JP2896362B2 - 癌腫の識別方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】 【発明の属する技術分野】腫瘍マーカーの同定を介して
癌を検出しそして診断するための能力は、広範な興味あ
る領域である。腫瘍マーカーは、物質、典型的にはタン
パク質、糖タンパク質、多糖、及び同様のものであり、
これらは腫瘍細胞によって生成されそしてそれらに特徴
的である。しばしば、腫瘍マーカーは、正常細胞及び腫
瘍細胞によって生成される。しかしながら、腫瘍細胞に
おいては、その生産量は幾分異常である。たとえば、腫
瘍マーカーの生産量は、癌細胞においてひじょうに増加
することができる。一方、正常細胞内又は表面上に通常
存在するタンパク質及び他の物質は、その細胞が悪性に
なる時、循環内に放出又は与えられるかも知れない。従
って血清中におけるそのような分泌される物質の検出
が、悪性の症候であることができる。 【０００２】癌診断において遭遇するもう一つの問題
は、第１次及び転移性腫瘍の両者の細胞起源を同定する
ことに関する。両タイプの腫瘍に関しては、異なる細胞
起源の腫瘍、たとえば上皮起源の腫瘍（癌）、非上皮の
結合組織に由来する腫瘍（肉腫）、及びリンパ腫瘍（リ
ンパ腫）の間で形態的に区別することは時々困難であ
る。さらに、乳房上皮癌に関しては、管上皮組織、分泌
上皮組織、及び筋上皮組織に由来する腫瘍間で区別する
ことは、しばしば困難である。従って、これまでに認識
されていない腫瘍マーカー、特に、循環中に分泌されそ
して血清検定によって同定することができる腫瘍マーカ
ーを同定することが望ましい。また、特定の腫瘍の細胞
起源の決定を可能にする方法及び組成物を開発すること
が望ましい。 【０００３】 【従来の技術】エストラジオール刺激に応じてある乳房
細胞系によって放出される５２，０００ダルトンのタン
パク質が同定されている。Ｗｅｓｔｌｅｙ及びＲｏｃｈ
ｅｆｏｒｔ、セル（Ｃｅｌｌ）（１９８０）２０：３５
３〜３３６２、及びＶｅｉｔｈなど。キャンサーリサー
チ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（１９８３）４
３：１８６１〜１８６８を参照のこと。ＭＣＦ−７ヒト
乳癌細胞系に対して生じるモノクローナル抗体は、２４
キロダルトンのサイトゾルタンパク質を同定することが
示されている。Ｃｉｏｃｃａなど。キャンサーリサーチ
（ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ）（１９８２）４２：
４２５６〜４２５８。 【０００４】組織ポリペプチド抗原（ＴＰＡ）と称され
るタンパク質は、上皮細胞の細胞質中間線維に関係して
いる。ＴＰＡは、血清中において及び細胞表面マーカー
として両方ともの腫瘍マーカーであると報告されてい
る。Ａｌｔｍａｎｎｓｂｅｒｇｅｒなど。Ｖｉｒｃｈｏ
ｗｓ Ａｒｃｈ．〔セルパソロジイ（Ｃｅｌｌ Ｐａｔ
ｈｏｌｏｇｙ）〕（１９８１）３７：２７７〜２８４
（この場合、乳癌細胞がプリケラチンに対する抗体と反
応し）：Ｗａｇｎｅｒなど。 【０００５】オーストラリアン アンド ニュージーラ
ンド ジャーナル オブ サージェリイ（Australian a
nd New Zealand Journal of Surgery)（１９８２）５
２：４１〜４３（この場合、ＴＰＡの高められた血清レ
ベルが胃及び腸癌に苦しむいくらかの患者に検出さ
れ）；Ｍｒｏｓｓなど。Ｋｌｉｎ．Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈ
ｒ（１９８３）６１：４６１〜４６８（この場合、ＴＰ
Ａの高められた血清レベルが乳癌に苦しむいくらかの患
者に見つけられ）そしてＬｕｎｉｎｇ及びＮｉｌｓｏ
ｎ。アクタ ケミカ スカンジナビカ（Ａｃｔａ Ｃｈ
ｅｍｉｃａ Ｓｅａｎｄｉｎａｖｉｃａ）（１９８３）
３７：７３１〜７５３（この場合、表皮ケラチンを含
む、ＴＰＡ及びある線維性タンパク質間の一部相同の配
列が報告された）を参照のこと。 【０００６】スウェーデンのブロマにあるＳａｎｇｔｅ
ｃ Ｍｅｄｉｃａｌは、商標Ｐｒｏｌｉｆｉｇｒｅｎ^R
ＲＩＡキットのもとで血清及び血漿中のＴＰＡの検出の
ためのキットを販売している。Ｍａｒｉｒｅｓｓｅな
ど。ジャーナル オブ ステロイド バイオケミストリ
ィ（Journal of Steroid Biochemistry)（１９８１）１
５：３７５〜３８１は、ＭＣＦ−７細胞の培養培地での
約５０kdの低転換速度のタンパク質の存在を報告してい
る。ケラチンの血清学的検出が、癌患者において報告さ
れている。Ｍａｄｒｉなど。ラボラトリイ インベステ
ィゲーション（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉ
ｇａｔｉｏｎ）（１９８３）４８：９８〜１０７。 【０００７】〈発明の要約〉この発明は、第１次及び転
移性上皮腫瘍、特に上皮乳房腫瘍を検出しそしてモニタ
ーするために有用な方法及び組成物を提供する。この方
法は、腫瘍性、上皮細胞によって循環中に放される細胞
外サイトケラチンの検出に基づく。この細胞外サイトケ
ラチンは、約４０〜４６キロダルトンの分子量を有しそ
して腫瘍性上皮細胞の細胞表面上に見出される約４２〜
４８kdのタンパク質に関係している。 【０００８】細胞外サイトケラチン及び細胞表面タンパ
ク質の両者は、今度は、細胞内サイトケラチンに関係し
ているが、しかし細胞外サイトケラチンは、ブロックさ
れているＮ−末端を有しそして水性溶液に溶解する点に
おいて、細胞内サイトキシン及び細胞表面サイトケラチ
ンの両者と異なる。細胞外サイトキシンの検出は、ハイ
ブリドーマ細胞系、ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１、「ＵＣＤ
