JP3043003B2

JP3043003B2 - １−（５−ブロモフル−２−イル）−２−ブロモ−２−ニトロエテンを得る方法

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Publication number: JP3043003B2
Application number: JP10299858A
Authority: JP
Inventors: ラモンカスタネドカンシオニロ; ドナトゴイズエタドミンゲツラモン; ゴンザレツガルシアオライダ; アントニオペレツドナトヨルゲ; ゴンザレツフェイトットジョセファ; アントニオシルベイラプラドエンリッケ; クエスタマゾーラマリオ; ラファエルマルティネツデルピノアントニオ; ルゴファリナースエステラ; エストラダロジャーエルネスト; デルカルメンカルタフエンテスアナ; ナビアザラルクィオフェリア; ソレダッドデルガドラスバルマリア
Original assignee: ユニベルシダッドセントラルデラスビラス
Priority date: 1994-04-21
Filing date: 1998-10-21
Publication date: 2000-05-22
Anticipated expiration: 2015-05-22
Also published as: CU22446A1; JPH11193278A; ATE228511T1; CA2147594A1; CA2147594C; JPH0892171A; EP0678516B1; JP2875969B2; ES2187546T3; DE69528922T2; EP0678516A1; DE69528922D1

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は広範な殺微生物（ｍｉｃ
ｒｏｃｉｄｅ）作用を有する生成物に関係している、一
般にヒト及び動物の健康に関する。実験動物、家畜、更
にはヒトで、非常に多数のグラム陽性細菌（５００菌株
以上）、グラム陰性細菌（１５００菌株以上）、真菌
（５００菌株以上）、その他の微生物（１００菌株以
上）に対して“試験管内”で評価した。

【０００２】

【従来の技術】この物質は１９７２年に著者・Ｚ．Ｎ．
Ｎａｚａｒｏｖａにより２度国際的な文献に発表され
た。一回目はＪｏｕｒｎａｌＫｈｉｍ．Ｆａｒｍ．Ｚ
ｈ．、６（１０）、５−８（１９７２）の“潜在的生物
活性を有する若干のフリルニトロオレフィン類の合成
（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｓｏｍｅｆｕｒｙｌｎ
ｉｔｏｒｏｏｌｅｆｉｎｓｗｉｔｈｂｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙ）”なる論文に著者・Ｇ．
Ｆ．Ｐｏｔｅｍｋｉｎとの共著でなされ、２回目はＪｏ
ｕｒｎａｌＺｈ．Ｏｒｇ．Ｋｈｉｍ．、８（２）、４
０４−１１（１９７２）の“フリルニトロオレフィン類
の物理化学的性質と反応性（Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉ
ｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｎｄｒｅａｃｔｉ
ｖｉｔｙｏｆｆｕｒｙｌｎｉｔｏｒｏｏｌｅｆｉｎ
ｅ）”なる論文に著者・Ｍ．Ｇ．Ｇｒｕｎｔｆｅｓｔ、
Ｇ．Ｆ．Ｐｏｔｅｍｋｉｎ、Ｙｕ．Ｖ．Ｋｏｌｏｄｙａ
ｚｈｎｙｉ、Ｖ．Ｚｖｅｒｅｖ及びＯ．Ａ．Ｏｓｉｐｏ
ｖとの共著でなされた。

【０００３】第一の論文は著者らが採用した合成経路に
関するものであり、一方第二の論文は広い一連の置換ニ
トロビニルフラン類に関する物理化学的研究を述べるも
ので、そこでは双極子能率について若干の計算結果が赤
外線と紫外線のスペクトルからの若干のデーターと共に
与えられており、またこれらの系についての理論的研究
が含まれている。

【０００４】これら２つの刊行論文に生成物の特定の生
物学的作用について報告しているものはない。

【０００５】第一の論文に記載されるその生成物を得る
方法は次の通りである：

【０００６】臭素０．０３Ｍをクロロホルム２０ｍＬに
溶解し、これを定速撹拌下、温度０℃においてβ−ニト
ロビニルフランのクロロホルム５０ｍＬ中０．０１５Ｍ
溶液に３０分間にわたり添加する。

【０００７】この溶液を２０〜２５℃の温度において３
〜４時間静置した。次に、その溶媒を室温で蒸留する。
その残分にβ−（５−ブロモフリル−２）−α，β−ジ
ブロモニトロエテンが、貯蔵又は蒸留すると分解する淡
黄色の油として得られる。

【０００８】水５０ｍＬ中の水酸化カリウム３．４ｇを
激しい撹拌下、２０〜２５℃において加えて生成した油
５．３ｇを得た。

【０００９】生成した沈澱を分離し、そして中性媒体が
得られるまで水洗し、乾燥し、そしてヘキサン中で２回
再結晶化する。報告された収量は２．７ｇ（６４％）
で、融点９４−９５℃の黄色結晶であった。

