JP2664043B2 - ４−（２−カルバゾイルピロリジン−１−イル）−２，１，３−ベンゾオキサジアゾールの新規光学活性誘導体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【技術分野】本発明は、アルデヒドおよびケトン等のカ
ルボニル基を含有する化合物の検出、定量の際に蛍光標
識試薬として用いることのできる４−（２−カルバゾイ
ルピロリジン−１−イル）−２，１，３−ベンゾオキサ
ジアゾールの新規な光学活性誘導体に関する。

【０００２】

【背景技術】アルデヒドおよびケトン類を検出、定量す
る際の蛍光標識試薬としては、従来、ダンシルヒドラジ
ン［Ｋａｗａｓａｋｉ，Ｔ．等Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ
ｒ．，２２６，１（１９８１）］、Ｏ−（アンスリルメ
チル）ヒドロキシルアミン類やアンスラセンカルボン酸
ヒドラジド類［Ｇｏｔｏ，Ｊ．等Ａｎａｌ．Ｓｃｉ．，
５，３９９（１９８９）］、ＤＭＥＱ−ヒドラジド［Ｙ
ａｍａｇｕｃｈｉ，Ｍ．等Ａｎａｌｙｓｔ，１１５，１
３６３（１９９０）］、ヒドラジノ−２，１，３−ベン
ゾオキサジアゾール類［Ｕｚｕ，Ｓ．等Ａｎａｌｙｓ
ｔ，１１５，１４７７（１９９０）］、Ｆｍｏｃ−ヒド
ラジン［Ｚｈａｎｇ，Ｒ−Ｅ．等Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．，１９５，１６０（１９９１）］等が知られてい
る。これらの試薬による方法は、特異性が高く、ケトン
類の検出限界においてもサブピコモルのオーダであり良
好であるが、標識化反応条件が苛酷であったり、試薬や
生成した誘導体の安定性が悪く、常に一定の測定結果は
得難いという問題がある。

【０００３】一方、光学異性体の形で存在し得るカルボ
ニル基を分離、定量するための吸光度標識試薬として
（＋）−２，２，２−トリフルオロ−１−フェニルヒド
ラジンが報告されている［Ｐｅｒｒｉｅｒａ，Ｗ．Ｅ．
等Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．，２４，１１０３（１９７
１）］。この試薬による方法の特異性は高いが、蛍光標
識法に比較し十分な測定感度を得ることができないとい
う欠点がある。

【０００４】

【発明の開示】本発明者等は、アルデヒドおよびケトン
類に対して選択的で反応性が高く、光学異性体を識別で
きる化合物を得るべく、合成ならびにスクリーニングを
重ねるなかで、（＋）−４−（２−カルバゾイルピロリ
ジン−１−イル）−２，１，３−ベンゾオキサジアゾー
ルあるいは（−）−４−（２−カルバゾイルピロリジン
−１−イル）−２，１，３−ベンゾオキサジアゾールの
７位にアミノスルフォニル基、ジアルキルアミノスルフ
ォニル基あるいはニトロ基を導入した新規な化合物がア
ルデヒドおよびケトン類に対する蛍光試薬として極めて
優れており、かつ未反応の蛍光試薬等に影響されること
なくカルボニル基を含有する光学異性体を高感度で分離
定量することが可能であることを見出した。本発明はか
かる知見に基づいてなされたものである。

【０００５】すなわち、本発明は、一般式（Ｉ）

【化３】 ［式中Ｒは、ＳＯ_２ＮＲ_１Ｒ_２（ただし、Ｒ_１、Ｒ
_２は、それぞれ水素原子または低級アルキルである）ま
たはＮＯ_２であり、＊は不斉中心を意味する。］で表わ
される４−（２−カルバゾイルピロリジン−１−イル）
−２，１，３−ベンゾオキサジアゾールの新規な光学活
性誘導体とその化合物からなる蛍光標識試薬を提供する
ものである。

