JP2024512351A - Ｇｄｆ－１５に対する抗体 - Google Patents

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メディミューン，エルエルシー
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Abstract

本開示は、ヒトＧＤＦ－１５結合抗体及びその抗原結合断片を対象とする。これらの抗体及び断片は、例えば、ヒトＧＤＦ－１５を検出するために、且つ／又はヒトＧＤＦ－１５の過剰発現に関連する癌又は体重減少、例えば悪液質を治療する方法において使用することができる。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月８日に出願された米国仮特許出願第６３／１５８，２７４号の優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ＥＦＳ－ＷＥＢを介して電子的に提出された配列表への参照
電子的に提出された配列表（名称：ＧＤＦ１５－１００－ＷＯ－ＰＣＴ＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５；サイズ：１９５，６２２バイト；及び作成日：２０２２年３月２日）の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
増殖／分化因子１５（ＧＤＦ－１５；マクロファージ阻害性サイトカイン（ＭＩＣ－１）、ＮＳＡＩＤ活性化遺伝子１タンパク質（ＮＡＧ－１）、ＮＳＡＩＤ調節遺伝子１タンパク質（ＮＲＧ－１）、胎盤ＴＧＦ－ベータ、胎盤骨形成タンパク質、及び前立腺分化因子としても知られる）は、ＴＧＦβスーパーファミリーの分泌ホモ二量体型タンパク質である。ＧＤＦ－１５は、炎症、妊娠、及び体重調節において機能的役割を有することが知られている。健康な組織においては、ＧＤＦ－１５発現は、胎盤及び前立腺上皮において最も高い。しかしながら、ＧＤＦ－１５はまた、多くの固形悪性腫瘍において発現され、いくつかの癌では、発現は患者の予後不良と関連している。
癌の治療に有用な抗体が依然として非常に必要とされている。本開示は、そのような抗ＧＤＦ－１５抗体を提供する。
本明細書においては、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片が提供される。いくつかの態様では、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含み、これらのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３は、（ａ）それぞれ配列番号：３～５、１２～１４、（ｂ）それぞれ配列番号：２１～２３、３０～３２、（ｃ）それぞれ配列番号：３９～４１、４８～５０、（ｄ）それぞれ配列番号：５７～５９、６６～６８、（ｅ）それぞれ配列番号：７５～７７、８４～８６、（ｆ）それぞれ配列番号：９３～９５、１０２～１０４、（ｇ）それぞれ配列番号：１１１～１１３、１２０～１２２、（ｈ）それぞれ配列番号：１２９～１３１、１３８～１４０、（ｉ）それぞれ配列番号：１４７～１４９、１５６～１５８、（ｊ）それぞれ配列番号：１６５～１６７、１７４～１７６、（ｋ）それぞれ配列番号：１８３～１８５、１９２～１９４、（ｌ）それぞれ配列番号：２０１～２０３、２１０～２１２、（ｍ）それぞれ配列番号：２１９～２２１、２２８～２３０、（ｎ）それぞれ配列番号：２３７～２３９、２４６～２４８、（ｏ）それぞれ配列番号：２５５～２５７、２６４～２６６、（ｐ）それぞれ配列番号：２７３～２７５、２８２～２８４、（ｑ）それぞれ配列番号：２９１～２９３、３００～３０２、（ｒ）それぞれ配列番号：３０９～３１１、３１８～３２０、（ｓ）それぞれ配列番号：３２７～３２９、３３６～３３８、（ｔ）それぞれ配列番号：３４５～３４７、３５４～３５６、（ｕ）それぞれ配列番号：３６３～３６５、３７２～３７４、（ｖ）それぞれ配列番号：３８１～３８３、３９０～３９２、（ｗ）それぞれ配列番号：３９９～４０１、４０８～４１０、（ｘ）それぞれ配列番号：４１７～４１９、４２６～４２８、（ｙ）それぞれ配列番号：４３５～４３７、４４４～４４６及び（ｚ）それぞれ配列番号：４５３～４５５、４６２～４６４からなる群から選択される配列を含む。
いくつかの態様では、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、ＡＢ１１７０００２、ＡＢ１１７０００６、ＡＢ１１７００１０、ＡＢ１１７００１９、ＡＢ１１７００２８、ＡＢ１１７００３６、ＡＢ１１７００４０、ＡＢ１１７００４３、ＡＢ１１７００４７、ＡＢ１１７００６９、ＡＢ１１７００７０、ＡＢ１１７００７２、ＡＢ１１７００７３、ＡＢ１１７００７４、ＡＢ１１７００８６、ＡＢ１１７０１４８、ＡＢ１１７０２４１、ＡＢ１１７０２４２、ＡＢ１１７０２４３、ＡＢ１１７０２４４、ＡＢ１１７０２４５、ＡＢ１１７０２４６、ＡＢ１１７０２４７、ＡＢ１１７０２４８、ＡＢ１１７０２４９又はＡＢ１５２００８５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲ、ＩＭＧＴ定義のＣＤＲ又はＡｂＭ定義ＣＤＲである。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片はＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨは、配列番号２、２０、３８、５６、７４、９２、１１０、１２８、１４６、１６４、１８２、２００、２１８、２３６、２５４、２７２、２９０、３０８、３２６、３４４、３６２、３８０、３９８、４１６、４３４又は４５２のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、抗体又はその抗体結合断片はＶＨ及びＶＬを含み、ＶＬは、配列番号１１、２９、４７、６５、８３、１０１、１１９、１３７、１５５、１７３、１９１、２０９、２２７、２４５、２６３、２８１、２９９、３１７、３３５、３５３、３７１、３８９、４０７、４２５、４４３又は４６１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片はＶＨ領域及びＶＬを含み、ＶＨは、配列番号２、２０、３８、５６、７４、９２、１１０、１２８、１４６、１６４、１８２、２００、２１８、２３６、２５４、２７２、２９０、３０８、３２６、３４４、３６２、３８０、３９８、４１６、４３４又は４５２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、ＶＨ及びＶＬを含み、軽鎖可変領域は、配列番号１１、２９、４７、６５、８３、１０１、１１９、１３７、１５５、１７３、１９１、２０９、２２７、２４５、２６３、２８１、２９９、３１７、３３５、３５３、３７１、３８９、４０７、４２５、４４３又は４６１のアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片はＶＨ及びＶＬを含み、これらのＶＨ及びＶＬは、（ａ）それぞれ配列番号２及び１１、（ｂ）それぞれ配列番号２０及び２９、（ｃ）それぞれ配列番号３８及び４７、（ｄ）それぞれ配列番号５６及び６５、（ｅ）それぞれ配列番号７４及び８３、（ｆ）それぞれ配列番号９２及び１０１、（ｇ）それぞれ配列番号１１０及び１１９、（ｈ）それぞれ配列番号１２８及び１３７、（ｉ）それぞれ配列番号１４６及び１５５、（ｊ）それぞれ配列番号１６４及び１７３、（ｋ）それぞれ配列番号１８２及び１９１、（ｌ）それぞれ配列番号２００及び２０９、（ｍ）それぞれ配列番号２１８及び２２７、（ｎ）それぞれ配列番号２３６及び２４５、（ｏ）それぞれ配列番号２５４及び２６３、（ｐ）それぞれ配列番号２７２及び２８１、（ｑ）それぞれ配列番号２９０及び２９９、（ｒ）それぞれ配列番号３０８及び３１７、（ｓ）それぞれ配列番号３２６及び３３５、（ｔ）それぞれ配列番号３４４及び３５３、（ｕ）それぞれ配列番号３６２及び３７１、（ｖ）それぞれ配列番号３８０及び３８９、（ｗ）それぞれ配列番号３９８及び４０７、（ｘ）それぞれ配列番号４１６及び４２５、（ｙ）それぞれ配列番号４３４及び４４３、並びに（ｚ）それぞれ配列番号４５２及び４６１からなる群から選択される配列を含む。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３２６の配列を含むＶＨと、配列番号３３５の配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの態様では、ＧＤＦ－１５に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３２６の配列を含むＶＨと配列番号３３５の配列を含むＶＬとを含む参照抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの態様では、エピトープは、水素／重水素交換アッセイを使用して決定される。
いくつかの態様では、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合するモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、参照抗体のＧＤＦ－１５への結合を競合的に阻害する。ここで、参照抗体は配列番号３２６の配列を含むＶＨと配列番号３３５の配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの態様では、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、成熟ＧＤＦ－１５のアミノ酸Ｅ２５～Ｗ３２（配列番号４８５）中のアミノ酸、成熟ＧＤＦ－１５のアミノ酸Ｖ３３～Ｑ４０（配列番号４８６）中のアミノ酸、及び／又は成熟ＧＤＦ－１５のアミノ酸Ｉ８９～Ｌ１０５（配列番号４８７）中のアミノ酸を含むＧＤＦ－１５のエピトープに結合する。
いくつかの態様では、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合するモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＧＤＦ－１５とＧＦＲＡＬとの相互作用を阻害し、ＧＤＦ－１５とＲＥＴとの相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、カニクイザルＧＤＦ－１５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、マウスＧＤＦ－１５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、カニクイザルＧＤＦ－１５及びマウスＧＤＦ－１５に結合する。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、癌細胞の増殖を阻害することができる。いくつかの態様では、増殖は、抗体又はその抗原結合断片の非存在下での増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも５０％、又は少なくとも７５％阻害される。癌細胞の増殖を阻害する抗体又はその抗原結合断片の能力は、癌細胞（例えば、ＬＮＣａＰ細胞）を９６ウェルプレートに５０００細胞／ウェルの密度でプレーティングし、抗体又はその抗原結合断片で４００～２５ｎＭの濃度で細胞を処理し、細胞を３日間インキュベートし、ＡＴＰに基づいて細胞の生存率を測定することによって決定することができ、ここで、抗体又はその抗原結合断片の存在下での生存率がその非存在下と比較して低いことは、その抗体又はその抗原結合が癌細胞の増殖を阻害することができることを示している。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、樹状細胞を活性化することができる。いくつかの態様では、活性化は、抗体又はその抗原結合断片の非存在下での活性化と比較して倍増する。樹状細胞を活性化する抗体又はその抗原結合断片の能力は、６ウェルプレートに単球を１００万細胞／ｍＬの密度でプレーティングし、この単球を１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４及び１００ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦで６日間処理し、ウェルに１５ｎＭのＣＤ４０Ｌ及び１０μｇ／ｍＬの抗ＧＤＦ１５抗体を２日間加え、ＣＤ１４及びＣＤ１ａの発現についてフローサイトメトリーにより細胞を分析して、樹状細胞への分化を確認するとともに、ＣＤ８３、ＣＤ８６及びＩＬ－１２ｐ７０の分泌について分析して活性化を測定することによって決定することができる。ここで、抗体又はその抗原結合断片の存在下でのＣＤ８３、ＣＤ８６又はＩＬ－１２ｐ７０の増加（非存在下と比較して）は、その抗体又はその抗原結合断片が樹状細胞を活性化することができることを示している。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、Ｔ細胞の増殖を増加させることができる。いくつかの態様では、増加は、抗体又はその抗原結合断片の非存在下での増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、又は少なくとも４０％である。Ｔ細胞の増殖を増加させる抗体又は抗原結合断片の能力は、１０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３及び１０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２８抗体でコーティングされた９６ウェルプレートに、単離されたＣＤ３細胞を１００，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングし、３３．３～０．０５ｎＭの濃度で抗体を加え、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて細胞の増殖を測定することによって決定することができる。ここで、抗体又は抗原結合断片の存在下での生存率がその非存在下と比較して高いことは、その抗体又はその抗原結合断片がＴ細胞の増殖を阻害することができることを示している。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、Ｔｈ１細胞の分化を増加させることができる。いくつかの態様では、増加は、抗体又はその抗原結合断片の非存在下での分化と比較して、少なくとも１．５倍又は少なくとも２倍である。Ｔｈ１細胞の分化を増加させる抗体又はその抗原結合断片の能力は、１０ｍｇ／ｍＬのマウス抗ＣＤ３抗体でコーティングされた２４ウェルプレートに、単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞を２５０，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングし、１０μｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片を５日間添加し、ＥＬＩＳＡによってＴＮＦ－アルファ及びＩＦＮγの分泌について培養上清を分析することによって決定することができる。ここで、抗体又はその抗原結合断片の存在下でのＴＮＦ－アルファ及びＩＦＮγ分泌レベルの増加（非存在下と比較して）は、その抗体又はその抗原結合断片がＴｈ１細胞の分化を増加させることができることを示している。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、ＧＤＦ－１５とＧＦＲＡＬとの相互作用を阻害する。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、ＧＤＦ－１５とＲＥＴとの相互作用を阻害する。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、成熟ＧＤＦ－１５のアミノ酸Ｅ２５～Ｗ３２（配列番号４８５）中のアミノ酸、成熟ＧＤＦ－１５のアミノ酸Ｖ３３～Ｑ４０（配列番号４８６）中のアミノ酸、及び／又は成熟ＧＤＦ－１５のアミノ酸Ｉ８９～Ｌ１０５（配列番号４８７）中のアミノ酸を含むエピトープに結合する。
いくつかの態様では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号４７４の配列を含む重鎖定常ドメインを含む重鎖を含む。いくつかの態様では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号４７５の配列を含む軽鎖定常ドメインを含む軽鎖を含む。
いくつかの態様では、抗体又は抗原結合断片は、重鎖定常領域をさらに含む。いくつかの態様では、重鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２重鎖定常領域からなる群から選択される。いくつかの態様では、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１定常領域である。
いくつかの態様では、抗体又は抗原結合断片は、軽鎖定常領域をさらに含む。いくつかの態様では、軽鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧκ及びＩｇＧλの軽鎖定常領域からなる群から選択される。いくつかの態様では、軽鎖定常領域は、ヒトＩｇＧκ軽鎖定常領域である。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ抗体又はその抗原結合断片である。
いくつかの態様では、抗体又は抗原結合断片は、半減期を改善するように操作されているＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、ＹＴＥ変異を有するＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ三重変異（ＴＭ）を有するＦｃ領域を含む。
いくつかの態様では、抗体又は抗原結合断片は、モノクローナル抗体又は抗原結合断片である。
いくつかの態様では、抗体又は抗原結合断片は、完全長抗体である。いくつかの態様では、抗体又は抗原結合断片は、抗原結合断片である。いくつかの態様では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結Ｆｖ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２又はｓｃＦｖ－Ｆｃを含む。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、検出可能な標識をさらに含む。
また本明細書においては、単離されたポリヌクレオチドが提供される。いくつかの態様では、単離されたポリヌクレオチドは、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片のＶＨ又は重鎖をコードする核酸分子を含む。いくつかの態様では、単離されたポリヌクレオチドは、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片のＶＬ又は軽鎖をコードする核酸分子を含む。
また本明細書においては、ベクターが提供される。いくつかの態様では、ベクターは、本明細書で提供されるポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、ベクターは単離されている。
また本明細書においては、宿主細胞が提供される。いくつかの態様では、宿主細胞は、本明細書で提供されるポリヌクレオチド、ベクター、又はベクターの組み合わせを含む。いくつかの態様では、宿主細胞は、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３及びＨｅＬａ細胞からなる群から選択される。いくつかの態様では、宿主細胞は単離されている。
また本明細書においては、抗体又はその抗原結合断片を作製する方法が提供される。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片を作製する方法は、この抗体又はその抗原結合断片が産生されるように、本明細書で提供される宿主細胞を培養することを含む。いくつかの態様では、方法は、抗体又はその抗原結合断片を培養物から単離することをさらに含む。
また本明細書においては、本明細書で提供される方法によって作製される抗体又はその抗原結合断片が提供される。
また本明細書においては、組成物が提供される。いくつかの態様では、組成物は、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片を含む。いくつかの態様では、組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。
また本明細書においては、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片を使用する方法が提供される。いくつかの態様では、対象の癌を治療する方法は、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物を対象に投与することを含む。いくつかの態様では、癌は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））癌、肝癌（肝細胞癌（ＨＣＣ））、腎細胞癌（ＲＣＣ）、膀胱癌、食道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌、乳癌、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）又は前立腺癌である。いくつかの態様では、癌は、ＧＤＦ－１５発現癌である。
いくつかの態様では、癌細胞の増殖を阻害する方法は、癌細胞を、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物と接触させることを含む。いくつかの態様では、増殖は、抗体又はその抗原結合断片の非存在下での増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも５０％、又は少なくとも７５％阻害される。いくつかの態様では、癌細胞は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））癌、肝癌（肝細胞癌（ＨＣＣ））、腎細胞癌（ＲＣＣ）、膀胱癌、食道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）又は前立腺癌の細胞である。
いくつかの態様では、樹状細胞を活性化する方法は、樹状細胞を、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物と接触させることを含む。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、抗体又はその抗原結合断片の非存在下での活性化と比較して、樹状細胞の活性化を倍増させる。
いくつかの態様では、Ｔ細胞の増殖を増大させる方法は、Ｔ細胞を、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物と接触させることを含む。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、Ｔ細胞の増殖を、抗体又はその抗原結合断片の非存在下での増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％又は少なくとも４０％増大させる。
いくつかの態様では、Ｔｈ１細胞の分化を増加させる方法は、Ｔｈ１細胞を、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物と接触させることを含む。いくつかの態様では、抗体又は抗原結合断片は、Ｔｈ１細胞の分化を、少なくとも１．５倍又は少なくとも２倍に増加させる。
いくつかの態様では、ＧＤＦ－１５とＲＥＴとの相互作用を阻害する方法は、ＧＤＦ－１５及び／又はＲＥＴを、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物と接触させることを含む。
いくつかの態様では、ＧＤＦ－１５とＧＦＲＡＬとの相互作用を阻害する方法は、ＧＤＦ－１５及び／又はＧＦＲＡＬを、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物と接触させることを含む。
本明細書で提供される方法のいくつかの態様では、接触はインビトロで起こる。本明細書で提供される方法のいくつかの態様では、対象において起こる。いくつかの態様では、対象は癌を有し、任意選択的に、その癌は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））癌、肝癌（肝細胞癌（ＨＣＣ））、腎細胞癌（ＲＣＣ）、膀胱癌、食道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）又は前立腺癌である。
いくつかの態様では、対象の悪液質を治療する方法は、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物を投与することを含む。
いくつかの態様では、対象における悪液質に関連する筋肉量の減少を阻害する方法は、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物を投与することを含む。いくつかの態様では、筋肉量の減少は脂肪量の減少を伴う。
いくつかの態様では、対象における悪液質に関連する意図しない体重減少を阻害又は低減する方法は、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物を投与することを含む。
いくつかの態様では、対象における悪液質に関連する臓器量の減少を阻害する方法は、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物を投与することを含む。いくつかの態様では、臓器は、腎臓、肝臓、心臓、又は脾臓である。いくつかの態様では、臓器量の減少は、筋肉量の減少、脂肪量の減少、又は意図しない体重減少を伴う。
いくつかの態様では、悪液質に罹患している対象の食欲を増進させる方法は、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物を投与することを含む。
いくつかの態様では、対象における悪液質の発生率及び／又は重症度を低下させ、それによって対象における悪液質を引き起こし得る抗癌剤の最大耐量を増加させる方法は、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物を対象に投与することを含む。
いくつかの態様では、悪液質は、癌、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症及び結核からなる群から選択される基礎疾患に関連している。
いくつかの態様では、対象の悪液質に関連する筋肉減少症を治療する方法は、本明細書で提供される抗体若しくは抗原結合断片又は組成物を対象に投与することを含む。
いくつかの態様では、試料中のヒトＧＤＦ－１５を検出する方法は、試料を本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片と接触させることを含む。いくつかの態様では、試料は、対象から得られる。いくつかの態様では、対象は癌を有する。
図１は、標準的な抗原提示ＥＬＩＳＡを用いた、ヒトＧＤＦ－１５に対するＧＤＦ－１５抗体の結合特異性を示す。（実施例４を参照されたい。） 図２は、標準的な抗原提示ＥＬＩＳＡを用いた、ＴＧＦβ１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ２４０－Ｂ）へのＧＤＦ－１５抗体の結合の欠如を示す。（実施例４を参照されたい。） 図３は、標準的な抗原提示ＥＬＩＳＡを用いた、ＢＭＰ７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ３５４－ＢＰ／ＣＦ）へのＧＤＦ－１５抗体の結合の欠如を示す。（実施例４を参照されたい。） 図４は、前立腺細胞の増殖に対するＧＤＦ－１５抗体の効果を示す。「２４１」は、ＡＢ１１７０２４１を示す。Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓは、対照抗体Ａを示し、Ｉｓｏ １は、陰性対照抗体を示す。（実施例６を参照されたい。） 図５Ａ、５Ｂ及び５Ｃは、単球由来樹状細胞における共刺激タンパク質の発現に対するＧＤＦ－１５抗体の効果を示す。「２４１」は、ＡＢ１１７０２４１を示す。Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓは、対照抗体Ａを示し、Ｉｓｏ １は、陰性対照抗体を示す。＊＊＊は、ｐ＜０．００５を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．００１を示す。（実施例７を参照されたい。） 図６は、Ｔ細胞増殖に対するＧＤＦ－１５抗体の効果を示す。ＧＤＦ１５（－）は、組換えｈｕ－ＧＤＦ１５の非存在下での増殖のレベルを示し、一方、ＧＤＦ１５（＋）は、組換えｈｕ－ＧＤＦ１５の存在下でのＴ細胞の増殖のレベルを示す。「２４１」は、ＡＢ１１７０２４１を示す。（実施例８を参照されたい。） 図７Ａ及び７Ｂは、Ｔ細胞のＧＤＦ－１５による阻害を逆転させるＧＤＦ－１５抗体の能力を示す。（実施例８を参照されたい。） 図８は、Ｔｈ１分化のＧＤＦ－１５による阻害を逆転させるＧＤＦ－１５抗体の能力を示す。（実施例９を参照されたい。） 図９は、樹状細胞（ＤＣ）活性化マーカーのＧＤＦ－１５によるダウンレギュレーションを逆転させるＧＤＦ－１５抗体の能力を示す。（実施例１０を参照されたい。） 図１０は、ＬＬ／２モデルにおける樹状細胞及びＣＤ８細胞の活性化を実証するフローサイトメトリーデータを示す。（実施例１１を参照されたい。） 図１１は、ＭＢＴ２モデルにおける樹状細胞及びＣＤ８細胞の活性化を実証するフローサイトメトリーデータを示す。（実施例１１を参照されたい。） 図１２は、ＧＤＦ－１５抗体が抗ＰＤ－Ｌ１不応性ＬＬ／２及びＭＢＴ２同系腫瘍において抗腫瘍活性を示し、動物の５０％が完全な腫瘍退縮を示すことを示す。（実施例１１を参照されたい。） 図１３Ａ及び１３Ｂは、ＨＤＸ－ＭＳ差分データによる、成熟ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体における保護の増加を示す。図１３Ａにおいて、上の行は、図１３Ｂにおけるマッピングに対応する、正規化されたＨＤＸ－ＭＳ差分データ（増加した保護のみを表示）を示す。黒／暗灰色領域は、ＧＤＦ１５単独と比較して、ＧＤＦ１５－Ｆａｂ複合体においてより保護されている。下の行は、ＧＤＦ１５タンパク質のどの領域がデータセットに含まれるかを示すＧＤＦ１５ペプチドカバレッジを示す。図１３Ｂは、ＰＤＢ構造５ｖｚ３（ＧＤＦ１５）にマッピングされた正規化ＨＤＸ－ＭＳ差分データを示す。２つの領域、Ｖ３３－Ｑ４０（配列番号４８６）及びＩ８９－Ｌ１０５（黒／暗灰色）（配列番号４８７）が、ＧＤＦ１５単独と比較して、成熟ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体においてより保護されており、結合を示している。正規化は、重水素取り込みの差が最も大きいペプチド（２７％、黒と白のバー）に基づく。（実施例１２を参照されたい。） 図１４Ａ及び１４Ｂは、ＨＤＸ－ＭＳ欠落領域を示す。図１４Ａは、図１４Ｂのマッピングに対応するＨＤＸ－ＭＳデータセット（上の行、黒色）において検出されない成熟ＧＤＦ１５タンパク質（配列番号４７９）の領域を強調したＧＤＦ１５ペプチドカバレッジマップである。図１４Ｂは、ＰＤＢ構造５ｖｚ３（ＧＤＦ１５）にマッピングされたＨＤＸ－ＭＳデータセット中に欠けているＧＤＦ１５領域を示す。ペプチドが検出されない領域（黒色）は、主にＮ末端と中央のシスチンノット（システイン側鎖を棒として示す）である。（実施例１２を参照されたい。） 図１５は、成熟ＧＤＦ１５の保護領域がそのＧＦＲＡＬ結合部位と重複していることを示す。正規化ＨＤＸ－ＭＳ差分データをＰＤＢ構造５ｖｚ３（ＧＤＦ１５）にマッピングし、ＧＦＲＡＬ（５ｖｚ４）の結晶構造を重ね合わせる。黒／暗灰色領域は、成熟ＧＤＦ１５単独と比較して、成熟ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体においてより保護されており、結合を示している。正規化は、重水素取り込みの差が最も大きいペプチド（２７％、黒と白のバー）に基づく。（実施例１２を参照されたい。） 図１６Ａ及び１６Ｂは、ＨＤＸ－ＭＳ差データによる、成熟ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体における露出の増加を示す。図１６Ａにおいて、上の行は、図１６Ｂにおけるマッピングに対応する、正規化されたＨＤＸ－ＭＳ差分データ（増加した露出のみを表示）を示す。１つの領域、Ｈ５８－Ｌ６５（ヒールドメイン）が、成熟ＧＤＦ１５単独と比較して、ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体においてより露出している。しかしながら、この差は、図１３Ａ及び１３Ｂにおいて観察された保護よりもはるかに弱い。図１６Ｂは、ＰＤＢ構造５ｖｚ３（ＧＤＦ１５）にマッピングされた正規化ＨＤＸ－ＭＳ差分露出データを示す。２つの領域、Ｖ３３－Ｑ４０（配列番号４８６）及びＩ８９－Ｌ１０４（黒／暗灰色）（配列番号４８７）が、ＧＤＦ１５単独と比較して、成熟ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体においてより保護されており、結合を示している。さらに、Ｅ２５－Ｗ３２ストレッチ（配列番号４８５）は、弱く保護されている。正規化は、重水素取り込みの差が最も大きいペプチド（２７％、黒と白のバー）に基づく。（実施例１２を参照されたい。） 図１７Ａ及び１７Ｂは、ＨＤＸ－ＭＳ差分データによる、成熟ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体における保護の増加を示す。図１７Ａにおいて、上の行は、図１７Ａにおけるマッピングに対応する、正規化されたＨＤＸ－ＭＳ差分データ（増加した保護のみを表示）を示す。黒／暗灰色領域は、成熟ＧＤＦ１５単独と比較して、成熟ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体においてより保護されている。下の行は、ＧＤＦタンパク質のどの領域がデータセットに含まれるかを示すＧＤＦ１５ペプチドカバレッジを示す。図１７Ｂは、ＰＤＢ構造５ｖｚ３（ＧＤＦ１５）にマッピングされた正規化ＨＤＸ－ＭＳ差分データを示す。２つの領域、Ｖ３３－Ｑ４０（配列番号４８６）及びＩ８９－Ｌ１０４（黒／暗灰色）（配列番号４８７）が、成熟Ｆ１５単独と比較して、成熟ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体においてより保護されており、結合を示している。さらに、Ｅ２５－Ｗ３２（配列番号４８５）ストレッチは、弱く保護されている。正規化は、このデータセット内の重水素取り込みの差が最も大きいペプチド（２３％、黒と白のバー）に基づく。（実施例１２を参照されたい。） 図１８Ａ及び１８Ｂは、ＨＤＸ－ＭＳ欠落領域を示す。図１８Ａは、図１８Ｂのマッピングに対応するＨＤＸ－ＭＳデータセット（上の行、黒色）において検出されない成熟ＧＤＦ１５タンパク質の領域を強調したＧＤＦ１５ペプチドカバレッジマップである。図１８Ｂは、ＰＤＢ構造５ｖｚ３（ＧＤＦ１５）にマッピングされたＨＤＸ－ＭＳデータセット中に欠けている成熟ＧＤＦ１５領域を示す。ペプチドが検出されない領域（黒色）は、主にＮ末端と中央のシステインノット（システイン側鎖を棒として示す）である。（実施例１２を参照されたい。） 図１９は、成熟ＧＤＦ１５の保護領域がそのＧＦＲＡＬ結合部位と重複していることを示す。正規化ＨＤＸ－ＭＳ差分データをＰＤＢ構造５ｖｚ３（ＧＤＦ１５）にマッピングし、ＧＦＲＡＬ（５ｖｚ４）の結晶構造を重ね合わせる。黒／暗灰色領域は、成熟ＧＤＦ１５単独と比較して、ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体においてより保護されており、結合を示している。正規化は、重水素取り込みの差が最も大きいペプチド（２３％、黒と白のバー）に基づく。（実施例１２を参照されたい。） 図２０Ａ及び２０Ｂは、ＨＤＸ－ＭＳ差データによる、成熟ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体における露出の増加を示す。図２０Ａにおいて、上の行は、図２０Ｂにおけるマッピングに対応する、正規化されたＨＤＸ－ＭＳ差分データ（増加した露出のみを表示）を示す。１つの領域、Ｈ５８－Ｌ６５（ヒールドメイン）が、ＧＤＦ１５単独と比較して、成熟ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体においてより露出している。しかしながら、この差は、図１７Ａ及び１７Ｂにおいて観察された保護よりもはるかに弱い。図２０Ｂは、ＰＤＢ構造５ｖｚ３（ＧＤＦ１５）にマッピングされた正規化ＨＤＸ－ＭＳ差分露出データを示す。正規化は、重水素取り込みの差が最も大きいペプチド（２３％、黒と白のバー）に基づく。（実施例１２を参照されたい。） 図２１は、実施例１２の実験１において、成熟ＧＤＦ１５タンパク質及び予め形成された成熟ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体を用いて得られたエピトープマッピング結果をまとめたものである。 図２２は、実施例１２の実験２において、成熟ＧＤＦ１５タンパク質、予め形成された成熟ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体、及びＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂを用いて得られたデータをまとめたものである。
