JP5705434B2

JP5705434B2 - キレート剤

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Publication number: JP5705434B2
Application number: JP2009539809A
Authority: JP
Inventors: セバスチャンクノール，; アルミンモドリンゲール，; ハンス−ユールゲンウェスター，; ホルストケスラー，
Original assignee: テクニッシュユニべルシタットミュンヘン
Priority date: 2006-12-08
Filing date: 2007-12-10
Publication date: 2015-04-22
Anticipated expiration: 2027-12-10
Also published as: EP2099776A1; JP2015155407A; IN2009CN02681A; WO2008068516A1; CA2671788A1; US20100081799A1; GB0624587D0; JP2010511687A; EP2099776B1; CN101605768A

Description

本発明は、キレート剤に関する。本発明は、特に標的分子への選択的結合のための一連の二官能性キレート剤に関する。

放射性核種の非共有結合では、放射性マーカーと標的分子を結びつけるために二官能性キレート剤（ＢＦＣＡ）が使用される。これらのＢＦＣＡの中では、１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）はよく研究されている大環状錯体リガンドであり、これは、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）^１とは対照的に、二価および三価金属両方の極めて安定性の高い錯体を形成することが示されている。^２、３このリガンドを金属キレーターとして含有する放射性医薬品は、治療および画像診断における幅広い利用が見出されている^４、５（非特許文献１および非特許文献２）。

ＤＯＴＡ−ペプチドは一般に、溶液中で^６、または保護されていないＤＯＴＡを使用して^１もしくはより便利にはＤＯＴＡの４つのカルボン酸基の多重活性化による副反応を克服するために保護されたＤＯＴＡ誘導体を使用して、樹脂結合ペプチドの遊離アミンにＤＯＴＡ残基を結合する固体担体上で合成される。従って、多数のＤＯＴＡ誘導体が開発されており、モノ結合体（ｍｏｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）の選択的形成が可能である。例えば、３基保護の市販のＤＯＴＡ−トリス（ｔｅｒｔ−ブチル）エステル^７および対応するベンジル保護アナログＤＯＴＡ−トリス（ベンジル）エステル^８、イソチオシアネート官能基化ｐ−ＮＣＳ−Ｂｚ−ＤＯＴＡ^９だけでなく、保護されていないさらなるカルボン酸基を含むＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）_４ ^１０が広く用いられているＢＦＣＡである。他のアプローチでは、ＤＯＴＡ部分を側鎖に含む誘導体化アミノ酸が用いられた^１１、またはＤＯＴＡ部分は樹脂結合ペプチドのＮ末端上で段階的に合成された^１２。これら全ての方法の主な制限は、ＤＯＴＡ残基の求電子性の結合である。この手順は、選択的反応用のその他のＮ−またはＳ−求核基を許容しない。

Ｈｅｐｐｅｌｅｒ，Ａ．；Ｆｒｏｉｄｅｖａｕｘ，Ｓ．；Ｅｂｅｒｌｅ，Ａ．Ｎ．；Ｍａｅｃｋｅ，Ｈ．Ｒ．Ｒｅｃｅｐｔｏｒｔａｒｇｅｔｉｎｇｆｏｒｔｕｍｏｒｌｏｃａｌｉｓａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈｒａｄｉｏｐｅｐｔｉｄｅｓ．ＣｕｒｒｅｎｔＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２０００，７，９７１−９９４．Ｍｉｌｅｎｉｃ，Ｄ．Ｅ．；Ｂｒａｄｙ，Ｅ．Ｄ．；Ｂｒｅｃｈｂｉｅｌ，Ｍ．Ｗ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｔａｒｇｅｔｅｄｒａｄｉａｔｉｏｎｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｙ．ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ２００４，３，４８８−４９８．

多官能性化合物の部位選択的官能基化を可能にする化学選択的アプローチが依然として求められている。しかし、そのような方法は、ＤＯＴＡ−結合放射性医薬品の合成にとって強力なツールとなるであろうし、新たな合成戦略や、錯構造、例えば我々が最近開発した、４−［^１８Ｆ］フルオロベンズアルデヒドを使用して^１８Ｆの標識に成功した多量体のアミノオキシ官能基化ＲＧＤ誘導体^１３の合成が可能となる。^１４最近の発表では、Ｈｏｖｉｎｅｎが、ナルトレキソンおよび２−デオキシ−Ｄ−リボースと接合したＤＯＴＡのトリスｔｅｒｔ−ブチルエステルの誘導体化によるアミノオキシ官能基化キレートの合成を報告している。^１５しかし、報告された手順は高価な出発材料を必要とし、ペプチドのような多官能性化合物への適用性は未だ明らかでない。

本発明は、例えば、以下を提供する：
（項目１）
式

の化合物であって、
式中、Ｒ ^１は、水素、メチル、エチル、カルボキシル保護基、および親水性部分から選択され、Ｒ ^２およびＲ ^３は、水素、メチル、エチル、およびカルボキシル保護基から独立して選択され、Ｒ ^４は、水素、メチル、エチル、親水性部分、およびカルボキシル保護基から選択され、Ｒ ^５は、アリール、ヘテロアリール、アルキル、またはこれらの基の組み合わせであり、カルボニル基、アミノオキシ基、または付加環化反応に参加するのに適した官能基で置換されている、化合物。
（項目２）
上記カルボニル基はケト基である、項目１に記載の化合物。
（項目３）
上記ケト基はメチルケトンである、項目２に記載の化合物。
（項目４）
付加環化反応に参加するのに適した上記官能基は、アルキン基またはアジド基である、項目１に記載の化合物。
（項目５）
上記アルキン基はエチニル基である、項目４に記載の化合物。
（項目６）
Ｒ ^５は、１つまたは２つの環を有する５員〜９員のアリールまたはヘテロアリール基である、項目１〜項目５のいずれか一項に記載の化合物。
（項目７）
Ｒ ^５は、６員のアリールまたはヘテロアリール基である、項目６に記載の化合物。
（項目８）
Ｒ ^５はフェニル基である、項目７に記載の化合物。
（項目９）
上記フェニル基は、パラ位が上記カルボニル基または付加環化反応に参加するのに適した上記官能基で置換されている、項目８に記載の化合物。
（項目１０）
Ｒ ^５は、長さがＣ１からＣ６のアルキルである、項目１に記載の化合物。
（項目１１）
Ｒ ^１、Ｒ ^２、およびＲ ^３は、同じ、または別のカルボキシル保護基である、項目１〜項目１０のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１２）
Ｒ ^４は、水素またはメチルである、項目１〜項目１１のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１３）
上記カルボニル保護基が存在する場合、それらは、ベンジル、フルオレニルメチル、およびｔ−ブチルから選択される、項目１〜項目１２のいずれか一項にに記載の化合物。
（項目１４）
Ｒ ^１、Ｒ ^２、およびＲ ^３はｔ−ブチルであり、Ｒ ^４は水素またはメチルである、項目１〜項目１３のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１５）
上記親水性部分は糖である、項目１に記載の化合物。
（項目１６）
式

の化合物であって、
式中、上記基Ｇ ^１からＧ ^４の２つ〜４つは、ＣＨ（ＣＯ _２Ｒ ^４）−Ｒ ^５であり、任意の残りの基Ｇ ^１からＧ ^４はＣＨ _２ＣＯ _２Ｒ ^１であり、Ｒ ^４は、水素、メチル、エチル、およびカルボキシル保護基から選択され、Ｒ ^５は、アリール、ヘテロアリール、アルキル、またはこれらの基の組み合わせであり、カルボニル基、アミノオキシ基、または付加環化反応に参加するのに適した官能基で置換されており、Ｒ ^１は、水素、メチル、エチル、カルボキシル保護基、および親水性部分から選択される、化合物。
（項目１７）
項目１〜項目１６のいずれか一項に記載の化合物と誘導体化標的分子とを有する結合体であって、Ｒ ^５がカルボニル基またはアミノオキシ基で置換されている場合は、上記標的分子は、相補的なアミノオキシ部分またはカルボニル部分を含むように誘導体化されており、上記化合物と標的分子はオキシム結合で結合されており、Ｒ ^５が付加環化反応に参加するのに適した官能基で置換されている場合は、上記標的分子は、上記付加環化反応用の相補基を含むように誘導体化されており、上記化合物と上記標的分子は、上記付加環化反応のヘテロ環生成物によって結合されている、結合体。
（項目１８）
上記化合物と標的分子は、１，２，３−トリアゾール基によって結合されている、項目１７に記載の結合体。
（項目１９）
項目１〜項目１６のいずれかに記載の化合物または項目１７もしくは項目１８に記載の結合体と錯体を形成する放射性核種を有するキレート。
（項目２０）
上記放射性核種は、アクチニウム２２５、ビスマス２１２、ビスマス２１３、鉛２０３、銅６４、銅６７、ガリウム６６、ガリウム６７、ガリウム６８、ルテチウム１７７、インジウム１１１、インジウム１１３、イットリウム８６およびイットリウム９０、ジスプロシウム１６２、ジスプロシウム１６５、ジスプロシウム１６７、ホルミウム１６６、プラセオジミウム１４２、プラセオジミウム１４３、プロメチウム１４９、およびテルビウム１４９から選択される、項目１９に記載のキレート。
（項目２１）
項目１に記載の化合物の合成の方法であって、上記合成は、２置換のアリール、ヘテロアリール、アルキル、または組み合わせＬ ^１ −ＣＨ（ＣＯ _２Ｒ ^４）−Ｒ ^５ −Ｘとシクレンとの反応であって、ここでＲ ^４およびＲ ^５は項目１に記載のものと同じ意味を持ち、Ｌ ^１は脱離基であり、Ｘは、カルボニル基、アミノオキシ基、または付加環化反応に参加するのに適した官能基である、またはそのような官能基の保護された形態である、反応；ならびに、Ｌ ^２ＣＨ _２ＣＯ _２Ｒを使用する上記シクレンのその他の窒素原子のアルキル化であって、ここでＲは、項目１で定めたようなＲ ^１、Ｒ ^２、またはＲ ^３であり、Ｌ ^２は脱離基である、アルキル化、を有する方法。
（項目２２）
シクレンの上記窒素原子の２つ〜４つは、Ｌ ^１ −ＣＨ（ＣＯ _２Ｒ ^４）−Ｒ ^５ −Ｘと反応し、Ｒ ^４は、水素、メチル、エチル、およびカルボキシル保護基から選択され、Ｒ ^５は項目１に記載のものと同じ意味を持ち、上記シクレンの残りの窒素原子は、Ｌ ^２ＣＨ _２ＣＯ _２Ｒを使用してアルキル化され、Ｒは、項目１で定めたようなＲ ^２またはＲ ^３である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
上記結合体の放射性核種との任意の錯体形成の前に、上記化合物および上記誘導体化標的分子は一緒に反応する、項目１７に記載の結合体の合成方法。
（項目２４）
上記化合物と標的分子は、遷移金属触媒の存在下で付加環化反応によって結合する、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
上記金属触媒は銅またはロジウムに基づいている、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
治療または診断において使用するための、項目１９に記載のキレート。
（項目２７）
過剰増殖性および／または腫瘍の状態の診断および／または治療用の薬剤の調製における、項目１９に記載のキレートの使用。
（項目２８）
過剰増殖性および／または腫瘍の状態の診断および／または治療に使用するための、項目１９に記載のキレート。
（項目２９）
上記状態は癌である、項目２７に記載の使用または項目２８に記載のキレート。
（項目３０）
上記癌はホルモン応答性である、項目２９に記載の使用またはキレート。
（項目３１）
対象における過剰増殖性および／または腫瘍性の状態の診断または治療の方法であって、上記方法は、それぞれ診断上または治療上効果的な量の項目１９または項目２０に記載のキレートの上記対象への投与から成る、方法。
（項目３２）
項目１７または項目１８に記載の結合体の合成における、項目１〜項目１６のいずれかに記載の化合物の使用。
（項目３３）
項目１９または２０に記載のキレートの合成における、項目１７または項目１８に記載の結合体の使用。
（項目３４）
上記標的分子はペプチドである、項目１７または項目１８に記載の結合体または項目１９または項目２０に記載のキレート。
（項目３５）
１つ以上のジスルフィド架橋を有する標的分子への二官能性キレート剤の金属触媒による接合の後に、二官能性キレート剤から金属触媒を脱キレートする方法であって、上記方法は、硫化ナトリウムを使用した金属イオンの除去と、それに続く、上記ジスルフィド架橋を再構築するための、ＮＨ _３ならびにアセトニトリルおよび水を有する溶媒での処理とから成る、方法。
（項目３６）
上記接合反応は、付加環化反応を伴う、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
上記二官能性キレート剤は、項目１に記載の化合物である、項目３５または項目３６に記載の方法。
（項目３８）
上記金属触媒は銅またはロジウムに基づいている、項目３５〜項目３７のいずれかに記載の方法。
（項目３９）
項目１６に記載の化合物と、上記Ｒ ^５基を介して上記化合物に結合する２つ以上の標的分子とを有する結合体。
本発明は、式：

の化合物を提供し、
式中、Ｒ^１は、水素、メチル、エチル、カルボキシル保護基、および親水性部分から選択され、Ｒ^２およびＲ^３は、水素、メチル、エチル、およびカルボキシル保護基から独立して選択され、Ｒ^４は、水素、メチル、エチル、親水性部分、およびカルボキシル保護基から選択され、Ｒ^５は、アリール、ヘテロアリール、アルキル、またはこれらの基の組み合わせであり、カルボニル基、アミノオキシ基、または付加環化反応に参加するのに適した官能基で置換されている。

