KR20220163367A

KR20220163367A - 조직 손상 2의 치료에 사용하기 위한 제제

Info

Publication number: KR20220163367A
Application number: KR1020227032160A
Authority: KR
Inventors: 마크 브리언 페피스; 크리스토퍼 스웨인; 그라함 왈터 테일러; 스테펜 폴 우드; 멜라니 수잔네 글로샵; 챠로테 엘리스 루이스 레인
Original assignee: 유씨엘 비즈니스 리미티드
Priority date: 2020-02-19
Filing date: 2021-02-18
Publication date: 2022-12-09
Also published as: EP4106753A1; JP2023534884A; CA3167333A1; AU2021225046A1; BR112022016243A2; CN115484949A; CN115484950A; WO2021170489A1; GB202002299D0; US20230101069A1; IL295636A; AU2021226076A1; EP4106754A1; WO2021165424A1; US20230118142A1; JP2023529047A; CA3167335A1

Abstract

의약에 사용하기 위한 제제로서, 상기 제제는 이의 개별 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 프로드럭 또는 그의 유도체를 포함하는 화학식 I의 화합물을 포함한다:
[화학식 I]

상기 식에서, Ar은 아릴 링커 기, 예를 들어, 1,4-페닐 기이다. 화학식 I의 화합물은 인간 C-반응성 단백질(CRP)의 억제제이고 CRP에 의해 매개되는 의학적 병태의 치료에 사용될 수 있다. 또한, 화학식 I의 화합물 및 이의 화학적 중간체의 제조 방법이 제공된다.

Description

조직 손상 2의 치료에 사용하기 위한 제제

본 발명은 생체내에서 C-반응성 단백질(CRP)에 특이적으로 결합하여 자가 세포 및 조직 리간드에 대한 CRP의 결합을 억제하는 제제, 및 특히 허혈성, 외상성, 감염성, 염증성 및 신생물성 병태에서 조직 손상의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 그러한 제제를 함유하는 조성물에 관한 것이다.

C-반응성 단백질(CRP)은 펜트락신 단백질 계열의 정상 혈장 단백질이며, 다른 구성원은 혈청 아밀로이드 P 성분(SAP)이다(1). CRP는 대부분의 형태의 조직 손상, 감염, 염증 및 암에 반응하여 순환 농도가 극적으로 증가하는 고전적인 급성기 단백질이다. 대부분의 경우, 달성된 CRP 값은 질환의 정도 및 활성과 밀접한 관련이 있다. CRP는 칼슘 의존성 리간드 결합 단백질로, 포스포콜린 잔기에 가장 높은 친화도로 결합하지만, 자가 기원과 외인성 기원 둘 다의 다양한 다른 리간드에도 결합한다. 자가 리간드는 천연 및 변형된 혈장 지단백질, 손상된 세포막, 다수의 상이한 인지질 및 관련 화합물, 및 작은 핵 리보핵단백질 입자를 포함한다. 외부 리간드는 일부 글리칸, 인지질 및 세균, 진균 및 기생충의 캡슐 및 체세포 구성요소와 같은 미생물의 기타 구성요소뿐만 아니라 식물 생성물을 포함한다. 거대분자 리간드에 결합된 CRP는 Clq를 통해 고전적 보체 경로를 활성화하여 보체 시스템의 주요 접착 분자인 C3의 활성화 및 고정, 주요 주화성 인자인 C3a 및 C5a의 생성, 및 말단 용해기(lytic phase)인 C5-C9의 결합을 유도한다.

질환 과정이 증가된 CRP 생성을 유발하는 정도와 활성을 밀접하게 반영하는 것 외에도, CRP의 더 높은 순환 농도는 또한 질환의 진행, 합병증의 발생 및 임상 결과를 유의하게 예측한다. 광범위한 질환에 걸쳐 이러한 연관성에 대한 광범위한 임상 관찰은 조직 손상 및 이에 따른 질환 중증도를 악화시키는 CRP의 병원성 역할과 일치한다. CRP는 정상의 건강한 세포에는 결합하지 않지만 죽은 세포와 손상된 세포에 노출된 리간드에 강하게 결합하여 이어서 보체를 활성화시킨다. CRP-매개된 보체 활성화는 조직으로부터 세포 파편을 제거하고 일부 미생물에 대한 숙주 방어에 기여할 수 있지만, 많은 항체-매개된 과민 반응에서와 마찬가지로 보체 활성화가 심각한 조직 손상을 유발할 수 있다는 것은 분명하다.

인간 CRP의 보체 의존성 병원성은 관상 동맥 결찰술을 받은 래트에게 인간 CRP를 투여하면 결과적인 급성 심근 경색의 크기가 증가한다는 입증에 의해 실험적으로 처음 확인되었다(2). 인간 CRP와 활성화된 래트 보체는 경색부와 그 주변에 침착되었고 조직 손상의 악화는 절대적으로 보체 의존성이었다. 래트에서의 뇌졸중의 중대뇌동맥 폐색 모델에서도 유사한 관찰이 이루어졌다(3). 그 후 여러 상이한 독립적 군(group)이 다양한 동물 모델에서 비슷한 관찰을 했다.

생체내 사용을 위한 최초의 CRP 결합의 소분자 억제제인 비스(포스포콜린)헥산(BPC6)의 설계는 허혈성 경색 후 조직 손상을 악화시키는 인간 CRP의 병원성 역할에 대한 결정적인 확인을 가능하게 하였다(2). 관상 동맥 결찰술을 받고 인간 CRP를 투여받은 래트에 이 화합물을 투여하면 치료를 받지 않은 인간 CRP 처리된 동물에서 발생하는 증가된 손상이 완전히 없어졌다. 그 후, 비스(포스포콜린)옥탄(BPC8)은 시험관내에서 CRP 결합의 보다 강력한 억제제로 밝혀졌으며, 허혈 재관류 설계뿐만 아니라 말단 관상 동맥 결찰술 후를 포함한 래트 급성 심근 경색 모델에서 인간 CRP 병원성에 대해 동일한 보호 효과가 있었다(Pepys, 미공개 관찰). 인간 CRP는 치료 표적으로서 검증되었으며 CRP 결합의 소분자 억제제를 통한 개입의 효능이 입증되었다.

이러한 관찰은 CRP의 순환 농도가 증가하는 매우 다양한 조직 손상 병태(condition)에서 질환 중증도를 감소시키기 위한 새로운 길을 열었다. 생체내 CRP 결합의 억제는 분명히 매우 상이한 병인을 가진 다양한 질환을 예방 또는 치료하지 못할 것이다. 그러나, 조직 손상 정도, 중증도 및 기간을 감소시켜 심장 마비, 뇌졸중, 류마티스 관절염 및 기타 원인 불명의 만성 염증성 질환, 화상, 세균 및 바이러스 감염 또는 암 악액질 및 기타 여러 병태를 가진 환자의 생존을 연장하는 것은 긴급한 주요 미충족 의학적 요구로 남아 있다.

WO 03/097104 A1은 CRP에 의해 결합되고 CRP 결합 또는 다른 리간드를 억제하는 제제를 기재하고 있다. 제제는 복수의 C-반응성 단백질(CRP) 분자와 복합체를 형성하도록 공유적으로 공동 연결된 복수의 리간드를 포함하고, 여기서, (i) 리간드 중 적어도 2개는 동일하거나 상이하고 CRP 분자 상에 존재하는 리간드 결합 부위에 의해 결합될 수 있거나; (ii) 리간드 중 적어도 하나는 CRP 분자 상에 존재하는 리간드 결합 부위에 의해 결합될 수 있고, 리간드 중 적어도 하나는 혈청 아밀로이드 P 성분(SAP) 분자 상에 존재하는 리간드 결합 부위에 의해 결합될 수 있다. CRP에 적합한 리간드는 비스(포스포콜린) 리간드이고, BPC8로 명명된 예시된 화합물은 하기 화학식 BPC8을 갖는다:

BPC8에서 숫자 8은 상기 식에서 n-옥틸 링커 기를 지칭한다. n-헥실, n-헵틸 등의 링커 기를 갖는 상응하는 화합물 BPC6, BPC7 등이 또한 개시되어 있다.

BPC6 및 BPC8은 천연 오량체 단백질 분자의 가교 쌍인 CRP에 의해 강하게 결합된다. 이들은 래트 급성 심근 경색 모델에서 인간 CRP의 부작용을 완전히 없앤다(4, Pepys et al. 미공개 관찰). 그러나, 비스(포스포콜린)알칸 시리즈의 화합물들은 대규모로 합성 및 정제하기가 어려웠다.

따라서, CRP에 의해 악화되고 선행 기술에 기재된 화합물에 비해 개선된 성질을 제공하는 의학적 병태의 치료에 사용하기 위해 보다 용이하게 제조되는 제제 또는 화합물에 대한 필요성이 남아 있다.

발명의 요약

제1 양태에서, 본 발명은 의약에 사용하기 위한 제제를 제공하며, 여기서, 상기 제제는 이의 개별 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 프로드럭 또는 유도체를 포함하는 화학식 I의 화합물을 포함한다:

[화학식 I]

상기 식에서, Ar은 아릴 링커 기, 예컨대 1,4-페닐이다.

적합하게는, 화학식 I의 화합물은 인간 C-반응성 단백질(CRP)의 억제제이다.

제2 양태에서, 본 발명은 염증성 및/또는 조직 손상 병태를 갖는 대상체에서 조직 손상의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 제1 양태에 따른 제제를 제공한다. 추가의 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체와 혼합된 본 발명의 제1 양태에 따른 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

추가의 양태, 본 발명은 하기 화학식 III의 화합물을 화학식 IV-A 또는 IV-B의 화합물:

[화학식 III]

(상기 식에서, R¹은 카복실 보호기이다)

과 반응시켜 화학식 V의 화합물:

[화학식 V]

을 형성한 후, 이어서 R¹ 보호기를 절단하여 화학식 I의 화합물을 형성하는 단계를 포함하는, 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 제공한다:

추가의 양태에서, 본 발명은 화학식 III의 화합물, 또는 화학식 III의 화합물과 광학 활성 유기산 화합물, 예컨대 (1S)-(+)-10-캄포르설폰산과의 염을 제공한다.

[화학식 I]

상기 식에서, Ar은 아릴 링커 기이다.

