JP2814433B2 - ｍＲＮＡの翻訳 - Google Patents

ｍＲＮＡの翻訳

Info

Publication number
JP2814433B2
JP2814433B2 JP62503414A JP50341487A JP2814433B2 JP 2814433 B2 JP2814433 B2 JP 2814433B2 JP 62503414 A JP62503414 A JP 62503414A JP 50341487 A JP50341487 A JP 50341487A JP 2814433 B2 JP2814433 B2 JP 2814433B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
sequence
translation
rna
untranslated leader
leader sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP62503414A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH01500961A (ja
Inventor
マイケル オーブリー ウィルソン，トマス
Original Assignee
ダイアテック、リミテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=10598884&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JP2814433(B2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by ダイアテック、リミテッド filed Critical ダイアテック、リミテッド
Publication of JPH01500961A publication Critical patent/JPH01500961A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP2814433B2 publication Critical patent/JP2814433B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
    • C12N9/1029—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)
    • C12N9/1033—Chloramphenicol O-acetyltransferase (2.3.1.28)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67—General methods for enhancing the expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6478—Aspartic endopeptidases (3.4.23)
    • C12N9/6481—Pepsins (3.4.23.1; 3.4.23.2; 3.4.23.3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01031—Beta-glucuronidase (3.2.1.31)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/001—Vector systems having a special element relevant for transcription controllable enhancer/promoter combination
    • C12N2830/002—Vector systems having a special element relevant for transcription controllable enhancer/promoter combination inducible enhancer/promoter combination, e.g. hypoxia, iron, transcription factor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/55—Vector systems having a special element relevant for transcription from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
    • C12N2840/10—Vectors comprising a special translation-regulating system regulates levels of translation
    • C12N2840/105—Vectors comprising a special translation-regulating system regulates levels of translation enhancing translation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
    • C12N2840/60—Vectors comprising a special translation-regulating system from viruses

