CN111088312A - 一种幽门螺杆菌检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents
一种幽门螺杆菌检测试剂盒及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111088312A CN111088312A CN201911364775.6A CN201911364775A CN111088312A CN 111088312 A CN111088312 A CN 111088312A CN 201911364775 A CN201911364775 A CN 201911364775A CN 111088312 A CN111088312 A CN 111088312A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- helicobacter pylori
- solution
- nickel chloride
- citric acid
- urea
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 title claims abstract description 54
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 title claims abstract description 54
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 8
- 229910021586 Nickel(II) chloride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 36
- QMMRZOWCJAIUJA-UHFFFAOYSA-L nickel dichloride Chemical compound Cl[Ni]Cl QMMRZOWCJAIUJA-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 36
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims abstract description 32
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 24
- XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K trisodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 23
- 230000008859 change Effects 0.000 claims abstract description 12
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 63
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 31
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 14
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 14
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 12
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 9
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical group C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 claims description 5
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 5
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 5
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 5
- XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-amino-4-(trifluoromethyl)-1,3-thiazole-5-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C=1SC(N)=NC=1C(F)(F)F XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 abstract description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 abstract 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 12
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 12
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 6
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 4
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 4
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 4
- VEQPNABPJHWNSG-UHFFFAOYSA-N Nickel(2+) Chemical compound [Ni+2] VEQPNABPJHWNSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 229910001453 nickel ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- ABIUHPWEYMSGSR-UHFFFAOYSA-N bromocresol purple Chemical compound BrC1=C(O)C(C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3S(=O)(=O)O2)C=2C=C(Br)C(O)=C(C)C=2)=C1 ABIUHPWEYMSGSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 5-methoxy-2-{[(4-methoxy-3,5-dimethylpyridin-2-yl)methyl]sulfinyl}-1H-benzimidazole Chemical compound N=1C2=CC(OC)=CC=C2NC=1S(=O)CC1=NC=C(C)C(OC)=C1C SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010007269 Carcinogenicity Diseases 0.000 description 1
- 108010076804 DNA Restriction Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000002064 Dental Plaque Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 206010019375 Helicobacter infections Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000002696 acid base indicator Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000007670 carcinogenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000260 carcinogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000011841 epidemiological investigation Methods 0.000 description 1
- XUFQPHANEAPEMJ-UHFFFAOYSA-N famotidine Chemical compound NC(N)=NC1=NC(CSCCC(N)=NS(N)(=O)=O)=CS1 XUFQPHANEAPEMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001596 famotidine Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000006241 metabolic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 150000002815 nickel Chemical class 0.000 description 1
- 229960000381 omeprazole Drugs 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种幽门螺杆菌检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒包括反应液和指示剂试纸，所述反应液包括pH3.0‑5.0的柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液、氯化镍和尿素，所述指示剂试纸可检测pH4.5‑7.0范围内pH变化。本发明试剂盒可用于检测唾液中幽门螺杆菌的感染情况，试剂简单，成本低廉，对人体无任何的伤害、痛苦、毒副反应和禁忌，操作简便快捷，灵敏度高，适宜推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种幽门螺杆菌检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori，HP)是慢性活动胃炎、消化性溃疡、胃癌和黏膜相关性淋巴瘤的重要病因。有研究表明，胃炎患者牙菌斑分离出的幽门螺杆菌，经培养并应用DNA限制性内切酶后，明确这些幽门螺杆菌与胃内相同，证实口腔内同样有幽门螺杆菌寄生，是继胃后的第二个贮存地。
自从1983年Marshall和Warren成功地分离出幽门螺杆菌以来。国内外学者对此进行了广泛的研究。目前检测Hp的方法可归纳为两大类。
侵入性的方法：即需通过内镜采取胃黏膜组织来检测Hp。有细菌培养法和病理学检测法。但因其在检测过称中要取胃粘膜组织，会造成胃粘膜损伤，并且退镜过程中可能存在微生物扩散。
非侵入性的方法：以免疫学法检测血清中的Hp抗体。已有多种方法检测，但公认以酶联免疫吸附试验和免疫印迹试验为优，优点是特异性高，可接近100％，且能进行定量分析，缺点是不能鉴别既往感染及现疫病人，主要适用于流行病学调查。除此之外常用尿素呼气试验(UBT)，目前临床使用的UBT分为14C-UBT和13C-UBT两种。其中14C-UBT由于放射性不适用于孕妇和儿童等受检者。尿素呼气试验(UBT)方法简单、快速，可靠、无痛苦，但需要特殊的检测设备且试剂昂贵。
目前市场上幽门螺杆菌快速检测方法针对于口腔幽门螺杆菌，通过采集口腔样品，经过尿素反应，经酸碱指示剂定性判定。但由于唾液成分复杂，某些成分或其他类微生物会对检测造成一定的影响，而且由于幽门螺杆菌数量少，脲酶反应往往不明显，使得指示剂变色不易区分观察，造成结果不准确。
发明内容
有鉴于此，本发明提出了一种灵敏度高、可定性检测幽门螺杆菌的试剂盒，在pH3-5的强酸缓冲液条件下筛选并扩大目标微生物，通过代谢反应改变溶液酸碱度，指示剂呈现明显变色，灵敏，易于观察，检测结果可靠。
本发明的技术方案是这样实现的：
第一方面，本发明提供了一种幽门螺杆菌检测试剂盒，包括反应液和指示剂试纸，所述反应液包括柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、氯化镍和尿素，所述指示剂试纸可检测pH4.5-7.0范围内pH变化。
在以上技术方案的基础上，优选的，所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液pH范围在3-5。
在以上技术方案的基础上，优选的，所述指示剂为甲基红、石蕊或溴甲酚紫，变色范围广，变色明显，易于观察。
第二方面，本发明提供了第一方面所述幽门螺杆菌检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、配制柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；
S2、称取无水氯化镍溶于去离子水中，配制13.0-25.9g/L氯化镍溶液；
