JP2823519B2 - 自己由来の上皮増殖因子を含むワクチン組成物 - Google Patents
自己由来の上皮増殖因子を含むワクチン組成物Info
- Publication number
- JP2823519B2 JP2823519B2 JP6335303A JP33530394A JP2823519B2 JP 2823519 B2 JP2823519 B2 JP 2823519B2 JP 6335303 A JP6335303 A JP 6335303A JP 33530394 A JP33530394 A JP 33530394A JP 2823519 B2 JP2823519 B2 JP 2823519B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- egf
- vaccine composition
- animals
- growth factor
- epidermal growth
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 title claims description 60
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 title claims description 58
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 title claims description 58
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 20
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 18
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 title claims 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 13
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims description 13
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 12
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 claims description 6
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 claims description 6
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 3
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 claims description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 claims 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 claims 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 52
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 50
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 23
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 20
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 20
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 17
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 16
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 14
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 13
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 12
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 11
- 208000003468 Ehrlich Tumor Carcinoma Diseases 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 9
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 7
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 7
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 7
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 7
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 5
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 5
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 4
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 4
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 3
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- QPJBWNIQKHGLAU-IQZHVAEDSA-N ganglioside GM1 Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](CO)O1 QPJBWNIQKHGLAU-IQZHVAEDSA-N 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010064912 Malignant transformation Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000036212 malign transformation Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- GICIECWTEWJCRE-UHFFFAOYSA-N 3,4,4,7-tetramethyl-2,3-dihydro-1h-naphthalene Chemical compound CC1=CC=C2C(C)(C)C(C)CCC2=C1 GICIECWTEWJCRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 6-[(5S)-5-[[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]methyl]-2-oxo-1,3-oxazolidin-3-yl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C[C@H]1CN(C(O1)=O)C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 102100033312 Alpha-2-macroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 101100373011 Drosophila melanogaster wapl gene Proteins 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000004354 Vulvar Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 230000001164 bioregulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 201000010983 breast ductal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000000574 ganglionic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 210000004483 pasc Anatomy 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 210000001913 submandibular gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000002978 thoracic duct Anatomy 0.000 description 1
- 230000004222 uncontrolled growth Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/485—Epidermal growth factor [EGF], i.e. urogastrone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は免疫学分野、特に自己由
来の（自己の）上皮増殖因子（ＥＧＦ）に対して自己免
疫反応を起こすことができるワクチン組成物に関する。
来の（自己の）上皮増殖因子（ＥＧＦ）に対して自己免
疫反応を起こすことができるワクチン組成物に関する。
【０００２】本発明の重要な目的は、ＥＧＦ依存性悪性
腫瘍の活性免疫療法のためのワクチン組成物を得ること
である。かかるワクチン組成物は上記腫瘍の増殖を阻害
することができ、それ故に悪性新生組織及び他のＥＧＦ
関連疾患の治療に有用である。従って本発明はまた、癌
治療の分野にも関連する。
腫瘍の活性免疫療法のためのワクチン組成物を得ること
である。かかるワクチン組成物は上記腫瘍の増殖を阻害
することができ、それ故に悪性新生組織及び他のＥＧＦ
関連疾患の治療に有用である。従って本発明はまた、癌
治療の分野にも関連する。
【０００３】
【従来技術】上皮増殖因子は上皮細胞の増殖を刺激する
ポリペプチドであり、悪性トランスフォーメーションに
関与する成長因子の１つであると考えられている。その
作用は主として膜受容体を介して行われる。
ポリペプチドであり、悪性トランスフォーメーションに
関与する成長因子の１つであると考えられている。その
作用は主として膜受容体を介して行われる。
【０００４】上皮増殖因子（以下ＥＧＦという）は５３