【０００６】本発明に係る上記式（Ｉ）で表される化合
物は、文献未載の新規化合物であり、その製造方法とし
ては、例えば下記の反応式Ｉに従って（＋）−４−（２
−クロロホルミルピロリジン−１−イル）−あるいは
（−）−４−（２−クロロホルミルピロリジン−１−イ
ル）−２，１，３−ベンゾオキサジアゾールとヒドラジ
ンとを反応させることにより、本発明の化合物である
（＋）−４−（２−カルバゾイルピロリジン−１−イ
ル）−あるいは（−）−４−（２−カルバゾイルピロリ
ジン−１−イル）−２，１，３−ベンゾオキサジアゾー
ルの誘導体を得ることができる。

【０００７】

【化４】 ［式中、Ｒおよび＊は、前記と同じ意味を有する］

【０００８】上記の式で表される反応において使用しう
る溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレン、テト
ラヒドロフラン、ジエチルエーテル、アセトン、アセト
ニトリル、ジオキサン、クロロホルム、ジクロルメタ
ン、酢酸エチル、アセトニトリル、エタノール、メタノ
ール等のごとき有機溶媒等が挙げられる。上記反応は、
通常０−２００℃の範囲内で行うことができるが、好ま
しくは５−５０℃である。反応に要する時間は、反応温
度、反応に供せられる化合物、溶媒等によって異なる
が、通常は５分−１２時間、好ましくは５分−３時間の
範囲で適宜選択される。

【０００９】反応混合物からの目的物の単離、精製は常
法に従って容易に行うことができる。例えば、ヘキサ
ン、ベンゼン、ジクロルメタン、クロロホルム、酢酸エ
チルのごとき有機溶媒による抽出、再結晶或いはシリカ
ゲル、活性炭素、イオン交換樹脂、デキストラン架橋重
合体、スチレンもしくはアクリル酸エステルの多孔質重
合体等を用いた各種のクロマトグラフィーを適用して行
うことができる。

【００１０】出発物質の（＋）−４−（２−クロロホル
ミルピロリジン−１−イル）−７−ニトロ−、（−）−
４−（２−クロロホルミルピロリジン−１−イル）−７
−ニトロ−、（＋）−４−（２−クロロホルミルピロリ
ジン−１−イル）−７−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスル
フォニル）−または（−）−４−（２−クロロホルミル
ピロリジン−１−イル）−７−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミ
ノスルフォニル）−２，１，３−ベンゾオキサジアゾー
ル等は、既知化合物であり、豊岡等の方法［Ａｎａｌｙ
ｓｔ １１８，７５９（１９９３）］等に従って製造す
ることができる。

【００１１】本発明に係る化合物は、下記の反応式に示
すごとく酸性触媒等の存在下で、アルデヒド類およびケ
トン類と選択的に反応結合し、対応する蛍光性のヒドラ
ゾン誘導体を生成する（式ＩＩ）。したがって、これを
利用して、検体中の光学活性なアルデヒド類やケトン類
と本発明に係る化合物とを反応させた後、生成する蛍光
物質を液体クロマトグラフィーで分離し、測定すること
により検体中の光学活性鏡像体をそれぞれ別々に検出で
き、また標準物質により作成した検量線を用いてその定
量を行うことが可能である。

【００１２】

【化５】 ［式中Ｒおよび＊は、前記と同じ意味を有する。またＲ
_３、Ｒ_４はＨあるいはアルキルまたはフェニルおよびそ
れらの誘導体である。］酸性触媒としては、酢酸、塩
酸、硫酸、硝酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸等
が用いられる。

【００１３】本発明に係る化合物を蛍光標識試薬として
アルデヒド、ケトン等のカルボニル基を有する光学異性
体を定量する際の好ましい条件は以下のとおりである。

【００１４】１）本発明の化合物とアルデヒド類、ケト
ン類との反応を酸性触媒の存在下で行わせる。 ２）この際の反応溶媒は、ベンゼン、ジクロロメタン、
アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジ
メチルスルホキサイド、エタノール、メタノール、水、
好ましくはアセトニトリル、水およびアセトニトリル−
水の混合溶液。 ３）反応温度は１５℃以上、好ましくは３０−８０℃。 ４）反応時間は１分−１０時間、好ましくは２分−６時
間である。

