JP2023528104A - 鉄皮石斛オリゴ糖、鉄皮石斛オリゴ糖誘導体及びその調製方法並びに適用 - Google Patents
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Abstract
【要約】本発明は、鉄皮石斛オリゴ糖、鉄皮石斛オリゴ糖誘導体及びその調製方法並びに適用に関し、主な技術は、前記鉄皮石斛オリゴ糖が３～９個のグリコシド残基を含み、非還元末端にグルコース残基を有することであり、その誘導体は、非還元末端で疎水性残基に置換されることによって得られ、さらに、両者の調製方法及び適用を提供する。本発明の有益な効果は：鉄皮石斛から初めて純度９９％以上の鉄皮石斛オリゴ糖が調製され、鉄皮石斛オリゴ糖の構造、抗老化活性及び免疫調節作用が明らかにされ、コラゲナーゼをよく阻害でき、ＴＮＦ－α及びＩＬ－６に対しても一定的な活性を示し、医薬品、食品、日用品の開発などの分野に応用できる。【選択図】図1
Description
本出願は、２０２１年３月０５日に中国特許庁に出願された出願番号が２０２１１０２４７１１７．×、発明名称が「鉄皮石斛オリゴ糖、鉄皮石斛オリゴ糖誘導体及びその調製方法並びに適用」の中国特許出願の優先権を主張し、その全ての内容が本出願に引用によって組み込まれている。
本発明は、天然薬化学の技術分野に関し、特に鉄皮石斛オリゴ糖、鉄皮石斛オリゴ糖誘導体及びその調製方法並びに適用に関する。
鉄皮石斛（デンドロビウムオフィシナーレＫｉｍｕｒａ Ｅｔ Ｍｉｇｏ、Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｋｉｍｕｒａ ｅｔ Ｍｉｇｏ）はラン科（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）セッコク属（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ）の多年草で、各種版の薬局方に記載されており、津液を生じて胃を養い、陰を養って熱を取り除き、肺を潤して腎を益し、目を明るくし、腰を強くする等の効果があると記載されている。現代の薬理学の研究により、鉄皮石斛には抗酸化作用、血糖降下作用、免疫調節作用、抗炎症作用等の活性があることが明らかにされている。古代の文献では鉄皮石斛の茎は、肌の潤沢や糖尿症に使用できると記録されている。研究によると、鉄皮石斛には、主に多糖（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）、スチルベン（ｓｔｉｌｂｅｎｅ）、フラボノイド、フラボン、リグニン等の化学成分が含まれている。
老化は人間の成長と発育の必然的な結果であり、老化をいかに遅らせるかは、スキンケア製品分野やバイオメディカル・ヘルスの分野では究極の命題とされてきた。老化は大きく２つのカテゴリーに分けられる：生理的老化と病理的老化である。生理的老化とは、成熟期を経て起こる生理的退化過程のことであり、病理的老化とは、さまざまな外来要因（さまざまな病気を含む）によって引き起こされる老化の変化のことである。両者を区別するのは実際には困難である。そして、鉄皮石斛に抗老化効果があることが古文書に記録されていることから、鉄皮石斛に含まれる天然で環境に優しく、安全で効率的な抗老化物質が人々の注目を集める研究の焦点となっている。
現在、多くの国内外の研究者が鉄皮石斛のさまざまな部分に対して化学成分を抽出・分離する研究を行い、多くの研究者は、主に低分子フェノール成分や分子量が１０万を超える多糖類成分を得る。一部の研究者は、鉄皮石斛からビベンジル類成分を中心に２０個化合物を分離し、活性スクリーニングにより鉄皮石斛の低分子フェノール類成分が抗酸化、抗炎症、抗腫瘍等の作用を有することを発現した。また、一部の研究者は、鉄皮石斛から２つの多糖類を抽出して分離し、その分子量はそれぞれ７．４×１０５Ｄａと５．４×１０５Ｄａである。一部の研究者は、水抽出とアルコール沈殿及び硫酸加水分解の方法を利用して鉄皮石斛から多糖類が得られ、活動スクリーニングにより、鉄皮石斛多糖類成分がマウスの末梢白血球の数に影響を与え、これは免疫調節作用があることを説明する。一部の研究者は、超音波抽出により鉄皮石斛多糖類が得られ、活性スクリーニングによりショウジョウバエのＳＯＤ、ＭＤＡ、ＣＡＴに効果があることを発現し、これは抗酸化作用があることを説明する。一部の研究者は、鉄皮石斛多糖類には４つの主要なホモ多糖があり、分子量は６８００～１．７８×１０５Ｄａであることを明らかにした。前の研究作業は、低分子フェノール成分や多糖類成分の薬理活性に集中されているが、オリゴ糖に関する研究はほとんど報告されていない。
これを考慮して、本発明は、鉄皮石斛オリゴ糖、鉄皮石斛オリゴ糖誘導体及びその調製方法並びに適用を提供するものであり、鉄皮石斛オリゴ糖は、抗老化効果や免疫調節効果を有し、抗老化効果や免疫調節効果を有する皮膚化粧品、健康食品、医薬品への適用が明らかにされた。
本発明の上記の目的を達成するために、本発明は、主に以下の技術案を提供する：
本発明は、前記鉄皮石斛オリゴ糖は、３～９個のグリコシド残基を含み、非還元末端にグルコース残基を有する鉄皮石斛オリゴ糖を提供する。
本発明は、前記鉄皮石斛オリゴ糖は、３～９個のグリコシド残基を含み、非還元末端にグルコース残基を有する鉄皮石斛オリゴ糖を提供する。
好ましくは、前記鉄皮石斛オリゴ糖は６つのグリコシド残基を含む。
前記鉄皮石斛オリゴ糖の構造は化Iに示すとおりである：
好ましくは、前記グリコシド残基は、ガラクトース残基、マンノース残基及びグルコース残基を含む。
好ましくは、前記ガラクトース残基、マンノース残基及びグルコース残基のモル比が、（３～２）：（２～１）：（２～１）である。
好ましくは、前記ガラクトース残基、マンノース残基及びグルコース残基のモル比は、２：１：１である。
本発明は、鉄皮石斛オリゴ糖誘導体を提供し、前記鉄皮石斛オリゴ糖誘導体は前記鉄皮石斛オリゴ糖のグルコース残基と疎水性残基との反応によって生成され、前記疎水性残基は、直鎖又は分岐鎖のＣ１－Ｃ１８アルキル基、Ｃ１－Ｃ１８アルキルカルボン酸、Ｃ１－Ｃ１８アルキルアミン、Ｃ１－Ｃ１８アリールアルキル基及びＣ１－Ｃ１８アルキルアミドのいずれか一つを含み、或は
前記疎水性残基は、ベンゾイル基、フェニルアセチル基、フェニルプロピオニル基のいずれか一つを含むことを特徴とする。
前記疎水性残基は、ベンゾイル基、フェニルアセチル基、フェニルプロピオニル基のいずれか一つを含むことを特徴とする。
本発明は、抗老化或は免疫調節製品の調製における上記の鉄皮石斛オリゴ糖或は鉄皮石斛オリゴ糖誘導体の適用を提供した。
好ましくは、前記製品には、医薬品、食品、製剤及び化粧品が含まれる。
好ましくは、前記化粧品の種類には、フェイスクリーム、乳剤、化粧水或はリペアクリームが含まれる。
本発明は、上記の鉄皮石斛オリゴ糖の抽出方法を提供し、
１）鉄皮石斛粉末の調製：鉄皮石斛の茎を乾燥させた後、粉砕して、ふるいにかけて鉄皮石斛粉末を得るステップと、
２）鉄皮石斛の水抽出物の調製：前記鉄皮石斛の粉末と水を混合した後、少なくとも１回の沸騰水浴を行い、次に水抽出物を合わせて鉄皮石斛の水抽出物を得るステップと、
３）鉄皮石斛の濃縮水抽出物の調製：前記鉄皮石斛の水抽出物に対して遠心分離した後、真空濃縮して、鉄皮石斛の濃縮水抽出物を得るステップと、
４）再構成液の調製：前記鉄皮石斛の濃縮水抽出物にエタノールを加え、沈殿させ、遠心分離し、上澄液を廃棄し、得られた沈殿物に水を加えて再構成し、再構成液を得るステップと、
５）鉄皮石斛オリゴ糖の水溶液の調製：前記再構成液に対して脱蛋白した後、凍結乾燥して鉄皮石斛粗多糖を得るステップと、前記鉄皮石斛粗多糖を水に溶解した後、そのなかにセルラーゼを加えて反応させた後、不活性化にして遠心分離し、沈殿物を廃棄して鉄皮石斛オリゴ糖の水溶液を得るステップと、
６）鉄皮石斛オリゴ糖の調製：鉄皮石斛オリゴ糖の水溶液に対して精製して、鉄皮石斛オリゴ糖を得るステップを含むことを特徴とする。
１）鉄皮石斛粉末の調製：鉄皮石斛の茎を乾燥させた後、粉砕して、ふるいにかけて鉄皮石斛粉末を得るステップと、
２）鉄皮石斛の水抽出物の調製：前記鉄皮石斛の粉末と水を混合した後、少なくとも１回の沸騰水浴を行い、次に水抽出物を合わせて鉄皮石斛の水抽出物を得るステップと、
３）鉄皮石斛の濃縮水抽出物の調製：前記鉄皮石斛の水抽出物に対して遠心分離した後、真空濃縮して、鉄皮石斛の濃縮水抽出物を得るステップと、
４）再構成液の調製：前記鉄皮石斛の濃縮水抽出物にエタノールを加え、沈殿させ、遠心分離し、上澄液を廃棄し、得られた沈殿物に水を加えて再構成し、再構成液を得るステップと、
５）鉄皮石斛オリゴ糖の水溶液の調製：前記再構成液に対して脱蛋白した後、凍結乾燥して鉄皮石斛粗多糖を得るステップと、前記鉄皮石斛粗多糖を水に溶解した後、そのなかにセルラーゼを加えて反応させた後、不活性化にして遠心分離し、沈殿物を廃棄して鉄皮石斛オリゴ糖の水溶液を得るステップと、
６）鉄皮石斛オリゴ糖の調製：鉄皮石斛オリゴ糖の水溶液に対して精製して、鉄皮石斛オリゴ糖を得るステップを含むことを特徴とする。
好ましくは、ステップ１）で、前記乾燥処理する温度は５０～６０℃であり、前記乾燥処理した後の鉄皮石斛の茎の水分質量含有量は６％未満であり、前記ふるいにかけるメッシュの数量は２０～４０メッシュであり、
ステップ２）では、前記鉄皮石斛粉末と水を１：（５０～８０）ｇ／ｍＬの質量体積比で混合し、沸騰水浴を２～３回行い、毎回の沸騰水浴の時間は１～２ｈであり、