個のアミノ酸からなるポリペプチドであり、その分子量
は約６０４５Ｄである。これはネズミ顎下腺から初めて
単離精製され（Ｃｏｈｅｎ Ｓ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．（１９６２）２３７，１．５５５）、後に類似の
分子がヒトの尿から得られた（Ｃｏｈｅｎ Ｓ．，Ｈｕ
ｍａｎ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔ
ｏｒ：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅ
ｓ ＰＮＡ ＵＳＡ，７２，１９７５ １３１７）。
個のアミノ酸からなるポリペプチドであり、その分子量
は約６０４５Ｄである。これはネズミ顎下腺から初めて
単離精製され（Ｃｏｈｅｎ Ｓ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．（１９６２）２３７，１．５５５）、後に類似の
分子がヒトの尿から得られた（Ｃｏｈｅｎ Ｓ．，Ｈｕ
ｍａｎ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔ
ｏｒ：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅ
ｓ ＰＮＡ ＵＳＡ，７２，１９７５ １３１７）。
【０００５】ＥＧＦは、インビトロ及びインビボの両方
において、上皮細胞と間充織細胞の増殖を刺激すること
ができる（Ｃｏｈｅｎ Ｓ．，Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ
Ｇ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ７２，１３１７，１９７
５）。ＥＧＦはある種の胸部癌細胞株において特異的な
刺激を与える（Ｏｚｂｏｒｎｅ Ｃ．Ｋ．ら、Ｃａｎ．
Ｒｅｓ．，４０，２．３６１（１９８０））。乳腺の分
化過程におけるＥＧＦの役割、主として小葉肺胞系の発
達に対する役割が実証されている（ＴｏｎｅｌｌｉＣ．
Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８０）２８５，２５０−２５
２）。
において、上皮細胞と間充織細胞の増殖を刺激すること
ができる（Ｃｏｈｅｎ Ｓ．，Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ
Ｇ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ７２，１３１７，１９７
５）。ＥＧＦはある種の胸部癌細胞株において特異的な
刺激を与える（Ｏｚｂｏｒｎｅ Ｃ．Ｋ．ら、Ｃａｎ．
Ｒｅｓ．，４０，２．３６１（１９８０））。乳腺の分
化過程におけるＥＧＦの役割、主として小葉肺胞系の発
達に対する役割が実証されている（ＴｏｎｅｌｌｉＣ．
Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８０）２８５，２５０−２５
２）。
【０００６】この生体制御作用は、１１８６個のアミノ
酸を有し、分子量約１７０ｋＤの糖タンパク質である膜
受容体（ＥＧＦ−Ｒ）を介して発揮され、その遺伝子は
クローニングされ配列決定されている。受容体の細胞内
ドメインはチロシン特異性プロテインキナーゼの活性と
共役しており、このプロテインキナーゼは悪性トランス
フォーメーション過程への関連を示す癌遺伝子ｖ−ｅｒ
ｂ−Ｂと構造的な相同性を示す（Ｈｅｌｄｉｎ Ｃ．
Ｈ．，Ｃｅｌｌ，３７，９−２０（１９８４））。
酸を有し、分子量約１７０ｋＤの糖タンパク質である膜
受容体（ＥＧＦ−Ｒ）を介して発揮され、その遺伝子は
クローニングされ配列決定されている。受容体の細胞内
ドメインはチロシン特異性プロテインキナーゼの活性と
共役しており、このプロテインキナーゼは悪性トランス
フォーメーション過程への関連を示す癌遺伝子ｖ−ｅｒ
ｂ−Ｂと構造的な相同性を示す（Ｈｅｌｄｉｎ Ｃ．
Ｈ．，Ｃｅｌｌ，３７，９−２０（１９８４））。
【０００７】ＥＧＦとその受容体は高い特異性を有する
分子複合体を構成し、両者間の相互作用は細胞成長制御
の重要なメカニズムを発現する。高濃度のＥＧＦ−Ｒは
胸癌、膀胱癌、卵巣癌、外陰癌、結腸癌、肺癌、脳癌及
び食道癌のような上皮起源の悪性腫瘍で検出されてい
る。腫瘍成長の制御の際にＥＧＦとその受容体が演じる
役割は知られていないが、腫瘍細胞内でのＥＧＦ−Ｒ発
現が自己分泌増殖刺激のためのメカニズムを提供し、制
御不能の増殖をもたらすという説がある（Ｓｃｈｌｅｓ
ｓｉｎｇｅｒ Ｊ．，ＳｃｈｒｅｉｂｅｒＡ．Ｂ．，Ｌ
ｅｖｉ Ａ．，Ｌｉｂｅｒｍａｎ Ｔ．，Ｙａｒｄｅｎ
Ｙ．，Ｃｒｉｔ． Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９
８３，１４（２），９３−１１１）。
分子複合体を構成し、両者間の相互作用は細胞成長制御
の重要なメカニズムを発現する。高濃度のＥＧＦ−Ｒは
胸癌、膀胱癌、卵巣癌、外陰癌、結腸癌、肺癌、脳癌及
び食道癌のような上皮起源の悪性腫瘍で検出されてい
る。腫瘍成長の制御の際にＥＧＦとその受容体が演じる
役割は知られていないが、腫瘍細胞内でのＥＧＦ−Ｒ発
現が自己分泌増殖刺激のためのメカニズムを提供し、制
御不能の増殖をもたらすという説がある（Ｓｃｈｌｅｓ
ｓｉｎｇｅｒ Ｊ．，ＳｃｈｒｅｉｂｅｒＡ．Ｂ．，Ｌ
ｅｖｉ Ａ．，Ｌｉｂｅｒｍａｎ Ｔ．，Ｙａｒｄｅｎ
Ｙ．，Ｃｒｉｔ． Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９
８３，１４（２），９３−１１１）。
【０００８】腫瘍細胞内のＥＧＦ−Ｒの存在はヒト胸癌
の予後の悪さの指標となることがわかっている。胸癌の
約４０％はＥＧＦに対する高い親和性を有する特異的結
合部位を示し、またエストロゲン受容体の存在とは負の
相関が存在し、これはＥＧＦ−Ｒが脱分化マーカーとし
て、あるいは悪性細胞の増殖の潜在的能力の指標として
役立つことを示している（Ｐｅｒｅｚ Ｒ．，Ｐａｓｃ
ｕａｌ Ｍ．Ｒ．，Ｍａｃｉａｓ Ａ．，Ｌａｇｅ
Ａ．，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ４，１８９−１９３，
１９８４）。
の予後の悪さの指標となることがわかっている。胸癌の
約４０％はＥＧＦに対する高い親和性を有する特異的結
合部位を示し、またエストロゲン受容体の存在とは負の
相関が存在し、これはＥＧＦ−Ｒが脱分化マーカーとし
て、あるいは悪性細胞の増殖の潜在的能力の指標として
役立つことを示している（Ｐｅｒｅｚ Ｒ．，Ｐａｓｃ
ｕａｌ Ｍ．Ｒ．，Ｍａｃｉａｓ Ａ．，Ｌａｇｅ
Ａ．，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ４，１８９−１９３，
１９８４）。
【０００９】また、ＥＧＦ−Ｒ発現は初期胸癌腫におけ
るよりも、局所的神経節変形（ｒｅｇｅｉｏｎａｌ ｇ
ａｎｇｌｉｏｎａｌ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）における
方が高いという報告もされている（Ｓａｉｎｓｂｕｒｙ
Ｊ．Ｒ．ら、（１９８５）Ｌａｎｃｅｔ １（８、４
２５），３６４−３６６）。また、受容体の発現は、胸
癌腫細胞の様々な組織学的サブタイプにおいて異なって
おり、このことがまたそれらの存在を予後の悪さを示す
シグナルとしているのであるという報告もされている
（Ｍａｃｉａｓ Ａ．ら（１９８６）Ａｎｔｉｃａｎｃ
ｅｒ Ｒｅｓ．６：８４９−８５２）。
るよりも、局所的神経節変形（ｒｅｇｅｉｏｎａｌ ｇ
ａｎｇｌｉｏｎａｌ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）における
方が高いという報告もされている（Ｓａｉｎｓｂｕｒｙ
Ｊ．Ｒ．ら、（１９８５）Ｌａｎｃｅｔ １（８、４
２５），３６４−３６６）。また、受容体の発現は、胸
癌腫細胞の様々な組織学的サブタイプにおいて異なって
おり、このことがまたそれらの存在を予後の悪さを示す
シグナルとしているのであるという報告もされている
（Ｍａｃｉａｓ Ａ．ら（１９８６）Ａｎｔｉｃａｎｃ
ｅｒ Ｒｅｓ．６：８４９−８５２）。
【００１０】Ｂａｌｂ−ｃマウスのエールリッヒ腹水腫
瘍（ＥＡＴ）モデルで行われた先の研究によれば、ＥＧ
Ｆのインビボ阻害効果が証明され（Ｌｏｍｂａｒｄｅｒ
ｏＪ．ら、Ｎｅｏｐｌａｓｍａ ３３，４（１９８
７））、この分子を生物学的応答モディファイヤーとし
てみなし得ることが示唆された。ＥＧＦ依存性腫瘍の細
胞膜にはＥＧＦ前駆体分子が存在することが前に報告さ
れている。本発明者らはこのことを重要な事実として報
告しており、この分子を自己抗体の作用の標的であると
みなしている（キューバ特許出願Ｎｏ．１１３／９
３）。様々な研究で得られた結果により、ＥＧＦ／ＥＧ
Ｆ−Ｒ系を治療作用の標的とみなし得る可能性が出てき
たのである。
瘍（ＥＡＴ）モデルで行われた先の研究によれば、ＥＧ
Ｆのインビボ阻害効果が証明され（Ｌｏｍｂａｒｄｅｒ
ｏＪ．ら、Ｎｅｏｐｌａｓｍａ ３３，４（１９８
７））、この分子を生物学的応答モディファイヤーとし
てみなし得ることが示唆された。ＥＧＦ依存性腫瘍の細
胞膜にはＥＧＦ前駆体分子が存在することが前に報告さ
れている。本発明者らはこのことを重要な事実として報
告しており、この分子を自己抗体の作用の標的であると
みなしている（キューバ特許出願Ｎｏ．１１３／９
３）。様々な研究で得られた結果により、ＥＧＦ／ＥＧ
Ｆ−Ｒ系を治療作用の標的とみなし得る可能性が出てき
たのである。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】ＥＧＦ−Ｒに対するモ
ノクローナル抗体を用いた受動免疫療法が多くの研究目
的となっており、これらの研究は、受容体の抗体による
特異的な認識がＥＧＦ結合を阻害し、悪性細胞の分裂誘
発刺激に対して阻害的効果を与えていることを示した
（ＳＡＴＯ Ｊ．Ｄ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ，１４６，６３−８１（１９８
７））。しかしこれらの抗体はネズミ起源のものであ
り、通常はヒト抗マウス抗体応答（ＨＡＭＡ）をひき起
こすのである。
ノクローナル抗体を用いた受動免疫療法が多くの研究目
的となっており、これらの研究は、受容体の抗体による
特異的な認識がＥＧＦ結合を阻害し、悪性細胞の分裂誘
発刺激に対して阻害的効果を与えていることを示した
（ＳＡＴＯ Ｊ．Ｄ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ，１４６，６３−８１（１９８
７））。しかしこれらの抗体はネズミ起源のものであ
り、通常はヒト抗マウス抗体応答（ＨＡＭＡ）をひき起
こすのである。
【００１２】本発明がなされるまで、ＥＧＦ依存性腫瘍
に対する活性な免疫療法であってその増殖を阻害するこ
とができるものは提案されたことはなかった。これは従
来技術は一貫して、自己由来の分子が、宿主が自己に対
して寛容であるように成育しているが故に、免疫反応を
誘発したりはしないだろうと報告しているためである。
に対する活性な免疫療法であってその増殖を阻害するこ