Ar 링커 기는 적합하게는 방향족 고리(들)에 1, 2 또는 3개의 헤테로 원자를 임의로 포함하는 모노사이클릭, 바이사이클릭, 또는 융합된 바이사이클릭 아릴 기이고, 상기 헤테로 원자는 적합하게는 N 또는 S로부터 선택된다. Ar 링커 기는 적합하게는 방향족 고리에 4 내지 12개의 탄소 원자를 포함한다(즉, 임의의 치환체 기에서 탄소 원자 제외). Ar 기의 방향족 고리(들)는 화학식 I에 나타낸 바와 같이 아미드 결합을 통해 화학식 I의 화합물의 회문식(palindromic) 말단 기에 연결된다. 적합하게는, 2개의 Ar-CO 결합 사이의 결합 각도는 약 180도이다. 따라서, 예를 들어, Ar이 페닐 기와 같은 단일 6-원 방향족 고리인 경우, 결합은 고리 상에 파라 (1,4)에 적합하게 위치한다. 이는 생성된 형태적 관계는 CRP의 각 수용체에 결합하기에 적절하게 퀴누클리디닐 말단 기를 위치시키는 것으로 보인다.

구현예에서, Ar 기는 1,4-페닐, 2,6-나프틸 또는 4,4'-비페닐, 또는 고리(들)에 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 포함하는 동일한 고리 시스템의 군(예를 들어, 1,4-페닐 대신에 2,6-피리딜)으로부터 선택된다. 각각의 경우, 방향족 고리는 하기에 정의된 바와 같은 하나 이상의 치환체 기 R로 치환될 수 있다.

이들 구현예에서, 링커 기 Ar은 하기 일반식 Ar-I 내지 Ar-VI로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다:

상기 식에서, R은 아릴 고리(들) 상에 하나 이상의 임의의 치환체를 나타낸다. 적합하게는, R은 할로겐, 하이드록시, 시아노, -CONH₂, 또는 C1-C5 (사이클로)알킬 또는 C1-C5 (사이클로)알콕시로부터 선택될 수 있으며, 여기서, 알킬 기는 페닐 기(예를 들어, 여기서, R은 -O-벤질임) 또는 하나 이상의 할로겐 원자로 임의로 치환되고, 예를 들어, 트리플루오로메틸이다. 보다 적합하게는, R은 C1-C4 알킬 또는 C1-C4 알콕시, 예를 들어, 메틸일 수 있다. 적합하게는, 아릴 링커 상에 0, 1 또는 2개의 R 치환체가 있고, 보다 적합하게는 0 또는 1개의 R 치환체가 있고, 일부 경우에는 R 치환체가 없다. 특정 구현예에서, Ar 링커 기는 0, 1 또는 2개의 R 치환체를 갖는 1,4-페닐 링커 기이다.

구현예에서, 아릴 링커 기 Ar은 화학식 Ar-VII 내지 Ar-XVI를 갖는 기로 이루어진 군으로부터 선택된다:

특히 관심 있는 구현예에서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 II를 갖는다:

[화학식 II]

이러한 화학식 II의 화합물은 또한 본원에서 P2B-B, 또는 APL-2191, 또는 실시예 1의 화합물로서 상호교환적으로 지칭된다.

화학식 I 및 II의 화합물은 R,R,R,R 입체이성질체이다. 이 구조의 다른 입체 이성질체는 더 적은 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. S,S,S,S 이성질체는 가장 활성인 대안적인 입체이성질체로 생각된다.

적합하게는, 본 발명의 제제에서 (R,R,R,R) 입체이성질체의 부분입체이성질체 순도는 적어도 약 50 중량%, 적합하게는 적어도 약 60 중량%, 보다 적합하게는 적어도 약 75 중량%, 보다 더 적합하게는 적어도 약 90 중량%, 및 가장 적합하게는 적어도 약 98 중량%이다. 즉, (R,R,R,R) 입체이성질체의 양은 제제에 존재하는 이 화합물의 다른 모든 입체이성질체의 양을 적절하게 초과한다. 가장 적합하게는, 제제에 존재하는 이 화합물의 모든 입체이성질체의 적어도 약 98 중량%가 R,R,R,R 입체이성질체이다.

화학식 I 및 II의 화합물의 결정질 또는 용해된 형태는 쯔비터이온성 형태(COO-QNH+)로 존재할 수 있고, 그러한 쯔비터이온성 형태는 이로써 상기 화학식 I 및 II의 정의에 포함된다. 마찬가지로, 화학식 I 및 II의 정의는 상기 화합물의 모든 결정질 형태 및 다형체를 포함한다.

상기 화학식 I의 2가 리간드 화합물이 시험관내 및 생체내에서 인간 CRP에 의해 강하게 결합되어 최대 5개의 리간드 분자에 의해 가교된 천연 오량체 CRP 분자 쌍의 안정한 복합체를 형성하는 것으로 밝혀졌다. 각 CRP 프로토머의 리간드 결합 포켓이 차단되고 각 CRP 오량체의 전체 결합(B) 면이 이 복합체에서 완전히 차단되어 CRP가 생체내 조직 손상 작용을 매개할 수 없다. 또한, CRP-리간드 복합체 내에서 천연 CRP의 비공유 회합된 개별 프로토머의 해리는 생리학적 조건 하에 완전히 억제된다.

적합하게는, 화학식 I의 화합물은 약 20 μM 이하, 적합하게는 약 10 μM 이하, 보다 적합하게는 약 5 μM 이하, 또는 가장 적합하게는 약 1 μM 이하의 IC₅₀을 갖는 인간 C-반응성 단백질(CRP)의 억제제이다. 특정 화합물이 특정 범위 내에서 IC₅₀을 갖는지 여부를 결정하기 위해 IC₅₀을 측정하는 적합한 방법이 아래에 설명되어 있다.

제2 양태에서, 본 발명은 CRP에 의해 매개되는 의학적 병태의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명에 따른 제제를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 CRP에 의해 매개되는 의학적 병태의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조를 위한 본 발명의 제1 양태에 따른 제제의 용도를 제공한다.

화학식 I의 화합물을 포함하는 본 발명에 따른 제제는 하나 이상의 다른 약제학적 활성 약물과 동시에, 별도로 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 그러한 다른 약제학적 활성 약물은, 예를 들어, 항염증성 약물, 예컨대 코르티코스테로이드; 항바이러스 약물, 항세균 약물 또는 항진균 약물 또는 항기생충 약물; 전염증성 사이토카인, 예컨대 IL-1, IL-6, TNF의 억제제/길항제; 항응고제; 보체 활성화 억제제 또는 이의 생리활성 단편을 포함할 수 있다.

본 발명은 치료량의 본 발명에 따른 제제 또는 본 발명에 따른 약제학적 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에서 CRP에 의해 매개되는 의학적 병태를 치료하는 방법을 추가로 제공한다.

구현예에서, 염증성 및/또는 조직 손상 병태는 급성 관상동맥 증후군, 불안정 협심증, 플라크 파열, 및/또는 초기 죽상혈전증 중 하나 이상을 포함한다.

구현예에서, 염증성 및/또는 조직 손상 병태는 감염, 감염의 알레르기 합병증, 염증성 질환, 허혈성 또는 기타 괴사, 외상성 조직 손상 및 악성 신생물(malignant neoplasia)로부터 선택된다.　예를 들어, 병태는 패혈증을 포함하는 세균 감염, 바이러스 감염, 진균 감염 및 기생충 감염으로부터 선택된 감염일 수 있다.

구현예에서, 병태는 류마티스 관절염, 청소년 만성 (류마티스) 관절염, 강직성 척추염, 건선성 관절염, 전신성 혈관염(systemic vasculitis), 류마티스성 다발근통, 라이터 증후군(Reiter's disease), 크론병 및 가족성 지중해열 및 기타 자가염증성 병태로부터 선택된 염증성 질환이다.

구현예에서, 병태는 심근 경색, 허혈성 뇌졸중, 종양 색전증 및 급성 췌장염으로부터 선택된 조직 괴사이다.

구현예에서, 병태는 정규 수술(elective surgery), 화상, 화학적 손상, 골절 및 압박 손상으로부터 선택된 외상이다.

구현예에서, 병태는 림프종, 호지킨병(Hodgkin's disease), 암종(carcinoma) 및 육종(sarcoma)으로부터 선택된 악성 신생물이다.

구현예에서, 병태는 류마티스성 열(rheumatic fever), 사구체신염, 및 나병 결절 홍반(erythema nodosum leprosum)으로부터 선택된 감염의 알레르기 합병증이다.

구현예에서, 병태는 중증 급성 호흡기 증후군(SARS) 코로나바이러스, 특히 SARS-CoV2에 의한 감염 또는 감염 합병증이다.

적합하게는, 상기 방법은 순환계 및 세포외 조직액에서 모든 가용성 CRP와 결합하기에 충분한 본 발명에 따른 제제의 양을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 양은 이용 가능한 CRP의 적어도 약 70%, 바람직하게 이용 가능한 CRP의 적어도 약 90% 및 최적으로 이용 가능한 CRP의 95%, 99% 또는 100%에 의해 결합되기에 충분할 수 있다.

추가의 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체와 혼합된 본 발명의 제1 양태에 따른 제제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제(이의 조합을 포함함)를 임의로 혼입하는, 본 발명에 따른 제제 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 에스테르 또는 프로드럭을 포함하여 제형화될 수 있다. 여기 및 본 명세서의 다른 곳에서, 용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 화학식 I의 화합물과 약제학적 사용을 위한 염의 형성을 위해 당업계에 알려져 있고 허용되는 음이온 또는 양이온과의 염을 지칭한다. 예를 들어, 산 부가염은 염산, 옥살산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 아세트산, 시트르산, 타르타르산, 탄산 또는 인산을 포함하지만 이에 제한되지 않는 약제학적으로 허용되는 무독성 산의 용액과 제제의 용액을 혼합함으로써 형성될 수 있다. 제제가 카복실산 기를 갖는 경우, 본 발명은 또한 이의 나트륨, 칼륨, 칼슘 및 4차 암모늄 염을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 이의 염, 바람직하게는 이의 무독성의 약제학적으로 허용되는 염을 고려한다. 특히 적합한 구현예에서, 염은 HCl과의 염, 특히 .2HCl 염이다.

치료용으로 허용되는 담체 또는 희석제는 약제학적 분야에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 문헌(Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985))에 기재되어 있다. 약제학적 담체, 부형제 또는 희석제의 선택은 의도된 투여 경로 및 표준 약제학적 관행과 관련하여 선택될 수 있다. 약제학적 조성물은 담체, 부형제 또는 희석제로서 또는 이에 추가로 임의의 적합한 결합제(들), 윤활제(들), 현탁제(들), 코팅제(들), 가용화제(들)를 포함할 수 있다.

방부제, 안정제, 염료 및 심지어 향미제가 약제학적 조성물에 제공될 수 있다. 항산화제 및 현탁제가 사용될 수도 있다.