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はmRNAの翻訳のエンハンサーに関する。 真核生物及び原核生物が翻訳を開始するメカニズム
は、一部共通の特徴を有しているが、他の点では異なっ
ていることが知られている。真核生物のメッセージは機
能上モノシストロニック（monocistronic）であって、
翻訳は５′末端で始まり、この末端におけるキャップ構
造（m7G5′ppp5′G...）の存在によって促進される〔シ
ャトキン，セル，第９巻，第645頁,1976年（Shatkin,Ce
ll,9,645（1976）〕。原核生物のメッセージはポリシス
トロニック（polycistronic）であって、５′末端以外
の部位で開始しうるが、キャップの存在は翻訳促進に繋
がらない。真核生物及び原核生物は双方ともコドンAUG
で翻訳を開始するが、但し原核生物はGUGを利用するこ
ともできる。双方における翻訳は、開始コドン近くのあ
る配列によって促進される。前核生物の場合には、それ
は所謂シャイン−ダルガルノ（Shine−Dalgarno）配列
（開始コドンより上流のプリンに富む３〜10ヌクレオチ
ドの領域）である。真核生物の場合には、それは（AUG
開始コドンのＡが＋１と表示される場合に）−３位のプ
リン及び＋４位のＧ残基であるが、更に効果的なチュー
ニング（tuning）のためには他の配列も加わる必要があ
る。これはスキャニング（scannig）モデルの“緩和”
バージョン（“relaxed"version）の一部であり〔コザ
ック，ヌクレイック・アシッズ・リサーチ，第12巻，第
857頁,1984年（kozak,Nuclec Acids Research,12,857
（1984）〕、それによって40Sリボソームサブユニット
が真核生物mRNAの５′末端で結合し、モデルの要求を満
たす最初のAUGと出会うまで、即ち60Sサブユニットが40
Sサブユニットと結合してタンパク質合成が始まる時点
まで、配列をスキャニングし続ける。この点について
は、下記コザックの文献を参考にすることができる：セ
ル，第15巻，第1109頁,1978年；ヌクレイック・アシッ
ズ・リサーチ，第９巻，第5233頁,1981年；及びセル，
第44巻，第283頁,1986年。 開始コドンの中及び近辺で必要なこれらの配列以外
に、翻訳を複製の面で促進させることが知られた他のmR
NA領域は存在しない。 真核生物の転写において、“エンハンサー”領域とし
て知られる配列は転写促進を図ることができる。 RNAウイルスは、正もしくは負の一重鎖RNA又は二重鎖
RNAを含んでいる。RNAウイルス群としては、大多数の植
物ウイルス（90％以上）、一部の動物ウイルス及び数種
のバクテリオファージがある。 RNAウイルスの中で最も広く研究されたものの１つ
は、タバコモザイクウイルス（以後TMVと称される）で
ある。TMVの完全ヌクレオチド配列が知られている〔ゲ
レットら，プロシーディング・オブ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンス USA,第79巻，第5818頁,198
2年（Goelet et al.,Proceeding of National Academy
of Science USA,79,5818（1982））〕。TMV RNAの５′
領域は鎖長70ヌクレチオドのRNアーゼT1耐性断片として
1965年に始めて単離されたが〔マンドリー，ツァイトシ
ュリフト・フュール・フェレルブングスレーレ，第97
巻，第281頁,1965年（Mundry,Zeitschrift fr Vererb
ungslehre,97,281（1965））〕、内部Ｇ残基を有してい
なかった〔マンデレル，ジャーナル・オブ・バイオロジ
カル・ケミストリー，第243巻，第3671頁（Mandeles,Jo
urnal of Biological Chemistry,243,3671）〕。この領
域〔以後、オメガと称される；マンデレス，ジャーナル
・オブ・モレキュラー・バイオロジカル・ケミストリー
（Journal of Molecular Biological Chemistry），第2
43巻，第3671頁〕は配列決定され〔リチャーズら，ヨー
ロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー，第
84巻，第513頁,1078年（Richards et al.,European Jou
rnl of Biochemistry,84,513（1978））〕、小麦麦芽リ
ボソームと二重（disome）開始複合体を形成することが
示された。１つのリボソームは、126キロドルトン（KD
a）のタンパク質コード領域のAUG開始部位を占めてお
り、第二のものは上流リーダー配列と結合している〔フ
ィリポウィクズ（Fillipowicz）及びヘッニ（Haenn
i），プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンスUSA,第76巻，第3111頁,1979年；
コナルスカら，ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バイ
オケミストリー，第114巻，第221頁,1981年（Konarska
et al.,European Journal of Biochemistry,114,221（1
981））〕。リボソーム会合におけるオメガの役割を支
持するもう１つの最近の証拠は、ウィルソン（Wilson）
及び共同研究者の脱外被（uncoating）／遺伝子発現デ
ータからきている〔ジャーナル・オブ・ゼネラル・バイ
ロロジー，第66巻，第1201頁,1985年（Jounal of Gener
al Virology,66,1201（1985））及びUCLAシンポジウ
ム，第54巻，第159頁,1987年（UCLA Symposium,54,159
（1987））で差違検討されている〕。TMV粒子が５′末
端へのリボソームの結合及び３′末端方向へのそれらの
翻訳移動によって脱外被されていることは、様々なイン
ビトロ翻訳系で観察された。 RNAウイルスの５′領域はmRNAの翻訳エンハンサーと
して機能することが、ここに発見されたのである。 第一面として、本発明はウイルスRNAの最初の開始コ
ドンまでのRNAウイルスの５′−リーダー配列（又はそ
の誘導体もしくは部分）を含むmRNAを提供するが、この
mRNAはリーダー配列を供与するウイルスに由来しない下
流配列も含んでいる。 第二面として、本発明はウイルスRNAの最初の開始コ
ドンまでのRNAウイルスの５′リーダー配列（又はその
誘導体もしくは部分）と相補的なDNA配列を提供する。 第三面として、本発明は、プロモーター、ウイルスRN
Aの最初の開始コドンまでのRNAウイルスの５′−リーダ
ー配列（又はその誘導体もしくは部分）と相補的な配列
及び適切な開始コドンを含むオープン読取枠を含んでい
るDNA配列を提供する。本発明はこのようなDNA配列を含
む発現ベクターをも提供する。 第四面として、本発明は、ウイルスRNAの最初の開始
コドンまでのRNAウイルスの５′リーダー配列（又はそ
の誘導体もしくは部分）における、RNAとしての又は相
補的DNAとしての、即ち５′−リーダーRNAがmRNAと接続
している場合のmRNAの翻訳のエンハンサーとしての用途
を提供する。 配列決定されたほとんどのRNAウイルスは、５′−リ
ーダー配列、即ち最初の開始コドンまでの（但し、それ
を含まない）５′末端における配列を含んでいる。いず
れのRNAウイルスからの適切な５′リーダー配列も、本
発明の翻訳エンハンサーとして使用可能である。 前記のように、TMVの５′−リーダー配列＋AUG開始コ
ドンはオメガとして知られており、かつそのヌクレオチ
ド配列も公知であるため（リチャーズら、ヨーロピアン
・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー，第84巻，第
513頁,1978年）、cDNAは合成することができる。TMVの
オメガプライム（Ω′，第１図参照）配列は、本発明の
好ましい翻訳エンハンサーを表わしている。 下記のような他のRNAウイルスの５′リーダー配列に
よる翻訳増強に関する情報も利用可能である： カブ黄斑モザイクウイルスゲノムRNA（フィリポウィ
クズ及びヘッニ，プロシーディング・オブ・ナショナル
・アカデミー・オブ・サイエンスUSA,第76巻，第3111
頁,1979年）、ブロウム（brome）モザイクウイルスRNA
3、アルファルファモザイクウイルスRNA4（ゲレット
ら，プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミー
・オブ・サイエンスUSA,第79巻，第5818頁,1982年）；
ラウス肉腫ウイルス〔ジェイ・エル・ダーリックス（J.
L.Darlix）ら，ヌクレイック・アシッズ・リサーチ，第
10巻，第5183頁,1982年〕。 いずれの具体的ケースにおいても、翻訳エンハンサー
としての機能が調節されるもののそれが損われないよう
な方法で天然５′−リーダー配列を変えることは、ほぼ
確実に可能であろう。このような変異体は本明細書にお
いて“誘導体”と呼ばれているが、天然配列の誘導体及
びそれらの翻訳エンハンサーとしての用途は本発明の一
部を構成している。天然５′リーダー配列（又は誘導体
配列）の一部のみが翻訳増強を起こすために必要とされ
るケースもあるであろう。配列のこのような一部は本明
細書において“部分”と呼ばれているが、天然配列もし
くはその誘導体の部分及びそれらの翻訳エンハンサーと
しての用途は本発明の一部を形成している。 いずれの具体的ケースにおいても、RNAウイルスの
５′リーダーのヌクレオチド配列の決定は、公知かつ易
利用性の技術を用いる当業者の技術的範囲内にあるべき
である。同様に、翻訳増強のための必要な天然５′−リ
ーダー配列の一部及び修正もしくは削除されうる配列の
同定（即ち、天然配列の誘導体及び部分の同定）は、ル
ーチン的実験により決定されうる問題である。 RNAウイルスの５′リーダー配列（又はその誘導体も
しくは部分）は、例えばT4RNAリガーゼを用いて適切なm
RNAの上流にそれらを結合させることによって、それ自
体を本発明の翻訳エンハンサーとして使用することがで
きる。５′−リーダー配列は下流mRNAの開始コドンのす
ぐ隣であってもよいし、又は介在配列によってそれから
離されていてもよい。しかしながら、相補的DNAの形で
５′−リーダー配列を用いることが好ましい。cDNAは望
ましいいかなる方法でも得ることができる。しかしなが
ら、問題の５′リーダー配列の比較的短い鎖長を考慮す
れば、cDNAを化学的に合成することが通常最も好都合で
あろう。cDNAは通常発現ベクターに組込まれる。発現ベ