／ＰＲ １０．１１」に由来するモノクローナル抗体又
は類似の特異性を「有する他の抗体」との反応によって
便利に達成することができる。 【０００９】この発明の組成物は、また種々の上皮腫瘍
の細胞起源を同定するために有用である。上皮サイトケ
ラチン、特にＵＣＤ／ＰＲ １０．１１と反応できるモ
ノクローナル抗体は、非上皮腫瘍、たとえば肉腫及びリ
ンパ腫と上皮腫瘍（癌）を区別するのに利用することが
できる。その上、抗体のグループ又はパネルを管上皮、
分泌上皮、及び筋上皮起源の第１次及び転移性乳房腫瘍
の間の区別をするために利用することができる。 【００１０】 【発明の実施の形態】方法及び組成物は、上皮腫瘍、特
に乳房上皮腫瘍の検出、同定、及びモニターリングのた
めに提供される。正常及び腫瘍性上皮細胞の両者は、細
胞表面上の約４２〜４８キロダルトン（kd）のタンパク
質（これは、細胞内サイトケラチンに免疫学的に及び組
成的に関係している）によって特徴づけられることが見
つけられた。 【００１１】また、サイトケラチン関連タンパク質の低
分子形（約４０〜４６kd）が正常及び腫瘍性細胞の両者
によって放出されるがしかし腫瘍性細胞からの放出速度
は相当に高いということが見出された。従って血清中の
そのような細胞外サイトケラチンの存在について検定す
ることによって、患者集団を、上皮新生物についてスク
リーンすることができる。この検定は特に上皮新生物の
ために治療を受けている患者の経過をモニターするため
に適切である。 【００１２】中間線維は、多くの細胞型における細胞体
質の主成分である。乳腺のような組織の上皮細胞は、ケ
ラチンから成る不溶性中間線維を含む。サイトケラチン
と称するこれらのタンパク質は、正常及び腫瘍性乳房細
胞の両者中に見つけられそしてタイプ１から１９〔Ｍｏ
ｌｌなど。セル（Ｃｅｌｌ）（１９８２）３１：１１〕
と称する少なくとも１９の異なるタンパク質のグループ
を含んで成る。これまで、そのようなサイトケラチン
は、細胞内サイトケラチンタンパク質であると信じられ
ていた。しかしながら後の実験部分に報告されている研
究は、そのような細胞内サイトケラチンに免疫学的に及
び組成的に関連しているタンパク質を、細胞表面上でも
見出すことができ、そして細胞から分泌され得るという
ことを証明している。 【００１３】この発明によって同定された細胞表面サイ
トケラチン及び細胞外サイトケラチンは、構造的に及び
免疫学的に既知の細胞内サイトケラチンに関連している
がしかし同一ではない。構造的に関連があるということ
は細胞外／細胞表面のサイトケラチン及び細胞内サイト
ケラチンの間で少なくとも６０％の相同性普通７５％又
はそれより大きな相同性が存在するということを意味す
る。免疫学的に関連があるということは、サイトケラチ
ン内で共通な少なくとも１つのエピトープ部位、普通多
数のエピトープ部位しかし、すべてのエピトープ部位よ
りも少ない部位が存在するであろうことを意味する。 【００１４】乳房上皮細胞の典型的な場合においては、
タイプ８，１８及び１９の細胞内サイトケラチンと免疫
学的に交叉反応をする少なくとも３つのエピトープが細
胞表面サイトケラチン上に存在するということが見出さ
れる。乳房上皮細胞から放出される細胞外サイトケラチ
ンは、タイプ８及びタイプ１８の細胞内サイトケラチン
と最も強く交叉反応し、そして水性溶液中で可溶性であ
る。細胞外サイトケラチンは、ブロックされているＮ−
末端を有するということも、さらに見出される。 【００１５】生物学的液体、たとえば血清中での細胞外
サイトケラチンの検出は、上皮癌の状態に関係があり得
る。腫瘍性上皮細胞は、正常な上皮細胞と比較して増大
された速度でサイトケラチンを放出し、そして血清中の
サイトケラチンレベルを疾患状態と関係することをでき
ることが観察される。たとえば、腫瘍が外科的に取り除
かれ又は他の形の治療によってその後退が誘発された
後、血清中のサイトケラチンレベルが、減少することが
予想され得る。従って患者の血清レベルをモニターする
ことによって増大した腫瘍負荷（第１次又は転移性いづ
れか）の特徴である細胞外サイトケラチンの増加レベル
を検出することができる。 【００１６】この発明は、また腫瘍細胞の細胞起源を決
定するために腫瘍細胞をスクリーニングするのに有用で
ある。腫瘍細胞におけるサイトケラチンの存在は、その
細胞の上皮起源のを診断するものである。従って、細胞
サイトケラチンに対して特異な抗体との反応によって非
上皮腫瘍と上皮腫瘍を区別することができる。さらに、
サイトケラチンと反応することができる抗体は、管上
皮、分泌上皮及び筋上皮の乳房細胞間を識別することが
できるということが見出された。 【００１７】従って、乳房上皮細胞のおのおのの型と反
応するが、しかし乳房上皮細胞の他の２つの型とは実質
的に反応性が低い抗体のグループ又はパネルを使用する
ことによって、乳房腫瘍の細胞起源を、組織化学的染色
技法により便利に決定することができる。通常の技法に
より抗体との反応性を基礎にして、陽性及び陰性のサン
プルを評価することが可能であろうことが、“実質的に
反応性が低い”ということによって意味される。腫瘍の
細胞起源の知識は、治療の適切な態様を選択する場合に
有用である。 【００１８】細胞サイトケラチン及び細胞外サイトケラ
チンの存在は、タンパク質と反応する抗体を用いる通常
のイムノアッセイ又は組織化学的染色技法を免疫学的に
使用して便利に決定することができる。免疫原として、
細胞サイトケラチンもしくは細胞外サイトケラチン、又
はそれらの抗原性フラグメントのいづれかを通常に使用
して（下に記載されているように）そのような抗体を生
産することができる。乳房腫瘍細胞系からの完全な又は
溶解した細胞を、免疫原として便利に使用することがで
きる。一方、サイトケラチンに特異な抗体を利用して、