【００１５】５）光学活性アルデヒドあるいはケトンと
結合して得られたヒドラゾンの蛍光誘導体の分離は、液
体クロマトグラフ法、薄層クロマトグラフ法、濾紙クロ
マトグラフ法、キャピラリ電気泳動法、ゲル電気泳動法
等により、好ましくは液体クロマトグラフ法、キャピラ
リ電気泳動法により行い、その場合用いるカラムは、オ
クタデシル−、オクチル−、シアノプロピル−、アミノ
プロピル−、ハイドロキシプロピル−、シリカゲル−カ
ラム、ヒドロキシアパタイトカラム、アルミナカラム等
逆相系、順相系いずれでもよく、好ましくはオクタデシ
ルカラム、シリカゲルカラムが有効である。また、溶離
溶媒としては、水、メタノール、エタノール、アセトニ
トリル、アセトン、ジエチルエーテル、クロロホルム、
ジクロルメタン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ベ
ンゼン、ヘキサン等、好ましくは水、アセトニトリル、
メタノールあるいはそれらの混合溶液、ヘキサン、ベン
ゼン、酢酸エチルあるいはそれらの混合溶液を用いる。

【００１６】６）蛍光誘導体を励起させ、生じた蛍光強
度を測定するための検出器の励起波長は、４００−５０
０ｎｍ、好ましくは４４０−４８０ｎｍであり、蛍光波
長は５１０−６００ｎｍ、好ましくは５３０−５８０ｎ
ｍである。

【００１７】本発明に係る化合物の特徴を列記すると次
のごとくである。

【００１８】１） アルデヒド類、ケトン類等のカルボ
ニル基に対して選択的に反応し、かつ反応性が高いの
で、アルデヒド類、ケトン類およびそれらの光学異性体
を同時に分離、かつ高感度に検出、定量することがで
き、優れた蛍光標識試薬として極めて有用である。

【００１９】２） この化合物の（＋）体あるいは
（−）体を使い分けることにより、光学活性なアルデヒ
ド類およびケトン類［（＋）体あるいは（−）体］の溶
出位置を逆転させることができ、微量混在する光学異性
体の一方を、多量に存在する光学異性体の他方よりクロ
マトグラム上で早く溶出させることができ、そのため、
従来、多量に存在する光学異性体の妨害によって分離定
量が不可能であった微量の光学異性体の一方を、精度良
く測定することができる。

【００２０】３） この化合物を還元糖の標識試薬とし
て用いると、従来、特異的吸収を示さず十分な感度が得
られなかったため測定が困難であった還元糖を一斉に高
感度で定量することができる。 ４） 溶液状態での安定性が高く、室温で一週間、冷蔵
庫中で一カ月以上安定性を保つ。 ５） アルデヒド類、ケトン類と結合した蛍光誘導体
は、ｐＨに依存しないほぼ一定の蛍光極大波長および安
定な蛍光強度をあたえる。

【００２１】６） アルデヒド類、ケトン類との蛍光誘
導体は安定性が高く、冷蔵庫中で一週間以上安定性を保
つ。 ７） 上記の蛍光誘導体は励起、蛍光極大波長が長波長
域にあるため、通常の蛍光検出法のみならず、化学発光
検出法やレーザー蛍光検出法によっても、光学活性なア
ルデヒド類およびケトン類の（＋）体および（−）体の
すべてを高感度に分離、検出することができる。

【００２２】本発明の化合物は前述のとおりの特性から
超微量（１０^−１４〜１０^−１６モル）で存在する個々
の光学活性なアルデヒド類、ケトン類について、その定
性分析、定量分析に応用できるばかりでなく、広くカル
ボニル基を含有する医薬品、農薬、汚染物等の光学活性
化合物の解析、定性、定量、あるいは、細胞、膜、組織
等の生体中の光学活性アルデヒド類、ケトン類の分離、
検出あるいは生体構成部分の構造と機能の関係について
の検討に際しての種々の分泌液、その他の臨床試料中の
アルデヒド類、ケトン類の定量に応用することができ、
さらにこれらを基礎とした代謝、臨床分析それらの自動
化の基礎技術あるいは生化学、生理学、および基礎、臨
床にわたる医学的研究等に非常に広範囲にわたって応用
することができる。

