JP2024501894A - Ｂ７ｈ４ターゲティング抗体－薬物コンジュゲートおよびその使用方法 - Google Patents

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Abstract

本開示は、概して、可溶性形態または膜結合状態（すなわち、細胞表面上で発現される場合）でヒトB7-H4に特異的に結合するモノクローナル抗体を含む抗体-薬物コンジュゲート、ならびにこれらのコンジュゲートを治療薬および/または診断薬として使用する方法に関する。TIFF2024501894000420.tif208165

Description

関連出願
本出願は、2021年1月4日に出願された米国仮出願第63/133,707号および2021年4月9日に出願された米国仮出願第63/172,968号の優先権および恩典を主張する。これらの出願の各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
配列表の参照による組み込み
2022年1月3日に作成され、サイズが118KBの「MRSN-034＿001WO＿SeqList.txt」という名称のテキストファイルの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
背景
B7-H4、B7x、B7S1、B7-S1およびVTCN1としても知られるB7-H4は、I型膜貫通タンパク質であり、T細胞受容体抗原性シグナルと併せて共シグナルを提供する、タンパク質のB7スーパーファミリーのメンバーである。B7-H4は、T細胞機能の負の調節因子であり、T細胞のライゲーションは、それらの増殖、サイトカイン分泌および細胞傷害性を阻害する。マウスでは、B7-H4の排除は、免疫細胞の恒常性に影響を与えず、自己免疫の徴候もない。B7-H4の受容体は分かっておらず、同定されていない。
ヒトB7-H4は、第1染色体上にマッピングされており、66kbに及ぶ6つのエクソンおよび5つのイントロンから構成され、そのうちエクソン6は、2つの異なる転写物を生成するための選択的スプライシングに使用される。ヒトB7-H4は282アミノ酸のタンパク質（アミノ末端シグナル配列を含む）であり、そのうち-227アミノ酸は、アミノ末端シグナル配列の切断後に細胞外空間にあると予測されている。B7-H4は、Ig様Vドメイン、Ig様Cドメイン、膜貫通ドメインおよび短い細胞質尾部を含む。
健康な組織ではB7-H4発現はタンパク質レベルで比較的限定されているが、B7-H4は、乳房、卵巣および子宮内膜の婦人科癌などのいくつかの固形腫瘍では一定して過剰発現される。腫瘍内のB7-H4の発現は、予後不良と相関する傾向がある。B7-H4の受容体は分かっていないが、T細胞上に発現されると考えられている。B7-H4は、T細胞活性を直接阻害すると考えられている。
放射線療法、細胞傷害性抗腫瘍剤を用いた従来の化学療法、ホルモン療法（アロマターゼ阻害剤、黄体形成ホルモン放出ホルモン類似体）、ビスホスホネートおよびシグナル伝達阻害剤を含む多種多様な治療様式が進行癌の治療に利用可能である。しかし、残念なことに、多くの患者は、これらの治療様式のいずれに対してもあまり応答しないか、または全く応答しない。そのため、B7-H4の生物学的活性を標的とする新しい治療剤を同定する必要がある。
したがって、B7-H4の生物学的活性を標的とする治療法が必要とされている。
いくつかの局面では、本開示は、アミノ酸配列GFIVSRNY（SEQ ID NO:2）を含む可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）、アミノ酸配列IYGSGRT（SEQ ID NO:3）を含む可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000002
またはアミノ酸配列
Figure 2024501894000003
を含む可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）、アミノ酸配列QSVSSSY（SEQ ID NO:53）を含む可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）、アミノ酸配列GAS（SEQ ID NO:54）を含む可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000004
を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む、B7-H4に特異的に結合する単離された抗体を提供する。
いくつかの局面では、単離された抗体は、SEQ ID NO:44のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列と、SEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列とを含む。いくつかの局面では、単離された抗体は、SEQ ID NO:45のアミノ酸配列を含む重鎖と、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの局面では、単離された抗体は、SEQ ID NO:22のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列と、SEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列とを含む。いくつかの局面では、単離された抗体は、SEQ ID NO:23のアミノ酸配列を含む重鎖と、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
いくつかの局面では、単離された抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの局面では、単離された抗体は、ウサギモノクローナル抗体、マウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、または完全ヒトモノクローナル抗体である。いくつかの局面では、単離された抗体はIgGアイソタイプである。いくつかの局面では、単離された抗体はIgG1アイソタイプである。
いくつかの局面では、単離された抗体は、アミノ酸配列GFIVSRNY（SEQ ID NO:2）を含む可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）、アミノ酸配列IYGSGRT（SEQ ID NO:3）を含む可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000005
を含む可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）、アミノ酸配列QSVSSSY（SEQ ID NO:53）を含む可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）、アミノ酸配列GAS（SEQ ID NO:54）を含む可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000006
を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む単離された抗体と、ヒトB7-H4への特異的結合について競合する。いくつかの局面では、単離された抗体はSEQ ID NO:44のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列およびSEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列を含む単離された抗体と、またはSEQ ID NO:45のアミノ酸配列を含む重鎖およびSEQ ID NO:52のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む単離された抗体と、ヒトB7-H4への特異的結合について競合する。
いくつかの局面では、本開示は、本開示の単離された抗体を含むB7-H4抗体-薬物コンジュゲートを提供する。
いくつかの局面では、1つまたは複数のリンカー-薬物部分がターゲティング部分に共有結合し、
各リンカー-薬物部分が、
各薬物ユニットについて放出可能アセンブリユニットを介してターゲティング部分を1つまたは複数の薬物ユニット（例えば、1つまたは複数の治療剤（D））に接続し、親水性基を各リンカー-薬物部分の薬物ユニットに接続する、多官能性リンカー
を含み、
放出可能アセンブリユニットが、ターゲティング部分によって標的とされた標的部位に近接して遊離薬物を放出することができ、かつ、
多官能性リンカーが、ターゲティング部分と親水性基との間にペプチド部分を含み、ペプチド部分が、少なくとも2つのアミノ酸を含む。
いくつかの局面では、本開示は、表A1および表A2のコンジュゲートのいずれか1つから選択されるコンジュゲートを提供する。
いくつかの局面では、本開示は、表B1および表B2のコンジュゲートのいずれか1つから選択されるコンジュゲートを提供する。
いくつかの局面では、本開示は、その必要がある対象に本開示のコンジュゲートの治療有効量を投与する工程を含む、対象の疾患または障害を治療または予防する方法を提供する。
いくつかの局面では、本開示は、その必要がある対象の疾患または障害を治療または予防するのに使用するためのコンジュゲートを提供する。
いくつかの局面では、本開示は、その必要がある対象の疾患または障害を治療するための医薬品の製造における本開示のコンジュゲートの使用を提供する。いくつかの局面では、本開示は、その必要がある対象の疾患または障害を治療または予防するための本開示のコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの局面、本開示の態様のいずれか1つの方法、コンジュゲート、または使用では、該コンジュゲートは、生分解時に1つまたは複数の治療剤を放出する。
いくつかの局面、本開示の態様のいずれか1つの方法、コンジュゲート、または使用では、疾患または障害は癌である。いくつかの局面、本開示の態様のいずれか1つの方法、コンジュゲート、または使用では、癌はB7-H4陽性癌である。
いくつかの局面、本開示の態様のいずれか1つの方法、コンジュゲート、または使用では、B7-H4陽性癌は、胆管癌（bile duct carcinoma）、乳癌、子宮内膜癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、子宮癌、甲状腺癌、腎癌、頭頸部癌、胃癌、黒色腫、胆管癌（bile duct carcinoma）、胆管癌（cholangial carcinoma）、膵癌、結腸癌および膀胱癌からなる群より選択される。
いくつかの局面では、対象はヒトである。
いくつかの局面では、本開示は、対象への治療剤の投与をさらに含む。
図1は、抗体グリカンの異なるグリコフォーム（G0、G1、G2、G0F、GIF、G2FおよびM5）を示すグラフである。 図2は、エンドグリコシダーゼの存在下でのグリコフォームG0、G1、G2、G0F、GIF、G2FおよびM5の混合物の脱グリコシル化を示すスキームである。 図3は、グリコシルトランスフェラーゼの存在下で、末端GlcNAc部分を含む中間抗体を、アジド修飾されたUDP-GalNAc誘導体分子と反応させる、アジド修飾抗体の調製プロセスを示すスキームである。 図4は、アジド修飾抗体を調製するプロセスの一態様を示すスキームである。 図5は、アジド修飾抗体が、歪みシクロアルキニル基（strained cycloalkynyl group）を含むリンカー-薬物部分にコンジュゲートされる、抗体-薬物コンジュゲートを調製するプロセスの一態様を示すスキームである。 図6は、修飾抗体を示すグラフである。 図7は、MX-1 TNBC異種移植マウスモデルにおけるB7-H4＿2F9細胞傷害性薬物コンジュゲート:コンジュゲート9-1（2.46/0.075、または4.92/0.150mg/kg）、コンジュゲート11（2.28/0.075、または4.56/0.150mg/kg）、コンジュゲート3（2.30/0.075、または4.60/0.150mg/kg）、コンジュゲート6（2.30/0.075、または4.61/0.150mg/kg）、コンジュゲート7（2.30/0.075、または4.60/0.150mg/kg）およびコンジュゲート1-1（2.30/0.075、または4.60/0.150mg/kg）（用量はいずれも、抗体/ペイロードによって与えられる）の抗腫瘍効果を示すグラフである。 図8は、MX-1 TNBC異種移植マウスモデルにおけるB7-H4＿2F9細胞傷害性薬物コンジュゲート:コンジュゲート14（2.57/0.150mg/kg）、コンジュゲート9-2（4.56/0.150mg/kg）、コンジュゲート10（14.37/0.150mg/kg）、コンジュゲート12（2.26/0.150、または0.75/0.050mg/kg）、コンジュゲート1-2（5.37/0.177、2.33/0.077、または1.79/0.059mg/kg）、コンジュゲート2-1（13.45/0.150、4.60/0.050、または2.30/0.025mg/kg）およびXMT-1604 B7-H4＿2F9V18（13.80/0mg/kg）（用量はいずれも、抗体/ペイロードによって与えられる）の抗腫瘍効果を示すグラフである。 図9は、HBCx-19患者由来異種移植モデルにおけるB7-H4＿2F9細胞傷害性薬物コンジュゲート:コンジュゲート1-2（1.79/0.059、または5.37/0.177mg/kg）、コンジュゲート9-2（4.56/0.150mg/kg）、コンジュゲート2-1（4.60/0.050、または13.45/0.150mg/kg）およびコンジュゲート10（14.37/0.150mg/kg）（用量はいずれも、抗体/ペイロードによって与えられる）の抗腫瘍効果を示すグラフである。 図10は、HBCx-24患者由来異種移植モデルにおけるB7-H4＿2F9細胞傷害性薬物コンジュゲート:コンジュゲート14（2.57/0.150mg/kg）、コンジュゲート9-2（4.56/0.150mg/kg）、コンジュゲート10（14.37/0.150mg/kg）、コンジュゲート12（2.26/0.150、または0.75/0.050mg/kg）、コンジュゲート1-2（4.56/0.150、2.30/0.076、または1.52/0.05mg/kg）、コンジュゲート2-1（13.45/0.150、4.60/0.050、または2.30/0.025mg/kg）およびXMT-1604（13.80/0mg/kg）（用量はいずれも、抗体/ペイロードによって与えられる）の抗腫瘍効果を示すグラフである。 図11は、MX-1異種移植マウスモデルにおけるB7-H4＿2F9 STINGアゴニスト薬物コンジュゲート:コンジュゲート17（0.085/0.030、または2.84/0.100mg/kg）、コンジュゲート16（0.89/0.030、または2.97/0.100mg/kg）、コンジュゲート15（0.85/0.030、または2.83/0.100mg/kg）およびdiABZI IV STINGアゴニスト（5mg/kg）（用量はいずれも、抗体/ペイロードによって与えられる）の抗腫瘍効果を示すグラフである。 図12は、MX-1 TNBC異種移植モデルにおけるB7-H4＿2F9 STINGアゴニスト薬物コンジュゲート:コンジュゲート14（2.57/0.150mg/kg）、コンジュゲート9-2（4.56/0.150mg/kg）、コンジュゲート12（2.26/0.150、または1.13/0.075mg/kg）、コンジュゲート1-3（4.68/0.150、または2.34/0.075mg/kg）およびコンジュゲート2-2（13.81/0.150、または6.90/0.075mg/kg）（用量はいずれも、抗体/ペイロードと表記される）の抗腫瘍効果を示すグラフである。 図13は、選択されていない一連のTNBCおよびER陽性乳癌患者由来異種移植モデルについて受容体状態によって分類された、最良効果中央値（median best response）（MBR）によって順序付けられたコンジュゲート1-3の効果を示す。Y軸は各モデルによって達成されたMBRを示し、X軸はモデルIDを識別する。 図14は、TPSスコアによって評価した場合の、実施例44のTNBCおよびER陽性乳癌患者由来異種移植モデルのサブセットに関するタンパク質発現を示す。
詳細な説明
本発明は、可溶性形態または膜結合状態（すなわち、細胞表面上で発現される場合）でヒトB7-H4に特異的に結合するモノクローナル抗体を提供する。本発明は、B7-H4に特異的に結合するモノクローナル抗体をさらに提供する。これらの抗体は、本明細書において、集合的に「B7-H4」抗体と呼ばれる。
定義
本明細書において記載される中間体化合物および/または本開示の化合物について提供される化学名は、そのような化合物の互変異性表現のいずれか1つを指し得る（いくつかの例では、そのような代替名は実験的に提供される）。命名された化合物（中間体化合物、または本開示の化合物）または構造的に示された化合物（中間体化合物、または本開示の化合物）への任意の言及は、そのような化合物の双性イオン形態、およびそれらの任意の混合物を含むあらゆる互変異性形態を包含することを意図していることを理解されたい。
用語「いくつかの態様では」、「本開示のいくつかの態様では」および「本開示の化合物のいくつかの態様では」は、適切な場合には区別なく使用され得ることを理解されたい。
用語「約」、「およそ」または「ほぼ」は、数値に関連して使用される場合、値の集合または範囲が含まれることを意味する。いくつかの態様では、「約X」は、Xの±25％、±20％、±15％、±10％、±5％、±2％、±1％、±0.5％、±0.2％または±0.1％である値の範囲を含み、ここで、Xは数値である。いくつかの態様では、用語「約」は、指定された値よりも5％高いまたは低い値の範囲を指す。いくつかの態様では、用語「約」は、指定された値よりも2％高いまたは低い値の範囲を指す。いくつかの態様では、用語「約」は、指定された値よりも1％高いまたは低い値の範囲を指す。
値の範囲の列挙は、本明細書において別段の指定がない限り、その範囲内に入る各別個の値を個別に参照する簡略方法として役立つことを意図しているにすぎず、各別個の値は、あたかもそれが本明細書において個別に列挙されているかのように本明細書に組み入れられる。本明細書において使用される範囲は、特に明記しない限り、その範囲の2つの限界を含む。いくつかの態様では、「xは1～6の整数である（x being an integer between 1 and 6）」および「xは1～6の整数である（x being an integer of 1 to 6）」という表現は、いずれも「xは、1、2、3、4、5または6である」を意味し、すなわち、用語「X～Y」および「X～Yの範囲」は、XおよびYならびにそれらの間の整数を含む。
本開示に従って利用される場合、以下の用語は、別段の指定がない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする:
本明細書において使用される場合、用語「抗B7-H4抗体」、「B7-H4抗体」および「B7-H4に結合する抗体」は、抗体がB7-H4を標的とする点で診断剤および/または治療剤として有用であるように十分な親和性でB7-H4に結合することができる抗体を指す。
本明細書において使用される用語「B7-H4」は、細胞内でのB7-H4前駆体タンパク質のプロセシングから生じる任意の天然の成熟B7-H4を指す。該用語は、別段の指定がない限り、霊長類（例えば、ヒトおよびカニクイザル）および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物供給源由来のB7-H4を含む。該用語はまた、B7-H4の天然に存在する変異体、例えば、スプライス変異体または対立遺伝子変異体を含む。
用語「B7-H4陽性癌」は、それらの表面にB7-H4を発現する細胞を含む癌を指す。いくつかの態様では、細胞表面上のB7-H4の発現は、例えば、免疫組織化学的検査、FACSなどの方法でB7-H4に対する抗体を使用して決定される。
あるいは、B7-H4 mRNA発現は、細胞表面上のB7-H4発現と相関すると考えられ、インサイチューハイブリダイゼーションおよびRT-PCR（定量的RT-PCRを含む）から選択される方法によって決定され得る。
用語「B7-H4陽性細胞」は、その表面にB7-H4を発現する細胞を指す。
本明細書において使用される用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、所望の抗原結合活性を示す限り、限定されることなく、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）および抗体断片を含む様々な抗体構造を包含する。抗体のアミノ酸配列のナンバリング、および相補性決定領域の同定のための様々な方法が当技術分野において公知である。例えば、Kabatナンバリングシステム（Kabat,E.A.,et al.,Sequences of Protein of immunological interest,Fifth Edition,US Department of Health and Human Services,US Government Printing Office（1991）を参照）またはIMGTナンバリングシステム（IMGT（登録商標）、international ImMunoGeneTics information system（登録商標）。オンラインで入手可能:http://www.imgt.org/）。IMGTナンバリングシステムは、コード配列内のアミノ酸位置、対立遺伝子のアライメントを決定し、全脊椎動物種由来の免疫グロブリン（IG）およびT細胞受容体（TR）内の配列を容易に比較するための当技術分野における信頼性が高く正確なシステムとして常用的に使用され、受け入れられている。IMGTデータの精度および一貫性は、免疫遺伝学および免疫情報学のための最初でこれまでのところ独自のオントロジーであるIMGT-ONTOLOGYに基づいている（Lefranc.M.P.et al.,Biomolecules,2014 Dec;4（4）,1102-1139を参照）。IMGTのツールおよびデータベースは、配列の大きなリポジトリから構築されたIMGT参照ディレクトリに対して実行される。IMGTシステムでは、IG V-DOMAINおよびIG C-DOMAINが、適切であれば常に、エクソンの区切りを考慮して区切られる。したがって、さらに多くの配列がIMGTデータベースに利用可能であるため、IMGTエクソンナンバリングシステムは、コード配列内のアミノ酸位置を決定し、対立遺伝子をアライメントするために当業者によって確実に使用され得、「使用される」。さらに、IMGT固有のナンバリングと他のナンバリング（すなわち、Kabat）との間の対応は、IMGT Scientificチャートで利用可能である（Lefranc.M.P.et al.,Biomolecules,2014 Dec;4（4）,1102-1139を参照）。
用語「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部を含み、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、限定されることなく、Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F（ab'）2;ダイアボディ;線状抗体;一本鎖抗体分子（例えばscFv）;および抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
本明細書において使用される参照抗体としての「同じエピトープに結合する抗体」という用語は、競合アッセイではその抗原に対する参照抗体の結合を50％以上遮断する抗体を指し、逆に、参照抗体は、競合アッセイではその抗原に対する抗体の結合を50％以上遮断する。例示的な競合アッセイは、本明細書において提供される。
抗体の「クラス」という用語は、その重鎖が有する定常ドメインまたは定常領域のタイプを指す。抗体には5つの主要なクラス、すなわち、IgA、IgD、IgE、IgGおよびIgMがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、IgGi、IgG2、IgG3、IgG4、IgAiおよびIgA2にさらに分けられ得る。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。
本明細書において使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、例えば、天然に存在する変異を含むまたはモノクローナル抗体調製物の生成中に生じる可能性のある変異体抗体を除いて、同一であり、および/または同じエピトープに結合し、そのような変異体は一般に少量存在する。異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を対象とする。したがって、修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の生成を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されることなく、ハイブリドーマ法、組換えDNA法、ファージディスプレイ法、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含む様々な技術によって作製され得、そのような方法、およびモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法は本明細書において記載されている。
用語「裸の抗体」は、異種部分（例えば、細胞傷害性部分またはSTINGアゴニスト薬物部分）にコンジュゲートしていない抗体を指す。裸の抗体は、薬学的製剤中に存在し得る。
用語「天然抗体」は、様々な構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然IgG抗体は、ジスルフィド結合した2つの同一の軽鎖および2つの同一の重鎖から構成された約150,000ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各重鎖は、N末端からC末端に向かって、可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（VH）と、それに続く3つの定常ドメイン（CH1、CH2およびCH3）とを有する。同様に、末端からC末端に向かって、各軽鎖は、可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（VL）と、それに続く定常軽（CL）ドメインとを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる2つのタイプのうちの1つに割り当てられ得る。
「単離された抗体」とは、その天然の環境の成分から分離されたものである。いくつかの態様では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、SDS-PAGE、等電点電気泳動（IEF）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換HPLCまたは逆相HPLC）によって決定される場合、純度95％または99％超まで精製される。抗体純度の評価方法の概説については、例えば、Flatman et al.,J.Chromatogr.B 848:79-87（2007）を参照されたい。
用語「エピトープ」は、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位を指す。
抗体の「ヒト化抗体」という用語は、親抗体の抗原結合特性を保持または実質的に保持するが、ヒトでは免疫原性が低い、非ヒト抗体（例えばマウス）に由来する抗体を指す。本明細書において使用されるヒト化は、脱免疫化（deimmunized）抗体を含むことを意図する。
抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化型」という用語は、ヒト化を受けた抗体を指す。
用語「と競合する」または「と交差競合する」は、2つ以上の抗体に関連して本明細書において使用される場合、2つ以上の抗体がB7-H4への結合について競合する、例えば、B7-H4結合について競合することを示す。抗体が1つまたは複数の他の抗体と25％以上競合する場合、抗体は、1つまたは複数の他の抗体がB7-H4に結合するのを「遮断する」かまたは「交差遮断し」、25％～74％は「部分遮断」を表し、75％～400％は「完全遮断」を表す。文脈によって特に定義または否定されない限り、本明細書において使用される場合、用語「と競合する」、「と交差競合する」、「遮断する」または「交差遮断する」は、抗体のそのような対を網羅することも意図している。
本明細書において使用される場合、「ヒトB7-H4に特異的に結合する」抗体とは、1×10-7以下、さらに典型的には5×10-8M以下、さらに典型的には3×10-8M以下、さらに典型的には1×10-9M以下、さらになお典型的には5×10-9M以下のKDでヒトB7-H4に結合する抗体を指すことを意図している。
タンパク質または細胞に対して「実質的に結合しない」という用語は、本明細書において使用される場合、タンパク質または細胞に結合しないかまたは高い親和性で結合しない、すなわち、1×10-8M以上、さらに好ましくは1×10-5M以上、さらに好ましくは1×10-4M以上、さらに好ましくは1×10-3M以上、さらになお好ましくは1×10-2M以上のKDでタンパク質または細胞に結合することを意味する。
用語「細胞傷害剤」または「細胞傷害性薬物部分」は、限定されることなく、アルキル化剤、腫瘍壊死因子、干渉物質、マイクロチューブリン阻害剤およびトポイソメラーゼ阻害剤を含む、主に細胞の機能を直接妨害することによって細胞死を引き起こすか、または細胞ミオシス（cell myosis）を阻害もしくは妨害する化合物を指す。
本明細書において使用される用語「STINGアゴニスト」は、例えば、STINGに結合すること、および/または下流のシグナル伝達（例えば、STING機能に関連する分子の活性化を特徴とする）を誘導することによって、STINGと相互作用することができる化合物または部分を指す。これには、STING、IRF3および/またはNF-kBの直接的なリン酸化が含まれるほか、STAT6も含まれ得る。いくつかの態様では、STING経路活性化は、1型インターフェロン（主にIFN-aおよびIFN-b）の産生、および/またはインターフェロン刺激遺伝子の発現を増加させる。
本明細書において使用される用語「STINGアゴニスト薬物部分」は、STINGアゴニストに由来し、STINGと相互作用することができる部分を指す。いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、その部分が本開示のコンジュゲートの残部に連結されることを可能にするように修飾されたSTINGアゴニストである。
用語「糖」は、単糖、例えば、グルコース（Glc）、ガラクトース（Gal）、マンノース（Man）およびフコース（Fuc）を指す。用語「糖誘導体」は、単糖糖の誘導体、すなわち、置換基および/または官能基を含む単糖糖を指す。糖誘導体の例には、限定されることなく、アミノ糖および糖酸が挙げられる。糖誘導体の例にはまた、S’（F’）X1として示される化合物も挙げられ、式中、S’は糖または糖誘導体であり、F’は官能基であり、x1は官能基の数を示す。
本明細書において使用される用語「コア-GlcNAc部分」は、抗体（例えば、GlcNAcのC1位を介して）に結合したGlcNAc（例えばコア-GlcNAc）を含む単糖部分、多糖部分またはオリゴ糖部分を指す。いくつかの態様では、GlcNAcは、抗体のアスパラギンアミノ酸の側鎖のアミド窒素原子へのN-グリコシド結合を介して抗体に結合している。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、抗体の天然のグリコシル化部位に存在するか、または抗体の異なる部位に導入される。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は単糖である（例えば、コア-GlcNAc部分は末端GlcNAc部分でもある）。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、フコースをさらに含み、例えば、コア-GlcNAc部分は二糖コア-GlcNAc-（α1-6-Fuc）部分（GlcNAc（Fuc）と呼ばれ得る）である。したがって、抗体がコア-GlcNAc部分を含む場合、抗体は、単糖コア-GlcNAc部分または二糖コア-GlcNAc部分を含み得、コア-GlcNAc部分は、フコース（例えば二糖コア-GlcNAc（Fuc）部分）をさらに含み得る。コア-GlcNAc部分がフコースをさらに含む場合、フコースは、コア-GlcNAc部分のα-1,6からO-6に結合され得る。フコースをさらに含むコア-GlcNAc部分は、コア-GlcNAc（Fuc）と呼ばれ得る。
用語「コア-GlcNAc」は、多糖またはオリゴ糖の一部である内部GlcNAcを指し、多糖またはオリゴ糖は、内部GlcNAcを介して抗体に結合している。
本明細書において使用される用語「末端GlcNAc部分」は、抗体に結合し、追加の修飾（例えば、P''-S''-A''の化合物による）に利用可能な末端官能基を有するGlcNAcを含む部分を指す。いくつかの態様では、末端GlcNAc部分は、フコースをさらに含む。いくつかの態様では、末端GlcNAc部分は、糖タンパク質（例えば抗体グリカン）のコア-GlcNAc部分をエンドグリコシダーゼと反応させることによって形成される。
用語「ヌクレオチド」は、その通常の科学的な意味で使用され、核酸塩基と、5炭素糖（リボースまたは2-デオキシリボースのいずれか）と、1、2または3個のリン酸基とから構成される分子を指す。リン酸基がなければ、核酸塩基と糖とは、ヌクレオシドを構成する。したがって、ヌクレオチドは、ヌクレオシド一リン酸、ヌクレオシド二リン酸またはヌクレオシド三リン酸とも呼ばれ得る。核酸塩基は、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシルまたはチミンであり得る。
用語「タンパク質」は、その通常の科学的な意味で使用され、約10個以上のアミノ酸を含むポリペプチドを含む。タンパク質は、天然アミノ酸または非天然アミノ酸を含み得る。
用語「糖タンパク質」は、本明細書において、その通常の科学的な意味で使用され、タンパク質に共有結合した1つまたは複数の単糖鎖またはオリゴ糖鎖（「グリカン」）を含むタンパク質を指す。グリカンは、タンパク質上のヒドロキシル基（O-結合グリカン）、タンパク質上のアミド機能（N-糖タンパク質）、またはタンパク質上の炭素（C-糖タンパク質）に結合していてもよい。糖タンパク質は、複数のグリカンを含み得、1つまたは複数の単糖グリカンと1つまたは複数のオリゴ糖グリカンとの組合せを含み得、N-結合グリカンとO-結合グリカンとC-結合グリカンとの組合せを含み得る。全タンパク質の50％超が何らかの形態のグリコシル化を有し、したがって、糖タンパク質として適格であると推定される。
用語「グリカン」は、本明細書において、その通常の科学的な意味で使用され、タンパク質に結合された単糖鎖またはオリゴ糖鎖を指す。したがって、グリカンとは、糖タンパク質の炭水化物部分を指す。グリカンは、1つの糖のC-1炭素を介してタンパク質に結合しており、追加の置換を伴わなくてもよいか（単糖）、またはそのヒドロキシル基のうちの1つもしくは複数でさらに置換されていてもよい（オリゴ糖）。天然に存在するグリカンは、典型的には、1～約10個の糖部分を含む。ただし、さらに長い糖鎖がタンパク質に結合されている場合、該糖鎖もグリカンと考えられる。糖タンパク質のグリカンは、単糖であり得る。グリカンは、オリゴ糖であってもよい。糖タンパク質のオリゴ糖鎖は、直鎖状または分岐状であり得る。オリゴ糖では、タンパク質に直接結合している糖は、コア糖と呼ばれる。オリゴ糖では、タンパク質に直接結合しておらず、少なくとも2つの他の糖に結合している糖は、内部糖と呼ばれる。オリゴ糖では、タンパク質に直接結合していないが、単一の他の糖に結合している、すなわち、その他のヒドロキシル基のうちの1つまたは複数に追加の糖置換基を有しない糖は、末端糖と呼ばれる。誤解を避けるために、糖タンパク質のオリゴ糖には複数の末端糖が存在し得るが、コア糖は1つだけである。グリカンは、O-結合グリカン、N-結合グリカンまたはC-結合グリカンであり得る。脱結合された（delinked）グリカンでは、単糖グリカンまたはオリゴ糖グリカンは、タンパク質のアミノ酸のC原子に結合している。
用語「グリコシルトランスフェラーゼ」は、糖タンパク質および糖脂質上に存在する複雑な炭水化物の合成に関与する酵素のスーパーファミリーを指す。
用語「N-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ」（GalNAc-T）は、タンパク質へのN-アセチル-D-ガラクトサミンの付加を触媒するN-アセチル-D-ガラクトサミントランスフェラーゼ酵素である。
本明細書において使用される用語「PEGユニット」は、式
Figure 2024501894000007
を有するポリエチレングリコールサブユニットを指す。いくつかの態様では、PEGユニットは、複数のPEGサブユニットを含む。
本明細書において使用される用語「アルキル」は、指定された数の炭素原子を有する飽和直鎖または分岐炭化水素基を表す。用語「C1～C6アルキル」または「C1～6アルキル」は、2～6個の炭素原子を含むメチル部分または直鎖もしくは分岐アルキル部分を指す。
例示的なアルキルには、限定されることなく、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、s-ブチル、t-ブチル、ペンチルおよびヘキシルが含まれる。
本明細書において使用される用語「ハロ（アルキル）」は、指定された数（n）の炭素原子と、1つまたは複数（最大2n＋1個）のハロゲン原子とを有する飽和直鎖または分岐炭化水素基を表す。「ハロ（C1～4アルキル）」基の例には、限定されることなく、-CF3（トリフルオロメチル）、-CCl3（トリクロロメチル）、1,1-ジフルオロエチル、2,2,2-トリフルオロエチル、およびヘキサフルオロイソプロピルが挙げられる。
本明細書において使用される用語「アルケニル」は、指定された数の炭素原子と、少なくとも1個から3個までの炭素-炭素二重結合とを有する直鎖または分岐炭化水素基を指す。例には、エテニルおよびプロペニルが挙げられる。
本明細書において使用される用語「アルキニル」は、指定された数の炭素原子と、少なくとも1個から3個までの炭素-炭素三重結合とを有する直鎖または分岐炭化水素基を指す。例には、エチニルおよびプロピニルが挙げられる。
本明細書において使用される用語「アルコキシ-」または「（アルキル）オキシ-」は、酸素連結原子を介して結合された、指定された数の炭素原子を有するアルキル部分を含む「アルキル-オキシ-」基を指す。例示的な「C1～4アルコキシ-」基または「（C1～4アルキル）オキシ-」基には、限定されることなく、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、s-ブトキシおよびt-ブトキシが含まれる。
本明細書において使用される用語「ハロ（アルキコキシ）-」は、酸素連結原子を介して結合された、指定された数（n）の炭素原子と、1つまたは複数（最大2n＋1個）のハロゲン原子とを有する飽和、直鎖または分岐炭化水素基を表す。例示的な「ハロ（C1～4アルコキシ）-」基には、限定されることなく、-OCHF2（ジフルオロメトキシ）、-OCF3（トリフルオロメトキシ）、-OCH2CF3（トリフルオロエトキシ）、および-OCH（CF3）2（ヘキサフルオロイソプロポキシ）が含まれる。
本明細書において使用される用語「アミノ」は、少なくとも1つの窒素原子を含む置換基を指す。具体的には、-NH2置換基、-NH（C1～4アルキル）置換基、アルキルアミノ置換基、または（C1～4アルキル）アミノ置換基もしくは（C1～4アルキル）（C1～4アルキル）アミノ置換基もしくはジアルキルアミノ置換基、アミド置換基、カルバミド置換基、尿素置換基およびスルファミド置換基が用語「アミノ」に含まれる。
本明細書において使用される用語「炭素環基または炭素環部分」は、環員が炭素原子である環式基または環式部分を指し、環式基または環式部分は、飽和、部分不飽和（非芳香族）または完全不飽和（芳香族）であってよい。
本明細書において使用される用語「シクロアルキル」は、環内に指定された数の炭素原子を含む非芳香族飽和炭化水素環基を指す。例えば、用語「C3～6シクロアルキル」は、3～6個の環炭素原子を有する環式基を指す。例示的な「C3～6シクロアルキル」基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが含まれる。
本明細書において使用される用語「アリール」は、環構造内にいかなるヘテロ原子も含まない、1つまたは複数の芳香環を有する「コンジュゲートされた」系または多環系を含む、芳香族性を有する基を指す。アリールという用語は、一価種および二価種の両方を含む。アリール基の例には、限定されることなく、フェニル、ビフェニル、ナフチルなどが挙げられる。いくつかの態様では、アリールはフェニルである。
本明細書において使用される用語「複素環基または複素環部分」は、環員として少なくとも2つの異なる元素の原子を有する環式基または環式部分を指し、その環式基または環式部分は、飽和、部分不飽和（非芳香族）または完全不飽和（芳香族）であってよい。
本明細書において使用される用語「ヘテロ原子」は、窒素原子、硫黄原子または酸素原子、例えば、窒素原子または酸素原子を指す。
本明細書において使用される用語「ヘテロシクロアルキル」は、3～10個の環原子を含み、酸素、硫黄および窒素から独立して選択される1つまたは複数（一般に1つまたは2つ）のヘテロ原子環員を含む非芳香族単環式または二環式基を指す。ヘテロシクロアルキル基の結合点は、任意の好適な炭素原子または窒素原子によるものであり得る。
本明細書において使用される用語「ヘテロアリール」は、窒素、酸素および硫黄から独立して選択される1～4個のヘテロ原子を含む、5～10個の環原子を含む芳香族単環式または二環式基を指し、基の少なくとも一部は芳香族である。例えば、この用語は、複素環部分に縮合したフェニル環、または炭素環部分に縮合したヘテロアリール環部分のいずれかを含む二環式複素環アリール基を包含する。ヘテロアリール基の結合点は、任意の好適な炭素原子または窒素原子によるものであり得る。
本明細書において使用される用語「ハロゲン」および「ハロ」は、ハロゲンラジカル、例えば、フルオロ置換基、クロロ置換基、ブロモ置換基またはヨード置換基を指す。
本明細書において使用される用語「オキソ」は、二重結合酸素部分を指し、例えば、炭素原子に直接結合している場合、カルボニル部分（C＝O）を形成する。
本明細書において使用される用語「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」は、ラジカル-OHを意味することを意図している。
本明細書において使用される用語「シアノ」は、ニトリル基、-C≡Nを指す。
本明細書において使用される用語「置換されていてもよい」は、基（アルキル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基またはヘテロアリール基など）もしくは環もしくは部分が非置換であり得るか、または基、環もしくは部分が1つもしくは複数の置換基によって置換され得ることを示す。基がいくつかの代替的な基から選択され得る場合、選択された基は同じであっても異なっていてもよい。好適な置換基には、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、ホスフェート、ホスホナト、ホスフィナト、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノおよびアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイルおよびウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、サルフェート、アルキルスルフィニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロシクリル、アルキルアリール、または芳香族部分もしくはヘテロ芳香族部分が含まれ得る。
本明細書において使用される用語「独立して」は、いくつかの可能な置換基から複数の置換基が選択される場合、それらの置換基が同じであっても異なっていてもよいことを意味する。
本明細書において使用される用語「薬学的に許容される」は、穏当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、または他の問題もしくは合併症を伴わずに、合理的な利益/リスク比に相応した、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに適した化合物、コンジュゲート、材料、組成物および剤形を指す。
本明細書において使用される場合、用語「治療する（treating）」または「治療する（treat）」は、疾患、病態または障害と戦うための患者の管理およびケアを表し、疾患、病態もしくは障害の症状もしくは合併症を緩和するための、または疾患、病態もしくは障害を排除するための、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩、多形もしくは溶媒和物の投与を含む。用語「治療する（treat）」は、インビトロまたは動物モデルにおける細胞の処置も含み得る。
本明細書において使用される場合、用語「予防する（preventing）」、「予防する（prevent）」または「から保護する（protecting against）」は、そのような疾患、病態または障害の症状または合併症の発症を低減または排除することを表す。
用語「対象」は、治療、観察または実験の対象であった動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。
用語「治療有効量」は、治療されている疾患、症候群、病態または障害の症状の緩和または部分的緩和を含む、研究者、獣医、医師または他の臨床医によって求められている、組織系、動物またはヒトにおける生物学的または医学的応答を誘発する、本開示のコンジュゲートを含む活性化合物または医薬品の量を指す。
治療「有効量」は、本明細書において定義されるように、そのような治療を必要とする患者に投与した場合に、有効に治療または予防するのに十分なコンジュゲートの量を意味することを意図する。そのような量に相当する所与のコンジュゲートの量は、特定のコンジュゲート（例えば、特定のコンジュゲートの効力（pICso）、効果（EC50）および生物学的半減期）、疾患状態およびその重症度、治療を必要とする患者の固有性（例えば、年齢、サイズおよび体重）などの要素に応じて変化するが、それでもなお、当業者によって常用的に決定され得る。同様に、コンジュゲートの治療期間および投与期間（投与量と投与量のタイミングとの間の期間、例えば、食事前/食事とともに/食事後）は、治療を必要とする哺乳動物の固有性（例えば体重）、特定のコンジュゲートおよびその特性（例えば薬物動態特性）、疾患または障害およびその重症度、ならびに使用される具体的な組成物および方法に従って変化するが、それでもなお、当業者によって決定され得る。
用語「組成物」は、特定の成分を治療有効量で含む生成物、および特定の量の特定の成分の組合せから直接的または間接的に生じる任意の生成物を指す。
本明細書において使用される場合、用語「薬学的に許容される賦形剤」は、一般に安全で、毒性がなく、生物学的にも他の点でも望ましくないものではない薬学的組成物を調製するのに有用な賦形剤を意味し、獣医用およびヒトの医薬用途に許容される賦形剤を含む。本明細書および特許請求の範囲において使用される「薬学的に許容される賦形剤」は、1つおよび複数のそのような賦形剤を含む。
いくつかの態様では、本開示のコンジュゲート、またはその鏡像異性体、ジアステレオマー、溶媒和物もしくは薬学的に許容される塩形態は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫およびB型肝炎などの疾患、症候群、病態または障害を治療または改善するのに有用である。
本明細書において使用される用語「本開示のコンジュゲート（conjugate（s）of the disclosure）」または「本開示のコンジュゲート（conjugate（s）of the present disclosure）」は、任意の形態、すなわち、任意の互変異性形態、任意の異性形態、任意の塩形態または非塩形態（例えば、遊離酸形態もしくは遊離塩基形態として、または塩、特にその薬学的に許容される塩として）およびその任意の物理的形態（例えば、非固体形態（例えば、液体形態または半固体形態）および固体形態（例えば、非晶質形態または結晶形態、特定の多形形態、水和物形態（例えば、一水和物、二水和物および半水和物）を含む溶媒和物形態を含む）、ならびに様々な形態の混合物の、本明細書において定義されるコンジュゲートを意味する。
したがって、任意の塩形態または非塩形態およびその任意の物理的形態、ならびに様々な形態の混合物の、本明細書において開示されるコンジュゲートが本開示に含まれる。そのようなものが本開示に含まれるが、任意の塩形態または非塩形態、およびその任意の物理的形態の、本開示のコンジュゲートは、様々なレベルの活性、様々なバイオアベイラビリティー、および製剤目的のための様々な取扱い特性を有し得ることが理解されるであろう。
本明細書において使用される場合、「A、BまたはCのうちの1つまたは複数」、「1つまたは複数のA、BまたはC」、「A、BおよびCのうちの1つまたは複数」、「1つまたは複数のA、BおよびC」、「A、BおよびCからなる群より選択される」、「A、BおよびCから選択される」などの表現は、区別なく使用され、別段の指定がない限り、A、Bおよび/またはCからなる群、すなわち、1つもしくは複数のA、1つもしくは複数のB、1つもしくは複数のC、またはそれらの任意の組合せからの選択をいずれも指す。
本明細書を通して、組成物が特定の成分を有するか、含む（including）か、または含む（comprising）ものとして記載される場合、組成物はまた、列挙された成分から本質的になるか、またはそれからなることが企図されることが理解される。同様に、方法またはプロセスが特定のプロセス工程を有するか、含む（including）か、または含む（comprising）ものとして記載される場合、プロセスはまた、列挙された処理工程から本質的になるか、またはそれからなる。さらに、本発明が動作可能なままである限り、特定の動作を実行するための工程順または順序は重要ではないことを理解されたい。さらに、2つ以上の工程または動作が同時に実行され得る。
本明細書において使用されるあらゆるパーセンテージおよび比は、別段の指定がない限り、重量による。本開示の他の特徴および利点は、様々な例から明らかである。提供される例は、本開示を実施するのに有用な様々な構成要素および方法を示している。例は、主張された開示を限定するものではない。本開示に基づいて、当業者は、本開示を実施するのに有用な他の構成要素および方法を識別し、使用することができる。
本明細書において引用されるすべての刊行物および特許文献は、あたかもそのような刊行物または文献の各々が参照により本明細書に組み入れられることが具体的かつ個別に示されているかのように、参照により本明細書に組み入れられる。刊行物および特許文献の引用は、関連する先行技術であることの承認として意図されておらず、その内容または日付に関するいかなる承認も構成しない。本明細書によって本発明を説明してきたが、当業者であれば、本発明は様々な態様で実施され得、以下の前述の説明および例は例示を目的としたものであり、添付の特許請求の範囲を限定するものではないことを認識するであろう。
2つ以上の抗体に関連して本明細書において使用される場合、用語「と競合する」または「と交差競合する」は、2つ以上の抗体が、実施例5または8に記載されるアッセイにおいてB7-H4への結合について競合する、例えば、B7-H4結合について競合することを示す。抗体が1つまたは複数の他の抗体と25％以上競合する場合、抗体は、好ましくは実施例5および8のアッセイを使用して決定される場合、1つまたは複数の他の抗体がB7-H4に結合するのを「遮断する」かまたは「交差遮断し」、25％～74％は「部分遮断」を表し、75％～400％は「完全遮断」を表す。抗体のいくつかの対について、実施例5または8のアッセイにおける競合または遮断は、一方の抗体がプレート上にコーティングされ、他方が競合するために使用される場合にのみ観察され、その逆は観察されない。文脈によって特に定義または否定されない限り、本明細書において使用される場合、用語「と競合する」、「と交差競合する」、「遮断する」または「交差遮断する」は、抗体のそのような対を網羅することも意図している。
抗体-薬物コンジュゲートおよびスキャフォールド
いくつかの局面では、本開示は、B7-H4抗体-薬物コンジュゲートを提供する。いくつかの態様では、B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、部位特異性を有する。いくつかの態様では、B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、部位特異性を有しない。いくつかの態様では、B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、生分解性および生体適合性であり、ならびに/または高い薬物負荷量と、標的抗原への強い結合とを示す。
いくつかの態様では、本開示は、B7-H4ターゲティング部分（例えば抗体）と、1つまたは複数のリンカー-薬物部分とを含むB7-H4抗体-薬物コンジュゲートであって、ターゲティング部分が、1つまたは複数のリンカー-薬物部分に共有結合しているB7-H4抗体-薬物コンジュゲートを提供する。
いくつかの態様では、B7-H4ターゲティング部分は、抗体、システイン操作抗体または修飾抗体である。
いくつかの態様では、B7-H4ターゲティング部分は、B7-H4抗体、システイン操作B7-H4抗体または修飾B7-H4抗体である。
いくつかの態様では、B7-H4ターゲティング部分はB7-H4抗体である。
いくつかの態様では、B7-H4ターゲティング部分はシステイン操作B7-H4抗体である。
いくつかの態様では、B7-H4ターゲティング部分は修飾B7-H4抗体である。
いくつかの局面では、本開示は、B7-H4ターゲティング部分（例えば抗体）と、ターゲティング部分に共有結合した1つまたは複数のリンカー-薬物部分とを含むB7-H4抗体-薬物コンジュゲートであって、
各リンカー-薬物部分が、
各薬物ユニットについて放出可能アセンブリユニットを介してターゲティング部分を1つまたは複数の薬物ユニット（例えば、1つまたは複数の治療剤（D））に接続し、親水性基を各リンカー-薬物部分の薬物ユニットに接続する、多官能性リンカー
を含み、
放出可能アセンブリユニットが、ターゲティング部分によって標的とされた標的部位に近接して遊離薬物を放出することができ、かつ
多官能性リンカーが、ターゲティング部分と親水性基との間にペプチド部分を含み、ペプチド部分が、少なくとも2つのアミノ酸を含む、B7-H4抗体-薬物コンジュゲートを提供する。
いくつかの局面では、本開示は、B7-H4ターゲティング部分（例えば抗体）と、ターゲティング部分に共有結合した1つまたは複数のリンカー-薬物部分とを含むB7-H4抗体-薬物コンジュゲートであって、
各リンカー-薬物部分が、
各薬物ユニットについて放出可能アセンブリユニットを介してB7-H4ターゲティング部分を1つまたは複数の薬物ユニット（例えば、1つまたは複数の治療剤（D））に接続し、親水性基を各リンカー-薬物部分の薬物ユニットに接続する、多官能性リンカー
を含み、かつ
放出可能アセンブリユニットが、ターゲティング部分によって標的とされた標的部位に近接して遊離薬物を放出することができる、B7-H4抗体-薬物コンジュゲートを提供する。
いくつかの局面では、本開示は、式（I'）のB7-H4抗体-薬物コンジュゲートを提供する:
Figure 2024501894000008
式中、
a2は、1～3の整数であり、
a3は、0～1の整数であり、
a4は、1～約5の整数であり、
a5は、1～3の整数であり、
d13は、1～約12の整数であり、
ANTIBODYは、B7-H4抗体、システイン操作B7-H4抗体または修飾B7-H4抗体であり、
LP'は、修飾抗体をMPに接続する二価リンカー部分であり、その対応する一価部分LPは、抗体の反応性部分と共有結合を形成することができる官能基WPを含み、
MPはストレッチャーユニットであり、
LMは、結合、または三価リンカーもしくは四価リンカーであり、LMが結合である場合、a2は1であるか、LMが三価リンカーである場合、a2は2であるか、またはLMが四価リンカーである場合、a2は3であり、
L3は、存在する場合、カルボニル含有部分であり、
MAは、少なくとも2つのアミノ酸を含むペプチド部分を含み、
T1は、親水性基を含み、T1とMAとの間の
Figure 2024501894000009
は、T1とMAとの直接的または間接的な結合を示し、
Dの各存在は、独立して、分子量約5kDa以下を有する治療剤であり、
LDの各存在は、独立して、DをMAに接続する二価リンカー部分であり、少なくとも1つの切断可能な結合を含み、その結果、結合が切断されると、Dは、その意図された治療効果のために活性形態で放出される。
いくつかの態様では、Dは、細胞傷害性薬物部分またはSTINGアゴニスト薬物部分である。
いくつかの態様では、Dは細胞傷害性薬物部分である。
いくつかの態様では、DはSTINGアゴニスト薬物部分である。
いくつかの態様では、抗体-薬物コンジュゲートは、式（II'）または（III'）のものである:
Figure 2024501894000010
いくつかの局面では、本開示は、B7-H4ターゲティング部分（例えば抗体）と、B7-H4ターゲティング部分に共有結合した1つまたは複数のリンカー部分とを含むB7-H4抗体スキャフォールドを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、式（II）～（V）のいずれか1つのB7-H4抗体スキャフォールドを提供する:
Figure 2024501894000011
式中、
a2は、1～3の整数であり、
a3は、存在する場合、0～1の整数であり、
a4は、1～約5の整数であり、
a5は、1～3の整数であり、
d13は、1～約12の整数であり、
ANTIBODYは、B7-H4抗体、システイン操作B7-H4抗体または修飾B7-H4抗体であり、
LP'は、抗体をMPに接続する二価リンカー部分であり、その対応する一価部分LPは、抗体の官能基と共有結合を形成することができる官能基WPを含み、
MPはストレッチャーユニットであり、
LMは、存在する場合、結合、または三価リンカーもしくは四価リンカーであり、LMが結合である場合、a2は1であるか、LMが三価リンカーである場合、a2は2であるか、またはLMが四価リンカーである場合、a2は3であり、
L3は、存在する場合、カルボニル含有部分であり、
MAは、少なくとも2つのアミノ酸を含むペプチド部分を含み、
T1は、親水性基を含み、T1とMAとの間の
Figure 2024501894000012
は、T1とMAとの直接的または間接的な結合を示し、
WDの各存在は、存在する場合、独立して、分子量約5kDa以下を有する治療剤（「D」）の官能基と共有結合を形成することができる官能基であり、
LDの各存在は、独立して、WDまたはDをMAに接続する二価リンカー部分であり、LDは、少なくとも1つの切断可能な結合を含み、その結果、結合が切断されると、Dは、その意図された治療効果のために活性形態で放出される。
本開示のコンジュゲートおよびスキャフォールドは、適用可能な場合、以下の特徴のうちの1つまたは複数を含むことができる。
いくつかの態様では、d13は、2～12、2～10、2～8、2～6、2～4、1～2、4～10、4～8、4～6、6～12、6～10、6～8、8～14、8～12または8～10の整数である。
