JP2617289B2 - モノクローナル抗体生産性ハイブリドマ細胞系 - Google Patents
モノクローナル抗体生産性ハイブリドマ細胞系Info
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Description
【０００１】本発明は、細胞外サイトケラチン上に存在
するエピトープに対して特異的なハイブリドマ細胞生産
性モノクローナル抗体に関する。腫瘍マーカーの同定を
介して癌を検出しそして診断するための能力は、広範な
興味ある領域である。腫瘍マーカーは、物質、典型的に
はタンパク質、糖タンパク質、多糖、及び同様のもので
あり、これらは腫瘍細胞によって生成されそしてそれら
に特徴的である。しばしば、腫瘍マーカーは、正常細胞
及び腫瘍細胞によって生成される。しかしながら、腫瘍
細胞においては、その生産量は幾分異常である。たとえ
ば、腫瘍マーカーの生産量は、癌細胞においてひじょう
に増加することができる。一方、正常細胞内又は表面上
に通常存在するタンパク質及び他の物質は、その細胞が
悪性になる時、循環内に放出又は与えられるかも知れな
い。従って血清中におけるそのような分泌される物質の
検出が、悪性の症候であることができる。
するエピトープに対して特異的なハイブリドマ細胞生産
性モノクローナル抗体に関する。腫瘍マーカーの同定を
介して癌を検出しそして診断するための能力は、広範な
興味ある領域である。腫瘍マーカーは、物質、典型的に
はタンパク質、糖タンパク質、多糖、及び同様のもので
あり、これらは腫瘍細胞によって生成されそしてそれら
に特徴的である。しばしば、腫瘍マーカーは、正常細胞
及び腫瘍細胞によって生成される。しかしながら、腫瘍
細胞においては、その生産量は幾分異常である。たとえ
ば、腫瘍マーカーの生産量は、癌細胞においてひじょう
に増加することができる。一方、正常細胞内又は表面上
に通常存在するタンパク質及び他の物質は、その細胞が
悪性になる時、循環内に放出又は与えられるかも知れな
い。従って血清中におけるそのような分泌される物質の
検出が、悪性の症候であることができる。
【０００２】癌診断において遭遇するもう一つの問題
は、第１次及び転移性腫瘍の両者の細胞起源を同定する
ことに関する。両タイプの腫瘍に関しては、異なる細胞
起源の腫瘍、たとえば上皮起源の腫瘍（癌）、非上皮の
結合組織に由来する腫瘍（肉腫）、及びリンパ腫瘍（リ
ンパ腫）の間で形態的に区別することは時々困難であ
る。さらに、乳房上皮癌に関しては、管上皮組織、分泌
上皮組織、及び筋上皮組織に由来する腫瘍間で区別する
ことは、しばしば困難である。
は、第１次及び転移性腫瘍の両者の細胞起源を同定する
ことに関する。両タイプの腫瘍に関しては、異なる細胞
起源の腫瘍、たとえば上皮起源の腫瘍（癌）、非上皮の
結合組織に由来する腫瘍（肉腫）、及びリンパ腫瘍（リ
ンパ腫）の間で形態的に区別することは時々困難であ
る。さらに、乳房上皮癌に関しては、管上皮組織、分泌
上皮組織、及び筋上皮組織に由来する腫瘍間で区別する
ことは、しばしば困難である。
【０００３】従って、これまでに認識されていない腫瘍
マーカー、特に、循環中に分泌されそして血清検定によ
って同定することができる腫瘍マーカーを同定すること
が望ましい。また、特定の腫瘍の細胞起源の決定を可能
にする方法及び組成物を開発することが望ましい。
マーカー、特に、循環中に分泌されそして血清検定によ
って同定することができる腫瘍マーカーを同定すること
が望ましい。また、特定の腫瘍の細胞起源の決定を可能
にする方法及び組成物を開発することが望ましい。
【０００４】
【従来の技術の記載】エストラジオール刺激に応じてあ
る乳房細胞系によって放出される５２，０００ドルトン
のタンパク質が同定されている。Ｗｅｓｔｌｅｙ及びＲ
ｏｃｈｅｆｏｒｔ、セル（Ｃｅｌｌ）（１９８０）２
０：３５３〜３３６２、及びＶｅｉｔｈなど。キャンサ
ーリサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（１９
８３）４３：１８６１〜１８６８を参照のこと。ＭＣＦ
−７ヒト乳癌細胞系に対して生じるモノクローナル抗体
は、２４キロドルトンのサイトゾルタンパク質を同定す
ることが示されている。Ｃｉｏｃｃａなど。キャンサー
リサーチ（ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ）（１９８
２）４２：４２５６〜４２５８。組織ポリペプチド抗原
（ＴＰＡ）と称されるタンパク質は、上皮細胞の細胞質
中間線維に関係している。ＴＰＡは、血清中において及
び細胞表面マーカーとして両方ともの腫瘍マーカーであ
ると報告されている。Ａｌｔｍａｎｎｓｂｅｒｇｅｒな
ど。Ｖｉｒｃｈｏｗｓ Ａｒｃｈ．〔セルパソロジイ
（Ｃｅｌｌ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ）〕（１９８１）３
７：２７７〜２８４（この場合、乳癌細胞がプリケラチ
ンに対する抗体と反応し）：Ｗａｇｎｅｒなど。オース
トラリアン アンド ニュージーランド ジャーナル
オブ サージェリイ（Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ ａｎｄ
Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｕ
ｒｇｅｒｙ）（１９８２）５２：４１〜４３（この場
合、ＴＰＡの高められた血清レベルが胃及び腸癌に苦し
むいくらかの患者に検出され）：Ｍｒｏｓｓなど。Ｋｌ
ｉｎ． Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ（１９８３）６１：４６
１〜４６８（この場合、ＴＰＡの高められた血清レベル
が乳癌に苦しむいくらかの患者に見つけられ）そしてＬ
ｕｎｉｎｇ及びＮｉｌｓｏｎ。アクタ ケミカ スカン
ジナビカ（Ａｃｔａ Ｃｈｅｍｉｃａ Ｓｃａｎｄｉｎ
ａｖｉｃａ）（１９８３）３７：７３１〜７５３（この
場合、表皮ケラチンを含む、ＴＰＡ及びある線維性タン
パク質間の一部相同の配列が報告された）を参照のこ
と。スウェーデンのブロマにあるＳａｎｇｔｅｃ Ｍｅ
ｄｉｃａｌは、商標Ｐｒｏｌｉｆｉｇｒｅｎ登録商標Ｒ
ＩＡキットのもとで血清及び血漿中のＴＰＡの検出のた
めのキットを発売している。Ｍａｒｉｒｅｓｓｅなど。
ジャーナル オブ ステロイド バイオケミストリイ
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＳｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ）（１９８１）１５：３７５〜３８１は、
ＭＣＦ−７細胞の培養培地での約５０kdの低転換速度の
タンパク質の存在を報告している。ケラチンの血清学的
検出が、癌患者において報告されている。Ｍａｄｒｉな
ど。ラボラトリイ インベスティゲーション（Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ）（１９８
３）４８：９８〜１０７。
る乳房細胞系によって放出される５２，０００ドルトン
のタンパク質が同定されている。Ｗｅｓｔｌｅｙ及びＲ
ｏｃｈｅｆｏｒｔ、セル（Ｃｅｌｌ）（１９８０）２
０：３５３〜３３６２、及びＶｅｉｔｈなど。キャンサ
ーリサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（１９
８３）４３：１８６１〜１８６８を参照のこと。ＭＣＦ
−７ヒト乳癌細胞系に対して生じるモノクローナル抗体
は、２４キロドルトンのサイトゾルタンパク質を同定す
ることが示されている。Ｃｉｏｃｃａなど。キャンサー
リサーチ（ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ）（１９８
２）４２：４２５６〜４２５８。組織ポリペプチド抗原
（ＴＰＡ）と称されるタンパク質は、上皮細胞の細胞質
中間線維に関係している。ＴＰＡは、血清中において及
び細胞表面マーカーとして両方ともの腫瘍マーカーであ
ると報告されている。Ａｌｔｍａｎｎｓｂｅｒｇｅｒな
ど。Ｖｉｒｃｈｏｗｓ Ａｒｃｈ．〔セルパソロジイ
（Ｃｅｌｌ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ）〕（１９８１）３
７：２７７〜２８４（この場合、乳癌細胞がプリケラチ
ンに対する抗体と反応し）：Ｗａｇｎｅｒなど。オース
トラリアン アンド ニュージーランド ジャーナル
オブ サージェリイ（Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ ａｎｄ
Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｕ
ｒｇｅｒｙ）（１９８２）５２：４１〜４３（この場
合、ＴＰＡの高められた血清レベルが胃及び腸癌に苦し
むいくらかの患者に検出され）：Ｍｒｏｓｓなど。Ｋｌ
ｉｎ． Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ（１９８３）６１：４６
１〜４６８（この場合、ＴＰＡの高められた血清レベル
が乳癌に苦しむいくらかの患者に見つけられ）そしてＬ
ｕｎｉｎｇ及びＮｉｌｓｏｎ。アクタ ケミカ スカン
ジナビカ（Ａｃｔａ Ｃｈｅｍｉｃａ Ｓｃａｎｄｉｎ
ａｖｉｃａ）（１９８３）３７：７３１〜７５３（この
場合、表皮ケラチンを含む、ＴＰＡ及びある線維性タン
パク質間の一部相同の配列が報告された）を参照のこ
と。スウェーデンのブロマにあるＳａｎｇｔｅｃ Ｍｅ
ｄｉｃａｌは、商標Ｐｒｏｌｉｆｉｇｒｅｎ登録商標Ｒ
ＩＡキットのもとで血清及び血漿中のＴＰＡの検出のた
めのキットを発売している。Ｍａｒｉｒｅｓｓｅなど。
ジャーナル オブ ステロイド バイオケミストリイ
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＳｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ）（１９８１）１５：３７５〜３８１は、
ＭＣＦ−７細胞の培養培地での約５０kdの低転換速度の
タンパク質の存在を報告している。ケラチンの血清学的
検出が、癌患者において報告されている。Ｍａｄｒｉな
ど。ラボラトリイ インベスティゲーション（Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ）（１９８
３）４８：９８〜１０７。
【０００５】
【発明の要約】この発明は、第１次及び転移性上皮腫
瘍、特に上皮乳房腫瘍を検出しそしてモニターするため
に有用な組成物を提供する。細胞外サイトケラチンは、
約４０〜４６キロドルトンの分子量を有しそして腫瘍性
上皮細胞の細胞表面上に見出される約４２〜４８kdのタ
ンパク質に関係している。細胞外サイトケラチン及び細
胞表面タンパク質の両者は、今度は、細胞内サイトケラ
チンに関係しているが、しかし細胞外サイトケラチン
は、ブロックされているＮ−末端を有しそして水性溶液
に溶解する点において、細胞内サイトキシン及び細胞表
面サイトケラチンの両者と異なる。細胞外サイトキシン
の検出は、ハイブリドーマ細胞系、ＵＣＤ／ＡＢ ６．
１１，「ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１」に由来するモノク
ローナル抗体又は「類似の特異性を」有する他の抗体と
の反応によって便利に達成することができる。
瘍、特に上皮乳房腫瘍を検出しそしてモニターするため
に有用な組成物を提供する。細胞外サイトケラチンは、
約４０〜４６キロドルトンの分子量を有しそして腫瘍性
上皮細胞の細胞表面上に見出される約４２〜４８kdのタ
ンパク質に関係している。細胞外サイトケラチン及び細
胞表面タンパク質の両者は、今度は、細胞内サイトケラ
チンに関係しているが、しかし細胞外サイトケラチン
は、ブロックされているＮ−末端を有しそして水性溶液
に溶解する点において、細胞内サイトキシン及び細胞表
面サイトケラチンの両者と異なる。細胞外サイトキシン
の検出は、ハイブリドーマ細胞系、ＵＣＤ／ＡＢ ６．
１１，「ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１」に由来するモノク
ローナル抗体又は「類似の特異性を」有する他の抗体と
の反応によって便利に達成することができる。
【０００６】この発明の組成物は、また種々の上皮腫瘍
の細胞起源を同定するために有用である。上皮サイトケ
ラチン、特にＵＣＤ／ＰＲ １０．１１と反応できるモ
ノクローナル抗体は、非上皮腫瘍、たとえば肉腫及びリ
ンパ腫と上皮腫瘍（癌）を区別するのに利用することが
できる。その上、抗体のグループ又はパネルを管上皮、