Ｒ^５がアルキルであるならば、好ましくは、このアルキルは、長さが１、２、３、４、５、または６個の炭素原子である。好ましくは、Ｒ^５は、アリールまたはヘテロアリール基である。より好ましくは、Ｒ^５は、１つまたは２つの環を有する５員〜９員のアリールまたはヘテロアリール基である。より好ましくは、Ｒ^５は、６員のアリールまたはヘテロアリール基である。さらにより好ましくは、Ｒ^５はフェニル基である。最も好ましくは、フェニル基は、パラ位がカルボニル基、アミノオキシ基、または付加環化反応に参加するのに適した官能基で置換されている。

好ましくは、Ｒ^５は、カルボニル基または付加環化反応に参加するのに適した官能基で置換されている。

本発明の一実施形態において、Ｒ^５は、カルボニル基で置換されている。好ましくは、このカルボニル基はケト基である。好ましくは、このケト基はメチルケトンである。ケト基の利点は、ケト基が高い反応性を持つ基ではないため、化合物に長期間の安定性を与えることである。これにより、これを長期間保存できるようになる。著しく長い期間にわたって化合物を保管しようとする際に、反応性の高い基は問題となる。さらに、ケト基は、ペプチドのような多官能性化合物への化学選択的結合を可能にする。別の利点は、ケト基は合成プロセスにおいてさらなる保護を必要としないことである。

本発明の別の実施形態において、付加環化反応に参加するのに適した官能基は、アルキン基またはアジド基である。好ましくは、このアルキン基はエチニル基である。

一実施形態において、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３は、水素およびカルボキシル保護基から独立して選択され、Ｒ^４は、水素、メチル、エチル、およびカルボキシル保護基から選択される。好ましくは、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３は同一である、または別のカルボキシル保護基である。好ましくは、Ｒ^４は、水素またはメチルである。より好ましくは、Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３は、ｔ−ブチルであり、Ｒ^４は、Ｈまたはメチルである。

カルボニル保護基が存在するならば、それらは好ましくはベンジル、フルオレニルメチル、およびｔ−ブチルから選択される。

一実施形態において、Ｒ^１またはＲ^４のどちらかは親水性部分である。好ましくは、Ｒ^１およびＲ^４は両方とも親水性部分である。Ｒ^４および／またはＲ^１が親水性部分の場合、化合物は好ましくは、ガリウム６８と錯体形成するために使用される。好ましくは、親水性部分は糖である。親水性部分、特に糖を化合物に結合させる利点は、それらが化合物の薬物動態特性を向上させることである。

本発明の別の態様において、式：

の化合物が提供され、
式中、基Ｇ^１からＧ^４の２つ〜４つは、ＣＨ（ＣＯ_２Ｒ^４）−Ｒ^５であり、任意の残りの基Ｇ^１からＧ^４はＣＨ_２ＣＯ_２Ｒ^１であり、Ｒ^４は、水素、メチル、エチル、およびカルボキシル保護基から選択され、Ｒ^５は上記で定めた通りであり、Ｒ^１は上記で定めた通りである。これによって化合物が複数の標的分子に結合できるようになり、それぞれのＲ^５基の位置に１つが結合する。

本発明は、上述のような化合物および誘導体化された標的分子を有する結合体も提供し、Ｒ^５がカルボニル基またはアミノオキシ基で置換されている場合は、標的分子は、相補的なアミノオキシ部分またはカルボニル部分を含むように誘導体化されており、化合物と標的分子はオキシム結合で結合されており、Ｒ^５が付加環化反応に参加するのに適した官能基で置換されている場合は、標的分子は、付加環化反応用の相補基を含むように誘導体化されており、化合物と標的分子は、付加環化反応のヘテロ環生成物によって結合される。Ｒ^５がカルボニル基またはアミノオキシ基で置換されている場合、Ｒ^５は好ましくはカルボニル基で置換されている。

この結合体の一実施形態において、化合物および標的分子は、１，２，３−トリアゾール基によって結合されている。

本発明は、上述の化合物または上述の結合体と錯体を形成する放射性核種を有するキレートも提供する。好ましくは、放射性核種は、アクチニウム２２５、ビスマス２１２、ビスマス２１３、鉛２０３、銅６４、銅６７、ガリウム６６、ガリウム６７、ガリウム６８、ルテチウム１７７、インジウム１１１、インジウム１１３、イットリウム８６およびイットリウム９０、ジスプロシウム１６２、ジスプロシウム１６５、ジスプロシウム１６７、ホルミウム１６６、プラセオジミウム１４２、プラセオジミウム１４３、プロメチウム１４９、およびテルビウム１４９から選択される。

本発明は、本発明に従う化合物の合成の方法も提供し、この合成は、２置換のアリール、ヘテロアリール、アルキル、または組み合わせＲ^５、Ｌ^１−ＣＨ（ＣＯ_２Ｒ^４）−Ｒ^５−Ｘとシクレンとの反応であって、ここでＲ^４およびＲ^５は上記と同じ意味を有し、Ｌ^１は脱離基であり、Ｘは、カルボニル基、アミノオキシ基、または付加環化反応に参加するのに適した官能基である、またはそのような官能基の保護形態である、アルキル化；ならびに、Ｌ^２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｒを使用するシクレンの他の窒素原子のアルキル化であって、ここでＲは、上記で定めたようなＲ^１、Ｒ^２、またはＲ^３であり、Ｌ^２は脱離基である、アルキル化、を有する。好ましくは、合成は、２置換のアリールまたはヘテロアリール、Ｒ^５、Ｌ^１−ＣＨ（ＣＯ_２Ｒ^４）−Ｒ^５−Ｘとシクレンとの反応を有する。

シクレンを出発材料として使用する利点は、他の化合物、例えば非常に高価なＤＯＴＡトリスｔｅｒｔ−ブチルエステルと比較して、シクレンが比較的安価であることである。

合成の方法は、さらなるＲ^５を含む基をシクレンと反応させるステップを伴い、シクレンの窒素原子の２〜４つはＬ^１−ＣＨ（ＣＯ_２Ｒ^４）−Ｒ^５−Ｘと反応し、Ｒ^４は、水素、メチル、エチル、およびカルボキシル保護基から選択され、Ｒ^５は上記と同じ意味を持ち、シクレンの任意の残りの窒素原子は、Ｌ^２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｒを用いてアルキル化され、Ｒは、上記で定めたようなＲ^１、Ｒ^２、またはＲ^３である。

本発明は、本発明の化合物と誘導体化標的分子を一緒に反応させることによって、本発明の結合体を合成する方法も提供する。この合成は、結合体と放射性核種との錯体形成でキレートを形成する前に行われてよい。あるいは、化合物と誘導体化標的分子を一緒に反応させる前に、本発明の化合物と放射性核種との錯体形成によってキレートを合成することが可能である。結合体と放射性核種の錯体形成の前に化合物と誘導体化標的分子を一緒に反応させることの利点は、放射性核種の操作に必要な注意を要さずに、最初にキレート剤がさらに操作（例、標的投与用に精製され処方される）されてよいことである。さらに、結合体は、使用のために異なる場所へ輸送される前に、中心となる場所において大量生産され得る。もう１つの利点は、化合物と放射性核種の錯体形成に使用される条件が非常に厳しいものであってよく、そうでなければ化合物に影響を与えかねないこれらの厳しい条件の前に最終的な結合体が形成されることである。

この方法の一実施形態において、遷移金属触媒の存在下で、化合物と標的分子が付加環化反応によって結合する。好ましくは、金属触媒は銅またはロジウムに基づいている。

本発明は、治療または診断において使用するためのキレートも提供する。

さらに、本発明は、過剰増殖性および／または腫瘍の状態の診断および／または治療用の薬剤の調製におけるキレートの使用を提供する。

さらに、本発明は、過剰増殖性および／または腫瘍の状態の診断および／または治療に使用するためのキレートを提供する。

好ましくは、上記の使用における状態は癌である。好ましくは、癌はホルモン応答性である。

本発明は、対象における過剰増殖性および／または腫瘍の状態の診断または治療の方法も提供し、この方法は、それぞれ診断上または治療上効果的な量の本発明に従うキレートの対象への投与を有する。

本発明は、本発明に従う結合体の合成における、本発明に従う化合物の使用を提供する。

さらに、本発明は、本発明に従うキレートの合成における、本発明に従う結合体の使用を提供する。

本発明は、結合体またはキレートも提供し、標的分子はペプチドである。

本発明は、１つ以上のジスルフィド架橋を有する標的分子への二官能性キレート剤の金属触媒による接合に続いて、二官能性キレート剤から金属触媒を脱キレート化する方法を提供し、この方法は、硫化ナトリウムを使用した金属イオンの除去および、続いて行われる、ジスルフィド架橋を再構築するための、ＮＨ_３およびアセトニトリルと水を有する溶媒での処理から成る。好ましくは、二官能性キレート剤は、本発明の化合物である。

一実施例において、接合反応は、付加環化反応を伴う。

好ましくは、金属触媒は銅またはロジウムに基づいている。

最後に、本発明は、上述のように、複数のＲ^５基を持つ化合物と、Ｒ^５基を介して化合物に結合する２つ以上の標的分子とを有する結合体を提供する。

ここで、一例にすぎないが、添付の図面を参照してより詳しく本発明を説明する。
４−アセチルフェニル−ＤＯＴＡ誘導体１および２、ならびにエチニルＤＯＴＡ誘導体３の構造を示す。オキシムライゲーションによって得られた粗製ＤＯＴＡ結合体１９のＨＰＬＣトレースを示す。１，３−双極付加環化と、続く脱保護（ステップ２、スキーム５）後に得られた粗製ＤＯＴＡ結合体２４のＨＰＬＣトレースを示す。ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するヌードマウス（ｎ＝５、競合試験ではｎ＝３）の３０分および６０分ｐ．ｉ．の［^６８Ｇａ］１９の生体内分布を示す。データは、ｇ組織当たりの％注射用量（％ｉＤ／ｇ）で与えられ、平均値±ＳＤである。ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するヌードマウス（ｎ＝５）の３０分および６０分ｐ．ｉ．の［６８Ｇａ］１９に見られた腫瘍対非腫瘍比を示す。データは、平均値±ＳＤである。ｔｅｒｔ−ブチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−（４−アセチルフェニル）アセテート（１）のＨＰＬＣトレースを示す。勾配：１０→８０％、３０分間。２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−（４−アセチルフェニル）酢酸（２）のＨＰＬＣトレースを示す。勾配：１０→６０％、３０分間。（Ｒ／Ｓ）−メチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−２−（４−エチニル）フェニル）アセテート（３）のＨＰＬＣトレースを示す。勾配：１０→１００％、３０分間。メチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−（４−アセチルフェニル）アセテート（１１）のＨＰＬＣトレースを示す。勾配：１０→８０％、３０分間。ＤＯＴＡ−Ｔｙｒ^３−オクトレオテート誘導体１９のＨＰＬＣトレースを示す。勾配：１０→６０％、３０分間。ＤＯＴＡ−Ｔｙｒ^３−オクトレオテート誘導体２４のＨＰＬＣトレースを示す。勾配：１０→６０％、６０分間。１，３−双極付加環化によって得られた粗製ＤＯＴＡ結合体２６のＨＰＬＣトレースを示す。勾配：１０→６０％、６０分間。ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−アセチルフェニル）アセテート（５）のＮＭＲスペクトルを示す。ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−アセチルフェニル）アセテート（５）のＮＭＲスペクトルを示す。ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−アセチルフェニル）アセテート（６）のＮＭＲスペクトルを示す。ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−アセチルフェニル）アセテート（６）のＮＭＲスペクトルを示す。メチル２−（４−アセチルフェニル）−２−ブロモアセテート（７）のＮＭＲスペクトルを示す。メチル２−（４−アセチルフェニル）−２−ブロモアセテート（７）のＮＭＲスペクトルを示す。ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−アセチルフェニル）−２−ブロモアセテート（８）のＮＭＲスペクトルを示す。ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−アセチルフェニル）−２−ブロモアセテート（８）のＮＭＲスペクトルを示す。メチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）］−（４−アセチルフェニル）アセテート（９）のＮＭＲスペクトルを示す。メチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）］−（４−アセチルフェニル）アセテート（９）のＮＭＲスペクトルを示す。ｔｅｒｔ−ブチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）］−（４−アセチルフェニル）アセテート（１０）のＮＭＲスペクトルを示す。ｔｅｒｔ−ブチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）］−（４−アセチルフェニル）アセテート（１０）のＮＭＲスペクトルを示す。メチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−（４−アセチルフェニル）アセテート（１１）のＮＭＲスペクトルを示す。メチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−（４−アセチルフェニル）アセテート（１１）のＮＭＲスペクトルを示す。２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−（４−アセチルフェニル）酢酸（２）のＮＭＲスペクトルを示す。２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−（４−アセチルフェニル）酢酸（２）のＮＭＲスペクトルを示す。ｔｅｒｔ−ブチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−（４−アセチルフェニル）アセテート（１）のＮＭＲスペクトルを示す。ｔｅｒｔ−ブチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−（４−アセチルフェニル）アセテート（１）のＮＭＲスペクトルを示す。メチル（４−ヨードフェニル）アセテート（１３）のＮＭＲスペクトルを示す。メチル（４−ヨードフェニル）アセテート（１３）のＮＭＲスペクトルを示す。メチル２−（４−（２−（トリメチルシリル）エチニル）フェニル）アセテート（１４）のＮＭＲスペクトルを示す。メチル２−（４−（２−（トリメチルシリル）エチニル）フェニル）アセテート（１４）のＮＭＲスペクトルを示す。メチル２−ブロモ−２−（４−（２−（トリメチルシリル）エチニル）フェニル）アセテート（１５）のＮＭＲスペクトルを示す。メチル２−ブロモ−２−（４−（２−（トリメチルシリル）エチニル）フェニル）アセテート（１５）のＮＭＲスペクトルを示す。メチル２−ブロモ−２−（４−（２−（トリメチルシリル）エチニル）フェニル）アセテート（１５）のＮＭＲスペクトルを示す。（Ｒ／Ｓ）−メチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）］−２−（４−エチニル）フェニル）アセテート（１６）のＮＭＲスペクトルを示す。（Ｒ／Ｓ）−メチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−２−（４−エチニル）フェニル）アセテート（３）のＮＭＲスペクトルを示す。（Ｒ／Ｓ）−メチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−２−（４−エチニル）フェニル）アセテート（３）のＮＭＲスペクトルを示す。Ｎ−（３−アジドプロピル）スクシンアミド（２１）のＮＭＲスペクトルを示す。Ｎ−（３−アジドプロピル）スクシンアミド（２１）のＮＭＲスペクトルを示す。

