JP2648305B2 - 多糖類ワクチン - Google Patents
多糖類ワクチンInfo
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
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- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 本発明は一般的に多糖類ワクチン用の新規免疫学的ア
ジュバントに関する。他面、本発明は、脂質エマルジョ
ン系又は油滴中において一定の生物学的アジュバントと
一緒に多糖類抗原を含有する新規免疫学的系に関する。
もう１つの面として、本発明は、多糖類抗原が本発明の
アジュバントと併用された場合に高い免疫原性を有する
ようになる方法に関する。
ジュバントに関する。他面、本発明は、脂質エマルジョ
ン系又は油滴中において一定の生物学的アジュバントと
一緒に多糖類抗原を含有する新規免疫学的系に関する。
もう１つの面として、本発明は、多糖類抗原が本発明の
アジュバントと併用された場合に高い免疫原性を有する
ようになる方法に関する。
本発明以前には、多糖類抗原は主にIgM抗体を刺激
し、IgG応答をわずかしか又は全く生じないことが文献
で報告されていた。更に、記憶消失（amnastic）応答又
は免疫学的記憶は、実験動物及びヒトにおいて多糖類抗
原から得ることは困難であった。したがって、多糖類抗
原の使用により誘導される免疫は持続期間が短かかっ
た。しかも、多糖類ワクチンが幼若年者の場合に高い免
疫原性を有することは証明されていなかった。このた
め、多糖類抗原が高い免疫原性を有することができ、も
ってIgG応答及び免疫学的記憶をはじめとして抗体産生
を一層促進するような方法が必要であった。
し、IgG応答をわずかしか又は全く生じないことが文献
で報告されていた。更に、記憶消失（amnastic）応答又
は免疫学的記憶は、実験動物及びヒトにおいて多糖類抗
原から得ることは困難であった。したがって、多糖類抗
原の使用により誘導される免疫は持続期間が短かかっ
た。しかも、多糖類ワクチンが幼若年者の場合に高い免
疫原性を有することは証明されていなかった。このた
め、多糖類抗原が高い免疫原性を有することができ、も
ってIgG応答及び免疫学的記憶をはじめとして抗体産生
を一層促進するような方法が必要であった。
広汎な面において、本発明は、多糖類抗原用の新規免
疫学的アジュバント、かかるアジュバントの製造方法、
及び多糖類抗原を一層免疫原性にさせるその用途に関す
る。
疫学的アジュバント、かかるアジュバントの製造方法、
及び多糖類抗原を一層免疫原性にさせるその用途に関す
る。
上記本発明は、多糖類類抗原用の新規免疫学的アジュ
バント、製造方法及び用途に関する。多糖類類抗原に対
する免疫応答を高めるために使用される免疫学的アジュ
バントは、下記成分からなる： （１）下記群から選択される脂質エマルジョン系： （Ａ）（ａ）代謝性油 （ｂ）低分子量ポリオール、及び （ｃ）レシチン を含有する脂質エマルジョン系（LES）、 又は （Ｂ）（ａ）軽質炭化水素の非生物分解性油又は生物分
解性油、及び （ｂ）界面活性剤 を含有する水中油型エマルジョン系（O/W） （２）精製無毒化エンドトキシン（RDE）、 並びに、 （３）トレハロースジミコレート（TDM） 本発明はしたがって、多糖類抗原が生物分解性脂質エ
マルジョン系又は水中油型エマルジョン系において一定
の生物学的アジュバントと併用された場合に高い免疫原
性を有するようになる方法に関し、以下これらについて
総合的に説明するが、本発明は狭義において水中油型エ
マルジョン系を第一成分とする免疫学的アジュバント及
び精製された多糖類抗原を含んでなる多糖類ワクチンを
提供するものである。かくして本発明は上述のごとき趣
旨に従って規定された特許請求の範囲の記載に係る特定
のアジュバンドを含有する多糖類ワクチンに限定され
る。多糖類抗原及び本発明のアジュバント系により誘導
される免疫応答性は、いくつかの点において抗原単独で
誘導される応答とは著しく異なる。アジュバント補助を
うけた抗原は、高力価で測定されるように、抗原単独で
誘導される場合よりも一層抗体産生を促進することが観
察された。しかも、アジュバント補助をうけた抗原混合
物は、抗原単独で得られる以上の高力価でIgGクラス抗
体の産生を促進する。本発明のアジュバント補助抗原混
合物は、１回目の免疫後よりも２回目の抗原注射後に高
い抗体応答を示すことから明らかなように、免疫学的記
憶を誘導することも観察された。
バント、製造方法及び用途に関する。多糖類類抗原に対
する免疫応答を高めるために使用される免疫学的アジュ
バントは、下記成分からなる： （１）下記群から選択される脂質エマルジョン系： （Ａ）（ａ）代謝性油 （ｂ）低分子量ポリオール、及び （ｃ）レシチン を含有する脂質エマルジョン系（LES）、 又は （Ｂ）（ａ）軽質炭化水素の非生物分解性油又は生物分
解性油、及び （ｂ）界面活性剤 を含有する水中油型エマルジョン系（O/W） （２）精製無毒化エンドトキシン（RDE）、 並びに、 （３）トレハロースジミコレート（TDM） 本発明はしたがって、多糖類抗原が生物分解性脂質エ
マルジョン系又は水中油型エマルジョン系において一定
の生物学的アジュバントと併用された場合に高い免疫原
性を有するようになる方法に関し、以下これらについて
総合的に説明するが、本発明は狭義において水中油型エ
マルジョン系を第一成分とする免疫学的アジュバント及
び精製された多糖類抗原を含んでなる多糖類ワクチンを
提供するものである。かくして本発明は上述のごとき趣
旨に従って規定された特許請求の範囲の記載に係る特定
のアジュバンドを含有する多糖類ワクチンに限定され
