JP2023534884A

JP2023534884A - 組織損傷の治療に使用するための作用剤２

Info

Publication number: JP2023534884A
Application number: JP2022550157A
Authority: JP
Inventors: ピープス，マーク・ブライアン; スウェイン，クリストファー; テイラー，グレアム・ウォルター; ウッド，スティーブン・ポール; グロソップ，メラニー・スザンヌ; ライン，シャーロット・アリス・ルイーズ
Original assignee: UCL Business Ltd
Current assignee: UCL Business Ltd
Priority date: 2020-02-19
Filing date: 2021-02-18
Publication date: 2023-08-15
Also published as: IL295636A; AU2021225046A1; BR112022016243A2; CA3167333A1; US20230101069A1; EP4106753A1; KR20220163367A; CN115484949A; JP2023529047A; WO2021170489A1; GB202002299D0; EP4106754A1; WO2021165424A1; CA3167335A1; AU2021226076A1; US20230118142A1; CN115484950A

Abstract

医薬に使用するための作用剤であって、式（Ｉ）：（式中、Ａｒは、例えば、１，４－フェニル基などのアリールリンカー基である）の化合物、その個々の薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体を含む、作用剤。式（Ｉ）の化合物は、ヒトＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の阻害剤であり、ＣＲＰにより媒介される医学的状態を治療するために使用できる。また、式（Ｉ）の化合物およびその化学中間体を作製するための方法が提供される。【化１】JPEG2023534884000044.jpg77170

Description

本発明は、ｉｎｖｉｖｏでＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）に特異的に結合し、それによりＣＲＰと自己細胞性および組織リガンドとの結合を阻害する作用剤（agent）、ならびに組織損傷、特に虚血性、外傷性、感染性、炎症性、および新生物性状態の治療または予防に使用するための、そのような作用剤を含有する組成物に関する。

Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）は、ペントラキシンタンパク質ファミリーの正常血漿タンパク質であり、その他のメンバーは血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）である（１）。ＣＲＰは、古典的な急性期タンパク質であり、その循環濃度は、組織傷害、感染症、炎症、およびがんのほとんどの形態に応答して劇的に増加する。ほとんどの状態では、到達するＣＲＰ値は、疾患の範囲および活性と密接に相関する。ＣＲＰは、カルシウム依存性リガンド結合タンパク質であり、最も高い親和性でホスホコリン残基に結合するが、由来が自己性および外因性の両方の様々な他のリガンドにも結合する。自己リガンドとしては、天然および修飾血漿リポタンパク質、損傷細胞膜、いくつかの異なるリン脂質および関連化合物、ならびに小型核リボ核タンパク質粒子が挙げられる。外因性リガンドとしては、細菌、真菌、および寄生虫の莢膜成分および体細胞成分等の、微生物の一部のグリカン、リン脂質、および他の成分、ならびに植物産物が挙げられる。巨大分子リガンドに結合したＣＲＰは、Ｃｌｑを介して古典的な補体経路を活性化し、補体系の主要な接着分子であるＣ３の活性化および固定化、主要な走化性因子であるＣ３ａおよびＣ５ａの産生、ならびに最終溶解相Ｃ５～Ｃ９の開始をもたらす。

ＣＲＰ産生の増加を誘発した疾患プロセスがなんであれ、その範囲および活性を密接に反映することに加えて、ＣＲＰのより高い循環濃度は、疾患の進行、合併症の発生、および臨床転帰も有意に予測する。幅広い範囲の疾患にわたってこの関連性が広範に臨床観察されることは、ＣＲＰが、組織損傷を悪化させ、ひいては疾患重症化させる病原性的役割を果たすことと一致している。ＣＲＰは、正常な健常細胞には結合しないが、死細胞および損傷細胞上に露出しているリガンドと強く結合し、次いで補体を活性化する。ＣＲＰ媒介性補体活性化は、組織からの細胞の破片のクリアランスおよび一部の微生物に対する宿主防御に寄与することができるものの、補体活性化は、多数の抗体媒介性過敏性反応と同様に、重度組織損傷を引き起こす可能性があることは明らかである。

ヒトＣＲＰの補体依存性病原性（complement dependent pathogenicity）は、冠動脈結紮術を受けたラットに対するヒトＣＲＰの投与が、その結果として生じる急性心筋梗塞のサイズを増加させることを実証することにより始めて実験的に確認された（２）。ヒトＣＲＰおよび活性化ラット補体が梗塞内およびその周囲に沈着し、組織損傷の悪化は、間違いなく補体依存性でだった。同様の観察が、ラット脳卒中の中大脳動脈閉塞モデルでなされた（３）。その後、いくつかの異なる独立したグループが、一連の異なる動物モデルで同等の観察をしている。

ｉｎｖｉｖｏで使用するための最初の小分子ＣＲＰ結合阻害剤であるビス（ホスホコリン）ヘキサン（ＢＰＣ６）が設計されたことにより、虚血性梗塞後の組織損傷悪化におけるヒトＣＲＰの病原性的役割の決定的確認が可能になった（２）。冠状動脈結紮術を受け、ヒトＣＲＰを受け取ったラットにこの化合物を投与すると、治療を受けなかったヒトＣＲＰで治療した動物で生じた損傷の増加が完全に排除された。その後、ビス（ホスホコリン）オクタン（ＢＰＣ８）が、ｉｎｖｉｔｒｏでＣＲＰ結合のより強力な阻害剤であることが見出され、虚血再灌流設計を含むラット急性心筋梗塞モデルにおいて、ならびに末端冠状動脈結紮後に、ヒトＣＲＰ病原性に対して同じ防御効果を有していた（Ｐｅｐｙｓ、未発表の観察）。このように、ヒトＣＲＰは、治療標的として検証され、ＣＲＰの小分子結合阻害剤による介入の有効性が実証された。

このような観察結果は、ＣＲＰの循環濃度が増加する非常に幅広く様々な組織損傷状態の疾患重症度を低減するための新規手段への道を切り開いている。ｉｎｖｉｖｏでのＣＲＰ結合の阻害は、病因が非常に異なる多様な疾患を予防も治癒もしないことは明らかであろう。しかし、組織損傷の範囲、重症度、および継続期間を低減し、心臓発作、脳卒中、関節リウマチ、および原因不明の他の慢性炎症性疾患、火傷、細菌およびウイルス感染症、またはがん悪液質、ならびに多数の他の状態を有する患者の生存を延長することは、依然として満たされていない緊急かつ大きな医療ニーズとなっている。

ＷＯ０３／０９７１０４Ａ１には、ＣＲＰに結合し、ＣＲＰ結合または他のリガンドを阻害する作用剤が記載されている。この作用剤は、複数のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）分子と複合体を形成するように共有結合で共連結された複数のリガンドを含み、（ｉ）リガンドの少なくとも２つは、同じであるかまたは異なり、ＣＲＰ分子に存在するリガンド結合部位に結合することが可能であるか；または（ｉｉ）リガンドの少なくとも１つは、ＣＲＰ分子上に存在するリガンド結合部位に結合することが可能であり、リガンドの少なくとも１つ他のものは、血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）分子上に存在するリガンド結合部位に結合することが可能である。ＣＲＰに対する好適なリガンドは、ビス（ホスホコリン）リガンドであり、ＢＰＣ８と命名された例示的な化合物は、下記式（ＢＰＣ８）を有する。

ＢＰＣ８の数字８は、上記式のｎ－オクチルリンカー基を指す。ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチルなどのリンカー基を有した対応する化合物ＢＰＣ６、ＢＰＣ７なども開示されている。

ＢＰＣ６およびＢＰＣ８は、ＣＲＰに強く結合し、天然５量体タンパク質分子の対を架橋する。ＢＰＣ６およびＢＰＣ８は、ラット急性心筋梗塞モデルにおけるヒトＣＲＰの有害効果を完全に排除した（４、およびＰｅｐｙｓら未発表の観察結果）。しかし、ビス（ホスホコリン）アルカン系列の化合物は、大規模な合成および精製が困難である。

このように、ＣＲＰにより悪化する医学的状態の治療に使用するための、より容易に調製され、先行技術に記載の化合物よりも向上した特性を提供する作用剤または化合物は依然として必要とされている。

第１の態様にて、本発明は、医薬に使用するための作用剤であって、式（Ｉ）：
（式中、Ａｒは、１，４－フェニルなどのアリールリンカー基である。）
の化合物、ならびにその個々の薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体を含む、作用剤を提供する。

好適には、式（Ｉ）の化合物は、ヒトＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の阻害剤である。

第２の態様にて、本発明は、炎症および／または組織損傷状態を有する対象における組織損傷の治療または予防に使用するための、本発明の第１の態様による作用剤を提供する。更なる一態様にて、本発明は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と混合されている、本発明の第１の態様による作用剤を含む医薬組成物を提供する。

更なる一態様にて、本発明は、式（Ｉ）の化合物を調製するための方法であって、式（ＩＩＩ）：
（式中、Ｒ^１はカルボキシル保護基である。）
の化合物を、式（ＩＶ－Ａ）または式（ＩＶ－Ｂ）：
の化合物と反応させて、式（Ｖ）の化合物を形成し、
続いて、Ｒ^１保護基を切断して、式（Ｉ）の化合物を形成するステップを含む方法を提供する。

更なる一態様にて、本発明は、式（ＩＩＩ）の化合物、または（１Ｓ）－（＋）－１０－カンファースルホン酸などの光学活性有機酸化合物（optically active organic acid compound）とのその塩を提供する。

第１の態様にて、本発明は、医薬に使用するための作用剤であって、式（Ｉ）：
（式中、Ａｒはアリールリンカー基である。）
の化合物、その個々の薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体を含む、作用剤を提供する。

Ａｒリンカー基は、好適には、芳香環に１、２、または３つのヘテロ原子を任意選択的に含有する単環式、二環式、または縮合二環式アリール基であり、ヘテロ原子は、好適にはＮまたはＳから選択される。Ａｒリンカー基は、好適には、芳香環に（すなわち、任意選択的な置換基の炭素原子を除く）４～１２個の炭素原子を含有する。Ａｒ基の芳香環は、式（Ｉ）に示されているように、アミド結合を介して式（Ｉ）の化合物のパリンドローム末端基に連結している。好適には、２つのＡｒ－ＣＯ結合間の結合角は、約１８０度である。したがって、例えば、Ａｒがフェニル基などの単一の６員芳香族環である場合、結合は、好適には、環のパラ位（１、４）に位置する。その結果生じる立体構造的な関係性により、キヌクリジニル末端基が、ＣＲＰの対応する受容基との結合に適切なものになるように位置決めされると考えられる。

一実施形態では、Ａｒ基は、１，４－フェニル、２，６－ナフチル、もしくは４，４’－ビフェニル、または環に１、２、もしくは３つのヘテロ原子を含有する同じ環系の基（例えば、１，４－フェニルの代わりに２，６－ピリジル）から選択される。各々の場合において、芳香環は、下記で規定する１つまたは複数の置換基Ｒで置換されていてもよい。