高度に官能基化された生体分子への化学選択的結合を可能にする新規な二官能性ポリ（アミノカルボキシレート）キレート剤の便利な合成が説明される。周知のキレーター１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）に基づいて、１当量のパラ位官能基化アルキル２−ブロモフェニルアセテートと３当量の市販のアルキル２−ブロモアセテートで１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン（シクレン）をアルキル化することによって、さらなる官能基を有する新規な二官能性キレート剤を合成した。得られた化合物は、さらなるカルボニルおよびアルキン官能基をそれぞれ有し、保護されていない適切な官能基化生体分子の迅速な部位特異的標識を可能にする。これは、化学選択的オキシムライゲーションおよび１，３−双極付加環化（クリック化学）による、我々の新たなＤＯＴＡ誘導体のソマトスタチンアナログＴｙｒ^３−オクトレオテートへの結合によって示された。マウスにおける初期生体内分布試験では、放射性金属化ペプチドを用いるｉｎｖｉｖｏ画像解析に対する、説明されたＤＯＴＡ接合の適合性が示された。

故に、我々の目標は、幅広い種類の官能基の存在下で化学選択的結合を可能にする新規なＤＯＴＡ誘導体を開発することであった。その結果、我々の方法を便利に、また広く用いられているが非常に高価なＤＯＴＡ−トリス（ｔｅｒｔ−ブチル）エステルの一般的な代替法とするために、安価な市販材料からわずかな合成ステップで容易に入手できる構造に焦点を当てた。さらに、対応する多官能性化合物が入手しやすいことは、我々の検討において重要な側面であった。オキシムライゲーション^{１６、１７}だけでなくＨｕｉｓｇｅｎ１，３−双極付加環化^{１８、１９}はよく研究されており、化学選択的カップリング用の強力な反応であって、我々の目的に要求される全てのものを満たしている。オキシムライゲーションは、オキシム結合の形成のもとのアミノオキシ成分とアルデヒドまたはメチルケトン^２０間の高度に選択的な反応を意味し、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏの両方で適度に安定であることが知られている。この反応は、Ｎ末端のシステインを除くあらゆる遊離アミノ酸側鎖を許容することが示され、例えば、ｔｅｍｐｌａｔｅａｓｓｅｍｂｌｅｄｓｙｎｔｈｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ^{２１、２２}、放射性標識ペプチド結合体^{２３、２４}、環状ペプチド^２５、およびタンパク質アナログ^{２６、２７}の合成における幅広い利用が見られた。トリアゾールの形成のためのアジドとアルキンの化学選択的Ｈｕｉｓｇｅｎ１，３−双極付加環化が、非常に有用な“クリック”反応として最近再認識され^{２８〜３０}、医薬品化学における各種の開発における用途が見出されている。^{３１〜３６}ＤＯＴＡ結合体合成のための様々な手法をユーザーに提供するために、我々は、上述の両反応タイプ用の適切なＤＯＴＡ誘導体に焦点を当てた。

故にこの報告では、我々は、化合物２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−（４−アセチルフェニル）酢酸（１）および２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−（４−アセチルフェニル）酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２）それぞれの、アミノオキシ官能基化化合物とのオキシムライゲーションのためのカルボニル成分としての合成と、アジド官能基化化合物との“クリック”反応のための２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−（４−トリメチルシリルエチニル）酢酸メチルエステル（３）の合成を提示する（図１）。加えて、これらの誘導体を、それらのメチルケトン−およびアルキン−官能基を介して生体分子に結合させるために、化合物２および３は、１つの異なって官能基化されたカルボキシル基によるさらなる選択的修飾を可能にするであろう。両クラスの誘導体は、腫瘍診断および内部放射線療法の目的のために十分に確立された標的分子であるソマトスタチンアナログである、適切なＮ−末端が修飾された保護されていないＴｙｒ^３−オクトレオテートと高度に選択的に反応することを証明した。^{３７〜４０}それぞれの生体分子の受容体親和性に影響を与えない新しい放射性リガンドの合成に対する、前述の異なる化学選択的接合アプローチの適用性を示すために、Ｔｙｒ^３−オクトレオテートアナログの１つを^６８Ｇａで標識し、ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するヌードマウスにおいて初期生体内分布試験で評価した。

実験手順
一般的事項。トリチルクロリドポリスチロール（ＴＣＰ）樹脂（０．９４ｍｍｏｌ／ｇ）をＰｅｐＣｈｅｍ（Ｔｕｅｂｉｎｇｅｎ、ドイツ）より購入した。カップリング試薬およびアミノ酸誘導体をＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、Ｎｅｏｓｙｓｔｅｍ、およびＩＲＩＳＢｉｏｔｅｃｈＧｍｂＨ、ＭｅｒｃｋＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＰｅｒｓｅｐｔｉｖｅＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＧｍｂＨ、およびＮｅｏｓｙｓｔｅｍより購入した。無水溶媒をＦｌｕｋａより購入した。その他全ての試薬および溶媒を、Ｍｅｒｃｋ、Ａｌｄｒｉｃｈ、およびＦｌｕｋａより購入し、そのまま使用した。無水溶媒を移すのに、標準的なシリンジ法を用いた。アルミバックプレート（Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０Ｆ_２５４）で薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を行った。２５４ｎｍでのＵＶ吸収によって、またはモリブデン酸セリウムアンモニウム（ＣＡＭ）で呈色させて化合物を可視化した。シリカゲル６０（Ｍｅｒｃｋ、２３０〜４００メッシュ）（分離される材料１ｇに対しておよそ５０ｇ）で、指示された溶出剤を使用してフラッシュクロマトグラフィーを実施した。クロマトグラフィー用の溶媒を使用前に蒸留した。クロマトグラフィー用の溶出溶媒系は、体積／体積比として報告する。ＯｍｎｉｃｒｏｍＹＭＣカラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍＣ_１８、１ｍＬ／分）を使用して、非ペプチド化合物は２５４ｎｍで、ペプチド化合物は２２０ｎｍで検出しＲＰ−ＨＰＬＣ解析を行った。溶出剤は、水（０．１％ＴＦＡ）からアセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）（３０分間）の直線的勾配とした。分析ＲＰ−ＨＰＬＣの保持時間（Ｒ_ｔ）は分で示し、勾配はアセトニトリルの割合で記載する。ＮＭＲ：ＢｒｕｋｅｒＡＣ−２５０、ＡＶ−３６０、ＡＶ−５００、およびＤＭＸ５００。^１Ｈおよび^１３ＣのＮＭＲスペクトルを周辺温度で記録した。スペクトルを、それらのそれぞれの溶媒シグナル（ＣＤＣｌ_３：^１Ｈ７．２６ｐｐｍ、^１３Ｃ７７．０ｐｐｍ、ＭｅＯＨ−ｄ_４：^１Ｈ３．３１ｐｐｍ、^１３Ｃ４９．０５ｐｐｍ）にキャリブレーションした。化学シフト（δ）は、１００万分の１（ｐｐｍ）で報告し、カップリング定数（Ｊ値）はヘルツ（Ｈｚ）で与える。多重度を説明するために以下の略号を使用した：ｓ、シングル、ｄ、ダブレット、ｔ、トリプレット、ｑ、カルテット、ｄｄ、ダブレットのダブレット、ｄｔ、トリプレットのダブレット、ｍ、マルチプレット、ｂ、ブロード。ＭＳ：ＦｉｎｎｉｇａｎＭＡＴ８２００（ＥＩ）、ＦｉｎｎｉｇａｎＬＣＱ（ＥＳＩ）。ＢｒｕｋｅｒＵｌｔｒａｆｌｅｘＴＯＦ／ＴＯＦでペプチド配列解析を行った。

メチル２−（４−アセチルフェニル）アセテート（５）。アルゴン雰囲気下、メチル２−ブロモアセテート（３．５５ｍＬ、３７．５ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（２５２ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ、３ｍｏｌ％）、Ｐ（ｏ−トリル）_３（１．０２ｇ、３．３５ｍｍｏｌ、９ｍｏｌ％）およびＫ_２ＣＯ_３（２６．０ｇ、０．１９ｍｍｏｌ、５．０当量）を含むＴＨＦ（１２０ｍＬ）の懸濁液に、４−アセチルフェニルボロン酸（７．３８ｇ、４５．０ｍｍｏｌ、１．２当量）を含むＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ（１２０ｍＬ／１．７ｍＬ）の溶液を１時間にわたり滴下しながら加えた。室温で１８時間攪拌後、混合物を濾過し、溶媒を減圧下で除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）に取り、次いで飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１５０ｍＬ）および食塩水で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥させた後、有機層を短いシリカゲルカラムで濾過して濃縮した。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：８）で、５（４．７３ｇ、６６％）を黄白色の固体として得た。Ｒ_ｆ＝０．１３（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン，１：４）；ｍｐ４４−４４°Ｃ；^１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．９１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），３．６８（ｓ，２Ｈ），２．５７（ｓ，３Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １９７．５，１７１．１，１３９．２，１３６．０，１２９．４（２Ｃ），１２８．５（２Ｃ），５２．１，４０．９，２６．５；ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_１１Ｈ_１２Ｏ_３の理論値１９２．０７８６４；実測値１９２．０７８６３。

メチル２−（４−アセチルフェニル）−２−ブロモアセテート（７）。５（３．００ｇ、１５．６ｍｍｏｌ、１．０当量）を含む無水ＣＣｌ_４（３００ｍＬ）の溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（３．３６ｇ、１８．９ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＢｒ_２（２滴）を加えた。混合物を還流するまで加熱し、５００Ｗのハロゲンランプで１０分間照射し、還流しながらさらに５０分間攪拌した。室温まで冷却した後反応溶液を濾過し、溶媒を濃縮し、粗生成物をシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：４）で精製して、７（３．７５ｇ、８９％）を黄白色の油として得た。Ｒ_ｆ＝０．１８（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン，１：４）；^１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．９４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），５．３８（ｓ，１Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １９７．１，１６８．２，１４０．４，１３７．５，１２８．９，１２８．６，５３．５，４５．３，２６．６；ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_１１Ｈ_１１ ^８１ＢｒＯ_３の理論値２７１．９８７１２；実測値２７１．９８７１６，ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_１１Ｈ_１１ ^７９ＢｒＯ_３の理論値２６９．９８９１７；実測値２６９．９８８６３。

（Ｒ／Ｓ）−メチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）］−２−（４−アセチルフェニル）アセテート（９）。室温の１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン（７６２ｍｇ、４．４３ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＫ_２ＣＯ_３（１．２７ｇ、９．２２ｍｍｏｌ、２．５当量）を含むＤＭＦ（１００ｍＬ）の懸濁液に、７（１．００ｇ、３．６９ｍｍｏｌ、１．０当量）を含むＤＭＦ（６０ｍＬ）の溶液を１０時間にわたって滴下しながら加えた。混合物を濾過して減圧下で濃縮した。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（勾配ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３１：７→７：１、１％ＮＥｔ_３）で９（８２９ｍｇ、６２％）を黄白色の固体として得た。Ｒ_ｆ＝０．１０（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３，３：１，１％ＮＥｔ_３）；ｍｐ３２−３５°Ｃ；^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ_４） δ ８．０４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），５．０２（ｓ，１Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．３７−３．３０（ｍ，２Ｈ），３．２４−３．１０（ｍ，４Ｈ），３．０９−３．０１（ｍ，４Ｈ），３．００−２．９４（ｍ，４Ｈ），２．６３（ｍ，５Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ_４） δ １９９．８，１７４．１，１３９．６，１３８．４，１３１．２（２Ｃ），１２９．８（２Ｃ），６６．５，５３．２，４８．０（２Ｃ），４６．３（２Ｃ），４３．８（２Ｃ），４３．８（２Ｃ），２６．８；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_１９Ｈ_３０Ｎ_４Ｏ_３の理論値３６２．２；実測値３６３．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

（Ｒ／Ｓ）−メチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−２−（４−アセチル−フェニル）アセテート（１１）。室温の９（７２３ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＫ_２ＣＯ_３（１．２４ｇ、８．９８ｍｍｏｌ、４．５当量）を含むＤＭＦ（５０ｍＬ）の懸濁液に、ｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモアセテート（０．９７ｍＬ、６．５８ｍｍｏｌ、３．３当量）を含むＤＭＦ（５０ｍＬ）の溶液を３０分間にわたって加えた。４時間の攪拌後、混合物を濾過して減圧下で濃縮した。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３１：１０→７：１、１％ＮＥｔ_３）で、１１（８３ｍｇ、８３％）を黄白色の固体として得た。９９％純度；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１０→８０％）Ｒ_ｔ＝１７．４；Ｒ_ｆ＝０．８３（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３，３：１，１％ＮＥｔ_３）；ｍｐ７３−７５°Ｃ；^１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．９５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），４．７５（ｓ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｄ，Ｊ＝１７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．４２（ｄ，Ｊ＝１７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．３９（ｄ，Ｊ＝１７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２４−３．０５（ｍ，３Ｈ），３．０２−２．６８（ｍ，６Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ），２．５７−２．４２（ｍ，４Ｈ），２．３５−２．２５（ｍ，２Ｈ），２．２５−２．１５（ｍ，２Ｈ），２．１４−２．０５（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．４５（ｓ，１８Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １９７．４，１７４．５，１７３．６，１７３．１，１７２．９，１３６．９，１３６．７，１３０．２（２Ｃ），１２８．３（２Ｃ），８２．５，８２．２，８２．１，７７．２，６４．８，５５．９，５５．７，５５．５，５２．７，５２．４，５２．３，４８．５，４８．０，４７．９，４７．８，４４．６，２７．９（３Ｃ），２７．８（３Ｃ），２７．７（３Ｃ），２６．６；ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_２２Ｈ_３６Ｎ_４Ｏ_３の理論値４０４．２７８７５；実測値４０４．２７９５１。