ステップ３）では、前記遠心分離の条件は、３０００～４０００ｒｐｍ／ｍｉｎ、８～１２ｍｉｎ、室温であり、前記真空濃度の条件は、回転蒸発法を使用し、エタノールの回収温度は＜５０℃であり、圧力は０．７Ｐａ～０．９Ｐａであり、前記鉄皮石斛濃縮水抽出物の物質と液体の質量体積比は１：（５～１０）ｇ／ｍＬである。
ステップ２）では、前記鉄皮石斛粉末と水を１：（５０～８０）ｇ／ｍＬの質量体積比で混合し、沸騰水浴を２～３回行い、毎回の沸騰水浴の時間は１～２ｈであり、
ステップ３）では、前記遠心分離の条件は、３０００～４０００ｒｐｍ／ｍｉｎ、８～１２ｍｉｎ、室温であり、前記真空濃度の条件は、回転蒸発法を使用し、エタノールの回収温度は＜５０℃であり、圧力は０．７Ｐａ～０．９Ｐａであり、前記鉄皮石斛濃縮水抽出物の物質と液体の質量体積比は１：（５～１０）ｇ／ｍＬである。
好ましくは、ステップ４）で、前記鉄皮石斛の濃縮水抽出物にエタノールを添加して沈殿させることは、具体的に、前記鉄皮石斛の濃縮水抽出物に体積濃度が９５％であるエタノールを、混合物のアルコール濃度が体積百分率で７０～８０％となるように添加し、一晩沈殿させることであり、
前記遠心分離の条件は、３５００～４５００ｒｐｍ、１８～２２ｍｉｎ、室温であり、前記再構成する時に沈殿物と水との重量体積比は１：（４～６）ｇ／ｍＬであり、
ステップ５）で、前記再構成液に対する除タンパク方法は、Ｓａｖａｇｅ法によって前記再構成液に対して除タンパクし、
前記凍結乾燥温度は４５℃であり、
前記鉄皮石斛粗多糖に水を加えて溶解することは、前記鉄皮石斛粗多糖に水を加えて４．５～５．５ｍｇ／ｍＬになるまで溶解することであり、
前記セルラーゼの添加量は、前記鉄皮石斛粗多糖の重量の２％～４％であり、
前記セルラーゼを添加した後、反応する反応温度は５５～６５℃であり、反応時間は２ｈ～４ｈであり、
前記不活性化にする方法は、２５～３５ｍｉｎ煮沸することによる不活性化処理であり、
前記遠心条件は３５００～４５００ｒｐｍ、１５～２５ｍｉｎ、室温であり、
前記鉄皮石斛オリゴ糖水溶液中のオリゴ糖含有量は８０％を超え、
ステップ６）では、前記精製はＧ７５ゲルカラムを使用して行われ、前記鉄皮石斛オリゴ糖の純度は９９．８６％である。
前記遠心分離の条件は、３５００～４５００ｒｐｍ、１８～２２ｍｉｎ、室温であり、前記再構成する時に沈殿物と水との重量体積比は１：（４～６）ｇ／ｍＬであり、
ステップ５）で、前記再構成液に対する除タンパク方法は、Ｓａｖａｇｅ法によって前記再構成液に対して除タンパクし、
前記凍結乾燥温度は４５℃であり、
前記鉄皮石斛粗多糖に水を加えて溶解することは、前記鉄皮石斛粗多糖に水を加えて４．５～５．５ｍｇ／ｍＬになるまで溶解することであり、
前記セルラーゼの添加量は、前記鉄皮石斛粗多糖の重量の２％～４％であり、
前記セルラーゼを添加した後、反応する反応温度は５５～６５℃であり、反応時間は２ｈ～４ｈであり、
前記不活性化にする方法は、２５～３５ｍｉｎ煮沸することによる不活性化処理であり、
前記遠心条件は３５００～４５００ｒｐｍ、１５～２５ｍｉｎ、室温であり、
前記鉄皮石斛オリゴ糖水溶液中のオリゴ糖含有量は８０％を超え、
ステップ６）では、前記精製はＧ７５ゲルカラムを使用して行われ、前記鉄皮石斛オリゴ糖の純度は９９．８６％である。
本発明は、上記の鉄皮石斛オリゴ糖誘導体の調製方法を提供し、以下のステップを含む：
１）脂肪酸を脂肪アルコールに還元し、
２）前記脂肪アルコールを鉄皮石斛オリゴ糖とグリコシル化して、前記鉄皮石斛オリゴ糖誘導体を得る。
１）脂肪酸を脂肪アルコールに還元し、
２）前記脂肪アルコールを鉄皮石斛オリゴ糖とグリコシル化して、前記鉄皮石斛オリゴ糖誘導体を得る。
好ましくは、ステップ１）で、前記脂肪酸を脂肪アルコールに還元するための反応プロセスは、９～１１ｍｍｏｌの脂肪酸、１８～２２ｍｍｏｌのＮａＢＨ４、３８～４２ｍｍｏｌのＡｌＣｌ３、２５～２９ｍｌのＴＨＦ、２～４ｍｌのＭｅＯＨを混合して反応させ、反応温度は９５～１０５℃であり、反応時間は７．５～８．５ｈであり、収率は８８～９２％であり、
ステップ２）で、前記グリコシル化の反応プロセスは、アルコールと糖のモル比は１：（８～１０）であり、混合した後、触媒として臭化セチルアンモニウムにより触媒反応させ、反応温度は１１０～１１５℃であり、反応時間は２．５～～３．５ｈであり、収率は７８～８２％である。
ステップ２）で、前記グリコシル化の反応プロセスは、アルコールと糖のモル比は１：（８～１０）であり、混合した後、触媒として臭化セチルアンモニウムにより触媒反応させ、反応温度は１１０～１１５℃であり、反応時間は２．５～～３．５ｈであり、収率は７８～８２％である。
本発明は、抗老化或は免疫調節製品を提供し、前記抗老化或は免疫調節製品が、フェイスクリーム、乳剤、化粧水或はリペアクリームであり、
質量百分率で、前記フェイスクリームには、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液０．４～０．６％、ステアリン酸７．５～８．５％、Ｃ１６アルコール１．５～２．５％、自己乳化モノグリセリド１．５～２．５％、水素化ラノリン１．５～２．５％、液体パラフィン１１～１３％、グリセロール６～８％、乳化剤１～２％、防腐剤０．１～０．３％、香料０．１～０．３％、余量の水が含まれ、
質量百分率で、前記乳液には、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液０．４～０．６％、ステアリン酸１．３～１．５％、セタノール０．０８～０．１２％、２－エチルアルコールセチルステアレート１．７～１．９％、ミリスチン酸イソプロピル０．１～０．３％、２－ヘキシル－１－デカノール０．９～１．１％、液体パラフィン７～８％、グリセロール２．５～３．５％、プロピレングリコール７～９％、トリエタノールアミン０．０８～０．１２％、カルボキシビニルポリマー０．３～０．４％、アラセル（Ａｒｌａｃｅｌ）１６５ １．５～２．５％、防腐剤０．１～０．３％、香料０．１～０．３％、余量の水が含まれ、
質量百分率で、前記化粧水には、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液１～１０％、ポリアクリル酸ナトリウム０．３～０．４％、グリセロール３．５～４．５％、１，３－ブタンジオール２～３％、ビタミンＢ５ ０．４～０．６％、アルブチン０．４～０．６％、ＥＤＴＡ－Ｎａ２ ０．０４～０．０６％、余量の脱イオン水が含まれ、
質量百分率で、前記リペアクリームには、グリセロール５～７％、カルボマー１．４～１．６％、トリエタノールアミン１．４～１．６％、プロピレングリコール５．５～６．５％、エチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩０．１５～０．２５％、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液９～１１％、精油０．４～０．６％、余量の脱イオン水が含まれる。
質量百分率で、前記フェイスクリームには、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液０．４～０．６％、ステアリン酸７．５～８．５％、Ｃ１６アルコール１．５～２．５％、自己乳化モノグリセリド１．５～２．５％、水素化ラノリン１．５～２．５％、液体パラフィン１１～１３％、グリセロール６～８％、乳化剤１～２％、防腐剤０．１～０．３％、香料０．１～０．３％、余量の水が含まれ、
質量百分率で、前記乳液には、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液０．４～０．６％、ステアリン酸１．３～１．５％、セタノール０．０８～０．１２％、２－エチルアルコールセチルステアレート１．７～１．９％、ミリスチン酸イソプロピル０．１～０．３％、２－ヘキシル－１－デカノール０．９～１．１％、液体パラフィン７～８％、グリセロール２．５～３．５％、プロピレングリコール７～９％、トリエタノールアミン０．０８～０．１２％、カルボキシビニルポリマー０．３～０．４％、アラセル（Ａｒｌａｃｅｌ）１６５ １．５～２．５％、防腐剤０．１～０．３％、香料０．１～０．３％、余量の水が含まれ、
質量百分率で、前記化粧水には、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液１～１０％、ポリアクリル酸ナトリウム０．３～０．４％、グリセロール３．５～４．５％、１，３－ブタンジオール２～３％、ビタミンＢ５ ０．４～０．６％、アルブチン０．４～０．６％、ＥＤＴＡ－Ｎａ２ ０．０４～０．０６％、余量の脱イオン水が含まれ、
質量百分率で、前記リペアクリームには、グリセロール５～７％、カルボマー１．４～１．６％、トリエタノールアミン１．４～１．６％、プロピレングリコール５．５～６．５％、エチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩０．１５～０．２５％、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液９～１１％、精油０．４～０．６％、余量の脱イオン水が含まれる。
従来技術と比較して、本発明の鉄皮石斛オリゴ糖、鉄皮石斛オリゴ糖誘導体及びその調製方法並びに適用は、少なくとも以下の有益な効果を有する：
