BR112020016990A2

BR112020016990A2 - regimes de dosagem de anticorpos contra b7-h4

Info

Publication number: BR112020016990A2
Application number: BR112020016990-0A
Authority: BR
Inventors: Sandeep P. INAMDAR; Helen L. Collins; Xiang Zhang; Hong Xiang
Original assignee: Five Prime Therapeutics, Inc.
Priority date: 2018-02-21
Filing date: 2019-02-21
Publication date: 2021-02-23
Also published as: JP2021513997A; IL276623A; CN111868089A; US20210070862A1; SG11202007820QA; CA3091161A1; AU2019226009A1; EP3755719A1; KR20200123169A; WO2019165075A1; JP7258038B2; JP7258038B6; US20230287123A1; MA51902A; JP2023089063A; MX2020008730A

Abstract

A presente divulgação fornece métodos de administração de anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno deste que se ligam especificamente à B7-H4 humana a um sujeito em necessidade, por exemplo, um paciente com câncer.

Description

REGIMES DE DOSAGEM DE ANTICORPOS CONTRA B7-H4

1. CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A presente divulgação refere-se, de forma geral, a métodos de administração de anticorpos que se ligam especificamente à B7-H4 humana para o tratamento de doenças como o câncer. São fornecidos regimes de dosagem vantajosos.

2. FUNDAMENTOS

[0002] B7-H4 (também conhecida como B7x, B7-S1 e VTCN1) é uma molécula reguladora imune que compartilha homologia com outros membros da família B7, incluindo PD-L1. É uma proteína transmembrana do tipo I, composta por ectodomínios IgV e IgC. Enquanto a expressão de B7-H4 em tecidos saudáveis é relativamente limitada no nível proteico, B7-H4 é expressa em vários tumores sólidos, como carcinomas ginecológicos da mama, ovário e endométrio. A expressão de B7-H4 nos tumores tende a se correlacionar com um mau prognóstico. O receptor para B7-H4 é desconhecido, mas acredita-se que seja expresso nas células T. Acredita-se que B7-H4 iniba diretamente a atividade das células T.

[0003] Dada a expressão e função de B7-H4, estão sendo desenvolvidos anticorpos que se ligam especificamente a B7-H4 para terapias que envolvem a modulação da atividade de B7-H4, por exemplo, para o tratamento de câncer. Em conformidade, há uma necessidade de regimes de dosagem para administração eficaz destes anticorpos.

3. SUMÁRIO

[0004] Métodos de administração de anticorpos contra B7-H4 e fragmentos de ligação ao antígeno destes usando um regime de dosagem terapeuticamente eficaz são fornecidos neste documento.

[0005] Em certos aspectos, um método de tratamento de um tumor sólido em um sujeito humano compreende administrar ao sujeito cerca de 0,005 a cerca de 20 mg/kg de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste que se liga especificamente à B7-H4 humana e compreende a cadeia pesada região determinante de complementaridade da região variável (VH) (CDR) 1, VH CDR2, VH CDR3 e sequências da região variável de cadeia leve (VL) CDR1, VL CDR2 e VL CDR3 do anticorpo 20502.

[0006] Em certos aspectos, um método de tratamento de um tumor sólido em um sujeito humano compreende administrar ao sujeito uma composição farmacêutica compreendendo (i) anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes, em que os anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes se ligam especificamente ao B7-H4 humano e compreendem a região determinante da complementaridade da região variável de cadeia pesada (VH) (CDR) 1, VH CDR2, VH CDR3 e a região variável de cadeia leve (VL) sequências CDR1, VL CDR2 e VL CDR3 do anticorpo 20502 e (ii) o excipiente farmaceuticamente aceitável deste, em que pelo menos 95% dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes na composição são afucosilados e em que são administrados cerca de 0,005 a cerca de 20 mg/kg dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes.

[0007] Em certos aspectos, as CDRs são as CDRs definidas pela Kabat, as CDRs definidas por Chothia ou as CDRs definidas pela AbM. Em certos aspectos, as sequências VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 e CDR3 compreendem as sequências de aminoácidos estabelecidas nas SEQ ID NOs: 5- 10, respectivamente.

[0008] Em certos aspectos, cerca de 20 mg/kg ou 20 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito. Em certos aspectos, cerca de 10 mg/kg ou 10 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito. Em certos aspectos, cerca de 3 mg/kg ou 3 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito. Em certos aspectos, cerca de 1 mg/kg ou 1 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito. Em certos aspectos, cerca de 0,3 mg/kg ou 0,3 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito. Em certos aspectos, cerca de 0,1 mg/kg ou 0,1 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito. Em certos aspectos, em que cerca de 0,03 mg/kg ou 0,03 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito. Em certos aspectos, cerca de 0,01 mg/kg ou 0,01 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito. Em certos aspectos, cerca de 0,005 mg/kg ou 0,005 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito.

[0009] Em certos aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado aproximadamente uma vez a cada três semanas.

[0010] Em certos aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado por via intravenosa.

[0011] Em certos aspectos, B7-H4 foi detectada no tumor sólido usando imuno-histoquímica (IHC) antes da administração.

[0012] Em certos aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste compreende um VH compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 11 e/ou um VL compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 12. Em certos aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia pesada e/ou uma região constante de cadeia leve. Em certos aspectos, a região constante de cadeia pesada é uma região constante de cadeia pesada de imunoglobulina humana IgG1 e/ou a região constante de cadeia leve é uma região constante de cadeia leve de imunoglobulina humana IgGκ. Em certos aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste compreende uma região constante de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 25 e/ou uma região constante de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 23. Em certos aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 21 e/ou uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 22.

[0013] Em certos aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é um anticorpo humano ou fragmento de ligação ao antígeno deste.

[0014] Em certos aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é desfucosilado.

[0015] Em certos aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é um anticorpo completo. Em certos aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é um fragmento de ligação ao antígeno. Em certos aspectos, o fragmento de ligação ao antígeno compreende um Fab, Fab', F(ab') 2, Fv de cadeia simples (scFv), Fv ligado por dissulfeto, domínio V-NAR, IgNar, intrabody, IgGΔCH2, minibody, F(ab')3, tetrabody, triabody, diabody, anticorpo de domínio único, DVD-Ig, Fcab, mAb2, (scFv)2 ou scFv-Fc.

[0016] Em certos aspectos, a fucosilação é indetectável na composição.

[0017] Em certos aspectos, o tumor sólido expressa B7-H4.

[0018] Em certos aspectos, o tumor sólido é irressecável, localmente avançado ou metastático.

[0019] Em certos aspectos, o tumor sólido é selecionado do grupo que consiste em câncer de mama, carcinoma ductal, carcinoma do endométrio, câncer de ovário, câncer urotelial, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de pâncreas, câncer de tireoide, câncer de rim e câncer de bexiga. Em certos aspectos, o tumor sólido é câncer de mama, câncer de ovário, câncer de endométrio ou câncer urotelial. Em certos aspectos, o câncer de mama é um câncer de mama avançado. Em certos aspectos, o câncer de mama é negativo para HER2. Em certos aspectos, o câncer de mama é um câncer de mama triplo negativo. Em certos aspectos, o câncer de mama é um câncer de mama positivo para receptores hormonais (HR). Em certos aspectos, o câncer de pulmão de células não pequenas é carcinoma de células escamosas. Em certas modalidades, o sujeito não recebeu terapia anterior com um antagonista de PD-1/PD-L1.

[0020] Em certos aspectos, o método compreende adicionalmente o monitoramento do número de células imunes no tumor. Em certos aspectos, o método compreende adicionalmente o monitoramento do número de células natural killer (NK), células CD4+ e/ou células CD8+ no tumor. Em certos aspectos, o método compreende adicionalmente o monitoramento dos níveis de citocinas no sujeito. Em certos aspectos, o método compreende adicionalmente o monitoramento dos níveis de IL-2, IL-6, IL-10, TNF e/ou interferon gama (IFNγ) no sujeito.

[0021] Em certas modalidades, o método para tratamento de um tumor sólido em um sujeito humano compreende a administração por via intravenosa ao sujeito uma vez a cada três semanas cerca de 20 mg/kg de um anticorpo do mesmo que se liga especificamente à B7-H4 humana e compreende uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 11 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 12.

[0022] Em certos aspectos, um método de tratamento de um tumor sólido em um sujeito humano compreende administrar ao sujeito uma composição farmacêutica compreendendo (i) anticorpos que se ligam especificamente à B7-H4 humana e compreendem um VH compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 11 e um VL compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 12 e (ii) um excipiente farmaceuticamente aceitável, em que pelo menos 95% dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno deste na composição são afucosilados e em que cerca de 20 mg/kg dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno deste são administrados por via intravenosa cerca de uma vez a cada três semanas.

[0023] Em certos aspectos, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 21 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 22. Em certos aspectos, o tumor sólido é câncer de mama, câncer de ovário, câncer de endométrio ou câncer urotelial.

4. BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0024] A FIG. 1 mostra a atividade de ADCC de anticorpos contra B7-H4 fucosilados e afucosilados contra células com vários níveis de expressão de B7- H4. (Ver Exemplo 3).

[0025] A FIG. 2 mostra o efeito dos anticorpos contra B7-H4 na inibição do crescimento tumoral em camundongos com tumores decorrentes de células cancerígenas CT26 projetadas para expressar B7-H4. (Ver Exemplo 4).

[0026] A FIG. 3 mostra o esquema de estudo de Fase 1a e 1b. SNC = sistema nervoso central; DLT = toxicidade limitante da dose; IV = intravenoso; LTFU = acompanhamento a longo prazo; MTD = dose máxima tolerada; DP = doença progressiva; Q3W = uma vez a cada 3 semanas; TNBC = câncer de mama triplo negativo; RD = dose recomendada. (Ver os exemplos 7 e 8).

5. DESCRIÇÃO DETALHADA

[0027] São fornecidos neste documento métodos de administração de anticorpos (por exemplo, anticorpos monoclonais) e seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana). Os anticorpos anti-B7-H4 e fragmentos de ligação ao antígeno destes podem ser administrados, por exemplo, para tratar um tumor sólido em um sujeito. Em uma modalidade particular, cerca de 20 mg/kg, cerca de 10 mg/kg, cerca de 3 mg/kg, cerca de 1 mg/kg, cerca de 0,3 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg, cerca de 0,03 mg/kg, cerca de 0,01 mg/kg, ou cerca de 0,005 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito, por exemplo, em que a administração ocorre a cada três semanas.

5.1 Terminologia

[0028] Conforme usado neste documento, o termo "B7-H4" refere-se a polipeptídeos B7-H4 de mamíferos, incluindo, mas não se limitando a, polipeptídeos B7-H4 nativos e isoformas de polipeptídeos B7-H4. "B7-H4" abrange polipeptídeos B7-H4 não processados de comprimento completo, bem como formas de polipeptídeos B7-H4 que resultam do processamento dentro da célula. Conforme usado neste documento, o termo "B7-H4 humano" refere-se a um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. Um "polinucleotídeo B7-H4", "nucleotídeo B7-H4" ou "ácido nucleico de B7-H4" refere- se a um polinucleotídeo que codifica B7-H4.

[0029] O termo "anticorpo" significa uma molécula de imunoglobulina que reconhece e se liga especificamente a um alvo, tal como uma proteína, polipeptídeo, peptídeo, carboidrato, polinucleotídeo, lipídio, ou combinações dos anteriores através de pelo menos um sítio de reconhecimento de antígeno dentro da região variável da molécula de imunoglobulina. Conforme usado neste documento, o termo "anticorpo" abrange anticorpos policlonais intactos, anticorpos monoclonais intactos, anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos humanos, proteínas de fusão compreendendo um anticorpo e qualquer outra molécula de imunoglobulina modificada contanto que os anticorpos exibam a atividade biológica desejada. Um anticorpo pode ser de qualquer uma das cinco maiores classes de imunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, ou suas subclasses (isotipos) (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2), com base na identidade de seus domínios constantes de cadeia pesada referidos como alfa, delta, épsilon, gama e mu, respectivamente. As diferentes classes de imunoglobulinas têm estruturas de subunidade diferentes e conhecidas e configurações tridimensionais. Os anticorpos podem ser puros ou conjugados a outras moléculas, tais como toxinas, radioisótopos etc.

[0030] O termo "fragmento de anticorpo" refere-se a uma porção de um anticorpo intacto. Um "fragmento de ligação ao antígeno", "domínio de ligação ao antígeno" ou "região de ligação ao antígeno" refere-se a uma porção de um anticorpo intacto que se liga a um antígeno. Um fragmento de ligação ao antígeno pode conter um sítio de reconhecimento antigênico de um anticorpo intacto (por exemplo, regiões determinantes da complementaridade (CDRs) suficientes para ligar especificamente o antígeno). Exemplos de fragmentos de anticorpos de ligação a antígeno incluem, mas não estão limitados a, fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 e Fv, anticorpos lineares e anticorpos de cadeia única. Um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo pode ser derivado de qualquer espécie animal, como roedores (por exemplo, camundongo, rato ou hamster) e humanos ou pode ser produzido artificialmente.

[0031] Os termos "anticorpo anti-B7-H4", "anticorpo contra B7-H4" e "anticorpo que se liga a B7-H4" referem-se a um anticorpo que é capaz de se ligar especificamente a B7-H4 com afinidade suficiente para que o anticorpo seja útil como um agente de diagnóstico e/ou terapêutico no direcionamento de B7-H4. Conforme usado neste documento, os termos "ligação específica", "ligação imunoespecífica", "reconhecimento imunoespecífico" e "reconhecimento específico" são termos análogos no contexto de anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno deste. Estes termos indicam que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste se liga a um epítopo via seu domínio de ligação ao antígeno e que a ligação implica alguma complementaridade entre o domínio de ligação ao antígeno e o epítopo. Em conformidade, um anticorpo que "se liga especificamente" ao B7-H4 humano (SEQ ID NO: 1) também pode se ligar ao B7- H4 de outras espécies (por exemplo, B7-H4 de macaco cynomolgus, camundongo e/ou rato) e/ou proteínas B7-H4 produzidas a partir de outros alelos humanos, mas a extensão da ligação a uma proteína não relacionada à B7-H4 (por exemplo, outros membros da família da proteína B7, como PD-L1) é menor que cerca de 10% da ligação do anticorpo para B7-H4 como medido, por exemplo, por um radioimunoensaio (RIA). Em uma modalidade específica, é fornecido neste documento um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste que se liga especificamente ao B7-H4 humano, macaco cynomolgus, camundongo e rato.

[0032] Um anticorpo "monoclonal" ou um fragmento de ligação deste ao antígeno deste refere-se a um anticorpo homogêneo ou população de fragmento de ligação a antígeno envolvido na ligação de um único determinante antigênico ou epítopo. Isto contrasta com os anticorpos policlonais que normalmente incluem anticorpos diferentes direcionados contra diferentes determinantes antigênicos. O termo anticorpo "monoclonal" ou fragmento de ligação deste ao antígeno deste abrange tanto os anticorpos monoclonais intactos e de comprimento completo, como os fragmentos de anticorpos (tais como Fab, Fab', F(ab')2, Fv), mutantes de cadeia única (scFv), proteínas de fusão que compreende uma porção de anticorpo e qualquer outra molécula de imunoglobulina modificada compreendendo um sítio de reconhecimento do antígeno. Adicionalmente, o anticorpo "monoclonal" ou fragmento de ligação ao antígeno deste refere-se a tais anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno deste em qualquer número de maneiras, incluindo, mas não limitado a, por hibridoma, seleção fágica, expressão recombinante e animais transgênicos.

[0033] Conforme usado neste documento, os termos “região variável” ou “domínio variável” são usados de forma intercambiável e são comuns na técnica. A região variável refere-se tipicamente a uma porção de um anticorpo, geralmente, uma porção de uma cadeia leve ou pesada, tipicamente cerca de 110 a 120 aminoácidos ou 110 a 125 aminoácidos do terminal amino na cadeia pesada madura e cerca de 90 a 115 aminoácidos na cadeia leve madura, que diferem extensamente em sequência entre os anticorpos e se usados na ligação e especificidade de um anticorpo particular para o seu antígeno particular. A variabilidade na sequência é concentrada naquelas regiões denominadas regiões determinantes de complementaridade (CDRs), enquanto as regiões mais altamente conservadas no domínio variável são denominadas regiões de framework (FR). Sem querer estar ligado a qualquer mecanismo ou teoria particular, acredita-se que CDRs das cadeias leves e pesadas são principalmente responsáveis pela interação e especificidade do anticorpo com o antígeno. Em certas modalidades, a região variável é uma região variável humana. Em certas modalidades, a região variável compreende CDR de roedor ou murino e regiões de framework humana (FRs). Em modalidades particulares, a região variável é uma região variável de primata (por exemplo, primata não humano). Em certas modalidades, a região variável compreende CDRs de roedores ou murinos e regiões de estrutura (FRs) de primatas (por exemplo, primatas não humanos).

[0034] Os termos "VL" e "domínio VL" são usados de forma intercambiável para se referir à região variável de cadeia leve de um anticorpo.

[0035] Os termos "VH" e "domínio VH" são usados de forma intercambiável para se referir à região variável de cadeia pesada de um anticorpo.

[0036] O termo "numeração de Kabat" e termos semelhantes são reconhecidos na técnica e referem-se a um sistema de numeração de resíduos de aminoácidos nas regiões variáveis de cadeia pesada e leve de um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno deste. Em certos aspectos, as CDRs podem ser determinadas de acordo com o sistema de numeração de Kabat (ver, por exemplo, Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391 e Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edição, U.S. Department of Health and Human Services, Publicação NIH Nº 91-3242). Usando o sistema de numeração de Kabat, as CDRs dentro de uma molécula de cadeia pesada de anticorpo estão tipicamente presentes nas posições de aminoácidos 31 a 35, que opcionalmente podem incluir um ou dois aminoácidos adicionais, após 35 (referido no esquema de numeração de Kabat como 35A e 35B) (CDR1), posições de aminoácidos 50 a 65 (CDR2) e posições de aminoácidos 95 a 102 (CDR3). Usando o sistema de numeração de Kabat, as CDRs dentro de uma molécula de cadeia leve de anticorpo estão tipicamente presentes nas posições de aminoácidos 24 a 34 (CDR1), posições de aminoácidos 50 a 56 (CDR2) e posições de aminoácidos 89 a 97 (CDR3). Em uma modalidade específica, as CDRs dos anticorpos descritos neste documento foram determinadas de acordo com o esquema de numeração de Kabat.

