JP2555391B2 - 金属キレートー蛋白質複合体を形成するための主鎖多置換キレート - Google Patents

金属キレートー蛋白質複合体を形成するための主鎖多置換キレート

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Description

【発明の詳細な説明】 背景技術 本発明は金属キレートおよび金属キレート蛋白質複合
体の形成に関する。
金属キレートにおける技術および診断および治療の目
的に金属キレート−蛋白質複合体を形成する方法に関心
がもたれている。代表的型のキレートおよび複合体並び
に複合体の形成方法は、特に米国特許第4,454,106号、
第4,472,509号および第4,339,426号に開示されている。
かかる複合体の一例は金属キレート−モノクロナール抗
体複合体である。抗体フラグメント、ポリクロナール抗
体、抗原、血液蛋白質、または血液リンパ球若しくは他
の細胞に結合する蛋白質もまた複合体の形成に使用する
ことができる。
蛋白質に複合化する二官能金属キレートの合成方法
は、アミノ酸アミドをエチレンジアミドに還元して一置
換誘導体を形成しこれ等誘導体をハロ酢酸でアルキル化
することにより二官能エチレンジアミン四酢酸（EDTA）
キレートに転換することを含む。（イエ等アナル．バイ
オケム.,100:152,1979）。同様に、一置換ジエチレント
リアミンはエチレンジアミンのアミノ酸エステルとの反
応および生成したアミノカルボニルの還元により合成さ
れる。（ブレッチビール（Brechbiel）等インオーガ．
ケム.,25:2772〜2781（1986）。ジエチレントリアミン
のハロ酢酸によるアルキル化により一置換二官能ジエチ
レントリアミン−五酢酸（DTPA）キレートが生成する。
二官能DTPAの他の合成法にはDTPAまたはEDTAカルボキ
シレートをクロロ蟻酸エステルと反応させて反応性無水
物を形成することが含まれる。〔クレジカーレク（Krej
carek）等、バイオケム，バイオフィーズ．レス．コミ
ュヌ（Biochem.Biophys.Res.Commun．）,77:581,197
7〕。二官能キレートとして使用するDTPAの二無水物
は、親DTPAの脱水により製造される〔ハナトウイッチ
（Hnatowich）等イント．ジェー．アプル．ラド．イソ
ト、（Int.J.Appl.Rad.Isot．），33:327,1982〕。炭素
１位で一置換されたEDTAキレートを用いて非置換EDTAキ
レートより試験管内でキレートから金属の遊離を一層よ
く妨げる実施もまた報告されている。〔ミーレス（Mear
es）等，アナル・バイオケム．（Anal・Biochem．），1
42:68,1984〕。
一般に、従来技術は金属−蛋白質キレート複合体を一
置換二官能EDTA若しくはDTPAキレートまたはDTPA無水物
を蛋白質と混合し次いでキレートすべき金属と反応させ
ることにより形成した。〔クレジカーレク等，バイオケ
ム，バイオフィズ，レス，コミュヌ77:581,1977;ブレッ
チビール等インオーガ．ケム（Inorg,Chem.），25:578
3,1986〕。これ等の方法により製造された金属キレート
複合化（conjugated）モノクロナール抗体を用い生体内
で腫瘍標的の位置を映像することが報告されている。
〔コウ（Khaw）等、サイエンス，209:295,1980〕。（シ
ャインバーグ等，サイエンス，215:1511,1982）。金属
キレート複合化モノクロナール抗体を用いる生体内人間
の癌の診断が報告されている。（レインズバーグ等，ラ
ンセット，２:694,1983）。然し治療の目的で金属キレ
ート共役モノクロナール抗体の腫瘍局限化特性を使用す
る試みは部分的には金属が生体内で金属キレート複合体
から遊離（しばしば遊離）する場合があり、特に放射性
金属塩の場合には、複合体が偶然に結合した金属を精確
に一掃する場合でも、骨髄等に望ましくない濃度の有毒
放射性核種を生成し得るので、普通用いられなかった。
偶然に結合した金属の金属キレート蛋白質複合体を精製
する方法は米国特許第4,472,509号に開示されている。
モノクロナール抗体に放射性金属を堅固に係合するため
に極めて強力な金属キレートを使用することおよび複合
体をきびしく精製して最大腫瘍局限化を行い且つ標的の
ない組織に送達するのを最小にすることの重要性はブレ
ッチビール（インオーガ．ケム,25,1986）によって議論
されている。マウスにおいて生体内で金属キレート複合
化ポリクロナール抗体から遊離される治療の放射性核種
の望ましくない局限化は人間における治療研究を除外し
た。〔バウグーン（Vaughn）等，エアー−ベリヒト（Ei
r−Bericht.）781986〕。金属キレート複合化モノクロ
ナール抗体として治療のため注射される放射性金属の生
体内における骨による吸収の増加もまた報告されてい
る。〔ハナトウィッチ等、ジェー．ニュクル．メド．
（J.Nucl.Med.），26:503,1985〕。放射性金属キレート
化ポリクロナール抗体の人間における可能的治療投与量
は骨髄毒性により制限された〔オーダー等，イント．ジ
ェー．ラド．オンコル． （Int.J.Rad.Oncol.），12:27
7,1986〕。
上述するところから金属を堅固に蛋白質に結合して金
属の遊離を最小にし、生体内で標的位置に金属を選択的
に送達し得る更に有効な金属キレート蛋白質複合体に対
する要求が続いていることは明らかである。
発明の開示 従って、本発明の目的は新規な多置換二官能ジエチレ
ントリアミン五酢酸キレートを提供することにある。
本発明の他の目的は新規なキレート−蛋白質複合体を
提供することにある。
本発明の更に他の目的は新規な金属キレート蛋白質複
合体を提供することにある。
本発明の他の目的および利点は発明の詳細な記載が進
むにつれて明らかになるであろう。
図面の簡単な説明 本発明のこれ等の目的、特徴および付随する利点の多
くは第１図の化合物の製造に対する添付図面に関連して
考慮する場合以下の詳細な記載を読むと一層よく理解さ
れる： 第１図はR1がパラ−ニトロベンジルであり、Ｒ3,4が