これらの実施形態では、リンカー基Ａｒは、下記式Ａｒ－Ｉ～式Ａｒ－ＶＩ：
（式中、Ｒは、アリール環の１つまたは複数の任意選択的な置換基を表す。）からなる群から選択されていてもよい。好適には、Ｒは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＣＯＮＨ_２、またはＣ１～Ｃ５（シクロ）アルキル、またはＣ１～Ｃ５（シクロ）アルコキシから選択されていてもよく、アルキル基は、任意選択的に、フェニル基で置換されていているか（例えば、Ｒは－Ｏ－ベンジルである）または１つもしくは複数のハロゲン原子で置換されており、例えばトリフルオロメチルである。より好適には、Ｒは、Ｃ１～Ｃ４アルキルまたはＣ１～Ｃ４アルコキシ、例えばメチルであってもよい。好適には、アリールリンカーには、０、１、または２つのＲ置換基が存在し、より好適には０または１つのＲ置換基が存在し、一部の場合では、Ｒ置換基は存在しない。特定の実施形態では、Ａｒリンカー基は、０、１、または２つのＲ置換基を有する１，４－フェニルリンカー基である。

一実施形態では、アリールリンカー基Ａｒは、下記式Ａｒ－ＶＩＩ～式Ａｒ－ＸＶＩ：
を有する基からなる群から選択される。

特に興味深い一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、下記式（ＩＩ）：
を有する。

また、式（ＩＩ）の化合物は、本明細書にて、Ｐ２Ｂ－Ｂ、またはＡＰＬ－２１９１、または実施例１の化合物と同義的に呼称する。

式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物は、Ｒ，Ｒ，Ｒ，Ｒ立体異性体である。この構造の他の立体異性体は、活性がより低いことが見出されている。Ｓ，Ｓ，Ｓ，Ｓ異性体は、最も活性な代替的立体異性体であると考えられる。

好適には、本発明に係る作用剤中の（Ｒ，Ｒ，Ｒ，Ｒ）立体異性体のジアステレオマー純度は、少なくとも約５０重量％、好適には少なくとも約６０％、より好適には少なくとも約７５％、さらにより好適には少なくとも約９０％、および最も好適には少なくとも約９８％である。すなわち（Ｒ，Ｒ，Ｒ，Ｒ）立体異性体の量は、好適には、作用剤中に存在するこの化合物のすべての他の立体異性体の量を超えている。最も好適には、作用剤中に存在するこの化合物の全立体異性体の少なくとも約９８重量％は、Ｒ，Ｒ，Ｒ，Ｒ立体異性体である。

結晶形態または溶解形態の式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物は、双性イオン形態（ＣＯＯ－ＱＮＨ＋）で存在することができ、このような双性イオン形態は、これによって上記式（Ｉ）および式（ＩＩ）の規定に包含される。同様に、式（Ｉ）および式（ＩＩ）の規定は、前記化合物のすべての結晶形態および多形体を包含する。

式（Ｉ）の上記二価リガンド化合物は、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏでヒトＣＲＰと強く結合し、最大５つのリガンド分子により架橋された天然５量体ＣＲＰ分子の対の安定複合体を形成することを見出した。各ＣＲＰプロトマーのリガンド結合ポケットは遮蔽され、各ＣＲＰ５量体の結合（Ｂ）面全体がこの複合体で完全に閉塞されるため、ＣＲＰは、ｉｎｖｉｖｏで組織損傷作用を媒介することができない。さらに、ＣＲＰ－リガンド複合体内からの、天然ＣＲＰの個々の非共有結合で付随したプロトマーの解離が、生理学的条件下では完全に阻害される。

好適には、式（Ｉ）の化合物は、約２０μＭもしくはそれよりも低い、好適には約１０μＭもしくはそれよりも低い、より好適には約５μＭもしくはそれよりも低い、または最も好適には約１μＭもしくはそれよりも低いＩＣ_５０を有する、ヒトＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の阻害剤である。ＩＣ_５０を測定して、特定の化合物が特定の範囲内のＩＣ_５０を有するか否かを決定するための好適な方法については、本明細書に記載する。

第２の態様にて、本発明は、ＣＲＰにより媒介される医学的状態の治療または予防に使用するための、本発明に係る作用剤を提供する。別の一態様にて、本発明は、ＣＲＰにより媒介される医学的状態を治療または予防するための医薬の製造のための、本発明の第１の態様による作用剤の使用を提供する。

式（Ｉ）の化合物を含む本発明に係る作用剤は、１つまたは複数の他の薬学的に活性な薬剤と同時的に、同時に、別々に、または順次に投与できる。そのような他の薬学的に活性な薬剤としては、例えば、コルチコステロイドなどの抗炎症薬；抗ウイルス薬、抗細菌薬、抗真菌薬、または抗寄生虫薬；ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦなどの炎症促進性サイトカインの阻害剤／アンタゴニスト；抗凝固剤；補体活性化の阻害剤またはその生理活性断片を挙げることができる。

本発明は、それを必要とする患者のＣＲＰにより媒介される医学的状態を治療するための方法であって、治療量の本発明に係る作用剤または本発明に係る医薬組成物を患者に投与することを含む方法をさらに提供する。

一実施形態では、炎症および／または組織損傷状態は、急性冠症候群、不安定狭心症、プラーク破裂、および／または初期アテローム血栓症の１つまたは複数を含む。

一実施形態では、炎症および／または組織損傷状態は、感染症、感染症のアレルギー性合併症、炎症性疾患、虚血性または他の壊死、外傷性組織損傷、ならびに悪性新生物形成から選択される。例えば、状態は、敗血症を含む細菌感染症、ウイルス感染症、真菌感染症、および寄生虫感染症から選択される感染症であってもよい。

一実施形態では、状態は、関節リウマチ、若年性慢性（リウマチ）関節炎、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、全身性血管炎、リウマチ性多発筋痛症、ライター病、クローン病、および家族性地中海熱、ならびに他の自己炎症性状態から選択される炎症性疾患である。

一実施形態では、状態は、心筋梗塞、虚血性脳卒中、腫瘍塞栓形成、および急性膵炎から選択される組織壊死である。

一実施形態では、状態は、待機手術、火傷、化学的傷害、骨折、および圧迫傷害から選択される外傷である。

一実施形態では、状態は、リンパ腫、ホジキン病、癌腫、および肉腫から選択される悪性新生物形成である。

一実施形態では、状態は、リウマチ熱、糸球体腎炎、および癩性結節性紅斑から選択される感染症のアレルギー性合併症である。

一実施形態では、状態は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス、特にＳＡＲ－ＳＣｏＶ２による感染症または感染症の合併症である。

好適には、本方法は、循環中および細胞外組織液中のすべての可溶性ＣＲＰに結合するのに十分な量の本発明に係る作用剤を患者に投与することを含む。例えば、その量は、利用可能なＣＲＰの少なくとも約７０％、好ましくは利用可能なＣＲＰの少なくとも約９０％、および最適には利用可能なＣＲＰの９５％、９９％、または１００％に結合するのに十分な量であってもよい。

更なる一態様にて、本発明は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と混合されている本発明の第１の態様による作用剤を含む、医薬組成物を提供する。

本発明に係る作用剤またはその薬学的に許容される塩、エステル、もしくはプロドラッグを含み、任意選択的に、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤（それらの組合せを含む）が組み込まれている医薬組成物を製剤化できる。本明細書にて「薬学的に許容される塩」は、式（Ｉ）の化合物と、薬学的に使用するための塩の形成に関する技術分野において公知であり受け入れられている陰イオンまたは陽イオンとの塩を指す。酸付加塩は、例えば、作用剤の溶液を、塩酸、シュウ酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、またはリン酸が挙げられるがこれらに限定されない、薬学的に許容される非毒性酸の溶液と混合することにより形成できる。作用剤が、カルボン酸基を有する場合、本発明では、それらのナトリウム、カリウム、カルシウム、および第四級アンモニウム塩が挙げられるがこれらに限定されないその塩、好ましくはその非毒性で薬学的に許容される塩も企図される。特に好適な実施形態では、塩は、ＨＣｌとの塩、特に．２ＨＣｌ塩である。

治療使用のために許容される担体または希釈剤は、医薬分野において周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏｅｄｉｔ，１９８５）に記載されている。薬学的担体、賦形剤、または希釈剤の選択は、意図されている投与経路および標準的な薬学的慣習に応じて選択できる。医薬組成物は、担体、賦形剤、もしくは希釈剤としてまたはそれらに加えて、任意選択的に好適な結合剤、滑沢剤、懸濁化剤、コーティング剤、可溶化剤を含んでいてもよい。

保存剤、安定剤、色素、およびさらには香味剤が、医薬組成物に提供されていてもよい。抗酸化剤および懸濁化剤も使用できる。

医薬組成物は、レシピエントにより代謝された場合にのみ活性になる作用剤またはその誘導体を含むプロドラッグの形態であってもよい。このような医薬組成物の成分の正確な性質および量は、経験的に決定することができ、部分的には組成物の投与経路に依存することになる。適切な場合、本発明に係る医薬組成物は、吸息により、坐剤もしくはペッサリーの形態で、ローション剤、液剤、クリーム剤、軟膏、もしくは散剤の形態で局所的に（眼科的を含む）、皮膚パッチの使用により、デンプンもしくはラクトースなどの賦形剤を含有する錠剤の形態で経口的に、または単独でもしくは賦形剤と混合したかのいずれかのカプセル剤またはオブール（ovule）で、または香味剤もしくは着色剤を含有するエリキシル剤、液剤、または懸濁剤の形で投与できるか、あるいは本発明に係る医薬組成物は、非経口的に、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、または動脈内に注射することができる。

本発明に係る組成物を、注射による投与のために組み込むことができる液体形態としては、綿実油、ゴマ油、ココナツ油、およびピーナッツ油等の食用油、ならびにエリキシルおよび類似の医薬ビヒクルを有する水性エマルジョンが挙げられる。水性懸濁物に好適な分散剤または懸濁化剤としては、トラガント、アカシア、アルギネート、デキストラン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニル－ピロリドン、およびゼラチンなどの合成および天然ガムが挙げられる。

非経口投与の場合、組成物は、他の物質、例えば、ｐＨを調整するための緩衝剤、または溶液を血液と等張性にするのに十分な塩もしくは単糖類を含有していてもよい無菌水溶液の形態で最も良好に使用できる。頬側または舌下投与の場合、組成物は、従来法で製剤化できる錠剤またはロゼンジ剤の形態で投与することができる。

本発明に係る化合物の使用は、体内のすべての循環性および他の可溶性ＣＲＰ分子をリガンド薬物で飽和することを目的とする。必要とされる薬物の１日用量は、好適には、複合体を形成することになる天然５量体ＣＲＰの１モル当たり少なくとも約１モルの薬物、より好適には少なくとも約５モルの薬物を提供する用量である。

医薬組成物の正確な形態およびその投薬量は、体重、投与経路、および疾患状態を含む、治療しようとする対象にも依存する可能性がある。これらは、当業者が対処する日常的な事項として決定されるだろう。

更なる一態様にて、本発明は、請求項１から６のいずれか１項に規定の式（Ｉ）の化合物を調製するための方法であって、式（ＩＩＩ）：
（式中、Ｒ^１は、カルボキシル保護基である。）
の化合物を、式（ＩＶ－Ａ）または式（ＩＶ－Ｂ）：
の化合物と反応させて、式（Ｖ）：
の化合物を形成し、続いてＲ^１保護基を切断して、式（Ｉ）の化合物を形成するステップを含む、方法を提供する。