[0037] Chothia se refere à localização de alças estruturais (Chothia e Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). A extremidade da alça de CDR-H1 de Chothia, quando numerada usando a convenção de numeração de Kabat, varia entre H32 e H34, dependendo do comprimento da alça (isto porque o esquema da numeração de Kabat coloca as inserções em H35A e H35B; se nem 35A nem 35B estiverem presentes, a alça termina em 32; se apenas 35A estiver presente, a alça termina em 33; se ambas 35A e 35B estiverem presentes, a alça termina em 34). As regiões hipervariáveis AbM representam um comprometimento entre as CDRs de Kabat e alças estruturais de Chothia, e são usadas pelo software de modelagem de anticorpo AbM da Oxford Molecular. Alça Kabat AbM Chothia L1 L24-L34 L24-L34 L24-L34

L2 L50-L56 L50-L56 L50-L56 L3 L89-L97 L89-L97 L89-L97 H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32.,34 (Numeração de Kabat) H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 (Numeração de Chothia) H2 H50-H65 H50-H58 H52-H56 H3 H95-H102 H95-H102 H95-H102

[0038] Conforme usado neste documento, o termo "região constante" e "domínio constante" são intercambiáveis e têm seus significados comuns na técnica. A região constante é uma porção de anticorpo, por exemplo, uma porção terminal carboxil de uma cadeia leve e/ou pesada que não está diretamente envolvida na ligação de um anticorpo ao antígeno, mas que pode exibir várias funções efetoras, como interação com o receptor Fc. A região constante de uma molécula de imunoglobulina tem geralmente uma sequência de aminoácidos mais conservada em relação a um domínio variável de imunoglobulina. Em certos aspectos, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante ou uma porção deste que é suficiente para citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpo (ADCC).

[0039] Conforme usado neste documento, o termo “cadeia pesada” quando usado em referência a um anticorpo pode se referir a qualquer tipo distinto, por exemplo, alfa (α), delta (δ), épsilon (ε), gama (γ) e mu (µ), com base na sequência de aminoácidos do domínio constante, que dá origem às classes IgA, IgD, IgE, IgG e IgM de anticorpos, respectivamente, incluindo subclasses de IgG, por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. As sequências de aminoácidos de cadeia pesada são bem conhecidas na técnica. Em modalidades específicas, a cadeia pesada é uma cadeia pesada humana.

[0040] Conforme usado neste documento, o termo “cadeia leve” quando utilizado em referência a um anticorpo pode referir-se a qualquer tipo distinto, por exemplo, kappa (k) ou lambda (λ) com base na sequência de aminoácidos dos domínios constantes. As sequências de aminoácidos de cadeia leve são bem conhecidas na técnica. Em modalidades específicas, a cadeia leve é uma cadeia leve humana.

[0041] O termo anticorpos "quiméricos" ou fragmentos de ligação ao antígeno destes refere-se aos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes em que a sequência de aminoácidos é derivada de duas ou mais espécies. Normalmente, a região variável de cadeias leve e pesada corresponde à região variável de anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes derivados de uma espécie de mamíferos (por exemplo, camundongo, rato, coelho etc.). com a especificidade, afinidade e capacidade desejadas enquanto as regiões constantes são homólogas às sequências nos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes derivados de outra (geralmente, humana) para evitar provocar uma resposta imune nessa espécie.

[0042] O termo anticorpo "humanizado" ou fragmento de ligação ao antígeno deste se refere às formas de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) ou fragmento de ligação ao antígeno que são cadeias de imunoglobulinas específicas, imunoglobulinas quiméricas, ou fragmentos destes que contêm sequências não humanas mínimas (por exemplo, murinas). Normalmente, os anticorpos humanizados ou fragmentos de ligação ao antígeno deste são imunoglobulinas humanas nas quais os resíduos da região determinante de complementaridade (CDR) são substituídos por resíduos de CDR de uma espécie não humana (por exemplo, camundongo, rato, coelho, hamster) que possuem a especificidade, afinidade e capacidade desejadas ("CDR enxertado") (Jones et al., Nature 321:522- 525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988)). Em alguns casos, certos resíduos da região de framework de Fv (FR) de uma imunoglobulina humana são substituídos pelos resíduos correspondentes em um anticorpo ou fragmento a partir de uma espécie não humana que tenha a especificidade, afinidade e capacidade desejadas. O anticorpo humanizado ou fragmento de ligação ao antígeno deste pode ser modificado adicionalmente pela substituição de resíduos adicionais na região de framework de Fv e/ou dentro dos resíduos não humanos de CDR para refinar e otimizar a especificidade, afinidade e/ou capacidade do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno. Geralmente, o anticorpo humanizado ou fragmento de ligação ao antígeno deste compreenderá domínios variáveis contendo todas ou substancialmente todas as regiões CDR que correspondem à imunoglobulina não- humana, considerando que todas ou substancialmente todas as regiões FR são aquelas de uma sequência consenso da imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado ou fragmento de ligação ao antígeno deste também pode compreender pelo menos uma porção de uma região ou domínio constante de imunoglobulina (Fc), normalmente o de uma imunoglobulina humana. Os exemplos de métodos usados para gerar anticorpos humanizados estão descritos na Patente U.S. 5,225,539; Roguska et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 91(3):969-973 (1994) e Roguska et al., Protein Eng. 9 (10): 895-904 (1996). Em algumas modalidades, um "anticorpo humanizado" é um anticorpo revestido.

[0043] O termo anticorpo "humano" ou fragmento de ligação ao antígeno deste significa um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste tendo uma sequência de aminoácidos derivada de um locus de gene da imunoglobulina humana, em que esse anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é produzido usando qualquer técnica conhecida na técnica. Esta definição de um anticorpo humano ou fragmento de ligação deste ao antígeno inclui anticorpos intactos ou completos e fragmentos destes.

[0044] Um anticorpo "fucosilado" ou fragmento de ligação ao antígeno deste ou um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste "sem fucose" refere-se a um anticorpo isotipo IgGl ou IgG3 ou fragmento de ligação ao antígeno deste que não possui fucose em sua glicosilação na região constante. A glicosilação de IgG1 ou IgG3 humana ocorre em Asn297 como núcleo glicosilação de oligossacarídeo do complexo biantenário fucosilado terminado com até 2 resíduos de Gal. Em algumas modalidades, o anticorpo fucosilado não possui fucose em Asn297. Estas estruturas são designadas como resíduos de glicano G0, G1 (α1,6 ou α1,3) ou G2, dependendo da quantidade de resíduos finais de Gal. Ver, por exemplo, Raju, T.S., BioProcess Int. 1: 44-53 (2003). A glicosilação do anticorpo Fc do tipo CHO é descrita, por exemplo, em Routier, F. FL, Glycoconjugate J. 14: 201-207 (1997).

[0045] Métodos para medir fucose incluem quaisquer métodos conhecidos na técnica. Para os fins deste documento, a fucose é detectada pelo método descrito no Exemplo 1 do documento WO2015/017600, que é incorporado neste documento por referência na sua totalidade. Resumidamente, a análise de glicano é realizada liberando glicanos do anticorpo (por exemplo, por liberação enzimática), rotulando os glicanos com ácido antranílico (2-AA) e depois purificando os glicanos marcados. A HPLC de fase normal com detecção fluorescente é usada para separar os glicanos e medir a quantidade relativa de cada glicano no anticorpo. Os glicanos podem ser identificados positivamente como ausentes ou incluindo fucose por espectrometria de massa. Em algumas modalidades, a fucose é indetectável em uma composição compreendendo uma pluralidade de anticorpos fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno deste. Em algumas modalidades, um anticorpo fucosilado ou fragmento de ligação ao antígeno deste possui afinidade aumentada para Fc gama RIIIA. Em algumas modalidades, um anticorpo fucosilado ou fragmento de ligação ao antígeno deste possui afinidade aumentada para Fc gama RIIIA(V158). Em algumas modalidades, um anticorpo fucosilado ou fragmento de ligação ao antígeno deste possui afinidade aumentada para Fc gama RIIIA(F158).

[0046] "Afinidade de ligação" se refere geralmente à força da soma total de interações não covalentes entre um sítio de ligação simples de uma molécula (por exemplo, um anticorpo ou antígeno de ligação ao antígeno deste) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). A menos que indicado de outra forma, conforme usado neste documento, "afinidade de ligação" se refere à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação de 1:1 entre membros de um par de ligação (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste e antígeno). A afinidade de uma molécula X pelo seu parceiro Y geralmente pode ser representada pela constante de dissociação (KD). A afinidade pode ser medida e/ou expressa de várias maneiras conhecidas na técnica, incluindo, mas não se limitando a, constante de dissociação de equilíbrio (KD), e constante de associação de equilíbrio (KA). O KD é calculado do quociente de koff/kon, em que kA é calculado do quociente de kon/koff. O kon se refere à constante de taxa de associação de, por exemplo, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste a um antígeno, e koff se refere à dissociação de, por exemplo, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste de um antígeno. O kon e o koff podem ser determinados por técnicas conhecidas pelos versados na técnica, tais como BIAcore® ou KinExA.

[0047] Conforme usado neste documento, um “epítopo” é um termo na técnica e refere-se a uma região localizada de um antígeno ao qual um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste pode se ligar especificamente. Um epítopo pode ser, por exemplo, aminoácidos contíguos de um polipeptídeo (epítopo linear ou contíguo) ou um epítopo pode, por exemplo, unir-se a partir de duas ou mais regiões não contíguas de um polipeptídeo ou polipeptídeos (conformacional,

não linear, epítopo descontínuo ou não contíguo). Em certas modalidades, o epítopo ao qual um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste se liga especificamente pode ser determinado por, por exemplo, espectroscopia de NMR, estudos de cristalografia por difração de raios-X, ensaios ELISA, troca de hidrogênio/deutério acoplada à espectrometria de massa (por exemplo, líquido espectrometria de massa por eletropulverização por cromatografia), ensaios de varredura de oligo-peptídeos baseados em matriz e/ou mapeamento de mutagênese (por exemplo, mapeamento de mutagênese direcionada ao sítio). Para cristalografia de raios X, a cristalização pode ser realizada usando qualquer um dos métodos conhecidos na técnica (por exemplo, Giegé R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303). Anticorpo/fragmento de ligação ao antígeno deste: os cristais de antígeno podem ser estudados usando técnicas conhecidas de difração de raios-X e podem ser refinados usando um software de computador como o X- PLOR (Universidade de Yale, 1992, distribuído por Molecular Simulations, Inc.; ver, por exemplo, Meth Enzymol (1985), volumes 114 e 115, eds Wyckoff HW et al.; US. 2004/0014194) e BUSTER (Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49 (Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed. Carter CW; Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56 (Pt 10): 1316-1323). Os estudos de mapeamento de mutagênese podem ser realizados usando qualquer método conhecido por um versado na técnica. Ver, por exemplo, Champe M et al., (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394 and Cunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085 para uma descrição de técnicas de mutagênese, incluindo técnicas de mutagênese de varredura de alanina.

[0048] Os termos "proteína de morte celular programada 1" e "PD-1" refere- se a um receptor imuno-inibitório pertencente à família CD28. PD-1 é expressa predominantemente em células T previamente ativadas in vivo e liga-se a dois ligantes, PD-L1 e PD-L2. O termo "PD-1", conforme usado neste documento, inclui PD-1 humano (hPD-1), variantes e isoformas de ocorrência natural de hPD-1 e homólogos de espécies de hPD-1. Uma sequência de hPD-1 é

MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGD NATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLP NGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAH PSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLK

EDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPAR RGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL (SEQ ID NO: 30).

[0049] Os termos "ligante 1 da morte celular programada 1" e "PD-L1" referem-se a um dos dois ligantes de glicoproteína da superfície celular para PD-1 (o outro sendo PD-L2) que regulam negativamente a ativação de células T e a secreção de citocinas ao se ligarem à PD-1. O termo "PD-L1", conforme usado neste documento, inclui PD-L1 humano (hPD-L1), variantes e isoformas de ocorrência natural de hPD-1 e homólogos de espécies de hPD-L1. Uma sequência hPD-L1 é

MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLA ALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKL QDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYP KAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPE

ENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGI QDTNSKKQSDTHLEET (SEQ ID NO:31).

[0050] O termo "antagonista de PD-1/PD-L1" refere-se a uma porção que perturba a via de sinalização de PD-1/PD-L1. Em algumas modalidades, o antagonista inibe a via de sinalização de PD-1/PD-L1 ligando-se à PD-1 e/ou PD- L1. Em algumas modalidades, o antagonista de PD-1/PD-L1 também se liga a PD- L2. Em algumas modalidades, um antagonista de PD-1/PD-L1 bloqueia a ligação de PD-1 a PD-L1 e, opcionalmente, a PD-L2. Os antagonistas exemplificativos não limitativos de PD-1/PD-L1 incluem antagonistas de PD-1, tais como anticorpos que se ligam a PD-1, por exemplo, nivolumabe (OPDIVO) e pembrolizumabe (KEYTRUDA); antagonistas de PD-L1, como anticorpos que se ligam a PD-L1 (por exemplo, atezolizumabe (TECENTRIQ), durvalumabe e avelumabe); proteínas de fusão, como AMP-224; e peptídeos, tais como AUR-012.

[0051] Um polipeptídeo, anticorpo, polinucleotídeo, vetor, célula ou composição que é "isolada" é um polipeptídeo, anticorpo, polinucleotídeo, vetor, célula ou composição, que é uma forma não encontrada na natureza. Polipeptídeos, anticorpos, polinucleotídeos, vetores, célula ou composições isoladas incluem aqueles que foram purificados a um grau no qual eles já não estão em uma forma na qual eles são encontrados na natureza. Em algumas modalidades, um anticorpo, polinucleotídeos, vetor, célula ou composição que é isolada é substancialmente pura. Conforme usado neste documento, "substancialmente puro" refere-se a material que é pelo menos 50% puro (ou seja, livre de contaminantes), com pelo menos 90% de pureza, com pelo menos 95% de pureza, com pelo menos 98% de pureza ou com pelo menos 99% de pureza.

[0052] Os termos "polipeptídeo", "peptídeo" e "proteína" são usados permutavelmente neste documento para se referir aos polímeros de aminoácidos de qualquer comprimento. Os polímeros podem ser lineares ou ramificados, podem compreender aminoácidos modificados, e podem ser interrompidos por não aminoácidos. Os termos também englobam um polímero de aminoácido que tenha sido modificado naturalmente ou por intervenção; por exemplo, pela formação da ligação de dissulfeto, glicosilação, lipidação, acetilação, fosforilação ou qualquer outra manipulação ou modificação, como conjugação com um componente de marcação. Também incluídos na definição estão, por exemplo, polipeptídeos contendo um ou mais análogos de um aminoácido (incluindo, por exemplo, aminoácidos não naturais etc.)., bem como outras modificações conhecidas na técnica. Entende-se que, visto que os polipeptídeos desta invenção se baseiam em anticorpos, em determinadas modalidades, os polipeptídeos podem ocorrer como cadeias únicas ou cadeias associadas.

[0053] Conforme usado neste documento, o termo "célula hospedeira" pode ser qualquer tipo de célula, por exemplo, uma célula primária, uma célula em cultura ou uma célula de uma linhagem celular. Em modalidades específicas, o termo "célula hospedeira" refere-se a uma célula transfectada com uma molécula de ácido nucleico e a progênie ou progênie potencial de tal célula. A progênie de tal célula pode não ser idêntica à célula de origem transfectada com a molécula de ácido nucleico, por exemplo, devido a mutações ou influências ambientais que podem ocorrer em gerações sucessivas ou integração da molécula de ácido nucleico no genoma da célula hospedeira.

[0054] O termo "formulação farmacêutica" se refere a uma preparação cuja forma permite que a atividade biológica do ingrediente ativo seja eficaz, e que não contém componentes adicionais que sejam inaceitavelmente tóxicos a um sujeito ao qual a formulação será administrada. A formulação pode ser estéril.

[0055] Os termos "administrar", "administrando", "administração" e semelhantes, conforme usados neste documento, referem-se a métodos que podem ser usados para permitir a distribuição de uma droga, por exemplo, um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste para o sítio de ação biológica desejado (por exemplo, administração intravenosa). As técnicas de administração que podem ser empregadas com os agentes e métodos descritos neste documento são encontradas em, por exemplo, Goodman e Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, edição atual, Pergamon; e Remington’s, Pharmaceutical Sciences, edição atual, Mack Publishing Co., Easton, Pa.

[0056] Conforme usado neste documento, os termos "sujeito" e "paciente" são usados de forma intercambiável. O sujeito pode ser um animal. Em algumas modalidades, o sujeito é um mamífero, tal como um animal não humano (por exemplo, vaca, porco, cavalo, gato, cachorro, rato, camundongo, macaco ou outro primata, etc).. Em algumas modalidades, o sujeito é um macaco cynomolgus. Em algumas modalidades, o sujeito é um humano.

[0057] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade de uma droga, por exemplo, um anticorpo anti-B7-H4 ou um fragmento de ligação ao antígeno deste, eficaz para tratar uma doença ou distúrbio em um sujeito. No caso do câncer, a quantidade terapeuticamente eficaz da droga pode reduzir o número de células cancerígenas; reduzir o tamanho ou fardo do tumor; inibir, certa medida, a infiltração de célula de câncer em órgãos periféricos; inibir, em certa medida, metástase do tumor; inibir, em certa medida, crescimento do tumor; aliviar, em certa medida, um ou mais sintomas associados ao câncer; e/ou resultar em uma resposta favorável, como maior sobrevivência livre de progressão (PFS), sobrevivência livre de doença (DFS) ou sobrevivência global (OS), resposta completa (CR), resposta parcial (PR), ou, em alguns casos, doença estável (SD), redução da doença progressiva (PD), tempo reduzido para progressão (TTP), ou qualquer combinação destes. À medida que a droga pode impedir o crescimento e/ou matar as células cancerígenas já existentes, ela pode ser citostática e/ou citotóxica.