약제학적 조성물은 수용자에 의해 대사될 때에만 활성이 되는 제제 또는 이의 유도체를 포함하는 프로드럭의 형태일 수 있다. 그러한 약제학적 조성물의 성분의 정확한 성질 및 양은 경험적으로 결정될 수 있고 부분적으로는 조성물의 투여 경로에 의존할 것이다. 적절한 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 흡입에 의해, 좌약 또는 페서리 형태로, 국소적으로 피부 패치를 사용하여 로션, 용액, 크림, 연고 또는 더스팅 분말 형태로 국소적으로(안과적으로 포함) 투여되거나, 전분 또는 락토스와 같은 부형제를 함유하는 정제의 형태로, 또는 단독으로 또는 부형제와 혼합하여 캡슐 또는 알모양(ovule) 형태로 경구 투여되거나, 향미제 또는 착색제를 함유하는 엘릭시르, 용액 또는 현탁액의 형태로 투여될 수 있거나, 이들은 비경구로, 예를 들어, 정맥내, 근육내, 피하 또는 동맥내 주사될 수 있다.

주사에 의한 투여를 위해 본 발명의 조성물이 혼입될 수 있는 액체 형태는 면실유, 참깨유, 코코넛유 및 땅콩유와 같은 식용유뿐만 아니라 엘릭서 및 유사한 약제학적 비히클을 갖는 수성 에멀젼을 포함한다. 수성 현탁액에 적합한 분산제 또는 현탁제는 트라가칸트, 아카시아, 알기네이트, 덱스트란, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 폴리비닐-피롤리돈 및 젤라틴과 같은 합성 및 천연 검을 포함한다.

비경구 투여의 경우, 조성물은 다른 물질, 예를 들어, pH를 조정하기 위한 완충제, 또는 용액을 혈액과 등장성으로 만들기에 충분한 염 또는 모노사카라이드를 함유할 수 있는 멸균 수용액의 형태로 가장 잘 사용될 수 있다. 협측 또는 설하 투여의 경우, 조성물은 통상적인 방식으로 제형화될 수 있는 정제 또는 로젠지(lozenges)의 형태로 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물의 사용은 체내에서 모든 순환하는 리간드 약물과 기타 가용성 CRP 분자로 포화시키는 것을 목표로 한다. 따라서, 요구되는 약물의 1일 용량은 복합될 천연 오량체 CRP의 몰당 적어도 약 1몰의 약물, 보다 적합하게는 적어도 약 5몰의 약물을 제공하는 것이 적합하다.

약제학적 조성물의 정확한 형태 및 이의 투여량은 또한 체중, 투여 경로 및 질환 병태를 포함하여 치료될 대상체에 의존할 수 있다. 이들은 숙련가에 의해 일상적인 문제로 결정될 것이다.

추가의 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 III의 화합물을 화학식 IV-A 또는 IV-B의 화합물:

[화학식 III]

(상기 식에서, R¹은 카복실 보호기이다)

과 반응시켜 화학식 V의 화합물:

을 형성한 후 R¹ 보호기를 절단하여 화학식 I의 화합물을 형성하는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물의 제조 방법을 제공한다.

보호기 R¹은 아미노산으로부터 펩티드 합성 동안 카복실 기를 보호하기 위해 통상적으로 사용되는 임의의 보호기일 수 있다. 예를 들어, 보호기 R¹은 C1-C5 알킬, 트리틸, 2,4-디메톡시벤질(DMB), 벤질, 또는 9-플루오레닐메틸로부터 선택될 수 있다. 구현예에서, 보호기 R¹은 C1-C5 알킬, 특히 메틸 기이다.

화학식 III의 화합물을 화학식 IV-A의 화합물과 반응시켜 화학식 V의 화합물을 형성하는 단계는 펩티드 합성에서 아미드 결합을 형성하기 위해 통상적으로 사용되는 임의의 방법에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 화학식 IV의 화합물의 -COOH 기는 이들을 강산의 에스테르 또는 화학식 -COX의 기(여기서, X는 클로로, 알킬설포네이트 또는 톨루엔설포네이트와 같은 친핵성 치환에 의해 용이하게 치환되는 이탈기이다)로 전환시킨 다음, 화학식 III의 화합물의 1차 아민 기와 친핵성 반응을 일으켜 활성화될 수 있다. 다른 구현예에서, 카복실산의 활성화는 유기 용매 및 염기의 존재 하에 포스페이트 함유 제제, 트리아진 기반 제제, 카보디이미드 기반 제제 또는 하이드록시벤조트리아졸 기반 제제로 수행될 수 있다. 바람직한 조건은 실온에서 MeCN 중 디이소프로필에틸아민과 함께 TBTU (2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸아미늄 테트라플루오로보레이트)를 포함한다.

대안적으로, 화학식 I의 화합물은 화합물 IV-B의 비스산 클로라이드를 사용하여 제조될 수 있다. 전형적인 반응 조건은 클로로포름 중에서 30℃로 16시간 동안 가온하는 것을 포함한다.

화학식 III 및 IV-A/B의 화합물은 상업적으로 입수 가능하거나, 본원에 기재된 방법에 따라 제조되거나, 또는 문헌에 따라 제조된다.

마지막으로, 화학식 V의 화합물에서 카복실레이트 기는 당업계에 널리 알려진 임의의 방법에 의해 탈보호된다. 예를 들어, 기 -COOR¹이 메틸 에스테르와 같은 알킬 에스테르인 경우, 에스테르는 50℃에서 1시간 동안 10% KOH(수성, aq.)와 같은 온화한 염기성 조건 하에 가수분해될 수 있고, 이어서 pH 4-5에서 포름산으로 중화될 수 있다.

구현예에서, 상기 방법은 화학식 VII의 화합물을 화학식 VIII의 화합물과 반응시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 화학식 III의 화합물을 제조하는 단계를 추가로 포함한다:

상기 식에서, L은 이탈기, 즉, 친핵성 치환에 의해 용이하게 치환되는 약염기성 기를 나타낸다. 적합하게는 이탈기 L은 브로모, 요오도, 알킬설포네이트 및 페닐설포네이트 기, 예컨대 p-브로모페닐설포네이트를 포함한다. R¹은 상기 정의된 바와 같은 카복실 보호기이다. 반응은 적합하게는 비양성자성 용매 중에서 강한 비친핵성 염기의 존재 하에 수행된다. 예를 들어, 강염기는 칼륨 비스(트리메틸실릴) 아미드, KHMDS일 수 있고, 용매는 톨루엔/THF일 수 있다. 반응은 친핵성 치환에 의해 진행되어 화학식 IX-A 및 IX-B의 입체이성질체의 혼합물을 형성한다:

이어서, 화학식 III의 화합물의 합성은 상기 입체이성질체의 혼합물을 가수분해 및 분해하여 화학식 III의 화합물, 또는 화학식 III의 화합물과 광학 활성 유기산 화합물과의 염으로 단리하는 단계를 포함한다. 가수분해는 약한 산성 조건 하에, 예를 들어, (1S)-10-캄포설폰산의 존재 하에 H₂O로 수행될 수 있다. 화학식 III의 염인 .2CSA는 혼합물로부터 우선적으로 침전된다. 거울상이성질체를 분리하기 위해 일반적으로 사용되는 다른 키랄 유기산이 적합할 수 있는데, 예를 들어, (2S,3S)-타르타르산, (R)-말산, 또는 (-)-(R)-만델산이다.

추가의 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 III의 화합물, 또는 화학식 III의 화합물과 상기 정의된 바와 같은 광학 활성 유기산 화합물과의 염을 제공한다:

[화학식 III]

상기 식에서, R¹은 상기 정의된 바와 같은 카복실 보호기이다.

구현예에서, 이 양태에 따른 화합물은 화학식 III의 화합물과 (1S)-(+)-10-캄포르설폰산(CSA)과의 염, 구체적으로 .2CSA 염이다.

실시예

본 발명은 이제 하기 실시예에 기재된 특정 구현예를 참조하여 설명되지만 이에 제한되지 않는다. 화합물은 통상적인 IUPAC 명명법을 사용하거나 화학물질 공급업체에 의해 명명된 대로 명명된다.

사용된 방법을 설명하기 위해 다음 합성 절차가 제공된다; 주어진 제조 또는 단계에 대해, 사용된 전구체는 주어진 설명의 단계에 따라 합성된 개별 배치로부터 반드시 유도되지 않을 수 있다.

분석 방법

실시예 및 제조가 분석 데이터를 인용하는 경우, 달리 명시되지 않는 한 다음 분석 방법 중 하나가 사용되었다.

NMR: 400 MHz Bruker Avance III 및 Bruker Avance Neo.

LC-MS 또는 HPLC 방법:

방법 1:

MS 기기 유형: SHIMADZU LC-MS-2020, 컬럼: Kinetex EVO C18 30 × 2.1 mm, 5 μm, 이동상 A: 물 중 0.0375% TFA(v/v), B: 아세토니트릴 중 0.01875% TFA(v/v), 구배: 0.0분 0% B → 0.8분 60% B → 1.20분 60% B → 1.21분 0% B → 1.55분 0% B 유속: 1.5 mL/분, 오븐 온도: 50℃; PDA 검출: 220 mm 및 254 mm.

방법 2:

MS 기기 유형: Agilent 1200 LC/G1956A MSD, 컬럼: Kinetex EVO C18 2.1 × 30 mm, 5 um, 이동상 A: 물 중 0.0375% TFA(v/v), B: 아세토니트릴 중 0.01875% TFA(v/v), 구배: 0.0분 90% B → 0.35분 90% B 유속: 1.5 mL/분, 오븐 온도: 50℃; DAD: 100-1000.

방법 3:

HPLC 기기 유형: SHIMADZU LC-20AB, 컬럼: Kinetex C18 LC 컬럼 4.6 × 50 mm, 5 μm, 이동상 A: 물 중 0.0375% TFA(v/v), B: 아세토니트릴 중 0.01875% TFA(v/v), 구배: 0.0분 0% B → 4.20분 60% B → 5.30분 60% B → 5.31분 0% B → 6.00분 0% B, 유속: 1.5 mL/분, 오븐 온도: 50℃; PDA 검출: PDA(220 nm 및 215 nm 및 254 nm).

방법 4:

MS 기기 유형: SHIMADZU LC-MS-2020, 컬럼: Kinetex EVO C18 30 × 2.1 mm, 5 μm, 이동상 A: 물 중 0.0375% TFA(v/v), B: 아세토니트릴 중 0.01875% TFA(v/v), 구배: 0.0분 0% B → 3.0분 60% B → 3.50분 60% B → 3.51분 0% B → 4.00분 0% B 유속: 0.8 mL/분, 오븐 온도: 50℃; PDA 검출: 220 nm 및 254 nm.

방법 5:

MS 기기 유형: SHIMADZU LC-MS-2020, 컬럼: Kinetex EVO C18 2.1 × 30 mm, 5 μm, 이동상 A: 물 중 0.025% NH₃ㆍH₂O(v/v), B: 아세토니트릴, 구배: 0.0분 0% B → 0.8분 60% B → 1.20분 60% B → 1.21분 0% B → 1.55분 0% B 유속: 1.5 mL/분, 오븐 온도: 40℃; PDA 검출: 220 nm 및 254 nm.