血清、第１次腫瘍細胞、又は腫瘍細胞系からサイトケラ
チンを単離し、免疫原として使用するための精製された
る抗原を得ることができる。 【００１９】通常の技法に従って広範囲の種類の脊椎動
物中に所望の免疫原を注入することによって抗体を得る
ことができる。適当な脊椎動物は、マウス、ラット、羊
及びヤギ、を含み、特にマウスが適切である。普通、改
良された力価及び特異性を有する、逐次的な放血により
定期的に動物から採血する。抗原は、筋肉内に、腹腔内
に、皮下に又はこれらと同様にして注入することができ
る。普通、完全又は不完全フロインドアジュバンドのよ
うな賦形剤が使用される。所望によりモノクローナル抗
体を製造することができる。 【００２０】モノクローナル抗体を得るために、免疫化
された脊椎動物からの脾臓細胞が不滅にされる。不滅化
の方法は臨界ではない。現在、最も通常な方法は、骨髄
腫融合パートナーによる融合である。他の技法は、ＥＢ
Ｖ形質転換、裸のＤＮＡ、たとえば、腫瘍遺伝子、レト
ロビールス、等による形質転換、又は細胞系の安定維持
及びモノクローナル抗体の生成をもたらすいづれか他の
方法を含む。ヒトモノクローナル抗体は、適切なヒト融
合パートナー、たとえばＷＩ−Ｌ２と脾臓細胞の融合に
よって得ることができる（ヨーロッパ出願番号８２．３
０１１０３．６に記載され、これと関連する部分を、引
用によりこの明細書に組み入れる）。 【００２１】マウス×マウスモノクローナル抗体を生成
するための詳しい技法は、Ｏｉ及びＨｅｒｚｅｎｂｅｒ
ｇの“細胞免疫学における選択法（Selected Methods i
n Cellular Immunology)，”Ｍｉｓｈｅｌｌ及びＳｈｉ
ｉｇｉ（出版）、W.H.Freeman 及びCo.,サンフランシス
コ（１９８０）ページ３５１〜３７２によって教示され
ている。この発明の抗体は、いづれかの免疫グロブリン
クラス、すなわちIgGl,IgG2a、及びIgG2b を含むIgG,Ig
A,IgD,IgE 、並びにIgM 、普通IgG 又はIgM であること
ができる。 【００２２】特に有用なモノクローナル抗体がこの発明
において使用のために製造されている。抗体ＵＣＤ／Ａ
Ｂ ６．１１は、上皮サイトケラチンの細胞内、細胞表
面、及び細胞外形と、特に分泌上皮細胞に特徴的である
タイプ１８サイトケラチンと反応的である。抗体ＵＣＤ
／ＰＲ １０．１１は、サイトケラチンの細胞内及び細
胞外形と、特に管上皮細胞に特徴的であるタイプ８サイ
トケラチンと反応的である。ＵＣＤ／ＰＲ ７．０１
は、筋上皮細胞に特徴的である抗原の細胞内及び細胞外
形と反応的である。これらの３つの抗体は、特に、それ
らが管起源、分泌起源、又は筋上皮起源であるかどうか
を決定するために腫瘍性上皮細胞をスクリーニングする
のに適切である。 【００２３】抗体ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１は、また、
それらが上皮起源のものであるかどうかを決定するため
に腫瘍細胞をスクリーニングするのに特に適切である。
ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１抗体は、上皮細胞のために高
い親和性を有しそしてひじょうに低いバックグラウンド
レベルを伴って高度に特異的な染色を提供することが見
出される。 【００２４】いったん適切な特異性を有する抗体が製造
されたなら、広範囲の種類の免疫学的検定法が利用可能
である。多くのコンピティティブ及び非コンピティティ
ブタンパク質結合検定は、科学及び特許文献に記載さ
れ、そしてそのような検定のひじょうに多くが商業的に
使用可能である。血清抗原を検出するために適切である
典型的なイムノアッセイは、アメリカ合衆国特許番号、
３，７９１，９３２；３，８１７，８３７；３，８３
９，１５３；３，８５０，７５２；３，８５０，５７
８；３，８５３，９８７；３，８６７，５１７；３，８
７９，２６２；３，９０１，６５４；３，９３５，０７
４；３，９８４，５３３；３，９９６，３４５；４，０
３４，０７４；及び４，０９８，８７６に記載されてい
る方法を含む。 【００２５】イムノアッセイを実施するより前に、ある
種の方法により生物学的サンプルをあらかじめ処理する
ことが普通必要であろう。サンプルの調製法は、生物学
的サンプル源に依存して異なるであろう。固形腫瘍及び
他の組織サンプルは、細胞を溶解することによって調製
されるであろう。血清サンプルは、典型的に、良く知ら
れている方法に従って、全血液を凝固しそして上清液を
単離することによって調製されるであろう。他の生物学
的液体、たとえば精液、痰、及び尿は、また細胞外サイ
トケラチンの存在について検定することができる。 【００２６】通常の免疫組織化学的染色技法も、また組
織サンプル中のサイトケラチンを検出するために用いる
ことができる。たとえば、組織サンプルを、ホルマリ
ン、Ｂ−５又は他の標準組織学的保存薬中に固定し、脱
水しそしてどの病院の病理実験室においても日常の仕事
であるようなパラフィン中に封入することができる。切
片をパラフィンから切り離しそしてガラススライド上に
置くことができる。次に細胞抗原が、検出されそしてラ
ベルされている抗体及びラベルされている第２抗体に暴
露することによっておのおの位置決定され得る。 【００２７】一方、細胞学的調製法を用いることができ
る。たとえば、組織サンプルからの細胞は、典型的に
は、生理学的pHで緩衝液中、ホルマリンに暴露し、次に
アセトン中に懸濁しそして遠心分離によりゼラチン−被
覆のスライド上にペレット化することによって、スライ
ド上に固定することができる。次にラベルされている抗
体に暴露するか、又はラベルされていない抗体及びラベ
ルされている第２抗体に暴露するかいづれかによって、
細胞表面受容体を位置決定することができる。サンプル