保護基Ｒ^１は、アミノ酸からのペプチド合成中にカルボキシル基を保護するために従来から使用されている保護基のいずれであってもよい。例えば、保護基Ｒ^１は、Ｃ１～Ｃ５アルキル、トリチル、２，４－ジメトキシベンジル（ＤＭＢ）、ベンジル、または９－フルオレニルメチルから選択できる。一実施形態では、保護基Ｒ^１は、Ｃ１～Ｃ５アルキル、特にメチル基である。

式（ＩＩＩ）の化合物を式（ＩＶ－Ａ）の化合物と反応させて、式（Ｖ）の化合物を形成するステップは、ペプチド合成においてアミド結合を形成するために従来から使用されている方法のいずれかにより実施できる。例えば、式（ＩＶ）の化合物の－ＣＯＯＨ基は、それらを強酸のエステル、または式－ＣＯＸの基（式中、Ｘは、クロロ、アルキルスルホネート、またはトルエンスルホネート等の、求核置換により容易に置き換えられる脱離基である。）の基に変換し、続いて式（ＩＩＩ）の化合物の第一級アミン基と求核反応させることにより活性化できる。他の実施形態では、カルボン酸の活性化は、有機溶媒および塩基の存在下で、ホスフェート含有試薬、トリアジン系試薬、カルボジイミド系試薬、またはヒドロキシベンゾトリアゾール系試薬のいずれかを用いて実施できる。好ましい条件は、室温でのＭｅＣＮ中のジイソプロピルエチルアミンと共にＴＢＴＵ（２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルアミニウムテトラフルオロボレートを含む。

代替的に、式（Ｉ）の化合物は、化合物（ＩＶ－Ｂ）のビス酸クロリドを使用して調製できる。典型的な反応条件は、クロロホルム中で１６時間３０℃に加温することを含む。

式（ＩＩＩ）および式（ＩＶ－Ａ／Ｂ）の化合物は、市販されているか、本明細書に記載の方法に従って調製されるか、または文献に従って調製されるかのいずれかである。

最後に、式（Ｖ）の化合物のカルボキシレート基は、当技術分野において周知の方法のいずれかにより脱保護される。例えば、基－ＣＯＯＲ^１が、メチルエステルなどのアルキルエステルである場合、このエステルを、１０％ＫＯＨ（水溶液）などの穏やかな塩基性条件下で１時間５０℃にて加水分解し、続いてギ酸によりｐＨ４～５で中和できる。

一実施形態では、本方法は、式（ＶＩＩ）の化合物を式（ＶＩＩＩ）の化合物と反応させるステップを含む方法により、式（ＩＩＩ）の化合物を調製することをさらに含む
（式中、Ｌは、脱離基、すなわち求核置換により容易に置き換えられる弱塩基性基を表す。）。好適な脱離基Ｌとしては、ブロモ、ヨード、アルキルスルホネート、およびｐ－ブロモフェニルスルホネート等のフェニルスルホネート基が挙げられる。Ｒ^１は、上記で規定したカルボキシル保護基である。反応は、好適には、非プロトン性溶媒中にて強力な非求核性塩基の存在下で実施される。例えば、強塩基は、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド、ＫＨＭＤＳであってもよく、溶媒は、トルエン／ＴＨＦであってもよい。反応は、求核置換により進行し、式（ＩＸ－Ａ）および式（ＩＸ－Ｂ）：
の立体異性体の混合物を形成する。

次いで、式（ＩＩＩ）の化合物の合成は、上記立体異性体の混合物を加水分解および分離して、式（ＩＩＩ）の化合物または光学活性有機酸化合物とのその塩を単離することを含む。加水分解は、穏やかな酸性条件下で、例えば（１Ｓ）－１０－カンファースルホン酸の存在下で、Ｈ_２Ｏにより実施できる。式（ＩＩＩ）．２ＣＳＡの塩は、混合物から優先的に沈殿する。鏡像異性体を分離するために一般的に使用される他のキラル有機酸は、例えば、（２Ｓ，３Ｓ）－酒石酸、（Ｒ）－リンゴ酸、または（－）－（Ｒ）－マンデル酸が好適であり得る。

更なる一態様にて、本発明は、式（ＩＩＩ）：
（式中、Ｒ^１は、上記で規定したカルボキシル保護基である。）
の化合物、または式（ＩＩＩ）の化合物と上記で規定した光学活性有機酸化合物との塩を提供する。

一実施形態では、該態様による化合物は、式（ＩＩＩ）の化合物と、（１Ｓ）－（＋）－１０－カンファースルホン酸（ＣＳＡ）との塩、特に．２ＣＳＡ塩である。

以下、下記実施例に記載の特定の実施形態を参照することによって本発明を説明する。化合物は、従来のＩＵＰＡＣ命名法を使用して命名されているか、または化学物質供給業者により命名されている。なお、本発明は、これらに限定されない。

以下の合成手順は、使用した方法を説明するために提供されている。所与の調製またはステップで使用した前駆体は、示されている説明におけるステップに従って合成された個々のバッチには必ずしも由来しない場合がある。

［分析方法］
実施例および調製物で分析データが引用されている場合、別様に指定されていない限り、以下の分析方法の１つを使用した。
（ＮＭＲ）：４００ＭＨｚＢｒｕｋｅｒＡｖａｎｃｅＩＩＩおよびＢｒｕｋｅｒＡｖａｎｃｅＮｅｏ。

（ＬＣ－ＭＳまたはＨＰＬＣ法）：
方法１：
ＭＳ装置タイプ：ＳＨＩＭＡＤＺＵＬＣ－ＭＳ－２０２０、カラム：ＫｉｎｅｔｅｘＥＶＯＣ１８３０×２．１ｍｍ、５μｍ、移動相Ａ：水中０．０３７５％ＴＦＡ（容積／容積）、Ｂ：アセトニトリル中０．０１８７５％ＴＦＡ（容積／容積）、勾配：０．０分０％Ｂ－＞０．８分６０％Ｂ－＞１．２０分６０％Ｂ－＞１．２１分０％Ｂ－＞１．５５分０％Ｂ流速：１．５ｍＬ／分、オーブン温度：５０℃；ＰＤＡ検出：２２０ｎｍおよび２５４ｎｍ。

方法２：
ＭＳ装置タイプ：Ａｇｉｌｅｎｔ１２００ＬＣ／Ｇ１９５６ＡＭＳＤ、カラム：ＫｉｎｅｔｅｘＥＶＯＣ１８２．１×３０ｍｍ、５ｕｍ、移動相Ａ：水中０．０３７５％ＴＦＡ（容積／容積）、Ｂ：アセトニトリル中０．０１８７５％ＴＦＡ（容積／容積）、勾配：０．０分９０％Ｂ－＞０．３５分９０％Ｂ流速：１．５ｍＬ／分、オーブン温度：５０℃；ＤＡＤ：１００～１０００。

方法３：
ＨＰＬＣ装置タイプ：ＳＨＩＭＡＤＺＵＬＣ－ＡＢ、カラム：ＫｉｎｅｔｅｘＣ１８ＬＣカラム４．６×５０ｍｍ、５μｍ、移動相Ａ：水中０．０３７５％ＴＦＡ（容積／容積）、Ｂ：アセトニトリル中０．０１８７５％ＴＦＡ（容積／容積）、勾配：０．０分０％Ｂ－＞４．２０分６０％Ｂ－＞５．３０分６０％Ｂ－＞５．３１分０％Ｂ－＞６．００分０％Ｂ流速：１．５ｍＬ／分、オーブン温度：５０℃；ＰＤＡ検出：ＰＤＡ（２２０ｎｍおよび２１５ｎｍおよび２５４ｎｍ）。

方法４：
ＭＳ装置タイプ：ＳＨＩＭＡＤＺＵＬＣ－ＭＳ－２０２０、カラム：ＫｉｎｅｔｅｘＥＶＯＣ１８３０×２．１ｍｍ、５μｍ、移動相Ａ：水中０．０３７５％ＴＦＡ（容積／容積）、Ｂ：アセトニトリル中０．０１８７５％ＴＦＡ（容積／容積）、勾配：０．０分０％Ｂ－＞３．０分６０％Ｂ－＞３．５０分６０％Ｂ－＞３．５１分０％Ｂ－＞４．００分０％Ｂ流速：０．８ｍＬ／分、オーブン温度：５０℃；ＰＤＡ検出：２２０ｎｍおよび２５４ｎｍ。

方法５：
ＭＳ装置タイプ：ＳＨＩＭＡＤＺＵＬＣ－ＭＳ－２０２０、カラム：ＫｉｎｅｔｅｘＥＶＯＣ１８２．１×３０ｍｍ、５μｍ、移動相Ａ：水中０．０２５％ＮＨ３・Ｈ２Ｏ（容積／容積）、Ｂ：アセトニトリル、勾配：０．０分０％Ｂ－＞０．８分６０％Ｂ－＞１．２０分６０％Ｂ－＞１．２１分０％Ｂ－＞１．５５分０％Ｂ流速：１．５ｍＬ／分、オーブン温度：４０℃；ＰＤＡ検出：２２０ｎｍおよび２５４ｎｍ。

方法６：
ＨＰＬＣ装置タイプ：ＳＨＩＭＡＤＺＵＬＣ－２０ＡＢ、カラム：ＫｉｎｅｔｅｘＣ１８ＬＣカラム４．６×５０ｍｍ、５μｍ、移動相Ａ：水中０．０３７５％ＴＦＡ（容積／容積）、Ｂ：アセトニトリル中０．０１８７５％ＴＦＡ（容積／容積）、勾配：０．０分０％Ｂ－＞４．２０分３０％Ｂ－＞５．３０分３０％Ｂ－＞５．３１分０％Ｂ－＞６．００分０％Ｂ流速：１．５ｍＬ／分、オーブン温度：５０℃；ＰＤＡ検出：ＰＤＡ（２２０ｎｍおよび２１５ｎｍおよび２５４ｎｍ）。

方法７：
ＭＳ装置タイプ：ＳＨＩＭＡＤＺＵＬＣ－２０ＡＢ、カラム：ＫｉｎｅｔｅｘＣ１８ＬＣカラム４．６×５０ｍｍ、５μｍ、移動相Ａ：水中０．０３７５％ＴＦＡ（容積／容積）、Ｂ：アセトニトリル中０．０１８７５％ＴＦＡ（容積／容積）、勾配：０．０分０％Ｂ－＞２．４０分３０％Ｂ－＞３．７０分３０％Ｂ－＞３．７１分０％Ｂ－＞４．００分０％Ｂ流速：１ｍＬ／分、オーブン温度：５０℃；ＰＤＡ検出：２２０ｎｍおよび２５４ｎｍ。

方法８：
ＭＳ装置タイプ：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＬＣ＆ＡｇｉｌｅｎｔＧ１９５６Ａ、カラム：ＷａｔｅｒｓＸＳｅｌｅｃｔＨＳＳＴ３３．５μｍ４．６×５０ｍｍ、移動相Ａ：水中０．０３７５％ＴＦＡ（容積／容積）、Ｂ：アセトニトリル中０．０１８７５％ＴＦＡ（容積／容積）、勾配：０．０分０％Ｂ－＞５．００分３０％Ｂ－＞６．００分１００％Ｂ－＞６．５０分１００％Ｂ－＞６．５１分０％Ｂ－＞７．００分０％Ｂ流速：１ｍＬ／分、オーブン温度：４０℃；ＰＤＡ検出：２２０ｎｍおよび２５４ｎｍ。