いくつかの態様では、d13は、1～2の範囲の整数である（例えば、d13は、1または2である）。いくつかの態様では、d13は、2～4の範囲の整数である（例えば、d13は、2、3または4である）。いくつかの態様では、d13は、4～6の範囲の整数である（例えば、d13は、4、5または6である）。いくつかの態様では、d13は、6～8の範囲の整数である（例えば、d13は、6、7または8である）。いくつかの態様では、d13は、6～10の範囲の整数である（例えば、d13は、6、7、8、9または10である）。いくつかの態様では、d13は6である。いくつかの態様では、d13は7である。
いくつかの態様では、d13は8である。いくつかの態様では、d13は、1または2である。いくつかの態様では、d13は1である。いくつかの態様では、d13は2である。
いくつかの態様では、L3は存在しない。
いくつかの態様では、各L3は、存在する場合、独立して、＊-C1～12アルキル-C（O）-＊＊、＊-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊、または＊-C1～12アルキル-C（O）-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊であり、式中、＊は、存在する場合には別のL3、またはLMへの結合を示し、＊＊は、存在する場合には別のL3、またはMAへの結合を示す。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は、＊-CH2CH2-C（O）-＊＊であるか、または＊-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊であり、式中、＊は、存在する場合には別のL3、またはLMへの結合を示し、＊＊は、存在する場合には別のL3、またはMAへの結合を示す。
いくつかの態様では、a3は2以上であり、少なくとも1つのL3は＊-C1～12アルキル-C（O）-＊＊であり、少なくとも1つのL3は＊-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、各L3は、＊-CH2CH2-C（O）-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊または＊NH-CH2CH2-C（O）-CH2CH2-C（O）-＊＊であり、式中、＊は、LMへの結合を示し、＊＊は、MAへの結合を示す。
いくつかの態様では、a4は1である。いくつかの態様では、a4は2である。いくつかの態様では、a4は3である。
B7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体とのコンジュゲーションのための変数LPおよびLP'
いくつかの態様では、LP'は二価リンカー部分である。いくつかの態様では、LP'は、B7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体のシステインをMPに接続する二価リンカー部分である。いくつかの態様では、LP'は、B7-H4抗体のシステインをMPに接続する二価リンカー部分である。いくつかの態様では、LP'は、システイン操作B7-H4抗体をMPに接続する二価リンカー部分である。
いくつかの態様では、LPは、対応する一価部分である。いくつかの態様では、LPは、B7-H4抗体のシステイン、またはシステイン操作B7-H4抗体のシステインに接続されていない場合、LP'の対応する一価部分である。いくつかの態様では、LPは、B7-H4抗体のシステインに接続されていない場合、LP'の対応する一価部分である。いくつかの態様では、LPは、システイン操作B7-H4抗体のシステインに接続されていない場合、LP'の対応する一価部分である。
いくつかの態様では、各LPは、B7-H4抗体のシステイン、またはシステイン操作B7-H4抗体のシステインに接続されていない場合、末端基WPを含む。
いくつかの態様では、LPは末端基WPを含み、各WPは、独立して、以下である:
Figure 2024501894000013
式中、
環Bは、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、
R1Kは脱離基であり、
R1Aは硫黄保護基であり、;
R2Jは、水素部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロ脂肪族部分または炭素環部分であり、
R3JはC1～6アルキルであり、Z1、Z2、Z3およびZ7の各々は、独立して、炭素原子または窒素原子である。
いくつかの態様では、各R1Kは、ハロまたはRC（O）O-であり、式中、Rは、水素部分、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、炭素環部分またはヘテロシクロアルキル部分である。
いくつかの態様では、各R1Aは、独立して、
Figure 2024501894000014
であり、式中、rは、1または2であり、Rs1、Rs2およびRs3の各々は、独立して、水素部分、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、炭素環部分またはヘテロシクロアルキル部分である。
いくつかの態様では、WPは
Figure 2024501894000015
である。いくつかの態様では、WPは、
Figure 2024501894000016
である。
いくつかの態様では、WPが
Figure 2024501894000017
である場合、LP'は、
Figure 2024501894000018
を含む。
修飾B7-H4抗体へのコンジュゲーションのための変数LPおよびLP’
いくつかの態様では、LP’は、LPの官能基（例えばWP）と修飾抗体の反応性部分（例えば、＊-GlcNAc-S''-A''の修飾GlcNAc部分）との間の反応によって形成される。
いくつかの態様では、LP’は、LPの官能基（例えばWP）と修飾抗体の反応性部分（例えば、＊-GlcNAc-S''-A''の修飾GlcNAc部分）との間に形成されたトリアゾリルを含む。
いくつかの態様では、各LPは、修飾B7-H4抗体に接続されていない場合、末端基WPを含む。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
Figure 2024501894000019
であり、
式中、
R8jは、水素、ハロゲン、C1～24アルキル（例えばC1～6アルキル）、C6～24シクロアルキル、6～24員ヘテロシクロアルキル、C6～24アリール、6～24員ヘテロアリール、-（C1～24アルキル）-（C6～24シクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロシクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（C6～24アリール）、または-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロアリール）であり、
C1～24アルキルは、1つまたは複数のO、NまたはSによって中断されていてもよく、C1～24アルキル（例えばC1～6アルキル）、C6～24シクロアルキル、6～24員ヘテロシクロアルキル、C6～24アリール、6～24員ヘテロアリール、-（C1～24アルキル）-（C6～24シクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロシクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（C6～24アリール）、または-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロアリール）は、1つまたは複数のC1～C12アルキル、C2～C12アルケニル、C2～C12アルキニル、C3～C12シクロアルキル、-O（C1～C12アルキル）、-O（C2～C12アルケニル）、-O（C2～C12アルキニル）、-O（C3～C12シクロアルキル）、ハロゲン、アミノ、オキソまたはシリルによって置換されていてもよく、
C1～C12アルキル、C2～C12アルケニル、C2～C12アルキニル、C3～C12シクロアルキル、-O（C1～C12アルキル）、-O（C2～C12アルケニル）、-O（C2～C12アルキニル）、-O（C3～C12シクロアルキル）は、置換されていてもよく、C1～C12アルキル、C3～C12シクロアルキル、-O（C1～C12アルキル）または-O（C3～C12シクロアルキル）は、1つまたは複数のO、NまたはSによって中断されていてもよく、
R10jは、水素、ハロゲン、C1～24アルキル（例えばC1～6アルキル）、C6～24シクロアルキル、6～24員ヘテロシクロアルキル、C6～24アリール、6～24員ヘテロアリール、-（C1～24アルキル）-（C6～24シクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロシクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（C6～24アリール）、または-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロアリール）であり、
C1～24アルキル（例えばC1～6アルキル）、C6～24シクロアルキル、6～24員ヘテロシクロアルキル、C6～24アリール、6～24員ヘテロアリール、-（C1～24アルキル）-（C6～24シクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロシクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（C6～24アリール）、または-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロアリール）は、置換されていてもよく、
各R11jは、独立して、水素、C1～24アルキル（例えばC1～6アルキル）、C6～24シクロアルキル、6～24員ヘテロシクロアルキル、C6～24アリール、6～24員ヘテロアリール、-（C1～24アルキル）-（C6～24シクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロシクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（C6～24アリール）、または-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロアリール）であり、
各R12jは、独立して、ハロゲン、-OR10j、-NO2、-CN、-S（O）2R10j、C1～24アルキル（例えばC1～6アルキル）、C6～24シクロアルキル、6～24員ヘテロシクロアルキル、C6～24アリール、6～24員ヘテロアリール、-（C1～24アルキル）-（C6～24シクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロシクロアルキル）、-（C1～24アルキル）-（C6～24アリール）、または-（C1～24アルキル）-（6～24員ヘテロアリール）であり、
u2は、0～8の範囲の整数である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
Figure 2024501894000020
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
Figure 2024501894000021
である。
いくつかの態様では、各R11jは水素である。いくつかの態様では、u2は0である。いくつかの態様では、R8jは水素である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
Figure 2024501894000022
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
Figure 2024501894000023
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのR12jは、電子求引基、例えば、ハメット置換基定数σが正値である基である。いくつかの態様では、好適な電子求引基は、当技術分野において公知である。いくつかの態様では、少なくとも1つのR12jは、ハロゲン（例えば、FまたはCl）、-OR10j、-NO2、-CN、-S（O）2R7j、置換C1～C12アルキルまたは置換C6～C12アリールであり、置換基のうちの少なくとも1つは電子求引基である。いくつかの態様では、少なくとも1つのR12jは、フッ素化C1～C12アルキル（例えば-CF3）、フッ素化C5～C12アリール（例えば-C6F5）またはハロアルキル化C5～C12アリール（例えば-［3,5-（CF3）2（C6H3）］）である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
Figure 2024501894000024
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
Figure 2024501894000025
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
Figure 2024501894000026
である。
いくつかの態様では、各R11jは水素である。いくつかの態様では、u2は0である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWPは
Figure 2024501894000027
である。
いくつかの態様では、各WPは、存在する場合、独立して、
Figure 2024501894000028
である。
いくつかの態様では、各WPは
Figure 2024501894000029
である。
いくつかの態様では、各LP’は、B7-H4修飾抗体に接続している場合、結合基WP’を含む。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWP’は
Figure 2024501894000030
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWP’は
Figure 2024501894000031
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWP’は
Figure 2024501894000032
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWP’は
Figure 2024501894000033
である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWP’は
Figure 2024501894000034
である。
ストレッチャーユニットMP
いくつかの態様では、MPは
Figure 2024501894000035
である;
式中、＊は、LP'またはLPへの結合を示し、＊＊は、LMまたはMAへの結合を示し、
各R66は、独立して、NHまたはOであり、
各R3は、独立して、-C（O）-NR5-または-NR5-C（O）-であり、
各R5は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、C3～8シクロアルキル、COOH、またはCOO-C1～6アルキルであり、
R4は、結合または-NR5-（CR20R21）-C（O）-であり、
各R20およびR21は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、ヒドロキシル化C6～10アリール、ポリヒドロキシル化C6～10アリール、5～12員複素環、C3～8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、または天然アミノ酸もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
各R7は、独立して、-O-、-NR8、-（C1～C10アルキル）-、-（C3～C8シクロアルキル）-、-アリール-、-O-（C1～C8アルキル）-、-（C1～C10アルキル）-アリール-、-アリール-（C1～C10アルキル）-、-（C1～C10アルキル）-（C3～C8シクロアルキル）-、-（C3～C8シクロアルキル）-（C1～C10アルキル）-、-（3～8員ヘテロシクロアルキル）-、-（5～8員ヘテロアリール）-、-（C1～C10アルキル）-（3～8員ヘテロシクロアルキル）-、-（C1～C10アルキル）-（5～8員ヘテロアリール）-、-（3～8員ヘテロシクロアルキル）-（C1～C10アルキル）-、-（5～8員ヘテロアリール）-（C1～C10アルキル）-、-O-C（O）-（CH2CH2O）r-（CH2）2-、-（CH2CH2O）r-、または-（CH2CH2O）r-（CH2）2-であり、
各b1は、独立して、0～6の範囲の整数であり、
各e1は、独立して、0～8の範囲の整数であり、
各f1は、独立して、1～6の範囲の整数であり、
各f2は、独立して、1～12の範囲の整数であり、
各g2は、独立して、1～4の範囲の整数である。
いくつかの態様では、b1は0である。いくつかの態様では、b1は1である。
いくつかの態様では、各f1は、独立して、1または2である。いくつかの態様では、f1は1である。いくつかの態様では、f1は2である。
いくつかの態様では、g2は、1または2である。いくつかの態様では、g2は1である。いくつかの態様では、g2は2である。
いくつかの態様では、f2は、4～6の範囲の整数である。
いくつかの態様では、R7は、-（C1～C10アルキル）-、-O-（C1～C8アルキル）-、-（CH2CH2O）r-、-O-C（O）-（CH2CH2O）r-（CH2）2-、または-（CH2CH2O）r-（CH2）2-である。
いくつかの態様では、R7は、-O-、-NH、-N（CH3）、-CH2-、-（CH2）2-、-（CH2）5-、-O-C（O）-（CH2CH2O）6-（CH2）2-、-（CH2CH2O）-（CH2）2-、-（CH2CH2O）2-（CH2）2-、-（CH2CH2O）4-（CH2）2-、または-（CH2CH2O）6-（CH2）2-である。
MPの態様について、＊は、LP'またはLPへの結合を示し、＊＊は、LMまたはMAへの結合を示すことが理解される。
いくつかの態様では、MPは
Figure 2024501894000036
である。
いくつかの態様では、MPは
Figure 2024501894000037
である。
いくつかの態様では、MPは
Figure 2024501894000038
である。
いくつかの態様では、MPは
Figure 2024501894000039
である。
いくつかの態様では、MPは
Figure 2024501894000040
である。
いくつかの態様では、MPは
Figure 2024501894000041
である。
いくつかの態様では、MPは
Figure 2024501894000042
である。
いくつかの態様では、MPは
Figure 2024501894000043
である。
変数LM
いくつかの態様では、LMは、結合（例えば、二価リンカー、または2つのアームを有する）または多アームリンカー（例えば、三価もしくは四価、または3つもしくは4つのアームを有する）であり、各アームは、同じであっても異なっていてもよい。
いくつかの態様では、LMは、結合（例えば、二価リンカー、または2つのアームを有する）または多アームリンカー（例えば、四価、または4つのアームを有する、3つのアームを有する三価）であり、各アームは、同じであっても異なっていてもよい。
本明細書において使用される用語「アーム」は、（1）存在する場合にはMPに結合しているか、または（2）存在する場合にはL3に結合しているか、もしくはL3が存在しない場合にはMAに結合しているLMの部分を指すことが理解される。
いくつかの態様では、LMは、結合（例えば、二価リンカー、または2つのアームを有する）である。
いくつかの態様では、LMは多アームリンカー（例えば、三価もしくは四価、または3つもしくは4つのアームを有する）であり、各アームは、同じであっても異なっていてもよい。いくつかの態様では、LMは多アームリンカー（例えば、三価もしくは四価、または3つもしくは4つのアームを有する）である。
いくつかの態様では、LMは、3つのアームを有する三価リンカーであり、各アームは、同じであっても異なっていてもよい。いくつかの態様では、LMは、3つのアームを有する三価リンカーであり、各アームは、同じであってよい。いくつかの態様では、LMは、3つのアームを有する三価リンカーであり、各アームは、異なっていてよい。
いくつかの態様では、LMは、4つのアームを有する四価リンカーであり、各アームは、同じであっても異なっていてもよい。いくつかの態様では、LMは、4つのアームを有する四価リンカーであり、各アームは、同じであってよい。いくつかの態様では、LMは、4つのアームを有する四価リンカーであり、各アームは、異なっていてよい。
いくつかの態様では、a2は2であり、LMは
Figure 2024501894000044
であり、
式中、
Figure 2024501894000045
は、存在する場合にはMPへの結合、またはMPが存在しない場合にはLPもしくはLP'への結合を示し、
Y1は、存在する場合にはL3への結合、またはL3が存在しない場合にはMAへの結合を示し、
R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素、置換されていてもよいC1～6アルキル、置換されていてもよいC2～6アルケニル、置換されていてもよいC2～6アルキニル、置換されていてもよいC3～19分岐アルキル、置換されていてもよいC3～8シクロアルキル、置換されていてもよいC6～10アリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいC1～6ヘテロアルキル、C1～6アルコキシ、アリールオキシ、C1～6ヘテロアルコキシ、C2～6アルカノイル、置換されていてもよいアリールカルボニル、C2～6アルコキシカルボニル、C2～6アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、置換されていてもよいC2～6アルカノイル、置換されていてもよいC2～6アルカノイルオキシ、置換されていてもよいC2～6置換アルカノイルオキシ、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8の各々は、存在する場合、独立して0～10の範囲の整数であり、
d1、d2、d3、d4、d5およびd7の各々は、存在する場合、独立して0～10の範囲の整数である。
いくつかの態様では、a2は2であり、LMは
Figure 2024501894000046
であり、
式中、
Figure 2024501894000047
は、MPへの結合を示し、
Y1は、存在する場合にはL3への結合、またはL3が存在しない場合にはMAへの結合を示し、
R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素、置換されていてもよいC1～6アルキル、置換されていてもよいC2～6アルケニル、置換されていてもよいC2～6アルキニル、置換されていてもよいC3～19分岐アルキル、置換されていてもよいC3～8シクロアルキル、置換されていてもよいC6～10アリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいC1～6ヘテロアルキル、C1～6アルコキシ、アリールオキシ、C1～6ヘテロアルコキシ、C2～6アルカノイル、置換されていてもよいアリールカルボニル、C2～6アルコキシカルボニル、C2～6アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、置換されていてもよいC2～6アルカノイル、置換されていてもよいC2～6アルカノイルオキシ、置換されていてもよいC2～6置換アルカノイルオキシ、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8の各々は、存在する場合、独立して0～10の範囲の整数であり、
d1、d2、d3、d4、d5およびd7の各々は、存在する場合、独立して0～10の範囲の整数である。
いくつかの態様では、a2は2であり、LMは
Figure 2024501894000048
である。
いくつかの態様では、a2は2であり、LMは
Figure 2024501894000049
である。
いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、存在する場合、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10である。いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、それぞれ独立して、0または1である。いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10である。いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、それぞれ独立して、0、1または2である。いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、それぞれ独立して、0である。いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、それぞれ独立して、1である。いくつかの態様では、c1、c2、c3、c4、c5、c7およびc8は、それぞれ独立して、2である。
いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、存在する場合、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、0または1である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、1、2、3または4である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、1である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、2である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、3である。いくつかの態様では、d1、d2、d3、d4、d5およびd7は、それぞれ独立して、4である。
いくつかの態様では、R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、C3～8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1～6アルキルである。いくつかの態様では、R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素またはC1～6アルキルである。いくつかの態様では、R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素である。いくつかの態様では、R2およびR’2は、それぞれ独立して、C1～6アルキルである。
いくつかの態様では、LMは
Figure 2024501894000050
である。
いくつかの態様では、a2は3であり、LMは
Figure 2024501894000051
であり、
式中、
Figure 2024501894000052
は、存在する場合にはMPへの結合、またはMPが存在しない場合にはLPもしくはLP'への結合を示し、
Y1は、存在する場合にはL3への結合、またはL3が存在しない場合にはMAへの結合を示し、
R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素、置換されていてもよいC1～6アルキル、置換されていてもよいC2～6アルケニル、置換されていてもよいC2～6アルキニル、置換されていてもよいC3～19分岐アルキル、置換されていてもよいC3～8シクロアルキル、置換されていてもよいC6～10アリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいC1～6ヘテロアルキル、C1～6アルコキシ、アリールオキシ、C1～6ヘテロアルコキシ、C2～6アルカノイル、置換されていてもよいアリールカルボニル、C2～6アルコキシカルボニル、C2～6アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、置換されていてもよいC2～6アルカノイル、置換されていてもよいC2～6アルカノイルオキシ、置換されていてもよいC2～6置換アルカノイルオキシ、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
c1、c2、c3、c4、c5、c6、c7およびc8の各々は、独立して0～10の範囲の整数であり、
d1、d2、d3、d4、d5、d6、d7およびd8の各々は、独立して0～10の範囲の整数であり、
e1、e2、e3、e4、e5、e6、e7およびe8の各々は、独立して0～10の範囲の整数である。
いくつかの態様では、a2は3であり、LMは
Figure 2024501894000053
Figure 2024501894000054
であり、
式中、
Figure 2024501894000055
は、MPへの結合を示し、
Y1は、存在する場合にはL3への結合、またはL3が存在しない場合にはMAへの結合を示し、
R2およびR’2は、それぞれ独立して、水素、置換されていてもよいC1～6アルキル、置換されていてもよいC2～6アルケニル、置換されていてもよいC2～6アルキニル、置換されていてもよいC3～19分岐アルキル、置換されていてもよいC3～8シクロアルキル、置換されていてもよいC6～10アリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいC1～6ヘテロアルキル、C1～6アルコキシ、アリールオキシ、C1～6ヘテロアルコキシ、C2～6アルカノイル、置換されていてもよいアリールカルボニル、C2～6アルコキシカルボニル、C2～6アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、置換されていてもよいC2～6アルカノイル、置換されていてもよいC2～6アルカノイルオキシ、置換されていてもよいC2～6置換アルカノイルオキシ、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
c1、c2、c3、c4、c5、c6、c7およびc8の各々は、独立して0～10の範囲の整数であり、
d1、d2、d3、d4、d5、d6、d7およびd8の各々は、独立して0～10の範囲の整数であり、
e1、e2、e3、e4、e5、e6、e7およびe8の各々は、独立して0～10の範囲の整数である。
いくつかの態様では、a2は3であり、LMは
Figure 2024501894000056
である。
いくつかの態様では、a2は3であり、LMは
Figure 2024501894000057
である。
いくつかの態様では、-LM-（L3）a2-は
Figure 2024501894000058
である。
アミノ酸ユニットが2つの結合部位（すなわち、末端薬物ユニット）を有するいくつかの態様では、上に示す結合部位のうちの1つは、例えば、H、OHまたはC1～3非置換アルキル基によって置換されていてもよい。
いくつかの態様では、LMが多アームリンカーであり、ストレッチャーユニットMPにまだ接続されていない場合、WMは、LMの末端であり、WMの各存在は、独立して、水素、保護基、脱離基、または共有結合を形成することによってLMをMPに接続することができる官能基である。
いくつかの態様では、WMはアミン保護基である。いくつかの態様では、WMはBOCである。
いくつかの態様では、WMはアミン保護基であり、LMは
Figure 2024501894000059
である。
いくつかの態様では、WMはアミン保護基であり、LMは
Figure 2024501894000060
である。
いくつかの態様では、WMはBOCであり、LMは
Figure 2024501894000061
である。
いくつかの態様では、WMは、アミン基を含む。いくつかの態様では、WMは、-C（O）-（CH2）w-NH2を含み、式中、wは、1～6の整数である。いくつかの態様では、WMは-C（O）-CH2-NH2である。
いくつかの態様では、WMは-C（O）-CH2-NH2であり、LMは
Figure 2024501894000062
である。
いくつかの態様では、WMは-C（O）-CH2-NH2であり、LMは
Figure 2024501894000063
である。
いくつかの態様では、WMはHである。
変数L3
いくつかの態様では、各L3は存在しない。いくつかの態様では、各L3はカルボニル含有部分である。
L3の態様について、＊は、存在する場合には別のL3、またはLMへの結合を示し、＊＊は、存在する場合には別のL3、またはMAへの結合を示すことが理解される。
いくつかの態様では、各L3は、存在する場合、独立して、＊-C1～12アルキル-C（O）-＊＊、＊-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊、または＊-C1～12アルキル-C（O）-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は＊-C1～12アルキル-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は＊-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、L3は＊-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、（L3）a3は＊-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は＊-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は＊-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、L3は＊-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、（L3）a3は＊-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は＊-C1～12アルキル-C（O）-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのL3は＊-CH2CH2-C（O）-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、L3は＊-CH2CH2-C（O）-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、（L3）a3は＊-CH2CH2-C（O）-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、a3は2以上であり、少なくとも1つのL3は＊-C1～12アルキル-C（O）-＊＊であり、少なくとも1つのL3は＊-NH-C1～12アルキル-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、（L3）a3は＊-CH2CH2-C（O）-NH-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
いくつかの態様では、（L3）a3は＊NH-CH2CH2-C（O）-CH2CH2-C（O）-＊＊である。
変数MA
いくつかの態様では、MAは、1つまたは複数の薬物および1つまたは複数の親水性基をLPまたはLP’に接続することができるリンカー部分である。いくつかの態様では、MAは、少なくとも2つのアミノ酸のペプチド部分を含む。いくつかの態様では、アミノ酸（単数）は、本明細書において「AA」と呼ばれ、アミノ酸（複数）は、本明細書において「AA’s」と呼ばれる。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、-LD-Dユニットと共有結合を形成することができ、複数の薬物の結合を可能にする部分である。いくつかの態様では、ペプチド部分は、単一のAAユニットを含むか、または2つ以上のAAユニット（例えば、2～10、2～6、または2、3、4、5もしくは6）を有し、AAユニットは、それぞれ独立して、天然アミノ酸もしくは非天然アミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、ジアミン、ポリアミンまたはそれらの組合せである。いくつかの態様では、必要な数の結合を有するために、AAユニットのうちの少なくとも1つは、-LD-Dユニットの結合を提供する官能化側鎖を有する。いくつかの態様では、例示的な官能化AAユニット（例えば、アミノ酸、アミノアルコールまたはアミノアルデヒド）には、例えば、アジド官能化AAユニットまたはアルキン官能化AAユニット（例えば、アジド基またはアルキン基を有するように修飾されたアミノ酸、アミノアルコールまたはアミノアルデヒド）が含まれる。いくつかの態様では、アジド基またはアルキン基は、クリックケミストリーを使用する結合のためのものである。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、2～12個のAAユニットを有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、2～10個のAAユニットを有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、2～6個のAAユニットを有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、2、3、4、5または6個のAAユニットを有する。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、2個のAAユニットを有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、3個のAAユニットを有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、4個のAAユニットを有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、5個のAAユニットを有する。いくつかの態様では、ペプチド部分は、6個のAAユニットを有する。
いくつかの態様では、ペプチド部分内の結合、またはコンジュゲート、その中間体もしくはスキャフォールドの他の成分との結合は、例えば、アミノ、カルボキシ、または他の官能基を介したものであり得る。いくつかの態様では、ペプチド部分の各アミノ酸は、独立して、チオール含有アミノ酸のD異性体またはL異性体であり得る。いくつかの態様では、ペプチド部分の各アミノ酸は、独立して、チオール含有アミノ酸のD異性体であり得る。いくつかの態様では、ペプチド部分の各アミノ酸は、独立して、チオール含有アミノ酸のL異性体であり得る。いくつかの態様では、チオール含有アミノ酸は、例えば、システイン、ホモシステインまたはペニシラミンであり得る。
いくつかの態様では、ペプチド部分を含む各アミノ酸は、独立して、以下のアミノ酸、すなわち、アラニン（β-アラニンを含む）、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、システイン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、メチオニン、セリン、チロシン、トレオニン、トリプトファン、プロリン、オルニチン、ペニシラミン、アミノアルキン酸、アミノアルカン二酸、ヘテロシクロ-カルボン酸、シトルリン、スタチン、ジアミノアルカン酸、その立体異性体、またはその誘導体のL異性体またはD異性体であり得る。
いくつかの態様では、ペプチド部分を含む各アミノ酸は、独立して、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン、オルニチン、リジン、セリン、トレオニン、グリシン、グルタミン、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セレノシステイン、プロリン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、バリン、アラニンまたはその立体異性体である。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、モノペプチド、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドを含む。いくつかの態様では、ペプチド部分は、ペンタペプチドを含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、少なくとも約5個のアミノ酸（例えば、5、6、7、8、9または10個のアミノ酸）を含む。いくつかの態様では、ペプチド部分は、最大約10個のアミノ酸を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分を独立して含む各アミノ酸は、グリシン、セリン、グルタミン酸、リジン、アスパラギン酸およびシステインである。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、少なくとも4個のグリシンおよび少なくとも1個のセリン、例えば、（グリシン）4およびセリンを含み、セリンは、ペプチド鎖に沿った任意の位置、例えば、（セリン）-（グリシン）4;（グリシン）-（セリン）-（グリシン）3;（グリシン）2-（セリン）-（グリシン）2;（グリシン）3-（セリン）-（グリシン）;または（グリシン）4-（セリン）などにある。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）4-（セリン）または（セリン）-（グリシン）4を含む。いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）4-（セリン）を含む。いくつかの態様では、ペプチド部分は、（セリン）-（グリシン）4を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、少なくとも4個のグリシンおよび少なくとも1個のグルタミン酸、例えば、（グリシン）4およびグルタミン酸を含み、グルタミン酸は、ペプチド鎖に沿った任意の位置にある。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グルタミン酸）-（グリシン）4または（グリシン）4-（グルタミン酸）を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）4-（セリン）を含み、セリンは、ペプチド鎖に沿った任意の位置にある。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）4-（セリン）-（グルタミン酸）を含み、セリンは、ペプチド鎖に沿った任意の位置にある。いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）4-（セリン）-（グルタミン酸）を含み、セリンは、ペプチド鎖に沿った任意の位置にある。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）1～4-（セリン）を含み、
ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（セリン）-（グリシン）1～4を含み、
ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
ペプチド部分の態様について、＊は、存在する場合にはL3への、またはL3が存在しない場合にはLMへの結合を示すことが理解される。いくつかの態様では、＊＊は、存在する場合にはT1への、またはT1が存在しない場合には-OHへの結合を示す。いくつかの態様では、＊＊＊は、存在する場合にはLDへの、またはLDが存在しない場合には水素への結合を示す。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000064
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）-（セリン）を含み、
ペプチド部分は、グリシンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）-（セリン）を含み、
ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000065
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）4-（セリン）を含み、
ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000066
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（セリン）-（グリシン）4を含み、
ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000067
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000068
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）1～4-（セリン）を含み、
ペプチド部分は、β-アラニンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000069
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）4-（セリン）を含み、
ペプチド部分は、β-アラニンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、セリンを介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000070
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）1～4-（グルタミン酸）を含み、
ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）1～4-（グルタミン酸）を含み、
ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000071
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）-（グルタミン酸）を含み、
ペプチド部分は、グリシンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000072
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グリシン）4-（グルタミン酸）を含み、
ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000073
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グルタミン酸）-（グリシン）1～4を含み、
ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000074
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000075
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グルタミン酸）-（グリシン）4を含み、
ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000076
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（グルタミン酸）-（グリシン）を含み、
ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グリシンのうちの1つを介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000077
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）1～4-（グルタミン酸）を含み、
ペプチド部分は、β-アラニンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000078
を含む。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）4-（グルタミン酸）を含み、
ペプチド部分は、β-アラニンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000079
を含む。
MAの態様について、＊は、存在する場合にはL3への結合、またはL3が存在しない場合にはLMへの結合を示し、＊＊は、T1への結合を示し、＊＊＊は、LDへの結合を示すことが理解される。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、（β-アラニン）-（グリシン）-（グルタミン酸）を含み、
ペプチド部分は、β-アラニンを介して、存在する場合にはL3に、またはL3が存在しない場合にはLMに結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはT1に結合しており、ペプチド部分は、グルタミン酸を介して、存在する場合にはLDに結合している。
いくつかの態様では、ペプチド部分は、
Figure 2024501894000080
を含む。
変数LD
いくつかの態様では、各LDは、独立して、DをMAに接続する二価リンカー部分である。いくつかの態様では、各LDは、少なくとも1つの切断可能な結合を含み、その結果、結合が切断されると、Dはその意図された治療効果のために活性形態で放出される。
いくつかの態様では、LDは、1つの切断可能な結合を含む。いくつかの態様では、LDは、複数の切断可能な部位または結合を含む。
各LDは、Dに接続される前に、独立して、一価部分LD'に対応することが理解される。
いくつかの態様では、LD'は、切断可能な結合を形成することができる官能基を含む。切断可能な結合を形成することができる官能基には、例えば、ジスルフィド結合を形成するためのスルフヒドリル基、ヒドラゾン結合を形成するためのアルデヒド基、ケトン基またはヒドラジン基、オキシム結合を形成するためのヒドロキシルアミン基、ペプチド結合を形成するためのカルボキシル基またはアミノ基、エステル結合を形成するためのカルボキシル基またはヒドロキシ基、およびグリコシド結合を形成するための糖が含まれ得る。
いくつかの態様では、各LDは、ジスルフィド交換によって切断可能なジスルフィド結合、酸性pHで切断可能な、酸に不安定な結合、および/またはヒドロラーゼによって切断可能な結合を含む。いくつかの態様では、LDは、カルバメート結合（すなわち、Rが水素またはアルキルなどである-O-C（O）-NR-）を含む。
いくつかの態様では、LD中の切断可能な結合の構造および配列は、結合が標的部位に存在する酵素の作用によって切断されるようなものであり得る。いくつかの態様では、切断可能な結合は、他の機構によって切断可能であり得る。
いくつかの態様では、LD中の切断可能な結合の構造および配列は、結合が標的部位に存在する酵素の作用によって切断されるようなものであり得る。いくつかの態様では、切断可能な結合は、他の機構によって切断可能であり得る。
いくつかの態様では、切断可能な結合は、腫瘍関連プロテアーゼを含む1つまたは複数の酵素によって酵素的に切断されて、薬物ユニットまたはDを遊離させることができ、本開示のコンジュゲートまたはその中間体もしくはスキャフォールドは、放出時にインビボでプロトン化されて、薬物ユニットまたはDを提供する。
いくつかの態様では、各LDは、独立して、
Figure 2024501894000081
であり、式中、
LEは、存在する場合、-NH-［（CH2CH2O）p-（CH2）0～2］q-C（O）-、-NH-（C1～C6アルキル）-O-C（O）-、または-NH-［（CH2CH2O）p-（CH2）0～2］q-C（O）-NH-（C1～C6アルキル）-O-C（O）-であり、式中、pは、約1～約20の範囲の整数であり、qは、約1～約10の範囲の整数であり、
各Wは、独立して、天然アミノ酸ユニットまたは非天然アミノ酸ユニットであり、
wは、約0～約12の範囲の整数であり、
＊＊＊は、MAへの結合を示し、
＊＊＊＊は、Dへの結合を示す。
いくつかの態様では、各LDは、独立して、
Figure 2024501894000082
である。
いくつかの態様では、各LDは、独立して、
Figure 2024501894000083
である。
いくつかの態様では、各LDは、独立して、
Figure 2024501894000084
である。
いくつかの態様では、LEは、少なくとも1つのPEGユニットを含む。
いくつかの態様では、PEGユニットは、少なくとも1個のサブユニット、少なくとも2個のサブユニット、少なくとも3個のサブユニット、少なくとも4個のサブユニット、少なくとも5個のサブユニットまたは少なくとも6個のサブユニットを含む。いくつかの態様では、PEGユニットは、少なくとも4個のサブユニット、少なくとも3個のサブユニット、少なくとも2個のサブユニットまたは少なくとも1個のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEGユニットは、少なくとも1個のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEGユニットは、少なくとも2個のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、pは、約1～約15、約1～約10、約1～約9、約1～約8、約1～約7、約1～約6、または約1～約5の範囲の整数である。
いくつかの態様では、pは、約1～約6の範囲の整数である。いくつかの態様では、pは、約1～約4の範囲の整数である。いくつかの態様では、pは、約1～約2の範囲の整数である。
いくつかの態様では、pは2である。
いくつかの態様では、qは、約1～約15、約1～約10、約1～約9、約1～約8、約1～約7、約1～約6、または約1～約5の範囲の整数である。
いくつかの態様では、qは、1、2、3、4または5である。いくつかの態様では、qは2である。
いくつかの態様では、LEは、存在する場合、-NH-（CH2CH2O）1～4-（CH2）2-C（O）-である。いくつかの態様では、LEは、存在する場合、-NH-（CH2CH2O）2-（CH2）2-C（O）-である。いくつかの態様では、LEは、存在する場合、-NH-（CH2CH2O）3-（CH2）0～2-C（O）-である。いくつかの態様では、LEは、存在する場合、-NH-（CH2CH2O）3-（CH2）-C（O）-である。いくつかの態様では、LEは、存在する場合、-NH-（CH2CH2O）3-（CH2）2-C（O）-である。いくつかの態様では、LEは、存在する場合、-NH-（CH2CH2O）-（CH2）0～2-C（O）-である。いくつかの態様では、LEは、存在する場合、-NH-CH2CH2O-C（O）-である。いくつかの態様では、LEは、存在する場合、-NH-（C1～C6アルキル）-O-C（O）-である。いくつかの態様では、LEは、存在する場合、-NH-CH2-CH（CH3）-O-C（O）-である。いくつかの態様では、LEは、存在する場合、-NH-［（CH2CH2O）1～4-（CH2）2-C（O）-NH-（C1～C6アルキル）-O-C（O）-である。いくつかの態様では、LEは、存在する場合、-NH-CH2CH2O-（CH2）2-C（O）-NH-（CH2）2-O-C（O）-である。
いくつかの態様では、wは、約1～約12の範囲の整数（例えば、1～6、もしくは1～4、もしくは1～3、または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11もしくは12）である。
いくつかの態様では、wは、0、1、2、3、4または5である。いくつかの態様では、wは、1、2、3、4または5である。
いくつかの態様では、wは1である。いくつかの態様では、wは2である。いくつかの態様では、wは3である。
いくつかの態様では、各Wは、独立して、天然アミノ酸もしくは非天然アミノ酸および/またはD異性体もしくはL異性体である。
いくつかの態様では、各Wは、独立して、天然または非天然のアルファアミノ酸、ベータアミノ酸またはガンマアミノ酸である。
いくつかの態様では、少なくとも1つのWは天然アミノ酸である。いくつかの態様では、少なくとも1つのWは非天然アミノ酸である。
いくつかの態様では、Wwは、天然アミノ酸を含まない。いくつかの態様では、Wwは、非天然アミノ酸を含まない。
いくつかの態様では、Wwは、非天然アミノ酸に結合された天然アミノ酸を含む。
いくつかの態様では、Wwは、天然アミノ酸のD-異性体に結合された天然アミノ酸を含む。
いくつかの態様では、Wwは、ジペプチド、例えば、-Val-Cit-、-Phe-Lys-、-Val-Ala-、またはGlu-Alaである。
いくつかの態様では、Wwは、モノペプチドユニット、ジペプチドユニット、トリペプチドユニット、テトラペプチドユニット、ペンタペプチドユニット、ヘキサペプチドユニット、ヘプタペプチドユニット、オクタペプチドユニット、ノナペプチドユニット、デカペプチドユニット、ウンデカペプチドユニットまたはドデカペプチドユニットである。
いくつかの態様では、Wwは、Dに直接コンジュゲートされるペプチド（例えば、1～12アミノ酸のペプチド）である。いくつかの態様では、ペプチドは、単一のアミノ酸である。いくつかの態様では、ペプチドはジペプチドである。いくつかの態様では、ペプチドはトリペプチドである。
いくつかの態様では、Ww中の各アミノ酸は、アラニン、β-アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、セリン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、バリン、システイン、メチオニン、セレノシステイン、オルニチン、ペニシラミン、アミノアルカン酸、アミノアルキン酸、アミノアルカン二酸、アミノ安息香酸、アミノ-ヘテロシクロ-アルカン酸、ヘテロシクロ-カルボン酸、シトルリン、スタチン、ジアミノアルカン酸およびその誘導体から独立して選択される。
いくつかの態様では、Ww中の各アミノ酸は、アラニン、β-アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、セリン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、バリン、シトルリンおよびその誘導体から独立して選択される。
いくつかの態様では、Ww中の各アミノ酸は、タンパク質原性アミノ酸および非タンパク質原性アミノ酸から独立して選択される。
いくつかの態様では、Ww中の各アミノ酸は、以下のアミノ酸、すなわち、アラニン、β-アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、システイン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、メチオニン、セリン、チロシン、トレオニン、トリプトファン、プロリン、オルニチン、ペニシラミン、アミノアルキン酸、アミノアルカン二酸、ヘテロシクロ-カルボン酸、シトルリン、スタチン、ジアミノアルカン酸、バリン、シトルリンおよびその誘導体のL異性体またはD異性体から独立して選択される。
