JP2868671B2 - 抗ウイルス組合せ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は抗ウイルス剤の組合せに関する。
更に詳しくは、本発明は１，３‐オキサチオランヌクレ
オシドアナログと他の抗ウイルス剤、特にＨＩＶに対し
て有効な剤との組合せに関する。

【０００２】ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は後天性
免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）及び慢性神経障害を含めた
様々な臨床症状を引き起こす。ＡＺＴ、ｄｄＣ及びｄｄ
ＩのようなヌクレオシドはインビトロでＨＩＶ複製を阻
害し、細胞によるそれらの５´‐三リン酸誘導体への代
謝後にウイルスコード逆転写酵素でそれらの抗ウイルス
活性を発揮するらしい。ＡＺＴはエイズ患者において罹
患率及び死亡率を減少させる。しかしながら、細胞のＨ
ＩＶ感染は宿主染色体中にウイルスゲノムを組込み、こ
のため長期にわたりＡＺＴ治療を続けることが必要であ
った。長期ＡＺＴ療法の結果として骨髄毒性及びＨＩＶ
‐１のＡＺＴ耐性変異体の出現を伴う。同様に、ｄｄＣ
で治療された一部のエイズ患者は末梢ニューロパシーを
生じ、ｄｄＩは膵炎及び末梢ニューロパシーを誘導する
ことが示された。

【０００３】化合物の組合せ使用は、低毒性で同等の抗
ウイルス効果を生じるか又は化合物間の相乗作用が生じ
る場合には薬物効力の増加を生じる。全体的薬物用量が
低下するほど、ＨＩＶの薬物耐性変異体の出現頻度もお
そらく減少するであろう。多数の異なる方法が異なるア
ッセイ系で一緒に作用する化合物の組合せ効果を試験す
るために用いられた。これら方法のすべては制限を有
し、例えば一部の方法はそれらが導かれた場合以外の系
に適用された。ＡＺＴは組換え可溶性ＣＤ４カスタノス
ペルミン及び組換えインターフェロンαを含めた逆転写
以外のＨＩＶ‐１複製ステップで作用する剤と組合せた
ときにインビトロで相乗抗ウイルス活性を示す。しかし
ながら、化合物の組合せは細胞毒性を増加させうること
に注意しなければならない。ＡＺＴ及び組換えインター
フェロンαは正常ヒト骨髄始原細胞で高い細胞毒性効果
を有する。

【０００４】ＡＺＴと他のヌクレオシドとの組合せも研
究された。ｄｄＣは高用量ＡＺＴの骨髄細胞毒性をその
抗ウイルス活性に影響せずに除く。ｄｄＩ及びＡＺＴは
組合せでやや高い選択性を示し、相乗抗ウイルス効果が
正常ヒト骨髄始原細胞に対して相加毒性以上に作用して
いる。

【０００５】下記式(I) の化合物：

【化２】 はＢＣＨ‐１８９又はＮＧＰＢ‐２１としても知られ、
特にエイズの原因体であるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩ
Ｖ）に対して抗ウイルス活性を有すると記載されていた
(5th Anti-Aids Conference,Montreal,Canada 5th-9th
June 1989:Abstracts T.C.O.1 and M.C.P.63；欧州特許
出願公開第３８２５６２号明細書）。式(I) の化合物は
下記式(I-1) 及び(I-2) の２種エナンチオマーのラセミ
混合物である：

【化３】

【０００６】式(I) の化合物のエナンチオマーはＨＩＶ
に対して等効力であるが、一方のエナンチオマー
（（−）エナンチオマー）は（＋）エナンチオマーより
も著しく低い細胞毒性を有する。その（−）エナンチオ
マーは（−）シス‐４‐アミノ‐１‐（２‐ヒドロキシ
メチル‐１，３‐オキサチオラン‐５‐イル）‐１Ｈ‐
ピリミジン‐２‐オンという化学名を有する。それは
（２Ｒ，シス）‐４‐アミノ‐１‐（２‐ヒドロキシメ
チル‐１，３‐オキサチオラン‐５‐イル）‐１Ｈ‐ピ
リミジン‐２‐オンという名称を有した式(I-1) の化合
物の絶対立体化学を有する。この化合物は現在３ＴＣと
して知られる。

【０００７】我々は式(I) の化合物、特にその（−）エ
ナンチオマーがＨＩＶ複製の公知阻害剤と組合せて用い
られた場合に予想外の利点を示すことをここに発見し
た。特に式(I) の化合物は、ＨＩＶ複製の公知阻害剤と
組合せて用いられた場合に、相乗抗ウイルス効果及び／
又は細胞毒性の減少を示す。