一方で、本発明は、鉄皮石斛から純度９９％以上で調製された鉄皮石斛オリゴ糖を初めて解明し、構造に対して解釈し、鉄皮石斛オリゴ糖の構造を明らかにした。
一方で、本発明は、鉄皮石斛から純度９９％以上で調製された鉄皮石斛オリゴ糖を初めて解明し、構造に対して解釈し、鉄皮石斛オリゴ糖の構造を明らかにした。
さらに、本発明は、鉄皮石斛オリゴ糖の抗老化活性に対して体系的な研究を初めて実施し、この研究により、鉄皮石斛オリゴ糖は、コラゲナーゼ等をよく阻害し、強力な抗老化効果を有し、ＴＮＦ－α及びＩＬ－６に対しても一定的な活性があり、優れた免疫調節効果があることが分かった。
もう一方では、本発明に関する鉄皮石斛オリゴ糖の調製方法及び活性適用の方向は、鉄皮石斛に関する方向への応用に科学的な根拠を提供する。
また、一方では、本発明によって調製された鉄皮石斛オリゴ糖は、中間体として鉄皮石斛シリーズ製品の開発（例えば、医薬品、食品、日用品の開発などの分野において適用する）に使用できる。
図１～図３は、本発明の鉄皮石斛オリゴ糖の構造と純度の同定ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ、ＮＭＲ、及びＭＳスペクトルであり、
は鉄皮石斛オリゴ糖の純度の同定ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤスペクトルであり、
は鉄皮石斛オリゴ糖の１Ｈ、１３Ｃ－ＮＭＲスペクトルであり、その中で、図２Ａは１Ｈ－ＮＭＲスペクトルであり、図２Ｂは１３Ｃ－ＮＭＲスペクトルであり、 図３～６は、鉄皮石斛オリゴ糖の抗老化活性試験結果図であり、
はＤＰＰＨフリーラジカル除去率で鉄皮石斛オリゴ糖の抗酸化率を決定する図であり（オリゴ糖濃度は４％、８％、１１％、１５％、２０％）、その中で、縦軸はＤＰＰＨフリーラジカル除去率が代表する抗酸化率であり、１から５までの横軸は、それぞれがオリゴ糖濃度４％、８％、１１％、１５％、２０％であり、
はエラスターゼ活性に対する鉄皮石斛オリゴ糖の阻害率であり（オリゴ糖濃度は４％、８％、１１％、１５％、２０％）、その中で、縦軸はエラスターゼ阻害率％であり、１から５までの横軸は、それぞれがオリゴ糖濃度４％、８％、１１％、１５％、２０％であり、
はコラゲナーゼ活性に対する鉄皮石斛オリゴ糖の阻害率であり（オリゴ糖濃度は０．４％、０．８％、１％、２％、４％）、その中で、縦軸はコラゲナーゼ阻害率％、１から５までの横軸は、それぞれがオリゴ糖濃度０．４％、０．８％、１％、２％、４％であり、
は、ヒアルロン酸の分泌に対する鉄皮石斛オリゴ糖の促進活性であり（オリゴ糖濃度は４％、８％、１１％、１５％、２０％）、その中で、縦軸はヒアルロン酸の分泌量（ｎｇ／ｍＬ）であり、１から５までの横軸は、それぞれがオリゴ糖濃度４％、８％、１１％、１５％、２０％であり、
は、ＲＡＷ２６４．７細胞の免疫調節活性に対する鉄皮石斛オリゴ糖の影響であり（オリゴ糖濃度は３．１２５μｇ／ｍＬ、６．２５μｇ／ｍＬ、１２．５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ）、その中で、図７のＡは、ＴＮＦ－α分泌量に対するオリゴ糖の影響であり、縦軸はＴＮＦ－α分泌量ｐｇ／ｍＬであり、１から５までの横軸はブランク、リポ多糖ＬＰＳ、オリゴ糖の最終反応濃度１２．５μｇ／ｍＬ、６．２５μｇ／ｍＬ、３．１２５μｇ／ｍＬであり、図７のＢは、ＩＬ－６分泌量に対するオリゴ糖の影響であり、縦軸はＩＬ－６分泌量ｐｇ／ｍＬであり、１から５までの横軸は、それぞれがブランク、リポ多糖ＬＰＳ、オリゴ糖の最終反応濃度２００μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬである。
以下、意図した発明目的を達成するための技術的手段及びその効果をさらに詳しく説明するために、図面及び好ましい実施例と併せて、本発明出願に基づく具体的な実施形態、構造、特徴及びその効果について詳細に説明する。以下の説明において、異なる「一実施例」或は「実施例」は、必ずしも同じ実施例を指すとは限らない。さらに、１つ或は複数の実施例における特定の特徴、構造、または特性は、任意の適切な形態で組み合わせることができる。
本発明における「スキンケア製品」という用語は、スキンケア化粧水、スキンケア乳液、スキンケアマスク、スキンケアクリームなどを指し、本発明の実施例におけるスキンケア製品は、化粧品を指すこともある。
本発明は、鉄皮石斛オリゴ糖を提供し、鉄皮石斛オリゴ糖は、３～９個のグリコシド残基を含み、非還元末端にグルコース残基を有し、６つのグリコシド残基を含有する構造は化Iに示とおりである：
その中で、グリコシド残基には、ガラクトース残基、マンノース残基、及びグルコース残基が含まれ、ガラクトース残基、マンノース残基及びグルコース残基のモル比は、（３～２）：（２～１）：（２～１）であり、好ましくは２：１：１である。
本発明は、鉄皮石斛オリゴ糖の抽出方法を提供し、以下のステップを含む：
１）鉄皮石斛粉末の調製：鉄皮石斛の茎を乾燥させた後、粉砕して、ふるいにかけて鉄皮石斛の粉末がえられ、
好ましくは、乾燥処理の温度は５０～６０℃であり、前記乾燥処理後の鉄皮石斛の茎の水分質量含有量は６％未満であり、前記ふるいにかけるメッシュの数量は２０～４０メッシュであり、
２）鉄皮石斛の水抽出物の調製：前記鉄皮石斛の粉末と水を混合した後、少なくとも１回の沸騰水浴を行い、次に水抽出物を合わせて鉄皮石斛の水抽出物が得られ、
好ましくは、前記鉄皮石斛粉末と水を１：（５０～８０）ｇ／ｍＬの質量体積比～で混合し、沸騰水浴を２～３回行い、毎回の沸騰水浴の時間は１～２ｈ間であり、
３）鉄皮石斛の濃縮水抽出物の調製：前記鉄皮石斛の水抽出物を遠心分離した後、それに対して真空濃縮して、鉄皮石斛の濃縮水抽出物が得られ、
好ましくは、遠心分離の条件は、３０００～４０００ｒｐｍ／ｍｉｎ、８～１２ｍｉｎ、室温であり、真空濃縮の条件は、回転蒸発法を使用し、エタノールの回収温度は＜５０℃であり、圧力は０．７Ｐａ～０．９Ｐａであり、鉄皮石斛の濃縮水抽出物の物質と液体の質量体積比は１：（５～１０）ｇ／ｍＬであり、
４）再構成液の調製：前記鉄皮石斛の濃縮水抽出物にエタノールを加え、沈殿させ、遠心分離し、上澄液を廃棄し、得られた沈殿物に水を加えて再構成し、再構成液が得られ、
好ましくは、前記鉄皮石斛の濃縮水抽出物に体積濃度が９５％であるエタノールを、混合物のアルコール濃度が体積百分率で７０～８０％となるように添加し、一晩沈殿させ、遠心分離の条件は、３５００～４５００ｒｐｍ、１８～２２ｍｉｎ、室温であり、前記沈殿物と水の重量体積比は１：（４～６）ｇ／ｍＬであり、水を加えて再構成させ、
５）鉄皮石斛オリゴ糖水溶液の調製：前記再構成液に対して除タンパクした後、凍結乾燥して鉄皮石斛粗多糖が得られ、前記鉄皮石斛粗多糖を水に溶解した後、これにセルラーゼを加えて反応させ、不活性化させて遠心分離し、沈殿物を廃棄して、鉄皮石斛オリゴ糖水溶液が得られ、
好ましくは、Ｓａｖａｇｅ法によって前記再構成液に対して除タンパクし、凍結乾燥温度は４５℃であり、前記鉄皮石斛粗多糖に水を加えて４．５～５．５ｍｇ／ｍＬになるまで溶解し、セルラーゼの添加量は、前記鉄皮石斛粗多糖の重量の２％～４％であり、セルラーゼを添加した後、反応する反応温度は５５～６５℃であり、反応時間は２ｈ～４ｈであり、沸騰するによって２５～３５ｍｉｎ間不活性化処理し、遠心条件は３５００～４５００ｒｐｍ、１５～２５ｍｉｎ、室温であり、前記鉄皮石斛オリゴ糖水溶液中のオリゴ糖含有量は８０％を超え、
６）鉄皮石斛オリゴ糖の調製：鉄皮石斛オリゴ糖水溶液に対して精製して、鉄皮石斛オリゴ糖が得られ、
好ましくは、精製はＧ７５ゲルカラムを使用して行われ、鉄皮石斛オリゴ糖の純度は９９．８６％である。
１）鉄皮石斛粉末の調製：鉄皮石斛の茎を乾燥させた後、粉砕して、ふるいにかけて鉄皮石斛の粉末がえられ、
好ましくは、乾燥処理の温度は５０～６０℃であり、前記乾燥処理後の鉄皮石斛の茎の水分質量含有量は６％未満であり、前記ふるいにかけるメッシュの数量は２０～４０メッシュであり、
２）鉄皮石斛の水抽出物の調製：前記鉄皮石斛の粉末と水を混合した後、少なくとも１回の沸騰水浴を行い、次に水抽出物を合わせて鉄皮石斛の水抽出物が得られ、
好ましくは、前記鉄皮石斛粉末と水を１：（５０～８０）ｇ／ｍＬの質量体積比～で混合し、沸騰水浴を２～３回行い、毎回の沸騰水浴の時間は１～２ｈ間であり、
３）鉄皮石斛の濃縮水抽出物の調製：前記鉄皮石斛の水抽出物を遠心分離した後、それに対して真空濃縮して、鉄皮石斛の濃縮水抽出物が得られ、
好ましくは、遠心分離の条件は、３０００～４０００ｒｐｍ／ｍｉｎ、８～１２ｍｉｎ、室温であり、真空濃縮の条件は、回転蒸発法を使用し、エタノールの回収温度は＜５０℃であり、圧力は０．７Ｐａ～０．９Ｐａであり、鉄皮石斛の濃縮水抽出物の物質と液体の質量体積比は１：（５～１０）ｇ／ｍＬであり、
４）再構成液の調製：前記鉄皮石斛の濃縮水抽出物にエタノールを加え、沈殿させ、遠心分離し、上澄液を廃棄し、得られた沈殿物に水を加えて再構成し、再構成液が得られ、
好ましくは、前記鉄皮石斛の濃縮水抽出物に体積濃度が９５％であるエタノールを、混合物のアルコール濃度が体積百分率で７０～８０％となるように添加し、一晩沈殿させ、遠心分離の条件は、３５００～４５００ｒｐｍ、１８～２２ｍｉｎ、室温であり、前記沈殿物と水の重量体積比は１：（４～６）ｇ／ｍＬであり、水を加えて再構成させ、