分泌上皮、及び筋上皮起源の第１次及び転移性乳房腫瘍
の間の区別をするために利用することができる。
の細胞起源を同定するために有用である。上皮サイトケ
ラチン、特にＵＣＤ／ＰＲ １０．１１と反応できるモ
ノクローナル抗体は、非上皮腫瘍、たとえば肉腫及びリ
ンパ腫と上皮腫瘍（癌）を区別するのに利用することが
できる。その上、抗体のグループ又はパネルを管上皮、
分泌上皮、及び筋上皮起源の第１次及び転移性乳房腫瘍
の間の区別をするために利用することができる。
【０００７】
【特定の態様の記載】組成物は、上皮腫瘍、特に乳房上
皮腫瘍の検出、同定、及びモニターリングのために提供
される。正常及び腫瘍性上皮細胞の両者は、細胞表面上
の約４２〜４８キロドルトン（kd）のタンパク質（これ
は、細胞内サイトケラチンに免疫学的に及び組成的に関
係している）によって特徴づけられることが見つけられ
た。また、サイトケラチン関連タンパク質の低分子形
（約４０〜４６kd）が正常及び腫瘍性細胞の両者によっ
て放出されるがしかし腫瘍性細胞からの放出速度は相当
に高いということが見出された。従って血清中のそのよ
うな細胞外サイトケラチンの存在について検定すること
によって、患者集団を、上皮新生物についてスクリーン
することができる。この検定は特に上皮新生物のために
治療を受けている患者の経過をモニターするために適切
である。
皮腫瘍の検出、同定、及びモニターリングのために提供
される。正常及び腫瘍性上皮細胞の両者は、細胞表面上
の約４２〜４８キロドルトン（kd）のタンパク質（これ
は、細胞内サイトケラチンに免疫学的に及び組成的に関
係している）によって特徴づけられることが見つけられ
た。また、サイトケラチン関連タンパク質の低分子形
（約４０〜４６kd）が正常及び腫瘍性細胞の両者によっ
て放出されるがしかし腫瘍性細胞からの放出速度は相当
に高いということが見出された。従って血清中のそのよ
うな細胞外サイトケラチンの存在について検定すること
によって、患者集団を、上皮新生物についてスクリーン
することができる。この検定は特に上皮新生物のために
治療を受けている患者の経過をモニターするために適切
である。
【０００８】中間線維は、多くの細胞型における細胞体
質の主成分である。乳腺のような組織の上皮細胞は、ケ
ラチンから成る「不溶性」中間線維を含む。サイトケラ
チンと称するこれらのタンパク質は、正常及び腫瘍性乳
房細胞の両者中に見つけられそしてタイプ１から１９
〔Ｍｏｌｌなど。セル（Ｃｅｌｌ）（１９８２）３１：
１１〕と称する少なくとも１９の異なるタンパク質のグ
ループを含んで成る。これまで、そのようなサイトケラ
チンは、細胞内サイトケラチンタンパク質であると信じ
られていた。しかしながら後の実験部分に報告されてい
る研究は、そのような細胞内サイトケラチンに免疫学的
に及び組成的に関連しているタンパク質を、細胞表面上
でも見出すことができ、そして細胞から分泌され得ると
いうことを証明している。
質の主成分である。乳腺のような組織の上皮細胞は、ケ
ラチンから成る「不溶性」中間線維を含む。サイトケラ
チンと称するこれらのタンパク質は、正常及び腫瘍性乳
房細胞の両者中に見つけられそしてタイプ１から１９
〔Ｍｏｌｌなど。セル（Ｃｅｌｌ）（１９８２）３１：
１１〕と称する少なくとも１９の異なるタンパク質のグ
ループを含んで成る。これまで、そのようなサイトケラ
チンは、細胞内サイトケラチンタンパク質であると信じ
られていた。しかしながら後の実験部分に報告されてい
る研究は、そのような細胞内サイトケラチンに免疫学的
に及び組成的に関連しているタンパク質を、細胞表面上
でも見出すことができ、そして細胞から分泌され得ると
いうことを証明している。
【０００９】この発明によって同定された細胞表面サイ
トケラチン及び細胞外サイトケラチンは、構造的に及び
免疫学的に既知の細胞内サイトケラチンに関連している
がしかし同一ではない。構造的に関連があるということ
は細胞外／細胞表面のサイトケラチン及び細胞内サイト
ケラチンの間で少なくとも６０％の相同性普通７５％又
はそれより大きな相同性が存在するということを意味す
る。免疫学的に関連があるということは、サイトケラチ
ン内で共通な少なくとも１つのエピトープ部位、普通多
数のエピトープ部位しかし、すべてのエピトープ部位よ
りも少ない部位が存在するであろうことを意味する。乳
房上皮細胞の典型的な場合においては、タイプ８，１８
及び１９の細胞内サイトケラチンと免疫学的に交叉反応
をする少なくとも３つのエピトープが細胞表面サイトケ
ラチン上に存在するということが見出される。乳房上皮
細胞から放出される細胞外サイトケラチンは、タイプ８
及びタイプ１８の細胞内サイトケラチンと最っとも強く
交叉反応し、そして水性溶液中で可溶性である。細胞外
サイトケラチンは、ブロックされているＮ−末端を有す
るということも、さらに見出される。
トケラチン及び細胞外サイトケラチンは、構造的に及び
免疫学的に既知の細胞内サイトケラチンに関連している
がしかし同一ではない。構造的に関連があるということ
は細胞外／細胞表面のサイトケラチン及び細胞内サイト
ケラチンの間で少なくとも６０％の相同性普通７５％又
はそれより大きな相同性が存在するということを意味す
る。免疫学的に関連があるということは、サイトケラチ
ン内で共通な少なくとも１つのエピトープ部位、普通多
数のエピトープ部位しかし、すべてのエピトープ部位よ
りも少ない部位が存在するであろうことを意味する。乳
房上皮細胞の典型的な場合においては、タイプ８，１８
及び１９の細胞内サイトケラチンと免疫学的に交叉反応
をする少なくとも３つのエピトープが細胞表面サイトケ
ラチン上に存在するということが見出される。乳房上皮
細胞から放出される細胞外サイトケラチンは、タイプ８
及びタイプ１８の細胞内サイトケラチンと最っとも強く
交叉反応し、そして水性溶液中で可溶性である。細胞外
サイトケラチンは、ブロックされているＮ−末端を有す
るということも、さらに見出される。
【００１０】生物学的液体、たとえば血清中での細胞外
サイトケラチンの検出は、上皮癌の状態に関係があり得
る。腫瘍性上皮細胞は、正常な上皮細胞と比較して増大
された速度でサイトケラチンを放出し、そして血清中の
サイトケラチンレベルを疾患状態と関係することをでき
ることが観察される。たとえば、腫瘍が外科的に取り除
かれ又は他の形の治療によってその後退が誘発された
後、血清中のサイトケラチンレベルが、減少することが
予想され得る。従って患者の血清レベルをモニターする
ことによって増大した腫瘍負荷（第１次又は転移性いづ
れか）の特徴である細胞外サイトケラチンの増加レベル
を検出することができる。
サイトケラチンの検出は、上皮癌の状態に関係があり得
る。腫瘍性上皮細胞は、正常な上皮細胞と比較して増大
された速度でサイトケラチンを放出し、そして血清中の
サイトケラチンレベルを疾患状態と関係することをでき
ることが観察される。たとえば、腫瘍が外科的に取り除
かれ又は他の形の治療によってその後退が誘発された
後、血清中のサイトケラチンレベルが、減少することが
予想され得る。従って患者の血清レベルをモニターする
ことによって増大した腫瘍負荷（第１次又は転移性いづ
れか）の特徴である細胞外サイトケラチンの増加レベル
を検出することができる。
【００１１】この発明は、また腫瘍細胞の細胞起源を決
定するために腫瘍細胞をスクリーニングするのに有用で
ある。腫瘍細胞におけるサイトケラチンの存在は、その
細胞の上皮起源を診断するものである。従って、細胞サ
イトケラチンに対して特異な抗体との反応によって非上
皮腫瘍と上皮腫瘍を区別することができる。さらに、サ
イトケラチンと反応することができる抗体は、管上皮、
分泌上皮及び筋上皮の乳房細胞間を識別することができ
るということが見出された。従って、乳房上皮細胞のお
のおのの型と反応するが、しかし乳房上皮細胞の他の２
つの型とは実質的に反応性が「低い典型的にはキットと
してパッケージされる抗体の」グループ又はパネルを使
用することによって、乳房腫瘍の細胞起源を、組織化学
的染色技法により便利に決定することができる。通常の
技法により抗体との反応性を基礎にして、陽性及び陰性
のサンプルを評価することが可能であろうことが、“実
質的に反応性が低い”ということによって意味される。
腫瘍の細胞起源の知識は、治療の適切な態様を選択する
場合に有用である。
定するために腫瘍細胞をスクリーニングするのに有用で
ある。腫瘍細胞におけるサイトケラチンの存在は、その
細胞の上皮起源を診断するものである。従って、細胞サ
イトケラチンに対して特異な抗体との反応によって非上
皮腫瘍と上皮腫瘍を区別することができる。さらに、サ
イトケラチンと反応することができる抗体は、管上皮、
分泌上皮及び筋上皮の乳房細胞間を識別することができ
るということが見出された。従って、乳房上皮細胞のお
のおのの型と反応するが、しかし乳房上皮細胞の他の２
つの型とは実質的に反応性が「低い典型的にはキットと
してパッケージされる抗体の」グループ又はパネルを使
用することによって、乳房腫瘍の細胞起源を、組織化学
的染色技法により便利に決定することができる。通常の
技法により抗体との反応性を基礎にして、陽性及び陰性
のサンプルを評価することが可能であろうことが、“実
質的に反応性が低い”ということによって意味される。
腫瘍の細胞起源の知識は、治療の適切な態様を選択する
場合に有用である。
【００１２】細胞サイトケラチン及び細胞外サイトケラ
チンの存在は、タンパク質と反応する抗体を用いる通常
のイムノアッセイ又は組織化学的染色技法を免疫学的に
使用して便利に決定することができる。免疫原として、
細胞サイトケラチンもしくは細胞外サイトケラチン、又
はそれらの抗原性フラグメントのいづれかを通常に使用
して（下に記載されているように）そのような抗体を生
産することができる。乳房腫瘍細胞系からの完全な又は
溶解した細胞を、免疫原として便利に使用することがで
きる。一方、サイトケラチンに特異な抗体を利用して、
血清、第１次腫瘍細胞、又は腫瘍細胞系からサイトケラ
チンを単離し、免疫原として使用するための精製された
る抗原を得ることができる。
チンの存在は、タンパク質と反応する抗体を用いる通常
のイムノアッセイ又は組織化学的染色技法を免疫学的に
使用して便利に決定することができる。免疫原として、
細胞サイトケラチンもしくは細胞外サイトケラチン、又
はそれらの抗原性フラグメントのいづれかを通常に使用
して（下に記載されているように）そのような抗体を生
産することができる。乳房腫瘍細胞系からの完全な又は
溶解した細胞を、免疫原として便利に使用することがで
きる。一方、サイトケラチンに特異な抗体を利用して、
血清、第１次腫瘍細胞、又は腫瘍細胞系からサイトケラ
チンを単離し、免疫原として使用するための精製された
る抗原を得ることができる。
【００１３】通常の技法に従って広範囲の種類の脊椎動
物中に所望の免疫原を注入することによって抗体を得る
ことができる。適当な脊椎動物は、マウス、ラット、羊
及びヤギ、を含み、特にマウスが適切である。普通、改
良された力価及び特異性を有する、逐次的な放血により
定期的に動物から採血する。抗原は、筋肉内に、腹腔内
に、皮下に又はこれらと同様にして注入することができ
る。普通、完全又は不完全フロインドアジュバンドのよ
うな賦形剤が使用される。所望によりモノクローナル抗
体を製造することができる。
物中に所望の免疫原を注入することによって抗体を得る
ことができる。適当な脊椎動物は、マウス、ラット、羊
及びヤギ、を含み、特にマウスが適切である。普通、改
良された力価及び特異性を有する、逐次的な放血により
定期的に動物から採血する。抗原は、筋肉内に、腹腔内
に、皮下に又はこれらと同様にして注入することができ
る。普通、完全又は不完全フロインドアジュバンドのよ
うな賦形剤が使用される。所望によりモノクローナル抗
体を製造することができる。
【００１４】モノクローナル抗体を得るために、免疫化
されたる脊椎動物からの脾臓細胞が不滅にされる。不滅
化の方法は臨界ではない。現在、最っとも通常な方法
は、骨髓腫融合パートナーによる融合である。他の技法
は、ＥＢＶ形質転換、裸のＤＮＡ、たとえば、腫瘍遺伝
子、レトロビールス、等による形質転換、又は細胞系の
安定維持及びモノクローナル抗体の生成をもたらすいづ
れか他の方法を含む。ヒトモノクローナル抗体は、適切
なヒト融合パートナー、たとえばＷＩ−Ｌ２と脾臓細胞
の融合によって得ることができる（ヨーロッパ出願番号
８２．３０１１０３．６に記載され、これと関連する部
分を、引用によりこの明細書に組み入れる）。マウス×
マウスモノクローナル抗体を生成するための詳しい技法
は、Ｏｉ及Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇの“細胞免疫学におけ