方法９：
ＭＳ装置タイプ：ＳＨＩＭＡＤＺＵＬＣＭＳ－２０２０、カラム：ＫｉｎｅｔｅｘＥＶＯＣ１８２．１×３０ｍｍ、５μｍ、移動相Ａ：水中０．０２５％ＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ（容積／容積）、Ｂ：アセトニトリル、勾配：０．０分５％Ｂ－＞０．８分９５％Ｂ－＞１．２分９５％Ｂ－＞１．２１分５％Ｂ－＞１．５５分５％Ｂ、流速：１．５ｍＬ／分、オーブン温度：４０℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍおよび２５４ｎｍ。

方法１０：
ＭＳ装置タイプ：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＬＣ＆ＡｇｉｌｅｎｔＧ１９５６Ａ、カラム：ＫＷａｔｅｒｓＸＳｅｌｅｃｔＨＳＳＴ３３．５μｍ４．６×５０ｍｍ、移動相Ａ：水中０．０３７５％ＴＦＡ（容積／容積）、Ｂ：アセトニトリル中０．０１８７５％ＴＦＡ（容積／容積）、勾配：０．０分０％Ｂ－＞５分３０％Ｂ－＞６分１００％Ｂ－＞６．５分１００％Ｂ－＞６．５１分０％Ｂ流速：０．６ｍＬ／分、オーブン温度：４０℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍおよび２５４ｎｍ。

ＨＰＬＣ法１：
ＭＳ装置タイプ：ＳＨＩＭＡＤＺＵＬＣ－２０ＡＢ、カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）Ｃ１８３．５μｍ４．６×１５０ｍｍ、移動相Ａ：水中０．０３７５％ＴＦＡ（容積／容積）、Ｂ：アセトニトリル中０．０１８７５％ＴＦＡ（容積／容積）、勾配：０．０分０％Ｂ－＞１０．０分６０％Ｂ－＞１５．０分６０％Ｂ－＞１５．０１分０％Ｂ－＞１５．０２分０％Ｂ－＞２０．０分０％Ｂ流速：１．０ｍＬ／分、オーブン温度：４０℃；ＵＶ検出：２２０ｎｍおよび２１５ｎｍおよび２５４ｎｍ。

［略語］
下記略語が使用されている場合、以下の意味が適用される。
ＡＣＮまたはＭｅＣＮは、アセトニトリルである。
ＣＤＣｌ_３は、重水素化クロロホルムである。
ＣＳＡは、カンファー－１０－スルホン酸である。
Ｄ_２Ｏは、重水である。
ＤＣＭは、ジクロロメタンである。
ＤＩＰＥＡまたはＤＩＥＡは、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンである。
ＤＭＡＰは、４－（ジメチルアミノ）ピリジンである。
ＤＭＳＯは、ジメチルスルホキシドである。
ＥＡは、酢酸エチルである。
ＥｔＯＨは、エタノールである。
ＦＡは、ギ酸である。
Ｈ_２Ｏは、水である。
ＨＣｌは、塩酸である。
ＨＰＬＣは、高速液体クロマトグラフィである。
ＩＰＡは、イソプロピルアルコールである。
ＫＨＭＤＳは、カリウムビス（トリメチルシリル）アミドである。
ＫＯＨは、水酸化カリウムである。
ＬＣＭＳは、液体クロマトグラフィ質量分析法である。
ＭｅＯＨは、メタノールである。
ＭＴＢＥは、メチルｔｅｒｔブチルエーテルである。
Ｎ_２は、窒素である。
Ｎａ_２ＳＯ_４は、硫酸ナトリウムである。
ＮＨ_３は、アンモニアである。
ＮＨ_４ＨＣＯ_３は、重炭酸アンモニウムである。
ＮＭＲは、核磁気共鳴法である。
ＰＤＡは、フォトダイオードアレイ検出器である。
ＳＦＣは、超臨界流体クロマトグラフィである。
ＴＢＴＵは、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルアミニウムテトラフルオロボレートである。
ＴＥＡは、トリエチルアミンである。
ＴＦＡは、トリフルオロ酢酸である
ＴＨＦは、テトラヒドロフランである。
ＴＬＣは、薄層クロマトグラフィである。

［調製］
（化合物２：［（３Ｓ）－キヌクリジン－３－イル］４－ブロモベンゼンスルホネートの調製）

ＤＣＭ（４０．００ｍＬ）中の（３Ｓ）－キヌクリジン－３－オール（２．００ｇ、１５．７３ｍｍｏｌ、１．００当量）、ＤＭＡＰ（１９．２１ｍｇ、１５７．３０μｍｏｌ、０．０１当量）、およびＴＥＡ（４．７８ｇ、４７．１９ｍｍｏｌ、６．５４ｍＬ、３．００当量）の溶液に、４－ブロモベンゼンスルホニルクロリド（６．０３ｇ、２３．６０ｍｍｏｌ、１．５０当量）を０℃で添加した。混合物を２０℃で１６時間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３（１００ｍＬ）で洗浄した。飽和ＮａＨＣＯ_３層をＥＡ（１００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、減圧下で濃縮して、粗生成物を黄色油状物として得た。黄色油状物を、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３０：１で溶出するシリカゲルでのクロマトグラフィで精製して、［（３Ｓ）－キヌクリジン－３－イル］４－ブロモベンゼンスルホネート（３．２０ｇ、８．３２ｍｍｏｌ、収率５２．８８％、純度９０％）を黄色固体として得た。それを^１ＨＮＭＲで分析した。
¹H NMR: (400MHz, CDCl₃) δ = 7.81 - 7.57 (m, 4H), 4.65 - 4.49 (m, 1H), 3.04 (dd, J=8.4, 15.2 Hz, 1H), 2.89 -2.48 (m, 5H), 1.93 ( d, J=2.8 Hz, 1H), 1.80 - 1.71 (m, 1H), 1.61 (tdd, J=4.6, 9.5, 13.9 Hz, 1H), 1.47 - 1.22 (m, 2H).

（ジアステレオマー４Ａおよび４Ｂの調製）
＜異性体４Ａ：（Ｒ）－メチル２－（（ジフェニルメチレン）アミノ）－２－（（３Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）アセテート＞
＜異性体４Ｂ：（Ｓ）－メチル２－（（ジフェニルメチレン）アミノ）－２－（（３Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）アセテート＞

トルエン（５７８ｍＬ）およびＴＨＦ（１８６ｍＬ）中の（３Ｓ）－キヌクリジン－３－イル４－ブロモベンゼンスルホネート（６３ｇ、１８２ｍｍｏｌ）およびメチル２－［（ジフェニルメチリデン）アミノ］アセテート（９２．２ｇ、３６４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＨＭＤＳ（トルエン中０．７０Ｍ、５２０ｍＬ）をＮ_２下で添加し、反応物を６５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を冷却し、水（１．００Ｌ）に注ぎ、酢酸エチル（１５００ｍＬ）を添加した。相を分離し、水性相を酢酸エチル（３×１．００Ｌ）で抽出した。有機相を飽和ブライン（２×５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。粗製の混合物（１１３ｇ）を暗褐色油状物として得、次のステップで直接使用した。
粗製の物質の選択されたＮＭＲデータは、ｄｒ（Ｒ，Ｒ）（Ｒ，Ｓ）＝２．３：１を示した。
¹H NMR: 400 MHz, DMSO-d₆: crude selected δ ppm 4.08 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.95 (d, J = 10.2 Hz, 1H).

（５．２（＋）－ＣＳＡ塩（Ｒ，Ｒ）の調製）
＜（Ｒ）－メチル２－アミノ－２－（（３Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）アセテートビス（（（１Ｓ，４Ｒ）－７，７－ジメチル－２－オキソビシクロ［２．２．１］ヘプタン－１－イル）メタンスルホネート）＞

ＩＰＡ（７００ｍＬ）中の４Ａおよび４Ｂの粗製の反応混合物（１０５ｇ、１７７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｈ_２Ｏ（３．２１ｇ、１７８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を４５℃に加温した。ＩＰＡ（３００ｍＬ）中の（＋）ＣＳＡ（１０３ｇ、４４２ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、反応物を４５℃で１２時間撹拌し続けた。反応混合物を２５℃に冷却し、濾過して白色固体を得た。固体をＩＰＡ（１００ｍＬ）およびＭＴＢＥ（１００ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥して、表題化合物を白色固体（６２．０ｇ、９３．５ｍｍｏｌ、収率５２．９％）として得た。
¹H NMR: 400 MHz, DMSO-d₆: δ ppm 9.62 - 9.58 (br, s, 1H), 8.51 (br, s, 3H), 4.25 - 4.22 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.25 - 3.23 (m, 5H), 2.90 - 2.86 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 2.66 (m, 2H), 2.41 - 2.37 (d, J = 14.8 Hz, 3H), 1.95 - 1.93 (m, 2H), 1.85 - 1.78 (m, 11H), 1.30 - 1.27 (m, 4H), 1.04 (s, 6H), 0.74 (s, 6H).

（化合物５．２（＋）－ＣＳＡ塩（Ｒ，Ｒ）の立体化学の確認）
２０ｍｇの化合物４Ａを１．３ｍＬジクロロメタン／シクロヘキサン／メタノール（５：５：３）に溶解した。溶液を半密閉の４ｍＬバイアルで維持し、室温でゆっくりと蒸発させた。２日目に結晶が観察され、Ｘ線結晶構造解析用に結晶を選択した。

結晶は、無色針状であり、寸法は、０．１０×０．０２×０．０２ｍｍ３だった。結晶構造の対称性は、ＨｙＰｉｘ－６０００ＨＥ面積検出器を備えたＲｉｇａｋｕＯｘｆｏｒｄＤｉｆｆｒａｃｔｉｏｎＸｔａＬＡＢＳｙｎｅｒｇｙ４円回折計を、ａ＝７．０２３６（２）Å、ｂ＝２６．８２０４（６）Å、ｃ＝１８．００６８（５）Å、α＝９０°、β＝９９．１１４（３）°、γ＝９０°、Ｖ＝３３４９．２２（１６）Å^３、Ｚ＝４、Ｄｃ＝１．３１５ｇ／ｃｍ^３、Ｆ（０００）＝１４２４．０、μ（ＣｕＫα）＝１．９１８ｍｍ^－１、およびＴ＝２９３（２）Ｋのパラメーターで使用したところ、単斜晶空間群Ｐ２_１に帰属した。極低温システム：ＯｘｆｏｒｄＣｒｙｏｓｔｒｅａｍ８００Ｃｕ：λ＝１．５４１８４Å、５０Ｗ、多層ミラーを有するマイクロフォーカス光源（μ－ＣＭＦ）。結晶からＣＣＤ検出器までの距離：ｄ＝３５ｍｍ管電圧：５０ｋＶ管電流：１ｍＡ。
５．２（＋）－ＣＳＡ塩の絶対配置は（Ｒ，Ｒ）に帰属した。

