JP6324970B2 - 抗ウロプラキンｉｉ抗体システムおよび方法 - Google Patents

Description

本出願は、２０１２年９月２７日になされた米国仮出願第６１／７０６，３１２号（ここで引用によってその全体が本明細書に参考として援用される）に基づく優先権および利益を主張する国際ＰＣＴ特許出願である。

本発明は新規抗ウロプラキンＩＩ抗体、組成物、混合物ならびに抗体を含むキットおよび抗体を使用するための方法に関連する。

本発明の背景
組織サンプル、特にバイオプシーによって得られたものの顕微鏡による観察は疾病の診断のための一般的な方法である。特に、免疫組織化学（ＩＨＣ）、すなわち特異的な抗体を用いて組織サンプル内の特異的なタンパク質の発現を検出する技術は診断、特に癌の診断および検出に有益なツールである。

ウロプラキン（「ＵＰ」もしくは「Ｕｐｓ」）は、正常な尿路上皮の表層（アンブレラ）細胞の管腔表面で発現する４つの膜貫通型タンパク質（ＵｐｓＩａ、Ｉｂ、ＩＩおよびＩＩＩ）の群を含み、それらは尿路上皮細胞の特異的分化産物である。ウロプラキンＩＩ（「ＵＰＩＩ」）は、尿路上皮の透過性障壁を強化し得る尿路上皮プラークの１５ｋＤaのタンパク質成分であり得る。ＵＰＩＩの発現は膀胱の膀胱移行上皮癌（ＴＣＣ）において異常になり得るため、これにより癌の診断に有用なマーカーとなり得る。Ｗｕ ｅｔ ａｌ．の文献には、ＵＰＩＩ ｍＲＮＡの膀胱癌の、およびおそらく膀胱癌の骨盤リンパ節への結節性転移すらの有望な診断マーカーとしての考察（「Ｕｒｏｐｌａｋｉｎ ＩＩ ａｓ ａ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｎｏｄａｌ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ｆｒｏｍ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ： cｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ ２０．」 Ｗｕ Ｘ， Ｋａｋｅｈｉ Ｙ， Ｚｅｎｇ Ｙ， Ｔａｏｋａ Ｒ， Ｔｓｕｎｅｍｏｒｉ Ｈ， Ｉｎｕｉ Ｍ． Ｊ Ｕｒｏｌ． ２００５ Ｄｅｃ；１７４（６）：２１３８−４２参照、ここで引用により本明細書に参考として援用される）が含まれている。ＵＰＩＩ ｍＲＮＡは、膀胱腫瘍組織標本１９中１９（１００％）、転移した骨盤リンパ節サンプル１６中１５（９３．８％）からそれぞれ検出された。一方、ＵＰＩＩ ｍＲＮＡは、６６の転移のない骨盤リンパ節サンプルからは、６例（１０％）のみから検出された。したがって、ＵＰＩＩ ｍＲＮＡの陽性の発現は、膀胱癌からの結節性転移を示し得る。根治的膀胱切除後の膀胱癌の患者の結節性転移を決定することは、患者のそのような分集団は生存のため至急術後の化学療法が必要となり得るため、重要であり得る。著者らは、ＵＰＩＩ ｍＲＮＡの検出が、おそらくＴＣＣの診断および管理における有用な情報を提供することにより、根治的膀胱切除に続く臨床転帰を改善し得ると結論付けている。したがって、患者（例えば、ＴＣＣ等）の組織におけるＵＰＩＩタンパク質発現を検出するための抗ＵＰＩＩ抗体が開発されることが望ましい。

研究により、ＵＰＩＩ ｍＲＮＡは原発性のおよび転移性のＴＣＣの患者の膀胱組織および末梢血での発現が示されており、尿路上皮癌腫のバイオマーカーとしての潜在的な役割が示唆されている。ＵＰＩＩの臨床的有用性は、おそらく単にそのｍＲＮＡのデータに基づくこれらの研究によって認識されているものであったかもしれない。特にタンパク質分子はｍＲＮＡ分子よりも安定であり得る場合、ＴＣＣ中のＵＰＩＩのタンパク質の局在を特徴付ける追加の調査が正当化され得る。ある研究では、おそらく進行した尿路上皮癌腫におけるＵＰの持続的な発現を実証するために、ＵＰＩｂ、ＵＰＩＩおよびＵＰＩＩＩアイソフォームすらの全てと反応し得る汎ＵＰ抗体が用いられた。しかしながら、特異的なＵＰＩＩタンパク質のレベルは、汎ＵＰ抗体を用いては決定することができなかった。（Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ Ｕｒｏｐｌａｋｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ： Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ Ｔｕｍｏｒ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｕｔｃｏｍｅ． Ｈｏｎｇ−Ｙｉｎｇ Ｈｕａｎｇ， Ｓｈａｈｒｏｋｈ Ｆ． Ｓｈａｒｉａｔ， Ｔｕｎｇ−Ｔｉｅｎ Ｓｕｎ， Ｈｅｒｂｅｒｔ Ｌｅｐｏｒ， Ｅｌｌｅｎ Ｓｈａｐｉｒｏ， Ｊｅｒ−Ｔｓｏｎｇ Ｈｓｉｅｈ， Ｒａｈｅｅｌａ Ａｓｈｆａｑ， Ｙａｉｒ Ｌｏｔａｎ， ａｎｄ Ｘｕｅ−Ｒｕ Ｗｕ， Ｈｕｍ Ｐａｔｈｏｌ． ２００７ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ； ３８（１１）： １７０３−１７１３参照、ここで引用により本明細書に参考として援用される）。おそらく特異的抗ＵＰＩＩ抗体がないことにより、尿路上皮癌腫におけるＵＰＩＩのタンパク質発現についてはほとんど知られ得ていない。

癌診断での使用のための、高感度で、また特異的でさえある抗ウロプラキンＩＩ抗体についての明確な必要性が存在している。抗ＵＰＩＩＩ抗体は、尿路上皮起源の癌腫のマーカーとして以前に開発されている。ここで本発明は、高度に特異的であり得、そして、抗ＵＰＩＩＩ抗体（クローンＢＣ１７）よりも高感度でさえあり得る抗ＵＰＩＩ抗体（クローンＢＣ２１）を提供する。ＴＣＣの場合において、本発明の実施例は、抗ＵＰＩＩＩ抗体（約５９中３３、約５６％）に比較して向上した感度（約５９中４６、約７８％）を示す抗ＵＰＩＩ抗体を提供する。おそらく、その強い染色特性に加え、抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）は抗ＵＰＩＩＩ抗体に比較してより広い局在パターンを示し得る。これは、抗ＵＰＩＩ抗体のより優れた感度に起因するものであり得るか、もしくはおそらく２つのアイソフォームが尿路上皮プラークの形成に区別できる役割を果たすことに起因するものであり得る。両者の機能の違いは完全には知られ得ていないが、しかしながら、ＵＰＩＩＩ遺伝子を欠損したマウスであっても小さな尿路上皮プラークを維持し得るところ、ＵＰＩＩ遺伝子を欠損したマウスでは尿路上皮プラークが見られなかった。もしＵＰＩＩとＵＰＩＩＩが実際に非重複の機能を示しているならば、片方のアイソフォームの測定は、ＴＣＣの有効な診断にとって十分でないかもしれない。したがって、抗ＵＰＩＩ抗体は、ＵＰアイソフォームのタンパク質発現をより完全にカバーするために必要とされ得る。

抗ＵＰＩＩ抗体の開発は、原発性のおよび転移性のですらあり得るＴＣＣの診断において有用であり得、おそらく以前の臨床研究におけるＵＰＩＩのｍＲＮＡ発現の検証において有用であり得、そして、ＵＰＩＩとＵＰＩＩＩ間のタンパク質発現の区別においてさえも有用であり得る。おそらく向上した染色感度を持ち、またおそらく同等のもしくはより優れた染色特異性（例えば抗ウロプラキンＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）と比較して）を保存してさえいる新規の抗ウロプラキンＩＩ抗体（例えば、抗ウロプラキンＩＩ抗体（ＢＣ２１））が、本発明において提供されている。

Ｕｒｏｐｌａｋｉｎ ＩＩ ａｓ ａ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｎｏｄａｌ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ｆｒｏｍ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ： ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ ２０． Ｗｕ Ｘ， Ｋａｋｅｈｉ Ｙ， Ｚｅｎｇ Ｙ， Ｔａｏｋａ Ｒ， Ｔｓｕｎｅｍｏｒｉ Ｈ， Ｉｎｕｉ Ｍ． Ｊ Ｕｒｏｌ． ２００５ Ｄｅｃ；１７４（６）：２１３８−４２ Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ Ｕｒｏｐｌａｋｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ： Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ Ｔｕｍｏｒ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｕｔｃｏｍｅ． Ｈｏｎｇ−Ｙｉｎｇ Ｈｕａｎｇ， Ｓｈａｈｒｏｋｈ Ｆ． Ｓｈａｒｉａｔ， Ｔｕｎｇ−Ｔｉｅｎ Ｓｕｎ， Ｈｅｒｂｅｒｔ Ｌｅｐｏｒ， Ｅｌｌｅｎ Ｓｈａｐｉｒｏ， Ｊｅｒ−Ｔｓｏｎｇ Ｈｓｉｅｈ， Ｒａｈｅｅｌａ Ａｓｈｆａｑ， Ｙａｉｒ Ｌｏｔａｎ， ａｎｄ Ｘｕｅ−Ｒｕ Ｗｕ， Ｈｕｍ Ｐａｔｈｏｌ． ２００７ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ； ３８（１１）： １７０３−１７１３

発明の開示
本発明の一般的な実施態様には、ＵＰＩＩを認識するモノクローナル抗体、それを調製する方法もしくは免疫組織化学での使用等が含まれ得る。実施態様において、抗ＵＰＩＩ抗体クローン（例えば、抗ＵＰＩＩ抗体クローンＢＣ２１）は、Ｂａｌｂ／ｃマウスを、Ｅ．ｃｏｌｉ発現により得られたアミノ酸２６−１５５に対応する組み換えヒトＵＰＩＩタンパク質で免疫することにより得られる。ＵＰＩＩタンパク質は、アジュバントとともに、腹腔内接種により、おそらく約３週間の間をあけて約５回、ＢＡＬＢ／ｃマウスに接種され得る。ＵＰＩＩに対する免疫反応性は組み換えＵＰＩＩタンパク質に対するダイレクトＥＬＩＳＡによって評価され得る。最も高い抗体価のマウスが、細胞融合によってハイブリドーマを発生させるために選ばれ得る。ヒト組織上のＵＰＩＩに対する最も良い反応性を示したハイブリドーマクローンが選ばれ、ＢＣ２１として指定され得る。ＢＣ２１クローンはアイソタイプについて試験され得、マウスＩｇＧ１／ｋａｐｐａとして同定され得る。ＢＣ２１抗体は、ハイブリドーマ細胞の大規模組織培養により、またＢＡＬＢ／ｃマウスの腹水により産生され得る。上清および抗体腹水は集められ得、プロテインＡアフィニティカラムにより抗体が精製され得る。ＢＣ２１は、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットおよびヒト組織においてさえもヒトＵＰＩＩタンパク質に対して特異的反応性を実証した。

抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、マウスモノクローナル抗ＵＰＩＩ抗体ＢＣ２１）は、組織サンプル中のＵＰＩＩの検出に有用であり得、おそらくいくつかの顕著な、しかし予期せぬ利点を現在知られている抗ＵＰＩＩＩ抗体に対してもち得る。伝統的な免疫組織化学手順中で用いられる際、抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、マウスモノクローナル抗ＵＰＩＩ抗体ＢＣ２１）は、公知の抗ＵＰＩＩＩ抗体の特異性とおそらく同様の特異性をもって、ＵＰＩＩの膜もしくは細胞質における染色をもたらし得る。しかしながら、抗ＵＰＩＩ抗体（例えばＢＣ２１）は、おそらく過去のＵＰＩＩＩ抗体と比較して向上した感度を示し得、それにより顕著な進歩を提供し得る。抗ＵＰＩＩ抗体（例えばＢＣ２１）を用いることで、サンプルの分析は簡単にされ得、そして、腫瘍細胞におけるＵＰＩＩの発現は容易に同定可能とされ得、それ以外の場合では診断が難しいもしくは不可能でさえある場合において診断が可能になる。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する。
（項目１）
アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）にＡＴＣＣ特許寄託番号第ＰＴＡ−１３１８１号で寄託されているハイブリドーマによって産生される抗体もしくはその断片。
（項目２）
アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）にＡＴＣＣ特許寄託番号第ＰＴＡ−１３１８１号で寄託されているハイブリドーマ細胞。
（項目３）
項目２に記載のハイブリドーマ細胞であって、さらに該ハイブリドーマ細胞によって産生される抗体もしくはその断片を含有するハイブリドーマ細胞。
（項目４）
項目１に記載のモノクローナル抗体を生産する方法であって、以下：
ウロプラキンＩＩを特異的に認識することができるモノクローナル抗体を産生する前記ハイブリドーマを培養する工程；および
該ハイブリドーマに該モノクローナル抗体を産生させる工程、
を包含する方法。
（項目５）
配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群より選択される核酸配列にコードされるアミノ酸配列のポリペプチドを含有する抗体もしくはその断片。
（項目６）
抗ウロプラキンＩＩ抗体もしくはその断片であって、配列番号２もしくは配列番号３の核酸配列にコードされるアミノ酸配列を含有する軽鎖可変領域、および配列番号１の核酸配列にコードされるアミノ酸配列を含有する重鎖可変領域を含有する該抗体もしくは該その断片。
（項目７）
配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群より選択される核酸配列にコードされるアミノ酸配列と少なくとも約７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含有する抗体。
（項目８）
配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群より選択される配列と少なくとも約７０％の同一性を有する核酸配列を含有する、単離および精製された核酸配列。
（項目９）
項目７もしくは８に記載の配列であって、前記少なくとも約７０％の同一性は、配列番号１に対する少なくとも約７０％の同一性ならびに配列番号２もしくは配列番号３に対する少なくとも約７０％の同一性を包含する配列。
（項目１０）
項目９に記載の配列であって、前記少なくとも約７０％の同一性は、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、および少なくとも約９９％からなる群から選択される割合を包含する配列。
（項目１１）
配列番号４の残基を含有するアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチドに特異的に結合する、抗体もしくはその断片。
（項目１２）
少なくとも２つの抗体もしくはその断片を含有する組成物であって、該少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの少なくとも１つが少なくともウロプラキンＩＩに特異的に結合する、組成物。
（項目１３）
項目１２に記載の組成物であって、少なくともウロプラキンＩＩに特異的に結合する前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの前記少なくとも１つは、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちのウロプラキンＩＩに特異的に結合し、そして、染色された細胞の１％より大きい陽性を指示するカットオフ値を有する、少なくとも１つを包含する、組成物。
（項目１４）
項目１２に記載の組成物であって、少なくともウロプラキンＩＩに特異的に結合する前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの前記少なくとも１つは、ウロプラキンＩＩに特異的に結合し、そして、以下：
−染色された細胞の約２％より大きい；
−染色された細胞の約３％より大きい；
−染色された細胞の約４％より大きい；
−染色された細胞の約５％より大きい；
−染色された細胞の約６％より大きい；
−染色された細胞の約７％より大きい；
−染色された細胞の約８％より大きい；
−染色された細胞の約９％より大きい；および
−染色された細胞の約１０％より大きい、からなる群から選択される陽性を指示するカットオフ値を有する、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの少なくとも１つを包含する、組成物。
（項目１５）
項目１２に記載の組成物であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの、前記少なくとも１つは、配列番号２もしくは配列番号３の核酸配列にコードされるアミノ酸配列を含有する軽鎖可変領域および配列番号１の核酸配列にコードされるアミノ酸配列を含有する重鎖可変領域を含有する、組成物。
（項目１６）
項目１２に記載の組成物であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの前記少なくとも１つは、配列番号２もしくは配列番号３の核酸配列にコードされるアミノ酸配列と少なくとも約７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含有する軽鎖可変領域および配列番号１の核酸配列にコードされるアミノ酸配列と少なくとも約７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含有する重鎖可変領域を含有する、組成物。
（項目１７）
項目１６に記載の組成物であって、前記少なくとも約７０％の同一性は、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、および少なくとも約９９％からなる群から選択される割合を包含する、組成物。
（項目１８）
項目１２に記載の組成物であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの前記少なくとも１つは、配列番号４の残基を包含するアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチドに特異的に結合する、組成物。
（項目１９）
項目１２に記載の組成物であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの前記少なくとも１つは、配列番号４の残基に対する少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチドに特異的に結合する、組成物。
（項目２０）
項目１９に記載の組成物であって、前記少なくとも約７０％の同一性は、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、および少なくとも９９％からなる群から選択される割合を包含する、組成物。
（項目２１）
項目１２に記載の組成物であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの前記少なくとも１つは、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）にＡＴＣＣ特許寄託番号第ＰＴＡ−１３１８１号で寄託されているハイブリドーマによって産生される抗体もしくはその断片を含む、組成物。
（項目２２）
項目１２に記載の組成物であって、１次抗体混合物を含有する、組成物。
（項目２３）
項目１２に記載の組成物であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片は、少なくとも２種の異なった生物種に由来する、組成物。
（項目２４）
項目２３に記載の組成物であって、前記少なくとも２種の異なった生物種は、マウス、ウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ、ヒトおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、組成物。
（項目２５）
項目１２に記載の組成物であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片は、二重染色手順を包含する、組成物。
（項目２６）
項目１２に記載の組成物であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片は、異なる可視化の結果を提供することが可能である、組成物。
（項目２７）
項目２６に記載の組成物であって、前記可視化の結果は色彩の結果を包含する、組成物。
（項目２８）
項目１２に記載の組成物であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの前記抗原に特異的に結合する抗体もしくはその断片でない少なくとも１つの抗体もしくはその断片は、ＧＡＴＡ−３、ｐ６３、ウロプラキンＩＩＩ、ＰＡＸ８、ＮＫＸ３．１、ＰＳＡ、ｐ４０およびその任意の組み合わせからなる群より選択される抗原に特異的に結合する組成物。
（項目２９）
項目１２に記載の組成物であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片は、以下：
−ウロプラキンＩＩおよびＧＡＴＡ−３；
−ウロプラキンＩＩおよびｐ６３；
−ウロプラキンＩＩおよびウロプラキンＩＩＩ；
−ウロプラキンＩＩおよびＰＡＸ８；
−ウロプラキンＩＩおよびＮＫＸ３．１；
−ウロプラキンＩＩおよびＰＳＡ；
−ウロプラキンＩＩ、ウロプラキンＩＩＩおよびＧＡＴＡ−３；
−ウロプラキンＩＩ、ＰＡＸ８およびＰＳＡ；
−ウロプラキンＩＩ、ＰＡＸ８およびＮＫＸ３．１；ならびに
−ウロプラキンＩＩおよびｐ４０、
からなる群より選択されるタンパク質にそれぞれ特異的に結合する、組成物。
（項目３０）
項目１２に記載の組成物であって、尿路上皮癌検出組成物、腎細胞癌検出組成物、前立腺癌検出組成物およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される検出組成物を含有する、組成物。
（項目３１）
ウロプラキンＩＩに特異的に結合し、そして、染色された細胞の１％より大きい陽性を指示するカットオフ値を有する、モノクローナル抗体もしくはその断片。
（項目３２）
項目３１に記載のモノクローナル抗体もしくはその断片であって、前記陽性を指示するカットオフ値が以下：
−染色された細胞の約２％より大きい；
−染色された細胞の約３％より大きい；
−染色された細胞の約４％より大きい；
−染色された細胞の約５％より大きい；
−染色された細胞の約６％より大きい；
−染色された細胞の約７％より大きい；
−染色された細胞の約８％より大きい；
−染色された細胞の約９％より大きい；および
−染色された細胞の約１０％より大きい、
からなる群から選択される、モノクローナル抗体もしくはその断片。
（項目３３）
項目５、６、１１、１２もしくは３１のいずれかに記載の抗体であって、該抗体もしくはその断片はアメリカンタイプカルチャーコレクションにＡＴＣＣ特許寄託番号第ＰＴＡ−１３１８１号で寄託されているハイブリドーマ細胞によって産生される、抗体。
（項目３４）
項目１、３、１１もしくは３１のいずれかに記載の抗体であって、該抗体もしくはその断片は、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群より選択される核酸配列にコードされるアミノ酸配列のポリペプチドを含有する、抗体。
（項目３５）
項目１、３、１１もしくは３１のいずれかに記載の抗体であって、該抗体もしくはその断片は、配列番号１および配列番号２または配列番号３の核酸配列にコードされるアミノ酸配列のポリペプチドを含有する、抗体。
（項目３６）
項目１、３、１１もしくは３１のいずれかに記載の抗体であって、該抗体もしくはその断片は、配列番号１および配列番号２または配列番号３の核酸配列にコードされるアミノ酸配列に対する少なくとも約７０％の同一性を有するポリペプチドを含有する、抗体。
（項目３７）
項目１、３、１１もしくは３１のいずれかに記載の抗体であって、該抗体もしくはその断片は、配列番号１および配列番号２もしくは配列番号３の核酸配列にコードされるアミノ酸配列に対する少なくとも約７０％の同一性を有するポリペプチドを含有する、抗体。
（項目３８）
項目１、３、５もしくは３１のいずれかに記載の抗体であって、該抗体もしくはその断片は、配列番号４の残基を含有するアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチドに特異的に結合する、抗体。
（項目３９）
項目１、３、５もしくは３１のいずれかに記載の抗体であって、該抗体もしくはその断片は、配列番号４の残基に対する少なくとも約７０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチドに特異的に結合する、抗体。
（項目４０）
項目３９に記載の抗体であって、前記少なくとも約７０％の同一性は、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、および少なくとも９９％からなる群から選択される割合を包含する、抗体。
（項目４１）
項目１、３、５、６、１１、１２もしくは３１のいずれかに記載の抗体であって、該抗体はモノクローナル抗体を含有する、抗体。
（項目４２）
項目４１に記載の抗体であって、前記モノクローナル抗体は染色された細胞の１％より大きい陽性を指示するカットオフ値を有する、抗体。
（項目４３）
項目４２に記載の抗体であって、前記陽性を指示するカットオフ値が以下：
−染色された細胞の約２％より大きい；
−染色された細胞の約３％より大きい；
−染色された細胞の約４％より大きい；
−染色された細胞の約５％より大きい；
−染色された細胞の約６％より大きい；
−染色された細胞の約７％より大きい；
−染色された細胞の約８％より大きい；
−染色された細胞の約９％より大きい；および
−染色された細胞の約１０％より大きい、
からなる群より選択される、抗体。
（項目４４）
項目４１に記載の抗体であって、前記モノクローナル抗体は、マウスモノクローナル抗体、ウサギモノクローナル抗体、ヤギモノクローナル抗体、ウマモノクローナル抗体、ニワトリモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、キメラ抗体およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、抗体。
（項目４５）
項目１、３、５、６、１１、１２もしくは３１のいずれかに記載の抗体であって、該抗体はポリクローナル抗体を包含する、抗体。
（項目４６）
項目４５に記載の抗体であって、前記ポリクローナル抗体は、ウサギポリクローナル抗体、マウスポリクローナル抗体、ヤギポリクローナル抗体、ウマポリクローナル抗体、ニワトリポリクローナル抗体、ヒト化ポリクローナル抗体およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、抗体。
（項目４７）
項目１、３、５、６、１１、１２もしくは３１のいずれかに記載の抗体であって、該抗体は単離された抗体を包含する、抗体。
（項目４８）
項目１、３、５、６、１１、１２もしくは３１のいずれかに記載の抗体であって、前記抗体の断片は抗体の抗原結合断片を包含する、抗体。
（項目４９）
項目１、３、５、６、１１、１２もしくは３１のいずれかに記載の抗体であって、さらに前記抗体もしくはその断片に結合された標識を含有する、抗体。
（項目５０）
標識と結合体化された項目１、３、５、６、１１、１２もしくは３１に記載の抗体もしくはその断片を含有する、癌診断剤。
（項目５１）
項目４９に記載の抗体であって、前記標識は、放射性元素、磁性粒子、放射性同位体、蛍光色素、酵素、毒素、信号、色素、検出酵素、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、β−ガラクトシダーゼ、色素原、ＦＡＳＴ ＲＥＤ、３，３’−ジアミノベンジジン、３−アミノ−９−エチルカルバゾール、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニドおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、抗体。
（項目５２）
項目５０に記載の抗体であって、前記標識は、放射性元素、磁性粒子、放射性同位体、蛍光色素、酵素、毒素、信号、色素、検出酵素、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、β−ガラクトシダーゼ、色素原、ＦＡＳＴ ＲＥＤ、３，３’−ジアミノベンジジン、３−アミノ−９−エチルカルバゾール、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニドおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、抗体。
（項目５３）
診断のもしくは予後の検査キットであって以下：
−項目１、３、５、６、１１、１２もしくは３１に記載の抗体もしくはその断片；および
−抗原に結合した場合の該抗体もしくは該その断片の抗体検出要素、
を含有する、検査キット。
（項目５４）
項目５３のキットを用いて生物学的サンプル中のウロプラキンＩＩを検出する方法であって、以下：
−生物学的サンプルを前記抗体もしくはその断片と接触させる工程；および
−前記抗体検出要素を用いて該抗体もしくは該その断片と該生物学的サンプル中の抗原との結合を検出する工程、
を包含する、方法。
（項目５５）
項目１、３、５、６もしくは１１のいずれかに記載の抗体であって、前記抗体もしくは前記その断片はウロプラキンＩＩに特異的に結合する、抗体。
（項目５６）
癌を検出するための項目１、３、５、６、１１もしくは３１に記載の抗体もしくはその断片または組成物の使用。
（項目５７）
癌の診断もしくは予後のための項目１、３、５、６、１１もしくは３１に記載の抗体もしくはその断片または組成物の使用。
（項目５８）
癌の治療の転帰を予想するための項目１、３、５、６、１１もしくは３１に記載の抗体もしくはその断片または組成物の使用。
（項目５９）
項目１、３、５、６、１１もしくは３１のいずれかに記載の抗体もしくはその断片または組成物の、癌の治療の有効性を評価するための使用。
（項目６０）
癌の再発を予想するための項目１、３、５、６、１１もしくは３１に記載の抗体もしくはその断片または組成物の使用。
（項目６１）
項目５６に記載の抗体もしくはその断片または組成物であって、前記抗体もしくはその断片または組成物の前記使用が、自動化染色装置上で行われる、抗体もしくはその断片または組成物。
（項目６２）
項目５６に記載の抗体もしくはその断片または組成物であって、前記検出が手動で行われる、抗体もしくはその断片または組成物。
（項目６３）
項目５６に記載の抗体もしくはその断片または組成物であって、前記検出が自動で行われる、抗体もしくはその断片または組成物。
（項目６４）
項目５６に記載の抗体もしくはその断片または組成物であって、前記検出が画像解析によって行われる、抗体もしくはその断片または組成物。
（項目６５）
生物学的サンプルに対して項目１、３、５、６、１１、１２もしくは３１の抗体もしくはその断片が結合するタンパク質を検出する方法であって、生物学的サンプルを該抗体もしくはその断片と接触させる工程；および該生物学的サンプル中の該タンパク質に結合した該抗体もしくはその断片の存在を検出する工程、を包含する方法。
（項目６６）
項目６５に記載の方法であって、前記生物学的サンプルは、血液、尿、尿路上皮組織、移行細胞組織および膀胱組織を包含する、方法。
（項目６７）
項目６５に記載の方法であって、前記生物学的サンプルは、正常組織、新生物性組織、膀胱組織、腎臓組織、卵巣組織、甲状腺組織、子宮内膜組織、腎性組織、扁桃腺組織、膵臓組織、結腸組織、リンパ節組織、胃組織、前立腺組織、肺組織および胸部組織からなる群より選択される、方法。
（項目６８）
項目６５に記載の方法であって、前記タンパク質に結合した抗体もしくはその断片の前記存在を検出する前記工程は、自動化染色装置上で行われる、方法。
（項目６９）
項目６５に記載の方法であって、前記タンパク質に結合した抗体もしくはその断片の前記存在を検出する前記工程が手動で行われる、方法。
（項目７０）
項目６５に記載の方法であって、前記タンパク質に結合した抗体もしくはその断片の前記存在を検出する前記工程が自動で行われる、方法。
（項目７１）
項目６５に記載の方法であって、前記タンパク質に結合した抗体もしくはその断片の前記存在を検出する前記工程はが画像解析によって行われる、方法。
（項目７２）
項目６５に記載の方法であって、前記検出は免疫組織化学（ＩＨＣ）、ＦＦＰＥのＩＨＣ、凍結組織切片のＩＨＣ、免疫細胞化学およびＥＬＩＳＡからなる群より選択される方法を包含する、方法。
（項目７３）
生物学的サンプル中の少なくとも２つの異なるタンパク質を検出する方法であって、以下：
−該生物学的サンプルと、少なくとも２つの抗体もしくはその断片を含有する組成物とを接触させる工程であって、該少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの少なくとも１つが少なくともウロプラキンＩＩに特異的に結合して抗原−抗体複合体を形成する工程；および
−該抗原−抗体複合体を検出する工程、
を包含する、方法。
（項目７４）
項目７３に記載の方法であって、少なくともウロプラキンＩＩに特異的に結合する前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの前記少なくとも１つは、少なくともウロプラキンＩＩに特異的に結合し、そして、染色された細胞の１％より大きい陽性を指示するカットオフ値を有する該少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの少なくとも１つを包含する、方法。
（項目７５）
項目７４に記載の方法であって、陽性を指示するカットオフ値は以下：
−染色された細胞の約２％より大きい；
−染色された細胞の約３％より大きい；
−染色された細胞の約４％より大きい；
−染色された細胞の約５％より大きい；
−染色された細胞の約６％より大きい；
−染色された細胞の約７％より大きい；
−染色された細胞の約８％より大きい；
−染色された細胞の約９％より大きい；および
−染色された細胞の約１０％より大きい、
からなる群より選択される、方法。
（項目７６）
項目７３に記載の方法であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片は、少なくとも１つの第一の１次抗体および少なくとも１つの第二の１次抗体を包含する、方法。
（項目７７）
項目７３に記載の方法であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの前記少なくとも１つは、配列番号２もしくは配列番号３の核酸配列にコードされるアミノ酸配列を含有する軽鎖可変領域および配列番号１の核酸配列にコードされるアミノ酸配列を含有する重鎖可変領域を含有する、方法。
（項目７８）
項目７３に記載の方法であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの前記少なくとも１つは、配列番号２もしくは配列番号３の核酸配列にコードされるアミノ酸配列と少なくとも約７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含有する軽鎖可変領域および配列番号１の核酸配列にコードされるアミノ酸配列と少なくとも約７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含有する重鎖可変領域を含有する、方法。
（項目７９）
項目７８に記載の方法であって、前記少なくとも約７０％の同一性は、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、および少なくとも約９９％からなる群から選択される割合を包含する、方法。
（項目８０）
項目７３に記載の方法であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの前記少なくとも１つは、配列番号４の残基を包含するアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチドに特異的に結合する、方法。
（項目８１）
項目７３に記載の方法であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの前記少なくとも１つは、配列番号４の残基に対する少なくとも約７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチドに特異的に結合する、方法。
（項目８２）
項目８１に記載の方法であって、前記少なくとも約７０％の同一性は、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、および少なくとも９９％からなる群から選択される割合を包含する、方法。
（項目８３）
項目７３に記載の方法であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの前記少なくとも１つは、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）にＡＴＣＣ特許寄託番号第ＰＴＡ−１３１８１号で寄託されているハイブリドーマによって産生される抗体もしくはその断片を包含する、方法。
（項目８４）
項目７３に記載の方法であって、前記組成物は、１次抗体混合物を含有する、方法。
（項目８５）
項目７３に記載の方法であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片は、少なくとも２種の異なった生物種に由来する、方法。
（項目８６）
項目８５に記載の方法であって、前記少なくとも２種の異なった生物種は、マウス、ウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ、ヒトおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、方法。
（項目８７）
項目７３に記載の方法であって、さらに前記生物学的サンプルの二重染色工程を包含する、方法。
（項目８８）
項目７３に記載の方法であって、さらに異なる可視化の結果を提供する工程を包含する、方法。
（項目８９）
項目８８に記載の方法であって、前記可視化の結果は色彩の結果を包含する、方法。
（項目９０）
項目７３に記載の方法であって、前記少なくとも２つの抗体もしくはその断片は、以下：
−ウロプラキンＩＩおよびＧＡＴＡ−３；
−ウロプラキンＩＩおよびｐ６３；
−ウロプラキンＩＩおよびウロプラキンＩＩＩ；
−ウロプラキンＩＩおよびＰＡＸ８；
−ウロプラキンＩＩおよびＮＫＸ３．１；
−ウロプラキンＩＩおよびＰＳＡ；
−ウロプラキンＩＩ、ウロプラキンＩＩＩおよびＧＡＴＡ−３；
−ウロプラキンＩＩ、ＰＡＸ８およびＰＳＡ；
−ウロプラキンＩＩ、ＰＡＸ８およびＮＫＸ３．１；ならびに
−ウロプラキンＩＩおよびｐ４０、
からなる群より選択されるタンパク質にそれぞれ特異的に結合する、方法。
（項目９１）
項目７３に記載の方法であって、前記抗原−抗体複合体を検出する前記工程は、前記サンプル上で少なくとも２つの抗原−抗体複合体の形成を検出する工程であって、前記第一の抗体はウロプラキンＩＩに特異的に結合し、前記第二の抗体はＧＡＴＡ−３、ｐ６３、ウロプラキンＩＩＩ、ＰＡＸ８、ＮＫＸ３．１、ＰＳＡ、ｐ４０およびその任意の組み合わせからなる群より選択される抗原に特異的に結合する工程を包含する、方法。
（項目９２）
動物もしくはヒト中のウロプラキンＩＩタンパク質を検出するイムノアッセイ法であって、下記：
−試験される動物もしくはヒトから組織を得る工程；
−該組織を項目１、３、５、６、１１、１２もしくは３１に記載の抗体もしくはその断片と、該組織にウロプラキンＩＩタンパク質が存在した場合に該抗体もしくはその断片が該タンパク質に結合するような量および条件で接触させる工程；ならびに
−該結合した抗体の存在を検出する工程、
を包含する、イムノアッセイ法。
（項目９３）
項目９２に記載の、動物もしくはヒト中のウロプラキンＩＩタンパク質を検出するイムノアッセイ法であって、さらに前記組織を固定または凍結する工程を包含する、イムノアッセイ法。
（項目９４）
項目９３に記載の、動物もしくはヒト中のウロプラキンＩＩタンパク質を検出するイムノアッセイ法であって、前記固定もしくは凍結された組織を、ウロプラキンＩＩのエピトープを露出させるために処理する工程をさらに包含する、イムノアッセイ法。
（項目９５）
項目９２に記載の、ウロプラキンＩＩタンパク質を検出するイムノアッセイ法であって、さらに免疫組織化学（ＩＨＣ）、ＦＦＰＥのＩＨＣ、凍結組織切片のＩＨＣ、免疫細胞化学およびＥＬＩＳＡからなる群より選択される方法を用いて前記動物もしくはヒト中の前記ウロプラキンＩＩを検出する工程を包含する、イムノアッセイ法。
（項目９６）
ウロプラキンＩＩタンパク質に特異的に結合する抗体の単離された調製物であって、該抗体は配列番号４（該ウロプラキンＩＩタンパク質の３６−５０残基）のペプチド中のエピトープに結合する、調製物。