５）鉄皮石斛オリゴ糖水溶液の調製：前記再構成液に対して除タンパクした後、凍結乾燥して鉄皮石斛粗多糖が得られ、前記鉄皮石斛粗多糖を水に溶解した後、これにセルラーゼを加えて反応させ、不活性化させて遠心分離し、沈殿物を廃棄して、鉄皮石斛オリゴ糖水溶液が得られ、
好ましくは、Ｓａｖａｇｅ法によって前記再構成液に対して除タンパクし、凍結乾燥温度は４５℃であり、前記鉄皮石斛粗多糖に水を加えて４．５～５．５ｍｇ／ｍＬになるまで溶解し、セルラーゼの添加量は、前記鉄皮石斛粗多糖の重量の２％～４％であり、セルラーゼを添加した後、反応する反応温度は５５～６５℃であり、反応時間は２ｈ～４ｈであり、沸騰するによって２５～３５ｍｉｎ間不活性化処理し、遠心条件は３５００～４５００ｒｐｍ、１５～２５ｍｉｎ、室温であり、前記鉄皮石斛オリゴ糖水溶液中のオリゴ糖含有量は８０％を超え、
６）鉄皮石斛オリゴ糖の調製：鉄皮石斛オリゴ糖水溶液に対して精製して、鉄皮石斛オリゴ糖が得られ、
好ましくは、精製はＧ７５ゲルカラムを使用して行われ、鉄皮石斛オリゴ糖の純度は９９．８６％である。
本発明は、抗老化或は免疫調節製品の調製における前記鉄皮石斛オリゴ糖の適用を提供する。
好ましくは、前記製品には、医薬品、食品、調剤及び化粧品が含まれ、好ましくは、前記化粧品の種類には、クリーム、乳剤、化粧水或はリペアクリームが含まれる。
本発明は、鉄皮石斛オリゴ糖誘導体を提供し、前記鉄皮石斛オリゴ糖のグルコース残基と疎水性残基との反応によって生成されたものであり、疎水性残基は、直鎖又は分岐鎖のＣ１－Ｃ１８アルキル基、Ｃ１－Ｃ１８アルキルカルボン酸、Ｃ１－Ｃ１８アルキルアミン、Ｃ１－Ｃ１８アリールアルキル基及びＣ１－Ｃ１８アルキルアミドのいずれか一つを含み、或は、
ベンゾイル、フェニルアセチル、及びフェニルプロピオニルのいずれか一つを含む（ヒドロキシとメトキシをフェニルに置き換える）。
ベンゾイル、フェニルアセチル、及びフェニルプロピオニルのいずれか一つを含む（ヒドロキシとメトキシをフェニルに置き換える）。
本発明は、上記の鉄皮石斛オリゴ糖誘導体の調製方法を提供し、以下のステップを含む：
１）脂肪酸を脂肪アルコールに還元し、
好ましくは、反応プロセスは、１０ｍｍｏｌの脂肪酸、２０ｍｍｏｌのＮａＢＨ４、４０ｍｍｏｌのＡｌＣｌ３、２７ｍＬのＴＨＦ、３ｍＬのＭｅＯＨを反応させ、反応温度は１００℃であり、反応時間は８ｈであり、収率は９０％であり、
２）脂肪アルコール及び鉄皮石斛オリゴ糖がグリコシル化を行い、
好ましくは、還元によって得られた脂肪アルコールと鉄皮石斛オリゴ糖を利用してグリコシル化反応を行い、反応プロセスは、アルコールと糖のモル比は１：（８～１０）であり、触媒は臭化セチルアンモニウムであり、反応温度は１１０～１１５℃であり、反応時間は３ｈであり、収率は８０％である。
１）脂肪酸を脂肪アルコールに還元し、
好ましくは、反応プロセスは、１０ｍｍｏｌの脂肪酸、２０ｍｍｏｌのＮａＢＨ４、４０ｍｍｏｌのＡｌＣｌ３、２７ｍＬのＴＨＦ、３ｍＬのＭｅＯＨを反応させ、反応温度は１００℃であり、反応時間は８ｈであり、収率は９０％であり、
２）脂肪アルコール及び鉄皮石斛オリゴ糖がグリコシル化を行い、
好ましくは、還元によって得られた脂肪アルコールと鉄皮石斛オリゴ糖を利用してグリコシル化反応を行い、反応プロセスは、アルコールと糖のモル比は１：（８～１０）であり、触媒は臭化セチルアンモニウムであり、反応温度は１１０～１１５℃であり、反応時間は３ｈであり、収率は８０％である。
本発明は、抗老化或は免疫調節製品の調製における前記鉄皮石斛オリゴ糖誘導体の適用を提供した。
好ましくは、前記製品には、医薬品、食品、調剤及び化粧品が含まれ、好ましくは、前記化粧品の種類には、フェイスクリーム、乳剤、化粧水或はリペアクリームが含まれる。
本発明は前記鉄皮石斛からオリゴ糖を分離及び精製する方法を提供し、鉄皮石斛多糖類は分子量（≧１００，０００）が大きく、皮膚細胞により吸収されにくいため、主に皮膚外に作用して保湿の役割を果たし、多糖類の酵素性分解により生成されるオリゴ糖は分子量が小さく、皮膚細胞により吸収されやすいので、抗老化の役割を果たし、両者の分子量の違いによって、区別的に適用することができる。
他方では、本発明は、鉄皮石斛オリゴ糖がＨａｃａｔ及びＲＡＷ２６４．７細胞の生存率及び生存時間を増加させられることをまた見出した。鉄皮石斛オリゴ糖が良好な抗老化活性及び免疫調節活性を有する可能性があることを考慮して、いくつ老化の主なターゲットタンパク質（エラスターゼ、コラゲナーゼ、ヒアルロン酸）に対して活性検証を行い、その結果、鉄皮石斛オリゴ糖はコラゲナーゼに対して強力な阻害作用を発揮し、コラーゲンの分解代謝を効果的に緩和し、皮膚の若々しい状態を維持でき、また、エラスターゼに対して一定的な阻害効果があり、同時に、一定的なヒアルロン酸の分泌を促進する活性もあることが分かった。鉄皮石斛オリゴ糖は、ＴＮＦ－α及びＩＬ－６に対しても一定的な活性を示し、優れた免疫調節作用を示している。
本発明は、抗老化或は免疫調節製品を提供し、前記抗老化或は免疫調節製品が、フェイスクリーム或は乳剤である。
前記抗老化或は免疫調節製品がフェイスクリームである場合、質量百分率で前記フェイスクリームには、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液０．４～０．６％、ステアリン酸７．５～８．５％、Ｃ１６アルコール１．５～２．５％、自己乳化モノグリセリド１．５～２．５％、水素化ラノリン１．５～２．５％、液体パラフィン１１～１３％、グリセロール６～８％、乳化剤１～２％、防腐剤０．１～０．３％、香料０．１～０．３％、余量の水が含まれ、
質量百分率で前記乳剤には、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液０．４～０．６％、ステアリン酸１．３～１．５％、セタノール０．０８～０．１２％、２－エチルアルコールセチルステアレート１．７～１．９％、ミリスチン酸イソプロピル０．１～０．３％、２－ヘキシル－１－デカノール０．９～１．１％、液体パラフィン７～８％、グリセロール２．５～３．５％、プロピレングリコール７～９％、トリエタノールアミン０．０８～０．１２％、カルボキシビニルポリマー０．３～０．４％、アラセル（Ａｒｌａｃｅｌ）１６５ １．５～２．５％、防腐剤０．１～０．３％、香料０．１～０．３％、余量の水が含まれる。
質量百分率で前記乳剤には、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液０．４～０．６％、ステアリン酸１．３～１．５％、セタノール０．０８～０．１２％、２－エチルアルコールセチルステアレート１．７～１．９％、ミリスチン酸イソプロピル０．１～０．３％、２－ヘキシル－１－デカノール０．９～１．１％、液体パラフィン７～８％、グリセロール２．５～３．５％、プロピレングリコール７～９％、トリエタノールアミン０．０８～０．１２％、カルボキシビニルポリマー０．３～０．４％、アラセル（Ａｒｌａｃｅｌ）１６５ １．５～２．５％、防腐剤０．１～０．３％、香料０．１～０．３％、余量の水が含まれる。
本発明は、抗老化或は免疫調節製品を提供し、前記抗老化或は免疫調節製品が、化粧水である。本発明において、質量百分率で前記化粧水には、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液１～１０％、ポリアクリル酸ナトリウム０．３～０．４％、グリセロール３．５～４．５％、１，３－ブタンジオール２～３％、ビタミンＢ５ ０．４～０．６％、アルブチン０．４～０．６％、ＥＤＴＡ－Ｎａ２ ０．０４～０．０６％、余量の脱イオン水が含まれる。
本発明において、前記化粧水の調製方法は、ポリアクリル酸ナトリウムを水に溶かし、充分に膨潤するまで攪拌し、剰余成分を加えて攪拌を続け、次に、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液を加えて攪拌した後、脱イオン水を加えて定積して、化粧水を得る。
本発明は、抗老化或は免疫調節製品を提供し、前記抗老化或は免疫調節製品がリペアクリームである。本発明において、質量百分率で前記リペアクリームには、グリセロール５～７％、カルボマー１．４～１．６％、トリエタノールアミン１．４～１．６％、プロピレングリコール５．５～６．５％、エチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩０．１５～０．２５％、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液９～１１％、精油０．４～０．６％、余量の脱イオン水が含まれる。
本発明において、前記リペアクリームの調製方法は、カルボマーを取って適量の脱イオン水に入れ、均一に撹拌し、停止状態で一晩放置して十分に膨潤させた後、グリセロールを加え、トリエタノールアミンでｐＨ値を調整し、ゲルマトリックスの粘度を上げて、カルボマーゲルが得られ、
オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液、プロピレングリコールと脱イオン水を混ぜた後、カルボマーゲル、精油、エチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩を加え、均一で繊細になるまで撹拌し、十分な量の蒸留水を加え、均一に研磨して、リペアクリームを得る。
オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液、プロピレングリコールと脱イオン水を混ぜた後、カルボマーゲル、精油、エチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩を加え、均一で繊細になるまで撹拌し、十分な量の蒸留水を加え、均一に研磨して、リペアクリームを得る。
以下、具体的な実施例によって本発明について詳細に説明する：
実施例１：
本実施例は、主に鉄皮石斛の茎から鉄皮石斛オリゴ糖を分離及び精製し、更に構造を同定することである：
鉄皮石斛の新鮮な茎を切り取り、５５℃の送風乾燥炉に入れて乾燥させ、水分を測定し、水分が６％以下になったら、粉砕して２０～４０メッシュの篩にかける。５０ｇの鉄皮石斛粉末に２５００ｍＬの超純水を加え、沸騰水浴を２回、毎回２ｈずつ行い、水抽出物を合わせる。その後遠心分離して、鉄皮石斛水抽出物が得られ、遠心分離条件は：３０００～４０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ、室温２５℃である。鉄皮石斛の水抽出物に対して５００ｍＬまで真空濃縮させて鉄皮石斛の濃縮水抽出物を得る。鉄皮石斛の濃縮水抽出物に適量の９５％エタノールを混合溶液のアルコール濃度が７０～８０％になるまで加え、一晩沈殿させてから遠心分離し、遠心分離条件は４０００ｒｐｍ、２０ｍｉｎ、室温２５℃であり、上澄液を廃棄して沈殿物を得る。沈殿物の重量１：５（ｍ：ｖ）（ｇ／ｍＬ）に従って、水を加えて再構成し、再構成液を得る。Ｓａｖａｇｅ法によって再構成液を除タンパクした後、凍結乾燥して鉄皮石斛粗多糖が得られ、２００ｍｇの鉄皮石斛粗多糖を取り、水で５ｍｇ／ｍＬに溶解し、鉄皮石斛多糖類の重量の２％～４％に従ってセルラーゼを添加し、均一に混合し、６０℃で２ｈ～４ｈ間反応させ、３０ｍｉｎ間煮沸して不活性化させ、遠心分離し、遠心分離条件は：４０００ｒｐｍ、２０ｍｉｎ、室温２５℃であり、沈殿物を廃棄する。鉄皮石斛オリゴ糖水溶液を得る（鉄皮石斛オリゴ糖水中のオリゴ糖の含有量は８０％を超える）。適量の鉄皮石斛オリゴ糖水溶液を取り、Ｇ７５ゲルカラムを通させて、１５０ｍｇの精製された鉄皮石斛オリゴ糖（純度９９．８６％、分子量約１０００）を得る。
実施例１：
本実施例は、主に鉄皮石斛の茎から鉄皮石斛オリゴ糖を分離及び精製し、更に構造を同定することである：
鉄皮石斛の新鮮な茎を切り取り、５５℃の送風乾燥炉に入れて乾燥させ、水分を測定し、水分が６％以下になったら、粉砕して２０～４０メッシュの篩にかける。５０ｇの鉄皮石斛粉末に２５００ｍＬの超純水を加え、沸騰水浴を２回、毎回２ｈずつ行い、水抽出物を合わせる。その後遠心分離して、鉄皮石斛水抽出物が得られ、遠心分離条件は：３０００～４０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ、室温２５℃である。鉄皮石斛の水抽出物に対して５００ｍＬまで真空濃縮させて鉄皮石斛の濃縮水抽出物を得る。鉄皮石斛の濃縮水抽出物に適量の９５％エタノールを混合溶液のアルコール濃度が７０～８０％になるまで加え、一晩沈殿させてから遠心分離し、遠心分離条件は４０００ｒｐｍ、２０ｍｉｎ、室温２５℃であり、上澄液を廃棄して沈殿物を得る。沈殿物の重量１：５（ｍ：ｖ）（ｇ／ｍＬ）に従って、水を加えて再構成し、再構成液を得る。Ｓａｖａｇｅ法によって再構成液を除タンパクした後、凍結乾燥して鉄皮石斛粗多糖が得られ、２００ｍｇの鉄皮石斛粗多糖を取り、水で５ｍｇ／ｍＬに溶解し、鉄皮石斛多糖類の重量の２％～４％に従ってセルラーゼを添加し、均一に混合し、６０℃で２ｈ～４ｈ間反応させ、３０ｍｉｎ間煮沸して不活性化させ、遠心分離し、遠心分離条件は：４０００ｒｐｍ、２０ｍｉｎ、室温２５℃であり、沈殿物を廃棄する。鉄皮石斛オリゴ糖水溶液を得る（鉄皮石斛オリゴ糖水中のオリゴ糖の含有量は８０％を超える）。適量の鉄皮石斛オリゴ糖水溶液を取り、Ｇ７５ゲルカラムを通させて、１５０ｍｇの精製された鉄皮石斛オリゴ糖（純度９９．８６％、分子量約１０００）を得る。
鉄皮石斛オリゴ糖の純度を高速液体クロマトグラフィーで同定し、その結果を図１に示し、鉄皮石斛オリゴ糖の構造をプロトン核磁気共鳴分析と炭素１３核磁気共鳴分析で同定し、結果を図２に示した。
実施例２：
ＤＰＰＨフリーラジカル除去実験
１試薬：
ＤＰＰＨ、水溶性ビタミンＥ（トロロックス、Ｔｒｏｌｏ×）（トロロックスは無水エタノールに溶解され、濃度は１０ｍＭであり、－２０℃で保存する）、純水。
ＤＰＰＨフリーラジカル除去実験
１試薬：
ＤＰＰＨ、水溶性ビタミンＥ（トロロックス、Ｔｒｏｌｏ×）（トロロックスは無水エタノールに溶解され、濃度は１０ｍＭであり、－２０℃で保存する）、純水。
２実験方法：
被測定薬物をＤＰＰＨ（最終濃度は１００Ｍ）と混合して反応させ、重複して３つのウェルを設定し、同時に薬物を含まないブランクコントロールウェルとトロロックス陽性コントロールウェルを設定し、３０℃で１ｈ後、マイクロプレートリーダーでＯＤ値を測定し、検出波長は５１５ｎｍであり、抗酸化率を算出した。
被測定薬物をＤＰＰＨ（最終濃度は１００Ｍ）と混合して反応させ、重複して３つのウェルを設定し、同時に薬物を含まないブランクコントロールウェルとトロロックス陽性コントロールウェルを設定し、３０℃で１ｈ後、マイクロプレートリーダーでＯＤ値を測定し、検出波長は５１５ｎｍであり、抗酸化率を算出した。
抗酸化率（％）＝（１－実験ウェルのＯＤ５１５ｎｍ／ブランクウェルのＯＤ５１５ｎｍ）×１００％。
３実験結果：
表１に示す。
表１に示す。
４結論：
表１のデータに基づいて、より明確に対比できる図３を作成し、図３及び表１から、この実験では、鉄皮石斛オリゴ糖のＤＰＰＨフリーラジカル除去能を評価したことが分かった。結果は、１５％～２０％の濃度で、鉄皮石斛オリゴ糖が一定的な抗酸化率（＞２０％）を持っていることを示した。
表１のデータに基づいて、より明確に対比できる図３を作成し、図３及び表１から、この実験では、鉄皮石斛オリゴ糖のＤＰＰＨフリーラジカル除去能を評価したことが分かった。結果は、１５％～２０％の濃度で、鉄皮石斛オリゴ糖が一定的な抗酸化率（＞２０％）を持っていることを示した。
実施例３：
エラスターゼ阻害率実験
１試薬：
サンプル、陽性対照カテキン、トリス（Ｔｒｉｓ）、ＨＣｌ、ブタ膵臓エラスターゼ、Ｎ－スクシニル－アラニン－アラニン－アラニン－ｐ－ニトロアニリン、ＤＭＳＯ。
エラスターゼ阻害率実験
１試薬：
サンプル、陽性対照カテキン、トリス（Ｔｒｉｓ）、ＨＣｌ、ブタ膵臓エラスターゼ、Ｎ－スクシニル－アラニン－アラニン－アラニン－ｐ－ニトロアニリン、ＤＭＳＯ。
２実験方法：
（１）溶液の調製
サンプル溶液の調製：１ｍｇ／ｍＬのサンプル溶液を調製し（純水或は緩衝液で調製し、水或は緩衝液に溶解しない場合は、まずサンプルをＤＭＳＯで溶解し、次に水或は緩衝液を加えるが、ＤＭＳＯの含有量は、原則として５％以下とする）。
（１）溶液の調製
サンプル溶液の調製：１ｍｇ／ｍＬのサンプル溶液を調製し（純水或は緩衝液で調製し、水或は緩衝液に溶解しない場合は、まずサンプルをＤＭＳＯで溶解し、次に水或は緩衝液を加えるが、ＤＭＳＯの含有量は、原則として５％以下とする）。
陽性対照溶液の調製：１ｍｇ／ｍＬカテキン、
緩衝液を調製する：Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液０．１Ｍ、ＰＨ＝８．０、
基質溶液を秤量及び調製する：Ｎ－スクシニル－アラニン－アラニン－アラニン－ｐ－ニトロアニリン（ＡＡＡＰＶＮ）溶液（２ｍＭ）、
調製：２８．５μｌのブタ膵臓エラスターゼ溶液（０．１７１Ｕ／ｍＬ）を取って１０ｍＬのＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液に溶解した。
緩衝液を調製する：Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液０．１Ｍ、ＰＨ＝８．０、
基質溶液を秤量及び調製する：Ｎ－スクシニル－アラニン－アラニン－アラニン－ｐ－ニトロアニリン（ＡＡＡＰＶＮ）溶液（２ｍＭ）、
調製：２８．５μｌのブタ膵臓エラスターゼ溶液（０．１７１Ｕ／ｍＬ）を取って１０ｍＬのＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液に溶解した。
（２）９６ウェルプレートに５０μＬサンプル＋５０μＬブタ膵臓エラスターゼ＋１００μＬ反応基質の溶液を添加した。
（３）室温で５ｍｉｎ間維持した後、４２０ｎｍで吸光度値を測定した。
エラスターゼ阻害率（％）＝（１－サンプルＯＤ４２０ｎｍ／実験ウェルＯＤ４２０ｎｍ）×１００％。
３実験結果：
表２に示す通りである。
表２に示す通りである。
４結論：
表２のデータに基づいて、より明確に対比できる図４を作成し、図４及び表２から、本実験は、鉄皮石斛オリゴ糖のエラスターゼ阻害率に対して評価したことが分かれる。結果は、２０％の濃度で、鉄皮石斛オリゴ糖が一定的なエラスターゼ阻害活性を持っている（＞１０％）ことを示した。
表２のデータに基づいて、より明確に対比できる図４を作成し、図４及び表２から、本実験は、鉄皮石斛オリゴ糖のエラスターゼ阻害率に対して評価したことが分かれる。結果は、２０％の濃度で、鉄皮石斛オリゴ糖が一定的なエラスターゼ阻害活性を持っている（＞１０％）ことを示した。
実施例４：
コラゲナーゼ阻害率についての実験
１．試薬：