S3、向步骤S2所述氯化镍溶液中加入尿素，搅拌至溶解，得到尿素和氯化镍混合溶液；
S4、将所述尿素和氯化镍混合溶液与柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液混合，得到反应液；
S5、取200μL所述反应液置于1.5mL离心管中，盖紧离心管管盖；
S6、取可检测pH4.5-7.0范围内pH变化的指示剂试液适量，将滤纸浸泡其中，干燥制得指示剂试纸，采用塑料袋真空密封；
S7、包装即得所述幽门螺杆菌检测试剂盒。
在以上技术方案的基础上，优选的，所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的pH3-5。
在以上技术方案的基础上，优选的，所述尿素和氯化镍混合溶液与柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液按照(2-4):1体积比混合。
第三方面，本发明提供了第一方面所述的幽门螺杆菌检测试剂盒的应用，具体包括用消毒棉签采集受试者适量唾液，用灭菌剪刀剪下棉签头并将其置于离心管中，盖紧离心管盖，振荡数秒后静置0.5-1h，取出棉签头擦拭指示剂试纸，观察指示剂试纸颜色变化，以判断受试者是否感染幽门螺杆菌。
本发明的幽门螺杆菌检测试剂盒及其制备方法相对于现有技术具有以下有益效果：
(1)本发明试剂盒采用pH3-5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液可以营造幽门螺杆菌有效增殖的环境，抑制其他细菌的增殖，同时幽门螺杆菌分泌的脲酶可发挥很好的酶活性，培养一定时间后，幽门螺杆菌数量增加，从而增加由此分泌产生的脲酶，提高检测反应的灵敏度；
(2)镍离子是幽门螺杆菌进化的关键，可以允许其在非常酸性的条件下存活，镍离子进去幽门螺杆菌细胞内，调节脲酶合成，本发明试剂盒反应液中的镍离子更有利于幽门螺杆菌定殖并分泌大量的脲酶；
(3)镍盐具有一定的毒性、致癌性，将其与柠檬酸混合会形成一部分配合物，可以降低镍离子毒性，同时这种配合物可以起到稳定尿素的作用，提高了该试剂盒的安全性和稳定性。
具体实施方式
下面将结合本发明实施方式，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
如果没有特殊说明，下面实施例所用的原料均为市售。
实施例1
本实施例提供一种幽门螺杆菌检测试剂盒，其包括反应液和指示剂试纸，所述反应液包括pH3.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、氯化镍和尿素，所述指示剂试纸为甲基红试纸。
其制备方法如下：
S1、称取21.01g柠檬酸溶解于去离子水中，定容到1L，得0.1mol/L柠檬酸溶液，称取29.41g柠檬酸钠溶液溶解于去离子水中，定容到1L，得0.1mol/L柠檬酸钠溶液，将上述柠檬酸溶液和柠檬酸钠溶液按体积比93:7混合，得到pH3.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；
S2、称取1.30g无水氯化镍溶于去离子水中，置于100mL容量瓶里，定容到100mL，得到氯化镍溶液；
S3、称取18g尿素溶于100mL所述氯化镍溶液中，得到尿素和氯化镍混合溶液；
S4、将所述尿素和氯化镍混合溶液与pH3.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液按照2:1体积比混合，得到反应液；
S5、取200μL所述反应液置于1.5mL离心管中，盖紧离心管管盖；
S6、取甲基红试液适量，将滤纸浸泡其中30min，干燥制得指示剂试纸，采用塑料袋真空密封；
S7、包装即得所述幽门螺杆菌检测试剂盒。
实施例2
本实施例提供一种幽门螺杆菌检测试剂盒，其包括反应液和指示剂试纸，所述反应液包括pH4.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、氯化镍和尿素，所述指示剂试纸为溴甲酚紫试纸。
其制备方法如下：
S1、称取21.01g柠檬酸溶解于去离子水中，定容到1L，得0.1mol/L柠檬酸溶液，称取29.41g柠檬酸钠溶液溶解于去离子水中，定容到1L，得0.1mol/L柠檬酸钠溶液，将上述柠檬酸溶液和柠檬酸钠溶液按体积比131:69混合，得到pH4.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；
S2、称取1.56g无水氯化镍溶于去离子水中，置于100mL容量瓶里，定容到100mL，得到氯化镍溶液；
S3、称取18g尿素溶于100mL所述氯化镍溶液中，得到尿素和氯化镍混合溶液；
S4、将所述尿素和氯化镍混合溶液与pH4.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液按照3:1体积比混合，得到反应液；
S5、取200μL所述反应液置于1.5mL离心管中，盖紧离心管管盖；
S6、取溴甲酚紫试液适量，将滤纸浸泡其中30min，干燥制得指示剂试纸，采用塑料袋真空密封；
S7、包装即得所述幽门螺杆菌检测试剂盒。
实施例3
本实施例提供一种幽门螺杆菌检测试剂盒，其包括反应液和指示剂试纸，所述反应液包括pH5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、氯化镍和尿素，所述指示剂试纸为石蕊试纸。
其制备方法如下：
S1、称取21.01g柠檬酸溶解于去离子水中，定容到1L，得0.1mol/L柠檬酸溶液，称取29.41g柠檬酸钠溶液溶解于去离子水中，定容到1L，得0.1mol/L柠檬酸钠溶液，将上述柠檬酸溶液和柠檬酸钠溶液按体积比41:59混合，得到pH5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；
S2、称取2.59g无水氯化镍溶于去离子水中，置于100mL容量瓶里，定容到100mL，得到氯化镍溶液；
S3、称取18g尿素溶于100mL所述氯化镍溶液中，得到尿素和氯化镍混合溶液；
S4、将所述尿素和氯化镍混合溶液与pH5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液按照4:1体积比混合，得到反应液；
S5、取200μL所述反应液置于1.5mL离心管中，盖紧离心管管盖；
S6、取石蕊试液适量，将滤纸浸泡其中30min，干燥制得指示剂试纸，采用塑料袋真空密封；
S7、包装即得所述幽门螺杆菌检测试剂盒。
实施例4、酸性反应液中细菌生长情况监测
分别用实施例1-3所述试剂盒中的反应液培养大肠杆菌、表皮葡萄球菌和幽门螺杆菌，观察细菌生长情况。按1％(v/v)量向实施例1-3三种反应液分别接种大肠杆菌、表皮葡萄球菌和幽门螺杆菌的种子液(OD600≈0.500)，在28℃、180rpm条件下振荡培养24h，之后在分光光度计上检测OD600值，比较每种菌株的生长情况。