【０００８】このため本発明の第一面において、式(I)
の化合物又はその薬学上許容される誘導体及びＨＩＶ複
製の阻害剤からなる組合せが提供される。阻害剤はその
ＨＩＶ複製阻害方法にかかわらずいかなるＨＩＶ複製阻
害剤であってもよい。このような阻害剤としては、例え
ばＨＩＶ逆転写酵素、ＨＩＶプロテアーゼ及びＴＡＴ等
を阻害するものがある。このような阻害剤としては、例
えば３´‐アジド‐３´‐デオキシチミジン（ＡＺＴ，
ジドブジン）、２´，３´‐ジデオキシシチジン（ｄｄ
Ｃ）、２´，３´‐ジデオキシイノシン（ｄｄＩ）、Ｎ
´‐〔１（Ｓ）‐ベンジル‐３‐〔４ａ（Ｓ），８ａ
（Ｓ），３（Ｓ）‐（tert‐ブチルカルバモイル）デカ
ヒドロイソキノリン‐２‐イル〕‐２（Ｒ）‐ヒドロキ
シプロピル〕‐Ｎ″‐（キノリン‐２‐イルカルバモイ
ル）‐Ｌ‐アスパラギンアミド（Ｒｏ３１‐８９５９）
及び（＋）‐Ｓ‐４，５，６，７‐テトラヒドロ‐５‐
メチル‐６‐（３‐メチル‐２‐ブテニル）イミダゾ
〔４，５，１‐ｊｋ〕〔１，４〕ベンゾジアゼピン‐２
（１Ｈ）‐チオン（Ｒ‐８２１５０，ＴＩＢＯ）又はそ
れらの薬学上許容される誘導体がある。

【０００９】好ましくは、式(I) の化合物はその（−）
エナンチオマー（３ＴＣ）の形である。好ましくは、Ｈ
ＩＶ複製の阻害剤はＡＺＴ、ｄｄＩ、Ｒｏ３１‐８９５
９又はＲ‐８２１５０（ＴＩＢＯ）から選択される。ｄ
ｄＩ又は特にＡＺＴがＨＩＶ複製の阻害剤として特に好
ましい。式(I) の化合物が（−）エナンチオマーの形で
ある場合、それは通常対応（＋）エナンチオマーを実質
上含まずに提供され、即ち約５％w/w 以下、好ましくは
約２％w/w 以下、特に約１％w/w 以下の（＋）エナンチ
オマーが存在するだけである。

【００１０】“薬学上許容される誘導体”とは、親化合
物のあらゆる薬学上許容される塩、エステル又はこのよ
うなエステルの塩あるいは受容体への投与で親化合物又
は抗ウイルス上活性な代謝産物もしくは残基を（直接的
又は間接的に）形成することができるあらゆる他の化合
物を意味する。式(I) の化合物が塩基部分及びオキサチ
オラン環のヒドロキシメチル基の双方における官能基で
その薬学上許容される誘導体を形成するように変えてよ
いことは当業者にとり明らかであろう。すべてのこのよ
うな官能基における修正が本発明の範囲内に含まれる。
しかしながら、オキサチオラン環の２‐ヒドロキシメチ
ル基の修正で得られた薬学上許容される誘導体が特に興
味ある。

【００１１】式(I) の化合物の好ましいエステルとして
は、２‐ヒドロキシメチル基の水素 分岐鎖アルキル（例えばメチル、エチル、ｎ‐プロピ
ル、ｔ‐ブチル、ｎ‐ブチル）、アルコキシアルキル
（例えばメトキシメチル）、アラルキル（例えばベンジ
ル）、アリールオキシアルキル（例えばフェノキシメチ
ル）、アリール（例えばハロゲン、Ｃ_1-4 アルキル又は
Ｃ_1-4 アルコキシで場合により置換されたフェニル）か
ら選択される〕により置換された化合物；アルキル‐又
はアラルキルスルホニル（例えばメタンスルホニル）の
ようなスルホン酸エステル；アミノ酸エステル（例えば
Ｌ‐バリル又はＬ‐イソロイシル）及び一、二又は三リ
ン酸エステルがある。上記エステルに関して他に指摘の
ないかぎり、存在するいかなるアルキル部分も有利には
炭素原子１〜１６、特に炭素原子１〜４を有する。この
ようなエステルに存在するいかなるアリール部分もフェ
ニル基を有することが有利である。特に、エステルはＣ
_1-16アルキルエステル、非置換ベンジルエステル又は少
なくとも１つのハロゲン（臭素、塩素、フッ素又はヨウ
素）、Ｃ_1-6 アルキル、Ｃ_1-6 アルコキシ、ニトロもし
くはトリフルオロメチル基で置換されたベンジルエステ
ルである。

【００１２】式(I) の化合物の薬学上許容される塩とし
ては薬学上許容される無機及び有機酸及び塩基から誘導
される塩がある。適切な酸の例としては塩酸、臭化水素
酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リ
ン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、ト
ルエン‐ｐ‐スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メ
タンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレ
ン‐２‐スルホン酸及びベンゼンスルホン酸がある。シ
ュウ酸のような他の酸はそれ自体薬学上許容されるもの
でないが、本発明の化合物及びそれらの薬学上許容され
る酸付加塩を得る上で中間体として有用である。適切な
塩基から誘導される塩としてはアルカリ金属（例えばナ
トリウム）、アルカリ土類金属（例えばマグネシウ
ム）、アンモニウム及びＮＲ_４ ⁺ （ＲはＣ_1-4 アルキル
である）塩がある。

【００１３】式(I) の化合物は組合せの第二成分と相乗
的であり及び／又は第二成分の細胞毒性効果を除く。式
(I) の化合物及び第二抗ウイルス剤の有利な効果は、例
えば１：２５０〜２５０：１、好ましくは１：５０〜５
０：１、特に約１：１０〜１０：１の広い比率にわたり
実現される。好都合には、各化合物はそれが単独で用い
られた場合に抗ウイルス活性を示す量で組合せて用いら
れる。

