JP2023519926A - 二重特異性核酸分子を含む抗癌ウイルスの構造 - Google Patents

Abstract

本発明は、抗腫瘍アデノウイルスおよびそれを含む抗癌用組成物に関するものであって、本願発明の二本鎖ｓｉＲＮＡは、第１の核酸および第２の核酸の発現を同時に阻害することにより、癌細胞の死滅を促進し、各ｓｉＲＮＡを一緒に処理したものより抗癌活性が顕著であり、抗癌剤との併用処理で癌細胞の死滅を相乗的に向上させる効果があり、これを発現するｓｈＲＮＡをコードする発現カセットとｈＴＥＲＴプロモーター含有アデノウイルスは、体内免疫応答を回避し、癌細胞に特異的に送達され、全身に治療効果があり、局所送達が可能であり、選択性に優れ、低侵襲治療としても顕著な抗癌効果を示し、種々の癌に抗癌用組成物または抗癌補助剤として有用に用いられることができる。【選択図】図１

Description

本発明は、抗腫瘍アデノウイルスおよびそれを含む抗癌用組成物に関する。

癌は、世界中で最も多くの死亡者を出す疾病の１つであって、革新的な癌治療薬の開発により、治療時に発生する医療費を節減でき、且つ、高付加価値を生み出すことができる。また、２００８年の統計によれば、従来の抗癌剤耐性を克服できる分子治療薬は、主要７カ国（米国、日本、フランス、ドイツ、イタリア、スペイン、英国）で＄１７．５ ｂｉｌｌｉｏｎを占め、２０１８年の場合は約＄４５ ｂｉｌｌｉｏｎ程のｍａｒｋｅｔ ｓｉｚｅを占め、２００８年に比べて９．５％の成長率を示すと予測されている。癌の治療は、手術、放射線療法、化学療法、生物学的療法に区分されるが、その中でも化学療法は、化学物質を用いて癌細胞の増殖を抑制したり、殺す治療法であって、抗癌剤によって現れる毒性は、相当部分正常細胞にも現れ、一定程度の毒性を示すので、抗癌剤が効果があっても一定期間使用すると効果がなくなる耐性が発生するため、癌細胞に選択的に作用し、耐性が生じない抗癌剤の開発が切実である（癌征服の現状Ｂｉｏｗａｖｅ ２００４．６（１９））。最近では、癌に対する分子遺伝情報の確保を通じて癌の分子特性を標的とした新しい抗癌剤の開発が進められており、癌細胞のみが持っている特徴的な分子標的（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔａｒｇｅｔ）を狙う抗癌剤は、薬剤耐性が生じないという報告もある。

遺伝子発現を抑制する技術は、疾患治療のための治療薬の開発および標的検証において重要なツールである。干渉ＲＮＡ（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ、以下、「ＲＮＡｉ」という）は、その役割が発見されて以来、様々な種類の哺乳動物細胞（ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌ）で配列特異的なｍＲＮＡに作用することが判明した（Ｓｉｌｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ：ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ（２００５）８３：７６４７７３）。ＲＮＡｉは、２１～２５ヌクレオチド長の二重らせん構造を有する小干渉リボ核酸短い干渉ＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ、以下、「ｓｉＲＮＡ」という）が相補的な配列を有する転写体（ｍＲＮＡ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ）に特異的に結合して転写体を分解することにより、特定のタンパク質の発現が抑制される現象である。細胞内では、ＲＮＡ二本鎖は、Ｄｉｃｅｒと呼ばれるエンドヌクレアーゼ（ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ）によってプロセッシングされ、２１～２３の二本鎖（ｂａｓｅ ｐａｉｒ、ｂｐ）のｓｉＲＮＡへと変換され、ｓｉＲＮＡは、ＲＩＳＣ（ＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ）に結合し、ガイド（アンチセンス）鎖が標的ｍＲＮＡを認識し、分解するプロセスを通じて標的遺伝子の発現を配列特異的に阻害する（ＮＵＣＬＥＩＣ－ＡＣＩＤ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ：ＢＡＳＩＣ ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ ＡＮＤ ＲＥＣＥＮＴ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２００２．１、５０３－５１４）。ベルトラン（Ｂｅｒｔｒａｎｄ）研究陣によれば、同じ標的遺伝子に対するｓｉＲＮＡは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ、ＡＳＯ）に比べて、生体内／外（ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ）でｍＲＮＡ発現に対して優れた阻害効果を有し、その効果が長期間持続する効果を含むことが明らかになった（Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｓｉＲＮＡｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２００２．２９６：１０００－１００４）。ｓｉＲＮＡを含むＲＮＡｉ技術を基盤とした治療薬の市場は、２０２０年頃、将来の世界市場規模が合計１２兆ウォン以上になると分析されており、当該技術を適用できる対象は、飛躍的に拡大し、従来の抗体、化合物ベースの医薬品では治療が困難な疾患を治療できる次世代の遺伝子治療技術として評価されている。また、ｓｉＲＮＡの作用機序は、標的ｍＲＮＡと相補的に結合し、標的遺伝子の発現を配列特異的に調節するので、従来の抗体ベースの医薬品や化学物質（ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｄｒｕｇ）が、特定のタンパク質標的に最適化されるまで、長い開発期間と開発コストが必要であるのに対し、適用できる対象を飛躍的に拡大することができ、開発期間が短縮され、医薬化が不可能な標的物質を含むあらゆるタンパク質標的に対して最適化されたリード化合物を開発することができる利点がある（Ｐｒｏｇｒｅｓｓ Ｔｏｗａｒｄｓ ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｕｓｅ ｏｆ ｓｉＲＮＡｓ．ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＴＨＥＲＡＰＹ．２００６ １３（４）：６６４－６７０）。そこで、最近では、このリボ核酸を介した干渉現象が、従来の化学合成医薬の開発において発生していた問題の解決策を提示しながら、特定のタンパク質の発現を転写レベルで選択的に抑制し、様々な疾患の治療薬、特に腫瘍治療薬を開発することに利用しようとする研究が進められている。また、ｓｉＲＮＡ治療薬は、従来の抗癌剤とは異なり、標的が明確で副作用が予測可能であるという利点があるが、このような標的特異性は、様々な遺伝子の問題によって引き起こされる疾患である腫瘍の場合、却ってこの標的特異性が原因となり、治療効果が高くないこともある。

Ｓｉｌｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ：ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ（２００５）８３：７６４７７３ ＮＵＣＬＥＩＣ－ＡＣＩＤ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ：ＢＡＳＩＣ ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ ＡＮＤ ＲＥＣＥＮＴ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２００２．１、５０３－５１４ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｓｉＲＮＡｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２００２．２９６：１０００－１００４ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ Ｔｏｗａｒｄｓ ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｕｓｅ ｏｆ ｓｉＲＮＡｓ．ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＴＨＥＲＡＰＹ．２００６ １３（４）：６６４－６７０

本発明の目的は、抗腫瘍アデノウイルスを提供することである。

併せて、本発明の目的は、癌治療用組成物を提供することである。

本発明によれば、本願発明の二本鎖ｓｉＲＮＡは、第１の核酸および第２の核酸の発現を同時に抑制することにより、癌細胞の死滅を促進し、それぞれのｓｉＲＮＡを一緒に処理したものよりも顕著な抗癌活性を示し、抗癌剤との併用処理において、癌細胞の死滅を相乗的に向上させる効果があり、これを含むｓｈＲＮＡをコードする発現カセットとｈＴＥＲＴプロモーターを含むアデノウイルスは、体内免疫応答を回避し、癌細胞に特異的に送達され、全身治療に効果があり、局所送達が可能で、選択性に優れ、低侵襲治療でも顕著な抗癌効果を示し、様々な癌種に抗癌用組成物または抗癌補助剤として有用に用いられることができる。

本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセットを含むｓｈＲＮＡを細胞内で発現させるためのベクターのマップを示す図である。 本発明のセット１－９の二重標的二本鎖ｓｉＲＮＡによるｍＴＯＲまたはＳＴＡＴ３遺伝子発現抑制効果を確認した図である。 本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１０（ｓｉ－ＢＢ１）によるＢＣＬ２遺伝子（左）およびＢＩ－１遺伝子（右）の発現抑制効果を確認した図である。 本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１１～１５によるＢＣＬ２遺伝子およびＢＩ－１遺伝子の発現抑制効果を確認した図である。 ＮＣ：対照群ｓｉＲＮＡ；および ｓｉ－ＢＢ２～ｓｉ－ＢＢ６：本発明のｓｉＲＮＡセット１１～１５ 癌細胞株における本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１６によるＡＲ遺伝子およびｍＴＯＲ遺伝子の発現抑制効果を確認した図である。 Ａ：ｈ４６０細胞株； Ｂ：ｐｃ３細胞株； ＮＣ：対照群ｓｉＲＮＡ； ｓｉＡＲ：ＡＲに対するｓｉＲＮＡ； ｓｉｍＴＯＲ：ｍＴＯＲに対するｓｉＲＮＡ；および ｓｉ－ＡＴ１：本発明のＡＲおよびｍＴＯＲ二重標的ｓｉＲＮＡセット１６ 本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１７－２８によるＡ５４９細胞株におけるＡＲ遺伝子およびｍＴＯＲ遺伝子の発現抑制効果を確認した図である。 ＮＣ：対照群ｓｉＲＮＡ；および ｓｉ－ＡＴ２～ｓｉ－ＡＴ１３：本発明のｓｉＲＮＡセット１７～２８ 本発明のｃ－ＭＥＴ及びＰＤ－Ｌ１を同時に抑制することができる二重標的ｓｉＲＮＡ（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ）セットによるｃ－ＭＥＴ及びＰＤ－Ｌ１遺伝子の発現抑制効果を種々の癌細胞株において確認した図である。 配列番号６６の ＴＴＧＧＡＴＣＣＡＡ ループｓｈＲＮＡ配列または配列番号６７の ＴＴＣＡＡＧＡＧＡＧ ループｓｈＲＮＡ配列をコードする配列を含むベクターによるｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３の発現量をｓｈＲＮＡ発現カセットのＤＮＡ量により確認した図である。 単一標的ｓｉＲＮＡ２つを直列に連結したものと本発明の二重標的ｓｈＲＮＡの遺伝子発現抑制効果を比較した図である。 本発明の二重標的ｓｉＲＮＡ（セット１－９の二重標的ｓｉＲＮＡ）でｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３を同時に抑制した場合のヒト肺癌細胞株Ａ５４９細胞の細胞生存率を確認した図である。 シスプラチン処理後、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡでｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３を同時に抑制した場合のヒト肺癌細胞株Ａ５４９細胞の細胞生存率を確認した図である。 パクリタキセル処理後、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡでｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３を同時に抑制した場合のヒト肺癌細胞株Ａ５４９細胞の細胞生存率を確認した図である。 ５－ＦＵ（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）処理後、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡでｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３を同時に抑制した場合のヒト肺癌細胞株Ａ５４９細胞の細胞生存率を確認した図である。 本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセットと抗癌剤の併用処理による癌細胞の死滅を確認した図である。 Ａ：抗癌剤＋Ｂｃｌ２ ｓｉＲＮＡ＋ＢＩ－１ ｓｉＲＮＡの併用処理；および Ｂ：本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１０（ｓｉ－ＢＢ１）＋ 抗癌剤の併用処理 抗癌剤として用いられているＢｃｌ２阻害剤であるＡＢＴ－７３７と本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１０（ｓｉ－ＢＢ１）の癌細胞の死滅効果と、これらの併用処理による相乗効果を確認した図である。 二重標的ｓｉＲＮＡセット１０（ｓｉ－ＢＢ１）と抗癌剤の併用処理による癌細胞の死滅効果をＢＣＬ２遺伝子に対するｓｉＲＮＡおよびＢＩ－１遺伝子に対するｓｉＲＮＡを一緒に処理した群と比較した図である。 癌細胞株における二重標的ｓｉＲＮＡセット１の抗癌剤の併用処理による癌細胞の死滅効果を確認した図である。 ＮＣ：対照群ｓｉＲＮＡ； ｎｏ ｔｒｅａｔ：抗癌剤を処理していない対照群； ｓｉ－ＡＴ１：本発明のＡＲおよびｍＴＯＲ二重標的ｓｉＲＮＡセット１６； Ａ：ＤＵ１４５細胞株；および Ｂ：Ｈ４６０細胞株 本発明のアデノウイルスの構造を模式化した図である。 本発明のアデノウイルスベクターのベクターマップを示す図である。Ｂｓ－ｓｈＲＮＡ：本発明の二重標的ｓｈＲＮＡをコードする配列挿入部位 ｈＴＥＲＴプロモーターおよび二重標的ｓｈＲＮＡをコードおよび発現する本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２によるｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３遺伝子の発現抑制効果を膀胱癌細胞株Ｔ２４および２５３ＪＢＶにおいて確認した図である。 ｈＴＥＲＴプロモーター及び二重標的ｓｈＲＮＡをコードおよび発現する本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２によるｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３遺伝子の発現抑制効果を頭頸部癌細胞株ＦａＤｕ及びＨＳＣ－２において確認した図である。 ｈＴＥＲＴプロモーター及び二重標的ｓｈＲＮＡをコード及び発現する本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２によるｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３遺伝子の発現抑制効果を皮膚扁平細胞癌細胞株Ａ４３１及びＨＳＣ－５において確認した図である。 膀胱癌細胞株Ｔ２４および２５３Ｊ－ＢＶにおける本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２によるｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３遺伝子の発現抑制効果をタンパク質レベルにおいて確認した図である。 ｈＴＥＲＴプロモーターおよび二重標的ｓｈＲＮＡ発現カセットを含む本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０１によるＢＣＬ２およびＢＩ－１遺伝子の発現抑制効果を確認した図である。 ｈＴＥＲＴプロモーターおよび二重標的ｓｈＲＮＡ発現カセットを含む本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０３によるＡＲおよびｍＴＯＲ遺伝子の発現抑制効果を前立腺癌細胞株ＬＮｃａｐにおいて確認した図である。 ｈＴＥＲＴプロモーター及び二重標的ｓｈＲＮＡ発現カセットを含む本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０３によるＡＲ及びｍＴＯＲ遺伝子の発現抑制効果を前立腺癌細胞株Ｃ４２Ｂ及び２２Ｒｖ１でｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて確認した図である。 ｈＴＥＲＴプロモーターおよび二重標的ｓｈＲＮＡ発現カセットを含む本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０３によるＡＲおよびｍＴＯＲ遺伝子の発現抑制効果をｉｎ ｖｉｖｏにおいて確認した図である。 ｈＴＥＲＴプロモーターおよび二重標的ｓｈＲＮＡ発現カセットを含む本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０４によるｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１遺伝子の発現抑制効果を確認した図である。 ｈＴＥＲＴプロモーターおよび二重標的ｓｈＲＮＡ発現カセットを含む本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０１による癌細胞株の死滅効果を確認した図である。 本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２による膀胱癌細胞株ＲＴ４、Ｔ２４及び２５３Ｊ－ＢＶの死滅効果を確認した図である。 本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２による頭頸部癌細胞株ＦａＤｕ及びＨＳＣ－２の死滅効果を確認した図である。 本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２による皮膚扁平上皮癌細胞株Ａ４３１およびＨＳＣ－５の死滅効果を確認した図である。 ｈＴＥＲＴプロモーターおよび二重標的ｓｈＲＮＡ発現カセットを含む本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０３による癌細胞株ＬＮｃａｐの死滅効果を確認した図である。 ｈＴＥＲＴプロモーターおよび二重標的ｓｈＲＮＡ発現カセットを含む本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０３による癌細胞株Ｃ４２Ｂおよび２２Ｒｖ１細胞株の死滅効果を確認した図である。 生体内膀胱癌細胞（２５３Ｊ－ＢＶ）に対する本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２の抗癌効果を確認した図である。 生体内頭頸部癌細胞（ＦａＤｕ）に対する本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２の抗癌効果を確認した図である。 生体内で形成された腫瘍（膀胱癌）に対する本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２の抗癌効果を確認した図である。 生体内に形成された腫瘍（膀胱癌）に対する投与回数によるＣＡ１０２の抗癌効果を確認した図である。 本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２の投与量による膠芽細胞腫の治療効果をｉｎ ｖｉｖｏにおいて確認した図である。 ｈＴＥＲＴプロモーターおよび二重標的ｓｈＲＮＡ発現カセットを含む本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０３による前立腺癌治療効果をｉｎ ｖｉｖｏにおいて確認した図である。 本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２およびこれとシスプラチンの併用処理による膀胱癌治療効果をｉｎ ｖｉｖｏにおいて確認した図である。

以下、本発明の実施例により本発明を詳細に説明する。ただし、以下の実施例は本発明の例示として提示されたものであり、これにより本発明が限定されるものではなく、本発明は後述する特許請求の範囲の記載及びそれから解釈される均等範疇内で様々な変形及び応用が可能である。

特に明記しない限り、核酸は左から右へ５’→３’の方向に記録される。本願に記載の数値範囲は、範囲を定義する数字を含み、定義された範囲内のそれぞれの整数または任意の非整数部分を含む。

特に断りがない限り、本願で使用されるすべての技術的および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。本願に記載のものと類似または等価の任意の方法および材料は、本発明を試験するための実行にて使用することができるが、好ましい材料および方法を本願に記載する。

一側面において、本発明はヒトテロメラーゼプロモーター（ｈＴＥＲＴ）；第１の核酸を標的配列とする塩基配列および第２の核酸を標的配列とする塩基配列を含む発現カセットを含む抗腫瘍アデノウイルスに関する。

一実施形態において、第１の核酸を標的配列とする塩基配列と、第２の核酸を標的とする塩基配列は、部分的にまたは１００％逆相補的配列であることができ、生体内で発現される場合、第１の核酸を標的とする配列と第２の核酸を標的とする配列は二本鎖を形成し、好ましくはｓｈＲＮＡを形成することができる。

一実施形態において、第１の核酸を標的配列とする塩基配列と、第２の核酸を標的とする塩基配列は、遺伝子発現時に部分的または１００％相補的に結合して二本鎖を形成することができる。

一実施形態において、ヒトテロメラーゼプロモーターは、アデノウイルスの内在性遺伝子と作動可能に連結されることができる。

本発明において、用語「作動可能に連結された」は、遺伝子発現制御配列（例えば、プロモーター、シグナル配列、または転写調節因子結合位置のアレイ）と別の遺伝子配列との間の機能的結合を意味し、それによって前記調節配列は、他の遺伝子配列の転写および／または解毒を調節するようになる。

一実施形態において、ｈＴＥＲＴプロモーターは、配列番号７４の塩基配列を含むことができる。さらに、ｈＴＥＲＴプロモーター配列は、公知の様々な修飾配列を含むことができる。

一実施形態において、アデノウイルスの内在性遺伝子は、５’ＩＴＲ－Ｃ１－Ｃ２－Ｃ３－Ｃ４－Ｃ５ ３’ＩＴＲの構造を有し；前記Ｃ１は、Ｅ１Ａ（配列番号７５）、Ｅ１Ｂ（配列番号７７）またはＥ１Ａ～Ｅ１Ｂを含み；前記Ｃ２は、Ｅ２Ｂ－Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３－Ｅ２Ａ－Ｌ４を含み；前記Ｃ３は、Ｅ３を含まないか、またはＥ３を含み；前記Ｃ４はＬ５を含み；および前記Ｃ５は、Ｅ４を含まないか、またはＥ４を含むことができ、配列番号７８の塩基配列を含むことができる。

一実施形態において、アデノウイルスは、Ｅ３領域が一部欠失していてもよく、欠失した塩基配列には配列番号８２の塩基配列が含まれていてもよい。

一実施形態において、発現カセットはアデノウイルスの内在性遺伝子のＣ３部位に位置することができる。

一実施形態において、ｈＴＥＲＴプロモーターは、アデノウイルスの内在性遺伝子のＥ１ＡおよびＥ１Ｂと作動可能に連結されることができる。

一実施形態において、アデノウイルスの内在性遺伝子のＥ１ＡとＥ１Ｂとの間にＩＲＥＳ配列（配列番号７６）がさらに含まれてもよい。

一実施形態において、前記発現カセットはｓｈＲＮＡをコードおよび発現することができる。

一実施形態において、前記ｓｈＲＮＡは同時に第１の核酸および第２の核酸の発現を阻害することができる。

一実施形態において、本発明の抗腫瘍アデノウイルスは、ＲＮＡ干渉により核酸のｍＲＮＡを分解するか、または翻訳を阻害することによって発現を抑制することができる。

一実施形態において、本発明の発現カセットは、第１の核酸または第２の核酸に特異的なセンス鎖および第２の核酸または第１の核酸に特異的なアンチセンス鎖が、部分的に相補的な結合をなす二本鎖ｓｉＲＮＡを発現させることにより、第１の核酸および第２の核酸を同時に抑制することができる。

本発明で使用される用語「発現の抑制」とは、標的遺伝子の発現または翻訳の低下を惹起することを意味し、好ましくは、それにより、標的遺伝子発現が検出不可能になる、または意味のないレベルで存在することを意味する。

本発明で使用される用語「ｓｉＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ）」とは、特定のｍＲＮＡの切断（ｃｌｅａｖａｇｅ）を介してＲＮＡｉ（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ）現象を誘導することができる短い二重鎖ＲＮＡを意味する。一般に、ｓｉＲＮＡは、標的遺伝子のｍＲＮＡと相同な配列を有するセンスＲＮＡ鎖と、これと相補的な配列を有するアンチセンスＲＮＡ鎖とからなるが、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡは、センスＲＮＡ鎖が第１の核酸または第２の核酸に特異的なｓｉＲＮＡ（第１の核酸または第２の核酸に対するアンチセンス鎖）であり、アンチセンスＲＮＡ鎖が第２の核酸または第１の核酸に特異的なｓｉＲＮＡ（第２の核酸または第１の核酸に対するアンチセンス鎖）であるため、二本鎖ｓｉＲＮＡがそれぞれ同時に第１の核酸または第２の核酸またはその発現を阻害することができる。

本発明の用語「ｓｈＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ ｈａｉｒｐｉｎ ＲＮＡ）」とは、一本鎖ＲＮＡで部分的に回文状の塩基配列を含むことにより、３’領域に二本鎖構造を有し、ヘアピンのような構造を形成し、細胞内で発現された後に細胞内に存在するＲＮａｓｅの一種であるｄｉｃｅｒによって切断され、ｓｉＲＮＡに変換し得るＲＮＡを意味するが、前記二本鎖構造の長さは、特に限定されないが、好ましくは１０ヌクレオチド以上であり、より好ましくは２０ヌクレオチド以上である。本発明において、前記ｓｈＲＮＡは、発現カセットに含まれていてもよく、前記ｓｈＲＮＡは、各遺伝子に対するｓｉＲＮＡアンチセンス鎖及びセンス鎖からなるセット配列からＵをＴに変換した後、センス鎖の３’にＴＴＧＧＡＴＣＣＡＡ（ＴＴＧＧＡＴＣＣＡＡループ）またはＴＴＣＡＡＧＡＧＡＧ（ＴＴＣＡＡＧＡＧＡＧループ）、アンチセンス鎖およびＴＴを連結してｓｈＲＮＡをコードする発現カセットを作製し、これを細胞内で発現させることによって生産することができる。

一実施形態において、第１の核酸は、第２の核酸の逆相補的配列と６０％以上の相補性を有する塩基配列を含むことができ、第２の核酸は、第１の核酸に対する逆相補的配列と６０％以上の相補性を有する塩基配列を含むことができる。

一実施形態において、第１の核酸は、第２の核酸の逆相補的配列と７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％以上の相補性を有する塩基配列を含むことができ、第２の核酸は、第１の核酸に対する逆相補的配列と７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％以上の相補性を有する塩基配列を含むことができる。