中の細胞表面タンパク質の量は、結合しているラベルの
量に直接的に比例する。 【００２８】放射性同位体のラベルを使用するホールボ
ディイメージング技法は、上皮腫瘍、特に転移した乳癌
の位置を見つけるために利用され得る。この発明の抗
体、又はそれらのフラグメントは、適切な放射性同位
体、典型的にはテクネチウム−９９， ¹²³Ｉ， ¹²⁵Ｉ，
もしくは ¹³¹Ｉ、又はそれらの組合せに結合され、そし
て非経腸的に投与された。ラベルの生体分布状態は、シ
ンチグラフィによってモニターされ、そしてラベルの蓄
積を、エストロゲン感受性の腫瘍性乳房上皮細胞の存在
に関係することができる。ホールボディイメージング技
法は、アメリカ特許第４，０３６，９４５及び４，３１
１，６８８に記載され、この開示を引用によりこの明細
書中に組み入れる。 【００２９】次の実験は、制限的でなく、例示的に提供
されている。 〈実 験〉次の略語が用いられる： ＢＳＡ−ウシ血清アルブミン ＤＣＣ−デキストラン被覆木炭 ＥＲ−エストロジン受容体 ＨＭＦＧＭ−ヒト乳脂肪乳球膜 ＩＥＦ−等電点電気泳動 ＭＣＡ−モノクローナル抗体 ＰＢＳ−リン酸緩衝化食塩溶液（０．０１Ｍのリン酸ナ
トリウム、pH７．３，０．１５Ｍの塩化ナトリウムを含
む） ＲＩＡ−ラジオイムノアッセイ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ−ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアク
リルアミドゲル電気泳動 【００３０】材料及び方法 細胞系 １．ＭＣＦ−７細胞。ＭＣＦ−７ヒト乳房腫瘍細胞系を
用いて、抗体生産のために免疫化及びスクリーンの両方
を行なった。これは、転移性乳癌を有する患者の胸膜の
滲出液に由来する十分に特徴づけられている細胞系であ
る〔ソウルなど。ジャーナル オブ ナショナル キャ
ンサー リサーチ（Journal of National Cancer Resea
rch)（１９７３）５１：１４０９〜１４１６〕。エスト
ロゲン及びプロエステロジン受容体の両者を含んでいる
ということが示されている。 【００３１】２．ＨＢＬ−１００。ＨＢＬ−１００は、
授乳中の乳房乳汁サンプルから開発された非腫瘍性ヒト
乳房上皮細胞系である〔ポラノウスキイなどイン ビト
ロ（Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ）（１９７６）１２：３２８〜３
３６〕。それはエストロゲン受容体を含まない。 ３．１８６−ＮＷＴ。１８６−ＮＷＴは、転移性乳癌を
有する患者からの腹水から開発されたヒト上皮細胞系で
ある。それはいかなる乳房細胞マーカも示さずそしてそ
れはＥＲ陰性である。 ４．Ｐ３×６３Ag ８．６５３。これは、ＭＣＡ生産の
ためにハイブリドマ融合パートナーとして用いられるマ
ウス脊髄腫細胞系である。それは、免疫グロブリン又は
いかなる免疫グロブリン サブユニットも生産しない
〔ケア−ニイなど。ジャーナル オブ イムノロジィ
（Journal of Immunology)（１９７９）１２３：１５４
８〜１５５５〕。 【００３２】増殖培地 ハイブリドマ細胞系は、ローズウェル パーク メモリ
アル インスティテュート カルチャー メディアム
１６４０（Ｇｉｂｃｏラボラトリィズ，グランド アイ
ランド，ニューヨーク）（加熱により不活性化されてい
る１０％子牛血清、１mMピルビン酸ナトリウム、０．１
mM非必須アミノ酸、２mM Ｌ−グルタミン、及び２５μ
ｇ／mlゲンタマイシンが補充されている）において増殖
された。ヒト乳房細胞系は、５％子牛又は馬血清のいづ
れか、１μｇ／mlインシュリン、２５μｇ／mlゲンタマ
イシン及び１００nM１７β−エストラジオール（シグマ
ケミカル カンパニイ，セントルイス，ミズウリィ）を
含むダルベッコ改変のイーグル最少必須培地中に維持さ
れた。 【００３３】５．細胞系ＡＥ１は、Ｔｓｅｎｇなど。セ
ル（Ｃｅｌｌ）（１９８２）３０：３６１〜３７２によ
って記載されているハイブリドマ細胞系であり、これ
は、サイトケラチンによる免疫化によって製造された。
この細胞系によって生産される抗体は、すべての酸性サ
イトケラチンに対してそして特にＭＣＦ−７タイプ１９
に対して特異的である。 ６．細胞系βＨ１１は、Ｇｏｗｎ及びＶｏｇｅｌ。ジャ
ーナル オブ セルバイオロジィ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（１９８２）９５：４
１４〜４２４により記載されているハイブリドマ細胞系
であり、これはサイトケラチンによる免疫化によって製
造された。この細胞系によって生産される抗体は、ＭＣ
Ｆ−７細胞におけるサイトケラチンタイプ８，１８及び
１９に対して特異的である。 【００３４】組織検体 正常な及び腫瘍性ヒト乳房組織のパラフィンブロック
は、カリフォールニア、サクラメントのカリフォールニ
ア大学医学センターの医学部病理学科から得られた。ヒト乳脂肪乳球膜 破損されたＨＭＦＧＭは、クロロホルム及びエーテルに
よりヒト乳汁のクリーム画分を抽出することによって製
造された〔Ｃｅｒｉａｎｉなど。プロスィーディング
オブ ザ ナショナル アカデミィ オブ サイエンス
アメリカ合衆国（Proceedhngs of the National Acad
emy of Science U.S.A)(１９７７）７４：５８２〜５８
６〕。 【００３５】モノクローナル抗体製造 標準的ポリエチレングリコール融合、すなわちＯｉ及び
Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇ。細胞免疫学における選択された
方法（Selected Methods in Cellular Immunology)（１
９８０），Ｍｉｓｈｅｌｌ及びＳｈｉｉｇｉ出版、W.H.