（Ｒ／Ｓ）−２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−２−（４−アセチルフェニル）酢酸・１／２ＡｃＯＨ（２）。室温の１１（２６．０ｍｇ、３１．７μｍｏｌ、１．０当量）を含むＴＨＦ（５ｍＬ）の溶液に、ＬｉＯＨ（１．７５ｍｇ、７２．９μｍｏｌ、２．３当量）を含む水（１５０μＬ）の溶液を加え、混合物を１８時間攪拌した。減圧下で濃縮後、粗生成物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２０→６０％、３０分間）で精製し、酢酸を凍結乾燥して除き、２（９．０ｍｇ、３８％、回収された１１に関して６６％）を無色の固体として得た。９４％純度；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１０→６０％）Ｒ_ｔ＝２５．７；ｍｐ６８−７２°Ｃ；^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ_４） δ ８．０６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），５．１２（ｓ，１Ｈ），４．０４−３．３４（ｍ，８Ｈ），３．３４−３．１８（ｍ，４Ｈ），３．１５−２．６６（ｍ，１０Ｈ），２．６３（ｓ，３Ｈ），１．９９（ｓ，１／２×３Ｈ（ＡｃＯＨ）），１．５３（ｓ，９Ｈ），１．５２（ｓ，１８Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ_４） δ １９９．７，１７５．２，１７２．７，１７０．４（ｂｒ，３Ｃ），１３８．８（２Ｃ），１３２．７（２Ｃ），１２９．８（２Ｃ），８４．１（ｂｒ，３Ｃ），６９．９，５６．５，５２．９−５１．０（ｂｒ，８Ｃ），２０．５（９Ｃ），２６．８，２０．８；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_３６Ｈ_５８Ｎ_４Ｏ_９の理論値６９０．４；実測値６９１．４［Ｍ＋Ｈ］^＋，７１３．４［Ｍ＋Ｎａ］^＋，７２９．３［Ｍ＋Ｋ］^＋。

メチル（４−ヨードフェニル）アセテート（１３）。（４−ヨードフェニル）酢酸（１２）（１５．０ｇ、５７．０ｍｍｏｌ）を含む無水メタノール（５０ｍＬ）の溶液に、ＳＯＣｌ_２（２０．７ｍＬ、２８５ｍｍｏｌ、５当量）を０℃で滴下しながら加えた。室温で１時間攪拌後、減圧下で溶媒を除去し、残渣をＥｔ_２Ｏ（４００ｍＬ）に溶解した。次いで、有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（４００ｍＬ）、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（４００ｍＬ）、および食塩水（４００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。減圧下で濃縮し１３（１４．７ｇ、９３％）を得た。Ｒ_ｆ＝０．５７（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン，１：４）；^１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．６５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．０３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），３．５６（ｓ，３Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １７１．３，１３７．６，１３３．５，１３１．２，９２．５，５２．０，４０．５。

１−アジド−３−アミノプロパン（２０）。文献の手順（５６）を若干変更した：１−ブロモ−３−アミノプロパン臭化水素酸塩（５．４７ｇ、２５．０ｍｍｏｌ、１．０当量）およびアジ化ナトリウム（３．２５ｇ、５０．０ｍｍｏｌ、２．０当量）を含む２０ｍＬの水溶液を、８０℃で２４時間加熱した。反応混合物を氷浴で冷却後、ジエチルエーテル（３０ｍＬ）を加えた。温度を１０℃未満に保ちながら、ＫＯＨペレットの添加によってｐＨを１４に調節した。有機層の分離後、ジエチルエーテルで水分をさらに抽出した。集めた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空中で注意深く濃縮した。残った油は、２１．０ｍｍｏｌ（８４％）の２０と、およそ等モル量のジエチルエーテルを含み（プロトンＮＭＲの積分に基づく）、それ以上精製せずに使用した。分光分析データは、文献２０と同一であった。

３−（３−アジドプロピルカルバモイル）プロパン酸（２１）。２０（５０１ｍｇ、５．００ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＮＥｔ_３（６９３μＬ、５．００ｍｍｏｌ、１．１当量）を含む１０ｍＬのアセトンの溶液に、無水コハク酸（４６０ｍｇ、４．５５ｍｍｏｌ、１．０当量）を含む５ｍＬのアセトンの溶液を、室温で１５分間にわたって加えた。反応混合物を室温でさらに１５時間攪拌した。真空中で濃縮後、残渣を希釈ＨＣｌ水溶液（２０ｍＬ）と酢酸エチル（２０ｍＬ）の間に区分化して分離し、水層を酢酸エチルでさらに抽出した（２×１０ｍＬ）。集めた有機層の濃縮後、２１（６５３ｍｇ、３．２７ｍｍｏｌ、７１％）を白色固体として得た。^１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ_４） δ ３．３４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．２４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．５９（ｄｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１．１Ｈｚ，２Ｈ），２．４４（ｄｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１．３Ｈｚ，２Ｈ），１．７４（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ_４） δ １７６．２，１７４．７，５０．０，３７．７，３１．５，３０．２，２９．７；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_１１Ｈ_１２Ｏ_３の理論値２００．１；実測値２０１．１（Ｍ＋Ｈ^＋）。

ペプチド合成
標準的なＦｍｏｃストラテジー（５７〜６０）に従い、ＴＣＰ−樹脂を用いてペプチド合成を行った。

ＴＣＰ樹脂へのＮ−Ｆｍｏｃ−アミノ酸の結合。一般的手順Ｉ。

無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）で２０分間膨潤させた後、ＴＣＰ樹脂（２．００ｇ、理論上０．９６ｍｍｏｌ／ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（１．２当量、２．３ｍｍｏｌ）を含む無水ＤＣＭ（１９ｍＬ）溶液およびＤＩＰＥＡ（９８０μＬ、３当量、５．８ｍｍｏｌ）で、室温にて２時間処理した。ＭｅＯＨ（２ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（０．４ｍＬ）を加えてフリー部位にキャップをし、反応混合物を１５分間振盪した。樹脂をＮＭＰ（３×１０ｍＬ）、ＤＣＭ（５×１０ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（３×１０ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させ、樹脂結合Ｎ−Ｆｍｏｃアミノ酸を得た。

Ｆｍｏｃの脱保護。一般的手順ＩＩ。

Ｆｍｏｃ保護樹脂を、２０％ピペリジンを含むＮＭＰの溶液１０ｍＬで処理し（３×１０分間）、ＮＭＰで洗浄した（５×１０ｍＬ）。

ＴＢＴＵ／ＨＯＢｔとのカップリング。一般的手順ＩＩＩ。

Ｆｍｏｃアミノ酸（２．５当量）、ＴＢＴＵ（２．５当量）、ＨＯＢｔ（２．５当量）、およびＤＩＰＥＡ（７当量）をＮＭＰに溶解して０．２ｍｍｏｌ／Ｌ溶液を得、これを樹脂に加えた。反応混合物を室温にて９０分間振盪し、ＮＭＰで洗浄した（５×１０ｍＬ）。

トリフルオロ酢酸での切断と脱保護。一般的手順ＩＶ。

樹脂をＤＣＭで洗浄し（３×１０ｍＬ）、ＴＦＡ、Ｈ_２Ｏ、およびトリイソプロピルシラン（９０：５：５、ｖ／ｖ／ｖ、２０ｍＬ）の混合物で３回×１０分間処理した。濾過による樹脂の除去後、濾液を集め、さらに９０分間攪拌した。溶媒を減圧下で濃縮し、Ｅｔ_２Ｏでペプチドを沈殿させた。

直鎖ペプチドのジスルフィド環化。一般的手順Ｖ。

直鎖ペプチドを高希釈（ｃ＝１ｍＭ）で水に溶解し、濃縮ＮａＨＣＯ_３水溶液を加えてｐＨを７〜８に調節した。次に、３０％のＨ_２Ｏ_２水溶液（３当量）を、激しく攪拌しながら滴下して加えた。３０分後に反応を停止させ、凍結乾燥によって溶媒を除去した。

シクロ［２，７］−ＡｏｘＡｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＯＨ（１８）およびシクロ［２，７］−３−（３−アジドプロピルカルバモイル）プロパノイル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＯＨ（２３）の合成。直鎖ペプチド配列、Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＯＨを、一般的手順Ｉ〜ＩＩＩと同様の方法で固相上に合成した。手順ＩＶに従って、サンプルを樹脂から切断し、ペプチド配列をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦペプチド配列解析で確認した。ＭＳ（ＭＡＬＤＩ）Ｃ_４９Ｈ_６６Ｎ_１０Ｏ_１２Ｓ_２の理論値１０５０．４３；実測値１０５１．４０［Ｍ＋Ｈ］^＋．さらなる手順では、樹脂を２つの部分に分けた：
１）シクロ［２，７］−ＡｏｘＡｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＯＨ（１８）：（Ｂｏｃ−アミノオキシ）酢酸を、一般的手順Ｉ〜ＩＩＩと同様の手法で上記の樹脂結合ペプチドの一部にカップリングさせ、直鎖ペプチドを、手順ＩＶに従って樹脂から切断した。ジスルフィド環化を一般的手順Ｖに従って行った。ステップＩＶおよびＶで使用する全ての溶媒の品質に十分注意しなくてはならない（ＨＰＬＣ品質）。小バッチの粗生成物を精製し、半分取（ｓｅｍｉｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ）ＲＰ−ＨＰＬＣ（２０→５０％、３０分間）による精製後にアミノオキシ官能基化Ｔｙｒ^３−オクトレオテート１８を無色の固体として得た。９７％純度；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１０→６０％）Ｒ_ｔ＝１７．３；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_５１Ｈ_６７Ｎ_１１Ｏ_１４Ｓ_２の理論値１１２１．４３；実測値１１２２．５［Ｍ＋Ｈ］^＋，５６２．１［（２Ｍ＋２Ｈ）／２］^２＋。
２）シクロ［２，７］−３−（３−アジドプロピルカルバモイル）プロパノイル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＯＨ（２３）。２１を、一般的手順Ｉ〜ＩＩＩと同様の手法で上記の樹脂結合ペプチドの一部にカップリングさせ、直鎖ペプチドを手順ＩＶに従って樹脂から切断した。ジスルフィド環化を一般的手順Ｖに従って行った。ジスルフィド環化を一般的手順Ｖに従って行った。半分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２０→６０％、３０分間）による精製後に、ペプチドを無色の固体として得た。９６％純度；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１０→５０％）Ｒ_ｔ＝２５．０；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_５６Ｈ_７４Ｎ_１４Ｏ_１４Ｓ_２の理論値１２３０．５０；実測値１２３１．６［Ｍ＋Ｈ］^＋，１２５３．６［Ｍ＋Ｎａ］^＋，１２６９．３［Ｍ＋Ｋ］^＋。

３−（３−アジドプロピルカルバモイル）プロパノイル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ（２５）の合成：直鎖ペプチドを、一般的手順Ｉ〜ＩＩＩと同様の手法にて固相上で合成し、手順ＩＶに従って樹脂から切断した。半分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２０→５０％、３０分間）による精製後に、ペプチドを無色の固体として得た。９７％純度；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１０→６０％，３０分）Ｒ_ｔ＝１６．８；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_３８Ｈ_５０Ｎ_１０Ｏ_１０の理論値８０６．３７；実測値８０７．６［Ｍ＋Ｈ］^＋，８２９．５［Ｍ＋Ｎａ］^＋。

ＤＯＴＡ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ誘導体２６の合成。室温の３（３．１ｍｇ、４．１μｍｏｌ、１．０当量）を含むＴＨＦ（０．２ｍＬ）の溶液に、ＬｉＯＨ（０．３ｍｇ、１４μｍｏｌ、３．４当量）を含む水（３０μＬ）の溶液を加え、混合物を１８時間攪拌した。次に、水（０．２ｍＬ）、ペプチド２２（３．８ｍｇ、４．１μｍｏｌ、１．０当量）、０．１ＭＣｕＳＯ_４水溶液（４９μＬ、４．９μｍｏｌ、１．２当量）および銅粉末（１０ｍｇ）を加え、混合物を１８時間攪拌した。この後、銅粉末を濾別し、Ｎａ_２Ｓ（Ｎａ_２Ｓ・９Ｈ_２Ｏ、１２ｍｇ、４９μｍｏｌ、１２．０当量）を加えて溶解した銅塩を沈殿させた。混合物を濾過し、溶媒を減圧下で除去した。ｔｅｒｔ−ブチルエステルを、ＴＦＡ／ＴＩＰＳ／Ｈ_２Ｏ混合物（９５：５：５、ｖ／ｖ／ｖ、１ｍＬ）で２時間処理することで切断した。その後、溶液を減圧下で濃縮し、半分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２０→５０％、３０分間）で粗生成物を直接精製して、凍結乾燥後に２３（３．２２ｍｇ、５１％）を無色の粉末として得た。９５％純度；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１０→６０％）Ｒ_ｔ＝１２．６；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_６２Ｈ_８２Ｎ_１４Ｏ_１８の理論値１３１０．５９；実測値６５６．９［（Ｍ＋２Ｈ）／２］^＋，６６７．９［（Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ）／２］^＋，１３１１．８［Ｍ＋Ｈ］^＋，１３３３．６［Ｍ＋Ｎａ］^＋，１３４９．５［Ｍ＋Ｋ］^＋。

ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−アセチルフェニル）アセテート（６）。アルゴン雰囲気下のｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモアセテート（６．８０ｍＬ、４６．４ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（３３６ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ、３ｍｏｌ％）、Ｐ（ｏ−トリル）_３（１．３６ｇ、４．４６ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）、およびＫ_２ＣＯ_３（３４．６ｇ、０．２５ｍｍｏｌ、５．４当量）を含むＴＨＦ（１６０ｍＬ）の懸濁液に、４−アセチルフェニルボロン酸（４）（９．８４ｇ、６０．０ｍｍｏｌ、１．３当量）を含むＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ（１６０ｍＬ／２．２ｍＬ）の溶液を１時間にわたり滴下しながら加えた。室温で１８時間攪拌後、混合物を濾過し、減圧下で溶媒を除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）に取り、次に飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１５０ｍＬ）および食塩水で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥させた後、有機層を、シリカゲルを通して濾過し濃縮した。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：８）で、６（６．７８ｇ、６３％）を黄白色の固体として得た。Ｒ_ｆ＝０．２７（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン，１：４）；ｍｐ５０−５２°Ｃ；^１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．９２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），３．５８（ｓ，２Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １９７．７，１７０．０，１４０．１，１３５．８，１２９．４（２Ｃ），１２８．５（２Ｃ），８１．２，４２．６，２８．０，２６．５；ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_１４Ｈ_１８Ｏ_３の理論値２３４．１２５５９；実測値２３４．１２５３２。

ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−アセチルフェニル）−２−ブロモアセテート（８）。６（２．８４ｇ、１２．１ｍｍｏｌ、１．０当量）を含む無水ＣＣｌ_４（２５０ｍＬ）の溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（２．５８ｇ、１４．５ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＢｒ_２（２滴）を加えた。混合物を還流するまで加熱し、５００Ｗのハロゲンランプで１０分間照射し、還流しながらさらに５０分間攪拌した。室温まで冷却した後、反応溶液を濾過し、溶媒を濃縮し、粗生成物をシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：１０）で精製して、８（３．３４ｇ、８８％）を黄白色の固体として得た。Ｒ_ｆ＝０．２７（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン，１：４）；ｍｐ５４−５６°Ｃ；^１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．９３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），５．２７（ｓ，１Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １９７．２，１６６．６，１４１．１，１３７．３，１２８．８（２Ｃ），１２８．６（２Ｃ），８３．５，４７．１，２７．６，２６．６；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ（％）３１４（＜１）［Ｍ（^８１Ｂｒ）］^＋，３１２（＜１）［Ｍ（^７９Ｂｒ）］^＋，２４１（１０）［Ｍ（^８１Ｂｒ）−ＯｔＢｕ］^＋，２３９（８）［Ｍ（^７９Ｂｒ）−ＯｔＢｕ］^＋；ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_１０Ｈ_８ ^８１ＢｒＯ_２［Ｍ（^８１Ｂｒ）−ＯｔＢｕ］の理論値２４０．９６８７２；実測値２４０．９６８３３，ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_１０Ｈ_８ ^７９ＢｒＯ_２［Ｍ（^７９Ｂｒ）−ＯｔＢｕ］の理論値２３８．９７０７６；実測値２３８．９７０７４。

（Ｒ／Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）］−２−（４−アセチルフェニル）アセテート（１０）。室温の１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン（３３１ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ、１．２当量）とＫ_２ＣＯ_３（５５２ｍｇ、３．９９ｍｍｏｌ、２．５当量）を含むＤＭＦの懸濁液に、８（５００ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ、１．０当量）を含むＤＭＦ（５０ｍＬ）の溶液を１０時間にわたって滴下しながら加えた。混合物を濾過し減圧下で濃縮した。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（勾配ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３１：７→７：１、１％ＮＥｔ_３）で、１０（４８８ｍｇ、７５％）を黄白色の固体として得た。Ｒ_ｆ＝０．１０（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３，３：１，１％ＮＥｔ_３）；ｍｐ３３−３６°Ｃ；^１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．９１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），４．６２（ｓ，１Ｈ），２．９０−２．６７（ｍ，１１Ｈ），２．６４−２．４４（ｍ，１０Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １９７．４，１７０．７，１４２．３，１３６．４，１２９．３，１２８．３，８１．９，６７．８，４９．３，４７．７，４５．９，４５．８，２８．１，２６．５；ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_２２Ｈ_３６Ｎ_４Ｏ_３の理論値４０４．２７８７５；実測値４０４．２７９５１。

（Ｒ／Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−２−（４−アセチルフェニル）アセテート（１）。室温の１０（７００ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＫ_２ＣＯ_３（１．０８ｍｇ、７．７９ｍｍｏｌ、４．５当量）を含むＤＭＦ（５０ｍＬ）の懸濁液に、ｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモアセテート（０．８４ｍＬ、５．７１ｍｍｏｌ、３．３当量）を含むＤＭＦ（２０ｍＬ）の溶液を３０分間にわたって加えた。４時間の攪拌後、混合物を濾過し減圧下で濃縮した。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３９：１、１％ＴＥＡ）で、１１（９３０ｍｇ、７２％）を黄白色の固体として得た。９９％純度；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１０→１００％）Ｒ_ｔ＝２２．０；Ｒ_ｆ＝０．８３（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３，３：１，１％ＮＥｔ_３）；ｍｐ７０−７１°Ｃ；^１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．９４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），４．６６（ｓ，１Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝１７．３Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．３８（ｄ，Ｊ＝１７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．２２−３．０５（ｍ，３Ｈ），２．９８−２．７０（ｍ，６Ｈ），２．６１（ｓ，３Ｈ），２．６１−２．４８（ｍ，２Ｈ），２．４６−２．３８（ｍ，１Ｈ），２．３６−２．２４（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．０４（ｍ，５Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １９７．６，１７３．４，１７３．１，１７３．０，１７２．９，１３７．２，１３６．６，１３０．３（２Ｃ），１２８．１（２Ｃ），８２．９，８２．２，８２．１，８２．０，６５．４，５６．０，５５．８，５５．５，５２．７，５２．４，５２．１，４８．５，４８．１，４８．０，４７．９，４４．５，２７．９（３Ｃ），２７．８（６Ｃ），２７．７（３Ｃ），２６．６；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ（％）７４６．０（９）［Ｍ］^＋，６４５．１（４７）［Ｍ−ＣＯ_２ｔＢｕ］^＋；ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_３５Ｈ_５７Ｎ_４Ｏ_７［Ｍ−ＣＯ_２ｔＢｕ］の理論値６４５．４２２７３；実測値６４５．４２２５７。

メチル２−（４−（２−（トリメチルシリル）エチニル）フェニル）アセテート（１４）。０℃のメチル（４−ヨードフェニル）アセテート（１３）（１２．８ｇ、４５ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリメチルシリル−アセチレン（９．３０ｍＬ、６７．５ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＴＥＡ（１４．９ｍＬ、１０８ｍｍｏｌ、２．４当量）を含む無水ＣＨ_３ＣＮ（１２０ｍＬ）の溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（３．６ｇ、３．１５ｍｍｏｌ、０．０７当量）およびＣｕＩ（６．００ｇ、３１．５ｍｍｏｌ、０．７当量）を加えた。０℃で３０分間、および室温で３時間攪拌後、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）を溶出剤として使用してシリカの短いカラムに通して混合物を濾過した。減圧下で溶媒を除去し、残渣をシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（勾配ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：８０→１：２０）で精製して、１４（１０．３ｇ、９３％）を黄白色の結晶として得た。Ｒ_ｆ＝０．２７（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン，１：１０）；ｍｐ５５−５８°Ｃ；^１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．４２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．６１（ｓ，２Ｈ），０．２５（ｓ，９Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １７１．４，１３４．３，１３２．０（２Ｃ），１２９．１（２Ｃ），１２２．０，１０４．７，９４．２，５２．０，４１．０，−０．０（３Ｃ）；ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_１４Ｈ_１８Ｏ_２Ｓｉの理論値２４６．１０７６１；実測値２４６．１０７４４。

メチル２−ブロモ−２−（４−（２−（トリメチルシリル）エチニル）フェニル）アセテート（１５）。−７８℃の１４（２．０７ｇ、８．４０ｍｍｏｌ、１．０当量）を含む無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）の溶液に、ＬＤＡ（ＴＨＦ／ｎ−ヘプタン／エチルベンゼン中の２Ｍ溶液、５．０４ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えて、溶液を１時間攪拌した。この後、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１．７９ｇ、１０．１ｍｍｏｌ、１．２当量）を含む無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）の懸濁液を加え、１８時間にわたって混合物を室温まで温めた。減圧下で溶媒を除去し、残渣をＣＣｌ_４（３０ｍＬ）に懸濁し、濾過し、蒸発させた。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（勾配ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：８０→１：２０、１％ＮＥｔ_３）による精製で、１５（１．２８ｇ、４７％、回収された１４に関して９２％）を得た。Ｒ_ｆ＝０．４２（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン，１：１０）；ｍｐ８２−８４°Ｃ；^１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．４７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．３２（ｓ，１Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），０．２５（ｓ，９Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １６８．３，１３５．７，１３２．２（２Ｃ），１２８．５（２Ｃ），１２４．２，１０４．１，９５．８，５３．３，４５．８，４５．８，−０．１（３Ｃ）；ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_１４Ｈ_１７ ^８１ＢｒＯ_２Ｓｉの理論値３２６．０１６０８；実測値３２６．０１６２２。

（Ｒ／Ｓ）−メチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）］−２−（４−（２−（トリメチルシリル）エチニル）フェニル）アセテート（１６）。室温の１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン（シクレン）（５４８ｍｇ、３．１８ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＫ_２ＣＯ_３（４３９ｍｇ、３．１８ｍｍｏｌ、１．２当量）を含むＤＭＦ（６０ｍＬ）の懸濁液に、１５（８６２ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ、１．０当量）を含むＤＭＦ（５０ｍＬ）の溶液を１０時間にわたって滴下しながら加えた。混合物を濾過し減圧下で濃縮した。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（勾配ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３１：９→９：１、１％ＮＥｔ_３）で、１６（５９０ｍｇ、５３％）を黄白色の固体として得た。Ｒ_ｆ＝０．１０（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３，３：１，１％ＮＥｔ_３）；ｍｐ７０−７５°Ｃ；^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ_４） δ ７．４９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．９０（ｓ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．２１−３．０１（ｍ，６Ｈ），３．０１−２．８２（ｍ，８Ｈ），２．７１−２．６２（ｍ，２Ｈ），０．２３（ｓ，９Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ_４） δ １７４．２，１３５．６，１３３．２（２Ｃ），１３０．８（２Ｃ），１２４．９，１０５．４，９５．９，６７．２，５３．０，４８．４（２Ｃ），４７．０（２Ｃ），４４．９（２Ｃ），４４．４（２Ｃ），−０．０（３Ｃ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_２２Ｈ_３６Ｎ_４Ｏ_２Ｓｉの理論値４１６．３；実測値４１７．４［（Ｍ＋Ｈ）］^＋，４３９．４［（Ｍ＋Ｎａ）］^＋。

（Ｒ／Ｓ）−メチル２−［１−（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）−４，７，１０−トリス（ｔｅｒｔ−ブチルアセテート）］−２−（４−エチニル）フェニル）アセテート（３）。室温の１６（５３０ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＫ_２ＣＯ_３（６３４ｍｇ、４．５７ｍｍｏｌ、３．６当量）を含むＤＭＦ（５０ｍＬ）の懸濁液に、ｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモアセテート（６１５μＬ、４．１９ｍｍｏｌ、３．３当量）を含むＤＭＦ（２０ｍＬ）の溶液を３０分間にわたって加えた。４時間の攪拌後、混合物を濾過して減圧下で濃縮し、残渣をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解した。その後、フッ化テトラブチルアンモニウム（４８１ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、１５分間の攪拌後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３１：１０、１％ＮＥｔ_３）で精製して、３（５０８ｍｇ、８５％）を黄白色の固体として得た。９９％純度；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１０→１００％）Ｒ_ｔ＝２０．０；Ｒ_ｆ＝０．２８（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３，１：９，１％ＮＥｔ_３）；ｍｐ６３−６８°Ｃ；^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ_４） δ ７．４８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），４．８３（ｓ，１Ｈ），３．７５（ｄ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．５５（ｓ，１Ｈ），３．５４（ｄ，Ｊ＝１７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．５１（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．２６−３．２１（ｍ，１Ｈ），３．１８−３．０５（ｍ，４Ｈ），２．９９−２．９２（ｍ，３Ｈ），２．８９（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），２．８７（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），２．７４−２．６３（ｍ，２Ｈ），２．３３（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），２．２８−２．１２（ｍ，４Ｈ），２．１２−２．０５（ｍ，２Ｈ），１．５４（ｓ，９Ｈ），１．５２（ｓ，１８Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ_４） δ １７６．３，１７５．４，１７５．１，１７４．７，１３４．１，１３２．８，１３１．７，１２３．８，８３．８，８３．５，８３．１，７９．７，６６．４，５９．６１，５９．５９，５９．５７，５７．１，５６．８，５６．７，５４．２，５３．９，５３．７，５３．２，４５．９，２８．５，２８．４，２８．３，２４．８；ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_３７Ｈ_５８Ｎ_４Ｏ_８の理論値６８６．４２５４６；実測値６８６．４２５３２。