る。多糖類抗原及び本発明のアジュバント系により誘導
される免疫応答性は、いくつかの点において抗原単独で
誘導される応答とは著しく異なる。アジュバント補助を
うけた抗原は、高力価で測定されるように、抗原単独で
誘導される場合よりも一層抗体産生を促進することが観
察された。しかも、アジュバント補助をうけた抗原混合
物は、抗原単独で得られる以上の高力価でIgGクラス抗
体の産生を促進する。本発明のアジュバント補助抗原混
合物は、１回目の免疫後よりも２回目の抗原注射後に高
い抗体応答を示すことから明らかなように、免疫学的記
憶を誘導することも観察された。
本発明以前には、いかなるタイプのアジュバントも純
粋多糖類抗原の有効な免疫増強剤として報告されたこと
はなかった。したがって、本発明は、純粋或いは精製さ
れた多糖類抗原の免疫原性も高めるようなこれまでに存
在しなかった手段を提供する。したがって、本発明のア
ジュバンドは、様々な起源由来の多糖類抗原を含有する
ワクチンに対する温血動物の一次及び二次（即ち、記
憶）免疫応答を促進するために使用される。例えば、本
発明のアジュバントと併用し得る多糖類抗原としては、
ストレプトコッカス・ニューモニアエ（Streptococcus
pneumoniae）、ネイセリア・メニンギチジス（Neisseri
a meningitidis）、クレブシエラ・ニューモニアエ（Ki
ebsiella pneumoniae）サルモラ・チフィ（Salmonella
typhi）又はヘモフィルス・インフルエンザ（Hemophilu
s influenzae）のような細菌の莢膜から精製される抗原
がある。真菌の莢膜もしくは細胞壁又はグラム陽性及び
グラム陰性菌の細胞壁から得られるような他の多糖類抗
原も、本発明のアジュバントと一緒に使用することがで
きる。多糖類抗原で唯一要求されるものは、かかる抗原
で誘導される免疫応答が適切な生物学的アジュバントの
存在により増強され得る応答であることである。
粋多糖類抗原の有効な免疫増強剤として報告されたこと
はなかった。したがって、本発明は、純粋或いは精製さ
れた多糖類抗原の免疫原性も高めるようなこれまでに存
在しなかった手段を提供する。したがって、本発明のア
ジュバンドは、様々な起源由来の多糖類抗原を含有する
ワクチンに対する温血動物の一次及び二次（即ち、記
憶）免疫応答を促進するために使用される。例えば、本
発明のアジュバントと併用し得る多糖類抗原としては、
ストレプトコッカス・ニューモニアエ（Streptococcus
pneumoniae）、ネイセリア・メニンギチジス（Neisseri
a meningitidis）、クレブシエラ・ニューモニアエ（Ki
ebsiella pneumoniae）サルモラ・チフィ（Salmonella
typhi）又はヘモフィルス・インフルエンザ（Hemophilu
s influenzae）のような細菌の莢膜から精製される抗原
がある。真菌の莢膜もしくは細胞壁又はグラム陽性及び
グラム陰性菌の細胞壁から得られるような他の多糖類抗
原も、本発明のアジュバントと一緒に使用することがで
きる。多糖類抗原で唯一要求されるものは、かかる抗原
で誘導される免疫応答が適切な生物学的アジュバントの
存在により増強され得る応答であることである。
上記のように、多数の多糖類抗原が免疫系を刺激する
ことは知られている。しかしながら、誘導される応答
は、二次応答用免疫学的記憶の誘導能のないIgMタイプ
の抗体がほとんどである。このため、本発明において
は、多糖類抗原及び生物学的アジュバントを含有するエ
マルジョン（LES又はO/Wによる）が調製される。このも
のが、免疫系の細胞に特定型の抗原を付与し、免疫系に
徐々に抗原を放出し、かつ免疫応答に包含される前駆細
胞を刺激するのである。
ことは知られている。しかしながら、誘導される応答
は、二次応答用免疫学的記憶の誘導能のないIgMタイプ
の抗体がほとんどである。このため、本発明において
は、多糖類抗原及び生物学的アジュバントを含有するエ
マルジョン（LES又はO/Wによる）が調製される。このも
のが、免疫系の細胞に特定型の抗原を付与し、免疫系に
徐々に抗原を放出し、かつ免疫応答に包含される前駆細
胞を刺激するのである。
上記のように、本発明の免疫学的アジュバントは２成
分からなる。第一成分は脂質エマルジョン系（LES）又
は水中油型エマルジョン系（O/W）のいずれかである。
第二成分は１種以上の精製無毒化エンドトキシン生物学
的アジュバントである。脂質エマルジョン系（LES）
は、代謝性油、低分子量ポリオール及びレシチンを含有
する。実際面では、LESで使用される代謝油は好ましく
はオレイン酸及びリノール酸のジグリセリド類及びトリ
グリセリド類から主になる脂肪油であることが判明し
た。特に好ましいのは、ピーナツ油、ヒマワリ種子油、
ベニバナ種子油、コーン油等の中に含まれ又はそれから
得られるもののような脂肪植物油である。オリーブ油、
綿実油又はスクアレンのような他の油類も本発明のアジ
ュバントに使用することができる。このように、油類は
代謝可能であって、エマルジョン系の成分及び細菌アジ
ュバント自体と融和性があり、しかも多糖類抗原に対す
る免疫応答を高めるために他の成分と併用されても有効
であることが好ましい。
分からなる。第一成分は脂質エマルジョン系（LES）又
は水中油型エマルジョン系（O/W）のいずれかである。
第二成分は１種以上の精製無毒化エンドトキシン生物学
的アジュバントである。脂質エマルジョン系（LES）
は、代謝性油、低分子量ポリオール及びレシチンを含有
する。実際面では、LESで使用される代謝油は好ましく
はオレイン酸及びリノール酸のジグリセリド類及びトリ
グリセリド類から主になる脂肪油であることが判明し
た。特に好ましいのは、ピーナツ油、ヒマワリ種子油、
