CN116656758B - 一种石斛寡糖和石斛鲜汁及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种石斛寡糖的制备方法，选取新鲜石斛茎条获得石斛多糖提取液，用活性比值为100:1‑500:1的内切β‑葡聚糖酶和葡甘聚糖酶进行酶解，将酶解液通过1000‑3000Da的截留膜，再通过200‑500Da的浓缩膜去除单糖溶液从而获得石斛寡糖原液浓缩液，冻干得石斛寡糖。本发明还公开了一种石斛寡糖和石斛寡糖的应用，所述石斛寡糖用上述方法制备获得。本发明的石斛寡糖和石斛鲜汁的制备方法能够在采用新鲜石斛作为原料的情况下，将内切β‑葡聚糖酶和葡甘聚糖酶配合使用，有效提高石斛寡糖的得率，还能够获得副产品石斛鲜汁。

Description

一种石斛寡糖和石斛鲜汁及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及天然医药化学技术领域，具体地说，是关于一种石斛寡糖和石斛鲜汁及其制备方法和应用。

背景技术

皮肤是人体表面最大的器官，承担着抵御外界有害环境、保护机体健康的重要使命。皮肤屏障便发挥着重要的作用，广义的皮肤屏障指微生物屏障、物理屏障、色素屏障和免疫屏障等。皮肤屏障的缺陷可能导致多种疾病，如银屑病、特应性皮炎、皮肤卟啉病、角质化鱼鳞病、湿疹等。角质层屏障是皮肤屏障的一个重要组成部分，角质层屏障功能的主要结构基础是：角质层细胞（砖块）、细胞间脂质（砂浆）和天然保湿因子（NMF）。

兜甲蛋白（Loricrin）是角质形成细胞终末分化标志物。兜甲蛋白表达在角质形成细胞分化的晚期，出现在表皮颗粒层，是角蛋白透明颗粒中的高硫成分，也是角质包膜的一个重要组成成分，对表皮的屏障功能起重要作用。

天然保湿因子NMF主要由角质细胞在分化过程中表达的丝聚蛋白 (FLG) 降解生成，因此，促进NMF的生成的关键是促进丝聚蛋白（FLG）的生成，FLG减少或缺失都可削弱皮肤屏障功能，导致多种皮肤病的发生。

水通道蛋白（AQP）是一类能快速转运水的膜整合蛋白，皮肤中主要表达AQP3，其主要存在于皮肤角质形成细胞和成纤维细胞中。AQP3可运输水和甘油，在保持表皮水合作用方面发挥重要作用，参与屏障的形成，其表达量的变化及功能缺陷会导致皮肤屏障功能受损而引起相关皮肤病。

透明质酸是一种酸性粘多糖，具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，皮肤中也含有大量的透明质酸。透明质酸合成酶（Hyaluronan synthaseHAS）是一类在透明质酸合成过程中发挥重要作用的酶，HAS可催化合成相当水平的透明质酸，补充人体在不同阶段与部位的透明质酸。因此，可通过此四种基因表达来寻找具有修复皮肤屏障作用的物质。

石斛为兰科植物金钗石斛（Dendrobium noble Lindl）、鼓槌石斛（Dendrobiumchrysotoxum Lindl）或流苏石斛（Dendrobium fimbriatum Hook）的栽培品及其同属植物近似的新鲜货干燥茎。石斛味甘，性微寒，归胃、肾经，具有益胃生津，滋阴清热的功效。现代研究表明，石斛多糖具有较好的保湿和修复皮肤屏障的作用，但石斛寡糖修复皮肤屏障的作用研究比较浅显。

现有的石斛寡糖的制备方法中有直接采用新鲜石斛提取天然石斛寡糖，不包含酶解过程；或以干石斛为原料并单独使用纤维素酶酶解制备石斛寡糖。采用这些方法制备石斛寡糖时都要大量使用乙醇，导致存储和运输的成本较高，安全性较低；除此之外，制备获得的石斛寡糖的得率和活性也都较低。