表1不同反应液中三种菌的生长情况
| 菌株 | 实施例1反应液 | 实施例2反应液 | 实施例3反应液 |
| 大肠杆菌 | 0.432 | 0.544 | 0.568 |
| 表皮葡萄球菌 | 0.641 | 0.663 | 0.757 |
| 幽门螺杆菌 | 1.580 | 1.596 | 1.525 |
由上表1可见，大肠杆菌和表皮葡萄球菌在强酸性条件下几乎没有生长，而幽门螺杆菌得到很好的增殖，长势良好。说明本发明试剂盒反应液可以抑制杂菌生长，让目的检测菌株幽门螺杆菌扩大培养，增加待测样本中幽门螺杆菌数量，使得脲酶反应结果更显著。
实施例5、本发明试剂盒检测效果验证
S1、受试对象
选取180个自愿者，各随机挑选60例分别采用实施例1-3试剂盒检测口腔幽门螺杆菌感染情况，受试者在检测前24h内未服用奥美拉唑、法莫替丁等药物，检测前1h内不准喝水、漱口，不吃酸碱性食物；同时采用胃镜取活检标本检测方法核实。
S2、幽门螺杆菌检测
检测方法如下：用消毒棉签采集受试者适量唾液，用灭菌剪刀剪下棉签头并将其置于离心管中，盖紧离心管盖，振荡数秒后静置0.5-1h，取出棉签头擦拭指示剂试纸，等候10sec后，观察指示剂试纸颜色变化，以判断受试者是否感染幽门螺杆菌。
判定标准：使用实施例1试剂盒，检测结果颜色为橙色，判定为幽门螺杆菌阳性，黄色为强阳性，红色为阴性；使用实施例2试剂盒，检测结果颜色为紫色，判定为幽门螺杆菌阳性，深紫色或紫红色为强阳性，黄色为阴性；使用实施例3试剂盒，检测结果颜色为紫色，判定为幽门螺杆菌阳性，蓝色为强阳性，红色为阴性。
结果显示，使用本发明试剂盒检测结果与胃镜取活检标本检测结果完全一致，准确率达100％，说明本发明试剂盒可以有效、精准检测幽门螺杆菌。
以上所述仅为本发明的较佳实施方式而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种幽门螺杆菌检测试剂盒，包括反应液和指示剂试纸，其特征在于：所述反应液包括柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、氯化镍和尿素，所述指示剂试纸可检测pH4.5-7.0范围内pH变化。
2.如权利要求1所述的幽门螺杆菌检测试剂盒，其特征在于：所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液pH范围在3-5。
3.如权利要求1所述的幽门螺杆菌检测试剂盒，其特征在于：所述指示剂为甲基红、石蕊或溴甲酚紫。
4.权利要求1所述的幽门螺杆菌检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、配制柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；
S2、称取无水氯化镍溶于去离子水中，配制13.0-25.9g/L氯化镍溶液；
S3、向步骤S2所述氯化镍溶液中加入尿素，搅拌至溶解，得到尿素和氯化镍混合溶液；
S4、将所述尿素和氯化镍混合溶液与柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液混合，得到反应液；
S5、取200μL所述反应液置于1.5mL离心管中，盖紧离心管管盖；
S6、取可检测pH4.5-7.0范围内pH变化的指示剂试液适量，将滤纸浸泡其中，干燥制得指示剂试纸，采用塑料袋真空密封；
S7、包装即得所述幽门螺杆菌检测试剂盒。
5.如权利要求4所述的幽门螺杆菌检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的pH 3-5。
6.如权利要求4所述的幽门螺杆菌检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述尿素和氯化镍混合溶液与柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液按照(2-4):1体积比混合。
7.权利要求1所述的幽门螺杆菌检测试剂盒的应用，其特征在于：用消毒棉签采集受试者适量唾液，用灭菌剪刀剪下棉签头并将其置于离心管中，盖紧离心管盖，振荡数秒后静置0.5-1h，取出棉签头擦拭指示剂试纸，观察指示剂试纸颜色变化，以判断受试者是否感染幽门螺杆菌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911364775.6A CN111088312A (zh) | 2019-12-26 | 2019-12-26 | 一种幽门螺杆菌检测试剂盒及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911364775.6A CN111088312A (zh) | 2019-12-26 | 2019-12-26 | 一种幽门螺杆菌检测试剂盒及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111088312A true CN111088312A (zh) | 2020-05-01 |
Family
ID=70397390
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911364775.6A Pending CN111088312A (zh) | 2019-12-26 | 2019-12-26 | 一种幽门螺杆菌检测试剂盒及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111088312A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113341142A (zh) * | 2021-06-07 | 2021-09-03 | 北京捷乐生物科技有限公司 | 一种胃幽门螺杆菌抗体检测方法及试剂盒 |
| CN114807298A (zh) * | 2022-05-31 | 2022-07-29 | 浙江省立同德医院(浙江省精神卫生研究院) | 一种幽门螺杆菌检测试剂盒 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104458725A (zh) * | 2014-12-08 | 2015-03-25 | 本溪泰斯特捷生物科技有限公司 | 一种幽门螺旋杆菌尿素酶检测试剂盒及其制备方法 |
| CN105203529A (zh) * | 2014-06-13 | 2015-12-30 | 亚山制药株式会社 | 幽门螺杆菌感染诊断用试剂盒 |