とができるものは提案されたことはなかった。これは従
来技術は一貫して、自己由来の分子が、宿主が自己に対
して寛容であるように成育しているが故に、免疫反応を
誘発したりはしないだろうと報告しているためである。
【００１３】本発明は担体タンパク質と共役した自己由
来のＥＧＦを含有するワクチン組成物を提供するもので
ある。かかる複合体は自己免疫効果により、人体に異種
タンパク質の導入という付帯的効果を伴うことなく、Ｅ
ＧＦ依存性腫瘍増殖を阻害する。
来のＥＧＦを含有するワクチン組成物を提供するもので
ある。かかる複合体は自己免疫効果により、人体に異種
タンパク質の導入という付帯的効果を伴うことなく、Ｅ
ＧＦ依存性腫瘍増殖を阻害する。
【００１４】このワクチン組成物はＥＧＦ依存性腫瘍又
はＥＧＦに関連したいかなる悪性疾患の治療にも使用す
ることができる。本明細書においてＥＧＦは、元の分子
と同様の免疫学的性質及び／又は効果を有するＥＧＦの
いかなるフラグメント及び／又は誘導体をも包含するも
のとして解釈されるべきである。誘導体は通常のアミノ
酸置換体、安定性及び／又は活性を増大させるためのア
ミノ酸の部位特異的な置換体、化学修飾体等を包含する
が、これらに限定されるものではない。
はＥＧＦに関連したいかなる悪性疾患の治療にも使用す
ることができる。本明細書においてＥＧＦは、元の分子
と同様の免疫学的性質及び／又は効果を有するＥＧＦの
いかなるフラグメント及び／又は誘導体をも包含するも
のとして解釈されるべきである。誘導体は通常のアミノ
酸置換体、安定性及び／又は活性を増大させるためのア
ミノ酸の部位特異的な置換体、化学修飾体等を包含する
が、これらに限定されるものではない。
【００１５】
１．免疫原性調製物の取得 ２つの調製物を得た。１つはタンパク質担体と共役した
ネズミＥＧＦ（ｍｕ−ＥＧＦ）であり、もう１つはやは
り担体タンパク質と共役したヒト組換えＥＧＦ（ｈｕ−
ｒｅ−ＥＧＦ）（キューバ国立医薬登録庁（Ｎａｔｉｏ
ｎａ Ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔ Ｒｅｇｉｓｔｅｒ ｏｆ
ｆｉｃｅ ｆｒｏｍ Ｃｕｂａ）、ＨＥＢＥＲＭＩＮ，
ＮＯ．１２６６）である。
ネズミＥＧＦ（ｍｕ−ＥＧＦ）であり、もう１つはやは
り担体タンパク質と共役したヒト組換えＥＧＦ（ｈｕ−
ｒｅ−ＥＧＦ）（キューバ国立医薬登録庁（Ｎａｔｉｏ
ｎａ Ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔ Ｒｅｇｉｓｔｅｒ ｏｆ
ｆｉｃｅ ｆｒｏｍ Ｃｕｂａ）、ＨＥＢＥＲＭＩＮ，
ＮＯ．１２６６）である。
【００１６】担体タンパク質と共役したｈｕ−ｒｅｃ−
ＥＧＦを含有する調製物は非ヒト霊長類及びヒトにのみ
使用すべく得られた。適当なアジュバントを適用した。
タンパク質担体と共役したｍｕ−ＥＧＦは自己由来ＥＧ
Ｆ分子を含む調製物の免疫原性と抗腫瘍効果を決定する
ためのモデルとしてマウスで行う研究において使用す
る。
ＥＧＦを含有する調製物は非ヒト霊長類及びヒトにのみ
使用すべく得られた。適当なアジュバントを適用した。
タンパク質担体と共役したｍｕ−ＥＧＦは自己由来ＥＧ
Ｆ分子を含む調製物の免疫原性と抗腫瘍効果を決定する
ためのモデルとしてマウスで行う研究において使用す
る。
【００１７】ｈｕ−ＥＧＦは霊長類のＥＧＦに非常に類
似しており自己分子として認識されるので、免疫原性試
験はｈｕ−ＥＧＦ−担体タンパク質共役体を投与した霊
長類で行われた。その結果から、自己由来分子が引き出
すことができる免疫原性応答を実証することができた。
似しており自己分子として認識されるので、免疫原性試
験はｈｕ−ＥＧＦ−担体タンパク質共役体を投与した霊
長類で行われた。その結果から、自己由来分子が引き出
すことができる免疫原性応答を実証することができた。
【００１８】調製物を得るために、１０ｍＭ ＰＢＳ／
ＭｇＣｌ２中ｍｕ−又はｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦの溶液
を、同じ溶媒中担体タンパク質の溶液と、タンパク質１
モルあたり１〜５モルのＥＧＦの割合で混合する。その
後０．５％グルタルアルデヒドを添加し０．１％〜０．
０５％の最終濃度を得る。混合物を室温で１〜３時間イ
ンキュベートし、次いでＰＢＳ／ＭｇＣｌ２１０ｍＭ中
で少なくとも３回透析溶液を替えて透析を行う。
ＭｇＣｌ２中ｍｕ−又はｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦの溶液
を、同じ溶媒中担体タンパク質の溶液と、タンパク質１
モルあたり１〜５モルのＥＧＦの割合で混合する。その
後０．５％グルタルアルデヒドを添加し０．１％〜０．
０５％の最終濃度を得る。混合物を室温で１〜３時間イ
ンキュベートし、次いでＰＢＳ／ＭｇＣｌ２１０ｍＭ中
で少なくとも３回透析溶液を替えて透析を行う。
【００１９】 共役体（Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）特性： 共役効率及び抗原性保持の試験はＥＬＩＳＡアッセイに
より行う。活性化ＰＶＣ（ＮＵＮＣ）のＥＬＩＳＡプレ
ートを、使用した担体タンパク質に対する抗血清５０μ
ｌ（濃度１〜１０μｇ／ｍｌ）でコートした。コレラ毒
素Ｂ鎖（ＣＴＢ）を担体として使用する場合は、プレー
トはガングリオシドＧＭ１でコートした。
より行う。活性化ＰＶＣ（ＮＵＮＣ）のＥＬＩＳＡプレ
ートを、使用した担体タンパク質に対する抗血清５０μ
ｌ（濃度１〜１０μｇ／ｍｌ）でコートした。コレラ毒
素Ｂ鎖（ＣＴＢ）を担体として使用する場合は、プレー
トはガングリオシドＧＭ１でコートした。
【００２０】次にＰＢＳ／ツイーンで３回洗浄を行い、
その後プレートをＰＢＳ／ツイーン中０．５％〜１％の
ＢＳＡの溶液でブロックし、３７℃で３０分〜１時間イ
ンキュベートした。アッセイすべき共役体の０．１〜
０．００１ｍｇ／ｍｌ希釈液を各プレートに５０μｌ／
ウェルずつ添加し、３７℃で３０分〜１時間インキュベ
ートした。
その後プレートをＰＢＳ／ツイーン中０．５％〜１％の
ＢＳＡの溶液でブロックし、３７℃で３０分〜１時間イ
ンキュベートした。アッセイすべき共役体の０．１〜
０．００１ｍｇ／ｍｌ希釈液を各プレートに５０μｌ／
ウェルずつ添加し、３７℃で３０分〜１時間インキュベ
ートした。
【００２１】次の工程では、マウス抗ｈｕ−ｒｅｃ−Ｅ
ＧＦ抗血清を１：５００〜１：１０００の希釈で５０μ
ｌ／ウェルずつ添加し、３７℃で３０分〜１時間インキ
ュベートした。最終工程として、プレートを抗マウスア
ルカリホスファターゼ抗血清で、１：５００〜１：１０
００の希釈下、５０μｌ／ウェルずつ、３７℃で３０分
〜１時間インキュベートした。
ＧＦ抗血清を１：５００〜１：１０００の希釈で５０μ
ｌ／ウェルずつ添加し、３７℃で３０分〜１時間インキ
ュベートした。最終工程として、プレートを抗マウスア
ルカリホスファターゼ抗血清で、１：５００〜１：１０
００の希釈下、５０μｌ／ウェルずつ、３７℃で３０分
〜１時間インキュベートした。
【００２２】ｐ−ニトロフェニルホスフェートをジエタ
ノールアミン中１ｍｇ／ｍｌの濃度で５０μｌ／ウェル
ずつ加えて３７℃で３０分間インキュベートを行ったと
ころ反応液が呈色した。ＥＬＩＳＡプレートリーダーで
光学濃度を４０５ｎｍで測定した。
ノールアミン中１ｍｇ／ｍｌの濃度で５０μｌ／ウェル
ずつ加えて３７℃で３０分間インキュベートを行ったと
ころ反応液が呈色した。ＥＬＩＳＡプレートリーダーで
光学濃度を４０５ｎｍで測定した。
【００２３】共役体はプレートをコーティングしている
分子に対する認識部位を保持しており、この分子は担体
タンパク質を特異的に認識し、同時に抗ＥＧＦ抗血清に
より認識されることができるので、結果から分子の活性
と共役の効率が示された。
分子に対する認識部位を保持しており、この分子は担体
タンパク質を特異的に認識し、同時に抗ＥＧＦ抗血清に
より認識されることができるので、結果から分子の活性
と共役の効率が示された。
【００２４】ＩＩ．ｍｕ−ＥＧＦ含有調製物により引き
出された効果のキャラクタリゼーション 前臨床試験 ＩＩ−ａ）内因性ＥＧＦ免疫原性：マウスにおける自己
免疫誘導 エンドゲン（ｅｎｄｏｇｅｎ）ＥＧＦに対する自己免疫
を誘導するという上記Ｉで述べた方法により得られたｍ
ｕ−ＥＧＦ含有免疫原性調製物の能力を証明するため
に、Ｂａｌｂ／ｃマウスで試験を行った。動物群には、
担体タンパク質と共役したｍｕ−ＥＧＦを４〜６週間の
間、１週間当たり各動物毎に５０〜１００μｇの範囲の
様々な用量で接種した。
出された効果のキャラクタリゼーション 前臨床試験 ＩＩ−ａ）内因性ＥＧＦ免疫原性：マウスにおける自己
免疫誘導 エンドゲン（ｅｎｄｏｇｅｎ）ＥＧＦに対する自己免疫
を誘導するという上記Ｉで述べた方法により得られたｍ
ｕ−ＥＧＦ含有免疫原性調製物の能力を証明するため
に、Ｂａｌｂ／ｃマウスで試験を行った。動物群には、
担体タンパク質と共役したｍｕ−ＥＧＦを４〜６週間の
間、１週間当たり各動物毎に５０〜１００μｇの範囲の
様々な用量で接種した。
【００２５】最初の週に免疫原性調製物を完全フロイン
トアジュバントで１：１の割合で調製し、以後すべての
用量は不完全フロイントアジュバントで調製した。アジ
ュバントのみを動物に投与した以外は上記と同様の操作
を対照群について行った。最後の免疫化の１週間後、動
物から血液を抽出し、血液の残りから血清を分離し、ｍ
ｕ−ＥＧＦに対する抗体の力価をＥＬＩＳＡ法で決定し
た。
トアジュバントで１：１の割合で調製し、以後すべての
用量は不完全フロイントアジュバントで調製した。アジ
ュバントのみを動物に投与した以外は上記と同様の操作
を対照群について行った。最後の免疫化の１週間後、動
物から血液を抽出し、血液の残りから血清を分離し、ｍ
ｕ−ＥＧＦに対する抗体の力価をＥＬＩＳＡ法で決定し
た。
【００２６】 ＩＩ−ｂ）ｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦの免疫原性 マウスにおけるｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦの免疫原性を立証
し、かつｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦに対する抗体がｍｕ−Ｅ
ＧＦを認識することを示すために、Ｂａｌｂ／ｃマウス
で実験を行った。動物群には、４〜６週間の間、１週間
当たり各動物毎にｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦ−タンパク質を
５０〜１００μｇの範囲の様々な用量で接種した。
し、かつｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦに対する抗体がｍｕ−Ｅ
ＧＦを認識することを示すために、Ｂａｌｂ／ｃマウス
で実験を行った。動物群には、４〜６週間の間、１週間
当たり各動物毎にｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦ−タンパク質を
５０〜１００μｇの範囲の様々な用量で接種した。
【００２７】最初の週に免疫原性調製物を完全フロイン