[0058] Termos como "tratar" ou "tratamento" ou "a tratar" ou "aliviar" ou "a aliviar" referem-se a medidas terapêuticas que curam, desaceleram, diminuem os sintomas e/ou interrompem a progressão de uma condição ou distúrbio patológico.

Portanto, aqueles que precisam de tratamento incluem aqueles já diagnosticado ou suspeitos de ter o distúrbio. Em determinadas modalidades, um sujeito é "tratado" para câncer de acordo com os métodos da presente invenção se o paciente apresentar um ou mais dentre: uma redução no número de ou ausência completa de células cancerígenas; uma redução do tamanho do tumor; inibição ou ausência de infiltração de células cancerígenas em órgãos periféricos, incluindo, por exemplo, a propagação do câncer em tecidos moles e osso; inibição de ou ausência de metástases de tumor; inibição ou ausência do crescimento do tumor; alívio de um ou mais sintomas associados com o câncer específico; redução de morbidade e mortalidade; melhoria na qualidade de vida; redução de tumorigenicidade, frequência tumorigênica ou capacidade tumorigênica de um tumor; redução no número ou frequência de células-tronco de câncer em um tumor; diferenciação de células tumorigênicas a um estado não-tumorigênico; aumento da sobrevivência sem progressão (PFS), sobrevivência sem doença (DFS) ou sobrevivência global (OS), resposta completa (CR), resposta parcial (PR), doença estável (SD), uma diminuição na doença progressiva (PD), uma redução do tempo para progressão (TTP), qualquer combinação destes.

[0059] Os termos "câncer" e "canceroso" referem ou descrevem a condição fisiológica em mamíferos em que uma população de células é caracterizada por crescimento celular não regulado. Exemplos de câncer incluem, entre outros, cânceres ginecológicos (por exemplo, câncer de mama (incluindo câncer de mama triplo negativo, carcinoma ductal, câncer de ovário e câncer de endométrio), câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de pâncreas, câncer de tireoide, câncer de rim (por exemplo, carcinoma de células renais) e câncer de bexiga (por exemplo, carcinoma de células uroteliais). O câncer pode ser um "câncer que expressa B7-H4" ou "B7-H4 que expressa câncer". Tais termos se referem a um câncer compreendendo células que expressam B7-H4. O câncer pode ser um tumor sólido que expressa B7-H4. O câncer pode ser um tumor primário ou pode ser câncer avançado ou metastático.

[0060] Um câncer "refratário" é um que avança apesar de um tratamento antitumoral, como quimioterapia, é administrado ao paciente com câncer.

[0061] Um câncer "recorrente" é uma que tem cresceu novamente, no sítio inicial ou em um sítio distante, após uma resposta à terapia inicial.

[0062] Conforme usado na presente divulgação e reivindicações, as formas singulares "um", "uma" e "a/o" incluem as formas plurais, a menos que o contexto dite claramente o contrário.

[0063] Entende-se que, sempre que as modalidades são descritas neste documento com a linguagem "compreendendo", também são fornecidas modalidades análogas descritas em termos de "consistindo em" e/ou "consistindo essencialmente em". Nesta divulgação, "compreende", "compreendendo", "contendo", "possuindo", e semelhantes pode ter o significado atribuído a eles na lei de Patentes dos EUA e pode significar "inclui", "incluindo", e semelhantes; "consistindo essencialmente em" ou "consiste essencialmente" também têm o significado atribuído na lei de Patentes dos EUA e estes termos são abertos, permitindo a presença de mais do que o que é lido, desde que características básicas ou novas daquilo que é lido não são alteradas pela presença de mais do que o que é lido, mas exclui modalidades da técnica anterior

[0064] A menos que especificamente indicado ou evidente a partir do contexto, como usado neste documento, o termo "ou" é entendido como sendo inclusivo. O termo "e/ou", tal conforme utilizado numa frase tal como "A e/ou B" neste documento, pretende incluir ambos "A e B", "A ou B", "A" e "B." Do mesmo modo, o termo "e/ou", conforme usado em uma expressão, tal como "A, B e/ou C", pretende abranger cada uma das seguintes modalidades: A, B e C; A, B ou C; A ou C; A ou B; B ou C; A e C; A e B; B e C; A (sozinho); B (sozinho); e C (sozinho).

[0065] Conforme usado neste documento, os termos “cerca de” e “aproximadamente”, quando usados para modificar um valor numérico ou intervalo numérico, indicam que os desvios de 5% a 10% acima e 5% a 10% abaixo do valor ou intervalo permanecem dentro do objetivo significado do valor ou intervalo recitado.

[0066] Quaisquer composições ou métodos fornecidos neste documento podem ser combinados com um ou mais de qualquer das outras composições e métodos fornecidos neste documento.

5.2 Métodos de Tratamento de Câncer

[0067] Em um aspecto, são apresentados neste documento métodos para o tratamento de câncer em um sujeito humano, compreendendo a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento.

[0068] Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento, em que cerca de 0,005 a cerca de 20 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste são administrados, por exemplo, cerca de uma vez a cada três semanas.

[0069] Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que cerca de 0,005 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, cerca de uma vez a cada três semanas. Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que cerca de 0,01 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, cerca de uma vez a cada três semanas. Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que cerca de 0,03 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, cerca de uma vez a cada três semanas. Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que cerca de 0,1 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, cerca de uma vez a cada três semanas. Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que cerca de 0,3 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, cerca de uma vez a cada três semanas. Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que cerca de 1 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, cerca de uma vez a cada três semanas. Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que cerca de 3 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno é administrado, por exemplo, cerca de uma vez a cada três semanas. Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que cerca de 10 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno é administrado, por exemplo, cerca de uma vez a cada três semanas. Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que cerca de 20 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, cerca de uma vez a cada três semanas.

[0070] Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que 0,005 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, uma vez a cada três semanas.

Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que de 0,01 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, uma vez a cada três semanas.

Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que 0,03 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, uma vez a cada três semanas.

Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que de 0,1 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, uma vez a cada três semanas.

Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que 0,3 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, uma vez a cada três semanas.

Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que 1 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, uma vez a cada três semanas. Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que 3 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno é administrado, por exemplo, uma vez a cada três semanas. Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que 10 mg/kg do anticorpo anti-B7- H4 ou fragmento de ligação ao antígeno é administrado, por exemplo, uma vez a cada três semanas. Em um aspecto, um método de tratamento de câncer em um sujeito humano compreende a administração a um sujeito em necessidade deste de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento ou uma composição farmacêutica deste, conforme descrita neste documento, em que 20 mg/kg do anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado, por exemplo, uma vez a cada três semanas.

[0071] De acordo com os métodos fornecidos neste documento, o anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno neste documento, ou a composição farmacêutica compreendendo anticorpos anti-B7-H4 ou fragmentos de ligação ao antígeno deste, podem ser administrados por via intravenosa.

[0072] Em uma certa modalidade, são fornecidas neste documento métodos para o tratamento de um câncer selecionado do grupo que consiste em: câncer de mama (por exemplo, câncer de mama avançado, câncer de mama triplo negativo ou carcinoma ductal), carcinoma endometrial, câncer de ovário, câncer urotelial, câncer de pulmão de células não pequenas (por exemplo, carcinoma de células escamosas), câncer de pâncreas, câncer de tireoide, câncer de rim (por exemplo, carcinoma de células renais) e câncer de bexiga (por exemplo, carcinoma de células uroteliais). Em uma determinada modalidade, são fornecidos neste documento métodos de tratamento de câncer de mama avançado (incluindo câncer de mama triplo-negativo), câncer de ovário, câncer endometrial ou câncer urotelial. Em uma determinada modalidade, são fornecidos neste documento métodos de tratamento de câncer de mama. Em uma determinada modalidade, são fornecidos neste documento métodos de tratamento de um câncer de mama positivo para receptor de hormônio (HR). Em uma determinada modalidade, são fornecidos neste documento métodos de tratamento de um câncer de ovário. Em uma determinada modalidade, são fornecidos neste documento métodos de tratamento de um câncer endometrial. Em uma determinada modalidade, são fornecidos neste documento métodos de tratamento de um câncer urotelial. Em uma determinada modalidade, fornecida neste documento, o sujeito não recebeu terapia anterior com um antagonista de PD-1/PD-L1. Em determinadas modalidades, esses métodos compreendem a administração de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste fornecido neste documento, ou uma composição farmacêutica compreendendo anticorpos anti-B7-H4 ou fragmentos de ligação ao antígeno destes fornecidos neste documento a um paciente (por exemplo, um paciente humano) em necessidade desta.

[0073] Em algumas modalidades, o câncer é um câncer que expressa B7- H4. Em determinadas modalidades, o câncer é um tumor sólido que expressa B7- H4. Em determinadas modalidades, B7-H4 foi detectado (por exemplo, usando imuno-histoquímica (IHC)) em uma amostra biológica obtida do sujeito.

[0074] Uma amostra biológica pode ser qualquer amostra biológica obtida de um sujeito, linhagem celular, tecido ou outra fonte de células potencialmente expressando B7-H4. Métodos para a obtenção de biópsias de tecidos e fluidos corporais de mamíferos são bem conhecidos na técnica. Amostras biológicas incluem células sanguíneas mononucleares periféricas. Uma amostra biológica também pode ser uma amostra de sangue, na qual células tumorais circulantes (ou "CTCs") podem expressar B7-H4 e serem detectadas.

[0075] O ensaio para o nível de expressão da proteína B7-H4 se destina a incluir a medição qualitativa ou quantitativa ou a estimativa do nível de uma proteína B7-H4 em uma primeira amostra biológica, seja diretamente (por exemplo, determinando ou estimando o nível de proteína absoluto) ou relativamente (por exemplo, comparando com o nível de proteína em uma segunda amostra biológica). O nível de expressão do polipeptídeo B7-H4 na primeira amostra biológica pode ser medido ou estimado e comparado com um nível padrão de proteína B7-H4, sendo o padrão determinado a partir de uma segunda amostra biológica que não está doente ou determinada pelos níveis médios de uma população de amostras que não estão doentes. Como será apreciado na técnica, uma vez conhecido o nível de polipeptídeo B7-H4 "padrão", ele pode ser usado repetidamente como padrão para comparação.

[0076] Em outra modalidade, um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste, ou composição farmacêutica, é administrado a um paciente (por exemplo, um paciente humano) diagnosticado com câncer para aumentar a proliferação de células T, células T CD4+ ou células T CD8+ no paciente. Em outra modalidade, um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste, ou composição farmacêutica, é administrado a um paciente (por exemplo, um paciente humano) diagnosticado com câncer para aumentar a produção de interferon-gama (IFNγ) no paciente. Em outra modalidade, um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste, ou composição farmacêutica, é administrado a um paciente (por exemplo, um paciente humano) diagnosticado com câncer para bloquear a atividade inibidora de B7-H4 contra células T em o paciente. Em outra modalidade, um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste, ou composição farmacêutica, é administrado a um paciente (por exemplo, um paciente humano) diagnosticado com câncer para esgotar as células cancerígenas que expressam B7-H4 no paciente.

[0077] Em algumas modalidades, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-B7-H4 ou um fragmento de ligação ao antígeno deste ou composição farmacêutica fornecida neste documento para uso como medicamento, em que o medicamento é para administração em cerca de 0,005 mg/kg a cerca de 20 mg/kg (por exemplo, cerca de 0,005 mg/kg, cerca de 0,01 mg/kg, cerca de 0,03 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg, cerca de 0,3 mg/kg, cerca de 1 mg/kg, cerca de 3 mg/kg, cerca de 10 mg/kg, ou cerca de 20 mg/kg) do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste. Em alguns aspectos, a presente invenção refere-se a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste ou composição farmacêutica fornecida neste documento, para uso em um método para o tratamento de câncer, em que cerca de 0,005 mg/kg a cerca de 20 mg/kg (por exemplo, cerca de 0,005 mg/kg, cerca de 0,01 mg/kg, cerca de 0,03 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg, cerca de 0,3 mg/kg, cerca de 1 mg/kg, cerca de 3 mg/kg, cerca de 10 mg/kg ou cerca de 20 mg/kg) do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado. Em alguns aspectos, a presente invenção refere-se a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste ou composição farmacêutica fornecida neste documento, para uso em um método para o tratamento de câncer em um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito cerca de 0,005 mg/kg a cerca de 20 mg/kg (por exemplo, cerca de 0,005 mg/kg, cerca de 0,01 mg/kg, cerca de 0,03 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg, cerca de 0,3 mg/kg, cerca de 1 mg/kg, cerca de 3 mg/kg, cerca de 10 mg/kg, ou cerca de 20 mg/kg) de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste ou composição farmacêutica fornecida neste documento.

[0078] Em algumas modalidades, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-B7-H4 ou um fragmento de ligação ao antígeno deste ou composição farmacêutica fornecida neste documento para uso como medicamento, em que o medicamento é para administração em 0,005 mg/kg a 20 mg/kg (por exemplo, 0,005 mg/kg, 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg, ou 20 mg/kg) do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste. Em alguns aspectos, a presente invenção refere-se a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste ou composição farmacêutica fornecida neste documento, para uso em um método para o tratamento de câncer, em que 0,005 mg/kg a 20 mg/kg (por exemplo, 0,005 mg/kg, 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg ou 20 mg/kg) do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado. Em alguns aspectos, a presente invenção refere-se a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste ou composição farmacêutica fornecida neste documento, para uso em um método para o tratamento de câncer em um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito 0,005 mg/kg a 20 mg/kg (por exemplo, 0,005 mg/kg, 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg, ou 20 mg/kg) de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste ou composição farmacêutica fornecida neste documento.

5.3 Anticorpos contra B7-H4 e Fragmentos de Ligação ao Antígeno Destes

[0079] São fornecidos neste documento métodos de tratamento de câncer em um sujeito humano compreendendo a administração ao sujeito de anticorpos (por exemplo, anticorpos monoclonais, como anticorpos quiméricos, humanizados ou humanos) e fragmentos de ligação ao antígeno destes que se ligam especificamente a B7-H4 (por exemplo, humanos B7-H4). Anticorpos contra B7-H4 exemplificativos e fragmentos de ligação ao antígeno destes que podem ser usados nos métodos fornecidos neste documento são conhecidos na técnica. As sequências de aminoácidos para B7-H4 humano, macaco cynomolgus, murino e rato são conhecidas na técnica e também são fornecidas aqui como representadas pelas SEQ ID NOs: 1-4, respectivamente. B7-H4 humano:

MASLGQILFWSIISIIIILAGAIALIIGFGISGRHSITVTTVASAGNIGEDGILSCT FEPDIKLSDIVIQWLKEGVLGLVHEFKEGKDELSEQDEMFRGRTAVFADQVIVGN ASLRLKNVQLTDAGTYKCYIITSKGKGNANLEYKTGAFSMPEVNVDYNASSETLR CEAPRWFPQPTVVWASQVDQGANFSEVSNTSFELNSENVTMKVVSVLYNVTIN

NTYSCMIENDIAKATGDIKVTESEIKRRSHLQLLNSKASLCVSSFFAISWALLPLSP YLMLK (SEQ ID NO:1) B7-H4 de macaco cynomolgus:

MASLGQILFWSIISIIFILAGAIALIIGFGISGRHSITVTTVASAGNIGEDGILSC TFEPDIKLSDIVIQWLKEGVIGLVHEFKEGKDELSEQDEMFRGRTAVFADQVIVGN ASLRLKNVQLTDAGTYKCYIITSKGKGNANLEYKTGAFSMPEVNVDYNASSETLR CEAPRWFPQPTVVWASQVDQGANFSEVSNTSFELNSENVTMKVVSVLYNVTIN

NTYSCMIENDIAKATGDIKVTESEIKRRSHLQLLNSKASLCVSSFLAISWALLPLAP YLMLK (SEQ ID NO:2) B7-H4 Murino

MASLGQIIFWSIINIIIILAGAIALIIGFGISGKHFITVTTFTSAGNIGEDGTLSCT FEPDIKLNGIVIQWLKEGIKGLVHEFKEGKDDLSQQHEMFRGRTAVFADQVVVGN ASLRLKNVQLTDAGTYTCYIRTSKGKGNANLEYKTGAFSMPEINVDYNASSESLR CEAPRWFPQPTVAWASQVDQGANFSEVSNTSFELNSENVTMKVVSVLYNVTIN

NTYSCMIENDIAKATGDIKVTDSEVKRRSQLQLLNSGPSPCVFSSAFVAGWALLS LSCCLMLR (SEQ ID NO:3) B7-H4 de Rato

MASLGQIIFWSIINVIIILAGAIVLIIGFGISGKHFITVTTFTSAGNIGEDGTLSC TFEPDIKLNGIVIQWLKEGIKGLVHEFKEGKDDLSQQHEMFRGRTAVFADQVVVG NASLRLKNVQLTDAGTYTCYIHTSKGKGNANLEYKTGAFSMPEINVDYNASSESL RCEAPRWFPQPTVAWASQVDQGANFSEVSNTSFELNSENVTMKVVSVLYNVTI NNTYSCMIENDIAKATGDIKVTDSEVKRRSQLELLNSGPSPCVSSVSAAGWALLS

LSCCLMLR (SEQ ID NO:4)

[0080] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento liga-se especificamente ao B7-H4 humano. Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento se liga especificamente ao B7-H4 humano e de macaco cynomolgus. Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento liga-se especificamente ao B7- H4 humano, murino e de rato. Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento se liga especificamente ao B7-H4 humano e de macaco cynomolgus, murino e de rato.

[0081] B7-H4 contém um ectodomínio IgC (aminoácidos 153-241 da SEQ ID NO: 1) e um ectodomínio IgV (aminoácidos 35-146 da SEQ ID NO: 1). Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento liga-se especificamente ao domínio de B7- H4 humano. Em conformidade, são fornecidos neste documento métodos para administrar anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno deste que se ligam especificamente a um polipeptídeo consistindo nos aminoácidos 35-146 da SEQ ID NO: 1.