방법 6:

HPLC 기기 유형: SHIMADZU LC-20AB, 컬럼: Kinetex C18 LC 컬럼 4.6 × 50 mm, 5 μm, 이동상 A: 물 중 0.0375% TFA(v/v), B: 아세토니트릴 중 0.01875% TFA(v/v), 구배: 0.0분 0% B → 4.20분 30% B → 5.30분 30% B → 5.31분 0% B → 6.00분 0% B, 유속: 1.5 mL/분, 오븐 온도: 50℃; PDA 검출: PDA(220 nm 및 215 nm 및 254 nm).

방법 7:

MS 기기 유형: SHIMADZU LC-20AB, 컬럼: Kinetex C18 LC 컬럼 4.6 × 50 mm, 5 μm, 이동상 A: 물 중 0.0375% TFA(v/v), B: 아세토니트릴 중 0.01875% TFA(v/v), 구배: 0.0분 0% B → 2.40분 30% B → 3.70분 30% B → 3.71분 0% B → 4.00분 0% B 유속: 1 mL/분, 오븐 온도: 50℃; PDA 검출: 220 nm 및 254 nm.

방법 8:

MS 기기 유형: Agilent 1100 LC 및 Agilent G1956A, 컬럼: Waters XSelect HSS T3 3.5 μm 4.6 × 50 mm, 이동상 A: 물 중 0.0375% TFA(v/v), B: 아세토니트릴 중 0.01875% TFA(v/v), 구배: 0.0분 0% B → 5.00분 30% B → 6.00분 100% B → 6.50분 100% B → 6.51분 0% B → 7.00분 0% B 유속: 1 mL/분, 오븐 온도: 40℃; PDA 검출: 220 nm 및 254 nm.

방법 9

MS 기기 유형: SHIMADZU LCMS-2020, 컬럼: Kinetex EVO C18 2.1 × 30 mm, 5 μm, 이동상 A: 물 중 0.025% NH₃ㆍH₂O(v/v), B: 아세토니트릴, 구배: 0.0분 5% B → 0.8분 95% B → 1.2분 95% B → 1.21분 5% B → 1.55분 5% B, 유속: 1.5 mL/분, 오븐 온도: 40℃; UV 검출: 220 nm 및 254 nm.

방법 10

MS 기기 유형: Agilent 1100 LC 및 Agilent G1956A, 컬럼: K Waters XSelect HSS T3 3.5 μm 4.6 × 50 mm, 이동상 A: 물 중 0.0375% TFA(v/v), B: 아세토니트릴 중 0.01875% TFA(v/v), 구배: 0.0분 0% B → 5분 30% B → 6분 100% B → 6.5분 100% B → 6.51분 0% B, 유속: 0.6 mL/분, 오븐 온도: 40℃; UV 검출: 220 nm 및 254 nm.

HPLC 방법 1:

MS 기기 유형: SHIMADZU LC-20AB, 컬럼: XBridge® C18 3.5 μm 4.6 × 150 mm, 이동상 A: 물 중 0.0375% TFA(v/v), B: 아세토니트릴 중 0.01875% TFA(v/v), 구배: 0.0분 0% B → 10.0분 60% B → 15.0분 60% B → 15.01분 0% B → 15.02분 0% B → 20.0분 0% B, 유속: 1.0 mL/분, 오븐 온도: 40℃; UV 검출: 220 nm 및 215 nm 및 254 nm.

약어

다음 약어가 사용된 경우, 다음 의미가 적용된다:

ACN 또는 MeCN은 아세토니트릴이고,

CDCl₃은 듀테로클로로포름이고,

CSA는 캄포르-10-설폰산이고,

D₂O는 중수소 산화물이고,

DCM은 디클로로메탄이고,

DIPEA 또는 DIEA는 N,N-디이소프로필에틸아민이고,

DMAP는 4-(디메틸아미노)피리딘이고,

DMSO는 디메틸 설폭사이드이고,

EA는 에틸 아세테이트이고,

EtOH는 에탄올이고,

FA는 포름산이고,

H₂O는 물이고,

HCl은 염산이고,

HPLC는 고성능 액체 크로마토그래피이고,

IPA는 이소프로필 알코올이고,

KHMDS는 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드이고,

KOH는 수산화칼륨이고,

LCMS는 액체 크로마토그래피 질량 분석법이고,

MeOH는 메탄올이고,

MTBE는 메틸 터트 부틸 에테르이고,

N₂는 질소이고,

Na₂SO₄는 황산나트륨이고;

NH₃은 암모니아이고,

NH₄HCO₃은 중탄산암모늄이고,

NMR은 핵자기공명이고,

PDA는 포토다이오드 어레이 검출기이고,

SFC는 초임계 유체 크로마토그래피이고,

TBTU는 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸아미늄 테트라플루오로보레이트이고,

TEA는 트리에틸아민이고,

TFA는 트리플루오로아세트산이고,

THF는 테트라하이드로푸란이고,

TLC는 박막 크로마토그래피이다.

제조

화합물 2의 제조: [(3S)-퀴누클리딘-3-일] 4-브로모벤젠설포네이트

DCM(40.00 mL) 중 (3S)-퀴누클리딘-3-올(2.00 g, 15.73 mmol, 1.00 당량), DMAP(19.21 mg, 157.30 μmol, 0.01 당량) 및　TEA(4.78 g, 47.19 mmol, 6.54 mL, 3.00 당량)의 용액에 0℃에서 4-브로모벤젠설포닐 클로라이드(6.03 g, 23.60 mmol, 1.50 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NaHCO₃(100 mL)으로 세척하였다. 포화 NaHCO₃ 층을 EA(100 mL × 2)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축하여 조 생성물(crude product)을 황색 오일로서 수득하였다.　황색 오일을 DCM:MeOH = 30:1로 용리되는 실리카 겔 상의 크로마토그래피로 정제하여 [(3S)-퀴누클리딘-3-일] 4-브로모벤젠설포네이트(3.20 g, 8.32 mmol, 52.88% 수율, 90% 순도)를 황색 고체로서 수득하고, 이를 ¹H NMR로 분석하였다.

¹ H NMR: (400MHz, CDCl₃) δ = 7.81 - 7.57 (m, 4H), 4.65 - 4.49 (m, 1H), 3.04 (dd, J=8.4, 15.2 Hz, 1H), 2.89 -2.48 (m, 5H), 1.93 ( d, J=2.8 Hz, 1H), 1.80 - 1.71 (m, 1H), 1.61 (tdd, J=4.6, 9.5, 13.9 Hz, 1H), 1.47 - 1.22 (m, 2H).

부분입체이성질체 4A 및 4B의 제조

이성질체 4A: (R)-메틸 2-((디페닐메틸렌)아미노)-2-((3R)-퀴누클리딘-3-일)아세테이트

이성질체 4B: (S)-메틸 2-((디페닐메틸렌)아미노)-2-((3R)-퀴누클리딘-3-일)아세테이트

톨루엔(578 mL) 및 THF(186 mL) 중 (3S)-퀴누클리딘-3-일 4-브로모벤젠설포네이트(63 g, 182 mmol) 및 메틸 2-[(디페닐메틸리덴)아미노]아세테이트(92.2 g, 364 mmol)의 용액에 N₂ 하에 KHMDS(톨루엔 중 0.70 M, 520 mL)를 첨가하고 반응물을 65℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 물(1.00 L)에 붓고, 에틸 아세테이트(1500 mL)를 첨가하였다. 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트(3 × 1.00 L)로 추출하였다. 유기층을 포화 염수(2 × 500 mL)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축하였다. 조 혼합물(113 g)을 암갈색 오일로 수득하고 다음 단계에서 직접 사용하였다.

조 물질의 선택된 NMR 데이터는 dr (R,R) (R,S) = 2.3:1을 나타냈다.

¹ H-NMR: 400 MHz, DMSO-d ₆: 선택된 조 물질 δ ppm 4.08 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.95 (d, J = 10.2 Hz, 1H).

5. 2 (+)-CSA 염(R,R)의 제조

(R)-메틸 2-아미노-2-((3R)-퀴누클리딘-3-일)아세테이트 비스(((1S,4R)-7,7-디메틸-2-옥소바이사이클로[2.2.1]헵탄-1-일)메탄설포네이트)

IPA(700 mL) 중 4A 및 4B의 조 반응 혼합물(105 g, 177 mmol)의 용액에 H₂O(3.21 g, 178 mmol)를 첨가하고, 반응물을 45℃로 가온하였다. IPA(300 mL) 중 (+) CSA(103 g, 442 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응물을 45℃에서 12시간 동안 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고 여과하여 백색 고체를 수득하였다. 고체를 IPA(100 mL) 및 MTBE(100 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 백색 고체(62.0 g, 93.5 mmol, 52.9% 수율)로서 수득하였다.

¹ H-NMR: 400 MHz, DMSO-d ₆ : δ ppm 9.62 - 9.58 (br, s, 1H), 8.51 (br, s, 3H), 4.25 - 4.22 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.25 - 3.23 (m, 5H), 2.90 - 2.86 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 2.66 (m, 2H), 2.41 - 2.37 (d, J = 14.8 Hz, 3H), 1.95 - 1.93 (m, 2H), 1.85 - 1.78 (m, 11H), 1.30 - 1.27 (m, 4H), 1.04 (s, 6H), 0.74 (s, 6H).

화합물 5. 2 (+)-CSA 염(R,R)에 대한 입체화학의 확인

20 mg의 화합물 4A를 1.3 mL의 디클로로메탄/사이클로헥산/메탄올(5:5:3)에 용해시켰다. 용액을 반 밀봉된 4 mL 바이알에 보관하고, 실온에서 천천히 증발시켰다. 결정은 둘째 날에 관찰되었고 결정은 X-선 결정학적 분석을 위해 선택되었다.

결정은 다음 치수를 갖는 무색 니들형이었다: 0.10 × 0.02 × 0.02 mm3. 결정 구조의 대칭은 다음 매개변수를 사용하여 단사정계 공간 군 P2₁에 할당되었다: HyPix-6000HE 영역 검출기가 장착된 Rigaku Oxford Diffraction XtaLAB Synergy 4원 회절계를 사용하여 a = 7.0236(2) Å, b = 26.8204(6) Å, c = 18.0068(5) Å, α = 90°, β = 99.114(3)°, γ = 90°, V = 3349.22(16) Å³, Z = 4, Dc = 1.315 g/cm³, F(000) = 1424.0, μ(Cu Kα) = 1.918 mm^-1 및 T = 293(2) K. 극저온 시스템: Oxford Cryostream 800 Cu: λ = 1.54184Å, 50 W, 다층 미러(μ-CMF)를 갖는 마이크로 초점 소스. 결정으로부터 CCD 검출기까지의 거리: d = 35 mm 튜브 전압: 50 kV 튜브 전류: 1 mA.