ベニバナ種子油、コーン油等の中に含まれ又はそれから
得られるもののような脂肪植物油である。オリーブ油、
綿実油又はスクアレンのような他の油類も本発明のアジ
ュバントに使用することができる。このように、油類は
代謝可能であって、エマルジョン系の成分及び細菌アジ
ュバント自体と融和性があり、しかも多糖類抗原に対す
る免疫応答を高めるために他の成分と併用されても有効
であることが好ましい。
実際には、広汎なポリオール類が脂質エマルジョン系
において使用することができる。使用されるポリオール
類は、液体であって代謝性油と混和可能であり、しかも
レシチン成分が溶解し得る低分子量ポリオールである。
適切なポリオール類としては、特にエチレングリコー
ル、1,2−プロパンジオール、1,3−プロパンジオール、
グリセリン、1,4−ブタンジオール、1,3−ブタンジオー
ル、1,2,4−ブタントリオール、1,5−ペンタンジオール
等がある。
において使用することができる。使用されるポリオール
類は、液体であって代謝性油と混和可能であり、しかも
レシチン成分が溶解し得る低分子量ポリオールである。
適切なポリオール類としては、特にエチレングリコー
ル、1,2−プロパンジオール、1,3−プロパンジオール、
グリセリン、1,4−ブタンジオール、1,3−ブタンジオー
ル、1,2,4−ブタントリオール、1,5−ペンタンジオール
等がある。
上記のように、脂質エマルジョン系の第三成分はレシ
チンである。明細書及び特許請求の範囲の全体にわたっ
て用いられる“レシチン”という語は、下記一般式のリ
ン脂質類をいずれも包含する意味である： 上記式中、R1及びR2は炭素原子22個以下の脂肪酸であ
り、R3はコリンである。これらのリン脂質は、通常リン
酸コリンエステルに結合するステアリン酸、パルミチン
酸、リノール酸又はリノレン酸の脂肪酸のジグリセリド
類の混合物である。
チンである。明細書及び特許請求の範囲の全体にわたっ
て用いられる“レシチン”という語は、下記一般式のリ
ン脂質類をいずれも包含する意味である： 上記式中、R1及びR2は炭素原子22個以下の脂肪酸であ
り、R3はコリンである。これらのリン脂質は、通常リン
酸コリンエステルに結合するステアリン酸、パルミチン
酸、リノール酸又はリノレン酸の脂肪酸のジグリセリド
類の混合物である。
実際面において、脂質エマルジョン系の非水性部分は
代謝性油約30〜約60重量％、ポリオール約30〜約60重量
％及びレシチン約１〜約15重量％を含有するのが好まし
いことが判明した。
代謝性油約30〜約60重量％、ポリオール約30〜約60重量
％及びレシチン約１〜約15重量％を含有するのが好まし
いことが判明した。
脂質エマルジョン系の製造法を説明すると、まず無菌
レシチン１部（10g）を棒磁石で撹拌しながらホットプ
レート上60℃で温和に加熱することにより白色グリセリ
ン10部（100g）に溶解した。使用前に、グリセリンを0.
2μｍフィルターユニットに通過させて無菌化した。次
いで、グリセリン及びレシチン混合物を無菌ブレンダー
カップ中に入れ、（100g;0.2μｍフィルターで無菌化さ
れている）ピーナツ油10部を中速度で混合しながらグリ
セリン及びレシチン混合物に徐々に加えた。
レシチン１部（10g）を棒磁石で撹拌しながらホットプ
レート上60℃で温和に加熱することにより白色グリセリ
ン10部（100g）に溶解した。使用前に、グリセリンを0.
2μｍフィルターユニットに通過させて無菌化した。次
いで、グリセリン及びレシチン混合物を無菌ブレンダー
カップ中に入れ、（100g;0.2μｍフィルターで無菌化さ
れている）ピーナツ油10部を中速度で混合しながらグリ
セリン及びレシチン混合物に徐々に加えた。
上記のように、免疫学的アジュバントの第一成分は、
脂質エマルジョン系に代わり、水中油型（O/W）エマル
ジョン系であってもよい。このO/W系は、代謝性油、例
えばスクアレン、又は非代謝性油、例えばスクアラン、
軽質鉱油、７−ｎ−ヘキシルオクタデカン、コノコ（Co
noco）スーパーオイルもしくはドラケオール（Drakeo
l）6VR鉱油〔ペンレコ社（Pennreco Company），バルタ
ー（Bulter），ペンシルバニア〕を含有することができ
る。水中油型エマルジョンは界面活性剤（detergent）
を含有している。界面活性剤の量は、エマルジョンの水
性部分中、典型的には約0.02〜0.20、好ましくは約0.10
〜0.20容量％である、ツイーン−80（Tween−80）及び
アルラセル〔Arlacel,アトラス・ケミカル社（Atlas Ch
mical Company）製造〕をはじめとするいかなる通常の
界面活性物質も使用することができる。油類はエマルジ
ョン総容量中約0.5〜３％を占める。脂質エマルジョン
系又は水中油型系において使用される成分は、もちろん
高度に精製されており、薬学上許容される等級を有す
る。
脂質エマルジョン系に代わり、水中油型（O/W）エマル
ジョン系であってもよい。このO/W系は、代謝性油、例
えばスクアレン、又は非代謝性油、例えばスクアラン、
軽質鉱油、７−ｎ−ヘキシルオクタデカン、コノコ（Co
noco）スーパーオイルもしくはドラケオール（Drakeo
l）6VR鉱油〔ペンレコ社（Pennreco Company），バルタ
ー（Bulter），ペンシルバニア〕を含有することができ
る。水中油型エマルジョンは界面活性剤（detergent）
を含有している。界面活性剤の量は、エマルジョンの水
性部分中、典型的には約0.02〜0.20、好ましくは約0.10
〜0.20容量％である、ツイーン−80（Tween−80）及び
アルラセル〔Arlacel,アトラス・ケミカル社（Atlas Ch
mical Company）製造〕をはじめとするいかなる通常の