発現カセットに含まれた第１の核酸を標的配列とする塩基配列または第２の核酸を標的配列とする塩基配列の変異体が本発明の範囲内に含まれる。本発明の発現カセットは、これを構成する核酸分子の機能的等価物、例えば、核酸分子の一部の塩基配列は、欠失（ｄｅｌｅｔｉｏｎ）、置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）または挿入（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ）によって修飾されているが、塩基配列分子と機能的に同じ作用をすることができる変異体（ｖａｒｉａｎｔｓ）を含む概念である。核酸分子に対する「配列相同性％」は、２つの最適に整列された配列と比較領域と比較することによって確定され、比較領域における核酸分子配列の一部は、２つの配列の最適な整列に対する参照配列（追加または欠失を含まない）に比べて追加または欠失（すなわちギャップ）を含んでもよい。

一実施形態において、核酸は、癌に関連する遺伝子であってもよい。

一実施形態において、癌関連遺伝子は、癌において発現が増加する癌遺伝子であってもよく、癌遺伝子には、アポトーシス（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）関連遺伝子、転写因子（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ）遺伝子、転移（Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）関連遺伝子、血管新生（Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）関連遺伝子、癌細胞特異的遺伝子、またはチロシン－キナーゼ（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ－Ｋｉｎａｓｅ）遺伝子であってもよい。

一実施形態において、前記アポトーシス関連遺伝子は、ＡＢＬ１、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＢＡＲＤ１、ＢＡＸ、ＢＣＬ１１Ｂ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ２Ａ１、ＢＣＬ２Ｌ１、ＢＣＬ２Ｌ１２、ＢＣＬ３、ＢＣＬ６、ＢＩＲＣ２、ＢＩＲＣ３、ＢＩＲＣ５、ＢＲＡＦ、ＣＡＲＤ１１、ＣＡＶ１、ＣＢＬ、ＣＤＣ２５Ａ、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＦＬＡＲ、ＣＮＲ２、ＣＴＮＮＢ１、ＣＵＬ４Ａ、ＤＡＸＸ、ＤＤＩＴ３、Ｅ２Ｆ１、Ｅ２Ｆ３、Ｅ２Ｆ５、ＥＳＰＬ１、ＦＯＸＯ１、ＨＤＡＣ１、ＨＳＰＡ５、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＧＦ２、ＪＵＮ、ＪＵＮＢ、ＪＵＮＤ、ＭＡＬＴ１、ＭＡＰ３Ｋ７、ＭＣＬ１、ＭＤＭ２、ＭＤＭ４、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＮＦＫＢ２、ＮＰＭ１、ＮＴＲＫ１、ＰＡＫ１、ＰＡＸ３、ＰＭＬ、ＰＲＫＣＡ、ＰＲＫＣＥ、ＰＴＫ２Ｂ、ＲＡＦ１、ＲＨＯＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＰ７３、ＴＲＡＦ６、ＹＷＨＡＧ、ＹＷＨＡＱまたはＹＷＨＡＺであってもよく；前記転写因子遺伝子は、ＡＲ、ＡＲＩＤ３Ａ、ＡＳＣＬ１、ＡＴＦ１、ＡＴＦ３、ＢＣＬ１１Ａ、ＢＣＬ１１Ｂ、ＢＣＬ３、ＢＣＬ６、ＣＤＣ５Ｌ、ＣＤＸ２、ＣＲＥＢ１、ＣＵＸ１、ＤＤＩＴ３、ＤＬＸ５、Ｅ２Ｆ１、Ｅ２Ｆ３、Ｅ２Ｆ５、ＥＬＦ４、ＥＬＫ１、ＥＬＫ３、ＥＮ２、ＥＲＧ、ＥＴＳ１、ＥＴＳ２、ＥＴＶ１、ＥＴＶ３、ＥＴＶ４、ＥＴＶ６、ＦＥＶ、ＦＥＺＦ１、ＦＬＩ１、ＦＯＳ、ＦＯＳＬ１、ＦＯＸＡ１、ＦＯＸＧ１、ＦＯＸＭ１、ＦＯＸＯ１、ＦＯＸＰ１、ＦＯＸＱ１、ＧＡＴＡ１、ＧＡＴＡ６、ＧＦＩ１、ＧＦＩ１Ｂ、ＧＬＩ１、ＧＬＩ２、ＧＬＩ３、ＨＥＳ６、ＨＨＥＸ、ＨＬＦ、ＨＭＧＡ１、ＨＭＧＡ２、ＨＯＸＡ１、ＨＯＸＡ９、ＨＯＸＤ１３、ＨＯＸＤ９、ＩＤ１、ＩＤ２、ＩＫＺＦ１、ＩＲＦ２、ＩＲＦ４、ＪＵＮ、ＪＵＮＢ、ＪＵＮＤ、ＫＡＴ６Ａ、ＫＤＭ２Ａ、ＫＤＭ５Ｂ、ＫＬＦ２、ＫＬＦ４、ＫＬＦ５、ＫＬＦ６、ＫＬＦ８、ＫＭＴ２Ａ、ＬＥＦ１、ＬＨＸ１、ＬＭＸ１Ｂ、ＭＡＦ、ＭＡＦＡ、ＭＡＦＢ、ＭＢＤ１、ＭＥＣＯＭ、ＭＥＦ２Ｃ、ＭＥＩＳ１、ＭＩＴＦ、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＭＹＣＬ、ＭＹＣＮ、ＮＡＮＯＧ、ＮＣＯＡ３、ＮＦＩＢ、ＮＦＫＢ２、ＮＫＸ２－１、ＯＴＸ２、ＰＡＴＺ１、ＰＡＸ２、ＰＡＸ３、ＰＡＸ４、ＰＡＸ８、ＰＢＸ１、ＰＢＸ２、ＰＩＴＸ２、ＰＬＡＧ１、ＰＬＡＧＬ２、ＰＰＡＲＧ、ＰＰＰ１Ｒ１３Ｌ、ＰＲＤＭ１０、ＰＲＤＭ１３、ＰＲＤＭ１４、ＰＲＤＭ１５、ＰＲＤＭ１６、ＰＲＤＭ６、ＰＲＤＭ８、ＰＲＤＭ９、ＲＡＲＡ、ＲＥＬ、ＲＥＲＥ、ＲＵＮＸ１、ＲＵＮＸ３、ＳＡＬＬ４、ＳＡＴＢ１、ＳＦＰＱ、ＳＩＸ１、ＳＮＡＩ１、ＳＯＸ２、ＳＯＸ４、ＳＰＩ１、ＳＲＥＢＦ１、ＳＴＡＴ３、ＴＡＦ１、ＴＡＬ１、ＴＡＬ２、ＴＢＸ２、ＴＢＸ３、ＴＣＦ３、ＴＦＣＰ２、ＴＦＥ３、ＴＨＲＡ、ＴＬＸ１、ＴＰ６３、ＴＰ７３、ＴＷＩＳＴ１、ＷＴ１、ＹＢＸ１、ＹＹ１、ＺＢＴＢ１６、ＺＢＴＢ７Ａ、ＺＩＣ２、ＺＮＦ２１７またはＺＮＦ２６８であってもよく；前記転移関連遺伝子は、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＲ、ＣＢＬ、ＣＤＨ１、ＣＲＫ、ＣＳＦ１、ＣＴＮＮＢ１、ＣＴＴＮ、ＣＸＣＲ４、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ１、ＦＬＴ３、ＦＹＮ、ＧＬＩ１、ＩＬＫ、ＩＴＧＡ３、ＪＡＫ２、ＭＥＴ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＬＸＮＢ１、ＰＲＫＣＩ、ＰＴＣＨ１、ＰＴＰＮ１１、ＲＡＣ１、ＲＨＯＡ、ＲＨＯＣ、ＲＯＣＫ１、ＳＭＯ、ＳＮＡＩ１、ＳＲＣ、ＴＣＦ３ またはＷＴ１であってもよく；前記血管新生関連遺伝子は、ＢＲＡＦ、ＣＡＶ１、ＣＴＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ２、ＥＴＳ１、ＦＧＦ４、ＦＧＦ６、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＩＤ１、ＮＲＡＳ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢまたはＳＰＡＲＣであってもよく；前記チロシン－キナーゼ遺伝子は、ＡＢＬ１、ＡＢＬ２、ＡＬＫ、ＡＸＬ、ＢＬＫ、ＥＧＦＲ、ＥＰＨＡ２、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＦＥＳ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＲ、ＦＬＴ３、ＦＹＮ、ＩＴＫ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＫＩＴ、ＬＣＫ、ＭＥＲＴＫ、ＭＥＴ、ＭＳＴ１Ｒ、ＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ３、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＴＫ２Ｂ、ＰＴＫ７、ＲＥＴ、ＲＯＳ１、ＳＲＣ、ＳＹＫ、ＴＥＣまたはＹＥＳ１であってもよい。
一実施形態において、前記癌遺伝子は、ＳＥＰＴＩＮ９、ＡＣＯＤ１、ＡＣＴＮ４、ＡＤＡＭ２８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＲＢＫ２、ＡＦＦ１、ＡＦＦ３、ＡＧＡＰ２、ＡＧＦＧ１、ＡＧＲＮ、ＡＨＣＹＬ１、ＡＨＩ１、ＡＩＭＰ２、ＡＫＡＰ１３、ＡＫＡＰ９、ＡＫＩＲＩＮ２、ＡＫＴＩＰ、ＡＬＤＨ１Ａ１、ＡＬＬ１、ＡＮＩＢ１、ＡＮＰ３２Ｃ、ＡＮＰ３２Ｄ、ＡＱＰ１、ＡＲＡＦ、ＡＲＨＧＥＦ１、ＡＲＨＧＥＦ２、ＡＲＨＧＥＦ５、ＡＳＰＳＣＲ１、ＡＵＲＫＡ、ＢＡＡＬＣ、ＢＡＩＡＰ２Ｌ１、ＢＡＮＰ、ＢＣＡＲ４、ＢＣＫＤＨＢ、ＢＣＬ９、ＢＣＬ９Ｌ、ＢＣＲ、ＢＭＩ１、ＢＭＰ７、ＢＯＣ、ＢＲＤ４、ＢＲＦ２、ＣＡＢＩＮ１、ＣＡＭＫ１Ｄ、ＣＡＰＧ、ＣＢＦＢ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＬ１、ＣＢＸ７、ＣＢＸ８、ＣＣＤＣ２８Ａ、ＣＣＤＣ６、ＣＣＮＢ１、ＣＣＮＢ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＬ１、ＣＤ２４、ＣＤＣ２５Ｃ、ＣＤＣ６、ＣＤＨ１７、ＣＤＫ１、ＣＤＫ１４、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５Ｒ２、ＣＤＫ６、ＣＤＫ８、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＤＫＮ３、ＣＤＯＮ、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＮＰＷ、ＣＨＤ１Ｌ、ＣＨＩＣ１、ＣＨＬ１、ＣＫＳ１Ｂ、ＣＭＣ４、ＣＮＴＮ２、ＣＯＰＳ３、ＣＯＰＳ５、ＣＲＫＬ、ＣＲＬＦ２、ＣＲＯＴ、ＣＲＴＣ１、ＣＲＹＡＢ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ３、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＮＫ２Ａ１、ＣＳＮＫ２Ａ２、ＣＴ４５Ａ１、ＣＴＢＰ２、ＣＴＮＮＤ２、ＣＴＳＺ、ＣＵＬ７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＹＧＢ、ＣＹＰ２４Ａ１、ＤＣＤ、ＤＣＵＮ１Ｄ１ＤＤＢ２、ＤＤＨＤ２、ＤＤＸ６、ＤＥＫ、ＤＩＳ３、ＤＮＰＨ１、ＤＰＰＡ２、ＤＰＰＡ４、ＤＳＧ３、ＤＵＳＰ１２、ＤＵＳＰ２６、ＥＣＨＳ１、ＥＣＴ２、ＥＥＦ１Ａ１、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＥＦ１Ｄ、ＥＩＦ３Ｅ、ＥＩＦ３Ｉ、ＥＩＦ４Ｅ、ＥＩＦ５Ａ２、ＥＬＡＶＬ１、ＥＬＬ、ＥＭＬ４、ＥＭＳＹ、ＥＮＴＰＤ５、ＥＰＣＡＭ、ＥＰＳ８、ＥＲＡＳ、ＥＲＧＩＣ１、ＥＲＶＷ－１、ＥＶＩ２Ａ、ＥＶＩ５、ＥＷＳＲ１、ＥＺＨ２、ＦＡＭ１８９Ｂ、ＦＡＭ７２Ａ、ＦＡＭ８３Ｄ、ＦＡＳＮ、ＦＤＰＳ、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ３、ＦＧＦ５、ＦＧＦ８、ＦＲ１ＯＰ、ＦＨＬ２、ＦＩＰ１Ｌ１、ＦＮＤＣ３Ｂ、ＦＲＡＴ１、ＦＵＢＰ１、ＦＵＳ、ＦＺＤ２、ＧＡＢ２、ＧＡＥＣ１、ＧＡＬＮＴ１０、ＧＡＬＲ２、ＧＬＯ１、ＧＭＮＮ、ＧＮＡ１２、ＧＮＡ１３、ＧＮＡＩ２、ＧＮＡＱ、ＧＮＡＳ、ＧＯＬＰＨ３、ＧＯＰＣ、ＧＰＡＴ４、ＧＰＭ６Ａ、ＧＰＭ６Ｂ、ＧＰＲ１３２、ＧＲＥＭ１、ＧＲＭ１、ＧＳＫ３Ａ、ＧＳＭ１、Ｈ１９、ＨＡＳ１、ＨＡＸ１、ＨＤＧＦＲＰ２、ＨＭＧＮ５、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＯＴＡＩＲ、ＨＯＴＴＩＰ、ＨＯＸＡ－ＡＳ２、ＨＲＡＳ、ＨＳＰＡ１Ａ、ＨＳＰＡ４、ＨＳＰＢ１、ＨＵＬＣ、ＩＤＨ１、ＩＦＮＧ、ＩＧＦ２ＢＰ１、ＩＫＢＫＥ、ＩＬ７Ｒ、ＩＮＰＰＬ１、ＩＮＴＳ１、ＩＮＴＳ２、ＩＮＴＳ３、ＩＮＴＳ４、ＩＮＴＳ５、ＩＮＴＳ７、ＩＮＴＳ８、ＩＲＳ２、ＩＳＴ１、ＪＵＰ、ＫＤＭ４Ｃ、ＫＩＡＡ０１０１、ＫＩＡＡ１５２４、ＫＩＦ１４、ＫＲＡＳ、ＫＳＲ２、ＬＡＭＴＯＲ５、ＬＡＰＴＭ４Ｂ、ＬＣＮ２、ＬＤＨＢ、ＬＥＴＭＤ１、ＬＩＮ２８Ａ、ＬＩＮ２８Ｂ、ＬＭＯ１、ＬＭＯ２、ＬＭＯ３、ＬＭＯ４、ＬＳＭ１、ＬＵＡＤＴ１、ＭＡＣＣ１、ＭＡＣＲＯＤ１、ＭＡＧＥＡ１１、ＭＡＬＡＴ１、ＭＡＭＬ２、ＭＡＰ３Ｋ８、ＭＡＰＲＥ１、ＭＡＳ１、ＭＣＣ、ＭＣＦ２、ＭＣＦ２Ｌ、ＭＣＴＳ１、ＭＥＦＶ、ＭＦＨＡＳ１、ＭＦＮＧ、ＭＩＥＮ１、ＭＩＮＡ、ＭＫＬ２、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬＴ１、ＭＬＬＴ１１、ＭＬＬＴ３、ＭＬＬＴ４、ＭＭＰ１２、ＭＭＳ２２Ｌ、ＭＮ１、ＭＮＡＴ１、ＭＯＳ、ＭＰＬ、ＭＰＳＴ、ＭＲＡＳ、ＭＲＥ１１Ａ、ＭＳＩ１、ＭＴＣＰ１、ＭＴＤＨ、ＭＴＯＲ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ４、ＭＵＭ１、ＭＹＤ８８、ＮＡＡＡ、ＮＡＮＯＧＰ８、ＮＢＰＦ１２、ＮＣＯＡ４、ＮＥＡＴ１、ＮＥＣＴＩＮ４、ＮＥＤＤ４、ＮＥＤＤ９、ＮＥＴ１、ＮＩＮＬ、ＮＭＥ１、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ４、ＮＯＶ、ＮＳＤ１、ＮＵＡＫ２、ＮＵＰ２１４、ＮＵＰ９８、ＮＵＴＭ１、ＯＬＲ１、ＰＡ２Ｇ４、ＰＡＤＩ２、ＰＡＫ７、ＰＡＲＫ７、ＰＡＲＭ１、ＰＢＫ、ＰＣＡＴ１、ＰＣＡＴ５、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＺＫ１ＩＰ１、ＰＥＬＰ１、ＰＦＮ１Ｐ３、ＰＩＧＵ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＩＭ１、ＰＩＭ２、ＰＩＭ３、ＰＩＲ、ＰＩＷＩＬ１、ＰＬＡＣ８、ＰＬＫ１、ＰＰＭ１Ｄ、ＰＰＰ１Ｒ１０、ＰＰＰ１Ｒ１４Ａ、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＭ１２、ＰＲＭＴ５、ＰＳＩＰ１、ＰＳＭＤ１０、ＰＴＣＨ２、ＰＴＭＡ、ＰＴＰ４Ａ１、ＰＴＰ４Ａ２、ＰＴＰ４Ａ３、ＰＴＴＧ１、ＰＴＴＧ１ＩＰ、ＰＴＴＧ２、ＰＶＴ１、ＲＡＢ１１Ａ、ＲＡＢ１８、ＲＡＢ２２Ａ、ＲＡＢ２３、ＲＡＢ８Ａ、ＲＡＬＧＤＳ、ＲＡＰ１Ａ、ＲＡＳＳＦ１、ＲＢＭ１４、ＲＢＭ１５、ＲＢＭ３、ＲＢＭＹ１Ａ１、ＲＦＣ３、ＲＧＬ４、ＲＧＲ、ＲＨＯ、ＲＩＮＧ１、ＲＩＮＴ１、ＲＩＴ１、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２３、ＲＲＡＳ、ＲＲＡＳ２、ＲＳＦ１、ＲＵＮＸ１Ｔ１、Ｓ１００Ａ４、Ｓ１００Ａ７、Ｓ１００Ａ８、ＳＡＧ、ＳＡＲＴ３、ＳＢＳＮ、ＳＥＡ、ＳＥＣ６２、ＳＥＲＴＡＤ１、ＳＥＲＴＡＤ２、ＳＥＲＴＡＤ３、ＳＥＴ、ＳＥＴＢＰ１、ＳＥＴＤＢ１、ＳＧＫ１、ＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ６、ＳＫＩ、ＳＫＩＬ、ＳＫＰ２、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ３Ａ２、ＳＭＲ３Ｂ、ＳＭＵＲＦ１、ＳＮＣＧ、ＳＮＯＲＡ５９Ａ、ＳＮＯＲＡ８０Ｅ、ＳＰＡＧ９、ＳＰＡＴＡ４、ＳＰＲＹ２、ＳＱＳＴＭ１、ＳＲＳＦ１、ＳＲＳＦ２、ＳＲＳＦ３、ＳＲＳＦ６、ＳＳ１８、ＳＳＸ１、ＳＳＸ２、ＳＳＸ２Ｂ、ＳＴＩＬ、ＳＴＭＮ１、ＳＴＲＡ６、ＳＴＹＫ１、ＳＵＺ１２、ＳＷＡＰ７０、ＳＹＴ１、ＴＡＣ１、ＴＡＣＳＴＤ２、ＴＡＦ１５、ＴＡＬＤＯ１、ＴＡＺ、ＴＢＣ１Ｄ１、ＴＢＣ１Ｄ１５、ＴＢＣ１Ｄ３、ＴＢＣ１Ｄ３Ｃ、ＴＢＣ１Ｄ７、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＣＬ６、ＴＣＰ１、ＴＦＧ、ＴＧＭ３、ＴＩＮＣＲ、ＴＫＴＬ１、ＴＬＥ１、ＴＭＥＭ１４０、ＴＭＰＯＰ２、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＮＳ４、ＴＰＤ５２、ＴＰＲ、ＴＲＥ１７、ＴＲＥＨ、ＴＲＩＢ１、ＴＲＩＢ２、ＴＲＩＭ２８、ＴＲＩＭ３２、ＴＲＩＭ８、ＴＲＩＯ、ＴＲＩＰ６、ＴＳＰＡＮ１、ＴＳＰＹ１、ＴＸＮ、ＴＹＭＳ、ＴＹＲＰ１、ＵＢＥ２Ｃ、ＵＢＥ３Ｃ、ＵＣＡ１、ＵＣＨＬ１、ＵＨＲＦ１、ＵＲＩ１、ＵＳＰ２２、ＵＳＰ４、ＵＳＰ６、ＶＡＶ１、ＶＡＶ２、ＶＡＶ３、ＶＩＭ、ＷＡＰＬ、ＷＨＳＣ１、ＷＨＳＣ１Ｌ１、ＷＩＳＰ１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ２、ＷＮＴ３、ＷＮＴ５Ａ、ＷＷＴＲ１、ＸＣＬ１、ＸＩＡＰ、ＹＡＰ１、ＹＥＡＴＳ４、ＹＹ１ＡＰ１、ＺＥＢ１－ＡＳ１、ＺＦＡＮＤ４、ＺＦＡＳ１、ＺＭＹＭ２、ＺＮＦ７０３またはＺＮＨＩＴ６であってもよい。

一実施形態において、癌細胞特異的遺伝子は、腫瘍細胞表面で発現されるＰＤ－Ｌ１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ １）であってもよい。