【００１０】提案された方法の内のもう１つのは次の通
りである：

【００１１】水酸化カリウム０．０２モルを水３モルに
溶解し、これを定速撹拌下で５−ブロモフルフラール
０．０１モル及びブロモニトロメタン０．０１モルのメ
タノール３０ｍＬ中溶液に３０分にわたり滴下し、塩と
氷の混合物により冷却する。この冷混合物を更に３０分
間静置し、次いで水３０ｍＬを加え、その冷混合物を少
しずつ濃塩酸３．２ｍＬと水１２ｍＬ中に滴下する。３
０分後に沈澱を分離し、中性媒体が得られるまで水洗
し、水蒸気を導入しながら蒸留、精製し、次いでアルコ
ールを用いて再結晶化する。

【００１２】この場合の報告された収率は７６．８％
で、融点は８８−８９℃であった。

【００１３】その著者らは一方の方法又は他方の方法を
実施して得た生成物は赤外線（ＩＲ）スペクトルと紫外
線（ＵＶ）スペクトル及び薄層クロマトグラフィーによ
り同定されたと述べている。

【００１４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は１−（フル−
２−イル）−２−ニトロエテンをより高い収率とより高
い水準の純度でもたらす方法を提供することを目的とす
る。

【００１５】

【課題を解決するための手段】上記の目的を達成する本
発明の方法は１−（フル−２−イル）−２−ニトロエテ
ンを臭素と１：２〜１：２．６の間で変動するモル比関
係で、二硫化炭素又は四塩化炭素の様な非極性溶媒を用
い、温度を２０〜６０℃の範囲に制御して撹拌下で１〜
６時間に及ぶ時間反応させることから成る。

【００１６】次いで、溶媒を大気圧下での単なる蒸留で
分離すると、この操作中に過剰の臭素が大部分、更には
生成している可能性がある臭化水素の一部が除かれる。

【００１７】中和と脱臭化水素反応（ｄｅ−ｈｙｄｒｏ
−ｂｒｏｍｉｎａｔｉｏｎ）を第三アミンを用いて同時
に行うと適当な混合物と、２０〜７０℃の範囲の温度制
御が確実に達成されるようになる。

【００１８】この工程が終ると、生成物は黄色の物質と
して沈澱するが、これを熱極性溶媒に溶解すると、その
生成物は数時間の静置後にその溶液から沈澱する。

【００１９】達成された、Ｚ．Ｎ．Ｎａｚａｒｏｖａに
よって報告された規模での収率は９０％以上であり、ま
た５．５モルの規模で達成された収率は６３％以下には
決してならなかった。より小さい規模で得られる純度は
常に９０％以上であり、またより大きな規模でも７５％
以下には決してならない。この低下はこの分析がなされ
たときに完全な乾燥法が無かったことに関係している。

【００２０】粗生成物の純度はガスクロマトグラフィー
とＨＰＬＣとで測定された。

【００２１】粗大な生成物を精製プロセスに付す。精製
プロセスはその生成物を２５〜７０℃の温度でエタノー
ル、イソプロパノール又はメタノールのような極性溶媒
に溶解し、それを微粉砕吸収剤に加え、そしてそれを１
０〜６０分間撹拌下に置くことから成る。

【００２２】更に、それを濾過し、その溶液を数時間に
わたり静置しておき、最後にその生成物を黄色結晶とし
て結晶化し、その結晶を濾過で分離し、乾燥し、そして
フラスコに入れる。

【００２３】この純粋な生成物は常に、有効成分を薬剤
として使用する、薬局方で確立された限界である９８〜
１００％の間で変動する純度を有する。

【００２４】その合成で認められる主たる不純物は１−
（５−ブロモフル−２−イル）−２−ニトロエテンであ
って、その含量は０．１〜１．９９％の間で変動する。

【００２５】このようにして得られた生成物は黄色結晶
として現れ、その融点は８８〜８９℃である。

【００２６】この全合成プロセスは有機相中で実施する
ことができるので、この方法には水性相の存在が原因と
なる非常に多数の操作が回避されるか、又は相当に少な
くなると言った幾つかの利点がある。このことは反応の
スケールアップを可能にするもので、Ｚ．Ｎ．Ｎａｚａ
ｒｏｖａが報告する０．０１５モルの言う規模から始め
て５．５モル、即ち３６６倍以上の規模まで大規模化す
ることが可能になり、それでもなおかつ良好な結果が得
られた。第三アミンの使用は、同時に、反応媒体のｐＨ
の中和と、樹脂、元々の方法を再現するときに常に生ず
るなにかを生成させることなく脱臭化水素反応の達成を
可能にする。Ｚ．Ｎ．Ｎａｚａｒｏｖａは精製後に得ら
れる生成物の純度について報告しなかったが、５−ブロ
モフルフラールとブロモニトロメタンとの縮合反応で達
した収率は７６．８％で、報告された融点は８８−８９
℃であるのに対して、１−（フル−２−イル）−２−ニ
トロメタンの臭素化では、常に２種の化合物の混合物が
得られるにもかかわらず、収率が６４％で、融点は９４
−９５℃であることは注目に値する。この方法を、後者
の方法をＺ．Ｎ．Ｎａｚａｒｏｖａらが記載する同じ規
模で実施した後、実験室規模で再現しようとしたとき、
達成された収率が非常に低かった外に、本発明者らがこ
こに記載した不純物、即ち１−（５−ブロモフル−２−
イル）−２−ニトロエテンが常に有意濃度で存在するこ
とが見いだされた。本発明者がここに記載している方法
は常に９８％より高い純度の再現を保証するものであ
る。上記不純物のレベルは常に２％未満に維持される
が、このことは、良好な製造実施例を観察すると分かる
ように、ヒトに使用される仕上げ形態の薬剤及び家畜用
薬剤の仕上げ用の信頼できる有効成分の供給を可能にす
るものである。