いくつかの態様では、Ww中の各アミノ酸は、独立して、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン、オルニチン、リジン、セリン、トレオニン、グリシン、グルタミン、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セレノシステイン、プロリン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、バリン、シトルリンまたはアラニンである。
いくつかの態様では、Ww中の各アミノ酸は、以下のアミノ酸、すなわち、アラニン、β-アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、セリン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、トリプトファン、シトルリンおよびバリンのL-異性体から独立して選択される。
いくつかの態様では、Ww中の各アミノ酸は、以下のアミノ酸、すなわち、アラニン、β-アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、セリン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、トリプトファン、シトルリンおよびバリンのD-異性体から独立して選択される。
いくつかの態様では、Ww中の各アミノ酸は、アラニン、β-アラニン、グリシン、グルタミン、グルタミン酸、イソグルタミン酸、イソアスパラギン酸、バリンシトルリンまたはアスパラギン酸である。
いくつかの態様では、Wwは、β-アラニンを含む。いくつかの態様では、Wwは、（β-アラニン）-（アラニン）を含む。いくつかの態様では、Wwは、（β-アラニン）と、任意でグルタミン酸、グルタミン、イソグルタミン酸、アスパラギン酸、イソアスパラギン酸、バリン、（バリン）-（アラニン）、（アラニン）-（アラニン）、または（バリン）-（シトルリン）とを含む。
いくつかの態様では、Wwは、（グルタミン酸）-（アラニン）を含む。
いくつかの態様では、Wwは、（β-アラニン）-（グルタミン）を含む。
いくつかの態様では、Wwは、（β-アラニン）-（グルタミン））-（アラニン）を含む。
いくつかの態様では、Wwは、グルタミン酸と、任意でアラニン、グリシン、イソグルタミン酸、アスパラギン酸、イソアスパラギン酸、バリン、（バリン）-（アラニン）、（アラニン）-（アラニン）、または（バリン）-（シトルリン）とを含む。
いくつかの態様では、Wwは、2,3-ジアミノプロパン酸を含む。いくつかの態様では、Wwは、（R）-2,3-ジアミノプロパン酸を含む。いくつかの態様では、Wwは、グルタミン酸を含む。いくつかの態様では、Wwは、（グルタミン酸）-（アラニン）を含む。いくつかの態様では、Wwは、（グルタミン酸）-（グリシン）-（アラニン）を含む。
いくつかの態様では、Wwは、L-グルタミン酸、D-グルタミン酸、（L-グルタミン酸）-（L-アラニン）、（L-グルタミン酸）-（D-アラニン）、（D-グルタミン酸）-（L-アラニン）、（D-グルタミン酸）-（D-アラニン）、（L-グルタミン酸）-（グリシン）-（L-アラニン）、D-グルタミン酸）-（グリシン）-（D-アラニン）、（L-グルタミン酸）-（グリシン）-（D-アラニン）、または（D-グルタミン酸）-（グリシン）-（L-アラニン）を含む。
いくつかの態様では、Wwは、1つまたは複数のアミノ酸に加えてカルバメート結合を含む。
いくつかの態様では、LD（例えばWw）は、酵素的切断（例えば、特定の酵素による）に対して選択的である。いくつかの態様では、特定の酵素は、腫瘍関連プロテアーゼである。
いくつかの態様では、LD（例えばWw）は、その切断がカテプシンB、CおよびD、またはプラスミンプロテアーゼによって触媒される結合を含む。
いくつかの態様では、LDは、糖切断部位を含む。
いくつかの態様では、LDは、酸素グリコシド結合を介して自己犠牲基（self-immolative group）に結合した糖部分（Su）を含む。
いくつかの態様では、「自己犠牲基」は、3つの離隔した化学部分（すなわち、糖部分（グリコシド結合を介して）、薬物ユニット（直接的または間接的）、およびMAが存在する場合にはMA（直接的または間接的）、またはMAが存在しない場合にはA1を一緒に共有結合することができる三官能性化学部分であり得る。
いくつかの態様では、グリコシド結合を標的部位で切断して、薬物の放出をもたらす自己犠牲反応シーケンスを開始することができる。
いくつかの態様では、各LDは、存在する場合、独立して、以下である:
Figure 2024501894000085
Figure 2024501894000086
Figure 2024501894000087
式中、＊＊＊は、MAへの結合を示し、＊＊＊＊は、Dへの結合を示す。
いくつかの態様では、各LDは、存在する場合、独立して、以下である:
Figure 2024501894000088
式中、
＊＊＊は、MAへの結合を示し、
＊＊＊＊は、Dへの結合を示す。
いくつかの態様では、各LDは、存在する場合、独立して、以下である:
Figure 2024501894000089
治療剤、薬物ユニットまたは変数D
いくつかの態様では、治療剤は細胞傷害性薬物部分である。いくつかの態様では、治療剤はSTINGアゴニスト薬物部分である。
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分は小分子である。
いくつかの態様では、治療剤は、分子量約5kDa以下を有する（例えば、分子量約4kDa以下、約3kDa以下、約1.5kDa以下または約1kDa以下を有する）。
いくつかの態様では、治療剤は、約1nM未満のIC50を有する。いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分またはSTINGアゴニスト薬物部分は、1nM未満のIC50を有する。
いくつかの態様では、治療剤は、約1nM超のIC50を有する、（例えば、細胞傷害性薬物部分またはSTINGアゴニスト薬物部分は、約1～約50nMのIC50を有する）。いくつかの態様では、治療剤は、約1nM超のIC50を有する。いくつかの態様では、治療剤は、1nM超のIC50を有する、（例えば、細胞傷害性薬物部分またはSTINGアゴニスト薬物部分は、1～50nMのIC50を有する）。いくつかの態様では、治療剤は、1nM超のIC50を有する。
いくつかの態様では、約1nM超のIC50を有する治療剤（例えば、「効力の低い薬物」）は、当技術分野において認識されているコンジュゲーション技術を使用した抗体とのコンジュゲーションには適していない。理論に拘束されることを望むものではないが、そのような治療剤（すなわち、細胞傷害剤薬物部分またはSTINGアゴニスト薬物部分）は、コンジュゲートの薬物動態学的特性および物理化学的特性を低下させることなく、当技術分野において認識されている技術を使用して十分なコピーの薬物（すなわち、8を超える）をコンジュゲートすることができないことから、従来の技術を使用したターゲティング抗体-薬物コンジュゲートに使用するには不十分な効力を有する。いくつかの態様では、本明細書において記載されるコンジュゲーション戦略を使用して、これらの効力の低い薬物の十分に高い負荷量を達成し、それによって、望ましい薬物動態学的特性および物理化学的特性を維持しながら、治療剤の高い負荷量をもたらすことができる。いくつかの態様では、本開示は、抗体と、スキャフォールドと、少なくとも8つの治療剤（すなわち、細胞傷害剤薬物部分またはSTINGアゴニスト薬物部分）とを含む抗体-薬物コンジュゲートであって、治療剤が約1nM超のIC50を有する抗体-薬物コンジュゲートに関する。
細胞傷害性薬物部分（変数D）
いくつかの態様では、治療剤は細胞傷害性薬物部分である。いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分は、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第2018/0154018号に記載されているように、（a）オーリスタチン化合物、（b）カリケアマイシン化合物、（c）デュオカルマイシン化合物（d）SN38、（e）ピロロベンゾジアゼピン、（f）ビンカ化合物、（g）チューブリシン化合物、（h）非天然カンプトテシン化合物、（i）メイタンシノイド化合物、（j）DNA結合薬、（k）キナーゼ阻害剤、（l）MEK阻害剤、（m）KSP阻害剤、（n）トポイソメラーゼ阻害剤、（o）DNAアルキル化薬、（p）RNAポリメラーゼ、（q）PARP阻害剤、（r）NAMPT阻害剤、（s）トポイソメラーゼ阻害剤、（t）タンパク質合成阻害剤、（u）DNA結合薬、（v）DNAインターカレーション薬または（w）免疫調節化合物の誘導体である。
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分はオーリスタチンF-ヒドロキシプロピルアミド-L-アラニンである。
いくつかの態様では、オーリスタチンは、式（X）の化合物である:
Figure 2024501894000090
式中、
R31およびR32の各々は、独立して、水素またはC1～8アルキルであり、R31およびR32のうちの最大1つはHであり、
R33は、水素、C1～8アルキル、C3～8炭素環、C6～10アリール、C1～8アルキル-C6～10アリール、X1-（C3～8炭素環）、C3～8複素環、またはX1-（C3～8複素環）であり、
R34は、水素、C1～8アルキル、C3～8炭素環、C6～10アリール、X1-C6～10アリール、X1-（C3～8炭素環）、C3～8複素環、またはX1-（C3～8複素環）であり、
R35は、水素またはメチルであり、
または、R34およびR35は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、式-（CR55R41）b-を有する炭素環式環を形成し、式中、R55およびR41の各々は、独立して、水素またはC1～8アルキルであり、bは3～7の整数であり、
R36は、水素またはC1～8アルキルであり、
R37は、水素、C1～8アルキル、C3～8炭素環、C6～10アリール、-X1-C6～10アリール、-X1-（C3～8炭素環）、C3～8複素環、または-X1-（C3～8複素環）であり、
各R38は、独立して、水素、OH、C1～8アルキル、C3～8炭素環、またはO-（C1～8アルキル）であり、
R53は、
Figure 2024501894000091
またはR54であり、
R39は、水素、C1～8アルキル、C6～10アリール、-X1-C6～10アリール、C3～8炭素環、C3～8複素環、-X1-C3～8複素環、-C1～8アルキレン-NH2、または（CH2）2SCH3であり、
各X1は、独立して、C1～10アルキレンまたはC3～10シクロアルキレンであり、
R44は、水素またはC1～8アルキルであり、
R45は、X3-R42またはNH-R19であり、
X3は、OまたはSであり、
R19は、水素、OH、アミノ基、C1～8アルキルアミノ、または-［C（R20R21）］a-R22であり、
R42は、アミノ基、C1～6アルキルアミノ、または-［C（R20R21）］a-R22であり、
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、ヒドロキシル化C6～10アリール、ポリヒドロキシル化C6～10アリール、5～12員複素環、C3～8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、または天然アミノ酸もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
R22は、-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C（O）（CH2）c-C（H）（R23）-N（H）（R23）、-R82-C（O）（CH2）d-（O CH2-CH2）f-N（H）（R23）、または-R82-（C（O）-CH（X2）-NH）d-R77であり、
各R23は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、C3～8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
X2は、天然アミノ酸または非天然アミノ酸の側鎖であり、
R77は、水素またはX2であり、NR77は、窒素含有環状化合物を形成し、
R82は、-NR23または酸素であり、
R54は、-C（R56）2--C（R56）2-C6～10アリール、-C（R56）2--C（R56）2-C3～8複素環、またはC（R56）2--C（R56）2-C3～8炭素環であり、
R56は、独立して、H、OH、C1～8アルキル、C3～8炭素環、-O-C1～8アルキル、-O-C（O）-R29、または-O-R23-O-C1～6アルキル-NH2であり、
R29は、アミノ基、5～12員ヘテロシクロアルキル、-R28-C1～6アルキル-R22、R28-C5～12ヘテロシクロアルキル-C1～6アルキル-R22、-［C（R20R21）］a-R22、もしくは-R28-C1～6アルキル-C6～12アリール-C1～6アルキル-R22であるか、またはR29は本明細書において定義されるR47であり、
R28は存在しないか、NR23または酸素であり、
aは、1～6の整数であり、cは、0～3の整数であり、dは、1～3の整数であり、fは、1～12の整数である。
いくつかの態様では、式（X）のオーリスタチン化合物において:
R39は、ベンジルまたは
Figure 2024501894000092
であり、R44は水素である。
いくつかの態様では、オーリスタチンは、式（Xa）の化合物:
Figure 2024501894000093
であり、
式中、
R33～R38、およびR44は、本明細書において定義される通りであり、
R31およびR32の一方は、水素またはC1～8アルキルであり、他方は
Figure 2024501894000094
であり、
式中、
R83は、水素またはCH3であり、
R84は、C1～6アルキルまたはC6～10アリールであり、
各R12’は、独立して、ハロゲン、-C1～8アルキル、-O-C1～8アルキル、ニトロ、またはシアノであり、
hは、0～4の整数であり、
uは、整数0または1であり、
R53は、
Figure 2024501894000095
またはR54であり、
R39は、水素、C1～8アルキル、C6～10アリール、-X1-C6～10アリール、C3～8炭素環、C3～8複素環、-X1-C3～8複素環、-C1～8アルキレン-NH2、または（CH2）2SCH3であり、
各X1は、独立して、C1～10アルキレンまたはC3～10シクロアルキレンであり、
R45は、X3-R42またはNH-R19であり、
X3は、OまたはSであり、
R19は、水素、OH、アミノ基、C1～8アルキルアミノ、または-［C（R20R21）］a-R22であり、
R42は、水素、アミノ基、C1～6アルキルアミノ、または-［C（R20R21）］a-R22であり、
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、ヒドロキシル化C6～10アリール、ポリヒドロキシル化C6～10アリール、5～12員複素環、C3～8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、または天然アミノ酸もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
R22は、-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C（O）（CH2）c-C（H）（R23）-N（H）（R23）、-R82-C（O）（CH2）d-（O-CH2-CH2）f-N（H）（R23）、または-R82-（C（O）-CH（X2）-NH）d-R77であり、
各R23は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、C3～8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
X2は、天然アミノ酸または非天然アミノ酸の側鎖であり、
R77は、水素またはX2であり、NR77は、窒素含有環状化合物を形成し、
R82は、-NR23または酸素であり、
R54は、-C（R56）2--C（R56）2-C6～10アリール、-C（R56）2--C（R56）2-C3～8複素環、または-C（R56）2--C（R56）2-C3～8炭素環であり、
R56は、独立して、水素、OH、C1～8アルキル、C3～8炭素環、-O-C1～8アルキル、-O-C（O）-R29、または-O-R23-O-C1～6アルキル-NH2であり、
R29は、アミノ基、5～12員ヘテロシクロアルキル、-R28-C1～6アルキル-R22、R28-C5～12ヘテロシクロアルキル-C1～6アルキル-R22、-［C（R20R21）］a-R22、もしくは-R28-C1～6アルキル-C6～12アリール-C1～6アルキル-R22であるか、またはR29は、本明細書において定義されるR47であり、
R28は存在しないか、NR23または酸素であり、
aは、1～6の整数であり、cは、0～3の整数であり、dは、1～3の整数であり、fは、1～12の整数である。
いくつかの態様では、式（Xa）のオーリスタチン化合物は、式（XIa）または式（XIb）の化合物:
Figure 2024501894000096
であり、
式中、
R92は、
Figure 2024501894000097
であり、
R83は、水素またはCH3である。
いくつかの態様では、式（X）のオーリスタチンは、式（XI）、式（XII）または式（XIII）の化合物であり、
ここで、式（XI）の化合物は
Figure 2024501894000098
であり、
式中、R31は、水素またはCH3であり、R42は、-CH3、または以下の構造のいずれか1つ:
Figure 2024501894000099
であり、
式中、
aは、1～6の整数であり、cは、0～3の整数であり、gは、2～6の整数であり;
ここで、式（XII）の化合物は
Figure 2024501894000100
であり、
式中、R31は、水素またはCH3であり、R40は、水素、-OH、-NH2、または以下の構造のいずれか:
Figure 2024501894000101
Figure 2024501894000102
であり、
式中、
aは、1～6の整数であり、gは、2～6の整数であり、cは、0～3の整数であり;
ここで、式（XIII）の化合物は
Figure 2024501894000103
であり、
式中、
R31は、水素またはCH3であり、
R29は、アミノ基、5～12員ヘテロシクロアルキル、-R28-C1～6アルキル-R22、R28-C5～12ヘテロシクロアルキル-C1～6アルキル-R22、-R28-［C（R20R21）］a-R22、もしくは-R28-C1～6アルキル-C6～12アリール-C1～6アルキル-R22であるか、またはR29は、本明細書において定義されるR47であり、
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、ヒドロキシル化C6～10アリール、ポリヒドロキシル化C6～10アリール、5～12員複素環、C3～8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3～8シクロアルキル、または天然アミノ酸もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり、
R22は、-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C（O）（CH2）c-C（H）（R23）-N（H）（R23）、-R82-C（O）（CH2）d-（O CH2-CH2）f-N（H）（R23）、または-R82-（C（O）-CH（X2）-NH）d-R77であり、
各R23は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、C3～8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
X2は、天然アミノ酸または非天然アミノ酸の側鎖であり、
R77は、水素またはX2であり、NR77は、窒素含有環状化合物を形成し、
R82は、-NR23または酸素であり、
R28は存在しないか、NR23または酸素であり、
aは、1～6の整数であり、cは、0～3の整数であり、dは、1～3の整数であり、fは、1～12の整数である。
式（XII）のいくつかの態様では、R40は
Figure 2024501894000104
である。
いくつかの態様では、式（XII）の化合物は、式（XIIa）、（XIIb）、（XIIc）、（XIId）、（XIIe）、（XIIf）、（XIIg）または（XIIh）の化合物:
Figure 2024501894000105
Figure 2024501894000106
Figure 2024501894000107
である。
式（XIII）の化合物のいくつかの態様では、R29は、-NH2、5員ヘテロシクロアルキル、-R28-C1～6アルキル-R22、R28-C5～12ヘテロシクロアルキル-C1～6アルキル-R22、もしくは-R28-C1～6アルキル-C6～12アリール-C1～6アルキル-R22であるか、またはR29は、本明細書において定義されるR47であり、
R28は、存在しないか、NR23または酸素であり、
R22は、-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C（O）（CH2）c-C（H）（R23）-N（H）（R23）、-R82-C（O）（CH2）d-（O CH2-CH2）f-N（H）（R23）、または-R82-（C（O）-CH（X2）-NH）d-R77であり、
各R23は、独立して、水素、C1～6アルキル、C6～10アリール、C3～8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1～6アルキルであり、
X2は、天然アミノ酸または非天然アミノ酸の側鎖であり、
R77は、水素またはX2であり、NR77は、窒素含有環状化合物を形成し、
R82は、-NR23または酸素であり、
cは、0～3の整数であり、dは、1～3の整数であり、fは、1～12の整数である。
いくつかの態様では、R29は:
Figure 2024501894000108
Figure 2024501894000109
であり、
式中、
aは、1～6の整数であり、cは、0～3の整数であり、gは、2～6の整数である。
Figure 2024501894000110
式中、R42は、H、-CH3（m/z＝760）、
Figure 2024501894000111
であり;
Figure 2024501894000112
式中、R40は、H、
Figure 2024501894000113
であり;または
Figure 2024501894000114
式中、-C（O）-R29は、
Figure 2024501894000115
である。
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分（D）は、以下である:
Figure 2024501894000116
STINGアゴニスト薬物部分（変数D）
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分（D）は、式（A）の化合物:
Figure 2024501894000117
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
Y1、Y2、Z1およびZ2は、それぞれ独立して、O、S、CまたはNであり、
X1、X2、W1およびW2は、それぞれ独立して、CまたはNであり、
X3およびX4は、それぞれ独立して、SまたはNRfであり、
X5は、NまたはCRA2であり、
X6は、NまたはCRA1であり、
X7は、NまたはCR4であり、
R3およびR5は、それぞれ独立して、-CON（Rd）（Rf）、-CH2N（Rd）（Rf）、-N（Rd）（Rf）、-N（Rd）CO（Rf）、-CH2N（Rd）CO（Rf）であるか、またはR3およびR5のうちの一方は、-CON（Rd）（Rf）、-CH2N（Rd）（Rf）、-N（Rd）（Rf）、-N（Rd）CO（Rf）、もしくは-CH2N（Rd）CO（Rf）であり、R3およびR5の他方は、H、-COOH、もしくは-CO2（RC）であり、
RcはC1～4アルキルであり、
RA2、RA1およびR4は、それぞれ独立して、H、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アミノ（C1～4アルキル）-、置換されていてもよい（C1～6アルキル）、または置換されていてもよい（C1～6アルキル）オキシ-であり、該置換されていてもよい（C1～6アルキル）、または置換されていてもよい（C1～6アルキル）オキシ-のC1～6アルキルは、ヒドロキシル、C1～4アルコキシル、-N（Re）（Rf）、-CO2（Rf）、-CON（Re）（Rf）、および-COOHを含む群よりそれぞれ独立して選択される1～4個の置換基によって置換されていてもよく、
各Rdは、独立して、H、ヒドロキシまたはC1～4アルキルであり、
Reは、H、（C1～4アルキル）、-CO（C1～4アルキル）、-OCO（C1～4アルキル）、および-CO2（C1～4アルキル）から選択され、
各Rfは、独立して、H、ヒドロキシ、または（C1～4アルキル）であり、
R14およびRC2は、それぞれ独立して、存在しないか、またはC1～4アルキルであり、C1～4アルキルは、ハロゲン、-ORc、-NRcRd、-CO2Rc、-CONRcRd、-SO2NRcRd、および-OCONRcRdから選択される置換基によって置換されていてもよく、
R16およびRC1は、それぞれ独立して、存在しないか、HまたはC1～4アルキルであり、
R15、R17、R18またはR19は、それぞれ独立して、存在しないか、HまたはC1～4アルキルであり、C1～4アルキルは、ハロゲン、-ORc、-NRcRd、-CO2Rc、-CONRcRd、-SO2NRcRd、および-OCONRcRdから選択される置換基によって置換されていてもよく、
（i）RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは存在し、RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは、RA2および/もしくはRA1の少なくとも1つの官能基を介して、LCが存在する場合にはLCに、もしくはLCが存在しない場合にはA1に、直接的もしくは間接的に接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介して、LCが存在する場合にはLCに、もしくはLCが存在しない場合にはA1に、直接的もしくは間接的に接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分（D）は、式（A'）の化合物:
Figure 2024501894000118
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、Y1、Y2、Z1、Z2、X1、X2、W1、W2、X3、X4、X5、X6、R3、R5、Rc、RA1、RA2、Rd、Re、Rf、R14、RC2、R16、RC1、R15、R17、R18およびR19は、式（A）で定義される通りである。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-a）の化合物:
Figure 2024501894000119
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
Y1、Y2、Z1、Z2、X1、X2、W1、W2、X3、X4、R3、R5、Rc、Rd、Re、Rf、R14、RC2、R16、RC1、R15、R17、R18およびR19は、式（A）で定義される通りであり、
X5はCRA2であり、
RA2は、ハロゲン、ヒドロキシル、置換されていてもよい（C1～6アルキル）、置換されている（C1～6アルキル）オキシ-、置換されていてもよい（C1～6アルキル）アミノ-、または置換されていてもよい（C1～6アルキル）（C1～4アルキル）アミノ-であり、該置換されていてもよい（C1～6アルキル）、または置換されている（C1～6アルキル）オキシ-のC1～6アルキルは、ヒドロキシル、C1～4アルコキシル、-N（Re）（Rf）、-CO2（Rf）、-CON（Re）（Rf）、および-COOHを含む群よりそれぞれ独立して選択される1～4個の置換基によって置換されていてもよく、
（i）RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-b）の化合物:
Figure 2024501894000120
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
Y1、Y2、Z1、Z2、X1、X2、W1、W2、X4、X5、X6、R3、R5、Rc、RA2、RA1、Rd、Re、Rf、R14、RC2、R16、RC1、R15、R17、R18およびR19は、式（A）で定義される通りであり、
（i）RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは存在し、RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは、RA2および/もしくはRA1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-c）の化合物:
Figure 2024501894000121
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
Y2、Z2、X2、W2、X3、X4、X5、X6、R3、R5、Rc、RA2、RA1、Rd、Re、Rf、R14、RC2、R16、RC1、R15、R17、R18およびR19は、式（A）で定義される通りであり、
W1、X1、Y1およびZ1のうちの1つはNであり、追加のW1、X1、Y1およびZ1は、O、SまたはCであり、
（i）RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは存在し、RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは、RA2および/もしくはRA1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-d）の化合物:
Figure 2024501894000122
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
Y1、Y2、Z1、Z2、X1、X2、W1、W2、X3、R3、R5、Rc、Rd、Re、Rf、R14、RA2、RC2、R16、RC1、R15、R17、R18およびR19は、式（A）で定義される通りであり、
X5はCRA2であり、
（i）RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-e）の化合物:
Figure 2024501894000123
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
Y1、Y2、Z1、Z2、X1、X2、X3、W1、W2、RA1、R3、R5、Rc、Rd、Re、Rf、R14、RC2、R16、RC1、R15、R17、R18およびR19は、式（A）で定義される通りであり、
X6はCRA1であり、
（i）RA1は、RA1の官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-f）の化合物:
Figure 2024501894000124
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X2、X3、X4、X5、X6、W2、Y2、Z2 R3、R5、Rc、RA2、RA1、Rd、Re、Rf、R16、R17、R18、R19、RC2およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
（i）RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは存在し、RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは、RA2および/もしくはRA1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-f1）の化合物:
Figure 2024501894000125
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X2、X3、X4、W2、Y2、Z2、R3、R5、Rc、Rd、Re、Rf、R16、RA2、R17、R18、R19、RC2およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
X5はCRA2であり、
（i）RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-f2）の化合物:
Figure 2024501894000126
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X2、X4、X5、X6、X7、W2、Y2、Z2 R3、R5、Rc、RA2、RA1、R4、Rd、Re、RC1、RC2、R16、R17、R18、R19およびRfは、式（A）で定義される通りであり、
（i）RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは存在し、RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは、RA2および/もしくはRA1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-f3）の化合物:
Figure 2024501894000127
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X2、X4、W2、Y2、Z2、R3、R5、Rc、Rd、Re、Rf、R16、RA2、RC2、R16、R17、R18、R19およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
X5はCRA2であり、
（i）RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-f4）の化合物:
Figure 2024501894000128
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X2、X4、W2、Y2、Z2、R3、R5、Rc、Rd、Re、Rf、R16、RA2、RC2、R16、R17、R18、R19およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
X5はCRA2であり、
（i）RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-f5）の化合物:
Figure 2024501894000129
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X2、W2、Y2、Z2、R3、R5、Rc、Rd、Re、Rf、R16、RA2、RC2、R16、R17、R18、R19およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
X5はCRA2であり、
（i）RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-f6）の化合物:
Figure 2024501894000130
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
Y1、Y2、Z1、Z2、X1、X2、W1、W2、X4、X5、X6、R3、R5、Rc、RA2、RA1、Rd、Re、Rf、R14、RC2、R16、RC1、R15、R17、R18およびR19は、式（A）で定義される通りであり、
（i）RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは存在し、RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは、RA2および/もしくはRA1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-f7）の化合物:
Figure 2024501894000131
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X2、X4、W2、Y2、Z2、R3、R5、Rc、Rd、Re、Rf、R16、RA2、RC2、R16、R17、R18、R19およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
X5はCRA2であり、
（i）RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-g）の化合物:
Figure 2024501894000132
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X3、X4、X5、X6、X7、R3、R5、Rc、RA2、RA1、R4、RC2、R17、R18、R19、Rd、Re、Rf、R16およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
Y2およびZ2は、それぞれ独立して、O、S、CまたはNであり、
X2およびW2は、それぞれ独立して、CまたはNであり、
（i）RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは存在し、RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは、RA2および/もしくはRA1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-g1）の化合物:
Figure 2024501894000133
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X2、W2、Y2、Z2、X3、X4、X5、R3、R5、Rc、Rd、Re、Rf、RA2、RC2、R17、R18、R19、R16およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、（i）RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-g2）の化合物:
Figure 2024501894000134
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X2、X4、X5、X6、X7、W2、Y2、Z2、R3、R5、Rc、RA2、RA1、R4、RC2、R17、R18、R19、Rd、Re、Rf、R16およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
（i）RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは存在し、RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは、RA2および/もしくはRA1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-g3）の化合物:
Figure 2024501894000135
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X2、X4、W2、Y2、Z2、R3、R5、Rc、RA2、RC2、R17、R18、R19、R16およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
X5はCRA2であり、
（i）RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続され、
任意で、RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-g4）の化合物:
Figure 2024501894000136
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X2、X4、W2、Y2、Z2 R3、R5、Rc、Rd、Re、Rf、RA2、RC2、R17、R18、R19、R16およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
X5はCRA2であり、
（i）RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-g5）の化合物:
Figure 2024501894000137
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X2、W2、Y2、Z2、R3、R5、Rc、Rd、Re、Rf、RA2、RC2、R17、R18、R19、R16およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
X5はCRA2であり、
（i）RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-g6）の化合物:
Figure 2024501894000138
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X2、X4、W2、Y2、Z2、R3、R5、Rc、RA2、RC2、R17、R18、R19、R16およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
X5はCRA2であり、
（i）RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続され、
任意で、RA2は、RA2の官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-h）の化合物:
Figure 2024501894000139
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X1、W1、Y1、Z1、X3、X4、X5、X6、R3、R5、Rc、RA2、RA1、Rd、Re、Rf、R14、R15、R18、R19、R16およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、（i）RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは存在し、RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは、RA2および/もしくはRA1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-h1）の化合物:
Figure 2024501894000140
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X1、X3、W1、Y1、Z1、X5、X6、R3、R5、Rc、RA2、RA1、Rd、Re、Rf、R14、R15、R18、R19、R16およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
（i）RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは存在し、RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは、RA2および/もしくはRA1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分は、式（A-h2）の化合物:
Figure 2024501894000141
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
X1、X3、W1、Y1、Z1、R3、R5、Rc、Rd、Re、Rf、RA2、R14、R15、R18、R19、R16およびRC1は、式（A）で定義される通りであり、
X5はCRA2であり、
（i）RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは存在し、RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは、RA2および/もしくはRA1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分（D）は、式（A）の化合物であり、化合物は、式（A-i）のもの:
Figure 2024501894000142
またはそのプロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩もしくは互変異性体であり、式中、
Y1、Y2、Z1、Z2、X1、X2、X3、X6、X7、W1、W2、RA1、RA2、R4、Rc、Rd、Re、Rf、R14、RC2、R16、RC1、R15、R17、R18およびR19は、式（A）で定義される通りであり、
（i）RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは存在し、RA2およびRA1のうちの少なくとも1つは、RA2および/もしくはRA1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続されるか、または（ii）RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは存在し、RC2およびRC1のうちの少なくとも1つは、RC2および/もしくはRC1の少なくとも1つの官能基を介してLDに接続される。
いくつかの態様では、各STINGアゴニスト薬物部分（D）は、独立して、以下である:
Figure 2024501894000143
Figure 2024501894000144
Figure 2024501894000145
Figure 2024501894000146
Figure 2024501894000147
Figure 2024501894000148
Figure 2024501894000149
Figure 2024501894000150
Figure 2024501894000151
Figure 2024501894000152
Figure 2024501894000153
式中、
R2は、存在しないか、-O-、または-NR4-であり、R4は、HまたはC1～3アルキルであり、
Figure 2024501894000154
は、LDへの結合を示す。
いくつかの態様では、各STINGアゴニスト薬物部分（D）は、独立して、以下である:
Figure 2024501894000155
Figure 2024501894000156
Figure 2024501894000157
Figure 2024501894000158
式中、
R2は、存在しないか、-O-、または-NR4-であり、R4は、HまたはC1～3アルキルであり、
Figure 2024501894000159
は、LDへの結合を示す。
いくつかの態様では、各STINGアゴニスト薬物部分（D）は、独立して、以下である:
Figure 2024501894000160
Figure 2024501894000161
式中、
R2は、存在しないか、-O-、または-NR4-であり、R4は、HまたはC1～3アルキルであり、
Figure 2024501894000162
は、LDへの結合を示す。
いくつかの態様では、各STINGアゴニスト薬物部分（D）は、独立して、以下である:
Figure 2024501894000163
Figure 2024501894000164
式中、
R2は、存在しないか、-O-、または-NR4-であり、R4は、HまたはC1～3アルキルであり、
Figure 2024501894000165
は、LDへの結合を示す。
いくつかの態様では、各STINGアゴニスト薬物部分（D）は、独立して、以下である:
Figure 2024501894000166
式中、
R2は、存在しないか、-O-、または-NR4-であり、R4は、HまたはC1～3アルキルであり、
Figure 2024501894000167
は、LDへの結合を示す。
親水性基（変数T1）
いくつかの態様では、本開示のコンジュゲートまたはスキャフォールドに含まれる親水性基は、水溶性かつ実質的に非抗原性のポリマーである。親水性基の例には、限定されることなく、ポリアルコール、ポリエーテル、ポリアニオン、ポリカチオン、ポリリン酸、ポリアミン、多糖、ポリヒドロキシ化合物、ポリリジンおよびその誘導体が挙げられる。いくつかの態様では、親水性基の一端は、それが切断不可能な結合によってまたは切断可能な結合を介してMAリンカーに（例えば、MAリンカー中のアミノ酸に）共有結合し得るように官能化され得る。いくつかの態様では、官能化は、例えば、アミン、チオール、NHSエステル、マレイミド、アルキン、アジド、カルボニルまたは他の官能基を介したものであり得る。いくつかの態様では、親水性基の他の末端（terminus）（または末端（termini））は、遊離しており、連結されていない。いくつかの態様では、「連結されていない」とは、親水性基が、Dもしくは薬物ユニット、または本開示のコンジュゲートもしくはスキャフォールドの他の成分などの別の部分に結合していないことを意味する。いくつかの態様では、親水性基の遊離しており、連結されていない末端には、メトキシ、カルボン酸、アルコールまたは他の好適な官能基が含まれ得る。いくつかの態様では、メトキシ、カルボン酸、アルコールまたは他の好適な官能基は、親水性基の末端（terminus）または末端（termini）のキャップとして作用する。
いくつかの態様では、切断可能な結合とは、血漿中を循環している間は切断に実質的に感受性ではないが、細胞内環境または腫瘍内環境では切断に感受性である結合を指す。いくつかの態様では、切断不可能な結合とは、いかなる生物学的環境であっても切断に対して実質的に感受性でないものである。いくつかの態様では、ヒドラゾンの化学的加水分解、ジスルフィドの還元、およびペプチド結合またはグリコシド結合の酵素的切断が、切断可能な結合の例である。いくつかの態様では、親水性基の例示的な結合は、アミド結合、エーテル結合、エステル結合、ヒドラゾン結合、オキシム結合、ジスルフィド結合、ペプチド結合またはトリアゾール結合を介する。いくつかの態様では、MAリンカーへの（例えば、MAリンカー中のアミノ酸への）親水性基の結合は、アミド結合を介する。
本開示のコンジュゲートまたはスキャフォールドが複数の親水性基を含むいくつかの態様では、複数の親水性基は、同じまたは異なる化学部分であり得る（例えば、異なる分子量、サブユニットの数、または化学構造の親水性基）。いくつかの態様では、複数の親水性基は、単一の結合部位または異なる部位でMAリンカーに結合することができる。
いくつかの態様では、親水性基の付加は、得られたコンジュゲートの薬物動態に対して、2つの潜在的影響を及ぼし得る。いくつかの態様では、所望の影響は、薬物または薬物-リンカーの曝露された疎水性要素によって誘導される非特異的相互作用の減少から生じる、クリアランスの減少（およびその結果としての曝露の増加）である。いくつかの態様では、望ましくない影響は、コンジュゲートの分子量の増加から生じ得る、体積および分布速度の低下である。いくつかの態様では、親水性基の分子量を増加させると、コンジュゲートの流体力学的半径が増加し、拡散性が低下し、これにより、コンジュゲートが腫瘍に浸透する能力が低下する可能性がある。これらの2つの競合する薬物動態学的作用のために、コンジュゲートクリアランスを減少させ、ひいては血漿曝露を増加させるために、十分に大きいが、その拡散性を大幅に低下させるほど大きくない親水性基を使用することが望ましい場合があり、これにより、コンジュゲートが、意図される標的細胞集団に到達する能力が低下する可能性がある。
いくつかの態様では、親水性基には、限定されることなく、糖アルコール（ポリアルコール、多価アルコール、アルジトールまたはグリシトール、例えば、イノシトール、グリセロール、エリスリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、ガラクチトール、マンニトール、ソルビトールなどとしても知られている）もしくはその誘導体（例えばアミノポリアルコール）、炭水化物（例えば糖）、ポリビニルアルコール、炭水化物系ポリマー（例えばデキストラン）、ヒドロキシプロピルメタクリルアミド（HPMA）、ポリアルキレンオキシドおよび/またはそのコポリマーが含まれる。
いくつかの態様では、T1は、複数のヒドロキシル（「-OH」）基、例えば、単糖、オリゴ糖、多糖などを組み込む部分を含む。
いくつかの態様では、T1は、複数の-（CR58OH）-基を含み、式中、R58は、-H、またはC1～8アルキルである。
いくつかの態様では、T1は、-OHまたは
Figure 2024501894000168
であり、式中、
n1は、0～約6の整数であり、
各R58は、独立して、-H、またはC1～8アルキルであり、
R60は、結合、C1～6アルキルリンカー、または-CHR59-であり、式中、R59は、-H、C1～8アルキル、シクロアルキル、またはアリールアルキルであり、
R61は、CH2OR62、COOR62、-（CH2）n2COOR62、または1つもしくは複数のヒドロキシルによって置換されたヘテロシクロアルキルであり、
R62は、-H、またはC1～8アルキルであり、
n2は、1～約5の整数である。
いくつかの態様では、T1は-OHである。
いくつかの態様では、T1は
Figure 2024501894000169
である。
いくつかの態様では、R58は-Hであり、R60は、結合またはC1～6アルキルリンカーであり、n1は、1～約6の整数であり、R61は、CH2OHまたはCOOHである。
いくつかの態様では、R58は-Hであり、R60は-CHR59-であり、n1は0であり、R61は、1つまたは複数のヒドロキシルによって置換されたヘテロシクロアルキル、例えば単糖である。
いくつかの態様では、T1は、グルコシル-アミン、ジアミンまたはトリアミンを含む。
いくつかの態様では、T1は、以下の断片またはその立体異性体のうちの1つまたは複数を含む:
Figure 2024501894000170
式中、
R59は、-H、C1～8アルキル、シクロアルキル、またはアリールアルキルであり、
n1は、1～約6の整数であり、
n2は、1～約5の整数であり、
n3は、約1～約3の整数である。
本明細書において、親水性基のあらゆる立体化学形態が企図されることが理解される。例えば、上記式では、親水性基は、リボース、キシロース、グルコース、マンノース、ガラクトースまたは他の糖に由来し、それらの分子上に存在するペンダントヒドロキシル基およびアルキル基の立体化学的配置を保持し得る。
前述の式では、様々なデオキシ化合物も企図されることが理解される。例示的には、適用可能な場合、親水性基について、以下の特徴のうちの1つまたは複数が企図される。
いくつかの態様では、n3は、2または3である。
いくつかの態様では、n1は、1、2または3である。
いくつかの態様では、n2は1である。
いくつかの態様では、R59は水素である。
いくつかの態様では、T1は
Figure 2024501894000171
である。いくつかの態様では、T1は
Figure 2024501894000172
である。
いくつかの態様では、T1は
Figure 2024501894000173
である。
いくつかの態様では、T1は
Figure 2024501894000174
であり、式中、
n4は、1～約25の整数であり、
各R63は、独立して、-H、またはC1～8アルキルであり、
R64は、結合またはC1～8アルキルリンカーであり、
R65は、-H、C1～8アルキル、-（CH2）n2COOR62、または-（CH2）n2COR66であり、
R62は、H、またはC1～8アルキルであり、
R66は、H、
Figure 2024501894000175
であり、
n2は、1～約5の整数である。
いくつかの態様では、T1は、
Figure 2024501894000176
であり、
式中、R67は、以下である:（1）OH
Figure 2024501894000177
式中、n4は、約2～約20、約4～約16、約6～約12、約8～約12の整数である。
いくつかの態様では、T1は
Figure 2024501894000178
である。
いくつかの態様では、n4は、約2～約20、約4～約16、約6～約12、約8～約12の整数である。
いくつかの態様では、n4は、6、7、8、9、10、11または12である。
いくつかの態様では、n4は、8または12である。
いくつかの態様では、T1は、
Figure 2024501894000179
であり、式中、n4は、約2～約24、約4～約16、約6～約12、約8～約12の整数である。
いくつかの態様では、n4は、6、7、8、9、10、11または12である。
いくつかの態様では、n4は8である。いくつかの態様では、n4は12である。
いくつかの態様では、T1は
Figure 2024501894000180
であり、式中、n4は8である。
いくつかの態様では、T1は、ポリエーテル、例えばポリアルキレングリコール（PAO）を含む。PAOには、限定されることなく、低級アルキレンオキシドのポリマー、特に、エチレンオキシドのポリマー、例えば、プロピレンオキシド、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール（PEG）、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらのコポリマー、およびそれらのブロックコポリマーなどが含まれる。
いくつかの態様では、ポリアルキレングリコールは、限定されることなく、多分散PEG、単分散PEG、および個別のPEGを含むポリエチレングリコール（PEG）である。多分散PEGは、サイズおよび分子量の不均一な混合物であるが、単分散PEGは、典型的には不均一な混合物から精製され、したがって、単一の鎖長および分子量を提供する。いくつかの態様では、PEGユニットは、規定された特定の鎖長を有する単一分子を提供する個別のPEGである。いくつかの態様では、ポリエチレングリコールはmPEGである。
いくつかの態様では、T1は、1つまたは複数のPEG鎖を含むPEGユニットを含む。PEG鎖は、例えば、直鎖、分岐または星形の構成で互いに結合することができる。PEGユニットは、反復PEGサブユニットを含むことに加えて、非PEG材料も含み得る（例えば、複数のPEG鎖の互いへのカップリングを容易にするために、またはアミノ酸へのカップリングを容易にするために）。非PEG材料とは、反復-CH2CH2O-サブユニットの一部ではない、PEG鎖中の原子を指す。いくつかの態様では、PEG鎖は、非PEG要素を介して互いに結合した2つのモノマーPEG鎖を含むことができる。いくつかの態様では、PEGユニットは、アミノ酸に結合した中心コアに結合した2つの直鎖PEG鎖を含むことができる（すなわち、PEGユニット自体が分岐している）。
PEGユニットは、反応性基を介してMAリンカーに（例えば、MAリンカー中のアミノ酸に）共有結合していてもよい。反応性基は、活性化PEG分子が結合し得るもの（例えば、遊離アミノ基またはカルボキシル基）である。いくつかの態様では、N末端アミノ酸およびリジン（K）は、遊離アミノ基を有し、C末端アミノ酸残基は、遊離カルボキシル基を有する。スルフヒドリル基（例えば、システイン残基に見られるように）もまた、PEGを結合させるための反応性基として使用され得る。