図１は、膀胱ＴＣＣ組織（グレード３）における抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）の染色の例を示している。 図２は、図１と同一の膀胱ＴＣＣ組織の連続切片における抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）の染色の例を示している。 図３は、膀胱ＴＣＣ組織（グレード２）における抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）の染色の例を示している。 図４は、図３と同一の膀胱ＴＣＣ組織の連続切片における抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）の染色の例を示している。 図５は、膀胱ＴＣＣ組織（グレード３）における抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）の染色の例を示している。 図６は、図５と同一の膀胱ＴＣＣ組織の連続切片における抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）の染色の例を示している。 図７は、膀胱ＴＣＣ組織（グレード３）における抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）の染色の例を示している。 図８は、図７と同一の膀胱ＴＣＣ組織の連続切片における抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）の染色の例を示している。 図９Ａおよび９Ｂは、ＢＣ２１およびＢＣ１７抗体とウロプラキンＩＩタンパク質およびウロプラキンＩＩＩタンパク質の交差反応性をウェスタンブロットによって示したものである。 図１０は、ＵＰＩＩとＵＰＩＩＩの混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（茶色）は膜性および細胞質性である。 図１１は、ＵＰＩＩとＧＡＴＡ３の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＧＡＴＡ３の染色（茶色）は核性である。 図１２は、ＵＰＩＩとＧＡＴＡ３の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＧＡＴＡ３の染色（茶色）は核性である。 図１３は、ＵＰＩＩとＵＰＩＩＩとＧＡＴＡ３の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩおよびＵＰＩＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＧＡＴＡ３の染色（茶色）は核性である。 図１４は、ＵＰＩＩとＰＡＸ８の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＰＡＸ８の染色（核性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図１５は、ＵＰＩＩとＰＡＸ８の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＰＡＸ８の染色（核性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図１６はＵＰＩＩとＰＡＸ８の混合物の腎細胞癌腫の染色の例を示している。ＰＡＸ８の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図１７はＵＰＩＩとＰＡＸ８の混合物の腎細胞癌腫の染色の例を示している。ＰＡＸ８の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図１８は、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＰＳＡの混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＰＡＸ８およびＰＳＡの染色（それぞれ核性および細胞質性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図１９は、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＰＳＡの混合物の腎細胞癌腫の染色の例を示している。ＰＡＸ８の染色（茶色）は細胞質性である、ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、赤）およびＰＳＡの染色（細胞質性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図２０は、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＰＳＡの混合物の前立腺癌の染色の例を示している。ＰＳＡの染色（茶色）は細胞質性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、赤）およびＰＡＸ８の染色（核性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図２１は、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＰＳＡの混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（茶色）は膜性および細胞質性である。ＰＡＸ８およびＰＳＡの染色（それぞれ核性および細胞質性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図２２は、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＰＳＡの混合物の腎細胞癌腫の染色の例を示している。ＰＡＸ８の染色（赤）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、茶色）およびＰＳＡの染色（細胞質性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図２３は、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＰＳＡの混合物の前立腺癌の染色の例を示している。ＰＳＡの染色（赤）は細胞質性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、茶色）およびＰＡＸ８の染色（核性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図２４は、ＵＰＩＩとＮＫＸ３．１の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＮＫＸ３．１の染色（核性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図２５は、ＵＰＩＩとＮＫＸ３．１の混合物の前立腺癌の染色の例を示している。ＮＫＸ３．１の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、赤色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図２６は、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＮＫＸ３．１の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（茶色）は膜性および細胞質性である。ＰＡＸ８の染色（核性、茶色）およびＮＫＸ３．１の染色（核性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図２７は、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＮＫＸ３．１の混合物の腎細胞癌腫の染色の例を示している。ＰＡＸ８の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、茶色）およびＮＫＸ３．１の染色（核性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図２８は、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＮＫＸ３．１の混合物の前立腺癌の染色の例を示している。ＮＫＸ３．１の染色（赤）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、茶色）およびＰＡＸ８の染色（核性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図２９は、ＵＰＩＩとｐ６３の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ｐ６３の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。 図３０は、ＵＰＩＩとｐ６３の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（茶色）は膜性および細胞質性である。ｐ６３の染色（核性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいは消失している。 図３１は、ＵＰＩＩとｐ６３の混合物の前立腺上皮内新生物（ＰＩＮ）の染色の例を示している。ｐ６３の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいは消失している。 図３２は、ＵＰＩＩとｐ６３の混合物の正常前立腺の染色の例を示している。ｐ６３の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいは消失している。 図３３は、ＵＰＩＩとｐ６３の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ｐ４０の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。 図３４は、本発明の様々な実施態様に従いキットの模式的な概要の例を示している。 図３５は、本発明の様々な実施態様に従いイムノアッセイ法の模式的な概要の例を示している。 図３６は、図１のカラー版であり、膀胱ＴＣＣ組織（グレード３）における抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）の染色の例を示している。 図３７は、図２のカラー版であり、図３６と同一の膀胱ＴＣＣ組織の連続切片における抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）の染色の例を示している。 図３８は、図３のカラー版であり、膀胱ＴＣＣ組織（グレード２）における抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）の染色の例を示している。 図３９は、図４のカラー版であり、図３８と同一の膀胱ＴＣＣ組織の連続切片における抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）の染色の例を示している。 図４０は、図５のカラー版であり、膀胱ＴＣＣ組織（グレード３）における抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）の染色の例を示している。 図４１は、図６のカラー版であり、図４０と同一の膀胱ＴＣＣ組織の連続切片における抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）の染色の例を示している。 図４２は、図７のカラー版であり、膀胱ＴＣＣ組織（グレード３）における抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）の染色の例を示している。 図４３は、図８のカラー版であり、図４２と同一の膀胱ＴＣＣ組織の連続切片における抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）の染色の例を示している。 図４４Ａおよび４４Ｂは図９Ａおよび９Ｂのカラー版であり、ＢＣ２１およびＢＣ１７抗体とウロプラキンＩＩタンパク質およびウロプラキンＩＩＩタンパク質の交差反応性をウェスタンブロットによって示したものである。 図４５は、図１０のカラー版であり、ＵＰＩＩとＵＰＩＩＩの混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（茶色）は膜性および細胞質性である。 図４６は、図１１のカラー版であり、ＵＰＩＩとＧＡＴＡ３の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＧＡＴＡ３の染色（茶色）は核性である。 図４７は、図１２のカラー版であり、ＵＰＩＩとＧＡＴＡ３の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＧＡＴＡ３の染色（茶色）は核性である。 図４８は、図１３のカラー版であり、ＵＰＩＩとＵＰＩＩＩとＧＡＴＡ３の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩおよびＵＰＩＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＧＡＴＡ３の染色（茶色）は核性である。 図４９は、図１４のカラー版であり、ＵＰＩＩとＰＡＸ８の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＰＡＸ８の染色（核性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図５０は、図１５のカラー版であり、ＵＰＩＩとＰＡＸ８の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＰＡＸ８の染色（核性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図５１は、図１６のカラー版であり、ＵＰＩＩとＰＡＸ８の混合物の腎細胞癌腫の染色の例を示している。ＰＡＸ８の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図５２は図１７のカラー版であり、ＵＰＩＩとＰＡＸ８の混合物の腎細胞癌腫の染色の例を示している。ＰＡＸ８の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図５３は、図１８のカラー版であり、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＰＳＡの混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＰＡＸ８およびＰＳＡの染色（それぞれ核性および細胞質性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図５４は、図１９のカラー版であり、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＰＳＡの混合物の腎細胞癌腫の染色の例を示している。ＰＡＸ８の染色（茶色）は細胞質性である、ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、赤）およびＰＳＡの染色（細胞質性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図５５は、図２０のカラー版であり、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＰＳＡの混合物の前立腺癌の染色の例を示している。ＰＳＡの染色（茶色）は細胞質性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、赤）およびＰＡＸ８の染色（核性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図５６は、図２１のカラー版であり、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＰＳＡの混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（茶色）は膜性および細胞質性である。ＰＡＸ８およびＰＳＡの染色（それぞれ核性および細胞質性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図５７は、図２２のカラー版であり、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＰＳＡの混合物の腎細胞癌腫の染色の例を示している。ＰＡＸ８の染色（赤）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、茶色）およびＰＳＡの染色（細胞質性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図５８は、図２３のカラー版であり、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＰＳＡの混合物の前立腺癌の染色の例を示している。ＰＳＡの染色（赤）は細胞質性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、茶色）およびＰＡＸ８の染色（核性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図５９は、図２４のカラー版であり、ＵＰＩＩとＮＫＸ３．１の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。ＮＫＸ３．１の染色（核性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図６０は、図２５のカラー版であり、ＵＰＩＩとＮＫＸ３．１の混合物の前立腺癌の染色の例を示している。ＮＫＸ３．１の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、赤色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図６１は、図２６のカラー版であり、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＮＫＸ３．１の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（茶色）は膜性および細胞質性である。ＰＡＸ８の染色（核性、茶色）およびＮＫＸ３．１の染色（核性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図６２は、図２７のカラー版であり、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＮＫＸ３．１の混合物の腎細胞癌腫の染色の例を示している。ＰＡＸ８の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、茶色）およびＮＫＸ３．１の染色（核性、赤）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図６３は、図２８のカラー版であり、ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＮＫＸ３．１の混合物の前立腺癌の染色の例を示している。ＮＫＸ３．１の染色（赤）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、茶色）およびＰＡＸ８の染色（核性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいはおそらく消失している。 図６４は、図２９のカラー版であり、ＵＰＩＩとｐ６３の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ｐ６３の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。 図６５は、図３０のカラー版であり、ＵＰＩＩとｐ６３の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ＵＰＩＩの染色（茶色）は膜性および細胞質性である。ｐ６３の染色（核性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいは消失している。 図６６は、図３１のカラー版であり、ＵＰＩＩとｐ６３の混合物の前立腺上皮内新生物（ＰＩＮ）の染色の例を示している。ｐ６３の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいは消失している。 図６７は、図３２のカラー版であり、ＵＰＩＩとｐ６３の混合物の正常前立腺の染色の例を示している。ｐ６３の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（膜性および細胞質性、茶色）はこのサンプルでは減少、あるいは消失している。 図６８は、図３３のカラー版であり、ＵＰＩＩとｐ４０の混合物の尿路上皮癌腫の染色の例を示している。ｐ４０の染色（茶色）は核性である。ＵＰＩＩの染色（赤）は膜性および細胞質性である。