【００１４】本組合せはヒトにおけるウイルス感染又は
ウイルス関連腫瘍に対して通常有用であると予想され、
インビトロ又はインビボでウイルス感染又は腫瘍増殖を
阻害するためのそれらの用法も本発明の範囲内に属す
る。このため第二面において、式(I) の抗ウイルス化合
物及びＨＩＶ複製の阻害剤の同時投与からなるヒトを含
めた哺乳動物におけるウイルス感染の治療方法が提供さ
れる。一緒又は多数の対合組合せのいずれかにおける式
(I) の化合物及び２種以上の第二抗ウイルス剤の組合せ
投与からなる治療方法も本発明の範囲内に属する。式
(I) の化合物及び第二抗ウイルス剤が同時、逐次的又は
組合せのいずれで投与してもよいことは明らかであろ
う。投与が逐次的である場合、第二活性成分を投与する
時間的遅れは組合せの相乗効果の利益を失うようなもの
であってはならない。好ましくは、投与は同時である。
ここで治療に言及するときは確立された感染又は症状の
治療のみならず予防にも及ぶことは当業者にとり明らか
であろう。

【００１５】治療用に必要な本発明の組合せ量は選択さ
れる具体的化合物のみならず投与経路、治療される症状
の性質、患者の年齢及び症状に応じて変わり、最終的に
は担当医又は獣医の裁量に委ねられることも更に明らか
であろう。しかしながら一般に、適切な用量は組合せ剤
の各活性成分に関して約１〜約７５０mg/kg の範囲、例
えば３〜約１２０mg/kg 受容体体重／日のような約１０
〜約７５mg/kg 体重／日、好ましくは６〜９０mg/kg/日
の範囲、最も好ましくは１５〜６０mg/kg/日の範囲であ
る。望ましい用量は単一用量で又は例えば２、３、４又
はそれ以上の準用量／日のような適切な間隔で投与され
る分割された用量で与えられることが都合よい。組合せ
剤は、例えば単位剤形当たり各々の活性成分１０〜１５
００mg、好都合には２０〜１０００mg、最も好都合には
５０〜７００mgを含有した単位剤形で投与されることが
都合よい。理想的には、組合せ剤は各々の活性化合物約
１〜約７５mM、好ましくは約２〜５０mM、最も好ましく
は約３〜約３０mMのピーク血漿濃度に達するように投与
されるべきである。これは例えば場合により塩水中で活
性成分の０．１〜５％溶液の静脈内注射により達成され
るか又は各々の活性成分約１〜約１００mgを含有したボ
ーラスとして経口投与される。望ましい血液レベルは各
々の活性成分約０．０１〜約５．０mg/kg/hrを与える持
続注入により又は約０．４〜約１５mg/kg を含有した断
続注入により維持される。

【００１６】治療用に組合せ剤の活性成分は化合物その
ままとして投与されることが可能であるが、医薬処方剤
として組合せ剤を提供することが好ましい。このため、
本発明は式(I) の化合物又はその薬学上許容される誘導
体及びＨＩＶ複製の阻害剤を１種以上のそれらのための
薬学上許容されるキャリア及び場合により他の治療及び
／又は予防成分と一緒に含む医薬処方剤を更に提供す
る。キャリアは処方の他の成分と適合しかつその受容体
に有害でないという意味で“許容しうる”ものでなけれ
ばならない。医薬処方剤としては経口、経直腸、経鼻、
局所（経口腔及び舌下を含む）、経膣もしくは非経口
（筋肉内、皮下及び静脈内を含む）投与に適した形又は
吸入もしくは通気による投与に適した形がある。処方剤
は適切であれば別個の投薬単位で提供されることが都合
よく、調剤業界で周知のいかなる方法で製造してもよ
い。すべての方法では活性化合物を液体キャリア、微粉
砕固体キャリア又は双方と混ぜ、しかる後必要であれば
製品を望ましい処方に成形するステップを含む。

【００１７】経口投与に適した医薬処方剤は各々が規定
量の活性成分を含有したカプセル、カシェ剤又は錠剤の
ような別個の単位として；粉末又は顆粒として；溶液、
懸濁液又は乳濁液として提供されることが都合よい。活
性成分はボーラス、舐剤又はペーストとして提供しても
よい。経口投与用の錠剤及びカプセルは結合剤、フィラ
ー、滑沢剤、崩壊剤又は保湿剤のような慣用的賦形剤も
含有してよい。錠剤は当業界で周知の方法に従いコート
してもよい。経口液体製剤は例えば水性もしくは油性懸
濁液、溶液、乳濁液、シロップ又はエリキシルの形であ
ってもあるいは使用前に水又は他の適切なビヒクルで調
製される乾燥製剤として提供してもよい。このような液
体製剤は懸濁化剤、乳化剤、非水性ビヒクル（食用油も
含む）又は保存剤のような慣用的添加剤を含有していて
もよい。

