JP2710344B2 - 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法 - Google Patents

高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法

Info

Publication number
JP2710344B2
JP2710344B2 JP63172589A JP17258988A JP2710344B2 JP 2710344 B2 JP2710344 B2 JP 2710344B2 JP 63172589 A JP63172589 A JP 63172589A JP 17258988 A JP17258988 A JP 17258988A JP 2710344 B2 JP2710344 B2 JP 2710344B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
fatty acid
fatty acids
polyunsaturated fatty
highly unsaturated
methyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
JP63172589A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH0223878A (ja
Inventor
健吾 秋元
芳史 新免
秀明 山田
昌 清水
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suntory Ltd
Original Assignee
Suntory Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suntory Ltd filed Critical Suntory Ltd
Priority to JP63172589A priority Critical patent/JP2710344B2/ja
Priority to EP89307062A priority patent/EP0355972B1/en
Priority to ES89307062T priority patent/ES2062001T3/es
Priority to DE89307062T priority patent/DE68912236T2/de
Priority to AT89307062T priority patent/ATE100148T1/de
Publication of JPH0223878A publication Critical patent/JPH0223878A/ja
Priority to US07/649,144 priority patent/US5314812A/en
Application granted granted Critical
Publication of JP2710344B2 publication Critical patent/JP2710344B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6432—Eicosapentaenoic acids [EPA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6434—Docosahexenoic acids [DHA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は醗酵法による高度不飽和脂肪酸及びそれらを
含有する脂質の製造方法に関する。
〔従来技術〕
微生物を利用する高度不飽和脂肪酸の製造方法とし
て、様々な菌の利用が種々提案されているが、エキノス
ポランジウム（Echinosporangium）属による高度不飽和
脂肪酸の製造方法は知られていない。
〔発明が解決しようとする課題〕
従って本発明は、高度不飽和脂肪酸を生産する能力を
有することが知られていなかったエキノスポランジウム