本開示は、ヒトＧＤＦ－１５に対する抗体及び抗原結合断片を提供する。
Ｉ．定義
本明細書で使用される場合、「ＧＤＦ－１５」又は「ＧＤＦ１５」という用語は、天然ＧＤＦ－１５ポリペプチド及びＧＤＦ－１５ポリペプチドのアイソフォームを含むがそれらに限定されない哺乳動物ＧＤＦ－１５ポリペプチドを指す。「ＧＤＦ－１５」には、完全長の未処理ＧＤＦ－１５ポリペプチド及び細胞内での処理により生じるＧＤＦ－１５ポリペプチドの形態が包含される。本明細書で使用される場合、用語「ヒトＧＤＦ－１５」は、配列番号４６９のアミノ酸配列；配列番号４６９の天然に存在するバリアント（例えば、配列番号４６９の２０２位にＤが存在する（すなわち、配列番号４７１）バリアントを含むがこれに限定されない）；及び配列番号４６９又は配列番号４７１の処理された形態（例えば、シグナルペプチド（例えばアミノ酸１－２９から）を欠く配列番号４６９又は配列番号４７１、或いはシグナルペプチド及びプロドメインの両方を欠く配列番号４６９又は配列番号４７１（すなわち、配列番号４７９及び配列番号４８０のアミノ酸を含む成熟形態）を含むがこれらに限定されない）を含むポリペプチドを指す。「ＧＤＦ－１５ポリヌクレオチド」、「ＧＤＦ－１５ヌクレオチド」、又は「ＧＤＦ－１５核酸」は、上記のものを含む任意のＧＤＦ－１５をコードするポリヌクレオチドを指す。
「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子であって、この免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１か所の抗原認識部位を介して、標的（例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質又は前述の組み合わせ）を認識して特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、当該抗体が所望の生物学的活性を示す限り、インタクトポリクローナル抗体、インタクトモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体を含む融合タンパク質、及び他のあらゆる修飾免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、免疫グロブリンの５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、又はそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）（それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる重鎖定常ドメインの同一性に基づく）のいずれかであり得る。免疫グロブリンの異なるクラスは、異なるよく知られたサブユニット構造及び３次元配置を有する。抗体は裸抗体であっても、毒素、放射性同位体などの他の分子にコンジュゲートされていてもよい。
「抗ＧＤＦ－１５抗体」、「ＧＤＦ－１５抗体」及び「ＧＤＦ－１５に結合する抗体」という用語は、抗体がＧＤＦ－１５活性の診断、治療及び／又はモジュレーターとして有用であるように、十分な親和性及び特異性でＧＤＦ－１５に結合することができる抗体を指す。
用語「モノクローナル抗体」は、本発明で使用される場合、Ｂ細胞の単一クローンによって産生され、同一エピトープに結合する抗体を指す。対照的に、用語「ポリクローナル抗体」は、異なるＢ細胞によって産生され、同一抗原の異なるエピトープに結合する抗体の集団を指す。
用語「抗体断片」は、インタクト抗体の一部分を指す。「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」又は「抗原結合領域」は、抗原に結合するインタクト抗体の一部分を指す。抗原結合断片は、インタクト抗体の抗原決定領域（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を含み得る。抗体の抗原結合断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、線状抗体、並びに一本鎖抗体が挙げられるが、これらに限定されない。抗体の抗原結合断片は、齧歯類（例えば、マウス、ラット、又はハムスター）及びヒトなどのあらゆる動物種から得ることもできるし、人工的に生成することもできる。
全抗体は、典型的には、次の４つのポリペプチドからなる：重（Ｈ）鎖ポリペプチドの２つの同一コピー及び軽（Ｌ）鎖ポリペプチドの２つの同一コピー。重鎖のそれぞれは、１つのＮ末端可変（ＶＨ）領域と、３つのＣ末端定常（ＣＨＩ、ＣＨ２及びＣＨ３）領域とを含み、各軽鎖は、１つのＮ末端可変（ＶＬ）領域と、１つのＣ末端定常（ＣＬ）領域とを含む。軽鎖及び重鎖の各対の可変領域は、抗体の抗原結合部位を形成する。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、同一の一般構造を有し、各領域は、それらの配列が比較的に保存されている４つのフレームワーク領域を含む。用語「フレームワーク領域」は、本明細書で使用される場合、超可変領域又は相補性決定領域（ＣＤＲ）間に位置する可変領域内の比較的に保存されたアミノ酸配列を指す。各可変ドメインには、ＦＷ１、ＦＷ２、ＦＷ３及びＦＷ４と指定されている４つのフレームワーク領域がある。これらのフレームワーク領域は、可変領域の構造フレームワークを提供するβシートを形成する（例えば、Ｃ．Ａ． Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．），Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（２００１）を参照されたい）。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３として知られる３つのＣＤＲは、抗原結合を担う、抗体の「超可変領域」を形成する。
用語「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」は、互換的に用いられ、抗体の軽鎖可変領域を指す。
用語「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」は、互換的に用いられ、抗体の重鎖可変領域を指す。
用語「Ｋａｂａｔ付番」及び同様の用語は、当該技術分野において認識されており、抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域又はそれらの抗原結合断片のアミノ酸残基を付番する方式を指す。いくつかの態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ付番方式に従って決定することができる（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ＆ Ｗｕ ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９０：３８２－３９１ ａｎｄ Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照されたい）。Ｋａｂａｔ付番方式を使用すると、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸３１位～３５位（ＣＤＲ１）（３５位の後に続く１つ又は２つの追加のアミノ酸（Ｋａｂａｔ付番スキームでは３５Ａ及び３５Ｂと称する）を任意選択的に含み得る）、アミノ酸５０位～６５位（ＣＤＲ２）及びアミノ酸９５位～１０２位（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ付番方式を使用すると、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸２４位～３４位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０位～５６位（ＣＤＲ２）及びアミノ酸８９位～９７位（ＣＤＲ３）に存在する。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ付番方式に従って決定されている。
Ｃｈｏｔｈｉａは、その代わりに、構造ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔ付番規則を使用して付番した場合のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、このループの長さに応じてＨ３２～Ｈ３４で変化する（これは、Ｋａｂａｔ付番方式がＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、このループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、このループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、このループは３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の妥協案を示し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって用いられている。
本明細書で使用される場合、「定常領域」又は「定常ドメイン」という用語は、互換的であり、当該技術分野における一般的な意味を有する。定常領域は、抗体部分、例えば、抗体が抗原に結合するのに直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示し得る、軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比較してより保存されたアミノ酸配列を有する。
本明細書で使用する用語「重鎖」は、抗体に関して使用する場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の別個のタイプ、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）及びミュー（μ）を指すことができ、これにより、ＩｇＧのサブクラス、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む、抗体のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭクラスがそれぞれ生じる。重鎖アミノ酸配列は、当技術分野で公知である。いくつかの態様では、重鎖はヒト重鎖である。
本明細書で使用する用語「軽鎖」は、抗体に関して使用する場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の別個のタイプ、例えばκ（カッパ）又はλ（ラムダ）を指すことができる。軽鎖アミノ酸配列は、当該技術分野でよく知られている。いくつかの態様では、軽鎖はヒト軽鎖である。
用語「キメラ」抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列が２つ以上の種から誘導される抗体又はその抗原結合断片を指す。典型的には、軽鎖及び重鎖双方の可変領域は、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）の一種に由来する、所望される特異性、親和性、及び能力を有する抗体又はその抗原結合断片の可変領域に対応し、一方、定常領域は、別の種（通常はヒト）における免疫応答を誘発することを回避するために、その種に由来する抗体又はその抗原結合断片内の配列に相同である。
「ヒト化」抗体は、ヒト抗体足場と、非ヒト抗体から得られるか又は誘導される少なくとも１つのＣＤＲとを含む抗体である。非ヒト抗体としては、例えばげっ歯類（例えば、マウス又はラット）などの任意の非ヒト動物から単離される抗体が挙げられる。ヒト化抗体は、非ヒト抗体から得られるか又は誘導される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含み得る。完全ヒト抗体は、非ヒト動物から得られるか又は誘導されるいかなるアミノ酸残基も含まない。完全ヒト抗体及びヒト化抗体は、マウス抗体又はキメラ抗体と比べて、ヒトにおける免疫反応を誘発するリスクが低いと理解されるであろう（例えば、Ｈａｒｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，２（３）：２５６－２６（２０１０）を参照されたい）。
用語「ヒト」抗体又はその抗原結合断片は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座から誘導されたアミノ酸配列を有する抗体又はその抗原結合断片を意味し、このような抗体又は抗原結合断片は、当該技術分野で知られる任意の手法を用いて作製される。ヒト抗体又はその抗原結合断片のこの定義には、インタクトな抗体又は完全長の抗体、及びその断片が含まれる。
「結合親和性」は、一般に、分子（例えば抗体又はその抗原結合断片）の単一の結合部位と、その結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有結合性の相互作用の合計の強度を指す。別段の指示がない限り、本明細書で用いられる「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体又はその抗原結合断片と抗原）間の１：１相互作用を反映する内因性結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）によって表され得る。親和性は、当該技術分野において知られている多くの方法、例えば平衡解離定数（ＫＤ）及び平衡結合定数（ＫＡ）（これらに限定されない）で測定され、且つ／又は表され得る。ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から算出される一方、ＫＡは、ｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から算出される。ｋｏｎは、例えば抗体又はその抗原結合断片の抗原に対する結合速度定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば抗体又はその抗原結合断片の抗原からの解離速度定数を指す。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、当業者に知られている技術、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）又はＫｉｎＥｘＡによって決定することができる。
本明細書で用いられる場合、「エピトープ」は、当該技術分野の用語であり、抗体又はその抗原結合断片が特異的に結合し得る抗原の局所領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの連続したアミノ酸であってもよいし（直鎖状エピトープ、又は連続エピトープ）、例えば、１つ以上のポリペプチドの２つ以上の非連続領域から一体となっていてもよい（立体構造エピトープ、非直鎖状エピトープ、不連続エピトープ、又は非連続エピトープ）。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片が結合するエピトープは、例えばＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶解析研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、水素／重水素交換質量分析法（例えば、液体クロマトグラフィエレクトロスプレー質量分析法）、アレイベースのオリゴペプチドスキャニングアッセイ、及び／又は変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶解析では、結晶化は、当該技術分野において知られている方法のいずれかを用いて達成され得る（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ ４）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３；Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３）。抗体／その抗原結合断片：抗原の結晶は、よく知られたＸ線回折技術を用いて調べることができ、且つコンピューターソフトウェア、例えばＸ－ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、１９９２、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃにより配布される；例えば、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ １１４ ＆ １１５，ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ ＨＷ ｅｔ ａｌ．，；Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４を参照されたい）、及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ １）：３７－６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３）を用いてリファインすることができる。変異誘発マッピング研究は、当業者に知られている任意の方法を用いて達成され得る。例えば、アラニンスキャニング変異誘発技術を含む変異誘発技術の説明について、Ｃｈａｍｐｅ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１３８８－１３９４、及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＣ ＆ Ｗｅｌｌｓ ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５を参照されたい。
参照抗体と「同じエピトープに結合する」抗体は、参照抗体と同じアミノ酸残基に結合する抗体を指す。抗体の、参照抗体と同じエピトープに結合する能力は、水素／重水素交換アッセイ（Ｃｏａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｒａｐｉｄ Ｃｏｍｍｕｎ．Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２００９；２３：６３９－６４７を参照されたい）又はＸ線結晶構造解析により決定し得る。
本明細書で使用される場合、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」及び「特異的に認識する」という用語は、抗体又はその抗原結合断片の文脈では類似用語である。これらの用語は、抗体又はその抗原結合断片がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、及び結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間にいくらかの相補性を伴うことを示す。したがって、例えば、ヒトＧＤＦ－５に「特異的に結合する」抗体は、他の種由来のＧＤＦ－１５（例えば、カニクイザル及び／又はマウスＧＤＦ－１５）及び／又は他のヒト対立遺伝子から産生されるＧＤＦ－１５タンパク質にも結合し得るが、非関連の非ＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ＴＧＦβ１又はＢＭＰ７）への結合の程度は、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定した場合、ＧＤＦ－１５への抗体の結合の約１０％未満である。
抗体は、所与のエピトープへの参照抗体の結合をある程度ブロックする限りにおいて、当該エピトープ又は重複エピトープに優先的に結合するならば、当該エピトープへの参照抗体の結合を「競合的に阻害する」と言われる。競合的阻害は、当該技術分野において知られる任意の方法、例えば競合ＥＬＩＳＡアッセイ及び実施例４で使用されているアッセイによって決定され得る。抗体は、所与のエピトープへの参照抗体の結合を少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％又は少なくとも５０％競合的に阻害すると言われ得る。
用語「核酸配列」は、ＤＮＡ又はＲＮＡのポリマー、すなわち、一本鎖又は二本鎖であり得、非天然又は改変されたヌクレオチドを含み得るポリヌクレオチドを包含することが意図されている。本発明で使用する「核酸」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチド（ＲＮＡ）又はデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）の、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。これらの用語は、分子の一次構造を指しており、したがって、二本鎖及び一本鎖ＤＮＡ並びに二本鎖及び一本鎖ＲＮＡが含まれる。これらの用語ニは、同等物として、ヌクレオチド類似体及び改変されたポリヌクレオチド、例えば、以下に限定されないが、メチル化及び／又はキャップ化ポリヌクレオチドから作製されたＲＮＡ又はＤＮＡの類似体が含まれる。核酸は、典型的には、リン酸結合を介して連結され、核酸配列又はポリヌクレオチドを形成するが、当該技術分野においては他の多くの連結（例えば、ホスホロチオエート、ボラノホスフェートなど）が知られている。
「単離」されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物は、天然には見出されない形態のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物としては、もはや天然に見出される形態ではない程度まで精製されているものが挙げられる。いくつかの態様では、単離された抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物は、実質的に純粋である。本明細書で使用される場合、「実質的に純粋な」は、少なくとも５０％純粋（すなわち、混入物を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、又は少なくとも９９％純粋な物質を指す。
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書では互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは直鎖でも分岐鎖でもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されていてもよい。この用語にはまた、天然に又は介在により、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質付加、アセチル化、リン酸化、又は任意の他の操作若しくは修飾、例えば標識成分とのコンジュゲーションにより修飾されているアミノ酸ポリマーも包含される。また、例えばアミノ酸の１つ又は複数の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）及び当該技術分野において知られる他の修飾を含有するポリペプチドも、この定義の範囲に含まれる。本開示のポリペプチドは抗体に基づくため、いくつかの態様では、ポリペプチドは単鎖又は結合鎖として存在し得ることが理解される。
「同一性パーセント」は、２つの配列（例えばアミノ酸配列又は核酸配列）間の同一性の程度を指す。同一性パーセントは、２つの配列をアラインし、且つギャップを導入して配列間の同一性を最大化させることによって決定することができる。アラインメントは、当該技術分野において知られているプログラムを用いて生じさせることができる。本明細書での目的のために、ヌクレオチド配列のアラインメントは、デフォルトパラメータに設定したｂｌａｓｔｎプログラムにより実行することができ、アミノ酸配列のアラインメントは、デフォルトパラメータに設定したｂｌａｓｔｐプログラムにより実行することができる（ワールドワイドウェブｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ上の全米バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）を参照されたい）。
本明細書で使用される場合、用語「宿主細胞」は、任意の種類の細胞、例えば初代細胞、培養細胞、又は細胞株由来細胞であってよい。いくつかの態様では、用語「宿主細胞」は、核酸分子でトランスフェクトされた細胞、及びそのような細胞の後代又は潜在的後代を指す。このような細胞の後代は、例えば、後続世代において、又は宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みにおいて生じ得る変異又は環境の影響のために、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同一でない場合がある。
本明細書で使用する「トランスフェクション」、「形質転換」又は「形質導入」は、物理的又は化学的方法を使用することによって宿主細胞へ１つ以上の外因性ポリヌクレオチドを導入することを指す。多くのトランスフェクション技術が、当該技術分野において知られており、例えば、リン酸カルシウムＤＮＡ共沈法（例えば、Ｍｕｒｒａｙ Ｅ．Ｊ． （ｅｄ．），Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（１９９１）を参照されたい）；ＤＥＡＥ－デキストラン；エレクトロポレーション；カチオン性リポソーム媒介トランスフェクション；タングステン粒子により促進される微粒子衝撃法（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３４６：７７６－７７７（１９９０））；及びリン酸ストロンチウムＤＮＡ共沈法（Ｂｒａｓｈ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，７：２０３１－２０３４（１９８７））が挙げられる。ファージ又はウイルスベクターは、多くが市販されている好適なパッケージング細胞中での感染性粒子の増殖後に宿主細胞に導入することができる。
用語「医薬配合物」は、活性成分の生物学的活性が有効となることを可能にするような形態をし、且つ配合物が投与される対象に対して許容できないほど毒性の高い追加の成分を含有しない製剤を指す。製剤は無菌であり得る。
「投与する」、「投与すること」、「投与」などの用語は、本明細書で使用される場合、薬物（例えば、抗ＧＤＦ－１５抗体又はその抗原結合断片）を所望の生物学的作用部位へ送達するために使用され得る方法を指す。本明細書に記載される薬剤及び方法と共に用いることのできる投与手法は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａに見出される。
本明細書で使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は互換的に用いられる。対象は、哺乳動物、例えば非ヒト動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、サル又は他の霊長類など）である。いくつかの態様では、対象はカニクイザルである。いくつかの態様では、対象はヒトである。
用語「治療有効量」は、対象の疾患又は病態を治療するのに有効な薬物、例えば抗ＧＤＦ－１５抗体又はその抗原結合断片の量を指す。
「治療すること」又は「治療」又は「治療する」又は「緩和すること」又は「緩和する」などの用語は、診断された病態又は障害の症状を治療し、減速させ、軽減し、且つ／又はその進行を止める治療措置を指す。したがって、治療を必要とする者には、障害を有すると既に診断された者又は障害を有することが疑われる者が含まれる。
本明細書で使用される場合、「癌」及び「癌性」という用語は、細胞の集団が無秩序な細胞増殖を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指す。癌の例としては、癌腫、芽細胞腫及び肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。このような癌のより具体的な例としては、扁平上皮癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、消化管癌、腎臓（ｒｅｎａｌ）癌、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）癌、前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌、甲状腺癌、メラノーマ、軟骨肉腫、神経芽細胞腫、膵臓癌、多形神経膠芽腫、子宮頸癌、脳腫瘍、胃癌、膀胱癌、ヘパトーマ（肝細胞癌（ＨＣＣ））、乳癌、結腸癌、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌、腎細胞癌、メルケル細胞癌、尿路上皮癌、胸腺癌、上皮癌、唾液腺癌、絨毛癌、口腔癌、皮膚癌、及び食道癌が挙げられる。癌は、「ＧＤＦ－１５を発現する癌」又は「ＧＤＦ－１５発現癌」であり得る。このような用語は、ＧＤＦ－１５を発現する細胞を含む癌を指す。