【００１８】本発明による化合物は非経口投与（例え
ば、ボーラス注射又は持続注入のような注射による）用
に処方してもよく、保存剤が添加されたアンプル、前充
填シリンジ、少容量注入又は多用量容器中において単位
用量形で提供してもよい。組成物は油性又は水性ビヒク
ル中で懸濁液、溶液又は乳濁液のような形をとって、懸
濁剤、安定剤及び／又は分散剤のような処方剤も含有し
てよい。一方、活性成分は使用前に適切なビヒクル、例
えば無菌無発熱物質水で調製するために滅菌固体物の無
菌的単離又は溶液からの凍結乾燥により得られた粉末形
であってもよい。

【００１９】表皮への局所投与の場合、本発明による化
合物は軟膏、クリームもしくはローションとして又は経
皮パッチとして処方してよい。軟膏及びクリームは、例
えば適切な増粘剤及び／又はゲル化剤の添加で水性又は
油性基剤と共に処方される。ローションは水性又は油性
基剤で処方され、一般に１種以上の乳化剤、安定剤、分
散剤、懸濁化剤、増粘剤又は着色剤も含有する。

【００２０】口内局所投与用に適した処方剤としては、
通常スクロース及びアラビアガム又はトラガカントガム
のような芳香基剤中に活性成分を含むロゼンジ；ゼラチ
ン及びグリセリン又はスクロース及びアラビアガムのよ
うな不活性基剤中に活性成分を含むパステル；適切な液
体キャリア中に活性成分を含む洗口液がある。キャリア
が固体である経直腸投与用に適した医薬処方剤は、最も
好ましくは単位用量坐剤として提供される。適切なキャ
リアとしてはカカオ脂及び当業界で常用される他の物質
があり、坐剤は活性化合物と軟化又は溶融キャリアとの
混和しかる後型内で冷却及び成形により形成されること
が都合よい。

【００２１】膣投与用に適した処方剤は、活性成分に加
えて適切として当業界で公知のようなキャリアを含有し
たペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、
フォーム又はスプレーとして提供してよい。

【００２２】鼻内投与の場合、本発明の化合物は液体ス
プレーもしくは飛散性粉末として又は滴剤の形で用いて
よい。滴剤は更に１種の分散剤、可溶化剤又は懸濁化剤
も含めて水性又は非水性基剤で処方される。液体スプレ
ーは加圧パックから放出されることが都合よい。

【００２３】吸入による投与の場合、本発明による化合
物は通気器、ネブライザー、加圧パック又はエアゾール
スプレーを放出する他の慣用的手段から放出されること
が都合よい。加圧パックはジクロロジフルオロメタン、
トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエ
タン、二酸化炭素又は他の適切なガスのような適切な噴
射剤を含む。加圧エアゾールの場合、投薬単位は計測量
を放出するバルブを備えることで決定される。一方、吸
入又は通気による投与の場合、本発明による化合物は乾
燥粉末組成物、例えば本化合物とラクトース又はデンプ
ンのような適切な粉末基剤との粉末ミックスの形をとっ
てもよい。粉末組成物は例えばゼラチンのようなカプセ
ルもしくはカートリッジ又は粉末が吸入器もしくは通気
器の助けで投与されるブリスターパックの単位剤形で提
供してもよい。

【００２４】所望であれば、活性成分を徐放性にするよ
うに適合された前記処方剤が用いられる。本発明による
医薬組成物は抗菌剤のような他の活性成分又は保存剤も
含有してよい。式(I) の化合物は欧州特許出願公開第３
８２５６２号明細書で記載されたように得られる。その
個々のエナンチオマーはそれらの構成エナンチオマーへ
のラセミ体の分離に関して当業界で公知のいずれかの方
法による分割でそのラセミ体から得られる。特に、それ
らはキラルＨＰＬＣ、シチジンデアミナーゼのような適
切な酵素による酵素媒介エナンチオマー選択性異化作用
又は５´‐ヌクレオチドを用いた適切な誘導体の選択的
酵素分解により公知のラセミ体から得られる。３ＴＣの
製造方法は国際特許出願公開ＷＯ第９１／１７１５９号
明細書で記載されている。

【００２５】下記例は本発明について示すが、但しその
制限としては解釈されない。中間体１ ５‐メトキシ‐１，３‐オキサチオラン‐２‐メタノー
ル安息香酸エステル 熱メタノール（１５ml）中塩化亜鉛（１．６ｇ）の溶液
をトルエン（１３００ml）中メルカプトアセトアルデヒ
ドジメチルアセタール（３４．２ｇ）及びベンゾイルオ
キシアセトアルデヒド（４８．３ｇ）の攪拌溶液に加
え、しかる後窒素下で５０分間加熱還流した。冷却され
た混合液を濃縮し、わずかなトルエンで希釈し、しかる
後多孔質珪藻土で濾過した。合わせた濾液及びトルエン
を水性飽和炭酸水素ナトリウム溶液（×２）及び塩水で
洗浄し、（ＭｇＳＯ_４）乾燥し、しかる後油状物まで蒸
発させ、これをシリカ（２kg、メルク９３８５）上カラ
ムクロマトグラフィーに付してクロロホルムで溶出さ
せ、油状物でアノマーの混合物（約１：１）として標題
生成物（４５．１ｇ）を得た； ¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ
-d₆ ）3.1-3.3(4H),3.42(6H),4.4-4.6(4H),5.41(1H),5.
46(1H),5.54(1H),5.63(1H),7.46(4H),7.58(2H),8.07(4
H);γmax(ＣＨＢｒ₃ ）1717.6cm^-1