る選択法（Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ），”Ｍｉｓ
ｈｅｌｌ及びＳｈｉｉｇｉ（出版）、Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅ
ｅｍａｎ及びＣｏ．，サンフランシスコ（１９８０）ペ
ージ３５１〜３７２によって教示されている。この発明
の抗体は、いづれかの免疫グロブリンクラス、すなわち
ＩｇＧ１，ＩｇＧ２ａ、及びＩｇＧ２ｂを含むＩｇＧ，
ＩｇＡ，ＩｇＤ，ＩｇＥ、並びにＩｇＭ、普通ＩｇＧ又
はＩｇＭであることができる。
されたる脊椎動物からの脾臓細胞が不滅にされる。不滅
化の方法は臨界ではない。現在、最っとも通常な方法
は、骨髓腫融合パートナーによる融合である。他の技法
は、ＥＢＶ形質転換、裸のＤＮＡ、たとえば、腫瘍遺伝
子、レトロビールス、等による形質転換、又は細胞系の
安定維持及びモノクローナル抗体の生成をもたらすいづ
れか他の方法を含む。ヒトモノクローナル抗体は、適切
なヒト融合パートナー、たとえばＷＩ−Ｌ２と脾臓細胞
の融合によって得ることができる（ヨーロッパ出願番号
８２．３０１１０３．６に記載され、これと関連する部
分を、引用によりこの明細書に組み入れる）。マウス×
マウスモノクローナル抗体を生成するための詳しい技法
は、Ｏｉ及Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇの“細胞免疫学におけ
る選択法（Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ），”Ｍｉｓ
ｈｅｌｌ及びＳｈｉｉｇｉ（出版）、Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅ
ｅｍａｎ及びＣｏ．，サンフランシスコ（１９８０）ペ
ージ３５１〜３７２によって教示されている。この発明
の抗体は、いづれかの免疫グロブリンクラス、すなわち
ＩｇＧ１，ＩｇＧ２ａ、及びＩｇＧ２ｂを含むＩｇＧ，
ＩｇＡ，ＩｇＤ，ＩｇＥ、並びにＩｇＭ、普通ＩｇＧ又
はＩｇＭであることができる。
【００１５】特に有用なモノクローナル抗体がこの発明
において使用のために製造されている。抗体ＵＣＤ／Ａ
Ｂ ６．１１は、上皮サイトケラチンの細胞内、細胞表
面、及び細胞外形と、特に分泌上皮細胞に特徴的である
タイプ１８サイトケラチンと反応的である。抗体ＵＣＤ
／ＰＲ １０．１１は、サイトケラチンの細胞内及び細
胞外形と、特に管上皮細胞に特徴的であるタイプ８サイ
トケラチンと反応的である。ＵＣＤ／ＰＲ ７．０１
は、筋上皮細胞に特徴的である抗原の細胞内及び細胞外
形と反応的である。これらの３つの抗体は、特に、され
らが管起源、分泌起源、又は筋上皮起源であるかどうか
を決定するために腫瘍性上皮細胞をスクリーニングする
のに適切である。
において使用のために製造されている。抗体ＵＣＤ／Ａ
Ｂ ６．１１は、上皮サイトケラチンの細胞内、細胞表
面、及び細胞外形と、特に分泌上皮細胞に特徴的である
タイプ１８サイトケラチンと反応的である。抗体ＵＣＤ
／ＰＲ １０．１１は、サイトケラチンの細胞内及び細
胞外形と、特に管上皮細胞に特徴的であるタイプ８サイ
トケラチンと反応的である。ＵＣＤ／ＰＲ ７．０１
は、筋上皮細胞に特徴的である抗原の細胞内及び細胞外
形と反応的である。これらの３つの抗体は、特に、され
らが管起源、分泌起源、又は筋上皮起源であるかどうか
を決定するために腫瘍性上皮細胞をスクリーニングする
のに適切である。
【００１６】抗体ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１は、また、
それらが上皮起源のものであるかどうかを決定するため
に腫瘍細胞をスクリーニングするのに特に適切である。
ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１抗体は、上皮細胞のために高
い親和性を有しそしてひじょうに低いバックグラウンド
レベルを伴って高度に特異的な染色を提供することが見
出される。
それらが上皮起源のものであるかどうかを決定するため
に腫瘍細胞をスクリーニングするのに特に適切である。
ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１抗体は、上皮細胞のために高
い親和性を有しそしてひじょうに低いバックグラウンド
レベルを伴って高度に特異的な染色を提供することが見
出される。
【００１７】いったん適切な特異性を有する抗体が製造
されたなら、広範囲の種類の免疫学的検定法が利用可能
である。多くのコンピティティブ及び非コンピティティ
ブタンパク質結合検定は、科学及び特許文献に記載さ
れ、そしてそのような検定のひじょうに多くが商業的に
使用可能である。血清抗原を検出するために適切である
典型的なイムノアッセイは、アメリカ合衆国特許番号、
３，７９１，９３２；３，８１７，８３７；３，８３
９，１５３；３，８５０，７５２；３，８５０，５７
８；３，８５３，９８７；３，８６７，５１７；３，８
７９，２６２；３，９０１，６５４；３，９３５，０７
４；３，９８４，５３３；３，９９６，３４５；４，０
３４，０７４；及び４，０９８，８７６に記載されてい
る方法を含む。
されたなら、広範囲の種類の免疫学的検定法が利用可能
である。多くのコンピティティブ及び非コンピティティ
ブタンパク質結合検定は、科学及び特許文献に記載さ
れ、そしてそのような検定のひじょうに多くが商業的に
使用可能である。血清抗原を検出するために適切である
典型的なイムノアッセイは、アメリカ合衆国特許番号、
３，７９１，９３２；３，８１７，８３７；３，８３
９，１５３；３，８５０，７５２；３，８５０，５７
８；３，８５３，９８７；３，８６７，５１７；３，８
７９，２６２；３，９０１，６５４；３，９３５，０７
４；３，９８４，５３３；３，９９６，３４５；４，０
３４，０７４；及び４，０９８，８７６に記載されてい
る方法を含む。
【００１８】イムノアッセイを実施するより前に、ある
種の方法により生物学的サンプルをあらかじめ処理する
ことが普通必要であろう。サンプルの調製法は、生物学
的サンプル源に依存して異なるであろう。固形腫瘍及び
他の組織サンプルは、細胞を溶解することによって調製
されるであろう。血清サンプルは、典型的に、良く知ら
れている方法に従って、全血液を凝固しそして上清液を
単離することによって調製されるであろう。他の生物学
的液体、たとえば精液、痰、及び尿は、また細胞外サイ
トケラチンの存在について検定することができる。
種の方法により生物学的サンプルをあらかじめ処理する
ことが普通必要であろう。サンプルの調製法は、生物学
的サンプル源に依存して異なるであろう。固形腫瘍及び
他の組織サンプルは、細胞を溶解することによって調製
されるであろう。血清サンプルは、典型的に、良く知ら
れている方法に従って、全血液を凝固しそして上清液を
単離することによって調製されるであろう。他の生物学
的液体、たとえば精液、痰、及び尿は、また細胞外サイ
トケラチンの存在について検定することができる。
【００１９】通常の免疫組織化学的染色技法も、また組
織サンプル中のサイトケラチンを検出するために用いる
ことができる。たとえば、組織サンプルを、ホルマリ
ン、Ｂ−５又は他の標準組織学的保存薬中に固定し、脱
水しそしてどの病院の病理実験室においても日常の仕事
であるようなパラフィン中に封入することができる。切
片をパラフィンから切り離しそしてガラススライド上に
置くことができる。次に細胞抗原が、検出されそしてラ
ベルされている抗体及びラベルされている第２抗体に暴
露することによっておのおの位置決定され得る。一方、
細胞学的調製法を用いることができる。たとえば、組織
サンプルからの細胞は、典型的には、生理学的pHで緩衝
液中、ホルマリンに暴露し、次にアセトン中に懸濁しそ
して遠心分離によりゼラチン−被覆のスライド上にペレ
ット化することによって、スライド上に固定することが
できる。次にラベルされている抗体に暴露するか、又は
ラベルされていない抗体及びラベルされている第２抗体
に暴露するかいづれかによって、細胞表面受容体を位置
決定することができる。サンプル中の細胞表面タンパク
質の量は、結合しているラベルの量に直接的に比例す
る。
織サンプル中のサイトケラチンを検出するために用いる
ことができる。たとえば、組織サンプルを、ホルマリ
ン、Ｂ−５又は他の標準組織学的保存薬中に固定し、脱
水しそしてどの病院の病理実験室においても日常の仕事
であるようなパラフィン中に封入することができる。切
片をパラフィンから切り離しそしてガラススライド上に
置くことができる。次に細胞抗原が、検出されそしてラ
ベルされている抗体及びラベルされている第２抗体に暴
露することによっておのおの位置決定され得る。一方、
細胞学的調製法を用いることができる。たとえば、組織
サンプルからの細胞は、典型的には、生理学的pHで緩衝
液中、ホルマリンに暴露し、次にアセトン中に懸濁しそ
して遠心分離によりゼラチン−被覆のスライド上にペレ
ット化することによって、スライド上に固定することが
できる。次にラベルされている抗体に暴露するか、又は
ラベルされていない抗体及びラベルされている第２抗体
に暴露するかいづれかによって、細胞表面受容体を位置
決定することができる。サンプル中の細胞表面タンパク
質の量は、結合しているラベルの量に直接的に比例す
る。
【００２０】放射性同位体のラベルを使用するホールボ
ディイメージング技法は、上皮腫瘍、特に転移した乳癌
の位置を見つけるために利用され得る。この発明の抗
体、又はそれらのフラグメントは、適切な放射性同位
体、典型的にはテクネチウム−９９， 123Ｉ， 125Ｉ、
もしくは 131Ｉ、又はそれらの組合せに結合され、そし
て非経腸的に投与された。ラベルの生体分布状態は、シ
ンチグラフィによってモニターされ、そしてラベルの蓄
積を、エストロゲン感受性の腫瘍性乳房上皮細胞の存在
に関係することができる。ホールボディイメージング技
法は、アメリカ特許第４，０３６，９４５及び４，３１
１，６８８に記載され、この開示を引用によりこの明細
書中に組み入れる。
ディイメージング技法は、上皮腫瘍、特に転移した乳癌
の位置を見つけるために利用され得る。この発明の抗
体、又はそれらのフラグメントは、適切な放射性同位
体、典型的にはテクネチウム−９９， 123Ｉ， 125Ｉ、
もしくは 131Ｉ、又はそれらの組合せに結合され、そし
て非経腸的に投与された。ラベルの生体分布状態は、シ
ンチグラフィによってモニターされ、そしてラベルの蓄
積を、エストロゲン感受性の腫瘍性乳房上皮細胞の存在
に関係することができる。ホールボディイメージング技
法は、アメリカ特許第４，０３６，９４５及び４，３１
１，６８８に記載され、この開示を引用によりこの明細
書中に組み入れる。
【００２１】次の実験は、制限的でなく、例示的に提供
されている。実 験 次の略語が用いられる：ＢＳＡ−ウシ血清アルブミン ＤＣＣ−デキストラン被覆木炭 ＥＲ−エストロジン受容体 ＨＭＦＧＭ−ヒト乳脂肪乳球膜 ＩＥＦ−等電点電気泳動 ＭＣＡ−モノクローナル抗体 ＰＢＳ−リン酸緩衝化食塩溶液（０．０１Ｍのリン酸ナ
トリウム、pH７．３，０．１５Ｍの塩化ナトリウムを含
む） ＲＩＡ−ラジオイムノアッセイ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ−ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアク
リルアミドゲル電気泳動
されている。実 験 次の略語が用いられる：ＢＳＡ−ウシ血清アルブミン ＤＣＣ−デキストラン被覆木炭 ＥＲ−エストロジン受容体 ＨＭＦＧＭ−ヒト乳脂肪乳球膜 ＩＥＦ−等電点電気泳動 ＭＣＡ−モノクローナル抗体 ＰＢＳ−リン酸緩衝化食塩溶液（０．０１Ｍのリン酸ナ
トリウム、pH７．３，０．１５Ｍの塩化ナトリウムを含
む） ＲＩＡ−ラジオイムノアッセイ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ−ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアク
リルアミドゲル電気泳動
【００２２】材料及び方法 細胞系 １．ＭＣＦ−７細胞。ＭＣＦ−７ヒト乳房腫瘍細胞系を
用いて、抗体生産のために免疫化及びスクリーンの両方
を行なった。これは、移転性乳癌を有する患者の胸膜の
滲出液に由来する十分に特徴づけられている細胞系であ
る〔ソウルなど。ジャーナル オブ ナショナル キャ
ンサー リサーチ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＮａｔｉｏｎ
ａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（１９７３）
５１：１４０９〜１４１６〕。エストロゲン及びプロエ
ステロジン受容体の両者を含んでいるということが示さ
れている。 ２．ＨＢＬ−１００。ＨＢＬ−１００は、授乳中の乳房
乳汁サンプルから開発された非腫瘍性ヒト乳房上皮細胞
系である〔ポラノウスキイなどイン ビトロ（Ｉｎ Ｖ
ｉｔｒｏ）（１９７６）１２：３２８〜３３６〕。それ
はエストロゲン受容体を含まない。 ３．１８６−ＮＷＴ。１８６−ＮＷＴは、転移性乳癌を
有する患者からの腹水から開発されたヒト上皮細胞系で
ある。それはいかなる乳房細胞マーカも示さずそしてそ
れはＥＲ陰性である。 ４．Ｐ３×６３Ａｇ ８．６５３。これは、ＭＣＡ生産
のためにハイブリドマ融合パートナーとして用いられる
マウス骨髓腫細胞系である。それは、免疫グロブリン又
はいかなる免疫グロブリン サブユニットも生産しない
〔ケア−ニイなど。ジャーナル オブ イムノロジィ
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）（１
９７９）１２３：１５４８〜１５５５〕。
用いて、抗体生産のために免疫化及びスクリーンの両方
を行なった。これは、移転性乳癌を有する患者の胸膜の
滲出液に由来する十分に特徴づけられている細胞系であ
る〔ソウルなど。ジャーナル オブ ナショナル キャ
ンサー リサーチ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＮａｔｉｏｎ
ａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（１９７３）
５１：１４０９〜１４１６〕。エストロゲン及びプロエ
ステロジン受容体の両者を含んでいるということが示さ
れている。 ２．ＨＢＬ−１００。ＨＢＬ−１００は、授乳中の乳房
乳汁サンプルから開発された非腫瘍性ヒト乳房上皮細胞
系である〔ポラノウスキイなどイン ビトロ（Ｉｎ Ｖ
ｉｔｒｏ）（１９７６）１２：３２８〜３３６〕。それ
はエストロゲン受容体を含まない。 ３．１８６−ＮＷＴ。１８６−ＮＷＴは、転移性乳癌を
有する患者からの腹水から開発されたヒト上皮細胞系で
ある。それはいかなる乳房細胞マーカも示さずそしてそ
れはＥＲ陰性である。 ４．Ｐ３×６３Ａｇ ８．６５３。これは、ＭＣＡ生産
のためにハイブリドマ融合パートナーとして用いられる
マウス骨髓腫細胞系である。それは、免疫グロブリン又
はいかなる免疫グロブリン サブユニットも生産しない
〔ケア−ニイなど。ジャーナル オブ イムノロジィ
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）（１
９７９）１２３：１５４８〜１５５５〕。
【００２３】増殖培地 ハイブリドマ細胞系は、ローズウェル、パークメモリア
ル インスティテュート カルチャーメディアム １６
４０（Ｇｉｂｃｏラボラトリィズ，グランドアイラン
ド，ニューヨーク）（加熱により不活性化されている１
０％子牛血清、１mMピルビン酸ナトリウム、０．１mM非
必須アミノ酸、２mM Ｌ−グルタミン、及び２５μｇ／
mlゲンタマイシンが補充されている）において増殖され
た。ヒト乳房細胞系は、５％子牛又は馬血清のいづれ
か、１μｇ／mlインシュリン、２５μｇ／mlゲンタマイ
シン及び１００nM １７β−エストラジオール（シグマ
ケミカル カンパニイ，セントルイス，ミズウリィ）
を含むダルベッコ改変のイーグル最少必須培地中に維持
された。 ５．細胞系ＡＥ１は、Ｔｓｅｎｇなど。セル（ｃｅｌ
ｌ）（１９８２）３０：３６１〜３７２によって記載さ
れているハイブリドマ細胞系であり、これは、サイトケ
ラチンによる免疫化によって製造された。この細胞系に
よって生産される抗体は、すべて酸性サイトケラチンに
対してそして特にＭＣＦ−７タイプ１９に対して特異的
である。 ６．細胞系βＨ１１は、Ｇｏｗｎ及びＶｏｇｅｌ。ジャ
ーナル オブ セル バイオロジィ（Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｌｇｙ）（１９８２）９
５：４１４〜４２４により記載されているハイブリドマ
細胞系であり、これはサイトケラチンによる免疫化によ
って製造された。この細胞系によって生産される抗体
は、ＭＣＦ−７細胞におけるサイトケラチンタイプ８，
１８及び１９に対して特異的である。
ル インスティテュート カルチャーメディアム １６
４０（Ｇｉｂｃｏラボラトリィズ，グランドアイラン
ド，ニューヨーク）（加熱により不活性化されている１
０％子牛血清、１mMピルビン酸ナトリウム、０．１mM非
必須アミノ酸、２mM Ｌ−グルタミン、及び２５μｇ／
mlゲンタマイシンが補充されている）において増殖され
た。ヒト乳房細胞系は、５％子牛又は馬血清のいづれ
か、１μｇ／mlインシュリン、２５μｇ／mlゲンタマイ
シン及び１００nM １７β−エストラジオール（シグマ
ケミカル カンパニイ，セントルイス，ミズウリィ）
を含むダルベッコ改変のイーグル最少必須培地中に維持
された。 ５．細胞系ＡＥ１は、Ｔｓｅｎｇなど。セル（ｃｅｌ
ｌ）（１９８２）３０：３６１〜３７２によって記載さ
れているハイブリドマ細胞系であり、これは、サイトケ
ラチンによる免疫化によって製造された。この細胞系に
よって生産される抗体は、すべて酸性サイトケラチンに
対してそして特にＭＣＦ−７タイプ１９に対して特異的
である。 ６．細胞系βＨ１１は、Ｇｏｗｎ及びＶｏｇｅｌ。ジャ
ーナル オブ セル バイオロジィ（Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｌｇｙ）（１９８２）９
５：４１４〜４２４により記載されているハイブリドマ
細胞系であり、これはサイトケラチンによる免疫化によ
って製造された。この細胞系によって生産される抗体
は、ＭＣＦ−７細胞におけるサイトケラチンタイプ８，
１８及び１９に対して特異的である。
【００２４】組織検体 正常な及び腫瘍性ヒト乳房組織のパラフィンブロック
は、カリフォールニア，サクラメントのカリフォールニ
ア大学医学センターの医学部病理学科から得られた。ヒト乳脂肪乳球膜 破損されたＨＭＦＧＭは、クロロホルム及びエーテルに
よりヒト乳汁のクリーム画分を抽出することによって製
造された〔Ｃｅｒｉａｎｉなど。プロスィーディング
オブ ザ ナショナル アカデミィ オブ サイエンス
アメリカ合衆国（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔ
ｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ Ｕ．Ｓ．Ａ）（１９７７）７４：５８２〜
５８６〕。
は、カリフォールニア，サクラメントのカリフォールニ
ア大学医学センターの医学部病理学科から得られた。ヒト乳脂肪乳球膜 破損されたＨＭＦＧＭは、クロロホルム及びエーテルに
よりヒト乳汁のクリーム画分を抽出することによって製
造された〔Ｃｅｒｉａｎｉなど。プロスィーディング
オブ ザ ナショナル アカデミィ オブ サイエンス
アメリカ合衆国（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔ
ｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ Ｕ．Ｓ．Ａ）（１９７７）７４：５８２〜
５８６〕。
【００２５】モノクローナル抗体製造 標準的ポリエチレングリコール融合、すなわちＯｉ及び
Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇ。細胞免疫学における選択された
方法（Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅ
ｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）（１９８０），
Ｍｉｓｈｅｌｌ及びＳｈｉｉｇｉ出版、Ｗ．Ｈ． Ｆｒ
ｅｅｍａｎ及びカンパニイ，サンフランシスコ，カリフ
ォールニア、ページ３５１〜３７２によって記載されて
いるようなヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン
選択方法によって行なわれる。抗体生産性クローンは、
Ｔｓｕ及びＨｅｒｚｅｎｂｅｒｇ。前記（１９８０）ペ
ージ３７３〜３９７によって記載されているように固相
ＲＩＡ及びオートラジオグラフィによって、放射性ヨー
ド化されているウサギ抗−マウスＩｇＧにより同定され
た。
Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇ。細胞免疫学における選択された
方法（Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅ
ｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）（１９８０），
Ｍｉｓｈｅｌｌ及びＳｈｉｉｇｉ出版、Ｗ．Ｈ． Ｆｒ
ｅｅｍａｎ及びカンパニイ，サンフランシスコ，カリフ
ォールニア、ページ３５１〜３７２によって記載されて
いるようなヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン
選択方法によって行なわれる。抗体生産性クローンは、
Ｔｓｕ及びＨｅｒｚｅｎｂｅｒｇ。前記（１９８０）ペ
ージ３７３〜３９７によって記載されているように固相
ＲＩＡ及びオートラジオグラフィによって、放射性ヨー
ド化されているウサギ抗−マウスＩｇＧにより同定され
た。
【００２６】生きている無傷のＭＣＦ−７細胞（２×１
０6 細胞）によりＢＡＬＢ／ｃマウスを週１度、４週間
にわたって腹腔内高度免疫した。３週間後、融合の前の
３日間、２×１０6 細胞により４度腹腔内にそのマウス
を免疫した。次に、マウス脾臓細胞をＰ３×６３Ａｇ
８．６５３マウス骨髓腫細胞と共にハイブリド形成し
た。
０6 細胞）によりＢＡＬＢ／ｃマウスを週１度、４週間
にわたって腹腔内高度免疫した。３週間後、融合の前の
３日間、２×１０6 細胞により４度腹腔内にそのマウス
を免疫した。次に、マウス脾臓細胞をＰ３×６３Ａｇ
８．６５３マウス骨髓腫細胞と共にハイブリド形成し
た。
【００２７】第１及び第２レベルのスクリーニングのた
めに完全に生きているＭＣＦ−７及びＨＢＬ−１００細
胞も、また固相ＲＩＡにおいて用いた〔ブラウンなど。
ジャーナル オブ イムノロジカル メソド（Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ）（１９７９）３１：２０１〜２０９〕。生きて
いる細胞を用いて、固定人工物についての選択を避け
た。ＭＣＦ−７を陽性スクリーンとして、ＥＲ陽極細胞
上の抗原に対する抗体を同定した。ＨＢＬ−１００を陰
性スクリーンとして用いて、ＥＲ陰極抗体を同定した。
また正常なヒト乳汁から単離されるＨＭＦＧＭを用い
て、標準固相ＲＩＡにより正常な乳房上皮の表面成分に
対して選択した〔Ｔｓｕ及びＨｅｒｚｅｎｂｅｒｇ前記
（１９８０）〕。最終スクリーニング判定基準は、抗原
の検出のためのイムノパーオキシダーゼ技法を用いて、
パラフィンスライド中の抗原の分布状態を直接的に映像
化することに基づいた。
めに完全に生きているＭＣＦ−７及びＨＢＬ−１００細
胞も、また固相ＲＩＡにおいて用いた〔ブラウンなど。
ジャーナル オブ イムノロジカル メソド（Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ）（１９７９）３１：２０１〜２０９〕。生きて
いる細胞を用いて、固定人工物についての選択を避け
た。ＭＣＦ−７を陽性スクリーンとして、ＥＲ陽極細胞
上の抗原に対する抗体を同定した。ＨＢＬ−１００を陰
性スクリーンとして用いて、ＥＲ陰極抗体を同定した。
また正常なヒト乳汁から単離されるＨＭＦＧＭを用い
て、標準固相ＲＩＡにより正常な乳房上皮の表面成分に
対して選択した〔Ｔｓｕ及びＨｅｒｚｅｎｂｅｒｇ前記
（１９８０）〕。最終スクリーニング判定基準は、抗原
の検出のためのイムノパーオキシダーゼ技法を用いて、
パラフィンスライド中の抗原の分布状態を直接的に映像
化することに基づいた。
【００２８】第２世代のモノクローナル抗体を上記のよ
うにして生産したが、しかしＭＣＦ−７組織培養培地
（融合系列１０抗体）又は１８６−ＮＷＴからの膜抽出
物（融合系列７抗体）のいづれかから単離される抗原に
より、マウスを免疫化した。下に記載しているようにし
て、ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１抗体により調製されたイム