以下に記載するようなアリール／アルキル基である多置
換ジエチレントリアミンの製造の反応経過を示すＲ3,4
がメチル基である場合、第１図の式で得られるジエチレ
ントアミン生成物は第１表の化合物（ｄ）である。
第２図はPGが保護基（後記）、ＲおよびＲ′がそれぞ
れ以下に記載するようにパラーニトロベンジル基または
アリール／アルキル基である多置換ジエチレントリアミ
ンの製造の反応過程を示す。Ｒがパラーニトロベンジル
でＲ′がメチルである場合、生成物ジエチレントリアミ
ンは第１表の化合物（ａ）である。ＲがメチルＲ′がパ
ラーニトロベンジルである場合には生成物ジエチレント
リアミンは第１表の化合物（ｃ）である。
第３図はPGが保護基（後記）、Ｒがパラ−ニトロベン
ジル,R′,R″がそれぞれ以下に記載するようにアルキル
／アリール基または水素原子である多置換ジエチレント
リアミンの製造の反応経過を示す。Ｒ′がＨでＲ″がメ
チルである場合、生成物ジエチレントリアミンは第１表
の化合物（ｂ）である。
発明の詳細な記載 ここで使用するすべての技術的または化学的用語は、
特記せぬ限り、本発明が属する技術の分野における通常
の知識を有するもにより普通理解されると同じ意味を有
する。ここに記載する方法および材料と同様または均等
のすべての方法および材料は本発明の実施または試験に
使用することができるが、好ましい方法および材料を記
載する。以下に挙げるすべての文献は参考のために記載
する。
炭素主鎖が多置換ではあるが、少なくもも２個の置換
基を有するジエチレントリアミンの合成を意図する。こ
の合成は適切な置換アルファーアミノ酸アミドを置換ア
ミノ酸とカルボジイミドカップリングし次いで生成した
アミドをトリアミンに還元することにより行う。
適当に置換したアルファーアミノ酸を置換アルファー
アミノオキシムと縮合させ次いで所望のトリアミンに還
元せんとする。
本発明の第１の観点は炭素主鎖上で少くとも２個の側
鎖（多置換）、その一つがニトロ置換基を有する側鎖に
より置換されるジエチレントリアミン五酢酸を含む特に
有用な系列の二官能キレートを意図する。これ等のキレ
ートは適当に多置換したジエチレントリアミンのハロ酸
アルキル化により製造することができる。
他の観点で、本発明は炭素主鎖上で少くとも２個の置
換基でその一つの置換基はニトロ，アミノ基を有するか
またはイソシアネート若しくはＮ−ヒドロキシサクシン
イミドエステル置換基である置換基で置換された一連の
ジエチレントリアミン五酢酸キレートを意図する。
尚他の観点で、本発明は炭素主鎖上で少くとも２個の
置換基により置換された一連のジエチレントリアミン五
酢酸キレートの蛋白質複合体を意図する。
本発明の尚他の観点は炭素主鎖上で水素原子ではない
少くとも２個の置換基により置換された一連のジエチレ
ントリアミン五酢酸キレートまたは金属キレートを蛋白
質に複合化することにより形成される金属キレート複合
化蛋白質を意図する。
更に特に、本発明は生物学的活性および特異性を保持
し、偶然に結合した金属を実質的に有さず、且つ従来技
術で知られている複合体より生体内で一層よく蛋白質に
結合する金属を保持する金属キレート複合化蛋白質、特
に金属キレート複合化モノクロナール抗体または抗体フ
ラグメントを提供する。生体内で遊離される金属を血液
中に存在するトランスフェリン、メタロチオネンまたは
他の金属結合性蛋白質（例えばフェリチン）により結合
することができる。かかる金属はしばしば長時間血液循
環系に保持され網内系（RES）の種々の器官に、骨、骨
髄または肝臓に向って離れる。かかるくクリアランスの
結果、肝臓、脾臓、腎臓、骨または骨髄における金属が
一定の濃度となる。肝臓、脾臓、骨、骨髄または腎臓の
如き標的とされない器官における放射性金属の無作為の
長時間循環または放射性物質の濃度は極めて望ましくな
いことは明らかである。本発明の目的はかかる重要な問
題を軽減することにある。
金属、特に放射性金属を蛋白質に複合化するのに有用
であることが示された多数の二官能キレートは診断に用
いるため生体内において金属を適当に保持するのには十
分強くない。従ってインジウムの二官能EDTA錯体は試験
動物マウスにおいてインジウムの無水物結合DTPA錯体の
如く、脱金属する（ブレッチビール等インオーガ．ケ
ム.,25,1986）。
先行技術のDTPA含有蛋白質複合体はDTPAのカルボキシ
レート基を介してまたはDTPAの窒素に結合する側鎖上の
官能基を介してDTPAを結合した。これ等のキレートは本
発明における主鎖多置換キレートの如く安定でない。主
鎖一置換DTPAもまた蛋白質に結合されたがこのキレート
のイットリウムおよびビスマス錯体は本発明におけるキ
レートの錯体の如く安定でない。
本発明の好適例および詳細な説明を次に記載し、利用
を実施例により更に記述する。
発明の好適例 本発明におりて、二官能キレートは、その構造の一部
分として、キレート主鎖の炭素原子に結合する側鎖を有
しこれがキレートから金属を遊離するのに必要とされる
キレート構造の配座開放（opening）を立体的に妨害す
るのに役立つ。種々の側鎖の任意のものを使用すること
ができ、選択はこの技術の分野における通常の知識を有
するものの範囲にある。側鎖は炭素に対する炭素または
エーテル結合等を含むことができる。炭化水素側鎖が好
ましい。例えばエーテル結合に存在する異原子がある場
合には、これ等は鎖長の決定の目的に炭素原子として教
えることができる。かかる構造は、制限なく１〜約15個
の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキル基例えば
メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル等；
エテン、プロペン、ブラン等を含む１〜約15個の炭素原
子を有する直鎖または分岐鎖アルケン基およびそのアイ
ソマー；フェニル、ジフェニル、ナフチル等を含むアリ
ール基；および１個以上の分岐または直鎖アルキレン基
における１〜約15個の炭素原子を有するベンジル、フェ
ニルエチレン、フェニルプロピレン等を含むアリールア