トアジュバントで１：１の割合で調製し、以後すべての
用量は不完全フロイントアジュバントで調製した。アジ
ュバントのみを動物に投与した以外は上記と同様の操作
を対照群について行った。最後の免疫化の１週間後、動
物から血液を抜き取り、血液の残りから血清を分離し、
ｍｕ−ＥＧＦに対する抗体の力価をＥＬＩＳＡ法で決定
した。
トアジュバントで１：１の割合で調製し、以後すべての
用量は不完全フロイントアジュバントで調製した。アジ
ュバントのみを動物に投与した以外は上記と同様の操作
を対照群について行った。最後の免疫化の１週間後、動
物から血液を抜き取り、血液の残りから血清を分離し、
ｍｕ−ＥＧＦに対する抗体の力価をＥＬＩＳＡ法で決定
した。
【００２８】 ＩＩ−ｃ）抗腫瘍活性 この実験は主として、自己由来のＥＧＦに対して得られ
た免疫応答がＥＧＦ依存性腫瘍において抗腫瘍効果を引
き出すことができるか否かを決定することを目的とす
る。先に述べた方法に従って決定された、より高い抗体
力価を持った動物に、各動物当たり２０万〜２００万個
の細胞濃度でエールリッヒ腹水腫瘍（ＥＡＴ）を接種し
た。対照群も同様に処理した。組織移植と生存の両者に
ついて動物を観察した。
た免疫応答がＥＧＦ依存性腫瘍において抗腫瘍効果を引
き出すことができるか否かを決定することを目的とす
る。先に述べた方法に従って決定された、より高い抗体
力価を持った動物に、各動物当たり２０万〜２００万個
の細胞濃度でエールリッヒ腹水腫瘍（ＥＡＴ）を接種し
た。対照群も同様に処理した。組織移植と生存の両者に
ついて動物を観察した。
【００２９】 ＩＩＩ．免疫応答のキャラクタリゼーション ＩＩＩ−ａ）抗体応答のイソタイプ マウスの自己由来ＥＧＦでの免疫化により得られた自己
免疫応答がイソタイプのＩｇＭ又はＩｇＧの抗体を産生
する応答であるか否かを決定するために、ＥＬＩＳＡア
ッセイを行い、上記ＩＩ−ａ）及びＩＩ−ｂ）で述べた
方法によりＥＧＦで免疫化した動物の血清をテストし
た。ＩｇＭキャラクタリゼーションの場合には、この分
子に対する抗血清を試料と共にインキュベートした。Ｉ
ｇＧキャラクタリゼーションはＩｇＧに対する抗血清で
行う。
免疫応答がイソタイプのＩｇＭ又はＩｇＧの抗体を産生
する応答であるか否かを決定するために、ＥＬＩＳＡア
ッセイを行い、上記ＩＩ−ａ）及びＩＩ−ｂ）で述べた
方法によりＥＧＦで免疫化した動物の血清をテストし
た。ＩｇＭキャラクタリゼーションの場合には、この分
子に対する抗血清を試料と共にインキュベートした。Ｉ
ｇＧキャラクタリゼーションはＩｇＧに対する抗血清で
行う。
【００３０】 ＩＩＩ−ｂ）免疫応答の記憶のキャラク夕リゼーション 活性な治療においてワクチンとして使用できる産物を開
発するには、免疫学的記憶を誘発する能力と、誘発され
た場合のその記憶の長さとを決定することが必要であ
る。この情報により、免疫化のスキームをその産物と共
に正確にデザインすることが可能となる。
発するには、免疫学的記憶を誘発する能力と、誘発され
た場合のその記憶の長さとを決定することが必要であ
る。この情報により、免疫化のスキームをその産物と共
に正確にデザインすることが可能となる。
【００３１】マウスの群を、各動物当たり５０〜１００
μｇのｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦの１回用量で、完全フロイ
ントアジュバントと１：１の割合で免疫化した。ｍｕ−
ＥＧＦに対する抗体産生の動力学を様々な群の動物につ
いて試験した。この試験は、最初の免疫化の後と、力価
が減少したときの再免疫化の後に行った。抗体濃度はＥ
ＬＩＳＡ法により決定した。
μｇのｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦの１回用量で、完全フロイ
ントアジュバントと１：１の割合で免疫化した。ｍｕ−
ＥＧＦに対する抗体産生の動力学を様々な群の動物につ
いて試験した。この試験は、最初の免疫化の後と、力価
が減少したときの再免疫化の後に行った。抗体濃度はＥ
ＬＩＳＡ法により決定した。
【００３２】 ＩＶ．非ヒト霊長類における免疫原性試験 免疫原性調製物の免疫原性の判断基準は、非ヒト霊長類
がヒトに最も近い種であるという理由により、非ヒト霊
長類で得られた結果に基づいている。一群の霊長類を、
５００μｇの用量でｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦ（破傷風毒素
と共役）を含有する免疫原性調製物で、アジュバントと
共に免疫化した。最後の免疫化の後、血液試料を抜き取
り、ｈｕ−ＥＧＦに対する抗体力価を決定した。
がヒトに最も近い種であるという理由により、非ヒト霊
長類で得られた結果に基づいている。一群の霊長類を、
５００μｇの用量でｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦ（破傷風毒素
と共役）を含有する免疫原性調製物で、アジュバントと
共に免疫化した。最後の免疫化の後、血液試料を抜き取
り、ｈｕ−ＥＧＦに対する抗体力価を決定した。
【００３３】
【実施例】例１ ＥＧＦ依存性腫瘍の細胞膜中における
ＥＧＦ前駆体分子の存在の研究 この研究はウェスタンブロット法により行った。様々な
段階の胸部導管癌腫の５種の試料、１つの頭部及び頚部
腫瘍、４種の繊維包嚢性形成障害（ｆｉｂｒｏｃｙｓｔ
ｉｃ ｄｙｓｐｌａｓｉａ）の試料、及び対照として得
られた５種の正常試料が研究に用いられた。細胞膜は他
に記載された手法により試料から得た（Ｇｒｉｍａｕｘ
Ｍ．，Ｒｅｖ，Ｎｅｕｒｏｌ．１９８８，１４４：１
０１−１０３）。電気泳動は２５０ｖ、１０Ｍａ、３．
ＯＷ、１５℃及び１５０Ｖｈで行った。分子量標準は１
４３００Ｄ（リゾチーム）〜３４００００Ｄ（α２マク
ログロブリン）の範囲で用いた。電気泳動を分離させた
タンパク質はバッファートランスファー溶液中ファスト
（Ｐｈａｓｔ）システム装置で０．４５μｍのニトロセ
ルロース膜にトランスファーした。トランスファーの
後、膜を、一定に攪拌した１０％脱脂乳で一晩ブロック
した。バッファー溶液で３回洗浄後、ヒトＥＧＦを認識
するマウスモノクローナル抗体を添加し、１時間インキ
ュベートした。
ＥＧＦ前駆体分子の存在の研究 この研究はウェスタンブロット法により行った。様々な
段階の胸部導管癌腫の５種の試料、１つの頭部及び頚部
腫瘍、４種の繊維包嚢性形成障害（ｆｉｂｒｏｃｙｓｔ
ｉｃ ｄｙｓｐｌａｓｉａ）の試料、及び対照として得
られた５種の正常試料が研究に用いられた。細胞膜は他
に記載された手法により試料から得た（Ｇｒｉｍａｕｘ
Ｍ．，Ｒｅｖ，Ｎｅｕｒｏｌ．１９８８，１４４：１
０１−１０３）。電気泳動は２５０ｖ、１０Ｍａ、３．
ＯＷ、１５℃及び１５０Ｖｈで行った。分子量標準は１
４３００Ｄ（リゾチーム）〜３４００００Ｄ（α２マク
ログロブリン）の範囲で用いた。電気泳動を分離させた
タンパク質はバッファートランスファー溶液中ファスト
（Ｐｈａｓｔ）システム装置で０．４５μｍのニトロセ
ルロース膜にトランスファーした。トランスファーの
後、膜を、一定に攪拌した１０％脱脂乳で一晩ブロック
した。バッファー溶液で３回洗浄後、ヒトＥＧＦを認識
するマウスモノクローナル抗体を添加し、１時間インキ
ュベートした。
【００３４】３回洗浄後、ビオチン化した抗マウス抗体
を添加し、１時間インキュベートした。パーオキシダー
ゼストレプタビジン共役体を添加し、１時間のインキュ
ベーション後、ジアミノベンシジン及び過酸化水素で反
応を行った。得られた結果から、正常組織に対応する被
験試料は、標準による高分子量のゾーンにはバンドを示
さないことがわかった。しかし、胸部病態に対応する試
料（形成障害と癌腫）は高分子量ゾーンに拡散したバン
ドを示した。これは腫瘍膜における高分子量ＥＧＦ前駆
体の存在を示す実験的証拠である。
を添加し、１時間インキュベートした。パーオキシダー
ゼストレプタビジン共役体を添加し、１時間のインキュ
ベーション後、ジアミノベンシジン及び過酸化水素で反
応を行った。得られた結果から、正常組織に対応する被
験試料は、標準による高分子量のゾーンにはバンドを示
さないことがわかった。しかし、胸部病態に対応する試
料（形成障害と癌腫）は高分子量ゾーンに拡散したバン
ドを示した。これは腫瘍膜における高分子量ＥＧＦ前駆
体の存在を示す実験的証拠である。
【００３５】例２ ｍｕ−ＥＧＦ／ＣＴＢ共役体の取得 ＰＢＳ／ＭｇＣｌ２１０ｍＭ中１ｍｌのｍｕ−ＥＧＦを
１ｍｇ／ｍｌの濃度で、２ｍｌの同溶媒中ＣＴＢの溶液
と、ＣＴＢ１ｍｏｌ当たりｍｕＥＧＦ１モルの割合で混
合した。グルタルアルデヒド（３ｍｌ、０．５％）を添
加して、０．０５％の最終濃度を得た。室温で１時間イ
ンキュベーションを行い、次いでＰＢＳ／ＭｇＣｌ２１
０ｍＭ中で、少なくとも透析液を３回替えて透析を行っ
た。
１ｍｇ／ｍｌの濃度で、２ｍｌの同溶媒中ＣＴＢの溶液
と、ＣＴＢ１ｍｏｌ当たりｍｕＥＧＦ１モルの割合で混
合した。グルタルアルデヒド（３ｍｌ、０．５％）を添
加して、０．０５％の最終濃度を得た。室温で１時間イ
ンキュベーションを行い、次いでＰＢＳ／ＭｇＣｌ２１
０ｍＭ中で、少なくとも透析液を３回替えて透析を行っ
た。
【００３６】例３ ｍｕ−ＥＧＦ／ＣＴＢ共役体キャラ
クタリゼーション 共役体テストのためのＥＬＩＳＡアッセイＰＶＣ活性化
ＥＬＩＳＡプレート（ＮＵＮＣ）をメタノール中４μｇ
／ｍｌの濃度のＧＭ１ガングリオシド（ＣＴＢ分子を認
識する）５０μｌでコートし、１時間風乾した。続いて
ＰＢＳ／ツイーンで３回洗浄を行い、次いでプレートを
ＰＢＳ／ツイーン中１％ＢＳＡの溶液でブロックし、３
７℃で３０分間インキュベートした。０．１〜０．００
１ｍｇ／ｍｌの共役体希釈液を５０μｌ／ウェルずつプ
レートに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。
次に１：１０００希釈のマウス抗ｍｕ−ＥＧＦ抗血清を
５０μｌ／ウェルずつ添加し、３７℃で１時間インキュ
ベートした。次いでプレートを３７℃で１時間、抗マウ
ス抗血清アルカリホスファターゼ共役体（希釈１：１０
００）、５０μｌ／ウェル、と共にインキュベートし
た。ジエタノールアミン中１ｍｇ／ｍｌの濃度のｐ−ニ
トロフェニルホスフェートを５０μｌ／ウェルずつ加
え、３７℃で３０分間インキュベートして呈色を行っ
た。光学濃度を４０５ｎｍで測定した。結果から、共役
体の濃度と吸光度との間に直接的な関係があることがわ
かった。分子がＧＭ１ガングリオシド（これはＣＴＢを
同定する）に対する認識を保持し、かつ同時に抗ｍｕ−
ＥＧＦ抗血清によって認識されるのであるから、この結
果は共役体の活性と共役の効率を証明するものである
（図１）。
クタリゼーション 共役体テストのためのＥＬＩＳＡアッセイＰＶＣ活性化
ＥＬＩＳＡプレート（ＮＵＮＣ）をメタノール中４μｇ
／ｍｌの濃度のＧＭ１ガングリオシド（ＣＴＢ分子を認
識する）５０μｌでコートし、１時間風乾した。続いて
ＰＢＳ／ツイーンで３回洗浄を行い、次いでプレートを
ＰＢＳ／ツイーン中１％ＢＳＡの溶液でブロックし、３
７℃で３０分間インキュベートした。０．１〜０．００
１ｍｇ／ｍｌの共役体希釈液を５０μｌ／ウェルずつプ
レートに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。