ノアフィニティ カラムを用いてその抗原を単離した。
第２世代の抗体についてのスクリーニング方法は、次の
通りであった。第２世代の抗体の選択は、固相ＲＩＡ，
Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｓ及びイムノパーオキシダー
ゼにおける反応性に基づいた。
うにして生産したが、しかしＭＣＦ−７組織培養培地
（融合系列１０抗体）又は１８６−ＮＷＴからの膜抽出
物（融合系列７抗体）のいづれかから単離される抗原に
より、マウスを免疫化した。下に記載しているようにし
て、ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１抗体により調製されたイム
ノアフィニティ カラムを用いてその抗原を単離した。
第２世代の抗体についてのスクリーニング方法は、次の
通りであった。第２世代の抗体の選択は、固相ＲＩＡ，
Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｓ及びイムノパーオキシダー
ゼにおける反応性に基づいた。
【００２９】免疫拡散法 Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｇ及びＮｉｌｓｓｏｎ。ハンドブ
ック オブ イクスペリメンタル イムノロジィ（Ｈａ
ｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ）（１９７３），Ｗｅｉｒ出版、ブラ
ックウエル，ロンドン、（チャプター１９）の二重拡散
法を用いて、ＭＣＡをアイソタイプ分けした。おのおの
のクローンからの上清液及びＰＢＳ（０．９％塩化ナト
リウム、１０mMリン酸ナトリウム、pH７．５）中１：１
００に希釈した腹水をおのおのの免疫グロブリンクラ
ス：ＩｇＭ，ＩｇＧ１，ＩｇＧ２ａ，ＩｇＧ３、及びＩ
ｇＡに対して特異な抗血清に対して反応せしめた。クラ
スに特異的抗血清は、インディアナのエルクハートのマ
イル ラボラトリィズから購入された。
ック オブ イクスペリメンタル イムノロジィ（Ｈａ
ｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ）（１９７３），Ｗｅｉｒ出版、ブラ
ックウエル，ロンドン、（チャプター１９）の二重拡散
法を用いて、ＭＣＡをアイソタイプ分けした。おのおの
のクローンからの上清液及びＰＢＳ（０．９％塩化ナト
リウム、１０mMリン酸ナトリウム、pH７．５）中１：１
００に希釈した腹水をおのおのの免疫グロブリンクラ
ス：ＩｇＭ，ＩｇＧ１，ＩｇＧ２ａ，ＩｇＧ３、及びＩ
ｇＡに対して特異な抗血清に対して反応せしめた。クラ
スに特異的抗血清は、インディアナのエルクハートのマ
イル ラボラトリィズから購入された。
【００３０】生細胞固相ＲＩＡ トリプシン処理によって、７５cm2 の組織培養フラスコ
から細胞を取得し、１つのウエルにつき５０，０００細
胞で９６ウエル細胞培養プレートを平板培養し、そして
１８〜２４時間培養した。すべての培養は、５％ＣＯ2
中、３７℃であった。増殖培地を、吸引除去し、０．０
８％ナトリウムアジドを含む増殖培地１５０μｌを添加
しそして細胞を、３０分間インキュベートした。５％子
牛血清及び０．０８％ナトリウムアジドを含むハンクス
液（洗浄緩衝液）により細胞をすすいだ。次に、洗浄緩
衝液を添加しそして細胞を、３０分間インキュベートし
た。この細胞を、再び洗浄緩衝液によりすすぎ、そして
ハイブリドマ培養からの組織培養液又は希釈された腹水
５０μｌを添加しそして１時間インキュベートした。次
にその細胞を、洗浄緩衝液により２度すすぎ、そして
125Ｉ−ウサギ抗−マウスＩｇＧ５０μｌ（２×１０4c
pm）を添加しそして１時間インキュベートした。その細
胞を、洗浄緩衝液により２度洗浄しそして陽性ウエル
を、オートラジオグラフィーによって可視化した。
から細胞を取得し、１つのウエルにつき５０，０００細
胞で９６ウエル細胞培養プレートを平板培養し、そして
１８〜２４時間培養した。すべての培養は、５％ＣＯ2
中、３７℃であった。増殖培地を、吸引除去し、０．０
８％ナトリウムアジドを含む増殖培地１５０μｌを添加
しそして細胞を、３０分間インキュベートした。５％子
牛血清及び０．０８％ナトリウムアジドを含むハンクス
液（洗浄緩衝液）により細胞をすすいだ。次に、洗浄緩
衝液を添加しそして細胞を、３０分間インキュベートし
た。この細胞を、再び洗浄緩衝液によりすすぎ、そして
ハイブリドマ培養からの組織培養液又は希釈された腹水
５０μｌを添加しそして１時間インキュベートした。次
にその細胞を、洗浄緩衝液により２度すすぎ、そして
125Ｉ−ウサギ抗−マウスＩｇＧ５０μｌ（２×１０4c
pm）を添加しそして１時間インキュベートした。その細
胞を、洗浄緩衝液により２度洗浄しそして陽性ウエル
を、オートラジオグラフィーによって可視化した。
【００３１】タンパク質分析 Ｌａｅｍｍｌｉ．ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ）（１９７
０）２２７：６８０〜６８５によって記載されている通
りに、１０％分解ゲルを含む４％アクリルアミド積み重
ねゲル（両者は、０．２％ＳＤＳを含む）を用いて、ド
デシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドスラブゲル
電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によりタンパク質を分析
した。５０μｌのサンプル緩衝液（６３mM ＴＲＩＳ，
pH６．８，１０％グリセロール、５％２−メルカプトエ
タノール、２．３％ＳＤＳ）中に、サンプルを加え、そ
して２０mAの一定電流により４時間電気泳動せしめた。
既知の標準タンパク質の分子量と比較してそれらの移動
度によってタンパク質の分子量を見積った。
０）２２７：６８０〜６８５によって記載されている通
りに、１０％分解ゲルを含む４％アクリルアミド積み重
ねゲル（両者は、０．２％ＳＤＳを含む）を用いて、ド
デシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドスラブゲル
電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によりタンパク質を分析
した。５０μｌのサンプル緩衝液（６３mM ＴＲＩＳ，
pH６．８，１０％グリセロール、５％２−メルカプトエ
タノール、２．３％ＳＤＳ）中に、サンプルを加え、そ
して２０mAの一定電流により４時間電気泳動せしめた。
既知の標準タンパク質の分子量と比較してそれらの移動
度によってタンパク質の分子量を見積った。
【００３２】Ｏ′ Ｆａｒｒｅｌｌ．ジャーナル オブ
バイオロジカル ケミストリィ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）（１
９７５）２５０：４００７〜４０２１によって記載され
ている通りに２次元電気泳動を実施したが、しかし第２
次元におけるＳＤＳ−ＰＡＧＥは、上に記載されている
通りであった。イムノアフィニティ精製した組織培養液
４０μｌ（蒸発乾燥せしめ、そして溶菌緩衝液に再溶解
されている）又は４０μｌの溶菌緩衝液に溶解された細
胞タンパク質（溶菌緩衝液２ml中に溶解されている１コ
ンフルエント１００mmペトリディッシュ）のいづれか
を、分析した。タンパク質濃度を、色素結合分析（Ｂｉ
ｏ−Ｒａｄラボラトリイズ，リッチモンド，カリフォー
ルニア）を用いて決定した。
バイオロジカル ケミストリィ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）（１
９７５）２５０：４００７〜４０２１によって記載され
ている通りに２次元電気泳動を実施したが、しかし第２
次元におけるＳＤＳ−ＰＡＧＥは、上に記載されている
通りであった。イムノアフィニティ精製した組織培養液
４０μｌ（蒸発乾燥せしめ、そして溶菌緩衝液に再溶解
されている）又は４０μｌの溶菌緩衝液に溶解された細
胞タンパク質（溶菌緩衝液２ml中に溶解されている１コ
ンフルエント１００mmペトリディッシュ）のいづれか
を、分析した。タンパク質濃度を、色素結合分析（Ｂｉ
ｏ−Ｒａｄラボラトリイズ，リッチモンド，カリフォー
ルニア）を用いて決定した。
【００３３】ウエスターン ブロット法（Ｗｅｓｔｅｒ
ｎ Ｂｌｏｔｓ） 抗体によって同定される抗原を特徴づけるために、Ｔｏ
ｗｂｉｎ，など。プロスィーディング オブ ザ ナシ
ョナル アカデミィ オブ サイエンス アメリカ合衆
国（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｕ．
Ｓ．Ａ）（１９７９）７６：４３５０〜４３５４によっ
て記載されているようなウエスターン法の変法を用い、
この場合タンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルからニト
ロセルロースフィルターに移されそしてＭＣＡによって
同定される。ニトロセルロースフィルターに移した後、
過剰のタンパク質結合性部位を、３％ＢＳＡを含むＰＢ
Ｓ中にそのフィルターを浸すことによってブロックし
た。１％ＢＳＡ及び１〜２×１０7cpmのヨード化された
抗体を含むＰＢＳ３０ml中にそのシートを１時間、イン
キュベートすることによって、抗原の位置を決定した。
次にそのフィルターをすすぎ、乾燥せしめそしてオート
ラジオグラフ化せしめた。１００pgほどの少量のタンパ
ク質を、この方法により検出することができる。
ｎ Ｂｌｏｔｓ） 抗体によって同定される抗原を特徴づけるために、Ｔｏ
ｗｂｉｎ，など。プロスィーディング オブ ザ ナシ
ョナル アカデミィ オブ サイエンス アメリカ合衆
国（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｕ．
Ｓ．Ａ）（１９７９）７６：４３５０〜４３５４によっ
て記載されているようなウエスターン法の変法を用い、
この場合タンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルからニト
ロセルロースフィルターに移されそしてＭＣＡによって
同定される。ニトロセルロースフィルターに移した後、
過剰のタンパク質結合性部位を、３％ＢＳＡを含むＰＢ
Ｓ中にそのフィルターを浸すことによってブロックし
た。１％ＢＳＡ及び１〜２×１０7cpmのヨード化された
抗体を含むＰＢＳ３０ml中にそのシートを１時間、イン
キュベートすることによって、抗原の位置を決定した。
次にそのフィルターをすすぎ、乾燥せしめそしてオート
ラジオグラフ化せしめた。１００pgほどの少量のタンパ
ク質を、この方法により検出することができる。
【００３４】ラベルされているタンパク質の分析 ステロイドホルモンを除くためにＤＣＣにより処理され
た５％子牛血清中に１０日間細胞を増殖せしめた。試験
の前２日間、細胞を、トリプトシ処理しそして１００mm
ペトリディッシュにつき４×１０6 細胞で平板培養し
た。２４時間後、エストラジオールを、この培地に添加
し、０，１，１０、及び１００nMのエストラジオール濃
度を得た。この培地を、２４時間後交換した。ホルモン
処理の４８時間後、細胞をハンクス液により２度洗浄し
た。正常なメチオニン濃度の１０％のほかに35Ｓ−メチ
オニン２００μCi／mlを含む、上記のようにホルモンが
補充されている血清不含培地を添加した。細胞及び培地
を、６〜１２時間の培養の後、収得した。
た５％子牛血清中に１０日間細胞を増殖せしめた。試験
の前２日間、細胞を、トリプトシ処理しそして１００mm
ペトリディッシュにつき４×１０6 細胞で平板培養し
た。２４時間後、エストラジオールを、この培地に添加
し、０，１，１０、及び１００nMのエストラジオール濃
度を得た。この培地を、２４時間後交換した。ホルモン
処理の４８時間後、細胞をハンクス液により２度洗浄し
た。正常なメチオニン濃度の１０％のほかに35Ｓ−メチ
オニン２００μCi／mlを含む、上記のようにホルモンが
補充されている血清不含培地を添加した。細胞及び培地
を、６〜１２時間の培養の後、収得した。
【００３５】イムノパーオキシダーゼ染色 用いられるイムノパーオキシダーゼ染色法は、Ｈｏｒａ
ｎ−Ｈａｎｄなど。キャンサー リサーチ（Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（１９８３）４３：７２８〜７
３５によって記載されているように、Ｈｓｕなど。ジャ
ーナル オブヒストケミストリィ アンド サイトケミ
ストリィ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）
（１９８１）２９：５７７〜５８０のアビジン−ビオチ