本明細書で使用される場合、「悪液質」は、基礎疾患に関連し、筋肉量の意図しない減少を特徴とするメタボリック症候群を意味する。悪液質はしばしば、意図しない体重減少、脂肪量の減少、食欲不振、炎症、インスリン抵抗性、疲労、筋力低下、食欲の著しい低下、及び／又は筋肉タンパク質分解の増加を伴う。悪液質は、飢餓、加齢に伴う筋肉量の減少、吸収不良、甲状腺機能亢進症とは異なる。悪液質に関連する基礎疾患としては、癌、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症、及び結核が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「サルコペニア」は、主に骨格筋量及び筋力の低下を特徴とする病態であると理解される。サルコペニアは、しばしば加齢に関連する。Ｒｕｅｇｇ ａｎｄ Ｇｌａｓｓ（２０１１）ＡＮＮＵＡＬ ＲＥＶ．ＰＨＡＲＭＡＣＯＬ． ＴＯＸＩＣＯＬ． ５１－３７３（３９５）を参照されたい。１つのアプローチでは、対象の四肢筋量を対象の身長（単位：メートル）で除した値が若年正常平均を２標準偏差よりも下回る場合、対象はサルコペニアであると特定することができる。（Ｔｈｏｍａｓ（２００７）前掲；Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９９）ＭＥＣＨ． ＡＧＥＩＮＧ ＤＥＶ． １４７：７５５－７６３も参照されたい）。
本開示及び請求項で使用される場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」には、文脈がそうではないことを明確に示していない限り、複数形が含まれる。
態様が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語と共に本明細書で説明される場合には常に、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」及び／又は「から実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語で説明される類似の態様も提供されることを理解されたい。本開示において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」などは、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味し得、「から実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」又は「から実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、オープンエンドであり、列挙されているものの基本的又は新規な特性が、列挙されているもの以外の存在によって変化しない限りにおいて、列挙されるもの以外の存在を許容するが、先行技術の態様は除外する。
特に明記されていない限り又は文脈から明らかでない限り、本明細書で使用される場合、「又は」という用語は、包括的であると理解される。「及び／又は」という用語は、本明細書において「Ａ及び／又はＢ」などの語句で使用される場合、「Ａ及びＢ」の両方、「Ａ又はＢ」、「Ａ」及び「Ｂ」を含むものとする。同様に、「及び／又は」という用語は、「Ａ、Ｂ及び／又はＣ」などの語句で使用される場合、以下のそれぞれを包含するものとする：Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）。本明細書における「又は」という用語の使用は、代替物が相互に排他的であることを意味するものではない。
「約」という用語は、本明細書で使用される場合、列挙された数±１０％を含む。したがって、「約１０」は、９～１１を意味する。当業者が理解するように、本明細書における値又はパラメータの「約」への言及は、その値又はパラメータ自体を対象とする態様を含む（及び説明する）。例えば、「約Ｘ」に言及する説明は、「Ｘ」の説明を含む
本明細書で提供される任意の化合物（例えば、抗体又はその抗原結合断片、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞）、組成物、又は方法は、本明細書で提供される他の化合物、組成物、及び方法のいずれかの１つ以上と組み合わせることができる
ＩＩ．抗ＧＤＦ－１５抗体
いくつかの態様では、ＧＤＦ－１５（例えば、ヒトＧＤＦ－１５）に特異的に結合する抗体（例えば、マウス、キメラ、ヒト化、又はヒト抗体などのモノクローナル抗体）及びその抗原結合断片が本明細書で提供される。
いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合する。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５及びカニクイザルＧＤＦ－１５に結合する。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５及びマウスＧＤＦ－１５に結合する。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５、カニクイザルＧＤＦ－１５及びマウスＧＤＦ－１５に結合する。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、表１及び表２に列挙した抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に列挙した抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙した同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ）を含む。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、表３に列挙した抗体のＶＨを含む。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、表４に列挙した抗体のＶＬを含む。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、表３及び表４に列挙した抗体のＶＨ及びＶＬ（すなわち、表３に列挙した抗体のＶＨ、及び表４に列挙した同じ抗体のＶＬ）を含む。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、表５に列挙した抗体のＶＨフレームワーク領域を含む。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、表６に列挙した抗体のＶＬフレームワーク領域を含む。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、表５及び表６に列挙した抗体の４つのＶＨフレームワーク領域及び４つのＶＬフレームワーク領域（すなわち、表５に列挙した抗体の４つのＶＨフレームワーク領域及び表６に列挙した同じ抗体の４つのＶＬフレームワーク領域）を含む
下記の実施例で使用する抗体の配列を表７にまとめる。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、そのＶＬドメインのみ若しくはそのＶＨドメインのみによって、又はその３つのＶＬ ＣＤＲのみ若しくはその３つのＶＨ ＣＤＲのみによって説明され得る。例えば、Ｒａｄｅｒ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ ９５：８９１０－８９１５を参照されたい。この文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、それには、ヒト軽鎖又はヒト重鎖ライブラリからそれぞれ相補性軽鎖又は重鎖を特定して、高い、又は元の抗体の親和性よりも高い親和性を有するヒト化抗体バリアントをもたらすことによる、マウス抗αｖβ３抗体のヒト化が説明されている。また、Ｃｌａｃｋｓｏｎ Ｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８を参照されたい。この文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、それには、特異的ＶＬドメイン（又はＶＨドメイン）を用い、ライブラリを相補性可変ドメインに関してスクリーニングすることによって、特異的抗原に結合する抗体を生成する方法が説明されている。スクリーニングは、特異的ＶＨドメインでは１４個の新たなパートナー、及び特異的ＶＬドメインでは１３個の新たなパートナーを生成した。これらは、ＥＬＩＳＡにより判定して、強力なバインダであった。また、Ｋｉｍ ＳＪ ＆ Ｈｏｎｇ ＨＪ，（２００７）Ｊ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ４５：５７２－５７７を参照されたい。この文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、それには、特異的ＶＨドメインを用い、ライブラリ（例えばヒトＶＬライブラリ）を相補的ＶＬドメインに関してスクリーニングすることによって、特異的抗原に結合する抗体を生成する方法が説明されており、選択されたＶＬドメインを次に、追加の相補的（例えばヒト）ＶＨドメインの選択を誘導するのに用いることができる。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲを、免疫グロブリン構造ループの位置を指すＣｈｏｔｈｉａ付番方式に従って決定することができる（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ ＆ Ｌｅｓｋ ＡＭ，（１９８７），Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７－９４８；Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２７：７９９－８１７；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ Ａ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５（１）：１７５－８２；及び米国特許第７，７０９，２２６号明細書を参照されたい）。典型的には、Ｋａｂａｔ付番規則を使用する場合、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループは重鎖アミノ酸２６～３２、３３、又は３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２ループは重鎖アミノ酸５２～５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ３ループは重鎖アミノ酸９５～１０２に存在し、一方、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ１ループは軽鎖アミノ酸２４～３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ２ループは軽鎖アミノ酸５０～５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ３ループは軽鎖アミノ酸８９～９７に存在する。Ｋａｂａｔ付番規則を使用して付番した場合のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、このループの長さに応じてＨ３２～Ｈ３４で変化する（これは、Ｋａｂａｔ付番方式がＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、このループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、このループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、このループは３４で終わる）。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、ＧＤＦ－１５抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＶＨ ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ ＶＬ ＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片である。いくつかの態様では、抗体及びその抗原結合断片は、１つ以上のＣＤＲを含み、ここで、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ及びＫａｂａｔ ＣＤＲは同じアミノ酸配列を有する。いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの組み合わせを含む抗体及びその抗原結合断片である。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ，（１９９９）Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ ７：１３２－１３６及びＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２７：２０９－２１２に記載されるようなＩＭＧＴ付番方式に従って決定することができる。ＩＭＧＴ付番スキームによれば、ＶＨ－ＣＤＲ１は２６位～３５位であり、ＶＨ－ＣＤＲ２は５１位～５７位であり、ＶＨ－ＣＤＲ３は９３位～１０２位であり、ＶＬ－ＣＤＲ１は２７位～３２位であり、ＶＬ－ＣＤＲ２は５０位～５２位であり、ＶＬ－ＣＤＲ３は８９位～９７位である。いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ（１９９９）（前掲）及びＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）（前掲）で記載されているような、ＧＤＦ－１５抗体のＩＭＧＴ ＶＨ ＣＤＲ及びＩＭＧＴ ＶＬ ＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片である。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ＲＭ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２：７３２－７４５に従って決定することができる。例えば、Ｍａｒｔｉｎ Ａ．“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ，” ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｅｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１，ｐｐ．４２２－４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）も参照されたい。いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ＲＭらにおける方法により決定されたＧＤＦ－１５抗体のＶＨ ＣＤＲ及びＶＬ ＣＤＲを含む抗体又はその抗原結合断片である。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループの間の妥協案を示すＡｂＭ超可変領域を参照し、ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）で使用されるＡｂＭ付番方式に従って決定することができる。いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、ＡｂＭ付番方式により決定されたＧＤＦ－１５抗体のＶＨ ＣＤＲ及びＶＬ ＣＤＲを含む抗体又はその抗原結合断片である。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、且つ表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８０％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８０％同一の配列を含むＶＬを含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、且つ表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８５％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８５％同一の配列を含むＶＬを含む。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、且つ表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬを含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、且つ表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９５％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９５％同一の配列を含むＶＬを含む。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、且つ表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９６％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９６％同一の配列を含むＶＬを含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、且つ表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９７％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９７％同一の配列を含むＶＬを含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、且つ表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９８％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９８％同一の配列を含むＶＬを含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、且つ表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９９％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９９％同一の配列を含むＶＬを含む。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８０％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８０％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ癌細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも５０％又は少なくとも７５％、阻害することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８５％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８５％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ癌細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも５０％又は少なくとも７５％、阻害することができる。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ癌細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも５０％又は少なくとも７５％、阻害することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９５％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９５％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ癌細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも５０％又は少なくとも７５％、阻害することができる。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９６％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９６％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ癌細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも５０％又は少なくとも７５％、阻害することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９７％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９７％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ癌細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも５０％又は少なくとも７５％、阻害することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９８％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９８％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ癌細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも５０％又は少なくとも７５％、阻害することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９９％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９９％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ癌細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも５０％又は少なくとも７５％、阻害することができる。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８０％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８０％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ樹状細胞を活性化することができ、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の活性化と比較して、樹状細胞の活性化を倍増させることができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８５％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８５％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ樹状細胞を活性化することができ、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の活性化と比較して、樹状細胞の活性化を倍増させることができる。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ樹状細胞を活性化することができ、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の活性化と比較して、樹状細胞の活性化を倍増させることができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９５％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９５％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ樹状細胞を活性化することができ、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の活性化と比較して、樹状細胞の活性化を倍増させることができる。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９６％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９６％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ樹状細胞を活性化することができ、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の活性化と比較して、樹状細胞の活性化を倍増させることができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９７％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９７％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ樹状細胞を活性化することができ、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の活性化と比較して、樹状細胞の活性化を倍増させることができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９８％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９８％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ樹状細胞を活性化することができ、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の活性化と比較して、樹状細胞の活性化を倍増させることができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９９％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９９％同一の配列を含むＶＬを含み、且つ樹状細胞を活性化することができ、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の活性化と比較して、樹状細胞の活性化を倍増させることができる。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８０％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８０％同一の配列を含むＶＬを含み、且つＴ細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％又は少なくとも４０％、阻害することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも８５％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも８５％同一の配列を含むＶＬを含み、且つＴ細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％又は少なくとも４０％、阻害することができる。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬを含み、且つＴ細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％又は少なくとも４０％、阻害することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９５％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９５％同一の配列を含むＶＬを含み、且つＴ細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％又は少なくとも４０％、阻害することができる。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９６％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９６％同一の配列を含むＶＬを含み、且つＴ細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％又は少なくとも４０％、阻害することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９７％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９７％同一の配列を含むＶＬを含み、且つＴ細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％又は少なくとも４０％、阻害することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９８％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９８％同一の配列を含むＶＬを含み、且つＴ細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％又は少なくとも４０％、阻害することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、本明細書で提供される抗体の６つのＣＤＲ（例えば、表１に列挙されている抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ、及び表２に列挙されている同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ、又は表３に列挙されているＶＨ及び表４にリストされている対応するＶＬのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＩＭＧＴ定義若しくはＡｂＭ定義のＣＤＲ）を含み、表３内の同じ抗体のＶＨ配列と少なくとも９９％同一の配列を含むＶＨ、及び表４内の同じ抗体のＶＬ配列と少なくとも９９％同一の配列を含むＶＬを含み、且つＴ細胞の増殖を、例えば、この抗体又はその抗体結合断片が存在しない場合の増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％又は少なくとも４０％、阻害することができる。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、重鎖定常領域及び／又は軽鎖定常領域を含む抗体又はその抗原結合断片である。重鎖に関して、いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体の重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖であり得る。
いくつかの態様では、重鎖は、ヒトアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖を含み得る。いくつかの態様では、ＧＤＦ－１５（例えば、ヒトＧＤＦ－１５）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、重鎖を含み、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、表３に記載のアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＧＤＦ－１５（例えば、ヒトＧＤＦ－１５）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、重鎖を含み、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、表３に記載のアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域は、配列番号４７３のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＧＤＦ－１５（例えば、ヒトＧＤＦ－１５）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、重鎖を含み、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、表３に記載のアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域は、配列番号４７４のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当該技術分野において説明されており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号明細書及びＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）（前掲）を参照されたい。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片の軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖又はヒトラムダ軽鎖である。いくつかの態様では、ＧＤＦ－１５（例えば、ヒトＧＤＦ－１５）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖を含み、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、表４に記載の配列を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ又はラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＧＤＦ－１５（例えば、ヒトＧＤＦ－１５）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖を含み、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、表４に記載の配列を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＧＤＦ－１５（例えば、ヒトＧＤＦ－１５）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖を含み、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、表４に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖の定常領域は、配列番号４７５のアミノ酸配列を含む。
例示的な重鎖及び軽鎖定常領域を表８に示す。
いくつかの態様では、ＧＤＦ－１５（例えば、ヒトＧＤＦ－１５）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される任意のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ若しくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、又はヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ若しくはＩｇＹ免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＧＤＦ－１５（例えば、ヒトＧＤＦ－１５）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される任意のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ若しくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）の定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、定常領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ若しくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）の定常領域のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）の半減期を改善するために改変されている任意の好適なクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ及びＩｇＥ）の定常領域（Ｆｃ）を含むことができる。例えば、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、変異していない同じ抗体と比べて半減期を延長する変異を含むＦｃを含み得る。
Ｆｃ領域の遺伝子操作は、当該技術分野において、治療用抗体の半減期を延長し、またインビボでの分解を防ぐために広く使用されている。いくつかの態様では、ＩｇＧの異化作用を媒介し、ＩｇＧ分子の分解を防ぐ胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対するＩｇＧ分子の親和性を高めるために、ＩｇＧ抗体又は抗原結合断片のＦｃ領域を改変することができる。好適なＦｃ領域アミノ酸の置換又は改変は、当該技術分野で知られており、例えば、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスにより番号付けされた、２５２位におけるメチオニン（Ｍ）からチロシン（Ｙ）への置換、２５４位におけるセリン（Ｓ）からトレオニン（Ｔ）への置換、及び２５６位におけるトレオニン（Ｔ）からグルタミン酸（Ｅ）への置換の三重置換（Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ；「ＹＴＥ」と呼ばれる）が挙げられる（例えば、米国特許第７，６５８，９２１号明細書；米国特許出願公開第２０１４／０３０２０５８号明細書；及びＹｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，６１（１）：ｅ０１０２０－１６（２０１７）を参照されたい；これらの各文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
重鎖定常領域にある三重変異（ＴＭ）Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ（欧州連合付番規則に従う；Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０５：２０１６７－２０１７２（２００８））は、ＩｇＧエフェクター機能を著しく低下させることができる。いくつかの態様では、三重変異を含むＩｇＧ１配列は、配列番号４７４を含む。
いくつかの態様では、例えば米国特許第５，６７７，４２５号明細書に記載されるように、Ｆｃ領域（ＣＨ１ドメイン）のヒンジ領域に、１つ、２つ又はそれ以上の変異（例えばアミノ酸置換）を導入して、ヒンジ領域のシステイン残基数を変更（例えば、増加又は減少）するようにしてもよい。ＣＨ１ドメインのヒンジ領域のシステイン残基数を変更して、例えば軽鎖及び重鎖の会合を促進してもよく、又は抗体若しくはその抗原結合断片の安定性を変化（例えば増大又は低減）させてもよい。
いくつかの態様では、エフェクター細胞の表面のＦｃ受容体（例えば、活性化Ｆｃ受容体）に対する抗体又はその抗原結合断片の親和性を増大又は低減させるために、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片のＦｃ領域（例えば、Ｋａｂａｔ付番方式（例えばＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス）に従って付番した、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１～３４０）、及び／若しくはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１～４４７）、並びに／又はヒンジ領域）に、１つ、２つ又はそれ以上の変異（例えばアミノ酸置換）が導入される。Ｆｃ受容体に対する親和性を低減又は増大させるＦｃ領域の変異、及びそのような変異をＦｃ受容体又はそのフラグメントに導入するための手法は当業者に知られている。Ｆｃ受容体に対する抗体又はその抗原結合断片の親和性を変化させることができるＦｃ受容体の変異の例は、例えばＳｍｉｔｈ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２０１２）ＰＮＡＳ １０９：６１８１－６１８６、米国特許第６，７３７，０５６号明細書、並びに国際公開第０２／０６０９１９号パンフレット、同第９８／２３２８９号パンフレット及び同第９７／３４６３１号パンフレットに記載されており、これらの文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、インビボでの抗体又はその抗原結合断片の半減期を変化（例えば、短縮又は延長）させるために、ＩｇＧ定常ドメイン又はそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくは、Ｆｃ又はヒンジ－Ｆｃドメイン断片）に、１つ、２つ又はそれ以上のアミノ酸変異（すなわち、置換、挿入又は欠失）が導入される。インビボでの抗体又はその抗原結合断片の半減期を変化（例えば、短縮又は延長）させる変異の例については、例えば、国際公開第０２／０６０９１９号パンフレット、同第９８／２３２８９号パンフレット及び同第９７／３４６３１号パンフレット、並びに米国特許第５，８６９，０４６号明細書、同第６，１２１，０２２号明細書、同第６，２７７，３７５号明細書及び同第６，１６５，７４５号明細書を参照されたい。いくつかの態様では、インビボでの抗体又はその抗原結合断片の半減期を短縮させるために、ＩｇＧ定常ドメイン又はそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくは、Ｆｃ又はヒンジ－Ｆｃドメイン断片）に、１つ、２つ又はそれ以上のアミノ酸変異（すなわち、置換、挿入又は欠失）が導入される。いくつかの態様では、インビボでの抗体又はその抗原結合断片の半減期を延長させるために、ＩｇＧ定常ドメイン又はそのＦｃＲｎ結合断片（例えば、Ｆｃ又はヒンジ－Ｆｃドメイン断片）に、１つ、２つ又はそれ以上のアミノ酸変異（すなわち、置換、挿入又は欠失）が導入される。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス（Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）前掲）に従って付番した、第２の定常（ＣＨ２）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１～３４０）及び／又は第３の定常（ＣＨ３）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１～４４７）に、１つ以上のアミノ酸変異（例えば、置換）を有し得る。いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片は、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従って付番した、２５１～２５７、２８５～２９０、３０８～３１４、３８５～３８９及び４２８～４３６位におけるアミノ酸残基の１つ、２つ、３つ又はそれ以上のアミノ酸置換を含むＩｇＧ定常ドメインを含む。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片のエフェクター機能を変化させるために、１つ、２つ又はそれ以上のアミノ酸置換がＩｇＧ定常ドメインのＦｃ領域に導入される。例えば、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従って付番したアミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０及び３２２から選択される１つ以上のアミノ酸を、抗体又はその抗原結合断片のエフェクターリガンドに対する親和性は変化するが、親抗体の抗原結合能は保持するように、異なるアミノ酸残基で置換することができる。親和性を変化させるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体又は補体のＣ１成分であり得る。この手法は、米国特許第５，６２４，８２１号明細書及び同第５，６４８，２６０号明細書でにさらに詳細に記載されている。いくつかの態様では、定常領域ドメインを（点変異又は他の手段によって）欠失又は不活性化させることにより、循環抗体又はその抗原結合断片のＦｃ受容体結合を低減させてもよく、それによって腫瘍局在化が増大する。定常ドメインを欠失又は不活化する変異についての説明は、例えば米国特許第５，５８５，０９７号明細書及び同第８，５９１，８８６号明細書を参照されたい。いくつかの態様では、１つ以上のアミノ酸置換をＦｃ領域に導入して、Ｆｃ領域上の潜在的なグリコシル化部位を除去することが可能であり、それによってＦｃ受容体結合を低減させ得る（例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７６：６５９１－６０４を参照されたい）。
いくつかの態様では、抗体又はその抗原結合断片が、変化したＣ１ｑ結合性及び／又は低減若しくは無効化した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有するように、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従って付番した定常領域のアミノ酸残基３２２、３２９及び３３１から選択される１つ以上のアミノ酸を、異なるアミノ酸残基で置換してもよい。この手法は、米国特許第６，１９４，５５１号明細書（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら）にさらに詳細に記載されている。いくつかの態様では、ＣＨ２ドメインのＮ末端領域のアミノ酸２３１位～２３８位内の１つ以上のアミノ酸残基を改変し、それによって抗体の補体に結合する能力を変化させる。この手法は、さらに国際公開第９４／２９３５１号パンフレットに記載されている。いくつかの態様では、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する抗体又はその抗原結合断片の能力を向上させ、且つ／或いは、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従って付番した下記の位置：２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８又は４３９で１つ以上のアミノ酸を変異させること（例えば、アミノ酸置換を導入すること）によって抗体又はその抗原結合断片のＦｃγ受容体に対する親和性を増大させるために、Ｆｃ領域が改変される。この手法は、さらに国際公開第００／４２０７２号パンフレットに記載されている。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従って付番した、２６７位、３２８位、又はその組み合わせに変異（例えば、置換）を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、及びその組み合わせからなる群から選択される変異（例えば、置換）を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ変異（例えば、置換）を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。いくつかの態様では、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ変異（例えば、置換）を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、又はＦｃγＲＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＢに対して増大した結合親和性を有する。
遺伝子操作されたグリコフォームは、種々の目的、例えば、以下に限定されるものではないが、エフェクター機能を増大又は低減するのに有用であり得る。本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片に遺伝子操作されたグリコフォームを生成するための方法としては、例えば、Ｕｍａｎａ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １７：１７６－１８０；Ｄａｖｉｅｓ Ｊ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ７４：２８８－２９４；Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７：２６７３３－２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ Ｔ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：３４６６－３４７３；Ｎｉｗａ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １：６２４８－６２５５；Ｐｒｅｓｔａ ＬＧ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ ３０：４８７－４９０；Ｋａｎｄａ Ｙ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ １７：１０４－１１８；米国特許第６，６０２，６８４号明細書；同第６，９４６，２９２号明細書；及び同第７，２１４，７７５号明細書；米国特許出願公開第２００７／０２４８６００号明細書；同第２００７／０１７８５５１号明細書；同第２００８／００６００９２号明細書；及び同第２００６／０２５３９２８号明細書；国際公開第００／６１７３９号パンフレット；国際公開第０１／２９２２４６号パンフレット；国際公開第０２／３１１１４０号パンフレット；及び国際公開第０２／３０９５４号パンフレット；Ｐｏｔｉｌｌｅｇｅｎｔ（商標）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）；並びにＧｌｙｃｏＭＡｂ（登録商標）ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｇｌｙｃａｒｔ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＧ、Ｚｕｒｉｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｆｅｒｒａｒａ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ９３：８５１－８６１；国際公開第０７／０３９８１８号パンフレット；国際公開第１２／１３０８３１号パンフレット；国際公開第９９／０５４３４２号パンフレット；国際公開第０３／０１１８７８号パンフレット；及び国際公開第０４／０６５５４０号パンフレットも参照されたい。
いくつかの態様では、本明細書に記載される定常領域の変異又は改変のいずれかを、２つの重鎖定常領域を有する本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片の一方又は両方の重鎖定常領域に導入してもよい。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片（例えば、ＡＢ１１７０００２、ＡＢ１１７０００６、ＡＢ１１７００１０、ＡＢ１１７００１９、ＡＢ１１７００２８、ＡＢ１１７００３６、ＡＢ１１７００４０、ＡＢ１１７００４３、ＡＢ１１７００４７、ＡＢ１１７００６９、ＡＢ１１７００７０、ＡＢ１１７００７２、ＡＢ１１７００７３、ＡＢ１１７００７４、ＡＢ１１７００８６、ＡＢ１１７０１４８、ＡＢ１１７０２４１、ＡＢ１１７０２４２、ＡＢ１１７０２４３、ＡＢ１１７０２４４、ＡＢ１１７０２４５、ＡＢ１１７０２４６、ＡＢ１１７０２４７、ＡＢ１１７０２４８、ＡＢ１１７０２４９又はＡＢ１５２００８５）と同じＧＤＦ－１５のエピトープ（例えば、ヒトＧＤＦ－１５のエピトープ）に結合する抗体又はその抗原結合断片が本明細書で提供される。いくつかの態様では、ＡＢ１１７０２４１（配列番号３２６のＶＨ及び配列番号３３５のＶＬを含む抗体）と同じＧＤＦ－１５エピトープに結合する抗体又はその抗原結合断片が本明細書で提供される。
競合結合アッセイを用いて、２つの抗体が重複エピトープに結合するかを判定することができる。免疫グロブリンが、試験下で、ＧＤＦ－１５などの共通抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイにより、競合結合を判定することができる。多数の種類の競合結合アッセイ、例えば、固相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ９：２４２－２５３を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ＴＮ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３７：３６１４－９を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ Ｅ ＆ Ｌａｎｅ Ｄ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；Ｉ－１２５標識を用いる固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ＧＡ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２５（１）：７－１５を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ ＲＣ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５２）；及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ Ｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：７７－８２）が知られている。典型的には、このようなアッセイは、非標識試験免疫グロブリン及び標識参照免疫グロブリンのいずれかを有する固体表面又は細胞に結合した精製抗原（例えば、ヒトＧＤＦ－１５などのＧＤＦ－１５）の使用を伴う。試験免疫グロブリンの存在下で、固体表面又は細胞に結合した標識の量を決定することによって、競合的阻害を測定することができる。通常、試験免疫グロブリンは、過剰に存在する。通常、競合抗体は、過剰に存在する場合、共通抗原への参照抗体の特異的結合を、少なくとも５０～５５％、５５～６０％、６０～６５％、６５～７０％、７０～７５％、又はそれ以上阻害する。競合結合アッセイは、標識抗原又は標識抗体を用いて、多数の異なるフォーマットで構成され得る。このアッセイの一般的なバージョンでは、抗原を、９６ウェルプレート上に固定する。次に、抗原に対する標識抗体の結合をブロックする未標識抗体の能力を、放射性標識又は酵素標識を用いて測定する。さらなる詳細について、例えば、Ｗａｇｅｎｅｒ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３０：２３０８－２３１５；Ｗａｇｅｎｅｒ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ６８：２６９－２７４；Ｋｕｒｏｋｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５０：４８７２－４８７９；Ｋｕｒｏｋｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｎｖｅｓｔ ２１：５２３－５３８；Ｋｕｒｏｋｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ １１：３９１－４０７、及びＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ Ｅ ＆ Ｌａｎｅ Ｄ ｅｄｉｔｏｒｓ（前掲），ｐｐ．３８６－３８９を参照されたい。
いくつかの態様では、競合アッセイは、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））を用いて、例えば、Ａｂｄｉｃｈｅ ＹＮ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ３８６：１７２－１８０に記載されているものなどの「インタンデムアプローチ」によって実行され、これによれば、ＧＤＦ－１５抗原をチップ表面に、例えばＣＭ５センサチップ上に固定した後、抗ＧＤＦ－１５抗体をチップ上に流す。抗体又はその抗原結合断片が、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体と競合するかどうかを判定するために、まず抗ＧＤＦ－１５抗体をチップ表面に流して飽和を達成し、その後、潜在的競合抗体を添加する。次いで、競合抗体又はその抗原結合断片の結合を、非競合対照と比較して判定し定量し得る。
いくつかの態様では、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｏｃｔｅｔ競合結合を用いて、ＧＤＦ－１５抗体又はその抗原結合断片が別のＧＤＦ－１５抗体又はその抗原結合断片のＧＤＦ－１５への結合を競合的に阻害することを決定する。
いくつかの態様では、当業者に知られる、又は本明細書に記載されるアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合アッセイ、懸濁アレイ若しくは表面プラズモン共鳴アッセイ、又は実施例４で使用される方法）を用いて決定される、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片（例えば、２０５０２、２０５０２．１又は２２２１３）がＧＤＦ－１５（例えば、ヒトＧＤＦ－１５）に結合するのを競合的に（例えば用量依存的に）阻害する抗体が、本明細書で提供される。
本明細書に記載される抗体又は抗原結合断片（例えば、モノクローナル抗体又は断片）は、ヒト抗体、ヒト化抗体、非ヒト抗体又はキメラ抗体であり得る、又はそれらから得られ得る。一態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、完全ヒト抗体である。いくつかの態様では、ＧＤＦ－１５に特異的に結合する、本明細書に記載されるような抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びｓｃＦｖからなる群から選択され、これらのＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はｓｃＦｖは、ＧＤＦ－１５に特異的に結合する、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はｓｃＦｖは、当業者に知られる任意の手法によって生成することができる。いくつかの態様では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はｓｃＦｖは、インビボで抗体の半減期を延長させる部分をさらに含む。この部分は、「半減期延長部分」とも称される。インビボでＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はｓｃＦｖの半減期を延長させるための当業者に知られる任意の部分が使用され得る。例えば、半減期延長部分としては、Ｆｃ領域、ポリマー、アルブミン、又はアルブミン結合タンパク質若しくは化合物が挙げられ得る。ポリマーとしては、天然の又は合成の、任意選択的に置換された直鎖又は分枝鎖のポリアルキレン、ポリアルケニレン、ポリオキシアルキレン、多糖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン、又はこれらの誘導体が挙げられ得る。置換基としては、１つ以上のヒドロキシ基、メチル基、又はメトキシ基が挙げられ得る。いくつかの態様では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はｓｃＦｖは、半減期延長部分を結合させるために、１つ以上のＣ末端アミノ酸を加えることによって改変することができる。いくつかの態様では、半減期延長部分は、ポリエチレングリコール又はヒト血清アルブミンである。いくつかの態様では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はｓｃＦｖは、Ｆｃ領域に融合されている。
ＧＤＦ－１５に結合する抗体又はその抗原結合断片は、検出可能な標識又は物質に融合又はコンジュゲート（例えば共有結合又は非共有結合）させることができる。検出可能な標識又は物質の例としては、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識；ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ）などの放射性同位体；ルミノールなどの発光標識；並びにフルオレセイン及びローダミンなどの蛍光標識、並びにビオチンが挙げられる。このような標識抗体又はその抗原結合断片は、ＧＤＦ－１５を検出するために使用することができる。
いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片は、単離又は生成される。一般に、単離された抗体又はその抗原結合断片は、単離された抗体又はその抗原結合断片とは異なる抗原特異性を有するその他の抗体又はその抗原結合断片を実質的に含まないものである。例えば、いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片の調製は、細胞材料及び／又は化学前駆体を実質的に含まない。
ＩＩＩ．核酸、ベクター、宿主細胞、及び抗体を生成する方法
ＧＤＦ－１５に免疫特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片は、抗体及びその抗原結合断片を合成するための当該技術分野で知られた任意の方法によって、例えば、化学合成によって、又は組換え発現技術によって、生成することができる。本明細書に記載される方法は、別段の指示がない限り、分子生物学、微生物学、遺伝分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び修飾、核酸ハイブリダイゼーション、並びに当該技術分野の技能の範囲内の関連分野における従来技術を使用する。これらの技術は、例えば、本明細書に引用されている参照文献に記載されており、文献に詳細に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８７年及び年次改訂版）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ （１９８７年及び年次改訂版）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｒｒｅｎ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照されたい。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、ＧＤＦ－１５に免疫特異的に結合する抗体又は抗原結合断片を製造する方法であって、本明細書に記載される細胞又は宿主細胞を培養することを含む方法である。いくつかの態様では、本明細書中で提供されるのは、ＧＤＦ－１５に免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を製造する方法であって、本明細書に記載される細胞又は宿主細胞（例えば、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む細胞又は宿主細胞）を用いて抗体又はその抗原結合断片を発現させる（例えば、組換え発現させる）ことを含む方法である。いくつかの態様では、細胞は、単離された細胞である。いくつかの態様では、外因性ポリヌクレオチドが細胞に導入されている。いくつかの態様では、当該方法はさらに、細胞、宿主細胞、又は培養物から得られた抗体又は抗原結合断片を分離又は精製する工程を含む。
ポリクローナル抗体を生成する方法が、当該技術分野において知られている（例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋの第１１章を参照されたい）。
モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ハイブリドーマ、組換え、及びファージディスプレイ技術、酵母ベース提示技術、又はこれらの組み合わせの使用を含む、当該技術分野で知られる多種多様な技術を使用して調製され得る。例えば、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、当該技術分野において知られており、例えば、Ｈａｒｌｏｗ Ｅ ＆ Ｌａｎｅ Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ＧＪ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３ ６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）で教示されるか、又はＫｏｈｌｅｒ Ｇ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５に記載されているものを含むハイブリドーマ技術を用いて生成することができる。本明細書に記載される抗体を選択し且つ生成するために使用され得る酵母ベースの提示法の例としては、例えば、国際公開第２００９／０３６３７９Ａ２号パンフレット、国際公開第２０１０／１０５２５６号パンフレット、及び国際公開第２０１２／００９５６８号パンフレット（これらの各文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されるものが挙げられる。