いくつかの態様では、PEGユニットは、限定されることなく、スクシンイミジルスクシネート（SS）、スクシンイミジルカーボネート（SC）、mPEG-イミデート、パラ-ニトロフェニルカーボネート（NPC）、スクシンイミジルプロピオネート（SPA）および塩化シアヌルを含む様々な反応性部分を有するメトキシ化PEG（「mPEG」）を使用することによって、MAリンカーに（例えば、MAリンカー中のアミノ酸に）結合され得る。mPEGの例には、限定されることなく、mPEG-スクシンイミジルスクシネート（mPEG-SS）、mPEG2-スクシンイミジルスクシネート（mPEG2-SS）、mPEG-スクシンイミジルカーボネート（mPEG-SC）、mPEG2-スクシンイミジルカーボネート（mPEG2-SC）、mPEG-イミデート、mPEG-パラ-ニトロフェニルカーボネート（mPEG-NPC）、mPEG-イミデート、mPEG2-パラ-ニトロフェニルカーボネート（mPEG2-NPC）、mPEG-スクシンイミジルプロピオネート（mPEG-SPA）、mPEG2-スクシンイミジルプロピオネート（mPEG2-SPA）、mPEG-N-ヒドロキシ-スクシンイミド（mPEG-NHS）、mPEG2-N-ヒドロキシ-スクシンイミド（mPEG2-NHS）、mPEG-塩化シアヌル、mPEG2-塩化シアヌル、mPEG2-リシノール-NPC、およびmPEG2-Lys-NHSが挙げられる。多種多様なPEG種を使用することができ、実質的に任意の好適な反応性PEG試薬を使用することができる。いくつかの態様では、反応性PEG試薬は、多官能性リンカーまたはMAリンカーに（例えば、MAリンカー中のアミノ酸に）結合すると、カルバメート結合またはアミド結合を形成する。反応性PEG試薬には、限定されることなく、mPEG2-N-ヒドロキシ-スクシンイミド（mPEG2-NHS）、二官能性PEGプロピオンアルデヒド（mPEG2-ALD）、マルチアームPEG（multi-Arm PEG）、マレイミド含有PEG（mPEG（MAL）2、mPEG2（MAL））、mPEG-NH2、mPEG-スクシンイミジルプロピオネート（mPEG-SPA）、mPEGブタン酸のスクシンイミド（mPEG-SBA）、mPEG-チオエステル、mPEG-二重エステル、mPEG-BTC、mPEG-ButyrALD、mPEG-アセトアルデヒドジエチルアセタール（mPEG-ACET）、ヘテロ官能性PEG（例えば、NH2-PEG-COOH、Boc-PEG-NHS、Fmoc-PEG-NHS、NHS-PEG-ビニルスルホン（NHS-PEG-VS）、またはNHS-PEG-MAL）、PEGアクリレート（ACRL-PEG-NHS）、PEG-リン脂質（例えばmPEG-DSPE）、当業者によって選択された化学作用によって活性化されたグリセリン系PEGを含む、SUNBRITE（商標）シリーズの多アームPEG、任意のSUNBRITE活性化PEG（限定されることなく、カルボキシル-PEG、p-NP-PEG、Tresyl-PEG、アルデヒドPEG、アセタール-PEG、アミノ-PEG、チオール-PEG、マレイミド-PEG、ヒドロキシル-PEG-アミン、アミノ-PEG-COOKヒドロキシル-PEG-アルデヒド、カルボン酸無水物型PEG、官能化PEG-リン脂質、ならびに他の同様のおよび/または好適な反応性PEGを含むが含まれる。
いくつかの態様では、PEGユニットは、少なくとも6個のサブユニット、少なくとも7個のサブユニット、少なくとも8個のサブユニット、少なくとも9個のサブユニット、少なくとも10個のサブユニット、少なくとも11個のサブユニット、少なくとも12個のサブユニット、少なくとも13個のサブユニット、少なくとも14個のサブユニット、少なくとも15個のサブユニット、少なくとも16個のサブユニット、少なくとも17個のサブユニット、少なくとも18個のサブユニット、少なくとも19個のサブユニット、少なくとも20個のサブユニット、少なくとも21個のサブユニット、少なくとも22個のサブユニット、少なくとも23個のサブユニットまたは少なくとも24個のサブユニットを含む。いくつかのそのような態様では、PEGユニットは、約72個以下のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEGユニットは、少なくとも6個のサブユニット、少なくとも7個のサブユニット、少なくとも8個のサブユニット、少なくとも9個のサブユニット、少なくとも10個のサブユニット、少なくとも11個のサブユニット、少なくとも12個のサブユニット、少なくとも13個のサブユニット、少なくとも14個のサブユニット、少なくとも15個のサブユニット、少なくとも16個のサブユニット、少なくとも17個のサブユニット、少なくとも18個のサブユニット、少なくとも19個のサブユニットまたは少なくとも20個のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEGユニットは、少なくとも6個のサブユニット、少なくとも7個のサブユニット、少なくとも8個のサブユニット、少なくとも9個のサブユニット、少なくとも10個のサブユニット、少なくとも11個のサブユニット、少なくとも12個のサブユニット、少なくとも13個のサブユニット、少なくとも14個のサブユニット、少なくとも15個のサブユニット、少なくとも16個のサブユニット、少なくとも17個のサブユニットまたは少なくとも18個のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEGユニットは、少なくとも6個のサブユニット、少なくとも7個のサブユニット、少なくとも8個のサブユニット、少なくとも9個のサブユニット、少なくとも10個のサブユニット、少なくとも11個のサブユニットまたは少なくとも12個のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEGユニットは、少なくとも8個のサブユニット、少なくとも9個のサブユニット、少なくとも10個のサブユニット、少なくとも11個のサブユニットまたは少なくとも12個のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、PEGユニットは、少なくとも6個のサブユニット、少なくとも7個のサブユニットまたは少なくとも8個のサブユニットを含む。
いくつかの態様では、直鎖状PEGユニットは、
Figure 2024501894000181
であり、
式中、
Figure 2024501894000182
は、MAリンカーへの（例えば、MAリンカー中のアミノ酸への）結合部位を示し、
Y71はPEG結合ユニットであり、
Y72はPEGキャッピングユニットであり、
Y73はPEGカップリングユニットであり（すなわち、複数のPEGサブユニット鎖を一緒にカップリングするために）、
d9は、2～72の整数であり、
各d10は、独立して、1～72の整数であり、
d11は、2～5の整数である。
いくつかの態様では、d9は、2～24の整数である。いくつかの態様では、d9は、4～24の整数である。いくつかの態様では、d9は、6～24、8～24、10～24、または12～24の整数である。
いくつかの態様では、PEGユニット中に少なくとも6個のPEGサブユニットが存在する。いくつかの態様では、PEGユニット中に少なくとも8個のPEGサブユニットが存在する。いくつかの態様では、PEGユニット中に少なくとも10個のPEGサブユニットが存在する。いくつかの態様では、PEGユニット中に少なくとも12個のPEGサブユニットが存在する。
いくつかの態様では、d9は、8または約8、12または約12、24または約24である。
いくつかの態様では、各Y72は、独立して、-C1～10アルキル、-C2～10アルキル-CO2H、-C2～10アルキル-OH、-C2～10アルキル-NH2、-C2～10アルキル-NH（C1～3アルキル）、またはC2～10アルキル-N（C1～3アルキル）2である。
いくつかの態様では、Y72は、-C1～10アルキル、-C2～10アルキル-CO2H、-C2～10アルキル-OH、または-C2～10アルキル-NH2である。
いくつかの態様では、PEGカップリングユニットは、PEGユニットの一部であり、反復CH2CH2O-サブユニットの2つ以上の鎖を接続するように作用する非PEG材料である。いくつかの態様では、PEGカップリングユニットY73は、-C2～10アルキル-C（O）-NH-、-C2～10アルキル-NH-C（O）-、-C2～10アルキル-NH-、-C2～10アルキル-C（O）-、-C2～10アルキル-O-、または-C2～10アルキル-S-である。
いくつかの態様では、各Y73は、独立して、-C1～10アルキル-C（O）-NH-、-C1～10アルキル-NH-C（O）-、-C2～10アルキル-NH-、-C2～10アルキル-O-、-C1～10アルキル-S-、または-C1～10アルキル-NH-である。
いくつかの態様では、PEG結合ユニットは、PEGユニットの一部であり、PEGユニットをMAリンカーに（例えば、MAリンカー中のアミノ酸に）結合するように作用する。いくつかの態様では、アミノ酸は、PEGユニットと結合を形成する官能基を有する。いくつかの態様では、アミノ酸へのPEGユニットの結合のための官能基は、ジスルフィド結合またはチオエーテル結合を形成するためのスルフヒドリル基、ヒドラゾン結合を形成するためのアルデヒド基、ケトン基またはヒドラジン基、オキシム結合を形成するためのヒドロキシルアミン、ペプチド結合を形成するためのカルボキシル基またはアミノ基、エステル結合を形成するためのカルボキシル基またはヒドロキシ基、スルホンアミド結合を形成するためのスルホン酸、カルバメート結合を形成するためのアルコール、およびスルホンアミド結合またはカルバメート結合またはアミド結合を形成するためのアミンを含む。いくつかの態様では、PEGユニットは、例えば、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、ヒドラゾン結合、オキシム結合、ペプチド結合、エステル結合、スルホンアミド結合、カルバメート結合またはアミド結合を介してアミノ酸に結合することができる。いくつかの態様では、PEGユニットを結合させるための反応は、適用可能な場合、環化付加、付加、付加/脱離もしくは置換反応、またはそれらの組合せであり得る。
直鎖状PEGユニットの例には、
Figure 2024501894000183
が挙げられ、
式中、
Figure 2024501894000184
は、多官能性リンカーまたはMAリンカーへの（例えば、MAリンカー中のアミノ酸への）結合部位を示し、各d9は、独立して、4～24、6～24、8～24、10～24、12～24、14～24、または16～24の整数である。
いくつかの態様では、d9は、約8、約12または約24である。
いくつかの態様では、d9は約8である。
いくつかの態様では、PEGユニットは、約300Da～約5kDa、約300Da～約4kDa、約300Da～約3kDa、約300Da～約2kDa、または約300Da～約1kDaである。いくつかの態様では、PEGユニットは、少なくとも6個のサブユニットまたは少なくとも8個、10個もしくは12個のサブユニットを有する。いくつかの態様では、PEGユニットは、少なくとも6個、または少なくとも8個、10個もしくは12個だが24個以下のサブユニットを有する。
いくつかの態様では、好適なポリエチレングリコールは、ポリマー分子の各末端に遊離ヒドロキシ基を有してもよいか、または低級アルキル基、例えばメチル基によってエーテル化された1つのヒドロキシ基を有してもよい。いくつかの態様では、好適なポリエチレングリコールは、エステル化可能なカルボキシ基を有するポリエチレングリコールの誘導体である。いくつかの態様では、ポリエチレングリコールは、通常、何らかの平均分子量を特徴とするポリマーの混合物として、PEGの商品名の下に市販されている。いくつかの態様では、約300～約5000の平均分子量を有するポリエチレングリコール。いくつかの態様では、約600～約1000の平均分子量を有するポリエチレングリコール。
いくつかの態様では、本明細書において開示されるコンジュゲート、スキャフォールドおよび方法に適した親水性基の例は、例えば、その各々の内容全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第8,367,065号第13欄、米国特許第8524696号第6欄、国際公開公報第2015/057699号および国際公開公報第2014/062697号に見出され得る。
抗体
いくつかの態様では、コア-N-アセチルグルコサミン置換基（コア-GlcNAc部分）を含む糖タンパク質は、コア-N-アセチルグルコサミン置換基（コア-GlcNAc部分）を含む抗体である。いくつかの態様では、糖タンパク質は、モノクローナル抗体（mAb）IgA抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgG抗体またはIgM抗体である。いくつかの態様では、抗体はIgG抗体である。いくつかの態様では、抗体はIgG1抗体である。いくつかの態様では、該抗体が全抗体である場合、抗体は、各重鎖上に1つまたは複数の（例えば1つの）コア-GlcNAc部分を含み、該コア-GlcNAc部分は、フコシル化されていてもよい。いくつかの態様では、全抗体は、2つ以上（例えば2つ）のフコシル化されていてもよいコア-GlcNAc部分を含む。いくつかの態様では、該抗体が一本鎖抗体または抗体断片、例えば、Fab断片またはFc断片である場合、抗体は、フコシル化されていてもよい1つまたは複数のコア-GlcNAc部分を含む。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分を含む抗体内で、該コア-GlcNAc部分は、該置換基が抗体の抗原結合部位を妨害しない限り、抗体上のどこに位置していてもよい。いくつかの態様では、該コア-GlcNAc部分は、抗体の天然N-グリコシル化部位に存在する。いくつかの態様では、抗体は、少なくとも1つの化学反応性基または化学反応性アミノ酸部分もしくは化学反応性側鎖を含むか、または含むように操作される。
いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを特定の組織、細胞、または細胞内の位置に導くことができる。いくつかの態様では、抗体は、培養物中、もしくは生物全体の中で、またはその両方でコンジュゲートを導くことができる。いくつかの態様では、抗体は、抗体が有効な特異性、親和性およびアビディティーで結合する標的細胞の細胞表面に存在するリガンドを含む。いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを肝臓以外の組織に導く。いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを特定の組織、例えば、肝臓、腎臓、肺または膵臓に導く。いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを標的細胞（例えば癌細胞）、細胞（例えば癌細胞）上に発現される受容体、マトリックス組織、または癌に関連するタンパク質（例えば腫瘍抗原）に導く。いくつかの態様では、腫瘍血管系を含む細胞が標的とされ得る。いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを特定の種類の細胞に導くことができ、例えば、クッパー細胞ではなく肝臓の肝細胞を特異的に標的とすることができる。いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを網状内皮系もしくはリンパ系の細胞、またはマクロファージもしくは好酸球などのプロフェッショナル食細胞に導くことができる。いくつかの態様では、コンジュゲート自体が、特異的標的指向性を必要としない、効果的な送達系である。
いくつかの態様では、抗体は、コンジュゲートを細胞内のある位置（例えば、核、細胞質またはエンドソーム）に導くことができる。いくつかの態様では、抗体は、受容体への細胞結合、または核への細胞質輸送、およびエンドソームもしくは他の細胞内小胞からの核進入または核放出を増強する。
いくつかの態様では、コンジュゲートは、本開示のB7-H4抗体または修飾B7-H4抗体を含む。
B7-H4抗体
本開示により、例えば、抗原提示細胞（APC）の表面に見られるI型膜貫通タンパク質であるB7-H4に結合する単離された抗体が提供される。B7-H4抗体には、限定されることなく、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体、ヒト抗体、ならびに本明細書において説明される重鎖および/または軽鎖CDRを含む抗体が含まれる。
いくつかの態様では、本開示のB7-H4抗体は、アミノ酸配列:
Figure 2024501894000185
を含む完全長ヒトB7-H4タンパク質上のエピトープに特異的に結合する。
いくつかの態様では、B7-H4抗体はヒト抗体である。いくつかの態様では、B7-H4抗体は、B7-H4活性を調節する。いくつかの態様では、抗体は、抗体を投与される対象においてADCC応答を誘導する抗体である。いくつかの態様では、B7-H4抗体は、B7-H4のT細胞抑制活性を阻害しない。本開示のB7-H4抗体は、例えば、完全長抗体であり得る。あるいは、抗体は、抗体断片、例えば、Fab断片、Fab'断片もしくはFab'2断片または一本鎖抗体（例えばscFv）であり得る。いくつかの態様では、抗体はIgG1抗体である。
いくつかの態様では、B7-H4抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。いくつかの態様では、B7-H4抗体は、重鎖可変領域と重鎖定常領域の少なくとも一部とを含む少なくとも1つの重鎖、および軽鎖可変領域と軽鎖定常領域の少なくとも一部とを含む少なくとも1つの軽鎖を含む。いくつかの態様では、B7-H4抗体は、各重鎖が重鎖可変領域と重鎖定常領域の少なくとも一部とを含む2つの重鎖、および各軽鎖が軽鎖可変領域と軽鎖定常領域の少なくとも一部とを含む2つの軽鎖を含む。
いくつかの態様では、ヒトB7-H4抗体は、1つまたは複数のヒト定常領域を含む。いくつかの態様では、ヒト重鎖定常領域は、IgA、IgG（例えば、IgG1、IgG2、IgG3またはIgG4、およびIgDから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの態様では、ヒト軽鎖定常領域は、カッパ（κ）およびラムダ（λ）から選択されるアイソタイプのものである。いくつかの態様では、本明細書において記載されるヒト抗体は、ヒトIgG定常領域を含む。いくつかの態様では、本明細書において記載されるヒト抗体は、ヒトIgG4重鎖定常領域を含む。いくつかの態様では、本明細書において記載されるヒト抗体は、ヒトIgG4定常領域およびヒトκ軽鎖を含む。
いくつかの態様では、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトIgG1重鎖定常領域またはヒトIgG3重鎖定常領域を含むヒトB7-H4抗体が選択される。いくつかの態様では、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトIgG4重鎖定常領域またはヒトIgG2重鎖定常領域を含むヒトB7-H4抗体が選択される。
いくつかの態様では、本開示の抗体は、抗体の特定の機能的特徴または機能的特性を特徴とする。例えば、抗体は、ヒトB7-H4に特異的に結合する。典型的には、本開示の抗体は、B7-H4に高い親和性で、例えば、1×10-7M以下のKDで結合する。本開示の抗B7-H4抗体は、典型的には、以下の特徴のうちの1つまたは複数を示す:
（a）1×10-7M以下のKDでヒトB7-H4に結合する;および/または
（b）B7-H4（例えばヒトB7-H4）をトランスフェクトしたヒトCHO細胞に結合する。
いくつかの態様では、抗体は、5×10-8M以下のKDでヒトB7-H4に結合するか、2×10-8M以下のKDでヒトB7-H4に結合するか、5×10-9M以下のKDでヒトB7-H4に結合するか、4×10-9M以下のKDでヒトB7-H4に結合するか、3×10-9M以下のKDでヒトB7-H4に結合するか、2×10-9M以下のKDでヒトB7-H4に結合するか、または1×10-9M以下のKDでヒトB7-H4に結合する。
B7-H4に対する抗体の結合能を評価するための標準的なアッセイは、例えば、ELISA、ウエスタンブロット、RIAおよびフローサイトメトリー分析を含め、当技術分野において公知である。抗体の結合動態（例えば結合親和性）はまた、当技術分野において公知の標準的なアッセイ、例えば、ELISA、ScatchardおよびBiacore（登録商標）システム分析によって評価され得る。
潜在的な治療用mAbは、それらの標的に結合しなければならないだけでなく、「開発可能性の問題」、例えば、安定性の低さ、または高レベルの凝集がないものでなければならない。本発明者らは、開発可能性の低さに関係すると考えられる5つの測定基準、すなわち、相補性決定領域（CDR）の全長、表面疎水性の程度および大きさ、CDR内の正電荷および負電荷、ならびに正味の重鎖表面電荷および軽鎖表面電荷の非対称性に関するガイドライン値を記載する。各特性のガイドラインカットオフは、CSTに見られる値から導出され、不適格候補を識別するためのフラッギングシステムが提案されている。
本開示の例示的なB7-H4抗体には、B7-H4＿2F9（参照によりその内容全体が本明細書に組み入れられる米国特許第8,609,816号に開示された、本明細書において「B7-H4＿2F9親抗体」、「2F9親抗体」または「親抗体」とも呼ばれるが含まれる。
潜在的な治療用mAbは、それらの標的に結合しなければならないだけでなく、「開発可能性の問題」、例えば、安定性の低さ、高レベルの凝集、低レベルの発現、低溶解性、共有結合的完全性、立体配座不安定性およびコロイド不安定性、高い多特異性、ならびに高い免疫原性がないものでなければならない。
開発可能性の低さに関係すると考えられる測定基準、例えば、相補性決定領域（CDR）の全長、表面疎水性の程度および大きさ、CDR内の正電荷および負電荷、正味の重鎖表面電荷および軽鎖表面電荷の非対称性、ならびに翻訳後修飾（PTM）などについて、B7-H4＿2F9親抗体配列を分析した。B7-H4＿2F9親抗体配列のこの開発可能性分析から、3つの潜在的な配列ライアビリティ（sequence liabilities）が明らかにされた。特に、B7-H4＿2F9親抗体配列は、不対システイン残基、アスパルテート異性化配列およびメチオニン酸化部位を有した。これらの3つの配列ライアビリティの各々は、抗体の安定性、効力および均一性などの潜在的な開発を生み出す可能性があり、下流の開発に複雑なプロセスをもたらす可能性がある。
B7-H4＿2F9親抗体の潜在的な配列ライアビリティに対処するために、これらの潜在的な開発可能性の懸念に対処する、B7-H4＿2F9の20個の変異体を設計し、生成した。これらの変異体抗体には、B7-H4＿2F9V1、B7-H4＿2F9V2、B7-H4＿2F9V3、B7-H4＿2F9V4、B7-H4＿2F9V5、B7-H4＿2F9V6、B7-H4＿2F9V7、B7-H4＿2F9V8、B7-H4＿2F9V9、B7-H4＿2F9V10、B7-H4＿2F9V11、B7-H4＿2F9V12、B7-H4＿2F9V13、B7-H4＿2F9V14、B7-H4＿2F9V15、B7-H4＿2F9V16、B7-H4＿2F9V17、B7-H4＿2F9V18、B7-H4＿2F9V19およびB7-H4＿2F9V20を含めた。B7-H4結合、多特異性および他の特性について、20個の変異体の各々を特性評価した。
本開示のモノクローナルB7-H4抗体の核酸配列およびアミノ酸配列を以下に示す。以下に示されるアミノ酸配列では、重鎖および軽鎖の相補性決定領域（CDR）に下線が引かれている。以下に示される相補性決定領域（CDR）を包含するアミノ酸は、IMGTナンバリングシステムに従って定義される（IMGT（登録商標）、international ImMunoGeneTics information system（登録商標）。オンラインで入手可能:http://www.imgt.org/）。
B7-H4 2F9可変領域
20個のB7-H4 2F9親変異体（すなわち、B7-H4＿2F9V1～B7-H4＿2F9V20）はいずれも、共通の軽鎖可変領域を共有する。（本明細書においてB7-H4＿2F9 VLと呼ばれる）
いくつかの態様では、本開示の全抗体は、SEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。
B7-H4＿2F9＿VLのVL鎖（SEQ ID NO:50）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000186
B7-H4＿2F9＿親のVH鎖（SEQ ID NO:1）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000187
B7-H4＿2F9V1のVH鎖（SEQ ID NO:5）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000188
B7-H4＿2F9V2のVH鎖（SEQ ID NO:8）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000189
B7-H4＿2F9V3のVH鎖（SEQ ID NO:11）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000190
B7-H4＿2F9V4のVH鎖（SEQ ID NO:14）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000191
B7-H4＿2F9V5のVH鎖（SEQ ID NO:17）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000192
B7-H4＿2F9V6のVH鎖（SEQ ID NO:20）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000193
B7-H4＿2F9V7のVH鎖（SEQ ID NO:22）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000194
B7-H4＿2F9V7可変重鎖は、本明細書においてXMT-1603可変重鎖とも呼ばれる。
B7-H4＿2F9V8のVH鎖（SEQ ID NO:24）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000195
B7-H4＿2F9V9のVH鎖（SEQ ID NO:26）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000196
B7-H4＿2F9V10のVH鎖（SEQ ID NO:28）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000197
B7-H4＿2F9V11のVH鎖（SEQ ID NO:30）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000198
B7-H4＿2F9V12のVH鎖（SEQ ID NO:32）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000199
B7-H4＿2F9V13のVH鎖（SEQ ID NO:34）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000200
B7-H4＿2F9V14のVH鎖（SEQ ID NO:36）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000201
B7-H4＿2F9V15のVH鎖（SEQ ID NO:38）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000202
B7-H4＿2F9V16のVH鎖（SEQ ID NO:40）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000203
B7-H4＿2F9V17のVH鎖（SEQ ID NO:42）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000204
B7-H4＿2F9V18のVH鎖（SEQ ID NO:44）（本明細書においてXMT-1604 VHとも呼ばれる）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000205
B7-H4＿2F9V18可変重鎖は、本明細書においてXMT-1604可変重鎖とも呼ばれる。
B7-H4＿2F9V19のVH鎖（SEQ ID NO:46）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000206
B7-H4＿2F9V20のVH鎖（SEQ ID NO:48）は、以下のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる:
Figure 2024501894000207
CDR
以下の表Iに、本開示のB7-H4抗体のCDRを要約する。
（表Ｉ）重鎖および軽鎖の相補性決定領域のアミノ酸配列。
Figure 2024501894000208
Figure 2024501894000209
CDR3ドメインは、CDR1および/またはCDR2ドメイン単独から独立して、同族抗原に対するB7-H4抗体の結合特異性を決定することができ、共通のCDR3配列に基づいて同じ結合特異性を有する複数の抗体を予測可能に生成することができることは当技術分野において周知である。
いくつかの態様では、抗体は、マウス抗体またはラット抗体などの非ヒト抗体由来の1つまたは複数の重鎖および/または軽鎖CDR3ドメインを含み、モノクローナル抗体は、B7-H4に特異的に結合することができる。いくつかの態様では、非ヒト抗体由来の1つまたは複数の重鎖および/または軽鎖CDR3ドメインを含むそのような本発明の抗体は、（a）対応する親非ヒト抗体と結合について競合することができ、（b）対応する親非ヒト抗体のような機能的特徴を保持し、（c）対応する親非ヒト抗体と同じエピトープに結合し、および/または（d）対応する親非ヒト抗体と同様の結合親和性を有する。
いくつかの態様では、第1のヒト抗体、例えば、非ヒト動物から得られたヒト抗体などに由来する1つまたは複数の重鎖および/または軽鎖CDR3ドメインを含むモノクローナル抗体、第1のヒト抗体は、B7-H4に特異的に結合することができ、第1のヒト抗体由来のCDR3ドメインは、B7-H4に対する結合特異性を欠くヒト抗体のCDR3ドメインを置換して、B7-H4に特異的に結合することができる第2のヒト抗体を生成する。いくつかの態様では、第1のヒト抗体由来の1つまたは複数の重鎖および/または軽鎖CDR3ドメインを含む抗体は、（a）対応する第1の親ヒト抗体と結合について競合することができ、（b）対応する第1の親ヒト抗体のような機能的特徴を保持し、（c）対応する第1の親ヒト抗体と同じエピトープに結合し、および/または（d）対応する第1の親ヒト抗体と同様の結合親和性を有する。
B7-H4 2F9定常領域
B7-H4 2F9親抗体、および本開示の20個の変異体は、アミノ酸配列:
Figure 2024501894000210
を含むかまたはそれからなる軽鎖定常領域を有する。
B7-H4 2F9軽鎖定常領域（SEQ ID NO:51）は、本明細書においてB7-H4 2F9 LCとも呼ばれる。
いくつかの態様では、本開示の抗体は、軽鎖可変領域アミノ酸配列および軽鎖定常領域アミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる軽鎖を含む。SEQ ID NO:52のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる本開示の抗体軽鎖（可変領域および定常領域）。
B7-H4 2F9親抗体、および本開示の20個の変異体は、アミノ酸配列:
Figure 2024501894000211
を含むかまたはそれからなるIgG1重鎖定常領域を有する。B7-H4 2F9 IgG1重鎖定常領域（SEQ ID NO:6）は、本明細書においてB7-H4 2F9 HCとも呼ばれる。
いくつかの態様では、SEQ ID NO:6を含むかまたはそれからなるIgG1重鎖定常領域は、N末端またはC末端に1つまたは複数のアミノ酸をさらに含む。いくつかの態様では、IgG1重鎖定常領域は、C末端リジンを含む。
いくつかの態様では、本開示の抗体は、重鎖可変領域アミノ酸配列および重鎖定常領域アミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる重鎖を含む。表II、および本明細書とともに出願した配列表に、本開示の抗体重鎖（可変領域および定常領域）を記載する。
いくつかの態様では、本開示の抗体は、アミノ酸配列:
Figure 2024501894000212
を含むかまたはそれからなるIgG2重鎖定常領域を含むことができる。
いくつかの態様では、本開示の抗体は、アミノ酸配列:
Figure 2024501894000213
を含むかまたはそれからなるIgG4重鎖定常領域を含むことができる。
（表ＩＩ）抗体重鎖アミノ酸配列（重鎖可変領域＋IgG1重鎖定常領域）
Figure 2024501894000214
具体的な態様
さらに別の態様では、本開示のB7-H4抗体は、本明細書において記載される好ましい抗体のアミノ酸配列に相同なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、抗体は、本開示の抗B7-H4抗体の所望の機能的特性を保持する。例えば、本開示は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、
（a）重鎖可変領域は、SEQ ID NO:44、22、30、40および42からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも80％相同なアミノ酸配列を含み、
（b）軽鎖可変領域は、SEQ ID NO:50のアミノ酸配列と少なくとも80％相同なアミノ酸配列を含み、
（c）抗体は、1×10-7M以下のKDでヒトB7-H4に結合し、
（d）抗体は、B7-H4をトランスフェクトしたヒトCHO細胞に結合する。
様々な態様では、抗体は、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であり得る。
他の態様では、VHおよび/またはVLアミノ酸配列は、上記の配列と85％、90％、95％、96％、97％、98％または99％相同であり得る。上記の配列のVH領域およびVL領域に対して高い（すなわち、80％以上）相同性を有するVH領域およびVL領域を有するB7-H4抗体は、SEQ ID NO:44、22、30、40および42に記載のアミノ酸配列をコードする核酸分子の変異誘発（例えば、部位特異的変異誘発またはPCR媒介変異誘発）、続いて、本明細書において記載される機能アッセイを使用して、保持された機能（すなわち、上記（c）および（d）に記載の機能）について、コードされた変化した抗体の試験することによって得ることができる。
好ましい態様では、重鎖可変領域CDR2配列は、SEQ ID NO:44、22、30、40および42のアミノ酸配列ならびにその保存的修飾からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域CDR2配列は、SEQ ID NO:54のアミノ酸配列およびその保存的修飾を含む。別の好ましい態様では、重鎖可変領域CDR1配列は、SEQ ID NO:44、22、30、40および42のアミノ酸配列ならびにその保存的修飾からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域CDR1配列は、SEQ ID NO:50のアミノ酸配列およびその保存的修飾を含む。
様々な態様では、抗体は、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であり得る。
いくつかの態様では、抗体は、本開示のB7-H4モノクローナル抗体のいずれかと同じ、ヒトB7-H4上のエピトープに結合する（すなわち、B7-H4への結合について本開示のモノクローナル抗体のいずれかと交差競合する能力を有する抗体）。
したがって、本開示の別の態様は、それぞれSEQ ID NO:44、22、30、40および42からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCDR1配列、CDR2配列およびCDR3配列を含む重鎖可変領域と、それぞれSEQ ID NO:53、54および55のアミノ酸配列を含むCDR1配列、CDR2配列およびCDR3配列を含む軽鎖可変領域とを含む単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
したがって、別の態様では、本開示は、（a）SEQ ID NO:2を含むアミノ酸配列、またはSEQ ID NO:2と比較して1個、2個、3個、4個もしくは5個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むVH CDR1領域、（b）SEQ ID NO:3を含むアミノ酸配列、またはSEQ ID NO:3と比較して1個、2個、3個、4個もしくは5個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むVH CDR2領域、（c）SEQ ID NO:16、10もしくは4からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはSEQ ID NO:16、10もしくは4と比較して1個、2個、3個、4個もしくは5個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むVH CDR3領域を含む重鎖可変領域を含む単離された抗B7-H4モノクローナル抗体またはその抗原結合部分を提供する。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:45、23、31、41または43からなる群より選択される配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を有する重鎖と、SEQ ID NO:52からなる群より選択される配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、（i）SEQ ID NO:45のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:52のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の軽鎖アミノ酸配列、（ii）SEQ ID NO:23のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:52のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の軽鎖アミノ酸配列、（iii）SEQ ID NO:31のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:52のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の軽鎖アミノ酸配列、（iv）SEQ ID NO:41のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:50のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の軽鎖アミノ酸配列、ならびに（v）SEQ ID NO:43のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:52のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の軽鎖アミノ酸配列からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列と軽鎖アミノ酸配列との組合せを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:45のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:23のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:31のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:41のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:43のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:45、23、31、41または43からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖と、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、（i）SEQ ID NO:45の重鎖アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:52の軽鎖アミノ酸配列、（ii）SEQ ID NO:23の重鎖アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:52の軽鎖アミノ酸配列、（iii）SEQ ID NO:31の重鎖アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:52の軽鎖アミノ酸配列、（iv）SEQ ID NO:41の重鎖アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:52の軽鎖アミノ酸配列、ならびに（v）SEQ ID NO:43の重鎖アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:52の軽鎖アミノ酸配列からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列と軽鎖アミノ酸配列との組合せを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:45の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:52の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:23の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:52の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:31の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:52の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:41の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:52の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:43の重鎖アミノ酸配列と、SEQ ID NO:52の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:44、22、30、40または42からなる群より選択される配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、SEQ ID NO:50からなる配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体の3つの重鎖CDRは、SEQ ID NO:2を含む配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域1（CDRH1）、SEQ ID NO:3を含む配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域2（CDRH2）、およびSEQ ID NO:16、10または4からなる群より選択される配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域3（CDRH3）、ならびにSEQ ID NO:45、23、31、41または43のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列を含む。
本明細書において開示される抗体の3つの軽鎖CDRは、SEQ ID NO:53を含む配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）、SEQ ID NO:54を含む配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）、およびSEQ ID NO:55を含む配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む。
抗体は、SEQ ID NO:2を含む配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:3を含む配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:16、10または4からなる群より選択される配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:53からなる群より選択される配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含むCDRL1、SEQ ID NO:54の配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含むCDRL2、およびSEQ ID NO:55のaと少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含むCDRL3、ならびにSEQ ID NO:45、23、31、41または43のアミノ酸配列と少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％ 98％、99％またはそれ以上同一の重鎖アミノ酸配列を含む重鎖CDR配列と軽鎖CDR配列との組合せを含む。
本明細書において開示される抗体の3つの重鎖CDRは、SEQ ID NO:2を含む群より選択されるアミノ酸配列を含むCDRH1、SEQ ID NO:3を含むアミノ酸配列を含むCDRH2、およびSEQ ID NO:10または16からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCDRH3、ならびにSEQ ID NO:45または23からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列を含む。
本明細書において開示される抗体の3つの軽鎖CDRは、SEQ ID NO:53のアミノ酸配列を有するCDRL1、SEQ ID NO:54のアミノ酸配列を有するCDRL2、およびSEQ ID NO:55のアミノ酸配列を有するCDRL3を含む。本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:2を含む選択されたアミノ酸配列を含むCDHR1、SEQ ID NO:3を含むアミノ酸配列を含むCDRH2、SEQ ID NO:10または16を含むアミノ酸配列を含むCDRH3、SEQ ID NO:53のアミノ酸配列を有するCDRL1、SEQ ID NO:54のアミノ酸配列を有するCDRL2、およびSEQ ID NO:55のアミノ酸配列を有するCDRL3、ならびにSEQ ID NO:45または23の重鎖アミノ酸配列を含む重鎖CDR配列と軽鎖CDR配列との組合せを含む本明細書において開示される抗体は、（i）SEQ ID NO:2のCDRH1アミノ酸配列、SEQ ID NO:3のCDRH2アミノ酸配列、SEQ ID NO:16のCDRH3アミノ酸配列、SEQ ID NO:53のCDRL1アミノ酸配列、SEQ ID NO:54のCDRL2アミノ酸配列、SEQ ID NO:55のCDRL3アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:45の重鎖アミノ酸配列、（ii）SEQ ID NO:2のCDRH1アミノ酸配列、SEQ ID NO:3のCDRH2アミノ酸配列、SEQ ID NO:10のCDRH3アミノ酸配列、SEQ ID NO:53のCDRL1アミノ酸配列、SEQ ID NO:54のCDRL2アミノ酸配列、SEQ ID NO:55のCDRL3アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:23の重鎖アミノ酸配列、（iii）SEQ ID NO:2のCDRH1アミノ酸配列、SEQ ID NO:3のCDRH2アミノ酸配列、SEQ ID NO:4のCDRH3アミノ酸配列、SEQ ID NO:53のCDRL1アミノ酸配列、SEQ ID NO:54のCDRL2アミノ酸配列、SEQ ID NO:55のCDRL3アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:31の重鎖アミノ酸配列、（iv）SEQ ID NO:2のCDRH1アミノ酸配列、SEQ ID NO:3のCDRH2アミノ酸配列、SEQ ID NO:4のCDRH3アミノ酸配列、SEQ ID NO:53のCDRL1アミノ酸配列、SEQ ID NO:54のCDRL2アミノ酸配列、SEQ ID NO:55のCDRL3アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:41の重鎖アミノ酸配列、ならびに（v）SEQ ID NO:2のCDRH1アミノ酸配列、SEQ ID NO:3のCDRH2アミノ酸配列、SEQ ID NO:10のCDRH3アミノ酸配列、SEQ ID NO:53のCDRL1アミノ酸配列、SEQ ID NO:54のCDRL2アミノ酸配列、SEQ ID NO:55のCDRL3アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:43の重鎖アミノ酸配列からなる群より選択される重鎖相補性決定領域アミノ酸配列と軽鎖相補性決定領域アミノ酸配列との組合せを含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:2のCDRH1アミノ酸配列、SEQ ID NO:3のCDRH2アミノ酸配列、SEQ ID NO:16のCDRH3アミノ酸配列、SEQ ID NO:53のCDRL1アミノ酸配列、SEQ ID NO:54のCDRL2アミノ酸配列、SEQ ID NO:55のCDRL3アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:45の重鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:2のCDRH1アミノ酸配列、SEQ ID NO:3のCDRH2アミノ酸配列、SEQ ID NO:10のCDRH3アミノ酸配列、SEQ ID NO:53のCDRL1アミノ酸配列、SEQ ID NO:54のCDRL2アミノ酸配列、SEQ ID NO:55のCDRL3アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:23の重鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:2のCDRH1アミノ酸配列、SEQ ID NO:3のCDRH2アミノ酸配列、SEQ ID NO:4のCDRH3アミノ酸配列、SEQ ID NO:53のCDRL1アミノ酸配列、SEQ ID NO:54のCDRL2アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:55のCDRL3アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:2のCDRH1アミノ酸配列、SEQ ID NO:3のCDRH2アミノ酸配列、SEQ ID NO:4のCDRH3アミノ酸配列、SEQ ID NO:53のCDRL1アミノ酸配列、SEQ ID NO:54のCDRL2アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:55のCDRL3アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、本明細書において開示される抗体は、SEQ ID NO:2のCDRH1アミノ酸配列、SEQ ID NO:3のCDRH2アミノ酸配列、SEQ ID NO:10のCDRH3アミノ酸配列、SEQ ID NO:53のCDRL1アミノ酸配列、SEQ ID NO:54のCDRL2アミノ酸配列、およびSEQ ID NO:55のCDRL3アミノ酸配列を含む。
本明細書において開示される好ましい抗体には、例えば、B7-H4-2F9V7（本明細書においてXMT 1603抗体とも呼ばれる）およびB7-H4-2F9V18（本明細書においてXMT 1604抗体とも呼ばれる）が含まれる。これらの抗体は、ヒトB7-H4に対する特異性を示し、インビトロでB7-H4の機能活性を阻害することが示されている。
B7-H4抗体の生成
B7-H4抗体は、例えば、本明細書において提供される実施例に記載される方法を使用して生成される。あるいは、または加えて、B7-H4に対する、またはその誘導体、断片、類似体ホモログもしくはオルソログに対するモノクローナル抗体の生成のために、当技術分野において公知の様々な手順が使用され得る。（例えば、参照によりその各々全体が本明細書に組み入れられるAntibodies:A Laboratory Manual,Harlow E,and Lane D,1988,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY;Kozbor,et al.,1983 Immunol Today 4:72）;Cole,et al.,1985 In:Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc.,pp.77-96;Cote,et al.,1983.Proc Natl Acad Sci USA 80:2026-2030;Cole,et al.,1985 In:Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc.,pp.77-96を参照）。
本明細書において開示されるモノクローナル抗体には、完全ヒト抗体またはヒト化抗体が含まれる。これらの抗体は、投与された免疫グロブリンに対するヒトによる免疫応答を生じさせることなくヒトに投与するのに適している。ヒト化B7-H4抗体または完全ヒトB7-H4抗体は、例えば、ヒト配列のみを含む抗体を使用するファージディスプレイ法を使用して開発される。そのような手法は、当技術分野において、例えば、参照により本明細書に組み入れられる国際公開公報第92/01047号および米国特許第6,521,404号において周知である。
抗体は、主に免疫血清のIgG画分を提供するプロテインAまたはプロテインGを使用するアフィニティークロマトグラフィーなどの周知の技術によって精製される。続いて、またはあるいは、求められる免疫グロブリンの標的である特異的抗原またはそのエピトープをカラムに固定化して、イムノアフィニティークロマトグラフィーにより免疫特異的抗体を精製してもよい。免疫グロブリンの精製は、例えば、D.Wilkinson（参照により本明細書に組み入れられるThe Scientist,published by The Scientist,Inc.,Philadelphia PA,Vol.14,No.8（April 17,2000）,pp.25-28）によって説明されている。
本発明はまた、Fv抗B7-H4断片、Fab抗B7-H4断片、Fab'抗B7-H4断片およびF（ab'）2抗B7-H4断片または抗B7-H4断片、一本鎖抗B7-H4抗体、少なくとも1つのアームがB7-H4に結合する多重特異性抗体、ならびにヘテロコンジュゲート抗B7-H4抗体を含む。
二重特異性抗体とは、少なくとも2つの異なる抗原に対する結合特異性を有する抗体である。この場合、結合特異性の1つはB7-H4に対するものである。第2の結合標的は、細胞表面タンパク質または受容体もしくは受容体サブユニットを含む任意の他の抗原である。
二重特異性抗体を作製するための方法は、当技術分野において公知である。従来、二重特異性抗体の組換え生成は、2つの免疫グロブリン重鎖/軽鎖対の共発現に基づいており、2つの重鎖は異なる特異性を有する（Milstein and Cuello,Nature,305:537-539（1983））。
二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片（例えば、F（ab'）2二重特異性抗体）として調製することができる。抗体断片から二重特異性抗体を生成するための技術は、文献に記載されている。
2つを超える結合価を有する抗体が企図される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Tutt et al.,J.Immunol.147:60（1991）。
例示的な二重特異性抗体は、2つの異なるエピトープに結合することができ、そのうちの少なくとも1つは、本明細書において開示されるタンパク質抗原に由来する。あるいは、免疫グロブリン分子の抗抗原性アーム（anti-antigenic arm）は、特定の抗原を発現する細胞に細胞防御機構を集中させるために、白血球上のトリガー分子、例えばT細胞受容体分子（例えば、CD2、CD3、CD28またはB7）、またはIgGのFc受容体（FcγR）、例えば、FcγRI（CD64）、FcγRII（CD32）およびFcγRIII（CD16）に結合するアームと組み合わされ得る。二重特異性抗体を使用して、特定の抗原を発現する細胞に細胞傷害剤を導くこともできる。これらの抗体は、抗原結合アームと、細胞傷害剤または放射性核種キレート剤、例えば、EOTUBE、DPTA、DOTAまたはTETAに結合するアームとを有する。関心対象の別の二重特異性抗体は、本明細書において記載されるタンパク質抗原に結合し、組織因子（TF）にさらに結合する。
ヘテロコンジュゲート抗体も本発明の範囲内である。ヘテロコンジュゲート抗体は、2つの共有結合した抗体から構成される。そのような抗体は、例えば、免疫系細胞を望ましくない細胞に対してターゲティングし（米国特許第4,676,980号を参照）、HIV感染を治療するために提案されている（国際公開公報第91/00360号、国際公開公報第92/200373号、EP03089を参照）。抗体は、架橋剤を伴う合成タンパク質化学を含む合成タンパク質化学における公知の方法を使用してインビトロで調製され得ると考えられる。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することによって構築され得る。この目的に適した試薬の例には、イミノチオレート、およびメチル-4-メルカプトブチルイミデート、ならびに例えば米国特許第4,676,980号に開示されているものが挙げられる。
例えば、異常なB7-H4発現および/または活性に関連する疾患および障害の治療における抗体の有効性を増強するために、エフェクター機能に関して本明細書において開示される抗体を修飾することが望ましい場合がある。例えば、システイン残基をFc領域に導入し、それによって、この領域に鎖間ジスルフィド結合を形成させることができる。このように生成されたホモ二量体抗体は、改善された内在化能力、および/または増大した補体媒介細胞殺傷および抗体依存性細胞傷害（ADCC）を有し得る。（Caron et al.,J.Exp Med.,176:1191-1195（1992）およびShopes,J.Immunol.,148:2918-2922（1992）を参照）。あるいは、二重Fc領域を有し、それによって、増強された補体溶解およびADCC能力を有することができる抗体を操作することができる。（Stevenson et al.,Anti-Cancer Drug Design,3:219-230（1989）を参照）。