Freeman 及びカンパニイ，サンフランシスコ，カリフォ
ールニア，ページ３５１〜３７２によって記載されてい
るようなヒポキサンチン−アミノプテリン−チミヂン選
択方法によって行なわれる。 【００３６】抗体生産性クローンは、Ｔｓｕ及びＨｅｒ
ｚｅｎｂｅｒｇ。前記（１９８０）ページ３７３〜３９
７によって記載されているように固相ＲＩＡ及びオート
ラジオグラフィによって、放射性ヨード化されているウ
サギ抗−マウスIgG により同定された。生きている無傷
のＭＣＦ−７細胞（２×１０⁶ 細胞）によりＢＡＬＢ／
ｃマウスを週１度、４週間にわたって腹腔内高度免疫し
た。３週間後、融合の前の３日間、２×１０⁶ 細胞によ
り４度腹腔内にそのマウスを免疫した。次に、マウス脾
臓細胞をＰ３×６３Ag８．６５３マウス骨髄腫細胞と共
にハイブリド形成した。 【００３７】第１及び第２レベルのスクリーニングのた
めに完全に生きているＭＣＦ−７及びＨＢＬ−１００細
胞も、また固相ＲＩＡにおいて用いた〔ブラウンなど。
ジャーナル オブ イムノロジカル メソド（Journal
of Immunological Methods)(１９７９）３１：２０１〜
２０９〕。生きている細胞を用いて、固定人工物につい
ての選択を避けた。ＭＣＦ−７を陽性スクリーンとし
て、ＥＲ陽極細胞上の抗原に対する抗体を同定した。Ｈ
ＢＬ−１００を陰性スクリーンとして用いて、ＥＲ陰極
抗体を同定した。また正常なヒト乳汁から単離されるＨ
ＭＦＧＭを用いて、標準固相ＲＩＡにより正常な乳房上
皮の表面成分に対して選択した〔Ｔｓｕ及びＨｅｒｚｅ
ｎｂｅｒｇ前記（１９８０）〕。 【００３８】最終スクリーニン判定基準は、抗原の検出
のためのイムノパーオキシダーゼ技法を用いて、パラフ
ィンスライド中の抗原の分布状態を直接的に映像化する
ことに基づいた。第２世代のモノクローナル抗体を上記
のようにして生産したが、しかしＭＣＦ−７組織培養培
地（融合系列１０抗体）又は１８６−ＮＷＴからの膜抽
出物（融合系列７抗体）のいづれかから単離される抗原
により、マウスを免疫化した。下に記載しているように
して、ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１抗体により調製されたイ
ムノアフィニティ カラムを用いてその抗原を単離し
た。第２世代の抗体についてのスクリーニング方法は、
次の通りであった。第２世代の抗体の選択は、固相ＲＩ
Ａ，Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｓ及びイムノパーオキシ
ダーゼにおける反応性に基づいた。 【００３９】免疫拡散法 Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｇ及びＮｉｌｓｓｏｎ。ハンドブ
ック オブ イクスペリメンタル イムノロジィ（Hand
book of Experimental Immunology)（１９７３），Ｗｅ
ｉｒ出版、ブラックウエル，ロンドン，（チャプター１
９）の二重拡散法を用いて、ＭＣＡをアイソタイプ分け
した。おのおののクローンからの上清液及びＰＢＳ
（０．９％塩化ナトリウム、１０mMリン酸ナトリウム、
pH７．５）中１：１００に希釈した腹水をおのおのの免
疫グロブリンクラス：IgM,IgG1,IgG2a,IgG3 、及びIgA
に対して特異な抗血清に対して反応せしめた。クラスに
特異的抗血清は、インディアナのエルクハートのマイル
ラボラトリィズから購入された。 【００４０】生細胞固相ＲＩＡ トリプシン処理によって、７５cm² の組織培養フラスコ
から細胞を取得し、１つのウエルにつき５０，０００細
胞で９６ウエル組織培養プレートを平板培養し、そして
１８〜２４時間培養した。すべての培養は、５％CO
₂ 中、３７℃であった。増殖培地を、吸引除去し、０．
０８％ナトリウムアジドを含む増殖培地１５０μｌを添
加しそして細胞を、３０分間インキュベートした。５％
子牛血清及び０．０８％ナトリウムアジドを含むハンク
ス液（洗浄緩衝液）により細胞をすすいだ。 【００４１】次に、洗浄緩衝液を添加しそして細胞を、
３０分間インキュベートした。この細胞を、再び洗浄緩
衝液によりすすぎ、そしてハイブリドマ培養からの組織
培養液又は希釈された腹水５０μｌを添加しそして１時
間インキュベートした。次にその細胞を、洗浄緩衝液に
より２度すすぎ、そして ¹²⁵Ｉ−ウサギ抗−マウスIgG
５０μｌ（２×１０⁴ ｃｐｍ）を添加しそして１時間イ
ンキュベートした。その細胞を、洗浄緩衝液により２度
洗浄しそして陽性ウエルを、オートラジオグラフィーに
よって可視化した。 【００４２】タンパク質分析 Ｌａｅｍｍｌｉ．ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ）（１９７
０）２２７：６８０〜６８５によって記載されている通
りに、１０％分解ゲルを含む４％アクリルアミド積み重
ねゲル（両者は、０．２％ＳＤＳを含む）を用いて、ド
デシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドスラブゲル
電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によりタンパク質を分析
した。５０μｌのサンプル緩衝液（６３mM ＴＲＩＳ，
pH６．８，１０％グリセロール、５％ ２−メルカプト
エタノール、２．３％ＳＤＳ）中に、サンプルを加え、
そして２０mAの一定電流により４時間電気泳動せしめ
た。既知の標準タンパク質の分子量と比較してそれらの
移動度によってタンパク質の分子量を見積った。 【００４３】Ｏ Ｆａｒｒｅｌｌ．ジャーナル オブ
バイオロジカル ケミストリィ（Journal of Biologica
l Chemistry)（１９７５）２５０：４００７〜４０２１
によって記載されている通りに２次元電気泳動を実施し
たが、しかし第２次元におけるＳＤＳ−ＰＡＧＥは、上
に記載されている通りであった。イムノアフィニティ精
製した組織培養液４０μｌ（蒸発乾燥せしめ、そして溶
菌緩衝液に再溶解されている）又は４０μｌの溶菌緩衝
液に溶解された細胞タンパク質（溶菌緩衝液２ml中に溶
解されている１コンフルエント１００mmペトリディッシ
ュ）のいづれかを、分析した。タンパク質濃度を、色素
結合分析（Ｂｉｏ−Ｒａｄラボラトリイズ，リッチモン
ド，カリフォールニア）を用いて決定した。 【００４４】ウエスターン ブロット法（Ｗｅｓｔｅｒ
ｎ Ｂｌｏｔｓ） 抗体によって同定される抗原を特徴づけるために、Ｔｏ
ｗｂｉｎ、など。プロスィーディング オブ ザ ナシ
ョナル アカデミィ オブ サイエンス アメリカ合衆
国（Proceeding of the National Academy of Science