5. 2 (+)-CSA 염의 절대 배열이 할당되었다(R,R).

대안적으로, 화합물 4A(R,R)는 하기 방법에 따라 단리될 수 있다:

4A 및 4B의 조 반응 혼합물을 EA:MeOH(40:1 내지 10:1)로 용리하면서 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 부분입체이성질체의 혼합물을 수득하였다. 부분입체이성질체는 키랄 분취용-SFC(컬럼: DAICEL CHIRALPAK IG(250 mm × 50 mm, 10 μm); 이동상: [0.1% NH₃ㆍH₂O EtOH]; B%: 45%; 320분)로 분할하여 화합물 4A(6.00 g, 16.5 mmol)의 2개의 부분입체이성질체를 갈색 오일로서 그리고 화합물 4B (RS)(9.00 g, 24.8 mmol)를 갈색 오일로서 수득하였다.

부분입체이성질체 1 (RR): (R)-메틸 2-((디페닐메틸렌)아미노)-2-((3R)-퀴누클리딘-3-일)아세테이트

¹H-NMR 400 MHz (DMSO-d ₆):δ ppm: 7.64-7.34 (m, 8H), 7.25-7.09 (m, 2H), 4.09 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.60 (s, 3H), 2.92-2.77 (m, 1H), 2.73-2.60 (m, 2H), 2.55 (br d, J = 6.4 Hz, 1H), 2.43-2.21 (m, 3H), 1.66-1.33 (m, 3H), 1.19 (br d, J = 5.2 Hz, 2H).

SFC: Rt = 1.633분, 100%

부분입체이성질체 2 (RS): (S)-메틸 2-((디페닐메틸렌)아미노)-2-((3R)-퀴누클리딘-3-일)아세테이트

¹H-NMR 400 MHz (DMSO-d ₆):δ ppm: 7.62-7.35 (m, 8H), 7.18 (dd, J = 1.6, 7.4 Hz, 2H), 3.96 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H), 2.95-2.80 (m, 1H), 2.65 (br t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.48 (br s, 1H), 2.4 -2.23 (m, 2H), 2.17 (br dd, J = 7.2, 13.6 Hz, 1H), 1.65-1.40 (m, 3H), 1.13-1.05 (m, 1H), 0.96-0.78 (m, 1H).

SFC: Rt = 1.854분, 100%

대안적으로, 화합물 4A 및 4B는 하기에 기재된 바와 같이 분취용 TLC를 사용하여 분리될 수 있다:

4A 및 4B의 혼합물을 분취용 TLC(EtOAc:MeOH(NH₃, 7 M) = 10:1)로 정제하여 202.25 mg의 4A(91.7% 순도, 98.6% ee.)를 황색 고체로서, 114.50 mg의 4B(97.7% 순도, 94.3% ee.)를　황색 오일로서 수득하였다.

LCMS MS m/z 363.2 [M+H]⁺

4A: ¹H NMR: (400MHz, CDCl₃): δ ppm 7.66 - 7.58 (m, 2H), 7.52 - 7.45 (m, 3H), 7.43 - 7.31 (m, 3H), 7.19 (dd, J=1.6, 7.4Hz, 2H), 4.22 (d, J=8.3 Hz, 1H), 3.73 - 3.68 (m, 3H), 3.17 - 3.03 (m, 1H), 2.92 - 2.82 (m, 2H), 2.64 - 2.51 (m, 3H), 1.77 - 1.55(m, 3H), 1.52 - 1.40 (m, 1H), 1.37 - 1.25 (m, 1H).

4B: ¹H NMR: (400MHz, CDCl₃): δ ppm 7.65 - 7.56 (m, 2H), 7.54 - 7.44 (m, 3H), 7.43 - 7.29 (m, 3H), 7.20 (dd, J=2.9, 6.4Hz, 2H), 4.08 (d, J=10.0 Hz, 1H), 3.76 - 3.72 (m, 3H), 3.24 - 3.09 (m, 1H), 3.00 - 2.80 (m, 2H), 2.61 - 2.38 (m, 3H), 1.81 - 1.58(m, 3H), 1.28 - 1.15 (m, 1H), 1.12 - 1.00 (m, 1H)

대안적으로, 화합물 5의 HCl 염은 하기 절차에 따라 수득될 수 있다: THF(6 mL) 중 상기 제조된 4A 입체이성질체(390.00 mg, 1.08 mmol)의 용액에 0℃에서 HCl(12 M(수성), 780.09 μL, 37% 순도)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 THF를 제거하였다. 잔류물에 메틸 3차 부틸 에테르(20 mL) 및 물(20 mL)을 첨가하였다. 수성 층을 감압 하에 농축하여 (R)-메틸 2-아미노-2-((3R)-퀴누클리딘-3-일)아세테이트(250.00 mg, 조 물질, 2HCl 염)를 황색 고체로서 수득하였다.

화합물 5 CSA 염으로부터 화합물 5 유리 모체의 제조

(R)-메틸 2-아미노-2-((3R)-퀴누클리딘-3-일)아세테이트

MeOH(900 mL) 중 Ambersep 900(470 g)의 현탁액에 메틸 (2R)-2-아미노-2-[(3R)-1-아자바이사이클로[2.2.2]옥탄-3-일]아세테이트 비스 (+) 캄포르설폰산 염(제조 1, 47.0 g, 70.9 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 N₂ 하에 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 진공에서 농축하여 표제 화합물(11.0 g, 55.5 mmol, 78.3% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.

화합물 5의 염산염은 또한 상기 기재된 Ambersep 900 방법을 사용하여 유리 모체로 전환될 수 있다.

실시예의 합성

실시예 1 APL-2191 P2B_B

(R,2R,2'R)-2,2'-(테레프탈로일비스(아잔디일))비스(2-((R)-퀴누클리딘-3-일)아세트산)

단계 1

MeCN(1.30 L) 중 메틸 (2R)-2-아미노-2-[(3R)-1-아자바이사이클로[2.2.2]옥탄-3-일]아세테이트(제조 2, 330 g, 333 mmol, MeCN 중 20% 용액) 및 벤젠-1,4-디카복실산(20.50 g, 123 mmol)에 N₂ 하에 TBTU(88.2 g, 275 mmol)를 첨가한 다음, DIEA(65.3 g, 505 mmol, 88.0 mL)를 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하여 조 황색 오일을 수득하고 이를 다음 단계에 직접 사용하였다.

단계 2

IPA(1.07 L) 중 단계 1로부터의 조 반응 혼합물(64.9 g, 123 mmol)의 용액에 KOH(69.2 g, 123 mmol, 1.07 L, 10% 수성)를 첨가하고, 반응물을 N₂ 하에 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 모액을 에틸 아세테이트(2 × 300 mL)로 추출하였다. 수성 층을 포름산을 사용하여 pH = 4-5로 조정하고, 12시간 동안 교반하였다. 생성된 백색 고체를 여과하고, 25℃로 냉각시키기 전에 90℃에서 2시간 동안 물(740 mL)에서 교반하였다. 고체를 여과하고, 물(2 × 300 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 백색 고체(31.4 g, 48.6 mmol, 39.5% 수율)로서 수득하였다.

¹H-NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 7.84 (s, 4H), 4.53 (br d, J = 10.8 Hz, 2H), 3.54 - 3.36 (m, 2H), 3.35 - 3.26 (m, 8H), 3.07 (br dd, J = 7.6, 12.2 Hz, 2H), 2.53 - 2.51 (m, 2H), 2.19 - 1.98 (m, 4H), 1.94 - 1.91 (m, 6H).

LCMS(방법 1): Rt = 2.275분, MS m/z [M+H]⁺ 499.4, 이론 질량: 498.6

HPLC(방법 1): Rt = 3.908분, 99.7%

원소 분석: C 45.89%; H 7.96%; N 8.18%, 이론치+10 H₂O: C 46.01%; H 8.02%; N 8.25%.

15 mg의 화합물 4A를 60℃에서 1.2 ml의 에탄올/H₂O(1:1)에 용해시켰다. 용액을 0.45 μm 미세다공성 필터를 통해 여과하고, 밀봉된 4 ml 바이알에 실온에서 보관하였다. 니들형 결정은 용액에서 관찰되었고 결정은 X-선 결정학적 분석을 위해 선택되었다.

결정은 다음 치수를 갖는 무색 니들형이었다: 0.30 × 0.04 × 0.04 mm3. 결정 구조의 대칭은 다음 매개변수를 사용하여 사방정계 공간 군 C222₁에 할당되었다: HyPix-6000HE 영역 검출기가 장착된 Rigaku Oxford Diffraction XtaLAB Synergy 4원 회절계를 사용하여 a = 15.9948(2) Å, b = 22.5673(3) Å, c = 9.5013(2) Å, α = 90°, β = 90°, γ = 90°, V = 3429.58(10) Å 3, Z = 4, Dc = 1.280 g/cm³, F(000) = 1424.0, μ(Cu Kα) = 0.889 mm^-1, 및 T = 110(14) K. 극저온 시스템: Oxford Cryostream 800 Cu: λ = 1.54184Å, 50 W, 다층 미러(μ-CMF)를 갖는 마이크로 초점 소스. 결정으로부터 CCD 검출기까지의 거리: d = 35 mm 튜브 전압: 50 kV 튜브 전류: 1 mA.

실시예 1의 절대 배열이 할당되었다(R,R, R,R).

실시예 1 HCl 염의 제조

H₂O(760 mL) 및 EtOH(760 mL) 중 APL-2191(30.9 g, 45.5 mmol, 1 당량, 10H₂O)의 현탁액에 25℃에서 HCl(12 M, 7.61 mL, 2.01 당량)을 첨가하고, 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축하였다. APL-2191ㆍ2HCl(28.2 g, 39.0 mmol, 85.7% 수율, 10H₂O)을 결정질 회백색 고체로서 얻었다.

LCMS(방법 1): Rt = 2.300분, MS m/z 250.1 [M+H/2]⁺

HPLC(방법 2): Rt = 3.889분, 99.3%

¹H-NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 7.85 (s, 4H), 4.67 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.63 - 3.50 (m, 2H), 3.41 - 3.22 (m, 8H), 3.10 (ddd, J = 1.8, 6.8, 13.2 Hz, 2H), 2.73 - 2.58 (m, 2H), 2.30 - 2.16 (m, 4H), 2.10 - 1.88 (m, 6H).

실시예 1은 또한 하기 절차에 따라 제조될 수 있다:

단계 1

CHCl₃(8.00 mL) 중 (R)-메틸 2-아미노-2-((3R)-퀴누클리딘-3-일)아세테이트(100.00 mg, 504.39 μmol)의 용액에 30℃에서 벤젠-1,4-디카보닐 클로라이드(51.20 mg, 252.19 μmol, 0.50 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 조 생성물을 백색 고체(180.00 mg, 조 물질, HCl 염)로서 수득하였다.