【００２７】本発明に記載される方法により得られる化
合物は、分子イオンに相当する質量／電荷の関係におい
て、２９７にピークを持つ質量スペクトルを示し、また
分子構造中に２個の臭素原子が存在することの特徴であ
るＭ＋２とＭ＋４と言うピークも示す。このピーク（Ｍ
⁺＝２９７）は包括的分子式としてのＣ₃Ｈ₃ＮＯ₃Ｂ
ｒ₂に相当し、これはまた窒素に関する要件も満足す
る。

【００２８】固相（ＫＢｒディスク）として記録された
この化合物のＩＲスペクトルにおいては、ニトロ基に相
当する１５０７ｃｍ^-1のバンド（非対称性の伸縮振動）
と１３０６ｃｍ^-1のバンド（対称性伸縮振動）が顕著で
ある。もう１つの興味あるバンドは１６１８ｃｍ^-1に現
れるもので、これは炭素−炭素二重結合の伸縮振動に相
当する。この分子の中に高い電子の共役が存在すること
は、３７１ｎｍに強い強度のバンドが現れる場合（ｌｇ
Ｅ＝４．０９）のＵＶスペクトルによって確証される。
ただし、この場合スペクトルは生成物のメタノール性溶
液を用いて記録される。このバンドのπ→π＊遷移に相
当するとの割り振りは、媒体の誘電率が低下するときに
顕著な浅色シフトが観察される場合に色々な極性を持つ
溶媒を用いてＵＶスペクトルのレジスターにより行われ
た。

【００２９】¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルは溶媒としてＣＤ
Ｃｌ₃を用いて記録された。化学シフトを伴う、それぞ
れ６．６３、７．３９及び８．５０ｐｐｍ及び包括的分
子式を考慮すると単一のプロトンに相当する同じ相対強
度を持つ３つの信号だけが観察された。

【００３０】これら信号の割り振りは化学シフトについ
て追加の増加分を含む表を用いて実現された。これらの
計算値は５位が臭素で置換されているフラン環の４位に
結合されているプロトンについては６．５９、そのフラ
ン環の３位の炭素に結合されているプロトンについては
７．３６であった。８．５０ｐｐｍに現れる化学シフト
はエステル性障害を少し有するオレフィン性プロトンの
特徴である。β−位にニトロ基と臭素原子を持つ二重結
合に結合されているプロトンについての化学シフトの計
算から、このプロトンは臭素に対してはトランスの位置
に、ニトロ基に対してはシスの位置に存在し、これは置
換基についてＺ配置に相当すると決定することができた
（計算された化学シフトはＺについて８．４８ｐｐｍ、
Ｅについて７．７０ｐｐｍであった）。

【００３１】¹³Ｃ−ＮＭＲのスペクトルから、分子中の
炭素原子は、以前から判明しているデーターから予想さ
れるように、ｓｐ²タイプのものであることが確証され
た。

【００３２】この化合物について結晶学的研究が行わ
れ、その化合物が斜方晶系構造を示すと決定され、また
以前から確立されているそれら原子の空間配置が確証さ
れた。この完全な構造解析から、当該化合物は（Ｚ）−
１−（５−ブロモフル−２−イル）−２−ブロモ−２−
ニトロエテンであると結論される。

【００３３】この化合物に対する抗微生物感受性を初め
に細菌と酵母菌様の真菌に対する連続希釈法（ｓｅｒｉ
ａｌｄｉｌｕｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ）により試験管
内で評価した。他の種については、寒天中での他の増殖
法で検定した。使用した固体培地と液体培地は、選択さ
れた微生物の増殖要件に従って、ミューラー・ヒントン
（Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ）培地、トリプトン・
ダイズ（ＴｒｙｐｔｏｎｅＳｏｙ）培地、サボーラウ
ド・デキストロース（ＳａｂｏｕｒａｕｄＤｅｘｔｒ
ｏｓｅ）培地、サボーラウド・マルトース（Ｓａｂｏｕ
ｒａｕｄＭａｌｔｏｓｅ）培地、その他であった。