U.S.A)（１９７９）７６：４３５０〜４３５４によって
記載されているようなウエスターン法の変法を用い、こ
の場合タンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルからニトロ
セルロースフィルターに移されそしてＭＣＡによって同
定される。 【００４５】ニトロセルロースフィルターに移した後、
過剰のタンパク質結合性部位を、３％ＢＳＡを含むＰＢ
Ｓ中にそのフィルターを浸すことによってブロックし
た。１％ＢＳＡ及び１〜２×１０⁷ ｃｐｍのヨード化さ
れた抗体を含むＰＢＳ３０ml中にそのシートを１時間、
インキュベートすることによって、抗原の位置を決定し
た。次にそのフィルターをすすぎ、乾燥せしめそしてオ
ートラジオグラフ化せしめた。１００pgほどの少量のタ
ンパク質を、この方法により検出することができる。 【００４６】ラベルされているタンパク質の分析 ステロイドホルモンを除くためにＤＣＣにより処理され
た５％子牛血清中に１０日間細胞を増殖せしめた。試験
の前２日間、細胞を、トリプトシ処理しそして１００mm
ペトリディッシュにつき４×１０⁶ 細胞で平板培養し
た。２４時間後、エストラジオールを、この培地に添加
し、０，１，１０、及び１００nMのエストラジオール濃
度を得た。この培地を、２４時間後交換した。ホルモン
処理の４８時間後、細胞をハンクス液により２度洗浄し
た。正常なメチオニン濃度の１０％のほかに³⁵Ｓ−メチ
オニン２００μCi／mlを含む、上記のようにホルモンが
補充されている血清不含培地を添加した。細胞及び培地
を、６〜１２時間の培養の後、取得した。 【００４７】イムノパーオキシダーゼ染色 用いられるイムノパーオキシダーゼ染色法は、Ｈｏｒａ
ｎ−Ｈａｎｄなど。キャンサー リサーチ（Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（１９８３）４３：７２８〜７
３５によって記載されているように、Ｈｓｕなど。ジャ
ーナル オブヒストケミストリィ アンド サイトケミ
ストリィ（Journal of Histochemistry and Cytochemis
try)（１９８１）２９：５７７〜５８０のアビジン−ビ
オチンイムノパーオキシダーゼ技法の変法であった。 【００４８】イムノアフィニティ クロマトグラフィ セファロース^R ４Ｂ（Pharmacia Fine Chemicals、ピス
キャットウエイ、ニュージャジィ）を、Ｍａｒｃｈな
ど。アナライティカル バイオケミストリィ（Ａｎａｌ
ｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｓｒｙ）（１９７
４）６０：１４９〜１５２によって記載されているよう
に臭化シアンにより活性化した。４℃で一晩、４０％硫
酸アンモニウム中での沈殿によって腹水から抗体を精製
した。この沈殿物を溶解しそして０．２Ｍリン酸ナトリ
ウム、pH７．３に対して透析した。活性化されたセファ
ロース^R （濾過され、コンパクトケーキにされた）の１
容積を抗体溶液（２mgタンパク質／ml）の１．５容積に
添加した。 【００４９】抗体を、４℃で１６時間、穏かに混合する
ことによりカップリングせしめた。セファローズ^R を、
再び濾過し、コンパクトケーキにし、３容積の水により
洗浄しそしてpH９の１Ｍエタノールアミンの１．５容積
に添加することにより未反応部位をブロックした。この
反応は、２７℃で２時間進行せしめた。次に、順にリン
酸緩衝液（０．１Ｍリン酸ナトリウム、pH７．３，１．
０Ｍ塩化ナトリウム）、０．１Ｍ酢酸、及び再びホスフ
ェート緩衝液のおのおのにつき１０容積により順次セフ
ァロース^R を洗浄した。０．１％ナトリウムアジドを含
むリン酸緩衝液中に４℃でこの樹脂を貯蔵した。 【００５０】アフィニティー樹脂を０．２〜１．０mlの
カラム中に注ぎ、５カラム容積の６Ｍグウアニジン−HC
l pH１．５によりストリッピングし、そして使用の前
に、少なくとも１０容積のＰＢＳによりすすいだ。組織
培養液を集めそして２mM ＥＤＴＡ及びフェニル−メチ
ル−スルフォニルフルオリドを添加し、タンパク質分解
を抑制した。２０分間、５０００Xgで遠心分離により、
次にグラスウール及び０．２２ミクロンのフィルターを
通しての濾過によって破片を取り除いた。サンプルを、
４℃で２０〜３０ml／時でアフィニティーカラムを通す
前に、セファロース^R ４Ｂの１mlカラムを通した。非特
異的に結合したタンパク質を、ＰＢＳ中０．５Ｍ尿素１
０〜２０mlにより溶出した。４カラム容積の６Ｍグウア
ニジン−HCl pH１．５のにより抗原を溶出し、この溶出
物を中和し、そして透析した。 【００５１】抗体のヨード化 クロラミンＴ法〔ＭｃＣｏｎａｈｅｇなど。メソッド
オブ エンザイモロジイ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｅｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ）（１９８０）７０：２１０〜２１
３〕により抗体を約２μCi／μｇの比活性にヨード化し
た。１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中、セファロース^R Ｇ−２
５（１cm×３０cmのカラム）上で分離し、そして使用す
るまで−７０℃で貯蔵した。 【００５２】結果 １．モノクローナル抗体の製造及び特徴付け 生細胞ＲＩＡにおけるオートラジオグラフィー結合パタ
ーンはＭＣＡの最初の選択の基礎であった。最初の融合
からの２８８ウエルのうち８７が、ＭＣＦ−細胞系に対
する抗体を生成するハイブリドコロニイを含んだ。これ
らのコロニイの２２を、拡大しそしてさらに特徴付ける
ために選んだ。９コロニイを限界希釈によってクローン
化した。これらから、ＵＣＤ／ＡＢ ６．０１及びＵＣ
Ｄ／ＡＢ６．１１と命名された２つの抗体を、さらに特
徴付けるために選択した。 【００５３】ＭＣＦ−７に対するＵＣＤ／ＡＢ ６．１
１の特異性を、ウエスターン法によって証明した。ＵＣ
Ｄ／ＡＢ ６．１１は、ＭＣＦ−７抽出物中の２つのＳ
ＤＳ−ＰＡＧＥバンドに結合したが、しかしＨＢＬ−１
００，ＮＷＴ−１８６ ＨＷＴ抽出物又はＨＭＦＧＭに
はなんら結合性をも示さなかった。比較すると、ＵＣＤ
／ＡＢ ６．１３と命名されたもう一つのクローンは、
ＨＭＦＧＭを除く３つのすべての細胞系に結合性を示し
た。 【００５４】アビジン−ビオチン イムノパーオキシダ
ーゼ技法を用いてのパラフィン切片における細胞抗原の
検出を実施例し、ＭＣＡがヒト乳房抗原に結合しそして
ＭＣＦ−７の組織培養人工物とは結合しないということ
を確かめた。正常の、形成異常の及び悪性の乳房組織に
