JP2535482B2 - カンジダ簡易鑑別用培地 - Google Patents
カンジダ簡易鑑別用培地Info
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Description
症の起炎菌であるカンジダ・アルビカンス（Candida al
bicans, 以下Ｃ．アルビカンス又はＣＡと略記する）と
カンジダ・グラブラータ（Candida glabrata，以下Ｃ．
グラブラータ又はＣＧと略記する）を培地上のコロニー
の色で容易に判別できるものであり、これを利用するこ
とによって、腟カンジダ症の起炎菌を簡便かつ速やかに
究明し治療対策を早期に確立することができる。尚Ｃ．
グラブラータは以前トルロプシス・グラブラータ（Toru
lopsis glabrata ）として分類されていた真菌であるの
で以下ＴＧと略記することがある。
起炎菌であるが、最近特に腟カンジダ症においてＣ．グ
ラブラータを起炎菌とするものが増加しつつあり、本症
はほとんどＣ．アルビカンスとＣ．グラブラータのいず
れかの単独感染又は混合感染により引き起こされてい
る。特にＣ．グラブラータの感染は難治性の場合が多く
婦人科領域で問題となっている。そこで起炎菌を同定し
早期に治療方針を確立するために、Ｃ．アルビカンスと
Ｃ．グラブラータを鑑別する必要があり、既に数種類の
鑑別用培地が市販されている。例えば日水製薬製の「ニ
ッスイスラントカンジダ培地」、セロテック社製の「Ｃ
Ａ−ＴＧ培地」等であり、これらはいずれも銅イオンの
取り込み能の差を利用してＣ．アルビカンスとＣ．グラ
ブラータとを識別するものである。銅イオンの取り込み
能の弱いＣ．アルビカンスは緑茶〜淡褐色、取り込み能
の強いＣ．グラブラータは暗褐色のコロニーを呈する。
従来の培地においては、臨床分離株によってコロニーの
色調にばらつきが生じ、またその色調の差も小さいので
Ｃ．アルビカンスとＣ．グラブラータを判別しにくく、
迅速な診断、治療対策の要求される臨床現場での鑑別培
地としては不十分なものであった。
のとして「Pagano−Levin 培地」が用いられている。該
培地の組成は「酵母分類同定法」（東大出版会）によれ
ば、酸化還元指示薬である２，３，５−トリフェニルテ
トラゾリウムクロリド（以下ＴＴＣと略記する）１００
μｇ／ｍｌ、酵母エキス０．１ｇ／１００ｍｌ、ペプト
ン１％、グルコース４．５％、寒天１．５％、ネオマイ
シン５００μｇ／１００ｍｌを含有し、ｐＨ６．０〜
６．２である。しかしながら、このPagano−Levin 培地
においては、Ｃ．アルビカンス及びＣ．グラブラータの
発育が遅く鑑別に時間がかかること、及びＣ．アルビカ
ンス及びＣ．グラブラータのコロニーの呈色の差が小さ
く、また培養時間が長くなるにつれ変色する等の理由で
識別しにくい等の問題がある。
目してなされたものであって、その目的はＣ．アルビカ
ンスとＣ．グラブラータを簡単明瞭に識別できる鑑別用
培地を提供することにある。
のできた本発明のカンジダ簡易識別用培地は、色素を添
加したサブロー培地に、２，３，５−トリフェニルテト
ラゾリウムクロリド（2,3,5-triphenyltetrazolium chl
oride)５〜３０μｇ／ｍｌ及び酵母エキス0.5〜５ｇ／
１００ｍｌを添加したものであることに要旨を有する。
改良すべく種々検討した結果、Pagano−Levin 培地を改
良し、特にＴＴＣと酵母エキスの添加量を規定すること
によりＣ．アルビカンスとＣ．グラブラータの発育が早
く、しかもコロニーが色調によって明瞭に識別すること
ができることを見出し本発明の完成に至ったものであ
る。以下本発明を発明の経緯に沿って説明する。
過程で、ＴＴＣと酵母エキスとが複合的に作用してカン
ジダのコロニーの色調に大きな影響を与えることを見出
した。従来のPagano−Levin 培地は酸化還元指示薬とし
てＴＴＣを添加し、Ｃ．アルビカンスとＣ．グラブラー
タの培地上での酸化還元能の差を利用してコロニーの色
調で判別しようとするものであり、酵母エキスは単なる
カンジダの発育促進物質として少量添加されるものであ
った。ところが、本発明者らはコロニーの呈色には酵母
エキス濃度が大きく関与していることを解明した。即
ち、酵母エキスの添加はカンジダの発育促進だけではな
く、Ｃ．アルビカンスとＣ．グラブラータのコロニーの
色調も変化させるのである。
たサブロー寒天培地にＴＴＣ２０μｇ／ｍｌを添加し、
更に表１に示す濃度になるように酵母エキスを添加し常
法に従って寒天培地を作成した。これにＣ．アルビカン
