチレンジアミン四酢酸を含むカ
リウム一リン酸緩衝液）を加えた。タイターテック フ
ルオロスキャンIIで励起波長３５５ｎｍ、発色蛍光波長
４６０ｎｍで蛍光強度を測定した。

【００３７】その結果、白血病細胞株培養上清において
濃度依存的に可溶性ヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物を検
出することが可能であった（図２）。

【００３８】

【実施例４ 抗ｃ−ｋｉｔ抗体を用いた阻止試験】上記
標準溶液、およびヒト血清に対して、ヒトｃ−ｋｉｔ癌
原遺伝子産物に対するモノクローナル抗体Ｌ６による阻
止試験を行った。

【００３９】標準溶液、およびヒト血清に、それぞれ、
抗ｃ−ｋｉｔ抗体（Ｌ６）、もしくは抗ＥｒｂＢ−２抗
体（ニチレイ）を０〜１０μｇ／ｍｌ（終濃度）の範囲
で添加し、反応させた後、上記、実施例３で記載した方
法と同様に反応、測定を行った。

【００４０】その結果、抗ｃ−ｋｉｔ抗体（Ｌ６）を添
加すると検体中のｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物の蛍光強度
が低下したことから、実施例３に記載されたモノクロー
ナル抗体を用いたサンドイッチエライザ法によって、検
体中のｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物を特異的に検出するこ
とが可能であることが明らかになった（図３）。

【００４１】

【実施例５ ヒト血清中の可溶性ｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子
産物の検出】実施例３に記載のモノクローナル抗体を用
いたサンドイッチエライザ法によって、２例のヒト血清
中の可溶性ヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物の検出を行っ
た。

【００４２】２例の血清検体を、ヒトプール血清を抗ｃ
−ｋｉｔ抗体（Ｌ１５）を固定化したアフィニティーカ
ラムによって吸収した吸収血清で希釈したところ、良好
な希釈直線が得られた。さらに、標準曲線より検体中の
ｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物の定量測定が可能であった。

【００４３】その結果、ヒト血清においても濃度依存的
に可溶性ヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物を検出すること
が可能であった（図４）。

【００４４】

【発明の効果】本発明によれば新規なモノクローナル抗
体を使用することにより、体液中のｃ−ｋｉｔ癌原遺伝
子産物を簡便に且つ正確に測定することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】白血病細胞株培養上清、および細胞溶解物に対
する抗ｃ−ｋｉｔ抗体（Ｌ６）を用いたウエスタンブロ
ッティング法による分析結果を示す。

【図２】白血病細胞株の培養上清から、抗ｃ−ｋｉｔ抗
体Ｌ１５を固定化したアフィニティーカラムによって精
製し作製した標準溶液を連続希釈し、サンドイッチエラ
イザ法によって測定した標準曲線を示す。

【図３】抗ｃ−ｋｉｔ抗体によるヒト血清中ｃ−ｋｉｔ
癌原遺伝子産物の阻止試験の結果を示す。

【図４】ヒト血清を吸収血清で連続希釈したときの希釈
曲線を示す。

フロントページの続き (56)参考文献 Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｆ ｔｒａｎ ｓｇｅｎｅｓ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ ｈｅｌｄ ａｔ ｔｈｅ 20ｔｈ ａｎｎｕａｌ ｍｅｅｔｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｋｅ ｙｓｔｏｎｅ Ｓｙｍｐｏｓｉａ ｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌ ｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔａｍａ ｒｒｏｎ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ，ＵＳＡ, Ｊａｎｕａｒｙ 12−18，Ｊ．Ｃｅｌ ｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，Ｓｕｐｐｌ．15 Ａ，Ｐ．195 Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．174, Ｎｏ．１，Ｐ．63−71（1991) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) G01N 33/574 G01N 33/577 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物に対して
   特異性があるモノクローナル抗体を一次抗体とし、さら
   に異なる抗原決定基を認識することのできるモノクロー
   ナル抗体を標識してこれを二次抗体として用い、しかも
   その際、一次抗体としてハイブリドーマＬ６（ＦＥＲＭ
   Ｐ−１３２２４）由来のモノクローナル抗体Ｌ６、二
   次抗体としてハイブリドーマＬ１５（ＦＥＲＭ Ｐ−１
   ３２２５）由来のモノクローナル抗体Ｌ１５を用いて、
   あるいは、一次抗体として該モノクローナル抗体Ｌ１
   ５、二次抗体として該モノクローナル抗体Ｌ６を用い
   て、可溶性ヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物を検出定量す
   ることを特徴とするヒトｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物の測
   定法。
2. 【請求項２】 白血病細胞株の細胞培養上清中に存在す
   る可溶性ｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物を標準物質として使
   用することを特徴とする請求項１に記載の測定法。
3. 【請求項３】 ハイブリドーマＬ６（ＦＥＲＭ Ｐ−１
   ３２２４）由来のモノクローナル抗体Ｌ６又はハイブリ
   ドーマＬ１５（ＦＥＲＭ Ｐ−１３２２５）由来のモノ
   クローナル抗体Ｌ１５を含有することを特徴とする可溶
   性ｃ−ｋｉｔ癌原遺伝子産物の測定用試薬。