[0082] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno para uso deste nos métodos descritos neste documento se liga especificamente ao B7-H4 humano e compreende as seis CDRs do anticorpo 20502 listadas conforme fornecido nas Tabelas 1 e 2. "20502" refere-se ao 20502, descrito neste documento. Tabela 1. Sequências de Aminoácidos VH CDR1 Antic VH CDR1 VH CDR2 VH CDR3 orpo (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:)

GSIKSGSYYWG NIYYSGSTYYNPSLRS AREGSYPNQFDP 20502 (SEQ ID NO:5) (SEQ ID NO:6) (SEQ ID NO:7) 1 As CDRs de VH na Tabela 1 são determinados de acordo com Kabat. Tabela 2. Sequências de Aminoácidos VL CDR2

VL CDR1 VL CDR2 VL CDR3 Anticorpo (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) RASQSVSSNLA GASTRAT (SEQ ID QQYHSFPFT (SEQ 20502 (SEQ ID NO:8) NO:9) ID NO:10) 2As CDRs de VL na Tabela 2 são determinadas de acordo com Kabat.

[0083] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento se liga especificamente ao B7-H4 humano e compreende a VH do anticorpo 20502 listado conforme listado na Tabela 3. Tabela 3: Sequências de aminoácidos de cadeia pesada variável (VH) Anticorpo Sequência de aminoácidos VH (SEQ ID NO)

QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSYYWGWIRQ

PPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLRSRVTISVDTSKNQFSLK 20502

LSSVTAADTAVYYCAREGSYPNQFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:11)

[0084] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento se liga especificamente ao B7-H4 humano e compreende a VL do anticorpo 20502 listado conforme listado na Tabela 4. Tabela 4: Sequências de Aminoácidos de Cadeia Leve Variável (VL) Anticorpo Sequência de aminoácidos VL (SEQ ID NO)

EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKP 20502 GQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSED FAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:12)

[0085] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento se liga especificamente ao B7-H4 humano e compreende a VH e a VL do anticorpo 20502 listado nas Tabelas 3 e 4.

[0086] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento se liga especificamente ao B7-H4 humano e compreende a VH do anticorpo 20502 listado conforme listado na Tabela 5. Tabela 5. Sequências de Aminoácidos VH FR 3 VH FR4 VH FR1 VH FR2 VH FR3 Anticorpo (SEQ ID (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) NO:)

QLQLQESGP WIRQPPGKGL RVTISVDTSKN WGQGTLVT GLVKPSETL EWIG (SEQ ID QFSLKLSSVTA VSS (SEQ 20502 SLTCTVSG NO:14) ADTAVYYC ID NO:16) (SEQ ID (SEQ ID NO:15) NO:13) 3As regiões de framework VH descritas na Tabela 5 são determinadas com base nos limites do sistema de numeração de Kabat para CDRs. Por outras palavras, as CDR de VH são determinadas por Kabat e as regiões de framework são os resíduos de aminoácidos que rodeiam as CDRs na região variável no formato FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4.

[0087] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento se liga especificamente ao B7-H4 humano e compreende a VL do anticorpo 20502 listado conforme listado na Tabela 6. Tabela 6. Sequência de Aminoácidos VLFR 4 VL FR1 VL FR2 VL FR3 VL FR4 Anticorpo (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID NO:) (SEQ ID

EIVMTQSPATLS WYQQKPGQA GIPARFSGSG FGGGT NO:) 20502 VSPGERATLSC PRLLIY (SEQ SGTEFTLTISS KVEIK (SEQ ID NO:17) ID NO:18) LQSEDFAVYY (SEQ ID 4As regiões de framework VL descritas na TabelaC6(SEQ são determinadas com ID NO:20) base nos limites do sistema de numeração de Kabat para CDRs. NO:19)Em conformidade, as CDRs de VH são determinadas por Kabat e as regiões de framework são os resíduos de aminoácidos que rodeiam as CDRs na região variável no formato FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4.

[0088] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento se liga especificamente ao B7-H4 humano e compreende as quatro regiões de framework

VH e as quatro regiões de framework VL do anticorpo 20502 listado nas Tabelas 5 e 6.

[0089] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento se liga especificamente ao B7-H4 humano e compreende a sequência de cadeia pesada do anticorpo 20502 listado na Tabela 7. Tabela 7: Sequências de Aminoácidos de Cadeia Pesada Completas Anticorpo Sequência de Aminoácidos de Cadeia Pesada de Completa (SEQ ID NO)

QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSYYWGWIRQPPG KGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLRSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCAREGSYPNQFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ

SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC 20502 DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD

VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVL HQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS RDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD

SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSL SPGK (SEQ ID NO:21)

[0090] Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento se liga especificamente ao B7-H4 humano e compreende a sequência de cadeia leve do anticorpo 20502 listado na Tabela 8. Tabela 8: Sequências de Aminoácidos de Cadeia Leve Completa Anticorpo Sequência de Aminoácidos de Cadeia Leve Completa (SEQ ID NO)

EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPG

QAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFA 20502 VYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLK

SGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKS

FNRGEC (SEQ ID NO:22)

[0091] Em determinadas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno para uso nos métodos descritos neste documento se liga especificamente ao B7-H4 humano e compreende a sequência de cadeia pesada e a sequência de cadeia leve do anticorpo 20502 listado nas Tabelas 7 e 8.

[0092] Em determinados aspectos, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento é descrito apenas por seu domínio VL, ou por seu domínio VH, ou por suas 3 VL CDRs isoladas ou por suas 3 VH CDRs isoladas. Ver, por exemplo, Rader C et al., (1998) PNAS 95: 8910-8915, que é incorporado neste documento por referência em sua totalidade, descrevendo a humanização do anticorpo anti-αvβ3 de camundongo pela identificação de uma cadeia leve ou pesada complementar, respectivamente, de uma biblioteca de cadeia leve e cadeia pesada humana, resultando em variantes de anticorpos humanizados com afinidades tão altas ou maiores do que a afinidade do anticorpo original. Ver também Clackson T et al., (1991) Nature 352: 624-628, que é incorporado neste documento por referência em sua totalidade, descrevendo métodos de produção de anticorpos que se ligam especificamente a um antígeno específico usando um domínio VL específico (ou domínio VH) e triar uma biblioteca para o domínio VH complementar (ou domínio VL). A triagem produziu 14 novos parceiros para um domínio VH específico e 13 novos parceiros para um domínio VL específico, que eram fortes ligantes, conforme determinado pelo ELISA. Ver também Kim SJ & Hong HJ, (2007) J Microbiol 45: 572-577, que é incorporado neste documento por referência em sua totalidade, descrevendo métodos de produção de anticorpos que se ligam especificamente a um antígeno específico usando um domínio VH específico e triando uma biblioteca (por exemplo, biblioteca VL humana) para domínios VL complementares; os domínios VL selecionados, por sua vez, podem ser usados para orientar a seleção de domínios VH complementares adicionais (por exemplo, humanos).

[0093] Em certos aspectos, as CDRs de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo podem ser determinadas de acordo com o esquema de numeração de Chothia, que se refere à localização das alças estruturais da imunoglobulina (vide, por exemplo, Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273: 927-948; Chothia C et al., (1992)

J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A et al., (1990) J Mol Biol 215(1): 175-82; e Patente U.S. nº 7,709,226). Tipicamente, quando se usa a convenção de numeração de Kabat, a alça de Chothia CDR-H1 está presente nos aminoácidos de cadeia pesada 26 a 32, 33 ou 34, a alça de Chothia CDR-H2 está presente nos aminoácidos de cadeia pesada 52 a 56, e a alça A de Chothia CDR-H3 está presente nos aminoácidos de cadeia pesada 95 a 102, enquanto a alça de Chothia CDR-L1 está presente nos aminoácidos de cadeia leve 24 a 34, a alça de Chothia CDR-L2 está presente nos aminoácidos de cadeia leve 50 a 56 e a alça de Chothia CDR-L3 está presente nos aminoácidos de cadeia leve 89 a 97. A extremidade da alça de CDR-H1 de Chothia, quando numerada usando a convenção de numeração de Kabat, varia entre H32 e H34, dependendo do comprimento da alça (isto porque o esquema da numeração de Kabat coloca as inserções em H35A e H35B; se nem 35A nem 35B estiverem presentes, a alça termina em 32; se apenas 35A estiver presente, a alça termina em 33; se ambas 35A e 35B estiverem presentes, a alça termina em 34).

[0094] Em certos aspectos, são fornecidos neste documento métodos de administração de anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno destes que se ligam especificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humano) e compreendem as CDRs Chothia VH e VL do anticorpo 20502 listado nas Tabelas 3 e 4. Em determinadas modalidades, são fornecidos neste documento métodos de administração de anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam especificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humano) e compreendem uma ou mais CDRs, em que as CDRs de Chothia e Kabat têm a mesma sequência de aminoácidos. Em certas modalidades, são fornecidos neste documento métodos de administração de anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno destes que se ligam especificamente ao B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humano) e compreendem combinações de CDRs de Kabat e CDRs de Chothia.

[0095] Em certos aspectos, as CDRs de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste podem ser determinadas de acordo com o sistema de numeração IMGT, conforme descrito em Lefranc MP, (1999) The Immunologist 7: 132-136 e Lefranc MP et al., (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212. De acordo com o esquema de numeração IMGT, VH-CDR1 está nas posições 26 a 35, VH-CDR2 está nas posições 51 a 57, VH-CDR3 está nas posições 93 a 102, VL-CDR1 está nas posições 27 a 32, VL-CDR2 está nas posições 50 a 52 e VL-CDR3 está nas posições 89 a 97. Em uma modalidade particular, são fornecidos neste documento métodos de administração de anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno destes que se ligam especificamente ao B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humano) e compreendem as CDRs de IMGT VH e VL do anticorpo 20502 listado nas Tabelas 3 e 4, por exemplo, conforme descrito em Lefranc MP (1999) supra e Lefranc M-P et al., (1999) supra).

[0096] Em certos aspectos, as CDRs de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste podem ser determinadas de acordo com MacCallum RM et al., (1996) J Mol Biol 262: 732-745. Ver também, por exemplo, Martin, A., “Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains,” em Antibody Engineering, Kontermann e Dübel, eds., Capítulo 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001). Em uma modalidade particular, são fornecidos neste documento métodos de administração de anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes que se ligam especificamente ao B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humano) e compreendem CDRs de VH e VL do anticorpo 20502 listado nas Tabelas 3 e 4 como determinado pelo método em MacCallum RM et al.

[0097] Em certos aspectos, as CDRs de um anticorpo ou fragmento deste podem ser determinadas de acordo com o esquema de numeração AbM, que se refere às regiões hipervariáveis de AbM, que representam um compromisso entre as alças estruturais de CDR e Chothia de Kabat, e são usadas pelo software de modelagem de anticorpos AbM da Oxford Molecular (Oxford Molecular Group, Inc).. Em uma modalidade particular, são fornecidos neste documento métodos de administração de anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes que se ligam especificamente ao B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humano) e compreendem CDRs de VH e VL do anticorpo 20502 listado nas Tabelas 3 e 4, conforme determinado pelo esquema de numeração AbM.

[0098] Em aspectos específicos, são fornecidos neste documento métodos administração de anticorpos que compreendem uma cadeia pesada e uma cadeia leve.

[0099] No que diz respeito à cadeia leve, em uma modalidade específica, a cadeia leve de um anticorpo descrito neste documento é uma cadeia leve kappa. A região constante de uma cadeia leve kappa humana pode compreender a seguinte sequência de aminoácidos:

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG

NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC (SEQ ID NO:23).

[0100] A região constante de uma cadeia leve kappa humana pode ser codificada pela seguinte sequência nucleotídica:

CGGACCGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAG CAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCC CAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAA CTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCT CAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTAC

GCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTC AACAGGGGAGAGTGT (SEQ ID NO:24).

[0101] Em uma modalidade particular, um anticorpo que se liga imunoespecificamente a um polipeptídeo B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana)para uso nos métodos descritos neste documento compreende uma cadeia leve em que a sequência de aminoácidos do domínio VL compreende a sequência apresentada na Tabela 4, e em que a região constante de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de uma região constante de cadeia leve kappa humana.

[0102] Em uma modalidade particular, um anticorpo que se liga imunoespecificamente ao B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humano) para uso nos métodos descritos neste documento compreende uma cadeia pesada em que a sequência de aminoácidos do domínio VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada na Tabela 3 e em que a região constante de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de uma região constante de cadeia pesada gama (γ) humana.

[0103] A região constante de uma cadeia pesada de IgG 1 humana pode compreender a seguinte sequência de aminoácidos:

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNW YVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG

QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGK (SEQ ID NO:25).

[0104] A região constante de uma cadeia pesada de IgG 1 humana pode ser codificada pelas seguintes sequências nucleotídicas:

GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAA GAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTT CCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGT GCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAAC GTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAAT CTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGG GGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATC TCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGAC CCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCC AAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAGC GTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGC AAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAG CCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGG ATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTA TCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAA CTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTAC AGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCA

TGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCT CCCTGTCTCCGGGTAAA. (SEQ ID NO:26)

[0105] Em uma modalidade específica, um anticorpo que se liga imunoespecificamente ao B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humano) para uso nos métodos descritos neste documento compreende um domínio VH e um domínio VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de qualquer domínio VH e VL descrito neste documento, e em que as regiões constantes compreendem as sequências de aminoácidos das regiões constantes de uma molécula de imunoglobulina IgG (por exemplo, uma IgG humana). Em outra modalidade específica, um anticorpo que se liga imunoespecificamente ao B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humano) para uso nos métodos descritos neste documento compreende um domínio VH e um domínio VL compreendendo uma sequência de aminoácidos de qualquer domínio VH e VL descrito neste documento, e em que as regiões constantes compreendem as sequências de aminoácidos das regiões constantes de uma molécula de imunoglobulina IgG1 (por exemplo, IgG1 humana).

[0106] Foi relatado que anticorpos com teor de fucose reduzido têm uma afinidade aumentada para receptores Fc, como, por exemplo, FcγRIIIA. Em conformidade, em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste para uso nos métodos descritos neste documento reduziu o teor de fucose ou não possui fucose (ou seja, é "fucosilado"). Estes anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes podem ser produzidos usando técnicas conhecidas por um versado na técnica. por exemplo, eles podem ser expressos em células deficientes ou sem a capacidade de fucosilar. Em um exemplo específico, podem ser usadas linhagens celulares com um nocaute de ambos os alelos do gene α1,6-fucosiltransferase (FUT8) para produzir anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes com teor de fucose reduzido. O sistema Potelligent ® (Lonza) é um exemplo de um sistema desse tipo que pode ser usado para produzir anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno destes com um teor de fucose reduzido. Alternativamente, anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes com conteúdo de fucose reduzido ou nenhum conteúdo de fucose podem ser produzidos, por exemplo: (i) cultivando células sob condições que evitam ou reduzem a fucosilação; (ii) remoção pós-tradução de fucose (por exemplo, com uma enzima fucosidase); (iii) adição pós-tradução do carboidrato desejado, por exemplo, após a expressão recombinante de uma glicoproteína não glicosilada; ou (iv) purificação da glicoproteína de modo a selecionar anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes que não são fucosilados. Ver, por exemplo, Longmore GD & Schachter H (1982) Carbohydr Res 100: 365-92 e Imai-Nishiya H et al., (2007) BMC Biotechnol. 7: 84 para métodos para a produção de anticorpos sem teor de fucose ou teor de fucose reduzido.

[0107] Em algumas modalidades, um anticorpo contra B7-H4 fucosilado ou fragmento de ligação ao antígeno deste aumentou a atividade ADCC in vitro em comparação com anticorpos contra B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno destes com a mesma sequência de aminoácidos. Em algumas modalidades, os anticorpos contra B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno deste causam lise específica que é pelo menos 10, pelo menos 15, pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos pelo menos 45, pelo menos 50, pelo menos 60, pelo menos 65, pelo menos 70 ou pelo menos 75 pontos percentuais maiores que a lise específica com anticorpos contra B7-H4 fucosilados. A lise específica pode ser determinada conforme descrito no Exemplo 2 deste documento.

[0108] Em algumas modalidades, o anticorpo contra B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste tem afinidade aumentada para Fc gama RIIIA em comparação com os anticorpos contra B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno destes com a mesma sequência de aminoácidos. Em algumas modalidades, os anticorpos contra B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno destes se ligam a Fc gama RIIIA com pelo menos 2 vezes, pelo menos 3 vezes, pelo menos 4 vezes, pelo menos 5 vezes, pelo menos 7 vezes, pelo menos 10 vezes, pelo menos 12 vezes, pelo menos 15 vezes, pelo menos 17 vezes ou pelo menos 20 vezes maior afinidade do que os anticorpos contra B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno destes. Em algumas modalidades, a afinidade para Fc gama RIIIA é determinada usando ressonância plasmônica de superfície. Em algumas modalidades, Fc gama RIIIA é selecionado dentre Fc gama RIIIA (V158) e Fc gama RIIIA (F158). Em algumas modalidades, Fc gama RIIIA é Fc gama RIIIA (V158).

[0109] Em algumas modalidades, a presença de fucose pode ser determinada por um método que compreende cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), eletroforese capilar ou espectrometria de massa MALDI-TOF.

[0110] Em modalidades específicas, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste (i) compreende as sequências CDR de 20502, as sequências VH e VL de 20502 ou as sequências de cadeia pesada e leve de 20502 e (ii) são fucosiladas.

[0111] Em modalidades específicas, uma composição compreende anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes que (i) compreendem as sequências CDR de 20502, as sequências VH e VL de 20502 ou as sequências de cadeia pesada e leve de 20502 e (ii) são fucosiladas, por exemplo, em que pelo menos 95% dos anticorpos na composição são fucosilados ou em que a fucosilação é indetectável na composição.

[0112] Glicoformas manipuladas podem ser úteis para uma variedade de fins, incluindo, mas não se limitando a, aumentar ou reduzir a função efetora. Os métodos para gerar glicoformas modificadas em um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste descritos neste documento incluem, mas não estão limitados aos divulgados, por exemplo, em Umaña P et al., (1999) Nat Biotechnol 17: 176-180; Davies J et al., (2001) Biotechnol Bioeng 74: 288-294; Shields RL et al., (2002) J Biol Chem 277: 26733-26740; Shinkawa T et al., (2003) J Biol Chem 278: 3466-3473; Niwa R et al., (2004) Clin Cancer Res 1: 6248-6255; Presta LG et al., (2002) Biochem Soc Trans 30: 487-490; Kanda Y et al., (2007) Glycobiology 17: 104-118; Patentes US Nº 6,602,684; 6.946.292; e 7,214,775; Publicação de Patente U.S. US 2007/0248600; 2007/0178551; 2008/0060092; e 2006/0253928; Publicações internacionais Nº WO 00/61739; WO 01/292246; WO 02/311140; e WO 02/30954; Tecnologia Potelligent ™ (Biowa, Inc. Princeton, NJ); e tecnologia de engenharia de glicosilação GlycoMAb® (Glycart biotechnology AG, Zurique, Suíça). Ver também, por exemplo, Ferrara C et al., (2006) Biotechnol Bioeng 93: 851-861; Publicações Internacionais Nº WO 07/039818; WO 12/130831; WO 99/054342; WO 03/011878; e WO 04/065540.