界面活性物質も使用することができる。油類はエマルジ
ョン総容量中約0.5〜３％を占める。脂質エマルジョン
系又は水中油型系において使用される成分は、もちろん
高度に精製されており、薬学上許容される等級を有す
る。
免疫学的アジュバントの第二成分は、精製無毒化エン
ドトキシンのような精製無毒化細菌アジュバントであ
る。以下RDEと称される無毒化エンドトキシンは、サル
モネラ属のRe変異株から得られる。無毒化エンドトキシ
ンは、参考のため本明細書に包含される米国特許第4,43
6,728号明細書に記載されている他の腸内細菌からも得
ることができる。無毒化エンドトキシンは合成により及
び遺伝子工学技術によっても製造し得る。第二成分のも
う一面は、トレハロースジミコレート（TDM）の添加で
ある。TDMは、ミコバクテリウム・アビウム（Micobacte
rium avium）、ミコバクテリウム・フレイ（M.phle
i）、ミコバクテリウム・ツベルクロシス（M.tuberculo
sis）〔H37RV株及びアイオマ（Ayoma）Ｂ株〕、ミコバ
クテリウム・ボビス（M.bovis）−BCG、ミコバクテリウ
ム・スメグマチス（M.smegmatis）、ミコバクテリウム
・カンサシイ（M.Kansaii）又はミコバクテリウム・ボ
ビニス（M.bovinis）をはじめとするあらゆるミコ細菌
から得られるが、格別限定されず、更にTDMはノカルジ
ア・ルブラ（Nocardia rubra）及びコリネバクテリウム
・ジフテリアエ（Corynebacterium diphtheriae）から
も得られる。TDMは1985年３月19日発行の米国特許第4,5
05,900号明細書の記載に従い製造することもできる。
ドトキシンのような精製無毒化細菌アジュバントであ
る。以下RDEと称される無毒化エンドトキシンは、サル
モネラ属のRe変異株から得られる。無毒化エンドトキシ
ンは、参考のため本明細書に包含される米国特許第4,43
6,728号明細書に記載されている他の腸内細菌からも得
ることができる。無毒化エンドトキシンは合成により及
び遺伝子工学技術によっても製造し得る。第二成分のも
う一面は、トレハロースジミコレート（TDM）の添加で
ある。TDMは、ミコバクテリウム・アビウム（Micobacte
rium avium）、ミコバクテリウム・フレイ（M.phle
i）、ミコバクテリウム・ツベルクロシス（M.tuberculo
sis）〔H37RV株及びアイオマ（Ayoma）Ｂ株〕、ミコバ
クテリウム・ボビス（M.bovis）−BCG、ミコバクテリウ
ム・スメグマチス（M.smegmatis）、ミコバクテリウム
・カンサシイ（M.Kansaii）又はミコバクテリウム・ボ
ビニス（M.bovinis）をはじめとするあらゆるミコ細菌
から得られるが、格別限定されず、更にTDMはノカルジ
ア・ルブラ（Nocardia rubra）及びコリネバクテリウム
・ジフテリアエ（Corynebacterium diphtheriae）から
も得られる。TDMは1985年３月19日発行の米国特許第4,5
05,900号明細書の記載に従い製造することもできる。
LES含有多糖類ワクチンの製造法は次のとおりであ
る：クロロホルム：メタノール4:1に溶解された第二成
分（RDE及び、場合によりTDM）を無菌バイアルに入れ、
溶媒を無菌窒素気流中で蒸発させる。無菌塩水中の多糖
類抗原を第二成分に加え、次いで全体的に混合する。実
際には、多糖類抗原細菌アジュバント混合物約３容量部
に上記のように調製されたLES混合物１容量部を加え、
この含水油混合物を白色乳化エマルジョンが得られるま
で撹拌機又はブレンダー中で混合する。エマルジョンを
得るための２成分の混合は通常２〜５分間行なわれる。
最終エマルジョン中の多糖類抗原濃度は約0.1〜1000μg
/0.2ml、RED濃度は約25〜約200μg/0.2ml、TDM濃度はも
し存在するとすれば約50〜400μg/0.2mlである。
る：クロロホルム：メタノール4:1に溶解された第二成
分（RDE及び、場合によりTDM）を無菌バイアルに入れ、
溶媒を無菌窒素気流中で蒸発させる。無菌塩水中の多糖
類抗原を第二成分に加え、次いで全体的に混合する。実
際には、多糖類抗原細菌アジュバント混合物約３容量部
に上記のように調製されたLES混合物１容量部を加え、
この含水油混合物を白色乳化エマルジョンが得られるま
で撹拌機又はブレンダー中で混合する。エマルジョンを
得るための２成分の混合は通常２〜５分間行なわれる。
最終エマルジョン中の多糖類抗原濃度は約0.1〜1000μg
/0.2ml、RED濃度は約25〜約200μg/0.2ml、TDM濃度はも
し存在するとすれば約50〜400μg/0.2mlである。
LES含有免疫学的アジュバントにおける２相の最適比
は、多糖類抗原無毒化細菌アジュバント塩溶液約３容量
部対脂質エマルジョン系約１容量部であるが、脂質エマ
ルジョン系対抗原アジュバント溶液の比は約1:1〜約1:8
の範囲であって、1:3の比が好ましい。
は、多糖類抗原無毒化細菌アジュバント塩溶液約３容量
部対脂質エマルジョン系約１容量部であるが、脂質エマ
ルジョン系対抗原アジュバント溶液の比は約1:1〜約1:8
の範囲であって、1:3の比が好ましい。
水中油型系の実例は次の通りである：クロロホルム：
メタノール4:1に各々溶解されたRDE5mg及びTDM 10mgを
350mlの組織ホモゲナイザー〔ベルコ（Bellco）〕に入
れる。溶媒を無菌窒素気流でRDE−TDM混合物から蒸発さ
せる。次いで、無菌油2ml〔ドラケオール6VR鉱油（ペン
レコ社，バルター，ペンシルバニア）、軽質鉱油、スク
ラン、スクアレン、７−ｎ−ヘキシルオクタデカン〕を
加え、混合物を油ペーストが均一になるまで自動乳棒で