システイン操作B7-H4抗体
いくつかの態様では、システイン操作B7-H4抗体は、ペプチドリンカーを含むコンジュゲートを、特定の組織、細胞、または細胞内の位置に導く。いくつかの態様では、システイン操作B7-H4抗体は、操作されたシステインを含む。
いくつかの態様では、B7-H4システイン操作抗体またはB7-H4システイン操作抗体断片は、対応する親抗体または親抗体断片（例えば、対応する野生型B7-H4抗体または野生型B7-H4抗体断片）の1つまたは複数のアミノ酸がシステイン（例えば、操作されたシステイン）によって置換されたB7-H4抗体またはB7-H4抗体断片である。いくつかの態様では、親B7-H4抗体または親B7-H4抗体断片は、本明細書において記載されるものである。
いくつかの態様では、B7-H4抗体は、システイン操作抗体を形成するように操作される。いくつかの態様では、システイン操作B7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体断片は、その対応する野生型B7-H4抗体または野生型B7-H4抗体断片の抗原結合能力を保持する。いくつかの態様では、システイン操作抗体またはシステイン操作抗体断片は、その対応する野生型B7-H4抗体または野生型B7-H4抗体断片に関する1つまたは複数の抗原に結合することができる。
いくつかの態様では、操作されたシステインは、鎖内ジスルフィドユニットまたは鎖間ジスルフィドユニットの一部ではない。いくつかの態様では、操作されたシステインは、求電子性官能基と反応性である遊離チオール基を含む。いくつかの態様では、B7-H4抗体またはB7-H4抗体断片の表面上の操作されたシステイン（例えば、その遊離チオール基）は、B7-H4抗体またはB7-H4抗体断片と、チオール反応性基（例えば、マレイミドまたはハロアセチル）を含むリンカー-薬物部分とのコンジュゲーションを可能にし得る。
B7-H4抗体またはB7-H4抗体断片内の1つまたは複数の非システインアミノ酸をシステインによって置換することにより、コンジュゲーションに利用可能な部位として1つまたは複数の操作されたシステインが作り出され得ることが理解される。いくつかの態様では、B7-H4抗体またはB7-H4抗体断片内の非システインアミノ酸をシステインによって置換することによって、反応性チオール基は、抗体または抗体断片のアクセス可能な部位として位置付けられ、抗体または抗体断片を他の部分（例えば、薬物部分またはリンカー-薬物部分）にコンジュゲートし、本開示のコンジュゲートを作り出すために使用され得る。いくつかの態様では、親B7-H4抗体または親B7-H4抗体断片の軽鎖のV205（KabatナンバリングまたはEUナンバリング）、または重鎖のA118もしくはS442（EUナンバリング）のアミノ酸がシステインによって置換される。いくつかの態様では、システイン操作抗体は、例えば、米国特許第7,521,541号に記載されているように生成され得る。
いくつかの態様では、システイン操作B7-H4抗体は、操作されたシステインのスルフヒドリル基、およびリンカー-薬物部分の官能基を介して共有結合を形成することによって、リンカー-薬物部分にコンジュゲートされる。
修飾B7-H4抗体
いくつかの態様では、B7-H4抗体は修飾B7-H4抗体である。
修飾B7-H4抗体のいくつかの態様では、＊は、修飾B7-H4抗体の残部に対する直接的または間接的な結合を示す。いくつかの態様では、S''は、糖または誘導体化糖である。いくつかの態様では、A''は、リンカー-薬物部分の官能基と共有結合を形成することができる官能基であり、
いくつかの態様では、コンジュゲーション前の修飾B7-H4抗体は、＊-S''-A''の糖-誘導体部分を含む。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体は、領域290～305内にアスパラギン基を（例えば、N297；EUナンバリングに）含む。いくつかの態様では、糖-誘導体部分は、このアスパラギン基に（例えば、N297に）直接的または間接的に結合される。
いくつかの態様では、コンジュゲーション前の修飾B7-H4抗体は、修飾GlcNAc部分、＊-GlcNAc-S''-A''を含み、GlcNAcはN-アセチルグルコサミンである。
いくつかの態様では、修飾GlcNAc部分は、GlcNAcのC1位を介して、修飾B7-H4抗体の残部に接続される。いくつかの態様では、修飾GlcNAc部分は、フコースをさらに含む。
いくつかの態様では、修飾GlcNAc部分は、アスパラギン基に（例えば、N297に）直接的または間接的に結合される。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体は、A''とリンカー-薬物部分の官能基との間に形成された共有結合を介して、リンカー-薬物部分にコンジュゲートされる。
いくつかの態様では、本開示の修飾B7-H4抗体は、
（a）B7-H4抗体とコア-GlcNAc部分とを含む糖タンパク質（例えばB7-H4抗体グリカン）をエンドグリコシダーゼと接触させ、それによって、抗体と末端GlcNAc部分とを含む中間抗体を形成する工程であって、任意で、末端GlcNAc部分が、フコースをさらに含む工程、および
（b）中間抗体を、グリコシルトランスフェラーゼの存在下で、P''-S''-A''の構造を有する化合物と接触させ、それによって、抗体と修飾GlcNAc部分、＊-GlcNAc-S''-A''とを含む修飾B7-H4抗体を形成する工程であって、任意で、修飾GlcNAc部分が、GlcNAcのC1位を介して、修飾B7-H4抗体の残部に結合される工程、を含むプロセスによって得られ、
GlcNAcはN-アセチルグルコサミンであり、
S''は、糖または誘導体化糖であり、
A''は、アジド、ケトまたはアルキニルであり、
P''は、ウリジン二リン酸（UDP）、グアノシン二リン酸（GDP）またはシチジン二リン酸（CDP）である。
いくつかの態様では、工程（a）および（b）は、連続的に行われる。いくつかの態様では、工程（a）および（b）は、同時に行われる。
いくつかの態様では、抗体グリカンは、グリコフォームG0、G1、G2、G0F、GIF、G2FおよびM5（例えば、図1に示されるグリコフォーム）の混合物を含む。
いくつかの態様では、抗体はモノクローナル抗体（mAb）である。
いくつかの態様では、抗体は、IgA抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgG抗体またはIgM抗体である。
いくつかの態様では、抗体は、IgG抗体、例えば、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体またはIgG4抗体である。いくつかの態様では、抗体はIgG1抗体である。
いくつかの態様では、抗体は完全長抗体であり、抗体グリカンは、1つまたは複数のコア-GlcNAc部分を含む。
いくつかの態様では、抗体は完全長抗体であり、抗体グリカンは、抗体の各重鎖に接続された1つまたは複数のコア-GlcNAc部分を含む。
いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、フコースをさらに含む。
いくつかの態様では、抗体は完全長抗体であり、抗体グリカンは、完全長抗体に接続された2つ以上のコア-GlcNAc部分を含む。
いくつかの態様では、抗体は完全長抗体であり、抗体グリカンは、完全長抗体に接続された2つのコア-GlcNAc部分を含む。
いくつかの態様では、2つ以上のコア-GlcNAc部分のうちの少なくとも1つは、フコースをさらに含む。
いくつかの態様では、2つ以上のコア-GlcNAc部分の各々は、フコースをさらに含む。
いくつかの態様では、抗体は、一本鎖抗体またはB7-H4抗体断片（例えば、Fab断片またはFc断片）であり、抗体グリカンは、抗体に接続された1つまたは複数のコア-GlcNAc部分（任意でフコースをさらに含む）を含む。
いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、抗体のある位置に接続され、コア-GlcNAc部分は、抗体の抗原結合部位を実質的に妨害しない。
いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、抗体のFc断片に接続される。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、CHドメインに接続される。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、抗体のFab断片またはFc断片に接続される。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、抗体のアスパラギンアミノ酸の側鎖のアミド窒素原子へのN-グリコシド結合を介して抗体に接続される。いくつかの態様では、コア-GlcNAc部分は、抗体の天然N-グリコシル化部位に接続される。
いくつかの態様では、抗体はIgG抗体であり、コア-GlcNAc部分は、IgGの天然N-グリコシル化部位に接続される。
いくつかの態様では、抗体はIgG抗体であり、コア-GlcNAc部分は、IgGの天然N-グリコシル化部位（例えば、IgGのN297 N-グリコシル化部位）に接続される。いくつかの態様では、N297 N-グリコシル化部位は、領域290～305内のアスパラギンにおいて（例えば、N297において）IgG抗体の重鎖の保存されたFc領域に存在する。
いくつかの態様では、中間抗体は、式（XXII）のもの:
Figure 2024501894000215
であり、
式中、
AbはB7-H4抗体であり、GlcNAcはN-アセチルグルコサミンであり、Fucはフコースであり、u3は0または1であり、u4は、1～16の範囲の整数である。
いくつかの態様では、u4は、1～10の範囲の整数である。いくつかの態様では、u4は、1、2、3、4、5、6、7または8である。いくつかの態様では、u4は、1、2、3、4、5または6である。いくつかの態様では、u4は、1、2、3または4である。いくつかの態様では、u4は、2または4である。いくつかの態様では、u4は、1または2である。いくつかの態様では、u4は1である。いくつかの態様では、u4は2である。
いくつかの態様では、抗体は、1つのコア-GlcNAc部分を含む（例えば、u4は1である）。いくつかの態様では、抗体は、2つのコア-GlcNAc部分を含む（例えば、u4は2である）。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体は、スキーム1に概説されるプロセスによって得られる。以下に示すように、グリコシルトランスフェラーゼの存在下で、1つの末端GlcNAc部分を含む式（XXIII）の中間抗体をP''-S''-A''の構造を有する化合物と接触させると、1つの修飾GlcNAc部分を含む修飾B7-H4抗体（例えば、式（XXIIIa）の修飾B7-H4抗体）が得られる。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体は、グリコシルトランスフェラーゼの存在下で、2つの末端GlcNAc部分を含む式（XXIV）の中間抗体をP''-S''-A''の構造を有する化合物と接触させることによって得られ、2つの修飾GlcNAc部分を含む修飾B7-H4抗体（例えば、式（XXIVa）の修飾B7-H4抗体）を提供する。
Figure 2024501894000216
式中、u3、Ab、S''、A''およびP''は、本明細書において定義される通りである。
いくつかの態様では、本開示によるプロセスで修飾される抗体グリカンは、グリカンを含み、該グリカンは、コア-GlcNAc部分、すなわち、グリカンの非還元末端に存在するGlcNAc部分を含む。いくつかの態様では、グリカンは、1つまたは複数の糖部分を含み、直鎖状または分岐状であり得る。
いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼと反応させると、末端GlcNAc部分を含む中間抗体（例えば、式（XXIII）または（XXIV）の中間抗体）が形成され得る。
いくつかの態様では、プロセスの工程（a）（脱グリコシル化またはトリミング）は、図2に示す通りであり、ここで、抗体グリコフォームG2F、GIF、G0F、G2、G1、G0およびM5（例えば、図1を参照）ならびに場合により追加のグリコフォーム（例えば三本鎖グリカン）の混合物が、フコースを含んでいてもよい（例えば、u3は、0または1である）末端GlcNAc部分を含む中間抗体に変換される。
いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、エンドグリコシダーゼEndo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo F1、Endo F2、Endo F3またはそれらの組合せである。
いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49またはそれらの組合せである。
いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、Endo SもしくはEndo SH、またはそれらの組合せである。いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼはEndo SHである。
いくつかの態様では、プロセスの工程（b）（修飾B7-H4抗体の形成）は、図3に示す通りであり、ここで、中間抗体は、モノクローナル抗体（mAb）と、モノクローナル抗体（mAb）の各重鎖上の末端GlcNAc部分（フコースを含んでいてもよい（例えば、u3は、0または1である））とを含む。いくつかの態様では、工程（b）において、末端GlcNAc部分が修飾GlcNAc部分に変換される。いくつかの態様では、該変換は、グリコシルトランスフェラーゼの存在下での末端GlcNAc部分とP''-S''-A''の化合物との反応を介して行われ得る。
いくつかの態様では、P''-S''-A''の化合物は、GalNAz-UDP（例えば4-AzGalNAc-UDP）である。いくつかの態様では、末端GlcNAc部分は、＊-GlcNAc-GalNAzまたは＊-GlcNAc（Fuc）-GalNAzであり、ここで、＊は、修飾B7-H4抗体の残部への結合を表す。
いくつかの態様では、脱グリコシル化/トリミング工程および修飾B7-H4抗体の形成の工程は、連続的に行われる。
いくつかの態様では、脱グリコシル化/トリミング工程および修飾B7-H4抗体の形成の工程は、同時に行われる。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体を調製するためのプロセスは、好適な緩衝液、例えば緩衝生理食塩水（例えば、リン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水）シトレート、HEPES、トリスおよびグリシン中で行われる。いくつかの態様では、緩衝液は、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）またはトリス緩衝生理食塩水である。いくつかの態様では、緩衝液はリン酸緩衝生理食塩水（PBS）である。
いくつかの態様では、プロセスは、約4～約50℃の範囲の温度で行われる。いくつかの態様では、プロセスは、約10～約45℃の範囲の温度で行われる。いくつかの態様では、プロセスは、約20～約40℃の範囲の温度で行われる。いくつかの態様では、プロセスは、約30～約37℃の範囲の温度で行われる。いくつかの態様では、プロセスは、約30℃の温度で行われる。いくつかの態様では、プロセスは、30℃の温度で行われる。
いくつかの態様では、プロセスは、約5～約9（例えば、約5.5～約8.5、約6～約8、または約7～約8）の範囲のpH値で行われる。いくつかの態様では、プロセスは、約7.4のpH値で行われる。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体を調製するためのプロセスは、図4に示す通りである。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体を調製するためのプロセスは、
（a）B7-H4抗体と、抗体の部位N297に接続されたコア-GlcNAc部分とを含む糖タンパク質（例えばB7-H4抗体グリカン）をエンドグリコシダーゼEndo SHと接触させ、それによって、末端GlcNAc部分を含む中間抗体を形成する工程、および
（b）β-（1,4）-GalNAcT酵素の存在下で中間抗体を4-AzGalNAc-UDPと接触させ、それによって、修飾GlcNAc部分を含む修飾B7-H4抗体を形成する工程、を含み、
工程（a）および（b）は、同時に行われる。
いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、139kDaの総分子量をもたらす、内部6xHisタグを含むGlyリッチスペーサーによって結合された、2つのエンドグリコシダーゼ、Endo SとEndo Hとの融合物であるEndo SHである。
いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、N末端6xHisタグを含み、45.7kDaの総分子量を有する。いくつかの態様では、N末端6xHisタグを含むβ-（1,4）-GalNAcT酵素は、イラクサギンウワバ（Trichoplusia ni）から誘導される。
いくつかの態様では、プロセスは、PBS緩衝液中、約7.4のpH値および約30℃の温度で行われる。
エンドグリコシダーゼ
エンドグリコシダーゼは、グリカン構造内の内部グリコシド結合を切断し、それによって、グリカン構造を再構築またはトリミングすることができる酵素である。例えば、エンドグリコシダーゼは、保存されたグリカン領域内の予測可能な部位で切断する場合、異種グリカン集団の容易な均質化に使用され得る。エンドグリコシダーゼの1つのクラスは、エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ（EC 3.2.1.96、Endo SまたはENGaseとして一般的に知られている）、（参照によりその全体が本明細書に組み入れられるWong et al.Chem.Rev.2011,111,4259に記載されているように）N,N’-ジアセチルキトビオースコアのβ-1,4-グリコシド結合を加水分解し、単一コアのN結合GlcNAc残基を残すことによって糖タンパク質からN-グリカンを除去する加水分解酵素のクラスを含む。エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼは、パウシマンノースに特異的なEndo D;高マンノースに特異的なEndo AおよびEndo H;高マンノースから二本鎖複合体に及ぶEndo Fサブタイプ;ならびにフコシル化グリカンを除く大部分のN-グリカン構造（高マンノース型/複合型/ハイブリッド型）を切断することができるEndo Mを含む一般的な化学酵素変異体とともに自然界に広く見出され、高マンノース型オリゴ糖の加水分解活性は、複合型およびハイブリッド型のオリゴ糖のそれよりも顕著に高い。いくつかの態様では、これらのENGaseは、遠位N-グリカン構造に対する特異性を示し、遠位N-グリカン構造を提示するタンパク質に対する特異性を示さず、天然条件下で糖タンパク質から大部分のN結合グリカンを切断するのに有用である。
いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼF1、F2およびF3は、天然タンパク質の脱グリコシル化に適している。Endo F1、F2およびF3の結合特異性は、タンパク質を変性させることなく、あらゆるクラスのN結合オリゴ糖を除去し得る、タンパク質の脱グリコシル化のための一般的な戦略を示唆している。いくつかの態様では、二本鎖構造および三本鎖構造は、それぞれエンドグリコシダーゼF2およびF3によって直ちに除去され得る。いくつかの態様では、オリゴマンノースおよびハイブリッド構造が、Endo F1によって除去され得る。
Endo Sは、化膿性連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）から分泌されるエンドグリコシダーゼであり、また、参照によりその全体が本明細書に組み入れられるCollin et al.（EMBO J.,2001,20,3046）によって開示されているように、グリコシドヒドロラーゼファミリー18に属する。上記ENGaseとは対照的に、Endo Sは、さらに明確な特異性を有し、ヒトIgGのFcドメイン内の保存されたN-グリカンのみを切断するために特異的であり（他の基質はこれまで同定されていない）、酵素とIgGとの間のタンパク質-タンパク質相互作用がこの特異性をもたらすことを示唆している。
Endo S2としても知られているEndo S49は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる国際公開公報第2013/037824号に記載されており、化膿性連鎖球菌NZ131から単離され、Endo Sのホモログである。Endo S49は、天然IgGに対して特異的なエンドグリコシダーゼ活性を有し、Endo Sよりも多種多様なFcグリカンを切断する。
Endo SHは、Glyリッチスペーサーによって結合された2つのエンドグリコシダーゼ、Endo SとEndo Hとの融合物である。Endo SHは、グリカン鎖のコア領域内の2つのN-アセチルグルコサミン（GluNAc）部分の間のN結合グリカンを特異的に切断する。
いくつかの態様では、抗体を脱グリコシル化するためのエンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo F1、Endo F2、Endo F3、Endo H、Endo M、Endo Aまたはそれらの組合せである。いくつかの態様では、抗体を脱グリコシル化するためのエンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo F1、Endo F2、Endo F3、Endo Hまたはそれらの組合せである。いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2またはEndo S49である。
いくつかの態様では、トリミングされるグリカンが複合型の二分岐構造である場合、エンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo F1、Endo F2、Endo F3またはそれらの組合せである。
いくつかの態様では、糖タンパク質がB7-H4抗体であり、トリミングされるオリゴ糖が、複合型の二分岐構造であり、N297におけるIgG保存N-グリコシル化部位に存在する場合、エンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo F1、Endo F2、Endo F3またはそれらの組合せである。いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49またはそれらの組合せである。
いくつかの態様では、糖タンパク質がB7-H4抗体であり、トリミングされるグリカンが、複合型の二分岐構造であり、N297におけるIgG保存N-グリコシル化部位に存在しない場合、エンドグリコシダーゼは、Endo F1、Endo F2、Endo F3またはそれらの組合せである。
いくつかの態様では、トリミングされるグリカンが高マンノースである場合、エンドグリコシダーゼは、Endo H、Endo M、Endo A、Endo F1またはそれらの組合せである。
いくつかの態様では、糖タンパク質がB7-H4抗体であり、トリミングされるオリゴ糖が、複合型の二分岐構造を有することに加えて、高マンノースであり、N297におけるIgG保存N-グリコシル化部位に存在する場合、エンドグリコシダーゼは、Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49またはそれらの組合せである。いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼは、Endo SまたはEndo SHである。いくつかの態様では、エンドグリコシダーゼはEndo SHである。
いくつかの態様では、本明細書において定義されるエンドグリコシダーゼ酵素は、精製を容易にするためのタグをコードする配列を含む。いくつかの態様では、該タグには、限定されることなく、FLAGタグ、ポリ（His）-タグ、HA-タグ、Myc-タグ、SUMO-タグ、GST-タグ、MBP-タグまたはCBP-タグが含まれる。いくつかの態様では、該タグは6xHisタグである。いくつかの態様では、該タグは、酵素のC末端で、または内部残基で、エンドグリコシド（endoglycoside）酵素に共有結合している。いくつかの態様では、該タグは、酵素のN末端でエンドグリコシド酵素に共有結合している。
いくつかの態様では、Endo SHは、139kDaの総分子量をもたらす、内部6xHisタグを含むGlyリッチスペーサーによって結合された、2つのエンドグリコシダーゼ、Endo SとEndo Hとの融合物である。
グリコシルトランスフェラーゼ
修飾B7-H4抗体を形成するプロセスは、グリコシルトランスフェラーゼの存在下で、式S''（A''）-P''の化合物を用いて、フコシル化されていてもよい末端N-アセチルグルコサミン（Gal-NAc）部分を有する脱グリコシル化/トリミング抗体を処理して、β-1,4-O-グリコシド結合を介して、GalNAc部分のC1で抗体に結合したGlcNAc-S''（A''）置換基を有する修飾B7-H4抗体を形成する工程を含む。
いくつかの態様では、グリコシルトランスフェラーゼは、β-1,4-ガラクトシルトランスフェラーゼ（4Gal-T）、β-（1,4）-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（β-（1,4）-GalNAcTまたはGalNAcT）またはそれらの変異種である。
β-（1,4）-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（β-（1,4）-GalNAcTまたはβ-（1,4）-GalNAcT）は、ヒト、エレガンス線虫（Caenorhabditis elegans）（参照によりその全体が本明細書に組み入れられるKawar et al,J.Biol.Chem.2002,277,34924）、キイロショウジョウバエ（Drosophila melanogaster）（参照によりその全体が本明細書に組み入れられるHoskins et al.Science 2007,316,1625）およびイラクサギンウワバ（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるVadaie et al,J.Biol.Chem.2004,279,33501）を含む多数の生物において同定されている。
β-（1,4）-N-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（β-（1,4）-GalNAcT）は当技術分野において公知である。いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcTは、ウリジン二リン酸-GalNAc（GalNAc-UDPとも呼ばれるUDP-GalNAc）から糖タンパク質グリカンの末端GlcNAc部分へのN-アセチルガラクトサミン（GalNAc）の転移を触媒する酵素であり、GalNAc部分のC1は、β-1,4-O-グリコシド結合を介して抗体に結合している。いくつかの態様では、末端GlcNAc部分はフコシル化されている。
いくつかの態様では、本発明のプロセスで使用されるβ-（1,4）-GalNAcT酵素は、無脊椎動物β-（1,4）-GalNAcT酵素であるか、またはそれから誘導され、例えば、無脊椎動物種に由来するβ-（1,4）-GalNAcTであるか、またはそれから誘導される。β-（1,4）-GalNAcT酵素は、当業者に公知の任意の無脊椎動物β-（1,4）-GalNAcT酵素であり得るか、またはそれから誘導され得る。いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、線形動物（Nematoda）門に由来する、例えば、クロマドラ綱（Chromadorea）もしくは双線綱（Secernentea）のクラスなどの、または節足動物（Arthropoda）門の、例えば、昆虫綱（Insecta）のクラスなどのβ-（1,4）-GalNAcT酵素であるか、またはそれから誘導される。いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、エレガンス線虫、カエノラブディティス・レマネイ（Caenorhabditis remanei）、ブリグサ線虫（Caenorhabditis briggsae）、ブタ回虫（Ascaris suum）、イラクサギンウワバ、キイロショウジョウバエ、バンクロフト糸状虫（Wuchereria bancrofti）、ロア糸状虫（Loa loa）、クビレハリアリ（Cerapachys biroi）、ネバダオオシロアリ（Zootermopsis nevadensis）、カンポノツス・フロリダヌス（Camponotus floridanus）、マガキ（Crassostrea gigas）またはオオカバマダラ（Danaus plexippus）、（例えば、エレガンス線虫、ブタ回虫、イラクサギンウワバまたはキイロショウジョウバエ）に由来するβ-（1,4）-GalNAcT酵素であるか、またはそれから誘導される。いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、エレガンス線虫、ブタ回虫またはイラクサギンウワバに由来するβ-（1,4）-GalNAcT酵素であるか、またはそれから誘導される。他の態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、イラクサギンウワバに由来するβ-（1,4）-GalNAcT酵素であるか、またはそれから誘導される。
用語「から誘導される」は、例えば、切断型酵素、変異型酵素、精製を容易にするためのタグを含む酵素、またはこれらの修飾の組合せを含む。したがって、から誘導されるとは、天然に存在するβ-（1,4）-GalNAcT酵素から、それぞれ1つまたは複数（例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20またはそれ以上）のアミノ酸を置換、挿入、欠失または付加することによって改変されたアミノ酸配列を有することを指す。β-（1,4）-GalNAcT酵素から誘導されるβ-（1,4）-GalNAcT酵素は、本明細書において、誘導型β-（1,4）-GalNAcT酵素、または改変型β-（1,4）-GalNAcT酵素、またはβ-（1,4）-GalNAcT変異型酵素とも呼ばれる。
いくつかの態様では、誘導型β-（1,4）-GalNAcT酵素は、安定性、溶解度、活性、および/または精製の容易さを増大させるために、追加のN末端アミノ酸もしくはC末端アミノ酸もしくは化学部分を加えることによって、またはN末端アミノ酸もしくはC末端アミノ酸を欠失させることによって修飾される。
いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、N末端細胞質ドメインおよび膜貫通ドメインを欠失させることによって修飾され、切断型酵素と呼ばれる。
1つまたは複数のアミノ酸が置換、付加または欠失されたβ-（1,4）-GalNAcT酵素は、本明細書において、変異型β-（1,4）-GalNAcT酵素または誘導型β-（1,4）-GalNAcT酵素とも呼ばれる。いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、N末端細胞質ドメインおよび膜貫通ドメインを欠失させることによって修飾され、1つまたは複数のアミノ酸を置換することによって変異される。1つまたは複数のアミノ酸の置換は、本明細書において、変異とも呼ばれる。1つまたは複数の置換アミノ酸を含む酵素は、変異型酵素とも呼ばれる。
いくつかの態様では、グリコシルトランスフェラーゼがβ-（1,4）-GalNAcT酵素または切断型β-（1,4）-GalNAcT酵素である場合、該酵素は、1つまたは複数の変異をさらに含む。いくつかの態様では、これらの変異には、限定されることなく、ロイシン（Lとも呼ばれるLeu）、メチオニン（Mとも呼ばれるMet）またはアラニン（Aとも呼ばれるAla）による257位のイソロイシン（Iとも呼ばれるHe）の置換が含まれる。いくつかの態様では、ヒスチジン（Hとも呼ばれるHis）による312位のメチオニン（Mとも呼ばれるMet）の置換も含まれる。本明細書におけるアミノ酸位置のナンバリングは、野生型β-（1,4）-GalNAcT酵素におけるアミノ酸位置のナンバリングに基づく。β-（1,4）-GalNAcT酵素が、例えば切断型酵素である場合、アミノ酸置換の位置を示すために本明細書において使用される番号は、対応する野生型β-（1,4）-GalNAcT酵素におけるアミノ酸位置のナンバリングに対応する。
いくつかの態様では、グリコシルトランスフェラーゼは、変異触媒ドメインを含むβ（1,4）-GalT酵素である。
触媒ドメインは、野生型酵素に見られるようなアミノ酸配列を有してもよい、または野生型配列とは異なるアミノ酸配列を有してもよい。野生型配列とは異なるアミノ酸配列を有する触媒ドメインは、本明細書において、変異触媒ドメインと呼ばれる。いくつかの態様では、変異は、単一のアミノ酸変化（例えば点変異）、または複数のアミノ酸変化（例えば、1～10、または1～6、または1、2、3もしくは4、または1もしくは2個のアミノ酸）、または1つもしくは複数のアミノ酸（例えば、1～10、または1～6、または1、2、3もしくは4、または1もしくは2個の）アミノ酸の欠失もしくは挿入を含み得る。いくつかの態様では、該変異触媒ドメインは、完全長酵素、例えば、β（1,4）-ガラクトシルトランスフェラーゼまたはα（1,3）-N-ガラクトシルトランスフェラーゼに存在し得るが、任意で追加のアミノ酸に結合された該変異触媒ドメインを含むポリペプチド断片または組換えポリペプチドにも存在し得る。
β（1,4）-ガラクトシルトランスフェラーゼIは、本明細書において、GalTと呼ばれる。そのような変異GalT触媒ドメインは、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる国際公開公報第2004/063344号に開示されている。国際公開公報第2004/063344号はまた、GalTのTyr-289変異体およびそれらの調製方法を開示している。これらの変異体は、Y289L、Y289NまたはY289Iと呼ばれる。
いくつかの態様では、GalT変異触媒ドメインは、Y289L、Y289N、Y289I、Y284LまたはR228Kである。いくつかの態様では、GalT変異触媒ドメインはY289Lである。
いくつかの態様では、GalT Y289F変異体、GalT Y289M変異体、GalT Y289V変異体、GalT Y289G変異体、GalT Y289I変異体、GalT Y289A変異体、GalT Y289N変異体およびGalT Y289L変異体は、例えば、国際公開公報第2004063344号、Qasba et al,Prot.Expr.Pur.2003,30,219、およびQasba et al,J.Biol.Chem.2002,277,20833（いずれも参照によりその全体が本明細書に組み入れられる）に記載されている部位特異的変異誘発プロセスを介して生成され得る。GalT Y289Fでは、289位のチロシンアミノ酸（Y）は、フェニルアラニン（F）アミノ酸によって置換され、GalT Y289Mでは、該チロシンは、メチオニン（M）アミノ酸によって置換され、GalT Y289Vでは、バリン（V）アミノ酸によって置換され、GalT Y289Gでは、グリシン（G）アミノ酸によって置換され、GalT Y289Iでは、イソロイシン（I）アミノ酸によって置換され、Y289Aでは、アナリン（analine）（A）アミノ酸によって置換される。
いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、精製を容易にするためのタグをコードする配列を含む。いくつかの態様では、該タグには、限定されることなく、FLAGタグ、ポリ（His）-タグ、HA-タグ、Myc-タグ、SUMO-タグ、GST-タグ、MBP-タグまたはCBP-タグが含まれる。他の態様では、該タグは6xHisタグである。いくつかの態様では、該タグは、酵素のC末端でβ-（1,4）-GalNAcT酵素に共有結合している。いくつかの態様では、該タグは、酵素のN末端でβ-（1,4）-GalNAcT酵素に共有結合している。
いくつかの態様では、β-（1,4）-GalNAcT酵素は、N末端6xHisタグを含み、45.7kDaの総分子量を有する。いくつかの態様では、N末端6xHisタグを含むβ-（1,4）-GalNAcT酵素は、イラクサギンウワバから誘導される。
P''-S''-A''の分子
いくつかの態様では、本開示の修飾B7-H4抗体を調製するプロセスで使用するためのP''-S''-A''の分子は、好適なガラクトシルトランスフェラーゼ触媒の基質である任意の糖誘導体ヌクレオチドであり得る。
いくつかの態様では、S''-A''は糖誘導体部分であり、式中、
S''は、糖または誘導体化糖であり、A''は、リンカー-薬物部分の官能基と共有結合を形成することができる官能基である。
いくつかの態様では、A''は、アジド部分、ケト部分またはアルキニル部分である。いくつかの態様では、A''は、アジド部分またはケト部分である。いくつかの態様では、A''はアジド部分である。いくつかの態様では、A''は-N3である。いくつかの態様では、A''はケト部分である。
いくつかの態様では、A''は、-［C（R8k）2］x2C（O）R9kであり、式中、
R9kは、メチルまたは置換されていてもよいC2～24アルキルであり、
各R8kは、独立して、水素、ハロゲンまたはR9kであり、
x2は、0～24の範囲の整数である。
いくつかの態様では、x2は、0～10の範囲の整数である。いくつかの態様では、x2は、0、1、2、3、4、5または6である。
いくつかの態様では、各R8kは水素である。
いくつかの態様では、A''はアルキニル部分である。いくつかの態様では、A''は、末端アルキニル部分、シクロアルキニル部分またはヘテロシクロアルキニル部分である。いくつかの態様では、A''は末端アルキニル部分である。いくつかの態様では、A''はシクロアルキニル部分である。いくつかの態様では、A''はヘテロシクロアルキニル部分である。
いくつかの態様では、A''は-［C（R8k）2］x2-C≡C-R8k基であり、式中、R8kおよびx2は、本明細書において定義される通りである。いくつかの態様では、A''は-［CH2］x2-C≡CHである。
いくつかの態様では、S''-A''は、糖または誘導体化糖、例えば、アミノ糖または他の誘導体化糖に由来する。いくつかの態様では、糖および誘導体化糖の例には、限定されることなく、ガラクトース（Gal）、マンノース（Man）、グルコース（Glc）、グルクロン酸（Gcu）およびフコース（Fuc）が挙げられる。アミノ糖とは、ヒドロキシル（OH）基がアミン基によって置換された糖であることが理解される。アミノ糖の例には、限定されることなく、N-アセチルグルコサミン（GlcNAc）およびN-アセチルガラクトサミン（GalNAc）が挙げられる。他の方法で誘導体化された糖の例には、限定されることなく、グルクロン酸（Gcu）およびN-アセチルノイラミン酸（シアル酸）が挙げられる。
いくつかの態様では、S''-A''は、ガラクトース（Gal）、マンノース（Man）、N-アセチルグルコサミン（GlcNAc）、グルコース（Glc）、N-アセチルガラクトサミン（GalNAc）、グルクロン酸（Gcu）、フコース（Fuc）またはN-アセチルノイラミン酸（シアル酸）に由来する。いくつかの態様では、S''-A''は、GlcNAc、Glc、GalまたはGalNAcに由来する。いくつかの態様では、S''-A''は、GlcNAcに由来する。いくつかの態様では、S''-A''は、Glcに由来する。いくつかの態様では、S''-A''は、GalまたはGalNAcに由来する。いくつかの態様では、S''-A''は、Galに由来する。いくつかの態様では、S''-A''は、GalNAcに由来する。
いくつかの態様では、官能基A''は、様々な方法でS''に結合され得る。
いくつかの態様では、A''は、S''の糖または誘導体化糖のC2位、C3位、C4位またはC6位の炭素原子に直接結合している（例えば、対応する位置のヒドロキシルの代わりに）。
いくつかの態様では、S''は、任意のヒドロキシルC6位を欠くフコースまたは誘導体化フコースである。いくつかの態様では、A''がフコースまたは誘導体化フコースのC6位に結合している場合、A''は、C6位の炭素原子に直接結合している。
いくつかの態様では、A''はアジド部分であり、A''は、S''の糖または誘導体化糖のC2位、C4位またはC6位に結合している。
いくつかの態様では、A''はアジド部分であり、A''は、S''の糖または誘導体化糖のC2位、C3位、C4位またはC6位の炭素原子に直接結合している（例えば、対応する位置のヒドロキシルの代わりに）。いくつかの態様では、S''-A''は6-アジドフコース（6-AzFuc）である。いくつかの態様では、A''はアジド部分であり、A''は、アミノ糖または誘導体化アミノ糖のN-アセチル部分に結合している（例えば、アセチル部分をアジドアセチル部分によって置換することによって）。いくつかの態様では、S''-A''は、2-アジドアセトアミドガラクトース（GalNAz）、6-アジド-6-デオキシガラクトース（6-AzGal）、6-アジド-6-デオキシ-2-アセトアミドガラクトース（6-AzGalNAc）、4-アジド-4-デオキシ-2-アセトアミドガラクトース（4-AzGalNAc）、6-アジド-6-デオキシ-2-アジドアセトアミドガラクトース（6-AzGalNAz）、2-アジドアセトアミドグルコース（GlcNAz）、6-アジド-6-デオキシグルコース（6-AzGlc）、6-アジド-6-デオキシ-2-アセトアミドグルコース（6-AzGlcNAc）、4-アジド-4-デオキシ-2-アセトアミドグルコース（4-AzGlcNAc）、または6-アジド-6-デオキシ-2-アジドアセトアミドグルコース（6-AzGlcNAz）である。いくつかの態様では、S''-A''は、GalNAz、4-AzGalNAc、GlcNAz、または6-AzGlcNAcである。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVb）、（XXXIVc）もしくは（XXIVd）の化合物またはその塩である。
いくつかの態様では、A''ケトおよびA''は、S''の糖または誘導体化糖のC2位の炭素原子に直接結合している（例えば、対応する位置のヒドロキシルの代わりに）。
いくつかの態様では、A''は、アミノ糖または誘導体化アミノ糖、例えばC2-誘導体化アミノ糖の窒素原子に結合している。いくつかの態様では、誘導体化アミノ糖は、-NC（O）-R9kの部分を含み、式中、R9kは、メチルまたは置換されていてもよいC2～24アルキル（例えばエチル）である。
いくつかの態様では、R9kはエチルである。
いくつかの態様では、S''-A''は、2-デオキシ-（2-オキソプロピル）-ガラクトース（2-ケト-Gal）、2-N-プロピオニル-ガラクトサミン（2-N-プロピオニルGal-NAc）、2-N-（4-オキソペンタノイル）-ガラクトサミン（2-N-Lev-Gal）、または2-N-ブチリル-ガラクトサミン（2-N-ブチリル-GalNAc）である。いくつかの態様では、S''-A''は、2-ケトGalNAc、または2-N-プロピオニル-GalNAcである。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVe）もしくは（XXIVf）の化合物またはその塩である。
いくつかの態様では、A''は、末端アルキニル、シクロアルキニルまたはヘテロシクロアルキニルである。いくつかの態様では、A''は、S''のC2-誘導体化アミノ糖に結合している。
いくつかの態様では、S''-A''は2-（ブタ-3-イン酸アミド）-2-デオキシ-ガラクトースである。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVg）の化合物またはその塩である。いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVd）の化合物またはその塩である。
いくつかの態様では、P''-S''-A''の化合物は、当技術分野において公知の様々な方法に従って合成され得る。いくつかの態様では、化合物は、例えば、その各々全体が参照により本明細書に組み入れられるWang et al.（Chem.Eur.J.16:13343-13345（2010））、Piller et al.（ACS Chem.Biol.7:753（2012））、Piller et al.（Bioorg.Med.Chem.Lett.15:5459-5462（2005）、およびPCT出願公開国際公開公報第2009/102820号に開示されているように、ヌクレオシド一リン酸P''またはヌクレオシド二リン酸P''を糖誘導体S''-A''に結合することによって合成される。
いくつかの態様では、P''は、ヌクレオシド一リン酸またはヌクレオシド二リン酸である。いくつかの態様では、P''は、ウリジン二リン酸（UDP）、グアノシン二リン酸（GDP）、チミジン二リン酸（TDP）、シチジン二リン酸（CDP）またはシチジン一リン酸（CMP）である。いくつかの態様では、P''はウリジン二リン酸（UDP）である。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVb）、（XXIVc）、（XXIVd）、（XXIVe）、（XXIVf）もしくは（XXIVg）の化合物:
Figure 2024501894000217
またはその塩であり、式中、R9kはC2～24アルキル基である。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は、GalNAz-UDP（例えば式（XXIVb））、6-AzGal-UDP（例えば式（XXIVc））、6-AzGalNAc-UDP（例えば式（XXIVd））、4-AzGalNAz-UDP、6-AzGalNAz-UDP、6-AzGlc-UDP、6-AzGlcNAz-UDP、2-ケトGal-UDP（例えば式（XXIVe））、2-N-プロピオニルGalNAc-UDP（例えば式（XXIVf）、式中、R9kはエチルである）、または2-（ブタ-3-イン酸アミド）-2-デオキシ-ガラクトース-UDP（例えば式（XXIVg））である。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は、GalNAz-UDPまたは4-AzGalNAc-UDPである。いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVb）または（XXIVd）の化合物である。GalNAz-UDP（例えば式（XXIVb））および6-AzGalNAc-UDP（例えば式（XXIVd））の合成は、その各々全体が参照により本明細書に組み入れられるPiller et al.（Bioorg.Med.Chem.Lett.15:5459-5462（2005））、およびWang et al.（Chem.Eur.J.16:13343-13345（2010））に開示されている。
いくつかの態様では、P''-S''-A''は4-AzGalNAc-UDPである。いくつかの態様では、P''-S''-A''は、式（XXIVd）の化合物またはその塩である。2-ケトGal-UDP（XXIVe）の合成は、いずれも参照によりその全体が本明細書に組み入れられるQasba et al.（J.Am.Chem.Soc.125:16162（2003））およびその補足情報に開示されている。
2-（ブタ-3-イン酸アミド）-2-デオキシ-ガラクトース-UDPの合成は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられるPCT出願公開国際公開公報第2009/102820号に開示されている。
変数d13
いくつかの態様では、d13は、約2～約14、約2～約12、約2～約10、約2～約8、約2～約6、約2～約4、約4～約10、約4～約8、約4～約6、約6～約14、約6～約12、約6～約10、約6～約8、約8～約14、約8～約12、または約8～約10の範囲の整数である。
いくつかの態様では、d13は、約2～約8の範囲の整数である。
いくつかの態様では、d13は、2、4、6または8である。いくつかの態様では、d13は、2、6または8である。いくつかの態様では、d13は8である。いくつかの態様では、d13は6である。いくつかの態様では、d13は2である。
B7-H4抗体-薬物コンジュゲート
いくつかの態様では、本開示のコンジュゲートは、Dの1つまたは複数の存在を含み、Dは、細胞傷害性薬物部分またはSTINGアゴニスト薬物部分であり、Dの1つまたは複数の存在は、同じであっても異なっていてもよい。
いくつかの態様では、B7-H4抗体またはB7-H4修飾抗体の1つまたは複数の存在は、リンカー-薬物部分に結合され、B7-H4抗体またはB7-H4修飾抗体の1つまたは複数の存在は、同じであっても異なっていてもよい。いくつかの態様では、Dの1つまたは複数の存在を含む1つまたは複数のリンカー-薬物部分は、1つのB7-H4抗体またはB7-H4修飾抗体に接続される。
いくつかの態様では、B7-H4抗体は、B7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体である。
いくつかの態様では、本明細書において記載されるターゲティングリガンド、リンカー、および薬物断片またはプロドラッグ断片は、例えば、開示される技術および方法に従って、本開示のコンジュゲートまたはスキャフォールドに組み込まれ得る。本開示の治療用コンジュゲートおよびターゲティングコンジュゲート、ならびにそれらを生成する方法を非限定的な例として以下に記載する。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体との間に形成されたスルフィド結合の総数（または結合点の総数）は、10以下（例えば、8、6、4または2）である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体との間に形成されたスルフィド結合の総数（または結合点の総数）は、8以下である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体との間に形成されたスルフィド結合の総数（または結合点の総数）は8である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体との間に形成されたスルフィド結合の総数（または結合点の総数）は6である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体との間に形成されたスルフィド結合の総数（または結合点の総数）は5である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体との間に形成されたスルフィド結合の総数（または結合点の総数）は4である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体との間に形成されたスルフィド結合の総数（または結合点の総数）は3である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体との間に形成されたスルフィド結合の総数（または結合点の総数）は2である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体との比は、約1:1～約8:1である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体との比は、約1:1～約6:1である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体との比は、約1:1～約4:1である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体との比は、約2:1～約2:1である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体との比は、約6:1～約8:1である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体との比は、約8:1である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分とB7-H4抗体との比は約6:1である。
いくつかの態様では、本開示はまた、システイン操作B7-H4抗体少なくとも2つの部分を含むまたはリンカー-薬物部分に関し、各部分は、タンパク質-リンカー-薬物コンジュゲートを形成するように、B7-H4抗体のチオール基にコンジュゲートすることができる。
いくつかの態様では、B7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体の1つまたは複数のチオール基は、タンパク質を還元することによって生成される。次いで、B7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体の1つまたは複数のチオール基は、B7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体からのチオール基とリンカー-薬物部分とをコンジュゲートさせることができる1つまたは複数のリンカー-薬物部分と反応し得る。いくつかの態様では、B7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体に接続された少なくとも2つの部分は、マレイミド基である。これらの態様では、Dは、細胞傷害性薬物部分またはSTINGアゴニスト薬物部分である。
いくつかの態様では、抗体は、DTT（クリーランド試薬、ジチオスレイトール）またはTCEP（トリス（2-カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩）などの還元剤を用いた処理によって、リンカー-薬物部分とのコンジュゲーションのために活性化され得る。いくつかの態様では、完全長モノクローナル抗体を過剰のTCEPによって還元して、（例えば、対応する親抗体またはシステイン操作抗体に存在するシステイン間の）ジスルフィド結合を還元して、還元型の抗体を得ることができる。新たに導入された不対システインは、本開示の抗体コンジュゲートを形成するためのリンカー-薬物部分との反応に利用可能なままであり得る。いくつかの態様では、過剰のリンカー-薬物部分を加えてコンジュゲーションを行い、抗体-薬物コンジュゲートを形成し、コンジュゲーション混合物を精製して過剰のリンカー-薬物中間体および他の不純物を除去する。
いくつかの態様では、B7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4/リンカー-薬物部分の比は、約1:1～約1:8、約1:1～約1:6、約1:1～約1:5、約1:1～約1:4、約1:1～約1:3、または約1:1～約1:2である。
本明細書において開示されるコンジュゲートは、広範囲なダイアフィルトレーションによって精製され得る（すなわち、任意の出発材料の除去）。必要に応じて、サイズ排除クロマトグラフィーによる追加の精製を行って、凝集したコンジュゲートを除去することができる。一般に、精製されたコンジュゲートは、典型的には、SECによって決定される場合、5％未満（例えば、2％w/w未満）の凝集したコンジュゲート;RP-HPLCによって決定される場合、0.5％未満（例えば、0.1％w/w未満）の遊離（非コンジュゲート）薬物;SECによって決定される場合、1％未満の薬物担持ペプチド含有スキャフォールド、およびHIC-HPLCによって決定される場合、2％未満（例えば、1％w/w未満）の非コンジュゲートB7-H4抗体を含有する。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4は、表A1および表A2に記載のコンジュゲートから選択される。
（表Ａ１）
Figure 2024501894000218
Figure 2024501894000219
Figure 2024501894000220
Figure 2024501894000221
Figure 2024501894000222
Figure 2024501894000223
式中、d13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、RC1、RC2、R4、X3、X4、X6、X7、X1、W1、Y1、Z1、X2、W2、Y2、Z2は本明細書において定義される通りであり、ANTIBODYはB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体である。
いくつかの態様では、表A1のコンジュゲートの場合、d13は、6～8の整数である。
いくつかの態様では、表A1のコンジュゲートの場合、d13は8である。いくつかの態様では、表A1のコンジュゲートの場合、d13は7である。いくつかの態様では、表A1のコンジュゲートの場合、d13は6である。
いくつかの態様では、表A1のコンジュゲートの場合、d13は8である。
（表Ａ２）
Figure 2024501894000224
Figure 2024501894000225
Figure 2024501894000226
Figure 2024501894000227
Figure 2024501894000228
Figure 2024501894000229
Figure 2024501894000230
Figure 2024501894000231
Figure 2024501894000232
Figure 2024501894000233
Figure 2024501894000234
Figure 2024501894000235
Figure 2024501894000236
Figure 2024501894000237
Figure 2024501894000238
Figure 2024501894000239
Figure 2024501894000240
Figure 2024501894000241
Figure 2024501894000242
Figure 2024501894000243
Figure 2024501894000244
Figure 2024501894000245
Figure 2024501894000246
Figure 2024501894000247
式中、d13は本明細書において定義される通りであり、ANTIBODYはB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体である。
いくつかの態様では、表A2のコンジュゲートの場合、d13は、6～8の整数である。
いくつかの態様では、表A2のコンジュゲートの場合、d13は8である。いくつかの態様では、表A2のコンジュゲートの場合、d13は7である。いくつかの態様では、表A2のコンジュゲートの場合、d13は6である。
いくつかの態様では、表A2のコンジュゲートの場合、d13は8である。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物コンジュゲートは、以下であり:
Figure 2024501894000248
Figure 2024501894000249
式中、d13は8であり、ANTIBODYは、B7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体であり、
B7-H4抗体は、アミノ酸配列GFIVSRNY（SEQ ID NO:2）を含む可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）、アミノ酸配列IYGSGRT（SEQ ID NO:3）を含む可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000250