ンイムノパーオキシダーゼ技法の変法であった。
ｎ−Ｈａｎｄなど。キャンサー リサーチ（Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（１９８３）４３：７２８〜７
３５によって記載されているように、Ｈｓｕなど。ジャ
ーナル オブヒストケミストリィ アンド サイトケミ
ストリィ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）
（１９８１）２９：５７７〜５８０のアビジン−ビオチ
ンイムノパーオキシダーゼ技法の変法であった。
【００３６】イムノアフィニティ クロマトグラフィ セファロース登録商標４Ｂ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉ
ｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，ピスキャットウエイ，ニュ
ージャジィ）を、Ｍａｒｃｈなど。アナライティカル
バイオケミストリィ（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ）（１９７４）６０：１４９〜１５２
によって記載されているように臭化シアンにより活性化
した。４℃で一晩、４０％硫酸アンモニウムの中での沈
殿によって腹水から抗体を精製した。この沈殿物を溶解
しそして０．２Ｍリン酸ナトリウム、pH７．３に対して
透析した。活性化されたセファロース登録商標（濾過さ
れ、コンパクトケーキにされた）の１容積を抗体溶液
（２mgタンパク質／ml）の１．５容積に添加した。抗体
を、４℃で１６時間、穏かに混合することによりカップ
リングせしめた。セファロース登録商標を、再び濾過
し、コンパクトケーキにし、３容積の水により洗浄しそ
してpH９の１Ｍエタノールアミンの１．５容積に添加す
ることにより未反応部位をブロックした。この反応は、
２７℃で２時間であった。次に、順にリン酸緩衝液
（０．１Ｍリン酸ナトリウム、pH７．３，１．０Ｍ塩化
ナトリウム）、０．１Ｍ酢酸、及び再びホスフェート緩
衝液のおのおのにつき１０容積により順次セファロース
登録商標を洗浄した。０．１％ナトリウムアジドを含む
リン酸緩衝液中に４℃でこの樹脂を貯蔵した。
ｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，ピスキャットウエイ，ニュ
ージャジィ）を、Ｍａｒｃｈなど。アナライティカル
バイオケミストリィ（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ）（１９７４）６０：１４９〜１５２
によって記載されているように臭化シアンにより活性化
した。４℃で一晩、４０％硫酸アンモニウムの中での沈
殿によって腹水から抗体を精製した。この沈殿物を溶解
しそして０．２Ｍリン酸ナトリウム、pH７．３に対して
透析した。活性化されたセファロース登録商標（濾過さ
れ、コンパクトケーキにされた）の１容積を抗体溶液
（２mgタンパク質／ml）の１．５容積に添加した。抗体
を、４℃で１６時間、穏かに混合することによりカップ
リングせしめた。セファロース登録商標を、再び濾過
し、コンパクトケーキにし、３容積の水により洗浄しそ
してpH９の１Ｍエタノールアミンの１．５容積に添加す
ることにより未反応部位をブロックした。この反応は、
２７℃で２時間であった。次に、順にリン酸緩衝液
（０．１Ｍリン酸ナトリウム、pH７．３，１．０Ｍ塩化
ナトリウム）、０．１Ｍ酢酸、及び再びホスフェート緩
衝液のおのおのにつき１０容積により順次セファロース
登録商標を洗浄した。０．１％ナトリウムアジドを含む
リン酸緩衝液中に４℃でこの樹脂を貯蔵した。
【００３７】アフィニティー樹脂を０．２〜１．０mlの
カラム中に注ぎ、５カラム容積の６Ｍグウアニジン−Ｈ
Ｃｌ pH１．５によりストリッピングし、そして使用の
前に、少なくとも１０容積のＰＢＳによりすすいだ。組
織培養液を集めそして２mMＥＤＴＡ及びフェニル−メチ
ル―スルフォニルフルオリドを添加し、タンパク質分解
を抑制した。２０分間、５０００Ｘｇで遠心分離によ
り、次にグラスウール及び０．２２ミクロンのフィルタ
ーを通しての濾過によって破片を取り除いた。サンプル
を、４℃で２０〜３０ml／時でアフィニティーカラムを
通す前に、セファロース登録商標４Ｂの１mlカラムを通
した。非特異的に結合したタンパク質を、ＰＢＳ中０．
５Ｍ尿素１０〜２０mlにより溶出した。４カラム容積の
６Ｍグウアニジン−ＨＣｌ pH１．５により抗原を溶出
し、この「離剤」を中和し、そして透析した。
カラム中に注ぎ、５カラム容積の６Ｍグウアニジン−Ｈ
Ｃｌ pH１．５によりストリッピングし、そして使用の
前に、少なくとも１０容積のＰＢＳによりすすいだ。組
織培養液を集めそして２mMＥＤＴＡ及びフェニル−メチ
ル―スルフォニルフルオリドを添加し、タンパク質分解
を抑制した。２０分間、５０００Ｘｇで遠心分離によ
り、次にグラスウール及び０．２２ミクロンのフィルタ
ーを通しての濾過によって破片を取り除いた。サンプル
を、４℃で２０〜３０ml／時でアフィニティーカラムを
通す前に、セファロース登録商標４Ｂの１mlカラムを通
した。非特異的に結合したタンパク質を、ＰＢＳ中０．
５Ｍ尿素１０〜２０mlにより溶出した。４カラム容積の
６Ｍグウアニジン−ＨＣｌ pH１．５により抗原を溶出
し、この「離剤」を中和し、そして透析した。
【００３８】抗体のヨード化 クロラミンＴ法〔ＭｃＣｏｎａｈｅｇなど。メソッド
オブ エンザイモロジィ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｅｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ）（１９８０）７０：２１０〜２１
３〕により抗体を約２μCi／μｇの比活性にヨード化し
た。１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中、セファロース登録商標
Ｇ−２５（１cm×３０cmのカラム）上で分離し、そして
使用するまで−７０℃で貯蔵した。
オブ エンザイモロジィ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｅｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ）（１９８０）７０：２１０〜２１
３〕により抗体を約２μCi／μｇの比活性にヨード化し
た。１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中、セファロース登録商標
Ｇ−２５（１cm×３０cmのカラム）上で分離し、そして
使用するまで−７０℃で貯蔵した。
【００３９】結 果 １．モノクローナル抗体の製造及び特徴付け 生細胞ＲＩＡにおけるオートラジオグラフィー結合パタ
ーンはＭＣＡの最初の選択の基礎であった。最初の融合
からの２８８ウエルのうち８７が、ＭＣＦ−細胞系に対
する抗体を生成するハイブリドコロニイを含んだ。これ
らのコロニイの２２を、拡大しそしてさらに特徴付ける
ために選んだ。９コロニイを限界希釈によってクローン
化した。これらから、ＵＣＤ／ＡＢ ６．０１及びＵＣ
Ｄ／ＡＢ６．１１と命名された２つの抗体を、さらに特
徴付けるために選択した。
ーンはＭＣＡの最初の選択の基礎であった。最初の融合
からの２８８ウエルのうち８７が、ＭＣＦ−細胞系に対
する抗体を生成するハイブリドコロニイを含んだ。これ
らのコロニイの２２を、拡大しそしてさらに特徴付ける
ために選んだ。９コロニイを限界希釈によってクローン
化した。これらから、ＵＣＤ／ＡＢ ６．０１及びＵＣ
Ｄ／ＡＢ６．１１と命名された２つの抗体を、さらに特
徴付けるために選択した。
【００４０】ＭＣＦ−７に対するＵＣＤ／ＡＢ ６．１
１の特異性を、ウエスターン法によって証明した。ＵＣ
Ｄ／ＡＢ ６．１１は、ＭＣＦ−７抽出物中の２つのＳ
ＤＳ−ＰＡＧＥバンドに結合したが、しかしＨＢＬ−１
００，ＮＷＴ−１８６ ＨＷＴ抽出物又はＨＭＦＧＭに
はなんら結合性をも示さなかった。比較すると、ＵＣＤ
／ＡＢ ６．１３と命名されたもう一つのクローンは、
ＨＭＦＧＭを除く３つのすべての細胞系に結合性を示し
た。
１の特異性を、ウエスターン法によって証明した。ＵＣ
Ｄ／ＡＢ ６．１１は、ＭＣＦ−７抽出物中の２つのＳ
ＤＳ−ＰＡＧＥバンドに結合したが、しかしＨＢＬ−１
００，ＮＷＴ−１８６ ＨＷＴ抽出物又はＨＭＦＧＭに
はなんら結合性をも示さなかった。比較すると、ＵＣＤ
／ＡＢ ６．１３と命名されたもう一つのクローンは、
ＨＭＦＧＭを除く３つのすべての細胞系に結合性を示し
た。
【００４１】アビジン−ビオチン イムノパーオキシダ
ーゼ技法を用いてのパラフィン切片における細胞抗原の
検出を実施例し、ＭＣＡがヒト乳房抗原に結合しそして
ＭＣＦ−７の組織培養人工物とは結合しないということ
を確かめた。正常の、形成異常の及び悪性の乳房組織に
おいて、ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１によって同定される抗
原の分布状態を、ホルマリン及びＢ−５で固定された組
織を用いて決定した。Ｂ−５固定化は、いっそうすぐれ
た細胞学的な詳細を提供した。
ーゼ技法を用いてのパラフィン切片における細胞抗原の
検出を実施例し、ＭＣＡがヒト乳房抗原に結合しそして
ＭＣＦ−７の組織培養人工物とは結合しないということ
を確かめた。正常の、形成異常の及び悪性の乳房組織に
おいて、ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１によって同定される抗
原の分布状態を、ホルマリン及びＢ−５で固定された組
織を用いて決定した。Ｂ−５固定化は、いっそうすぐれ
た細胞学的な詳細を提供した。
【００４２】アビジン−ビオチン イムノパーオキシダ
ーゼ染色を用いて、ＵＣＤ／ＡＢ６．１１は、正常な筋
上皮、支質、又は管腔分泌生成物とではなく、正常な前
泌乳性上皮細胞に結合することが見出された。ＵＣＤ／
ＡＢ ６．１１によって検出される抗原は、まず第１に
核上顆粒に位置決定されたこの抗原は、乳球間に斑点状
分布を有し、その結果陽性的に染色する乳球が、しばし
ば陰性的に染色する乳球に隣接しているのを見出され
た。多くの場合、個々の乳球内の隣接する細胞は、選択
的に陽性及び陰性であった。
ーゼ染色を用いて、ＵＣＤ／ＡＢ６．１１は、正常な筋
上皮、支質、又は管腔分泌生成物とではなく、正常な前
泌乳性上皮細胞に結合することが見出された。ＵＣＤ／
ＡＢ ６．１１によって検出される抗原は、まず第１に
核上顆粒に位置決定されたこの抗原は、乳球間に斑点状
分布を有し、その結果陽性的に染色する乳球が、しばし
ば陰性的に染色する乳球に隣接しているのを見出され
た。多くの場合、個々の乳球内の隣接する細胞は、選択
的に陽性及び陰性であった。
【００４３】イムノパーオキシダーゼにより染色された
乳癌細胞のパラフィン切片９０％（１８／２０）は、Ｕ
ＣＤ／ＡＢ ６．１１のためには陽性であった。特定の
組織切片における悪性細胞のほとんどは染色した。顆粒
及び表面染色も観察されたけれども、この染色パター
は、一般的に拡散的であり且つ細胞質的であった。染色
は、隣接する正常細胞においてよりも腫瘍細胞において
ひじょうに濃かった。染色は、また第１次乳房腫瘍癌に
おいてよりも転移性腫瘍細胞においてより濃かった。こ
れらの結果は、転移性乳癌細胞において、抗原の生成が
増大しているということを示す。
乳癌細胞のパラフィン切片９０％（１８／２０）は、Ｕ
ＣＤ／ＡＢ ６．１１のためには陽性であった。特定の
組織切片における悪性細胞のほとんどは染色した。顆粒
及び表面染色も観察されたけれども、この染色パター
は、一般的に拡散的であり且つ細胞質的であった。染色
は、隣接する正常細胞においてよりも腫瘍細胞において
ひじょうに濃かった。染色は、また第１次乳房腫瘍癌に
おいてよりも転移性腫瘍細胞においてより濃かった。こ
れらの結果は、転移性乳癌細胞において、抗原の生成が
増大しているということを示す。
【００４４】いくらかの、しかしすべてではない乳房形
成異常（線維嚢胞疾患）がＵＣＤ／ＡＢ ６．１１によ
り染色された。ＭＣＦ−７組織培養培地からの６．１１
抗体によるイムノクロマトグラフィによって単離された
抗原による免疫化から得られる第２世代のモノクローナ
ル抗体を、シリーズ１０と命名した。さらに特徴付けそ
して試験するために選択された特定の抗体は、ＵＣＤ／
ＰＲ １０．０２，ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１、及びＵ
ＣＤ／ＰＲ １０．１２であった。ＵＣＤ／ＰＲは、タ