おいて、ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１によって同定される抗
原の分布状態を、ホルマリン及びＢ−５で固定された組
織を用いて決定した。Ｂ−５固定化は、いっそうすぐれ
た細胞学的な詳細を提供した。 【００５５】アビジン−ビオチン イムノパーオキシダ
ーゼ染色を用いて、ＵＣＤ／ＡＢ６．１１は、正常な筋
上皮、支質、又は管腔分泌生成物とではなく、正常な前
泌乳性上皮細胞に結合することが見出された。ＵＣＤ／
ＡＢ ６．１１によって検出される抗原は、まず第１に
核上顆粒に位置決定されたこの抗原は、乳球間に斑点状
分布を有し、その結果陽性的に染色する乳球が、しばし
ば陰性的に染色する乳球に隣接しているのを見出され
た。多くの場合、個々の乳球内の隣接する細胞は、選択
的に陽性及び陰性であった。 【００５６】イムノパーオキシダーゼにより染色された
乳癌細胞のパラフィン切片９０％（１８／２０）は、Ｕ
ＣＤ／ＡＢ ６．１１のためには陽性であった。特定の
組織切片における悪性細胞のほとんどは染色した。顆粒
及び表面染色も観察されたけれども、この染色パター
は、一般的に拡散的であり且つ細胞質的であった。染色
は、隣接する正常細胞においてよりも腫瘍細胞において
ひじょうに濃かった。染色は、また第１次乳房腫瘍癌に
おいてよりも転移性腫瘍細胞においてより濃かった。こ
れらの結果は、転移性乳癌細胞において、抗原の生成が
増大しているということを示す。 【００５７】いくらかの、しかしすべてではない乳房形
成異常（線維嚢胞疾患）がＵＣＤ／ＡＢ ６．１１によ
り染色された。ＭＣＦ−７組織培養培地からの６．１１
抗体によるイムノクロマトグラフィによって単離された
抗原による免疫化から得られる第２世代のモノクローナ
ル抗体を、シリーズ１０と命名した。さらに特徴付けそ
して試験するために選択された特定の抗体は、ＵＣＤ／
ＰＲ １０．０２，ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１、及びＵ
ＣＤ／ＰＲ １０．１２であった。 【００５８】ＵＣＤ／ＰＲは、タイプ１８サイトケラチ
ンと反応するが、しかしＵＣＤ／ＡＢ ６．１１（６．
１１抗原）によって認識される抗原へのＵＣＤ／ＡＢ
６．１１又はＵＣＤ／ＰＲ １０．１１の結合を抑制し
ないネズミIgM である。ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１は、
６．１１抗原及びタイプ８サイトケラチン並びにより低
い程度では、タイプ８サイトケラチンと反応するネズミ
IgG である。ＵＣＤ／ＰＲ １０．１２は、６．１１抗
原と反応するネズミIgM である。１８６−ＮＷＴ細胞か
らの（６．１１抗体によるイムノクロマトグラフィによ
って単離された）抗原による免疫化から得られる第２世
代のモノクローナル抗体を、シリーズ７と命名する。Ｕ
ＣＤ／ＰＲ ７．０１と命名された１つの特定の抗体
は、筋上皮細胞に対して特異的であるということが見出
された。 【００５９】２．細胞表面抗原 免疫沈殿法及びこれに続くラクトパーオキシダーゼによ
る生細胞の細胞表面タンパク質のヨード化を用いて、Ｕ
ＣＤ／ＡＢ ６．１１によって同定される抗原の細胞表
面位置をさらに特徴づけた。このデータは、細胞がエス
トラジオールにより又はエストラジンによらないで増殖
される時、抗原が細胞表面上に位置するということを示
した。 【００６０】３．異なるケラチン−関連タンパク質との
抗原の反応性 細胞内ケラチン−関連タンパク質の３つの型（タイプ
８，１８及び１９に関する）が、ＭＣＦ−７乳癌細胞系
中に同定された。これらのタンパク質は、約５２，４
６、及び４６kdの分子量及びそれぞれ６．１〜６．０，
５．８〜５．３、及び５．２〜５．０の範囲内に等電点
を有することが推定された。観察される多重等電点形
は、多種のケラチンの種々のリン酸化に少なくとも部分
的に基くと信じられている。 【００６１】抗−ケラチンモノクローナル抗体を用いる
イムノブロットは、おのおののタンパク質型に対するお
のおのの抗体の異なる結合パターンをもたらす。たとえ
ば、３５βＨ１１抗体は、すべての３つのＭＣＦ−７細
胞ケラチン−関係のタンパク質を認識し、一方ＡＥ１，
ＵＣＤ／ＡＢ ６．０１，ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１及び
ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１のおのおのは、種々のタンパ
ク質型を区別した。第１表を参照のこと。 【００６２】 【表１】 【００６３】４．６．１１及び１０．１１によって認識
されるエピトープの組織分布 モノクローナル抗体ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１及びＵＣＤ
／ＰＲ １０．１１によって認識されるエピトープの組
織分布を決定し、そして免疫診断におけるこれらの抗体
の実用性を評価するために、多数のホルマリン又はＢ５
−固定のパラフィン組織切片を、アビジン−ビオチン
イムノパーオキシダーゼ法によってスクリーニングし
た。結果は、下の表２〜４に示されている。組織学的に
正常な組織において、両抗体は、乳腺、肝腺及び唾液
腺、胃及び腸粘膜、及び腎臓の遠位尿細管を含む単純上
皮を染色した。両抗体は、神経及び血液要素との反応に
は機能しないが、しかしＵＣＤ／ＡＢ ６．１１（しか
しＵＣＤ／ＰＲ １０．１１ではない）は、しばしば平
滑筋の成分と弱く反応した。 【００６４】 【表２】 【００６５】 【表３】 【００６６】 【表４】【００６７】５．生細胞上のエピトープ分布状態 生きている、無傷のＭＣＦ−７細胞に間接的イミノフル
オレセンスを実施することによって細胞表面エピトープ
に結合する細胞表面を可視化した。ＵＣＤ／ＡＢ ６．
０１及びＵＣＤ／ＡＢ ６．１１が、細胞と細胞の接解
の濃縮領域に伴って、全細胞表面に分散された斑文状の
抗原を同定した。細胞表面エピトープは軽いトリプシン
処理によって容易に取り除かれ、パッチ形成又はキャッ
プ形成の形跡を示さず、そして細胞が血清−含有又は血
清−不含培地のいづれかで増殖する場合、存在した。し
かしながら、ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１，３５βＨ１１
及びＡＥ１によって認識されたエピトープは、類似の間
接的イムノフルオレセンス実験では検出され得なかっ
た。 【００６８】６．分泌された６．１１抗原の特徴付け ケラチンに関係する抗原は、また腫瘍性乳房組織培養培
地において可溶性タンパク質として見出され得る。ＭＣ
Ｆ−７，Ｔ４７Ｄ、及びＳＫ−ＢＲ３ ヒト乳房細胞系
からの培養液は、それぞれケラチンのような免疫活性を
含んでいることが見出されている。試験された５つのモ