【００３４】温度とインキュベーション時間の長さは個
々の条件と微生物の検定対象の特性に応じて調整され
た。最低阻害濃度（ＭＩＣ）はＭＩＣ₅₀とＭＩＣ₁₉₀に
関してμｇ／ｍＬで計算した。

【００３５】本発明の製造法の性能に関する実施例証拠１：次の表には、幾つかの合成例が提案された方法
に従って、かつＺ．Ｎ．Ｎａｚａｒｏｖａによって報告
されたと同じ規模を用いて示される。

【００３６】

【表１】時間温度収率純度モル比関係（ｈ） ℃ （％）（％）１：２４５０８０．４９８．０１：２．５３４５８５．０９８．８１：２．５４４０９３．０９９．５１：２．５５５０８６．２９８．２

【００３７】幾つかの結果は、また、文献に示される規
模よりも３６６倍大きい規模を用いて得られたものであ
る。

【００３８】証拠２：

【表２】純度( ％) 不純物( ％) 合成Ｎｏ. 対原料収率( ％) 純生成物１６３．０５９８．３４１．６６２６６．１１９８．９９１．０１３７１．０１９８．６５１．３５４６６．７２９８．８１１．１９５７１．９３９９．５４０．４６

【００３９】注：この定量的純度の測定はガスクロマト
グラフィーを用いて行われた。

【００４０】証拠３：次の微生物に対して最低阻害濃度
（ＭＩＣ）の対応する値を用いて行った試験管内検定

【００４１】１．ヒトと動物の健康に関連

【００４２】ＭＩＣ₅₀の値ＭＩＣ₉₀の値（μｇ／ｍＬ）（μｇ／ｍＬ）細菌１．１．グラム陰性菌１．１．１．シュードモナス科緑膿菌０７．８４１４．９７シュードモナス・マルトフィラ（ｍａｌｔｏｐｈｉｌａ）２９．７３４５．０６

【００４３】１．１．２．腸内細菌科大腸菌０７．５３１５．２６エンテロバクターｓｐｐ０５．３０１７．１６クレブシェラｓｐｐ（肺炎杆菌を含む）１０．９９２１．３４プロテウス・ミラビリス（ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）０９．３６２４．１５プロテウス・ブルガリス（ｖｕｌｇａｒｉｓ）０５．９５１９．７５プロテウス・モルガニイ（ｍｏｒｇａｎｉｉ）０３．１３１０．１５プロテウス・レットゲリ（ｒｅｔｔｇｅｒｉ）０２．７８０９．９２エンテロバクター・アグロメランス（ａｇｌｏｍｅｒａｎｓ）（生体内検定）ネズミチフス菌０７．４３１７．６８腸炎菌０６．８６１１．５０サルモネラ・オクスフォード（ｏｘｆｏｒｄ）０４．４２０５．８３サルモネラ・ダブリン（ｄｕｂｌｉｎ）０４．３８０５．７３ブタコレラ菌０５．５７１０．５１チフス菌０２．５０１０．００霊菌０５．０３１０．９５

【００４４】１．１．３．ブルセラ科パスツレラ・ハエモリティカ（ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）０３．７２０５．６３パスツレラ・ムルトシダ（ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）０３．５９０９．４７インフルエンザ菌０３．５１３９．２３モラクセラ・ボビス（ｂｏｖｉｓ）０２．６３０５．０８

【００４５】１．１．４．ナイセリア科髄膜炎菌０１．８４０３．４７

【００４６】１．２．グラム陽性菌１．２．１．ミクロコッカス科黄色ブドウ球菌０５．９１１２．９４スタフィロコッカス・アルバス（ａｌｂｕｓ）１０．２５１９．８４サルシナ・ルテア（ｌｕｔｅａ）０１．５６０４．４２

【００４７】１．２．２．乳酸菌科ストレプトコッカス・アガラクチアエ（ａｇａｌａｃｔｉａｅ）０１．９９０４．５５化膿連鎖球菌０１．８６０４．４２

【００４８】１．２．３．コリネバクテリア科コリネバクテリウム・パイオゲネス（ｐｙｏｇｅｎｅｓ）リステリア菌０３．１３０５．４４

【００４９】１．２．４．バチルス科枯草菌０２．２７０５．０８バチルス・アルベイ（ａｌｖｅｉ）０２．２１０５．０８

【００５０】１．３．高級細菌（ＨｉｇｈｅｒＢａｃｔｅｒｉａ）１．３．１．トレポネーマ科レプトスピラ・カニコラ（ｃａｎｉｃｏｌａ）０９．３６１５．３９レプトスピラ・ポモナ（ｐｏｍｏｎａ）０８．８４１１．６６１．３．２．スピリルム科ビブリオ・コレラエ・セル・イナバ（Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅｓｅｒ．Ｉｎａｂａ）０５．８７１７．６８