一実施形態において、本発明の発現カセットの転写物が標的とする第１の核酸および第２の核酸は、ＡＢＬ１、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＢＡＲＤ１、ＢＡＸ、ＢＣＬ１１Ｂ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ２Ａ１、ＢＣＬ２Ｌ１、ＢＣＬ２Ｌ１２、ＢＣＬ３、ＢＣＬ６、ＢＩＲＣ２、ＢＩＲＣ３、ＢＩＲＣ５、ＢＲＡＦ、ＣＡＲＤ１１、ＣＡＶ１、ＣＢＬ、ＣＤＣ２５Ａ、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＦＬＡＲ、ｃ－ＭＥＴ、ＣＮＲ２、ＣＴＮＮＢ１、ＣＵＬ４Ａ、ＤＡＸＸ、ＤＤＩＴ３、Ｅ２Ｆ１、Ｅ２Ｆ３、Ｅ２Ｆ５、ＥＳＰＬ１、ＦＯＸＯ１、ＨＤＡＣ１、ＨＳＰＡ５、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＧＦ２、ＪＵＮ、ＪＵＮＢ、ＪＵＮＤ、ＭＡＬＴ１、ＭＡＰ３Ｋ７、ＭＣＬ１、ＭＤＭ２、ＭＤＭ４、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＮＦＫＢ２、ＮＰＭ１、ＮＴＲＫ１、ＰＡＫ１、ＰＡＸ３、ＰＭＬ、ＰＲＫＣＡ、ＰＲＫＣＥ、ＰＴＫ２Ｂ、ＲＡＦ１、ＲＨＯＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＰ７３、ＴＲＡＦ６、ＹＷＨＡＧ、ＹＷＨＡＱ、ＹＷＨＡＺ、ＡＲ、ＡＲＩＤ３Ａ、ＡＳＣＬ１、ＡＴＦ１、ＡＴＦ３、ＢＣＬ１１Ａ、ＢＣＬ１１Ｂ、ＢＣＬ３、ＢＣＬ６、ＣＤＣ５Ｌ、ＣＤＸ２、ＣＲＥＢ１、ＣＵＸ１、ＤＤＩＴ３、ＤＬＸ５、Ｅ２Ｆ１、Ｅ２Ｆ３、Ｅ２Ｆ５、ＥＬＦ４、ＥＬＫ１、ＥＬＫ３、ＥＮ２、ＥＲＧ、ＥＴＳ１、ＥＴＳ２、ＥＴＶ１、ＥＴＶ３、ＥＴＶ４、ＥＴＶ６、ＦＥＶ、ＦＥＺＦ１、ＦＬＩ１、ＦＯＳ、ＦＯＳＬ１、ＦＯＸＡ１、ＦＯＸＧ１、ＦＯＸＭ１、ＦＯＸＯ１、ＦＯＸＰ１、ＦＯＸＱ１、ＧＡＴＡ１、ＧＡＴＡ６、ＧＦＩ１、ＧＦＩ１Ｂ、ＧＬＩ１、ＧＬＩ２、ＧＬＩ３、ＨＥＳ６、ＨＨＥＸ、ＨＬＦ、ＨＭＧＡ１、ＨＭＧＡ２、ＨＯＸＡ１、ＨＯＸＡ９、ＨＯＸＤ１３、ＨＯＸＤ９、ＩＤ１、ＩＤ２、ＩＫＺＦ１、ＩＲＦ２、ＩＲＦ４、ＪＵＮ、ＪＵＮＢ、ＪＵＮＤ、ＫＡＴ６Ａ、ＫＤＭ２Ａ、ＫＤＭ５Ｂ、ＫＬＦ２、ＫＬＦ４、ＫＬＦ５、ＫＬＦ６、ＫＬＦ８、ＫＭＴ２Ａ、ＬＥＦ１、ＬＨＸ１、ＬＭＸ１Ｂ、ＭＡＦ、ＭＡＦＡ、ＭＡＦＢ、ＭＢＤ１、ＭＥＣＯＭ、ＭＥＦ２Ｃ、ＭＥＩＳ１、ＭＩＴＦ、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＭＹＣＬ、ＭＹＣＮ、ＮＡＮＯＧ、ＮＣＯＡ３、ＮＦＩＢ、ＮＦＫＢ２、ＮＫＸ２－１、ＯＴＸ２、ＰＡＴＺ１、ＰＡＸ２、ＰＡＸ３、ＰＡＸ４、ＰＡＸ８、ＰＢＸ１、ＰＢＸ２、ＰＤ－Ｌ１、ＰＩＴＸ２、ＰＬＡＧ１、ＰＬＡＧＬ２、ＰＰＡＲＧ、ＰＰＰ１Ｒ１３Ｌ、ＰＲＤＭ１０、ＰＲＤＭ１３、ＰＲＤＭ１４、ＰＲＤＭ１５、ＰＲＤＭ１６、ＰＲＤＭ６、ＰＲＤＭ８、ＰＲＤＭ９、ＲＡＲＡ、ＲＥＬ、ＲＥＲＥ、ＲＵＮＸ１、ＲＵＮＸ３、ＳＡＬＬ４、ＳＡＴＢ１、ＳＦＰＱ、ＳＩＸ１、ＳＮＡＩ１、ＳＯＸ２、ＳＯＸ４、ＳＰＩ１、ＳＲＥＢＦ１、ＳＴＡＴ３、ＴＡＦ１、ＴＡＬ１、ＴＡＬ２、ＴＢＸ２、ＴＢＸ３、ＴＣＦ３、ＴＦＣＰ２、ＴＦＥ３、ＴＨＲＡ、ＴＬＸ１、ＴＰ６３、ＴＰ７３、ＴＷＩＳＴ１、ＷＴ１、ＹＢＸ１、ＹＹ１、ＺＢＴＢ１６、ＺＢＴＢ７Ａ、ＺＩＣ２、ＺＮＦ２１７、ＺＮＦ２６８、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＲ、ＣＢＬ、ＣＤＨ１、ＣＲＫ、ＣＳＦ１、ＣＴＮＮＢ１、ＣＴＴＮ、ＣＸＣＲ４、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ１、ＦＬＴ３、ＦＹＮ、ＧＬＩ１、ＩＬＫ、ＩＴＧＡ３、ＪＡＫ２、ＭＥＴ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＬＸＮＢ１、ＰＲＫＣＩ、ＰＴＣＨ１、ＰＴＰＮ１１、ＲＡＣ１、ＲＨＯＡ、ＲＨＯＣ、ＲＯＣＫ１、ＳＭＯ、ＳＮＡＩ１、ＳＲＣ、ＴＣＦ３、ＷＴ１、ＢＲＡＦ、ＣＡＶ１、ＣＴＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ２、ＥＴＳ１、ＦＧＦ４、ＦＧＦ６、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＩＤ１、ＮＲＡＳ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＳＰＡＲＣ、ＡＢＬ１、ＡＢＬ２、ＡＬＫ、ＡＸＬ、ＢＬＫ、ＥＧＦＲ、ＥＰＨＡ２、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＦＥＳ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＲ、ＦＬＴ３、ＦＹＮ、ＩＴＫ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＫＩＴ、ＬＣＫ、ＭＥＲＴＫ、ＭＥＴ、ＭＳＴ１Ｒ、ＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ３、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＴＫ２Ｂ、ＰＴＫ７、ＲＥＴ、ＲＯＳ１、ＳＲＣ、ＳＹＫ、ＴＥＣ、ＹＥＳ１、ＳＥＰＴＩＮ９、ＡＣＯＤ１、ＡＣＴＮ４、ＡＤＡＭ２８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＲＢＫ２、ＡＦＦ１、ＡＦＦ３、ＡＧＡＰ２、ＡＧＦＧ１、ＡＧＲＮ、ＡＨＣＹＬ１、ＡＨＩ１、ＡＩＭＰ２、ＡＫＡＰ１３、ＡＫＡＰ９、ＡＫＩＲＩＮ２、ＡＫＴＩＰ、ＡＬＤＨ１Ａ１、ＡＬＬ１、ＡＮＩＢ１、ＡＮＰ３２Ｃ、ＡＮＰ３２Ｄ、ＡＱＰ１、ＡＲＡＦ、ＡＲＨＧＥＦ１、ＡＲＨＧＥＦ２、ＡＲＨＧＥＦ５、ＡＳＰＳＣＲ１、ＡＵＲＫＡ、ＢＡＡＬＣ、ＢＡＩＡＰ２Ｌ１、ＢＡＮＰ、ＢＣＡＲ４、ＢＣＫＤＨＢ、ＢＣＬ９、ＢＣＬ９Ｌ、ＢＣＲ、ＢＭＩ１、ＢＭＰ７、ＢＯＣ、ＢＲＤ４、ＢＲＦ２、ＣＡＢＩＮ１、ＣＡＭＫ１Ｄ、ＣＡＰＧ、ＣＢＦＢ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＬ１、ＣＢＸ７、ＣＢＸ８、ＣＣＤＣ２８Ａ、ＣＣＤＣ６、ＣＣＮＢ１、ＣＣＮＢ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＬ１、ＣＤ２４、ＣＤＣ２５Ｃ、ＣＤＣ６、ＣＤＨ１７、ＣＤＫ１、ＣＤＫ１４、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５Ｒ２、ＣＤＫ６、ＣＤＫ８、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＤＫＮ３、ＣＤＯＮ、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＮＰＷ、ＣＨＤ１Ｌ、ＣＨＩＣ１、ＣＨＬ１、ＣＫＳ１Ｂ、ＣＭＣ４、ＣＮＴＮ２、ＣＯＰＳ３、ＣＯＰＳ５、ＣＲＫＬ、ＣＲＬＦ２、ＣＲＯＴ、ＣＲＴＣ１、ＣＲＹＡＢ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ３、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＮＫ２Ａ１、ＣＳＮＫ２Ａ２、ＣＴ４５Ａ１、ＣＴＢＰ２、ＣＴＮＮＤ２、ＣＴＳＺ、ＣＵＬ７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＹＧＢ、ＣＹＰ２４Ａ１、ＤＣＤ、ＤＣＵＮ１Ｄ１ＤＤＢ２、ＤＤＨＤ２、ＤＤＸ６、ＤＥＫ、ＤＩＳ３、ＤＮＰＨ１、ＤＰＰＡ２、ＤＰＰＡ４、ＤＳＧ３、ＤＵＳＰ１２、ＤＵＳＰ２６、ＥＣＨＳ１、ＥＣＴ２、ＥＥＦ１Ａ１、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＥＦ１Ｄ、ＥＩＦ３Ｅ、ＥＩＦ３Ｉ、ＥＩＦ４Ｅ、ＥＩＦ５Ａ２、ＥＬＡＶＬ１、ＥＬＬ、ＥＭＬ４、ＥＭＳＹ、ＥＮＴＰＤ５、ＥＰＣＡＭ、ＥＰＳ８、ＥＲＡＳ、ＥＲＧＩＣ１、ＥＲＶＷ－１、ＥＶＩ２Ａ、ＥＶＩ５、ＥＷＳＲ１、ＥＺＨ２、ＦＡＭ１８９Ｂ、ＦＡＭ７２Ａ、ＦＡＭ８３Ｄ、ＦＡＳＮ、ＦＤＰＳ、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ３、ＦＧＦ５、ＦＧＦ８、ＦＲ１ＯＰ、ＦＨＬ２、ＦＩＰ１Ｌ１、ＦＮＤＣ３Ｂ、ＦＲＡＴ１、ＦＵＢＰ１、ＦＵＳ、ＦＺＤ２、ＧＡＢ２、ＧＡＥＣ１、ＧＡＬＮＴ１０、ＧＡＬＲ２、ＧＬＯ１、ＧＭＮＮ、ＧＮＡ１２、ＧＮＡ１３、ＧＮＡＩ２、ＧＮＡＱ、ＧＮＡＳ、ＧＯＬＰＨ３、ＧＯＰＣ、ＧＰＡＴ４、ＧＰＭ６Ａ、ＧＰＭ６Ｂ、ＧＰＲ１３２、ＧＲＥＭ１、ＧＲＭ１、ＧＳＫ３Ａ、ＧＳＭ１、Ｈ１９、ＨＡＳ１、ＨＡＸ１、ＨＤＧＦＲＰ２、ＨＭＧＮ５、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＯＴＡＩＲ、ＨＯＴＴＩＰ、ＨＯＸＡ－ＡＳ２、ＨＲＡＳ、ＨＳＰＡ１Ａ、ＨＳＰＡ４、ＨＳＰＢ１、ＨＵＬＣ、ＩＤＨ１、ＩＦＮＧ、ＩＧＦ２ＢＰ１、ＩＫＢＫＥ、ＩＬ７Ｒ、ＩＮＰＰＬ１、ＩＮＴＳ１、ＩＮＴＳ２、ＩＮＴＳ３、ＩＮＴＳ４、ＩＮＴＳ５、ＩＮＴＳ７、ＩＮＴＳ８、ＩＲＳ２、ＩＳＴ１、ＪＵＰ、ＫＤＭ４Ｃ、ＫＩＡＡ０１０１、ＫＩＡＡ１５２４、ＫＩＦ１４、ＫＲＡＳ、ＫＳＲ２、ＬＡＭＴＯＲ５、ＬＡＰＴＭ４Ｂ、ＬＣＮ２、ＬＤＨＢ、ＬＥＴＭＤ１、ＬＩＮ２８Ａ、ＬＩＮ２８Ｂ、ＬＭＯ１、ＬＭＯ２、ＬＭＯ３、ＬＭＯ４、ＬＳＭ１、ＬＵＡＤＴ１、ＭＡＣＣ１、ＭＡＣＲＯＤ１、ＭＡＧＥＡ１１、ＭＡＬＡＴ１、ＭＡＭＬ２、ＭＡＰ３Ｋ８、ＭＡＰＲＥ１、ＭＡＳ１、ＭＣＣ、ＭＣＦ２、ＭＣＦ２Ｌ、ＭＣＴＳ１、ＭＥＦＶ、ＭＦＨＡＳ１、ＭＦＮＧ、ＭＩＥＮ１、ＭＩＮＡ、ＭＫＬ２、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬＴ１、ＭＬＬＴ１１、ＭＬＬＴ３、ＭＬＬＴ４、ＭＭＰ１２、ＭＭＳ２２Ｌ、ＭＮ１、ＭＮＡＴ１、ＭＯＳ、ＭＰＬ、ＭＰＳＴ、ＭＲＡＳ、ＭＲＥ１１Ａ、ＭＳＩ１、ＭＴＣＰ１、ＭＴＤＨ、ＭＴＯＲ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ４、ＭＵＭ１、ＭＹＤ８８、ＮＡＡＡ、ＮＡＮＯＧＰ８、ＮＢＰＦ１２、ＮＣＯＡ４、ＮＥＡＴ１、ＮＥＣＴＩＮ４、ＮＥＤＤ４、ＮＥＤＤ９、ＮＥＴ１、ＮＩＮＬ、ＮＭＥ１、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ４、ＮＯＶ、ＮＳＤ１、ＮＵＡＫ２、ＮＵＰ２１４、ＮＵＰ９８、ＮＵＴＭ１、ＯＬＲ１、ＰＡ２Ｇ４、ＰＡＤＩ２、ＰＡＫ７、ＰＡＲＫ７、ＰＡＲＭ１、ＰＢＫ、ＰＣＡＴ１、ＰＣＡＴ５、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＺＫ１ＩＰ１、ＰＥＬＰ１、ＰＦＮ１Ｐ３、ＰＩＧＵ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＩＭ１、ＰＩＭ２、ＰＩＭ３、ＰＩＲ、ＰＩＷＩＬ１、ＰＬＡＣ８、ＰＬＫ１、ＰＰＭ１Ｄ、ＰＰＰ１Ｒ１０、ＰＰＰ１Ｒ１４Ａ、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＭ１２、ＰＲＭＴ５、ＰＳＩＰ１、ＰＳＭＤ１０、ＰＴＣＨ２、ＰＴＭＡ、ＰＴＰ４Ａ１、ＰＴＰ４Ａ２、ＰＴＰ４Ａ３、ＰＴＴＧ１、ＰＴＴＧ１ＩＰ、ＰＴＴＧ２、ＰＶＴ１、ＲＡＢ１１Ａ、ＲＡＢ１８、ＲＡＢ２２Ａ、ＲＡＢ２３、ＲＡＢ８Ａ、ＲＡＬＧＤＳ、ＲＡＰ１Ａ、ＲＡＳＳＦ１、ＲＢＭ１４、ＲＢＭ１５、ＲＢＭ３、ＲＢＭＹ１Ａ１、ＲＦＣ３、ＲＧＬ４、ＲＧＲ、ＲＨＯ、ＲＩＮＧ１、ＲＩＮＴ１、ＲＩＴ１、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２３、ＲＲＡＳ、ＲＲＡＳ２、ＲＳＦ１、ＲＵＮＸ１Ｔ１、Ｓ１００Ａ４、Ｓ１００Ａ７、Ｓ１００Ａ８、ＳＡＧ、ＳＡＲＴ３、ＳＢＳＮ、ＳＥＡ、ＳＥＣ６２、ＳＥＲＴＡＤ１、ＳＥＲＴＡＤ２、ＳＥＲＴＡＤ３、ＳＥＴ、ＳＥＴＢＰ１、ＳＥＴＤＢ１、ＳＧＫ１、ＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ６、ＳＫＩ、ＳＫＩＬ、ＳＫＰ２、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ３Ａ２、ＳＭＲ３Ｂ、ＳＭＵＲＦ１、ＳＮＣＧ、ＳＮＯＲＡ５９Ａ、ＳＮＯＲＡ８０Ｅ、ＳＰＡＧ９、ＳＰＡＴＡ４、ＳＰＲＹ２、ＳＱＳＴＭ１、ＳＲＳＦ１、ＳＲＳＦ２、ＳＲＳＦ３、ＳＲＳＦ６、ＳＳ１８、ＳＳＸ１、ＳＳＸ２、ＳＳＸ２Ｂ、ＳＴＩＬ、ＳＴＭＮ１、ＳＴＲＡ６、ＳＴＹＫ１、ＳＵＺ１２、ＳＷＡＰ７０、ＳＹＴ１、ＴＡＣ１、ＴＡＣＳＴＤ２、ＴＡＦ１５、ＴＡＬＤＯ１、ＴＡＺ、ＴＢＣ１Ｄ１、ＴＢＣ１Ｄ１５、ＴＢＣ１Ｄ３、ＴＢＣ１Ｄ３Ｃ、ＴＢＣ１Ｄ７、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＣＬ６、ＴＣＰ１、ＴＦＧ、ＴＧＭ３、ＴＩＮＣＲ、ＴＫＴＬ１、ＴＬＥ１、ＴＭＥＭ１４０、ＴＭＰＯＰ２、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＮＳ４、ＴＰＤ５２、ＴＰＲ、ＴＲＥ１７、ＴＲＥＨ、ＴＲＩＢ１、ＴＲＩＢ２、ＴＲＩＭ２８、ＴＲＩＭ３２、ＴＲＩＭ８、ＴＲＩＯ、ＴＲＩＰ６、ＴＳＰＡＮ１、ＴＳＰＹ１、ＴＸＮ、ＴＹＭＳ、ＴＹＲＰ１、ＵＢＥ２Ｃ、ＵＢＥ３Ｃ、ＵＣＡ１、ＵＣＨＬ１、ＵＨＲＦ１、ＵＲＩ１、ＵＳＰ２２、ＵＳＰ４、ＵＳＰ６、ＶＡＶ１、ＶＡＶ２、ＶＡＶ３、ＶＩＭ、ＷＡＰＬ、ＷＨＳＣ１、ＷＨＳＣ１Ｌ１、ＷＩＳＰ１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ２、ＷＮＴ３、ＷＮＴ５Ａ、ＷＷＴＲ１、ＸＣＬ１、ＸＩＡＰ、ＹＡＰ１、ＹＥＡＴＳ４、ＹＹ１ＡＰ１、ＺＥＢ１－ＡＳ１、ＺＦＡＮＤ４、ＺＦＡＳ１、ＺＭＹＭ２、ＺＮＦ７０３およびＺＮＨＩＴ６からなる群からそれぞれ選ばれる互いに異なる核酸であってもよい。

一実施形態において、第１の核酸は、ＳＴＡＴ３（ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ３）であってもよく、第２の核酸は、ｍＴＯＲ（ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ）であってもよく、この場合、発現カセットは、配列番号１および２、配列番号３及び４、配列番号５及び６、配列番号７及び８、配列番号９及び１０、配列番号１１及び１２、配列番号１３及び１４、配列番号１５及び１６、又は配列番号１７及び１８の塩基配列においてＵがＴに変換された核酸を含んでいてもよい。前記において、配列番号１及び２のｓｉＲＮＡは２１ｍｅｒのうち１７ｍｅｒが、配列番号３及び４のｓｉＲＮＡは２０ｍｅｒのうち１６ｍｅｒが、配列番号５及び６のｓｉＲＮＡは１９ｍｅｒのうち１５ｍｅｒが、配列番号７及び８のｓｉＲＮＡは１８ｍｅｒのうち１４ｍｅｒが、および配列番号９および１０のｓｉＲＮＡは１７ｍｅｒのうち１６ｍｅｒが、配列番号１１および１２のｓｉＲＮＡは２０ｍｅｒのうち１７ｍｅｒが、配列番号１３および１４のｓｉＲＮＡは１９ｍｅｒのうち１６ｍｅｒが、配列番号１５および１６のｓｉＲＮＡは１８ｍｅｒのうち１５ｍｅｒが、配列番号１７および１８のｓｉＲＮＡは１７ｍｅｒのうち１４ｍｅｒが、相補的に結合することができる。また、第１の核酸がＳＴＡＴ３および第２の核酸がｍＴＯＲである場合、発現カセットに含まれたｓｈＲＮＡ発現ＤＮＡ（ＳＴＡＴ３およびｍＴＯＲ二重標的ｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列）は、配列番号６６または６７の塩基配列を含むことができる。

一実施形態において、第１の核酸は、ＢＣＬ２（Ｂ－ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ ２）であってもよく、第２の核酸はＢＩ－１（ＢＡＸ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ １）であってもよく、この場合、発現カセットは配列番号１９および２０、配列番号２１および２２、配列番号２３および２４、配列番号２５および２６、配列番号２７および２８、または配列番号２９および３０の塩基配列を含むことができる。前記において、配列番号１９および２０からなる２１ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１０は、１５ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号２１および２２からなる２０ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１１は、１４ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号２３および２４からなる２０ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１２は、１４ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号２５および２６からなる１９ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１３は、１３ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号２７および２８からなる１９ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１４は、１３ｍｅｒが互いに相補的であり、および配列番号２９および３０からなる１８ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１５は、１２ｍｅｒが互いに相補的である。下記表２の配列番号１９、２１、２３、２５、２７または２９のｓｉＲＮＡ（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｂｃｌ－２）がＢｃｌ－２のｍＲＮＡに相補的に結合し、配列番号２０、２２、２４、２６、２８または３０のｓｉＲＮＡ（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＢＩ－１）が、ＢＩ－１のｍＲＮＡに相補的に結合することができる。また、第１の核酸がＢＣＬ２および第２の核酸がＢＩ－１である場合、発現カセットに含まれたｓｈＲＮＡ発現ＤＮＡは、配列番号６８または６９の塩基配列を含むことができる。

一実施形態において、第１の核酸は、ＡＲ（ａｎｄｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）であってもよく、第２の核酸は、ｍＴＯＲ（ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ）であってもよく、この場合、発現カセットは、配列番号３１および３２、配列番号３３および３４、配列番号３５および３６、配列番号３７および３８、配列番号３９および４０、配列番号４１および４２、配列番号４３および４４、配列番号４５および４６、配列番号４７および４８、配列番号４９および５０、配列番号５１および５２、配列番号５３および５４、または配列番号５５および５６の塩基配列を含むことができる。前記において、配列番号３１及び３２からなる２０ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１６は、１８ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号３３及び３４からなる１９ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１７は、１７ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号３５及び３６からなる１８ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１８は、１６ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号３７および３８からなる１７ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１９は、１５ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号３９および４０からなる１９ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２０は、１５ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号４１および４２からなる１８ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２１は、１４ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号４３および４４からなる１７ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２２は、１３ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号４５および４６からなる２３ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２３は、１９ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号４７および４８からなる２２ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２４は、１８ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号４９および５０からなる２２ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２５は、１８ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号５１および５２からなる２１ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２６は、１７ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号５３および５４からなる２０ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２７は、１６ｍｅｒが互いに相補的であり、および配列番号５５および５６からなる２１ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２８は、１７ｍｅｒが互いに相補的である。配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３または５５のｓｉＲＮＡ（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＡＲ）がＡＲのｍＲＮＡに相補的に結合し、配列番号３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６のｓｉＲＮＡ（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｍＴＯＲ）がｍＴＯＲのｍＲＮＡに相補的に結合することができる。また、第１の核酸がＡＲおよび第２の核酸がｍＴＯＲである場合、発現カセットに含まれたｓｈＲＮＡ発現ＤＮＡは、配列番号７０または７１の塩基配列を含むことができる。

一実施形態において、第１の核酸は、ＭＧＭＴ（Ｏ－６－ｍｅｔｈｙｌｇｕａｎｉｎｅ－ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）であってもよく、第２の核酸は、ｍＴＯＲであってもよく、この場合、発現カセットは配列番号５７および５８の塩基配列を含むことができる。

一実施形態において、第１の核酸は、ＢＣＬ２であってもよく、第２の核酸は、ＭＣＬ１（ＭＣＬ１ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）であってもよく、この場合、発現カセットは配列番号５９および６０の塩基配列を含むことができる。

一実施形態において、第１の核酸はＳＴＡＴ３であってもよく、第２の核酸はＴＦＥＢ（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＥＢ）であってもよく、この場合、発現カセットは配列番号６１および６２の塩基配列を含むことができる。