| CN112683893A (zh) * | 2020-12-21 | 2021-04-20 | 南京康容健康科技有限公司 | 一种高灵敏度的幽门螺杆菌检测试剂盒 |
-
2019
- 2019-12-26 CN CN201911364775.6A patent/CN111088312A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105203529A (zh) * | 2014-06-13 | 2015-12-30 | 亚山制药株式会社 | 幽门螺杆菌感染诊断用试剂盒 |
| CN104458725A (zh) * | 2014-12-08 | 2015-03-25 | 本溪泰斯特捷生物科技有限公司 | 一种幽门螺旋杆菌尿素酶检测试剂盒及其制备方法 |
| CN112683893A (zh) * | 2020-12-21 | 2021-04-20 | 南京康容健康科技有限公司 | 一种高灵敏度的幽门螺杆菌检测试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| A AGHA等: "Effect of different organic acids (citric, malic and ascorbic) on intragastric urease activity", 《ALIMENT PHARMACOL THER》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113341142A (zh) * | 2021-06-07 | 2021-09-03 | 北京捷乐生物科技有限公司 | 一种胃幽门螺杆菌抗体检测方法及试剂盒 |
| CN114807298A (zh) * | 2022-05-31 | 2022-07-29 | 浙江省立同德医院(浙江省精神卫生研究院) | 一种幽门螺杆菌检测试剂盒 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4748113A (en) | Compositions and methods for the diagnosis of gastrointestinal disorders involving urease | |
| CN100580091C (zh) | 人与动物共患结核病荧光pcr快速诊断试剂盒 | |
| CA2160916C (en) | Test composition for the rapid detection of helicobacter pylori in gastric biopsy tissue | |
| Könönen et al. | Bacteroides, Porphyromonas, Prevotella, Fusobacterium, and Other Anaerobic Gram‐Negative Rods | |
| CN111088312A (zh) | 一种幽门螺杆菌检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN102305857A (zh) | 一种测定幽门螺杆菌抗体的胶乳免疫试剂及其检测方法 | |
| CN112683893A (zh) | 一种高灵敏度的幽门螺杆菌检测试剂盒 | |
| CN105203529A (zh) | 幽门螺杆菌感染诊断用试剂盒 | |
| US6187556B1 (en) | Composition, kit, and method for detecting Helicobacter pylori in biopsy | |
| CA1274757A (en) | Compositions and methods for the detection of urease for the diagnosis of campylobacter pyloridis infection | |
| US9410179B2 (en) | Diagnostic method for the determination of Helicobacter pylori | |
| CN103834741B (zh) | 一种无创幽门螺杆菌基因检测试剂盒及其制备和检测方法 | |
| JP3459877B2 (ja) | 培 地 | |
| CN106086213A (zh) | 口腔中幽门螺杆菌pcr检测方法 | |
| US20240174973A1 (en) | Culture medium for testing drug resistance of h.pylori as well as preparation method and use thereof | |
| EP0920531B1 (en) | Test strip for detecting gastric problems based on the presence of urease | |
| Hotis et al. | A simple method for detecting mastitis streptococci in milk | |
| Liebman et al. | Evaluation of the string test in intestinal bacterial overgrowth | |
| CN106755279A (zh) | 用于检测细菌性阴道炎的培养液、试剂盒及检测方法 | |
| CN101851661B (zh) | 非诊断目的的在a-peg-b列阵下加快检测支原体时间的方法 | |
| JPH03168098A (ja) | トリコモナス症診断用半流動培地 | |
| KR100306587B1 (ko) | 헬리코박터파이로리감염의진단방법및그를위한신속요소분해효소반응키트 | |
| CN105820975A (zh) | 一种口腔幽门螺杆菌培养方法 | |
| Salihu et al. | Development of a prototype milk screening reagent for the detection of bovine subclinical mastitis using common detergents and Hibiscus sabdariffa petals. | |
| Singh et al. | Bacterial deoxyribonuclease production and its possible influence on mastitis detection |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200501 |