代替的に、化合物４Ａ（Ｒ，Ｒ）は、下記方法に従って単離できた。

４Ａおよび４Ｂの粗製の反応混合物を、ＥＡ：ＭｅＯＨ（４０：１～１０：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して、ジアステレオマーの混合物を得た。ジアステレオマーをキラル分取ＳＦＣ（カラム：ＤＡＩＣＥＬＣＨＩＲＡＬＰＡＫＩＧ（２５０ｍｍ×５０ｍｍ，１０μｍ）；移動相：［０．１％ＮＨ_３・Ｈ_２ＯＥｔＯＨ］；Ｂ％：４５％；３２０分）で分離して、褐色油状物として化合物４Ａ（６．００ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）および褐色油状物として化合物４Ｂ（ＲＳ）（９．００ｇ、２４．８ｍｍｏｌ）の２つのジアステレオマーを得た。
＜ジアステレオマー１（ＲＲ）：（Ｒ）－メチル２－（（ジフェニルメチレン）アミノ）－２－（（３Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）アセテート＞
¹H NMR: 400 MHz (DMSO-d₆):δ ppm: 7.64-7.34 (m, 8H), 7.25-7.09 (m, 2H), 4.09 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.60 (s, 3H), 2.92-2.77 (m, 1H), 2.73-2.60 (m, 2H), 2.55 (br d, J = 6.4 Hz, 1H), 2.43-2.21 (m, 3H), 1.66-1.33 (m, 3H), 1.19 (br d, J = 5.2 Hz, 2H).
SFC: Rt = 1.633 min, 100%
＜ジアステレオマー２（ＲＳ）：（Ｓ）－メチル２－（（ジフェニルメチレン）アミノ）－２－（（３Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）アセテート＞
¹H NMR 400 MHz (DMSO-d₆):δ ppm: 7.62-7.35 (m, 8H), 7.18 (dd, J = 1.6, 7.4 Hz, 2H), 3.96 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H), 2.95-2.80 (m, 1H), 2.65 (br t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.48 (br s, 1H), 2.4 -2.23 (m, 2H), 2.17 (br dd, J = 7.2, 13.6 Hz, 1H), 1.65-1.40 (m, 3H), 1.13-1.05 (m, 1H), 0.96-0.78 (m, 1H).
SFC: Rt = 1.854 min, 100%

代替的に、化合物４Ａおよび４Ｂは、下記の分取ＴＬＣを使用して分離できた。
４Ａおよび４Ｂの混合物を、分取ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ（ＮＨ_３、７Ｍ）＝１０：１）で精製して、２０２．２５ｍｇの４Ａ（純度９１．７％、９８．６％ｅｅ．）を黄色固体として、１１４．５０ｍｇの４Ｂ（純度９７．７％、９４．３％ｅｅ．）を黄色油状物として得た。
LCMS MS m/z 363.2 [M+H]⁺
４Ａ: ¹H NMR: (400MHz, CDCl₃): δ ppm 7.66 - 7.58 (m, 2H), 7.52 - 7.45 (m, 3H), 7.43 - 7.31 (m, 3H), 7.19 (dd, J=1.6, 7.4Hz, 2H), 4.22 (d, J=8.3 Hz, 1H), 3.73 - 3.68 (m, 3H), 3.17 - 3.03 (m, 1H), 2.92 - 2.82 (m, 2H), 2.64 - 2.51 (m, 3H), 1.77 - 1.55(m, 3H), 1.52 - 1.40 (m, 1H), 1.37 - 1.25 (m, 1H).
４Ｂ: ¹H NMR: (400MHz, CDCl₃): δ ppm 7.65 - 7.56 (m, 2H), 7.54 - 7.44 (m, 3H), 7.43 - 7.29 (m, 3H), 7.20 (dd, J=2.9, 6.4Hz, 2H), 4.08 (d, J=10.0 Hz, 1H), 3.76 - 3.72 (m, 3H), 3.24 - 3.09 (m, 1H), 3.00 - 2.80 (m, 2H), 2.61 - 2.38 (m, 3H), 1.81 - 1.58(m, 3H), 1.28 - 1.15 (m, 1H), 1.12 - 1.00 (m, 1H)

代替的に、化合物５のＨＣｌ塩を、以下の手順に従って得た。
ＴＨＦ（６ｍＬ）中の、上記で調製した４Ａ立体異性体（３９０．００ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ（１２Ｍ（水溶液）、７８０．０９μＬ、純度３７％）を０℃で添加した。混合物を０℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮してＴＨＦを除去した。残留物に、メチル第三級ブチルエーテル（２０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）を添加した。水性層を減圧下で濃縮して、（Ｒ）－メチル２－アミノ－２－（（３Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）アセテート（２５０．００ｍｇ、粗製、２ＨＣｌ塩）を黄色固体として得た。

（化合物５ＣＳＡ塩からの化合物５遊離親の調製）
＜（Ｒ）－メチル２－アミノ－２－（（３Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）アセテート＞
ＭｅＯＨ（９００ｍＬ）中のＡｍｂｅｒｓｅｐ９００（４７０ｇ）の懸濁物に、メチル（２Ｒ）－２－アミノ－２－［（３Ｒ）－１－アザビシクロ［２．２．２］オクタン－３－イル］アセテートビス（＋）カンファースルホン酸塩（調製物１、４７．０ｇ、７０．９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を、Ｎ_２下で１時間２０℃にて撹拌した。反応混合物を濾過し、真空中で濃縮して、表題化合物（１１．０ｇ、５５．５ｍｍｏｌ、収率７８．３％）を黄色油状物として得た。
¹H NMR: 400 MHz (DMSO-d₆):δ ppm: 7.64-7.34 (m, 8H), 7.25-7.09 (m, 2H), 4.09 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.60 (s, 3H), 2.92-2.77 (m, 1H), 2.73-2.60 (m, 2H), 2.55 (br d, J = 6.4 Hz, 1H), 2.43-2.21 (m, 3H), 1.66-1.33 (m, 3H), 1.19 (br d, J = 5.2 Hz, 2H).

化合物５の塩酸塩を、上記のＡｍｂｅｒｓｅｐ９００法を用いて遊離親に変換することもできた。

［実施例の合成］
［実施例１］
（ＡＰＬ－２１９１Ｐ２Ｂ＿Ｂ）
＜（Ｒ，２Ｒ，２’Ｒ）－２，２’－（テレフタロイルビス（アザンジイル））ビス（２－（（Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）酢酸）＞

ステップ１：
ＭｅＣＮ（１．３０Ｌ）中のメチル（２Ｒ）－２－アミノ－２－［（３Ｒ）－１－アザビシクロ［２．２．２］オクタン－３－イル］アセテート（調製物２、３３０ｇ、３３３ｍｍｏｌ、ＭｅＣＮ中２０％溶液）およびベンゼン－１，４－ジカルボン酸（２０．５０ｇ，１２３ｍｍｏｌ）に、Ｎ_２下でＴＢＴＵ（８８．２ｇ、２７５ｍｍｏｌ）を、続いてＤＩＥＡ（６５．３ｇ、５０５ｍｍｏｌ、８８．０ｍＬ）を添加した。反応物を２５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮して粗製の黄色油状物を得、それを次のステップで直接使用した。

ステップ２：
ＩＰＡ（１．０７Ｌ）中の、ステップ１の粗製の反応混合物（６４．９ｇ、１２３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＯＨ（６９．２ｇ、１２３ｍｍｏｌ、１．０７Ｌ、１０％水溶液）を添加し、反応物をＮ_２下で１時間５０℃にて撹拌した。反応混合物を濾過し、母液を酢酸エチル（２×３００ｍＬ）で抽出した。水性層をギ酸でｐＨ＝４～５に調整し、１２時間撹拌した。得られた白色固体を濾過し、水（７４０ｍＬ）中で２時間９０℃にて撹拌してから、２５℃に冷却した。固体を濾過し、水（２×３００ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥して、表題化合物を白色固体（３１．４ｇ、４８．６ｍｍｏｌ、収率３９．５％）として得た。
¹H NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 7.84 (s, 4H), 4.53 (br d, J = 10.8 Hz, 2H), 3.54 - 3.36 (m, 2H), 3.35 - 3.26 (m, 8H), 3.07 (br dd, J = 7.6, 12.2 Hz, 2H), 2.53 - 2.51 (m, 2H), 2.19 - 1.98 (m, 4H), 1.94 - 1.91 (m, 6H).
LCMS（方法１）: Rt = 2.275 min, MS m/z [M+H]⁺ 499.4, theoretical mass: 498.6
HPLC（方法１）: Rt = 3.908 min, 99.7%

元素分析：Ｃ４５．８９％；Ｈ７．９６％；Ｎ８．１８％、理論値＋１０Ｈ_２Ｏ：Ｃ４６．０１％；Ｈ８．０２％；Ｎ８．２５％。１５ｍｇの化合物４Ａを１．２ｍｌのエタノール／Ｈ_２Ｏ（１：１）に６０℃で溶解した。溶液を０．４５μｍ微孔性フィルターで濾過し、密閉した４ｍｌバイアルに室温で維持した。溶液中に針状結晶が観察され、Ｘ線結晶構造解析用に結晶を選択した。

結晶は、無色針状であり、寸法は、０．３０×０．０４×０．０４ｍｍ３であった。結晶構造の対称性は、ＨｙＰｉｘ－６０００ＨＥ面積検出器を備えたＲｉｇａｋｕＯｘｆｏｒｄＤｉｆｆｒａｃｔｉｏｎＸｔａＬＡＢＳｙｎｅｒｇｙ４円回折計を、ａ＝１５．９９４８（２）Å、ｂ＝２２．５６７３（３）Å、ｃ＝９．５０１３（２）Å、α＝９０°、β＝９０°、γ＝９０°、Ｖ＝３４２９．５８（１０）Å３、Ｚ＝４、Ｄｃ＝１．２８０ｇ／ｃｍ３、Ｆ（０００）＝１４２４．０、μ（ＣｕＫα）＝０．８８９ｍｍ^－１、およびＴ＝１１０（１４）Ｋのパラメーターで使用したところ、斜方晶空間群Ｃ２２２_１に帰属した。極低温システム：ＯｘｆｏｒｄＣｒｙｏｓｔｒｅａｍ８００Ｃｕ：λ＝１．５４１８４Å、５０Ｗ、多層ミラーを有するマイクロフォーカス光源（μ－ＣＭＦ）。結晶からＣＣＤ検出器までの距離：ｄ＝３５ｍｍ管電圧：５０ｋＶ管電流：１ｍＡ。
実施例１の絶対配置は、（Ｒ，Ｒ，Ｒ，Ｒ）に帰属した。

（実施例１ＨＣｌ塩の調製）
Ｈ_２Ｏ（７６０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（７６０ｍＬ）中のＡＰＬ－２１９１（３０．９ｇ、４５．５ｍｍｏｌ、１当量、１０Ｈ_２Ｏ）の懸濁物に、ＨＣｌ（１２Ｍ、７．６１ｍＬ、２．０１当量）を２５℃で加え、１２時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮した。ＡＰＬ－２１９１・２ＨＣｌ（２８．２ｇ、３９．０ｍｍｏｌ、収率８５．７％、１０Ｈ_２Ｏ）を結晶性オフホワイト固体として得た。
LCMS（方法１）: Rt = 2.300 min, MS m/z 250.1 [M+H/2]⁺
HPLC（方法２）: Rt = 3.889 min, 99.3%
¹H NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 7.85 (s, 4H), 4.67 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.63 - 3.50 (m, 2H), 3.41 - 3.22 (m, 8H), 3.10 (ddd, J = 1.8, 6.8, 13.2 Hz, 2H), 2.73 - 2.58 (m, 2H), 2.30 - 2.16 (m, 4H), 2.10 - 1.88 (m, 6H).