【００５１】１．４．スコトバクテリア（Ｓｃｏｔｏｂａｃｔｅｒｉａ）１．４．１．マイコプラズマ科マイコプラズマ・ボビゲニタリウム（ｂｏｖｉｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ）５０．００

【００５２】真菌１．５．出芽性単一形真菌１．５．１．クリプトコッカス科鳶口瘡カンジダ０３．１１０７．９５カンジダ・パラシロシス（ｐａｒａｓｉｌｏｓｉｓ）０３．５６０６．９３カンジダ・トロピカリス（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）０２．７８０５．２９カンジダ・シュードトロピカリス（ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）０１．９２０３．５６カンジダ・ゼイファノイド（ｚｅｙｆａｎｏｉｄｅ）０１．９２０３．５６カンジダ・グラブラタ（ｇｌａｂｒａｔａ）（生体内検定）カンジダ・ステラトイデア（ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ）０１．９２０３．５６カンジダ・グイリエルモンジ（ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉ）０１．９２０２．８４カンジダ・クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）０１．９２０２．８４カンジダｓｐ（生体内検定）でん風菌（生体内検定）

【００５３】１．６．糸状単一形真菌１．６．１．モニリア科アスペルギルスｓｐ１６．２１４８．３０紅色白癬菌１３．８０２４．０３毛瘡白癬菌１７．６８４０．６１イヌ小胞子菌０７．９１２０．７８石膏状小胞子菌１２．５０有毛表皮菌１２．５０

【００５４】１．６．２．ツベルクラリア科フサリウムｓｐ５０．００

【００５５】実験の再現性と数種の実験動物における細
菌感染と真菌感染の治療に関する若干の研究をハムスタ
ー、ラット、マウス、モルモット、ウサギ及びイヌを使
用し、また１−（５−ブロモフル−２−イル）−２−ブ
ロモ−２−ニトロエテンを有効成分とする色々な配合剤
を用いて行った。

【００５６】この説明書で参照される有効性に関する研
究を保証するのに必要とされる実験動物に関する毒物学
的研究において、１−（５−ブロモフル−２−イル）−
２−ブロモ−２−ニトロエテンのトラガカントゴムを賦
形剤として使用しての経口投与ルートによる平均致死量
（ＬＤ₅₀）は雌のＯＦ１マウスと雄のＯＦ１マウスにお
いてそれぞれ体重１ｋｇ当たり１７３１．４ｍｇ及び１
８３５．８ｍｇであることが確かめられた。スプラグ・
ドーレー（ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ）ラットを用
いたときは、これらの数字は雌及び雄についてそれぞれ
体重１ｋｇ当たり１５１５．５ｍｇ及び１８５７．３ｍ
ｇであった。

【００５７】経皮ルートを調べるために、前記生成物を
ＯＦ１マウスについて体重１０ｇ当たり０．２ｍＬの量
で肩甲骨間の領域（マウスの約１０％をカバーする面
積）に適用した。そのＬＤ₅₀はＯＦ１マウスを使用した
場合雌と雄についてそれぞれ９．８％及び１２．１％で
あり、またスプラグ・ドーレーラットを使用した場合は
それぞれ１４．７％及び１５．８％であった。後者の場
合も生成物は同じ領域に同じ体重当たりの量で適用し
た。更に、これらの実験中に病理解剖学的要素と臨床的
発現が特徴付けられた。

【００５８】眼の被刺激性を調べる研究を行ったとき
は、前記生成物は１．２５％未満の濃度では目の構造に
対して刺激を生まないことが確かめられた。

【００５９】１−（５−ブロモフル−２−イル）−２−
ブロモ−２−ニトロエテンの慢性毒性に関する研究をス
プラグ・ドーレーラットに対して行った。血液学的研
究、血液化学的研究及び組織病理学的研究では、６カ月
間に局所適用した場合、当該生成物はいかなる顕著な血
液学的又は組織病理学的変質も、また血液化学に対して
何らの変化も引き起こさないことが示された。

【００６０】証拠４：１−（５−ブロモフル−２−イ
ル）−２−ブロモ−２−ニトロエテンの４種の軟膏剤に
ついて生体内での有効さを、親水性軟膏剤中１％、０．
５％、０．２５％及び０．１２５％において評価した。
軟膏剤はモルモットに作られた２ｃｍ²の熱傷に塗布さ
れ、続いて緑膿菌を感染させた。この感染性細菌の負荷
量は１×１０５ＣＦＵ／ｍＬであった。正及び負の対照
が用いられた。有効平均用量（ＤＥ₅₀）は０．１２５％
の濃度において見いだされた（表３）。