いくつかの態様では、モノクローナル抗体又は抗原結合断片は、クローン細胞（例えば、組換え抗体又は抗原結合断片を産生するハイブリドーマ又は宿主細胞）によって産生される抗体又は抗原結合断片であり、抗体又は抗原結合断片は、例えばＥＬＩＳＡ、又は当該技術分野で知られる、若しくは本明細書の実施例で示される他の抗原結合アッセイによって決定されるように、ＧＤＦ－１５に免疫特異的に結合する。いくつかの態様では、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ヒト抗体又はその抗原結合断片であり得る。いくつかの態様では、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、Ｆａｂ断片又はＦ（ａｂ’）２断片であり得る。本明細書に記載されるモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５に記載されるハイブリドーマ法によって製造し得るか、又は、例えば本明細書に記載される技術を用いて、ファージライブラリから単離し得る。クローン細胞株の、またそれによって発現されるモノクローナル抗体及びその抗原結合断片を調製する他の方法は、当該技術分野においてよく知られている（例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．（前掲）の第１１章を参照されたい）。
本明細書中に記載される抗体の抗原結合断片は、当業者に知られる任意の技術によって生成され得る。例えば、本明細書に記載されるＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、（Ｆａｂ断片を生成するための）パパイン、又は（Ｆ（ａｂ’）２断片を生成するための）ペプシンなどの酵素を用いた免疫グロブリン分子のタンパク質分解的切断によって生成され得る。Ｆａｂ断片は、四量体抗体分子の２つの同一のアームのうちの１つに対応し、重鎖のＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインと対をなす完全軽鎖を含有する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域のジスルフィド結合によって連結した四量体抗体分子の２つの抗原結合アームを含有する。
さらに、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片はまた、当該技術分野において知られる種々のファージディスプレイ法及び／又は酵母ベースの提示法を用いて生成することができる。ファージディスプレイ法では、タンパク質は、これをコードするポリヌクレオチド配列を有するファージ粒子の表面に提示される。特に、ＶＨドメイン及びＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物ｃＤＮＡライブラリ（例えば、罹患組織のヒト又はマウスｃＤＮＡライブラリ）から増幅される。ＶＨドメイン及びＶＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーと一緒に組換えられて、ファージミドベクター中にクローニングされる。ベクターは、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）内にエレクトロポレートされ、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）にヘルパーファージが感染する。これらの方法において用いられるファージは、典型的には、繊維状ファージ、例えばｆｄ及びＭ１３であり、通常、ＶＨドメイン及びＶＬドメインが、ファージ遺伝子ＩＩＩ又は遺伝子ＶＩＩＩに組換えにより融合する。特定の抗原に結合する抗体又はその抗原結合断片を発現するファージは、抗原により、例えば、標識抗原、又は固体表面若しくはビーズに結合したか若しくは捕捉された抗原を用いて、選択又は識別され得る。本明細書に記載される抗体又は断片を製造するのに用いられ得るファージディスプレイ法の例としては、Ｂｒｉｎｋｍａｎ Ｕ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０；Ａｍｅｓ ＲＳ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７－１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ＣＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２４：９５２－９５８；Ｐｅｒｓｉｃ Ｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ １８７：９－１８；Ｂｕｒｔｏｎ ＤＲ ＆ Ｂａｒｂａｓ ＣＦ（１９９４）Ａｄｖａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５７：１９１－２８０；国際出願ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４号明細書、国際公開第９０／０２８０９号パンフレット、国際公開第９１／１０７３７号パンフレット、国際公開第９２／０１０４７号パンフレット、国際公開第９２／１８６１９号パンフレット、国際公開第９３／１１２３６号パンフレット、国際公開第９５／１５９８２号パンフレット、国際公開第９５／２０４０１号パンフレット、及び国際公開第９７／１３８４４号パンフレット；並びに米国特許第５，６９８，４２６号明細書、同第５，２２３，４０９号明細書、同第５，４０３，４８４号明細書、同第５，５８０，７１７号明細書、同第５，４２７，９０８号明細書、同第５，７５０，７５３号明細書、同第５，８２１，０４７号明細書、同第５，５７１，６９８号明細書、同第５，４２７，９０８号明細書、同第５，５１６，６３７号明細書、同第５，７８０，２２５号明細書、同第５，６５８，７２７号明細書、同第５，７３３，７４３号明細書、及び同第５，９６９，１０８号明細書に開示されるものが挙げられる。
ヒト抗体、非ヒト抗体、キメラ抗体又はヒト化抗体は、インビトロの供給源（例えば、ハイブリドーマ又は組換え的に抗体を産生する細胞株）及びインビボの供給源（例えば、げっ歯類、ヒト扁桃腺）を含む任意の手段によって入手することができる。抗体を生成する方法は、当該技術分野において知られており、例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ． Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：５１１－５１９（１９７６）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｓ．），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）；及びＪａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．），Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ． （２００１））に記載されている。いくつかの態様では、ヒト抗体又はキメラ抗体は、１つ又は複数の内因性免疫グロブリン遺伝子が１つ又は複数のヒト免疫グロブリン遺伝子で置き換えられているトランスジェニック動物（例えば、マウス）を使用して生成することができる。内因性抗体遺伝子が効果的にヒト抗体遺伝子で置き換えられているトランスジェニックマウスの例としては、以下に限定されるものではないが、Ｍｅｄａｒｅｘ ＨＵＭＡＢ－ＭＯＵＳＥ（商標）、Ｋｉｒｉｎ ＴＣ ＭＯＵＳＥ（商標）及びＫｙｏｗａ Ｋｉｒｉｎ ＫＭ－ＭＯＵＳＥ（商標）が挙げられる（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２３（９）：１１１７－２５（２００５），及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｈａｎｄｂ． Ｅｘｐ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１８１：６９－９７（２００８）を参照されたい）。ヒト化抗体は、当該技術分野において知られる任意の好適な方法を用いて生成することができ（例えば、Ａｎ，Ｚ．（ｅｄ．），Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ Ｂｅｎｃｈ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｂｏｋｅｎ，Ｎ．Ｊ． （２００９）を参照されたい）、例えば、非ヒトＣＤＲのヒト抗体足場への移植（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，３６（１）：２５－３４（２００５）；及びＨｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１４４（１）：１１５－１２０（２００８）を参照されたい）が挙げられる。いくつかの態様では、ヒト化抗体を、例えば米国特許出願公開第２０１１／０２８７４８５Ａ１号明細書に記載されている方法を使用して作製し得る。
ＩＩＩ（ａ）． 核酸
本明細書で提供されるのは、ヒトＧＤＦ－１５に結合する抗体若しくはその抗原結合断片（任意選択的に、この抗体若しくはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体若しくは断片である）又はその断片（例えば、ＶＨ及び／又はＶＬ）をコードする核酸配列を含む１種以上の単離されたポリヌクレオチドである。
また本明細書で提供されるのは、配列番号２、２０、３８、５６、７４、９２、１１０、１２８、１４６、１６４、１８２、２００、２１８、２３６、２５４、２７２、２９０、３０８、３２６、３４４、３６２、３８０、３９８、４１６、４３４及び４５２からなる群から選択される配列を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。いくつかの態様では、ポリペプチドを含む抗体又はその抗原結合断片は、ＧＤＦ－１５に免疫特異的に結合する。
また本明細書で提供されるのは、配列番号１１、２９、４７、６５、８３、１０１、１１９、１３７、１５５、１７３、１９１、２０９、２２７、２４５、２６３、２８１、２９９、３１７、３３５、３５３、３７１、３８９、４０７、４２５、４４３及び４６１からなる群から選択される配列を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。いくつかの態様では、ポリペプチドを含む抗体又はその抗原結合断片は、ＧＤＦ－１５に免疫特異的に結合する。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の抗体又は抗原結合断片の軽鎖又は重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗体のＶＨ ＦＲ及びＣＤＲを含む重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むことができる（例えば、表１及び表５を参照されたい）。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗体のＶＬ ＦＲ及びＣＤＲを含む軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含むことができる（例えば、表２及び表６を参照されたい）。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるポリヌクレオチド又はポリヌクレオチドの組み合わせは、ＧＤＦ－１５（例えば、ヒトＧＤＦ－１５）に免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列又はヌクレオチド配列の組み合わせを含み、抗体又はその抗原結合断片は重鎖を含み、重鎖は表３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、表８に示す重鎖定常領域配列（例えば、配列番号４７３又は４７４）を含む重鎖定常領域とを含む。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるポリヌクレオチド又はポリヌクレオチドの組み合わせは、ＧＤＦ－１５（例えば、ヒトＧＤＦ－１５）に免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列又はヌクレオチド配列の組み合わせを含み、抗体又はその抗原結合断片は軽鎖を含み、軽鎖は表４に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインと、表８に示す軽鎖定常領域配列（例えば、配列番号４７５）を含む軽鎖定常領域とを含む。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるポリヌクレオチド又はポリヌクレオチドの組み合わせは、ＧＤＦ－１５（例えば、ヒトＧＤＦ－１５）に免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列又はヌクレオチド配列の組み合わせを含み、抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）重鎖（ここで、重鎖は、表３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、表８に示す重鎖定常領域配列（例えば、配列番号４７３又は４７４）を含む重鎖定常領域とを含む）及び（ｉｉ）軽鎖（ここで、軽鎖は、表４に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインと、表８に示す軽鎖定常領域配列（例えば、配列番号４７５）を含む軽鎖定常領域とを含む）を含む。
いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ－１５に結合し、表９に列挙されるＶＨ及び／又はＶＬをコードするＤＮＡ配列によってコードされる。したがって、本明細書においてはまた、表９に列挙されるＶＨ及び／又はＶＬをコードする配列を含む核酸を含むポリヌクレオチドが提供される。
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、表９に列挙されるＶＨをコードする配列を含むヌクレオチド、及び重鎖定常領域（例えば、配列番号４７３及び４７４）をコードする配列を含むヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、表９に列挙されるＶＬをコードする配列を含むヌクレオチド、及び軽鎖定常領域（例えば、配列番号４７５）をコードする配列を含むヌクレオチドを含む。
また本明細書においては、例えばコドン／ＲＮＡ最適化、異種シグナル配列との置換、及びｍＲＮＡ不安定性要素の排除によって最適化される、ＧＤＦ－１５に特異的に結合する本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドが提供される。コドン変化（例えば、遺伝子コードの縮退に起因して同じアミノ酸をコードするコドン変化）を導入し、且つ／又はｍＲＮＡの阻害領域を除去することによって、組換え発現のためのＧＤＦ－１５又はそのドメイン（例えば、重鎖、軽鎖、ＶＨドメイン、又はＶＬドメイン）に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片をコードする最適化された核酸を生成するための方法は、例えば、米国特許第５，９６５，７２６号明細書、同第６，１７４，６６６号明細書、同第６，２９１，６６４号明細書、同第６，４１４，１３２号明細書、及び同第６，７９４，４９８号明細書に記載される最適化法を適宜適応させることによって実施可能である。
本明細書に記載される抗体若しくはその抗原結合断片、又はそのドメインをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野においてよく知られる方法（例えば、ＰＣＲ及び他の分子クローニング法）を用いて、好適な供給源（例えばハイブリドーマ）由来の核酸から生成され得る。例えば、知られている配列の３’末端及び５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを用いたＰＣＲ増幅は、目的の抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られるゲノムＤＮＡを用いて実行され得る。このようなＰＣＲ増幅法を用いて、抗体又はその抗原結合断片の軽鎖及び／又は重鎖をコードする配列を含む核酸を得ることができる。このようなＰＣＲ増幅法を用いて、抗体又はその抗原結合断片の可変軽鎖領域及び／又は可変重鎖領域をコードする配列を含む核酸を得ることができる。増幅された核酸は、宿主細胞内での発現のために、また例えば、キメラ抗体及びヒト化抗体又はそれらの抗原結合断片を生成するためのさらなるクローニングのために、ベクターにクローニングすることができる。
本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、例えば、ＲＮＡ形態であってもＤＮＡ形態であってもよい。ＤＮＡとしては、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡが挙げられ、ＤＮＡは、二本鎖であっても一本鎖であってもよい。一本鎖の場合、ＤＮＡは、コード鎖であっても非コード（アンチセンス）鎖であってもよい。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、１つ以上の内因性イントロンを欠いているｃＤＮＡ又はＤＮＡである。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、天然に存在しないポリヌクレオチドである。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、組換えにより生成される。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは単離されている。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、実質的に純粋である。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、天然成分から精製される。
ＩＩＩ（ｂ）． ベクター及び宿主細胞
本開示は、ヒトＧＤＦ－１５に結合する抗体又はその抗原結合断片（任意選択的に、この抗体又はその抗原結合断片の１つ又は複数は、モノクローナル抗体又は断片である）をコードする１種又は複数の核酸配列を含む１種又は複数のベクターをさらに提供する。ベクターは、例えば、プラスミド、エピソーム、コスミド、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルス若しくはアデノウイルス）又はファージであり得る。好適なベクター及びベクターの調製方法は、当該技術分野でよく知られている（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ． （２００１）、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ． （１９９４）を参照されたい）。
ヒトＧＤＦ－１５に結合する抗体又はその抗原結合断片（任意選択的に、この抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体又は断片である）をコードする核酸配列に加えて、このベクターは、望ましくは、宿主細胞中でのこのコード配列の発現をもたらす発現制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、転写ターミネーター、配列内リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）など）を含む。例示的な発現制御配列は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）に記載されている。
ヒトＧＤＦ－１５に結合する抗体又はその抗原結合断片（任意選択的に、この抗体又はその抗原結合断片の１つ又は複数は、モノクローナル抗体又は断片である）をコードする核酸配列を含むベクターを、コードされるポリペプチドを発現し得る宿主細胞（例えば、任意の好適な原核細胞又は真核細胞）に導入し得る。したがって、本開示は、このベクターを含む単離細胞を提供する。使用し得る宿主細胞としては、容易且つ確実に増殖し得、適度に速い増殖速度を有し、十分に特徴付けられた発現系を有し、容易に且つ効率的に形質転換又はトランスフェクトし得る細胞が挙げられる。好適な原核細胞の例としては、以下に限定されるものではないが、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属（バチルス・サブティルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びバチルス・ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）など）、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属（Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）など）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属及びエルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）属が挙げられる。特に有用な原核細胞としては、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）（例えば、Ｋ１２、ＨＢ１０１（ＡＴＣＣ Ｎｏ．３３６９４）、ＤＨ５ａ、ＤＨ１０、ＭＣ１０６１（ＡＴＣＣ Ｎｏ．５３３３８）、及びＣＣ１０２）の様々な菌株が挙げられる。好適な真核細胞は、当該技術分野において知られており、例えば、酵母細胞、昆虫細胞及び哺乳動物細胞が挙げられる。いくつかの態様では、ベクターは、哺乳動物細胞中で発現される。多数の好適な哺乳動物宿主細胞が当該技術分野で知られており、多くは、米国培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から入手可能である。好適な哺乳動物細胞の例としては、以下に限定されないが、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ６１）、ＣＨＯ ＤＨＦＲ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，９７：４２１６－４２２０（１９８０））、ヒト胎児腎（ＨＥＫ）２９３又は２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ１５７３）及び３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ９２）が挙げられる。他の好適な哺乳動物細胞株は、サルＣＯＳ－１（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ１６５０）及びＣＯＳ－７細胞株（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ１６５１）並びにＣＶ－１細胞株（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ７０）である。哺乳動物細胞は、望ましくは、ヒト細胞である。例えば、哺乳動物細胞は、ヒトリンパ球又はリンパ球由来の細胞株、例えばプレＢリンパ球系統（ｐｒｅ－Ｂ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｏｒｉｇｉｎ）の細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞株（Ｃｒｕｃｅｌｌ Ｈｏｌｌａｎｄ Ｂ．Ｖ．，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）又はヒト胎児腎（ＨＥＫ）２９３若しくは２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ１５７３）であり得る。
本明細書に記載の抗体若しくは抗原結合断片（任意選択的に、モノクローナル抗体又は断片）のいずれかのアミノ酸をコードする核酸配列は、「トランスフェクション」、「形質転換」又は「形質導入」によって細胞に導入され得る。
本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片が組換え発現によって産生されたら、これを、当該技術分野で知られる任意の免疫グロブリン分子精製法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティ、特にプロテインＡ後の特異的抗原に対する親和性によるもの、及びサイズ排除クロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解度、又は任意の他の標準的なタンパク質精製技術によって精製することができる。さらに、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に記載される、又はさもなければ当該技術分野で知られる異種ポリペプチド配列に融合させて、精製を促進することができる。
ＩＶ．医薬組成物
本明細書に記載される抗ＧＤＦ－１５抗体又はその抗原結合断片を含む組成物が本明細書において提供される。いくつかの態様では、所望の純度を有する抗体又はその抗原結合断片は、例えば、生理学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤を含む製剤中に存在する（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）。許容される担体、賦形剤、又は安定剤は、利用される投与量及び濃度ではレシピエントに対して非毒性である。非経口投与に好適な製剤としては、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び製剤を意図するレシピエントの血液と等張にする溶質を含み得る水性及び非水性の等張滅菌注射液、並びに、懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び保存剤を含み得る水性及び非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。
いくつかの態様では、医薬組成物は、本明細書に記載される抗ＧＤＦ－１５抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｗｉｔｈ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ ｅｄ．（２００３）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照されたい）。本明細書に記載の医薬組成物は、いくつかの態様では、医薬として使用するためのものである。インビボ投与に使用される組成物は、無菌であり得る。これは、例えば、無菌濾過膜に通して濾過することにより容易に達成される。
本明細書に記載の医薬組成物は、インビボ又はインビトロで生物学的効果を発揮するために使用することができる。
本明細書に記載の医薬組成物は、癌を治療するために使用することができる。いくつかの態様では、癌は、扁平上皮癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、消化管癌、腎臓（ｒｅｎａｌ）癌、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）癌、前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌、甲状腺癌、メラノーマ、軟骨肉腫、神経芽細胞腫、膵臓癌、多形神経膠芽腫、子宮頸癌、脳腫瘍、胃癌、膀胱癌、ヘパトーマ（肝細胞癌（ＨＣＣ））、乳癌、結腸癌、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌、腎細胞癌、メルケル細胞癌、尿路上皮癌、胸腺癌、上皮癌、唾液腺癌、絨毛癌、口腔癌、皮膚癌、又は食道癌である。いくつかの態様では、癌は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））癌、肝癌（肝細胞癌（ＨＣＣ））、腎細胞癌（ＲＣＣ）、膀胱癌、食道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）又は前立腺癌である。癌は、ＧＤＦ－１５発現癌であり得る。
本明細書に記載の医薬組成物は、癌細胞の増殖を阻害するために使用することができる。癌細胞は、扁平上皮癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、消化管癌、腎臓（ｒｅｎａｌ）癌、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）癌、前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌、甲状腺癌、メラノーマ、軟骨肉腫、神経芽細胞腫、膵臓癌、多形神経膠芽腫、子宮頸癌、脳腫瘍、胃癌、膀胱癌、ヘパトーマ（肝細胞癌（ＨＣＣ））、乳癌、結腸癌、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌、腎細胞癌、メルケル細胞癌、尿路上皮癌、胸腺癌、上皮癌、唾液腺癌、絨毛癌、口腔癌、皮膚癌、又は食道癌の細胞であり得る。いくつかの態様では、癌細胞は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））癌、肝癌（肝細胞癌（ＨＣＣ））、腎細胞癌（ＲＣＣ）、膀胱癌、食道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）又は前立腺癌の細胞である。癌細胞は、ＧＤＦ－１５発現癌細胞であり得る。
本明細書に記載の医薬組成物は、樹状細胞を活性化するため、Ｔ細胞の増殖を増加させるため、及び／又はＴｈ１細胞の分化を増加させるために使用することができる。樹状細胞、Ｔ細胞、及び／又はＴｈ１細胞は、インビトロにあり得る。樹状細胞、Ｔ細胞、及び／又はＴｈ１細胞は、対象、例えばヒト対象内にあり得る。いくつかの態様では、対象、例えばヒト対象は、癌を有する。
本明細書に記載の医薬組成物は、悪液質を治療するために使用することができる。いくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、悪液質などの疾患又は病態を治療するために使用される。いくつかの態様では、悪液質は、癌、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症及び結核からなる群から選択される基礎疾患に関連している。
いくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、悪液質に関連する筋肉量の減少及び脂肪量の減少を阻害するために使用される。いくつかの態様では、悪液質は、癌、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症及び結核からなる群から選択される基礎疾患に関連している。
いくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、悪液質に関連する意図しない体重減少を阻害又は低減するために使用される。
いくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、悪液質に関連する臓器量の減少、筋肉量の減少、脂肪量の減少、及び不意図しない体重減少を阻害するために使用される。いくつかの態様では、悪液質は、癌、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症及び結核からなる群から選択される基礎疾患に関連している。いくつかの態様では、臓器は、腎臓、肝臓、心臓、又は脾臓である。
いくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、悪液質に関連するサルコペニアを治療するために使用される。
いくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、悪液質の発生率及び／又は重症度を低下させ、それによって悪液質を引き起こすおそれのある抗癌剤の最大耐量を増加させるために使用される。
いくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、悪液質に罹患している対象の食欲を増加させるために使用される。いくつかの態様では、悪液質は、癌、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症及び結核からなる群から選択される基礎疾患に関連している。
Ｖ．治療上の使用及び方法