また、実施例１は、下記の手順に従って調製できた。
ステップ１：
ＣＨＣｌ３（８．００ｍＬ）中の（Ｒ）－メチル２－アミノ－２－（（３Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）アセテート（１００．００ｍｇ、５０４．３９μｍｏｌ）の溶液に、ベンゼン－１，４－ジカルボニルクロリド（５１．２０ｍｇ、２５２．１９μｍｏｌ、０．５０当量）を３０℃で添加した。混合物を３０℃で１６時間撹拌した。混合物を濃縮して粗生成物を白色固形物（１８０．００ｍｇ、粗製、ＨＣｌ塩）として得た。
LCMS: MS m/z 527.5 [M+N]⁺

ステップ２：
ＴＨＦ（２．００ｍＬ）中のビスメチルエステル（１８０．００ｍｇ、３４１．８０μｍｏｌ）の溶液に、水（２ｍＬ）中のＬｉＯＨ（４８．００ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮してＴＨＦを除去した。混合物に１ＭＨＣｌ（水溶液）を添加してｐＨ＝３にした。混合物を減圧下で濃縮した。残留物をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ）で精製して、実施例１（２４．２０ｍｇ、４８．０５μｍｏｌ、収率１４．０６％、純度９９％）を白色固形物として得た。
¹H NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm 7.77 (s, 4H), 4.62 (d, J=11.2 Hz, 2H), 3.50 (br t, J=10.9 Hz, 2H), 3.41 - 3.14(m, 8H), 3.11 - 2.96 (m, 2H), 2.65 - 2.57 (m, 2H), 2.32 - 2.07 (m, 4H), 2.05 - 1.79 (m, 6H).
LCMS: Rt = 5.91, MS m/z 501.1 [M+H]⁺, theoretical mass: 500.2

下記の実施例を、各実施例に記載の適切なジカルボン酸および化合物５（Ｒ，Ｒ）を使用して、実施例１に記載のものと同じ手順を使用して調製した（下記の基本方法を参照されたい。）。実施例は、ステップ１およびステップ２に個々に記載されているように精製した。

［実施例２～１１の基本方法］：

ステップ１：
ＡＣＮ（１０Ｖ）中の化合物５（２．７０当量）の溶液に、ＴＢＴＵ（２．２３当量）および適切なカルボン酸（１当量）を窒素下で２０℃にて添加した。ＤＩＥＡ（４．１１当量）を混合物に添加し、混合物をＮ_２下で６時間２０℃にて撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、各実施例について記載されているように精製した。

ステップ２：
ＩＰＡ（２０．０Ｖ）中のビス－メチルエステル（１．００当量）の溶液に、ＫＯＨ水溶液（１０．０％、１０．０当量）を２０℃で添加した。混合物を５０℃で１時間撹拌し、室温に冷却し、各実施例について記載されているように精製した。

［実施例２］
（ＡＰＬ－６９６８）
＜（Ｒ，２Ｒ，２’Ｒ）－２，２’－（（ピリジン－２，５－ジカルボニル）ビス（アザンジイル））ビス（２－（（Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）酢酸）＞

実施例２を、ピリジン－２，５－ジカルボン酸を使用して基本方法に従って調製した。
ステップ１：
残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＧｅｍｉｎｉ－ＮＸＣ１８７５×３０ｍｍ、３μｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～２０％、７分）で精製して、ビスメチルエステル（３３０ｍｇ、５２４μｍｏｌ、収率４３．８％、純度９１．２％、ＦＡ）を白色固体として得た。
¹H NMR 400 MHz (CDCl₃):δ ppm: 8.93 (br s, 1H), 8.82 - 8.60 (m, 2H), 8.50 - 8.40 (m, 2H), 8.26 - 8.24 (m, 1H), 8.02 - 8.01 (m, 1H), 4.92 - 4.84 (m, 1H), 4.82 - 4.73 (m, 1H), 3.80 (d, J = 14.0 Hz, 6H), 3.28 - 3.12 (m, 7H), 2.31 - 2.12 (m, 12H), 1.99 - 1.77 (m, 10H).
LCMS（方法１）Rt = 0.685 min, MS m/z [M+H]⁺ 528.2

ステップ２：
残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＷａｔｅｒｓＡｔｌａｎｔｉｓＴ３１５０×３０ｍｍ、５μｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～２０％、１０分）で精製して、実施例２（７４．０ｍｇ、１３２μｍｏｌ、純度９７．４％、ＦＡ）を白色固体として得た。
MS（方法８）: MS m/z 499.9 [M+H]⁺, theoretical mass: 499.2
HPLC（方法１）: Rt = 2.31 min
¹H NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 8.97 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.33 - 8.31 (m, 1H), 8.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.56 (dd, J = 8.4, 10.4 Hz, 2H), 3.60 - 3.52 (m, 2H), 3.39 - 3.24 (m, 8H), 3.13 - 3.04 (m, 2H), 2.62 - 2.51 (m, 2H), 2.28 - 2.19 (m, 4H), 2.05 - 1.89 (m, 6H).

［実施例３］
（ＡＰＬ－６９６９）
＜（Ｒ，２Ｒ，２’Ｒ）－２，２’－（（ピラジン－２，５－ジカルボニル）ビス（アザンジイル））ビス（２－（（Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）酢酸）＞

実施例３を、ピラジン－２，５－ジカルボン酸を使用して基本方法に従って調製した。
ステップ１：
残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＷａｔｅｒｓＸｂｒｉｄｇｅ１５０×２５ｍｍ、５μｍ；移動相：［水（１０ｍＭＮＨ_４ＨＣＯ_３）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１４％～４４％、９分）で精製して、ビスメチルエステル（９０．０ｍｇ、１２４μｍｏｌ、収率１０．４％、純度７２．７％）を白色固体として得た。
LCMS（方法１）: Rt = 0.704 min, MS m/z 529.3 [M+H]⁺

ステップ２：
混合物を濾過し、ＦＡ（水溶液、水中２０％）を添加して混合物をｐＨ＝７～８に調整し、混合物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＷａｔｅｒｓＸｂｒｉｄｇｅ１５０×２５ｍｍ、５μｍ；移動相：［水（１０ｍＭＮＨ_４ＨＣＯ_３）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～１０％、９分）で精製して、実施例３（５１．０ｍｇ、９８．０μｍｏｌ、収率５７．５％、純度９６．０％）を白色固体として得た。
MS（方法２）: MS [M+H]⁺ 501.1, theoretical mass: 500.2
HPLC（方法３）: Rt = 0.824 min
¹H NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 9.21 (s, 2H), 8.38 (br s, 4H), 4.55 (d, J = 3.60 Hz, 2H), 3.53 - 3.48 (m, 2H), 3.40 - 3.20 (m, 8H), 3.10 - 3.01 (m, 2H), 2.63 - 2.52 (m, 2H), 2.21 (br s, 4H), 2.07 - 1.85 (m, 6H).

［実施例４］
（ＡＰＬ－６９７０）
＜（Ｒ，２Ｒ，２’Ｒ）－２，２’－（（ピリダジン－３，６－ジカルボニル）ビス（アザンジイル））ビス（２－（（Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）酢酸）＞

実施例４を、ピリダジン－３，６－ジカルボン酸を使用して基本方法に従って調製した。
ステップ１：
残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＧｅｍｉｎｉ－ＮＸＣ１８７５×３０ｍｍ、３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭＮＨ_４ＨＣＯ_３）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、８分）で精製して、ビスメチルエステル（１１０ｍｇ、１４４μｍｏｌ、収率２２．０％、純度８１．１％）を白色固体として得た。
¹H NMR 400 MHz (CDCl₃):δ ppm: 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.72 (s, 1H), 7.65 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.55 - 6.50 (m, 2H), 4.96 - 4.91 (m, 2H), 3.79 (s, 6H), 3.16 - 3.05 (m, 3H), 3.02 - 2.69 (m, 11H), 2.31 (s, 3H), 2.09 - 1.87 (m, 9H), 1.79 - 1.63 (m, 5H).
LCMS（方法１）: Rt = 0.807 min, MS m/z 617.3

ステップ２：
残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＷａｔｅｒｓＡｔｌａｎｔｉｓＴ３１５０×３０ｍｍ、５μｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～２０％、１０分）で精製して、実施例４（８７．０ｍｇ、１５４μｍｏｌ、収率３２．７％、純度９７．３％、ＦＡ）を白色固体として得た。
LCMS（方法８）: Rt = 2.296 min, MS m/z 501.4 [M+H]⁺, theoretical mass: 500.3
¹H NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 8.41 (s, 2H), 8.35 (s, 0.25H), 4.62 (d, J = 10.8 Hz, 2H), 3.62 - 3.52 (m, 2H), 3.42 - 3.22 (m, 8H), 3.19 - 3.09 (m, 2H), 2.68 - 2.55 (m, 2H), 2.30 - 2.18 (m, 4H), 2.09 - 1.86 (m, 6H).

［実施例５］
（ＡＰＬ－６９７１）
＜（Ｒ）－２－（４’－（（（Ｒ）－カルボキシ（（Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）メチル）カルバモイル）－［１，１’－ビフェニル］－４－イルカルボキサミド）－２－（（Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）酢酸＞

実施例５を、［１，１’－ビフェニル］－４，４’－ジカルボン酸を使用して基本方法に従って調製した。
ステップ１：
粗製の物質を無色液体として得、次のステップに直接使用した。
LCMS（方法１）Rt = 0.789 min, MS m/z 603.4 [M+H]⁺

ステップ２：
混合物を濾過し、ＦＡ（水溶液、水中２０％）を添加し、混合物をｐＨ＝７～８に調整した。分取ＨＰＬＣ（カラム：ＷａｔｅｒｓＸｂｒｉｄｇｅ１５×２５ｍｍ、５μｍ；移動相：［水（１０ｍＭＮＨ_４ＨＣＯ_３）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～１０％、９分）で精製して、実施例５（３７．０ｍｇ、６３．７μｍｏｌ、収率１５．５％、純度９９．０％）を白色固体として得た。
LCMS（方法４）: Rt = 1.43 min, MS m/z 575.3 [M+H]⁺, theoretical mass: 574.2
¹H NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 7.89 - 7.77 (m, 8H), 4.55 (d, J = 10.8 Hz, 2H), 3.59 - 3.50 (m, 2H), 3.42 - 3.18 (m, 8H), 3.13 - 3.02 (m, 2H), 2.58 - 2.48 (m, 2H), 2.30 - 2.15 (m, 4H), 2.09 - 1.84 (m, 6H).