【００６１】

【表３】表３．緑膿菌による皮膚感染における生成物Ｇ
−１の有効さ

【００６２】注：Conc. ＝濃度を意味する。

【００６３】略号：Ｌ＝肝臓、Ｓ＝脾臓、Ｋ＝腎臓、Ｌ
ｕ＝肺臓、Ｈ＝心臓、Ｂ＝脳Ｇ−１＝１−（５−ブロモフル−２−イル）−２−ブロ
モ−２−ニトロエテンを意味する。＊＝接種後の日数。

【００６４】証拠５：本発明者らは、ニュー・ジーラン
ド産ウサギに緑膿菌で引き起こされた眼の感染について
の侵食（ｅｒｏｓｉｏｎ）／点眼法による実験的治療に
０．０５％の２つの油性溶液が有効なことを確証した。
この治療効果は臨床的かつ微生物学的の両者において確
かめられた。（治療されなかった）対照グループに関し
て有意差が観察された（表４及び５）。

【００６５】

【表４】

【００６６】略号：Ｉ−Ｇ−１の軟膏剤、０．０５％（８日間治療）ＩＩ−Ｇ−１の軟膏剤、０．０５％（４日間治療）ＩＩＩ−Ｇ−１の点眼剤、０．０５％（４日間治療）ＩＶ−対照（接種したが、治療せず）

【００６７】

【表５】表５．治療後の臨床的及び微生物学的評価

【００６８】略号：Ｉ−Ｇ−１の軟膏剤、０．０５％（８日中治療）ＩＩ−Ｇ−１の軟膏剤、０．０５％（４日中治療）ＩＩＩ−Ｇ−１の点眼剤、０．０５％（４日中治療）ＩＶ−対照（接種したが、治療せず）

【００６９】それぞれ０．１５％、０．２％及び０．２
５％の３種の油性溶液が有効であることと、偽薬が投与
された対照グループとの比較は実験的に感染せしめられ
たマウスにおいて緑膿菌と黄色ブドウ球菌を用いる“埋
没スポンジ（ｉｍｐｌａｎｔｅｄｓｐｏｎｇｅ）”法
により証明された。感染動物の回復は３〜３．４日の治
療期間で起こった（表６及び７）。

【００７０】

【表６】表６．黄色ブドウ球菌が接種されたマウスに対
する治療効果

【００７１】共通のアルファベットを持たない百分率に
は統計的に有意差がある（ｐ＜０．０５）。

【００７２】略号：ｎ−回復した動物の累積数。Ｔｒ−回復時間（日数）の加重平均。Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ：１−（５−ブロモフル−２−イル）−２−ブロモ− ２−ニトロエテンにより治療。

【００７３】

【表７】表７．緑膿菌が接種されたマウスに対する治療
効果

【００７４】共通のアルファベットを持たない百分率に
は統計的に有意差がある（ｐ＜０．０５）。

【００７５】略号：ｎ−回復した動物の累積数。Ｔｒ−回復時間（日数）の加重平均。Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ：１−（５−ブロモフル−２−イル）−２−ブロモ− ２−ニトロエテンにより治療。

【００７６】証拠６：前記の有効成分が眼の細菌感染に
対して有効なことが角結膜炎に掛かった動物の目９４３
５個を含む研究で立証された。８０９３個の目はウシの
ものであり、１３４２個は他の種（ヒツジ、ウサギ、イ
ヌ、ウマ、ブタ、ネコ、モルモット及び数種の鳥）から
のものであった。結果は臨床回復率が７４〜９１％の範
囲で、最高８９．６％に達することを示した（表８）。

【００７７】ある場合には、結果を他の現在使用されて
いる薬剤により得られた結果と比較した。

【００７８】

【表８】

【００７９】共通のアルファベットを持たない百分率に
は統計的に有意差がある（ｐ＜０．０１）。

【００８０】略号：１＝感染性ウシ角結膜炎（ＲＳ）＝規模を小さくした制御された条件での臨床試験（０）＝軟膏剤（Ｉ）＝注射薬ｎ＝治療された目の個数Ｐ±＝臨床回復率（加重平均）に対する治療の平均Ｃｒ＝臨床回復率２＝結膜炎３＝角膜炎４＝角結膜炎５＝眼瞼炎６＝一般の眼の感染症７＝拡張（ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）状態での拡張又は臨床試験（＊）＝９種の異なる動物種における医学的検死（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｉｎｑｕｅｓｔ）での大量適用（ｍａｓｓｉｖｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）Ｇ−１：１−（５−ブロモフル−２−イル）−２−ブロモ−２−ニトロエテンを意味する。

【００８１】証拠７：前記の有効成分をパイオシアノシ
ス（ｐｙｏｃｙａｎｏｓｉｓ）に掛かった雄ウシ（緑膿
菌により感染）に体重１ｋｇ当たり５〜１０ｍｇの用量
で筋肉内注射で投与した。これらの動物はこの薬剤に対
していかなるアレルギー反応も示すことなく臨床的に回
復した。幾つかの殺菌レベルが血清において治療後１時
間から２４時間までに証明された。精液に対して３日、
７日、１４日及び２８日の期間に行われた微生物学的分
析はこの細菌の存在に対して負で、この国の人工受精セ
ンターの品質保証として確立されている精液パラメータ
ーに関していかなる変化も検出されなかった。臨床試験
に係わった動物にはアレルギー反応は検出されなかった
（表９）。