[0113] Em certas modalidades, qualquer uma das mutações ou modificações da região constante descritas neste documento pode ser introduzida em uma ou ambas as regiões constantes de cadeia pesada de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento tendo duas regiões constantes de cadeia pesada.

[0114] Em outra modalidade particular, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente ao B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humano), compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende um domínio VH compreendendo a sequência de aminoácidos VH CDR1, VL CDR2 e VL CDR3 do anticorpo 20502 listado na Tabela 1; (ii) a cadeia leve compreende um domínio VL que compreende a sequência de aminoácidos do domínio VL compreendendo VL CDR1, VH CDR2 e VH CDR3 do anticorpo 20502 listado na Tabela 2; (iii) e a cadeia pesada compreende ainda um domínio constante de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos do domínio constante de uma cadeia pesada de IgG1 humana; e (iv) a cadeia leve compreende ainda um domínio de cadeia leve constante compreendendo a sequência de aminoácidos do domínio constante de uma cadeia leve kappa humana.

[0115] Em outra modalidade particular, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana), compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende um domínio VH compreendendo a sequência de aminoácidos do domínio VH do anticorpo 20502 listado na Tabela 3; (ii) a cadeia leve compreende um domínio VL que compreende a sequência de aminoácidos do domínio VL do anticorpo 20502 listado na Tabela 4; (iii) e a cadeia pesada compreende ainda um domínio constante de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos do domínio constante de uma cadeia pesada de IgG1 humana; e (iv) a cadeia leve compreende ainda um domínio de cadeia leve constante compreendendo a sequência de aminoácidos do domínio constante de uma cadeia leve kappa humana.

[0116] Em modalidades específicas, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana) exibe atividade de bloqueio de checkpoint de células T. Em modalidades específicas, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana) aumenta a produção de interferon-gama (IFNγ) em células T. Em modalidades específicas, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana) aumenta a proliferação de células T. Em modalidades específicas, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana) aumenta a proliferação de células T CD4+. Em modalidades específicas, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana) aumenta a proliferação de células T CD8+.

[0117] Em modalidades específicas, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana) exibe atividade de citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC). Em modalidades específicas, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana) exibe atividade de citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) em linhagens celulares com pelo menos 300.000 moléculas de B7-H4 de superfície celular (por exemplo, células SK-BR-3). Em modalidades específicas, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana) exibe atividade de citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) em linhagens celulares com pelo menos 100.000 moléculas de B7-H4 de superfície celular (por exemplo, células HCC1569). Em modalidades específicas, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana) exibe atividade de citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) em linhagens celulares com pelo menos 50.000 moléculas B7-H4 de superfície celular (por exemplo, células ZR-75-1). Em modalidades específicas, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana) exibe atividade de citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) em linhagens celulares com pelo menos 30.000 moléculas de B7-H4 de superfície celular (por exemplo, células MDA-MB-468). Em modalidades específicas, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana) exibe atividade de citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) em linhagens celulares com pelo menos 15.000 moléculas de B7-H4 de superfície celular (por exemplo, células HCC1964).

[0118] Em um aspecto específico, um fragmento de ligação ao antígeno, conforme descrito neste documento, que se liga imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humana), é selecionado do grupo que consiste em um Fab, Fab', F(ab')2 e scFv, em que o Fab, Fab', F(ab')2 ou scFv compreende uma sequência da região variável de cadeia pesada e uma sequência da região variável de cadeia leve de um anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno deste conforme descrito neste documento. Um Fab, Fab', F(ab')2 ou scFv pode ser produzido por qualquer técnica conhecida pelos versados na técnica. Em certas modalidades, o Fab, Fab', F(ab')2 ou scFv compreende adicionalmente uma fração que estende a meia-vida do anticorpo in vivo. A fração também é denominada "fração de prolongamento da meia-vida." Qualquer fração conhecida por aqueles versados na técnica que prolonga a meia-vida de um Fab, Fab', F(ab')2 ou scFv in vivo pode ser usada. por exemplo, a fração de prolongamento da meia-vida pode incluir uma região Fc, um polímero, uma albumina ou uma proteína ou composto de ligação à albumina. O polímero pode incluir um polialquileno, polialquenileno, polioxilalquileno, polissacarídeo, polietileno glicol, polipropileno glicol, álcool polivinílico, metoxipolietileno glicol, lactose, amilose, dextrano, glicogênio ou derivado destes naturais, sintéticos, de cadeia linear ou ramificada opcionalmente substituídos. Os substituintes podem incluir um ou mais grupos hidroxi, metil ou metoxi. Em certas modalidades, o Fab, Fab', F(ab')2 ou scFv podem ser modificados pela adição de um ou mais aminoácidos de terminal C para ligação da fração de prolongamento da meia-vida. Em certas modalidades, a fração de prolongamento da meia-vida é polietilenoglicol ou albumina sérica humana. Em certas modalidades, o Fab, Fab', F(ab')2 ou scFv é fundido a uma região Fc.

5.4 Composições Farmacêuticas

[0119] São fornecidos neste documento métodos de administração de composições compreendendo um anticorpo anti-B7-H4 ou um fragmento de ligação ao antígeno deste com o grau de pureza desejado em um veículo, excipiente ou estabilizador fisiologicamente aceitável (Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA). Os carreadores, excipientes ou estabilizantes aceitáveis não são tóxicos para os receptores nas dosagens e concentrações empregadas. (Ver, por exemplo, Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20ª Edição (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7ª Edição, Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3ª Edição, Pharmaceutical Press (2000)). As composições a serem usadas para administração in vivo podem ser estéreis. Isto é prontamente conseguido pela filtração através, por exemplo, de membranas de filtração estéreis.

[0120] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos para administração de uma composição farmacêutica, em que a composição farmacêutica compreende anticorpos anti-B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno destes e um carreador farmaceuticamente aceitável.

Em modalidades específicas, são fornecidos métodos para administração de uma composição farmacêutica, em que a composição farmacêutica compreende anticorpos anti-B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno, por exemplo, em que pelo menos 80% dos anticorpos na composição são fucosilados.

Em modalidades específicas, são fornecidos métodos para administração de uma composição farmacêutica, em que a composição farmacêutica compreende anticorpos anti-B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno, por exemplo, em que pelo menos 85% dos anticorpos na composição são fucosilados.

Em modalidades específicas, são fornecidos métodos para administração de uma composição farmacêutica, em que a composição farmacêutica compreende anticorpos anti-B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno, por exemplo, em que pelo menos 90% dos anticorpos na composição são fucosilados.

Em modalidades específicas, são fornecidos métodos para administração de uma composição farmacêutica, em que a composição farmacêutica compreende anticorpos anti-B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno, por exemplo, em que pelo menos 95% dos anticorpos na composição são fucosilados.

Em modalidades específicas, são fornecidos métodos para administração de uma composição farmacêutica, em que a composição farmacêutica compreende anticorpos anti-B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno, por exemplo, em que pelo menos 96% dos anticorpos na composição são fucosilados.

Em modalidades específicas, são fornecidos métodos para administração de uma composição farmacêutica, em que a composição farmacêutica compreende anticorpos anti-B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno, por exemplo, em que pelo menos 97% dos anticorpos na composição são fucosilados.

Em modalidades específicas, são fornecidos métodos para administração de uma composição farmacêutica, em que a composição farmacêutica compreende anticorpos anti-B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno, por exemplo, em que pelo menos 98% dos anticorpos na composição são fucosilados.

Em modalidades específicas, são fornecidos métodos para administração de uma composição farmacêutica, em que a composição farmacêutica compreende anticorpos anti-B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno, por exemplo, em que pelo menos 99% dos anticorpos na composição são fucosilados. Em modalidades específicas, são fornecidas composições farmacêuticas, em que a composição farmacêutica compreende anticorpos anti-B7-H4 fucosilados ou fragmentos de ligação ao antígeno em que a fucose é indetectável na composição.

[0121] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos para administração de uma composição farmacêutica, em que a composição farmacêutica compreende (i) um anticorpo isolado ou fragmento de ligação ao antígeno deste que se liga especificamente ao B7-H4 humano, compreendendo (a) a região variável de cadeia pesada (VH) região determinante de complementaridade (CDR) 1, VH CDR2, VH CDR3 e região variável de cadeia leve (VL) sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 5-10, respectivamente, (b) uma região variável de cadeia pesada compreendendo o sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12 ou (c) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22, e (ii) um excipiente farmaceuticamente aceitável.

[0122] Também é fornecido neste documento um método para administração de uma composição farmacêutica, em que a composição farmacêutica compreendendo (i) anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno deste que se ligam especificamente ao B7-H4 humano e compreendem as sequências da região determinante da complementaridade (CDR) 1, VH da região variável de cadeia pesada (VH) CDR2, VH CDR3 e sequências da região variável de cadeia leve (VL) CDR1, CDR2 e CDR3 das SEQ ID NOs: 5-10, respectivamente e (ii) um excipiente farmaceuticamente aceitável, em que pelo menos 80%, pelo menos 85%, em pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno deste na composição são fucosilados. Em uma modalidade, (i) o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12 ou (ii) o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 22.

5.5 Produção de Anticorpos e Polinucleotídeos

[0123] Os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno destes que se ligam imunoespecificamente a B7-H4 (por exemplo, B7-H4 humano) podem ser produzidos por qualquer método conhecido na técnica para a síntese de anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno destes, por exemplo, por síntese química ou por técnicas de expressão recombinante. Os métodos descritos neste documento empregam, a menos que indicado em contrário, técnicas convencionais em biologia molecular, microbiologia, análise genética, DNA recombinante, química orgânica, bioquímica, PCR, síntese e modificação de oligonucleotídeos, hibridização de ácido nucleico e campos relacionados dentro da competência dos versados na técnica. Estas técnicas são descritas, por exemplo, nas referências citadas neste documento e estão totalmente explicadas na literatura. Ver, por exemplo, Sambrook J et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel FM et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 e atualizações anuais); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 e atualizações anuais) Gait (ed). (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Pratical Approach, IRL Press; Eckstein (ed). (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B et al., (edições) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press.

[0124] Em certos aspectos, são fornecidos neste documento métodos para administração de um anticorpo anti-B7-H4 ou um fragmento de ligação ao antígeno deste ou uma composição farmacêutica compreendendo esses anticorpos ou fragmentos, em que os anticorpos ou fragmentos são produzidos por expressão recombinante de um polinucleotídeo que compreende uma sequências nucleotídicas em uma célula hospedeira.

[0125] Em certos aspectos, o anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno administrado de acordo com os métodos fornecidos neste documento compreende uma região variável de cadeia pesada codificada por um polinucleotídeo compreendendo a sequência nucleotídica mostrada na Tabela 9 (ou seja, SEQ ID NO:27). Em certos aspectos, o anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno administrado de acordo com os métodos fornecidos neste documento compreende uma região variável de cadeia pesada codificada por um polinucleotídeo compreendendo a sequência nucleotídica mostrada na Tabela 9 (ou seja, SEQ ID NO: 27) e uma sequência nucleotídica que codifica uma região constante de cadeia pesada gama (γ) humana. Em certos aspectos, o anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno administrado de acordo com os métodos fornecidos neste documento compreende uma região variável de cadeia pesada codificada por um polinucleotídeo compreendendo a sequência nucleotídica mostrada na Tabela 9 (ou seja, SEQ ID NO:27) e um domínio constante de cadeia pesada codificado por um polinucleotídeo que compreende a sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 26. Tabela 9: Sequências polinucleotídicas codificadoras de regiões variáveis de cadeia pesada Anticorpo Sequência Polinucleotídica Codificadora de Regiões Variáveis de cadeia pesada (SEQ ID NO) 20502 CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCT

TCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCA TCAAAAGTGGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCC CAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAACATCTATTATAGTG GGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAGAAGTCGAGTCACCAT ATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGT TCTGTGACCGCCGCAGACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAGA

GAAGGATCTTACCCCAATCAGTTTGATCCATGGGGACAGGGTA CATTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO:27)

[0126] Em certos aspectos, o anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno administrado de acordo com os métodos fornecidos neste documento compreende uma região variável de cadeia leve codificada por um polinucleotídeo compreendendo a sequência nucleotídica mostrada na Tabela 10 (ou seja, SEQ ID NO:28). Em certos aspectos, o anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno administrado de acordo com os métodos fornecidos neste documento compreende uma região variável de cadeia leve codificada por um polinucleotídeo compreendendo a sequência nucleotídica mostrada na Tabela 10 (ou seja, SEQ ID NO: 28) e uma sequência nucleotídica que codifica uma região constante de cadeia leve lambda humana. Em certos aspectos, o anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno administrado de acordo com os métodos fornecidos neste documento compreende uma região variável de cadeia leve codificada por um polinucleotídeo compreendendo a sequência nucleotídica mostrada na Tabela 10 (ou seja, SEQ ID NO:28) e um domínio constante de cadeia leve codificado por um polinucleotídeo que compreende a sequência nucleotídica da SEQ ID NO: 24. Tabela 10: Sequências polinucleotídicas codificadoras de regiões variáveis de cadeia leve Anticorpo Sequência Polinucleotídica Codificadora de Regiões Variáveis de cadeia leve (SEQ ID NO) 20502 GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTC

CAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTG TTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCAGGGCCACTG GTATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGT TCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAGT

TTATTACTGTCAGCAGTACCACTCCTTCCCTTTCACTTTTGGCG GAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA (SEQ ID NO:28)

[0127] Em certos aspectos, o anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno administrado de acordo com os métodos fornecidos neste documento compreende uma cadeia pesada variável codificada por um polinucleotídeo compreendendo a sequência nucleotídica codificadora de cadeias pesadas variáveis mostrada na Tabela 9 (ou seja, SEQ ID NO:27) e uma cadeia leve variável codificada por um polinucleotídeo que compreende a sequência nucleotídica codificadora de cadeias leves variáveis mostrada na Tabela 10 (ou seja, SEQ ID NO: 28).

[0128] Em certos aspectos, o anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno administrado de acordo com os métodos fornecidos neste documento compreende (i) uma cadeia pesada codificada por um polinucleotídeo compreendendo a sequência nucleotídica codificadora de cadeias pesadas variáveis mostrada na Tabela 9 (ou seja, SEQ ID NO: 27) e uma sequência nucleotídica que codifica uma região constante de cadeia pesada gama humana (γ) e (ii) uma cadeia leve codificada por um polinucleotídeo compreendendo a sequência nucleotídica que codifica a cadeia leve variável mostrada na Tabela 10 (ou seja, SEQ ID NO: 28) e uma sequência nucleotídica que codifica uma região constante de cadeia leve lambda humana.

[0129] Em certos aspectos, o anticorpo anti-B7-H4 ou fragmento de ligação ao antígeno administrado de acordo com os métodos fornecidos neste documento compreende (i) uma cadeia pesada codificada por um polinucleotídeo que compreende a sequência nucleotídica codificadora de cadeias pesadas variáveis mostrada na Tabela 9 (ou seja, SEQ ID NO:27) e a sequência nucleotídica codificadora de domínios constantes de cadeia pesada da SEQ ID NO:26 e (ii) uma cadeia leve codificada por um polinucleotídeo que compreende a sequência nucleotídica codificadora de cadeias leves variáveis mostrada na Tabela 10 (ou seja, SEQ ID NO:28) e a sequência nucleotídica codificadora de domínios constantes de cadeia leve da SEQ ID NO:24.

[0130] Em certos aspectos, os anticorpos anti-B7-H4 ou fragmentos de ligação ao antígeno administrado de acordo com os métodos fornecidos neste documento são codificados por polinucleotídeos que codificam anticorpos anti-B7- H4 ou fragmentos de ligação ao antígeno destes ou um domínio destes que são otimizados, por exemplo, por otimização de códon/RNA, substituição por sequências sinal heterólogas e eliminação de elementos de instabilidade de mRNA. Métodos para gerar ácidos nucleicos otimizados que codificam um anticorpo anti- B7-H4 ou um fragmento de ligação ao antígeno deste ou um domínio deste (por exemplo, cadeia pesada, cadeia leve, domínio VH ou domínio VL) para expressão recombinante através da introdução de alterações de códon (por exemplo, uma alteração de códon que codifica o mesmo aminoácido devido à redundância do código genético) e/ou eliminação de regiões inibidoras no mRNA podem ser realizados adaptando-se os métodos de otimização descritos em, por exemplo, Patentes US Nº 5,965,726; 6,174,666; 6,291,664; 6,414,132; e 6,794,498, em conformidade.

[0131] Os polinucleotídeos podem estar, por exemplo, na forma de RNA ou na forma de DNA. DNA inclui cDNA, DNA genômico e DNA sintético. O DNA pode ser de fita dupla ou fita simples. Se for de fita simples, o DNA pode ser a fita codificadora ou a fita não codificadora (anti-sense). Em certas modalidades, o polinucleotídeo é um cDNA ou um DNA sem um ou mais íntrons. Em certas modalidades, um polinucleotídeo é um polinucleotídeo que não ocorre naturalmente. Em certas modalidades, um polinucleotídeo é produzido de forma recombinante. Em certas modalidades, os polinucleotídeos são isolados. Em certas modalidades, os polinucleotídeos são substancialmente puros. Em certas modalidades, um polinucleotídeo é purificado a partir de componentes naturais.

[0132] Em certos aspectos, os vetores (por exemplo, vetores de expressão) compreendem sequências nucleotídicas que codificam anticorpos anti-B7-H4 e fragmentos de ligação ao antígeno destes ou um domínio destes para expressão recombinante em células hospedeiras, de preferência em células de mamíferos. Em certos aspectos, as células, por exemplo, células hospedeiras, compreendem tais vetores para expressão recombinante de anticorpos anti-B7-H4 ou um fragmento de ligação ao antígeno destes descritos neste documento (por exemplo, anticorpos humanos ou humanizados ou fragmentos de ligação ao antígeno destes). Portanto, um método para produzir um anticorpo ou fragmentos de ligação ao antígeno destes descrita neste documento pode compreender a expressão desse anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno deste em uma célula hospedeira.