一実施形態において、第１の核酸は、ｃ－ＭＥＴ（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ＭＥＴ ｐｒｏｔｏ－ｏｎｃｏｇｅｎｅ）であってもよく、第２の核酸はＰＤ－Ｌ１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ １）であってもよく、この場合、発現カセットは、配列番号６３および６４の塩基配列において、ＵがＴに変換された核酸を含んでもよい。前記において、配列番号６３および６４のｓｉＲＮＡは、１９ｍｅｒのうち１５ｍｅｒが相補的に結合することができる。また、第１の核酸がｃ－ＭＥＴおよび第２の核酸がＰＤ－Ｌ１である場合、発現カセットに含まれたｓｈＲＮＡ発現ＤＮＡは、配列番号７２または７３の塩基配列を含むことができる。

一実施形態において、発現カセットは、第１の核酸を標的配列とする塩基配列、ヘアピン構造をなすことができるループ配列、および第２の核酸を標的配列とする塩基配列を順次コードする塩基配列を含むことができる。

一実施形態において、発現カセットは、Ｕ６プロモーターによって発現が調節されることができる。

一実施形態において、アデノウイルスは、グループＣの血清型が５型であるアデノウイルスであってもよい。

一実施形態において、本発明の抗腫瘍ウイルスは、野生型アデノウイルスに比べて腫瘍殺傷能が高く、野生型アデノウイルスにｈＴＥＲＴプロモーターが導入されたアデノウイルスに比べて腫瘍殺傷能が高いことがある。

一側面において、本発明は、本発明の抗腫瘍ウイルスを含む癌治療用組成物に関する。

一実施形態において、本発明の組成物は、抗癌剤をさらに含むことができ、例えば、アシビシン、アクラルビシン、アコダゾール、アクロニシン、アドゼレシン、アラノシン、アルデスロイキン、アロプリノールナトリウム、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アモナフィド、アンプリジェン、アムサクリン、アンドロゲン、アングイジン、アフィジコリングリシネート、アサレイ、アスパラギナーゼ、５－アザシチジン、アザチオプリン、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、ベーカーズアンチフォール、ベータ－２－デオキシチオグアノシン、ビサントレンＨＣｌ、硫酸ブレオマイシン、ブスルファン、ブチオニンスルホキシミン、ＢＷＡ ７７３Ｕ８２、ＢＷ ５０２Ｕ８３／ＨＣｌ、ＢＷ ７Ｕ８５メシレート、セラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、クロロキノキサリン－スルホンアミド、クロロゾトシン、クロモマイシンＡ３、シスプラチン、クラドリビン、コルチコステロイド、コリネバクテリウム・パルバム、ＣＰＴ－１１、クリスナトール、シクロシチジン、シクロホスファミド、シタラビン、シテンベナ、ダビスマレアート、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシンＨＣｌ、デアザウリジン、デクスラゾキサン、ジアンヒドロガラクチトール、ジアジコン、ジブロモダルシトール、ジデムニンＢ、ジエチルジチオカルバメート、ジグリコアルデヒド、ジヒドロ－５－アザシチジン、ドキソルビシン、エキノマイシン、エダトレキセート、エデルフォシン、エフロルニチン、Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ溶液、エルサミトルシン、エピルビシン、エソルビシン、リン酸エストラムスチン、エストロゲン、エタニダゾール、エチオフォス、エトポシド、ファドラゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボン酢酸、フロクスウリジン、リン酸フルダラビン、５’－フルオロウラシル、Ｆｌｕｏｓｏｌ^ＴＭ、フルタミド、硝酸ガリウム、ゲムシタビン、酢酸ゴセレリン、ヘプスルファム、ヘキサメチレンビスアセトアミド、ホモハリントニン、硫酸ヒドラジン、４－ヒドロキシアンドロステンジオン、ヒドロキシウレア、イダルビシンＨＣｌ、イホスファミド、４－イポメアノール、イプロプラチン、イソトレチノイン、ロイコボリンカルシウム、酢酸リュープロリド、レバミゾール、リポソームダウノルビシン、リポソーム封入ドキソルビシン、ロムスチン、ロニダミン、メイタンシン、メクロレタミン塩酸塩、メルファラン、メノガリル、メルバロン、６－メルカプトプリン、メスナ、カルメット・ゲラン桿菌のメタノール抽出残渣、メトトレキサート、Ｎ－メチルホルムアミド、ミフェプリストン、ミトグアゾン、マイトマイシン－Ｃ、ミトタン、ミトキサントロン塩酸塩、単球／マクロファージコロニー刺激因子、ナビロン、ナフォキシジン、ネオカルチノスタチン、酢酸オクトレオチド、オルマプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パラ、ペントスタチン、ピペラジンジオン、ピポブロマン、ピラルビシン、ピリトレキシム、ピロキサントロン塩酸塩、ＰＩＸ－３２１、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プレドニムスチン、プロカルバジン、プロゲスチン、ピラゾフリン、ラゾキサン、サルグラモスチム、セムスチン、スピロゲルマニウム、スピロムスチン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、スロフェヌル、スラミンナトリウム、タモキシフェン、タキソテール、テガフール、テニポシド、テレフタルアミジン、テロキシロン、チオグアニン、チオテパ、チミジン注射、チアゾフリン、トポテカン、トレミフェン、トレチノイン、トリフロペラジン塩酸塩、トリフルリジン、トリメトレキサート、ＴＮＦ（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ）、ウラシルマスタード、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ビンゾリジン、Ｙｏｓｈｉ ８６４、ゾルビシン、サイトシンアラビノシド、エトポシド、メルファラン、タキソール、およびそれらの混合物を含むことができる。好ましくは、シスプラチン、パクリタキセル、５－ＦＵ（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、メトトレキサート、ドキソルビシン、ダウノルビシン、サイトシンアラビノシド、エトポシド、メルファラン、クロラムブシル、シクロホスファミド、ビンデシン、マイトマイシン、ブレオマイシン、タモキシフェンおよびタキソールであり、さらに好ましくは、シスプラチン、パクリタキセルまたは５－ＦＵ（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）であるが、本発明の組成物と併用処理し、抗癌効果に相乗効果を示すという目的を達成することであれば、これらに限定されるものではない。

癌は、大腸癌、乳癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、脳腫瘍、頭頸部癌、黒色腫、骨髄腫、白血病、リンパ腫、胃癌、肺癌、膵臓癌、非小細胞性肺癌、肝臓癌、食道癌、小腸癌、肛門周囲癌、卵管癌、子宮内膜癌、膣癌、陰門癌、ホジキン病、膀胱癌、腎臓癌、尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、骨癌、皮膚癌、頭部癌、頸部癌、皮膚黒色腫、眼内黒色腫、内分泌腺癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、一次ＣＮＳリンパ腫、脊髄腫瘍、多形性膠芽腫および下垂体腺腫からなる群から選択されるいずれかであってもよい。

本発明において、用語「プロモーター」は、ＲＮＡポリメラーゼの結合部位を含み、プロモーター下流（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ）遺伝子のｍＲＮＡへの転写開始活性を有する、暗号化領域の上流（ｕｐｓｔｒｅａｍ）の非翻訳核酸配列を指す。本発明の発現カセットにおいて、前記プロモーターは、ｓｈＲＮＡの発現を開始できる任意のプロモーターも可能である。具体的には、本発明のプロモーターは、すべての時間帯に常時目的遺伝子の発現を誘導するプロモーター（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ）または特定の位置、時期に目的遺伝子の発現を誘導するプロモーター（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ）を用いることができ、その例としては、Ｕ６プロモーター、Ｈ１プロモーター、ＣＭＶ（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＣＡＧプロモーター（Ｈｉｔｏｓｈｉ Ｎｉｗａ ｅｔ ａｌ．、Ｇｅｎｅ、１０８：１９３－１９９、１９９１）、ＣａＭＶ ３５Ｓプロモーター（Ｏｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ ３１３：８１０－８１２、１９８５）、Ｒｓｙｎ７プロモーター（米国特許出願第０８／９９１、６０１号）、イネアクチン（ｒｉｃｅ ａｃｔｉｎ）プロモーター（ＭｃＥｌｒｏｙ ｅｔ ａｌ．、Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ ２：１６３－１７１、１９９０）、ユビキチンプロモーター（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．、Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１２：６１９－６３２、１９８９）、ＡＬＳプロモーター（米国特許出願第０８／４０９、２９７）などがある。この他にも米国特許第５、６０８、１４９；第５、６０８、１４４号、第５、６０４、１２１号、第５、５６９、５９７号、第５、４６６、７８５号、第５、３９９、６８０号、第５、２６８、４６３号、及び第５、６０８、１４２号等に開示されたプロモーター等、当業者に自明な公知のあらゆるプロモーターを使用することができ、これに制限されるものではない。好ましくは、本発明のプロモーターは、Ｕ６プロモーター、ＨＩプロモーター、ＣＭＶプロモーターであってもよく、本発明の好ましい一実施形態によれば、Ｕ６プロモーターを使用することができる。

本発明の組成物には、補助剤（ａｄｊｕｖａｎｔ）をさらに含むことができる。前記補助剤は、当技術分野で知られているものであれば、いずれも制限なく使用することができるが、例えば、完全フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ）アジュバントまたは不完全フロイントアジュバントをさらに含んで、効果を高めることができる。

本発明による組成物は、有効成分を薬学的に許容される担体に混入させた形態で製造することができる。ここで、薬学的に許容される担体は、医薬分野で通常使用される担体、賦形剤および希釈剤を含む。本発明の組成物に用いることができる薬学的に許容される担体は、これらに限定されるものではないが、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルギン酸、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱物油が挙げられる。

本発明の組成物は、それぞれ通常の方法に従って、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口剤形、外用剤、坐剤または滅菌注射用液の形態に剤形化して使用することができる。

製剤化する場合、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を用いて調製することができる。経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、有効成分に少なくとも１種以上の賦形剤、例えば、デンプン、カルシウムカーボネート、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを混ぜて調製することができる。また、単純な賦形剤に加えて、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの潤滑剤も使用することができる。経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤等が挙げられるが、一般に使用される希釈剤である水、リキッドパラフィンに加えて、種々の賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれることができる。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水溶性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤および坐剤が含まれる。非水溶性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、エチルオレートなどのような注射可能なエステルなどを用いることができる。坐剤の基剤としては、ウィテプゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、ツイン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどを用いることができる。

本発明による組成物は、個体にあらゆる経路で投与することができる。全部の投与方式が予想されるが、例えば、経口、静脈、筋肉、皮下、腹腔内注射によって投与されることができる。

本発明による医薬組成物の投与量は、個体の年齢、体重、性別、身体状態などを考慮して選択される。前記医薬組成物中に含まれる単一ドメイン抗体の濃度は、対象に応じて多様に選択できることは自明なことであり、好ましくは医薬組成物に０．０１～５、０００μｇ／ｍｌの濃度で含まれることである。その濃度が０．０１μｇ／ｍｌ未満である場合には、薬学的活性がみられないことがあり得、５、０００μｇ／ｍｌを超えた場合には人体に毒性を示し得る。

本発明の組成物は、癌およびその合併症の予防または治療に用いられることができ、抗癌補助剤としても使用することができる。

また、本発明は薬学的に有効な量の本発明の組成物を個体に投与する段階を含む、癌の予防および治療方法を提供する。

本発明の組成物は、治療的有効量または薬学的に有効な量で投与される。用語「薬学的に有効な量」とは、医学的治療に適用可能な合理的な恩恵／リスクの割合で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効用量レベルは、個体の種類および重症度、年齢、性別、薬物活性、薬剤感受性、投与時間、投与経路および排出率、治療期間、同時に使用される薬物を含む要素、および他の医学分野でよく知られた要素に応じて決定することができる。

一側面において、本発明は、本発明の抗腫瘍アデノウイルスの腫瘍予防または治療用途に関する。

一側面において、本発明は、本発明の抗腫瘍アデノウイルスを用いた腫瘍の治療方法に関する。

以下の実施例を通じて本発明をより詳細に説明する。しかし、以下の実施例は本発明の内容を具体化するためのものに過ぎないものであり、これにより本発明が限定されるものではない。

実施例１．二重標的ｓｉＲＮＡの作製
１－１．ｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３二重標的ｓｉＲＮＡ
ＳＴＡＴ３（ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ３）およびｍＴＯＲ（ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ）を同時に阻害することができる二重標的ｓｉＲＮＡ（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ）を下記表１に示す配列の通り作製した（Ｂｉｏｎｅｅｒ、Ｄａｅｊｅｏｎ、Ｋｏｒｅａ）。具体的には、セット１の配列番号１および２のｓｉＲＮＡは、２１ｍｅｒのうち１７ｍｅｒが、セット２の配列番号３および４のｓｉＲＮＡは、２０ｍｅｒのうち１６ｍｅｒが、セット３の配列番号５および６のｓｉＲＮＡは、１９ｍｅｒのうち１５ｍｅｒが、セット４の配列番号７および８のｓｉＲＮＡは、１８ｍｅｒのうち１４ｍｅｒが、及びセット５の配列番号９および１０のｓｉＲＮＡは、１７ｍｅｒのうち１６ｍｅｒが、相補的に結合する。また、セット６の配列番号１１及び１２のｓｉＲＮＡは、２０ｍｅｒのうち１７ｍｅｒが、セット７の配列番号１３及び１４のｓｉＲＮＡは、１９ｍｅｒのうち１６ｍｅｒが、セット８の配列番号１５及び１６のｓｉＲＮＡは、１８ｍｅｒのうち１５ｍｅｒが、及びセット９の配列番号１７および１８のｓｉＲＮＡは、１７ｍｅｒのうち１４ｍｅｒが、相補的に結合する。以下の表１の各セットの２つの配列がｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ形態で細胞内に入った後、各セットのａｎｔｉｓｅｎｓｅ＿ｍＴＯＲのｓｉＲＮＡが、ｍＴＯＲ ｍＲＮＡ（ｇｉ｜２０６７２５５５０｜ｒｅｆ｜ＮＭ＿００４９５８．３｜Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ（ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ）（ＭＴＯＲ）、ｍＲＮＡ）の標的部位に相補的に結合し、各セットのａｎｔｉｓｅｎｓｅ＿ＳＴＡＴ３のｓｉＲＮＡが、ＳＴＡＴ３ ｍＲＮＡ（ｇｉ｜４７０８０１０４｜ｒｅｆ｜ＮＭ＿１３９２７６．２｜Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ３（ａｃｕｔｅ－ｐｈａｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｆａｃｔｏｒ）（ＳＴＡＴ３）、ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ｖａｒｉａｎｔ １、ｍＲＮＡ）の標的部位に相補的に結合し、ｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３遺伝子発現を減少させる。

１－２．ＢＣＬ２およびＢＩ－１二重標的ｓｉＲＮＡ
ＢＣＬ２（Ｂ－ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ ２）およびＢＩ－１（ＢＡＸ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ １）を同時に阻害することができる２１ｍｅｒの二重標的ｓｉＲＮＡ（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ）を下記表２に示す配列の通り作製した（Ｂｉｏｎｅｅｒ、Ｄａｅｊｅｏｎ、Ｋｏｒｅａ）。具体的には、下記表２の配列番号１９及び２０からなる２１ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１０は、１５ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号２１及び２２からなる２０ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１１は、１４ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号２３および２４からなる２０ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１２は、１４ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号２５および２６からなる１９ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１３は、１３ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号２７および２８からなる１９ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１４は、１３ｍｅｒが互いに相補的であり、及び配列番号２９および３０からなる１８ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１５は、１２ｍｅｒが互いに相補的である。下記表２の配列番号１９、２１、２３、２５、２７または２９のｓｉＲＮＡ（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｂｃｌ－２）がＢｃｌ－２のｍＲＮＡに相補的に結合し、配列番号２０、２２、２４、２６、２８または３０のｓｉＲＮＡ（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＢＩ－１）がＢＩ－１のｍＲＮＡに相補的に結合するので、本発明のｓｉＲＮＡセット１０－１５は、Ｂｃｌ－２およびＢＩ－１遺伝子の発現を同時に減少させる。

１－３．ＡＲおよびｍＴＯＲ二重標的ｓｉＲＮＡ
ＡＲ（ａｎｄｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）及びｍＴＯＲ（ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ）を同時に阻害することができる二重標的ｓｉＲＮＡ（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ）セットを、以下表３に示す配列の通り作製した（Ｂｉｏｎｅｅｒ、Ｄａｅｊｅｏｎ、Ｋｏｒｅａ）。具体的には、配列番号３１および３２からなる２０ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１６は、１８ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号３３および３４からなる１９ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１７は、１７ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号３５および３６からなる１８ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１８は、１６ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号３７および３８からなる１７ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット１９は、１５ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号３９および４０からなる１９ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２０は、１５ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号４１および４２からなる１８ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２１は、１４ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号４３および４４からなる１７ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２２は、１３ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号４５および４６からなる２３ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２３は、１９ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号４７および４８からなる２２ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２４は、１８ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号４９および５０からなる２２ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２５は、１８ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号５１および５２からなる２１ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２６は、１７ｍｅｒが互いに相補的であり、配列番号５３および５４からなる２０ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２７は、１６ｍｅｒが互いに相補的であり、及び配列番号５５および５６からなる２１ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット２８は１７ｍｅｒが互いに相補的である。下記表３の配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３または５５のｓｉＲＮＡ（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＡＲ）がＡＲのｍＲＮＡに相補的に結合し、配列番号３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４または５６のｓｉＲＮＡ（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｍＴＯＲ）がｍＴＯＲのｍＲＮＡに相補的に結合する。したがって、本発明のｓｉＲＮＡセット１６－２８は、ＡＲおよびｍＴＯＲ遺伝子の発現を同時に減少させる。

１－４．ＭＧＭＴおよびｍＴＯＲ二重標的ｓｉＲＮＡ
ＭＧＭＴ（Ｏ－６－ｍｅｔｈｙｌｇｕａｎｉｎｅ－ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ＮＭ＿００２４１２．５）およびｍＴＯＲ（ＮＭ＿００４９５８．３）遺伝子の発現を同時に減少（阻害）することができる二重標的ｓｉＲＮＡ（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ）セットを下記表４に示す配列の通り作製した（Ｂｉｏｎｅｅｒ、Ｄａｅｊｅｏｎ、Ｋｏｒｅａ）。

１－５．ＢＣＬ２およびＭＣＬ１二重標的ｓｉＲＮＡ
ＢＣＬ２（ＮＭ＿０００６３３．２）およびＭＣＬ１（ＭＣＬ１ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ、ＮＭ＿０２１９６０．５）遺伝子の発現を同時に減少（阻害）させることができる二重標的ｓｉＲＮＡ（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ）セットを下記表５に示す配列の通り作製した（Ｂｉｏｎｅｅｒ、Ｄａｅｊｅｏｎ、Ｋｏｒｅａ）。

１－６．ＳＴＡＴ３およびＴＦＥＢ二重標的ｓｉＲＮＡ
ＳＴＡＴ３（ＮＭ＿１３９２７６．２）およびＴＦＥＢ（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＥＢ、ＮＭ＿００７１６２．２）遺伝子の発現を同時に減少（阻害）させることができる二重標的ｓｉＲＮＡ（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ）セットを下記表６に示す配列の通り作製した（Ｂｉｏｎｅｅｒ、Ｄａｅｊｅｏｎ、Ｋｏｒｅａ）。

１－７．ｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１二重標的ｓｉＲＮＡ
ｃ－ＭＥＴ（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ＭＥＴ ｐｒｏｔｏ－ｏｎｃｏｇｅｎｅ）およびＰＤ－Ｌ１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ １）を同時に阻害することができる二重標的ｓｉＲＮＡ（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ）セットを下記表７に示す配列の通り作製した（Ｂｉｏｎｅｅｒ、Ｄａｅｊｅｏｎ、Ｋｏｒｅａ）。具体的には、配列番号６３および６４からなる１９ｍｅｒのｓｉＲＮＡセット３２は、１５ｍｅｒが互いに相補的であり、下記表７の配列番号６３のｓｉＲＮＡ（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｃ－ＭＥＴ）がｃ－ＭＥＴのｍＲＮＡに相補的に結合し、配列番号６４のｓｉＲＮＡ（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＰＤ－Ｌ１）がＰＤ－Ｌ１のｍＲＮＡに相補的に結合する。したがって、本発明のｓｉＲＮＡセットは、ｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１遺伝子の発現を同時に減少させる。

実施例２．二重標的ｓｈＲＮＡの作製
２－１．ｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３標的ｓｈＲＮＡ
前記実施例にて作製したｓｉＲＮＡを細胞内で発現可能にするためにｓｈＲＮＡを発現する発現カセットを作製した。具体的には、ｓｉＲＮＡ等のうちのセット１の二重標的ｓｉＲＮＡ（配列番号１及び２）ｓｉＲＮＡ二本鎖の配列とループ配列を含むｓｈＲＮＡ等（ＴＴＧＧＡＴＣＣＡＡループｓｈＲＮＡ及びＴＴＣＡＡＧＡＧＡＧループｓｈＲＮＡ）を代表的に作製した（表８）。作製した各ｓｈＲＮＡ発現カセット等をそれぞれｐＥ３．１ベクター（図１）の制限酵素ＰｓｔＩおよびＥｃｏＲＶ切断位置にＵ６プロモーター（配列番号６５）の後にくるように配置し、ｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３を標的とする二重標的ｓｉＲＮＡを含む２種のｓｈＲＮＡを細胞内で発現する組換え発現ベクターを作製した。

２－２．ＢＣＬ２およびＢＩ－１標的ｓｈＲＮＡ
前記実施例にて作製したｓｉＲＮＡを細胞内で発現可能にするために、ｓｈＲＮＡを発現する発現カセットを作製した。具体的には、ｓｉＲＮＡ等のうちセット１０の二重標的ｓｉＲＮＡ（配列番号１９および２０）ｓｉＲＮＡ二本鎖配列とループ配列を含むｓｈＲＮＡ等（ＴＴＧＧＡＴＣＣＡＡループｓｈＲＮＡおよびＴＴＣＡＡＧＡＧＡＧループｓｈＲＮＡ）を代表的に作製した（表９）。作製した各ｓｈＲＮＡを発現する発現カセットを、それぞれｐＥ３．１ベクター（図１）の制限酵素ＰｓｔＩおよびＥｃｏＲＶ切断位置にＵ６プロモーター（配列番号６５）の後に来るように配置し、ＢＣＬ２およびＢＩ－１を標的とする二重標的ｓｉＲＮＡを含む２種のｓｈＲＮＡを細胞内で発現する組換え発現ベクターを作製した。

２－３．ＡＲおよびｍＴＯＲ標的ｓｈＲＮＡ
前記実施例にて作製したｓｉＲＮＡを細胞内で発現可能にするために、ｓｈＲＮＡを発現する発現カセットを作製した。具体的には、ｓｉＲＮＡ等のうちセット１６の二重標的ｓｉＲＮＡ（配列番号３１および３２）ｓｉＲＮＡ二本鎖配列とループ配列を含むｓｈＲＮＡ等（ＴＴＧＧＡＴＣＣＡＡループｓｈＲＮＡおよびＴＴＣＡＡＧＡＧＡＧループｓｈＲＮＡ）を代表的に作製した（表１０）。作製した各ｓｈＲＮＡを発現する発現カセットをそれぞれｐＥ３．１ベクター（図１）の制限酵素ＰｓｔＩおよびＥｃｏＲＶ切断位置にＵ６プロモーター（配列番号６５）の後にくるように配置し、ＡＲおよびｍＴＯＲを標的とする二重標的ｓｉＲＮＡを含む２種のｓｈＲＮＡを細胞内で発現する組換え発現ベクターを作製した。