クターは、ベクター中に含まれているそれらのDNA配列
を発現させることができ、かつそのDNA配列がそれらの
発現を行なわせうる他の配列と作働可能に結合せしめら
れているのであれば、いかなるベクターであってもよ
い。発現ベクターは、プロモーター、ウイルスRNAの最
初の開始コドンまでの（但しそれを含まない）RNAウイ
ルスの５′−リーダー配列（又はその誘導体もしくは部
分）と相補的な配列及び適切な開始コドンを含むオープ
ン読取枠を有するDNA配列を通常含んでいる。オープン
読取枠は通常重要な１種以上のタンパク質についてコー
ドしている。発現ベクターは、DNA配列が転写及び翻訳
により発現される宿主細胞中に安定的に又は一時的に直
接組込まれる。安定的発現の場合には、ベクターはエピ
ソームとして又は染色体DNAの必須部分として宿主中で
複製可能でなければならない。又は、発現ベクターはイ
ンビトロで転写させることができ、その際にはRNAが一
時的発現のために細胞中に直接組込まれる。 本発明の翻訳エンハンサーは、mRNAの翻訳能力を高め
ることが望まれるいかなる状況下においても使用可能で
ある。しかしながら、エンハンサーの効果はそれが存在
しなければ不十分にしか翻訳されないmRNAの場合におい
て最も著しいことに留意すべきである。したがって、本
発明のキャップもしくはエンハンサー又は双方の付加は
翻訳を促進させることになる。既にキャップを有してい
るmRNAの場合であっても、本発明のエンハンサーの効果
はなお存在している。 本発明の翻訳エンハンサーは、例えは植物細胞、細菌
及び動物細胞のような多数の異なるタイプの発現系にお
いて有効であるが、但し特定のエンハンサーは他の系よ
りむしろ１つの系とより適合するようである。例えばイ
ンビドロ試験時におけるTMVのオメガ配列はウサギ網状
赤血球溶解物系の場合よりも小麦麦芽系及び大腸菌（Es
chjrichia coll）の場合により大きな増強性を示すよう
であるが、翻訳の増強自体は３種すべての系で観察され
る。特定のエンハンサーと特定の発現系との適合性は、
通常当業者の技術的範囲内に十分属する事項であろう。 一般的に、本発明の翻訳エンハンサーは、農業を含む
商業面に対する生物又は細胞系の価値がその天然遺伝子
又は人工産生遺伝子の１つの発現レベルによって決定さ
れる場合であれば、いずれにおいても利点を生かしつつ
用いることができる。 （ｉ） 遺伝子工学生物又は細胞系で商業的に有用なタ
ンパク質の産生に際して。 （ii） 酵素で触媒される中間代謝産物の産生速度が特
定酵素の合成速度を増加させることによって高められう
るような発酵に際して。 （iii） ウイルス感染の影響がウイルス弱毒体との前
接触によって抑制させることができ、かつ保護を付与す
る成分の産生レベルを増加させることにより保護レベル
を高めることが有利であるようなウイルス交差保護に際
して。例えば植物は、ウイルス外被（coat）タンパク質
についてコードするTMV RNA部分のcDNAコピーを含むア
ナロバクテリウム（Agrobacterium）遺伝子工学株にそ
れらを接触されることによってTMV感染から保護するこ
とができる。植物ゲノムに挿入された細菌cDNAは、ウイ
ルス自体による感染から植物を保護する外被タンパク質
を連続的に発現する。 （iv） 除草剤耐性等の性質が植物の中間代謝の人工的
修正によって付与されるような植物の遺伝子工学に際し
て。 （ｖ） 例えば、部分的クローンの発現産物に対する抗
体を産生させることが望まれている場合における、遺伝
子の部分的クローンの発現に際して。 本発明は下記実験操作によって更に詳細に説明されて
いる。 実 験 mRNA 本発明の態様のキメラmRNAを、第１図で示されている
ように、下記方法で産生した。 TMV RNAブルガレ（vulgare）株の配列を用いて（ゲ
レットら，プロシーディング・オブ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンスUSA,第79巻，第5818頁,1982
年）、126kDaオープン読取枠のAUG開始コドンの上流に
おいて５′キャップ（m7Gppp及び隣接Ｇ残基）を含まな
い67塩基配列に対して相補的なDNA配列を含む81塩基オ
リゴヌレオチドを合成した。この配列はオメガプライム
と呼ばれている。Hind III部位をこのオリゴヌクレオチ
ドの５′末端に組込み、かつSal I部位を３′末端に組
込んだ。オメガプライム配列の３′末端における13塩基
及びSel I部位を含む20塩基の第二オリゴヌクレオチド
を、第二鎖合成用のプライマー（primer）として合成し
た。アニーリング（annealing）後、第二鎖合成はDNAポ
リメラーゼＩのクレノウ断片を用いて完了させた。 得られた二重鎖81bp断片をHind III/Sal Iで消化させ
て一重鎖付着端をもつ77dp断片を作成し、pUC19の対応
部位に挿入した。合成の結果TMVのオメガプライム配列
が正しい向きをしているという事実は、ジデオキシ鎖タ
ーミネーション法〔サンガ（Sanger）ら，プロシーディ
ング・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエン
スUSA,第74巻，第5463頁,1977年〕を用いた配列分析に
よって立証された。次いで、TMVのオメガプライムを含
む断片をプラスミドpJ II 1のHind III/Sal I部位に組
込み、pJ II 101を得た。pJ II 1は、BamH I断片として
のアセンブリー（assenbly）配列のTMV源をpSP64の対応
部位に挿入し〔メルトン（Melton），ヌクレイック・ア
シッズ・リサーチ，第12巻，第7035頁,1984年〕、かつS
ma I部位をBg1 II部位に変えることにより〔ストリート
ら，バイオロジー，第155巻，第299頁,1986年（Sleat e
t al.,Virology,155,299（1986））〕得られる。 Tn9のクロラムフェニコールアセチルトランスフェラ
ーゼ遺伝子（CAT）を含むpCM1から779bpSal I）末端断
片〔クローズ及びロドリゲス，ジーン，第20巻，第305
頁,1982年（Close and Rodriguez,Gene,20,305（198
2））〕をpJ II1及びpJ II101のSa1 I部位に組込み、そ
れぞれpJ II2及びpJ II102を得た。Tn5のネオマイシン
ホスホトランスフェラーゼII遺伝子（NPT II）を含むpM
KNR−Ｈからの1.27kb Bg1 II/Sa1 I断片〔ギャリー
ら，ジャーナル・オブ・バイテリオロジー，第161巻，
第1034頁,1985年（Gallie et al.,Journal of Bacterio
logy,161,1034（1985））〕をクレノウ断片でブラント
末端化し、pJ II1及びpJ II101のAcc I部位に組込み、
それぞれpJ II3及びpJ II103を得た。CAT及びNPT II双
方の正確な配向性は制限断片分析によって立証された。 pJ II2及びpJ II102をBg1 IIでかつpJ II3及びpJ II1
03をEcoR Iで直鎖化後、各々のRNA転写体をSP6 RNAポ
リメラーゼの使用により産生した。各々のキャップ体
も、キャップ転写体の対応的産生を確保するGpppG及びS
P6ポリメラーゼの反応条件を用いて産生した。キャップ
及び非キャップ反応からのRNA並びにオメガ配列をもつ
又はもたない構造体に関する同量産生は、ホルムアルデ
ヒド−アガロースゲルを変性させることによって立証さ
れた。 同量の様々なCAT含有転写及びNRT II含有転写体を標
準的反応条件下でウサギ網状赤血球溶解物（MDL）、小
麦麦芽Ｓ−30（WG）及び大腸菌Ｓ−30のインビトロ翻訳
系に加えた。得られたポリペプチド産物を35S−メチオ
ニンで標識した。 第２図及び第３図は、MDL（第２図，トラック１〜1
1）、WG（第２図，トラック12〜22）及び大腸菌（第３
図）からの翻訳産物のSDS−PAGE分析について示してい
る。第２図において、鋳型添加物は：トラック１及び12
がH2O（内在性翻訳）；トラック２及び13がBa1 II直鎖
化pJ II102 DNA;トラック３及び14がCAT RNA;トラッ
ク４及び15がオメガプライム−CAT RNA;トラック５及
び16が５′キャップCAT RNA;トラック６及び17が５′
キャップ−オメガプライム−CAT RNA;トラック７及び1
8がEcoR I直鎖化pJ II103 DNA;トラック８及び19がNPT
II RNA;トラック９及び20がオメガプライム−NPT II
RNA;トラック10及び21が５′キャップ−NPT II RNA;
トラック11及び22が５′キャップ−オメガプライム−NP
T II RNAであった。14C標識マーカータンパク質〔アメ
ルシャム・インターナショナル社（Amersham Internati
nonal,plc）〕はトラックＭに加えた。キロドルトン（k
Da）としてのそれらの各々の大きさは左側に示されてい
る。乾燥ゲルを室温で３日間オートラジオグラフィーに
付した。第３図において、鋳型添加物は：トラック１が
H2O（内在性翻訳）：トラック２がBg1 II直鎖化pJ II10
2 DNA;トラック３がCAT RNA;トラック４がオメガプラ
イム−CAT RNA;トラック５が５′キャップ−CAT RNA;
トラック６が５′キャップ−オメガプライム−CAT RN
A;トラック７がEcoR I直鎖化pJ II103 DNA;トラック８
がNPT II RNA;トラック９がオメガプライム−NRT II
DNA;トラック10が５′キャップ−NPT II RNA;トラック
11が５′キャップ−オメガプライム−NPT II RNAであ
った。14C標識マーカータンパク質はトラックＭに加
え、それらの大きさ（kDa）は左側に示されている。乾
燥ゲルを室温で３日間オートジオグラフィーに付した。
大腸菌Ｓ−30系は転写活性系であるが、天然大腸菌RNA
ポリメラーゼはSP6プロモーターを認識しえないことに
留意すべきである。 下記第１表はオメガプライム配列の促進効果について
示している。第２図及び第３図に示されたゲルからゾー
ンを取出し、翻訳産物の各バンドにおける放射能を測定
し、オメガプライム配列を含まないRNAからの放射能に
対して各々の場合データを標準化した。この方法でデー
タを表現すると、キャップ単独による何らかの促進効果
は除かれ、オメガプライム配列の促進効果のみが示され
る。 第 １ 表 mRNA WG MDL 大腸菌 CAT １ １ １ オメガプライム−CAT 10 1.2 11 GpppG−CAT １ １ １ GpppG−オメガ プライム−CAT 3.8 2.2 2.7 NPT II １ １ １ オメガプライム−NPT II 71 17.8 74 GpppG−NPT II １ １ １ GpppG−オメガ プライム−NPT II 9.5 1.5 9.6 考 察 TMVのオメガプライム領域の存在は、キャップ又は非