【００２６】中間体２ （±）‐シス‐１‐（２‐ベンゾイルオキシメチル‐
１，３‐オキサチオラン‐５‐イル）‐（１Ｈ）‐ピリ
ミジン‐２，４‐ジオン 微粉砕ウラシル（９．６２ｇ）、ヘキサメチルジシラザ
ン（５０ml）及び硫酸アンモニウム（３０mg）の混合液
を透明な溶液が得られるまで窒素下で加熱還流した。こ
れを冷却し、しかる後無色油状物まで蒸発させ、これを
窒素雰囲気下でアセトニトリル（１００ml）に溶解し
た。溶液をアセトニトリル（６００ml）中５‐メトキシ
‐１，３‐オキサチオラン‐２‐メタノール安息香酸エ
ステル（中間体１）（１９．４３ｇ）の攪拌氷冷溶液に
加え、トリメチルシリルトルフルオロメタンスルホネー
ト（１４．７ml）を加えた。氷浴を取除き、溶液を窒素
下で４５分間加熱還流した。冷却及び蒸発後、残渣を１
kgのシリカゲル（メルク９３８５）上カラムクロマトグ
ラフィーによりクロロホルム／メタノール９：１で溶出
させて精製した。適切な分画を冷却し、蒸発させて、粗
製残渣を得た。これを最少の熱メタノール（約１２００
ml）から分別結晶化し、白色結晶として標題化合物
（６．３２ｇ）を得た； ¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ-d₆ ）
11.36(1H,bs),7.50-8.00(6H,m),6.20(1H,t),5.46(2H,
m),4.62(2H,m),3.48(1H,m),3.25(1H,m).

【００２７】中間体３ （±）‐シス‐４‐アミノ‐１‐（２‐ベンゾイルオキ
シメチル‐１，３‐オキサチオラン‐５‐イル）‐（１
Ｈ）‐ピリミジン‐２‐オン 方法（ａ） ヘキサメチルジシラザン（１１０ml）中シトシン（２
０．７０５ｇ）及び硫酸アンモニウム（数mg）の懸濁液
を窒素下で２．５時間にわたり攪拌かつ加熱還流した。
溶媒を蒸発により除去し、残留固体物を乾燥アセトニト
リル（３５０ml）に溶解した。この溶液を窒素下でアセ
トニトリル（６５０ml）中５‐メトキシ‐１，３‐オキ
サチオラン‐２‐メタノール安息香酸エステル（中間体
１）（４３．５７ｇ）の攪拌氷冷溶液に軟質針技術で移
した。トリメチルシリルトルフルオロメタンスルホネー
ト（３３ml）を加え、溶液を環境温度まで加温し（１．
５時間）、しかる後一夜加熱還流した。残留混合物を濃
縮し、飽和水性炭酸水素ナトリウム溶液（５００ml）で
希釈し、しかる後酢酸エチル（３×５００ml）で抽出し
た。合わせた抽出液を水（２×２５０ml）及び塩水（２
５０ml）で洗浄し、（ＭｇＳＯ_４）乾燥し、しかる後泡
状物まで蒸発させ、これをシリカ（６００ｇ、メルク７
７３４）上カラムクロマトグラフィーに付して酢酸エチ
ル‐メタノール混合液で溶出させ、アノマーの混合物
（約１：１、３１．５９ｇ）を得た。混合物を水（４５
ml）及びエタノール（９．０ml）から結晶化させて固体
物（１０．２３ｇ）を得、これをエタノール（１２０m
l）及び水（３０ml）から再結晶化し、白色固体物とし
て標題生成物（９．２６ｇ）を得た；λmax(ＭｅＯＨ）
229.4mm(Ｅ_1cm ^1%610)；272.4mm(Ｅ_1cm ^1%293)； ¹Ｈ
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ-d₆ ）3.14(1H),3.50(1H),4.07(2H),
5.52(1H),5.66(1H),6.28(1H),7.22(2H),7.56(2H),7.72
(2H),8.10(2H).

【００２８】方法（ｂ） オキシ塩化リン（７．０ml）をアセトニトリル（１２０
ml）中１，２，４‐トリアゾール（１１．６５ｇ）の攪
拌氷冷懸濁液に滴下し、しかる後内部温度を１５℃以下
に保ち、トリエチルアミン（２２．７ml）を滴下した。
１０分間後アセトニトリル（３３０ml）中（±）‐シス
‐１‐（２‐ベンゾイルオキシメチル‐１，３‐オキサ
チオラン‐５‐イル）‐（１Ｈ）‐ピリミジン‐２，４
‐ジオン（中間体２）（６．２７ｇ）の溶液をゆっくり
と加えた。次いで攪拌を室温で一夜続けた。混合液を氷
浴で冷却し、トリエチルアミン（３０ml）しかる後水
（２１ml）をゆっくりと加えた。得られた溶液を蒸発さ
せ、残渣を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（４００ml）及
びクロロホルム（３×２００ml）に分配した。合わせた
クロロホルム抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過
し、蒸発させて、粗製残渣（９．７ｇ）を得た。残渣を
１，４‐ジオキサン（２４０ml）に溶解し、濃水性アン
モニア溶液（比重０．８８０、５０ml）を加えた。１．
５時間後に溶液を蒸発させ、残渣をメタノールに溶解さ
せた。これは固体物を沈澱させたが、これを濾去した。
母液をシリカゲル（メルク９３８５、６００ｇ）上カラ
ムクロマトグラフィーにより精製した。適切な分画をプ
ールし、蒸発させ、方法（ａ）で得られた場合と同一の
標題化合物を淡黄褐色固体物（２．１８ｇ）を得た。