発明を実施するための態様
前述の議論から理解され得るように、本発明は様々に組み合わせることのできる種々の局面を含んでいる。以下の説明は、構成要素を列挙し、本発明の実施形態のいくつかを説明するために提供される。これらの構成要素は初期の実施形態と共に記載されるが、追加の実施形態を作り出すために、これらの構成要素は任意の様式、数量において組み合わされ得ることが理解されるべきである。様々に説明される実施例及び好ましい実施形態は、本発明を明示されたシステム、技術、及び応用に限定するものと解釈されるべきではない。さらに、この説明は、この適用または後に続く任意の適用内において、開示された任意の数量の構成要素、個々の構成要素単独および全ての構成要素の任意のおよび全ての並び換えおよび組み合わせを伴う、様々な実施態様、システム、技術、方法、装置、および応用の全ての記載および特許請求の範囲を支持および包含するものと理解されるべきである。

本発明の実施態様は、ＵＰＩＩに特異的に結合し、いくつかの種類のガンの診断においてＵＰＩＩの検出に使用され得る抗体およびそれに関する方法を提供し得る。抗体は、抗体のフラグメント、マウスモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化モノクローナル抗体、ヒトモノクローナル抗体、それ自体またはその断片に標識を結合もしくはコンジュゲートさせた抗体、検出可能な信号または色素で標識された抗体、毒素で標識された抗体等であり得る。標識としては、放射性元素、磁性粒子、放射性同位体、蛍光色素、酵素、毒素、信号、色素、検出酵素、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、β−ガラクトシダーゼ、色素原、ＦＡＳＴ ＲＥＤ、３，３’−ジアミノベンジジン、３−アミノ−９−エチルカルバゾール、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニドおよびそれらの任意の組み合わせ等が挙げられ得るが、それに限定されない。本発明のシステムおよび方法は、上記抗体またはＵＰＩＩと結合できるその抗原結合部位と関連し得る。

本発明の実施態様は、ＵＰＩＩに特異的に結合し、いくつかの種類のガンの診断においてＵＰＩＩの検出に使用され得るモノクローナル抗体およびそれに関する方法を提供し得る。モノクローナル抗体は、抗体のフラグメント、マウスモノクローナル抗体、ウサギモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化モノクローナル抗体、ヒトモノクローナル抗体、検出可能な信号または色素で標識された抗体、毒素で標識された抗体等であり得る。本発明のシステムおよび方法は、上記モノクローナル抗体またはそのＵＰＩＩと結合できる抗原結合部位と関連し得る。

マウスモノクローナル抗体は、免疫組織化学手順の１次抗体を含む、特定の分析物を同定するためのイムノアッセイ法に一般的に用いられ得る。目的のタンパク質標的に特異的なマウスモノクローナル抗体は、一般的に知られている過程を用いて生産することができる。一般的に、マウスを目的の抗原（所望の標的のペプチド断片またはタンパク質標的全長）に曝露することで免疫応答を引き起こし得、その免疫応答において、マウスは上記抗原に結合する複数の抗体を産生し、抗体の各々は特定のＢ細胞によって産生され得る。これらのＢ細胞は、マウス脾臓から単離され得、また産生された抗体はＩＨＣの１次抗体としてその適性を評価され得る。最適な抗体を選択した後、関連するＢ細胞は、公知の方法を用いて腫瘍細胞と融合され得、おそらく結果としてハイブリドーマとなり、無限に増殖することができ継続的に所望の抗体を産生し得る新しい細胞系統となり得る。

モノクローナル抗体はいくつかの理由により、ポリクローナル抗体より好まれ得る。特に、モノクローナル抗体は単一のＢ細胞から誘導され得、そのため単一のエピトープを認識し得、おそらく結果としてより高い特異性を持ち得る。またモノクローナル抗体は細胞培養において簡便にまた再現可能に産生され得、おそらく結果として所望の抗体の継続的な供給をし得る。無論、いくつかの実施態様ではポリクローナル抗体も使用され得る。

抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、マウスモノクローナル抗ＵＰＩＩ抗体ＢＣ２１）は、上記の一般的な過程によって産生され得、おそらく特に既知の抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）と比較して、様々な正常および新生物性の組織に対する免疫組織化学的な感度および特異性によって評価され得る。

ＵＰＩＩタンパク質発現の例：アミノ酸配列２６から１５５のＵＰＩＩ組み換えタンパク質はＥ．ｃｏｌｉからクローニング、発現させ得る。手軽にはＵＰＩＩｃＤＮＡがクローニング、精製され得る。該ＵＰＩＩｃＤＮＡは制限酵素により分解され得、ｐＥＴ３０ａ−ＧＳＴベクター中にライゲーションされ得る。ＢＬ２１細胞はコンストラクトによって形質転換され得る。正確なサイズの組み換えタンパク質が発現しているコロニーは選択され得、シーケンシングされ得る。０．５ｍＭのＩＰＴＧを含むＬＢ培地でＥ．ｃｏｌｉを培養することによってさらに規模を拡大した生産を実現し得る。最終的なＵＰＩＩ組み換えタンパク質はＳＤＳ−ＰＡＧＥによって精製され得、分析され得る。

宿主免疫の例：雌性ＢＡＬＢ／ｃ（約６週から８週齢）マウスは、フロイント完全アジュバント中の個体あたり約１００μｇのヒトＵＰＩＩタンパクを用いて、腹腔内（ｉ．ｐ．）免疫され得る。約３週間後、さらにフロイント不完全アジュバント中の個体あたり１００μｇのヒトＵＰＩＩタンパクを用いて、約３週間の間隔をおいてさらに約４回、上記マウスを追加免疫し得る。マウスは尾部から採血され得、後の酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）による抗体価の分析のため血清を集め−２０℃で保存し得る。

ハイブリドーマの例：ＵＰＩＩに対する抗体を産生するハイブリドーマはＵＰＩＩで免疫されたＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓細胞から標準的な技術によって作成され得る。例えば、約５０％のポリエチレングリコールを用いてインキュベーションすることで、約４：１の比率で、ＵＰＩＩで免疫されたマウスの脾臓細胞を、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ ８．６５３骨髄腫細胞（ＳＰ２／０ Ｂａｌｂ／ｃ骨髄腫細胞に由来する非分泌性骨髄腫）と融合させ得る。インキュベーションに続いて、細胞はおそらく約３００×ｇ、約１０分間の遠心分離によってペレット状にされ得、約２５ｍｌのＰＢＳ中で洗浄され得、再遠心分離され得、細胞のペレットは約２０％のウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｕｔａｈ，Ｃｏ）を含む約１００ｍｌの新鮮なダルベッコ培地に再懸濁され得る。約１００μｌずつのアリコートは、１０枚の９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｌｏｗｅｌｌ，ＭＡ）の各ウェルに添加することができる。約２４時間後、約１Ｍのヒポキサンチン（ＨＴ）、約４ｍＭのアミノプテリンおよび約１６０ｍＭのチミジン（ＨＡＴ）を添加した約１００μｌのＤＭＥＭ培養培地をマイクロタイターの各ウェルに添加することができる。培地は、おそらく約４日後に完全培地（おそらくＨＡＴとＨＴを含む）に変更され得る。その後約１０日間にわたり、培地は除去され得、ＨＡＴおよびＨＴの添加量を減らした、もしくはおそらく添加を無くした新鮮な培地に変更され得る。ハイブリドーマの上清はＵＰＩＩへの抗体反応性によりＥＬＩＳＡでスクリーニングされ得、また、ハイブリドーマのクローンはそこで選択され得、おそらく限界希釈による２回のクローニングによって安定化され得る。

抗ヒトＵＰＩＩハイブリドーマクローンＢＣ２１とも言われるハイブリドーマ細胞は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）にＡＴＣＣ特許寄託番号第ＰＴＡ−１３１８１号で寄託されている。本発明の実施態様は、ＡＴＣＣに寄託されている該ハイブリドーマによって産生される抗体もしくはそのフラグメントを提供し得、ウロプラキンＩＩを特異的に認識することができるモノクローナル抗体を産生する該ハイブリドーマ細胞を培養することによってモノクローナル抗体を産生するための方法、また該ハイブリドーマにモノクローナル抗体を産生させる方法をも含み得る。

ＥＬＩＳＡ：宿主のＵＰＩＩに対する抗血清免疫反応はＥＬＩＳＡによって測定され得る。例えば、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のＵＰＩＩの溶液（約１μｇ／ｍｌ）は、約９６ウェルの平底ポリスチレンプレートを被覆するのに使用され得る。該プレートは、次に約１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）−ＰＢＳによってブロックされ得る。希釈された免疫血清もしくはハイブリドーマ上清のいずれかが添加され得、約３７℃で約１時間インキュベートされ得る。該プレートをＰＢＳで洗浄後、該プレートはヤギ抗マウスＨＲＰ試薬（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）とともにインキュベートされ得る。インキュベートは約３７℃、約３０分間で完了し得る。発色させるためにＡＢＴＳ基質が加えられ得、また約４０５ｎｍにおける吸光度（Ａ４０５）がマイクロタイタープレートリーダーによって測定され得る。