キャップ状態でCAT又はNPT II配列を含む転写体の発現
を促進させる。促進は翻訳効率の悪いNPT II転写体を場
合に最も著しい。このように、NPT II遺伝子を含むTn5
断片は、NTP II遺伝子のAUG開始コドンのすぐ上流に更
にAUGを有している。しかも“コザック側（Kozak rul
e）”（これに関するコザックの論文参照）によれば、N
PT II開始コドン近辺の領域は翻訳開始能の乏しいシグ
ナルを構成していることを示唆する。WG及びMDLの場合
（第２図，第８列及び第19列）で観察されるように、キ
ャップ又はオメガプライムのないNPT II転写体はほとん
ど機能していない。キャップ又はオメガプライムの付加
は翻訳を改善するが、オメガプライムの存在はキャップ
単独の存在よりも優れた促進効果を有している。大腸菌
翻訳メカニズムは、キャップ依存性でないものの、オメ
ガプライム配列の存在によって著しく促進される（第３
図，第４、６、９及び11列）。大腸菌の場合において、
CAT又はNPT II mRNA上のオメガプライム配列にキャッ
プを付加してもその翻訳をほとんど促進しなかったが、
一方キャップCAT又はNPT II mRNAにオメガプライムを
付加すると著しく増強された。 CAT遺伝子mRNAは、たとえキャップ又はオメガプライ
ム配列を有していない場合であっても、真核生物系にお
いてはより効果的に機能する。５′末端から最初のAUG
はCATの開始コドンであって、開始コドン中の及びその
近辺の配列は“コザック則”に十分合致している。この
ことは、更に著しく低いmRNA濃度が利用可能な35S−メ
チオニンプールの消費を防ぐために必要とされるMDL系
の場合に最も明らかである。その際に驚くべきことでは
ないが、CAT mRNAにおけるオメガプライム配列の存在
は促進的でなかった。MDLはWGほどキャップ依存性でな
いと考えられるが、しかしながら、NPT II転写体上にお
けるキャップの存在はわずかに促進効果を有しており
（第２図，第８列及び第10列）、一方CAT転写上におけ
るその存在はさほど効果がなかった（第２図，第３列及
び第５列）。CAT mRNA単独ではWR系において著しく低
い活性しかなかった。結論として、キャップもしくはオ
メガプライム配列の存在又は双方の存在は非常に促進的
であった（第２図，第14〜17列）。WGにおいて、NPT II
mRNA上のオメガプライム配列にキャップを付加しても
（第２図，第20列及び第22列）、その翻訳をほとんど促
進しなかったが、一方キャップ又は非キャップNPT II
mRNAにオメガプライムを付加すると（第２図，第19列及
び第21列）著しく増強された。 したがって、オメガプライム配列の存在は真核生物系
（MDL及びWG）及び原核生物系双方において翻訳を増強
する。このことはTMV粒子の脱外被能と一致し、RNAは真
核生物又は原核生物の翻訳メカニズムによって翻訳され
る。オメガプライム配列は、キャップ単独の存在の場合
よりも転写体の発現に関して通常高い促進効果を有して
いる。しかも、オメガプライム配列は、例えば原核生物
系及びある程度MDL系において、キャッピング（cappin
g）では効果のない条件下で翻訳を増強する。 継続実験操作 CAT mRNA及びオメガプライムリーダー配列の誘導体
もしくは部分を含むキメラRNA構造体を前記と同様の方
法で作成したが、最初の合成DNA配列は必要なRNAを生じ
うるように選択しておいた。第４図に示されているよう
に、５つの欠失体（Δ１〜Δ５と表記されている）、１
つのＡ→Ｃトランスバージョン体（transversion）及び
１つの〔C,A〕ｎ→〔Ｕ〕ｎ置換体（substitution）が
あった。 CAT mRNAを含む別のキメラRNA構造体を、TMV（U1,ブ
ルガレ（vulgare）又は普通株）以外の下記ウイルスの
５′−リーダー配列を用いて同様の方法で作成した:TMV
のトマト株（SPS単離物）、カブ黄斑モザイクウイルス
（TYMV）、ブロウムモザイクウイルスRNA3（BMV3）、ラ
ウス肉腫ウイルス部分リーダー（RSV）及びアルファル
ファモザイクウイルスRNA4（A1MV4）。合成された最初
のDNA配列及び制限部位地図は第５図〜第９図にそれぞ
れ示されている。 RNA構造体の他の１組を同様の方法で製造したが、但
しCATの代わりに大腸菌リポーター遺伝子β−グルクロ
ニダーゼ（GUS）を用いた。用いられたリーダー配列
は、ポリリンカー（比較目的用）もしくはU1オメガ（即
ち、TMVからのオメガプライム）又はオメガプライムの
誘導体もしくは部分、及び前記のような他のウイルスの
リーダーであった。GUS遺伝子は、人工的に“良好な”
コザックの配列関係（context）（第９表参照）又は天
然の“悪い”コザックの配列関係においてpRAJ235/240
からのSa1 I断片として用いた〔ジェファーソン（Jeffe
rson）ら，プロシーディンクギ・オブ・ナショナル・ア
カデミー・オブ・サイエンスUSA,第83巻，第8447頁,198
6年〕。リーダー配列及び制限部位地図は第10〜第13図
に示されている。リポーター遺伝子の発現は、ジェファ
ーソンら，プロシーディング・オブ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンスUSA,第83巻，第8447頁,1986
年に記載されているような螢光測定法により調べた。 前記３つのインビトロ翻訳系に加えて、下記２つのイ
ンビボ系を用いたゼノパス・ラエビス（Xenopus laevi
s）卵母細胞の微量注入及びタバコ〔ニコチアナ・タバ
クム（Nicotiana tabacum）のキサンチ（Xanthi）種〕
葉肉原形質体のエレクトロポレーション（electroporat
ion）。それぞれの操作は下記のとおりであった： 各合成SP6 mRNA（又はそれらの対応DNA鋳型）2ngを
標準的方法〔コルマン・エー，ハーメス・ビー・デー及
びヒギンズ・エス・ジェイ（編集），転写及び翻訳：実
用的アプローチ,IRLプレス，オックスフォード，第271
頁,1984年（Colman A.In Hames,B.D.and Higgins,S.J.
（eds.）,Transcripion and Translation:A practical
Approach,IRL Press,Oxford,271（1984））〕に従い30
のバッチ中の第６期のX.ラエビス卵母細胞の細胞質に微
量注入した。卵母細胞を修正バース塩水（Modified Ba
rths′ Saline MBS）中で18時間インキュベートし、
かかる後蒸留水で簡単に洗浄した。ゼノパス卵母細胞の
抽出物は、10mM DTT（17μ／卵母細胞）含有のpH7.4
の0.25MトリスHcl中に各サンプルを再懸濁し、しかる後
15秒間超音波処理することによって調製した。不溶性物
質を15分間の微量遠心分離によって除去し、卵母細胞と
同数得られた抽出物分を公表された方法でCAT又はGUS活
性について分析した（GAT:ガリーら，ヌクレイック・ア
シッズ・リサーチ，第15巻，第3257頁、1987年）;GUS:
ジェファーソンら，プロシーディング・オブ・ナショナ
ル・アカデミー・オブ・サイエンスUSA,第83巻，第8447
頁,1986年）。 葉肉原形質体をN.タバクム（キサンチ種）の葉から分
離し、0.7Mマンニトール中で存在した。原形質体（1
06）を60xgで３分間遠心分離し、RNA（８μｍ）含有の
氷冷0.7Mマンニトール1ml中に再懸濁し、エレクトロポ
レーション用セルに移し、セルに50nFコンデンサーを取
付けることによって単一電圧パルス（2.5kV/cm）を加え
た。パルスは速い立上り時間（１μｓ以下）を有しかつ
半減時間約５μｓの指数減衰性を有していた。エレクト
ロポレーション処理原形質体を０〜４℃で10分間保存し
た。0.7Mマンニトール0mlを加え、原形質体を60xgで３
分間の遠心分離によって回収した。次いで原形質体を培
地中に再懸濁、9cm径ペリト皿中25℃で21時間インキュ
ベートした。 エレクトロポレーション処理原形質体の各サンプル
を、CATアッセイの場合には2mMロイペプチン及び10mMジ
チオトレイトール（DTT）含有のpH7.4の0.25MトリスHCl
又はGUSアッセイの場合には10mM ２−メルカプトエタ
ノール含有のpH7.0の50mMリン酸ナトリウム150μ中で
沈降させ、再懸濁し、超音波処理した。抽出分を室温又
は４℃において10,000xgで10分間微量遠心分離した。 第14図は、エレクトロポレーション処理タバコ原形質
体中におけるキャップ又は非キャップCAT RNAの発現に
関してのオメガプライムの効果について示している。各
原スポットは５×104の生存原形質体に相当する抽出物
を含んでいた。各サプルに関する基質（14C−クロラム
フェニコール）からそのモノアセチル化体（左側に表
示）への変換率（％）はトラックの上部に示されてい
る。エレクトロポレーション処理RNA又は標準は：トラ
ック１がRNAなし（偽物）；トラック２がCAT RNA;トラ
ック３がオメガプライム−CAT RNA;トラック４が５′
キャップ−CAT RNA;トラック５が５′キャップ−オメ
ガプライム−CAT RNA;トラック６がトラック１の同量
抽出物に加えられた0.1単位の精製CAT酵素；トラック７
が0.1単位の精製CAT酵素単独であった。乾燥tlcプレー
トを２日間オートラジオグラフィーに付した後、除去
し、モノアセチル化産物（３−Ac/1−Ac）に相当する14
C標識スポット中の放射能について測定したが、変換率
％データは抽出物中の関連CAT活性を表わしている。オ
メガプライム（＋/5′キャップ）はCAT RNA発現に関し
て最も促進的であった。 第15図は、X.ラエビス卵母細胞中に微量注入されたキ
ャップ又は非キャップCAT RNAの発現に関するオメガプ
ライムの効果について示している。同量の各CAT RNA構
造体又は直鎖DNA鋳型（2ng）を完全に卵母細胞１個当た
りで注入した。同量の卵母細胞抽出物（0.3×細胞に相
当する）を他に言及のない限り各ケースにおいて分析し
た。14C−クロラムフェニコールからそのモノアセチル
化体への変換体（％）は各トラックの上部に示されてい
る。トラック５及び６において、ジアセチル化体への変
換率（％）は＊で示されている。微量注入されたRNA又
は標準は：トラック１がRNAなし（偽物）；トラック２
がBgl II直鎖化pJ II102;トラック３がCAT RNA;トラッ
ク４がオメガプライム−CAT RNA;トラック５が５′キ
ャップ−CAT RNA;トラック６が５′キャップ−オメガ
プライム−CAT RNA;トラック７が20倍希釈抽出物であ
ること以外はトラック５と同様；トラック８が20倍希釈
されていること以外はトラック６と同様；トラック９が