様々な態様において、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のその医薬組成物を使用するインビトロ及びインビボの方法である。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、癌を治療する方法である。癌を治療する方法は、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要としている対象に投与することを含み得る。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、対象における癌細胞の増殖を阻害する方法である。対象における癌細胞の増殖を阻害する方法は、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要としている対象に投与することを含み得る。対象は、例えば、癌を有する対象であり得る。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、対象における樹状細胞の活性化を増加させる方法である。対象における樹状細胞の増殖を増加させる方法は、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要としている対象に投与することを含み得る。対象は、例えば、癌を有する対象であり得る。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、対象におけるＴ細胞の増殖を増加させる方法である。対象におけるＴ細胞の増殖を増加させる方法は、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要としている対象に投与することを含み得る。対象は、例えば、癌を有する対象であり得る。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、対象におけるＴｈ１細胞の分化を増加させる方法である。対象におけるＴｈ１細胞の分化を増加させる方法は、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要としている対象に投与することを含み得る。対象は、例えば、癌を有する対象であり得る。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、悪液質を治療する方法である。悪液質を治療する方法は、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要としている対象に投与することを含み得る。いくつかの態様では、悪液質は、癌、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症及び結核からなる群から選択される基礎疾患に関連している。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、悪液質に関連する筋肉量の減少及び脂肪量の減少を阻害する方法である。悪液質に関連する筋肉量の減少及び脂肪量の減少を阻害する方法は、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要としている対象に投与することを含み得る。いくつかの態様では、悪液質は、癌、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症及び結核からなる群から選択される基礎疾患に関連している。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、悪液質に関連する意図しない体重減少を阻害又は低減する方法である。悪液質に関連する意図しない体重減少を阻害又は低減する方法は、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要としている対象に投与することを含み得る。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、悪液質に関連する、臓器量の減少、筋肉量の減少、脂肪量の減少、及び意図しない体重減少を阻害する方法である。悪液質に関連する、臓器量の減少、筋肉量の減少、脂肪量の減少、及び意図しない体重減少を阻害する方法は、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要としている対象に投与することを含み得る。いくつかの態様では、悪液質は、癌、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症及び結核からなる群から選択される基礎疾患に関連している。いくつかの態様では、臓器は、腎臓、肝臓、心臓、又は脾臓である。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、悪液質に関連するサルコペニアを治療する方法である。悪液質に関連するサルコペニアを治療する方法は、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要としている対象に投与することを含み得る。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、悪液質の発生率及び／又は重症度を低下させ、それによって悪液質を引き起こすおそれのある抗癌剤の最大耐量を増加させる方法である。悪液質の発生率及び／又は重症度を低下させ、それによって悪液質を引き起こすおそれのある抗癌剤の最大耐量を増加させる方法は、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要としている対象に投与することを含み得る。
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、悪液質に罹患している対象の食欲を増加させる方法である。悪液質に罹患している対象の食欲を増加させる方法は、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要としている対象に投与することを含み得る。いくつかの態様では、悪液質は、癌、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症及び結核からなる群から選択される基礎疾患に関連している。
本明細書で提供される抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書で提供されるその医薬組成物は、任意の好適な手段によって投与することができる。
本明細書で提供される抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書で提供されるその医薬組成物の適切な投与量及び投与レジメンは、単独で、又は１つ以上の他の追加の治療薬と組み合わせて使用される場合、治療する疾患、疾患の重症度及び経過、投与経路、並びに他の因子に依存する。
いくつかの態様では、医薬として使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。
いくつかの態様では、癌を治療する方法において使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、対象における癌を治療する方法で使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。
いくつかの態様では、悪液質を治療する方法において使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、対象における悪液質を治療する方法で使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。
いくつかの態様では、悪液質に関連する筋肉量及び脂肪量の減少を阻害するための方法で使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、対象における悪液質に関連する筋肉量及び脂肪量の減少を阻害する方法で使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。
いくつかの態様では、悪液質に関連する意図しない体重減少を阻害又は低減するための方法で使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、対象における悪液質に関連する意図しない体重減少を阻害又は低減する方法で使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。
いくつかの態様では、悪液質に関連する臓器量の減少、筋肉量の減少、脂肪量の減少、及び意図しない体重減少を阻害する方法で使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、対象における悪液質に関連する臓器量の減少、筋肉量の減少、脂肪量の減少、又は意図しない体重減少を阻害する方法で使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。
いくつかの態様では、悪液質に関連するサルコペニアを治療する方法において使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、対象における悪液質に関連するサルコペニアを治療する方法で使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。
いくつかの態様では、悪液質の発生率及び／又は重症度を低下させ、それによって悪液質を引き起こすおそれにある抗癌剤の最大耐量を増加させる方法で使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、悪液質の発生率及び／又は重症度を低下させ、それによって悪液質を引き起こすおそれのある抗癌剤の最大耐量を増加させる方法で使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。
いくつかの態様では、悪液質に罹患している対象の食欲を増進させる方法は悪液質で使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、悪液質に罹患している対象の食欲を増進させる方法で使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。
ＶＩ．検出用途及び診断用途
本明細書に記載される抗ＧＤＦ－１５抗体又はその抗原結合断片は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降法、又はウェスタンブロッティング法などのイムノアッセイを含む、当業者に知られた古典的方法を使用して、生体試料中のＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）のレベルをアッセイするために使用することができる。好適な抗体アッセイ標識は、当該技術分野で知られており、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識；ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ）などの放射性同位体；ルミノールなどの発光標識；並びにフルオレセイン及びローダミンなどの蛍光標識、並びにビオチンが挙げられる。このような標識を用いて、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片を標識することができる。或いは、本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体又はその抗原結合断片を認識する第２の抗体又はその抗原結合断片を標識し、抗ＧＤＦ－１５抗体又はその抗原結合断片と組み合わせて使用して、ＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）レベルを検出することができる。
ＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）の発現レベルをアッセイすることは、第１の生体試料中のＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）のレベルを、直接的（例えば、絶対タンパク質レベルを決定又は推定することによって）又は相対的（例えば、第２の生体試料中の疾患に関連するタンパク質のレベルを比較することによって）に、定性的又は定量的に測定又は推定することを含むことを意図する。第１の生体試料中のＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）発現レベルを測定又は推定して標準ＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）レベルと比較することができ、この標準は、障害を有しない個体から得た第２の生体試料から取られるか、又は障害を有しない個体集団の平均レベルによって決定される。当該技術分野で理解されるであろうように、一旦「標準」ＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）レベルがわかれば、それを比較用の標準として繰り返し使用することができる。
本明細書で用いられる場合、用語「生体試料」は、ＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）を潜在的に発現する対象、細胞株、組織、又は他の細胞供給源から得られる任意の生体試料を指す。動物（例えばヒト）から組織生検及び体液を得る方法は、当該技術分野においてはよく知られている。
ＧＤＦ－１５レベルの上昇は、癌（例えば、結腸直腸癌及び非小細胞肺癌）における全生存率の低下と関連している。したがって、本明細書に記載される抗ＧＤＦ－１５抗体は、当業者によく知られ、標準的であり、本明細書に基づく、インビトロ及びインビボで用途を含む、予後、診断、モニタリング及びスクリーニング用途に使用され得る。
本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体及びその抗原結合断片は、検出可能又は機能的標識を保有することができる。蛍光標識が用いられる場合、当該技術分野において知られている、現在利用可能な顕微鏡検査及び蛍光活性化セルソーター分析（ＦＡＣＳ）、又はこれら両方の方法の手順の組み合わせを利用して、特異的な結合部材を同定及び定量化することができる。本明細書に記載の抗ＧＤＦ－１５抗体又はその抗原結合断片は、蛍光標識を保有することができる。例示的な蛍光標識としては、例えば、反応性のコンジュゲートプローブ、例えば、アミノクマリン、フルオレセイン、並びにテキサスレッド、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ色素、Ｃｙ色素、及びＤｙＬｉｇｈｔ色素が挙げられる。抗ＧＤＦ－１５抗体は、同位体３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１１７Ｌｕ、１２１Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１９８Ａｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ及び１８６Ｒｅなどの放射性標識を保有することができる。放射性標識を使用する場合、当該技術分野で既知の現在利用可能な計数手順を利用して、抗ＧＤＦ－１５抗体又は抗原結合断片のＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）への特異的結合を同定及び定量化することができる。標識が酵素である場合、検出は、現在利用されている、当該技術分野において知られている比色技術、分光光度技術、蛍光分光光度技術、電流測定技術、又は気体定量技術によっても達成することができる。これは、試料又は対照試料を抗ＧＤＦ－１５抗体又はその抗原結合断片と、抗体又はその抗原結合断片とＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）との複合体の形成を可能にする条件下で接触させることによって達成することができる。抗体又はその抗原結合断片とＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）との間で形成された複合体を検出し、試料及び対照において比較する。本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片のヒトＧＤＦ－１５への特異的結合の観点から、抗体又はその抗原結合断片を使用して、試料中のＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）の発現を特異的に検出することができる。本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片はまた、免疫親和性精製によりＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）を精製するために使用することができる。
例えば、ＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）の存在の程度を定量的に分析するための試験キットの形態で調製され得るアッセイシステムも本明細書に含められる。当該系又は試験キットは、標識成分、例えば標識した抗体又は抗原結合断片、及び１つ以上の追加の免疫化学試薬を含み得る。キットの詳細については、例えば、以下のＶＩＩ節を参照されたい。
いくつかの態様では、試料中のＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）をインビトロで検出するための方法であって、前記試料を抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含む方法が、本明細書で提供される。いくつかの態様では、インビトロで試料中のＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）を検出するための、本明細書で提供される抗体又はその抗原結合断片の使用が、本明細書で提供される。いくつかの態様では、対象、又は対象から得られた試料中のＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）の検出に使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が本明細書で提供される。いくつかの態様では、診断薬として使用するための、本明細書で提供される抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物が、本明細書で提供される。いくつかの態様では、抗体は検出可能な標識を含む。
ＶＩＩ．キット
本明細書に記載の１つ以上の抗体又はその抗原結合断片を含むキットが、本明細書で提供される。いくつかの態様では、本明細書で提供される１つ以上の抗体又はその抗原結合断片などの、本明細書に記載の医薬組成物の成分の１つ以上を充填した１つ以上の容器を含む医薬パック又はキットが、本明細書で提供される。任意選択的に、こうした容器は、医薬品又は生物学的製剤の製造、使用、又は販売を規制する政府機関によって規定された形態の通知を伴ってもよく、この通知は、ヒトに投与するための製造、使用、又は販売の機関による承認を示す。
また本明細書においては、検出法に用いることができるキットが提供される。いくつかの態様では、キットは、１つ以上の容器内に、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片、好ましくは精製された抗体又はその抗原結合断片を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載のキットは、対照として使用することができる、実質的に単離されたＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）を含有する。いくつかの態様では、本明細書に記載されるキットはさらに、ＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）と反応しない対照抗体又はその抗原結合断片を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載のキットは、抗体又はその抗原結合断片のＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）への結合を検出するための１つ以上の要素を含有する（例えば、抗体又はその抗原結合断片は、蛍光化合物、酵素基質、放射性化合物、又は発光化合物などの検出可能な基質にコンジュゲートされてもよく、或いは、第１の抗体又はその抗原結合断片を認識する第２の抗体又はその抗原結合断片が検出可能な基質にコンジュゲートされてもよい）。いくつかの態様では、本明細書で提供されるキットは、組換えにより生成された、又は化学的に合成されたＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）を含むことができる。キットで提供されるＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）はまた、固体支持体に結合されていてもよい。いくつかの態様では、上記のキットの検出手段は、ＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）が結合する固体支持体を含む。また、そのようなキットは、非結合レポーター標識抗ＧＤＦ－１５抗体若しくはその抗原結合断片、又は抗マウス／ラット抗体若しくはその抗原結合断片を含んでもよい。この態様においては、ＧＤＦ－１５タンパク質（例えば、ヒトＧＤＦ－１５タンパク質）への抗体又はその抗原結合断片の結合は、レポーター標識抗体又はその抗原結合断片の結合によって検出可能である。
本節における実施例は、例示として提供されるものであって、限定するものとしてではない。
実施例１：ヒト、カニクイザル及びマウスのＧＤＦ－１５タンパク質の発現及び精製のための方法
ヒト及びカニクイザルの成熟ＧＤＦ－１５タンパク質を発現させるためのコンストラクトの設計に使用されるタンパク質配列は、ＵｎｉＰｒｏｔエントリーＱ９９９８８（ヒト；配列番号４６９）及びＧ７ＰＷＺ３（カニクイザル（ｃｙｎｏ）；配列番号４７０）から得た。野生型ヒトＧＤＦ－１５タンパク質に加えて、一般的なバリアントＨ２０２Ｄ（ＭＡＦ＝０．２３１；配列番号４７１）を生成した（Ｅｎｓｅｍｂｌ ＥＮＳＴ０００００２５２８０９．３）。マウスＧＤＦ－１５配列は、ＵｎｉｐｒｏｔエントリーＱ９Ｚ０Ｊ７（配列番号４７２）から得た。
（配列番号４６９；シグナルペプチド（アミノ酸１～２９）に下線）
（配列番号４７９；成熟ＧＤＦ－１５）
（配列番号４８０；成熟ＧＤＦ－１５ Ｈ２０２Ｄ）
（配列番号４７０；シグナルペプチド（アミノ酸１～２９）に下線）
（配列番号４７１；シグナルペプチド（アミノ酸１～２９）に下線；Ｈ２０２Ｄ 太字及び下線）
（配列番号４７２；シグナルペプチド（アミノ酸１～３０）に下線）
非タグ化ヒト及びカニクイザルＧＤＦ－１５タンパク質
ヒト及びカニクイザルＧＤＦ－１５（残基１９７～３０８）の成熟ペプチドに対応する配列を、ｐＥＴ－２８ａ（Ｍｅｒｃｋ）細菌発現ベクターにクローニングした。コンストラクトをＢＬ２１（ＤＥ３）細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で発現させ、封入体から抽出し、標準的な技術を用いてリフォールディングした。タンパク質を、標準的な技術を用い、陽イオン交換クロマトグラフィー及びサイズ排除クロマトグラフィーにより精製した。
哺乳動物は、Ｈｉｓ及びＦＬＡＧ標識ヒト及びカニクイザルＧＤＦ－１５タンパク質を発現した
Ｎ末端ポリヒスチジン（ｐｏｌｙ－Ｈｉｓ）及びＦＬＡＧタグをコードする成熟ヒト及びカニクイザルＧＤＦ－１５タンパク質をｐＤＥＳＴ１２．２ ＯｒｉＰ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ） ＜３０１７ベクターにクローニングした。このコンストラクトをＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で発現させ、標準的な固定化金属アフィニティークロマトグラフィー及びサイズ排除クロマトグラフィー精製を用いて馴化培地から精製した。
Ｈｉｓタグ及びＦＬＡＧタグ付きマウスＧＤＦ－１５タンパク質のクローニング、発現及び精製
完全長マウスＧＤＦ－１５コンストラクトを、フューリン切断部位のＣ末端近くにＦＬＡＧ及びポリＨｉｓタグを有するように設計し、ｐＤＥＳＴ１２．２ ＯｒｉＰ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）ベクターにクローニングした。マウスＧＤＦ－１５プラスミド及びフューリンタンパク質をコードするプラスミドをチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に同時トランスフェクトした。成熟二量体マウスＧＤＦ－１５タンパク質を、標準的な固定化金属アフィニティークロマトグラフィー及びサイズ排除クロマトグラフィー精製を用いて馴化培地から精製した。
ＰｒｏヒトＧＤＦ－１５
完全長ヒトＧＤＦ－１５（Ｐｒｏ－ＧＤＦ－１５）Ｆｃ融合コンストラクトを、ＧＤＦ－１５残基１９０～１９６の欠失を有し（Ｂａｕｓｋｉｎ ｅｔ ａｌ． ２０１０）、Ｎ末端Ｆｃ及びポリＨｉｓタグを有するように設計した。コンストラクトをｐＤＥＳＴ１２．２ＯｒｉＰ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にクローニングし、相補的Ｆｃコンストラクトと共にＣＨＯ細胞に同時トランスフェクトした。二量体Ｐｒｏ－ＧＤＦ－１５タンパク質を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＰｒｉｓｍＡカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて馴化培地から精製した。ＦｃタグをＴＥＶプロテアーゼを用いて切断し、放出されたＨｉｓ－Ｐｒｏ－ＧＤＦ－１５タンパク質を、標準的な固定化金属アフィニティークロマトグラフィー及びサイズ排除クロマトグラフィーを用いてさらに精製した。
げっ歯類の免疫付与時の寛容破壊のためのマウスＧＤＦ－１５の毒素融合形態
組換えマウスＧＤＦ－１５によるマウスの免疫付与時の寛容を破壊するために、タンパク質を、Ｔ細胞エピトープを含有する抗原に融合させた。まず、ＦｃタグとＧＤＦ－１５との間に配置されたＴＥＶ切断部位を有するＦｃタグにＮ末端で融合された成熟マウスＧＤＦ－１５（残基１８９～３０３）コンストラクトを設計した。コンストラクトをｐＤＥＳＴ１２．２ＯｒｉＰ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にクローニングし、相補的Ｆｃコンストラクトと共にＣＨＯ細胞に同時トランスフェクトした。二量体Ｆｃタグ付きＧＤＦ－１５タンパク質を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＰｒｉｓｍＡカラムを使用して馴化培地から精製し、次いで、ＴＥＶプロテアーゼを使用して切断して、二量体マウスＧＤＦ－１５を生成した。マウスＧＤＦ１５を、ジプテリア毒素フラグメントＡ（ＤＴＡ）、又は破傷風毒素（ＴＴ）に由来するジペプチド（Ｐｅｒｃｉｖａｌ－Ａｌｗｙｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５に記載）の変形型の細菌毒素に共有結合的に融合させて、免疫原Ｈｉｓ－ＴＴ－マウスＧＤＦ－１５及びＨｉｓ－ＤＴＡ－マウスＧＤＦ－１５を生成した。細菌発現系を用いてＨｉｓタグ付きＤＴＡを作製し、ＣＨＯ細胞を用いてＨｉｓタグ付きＴＴを作製した。抗原を、標準的な固定化金属アフィニティークロマトグラフィー及びサイズ排除クロマトグラフィー技術を用いて精製した。
実施例２：ハイブリドーマ技術による抗ヒトＧＤＦ－１５抗体の生成方法
免疫付与
組換えヒトＧＤＦ－１５（ｈＧＤＦ－１５）を用いてＣＤ１マウスを免疫した。２つの群のマウスを使用した。群１では、マウスをタグなしｈＧＤＦ－１５で免疫し、群２のマウスは、１０個のヒスチジンタグ付きｈＧＤＦ－１５で免疫した。
組換えタンパク質をＰＢＳで希釈し、等量の完全フロイントアジュバントで乳化し、２つの部位でマウスに注射した。その後の３回の注射においては、同数の細胞をフロイント不完全アジュバントで乳化し、上記のように注射した。２４日目に、ＰＢＳ中の組換えタンパク質を腹腔内に注射することによって、最終追加免疫を行った。
尾静脈出血が、免疫前、初回免疫後１３日目、及び２回目免疫後２０日目にマウスから得られた。ヒトＧＤＦ－１５に対するＩｇＧ力価を、血清ＥＬＩＳＡによって決定した。最も高い力価を有する動物をハイブリドーマ生成のために使用した。
ｈＧＤＦ－１５に対するマウス免疫応答の評価
ヒトＧＤＦ－１５及び無関係なタンパク質対照に対する血清ＩｇＧ力価を、標準的な技術を用いて９６ウェルマイクロタイタープレート中でＥＬＩＳＡによって決定した。ＨＲＰ標識ポリクローナルヤギ抗マウスＩｇＧ特異的二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｌａｂｓ）を用いて抗体を検出し、ＴＭＢ基質（Ｓｉｇｍａ）を用いてアッセイを進め、続いて０．５Ｍ硫酸を添加して反応を停止させた。次いで、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ＥｎＶｉｓｉｏｎ２１０３マルチラベルプレートリーダーを用いてプレートを読み取った。
ヒトＧＤＦ－１５及び無関係なタンパク質の血清滴定曲線をプロットし、曲線下面積（ＡＵＣ）を計算した。
モノクローナルマウスＩｇＧの単離
最終追加免疫の４日後に、リンパ節を無菌採取し、細胞を機械的破壊によって単離し、計数した。これらの細胞をＳＰ２／０骨髄腫細胞と混合し、電気融合装置を用いて融合した。得られた融合物をメチルセルロースに基づく半固形培地と混合し、ＯｍｎｉＴｒａｙプレートに蒔いた。半固形培地は、ＣｌｏｎｅＭａｔｒｉｘ及びＤＭＥＭを含み、２０％ＦＣＳ、１０％ＢＭ Ｃｏｎｄｉｍｅｄ Ｈ１、１ｍＭピルビン酸ナトリウム及びＯＰＩ培地添加物、２％ヒポキサンチンアザセリン、並びにＦＩＴＣ結合型ヤギ抗ラットＩｇＧを添加した。半固形培地中の細胞は、５％ＣＯ２インキュベーター内、３７℃で１３日間培養した。このインキュベーション期間中、クローンコロニーが単一の前駆ハイブリドーマ細胞から形成される。これらのコロニーは、半固形培地中に存在するＦＩＴＣ結合型抗ＩｇＧによりコロニー近傍で捕捉されるＩｇＧを分泌する。結果的に生じる免疫複合体の形成は、ＣｌｏｎｅＰｉｘ ＦＬコロニーピッカー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）によって可視化した場合、蛍光「ハロー」として細胞周囲で認めることができる。次に、これらのハローを伴うコロニーを９６ウェルマイクロタイタープレートに採取する。
培養３～５日後、採取したコロニーの上清を回収し、ヒトＧＤＦ－１５結合についてスクリーニングした。
マウスＩｇＧのＤＮＡ配列決定及び精製
メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）をハイブリドーマ細胞から磁気オリゴ（ｄＴ）粒子を用いて抽出し、ｃＤＮＡに逆転写した。全てのマウスＩｇＧサブクラスに特異的なポリＣ及び定常領域ＶＨ又はＶＬプライマーを用いて、ＰＣＲ増幅を実施した。
マウスＩｇＧの精製
細胞を、２４ウェルプレート内で増殖させ、ＨｙｐｅｒＺｅｒｏ及びグルタミンを添加した血清フリーＨＬ－１培地中で過成長させた。１０日後、上清を９６ウェルマスターブロックに移し、全てのサブクラスのマウスＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３）を、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｍｉｎｉｔｒａｃｋを用いてＰｒｏＰｌｕｓ樹脂（Ｐｈｙｎｅｘｕｓ）上の過成長細胞培養上清から精製した。捕捉したマウスＩｇＧを、１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１４０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ３．０で溶出させ、次いで、等体積の２００ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ８．０で中和させた。精製したＩｇＧを、ＵＶ－Ｓｔａｒ ３８４ウェルプレート内で２８０ｎｍでの吸光度読み取りを用いて定量化した。
マウスＩｇＧの再フォーマット