１分間ホモゲナイズする。塩水中の0.2％ツイーン80 9
8mlを次いでホモゲナイザーに入れる。自動乳棒を用い
て、エマルジョンが得られるまで混合物を更に約４〜５
分間ホモゲナイズする。
メタノール4:1に各々溶解されたRDE5mg及びTDM 10mgを
350mlの組織ホモゲナイザー〔ベルコ（Bellco）〕に入
れる。溶媒を無菌窒素気流でRDE−TDM混合物から蒸発さ
せる。次いで、無菌油2ml〔ドラケオール6VR鉱油（ペン
レコ社，バルター，ペンシルバニア）、軽質鉱油、スク
ラン、スクアレン、７−ｎ−ヘキシルオクタデカン〕を
加え、混合物を油ペーストが均一になるまで自動乳棒で
１分間ホモゲナイズする。塩水中の0.2％ツイーン80 9
8mlを次いでホモゲナイザーに入れる。自動乳棒を用い
て、エマルジョンが得られるまで混合物を更に約４〜５
分間ホモゲナイズする。
水中の多糖類抗原適切量を液体エマルジョンに加え、
次いで得られるエマルジョンが乳濁的外観を呈するまで
シリンダ及び20ゲージ針を用いた少なくとも２分間の吸
引及び排出の繰返しにより混合する。
次いで得られるエマルジョンが乳濁的外観を呈するまで
シリンダ及び20ゲージ針を用いた少なくとも２分間の吸
引及び排出の繰返しにより混合する。
水中油型エマルジョンは、場合により、10mlホイート
ン（Wheaton）血清バイアル中に5ml入れて凍結乾燥して
もよい。バイアルをレブコ（Revco）フリーザー中温度
−95℃で凍結し、ラブコノコ（Labconoco）凍結乾燥器
の無菌容器中で凍結乾燥する。バイアルを次いで無菌的
に密封する。凍結乾燥RDE−TDMエマルジョンを所望濃度
の多糖類抗原含有の無菌水5mlの注入により再調製す
る。これは、得られるエマルジョンが乳濁的外観を呈す
るまで、シリンジを用いた少なくとも２分間の吸引及び
排出の繰返しにより乳化される。
ン（Wheaton）血清バイアル中に5ml入れて凍結乾燥して
もよい。バイアルをレブコ（Revco）フリーザー中温度
−95℃で凍結し、ラブコノコ（Labconoco）凍結乾燥器
の無菌容器中で凍結乾燥する。バイアルを次いで無菌的
に密封する。凍結乾燥RDE−TDMエマルジョンを所望濃度
の多糖類抗原含有の無菌水5mlの注入により再調製す
る。これは、得られるエマルジョンが乳濁的外観を呈す
るまで、シリンジを用いた少なくとも２分間の吸引及び
排出の繰返しにより乳化される。
上記方法のいずれかにより、水性多糖類抗原溶液のエ
マルジョン（即ち、LES又はO/W）が得られ、このエマル
ジョンは抗原を徐々に放出し、抗原性刺激を持続化し、
かつ無毒化細菌アジュバントにより誘導される抗原近く
での細胞刺激を起こす。この併存的活性は、実施例中の
表から明らかなように、抗原に対する宿主の応答性を高
める。
マルジョン（即ち、LES又はO/W）が得られ、このエマル
ジョンは抗原を徐々に放出し、抗原性刺激を持続化し、
かつ無毒化細菌アジュバントにより誘導される抗原近く
での細胞刺激を起こす。この併存的活性は、実施例中の
表から明らかなように、抗原に対する宿主の応答性を高
める。
上記のように、免疫学的アジュバントは精製無毒化エ
ンドトキシンの他の場合によりトレハロースジミコレー
トを含有していてもよい。トレハロースジミコレート
（TDM）は、米国特許第4,505,900号明細書に記載されて
いるように、例えばミコバクテリウム・アビウム、ミコ
バクテリウム・フレイ、ミコバクテリウム・ツベルクロ
シス（H37RV株及びアイオマＢ株）、ミコバクテリウム
・ボビスBCG、ミコバクテリウム・スメグマチス、ミコ
バクテリウム・カンサシイ、ノカルジア・ルブラ、ミコ
バクリテリウム・ボビニス及びコリネバクテリウム・ジ
フテリアエのような微生物から得ることができる。
ンドトキシンの他の場合によりトレハロースジミコレー
トを含有していてもよい。トレハロースジミコレート
（TDM）は、米国特許第4,505,900号明細書に記載されて
いるように、例えばミコバクテリウム・アビウム、ミコ
バクテリウム・フレイ、ミコバクテリウム・ツベルクロ
シス（H37RV株及びアイオマＢ株）、ミコバクテリウム
・ボビスBCG、ミコバクテリウム・スメグマチス、ミコ
バクテリウム・カンサシイ、ノカルジア・ルブラ、ミコ
バクリテリウム・ボビニス及びコリネバクテリウム・ジ
フテリアエのような微生物から得ることができる。
ミコバクテリウム・アビウム等の細菌を増殖し、採取
し、しかる後加熱殺菌する。細菌集団を次いで数回溶媒
で抽出し、活性は溶媒可溶性分画を単離する。この分画
を一連の溶媒抽出によって更に精製し、粗TDMを得る
〔ミコ細菌細胞壁からの生物学的活性成分、Ｉ、細胞壁
骨格及び成分P3の単離及び組成；アズマ（Azuma）ら、
ジャーナル・オブ・ザ・ナショナル・キャンサー・イン
スティテュート（Journal of the National Cancer Ins
titute），第52巻，第95−101頁,1974年参照；参考のた
め本発明に包含される〕。アズマらで記載されているよ
うに、粗TDMを次いで遠心微粒子シリカゲルクロマトグ
ラフィーにより更に精製して、精製TDMを得てもよい。T
DMの精製は、本発明と同一の譲受人に譲渡された1982年
４月29日出願の同時係属出願第372,843号明細書に開示
された操作によっても行なうことができる。
し、しかる後加熱殺菌する。細菌集団を次いで数回溶媒
で抽出し、活性は溶媒可溶性分画を単離する。この分画
を一連の溶媒抽出によって更に精製し、粗TDMを得る
〔ミコ細菌細胞壁からの生物学的活性成分、Ｉ、細胞壁
骨格及び成分P3の単離及び組成；アズマ（Azuma）ら、
ジャーナル・オブ・ザ・ナショナル・キャンサー・イン
スティテュート（Journal of the National Cancer Ins