トラック１の同量抽出物に加えられた0.1単位の精製CAT
酵素；トラック10が0.1単位の精製CAT酵素単独であっ
た。乾燥tlcプレートを室温で18時間オートラジオグラ
フィーに付した後、関連14C標識スポットを取出してカ
ウントした。 下記表は更に得られた結果について示している。 すべてのRNAはキャップされていなかった。 上記結果は、オメガプライムがCATの翻訳を促進させ
ることを示している。欠失体１〜５は、この効果を完全
に消失させることなく低下させている。同様のことがＡ
→Ｃトランスバージョン体にもあてはまる。〔Ｕ〕ｎ置
換体は、あるとしてもほとんどが効果をもっていない。 すべてのRNAはキャップされていなかった。 オメガU1はTMV（ブルガレ）の標準株に由来する。 オメガSPSはTMVのトマト株に由来する。 TYMV:カブ黄斑モザイクウイルスリーダー BMV3:ブロウモザイクウイルスRNA3 RSV:ラウス肉腫ウイルスからの部分リーダー配列 AlMV4:アルファルファモザイクウイルスRNA4 前記結果はTMV U1由来オメガプライムがこの系にお
いてCAT RNAの翻訳を促進することを示している。TMV
トマト株オメガプライムも同様であるが、但しやや劣っ
ている。他のウイルスリーダーはさほど又は全く効果が
なく、TYMVリーダーは阻害的であるかもしれない。注：これらの数値は、CATメッセージの５′未満の様々
な配列の付加によって生じる翻訳の促進率を比較したも
のである。翻訳はキャップのある又はキャップのないメ
ッセージに関して行われた。各欄は（第２表及び第３表
のように）独立したゲルから切除回収された放射性CAT
タンパク質の収率を示している。各バンドを切出し、カ
ウントし、かつmRNAが未修正CATメッセージであるバン
ドに対して標準化した。 前記結果は、オメガプライムが５′キャップの存在又
は非存在下でこの系において促進させることを示してい
る。他のウイルスリーダー配列及びオメガプライムの誘
導体もしくは部分は翻訳を様々な程度に増強させるが、
但しオメガプライム自体よりも優位に優れているケース
はまれである。 上記結果は、オメガプライム、その誘導体の一部及び
トマト株オメガプライムが翻訳を最大に促進させること
を示している。他の配列も大半は、但し異なる程度で促
進させる。大腸菌は翻訳のために５′キャップを要しな
い。 （＊構造体は５′キャップのある又はない“悪い"GUS外
来（ex）pRAJ 235/240であった） すべてのmRNA構造体を８μg/mlでエレクトロポレーシ
ョン処理し、洗浄された原形質体を（ガリーら，ヌクレ
イック・アシッズ・リサーチ，第15巻，第3257頁,1987
年）記載のように20時間インキュベートした。 “悪い”コザック構造体（235）リーダーの配列は下
記のとおりである： ポリリンカー中へのオメガプライムの挿入は下記のとお
りである： ＊この箇所におけるオメガプライムは下記のとおりであ
る： 及び欠失オメガプライム誘導体父がしかるべく後に続
く。 子牛プレプロキモシン又はチキンプレリゾチームをコ
ードするメッセンジャーRNAを、TMV5′末端配列（オメ
ガプライム）を付加させて又はさせないでインビトロ合
成した。mRNAをウサギ網状赤血球（MDL）、小麦麦芽（W
G）又は大腸菌（EC）由来の系でインビトロ翻訳させ
た。 プラスミドpJ II6及びpJ II7（第16図）をプラスミド
pST64CT、pSP64LT〔スリート（Sleat）ら，バイロロジ
ー，第155巻，第299頁,1986年〕及びpJ II101の成分を
用いて作成した。pJ II6及びpJ II7は、M31 mp11由来
ポリリンカー配列に隣接するバクテリオファージSP6RNA
ポリメラーゼのプロモーターを含む転写プラスミドpSP6
4〔メルトン（Melton）,1984年〕の誘導体である。pSP6
4CT及びpSP64LTのプレプロキモシン及びプレリゾチーム
コード領域をそれぞれHind III断片として取出し、DNA
ポリメラーゼＩのクレノウ断片でブラント末端化し、pJ
II101のHinc II部位に組込んでクローニングし、それ
ぞれpJ II106及びpJ II107を得た（第16図）。これらの
構造体は、５′末端オメガプライム配列をもつメッセン
ジャー（messenger−sense）プレプロキモシン及びプレ
リゾチーム転写体の合成を指示させるために用いた。親
プラスミドpSP64CT及びpSP64LTはオメガプライムのない
mRNAの合成のための鋳型であった。 結果は下記第７表に示されている。 前記方法と同様の方法で、様々なキメラRNA構造体
を、NPT IIコード領域、及びオメガプライム、２つのタ
ンディ（tandem）オメガプライム領域、長鎖（77塩基）
“ジャンク（junk）”リーダー（ポリリンカー）配列も
しくは中央オメガプライムと一緒の“ジャンク”を用い
て作成した。構造体は第17図に示されており、結果は下
記第８表に示されている。 これは、ランダムポリリンカー配列が80Sリボソーム
系においてオメガプライムの代わりにならず、原核生物
（70S）系でのみわずかに代わりになることを示してい
る。２つのランダムオメガプライムのみが70S発現に寄
与する（例えば、オメガプライムの単一コピー）。 β−グルクロニダーゼmRNA（GUS mRNA）の発現に対
するオメガプライムの効果に関して第６表（前掲）に掲
示されたデータを更に拡張するために、別の一連の構造
体として開始コドン（AUG）近辺の配列関係が修正され
たGUS遺伝子を用いた。下記の“良好な配列関係”をも
つリーダー： を含むパルスミドpRAJ275は、GUSのこのバージョンのた
めの供給源であった。オメガプライム及び様々な他のリ
ーダー構造体を前記のようにHind III/Sal I部位に挿入
した。pRAJ275構造体の詳細は下記のとおりである： pRAJ275はpRAJ255の誘導体であって（ジェファーソン
ら，プロシーティグ・オブ・ナショナル・アカデミー・
オブ・サイエンスUSA,第83巻，第8447頁,1986年）、こ
こにおいてGUSの５′配列は連続的（progressive）BAL3
1削除によって除去され、ゴザック〔ミクロバイオロジ
ー・レビューズ，第47巻，第１頁,1983年（microbiolog
y Reviews,47,1（1983））〕により規定された“コンセ
ンサス（consensus）”翻訳イニシエーターを構成して
いた合成オリゴヌクレオチドで置き換えられている。こ
のプラスミドはイニシエーターATGコドンに位置する特
有のNco I部位（CCATGG）を有しており、その周囲配列
関係はGTCGACCATGGTCである。イニシエータ近辺の配列
関係は所定量のmRNAの翻訳産物レベルに関して充分な効
果を発揮しうることが、インビトロ及びインビボ双方で
示された。この構造はこの効果を最大化させるために調
整された。それはpUC19におけるSal I−EcoR I断片とし
て与えられた。 ５′キャップ又は非キャップ転写体を前記のようにタ
バコ原形質体中にエレクトロポレーションし、GUS発現
レベルを抽出物中で測定した。 非キャップRNAもMDLまたはWG無細胞翻訳系に加え、合
成されたGUSタンパク質レベルは第２図及び第３図（第
１表）のように放射性ゲルバンドを切取ってカウントす
ることによって測定した。結果は第９表に示されてい
る。 RNA構造体の別の１組を、大腸菌リポーター遺伝子β
−グルクロニダーゼ（GUS）及び更に誘導トリプトファ
ン（Trp）プロモーターを用いて、前記と同様の方法に
より作成した。Trpプロモーターはファルマシア社（Pha
rmacia Ltd.）から購入し、制限エンドヌクレアーゼ消
化、補充、サブクローニング等の慣用的技術により修正
し、３′−Hind III部位（第18図）及びブラント５′末
端を作出した。次いで、この二重鎖（ds）DNA断片をSP6
プロモーター（インビボの大腸菌中では作動しない）及
び重要な５′−リーダー構造の間で様々なリーダー−リ
ポーター（GUS）遺伝子プラスミド中に挿入した。 得られたプラスミドDNAは標準的方法によりコンピテ
ント（competent）大腸菌細胞を形質転換させるために
用いたが、Trpプロモーターは現場で誘導されて、キメ
ラリーダー−リポーターmRNAを産出した。転写開始点は
Hind III部位（AAGCTT）中のＧに対応する。 形質転換された大腸菌細胞中における転写体の発現
は、分光測定法により調べた（ジェファーソンら，プロ
シーディング・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・
サイエンスUSA,第83巻，第8447頁,1986年）。結果（第1
0表）は、GUS発現がオメガプライムの存在により及びあ
る程度オメガプライムの他のリーダー配列もしくは誘導
体により、コザック配列関係の“良好な”又は“悪い”
構造体のいずれかからインビボで増強されたことを示し
ている。 結 論 オメガプライムは、現場でTrpプロモーターを用いた
場合に、プラスミドDNAで形質転換された大腸菌中でのG
US RNAのインビボ発現を増強する。 継続実験は超らせん二重鎖pUC19 DNAを用いて行なわ
れたが、これはカリフラワーモザイクウイルス（CaMV）
35Sプロモーター、ノパリンシンターゼターミネーター
〔アグログバクテリウム・ツメファシエンス（Agrobact
erium tumefaciens）由来〕及びそれらの中間にCAT DN
A（●，▲）もしくはオメガプライムCAT DNA（○，
△）のいずれかを有するように修正されている。 構造体（第19図）は二元ベクター系から作成したが
〔ベバン（Bevan），ヌクレイック・アシッズ・リサー
チ，第12巻，第8711頁,1984年〕、その場合においてCaM
V35Sプロモーター及びNosターミネーターをHind III及
びEcoR I部位で切除し、プラスミドpUC19に挿入するこ
とによってpUC35S Nosを得た。 構造体pUC35SCATNos及びpUC35SオメガプライムCATNos
は、CAT又はオメガプライムCATをそれぞれBamH I部位で
プラスミド中に挿入することによって作成した。 様々な量のプラスミドDNA（μg/ml）を前記のように
原形質体にエレクトロポレーション処理し、細胞を25℃
で６時間（○，●）又は26時間インキュベートし、溶離
させて、（前記のような）CATアッセイを行なった。 第20図に示された結果は、図示された100〜150μｇの
超らせんプラスミドDNAの注入をうけた細胞はオメガプ
ライムが構造体中に存在している場合（△，○）にCAT
発現を増強させていた（２倍）ことを示している。 これらの結果は、安定的形質転換原性（transgenic）
植物中での遺伝子発現がプロモーター（インビボ転写
用）及び翻訳オープン読取枠の間へのオメガプライム配
列の挿入によって同様に増強されるであろうということ
を示している。