モノクローナル抗体のアイソタイプ：抗ＵＰＩＩ抗体（例えばＢＣ２１モノクローナル抗体）は、マウスモノクローナル抗体アイソタイピングキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）を用いてアイソタイピングされ得る。例えば、マウスモノクローナル抗体（ＢＣ２１）細胞からの約１００μｌの上清が、ヤギ抗マウスＩｇＧ１，ＩｇＧ２Ａ，ＩｇＧ２Ｂ，ＩｇＧ３，ＩｇＭおよびＩｇＡ抗体で被覆したプレートに添加され得る。約３０分間のインキュベートの後、プレートはＰＢＳで３回洗浄され得、ヤギ抗マウスＩｇ−ＨＲＰ試薬とともにインキュベートされ得る。発色させるためにＡＢＴＳ基質が加えられ得、また約４０５ｎｍにおける吸光度（Ａ４０５）がマイクロタイタープレートリーダーによって測定され得る。該ＢＣ２１クローンはアイソタイプについて試験され得、マウスＩｇＧ１／ｋａｐｐａと同定され得る。

抗体産生および精製：クローンＢＣ２１から選択されたハイブリドーマ細胞は１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培養培地もしくは任意の無血清培地で培養され得る。培養上清はプロテインＡアフィニティカラムによってさらに精製され得る。該ハイブリドーマ細胞は抗体腹水を産生させるためプリスタン刺激されたＢＡＬＢ／ｃマウスにインジェクションもされ得る。該抗体腹水はプロテインＡアフィニティカラムによってさらに精製され得る。ＩｇＧの濃度はヒトＩｇＧの吸光係数約１．４（２８０ｎｍにおいて約０．１％）を用いて分光測光法により測定され得る。ＩｇＧの純度はＳＤＳ−ＰＡＧＥにより決定され得る。

ウェスタンブロッティングによって検査される交差反応性：精製されたモノクローナル抗体（ＢＣ２１）はウェスタンブロッティングによって特徴づけられ得る。完全長のＵＰＩＩもしくはＵＰＩＩＩタンパク質は、トリス−グリシン緩衝液と約４から１２％のＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いたタンパク質ゲル電気泳動に供され得、トリス−グリシン緩衝液中のニトロセルロースフィルターに転写され得る。ブロット上のタンパク質は、ブロッキングバッファでブロックした後、ＢＣ２１抗体と室温で約６０分間インキュベートすることにより、おそらくそれに続いてペルオキシダーゼがコンジュゲートされたヤギの抗マウス免疫グロブリンとインキュベートすることにより、可視化され得る。

ＶＨおよびＶＬ配列の決定：全ＲＮＡはＱｉａｇｅｎ ｋｉｔ（ＵＳＡ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を用いて該製造会社の指示通りにハイブリドーマから抽出され得る。１段階目のＲＴ−ＰＣＲはＱＩＡＧＥＮ（登録商標）ＯｎｅＳｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔによって行われ得る。ＲＴ−ＰＣＲは重鎖および軽鎖に特異的なプライマーセットによって行われ得る。それぞれのＲＮＡサンプルについて、約１２の別々の重鎖および約１１の別々の軽鎖のＲＴ−ＰＣＲ反応を、可変領域のリーダー配列をカバーする縮重フォワードプライマー混合物を用いて設定することができる。リバースプライマーは重鎖および軽鎖の定常部分に位置し得る。制限酵素認識部位は該プライマーに組み込まれないようにされ得る。１段階目の反応からの該ＲＴ−ＰＣＲ産物は２段階目のＰＣＲで増幅され得る。約１２の別々の重鎖および約１１の別々の軽鎖のＲＴ−ＰＣＲ反応を、抗体可変領域に特異的なセミネステッドプライマーセットを用いて設定することができる。増幅されたｃＤＮＡはゲルで精製することができ、次にシークエンシングされ得る。

配列番号４で同定されるＵＰＩＩのエピトープＬＳＰＡＬＴＥＳＬＬＶＡＬＰＰに結合する本明細書で記載されるモノクローナル抗体の重鎖および／もしくは軽鎖可変領域のＣＤＲのうちの１つあるいはそれ以上のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供するために、（ＢＣ２１）可変領域はシーケンシングされた。重鎖可変領域の配列は配列番号１で同定され、軽鎖可変領域の配列は配列番号２もしくは配列番号３で同定される。抗体もしくはそのフラグメントは配列番号１および／もしくは配列番号２および／もしくは配列番号３の核酸配列にコードされるアミノ酸配列のポリペプチドを含み得る。抗体もしくはそのフラグメントは、配列番号２および／もしくは配列番号３の核酸配列にコードされるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含み得、また配列番号１の核酸配列にコードされるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域をも含み得る。抗体もしくはそのフラグメントは配列番号４のアミノ酸配列の少なくとも１つのポリペプチドに特異的に結合し得る。本明細書で記載するように、そのフラグメントは抗原結合フラグメントを含み得る。

実施態様において、抗体もしくはそのフラグメントもしくは単離および精製された核酸配列まで、配列番号１および／もしくは配列番号２および／もしくは配列番号３の核酸配列にコードされるアミノ酸配列と少なくとも約７０％の同一性を有するアミノ酸配列をもち得る。抗体もしくはそのフラグメントは、配列番号４の残基と少なくとも約７０％の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドの少なくとも１つ以上と特異的に結合し得る。少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％およびおそらく少なくとも約９９％等にいたるまでの、他の割合が挙げられ得るがそれに限定されない。
重鎖および軽鎖の可変領域の配列を、当業者にとって公知のソフトウェアを用いてコンピュータ処理し、相補性決定領域（ＣＤＲ）を生成することができる。したがって、重鎖の可変領域の配列である配列番号１は、配列番号５（ＣＤＲ１）、配列番号６（ＣＤＲ２）および配列番号７（ＣＤＲ３）のＣＤＲ配列をもたらす。軽鎖の可変領域の配列である配列番号２は、配列番号８（ＣＤＲ１）、配列番号９（ＣＤＲ２）および配列番号１０（ＣＤＲ３）のＣＤＲ配列をもたらす。軽鎖の可変領域の配列である配列番号３は、配列番号１１（ＣＤＲ１）、配列番号１２（ＣＤＲ２）および配列番号１３（ＣＤＲ３）のＣＤＲ配列をもたらす。

マウス抗ＵＰＩＩ（ＢＣ２１）結合配列のエピトープマッピング：抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、ＢＣ２１）によって認識されるＵＰＩＩのペプチド配列を決定するために、おそらくダイレクトＥＬＩＳＡおよびドットブロットの２つのアッセイを用いてエピトープマッピングが行われ得る。ＥＬＩＳＡアッセイでは、抗ＵＰＩＩ（ＢＣ２１）抗体の感度および特異性が、約１：５００および約１：１０００で抗体価を測定することにより、決定され得る。それぞれ長さ約１５アミノ酸のオーバーラッピングペプチドは、おそらく２６から１５５アミノ酸までのヒトＵＰＩＩタンパク質配列をカバーし、より好ましいＢＣ２１結合配列を決定するために用いられ得る。

ＢＣ２１のエピトープは、配列番号４で同定されるＬＳＰＡＬＴＥＳＬＬＶＡＬＰＰである、ＵＰＩＩの３６から５０のアミノ酸残基に含まれることが示された。マウスモノクローナルＵＰＩＩ抗体のエピトープ、もしくはその部分は、マウス以外の生物種（例えばウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ等）での産生を含む新規モノクローナル抗体の産生に有用な抗原であり得る。無論、ポリクローナル抗体も、ウロプラキンＩＩタンパク質の３６から５０残基に関連する配列番号４中のエピトープに特異的に結合し得る。

ダイレクトＥＬＩＳＡの手順のために、まずプレートはコーティングバッファー（ｐＨ約９．５）中の約１００μｌの約５μｇ／ｍＬのＵＰＩＩペプチドを用いて約４℃でオーバーナイトで被覆し得、続いて１ウェルあたり約２００μｌでのブロッキング（約３％ＢＳＡ）を室温で約１時間行い得る。プレートは約１００ｎｇ／ｍＬおよび約２００ｎｇ／ｍＬの精製されたＵＰＩＩ抗体とともに別々に、ＥＬＩＳＡプレートシェーカー上でおよそ室温で約１時間インキュベートされ得る。次にプレートはＰＢＳＴ（１ウェルあたり約３００μｌ）でおそらく５回洗浄され得、続いてヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰが該プレートに加えられ得、プレートシェーカー上で約１時間インキュベートされ得る。次にプレートはＰＢＳＴ（１ウェルあたり約３００μｌ）で洗浄され得、乾燥させるために吸収され得、１ウェルあたり約１００μｌのＴＭＢが加えられ得、約５分間シェーカー上で発色され得、また続いてストップソリューション（１ウェルあたり約５０μｌ）までもが加えられ得る。吸光度は、おそらく該製造会社の推奨に従ってＥＬＩＳＡプレートリーダー上で約４５０ｎｍにおいて測定され得る。

ドットブロットアッセイのために、ニトロセルロースメンブレンは濃度約１ｍｇ／ｍｌの、ペプチドあたり４連でペプチド約１μｌでブロットされ得る。このメンブレンは完全に乾燥し得るまで室温で約１時間インキュベートされ得る。該メンブレンはＴＢＳＴ（例えば、約５０ｍＭのＴｒｉｓ、約０．５ＭのＮａＣｌ、約０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０、ｐＨ約７．４）中の約３％のＢＳＡで室温で約１時間ブロックされ得、次にＴＢＳＴ中にマウス抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）約２００ｎｇ／ｍｌが約１時間室温で加えられ得る。次に該メンブレンはオービタルシェーカー上でＴＢＳＴで約３回（それぞれ約１０分間）洗浄され得、続いてヤギ抗マウスＩｇＧ１−ＡＰ二次抗体とともにＴＢＳＴ中で約１時間室温でインキュベートされ得る。該メンブレンは振盪機上でＴＢＳＴでおそらく約３回（それぞれ約１０分間）洗浄され得る。結合はＷｅｓｔｅｒｎ Ｇｌｏ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ検出試薬を加えてフィルムに露出することで検出され得る。

抗ＵＰＩＩ ＢＣ２１を用いた免疫組織化学手法：抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、マウスモノクローナル抗ＵＰＩＩ抗体ＢＣ２１）を用いた免疫組織化学は、ホルマリン固定パラフィン包理（ＦＦＰＥ）組織サンプル上で、当業者に一般的に知られている手順を用いて、下記の非限定的な例で一般的に例示されるように行われ得る（例えばステップ間でｐＨ約７．６のトリス緩衝生理食塩水で洗浄する）。

１）ホルマリン固定パラフィン包理組織の切片（〜５μｍ）はおそらくポリリジン被覆された市販のスライドガラス上に載せられ得る。
２）切片は脱パラフィンされ得（キシレンもしくはキシレン代用品を用いて）、おそらく一連のアルコール／水溶液を通じて再水和され得、おそらく続いておそらく約３％の過酸化水素水溶液により内在性のペルオキシダーゼをブロックし得る。
３）サンプルは圧力釜（Ｒｅｖｅａｌ， Ｄｅｃｌｏａｋｉｎｇ Ｃｈａｍｂｅｒ； Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ）中でクエン酸バッファーを用いて熱誘導性抗原回復に供され得、約３０秒間約１２５℃に加熱され得る。（他の当業者に知られた抗原回復手法（例えば、スチーマー、マイクロ波オーブン、酵素等）もまた許容される。）組織は約１０分間放冷され得、次に脱イオン水ですすがれ得る。
４）ＵＰＩＩ抗体ＢＣ２１は、キャリアタンパク質としてのウシ血清アルブミンとともにリン酸緩衝液（ｐＨ約６．０）に約３０分間アプライされ得る。
５）おそらく西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を結合体化した二次抗体を用いたＵＰＩＩ抗体の検出（ＭＡＣＨ ４ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＨＲＰ−Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ， Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ）は２つのステップで完成され得る。最初にウサギ抗マウスＩｇＧ抗体が約１０分間アプライされ得、続いてヤギ抗ウサギＨＲＰ結合体とともに約１０分間インキュベートされ得る。
６）おそらく最後の検出ステップとして、おそらく約０．０２％の過酸化水素を含有するバッファー中の３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）（Ｂｅｔａｚｏｉｄ ＤＡＢ， Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ）がアプライされ得る。ＨＲＰを介した機構を通じたＤＡＢの酸化により、茶色の発色性の産物の沈殿が起こり得、おそらくＵＰＩＩの発現部位を同定することを可能にし得る。
７）スライドガラスはおそらく改良マイヤー処方ヘマトキシリンにより手軽に対比染色され得る。

マウスモノクローナル抗ＵＰＩＩ抗体ＢＣ２１を用いた免疫組織化学染色の結果：上記の手順を用いて、様々な正常および新生物性の組織のＵＰＩＩの発現がＢＣ２１を用いて評価され、マウスモノクローナル抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７，Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ）を用いた染色パターンと比較された。両方の抗体は当業者に周知の方法を用いて抗体価について最適化された（例えば、濃度）。例えば、様々な抗体価は染色の強度を最大化し、おそらく同時にバックグラウンドの染色を最小化あるいは消去までするように評価された。それぞれの抗体に対して、最大の染色強度とおそらく同時に最小のバックグラウンドの染色を与える抗体価が用いられた。

図１〜８は、いくつかの膀胱移行上皮癌の抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）による染色の例を、抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）を用いた染色と比較して、同一の試料の連続的な切片上で示している。

表１は、組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）を用いた１７８の膀胱癌の試料（例えば、移行上皮癌（ＴＣＣ）および乳頭状ＴＣＣ）を染色した抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）の感度を示している。約５％以上の腫瘍細胞の染色のカットオフをＵＰＩＩ「陽性」のケースを決定する基準として用い、反対に約５％未満の腫瘍細胞の染色は「陰性」のケースを決定する基準として用いたところ、１７８中１３７（約７７％）がＵＰＩＩ（ＢＣ２１）に対して陽性であることが分かった。より高いグレードの腫瘍の診断は往々にして困難であることがある。これらの試料において抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）は８３中６８（約８２％）のグレードＩＩの腫瘍を、また４４中２５（約５７％）のグレードＩＩＩの腫瘍を同定した。

抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）と比較した抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）のより高い感度は、それぞれの抗体を用いたグレードＩ、ＩＩおよびＩＩＩのＴＣＣの５９の同一の試料の染色によって決定された（表２）。同一の基準を用いて、３３の試料（約５６％）が抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）によって陽性と決定されたのに比較して、抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）は４６の試料（約７８％）を陽性と同定した。グレードＩＩの試料では、抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）および抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）は、それぞれ約７７％（３５中２７）および約５４％（３５中１９）の感度を示した。グレードＩＩＩの試料では、抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）および抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）は、約６４％（１１中７）の同様の感度を示した。多数の比較において、抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）は、抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）よりも濃い染色を与えた。

抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）は、おそらく様々な正常（表３）および新生物性（表４）組織においてすら評価された際、高度に特異的であり得る。膀胱および尿道のみが、ＵＰＩＩ（ＢＣ２１）で陽性として染色される正常組織であり得る。そのような染色が期待され得るが、おそらく正常尿管上皮での知られているＵＰＩＩ発現を考慮すると、抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）が他のどんな正常もしくは新生物性の組織を染色し得ないということはその高い特異性を示すものであり得る。

抗ＵＰＩＩ抗体（例えばモノクローナルマウス抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１））は、おそらくモノクローナルマウス抗ＵＰＩＩＩ抗体（ＢＣ１７）と比較したとしても、改善された感度によって明確な利点を提供し得る。図１〜８は、膀胱ＴＣＣの同一の試料の連続的な切片のＢＣ２１とＢＣ１７の染色の比較の例を示しており、おそらくＢＣ２１のより高い感度を示している。例えば、図１および２の試料は、ＢＣ２１による膜および細胞質の強い染色（図１）を表し得、一方この場合のＢＣ１７の染色は最小限であり得る（図２）。図３および４では、ＢＣ２１の強く広範な染色が観察され得（図３）、それに対してＢＣ１７の同一の試料上では疎らで限局的な染色のみが観察され得る（図４）。同様に図５および６の試料はＢＣ２１による強い染色を示し得る（図５）が、ＢＣ１７によっては限られた染色のみがあり得る（図６）。最後に図７および８はまたＢＣ２１の強い染色を表し得る試料を示している（図７）が、それに対してＢＣ１７はこの同一の試料上で陰性であり得る（図８）。

これらの例は、病理医が、より感度の低い抗体（例えばＢＣ１７（図１、２、７および８））では不可能であった、抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、ＢＣ２１）を用いた尿路上皮癌の存在の確定的な同定ができるようになり得た場合を証明している。あるいは、抗ＵＰＩＩＩ抗体（例えば、ＢＣ１７）による曖昧な結果は信頼性の欠如した疑わしい診断を招き得た一方で、抗ＵＰＩＩ抗体（例えばＢＣ２１）ははっきりした明確な結果を提供し得る（図３、４、５および６）。

図３、４、５および６で観察されるＢＣ１７による最小限の染色は、病理医がより感度の低い抗体を使う際に直面し得る困難、特に観察された染色が疎らで薄くあり得た際に、これがＵＰＩＩの存在を示しておりおそらく尿路上皮癌を示す真に陽性の染色であるのか、あるいは、誤解を招くような人為的結果の染色であり却下されるべきものであるのか確信を持って決定するのが難しいというような困難の優れた例を提供し得る。より感度の低い抗体に関連した曖昧さは、疑わしい、もしくは不正確な診断までも招き得、尿路上皮癌の患者は適時に適切な治療を受けることができなくなり得る。それに対して、抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、ＢＣ２１）は、その向上した感度によって、診断にとって顕著な利点を提供し得る。抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、ＢＣ２１）は尿路上皮癌の強く明確な染色をもたらし得、それにより病理医は正確に尿路上皮癌の診断を返すことができ得、おそらく患者は迅速に最も適切な治療を受け得る。

マウスモノクローナル抗ＵＰＩＩ抗体ＢＣ２１によるウェスタンブロットの結果：ＢＣ２１のＵＰＩＩタンパク質に対する結合はウェスタンブロット（図９Ａ）によって証明され得る。ＢＣ２１のＵＰＩＩＩタンパク質に対する同様の結合がないこともまたウェスタンブロットによって示され得る（図９Ａ）。反対に抗ＵＰＩＩＩ抗体ＢＣ１７はＵＰＩＩタンパク質に結合し得ないが、ＵＰＩＩＩタンパク質を認識し得る（図９Ｂ）。

本発明のいくつかの実施態様において、抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、モノクローナルマウス抗ＵＰＩＩ抗体ＢＣ２１）は上記手順の多数のバリエーションおよび当業者に知られた他の方法での使用に適切であり得る。ＢＣ２１で染色された試料は永久標本封入剤およびカバーガラスを用いて保管され得る。ＢＣ２１抗体は標準的な手順を用いて自動化染色装置においても使用され得る。また当業者に一般的に知られた多数の代替の検出手法（例えば、蛍光）、検出酵素（例えば、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、ベータ−ガラクトシダーゼ等）およびおそらく色素原（例えば、３−アミノ−９−エチルカルバゾール、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド等）すらの使用もまた想定することができる。

抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、モノクローナルマウス抗ＵＰＩＩ抗体）のエピトープ、もしくはその部分は、当業者が理解しているように、マウス以外の生物種（例えばウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ等）での産生を含む新規モノクローナル抗体の産生に有用な抗原であり得る。ウロプラキンＩＩＩに対するモノクローナル抗体としては、マウスモノクローナル抗体、ウサギモノクローナル抗体、ヤギモノクローナル抗体、ウマモノクローナル抗体、ニワトリモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、キメラ抗体、任意のそれらの組み合わせ等が挙げられるが、それに限定されない。他の実施態様において、ウロプラキンＩＩＩに対するポリクローナル抗体としては、ウサギポリクローナル抗体、マウスポリクローナル抗体、ヤギポリクローナル抗体、ウマポリクローナル抗体、ニワトリポリクローナル抗体、ヒト化ポリクローナル抗体、任意のそれらの組み合わせ等が挙げられ得るが、それに限定されない。さらに他の実施態様において抗体は単離された抗体であり得る。

抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、ＢＣ２１）のホルマリン固定パラフィン包理組織の免疫組織化学における使用が本明細書で記載され得るが、他のイムノアッセイでの有用性が容易に想像され得、全て本出願に包含される。特に、ＦＦＰＥのＩＨＣで用いられるのと同一の試薬の多数が凍結組織切片のＩＨＣにおいても使用され得るということは、周知であり得る。抗ＵＰＩＩ抗体（ＢＣ２１）は、ＥＬＩＳＡを含むおそらく一般的に知られた方法を用いた他のイムノアッセイにおいてもまた有用であり得る。

おそらくＩＨＣと関連する本発明の他の局面において、抗ＵＰＩＩ抗体は、「二重染色」手順（多重染色もしくはマルチプレックスとも記載される）を行うため、混合物の一部として１つもしくはそれ以上の追加の１次抗体と共同して使用され得る。そのような「二重染色」手順は当該分野で一般的に周知であり得るが、特定の診断への適用のための最適な１次抗体の組み合わせは知られ得ていない。

この方法において、抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、モノクローナルマウス抗ＵＰＩＩ抗体ＢＣ２１）は、１次抗体混合物中で１つもしくはそれ以上の抗体と組み合わせることが可能である。追加の抗体のうちの少なくとも１つは、マウス以外の生物種に由来するもの（例えば、ウサギ抗体等）であり得る。抗体は、少なくとも２つの異なる生物種に由来するもの（例えば、マウス宿主もしくはウサギ宿主等）であり得るが、それに限定されない。生物種としてはマウス、ウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ、ヒト、それらの任意の組み合わせ等が挙げられ得るが、それに限定されない。抗体はモノクローナルもしくはポリクローナルであり得る。このように、１次抗体混合物中の多重抗体は、それに続く検出および可視化のステップにおいてさえも区別され得る。例えば、組織サンプルを１次抗体混合物とインキュベーションすることに続いて、通常のＨＲＰ結合ヤギ抗マウス抗体がアプライされ得、おそらく適切な色素原（例えば、ＤＡＢ等）がそれに続き得る。続いて、ＡＰ結合ヤギ抗ウサギ抗体を用いて、おそらく適切な色素原（例えば、Ｆａｓｔ Ｒｅｄ等）がそれに続いて、２次検出ステップが行われ得る。このように、２つもしくはそれ以上の標的が、結果として生じる２色によって同一の組織サンプル上で同定され得る。この具体例において、マウス１次抗体（ＢＣ２１を含む）は茶色（ＤＡＢ）の染色をもたらし、またウサギ１次抗体は赤（Ｆａｓｔ Ｒｅｄ）の染色をもたらし得る。

抗体−酵素結合体を含む抗マウスもしくは抗ウサギ抗体は、マウス、ウサギ、ニワトリ、ウマ、ラット、ヤギ、ヒツジ等を含むがそれに限定されない異なる宿主生物種に由来し得る。１次抗体は、マウス、ウサギ、ニワトリ、ウマ、ラット、ヤギ、ヒツジ等を含むがそれに限定されない様々な宿主生物種に由来し得る。実施態様において、抗体は抗体−酵素結合体を含み得、また１次抗体は２つの異なる宿主生物種から得られ得る。ＤＡＢおよび／もしくはＦａｓｔ Ｒｅｄ以外の色素原もまた使用され得る。

２以上の抗体の使用、マウスおよびウサギ以外の生物種の使用、他の色素原および検出システム、検出ステップの異なる順序ならびにおそらく３もしくはそれ以上の色数をもたらす変更（変性ステップを必要とし得る）までも含むがそれに限定されない、二重染色法の多重の代替も可能である。

本発明の実施態様は、少なくとも２つの抗体もしくはその断片を、その２つのうちの少なくとも１つの抗体もしくはその断片が少なくともウロプラキンＩＩに対して特異的に結合するようなおそらく混合物として有する組成物を提供し得る。これは、生物学的サンプル中の少なくとも２つの異なるタンパク質を検出する方法を提供し得、おそらくそれは、少なくとも２つの抗体もしくはその断片を含み、その少なくとも２つのうちの少なくとも１つの抗体もしくはその断片が少なくともウロプラキンＩＩに対して特異的に結合し得、抗原−抗体複合体を形成し、抗原−抗体複合体が検出され得るような組成物と生物学的サンプルを接触させることによる。組成物は少なくとも１つの第一の１次抗体および少なくとも１つの第二の１次抗体を有し得る。生物学的サンプルとしては、血液、尿、膀胱組織、尿路上皮組織、移行細胞、正常組織、新生物性組織、腎臓組織、卵巣組織、甲状腺組織、子宮内膜組織、腎性組織、扁桃腺組織、膵臓組織、結腸組織、リンパ節組織、新生物性膵臓組織、胃組織、前立腺組織、肺組織および胸部組織等が挙げられ得るがそれに限定されない。

少なくとも１つの抗体もしくはその断片は少なくともウロプラキンＩＩに対して特異的に結合し得、染色された細胞の１％より大きい陽性を指示するカットオフ値までも有し得る。本明細書で記載されるように、陽性を指示するカットオフ値は陽性の染色結果を指示するために必要とされる染色された細胞の割合を提供し得る。他のカットオフ値には染色された細胞の約１％より大きい、染色された細胞の約２％より大きい、染色された細胞の約３％より大きい、染色された細胞の約４％より大きい、染色された細胞の約５％より大きい、染色された細胞の約６％より大きい、染色された細胞の約７％より大きい、染色された細胞の約８％より大きい、染色された細胞の約９％より大きい、おそらく染色された細胞の約１０％さえよりも大きいもしくはそれ以上の割合等が挙げられ得るがそれに限定されない。

実施態様において、本発明は、異なる可視化された結果（例えば、異なる色の結果）を提供することができ得るような少なくとも２つの抗体もしくはその断片を含む組成物を提供し得る。他の実施態様で下記の通り考察されるように、組成物は、少なくとも２つの抗体もしくはその断片のうちの抗ＵＰＩＩ抗体以外の少なくとも１つがＧＡＴＡ−３、ｐ６３、ウロプラキンＩＩＩ、ＰＡＸ８、ＮＫＸ３．１、ＰＳＡ、それらの任意の組み合わせ等に対して特異的に結合し得ることを提供し得る。抗体、その組成物は、おそらく抗ウロプラキンＩＩ抗体とともに、尿路上皮癌検出組成物、腎細胞癌検出組成物、前立腺細胞癌検出組成物、任意のそれらの組み合わせ等を含むがそれに限定されない検出システムを提供し得る。

いくつかの実施態様では、１次抗体混合物のために単色の染色が使用され得る。１つの例では、１次抗体混合物が全て同一の宿主生物種に由来する抗体から構成されている場合に、１つの抗体酵素結合体が、全ての抗体の存在を１つの色で染色するために使用され得る。それぞれの抗体の存在もしくは不存在は細胞内局在に基づいて決定され得、あるいはおそらくそのような決定は不要で、それぞれの個々の抗体の存在もしくは不存在の同定無しに染色が有効に解釈され得る。

ＩＨＣ手順のいくつかのステップは、当業者に知られているように、おそらく試薬の混合物を用いることによって、順番にもしくは同時に行われ得る。例えば、１次抗体混合物中のものとして記載される抗体は、代わりに１つもしくはそれ以上の抗体の連続的なステップの中でアプライされ得る。同様に検出試薬は、試薬混合物中で同時に、もしくは連続的なステップ中の別々の試薬でアプライされ得る。

いくつかの実施態様において、第一の１次抗体がアプライされ得、続いて第一の抗体−酵素結合体および第一の色素原、そして次に変性ステップを経て、その後に第二の１次抗体のアプライに進み、続いて第二の抗体−酵素結合体、第二の色素原と続き得る。このように、２つの異なる色の２重染色は、同一の生物種由来の１次抗体を用いて実現され得る。

抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、マウスモノクローナル抗ＵＰＩＩ抗体ＢＣ２１）と１次抗体混合物中で多重染色手順での使用のために組み合わせた際に診断に有用となり得る抗体としては、以下のものが挙げられる。

抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、マウスモノクローナル抗ＵＰＩＩ抗体ＢＣ２１）はＵＰＩＩ検出に特異的であり得、またヒト組織サンプルにおけるいくつかのタイプの癌の診断のための免疫組織化学的手順に有用であり得る。特に、抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、ＢＣ２１）は、抗ＵＰＩＩＩ抗体ＢＣ１７に対して、より高い感度を含むがそれに限定されない利点を持つ。

ＵＰＩＩタンパク質の発現レベルは、膀胱癌の場合の患者転帰の予後的マーカーであり得る。抗体（例えば、ＢＣ２１）を用いたＵＰＩＩ発現の決定は、肯定的な転帰（例えば、より長い生存期間、より長い時間での疾患の進行、腫瘍サイズの縮小等）または肯定的もしくは良い予後をより経験しそうな患者なのか、あるいは否定的な転帰（例えば、より短い生存期間、より短い時間での疾患の進行等）または否定的もしくは悪い予後をより経験しそうな患者であるのかを同定することを支援し得る。抗体（例えば、ＢＣ２１）を用いたＵＰＩＩ発現の決定は、ある治療処置に対する患者の反応を予想することもまた支援し得る。例えば、ＵＰＩＩ発現のレベルは、患者が特定の医薬品（抗体を用いた医薬も含む）から利益を得られる可能性を決定することを支援し得る。反対に、ＵＰＩＩ発現は、患者が特定の治療処置から利益を得られない可能性を決定することを支援し得る。

抗ＵＰＩＩ抗体（例えば、マウスモノクローナルＵＰＩＩ抗体ＢＣ２１）と1次抗体混合物中で多重染色手順での使用のために組み合わせた際に診断に有用となり得る抗体の他の実施態様としては、以下のものが挙げられる。

＊それぞれの染色の挙げられた色は、検出システムの結果であり得、検出システムにはおそらくＨＲＰと結合体化された抗マウス抗体およびおそらくＡＰと結合体化された抗マウス抗体さえも、おそらく色素原としてＤＡＢおよびＦａｓｔ Ｒｅｄとともに含まれ得、マウス抗体には茶色の染色、ウサギ抗体には赤色の染色をもたらし得る（ＤＳ＃２として記載）。他方、検出システムにはおそらくＡＰと結合体化された抗マウス抗体およびおそらくＨＲＰと結合体化された抗ウサギ抗体さえも、おそらく色素原としてＤＡＢおよびＦａｓｔ Ｒｅｄとともに含まれ得、マウス抗体には赤色の染色、ウサギ抗体には茶色の染色をもたらし得る（ＤＳ＃１として記載）。いくつかの場合では、抗原が染色の細胞内局在によって区別され得るため２つの色は不必要であり得、あるいはどの抗原が染色されているかを決定することが診断的におそらく重要ではない。他の色の組み合わせは、他の検出システムもしくは色素原を用いて得られ得、全部がこの開示に包含されることが意図されている。

表６に列挙された様々な混合物の非限定的な例は、単なる例示であり、またある癌の全ての場合に同じ結果が生じることを示唆することを意図するものではない。例えば、尿路上皮癌の全ての場合でＵＰＩＩおよび／もしくはＧＡＴＡ３に対して陽性になり得るわけではない。加えて、腎細胞癌の全ての場合でＰＡＸ８に対して陽性になり得るわけではない等である。それぞれのマーカーは他の場合では減少もしくは消失すらし得る。

いくつかの実施態様では、尿路上皮組織を染色するもう１つの抗体（例えばＵＰＩＩＩ）とＵＰＩＩを組み合わせることは、それぞれの抗体で別々に染色した場合と比較しておそらく感度が向上し、有用であり得る。図１０は、尿路上皮癌の標本を染色したＵＰＩＩＩとＵＰＩＩの混合物の例を示している。いくつかの場合では、おそらくＵＰＩＩＩの染色が減少もしくは消失している場合に、ＵＰＩＩの染色が観察され得る。他の場合では、おそらくＵＰＩＩの染色が減少もしくは消失している場合に、ＵＰＩＩＩの染色が観察され得る。

ＵＰＩＩとＧＡＴＡ３の混合物もまた尿路上皮癌に対する向上した感度を提供し得る。ＵＰＩＩとＧＡＴＡ３の混合物により染色された尿路上皮癌の標本が図１１に示されている。いくつかの場合では、おそらくＧＡＴＡ３の染色が減少もしくは消失している場合に、ＵＰＩＩの染色が観察され得る。他の場合では、おそらくＵＰＩＩの染色が減少もしくは消失している場合に、ＧＡＴＡ３の染色が観察され得る。

尿路上皮癌の複数のマーカーを組み合わせることは、感度をさらに向上させ得る。ＵＰＩＩとＧＡＴＡ３の混合物によって染色された標本が図１２に示されている。ＵＰＩＩとＵＰＩＩＩとＧＡＴＡ３の混合物によって染色された同一の標本が図１３に示されている。おそらくＵＰＩＩとＵＰＩＩＩとＧＡＴＡ３の混合物の方がより染色が観察され、改善した感度をもたらし得る。

ＵＰＩＩとＰＡＸ８を組み合わせることは、尿路上皮癌と腎細胞癌を区別するのに有用であり得る。ＵＰＩＩは尿路上皮癌を染色し得るが、尿路上皮癌はＰＡＸ８によっては染色されない（図１４および１５）。それに対して、腎細胞癌はＰＡＸ８によって染色され得るが、おそらくＵＰＩＩによってはされない（図１６および１７）。

ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＰＳＡを組み合わせることは、尿路上皮癌、腎細胞癌および前立腺癌を区別するのに有用であり得る。ＵＰＩＩは尿路上皮癌を染色し得るが、尿路上皮癌はＰＡＸ８もしくはＰＳＡによっては染色されない（図１８および２１）。それに対して、腎細胞癌はＰＡＸ８によって染色され得るが、おそらくＵＰＩＩもしくはＰＳＡによってはされない（図１９および２２）。加えて、前立腺癌はＰＳＡによって染色され得るが、おそらくＵＰＩＩもしくはＰＡＸ８によってはされない（図２０および２３）。

ＵＰＩＩとＮＫＸ３．１を組み合わせることは、尿路上皮癌と前立腺癌を区別するのに有用であり得る。ＵＰＩＩは尿路上皮癌を染色し得るが、尿路上皮癌はＮＫＸ３．１によっては染色されない（図２４）。それに対して、前立腺癌はＮＫＸ３．１によって染色され得るが、おそらくＵＰＩＩによってはされない（図２５）。

ＵＰＩＩとＰＡＸ８とＮＫＸ３．１を組み合わせることは、尿路上皮癌、腎細胞癌および前立腺癌を区別するのに有用であり得る。ＵＰＩＩは尿路上皮癌を染色し得るが、尿路上皮癌はＰＡＸ８もしくはＮＫＸ３．１によっては染色されない（図２６）。それに対して、腎細胞癌はＰＡＸ８によって染色され得るが、おそらくＵＰＩＩもしくはＮＫＸ３．１によってはされない（図２７）。加えて、前立腺癌はＮＫＸ３．１によって染色され得るが、おそらくＵＰＩＩもしくはＰＡＸ８によってはされない（図２８）。

ＵＰＩＩとｐ６３の混合物もまた、尿路上皮癌への向上した感度を提供し得る。ＵＰＩＩとｐ６３の混合物で染色された尿路上皮癌の標本が図２９および３０に示されている。正常前立腺もしくはおそらく前立腺上皮内新生物（ＰＩＮ）はｐ６３によって染色され得るが、おそらくＵＰＩＩによってはされない（図３１および３２）。

ＵＰＩＩとｐ４０の混合物もまた、尿路上皮癌への向上した感度を提供し得る。ＵＰＩＩとｐ４０の混合物で染色された尿路上皮癌の標本が図３３に示されている。

図３４は、本発明の様々な実施態様の模式的な概要を示しており、おそらくハイブリドーマによっても提供される抗体、その断片、その部分を、組成物もしくは混合物中にさえおいて提供し得るキット（５）を含んでおり、抗体（１）等は生物学的サンプル（２）と接触させられ得、少なくとも１つの抗体−抗原複合体（３）を形成し、次に抗体−抗原複合体は検出器（４）によって検出され得る。

イムノアッセイ法の一例として、本発明の実施態様は、試験される動物もしくはヒトからの組織の採取（６）、前記組織の固定もしくは凍結（７）、ウロプラキンＩＩＩのエピトープを露出させるための固定もしくは凍結された前記組織への処理（８）、前記処理された組織と本明細書で考察される抗体もしくはその断片を、前記組織にウロプラキンＩＩＩタンパク質が存在した場合に抗体もしくはその断片がウロプラキンＩＩＩタンパク質に結合するような量、条件で接触させること（９）、おそらく前記結合した抗体の存在を検出すること（１０）までも、図３５に模式的に示されたように提供し得る。

本発明は、抗体もしくはその断片（本明細書で考察されるように）を、該抗体もしくはその断片がおそらく抗原に結合した際に抗体を検出する要素とともに、含み得る診断もしくは予後の診断のキットを、実施態様において提供し得る。これは、生物学的サンプルを抗体もしくはその断片と接触させる方法、生物学的サンプル中の抗原と共存もしくはタンパク質と結合した抗体もしくはその断片の結合もしくは存在を、おそらく抗体検出要素を用いて検出する方法すらも提供し得る。実施態様は、おそらく試験される動物もしくはヒトから組織を採取することによって、本明細書で表された様々な実施態様に従い、ウロプラキンＩＩが組織の中に存在していた場合に抗体もしくはその断片がウロプラキンＩＩと結合し得るような量および条件で組織を抗体もしくはその断片と接触させることによって、また結合した抗体の存在の検出にさえもよって、哺乳動物もしくはヒトにおいてウロプラキンＩＩタンパク質を検出するためのイムノアッセイ法を提供し得る。生物学的サンプルとしては、おそらく使用される抗体もしくは混合物にも依存して、血液、尿、尿路上皮組織、移行細胞組織、膀胱組織、正常組織、新生物性組織、腎臓組織、卵巣組織、甲状腺組織、子宮内膜組織、腎性組織、扁桃腺組織、膵臓組織、結腸組織、リンパ節組織、新生物性膵臓組織、胃組織、前立腺組織、肺組織および胸部組織等が挙げられ得るがそれに限定されない。

なお、用語（例えば、ＵＰＩＩ、ＵＰＩＩ抗体、ＵＰＩＩＩ、ＵＰＩＩＩ抗体、ＢＣ２１もしくはＢＣ１７等）の使用は、当業者が適切であると理解する場合に、抗ＵＰＩＩ抗体もしくは抗ＵＰＩＩＩ抗体等に関連し得る。

前述の内容によって容易に理解できるように、本発明の基本的なコンセプトは様々な方法で具体化され得る。それは抗体の技術ならびに適切な抗体を完成させる装置の両方に関連する。本出願において、抗体技術は、記載された様々な装置によって実現されたことが示されている結果の一部として、また利用することが固有の特徴であるステップとして開示されている。それらは単に、意図および記載の通りに装置を利用したことによる自然な結果である。加えて、いくつかの装置が開示されているが、これらは特定の方法を実現させるだけではなく様々な方法で変更もされ得ることが理解されるべきである。重要なことに、前述の内容の全てに関して、これらの面の全てはこの開示に包含されることが理解されるべきである。

本出願に含まれる考察は、基礎的な説明として役立つことが意図されている。読者は、具体的な考察は明示的に可能な全ての実施態様を記載しているわけではなく、多数の代替が暗示されていることに注意すべきである。それはまた、発明の一般的な性質全てを説明し得ず、また個々の特徴もしくは要素が、どのようにより広範な機能または多彩な代替もしくは等価の要素を実際に代表しているのかということについて明示的に示し得ない。重ねて、これらはこの開示に暗示的に包含される。装置志向の用語法で本発明が記載される場合、装置のそれぞれの要素は暗示的に機能を果たす。装置は、装置に関する特許請求の範囲のだけのために含まれ得るのみではなく、方法もしくは手順の特許請求の範囲もまた、発明およびそれぞれの要素が実現する機能に関連するものとして含まれ得る。記載および用語法は、そのどちらも任意の後に続く特許出願に含まれる特許請求の範囲を制限することを意図するものではない。

様々な変更が発明の本質から離れることなく行われ得ることもまた理解されるべきである。そのような変更もまた、記載に暗示的に含まれる。それらもまた本発明の範囲に属する。明示的に示された（複数の）実施態様を包含する広範な開示、多様な暗示的な代替の実施態様および広範な方法もしくは手順等はこの開示に包含され、後に続く任意の特許出願の特許請求の範囲を起案する際に依存され得る。そのような言語の変更および、より広いもしくはより詳細な請求項作成は後日（例えば、任意の必要とされる期限までに）、あるいは出願人が続いてこの内容に基づいた現特許の内容を求める場合に完成され得るということが理解されるべきである。この理解とともに、読者はこの開示が、任意の後に続いて出願された特許出願であって、出願者の権利の範囲内とみなされる特許請求の範囲に基づき審査を求め得るような、また本発明の多数の局面をカバーする特許を、独立におよび１つの総体的なシステムの双方として生じさせるように計画され得るような、特許出願を支持するものとして理解されるべきであることに注意すべきである。