发明内容

本发明针对上述技术问题，以新鲜石斛为原材料，通过将内切β-葡聚糖酶和葡甘聚糖酶配合使用，从新鲜石斛中提取出石斛寡糖，有效降低运输和存储成本，提高提取过程的安全性；制备获得的石斛寡糖得率较高，在促进皮肤屏障相关基因表达方面的活性也较高。除此之外，本发明的制备方法还能够获得一种副产品石斛鲜汁，在皮肤保湿方面也有较好的应用。因此，本发明的第一个目的在于提供一种石斛寡糖的制备方法。本发明的第二个目的在于提供一种石斛寡糖。本发明的第三个目的在于提供一种石斛寡糖的应用。本发明的第四个目的在于提供一种石斛鲜汁的制备方法。本发明的第五个目的在于提供一种石斛鲜汁。本发明的第六个目的在于提供一种石斛鲜汁的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

作为本发明的第一个方面，一种石斛寡糖的制备方法，包括如下步骤：

S1、选取新鲜石斛茎条，经灭菌灭酶后榨汁，得到滤渣和汁液，对汁液进行离心，得到沉淀和上清液；

S2、将滤渣和沉淀合并，加入去离子水并加热，获得石斛多糖提取液；

S3、向石斛多糖提取液中加入活性比值为100:1-500:1的内切β-葡聚糖酶和葡甘聚糖酶，获得酶解液；

S4、将酶解液通过1000-3000Da的截留膜，再通过200-500Da的浓缩膜去除单糖溶液，获得石斛寡糖原液浓缩液；

S5、冻干得石斛寡糖。

优选地，所述S3中向石斛多糖提取液中加入的内切β-葡聚糖酶和葡甘聚糖酶的酶活比值为200:1。

优选地，所述S4中截留膜的截留分子量为2000Da，所述浓缩膜的截留分子量为500Da。

根据本发明，所述S1中对新鲜石斛茎条以微波灭菌灭酶，以减少新鲜石斛自身含有的酶对有效成分造成破坏。

具体地，以600W的波长对新鲜石斛茎条进行微波灭菌灭酶10min。

根据本发明，所述S2中向合并后的沉淀和滤渣中加入的去离子水的质量为滤渣和沉淀总质量的5-20倍。

作为本发明的第二个方面，一种石斛寡糖，其是通过上述所述的石斛寡糖的制备方法制备获得。

作为本发明的第三个方面，一种石斛寡糖在制备具有皮肤屏障修复作用的产品中的应用。

进一步地，一种石斛寡糖在制备具有皮肤屏障修复作用的美容产品或外用制剂中的应用。

作为本发明的第四个方面，一种石斛寡糖在促进皮肤屏障相关基因表达中的应用。

具体地，所述皮肤屏障相关基因为兜甲蛋白mRNA、丝聚蛋白mRNA、水通道蛋白mRNA和透明质酸mRNA。

作为本发明的第五个方面，一种石斛鲜汁的制备方法，包括如下步骤：

S6、向S1获得的上清液中加入内切β-葡聚糖酶并调节酶活至10-200U/mL，进行酶解，获得酶解液；

S7、对S6中获得的酶解液依次进行除蛋白、脱色、脱盐、膜过滤等操作，获得石斛鲜汁；

进一步地，向S7中获得的石斛鲜汁中加入有机溶剂作为稳定剂，得到稳定的石斛鲜汁。

根据本发明，所述S7中用等电点、絮凝或电泳等方法除蛋白；用活性炭或树脂等方法脱色；用反渗透或离子交换树脂等方法脱盐。

根据本发明，所述S8中作为稳定剂的有机溶剂中包含0.5%1,2-己二醇和0.5%对羟基苯乙酮，还包含5%甲基丙二醇或5%甘油或5%丁二醇。

作为本发明的第六个方面，一种石斛鲜汁，其是通过上述所述的石斛鲜汁的制备方法制备获得。

作为本发明的第七个方面，一种上述所述的石斛鲜汁在美容护肤品中的应用。

进一步地，一种石斛鲜汁在提高皮肤保湿功效的美容护肤品中的应用。

本发明的有益效果：

以内切β-葡聚糖酶和葡聚糖苷酶的酶活比值为100:1-500:1制备获得的石斛寡糖的得率和活性都较高，能够有效促进兜甲蛋白、丝聚蛋白、水通道蛋白和透明质酸的mRNA表达，从而具有促进皮肤屏障修复的作用，因此在美容领域、外用制剂领域具有广泛的应用。