【００８２】治療された雄ウシから採取した凍結精液に
対して更に行われた研究は細胞毒性も精子の形態変化も
示さなかった。

【００８３】

【表９】

【００８４】略号：Ｇ−１＝これは１−（５−ブロモフ
ル−２−イル）−２−ブロモ−２−ニトロエテンを意味
する。

【００８５】証拠８：前記の有効成分を化膿性及びカタ
ラル化膿性（ｃａｔｈａｒｒａｌｐｕｒｕｌｅｎｔ）乳
腺炎に冒された雌のウシに毎日乳房内経由で０．１％の
濃度において３日連続で注射した。乳腺炎において単離
された微生物は緑膿菌と黄色ブドウ球球であった。対照
薬剤としてネオマイシンの乳房内注入を用いた。

【００８６】乳腺の罹患ゾーンの臨床的回復率はＧ−１
と対照薬剤の注入についてそれぞれ９８．２５％と１０
０％であった（表１０）。

【００８７】

【表１０】

【００８８】略号：Ｇ−１＝これは１−（５−ブロモフ
ル−２−イル）−２−ブロモ−２−ニトロエテンを意味
する。

【００８９】証拠９：前記の有効成分を雌のウシの敗血
性産じょく子宮炎の治療のために１．５％油性溶液とし
て使用した。この治療はこの病気の診断から連続３日間
２４時間間隔で子宮内ルートで４０ｍＬ適用することか
ら成っていた。この治療をテトラサイクリンを使用して
腹部大動脈に注射した場合と比較した。２７匹の動物を
治療して、平均１７．７日の臨床的回復の治療期間（Ｔ
−Ｒ）で２７匹の内合計２０匹（７４．１％）の回復を
達成した。テトラサイクリンを使用した場合、１９匹の
内１３匹が回復し（６８．４％）、そのＴ−Ｒは３９日
であった。新配合薬の使用後に達した受精率は１．０９
±０．３０日で、統計的に有意差を示す（ｐ＜０．０
１）テトラサイクリンの使用後に達した受精率（１．７
８±１．９９日）に匹敵するものであった（表１１）。

【００９０】

【表１１】表１１．Ｇ−１を使用しての敗血性産じょく
子宮炎の臨床的回復

【００９１】共通のアルファベットを持たない百分率に
は統計的に有意差がある（ｐ＜０．０１）

【００９２】略号：Ｔ−Ｒ：臨床的回復の平均治療期間ＡＩＲ：人口受精率Ｇ−１：これは１−（５−ブロモフル−２−イル）−２−ブロモ−２− ニトロエテンを意味する。

【００９３】証拠１０：１つの軟膏薬を開発し、４つの
異なる病院の患者３８６人の臨床試験段階ＩＩＩに供し
た。一次膿皮症（ｐｒｉｍａｒｙｐｙｏｄｅｒｍｉｔ
ｉｓ）において、その有効率は８９．２％で、ゲンタマ
イシンで得られた有効率に匹敵するものであった。カン
ジダ及び皮膚糸状菌で引き起こされる皮膚カンジダ症、
ひこう疹変色症、皮膚真菌症、爪真菌症においては、有
効率はそれぞれ７９．３％、８８．０％、７６．９％、
３２．６％及び４２．９％で、ケトコナゾールに匹敵す
るものであった。

【００９４】前記の有効成分及びその製剤形に関する研
究は、広い範囲の強力な抗細菌性と抗真菌性を併せ持つ
こと、及び市販の他の製品より毒性があまり高くないこ
とを明らかにしている（表１２及び１３）。

【００９５】

【表１２】表１２．治療効果

【００９６】略号：ａ＝研究に含まれた総症例数ｂ＝回復した患者数Ｇ−１：これは１−（５−ブロモフル−２−イル）−２−ブロモ−２− ニトロエテンを意味する。

【００９７】

【表１３】

【００９８】略号：Ｇ−１：これは１−（５−ブロモフ
ル−２−イル）−２−ブロモ−２−ニトロエテンを意味
する。

【００９９】「１−（５−ブロモフル−２−イル）−２
−ブロモ−２−ニトロエテンを得る方法及びその殺菌作
用」

【０１００】従来の研究本発明は１−（５−ブロモフル−２−イル）−２−ブロ
モ−２−ニトロエテンを得、そして精製する方法及びそ
の殺菌作用に関する。当該生成物はヒト及び動物の健康
に関係しての使用に関して広い範囲の殺菌剤であるの
で、この化合物を高収率、高純度で確実に得、精製する
方法を獲得することは極めて重要なことである。本発明
の方法は上記の要件を満たすものである。