プロテアーゼ緩衝液、プロテアーゼ、プロテアーゼマトリックス、阻害剤（１，１０－フェナントロリン、１，１０－Ｐｈｅｎａｎｔｈｒｏｌｉｎｅ ）。すべての試薬は－２０℃で保存される。
コラゲナーゼ阻害率についての実験
１．試薬：
プロテアーゼ緩衝液、プロテアーゼ、プロテアーゼマトリックス、阻害剤（１，１０－フェナントロリン、１，１０－Ｐｈｅｎａｎｔｈｒｏｌｉｎｅ ）。すべての試薬は－２０℃で保存される。
２．実験方法：
（１）溶液の調製：
コラゲナーゼ反応混合物は表３に示す通りである。
（１）溶液の調製：
コラゲナーゼ反応混合物は表３に示す通りである。
（２）組成物は次のように設計される：
（ａ）バックグラウンドブランクウェル：１００μｌ／ウェルのプロテアーゼ緩衝液。
（ａ）バックグラウンドブランクウェル：１００μｌ／ウェルのプロテアーゼ緩衝液。
（ｂ）サンプルウェル：１００μｌ、お互いに異なる濃度に配合できる。
（ｃ）陽性対照ウェル：１０μｌプロテアーゼ＋９０μｌプロテアーゼ緩衝液。
（ｄ）阻害剤対照ウェル：１０μｌのプロテアーゼ＋２μｌの阻害剤＋８８μｌのプロテアーゼ緩衝液は表４に示す通りである。
（３）上記のグループ別に試薬を添加した後、各ウェルに１００μｌのコラゲナーゼ反応混合物を添加し、遮光して培養した後、３４５ｎｍでＯＤ値を測定した。
培養時間は、被測サンプルの活性によって決められ、低活性サンプルは１～３ｈ間培養できる。
コラゲナーゼの阻害率（％）＝（ＯＤバックグラウンドウェル－ＯＤサンプルウェル）／（ＯＤバックグラウンドウェル－ＯＤ陽性対照ウェル）。
３実験結果：
表５に示す通りである。
表５に示す通りである。
４結論：
表５のデータに基づいて、より明確に対比できる図５を作成し、図５及び表５から、本実験では、鉄皮石斛オリゴ糖のコラゲナーゼ阻害率に対して評価したことが分かる。結果は、鉄皮石斛オリゴ糖が０．４％～４％の濃度で強いコラゲナーゼ阻害活性（＞５０％）を持っていることを示した。
表５のデータに基づいて、より明確に対比できる図５を作成し、図５及び表５から、本実験では、鉄皮石斛オリゴ糖のコラゲナーゼ阻害率に対して評価したことが分かる。結果は、鉄皮石斛オリゴ糖が０．４％～４％の濃度で強いコラゲナーゼ阻害活性（＞５０％）を持っていることを示した。
実施例５：
ヒアルロン酸分泌促進についての実験
１試薬と細胞：
ヒト不死化皮質細胞（Ｈａｃａｔ細胞）、ヒトヒアルロン酸Ｅｌｉｓａキット、蒸留水。
ヒアルロン酸分泌促進についての実験
１試薬と細胞：
ヒト不死化皮質細胞（Ｈａｃａｔ細胞）、ヒトヒアルロン酸Ｅｌｉｓａキット、蒸留水。
２実験方法：
９６ウェルプレートで、ウェルごとに１００ｍＬの細胞懸濁液を接種し、懸濁液の濃度は４×１０５個／ｍＬである。２４ｈ間培養した後、ＰＢＳで１～２回洗浄した後、お互いに異なる濃度の被測薬物を含有する無血清培地を添加し、２４ｈ培養を続ける。薬物を含まないブランク対照とＴＧＦ－β陽性対照を設定し、１％ＰＭＳＦを含むリパ（ｒｉｐａ）溶解物を使用して細胞に対して溶解し、遠心分離後に上澄液を取り、コラーゲンＥＬＩＳＡキットによって提供される方法でヒアルロン酸の分泌を検出し、マイクロプレートリーダーでＯＤ値を測定し、検出波長は４５０ｎｍである。ＯＤ値を標準曲線の回帰式に代入して、ヒアルロン酸分泌の増加率を計算して得る。
９６ウェルプレートで、ウェルごとに１００ｍＬの細胞懸濁液を接種し、懸濁液の濃度は４×１０５個／ｍＬである。２４ｈ間培養した後、ＰＢＳで１～２回洗浄した後、お互いに異なる濃度の被測薬物を含有する無血清培地を添加し、２４ｈ培養を続ける。薬物を含まないブランク対照とＴＧＦ－β陽性対照を設定し、１％ＰＭＳＦを含むリパ（ｒｉｐａ）溶解物を使用して細胞に対して溶解し、遠心分離後に上澄液を取り、コラーゲンＥＬＩＳＡキットによって提供される方法でヒアルロン酸の分泌を検出し、マイクロプレートリーダーでＯＤ値を測定し、検出波長は４５０ｎｍである。ＯＤ値を標準曲線の回帰式に代入して、ヒアルロン酸分泌の増加率を計算して得る。
３実験結果：
表６に示す通りである。
表６に示す通りである。
４結論：
表６のデータに基づいて、より明確に対比できる図６を作成し、図６及び表６から、本実験は、鉄皮石斛オリゴ糖のヒアルロン酸分泌を促進する能力に対して評価することが分かれる。結果は、８％～２０％の濃度で、鉄皮石斛オリゴ糖が一定的なヒアルロン酸分泌促進活性（＞０．３ｎｇ／ｍＬ）を有することを示した。
表６のデータに基づいて、より明確に対比できる図６を作成し、図６及び表６から、本実験は、鉄皮石斛オリゴ糖のヒアルロン酸分泌を促進する能力に対して評価することが分かれる。結果は、８％～２０％の濃度で、鉄皮石斛オリゴ糖が一定的なヒアルロン酸分泌促進活性（＞０．３ｎｇ／ｍＬ）を有することを示した。
実施例６：
鉄皮石斛オリゴ糖の免疫調節活性についての評価
１実験用細胞と試薬：
ＲＡＷ２６４．７細胞、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６キット、蒸留水。
鉄皮石斛オリゴ糖の免疫調節活性についての評価
１実験用細胞と試薬：
ＲＡＷ２６４．７細胞、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６キット、蒸留水。
２実験方法：
対数成長されたＲＡＷ２６４．７細胞を取り、細胞数量に対してカウントした後、１２ウェルプレートに接種した。それをインキュベーターに置き一晩経て、細胞上澄液を廃棄し、無菌操作下で異なる濃度の鉄皮石斛オリゴ糖、リポ多糖、及び基本培地１６４０を与え、２４ｈ間介入する後に上澄液を収集し、使用するために－２０℃で保存した。ＥＬＩＳＡキットの説明書によってＴＮＦ－αとＩＬ－６の分泌量の変化を検出した。ＯＤ値はマイクロプレートリーダーで測定し、検出波長は４５０ｎｍである。ＯＤ値を標準曲線の回帰式に代入して、ＴＮＦ－α及びＩＬ－６分泌の増加率を計算して得る。
対数成長されたＲＡＷ２６４．７細胞を取り、細胞数量に対してカウントした後、１２ウェルプレートに接種した。それをインキュベーターに置き一晩経て、細胞上澄液を廃棄し、無菌操作下で異なる濃度の鉄皮石斛オリゴ糖、リポ多糖、及び基本培地１６４０を与え、２４ｈ間介入する後に上澄液を収集し、使用するために－２０℃で保存した。ＥＬＩＳＡキットの説明書によってＴＮＦ－αとＩＬ－６の分泌量の変化を検出した。ＯＤ値はマイクロプレートリーダーで測定し、検出波長は４５０ｎｍである。ＯＤ値を標準曲線の回帰式に代入して、ＴＮＦ－α及びＩＬ－６分泌の増加率を計算して得る。
３実験結果：
表７に示す通りである。
表７に示す通りである。
４結論：
表７のデータに基づいて、より明確に対比できる図７を作成し、図７及び表７から、本実験は、鉄皮石斛オリゴ糖のＲＡＷ２６４．７細胞の免疫調節活性効果を評価することが分かれる。結果は、３．１２５μｇ／ｍＬの濃度で、ＲＡＷ２６４．７大食細胞によるＴＮＦ－αの分泌が極めて顕著に増加し、陽性対照ＬＰＳに相当することを示し、５０μｇ／ｍＬの濃度で、ＲＡＷ２６４．７大食細胞によるＩＬ－６の分泌が極めて顕著に増加し、陽性対照ＬＰＳに相当することを示す。
表７のデータに基づいて、より明確に対比できる図７を作成し、図７及び表７から、本実験は、鉄皮石斛オリゴ糖のＲＡＷ２６４．７細胞の免疫調節活性効果を評価することが分かれる。結果は、３．１２５μｇ／ｍＬの濃度で、ＲＡＷ２６４．７大食細胞によるＴＮＦ－αの分泌が極めて顕著に増加し、陽性対照ＬＰＳに相当することを示し、５０μｇ／ｍＬの濃度で、ＲＡＷ２６４．７大食細胞によるＩＬ－６の分泌が極めて顕著に増加し、陽性対照ＬＰＳに相当することを示す。
実施例７：脂肪酸のグリコシル化
１実験試薬：
鉄皮石斛オリゴ糖、脂肪酸、ＮａＢＨ４、ＭｅＯＨ、金属塩、ＡｌＣｌ３、ＴＨＦ、触媒等。
１実験試薬：
鉄皮石斛オリゴ糖、脂肪酸、ＮａＢＨ４、ＭｅＯＨ、金属塩、ＡｌＣｌ３、ＴＨＦ、触媒等。
２実験方法と結果：
１）Ｃ６脂肪酸を脂肪アルコールに還元する：脂肪酸１０ｍｍｏｌ、ＮａＢＨ４２０ｍｍｏｌ、ＡｌＣｌ３４０ｍｍｏｌ、ＴＨＦ２７ｍＬ、ＭｅＯＨ３ｍＬ、反応温度：１００℃、反応時間：８ｈ、収率：９０％である。
１）Ｃ６脂肪酸を脂肪アルコールに還元する：脂肪酸１０ｍｍｏｌ、ＮａＢＨ４２０ｍｍｏｌ、ＡｌＣｌ３４０ｍｍｏｌ、ＴＨＦ２７ｍＬ、ＭｅＯＨ３ｍＬ、反応温度：１００℃、反応時間：８ｈ、収率：９０％である。
２）グリコシル化：還元によって得られた脂肪アルコールと鉄皮石斛オリゴ糖を利用してグリコシル化反応を行い、アルコールと糖のモル比は１：８～１０であり、触媒は臭化セチルアンモニウムであり、反応温度は１１０～１１５℃であり、反応時間は３ｈであり、収率は８０％である。
３結論：
反応は、鉄皮石斛オリゴ糖の有する末端グリコシドも脂肪酸とグリコシル化反応が発生できることを表明する。
反応は、鉄皮石斛オリゴ糖の有する末端グリコシドも脂肪酸とグリコシル化反応が発生できることを表明する。
実施例８：
本実施例は、抗老化或は免疫調節フェイスクリームを提供し、その中で、質量百分率で、フェイスクリームには、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液０．４～０．６％、ステアリン酸７．５～８．５％、Ｃ１６アルコール１．５～２．５％、自己乳化モノグリセリド１．５～２．５％、水素化ラノリン１．５～２．５％、液体パラフィン１１～１３％、グリセリン６～８％、乳化剤１～２％、防腐剤０．１～０．３％、香料０．１～０．３％、余量の水が含まれる。上記組成のフェイスクリームは、化粧品の一般的な製造方法によって製造される。