titute），第52巻，第95−101頁,1974年参照；参考のた
め本発明に包含される〕。アズマらで記載されているよ
うに、粗TDMを次いで遠心微粒子シリカゲルクロマトグ
ラフィーにより更に精製して、精製TDMを得てもよい。T
DMの精製は、本発明と同一の譲受人に譲渡された1982年
４月29日出願の同時係属出願第372,843号明細書に開示
された操作によっても行なうことができる。
アジュバント系で使用される場合に、トレハロースジ
ミコレートは約50〜約5000μg/ml、更に好ましくは約25
0〜約2000μg/mlの濃度で使用される。
ミコレートは約50〜約5000μg/ml、更に好ましくは約25
0〜約2000μg/mlの濃度で使用される。
上記のように、様々な多糖類抗原と混合される本発明
の免疫学的アジュバントは、かかる抗原に対する免疫応
答を高めるため、動物及びヒト双方の宿主用の各種ワク
チン類に使用される。実際には、精製無毒化エンドトキ
シンは約25〜約200μg/用量の濃度で使用され、特に高
い免疫応答は約100μg/用量で誘導されることが判明し
た。トレハロースジミコレートは約50〜約400μg/用量
の濃度で使用することが好ましい。所望であれば、他の
成分又は添加剤も本発明のアジュバントと併用すること
ができる。
の免疫学的アジュバントは、かかる抗原に対する免疫応
答を高めるため、動物及びヒト双方の宿主用の各種ワク
チン類に使用される。実際には、精製無毒化エンドトキ
シンは約25〜約200μg/用量の濃度で使用され、特に高
い免疫応答は約100μg/用量で誘導されることが判明し
た。トレハロースジミコレートは約50〜約400μg/用量
の濃度で使用することが好ましい。所望であれば、他の
成分又は添加剤も本発明のアジュバントと併用すること
ができる。
下記実施例におけるデキストラン及びSSS III多糖類
を用いた受身赤血球凝集素試験は、次のように行なわれ
た： デキストラン使用受身赤血球凝集素（HA）試験のプロト
コール アルシーバー（Alsever）溶液中の羊赤血球（SRBC）5
mlを塩水で５回洗浄した。パルミトイルデキストランを
1mg/mlの濃度で塩水に溶解し、0.5ml（パルミトイルデ
キストラン 500μｇ）を10％洗浄SRBC溶液5mlに加え
た。この混合物を十分に混合し、37℃で30分間インキュ
ベートした。デキストラン−SRBC溶液を塩水で５回洗浄
し、しかる後細胞を10％濃度で再懸濁した。
を用いた受身赤血球凝集素試験は、次のように行なわれ
た： デキストラン使用受身赤血球凝集素（HA）試験のプロト
コール アルシーバー（Alsever）溶液中の羊赤血球（SRBC）5
mlを塩水で５回洗浄した。パルミトイルデキストランを
1mg/mlの濃度で塩水に溶解し、0.5ml（パルミトイルデ
キストラン 500μｇ）を10％洗浄SRBC溶液5mlに加え
た。この混合物を十分に混合し、37℃で30分間インキュ
ベートした。デキストラン−SRBC溶液を塩水で５回洗浄
し、しかる後細胞を10％濃度で再懸濁した。
Ｖ底96ウェル微量滴定プレートを用いて、血清試料を
0.5％牛血清アルブミン（BSA）緩衝液により２段階で希
釈した。各ウェルの最終容量は50μであった。各ウェ
ルに0.5％デキストラン−SRBC 50μを加えた。プレ
ートを室温で一夜インキュベートした。
0.5％牛血清アルブミン（BSA）緩衝液により２段階で希
釈した。各ウェルの最終容量は50μであった。各ウェ
ルに0.5％デキストラン−SRBC 50μを加えた。プレ
ートを室温で一夜インキュベートした。
同一の微量滴定プレートセットに0.1M2−メルカプト
エタノール50μを血清試料希釈後に加え、次いでデキ
ストラン被覆SRBC 50μを加えた。
エタノール50μを血清試料希釈後に加え、次いでデキ
ストラン被覆SRBC 50μを加えた。
SSS III多糖類使用受身赤血球凝集素（HA）試験のプロ
トコール 羊赤血球（SRBC）5mlを塩水（0.85％）で５回洗浄し
た。SSS III多糖類を1mg/mlで塩水に溶解した。充填SRB
C 0.5mlに、１）塩水1ml及び ２）SSS III塩水1ml（1
000μｇ）を加えた。混合物を静かに撹拌し、塩水中の
0.1％塩化クロム（CrCl3・6H2O）1mlを撹拌しながら滴
下した。混合物を室温で５分間放置した。SSS III被覆S
RBCを塩水で５回洗浄し、塩水中10％細胞懸濁液として
再懸濁した。
トコール 羊赤血球（SRBC）5mlを塩水（0.85％）で５回洗浄し
た。SSS III多糖類を1mg/mlで塩水に溶解した。充填SRB
C 0.5mlに、１）塩水1ml及び ２）SSS III塩水1ml（1
000μｇ）を加えた。混合物を静かに撹拌し、塩水中の
0.1％塩化クロム（CrCl3・6H2O）1mlを撹拌しながら滴
下した。混合物を室温で５分間放置した。SSS III被覆S
RBCを塩水で５回洗浄し、塩水中10％細胞懸濁液として
再懸濁した。
各群における個々のマウスの血清を、Ｖ底96ウェル微
量滴定プレートのウェル中において、２段階で希釈し
た。開始希釈は1:10であり、ウェル当たりの希釈血清最
終容量は50μであった。
量滴定プレートのウェル中において、２段階で希釈し
た。開始希釈は1:10であり、ウェル当たりの希釈血清最
終容量は50μであった。
希釈血清含有の各ウェルにSSS III被覆SRBC 50μ
（0.5％細胞懸濁液）を加え、プレートを室温で一夜イ
ンキュベートした。同一の微量滴定プレートセットに0.
1M2−メルカプトエタノール50μを血清試料希釈後に
加え、次いで被覆SRBC 50μを加えた。
（0.5％細胞懸濁液）を加え、プレートを室温で一夜イ
ンキュベートした。同一の微量滴定プレートセットに0.