化学選択的オキシムライゲーション。ＤＯＴＡ−Ｔｙｒ^３−オクトレオタート誘導体１９の合成。１（３．３ｍｇ、４．５μｍｏｌ、１．０当量）を、１０ＮのＨＣｌ水溶液を含むジオキサン（５０／５０、ｖ／ｖ、２ｍＬ）中で１８時間脱保護した後、溶媒を減圧下で除去した。残渣をＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１：１、ｖ／ｖ、０．２ｍＬ、ＨＰＬＣグレード）にｐＨ４（ＴＦＡ、ＨＰＬＣグレード）で溶解し、１８（６．１ｍｇ、４．５μｍｏｌ、１．０当量）を加えた。１８時間攪拌後、溶媒を濃縮して、半分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２０→５０％、３０分間）で粗生成物を直接精製して、凍結乾燥後に１９（６．１ｍｇ、７３％）を無色の粉末として得た。９７％純度；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１０→６０％）Ｒ_ｔ＝１８．１；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_７５Ｈ_９９Ｎ_１５Ｏ_２２Ｓ_２の理論値１６２５．７；実測値１６２６．６［Ｍ＋Ｈ］^＋，１６６４．６［Ｍ＋Ｋ］^＋。

化学選択的１，３−双極付加環化。（“クリック”化学）。ＤＯＴＡ−Ｔｙｒ^３−オクトレオタート誘導体２４の合成。室温の３（３．１ｍｇ、４．１μｍｏｌ、１．０当量）を含むＴＨＦ（０．２ｍＬ）の溶液に、ＬｉＯＨ（０．３３ｍｇ、１４μｍｏｌ、３．４当量）を含むＨ_２Ｏ（３０μＬ）の溶液を加え、混合物を１８時間攪拌した。次いで、Ｈ_２Ｏ（０．２ｍＬ）、ペプチド２５（５．５ｍｇ、４．１μｍｏｌ、１．０当量）、０．１ＭＣｕＳＯ_４水溶液（４９μＬ、４．９μｍｏｌ、１．２当量）および銅粉末（１０ｍｇ）を加えて、混合物を１８時間攪拌した。この後、銅粉末を濾別し、減圧下で溶媒を除去し、ＴＦＡ／ＴＩＰＳ／Ｈ_２Ｏの混合物（９５：５：５、ｖ／ｖ、１ｍＬ）で２時間処理することによってｔｅｒｔ−ブチルエステルを切断した。溶媒を再度除去し、残渣をＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ（１：１、ｖ／ｖ、１ｍＬ）に取り、Ｎａ_２Ｓ（Ｎａ_２Ｓ・９Ｈ_２Ｏ、１２ｍｇ、４９μｍｏｌ、１２．０当量）を加えて銅塩を沈殿させた。混合物を濾過し、半分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２０→５０％、３０分間）で粗生成物を直接精製して、凍結乾燥後に直鎖状の２４（３．０ｍｇ、３７％）を無色の粉末として得た。ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ／ＤＭＳＯ（１：１：０．１、４ｍＬ）中で４８時間攪拌することによって、直鎖状ペプチドを定量的収率で再環化した。ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１：２、ｖ／ｖ、１０ｍＬ、ｐＨ１〜３（ＴＦＡ））から蒸発および凍結乾燥させた後、２４（３．０ｍｇ、２５から３７％）を白色粉末として分離した。９７％純度；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１０→６０％）Ｒ_ｔ＝１６．１；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_８０Ｈ_１０６Ｎ_１８Ｏ_２２Ｓ_２の理論値１７３４．７；実測値８６８．８［（Ｍ＋２Ｈ）／２］^＋，１７３５．５［Ｍ＋Ｈ］^＋。

１９の^６８Ｇａ−標識。^６８ＧａＣｌ_３を、インハウスの“ＯＢＮＩＮＳＫ”^６８Ｇｅ／^６８Ｇａジェネレーター（１．４８ＧＢｑ、ＣｈｅｍｏｔｒａｄｅＣｈｅｍｉｅｈａｎｄｅｌｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔＧｍｂＨ、ライプチヒ、ドイツ）から、０．１ＮのＨＣｌで溶出した。^６８Ｇａ標識については、最初にジェネレーター溶出液を最終量がおよそ２００μＬになるように真空中で濃縮した。通常は行わないものの、この実験的研究に使用された古いジェネレーターによってもたらされた比較的少ない^６８Ｇａ放射活性を完全に活用できるようにするためにはこの濃縮ステップが必要であった。次に、^６８Ｇａ活性を２３０μＬの０．１ＮＮａＯＡｃ（ｐＨ＝４．５）で希釈し、８０μＬの１ＮＮａＯＨを加えることによってｐＨ３．５に緩衝した。２．２μＬの０．７ｍＭペプチド１９ストック溶液（１．５ｎｍｏｌ（３μｇ）のペプチドに相当する）を加えた後、反応混合物を１５分間９５℃に加熱した。室温まで冷却後、反応混合物を２ｍＬの水で希釈した。未反応の^６８Ｇａ活性を除去するために、標識ペプチド［^６８Ｇａ］１９をＳｅｐ−ＰａｋＣ−１８カートリッジ上に固定化し、１０ｍＬの水で洗浄し、２ｍＬのエタノールで溶出した。マウス注射用のエタノールを含まない溶液を得るために、溶媒を真空中で蒸発させ、最終的な放射能濃度が３８μＣｉ／１００μＬとなるように生成物を２ｍＬのＰＢＳに再溶解した。Ｓｙｋａｍ勾配ＨＰＬＣシステム（ＳｙｋａｍＧｍｂＨ、フルスランフェルドブルック、ドイツ）およびＵＶＩＳ２００フォトメーター（Ｌｉｎｅａｒ（商標）ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔＣｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ、リーノ−、米国）を使用して、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ１００Ｃ１８（５μｍ、１２５×４．０ｍｍ）カラムで品質管理用の分析ＨＰＬＣを行った。放射活性測定については、ＵＶフォトメーターのアウトレットをＮａ（Ｔｌ）ウェルタイプシンチレーションカウンターＡｃｅＭａｔｅ（商標）９２５−Ｓｃｉｎｔ（ＥＧ＆ＧＯｒｔｅｃ、ミュンヘン、ドイツ）に接続した。使用した溶出剤は、Ｈ_２Ｏ（０．１％ＴＦＡ、溶媒Ａ）およびＣＨ_３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ、溶媒Ｂ）で、勾配は：０〜２分間が０％Ｂ、２〜９分間が０〜４０％Ｂ、９〜１５分間が４０％Ｂとした。１ｍＬ／分の一定流量でペプチドを溶出した。ＵＶ検出波長は２２０ｎｍであった。Ｒ_ｔ（［^６８Ｇａ］１９）＝１５．３分；Ｋ’ ＝８．１３。

動物実験。その高いｓｓｔ_２−ソマトスタチン受容体発現のため、ラット膵臓腫瘍細胞株ＡＲ４２Ｊを腫瘍モデルとして使用した。^５５腫瘍増殖を確立するため、１ｍＭＥＤＴＡを含むＰＢＳを用いて細胞を培養フラスコの表面から剥がし、遠心分離して、無血清培地（ＲＰＭＩ−１６４０、Ｂｉｏｃｈｒｏｍ、ベルリン、ドイツ）に再懸濁した。細胞懸濁液の濃度は３．７×１０^６個／血清１００μＬであった。ヌードマウス（雌、６〜８週）の脇腹に、１００μＬの細胞懸濁液を皮下注射した。腫瘍移植の１０日後に、全てのマウスは触知可能な充実性腫瘤を示し（腫瘍重量は０．７〜１．４ｇ）、これらを実験に使用した。

生体内分布試験では、３８μＣｉの［^６８Ｇａ］１９（０．１５μｇのペプチドに相当する）を含む１００μＬのＰＢＳを、マウスの尾静脈に静脈内注射した。放射性リガンドの非特異的な組織内蓄積を、過剰量のｃｏｌｄｃｏｍｐｅｔｉｔｏｒ（２０μｇＴｙｒ^３−オクトレオチド／マウス）の同時注入よって判定した。放射性リガンド注射後の異なる時点（３０分および６０分ｐ．ｉ．）において、マウス（時間点につきｎ＝５；６０分ｐ．ｉ．におけるブロッキング試験用にｎ＝３）を屠殺し、解剖した。目的とする臓器を取り出し、重量を測定し、γカウンター（Ｗａｌｌａｃｈ、トゥルク、フィンランド）でカウントした。データは、ｇ組織当たりの％注射用量（％ｉＤ／ｇ）で表す。

結果
オキシムライゲーションを介したアミノオキシ官能基化ペプチドへの化学選択的結合のためのカルボニル−置換ＤＯＴＡ誘導体の開発。我々の合成戦略を計画する上で、アミノオキシ基は、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル保護アミノオキシ官能基化アミノ酸成分として容易にペプチドに組み込まれうることから、我々は、カルボニル官能基をＤＯＴＡ部分に結合させることを決定した。カルボニル官能基として、アルデヒドよりも、その有意に高い安定性からメチルケトンが好ましかった。この手順は、アルデヒドを使用する場合には不可欠であろうさらなる保護および脱保護のステップを回避し、最終化合物をより長期間にわたって容易に保存できるようにする。さらに、我々のアイディアは、我々の新しいＤＯＴＡ誘導体の潜在的な応用範囲を拡大するものであった。これまでは、モノ結合体の選択的形成を可能にする誘導体に主に焦点が当てられていたが、選択的に変換され得る２つの異なる官能基を提供する新規なＤＯＴＡ誘導体の開発は、例えば、ホモ−およびヘテロオリゴマーの選択的合成^４１または薬物動態の向上^４２をもたらすことが示されている、糖のようなさらなる基の結合などの新たな機会をもたらすものとなるだろう。従って我々は、２つの異なる保護基戦略を策定した：ｉ）塩基に不安定な１つの保護基での直交保護（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）であり、１つのカルボン酸基の選択的脱保護と誘導体化を可能にするもの、およびｉｉ）モノ結合体のみが望ましい場合に１ステップの脱保護を提供する、酸に不安定な基での完全な保護である。

我々の合成は、４−アセチルフェニルボロン酸（４）から始まり、これを鈴木クロスカップリング反応においてメチル２−ブロモアセテートおよびｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモアセテートとそれぞれ反応させて、対応する２−（４−アセチルフェニル）置換アセテート５および６を良好な収率で形成させた（スキーム１）。^４３

スキーム１．カルボニル置換ＤＯＴＡ誘導体１および２の合成。^ａ
^ａ試薬と条件：（ａ）ＢｒＣＨ_２ＣＯ_２Ｒ、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２／Ｐ（ｏ−Ｔｏｌ）_３、Ｋ_２ＣＯ_３、ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ、１８時間、５：６６％、６：６３％、（ｂ）ＮＢＳ、Ｂｒ_２、ｈｖ、ＣＣｌ_４、１時間、７：８９％、８：８８％、（ｃ）１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン、Ｋ_２ＣＯ_３、ＤＭＦ、１０時間、９：６２％、１０：７５％、（ｄ）ＢｒＣＨ_２ＣＯ_２ｔ−ＢｕＫ_２ＣＯ_３、ＤＭＦ、４時間、１１：８３％、１：７２％、（ｅ）ＬｉＯＨ、ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ、１８時間、３８％（回収された１１に関して６６％）。

触媒量の臭素の存在下、Ｎ−ブロモスクシンイミドを使用したラジカル条件下でのα臭素化と、光照射による開始によって、α−ブロモエステル７および８を高収率（それぞれ８９％および８８％）で得た。後者の化合物を、Ｋ_２ＣＯ_３の存在下、シクレンを含むＤＭＦの溶液にゆっくりと加えて、対応するモノアルキル化シクレン付加化合物９および１０を６２％および７５％の収率で得た。続くｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモアセテートでのペルアルキル化で、テトラエステル１１および１（それぞれ８３％および７２％の収率）が得られた。驚いたことに、ＬｉＯＨを用いたメチルエステル１１の鹸化の間に、ｔｅｒｔ−ブチルエステルの部分的な脱保護が観察された。しかし、この副反応が主反応よりもゆっくりと進行することから、生成物のさらなる切断を防ぐために、約５０％の変換で反応を止めた場合、良好な収率で所望の遊離酸２を得ることができる。このようにして、ＨＰＬＣによる精製後に２を３８％の収率（回収された１１に基づいて６６％）で得た。ＬｉＩを使用した試行的鹸化では、複数の生成物からなる分離不能な混合物がもたらされ、炭酸塩を使用した場合、鹸化は起こらなかった。

Ｈｕｉｓｇｅｎ１，３−双極付加環化を介したアジド官能基化ペプチドへの化学選択的結合のためのアルキン置換ＤＯＴＡ誘導体の開発。Ｈｕｉｓｇｅｎ付加環化^{１８，１９}を介したペプチドへの結合を可能にする適切なＤＯＴＡ誘導体のデザインでは、例えば、アジド酸の導入^{４４〜４６}によって、または固相上でのジアゾ転移^４７によって、アジド官能基化ペプチドが利用できることから、我々は、アルキン官能基をＤＯＴＡ誘導体に結合させることに決めた。カルボニル置換誘導体の合成における有意義な経験を経て、アルキンの組み込みのための中核的残基として、我々は２−ブロモ−２−フェニル酢酸を再度選択し、上述のものと類似の合成経路が可能となった。

市販の４−ヨードフェニル酢酸（１２）を、メチルエステル１３（９３％収率）としてまず保護し、その後、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４／ＣｕＩを触媒として用いて、トリメチルシリル−アセチレンでの薗頭カップリングを行い、４−アルキニルフェニルアセテート１４を９３％の収率で得た（スキーム２）。