【００２３】本発明の化合物の中から、（＋）−４−
（２−カルバゾイルピロリジン−１−イル）−７−
（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスルフォニル）−２，１，３
−ベンゾオキサジアゾール（以下［（＋）−ＤＢＤ−Ｐ
ｒｏＣＺ］と略記する）を代表例として取り上げ、アル
デヒド（ベンズアルデヒド）との反応性および光学活性
アルデヒド（２−フェニルプロピオナール）および光学
活性ケトン（２−メチルサイクロヘキサノン）より生成
した蛍光誘導体の液体クロマトグラフィーでの分離度
（Ｒｓ）について行った実験例を以下に示す。

【００２４】

【実験例】

例−１ （＋）−ＤＢＤ−ＰｒｏＣＺとベンズアルデ
ヒドとの反応性 １．蛍光標識試薬の調製 （＋）−ＤＢＤ−ＰｒｏＣＺ３．５４ｍｇを全量が１．
０ｍｌになるようにアセトニトリルに溶解した。 ２．被検サンプルの調製 ベンズアルデヒド１０．６１ｍｇを全量が１００ｍｌに
なるようにアセトニトリルに溶解した。次いでその溶液
０．１ｍｌを分取し、アセトニトリル−水（７：３）を
加え、全量を１０ｍｌとした（１０μＭ）。

【００２５】３．酸性触媒溶液の調製 トリクロロ酢酸０．５ｇにアセトニトリルを加えて溶か
し全量を１００ｍｌとした（０．５％）。 ４．上記２で調製したサンプルを０．４ｍｌ分取し、こ
れに、上記１、３で調製した蛍光標識試薬および触媒溶
液をそれぞれ５０μｌ加え、全体を室温で５、２０、３
５、５０、６５、８０、９５分間放置後、これらの各時
間ごとの反応溶液について、以下に示す条件下で液体ク
ロマトグラフ法により分離し、蛍光検出を行った。この
結果を図１に示す。

【００２６】装 置：島津ＬＣ−９Ａ液体クロマトグラ
フ カラム：イナ−トシルＯＤＳ−２（１５０×４．６ｍ
ｍ、ｉ．ｄ．，５μｍ） カラム温度：４０℃ 溶出液：水／アセトニトリル（５５／４５） 注入量：５μｌ 流 速：毎分１．０ｍｌ 蛍光検出器：島津ＲＦ−５５０ 検出波長：励起波長４５０ｎｍ、蛍光波長５３５ｎｍ

【００２７】後掲図１から明らかなように３５−５０分
後に反応が最大に達し、以後ほぼ一定の蛍光強度（収
率）を示すことが認められた。 例−２ 蛍光標識試薬と光学活性アルデヒド（２−フ
ェニルプロピオナール）および光学活性ケトン（２−メ
チルサイクロヘキサノン）より生成した蛍光誘導体の分
離度（Ｒｓ）の検討 １．蛍光標識試薬の調製 （＋）−ＤＢＤ−ＰｒｏＣＺ３．５４ｍｇを全量が１．
０ｍｌになるようにアセトニトリルに溶解した。 ２．被検サンプルの調製

【００２８】（Ａ） （±）−（２−フェニルプロピオ
ナール）１３．４２ｍｇを全量が１００ｍｌになるよう
にアセトニトリルに溶解した。次いでその溶液０．１ｍ
ｌを分取し、アセトニトリル−水（７：３）を加え、全
量を１０ｍｌとした（１０μＭ）。

【００２９】（Ｂ） （±）−２−メチルサイクロヘキ
サノン１１．２２ｍｇを全量が１００ｍｌになるように
アセトニトリルに溶解した。次いでその溶液０．１ｍｌ
を分取し、アセトニトリル−水（７：３）を加え、全量
を１０ｍｌとした（１０μＭ）。 ３．酸性触媒溶液の調製 トリクロロ酢酸０．５ｇにアセトニトリルを加えて溶か
し全量を１００ｍｌとした（０．５％）。