【００２９】中間体４ （±）‐シス‐４‐アミノ‐１‐（２‐ヒドロキシメチ
ル‐１，３‐オキサチオラン‐５‐イル）‐（１Ｈ）‐
ピリミジン‐２‐オン メタノール（２５０ml）中（シス）‐４‐アミノ‐１‐
（２‐ベンゾイルオキシメチル‐１，３‐オキサチオラ
ン‐５‐イル）‐（１Ｈ）‐ピリミジン‐２‐オン（中
間体３）（８．１９ｇ）及びアンバーライト(Amberlit
e) ＩＲＡ‐４００（ＯＨ）樹脂（８．２４ｇ）の懸濁
液を１．２５時間にわたり攪拌かつ加熱還流した。固体
物を濾去し、しかる後メタノールで洗浄した。合わせた
濾液を蒸発させた。残渣を酢酸エチル（８０ml）で摩砕
した。得られた白色固体物を濾取し、標題生成物（５．
０９ｇ）を得た； ¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ-d₆ ）3.04(1
H),3.40(1H),3.73(2H),5.18(1H),5.29(1H),5.73(1H),6.
21(1H),7.19(2H),7.81(1H).

【００３０】例１ （−）‐シス‐４‐アミノ‐１‐（２‐ヒドロキシメチ
ル‐１，３‐オキサチオラン‐５‐イル）‐（１Ｈ）‐
ピリミジン‐２‐オン （ｉ）栄養ブロス〔オキソイド社(Oxoid Ltd) 〕の３つ
の５０mlフラスコを栄養寒天プレートから掻き取られた
各々の大腸菌（ＡＴＣＣ２３８４８）で環状に接種し
た。フラスコを２５０回転/minで振盪しながら３７℃で
一夜インキュベートし、しかる後各フラスコを用いて７
Ｌ醗酵槽中のＣＤＤ培地〔３g/l グルタミン酸；０．２
g/l ＭｇＳＯ_４；２．５g/l Ｋ_２ＳＯ_４；２．３g/l Ｎ
ａＣｌ；１．１g/l Ｎａ_２ＨＰＯ_４・２Ｈ_２Ｏ；０．６
g/l ＮａＨ_２ＰＯ_４・２Ｈ_２Ｏ；１．２g/l シチジン〕
４Ｌに接種した。培養物を４Ｌ/minで通気下３７℃で７
５０回転/minで醗酵させた。２４時間増殖後に細胞を遠
心（５０００ｇ、３０分間）で集め、湿重量７２ｇを得
た。細胞ペレットを２０mMトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ
７．５）３００mlに再懸濁し、超音波（４×４５秒間）
で破壊した。細胞砕片を遠心（３０，０００ｇ、３０分
間）により除去し、上澄中のタンパク質を７５％飽和ま
で硫酸アンモニウムの添加で沈降させた。沈降物を遠心
（３０，０００ｇ、３０分間）で集め、ペレットを硫酸
アンモニウム（７５％飽和）含有ＨＥＰＥＳ緩衝液（１
００mM、ｐＨ７．０）２５mlに再懸濁した。酵素溶液を
１２，０００rpm で３０分間の遠心により得た。上澄を
捨て、ペレットを原容量までトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ
７．０、１００mM）に溶解した。

【００３１】（ii）中間体４（１１５mg）を水（１００
ml）に溶解し、攪拌した。酵素溶液（０．５ml）を加
え、混合液をＨＣｌ（２５mM）の継続的添加により一定
ｐＨで維持した。変換はキラルＨＰＬＣによりモニター
し、（＋）エナンチオマーの基質が優先的に脱アミノ化
されたことを示した。２２時間後に（＋）エナンチオマ
ーの基質（ＲＴ１２．５min)が完全に除去され、溶液を
濃水酸化ナトリウムの添加でｐＨ１０．５に調整した。
上記で得られた溶液をｐＨ１１に前平衡化されたＱＡＥ
セファデックスのカラム〔Ａ２５；ファルマシア(Pharm
acia);３０Ｘ１．６cm〕で溶出させた。カラムを水（２
００ml）しかる後ＨＣｌ（０．１Ｍ）で洗浄した。分画
（４０ml）を取出し、逆相ＨＰＬＣで分析した。未反応
（−）エナンチオマーの基質含有の分画５‐１３を合わ
せ、ＨＣｌでｐＨ７．５に調整した。脱アミノ化生成物
含有の分画４７を希ＮａＯＨでｐＨ７．５に調整した。
キラルＨＰＬＣによる分析では、この物質が主成分とし
て一方のエナンチオマー（ＲＴ１０．２min)及び副成分
として他方のエナンチオマー（ＲＴ８．５min)からなる
混合物（e.e 約９０％）であることを示した。