またはアミノ酸配列
Figure 2024501894000251
を含む可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）、アミノ酸配列QSVSSSY（SEQ ID NO:53）を含む可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）、アミノ酸配列GAS（SEQ ID NO:54）を含む可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000252
を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物コンジュゲートは、以下であり:
Figure 2024501894000253
式中、d13は8であり、ANTIBODYは、B7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体であり、
B7-H4抗体は、アミノ酸配列GFIVSRNY（SEQ ID NO:2）を含む可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）、アミノ酸配列IYGSGRT（SEQ ID NO:3）を含む可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000254
またはアミノ酸配列
Figure 2024501894000255
を含む可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）、アミノ酸配列QSVSSSY（SEQ ID NO:53）を含む可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）、アミノ酸配列GAS（SEQ ID NO:54）を含む可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000256
を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む。
いくつかの態様では、STINGアゴニスト薬物コンジュゲートは、以下であり:
Figure 2024501894000257
式中、d13は8であり、ANTIBODYはB7-H4抗体であるか、またはd13は2であり、ANTIBODYはシステイン操作B7-H4抗体であり、
B7-H4抗体は、アミノ酸配列GFIVSRNY（SEQ ID NO:2）を含む可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）、アミノ酸配列IYGSGRT（SEQ ID NO:3）を含む可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000258
またはアミノ酸配列
Figure 2024501894000259
を含む可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）、アミノ酸配列QSVSSSY（SEQ ID NO:53）を含む可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）、アミノ酸配列GAS（SEQ ID NO:54）を含む可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000260
を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む。
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4は、表B1に記載のコンジュゲートから選択される。
（表Ｂ１）
Figure 2024501894000261
Figure 2024501894000262
Figure 2024501894000263
Figure 2024501894000264
Figure 2024501894000265
Figure 2024501894000266
Figure 2024501894000267
Figure 2024501894000268
Figure 2024501894000269
Figure 2024501894000270
Figure 2024501894000271
Figure 2024501894000272
Figure 2024501894000273
Figure 2024501894000274
Figure 2024501894000275
Figure 2024501894000276
式中、d13は本明細書において定義される通りであり、ANTIBODYはB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体である。
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体は、式（XXX）のコンジュゲートである:
Figure 2024501894000277
式中、各RAは、以下であり、
Figure 2024501894000278
d13は、2、4、6または8である。
他の態様では、細胞傷害性薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体は、式（XXX）のコンジュゲートである］
式中、各RAは、以下であり、
Figure 2024501894000279
Figure 2024501894000280
Figure 2024501894000281
Figure 2024501894000282
Figure 2024501894000283
式中、
d13は、2、4、6または8である。
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体は、式（XXX）のコンジュゲートであり、各RAは、以下である:
Figure 2024501894000284
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体は、式（XXXI-1）、（XXXI-2）、（XXXI-3）または（XXXI-4）のコンジュゲートである:
Figure 2024501894000285
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体は、式（XXXII）のコンジュゲートである:
Figure 2024501894000286
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体は、式（XXXII）のコンジュゲートである:
Figure 2024501894000287
式中、各RBは、以下である:
Figure 2024501894000288
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体は、式（XXXI-1）、（XXXI-2）、（XXXI-3）、（XXXI-4）または（XXXII）のコンジュゲートであり、式中、変数-LD-Dは、以下である:
Figure 2024501894000289
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体は、式（XXXI-1）、（XXXI-2）、（XXXI-3）、（XXXI-4）または（XXXII）のコンジュゲートであり、式中、変数-LD-Dは、以下である:
Figure 2024501894000290
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体は、式（XXXXIII-3）のコンジュゲートである:
Figure 2024501894000291
式中、各RAは、以下である:
Figure 2024501894000292
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体は、式（XXXXIII-8）のコンジュゲートである:
Figure 2024501894000293
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体は、式（XXXIII-5）のコンジュゲートである:
Figure 2024501894000294
式中、d13は、本明細書において定義される通りである。
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分にコンジュゲートされたB7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体は、式（XXXIII-8）のコンジュゲートである:
Figure 2024501894000295
式中、d13は、本明細書において定義される通りである。
修飾B7-H4抗体薬物コンジュゲート
いくつかの態様では、本開示の修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、本開示の修飾B7-H4抗体を、修飾B7-H4抗体内の修飾GlcNAc部分、＊-GlcNAc-S''-A''の官能基A''と共有結合を形成することができる官能基（例えばWP）を含むリンカー-薬物部分と反応させることによって得ることができる。
いくつかの態様では、WPは、アルキニル、例えばシクロアルキニル、ヘテロシクロアルキニルまたは末端アルキニルを含む。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体の官能基A''は、アジド、ケトまたはアルキニルである。いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体の官能基A''はアジドである。いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体のアジド官能基A''は、リンカー-薬物部分のWPのアルキニル（例えば、シクロアルキニル、ヘテロシクロアルキニルまたは末端アルキニル）と反応して、トリアゾール部分を形成する（例えば、環化付加反応を介して）。アジド基とアルキニル基との環化付加反応は、「クリックケミストリー」として当技術分野において公知である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分のWPは、末端アルキニルを含み、環化付加反応は、触媒（例えば、Cu（I）触媒）の存在下で行われ得る。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分のWPは、シクロアルキニルまたはヘテロシクロアルキニル（例えば、歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニル）を含む。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分のWPは、歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルを含み、環化付加反応は、触媒の存在下または非存在下で行われ得る。いくつかの態様では、環化付加反応は、「無金属クリックケミストリー（metal-free click chemistry）」として当技術分野において公知の歪み促進アジド-アルキン環化付加（SPAAC）と呼ばれる反応によって自発的に起こり得る。いくつかの態様では、歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルは、本明細書において記載される通りである。
いくつかの態様では、コンジュゲーション時に、修飾B7-H4抗体の官能基A''と、リンカー-薬物部分のWPとは、トリアゾール部分を形成する。
いくつかの態様では、コンジュゲーション時に、修飾B7-H4抗体の官能基A''と、リンカー-薬物部分のWPとは、式（XXXV）:
Figure 2024501894000296
のトリアゾール部分を形成し、
式中、＊は、修飾B7-H4抗体の残部への直接的または間接的な結合を表し、＊＊は、存在する場合にはMp、またはLMもしくはMAへの結合を示す。
いくつかの態様では、本開示のアジド修飾B7-H4抗体をアルキニル基を含むリンカー-薬物部分と反応させて、環化付加反応を介して抗体-薬物コンジュゲートを形成する場合、抗体-薬物コンジュゲート内の形成されたトリアゾール部分は、加水分解および/または他の分解経路に耐性であり得る。
いくつかの態様では、本開示のアルデヒド修飾B7-H4抗体またはケトン修飾B7-H4抗体をヒドロキシルアミンまたはヒドラジンを含むリンカー-薬物部分と反応させる場合、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲート内の得られたオキシム部分またはヒドラゾン部分は、中性条件で比較的不活性であり得る。
いくつかの態様では、本開示の修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、高い安定性を有し得る。
いくつかの態様では、本開示の修飾B7-H4抗体および修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、官能基A''（例えば、アジド、ケトまたはアルキニル）を抗体に導入するためのプロセスが容易であり、一般的に適用可能であることから、実用的な合成経路によって合成され得る。
いくつかの態様では、本開示の部位特異的B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、修飾B7-H4抗体をリンカー-薬物部分と反応させる工程を含むプロセスによって得られ、
リンカー-薬物部分は、シクロアルキニルまたはヘテロシクロアルキニルを含み、
修飾B7-H4抗体は、コンジュゲーション前に、B7-H4抗体と、GlcNAcのC1位を介してB7-H4抗体に結合した＊-GlcNAc-S''-A''の修飾GlcNAc部分とを含み、GlcNAcはN-アセチルグルコサミンであり、S''は、糖または誘導体化糖であり、A''はアジドである。
いくつかの態様では、A''は、シクロアルキニルまたはヘテロシクロアルキニルである。いくつかの態様では、A''はシクロアルキニルである。いくつかの態様では、A''はヘテロシクロアルキニルである。
いくつかの態様では、A''は、歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルである。いくつかの態様では、A''は、歪みシクロアルキニルである。いくつかの態様では、A''は、歪みヘテロシクロアルキニルである。
いくつかの態様では、本開示の部位特異的B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、
（a）式（XXII）の中間抗体であって:
Figure 2024501894000297
式中、
AbがB7-H4抗体であり、GlcNAcがN-アセチルグルコサミンであり、Fucがフコースであり、u3が、0または1であり、d13が、1～12の範囲の整数である、中間抗体を、
化合物P''-S''-A''であって、式中、
S''が、糖または誘導体化糖であり、A''がアジドであり、Pが、ウリジン二リン酸（UDP）、グアノシン二リン酸（GDP）またはシチジン二リン酸（CDP）である、化合物P''-S''-A''
と、ガラクトシルトランスフェラーゼの存在下で接触させ、それによって、修飾GlcNAc部分、＊-GlcNAc-S''-A''を含む修飾B7-H4抗体を形成する工程（任意で、修飾GlcNAc部分が、GlcNAcのC1位を介して、修飾抗体の残部に結合される）、および
（b）修飾B7-H4抗体を、歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルを含むリンカー-薬物部分と反応させ、それによって、抗体-薬物コンジュゲートを形成する工程
を含むプロセスによって得られる。
いくつかの態様では、部位特異的B7-H4抗体-薬物コンジュゲートを調製するためのプロセスは、図5に示される通りである。
いくつかの態様では、B7-H4抗体の各アミノ酸N297にアジドを含む修飾抗体は、無金属クリックケミストリーによって、歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルを含むリンカー-薬物部分とコンジュゲートされて、本開示の部位特異的抗体-薬物コンジュゲートを形成する。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体が少なくとも1つのアジド部分を含み、リンカー-薬物部分が歪みシクロアルキニルを含む場合、修飾抗体内のアジドとリンカー-薬物部分の歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルとの間の環化付加反応に、銅触媒の存在は必要ではない。いくつかの態様では、環化付加反応は、銅触媒の非存在下で進行し、これにより、プロセスに銅触媒を使用することのいくつかの起こり得る欠点が軽減され得る。
いくつかの態様では、Cu（I）触媒は、一般に、抗体のアジド部分と末端アルキン部分との環化付加に必要とされる。いくつかの態様では、効率的な変換のための最適なパラメータを見つけるために、条件の広範囲な最適化と微調整とが必要とされ得る。それにもかかわらず、そのような条件下であっても、活性酸素種の同時形成は常に完全に回避されるとは限らず、これにより、抗体/タンパク質に対する酸化的損傷（例えば、メチオニン、ヒスチジン、システインまたはジスルフィド結合の酸化）が誘発される可能性がある。他のプロトコルは、固定細胞を標識し、糖タンパク質を合成するために、CuBrなどのCu（I）源を使用している。これらの場合、空気中のCu（I）の不安定性は、効率的な反応のために極めて過剰なCu（例えば、4mm超）および配位子を必要とし、これにより、抗体/タンパク質の損傷または沈殿に加えて、精製後の残留金属の存在というリスクが高まる可能性もある。したがって、銅触媒の存在下でのアジド含有抗体と末端アルキンとのコンジュゲーションは、望ましくないアミノ酸酸化による広範囲な副生成物形成をもたらす可能性がある。
いくつかの態様では、（例えば、抗体の各アミノ酸N297に）アジドを含む修飾B7-H4抗体は、（例えば、無金属クリックケミストリーによって）歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルを含むリンカー-薬物部分とコンジュゲートされる。
いくつかの態様では、コンジュゲーション時に、修飾B7-H4抗体のアジド部分と、リンカー-薬物部分の歪みシクロアルキニルまたは歪みヘテロシクロアルキニルとは、式（XXXV）:
Figure 2024501894000298
のトリアゾール部分を形成し、
式中、＊は、修飾抗体の残部への直接的または間接的な結合を表し、＊＊は、存在する場合にはMp、またはLMもしくはMAへの結合への結合を示す。
いくつかの態様では、本開示のB7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、Dの1つまたは複数の存在を含み、各Dは独立して治療剤（例えば、細胞障害性の薬物部分）であり、Dの1つまたは複数の存在は、同じであっても異なっていてもよい。
いくつかの態様では、B7-H4抗体の1つまたは複数の特異的部位が、リンカー-薬物部分に結合され、1つまたは複数の特異的部位に結合したリンカー-薬物部分は、同じであっても異なっていてもよい。いくつかの態様では、D（すなわち、細胞障害性の薬物部分）の1つまたは複数の存在を含む1つまたは複数のリンカー-薬物部分が、1つのB7-H4抗体に結合される。
いくつかの態様では、Dは細胞障害性の薬物部分であって、細胞障害性の薬物部分は、（a）オーリスタチン化合物、（b）カリケアマイシン化合物、（c）デュオカルマイシン化合物（d）SN38、（e）ピロロベンゾジアゼピン、（f）ビンカ化合物、（g）チューブリシン化合物、（h）非天然カンプトテシン化合物、（i）メイタンシノイド化合物、（j）DNA結合薬、（k）キナーゼ阻害剤、（l）MEK阻害剤、（m）KSP阻害剤、（n）トポイソメラーゼ阻害剤、（o）DNAアルキル化薬、（p）RNAポリメラーゼ、（q）PARP阻害剤、（r）NAMPT阻害剤、（s）トポイソメラーゼ阻害剤、（t）タンパク質合成阻害剤、（u）DNA結合薬、（v）DNAインターカレーション薬または（w）免疫調節化合物である。
いくつかの態様では、D、細胞障害性の薬物部分は、（a）オーリスタチン化合物、（b）カリケアマイシン化合物、（c）デュオカルマイシン化合物、（d）カンプトテシン化合物、（e）ピロロベンゾジアゼピン化合物、（f）ビンカ化合物またはその類似体である。
いくつかの態様では、オーリスタチン化合物は、オーリスタチン、ドラスタチン、モノメチルオーリスタチンE（MMAE）、モノメチルオーリスタチンF（MMAF）、オーリスタチンF、AF-HPA、MMAF-HPA、またはフェニレンジアミン（AFP）である。
いくつかの態様では、デュオカルマイシンまたはその類似体は、デュオカルマイシンA、デュオカルマイシンB1、デュオカルマイシンB2、デュオカルマイシンC1、デュオカルマイシンC2、デュオカルマイシンD、デュオカルマイシンSA、CC-1065、アドゼレシン、ビセレシンまたはカルゼルシンである。
いくつかの態様では、カンプトテシン化合物は、カンプトテシン、CPT-11（イリノテカン）、SN-38またはトポテカンである。
いくつかの態様では、ピロロベンゾジアゼピン化合物は、ピロロベンゾジアゼピン単量体、対称ピロロベンゾジアゼピン二量体または非対称ピロロベンゾジアゼピン二量体である。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体は、アミノ酸N297で修飾される。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、12以下である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、10以下である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、8以下である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、6以下である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、4以下である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、2以下である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との間に形成される特異的結合の総数（または結合点の総数）は、2である。
いくつかの態様では、本明細書において記載される修飾B7-H4抗体、リンカーまたは治療剤は、当技術分野において公知の様々な技術および方法に従って、本開示のコンジュゲートまたはスキャフォールドに組み込まれ得る。本開示のコンジュゲート、およびコンジュゲートの生成方法は、本明細書において記載される（例えば、非限定的な態様および例によって）。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との間に形成される結合の総数（または結合点の総数）は、12以下である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は、1:1超12:1以下である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は、約12:1、約11:1、約10:1、約9:1、約8:1、約7:1、約6:1、約5:1、約4:1、約3:1、約2:1または約1:1である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は、2:1～10:1である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は、約10:1、約9:1、約8:1、約7:1、約6:1、約5:1、約4:1、約3:1または約2:1である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は、約2:1～約4:1である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は、約4:1、約3:1または約2:1である。いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は、約2:1、または1:1である。
いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾B7-H4抗体との比は、約8:1、約7:1、約6:1、約5:1、約4:1、約3:1、約2:1または約1:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾B7-H4抗体との比は、約6:1、約5:1、約4:1、約3:1、約2:1または約1:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾B7-H4抗体との比は、約6:1、約5:1、約4:1または約3:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は1:1であり、治療剤（D）と修飾B7-H4抗体との比は、約3:1、約2:1または約1:1である。
いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾B7-H4抗体との比は約8:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾B7-H4抗体との比は約6:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾B7-H4抗体との比は約5:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾B7-H4抗体との比は約4:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾B7-H4抗体との比は約3:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾B7-H4抗体との比は約2:1である。いくつかの態様では、a2は3であり、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は2:1であり、治療剤（D）と修飾B7-H4抗体との比は約1:1である。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分と修飾B7-H4抗体との比は、約2:1である。
いくつかの態様では、抗体は、官能基A''を含む糖-誘導体部分に結合した領域290～305に（例えば、N297に）アスパラギン基を含み、修飾B7-H4抗体は、A''とリンカー-薬物部分の官能基との間に形成される共有結合によって、リンカー-薬物部分にコンジュゲートされる。
いくつかの態様では、リンカー-薬物部分は、少なくとも2つの官能基を含み、その各々は、修飾B7-H4抗体の糖-誘導体部分の官能基A''と共有結合を形成して（例えば、抗体のアミノ酸N297に）、抗体-薬物コンジュゲートを形成することができる。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体とリンカー-薬物部分との比は、約1:1～約1:2である。
いくつかの態様では、本開示の修飾B7-H4抗体薬物コンジュゲートおよびスキャフォールドは、広範囲なダイアフィルトレーションによって精製され得る（例えば、任意の出発材料を除去するために）。必要に応じて、サイズ排除クロマトグラフィーによる追加の精製を行って、凝集したコンジュゲートを除去することができる。いくつかの態様では、精製されたコンジュゲートまたはスキャフォールドは、SECによって決定される場合、5％w/w未満（例えば、2％w/w未満）の凝集したコンジュゲート;RP-HPLCによって決定される場合、0.5％w/w未満（例えば、0.1％w/w未満）の遊離（非コンジュゲート）薬物;SECによって決定される場合、1％w/w未満の薬物担持ペプチド含有スキャフォールド;および/またはHIC-HPLCによって決定される場合、2％w/w未満（例えば、1％w/w未満）の非コンジュゲート抗体を含む。
いくつかの態様では、細胞傷害性薬物部分に対する修飾B7-H4抗体薬物コンジュゲートは、表B2に記載のコンジュゲートから選択される。
（表Ｂ２）
Figure 2024501894000299
Figure 2024501894000300
Figure 2024501894000301
Figure 2024501894000302
Figure 2024501894000303
Figure 2024501894000304
Figure 2024501894000305
Figure 2024501894000306
Figure 2024501894000307
Figure 2024501894000308
Figure 2024501894000309
Figure 2024501894000310
式中、
Antibodyは修飾B7-H4抗体であり、
■はGlcNAcであり、△はFucであり、□はGalNAcであり、かつd13は、本明細書において定義される通りである。
特に指示しない限り、本開示において、■の記号は、GlcNAcを指すと理解される。特に指示しない限り、本開示において、△の記号は、フコースを指すと理解される。特に指示しない限り、本開示において、□の記号は、GalNAcを指すと理解される。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV）のものである:
Figure 2024501894000311
式中、
各RAは以下であり、
Figure 2024501894000312
d13は2であり、1つまたは複数のリンカー-薬物部分は、抗体のN297でアスパラギン基に結合している。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV）のものであり、式中、各RAは以下であり、
Figure 2024501894000313
Figure 2024501894000314
Figure 2024501894000315
Figure 2024501894000316
Figure 2024501894000317
式中、d13は2であり、修飾B7-H4抗体は、コンジュゲートの残部に接続されているN297に、1つまたは複数のアスパラギン基を含む。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV）のものであり、式中、各RAは以下である。
Figure 2024501894000318
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV）のものであり、式中、各RAは以下である。
Figure 2024501894000319
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV）のものであり、式中、各RAは以下である。
Figure 2024501894000320
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV）のものであり、式中、各RAは以下である。
Figure 2024501894000321
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV）のものであり、式中、各RAは以下である。
Figure 2024501894000322
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV）のものであり、式中、各RAは以下である。
Figure 2024501894000323
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV）のものであり、式中、各RAは以下である。
Figure 2024501894000324
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV）のものであり、式中、各RAは以下である:
Figure 2024501894000325
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV）のものであり、式中、各RAは以下である。
Figure 2024501894000326
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV-1）、（XXXIV-2）、（XXXIV-3）または（XXXIV-4）のものである:
Figure 2024501894000327
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXV）のものであり:
Figure 2024501894000328
式中、各RBは以下である:
Figure 2024501894000329
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV-1）、（XXXIV-2）、（XXXIV-3）、（XXXIV-4）または（XXXV）のものであり、式中、-LD-Dの部分は以下である:
Figure 2024501894000330
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXIV-1）、（XXXIV-2）、（XXXIV-3）、（XXXIV-4）または（XXXV）のものであり、式中、-LD-Dの部分は以下である:
Figure 2024501894000331
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXVI）のものである:
Figure 2024501894000332
式中、各RAは以下である。
Figure 2024501894000333
Figure 2024501894000334
Figure 2024501894000335
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXVI）のコンジュゲートであり、式中、各RAは以下であり、
Figure 2024501894000336
修飾B7-H4抗体は、コンジュゲートの残部に接続されているN297に、1つまたは複数のアスパラギン基を含む。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXVII）のコンジュゲートであり:
Figure 2024501894000337
式中、
d13は2であり、
ANTIBODYは、アミノ酸配列GFIVSRNY（SEQ ID NO:2）を含む可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）、アミノ酸配列IYGSGRT（SEQ ID NO:3）を含む可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000338
またはアミノ酸配列
Figure 2024501894000339
を含む可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）、アミノ酸配列QSVSSSY（SEQ ID NO:53）を含む可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）、アミノ酸配列GAS（SEQ ID NO:54）を含む可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000340
を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む、B7-H4抗体である。
リンカー-薬物部分は、B7-H4抗体のN297でアスパラギン基に結合している;
■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
いくつかの態様では、修飾B7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、式（XXXVIII）のコンジュゲートであり:
Figure 2024501894000341
式中、
d13は整数2であり、
ANTIBODYは、アミノ酸配列GFIVSRNY（SEQ ID NO:2）を含む可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）、アミノ酸配列IYGSGRT（SEQ ID NO:3）を含む可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000342
またはアミノ酸配列
Figure 2024501894000343
を含む可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）、アミノ酸配列QSVSSSY（SEQ ID NO:53）を含む可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）、アミノ酸配列GAS（SEQ ID NO:54）を含む可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）、アミノ酸配列
Figure 2024501894000344
を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む、B7-H4抗体である。
リンカー-薬物部分は、抗体のN297でアスパラギン基に結合している;
■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
使用方法
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象に本明細書において開示されるコンジュゲートの治療有効量を投与する工程を含む、対象の疾患または障害を治療または予防する方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象に本明細書において開示されるコンジュゲートの治療有効量を投与する工程を含む、対象の疾患または障害を治療する方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象に本明細書において開示されるコンジュゲートを投与する工程を含む、対象の疾患または障害を治療または予防する方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象に本明細書において開示されるコンジュゲートを投与する工程を含む、対象の疾患または障害を治療する方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象に本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を投与する工程を含む、対象の癌を治療する方法に関する。いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象に本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を投与する工程を含む、対象のB7-H4陽性癌を治療する方法に関する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象の疾患または障害を治療または予防するのに使用するための、本明細書において開示されるコンジュゲートを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象の疾患または障害の治療に使用するための、本明細書において開示されるコンジュゲートを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象の癌を治療するための、本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象のB7-H4陽性発現癌を治療するための本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象の疾患または障害を治療するための医薬品の製造における本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象の疾患または障害を治療または予防するための医薬品の製造における本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象の癌を治療するための医薬品の製造における本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象のB7-H4陽性発現癌を治療するための医薬品の製造における本明細書において開示されるコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象の疾患または障害を治療または予防するためのコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象の疾患または障害を治療するためのコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象に本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を投与する工程を含む、対象の癌を治療するためのコンジュゲートの使用を提供する。いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象に本明細書において開示されるコンジュゲートの有効量を投与する工程を含む、対象のB7-H4陽性発現癌を治療するためのコンジュゲートの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象に本開示の少なくとも1つのコンジュゲートの効率的な量を投与する工程を含む、対象の疾患または障害を治療または予防する方法であって、該コンジュゲートが、生分解時に1つまたは複数の治療剤を放出する方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象に本開示の少なくとも1つのコンジュゲートの効率的な量を投与する工程を含む、対象の疾患または障害を治療する方法であって、該コンジュゲートが、生分解時に1つまたは複数の治療剤を放出する方法を提供する。
いくつかの態様では、疾患は癌である。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるB7-H4抗体-薬物コンジュゲートの治療有効量を対象に投与する工程を含む方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるB7-H4抗体-薬物コンジュゲートを対象に投与する工程を含む方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、細胞の表面上のB7-H4へのB7-H4抗体-薬物コンジュゲートの結合、それに続く内在化を許容する条件下でB7-H4抗体-薬物コンジュゲートに細胞を曝露し、それによって、細胞の増殖を阻害する工程を含む、B7-H4陽性細胞の増殖を阻害する方法を提供する。ある特定の態様では、方法は、インビトロ法またはインビボ法である。さらなる態様では、細胞は、乳房細胞、卵巣細胞または子宮内膜細胞である。
インビトロでの細胞増殖の阻害は、Promega（Madison,Wis.）から市販されているCellTiter-Glo（商標）Luminescent Cell Viability Assayを使用してアッセイされ得る。そのアッセイは、代謝的に活性な細胞の指標である、存在するATPの定量に基づいて培養中の生存細胞の数を決定する。Crouch et al.（1993）J.Immunol.Meth.160:81-88、米国特許第6,602,677号を参照されたい。アッセイは、96または384ウェルフォーマットで行われ得、これにより、自動ハイスループットスクリーニング（HTS）に適したものになる。Cree et al.（1995）AntiCancer Drugs 6:398-404を参照されたい。アッセイ手順は、単一の試薬（CellTiter-Glo（登録商標）Reagent）を培養細胞に直接加えることを伴う。その結果、細胞が溶解し、ルシフェラーゼ反応による発光シグナルが発生する。発光シグナルは、存在するATPの量に比例し、存在するATPの量は、培養中に存在する生存細胞の数に正比例する。データは、ルミノメータまたはCCDカメラ撮像装置によって記録することができる。発光出力は、相対発光量（RLU）として表される。
いくつかの態様では、本開示は、医薬品として使用するためのB7-H4抗体-薬物コンジュゲートを提供する。いくつかの態様では、治療方法に使用するためのB7-H4抗体-薬物コンジュゲートが提供される。いくつかの態様では、B7-H4陽性癌の治療に使用するためのB7-H4抗体-薬物コンジュゲートが提供される。いくつかの態様では、本発明は、B7-H4陽性癌を有する個体を治療する方法に使用するためのB7-H4抗体-薬物コンジュゲートであって、方法が、B7-H4抗体-薬物コンジュゲートの有効量を個体に投与する工程を含むB7-H4抗体-薬物コンジュゲートを提供する。いくつかの態様では、方法は、例えば、以下に記載されるように、少なくとも1つの追加の治療剤の有効量を個体に投与する工程をさらに含む。
いくつかの態様では、本開示は、医薬品の製造または調製におけるB7-H4抗体-薬物コンジュゲートの使用を提供する。いくつかの態様では、医薬品は、B7-H4陽性癌を治療するためのものである。いくつかの態様では、医薬品は、B7-H4陽性癌を治療する方法に使用するためのものであり、方法は、B7-H4陽性癌を有する個体に医薬品の有効量を投与する工程を含む。いくつかの態様では、方法は、例えば、以下に記載されるように、少なくとも1つの追加の治療剤の有効量を個体に投与する工程をさらに含む。
いくつかの態様では、本開示は、B7-H4陽性癌を治療する方法を提供する。いくつかの態様では、方法は、そのようなB7-H4陽性癌を有する個体にB7-H4抗体-薬物コンジュゲートの有効量を投与する工程を含む。いくつかの態様では、方法は、以下に記載されるように、少なくとも1つの追加の治療剤の有効量を個体に投与する工程をさらに含む。
いくつかの態様では、B7-H4陽性癌は、例えば、乳癌、子宮内膜癌、卵巣癌、非小細胞肺癌（例えば扁平上皮癌）、膵癌、甲状腺癌、腎癌（例えば腎細胞癌）、膀胱癌（例えば尿路上皮細胞癌）、結腸癌、頭頸部癌、小細胞肺癌、胃癌、黒色腫、胆管癌、子宮癌および胆管癌である。
いくつかの態様では、B7-H4陽性癌は、例えば、乳癌子宮内膜癌、卵巣癌または胆管癌である。
いくつかの態様では、B7-H4陽性乳癌は、トリプルネガティブ乳癌、ホルモン受容体陽性/HER2（-）（HR＋/HER2（-））乳癌または腺管癌である。
いくつかの態様では、B7-H4陽性卵巣癌は、漿液性腺癌卵巣癌である。
いくつかの態様では、B7-H4陽性卵巣癌は、高悪性度漿液性卵巣癌である。いくつかの態様では、高悪性度漿液性卵巣癌は、卵管癌または原発性腹膜癌である。いくつかの態様では、卵管癌または原発性腹膜癌は転移性である。いくつかの態様では、卵管癌または原発性腹膜癌は再発性である。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象に本明細書において開示されるコンジュゲートまたはその薬学的組成物の有効量を投与する工程を含む、対象のトリプルネガティブ乳癌を治療する方法に関する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象に本明細書において開示されるコンジュゲートまたはその薬学的組成物の有効量を投与する工程を含む、対象のHR＋/HER2（-）乳癌を治療する方法に関する。
いくつかの態様では、本開示は、その必要がある対象に本明細書において開示されるコンジュゲートまたはその薬学的組成物の有効量を投与する工程を含む、対象の子宮内膜癌を治療する方法に関する。
いくつかの態様では、トリプルネガティブ乳癌対象は、トポイソメラーゼ阻害剤またはそのADC、例えば、サシツズマブゴビテカンなど;化学療法剤、例えば、ドセタキセル、ドキソルビシン、シクロホスファミド、カルボプラチン、パクリタキセル、nab-パクリタキセル、ゲムシタビンおよびシスプラチンなど;抗新生物剤、例えば、アテゾリズマブなど;AKT阻害剤、例えば、イパタセルチブなど;PARP阻害剤、例えば、オラパリブ（Lynparza）、ルカパリブ（Rubraca）、タラゾパリブおよびニラパリブ（Zejula）など、またはそれらの組合せによる事前の治療を受けたことがある。
いくつかの態様では、HR＋/HER2（-）乳癌対象は、サイクリン依存性キナーゼ4および6（CDK4/6）阻害剤、例えば、パルボシクリブ、リボシクリブおよびアベマシクリブなど;化学療法剤、例えば、ドセタキセル、ドキソルビシン、シクロホスファミド、カルボプラチン、パクリタキセル、nab-パクリタキセル、ゲムシタビンおよびシスプラチンなど;血管新生阻害剤、例えば、ベバシズマブ（Avastin）など;エストロゲン受容体アンタゴニスト、例えば、フルベストラント（Faslodex）など;mTOR阻害剤、例えば、エベロリムスなど;PI3K阻害剤、例えば、アルペリシブなど;またはそれらの組合せによる事前の治療を受けたことがある。
いくつかの態様では、卵巣癌対象は、化学療法剤、例えば、ドセタキセル、ドキソルビシン、シクロホスファミド、カルボプラチン、パクリタキセル、nab-パクリタキセル、ゲムシタビンおよびシスプラチンなど;血管新生阻害剤、例えばベバシズマブ（Avastin）など;PARP阻害剤、例えば、ニラパリブ（Zejula）、オラパリブ（Lynparza）およびベリパリブなど;ベバシズマブと組み合わせたオラパリブ（Lynparza）;またはそれらの組合せによる事前の治療を受けたことがある。
いくつかの態様では、子宮内膜癌対象は、化学療法剤、例えば、ドセタキセル、ドキソルビシン、シクロホスファミド、カルボプラチン、パクリタキセル、nab-パクリタキセル、ゲムシタビンおよびシスプラチンなど;プロゲスチン、例えば、酢酸メドロキシプロゲステロン（Provera（登録商標））および酢酸メゲストロール（Megace）など;抗エストロゲン薬、例えば、タモキシフェンなど;黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト（LHRHアゴニスト）、例えば、ゴセレリン（Zoladex）およびロイプロリド（Lupron）など;アロマターゼ阻害剤、例えば、レトロゾール（Femara）、アナストロゾール（Arimidex）およびエキセメスタン（Aromasin）など;キナーゼ阻害剤、例えば、レンバチニなど;;血管新生阻害剤、例えば、ベバシズマブ（Avastin）など;mTOR阻害剤、例えば、エベロリムス（Afinitor）など;PD-1抗体、例えば、ニボルマブ（OPDIVO）、ペンブロリズマブ（KEYTRUDA）、MEDI-0680（AMP-514;国際公開公報第2012/145493号）、カムレリズマブ（SHR-1210）、チスレリズマブ（BGB-A317）およびスパルタリズマブ（NPVPDR001、NVS240118、PDR001）など;またはそれらの組合せによる事前の治療を受けたことがある。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートまたはその薬学的組成物の有効量を対象に投与する工程を含む、PD-1/PD-L1阻害剤の不十分なレスポンダーである癌対象を治療する方法に関する。
PD-1/PD-L1阻害剤の不十分なレスポンダーである癌対象は、以前にPD-1/PD-L1阻害剤に応答したことがある可能性があるが、PD-1/PD-L1阻害剤に対する応答が低下している可能性があるか、または癌がPD-1/PD-L1阻害剤に応答したことがない可能性がある。PD-1/PD-L1阻害剤に対する不十分な応答とは、標準用量のPD-1/PD-L1阻害剤の後に改善すると予測される癌の局面が改善しないこと、および/または標準用量よりも多い用量が投与された場合にのみ改善が起こることを意味する。いくつかの態様では、PD-1/PD-L1阻害剤の不十分なレスポンダーである、癌を有する対象は、少なくとも2週間、少なくとも3週間、少なくとも4週間、少なくとも6週間または少なくとも12週間にわたって標準用量を投与された後、PD-1/PD-L1阻害剤に対する不十分な応答を経験したことがあるか、または経験している。「標準」用量は、医療専門家によって決定され、対象の年齢、体重、健康履歴、疾患の重症度、投与頻度などに依存し得る。いくつかの態様では、PD-1/PD-L1阻害剤の不十分なレスポンダーである、癌を有する対象は、抗PD-1抗体および/または抗PD-L1抗体に対する不十分な応答を経験したことがあるか、または経験している。いくつかの態様では、PD-1/PD-L1阻害剤の不十分なレスポンダーである、癌を有する対象は、AMP-224に対する不十分な応答を経験したことがあるか、または経験している。いくつかの態様では、PD-1/PD-L1阻害剤の不十分なレスポンダーである、癌を有する対象は、ニボルマブ、ペンブロリズマブおよびアテゾリズマブから選択されるPD-1/PD-L1阻害剤に対する不十分な応答を経験したことがあるか、または経験している。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書において開示されるコンジュゲートまたはその薬学的組成物の有効量を対象に投与する工程を含む、低レベルのPD-L1を発現する癌を治療する方法に関する。いくつかの態様では、「低レベルのPD-L1」を発現する、または「低レベルでPD-L1」を発現する癌とは、対象がPD-L1発現レベルに基づいて治療のために選択される、PD-1アンタゴニストまたはPD-L1アンタゴニストによる治療について適応とされる癌では、PD-L1のレベルが発現レベル未満であることを示す。いくつかの態様では、「低レベルのPD-L1」は、腫瘍内の細胞の1％未満が膜染色を有するものである。いくつかの態様では、PD-L1に関する「低レベル」は、1％未満の染色であり、例えば、腫瘍の細胞の0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1％または0％が染色される。いくつかの態様では、PD-L1発現レベルは、発色IHCまたは免疫蛍光IHC（Aquaスコアリング）によって測定され得る。ある特定の態様では、5％以下のPD-L1染色（腫瘍および/または免疫細胞を含む）は、試料が「低レベルのPD-L1」を発現することを示し得る。ある特定の態様では、10％以下のPD-L1染色（腫瘍および/または免疫細胞を含む）は、試料が「低レベルのPD-L1」を発現することを示し得る。本明細書において別段の指定がない限り、本明細書において5％の閾値が使用される（すなわち、5％以下は「低レベルのPD-L1」を示す）。
いくつかの態様では、本明細書において開示されるコンジュゲートまたはその薬学的組成物は、患者のT細胞、CD4＋T細胞またはCD8＋T細胞の増殖を増加させるために、癌と診断された対象に投与される。別の態様では、本明細書において開示されるコンジュゲートまたはその薬学的組成物は、対象のインターフェロン-ガンマ（IFNγ）産生を増加させるために、癌と診断された対象に投与される。別の態様では、本明細書において開示されるコンジュゲートまたはその薬学的組成物は、対象のT細胞に対するB7-H4の阻害活性を遮断するために、癌と診断された対象に投与される。別の態様では、本明細書において開示されるコンジュゲートまたはその薬学的組成物は、対象のB7-H4発現癌細胞を枯渇させるために、癌と診断された対象に投与される。
いくつかの態様では、本明細書において開示されるコンジュゲートまたはその薬学的組成物は、上記に示されるような対象に、追加の治療剤、例えば、PD-1アンタゴニスト;PD-L1アンタゴニスト;トポイソメラーゼ阻害剤もしくはそのADC、例えば、サシツズマブゴビテカンなど;化学療法剤、例えば、ドセタキセル、ドキソルビシン、シクロホスファミド、カルボプラチン、パクリタキセル、nab-パクリタキセル、ゲムシタビンおよびシスプラチンなど;抗新生物剤、例えば、アテゾリズマブなど;血管新生阻害剤、例えばベバシズマブ（Avastin）など;AKT阻害剤、例えば、イパタセルチブなど;PARP阻害剤、例えば、オラパリブ（Lynparza）、ルカパリブ（Rubraca）、タラゾパリブおよびニラパリブ（Zejula）など;サイクリン依存性キナーゼ4および6（CDK4/6）阻害剤、例えば、パルボシクリブ、リボシクリブおよびアベマシクリブなど;選択的エストロゲン受容体アンタゴニスト、例えば、フルベストラント（Faslodex）など;mTOR阻害剤、例えば、エベロリムス（Afinitor）など;PI3K阻害剤、例えば、アルペリシブなど;またはそれらの組合せとさらに組み合わせて投与される。
いくつかの態様では、追加の治療剤は、PD-1アンタゴニスト、例えば拮抗性PD-1抗体である。好適なPD-1抗体には、例えば、ニボルマブ（OPDIVO）、ペンブロリズマブ（KEYTRUDA）、MEDI-0680（AMP-514;国際公開公報第2012/145493号）。カムレリズマブ（SHR-1210）、チスレリズマブ（BGB-A317）またはスパルタリズマブ（NPVPDR001、NVS240118、PDR001）が含まれる。追加の治療剤には、ピディリズマブ（CT-011）も含まれ得る。AMP-224と呼ばれる、IgG1のFc部分に融合したPD-L2の細胞外ドメインから構成される組換えタンパク質（B7-DC）も、PD-1受容体に拮抗するために使用され得る。
いくつかの態様では、PD-L1アンタゴニストは、拮抗性PD-L1抗体である。好適なPD-L1抗体には、例えば、アテゾリズマブ（TECENTRIQ）、デュルバルマブ（MEDI4736）、BMS-936559（国際公開公報第2007/005874号）、アベルマブ（国際公開公報第2013/79174号）またはrHigM12B7が含まれる。
いくつかの態様では、例えば、癌がHer2癌である場合、追加の治療剤は、トラスツズマブ、トラスツズマブエムタンシン（Kadcyla（登録商標））ペルツズマブ（Perjeta（登録商標））、チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、ラパチニブおよびツカチニブなどである。
上記のそのような併用療法は、併用投与（2つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤に含まれる場合）および別個の投与を包含し、その場合、本発明の抗体または抗体-薬物コンジュゲートの投与は、追加の治療剤および/またはアジュバントの投与の前、それと同時および/またはその後に行われ得る。本発明のB7-H4抗体-薬物コンジュゲートは、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
対象に投与されるB7-H4抗体-薬物コンジュゲートを含む活性剤の正確な量を決定することは、当業者のレベルの範囲内である。例えば、癌および固形腫瘍を治療するためのそのような薬剤および使用は、当技術分野において周知である。したがって、そのような薬剤の投与量は、所与の投与経路の下でその薬剤の標準的な投与レジメンに基づいて選択することができる。