イプ１８サイトケラチンと反応するが、しかしＵＣＤ／
ＡＢ ６．１１（６．１１抗原）によって認識される抗
原へのＵＣＤ／ＡＢ ６．１１又はＵＣＤ／ＰＲ １
０．１１の結合を抑制しないネズミＩｇＭである。ＵＣ
Ｄ／ＰＲ１０．１１は、６．１１抗原及びタイプ８サイ
トケラチン並びにより低い程度では、タイプ８サイトケ
ラチンと反応するネズミＩｇＧである。ＵＣＤ／ＰＲ
１０．１２は、６．１１抗原と反応するネズミＩｇＭで
ある。
成異常（線維嚢胞疾患）がＵＣＤ／ＡＢ ６．１１によ
り染色された。ＭＣＦ−７組織培養培地からの６．１１
抗体によるイムノクロマトグラフィによって単離された
抗原による免疫化から得られる第２世代のモノクローナ
ル抗体を、シリーズ１０と命名した。さらに特徴付けそ
して試験するために選択された特定の抗体は、ＵＣＤ／
ＰＲ １０．０２，ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１、及びＵ
ＣＤ／ＰＲ １０．１２であった。ＵＣＤ／ＰＲは、タ
イプ１８サイトケラチンと反応するが、しかしＵＣＤ／
ＡＢ ６．１１（６．１１抗原）によって認識される抗
原へのＵＣＤ／ＡＢ ６．１１又はＵＣＤ／ＰＲ １
０．１１の結合を抑制しないネズミＩｇＭである。ＵＣ
Ｄ／ＰＲ１０．１１は、６．１１抗原及びタイプ８サイ
トケラチン並びにより低い程度では、タイプ８サイトケ
ラチンと反応するネズミＩｇＧである。ＵＣＤ／ＰＲ
１０．１２は、６．１１抗原と反応するネズミＩｇＭで
ある。
【００４５】１８６−ＮＷＴ細胞からの６．１１抗体に
よるイムノクロマトグラフィによって単離された抗原に
よる免疫化から得られる第２世代のモノクローナル抗体
を、シリーズ７と命名する。ＵＣＤ／ＰＲ ７．０１と
命名された１つの特定の抗体は、筋上皮細胞に対して特
異的であるということが見出された。
よるイムノクロマトグラフィによって単離された抗原に
よる免疫化から得られる第２世代のモノクローナル抗体
を、シリーズ７と命名する。ＵＣＤ／ＰＲ ７．０１と
命名された１つの特定の抗体は、筋上皮細胞に対して特
異的であるということが見出された。
【００４６】２．細胞表面抗原 免疫沈殿法及びこれに続くラクトパーオキシダーゼによ
る生細胞の細胞表面タンパク質のヨード化を用いて、Ｕ
ＣＤ／ＡＢ ６．１１によって同定される抗原の細胞表
面位置をさらに特徴づけた。このデータは、細胞がエス
トラジオールにより又はエストラジンによらないで増殖
される時、抗原が細胞表面上に位置するということを示
した。
る生細胞の細胞表面タンパク質のヨード化を用いて、Ｕ
ＣＤ／ＡＢ ６．１１によって同定される抗原の細胞表
面位置をさらに特徴づけた。このデータは、細胞がエス
トラジオールにより又はエストラジンによらないで増殖
される時、抗原が細胞表面上に位置するということを示
した。
【００４７】３．異なるケラチン−関連タンパク質との
抗原の反応性 細胞内ケラチン−関連タンパク質の３つの型（タイプ
８，１８及び１９に関する）が、ＭＣＦ−７乳癌細胞系
中に同定された。これらのタンパク質は、約５２，４
６、及び４６kdの分子量及びそれぞれ６．１〜６．０，
５．８〜５．３、及び５．２〜５．０の範囲内に等電点
を有することが推定された。観察される多重等電点形
は、多種のケラチンの種々のリン酸化に少なくとも部分
的に基くと信じられている。抗−ケラチンモノクローナ
ル抗体を用いるイムノプロットは、おのおののタンパク
質型に対するおのおのの抗体の異なる結合パターンをも
たらす。たとえば、３５βＨ１１抗体は、すべての３つ
のＭＣＦ−７細胞ケラチン−関係のタンパク質を認識
し、一方ＡＥ１、ＵＣＤ／ＡＢ ６．０１，ＵＣＤ／Ａ
Ｂ６．１１及びＵＣＤ／ＰＲ １０．１１のおのおの
は、種々のタンパク質型を区別した。表１を参照のこ
と。
抗原の反応性 細胞内ケラチン−関連タンパク質の３つの型（タイプ
８，１８及び１９に関する）が、ＭＣＦ−７乳癌細胞系
中に同定された。これらのタンパク質は、約５２，４
６、及び４６kdの分子量及びそれぞれ６．１〜６．０，
５．８〜５．３、及び５．２〜５．０の範囲内に等電点
を有することが推定された。観察される多重等電点形
は、多種のケラチンの種々のリン酸化に少なくとも部分
的に基くと信じられている。抗−ケラチンモノクローナ
ル抗体を用いるイムノプロットは、おのおののタンパク
質型に対するおのおのの抗体の異なる結合パターンをも
たらす。たとえば、３５βＨ１１抗体は、すべての３つ
のＭＣＦ−７細胞ケラチン−関係のタンパク質を認識
し、一方ＡＥ１、ＵＣＤ／ＡＢ ６．０１，ＵＣＤ／Ａ
Ｂ６．１１及びＵＣＤ／ＰＲ １０．１１のおのおの
は、種々のタンパク質型を区別した。表１を参照のこ
と。
【００４８】
【表１】
【００４９】４．６．１１及び１０．１１によって認識
されるエピトープの組織分布 モノクローナル抗体ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１及びＵＣＤ
／ＰＲ １０．１１によって認識されるエピトープの組
織分布を決定し、そして免疫診断におけるこれらの抗体
の実用性を評価するために、多数のホルマリン又はＢ５
−固定のパラフィン組織切片を、アビジン−ビオチン
イムノパーオキシダーゼ法によってスクリーニングし
た。結果は、下の表２〜表５に示されている。組織学的
に正常な組織において、両抗体は、乳腺、肝腺及び唾液
腺、胃及び腸粘膜、及び腎臓の遠位尿細管を含む単純上
皮を染色した。両抗体は、神経及び血液要素との反応に
は機能しないが、しかしＵＣＤ／ＡＢ ６．１１（しか
しＵＣＤ／ＰＲ １０．１１ではない）は、しばしば平
滑筋の成分と弱く反応した。
されるエピトープの組織分布 モノクローナル抗体ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１及びＵＣＤ
／ＰＲ １０．１１によって認識されるエピトープの組
織分布を決定し、そして免疫診断におけるこれらの抗体
の実用性を評価するために、多数のホルマリン又はＢ５
−固定のパラフィン組織切片を、アビジン−ビオチン
イムノパーオキシダーゼ法によってスクリーニングし
た。結果は、下の表２〜表５に示されている。組織学的
に正常な組織において、両抗体は、乳腺、肝腺及び唾液
腺、胃及び腸粘膜、及び腎臓の遠位尿細管を含む単純上
皮を染色した。両抗体は、神経及び血液要素との反応に
は機能しないが、しかしＵＣＤ／ＡＢ ６．１１（しか
しＵＣＤ／ＰＲ １０．１１ではない）は、しばしば平
滑筋の成分と弱く反応した。
【００５０】
【表２】
【００５１】
【表３】
【００５２】
【表４】
【００５３】
【表５】
【００５４】５．生細胞上のエピトープ分布状態 生きている、無傷のＭＣＦ−７細胞に間接的イミノフル
オレセンスを実施することによって細胞表面エピトープ
に結合する細胞表面を可視化した。ＵＣＤ／ＡＢ ６．
０１及びＵＣＤ／ＡＢ ６．１１が、細胞と細胞の接解
の濃縮領域に伴って、全細胞表面に分散された斑文状の
抗原を同定した。細胞表面エピトープは軽いトリプシン
処理によって容易に取り除かれ、パッチ形成又はキャッ
プ形成の形跡を示さず、そして細胞が血清−含有又は血
清−不含培地のいづれかで増殖する場合、存在した。し
かしながら、ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１，３５βＨ１１
及びＡＥ１によって認識されたエピトープは、類似の間
接的イムノフルオレセンス実験では検出され得なかっ
た。
オレセンスを実施することによって細胞表面エピトープ
に結合する細胞表面を可視化した。ＵＣＤ／ＡＢ ６．
０１及びＵＣＤ／ＡＢ ６．１１が、細胞と細胞の接解
の濃縮領域に伴って、全細胞表面に分散された斑文状の
抗原を同定した。細胞表面エピトープは軽いトリプシン
処理によって容易に取り除かれ、パッチ形成又はキャッ
プ形成の形跡を示さず、そして細胞が血清−含有又は血
清−不含培地のいづれかで増殖する場合、存在した。し
かしながら、ＵＣＤ／ＰＲ １０．１１，３５βＨ１１
及びＡＥ１によって認識されたエピトープは、類似の間
接的イムノフルオレセンス実験では検出され得なかっ
た。
【００５５】６．分泌された６．１１抗原の特徴付け ケラチンに関係する抗原は、また腫瘍性乳房組織培養培
地において可溶性タンパク質として見出され得る。ＭＣ
Ｆ−７，Ｔ４７Ｄ、及びＳＫ−ＢＲ３ヒト乳房細胞系か
らの培養液は、それぞれケラチンのような免疫活性を含
んでいることが見出されている。試験された５つのモノ
クローナル抗体のうち４つが、ＭＣＦ−７培養上清液か
らの抗原に結合し（表６）、そしてこの抗原は４０〜４
６キロドルトンの分子量範囲及び５．０〜５．２の等電
点を有する。追加実験は、ＭＣＦ−７組織培養抗原が
３．６Ｓの沈降係数及び１．２５ｇ／cm3 の浮力密度を
持つということを示した。
地において可溶性タンパク質として見出され得る。ＭＣ
Ｆ−７，Ｔ４７Ｄ、及びＳＫ−ＢＲ３ヒト乳房細胞系か
らの培養液は、それぞれケラチンのような免疫活性を含
んでいることが見出されている。試験された５つのモノ
クローナル抗体のうち４つが、ＭＣＦ−７培養上清液か
らの抗原に結合し（表６）、そしてこの抗原は４０〜４
６キロドルトンの分子量範囲及び５．０〜５．２の等電
点を有する。追加実験は、ＭＣＦ−７組織培養抗原が
３．６Ｓの沈降係数及び１．２５ｇ／cm3 の浮力密度を
持つということを示した。
【００５６】
【表６】
【００５７】従って、このＭＣＦ−７細胞外抗原は、細
胞内サイトケラチンに関係しているようである。まず、
非乳房ケラチン（たとえば３５βＨ１１及びＡＥ１）に
対して生じた抗体は、その抗原を認識する。第２に、ハ
イブリドマが免疫アフィニティにより精製されたＭＣＦ
−７組織液抗原により免疫化されたマウスから生産され
る場合、この得られる抗体（たとえば、ＵＣＤ／ＰＲ
１０．１１）は、非乳房ケラチンと広く反応する。第３
に、精製されたＭＣＦ−７抗原のアミノ酸組成物は、他
のケラチンに見つけられるアミノ酸組成物、特にグリシ
ン及びグルタミン酸−グルタミン残基がタンパク質の総
アミノ酸の２５％〜３０％を含んで成るということに密
接に近い。表７を参照のこと。
胞内サイトケラチンに関係しているようである。まず、
非乳房ケラチン（たとえば３５βＨ１１及びＡＥ１）に
対して生じた抗体は、その抗原を認識する。第２に、ハ
イブリドマが免疫アフィニティにより精製されたＭＣＦ
−７組織液抗原により免疫化されたマウスから生産され
る場合、この得られる抗体（たとえば、ＵＣＤ／ＰＲ
１０．１１）は、非乳房ケラチンと広く反応する。第３
に、精製されたＭＣＦ−７抗原のアミノ酸組成物は、他
のケラチンに見つけられるアミノ酸組成物、特にグリシ
ン及びグルタミン酸−グルタミン残基がタンパク質の総
アミノ酸の２５％〜３０％を含んで成るということに密
接に近い。表７を参照のこと。
【００５８】
【表７】
【００５９】７．細胞外サイトケラチンのための血清検
定 ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１をラジオイムノアッセイに使用
し、正常な血清及び乳癌に罹患している患者からの血清
の両者中細胞外サイトケラチンの存在を検定した。この
検定は、マイルなど。（１９７３）〔医学におけるラジ
オイムノアッセイ及びそれに関する方法（“Ｒａｄｉｏ
ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ
Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ”〕、
インターナショナル アトミック エナージイ エジェ
ンスィ，ビエナ，オーストリア，ページ１４９〜１６
４、第１巻〕によって記載されている２−部位イムノラ
ジオメトリックアッセイ（ＩＲＭＡ）の変法であった。
精製されたモノクローナル抗体ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１
を、プラスチック マイクロタイター プレート ウエ
ル上に吸着せしめた。吸着の後、サンプル血清を、おの
おののウエル中に置いた。細胞外サイトケラチンが、血
清サンプル中に存在する場合、固相に結合したＵＣＤ／
ＡＢ ６．１１は、サイトケラチンを捕捉するために反
応した。次に、サイトケラチン上の異なるエピトープの
ために特異な過剰に精製したウサギＩｇＧ抗体を、ミイ
クロタイターウエル〔ここで、結合しているサイトケラ
チン（もしあるなら）と反応する〕に導入した。次に
125Ｉによりラジオラベルしたタンパク質の過剰の量
を、ウエル〔ここで、ウサギＩｇＧと反応する〕に導入
した。未結合のラベルされたタンパク質Ａを除くために
洗浄した後、おのおののウエルの放射能の量を決定し
た。従って、細胞外サイトケラチンの量は、結合してい