【００３０】４．上記２で調製したサンプルを０．４ｍ
ｌ分取し、これに、上記１、３で調製した蛍光標識試薬
および触媒溶液をそれぞれ５０μｌ加え、６５℃で５分
間反応させた後、それらの反応溶液を以下に示す条件下
に液体クロマトグラフ法により分離し、蛍光検出した。
蛍光標識されたアルデヒドあるいはケトンの光学異性体
のピークの溶出時間を測定し、下記の式にしたがって分
離度（Ｒｓ）を計算した。その結果を表１に示す。

【００３１】装 置：島津ＬＣ−９Ａ液体クロマトグラ
フ カラム：イナ−トシルＳＩＬ（１５０×４．６ｍｍ，
ｉ．ｄ．，５μｍ）［２−フェニルプロピオナールを反
応させたとき］ イナ−トシルＯＤＳ−２（１５０×４．６ｍｍ，ｉ．
ｄ．，５μｍ）［２−メチルサイクロヘキサノンを反応
させたとき］ カラム温度：４０℃ 溶出液：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（６：４）［２−フ
ェニルプロピオナールを反応させたとき］ 水／アセトニトリル（６／４）［２−メチルサイクロヘ
キサノンを反応させたとき］ 注入量：５μｌ 流 速：毎分１．０ｍｌ 蛍光検出器：島津ＲＦ−５５０ 検出波長：励起波長４５０ｎｍ、蛍光波長５３５ｎｍ Ｒｓ＝２（ｔ_Ｒ２−ｔ_Ｒ１）／Ｗ_１＋Ｗ_２ ｔ_Ｒ１，ｔ_Ｒ２：それぞれ、蛍光標識されたジアステレ
オマーの溶出時間を表わす。Ｗ_１，Ｗ_２：それぞれ、蛍
光標識されたジアステレオマーのピーク幅を表わす。

【００３２】

【表１】

【００３３】例−３ 蛍光標識試薬とアルデヒドとの
反応により生成した蛍光誘導体の検出能の検討 １．蛍光標識試薬の調製 （＋）−ＤＢＤ−ＰｒｏＣＺ３．５４ｍｇを全量が１．
０ｍｌになるようにアセトニトリルに溶解した。 ２．被検サンプルの調製 ｎ−ブタナール７．２１ｍｇ、ｎ−ペンタナール８．６
１ｍｇ、ｎ−ヘキサナール１０．０２ｍｇ、ｎ−ペプタ
ナール１１．４２ｍｇ、ｎ−オクタナール１２．８２ｍ
ｇ、ｎ−ノナナール１４．２２ｍｇの混合溶液にアセト
ニトリルを加えて溶かし全量が１００ｍｌとした。次い
でその溶液０．１ｍｌを分取し、アセトニトリル−水
（７：３）を加え、全量を１０ｍｌとした（それぞれ１
０μＭ）。

【００３４】３．酸性触媒溶液の調製 トリクロロ酢酸０．５ｇにアセトニトリルを加えて溶か
し全量を１００ｍｌとした（０．５％）。 ４．上記２で調製したサンプルを０．４ｍｌ分取し、こ
れに、上記１、３で調製した蛍光標識試薬および触媒溶
液をそれぞれ５０μｌ加え、６５℃で５分間反応させた
後、それらの反応溶液を以下に示す条件下に液体クロマ
トグラフ法により分離し、蛍光検出した。その結果を図
２に示す。

【００３５】装 置：島津ＬＣ−９Ａ液体クロマトグラ
フ カラム：イナ−トシルＯＤＳ−２（１５０×４．６ｍ
ｍ、ｉ．ｄ．，５μｍ）カラム温度：４０℃ 溶出液：（Ａ）１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．１）／
アセトニトリル（５０／５０） （Ｂ）１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．１）／アセトニ
トリル（３０／７０） 溶出法：リニアグラジェント法により、２０分間でＡ１
００％からＢ１００％とする。 注入量：２μｌ 流 速：毎分１．０ｍｌ 蛍光検出器：島津ＲＦ−５５０ 検出波長：励起波長４５０ｎｍ、蛍光波長５３５ｎｍ 後掲図２に示された各脂肪アルデヒドの誘導体のピーク
は１６ピコモル（１６×１０^−１２モル）に相当する。
このクロマトグラムより算出した検出限界は、およそ５
０フェムトモル（５×１０^−１４モル）であった。