[0133] Um vetor de expressão pode ser transferido para uma célula (por exemplo, célula hospedeira) por técnicas convencionais, e as células resultantes podem então ser cultivadas por técnicas convencionais para produzirem um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno deste descrito neste documento (por exemplo, um anticorpo ou um fragmento ligação ao antígeno deste compreendendo as seis CDRs, VH, VL, VH e VL, a cadeia pesada, a cadeia leve ou a cadeia pesada e a leve de 20502) ou um domínio deste (por exemplo, VH, VL, VH e VL, a cadeia pesada ou a cadeia leve de 20502).

[0134] Em certas modalidades, os anticorpos anti-B7-H4 ou um fragmento de ligação ao antígeno destes (por exemplo, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno deste compreendendo as CDRs de 20502) administrado de acordo com os métodos fornecidos neste documento são produzidos em células CHOK1SV da Potelligent®.

[0135] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-B7-H4 ou fragmentos de ligação ao antígeno destes (por exemplo, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno deste compreendendo as CDRs de 20502) administrado de acordo com os métodos fornecidos neste documento são produzidos em uma célula hospedeira sem um gene de alfa-1,6-fucosiltransferase (FUT8) funcional. Em algumas modalidades, a célula hospedeira é uma célula CHO.

[0136] Em modalidades específicas, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste administrado de acordo com os métodos fornecidos neste documento é isolado ou purificado. Geralmente, um anticorpo isolado ou um fragmento de ligação ao antígeno deste é substancialmente isento de outros anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes com especificidades antigênicas diferentes do anticorpo isolado ou de um fragmento de ligação ao antígeno deste. por exemplo, em uma modalidade particular, uma preparação de um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno deste descrita neste documento é substancialmente isenta de material celular e/ou precursores químicos.

[0137] Os seguintes exemplos são oferecidos a título de ilustração e não a título de limitação.

6. EXEMPLOS

[0138] Os exemplos nesta Seção (ou seja, na Seção 6) são oferecidos a título de ilustração, não como limitação.

6.1 Exemplo 1: Avaliação da Prevalência da Expressão de B7-H4 em Múltiplas Indicações

[0139] O anticorpo monoclonal de camundongo B7-H4 A57.1 (número de catálogo ATCC PTA-5180) foi usado para detectar a presença de B7-H4 em amostras de arquivo, uma mistura de seções inteiras e microarranjos de tumores. As amostras foram tratadas com o anticorpo primário e detectadas usando um sistema de detecção de polímero conectado ao DAB (Ventana Medical Systems).

[0140] O B7-H4 foi prontamente detectado na membrana e o citosol nos tecidos tumorais colhidos em uma variedade de pacientes com câncer, incluindo carcinoma ductal invasivo, câncer de mama triplo negativo, câncer de ovário, câncer de pulmão de células não pequenas e câncer endometrial. Além disso, a frequência de expressão também foi alta nas indicações listadas na Tabela 11. Tabela 11: Detecção de B7-H4 em Tumores Tipo de Tumor #Total #Positivo Percentual

Positivo Câncer de Mama 74 58 78% Triplo Negativo Carcinoma Ductal 51 38 74,50% Invasivo Carcinoma 77 54 70% Endometrial Câncer de Ovário 141 85 60% Câncer de Pulmão de Não Pequenas 47 19 40% Células (Escamosas)

[0141] B7-H4 é expresso em outros cânceres, como câncer de mama, câncer de rim (por exemplo, carcinoma de células renais), câncer de bexiga (por exemplo, carcinoma de células uroteliais), câncer de pâncreas e câncer de tireoide. Ver por exemplo, Zhu, J., et al., Asian Pacific J. Cancer Prev. 14: 3011-3015 (2011), Krambeck A, et al., PNAS 103: 10391-10396 (2006), Fan, M. et al., Int. J. Clin. Exp. Pathol. 7: 6768-6775 (2014), Xu, H., et al., Oncology Letters 11: 1841-1846 (2016) e Liu, W., et al., Oncology Letters 8: 2527-2534 (2014).

6.2 Exemplo 2: Anticorpos 20502 Afucosilados e Fucosilados

[0142] Anticorpos com regiões Fc com teor de fucose reduzido em frações de glicano podem exibir atividade ADCC mais alta em comparação com um anticorpo totalmente fucosilado (Niwa R et al., Clinical Cancer Research 11 (6): 2327-36 (2005)). Os anticorpos contra B7-H4 foram gerados em células CHO-x (Yamane-Ohnuki N, et al. Biotechnology and Bioengineering 87 (5): 614-22 (2004)) para produzir anticorpos normalmente fucosilados e em uma linhagem celular CHO projetada para produzir anticorpos fucosilados (células CHO-y) (id)..

[0143] Os anticorpos 20502 fucosilados e afucosilados foram caracterizados por ressonância plasmônica de superfície (SPR). Resumidamente, o anticorpo Fab anti-humano foi imobilizado em uma superfície de chip SPR derivado de carboxil e os anticorpos anti-B7-H4 foram capturados na superfície resultante a 5 µg/ml por 30 segundos. O B7-H4 IgV-huIgG1 em várias concentrações (0 nM, 3,7 nM, 11,1 nM, 33,3 nM, 100 nM e 300 nM) foi então escoado sobre a superfície e deixado se ligar aos anticorpos anti-B7-H4 durante a associação seguida por uma lavagem com tampão durante a fase de dissociação. B7-H4 IgV-huIgG1:

MASLGQILFWSIISIIIILAGAIALIIGFGISGRHSITVTTVASAGNIGEDGILSCT FEPDIKLSDIVIQWLKEGVLGLVHEFKEGKDELSEQDEMFRGRTAVFADQVIVGN ASLRLKNVQLTDAGTYKCYIITSKGKGNANLEYKTGAFSGSEPKSSDKTHTCPPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK

TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG K (SEQ ID NO: 29)

[0144] Os dados foram ajustados usando um modelo de ligação 1: 1, e o 20502 fucosilado e afucosilado mostrou ligação semelhante à proteína B7-H4 humana. Portanto, não há impacto da glicosilação na ligação.

[0145] As afinidades de ligação das regiões Fc de 20502 fucosilado (Ab-F) e 20502 afucosilado (Ab-A) a FcyRIIIa (V158) também foram caracterizadas por ressonância plasmônica de superfície (SPR). Resumidamente, a proteína A foi covalentemente ligada a um chip de dextrano usando o kit de acoplamento de amina com etilenodiamina 100 mM em tampão borato de sódio 100 mM, pH 8,0 como reagente de bloqueio. O Ab-A ou Ab-F foi capturado em 2 densidades em células de fluxo separadas, e um fluxo derivado de proteína A serviu como controle de referência. Fc gama RIIIA (V158) foi diluído em tampão de corrida HBS-P + e injetado em 6 concentrações (0 nM, 1,37 nM, 12,3 nM, 37 nM, 111 nM, 333 nM e 1000 nM) em duplicado. A constante de associação, constante de dissociação e afinidade para a ligação de Ab-A foram calculadas usando o modelo de ligação 1: 1 do Biacore T200 Evaluation Software. A constante de afinidade para a ligação Ab-A e Ab-F foi determinada usando o modelo de afinidade em estado estacionário Biacore T200 Evaluation Software. O anticorpo contra B7-H4 afucosilado tem uma afinidade 140 vezes maior para o receptor gama Fc IIIA (V158) do que o mesmo anticorpo com um Fc fucosilado (Ab-F) (Tabela 12). Tabela 12: Ligação ao Alelo do Receptor FcyIIIa (FcyRIIIa) V158 ka (1/Ms) kd (1/s) KD (nM) Ab-A 6,46E+05 9,54E-10 15 Ab-F N/A N/A 210

[0146] A atividade de bloqueio de checkpoint de células T de anticorpos 20502 fucosilados e afucosilados também foi caracterizada. Nestes experimentos, as células T humanas primárias foram enriquecidas a partir de PBMCs usando o Kit de Enriquecimento de Células T Humanas EasySep ™ com base nas instruções do fabricante. As células T enriquecidas foram incubadas a 2x10 5 células/mL com Dynabeads anti-CD3/anti-CD28, a uma razão de uma esfera por célula, a 37 °C. Seis dias depois, as esferas foram removidas magneticamente e as células T foram lavadas e incubadas a 1x106 células/mL com 10 U/mL IL-2 a 37°C. Quatro dias depois, as células T foram lavadas e incubadas a 1x106 células/mL juntamente com células apresentadoras de antígeno artificial (aAPCs) a uma concentração de 2x106 células/mL a 37°C na presença de titulação de dose de anticorpo contra B7-H4. AAPCs foram tratados com Mitomicina C durante uma hora a 37 °C e, em seguida, completamente lavados antes de adicionar à co-cultura de células T. 72 horas após a co-cultura de células T, aAPCs e anticorpos contra B7-H4, as placas foram centrifugadas e os sobrenadantes foram colhidos e avaliados quanto à produção de IFNγ por ELISA. A produção de IFNγ foi representada graficamente em função da concentração de anticorpos e a potência de EC50 foi calculada usando o ajuste da curva de regressão não linear (GraphPad Prism).

[0147] Os anticorpos contra B7-H4 demonstraram atividade potente de bloqueio de checkpoint de células T, medida por um aumento na produção de IFNγ. Além disso, não houve diferença demonstrável na potência entre os anticorpos afucosilados e fucosilados (Tabela 13). Tabela 13: Potência de Bloqueio de Checkpoint das células T Ensaio aAPC (EC50 +/- STD; nM) Anticorpo BIN Afucosilado Fucosilado 20502 3 0,89 +/-0,44 0,74 +/-0,39

[0148] Em experimentos adicionais, a atividade ADCC de anticorpos 20502 fucosilados e afucosilados também foi caracterizada contra uma linhagem celular alvo que expressa B7-H4. Especificamente, as células PBMCs humanas primárias foram ativadas por citocinas a 1x106 células/mL com 200 IU/mL de IL-2 a 37°C. No dia seguinte, as células foram lavadas e incubadas na proporção Efetor: Alvo 40: 1 com células alvo SK-BR-3 que foram marcadas com Calcein-AM. 4 horas após a incubação, a lise das células alvo foi quantificada usando um fluorímetro. Uma amostra tratada com Triton/X serviu como amostra de controle de lise máxima, enquanto uma amostra tratada apenas com meio serviu como amostra de controle de lise de fundo. A porcentagem (%) de lise específica foi calculada da seguinte forma: [1-((amostra - controle de meio)/(lise máxima - controle de meio))] x100. A porcentagem (%) de lise específica foi representada em gráfico vs. concentração de anticorpos e a potência de EC50 foi calculada usando ajuste de curva de regressão não linear (GraphPad Prism).

[0149] Os anticorpos contra B7-H4 demonstraram potente atividade ADCC dependente da dose contra a linhagem celular da mama que expressa B7-H4 endógena SK-BR-3. Além disso, os anticorpos afucosilados demonstraram atividade de ADCC significativamente mais potente em comparação com os anticorpos fucosilados (Tabela 14). Tabela 14: Atividade de ADCC Ensaio ADCC (EC50 +/- STD; nM) Anticorpo BIN Afucosilado Fucosilado 20502 3 0,0007 +/- 0,0370 +/-6,2E-2 1,1x10E-3

6.3 Exemplo 3: Correlação da Atividade de ADCC com a Densidade do Receptor

[0150] A densidade de B7-H4 foi quantificada na superfície das células SK- BR-3, HCC1569, ZR-75-1, MDA-MB-48 e HCC1964 por FACS, de acordo com as especificações do fabricante. Especificamente, 1x105 células foram incubadas com 15 µg/mL de anticorpo contra B7-H4 em gelo durante 25 minutos. Em paralelo, uma gota de microesferas QuantumTM Simply Cellular (QSC) (pré-revestidas com concentrações crescentes de anticorpo de captura de IgG anticamundongo) também foi incubada com 15 ug/mL de anticorpo contra B7-H4 em gelo durante 25 minutos. Após a incubação, as células e as microesferas QSC foram sedimentadas e lavadas e as amostras foram adquiridas em um citômetro de fluxo. Os dados foram analisados usando software FlowJo. A intensidade média de fluorescência (MFI) foi calculada e inserida na planilha QuickCal®. Uma regressão associando o valor do canal de fluorescência de cada cordão ao seu valor pré-atribuído de capacidade de ligação ao anticorpo (ABC) será calculada automaticamente. Um valor ABC foi atribuído uma vez que os valores MFI para as células rotuladas também foram adicionados ao modelo).

[0151] Os anticorpos contra B7-H4 foram avaliados quanto à atividade de ADCC contra linhagens celulares alvo expressando B7-H4 com diferentes níveis de densidade de superfície celular B7-H4. Especificamente, 1x104 células alvo SK-BR- 3, HCC1569, ZR-75-1, MDA-MB-468 ou HCC1964 foram co-incubadas com titulações de dose de anticorpo contra B7-H4 a 4°C. 25 minutos depois, um frasco de uso único de células repórter Jurkat-huCD16 da Promega foi descongelado e 7,5x104 células foram adicionadas à mistura de célula alvo/anticorpo contra B7-H4 e incubadas a 37°C. 24 horas depois, as amostras foram trazidas à temperatura ambiente (RT) e incubadas com tampão Bio-Glo. O substrato e a luminescência foram quantificados em um leitor de etiquetas múltiplas EnVision. Os dados foram representados como luminescência vs. concentração de anticorpos e a potência de EC50 foi calculada usando ajuste de curva de regressão não linear (GraphPad Prism).

[0152] A atividade de ADCC do anticorpo contra B7-H4 dependia da densidade da superfície celular B7-H4: uma vez que o número de moléculas da superfície celular diminuiu, a quantidade de atividade máxima de ADCC também diminuiu. Além disso, os anticorpos afucosilados demonstraram atividade ADCC aprimorada em comparação com os anticorpos fucosilados, especialmente contra células alvo com níveis mais baixos de densidade de superfície celular B7-H4 (Fig. 1).

6.4 Exemplo 4: Eficácia Antitumoral In Vivo

[0153] Ao contrário dos tumores humanos, os modelos de camundongos não expressam endogenamente altos níveis de proteína B7-H4. Para testar 20502 afucosilado em camundongos, foram usados modelos de câncer de camundongos singênicos usando linhagens celulares de tumores de murinos projetadas para expressar a proteína B7-H4. Camundongos BALB/c fêmeas com sete semanas de idade foram adquiridos da Charles River Laboratories (Hollister, CA) e foram aclimatados durante até três semanas antes do início dos estudos. A linhagem celular de carcinoma colorretal murino CT26 foi manipulada para expressar uma proteína quimérica que consiste no domínio extracelular de B7-H4 de murino com o domínio transmembrana de B7H3 de murino. Essas células tumorais foram implantadas por via subcutânea sobre o flanco direito dos camundongos em

1,0x106 células/200 μL/camundongo. Antes da inoculação, as células foram cultivadas durante não mais de três passagens em meio RPMI 1640 suplementado com 10% de Soro Fetal Bovino Inativado pelo Calor (FBS), 2 mM de L-glutamina. As células foram cultivadas a 37°C em atmosfera umidificada com 5% de CO 2. Ao atingir 80-85% de confluência, as células foram colhidas e ressuspensas em uma mistura 1:1 de RPMI 1640 isento de soro e Matrigel a 5 x 106 células por mililitro).

[0154] Os camundongos foram monitorados duas vezes por semana após o implante celular para o crescimento do tumor. Para as medições tumorais, o comprimento e a largura de cada tumor foram medidos usando paquímetros e o volume foi calculado de acordo com a fórmula: Volume do tumor (mm 3) = (largura (mm) x comprimento (mm))2/2. No dia do início do tratamento, todos os tumores foram medidos, os valores extremos foram excluídos e os ratos foram aleatoriamente designados para os grupos de tratamento. Para o tratamento anti- B7-H4, foram administrados anticorpos 20502 afucosilados. Como controles, administrou-se aos camundongos IgG policlonal humana (Bio X Cell, BE0092) ou IgG2a de camundongo (Bio X Cell, BE0085). Os anticorpos foram administrados quatro vezes por injeção intravenosa (iv) duas vezes por semana, começando no dia 4 ou 5 após a inoculação.

[0155] Os tumores continuaram a ser medidos pelo menos duas vezes por semana até o volume do tumor exceder 10% do peso do animal, ou aproximadamente 2000 mm3. A alteração no tamanho do tumor é mostrada representando graficamente tumores individuais em relação ao dia em que os animais foram inoculados com células CT26. Os valores de P foram calculados usando análises de teste t bicaudais desemparelhadas dos volumes de tumor calculados em cada dia de medição.

[0156] O modelo de CT26 manipulado que expressa a proteína B7-H4 demonstrou inibição significativa do crescimento tumoral dependente da dose em 5 níveis de dose na faixa de doses de 1 a 30 mg/kg (FIG. 2). O impacto mais comum em animais individuais foi a inibição do crescimento tumoral. No entanto, o tratamento de 20502 afucosilado resultou em regressão completa do tumor em 7 de 15 camundongos no grupo 30 mg/kg, 6 de 15 camundongos no grupo 20 mg/kg e 5 de 15 camundongos no grupo 10 mg/kg (FIG 2). O 20502 afucosilado doseado a 3 mg/kg ou menos provocou atividade antitumoral mínima em comparação com o grupo de tratamento com controle negativo (IgG humana).

6.5 Exemplo 5: Farmacocinética não Clínica

[0157] A farmacocinética (PK) e a toxicocinética (TK) do 20502 afucosilado foram avaliadas após uma administração intravenosa semanal única e/ou repetida (IV) em camundongos, ratos e macacos cynomolgus. As características de farmacocinética observadas foram consistentes em todos os estudos. Em todas as espécies, o 20502 afucosilado demonstrou PK linear e um aumento proporcional à dose na exposição (área sob a curva de concentração sérica-tempo [AUC]) com o aumento da dose. Houve um aumento aproximado de 2 vezes na exposição semanal (AUC0-7 dias) após 4 administrações semanais de 20502 entre a primeira e a última dose; no entanto, o estado estacionário não foi alcançado. Não foram aparentes diferenças substanciais entre os sexos nos perfis séricos de concentração-tempo de 20502 afucosilado. No macaco cynomolgus (em 2 estudos diferentes), a meia-vida estimada em animais em recuperação variou de aproximadamente 8,8 a 12 dias, com doses variando de 1 a 100 mg/kg. A meia- vida estimada em camundongos após uma única administração de infusão intravenosa a 40 mg/kg foi de aproximadamente 13,2 dias. As características de PK do 20502 afucosilado em animais suportam a infusão IV em humanos com um regime de dose uma vez a cada 3 semanas (Q3W).