【０１０１】今日までになされた文献調査で見いだされ
た報文は２件だけで、それは本発明の説明において議論
されたＺ．Ｎ．Ｎａｚａｒｏｖａによるものであるが、
それらにはその生成物の生物学的性質は報告されていな
かった。この文献調査は次のものによった：

【０１０２】ＣｈｅｍｉｃａｌＡｂｓｔｒａｃｔｓ１９９３年１２月までＢｅｉｌｓｔｅｉｎ１９９３年１２月までＣＡＰＲＥＶＩＥＷＳ１９９３年１２月までＷＰＩＮＤＥＸ１９９３年１２月までＩＦＩＰＡＴ１９９３年１２月までＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＢｕｌｌｅｔｉｎＡｂｓｔｒａｃｔｓ１９９２年までＣｕｒｒｅｎｔＣｏｎｔｅｎｔｓ１９９２年までＭｅｄｌｉｎｅ１９９２年までＴｒｏｐｉｃａｌＰｏｓｔＭａｎａｇｅｍｅｎｔ１９９２年までＰｅｓｔｉｃｉｄｅＩｎｄｅｘ１９９２年まで

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ラモンドナトゴイズエタドミンゲツキューバ国ビラクララ，サンタクララ，カレテラアカマユアニ 48 (72)発明者オライダゴンザレツガルシアキューバ国ビラクララ，サンタクララ，サンディノ，エントレ４タイ５タ，アプト４ − エイ，エディフィシオ 12 ピー − ２ (72)発明者ヨルゲアントニオペレツドナトキューバ国ビラクララ，サンタクララ，エントレマセオイユニオン, カンデラリア 111 (72)発明者ジョセファゴンザレツフェイトットキューバ国ビラクララ，サンタクララ，カレテラアカマユアニケイエム５，レパルトユニベルシタリオ 611 (72)発明者エンリッケアントニオシルベイラプラドキューバ国ビラクララ，サンタクララ，サンディノ，エントレ４タイ５タ，アプト４ − エイ，エディフィシオ 12 ピー − ２ (72)発明者マリオクエスタマゾーラキューバ国ビラクララ，サンタクララ，ルプト，ビギアスル，シルカンバラシオンスル，アプト 11，エディフィシオ 328 (72)発明者アントニオラファエルマルティネツデルピノキューバ国ビラクララ，サンタクララ，ルプトカマチョ，エントレ 12 イ 10，カルレ９エヌエイエス／エヌ (72)発明者エステラルゴファリナースキューバ国ビラクララ，サンタクララ，ルプトリベルタッド，エントレ２ダイ４タ，カレテラアサグア 270（アルトス) (72)発明者エルネストエストラダロジャーキューバ国ビラクララ，サンタクララ，ルプトエスカムブレイ，エントレ３ライ７マ，アプト 25，エスカレラ 315，カルレ 14 (72)発明者アナデルカルメンカルタフエンテスキューバ国ビラクララ，サンタクララ，ラスアンティラス，カレテラアカマユアニケイエム５１／２, アプト 38，ブロックエイ (72)発明者オフェリアナビアザラルクィキューバ国ビラクララ，サンタクララ，エントレザヤスイアレマン, アプトシー，エドゥアルドマチャド 114 (72)発明者マリアソレダッドデルガドラスバルキューバ国ビラクララ，サンタクララ，ルプトラゴメラ，ナンバー 114，カレテラセントラルケイエム 294 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07D 307/56 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】１−（フル−２−イル）−２−ニトロエ
テンを１：２〜１：２．６のモル比関係にある臭素によ
り非極性溶媒中で２０〜６０℃の範囲に調整された温度
を用いて１〜６時間直接臭素化し、続いて蒸留により溶
媒を除去し、そして更に２０〜７０℃の温度において第
三アミンにより中和し、かつ脱臭化水素化し、最後に生
成物を極性溶媒を用いて抽出し、そして吸着剤と極性溶
媒により精製することを特徴とする、１−（５−ブロモ
フル−２−イル）−２−ブロモ−２−ニトロエテンを得
る方法。
【請求項２】臭素化反応に用いられる非極性溶媒が、
二硫化炭素及び四塩化炭素であることを特徴とする請求
項１に記載の、１−（５−ブロモフル−２−イル）−２
−ブロモ−２−ニトロエテンを得る方法。
【請求項３】中和反応に用いられる第三アミンがピリ
ジンであることを特徴とする請求項１に記載の、１−
（５−ブロモフル−２−イル）−２−ブロモ−２−ニト
ロエテンを得る方法。
【請求項４】使用される極性溶媒がエタノール、イソ
プロパノール及びメタノールであることを特徴とする請
求項１に記載の、１−（５−ブロモフル−２−イル）−
２−ブロモ−２−ニトロエテンを得る方法。