マウスハイブリドーマＩｇＧクローンを分子的に再フォーマットして、基本的にＰｅｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ．，１９９７に記載されているように、各ハイブリドーマについて、マウスＶＨ及びＶＬドメイン並びに関連するマウスＩｇＧ定常ドメインを発現するコンストラクトを生成した。ヒト重鎖定常ドメイン及び調節エレメントを含有する関連するベクターにＶＨドメインをクローニングして、哺乳動物細胞で全ＩｇＧ１重鎖を発現させた。同様に、適切なマウス軽鎖（ラムダ又はカッパ）定常ドメイン及び調節エレメントの発現用ベクターにＶＬドメインをクローニングして、哺乳動物細胞に全ＩｇＧ軽鎖を発現させた。ＩｇＧを得るために、哺乳動物懸濁ＣＨＯ細胞を、重鎖ＩｇＧベクター及び軽鎖ＩｇＧベクターで一時的にトランスフェクトした。ＩｇＧを発現させて、培地に分泌させた。ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅクロマトグラフィーカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１１００３４９３（１ｍｌカラム用）；１１００３４９５（５ｍｌカラム用））、及びＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ製のＡｋｔａＸｐｒｅｓｓ（商標）精製システムを用いて、清澄化した上清からＩｇＧを精製した。溶出した物質を、ＰＤ－１０脱塩カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ；カタログ番号；１７０８５１０１）を用いて、ＰＢＳ中に緩衝液交換した。ＩｇＧの濃度を、ＩｇＧのアミノ酸配列に基づく吸光係数を用いて分光光度的に決定し（Ｐａｃｅ ｅｔ ａｌ．，１９９５）、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びＨＰ－ＳＥＣ分析を用いて、精製されたＩｇＧの純度を分析した。
マウス抗ヒトＧＤＦ－１５ ＩｇＧのパネルのヒト化
抗ヒトＧＤＦ－１５マウスＩｇＧを、インビトロ結合及び活性データに基づいてヒト化、すなわち、マウス可変重鎖フレームワーク領域及びマウス可変軽鎖フレームワーク領域を最も近いヒトＩｇＧ可変ドメインで置き換えるために選択した。
ハイブリドーマクローン（ＶＨ及びＶＬ）のそれぞれのアミノ酸配列を、ＩＭＧＴヒト重鎖生殖系列配列及びＩＭＧＴヒト軽鎖生殖系列配列に対して分析した。各抗体Ｖ遺伝子について、マウスＶ遺伝子に最も近い単一のヒトＶ遺伝子配列（バーニア残基及びＣＤＲを除く）を同定した。さらに、各Ｖ遺伝子について、最も近い個々のフレームワーク領域（ＦＷ１、ＦＷ２、ＦＷ３及びＦＷ４；やはりバーニア残基及びＣＤＲを除く）も同定した。各ハイブリドーマクローンについて、マウス生殖系列から最も少ないアミノ酸変化を与えた単一のヒト生殖系列又は複合ヒト生殖系列を選択した。
コドン最適化の後、各ヒト化Ｖ遺伝子配列を合成し、分子的に再フォーマットして、以下の変更を有する上記のヒトＩｇＧ１ ＴＭ抗体を生成した。ヒト重鎖定常ドメイン及び調節エレメントを含有するベクターにＶＨドメインをクローニングして、哺乳動物細胞で全ＩｇＧ１重鎖を発現させた。この定常領域は、エフェクターｎｕｌｌヒトＩｇＧ１をもたらす三重変異（ＴＭ）Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ（配列番号４７４）を含有した。同様に、ヒト軽鎖（カッパ）定常ドメイン及び調節エレメントの発現用ベクターにＶＬドメインをクローニングして、哺乳動物細胞に全ＩｇＧ軽鎖を発現させた。ＩｇＧを得るために、哺乳動物懸濁ＣＨＯ細胞を、重鎖ＩｇＧベクター及び軽鎖ＩｇＧベクターで一時的にトランスフェクトした。ＩｇＧを発現させて、培地に分泌させた。ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅクロマトグラフィーカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１１００３４９３（１ｍｌカラム用）；１１００３４９５（５ｍｌカラム用））、及びＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ製のＡｋｔａＸｐｒｅｓｓ（商標）精製システムを用いて、清澄化した上清からＩｇＧを精製した。溶出した物質を、ＰＤ－１０脱塩カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ；カタログ番号；１７０８５１０１）を用いて、ＰＢＳ中に緩衝液交換した。ＩｇＧの濃度を、ＩｇＧのアミノ酸配列に基づく吸光係数を用いて分光光度的に決定し（Ｐａｃｅ ｅｔ ａｌ．，１９９５）、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びＨＰ－ＳＥＣ分析を用いて、精製されたＩｇＧの純度を分析した。
抗体ＡＢ１１７０２４３の重鎖ＣＤＲ２を変異させて、配列ＮＮＧ内の脱アミド化の問題を除いた。この位置でのＮＱＧへの変異により、熱ストレスに対して優れた安定性を示したクローンＡＢ１１７０２４１が生成された。
実施例３：ハイブリドーマ技術による抗マウスＧＤＦ－１５抗体の生成方法
免疫付与
組換えマウスＧＤＦ－１５（ｍＧＤＦ－１５）を用いてＣＤ１マウスを免疫した。２つの群のマウスを使用した。マウスにおいて、寛容を破壊し、ＧＤＦ－１５マウスバージョンに対する強力な免疫応答を生じさせるために、Ｔヘルパーエピトープを、Ｐｅｒｃｉｖａｌ－Ａｌｗｙｎ ｅｔ ａｌ． （２０１５）に記載されているように、免疫原に組み込んだ。群１では、マウスをＨｉｓ－ＴＴ－ｍＧＤＦ－１５で免疫し、群２のマウスは、Ｈｉｓ－ＤＴＡ－ｍＧＤＦ－１５で免疫した。免疫付与は、前述のように行った。マウスハイブリドーマＩｇＧクローンを、上記のように分子的に再フォーマットして、ＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ；配列番号４７７）フォーマットでマウスＶＨドメイン及びマウスＶＬドメインを発現するコンストラクトを生成した。
実施例４：抗体をプロファイリングする方法
組換えＧＤＦ－１５タンパク質への特異的結合のためのハイブリドーマＩｇＧのスクリーニング
ヒトＧＤＦ－１５及び精製ＩｇＧによる免疫付与から生成された上清をスクリーニングして、ヒトＧＤＦ－１５、カニクイザルＧＤＦ－１５、又はマウスＧＤＦ－１５に特異的に結合するＩｇＧを特定した。ＨＴＲＦ（ホモジニアス時間分解蛍光）アッセイは、ビオチン化ヒトＨ２０２Ｄ ＧＤＦ－１５バリアント、カニクイザルＧＤＦ－１５及びマウスＧＤＦ－１５に対する試験抗体のタイトレーションの結合時の測定可能なＦＲＥＴシグナルの検出に基づく。ユーロピウムクリプテート（ＥｕＫ）標識ストレプトアビジン及び抗ヒトＩｇＧ ＸＬ６６５（Ｃｉｓ Ｂｉｏ）を、それぞれエネルギー供与体及び受容体として働く二次検出試薬として使用した。試験抗体結合がなければ、ＦＲＥＴ蛍光は検出されない。試験抗体がＧＤＦ－１５に結合すると、二次試薬の供与体／受容体のペア間に物理的近接が生じ、ＦＲＥＴをもたらす。ＦＲＥＴを、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーでレシオメトリックに［６６５ｎｍ（受容体）／６２０ｎｍ（供与体）］測定し、データをＰＲＩＳＭ ６（登録商標）ソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ）を用いてプロットした。データは表１０に示す。
ホモジニアスアッセイフォーマットにおける組換えヒトＧＤＦ－１５タンパク質への競合的結合のためのハイブリドーマＩｇＧのスクリーニング
ヒトＧＤＦ－１５での免疫付与により得られた、免疫付与からの粗上清の形態、又は精製ＩｇＧの形態の抗体を、対照抗ＧＤＦ－１５抗体「抗体Ａ」によって認識されるエピトープと結合し、それと競合することに基づいて選択した。ＤｙＬｉｇｈｔ ６５０標識抗体Ａのユウロピウム標識ヒトＧＤＦ－１５（Ｐｒｏｓｐｅｃ）への結合を測定するＨＴＲＦエピトープ競合アッセイを用いて、生化学的エピトープ競合フォーマットを適用した。抗体Ａ結合がなければ、ＦＲＥＴ蛍光は検出されない。抗体ＡがＧＤＦ－１５に結合すると、二次試薬の供与体／受容体のペア間に物理的近接が生じ、ＦＲＥＴをもたらす。同一又は類似のエピトープを認識する抗体との競合は、ＦＲＥＴシグナルの用量依存的減少をもたらす。ＦＲＥＴを、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーでレシオメトリックに［６６５ｎｍ（アクセプター）／６２０ｎｍ（ドナー）］測定し、データをＰＲＩＳＭ ６（登録商標）ソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ）を用いて４パラメータロジスティック方程式にカーブフィッティングすることによってＩＣ５０値を決定した。データを表１０及び表１１に示す。
パラログに対するＩｇＧの特異性
精製されたヒト化ＩｇＧを、標準的な抗原提示ＥＬＩＳＡを用いて、同じファミリーの２つのさらなるメンバーであるＴＧＦβ１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ２４０－Ｂ）及びＢＭＰ７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ３５４－ＢＰ／ＣＦ）上のヒトＧＤＦ－１５への結合についてスクリーニングした。ヒトＧＤＦ－１５、ヒトＴＧＦβ１又はヒトＢＭＰ７をＮｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ（商標）プレートに吸着させた。過剰な結合していない抗原を除去した後、試験ＩｇＧのタイトレーションをプレートに加えた。１時間のインキュベーション後、結合していないＩｇＧを除去した。ＩｇＧ結合の程度を、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）酵素にコンジュゲートした抗ヒトＩｇＧ抗体を添加し、基質ＴＭＢとのその反応生成物の４５０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定した。データを図１～３に示すが、試験した全ての抗体がヒトＧＤＦ－１５に結合したが、ヒトＴＧＦβ１又はヒトＢＭＰ７には結合しなかったことを示している。
異種（ＤＥＬＦＩＡ）アッセイフォーマットにおける組換えマウスＧＤＦ－１５タンパク質への結合のためのハイブリドーマＩｇＧのスクリーニング
マウスＧＤＦ－１５での免疫付与により得られた、免疫付与からの粗上清の形態、又は精製ＩｇＧの形態の抗体を、それらが異なる親和性／結合強度で固定化マウスＧＤＦ－１５に結合することに基づいてトリアージした。
マウスＧＤＦ－１５を、３７℃で１時間、高結合超低容量３８４ウェルアッセイプレートの表面に固定化し、次いで、洗浄し、次いで、過剰の無関係のタンパク質で反応部位をブロックした。さらに洗浄した後、試験抗体のタイトレーションを、３７℃で１時間、固定化したマウスＧＤＦ－１５に結合させた。続いて、結合していないＩｇＧを除去するために徹底した洗浄を行った。ユウロピウムキレート標識抗マウスＩｇＧ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を二次検出試薬として使用し、マウスＧＤＦ－１５に結合した試験ＩｇＧに３７℃で１時間結合させた。さらに徹底した洗浄を行った後、ＤＥＬＦＩＡ増強溶液（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を添加することによってシグナルを発現させた。プレートを室温で２０分間放置した後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで読み取り、ＰＲＩＳＭ ６（登録商標）ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用して、データを４パラメータロジスティック方程式にカーブフィッティングすることによってＥＣ５０値を決定した。ＡＢ１５２００８５及びＡＢ１１７０１１９抗体のデータを表１２に示す。
ホモジニアスアッセイフォーマットにおける組換えマウスＧＤＦ－１５タンパク質への競合的結合のためのハイブリドーマＩｇＧのスクリーニング
マウスＧＤＦ－１５での免疫付与により得られた、粗上清又は精製ＩｇＧの形態の抗体を、ヒト抗ヒトＧＤＦ－１５ＩｇＧ；ＡＢ１１７０２４３によって認識される所望のエピトープ（機能的スクリーニングアッセイに基づく）に結合し、それと競合することに基づいて選択した。Ｆｌａｇタグ付きマウスＧＤＦ－１５へのＤｙＬｉｇｈｔ６５０標識ＡＢ１１７０２４３（エネルギー受容体）の結合を測定するＨＴＲＦエピトープ競合アッセイを用いて、生化学的エピトープ競合フォーマットを適用した。ユウロピウム標識抗Ｆｌａｇ（Ｃｉｓ－Ｂｉｏ）をエネルギー供与体として使用した。標識ＡＢ１１７０２４３の結合がなければ、ＦＲＥＴ蛍光は検出されない。ＡＢ１１７０２４３がマウスＧＤＦ－１５に結合すると、二次試薬の供与体／受容体のペア間に物理的近接性が生じ、ＦＲＥＴをもたらす。同一又は類似のエピトープを認識する抗体との競合は、ＦＲＥＴシグナルの用量依存的減少をもたらす。ＦＲＥＴを、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーでレシオメトリックに［６６５ｎｍ（アクセプター）／６２０ｎｍ（ドナー）］測定し、データをＰＲＩＳＭ ６（登録商標）ソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ）を用いて４パラメータロジスティック方程式にカーブフィッティングすることによってＩＣ５０値を決定した。ＡＢ１５２００８５及びＡＢ１１７０１１９抗体のデータを表１２に示す。
実施例５：Ｂｉａｃｏｒｅアフィニティ分析
ヒト化抗ヒトＧＤＦ－１５抗体又は抗マウスＧＤＦ－１５マウスＩｇＧ１の抗原結合断片（Ｆａｂ）を発現させ（Ｓｐｏｏｎｅｒ ｅｔ ａｌ． ２０１５）、親和性をＢｉａｃｏｒｅ ８Ｋを用いて２５℃で測定した。Ｎ末端のＦｌａｇタグ及びＨｉｓタグを有する成熟組換えヒトＧＤＦ－１５、ヒトＧＤＦ－１５ Ｈ２０２Ｄバリアント、マウスＧＤＦ－１５、及びカニクイザルＧＤＦ－１５を用いて実験を行った。全ての種を、ＥＺリンクスルホ－ＮＨＳ－ＬＣ－ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて化学的にビオチン化した。
標準的なアミンカップリング技術を用いて、１０ｍＭ酢酸ナトリウム ｐＨ４．５中において４μｇ／ｍｌの濃度でストレプトアビジンをＣ１チップ表面に共有結合的に固定化した。組換えビオチン化ＧＤＦ－１５種を、Ｆａｂ結合が可能となるようにＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中でストレプトアビジンチップ表面にタイトレートした。
抗ＧＤＦ－１５ ＦａｂをＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液ｐＨ７．４中で連続希釈し（０．０７８１～１０ｎＭ、０．１９５～２５ｎＭ、０．２３４～３０ｎＭ又は３．１２５～２００ｎＭ）、３分間の会合及び１０分間の解離で５０μｌ／分でチップ上に流した。同じ条件下で複数回の緩衝液のみの注入を行って、最終的なセンサーグラムセットのダブルリファレンスの差し引きを可能にし、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ解析ソフトウェアを用いて分析した。チップ表面は５０ｍＭ ＮａＯＨのパルスで完全に再生した。
選択されたクローンについてのＢｉａＣｏｒｅアフィニティの結果を、表１３～２０に提供する。
実施例６：ＧＤＦ－１５抗体は前立腺癌細胞の増殖を阻害する
図４に示す結果は、ＧＤＦ－１５抗体がＬＮＣａＰ前立腺癌細胞の増殖を阻害することを実証する。ＬＮＣａＰ細胞を９６ウェルプレートに５０００細胞／ウェルの密度でプレーティングし、４００～２５ｎＭの２倍希釈系列で希釈した示された抗体で処理した。細胞を３日間インキュベートし、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて生存率を決定した。
実施例７：ＧＤＦ－１５抗体は、ｍｏＤＣ上の共刺激タンパク質のアップレギュレーションを促進する
図５Ａ、５Ｂ及び５Ｃに示す結果は、ＧＤＦ－１５抗体が単球由来樹状細胞（ｍｏＤＣ）上の共刺激タンパク質のアップレギュレーションを促進することを示す。健康なドナーからの単球をＭｉｌｔｅｎｙｉキット（ＣＤ１４マイクロビーズ、ヒトカタログ番号１３０－０５０－２０１）によって単離し、６ウェルプレートに１００万細胞／ｍＬの密度でプレーティングした。それらを、１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）及び１００ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で６日間処理した。６日後、４００ｎｇ／ｍＬの組換えｈｕ－ＧＤＦ１５（Ｐｒｏｓｐｅｃ、カタログ番号ＣＹＴ－３３５）を含むか又は含まない１５ｎＭのＣＤ４０Ｌ（Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＩＮＴ Ｉｎｃ）を、ウェル及び／又は１０μｇ／ｍｌの抗ＧＤＦ１５抗体に加えた。２日後、細胞を、フローサイトメトリーにより、ＣＤ１４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及びＣＤ１ａ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）の発現について分析して樹状細胞への分化を確認するとともに、活性化を測定するためにＣＤ８３（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＣＤ８６（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の発現について分析した。ＩＬ－１２ｐ７０の分泌はＥＬＩＳＡにより測定した。データを、ＧＤＦ１５の非存在下で活性化された細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）のパーセンテージとして示す。抗ＧＤＦ１５抗体は、ＣＤ８３、ＣＤ８６の発現、及びＩＬ－１２ｐ７０の分泌を、ＧＤＦ１５の非存在下で観察された発現レベルまで回復させることができた。
実施例８：ＧＤＦ－１５抗体は、Ｔ細胞増殖のＧＤＦ１５阻害を逆転させる
図６及び７Ａに示す結果は、抗ＧＤＦ－１５抗体がＧＤＦ１５の抗増殖効果を逆転させることを実証する。ＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞単離キット（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によってＣＤ３細胞を単離し、１０μｇ／ｍｌ抗ＣＤ３（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１６－００３７）及び１０μｇ／ｍｌ抗ＣＤ２８抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ カタログ番号３０２９２３、クローンＣＤ２８．２）でコーティングした９６ウェルプレートに１００，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングした。組換えｈｕ－ＧＤＦ１５を４００ｎｇ／ｍＬで添加し、抗体を３３．３～０．０５ｎＭの５倍希釈系列で添加した。細胞生存率を、相対発光量（ＲＳＵ）によって測定されるＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して決定した。図７Ｂの結果は、ＡＢ１５２００８５がマウスＧＤＦ－１５の抗増殖効果を逆転させることを示す。抗体ＡＢ１１７０２４１及びＡＢ１５２００８５は、Ｔ細胞への完全な増殖を回復した。
実施例９：ＧＤＦ－１５抗体は、Ｔｈ１分化のＧＤＦ－１５阻害を逆転させる
図８に示す結果は、ＧＤＦ－１５抗体がＴｈ１分化のＧＤＦ－１５阻害を逆転させることを実証する。ＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＥａｓｙＳｅｐヒトＣＤ４＋Ｔ細胞単離キット（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって健常ドナーから単離した。細胞を、１０ｍｇ／ｍＬのマウス抗ヒトＣＤ３抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）でコーティングした２４ウェルプレートに２５０，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングした。ＣｅｌｌＸＶｉｖｏ（商標）ヒトＴｈ１細胞分化キット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）により、５日間の４００ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＧＤＦ－１５タンパク質及び又は１０μｇ／ｍＬの抗ヒトＧＤＦ－１５抗体の存在下で、Ｔ細胞をＴｈ１表現型に偏らせた。５日目に、培養上清を回収し、ＥＬＩＳＡにより、ヒトＴＮＦ－アルファ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）及びヒトＩＦＮγ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）分泌を分析した。グラフは、組換えｈｕ－ＧＤＦ１５なしで観察されたレベルに正規化した分泌のレベルを示す。ＧＤＦ１５抗体ＡＢ１１７０２４１は、サイトカイン分泌を完全なレベルまで回復させる。
実施例１０：ＧＤＦ－１５抗体は、ＤＣ活性化マーカーのＧＤＦ－１５によるダウンレギュレーションを逆転させる
図９に示される結果は、ＧＤＦ－１５抗体が樹状細胞（ＤＣ）活性化マーカーのＧＤＦ－１５ダウンレギュレーションを逆転させることを実証する。健康なドナーからの単球をＭｉｌｔｅｎｙｉキット（ＣＤ１４マイクロビーズ、ヒトカタログ番号１３０－０５０－２０１）によって単離し、６ウェルプレートに１００万細胞／ｍＬの密度でプレーティングした。それらを１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２０４－ＩＬ－０５０）及び１００ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２１５－ＧＭ－０５０）で６日間処置した。６日後、４００ｎｇ／ｍＬの組換えｈｕ－ＧＤＦ１５（Ｐｒｏｓｐｅｃ、カタログ番号ＣＹＴ－３３５）及び／又は１０μｇ／ｍｌの抗ＧＤＦ１５抗体を含むか又は含まない１５ｎＭのＣＤ４０Ｌ（Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＩＮＴ ＩｎｃＩｎｃ、カタログ番号ＡＬＸ－５２２－１１０－Ｃ０１０）を、ウェルに加えた。２日後、細胞を、フローサイトメトリーにより、ＣＤ１４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３６７１１６）及びＣＤ１ａ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３００１２８）の発現について分析して樹状細胞への分化を確認するとともに、活性化を測定するためにＣＤ８３（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＣＤ８６（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の発現について分析した。ｈｕ－ＧＤＦ１５の非存在下で活性化された試料について得られた平均蛍光強度（ＭＦＩ）に対してデータを正規化した。抗ＧＤＦ１５抗体ＡＢ１１７０２４１は、ＣＤ８３及びＣＤ８６の両方の完全な発現を回復させる。
実施例１１：ＧＤＦ－１５抗体は、腫瘍退縮をもたらし、抗ＰＤ－Ｌ１不応性及びＭＢＴ２同系腫瘍において抗腫瘍活性を有する
図１０及び１２に示す結果は、抗ＧＤＦ１５抗体がＬＬ／２同系マウスモデルにおいて抗原提示細胞及び活性化Ｔ細胞を増加させることを実証する。ＬＬ／２細胞を、Ｂａｌｂ／ｃマウスの側腹部に皮下注射した（マウス１匹あたり５００，０００個）。腫瘍を１５０ｍｍ３に成長させたところで、マウスを１群あたり１２匹の治療群に無作為に割り付けた。様々な群を、示された抗体１０ｍｇ／ｋｇで週２回、合計４週間処置した。腫瘍を、カリパスを用いて週２回測定し、得られた腫瘍成長曲線を示す。マウスの別々のコホート（ｎ＝６）を、示された抗体１０ｍｇ／ｋｇで週２回、１週間処置した。２回目の投与の２４時間後に腫瘍を回収し、ＧｅｎｔｌｅＭａｃｓによって分離し、フローサイトメトリーのために染色した。使用した抗体は、ＣＤ４５ ＢＶ７８５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ１１ｃ ＢＶ４８０（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ）、ＣＤ８６ ＡＰＣＲ７００（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ１０３ ＰＥＲＣＰ－ＣＹ５．５（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ＣＤ８ ＢＵＶ７３７（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｅｎｓｏｎ）、ＣＤ６９ ＢＵＶ５６３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及びＩＦＮガンマＢＶ７１１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）であった。ＤＡＰＩを生／死ゲーティングに使用した。全てのデータを、ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして提示する。
図１１及び１２に示す結果は、抗ＧＤＦ１５抗体がＭＢＴ２同系マウスモデルにおいて抗原提示細胞及び活性化Ｔ細胞を増加させることを実証する。ＭＢＴ２細胞を、Ｂａｌｂ／ｃマウスの側腹部に皮下注射した（マウス１匹あたり２×１０６個）。腫瘍を１５０ｍｍ３に成長させたところで、マウスを１群あたり１２匹の治療群に無作為に割り付けた。様々な群を、示された抗体１０ｍｇ／ｋｇで週２回、合計４週間処置した。腫瘍を、カリパスを用いて週２回測定し、得られた腫瘍成長曲線を示す。マウスの別々のコホート（ｎ＝６）を、示された抗体１０ｍｇ／ｋｇで週２回、１週間処置した。２回目の投与の２４時間後に腫瘍を回収し、ＧｅｎｔｌｅＭａｃｓによって分離し、フローサイトメトリーのために染色した。使用した抗体は、ＣＤ４５ ＢＶ７８５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ１１ｃ ＢＶ４８０（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ）、ＣＤ８６ ＡＰＣＲ７００（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ１０３ ＰＥＲＣＰ－ＣＹ５．５（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ＣＤ８ ＢＵＶ７３７（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｅｎｓｏｎ）、ＣＤ６９ ＢＵＶ５６３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及びＩＦＮガンマＢＶ７１１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）であった。ＤＡＰＩを生／死ゲーティングに使用した。全てのデータを、ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして提示する。
実施例１２：ＡＢ１１７０２４１エピトープ分析
ＧＤＦ１５の発現及び精製
ニュールツリンについてＢｉｇａｌｋｅらが記載しているのと同様のプロトコールに従って、ＧＤＦ１５タンパク質を発現させ精製した（Ｂｉｇａｌｋｅ，Ｊａｎｎａ Ｍ．，ｅｔ ａｌ． “Ｃｒｙｏ－ＥＭ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ＲＥＴ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ ｒｅｖｅａｌｓ ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｉｔｓ ｃｙｓｔｅｉｎｅ －ｒｉｃｈ ｄｏｍａｉｎ．” Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｄｖａｎｃｅｓ ５：７ｅａａｕ４２０２（２０１９））。成熟ＧＤＦ１５残基（残基Ａｌａ－１９７～Ｉｌｅ－３０８（配列番号４７９））をｐＥＴ２４ａベクターにクローニングし、２５℃での自動誘導によってエシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｓｔａｒ中で発現させた。得られた封入体を、室温（ＲＴ）で一晩、可溶化緩衝液（８Ｍ尿素、０．１Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、１０ｍＭ ＴＣＥＰ、５０ｍＭトリス－Ｃｌ ｐＨ８．５）に溶解し、リフォールディング緩衝液（３Ｍ尿素、１５％（ｗ／ｖ）グリセロール、７５ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、０．３Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭグリシン、４ｍＭシステイン、５０ｍＭトリス－ＨＣｌ、ｐＨ８．５）にゆっくりと滴下した。ゆっくりと撹拌しながら室温で３日間インキュベートした。緩衝液Ａ（３Ｍ尿素、１５％（ｗ／ｖ）グリセロール、７５ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、５０ｍＭトリス－ＨＣｌ、ｐＨ８．５）中で洗浄したＮｉ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦを、リフォールディングしたＧＤＦ１５に添加し、ゆっくり撹拌しながら室温で一晩インキュベートした。樹脂を除去し、最初に緩衝液Ａ、次に緩衝液Ｂ（３Ｍ尿素、１５％（ｗ／ｖ）グリセロール、７５ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、５０ｍＭトリス－ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ、１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、ｐＨ８．５）で洗浄し、最後に緩衝液Ａを再び洗浄した。樹脂をカラムに移し、１％緩衝液Ｃ（３Ｍ尿素、１５％（ｗ／ｖ）グリセロール、７５ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、５０ｍＭトリス－ＨＣｌ、５００ｍＭイミダゾール、ｐＨ８．５）を添加した緩衝液Ａ（イミダゾールの最終濃度、５ｍＭ）で洗浄した。次いで、タンパク質を４０％緩衝液Ａ及び６０％緩衝液Ｃ（イミダゾールの最終濃度、３００ｍＭ）中に溶出させた。採取した試料を緩衝液Ａで希釈して、１Ｍ尿素及びタンパク質濃度０．４ｍｇ／ｍｌの最終濃度とした。３ｍＭ還元グルタチオン（ＧＳＨ）及び０．３ｍＭグルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）をタンパク質に添加し、次いで、室温で一晩ゆっくり撹拌しながらＨＮ－タグをＴＥＶ－プロテアーゼにより切断した。翌日、尿素粉末を添加して、尿素の最終濃度を３Ｍとした。沈殿物を遠心分離によって除去し、９６％緩衝液Ａ及び４％緩衝液Ｃ（最終２０ｍＭのイミダゾール）中で平衡化されたＮｉ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦを含有するカラムに材料をロードした。切断された二量体ＧＤＦ１５を、５０ｍＭイミダゾールを含有する緩衝液で樹脂を洗浄することによって回収した。酢酸を添加することによって、ｐＨをｐＨ４に低下させた。タンパク質溶液を、３Ｍ尿素、１０％（ｗ／ｖ）グリセロール、２５ｍＭ酢酸Ｎａ、ｐＨ４（酢酸で調整）中で平衡化したＨｉＴｒａｐ ＳＰカラムにロードした。タンパク質を、５０％ ３Ｍ尿素、１０％（ｗ／ｖ）グリセロール、２５ｍＭ酢酸Ｎａ、１Ｍ ＮａＣｌ、１Ｍアルギニン－Ｃｌ、ｐＨ４（酢酸で調整）中に溶出した。濃縮したタンパク質を、２５ｍＭ酢酸Ｎａ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ４．０中で平衡化したＳｕｐｅｒｄｅｘ ７５カラムにロードし、タンパク質を液体窒素中で急速凍結した。
ＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体の形成
ＧＤＦ１５とＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂとを１．２：１の比率で混合し、４℃で一晩インキュベートした。混合物をＳＥＣカラム（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬ）に０．０２５Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５及び０．１５０Ｍ ＮａＣｌで流した。複合体を含有する画分をプールし、濃縮した。
水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）
溶出緩衝液（Ｅ－緩衝液）：
０．０２５ＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５（Ｈａｍｐｔｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（Ｈ２Ｏ中）
０．１５Ｍ ＮａＣｌ（Ｈａｍｐｔｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（Ｈ２Ｏ中）
標識緩衝液（Ｌ－緩衝液）：