Claims (1)

  1. (57)【特許請求の範囲】 １．下記のｉ）、ii）及びiii）を含む配列を有するDNA
    分子： （ｉ）プロモーター （ii）RNAウイルスの５′−非翻訳リーダー配列又はそ
    の誘導体もしくは部分の配列に相補的な翻訳増強配列
    （但し、ブロウムモザイクウイルスRNA ４の５′−非
    翻訳リーダー配列を除く）、及び （iii）上記翻訳増強配列の下流に、５′−非翻訳リー
    ダー配列が由来するRNAウイルスに非相同のコード配列
    （但し、適切な開始コドンを含む） 但し、上記プロモーター、翻訳増強配列及びコード配列
    間の該プロモーターのコントロール下における関係は、
    mRNA種を産出するようなもので、上記コード配列の発現
    産物を産出するその翻訳は、翻訳増強配列に相当するmR
    NAの部分によって増強される。 ２．転写エンハンサー配列をも含む、請求項１に記載の
    DNA分子。 ３．５′−非翻訳リーダー配列が植物ウイルス由来であ
    る、請求項１又は２に記載のDNA分子。 ４．５′−非翻訳リーダー配列がタバコモザイクウイル
    スのオメガプライム（Ω′）配列又はその誘導体もしく
    は部分である、請求項３に記載のDNA分子。 ５．５′−非翻訳リーダー配列がアルファルファモザイ
    クウイルスRNA4由来である、請求項３に記載のDNA分
    子。 ６．下記のｉ）、ii）及びiii）を含むDNA配列を細胞中
    に組込んでなる微生物又は細胞培養物： （ｉ）プロモーター （iii）RNAウイルスの５′−非翻訳リーダー配列又はそ
    の誘導体もしくは部分の配列に相補的な翻訳増強配列
    （但し、ブロウムモザイクウイルスRNA ４の５′−非
    翻訳リーダー配列を除く）、及び （iii）上記翻訳増強配列の下流に、５′−非翻訳リー
    ダー配列が由来するRNAウイルスの非相同のコード配列
    （但し、適切な開始コドンを含む）但し、上記プロモー
    ター、翻訳増強配列及びコード配列間の該プロモーター
    のコントロール下における関係は、mRNA種を産生するよ
    うなもので、上記コード配列の発現産物を産生するその
    翻訳は、翻訳増強配列に相当するmRNAの部分によって増
    強される。 ７．DNA配列が転写エンハンサー配列をも含む、請求項
    ６に記載の微生物又は細胞培養物。 ８．５′−非翻訳リーダー配列が植物ウイルス由来であ
    る、請求項６又７に記載の微生物又は細胞培養物。 ９．５′−非翻訳リーダー配列がタバコモザイクウイル
    スのオメガプライム（Ω′）配列又はその誘導体もしく
    は部分である、請求項８に記載の微生物又は細胞培養
    物。 １０．５′−非翻訳リーダー配列がアルファルファモザ
    イクウイルスRNA4由来である、請求項８に記載の微生物
    又は細胞培養物。
JP62503414A 1986-06-04 1987-06-04 ｍＲＮＡの翻訳 Expired - Lifetime JP2814433B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB868613481A GB8613481D0 (en) 1986-06-04 1986-06-04 Translation of mrna
GB8613481 1986-06-04