ルキレン基を含む。側鎖は活性基、特に水素および水素
化物試験により容易に還元されるものを実質的に有する
べきではない。好ましくは側鎖には５個以下の炭素を有
する直鎖または分岐鎖アルカン、ベンジルおよびフェニ
ルエチレンが含まれる。最も好ましいかかる側鎖は第２
表および式2,3に示すようにメチル基である。
本発明における二官能キレートはその分子構造の他の
部分にキレート主鎖の炭素原子に結合し且つ蛋白質のア
ミノ酸残基と直接反応して共有結合を形成する反応性官
能基を持つ置換基を有する。かかる反応性官能基にはイ
ソチオシアネート、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミドエス
テルおよびハロアセトアミドが含まれる。本発明の実施
によると反応性官能基はキレート主鎖に直接結合するか
または広範囲の側鎖を介して結合することができる。広
範囲の側鎖の任意のものを用いることができ特定なもの
の選定は当業者が選定し得る範囲内にある。炭化水素側
鎖が好ましい。異原子が、例えばエーテル結合に存在し
炭素主鎖を中断する場合、異原子は鎖長の決定の目的の
ため炭素原子として数える。かかる構造は、制限なし
に、１〜約15個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖
アルキレン基例えばメチレン、エチレン、プロピレン、
ブチレン、イソプロピレン等；エテニレン、プロペニレ
ン、ブテニレン等を含む１〜約15個の炭素原子を有する
直鎖若しくは分岐鎖アルケニレン基およびそのアイソマ
ー；フェニレン、ジフェニレン、ナフチレン等を含むア
リーレン基；および１個以上の分岐鎖または直鎖アルキ
ル基におけるベンジル、フェニルエチレン、フェニルプ
ロピレン等を含む１〜約15個の炭素原子を有するアルキ
ルアリール基を含む。この側鎖の本質的目的はキレート
と官能基との間の安定な結合として役立つだけである。
側鎖は上記の所望の官能基以外の活性基を本質的に含む
べきではない。好ましい側鎖には置換直鎖アルカン、ベ
ンジルおよびフェニルエチレンが含まれる。
本発明の好ましい観点において、式2,3の多置換DTPA
誘導体の製造に際し中間体として第１表の置換基を有す
る、式（１）に示す構造のジエチレントリアミンが望ま
しい。
好ましいキレートは式２で表わされる。
式２において、Ｘは好ましくはハロアセトアミド、イ
ソチオシアネートまたはＮ−ヒドロキシサクシンイミド
でR1〜R4,R1′〜R4′は水素原子、または５個以下の炭
素原子を有するアルキル基で、アイソマー構造もしくは
置換に関係なく任意のものでよくｎ＝５である。
本発明の他の好ましい観点において、式３に示す構造
のキレートが好ましく、この場合X,R1〜R4,R1′〜R4′
およびｎは式２のものと同じである。
本発明を実施するのに最も好ましいものは、置換基が
第２表に示すもである式２および３の化合物で化合物２
（ａ）、２（ｂ）、２（ｃ）および２（ｄ）として示
す。
第１表 式１の置換基 R1,R1′ R2,R2′ R3,R3′ R4,R4′ 1(a) p-NO２-Bz,H H,H CH3,H H,H 1(b) p-NO２-Bz,H H,H H,H CH3,H 1(c) H,H p-NO２-Bz,H H,H CH3,H 1(d) p-NO２-Bz,H H,H CH3,H CH3,H 表中のｐ−NO2−Bzはパラ−ニトロベンジル基を示
す。
第２表 R1,R1′ R2,R2′ R3,R3′ R4,R4′ ２（ａ） SCNBz,H H,H CH3,H H,H ２（ｂ） SCNBz,H H,H H,H CH3,H ２（ｃ） H,H SCNBz,H H,H CH3,H ２（ｄ） SCNBz,H H,H CH3,H CH3,H 表中のSCNBzはパラ−イソチオシアナトベンジル基を
示す。
活性側鎖のキレート炭素主鎖への導入は先行技術に記
載されている（ミーレス等、アナル・バイオケム.142,6
8,1984）。
DTPAの殆ど全部の合成は終りから２番目の反応工程と
して親ジエチレントリアミンのアルキル化を有する。従
って炭素主鎖多置換DTPAの製造方法は親ジエチレントリ
アミンの製造に帰する。
置換ジエチレントリアミンの従来の製造方法は第１図
に示してある。この方法はアミノ酸エステルとエチレン
ジアミンを反応させ次いでジエチレンジアミンに還元す
る。
第１図の反応を使用してR1がパラ−ニトロベンジルで
R3,R4がメチルである第１表の新規な化合物１（ｄ）を
得ることができる。この反応系に従って、2,3−ジアミ
ノブタンをｐ−ニトロベンジルアラニン メチルエステ
ルと反応させ生成物をジボランで還元して２（ｄ）の親
ジエチレントリアミンを得る。２（ｄ）を製造するた
め、親ジエチレントリアミンの窒素をブロモ酢酸でアル
キル化し、次いでニトロ基を水素で接触還元し、生成し
たアミンをチオホスゲンと反応させる。
然し第１図の方法を使用して第２表の化合物２（ａ）
および／または２（ｂ）を製造する場合は、1,2−ジア
ミノプロパンとｐ−ニトロフェニルアラニン メチルエ
ステルとの反応、続く上記の還元、アルキル化、還元お
よびチオカルボキシル化工程の結果、幾何異性体である
化合物２（ａ）および２（ｂ）の混合物が得られる。異
性体の分離は現在有効な方法により実施されない。第１
図の方法を改良しても単離した２（ａ）および２（ｂ）
の純粋な試料を製造するのに用いることはできない。
２（ａ）および２（ｂ）の純粋な試料が製薬用に必要
である場合に、多置換DTPAの親ジエチレントリアミンを
製造するため第２図、第３図に示す新規な方法が考え出
された。
化合物（ａ）を製造するため第２図の方法に従って、
アミノ−保護α−アミノ酸、この場合はｔ−ブチルオキ
シカルボニル−ｐ−ニトロフェニルアラニンをアミノ酸
アミド、この場合は、アラニン アミドに、カルボキシ
レートを適当な試薬によって活性化することにより、カ
ップリングする。かかる試薬は業界で知られており特に
好ましくは1,3−ジシクロヘキシカルボジイミド若しく
は多の他のカルボジイミド、カルボキシカルボン酸エス
テル、混合無水物等が含まれる。カップリングした生成
物は次いでトリフルオロ酢酸若しくは他の脱保護用試薬