０．０２５Ｍ ＨＥＰＥＳ（Ｓｉｇｍａ）（Ｄ２Ｏ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ）中）、ｐＨメーターによる測定値７．１（非重水素化緩衝液のｐＨ７．５に対応（Ｃｏｖｉｎｇｔｏｎ，Ａｒｔｈｕｒ Ｋ．，ｅｔ ａｌ． ”Ｕｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｇｌａｓｓ ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ ｉｎ ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ ｏｘｉｄｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ ｐＤ（ｐａＤ）ｓｃａｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ ｐＨ ｉｎ ｈｅａｖｙ ｗａｔｅｒ．” Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４０（４）：７０１（１９６８））。
０．１５Ｍ ＮａＣｌ（Ｓｏｇｍａ）（Ｄ２Ｏ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ）中）
クエンチ緩衝液：
２Ｍ尿素（Ｓｉｇｍａ）
０．４Ｍ ＴＣＥＰ（Ｓｉｇｍａ）
ｐＨ２．５（Ｈ２Ｏ中）
水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）データを２つの別々の実験で収集した。
実験１（結果を図２１に要約）
実験を開始する直前に、Ｅ－緩衝液中のＧＤＦ１５タンパク質（９μＭ）及び予め形成したＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体（１１．２μＭ）を解凍し、０．２２μｍスピンフィルター（Ａｍｉｃｏｎ）を用いて濾過した。交換反応を、ＣＴＣ ＰＡＬサンプルハンドリングロボット（ＬＥＡＰ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて行った。反応は、３μＬのタンパク質試料を５７μＬのＬ－緩衝液（重水素化）と共に、２０℃で０．５、１、１０及び３０分間インキュベートすることによって行った。
実験２（結果を図２２に要約）
実験を開始する直前に、Ｅ－緩衝液中のＧＤＦ１５タンパク質（１０μＭ）、予め形成したＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体（９．６μＭ）、及びＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ（１０μＭ）を解凍し、０．２２μｍスピンフィルター（Ａｍｉｃｏｎ）を使用して濾過した。交換反応を、ＣＴＣ ＰＡＬサンプルハンドリングロボット（ＬＥＡＰ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて行った。反応は、３μＬのタンパク質試料を５７μＬのＬ－緩衝液（重水素化）と共に、２０℃で０．５、１、５及び３０分間インキュベートすることによって行った。
実験１及び２（結果を図２２に要約）
両方の実験における交換反応を、５０μＬのクエンチ溶液（２Ｍ尿素、０．４Ｍ ＴＣＥＰ ｐＨ２．５）を０℃で添加することによって停止させた。続いて、試料をオンラインペプシン消化系に注入し、１５０μＬ ｍｉｎ－１で０．３％ギ酸水溶液中、２．１×３０ｍｍのＢＥＨペプシンカラム（Ｗａｔｅｒｓ）を用いて消化に供した。消化されたペプチドを、２．１×５ｍｍ、１．７μｍ、Ｃ１８トラップ（ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ ＶａｎＧｕａｒｄ Ｐｒｅ－Ｃｏｌｕｍｎ、Ｗａｔｅｒｓ）カラムを用いて３分間捕捉した。脱塩されたペプチドを分離し、Ｃ１８逆相カラム（ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８カラム、１．７μｍ、２．１×１００ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ）を用いて、４０μＬ ｍｉｎ－１で６－分５－４０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）アセトニトリル（０．１％ギ酸を含む）勾配で溶出した。得られたペプチドを、検出及び質量測定のために、ＭＳＥモードで取得するＳＹＮＡＰＴ ＸＳ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ）へのエレクトロスプレーによってイオン化した。ＧＤＦ１５及びＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ配列を含むタンパク質データベースのＰｒｏｔｅｉｎ Ｌｙｎｘ Ｇｌｏｂａｌ Ｓｅｒｖｅｒ２．０検索を用いて、非標識タンパク質由来のペプチドを同定した。各重水素標識実験を少なくとも３回行った。各ペプチドの相対重水素レベルを、重水素で標識した試料の平均質量を非重水素化対照試料の質量から差し引くことによって算出した。全ての質量スペクトルを、ＤｙｎａｍＸ ３．０（Ｗａｔｅｒｓ）で処理した。正規化した水素－重水素交換データを、Ｐｙｍｏｌ（Ｓｃｈｒｏｅｄｉｎｇｅｒ）を用いてＧＤＦ１５（５ｖｚ３）の結晶構造上にマッピングした。ＨＤＸ－ＭＳデータは、Ｋｌｅｉｎ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｄｙｎａｍｉｃ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｌｏｏｐ ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ ｉｎ ＦＧＦＲ１ ｋｉｎａｓｅ，”Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ． ６：７８７７（２０１５）に報告されているように、アミノ酸１個あたりの平均重水素化レベルを用いて計算した。標識試料と非標識試料との間の０．５Ｄａの差を有意とみなした。
結果
ＧＤＦ１５及びＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体のペプシン切断後に検出された配列ペプチドは、実験１ではＧＤＦ１５配列の５０％、実験２では４９％のペプチドカバレッジをもたらした。いくつかのペプチドはデータセットのうちの１つのみに存在し、これは、組み合わされたデータセットが５６％の総ペプチドカバレッジを有することを意味する。検出されなかったペプチドは、主にＧＤＦ１５タンパク質の中心及びＮ末端のシステインノットに由来した。ＧＤＦ１５の低い分解度は、他のシステインノットタンパク質について観察されている。
ＧＤＦ１５単独とＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂとの複合体におけるＧＤＦ１５との間の重水素取り込みの差を決定し、正規化した取り込みデータを図１３～１９のＧＤＦ１５結晶構造（ＰＤＢ ＩＤ：５ＶＺ３）にプロットし、表２０に要約する。図１３、１５～１７、１９、及び２０における黒／暗灰色領域は、ＧＤＦ１５単独と比較してＧＤＦ１５－ＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂ複合体においてより保護されているＧＤＦ１５ペプチドを示し、これらの領域へのＡＢ１１７０２４１ Ｆａｂの結合を示唆する。最も強い保護を有する成熟ＧＤＦ１５の領域は、Ｖ３３－Ｑ４０（最も強い）（配列番号４８６）及びＩ８９－Ｌ１０５（配列番号４８７）である。実験２では、Ｅ２５－Ｗ３２（配列番号４８５）が保護（弱く、実験１では検出されない）を示した。図１６及び２０は、ＧＤＦ１５ペプチドの露出が増加した領域を示す。これはＧＤＦ１５のヒールドメインにおけるアルファヘリックスについて見られるが、この効果は弱い。
ＨＤＸ保護領域は、ＧＤＦ１５の拡張フィンガードメイン及び隣接領域上に位置する。タンパク質は対称ホモ二量体であるので、エピトープは両方のサブユニットに存在する。したがって、２つのＡＢ１１７０２４１コピーが同時にホモ二量体に結合することが可能であるはずである。
保護領域の１つは、ＧＤＮＦファミリー受容体α様タンパク質（ＧＦＲＡＬ）と相互作用するベータ－ヘアピン構造を構成するＩ８９－Ｌ１０５ストレッチ（配列番号４８７）である。配列番号４７９のＩ８９は、変異研究によって、ＧＤＦ１５－ＧＦＲＡＬ相互作用面における重要な残基であることが示されている（Ｈｓｕ，Ｊｅｒ－Ｙｕａｎ，ｅｔ ａｌ． “Ｎｏｎ－ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ａ ｂｒａｉｎｓｔｅｍ－ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ＧＤＦ１５．”５５０（７６７５）：２５５（２０１７））。最も強い保護度を示すＧＤＦ１５のストレッチ、Ｖ３３－Ｑ４０（配列番号４８６）は、ＧＤＦ１５とプロトオンコジーンチロシン－タンパク質キナーゼ受容体Ｒｅｔ（ＲＥＴ）との間の相互作用面の一部である（Ｌｉ，Ｊｉｅ，ｅｔ ａｌ． “Ｃｒｙｏ－ＥＭ ａｎａｌｙｓｅｓ ｒｅｖｅａｌ ｔｈｅ ｃｏｍｍｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ａｎｄ ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＲＥＴ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｉｇａｎｄｓ．”Ｅｌｉｆｅ ８：ｅ４７６５０（２０１９））。保護がより弱いペプチドＥ２５－Ｗ３２（配列番号４８６）は、ＧＤＦ１５－ＲＥＴ相互作用に必須であることが実証されている保存残基Ｗ３２を有する。まとめると、ＨＤＸ－ＭＳデータは、ＡＢ１１７０２４１エピトープがタンパク質表面の２つの隣接領域に位置し、ＧＦＲＡＬ結合及びＲＥＴ結合の両方を妨害することができることを示唆している。

Claims (73)

  1. 可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含み、前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３は、（ａ）それぞれ配列番号３２７～３２９、３３６～３３８、（ｂ）それぞれ配列番号３～５、１２～１４、（ｃ）それぞれ配列番号２１～２３、３０～３２、（ｄ）それぞれ配列番号３９～４１、４８～５０、（ｅ）それぞれ配列番号５７～５９、６６～６８、（ｆ）それぞれ配列番号７５～７７、８４～８６、（ｇ）それぞれ配列番号９３～９５、１０２～１０４、（ｈ）それぞれ配列番号１１１～１１３、１２０～１２２、（ｉ）それぞれ配列番号１２９～１３１、１３８～１４０、（ｊ）それぞれ配列番号１４７～１４９、１５６～１５８、（ｋ）それぞれ配列番号１６５～１６７、１７４～１７６、（ｌ）それぞれ配列番号１８３～１８５、１９２～１９４、（ｍ）それぞれ配列番号２０１～２０３、２１０～２１２、（ｎ）それぞれ配列番号２１９～２２１、２２８～２３０、（ｏ）それぞれ配列番号２３７～２３９、２４６～２４８、（ｐ）それぞれ配列番号２５５～２５７、２６４～２６６、（ｑ）それぞれ配列番号２７３～２７５、２８２～２８４、（ｒ）それぞれ配列番号２９１～２９３、３００～３０２、（ｓ）それぞれ配列番号３０９～３１１、３１８～３２０、（ｔ）それぞれ配列番号３４５～３４７、３５４～３５６、（ｕ）それぞれ配列番号３６３～３６５、３７２～３７４、（ｖ）それぞれ配列番号３８１～３８３、３９０～３９２、（ｗ）それぞれ配列番号３９９～４０１、４０８～４１０、（ｘ）それぞれ配列番号４１７～４１９、４２６～４２８、（ｙ）それぞれ配列番号４３５～４３７、４４４～４４６及び（ｚ）それぞれ配列番号４５３～４５５、４６２～４６４からなる群から選択される配列を含む、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片。
  2. ＡＢ１１７０２４１、ＡＢ１１７０００２、ＡＢ１１７０００６、ＡＢ１１７００１０、ＡＢ１１７００１９、ＡＢ１１７００２８、ＡＢ１１７００３６、ＡＢ１１７００４０、ＡＢ１１７００４３、ＡＢ１１７００４７、ＡＢ１１７００６９、ＡＢ１１７００７０、ＡＢ１１７００７２、ＡＢ１１７００７３、ＡＢ１１７００７４、ＡＢ１１７００８６、ＡＢ１１７０１４８、ＡＢ１１７０２４４、ＡＢ１１７０２４２、ＡＢ１１７０２４３、ＡＢ１１７０２４５、ＡＢ１１７０２４６、ＡＢ１１７０２４７、ＡＢ１１７０２４８、ＡＢ１１７０２４９又はＡＢ１５２００８５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片。
  3. 前記ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義ＣＤＲ、ＩＭＧＴ定義ＣＤＲ又はＡｂＭ定義ＣＤＲである、請求項２に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  4. ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３２６、２、２０、３８、５６、７４、９２、１１０、１２８、１４６、１６４、１８２、２００、２１８、２３６、２５４、２７２、２９０、３０８、３４４、３６２、３８０、３９８、４１６、４３４又は４５２のアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  5. ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＬは、配列番号３３５、１１、２９、４７、６５、８３、１０１、１１９、１３７、１５５、１７３、１９１、２０９、２２７、２４５、２６３、２８１、２９９、３１７、３５３、３７１、３８９、４０７、４２５、４４３又は４６１のアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  6. ＶＨ領域及びＶＬを含み、ＶＨは、配列番号３２６、２、２０、３８、５６、７４、９２、１１０、１２８、１４６、１６４、１８２、２００、２１８、２３６、２５４、２７２、２９０、３０８、３４４、３６２、３８０、３９８、４１６、４３４又は４５２のアミノ酸配列を含む、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片。
  7. ＶＨ及びＶＬを含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３３５、１１、２９、４７、６５、８３、１０１、１１９、１３７、１５５、１７３、１９１、２０９、２２７、２４５、２６３、２８１、２９９、３１７、３５３、３７１、３８９、４０７、４２５、４４３又は４６１のアミノ酸配列を含む、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片。
  8. ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨ及びＶＬは、（ａ）それぞれ配列番号３２６及び３３５、（ｂ）それぞれ配列番号２及び１１、（ｃ）それぞれ配列番号２０及び２９、（ｄ）それぞれ配列番号３８及び４７、（ｅ）それぞれ配列番号５６及び６５、（ｆ）それぞれ配列番号７４及び８３、（ｇ）それぞれ配列番号９２及び１０１、（ｈ）それぞれ配列番号１１０及び１１９、（ｉ）それぞれ配列番号１２８及び１３７、（ｊ）それぞれ配列番号１４６及び１５５、（ｋ）それぞれ配列番号１６４及び１７３、（ｌ）それぞれ配列番号１８２及び１９１、（ｍ）それぞれ配列番号２００及び２０９、（ｎ）それぞれ配列番号２１８及び２２７、（ｏ）それぞれ配列番号２３６及び２４５、（ｐ）それぞれ配列番号２５４及び２６３、（ｑ）それぞれ配列番号２７２及び２８１、（ｒ）それぞれ配列番号２９０及び２９９、（ｓ）それぞれ配列番号３０８及び３１７、（ｔ）それぞれ配列番号３４４及び３５３、（ｕ）それぞれ配列番号３６２及び３７１、（ｖ）それぞれ配列番号３８０及び３８９、（ｗ）それぞれ配列番号３９８及び４０７、（ｘ）それぞれ配列番号４１６及び４２５、（ｙ）それぞれ配列番号４３４及び４４３、並びに（ｚ）それぞれ配列番号４５２及び４６１からなる群から選択される配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  9. 配列番号３２６の配列を含むＶＨ、及び／又は配列番号３３５の配列を含むＶＬを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  10. 配列番号３２６の配列を含むＶＨと配列番号３３５の配列を含むＶＬとを含む参照抗体と同じエピトープに結合し、任意選択的に、前記エピトープは水素／重水素交換アッセイを用いて決定される、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合するモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
  11. 参照抗体のＧＤＦ－１５への結合を競合的に阻害し、前記参照抗体は配列番号３２６の配列を含むＶＨと配列番号３３５の配列を含むＶＬとを含む、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合するモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
  12. ＧＤＦ－１５のアミノ酸Ｅ２５～Ｗ３２（配列番号４８５）中のアミノ酸、ＧＤＦ－１５のアミノ酸Ｖ３３～Ｑ４０（配列番号４８６）中のアミノ酸、及び／又はＧＤＦ－１５のアミノ酸Ｉ８９～Ｌ１０５（配列番号４８７）中のアミノ酸を含むＧＤＦ－１５のエピトープに結合するモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
  13. ＧＤＦ－１５とＧＦＲＡＬとの相互作用を阻害し、且つＧＤＦ－１５とＲＥＴとの相互作用を阻害する、ヒトＧＤＦ－１５に特異的に結合するモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
  14. カニクイザルＧＤＦ－１５及び／又はマウスＧＤＦ－１５に結合する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  15. 癌細胞の増殖を阻害することができ、任意選択的に、前記増殖は、前記抗体又はその抗原結合断片の非存在下での増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも５０％、又は少なくとも７５％阻害される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  16. 樹状細胞を活性化することができ、任意選択的に、活性化は、前記抗体又はその抗原結合断片の非存在下での活性化と比較して倍増する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  17. Ｔ細胞の増殖を増加させることができ、任意選択的に、前記増加は、前記抗体又はその抗原結合断片の非存在下での増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、又は少なくとも４０％の増加である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  18. Ｔｈ１細胞の分化を増加させることができ、任意選択的に、前記増加は、前記抗体又はその抗原結合断片の非存在下での分化と比較して、少なくとも１．５倍又は少なくとも２倍である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  19. ＧＤＦ－１５とＧＦＲＡＬとの相互作用を阻害する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  20. ＧＤＦ－１５とＲＥＴとの相互作用を阻害する、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  21. ＧＤＦ－１５のアミノ酸Ｅ２５～Ｗ３２（配列番号４８５）中のアミノ酸、ＧＤＦ－１５のアミノ酸Ｖ３３～Ｑ４０（配列番号４８６）中のアミノ酸、及び／又はＧＤＦ－１５のアミノ酸Ｉ８９～Ｌ１０５（配列番号４８７）中のアミノ酸を含むエピトープに結合する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  22. 配列番号４７４の配列を含む重鎖定常ドメインを含む重鎖を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  23. 配列番号４７５の配列を含む軽鎖定常ドメインを含む軽鎖を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  24. 重鎖定常領域をさらに含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  25. 前記重鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２重鎖定常領域からなる群から選択される、請求項２４に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  26. 前記重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１定常領域である、請求項２５に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  27. 軽鎖定常領域をさらに含む、請求項１～２１及び２４～２６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  28. 前記軽鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧκ及びＩｇＧλ軽鎖定常領域からなる群から選択される、請求項２７に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  29. 前記軽鎖定常領域は、ヒトＩｇＧκ軽鎖定常領域である、請求項２８に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  30. ＩｇＧ抗体又はその抗原結合断片である、請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  31. 半減期を改善するように操作されているＦｃ領域を含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  32. ＹＴＥ変異を有するＦｃ領域を含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  33. Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ三重変異（ＴＭ）を有するＦｃ領域を含む、請求項１～３２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  34. モノクローナル抗体又は抗原結合断片である、請求項１～３３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  35. 完全長の抗体である、請求項１～３４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  36. 抗原結合断片である、請求項１～３５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  37. Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結Ｆｖ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２又はｓｃＦｖ－Ｆｃを含む、請求項３６に記載の抗原結合断片。
  38. 検出可能な標識をさらに含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  39. 請求項１～３８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片の前記ＶＨ又は重鎖をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
  40. 請求項１～３８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片の前記ＶＬ又は軽鎖をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
  41. 請求項３９及び／又は請求項４０に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  42. 請求項３９及び／若しくは４０に記載のポリヌクレオチド、請求項４１に記載のベクター、又は請求項３９に記載のポリヌクレオチドを含む第１のベクター及び請求項４０に記載のポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む宿主細胞。
  43. ＣＨＯ、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３及びＨｅＬａ細胞からなる群から選択される、請求項４２に記載の宿主細胞。
  44. 単離されている、請求項４２又は４３に記載の宿主細胞。
  45. 抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、請求項４２～４４のいずれか一項に記載の宿主細胞を、前記抗体又はその抗原結合断片が産生されるように培養する工程を含み、任意選択的に、前記培養物から前記抗体又はその抗原結合断片を単離する工程をさらに含む方法。
  46. 請求項４５に記載の方法によって生成される抗体又はその抗原結合断片。
  47. 請求項１～３８及び４６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片と、任意選択的に、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
  48. 対象における癌を治療する方法であって、請求項１～３８及び４６のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項４０に記載の組成物を、前記対象に投与することを含む方法。
  49. 前記癌は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））癌、肝癌（肝細胞癌（ＨＣＣ））、腎細胞癌（ＲＣＣ）、膀胱癌、食道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌、乳癌、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）又は前立腺癌である、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記癌は、ＧＤＦ－１５を発現する癌である、請求項４８又は４９に記載の方法。
  51. 癌細胞の増殖を阻害する方法であって、前記癌細胞を、請求項１～３８及び４６のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項４７に記載の組成物と接触させることを含む方法。
  52. 前記増殖は、前記抗体又はその抗原結合断片の非存在下での増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも５０％、又は少なくとも７５％阻害される、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記癌細胞は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））癌、肝癌（肝細胞癌（ＨＣＣ））、腎細胞癌（ＲＣＣ）、膀胱癌、食道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌、乳癌、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）又は前立腺癌の細胞である、請求項５１又は５２に記載の方法。
  54. 樹状細胞を活性化する方法であって、前記樹状細胞を、請求項１～３８及び４６のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項４７に記載の組成物と接触させることを含む方法。
  55. 前記抗体又はその抗原結合断片は、前記抗体又はその抗原結合断片の非存在下での活性化と比較して、前記樹状細胞の活性化を倍増させる、請求項５４に記載の方法。
  56. Ｔ細胞の増殖を増大させる方法であって、前記Ｔ細胞を、請求項１～３８及び４６のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項４７に記載の組成物と接触させることを含む方法。
  57. 前記抗体又はその抗原結合断片は、Ｔ細胞の増殖を、前記抗体又はその抗原結合断片の非存在下での増殖と比較して、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％又は少なくとも４０％増大させる、請求項５６に記載の方法。
  58. Ｔｈ１細胞の分化を増加させる方法であって、前記Ｔｈ１細胞を、請求項１～３８及び４６のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項４７に記載の組成物と接触させることを含む方法。
  59. 前記抗体又はその抗原結合断片は、Ｔｈ１細胞の分化を、前記抗体又はその抗原結合断片の非存在下での分化と比較して、少なくとも１．５倍又は少なくとも２倍に増加させる、請求項５８に記載の方法。
  60. ＧＤＦ－１５とＲＥＴとの相互作用を阻害する方法であって、前記ＧＤＦ－１５及び／又は前記ＲＥＴを、請求項１～３８及び４６のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項４７に記載の組成物と接触させることを含む方法。
  61. ＧＤＦ－１５とＧＦＲＡＬとの相互作用を阻害する方法であって、前記ＧＤＦ－１５及び／又は前記ＧＦＲＡＬを、請求項１～３８及び４６のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項４７に記載の組成物と接触させることを含む方法。
  62. 前記接触はインビトロで起こる、請求項５１～６１のいずれか一項に記載の方法。
  63. 前記接触は対象内で起こる、請求項５１～６１のいずれか一項に記載の方法。
  64. 前記対象は癌を有し、任意選択的に、前記癌は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））癌、肝癌（肝細胞癌（ＨＣＣ））、腎細胞癌（ＲＣＣ）、膀胱癌、食道癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌、乳癌、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）又は前立腺癌である、請求項６３に記載の方法。
  65. 対象における悪液質を治療し、悪液質に関連する筋肉量の減少を阻害し、悪液質に関連する意図しない体重減少を阻害又は低減し、悪液質に関連する臓器量の減少を阻害し、又は悪液質に罹患している対象の食欲を増進させる方法であって、請求項１～３８及び４６のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項４７に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
  66. 前記筋肉量の減少は、脂肪量の減少を伴っている、請求項６５に記載の方法。
  67. 前記臓器は、腎臓、肝臓、心臓、又は脾臓である、請求項６５に記載の方法。
  68. 前記臓器量の減少は、筋肉量の減少、脂肪量の減少、又は意図しない体重減少を伴っている、請求項６５又は６７に記載の方法。
  69. 対象における悪液質の発生率及び／又は重症度を低下させ、それによって前記対象における悪液質を引き起こし得る抗癌剤の最大耐量を増加させる方法であって、請求項１～３８及び４６のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項４７に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
  70. 前記悪液質は、癌、慢性心不全、慢性腎疾患、ＣＯＰＤ、ＡＩＤＳ、多発性硬化症、関節リウマチ、敗血症及び結核からなる群から選択される基礎疾患に関連している、請求項６５～６９のいずれか一項に記載の方法。
  71. 対象における悪液質に関連するサルコペニアを治療する方法であって、請求項１～３８及び４６のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項４７に記載の組成物を、前記対象に投与することを含む方法。
  72. 試料中のヒトＧＤＦ－１５を検出する方法であって、前記試料を、請求項１～３８及び４６のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合断片と接触させることを含み、任意選択的に、前記試料は対象から得られる、方法。
  73. 前記対象は、癌を有する、請求項７２に記載の方法。
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