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP22837197A Division JP3658654B2 (ja) 1986-06-04 1997-08-25 ポリペプチドの製造方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH01500961A JPH01500961A (ja) 1989-04-06
JP2814433B2 true JP2814433B2 (ja) 1998-10-22

Family

ID=10598884

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP62503414A Expired - Lifetime JP2814433B2 (ja) 1986-06-04 1987-06-04 ｍＲＮＡの翻訳
JP22837197A Expired - Lifetime JP3658654B2 (ja) 1986-06-04 1997-08-25 ポリペプチドの製造方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP22837197A Expired - Lifetime JP3658654B2 (ja) 1986-06-04 1997-08-25 ポリペプチドの製造方法

Country Status (8)

Country Link
US (2) US5489527A (ja)
EP (1) EP0270611B1 (ja)
JP (2) JP2814433B2 (ja)
AT (1) ATE110412T1 (ja)
AU (1) AU614062B2 (ja)
DE (1) DE3750422T2 (ja)
GB (2) GB8613481D0 (ja)
WO (1) WO1987007644A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012161352A1 (ja) 2011-05-25 2012-11-29 国立大学法人岡山大学 Reic発現アデノウイルスベクター

Families Citing this family (104)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5135855A (en) * 1986-09-03 1992-08-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Rapid, versatile and simple system for expressing genes in eukaryotic cells
CA1339841C (en) * 1988-07-15 1998-04-28 Robert L. Erwing Synthesis of stereospecific enzyme by non-chromosomal transformation a host
JPH0253491A (ja) * 1988-08-17 1990-02-22 Japan Tobacco Inc ベクター及びその利用方法
ATE160173T1 (de) * 1988-08-19 1997-11-15 Seminis Vegetable Seeds Inc Potyvirus-hüllproteingene und damit transformierte pflanzen
EP0418695A1 (de) * 1989-09-13 1991-03-27 Ciba-Geigy Ag Regulatorische DNA-Sequenz
US5994526A (en) * 1996-06-21 1999-11-30 Plant Genetic Systems Gene expression in plants
US6303848B1 (en) 1998-01-16 2001-10-16 Large Scale Biology Corporation Method for conferring herbicide, pest, or disease resistance in plant hosts
US20020164585A1 (en) * 1998-01-16 2002-11-07 Sean Chapman Method for enhancing RNA or protein production using non-native 5' untranslated sequences in recombinant viral nucleic acids
US6426185B1 (en) 1998-01-16 2002-07-30 Large Scale Biology Corporation Method of compiling a functional gene profile in a plant by transfecting a nucleic acid sequence of a donor plant into a different host plant in an anti-sense orientation
US20030027173A1 (en) * 1998-01-16 2003-02-06 Della-Cioppa Guy Method of determining the function of nucleotide sequences and the proteins they encode by transfecting the same into a host
CA2385134A1 (en) * 1999-10-15 2001-04-19 Wakenyaku Co., Ltd. Template molecule having broad applicability and highly efficient function means of cell-free synthesis of proteins by using the same
FI20000182A0 (fi) * 2000-01-28 2000-01-28 Teemu Teeri Nukleotidisekvenssien käyttö proteiinisynteesin ja proteiinien ilmentämisen lisäämiseksi
EP1314781A4 (en) * 2000-08-30 2004-11-03 Endo Yaeta Dr DESIGN AND CONSTRUCTION OF A TRANSCRIPTION MODEL OF ACELLULAR PROTEIN SYNTHESIS, AND DISCONTINUOUS DILUTION METHOD FOR USE IN SYNTHESIS OF ACELLULAR WHEAT GERM PROTEIN
JP4723713B2 (ja) * 2000-09-25 2011-07-13 トヨタ自動車株式会社 ｍＲＮＡの潜在的翻訳制御因子のスクリーニング方法
FR2815969B1 (fr) 2000-10-30 2004-12-10 Aventis Cropscience Sa Plantes tolerantes aux herbicides par contournement de voie metabolique
WO2002046395A1 (fr) * 2000-12-07 2002-06-13 Keio University Proteine a c-terminaison modifiee et procede permettant d'obtenir cette proteine, agent de modification et matrice de traduction necessaire a la production d'une proteine a c-terminaison modifiee, et procede de detection de l'interaction proteique avec l'utilisation de ladite proteine
WO2002068665A2 (en) 2001-02-22 2002-09-06 Rhobio Constitutive promoter from arabidopsis
WO2003064621A2 (en) * 2002-02-01 2003-08-07 Ambion, Inc. HIGH POTENCY siRNAS FOR REDUCING THE EXPRESSION OF TARGET GENES
CA2475003A1 (en) 2002-02-01 2003-08-07 Sequitur, Inc. Double-stranded oligonucleotides
US20060009409A1 (en) 2002-02-01 2006-01-12 Woolf Tod M Double-stranded oligonucleotides
EP1532271A4 (en) * 2002-06-12 2006-10-18 Ambion Inc METHODS AND COMPOSITIONS RELATED TO POLYPEPTIDES WITH RNASE III DOMAINS THAT TRANSFER RNA INTERFERENCE
US20040248094A1 (en) * 2002-06-12 2004-12-09 Ford Lance P. Methods and compositions relating to labeled RNA molecules that reduce gene expression
US20100075423A1 (en) * 2002-06-12 2010-03-25 Life Technologies Corporation Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference
US20040029275A1 (en) * 2002-08-10 2004-02-12 David Brown Methods and compositions for reducing target gene expression using cocktails of siRNAs or constructs expressing siRNAs
FR2848570B1 (fr) 2002-12-12 2005-04-01 Bayer Cropscience Sa Cassette d'expression codant pour une 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase (epsps) et plantes tolerantes aux herbicides la contenant
US20060142228A1 (en) * 2004-12-23 2006-06-29 Ambion, Inc. Methods and compositions concerning siRNA's as mediators of RNA interference
NZ568562A (en) 2005-11-04 2011-03-31 Dow Agroscience Llc Preparation of vaccine master cell lines using recombinant plant suspension cultures
ITUD20060280A1 (it) * 2006-12-29 2008-06-30 Univ Degli Studi Udine Sequenza artificiale di dna evente funzione di leader in 5' (5'-utr) ottimizzata per la sovraespressione di proteine eterologhe in pianta
JP5048524B2 (ja) 2007-03-08 2012-10-17 住友化学株式会社 植物における、化学物質による外来遺伝子の誘導発現方法
AU2009299987A1 (en) * 2008-10-01 2010-04-08 Tet Systems Gmbh & Co. Kg Tetracycline inducible transcription control sequence
AR074941A1 (es) 2009-01-07 2011-02-23 Bayer Cropscience Sa Plantas transplastomicas exentas de marcador de seleccion
TW201142029A (en) 2009-11-24 2011-12-01 Univ Leuven Kath Banana promoters
WO2011076889A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Bayer Cropscience Ag Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides
EP2516631B1 (en) 2009-12-23 2018-02-14 Bayer Intellectual Property GmbH Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides
BR112012015697A2 (pt) 2009-12-23 2015-08-25 Bayer Intelectual Property Gmbh Plantas tolerantes a herbicidas inibidores de hppd.
EP2516630B1 (en) 2009-12-23 2017-11-15 Bayer Intellectual Property GmbH Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides
CN102869769A (zh) 2009-12-23 2013-01-09 拜尔知识产权有限公司 耐受hppd抑制剂型除草剂的植物
CN102741415A (zh) 2010-02-02 2012-10-17 拜尔农科股份公司 使用hppd抑制剂作为选择剂的大豆转化
RU2651501C2 (ru) 2010-02-04 2018-04-19 Байер Кропсайенс Аг Способ увеличения фотосинтетической фиксации углерода с использованием белка слияния из многих субъединиц гликолатдегидрогеназы
EP2669369A1 (en) 2010-11-10 2013-12-04 Bayer CropScience AG HPPD variants and methods of use
EP2468882A1 (de) 2010-12-27 2012-06-27 Bayer CropScience AG Aurorakinaseaktivatorpolypeptide zum Identifizieren von fungizid wirksamen Verbindungen
US20140090102A1 (en) 2011-01-24 2014-03-27 Stéphane Pien Use of the rd29 promoter or fragments thereof for stress-inducible expression of transgenes in cotton
JP5847920B2 (ja) 2011-03-25 2016-01-27 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ Ｈｐｐｄインヒビター除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物植物の領域において望まぬ植物を制御するためのｎ−（１，２，５−オキサジアゾール−３−イル）ベンズアミドの使用
HUE025756T2 (en) 2011-03-25 2016-04-28 Bayer Ip Gmbh Use of N- (tetrazol-4-yl) or N- (triazol-3-yl) arylcarboxamides or salts thereof for the control of undesirable plants in hppd inhibitor herbicides tolerant transgenic crops
AU2012238601B2 (en) 2011-04-07 2017-01-12 Bayer Cropscience Nv Seed - specific promoter in cotton
MX2014001689A (es) 2011-08-12 2014-05-27 Bayer Cropscience Nv Expresion especifica de celula guardiana de transgenes en algodon.
CN103890181A (zh) 2011-08-22 2014-06-25 拜尔作物科学公司 修饰植物基因组的方法和手段
AU2013201355B2 (en) 2011-10-12 2015-07-09 Bayer Cropscience Ag Plants with decreased activity of a starch dephosphorylating enzyme
EP2766487A1 (en) 2011-10-12 2014-08-20 Bayer CropScience AG Plants with decreased activity of a starch dephosphorylating enzyme
MY196630A (en) 2012-09-14 2023-04-23 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Hppd Variants and Methods of use
CN104955947A (zh) 2013-01-29 2015-09-30 格拉斯哥大学董事会 用于增加植物中胁迫耐受性和生物量的方法和工具
EP3017049B1 (en) 2013-07-01 2018-08-22 Bayer CropScience NV Methods and means for modulating flowering time in monocot plants
CA2917103C (en) 2013-07-09 2021-01-12 Board Of Trustees Of Michigan State University Transgenic plants produced with a k-domain, and methods and expression cassettes related thereto
US11459579B2 (en) 2013-07-09 2022-10-04 Board Of Trustees Of Michigan State University Transgenic plants produced with a K-domain, and methods and expression cassettes related thereto
CA2925033A1 (en) 2013-09-24 2015-04-02 Bayer Cropscience Nv Hetero-transglycosylase and uses thereof
CN106459986B (zh) 2014-03-11 2020-06-30 拜耳作物科学有限合伙公司 Hppd变体和使用方法
AU2015292616B2 (en) 2014-07-22 2021-09-02 Nmc, Inc. Improved carbon fixation systems in plants and algae
WO2016050512A1 (en) 2014-10-03 2016-04-07 Bayer Cropscience Nv Methods and means for increasing stress tolerance and biomass in plants
MA41180A (fr) 2014-12-17 2017-10-24 Bayer Cropscience Nv Plantes caractérisées par une capacité améliorée de fixation du carbone photosynthétique
MX2018003044A (es) 2015-09-11 2018-04-11 Bayer Cropscience Ag Variantes de hppd y metodos de uso.
WO2017184727A1 (en) 2016-04-21 2017-10-26 Bayer Cropscience Lp Tal-effector mediated herbicide tolerance
US20190225974A1 (en) 2016-09-23 2019-07-25 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Targeted genome optimization in plants
MX2019005835A (es) 2016-11-23 2019-10-30 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Genes de toxinas axmi669 y axmi991 y metodos para su uso.
AU2017382305A1 (en) 2016-12-22 2019-07-18 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Use of CRY14 for the control of nematode pests
CN110431234B (zh) 2017-01-18 2024-04-16 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司 Bp005毒素基因及其使用方法
UY37570A (es) 2017-01-18 2018-08-31 Bayer Cropscience Lp Uso de bp005 para el control de patógenos de planta
KR20190110612A (ko) 2017-02-01 2019-09-30 모더나티엑스, 인크. 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 면역조절 치료 mrna 조성물
CA3055317A1 (en) 2017-03-07 2018-09-13 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Hppd variants and methods of use
WO2018213789A1 (en) 2017-05-18 2018-11-22 Modernatx, Inc. Modified messenger rna comprising functional rna elements
US20200268666A1 (en) 2017-06-14 2020-08-27 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding coagulation factor viii
BR112020008092A2 (pt) 2017-10-24 2020-09-15 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC método para conferir tolerância a um herbicida e planta de soja transgênica
BR112020008096A2 (pt) 2017-10-24 2020-11-03 Basf Se método para conferir tolerância a um herbicida e planta de soja transgênica
JP7423521B2 (ja) 2017-11-22 2024-01-29 モダーナティエックス・インコーポレイテッド フェニルケトン尿症の治療用のフェニルアラニンヒドロキシラーゼをコードするポリヌクレオチド
CA3079428A1 (en) 2017-11-22 2019-05-31 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding ornithine transcarbamylase for the treatment of urea cycle disorders
US20220265856A1 (en) 2017-11-22 2022-08-25 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding propionyl-coa carboxylase alpha and beta subunits for the treatment of propionic acidemia
EP3773745A1 (en) 2018-04-11 2021-02-17 ModernaTX, Inc. Messenger rna comprising functional rna elements
WO2019233349A1 (zh) 2018-06-04 2019-12-12 青岛清原化合物有限公司 突变型对羟苯基丙酮酸双氧化酶、其编码核酸以及应用
US20220184185A1 (en) 2018-07-25 2022-06-16 Modernatx, Inc. Mrna based enzyme replacement therapy combined with a pharmacological chaperone for the treatment of lysosomal storage disorders
EP3846776A1 (en) 2018-09-02 2021-07-14 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding very long-chain acyl-coa dehydrogenase for the treatment of very long-chain acyl-coa dehydrogenase deficiency
JP2022500436A (ja) 2018-09-13 2022-01-04 モダーナティエックス・インコーポレイテッドModernaTX, Inc. 糖原病を処置するためのグルコース−６−ホスファターゼをコードするポリヌクレオチド
EP3849594A2 (en) 2018-09-13 2021-07-21 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding branched-chain alpha-ketoacid dehydrogenase complex e1-alpha, e1-beta, and e2 subunits for the treatment of maple syrup urine disease
JP2022500444A (ja) 2018-09-14 2022-01-04 モダーナティエックス・インコーポレイテッドModernaTX, Inc. クリグラー−ナジャー症候群の治療のためのウリジン二リン酸グリコシルトランスフェラーゼ１ファミリー、ポリペプチドａ１をコードするポリヌクレオチド
MA53734A (fr) 2018-09-27 2021-08-04 Modernatx Inc Polynucléotides codant pour l'arginase 1 pour le traitement d'une déficience en arginase
JP2022532078A (ja) 2019-05-08 2022-07-13 アストラゼネカ アクチボラグ 皮膚及び創傷のための組成物並びにその使用の方法
WO2020263985A1 (en) 2019-06-24 2020-12-30 Modernatx, Inc. Messenger rna comprising functional rna elements and uses thereof
EP4045076A1 (en) 2019-10-15 2022-08-24 ModernaTX, Inc. Mrnas encoding granulocyte-macrophage colony stimulating factor for treating parkinson's disease
US20240158458A1 (en) 2019-10-15 2024-05-16 Moderna TX, Inc. Mrnas encoding immune modulating polypeptides and uses thereof
EP4087544A1 (en) 2020-01-10 2022-11-16 ModernaTX, Inc. Methods of making tolerogenic dendritic cells
EP4096720A2 (en) 2020-01-30 2022-12-07 ModernaTX, Inc. Mrnas encoding metabolic reprogramming polypeptides and uses thereof
AU2021270587A1 (en) 2020-05-14 2022-12-08 Modernatx, Inc. LNP compositions comprising an mRNA therapeutic and an effector molecule
EP4158005A1 (en) 2020-06-01 2023-04-05 ModernaTX, Inc. Phenylalanine hydroxylase variants and uses thereof
CA3187261A1 (en) 2020-06-23 2021-12-30 Modernatx, Inc. Lnp compositions comprising mrna therapeutics with extended half-life
WO2022204380A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles containing polynucleotides encoding propionyl-coa carboxylase alpha and beta subunits and uses thereof
WO2022204067A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Dna Twopointo Inc. Tetracycline-inducible expression systems
JP2024512026A (ja) 2021-03-24 2024-03-18 モデルナティエックス インコーポレイテッド オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症の治療を目的とした脂質ナノ粒子及びオルニチントランスカルバミラーゼをコードするポリヌクレオチド
US20240207374A1 (en) 2021-03-24 2024-06-27 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles containing polynucleotides encoding glucose-6-phosphatase and uses thereof
US20240207444A1 (en) 2021-03-24 2024-06-27 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles containing polynucleotides encoding phenylalanine hydroxylase and uses thereof
WO2022204369A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding methylmalonyl-coa mutase for the treatment of methylmalonic acidemia
WO2022271776A1 (en) 2021-06-22 2022-12-29 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding uridine diphosphate glycosyltransferase 1 family, polypeptide a1 for the treatment of crigler-najjar syndrome
EP4408871A1 (en) 2021-10-01 2024-08-07 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding relaxin for the treatment of fibrosis and/or cardiovascular disease
WO2023196399A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles and polynucleotides encoding argininosuccinate lyase for the treatment of argininosuccinic aciduria
WO2024137438A2 (en) 2022-12-19 2024-06-27 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Insect toxin genes and methods for their use
WO2024182301A2 (en) 2023-02-27 2024-09-06 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles and polynucleotides encoding galactose-1-phosphate uridylyltransferase (galt) for the treatment of galactosemia
WO2024218400A1 (en) 2023-04-21 2024-10-24 Inprother Aps Improved expression of surface-displayed antigens

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5851894A (ja) * 1981-05-27 1983-03-26 ナシヨナル・リサ−チ・カウンスル・オブ・カナダ Ｒｎａ植物ウイルスベクタ−またはその部分の作製、利用方法
JPS6229984A (ja) * 1985-03-07 1987-02-07 マイコジェン　プラント　サイエンス，インコーポレイテッド 植物感染性キャップ化ｒｎａ分子

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3485850T2 (de) * 1983-11-08 1993-01-21 Teijin Ltd Genfragmente, abgeleitet vom menschlichen immunoglobulin-gen.
DE3431140A1 (de) * 1984-08-24 1986-03-06 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Enhancer fuer eukaryotische expressionssysteme
US5466788A (en) * 1985-03-07 1995-11-14 Mycogen Plant Science, Inc. Subgenomic promoter
JPS629984A (ja) * 1985-07-08 1987-01-17 Ookura Eng Kk 自動選字装置
US4820639A (en) * 1985-12-04 1989-04-11 Massachusetts Institute Of Technology Process for enhancing translational efficiency of eukaryotic mRNA
IL98886A (en) * 1986-04-09 1992-12-01 Lilly Co Eli Method for producing a functional polypeptide in a eukaryotic cell
US4962028A (en) * 1986-07-09 1990-10-09 Dna Plant Technology Corporation Plant promotors

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5851894A (ja) * 1981-05-27 1983-03-26 ナシヨナル・リサ−チ・カウンスル・オブ・カナダ Ｒｎａ植物ウイルスベクタ−またはその部分の作製、利用方法
JPS6229984A (ja) * 1985-03-07 1987-02-07 マイコジェン　プラント　サイエンス，インコーポレイテッド 植物感染性キャップ化ｒｎａ分子

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012161352A1 (ja) 2011-05-25 2012-11-29 国立大学法人岡山大学 Reic発現アデノウイルスベクター
US9222107B2 (en) 2011-05-25 2015-12-29 National University Corporation Okayama University REIC-expressing adenovirus vector

Also Published As

Publication number Publication date
ATE110412T1 (de) 1994-09-15
US5489527A (en) 1996-02-06
JPH01500961A (ja) 1989-04-06
EP0270611B1 (en) 1994-08-24
US5891665A (en) 1999-04-06
AU7489687A (en) 1988-01-11
EP0270611A1 (en) 1988-06-15
GB8801508D0 (en) 1988-03-16
JP3658654B2 (ja) 2005-06-08
GB8613481D0 (en) 1986-07-09
GB2199328B (en) 1990-10-24
WO1987007644A1 (en) 1987-12-17
JPH10146197A (ja) 1998-06-02
GB2199328A (en) 1988-07-06
DE3750422D1 (de) 1994-09-29
AU614062B2 (en) 1991-08-22
DE3750422T2 (de) 1994-12-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2814433B2 (ja) ｍＲＮＡの翻訳
Yanofsky et al. The virD operon of Agrobacterium tumefaciens encodes a site-specific endonuclease
Lessl et al. Sequence similarities between the RP4 Tra2 and the Ti VirB region strongly support the conjugation model for T-DNA transfer.
Gallie et al. The 5'-leader sequence of tobacco mosaic virus RNA enhances the expression of foreign gene transcripts in vitro and in vivo
EP0131623B1 (en) Chimeric genes suitable for expression in plant cells
EP0194809B1 (en) Rna transformation vector
AU639891B2 (en) Expression cassette for plants
US6174724B1 (en) Chimeric genes suitable for expression in plant cells
CN113728098A (zh) 具有ruvc结构域的酶
US11905535B2 (en) Genetic engineering of fungi to modulate tryptamine expression
BR112014014105B1 (pt) Método para modificar um sítio-alvo predeterminado no interior de um ácido nucleico genômico ou organelar alvo em uma célula hospedeira eucariótica por um complexo núcleoproteína
CA3177051A1 (en) Class ii, type ii crispr systems
US20220298494A1 (en) Enzymes with ruvc domains
Williamson et al. The synthesis of a 19 kilodalton zein protein in transgenic petunia plants
Perani et al. Gene transfer methods for crop improvement: Introduction of foreign DNA into plants.
Ruoff et al. Characterization of the self-splicing products of a mobile intron from the nuclear rDNA of Physarum polycephalum
Wolfe et al. Evolution of the plastid ribosomal RNA operon in a nongreen parasitic plant: accelerated sequence evolution, altered promoter structure, and tRNA pseudogenes
Barnett et al. Transcription start sites for syrM and nodD3 flank an insertion sequence relic in Rhizobium meliloti
BRPI0014481B1 (pt) construto e uso do mesmo para regular a expressão de um gene exógeno em uma planta transgênica
Strabala et al. Isolation and characterization of an ipt gene from the Ti plasmid Bo542
Furner et al. Single-stranded DNA transforms plant protoplasts
HUNT Identification and characterization of cryptic polyadenylation sites in the 3′ region of a pea ribulose-1, 5-bisphosphate carboxylase small subunit gene
Winkler et al. The group IIB intron from the green alga Scenedesmus obliquus mitochondrion: molecular characterization of the in vitro splicing products
Culianez-Macia et al. Right-border sequences enable the left border of an Agrobacterium tumefaciens nopaline Ti-plasmid to produce single-stranded DNA
US5612193A (en) Translation of mRNA

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

EXPY Cancellation because of completion of term