次に１：１０００希釈のマウス抗ｍｕ−ＥＧＦ抗血清を
５０μｌ／ウェルずつ添加し、３７℃で１時間インキュ
ベートした。次いでプレートを３７℃で１時間、抗マウ
ス抗血清アルカリホスファターゼ共役体（希釈１：１０
００）、５０μｌ／ウェル、と共にインキュベートし
た。ジエタノールアミン中１ｍｇ／ｍｌの濃度のｐ−ニ
トロフェニルホスフェートを５０μｌ／ウェルずつ加
え、３７℃で３０分間インキュベートして呈色を行っ
た。光学濃度を４０５ｎｍで測定した。結果から、共役
体の濃度と吸光度との間に直接的な関係があることがわ
かった。分子がＧＭ１ガングリオシド（これはＣＴＢを
同定する）に対する認識を保持し、かつ同時に抗ｍｕ−
ＥＧＦ抗血清によって認識されるのであるから、この結
果は共役体の活性と共役の効率を証明するものである
（図１）。
【００３７】例４ 自己由来ＥＧＦの免疫原性：マウス
における自己免疫の誘発 自己由来ＥＧＦを含有する免疫原性調製物が自己免疫を
誘発することができることを示すために、Ｂａｌｂ／ｃ
マウスで実験を行った。動物の群に、４〜６週間の間毎
週皮下的に、各動物毎に５０μｇの共役ｍｕ−ＥＧＦの
用量を接種した。最初の週に免疫原性調製物を完全フロ
イントアジュバントで１：１の割合で調製し、以後のす
べての用量は不完全フロイントアジュバントで調製し
た。アジュバントのみを動物に投与した以外は上記と同
様の操作を対照群について行った。最後の免疫化の１週
間後、動物から血液を抜き取り、血清を得、ｍｕ−ＥＧ
Ｆに対する抗体の力価をＥＬＩＳＡ法により決定した。
における自己免疫の誘発 自己由来ＥＧＦを含有する免疫原性調製物が自己免疫を
誘発することができることを示すために、Ｂａｌｂ／ｃ
マウスで実験を行った。動物の群に、４〜６週間の間毎
週皮下的に、各動物毎に５０μｇの共役ｍｕ−ＥＧＦの
用量を接種した。最初の週に免疫原性調製物を完全フロ
イントアジュバントで１：１の割合で調製し、以後のす
べての用量は不完全フロイントアジュバントで調製し
た。アジュバントのみを動物に投与した以外は上記と同
様の操作を対照群について行った。最後の免疫化の１週
間後、動物から血液を抜き取り、血清を得、ｍｕ−ＥＧ
Ｆに対する抗体の力価をＥＬＩＳＡ法により決定した。
【００３８】コスター（Ｃｏａｓｔａｒ）プレートを炭
酸塩−重炭酸塩バッファー（ｐＨ９．６）中１０μｇ／
ｍｌの濃度のｍｕ−ＥＧＦでコートし、一晩インキュベ
ートした。プレートを洗浄後、試料を様々な希釈で添加
した。１時間インキュベーションを行った。アルカリホ
スファターゼ抗マウス抗体共役体を添加し、１時間イン
キュベートした後、呈色が起こり、光学密度をＥＬＩＳ
Ａリーダー中４０５ｎｍで測定した。ｍｕ−ＥＧＦ−Ｃ
ＴＢ調製物で免疫化したすべての動物が１：１０００希
釈までｍｕ−ＥＧＦに対する抗体力価を発揮した。対照
群は抗体力価を示さなかった（図２）。
酸塩−重炭酸塩バッファー（ｐＨ９．６）中１０μｇ／
ｍｌの濃度のｍｕ−ＥＧＦでコートし、一晩インキュベ
ートした。プレートを洗浄後、試料を様々な希釈で添加
した。１時間インキュベーションを行った。アルカリホ
スファターゼ抗マウス抗体共役体を添加し、１時間イン
キュベートした後、呈色が起こり、光学密度をＥＬＩＳ
Ａリーダー中４０５ｎｍで測定した。ｍｕ−ＥＧＦ−Ｃ
ＴＢ調製物で免疫化したすべての動物が１：１０００希
釈までｍｕ−ＥＧＦに対する抗体力価を発揮した。対照
群は抗体力価を示さなかった（図２）。
【００３９】例５ ｈｕ−ｒｅｃＥＧＦの免疫原性：マ
ウスにおける自己免疫の誘発 ｈｕ−ｒｅｃＥＧＦを含有する免疫原性調製物がｍｕ−
ＥＧＦに対する抗体力価を生ずることができることを示
すために、Ｂａｌｂ／ｃマウスで実験を行った。動物の
群に、４〜６週間の間毎週皮下的に、各動物毎に５０μ
ｇのｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦの用量を接種した。最初の週
に免疫原性調製物を完全フロイントアジュバントで１：
１の割合で調製し、以後のすべての用量は不完全フロイ
ントアジュバントで調製した。アジュバントのみを動物
に投与した以外は上記と同様の操作を対照群について行
った。最後の免疫化の１週間後、動物から血液を抜き取
り、血清を得、ｍｕ−ＥＧＦに対する抗体の力価をＥＬ
ＩＳＡ法により決定した。
ウスにおける自己免疫の誘発 ｈｕ−ｒｅｃＥＧＦを含有する免疫原性調製物がｍｕ−
ＥＧＦに対する抗体力価を生ずることができることを示
すために、Ｂａｌｂ／ｃマウスで実験を行った。動物の
群に、４〜６週間の間毎週皮下的に、各動物毎に５０μ
ｇのｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦの用量を接種した。最初の週
に免疫原性調製物を完全フロイントアジュバントで１：
１の割合で調製し、以後のすべての用量は不完全フロイ
ントアジュバントで調製した。アジュバントのみを動物
に投与した以外は上記と同様の操作を対照群について行
った。最後の免疫化の１週間後、動物から血液を抜き取
り、血清を得、ｍｕ−ＥＧＦに対する抗体の力価をＥＬ
ＩＳＡ法により決定した。
【００４０】コスタープレートを炭酸塩−重炭酸塩バッ
ファー（ｐＨ９．６）中１０μｇ／ｍｌの濃度のｍｕ−
ＥＧＦでコートし、一晩インキュベートした。プレート
を洗浄後、試料を様々な希釈で添加した。１時間インキ
ュベーションを行った。アルカリホスファターゼ抗マウ
ス抗体共役体を添加し、１時間インキュベートした後、
呈色が起こり、光学密度をＥＬＩＳＡリーダー中４０５
ｎｍで測定した。ｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦ調製物で免疫化
したすべての動物が１：２００００希釈までｍｕ−ＥＧ
Ｆに対する抗体力価を発揮した。対照群は抗体力価を示
さなかった（図３）。
ファー（ｐＨ９．６）中１０μｇ／ｍｌの濃度のｍｕ−
ＥＧＦでコートし、一晩インキュベートした。プレート
を洗浄後、試料を様々な希釈で添加した。１時間インキ
ュベーションを行った。アルカリホスファターゼ抗マウ
ス抗体共役体を添加し、１時間インキュベートした後、
呈色が起こり、光学密度をＥＬＩＳＡリーダー中４０５
ｎｍで測定した。ｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦ調製物で免疫化
したすべての動物が１：２００００希釈までｍｕ−ＥＧ
Ｆに対する抗体力価を発揮した。対照群は抗体力価を示
さなかった（図３）。
【００４１】例６ 水酸化アルミニウムとの調製物にお
けるｈｕ−ｒｅｃＥＧＦの免疫原性 ｈｕ−ｒｅｃＥＧＦと、アジュバントとして水酸化アル
ミニウムを含有する免疫原性調製物がｍｕ−ＥＧＦに対
して抗体力価を生じることができることを示すために、
Ｂａｌｂ／ｃマウスで実験を行った。動物の群に、４〜
６週間の間毎週皮下的に、各動物毎に５０μｇのｈｕ−
ｒｅｃＥＧＦ（アジュバントとして水酸化アルミニウム
と共に）の用量を接種した。アジュバントのみを動物に
投与した以外は上記と同様の操作を対照群について行っ
た。最後の免疫化の１週間後、動物から血液を抜き取
り、血清を得、ｍｕ−ＥＧＦに対する抗体の力価をＥＬ
ＩＳＡ法により決定した。
けるｈｕ−ｒｅｃＥＧＦの免疫原性 ｈｕ−ｒｅｃＥＧＦと、アジュバントとして水酸化アル
ミニウムを含有する免疫原性調製物がｍｕ−ＥＧＦに対
して抗体力価を生じることができることを示すために、
Ｂａｌｂ／ｃマウスで実験を行った。動物の群に、４〜
６週間の間毎週皮下的に、各動物毎に５０μｇのｈｕ−
ｒｅｃＥＧＦ（アジュバントとして水酸化アルミニウム
と共に）の用量を接種した。アジュバントのみを動物に
投与した以外は上記と同様の操作を対照群について行っ
た。最後の免疫化の１週間後、動物から血液を抜き取
り、血清を得、ｍｕ−ＥＧＦに対する抗体の力価をＥＬ
ＩＳＡ法により決定した。
【００４２】コスタープレートを炭酸塩−重炭酸塩バッ
ファー（ｐＨ９．６）中の１０μｇ／ｍｌの濃度のｍｕ
−ＥＧＦでコートし、一晩インキュベートした。プレー
トを洗浄後、試料を様々な希釈で添加した。１時間イン
キュベーションを行った。アルカリホスファターゼ抗マ
ウス抗体共役体を添加し、１時間インキュベートした
後、呈色が起こり、光学密度をＥＬＩＳＡリーダー中４
０５ｎｍで測定した。ｈｕ−ｒｅｃＥＧＦ／Ａ１ＯＨ調
製物で免疫化したすべての動物が１：４０００希釈まで
ｍｕ−ＥＧＦに対する抗体力価を発揮した。対照群は抗
体力価を示さなかった（図４）。
ファー（ｐＨ９．６）中の１０μｇ／ｍｌの濃度のｍｕ
−ＥＧＦでコートし、一晩インキュベートした。プレー
トを洗浄後、試料を様々な希釈で添加した。１時間イン
キュベーションを行った。アルカリホスファターゼ抗マ
ウス抗体共役体を添加し、１時間インキュベートした
後、呈色が起こり、光学密度をＥＬＩＳＡリーダー中４
０５ｎｍで測定した。ｈｕ−ｒｅｃＥＧＦ／Ａ１ＯＨ調
製物で免疫化したすべての動物が１：４０００希釈まで
ｍｕ−ＥＧＦに対する抗体力価を発揮した。対照群は抗
体力価を示さなかった（図４）。
【００４３】例７ 抗腫瘍活性 この実験は主として、自己由来のＥＧＦに対して得られ
た免疫応答がＥＧＦ依存性腫瘍において抗腫瘍効果を引
き出すことができるか否かを決定することを目的とし
た。例５で既述した方法に従って決定された、より高い
抗体力価を持った動物に、各動物当たり２００万個のＥ
ＡＴ細胞濃度でエールリッヒ腹水腫瘍（ＥＡＴ）を接種
した。対照群（非免疫化マウス）も同様に処理した。組
織移植と生存の両者について動物を観察した。処理動物
と対照動物の生存曲線を図５に示す。寿命インデックス
の増加は２２．５％であり、Ｍａｎｔｅｌ Ｈａｅｎｓ
ｚｅｌ及びＷｉｌｃｏｘｏｎテストに従い、対照に比べ
て処理動物においては、統計的に有意な生存率の増加が
示された。
た免疫応答がＥＧＦ依存性腫瘍において抗腫瘍効果を引
き出すことができるか否かを決定することを目的とし
た。例５で既述した方法に従って決定された、より高い
抗体力価を持った動物に、各動物当たり２００万個のＥ
ＡＴ細胞濃度でエールリッヒ腹水腫瘍（ＥＡＴ）を接種
した。対照群（非免疫化マウス）も同様に処理した。組
織移植と生存の両者について動物を観察した。処理動物
と対照動物の生存曲線を図５に示す。寿命インデックス
の増加は２２．５％であり、Ｍａｎｔｅｌ Ｈａｅｎｓ
ｚｅｌ及びＷｉｌｃｏｘｏｎテストに従い、対照に比べ
て処理動物においては、統計的に有意な生存率の増加が
示された。
【００４４】例８ ｍｕ−ＥＧＦに対する抗体力価と
１２５Ｉ ＥＧＦ生体分布との間の関連 この実験は、ｍｕ−ＥＧＦに対して抗体力価を持たない
動物に比べて、ｍｕ−ＥＧＦに対して抗体力価を持つ動
物において１２５Ｉ ＥＧＦの生体分布が異なることを
示す目的で行った。かかる目的のため以下の４群のマウ
スを用いて実験を行った。 第１群：ｍｕ−ＥＧＦに対して抗体力価を持ったマウス
３０匹 第２群：ｍｕ−ＥＧＦに対して抗体力価を持たないマウ
ス３０匹 第３群：ＥＡＴを移植したｍｕ−ＥＧＦに対して抗体力
価を持ったマウス３０匹 第４群：ＥＡＴを移植したｍｕ−ＥＧＦに対して抗体力
価を持たないマウス３０匹
１２５Ｉ ＥＧＦ生体分布との間の関連 この実験は、ｍｕ−ＥＧＦに対して抗体力価を持たない