6.6 Exemplo 6: Toxicologia

[0158] Foram realizados estudos de toxicologia com 20502 afucosilados em ratos e macacos cynomolgus. Os estudos incluíram um estudo piloto de farmacocinética (PK)/tolerabilidade de dose única em ratos, um estudo piloto de toxicidade de dose repetida em macacos cynomolgus e estudos de toxicidade em doses repetidas de boas práticas de laboratório (GLP) que permitam novas drogas (IND) em ratos e macacos cynomolgus, bem como um estudo de reatividade cruzada de tecido GLP com tecidos de macaco humano, rato e macaco cynomolgus.

[0159] No estudo piloto de tolerabilidade de dose única em ratos, os animais receberam doses de até 40 mg/kg como uma infusão intravenosa de 30 minutos (IV). O 20502 afucosilado não teve efeito nas observações clínicas, pesos corporais, consumo de alimentos, avaliações de patologia clínica (química sérica ou hematologia), observações brutas, pesos de órgãos ou avaliação histopatológica.

[0160] No estudo piloto de toxicologia de dose repetida, os macacos cynomolgus receberam 4 doses intravenosas semanais de 20502 afucosilados até 100 mg/kg como uma infusão intravenosa de 30 minutos. Todas as doses foram bem toleradas pelos macacos cynomolgus. Não houve mortalidades não programadas relacionadas ao artigo de teste ou alterações atribuídas à administração de 20502 afucosilado durante a avaliação de observações clínicas, pesos corporais, patologia clínica, necropsia, peso de órgãos ou parâmetros histopatológicos.

[0161] Nos estudos de toxicologia de GLP de dose repetida, o 20502 afucosilado foi administrado por IV a níveis de dose de 1, 10 e 100 mg/kg/dose tanto a ratos quanto a macacos cynomolgus durante 4 doses semanais. A reversibilidade da toxicidade foi avaliada durante um período de recuperação de 6 semanas após a administração final. Os parâmetros para avaliação incluíram exames oftalmológicos, observações clínicas, temperatura corporal, pesos corporais, consumo de alimentos, hematologia, coagulação, química clínica, urinálise, pesos de órgãos, avaliação macroscópica e microscópica. No estudo do macaco cynomolgus, os eletrocardiogramas (ECGs) também foram avaliados para avaliar possíveis toxicidades cardíacas.

[0162] Durante a avaliação do estudo de GLP em ratos, o 20502 afucosilado foi geralmente bem tolerado e não houve efeitos tóxicos atribuídos ao 20502 afucosilado. O nível de efeito adverso não observado (NOAEL) em ratos Sprague Dawley foi considerado como 100 mg/kg/dose.

[0163] No estudo do macaco cynomolgus GLP, o 20502 afucosilado foi geralmente bem tolerado e não houve eventos adversos (EAs) atribuídos ao 20502 afucosilado observados em nenhum dos parâmetros avaliados. Durante o estudo, foi observada uma incidência mais alta de diarreia no final da fase de dosagem nos grupos de doses mais altas. Devido à maior incidência de animais afetados na dose média e alta, bem como no início da fase posterior do período de dosagem, é possível uma relação com a exposição de 20502 afucosilado. Não houve alterações microscópicas no trato intestinal em animais tratados com 20502 afucosilados, incluindo animais com diarreia; portanto, essa descoberta foi considerada não adversa, mas possivelmente relacionada ao artigo de teste. Houve uma única mortalidade no estudo. Um animal no grupo de recuperação da dose média foi encontrado morto no Dia do Estudo 35, 14 dias após a última dose. Observações clínicas, avaliação macroscópica e microscópica foram consistentes com o diagnóstico de torção intestinal. As torções intestinais ocorrem ocasionalmente em macacos cynomolgus, e isso foi considerado uma condição espontânea neste animal e não relacionado ao artigo de teste. O NOAEL no macaco cynomolgus foi considerado 100 mg/kg/dose.

[0164] Além dos estudos de toxicologia in vivo, um estudo de reatividade cruzada de tecido compatível com GLP foi realizado para comparar a ligação de 20502 fucosilado a um painel de 36 tecidos de rato, macaco cynomolgus e humano. Os resultados mostraram que o padrão de ligação do 20502 afucosilado foi semelhante entre as três espécies e limitado ao epitélio da glândula mamária.

[0165] Portanto, 20502 afucosilado foi bem tolerado em macaco cynomolgus e rato. O NOAEL em ambas as espécies foi considerado 100 mg/kg/dose, a dose mais alta testada quando administrada em 4 doses IV semanais.

6.7 Exemplo 7: Escalonamento e Exploração de Dose de 20502 Afucosilado da Fase 1a

[0166] Um estudo multicêntrico aberto de fase 1a é conduzido em até 34 pacientes com tumores sólidos avançados usando 20502 afucosilado. (A) DESENHO DO ESTUDO

[0167] A fase 1a inclui uma fase de escalonamento da dose e uma fase de exploração da dose. O esquema de estudo da fase 1a é fornecido na FIG. 3. Em ambas as fases de Escalonamento de dose e Exploração de Dose, 20502 afucosilado é administrado como uma infusão intravenosa (IV) de 60 minutos a cada três semanas (Q3W) no Dia 1 de cada ciclo de 21 dias. A dose de 20502 afucosilado é baseada no peso corporal no Ciclo 1, Dia 1. Após o Ciclo 1, a dose é recalculada em cada visita à perfusão apenas se o peso do paciente tiver mudado> 10% em relação ao Ciclo 1, Dia 1.

[0168] O escalonamento da dose da fase 1a inclui um desenho inicial de titulação acelerada, seguido de um desenho padrão de escalonamento de dose 3 + 3 em níveis de dose maiores ou iguais a 1 mg/kg até a dose máxima tolerada (MTD) e/ou a dose recomendada (RD) para A fase 1b é determinada. Até 16 a 48 pacientes participam do Escalonamento de Dose. São administradas doses de 0,01

(ou 0,005) a 20 mg/kg de acordo com as coortes descritas na Tabela 15, e as segundas doses dos pacientes devem ser pelo menos 21 dias após as primeiras doses. Tabela 15: Níveis de Dose Nível de Dose Dose Regime -1* 0,005 mg/kg de 20502 Afucosilado Q3W 1 0,01 mg/kg de 20502 Afucosilado Q3W 2 0,03 mg/kg de 20502 Afucosilado Q3W 3 0,1 mg/kg de 20502 Afucosilado Q3W 4 0,3 mg/kg de 20502 Afucosilado Q3W 5 1 mg/kg de 20502 Afucosilado Q3W 6 3 mg/kg de 20502 Afucosilado Q3W 7 10 mg/kg de 20502 Afucosilado Q3W 8 20 mg/kg de 20502 Afucosilado Q3W * Se o MTD for excedido no primeiro nível de dose de 20502 afucosilado (0,01 mg/kg), a dose será reduzida para 0,005 mg/kg.

[0169] Durante o Escalonamento de Dose da fase 1a, a avaliação da Toxicidade Limitativa da Dose (DLT) começa no primeiro dia de tratamento após o início da infusão e continua durante 21 dias. Um DLT é definido de acordo qualquer um dos seguintes, independentemente da atribuição (exceto para aqueles eventos claramente devido à doença subjacente ou causas estranhas): (i) Grau 3 ou toxicidade não hematológica superior (diferente de náusea, vômito e diarreia de Grau 3) ocorrendo com os primeiros 21 dias de tratamento), (ii) náuseas, vômitos e diarreia de grau 3 durando pelo menos 72 horas, apesar dos cuidados de suporte ideais, ocorrendo nos primeiros 21 dias de tratamento, (iii) neutropenia febril e/ou infecção documentada com infecção absoluta contagem de neutrófilos (ANC) inferior a 1,0×109 por L, neutropenia de Grau 4 com duração de mais de 7 dias, trombocitopenia de Grau 4 (menos de 25,0×109 por L) ou Trombocitopenia de Grau 3 (menos de 50,0–25,0×109 por L) acompanhada por sangramento nos primeiros 21 dias de tratamento, (iv) aspartato aminotransferase/alanina transaminase (AST/ALT) mais de 3 vezes o limite superior do normal (LSN) e bilirrubina total concorrente mais de duas vezes LSN não relacionado ao envolvimento do fígado com câncer, (v) outros valores laboratoriais de Grau 3 que não são de importância clínica que não se resolvem em 72 horas, ou (vi) qualquer valor laboratorial de Grau 4, independentemente das sequelas clínicas.

[0170] Um desenho de titulação acelerada envolvendo pelo menos 1 paciente em cada nível de dose é realizado para os níveis de dose de 0,01, 0,03, 0,1 e 0,3 mg/kg. O encaminhamento da dose para o próximo nível de dose prossegue após pelo menos 1 paciente concluir o intervalo de avaliação de 21 dias. Se um único paciente apresentar DLT ou pelo menos 2 pacientes apresentarem EAs moderados (em qualquer nível de dose) durante o intervalo de avaliação de 21 dias, outros pacientes serão incluídos no nível de dose atual e os critérios padrão de escalonamento de dose 3 + 3 se aplicarão a esse coorte, bem como todas as coortes de dosagem subsequentes. EAs moderados são definidos como ≥ EAs de Grau 2, independentemente da atribuição (exceto para os eventos claramente devidos à doença subjacente ou causas estranhas). Os valores laboratoriais de grau 2 não são considerados EAs moderados para este propósito, a menos que acompanhados por sequelas clínicas.

[0171] O escalonamento de dose intrapaciente será permitida em pacientes inscritos em níveis de dose abaixo de 1 mg/kg, desde que: (i) o paciente não tenha experimentado um DLT; (ii) todos os outros EAs se recuperaram para o Grau 1 ou menos antes da escalada da dose; (iii) o paciente pode apenas aumentar a dose em um nível máximo de 1 dose a cada 21 dias; e (iv) o paciente não pode escalar a dose além do nível de dose de 1 mg/kg, a menos que o nível da dose tenha sido eliminado de acordo com o desenho padrão de escalonamento de dose 3+3, conforme descrito abaixo.

[0172] O algoritmo descrito na Tabela 16A abaixo é usado para todas as escalações de dose padrão 3+3. Tabela 16A: Algoritmo de Fase 1a para Decisões de Escalonamento de Dose 3 + 3 Número de Pacientes com DLT em um Regra de Decisão de Escalonamento de Dose Determinado Nível de Dose 0/3 Inscrever 3 pacientes no próximo nível de dose

(próxima/mais alta coorte) Inscrever mais 3 pacientes no nível de dose atual (coorte 1/3 atual) Parar a inscrição. Digitar mais 3 pacientes no nível de dose anterior (coorte anterior/mais baixa), se apenas 3 tiverem ≥2/3 sido inseridos anteriormente ou em um nível de dose intermediário Inscrever 3 pacientes no próximo nível de dose 1/6 (próxima/mais alta coorte) Parar a inscrição. Inscrever mais 3 pacientes no nível de dose mais baixo (coorte anterior/mais baixa), se apenas 3 ≥2/6 tiverem sido inseridos anteriormente ou em um nível de dose intermediário

[0173] A MTD e/ou RD de 20502 afucosilado para a Fase 1a é identificado com base em uma avaliação da segurança geral, tolerabilidade, farmacodinâmica, farmacocinética e eficácia preliminar. A RD levará em consideração as toxicidades observadas durante e após o período de avaliação de DLT, bem como as reduções e interrupções de dose devido à toxicidade que não atende aos critérios de DLT. A RD, portanto, pode ou não ser o mesmo que a MTD identificada. por exemplo, se a MTD não for alcançada, ou se os dados dos ciclos subsequentes de tratamento da Fase 1a fornecerem informações adicionais sobre o perfil de segurança, a RD poderá ser uma dose diferente, embora não mais alta, do que a MTD. A MTD estará em um nível de dose em que não mais que 1/6 pacientes relataram um DLT. A RD também será uma dose em que não mais que 1/6 pacientes relataram DLT, mas pode ser menor que a MTD. Em algumas modalidades, a MTD estará em um nível de dose em que não mais que 1/3, 1/4 ou 1/5 dos pacientes relataram um DLT. A RD também será uma dose em que não mais que 1/3, 1/4 ou 1/5 dos pacientes relataram um DLT, mas pode ser menor do que a MTD.

[0174] A coorte de Fase 1a de Exploração de Dose registra mais de 3 pacientes (até 10 pacientes adicionais em todos os níveis de dose). A triagem prévia do tecido tumoral de arquivo (ou biópsia fresca se o tecido de arquivo não estiver disponível) é usada para testar os níveis de expressão de B7-H4 por imuno- histoquímica (IHC) para todos os pacientes durante a Exploração de Dose de Fase

1a. O tecido tumoral de arquivo (ou biópsia fresca) pode ser usado para análise de biomarcadores, conforme neste documento. Além disso, biópsias frescas são usadas durante a triagem e pós-tratamento para análise farmacodinâmica expandida.

[0175] Em uma modalidade, as coortes de doses propostas para a Exploração de Dose em Monoterapia de Fase 1a são mostradas na Tabela 16B. Tabela 16B: Coorte/Nível de Dose Proposto para A Exploração de Doses da Fase 1a Coorte Dose Regime 1 3 mg/kg Q3W 2 10 mg/kg Q3W 3 MTD/RD Q3W Abreviaturas: MTD = dose máxima tolerada; Q3W = uma vez a cada 3 semanas; RD = dose recomendada.

[0176] Em uma modalidade, a dose recomendada é de 20 mg/kg. (B) SUJEITOS

[0177] Um total de 12 a 24 pacientes é identificado com base nos seguintes critérios de inclusão e exclusão.

[0178] Os pacientes na fase 1a atendem a todos os seguintes critérios de inclusão: • Tumores sólidos confirmados histologicamente, exceto tumores do sistema nervoso central (SNC); • Doença inoperável, localmente avançada ou metastática; • Refratários ou intolerantes às terapias existentes, conhecidas por fornecer benefícios clínicos para a condição do paciente; e • Pelo menos uma lesão mensurável na linha de base de acordo com RECIST v1.1 (Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos 1.1); locais de tumor situados em uma área previamente irradiada, ou em uma área submetida a outra terapia locorregional, não são considerados mensuráveis a menos que tenha sido demonstrada progressão na lesão.

[0179] Critérios de exclusão: Pacientes na Fase 1a não têm histórico de anticorpos antidrogas (ADAs), reação alérgica grave, anafilática ou outra reação relacionada à infusão a um agente biológico anterior e não apresentam hipersensibilidade conhecida a nenhum componente do componente afucosilado. Formulação 20502. (C) RESULTADOS

[0180] A incidência de eventos adversos de Grau 3 e 4 e anormalidades laboratoriais clínicas definidas como toxicidade limitante da dose são avaliadas para mostrar que o 20502 afucosilado é seguro e tolerável em pacientes com tumores sólidos avançados. A incidência de eventos adversos, anormalidades laboratoriais clínicas e anormalidades no ECG são avaliadas para determinar a dose máxima tolerada e/ou a dose recomendada de 20502 afucosilado.

[0181] Parâmetros farmacocinéticos (AUC (área sob a curva de concentração sérica e tempo),Cmax (concentração sérica máxima), Cmin (concentração sérica mínima), depuração (CL), t1/2 (meia-vida terminal), Vss (volume de distribuição em um equilíbrio estado), e Cvale (concentração sérica de vale no final de um intervalo de dosagem) em pacientes com tumores sólidos avançados são determinados a partir de dados de concentração-tempo de 20502 soro afucosilado usando uma análise não compartimental. As concentrações de 20502 afucosilado no soro são determinadas usando o método de ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA). O impacto de imunogenicidade (isto é, respostas imunes de anticorpos antidrogas ao 20502 afucosilado) em pacientes com tumores sólidos avançados na exposição ao 20502 afucosilado é avaliado medindo-se o total de anticorpos 20502 antifucosilados de todos os pacientes.

[0182] Também são demonstrados os benefícios clínicos do 20502 afucosilado em pacientes com tumores sólidos avançados. As avaliações do tumor incluem um exame clínico e geração de imagens (por exemplo, tomografia computadorizada (TC) com espessura de corte apropriada de acordo com RECIST v 1.1 ou imagem por ressonância magnética (MRI)). Os tumores são avaliados na triagem, a cada 9 semanas nos primeiros 12 meses e a cada 12 semanas (+/- 2 semanas) a seguir, para mostrar inibição do crescimento e regressão do tumor (por exemplo, regressão completa do tumor).

[0183] A taxa de resposta geral (ORR), a duração da resposta (DOR) e a sobrevida livre de progressão (PFS) também são determinadas como medidas de eficácia. A ORR é definida como o número total de pacientes com respostas confirmadas (resposta completa (CR) ou resposta parcial (PR) por RECIST v.1.1)

dividido pelo número total de pacientes que podem ser avaliados por uma resposta. A DOR é definida como o tempo desde o início da resposta (RC ou RP) que é subsequentemente confirmado até a primeira observação de doença progressiva ou morte por qualquer causa. A PFS é definida como o tempo desde a primeira dose do paciente até a primeira observação de doença progressiva ou morte devido a qualquer causa.

[0184] Biomarcadores farmacodinâmicos também são observados. Uma análise pode ser realizada do infiltrado de células imunes em biópsias de tumores antes e depois do tratamento. por exemplo, as alterações nos marcadores do infiltrado imunológico do tumor (incluindo, entre outras, células assassinas naturais (NK), CD4, CD8 e/ou outros biomarcadores imunológicos selecionados) são avaliadas por análise de IHC e/ou ácido ribonucleico (RNA). Além disso, as alterações nos níveis de citocinas (por exemplo, IL-2, IL-6, IL-10, TNF e/ou interferon gama (IFNγ)) são avaliadas por análise multiplexada.