２－４．ｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１標的ｓｈＲＮＡ
前記実施例にて作製したｓｉＲＮＡを細胞内で発現可能にするために、二重標的ｓｉＲＮＡ ｓｉＲＮＡ二本鎖の配列とループ配列を含むｓｈＲＮＡ発現カセット等（ＴＴＧＧＡＴＣＣＡＡループｓｈＲＮＡおよびＴＴＣＡＡＧＡＧＡＧループｓｈＲＮＡ）を作製した。具体的には、５’から３’方向に前記表７のｓｉＲＮＡセット（配列番号６３および６４）のセンス鎖の３’にＴＴＧＧＡＴＣＣＡＡ（ＴＴＧＧＡＴＣＣＡＡループ）またはＴＴＣＡＡＧＡＧＡＧ（ＴＴＣＡＡＧＡＧＡＧループ）、アンチセンス鎖およびＴＴを連結し、ｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を作製し、表１１に示した（ｓｉＲＮＡは大文字で、追加の配列は小文字で表した）。作製したｓｈＲＮＡ発現カセットをそれぞれｐＥ３．１ベクター（図１）の制限酵素ＰｓｔＩ及びＥｃｏＲＶ切断位置にＵ６プロモーター（配列番号６５）の後にくるように配置し、ｃ－ＭＥＴ及びＰＤ－Ｌ１を標的とする二重標的ｓｉＲＮＡを含む２種のｓｈＲＮＡを細胞内で発現する組換え発現ベクターを作製した。

実施例３．二重標的ｓｉＲＮＡの遺伝子発現阻害効果の確認
３－１．ｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３発現の阻害
１２ウェルプレートにＨｅｌａ細胞を分注した後、細胞密度が５０％になるまで１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ社）を添加したＲＰＭＩ培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ社）において３７℃、５％のＣＯ_２の条件で培養した。その後、前記細胞に前記実施例１にて作製したセット１－９の二重標的ｓｉＲＮＡをそれぞれリポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）３０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）でトランスフェクションし、ｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３を同時にノックダウンした。トランスフェクション４８時間後、細胞を破砕し、ＧｅｎｅＪＥＴ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で全ＲＮＡを抽出した。抽出した全ＲＮＡを鋳型として用い、ＲｅｖｏＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ ＰｒｅＭｉｘ（ｉＮｔＲＯＮ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ）で逆転写反応を行った。逆転写されたｃＤＮＡを２５～２００ｎｇ含有した試料２０μｌとＡｍｐＯＮＥ ｔａｑ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＧｅｎｅＡｌｌ）およびＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓｓａｙｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてｍＴＯＲ（Ｈｓ００２３４５２２＿ｍ１）、ＳＴＡＴ３（Ｈｓ０１０４７５８０＿ｍ１）およびＧＡＰＤＨ（Ｈｓ０２７５８９９１＿ｇ１）に対し、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７７００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ＳｙｓｔｅｍおよびＱＳ３ Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ（Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて反応を行った。Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ反応条件は、［５０℃で２分、９５℃で１０分、および９５℃で１５秒および６０℃で６０秒の２段階サイクル］を計４０サイクル行った。全ての反応は３回ずつ繰り返して行い、これらの平均値をとった。このようにして得られた結果は、ハウスキーピング遺伝子であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ値に対して正規化した。

その結果、セット１－９の二重標的ｓｉＲＮＡにより、ｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３は、対照群と比較して、残存発現が約２０～４０％であることが確認され、二重標的ｓｉＲＮＡが二つの遺伝子全部同時に発現を阻害することがわかった（図２）。

３－２．ＢＣＬ２およびＢＩ－１発現阻害
１２ウェルプレートにＨｅｌａ細胞をそれぞれ分注した後、細胞密度が５０％になるまで１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ社）を添加したＲＰＭＩ培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ社）で３７℃、５％のＣＯ_２の条件で培養した。その後、前記Ｈｅｌａ細胞が培養されたウェルに前記実施例１（表２）にて作製した二重標的ｓｉＲＮＡセット１０を（ｓｉ－ＢＢ１）および二重標的ｓｉＲＮＡセット１１～１５を、ウェル当たり８０ｐｍｏｌずつ３μｌのリポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）３０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）でトランスフェクションし、ＢＣＬ２およびＢＩ－１を同時にノックダウンした。トランスフェクション４８時間後、細胞を破砕し、ＧｅｎｅＪＥＴ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で全ＲＮＡを抽出した。抽出した全ＲＮＡを鋳型として用い、ＲＴ－ＰＣＲ反応によりｃＤＮＡに逆転写した後、ｑ－ＰＣＲ反応により二重標的ｓｉＲＮＡによるＢＣＬ２およびＢＩ－１のｍＲＮＡ発現量を確認した。参考までに、使用したプローブはＢｃｌ２（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｈｓ００６０８０２３＿ｍ１）、ＢＩ－１（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｄｍ０１８３５８９２＿ｇ１）、ＧＡＰＤＨ（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１）であり、ＱＳ３装置を用いて行った。全部の反応は３回ずつ繰り返し行われ、これらの平均値をとった。このようにして得られた結果は、ハウスキーピング遺伝子であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ値に対して正規化した。

その結果、二重標的ｓｉＲＮＡセットによりＢＣＬ２およびＢＩ－１の発現が全部減少し、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡが二つの遺伝子発現を同時に阻害することが分かった（図３および図４）。

したがって、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡは、二つの遺伝子の発現を同時に阻害するものであり、これにより癌細胞の死滅を促進し、顕著な抗癌活性がみられることが確認されたところ、種々の癌に抗癌用組成物または抗癌補助剤として有用に用いられ得ることを示唆する。

３－３．ＡＲおよびｍＴＯＲ発現の阻害
１２ウェルプレートにＰＣ３細胞株、ｈ４６０およびＡ５４９細胞株をそれぞれ分注した後、細胞密度が５０％になるまで１０％ ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ社）を添加したＲＰＭＩ培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ社）において３７℃、５％のＣＯ_２の条件で培養した。その後、前記細胞が培養されたウェルに前記実施例１にて作製した二重標的ｓｉＲＮＡセット１６－２８（表３）をそれぞれウェル当たり８０ｐｍｏｌずつ３μｌのリポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）３０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ 、ＵＳＡ）でトランスフェクションし、ＡＲおよびｍＴＯＲを同時にノックダウンした。ここで、セット１６はｈ４６０細胞に、セット１７はＰＣ３細胞にトランスフェクションしてノックダウンしており、これに対する陽性対照群として、下記表１２に記載のＡＲに対するｓｉＲＮＡと、ｍＴＯＲに対するｓｉＲＮＡをそれぞれトランスフェクションした。トランスフェクション４８時間後、細胞を破砕し、ＧｅｎｅＪＥＴ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で全ＲＮＡを抽出した。抽出した全ＲＮＡを鋳型として用い、ＲＴ－ＰＣＲ反応によりｃＤＮＡに逆転写した後、ｑ－ＰＣＲ反応により各ｓｉＲＮＡと本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１６－２８（ｓｉ－ＡＴ１－ｓｉＡＴ１３）によるＡＲおよびｍＴＯＲのｍＲＮＡ発現量を確認した。ｍＲＮＡ発現量を確認するために、ＡＲまたはｍＴＯＲに対するプライマーセットと反応混合物［１０Ｘ ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ ２μｌ、ＨＱ Ｂｕｆｆｅｒ ２μｌ、ｄＮＴＰ １．６μｌ、Ｐｒｉｍｅｒ（Ｆ、Ｒ、１０ ｐｍｏｌｅ／ｕｌ）それぞれ１μｌ、Ｔｅｍｐｌａｔｅ（５００ｎｇ）２μｌ、Ｔａｑ ０．２μｌ、ＤＷ １０．２μｌ、Ｔｏｔａｌ ｖｏｌ．２０μｌ］を用いた。ＰＣＲ条件で［９５℃で２分、９５℃で２０秒を３０サイクル、６０℃で１０秒および７２℃で３０～６０秒、７２℃で５分］ノックダウンした細胞破砕物におけるＡＲおよびｍＴＯＲのｍＲＮＡをｃＤＮＡに変換した。また、逆転写されたｃＤＮＡを鋳型として用い、反応混合物を［Ｔｅｍｐｌａｔｅ（ＲＴ－ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ）６μｌ、Ｔａｑｍａｎ ｐｒｏｂｅ ３μｌ、１０Ｘ ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ ６μｌ、ＨＱ Ｂｕｆｆｅｒ ６μｌ、ｄＮＴＰ ４．８μｌ、Ｔａｑ ０．６μｌ、ＤＷ １０．２μｌ、Ｔｏｔａｌ ｖｏｌ．６０μｌ］を調製し、ｑＰＣＲを行った［９５℃で１０分、９５℃で１５秒、および６０℃で１分あたり４０サイクル］。参考までに、使用したプローブは、ＡＲ（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｈｓ００１７１１７２＿ｍ１）、ｍＴＯＲ（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｈｓ００２３４５０８＿ｍ１）、ＧＡＰＤＨ（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１）であり、ＱＳ３装置を用いて行った。全部の反応は３回ずつ繰り返し行われ、それらの平均値をとった。このようにして得られた結果は、ハウスキーピング遺伝子であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ値に対して正規化した。

その結果、ＰＣ３細胞およびｈ４６０細胞株の両者において、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１６および１７によって、ＡＲおよびｍＴＯＲの発現が全部減少しており（図５）、減少の程度は、それぞれのｓｉＲＮＡによる効果と類似またはより優れていることが示された。また、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１７および２８により、ＡＲおよびｍＴＯＲの発現が減少した（図６）。これにより、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡが二つの遺伝子の発現を同時に効果的に阻害することができることが分かった。

３－４．ｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１発現の阻害
１２ウェルプレートに、膠芽腫細胞株Ｕ－８７、前立腺癌細胞株ＣＷＲ２２Ｒｖ－１（２２Ｒｖ－１）、黒色腫細胞株Ａ４３１および非小細胞肺癌細胞株ＨＣＣ８２７をそれぞれ分注した後、細胞密度が５０％になるまで１０％ ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ社）を添加したＲＰＭＩ培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ社）において、３７℃、５％のＣＯ_２の条件で培養した。その後、前記細胞が培養されたウェルに、前記実施例にて作製した二重標的ｓｉＲＮＡセット（表７）をウェル当たり８０ｐｍｏｌずつ３μｌのリポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）３０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）でトランスフェクションし、ｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１を同時にノックダウンした。トランスフェクション４８時間後、細胞をそれぞれ破砕し、ＧｅｎｅＪＥＴ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で全ＲＮＡを抽出した。抽出した全ＲＮＡを鋳型として用い、ＲＴ－ＰＣＲ反応によりｃＤＮＡに逆転写した後、ｑ－ＰＣＲ反応により各ｓｉＲＮＡと本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセットによるｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１のｍＲＮＡ発現量を確認した。ｍＲＮＡ発現量を確認するために、ＰＤ－Ｌ１またはｃ－ＭＥＴに対するプライマーセットと反応混合物［１０Ｘ ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ ２μｌ、ＨＱ Ｂｕｆｆｅｒ ２μｌ、ｄＮＴＰ １．６μｌ、Ｐｒｉｍｅｒ（Ｆ、Ｒ、１０ ｐｍｏｌｅ／ｕｌ）それそれ１μｌ、Ｔｅｍｐｌａｔｅ（５００ｎｇ）２μｌ、Ｔａｑ ０．２μｌ、ＤＷ １０．２μｌ、Ｔｏｔａｌ ｖｏｌ．２０μｌ］を用いた。ＰＣＲ条件で［９５℃で２分、９５℃で２０秒を３０サイクル、６０℃で１０秒および７２℃で３０～６０秒、７２℃で５分］ノックダウンした細胞破砕物におけるｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１のｍＲＮＡをｃＤＮＡに変換した。また、逆転写されたｃＤＮＡを鋳型として用い、反応混合物を［Ｔｅｍｐｌａｔｅ（ＲＴ－ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ）６μｌ、Ｔａｑｍａｎ ｐｒｏｂｅ ３μｌ、１０Ｘ ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ ６μｌ、ＨＱ Ｂｕｆｆｅｒ ６μｌ、ｄＮＴＰ ４．８μｌ、Ｔａｑ ０．６μｌ、ＤＷ １０．２μｌ、Ｔｏｔａｌ ｖｏｌ．６０μｌ］を調製し、ＱＳ３装置を用いてｑＰＣＲを行った［９５℃で１０分、９５℃で１５秒、および６０℃で１分あたり４０サイクル］。全部の反応は３回ずつ繰り返し行われ、これらの平均値をとった。このようにして得られた結果は、ハウスキーピング遺伝子であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ値に対して正規化した。

その結果、Ｕ－８７細胞株、２２Ｒｖ－１細胞株、Ａ４３１細胞株、およびＨＣＣ８２７細胞株の全部において、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセットにより、ｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１の発現が全部減少することが示された（図７ａ～７ｄ）。これにより、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡが二つの遺伝子発現を同時に効果的に阻害することができることが分かった。

実施例４．二重標的ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡの遺伝子発現阻害効果の確認
４－１．二重標的ｓｈＲＮＡの遺伝子発現阻害効果
前記実施例２にて作製したｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３標的ｓｈＲＮＡをコードする配列番号６６のＴＴＣＡＡＧＡＧＡＧループｓｈＲＮＡ配列または配列番号６７のＴＴＣＡＡＧＡＧＡＧループｓｈＲＮＡ配列（表８）を含むベクターを、リポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）３０００を用いてＡ５４９細胞および膠芽細胞腫細胞Ｕ－８７（Ｕ８７ＭＧ）にそれぞれ０、１および２μｇずつトランスフェクションした。トランスフェクション４８時間後、前記実施例に記載のＲｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲ分析方法を用いて、ｍＴＯＲとＳＴＡＴ３の遺伝子発現の減少程度を確認した。

その結果、ｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３の発現は、本願発明の二重標的ｓｉＲＮＡを含む２種のｓｈＲＮＡの全部において減少し、ｓｈＲＮＡのＤＮＡ量に比例して２０％程度まで減少する傾向が示された（図８）。

４－２．単一標的ｓｉＲＮＡおよび二重標的ｓｈＲＮＡの遺伝子発現阻害効果の比較
２つの単一標的ｓｉＲＮＡを２つのプロモーターを用いて直列に連結したものと、本発明の二重標的ｓｈＲＮＡの遺伝子発現阻害効果を比較した。具体的には、ｍＴＯＲに対するｓｉＲＮＡおよびＳＴＡＴ３に対するｓｉＲＮＡをｍＴＯＲ－ＳＴＡＴ３またはＳＴＡＴ３－ｍＴＯＲの順に直列連結した後、これのｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３に対する遺伝子発現阻害効果を本発明のｍＴＯＲ／ＳＴＡＴ３二重標的ｓｈＲＮＡと比較した。

その結果、２９３Ｔ細胞株において、各遺伝子に対する２つのｓｉＲＮＡをプロモーターを用いて直列に連結した場合（ｄｉｒｅｃｔ ｓｈｍＴＯＲ－ＳＴＡＴ３またはｄｉｒｅｃｔ ｓｈＳＴＡＴ３－ｍＴＯＲ）よりも、本発明の二重標的ｓｈＲＮＡを用いた場合、遺伝子発現阻害効果が著しく高いことが示された（図９）。

実施例５．二重標的ｓｉＲＮＡによる癌細胞の死滅効果の確認
本発明のセット１－９の二重標的ｓｉＲＮＡによる癌細胞に対する死滅効果を確認するために、ヒト肺癌細胞株Ａ５４９細胞を９６ウェルプレートに５×１０^３ ｃｅｌｌ／ウェルにそれぞれ分注した後、リポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）３０００でセット１－９の二重標的ｓｉＲＮＡのそれぞれを細胞にトランスフェクションした。トランスフェクション４８時間後、さらに２４時間後に５ｍｇ／ｍＬ ＭＴＴ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｌｔｄ．）を細胞に処理し、４時間インキュベートした。その後、培地を取り除き、可溶化溶液（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）および停止液（ｓｔｏｐ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）１５０μｌを処理し、３７℃で４時間インキュベートした。反応溶液の吸光度を５７０ｎｍで測定し、下記式を用いて細胞生存率を算出した。

その結果、本発明のセット１－９の二重標的ｓｉＲＮＡでｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３を同時に阻害したとき、細胞生存率が対照群に比べて有意に減少することが確認された。したがって、本発明のセット１－９の二重標的ｓｉＲＮＡが癌細胞を効果的に死滅することが確認された（図１０）。

実施例６．二重標的ｓｉＲＮＡと抗癌剤併用処理による癌細胞の死滅効果の確認
６－１．ｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３二重標的ｓｉＲＮＡの抗癌剤との併用処理
６－１－１．シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）との併用処理
ヒト肺癌細胞株Ａ５４９細胞を９６ウェルプレートに５×１０^３ ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌに分注した後、リポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）３０００で本発明のセット１－９の二重標的ｓｉＲＮＡ（ｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３同時ノックダウン）をそれぞれ細胞にトランスフェクションした。トランスフェクション４８時間後、シスプラチン５μＭを処理し、１０時間インキュベートした。その後、前記実施例と同様にＭＴＴ反応を行い、その吸光度を５７０ｎｍで測定し、細胞生存率を算出した。

その結果、シスプラチンと併用処理を行い、本発明のセット１－９の二重標的ｓｉＲＮＡでｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３を同時に阻害した場合、細胞生存率が約５０～７０％まで減少し、対照群に比べて有意な差を示すことが確認された。したがって、抗癌剤との併用処理においても、二つの遺伝子を同時に阻害する際にアポトーシス効果が著しく向上することが確認された（図１１）。

６－１－２．パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）との併用処理
ヒト肺癌細胞株Ａ５４９細胞を９６ウェルプレートに５×１０^３ ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌに分注した後、リポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）３０００で本発明のセット１－９の二重標的ｓｉＲＮＡ（ｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３同時ノックダウン）をそれぞれ細胞にトランスフェクションした。トランスフェクション４８時間後、パクリタキセル５μＭを処理し、１０時間インキュベートした。その後、前記実施例４と同様にＭＴＴ反応を行い、その吸光度を５７０ｎｍで測定し、細胞生存率を算出した。

その結果、パクリタキセルとの併用処理を行い、本発明のセット１－９の二重標的ｓｉＲＮＡでｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３を同時に阻害した場合、細胞生存率が約３０～５０％まで減少し、対照群に比べて有意な差があることを示すことが確認された。したがって、抗癌剤との併用処理においても、二つの遺伝子を同時に阻害する際にアポトーシス効果が著しく向上することが確認された（図１２）。

６－１－３．５－フルオロウラシル（５－ＦＵ、５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）との併用処理
ヒト肺癌細胞株Ａ５４９細胞を９６ウェルプレートに５×１０^３ ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌに分注した後、リポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）３０００で本発明のセット１－９の二重標的ｓｉＲＮＡ（ｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３同時ノックダウン）をそれぞれ細胞にトランスフェクションした。トランスフェクション４８時間後、パクリタキセル５μＭを処理し、１０時間インキュベートした。その後、前記実施例４と同様にＭＴＴ反応を行い、その吸光度を５７０ｎｍで測定し、細胞生存率を算出した。

その結果、５－フルオロウラシルと併用処理し、本発明のセット１－９の二重標的ｓｉＲＮＡでｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３を同時に阻害したとき、細胞生存率が約３０％まで減少し、対照群に比べて有意な差が見られることが確認された。したがって、抗癌剤との併用処理においても、二つの遺伝子を同時に阻害する際にアポトーシス効果が著しく向上することが確認された（図１３）。

６－２．ＢＣＬ２およびＢＩ－１二重標的ｓｉＲＮＡの抗癌剤との併用処理
６－２－１．ＢＣＬ２およびＢＩ－１二重標的ｓｉＲＮＡの相乗的抗癌効果
ヒト子宮頸癌細胞株であるＨｅｌａ細胞に本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１（ｓｉ－ＢＢ１）、または対照群として個別ＢＣＬ２ ｓｉＲＮＡおよびＢＩ－１ ｓｉＲＮＡをそれぞれトランスフェクションした後、抗癌剤を種類別に６時間処理した後、癌細胞株の死滅程度をＭＴＴ分析によって確認した。具体的には、６ウェルプレートに分注したＨｅｌａ細胞にウェル当たり２００ｐｍｏｌｅのｓｉＲＮＡをリポフェクタミン７．５μｌでトランスフェクションした後、４８時間インキュベートし、細胞株を再び９６ウェルプレートに再分注し、５０％細胞密度（２．５×１０^４）となるように培養した後、対照群の場合、抗癌剤の濃度をタキソール０．５μＭ、シスプラチン２０μＭ及びエトポシド１０μＭでそれぞれ処理し、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセットを処理した細胞にはその半分濃度であるタキソール０．２５μＭ、シスプラチン１０μＭおよびエトポシド５μＭでそれぞれ処理した後、６時間後、前記実施例と同様にＭＴＴ分析を行い、癌細胞の死滅の程度を確認した。

その結果、ＢＣＬ２またはＢＩ－１のそれぞれに対するｓｉＲＮＡを一緒にトランスフェクションした対照群の場合、癌細胞の死滅がほとんど起こらず、抗癌剤と併用処理する際のみ抗癌剤による癌細胞の死滅効果が一部発生した（図１４Ａ）。その反面、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１（ｓｉ－ＢＢ１）の場合、癌細胞の死滅が顕著に発生し、ＢＣＬ２ ｓｉＲＮＡ及びＢＩ－１ ｓｉＲＮＡを共に処理した対照群より顕著に少ない濃度の抗癌剤との併用処理にも癌細胞の死滅効果が相乗的に増加することがわかった（図１４Ｂ）。これにより、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡ自体が抗癌活性を示し、抗癌剤との併用処理による相乗効果も二重標的ｓｉＲＮＡに特異的であることを推測することができた。

６－２－２．ＢＣＬ２およびＢＩ－１二重標的ｓｉＲＮＡのＢｃｌ２阻害剤との効果の比較
本発明のＢＣＬ２およびＢＩ－１に対する二重標的ｓｉＲＮＡセット１（ｓｉ－ＢＢ１）の癌細胞の死滅阻害効果を、ＢＣＬ２の阻害による癌細胞治療薬として用いられているＡＢＴ－７３７薬物と比較した。具体的には、前記実施例と同様に前立腺癌細胞であるＬｎＣａｐ細胞株を分注した後、本発明のＢＣＬ２およびＢＩ－１に対するｓｉＲＮＡセット１（ｓｉ－ＢＢ１）をトランスフェクションし、ＡＢＴ－７３７ ３μＭを処理し、１２時間インキュベートした後、ＭＴＴ分析により癌細胞株の死滅程度を確認した。

その結果、ＡＢＴ－７３７または本発明のＢＣＬ２およびＢＩ－１に対するｓｉＲＮＡセット１（ｓｉ－ＢＢ１）処理によりＬｎＣａｐ細胞株の死が増加し、特にＡＢＴ－７３７と本発明の二重標的ｓｉＲＮＡを併用処理した場合、相乗的に癌細胞の死滅が著しく増加したことがわかった（図１５）。

６－２－３．ＢＣＬ２およびＢＩ－１二重標的ｓｉＲＮＡと各ｓｉＲＮＡの抗癌効果の比較
ヒト前立腺癌細胞株であるＰＣ３細胞株を６ウェルプレートにそれぞれ培養した後、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１０（ｓｉ－ＢＢ１）と、対照群として下記表１３のＢＣＬ２またはＢＩ－１それぞれに対するｓｉＲＮＡをそれぞれトランスフェクションした後、４８時間後にシスプラチンを１０～２０μＭで処理した。シスプラチン処理１２時間後、５ｍｇ／ｍＬ ＭＴＴ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｌｔｄ．）を細胞に処理し、４時間インキュベートした。その後、培地を取り除き、可溶化溶液（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）および停止液（ｓｔｏｐ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）１５０μｌを処理し、３７℃で４時間インキュベートした。反応溶液の吸光度を５７０ｎｍで測定し、前記式１を使って細胞生存率を算出した。

その結果、シスプラチンを処理せず、対照群ｓｉＲＮＡを処理した対照群に比べて本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１０をシスプラチンと併用処理した群が癌細胞の死滅が著しく増加しており、その程度がＢＣＬ２およびＢＩ－１それぞれに対するｓｉＲＮＡを処理した群に比べて有意に増加したことがわかった（図１６）。