により脱保護し、次いでジボランで還元して２（ａ）の
親ジエチレントリアミンを生成する。標準のアルキル
化、還元およびチオカルボニル化工程により幾何学的に
純粋な２（ａ）が得られる。化合物２（ｃ）を類似する
過程により製造することができる。
２（ｂ）の親ジエチレントリアミンを製造するため、
第３図の新規な合成方法が考え出された。第３図に示す
方法に従って、アミノ保護α−アミノ酸、ｔ−ブチルオ
キシカルボニル−ｐ−ニトロフェニルアラニン、をα−
アミノケトンに、この場合アミノアセトンに、カルボキ
シレートを適当な試薬で活性化することによりカップリ
ングする。有用なカップリング試薬は業界で知られてお
り特に好ましくは1,3−ジシクロヘキシルカルボジイミ
ドまたは他のカルボジイミド、カルボキシカルボン酸エ
ステル、混合無水物等が含まれる。次いでケトン生成物
をメトキシルアミンとの反応により対応するメチルオキ
シムエーテルに転化する。生成したオキシムを脱保護し
還元して２（ｂ）の親ジエチレントリアミンを得る。ア
ルキル化、還元およびチオカルボキシル化の標準反応過
程により幾何学的に純粋な２（ｂ）が得られる。また３
−アミノ−２−ブタンがアミノアセトンとおきかわる場
合第３図に示す反応および連続工程を使用して化合物２
（ｄ）を製造することができることは勿論である。便宜
のため、α−アミノケトンをそれらのアルキルオキシム
エーテル、好ましくはメチルエーテルに、第３図におけ
るカップリング工程前に、メトキシルアミン等で処理す
ることにより、転化することができる。
式２および３のチオシアネートキレートおよび第２表
のキレートを複合化する方法は、業界でよく知られてお
り、文献に記載されている〔ブレッチビール等スプレ
（supra）〕 金属キレート蛋白質複合体に用いるための蛋白質の選
定は絶対的なものでない。任意の望ましい蛋白質を複合
体を形成するために用いることができる。モノクロナー
ル抗体が診断用および治療の目的に金属キレート蛋白質
複合体の形成用の好ましい蛋白質としてしばしば選定さ
れることは勿論である。たの適当な蛋白質にはポリクロ
ナール抗体、抗原、血液蛋白質等が含まれる。一般にキ
レートおよび蛋白質は蛋白質の濃度により決定されるが
1:1より大で約100:1より小であるモル比で混合する。約
2:1〜約4:1の比が好ましいが、反応条件の選定は当業者
の選定しうる範囲内である。
本発明を実施するに当たって蛋白質と結合させるのに
好ましい金属はキレートを蛋白質に結合する前または後
でキレートすることができる。方法の選定は使用する特
定金属の加水分解性向により、当業者には充分選定され
る。
本発明を実施する際、即ち、蛋白質複合体を形成する
ためハロアセトアミド、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド
エステルまたはイソチオシアネートを使用する場合に
は、複合体の形成に触媒は必要でなく、反応のpHは約６
〜9.5が望ましい。触媒は必要でないが、使用すると３
〜４倍またはそれ以上複合化反応の速度を増すことがで
きる。適当な触媒は一般の塩基触媒でトリエチルアミ
ン、N,N−ジメチルアミノピリジン等が含まれる。
任意適当な金属をキレートに用いることができかかる
金属には常磁性を示す金属、蛍光性金属および放射性金
属が含まれる。代表的常磁性金属にはガドリニウムおよ
び鉄があり、蛍光性金属にはランタニド系の数種の金属
例えばテルビウムおよびニーロピウムがあり；放射性金
属には放射性核種のビスマス、インジウム、イットリウ
ムおよびスカンジウムが含まれる。
金属キレート化は水溶液、好ましくは約１〜約７のp
H、最も好ましくは約４〜約６のpHを有する希酸媒質中
で実施される。約20℃〜27℃若しくはそれ以下（凍結直
前まで）の周囲温度を金属キレート化に用いるのが好ま
しい。固形または溶液とした任意適当な金属塩を溶液中
で遊離のキレートと接触させるかまたはキレート化した
金属を形成するために蛋白質に結合させる。金属の使用
量は痕跡量からキレートと等モル以上の分量とすること
ができる。広範囲の金属塩、例えば硝酸塩、沃化物、塩
化物、クエン酸塩、酢酸塩等を使用することができる。
任意所定の金属に対する適当な金属塩の選定並びに任意
所定の金属に対する特に適するキレートの選定は当業者
が選定し得る範囲のものである。本発明の実施はむしろ
少量の金属および蛋白質を処理して金属キレートおよび
金属キレート蛋白質複合体の形成を可能にすることは明
らかである。
予め形成した金属キレートを蛋白質と結合しなければ
ならない場合には、この際キレート化した金属を水溶液
中で所望蛋白質と約６〜11のpH、最も好ましくは約７〜
約9.5のpHで混合する。pHは重炭酸塩緩衝液の如き緩衝
液で調整するのが好ましい。適当な緩衝液の選定も当業
者が選定し得る範囲に入る。溶液の温度は凍結直前から
キレートが不安定になるかまたは蛋白質が変性する温度
までの範囲とすることができる。37℃以上の温度がしば
しば蛋白質を変性する傾向がある。
本発明における金属キレート蛋白質複合体は、所要に
応じて、そのまま適当なpHに調整して使用することがで
る。或いはまた、複合体を複合化してないキレートまた
は任意の副反応による生成物から精製することが望まし
い場合には、生成物を精製することができる。カラムク
ロマトグラフィおよび高性能液体クロマトグラフィ（HP
LC）を含む業界で知られている種々の標準的精製技術を
使用することができる。
本発明によれば放射性キレート複合化モノクロナール
抗体を体内に導入し標的領域において濃厚にすることが
できる生体内治療法を意図することができる。安定なDT
PA錯体を形成し細胞毒性ベーター粒子、陽電子、オージ
ェ電子およびアルファー粒子を放出する広範囲の放射性
アイソトープがある。アイソトープを放出する有用なベ
ーター粒子にはSc−46,Sc−47,Sc−48,Ga−72およびGa
−73並びにＹ−90が含まれる。Bi−212は有用なアルフ
ァーエミッターである。治療効果は複合体が標的の細胞
に近いかまたは接触し結合する場合に起こる。細胞の死
は細胞に接近して位置する放射性金属の放射される場合