正確な投与量および治療期間は、治療される組織または腫瘍の関数であり、公知の試験プロトコルを使用して経験的に、もしくはインビボもしくはインビトロ試験データからの外挿によって決定され得、および/または特定の薬剤の公知の投与レジメンから決定され得ることが理解される。また、濃度および投与量値は、治療される個体の年齢、個体の体重、投与経路、および/または疾患の程度もしくは重症度、ならびに熟練した医療従事者のレベル内にある考慮すべき他の因子によっても変化し得ることに留意されたい。一般に、投与レジメンは、毒性を制限するように選択される。主治医は、毒性、または骨髄、肝臓もしくは腎臓もしくは他の組織の機能不全に起因して投与量を低下させるために治療を終了、中断または調整する方法および時期を知っていることに留意すべきである。逆に、主治医はまた、臨床的応答が適切でない（毒性副作用を排除する）場合、治療をさらに高いレベルに調整する方法および時期を知っている。任意の特定の対象について、特定の投与レジメンが、個々の必要性、および製剤の投与を管理または監督する者の専門的判断に従って経時的に調整されるべきであり、本明細書において記載される濃度範囲は例示にすぎず、その範囲を限定することを意図するものではないことをさらに理解されたい。
別段の定義がない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書において、単数形は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、複数形も含む。本明細書において記載されるものと同様または同等の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、好適な方法および材料を以下に記載する。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先される。さらに、材料、方法および実施例は、単なる例示であり、限定することを意図するものではない。
本明細書を通して、化合物、スキャフォールドおよび組成物が特定の成分を有するか、含む（including）か、または含む（comprising）ものとして記載される場合、組成物はまた、列挙された成分から本質的になるか、またはそれからなることが企図される。同様に、方法またはプロセスが特定のプロセス工程を有するか、含む（including）か、または含む（comprising）ものとして記載される場合、プロセスはまた、列挙された処理工程から本質的になるか、またはそれからなる。さらに、本発明が動作可能なままである限り、特定の動作を実行するための工程順または順序は重要ではないことを理解されたい。さらに、2つ以上の工程または動作が同時に実行され得る。
本明細書において記載されるすべての方法は、本明細書において別段の指定がない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で行うことができる。本明細書において提供されるありとあらゆる例または例示的な文言（例えば「など」）の使用は、単に本発明をさらによく説明することを意図するものであり、明示的に別段の主張がない限り、特許請求の範囲に対する限定として解釈されるべきではない。本明細書におけるいかなる文言も、主張されていないいずれかの要素が主張されているものにとって不可欠であることを示すと解釈されるべきではない。
以下の実施例は、リンカー、薬物分子および抗体または抗体断片、ならびにそれらを調製するための方法の例示である。これらは限定することを意図するものではなく、他の試薬または方法を利用してもよいことが当業者によって容易に理解されるであろう。
略語
以下の略語は、以下の反応スキームおよび合成例で使用される。この一覧は、有機合成の当業者によって容易に理解される追加の標準的な略語として本出願で使用される略語の包括的な一覧であることを意味するものではなく、合成スキームおよび実施例でも使用され得る。
略語:
Figure 2024501894000345
一般的な情報
特に指示しない限り、試薬はいずれも、関連する提供者から購入した。
B7-H4＿2F9親抗体（抗B7-H4抗体）および2A7は、米国特許第2011/0085970号に開示されている。1D11抗体は、米国特許第20160159910号に開示されている。Endo SHは、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられるPCT出願国際公開公報第2017137459号に記載されているように調製した。UDP-アジド糖およびGalNAcTは、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第9,988,662号に記載されているように調製した。
diABZI STINGアゴニストは、Ramanjulu et al（Nature,564（7736）:439-443（2018））に記載されているように調製した。
処置群と対照群との間の腫瘍体積中央値（MTV）のパーセント差として、腫瘍増殖阻害（％TGI）を定義した。各有効性試験を通して腫瘍サイズを測定して、腫瘍増殖阻害（TGI）を決定した。
適用可能な場合、コンジュゲートの薬物含有量を分光光度的に決定し、そうでなければ、薬物含有量の定量決定のためにRP-HPLCまたはLC/MSを行った。
分光光度的に、またはELISAによって、抗体-薬物コンジュゲートのタンパク質含有量を決定した。
必要に応じて広範囲のダイアフィルトレーション、CHTクロマトグラフィーまたはHICによって、抗体-薬物コンジュゲート、薬物担持スキャフォールドまたは抗体スキャフォールドを精製した（すなわち、残留未反応薬物、非コンジュゲート抗体、酵素または出発材料の除去）。必要に応じて、SECまたはHICによる追加の精製を行って、凝集した抗体-薬物コンジュゲートを除去した。一般に、抗体-薬物コンジュゲートは、精製されると、SECによって決定される場合、5％（w/w）未満（例えば、2％（w/w）未満）の凝集した抗体-薬物コンジュゲート;RP-HPLCおよび/またはLC-MS/MSによって決定される場合、0.5％（w/w）未満（例えば、0.1％（w/w）未満）の遊離（非コンジュゲート）薬物;SECおよび/またはRP-HPLCによって決定される場合、1％（w/w）未満の遊離薬物コンジュゲート;ならびにHIC-HPLCおよび/またはRP-HPLCによって決定される場合、10％（w/w）未満（例えば、1％（w/w）未満）の非コンジュゲート抗体または非コンジュゲート抗体断片を含有した。文献に記載されている手順を使用して、還元抗体または部分還元抗体を調製した。例えば、Francisco et al.,Blood 102（4）:1458-1465（2003）を参照されたい。UV-Vis分光光度法またはRP-HPLCによって、総薬物（コンジュゲートおよび非コンジュゲート）濃度を決定した。
生物学的試料中の遊離AF-HPA薬物の濃度を決定するために、ACNを用いて酸性化試料を処理した。遊離薬物を抽出し、ACN上清を分析した。非臨床試料中のコンジュゲートAF-HPAの濃度を決定するために、試料を、抗IgG1抗体によってコーティングされた磁気ビーズを使用する免疫捕獲に供し、続いて完全塩基性加水分解に供した。LC-MS/MSによって、放出されたAF-HPA薬物を含有するACN上清を分析した。非臨床試料中の総抗体濃度は、抗IgG1抗体を使用した免疫捕獲の後に、トリプシン消化後の抗体に固有のペプチド配列の検出を介して、LC-MS/MSによって測定した。臨床試料については、内因性抗体の干渉を回避するために抗イディオタイプ抗体を免疫捕獲に使用したことを除いて、同じ手順に従うことができた。
C4カラム、ACN勾配およびUV検出を使用するRP-HPLCによって、遊離AFおよび遊離AF-HPAの分析を行った。ピーク面積を統合し、AF標準およびAF-HPA標準と比較する。該方法は、血漿ホモジネートおよび組織ホモジネート中のAFおよびAF-HPAについて定量的であり、0.1ng/mL～150ng/mLの濃度範囲にわたって直線状である。1ng/mL～5,000ng/mLのダイナミックレンジを有する同じ条件下で、NaOH（水溶液）による加水分解後に放出された総薬物（AF-HPA）を測定した。総抗体標準は、0.1μg/mL～100μg/mLの範囲である。
DADを備えたShimadzu Prominence HPLCシステムを用いたHIC-HPLCによって、抗体-薬物コンジュゲートの疎水性を決定した。これらの分析のために、TSKゲルブチル-NPRカラム（2.5μm粒径）を35℃に保持した。移動相Aは1.5M硫酸アンモニウム、25mMリン酸ナトリウム、pH7.0であり、移動相Bは25mMリン酸ナトリウム、10％イソプロピルアルコール、pH7.0であった。分離は、移動相Bの0～100％の直線勾配を用いて、25分間にわたって行った。流速は1mL/分であった。試料注入は約10μg～約100μgの範囲であった。
抗体-薬物コンジュゲートを完全塩基加水分解に供することによって、細胞傷害剤薬物部分を含むコンジュゲートの薬物対抗体比（DAR）を決定した。次いで、RP-HPLCを用いて、標準曲線から、放出されたAF-HPAを定量した。測定されたAF-HPA濃度を抗体含有量と相関させて、DARを決定した。
コンジュゲートの吸収を測定することによって、STINGアゴニスト薬物部分を含むコンジュゲートの薬物抗体比（DAR））を決定した。抗体およびSTINGアゴニストペイロードの適切なモル吸光係数を使用して、DAR値を計算した。
デジタルノギスを使用して腫瘍を週に2回測定し、式:腫瘍体積（mm3）＝（幅2×長さ）/2を使用して腫瘍体積を計算した。1週目に連日、およびその後週に2回体重を記録した。個々の腫瘍体積が≧1000mm3、≧1500mm3に達するまで、または示されるように、動物の試験を続けた。式:体重変化（％）＝（（体重試験X日目-体重試験1日目）/体重試験1日目）＊100を使用して、体重の変化率を計算した。平均±平均値の標準誤差（SEM）として腫瘍体積を報告する。処置群と対照群との間の平均腫瘍体積（MTV）のパーセント差として、腫瘍増殖阻害（％TGI）を定義した。各有効性試験を通して腫瘍サイズを測定して、腫瘍増殖阻害（TGI）を決定した。式:退縮（％）＝（1-（平均腫瘍体積最終値）/（平均腫瘍体積1日目））＊100を使用して、腫瘍退縮率を計算した。
異種移植片試験では、個々の動物の退縮応答をカテゴリーに分類する。3回の連続測定について1日目の体積では50％以下の腫瘍体積、およびこれらの3回の測定のうちの少なくとも1回について13.5mm3以上の腫瘍体積として部分奏効（PR）を定義する。3回の連続測定について13.5mm3未満の腫瘍体積として完全奏効（CR）を定義する。無腫瘍生存動物（TFS）は、試験終了時にCRを有すると分類される。動物を、PR事象またはCR事象について試験中に1回のみ、およびPR基準とCR基準の両方が満たされた場合にはCRとしてのみ、スコア化した。試験終了時にCR応答を有した動物を、無腫瘍生存動物（TFS）としてさらに分類した。
PDX試験では、個々の動物の退縮応答を以下のカテゴリーに分類する:
TS（腫瘍安定化）＝数回の連続測定中に一定の腫瘍サイズを示すマウスの数。
PR（部分退縮）＝数回の連続測定中に初期腫瘍サイズよりも小さい腫瘍サイズを示すマウスの数。
CR（完全退縮）＝数回の連続測定中に0～13mm3の腫瘍サイズを示すマウスの数。
TFS（無腫瘍生存動物）＝グループ日（Group day）終了までに記録された競合退縮の数。
実施例1:XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）細胞傷害性薬物コンジュゲート1の合成
Figure 2024501894000346
式中、■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
工程1．アジド修飾XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体
50mM Tris-HCl、pH7.6中のXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体（12.71mg、0.088μmole）に、Endo SH（0.127mg、1重量％）、GalNAcT（0.64mg、5重量％）、UDP-アジド糖（1.34mg、2.12μmole）およびMnCl2（1.18mg、9.4μmole）の順序でこれらを加えて、13.5g/Lの最終抗体濃度を達成した。反応物を30rpmで30℃で17時間撹拌した。粗アジド修飾XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体をプロテインAクロマトグラフィーおよび透析によって精製して、アジド修飾XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体（10.53mg、収率83％）を得た。
工程2．XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）薬物コンジュゲート1
PBS、pH7.2中のアジド修飾XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体（10.03mg、0.070μmole）と、スキャフォールド1A（4.25mg、0.67μmole、米国特許第17/144,378号に記載されているように調製）水溶液とを穏やかに混合し、次いで、振盪または揺動することなく30℃で20時間放置した。粗生成物をUF/DFおよびHICによって精製して、コンジュゲート1-1を得（5.85mg、収率58％）、コンジュゲート1-1は、還元RP-HPLCによって決定される場合、5.9のDARを有した。
コンジュゲート1-1、1-2および1-3の詳細を以下に示す。
Figure 2024501894000347
実施例2:XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）細胞傷害性薬物コンジュゲート2、DAR 2.0の合成
Figure 2024501894000348
式中、■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
アジド修飾XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体（50mg、0.346μmole）と、スキャフォールド1Aの代わりにスキャフォールド2A（7.12mg、3.34μmole）とを工程2で使用したことを除いて、実施例1に記載したようにコンジュゲート2を合成した。精製されたコンジュゲート2（30.1mg、収率60％）は、還元RP-HPLCによって決定される場合、2.0のDARを有した。コンジュゲート2-1および2-2の詳細を以下に示す。
Figure 2024501894000349
実施例3:XMT-1603（K＋）（B7-H4＿2F9V7）細胞傷害性薬物コンジュゲート3、DAR 5.9の合成
Figure 2024501894000350
式中、■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
アジド修飾XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体の代わりに工程2でアジド修飾XMT-1603（K＋）（B7-H4＿2F9V7）抗体（13.7mg、0.095μmole、実施例1、工程1に記載されているように調製）を使用したことを除いて、実施例1に記載したようにコンジュゲート3を合成した。精製されたコンジュゲート3（8.8mg、収率64％）は、還元RP-HPLCによって決定される場合、5.9のDARを有した。
実施例4:XMT-1603（B7-H4＿2F9V7）細胞傷害性薬物コンジュゲート4、DAR 5.9の合成
Figure 2024501894000351
式中、■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
アジド修飾XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体の代わりに工程2でアジド修飾XMT-1603（B7-H4＿2F9V7）抗体（22mg、0.153μmole、実施例1、工程1に記載されているように調製）を使用したことを除いて、実施例1に記載したようにコンジュゲート4を合成した。精製されたコンジュゲート4（13.8mg、収率63％）は、還元RP-HPLCによって決定される場合、5.9のDARを有した。
実施例5:XMT-1603（B7-H4＿2F9V7）細胞傷害性薬物コンジュゲート5、DAR 1.9の合成
Figure 2024501894000352
式中、■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
アジド修飾XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体の代わりに工程2でアジド修飾XMT-1603（B7-H4＿2F9V7）抗体（50mg、0.347μmole、実施例1、工程1に記載されているように調製）を使用したことを除いて、実施例2に記載したようにコンジュゲート5を合成した。精製されたコンジュゲート5（30.5mg、収率61％）は、還元RP-HPLCによって決定される場合、1.9のDARを有した。
実施例6:B7-H4＿2F9V11（K＋）細胞傷害性薬物コンジュゲート6、DAR 5.9の合成
Figure 2024501894000353
式中、■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
アジド修飾XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体の代わりに工程2でアジド修飾B7-H4＿2F9V11（K＋）抗体（16.66mg、0.116μmole、実施例1、工程1に記載されているように調製）を使用したことを除いて、実施例1に記載したようにコンジュゲート6を合成した。精製されたコンジュゲート6（10.75mg、収率65％）は、還元RP-HPLCによって決定される場合、5.9のDARを有した。
実施例7:B7-H4＿2F9V17（K＋）細胞傷害性薬物コンジュゲート7、DAR 5.9の合成
Figure 2024501894000354
式中、■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
アジド修飾XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体の代わりに工程2でアジド修飾B7-H4＿2F9V17（K＋）抗体（13.62mg、0.094μmole、実施例1、工程1に記載されているように調製）を使用したことを除いて、実施例1に記載したようにコンジュゲート7を合成した。精製されたコンジュゲート7（8.1mg、収率59％）は、還元RP-HPLCによって決定される場合、5.9のDARを有した。
実施例8:1D11細胞傷害性薬物コンジュゲート8、DAR 5.8の合成
Figure 2024501894000355
式中、■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
アジド修飾XMT-1604（）B7-H4＿2F9V18抗体の代わりに工程2でアジド修飾1D11抗体（15mg、1.04μmole、実施例1、工程1に記載されているように調製）を使用したことを除いて、実施例1に記載したようにコンジュゲート8を合成した。精製されたコンジュゲート8-1および8-2の詳細を以下の表に示す。
Figure 2024501894000356
実施例9:リツキシマブ細胞傷害性薬物コンジュゲート9、DAR 5.7の合成
Figure 2024501894000357
式中、■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
アジド修飾XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体の代わりに工程2でアジド修飾リツキシマブ抗体（131.4mg、0.91μmole、実施例1、工程1に記載されているように調製）を使用したことを除いて、実施例1に記載したようにコンジュゲート9を合成した。精製されたコンジュゲート9-1および9-2の詳細を以下の表に示す。
Figure 2024501894000358
実施例10:リツキシマブ細胞傷害性薬物コンジュゲート10、DAR 1.9の合成
Figure 2024501894000359
式中、■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
アジド修飾XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体の代わりに工程2でアジド修飾リツキシマブ抗体（35mg、0.242μmole、実施例1、工程1に記載されているように調製）を使用したことを除いて、実施例2に記載したようにコンジュゲート10を合成した。精製されたコンジュゲート10（24mg、収率69％）は、還元RP-HPLCによって決定される場合、1.9のDARを有した。
実施例11:B7-H4＿2F9細胞傷害性薬物コンジュゲート11、DAR 5.9の合成
Figure 2024501894000360
式中、■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
アジド修飾XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体の代わりに工程2でアジド修飾B7-H4＿2F9抗体（21.2mg、0.147μmole、実施例1、工程1に記載されているように調製）を使用したことを除いて、実施例1に記載したようにコンジュゲート11を合成した。精製されたコンジュゲート11（11.2mg、収率53％）は、還元RP-HPLCによって決定される場合、5.9のDARを有した。
実施例12:XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）細胞傷害性薬物コンジュゲート12、DAR 11.9の合成
Figure 2024501894000361
TEAA緩衝液、pH7（4mL）中のXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体（20mg、0.139μmole）の溶液に、撹拌しながらTCEP（0.0993mg、0.347μmole）の溶液を加えた。混合物を室温で1.5時間インキュベートした。次いで、激しく撹拌したTEAA緩衝液、pH6（1.8mL）中のスキャフォールド12A（18mg、1.807μmole、米国特許第9,849,191号に記載されているように調製）の溶液に、部分的に還元されたXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体を加えた。撹拌を室温で1時間続けた。TEAA緩衝液、pH7（0.084mL）中のシステイン（0.421mg、3.47μmole）の水溶液を用いて反応をクエンチした。周囲温度、pH7.0で30分間撹拌した後、反応混合物をpH5.8に酸性化した。粗生成物をWCXによって精製して、コンジュゲート12を得（10mg、収率50％）、コンジュゲート12は、加水分解とそれに続くRP-HPLCによって決定される場合、11.9のDARを有した。
実施例13:XMT-1603（B7-H4＿2F9V7）細胞傷害性薬物コンジュゲート13、DAR 11.8の合成
Figure 2024501894000362
XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体の代わりにXMT-1603（B7-H4＿2F9V7）抗体（20mg、6.99μmole）を使用したことを除いて、実施例12に記載したようにコンジュゲート13を合成した。精製されたコンジュゲート13（11.5mg、収率58％）は、加水分解とそれに続くRP-HPLCによって決定される場合、11.8のDARを有した。
実施例14:リツキシマブ細胞傷害性薬物コンジュゲート14、DAR 10.8の合成
Figure 2024501894000363
XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体の代わりにリツキシマブ抗体（100mg、6.99μmole）を使用したことを除いて、実施例12に記載したようにコンジュゲート14を合成した。精製されたコンジュゲート14（62.6mg、収率63％）は、加水分解とそれに続くRP-HPLCによって決定される場合、10.8のDARを有した。
実施例15:XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）STINGアゴニスト薬物コンジュゲート15、DAR 6.8の合成
Figure 2024501894000364
50mM HEPES、1mM EDTA緩衝液、pH7.0（1.53mL）中のXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）（8mg、0.055μmole）の溶液に、撹拌しながら50mM HEPES、1mM EDTA緩衝液、pH7.0（0.075mL）中のTCEP（8mg、0.055μmole）の溶液を加えた。混合物を37℃で1.5時間インキュベートした。次いで、DMA（0.16mL）中のスキャフォールド15A（米国特許第17/221,341号に記載されているように調製、1.18mg、0.5μmole）の溶液に、撹拌しながら、還元されたXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）を加えた。撹拌を37℃で1時間続けた。50mM HEPES、1mM EDTA緩衝液、pH7（0.02mL）中のシステイン（0.1mg、0.83μmole）の水溶液を用いて反応をクエンチした。周囲温度、pH7で45分間撹拌した後、粗生成物をCHTクロマトグラフィーによって精製してコンジュゲート15（7.6mg、収率95％）を得、コンジュゲート15は、UV-Visによって決定される場合、6.8のDARを有した。コンジュゲート15-1および15-2を同様の方法で合成した。対応する精製されたコンジュゲートの詳細を以下の表に示す。
Figure 2024501894000365
実施例16:1D11 STINGアゴニストコンジュゲート16、DAR 6.5の合成
Figure 2024501894000366
XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体の代わりに1D11抗体（8mg、0.055μmole）を使用したことを除いて、実施例15に記載したようにコンジュゲート16を合成した。精製されたコンジュゲート16（7mg、収率87.5％）は、UV-Visによって決定される場合、6.5のDARを有した。
実施例17:パリビズマブSTINGアゴニストコンジュゲート17、DAR 6.8の合成
Figure 2024501894000367
XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体の代わりにパリビズマブを使用したことを除いて、実施例15に記載したようにコンジュゲート17を合成した。精製されたコンジュゲート17（7mg、収率87.5％）は、UV-Visによって決定される場合、6.8のDARを有した。
実施例18:1D11 STINGアゴニストコンジュゲート18、DAR 6.9の合成
Figure 2024501894000368
50mM HEPES、1mM EDTA緩衝液、pH7.0（3.105mL）中の1D11（15.9mg、0.109μmole）の溶液に、撹拌しながら50mM HEPES、1mM EDTA緩衝液、pH7.0（0.075mL）中のTCEP（0.125mg、0.436μmole）の溶液を加えた。混合物を37℃で1.5時間インキュベートした。次いで、DMA（0.31mL）中のスキャフォールド18A（米国特許第17/221,341号に記載されているように調製、2.084mg、0.872μmole）の溶液に、撹拌しながら、還元された1D11を加えた。撹拌を37℃で1時間続けた。50mM HEPES、1mM EDTA緩衝液、pH7（0.04mL）中のシステイン（0.198mg、1.635μmole）の水溶液を用いて反応をクエンチした。周囲温度、pH7で45分間撹拌した後、粗生成物をCHTクロマトグラフィーによって精製してコンジュゲート18（10.8mg、収率68％）を得、コンジュゲート18は、UV-Visによって決定される場合、6.9のDARを有した。
実施例19:1D11 STINGアゴニストコンジュゲート19、DAR 6.5の合成
Figure 2024501894000369
50mM HEPES、1mM EDTA緩衝液、pH7.0（1.921mL）中の1D11（10mg、0.069μmole）の溶液に、撹拌しながら50mM HEPES、1mM EDTA緩衝液、pH7.0（0.079mL）中のTCEP（0.079mg、0.276μmole）の溶液を加えた。混合物を37℃で1.5時間インキュベートした。次いで、DMA（0.2mL）中のスキャフォールド20A（米国特許第17/221,341号に記載されているように調製、0.606mg、0.552μmole）の溶液に、撹拌しながら、還元された1D11を加えた。撹拌を37℃で1時間続けた。50mM HEPES、1mM EDTA緩衝液、pH7（0.013mL）中のシステイン（0.125mg、1.035μmole）の水溶液を用いて反応をクエンチした。周囲温度、pH7で45分間撹拌した後、粗生成物をCHTクロマトグラフィーによって精製してコンジュゲート19（8.2mg、収率82％）を得、コンジュゲート19は、UV-Visによって決定される場合、6.5のDARを有した。
実施例20:B7-H4＿2F9V18 STINGアゴニストコンジュゲート21、DAR 6.9の合成
Figure 2024501894000370
1D11抗体の代わりにXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体（10mg、0.069μmole）を使用したことを除いて、実施例19に記載したようにコンジュゲート20を合成した。精製されたコンジュゲート20（6.2mg、収率62％）は、UV-Visによって決定される場合、6.9のDARを有した。
実施例21:スキャフォールド24の合成
Figure 2024501894000371
工程1．化合物22
Figure 2024501894000372
化合物21（250mg、0.124mmol、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第15/819,650号に記載されている手順を使用して調製した）、水（5.9mL）、NMP（1.5mL）、EDC（166mg、0.868mmol）およびHOAt（0.041mg、0.298mmol）を氷浴中で撹拌し、1N NaHCO3（水溶液）を用いてpHを約6.5に調整した。化合物2（631mg、0.558mmol）を加えた後、pHを約6.5に調整した。得られた混合物を低温で3時間撹拌した。追加のEDC、HOAtおよび化合物2（198mg、0.164mmol）を加え、撹拌を一晩続けた。10％～60％～100％v/vのACN/H2OのACN/H2Oの段階勾配を用いて、C18カートリッジ（100g）上で反応混合物を精製した。所望の画分を凍結乾燥して、化合物22を白色アモルファス固体として得た（275mg、収率53％）。MS:2083.64（2＋）,1389.43（3＋）,1042.35（4＋）.
工程2．化合物23
Figure 2024501894000373
ガラスParrボトル内の化合物22（375mg、0.09mmol）、EtOH（1.5mL）および水（1.5mL）の混合物にアルゴンを通過させてバブリングさせ、その後、Pd/C（9.5mg、0.009mmol）を加えた。ボトルを水素化装置に取り付け、次いで、連続的に真空圧送し、アルゴンを充填し、次いで、水素（0.762mg、0.378mmol）を30psiまで充填し、混合物を一晩激しく撹拌した。反応混合物をシリカゲルのプラグを通して濾過し、油状物に濃縮した。油状物をACN/H2Oに溶解し、凍結乾燥して、白色アモルファス固体（220mg、収率63％）として化合物23を得た。MS:1926.60（2＋）,1284.74（3＋）,963.80（4＋）.
工程3．スキャフォールド24
Figure 2024501894000374
ACN（1.04mL）およびDMF（0.500mL）中の化合物23（150mg、0.039mmol）の氷冷溶液に、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル1-（（1R,8S,9s）-ビシクロ［6.1.0］ノナ-4-イン-9-イル）-3-オキソ-2,7,10-トリオキサ-4-アザトリデカン-13-オエート（35mg、0.078mmol）およびDIPEA（0.027mL、0.156mmol）、最終pH約8～約9を加えた。混合物を室温で2時間撹拌し、次いで、濃縮し、移動相としてACN/H2O（0.1％TFA）を使用する分取HPLCを用いて精製した。所望の画分を凍結乾燥して、スキャフォールド24を白色アモルファス固体として得た（93.1mg、収率57％）。MS:2094.23（2＋）,1396.43（3＋）,1047.62（4＋）838.30（5＋）.
実施例22:B7-H4＿2F9に対する翻訳後修飾リスクの同定、およびB7-H4変異体の生成。
B7-H4-＿2F9およびB7-H4＿2A7（米国特許第20110085970号に開示）のVH領域およびVL領域の分析により、抗体開発可能性に対する潜在的なリスクのために望ましくないと考えられる潜在的な翻訳後修飾（PTM）ライアビリティ（post-translational modification（PTM）liabilities）が同定された。以下に示すように、この分析の結果から、B4-H4＿2F9のVH鎖における潜在的なリスクが同定された。これらは、理論上のリスクが高い順に、以下に示すB7-H4＿2F9の非カノニカルシステイン残基、潜在的なAsp異性化部位および潜在的なMet酸化部位を含んでいた。
Figure 2024501894000375
表1に要約されるように、所望の抗体特性を保持しながら、潜在的なPTMハザードを排除するために、抗体B4-H4＿2F9の変異体を生成した。生成された各変異体抗体は、非カノニカルシステインリスクを排除するための4つの変化のうちの1つを含んでいた（DCからYY、DY、DAまたはDS）。変異体は、非カノニカルシステインリスクに対処することに加えて、これらの変異を単独で（B7-H4＿2F9V1、B7-H4＿2F9V6、B7-H4＿2F9V11、B7-H4＿2F9V16）、または潜在的なAsp異性化部位（DGからDA）を除去する変異も有する4つの変異体を含む他の変異と組み合わせて含んでいた:B7-H4＿2F9V2、B7-H4＿2F9V7、B7-H4＿2F9V12、B7-H4＿2F9V17。4つの変異体は、これらの変異に加えて、潜在的なメチオニン酸化ハザードに対処するための追加の変異（MDVからLDV;B7-H4＿2F9V3、B7-H4＿2F9V8、B7-H4＿2F9V13、B7-H4＿2F9V18）を有し、したがって、3つの潜在的なPTMライアビリティ全部に対処した。非カノニカルシステインリスクに対処するための変異を含むことに加えて、B4-H4＿2F9 HCDR3領域の代わりに2A7 HCDR3領域に付加することによって、Asp異性化配列を排除するために4つの変異体を設計した（B7-H4＿2F9V4、B7-H4＿2F9V9、B7-H4＿2F9V14、B7-H4＿2F9V19）。残りの4つの変異体は、非カノニカルシステインリスクに対処するための変異、2A7 HCDR3領域を含めることによるAsp異性化リスク、およびメチオニン酸化リスクに対処するためのMDVからLDVへの変異を含んでいた（B7-H4＿2F9V5、B7-H4＿2F9V10、B7-H4＿2F9V15、B7-H4＿2F9V20）。表1に、B4-H4＿2F9抗体配列変異、および対処したPTMライアビリティを要約する。
（表１）
Figure 2024501894000376
実施例23:ELISAによるヒトB7-H4タンパク質へのB7-H4＿F9親抗体およびその20 B7-H4＿2F9抗体変異体の結合
ペプチド（PBS中1μg/mL）との4℃での一晩のインキュベーションによって、96ウェルプレートの各ウェルの表面に、組換えヒトB7-H4タンパク質（R＆D Systems ＃6576-B7-050）をコーティングした。次いで、BSA（0.1％Tween 20を含有するPBS（PBST）中5％）と室温で1時間インキュベートすることによって、ウェルをブロッキングした。次いで、試験物（B7-H4＿2F9抗体変異体および20 B7-H4＿2F9抗体変異体）の一定範囲の希釈物（0.0061nM～100nM; PBS中の3％BSAで4倍段階希釈）を各ウェルに加え、プレートを穏やかに揺動させながら室温で1時間インキュベートした。PBST（3x）を用いて洗浄することによって、未結合の試験物を除去した。HRPにコンジュゲートした二次抗ヒトIgG（PBST中0.16μg/mL）を各ウェル内で1時間インキュベートした。PBST（3x）を用いて洗浄することによって、未結合の二次抗体を除去した。HRP基質、TMBを各ウェルに加え、青色が見えるまでインキュベートした。硫酸（0.2N、100μL）を加えることによって、反応をクエンチした。プレートリーダー（Molecular Devices、Spectramax M5）で450nmでの吸光度を測定した。GraphPad Prismソフトウェアを使用して、値をプロットした。4パラメータカーブフィッティングによってEC50値を決定した。表2に結合値（EC50）を要約する。
（表２）
Figure 2024501894000377
表2に示すように、B7-H4＿2F9親抗体は、1.46nMのEC50値でヒトB7-H4タンパク質に結合し、B4-H4＿2F9変異体は、0.94nM～＞100nMのEC50値でヒトB7-H4タンパク質に結合する。B7-H4に4.40nM～11.67nMのEC50値で結合するB7-H4＿2F9V1、B7-H4＿2F9V4、B7-H4＿2F9V6、B7-H4＿2F9V11およびB7-H4＿2F9V14、ならびにこのアッセイでは測定可能な結合を有しなかったB7-H4＿2F9V12を除いて、ほとんどの変異体は、B4-H4＿2F9と同様のEC50値（3倍以内）で結合する。
実施例24:FACSによる20 B7-H4＿2F9抗体変異体の細胞結合
MACSQuantフローサイトメーター（Miltenyi Biotec、Bergisch Gladbach,Germany）を使用して、培養したMX-1細胞およびHCC1569細胞に対するB7-H4＿2F9変異体抗体およびツールB7-H4抗体1D11の細胞表面結合を評価した。10％FBS（Life Technologies）および1％ペニシリン/ストレプトマイシン（Life Technologies）を含むDMEM:F12K（Life Technologies）中でMX-1細胞を増殖させた。10％FBS（Life Technologies）および1％ペニシリン/ストレプトマイシン（Life Technologies）を含むRPMI（ATCC）中でHCC1569細胞を増殖させた。染色のために、Accutase細胞剥離液（Innovative Cell Technologies）による処理によって細胞を剥離した。剥離した細胞を培地中で粉砕し、培地（75μL）中50,000細胞の密度で96ウェルU底プレートに播種した。6％ヤギ血清を含む総体積100μLの培地中、様々な濃度（100nM～0.0128nM;3倍段階希釈）の試験物とともに、氷上で3時間細胞をインキュベートした。細胞を氷冷PBS（3ｘ）を用いて洗浄し、各洗浄工程の合間に1,000×RCFでペレット化し、2％ヤギ血清（100μL）および二次蛍光標識抗体Alexa Fluor（登録商標）647標識ヤギ抗ヒトIgG（5μg/mL、Life Technologies）を含むRPMI-1640に氷上で1時間再懸濁した。細胞を氷冷PBS（3ｘ）を用いて洗浄し、1％パラホルムアルデヒド（100μL）を含む氷冷PBSに再懸濁した。フローサイトメーターを用いて各処理について5,000個の細胞を分析することによって、細胞1個当たりの蛍光を決定した。各処理の蛍光中央値をプロットし、Graphpad Prismソフトウェアを用いて4パラメータカーブフィッティングによってEC50値を計算した。
表3に、示された細胞株への結合に関する20 B7-H4＿2F9抗体変異体抗体のEC50値を要約する。
（表３）
Figure 2024501894000378
表3に示すように、MX-1細胞の表面への結合に関するEC50値は、B4-H4＿2F9に関する1.58nMと対比して、0.9～4.43nMの範囲内であった。MX-1細胞への大部分のB7-H4＿2F9変異体の結合に関するEC50値は、4.43nMであったB7-H4＿2F9V2を除いて、B4-H4＿2F9と非常に類似していた（2倍以内）。MX-1細胞への1D11抗体の結合に関するEC50値は4.9nMであった。HCC1569細胞の表面へのB4-H4＿2F9変異体の結合に関するEC50値は、B4-H4＿2F9に関する1.26nMと対比して、0.52～2.28nMの範囲内であった。HCC1569細胞へのほとんどの変異体の結合に関するEC50値は、0.52nMであったB7-H4＿2F9V15を除いて、B4-H4＿2F9と非常に類似していた。HCC1569細胞の表面への1D11抗体の結合に関するEC50値は3.44nMであった。
実施例25:ELISAによる20 B7-H4＿2F9抗体変異体の多反応性（Polyreactivity）の評価
バキュロウイルス粒子（BVP）ELISAによって、20 B7-H4＿2F9抗体変異体および対照の多反応性を評価した。カーボネート緩衝液、pH9.6、4℃中の1％BVP抽出物によって、プレートを一晩コーティングした。150、50、16.7および5.6μg/mLの試験抗体を三連で試験した。陽性対照抗体（Human IgG1 Poly-Specificity Control Antibody;MEDNA Cat ＃ H1308）および陰性対照抗体（Human IgG1アイソタイプ対照MEDNA Cat ＃ 1301;Mouse IgGアイソタイプ対照（Invitrogen Cat ＃ 31903）を使用して、標準的なELISAプロトコルに従ってアッセイを行った。三連での150μg/mlの濃度の試験抗体のバックグラウンドシグナル（二次抗体のみ）に対するELISAシグナルに基づいて、BVPスコアを計算した。表4に、抗体の平均BVPスコアを要約する。
（表４）
Figure 2024501894000379
表4に示すように、B7-H4＿2F9（10.7）のBVPスコアは、1D11抗体のBVPスコアと類似している。結果は、B4-H4＿2F9抗体と比較して、変異体に対して行われた小さな配列変化から生じる広範囲のBVPスコアを示した。変異体B7-H4＿2F9V6、XMT-1603（＋K）B7-H4＿2F9V7、B7-H4＿2F9V8、B7-H4＿2F9V11、B7-H4＿2F9V16、B7-H4＿2F9V17、およびXMT-1604（＋K）B7-H4＿2F9V18はいずれも、B7-H4＿2F9抗体および1D11抗体のBVPスコアよりも低いBVPスコアを有し、多反応性の所望の低下が示された。残りの変異体は、B7-H4＿2F9抗体、1D11抗体および陽性対照のBVPスコアよりも大きいBVPスコアを有し、B7-H4＿2F9V3抗体、B7-H4＿2F9V5抗体、B7-H4＿2F9V9抗体、B7-H4＿2F9V10抗体、B7-H4＿2F9V15抗体、B7-H4＿2F9V19抗体、およびB7-H4＿2F9V20抗体を含む。最も低いBVPスコアを有する5つの変異体（XMT-1603（＋K）B7-H4＿2F9V7、B7-H4＿2F9V8、B7-H4＿2F9V11、B7-H4＿2F9V17、およびXMT-1604（＋K）B7-H4＿2F9V18）は、多反応性の所望の低下を示す。配列変化および結果として生じるBVPスコアは予測することができなかった。
実施例26:OctetによるヒトB7-H4タンパク質へのB7-H4＿2F9抗体変異体の結合親和性
B4-H4＿2F9、ツール抗体1D11および5つのB7-H4変異体抗体（XMT-1603（＋K）（B7-H4＿2F9V7）、B7-H4＿2F9V11、B7-H4＿2F9V16、B7-H4＿2F9V17、およびXMT-1604（＋K）（B7-H4＿2F9V18）の結合動態をBiolayer Interferometry（BLI;Octet;ForteBio）によって決定し、親和性値を標準的なOctet手順（ForteBio）を使用して決定した。抗体を1×動態緩衝液中で抗ヒトFcバイオセンサに固定化した。次いで、漸増濃度の組換えヒトB7-H4タンパク質（R＆D Systems ＃6576-B7-050）を、1×動態緩衝液中の固定化ペプチドと会合させた。表5に、試験抗体に関する25℃でのKd（平衡解離定数）、kon（会合速度）およびkoff（解離速度）を要約する。
（表５）
Figure 2024501894000380
表5に示すように、B7-H4＿2F9抗体および試験したB7-H4＿2F9抗体変異体:XMT-1603（＋K）（B7-H4＿2F9V7）、B7-H4＿2F9V11、B7-H4＿2F9V16、B7-H4＿2F9V17、およびXMT-1604（＋K）（B7-H4＿2F9V18）は、ヒトB7-H4への結合について同等の親和性値を有する。B4-H4＿2F9変異体のKd値は、B4-H4＿2F9の1.39E-08Mと比較して、1.10E-08～2.23E-08 Mの範囲内である。B4-H4＿2F9変異体のkon値は、B4-H4＿2F9の1.59E＋05（M-1s-1）と比較して、7.39E＋04～1.84E＋05（M-1s-1）の範囲内である。B4-H4＿2F9変異体のkoff値は、B4-H4＿2F9の2.21E-03 s-1と比較して、1.61E-03～2.67E-03 s-1の範囲内である。ツール抗体1D11は、B4-H4＿2F9の100分の1未満のKd値を有する。1D11抗体のkon値は、B4-H4＿2F9および変異体抗体の値と非常に類似している（2倍以内）が、Koff値はB7-H4＿2F9および変異体の値の100分の1未満である。
実施例27:T細胞抑制に関するXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）抗体の評価
野生型HEK-293細胞（HEK-293-WT）、またはB7-H4を発現するように操作されたHEK293細胞（HEK-293-B7-H4）を播種し、96ウェルプレート内、50,000細胞の密度で、10％FBSおよび5％ペニシリン/ストレプトマイシンを補充したイーグル最小必須培地中で培養し、5％CO2の加湿雰囲気中、37℃で一晩接着させた。翌日、培地を除去し、T細胞培地（10％FBSおよび5％ペニシリン/ストレプトマイシンを含むイスコフ改変ダルベッコ培地）と交換した。細胞を1D11ツール抗体、XMT-1604（＋K）（B7-H4＿2F9V18）抗体、または非結合対照抗体、パリビズマブとともに、50nMの最終濃度で37℃で2時間インキュベートした後、以下のように調製したCD3＋T細胞を加えた。凍結ヒトPBMC（2.5×107細胞）を解凍し、Easy step（商標）ヒトT細胞単離キット（StemCell Technologies）を使用してCD3＋T細胞について濃縮した。CD3＋T細胞をCellTrace（商標）Violet細胞増殖キット（CTV;ThermoFisher Scientific）を用いて標識し、2×106細胞/mLに調整した。CTV標識T細胞（1×105）を、試験物によって処理したHEK-293-WT細胞またはHEK-293-B7-H4細胞に加え、Immunocult（商標）Human CD3/CD28 T Cell Activator（StemCell Technologies）を用いて刺激し、5％CO2中37℃でインキュベートした。HEK-293-WTまたはHEK-293-B7-H4とCTV標識T細胞との共培養の4日後、フローサイトメトリーを使用してCTV標識T細胞の希釈によってT細胞増殖を評価した。各群からの共培養細胞（CTV標識T細胞およびHEK-293-WT/HEK-293-B7-H4細胞）をU底96ウェルプレートに移し、PBSを用いて洗浄し、生/死Fixable Aqua死細胞染色色素（ThermoFisher Scientific）によって染色し、次いで、フルオロフォアコンジュゲート標的特異的抗体またはアイソタイプ対照抗体（FITC抗ヒトCD45、PE/Cy7抗ヒトCD4、PE抗ヒトCD8）によってさらに染色した。細胞を固定し、関心対象のタンパク質の表面発現をMACSQuantフローサイトメーターを用いたフローサイトメトリー分析によって決定した。以下の階層的フロー、すなわち、1）シングルゲート、2）生細胞、3）CD45＋細胞、および4）希釈CTV（非刺激T細胞と比較）を使用して、FlowJoソフトウェアによってデータ分析を行った。それぞれ希釈CTVと組み合わせたCD4＋、および希釈CTVと組み合わせたCD8＋を使用して、増殖CD4＋T細胞または増殖CD8＋T細胞のパーセンテージを計算した。データは、各試験物に関する三連ウェルの平均（±標準偏差）を表す。表6は、各条件に関する生細胞、CD45＋、増殖CD4＋T細胞、および増殖CD8＋T細胞の集団（％）を示す。
（表６）
Figure 2024501894000381
aシングルに対してゲーティング;b生細胞に対してゲーティング;cシングル/生細胞/CD45＋に対してゲーティング
表6に示すように、増殖CD4＋細胞および増殖CD8＋T細胞の割合は、T細胞をHEK-293-B7-H4細胞とともに培養した場合、対照群（パリビズマブ）のHEK-293-WT細胞と比較して有意に減少した（スチューデントのt検定;それぞれP≦0.001およびP≦0.05）。1D11 B7-H4＿または1604（＋K）（B7-H4＿2F9V18）抗体による処理は、CD4＋T細胞またはCD8＋T細胞のいずれかに対する増殖を顕著に回復させなかった。したがって、XMT-1604（＋K）（B7-H4＿2F9V18）は、共培養されたCD4＋T細胞またはCD8＋T細胞に対するHEK-293-B7-H4細胞の抗増殖効果を阻害しなかった。
実施例28:ELISAによるB7-H4タンパク質への変異体B7-H4細胞傷害性薬物抗体-薬物コンジュゲートの結合
ウェルをブロッキング緩衝液（PBS中の4％BSA）とのインキュベーションによってブロッキングし、B7-H4試験物および非結合対照の一定範囲の希釈物（0.0013nM～100nM; PBS中の1％BSAで5倍段階希釈）を使用したことを除いて、ELISAによるB7-H4タンパク質への、B4-H4＿2F9変異体XMT-1603（＋K）から生成されたADC DAR6コンジュゲート;コンジュゲート3）、B7-H4＿2F9V11コンジュゲート6、B7-H4＿2F9V17コンジュゲート7、XMT-1604（＋K）;コンジュゲート1-1、およびコンジュゲート8-1、対応する非コンジュゲート抗体、非結合対照ADCコンジュゲート9-1、ならびに非結合対照mAb（パリビズマブ）の結合を実施例23に記載されるように行った。表7に結合値（EC50）を要約する。
（表７）
Figure 2024501894000382
表7に示すように、B4-H4＿2F9変異体抗体XMT-1603（＋K）（B7-H4＿2F9V7）、B7-H4＿2F9V11、およびXMT-1604（＋K）（B7-H4＿2F9V18）、ならびに1D11を用いて作製された抗体-薬物コンジュゲートのEC50値は、対応する非コンジュゲート抗体と類似した結合値（2.5倍以内）を有した。コンジュゲート7の結合は、その非コンジュゲート抗体B7-H4＿2F9V17の4分の1超の効力であることが示された。対照抗体およびそれらの対応するADCに観察された結合の欠如は、B7-H4ターゲティング抗体およびADCの結合特異性を示す。
実施例29:ELISAによるヒトB7-H4タンパク質へのXMT-1603（B7-H4＿2F9V7）およびXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）細胞傷害性薬物コンジュゲートの結合
試験物の一定範囲の希釈物（0.0013nM～100nM; PBS中の1％BSAで5倍段階希釈）を使用したことを除いて、XMT-1603（＋K）（B7-H4＿2F9V7）、XMT-1604（＋K）（B7-H4＿2F9V18）、およびそれらの対応する細胞傷害性薬物コンジュゲートによるヒトB7-H4タンパク質への結合を実施例23に記載されるようにELISAによって試験した。試験物は、コンジュゲート5、コンジュゲート4、コンジュゲート13、コンジュゲート2-1、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート12であった。この試験で使用した対照には、非結合抗体、ならびに非結合対照ADC、コンジュゲート10、コンジュゲート9-2およびコンジュゲート14（Dolaflexin DAR10.9）を含めた。表8に結合値（EC50）を要約する。
（表８）
Figure 2024501894000383
表8に示すように、B4-H4＿2F9変異体抗体XMT-1603 B7-H4＿2F9V7およびXMT-1604 B7-H4＿2F9V18を用いて作製されたコンジュゲートのEC50値は、それらの非コンジュゲート抗体と類似していた（2倍以内）。対照抗体に観察された結合の欠如は、B7-H4ターゲティング抗体およびADCの結合特異性を示す。
実施例30:ELISAによるヒト、サル、ラットおよびマウス由来のB7-H4タンパク質へのXMT-1604 B7-H4＿2F9V18および細胞傷害性薬物コンジュゲートの結合
XMT-1604（B7H4＿2F9V18）および対応する細胞傷害性薬物コンジュゲートによるヒトB7-H4、サルB7-H4、ラットB7-H4およびマウスB7-H4由来のB7-H4タンパク質への結合を実施例23に記載されるようにELISAによって試験した。これらの試験で使用したタンパク質は、ヒトB7-H4（R＆D Systems;6576-B7-050）、サルB7-H4（Creative Biomart;VTCN1-1519R）、ラット（R＆D Systems 10085-B7）およびマウス（Creative Biomart;VTCN1-1519R）であった。試験物は、コンジュゲート2-1、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート12であった。この試験で使用した対照には、非結合hu-IgG1抗体、ならびに非結合対照ADC、コンジュゲート10、コンジュゲート9-2およびコンジュゲート14を含めた。表9に結合値（EC50）を要約する。ヒトB7-H4、サルB7-H4、ラットB7-H4およびマウスB7-H4の場合。結果は、2つの試験の平均である。
（表９）
Figure 2024501894000384
表9に示すように、XMT-1604（B7H4＿2F9V18）、ならびに対応する細胞傷害性薬物コンジュゲート、コンジュゲート12、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート2-1の結合値は、試験した4つの種にわたって互いに類似していた。EC50値の範囲は、ヒトB7-H4タンパク質への結合については0.20～0.30nM、サルタンパク質については0.17～0.24nM、ラットタンパク質については0.13～0.18nM、およびマウスタンパク質については0.30～0.52nMである。対照細胞傷害性薬物コンジュゲートおよび抗体は、B7-H4タンパク質への結合を示さなかった。
実施例31:OctetによるヒトB7-H4タンパク質に対するXMT-1604 B7-H4＿2F9V18および細胞傷害性薬物コンジュゲートの結合親和性
実施例23に記載されるようにBiolayer Interferometry（Octet）によって、ヒトB7-H4に対するXMT-1604 B7-H4＿2F9V18-バッチ1、およびそのXMT細胞傷害性薬物コンジュゲート、コンジュゲート2-1、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート12、ならびにXMT-1604 B7-H4＿2F9V18-バッチ2、およびその細胞傷害性薬物コンジュゲートおよびコンジュゲート2-2、コンジュゲート1-3という2つのバッチの結合動態を評価した。表10に結果を要約する。ヒトB7-H4、サルB7-H4、ラットB7-H4およびマウスB7-H4の場合。XMT-1604 B7H4＿2F9V18-バッチ1、コンジュゲート12、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート2-1に関する結果は3つの試験の平均であり、XMT-1604 B7-H4＿2F9V18-バッチ2、コンジュゲート2-2およびコンジュゲート1-3を1回分析した。
（表１０）
Figure 2024501894000385
表10に示すように、XMT-1604（B7H4＿2F9V18細胞傷害性薬物コンジュゲートおよびXMT-1604 B7H4＿2F9V18抗体のKd値、kon値およびkoff値は、非コンジュゲート抗体と類似していた。XMT-1604 B7H4＿2F9V18-バッチ1ならびにそのコンジュゲート、コンジュゲート12、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート2-1の場合、Kd値は1.87E-08～2.56E-08 Mの範囲であり、kon値は8.13E＋04～1.09E＋05 M-1s-1の範囲であり、koff値は1.80E-03～1.94E-03 s-1 -の範囲である。XMT-1604 B7H4＿2F9V18-バッチ2ならびにその細胞傷害性薬物コンジュゲート、コンジュゲート1-3およびコンジュゲート2-2の場合、Kd値は2.15E-08～2.51E-08 Mであり、kon値は8.51E＋04～1.06E＋05であり、koff値は2.01E-03～2.44E-03である。
実施例32:FACSによるXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）B7-H4細胞傷害性薬物-薬物コンジュゲートに関する細胞結合アッセイ
XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）ならびにそのコンジュゲート、コンジュゲート2-1、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート12によるヒトB7-H4への細胞表面結合をフローサイトメトリーによって評価したこの試験で使用した対照には、非結合hu-IgG1抗体、パリビズマブ、ならびにADC、コンジュゲート10、コンジュゲート9-2およびコンジュゲート14を含めた。
試験物を0.0013nM～100nMの濃度;PBS中の1％BSAで5倍段階希釈で評価したことを除いて、実施例24に記載されるように、MACSQuantフローサイトメーター（Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany）を使用して、ヒトB7-H4を安定にトランスフェクトした細胞株MX-1細胞およびHEK-293細胞、ならびに非トランスフェクトHEK-293細胞への試験物の結合を評価した。MX-1細胞を実施例24に記載されるように増殖させた。HEK-293-B7-H4細胞をEMEM（ATCC）、10％FBS、1％ペニシリン/ストレプトマイシン、および3μg/mlピューロマイシン（Life Technologies）中で増殖させ、非トランスフェクトHEK-293細胞をEMEM、10％FBS、1％ペニシリン/ストレプトマイシン中で増殖させた。表11に、MX-1細胞、HEK-293-B7-H4細胞およびHEK-293細胞の表面上の試験物のEC50値を要約する。結果は、各試験物に関する2回の反復実験の平均値である。
（表１１）
Figure 2024501894000386
表11に示すように、MX-1細胞およびHEK-293-B7-H4細胞へのXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）の結合は、その細胞傷害性薬物コンジュゲート、コンジュゲート12、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート2-1の結合と非常に類似していた（いずれも2倍以内）。非結合対照抗体およびその細胞傷害性薬物コンジュゲートは、MX-1細胞またはHEK-293-B7-H4細胞に結合せず、試験物はいずれも非トランスフェクトHEK-293細胞に結合しなかった。これらの結果は、細胞表面B7-H4へのXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）およびその細胞傷害性薬物コンジュゲートの特異的で強力な結合を示す。