動物に比べて、ｍｕ−ＥＧＦに対して抗体力価を持つ動
物において１２５Ｉ ＥＧＦの生体分布が異なることを
示す目的で行った。かかる目的のため以下の４群のマウ
スを用いて実験を行った。 第１群：ｍｕ−ＥＧＦに対して抗体力価を持ったマウス
３０匹 第２群：ｍｕ−ＥＧＦに対して抗体力価を持たないマウ
ス３０匹 第３群：ＥＡＴを移植したｍｕ−ＥＧＦに対して抗体力
価を持ったマウス３０匹 第４群：ＥＡＴを移植したｍｕ−ＥＧＦに対して抗体力
価を持たないマウス３０匹
【００４５】第１群と第２群の血液、肺、腎、肝及び皮
膚から試料を次の時点で採取した：２、５、８、１１、
１５、２０、３０、６０、１２０及び１５０分。相当す
る時間ごとに３匹の動物を殺し、摘出した器官における
放射活性をカウントした。得られた結果から、主として
腎と肝において１２５Ｉ ＥＧＦの経時的蓄積に差異が
見られた（図６（ａ）及び（ｂ））。これはＥＧＦに対
する抗体の存在がこの分子の生体分布を変えることを示
している。第３群と第４群の血液、肺、腎、肝、皮膚及
び腹水から試料を次の時点で採取した：２、５、８、１
１、１５、２０、３０、６０、１２０及び１５０分。相
当する時間ごとに３匹の動物を殺し、摘出した器におけ
る放射活性をカウントした。抗体力価を持たない動物よ
りも、抗体力価を持った動物の腹水の方が、標識化ＥＧ
Ｆの蓄積が少なかったと言える（図７）。このことは、
これらの動物の腹水中に存在するＥＧＦのより速い浄化
作用、及び／又は腹水へのＥＧＦのアクセスの制限を示
している。
膚から試料を次の時点で採取した：２、５、８、１１、
１５、２０、３０、６０、１２０及び１５０分。相当す
る時間ごとに３匹の動物を殺し、摘出した器官における
放射活性をカウントした。得られた結果から、主として
腎と肝において１２５Ｉ ＥＧＦの経時的蓄積に差異が
見られた（図６（ａ）及び（ｂ））。これはＥＧＦに対
する抗体の存在がこの分子の生体分布を変えることを示
している。第３群と第４群の血液、肺、腎、肝、皮膚及
び腹水から試料を次の時点で採取した：２、５、８、１
１、１５、２０、３０、６０、１２０及び１５０分。相
当する時間ごとに３匹の動物を殺し、摘出した器におけ
る放射活性をカウントした。抗体力価を持たない動物よ
りも、抗体力価を持った動物の腹水の方が、標識化ＥＧ
Ｆの蓄積が少なかったと言える（図７）。このことは、
これらの動物の腹水中に存在するＥＧＦのより速い浄化
作用、及び／又は腹水へのＥＧＦのアクセスの制限を示
している。
【００４６】例９ 免疫応答キャラクタリゼーション： 自己由来ＥＧＦに対して得られたイソタイプ自己由来Ｅ
ＧＦによるマウスの免疫化により得られた自己免疫応答
がイソタイプのＩｇＭ又はＩｇＧの抗体を産生する応答
であるか否かを知るために、プレートを１０μｇ／ｍｌ
の濃度のｍｕ−ＥＧＦ ５０μｌ／ウェルずつでコート
し、３７℃で１時間インキュベートするＥＬＩＳＡアッ
セイを行った。続いて、例５に従ってｍｕ−ＥＧＦ−Ｃ
ＴＢで免疫化した動物の血清の１：１０〜１：１０００
希釈液を５０μｌ／ウェルずつ適用して、３７℃で１時
間インキュベートした。ＩｇＧ又は１ｇＭの対応する抗
血清（それぞれ抗ＩｇＧ又は抗ＩｇＭ）に対する応答を
測定するために併行するプレート操作を行った。ジエタ
ノールアミン中１ｍｇ／ｍｌの濃度のｐ−ニトロフェニ
ルホスフェートを加え、３７℃で３０分間インキュベー
トしたところプレート内で呈色が見られ、光学密度の値
を４０５ｎｍで読み取った。ＩｇＧ応答はすべての処理
動物で見られた（図８）。
ＧＦによるマウスの免疫化により得られた自己免疫応答
がイソタイプのＩｇＭ又はＩｇＧの抗体を産生する応答
であるか否かを知るために、プレートを１０μｇ／ｍｌ
の濃度のｍｕ−ＥＧＦ ５０μｌ／ウェルずつでコート
し、３７℃で１時間インキュベートするＥＬＩＳＡアッ
セイを行った。続いて、例５に従ってｍｕ−ＥＧＦ−Ｃ
ＴＢで免疫化した動物の血清の１：１０〜１：１０００
希釈液を５０μｌ／ウェルずつ適用して、３７℃で１時
間インキュベートした。ＩｇＧ又は１ｇＭの対応する抗
血清（それぞれ抗ＩｇＧ又は抗ＩｇＭ）に対する応答を
測定するために併行するプレート操作を行った。ジエタ
ノールアミン中１ｍｇ／ｍｌの濃度のｐ−ニトロフェニ
ルホスフェートを加え、３７℃で３０分間インキュベー
トしたところプレート内で呈色が見られ、光学密度の値
を４０５ｎｍで読み取った。ＩｇＧ応答はすべての処理
動物で見られた（図８）。
【００４７】例１０ 自己由来ＥＧＦに対する免疫応答
の記憶のキャラクタリゼーション １０匹のマウスの２つの群について、完全フロイントア
ジュバント中５０μｇのｈｕ−ｒｅ−ＥＧＦによる単一
免疫化を研究した。 第Ｉ群：この群の動物については、ｍｕ−ＥＧＦに対す
る抗体産生の動力学を調べた。４日毎に血液試料を抜き
取った。抗体濃度はＥＬＩＳＡ法により決定した。 第ＩＩ群：第Ｉ群からの抗体力価が減少した動物を再び
免疫化した。２日毎に血液試料を抜き取った。抗体濃度
はＥＬＩＳＡ法により決定した。結果は、動物を調製物
で再度免疫化したときの記憶応答を示している（図
９）。
の記憶のキャラクタリゼーション １０匹のマウスの２つの群について、完全フロイントア
ジュバント中５０μｇのｈｕ−ｒｅ−ＥＧＦによる単一
免疫化を研究した。 第Ｉ群：この群の動物については、ｍｕ−ＥＧＦに対す
る抗体産生の動力学を調べた。４日毎に血液試料を抜き
取った。抗体濃度はＥＬＩＳＡ法により決定した。 第ＩＩ群：第Ｉ群からの抗体力価が減少した動物を再び
免疫化した。２日毎に血液試料を抜き取った。抗体濃度
はＥＬＩＳＡ法により決定した。結果は、動物を調製物
で再度免疫化したときの記憶応答を示している（図
９）。
【００４８】例１１ 免疫原性調製物の取得：ｈｕ−ｒ
ｅｃＥＧＦ破傷風毒素 ＰＢＳ／ＭｇＣｌ２１０ｍＭ中１．４ｍｇ／ｍｌの濃度
のｈｕ−ＥＧＦ溶液を、同じ溶媒中４ｍｇ／ｍｌの濃度
のＴＴ溶液２ｍｌと混合した。グルタルアルデヒド（３
ｍｌ、０．５％）を添加して０．０５％の最終濃度を得
た。室温で１時間インキュベーションを行い、続いてＰ
ＢＳ／ＭｇＣｌ２１０ｍＭ中で、透析液を少なくとも３
回替えて透析を行った。
ｅｃＥＧＦ破傷風毒素 ＰＢＳ／ＭｇＣｌ２１０ｍＭ中１．４ｍｇ／ｍｌの濃度
のｈｕ−ＥＧＦ溶液を、同じ溶媒中４ｍｇ／ｍｌの濃度
のＴＴ溶液２ｍｌと混合した。グルタルアルデヒド（３
ｍｌ、０．５％）を添加して０．０５％の最終濃度を得
た。室温で１時間インキュベーションを行い、続いてＰ
ＢＳ／ＭｇＣｌ２１０ｍＭ中で、透析液を少なくとも３
回替えて透析を行った。
【００４９】例１２ 共役化キャラクタリゼーション： ｈｕ−ｒｅｃＥＧＦ破傷風毒素共役テストのためのＥＬ
ＩＳＡアッセイコスタープレート（Ｈｉｇｈ Ｂｉｎｄ
ｉｎｇ）を、羊から得られた５０μｌの抗血清抗ＴＴ
で、１０μｇ／ｍｌの濃度でコートし、一晩インキュベ
ートした。続いてＰＢＳ／ツイーンで３回洗浄を行い、
次にプレートをＰＢＳ／ツイーン中１％ＢＳＡ溶液でブ
ロックし、３７℃で３０分間インキュベートした。０．
１〜０．００１ｍｇ／ｍｌの共役体希釈液を５０μｌ／
ウェルずつプレートに添加し、３７℃で１時間インキュ
ベートした。次に１：１０００希釈のマウス抗ｈｕ−Ｅ
ＧＦ抗血清を５０μｌ／ウェルずつ添加し、３７℃で１
時間インキュベートした。
ＩＳＡアッセイコスタープレート（Ｈｉｇｈ Ｂｉｎｄ
ｉｎｇ）を、羊から得られた５０μｌの抗血清抗ＴＴ
で、１０μｇ／ｍｌの濃度でコートし、一晩インキュベ
ートした。続いてＰＢＳ／ツイーンで３回洗浄を行い、
次にプレートをＰＢＳ／ツイーン中１％ＢＳＡ溶液でブ
ロックし、３７℃で３０分間インキュベートした。０．
１〜０．００１ｍｇ／ｍｌの共役体希釈液を５０μｌ／
ウェルずつプレートに添加し、３７℃で１時間インキュ
ベートした。次に１：１０００希釈のマウス抗ｈｕ−Ｅ
ＧＦ抗血清を５０μｌ／ウェルずつ添加し、３７℃で１
時間インキュベートした。
【００５０】次に、プレートを抗マウス抗血清アルカリ
ホスファターゼ共役体（希釈率１：１０００）の５０μ
ｌ／ウェルずつと共に３７℃で１時間インキュベートし
た。ジエタノールアミン中１ｍｇ／ｍｌの濃度のｐ−ニ
トロフェニルホスフェートを５０μｌ／ウェルずつ加
え、３７℃で３０分間インキュベートしたところ、呈色
が起こり、光学密度を４０５ｎｍで測定した。結果は、
共役体の濃度と吸光度との間の直接関係を示している。
分子は抗血清抗ＴＴに対する認識を保持し、かつ同時に
抗ｍｕ−ＥＧＦ抗血清により認識されるので、この結果
は共役体の活性と共役の効率を示している（図１０）。
ホスファターゼ共役体（希釈率１：１０００）の５０μ
ｌ／ウェルずつと共に３７℃で１時間インキュベートし
た。ジエタノールアミン中１ｍｇ／ｍｌの濃度のｐ−ニ
トロフェニルホスフェートを５０μｌ／ウェルずつ加
え、３７℃で３０分間インキュベートしたところ、呈色
が起こり、光学密度を４０５ｎｍで測定した。結果は、
共役体の濃度と吸光度との間の直接関係を示している。
分子は抗血清抗ＴＴに対する認識を保持し、かつ同時に
抗ｍｕ−ＥＧＦ抗血清により認識されるので、この結果
は共役体の活性と共役の効率を示している（図１０）。
【００５１】例１３ 非ヒト霊長類における担体タンパ
ク質（ＴＴ）にカップルしたｈｕ−Ｅ ＧＦの免疫原性の研究この研究は身体検査、胸部Ｘ線及
び血液テストを含む臨床獣検査に付された４匹のアカゲ
ザルで行った。これらの動物を例１０に従い、ＴＴにカ
ップルしたｈｕ−ＥＧＦで免疫化した。免疫化は第１、
２、３、４、６及び１２週に皮下的に行った。最初の免
疫化には完全フロイントアジュバントを用い、他のすべ
てには不完全フロイントアジュバントを用いた。動物か
ら血液を抜き取り、ＥＬＩＳＡにより抗体力価を決定し
た。コスタープレートを炭酸塩−重炭酸塩バッファー
（ｐＨ９．６）中１０μｇ／ｍｌの濃度のｈｕ−ＥＧＦ
でコートし、一晩インキュベートした。プレートを洗浄
後、試料を様々な希釈で添加した。１時間インキュベー
ションを行った。アルカリホスファターゼ抗ヒト抗体共
役体を添加し、１時間インキュベートした後、呈色が起
こった。光学密度をＥＬＩＳＡリーダー中４０５ｎｍで
測定した。ｈｕ−ＥＧＦ−ＴＴ調製物で免疫化した動物
はすべて、１：２００００希釈までｈｕ−ＥＧＦに対し
て抗体力価を発揮した（図１１）。
ク質（ＴＴ）にカップルしたｈｕ−Ｅ ＧＦの免疫原性の研究この研究は身体検査、胸部Ｘ線及
び血液テストを含む臨床獣検査に付された４匹のアカゲ
ザルで行った。これらの動物を例１０に従い、ＴＴにカ
ップルしたｈｕ−ＥＧＦで免疫化した。免疫化は第１、
２、３、４、６及び１２週に皮下的に行った。最初の免
疫化には完全フロイントアジュバントを用い、他のすべ
てには不完全フロイントアジュバントを用いた。動物か
ら血液を抜き取り、ＥＬＩＳＡにより抗体力価を決定し
た。コスタープレートを炭酸塩−重炭酸塩バッファー
（ｐＨ９．６）中１０μｇ／ｍｌの濃度のｈｕ−ＥＧＦ
でコートし、一晩インキュベートした。プレートを洗浄
後、試料を様々な希釈で添加した。１時間インキュベー
ションを行った。アルカリホスファターゼ抗ヒト抗体共
役体を添加し、１時間インキュベートした後、呈色が起
こった。光学密度をＥＬＩＳＡリーダー中４０５ｎｍで
測定した。ｈｕ−ＥＧＦ−ＴＴ調製物で免疫化した動物
はすべて、１：２００００希釈までｈｕ−ＥＧＦに対し