属微生物を利用して、安価な常用の培地を用いて効率よ
く高度不飽和脂肪酸を製造する方法を提供しようとする
ものである。
〔課題を解決するための手段〕
本発明者等は、上記の目的を達成するため種々研究し
た結果、エキノスポランジウム属に属する微生物が高度
不飽和脂肪酸を生産する能力を有するという全く新しい
知見を得た。従って本発明は、エキノスポランジウム属
に属し、高度不飽和脂肪酸生産能を有する微生物を培養
して高度不飽和脂肪酸又は高度不飽和脂肪酸を含有する
脂質を生成せしめ、そして高度不飽和脂肪酸を採取する
ことを特徴とする高度不飽和脂肪酸の製造方法；及びエ
キノスポランジウム属に属し、高度不飽和脂肪酸生産能
を有する微生物を培養し、そして高度不飽和脂肪酸を含
有する脂質を採取することを特徴とする高度不飽和脂肪
酸を含有する脂質の製造方法を提供する。
〔具体的な説明〕
本発明において、高度不飽和脂肪酸とは、３個以上の
二重結合を炭素鎖中に有する脂肪酸を意味し、好ましく
は炭素原子数18〜22個を有する。このような高度不飽和
脂肪酸として、例えば、γ−リノレン酸、ビスホモ−γ
−リノレン酸、アラキドン酸等を挙げることができる。
本発明においては、エキノスポランジウム属に属し、
高度不飽和脂肪酸生産能を有する微生物であればすべて
使用することができる。例えばエキノスポランジウム・
トランスバーサリス（Echinosporangium transversali
s）ATCC 16960（NRRL 3116）,ATCC 18036（NRRL 5525）
等を挙げることができる。これらの菌株はいずれも、米
国アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Am
erican Type Culture Collection;ATCC）からなんら制
限なく入手することができる。
エキノスポランジウム属に属し高度不飽和脂肪酸生産
能を有する微生物を培養して得られる高度不飽和脂肪酸
は、例えばγ−リノレン酸、ビスホモ−γ−リノレン
酸、アラキドン酸等を挙げることができる。
本発明に使用される菌株を培養する為には、その菌株
の胞子、菌子、又は予め培養して得られた前培養液を、
液体培地又は固体培地に接種し培養する。液体培地の場
合に、炭素源としてはグルコース、フラクトース、キシ
ロース、サッカロースマルトース、可溶性デンプン、糖
蜜、グリセロール、マンニトール等の一般的に使用され
ているものが、いずれも使用できるが、これらに限られ
るものではない。窒素源としてはペプトン、酵母エキ
ス、麦芽エキス、肉エキス、カザミノ酸、コーンスティ
プリカー等の天然窒素源の他に、尿素等の有機窒素源、
ならびに硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アン
モニウム等の無機窒素源を用いることができる。この他
必要に応じリン酸塩、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸
銅等の無機塩及びビタミン等も微量栄養源として使用で
きる。これらの培地成分は微生物の成育を害しない濃度
であれば特に制限はない。実用上一般に、炭素源は0.1
〜30重量％、好ましくは１〜10重量％、窒素源は0.01〜
５重量％、好ましくは0.1〜２重量％の濃度とするのが
良い。
固体培地で培養する場合は、固形物重量に対して50〜
100重量％の水を加えたふすま、もみがら、米ぬか等を
用い、５〜40℃、好ましくは20〜30℃の温度において、
３〜14日間培養を行う。この場合に必要に応じて培地中
に窒素源、無機塩類、微量栄養源を加えることができ
る。
また、高度不飽和脂肪酸の生産量を増加せしめるため
には、モルティエレラ属微生物等を利用する場合と同
様、培地中にヘキサデカンもしくはオクタデカンのごと
き炭化水素；オレイン酸もしくはリノール酸のごとき脂
肪酸またはその塩、例えばナトリウム塩もしくはカリウ
ム塩；又はオリーブ油、綿実油もしくはヤシ油のごとき
油脂類を単独で、又は組み合わせて存在せしめるのが好