1M2−メルカプトエタノール50μを血清試料希釈後に
加え、次いで被覆SRBC 50μを加えた。
下記実施例において、デキストラン、パルミトイルデ
キストラン及びストレプトコッカス・ニューモニアエII
I型の莢膜多糖類（SSS III）は、微生物免疫の国立衛生
研究所、ベセスダ、メリーランドのピー・ジェィ・ベー
カー博士（Dr.P.J.Baker）から提供をうけた。
キストラン及びストレプトコッカス・ニューモニアエII
I型の莢膜多糖類（SSS III）は、微生物免疫の国立衛生
研究所、ベセスダ、メリーランドのピー・ジェィ・ベー
カー博士（Dr.P.J.Baker）から提供をうけた。
下記例は本発明の実例（例１及び例２）並びに参考例
（例３）である。なお、これらの例で用いたTDMは、い
ずれも以下の方法により得たものである。
（例３）である。なお、これらの例で用いたTDMは、い
ずれも以下の方法により得たものである。
TDMの製法：ミコバクテリウム・フレイ（M.phlei）の
細菌を増殖し、採取し、しかる後加熱殺菌する。細菌集
団を次いで数回溶媒で抽出し、活性な溶媒可溶性分画を
単離する。この分画を一連の溶媒抽出によって更に精製
し、粗TDMを得る〔ミコ細菌細胞壁からの生物学的活性
成分、Ｉ、細胞壁骨格及び成分P3の単離及び組成；アズ
マ（Azuma）ら、ジャーナル・オブ・ザ・ナショナル・
キャンサー・インスティテュート（Journal of the Nat
ional Cancer Institute），第52巻，第95−101頁,1974
年参照〕。粗TDMを次いで遠心微粒子シリカゲルクロマ
トグラフィーにより更に精製して、精製TDMを得る。
細菌を増殖し、採取し、しかる後加熱殺菌する。細菌集
団を次いで数回溶媒で抽出し、活性な溶媒可溶性分画を
単離する。この分画を一連の溶媒抽出によって更に精製
し、粗TDMを得る〔ミコ細菌細胞壁からの生物学的活性
成分、Ｉ、細胞壁骨格及び成分P3の単離及び組成；アズ
マ（Azuma）ら、ジャーナル・オブ・ザ・ナショナル・
キャンサー・インスティテュート（Journal of the Nat
ional Cancer Institute），第52巻，第95−101頁,1974
年参照〕。粗TDMを次いで遠心微粒子シリカゲルクロマ
トグラフィーにより更に精製して、精製TDMを得る。
例 １ この実験では、BALB/Cマウス（マウス６匹/1群）に下
記の皮下注射（0.2ml/動物）をした：群1,塩水中のデキ
ストラン100μg;群2,塩水中のデキストラン100μｇ＋RD
E50μg;群3,等容量のLES脂質エマルジョンで乳化された
塩水中のデキストラン100μｇ＋RDE 50μg;群4,RDE 5
0μｇ＋TDM 50μg/用量の凍結乾燥水中油型エマルジョ
ン含有バイアル中で乳化されたデキストラン100μg;群
5,抗原なし。
記の皮下注射（0.2ml/動物）をした：群1,塩水中のデキ
ストラン100μg;群2,塩水中のデキストラン100μｇ＋RD
E50μg;群3,等容量のLES脂質エマルジョンで乳化された
塩水中のデキストラン100μｇ＋RDE 50μg;群4,RDE 5
0μｇ＋TDM 50μg/用量の凍結乾燥水中油型エマルジョ
ン含有バイアル中で乳化されたデキストラン100μg;群
5,抗原なし。
第１回免疫後20日目に、各群のすべてのマウスは、第
１回注射と同様に調製された第２回注射の投与をうけ
た。
１回注射と同様に調製された第２回注射の投与をうけ
た。
各血清試料を免疫後の様々な時点で数回採血すること
により集めた。
により集めた。
得られた結果は下記表Ｉに記載されている： ａ すべての抗原投与群は０日目及び20日目に皮下注射
された。
された。
ｂ 結果は各群における平均逆数力価として示されてい
る。各血清試料の開始希釈倍率は1:10であった。括弧内
の数値は0.1M2−メルカプトエタノール処理血清の平均
力価である。これらはIgG応答を示す。
る。各血清試料の開始希釈倍率は1:10であった。括弧内
の数値は0.1M2−メルカプトエタノール処理血清の平均
力価である。これらはIgG応答を示す。
例 ２ 本実験においては、以下のように、多糖類抗原（0.5
μg/マウス）単独で又はRDEアジュバントと併用してBAL
B/Cマウスを皮下注射（0.2ml）した：群1,SSS IIIを水
溶液として投与した；群2,SSS III水溶液をRDE （50μ
g/マウス）及びTDM（50μg/マウス）の水中油型エマル
ジョン含有バイアル中で乳化された；群3,SSS III水溶
液をRDE（100μg/マウス）水溶液に加え、混合物を等容
量のLESに加え、乳化させた；群4,SSS III水溶液をRDE
（50μg/マウス）水溶液に加え、等容量の水酸化アルミ
ニウムゲル〔アルヒドロゲル（Alhydrogel）〕と混合し
た；群5,免疫しなかった。
μg/マウス）単独で又はRDEアジュバントと併用してBAL
B/Cマウスを皮下注射（0.2ml）した：群1,SSS IIIを水
溶液として投与した；群2,SSS III水溶液をRDE （50μ
g/マウス）及びTDM（50μg/マウス）の水中油型エマル
ジョン含有バイアル中で乳化された；群3,SSS III水溶
液をRDE（100μg/マウス）水溶液に加え、混合物を等容
量のLESに加え、乳化させた；群4,SSS III水溶液をRDE
（50μg/マウス）水溶液に加え、等容量の水酸化アルミ
ニウムゲル〔アルヒドロゲル（Alhydrogel）〕と混合し
た；群5,免疫しなかった。
すべての群は６〜８週令のマウス10匹を有していた。
各群のマウスに、RDE−TDM水中油型エマルジョンで乳化
されたSSS III（0.5μg/マウス）含有の二次皮下注射を
21日目に投与した。括弧内の数値は0.1M2−メルカプト
エタノール処理後におけるこれら血清の平均力価を示
す。
各群のマウスに、RDE−TDM水中油型エマルジョンで乳化
されたSSS III（0.5μg/マウス）含有の二次皮下注射を
21日目に投与した。括弧内の数値は0.1M2−メルカプト
エタノール処理後におけるこれら血清の平均力価を示
す。
得られた結果は下記表IIに記載されている： ａ SSS IIIとは、ストレプトコッカス・ニューモニアI
III型由来の精製莢膜多糖類のことである。マウスを０
日目及び21日目に皮下注射した。
III型由来の精製莢膜多糖類のことである。マウスを０
日目及び21日目に皮下注射した。
ｂ 結果は各群の平均逆数力価として示されている。各
血清試料の開始希釈倍率は1:10であった。括弧内の数値
は0.1M2−メルカプトエタノール処理血清の平均力価で
ある。
血清試料の開始希釈倍率は1:10であった。括弧内の数値
は0.1M2−メルカプトエタノール処理血清の平均力価で
ある。
例 ３（参考例） 本実験では、LES脂質エマルジョンアジュバント系中
においてSSS III多糖類抗原単独で又はRDEと併用して、
BALB/Cマウスに皮下注射（0.2ml/マウス）した。一次免
疫後21日目に、DRE−TDM水中油型エマルジョンに混合さ
れたSSS IIIの二次注射（0.5μｇ）をすべてのマウスに
投与した。
においてSSS III多糖類抗原単独で又はRDEと併用して、
BALB/Cマウスに皮下注射（0.2ml/マウス）した。一次免
疫後21日目に、DRE−TDM水中油型エマルジョンに混合さ
れたSSS IIIの二次注射（0.5μｇ）をすべてのマウスに
投与した。
得られた結果は下記表IIIに記載されている： ａ SSS IIIとは、ストレプトコッカス・ニューモニア
エIII型由来の精製莢膜多糖類のことである。マウスを
０日目及び21日目に皮下免疫した。
エIII型由来の精製莢膜多糖類のことである。マウスを
０日目及び21日目に皮下免疫した。
ｂ 結果は一連の採血による各血清試料の平均HA力価と