の直接のまたは間接の結果とすることができる。
本発明のこの観点における利点はいくつかある。第一
に複合化したモノクロナール抗体の高度の特異性は全放
射投与量を最小にする。標的細胞に対する十分な放射を
使用する必要がある。更に、一般に放射性金属キレート
を人体から速やかに浄化して複合化した固体を分裂させ
る必要がある。アイソトープは短時間存在することがで
きアイソトープがキレートに保持される親和性定数は極
めて大でこの結果金属が安定に結合される。さらに、放
射性金属の使用量が最小となることにより、放射性金属
キレート複合化抗体を製造し投与する人に対する放射の
危険が著しく低減する。
本発明にかかる使用する放射性金属キレート複合化モ
ノクロナール抗体の特性によって、治療中の組織の損傷
または全体の身体への投与量は現在使用されている放射
治療法例えばアイソトープ インプラント、生体外放射
治療、およびヨードー131標識付けしたポリクロナール
抗体または自己抗体を用いる免疫放射治療に比べて著し
く低い。更に、標的放射生物学の生物学および物理学的
の半減期が制御され、全体の身体への放射の影響が最小
になる。放射が特定の細胞型（例えば、腫瘍性細胞）を
標的とするので、治療投与量は局限されるかまたは転移
する悪性細胞に特異的に送達される。特に転移した細胞
に治療放射の有効量を供給する放射性金属キレート複合
化モノクロナール抗体の能力もまた独特で癌の治療に特
に有効である。
他の例において、本発明によれば、生体内診断法を意
図することができ、この方法は金属キレート複合化モノ
クロナール抗体を体内に導入し、複合体を十分な時間局
限化しその程度および局限化の部位を確認する。本発明
によればまたキレート複合化モノクロナール抗体を使用
する生体内分析法を意図することができる。本発明にお
ける複合化抗体は偶然にまたは弱くキレートした金属を
実質的に有しない。本発明における抗体に複合化するキ
レートはジエチレントリアミン五酢酸（DTPA）の誘導体
である。
他の診断および治療技術はここに参考のため記載する
米国特許第4,454,106号に記載されている。
次の実施例は例示の目的だけに用い本発明を制限せん
とするものではない。
実施例 実施例１ 1,（２）−メチル−４−ｐ−イソチオシアナトベンジ
ル）ジエチレントリアミン五酢酸の製造。（第２表の化
合物２（ａ）,2（ｂ）の幾何異性体の混合物）。
メチルｐ−ニトロフェニルアラニン ヒドロクロリド 乾燥メタノール（200ml）を−10℃に冷却した二つ口
丸底フラスコ中でHCl（ガス）で飽和した。ｐ−ニトロ
フェニルアラニン（10.0g,47.6ミリモル）を一回で添加
し約18時間かきまぜ、溶液を回転蒸発機で乾燥近くまで
蒸発させ沈澱した生成物をブフナ漏斗に収集した。約50
℃で真空下乾燥させた後、収量は10.97g（88.3％）であ
った。遊離アミノエステルのTLC（薄層クロマトグラフ
ィ）をCHCl3:MeOH（4:1）で行いRf＝0.85〜0.88であ
た。1H NMR220MHz,D2O,pH1.5）8.20（d,2 J＝10.0）,7.
53（d,2,J＝10.0）,4.55（t,1,J＝5.00）,3.84（s,3）,
3.43（m,2）;CI−MS 225（（Ｍ＋１）/Z）。
C10H13N2O4C1に対する分析、計算値:C,46.07;H,5.03;N,
10.74;C1,13.60。
実験値:C,45.87;H,5.08;N,10.48;C1,13.58。
Ｎ−（２−アミノ−〔１（２）−メチル〕エチル）−ｐ
−ニトロフェニルアラニン アミド メチルｐ−ニトロフェニルアラニン ヒドロクロリド
（9.80g,37.63ミリモル）をトリエチルアミン（6.78ml,
45.2ミリモル）で処理してアミノエステルを遊離させ
た。溶媒を除去した後、残留油状物をメタノール（5m
l）中1,2−ジアミノプロパン（50ml）に室温（20゜〜24
℃）で激しくかきまぜながら滴下した。18時間かきまぜ
た後、過剰の溶媒を回転蒸発機により50℃0.01mの真空
下で一定重量（10.01g,96％）に達するまで除去した。
生成物のTLCをシリカ上CHCl3:MeOH（4:1）で行いRf＝0.
10〜0.12であった。1H NMR（220MHz,D）,pH10.0）8.06
（d,2,J＝7.5）,7.41（d,2,J＝7.5）,3.72（t,1,J＝8.
0）,3.18−2.73（m,5）,0.918（m,3）;CI−MS 267
（（Ｍ＋１）/z）。
C12H18N4O3に対する分析、計算値:C,54.53;H,6.77;N,2
1.05;実験値:C,54.33;H,6.76;N,20.92。
１（２）−メチル−４−（ｐ−ニトロベンジル）ジエチ
レン トリアミン トリヒドロクロリド Ｎ−（２−アミノ−〔１（２）−メチル〕エチル）−
ｐ−ニトロフェニルアラニン アミド（9.90g,37.2ミリ
モル）を１モルのBH3THF（水素化硼素テトラヒドロフラ
ン）（200ml）で還元した。１の三つ口丸底フラスコ
に還流冷却器、隔壁、アルゴン入口およびバブラ−出口
を取付け火炎で乾燥した。アミド（8.12g,38.9ミリモ
ル）を乾燥テトラヒドロフランTHF（150ml）の入った反
応フラスコ中に入れ−10℃に冷却した。次いで、１モル
のBH3THF溶液（200ml）を注射器で添加した。反応溶液
を−10℃で１時間かきまぜ、次いでおだやかに18時間還
流し、然る後これを−10℃に冷却し乾燥メタノール（25
ml）を注入した。溶液を室温にしほぼ乾燥するまで溶媒
を除去した。再びメタノール（25ml）を添加し溶液を蒸
発させた。ボラン凝集体の開裂はHCl飽和エタノール性
溶液の激しい還流と濃HCl水溶液（5ml）の添加を必要と
した。生成物がきれいに沈澱し０℃に６時間冷却した後
収集し真空下乾燥した（11.60g,86.3％）。CI−MS362
（（Ｍ＋１）/z）。C12H23N4O2Cl3に対する分析、計算
値:C,39.85;H,6.65;N,15.49。実験値:C,39.99;H,6.64;
N,15.14。
１（２）メチル−４（ｐ−ニトロベンジル）ジエチレン