【００３２】（iii)前記段階（ii）を大規模で繰り返し
た。水２５０ml中例１の化合物（３６３mg）を段階
（ｉ）の場合のように調製された酵素溶液（０．５ml）
と共にインキュベートした。更に一部（０．５ml）の酵
素を１８及び４７時間後に追加した。反応混合液を７０
時間攪拌し、しかる後更に６４時間放置した。キラルＨ
ＰＬＣによる分析では（＋）エナンチオマーの基質が完
全に脱アミノ化されたことを示したため、得られた溶液
をＮａＯＨでｐＨ１０．５に調整した。上記溶液を同Ｑ
ＡＥカラムにのせ、段階（ｉ）の場合のように溶出させ
た。残留基質及び脱アミノ化生成物の混合物を含有した
分画２‐６を合わせた。残留基質（（−）エナンチオマ
ー）含有分画７‐１３を合わせ、ｐＨ７．５に調整し
た。脱アミノ化生成物含有分画２５‐２６を合わせ、中
和した。上記分画２‐６を同ＱＡＥカラムで再溶出させ
た。この第二カラムからの分画３‐１１は未反応基質
（（−）エナンチオマー）を含有していた。分画７０は
脱アミノ化生成物を含有していた。 （iv）段階（ii）及び（iii)からの分割された基質分画
を合わせ、ｐＨ７．５に調整した。この溶液を水で充填
されたＸＡＤ‐１６のカラム（４０×２．４cm）で溶出
させた。カラムを水洗し、しかる後アセトン：水（１：
４v/v)で溶出させた。望ましい（−）エナンチオマー含
有の分画を合わせて凍結乾燥し、白色粉末（１９０mg）
を得た。

【００３３】上記で用いたＨＰＬＣ法は下記のとおりで
あった： １．逆相分析ＨＰＬＣ カラム：キャピタルカートリッジ(Capital Cartridge) スフェリゾルブ(Spherisorb)ＯＤＳ‐２（５μＭ） １５０×４．６mm 溶出液：リン酸二水素アンモニウム（５０mM）＋５％Ｍ
ｅＣＮ 流速：１．５ml/min 検出：ＵＶ２７０nm 保持時間：ＢＣＨ１８９ ５．５min ：脱アミノ化ＢＣＨ１８９ ８．１min ２．キラル分析ＨＰＬＣ カラム：シクロボンドＩアセチル(Cyclobond I Acetyl) ２５０×４．６mm 溶出液：０．２％酢酸トリエチルアンモニウム（ｐＨ
７．２） 流速：１．０ml/min 検出：ＵＶ２７０nm 保持時間：ＢＣＨ１８９ １１．０及び１２．５min ：脱アミノ化ＢＣＨ１８９ ８．５及び１０．２min （生体変換は１２．５min でピークの喪失及び１０．２
min で生成物の蓄積をモニターすることにより追跡し
た）

【００３４】例２ ３．１単独又は組合せの抗ウイルス活性 化合物を最初に９６ウェル微量滴定プレートにおいて２
倍ずつ連続希釈した。チェッカーボード滴定は各化合物
希釈液から２５ml部分を単独又は組合せ双方で（新しい
９６ウェル微量滴定プレート中で最終容量５０mlに）ミ
ックスすることにより調製した。ＲＰＭＩ１６４０増殖
培地中で一部のＭＴ‐４細胞（１０^６細胞／ml）を２×
１０^-3感染用量／細胞でＨＩＶ‐１株ＲＦにより感染さ
せた。ウイルスを室温で９０分間吸着させた後、細胞を
ＲＰＭＩ１６４０増殖培地中で洗浄して未吸着ウイルス
を除去し、ＲＰＭＩ１６４０増殖培地に１０^６細胞／ml
で再懸濁した。感染細胞懸濁液５０mlを化合物又は増殖
培地のみ含有のウェルに接種した。擬感染細胞懸濁液５
０mlを非化合物含有ウェルに接種した。次いでプレート
を５％ＣＯ_２／空気中３７℃で７日間インキュベートし
た。インキュベート後、７．５mg/ml の３‐（４，５‐
ジメチルチアゾール‐２‐イル）‐２，５‐ジフェニル
テトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）１０mlをすべてのウ
ェルに加え、プレートを３７℃で更に９０分間インキュ
ベートした。次いでイソプロパノール中１０％(v/v) ト
リトンＸ‐１００ １５０mlを加え、細胞を再懸濁させ
た。１５分間後に室温でプレートをマルチスキャンＭＣ
(Multiskan MC)〔フローラボラトリーズ(Flow Laborato
ries),アービン，ＵＫ〕リーダーにおいて４０５nmで分
析した。黄色ＭＴＴからそのホルマザン誘導体への変換
は未感染未処理細胞で最大であり、未処理感染細胞では
存在しない。