ノクローナル抗体のうち４つが、ＭＣＦ−７培養上清液
からの抗原に結合し（第３表）、そしてこの抗原は４０
〜４６キロダルトンの分子量範囲及び５．０〜５．２の
等電点を有する。追加実験は、ＭＣＦ−７組織培養抗原
が３．６Ｓの沈降係数及び１．２５ｇ／cm³ の浮力密度
を持つということを示した。 【００６９】 【表５】 【００７０】従って、このＭＣＦ−７細胞外抗原は、細
胞内サイトケラチンに関係しているようである。まず、
非乳房ケラチン（たとえば３５βＨ１１及びＡＥ１）に
対して生じた抗体は、その抗原を認識する。第２に、ハ
イブリドーマが免疫アフィニティにより精製されたＭＣ
Ｆ−７組織液抗原により免疫化されたマウスから生産さ
れる場合、この得られる抗体（たとえば、ＵＣＤ／ＰＲ
１０．１１）は、非乳房ケラチンと広く反応する。第
３に、精製されたＭＣＦ−７抗原のアミノ酸組成物は、
他のケラチンに見つけられるアミノ酸組成物、特にグリ
シン及びグルタミン酸−グルタミン残基がタンパク質の
総アミノ酸の２５％〜３０％を含んで成るということに
密接に近い。表６を参照のこと。 【００７１】 【表６】 【００７２】７．細胞外サイトケラチンのための血清検
定 ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１をラジオイムノアッセイに使用
し、正常な血清及び乳癌に羅患している患者からの血清
の両者中細胞外サイトケラチンの存在を検定した。この
検定は、マイルなど。（１９７３）〔医学におけるラジ
オイムノアッセイ及びそれに関する方法（“Radioimmun
oassays and Related Procedures in Medicine”）、イ
ンターナショナル アトミック エナージイ エジェン
スィ，ビエナ，オーストリア，ページ１４９〜１６４、
第１巻〕によって記載されている２−部位イムノラジオ
メトリックアッセイ（ＩＲＭＡ）の変法であった。 【００７３】精製されたモノクローナル抗体ＵＣＤ／Ａ
Ｂ ６．１１を、プラスチック マイクロタイター プ
レート ウエル上に吸着せしめた。吸着の後、サンプル
血清を、おのおののウエル中に置いた。細胞外サイトケ
ラチンが、血清サンプル中に存在する場合、固相に結合
したＵＣＤ／ＡＢ ６．１１は、サイトケラチンを捕捉
するために反応した。次に、サイトケラチン上の異なる
エピトープのために特異な過剰に精製したウサギIgG 抗
体を、ミイクロタイターウエル〔ここで、結合している
サイトケラチン（もしあるなら）と反応する〕に導入し
た。 【００７４】次に ¹²⁵Ｉによりラジオラベルしたタンパ
ク質の過剰の量を、ウエル〔ここで、ウサギIgG と反応
する〕に導入した。未結合のラベルされたタンパク質Ａ
を除くために洗浄した後、おのおののウエルの放射能の
量を決定した。従って、細胞外サイトケラチンの量は、
結合している放射能の量に直接的に比例した。サイトケ
ラチンの絶対量を、あらかじめ用意した標準曲線から決
定した。 【００７５】正常な血清を、細胞外サイトケラチンの存
在について検定する場合、得られた値は、１４０〜３２
６０ＣＰＭに対応して０．０２μｇ／ml〜０．８２μｇ
／mlに分布した。乳癌患者についてのこの値は、３４０
〜１０，８００ＣＰＭに対応して０．０５μｇ／ml〜３
３．４μｇ／mlであった。任意のカット−オフとして１
０００ＣＰＭを選択する場合、１４の正常な血清サンプ
ルのうち２（１４％）つが、陽性であった。乳癌患者に
ついては、８３のサンプルのうち３０（３６％）が陽性
であった。従って、血清中の細胞外サイトケラチンの存
在は、上皮腫瘍、たとえば乳癌に羅患している患者中に
は有意に高められる。 【００７６】この発明に従えば、正確且つ敏感な検定
が、生物学的サンプルにおける特定の４２〜４８kdの細
胞タンパク質及び関連する４０〜４６kdの血清タンパク
質の存在を検出するために提供される。この方法は特
に、エストロゲン療法に敏感であるこれらの乳房腫瘍を
同定することのために有用である。この方法は、また、
乳房から転移したエストロゲン−感受性の乳房腫瘍を同
定することのために、そしてそのような腫瘍についての
患者の血清をスクリーニングすることのために有用であ
る。前述の発明は、明確に理解するために、例示的及び
例的な方法によって、いくらか詳細に記載しているけれ
ども、ある変更及び修飾を、付属の請求の範囲内で実施
することができる。 【００７７】この発明は、デパートメント オブ ヘル
ス アンド ヒューマン サービス（Department of He
alth and Human Services)によって与えられた許可番号
Ｎｏ．１ ＣＰ ０１００８下で、政府支援により行な
われた。政府は、この発明に確かな権利を持つ。ハイブ
リドマ細胞系ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１は、１９８３年１
２月８日にアメリカン タイプ カルチャー コレクシ
ョン（American Type Culture Collection）に寄託され
そして受入番号ＨＢ ８４５８を付与された。ハイブリ
ドマ細胞系ＵＣＤ／ＡＢ ６．０１及びＵＣＤ／ＰＲ
１０．１１は、１９８５年１月３日にアメリカン タイ
プ カルチャー コレクションに寄託されそして受入番
号ＨＢ ８６９３及びＨＢ ８６９４をそれぞれ付与さ
れた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 ブラボン，アラン シー. アメリカ合衆国，メリーランド 20331, アンドリュース エア フォース ベイ ス，マルコルム グロウ ユーエスエー エフ メディカル センター（番地な し) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) G01N 33/574 G01N 33/577 C07K 16/32 C12P 21/08

Claims (1)

1. (57)【特許請求の範囲】 １．非上皮起源の腫瘍からの癌腫を識別する方法であっ
   て、抗体ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１を、又はＵＣＤ／Ｐ
   Ｒ １０．１１によって認識されるエピトープ部位に対
   する少なくとも等しい親和性を有する他の抗体を、腫瘍
   細胞のサンプルと一緒にし、そして特異的な抗体−抗原
   複合体の形成を決定することを含んで成る方法。 ２．前記ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１抗体がアメリカンタ
   イプカルチャーコレクションに取得番号ＨＢ８６９４と
   して寄託されているハイブリドマ細胞系からである請求
   項１に記載の方法。