除此之外，本发明的制备方法还能够获得一种副产品石斛鲜汁，在美容护肤产品尤其是皮肤保湿产品有较好的应用。

附图说明

图1为使用在线酶解-分子截留机组制备石斛寡糖浓缩液的示意性流程图。

图2为各样品对FLG mRNA表达促进作用的柱状图。

图3为各样品对AQP3 mRNA表达促进作用的柱状图。

图4为各样品对Loricrin mRNA表达促进作用的柱状图。

图5为各样品对HAS2 mRNA表达促进作用的柱状图。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明做进一步解释说明。以下实施例仅用于说明本发明而非用于限制本发明的范围。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1-3和对比例1-3均采用如下方法进行：

1、预处理

S1、选材：选用生长期超过3年的新鲜石斛茎条1000g；

S2、微波灭菌灭酶：以600W的波长将新鲜石斛茎条微波灭菌灭酶10min；

S3、榨汁：对微波后的石斛茎条进行榨汁，得到汁液和滤渣；

S4、离心：对汁液进行离心，得到上清和沉淀。

2、制备石斛寡糖

S5、将榨汁后的滤渣和离心后的沉淀合并，向其中加入滤渣和沉淀总质量5-20倍量的去离子水并加热，以溶解和提取石斛多糖，获得石斛多糖提取液；

S6、分别加入内切β-葡聚糖酶和葡甘聚糖酶，或者单独加入内切β-葡聚糖酶，或者单独加入葡甘聚糖酶；

S7、经在线酶解-分子截留机组制备石斛寡糖原液浓缩液；

S8、冻干得石斛寡糖，计算得率。

3、制备石斛鲜汁

S9、向S4获得的上清液中加入内切β-葡聚糖酶；

S10、用等电点法、絮凝或电泳等方法除蛋白；

S11、用活性炭或树脂等方法脱色；

S12、反渗透或离子交换树脂等方法脱盐；

S13、进行膜过滤后，得到石斛鲜汁原液；

S14、向石斛鲜汁原液中加入0.5%的1,2-己二醇和0.5%的对羟基苯乙酮，以及5%的甲基丙二醇或5%甘油或5%丁二醇作为稳定剂，得到石斛鲜汁。

如图1所示，为S7中的在线酶解-分子截留机组的示意图。在线酶解-分子截留机组由酶解罐、循环截留-浓缩膜机组构成。将内切-β葡聚糖酶和葡甘聚糖酶以及S5中获得的石斛多糖提取液置于酶解罐中进行充分酶解，将酶解液通过2000Da的截留膜，寡糖和单糖以及水分子能够穿过截留膜，但多糖等其他大分子物质无法穿过从而被截留下来，截留下来的混合物继续回到酶解罐中进行酶解，使石斛多糖继续酶解成为石斛寡糖或单糖从而穿过截留膜；再将单糖和寡糖的混合溶液通过一道500Da的浓缩膜，单糖分子和水分子能够通过，石斛寡糖则被过滤下来，从而形成石斛寡糖浓缩液，为本步骤获得的产物；而通过浓缩膜的单糖溶液则再度回到酶解罐中，保证酶解罐中水量的充足，以继续在酶解罐中进行酶解反应。

实施例1-3与对比例1-3中使用的酶及石斛寡糖的得率如表1所示。

表1实施例1-3与对比例1-3对照表

表1中，酶活比值指S6步骤中加入的内切β-葡聚糖酶和葡甘聚糖酶的酶活比值。

对比例4

（1）称取铁皮石斛新鲜茎1000g，加入12L水，70℃回流提取2h，重复提取2次；

（2）将过滤后的提取液合并，减压浓缩至约2L；

（3）大型离心机3600rpm离心10min，弃去药渣，上清液加入4倍体积无水乙醇，充分搅拌均匀后静置过夜；

（4）大型离心机3600rpm离心10min，收集上清液合并后减压浓缩至无乙醇，冷冻干燥得到铁皮石斛总寡糖19.2g，得率1.92%。

对比例5

（1）将铁皮石斛新鲜茎1000g切断放置于鼓风干燥箱中55℃干燥，测其水分，水分达到6％以下时，将其粉碎过20~40目筛，加超纯水10000ml，沸水浴2次，每次2h，合并水提液；

（2）之后离心，离心条件：4000rpm，10min，室温25℃，获得铁皮石斛水提液；将铁皮石斛水提液减压浓缩至2000ml，得到铁皮石斛浓缩水提液；

（3）向铁皮石斛浓缩水提液中加入适量95％乙醇至混合水液醇浓度为70~80％，隔夜沉淀，之后离心，离心条件：4000rpm，20min，室温25℃，弃去上清液，得到沉淀；按沉淀重量1:5(m:v)(g/ml)加入水复溶，得到复溶液；