【００３６】本発明に係る化合物とアミン類との反応に
より生成した蛍光誘導体は、励起波長および蛍光波長が
共に長波長であるため、生体試料を取扱う場合には、励
起波長および蛍光波長が比較的短波長域（４００ｎｍ以
下）にある生体成分の影響を受けにくく、微量物質の測
定に際し、再現性の良いデータを得ることができる。ま
た未反応の蛍光試薬や触媒等をあらかじめ除去するとい
うような繁雑な前処理操作が不要であることも優れた特
徴の一つである。さらに順相系、逆相系の両方で分離、
検出することができる。また通常の蛍光法での検出限界
は約１０フェムトモル（１０^−１４モル）と十分高感度
であるが、化学発光法やレーザー蛍光法により更に１０
−１００倍感度の向上がはかられる。次に実施例によっ
て本発明に係る化合物の合成法を説明する。

【００３７】

【実施例】

実施例−１ （＋）−４−（２−カルバゾイルピロリジン−１−イ
ル）−７−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスルフォニル）−
２，１，３−ベンゾオキサジアゾール（［（＋）−ＤＢ
Ｄ−ＰｒｏＣＺ］と略記する）および（−）−４−（２
−カルバゾイルピロリジン−１−イル）−７−（Ｎ，Ｎ
−ジメチルアミノスルフォニル）−２，１，３−ベンゾ
オキサジアゾール（［（−）−ＤＢＤ−ＰｒｏＣＺ］と
略記する）の合成

【００３８】ヒドラジン・１水和物７０ｍｇ（１．４ｍ
ｍｏｌ）を含むメタノール溶液１００ｍｌに（＋）−４
−（２−クロロホルミルピロリジン−１−イル）−７−
（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスルフォニル）−２，１，３
−ベンゾオキサジアゾール（［（＋）−ＤＢＤ−Ｐｒｏ
−ＣＯＣｌ］と略記する）１３０ｍｇ（０．３６ｍｍｏ
ｌ）を溶かした無水ベンゼン溶液２５ｍｌを撹拌下ゆっ
くり滴下する。室温で約３０分間撹拌反応後、反応液中
の溶媒を減圧留去する。残渣にメタノール／酢酸エチル
（１：９）の混合溶液を加えて再結晶し、（＋）−ＤＢ
Ｄ−ＰｒｏＣＺの黄色結晶１４７ｍｇを得た（収率９１
％）。

【００３９】（＋）−ＤＢＤ−ＰｒｏＣＺの主な物性値
は次のとおりである。 融点 １０２−１０９℃（分解）；ＩＲ（ＫＢｒ）１６
７５、１６００、１５５５、１４１５、１３４０、１１
４０、９７０ｃｍ^−１；^１Ｈ−ＮＭＲ（重クロロホル
ム）ＰＰＭ，７．７４（１Ｈ，ｄ）、６．０７（１Ｈ，
ｄ）、４．９８（１Ｈ，ｂｓ）、３．９５−４．１０
（３Ｈ，ｍ）、３．６−３．８（２Ｈ，ｍ）、２．８
（６Ｈ，ｓ）、２．３−２．４５（２Ｈ，ｍ）、２．１
−２．３（２Ｈ，ｍ）。 （−）−４−（２−カルバゾイルピロリジン−１−イ
ル）−７−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスルフォニル）−
２，１，３−ベンゾオキサジアゾール（［（−）−ＤＢ
Ｄ，ＰｒｏＣＺ］と略記する）も（−）−４−（２−ク
ロロホルミルピロリジン−１−イル）−７−（Ｎ，Ｎ−
ジメチルアミノスルフォニル）−２，１，３−ベンゾオ
キサジアゾール（［（−）−ＤＢＤ−Ｐｒｏ−ＣＯＣ
ｌ］と略記する）から同様に合成することができる。