スキーム２．アルキン官能基化ＤＯＴＡ誘導体の合成。^ａ
^ａ試薬と条件：（ａ）ＳＯＣｌ_２、ＭｅＯＨ、１時間、９３％、（ｂ）ＨＣ≡Ｃ−ＴＭＳ、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４／ＣｕＩ、ＮＥｔ_３、ＣＨ_３ＣＮ、３時間、９３％、（ｃ）１）ＬＤＡ、ＴＨＦ、１時間、２）ＮＢＳ、ＴＨＦ、１８時間、４７％（回収された１４に関して９２％）、（ｄ）１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン、Ｋ_２ＣＯ_３、ＤＭＦ、１０時間、５３％、（ｅ）１）ＢｒＣＨ_２ＣＯ_２ｔ−ＢｕＫ_２ＣＯ_３、ＤＭＦ、４時間、２）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ、１５分間、８５％。

残念なことに、７および８について上述したようなラジカル条件下での１４のα臭素化は、ＮＢＳおよびＢｒ_２／ｈｖを開始剤としたもの両方で失敗した。これは、三重結合の存在によって生じた副反応に起因する可能性が高い。従って我々は、求電子的に臭化物を導入することによってこの問題を回避した。この目的のために、我々は、Ｅｖａｎｓら^４８が説明しているものと類似の手法でエステル１４をホウ素エノラートに変換し、ＬＤＡおよびＢｕ_２ＢＯＴｆで処理して、その後ＮＢＳを求電子的臭素化試薬として加えた。しかし、α−ブロモエステル１５の収率はむしろ不良であった（３９％）。反応をさらに最適化する試みにおいて、我々は、ＬＤＡでの脱プロトン化によって得られる１４のリチウムエノラートがＮＢＳと直接反応すれば、変換が非常にクリーンに進行することを見出した。このようにして１５を４７％の収率で得ることができ、未反応の１４が４９％の収率で一緒に回収された。この結果は、反応中の１当量の１４のリチウムエノラートで形成された生成物の迅速な脱プロトン化につながる、α−ブロモエステル１５の１４に対する著しく高い酸性度によって説明される。たとえエノラートを著しく過剰なＮＢＳに加えても、収率をそれ以上上げることはできなかった。しかし、回収された出発材料１４に基づくと、収率はほぼ定量的であった。上述のものと類似の方法で、α−ブロモエステル１５でのシクレンのモノアルキル化を行い、１６を５３％の収率で得た。続くｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモアセテートでのペルアルキル化およびＴＢＡＦを用いたＴＭＳ保護基の切断によって、テトラエステル３を得た（２ステップで８５％の収率）。２の合成で述べたように、我々は、３中のメチルエステルの選択的な鹸化も試みた。しかし、我々にとっても大きな驚きであったが、１当量のＬｉＯＨの存在下では、３中のｔｅｒｔ−ブチルエステルの切断はさらに迅速に進行し、我々は、切断されたｔｅｒｔ−ブチルエステルおよびメチルエステルの１つを有する対応する化合物を主生成物として見出した。１つのｔｅｒｔ−ブチル基を持たない位置異性体の中の所望の生成物は、わずかな量でしか検出できなかった。

ＤＯＴＡケトン誘導体１を使用した、オキシムライゲーションを介したＤＯＴＡ−Ｔｙｒ^３−オクトレオタート結合体１９の化学選択的合成。これらの新規な官能基化キレーターを手にして、我々は、Ｎ−末端アミノオキシへだけでなく、Ｔｙｒ^３−オクトレオタートに基づくアルキン官能基化ソマトスタチンアナログへの化学選択的結合を詳細に調べた。

我々の初期の実験では、オキシムライゲーションにｔｅｒｔ−ブチル保護ＤＯＴＡケトン１を直接使用したが、反応は非常にクリーンに進行したものの、得られた結合体のオキシム結合は、ｔｅｒｔ−ブチル基の完全な脱保護に必要な強力な酸性条件下では安定ではなかった。従って我々は、ライゲーションの前にｉｎｓｉｔｕで１を脱保護しなくてはならなかった。比較的穏やかな方法（ギ酸^４９または５０％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ）を使用すると脱保護は失敗し、Ｆｍｏｃペプチド化学で使用される標準的な脱保護用混合物であるＴＦＡ／ＴＩＰＳ／Ｈ_２Ｏ（９５／２．５／２．５、ｖ／ｖ／ｖ）混合物^５０を用いると、１中のケトンの還元がもたらされた。１０ＮのＨＣｌ水溶液を含むジオキサン（５０／５０、ｖ／ｖ）で処理した場合、定量的切断が実現された（スキーム３）。次に、得られた脱保護されたキレーター１７を、ｐＨ４（ＴＦＡ）においてＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ混合物中で等モル量のアミノオキシ官能基化Ｔｙｒ^３オクトレオタート１８と反応させて、純度８５％（ＨＰＬＣ解析による）で所望の結合体１９を得た（スキーム３）（図２）。遊離アミノオキシ官能基が生じるあらゆる反応は、カルボニル官能基化された不純物との副反応を防ぐために高い溶媒純度（ＨＰＬＣグレード）が必要とされることを強調する必要がある。分取ＨＰＬＣで最終生成物をさらに精製して、収率７３％、純度９７％で１９を得た。

スキーム３．ＤＯＴＡ誘導体１およびアミノオキシ官能基化Ｔｙｒ^３−オクトレオタート１８の化学選択的オキシムライゲーション。^ａ
^ａ試薬と条件：（ａ）１０ＮＨＣｌ／ジオキサン（１：１、ｖ／ｖ）、１８時間、（ｂ）ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ（１：１、ｖ／ｖ、ＨＰＬＣグレード）ｐＨ４（ＴＦＡ、ＨＰＬＣグレード）、１８時間、７３％（２ステップ）。

ＤＯＴＡアルキン誘導体３を使用したＨｕｉｓｇｅｎ１，３−双極付加環化を介したＤＯＴＡ−Ｔｙｒ^３−オクトレオタート結合体２４の化学選択的合成。Ｔｙｒ^３−オクトレオタートのアジド官能基化に関して、我々は、固相上での３−（３−アジドプロピルカルバモイル）プロパン酸２１での単純なＮ末端伸長法を選択した。複数の生物活性ペプチドにおいては、ＢＦＣＡと標的分子との間にスペーサーを使用するのが非常に重要であること、および、我々のグループにおけるこれまでの経験を踏まえ、２１をリンカーとして選択した。１−ブロモ−３−アミノプロパンから出発する２１の２ステップの合成は安価で、収率が高く、スケールアップが容易で、クロマトグラフィーを必要としない（スキーム４）。

スキーム４．３−（３−アジドプロピルカルバモイル）プロパン酸２１の合成。^ａ
^ａ試薬と条件：（ａ）ＮａＮ_３、Ｈ_２Ｏ、８０℃、２４時間、８４％、（ｂ）無水コハク酸、ＮＥｔ_３、アセトン、１５時間、７１％。

付加環化の前に、メチルエステル３をｉｎｓｉｔｕで鹸化し（上述のように、このステップはｔｅｒｔ−ブチルエステルの切断と一緒に進行する）、得られる遊離酸２２の混合物を、Ｃｕ／ＣｕＳＯ_４を触媒系として使用して、ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物中でアジド官能基化Ｔｙｒ^３−オクトレオタート２３と反応させた（スキーム５）。次に、粗生成物混合物をＴＦＡ／ＴＩＰＳ／Ｈ_２Ｏ（９５／２．５／２．５、ｖ／ｖ／ｖ）混合物^５０を使用して直接脱保護し、良好な純度（ＨＰＬＣ解析によると６９％、図３）で粗生成物２４を得た（スキーム５）。しかし、ＥＳＩ法による質量分析では、２４が非常に安定した銅錯体として得られたことが示され、これは、酸性溶出剤を使用したＨＰＬＣ精製中でも安定であることが証明された。しかしながら、銅塩は硫化ナトリウムでの沈殿によって容易に除去することができた。このステップの結果として、分子内ジスルフィド架橋の開裂が生じ、ペプチドをＨＰＬＣ精製後に再環化しなくてはならなかった。定量的収率で環化が行われ、所望の結合体２４を３７％の収率で２３から、９７％の純度で得た。

スキーム５．ＤＯＴＡ誘導体３およびアジド官能基化Ｔｙｒ^３−オクトレオタート２３の化学選択的１，３−双極付加環化。^ａ
^ａ試薬と条件：（ａ）ＬｉＯＨ、ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ、１８時間、（ｂ）１）Ｃｕ／ＣｕＳＯ_４、ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ、１８時間、２）ＴＦＡ／ＴＩＰＳ／Ｈ_２Ｏ（９５：５：５、ｖ／ｖ）、２時間、３）Ｎａ_２Ｓ、ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ、４）ＤＭＳＯ、ＮＨ_３、ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ、４８時間、３７％（５ステップ）。

我々の手順を確認するために、システインを含まないアジド官能基化サンプルペプチド３−（３−アジドプロピルカルバモイル）プロパノイル−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ（２５、サポート情報を参照）で反応を繰り返した。類似の方法で、付加環化によって銅錯体生成物の形成がもたらされたが、この場合は、副反応なしで金属イオンを除去することができた。ｔｅｒｔ−ブチルエステルの脱保護によって、ＨＰＬＣ解析によると７６％の純度の粗生成物が得られた。ＨＰＬＣ精製後、対応する結合体２６を５１％の収率で得た。

放射性標識。通常は、さらなる処理を行わずに、ペプチド標識に^６８Ｇｅ／^６８Ｇａジェネレーター溶出液が直接使用される。しかしこの研究では溶出液を蒸発乾固させ、^６８Ｇａ放射能を少量の反応バッファー（０．１ＮＮａＯＡｃ、ｐＨ３．５）に再溶解し、これを放射性金属化反応に使用した。ジェネレーターはほぼ消耗していたが、この手順によって、効率的な放射性金属導入に必要なペプチド前駆体の量の低減が可能となり、故に、比較的高い比放射能の［^６８Ｇａ］１９がもたらされた（マウスへの注射の時点において５７０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）。［^６８Ｇａ］１９は、５５．７％の放射化学的収率で得られた。［^６８Ｇａ］１９の放射化学的純度は９１．４％であった。

生体内分布試験。ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するヌードマウスの３０分および６０分ｐ．ｉ．における［^６８Ｇａ］１９の生体内分布データを図４に示す。両時間点において、放射性リガンドの血中濃度は比較的高かった（３０分および６０分ｐ．ｉ．において、それぞれ２．３７±０．３５および１．７１±０．１７％ｉＤ／ｇ）。観察期間中に腎臓内蓄積は急速に低下し（２０．０±２．４から１１．９±１．９％ｉＤ／ｇ）、これは［^６８Ｇａ］１９の腎クリアランスを示していたが、その他の排泄器官、すなわち肝臓および腸管におけるトレーサー蓄積は、長時間にわたってゆっくりとしか低下せず、これはおそらく排出と関係のない非特異的蓄積に起因するものである。ｓｓｔ発現組織では、腫瘍と他のｓｓｔ陽性臓器との強い相違が観察された。膵臓、副腎、および胃におけるトレーサー蓄積が３０〜６０分ｐ．ｉ．の間に有意に低下した一方、腫瘍内蓄積はこの期間ほぼ一定のままであった（３０および６０分ｐ．ｉ．においてそれぞれ７．７３±１．５２および７．４６±１．３０）。このことと、他の臓器内の非特異的なトレーサー蓄積の全体的な低下が、３０〜６０分ｐ．ｉ．の間の腫瘍／臓器比の上昇につながった（図５）。過剰量の未標識競合物質（２０μｇＴｙｒ３−オクトレオチド／マウス）の同時注入による競合試験（６０分ｐ．ｉ．）において、腫瘍内蓄積が主に受容体を介していることが示された。これらの条件下で、腫瘍内蓄積は２．６８±０．３６％ｉＤ／ｇに低下した。

考察
ＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラキス（カルボキシメチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン）およびその誘導体は、様々な二価および三価の金属イオンと非常に安定した錯体を形成できることから、医療分野における画像技術用のキレーターの重要なクラスとして浮上した。キレーターが接合した標的生体分子の便利な合成のために、直交保護されたカルボキシ基を有する、種々の適当なプロキレーター説明されている。しかし、これまでのところ、標的分子内のアミンまたはカルボキシル官能基を介するもの以外の結合を可能にするプロキレーターの合成に関する報告は１つしかない。^１５オキシムライゲーションまたはクリック化学を介する化学選択的結合を可能にするＢＦＣＡの開発における我々のアプローチは、新規なキレーター１、２、および３の合成をもたらした。この合成における最初の重要なステップは、シクレンのモノアルキル化である。文献では、２当量^７または５当量^８のシクレンが使用され、定量的収率がアルキル化剤の量に基づいて計算される、複数の類似のモノアルキル化の例が存在する。金属を保護基として使用する試みも存在する。^５１一連のもののうちシクレンが最も高価な試薬であることから、我々の合成においては、おおよそ等モル量のアルキル化剤を使用し、化合物１６、９、および１０について、それぞれシクレンに基づいて５３、６２、および７５％の間で満足のいく収率を得た。粗生成物をさらに直接アルキル化することができたが、得られた化合物のアルキル化酢酸エステル残基の性質のみが異なっているもっと後の段階における分離よりも、高度にアルキル化された生成物および未反応のシクレンから粗生成物を分離するほうが容易であったため、フラッシュクロマトグラフーを使用してこの段階でこの中間体の精製を行った。通常は、拡散バンドのためにシリカでのシクレン誘導体の分離は時として非常に困難であること、分取ＲＰ−ＨＰＬＣによる精製が優れた代替手段であることにも留意するべきである。α−ブロモエステル７、８、および１５の合成は複雑ではなく、生成物が良好な収率で得られた。