【００３５】用量‐応答曲線を各化合物単独（ＩＣ５０
％値）に関して及び第二化合物の固定濃度下で各化合物
の逆滴定に関してプロットした。ＩＣ５０％値を示すす
べての化合物組合せのイソボログラムをプロットした。
図１‐５はＡＺＴ、ｄｄＣ、ｄｄＩ、Ｒｏ３１‐８９５
９及びＲ‐８２１５０（ＴＩＢＯ）と各々組合された３
ＴＣのイソボログラムである。化合物組合せのＩＣ５０
％値が各化合物自体のＩＣ５０％値を合わせたライン上
に存在する場合、その２化合物は相加的に作用する。組
合せＩＣ５０％がラインの左に存在する場合、その化合
物は相乗的に作用している。ＡＺＴ、ｄｄＣ、ｄｄＩ、
Ｒｏ３１‐８９５９及びＲ‐８２１５０（ＴＩＢＯ）と
組合された３ＴＣに関する用量‐応答曲線は各々図１‐
５で示されている。毒性効果は組合せの抗ウイルス活性
が判明した場合に観察されなかった。

【００３６】例３ 化合物単独及び組合せの細胞毒性 これらの実験において、３ＴＣ、ＡＺＴ及びｄｄＣ単独
及び組合せ（１：１、１：５及び５：１のmg/ml 比）の
細胞毒性を未感染末梢血液リンパ球及び確立されたＴリ
ンパ球細胞系で比較した。細胞毒性は〔^３Ｈ〕‐チミジ
ン取込みアッセイを用いて測定した。ＰＢＬ細胞におい
て各化合物又は１：１組合せに関して得られた典型的な
用量‐応答曲線は各々図６及び７で示されている。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＡＺＴと組合わされた３ＴＣのイソボログラム
を示している。

【図２】ｄｄＣと組合わされた３ＴＣのイソボログラム
を示している。

【図３】ｄｄＩと組合わされた３ＴＣのイソボログラム
を示している。

【図４】Ｒｏ３１‐８９５９と組合わされた３ＴＣのイ
ソボログラムを示している。

【図５】Ｒ‐８２１５０（ＴＩＢＯ）と組合わされた３
ＴＣのイソボログラムを示している。

【図６】ＰＢＬ細胞において各化合物又は１：１組合せ
に関して得られた典型的な用量‐応答曲線について示し
ている。

【図７】ＰＢＬ細胞において各化合物又は１：１組合せ
に関して得られた典型的な用量‐応答曲線について示し
ている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平５−501117（ＪＰ，Ａ) 特開 平６−506199（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−7282（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−204414（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−142733（ＪＰ，Ａ) 特開 昭64−38030（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−270876（ＪＰ，Ａ) 特表 平２−504283（ＪＰ，Ａ) 国際公開90／8550（ＷＯ，Ａ１) 国際公開90／11081（ＷＯ，Ａ１) 国際公開90／14830（ＷＯ，Ａ１) Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒ ｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，176（１）, （1991．４．15），ｐ．180−８ (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) A61K 31/505 A61K 31/47 A61K 31/55 A61K 31/70 ＣＡ（ＳＴＮ)

Claims (11)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】（２Ｒ，シス）−４−アミノ−１−（２−
   ヒドロキシメチル−１，３−オキサチオラン−５−イ
   ル）−１Ｈ−ピリミジン−２−オン（３ＴＣ）又はその
   薬学上許容される塩、エステル又は該エステルの塩、及
   び３´−アジド−３´−デオキシチミジン（ＡＺＴ）又
   はその薬学上許容される塩、エステル又は該エステルの
   塩からなる抗ウイルス医薬処方剤。
2. 【請求項２】（２Ｒ，シス）−４−アミノ−１−（２−
   ヒドロキシメチル−１，３−オキサチオラン−５−イ
   ル）−１Ｈ−ピリミジン−２−オン（３ＴＣ）及び３´
   −アジド−３´−デオキシチミジン又はその薬学上許容
   される塩、エステル又は該エステルの塩からなる請求項
   １に記載の医薬処方剤。
3. 【請求項３】３ＴＣが相乗的抗ウイルス効果を奏する、
   請求項１又は２に記載の医薬処方剤。
4. 【請求項４】３ＴＣ対ＡＺＴの比率が重量で２５０：１
   〜１：２５０である、請求項１〜３のいずれか一項に記
   載の医薬処方剤。
5. 【請求項５】３ＴＣ対ＡＺＴの比率が１：１０〜１０：
   １である、請求項４に記載の医薬処方剤。
6. 【請求項６】３ＴＣ及びＡＺＴの同時投与に適してい
   る、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬処方剤。
7. 【請求項７】３ＴＣ及びＡＺＴの逐次投与に適してい
   る、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬処方剤。
8. 【請求項８】（２Ｒ，シス）−４−アミノ−１−（２−
   ヒドロキシメチル−１，３−オキサチオラン−５−イ
   ル）−１Ｈ−ピリミジン−２−オン（３ＴＣ）又はその
   薬学上許容される塩、エステル又は該エステルの塩、及
   び３′−アジド−３′−デオキシチミジン（ＡＺＴ）又
   はその薬学上許容される塩、エステル又は該エステルの
   塩、及び薬学上許容されるキャリアからなる抗ウイルス
   医薬処方剤。
9. 【請求項９】経口投与に適している、請求項８に記載の
   医薬処方剤。
10. 【請求項１０】３ＴＣ及びＡＺＴの同時投与に適してい
    る、請求項８又は９に記載の医薬処方剤。
11. 【請求項１１】３ＴＣ及びＡＺＴの逐次投与に適してい
    る、請求項８又は９に記載の医薬処方剤。