LCMS: MS m/z 527.5 [M+H]⁺

단계 2

THF(2.00 mL) 중 비스 메틸 에스테르(180.00 mg, 341.80 μmol)의 용액에 25℃에서 물(2 mL) 중 LiOH(48.00 mg, 2.00 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하여 THF를 제거하였다. 혼합물에 1M HCl(수성)을 첨가하여 pH=3이 되도록 하였다. 혼합물을 감압하에 농축하였다. 잔류물을 MeOH(5 mL)에 용해시키고 분취용 HPLC(TFA)로 정제하여 실시예 1(24.20 mg, 48.05 μmol, 14.06% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득하였다.

¹H NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm 7.77 (s, 4H), 4.62 (d, J=11.2 Hz, 2H), 3.50 (br t, J=10.9 Hz, 2H), 3.41 - 3.14(m, 8H), 3.11 - 2.96 (m, 2H), 2.65 - 2.57 (m, 2H), 2.32 - 2.07 (m, 4H), 2.05 - 1.79 (m, 6H).

LCMS: Rt = 5.91, MS m/z 501.1 [M+H]⁺, 이론 질량: 500.2

하기 실시예는 각 실시예에 대해 기재된 바와 같은 적절한 디카복실산 및 화합물 5(R,R)를 사용하여 실시예 1에 대해 기재된 바와 동일한 절차(하기 일반적인 방법 참조)를 사용하여 제조되었다. 실시예를 단계 1 및 단계 2에 대해 개별적으로 기재된 바와 같이 정제하였다.

실시예 2-11에 대한 일반적인 방법:

단계 1

ACN(10 V) 중 화합물 5(2.70 당량)의 용액에 질소 하에 20℃에서 TBTU(2.23 당량) 및 적절한 카복실산(1 당량)을 첨가하였다. DIEA(4.11 당량)를 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 N₂ 하에 20℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축하고 각 실시예에 대해 기재된 바와 같이 정제하였다.

단계 2

IPA(20.0 V) 중 비스-메틸 에스테르(1.00 당량)의 용액에 20℃에서 수성 KOH(10.0%, 10.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 각 실시예에 대해 기재된 바와 같이 정제하였다.

실시예 2 APL-6968

(R,2R,2'R)-2,2'-((피리딘-2,5-디카보닐)비스(아잔디일))비스(2-((R)-퀴누클리딘-3-일)아세트산)

실시예 2는 피리딘-2,5-디카복실산을 사용하는 일반적인 방법에 따라 제조하였다.

단계 1

잔류물을 분취용-HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75 × 30 mm, 3 μm: 이동상: [물 (0.225% FA)-ACN]; B%: 1%-20%, 7분)로 정제하여 비스 메틸 에스테르(330 mg, 524 μmol, 43.8% 수율, 91.2% 순도, FA)를 백색 고체로서 수득하였다.

¹H-NMR 400 MHz (CDCl₃):δ ppm: 8.93 (br s, 1H), 8.82 - 8.60 (m, 2H), 8.50 - 8.40 (m, 2H), 8.26 - 8.24 (m, 1H), 8.02 - 8.01 (m, 1H), 4.92 - 4.84 (m, 1H), 4.82 - 4.73 (m, 1H), 3.80 (d, J = 14.0 Hz, 6H), 3.28 - 3.12 (m, 7H), 2.31 - 2.12 (m, 12H), 1.99 - 1.77 (m, 10H).

LCMS(방법 1) Rt = 0.685분, MS m/z [M+H]⁺ 528.2

단계 2

잔류물을 분취용-HPLC(컬럼: Waters Atlantis T3 150 × 30 mm, 5 μm; 이동상: [물 (0.225% FA)-ACN]; B%: 1%-20%, 10분)로 정제하여 실시예 2(74.0 mg, 132 μmol, 97.4% 순도, FA)를 백색 고체로서 수득하였다.

MS(방법 8): MS m/z 499.9 [M+H]⁺, 이론 질량: 499.2

HPLC(방법 1): Rt = 2.31분

¹H-NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 8.97 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.33 - 8.31 (m, 1H), 8.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.56 (dd, J = 8.4, 10.4 Hz, 2H), 3.60 - 3.52 (m, 2H), 3.39 - 3.24 (m, 8H), 3.13 - 3.04 (m, 2H), 2.62 - 2.51 (m, 2H), 2.28 - 2.19 (m, 4H), 2.05 - 1.89 (m, 6H).

실시예 3 APL-6969

(R,2R,2'R)-2,2'-((피라진-2,5-디카보닐)비스(아잔디일))비스(2-((R)-퀴누클리딘-3-일)아세트산)

실시예 3은 피라진-2,5-디카복실산을 사용하는 일반적인 방법에 따라 제조하였다.

단계 1

잔류물을 분취용-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 × 25 mm, 5 μm; 이동상: [물 (10 mM NH₄HCO₃)-ACN]; B%: 14%-44%, 9분)로 정제하여 비스 메틸 에스테르(90.0 mg, 124 μmol, 10.4 % 수율, 72.7% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다.

LCMS(방법 1): Rt = 0.704분, MS m/z 529.3 [M+H]⁺

단계 2

혼합물을 여과하고, FA(수성, 물 중 20%)를 첨가하여 혼합물을 pH = 7~8로 조정하고, 혼합물을 분취용-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 × 25 mm, 5 μm; 이동상: [물 (10 mM NH₄HCO₃)-ACN]; B%: 1%-10%, 9분)로 정제하여 실시예 3(51.0 mg, 98.0 μmol, 57.5% 수율, 96.0% 순도)을 백색 고체로서 수득하였다.

MS(방법 2): MS [M+H]⁺ 501.1, 이론 질량: 500.2

HPLC(방법 3): Rt = 0.824분

¹H-NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 9.21 (s, 2H), 8.38 (br s, 4H), 4.55 (d, J = 3.60 Hz, 2H), 3.53 - 3.48 (m, 2H), 3.40 - 3.20 (m, 8H), 3.10 - 3.01 (m, 2H), 2.63 - 2.52 (m, 2H), 2.21 (br s, 4H), 2.07 - 1.85 (m, 6H).

실시예 4 APL-6970

(R,2R,2'R)-2,2'-((피리다진-3,6-디카보닐)비스(아잔디일))비스(2-((R)-퀴누클리딘-3-일)아세트산)

실시예 4는 피리다진-3,6-디카복실산을 사용하는 일반적인 방법에 따라 제조하였다.

단계 1

잔류물을 분취용-HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75 × 30 mm 3 μm; 이동상: [물 (10 mM NH₄HCO₃)-ACN]; B%: 5%-35%, 8분)로 정제하여 비스 메틸 에스테르(110 mg, 144 μmol, 22.0% 수율, 81.1% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다.

¹H-NMR 400 MHz (CDCl₃):δ ppm: 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.72 (s, 1H), 7.65 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.55 - 6.50 (m, 2H), 4.96 - 4.91 (m, 2H), 3.79 (s, 6H), 3.16 - 3.05 (m, 3H), 3.02 - 2.69 (m, 11H), 2.31 (s, 3H), 2.09 - 1.87 (m, 9H), 1.79 - 1.63 (m, 5H).

LCMS(방법 1): Rt = 0.807분, MS m/z 617.3

단계 2

잔류물을 분취용-HPLC(컬럼: Waters Atlantis T3 150 × 30 mm, 5 μm; 이동상: [물 (0.225% FA)-ACN]; B%: 1%-20%, 10분)로 정제하여 실시예 4(87.0 mg, 154 μmol, 32.7% 수율, 97.3% 순도, FA)를 백색 고체로서 수득하였다.

LCMS(방법 8): Rt = 2.296분, MS m/z 501.4 [M+H]⁺, 이론 질량: 500.3

¹H-NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 8.41 (s, 2H), 8.35 (s, 0.25H), 4.62 (d, J = 10.8 Hz, 2H), 3.62 - 3.52 (m, 2H), 3.42 - 3.22 (m, 8H), 3.19 - 3.09 (m, 2H), 2.68 - 2.55 (m, 2H), 2.30 - 2.18 (m, 4H), 2.09 - 1.86 (m, 6H).

실시예 5 APL-6971

(R)-2-(4'-(((R)-카복시((R)-퀴누클리딘-3-일)메틸)카바모일)-[1,1'-비페닐]-4-일카복스아미도)-2-((R)-퀴누클리딘-3-일)아세트산

실시예 5는 [1,1'-비페닐]-4,4'-디카복실산을 사용하는 일반적인 방법에 따라 제조하였다.

단계 1

조 물질을 무색 액체로 수득하여 다음 단계에 직접 사용하였다.

LCMS(방법 1) Rt = 0.789분, MS m/z 603.4 [M+H]⁺

단계 2

혼합물을 여과하고, FA(수성, 물 중 20%)를 첨가하고, 혼합물을 pH = 7~8로 조정하였다. 분취용-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 15 × 25 mm, 5 μm; 이동상: [물 (10 mM NH₄HCO₃)-ACN]; B%: 1%-10%, 9분)로 정제하여 실시예 5(37.0 mg, 63.7 μmol, 15.5% 수율, 99.0% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다.

LCMS(방법 4): Rt = 1.43분, MS m/z 575.3 [M+H]⁺, 이론 질량: 574.2

¹H-NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 7.89 - 7.77 (m, 8H), 4.55 (d, J = 10.8 Hz, 2H), 3.59 - 3.50 (m, 2H), 3.42 - 3.18 (m, 8H), 3.13 - 3.02 (m, 2H), 2.58 - 2.48 (m, 2H), 2.30 - 2.15 (m, 4H), 2.09 - 1.84 (m, 6H).

실시예 6 APL-6972

(R)-2-(4'-(((R)-카복시((R)-퀴누클리딘-3-일)메틸)카바모일)-2'-메틸-[1,1'-비페닐]-4-일카복스아미도)-2-((R)-퀴누클리딘-3-일)아세트산

실시예 6은 2-메틸-[1,1'-비페닐]-4,4'-디카복실산을 사용하는 일반적인 방법에 따라 제조하였다.

단계 1

잔류물을 분취용-HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75 × 30 mm, 3 μm; 이동상: [물 (10 mM NH₄HCO₃)-ACN]; B%: 5%-35%, 8분)로 정제하여 비스 에스테르(110 mg, 144 μmol, 22.0% 수율, 81.1% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다.

LC-MS(방법 1): Rt = 0.807분, MS m/z 617.3 [M+H]⁺

단계 2

잔류물을 분취용-HPLC(컬럼: Waters Atlantis T3 150 × 30 mm, 5 μm; 이동상: [물 (0.225% FA)-ACN]; B%: 1%-20%, 10분)로 정제하여 실시예 6(FA 염, 16 mg, 5.44 μmol, 4.13% 수율, 95.0% 순도)을 백색 고체로서 수득하였다.