て抗体力価を発揮した（図１１）。
【図１】ＣＴＢとｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦとの間の共役効
率の決定のためのＥＬＩＳＡアッセイ Ｘ軸：共役体の連続希釈（１ｍｇ／ｍｌから０．００１
ｍｇ／ｍｌまで） Ｙ軸：ＥＬＩＳＡプレートリーダーで測定した４０５ｎ
ｍでの光学密度
率の決定のためのＥＬＩＳＡアッセイ Ｘ軸：共役体の連続希釈（１ｍｇ／ｍｌから０．００１
ｍｇ／ｍｌまで） Ｙ軸：ＥＬＩＳＡプレートリーダーで測定した４０５ｎ
ｍでの光学密度
【図２】共役ｍｕ−ＥＧＦ−ＣＴＢで免疫化した５匹の
マウスにおけるｍｕ−ＥＧＦに対する抗体力価の決定の
ためのＥＬＩＳＡアッセイ Ｘ軸：抗血清希釈（１：１０、１：１００、１：１００
０） Ｙ軸：ＥＬＩＳＡプレートリーダーで測定した４０５ｎ
ｍでの光学密度 曲線は免疫化前の５匹の被験動物と比較した同じ動物の
力価を表す。
マウスにおけるｍｕ−ＥＧＦに対する抗体力価の決定の
ためのＥＬＩＳＡアッセイ Ｘ軸：抗血清希釈（１：１０、１：１００、１：１００
０） Ｙ軸：ＥＬＩＳＡプレートリーダーで測定した４０５ｎ
ｍでの光学密度 曲線は免疫化前の５匹の被験動物と比較した同じ動物の
力価を表す。
【図３】ｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦで免疫化した５匹のマウ
スにおけるｍｕ−ＥＧＦに対する抗体力価の決定のため
のＥＬＩＳＡアッセイ Ｘ軸：血清希釈１：１００、１：１０００、１：１００
００、１：２００００ Ｙ軸：４０５ｎｍでの光学密度
スにおけるｍｕ−ＥＧＦに対する抗体力価の決定のため
のＥＬＩＳＡアッセイ Ｘ軸：血清希釈１：１００、１：１０００、１：１００
００、１：２００００ Ｙ軸：４０５ｎｍでの光学密度
【図４】アジュバントとしての水酸化アルミニウム中の
ｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦで免疫化した５匹のマウスにおけ
る、ｍｕ−ＥＧＦに対する抗体力価決定のためのＥＬＩ
ＳＡアッセイ Ｘ軸：血清希釈１：１００、１：５００、１：１００
０、１：２０００、１：４０００、１：８０００ Ｙ軸：４０５ｎｍでの光学密度
ｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦで免疫化した５匹のマウスにおけ
る、ｍｕ−ＥＧＦに対する抗体力価決定のためのＥＬＩ
ＳＡアッセイ Ｘ軸：血清希釈１：１００、１：５００、１：１００
０、１：２０００、１：４０００、１：８０００ Ｙ軸：４０５ｎｍでの光学密度
【図５】ｍｕ−ＥＧＦ−ＣＴＢで免疫化し、次いでエー
ルリッヒ腹水腫瘍で接種した動物の生存率（免疫化して
いないが同じ腫瘍で接種した対照動物と比較）
ルリッヒ腹水腫瘍で接種した動物の生存率（免疫化して
いないが同じ腫瘍で接種した対照動物と比較）
【図６】免疫化していない対照と比較した、ｈｕ−ｒｅ
ｃ−ＥＧＦで免疫化したマウスの器官における１２５Ｉ
ＥＧＦの蓄積（ａ）は肝、（ｂ）は腎における蓄積を
示す。
ｃ−ＥＧＦで免疫化したマウスの器官における１２５Ｉ
ＥＧＦの蓄積（ａ）は肝、（ｂ）は腎における蓄積を
示す。
【図７】あらかじめｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦで免疫化し、
ＥＡＴを移植した動物の腹水中のｍｕ−ＥＧＦ Ｉ
１２５の蓄積
ＥＡＴを移植した動物の腹水中のｍｕ−ＥＧＦ Ｉ
１２５の蓄積
【図８】ｍｕ−ＥＧＦ−ＣＴＢで免疫化した動物におけ
る免疫応答のＩｇＧ又はＩｇＭの決定のためのＥＬＩＳ
Ａアッセイ
る免疫応答のＩｇＧ又はＩｇＭの決定のためのＥＬＩＳ
Ａアッセイ
【図９】ｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦで免疫化した動物におけ
るｍｕ−ＥＧＦに対する抗体応答動力学（ＩｇＧ）（記
憶） Ｘ軸：時間（日） Ｙ軸：抗体力価の逆対数（平均値）
るｍｕ−ＥＧＦに対する抗体応答動力学（ＩｇＧ）（記
憶） Ｘ軸：時間（日） Ｙ軸：抗体力価の逆対数（平均値）
【図１０】破傷風毒素とｈｕ−ｒｅｃ−ＥＧＦとの共役
の効率決定のためのＥＬＩＳＡアッセイ Ｘ軸：共役体の希釈 Ｙ軸：４０５ｎｍでの光学密度
の効率決定のためのＥＬＩＳＡアッセイ Ｘ軸：共役体の希釈 Ｙ軸：４０５ｎｍでの光学密度
【図１１】破傷風毒素にカップルしたｈｕ−ｒｅｃ−Ｅ
ＧＦで免疫化した非ヒト霊長類におけるｈｕ−ｒｅｃ−
ＥＧＦに対する抗体力価
ＧＦで免疫化した非ヒト霊長類におけるｈｕ−ｒｅｃ−
ＥＧＦに対する抗体力価
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (72)発明者 ギセラ ゴンザレツ マリネロ キューバ国シウダッド デ ラ ハバ ナ，プラザ，ベダド，カレ ６ ナンバ ー 359 イー／15 ワイ 17 (72)発明者 ベリンダ サンチェツ ラミレツ キューバ国シウダッド デ ラ ハバ ナ，セントロ ハバナ，リールタッド ナンバー 415 アプト．22 イー／サ ン ホセ ワイ サン ラファエル (72)発明者 エドゥアルド スアレツ ペツタナ キューバ国シウダッド デ ラ ハバ ナ，10 デ オクツブレ，ゴス ナンバ ー 370 イー／ビスタ アレグレ ワ イ サン マリアノ (72)発明者 イレーヌ ビューソレイル デルガド キューバ国シウダッド デ ラ ハバ ナ，ルプト．フローレス，プラヤ，カレ 180 イー／イラ．ワイ ５タ．エデ ィフ．エイ − ３，アプト．17 (72)発明者 ギルダ ヌネツ ガンドルフ キューバ国シウダッド デ ラ ハバ ナ，レグラ，マルティ ナンバー 356 イー／27 デ ノヴィエンブレ ワイ アラングレン (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) A61K 39/00 A61K 39/385 A61K 47/02 ＢＩＯＴＥＣＨＡＢＳ（ＳＴＮ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
Claims (9)
- 【請求項１】 アジュバントを含有し、担体タンパク質
と複合した自己由来の上皮増殖因子のワクチン組成物で
あって、該自己由来の上皮増殖因子に対して自己免疫反
応を起こすことができることを特徴とする上記ワクチン
組成物。 - 【請求項２】 ヒト組換え上皮増殖因子を含む請求項１
記載のワクチン組成物。 - 【請求項３】 担体タンパク質としてコレラ毒素Ｂ鎖を
含む請求項１記載のワクチン組成物。 - 【請求項４】 担体タンパク質として破傷風毒素を含む
請求項１記載のワクチン組成物。 - 【請求項５】 担体タンパク質としてモノクローナル抗
体を含む請求項１記載のワクチン組成物。 - 【請求項６】 担体タンパク質としてネイセイリア メ
ニンギチデス（Ｎｅｉｓｓｅｉｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉ
ｔｉｄｅｓ）の外膜タンパク質を含む請求項１記載のワ
クチン組成物。 - 【請求項７】 アジュバントとして水酸化アルミニウム
を含む請求項１記載のワクチン組成物。 - 【請求項８】 請求項１から７までのいずれか１項記載
のワクチン組成物を含む悪性疾患治療薬。 - 【請求項９】 哺乳類の自己由来の上皮増殖因子を使用
することを特徴とする上皮増殖因子関連疾患の治療用ワ
クチンの製造方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CU113/93 | 1993-12-09 | ||
| CU1993113 | 1993-12-09 | ||
| CN95115090A CN1106858C (zh) | 1993-12-09 | 1995-08-17 | 具有抗肿瘤活性的疫苗组合物及其在恶性疾病治疗方面的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07285883A JPH07285883A (ja) | 1995-10-31 |
| JP2823519B2 true JP2823519B2 (ja) | 1998-11-11 |
Family
ID=37708289
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6335303A Expired - Lifetime JP2823519B2 (ja) | 1993-12-09 | 1994-12-09 | 自己由来の上皮増殖因子を含むワクチン組成物 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0657175B1 (ja) |
| JP (1) | JP2823519B2 (ja) |
| CN (1) | CN1106858C (ja) |
| CA (1) | CA2137639C (ja) |
| DE (1) | DE69434279T2 (ja) |
| ES (1) | ES2237750T3 (ja) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20010102556A (ko) * | 1999-03-11 | 2001-11-15 | 추후제출 | 암 및 과증식성 장애의 치료 조성물 및 치료방법 |
| US7087592B1 (en) | 1999-08-23 | 2006-08-08 | Entre Med, Inc. | Compositions comprising purified 2-methoxyestradiol and methods of producing same |
| CU22979A1 (es) * | 2000-12-08 | 2004-09-09 | Centro Inmunologia Molecular | Combinación inmunoterapéutica para el tratamiento de tumores que sobre-expresan receptores con actividad quinasa en residuos de tirosina |
| CA2646065C (en) | 2006-03-20 | 2014-01-14 | Entremed, Inc. | Disease modifying anti-arthritic activity of 2-methoxyestradiol |
| CU23652A1 (es) | 2007-06-29 | 2011-05-27 | Centro Inmunologia Molecular | Composición vacunal homogénea para el tratamiento del cáncer y su método de obtención |
| CN102078604A (zh) * | 2010-12-31 | 2011-06-01 | 北京民海生物科技有限公司 | 脑膜炎球菌荚膜多糖多价结合疫苗，其制备方法和应用 |
| CN108864291A (zh) * | 2011-11-23 | 2018-11-23 | 拜奥文斯瑞有限公司 | 重组蛋白及其治疗用途 |