６－３．ＡＲおよびｍＴＯＲ二重標的ｓｉＲＮＡの抗癌剤との併用処理
ＤＵ１４５細胞株およびＨ４６０細胞株を６ウェルプレートにそれぞれ培養した後、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１６（ｓｉ－ＡＴ１）をそれぞれトランスフェクションした後、４８時間後にシスプラチン５０ｕＭ、エトポシド２０ｕＭまたはタキソール１ｕＭを処理し、１６時間インキュベートした。その後、５ｍｇ／ｍＬ ＭＴＴ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｌｔｄ．）を細胞に処理し、４時間インキュベートした後、培地を取り除き、可溶化溶液（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）及び停止液（ｓｔｏｐ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）１５０μｌを処理し、３７℃で４時間インキュベートした。反応溶液の吸光度を５７０ｎｍで測定し、細胞生存率を算出した。

その結果、前立腺癌細胞株であるＤＵ１４５細胞株に対して、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡが単独でも細胞死滅を誘発し（抗癌剤無処理群（ｎｏ ｔｒｅａｔ））、細胞死滅効果を示さないシスプラチン処理群でも本発明の二重標的ｓｉＲＮＡが細胞死滅を引き起こすことがわかった。また、若干の抗癌活性を示したエトポシドとタキソールについても本発明の二重標的ｓｉＲＮＡセット１６（ｓｉ－ＡＴ１）を併用処理することによりＤＵ１４５死滅を著しく向上させることが確認された（図１７Ａ）。また、肺癌細胞株であるＨ４６０についても、ＤＵ１４５細胞株と同様に、本発明の二重標的ｓｉＲＮＡ自体が細胞死滅効果を示し、エトポシドとタキソールとの併用処理した時、著しく抗癌活性を示すことがわかった（図１７Ｂ）。

実施例７．二重標的ｓｈＲＮＡコーディングアデノウイルスの作製
ｈＴＥＲＴプロモーター（配列番号７４）－Ｅ１Ａ（配列番号７５）－ＩＲＥＳ（配列番号７６）－Ｅ１Ｂ配列（配列番号７７）（全配列：配列番号７８）をアデノウイルスベクターのＳｐｅＩとＳｃａＩの間に挿入した後、Ｕ６プロモーターと前記実施例にて作製したＢＣＬ２及びＢＩ－１二重標的ｓｈＲＮＡ（Ｕ６プロモーター＋ＢＣＬ２及びＢＩ－１二重標的ｓｈＲＮＡコード配列：配列番号７９）、ｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３二重標的ｓｈＲＮＡ（Ｕ６プロモーター＋ｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３二重標的ｓｈＲＮＡコード配列：配列番号８０）およびＡＲおよびｍＴＯＲ二重標的ｓｈＲＮＡ配列（Ｕ６プロモーター＋ＡＲおよびｍＴＯＲ二重標的ｓｈＲＮＡコード配列：配列番号８１）をそれぞれＥ３領域（ｒｅｇｉｏｎ）にＳｐｅＩの間に挿入することによってｈＴＥＲＴプロモーターおよび二重標的ｓｈＲＮＡをコードおよび発現し、感染性のある組換えアデノウイルスを作製した（ＢＣＬ２およびＢＩ－１二重標的ｓｈＲＮＡコーディングおよび発現アデノウイルス：ＣＡ１０１；ｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３二重標的ｓｈＲＮＡコーディングおよび発現アデノウイルス：ＣＡ１０２；ＡＲおよびｍＴＯＲ二重標的ｓｈＲＮＡコーディングおよび発現アデノウイルス：ＣＡ１０３；およびｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１二重標的ｓｈＲＮＡコーディング（発現）アデノウイルス：ＣＡ１０４）（図１９参照）。併せて、対照群としてｈＴＥＲＴのみを挿入した組換えアデノウイルスも作製した（ＣＡ１０Ｇ）。その後、作製されたアデノウイルスベクターの配列を分析し、異常がない場合、ＰａｃＩ制限酵素を用いてウイルスゲノムを線形化し、２９３Ａ細胞にＣａＣｌ_２法を用いて形質導入して各ウイルスを産生した。

実施例８．二重標的ｓｈＲＮＡコードするアデノウイルスの遺伝子発現阻害の確定
８－１．ＣＡ１０２のｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３発現阻害の確認
８－１－１．ｍＲＮＡレベルの確認
８－１－１－１．膀胱癌
前記実施例７にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０２の標的遺伝子ｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３に対する発現阻害効果が膀胱癌細胞株から確認された。具体的には、ヒト膀胱癌細胞株であるＴ２４細胞（０．５Ｘ１０^５／ｗｅｌｌ）および２５３ＪＢＶ細胞（１Ｘ１０^５／ｗｅｌｌ）をそれぞれ１２ウェルプレートに分注した後、１時間後にＣＡ１０ＧおよびＣＡ１０２をそれぞれのウェルに１０ＭＯＩとなるように処理し、７２時間後にＲＮＡ ｐｒｅｐ ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ、９７６７Ａ）を用いてＲＮＡ ｐｒｅｐを行った。その後、Ｎａｎｏｄｉｒｐを用いてＲＮＡを定量し、ＲＴプレミックス（ｉｎｔｒｏｎ、２５０８１）を用いてチューブ当たり４００ｎｇ／２０ｕｌを入れ、プレミックス（ｐｒｅｍｉｘ）内容物とよく混ぜた後、ＰＣＲ機器を用いて４５℃で１ｈｒおよび９５℃で５分間反応させ、ｃＤＮＡを合成した。合成したｃＤＮＡ ２ｕｌを鋳型として用い、実験群に対応するＰＣＲ混合物（総体積、２０ｕｌ）を製造した（鋳型２ｕｌ、順方向プライマー０．５ｕｌ（１０ｐｍｏｌｅ／ｕｌ）、逆方向プライマー０．５ｕｌ（１０ｐｍｏｌｅ／ｕｌ）、１０ｕｌ ２Ｘ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ｂｉｏｌｉｎｅ、ＢＩＯ－９４００５）および７ｕｌ ＤＷ）。得られたＰＣＲ混合物をボルテックスしてよく混ぜ、遠心分離した後、ｑＰＣＲ機器（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＱＳ３）で９５℃で５分、９５℃で１０秒、および６０℃で３０秒を４０サイクル反応させた。結果はｑＰＣＲ機器のプログラムを用いて分析した。

その結果、Ｔ２４細胞および２５３ＪＢＶ細胞の両方において、ｈＴＥＲＴプロモーターおよびｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３二重標的ｓｈＲＮＡをコードおよび発現する本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２は、ｈＴＥＲＴプロモーターのみを含む組換えアデノウイルスＣＡ１０Ｇに比べて顕著にｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３の発現を阻害することが示された（図２０）。

８－１－１－２．頭頸部癌
前記実施例７にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０２の標的遺伝子ｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３に対する発現阻害効果を前記実施例の方法で頭頸部癌細胞株であるＨＳＣ－２及びＦａｄｕにおいて確認した結果、両細胞株ともに、ｈＴＥＲＴプロモーターとｍＴＯＲ ＳＴＡＴ３二重標的ｓｈＲＮＡをコードおよび発現する本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２は、ｈＴＥＲＴプロモーターのみを含む組換えアデノウイルスＣＡ１０Ｇに比べて顕著にｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３遺伝子の発現を阻害することが示された（図２１）。

８－１－１－３．皮膚扁平上皮癌（Ｓｋｉｎ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）
前記実施例７にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０２の標的遺伝子ｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３に対する発現阻害効果を前記実施例の方法で皮膚扁平上皮癌細胞株であるＡ４３１及びＨＳＣ－５において確認した結果、両細胞株ともに、ｈＴＥＲＴプロモーターとｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３二重標的ｓｈＲＮＡをコードおよび発現する本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２は、ｈＴＥＲＴプロモーターのみを含む組換えアデノウイルスＣＡ１０Ｇに比べて顕著にｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３遺伝子の発現を阻害することが示された（図２２）。

８－１－２．タンパク質発現阻害の確認
前記実施例７にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０２を膀胱癌細胞株Ｔ２４細胞および２５３ＪＢＶ細胞に処理した後、ウエスタンブロット分析により標的遺伝子ｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３に対する発現阻害効果をタンパク質レベルから確認された。その結果、両細胞株ともに、本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２がｍＴＯＲおよびＳＴＡＴ３のタンパク質発現を阻害することが確認された（図２３）。

８－２．ＣＡ１０１のＢＣＬ２およびＢＩ－１発現阻害の確定
前記実施例７にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０１の標的遺伝子ＢＣＬ２およびＢＩ－１に対する発現阻害効果を確認した。具体的には、Ｕ－８７細胞（１Ｘ１０^５／ｗｅｌｌ）を１２ウェルプレートに分注した後、１時間後にＣＡ１０ＧおよびＣＡ１０１をそれぞれのウェルに１０ＭＯＩとなるように処理し、７２時間後にＲＮＡ ｐｒｅｐ ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ、９７６７Ａ）を用いてＲＮＡ ｐｒｅｐを行った。その後、Ｎａｎｏｄｉｒｐを用いてＲＮＡを定量し、ＲＴプレミックス（ｉｎｔｒｏｎ、２５０８１）を用いてチューブ当たり４００ｎｇ／２０ｕｌを入れ、プレミックス（ｐｒｅｍｉｘ）内容物とよく混ぜた後、ＰＣＲ機器を用いて４５℃で１ｈｒおよび９５℃で５分間反応させ、ｃＤＮＡを合成した。合成したｃＤＮＡ ２ｕｌを鋳型として用い、実験群に該当するＰＣＲ混合物（総体積、２０ｕｌ）を製造した（鋳型２ｕｌ、順方向プライマー０．５ｕｌ（１０ｐｍｏｌｅ／ｕｌ）、逆方向プライマー０．５ｕｌ（１０ｐｍｏｌｅ／ｕｌ）、１０ｕｌ ２Ｘ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ｂｉｏｌｉｎｅ、ＢＩＯ－９４００５）および７ｕｌ ＤＷ）。得られたＰＣＲ混合物をボルテックスしてよく混ぜ、遠心分離した後、ｑＰＣＲ機器（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＱＳ３）で９５℃で５分、９５℃で１０秒、および６０℃で３０秒を４０サイクル反応させた。結果はｑＰＣＲ機器にあるプログラムを用いて分析した。

その結果、Ｕ－８７細胞において、ｈＴＥＲＴプロモーターおよびＢＣＬ２およびＢＩ－１二重標的ｓｈＲＮＡをコードおよび発現する本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０１は、ｈＴＥＲＴプロモーターのみを含む組換えアデノウイルスＣＡ１０Ｇに比べて著しくＢＣＬ２およびＢＩ－１遺伝子の発現を阻害することが示された（図２４）。

８－３．ＣＡ１０３のＡＲおよびｍＴＯＲ発現阻害の確認
８－３－１．ｉｎ ｖｉｔｒｏ
前記実施例７にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０３の標的遺伝子ＡＲ及びｍＴＯＲに対する発現阻害効果を確認した。具体的には、ヒト前立腺癌細胞株であるＬＮｃａｐ、Ｃ４２Ｂ、および２２Ｒｖ１をそれぞれ１Ｘ１０^５／ｗｅｌｌで１２ウェルプレートに分注した後、１時間後にＣＡ１０ＧおよびＣＡ１０３をそれぞれのウェルに２または５ＭＯＩとなるように処理し、７２時間後にＲＮＡ ｐｒｅｐ ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ、９７６７Ａ）を用いてＲＮＡ ｐｒｅｐを行った。その後、Ｎａｎｏｄｉｒｐを用いてＲＮＡを定量し、ＲＴプレミックス（ｉｎｔｒｏｎ、２５０８１）を用いてチューブ当たり４００ｎｇ／２０ｕｌを入れ、プレミックス（ｐｒｅｍｉｘ）内容物とよく混ぜた後、ＰＣＲ機器を用いて４５℃で１ｈｒおよび９５℃で５分間反応させ、ｃＤＮＡを合成した。合成したｃＤＮＡ ２ｕｌを鋳型として用い、実験群に該当するＰＣＲ混合物（総体積、２０ｕｌ）を製造した（鋳型２ｕｌ、順方向プライマー０．５ｕｌ（１０ｐｍｏｌｅ／ｕｌ）、逆方向プライマー０．５ｕｌ（１０ｐｍｏｌｅ／ｕｌ）、１０ｕｌ ２Ｘ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ｂｉｏｌｉｎｅ、ＢＩＯ－９４００５）および７ｕｌ ＤＷ）。得られたＰＣＲ混合物をボルテックスしてよく混ぜ、遠心分離した後、ｑＰＣＲ機器（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＱＳ３）で９５℃で５分、９５℃で１０秒、および６０℃で３０秒を４０サイクル反応させた。結果はｑＰＣＲ機器にあるプログラムを用いて分析した。

その結果、ＬＮｃａｐ細胞株において、ｈＴＥＲＴプロモーターとＡＲおよびｍＴＯＲ二重標的ｓｈＲＮＡをコードおよび発現する本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０３は、ｈＴＥＲＴプロモーターのみを含む組換えアデノウイルスＣＡ１０Ｇに比べて著しくＡＲおよびｍＴＯＲ遺伝子の発現を阻害することが示された（図２５）。また、Ｃ４２Ｂおよび２２Ｒｖ１細胞株においても、本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０３がＣＡ１０Ｇに比べて著しくＡＲおよびｍＴＯＲ遺伝子の発現を阻害することが示された（図２６）。

８－３－２．ｉｎ ｖｉｖｏ
ｂａｌｂ／ｃのｎｕ／ｎｕマウスに前立腺癌細胞株（２２Ｒｖ－１）を皮下移植し、前立腺癌マウスモデルを構築した後、前記実施例７にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０ＧおよびＣＡ１０３をそれぞれ腫瘍内１回直接投与（２×１０^８ ｐｆｕ／ｓｐｏｔ、３ｔｉｍｅｓ）し、２１日後腫瘍を摘出し、腫瘍内ＡＲおよびｍＴＯＲ遺伝子の発現程度をウエスタンブロット分析およびＩＨＣ分析により確認した。ウエスタンブロット分析の結果、ＣＡ１０３を投与した群から対照群およびＣＡ１０Ｇ投与群に比べてｍＴＯＲおよびＡＲの発現が減少したことが示され、ＩＨＣ分析結果からもＣＡ１０３を投与した群から、ｍＴＯＲおよびＡＲの蛍光発現が、対照群およびＣＡ１０Ｇ投与群に比べて７０～９０％以上減少したことが示され、ＣＡ１０３が腫瘍内の標的遺伝子であるｍＴＯＲおよびＡＲの発現を効果的に阻害することが確認された（図２７）。

８－４．ＣＡ１０４のｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１発現阻害の確認
前記実施例７にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０４の標的遺伝子ｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１に対する発現阻害効果を確認した。具体的には、Ａ４３１細胞株（１Ｘ１０^５／ｗｅｌｌ）を１２ウェルプレートに分注した後、１時間後にＣＡ１０ＧおよびＣＡ１０４をそれぞれのウェルに２または５ＭＯＩとなるように処理し、７２時間後にＲＮＡ ｐｒｅｐ ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ、９７６７Ａ）を用いてＲＮＡ ｐｒｅｐを行った。その後、Ｎａｎｏｄｉｒｐを用いてＲＮＡを定量し、ＲＴプレミックス（ｉｎｔｒｏｎ、２５０８１）を用いてチューブ当たり４００ｎｇ／２０ｕｌを入れ、プレミックス（ｐｒｅｍｉｘ）内容物とよく混ぜた後、ＰＣＲ機器を用いて４５℃で１ｈｒおよび９５℃で５分間反応させてｃＤＮＡを合成した。合成したｃＤＮＡ ２ｕｌを鋳型として用い、実験群に該当するＰＣＲ混合物（総体積、２０ｕｌ）を製造した（鋳型２ｕｌ、順方向プライマー０．５ｕｌ（１０ｐｍｏｌｅ／ｕｌ）、逆方向プライマー０．５ｕｌ（１０ｐｍｏｌｅ／ｕｌ）、１０ｕｌ ２Ｘ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ｂｉｏｌｉｎｅ、ＢＩＯ－９４００５）および７ｕｌ ＤＷ）。得られたＰＣＲ混合物をボルテックスしてよく混ぜ、遠心分離した後、ｑＰＣＲ機器（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＱＳ３）で９５℃で５分、９５℃で１０秒、および６０℃で３０秒を４０サイクル反応させた。結果はｑＰＣＲ機器にあるプログラムを用いて分析した。

その結果、Ａ４３１細胞において、ｈＴＥＲＴプロモーターおよびｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１二重標的ｓｈＲＮＡをコードおよび発現する本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０４は、ｈＴＥＲＴプロモーターのみを含む組換えアデノウイルスＣＡ１０Ｇに比べて著しくｃ－ＭＥＴおよびＰＤ－Ｌ１遺伝子の発現を阻害することが示された（図２８）。

実施例９．二重標的ｓｈＲＮＡコードするアデノウイルスの抗癌効果の確定
９－１．ＣＡ１０１の抗癌効果の確認
前記実施例７にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０Ｇ及びＣＡ１０１の癌細胞の死滅効果を比較した。具体的には、Ｕ８７ＭＧ細胞（５Ｘ１０^３／ｗｅｌｌ）を９６ウェルプレートにそれぞれ広げた後、１時間後にＣＡ１０ＧおよびＣＡ１０１をそれぞれのウェルに１、２、５、１０、３０または５０ＭＯＩとなるように処理したしてから７２時間後に、ＭＴＴ試薬を加え、３７℃で３時間インキュベートした。３時間後、各ウェルから培地を取り除き、ＤＭＳＯを１００μｌずつ入れた後、すぐにマイクロプレートリーダーを用いて波長５４０ｎｍで吸光度を測定し、ＭＴＴ分析を行った。

その結果、ＣＡ１０Ｇに比べて本発明のＣＡ１０１が著しく癌細胞を死滅させることが確認できた（図２９）。

９－２．ＣＡ１０２の抗癌効果の確認
９－２－１．膀胱癌
前記実施例７にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０Ｇ及びＣＡ１０２の癌細胞の死滅効果を比較した。具体的には、Ｔ２４細胞（２．５×１０^３／ｗｅｌｌ）、２５３Ｊ－ＢＶ細胞（５×１０^３／ｗｅｌｌ）およびヒト膀胱上皮細胞株ＲＴ４細胞（５×１０^３／ｗｅｌｌ）をそれぞれ９６ウェルプレートに広げた後、１時間後にＣＡ１０ＧおよびＣＡ１０２をそれぞれのウェルに１、２、５、１０、２０または５０ＭＯＩとなるように処理してから７２時間後にＭＴＴ試薬を加え、３７℃で３時間インキュベートした。３時間後、各ウェルから培地を取り除き、ＤＭＳＯを１００μｌずつ入れた後、直ちにマイクロプレートリーダーを用いて波長５４０ｎｍで吸光度を測定し、ＭＴＴ分析を行った。

その結果、ＣＡ１０Ｇに比べて本発明のＣＡ１０２が著しく癌細胞を死滅させることが確認できた（図３０）。

９－２－２．頭頸部癌
本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２の頭頸部癌細胞の死滅効果を確認するために、前記実施例４にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０ＧおよびＣＡ１０２を頭頸部癌細胞株であるＨＳＣ－２およびＦａｄｕ処理し、ＭＴＴ分析を通じて細胞死滅効果を比較した。その結果、１０ＭＯＩ処理を基準としてＣＡ１０Ｇ処理した時、約４０％程の細胞が死滅したのに対し、ｍＴＯＲ及びＳＴＡＴ３二重標的ｓｈＲＮＡをコードおよび発現するＣＡ１０２は、７０％以上の死滅を誘導したことが示された（図３１）。

９－２－３．皮膚扁平上皮癌
本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２の皮膚扁平上皮癌細胞の死滅効果を確認するために、前記実施例４にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０ＧおよびＣＡ１０２を皮膚扁平上皮癌細胞株であるＡ４３１およびＨＳＣ－５に処理し、ＭＴＴ分析を通じて細胞の死滅効果を比較した。その結果、１０ＭＯＩ処理を基準としてＣＡ１０Ｇに比べＣＡ１０２の細胞の死滅効果が著しく高いことが示された（図３２）。

９－３．ＣＡ１０３の抗癌効果の確認
前記実施例７にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０Ｇ及びＣＡ１０３の癌細胞の死滅効果を比較した。具体的には、ＬＮｃａｐ、Ｃ４２Ｂおよび２２Ｒｖ１細胞株をそれぞれ５Ｘ１０^３／ｗｅｌｌで９６ウェルプレートにそれぞれ分注した後、１時間後にＣＡ１０ＧおよびＣＡ１０３をそれぞれのウェルに１、２、５、１０、２０、４０または５０ＭＯＩになるように処理してから７２時間後にＭＴＴ試薬を入れ、３７℃で３時間インキュベートした。３時間後、各ウェルから培地を取り除き、ＤＭＳＯを１００μｌずつ入れた後、すぐにマイクロプレートリーダーを用いて波長５４０ｎｍで吸光度を測定してＭＴＴ分析を行った。

その結果、ＬＮｃａｐ細胞株の場合、ＣＡ１０Ｇに比べて本発明のＣＡ１０３が顕著に癌細胞を死滅させることが確認でき（図３３）、Ｃ４２Ｂおよび２２Ｒｖ１細胞株の場合であっても、本発明のＣＡ１０３が著しく癌細胞を死滅させることが確認された（図３４）。

実施例１０．二重標的ｓｈＲＮＡコードするアデノウイルスのｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効果の確定
１０－１．ＣＡ１０２の抗癌効果の確認
１０－１－１．ｉｎ ｖｉｖｏ癌細胞に対する抗癌効果
本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０２の体内癌細胞に対する抗癌効果を確認するために、１００ｍｍ^３プレートに１．０×１０^７個の膀胱癌細胞株２５３Ｊ－ＢＶおよび頭頸部癌細胞株ＦａＤｕをそれぞれ培養した後、本発明の組換えアデノウイルスＣＡ１０及びＣＡ１０２をそれぞれ２ＭＯＩおよび５ＭＯＩで１時間処理し（対照群はＰＢＳ処理）、新しい培地と交換し、２時間培養した。その後、細胞を回収し、マトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）と１：１（ｖ／ｖ）の割合で混合し、６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃのｎｕ－ｎｕマウスに移植（Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ）した後、３２日間観察した。その結果、２５３Ｊ－ＢＶの場合、ＣＡ１０Ｇを２ＭＯＩ処理した群において癌細胞の大きさが有意に減少し、ＣＡ１０２を２ＭＯＩ処理した群からは癌細胞が終息したことが示された（図３５）。また、ＦａＤｕの場合、ＣＡ１０Ｇを５ＭＯＩ処理した群の癌細胞の大きさは対照群に比べて大きな差が示されなかったが、ＣＡ１０２を５ＭＯＩ処理した群からは癌細胞が終息したことが示された（図３６）。

１０－１－２．ｉｎ ｖｉｖｏで形成された腫瘍に対する抗癌の効果
Ｂａｌｂ／ｃのｎｕ－ｎｕ６週齢雄マウスに５．０×１０^６個の膀胱癌細胞株２５３Ｊ－ＢＶを移植した後、週に２回ずつ大きさを観察し、腫瘍の大きさが平均して１５０～２００ｍｍ^３になった時、各腫瘍の大きさの平均値を一定に各群に分け、３日間毎日１回ずつ合計３回、２．０×１０^８ ＰＦＵのＣＡ１０Ｇ及びＣＡ１０２ウイルスをそれぞれ腫瘍に注入（Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）した。その後、腫瘍の大きさを週に２回ずつ４３日間観察した。その結果、ＣＡ１０Ｇを投与した場合には対照群に比べて腫瘍の大きさが減少したが、時間が経過するにつれて癌細胞の成長率が再び増加することが示されたの対し、ＣＡ１０２を投与した場合には対照群およびＣＡ１０Ｇに比べて腫瘍の大きさが有意に減少し、時間が経過しても癌細胞の成長が有意に阻害されることが確認された（図３７）。