驚くべきことに、３および１１中のメチルエステルの最終的な鹸化は、複数の条件下においてｔｅｒｔ−ブチルエステルの加水分解ももたらした。３については、２を単一生成物として得るために、約５０％の変換で反応を停止することが可能であった。残念ながら、アルキン誘導体１１の場合は、ｔｅｒｔ−ブチルエステルの切断はさらに速く進行した。従って、我々は、遊離酸２２の混合物との化学選択的１，２，３トリアゾール形成を行い、次いでＴＦＡでの処理によって残りのｔｅｒｔ−ブチル基を切断した。クリック反応^{２８、２９、３１〜３６}について、我々は、過剰量の銅金属と一緒に１．２当量の硫酸銅を使用し、これによって、触媒活性のＣｕ^Ｉ種のｉｎｓｉｔｕ生成がもたらされた。わずか１ｍｏｌ％のＣｕ^ＩＩ塩が用いられている報告^５２があるものの、１当量のＣｕ^ＩＩが、ＤＯＴＡ誘導体２２によって直ちに錯体化される事実を考えると、我々は過剰量のＣｕ^ＩＩ塩を使用しなくてはならなかった。しかし、文献では多くの異なる手順が存在し^５２、我々の目的にとって触媒量の最適化は不可欠ではなかった。

モデルペプチド２５を使用すると、１，２，３−トリアゾール誘導体へのクリーンな変換が観察された。金属を含まない化合物を入手するために硫化ナトリウムでの沈殿が不可欠であること、および、その後に２４中の開裂したジスルフィド架橋の再環化が必要であることに直面したため、Ｔｙｒ^３−オクトレオタートの場合にみられるようなジスルフィド架橋を含む標的分子には、この手法でのキレーターの化学選択的導入は推奨できなかった。しかし、システインを含まない標的部分にとっては、我々のアルキン誘導体化キレーターは、モデルペプチド２５との反応によって示されたように、高度に化学選択的なＢＦＣＡの結合に対するもう１つの優れた代替法を提供する。ごく最近、Ｌｉｎと共同研究者らは、Ｃｕ^Ｉ−触媒による１，２，３−トリアゾール形成による部位特異的タンパク質修飾を示した。^５３この手法を適用し、アルキン官能基化ＤＯＴＡ誘導体２２を使用すると、タンパク質の部位特異的ＤＯＴＡ標識が可能となるであろう。

我々の新しいメチルケトン官能基化キレーター１７の、保護されていないＮ末端アミノオキシ官能基化Ｔｙｒ^３−オクトレオタートとのオキシムライゲーションは、円滑に、副生成物もなく進行し、これにより、メチルケトンとヒドロキシルアミンの化学選択的縮合のもう１つの例が追加された。しかし、ベンズアルドキシムのみをもたらす、１８をベンズアルデヒドとアセトフェノンに同時に曝露する競合実験で我々が証明したように、アミノオキシ基とのケトンの反応速度はアルデヒドと比較すると非常に遅い。４時間の反応時間の後、等モル量のメチルケトン１７を使用すると、変換は約６０％であり、一晩放置すると終了まで進んだ。従って、我々は、アミノオキシ官能基化生体分子のライゲーションに適した、実験台上で安定な新規なＤＯＴＡ誘導体の化学選択的結合を示すことに成功した。最近提示されたアミノオキシ官能基化ＤＯＴＡ誘導体^１５と比較すると、ＳＰＰＳ用の適切なアミノオキシ官能基化成分が市販されていることから（例、Ｂｏｃ−Ａｍｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｄｐｒ（Ｂｏｃ−Ａｏａ）−ＯＨ）、我々の逆アプローチによって、ペプチド配列中のあらゆる位置における我々のキレーターの導入が可能になる。

［^６８Ｇａ］１９が、３０分および６０分ｐ．ｉ．において特異的かつ高い腫瘍内蓄積を示したことが、ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するヌードマウスにおける最初のｉｎｖｉｖｏ評価で示され、これはｓｓｔ受容体親和性が、用いられるライゲーション化学によってほとんど影響を受けないままであることを示唆する。［^６８Ｇａ］１９について見出された腫瘍内蓄積および腫瘍対臓器比が、同じ腫瘍モデルにおける“参照”リガンド［^６８Ｇａ］ＤＯＴＡＴＯＣ（ＤＯＴＡ−Ｔｙｒ^３−オクトレオチド）および［^６８Ｇａ］ＤＯＴＡＴＡＴＥ（ＤＯＴＡ−Ｔｙｒ^３−オクトレオタート）^５４について報告されたものほど高くなかったが、この研究で提示されたＤＯＴＡカップリング手法に基づく放射性金属化オクトレオタートアナログを、恐らくは最適化の後に、ｉｎｖｉｖｏのｓｓｔイメージングにも用いてよい。この文脈では、［^６８Ｇａ］１９は、それらの受容体結合能に挑戦することなく、新規な受容体結合放射性ペプチドの合成に対する、オキシムライゲーションを介したＤＯＴＡ接合化学の一般的適用性の原理の証明に役立ち得る。

結論
本書で説明した新規なアルキンおよびケト官能基化ＤＯＴＡ誘導体によって、多官能性化合物との容易で化学選択的な接合が可能となる。さらに、遊離カルボキシルおよびカルボニル部分を有する二官能性誘導体が報告され、これは、ヘテロダイマーのような高級化合物のさらなる誘導および合成にとって有用なツールであってよい。我々の新たな修飾キレーターに関して、我々は、ＢＦＣＡの最終的な適用を考慮して、複雑な保護基化学を回避する経済的で単純な手順を開発した。これにより、標識化合物がわずかな合成ステップで簡単に入手できるようになる。アルキンだけでなくメチルケトン官能基化ＤＯＴＡ誘導体も、対応する接合反応において適切なＮ末端修飾Ｔｙｒ^３−オクトレオタートと高度に選択的に反応することが証明された。さらに、ＡＲ４２Ｊ腫瘍を有するヌードマウスにおける［^６８Ｇａ］１９の薬物動態は、診断的および治療的ｉｎｖｉｖｏ応用のための新たな放射性金属化ペプチドリガンドの合成に対する、化学選択的ＢＦＣ接合アプローチの適合性を示す。

参考文献

Claims

式

の化合物であって、
式中、
Ｒ^１は、水素、メチル、エチルおよびカルボキシル保護基から選択され、
Ｒ^２およびＲ^３は、水素、メチル、エチル、およびカルボキシル保護基から独立して選択され、
Ｒ^４は、水素、メチル、エチルおよびカルボキシル保護基から選択され、
Ｒ^５は、メチルケトンで置換されたアリールまたはアルキン基もしくはアジド基である付加環化反応に参加するのに適した官能基で置換されたアリールであり、
前記カルボキシル保護基は、存在する場合、ベンジル、フルオレニルメチルおよびｔ−ブチルからなる群より選択される、化合物。
前記アルキン基はエチニル基である、請求項１に記載の化合物。
Ｒ^５は、１つまたは２つの環を有する５員〜９員のアリール基である、請求項１〜請求項２のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^５は、６員のアリール基である、請求項３に記載の化合物。
Ｒ^５はフェニル基である、請求項４に記載の化合物。
前記フェニル基は、パラ位が前記メチルケトン基またはアルキン基もしくはアジド基である付加環化反応に参加するのに適した前記官能基で置換されている、請求項５に記載の化合物。
Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３は、同じ、または別のカルボキシル保護基であり、前記カルボキシル保護基は、存在する場合、ベンジル、フルオレニルメチルおよびｔ−ブチルからなる群より選択される、請求項１〜請求項６のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^４は、水素またはメチルである、請求項１〜請求項７のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３はｔ−ブチルであり、Ｒ^４は水素またはメチルである、請求項１〜請求項８のいずれか一項に記載の化合物。
式

の化合物であって、
式中、前記基Ｇ^１からＧ^４の１つは、ＣＨ（ＣＯ_２Ｒ^４）−Ｒ^５であり、任意の残りの基Ｇ^１からＧ^４はＣＨ_２ＣＯ_２Ｒ^１であり、Ｒ^４は、水素、メチル、エチル、およびカルボキシル保護基から選択され、Ｒ^５は、メチルケトンで置換されたアリールまたはアルキン基もしくはアジド基である付加環化反応に参加するのに適した官能基で置換されたアリールであり、Ｒ^１は、水素、メチル、エチルおよびカルボキシル保護基から選択され、前記カルボキシル保護基は、存在する場合、ベンジル、フルオレニルメチルおよびｔ−ブチルからなる群より選択される、化合物。
請求項１〜請求項１０のいずれか一項に記載の化合物と誘導体化標的分子とを有する結合体であって、Ｒ^５がメチルケトンで置換されている場合は、前記標的分子は、相補的なメチルケトンを含むように誘導体化されており、前記化合物と標的分子はオキシム結合で結合されており、Ｒ^５がアルキン基もしくはアジド基である付加環化反応に参加するのに適した官能基で置換されている場合は、前記標的分子は、前記付加環化反応用の相補基を含むように誘導体化されており、前記化合物と前記標的分子は、前記付加環化反応のヘテロ環生成物によって結合されており、前記標的分子はペプチドである、結合体。
前記化合物と標的分子は、１，２，３−トリアゾール基によって結合されている、請求項１１に記載の結合体。
請求項１〜請求項１０のいずれかに記載の化合物または請求項１１もしくは請求項１２に記載の結合体と錯体を形成する放射性核種を有するキレート。
前記放射性核種は、アクチニウム２２５、ビスマス２１２、ビスマス２１３、鉛２０３、銅６４、銅６７、ガリウム６６、ガリウム６７、ガリウム６８、ルテチウム１７７、インジウム１１１、インジウム１１３、イットリウム８６およびイットリウム９０、ジスプロシウム１６２、ジスプロシウム１６５、ジスプロシウム１６７、ホルミウム１６６、プラセオジミウム１４２、プラセオジミウム１４３、プロメチウム１４９、およびテルビウム１４９から選択される、請求項１３に記載のキレート。
請求項１に記載の化合物の合成の方法であって、前記合成は、２置換のアリール、ヘテロアリール、アルキル、またはＬ ^１−ＣＨ（ＣＯ_２Ｒ^４）−Ｒ^５−Ｘとシクレンとの反応であって、ここでＲ^４およびＲ^５は請求項１に記載のものと同じ意味を持ち、Ｌ^１は脱離基であり、Ｘは、メチルケトン、またはアルキン基もしくはアジド基である付加環化反応に参加するのに適した官能基である、またはそのような官能基の保護された形態である、反応；ならびに、Ｌ^２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｒを使用する前記シクレンのその他の窒素原子のアルキル化であって、ここでＲは、請求項１で定めたようなＲ^１、Ｒ^２、またはＲ^３であり、Ｌ^２は脱離基である、アルキル化、を有する方法。
シクレンの前記窒素原子の２つ〜４つは、Ｌ^１−ＣＨ（ＣＯ_２Ｒ^４）−Ｒ^５−Ｘと反応し、Ｒ^４は、水素、メチル、エチル、およびカルボキシル保護基から選択され、Ｒ^５は請求項１に記載のものと同じ意味を持ち、前記シクレンの残りの窒素原子は、Ｌ^２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｒを使用してアルキル化され、Ｒは、請求項１で定めたようなＲ^２またはＲ^３であり、前記カルボキシル保護基は、存在する場合、ベンジル、フルオレニルメチルおよびｔ−ブチルからなる群より選択される、請求項１５に記載の方法。
前記結合体の放射性核種との任意の錯体形成の前に、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物および請求項１１に記載の誘導体化標的分子を、遷移金属触媒の存在下で付加環化反応によって反応させる工程を包含する、請求項１１に記載の結合体の合成方法。
前記金属触媒は銅またはロジウムを含む、請求項１７に記載の方法。
治療または診断において使用するための、請求項１３に記載のキレート。
過剰増殖性および／または腫瘍の状態の診断および／または治療用の薬剤の調製における、請求項１３に記載のキレートの使用。
過剰増殖性および／または腫瘍の状態の診断および／または治療に使用するための、請求項１３に記載のキレート。
前記状態は癌である、請求項２０に記載の使用または請求項２１に記載のキレート。
前記癌はホルモン応答性である、請求項２２に記載の使用またはキレート。
対象における過剰増殖性および／または腫瘍性の状態の診断または治療のための組成物であって、前記組成物は、それぞれ診断上または治療上効果的な量の請求項１３または請求項１４に記載のキレートを含有する、組成物。
請求項１１または請求項１２に記載の結合体の合成における、請求項１〜請求項１０のいずれかに記載の化合物の使用であって、前記結合体の放射性核種との任意の錯体形成の前に、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物および請求項１１に記載の誘導体化標的分子が、遷移金属触媒の存在下で付加環化反応によって反応されることを特徴とする、使用。
請求項１３または１４に記載のキレートの合成における、請求項１１または請求項１２に記載の結合体の使用であって、請求項１１または請求項１に記載の結合体が放射性核種と錯体形成されることを特徴とする、使用。
１つ以上のジスルフィド架橋を有する標的分子への二官能性キレート剤の金属触媒による接合の後に、二官能性キレート剤から金属触媒を脱キレートする方法であって、前記方法は、硫化ナトリウムを使用した金属イオンの除去と、それに続く、前記ジスルフィド架橋を再構築するための、ＮＨ_３ならびにアセトニトリルおよび水を有する溶媒での処理とから成り、前記二官能性キレート剤は請求項１に記載の化合物である、方法。
前記接合反応は、付加環化反応を伴う、請求項２７に記載の方法。
前記金属触媒は銅またはロジウムを含む、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
請求項１０に記載の化合物と、前記Ｒ^５基を介して前記化合物に結合する２つ以上の標的分子とを有する結合体であって、前記２つ以上の標的分子はペプチドである、結合体。