る放射能の量に直接的に比例した。サイトケラチンの絶
対量を、あらかじめ用意した標準曲線から決定した。
定 ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１をラジオイムノアッセイに使用
し、正常な血清及び乳癌に罹患している患者からの血清
の両者中細胞外サイトケラチンの存在を検定した。この
検定は、マイルなど。（１９７３）〔医学におけるラジ
オイムノアッセイ及びそれに関する方法（“Ｒａｄｉｏ
ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ
Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ”〕、
インターナショナル アトミック エナージイ エジェ
ンスィ，ビエナ，オーストリア，ページ１４９〜１６
４、第１巻〕によって記載されている２−部位イムノラ
ジオメトリックアッセイ（ＩＲＭＡ）の変法であった。
精製されたモノクローナル抗体ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１
を、プラスチック マイクロタイター プレート ウエ
ル上に吸着せしめた。吸着の後、サンプル血清を、おの
おののウエル中に置いた。細胞外サイトケラチンが、血
清サンプル中に存在する場合、固相に結合したＵＣＤ／
ＡＢ ６．１１は、サイトケラチンを捕捉するために反
応した。次に、サイトケラチン上の異なるエピトープの
ために特異な過剰に精製したウサギＩｇＧ抗体を、ミイ
クロタイターウエル〔ここで、結合しているサイトケラ
チン（もしあるなら）と反応する〕に導入した。次に
125Ｉによりラジオラベルしたタンパク質の過剰の量
を、ウエル〔ここで、ウサギＩｇＧと反応する〕に導入
した。未結合のラベルされたタンパク質Ａを除くために
洗浄した後、おのおののウエルの放射能の量を決定し
た。従って、細胞外サイトケラチンの量は、結合してい
る放射能の量に直接的に比例した。サイトケラチンの絶
対量を、あらかじめ用意した標準曲線から決定した。
【００６０】正常な血清を、細胞外サイトケラチンの存
在について検定する場合、得られた値は、１４０〜３２
６０CPM に対応して０．０２μｇ／ml〜０．８２μｇ／
mlに分布した。乳癌患者についてのこの値は、３４０〜
１０，８００CPM に対応して０．０５μｇ／ml〜３．３
４μｇ／mlであった。任意のカット−オフとして１００
０CPM を選択する場合、１４の正常な血清サンプルのう
ち２つ（１４％）が、陽性であった。乳癌患者について
は、８３のサンプルのうち３０（３６％）が陽性であっ
た。従って、血清中の細胞外サイトケラチンの存在は、
上皮腫瘍、たとえば乳癌に罹患している患者中には有意
に高められる。
在について検定する場合、得られた値は、１４０〜３２
６０CPM に対応して０．０２μｇ／ml〜０．８２μｇ／
mlに分布した。乳癌患者についてのこの値は、３４０〜
１０，８００CPM に対応して０．０５μｇ／ml〜３．３
４μｇ／mlであった。任意のカット−オフとして１００
０CPM を選択する場合、１４の正常な血清サンプルのう
ち２つ（１４％）が、陽性であった。乳癌患者について
は、８３のサンプルのうち３０（３６％）が陽性であっ
た。従って、血清中の細胞外サイトケラチンの存在は、
上皮腫瘍、たとえば乳癌に罹患している患者中には有意
に高められる。
【００６１】この発明に従えば、正確且つ敏感な検定
が、生物学的サンプルにおける特定の４２〜４８kdの細
胞タンパク質及び関連する４０〜４６kdの血清タンパク
質の存在を検出するために提供される。この方法は特
に、エストロゲン療法に敏感であるこれらの乳房腫瘍を
同定することのために有用である。この方法は、また、
乳房から転移したエストロゲン−感受性の乳房腫瘍を同
定することのために、そしてそのような腫瘍についての
患者の血清をスクリーニングすることのために有用であ
る。前述の発明は、明確に理解するために、例示的及び
例的な方法によって、いくらか詳細に記載しているけれ
ども、ある変更及び修飾を、付属の請求の範囲内で実施
することができる。
が、生物学的サンプルにおける特定の４２〜４８kdの細
胞タンパク質及び関連する４０〜４６kdの血清タンパク
質の存在を検出するために提供される。この方法は特
に、エストロゲン療法に敏感であるこれらの乳房腫瘍を
同定することのために有用である。この方法は、また、
乳房から転移したエストロゲン−感受性の乳房腫瘍を同
定することのために、そしてそのような腫瘍についての
患者の血清をスクリーニングすることのために有用であ
る。前述の発明は、明確に理解するために、例示的及び
例的な方法によって、いくらか詳細に記載しているけれ
ども、ある変更及び修飾を、付属の請求の範囲内で実施
することができる。
【００６２】この発明は、デパートメント オブ ヘル
ス アンド ヒューマン サービス（Ｄｅｐａｒｔｍｅ
ｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅ
ｒｖｉｃｅｓ）によって与えられた許可番号Ｎｏ．１
ＣＰ ０１００８下で、政府支援により行なわれた。政
府は、この発明に確かな権利を持つ。ハイブリドマ細胞
系ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１は、１９８３年１２月８日に
アメリカン タイプ カルチャー コレクション（Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅ
ｃｔｉｏｎ）に寄託されそして受入番号ＨＢ ８４５８
を付与された。ハイブリドマ細胞系ＵＣＤ／ＡＢ ６．
０１及びＵＣＤ／ＰＲ１０．１１は、１９８５年１月３
日にアメリカン タイプ カルチャー コレクションに
寄託されそして受入番号ＨＢ ８６９３及びＨＢ ８６
９４をそれぞれ付与された。
ス アンド ヒューマン サービス（Ｄｅｐａｒｔｍｅ
ｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅ
ｒｖｉｃｅｓ）によって与えられた許可番号Ｎｏ．１
ＣＰ ０１００８下で、政府支援により行なわれた。政
府は、この発明に確かな権利を持つ。ハイブリドマ細胞
系ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１は、１９８３年１２月８日に
アメリカン タイプ カルチャー コレクション（Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅ
ｃｔｉｏｎ）に寄託されそして受入番号ＨＢ ８４５８
を付与された。ハイブリドマ細胞系ＵＣＤ／ＡＢ ６．
０１及びＵＣＤ／ＰＲ１０．１１は、１９８５年１月３
日にアメリカン タイプ カルチャー コレクションに
寄託されそして受入番号ＨＢ ８６９３及びＨＢ ８６
９４をそれぞれ付与された。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/577 9162−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 アラン シー．ブラボン アメリカ合衆国，メリーランド 20331, アンドリュース エア フォース ベイ ス，マルコルム グロウ ユーエスエー エフ メディカル センター（番地な し)
Claims (3)
- 【請求項１】 ヒト乳房上皮細胞によって放される、
５．０〜５．２の等電点を有する約４０〜４６kdの血清
可溶性細胞外サイトケラチン上に存在する、アメリカン
タイプカルチャーコレクション取得番号ＨＢ８４５８と
して寄託されたハイブリドマ細胞系から生成されたＵＣ
Ｄ／ＡＢ ６．１１抗体及びアメリカンタイプカルチャ
ーコレクション取得番号ＨＢ８６９４として寄託された
ハイブリドマ細胞系から生成されたＵＣＤ／ＰＲ １
０．１１抗体によって認識されるエピトープに対するモ
ノクローナル抗体を生産するハイブリドマ細胞系。 - 【請求項２】 前記ハイブリドマ細胞系がアメリカンタ
イプカルチャーコレクション取得番号ＨＢ８４５８を有
するハイブリドマ細胞系ＵＣＤ／ＡＢ ６．１１である
特許請求の範囲第１項記載のハイブリドマ細胞系。 - 【請求項３】 前記ハイブリドマ細胞系がアメリカンタ
イプカルチャーコレクション取得番号ＨＢ８６９４を有
するハイブリドマ細胞系ＵＣＤ／ＡＢ １０．１１であ
る特許請求の範囲第１項記載のハイブリドマ細胞系。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US56886284A | 1984-01-06 | 1984-01-06 | |
| US568862 | 1984-01-06 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63177250A Division JP2537539B2 (ja) | 1984-01-06 | 1988-07-18 | モノクロ―ナル抗体 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08275778A JPH08275778A (ja) | 1996-10-22 |
| JP2617289B2 true JP2617289B2 (ja) | 1997-06-04 |
Family
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Family Applications (5)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60500313A Expired - Lifetime JP2723203B2 (ja) | 1984-01-06 | 1985-01-03 | サイトケラチン腫瘍マーカー及びそれらの検出のためのアッセイ |
| JP63177250A Expired - Lifetime JP2537539B2 (ja) | 1984-01-06 | 1988-07-18 | モノクロ―ナル抗体 |
| JP63177251A Expired - Lifetime JPH0681760B2 (ja) | 1984-01-06 | 1988-07-18 | サイトケラチン腫瘍マーカー |
| JP8086581A Expired - Lifetime JP2617289B2 (ja) | 1984-01-06 | 1996-04-09 | モノクローナル抗体生産性ハイブリドマ細胞系 |
| JP9260504A Expired - Lifetime JP2896362B2 (ja) | 1984-01-06 | 1997-09-25 | 癌腫の識別方法 |
Family Applications Before (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60500313A Expired - Lifetime JP2723203B2 (ja) | 1984-01-06 | 1985-01-03 | サイトケラチン腫瘍マーカー及びそれらの検出のためのアッセイ |
| JP63177250A Expired - Lifetime JP2537539B2 (ja) | 1984-01-06 | 1988-07-18 | モノクロ―ナル抗体 |
| JP63177251A Expired - Lifetime JPH0681760B2 (ja) | 1984-01-06 | 1988-07-18 | サイトケラチン腫瘍マーカー |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9260504A Expired - Lifetime JP2896362B2 (ja) | 1984-01-06 | 1997-09-25 | 癌腫の識別方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4775620A (ja) |
| EP (1) | EP0167616B1 (ja) |
| JP (5) | JP2723203B2 (ja) |
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| CA (1) | CA1336171C (ja) |
| DE (1) | DE3588043T2 (ja) |
| WO (1) | WO1985003132A1 (ja) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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