[0185] Os pacientes receberam 20502 afucosilado em uma gama de níveis de dose. 24 pacientes que não foram selecionados para B7-H4 com tumores sólidos avançados e com mediana de três (3) terapias anteriores foram tratados com anticorpo 20502 afucosilado. Em uma coorte de escalonamento de doses, 18 pacientes receberam níveis de dose de 0,01 mg/kg a 20 mg/kg a cada três semanas (Q3W) em uma titulação acelerada, seguida pelo desenho 3+3. Os pacientes foram tratados com um número médio de 3 (intervalo = 1-11) doses de 20502 afucosilado. A maioria recebeu 3 mg/kg (n = 8) ou 10 mg/kg (n = 6) de 20502 afucosilado. Sete (7) dos pacientes da coorte de escalonamento de dose foram identificados retrospectivamente como B7-H4 positivo. Em uma coorte de exploração de dose separada, seis (6) pacientes positivos para B7-H4 (do total de 24 pacientes) foram tratados com doses de 3 mg/kg ou 10 mg/kg de Q3W com biópsias obrigatórias antes e durante o tratamento. Não foram necessárias reduções de dose e nenhuma toxicidade limitante da dose ou eventos adversos graves relacionados ao tratamento (SAEs) foram observados em 24 pacientes. Portanto, o 20502 afucosilado demonstrou um perfil de segurança favorável, e os dados sugerem que 20 mg/kg podem ser selecionados como a dose recomendada.

6.8 Exemplo 8: Expansão de Dose de 20502 Afucosilado de Fase 1b

[0186] Um estudo multicêntrico aberto de fase 1b é realizado usando 20502 afucosilado em até 210 pacientes com tipos de tumores sólidos específicos com níveis de expressão de B7-H4 determinados por imuno-histoquímica (IHC). Os tipos específicos de tumores sólidos foram identificados com base em sua alta prevalência de expressão de B7-H4 e disponibilidade limitada de terapias eficazes no cenário irressecável e metastático. (A) DESENHO DO ESTUDO

[0187] A fase 1b é uma porção de expansão de dose do estudo. O esquema de estudo de Fase 1b é fornecido na FIG. 3. A inscrição na expansão da dose de Fase 1b começa após a identificação da dose máxima tolerada (MTD) e/ou dose recomendada (RD) na fase 1a.

[0188] A Fase 1b inclui coortes específicas do tumor de até 30 pacientes cada, conforme mostrado na Tabela 17. O estudo de Fase 1b pode ter mais ou menos coortes do que o mostrado na Tabela 17, mas não deve exceder 7 coortes. Tabela 17: Coortes de Expansão de Fase 1b e Tipos de Tumor Coorte Tipo de Tumor 1b1 Câncer de mama 1b2 Câncer de ovário 1b3 Câncer do endométrio 1b4 Câncer urotelial

[0189] O tecido tumoral de arquivo (ou biópsia fresca, se o tecido de arquivo não estiver disponível) é usado para testar os níveis de expressão de B7-H4 por imuno-histoquímica (IHC) para pré-triagem de todos os pacientes e para análise de biomarcadores. Além disso, biópsias novas, realizadas durante a triagem e o pós- tratamento, são usadas para análises farmacodinâmicas expandidas de um subconjunto de pacientes (10 pacientes por coorte de 30 pacientes).

[0190] O 20502 afucosilado é administrado como dose intravenosa de 60 minutos (IV) a cada três semanas (Q3W) no dia 1 de cada ciclo de 21 dias. A dose de 20502 afucosilado é baseada no peso corporal no Ciclo 1, Dia 1. Após o Ciclo 1, a dose será recalculada em cada visita à perfusão apenas se o peso do paciente tiver mudado> 10% em relação ao Ciclo 1, Dia 1. (B) SUJEITOS

[0191] Participarão até 30 pacientes com câncer de mama, câncer de ovário, câncer de endométrio ou urotelial. Também podem participar coortes adicionais específicas de cada tipo de tumor, de até 30 pacientes.

[0192] Os pacientes na Fase 1b atendem a todos os seguintes critérios de inclusão: • Todos os critérios de inclusão para a Fase 1a (tumores sólidos confirmados histologicamente, exceto tumores do sistema nervoso central (SNC)); • Positivo para a expressão de B7-H4 em uma amostra de tumor fresco ou arquivada, avaliada por um ensaio de imuno-histoquímica (IHC); • Para a Coorte 1b1 - câncer de mama o Câncer de mama metastático confirmado histologicamente ou citologicamente; o Doença progressiva ou incapaz de tolerar quimioterapia com antraciclina e taxano; o Doença progressiva ou após pelo menos uma quimioterapia sistêmica no contexto metastático; o Pacientes com doença positiva no receptor de estrogênio (ER) e/ou no receptor de progesterona (PR) (definido como ER e/ou PR> 1%) devem ser refratários aos hormônios (progredidos após 3 terapias endócrinas sequenciais) ou ter doença visceral sintomática; e o Pacientes têm doença HER2 negativo; • Para pacientes com câncer de mama triplo negativo (TNBC) na Coorte 1b1: o TNBC metastático confirmado histologicamente ou citologicamente; e o Pelo menos duas linhas anteriores de quimioterapia sistêmica com pelo menos uma sendo administrada no cenário metastático; • Para pacientes com câncer de mama positivo para receptores hormonais (HR+) na Coorte 1b1: o Carcinoma metastático de HR+ da mama confirmado histologicamente ou citologicamente; o Os pacientes receberam pelo menos duas linhas anteriores de terapia hormonal; e o Os pacientes receberam pelo menos uma linha anterior de quimioterapia sistêmica (no cenário adjuvante ou metastático) • Para a Coorte 1b2 - câncer de ovário o Diagnóstico confirmado histologicamente ou citologicamente de câncer epitelial recorrente de ovário, peritoneal primário ou trompa de Falópio que é refratário às terapias existentes conhecidas por fornecer benefício clínico; e o Doença progressiva em ou após pelo menos dois regimes anteriores de tratamento, incluindo pelo menos um regime contendo platina ou incapaz de tolerar quimioterapia adicional; • Para a Coorte 1b3 - câncer de endométrio o Câncer endometrial recorrente ou persistente confirmado histologicamente ou citologicamente que é refratário a tratamentos curativos ou estabelecidos; e o Doença progressiva em ou após pelo menos um regime anterior de quimioterapia sistêmica ou incapaz de tolerar quimioterapia sistêmica; • Para a Coorte 1b4 - câncer urotelial o Câncer urotelial confirmado histologicamente ou citologicamente; e o Doença progressiva após ou intolerância a um regime contendo platina e a um agente direcionado para PD-1/PD-L1.

[0193] Pacientes na Fase 1b não têm histórico de anticorpos antidrogas (ADAs), reação alérgica grave, anafilática ou outra reação relacionada à infusão a um agente biológico anterior e não apresentam hipersensibilidade conhecida em nenhum componente de formulação de 20502 afucosilado. (C) RESULTADOS

[0194] A incidência de eventos adversos, anormalidades laboratoriais clínicas e anormalidades no ECG é avaliada para demonstrar a segurança e a tolerabilidade do 20502 afucosilado em pacientes com tumores sólidos avançados positivos para B7-H4.

[0195] Os parâmetros farmacocinéticos (AUC, Cmax, Cmin, CL, t1/2, Vss (volume de distribuição em estado estacionário)) em pacientes com tumores sólidos avançados B7-H4-positivos são determinados a partir de dados de concentração- tempo de 20502 afucosilado sérico usando uma análise não compartimental. As concentrações de 20502 afucosilado no soro são determinadas usando o método de ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA).

[0196] Biomarcadores farmacodinâmicos também são observados. por exemplo, as alterações nos marcadores do infiltrado imunológico do tumor (incluindo, entre outras, células assassinas naturais (NK), CD4, CD8 e/ou outros biomarcadores imunológicos selecionados) são avaliadas por análise de IHC e/ou ácido ribonucleico (RNA). Além disso, as alterações nos níveis de citocinas (por exemplo, IL-2, IL-6, IL-10, TNF e/ou interferon gama (IFNγ)) são avaliadas por análise multiplexada.

[0197] O impacto de imunogenicidade (isto é, respostas imunes de anticorpos antidrogas ao 20502 afucosilado) em pacientes com tumores sólidos avançados positivos para B7-H4 na exposição ao 20502 afucosilado é avaliado medindo-se o total de anticorpos 20502 antifucosilados de todos os pacientes.

[0198] Os benefícios clínicos do 20502 afucosilado também são demonstrados. As avaliações do tumor incluem um exame clínico e geração de imagens (por exemplo, tomografia computadorizada (TC) com espessura de corte apropriada de acordo com RECIST v 1.1 ou imagem por ressonância magnética (MRI)). Os tumores são avaliados na triagem, a cada 9 semanas nos primeiros 12 meses e a cada 12 semanas (+/- 2 semanas) a seguir, para mostrar inibição do crescimento e regressão do tumor (por exemplo, regressão completa do tumor).

[0199] A sobrevida global, definida como o tempo desde a primeira dose de um paciente até a morte devido a qualquer causa, também é determinada como uma medida de eficácia. As taxas gerais de sobrevida demonstram o benefício clínico do 20502 afucosilado em pacientes com tumores sólidos avançados positivos para B7-H4. ***

[0200] A presente invenção não deve ser limitada em escopo pelas modalidades específicas descritas neste documento. De fato, várias modificações da invenção além daquelas mostradas e descritas se tornarão aparentes para aqueles versados na técnica a partir da descrição anterior e das figuras anexas. Tais modificações se destinam a permanecer dentro do escopo das reivindicações anexas.

[0201] Todas as referências (por exemplo, publicações ou patentes ou pedidos de patentes) citadas neste documento são incorporadas neste documento por referência nas suas totalidades e para todos os fins na mesma extensão, como se cada referência individual (por exemplo, publicação ou patente ou pedido de patente) fosse específica e individualmente indicada para ser incorporada por referência na sua totalidade para todos os fins.

[0202] Outras modalidades estão no escopo das seguintes reivindicações.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método para tratamento de um tumor sólido em um sujeito humano, o método caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao sujeito de cerca de 0,005 a cerca de 20 mg/kg de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste que se liga especificamente à B7-H4 humana e compreende região determinante de complementaridade da (CDR) 1 na região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, uma VH CDR2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6, uma VH CDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, uma região variável de cadeia leve (VL) na CDR1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8, uma VL CDR2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9 e uma VL CDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10.

2. Método para tratamento de um tumor sólido em um sujeito humano, o método caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao sujeito de uma composição farmacêutica compreendendo (i) anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes, em que os anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes se ligam especificamente à B7-H4 humana e compreendem uma VH CDR1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, uma VH CDR2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6, uma VH CDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, uma VL CDR1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8, uma VL CDR2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9 e uma VL CDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 e (ii) um excipiente farmaceuticamente aceitável, em que pelo menos 95% dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes na composição são não fucosilados, e em que são administrados cerca de 0,005 a cerca de 20 mg/kg dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que cerca de 20 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que cerca de 10 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que cerca de 3 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito.

6. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que cerca de 1 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito.

7. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que cerca de 0,3 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que cerca de 0,1 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito.

9. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que cerca de 0,03 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito.

10. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que cerca de 0,01 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito.

11. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que cerca de 0,005 mg/kg do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é administrado ao sujeito.

12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-11, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno deste é administrado cerca de uma vez a cada três semanas.

13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-12, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno deste é administrado por via intravenosa.

14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-13, caracterizado pelo fato de que B7-H4 foi detectada no tumor sólido usando imuno- histoquímica (IHC) antes da administração.

15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14,

caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste compreende uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 11 e/ou uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 12.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-15, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante da cadeia pesada e/ou uma região constante da cadeia leve.

17. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a região constante da cadeia pesada é uma região constante da cadeia pesada de imunoglobulina IgG1 humana e/ou em que a região constante da cadeia leve é uma região constante da cadeia leve de imunoglobulina IgGκ humana.

18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-17, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste compreende uma região constante da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 25 e/ou uma região constante da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 23.

19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-18, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 21 e/ou uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 22.

20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-19, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é um anticorpo humano ou fragmento de ligação ao antígeno deste.

21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3-19, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno deste é não fucosilado.

22. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-21, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é um anticorpo completo.

23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-21,

caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno deste é um fragmento de ligação ao antígeno.

24. Método, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o fragmento de ligação a antígeno compreende um Fab, Fab’, F(ab’)2, Fv de cadeia única (scFv), Fv ligado a dissulfeto, domínio V-NAR, IgNar, intrabody, IgGΔCH2, minibody, F(ab’)3, tetrabody, triabody, diabody, anticorpo de domínio único, DVD-Ig, Fcab, mAb2, (scFv)2, ou scFv-Fc.

25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2-24, caracterizado pelo fato de que a fucosilação é indetectável na composição.

26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido expressa B7-H4.

27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-26, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é inoperável, localmente avançado ou metastático.

28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-27, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é selecionado do grupo que consiste em câncer de mama, carcinoma ductal, carcinoma do endométrio, câncer de ovário, câncer urotelial, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de pâncreas, câncer de tireoide, câncer de rim e câncer de bexiga.

29. Método, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é câncer de mama, câncer de ovário, câncer de endométrio ou câncer urotelial.

30. Método, de acordo com a reivindicação 28 ou 29, caracterizado pelo fato de que o câncer de mama é um câncer de mama avançado.

31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28-30, caracterizado pelo fato de que o câncer de mama é negativo para HER2.

32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28-31, caracterizado pelo fato de que o câncer de mama é um câncer de mama triplo negativo.

33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28-31, caracterizado pelo fato de que o câncer de mama é um câncer de mama positivo para receptores de hormônios (HR).

34. Método, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o câncer de pulmão de células não pequenas é o carcinoma de células escamosas.

35. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-34, caracterizado pelo fato de que o sujeito não recebeu terapia anterior com um antagonista de PD-1/PD-L1.

36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-35, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda o monitoramento do número de células imunes no tumor.

37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-35, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda o monitoramento do número de células natural killer (NK), células CD4+ e/ou células CD8+ no tumor.

38. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-37, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda o monitoramento dos níveis de citocinas no sujeito.

39. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-37, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda o monitoramento dos níveis de IL-2, IL-6, IL-10, TNF e/ou interferon gama (IFNγ) no sujeito.

40. Método para tratamento de um tumor sólido em um sujeito humano, caracterizado pelo fato de que compreende a administração por via intravenosa ao sujeito uma vez a cada três semanas cerca de 20 mg/kg de um anticorpo do mesmo que se liga especificamente à B7-H4 humana e compreende uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 11 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 12.

41. Método para tratamento de um tumor sólido em um sujeito humano, o método caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao sujeito de uma composição farmacêutica compreendendo (i) anticorpos que se ligam especificamente à B7-H4 humana e compreendem uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 11 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 12 e (ii) um excipiente farmaceuticamente aceitável, em que pelo menos 95% dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes na composição são não fucosilados, e em que cerca de 20 mg/kg dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno destes são administrados por via intravenosa cerca de uma vez a cada três semanas.

42. Método, de acordo com a reivindicação 40 ou 41, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 21 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID NO: 22.

43. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40-42, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é câncer de mama, câncer de ovário, câncer de endométrio ou câncer urotelial.

Afucosilado SK-BR-3 (342.348 receptores) HCC1569 (342.348 receptores) ZR-75-1 (51.617 receptores)

Petição 870210008086, de 22/01/2021, pág. 76/79 MDA-MB-468 (34.659 receptores) HCC1964 (15.676 receptores)

Luminescência Fucosilado 1/3

SK-BR-3 (342.348 receptores) HCC1569 (342.348 receptores) ZR-75-1 (51.617 receptores) MDA-MB-468 (34.659 receptores) HCC1964 (15.676 receptores)

Luminescência

Dias após a inoculação

(Meio mm3±SD Volume Tumoral

FASE 1a (até 58 pacientes no total): FASE 1b (até 210 pacientes no total): Escalonamento de Dose 1a (16 a 48 pacientes): Expansão de Dose 1b: • Tumores sólidos que são irressecáveis, exceto tumores de SNC primários localmente avançado • Pré-triagem de B7-H4+ ou metastático • Aproximadamente, 30 pacientes planejados em cada 4 coortes • Infusões IV de 20502 durante 60 minutos a cada três semanas de expansão de tipos de tumor de B7-H4+ • Desenho de titulação acelerado inicial seguido por escalonamento dose 3+3 padrão até MTD ou • Coortes específicas ao tumor adicional podem ser registradas; Petição 870210008086, de 22/01/2021, pág. 78/79 RD é determinado nenhuma coorte de expansão individual excederá 30 pacientes • 8 níveis de dose de escalonamento planejado: 0,01, 0,03, 0,1, 0,3, 1,3, 10, 20 mg/kg • Dosagem em MTD ou RD de Fase 1a Exploração de Dose 1a (até 10 pacientes adicionais): • Biópsias obrigatórias em 10 pacientes por coorte • Pré-triagem de B7-H4+ é necessária em exploração de dose • Avaliação adicional de segurança, PK, farmacodinâmica e atividade clínica.

Fase 1b Coorte 1b1: Fase 1a Mama Coorte 1b2: Ovariano 3/3 Coorte 1b3: Endométrico Triagem de 28 Coorte 1b4: Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Urotelial 0,1 mg/kg 0,3 mg/kg 0,01 mg/kg 0,03 mg/kg Coorte 1b5 Potencial Período de DLT de 21 Período de DLT de 21 Período de DLT de 21 Período de DLT de 21 Período de DLT de 21 Período de DLT de 21 Período de DLT de 21 Coorte 1b6 Potencial desenho de titulação acelerada desenho 3+3 Coorte 1b7 Potencial Avaliações tumorais em pacientes no tratamento: durante a triagem e a cada 9 semanas durante os primeiros 12 meses (e a cada 12 [±2] semanas, em seguida) Após a descontinuação do tratamento do estudo: a cada 12 semanas até a progressão da doença, revogação de consentimento ou nova terapia anticâncer Tratamento até PD ou toxicidade inaceitável Fim do acompanhamento após o tratamento: 28 (±7) dias e 100 (±7) dias após a última dose Acompanhamento a longo prazo (apenas aplicado à Fase 1b): Contato a cada 12 (±2) semanas para estado da sobrevida