ましい。これらの添加物は培養開始前の培地又は培養中
の培養液に添加することができる。これらの添加物は一
度に添加することもでき、又は連続的に、もしくは複数
回に分けて経時的に添加することもできる。培養開始前
においては炭化水素、脂肪酸もしくはその塩、又は油脂
類の添加が好ましく、培養中においては脂肪酸もしくは
その塩、又は油脂類の添加が好ましい（特開昭63-1469
5，63-14696，63-14697，63-44891）。
またさらに、ビスホモ−γ−リノレン酸の生産量を増
加せしめるためには、アラキドン酸生産能を有するエキ
ノスポランジウム属微生物を胡麻油又は落花生油、ある
いは胡麻油又は落花生油中に含まれる有効成分の存在下
で培養するのが好ましい。この場合の胡麻油及び落花生
油は粗製品でも精製品でもよい。本発明においては、ビ
スホモ−γ−リノレン酸の蓄積を促進する物質として胡
麻油の抽出物を使用することができ、この場合、胡麻油
とは実質的に非混合和性であり且つ有効成分を抽出・溶
解することができる種々の有機溶剤を用いて抽出を行う
ことができる。このような有機溶剤として、例えばアセ
トン、メチルエチルケトン、ジエチルケトン、メタノー
ル、エタノール等を挙げることができる。有効成分を含
有する抽出物を得るには、例えば胡麻油と上記の溶剤の
いずれかとを均一に混合した後、低温において静置し、
遠心分離等の常法に従って相分離を行い、溶剤画分から
溶剤を蒸発除去することにより得られる。本発明におい
て使用する添加物はまた、胡麻種子からの抽出部であっ
てもよい。この場合、胡麻種子を必要により破砕した
後、任意の溶剤、例えば胡麻油からの抽出について前記
した溶剤を用いて常法により抽出することができる。抽
出残渣を分離した後、抽出液から蒸発等により溶剤を除
去することにより抽出物が得られる。
本発明によれば、この様にして調製される抽出物中に
含まれるセサミン、セサミノール、エピセサミン、エピ
セサミノール、セサモリン、２−（3,4−メチレンジオ
キシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシ
フェニル）−3,7−ジオキサビシクロ〔3.3.0〕オクタ
ン、2,6−ビス−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェ
ニル）−3,7−ジオキサビシクロ〔3.3.0〕オクタン、又
は２−（3,4−メチレンジオキシフェニル）−６−（３
−メトキシ−４−ヒドロキシフェノキシ）−3,7−ジオ
キサビシクロ〔3.3.0〕オクタン等のリグナン類化合物
を単独で、又はいずれか２種類以上を組み合わせて使用
することもできる。これらはいずれも既知化合物であり
商業的に入手することができる。また、これらの化合物
を胡麻油抽出物から得るためには、前記のようにして得
られる抽出物をカラムクロマトグラフィー、高速液体ク
ロマトグラフィー、再結晶、蒸留等の常法に従って処理
することにより目的とする化合物を単離すればよい。
この発明の添加物としてはさらに、各種の植物、例え
ば香辛性植物、たとえばタラゴン（Tarragon）、イノン
ド種子（Dill Seed）、パセリ（Parsley）、ウコン（Tu
rmeric）、ナツメグ（Nutmeg）等からの抽出物、又はこ
れから製造された香辛料からの抽出物を使用することが
できる。これらの抽出物は常用の溶剤、例えばジクロロ
メタン、エタノール、メタノール、エチルエーテル等を
用いて調製することができる。
添加物の量はおよそ次の通りである。胡麻油又は落花
生油、あるいはこの両者の総添加量は培地に対して0.00
1〜10重量％、好ましくは0.5〜10重量％である。胡麻油
の抽出物を添加する場合、その添加量は培地に対して３
×10-3〜３×10-1重量％である。また、セサミン、セサ
ミノール、エピセサミン、エピセサミノール等のリグナ
ン類化合物を添加する場合その量（これらの２種類以上
を組み合わせて使用する場合はその合計量）は、培地に
対して１×10-3〜１×10-1重量％である。これらの添加
物類は生産微生物を接種する前又はその直後の培地に加
えてもよく、又は培養を開始した後に加えてもよく、あ
るいは両時点で加えてもよい。培養開始後の添加は１回
でもよく、又は複数回に分けて間欠的に添加してもよ
い。あるいは、連続的に添加することもできる。なお、
上記の各種の添加物のほかに、さらにアラキドン酸の生
産を上げる油脂、例えば、オリブ油、大豆油、綿実油、
ヤシ油等を使用することもできる（特願昭63-53642）。
培養温度は５〜40℃、好ましくは20〜30℃として、培
地のpHは４〜10、好ましくは６〜９として通気攪拌培
養、振盪培養、又は静置培養を行う。培養は通常２〜10
日間行う。
このように培養して、菌体内に高度不飽和脂肪酸を含
有する脂質が生産蓄積される。液体培地を使用した場合
には培養菌体から、次のようにして高度不飽和脂肪酸の
採取を行う。
培養終了後、培養液より遠心分離及び濾過等の常用の
固液分離手段により培養菌体を得る。菌体は十分水洗
し、好ましくは乾燥する。乾燥は凍結乾燥、風乾等によ
って行うことができる。乾燥菌体は、好ましくは窒素気
流下で有機溶媒によって抽出処理する。有機溶媒として
はエーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、クロ
ロホルム、ジクロロメタン、石油エーテル等を用いるこ
とができ、またメタノールと石油エーテルの交互抽出や
クロロホルム−メタノール−水の一層系の溶媒を用いた
抽出によっても良好な結果を得ることができる。抽出物
から減圧下で有機溶媒を留去することにより、高濃度の
高度不飽和脂肪酸を含有した脂質が得られる。
また、上記の方法に代えて湿菌体を用いて抽出を行う
ことができる。メタノール、エタノール等の水に対して
相溶性の溶媒、又はこれらと水及び／または他の溶媒と
から成る水に対して相溶性の混合溶媒を使用する。その
他の手順は上記と同様である。
上記のようにして得られた脂質中には、各種高度不飽
和脂肪酸が脂質化合物、例えば脂肪の構成成分として含
まれている。これらを直線分離することもできるが、低
級アルコールとのエステル、例えばγ−リノレン酸メチ
ル、ビスホモ−γ−リノレン酸メチル、アラキドン酸メ
チルとして分離するの好ましい。このようなエステルに
することにより、他の脂質成分から容易に分離すること
ができ、また、培養中に生成する他の脂肪酸、例えばパ
ルミチン酸、オレイン酸、リノール酸等（これらも、高
度不飽和脂肪酸のエステル化に際してエスレル化され
る）から容易に分離することができる。例えば、高度不
飽和脂肪酸のメチルエステルを得るには、前記の抽出脂
質を無水メタノール−酢酸５〜10％，BF3−メタノール1
0〜50％等により、室温にて１〜24時間処理するのが好
ましい。
前記の処理液から高度不飽和脂肪酸メチルエステルを
回収するにはヘキサン、エーテル、酢酸エチル等の有機
溶媒で抽出するのが好ましい。次に、この抽出液を無水
硫酸ナトリウム等により乾燥し、有機溶媒を好ましくは
減圧下で留去することにより主として脂肪酸エステルか
らなる混合物が得られる。この混合物中には、目的とす
る高度不飽和脂肪酸メチルエステルの他に、パルミチン
酸メチルエステル、ステアリン酸メチルエステル、オレ
イン酸メチルエステル等の脂肪酸メチルエステルが含ま
れている。これらの脂肪酸メチルエステル混合物から高
度不飽和脂肪酸メチルエステルを単離するには、カラム
クロマトグラフィー、低温結晶化法、尿素包接法、液々
交流分配クロマトグラフィー等を単独で、又は組み合わ
せて使用することができる。
こうして単離された各種高度不飽和脂肪酸メチルから
高度不飽和脂肪酸を得るには、アルカリで加水分解した
後、エーテル、酢酸エチル等の有機溶媒で抽出すればよ
い。
又、高度不飽和脂肪酸をそのメチルエステルを経ない
で採取するには、前記の抽出脂質をアルカリ分解（例え
ば５％水酸化ナトリウムにより室温にて２〜３時間）し
た後、この分解液から、脂肪酸の抽出・精製に常用され
ている方法により抽出・精製することができる。
次に、実施例により、この発明をさらに具体的に説明
する。
実施例１ グルコース２％及び酵母エキス１％を含む培地（pH6.
0）100mlを500mlエルレンマイヤーフラスコに入れ、120
℃で20分間殺菌した。エキノスポランジウム・トランス
バーサリス（Echinos-porangium transversalis）NRRL
3116（ATCC 16960）及びNRRL 5525（ATCC 18036）を別
々に培地に１白金耳を接種し、レシプロシェーカー（11
0rpm）により28℃で８日間振盪培養した。培養後、濾過
により菌体を回収し、十分水洗した後、凍結乾燥し、そ
れぞれ809mg、及び784mgの乾燥菌体を得た。この菌体よ
り、クロロホルム−メタノール−水の一層系の溶媒を用
いる。Bligh＆Dyerの抽出法によって油脂を抽出した
所、それぞれ194.5mg、及び161.3mgの油脂が得られた。
この油脂を無水メタノール−塩酸（10％）を用いて50℃
にて３時間処理することによってメチルエステル化し、
エーテルで抽出して、それぞれ485mg、及び420mgの脂肪
酸メチルを得た。この脂肪酸メチルの組成はガスクロマ
トグラフィーによる分析で、それぞれパルミチン酸メチ
ル11.9％、及び12.2％、ステアリン酸メチル4.9％、及
び4.2％、オレイン酸メチル38.4％、及び40.1％、リノ
ール酸メチル13.1％、及び14.3％、γ−リノレン酸メチ
ル5.5％、及び5.1％、ビスホモ−γ−リノレン酸メチル
5.0％、及び4.7％、アラキドン酸メチル21.2％、及び1
9.4％でることが認められた。NRRL 3116株より得た、こ
の混合物脂肪酸メチルについて、さらにカラムクロマト
グラフィーによって分離し、γ−リノレン酸メチル、ビ
スホモ−γ−リノレン酸メチル及びアラキドン酸メチル
画分をそれぞれ分取し、ロータリーエバポレーターによ
って溶媒を留去した結果精製されたγ−リノレン酸メチ
ル、ビスホモ−γ−リノレン酸メチル及びアラキドン酸
メチルをそれぞれ13.3,12.1、及び51.4mg得た。本標品
と市販のγ−リノレン酸メチル、ビスホモ−γ−リノレ
ン酸メチル及びアラキドン酸メチル標準サンプルについ
て、ガスクロマトグラフィー分析、高速液体クロマトグ
ラフィー分析、質量分析、及びNMR分析によって比較を
行ったところ、両者はいずれの分析においても一致し
た。
実施例２ グルコース２％及び酵母エキス１％、並びに種々の炭
化水素、脂肪酸ナトリウム又は油脂0.5％を含む培地（p
H6.0）2mlを10mlのエルレンマイヤーフラスコに入れ、1
20℃で20分間殺菌した。エキノスポランジウム・トラン
スバーサリスNRRL 3116（ATCC 16960）をそれぞれの培
地に１白金耳を接種し、レシプロシェーカー（110rpm）
により28℃で７日間振盪培養した。培養後、濾過により
菌体を回収し、十分水洗した後遠心エバポレーター（60
℃、２時間）で乾燥させ、そして、塩化メチレン2ml、
無水メタノール−塩酸（10％）2ml加え、50℃で３時間
処理することによってメチルエステル化し、ｎ−ヘキサ
ン4ml水1mlを加え、２回抽出し溶媒を遠心エバポレータ
ー（40℃、１時間）で留去した後、得られた脂肪酸メチ
ルエステルをガスクロマトグラフィーで分析した。第１
表にその結果を示す。
標準培地を炭化水素、脂肪酸ナトリウム又は油脂類を
添加した場合、高度不飽和脂肪酸の生成量は無添加にく
らべ、１〜20％向上した。
実施例３ グルコース４％、酵母エキス１％及び胡麻油２％を含
む培地（pH6.0）；グルコース４％、酵母エキス１％及
び落花生油２％を含む培地（pH6.0）；グルコース４
％、酵母エキス１％及びオリブ油２％を含む培地（pH6.
0）；並びにグルコース４％及び酵母エキス１％を含む
培地（pH6.0）2mlを10mlのエルレンマイヤーフラスコに
入れ、120℃で20分間殺菌した。エキノスポランジウム
・トランスバーサリスNRRL 3116（ATCC 16960）をそれ
ぞれの培地に１白金耳を接種し、レシプロシェーカー
（110rpm）により28℃で７日間振盪培養した。培養後、
実施例２と同様に濾過、水洗、乾燥、加水分解、メチル
エステル化、及び抽出を行い、得られた脂肪酸メチルエ
ステルをガスクロマトグラフィーで分析した。第２表に
その結果を示す。
第３表から明らかなように、胡麻油又は落花生油を培
地に添加することにより、アラキドン酸の生産が押さえ
られ、ビスホモ−γ−リノレン酸が大量に生産された。
又、胡麻油又は落花生油以外の油の一例としてオリブ油
を添加したが、ビスホモ−γ−リノレン酸の大量生産は
認められなかった。
この結果から、胡麻油及び落花生油以外に、胡麻油の
有機溶剤抽出物、あるいは該抽出物中の有効成分である
セサミン（2,6−ビス−（3,4−メチレンジオキシフェニ
ル）−シス−3,7−ジオキサビシクロ〔3.3.0〕オクタ
ン）、セミノール（２−（3,4−メチレンジオキシ−６
−ヒドロキシフェニル）−６−（3,4−メチレンジオキ
シフェニル）−シス−3,7−ジオキサビシクロ〔3.3.0〕
オクタン）、エピセサミン、エピセサミノール、さら
に、胡麻油の粗製品からセサモリン、又胡麻種子のアセ
トン抽出物から得た２−（3,4−メチレンジオキシフェ
ニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニ
ル）−3,7−ジオキサビシクロ〔3.3.0〕オクタン、2,6
−ビス−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−
3,7−ジオキサビシクロ〔3.3.0〕オクタン、２−（3,4
−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−
４−ヒドロキシフェノキシ）−3,7−ジオキサビシクロ
〔3.3.0〕オクタンの添加により、ビスホモ−γ−リノ
レン酸の生産が増加するのは明らかである（特願昭63-5
3642）。
実施例４ グルコース４％、酵母エキス１％及びセサミン又はエ
ピセサミン0.01％を含む培地（pH6.0）2mlを10mlのエル
レンマイヤーフラスコに入れ、120℃で20分間殺菌し
た。エキノスポランジウム・トランスバーサリスNRRL 3
116（ATCC 16960）をそれぞれの培地に１白金耳を接種
し、レシプロシェーカー（110rpm）により28℃で７日間
振盪培養した。培養後、実施例２と同様に濾過、水洗、
乾燥、加水分解、メチルエステル化及び抽出を行い、得
られた脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラフィー
で分析した。セサミン、エピセサミンの添加によりビス
ホモ−γ−リノレン酸が大量に生産することが認めら
れ、培地当りの生産量はそれぞれ401.3mg/l、及び383.5
mg/lであった。
実施例５ グルコース４％及び酵母エキス１％を含む培地（pH6.
0）4mlを20mlのエルレンマイヤーフラスコに入れ、120
℃で20分間殺菌した。エキノスポランジウム・トランス
バーサリスNRRL 3116（ATCC 16960）を培地に１白金耳
を接種し、レシプロシェーカー（110rpm）により28℃で
２日間振盪培養した後、胡麻油80mg（２％）又はセサミ
ン0.4mg（0.01％）を加え、さらに６日間培養した。実
施例２と同様に濾過、水洗、乾燥、加水分解、メチルエ
ステル化及び抽出を行い、得られた脂肪酸メチルエステ
ルをガスクロマトグラフィーで分析した。培養中に胡麻
油、又はセサミンを添加してもビスホモ−γ−リノレン
酸が大量に生産することが認められ、培地当りの生産量
はそれぞれ440.3mg/l、及び412.7mg/lであった。
実施例６ 香辛料であるタラゴン（Tarragon）、イノンド種子
（Dill Seed）、パセリ（Parsley）、ウコン（Turmeri
c）、及びナツメグ（Nutmeg）各々0.5gに別々に5mlのジ
クロロメタンを添加し、乳針材中で磨砕、抽出を行った
後、遠心分離にかけて、上清を集め、溶媒をエバポレー
ターで留去し、それぞれの香辛料について抽出物を得
た。
上記の抽出物を4mlのエタノールに溶解した溶液、あ
るいは、ウラシル、シトシン、アデニン、グアニン、ヒ
ポキサンチンの各4mg/ml水溶液を、基本培地（グルコー
ス４％、酵母エキス１％、pH6.0）10ml（試験管中）に
それぞれ滅菌濾過後50μｌずつ添加し、これにエキノス
ポランジウム・トランスバーサリスNRRL 3116（ATCC 16
960）を１白金耳を接種し、28℃で６日間振盪培養（300
rmp）して得られた菌体について実施例２に従ってそれ
ぞれの培地当りのビスホモ−γ−リノレン酸生産量を求
めたところ、タラゴン（Tarragon）抽出物添加では0.32
g/l、イノンド種子（Dill Seed）抽出物添加では0.28g/
l、パセリ（Parsley）抽出物添加では0.26g/l、ウコン
（Turmeric）抽出物添加では0.40g/l、ナツメグ（Nutme
g）抽出物添加では0.30g/l、ウラシル添加では0.22g/
l、シトシン添加では0.20g/l、アデニン添加では0.25g/
l、グアニン添加では0.23g/l、ヒポキサンチン添加物で
は0.21g/lであった。又、同時に比較のために、これら
添加物を加えなかった対照区の培地当りのビスホモ−γ
−リノレン酸生産量は0.14g/lであった。

Claims (2)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】エキノスポランジウム（Echinosporangiu
    m）属に属し、高度不飽和脂肪酸生産能を有する微生物
    を培養して、高度不飽和脂肪酸、又は高度不飽和脂肪酸
    を含有する脂質を生成せしめ、そして高度不飽和脂肪酸
    を採取することを特徴とする高度不飽和脂肪酸の製造方
    法。
  2. 【請求項２】エキノスポランジウム（Echinosporangiu
    m）属に属し、高度不飽和脂肪酸生産能を有する微生物
    を培養して、高度不飽和脂肪酸を含有する脂質を採取す
    ることを特徴とする高度不飽和脂肪酸を含有する脂質の
    製造方法。
JP63172589A 1988-07-13 1988-07-13 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法 Expired - Fee Related JP2710344B2 (ja)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP63172589A JP2710344B2 (ja) 1988-07-13 1988-07-13 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法
EP89307062A EP0355972B1 (en) 1988-07-13 1989-07-12 Process for production of fatty acids having high degree of unsaturation
ES89307062T ES2062001T3 (es) 1988-07-13 1989-07-12 Procedimiento para la produccion de acidos grasos que tienen un alto grado de insaturacion.
DE89307062T DE68912236T2 (de) 1988-07-13 1989-07-12 Verfahren zur Herstellung von hochgradig ungesättigten Fettsäuren.
AT89307062T ATE100148T1 (de) 1988-07-13 1989-07-12 Verfahren zur herstellung von hochgradig ungesaettigten fettsaeuren.
US07/649,144 US5314812A (en) 1988-07-13 1991-02-01 Microbiological process for production of fatty acids having high degree of unsaturation with echinosporangium

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP63172589A JP2710344B2 (ja) 1988-07-13 1988-07-13 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH0223878A JPH0223878A (ja) 1990-01-26
JP2710344B2 true JP2710344B2 (ja) 1998-02-10

Family

ID=15944649

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP63172589A Expired - Fee Related JP2710344B2 (ja) 1988-07-13 1988-07-13 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法

Country Status (6)

Country Link
US (1) US5314812A (ja)
EP (1) EP0355972B1 (ja)
JP (1) JP2710344B2 (ja)
AT (1) ATE100148T1 (ja)
DE (1) DE68912236T2 (ja)
ES (1) ES2062001T3 (ja)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9011874D0 (en) * 1990-05-26 1990-07-18 West Of Scotland College The Method of producing a fatty acid
EP0657543A4 (en) * 1992-03-31 1997-01-02 Kawasaki Steel Co METHOD FOR PRODUCING DECOSAHEXAIC ACID.
US5767271A (en) * 1994-12-26 1998-06-16 The Nisshin Oil Mills, Ltd. Lignan glycosides and hydroxy radical scavengers
US6071963A (en) * 1996-11-06 2000-06-06 Roche Vitamins Inc. Water dispersible compositions
US8207363B2 (en) * 2009-03-19 2012-06-26 Martek Biosciences Corporation Thraustochytrids, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
JP5920890B2 (ja) 2010-01-19 2016-05-18 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． エイコサペンタエン酸生成微生物、脂肪酸組成物、ならびにそれらを作る方法およびそれらの使用
US9222112B2 (en) 2011-07-21 2015-12-29 Dsm Ip Assets B.V. Eicosapentaenoic acid-producing microorganisms, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0155420B1 (en) * 1984-02-09 1988-03-23 The Agency of Industrial Science and Technology A method for the preparation of a fungal body and a lipid rich in gamma-linolenic acid therefrom
JP2746371B2 (ja) * 1987-12-21 1998-05-06 サントリー株式会社 ビスホモ−γ−リノレン酸及びこれを含有する脂質の製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
DE68912236T2 (de) 1994-04-28
US5314812A (en) 1994-05-24
EP0355972B1 (en) 1994-01-12
ATE100148T1 (de) 1994-01-15
EP0355972A3 (en) 1990-03-07
DE68912236D1 (de) 1994-02-24
ES2062001T3 (es) 1994-12-16
EP0355972A2 (en) 1990-02-28
JPH0223878A (ja) 1990-01-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3354581B2 (ja) ジホモ−γ−リノレン酸及びこれを含有する脂質の製造方法
JP2746371B2 (ja) ビスホモ−γ−リノレン酸及びこれを含有する脂質の製造方法
JP3354582B2 (ja) オメガ９系高度不飽和脂肪酸およびこれを含有する脂質の製造方法
JPS63185390A (ja) 藻類によるエイコサペンタエン酸の製造方法
JPH0591886A (ja) ８，１１−エイコサジエン酸及びこれを含有する脂質の製造方法
US5093249A (en) Process for production of dihomo-γ-linolenic acid and inhibitor for unsaturation reaction at Δ5-position of fatty acid
CN105814209A (zh) 含有二高-γ-亚麻酸的微生物油和含有二高-γ-亚麻酸的微生物生物质
EP0624202A1 (en) Method to produce single cell oil containing gamma-linolenic acid
JP2710344B2 (ja) 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法
US6777211B1 (en) Process for producing hydroxylated fatty acid and delta-lactone
JPH0734752B2 (ja) アラキドン酸及びこれを含有する脂質の製造方法
CA2213374C (en) Process for producing omega-9 highly unsaturated fatty acid and lipid containing the same
JPH01228486A (ja) 奇数鎖高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法
JP2944132B2 (ja) 新規高度不飽和脂肪酸並びに該脂肪酸又はこれを含有する脂質の製造方法
JP2730081B2 (ja) 微生物によるアラキドン酸含有油脂の製造方法
JPH0712315B2 (ja) エイコサペンタエン酸及びこれを含有する脂質の製造方法
EP0276982A2 (en) Process for production of fatty acids having high degree of unsaturation
JPH0722513B2 (ja) ビスホモ―γ―リノレン酸及びこれを含有する脂質の製造方法
JP3332949B2 (ja) ５，１１，１４−エイコサトリエン酸及び５，１１，１４，１７−エイコサテトラエン酸並びにこれらを含有する脂質の製造方法
JP2958361B2 (ja) ジホモ―γ―リノレン酸の製造法および脂肪酸の△５位不飽和化反応抑制剤
JP2848810B2 (ja) アラキドン酸高含有脂肪の製造方法
JPH08163990A (ja) 油脂含有藻体およびそれから得られる油脂の製造方法
JPH062068B2 (ja) ω６系不飽和脂胞酸含有リン脂質の製造法
JPH02268690A (ja) ビスホモ―γ―リノレン酸含有脂質の製造法
JPH0811072B2 (ja) 牛脂を炭素源として培養した酵母中に脂質を蓄積させる方法

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Cancellation because of no payment of annual fees