本実施例は、抗老化或は免疫調節フェイスクリームを提供し、その中で、質量百分率で、フェイスクリームには、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液０．４～０．６％、ステアリン酸７．５～８．５％、Ｃ１６アルコール１．５～２．５％、自己乳化モノグリセリド１．５～２．５％、水素化ラノリン１．５～２．５％、液体パラフィン１１～１３％、グリセリン６～８％、乳化剤１～２％、防腐剤０．１～０．３％、香料０．１～０．３％、余量の水が含まれる。上記組成のフェイスクリームは、化粧品の一般的な製造方法によって製造される。
実施例９：
本実施例は、抗老化或は免疫調節乳剤を提供し、その中で、質量百分率で、乳液には、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液０．４～０．６％、ステアリン酸１．３～１．５％、セタノール０．０８～０．１２％、２－エチルアルコールセチルステアレート１．７～１．９％、ミリスチン酸イソプロピル０．１～０．３％、２－ヘキシル－１－デカノール０．９～１．１％、液体パラフィン７～８％、グリセロール２．５～３．５％、プロピレングリコール７～９％、トリエタノールアミン０．０８～０．１２％、カルボキシビニルポリマー０．３～０．４％、アラセル（Ａｒｌａｃｅｌ）１６５ １．５～２．５％、防腐剤０．１～０．３％、香料０．１～０．３％、余量の水が含まれる。上記組成の乳剤は、化粧品の一般的な製造方法によって製造される。
本実施例は、抗老化或は免疫調節乳剤を提供し、その中で、質量百分率で、乳液には、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液０．４～０．６％、ステアリン酸１．３～１．５％、セタノール０．０８～０．１２％、２－エチルアルコールセチルステアレート１．７～１．９％、ミリスチン酸イソプロピル０．１～０．３％、２－ヘキシル－１－デカノール０．９～１．１％、液体パラフィン７～８％、グリセロール２．５～３．５％、プロピレングリコール７～９％、トリエタノールアミン０．０８～０．１２％、カルボキシビニルポリマー０．３～０．４％、アラセル（Ａｒｌａｃｅｌ）１６５ １．５～２．５％、防腐剤０．１～０．３％、香料０．１～０．３％、余量の水が含まれる。上記組成の乳剤は、化粧品の一般的な製造方法によって製造される。
実施例１０：
本実施例は、抗老化或は免疫調節化粧水を提供し、その中で、質量百分率で、化粧水には、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液１～１０％、ポリアクリル酸ナトリウム０．３～０．４％、グリセロール３．５～４．５％、１，３－ブタンジオール２～３％、ビタミンＢ５ ０．４～０．６％、アルブチン０．４～０．６％、ＥＤＴＡ－Ｎａ２ ０．０４～０．０６％、余量の脱イオン水が含まれる。化粧水の調製方法は、ポリアクリル酸ナトリウムを水に溶かし、十分に膨潤するまで攪拌し、残りの成分を加えて攪拌を続け、次に、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液を加えて攪拌した後、脱イオン水を加えて定積して、化粧水を得る。
本実施例は、抗老化或は免疫調節化粧水を提供し、その中で、質量百分率で、化粧水には、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液１～１０％、ポリアクリル酸ナトリウム０．３～０．４％、グリセロール３．５～４．５％、１，３－ブタンジオール２～３％、ビタミンＢ５ ０．４～０．６％、アルブチン０．４～０．６％、ＥＤＴＡ－Ｎａ２ ０．０４～０．０６％、余量の脱イオン水が含まれる。化粧水の調製方法は、ポリアクリル酸ナトリウムを水に溶かし、十分に膨潤するまで攪拌し、残りの成分を加えて攪拌を続け、次に、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液を加えて攪拌した後、脱イオン水を加えて定積して、化粧水を得る。
好ましい技術案は：０．３５ｇのポリアクリル酸ナトリウムを７０ｍＬの水に溶解し、攪拌し、充分に膨潤させることである。組成中の剰余成分を撹拌しながらゆっくり加え、次に、本発明の実施例１で調製されたオリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液を１０％添加し、均一に混合するように攪拌する。脱イオン水を１００ｍＬまで加えて包装すればよい。
実施例１１：
本実施例は、抗老化或は免疫調節リペアクリームを提供し、その中で、質量百分率で、リペアクリームには、グリセロール５～７％、カルボマー１．４～１．６％、トリエタノールアミン１．４～１．６％、プロピレングリコール５．５～６．５％、エチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩０．１５～０．２５％、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液９～１１％及び精油０．４～０．６％、余量の脱イオン水が含まれ、
リペアクリームの調製方法は、カルボマーを適量の脱イオン水に入れ、均一に撹拌し、停止状態で一晩放置して十分に膨潤させた後、グリセロールを加え、トリエタノールアミンでｐＨ値を調整し、ゲルマトリックスの粘度を上げる。別に組成量のオリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液、プロピレングリコール及び脱イオン水を取り、均一に混合し、次に、カルボマーゲルを加え、組成量の精油とエチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩を加え、均一で繊細になるまで攪拌し、蒸留水を十分な量まで加え、均一に研磨して、リペアクリームを得る。
本実施例は、抗老化或は免疫調節リペアクリームを提供し、その中で、質量百分率で、リペアクリームには、グリセロール５～７％、カルボマー１．４～１．６％、トリエタノールアミン１．４～１．６％、プロピレングリコール５．５～６．５％、エチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩０．１５～０．２５％、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液９～１１％及び精油０．４～０．６％、余量の脱イオン水が含まれ、
リペアクリームの調製方法は、カルボマーを適量の脱イオン水に入れ、均一に撹拌し、停止状態で一晩放置して十分に膨潤させた後、グリセロールを加え、トリエタノールアミンでｐＨ値を調整し、ゲルマトリックスの粘度を上げる。別に組成量のオリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液、プロピレングリコール及び脱イオン水を取り、均一に混合し、次に、カルボマーゲルを加え、組成量の精油とエチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩を加え、均一で繊細になるまで攪拌し、蒸留水を十分な量まで加え、均一に研磨して、リペアクリームを得る。
好ましい技術案は：グリセロール６ｇ、カルボマー１．５ｇ、トリエタノールアミン１．５ｇ、プロピレングリコール６ｇ、エチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩０．２ｇ、本発明の実施例１によって得られたオリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液１０％及び適量の脱イオン水を総重量が１００ｇになるまで加える。調製方法：カルボマーを適量の脱イオン水に入れ、均一に攪拌し、停止状態で一晩放置して十分に膨潤させた後、グリセロールを加え、トリエチルアミンでｐＨ値を調整し、ゲルマトリックスの粘度を上げる。別に組成量のタンシノン抽出物、プロピレングリコール及び脱イオン水を取り、均一に混合する。次に、カルボマーゲルを加え、０．５％の精油、エチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩を加え、均一で繊細になるまで攪拌し、蒸留水を十分な量まで加え、均一に研磨すればよい。
以上のように、本発明の好ましい実施例にすぎず、いかなる形態においても本発明を限定することを意図するものではない。本発明の技術的本質に基づいて上記の実施例に対して行われる任意の単純な修正、同等の変更及び修正は、依然として本発明の技術案の範囲内に入れる。
好ましい技術案は、グリセロール６ｇ、カルボマー１．５ｇ、トリエタノールアミン１．５ｇ、プロピレングリコール６ｇ、エチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩０．２ｇ、本発明の実施例１によって得られたオリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液１０％及び適量の脱イオン水を総重量が１００ｇになるまで加える。調製方法：カルボマーを適量の脱イオン水に入れ、均一に攪拌し、停止状態で一晩放置して十分に膨潤させた後、グリセロールを加え、トリエチルアミンでｐＨ値を調整し、ゲルマトリックスの粘度を上げる。別に組成量のオ
リゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液、プロピレングリコール及び脱イオン水を取り、均一に混合する。次に、カルボマーゲルを加え、０．５％の精油、エチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩を加え、均一で繊細になるまで攪拌し、蒸留水を十分な量まで加え、均一に研磨すればよい。
Claims (16)
- 鉄皮石斛オリゴ糖であって、前記鉄皮石斛オリゴ糖は、３～９個のグリコシド残基を含み、非還元末端にグルコース残基を有することを特徴とする鉄皮石斛オリゴ糖。
- 前記鉄皮石斛オリゴ糖は６つのグリコシド残基を含むことを特徴とする請求項１に記載の鉄皮石斛オリゴ糖。
- 前記鉄皮石斛オリゴ糖の構造は化Iに示すとおりであることを特徴とする請求項１又は２に記載の鉄皮石斛オリゴ糖。
- 前記グリコシド残基は、ガラクトース残基、マンノース残基及びグルコース残基を含むことを特徴とする請求項１に記載の鉄皮石斛オリゴ糖。
- 前記ガラクトース残基、マンノース残基及びグルコース残基のモル比が、（３～２）：（２～１）：（２～１）であることを特徴とする請求項４に記載の鉄皮石斛オリゴ糖。
- 前記ガラクトース残基、マンノース残基及びグルコース残基のモル比は、２：１：１であることを特徴とする請求項５に記載の鉄皮石斛オリゴ糖。
- 鉄皮石斛オリゴ糖誘導体であって、前記鉄皮石斛オリゴ糖誘導体は前記請求項１～６のいずれか一項に記載の鉄皮石斛オリゴ糖のグルコース残基と疎水性残基との反応によって生成されたものであり、前記疎水性残基は、直鎖又は分岐鎖のＣ１－Ｃ１８アルキル基、Ｃ１－Ｃ１８アルキルカルボン酸、Ｃ１－Ｃ１８アルキルアミン、Ｃ１－Ｃ１８アリールアルキル基及びＣ１－Ｃ１８アルキルアミドのいずれか一つを含み、或は
前記疎水性残基は、ベンゾイル基、フェニルアセチル基、フェニルプロピオニル基のいずれか一つを含むことを特徴とする鉄皮石斛オリゴ糖誘導体。 - 前記請求項１～６のいずれか一項に記載の鉄皮石斛オリゴ糖、或は請求項７に記載の鉄皮石斛オリゴ糖誘導体の抗老化或は免疫調節製品の調製における適用。
- 前記製品には、医薬品、食品、製剤及び化粧品が含まれることを特徴とする請求項８に記載の適用。
- 前記化粧品の種類には、フェイスクリーム、乳剤、化粧水、リペアクリームが含まれることを特徴とする請求項９に記載の適用。
- 請求項１～２のいずれか一項に記載の鉄皮石斛オリゴ糖の抽出方法であって、
１）鉄皮石斛粉末の調製：鉄皮石斛の茎を乾燥させた後、粉砕にして、ふるいにかけて鉄皮石斛粉末を得るステップと、
２）鉄皮石斛の水抽出物の調製：前記鉄皮石斛の粉末と水を混合した後、少なくとも１回の沸騰水浴を行い、次に水抽出物を合わせて鉄皮石斛の水抽出物を得るステップと、
３）鉄皮石斛の濃縮水抽出物の調製：前記鉄皮石斛の水抽出物に対して遠心分離した後、真空濃縮して、鉄皮石斛の濃縮水抽出物を得るステップと、
４）再構成液の調製：前記鉄皮石斛の濃縮水抽出物にエタノールを加え、沈殿させ、遠心分離し、上澄液を廃棄し、得られた沈殿物に水を加えて再構成し、再構成液を得るステップと、
５）鉄皮石斛オリゴ糖の水溶液の調製：前記再構成液に対して脱蛋白した後、凍結乾燥して鉄皮石斛粗多糖を得るステップと、前記鉄皮石斛粗多糖を水に溶解した後、そのなかにセルラーゼを加えて反応させた後、不活性化にして遠心分離し、沈殿物を廃棄して鉄皮石斛オリゴ糖の水溶液を得るステップと、
６）鉄皮石斛オリゴ糖の調製：鉄皮石斛オリゴ糖の水溶液対して精製して、鉄皮石斛オリゴ糖を得るステップを含むことを特徴とする鉄皮石斛オリゴ糖の抽出方法。 - ステップ１）で、前記乾燥処理する温度は５０～６０℃であり、前記乾燥処理した後の鉄皮石斛の茎の水分質量含有量は６％未満であり、前記ふるいにかけるメッシュの数量は２０～４０メッシュであり、
ステップ２）で、前記鉄皮石斛粉末と水を１：（５０～８０）ｇ／ｍＬの質量体積比で混合し、沸騰水浴を２～３回行い、毎回の沸騰水浴の時間は１～２ｈ間であり、
ステップ３）は、前記遠心分離の条件は、３０００～４０００ｒｐｍ／ｍｉｎ、８～１２ｍｉｎ、室温であり、前記真空濃度の条件は、回転蒸発法を使用し、エタノールの回収温度は＜５０℃であり、圧力は０．７Ｐａ～０．９Ｐａであり、前記鉄皮石斛の濃縮水抽出物の物質と液体の質量体積比は１：（５～１０）ｇ／ｍＬであることを特徴とする請求項１１に記載の鉄皮石斛オリゴ糖の抽出方法。 - 前記鉄皮石斛オリゴ糖の抽出方法であって、
ステップ４）では、前記鉄皮石斛の濃縮水抽出物にエタノールを添加して沈殿させることは、具体的に、前記鉄皮石斛の濃縮水性抽出物に体積濃度が９５％であるエタノールを、混合物のアルコール濃度が体積百分率で７０～８０％となるように添加し、一晩沈殿させることであり、
前記遠心分離の条件は、３５００～４５００ｒｐｍ、１８～２２ｍｉｎ、室温であり、前記再構成する時に沈殿物と水との重量体積比は１：（４～６）ｇ／ｍＬであり、
ステップ５）で、前記再構成液に対する脱蛋白する方法は、Ｓａｖａｇｅ法によって前記再構成液に対して脱蛋白し、
前記凍結乾燥温度は４５℃であり、
前記鉄皮石斛粗多糖に水を加えて溶解することは、前記鉄皮石斛粗多糖に水を加えて４．５～５．５ｍｇ／ｍＬになるまで溶解することであり、
前記セルラーゼの添加量は、前記鉄皮石斛粗多糖の重量の２％～４％であり、
前記セルラーゼを添加した後、反応する反応温度は５５～６５℃であり、反応時間は２ｈ～４ｈであり、
前記不活性化にする方法は、２５～３５ｍｉｎ煮沸することによる不活性化処理であり、
前記遠心条件は３５００～４５００ｒｐｍ、１５～２５ｍｉｎ、室温であり、
前記鉄皮石斛オリゴ糖水溶液中のオリゴ糖含有量は８０％を超え、
ステップ６）で、前記精製はＧ７５ゲルカラムを使用して行われ、前記鉄皮石斛オリゴ糖の純度は９９．８６％であることを特徴とする請求項１１に記載の鉄皮石斛オリゴ糖の抽出方法。 - 請求項３に記載の鉄皮石斛オリゴ糖誘導体の調製方法であって、以下のステップを含む：
１）脂肪酸を脂肪アルコールに還元し、
２）前記脂肪アルコールを鉄皮石斛オリゴ糖とグリコシル化して、前記鉄皮石斛オリゴ糖誘導体を得ることを特徴とする鉄皮石斛オリゴ糖誘導体の調製方法。 - ステップ１）で、前記脂肪酸を脂肪アルコールに還元するための反応プロセスは、９～１１ｍｍｏｌの脂肪酸、１８～２２ｍｍｏｌのＮａＢＨ４、３８～４２ｍｍｏｌのＡｌＣｌ３、２５～２９ｍｌのＴＨＦ、２～４ｍｌのＭｅＯＨを混合して反応させ、反応温度は９５～１０５℃であり、反応時間は７．５～８．５ｈであり、収率は８８～９２％であり、
ステップ２）で、前記グリコシル化の反応プロセスは、アルコールと糖のモル比は１：（８～１０）であり、混合した後、触媒として臭化セチルアンモニウムにより触媒反応させ、反応温度は１１０～１１５℃であり、反応時間は２．５～３．５ｈであり、収率は７８～８２％であることを特徴とする請求項１４に記載の鉄皮石斛オリゴ糖誘導体の調製方法。 - 抗老化或は免疫調節製品であって、前記抗老化或は免疫調節製品が、フェイスクリーム、乳剤、化粧水或はリペアクリームであり、
質量百分率で、前記フェイスクリームには、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液０．４～０．６％、ステアリン酸７．５～８．５％、Ｃ１６アルコール１．５～２．５％、自己乳化モノグリセリド１．５～２．５％、水素化ラノリン１．５～２．５％、液体パラフィン１１～１３％、グリセロール６～８％、乳化剤１～２％、防腐剤０．１～０．３％、香料０．１～０．３％、余量の水が含まれ、
質量百分率で、前記乳剤には、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液０．４～０．６％、ステアリン酸１．３～１．５％、セタノール０．０８～０．１２％、２－エチルアルコールセチルステアレート１．７～１．９％、ミリスチン酸イソプロピル０．１～０．３％、２－ヘキシル－１－デカノール０．９～１．１％、液体パラフィン７～８％、グリセロール２．５～３．５％、プロピレングリコール７～９％、トリエタノールアミン０．０８～０．１２％、カルボキシビニルポリマー０．３～０．４％、アラセル（Ａｒｌａｃｅｌ）１６５ １．５～２．５％、防腐剤０．１～０．３％、香料０．１～０．３％、余量の水が含まれ、
質量百分率で、前記化粧水には、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液１～１０％、ポリアクリル酸ナトリウム０．３～０．４％、グリセロール３．５～４．５％、１，３－ブタンジオール２～３％、ビタミンＢ５ ０．４～０．６％、アルブチン０．４～０．６％、ＥＤＴＡ－Ｎａ２ ０．０４～０．０６％、余量の脱イオン水が含まれ、
質量百分率で、前記リペアクリームには、グリセロール５～７％、カルボマー１．４～１．６％、トリエタノールアミン１．４～１．６％、プロピレングリコール５．５～６．５％、エチル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩０．１５～０．２５％、オリゴ糖が豊富な鉄皮石斛原液９～１１％、精油０．４～０．６％、余量の脱イオン水が含まれることを特徴とする抗老化或は免疫調節製品。
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