実施例33:XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）-細胞傷害性薬物コンジュゲートに関する細胞傷害性アッセイ
XMT-1604（B7-H4＿2F9V18）細胞傷害性薬物コンジュゲートの抗増殖活性を細胞傷害性アッセイで試験した。試験細胞傷害性薬物コンジュゲートは、コンジュゲート2-1、コンジュゲート1-2、コンジュゲート1-3およびコンジュゲート12であった。この試験で使用した対照には、非結合対照コンジュゲート、コンジュゲート10、コンジュゲート9-2およびコンジュゲート14を含めた。
CellTiter-Glo（登録商標）（Promega Corp）を使用してインビトロでHEK-293-B7-H4細胞および非トランスフェクトHEK-293細胞を使用して、細胞傷害性アッセイを行った。細胞を2,000細胞/ウェルの密度で白壁（体積）96ウェルプレートに播種し、5％CO2の加湿雰囲気下、37℃で一晩接着させた。漸増濃度の試験物とともに細胞をインキュベートした。3日後、またはCAMA-1細胞については5日後、CellTiter-Glo（登録商標）試薬を室温でウェルに加えた。SpectraMax M5プレートリーダー（Molecular Devices）を使用して、10分後に発光シグナルを測定した。Graphpad Prismソフトウェアを使用して用量応答曲線を作成した。4パラメータカーブフィッティングからEC50値を決定した。表12にEC50値を要約する。示される値は、各試験物に関する2回の反復実験の平均値である。
（表１２）
Figure 2024501894000387
表12に示すように、CAMA-1細胞では、コンジュゲート1-3はコンジュゲート9-2の200倍超強力であった。HEK-293-B7-H4細胞では、コンジュゲート12、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート2-1は同様の細胞傷害性効力を示したが（2倍以内）、非結合対照コンジュゲート、コンジュゲート9-2、コンジュゲート10およびコンジュゲート14の効力は100分の1未満であった。B7-H4を発現しない非トランスフェクトHEK-293細胞では、全コンジュゲートが、100nMを超える同様のEC50値（2倍以内）を示した。これらの試験の結果は、B7-H4コンジュゲートによる細胞傷害性の特異的で強力な誘導を示す。
実施例34:ELISAによる組換えヒトB7-H4タンパク質へのXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）および1D11 STINGアゴニストコンジュゲートの結合
ウェルをブロッキング緩衝液（PBST中の3％BSA）とのインキュベーションによってブロッキングし、0～100nMという試験物の一定範囲の希釈物（PBST中の1％BSAで4倍段階希釈）を使用したことを除いて、実施例23に記載されるように、組換えヒトB7-H4タンパク質へのXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）ならびにそのSTINGアゴニストコンジュゲート、コンジュゲート15およびコンジュゲート19の結合をELISAによって行った。この試験での他の試験物は、1D11抗体およびそのSTINGアゴニストコンジュゲート（コンジュゲート16、コンジュゲート18およびコンジュゲート20）、非結合抗体（パリビズマブ）およびそのSTINGアゴニストコンジュゲート、コンジュゲート17である。表13に結合値（EC50）を要約する。
（表１３）
Figure 2024501894000388
表13に示すように、それぞれ0.991.08nM、0.76、0.47および1.54というコンジュゲート15、コンジュゲート16、コンジュゲート18、コンジュゲート19およびコンジュゲート20のEC50値は同等であったが、対照抗体およびそのコンジュゲートはいかなる結合も示さなかった。これらの結果は、ヒトB7-H4タンパク質へのXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）およびそのコンジュゲートの特異的結合を示す。
実施例35:FACSによるXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）および1D11 STINGアゴニストコンジュゲートの細胞結合アッセイ
MACSQuantフローサイトメーター（Miltenyi Biotec、Bergisch Gladbach,Germany）を使用して、MX-1細胞へのXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）およびそのコンジュゲート（コンジュゲート15、コンジュゲート15-1およびコンジュゲート20）の細胞表面結合を評価した。この試験で使用した対照には、1D11抗体およびそのコンジュゲート（コンジュゲート16およびコンジュゲート19）ならびに非結合抗体（パリビズマブ）およびそのコンジュゲート、コンジュゲート17を含めた。6％ヤギ血清を用いて補正した総体積100μlの培地中、0.0122nM～200nMの様々な濃度（4倍段階希釈）の試験物とともに細胞を氷上で2時間インキュベートしたことを除いて、実験例24に記載されるように実験を行った。細胞を氷冷PBS（2x）を用いて洗浄し、各洗浄工程の合間に1,000×RCFでペレット化し、2％ヤギ血清（100μL）および二次蛍光標識抗体Alexa Fluor（登録商標）647標識ヤギ抗ヒトIgG（6μg/mL、Life Technologies）を含むRPMI-1640に氷上で1時間再懸濁した。細胞を氷冷PBS（2x）を用いて洗浄し、1％パラホルムアルデヒド（100μL）を含む氷冷PBSに再懸濁した。フローサイトメーターを用いて各処理について10,000個の細胞を分析することによって、細胞1個当たりの蛍光を決定した。表14に、MX-1細胞への結合に関する抗体およびそれらの対応するSTINGアゴニストコンジュゲートのEC50値を要約する。
（表１４）
Figure 2024501894000389
表14に示すように、MX-1細胞へのXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）およびそのコンジュゲート（コンジュゲート15、コンジュゲート15-1およびコンジュゲート20）の結合は同等であり、それらのEC50値は、1D11抗体およびそのコンジュゲート（コンジュゲート16およびコンジュゲート19）について観察されたEC50値よりも大きかった（2～4倍以内）。非結合対照抗体（パリビズマブ）およびそのコンジュゲート、コンジュゲート17は、MX-1細胞に結合しなかった。これらの結果は、細胞表面B7-H4へのB7-H4＿2F9V18ならびにそのコンジュゲート、コンジュゲート15、コンジュゲート15-1およびコンジュゲート20の特異的な低nM結合を示す。
実施例36:癌細胞/THP1ルシフェラーゼレポーター細胞共培養を使用したXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）および1D11 STINGアゴニストコンジュゲートのSTING活性化インビトロ機能アッセイ
癌細胞/THP1-IRF3-ルシフェラーゼレポーター細胞共培養アッセイによって、B7-H4ターゲティングSTINGアゴニストコンジュゲートによる免疫細胞内のSTING経路の誘導を評価した。MX-1細胞を96ウェルCellBind表面組織培養プレート（17,000細胞/ウェル）に播種し、10％FBSおよび1％ペニシリン/ストレプトマイシンを含むRPMI-1640培地中で4時間付着させた。コンジュゲート:コンジュゲート15、コンジュゲート16、コンジュゲート19、コンジュゲート20、コンジュゲート15-1、コンジュゲート15-2およびコンジュゲート17または遊離STINGアゴニスト（米国特許第11,155,567号に記載されているように調製）の一定範囲の希釈物（ペイロードに基づいて0.01nM～100nM;増殖培地で4倍段階希釈）を各ウェルに加え、プレートを37℃で20分間インキュベートした。次いで、THP1-Dual（商標）細胞（InvivoGen）（50,000個の細胞）を各ウェルに加え、5％CO2の加湿雰囲気中、37℃で24時間インキュベーションを続けた。各インキュベート試料からの細胞培養上清（20μL）を再懸濁したQUANTI-Luc（InvivoGen）（50μL）に加え、SpectraMax M5プレートリーダー（Molecular Devices）を使用して発光シグナルを直ちに測定した。用量反応曲線からEC50値を決定した。表15は、MX-1癌細胞と共培養したTHP1-Dual細胞におけるEC50値を示す。
（表１５）
Figure 2024501894000390
表15に示すように、STINGアゴニストコンジュゲート、コンジュゲート15、コンジュゲート16、コンジュゲート19、コンジュゲート20、コンジュゲート15-1、コンジュゲート15-2はともに、同様のルシフェラーゼレポーター活性を示し、EC50値は、1nM未満であり、それぞれ非結合抗体（パリビズマブ）コンジュゲート、コンジュゲート17および遊離STINGアゴニストの少なくとも200分の1未満であった。したがって、B7-H4＿2F9V18 STINGアゴニストコンジュゲートは、標的特異性、および活性に関する免疫細胞（THP1）へのFc受容体媒介送達の何らかの役割を実証する。
実施例37:MX-1 TNBC異種移植マウスモデルにおけるB7-H4＿2F9細胞傷害性薬物コンジュゲートの投与に対する腫瘍増殖応答
雌の無胸腺ヌードマウスに、MX-1ヒト乳癌異種移植片腫瘍断片（約1mm3/マウス）を皮下移植した。腫瘍体積が63～196mm3（平均＝119～123mm3/群）となった際に、動物を処置群に無作為に割り付けた（n＝10/群）。ビヒクル、コンジュゲート9-1（2.46/0.075、または4.92/0.150mg/kg）、コンジュゲート11（2.28/0.075、または4.56/0.150mg/kg）、コンジュゲート3（2.30/0.075、または4.60/0.150mg/kg）、コンジュゲート6（2.30/0.075、または4.61/0.150mg/kg）、3740（2.30/0.075、または4.60/0.150mg/kg）またはコンジュゲート1-1（2.30/0.075、または4.60/0.150mg/kg）を1日目に静脈内投与した（用量はいずれも、抗体/ペイロードによって与えられる）。顕著な体重減少または臨床所見は認められなかった。
図7は、B7-H4＿2F9細胞傷害性薬物コンジュゲート:コンジュゲート9-1、コンジュゲート11、コンジュゲート3、コンジュゲート6、コンジュゲート7およびコンジュゲート1-1を用いて処置したMX-1腫瘍担持マウスの腫瘍体積に関する結果を提供する。コンジュゲート11 2.28/0.075mg/kgによる処置は、4つのCRをもたらした。コンジュゲート3 2.30/0.075mg/kgによる処置は、1つのPRおよび1つのCRをもたらした。コンジュゲート6 2.30/0.075mg/kgによる処置は、1つのPR、2つのCR、1つのTFSをもたらした。コンジュゲート7 2.30/0.075mg/kgによる処置は、1つのPR、3つのCR、1つのTFSをもたらした。コンジュゲート1-1 2.30/0.075mg/kgによる処置は、2つのPR、1つのCR、1つのTFSをもたらした。コンジュゲート11 4.56/0.150mg/kgによる処置は、1つのPR、9つのCR、4つのTFSをもたらした。コンジュゲート34.60/0.150mg/kgによる処置は、10のCR、6つのTFSをもたらした。コンジュゲート6 4.61/0.150mg/kgによる処置は、10のCR、10のTFSをもたらした。コンジュゲート7 4.60/0.150mg/kgによる処置は、10のCR、8つのTFSをもたらした。コンジュゲート1-1 4.60/0.150mg/kgによる処置は、10のCR、7つのTFSをもたらした。他の処置は退縮応答を誘導しなかった。
実施例38:MX-1 TNBC異種移植マウスモデルにおけるB7-H4＿2F9V18細胞傷害性薬物コンジュゲートの投与に対する腫瘍増殖応答
雌の無胸腺ヌードマウスに、MX-1ヒト乳癌異種移植片腫瘍断片（約1mm3/マウス）を皮下移植した。腫瘍体積が75～221mm3（平均＝123.5～126.8mm3/群）となった際に、動物を処置群に無作為に割り付けた（n＝10/群）。ビヒクル、コンジュゲート14（2.57/0.150mg/kg）、コンジュゲート9-2（4.56/0.150mg/kg）、コンジュゲート10（14.37/0.150mg/kg）、コンジュゲート12（2.26/0.150、または0.75/0.050mg/kg）、コンジュゲート1-2（5.37/0.177、2.33/0.077、または1.79/0.059mg/kg）、コンジュゲート2-1（13.45/0.150、4.60/0.050、または2.30/0.025mg/kg）またはXMT-1604 B7-H4＿2F9V18（13.80/0mg/kg）を1日目に静脈内投与した（用量はいずれも、抗体/ペイロードによって与えられる）。顕著な体重減少または臨床所見は認められなかった。
図8は、B7-H4＿2F9細胞傷害性薬物コンジュゲート:コンジュゲート14、コンジュゲート9-2、コンジュゲート10、コンジュゲート12、コンジュゲート1-2、コンジュゲート2-1およびXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）を用いて処置したMX-1腫瘍担持マウスの腫瘍体積に関する結果を提供する。コンジュゲート14 2.57/0.150mg/kgによる処置は、1つのCR、1つのTFSをもたらした。コンジュゲート12 2.26/0.150mg/kgによる処置は、1つのPRをもたらした。コンジュゲート1-2 5.37/0.177mg/kgによる処置は、10のCR、8つのTFSをもたらした。コンジュゲート1-2 2.33/0.077mg/kgによる処置は、1つのPR、2つのCR、2つのTFSをもたらした。コンジュゲート1-2 1.79/0.050mg/kgによる処置は、1つのCRをもたらした。他の処置は退縮応答を誘導しなかった。
実施例39:HBCx-19患者由来異種移植モデルにおけるB7-H4＿2F9V18細胞傷害性薬物コンジュゲートの投与に対する腫瘍増殖応答
雌の無胸腺ヌードマウスに、HBCx-19ヒト乳癌異種移植片腫瘍断片（4×3mm/マウス）を皮下移植した。腫瘍体積が75～221mm3（平均＝123.5～126.8mm3/群）となった際に、動物を処置群に無作為に割り付けた（n＝10/群）。ビヒクル、コンジュゲート1-2（1.79/0.059、または5.37/0.177mg/kg）、コンジュゲート9-2（4.56/0.150mg/kg）、コンジュゲート2-1（4.60/0.050、または13.45/0.150mg/kg）またはコンジュゲート10（14.37/0.150mg/kg）を1日目に静脈内投与した（用量はいずれも、抗体/ペイロードによって与えられる）。顕著な体重減少または臨床所見は認められなかった。
図9は、B7-H4＿2F9細胞傷害性薬物コンジュゲート:コンジュゲート9-2、コンジュゲート10、コンジュゲート1-21およびコンジュゲート2-1を用いて処置したHBCx-19腫瘍担持マウスの腫瘍体積に関する結果を提供する。コンジュゲート1-2（5.37/0.177mg/kg）による処置は、7つのTFSをもたらし、このコンジュゲートが最も有効であることが示された。他の処置は抗腫瘍応答を誘導しなかった。
実施例40:HBCx-24患者由来異種移植モデルにおけるB7-H4＿2F9V18細胞傷害性薬物コンジュゲートの投与に対する腫瘍増殖応答
雌の無胸腺ヌードマウスに、HBCx-24ヒト乳癌異種移植片腫瘍断片（4×3mm/マウス）を皮下移植した。腫瘍体積が62.5～256mm3（平均＝141.40～149.25mm3/群）となった際に、動物を処置群に無作為に割り付けた（n＝10/群）。ビヒクル、コンジュゲート14（2.57/0.150mg/kg）、コンジュゲート9-2（4.56/0.150mg/kg）、コンジュゲート10（14.37/0.150mg/kg）、コンジュゲート12（2.26/0.150、または0.75/0.050mg/kg）、コンジュゲート1-2（4.56/0.150、2.30/0.076、または1.52/0.05mg/kg）、コンジュゲート2-1（13.45/0.150、4.60/0.050、または2.30/0.025mg/kg）またはXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）（13.80/0mg/kg）を1日目に静脈内投与した（用量はいずれも、抗体/ペイロードによって与えられる）。顕著な体重減少または臨床所見は認められなかった。
図10は、B7-H4＿2F9細胞傷害性薬物コンジュゲート:コンジュゲート14、コンジュゲート9-2、コンジュゲート10、コンジュゲート12、コンジュゲート1-2、コンジュゲート2-1およびXMT-1604（B7-H4＿2F9V18）を用いて処置したHBCx-24腫瘍担持マウスの腫瘍体積に関する結果を提供する。コンジュゲート12（2.26/0.150mg/kg）による処置は、3つのPR、6つのCR、1つのTFSをもたらした。コンジュゲート1-2（1.52/0.050mg/kg（による処置は、5つのTFSをもたらした。コンジュゲート1-2（2.30/0.076mg/kg）による処置は、3つのPRおよび4つのCRをもたらした。コンジュゲート1-2（4.56/0.150mg/kg）による処置は、10のCRおよび3つのTFSをもたらした。コンジュゲート2-1（4.60/0.050mg/kg）による処置は、5つのTSをもたらした。コンジュゲート2-1（13.80/0.150mg/kg）による処置は、7つのTSをもたらした。他の処置は抗腫瘍応答を誘導しなかった。
実施例41:B7-H4＿2F9V18細胞傷害性薬物コンジュゲートの投与後のMX-1腫瘍マウスにおける総薬物の血漿曝露
雌の無胸腺ヌードマウスに、MX-1腫瘍断片を皮下移植した（各群n＝4）。コンジュゲート12（2.26/0.150、または0.75/0.050mg/kg）、コンジュゲート1-2（5.37/0.177、2.33/0.077、または1.79/0.059mg/kg）またはコンジュゲート2-1（13.80/0.150、4.60/0.050、または2.30/0.025mg/kg）を1日目に静脈内投与した（用量はいずれも、抗体/ペイロードによって与えられる）。投与後15分、24時間（2日目）、72時間（4日目）、168時間（8日目）、240時間（11日目）および336時間（15日目）の時点で、テールスニップ（tail snip）血液試料（0.04mL）を採取した。採取のためにK2EDTA抗凝固剤を用いて血液を血漿に処理した。試料を瞬間凍結し、出荷まで-80℃で保存した。
MSD-ECLサンドイッチイムノアッセイを使用して、総抗体を測定した。試料を一般的な抗ヒトFc磁気ビーズを使用して免疫捕獲し、コンジュゲート薬物を放出させるために水酸化ナトリウムを用いて処理した後、LC-MSによってコンジュゲート薬物を測定した。表16および表17は、それぞれ総抗体およびコンジュゲート薬物のPKパラメータを示す。
（表１６）
Figure 2024501894000391
（表１７）
Figure 2024501894000392
総抗体について、コンジュゲート12、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート2-1は、用量比例Cmaxを有するように思われる。試験物はいずれも、用量が増加するにつれてクリアランスの減少を示すように思われる。コンジュゲート1-2は、様々な用量レベルでコンジュゲート2-1と同等のクリアランスを有するが、DARの差、および等しいペイロード投与のために、抗体の曝露（AUC）は低い。
抗体コンジュゲート薬物の場合、コンジュゲート12、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート2-1は、用量比例Cmaxを有するように思われる。0.15mg/kgおよび0.05mg/kgのペイロード用量を有するコンジュゲート12は、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート2-1よりも低い曝露および速いクリアランスを有することが観察された。コンジュゲート1-2は、様々な用量レベルでコンジュゲート2-1と同等の曝露およびクリアランスを有する。
実施例42:B7-H4＿2F9細胞傷害性薬物コンジュゲートの投与後のMX-1腫瘍マウスにおける総薬物の血漿曝露
雌の無胸腺ヌードマウスに、MX-1腫瘍断片を皮下移植した（各群n＝4）。ビヒクル、コンジュゲート11（4.56/0.150mg/kg）、コンジュゲート3（4.60/0.150mg/kg）、コンジュゲート6（4.61/0.150mg/kg）、3740（4.60/0.150mg/kg）またはコンジュゲート1-1（4.60/0.150mg/kg）を1日目に静脈内投与した（用量はいずれも、抗体/ペイロードによって与えられる）。投与後15分、24時間（2日目）、72時間（4日目）、168時間（8日目）、240時間（11日目）および336時間（15日目）の時点で、テールスニップ血液試料（0.04mL）を採取した。採取のためにK2EDTA抗凝固剤を用いて血液を血漿に処理した。試料を瞬間凍結し、出荷まで-80℃で保存した。
MSD-ECLサンドイッチイムノアッセイを使用して、総抗体を測定した。コンジュゲート薬物を放出させるために水酸化ナトリウムを用いて試料を直接処理した後、LC-MSによって総薬物を測定した。表18および表19は、それぞれ総抗体および総薬物のPKパラメータを示す。
（表１８）
Figure 2024501894000393
（表１９）
Figure 2024501894000394
総抗体について、試験物はいずれも、AUC∞として表されるほぼ同等のCmax、クリアランスおよび曝露を有する。コンジュゲート薬物ついて、試験物はいずれも、AUC∞として表されるCmax、クリアランスおよび曝露に関して同等のPKパラメータを有する。
実施例43:MX-1異種移植マウスモデルにおけるB7-H4＿2F9V18および1D11 STINGアゴニスト薬物コンジュゲートの投与に対する腫瘍増殖応答
雌のCB.17 SCIDマウスに、MX-1ヒト乳癌異種移植片腫瘍断片（約1mm3/マウス）を皮下接種した。腫瘍体積が63～108mm3（平均＝76.8～82mm3/群）となった際に、動物を処置群に無作為に割り付けた（n＝10/群）。ビヒクル、コンジュゲート17（0.085/0.030、または2.84/0.100mg/kg）、コンジュゲート16（0.89/0.030、または2.97/0.100mg/kg）、コンジュゲート15（0.85/0.030、または2.83/0.100mg/kg）またはdiABZI IV STINGアゴニスト（5mg/kg）を1日目に静脈内投与した（用量はいずれも、抗体/ペイロードと表記される）。
図11は、STINGアゴニスト薬物コンジュゲート:コンジュゲート17、コンジュゲート16、コンジュゲート15およびdiABZI IV STINGアゴニストを用いて処置したMX-1腫瘍担持マウスの腫瘍体積に関する結果を提供する。コンジュゲート17（2.84/0.100mg/kg）による処置は、1つのCRをもたらした。この動物を試験終了時（60日目）に無腫瘍生存動物として分類した。コンジュゲート16（0.89/0.030mg/kg）による処置は、1つのPRおよび2つのCR;1つのTFSをもたらした。コンジュゲート16（2.97/0.100mg/kg）による処置は、8つのCR、6つのTFSをもたらした。コンジュゲート15（0.85/0.030mg/kg）による処置は、1つのCRおよび1つのTFSをもたらした。コンジュゲート15（2.83/0.100mg/kg）による処置は、10のCR、5つのTFSをもたらした。diABZI IV STINGアゴニスト（5mg/kg）による処置は、1つのCRをもたらした。結果は、コンジュゲート15（2.83/0.100mg/kg）が最も有効であったことを示す。
実施例44:MX-1 TNBC異種移植モデルにおけるB7-H4＿2F9V18細胞傷害性薬物コンジュゲートの投与に対する腫瘍増殖応答
雌の無胸腺ヌードマウスに、MX-1ヒト乳癌異種移植片腫瘍断片（1mm3/マウス）を皮下移植した。腫瘍体積が75～196mm3（平均＝125～128mm3/群）となった際に、動物を処置群に無作為に割り付けた（n＝10/群）。ビヒクル、コンジュゲート14（2.57/0.150mg/kg）、コンジュゲート9-2（4.56/0.150mg/kg）、コンジュゲート12（2.26/0.150、または1.13/0.075mg/kg）、コンジュゲート1-3（4.68/0.150、または2.34/0.075mg/kg）またはコンジュゲート2-2（13.81/0.150、または6.90/0.075mg/kg）を1日目に静脈内投与した（用量はいずれも、抗体/ペイロードと表記される）。顕著な体重減少または臨床所見は認められなかった。
図12は、コンジュゲート14、コンジュゲート9-2、コンジュゲート12、コンジュゲート1-3またはコンジュゲート2-2を用いて処置したMX-1腫瘍担持マウスの腫瘍体積に関する結果を提供する。コンジュゲート12（2.26/0.150mg/kg）による処置は、1つのCRをもたらした。コンジュゲート1-3（4.68/0.150mg/kg）による処置は、10のCR、7つのTFSをもたらした。コンジュゲート1-3（2.34/0.075mg/kg）による処置は、2つのPRをもたらした。他の処置は退縮応答を誘導しなかった。
実施例45:B7-H4＿2F9V18細胞傷害性薬物コンジュゲートの投与後のマウスにおける血漿曝露
雌の無胸腺ヌードマウスに、MX-1ヒト乳癌異種移植片腫瘍断片（約1mm3/マウス）を皮下移植した。ビヒクル、コンジュゲート1-3（2.32/0.075;4.65/0.15）、コンジュゲート2-2（6.74/0.075;13.5/0.15）またはコンジュゲート12（1.13/0.075;2.26/0.15）を1日目に単回用量として静脈内投与した（用量はいずれも、抗体/ペイロードと表記される）。投与後15分、24時間（2日目）、72時間（4日目）、168時間（8日目）、240時間（11日目）および336時間（15日目）の時点で、テールスニップ血液試料（0.04mL）を採取した。採取のためにK2EDTA抗凝固剤を用いて血液を血漿に処理した。試料を瞬間凍結し、出荷まで-80℃で保存した。
MSD-ECLサンドイッチイムノアッセイを使用して、総抗体を測定した。試料を磁気ビーズ上に固定化した抗ヒトIgG1 Fc抗体による免疫捕獲、続いて、加水分解によるAF-HPA放出に供した後、LC-MSによってコンジュゲート薬物を測定した。表20および表21は、それぞれ総抗体およびコンジュゲート薬物のPKパラメータを示す。
（表２０）
Figure 2024501894000395
（表２１）
Figure 2024501894000396
総抗体について、コンジュゲート1-3、コンジュゲート2-2およびコンジュゲート12は、用量比例Cmaxを有するように思われる。コンジュゲート12は、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート2-2よりも低い曝露および速いクリアランスを有することが観察された。コンジュゲート1-3は、様々な用量レベルでコンジュゲート2-2と同等のクリアランスを有するが、抗体の曝露（AUC）は低い。
抗体コンジュゲート薬物の場合、コンジュゲート1-3、コンジュゲート2-2およびコンジュゲート12は、用量比例Cmaxを有するように思われる。コンジュゲート12は、コンジュゲート1-2およびコンジュゲート2-2よりも低い曝露および速いクリアランスを有することが観察された。コンジュゲート1-3は、様々な用量レベルでコンジュゲート2-1と同等の曝露およびクリアランスを有する。
実施例46:B7-H4-細胞傷害性薬物コンジュゲートの投与後のカニクイザルにおける血漿曝露試験
カニクイザルに、ビヒクル、コンジュゲート1-3（2.81/0.09）またはコンジュゲート2-2（8.28/0.09）を45分かけてIV注入により静脈内注射した（各群について雄1匹および雌1匹）。投与前ならびに注入終了後1時間、6時間、24時間（1日目）、96時間（5日目）、168時間（8日目）、240時間（11日目）および336時間（15日目）および504時間（22日目）に血液試料を採取した。採取のためにK2-EDTA抗凝固剤を用いて血液を血漿に処理した。試料をドライアイス上で凍結し、出荷まで-80℃で保存した。
MSD-ECLサンドイッチイムノアッセイを使用して、総抗体を測定した。遊離薬物をLC-MSによって測定した。試料を磁気ビーズ上に固定化した抗ヒトIgG1 Fc抗体による免疫捕獲、続いて、加水分解によるAF-HPA放出に供した後、LC-MSによってコンジュゲート薬物を測定した。表22、表23および表24は、それぞれ総抗体、コンジュゲート薬物および遊離薬物のPKパラメータを示す。
（表２２）
Figure 2024501894000397
（表２３）
Figure 2024501894000398
（表２４）
Figure 2024501894000399
総抗体について、コンジュゲート1-3は、様々な用量レベルでコンジュゲート2-2と同等のクリアランスを有する。コンジュゲート薬物について、コンジュゲート1-3は、コンジュゲート2-2と同等の曝露およびクリアランスを有する。コンジュゲート1-3およびコンジュゲート2-2はともに、低レベルの遊離AF-HPAを有する。
実施例47:B7-H4 STINGアゴニスト薬物コンジュゲートの投与後のカニクイザルにおける血漿曝露試験
カニクイザルに、コンジュゲート15-2（9.0/0.33）を45分かけてIV注入により静脈内注射した（雄1匹および雌1匹）。投与前ならびに注入終了後1時間、6時間、24時間（1日目）、48時間（2日目）、96時間（5日目）、168時間（8日目）、240時間（11日目）、336時間（15日目）および504時間（22日目）に血液試料を採取した。採取のためにK2-EDTA抗凝固剤を用いて血液を血漿に処理した。試料をドライアイス上で凍結し、出荷まで-80℃で保存した。
MSD-ECLサンドイッチイムノアッセイを使用して、総抗体を測定した。遊離薬物をLC-MSによって測定した。試料を磁気ビーズ上に固定化した抗ヒトIgG1 Fc抗体による免疫捕獲、続いて、加水分解による薬物放出に供した後、LC-MSによってコンジュゲート薬物を測定した。表25、表26および表27は、それぞれ総抗体、コンジュゲート薬物および遊離薬物のPKパラメータを示す。
（表２５）
Figure 2024501894000400
（表２６）
Figure 2024501894000401
（表２７）
Figure 2024501894000402
実施例48．選択されていない一連のヒト乳癌原発性異種移植片に対するB7-H4＿2F9V18細胞傷害性薬物コンジュゲートの有効性
供給者によって以前の治療歴によって注釈付けされ、TNBCとER陽性サブタイプとに分けられた28の乳癌患者由来異種移植モデル（Champions Oncology）のパネルを無胸腺Nude-Foxn1nマウスに移植した。腫瘍が150～300mm3の平均体積に達した際に、1日目にコンジュゲート1-3（4.71mg/kg/0.15mg/kg、抗体/ペイロード）または生理食塩水ビヒクルの単回静脈内投与によって動物（n＝3）を処置した。1500mm3という対照群の平均腫瘍体積の計画されたエンドポイント、または28日目まで、腫瘍体積を測定した。エンドポイントでは、異種移植片または腫瘍床（触知可能な塊がない場合）をホルマリン固定パラフィン包埋材料として採取した。予想外に急速な増殖/不明瞭な腫瘍起源（CTG-3277）、またはビヒクル動物における非常に遅い増殖（CTG-2611）のために、この試験のために最初に提案された2つの追加のER陽性モデルを要約分析から除外した。
図13は、供給業者によって注釈付けされているように、受容体状態（TNBC対ER陽性）によって分類された、最良効果中央値（MBR）によって順序付けられたコンジュゲート1-3の有効性を示す。Y軸は各モデルによって達成されたMBRを示し、X軸はモデルIDを識別する。この試験では、乳癌モデルの9/28（32％）が、コンジュゲート1-3の単回用量後に50％（Y軸上で-0.5として示される）以上の最良効果中央値を達成し、50％以上のMBRの抗腫瘍効果は、ER陽性モデル3/13（23％）と比較してTNBCモデル6/15（40％）ではさらに頻度が高かった。
実施例49．マウス初代異種移植片組織におけるB7-H4のタンパク質およびRNA発現
実施例44からの異種移植片組織の利用可能性に基づいて、RNAおよびタンパク質分析を行った。製造者の指示に従ってQiagen Rneasy FFPEキットを使用して、FFPE試料からRNAを抽出した。ナノドロップ読取りに基づいて試料を等化し、exDNase EnzymeとともにThermofisher SuperScript IV VILO Master Mixを使用してcDNAを生成した。TaqMan Fast Advanced Master Mixを用いて遺伝子発現アッセイを設定した。ABIアッセイHs01552471＿g1をVTCN1に使用した。Hs99999903＿m1 ACTBおよびHs03929097＿g1 GAPDHを内因性対照として使用した。Universal RNA対照と比較した各ビヒクル処置群（一般にn＝3）の動物の平均のΔΔ Ctとして発現データを分析した。
各モデルからの単一のビヒクル処置動物に対して、B7-H4発現を検出するためのIHCを行った。要約すると、組織を4μで正に帯電したスライド上に切片化し、一晩乾燥させた。Leica BOND IIIプラットフォームを使用して、切片を焼成し、脱脂し、抗原回収に供した（LEICA BOND III ER1＋Proteinase K）。一次B7-H4抗体（Abcam ab209242）を0.2μg/mlの濃度で使用した（DAKO/Agilent希釈剤S3022で調製）。Leica BOND Polymer Refineシステム/DAB色素原を使用して、シグナルを検出した。スライドを光学顕微鏡によって評価し、HスコアおよびTPS法を使用してスコア化した。
図14は、TPSスコアによって評価したタンパク質発現を示す。有効性/発現の関係があるように思われた。TPSスコアを受容体状態によってトレリスにした場合、TNBCとして注釈付けしたモデルでは、発現がさらに高くなりやすかった。Hスコアまたは相対RNA発現値を化合物の有効性と比較すると、同様のパターンが見られた。
均等物
本発明の1つまたは複数の態様の詳細は、上記の添付の説明に記載されている。本明細書において記載されるものと同様または同等の任意の方法および材料を本開示の実施または試験に使用することができるが、ここで方法および材料を説明する。本開示の他の特徴、目的および利点は、説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、複数の言及を含む。別段の定義がない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を一般に有する。本明細書において引用されるすべての特許および刊行物は、参照により組み入れられる。
前述の説明は、例示のみを目的として提示されており、開示された正確な形態に本発明を限定することを意図するものではなく、添付の特許請求の範囲によって限定することを意図している。

Claims (28)

  1. アミノ酸配列GFIVSRNY（SEQ ID NO:2）を含む可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）、アミノ酸配列IYGSGRT（SEQ ID NO:3）を含む可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）、アミノ酸配列
    Figure 2024501894000403
    またはアミノ酸配列
    Figure 2024501894000404
    を含む可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）、アミノ酸配列QSVSSSY（SEQ ID NO:53）を含む可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）、アミノ酸配列GAS（SEQ ID NO:54）を含む可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）、アミノ酸配列
    Figure 2024501894000405
    を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）
    を含む、B7-H4に特異的に結合する単離された抗体。
  2. SEQ ID NO:44のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列と、SEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列とを含む、請求項1記載の単離された抗体。
  3. SEQ ID NO:45のアミノ酸配列を含む重鎖と、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項1記載の単離された抗体。
  4. SEQ ID NO:22のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列と、SEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列とを含む、前記請求項のいずれか一項記載の単離された抗体。
  5. SEQ ID NO:23のアミノ酸配列を含む重鎖と、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、前記請求項のいずれか一項記載の単離された抗体。
  6. モノクローナル抗体である、前記請求項のいずれか一項記載の単離された抗体。
  7. ウサギモノクローナル抗体、マウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、または完全ヒトモノクローナル抗体である、前記請求項のいずれか一項記載の単離された抗体。
  8. IgGアイソタイプである、前記請求項のいずれか一項記載の単離された抗体。
  9. IgG1アイソタイプである、前記請求項のいずれか一項記載の単離された抗体。
  10. アミノ酸配列GFIVSRNY（SEQ ID NO:2）を含む可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）、アミノ酸配列IYGSGRT（SEQ ID NO:3）を含む可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）、アミノ酸配列
    Figure 2024501894000406
    を含む可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）、アミノ酸配列QSVSSSY（SEQ ID NO:53）を含む可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）、アミノ酸配列GAS（SEQ ID NO:54）を含む可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）、アミノ酸配列
    Figure 2024501894000407
    を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）
    を含む単離された抗体と、ヒトB7-H4への特異的結合について競合する、前記請求項のいずれか一項記載の単離された抗体。
  11. SEQ ID NO:44のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列およびSEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列を含む単離された抗体と、またはSEQ ID NO:45のアミノ酸配列を含む重鎖およびSEQ ID NO:52のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む単離された抗体と、ヒトB7-H4への特異的結合について競合する、前記請求項のいずれか一項記載の単離された抗体。
  12. 前記請求項のいずれか一項記載の単離された抗体を含む、B7-H4抗体-薬物コンジュゲート。
  13. ターゲティング部分に共有結合した1つまたは複数のリンカー-薬物部分を含み、
    各リンカー-薬物部分が、
    各薬物ユニットについて放出可能アセンブリユニットを介してターゲティング部分を1つまたは複数の薬物ユニット（例えば、1つまたは複数の治療剤（D））に接続し、親水性基を各リンカー-薬物部分の薬物ユニットに接続する、多官能性リンカー
    を含み、
    放出可能アセンブリユニットが、ターゲティング部分によって標的とされた標的部位に近接して遊離薬物を放出することができ、かつ
    多官能性リンカーが、ターゲティング部分と親水性基との間にペプチド部分を含み、ペプチド部分が、少なくとも2つのアミノ酸を含む、
    請求項12記載のコンジュゲート。
  14. 表A1および表A2のコンジュゲートのいずれか1つから選択される、コンジュゲート。
  15. 表B1および表B2のコンジュゲートのいずれか1つから選択される、コンジュゲート。
  16. 式（XXXVII）のものである、請求項12記載のコンジュゲート:
    Figure 2024501894000408
    式中、
    d13は2であり、
    ANTIBODYは、アミノ酸配列GFIVSRNY（SEQ ID NO:2）を含む可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）、アミノ酸配列IYGSGRT（SEQ ID NO:3）を含む可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）、アミノ酸配列
    Figure 2024501894000409
    またはアミノ酸配列
    Figure 2024501894000410
    を含む可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）、アミノ酸配列QSVSSSY（SEQ ID NO:53）を含む可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）、アミノ酸配列GAS（SEQ ID NO:54）を含む可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）、アミノ酸配列
    Figure 2024501894000411
    を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む、B7-H4修飾抗体であり、
    リンカー-薬物部分は、B7-H4抗体のN297でアスパラギン基に結合しており、かつ
    ■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
  17. 式（XXXVIII）のものである、請求項12記載のコンジュゲート:
    Figure 2024501894000412
    式中、
    d13は整数2であり、
    ANTIBODYは、アミノ酸配列GFIVSRNY（SEQ ID NO:2）を含む可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）、アミノ酸配列IYGSGRT（SEQ ID NO:3）を含む可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）、アミノ酸配列
    Figure 2024501894000413
    またはアミノ酸配列
    Figure 2024501894000414
    を含む可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）、アミノ酸配列QSVSSSY（SEQ ID NO:53）を含む可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）、アミノ酸配列GAS（SEQ ID NO:54）を含む可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）、アミノ酸配列
    Figure 2024501894000415
    を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む、B7-H4抗体であり、
    リンカー-薬物部分は、前記抗体のN297でアスパラギン基に結合しており、
    ■はGlcNAcであり、△はFucであり、かつ□はGalNAcである。
  18. 以下の式のものであるコンジュゲート:
    Figure 2024501894000416
    式中、d13は8であり、
    ANTIBODYは、B7-H4抗体またはシステイン操作B7-H4抗体であり、
    B7-H4抗体は、アミノ酸配列GFIVSRNY（SEQ ID NO:2）を含む可変重鎖相補性決定領域1（CDRH1）、アミノ酸配列IYGSGRT（SEQ ID NO:3）を含む可変重鎖相補性決定領域2（CDRH2）、アミノ酸配列
    Figure 2024501894000417
    またはアミノ酸配列
    Figure 2024501894000418
    を含む可変重鎖相補性決定領域3（CDRH3）、アミノ酸配列QSVSSSY（SEQ ID NO:53）を含む可変軽鎖相補性決定領域1（CDRL1）、アミノ酸配列GAS（SEQ ID NO:54）を含む可変軽鎖相補性決定領域2（CDRL2）、アミノ酸配列
    Figure 2024501894000419
    を含む可変軽鎖相補性決定領域3（CDRL3）を含む。
  19. その必要がある対象に請求項12～18のいずれか一項記載のコンジュゲートを投与する工程を含む、対象の疾患または障害を治療または予防する方法。
  20. その必要がある対象の疾患または障害を治療または予防するのに使用するための、請求項12～18のいずれか一項記載のコンジュゲート。
  21. その必要がある対象の疾患または障害の予防の治療のための医薬品の製造における、請求項12～18のいずれか一項記載のコンジュゲートの使用。
  22. その必要がある対象の疾患または障害の治療または予防のための、請求項12～18のいずれか一項記載のコンジュゲートの使用。
  23. 前記コンジュゲートが、生分解時に1つまたは複数の治療剤を放出する、請求項19～22のいずれか一項記載の方法、コンジュゲート、または使用。
  24. 前記疾患または障害が癌である、請求項19～23のいずれか一項記載の方法、コンジュゲート、または使用。
  25. 前記癌がB7-H4陽性癌である、請求項24記載の方法、コンジュゲート、または使用。
  26. B7-H4陽性癌が、胆管癌（bile duct carcinoma）、乳癌、子宮内膜癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、子宮癌、甲状腺癌、腎癌、頭頸部癌、胃癌、黒色腫、胆管癌（bile duct carcinoma）、胆管癌（cholangial carcinoma）、膵癌、結腸癌、または膀胱癌である、請求項25記載の方法、コンジュゲート、または使用。
  27. 前記対象がヒトである、請求項19～26のいずれか一項記載の方法、コンジュゲート、または使用。
  28. 前記対象への治療剤の投与をさらに含む、請求項19～27のいずれか一項記載の方法。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2022543086A (ja) 2019-08-02 2022-10-07 メルサナ セラピューティクス インコーポレイテッド がんの処置用のＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子刺激因子）アゴニストとしてのビス－［Ｎ－（（５－カルバモイル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２－イル）－ピラゾール－５－カルボキサミド］誘導体および関連化合物
MX2023008000A (es) 2021-01-04 2023-07-13 Mersana Therapeutics Inc Conjugados de anticuerpo dirigido a b7-h4 y farmaco, y metodos de uso de los mismos.
US20240050585A1 (en) 2022-05-17 2024-02-15 Mersana Therapeutics, Inc. B7-h4-targeted antibody-drug conjugates for the treatment of cancer

Family Cites Families (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
AU2004204463B2 (en) 2003-01-10 2009-02-12 Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services National Institutes Of Health Catalytic domains of beta(1,4)-galactosyltransferase I having altered donor and acceptor specificities, domains that promote in vitro protein folding, and methods for their use
EP1868647A4 (en) 2005-03-24 2009-04-01 Millennium Pharm Inc OV064 BINDING ANTIBODIES AND METHOD FOR THEIR USE
US8759490B2 (en) 2005-03-24 2014-06-24 Millennium Pharamaceuticals, Inc. Antibodies that bind OV064 and methods of use therefor
CN104356236B (zh) 2005-07-01 2020-07-03 E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体
EP1963371A2 (en) 2005-12-08 2008-09-03 Medarex Inc. Human monoclonal antibodies to o8e
US9121853B2 (en) 2006-03-20 2015-09-01 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-H4 expression on tumor vasculature
CA2673659A1 (en) 2006-12-27 2008-07-10 The Johns Hopkins University Methods of detecting and diagnosing inflamatory responses and disorders by determining the level of soluble b7-h4
EP2224958A2 (en) 2007-11-30 2010-09-08 Bristol-Myers Squibb Company Anti-b7h4 monoclonal antibody-drug conjugate and methods of use
WO2009102820A2 (en) 2008-02-11 2009-08-20 Government Of The U.S A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Modified sugar substrates and methods of use
US8852599B2 (en) 2011-05-26 2014-10-07 Bristol-Myers Squibb Company Immunoconjugates, compositions for making them, and methods of making and use
WO2012171020A1 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
AU2012296613B2 (en) 2011-08-15 2016-05-12 Amplimmune, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and their uses
GB201115841D0 (en) 2011-09-13 2011-10-26 Genovis Ab Protein and method
WO2013067492A1 (en) 2011-11-03 2013-05-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Isolated b7-h4 specific compositions and methods of use thereof
WO2014100483A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Amplimmune, Inc. Anti-human b7-h4 antibodies and their uses
KR20150127199A (ko) 2013-03-14 2015-11-16 제넨테크, 인크. 항-b7-h4 항체 및 면역접합체
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
KR102087850B1 (ko) 2013-10-11 2020-03-12 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드 단백질-고분자-약물 접합체
CN106804108B (zh) 2014-09-12 2021-08-10 基因泰克公司 抗-b7-h4抗体及免疫缀合物
US10626176B2 (en) 2014-10-31 2020-04-21 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind B7-H4
JP6966162B2 (ja) * 2015-04-23 2021-11-10 シンアフィックス ビー．ブイ． β（１，４）−Ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼであるか又はそれに由来するグリコシルトランスフェラーゼを用いる糖タンパク質の改変方法
US10858641B2 (en) 2016-02-08 2020-12-08 Synaffix B.V. Enzymes for trimming of glycoproteins
EP3492591A4 (en) 2016-07-26 2020-04-01 Shizuoka Prefecture ANTI-B7-H4 ANTIBODIES
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
CA3064697A1 (en) 2017-04-19 2018-10-25 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-vtcn1 antibodies and antibody drug conjugates
US10814011B1 (en) 2017-06-16 2020-10-27 Nantbio, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and methods
JP7437301B2 (ja) 2017-08-25 2024-02-22 ファイヴ プライム セラピューティクス インク Ｂ７－ｈ４抗体及びその使用方法
CN112566934A (zh) 2018-01-23 2021-03-26 奈斯科尔公司 B7-h4抗体及其使用方法
JP7393337B2 (ja) 2018-02-11 2023-12-06 江▲蘇▼豪森▲薬▼▲業▼集▲団▼有限公司 抗ｂ７－ｈ４抗体、その抗原結合断片及びその医薬用途
JP2021514379A (ja) 2018-02-21 2021-06-10 ファイブ プライム セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｂ７−ｈ４抗体製剤
BR112020016990A2 (pt) 2018-02-21 2021-02-23 Five Prime Therapeutics, Inc. regimes de dosagem de anticorpos contra b7-h4
CN108948204B (zh) 2018-06-15 2023-01-13 苏州旭光科星抗体生物科技有限公司 抗人b7-h4单克隆抗体、鉴定方法、应用和试剂盒
WO2020081497A1 (en) 2018-10-15 2020-04-23 Five Prime Therapeutics, Inc. Combination therapy for cancer
US20230021500A1 (en) 2018-10-29 2023-01-26 Mersana Therapeutics, Inc. Cysteine engineered antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers
WO2020244657A1 (zh) 2019-06-06 2020-12-10 上海翰森生物医药科技有限公司 抗b7-h4抗体-药物偶联物及其医药用途
US11786605B2 (en) 2020-01-09 2023-10-17 Mersana Therapeutics, Inc. Site specific antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers
WO2021155307A1 (en) 2020-01-30 2021-08-05 Apeximmune Therapeutics Inc. Anti-b7-h4 constructs and uses thereof
KR20220154757A (ko) 2020-03-18 2022-11-22 젠맵 에이/에스 B7h4에 결합하는 항체
AU2021248635A1 (en) 2020-04-02 2022-10-27 Mersana Therapeutics, Inc. Antibody drug conjugates comprising STING agonists
MX2023000160A (es) 2020-06-30 2023-02-22 Nona Biosciences Suzhou Co Ltd Anticuerpo anti-b7h4, anticuerpo biespecifico y uso de los mismos.
MX2023008000A (es) 2021-01-04 2023-07-13 Mersana Therapeutics Inc Conjugados de anticuerpo dirigido a b7-h4 y farmaco, y metodos de uso de los mismos.

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