（4）Sevage法对复溶液除蛋白后，冷冻干燥得铁皮石斛粗多糖72.8g，将铁皮石斛粗多糖加水溶解至5mg/ml，按铁皮石斛多糖重量的2％投入纤维素酶，混匀，在60℃反应3h后，煮沸30min灭活，离心，离心条件：4000rpm，20min，室温25℃，弃去沉淀；得铁皮石斛寡糖水溶液(铁皮石斛寡糖水溶液中寡糖含量大于80％)；

（5）取适量铁皮石斛寡寡糖水液过G75凝胶柱，得纯化的铁皮石斛寡糖54.6g，即石斛寡糖得率5.46%。

对比例6

（1）将铁皮石斛新鲜茎1000g切断放置于55℃的鼓风干燥箱中干燥，测其水分，水分达到6％以下时，将其粉碎过20~40目筛，以铁皮石斛粉末:80％乙醇＝1:10(m:v)(g/ml)加热至80℃~85℃，回流提取2次，每次60min，抽滤，合并滤液，减压浓缩滤液并回收乙醇至无醇味，按水混悬液体积的5％加入1,3-丁二醇助溶得到透明澄清酚类成分液体；

（2）滤渣挥干至无醇味，以铁皮石斛滤渣:超纯水＝1:50(m:v)(g/ml)，按铁皮石斛粉末重量的4％投入纤维素酶，混匀，60℃反应4h后，煮沸60min灭活，之后离心，离心条件：4000rpm，10min，室温25℃；获得铁皮石斛寡糖水提原液（水提液中寡糖含量为80％~90％）；

（3）合并酚类成分液体及水提原液，涡旋混匀，隔夜静置24h，之后离心，离心条件：4000rpm，10min，室温25℃；得富含寡糖得铁皮石斛原液；

（4）将上述步骤中得到得铁皮石斛原液冷冻干燥后得干燥提取物83.2g，HPLC-ELSD检测寡糖重量百分比占整个富集物的88.35％，即石斛寡糖得率为7.35%。

如上所述，实施例1-3中以新鲜石斛为原料，将内切β-葡聚糖酶和葡甘聚糖酶配合使用，对石斛多糖进行酶解，获得石斛寡糖，二者的酶活比值在100:1-500:1之间，实施例1中两种酶的活性比值为100:1，实施例2中两种酶的活性比值为200:1，实施例3中两种酶的活性比值为500:1。实施例1-3中还可获得石斛鲜汁作为副产品。

对比例1中以新鲜石斛为原料，将内切-β葡聚糖酶和葡甘聚糖酶两种酶的活性比值调整为10:1制备石斛寡糖；对比例2中以新鲜石斛为原料，仅采用内切β-葡聚糖酶来对石斛多糖进行酶解制备石斛寡糖；而对比例3中则同样地以新鲜石斛为原料，但仅采用葡甘聚糖酶对石斛多糖进行酶解制备石斛寡糖。对比例1-3中也可获得石斛鲜汁作为副产品。

对比例4中以新鲜石斛为原料提取天然石斛寡糖，制备方法中不包含酶解过程；对比例5中以干石斛为原料并单独使用纤维素酶酶解制备石斛寡糖；对比例6中以干石斛为原料并单独使用纤维素酶酶解制备石斛寡糖和多酚联合体。

效果实施例1石斛寡糖得率对比

各实施例和对比例中石斛寡糖的得率如表2所示。

表2石斛寡糖的得率

如表1所示，本发明的实施例1-3中石斛寡糖的得率均在8%以上，明显高于各对比例。

对比例2中仅用内切β-葡聚糖酶来进行酶解，对比例3中仅用葡甘聚糖酶进行酶解，石斛寡糖的得率都较低；对比例1中也采用了内切β-葡聚糖酶和葡甘聚糖酶两者共同使用对石斛多糖进行酶解，但两种酶的活性比值为10:1，石斛寡糖的得率仅有1.92%，说明将两者配合使用也需要控制好两种酶的用量比例，即内切β-葡聚糖酶和葡甘聚糖酶的活性比值为100:1-500:1，实施例3中石斛寡糖的得率也略高于实施例1和实施例2中的得率，因此，优选地，两种酶的活性比值为200:1。