スとＣ．グラブラータ標準菌株を植菌して３７℃で２日
間培養して発育度とコロニーの色調を調べた。結果を表
１に示す。
が高くなるにつれＣ．アルビカンスのコロニーは白色か
ら赤色へと変化し、逆にＣ．グラブラータのコロニーは
赤色から白色へと変化していくことが判明した。また酵
母エキス濃度が０．５〜５ｇ／１００ｍｌの範囲でＣ．
アルビカンスとＣ．グラブラータのコロニーの色調の違
いに基づく識別度に優れていることが分かる。
る酵母エキス濃度は０．５〜５ｇ／１００ｍｌと規定し
た。この範囲内ではＣ．アルビカンスとＣ．グラブラー
タの鑑別性に優れているが、細菌汚染等を考慮すると１
〜２ｇ／１００ｍｌがより好ましい範囲として推奨され
る。
させた以外は試験例１と同様に培地を作成し、コロニー
の色調、発育度及びＣ．アルビカンスとＣ．グラブラー
タの識別度を調べた。結果を表２に示す。
るＴＴＣ添加量は５〜30μｇ／ｍｌである必要がある。
より好ましくは１０〜２０μｇ／ｍｌの範囲が挙げられ
る。即ち、５μｇ／ｍｌ未満ではコロニーの色調が弱く
なり、５０μｇ／ｍｌを超えると菌の発育を抑制するの
で好ましくない。
響されるが、本発明の培地におけるｐＨの影響について
試験を行った。 色素としてパテントブルー１０ｍｇを添
加したサブロー寒天培地１リットルに酵母エキス１０
ｇ、硫酸マグネシウム２．１ｇ、リン酸２水素カリウム
２．０ｇ、塩酸チアミン５０ｍｇを添加し、更にＴＴＣ
２０μｇ／ｍｌを加え、ｐＨを下記表３に示す様に種々
のｐＨとして、常法に従って寒天培地を作製した。各供
試培地にＣ．アルビカンスとＣ．グラブラータを接種し
３７℃２日間培養後、コロニーの色調を調べた。その結
果を表３に示す。尚ＣＡ及びＣＧは、弱酸性か中性で良
好に生育する。
たｐＨ５．０〜７．５の全てで良好な識別性を示し、特
にｐＨ６．０〜７．５で良好であった。本発明の培地に
添加する色素は、培地の背景色として呈色させるため用
いるものなので、Ｃ．アルビカンス及びＣ．グラブラー
タのコロニー色調との対比が良好でしかもそれらに影響
を与えないものが好ましく、例えばパテントブルーが挙
げられる。
定されず、通常の真菌鑑別用培地に用いられる成分を常
法に従って添加すればよい。例えば培地を固化させコロ
ニーの色調を観察しやすくするために寒天等を添加して
もよい。また、検体中に混在する雑菌の増殖を抑制ない
し殺菌するために、抗生物質であるクロラムフェニコー
ル，硫酸コリスチン等を添加することが好ましい。
明するが、下記実施例は本発明を制限するものではな
く、前・後記の趣旨を逸脱しない範囲で変更実施するこ
とは全て本発明の技術的範囲に包含される。
ｇ及びクロラムフェニコール４００mg、パテントブルー
１０mgを水１リットルに溶かし、ｐＨを６．２に調製
後、寒天１５ｇを加え、１２１℃、１０分間オートクレ
ーブ滅菌した。これを５０℃に保温し、これに濾過滅菌
したＴＴＣ２０mgを加え撹拌後シャーレに流し込み固化
させた。
ブラータを用いて、各々の比率を変えた混合懸濁液を準
備し、これらを上記の鑑別用培地に塗布し、３７℃、２
日間培養してコロニーを形成させた。この結果、Ｃ．ア
ルビカンスは緑色の培地上に鮮やかな赤色のコロニー
を、Ｃ．グラブラータは白色のコロニーを形成し、本発
明の鑑別用培地で容易に識別することができた。
の混合比率と平板培地に形成したコロニー数は表４に示
す通り混合比とよく相関し、本発明の培地を用いること
により、混合菌株の比率も容易に検出することができ
た。
酸２水素カリウム2.0ｇ、塩酸チアミン５０ｍｇ及び硫
酸コリスチン３０ｍｇ加えて実施例１と同様の処方によ
り本発明の鑑別用培地を得た。次いで腟粘膜より綿棒で
採取した臨床材料１６８検体を上記培地に塗抹し、３７
℃、３日間培養した。コロニーが形成されたものが６７
検体あり、このうち赤色コロニー（Ｃ．アルビカンスと
判定）が５１検体、白色コロニー（Ｃ．グラブラータと
判定）が１０検体、赤と白のコロニーの混在（Ｃ．アル
ビカンスとＣ．グラブラータの混合感染と判定）が６検
体であった。上記６７検体について、各々純粋分離後、
カンジダ同定用キットカンジダチェック（ヤトロン社
製）を用いて同定したところ、本発明の鑑別用培地によ
る上記結果と完全に一致した。
本培地）、基本培地に酵母エキス、カザミノ酸、コーン
スティーブ、ビーフエキス、心臓エキスを加えた培地に
各々Ｃ．アルビカンスとＣ．グラブラータを塗抹した。
３７℃、５日間培養し、経過日数に対するコロニーの大
きさ及び色調を観察した。その結果を表５に示す。
育にそれほど差は見られなかったが、コロニーの色調に