トリアミン五酢酸：親ジエチレントリアミン（1.0g,2.7
7ミリモル）をブロモ酢酸（5.767g,41.5ミリモル）およ
び7N KOH（13.04ml）で処理した。反応溶液を室温で72
時間かきまぜた。溶液を濃HBrでpH1.5の酸性としエーテ
ルで抽出した（３×100ml）。水溶液を蒸発させ固体と
し2.6×30cmイオン交換カラムAG50W X8,200〜400メッシ
ュ,H+形〔ビオラド（Bio Rad）社、リッチモンドCA〕上
に負荷し水洗して未反応物質、加水分解生成物および塩
を除去した。粗生成物を2Nアンモニア水溶液で溶離し
た。粗生成物を更に10×250mm,C18逆相カラムを使用す
るHPLCにより100％メタノールに対し0.05モルのトリエ
チレアンモニウム アセテートの25分変化度で3ml/分の
流速を用いて精製した。生成物は9.1分の滞留時間を有
した。HPLCからの画分を混合し上記のAG50W X8カラムで
再びクロマトグラフィーしてトリエチルアンモニウムア
セテート緩衝液を除去した。生成物を収集し溶媒を蒸発
させて固形物（0.648g,43.2％）を得た。
１（２）−メチル−４−（ｐ−アミノベンジル）ジエチ
レントリアミン五酢酸 親ニトロベンジルDTPA（100.0m
g,0.1845ミリモル）をPd/Cを用いて水素化した。水ジャ
ケット付三つ口フラスコ（50ml）に10％Pd/C（43mg）、
H2O（5ml）を供給しかきまぜ棒を取付した。中心の頚部
を常圧水素化装置に取付け、一側の頚部に注入弁を取付
け、残りの頚部をしっかり栓をした。組立てた水素化装
置を排気し水素でフラッシュしこの間反応フラスコを４
℃に冷却した。ニトロ化合物を水（10ml）に溶解し５モ
ルNaOHを添加してpHを10.0にした。溶液を反応フラスコ
に注入し水素の消費量を監視した。反応後、混合物を微
細フリットとセライト535（フルカAG,スイス国）を介し
て濾過した。溶媒を除去し残留物を真空下18時間乾燥し
収率はほぼ定量的であった。
１（２）−メチル−４−（ｐ−イソチオシアナトベンジ
ル）ジエチレントリアミン五酢酸（第２表の化合物２
（ａ）,2（ｂ）の混合物）。アニリン前駆物質と上記化
合物２（ａ）,2（ｂ）の親化合物（0.095g,0.1845ミリ
モル）を水（5ml）pH8.5に溶解し、チオフォスゲン（0.
212g,1.845ミリモル）のCHCl3（10ml）溶液で処理する
ことにより粗生成物に転換した。この粗生成物を１×30
cmフロリシル（Florisil）（シグマ，セント．ルイス,M
o）上でカラム クロマトグラフィしCH3CN:H2O（30:8）
で溶離し生成物が最初に溶離した。溶媒を最小加熱で除
去し残留する水溶液を一夜凍結乾燥した。シリカ上でCH
3CN:H2O（30:8）を使用して得た生成物のRfは0.20であ
った。IRスペクトルはイソチオシアネートに対し2100cm
-1に特徴ある吸収を示した。
実施例２ 実施例１の方法において合成の第２段階で1,2−ジア
ミノ プロパンの代わりに2,3−ジアミノブタンを用い
た以外は同様にして第２表の化合物２（ｄ）を製造し
た。
実施例３ １（ｐ−イソチオシアナトベンジル）−３−メチルDT
PA。
（単−幾何異性体として第２表における化合物２（ａ）
の合成） ｔ−ブトキシカルボニル−（d,l）−ｐ−ニトロフェニ
ルアラニン:p−ニトロフェニルアラニン（7.94g,37.8ミ
リモル）を50％ジオキサン水溶液（60ml）に溶解し、ト
リエチルアミン（7.9ml,56.7ミリモル）を添加した。
〔２−（ｔ−ブトキシカルボニルオキシアミノ）２−フ
ェニルアセトニトリル〕（10.24g,41.6ミリモル，アル
ドリッヒ ケミカル コンパニー）を添加し溶液を２時
間かきまぜた。酢酸エチル（100ml）および水（50ml）
を添加し内容物を分離漏斗に注入した。水性相を保持し
酢酸エチル（100ml）で２回抽出した。水性相を０℃に
冷却し、pHを3NHClで2.0に調整し、この際形成された沈
澱を集め真空下乾燥した。濾液を酢酸エチルで２回（10
0ml）抽出し、MgSO4上で乾燥し溶媒を除去し乾燥した。
２つの画分は同一であることが立証され混合した（11.0
g,94.0％）。化合物の融点は165℃であった。
1H NMR（220MHz,DMSO−d6）8.036（d,2J＝8.00）,7.2
9（d,2,J＝8.00）,5.38（d,1,J＝8.00）,4.44（m,1）,
3.25（dd,1,J＝13.0,6.00）,3.05（dd,1,J＝13,0,6.0
0）,1.39（s,9）:CI−MS 311（（Ｍ＋１）/z）。
ｔ−ブトキシカルボニル−（dl）−ｐ−ニトロフェニル
アラニニル−（１）−アラニンアミド： BOC−（dl）−ｐ−ニトロフェニルアラニン（10.0g,3
2.26ミリモル）,1−アラニンアミド ヒドロブロミド
（5.45g,32.26ミリモル），トリエチルアミン（4.487m
l,32.36ミリモル）および１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール（3.84g,28.4ミリモル）を酢酸エチル（400ml）
に溶解した。ジシクロヘキシルカルボジイミド（7.30g,
35.44ミリモル）の酢酸エチル（25ml）溶液を添加し反
応混合物を18時間かきまぜ然る後３滴（約0.15ml）の濃
酢酸を添加した。ジシクロヘキシル尿素を濾別し濾液を
飽和塩化ナトリウム溶液（100ml）,1NHCl（３×100m
l），飽和塩溶液（100ml）,5％NaHCO3（３×100ml）お
よび飽和塩溶液（100ml）で順次抽出した。有機溶液をM
gSO4上で乾燥し、濾過し、50mlに減した。石油エーテル
（50ml）を添加しフラスコの内容物を０℃に12時間冷却
した。沈澱をブフナ漏斗上に集めて真空下乾燥した（1
0.55g,86.1％）。
1H NMR（220MHz,CDCl3/d6−DMSO）8.08（d,2,J＝9.
0）,7.91（m,1）7.45（d,2,J＝9.0）,7.14（d,1,J＝12.
0）,6.68（m,2）,4.35（m,2）,3.17（dd,1,J＝15.0,6.