１０－１－３．投与回数によるｉｎ ｖｉｖｏで形成された腫瘍に対する抗癌効果
Ｂａｌｂ／ｃのｎｕ－ｎｕ６週齢雄マウスに５．０×１０^６の膀胱癌細胞株２５３Ｊ－ＢＶを移植した後、週に２回ずつ大きさを観察し、腫瘍の大きさが平均して２００ｍｍ^３になったとき、各腫瘍の大きさの平均値を一定に各群に分け、３日間毎日１回ずつ合計５回１．０×１０^８ ＰＦＵのＣＡ１０ＧとＣＡ１０２ウイルスをそれぞれ腫瘍に注入（Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）した。その後、腫瘍の大きさを週に２回４２日間観察した。その結果、腫瘍の大きさがＣＡ１０２を投与した回数によって減少し、投与回数によって癌細胞の成長が阻害されることが確認された（図３８）。

１０－１－４．投与量によるｉｎ ｖｉｖｏで形成された腫瘍に対する抗癌効果
Ｂａｌｂ／ｃのｎｕ－ｎｕ６週齢雄マウスに膠芽腫細胞株（Ｕ－８７）を皮下移植した後、腫瘍の大きさを観察した後、腫瘍の大きさが平均して２００ｍｍ^３になったとき、各腫瘍の大きさの平均値を一定に各群に分け、各群別にＣＡ１０２の投与量を変化させ、腫瘍内に直接投与し、腫瘍の体積及び重量を観察した。その結果、ＣＡ１０Ｇ処置群に比べてＣＡ１０２処置群において腫瘍の体積および重量が大幅に減少しており、投与量が増加するにつれて抗癌効果がさらに増加することが確認された（図３９）。

１０－２．ＣＡ１０３の抗癌効果の確認
Ｂａｌｂ／ｃのｎｕ／ｎｕマウスに前立腺癌細胞株（２２Ｒｖ－１）を皮下移植し、前立腺癌マウスモデルを構築した後、前記実施例７にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０ＧおよびＣＡ１０３をそれぞれ腫瘍内に直接投与（２×１０^８ ｐｆｕ／ｓｐｏｔ、３ｔｉｍｅｓ）し、その生長を観察した結果、無処理対照群（ｂｕｆｆｅｒ処理群）及びベクター対照群（ＣＡ１０Ｇ処理群）に比べてＣＡ１０３を処理した群において腫瘍の体積及び重量が大きく減少することが確認された（図４０）。

実施例１１．二重標的ｓｈＲＮＡをコードするアデノウイルスの抗癌剤との併用処理効果の確認
Ｂａｌｂ／ｃのｎｕ／ｎｕマウスに膀胱癌細胞株（２５３Ｊ－ＢＶ）を皮下移植して膀胱癌マウスモデルをそれぞれ構築した後、前記実施例７にて作製した組換えアデノウイルスＣＡ１０ＧおよびＣＡ１０２をそれぞれ腫瘍内に直接投与し、腫瘍の生長を観察した結果、無処理対照群（ｂｕｆｆｅｒ処理群）およびベクター対照群（ＣＡ１０Ｇ処理群）に比べてＣＡ１０２処理群において腫瘍の体積および重量が著しく減少することが示され、抗癌剤であるシスプラチンを併用投与した場合には、抗癌効果が相乗的に増加することが確認された（図４１）。

Claims (31)