［実施例６］
（ＡＰＬ－６９７２）
＜（Ｒ）－２－（４’－（（（Ｒ）－カルボキシ（（Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）メチル）カルバモイル）－２’－メチル－［１，１’－ビフェニル］－４－イルカルボキサミド）－２－（（Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）酢酸＞

実施例６を、２－メチル－［１，１’－ビフェニル］－４，４’－ジカルボン酸を使用して基本方法に従って調製した。
ステップ１：
残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＧｅｍｉｎｉ－ＮＸＣ１８７５×３０ｍｍ、３μｍ；移動相：［水（１０ｍＭＮＨ_４ＨＣＯ_３）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、８分）で精製して、ビスエステル（１１０ｍｇ、１４４μｍｏｌ、収率２２．０％、純度８１．１％）を白色固体として得た。
LC-MS（方法１）: Rt = 0.807 min, MS m/z 617.3 [M+H]⁺
¹H NMR 400 MHz (CDCl₃):δ ppm: 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.72 (s, 1H), 7.65 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.55 - 6.50 (m, 2H), 4.96 - 4.91 (m, 2H), 3.79 (s, 6H), 3.16 - 3.05 (m, 3H), 3.02 - 2.69 (m, 11H), 2.31 (s, 3H), 2.09 - 1.87 (m, 9H), 1.79 - 1.63 (m, 5H).

ステップ２：
残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＷａｔｅｒｓＡｔｌａｎｔｉｓＴ３１５０×３０ｍｍ、５μｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～２０％、１０分）で精製して、実施例６（ＦＡ塩、１６ｍｇ、５．４４μｍｏｌ、収率４．１３％、純度９５．０％）を白色固体として得た。
LCMS（方法４）: Rt = 1.597 min, MS m/z 589.3 [M+H]⁺, theoretical mass: 588.3
¹H NMR 400 MHz (D₂O+DMSO):δ ppm: 8.24 (s, 1H), 7.90 - 7.80 (m, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.68 - 7.62 (m, 1H), 7.43 (br d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.34 - 7.27 (m, 1H), 3.35 - 3.32 (m, 2H), 3.26 - 3.05 (m, 9H), 2.91 - 2.83 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.15 - 2.07 (m, 4H), 1.92 - 1.68 (m, 7H).

［実施例７］
（ＡＰＬ－６９７３）
＜（Ｒ，２Ｒ，２’Ｒ）－２，２’－（（ナフタレン－２，６－ジカルボニル）ビス（アザンジイル））ビス（２－（（Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）酢酸）＞

実施例７を、ナフタレン－２，６－ジカルボン酸を使用して基本方法１に従って調製した。
ステップ１：
残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：３＿ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａＣ１８７５×３０ｍｍ、３μｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、７分）で精製し、混合物を凍結乾燥して、ビスエステル（１６０ｍｇ、２７７μｍｏｌ、収率６０．０％）を白色固体として得た。
LC-MS（方法１）: Rt = 0.770 min, MS m/z [M+H]⁺ 577.4

ステップ２：
混合物を濾過し、ＦＡ（水溶液、水中２０％）を添加し、混合物をｐＨ＝７～８に調整した。残留物を、分取ＨＰＬＣ（カラム：ＷａｔｅｒｓＸｂｒｉｄｇｅ１５０^＊２５ｍｍ^＊５ｕｍ；移動相：［水（１０ｍＭＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～１０％、９分）で精製して、実施例７（３５．０ｍｇ、６２．０μｍｏｌ、収率２２．０％、純度９６．０％）を白色固体として得た。
LCMS（方法５）: Rt = 0.282 min, MS m/z 549.1 [M+H]⁺, theoretical mass: 548.2
HPLC（方法６）: Rt = 1.624 min
¹H NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 8.23 (s, 2H), 7.95 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 7.77 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 4.59 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.64 - 3.52 (m, 2H), 3.44 - 3.23 (m, 10H), 3.15 - 3.04 (m, 2H), 2.63 - 2.52 (m, 2H), 2.31 - 2.18 (m, 5H), 2.09 - 1.86 (m, 7H).

［実施例８］
（ＡＰＬ－６９７４）
＜（Ｒ，２Ｒ，２’Ｒ）－２，２’－（（２，５－ジメチルテレフタロイル）ビス（アザンジイル））ビス（２－（（Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）酢酸）＞

実施例８を、２，５－ジメチルベンゼン－１，４－ジカルボン酸を使用して基本方法に従って調製した。
ステップ１：
粗生成物をＡＣＮ（５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（３ｍＬ）で１０分間２０℃にて粉砕し、濾過して、ビスエステル（１１４ｍｇ、１８５μｍｏｌ、収率１７．９％、純度９０．１％）を白色固体として得た。
LCMS（方法１）: Rt = 0.771 min, MS m/z 555.3 [M+H]⁺,
¹H NMR 400 MHz (DMSO):δ ppm: 8.75 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.18 (br s, 1H), 4.50 - 4.46 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.17 - 2.91 (s, 12H), 2.78-2.68 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.20 - 2.19 (m, 1H), 1.96 - 1.90 (m, 1H), 1.83 - 1.68 (m, 2H), 1.74 - 1.53 (m, 2H), 1.16 (d, J = 6.0 Hz, 1H).

ステップ２：
残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＷａｔｅｒｓＡｔｌａｎｔｉｓＴ３１５０×３０ｍｍ、５μｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～２０％、１０分）で精製して、実施例８（１０．０ｍｇ、１７．１μｍｏｌ、収率９．５０％、純度９８．１％、ＦＡ）を白色固体として得た。
LCMS（方法８）: Rt = 2.773 min, MS m/z 527.3 [M+H]⁺, theoretical mass: 526.3
¹H NMR 400 MHz (D₂O+DMSO):δ ppm: 7.16 (s, 2H), 4.34 (br d, J = 10.4 Hz, 2H), 3.41 - 3.33 (m, 2H), 3.22 - 3.10 (m, 7H), 2.94 - 2.88 (m, 2H), 2.36 - 2.27 (m, 3H), 2.21 (s, 6H), 2.16 - 2.01 (m, 4H), 1.90 - 1.70 (m, 6H).
LCMS m/z 527.3 [M+H]⁺, theoretical mass: 526.3, Rt = 2.77 minutes, 100%

［実施例９］
（ＡＰＬ－６９７５）
＜（Ｒ，２Ｒ，２’Ｒ）－２，２’－（（２－メチルテレフタロイル）ビス（アザンジイル））ビス（２－（（Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）酢酸）＞

実施例９を、２－メチルベンゼン－１，４－ジカルボン酸を使用して基本方法に従って調製した。
ステップ１：
残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘｌｕｎａＣ１８１５０×２５ｍｍ、１０μｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：０％～２０％、１０分）で精製して、ビスエステル（５００ｍｇ、６４７μｍｏｌ、収率２３．３％、純度７０．０％）を白色固体として得た。
LCMS（方法１）: Rt = 0.707 min, MS m/z 541.2 [M+H]⁺

ステップ２：
混合物を濾過し、ＦＡ（水溶液、水中２０％）を添加して混合物をｐＨ＝７～８に調整した。混合物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＷａｔｅｒｓＸｂｒｉｄｇｅ１５０×２５ｍｍ、５μｍ；移動相：［水（１０ｍＭＮＨ_４ＨＣＯ_３）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～１０％、９分）で精製して、実施例９（１１６ｍｇ、２０２．２６μｍｏｌ、収率５４．６７％、純度９７．４％、ＦＡ）を白色固体として得た。
LCMS（方法８）: Rt = 2.353 min, MS m/z 513.0 [M+H]⁺, theoretical mass: 512.3
¹H NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 8.38 (m, 1H), 7.64 - 7.59 (m, 2H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.53 - 4.48 (m, 2H), 3.60 - 3.49 (m, 2H), 3.39 - 3.21 (m, 8H), 3.12 - 2.99 (m, 2H), 2.54 - 2.40 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.30 - 2.14 (m, 4H), 2.04 - 1.86 (m, 6H).

［実施例１０］
（ＡＰＬ－６９７６）
＜（Ｒ，２Ｒ，２’Ｒ）－２，２’－（（２，５－ビス（ベンジルオキシ）テレフタロイル）ビス（アザンジイル））ビス（２－（（Ｒ）－キヌクリジン－３－イル）酢酸）＞

実施例１０を、２，５－ビス（ベンジルオキシ）ベンゼン－１，４－ジカルボン酸を使用して基本方法に従って調製した。
ステップ１：
残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘｌｕｎａＣ１８１５０×２５ｍｍ、１０μｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１１％～４１％、１０分）で精製して、ビスエステル（１８０ｍｇ、２１１μｍｏｌ、収率３９．９％、純度９２．１％、ＦＡ）を白色固体として得た。
¹H NMR 400 MHz (CDCl₃):δ ppm: 8.52 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.37 (s, 1H), 7.93 (s, 2H), 7.58 - 7.40 (m, 10H), 5.27 - 5.17 (m, 4H), 4.79 - 4.75 (m, 2H), 3.69 (s, 6H), 3.34 - 3.14 (m, 6H), 3.07 - 2.95 (m, 2H), 2.90 - 2.75 (m, 4H), 2.11 - 2.01 (m, 2H), 1.99 - 1.88 (m, 6H), 1.85 - 1.70 (m, 4H).

ステップ２：
残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘｌｕｎａＣ１８１５０×２５ｍｍ、１０μｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～３０％、１０分）で精製して、実施例１０（６７．０ｍｇ、８７．６μｍｏｌ、収率４０．４％、純度９９．０％、ＦＡ）を白色固体として得た。
LCMS（方法１）: Rt = 0.799 min, MS m/z 711.3 [M+H]⁺, theoretical mass: 710.33
HPLC（方法７）: Rt = 2.519 min.
¹H NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 7.64 (s, 2H), 7.59 - 7.50 (m, 10H), 5.25 - 5.17 (m, 4H), 4.57 (d, J = 10.4 Hz, 2H), 3.28 - 3.10 (m, 6H), 2.98 - 2.88 (m, 2H), 2.75 - 2.67 (m, 2H), 2.47 - 2.35 (m, 2H), 2.13 - 2.02 (m, 6H), 2.08 - 1.87 (m, 2H), 1.86 - 1.73 (m, 4H).