【００４０】実施例−２ （＋）−４−（２−カルバゾイルピロリジン−１−イ
ル）−７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾー
ル（以下［（＋）−ＮＢＤ−ＰｒｏＣＺ］と略記する）
および（−）−４−（２−カルバゾイルピロリジン−１
−イル）−７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジア
ゾール（以下［（−）−ＮＢＤ−ＰｒｏＣＺ］と略記す
る）の合成

【００４１】ヒドラジン・１水和物３５ｍｇ（０．７ｍ
ｍｏｌ）を含むメタノール溶液１００ｍｌに（＋）−４
−（２−クロロホルミルピロリジン−１−イル）−７−
ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール
（［（＋）−ＮＢＤ−Ｐｒｏ−ＣＯＣｌ］と略記する）
５０ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）を溶かした無水ベンゼン
溶液１５ｍｇを撹拌下ゆっくり滴下する。室温で約３０
分間撹拌反応後、反応液中の溶媒を減圧留去する。残渣
に水２０ｍｌおよび酢酸エチル１５ｍｌを加え抽出す
る。同様な抽出操作を２回繰り返す。酢酸エチル抽出液
を合せ溶媒を減圧留去した後メタノール／酢酸エチル
（１：１）の混合溶液を加えて再結晶し、（＋）−ＮＢ
Ｄ−ＰｒｏＣＺの赤色結晶１５ｍｇを得た（収率３０
％）。

【００４２】（＋）−ＮＢＤ−ＰｒｏＣＺの主な物性値
は次のとおりである。 融点 １１７−１２１℃；ＩＲ（ＫＢｒ）１６７５、１
６１５、１５５５、１３２０、１２９０、１２６０ｃｍ
^−１；^１Ｈ−ＮＭＲ（重クロロホルム）ＰＰＭ，８．４
１（１Ｈ，ｄ）、７．５０（１Ｈ，ｂｓ）、６．１２
（１Ｈ，ｄ）、５．２０（１Ｈ，ｂｓ）、３．６−４．
２（４Ｈ，ｍ）、２．１−２．６（４Ｈ，ｍ）。

【００４３】（−）−４−（２−カルバゾイルピロリジ
ン−１−イル）−７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキ
サジアゾール（［（−）−ＮＢＤ−ＰｒｏＣＺ］と略記
する）も（−）−４−（２−クロロホルミルピロリジン
−１−イル）−７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサ
ジアゾール（［（−）−ＮＢＤ−Ｐｒｏ−ＣＯＣｌ］と
略記する）から同様に合成することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明に係る化合物の一つである（＋）−ＤＢ
Ｄ−ＰｒｏＣＺとベンズアルデヒドを反応させたときの
反応時間と蛍光強度（収率）の関係を示すグラフであ
る。

【図２】本発明に係る化合物の一つである（＋）−ＤＢ
Ｄ−ＰｒｏＣＺと脂肪族アルデヒドとの混合溶液を反応
させたときに得られた混合物のクロマトグラムである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平７−188224（ＪＰ，Ａ) 特開 平６−184141（ＪＰ，Ａ) 特公 平６−51699（ＪＰ，Ｂ２) 特公 平８−19122（ＪＰ，Ｂ２) 国際公開93／3382（ＷＯ，Ａ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（Ｉ） 【化１】 （式中ＲはＳＯ_２ＮＲ_１Ｒ_２（ただし、Ｒ_１、Ｒ_２は、
   それぞれ水素原子または低級アルキルである）、または
   ＮＯ_２であり、＊は不斉中心を意味する。）で表わされ
   る４−（２−カルバゾイルピロリジン−１−イル）−
   ２，１，３−ベンゾオキサジアゾールの新規光学活性誘
   導体。
2. 【請求項２】 一般式（Ｉ） 【化２】 （式中ＲはＳＯ_２ＮＲ_１Ｒ_２（ただし、Ｒ_１、Ｒ_２は、
   それぞれ水素原子または低級アルキルである）、または
   ＮＯ_２であり、＊は不斉中心を意味する。）で表わされ
   る４−（２−カルバゾイルピロリジン−１−イル）−
   ２，１，３−ベンゾオキサジアゾールの光学活性誘導体
   からなることを特徴とするアルデヒドおよびケトン類の
   ための分析用蛍光標識試薬。