LCMS(방법 4): Rt = 1.597분, MS m/z 589.3 [M+H]⁺, 이론 질량: 588.3

¹H-NMR 400 MHz (D₂O+DMSO):δ ppm: 8.24 (s, 1H), 7.90 - 7.80 (m, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.68 - 7.62 (m, 1H), 7.43 (br d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.34 - 7.27 (m, 1H), 3.35 - 3.32 (m, 2H), 3.26 - 3.05 (m, 9H), 2.91 - 2.83 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.15 - 2.07 (m, 4H), 1.92 - 1.68 (m, 7H).

실시예 7 APL-6973

(R,2R,2'R)-2,2'-((나프탈렌-2,6-디카보닐)비스(아잔디일))비스(2-((R)-퀴누클리딘-3-일)아세트산)

실시예 7은 나프탈렌-2,6-디카복실산을 사용하는 일반적인 방법 1에 따라 제조하였다.

단계 1

잔류물을 분취용-HPLC(컬럼: 3_Phenomenex Luna C18 75 × 30 mm, 3 μm; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 5%-35%, 7분)로 정제하고, 혼합물을 동결건조시켜 비스 에스테르(160 mg, 277 μmol, 60.0% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.

LC-MS(방법 1): Rt = 0.770분, MS m/z [M+H]⁺ 577.4

단계 2

혼합물을 여과하고, FA(수성, 물 중 20%)를 첨가하여 혼합물을 pH 7~8로 조정하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm*5 um; 이동상: [물 (10 mM NH₄HCO₃)-ACN]; B%: 1%-10%, 9분)로 정제하여 실시예 7(35.0 mg, 62.0 μmol, 22.0% 수율, 96.0% 순도)을 백색 고체로서 수득하였다.

LCMS(방법 5): Rt = 0.282분, MS m/z 549.1 [M+H]⁺, 이론 질량: 548.2

HPLC(방법 6): Rt = 1.624분

¹H-NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 8.23 (s, 2H), 7.95 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 7.77 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 4.59 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.64 - 3.52 (m, 2H), 3.44 - 3.23 (m, 10H), 3.15 - 3.04 (m, 2H), 2.63 - 2.52 (m, 2H), 2.31 - 2.18 (m, 5H), 2.09 - 1.86 (m, 7H).

실시예 8 APL-6974

(R,2R,2'R)-2,2'-((2,5-디메틸테레프탈로일)비스(아잔디일))비스(2-((R)-퀴누클리딘-3-일)아세트산)

실시예 8은 2,5-디메틸벤젠-1,4-디카복실산을 사용하는 일반적인 방법에 따라 제조하였다.

단계 1

조 생성물을 20℃에서 10분 동안 ACN(5 mL) 및 MeOH(3 mL)로 분쇄하고 여과하여 비스 에스테르(114 mg, 185 μmol, 17.9% 수율, 90.1% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다.

LCMS(방법 1): Rt = 0.771분, MS m/z 555.3 [M+H]⁺,

¹H-NMR 400 MHz (DMSO):δ ppm: 8.75 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.18 (br s, 1H), 4.50 - 4.46 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.17 - 2.91 (s, 12H), 2.78-2.68 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.20 - 2.19 (m, 1H), 1.96 - 1.90 (m, 1H), 1.83 - 1.68 (m, 2H), 1.74 - 1.53 (m, 2H), 1.16 (d, J = 6.0 Hz, 1H).

단계 2

잔류물을 분취용-HPLC(컬럼: Waters Atlantis T3 150 × 30 mm, 5 μm; 이동상: [물 (0.225% FA)-ACN]; B%: 1%-20%, 10분)로 정제하여 실시예 8(10.0 mg, 17.1 μmol, 9.50% 수율, 98.1% 순도, FA)을 백색 고체로서 수득하였다.

LCMS(방법 8): Rt = 2.773분, MS m/z 527.3 [M+H]⁺, 이론 질량: 526.3

¹H-NMR 400 MHz (D₂O+DMSO):δ ppm: 7.16 (s, 2H), 4.34 (br d, J = 10.4 Hz, 2H), 3.41 - 3.33 (m, 2H), 3.22 - 3.10 (m, 7H), 2.94 - 2.88 (m, 2H), 2.36 - 2.27 (m, 3H), 2.21 (s, 6H), 2.16 - 2.01 (m, 4H), 1.90 - 1.70 (m, 6H).

LCMS m/z 527.3 [M+H]⁺, 이론 질량: 526.3, Rt = 2.77분, 100%

실시예 9 APL-6975

(R,2R,2'R)-2,2'-((2-메틸테레프탈로일)비스(아잔디일))비스(2-((R)-퀴누클리딘-3-일)아세트산)

실시예 9는 2-메틸벤젠-1,4-디카복실산을 사용하는 일반적인 방법에 따라 제조하였다.

단계 1

잔류물을 분취용-HPLC(컬럼: Phenomenex luna C18 150 × 25 mm, 10 μm; 이동상: [물 (0.225% FA)-ACN]; B%: 0%-20%, 10분)로 정제하여 비스 에스테르(500 mg, 647 μmol, 23.3% 수율, 70.0% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다.

LCMS(방법 1): Rt = 0.707분, MS m/z 541.2 [M+H]⁺

단계 2

혼합물을 여과하고, FA(수성, 물 중 20%)를 첨가하여 혼합물을 pH 7~8로 조정하였다. 혼합물을 분취용-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 × 25 mm,　5 μm; 이동상: [물 (10 mM NH₄HCO₃)-ACN]; B%: 1%-10%, 9분)로 정제하여 실시예 9(116 mg, 202.26 μmol, 54.67% 수율, 97.4% 순도, FA)를 백색 고체로서 수득하였다.

LCMS(방법 8): Rt = 2.353분, MS m/z 513.0 [M+H]⁺, 이론 질량: 512.3

¹H-NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 8.38 (m, 1H), 7.64 - 7.59 (m, 2H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.53 - 4.48 (m, 2H), 3.60 - 3.49 (m, 2H), 3.39 - 3.21 (m, 8H), 3.12 - 2.99 (m, 2H), 2.54 - 2.40 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.30 - 2.14 (m, 4H), 2.04 - 1.86 (m, 6H).

실시예 10 APL-6976

(R,2R,2'R)-2,2'-((2,5-비스(벤질옥시)테레프탈로일)비스(아잔디일))비스(2-((R)-퀴누클리딘-3-일)아세트산)

실시예 10은 2,5-비스(벤질옥시)벤젠-1,4-디카복실산을 사용하는 일반적인 방법에 따라 제조하였다.

단계 1

잔류물을 분취용-HPLC(컬럼: Phenomenex luna C18 150 × 25 mm, 10 μm; 이동상: [물 (0.225% FA)-ACN]; B%: 11%-41%, 10분)로 정제하여 비스 에스테르(180 mg, 211 μmol, 39.9% 수율, 92.1% 순도, FA)를 백색 고체로서 수득하였다.

¹H-NMR 400 MHz (CDCl₃):δ ppm: 8.52 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.37 (s, 1H), 7.93 (s, 2H), 7.58 - 7.40 (m, 10H), 5.27 - 5.17 (m, 4H), 4.79 - 4.75 (m, 2H), 3.69 (s, 6H), 3.34 - 3.14 (m, 6H), 3.07 - 2.95 (m, 2H), 2.90 - 2.75 (m, 4H), 2.11 - 2.01 (m, 2H), 1.99 - 1.88 (m, 6H), 1.85 - 1.70 (m, 4H).

단계 2

잔류물을 분취용-HPLC(컬럼: Phenomenex luna C18 150 × 25 mm, 10 μm; 이동상: [물 (0.225% FA)-ACN]; B%: 1%-30%, 10분)로 정제하여 실시예 10(67.0 mg, 87.6 μol, 40.4% 수율, 99.0% 순도, FA)를 백색 고체로서 수득하였다.

LCMS(방법 1): Rt = 0.799분, MS m/z 711.3 [M+H]⁺, 이론 질량: 710.33

HPLC(방법 7), Rt = 2.519분.

¹H-NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 7.64 (s, 2H), 7.59 - 7.50 (m, 10H), 5.25 - 5.17 (m, 4H), 4.57 (d, J = 10.4 Hz, 2H), 3.28 - 3.10 (m, 6H), 2.98 - 2.88 (m, 2H), 2.75 - 2.67 (m, 2H), 2.47 - 2.35 (m, 2H), 2.13 - 2.02 (m, 6H), 2.08 - 1.87 (m, 2H), 1.86 - 1.73 (m, 4H).

실시예 11 P2B-E(APL 번호 없음)

2-[[3-[[카복시-[(3R)-퀴누클리딘-3-일]메틸]카바모일] 벤조일]아미노]-2-[(3R)-퀴누클리딘-3-일]아세트산

단계 1

CHCl₃(4 mL) 중 메틸 2-아미노-2-[(3R)-퀴누클리딘-3-일]아세테이트(100.00 mg, 504.39 μmol)의 용액에 30℃에서 벤젠-1,3-디카보닐 클로라이드(51.20 mg, 252.20 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.

LCMS: Rt = 0.881분, MS m/z 527.3 [M+H]⁺

단계 2

THF(4 mL) 중 비스 메틸 에스테르(165.00 mg, 313.31 μmol)의 용액에 30℃에서 H₂O(4 mL) 중 LiOH(96.00 mg, 4.01 mmol, 12.79)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하여 THF를 제거하였다. 잔류물에 물(10 mL) 및 1 M HCl(수성)을 첨가하여 pH=2가 되도록 하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 분취용 HPLC로 정제하여 실시예 11(37.20 mg, 63.79 μmol, 40.72% 수율, 98% 순도, 2HCl)을 백색 고체로서 수득하였다.

¹H-NMR 400 MHz (D₂O):δ ppm: 8.10 - 8.01 (m, 1H), 7.88 (dd, J=1.7, 7.8 Hz, 2H), 7.54 (t, J=7.8 Hz, 1H), 4.62(d, J=11.0 Hz, 2H), 3.59 - 3.50 (m, 2H), 3.38 - 3.15 (m, 8H), 3.11 - 2.99 (m, 2H), 2.71 - 2.54 (m, 2H), 2.26 - 2.07 (m, 4H), 2.06- 1.78 (m, 6H).