对比例4中仅以新鲜石斛为原料提取天然石斛寡糖，制备方法中不包含酶解过程，石斛寡糖的得率较低；对比例5中单独使用纤维素酶，能够将细胞壁裂解开来，从而提高提取过程的提取率，因而对比例5中石斛寡糖的得率虽然也低于实施例1-3，但略高于对比例4；对比例6中主要使用的也是纤维素酶，石斛寡糖的得率同样较低。

综上所述，采用实施例中的方法即将内切β-葡聚糖酶和葡甘聚糖酶二者配合使用能够提高石斛寡糖的得率，且二者的酶活比值需要控制在100:1-500:1之间，优选200:1。

效果实施例2是否获得副产品石斛鲜汁及其状态

表3是否获得副产品石斛鲜汁及其状态表

如表3中所示，实施例1-3和对比例1-3中均获得了石斛鲜汁，对比例4-6中未获得石斛鲜汁。实施例1-3中加入的内切β-葡聚糖酶的酶活在10U/mL-200U/mL之间，对比例1中加入的内切β-葡聚糖酶的酶活为5U/mL，对比例2中加入的内切β-葡聚糖酶的酶活为300U/mL，对比例3中加入的内切β-葡聚糖酶的酶活为10U/mL。实施例1、2、3及对比例2、3中获得的石斛鲜汁的状态较稀，方便使用；对比例1中获得的石斛鲜汁状态粘稠，使用不便。因此内切β-葡聚糖酶的酶活在10-300U/mL时，都可获得方便使用的状态较稀的石斛鲜汁，但对比例2中的酶活较高，酶解时间也较长，生产成本过高，因此在制备石斛鲜汁时，将内切β-葡聚糖酶的活性控制在10U/mL-200U/mL之间，能够在保持生产成本的基础上获得方便使用的石斛鲜汁。

效果实施例3对皮肤相关基因的表达促进作用验证

1、主要试剂：

DMEM培养基，胎牛血清（FBS），胰酶，总RNA提取试剂（Trizol），三氯甲烷，异丙醇，乙醇，DEPC水，PrimeScriptTMRT Master Mix (Takara)，TB Green Premix Ex TaqTMⅡ(Takara)，各基因相关引物；T25细胞培养瓶、96孔板购自康宁公司；细胞计数试剂盒(cck)-8购自Dojindo Molecular Technologies；磷酸缓冲盐溶液（PBS，1X）购自碧云天。

2、细胞系及细胞培养：

本发明采用的细胞株：人永生化角质形成细胞HaCaT源自于上海市皮肤病医院。HaCaT使用DMEM+10%FBS培养基，在细胞培养箱（5% CO2，37℃）中培养。

3、对各基因构建引物序列并进行逆转录：

将HaCaT细胞按每孔20w个接种于6孔板，培养24h后加入培养基或2mL待测样品的溶液，继续孵育24h，按照试剂盒说明书提取HaCaT细胞总RNA并进行逆转录反应。

检测基因：FLG、Loricrin、水通道蛋白(AQP3)

表4引物列表

4、各样品作用于HaCaT细胞对皮肤相关基因表达的影响

表5各样品对FLG、AQP3、Loricrin、HAS2的mRNA表达的影响

如表5中所示，分别取0.01%的石斛多糖和实施例1-3及对比例4-6中获得的石斛寡糖样品作用于HaCaT细胞进行FLG、AQP3、Loricrin、HAS2的mRNA表达，以不加任何样品进行mRNA的表达为空白对照，将各组的相对表达量记于表5中，并分别绘制柱状图，具体见附图2、3、4、5。

如图2、图4和图5所示，0.01%的浓度下，石斛多糖、石斛寡糖对FLG、Loricrin、HAS2mRNA的表达均具有一定的促进作用，石斛寡糖的效果显著优于石斛多糖的促进作用，本发明石斛寡糖经内切β-葡聚糖酶和葡甘聚糖酶联合酶解制备而得，其促进效果优于对比例4的方法制备获得的石斛寡糖，优于对比例5的方法制备获得的石斛寡糖，优于对比例6的方法制备获得的石斛寡糖。

如图3所示，0.01%石斛多糖对AQP3 mRNA的表达不具有促进或抑制作用，0.01%本发明各实施例获得的石斛寡糖对AQP3 mRNA的表达具有显著促进作用，0.01%各对比例获得的石斛寡糖对AQP3 mRNA的表达具有促进作用，但不具有显著性。