| JP6873530B2 (ja) | 2013-03-15 | 2021-05-19 | イン3バイオ・リミテッドIn3Bio Ltd. | 自己組織化合成タンパク質（Ｓｅｌｆ−Ａｓｓｅｍｂｌｉｎｇ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ） |
| KR20230149857A (ko) * | 2016-07-07 | 2023-10-27 | 더 보드 어브 트러스티스 어브 더 리랜드 스탠포드 주니어 유니버시티 | 항체-애쥬번트 접합체 |
| CU20170173A7 (es) * | 2017-12-27 | 2019-11-04 | Ct Inmunologia Molecular | Nano-partículas que contienen el gangliósido gm3 como inmunomoduladoras |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IN165717B (ja) * | 1986-08-07 | 1989-12-23 | Battelle Memorial Institute | |
| AU651949B2 (en) * | 1989-07-14 | 1994-08-11 | American Cyanamid Company | Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines |
| JPH05502880A (ja) * | 1989-12-22 | 1993-05-20 | セラジェン・インコーポレーテッド | トランスロケーション領域および細胞結合領域を有するハイブリッド分子 |
-
1994
- 1994-12-08 EP EP94203576A patent/EP0657175B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-08 DE DE69434279T patent/DE69434279T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-08 ES ES94203576T patent/ES2237750T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-08 CA CA002137639A patent/CA2137639C/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-09 JP JP6335303A patent/JP2823519B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-08-17 CN CN95115090A patent/CN1106858C/zh not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0657175A2 (en) | 1995-06-14 |
| EP0657175B1 (en) | 2005-03-02 |
| JPH07285883A (ja) | 1995-10-31 |
| ES2237750T3 (es) | 2005-08-01 |
| CA2137639A1 (en) | 1995-06-10 |
| CN1106858C (zh) | 2003-04-30 |
| EP0657175A3 (en) | 1996-12-18 |
| CA2137639C (en) | 1999-01-26 |
| CN1142973A (zh) | 1997-02-19 |
| DE69434279D1 (de) | 2005-04-07 |
| DE69434279T2 (de) | 2006-04-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5894018A (en) | Vaccine composition comprising autologous epidermal growth factor or a fragment or a derivative thereof having anti-tumor activity and use thereof in the therapy of malignant diseases | |
| Unanue et al. | Experimental allergic glomerulonephritis induced in the rabbit with heterologous renal antigens | |
| Fuks et al. | Carcinoembryonic antigen (CEA): Molecular biology and clinical significance | |
| US4446122A (en) | Purified human prostate antigen | |
| JP2823519B2 (ja) | 自己由来の上皮増殖因子を含むワクチン組成物 | |
| JP3003976B2 (ja) | 抗ガングリオシドモノクローナル抗体および悪性腫瘍の特異的能動免疫療法におけるそれらの使用 | |
| US20040001789A1 (en) | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of gp96 or precursors thereof | |
| Pearce et al. | Three major surface antigens of Schistosoma mansoni are linked to the membrane by glycosylphosphatidylinositol. | |
| RU2163243C2 (ru) | Белки из печени козы, обладающие противоопухолевой активностью, фармацевтическая композиция | |
| Wolf et al. | Specificity of reagents directed to the Thomsen-Friedenreich antigen and their capacity to bind to the surface of human carcinoma cell lines | |
| AU2002221520B2 (en) | Vaccine composition containing transforming growth factor alpha | |
| WO1981001849A1 (en) | Purified human prostate antigen | |
| MX2011000116A (es) | Agente inductor de inmunidad y metodo para la deteccion de cancer. | |
| Nakamura et al. | Oligomeric IgA: the major component of the in vitro primary response of mouse spleen fragments | |
| EP0162825A2 (en) | The use of a specific carcinom associated antigen (hapten), fucosylsialosylgangliotetraose (Fuc-GM1) in diagnostic or therapeutic procedures related to human lung cancer (small cell carcinomas) | |
| KR19990022406A (ko) | 종양 관련 에피토프 | |
| JP2003521523A (ja) | 病的脈管新生状態予防方法または減衰方法 | |
| AU2007203242B2 (en) | Vaccine composition containing transforming growth factor alpha | |
| Gathuru et al. | In vitro immunization of rat spleen lymphocytes with Forssman glycosphingolipid antigen and the generation of a monoclonal antibody | |
| JPH02135098A (ja) | Ｎ−グリコリル型ｇｍ↓２を認識するモノクローナル抗体及びそれを産生するハイブリドーマ | |
| Mulet et al. | The enlargement of the hormone immune deprivation concept to the blocking of TGFα-autocrine loop: EGFR signaling inhibition | |
| US5635361A (en) | Diagnosis of cancer using tumor-mimetic cell surface antigen from chemically modified normal cells | |
| JP2553343B2 (ja) | 癌抗体の測定法 | |
| Berns | Biochemical and immunological investigations of animal and human tumour-associated antigens | |
| JPS63258897A (ja) | 抗ｒ−バインダモノクロナ−ル抗体とその製法および用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080904 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080904 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090904 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100904 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100904 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110904 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120904 Year of fee payment: 14 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120904 Year of fee payment: 14 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130904 Year of fee payment: 15 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |