JP2678609B2 - 新規な２−クロルニトロフェニルリン酸塩及びこれを用いるホスファターゼ活性測定法 - Google Patents
新規な２−クロルニトロフェニルリン酸塩及びこれを用いるホスファターゼ活性測定法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、臨床診断薬の分野に於て、ホスファターゼ
活性測定用の有用な基質として、或は光化学の分野に於
ける効果的な光受容体として等の用途が期待できる新規
な２−クロルニトロフェニルリン酸塩と、これを基質と
して用いるホスファターゼ活性の測定方法に関する。
活性測定用の有用な基質として、或は光化学の分野に於
ける効果的な光受容体として等の用途が期待できる新規
な２−クロルニトロフェニルリン酸塩と、これを基質と
して用いるホスファターゼ活性の測定方法に関する。
ニトロフェニルリン酸誘導体は、一定の条件下、ホス
ファターゼ類によって加水分解され、また、光化学反応
に関与し光受容体としての作用を示す為、臨床診断薬の
分野に於けるホスファターゼ活性測定用の基質や光化学
の分野に於ける光受容体等として有用である。
ファターゼ類によって加水分解され、また、光化学反応
に関与し光受容体としての作用を示す為、臨床診断薬の
分野に於けるホスファターゼ活性測定用の基質や光化学
の分野に於ける光受容体等として有用である。
しかしながら、ニトロフェニルリン酸誘導体は一般に
保存安定性、特に熱安定性が悪く、保存安定性、熱安定
性が比較的長い化合物は水に対する溶解速度が遅い等の
問題があった。
保存安定性、特に熱安定性が悪く、保存安定性、熱安定
性が比較的長い化合物は水に対する溶解速度が遅い等の
問題があった。
特に、これを臨床診断薬の分野で基質として用いよう
とするときは、保存安定性が悪ければ使用の度に精製を
繰り返す必要があり、実際上基質として用いることがで
きないし、また、水に対する溶解速度が遅ければ、使用
上の迅速性が損なわれる。
とするときは、保存安定性が悪ければ使用の度に精製を
繰り返す必要があり、実際上基質として用いることがで
きないし、また、水に対する溶解速度が遅ければ、使用
上の迅速性が損なわれる。
本発明の目的は、保存安定性、熱安定性に優れ、且つ
水に対する溶解性にも優れたニトロフェニルリン酸誘導
体、及び同誘導体を基質として用いるホスファターゼ活
性の測定方法を提供するにある。
水に対する溶解性にも優れたニトロフェニルリン酸誘導
体、及び同誘導体を基質として用いるホスファターゼ活
性の測定方法を提供するにある。
本発明は、一般式 （式中、Ａはカリウム、アンモニウム、エチル２−ヒド
ロキシエチルアンモニウム、1,1−ジメチル−２−ヒド
ロキシエチルアンモニウム、1,1−ビス（ヒドロキシメ
チル］−２−ヒドロキシエチルアンモニウム又は２−ヒ
ドロキシエチルアンモニウムを表わす。）で示される２
−クロルニトロフェニルリン酸塩及びこれを基質として
用いることを特徴とするホスファターゼ活性の測定方法
の発明である。
ロキシエチルアンモニウム、1,1−ジメチル−２−ヒド
ロキシエチルアンモニウム、1,1−ビス（ヒドロキシメ
チル］−２−ヒドロキシエチルアンモニウム又は２−ヒ
ドロキシエチルアンモニウムを表わす。）で示される２
−クロルニトロフェニルリン酸塩及びこれを基質として
用いることを特徴とするホスファターゼ活性の測定方法
の発明である。
本発明に係る２−クロルニトロフェニルリン酸塩は２
−クロルニトロフェニルリン酸のモノカリウム塩、モノ
アンモニウム塩、モノ（エチル２−ヒドロキシエチルア
ンモニウム）塩、モノ〔1,1−ジメチル−２−ヒドロキ
シエチルアンモニウム〕塩、モノ（1,1−ビス（ヒドロ
キシメチル）−２−ヒドロキシエチルアンモニウム）塩
又はモノ（２−ヒドロキシエチルアンモニウム）塩であ
り、その構造式は夫々以下の通りである。
−クロルニトロフェニルリン酸のモノカリウム塩、モノ
アンモニウム塩、モノ（エチル２−ヒドロキシエチルア
ンモニウム）塩、モノ〔1,1−ジメチル−２−ヒドロキ
シエチルアンモニウム〕塩、モノ（1,1−ビス（ヒドロ
キシメチル）−２−ヒドロキシエチルアンモニウム）塩
又はモノ（２−ヒドロキシエチルアンモニウム）塩であ
り、その構造式は夫々以下の通りである。
（１）２−クロルニトロフェニルリン酸カリウム （２）２−クロルニトロフェニルリン酸モノアンモニウ
ム （３）２−クロルニトロフェニルリン酸エチル ２−ヒ
ドロキシエチルアンモニウム （４）２−クロルニトロフェニルリン酸1,1−ジメチル
−２−ヒドロキシエチルアンモニウム （５）２−クロルニトロフェニルリン酸1,1−ビス（ヒ
ドロキシメチル）−２−ヒドロキシエチルアンモニウム （６）２−クロルニトロフェニルリン酸２−ヒドロキシ
エチルアンモニウム ここにNO2基のベンゼン環上の置換位置は３−,4−,5
−,6−位のいずれにても可である。
ム （３）２−クロルニトロフェニルリン酸エチル ２−ヒ
ドロキシエチルアンモニウム （４）２−クロルニトロフェニルリン酸1,1−ジメチル
−２−ヒドロキシエチルアンモニウム （５）２−クロルニトロフェニルリン酸1,1−ビス（ヒ
ドロキシメチル）−２−ヒドロキシエチルアンモニウム （６）２−クロルニトロフェニルリン酸２−ヒドロキシ
エチルアンモニウム ここにNO2基のベンゼン環上の置換位置は３−,4−,5
−,6−位のいずれにても可である。
２−クロルニトロフェニルリン酸及び２−クロル−４
−ニトロフェニルリン酸のモノナトリウム塩や同ジ又は
モノシクロヘキシルアンモニウム塩は既に公知の化合物
であるが、本発明に係る２−クロルニトロフェニルリン
酸塩はいずれも文献未載の新規化合物である。また、該
ナトリウム塩は結晶状態での安定性が悪く、ホスファタ
ーゼ活性測定用の基質として到底実用化できるようなも
のではなく、また、該シクロヘキシルアンモニウム塩は
水に対する溶解速度が著しく遅い。
−ニトロフェニルリン酸のモノナトリウム塩や同ジ又は
モノシクロヘキシルアンモニウム塩は既に公知の化合物
であるが、本発明に係る２−クロルニトロフェニルリン
酸塩はいずれも文献未載の新規化合物である。また、該
ナトリウム塩は結晶状態での安定性が悪く、ホスファタ
ーゼ活性測定用の基質として到底実用化できるようなも
のではなく、また、該シクロヘキシルアンモニウム塩は
水に対する溶解速度が著しく遅い。
これに対して本発明化合物は、表１に示される通り安
定性が極めて良好であり、且つ水に対する溶解速度も充
分速い。
定性が極めて良好であり、且つ水に対する溶解速度も充
分速い。
本発明化合物は、例えば次のようにして容易に合成す
ることができる。
ることができる。
即ち、先ず、２−クロルニトロフェノールを例えばベ
ンゼン、トルエン等の適当な溶媒に溶解し、ピリジン等
の脱塩酸剤の存在下、オキシ塩化リンと反応させて相当
するフェニルホスホリルクロリド体とする。次いでこれ
を加水分解し、得られたフェニルリン酸エステル体を相
当する塩基又は塩類で造塩反応させることにより、目的
の本発明化合物２−クロルニトロフェニルリン酸塩を合
成することができる。
ンゼン、トルエン等の適当な溶媒に溶解し、ピリジン等
の脱塩酸剤の存在下、オキシ塩化リンと反応させて相当
するフェニルホスホリルクロリド体とする。次いでこれ
を加水分解し、得られたフェニルリン酸エステル体を相
当する塩基又は塩類で造塩反応させることにより、目的
の本発明化合物２−クロルニトロフェニルリン酸塩を合
成することができる。
（式中、Ａは前記に同じ。） かくして合成された本発明化合物は、アルカリ側に至
適pHをもつアルカリホスファターゼ（ALP）や酸性側に
至適pHをもつ酸性ホスファターゼ（ACP）が作用する基
質となり得、これを利用して血清等生体試料中のホスフ
ァターゼ活性を測定することにより、ALCの場合には主
として骨疾患や肝・胆道疾患等の、また、ACPの場合に
は、主として前立腺癌等の診断指標として利用すること
ができる。
適pHをもつアルカリホスファターゼ（ALP）や酸性側に
至適pHをもつ酸性ホスファターゼ（ACP）が作用する基
質となり得、これを利用して血清等生体試料中のホスフ
ァターゼ活性を測定することにより、ALCの場合には主
として骨疾患や肝・胆道疾患等の、また、ACPの場合に
は、主として前立腺癌等の診断指標として利用すること
ができる。
本発明に係るホスファターゼ活性測定法の方法それ自
体は、基質として本発明化合物を用いる以外は自体公知
のホスファターゼ活性測定法の常法に従ってこれを行え
ば足りる。即ち、ALP活性を測定する場合には、例えば
Z.Klim.Chem.Clin.Biochem.,12,Jg.S.87−91（1974）に
記載の方法に準拠し、ALPの酵素反応により遊離した２
−クロルニトロフェノールを比色しALP活性を測定すれ
ばよいし、ACP活性を測定する場合には、例えば、Enzym
e,20,248−256（1975）に記載の方法に準拠し、ACPの酵
素反応により遊離した２−クロルニトロフェノールを比
色し、ACP活性を測定すればよい。
体は、基質として本発明化合物を用いる以外は自体公知
のホスファターゼ活性測定法の常法に従ってこれを行え
ば足りる。即ち、ALP活性を測定する場合には、例えば
Z.Klim.Chem.Clin.Biochem.,12,Jg.S.87−91（1974）に
記載の方法に準拠し、ALPの酵素反応により遊離した２
−クロルニトロフェノールを比色しALP活性を測定すれ
ばよいし、ACP活性を測定する場合には、例えば、Enzym
e,20,248−256（1975）に記載の方法に準拠し、ACPの酵
素反応により遊離した２−クロルニトロフェノールを比
色し、ACP活性を測定すればよい。
また、前立腺癌の診断の場合に、Ｌ（＋）酒石酸が酸
性ホスファターゼのうちの前立腺分画を抑制する作用が
あることを利用し、これを用いて測定を行うことがある
が、このような場合にも本発明化合物は当然のことなが
ら基質として既存の基質と同様に使用可能であることは
言うまでもない。
性ホスファターゼのうちの前立腺分画を抑制する作用が
あることを利用し、これを用いて測定を行うことがある
が、このような場合にも本発明化合物は当然のことなが
ら基質として既存の基質と同様に使用可能であることは
言うまでもない。
本発明の測定法に於て用いられる緩衝剤その他の試薬
類は自体公知の測定法に於て用いられるものに準じてこ
れを用いればよく、また、測定波長を長波長側にシフト
させたり、感度を挙げる目的でシクロデキストリン又は
その誘導体を添加する等は任意である。
類は自体公知の測定法に於て用いられるものに準じてこ
れを用いればよく、また、測定波長を長波長側にシフト
させたり、感度を挙げる目的でシクロデキストリン又は
その誘導体を添加する等は任意である。
尚、本発明化合物は結晶状態に於ける安定性が極めて
良好なので、これを基質として用いる場合、使用直前に
これを合成したり精製したりする必要は全くなく、予め
合成し、室温で保存しておいたものでもそのまま用いる
ことができ、それによって測定値に影響を及ぼすような
ことはない。また、本発明化合物は水に対する溶解速度
が極めて速い為、これを緩衝液等所望の試薬に溶解する
に際し迅速に溶解し得、測定の迅速性は全く損なわれな
い。因みに、従来公知の２−クロル−４−ニトロフェニ
ルリン酸ジシクロヘキシルアンモニウム塩は、水と軽く
振って置いただけでは溶解迄に数時間を要し、撹拌状態
に置いても数10分はかかるのに対し、本発明化合物を溶
かす場合は水と軽く振って置いただけでも数分間で充分
である。
良好なので、これを基質として用いる場合、使用直前に
これを合成したり精製したりする必要は全くなく、予め
合成し、室温で保存しておいたものでもそのまま用いる
ことができ、それによって測定値に影響を及ぼすような
ことはない。また、本発明化合物は水に対する溶解速度
が極めて速い為、これを緩衝液等所望の試薬に溶解する
に際し迅速に溶解し得、測定の迅速性は全く損なわれな
い。因みに、従来公知の２−クロル−４−ニトロフェニ
ルリン酸ジシクロヘキシルアンモニウム塩は、水と軽く
振って置いただけでは溶解迄に数時間を要し、撹拌状態
に置いても数10分はかかるのに対し、本発明化合物を溶
かす場合は水と軽く振って置いただけでも数分間で充分
である。
本発明の測定法は、一点測定法、レイトアッセイ法の
いずれにも適用可能である。また、本発明の測定法は自
動分析装置への適応性もよく、必要に応じて用手法、自
動分析のいずれにて行うも可である。
いずれにも適用可能である。また、本発明の測定法は自
動分析装置への適応性もよく、必要に応じて用手法、自
動分析のいずれにて行うも可である。
更にまた、本発明の測定法は、簡便な試験紙法や、反
応試薬を含有させた多層分析シート（多層一体型定量分
析フィルム）を使用する所謂乾式定量法にも応用するこ
とができる。
応試薬を含有させた多層分析シート（多層一体型定量分
析フィルム）を使用する所謂乾式定量法にも応用するこ
とができる。
以下に実施例を示すが、本発明はこれらの実施例によ
って何等の制約を受けるものではない。
って何等の制約を受けるものではない。
実施例1. ２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸カリウムの合成 ２−クロル−４−ニトロフェノール52g（0.3モル）を
トルエン20mlに溶解し、オキシ塩化リン52.2g（0.36モ
ル）を加え、−10〜30℃に保ちながら、撹拌下ピリジン
28.5g（0.36モル）を滴下した。滴下終了後更に20〜30
℃で20分間反応させ、析出したピリジン塩酸塩を除去し
た後、水を60ml加え、50℃で30分間加水分解反応を行な
った。反応後、トルエン層を除き、水層をメチルイソブ
チルケトン200mlで抽出した。水洗後、20％炭酸カリウ
ム含有メタノール水溶液を加えてpH3.5に調整し、アセ
トン500mlを加えて析出する結晶を取、洗浄、乾燥し
て２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸モノカリウム
塩42gを得た。
トルエン20mlに溶解し、オキシ塩化リン52.2g（0.36モ
ル）を加え、−10〜30℃に保ちながら、撹拌下ピリジン
28.5g（0.36モル）を滴下した。滴下終了後更に20〜30
℃で20分間反応させ、析出したピリジン塩酸塩を除去し
た後、水を60ml加え、50℃で30分間加水分解反応を行な
った。反応後、トルエン層を除き、水層をメチルイソブ
チルケトン200mlで抽出した。水洗後、20％炭酸カリウ
ム含有メタノール水溶液を加えてpH3.5に調整し、アセ
トン500mlを加えて析出する結晶を取、洗浄、乾燥し
て２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸モノカリウム
塩42gを得た。
mp:285℃（dec）。
UV吸収:310nm。
実施例2. ２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸モノアンモニウ
ムの合成 実施例１に於て20％炭酸カリウム含有メタノール溶液
に代えて水酸化アンモニウム（25％）を用いる以外は実
施例１と全く同様にして、２−クロル−４−ニトロフェ
ニルリン酸モノアンモニウム塩35gを得た。
ムの合成 実施例１に於て20％炭酸カリウム含有メタノール溶液
に代えて水酸化アンモニウム（25％）を用いる以外は実
施例１と全く同様にして、２−クロル−４−ニトロフェ
ニルリン酸モノアンモニウム塩35gを得た。
mp:193℃（dec）。
UV吸収:310nm。
実施例3.〜6. ２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸有機アンモニウ
ム塩の合成 実施例１と同様にして２−クロル−４−ニトロフェノ
ール52gを相当するフェニルホスホリルクロリド体と
し、加水分解反応後トルエン層を除いて水層をメチルイ
ソブチルケトン200mlで抽出し、水洗後抽出液に表２に
記載の有機アミンを加えてpH3.5に調整した後、アセト
ン500mlを加え析出する結晶を取するかアセトンを加
えずに濃縮乾固し、洗浄、乾燥して目的とする２−クロ
ル−４−ニトロフェニルリン酸有機アンモニウム塩を得
た。結果を表２に併せて示す。
ム塩の合成 実施例１と同様にして２−クロル−４−ニトロフェノ
ール52gを相当するフェニルホスホリルクロリド体と
し、加水分解反応後トルエン層を除いて水層をメチルイ
ソブチルケトン200mlで抽出し、水洗後抽出液に表２に
記載の有機アミンを加えてpH3.5に調整した後、アセト
ン500mlを加え析出する結晶を取するかアセトンを加
えずに濃縮乾固し、洗浄、乾燥して目的とする２−クロ
ル−４−ニトロフェニルリン酸有機アンモニウム塩を得
た。結果を表２に併せて示す。
実施例7. ２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸モノアンモニウ
ムを用いた前立腺由来酸性ホスファターゼ活性の測定 ＜試 料＞ 朝鮮人血清40検体を測定試料とした。
ムを用いた前立腺由来酸性ホスファターゼ活性の測定 ＜試 料＞ 朝鮮人血清40検体を測定試料とした。
＜試 液＞ （１）緩衝液 クエン酸10.51g、水酸化ナトリウム5.43g及びヘプタ
キス（６−０−３−ヒドロキシプロピル）−β−シクロ
デキストリン15.41gを蒸留水に溶解し、全量１とし
た。（pH6.0）。
キス（６−０−３−ヒドロキシプロピル）−β−シクロ
デキストリン15.41gを蒸留水に溶解し、全量１とし
た。（pH6.0）。
（２）基質液 ２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸モノアンモニ
ウム541mgを蒸留水に溶解し、全量100mlとした。
ウム541mgを蒸留水に溶解し、全量100mlとした。
（３）酒石酸溶液 酒石酸3.0gを蒸留水に溶解し、水酸化ナトリウム溶液
でpHを6.0とした後全量100mlとした。
でpHを6.0とした後全量100mlとした。
＜操作法＞ 緩衝液100mlに蒸留水10mlを加えてよく混合し、総酸
性ホスファターゼ測定用緩衝液とした。この2.0mlに試
料100μを加え混合後、37℃で５分間放置した。これ
に基質液0.5mlを加えよく混合後、410nmに於ける１分間
当りの吸光度増加率ΔETを求めた。試料の代わりに蒸留
水を用いて同様に操作しΔＥＴ・Blを求めた。
性ホスファターゼ測定用緩衝液とした。この2.0mlに試
料100μを加え混合後、37℃で５分間放置した。これ
に基質液0.5mlを加えよく混合後、410nmに於ける１分間
当りの吸光度増加率ΔETを求めた。試料の代わりに蒸留
水を用いて同様に操作しΔＥＴ・Blを求めた。
次に、緩衝液100mlに酒石酸溶液10mlを加えてよく混
合し前立腺由来外酸性ホスファターゼ測定用緩衝液と
し、この2.0mlを用いて前記と同じ試料と蒸留水につい
て同様に操作し、ΔES及びΔＥＳ・Blを求めた。
合し前立腺由来外酸性ホスファターゼ測定用緩衝液と
し、この2.0mlを用いて前記と同じ試料と蒸留水につい
て同様に操作し、ΔES及びΔＥＳ・Blを求めた。
得られた（ΔET−ΔＥＴ・Bl）値と（ΔES−ΔＥ
Ｓ・Bl）値を用い、１分間に１マイクロモルの２−クロ
ル−４−ニトロフェノールを遊離する酵素量を１単位
（Ｕ）として、総酸性ホスファターゼの活性値A1（mU）
及び前立腺由来外酸性ホスファターゼの活性値A2（mU）
を求め、（A1−A2）値から前立腺由来酸性ホスファター
ゼの活性値（mU）を求めた。結果を表３に示す。
Ｓ・Bl）値を用い、１分間に１マイクロモルの２−クロ
ル−４−ニトロフェノールを遊離する酵素量を１単位
（Ｕ）として、総酸性ホスファターゼの活性値A1（mU）
及び前立腺由来外酸性ホスファターゼの活性値A2（mU）
を求め、（A1−A2）値から前立腺由来酸性ホスファター
ゼの活性値（mU）を求めた。結果を表３に示す。
実施例8. ２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸モノカリウムを
用いた前立腺由来酸性ホスファターゼ活性の測定 ＜試 料＞ 実施例７と同じ試料を用いた。
用いた前立腺由来酸性ホスファターゼ活性の測定 ＜試 料＞ 実施例７と同じ試料を用いた。
＜試 液＞ （１）基質緩衝液 クエン酸10.51g、水酸化ナトリウム5.43g、α−シク
ロデキストリン7.78g及び２−クロル−４−ニトロフェ
ニルリン酸モノカリウム1.17gを蒸留水に溶解し全量１
とした（pH6.0）。
ロデキストリン7.78g及び２−クロル−４−ニトロフェ
ニルリン酸モノカリウム1.17gを蒸留水に溶解し全量１
とした（pH6.0）。
（２）酒石酸溶液 酒石酸1.5gを蒸留水に溶解し水酸化ナトリウム溶液で
pHを6.0とした後、全量100mlとした。
pHを6.0とした後、全量100mlとした。
＜操作法＞ 試料20μに基質緩衝液300μを加えてよく混合
し、37℃に２分間放置後、415nmの吸光度の増加を３分
間測定して１分間当りの増加率ΔETを求めた。次いで、
これに酒石酸溶液75μを加えてよく混合し、37℃で１
分間放置後、415nmの吸光度の増加を３分間測定し、１
分間当りの増加率ΔESを求めた。得られたΔET,ΔESの
値から の値を算出し、この値から実施例７と同様、１分間に１
マイクロモルの２−クロル−４−ニトロフェノールを遊
離する酵素量を１単位（Ｕ）として、前立腺由来酸性ホ
スファターゼ活性値（mU）を求めた。結果を表３に実施
例７の結果と併せて示す。
し、37℃に２分間放置後、415nmの吸光度の増加を３分
間測定して１分間当りの増加率ΔETを求めた。次いで、
これに酒石酸溶液75μを加えてよく混合し、37℃で１
分間放置後、415nmの吸光度の増加を３分間測定し、１
分間当りの増加率ΔESを求めた。得られたΔET,ΔESの
値から の値を算出し、この値から実施例７と同様、１分間に１
マイクロモルの２−クロル−４−ニトロフェノールを遊
離する酵素量を１単位（Ｕ）として、前立腺由来酸性ホ
スファターゼ活性値（mU）を求めた。結果を表３に実施
例７の結果と併せて示す。
参考例1. ｐ−ニトロフェニルリン酸を用いた前立腺由来酸性ホス
ファターゼ活性の測定（従来法） 市販の酸性ホスファターゼ測定用キットである「酸性
ホスファＢ−テストワコー（和光純薬工業（株）製）」
を使用し、実施例７と同じ試料について前立腺由来酸性
ホスファターゼ活性の測定を行った。尚、操作法は同キ
ットに添付の現品説明書に記載の測定操作法に従って行
った。
ファターゼ活性の測定（従来法） 市販の酸性ホスファターゼ測定用キットである「酸性
ホスファＢ−テストワコー（和光純薬工業（株）製）」
を使用し、実施例７と同じ試料について前立腺由来酸性
ホスファターゼ活性の測定を行った。尚、操作法は同キ
ットに添付の現品説明書に記載の測定操作法に従って行
った。
測定結果を表３に併せて示す。尚、前立腺由来酸性ホ
スファターゼの活性値は、１分間に１マイクロモルのｐ
−ニトロフェノールを遊離する酵素量を１単位（Ｕ）と
して表示した。
スファターゼの活性値は、１分間に１マイクロモルのｐ
−ニトロフェノールを遊離する酵素量を１単位（Ｕ）と
して表示した。
表３の結果から明らかな如く、基質として２−クロル
−４−ニトロフェニルリン酸モノアンモニウム塩を用い
た実施例７の測定値と、基質として２−クロル−４−ニ
トロフェニルリン酸モノカリウム塩を用いた実施例８の
測定値とを比較した場合、何れの検体に於てもほぼ同等
の測定値が得られており、塩の種類による測定値への影
響は殆どないと考えられる。また、実施例７及び８の測
定値と従来法である参考例１の測定値とを比較した場
合、基質特異性の差のためか、実施例７及び８で得られ
た各検体の測定値は、参考例１のそれよりも若干高くは
なっている。しかしながら、これらの測定値間の相関係
数は何れも1.00と良好な値を示し、本発明の２−クロル
ニトロフェニルリン酸塩は、酸性ホスファターゼの基質
として有用であることが判る。
−４−ニトロフェニルリン酸モノアンモニウム塩を用い
た実施例７の測定値と、基質として２−クロル−４−ニ
トロフェニルリン酸モノカリウム塩を用いた実施例８の
測定値とを比較した場合、何れの検体に於てもほぼ同等
の測定値が得られており、塩の種類による測定値への影
響は殆どないと考えられる。また、実施例７及び８の測
定値と従来法である参考例１の測定値とを比較した場
合、基質特異性の差のためか、実施例７及び８で得られ
た各検体の測定値は、参考例１のそれよりも若干高くは
なっている。しかしながら、これらの測定値間の相関係
数は何れも1.00と良好な値を示し、本発明の２−クロル
ニトロフェニルリン酸塩は、酸性ホスファターゼの基質
として有用であることが判る。
本発明は、新規な２−クロルニトロフェニルリン酸塩
とこれを基質として用いるホスファターゼ活性測定法を
提供するものであり、本発明化合物は保存安定性、熱安
定性に優れている為、室温でも長期間保存可能なのでこ
れをホスファターゼ活性測定用の基質として用いる場
合、使用直前にこれを合成したり精製したりする必要が
ない点、及び、本発明化合物は水に対する溶解速度が極
めて速く、緩衝液等所望の試薬に速やかに溶解するの
で、測定の迅速性が全く損なわれない点等に甚だ顕著な
効果を奏するものである。
とこれを基質として用いるホスファターゼ活性測定法を
提供するものであり、本発明化合物は保存安定性、熱安
定性に優れている為、室温でも長期間保存可能なのでこ
れをホスファターゼ活性測定用の基質として用いる場
合、使用直前にこれを合成したり精製したりする必要が
ない点、及び、本発明化合物は水に対する溶解速度が極
めて速く、緩衝液等所望の試薬に速やかに溶解するの
で、測定の迅速性が全く損なわれない点等に甚だ顕著な
効果を奏するものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭62−115298（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−96099（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−110058（ＪＰ，Ａ) 特公 昭45−34872（ＪＰ，Ｂ１)
Claims (2)
- 【請求項１】一般式 （式中、Ａはカリウム、アンモニウム、エチル２−ヒド
ロキシエチルアンモニウム、1,1−ジメチル−２−ヒド
ロキシエチルアンモニウム、1,1−ビス（ヒドロキシメ
チル）−２−ヒドロキシエチルアンモニウム又は２−ヒ
ドロキシエチルアンモニウムを表わす。）で示される２
−クロルニトロフェニルリン酸塩。 - 【請求項２】一般式 （式中、Ａはカリウム、アンモニウム、エチル２−ヒド
ロキシエチルアンモニウム、1,1−ジメチル−２−ヒド
ロキシエチルアンモニウム、1,1−ビス（ヒドロキシメ
チル）−２−ヒドロキシエチルアンモニウム又は２−ヒ
ドロキシエチルアンモニウムを表わす。）で示される２
−クロルニトロフェニルリン酸塩を基質として用いるこ
とを特徴とするホスファターゼ活性の測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63021479A JP2678609B2 (ja) | 1988-02-01 | 1988-02-01 | 新規な２−クロルニトロフェニルリン酸塩及びこれを用いるホスファターゼ活性測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63021479A JP2678609B2 (ja) | 1988-02-01 | 1988-02-01 | 新規な２−クロルニトロフェニルリン酸塩及びこれを用いるホスファターゼ活性測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01197493A JPH01197493A (ja) | 1989-08-09 |
| JP2678609B2 true JP2678609B2 (ja) | 1997-11-17 |
Family
ID=12056108
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63021479A Expired - Lifetime JP2678609B2 (ja) | 1988-02-01 | 1988-02-01 | 新規な２−クロルニトロフェニルリン酸塩及びこれを用いるホスファターゼ活性測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2678609B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5981206A (en) * | 1992-05-20 | 1999-11-09 | Johnson & Johnson Clinical Diagnostic Systems, Inc. | Dry analytical element and method for the detection of prostatic acid phosphatase |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61110058A (ja) * | 1984-11-02 | 1986-05-28 | Fuji Photo Film Co Ltd | アルカリ性ホスフアタ−ゼ活性測定用一体型多層分析要素 |
| JPS6296099A (ja) * | 1985-10-22 | 1987-05-02 | Toyobo Co Ltd | 酸性フオスフアタ−ゼ活性測定試薬 |
| JPS62115298A (ja) * | 1985-11-12 | 1987-05-26 | Sanko Junyaku Kk | 酸性ホスフアタ−ゼの測定法 |
-
1988
- 1988-02-01 JP JP63021479A patent/JP2678609B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01197493A (ja) | 1989-08-09 |
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