LCMS Rt = 5.9분, MS m/z = 499.3 [M+H]⁺, 이론 질량: 498

생물학적 검정

MIRA　면역탁도 검정

Roche COBAS MIRA Plus 자동분석기의 CRP 면역탁도 검정은 상이한 CRP 에피토프에 대한 특이성을 갖는 2개의 상이한 단일클론 항체와 공유 결합된 2개의 상이한 크기의 라텍스 입자를 사용한다(5). 상기 검정은 감도와 특이도가 높고 검출 상한이 높은 천연 오량체 CRP 측정을 위해 Roche에 의해 검증되었다; 이것은 본 발명자들 실험실에서 생성된 표준에 대해 보정되었다. 우연하게도, 검정의 항체 중 하나는 CRP의 리간드 결합 B 면에 존재하는 에피토프에 결합한다. 따라서, 결합 포켓이 리간드에 의해, 예를 들어, 오량체의 B면 대 B면 복합화에 의해 점유되거나 폐색되는 경우, 상이한 에피토프에 결합하는 항체를 사용하는 다른 유형의 검정에 의해 입증될 수 있지만 검정은 CRP를 검출하지 못한다. BPC8 및 APL-2191과 같은 2가 화합물은 CRP 오량체의 쌍을 가교하도록 설계되었다. 따라서, MIRA 검정에서 CRP 인식의 억제는 그러한 리간드와 CRP 사이의 복합체 형성의 효능과 역가를 모니터링하는 편리한 도구이다(6).

CRP 농도는 COBAS MIRA 자동분석기에 의해 리간드의 존재 및 부재 하에 측정되었다. 트리스하이드록시메틸아민(100 mM), 염화칼슘(20 mM) 및 염화나트륨(1.4 M)으로부터 MilliQ 물에서 농축된 트리스-칼슘 완충액(×10 TC)을 제조하였다. HCl을 사용하여 pH를 8.0으로 조정하고 아지드화나트륨을 첨가하였다(0.1% w/v); 완충액을 4℃에서 보관하였다. 10배 희석된 작업 완충액(TC)은 900 ml의 MilliQ 물로 100 ml의 ×10 농축 완충액을 희석하여 제조하였다. 인간 CRP는 이전에 보고된 바와 같이 단리, 정제 및 특성화되었으며(6-9) -80℃에서 냉동 보관되었다. 필요한 경우, 스톡 CRP를 37℃에서 해동하고 실험 기간 동안 4℃에서 유지된 작업 희석액을 제조하였다. CRP 농도는 320 nm(광 산란)에서 흡광도에 대해 보정한 후 A ₂₈₀ 을 측정하고 인간 CRP에 대해 측정된 흡광 계수 A(1%,1cm) = 17.5를 사용하여 1 cm 광 경로가 있는 석영 큐벳에서 분광광도계(Beckman Coulter DU　650)로 결정되었다(10). TC 완충액에서 ~90 μg/ml(0.78 μM의 오량체)의 인간 CRP를 스톡 용액으로부터 제조하였다; 75 μl 분취량을 검정에 사용하였다. 화합물은 Wuxi AppTec(Wuhan, China)에 의해 고체로서 공급되었다. 이들은 용해도에 따라 최대 10 mM(S1로 표시됨)의 적합한 농도로 TC 완충액에 용해되었다. 이어서, 이들을 TC 완충액(100 μl 리간드 + 200 μl TC)으로 1:2로 연속 희석하여 최대 9개의 희석액, S2-S10을 제공하였다. TC 완충액 대조군(S0)이 각 검정에 포함되었다. 15　μl 부피의 각 리간드 용액을 75 μl의 CRP와 함께 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 최종 농도는 0.73 μM 천연 오량체 CRP, 리간드 S1-S10 = 625-0.03 μM이며, 이는 850-0.04의 리간드:CRPr 비율에 상응한다. 화합물이 TC 완충액에서 용해도가 감소한 경우, 100 μM의 최종 최고 검정 농도에 상응하는 더 낮은 스톡 농도(0.6 mM로부터)가 사용되었다.

데이터는 최종 총 리간드 농도(μM)에 대해 측정된 CRP(mg/L)로 표시되며 EC₅₀을 계산하기 위해 4개의 매개변수 로지스틱 곡선 y = 최소 + (최대-최소)/(1+(x/EC₅₀)^-Hill 기울기)를 사용하여 Sigmaplot(V14)을 사용하여 플롯팅되었다. 적절한 경우, 샘플은 또한 알려진 양의 인간 CRP를 첨가한 후 전체 정상 인간 혈청에서 측정하였다. 모든 화합물은 Carbogen AMCIS AG에 의해 제조되고 10 mM 농도로 멸균수로 희석된, 고도로 정제된 비스(포스포콜린)옥탄(BPC8) 제제와 비교하여 검정하였다. -80℃에서 보관하였다. 용액은 필요에 따라 TC 완충액으로 희석하였다.

표 1은 실시예 1-12에 대한 MIRA 면역탁도 검정에 대한 데이터를 나타낸다.

[표 1]

화학식 I의 예는 RR,RR 입체이성질체이다. 이 구조의 다른 입체이성질체는 활성이 적거나 활성이 없다. SS,SS 이성질체는 가장 활성인 대안적인 이성질체이다(QA,QA 퀴누클리딘으로 표시됨, 아미노산: SS,SS IC₅₀ 34.4 μM, RS,RS IC₅₀ > 1000 μM, SR,SR IC₅₀ > 1000 μM, RS,RR >1000 μM). 대안적인 이성질체는 적합한 보호기 전략이 사용된 원하는 입체이성질체를 사용하여 상기 방법에 따라 당업자에 의해 제조될 수 있다.

이 텍스트에 인용된 각 문서("출원 인용 문서") 및 각 출원 인용 문서에서 인용되거나 참조된 각 문서, 및 이 텍스트와 이 텍스트에 통합된 임의의 문서에 언급된 임의의 생성물에 대한 임의의 제조업체의 사양 또는 지침은 본원에 참조로 포함되고; 본원에 참조로 포함된 각 문서의 기술은 본 발명의 실시에 사용될 수 있다.

본 발명은 2020년 2월 19일에 출원된 영국 특허 출원 GB2002299.2로부터 우선권을 주장하며, 그 전체 내용도 본원에 참조로 명시적으로 포함된다.

참조문헌

Claims

의약에 사용하기 위한 제제로서, 상기 제제가 이의 개별 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 프로드럭 또는 유도체를 포함하는 화학식 I의 화합물을 포함하는 제제:
화학식 I

상기 식에서, Ar은 아릴 링커 기이다.
제1항에 있어서, 상기 링커 기 Ar이 하기 일반식 Ar-I 내지 Ar-VI로 이루어진 군으로부터 선택되는, 의약에 사용하기 위한 제제:

상기 식에서, R은 할로겐, 하이드록시, 시아노, -CONH₂, 또는 C1-C5 (사이클로)알킬 또는 C1-C5 (사이클로)알콕시로부터 선택된 아릴 고리(들) 상의 하나 이상의 임의의 치환체를 나타내고, 여기서, 상기 알킬 기는 페닐 기 또는 하나 이상의 할로겐 원자로 임의로 치환된다.
제2항에 있어서, 상기 아릴 링커 기 Ar이 화학식 Ar-VII 내지 Ar-XVI를 갖는 기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 의약에 사용하기 위한 제제:

.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, (R,R,R,R) 이성질체의 부분입체이성질체 순도가 적어도 약 50 중량%, 적합하게는 적어도 약 60 중량%, 보다 적합하게는 적어도 약 75 중량%, 보다 더 적합하게는 적어도 약 90 중량%, 및 가장 적합하게는 적어도 약 98 중량%인, 의약에 사용하기 위한 제제.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 화합물이 하기 화학식 II를 갖는 것인, 의약에 사용하기 위한 제제:
화학식 II
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 화합물이 염산염, 특히 2HCl 염인, 의약에 사용하기 위한 제제.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 화합물이 약 20 μM 이하, 보다 더 바람직하게는 약 10 μM 이하, 또는 약 5 μM, 또는 약 1 μM 이하의 IC₅₀을 갖는 인간 C-반응성 단백질(CRP)의 억제제인, 의약에 사용하기 위한 제제.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 염증성 및/또는 조직 손상 병태를 갖는 대상체에서 조직 손상의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 제제.
제8항에 있어서, 상기 염증성 및/또는 조직 손상 병태가 급성 관상동맥 증후군, 불안정 협심증, 플라크 파열 및/또는 초기 죽상혈전증 중 하나 이상을 포함하는, 제제.
제9항에 있어서, 상기 염증성 및/또는 조직 손상 병태가 감염, 감염의 알레르기 합병증, 염증성 질환, 허혈성 또는 기타 괴사, 외상성 조직 손상 및 악성 신생물(malignant neoplasia)로부터 선택되는, 제제.
제10항에 있어서, 상기 병태가 패혈증을 포함하는 세균 감염, 바이러스 감염, 예를 들어, SARS-Cov-2 감염과 같은 중증 급성 호흡기 증후군(SARS) 바이러스 감염, 진균 감염 및 기생충 감염으로부터 선택되는 감염인, 제제.
제8항에 있어서, 상기 병태가 류마티스 관절염, 청소년 만성 (류마티스) 관절염, 강직성 척추염, 건선성 관절염, 전신성 혈관염(systemic vasculitis), 류마티스성 다발근통, 라이터 증후군(Reiter's disease), 크론병 및 가족성 지중해열 및 기타 자가염증성 병태로부터 선택된 염증성 질환인, 제제.
제8항에 있어서, 상기 병태가 심근 경색, 허혈성 뇌졸중(ischaemic stroke), 종양 색전증(tumour embolization) 및 급성 췌장염으로부터 선택된 조직 괴사인, 제제.
제8항에 있어서, 상기 병태가 정규 수술(elective surgery), 화상, 화학적 손상, 골절 및 압박 손상으로부터 선택된 외상인, 제제.
상기 병태가 림프종, 호지킨병(Hodgkin's disease), 암종(carcinoma) 및 육종(sarcoma)으로부터 선택된 악성 신생물인, 제8항에 따른 용도.
제8항에 있어서, 상기 병태가 류마티스성 열(rheumatic fever), 사구체신염, 및 나병 결절 홍반(erythema nodosum leprosum)으로부터 선택된 감염의 알레르기 합병증인, 제제.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 제제를 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체와 혼합하여 포함하는 약제학적 조성물.
하기 화학식 III의 화합물을 화학식 IV-A 또는 IV-B의 화합물:
화학식 III

(상기 식에서, R¹은 카복실 보호기이다)

과 반응시켜 화학식 V의 화합물:
화학식 V

을 형성한 후, R¹ 보호기를 절단하여 화학식 I의 화합물을 형성하는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물의 제조 방법.
화학식 III의 화합물, 또는 화학식 III의 화합물과 광학 활성 유기산 화합물과의 염:
화학식 III

상기 식에서, R¹은 카복실 보호기이다.
제19항에 있어서, 상기 화합물이 화학식 III의 화합물과 (1S)-(+)-10-캄포르설폰산과의 염인, 화합물.
제19항 또는 제20항에 있어서, 상기 보호기 R¹이 메틸인, 화합물.