0）,2.98（dd,1,J＝15.0,8.0）,1.38（s,9）;CI−MS 38
1（（Ｍ＋１）/z）。
C17H24N4O6に対する分析、計算値:C,53.68;H,6.31;N,
14.73。実験値:C,53.92;H,6.59;N,14.84。
２−メチル−４−（ｐ−ニトロベンジル）ジエチレント
リアミントリヒドロクロリド 上記ジペプチド アミド（5.10g,13.42ミリモル）を
トリフルオロ酢酸（50ml）で１時間処理することにより
脱保護し然る後溶液を回転蒸発機で植ほぼ乾燥するまで
蒸発させた。メタノール（50ml）を添加し溶液を取出し
て乾燥させた。生成した固体を0.01mm50℃に８時間保持
して残留する酸の除去を確保した。
生成したアンモニウム塩（5.10g,13.42ミリモル）のT
HF（50ml）溶液をコンデンサを取付けた250mlの火炎乾
燥した三つ口フラスコにアルゴン雰囲気下で添加した。
フラスコを０℃に冷却し１モルのBH3THF（30.8ml）を注
射器により添加した。反応溶液を２時間加熱し激しく還
流させ次いで室温で更に２時間かきまぜた。反応フラス
コを０℃に冷却しメタノール（25ml）を緩徐に注入して
過剰の水素化物を分解した。溶液を乾燥するまで減ら
し、無水エタノール（50ml）に供給し、濃HCl（50ml）
を添加した。溶液を２時間激しく還流させ次いで乾燥さ
せた。残留物を水に溶解し、1.5×20cm AG50W X8,H
+形，イオン交換カラムに負荷し、溶離剤が中性になる
まで水洗した。生成物を濃塩化水素酸（125ml）を用い
てカラムから溶離し、10mlまで濃縮し、一夜凍結乾燥し
た。残留する固体はほぼ純粋であることを確かめた（1.
823g,66.2％） 1H NMR（500MHz,D2O,pH1.0）8.268（d,2,J＝8.0）,7.
614（d,2,J＝8.0）,4.106（m,l）3.773（m,1）,3.680−
3.450（m,3）,3.393（m,1）,3.312（m,1）,3.212（m,
1）,1.493（br.t,3）；（500MHz,D2O,pH11.0）8.091
（d,2,J＝8.0）,7.438（d,2,J＝8.0）,3,167（m,1）,2.
910（m,1）2.75−2.45（極めて複雑な多重線,6）,1.031
（br.s,3）;CI−MS 253（（Ｍ＋１）/z）。
C12H23N4O2Cl3に対する分析、計算値:C,39.85;H,6.3
6;N,15.49。実験値:C,39.88;H,6.36;N,15.28。
このジエチレントリアミンの化合物２（ａ）への転化
は実施例１に記載した方法により達成した。
実施例４ １−ｐ−イソチオシアナトベンゼン−４−メチルDTPA
〔第３図に示す反応経過に従って純粋な幾何異性体とし
て製造される化合物２（ｂ）〕 BOC−ｐ−ニトロフェニルアラニン２−オキソプロピル
アミド ｔ−ブチルオキシカルボニル−ｐ−ニトロフェニルア
ラニン（4.42g,14.26ミリモル），アミノアセトン ヒ
ドロクリド（1.56g,14.26ミリモル）、トリエチルアミ
ン（1.44g,14.26ミリモル）,1−ヒドロキシベンゾトリ
アゾール（1.69g,12,55ミリモル）を、酢酸エチル（400
ml）に溶解した。1,3−ジシクロヘキシルカルボジイミ
ド（3.23g,15.68ミリモル）の酢酸エチル（25ml）溶液
を添加し溶液を18時間かきまぜた。氷酢酸（0.2ml）を
添加し溶液を濾過した。濾液を飽和塩溶液（100ml）、1
NHCl溶液（３×100ml）、飽和塩溶液（100ml）、５％重
炭酸塩溶液（３×100ml）および飽和塩溶液（100ml）で
抽出した。有機層をMgSO4上で乾燥し、濾過し50mlに濃
縮した。石油エーテル（50ml）を添加し溶液を12時間０
℃に冷却した。沈澱した生成物を集め真空下で乾燥し
た。
BOC−ｐ−ニトロフェニルエラニン−２−（オキシムメ
チルエーテル）プロピルアミド ケトン（200g,5.47ミリモル）をピリジン（10ml）に
溶解しメトキシルアミン ヒドロクロリド（0.914g,10.
95ミリモル）を添加した。溶液を12時間かきまぜ然る後
溶媒を除去した。残留物を最少量の酢酸エチルに溶解し
石油エーテルを添加することにより晶出しオキシムエー
テルアミドを得た。
１−メチル−４−（ｐ−ニトロベンジル）ジエチレント
リアミン トリヒドロクロリド 上記オキシム エーテル（3.00g,7.61ミリモル）を適
当なトリフルオロ酢酸（10ml）を用いかきまぜて脱保護
した。溶媒を高真空回転蒸発により除去した。
残留物をテトラヒドロフラン（50ml）に溶解し還流冷
却器、アルゴン入口およびバブラー出口および注入口を
取付けた火炎乾燥したフラスコに添加した。溶液を０℃
に冷却し１モルBH3THF（200ml）を注射器により添加し
た。６時間還流して反応を行い０℃に冷却し、メタノー
ル（25ml）を添加しすべての過剰水素化物を分解した。
溶液を回転蒸発機で蒸発させてほぼ乾燥させ残留物をメ
タノール（100ml）中に供給した。エタノール溶液をHCl
（ガス）で飽和させ４時間還流し、然る後溶液を０℃で
18時間冷却した。沈澱を集め、ジエチルエーテルで洗浄
し、真空下で乾燥した。
このジエチレントリアミンの化合物２（ｂ）への添加
を実施例１に記載した方法により達成した。
参考例１ ロウシャー・ロイケミア・ウィルス（Rauscher leuk
emia virus）に対し特有のモノクロナール抗体に以下
の如く第２表のキレートａおよびｂの混合物を用いて標
識付けした。抗体を約8.5のpHを有する普通の緩衝塩溶
液中に懸濁させた。キレートを水溶液に添加した。この
蛋白質溶液を反応一夜後金属を含まない0.05モルクエン
酸塩、0.15モルNaCl緩衝液、pH5.5に対して透析により
精製した。金属で標識付けする前に、蛋白質を0.02モル
のＮ−モルホリノエタンスルホン酸および0.08モルの酢
酸塩を含む溶液、pH5.9に対して透析した。イットリウ
ム−90で標識付けするため、蛋白質溶液を約４〜5.5のp
Hのアイソトープ酢酸塩溶液と反応させTSK 3000サイズ
の排除カラム（ベックマン社、バークレイ,CA）を通す
ことおよび透析により精製した。このようにして得た標
識付けした抗体を脾臓がロウシャー・ロイケミア・ウィ
ルスにおかされたマウスに注射した場合、抗体が脾臓に
おいて局限化され注射薬量の30％が腫瘍状の脾臓に結合