FLG、Loricrin、HAS2和AQP3在皮肤屏障修复中都具有重要作用，因此，可将石斛寡糖应用于皮肤屏障修复相关的外用制剂及美容护肤产品中。

效果实施例4石斛鲜汁的保湿效果验证--斑马鱼胚胎失水抑制测试

1、设备及材料

（1）设备：鱼缸、网筛、pH计、溶解氧测定仪、盐度计（电导率测定仪）、分析天平、显微镜、恒温箱、移液管、离心管、玻璃容器（如烧杯、容量瓶等）、旋涡混合仪、超声水浴锅、离心机、低温冰箱、可调节移液器和吸头等。

（2）材料：亲鱼养殖用水、鱼胚胎培养液、失水模型诱导剂溶液（15gNaCl溶于1000mL水）、三卡因溶液（200mg三卡因溶于48.95mL水，4℃储存，30日内有效）等。

2、实验方法：

设置5组对照组，每组随机挑选24尾鱼胚胎于3cm培养皿中，分别加入5mL对照溶液，放置于28℃±1℃的恒温箱中培养3h±0.5h。

表6斑马鱼胚胎失水抑制对照组设置

分别向上述5组对照组的培养皿中加入三卡因，将斑马鱼麻醉，放到体式显微镜下按照统一拍照参数对鱼胚胎尾部进行拍摄。

3、结果及分析

用如Image J的分析软件打开上述步骤中获得的鱼胚胎尾部照片，对每尾鱼胚胎从肛门到尾鳍末端区域进行标记，然后选择“测量”栏里的“测量面积”以量度鱼胚胎尾巴面积，计算尾巴面积缩小抑制率。

抑制率=（S-M）/(C-M)*100%，

式中，S-阳性对照组和受试组中鱼胚胎尾巴面积的平均值；

C-空白对照组中鱼胚胎尾巴面积的平均值；

M-模型对照组中鱼胚胎尾巴面积的平均值。

计算得到的各组数据如表7所示。

表7各对照组中鱼尾面积及面积缩小抑制率

由表7可知，受试组1中的鱼尾面积缩小抑制率高达87%，显著高于受试组2中的鱼尾面积缩小抑制率，也显著高于阳性对照组中的鱼尾面积缩小抑制率，说明实施例3中制备获得的石斛鲜汁具有非常良好的保湿作用，且这种保湿作用显著强于对比例2中获得的石斛鲜汁，也显著强于甘油的保湿效果。

综上所述，本发明的实施例中采用新鲜石斛茎条，用内切β-葡聚糖酶和葡甘聚糖酶以100:1-500:1的活性比值配合使用进行酶解，获得的石斛寡糖对皮肤相关的基因FLG、AQP3、Loricrin、HAS2 mRNA的表达均具有显著的促进作用，且石斛寡糖的得率更高，在制备石斛寡糖时也避免了使用乙醇，具有一定的绿色环保安全性；除此之外，还能够获得具有良好保湿效果的副产品石斛鲜汁。

以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种石斛寡糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、选取新鲜石斛茎条，经灭菌灭酶后榨汁，得到滤渣和汁液，对汁液进行离心，得到沉淀和上清液；

S2、将滤渣和沉淀合并，加入去离子水并加热，获得石斛多糖提取液；

S3、向石斛多糖提取液中加入活性比值为100:1-500:1的内切β-葡聚糖酶和葡甘聚糖酶，获得酶解液；

S4、将酶解液通过1000-3000Da的截留膜，再通过200-500Da的浓缩膜去除单糖溶液，获得石斛寡糖原液浓缩液；

S5、冻干得石斛寡糖。

2.如权利要求1所述的石斛寡糖的制备方法，其特征在于，所述S3中向石斛多糖提取液中加入的内切β-葡聚糖酶和葡甘聚糖酶的活性比值为200:1。

3.如权利要求1所述的石斛寡糖的制备方法，其特征在于，所述S4中将酶解液通过2000Da的截留膜，再通过500Da的浓缩膜去除单糖溶液，获得石斛寡糖原液浓缩液。

4.一种石斛寡糖，其特征在于，其通过如权利要求1-3任一项所述的石斛寡糖的制备方法制备获得。

5.一种如权利要求4所述的石斛寡糖在制备具有促进皮肤屏障修复作用的产品中的应用。