1. ヒトテロメラーゼプロモーター（ｈＴＥＲＴ）；及び
   第１の核酸を標的配列とする塩基配列および第２の核酸を標的配列とする塩基配列とを含む発現カセットを含む抗腫瘍アデノウイルスにおいて、
   前記第１の核酸を標的配列とする塩基配列と、第２の核酸を標的配列とする塩基配列は、細胞または組織で発現する場合、部分的に二本鎖をなし、第１の核酸および第２の核酸を標的とするｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡを形成するものである、抗腫瘍アデノウイルス。
2. ヒトテロメラーゼプロモーターは、アデノウイルスの内在性遺伝子と作動可能に連結されたことを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
3. アデノウイルスの内在性遺伝子は、５’ＩＴＲ－Ｃ１－Ｃ２－Ｃ３－Ｃ４－Ｃ５ ３’ＩＴＲの構造を有し、
   前記Ｃ１は、Ｅ１Ａ、Ｅ１ＢまたはＥ１Ａ～Ｅ１Ｂを含み；
   前記Ｃ２は、Ｅ２Ｂ－Ｌ１－Ｌ２－Ｌ３－Ｅ２Ａ－Ｌ４を含み；
   前記Ｃ３は、Ｅ３を含まないか、またはＥ３を含み；
   前記Ｃ４は、Ｌ５を含み；および
   前記Ｃ５は、Ｅ４を含まないか、またはＥ４を含むことを特徴とする、請求項２に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
4. 発現カセットが、アデノウイルスの内在性遺伝子のＣ３部位に位置することを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
5. ｈＴＥＲＴプロモーターが、アデノウイルスの内在性遺伝子のＥ１ＡおよびＥ１Ｂと作動可能に連結されたことを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
6. Ｅ１ＡとＥ１Ｂとの間にＩＲＥＳ配列がさらに含まれたことを特徴とする、請求項５に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
7. 発現カセットが、ｓｈＲＮＡをコードすることを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
8. ｓｈＲＮＡが、同時に第１の核酸および第２の核酸を阻害することを特徴とする、請求項７に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
9. 核酸は、癌関連遺伝子であることを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
10. 前記癌関連遺伝子は、癌において発現が増加する癌遺伝子（ｏｎｃｏｇｅｎｅ）であることを特徴とする、請求項９に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
11. 癌遺伝子は、アポトーシス（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）関連遺伝子、転写因子（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ）遺伝子、転移（Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）関連遺伝子、血管新生（Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）関連遺伝子、またはチロシン－キナーゼ（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ－Ｋｉｎａｓｅ）遺伝子であることを特徴とする、請求項１０に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
12. 前記アポトーシス関連遺伝子は、ＡＢＬ１、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＢＡＲＤ１、ＢＡＸ、ＢＣＬ１１Ｂ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ２Ａ１、ＢＣＬ２Ｌ１、ＢＣＬ２Ｌ１２、ＢＣＬ３、ＢＣＬ６、ＢＩＲＣ２、ＢＩＲＣ３、ＢＩＲＣ５、ＢＲＡＦ、ＣＡＲＤ１１、ＣＡＶ１、ＣＢＬ、ＣＤＣ２５Ａ、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＦＬＡＲ、ＣＮＲ２、ＣＴＮＮＢ１、ＣＵＬ４Ａ、ＤＡＸＸ、ＤＤＩＴ３、Ｅ２Ｆ１、Ｅ２Ｆ３、Ｅ２Ｆ５、ＥＳＰＬ１、ＦＯＸＯ１、ＨＤＡＣ１、ＨＳＰＡ５、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＧＦ２、ＪＵＮ、ＪＵＮＢ、ＪＵＮＤ、ＭＡＬＴ１、ＭＡＰ３Ｋ７、ＭＣＬ１、ＭＤＭ２、ＭＤＭ４、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＮＦＫＢ２、ＮＰＭ１、ＮＴＲＫ１、ＰＡＫ１、ＰＡＸ３、ＰＭＬ、ＰＲＫＣＡ、ＰＲＫＣＥ、ＰＴＫ２Ｂ、ＲＡＦ１、ＲＨＯＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＰ７３、ＴＲＡＦ６、ＹＷＨＡＧ、ＹＷＨＡＱまたはＹＷＨＡＺであることを特徴とする、請求項１１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
13. 転写因子遺伝子は、ＡＲ、ＡＲＩＤ３Ａ、ＡＳＣＬ１、ＡＴＦ１、ＡＴＦ３、ＢＣＬ１１Ａ、ＢＣＬ１１Ｂ、ＢＣＬ３、ＢＣＬ６、ＣＤＣ５Ｌ、ＣＤＸ２、ＣＲＥＢ１、ＣＵＸ１、ＤＤＩＴ３、ＤＬＸ５、Ｅ２Ｆ１、Ｅ２Ｆ３、Ｅ２Ｆ５、ＥＬＦ４、ＥＬＫ１、ＥＬＫ３、ＥＮ２、ＥＲＧ、ＥＴＳ１、ＥＴＳ２、ＥＴＶ１、ＥＴＶ３、ＥＴＶ４、ＥＴＶ６、ＦＥＶ、ＦＥＺＦ１、ＦＬＩ１、ＦＯＳ、ＦＯＳＬ１、ＦＯＸＡ１、ＦＯＸＧ１、ＦＯＸＭ１、ＦＯＸＯ１、ＦＯＸＰ１、ＦＯＸＱ１、ＧＡＴＡ１、ＧＡＴＡ６、ＧＦＩ１、ＧＦＩ１Ｂ、ＧＬＩ１、ＧＬＩ２、ＧＬＩ３、ＨＥＳ６、ＨＨＥＸ、ＨＬＦ、ＨＭＧＡ１、ＨＭＧＡ２、ＨＯＸＡ１、ＨＯＸＡ９、ＨＯＸＤ１３、ＨＯＸＤ９、ＩＤ１、ＩＤ２、ＩＫＺＦ１、ＩＲＦ２、ＩＲＦ４、ＪＵＮ、ＪＵＮＢ、ＪＵＮＤ、ＫＡＴ６Ａ、ＫＤＭ２Ａ、ＫＤＭ５Ｂ、ＫＬＦ２、ＫＬＦ４、ＫＬＦ５、ＫＬＦ６、ＫＬＦ８、ＫＭＴ２Ａ、ＬＥＦ１、ＬＨＸ１、ＬＭＸ１Ｂ、ＭＡＦ、ＭＡＦＡ、ＭＡＦＢ、ＭＢＤ１、ＭＥＣＯＭ、ＭＥＦ２Ｃ、ＭＥＩＳ１、ＭＩＴＦ、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＭＹＣＬ、ＭＹＣＮ、ＮＡＮＯＧ、ＮＣＯＡ３、ＮＦＩＢ、ＮＦＫＢ２、ＮＫＸ２－１、ＯＴＸ２、ＰＡＴＺ１、ＰＡＸ２、ＰＡＸ３、ＰＡＸ４、ＰＡＸ８、ＰＢＸ１、ＰＢＸ２、ＰＩＴＸ２、ＰＬＡＧ１、ＰＬＡＧＬ２、ＰＰＡＲＧ、ＰＰＰ１Ｒ１３Ｌ、ＰＲＤＭ１０、ＰＲＤＭ１３、ＰＲＤＭ１４、ＰＲＤＭ１５、ＰＲＤＭ１６、ＰＲＤＭ６、ＰＲＤＭ８、ＰＲＤＭ９、ＲＡＲＡ、ＲＥＬ、ＲＥＲＥ、ＲＵＮＸ１、ＲＵＮＸ３、ＳＡＬＬ４、ＳＡＴＢ１、ＳＦＰＱ、ＳＩＸ１、ＳＮＡＩ１、ＳＯＸ２、ＳＯＸ４、ＳＰＩ１、ＳＲＥＢＦ１、ＳＴＡＴ３、ＴＡＦ１、ＴＡＬ１、ＴＡＬ２、ＴＢＸ２、ＴＢＸ３、ＴＣＦ３、ＴＦＣＰ２、ＴＦＥ３、ＴＨＲＡ、ＴＬＸ１、ＴＰ６３、ＴＰ７３、ＴＷＩＳＴ１、ＷＴ１、ＹＢＸ１、ＹＹ１、ＺＢＴＢ１６、ＺＢＴＢ７Ａ、ＺＩＣ２、ＺＮＦ２１７またはＺＮＦ２６８であることを特徴とする、請求項１１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
14. 転移関連遺伝子は、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＲ、ＣＢＬ、ＣＤＨ１、ＣＲＫ、ＣＳＦ１、ＣＴＮＮＢ１、ＣＴＴＮ、ＣＸＣＲ４、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ１、ＦＬＴ３、ＦＹＮ、ＧＬＩ１、ＩＬＫ、ＩＴＧＡ３、ＪＡＫ２、ＭＥＴ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＬＸＮＢ１、ＰＲＫＣＩ、ＰＴＣＨ１、ＰＴＰＮ１１、ＲＡＣ１、ＲＨＯＡ、ＲＨＯＣ、ＲＯＣＫ１、ＳＭＯ、ＳＮＡＩ１、ＳＲＣ、ＴＣＦ３またはＷＴ１であることを特徴とする、請求項１１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
15. 血管新生関連遺伝子は、ＢＲＡＦ、ＣＡＶ１、ＣＴＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ２、ＥＴＳ１、ＦＧＦ４、ＦＧＦ６、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＩＤ１、ＮＲＡＳ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢまたはＳＰＡＲＣであることを特徴とする、請求項１１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
16. チロシン－キナーゼ遺伝子は、ＡＢＬ１、ＡＢＬ２、ＡＬＫ、ＡＸＬ、ＢＬＫ、ＥＧＦＲ、ＥＰＨＡ２、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＦＥＳ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＲ、ＦＬＴ３、ＦＹＮ、ＩＴＫ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＫＩＴ、ＬＣＫ、ＭＥＲＴＫ、ＭＥＴ、ＭＳＴ１Ｒ、ＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ３、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＴＫ２Ｂ、ＰＴＫ７、ＲＥＴ、ＲＯＳ１、ＳＲＣ、ＳＹＫ、ＴＥＣまたはＹＥＳ１であることを特徴とする、請求項１１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
17. 癌遺伝子は、ＳＥＰＴＩＮ９、ＡＣＯＤ１、ＡＣＴＮ４、ＡＤＡＭ２８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＲＢＫ２、ＡＦＦ１、ＡＦＦ３、ＡＧＡＰ２、ＡＧＦＧ１、ＡＧＲＮ、ＡＨＣＹＬ１、ＡＨＩ１、ＡＩＭＰ２、ＡＫＡＰ１３、ＡＫＡＰ９、ＡＫＩＲＩＮ２、ＡＫＴＩＰ、ＡＬＤＨ１Ａ１、ＡＬＬ１、ＡＮＩＢ１、ＡＮＰ３２Ｃ、ＡＮＰ３２Ｄ、ＡＱＰ１、ＡＲＡＦ、ＡＲＨＧＥＦ１、ＡＲＨＧＥＦ２、ＡＲＨＧＥＦ５、ＡＳＰＳＣＲ１、ＡＵＲＫＡ、ＢＡＡＬＣ、ＢＡＩＡＰ２Ｌ１、ＢＡＮＰ、ＢＣＡＲ４、ＢＣＫＤＨＢ、ＢＣＬ９、ＢＣＬ９Ｌ、ＢＣＲ、ＢＭＩ１、ＢＭＰ７、ＢＯＣ、ＢＲＤ４、ＢＲＦ２、ＣＡＢＩＮ１、ＣＡＭＫ１Ｄ、ＣＡＰＧ、ＣＢＦＢ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＬ１、ＣＢＸ７、ＣＢＸ８、ＣＣＤＣ２８Ａ、ＣＣＤＣ６、ＣＣＮＢ１、ＣＣＮＢ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＬ１、ＣＤ２４、ＣＤＣ２５Ｃ、ＣＤＣ６、ＣＤＨ１７、ＣＤＫ１、ＣＤＫ１４、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５Ｒ２、ＣＤＫ６、ＣＤＫ８、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＤＫＮ３、ＣＤＯＮ、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＮＰＷ、ＣＨＤ１Ｌ、ＣＨＩＣ１、ＣＨＬ１、ＣＫＳ１Ｂ、ＣＭＣ４、ＣＮＴＮ２、ＣＯＰＳ３、ＣＯＰＳ５、ＣＲＫＬ、ＣＲＬＦ２、ＣＲＯＴ、ＣＲＴＣ１、ＣＲＹＡＢ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ３、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＮＫ２Ａ１、ＣＳＮＫ２Ａ２、ＣＴ４５Ａ１、ＣＴＢＰ２、ＣＴＮＮＤ２、ＣＴＳＺ、ＣＵＬ７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＹＧＢ、ＣＹＰ２４Ａ１、ＤＣＤ、ＤＣＵＮ１Ｄ１ＤＤＢ２、ＤＤＨＤ２、ＤＤＸ６、ＤＥＫ、ＤＩＳ３、ＤＮＰＨ１、ＤＰＰＡ２、ＤＰＰＡ４、ＤＳＧ３、ＤＵＳＰ１２、ＤＵＳＰ２６、ＥＣＨＳ１、ＥＣＴ２、ＥＥＦ１Ａ１、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＥＦ１Ｄ、ＥＩＦ３Ｅ、ＥＩＦ３Ｉ、ＥＩＦ４Ｅ、ＥＩＦ５Ａ２、ＥＬＡＶＬ１、ＥＬＬ、ＥＭＬ４、ＥＭＳＹ、ＥＮＴＰＤ５、ＥＰＣＡＭ、ＥＰＳ８、ＥＲＡＳ、ＥＲＧＩＣ１、ＥＲＶＷ－１、ＥＶＩ２Ａ、ＥＶＩ５、ＥＷＳＲ１、ＥＺＨ２、ＦＡＭ１８９Ｂ、ＦＡＭ７２Ａ、ＦＡＭ８３Ｄ、ＦＡＳＮ、ＦＤＰＳ、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ３、ＦＧＦ５、ＦＧＦ８、ＦＲ１ＯＰ、ＦＨＬ２、ＦＩＰ１Ｌ１、ＦＮＤＣ３Ｂ、ＦＲＡＴ１、ＦＵＢＰ１、ＦＵＳ、ＦＺＤ２、ＧＡＢ２、ＧＡＥＣ１、ＧＡＬＮＴ１０、ＧＡＬＲ２、ＧＬＯ１、ＧＭＮＮ、ＧＮＡ１２、ＧＮＡ１３、ＧＮＡＩ２、ＧＮＡＱ、ＧＮＡＳ、ＧＯＬＰＨ３、ＧＯＰＣ、ＧＰＡＴ４、ＧＰＭ６Ａ、ＧＰＭ６Ｂ、ＧＰＲ１３２、ＧＲＥＭ１、ＧＲＭ１、ＧＳＫ３Ａ、ＧＳＭ１、Ｈ１９、ＨＡＳ１、ＨＡＸ１、ＨＤＧＦＲＰ２、ＨＭＧＮ５、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＯＴＡＩＲ、ＨＯＴＴＩＰ、ＨＯＸＡ－ＡＳ２、ＨＲＡＳ、ＨＳＰＡ１Ａ、ＨＳＰＡ４、ＨＳＰＢ１、ＨＵＬＣ、ＩＤＨ１、ＩＦＮＧ、ＩＧＦ２ＢＰ１、ＩＫＢＫＥ、ＩＬ７Ｒ、ＩＮＰＰＬ１、ＩＮＴＳ１、ＩＮＴＳ２、ＩＮＴＳ３、ＩＮＴＳ４、ＩＮＴＳ５、ＩＮＴＳ７、ＩＮＴＳ８、ＩＲＳ２、ＩＳＴ１、ＪＵＰ、ＫＤＭ４Ｃ、ＫＩＡＡ０１０１、ＫＩＡＡ１５２４、ＫＩＦ１４、ＫＲＡＳ、ＫＳＲ２、ＬＡＭＴＯＲ５、ＬＡＰＴＭ４Ｂ、ＬＣＮ２、ＬＤＨＢ、ＬＥＴＭＤ１、ＬＩＮ２８Ａ、ＬＩＮ２８Ｂ、ＬＭＯ１、ＬＭＯ２、ＬＭＯ３、ＬＭＯ４、ＬＳＭ１、ＬＵＡＤＴ１、ＭＡＣＣ１、ＭＡＣＲＯＤ１、ＭＡＧＥＡ１１、ＭＡＬＡＴ１、ＭＡＭＬ２、ＭＡＰ３Ｋ８、ＭＡＰＲＥ１、ＭＡＳ１、ＭＣＣ、ＭＣＦ２、ＭＣＦ２Ｌ、ＭＣＴＳ１、ＭＥＦＶ、ＭＦＨＡＳ１、ＭＦＮＧ、ＭＩＥＮ１、ＭＩＮＡ、ＭＫＬ２、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬＴ１、ＭＬＬＴ１１、ＭＬＬＴ３、ＭＬＬＴ４、ＭＭＰ１２、ＭＭＳ２２Ｌ、ＭＮ１、ＭＮＡＴ１、ＭＯＳ、ＭＰＬ、ＭＰＳＴ、ＭＲＡＳ、ＭＲＥ１１Ａ、ＭＳＩ１、ＭＴＣＰ１、ＭＴＤＨ、ＭＴＯＲ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ４、ＭＵＭ１、ＭＹＤ８８、ＮＡＡＡ、ＮＡＮＯＧＰ８、ＮＢＰＦ１２、ＮＣＯＡ４、ＮＥＡＴ１、ＮＥＣＴＩＮ４、ＮＥＤＤ４、ＮＥＤＤ９、ＮＥＴ１、ＮＩＮＬ、ＮＭＥ１、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ４、ＮＯＶ、ＮＳＤ１、ＮＵＡＫ２、ＮＵＰ２１４、ＮＵＰ９８、ＮＵＴＭ１、ＯＬＲ１、ＰＡ２Ｇ４、ＰＡＤＩ２、ＰＡＫ７、ＰＡＲＫ７、ＰＡＲＭ１、ＰＢＫ、ＰＣＡＴ１、ＰＣＡＴ５、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＺＫ１ＩＰ１、ＰＥＬＰ１、ＰＦＮ１Ｐ３、ＰＩＧＵ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＩＭ１、ＰＩＭ２、ＰＩＭ３、ＰＩＲ、ＰＩＷＩＬ１、ＰＬＡＣ８、ＰＬＫ１、ＰＰＭ１Ｄ、ＰＰＰ１Ｒ１０、ＰＰＰ１Ｒ１４Ａ、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＭ１２、ＰＲＭＴ５、ＰＳＩＰ１、ＰＳＭＤ１０、ＰＴＣＨ２、ＰＴＭＡ、ＰＴＰ４Ａ１、ＰＴＰ４Ａ２、ＰＴＰ４Ａ３、ＰＴＴＧ１、ＰＴＴＧ１ＩＰ、ＰＴＴＧ２、ＰＶＴ１、ＲＡＢ１１Ａ、ＲＡＢ１８、ＲＡＢ２２Ａ、ＲＡＢ２３、ＲＡＢ８Ａ、ＲＡＬＧＤＳ、ＲＡＰ１Ａ、ＲＡＳＳＦ１、ＲＢＭ１４、ＲＢＭ１５、ＲＢＭ３、ＲＢＭＹ１Ａ１、ＲＦＣ３、ＲＧＬ４、ＲＧＲ、ＲＨＯ、ＲＩＮＧ１、ＲＩＮＴ１、ＲＩＴ１、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２３、ＲＲＡＳ、ＲＲＡＳ２、ＲＳＦ１、ＲＵＮＸ１Ｔ１、Ｓ１００Ａ４、Ｓ１００Ａ７、Ｓ１００Ａ８、ＳＡＧ、ＳＡＲＴ３、ＳＢＳＮ、ＳＥＡ、ＳＥＣ６２、ＳＥＲＴＡＤ１、ＳＥＲＴＡＤ２、ＳＥＲＴＡＤ３、ＳＥＴ、ＳＥＴＢＰ１、ＳＥＴＤＢ１、ＳＧＫ１、ＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ６、ＳＫＩ、ＳＫＩＬ、ＳＫＰ２、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ３Ａ２、ＳＭＲ３Ｂ、ＳＭＵＲＦ１、ＳＮＣＧ、ＳＮＯＲＡ５９Ａ、ＳＮＯＲＡ８０Ｅ、ＳＰＡＧ９、ＳＰＡＴＡ４、ＳＰＲＹ２、ＳＱＳＴＭ１、ＳＲＳＦ１、ＳＲＳＦ２、ＳＲＳＦ３、ＳＲＳＦ６、ＳＳ１８、ＳＳＸ１、ＳＳＸ２、ＳＳＸ２Ｂ、ＳＴＩＬ、ＳＴＭＮ１、ＳＴＲＡ６、ＳＴＹＫ１、ＳＵＺ１２、ＳＷＡＰ７０、ＳＹＴ１、ＴＡＣ１、ＴＡＣＳＴＤ２、ＴＡＦ１５、ＴＡＬＤＯ１、ＴＡＺ、ＴＢＣ１Ｄ１、ＴＢＣ１Ｄ１５、ＴＢＣ１Ｄ３、ＴＢＣ１Ｄ３Ｃ、ＴＢＣ１Ｄ７、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＣＬ６、ＴＣＰ１、ＴＦＧ、ＴＧＭ３、ＴＩＮＣＲ、ＴＫＴＬ１、ＴＬＥ１、ＴＭＥＭ１４０、ＴＭＰＯＰ２、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＮＳ４、ＴＰＤ５２、ＴＰＲ、ＴＲＥ１７、ＴＲＥＨ、ＴＲＩＢ１、ＴＲＩＢ２、ＴＲＩＭ２８、ＴＲＩＭ３２、ＴＲＩＭ８、ＴＲＩＯ、ＴＲＩＰ６、ＴＳＰＡＮ１、ＴＳＰＹ１、ＴＸＮ、ＴＹＭＳ、ＴＹＲＰ１、ＵＢＥ２Ｃ、ＵＢＥ３Ｃ、ＵＣＡ１、ＵＣＨＬ１、ＵＨＲＦ１、ＵＲＩ１、ＵＳＰ２２、ＵＳＰ４、ＵＳＰ６、ＶＡＶ１、ＶＡＶ２、ＶＡＶ３、ＶＩＭ、ＷＡＰＬ、ＷＨＳＣ１、ＷＨＳＣ１Ｌ１、ＷＩＳＰ１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ２、ＷＮＴ３、ＷＮＴ５Ａ、ＷＷＴＲ１、ＸＣＬ１、ＸＩＡＰ、ＹＡＰ１、ＹＥＡＴＳ４、ＹＹ１ＡＰ１、ＺＥＢ１－ＡＳ１、ＺＦＡＮＤ４、ＺＦＡＳ１、ＺＭＹＭ２、ＺＮＦ７０３またはＺＮＨＩＴ６であることを特徴とする、請求項１０に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
18. 前記核酸は、ＡＢＬ１、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＢＡＲＤ１、ＢＡＸ、ＢＣＬ１１Ｂ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ２Ａ１、ＢＣＬ２Ｌ１、ＢＣＬ２Ｌ１２、ＢＣＬ３、ＢＣＬ６、ＢＩＲＣ２、ＢＩＲＣ３、ＢＩＲＣ５、ＢＲＡＦ、ＣＡＲＤ１１、ＣＡＶ１、ＣＢＬ、ＣＤＣ２５Ａ、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＦＬＡＲ、ｃ－ＭＥＴ、ＣＮＲ２、ＣＴＮＮＢ１、ＣＵＬ４Ａ、ＤＡＸＸ、ＤＤＩＴ３、Ｅ２Ｆ１、Ｅ２Ｆ３、Ｅ２Ｆ５、ＥＳＰＬ１、ＦＯＸＯ１、ＨＤＡＣ１、ＨＳＰＡ５、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＧＦ２、ＪＵＮ、ＪＵＮＢ、ＪＵＮＤ、ＭＡＬＴ１、ＭＡＰ３Ｋ７、ＭＣＬ１、ＭＤＭ２、ＭＤＭ４、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＮＦＫＢ２、ＮＰＭ１、ＮＴＲＫ１、ＰＡＫ１、ＰＡＸ３、ＰＭＬ、ＰＲＫＣＡ、ＰＲＫＣＥ、ＰＴＫ２Ｂ、ＲＡＦ１、ＲＨＯＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＰ７３、ＴＲＡＦ６、ＹＷＨＡＧ、ＹＷＨＡＱ、ＹＷＨＡＺ、ＡＲ、ＡＲＩＤ３Ａ、ＡＳＣＬ１、ＡＴＦ１、ＡＴＦ３、ＢＣＬ１１Ａ、ＢＣＬ１１Ｂ、ＢＣＬ３、ＢＣＬ６、ＣＤＣ５Ｌ、ＣＤＸ２、ＣＲＥＢ１、ＣＵＸ１、ＤＤＩＴ３、ＤＬＸ５、Ｅ２Ｆ１、Ｅ２Ｆ３、Ｅ２Ｆ５、ＥＬＦ４、ＥＬＫ１、ＥＬＫ３、ＥＮ２、ＥＲＧ、ＥＴＳ１、ＥＴＳ２、ＥＴＶ１、ＥＴＶ３、ＥＴＶ４、ＥＴＶ６、ＦＥＶ、ＦＥＺＦ１、ＦＬＩ１、ＦＯＳ、ＦＯＳＬ１、ＦＯＸＡ１、ＦＯＸＧ１、ＦＯＸＭ１、ＦＯＸＯ１、ＦＯＸＰ１、ＦＯＸＱ１、ＧＡＴＡ１、ＧＡＴＡ６、ＧＦＩ１、ＧＦＩ１Ｂ、ＧＬＩ１、ＧＬＩ２、ＧＬＩ３、ＨＥＳ６、ＨＨＥＸ、ＨＬＦ、ＨＭＧＡ１、ＨＭＧＡ２、ＨＯＸＡ１、ＨＯＸＡ９、ＨＯＸＤ１３、ＨＯＸＤ９、ＩＤ１、ＩＤ２、ＩＫＺＦ１、ＩＲＦ２、ＩＲＦ４、ＪＵＮ、ＪＵＮＢ、ＪＵＮＤ、ＫＡＴ６Ａ、ＫＤＭ２Ａ、ＫＤＭ５Ｂ、ＫＬＦ２、ＫＬＦ４、ＫＬＦ５、ＫＬＦ６、ＫＬＦ８、ＫＭＴ２Ａ、ＬＥＦ１、ＬＨＸ１、ＬＭＸ１Ｂ、ＭＡＦ、ＭＡＦＡ、ＭＡＦＢ、ＭＢＤ１、ＭＥＣＯＭ、ＭＥＦ２Ｃ、ＭＥＩＳ１、ＭＩＴＦ、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＭＹＣＬ、ＭＹＣＮ、ＮＡＮＯＧ、ＮＣＯＡ３、ＮＦＩＢ、ＮＦＫＢ２、ＮＫＸ２－１、ＯＴＸ２、ＰＡＴＺ１、ＰＡＸ２、ＰＡＸ３、ＰＡＸ４、ＰＡＸ８、ＰＢＸ１、ＰＢＸ２、ＰＤ－Ｌ１、ＰＩＴＸ２、ＰＬＡＧ１、ＰＬＡＧＬ２、ＰＰＡＲＧ、ＰＰＰ１Ｒ１３Ｌ、ＰＲＤＭ１０、ＰＲＤＭ１３、ＰＲＤＭ１４、ＰＲＤＭ１５、ＰＲＤＭ１６、ＰＲＤＭ６、ＰＲＤＭ８、ＰＲＤＭ９、ＲＡＲＡ、ＲＥＬ、ＲＥＲＥ、ＲＵＮＸ１、ＲＵＮＸ３、ＳＡＬＬ４、ＳＡＴＢ１、ＳＦＰＱ、ＳＩＸ１、ＳＮＡＩ１、ＳＯＸ２、ＳＯＸ４、ＳＰＩ１、ＳＲＥＢＦ１、ＳＴＡＴ３、ＴＡＦ１、ＴＡＬ１、ＴＡＬ２、ＴＢＸ２、ＴＢＸ３、ＴＣＦ３、ＴＦＣＰ２、ＴＦＥ３、ＴＨＲＡ、ＴＬＸ１、ＴＰ６３、ＴＰ７３、ＴＷＩＳＴ１、ＷＴ１、ＹＢＸ１、ＹＹ１、ＺＢＴＢ１６、ＺＢＴＢ７Ａ、ＺＩＣ２、ＺＮＦ２１７、ＺＮＦ２６８、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＲ、ＣＢＬ、ＣＤＨ１、ＣＲＫ、ＣＳＦ１、ＣＴＮＮＢ１、ＣＴＴＮ、ＣＸＣＲ４、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ１、ＦＬＴ３、ＦＹＮ、ＧＬＩ１、ＩＬＫ、ＩＴＧＡ３、ＪＡＫ２、ＭＥＴ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＬＸＮＢ１、ＰＲＫＣＩ、ＰＴＣＨ１、ＰＴＰＮ１１、ＲＡＣ１、ＲＨＯＡ、ＲＨＯＣ、ＲＯＣＫ１、ＳＭＯ、ＳＮＡＩ１、ＳＲＣ、ＴＣＦ３、ＷＴ１、ＢＲＡＦ、ＣＡＶ１、ＣＴＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ２、ＥＴＳ１、ＦＧＦ４、ＦＧＦ６、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＩＤ１、ＮＲＡＳ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＳＰＡＲＣ、ＡＢＬ１、ＡＢＬ２、ＡＬＫ、ＡＸＬ、ＢＬＫ、ＥＧＦＲ、ＥＰＨＡ２、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＦＥＳ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＲ、ＦＬＴ３、ＦＹＮ、ＩＴＫ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＫＩＴ、ＬＣＫ、ＭＥＲＴＫ、ＭＥＴ、ＭＳＴ１Ｒ、ＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ３、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＴＫ２Ｂ、ＰＴＫ７、ＲＥＴ、ＲＯＳ１、ＳＲＣ、ＳＹＫ、ＴＥＣ、ＹＥＳ１、ＳＥＰＴＩＮ９、ＡＣＯＤ１、ＡＣＴＮ４、ＡＤＡＭ２８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＲＢＫ２、ＡＦＦ１、ＡＦＦ３、ＡＧＡＰ２、ＡＧＦＧ１、ＡＧＲＮ、ＡＨＣＹＬ１、ＡＨＩ１、ＡＩＭＰ２、ＡＫＡＰ１３、ＡＫＡＰ９、ＡＫＩＲＩＮ２、ＡＫＴＩＰ、ＡＬＤＨ１Ａ１、ＡＬＬ１、ＡＮＩＢ１、ＡＮＰ３２Ｃ、ＡＮＰ３２Ｄ、ＡＱＰ１、ＡＲＡＦ、ＡＲＨＧＥＦ１、ＡＲＨＧＥＦ２、ＡＲＨＧＥＦ５、ＡＳＰＳＣＲ１、ＡＵＲＫＡ、ＢＡＡＬＣ、ＢＡＩＡＰ２Ｌ１、ＢＡＮＰ、ＢＣＡＲ４、ＢＣＫＤＨＢ、ＢＣＬ９、ＢＣＬ９Ｌ、ＢＣＲ、ＢＭＩ１、ＢＭＰ７、ＢＯＣ、ＢＲＤ４、ＢＲＦ２、ＣＡＢＩＮ１、ＣＡＭＫ１Ｄ、ＣＡＰＧ、ＣＢＦＢ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＬ１、ＣＢＸ７、ＣＢＸ８、ＣＣＤＣ２８Ａ、ＣＣＤＣ６、ＣＣＮＢ１、ＣＣＮＢ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＬ１、ＣＤ２４、ＣＤＣ２５Ｃ、ＣＤＣ６、ＣＤＨ１７、ＣＤＫ１、ＣＤＫ１４、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５Ｒ２、ＣＤＫ６、ＣＤＫ８、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＤＫＮ３、ＣＤＯＮ、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＮＰＷ、ＣＨＤ１Ｌ、ＣＨＩＣ１、ＣＨＬ１、ＣＫＳ１Ｂ、ＣＭＣ４、ＣＮＴＮ２、ＣＯＰＳ３、ＣＯＰＳ５、ＣＲＫＬ、ＣＲＬＦ２、ＣＲＯＴ、ＣＲＴＣ１、ＣＲＹＡＢ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ３、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＮＫ２Ａ１、ＣＳＮＫ２Ａ２、ＣＴ４５Ａ１、ＣＴＢＰ２、ＣＴＮＮＤ２、ＣＴＳＺ、ＣＵＬ７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＹＧＢ、ＣＹＰ２４Ａ１、ＤＣＤ、ＤＣＵＮ１Ｄ１ＤＤＢ２、ＤＤＨＤ２、ＤＤＸ６、ＤＥＫ、ＤＩＳ３、ＤＮＰＨ１、ＤＰＰＡ２、ＤＰＰＡ４、ＤＳＧ３、ＤＵＳＰ１２、ＤＵＳＰ２６、ＥＣＨＳ１、ＥＣＴ２、ＥＥＦ１Ａ１、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＥＦ１Ｄ、ＥＩＦ３Ｅ、ＥＩＦ３Ｉ、ＥＩＦ４Ｅ、ＥＩＦ５Ａ２、ＥＬＡＶＬ１、ＥＬＬ、ＥＭＬ４、ＥＭＳＹ、ＥＮＴＰＤ５、ＥＰＣＡＭ、ＥＰＳ８、ＥＲＡＳ、ＥＲＧＩＣ１、ＥＲＶＷ－１、ＥＶＩ２Ａ、ＥＶＩ５、ＥＷＳＲ１、ＥＺＨ２、ＦＡＭ１８９Ｂ、ＦＡＭ７２Ａ、ＦＡＭ８３Ｄ、ＦＡＳＮ、ＦＤＰＳ、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ３、ＦＧＦ５、ＦＧＦ８、ＦＲ１ＯＰ、ＦＨＬ２、ＦＩＰ１Ｌ１、ＦＮＤＣ３Ｂ、ＦＲＡＴ１、ＦＵＢＰ１、ＦＵＳ、ＦＺＤ２、ＧＡＢ２、ＧＡＥＣ１、ＧＡＬＮＴ１０、ＧＡＬＲ２、ＧＬＯ１、ＧＭＮＮ、ＧＮＡ１２、ＧＮＡ１３、ＧＮＡＩ２、ＧＮＡＱ、ＧＮＡＳ、ＧＯＬＰＨ３、ＧＯＰＣ、ＧＰＡＴ４、ＧＰＭ６Ａ、ＧＰＭ６Ｂ、ＧＰＲ１３２、ＧＲＥＭ１、ＧＲＭ１、ＧＳＫ３Ａ、ＧＳＭ１、Ｈ１９、ＨＡＳ１、ＨＡＸ１、ＨＤＧＦＲＰ２、ＨＭＧＮ５、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＯＴＡＩＲ、ＨＯＴＴＩＰ、ＨＯＸＡ－ＡＳ２、ＨＲＡＳ、ＨＳＰＡ１Ａ、ＨＳＰＡ４、ＨＳＰＢ１、ＨＵＬＣ、ＩＤＨ１、ＩＦＮＧ、ＩＧＦ２ＢＰ１、ＩＫＢＫＥ、ＩＬ７Ｒ、ＩＮＰＰＬ１、ＩＮＴＳ１、ＩＮＴＳ２、ＩＮＴＳ３、ＩＮＴＳ４、ＩＮＴＳ５、ＩＮＴＳ７、ＩＮＴＳ８、ＩＲＳ２、ＩＳＴ１、ＪＵＰ、ＫＤＭ４Ｃ、ＫＩＡＡ０１０１、ＫＩＡＡ１５２４、ＫＩＦ１４、ＫＲＡＳ、ＫＳＲ２、ＬＡＭＴＯＲ５、ＬＡＰＴＭ４Ｂ、ＬＣＮ２、ＬＤＨＢ、ＬＥＴＭＤ１、ＬＩＮ２８Ａ、ＬＩＮ２８Ｂ、ＬＭＯ１、ＬＭＯ２、ＬＭＯ３、ＬＭＯ４、ＬＳＭ１、ＬＵＡＤＴ１、ＭＡＣＣ１、ＭＡＣＲＯＤ１、ＭＡＧＥＡ１１、ＭＡＬＡＴ１、ＭＡＭＬ２、ＭＡＰ３Ｋ８、ＭＡＰＲＥ１、ＭＡＳ１、ＭＣＣ、ＭＣＦ２、ＭＣＦ２Ｌ、ＭＣＴＳ１、ＭＥＦＶ、ＭＦＨＡＳ１、ＭＦＮＧ、ＭＩＥＮ１、ＭＩＮＡ、ＭＫＬ２、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬＴ１、ＭＬＬＴ１１、ＭＬＬＴ３、ＭＬＬＴ４、ＭＭＰ１２、ＭＭＳ２２Ｌ、ＭＮ１、ＭＮＡＴ１、ＭＯＳ、ＭＰＬ、ＭＰＳＴ、ＭＲＡＳ、ＭＲＥ１１Ａ、ＭＳＩ１、ＭＴＣＰ１、ＭＴＤＨ、ＭＴＯＲ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ４、ＭＵＭ１、ＭＹＤ８８、ＮＡＡＡ、ＮＡＮＯＧＰ８、ＮＢＰＦ１２、ＮＣＯＡ４、ＮＥＡＴ１、ＮＥＣＴＩＮ４、ＮＥＤＤ４、ＮＥＤＤ９、ＮＥＴ１、ＮＩＮＬ、ＮＭＥ１、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ４、ＮＯＶ、ＮＳＤ１、ＮＵＡＫ２、ＮＵＰ２１４、ＮＵＰ９８、ＮＵＴＭ１、ＯＬＲ１、ＰＡ２Ｇ４、ＰＡＤＩ２、ＰＡＫ７、ＰＡＲＫ７、ＰＡＲＭ１、ＰＢＫ、ＰＣＡＴ１、ＰＣＡＴ５、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＺＫ１ＩＰ１、ＰＥＬＰ１、ＰＦＮ１Ｐ３、ＰＩＧＵ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＩＭ１、ＰＩＭ２、ＰＩＭ３、ＰＩＲ、ＰＩＷＩＬ１、ＰＬＡＣ８、ＰＬＫ１、ＰＰＭ１Ｄ、ＰＰＰ１Ｒ１０、ＰＰＰ１Ｒ１４Ａ、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＭ１２、ＰＲＭＴ５、ＰＳＩＰ１、ＰＳＭＤ１０、ＰＴＣＨ２、ＰＴＭＡ、ＰＴＰ４Ａ１、ＰＴＰ４Ａ２、ＰＴＰ４Ａ３、ＰＴＴＧ１、ＰＴＴＧ１ＩＰ、ＰＴＴＧ２、ＰＶＴ１、ＲＡＢ１１Ａ、ＲＡＢ１８、ＲＡＢ２２Ａ、ＲＡＢ２３、ＲＡＢ８Ａ、ＲＡＬＧＤＳ、ＲＡＰ１Ａ、ＲＡＳＳＦ１、ＲＢＭ１４、ＲＢＭ１５、ＲＢＭ３、ＲＢＭＹ１Ａ１、ＲＦＣ３、ＲＧＬ４、ＲＧＲ、ＲＨＯ、ＲＩＮＧ１、ＲＩＮＴ１、ＲＩＴ１、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２３、ＲＲＡＳ、ＲＲＡＳ２、ＲＳＦ１、ＲＵＮＸ１Ｔ１、Ｓ１００Ａ４、Ｓ１００Ａ７、Ｓ１００Ａ８、ＳＡＧ、ＳＡＲＴ３、ＳＢＳＮ、ＳＥＡ、ＳＥＣ６２、ＳＥＲＴＡＤ１、ＳＥＲＴＡＤ２、ＳＥＲＴＡＤ３、ＳＥＴ、ＳＥＴＢＰ１、ＳＥＴＤＢ１、ＳＧＫ１、ＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ６、ＳＫＩ、ＳＫＩＬ、ＳＫＰ２、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ３Ａ２、ＳＭＲ３Ｂ、ＳＭＵＲＦ１、ＳＮＣＧ、ＳＮＯＲＡ５９Ａ、ＳＮＯＲＡ８０Ｅ、ＳＰＡＧ９、ＳＰＡＴＡ４、ＳＰＲＹ２、ＳＱＳＴＭ１、ＳＲＳＦ１、ＳＲＳＦ２、ＳＲＳＦ３、ＳＲＳＦ６、ＳＳ１８、ＳＳＸ１、ＳＳＸ２、ＳＳＸ２Ｂ、ＳＴＩＬ、ＳＴＭＮ１、ＳＴＲＡ６、ＳＴＹＫ１、ＳＵＺ１２、ＳＷＡＰ７０、ＳＹＴ１、ＴＡＣ１、ＴＡＣＳＴＤ２、ＴＡＦ１５、ＴＡＬＤＯ１、ＴＡＺ、ＴＢＣ１Ｄ１、ＴＢＣ１Ｄ１５、ＴＢＣ１Ｄ３、ＴＢＣ１Ｄ３Ｃ、ＴＢＣ１Ｄ７、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＣＬ６、ＴＣＰ１、ＴＦＧ、ＴＧＭ３、ＴＩＮＣＲ、ＴＫＴＬ１、ＴＬＥ１、ＴＭＥＭ１４０、ＴＭＰＯＰ２、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＮＳ４、ＴＰＤ５２、ＴＰＲ、ＴＲＥ１７、ＴＲＥＨ、ＴＲＩＢ１、ＴＲＩＢ２、ＴＲＩＭ２８、ＴＲＩＭ３２、ＴＲＩＭ８、ＴＲＩＯ、ＴＲＩＰ６、ＴＳＰＡＮ１、ＴＳＰＹ１、ＴＸＮ、ＴＹＭＳ、ＴＹＲＰ１、ＵＢＥ２Ｃ、ＵＢＥ３Ｃ、ＵＣＡ１、ＵＣＨＬ１、ＵＨＲＦ１、ＵＲＩ１、ＵＳＰ２２、ＵＳＰ４、ＵＳＰ６、ＶＡＶ１、ＶＡＶ２、ＶＡＶ３、ＶＩＭ、ＷＡＰＬ、ＷＨＳＣ１、ＷＨＳＣ１Ｌ１、ＷＩＳＰ１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ２、ＷＮＴ３、ＷＮＴ５Ａ、ＷＷＴＲ１、ＸＣＬ１、ＸＩＡＰ、ＹＡＰ１、ＹＥＡＴＳ４、ＹＹ１ＡＰ１、ＺＥＢ１－ＡＳ１、ＺＦＡＮＤ４、ＺＦＡＳ１、ＺＭＹＭ２、ＺＮＦ７０３またはＺＮＨＩＴ６であることを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
19. 第１の核酸および第２の核酸は、互いに異なることを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
20. 第１の核酸が、第２の核酸の逆相補的配列と６０％以上の相補性を有する塩基配列を含むことを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
21. 第２の核酸が、第１の核酸に対する逆相補的配列と６０％以上の相補性を有する塩基配列を含むことを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
22. 発現カセットが、第１の核酸を標的配列とする塩基配列、ヘアピン構造を形成することができるループ配列、および第２の核酸を標的配列とする塩基配列を順次コードする塩基配列を含むことを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
23. 発現カセットが、Ｕ６プロモーターによって発現が制御されることを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
24. アデノウイルスは、グループＣのアデノウイルスであることを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
25. 血清型が５型であることを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
26. 抗腫瘍ウイルスが、野生型アデノウイルスに比べて腫瘍殺傷能が高いことを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
27. 抗腫瘍ウイルスが、野生型アデノウイルスにｈＴＥＲＴプロモーターが導入されたアデノウイルスに比べて腫瘍殺傷能が高いことを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルス。
28. 請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルスを含むことを特徴とする、癌治療用組成物。
29. さらに抗癌剤を含むことを特徴とする、請求項２８に記載の癌治療用組成物。
30. 請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルスの腫瘍予防または治療用途。
31. 請求項１に記載の抗腫瘍アデノウイルスを用いた腫瘍の治療方法。

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