［実施例１１］
（Ｐ２Ｂ－Ｅ（ＡＰＬ番号なし））
＜２－［［３－［［カルボキシ－［（３Ｒ）－キヌクリジン－３－イル］メチル］カルバモイル］ベンゾイル］アミノ］－２－［（３Ｒ）－キヌクリジン－３－イル］酢酸＞

ステップ１：
ＣＨＣｌ_３（４ｍＬ）中のメチル２－アミノ－２－［（３Ｒ）－キヌクリジン－３－イル］アセテート（１００．００ｍｇ、５０４．３９μｍｏｌ）の溶液に、ベンゼン－１，３－ジカルボニルクロリド（５１．２０ｍｇ、２５２．２０μｍｏｌ）を３０℃で添加した。混合物を３０℃で１６時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を黄色固体として得た。
LCMS: Rt = 0.881 min, MS m/z 527.3 [M+H]⁺

ステップ２：
ＴＨＦ（４ｍＬ）中のビスメチルエステル（１６５．００ｍｇ、３１３．３１μｍｏｌ）の溶液に、Ｈ_２Ｏ（４ｍＬ）中のＬｉＯＨ（９６．００ｍｇ、４．０１ｍｍｏｌ、１２．７９）を３０℃で添加した。混合物を３０℃で２時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮してＴＨＦを除去した。残留物に水（１０ｍＬ）および１ＭＨＣｌ（水溶液）を添加してｐＨ＝２にした。混合物を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣで精製して、実施例１１（３７．２０ｍｇ、６３．７９μｍｏｌ、収率４０．７２％、純度９８％、２ＨＣｌ）を白色固体として得た。
¹H NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 8.10 - 8.01 (m, 1H), 7.88 (dd, J=1.7, 7.8 Hz, 2H), 7.54 (t, J=7.8 Hz, 1H), 4.62(d, J=11.0 Hz, 2H), 3.59 - 3.50 (m, 2H), 3.38 - 3.15 (m, 8H), 3.11 - 2.99 (m, 2H), 2.71 - 2.54 (m, 2H), 2.26 - 2.07 (m, 4H), 2.06- 1.78 (m, 6H).
LCMS Rt = 5.9 min, MS m/z = 499.3 [M+H]⁺, theoretical mass: 498

［生物学的アッセイ］
（ＭＩＲＡ免疫比濁アッセイ）
ＲｏｃｈｅＣＯＢＡＳＭＩＲＡＰｌｕｓ自動分析装置でのＣＲＰ免疫比濁アッセイでは、異なるＣＲＰエピトープに対する特異性を有する２つの異なるモノクローナル抗体と共有結合でカップリングされた２つの異なるサイズのラテックス粒子が利用される（５）。このアッセイは、天然５量体ＣＲＰの測定がＲｏｃｈｅにより検証されており、感度および特異性が高く、検出上限が高く、本発明者らの検査室で生成された標準物質に対して較正されていた。思いがけないことだが、アッセイの抗体の一方は、ＣＲＰのリガンド結合Ｂ面に存在するエピトープに結合する。したがって、結合ポケットがリガンドにより占有されているか、または例えば５量体のＢ面間複合体形成により閉塞されている場合、このアッセイではＣＲＰを検出することができないが、ＣＲＰの検出は、異なるエピトープに結合する抗体が使用される他のタイプのアッセイにより実証できる。ＢＰＣ８およびＡＰＬ－２１９１などの二価化合物は、ＣＲＰ５量体の対を架橋するように設計されていた。したがって、ＭＩＲＡアッセイにおけるＣＲＰ認識の阻害は、そのようなリガンドとＣＲＰとの間の複合体形成の有効性および効力をモニターするための便利なツールである（６）。

ＣＲＰ濃度を、リガンドの存在下および非存在下でＣＯＢＡＳＭＩＲＡ自動分析装置により測定した。濃縮トリス－カルシウム緩衝液（×１０ＴＣ）を、トリスヒドロキシメチルアミン（１００ｍＭ）、塩化カルシウム（２０ｍＭ）、および塩化ナトリウム（１．４Ｍ）から、ＭｉｌｌｉＱ水で調製した。ＨＣｌを使用してｐＨを８．０に調整し、アジ化ナトリウムを添加した（０．１％重量／容積）。緩衝液を４℃で保管した。１００ｍｌの×１０濃縮緩衝液を９００ｍｌのＭｉｌｌｉＱ水で希釈することにより、１０倍希釈作業緩衝液（ＴＣ）を調製した。ヒトＣＲＰを、以前の報告のように（６～９）単離、精製、および特徴付し、－８０℃で凍結保管した。必要に応じて、ストックＣＲＰを３７℃で解凍し、調製した作業希釈物を、実験中４℃で維持した。ＣＲＰ濃度を、３２０ｎｍの吸光度（光散乱）に関して補正後にＡ_２８０を測定し、ヒトＣＲＰの測定吸収係数Ａ（１％、１ｃｍ）＝１７．５を使用することにより（１０）、光路が１ｃｍの石英キュベットで分光測光的（ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒＤＵ６５０）に決定した。ＴＣ緩衝液中約９０μｇ／ｍｌ（０．７８μＭの５量体）のヒトＣＲＰを、ストック溶液から調製し、７５μｌのアリコートをアッセイに使用した。化合物は、ＷｕｘｉＡｐｐＴｅｃ（武漢、中国）から固体として供給された。化合物を、溶解度に応じて最大１０ｍＭの適切な濃度でＴＣ緩衝液に溶解した（Ｓ１と標記）。次いでそれらをＴＣ緩衝液で１：２に系列希釈し（１００μｌリガンド＋２００μｌＴＣ）、最大９つの希釈物Ｓ２～Ｓ１０を準備した。ＴＣ緩衝液対照（Ｓ０）を、各アッセイに含めた。１５μｌ容積の各リガンド溶液を、７５μｌのＣＲＰと共に室温で１時間インキュベートした。最終濃度は、０．７３μＭ天然５量体ＣＲＰ、リガンドＳ１～Ｓ１０＝６２５～０．０３μＭであり、これはリガンド：ＣＲＰ_ｒ比８５０～０．０４に相当した。化合物のＴＣ緩衝液に対する溶解度が低い場合は、１００μＭの最終的トップアッセイ濃度に対応する、より低いストック濃度（０．６ｍＭから）を使用した。

データは、最終総リガンド濃度（μＭ）に対するＣＲＰ測定値（ｍｇ／Ｌ）として表されており、Ｓｉｇｍａｐｌｏｔ（Ｖ１４）を使用してプロットし、４パラメーターロジスティック曲線ｙ＝最小値＋（最大値－最小値）／（１＋（ｘ／ＥＣ_５０）^－Ｈｉｌｌ傾き）を使用してＥＣ_５０を算出した。また、必要に応じて、既知量のヒトＣＲＰを添加した後の全正常ヒト血清中の試料を測定した。化合物はすべて、ＣａｒｂｏｇｅｎＡＭＣＩＳＡＧにより調製され、無菌水に希釈して１０ｍＭ濃度にした、ビス（ホスホコリン）オクタン（ＢＰＣ８）の高度精製調製物と比較してアッセイした。それを－８０℃で保管した。必要に応じて、溶液をＴＣ緩衝液で希釈した。

式（Ｉ）の実施例は、ＲＲ，ＲＲ立体異性体である。この構造の他の立体異性体は、活性がより低いかまたは活性がない。ＳＳ，ＳＳ異性体は、最も活性な代替異性体である（ＱＡ，ＱＡキヌクリジンと表記、アミノ酸：ＳＳ，ＳＳＩＣ５０３４．４μＭ、ＲＳ，ＲＳＩＣ５０＞１０００μＭ、ＳＲ，ＳＲＩＣ５０＞１０００μＭ、ＲＳ，ＲＲ＞１０００μＭ）。当業者であれば、好適な保護基戦略を用いて、所望の立体異性体を使用し、上記の方法に従って、別の異性体を調製できる。

本書で引用されている各文献（「出願引用文献」）および出願引用文献にて引用または参照されている各文書、ならびに本明細書および本明細書に組み込まれているあらゆる文書で言及されているあらゆる製品のあらゆる製造業者の仕様書または説明書は、引用によりそのすべてが本明細書の一部をなすものとする。また、引用によりそのすべてが本明細書の一部をなすものとする各文書における技術を、本発明の実施に使用できる。

本発明は、引用によりそのすべてが本明細書の一部をなすものとする、２０２０年２月１９日に出願された英国特許出願ＧＢ２００２２９９．２の優先権を主張する。

Claims

医薬に使用するための作用剤であって、式（Ｉ）：
（式中、Ａｒは、アリールリンカー基である。）
の化合物、ならびにその個々の薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、または誘導体を含む、作用剤。
前記リンカー基Ａｒが、下記式Ａｒ－Ｉ～式Ａｒ－ＶＩ：
からなる群から選択され、
式中、Ｒは、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、－ＣＯＮＨ_２、またはＣ１～Ｃ５（シクロ）アルキルもしくはＣ１～Ｃ５（シクロ）アルコキシから選択される、アリール環の１つまたは複数の任意選択的な置換基を表し、前記アルキル基は、フェニル基で、または１つもしくは複数のハロゲン原子で任意選択的に置換されている、請求項１に記載の医薬に使用するための作用剤。
前記アリールリンカー基Ａｒが、下記式Ａｒ－ＶＩＩ～式Ａｒ－ＸＶＩ：
からなる群から選択される、請求項２に記載の医薬に使用するための作用剤。
（Ｒ，Ｒ，Ｒ，Ｒ）立体異性体のジアステレオマー純度が、少なくとも約５０重量％、好適には少なくとも約６０重量％、より好適には少なくとも約７５重量％、さらにより好適には少なくとも約９０重量％、最も好適には少なくとも約９８重量％である、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬に使用するための作用剤。
式（Ｉ）の化合物が、下記式（ＩＩ）：
を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬に使用するための作用剤。
式（Ｉ）の化合物が、塩酸塩、特に．２ＨＣｌ塩である、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬に使用するための作用剤。
式（Ｉ）の化合物が、約２０μＭ以下、さらにより好ましくは約１０μＭ以下、または約５μＭ以下、または約１μＭ以下のＩＣ_５０を有する、ヒトＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の阻害剤である、請求項１～６のいずれか１項に記載の医薬に使用するための作用剤。
炎症および／または組織損傷状態を有する対象における組織損傷の治療または予防に使用するための、請求項１～７のいずれか１項に記載の作用剤。
前記炎症および／または組織損傷状態は、急性冠症候群、不安定狭心症、プラーク破裂、および／または初期アテローム血栓症の１つまたは複数を含む、請求項８に記載の作用剤。
前記炎症および／または組織損傷状態は、感染症、感染症のアレルギー性合併症、炎症性疾患、虚血性または他の壊死、外傷性組織損傷、および悪性新生物形成から選択される、請求項９に記載の作用剤。
前記状態は、敗血症を含む細菌感染症、ウイルス感染症、例えばＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２感染症などの重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス感染症、真菌感染症、および寄生虫感染症から選択される感染症である、請求項１０に記載の作用剤。
前記状態は、関節リウマチ、若年性慢性（リウマチ）関節炎、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、全身性血管炎、リウマチ性多発筋痛症、ライター病、クローン病、および家族性地中海熱、および他の自己炎症性状態から選択される炎症性疾患である、請求項８に記載の作用剤。
前記状態は、心筋梗塞、虚血性脳卒中、腫瘍塞栓形成、および急性膵炎から選択される組織壊死である、請求項８に記載の作用剤。
前記状態は、待機手術、火傷、化学的傷害、骨折、および圧迫傷害から選択される外傷である、請求項８に記載の作用剤。
前記状態は、リンパ腫、ホジキン病、癌腫、および肉腫から選択される悪性新生物形成である、請求項８に記載の使用。
前記状態は、リウマチ熱、糸球体腎炎、および癩性結節性紅斑から選択される、感染症のアレルギー性合併症である、請求項８に記載の作用剤。
１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と混合されている請求項１～７のいずれか１項に記載の作用剤を含む医薬組成物。
請求項１～７のいずれか１項に規定されている式（Ｉ）の化合物を調製するための方法であって、式（ＩＩＩ）：
（式中、Ｒ^１は、カルボキシル保護基である。）
の化合物を、式（ＩＶ－Ａ）または式（ＩＶ－Ｂ）：
の化合物と反応させて、式（Ｖ）：
の化合物を形成し、
続いて、前記Ｒ^１保護基を切断して、式（Ｉ）の化合物を形成するステップを含む方法。
式（ＩＩＩ）：
（式中、Ｒ^１は、カルボキシル保護基である。）
の化合物、または光学活性有機酸化合物とのその塩。
式（ＩＩＩ）の化合物と（１Ｓ）－（＋）－１０－カンファースルホン酸との塩である、請求項１９に記載の化合物。
前記保護基Ｒ^１は、メチルである、請求項１９または２０に記載の化合物。