差が見られた。即ち酵母エキス以外では培養日数が経過
するにつれて、Ｃ．アルビカンスは白から桃色、Ｃ．グ
ラブラータは赤から桃色に変化し、両色調が接近するの
に対し、酵母エキス添加培地は５日間培養してもＣ．ア
ルビカンスは赤色、Ｃ．グラブラータは白色のままであ
った。又カザミノ酸添加培地は基本培地と同様５日間培
養してもＣ．アルビカンスは白色、Ｃ．グラブラータは
赤色であったが、カンジダの発育が極めて悪かった。
セロテック社製の「ＣＡ−ＴＧ培地」（Ｃｕイオンを添
加）を用いた。腟粘膜より綿棒で摂取した臨床材料を上
記培地に塗抹し、３７℃、５日間培養した。発育し、コ
ロニーを形成した検体につき各々経過日数ごとにカンジ
ダ同定用キット「カンジダチェック」（ヤトロン社製）
によって同定したコロニー数を分母とし、コロニーの色
を基準として鑑別したコロニー数を分子として表した結
果を表６に示す。
場合Ｃ．アルビカンス，Ｃ．グラブラータの双方に関し
て培養１日目から高い鑑別性を示し、早期鑑別が可能で
あることが分かる。また培養を続けて５日目になっても
鑑別性は高く、例えば臨床で数日後に鑑別するような場
合でも、十分実用性があることが分かる。一方比較培地
は、培養日数に依らずＣ．グラブラータの鑑別性が非常
に低く、また培養日数が長くなるにつれてＣ．アルビカ
ンスの鑑別性が次第に低下することが分かる。
本発明によれば、試料中にＣ．アルビカンスが存在する
か、Ｃ．グラブラータが存在するか又は両者が存在する
かを培地上のコロニーの色調で判断し、しかも対比色の
培地上に赤と白色のコロニーの有無で判別するため、従
来培地に比べてより簡単に判別できる。しかも臨床分離
株の色調もバラツキが見られないため正確に腟カンジダ
症起炎菌を判別できるという画期的な効果を有する。
Claims (1)
- 【請求項１】 色素を添加したサブロー培地に、２，
３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロリド（2,3,5-
triphenyltetrazolium chloride)５〜３０μｇ／ｍｌ及
び酵母エキス０．５〜５ｇ／１００ｍｌを添加したもの
であることを特徴とするカンジダ簡易鑑別用培地。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23723592A JP2535482B2 (ja) | 1992-09-04 | 1992-09-04 | カンジダ簡易鑑別用培地 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23723592A JP2535482B2 (ja) | 1992-09-04 | 1992-09-04 | カンジダ簡易鑑別用培地 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0678793A JPH0678793A (ja) | 1994-03-22 |
| JP2535482B2 true JP2535482B2 (ja) | 1996-09-18 |
Family
ID=17012394
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23723592A Expired - Lifetime JP2535482B2 (ja) | 1992-09-04 | 1992-09-04 | カンジダ簡易鑑別用培地 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2535482B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006112461A1 (ja) * | 2005-04-18 | 2006-10-26 | Microbio Kabushiki Kaisha | アリシクロバチルス・アシドテレストリス菌検出用試薬、検出用培地および検出方法 |
| JP2021122236A (ja) | 2020-02-05 | 2021-08-30 | 学校法人帝京大学 | スクリーニング用培地及びスクリーニング方法 |
-
1992
- 1992-09-04 JP JP23723592A patent/JP2535482B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0678793A (ja) | 1994-03-22 |
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