して示されている。括弧内の数値は0.1M2−メルカプト
エタノール処理血清の平均HA力値を示す。これらはIgG
応答性を示す。
して示されている。括弧内の数値は0.1M2−メルカプト
エタノール処理血清の平均HA力値を示す。これらはIgG
応答性を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭60−11429（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−72825（ＪＰ，Ａ) 特公 平４−1728（ＪＰ，Ｂ２) 米国特許4340588（ＵＳ，Ａ)
Claims (6)
- 【請求項１】1gG応答及び免疫学的記憶の点から抗体産
生を一層促進しうる、精製された多糖類抗原及び下記の
免疫学的アジュバントを含有してなる多糖類ワクチン： （１）（ａ） 軽質炭化水素の非生物分解性油もしくは
生物分解性油、及び （ｂ） 界面活性剤 を含有する水中油型エマルジョン系（O/W）、 （２）精製無毒化エンドトキシン（RDE）、並びに、 （３）トレハロースジミコレート（TDM）からなること
を特徴とするアジュバント。 - 【請求項２】抗原及び精製無毒化エンドトキシンが無菌
塩溶液中に含有されている、特許請求の範囲第１項記載
のワクチン。 - 【請求項３】無菌塩溶液中の抗原濃度が約0.1〜約5000
μg/mlであり、無菌塩溶液中の精製無毒化エンドトキシ
ン濃度が約125〜1000μg/mlである、特許請求の範囲第
２項記載のワクチン。 - 【請求項４】水中油型エマルジョン系が軽質炭化水素の
非生物分解性油もしくは生物分解性油及び界面活性剤約
0.5〜３％からなり、かつ無菌塩溶液中の抗原濃度が約
0.5〜約5000μg/mlであり、無菌塩溶液中の精製無毒化
エンドトキシン濃度が約125〜1000μg/mlである、特許
請求の範囲第１〜３項のいずれか一項に記載のワクチ
ン。 - 【請求項５】生物分解性油がピーナツ油、ヒマワリ種子
油、ベニバナ種子油、コーン油、オリーブ油、綿実油又
はスクアレンである、特許請求の範囲第１項記載のワク
チン。 - 【請求項６】非生物分解性油が軽質鉱油、スクアラン、
７−ｎ−ヘキシルオクタデカン、ドラケオール6VR又は
鉱油である、特許請求の範囲第１項記載のワクチン。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/852,118 US4803070A (en) | 1986-04-15 | 1986-04-15 | Immunological emulsion adjuvants for polysaccharide vaccines |
| US852118 | 1986-04-15 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6322029A JPS6322029A (ja) | 1988-01-29 |
| JP2648305B2 true JP2648305B2 (ja) | 1997-08-27 |
Family
ID=25312539
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62092948A Expired - Lifetime JP2648305B2 (ja) | 1986-04-15 | 1987-04-15 | 多糖類ワクチン |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4803070A (ja) |
| JP (1) | JP2648305B2 (ja) |
| BE (1) | BE1001630A4 (ja) |
| CA (1) | CA1322333C (ja) |
| CH (1) | CH675076A5 (ja) |
| DE (1) | DE3712768A1 (ja) |
| GB (1) | GB2189143B (ja) |
| IT (1) | IT1205820B (ja) |
| NL (1) | NL194603C (ja) |
Families Citing this family (46)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1267087A (en) * | 1985-02-14 | 1990-03-27 | Nicolaas Visser | Synthetic immunogen |
| US5554372A (en) * | 1986-09-22 | 1996-09-10 | Emory University | Methods and vaccines comprising surface-active copolymers |
| EP0324455A3 (en) * | 1988-01-15 | 1991-03-27 | Hans O. Ribi | Novel polymeric immunological adjuvants |
| JPH0832638B2 (ja) * | 1989-05-25 | 1996-03-29 | カイロン コーポレイション | サブミクロン油滴乳剤を含んで成るアジュバント製剤 |
| FR2649012B1 (fr) * | 1989-07-03 | 1991-10-25 | Seppic Sa | Emulsions multiphasiques injectables |
| FR2649013B1 (fr) * | 1989-07-03 | 1991-10-25 | Seppic Sa | Vaccins et vecteurs de principes actifs fluides contenant une huile metabolisable |
| US5268454A (en) | 1991-02-08 | 1993-12-07 | La Jolla Pharmaceutical Company | Composition for inducing humoral anergy to an immunogen comprising a t cell epitope-deficient analog of the immunogen conjugated to a nonimmunogenic carrier |
| DE4007315A1 (de) * | 1990-03-08 | 1991-09-12 | Behringwerke Ag | Verwendung von zink-calciumhydroxid, lecithin und pao zur adjuvierung von antigenloesungen und auf diese weise adjuvierte antigenloesungen |
| US5246707A (en) * | 1990-04-26 | 1993-09-21 | Haynes Duncan H | Sustained release delivery of water-soluble bio-molecules and drugs using phospholipid-coated microcrystals, microdroplets and high-concentration liposomes |
| US5091188A (en) * | 1990-04-26 | 1992-02-25 | Haynes Duncan H | Phospholipid-coated microcrystals: injectable formulations of water-insoluble drugs |
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