しているのが見られ僅か１〜２％の放射性薬量が骨髄が
破壊されることになる骨内に見出された。これに対し、
従来のDTPAの混合無水物を用いて標識付けした抗体は上
述の如くＹ−90で標識付けし同じマウス腫瘍試験動物に
注射した場合もほぼ同じ程度に脾臓において局限化され
たが注射した放射性薬量の約８〜12％が骨髄に見出され
望ましくなかった（データは示さず）。
別の研究で、アイソトープの沃化物溶液を第２表に記
載したようなキレート２（ａ）,2（ｂ）を用いてつくっ
た抗体との反応によりビスマス−212若しくはBi−206で
標識付けした。またこれ等の調剤をマウスに注射したと
ころ組織分布データは薬量の５〜10％が腎臓中に見出さ
れることを示した。然し従来技術の混合無水物キレート
を用いて標識付けした抗体は同じ時間中に50％もの多量
の薬量を腎臓において損失し腎臓の損傷をおこした。他
の放射性アイソトープを用いて同様に標識付けを行い標
的組織または器官に対して同様に試験を行った。
これ等の研究は本発明のキレートが腫瘍に対し治療ア
イソトープを特異的に送達するのに使用するために顕著
に利用されしかも腎臓および骨の如き標的とされない器
官への化合物の分布が最小化されることを示す。標的組
織または器官の撮像は業界でよく知られている標準の放
射線透過写真技術により行うことができる。
ここに記載した実施例は例示の目的にだけ記載したも
のでその種々な変化または改変は当業者に示唆され本発
明の精神および範囲並びに付加する請求の範囲の範囲内
に含まれるものである。
フロントページの続き (72)発明者 ブリッチビル・マーチン・ダブリュー アメリカ合衆国ヴァージニア州 22042 フォールス チャーチ サマーフィー ルド ロード 2824 (56)参考文献 Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ．25Ｎ ｏ．16（1986−７−30）Ｐ．2772−2781

Claims (11)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】（ａ）アミノ−保護α−アミノ酸をアミノ
    酸アミドと反応させ；（ｂ）保護したアミノ酸を脱保護
    し；（ｃ）工程（ｂ）で得られた生成物を還元して多置
    換ジエチレントリアミンを生成し；（ｄ）上記ジエチレ
    ントリアミンをハロ酢酸またはハロ酢酸エステルを用い
    てアルキル化することにより所望の多置換ジエチレント
    リアミン五酢酸またはそのエステルに転換することを特
    徴とする多置換ジエチレントリアミン五酢酸キレートの
    製造方法。
  2. 【請求項２】（ａ）アミノ−保護α−アミノ酸をａ−ア
    ミノトケンと反応させ；（ｂ）生成したケトンをメトキ
    シルアミンと反応させることによりオキシムエーテルに
    転換し；（ｃ）生成したオキシムエーテルを脱保護し次
    いで脱保護したオキシムエーテルを還元して多置換ジエ
    チレントリアミンを生成し、これをハロ酢酸またはエス
    テルでアルキル化した後所望の多置換ジエチレントリア
    ミン五酢酸またはそのエステルを生成することを特徴と
    する多置換ジエチレントリアミン五酢酸キレートの製造
    方法。
  3. 【請求項３】ジエチレントリアミン五酢酸（DTPA）の炭
    素主鎖に結合した一つの側鎖ｐ−Ｘ−C6H4−Ｙ−を有す
    る次の式２または3: で表わされる多置換DTPAにおいて、前記Ｘが、Ｎ−ヒド
    ロキシサクシンイミドエステル、イソチオシアネートお
    よびハロアセトアミドよりなる群から選択した１個の官
    能基であり、Ｙが、１〜15個の炭素原子を有する直鎖ま
    たは分岐鎖アルキレン基;1〜15個の炭素原子を有する直
    鎖または分岐鎖アルケニレン基;6〜14個の炭素原子を有
    するアリーレン基；および１個以上の分岐鎖または直鎖
    アルキレン基に１〜15個の炭素原子を有するアリールア
    ルキレン基よりなる群から選択した側鎖であり、且つ、
    式中DTPAの炭素主鎖に結合した１個以上の追加の側鎖R1
    〜R4およびR1′〜R4′が含まれ、前記R1〜R4およびR1′
    〜R4′を水素;1〜15個の炭素原子を有する直鎖または分
    岐鎖アルキル基;1〜15個の炭素原子を有する直鎖または
    分岐鎖アルケン基;6〜14個の炭素原子を有するアリール
    基;1個以上の分岐鎖または直鎖アルキル基に１〜15個の
    炭素原子を有するアルキルアリール基；およびそれらの
    混合物よりなる群から選択し、少なくとも１個の追加の
    側鎖が少なくとも１個の炭素原子を含むことを特徴とす
    る多置換DTPA。
  4. 【請求項４】Ｘがハロアセトアミドであることを特徴と
    する請求項３記載の多置換DTPA。
  5. 【請求項５】Ｘがイソチオシアネートであることを特徴
    とする請求項３記載の多置換DTPA。
  6. 【請求項６】ＸがＮ−ヒドロキシサクシンイミドエステ
    ルであることを特徴とする請求項３記載の多置換DTPA。
  7. 【請求項７】R1〜R4,R1′〜R4′基が次表R1,R1′ R2,R2′ R3,R3′ R4,R4′ SCNBz,H H,H CH3,H H,H SCNBz,H H,H H,H CH3,H H,H SCNBz,H H,H CH3,H SCNBz,H H,H CH3,H CH3,H 表中のSCNBz,Hはｐ−イソチオシアナトベンジル基を示
    す。 で表わされるものであることを特徴とする請求項３記載
    の多置換DTPA。
  8. 【請求項８】蛋白質と複合化されることを特徴とする請
    求項３記載の多置換DTPA。
  9. 【請求項９】上記蛋白質がモノクローナルまたはポリク
    ローナル抗体またはそのフラグメントであることを特徴
    とする請求項８記載のDTPA。
  10. 【請求項１０】放射性標識付けされることを特徴とする
    請求項９記載のDTPA。
  11. 【請求項１１】放射生標識がIn−111、Ｙ−90、Bi−21
    2、Ga−68およびSc−47から成る群から選ばれることを
    特徴とする請求項10記載のDTPA。
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