さらに、本発明および請求項の様々な要素のそれぞれもまた様々に実現され得る。加えて、使用もしくは暗示される際、要素は物理的に接続されてもされなくてもよい個々の複数の構造を包含すると解釈されるべきである。この開示は、任意の装置に関する実施態様、方法もしくは手順の実施態様である実施態様の変更であっても、あるいはこれらの任意の要素の単なる変更でさえあっても、それぞれのそのような変更を包含すると理解されるべきである。特に、本開示が本発明の要素に関係している場合、たとえ機能もしくは結果のみが同一であったとしても、それぞれの要素の用語は等価の装置に関する用語もしくは方法に関する用語で表現され得る。そのような等価の、より広範なもしくはより一般的でさえある用語は、それぞれの要素もしくは行為の記載に含まれると考えられるべきである。そのような用語は、本発明が権利を受ける暗示的な広範な範囲を明示的にすることが望まれた場合に置き換えられることが可能である。１つの例としては、全ての行為は、その行為をおこすための手段としてもしくはその行為を生じさせるような要素として表現され得ることが理解されるべきである。同様に、開示されたそれぞれの物理的要素は、その物理的要素が促進する行為の開示も包含すると理解されるべきである。最後の側面に関連して、１つの例としては、「検出」もしくは「検出器」の開示は、明示的に考察されているかいないかに関わらず、「検出する」という行為の開示を包含すると理解されるべきであり、また反対に、「検出する」という行為が有効に開示されている場合に、そのような開示は「検出器」および「検出するための手段」の開示さえも包含すると理解されるべきである。そのような変更および代替の用語は、本記載に明示的に含まれると理解されるべきである。さらに、そのようなそれぞれの手段（明示的にそう記載されているかいないかに関わらず）は、与えられた機能を実施できる全ての要素を包含するとして理解されるべきであり、また記載された機能を実施できる要素の全ての記載は、その機能を実施するための手段の非限定的な例として理解されるべきである。

この特許出願で言及されたいかなる法律、法令、規定もしくは規則またはこの特許出願で言及された特許、文献または他の参照は、本明細書において参考として援用される。本出願によって主張される全ての優先権は参考として援用される。加えて、使用されるそれぞれの用語に関して、その本出願における使用が広く支持されている解釈と一致しない場合には、共通の辞書的定義が、それぞれの用語に対して組み入れられると理解されるべきであり、また全ての定義、代替の用語および同意語（例えば、ランダムハウスウェブスター大辞典第２版に含まれるような）は参考として援用される。最後に、下記に列挙されたもしくは引用文献の任意のリスト中の全ての参照または本出願によって提出される他の情報の記述は参考として援用されるが、しかしながら、上記のそれぞれに関して、参考として援用されたそのような情報もしくは記述が、この／これらの発明の特許権付与と一致しないと考えられ得る限りは、そのような記述は明示的に出願人によってなされたものと考えるべきではない。

したがって、出願人は、少なくとも、ｉ）本明細書で開示および記載された抗体装置のそれぞれ、ｉｉ）開示および記載された関連の方法、ｉｉｉ）これらの装置および方法それぞれの類似の、等価のもしくは暗示されさえした変更、ｉｖ）開示及び記載されたように示された機能のそれぞれを実現するそれらの代替の設計、ｖ）開示され記載されて示された機能のそれぞれを、それを実現すると暗示されているように実現するそれらの代替の設計および方法、ｖｉ）分離され独立した発明として示されたそれぞれの特徴、構成物およびステップ、ｖｉｉ）開示された様々なシステムまたは構成物によって促進される適用、ｖｉｉｉ）そのようなシステムもしくは構成物によって生産された結果物、ｉｘ）言及された任意の具体的な分野もしくは装置に現在応用されると示されもしくは記載されたそれぞれのシステム、方法および要素、ｘ）付随する任意の例示に関し、また上記で実質的に記載された方法および装置、ｘｉ）ステップを実行するための手段を含む本明細書で記載された方法を実行するための装置、ｘｉｉ）開示された要素それぞれの様々な組み合わせおよび並べ替え、ｘｉｉｉ）それぞれの潜在的な従属項、またはそれぞれのおよび全ての独立項もしくは提示された概念への従属としての概念およびｘｉｖ）本明細書で記載された全ての発明に対して請求項を支持し、発明の記述を行ったと理解されるべきである。

現在もしくは後日のいずれでも審査のために提示される請求項に関して、実用的な理由でおよび審査の負担の大きな増大を避けるために、出願人はいつでも初期の請求項のみもしくはおそらく初期の従属項のみを伴う初期の請求項のみを提示し得ることが理解されるべきである。本出願もしくは後に続く出願の可能性のある範囲に関心のある官庁および任意の第三者は、予備的な補正、その他の補正、特許請求の範囲の言語もしくは記載された議論に関わらず本願発明、本願発明の利益を主張する場合、または任意の継続において、後日より広い特許請求の範囲が提示され得ることを理解するべきであり、それにより、任意の場合が係属している間にわたり、いかなる潜在的な主題も否認もしくは放棄する意図はない。任意の補正、特許請求の範囲の言語、またはこのもしくは任意の後に続く出願において提示された議論が先行技術を回避するためになされたと考えられる限り、そのような理由は後に提示される特許請求の範囲等によって抹消され得る可能性があるため、より広い特許請求の範囲が提示された場合もしくは時において、そのような特許請求の範囲は、任意の以前の時点で考案された任意の関連する先行技術に立ち返る必要があり得ることを要求することが理解されるべきである。審査官および、現在のもしくは後の潜在的な範囲に関心のある、または任意の時点において潜在的な範囲の否認もしくは放棄の指示の可能性があるか考慮しているその他の者の両者は、そのような放棄もしくは否認は、このもしくは任意の後に続く出願においてまったく意図されていないもしくはまったく存在しないことに注意すべきである。制限（例えば、Ｈａｋｉｍ ｖ． Ｃａｎｎｏｎ Ａｖｅｎｔ Ｇｒｏｕｐ， ＰＬＣ， ４７９ Ｆ．３ｄ １３１３ （Ｆｅｄ． Ｃｉｒ ２００７）で起こったような）等は明確にこのもしくは任意の後に続く関連事項において意図されていない。加えて、サポートは新規事項制限法（ヨーロッパ特許条約１２３条（２）および米国特許法（ＵＳＣ３５）１３２条もしくは他の同様の法規を含むがこれに限定されない）において、様々な従属項または１つの独立な請求項もしくは従属としての概念の下に提示される他の要素または他の任意の独立の請求項もしくは概念の下の要素を追加するのを可能にするために要求される程度に存在していると理解されるべきである。任意の時点で任意の請求項を起案する際に、この出願においてか、任意の後に続く出願においてかに関わらず、出願人は法的に可能な限りすべてのかつ広範な権利範囲を獲得することを意図しているということもまた理解されるべきである。微細な置換がなされる範囲において、出願人が任意の特定の実施態様を文言上包含するように任意の請求項を起案しなかった範囲において、およびその他の適用可能な場合において、出願人はどのような形であれ、出願人がすべての不測の事態を予期することが単純にでき得ないような範囲について意図しもしくは実際に放棄しようとするものと理解されるべきではなく、当業者は、文言上そのような代替の実施態様を包含するような請求項を起案できたであろうとは合理的に期待されるべきではない。

さらに、移行句「含む」の使用は、使用された場合もしくは時において、本明細書では「オープンエンド」請求項を維持するために、慣習的な請求項の解釈にしたがって使用される。したがって、文脈が他の意味を要求しない限り、「含む」という用語、または「含んだ」もしくは「含んでいる」というバリエーションは、述べられた要素、ステップ、要素の群もしくは複数のステップを含むということを暗示することを意図するが、他のいかなる要素、ステップ、要素の群もしくは複数のステップも排除することを暗示することを意図するものではないことが理解されるべきである。そのような用語は、出願人が法的に許容される最も広い権利範囲を得るために、もっとも拡張された形で解釈されるべきである。「もしくは他のいずれかの請求項」という句の使用は、他の任意の請求項（例えば他の従属項、他の独立項、以前に挙げられた請求項および後に挙げられた請求項等）に従属する任意の請求項のためのサポートを提供するために用いられる。１つの明確にする例としては、請求項が「請求項２０もしくは他のいずれかの請求項に」従属する場合などでは、所望され、なお開示の範囲内にある場合には、請求項１、請求項１５、もしくは請求項２５にさえも（そのようなものが存在している場合）従属するとして書き直されることが可能である。この句はまた、請求項中の要素の任意の組み合わせのためのサポートを提供し、特定の請求項の組み合わせ（例えば、方法、装置、プロセス等に関する請求項の組み合わせ）のための任意の所望の適切な先行する基礎を組み込みさえすることが理解されるべきである。

最後に、任意の時点で記載された任意の請求項はここで本発明の本明細書の一部として参考として援用される。また、出願人は、任意のもしくはすべての請求項または任意の要素またはその構成物を支持するための追加の記載としての請求項のそのように援用された内容のすべてもしくは一部を使用する権利を明確に有する。また、さらに出願人は、そのような請求項もしくは任意の要素もしくはその構成物の援用された内容の全部もしくは任意の部分を説明から請求項へ移動させる権利を明確に有し、あるいは、この出願による、または任意の後に続く継続、分割、もしくはその一部継続出願による保護を求める事項を特定するため必要である場合における逆の場合の権利を明確に有し、または任意の国もしくは協定の特許法律、法令もしくは規則から利益を得、それらに従い料金を減少させもしくはそれらに従うための権利も明確に有する。また、参考として援用されたそのような内容はこの出願の全体の係属（後に続く任意の継続、分割、もしくは一部係属出願、任意の再出願もしくはその上の延長を含む）している期間において有効であるとする。

Claims (12)

1. アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）にＡＴＣＣ特許寄託番号第ＰＴＡ−１３１８１号で寄託されているハイブリドーマによって産生される単離された抗体もしくは該単離された抗体の単離された抗原結合断片であって、配列番号４を含むウロプラキンＩＩに特異的に結合する、単離された抗体もしくはその単離された抗原結合断片。
2. アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）にＡＴＣＣ特許寄託番号第ＰＴＡ−１３１８１号で寄託されているハイブリドーマ細胞。
3. 請求項２に記載のハイブリドーマ細胞であって、さらに該ハイブリドーマ細胞によって産生される抗体を含有するハイブリドーマ細胞。
4. 請求項１に記載のモノクローナル抗体を生産する方法であって、以下：
   ウロプラキンＩＩを特異的に認識することができるモノクローナル抗体を産生する、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）にＡＴＣＣ特許寄託番号第ＰＴＡ−１３１８１号で寄託されている前記ハイブリドーマを培養する工程；および
   該ハイブリドーマに該モノクローナル抗体を産生させる工程、
   を包含する方法。
5. 請求項１に記載の単離された抗体もしくはその単離された抗原結合断片と、少なくとも１つの追加の単離された抗体もしくはその単離された抗原結合断片とを含有する組成物であって、該少なくとも１つの追加の単離された抗体もしくはその単離された抗原結合断片は、ＧＡＴＡ−３、ｐ６３、ウロプラキンＩＩＩ、ＰＡＸ８、ＮＫＸ３．１、ＰＳＡおよびｐ４０からなる群より選択される抗原に特異的に結合する、組成物。
6. 請求項５に記載の組成物であって、前記単離された抗体もしくはその単離された抗原結合断片と、前記少なくとも１つの追加の単離された抗体もしくはその単離された抗原結合断片とは、以下：
   −ウロプラキンＩＩおよびＧＡＴＡ−３；
   −ウロプラキンＩＩおよびｐ６３；
   −ウロプラキンＩＩおよびウロプラキンＩＩＩ；
   −ウロプラキンＩＩおよびＰＡＸ８；
   −ウロプラキンＩＩおよびＮＫＸ３．１；
   −ウロプラキンＩＩおよびＰＳＡ；
   −ウロプラキンＩＩ、ウロプラキンＩＩＩおよびＧＡＴＡ−３；
   −ウロプラキンＩＩ、ＰＡＸ８およびＰＳＡ；
   −ウロプラキンＩＩ、ＰＡＸ８およびＮＫＸ３．１；ならびに
   −ウロプラキンＩＩおよびｐ４０、
   からなる群より選択されるタンパク質にそれぞれ特異的に結合する、組成物。
7. 標識と結合体化された請求項１に記載の単離された抗体もしくはその単離された抗原結合断片。
8. 請求項７に記載の抗体であって、前記標識は、放射性元素、磁性粒子、放射性同位体、蛍光色素、酵素、毒素、色素、検出酵素、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、β−ガラクトシダーゼ、色素原、ＦＡＳＴ ＲＥＤ、３，３’−ジアミノベンジジン、３−アミノ−９−エチルカルバゾール、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニドおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、抗体。
9. 請求項１に記載の単離された抗体もしくはその単離された抗原結合断片；および
   ウロプラキンＩＩ抗原に結合した場合の該請求項１に記載の単離された抗体もしくはその単離された抗原結合断片の抗体検出試薬
   を含む、キット。
10. 生物学的サンプル中のウロプラキンＩＩを検出する方法であって、
    （ａ）請求項９に記載のキットを提供する工程；ならびに
    （ｂ）前記単離された抗体もしくは前記その単離された抗原結合断片のウロプラキンＩＩ抗原との結合を、
    （ｉ）該生物学的サンプルを、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）にＡＴＣＣ特許寄託番号第ＰＴＡ−１３１８１号で寄託されているハイブリドーマによって産生される前記単離された抗体もしくはその単離された抗原結合断片と接触させる工程であって、該抗体もしくはその抗原結合断片は、配列番号４を含むウロプラキンＩＩに特異的に結合して複合体を形成する、工程；および
    （ｉｉ）該キットにおいて提供される前記抗体検出試薬により該複合体を検出する工程
    を含むイムノアッセイであって、免疫組織化学（ＩＨＣ）、ＦＦＰＥのＩＨＣ、凍結組織切片のＩＨＣ、免疫細胞化学およびＥＬＩＳＡからなる群より選択されるイムノアッセイによって検出する工程；
    を包含する、方法。
11. 前記生物学的サンプルは、血液、尿、尿路上皮組織、移行細胞組織および膀胱組織を包含する、請求項１０に記載の方法。
12. 前記生物学的サンプルは、正常組織、新生物性組織、膀胱組織、腎臓組織、卵巣組織、甲状腺組織、子宮内膜組織、腎性組織、扁桃腺組織、膵臓組織、結腸組織、リンパ節組織、胃組織、前立腺組織、肺組織および胸部組織からなる群より選択される、請求項１０に記載の方法。

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