JP2023517660A - シグレック３／ｃｄ３３に結合させるための材料及び方法 - Google Patents

シグレック３／ｃｄ３３に結合させるための材料及び方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2023517660A
JP2023517660A JP2022554748A JP2022554748A JP2023517660A JP 2023517660 A JP2023517660 A JP 2023517660A JP 2022554748 A JP2022554748 A JP 2022554748A JP 2022554748 A JP2022554748 A JP 2022554748A JP 2023517660 A JP2023517660 A JP 2023517660A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
hcdr3
hcdr2
hcdr1
nos
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2022554748A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2021181366A5 (ja
Inventor
ドゥーナン，パトリック，ジョン
ガネサン，ラージクマール
デレベ，メハバウ，ゲタフン
ヴェンカタラマニ，サチャデヴィ
シンハ，サンジャヤ
エス． グレワル，イクバール
アール フィーハウゼン，カーラ
Original Assignee
ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド filed Critical ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド
Publication of JP2023517660A publication Critical patent/JP2023517660A/ja
Publication of JPWO2021181366A5 publication Critical patent/JPWO2021181366A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/464412—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464424—CD20
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
    • A61K51/1096—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies radioimmunotoxins, i.e. conjugates being structurally as defined in A61K51/1093, and including a radioactive nucleus for use in radiotherapeutic applications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2815—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Seal Device For Vehicle (AREA)
  • Package Frames And Binding Bands (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本発明は、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３タンパク質に結合する抗原結合ドメイン、それらをコードするポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、それらを作製及び使用する方法を提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年３月１３日出願の米国仮特許出願第６２／９８９０９３号明細書、２０２０年３月１３日出願の米国仮特許出願第６２／９８９０７１号明細書、２０２０年３月１３日出願の米国仮特許出願第６２／９８９１２０号明細書、２０２０年３月１３日出願の米国仮特許出願第６２／９８９１８７号明細書及び２０２０年３月１３日出願の米国仮特許出願第６２／９８９２３０号明細書の優先権を主張する。
本発明は、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３タンパク質に結合する抗原結合ドメイン、それらをコードするポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、それらを作製及び使用する方法を提供する。
シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン３（シグレック－３）としても知られる骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３は、タンパク質のシアル酸結合ファミリーのメンバーである。ＣＤ３３は、その細胞外ドメイン（ＥＣＤ）及び細胞内免疫受容体チロシンベース阻害剤モチーフ（ＩＴＩＭ）モチーフにおいてＮ末端シアル酸結合ドメインを有するＩ型一回膜貫通タンパク質である（Ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）［４］。
正常な細胞において、ＣＤ３３は、免疫細胞の維持及び細胞－細胞相互作用に関与する［５］。ＣＤ３３タンパク質は、少なくとも骨髄、肺、皮膚、虫垂、脾臓、リンパ節及び扁桃腺で発現される。ＣＤ３３ｍＲＮＡの発現は、骨髄、脳、眼、肺、内分泌組織、唾液腺、食道、胃、結腸、直腸、肝臓、胆嚢、膵臓、腎臓、膀胱、男性及び女性生殖器組織、前立腺、乳房、心臓、平滑筋、骨格筋、脂肪組織、皮膚、胸腺、虫垂、脾臓、リンパ節、扁桃腺、顆粒球及び血液（例えば、ＰＢＭＣ、樹状細胞及びリンパ球）を含むが、限定されない多岐にわたる組織及び臓器で見出されている。例えば、ｗｗｗ．ｐｒｏｔｅｉｎａｔｌａｓ．ｏｒｇ／ＥＮＳＧ０００００１０５３８３－ＣＤ３３／ｔｉｓｓｕｅを参照されたい。
ＣＤ３３は、ＡＭＬ患者の９０％で発現され［６］、ＡＭＬ免疫療法に対して最も広く調べられている表面抗原の１つである。抗体－薬物／抗体－毒素複合体、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びＴ細胞リダイレクト二特異性抗体を含めて、ＣＤ３３を標的とするためのいくつかのアプローチが調べられている［７］。治療及び診断目的のためのさらなるＣＤ３３結合ドメインが必要とされている。
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、急速な発症及び進行を特徴とする、骨髄細胞系列の白血病のタイプである［１］。ＡＭＬは、不均一な疾患であり、分子変化が広く変動しており、それに併せて臨床転帰が様々である。さらに、ＡＭＬは、ＡＭＬ芽細胞又は白血病細胞の自己再生し、継続的に増殖し、免疫系を回避する能力を特徴とし、その結果、少数クローンからの疾患再発が起こる［２］。従って、ＡＭＬは、歴史的に、長期生存率が最低であるものの１つであると考えられており、成人ＡＭＬの全５年生存率は、約２７％である。生存率は、年齢と強く逆相関している［３］。歴史的に、主要なＡＭＬ治療ストラテジーは、幹細胞移植とともに化学療法を含む。しかし、近年、重要な表面抗原を探索して、ＡＭＬに対する免疫療法を開発するために積極的な努力がなされてきた。ＡＭＬ細胞で高発現される表面抗原の１つは、ＣＤ３３である。
一態様では、本開示は、ＣＤ３３に結合する単離タンパク質を提供し、この単離タンパク質は、
ａ）配列番号１８の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号２３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号２４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号２５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号２６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｊ）配列番号２７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
又はそれらのＣＤ３３結合断片
を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、
ａ）それぞれ配列番号１、６及び１２；
ｂ）それぞれ配列番号２、７及び１３；
ｃ）それぞれ配列番号１、８及び１４；
ｄ）それぞれ配列番号３、９及び１３；
ｅ）それぞれ配列番号４、１０及び１５；
ｆ）それぞれ配列番号５、１１及び１６；又は
ｇ）それぞれ配列番号５、１１及び１７
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ＶＨＨである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、Ｆａｂである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む。
別の態様では、本開示は、ＣＤ３３に結合する単離タンパク質を提供し、この単離タンパク質は、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨＨを含む。
別の態様では、本開示は、ＣＤ３３に結合する単離タンパク質を提供し、この単離タンパク質は、
ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｋ）配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｌ）配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６及び４５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８及び４７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９及び４８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１及び５０；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２及び５１；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４及び５１；
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２及び５１、
ｋ）それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９；
ｌ）それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０；又は
ｍ）それぞれ配列番号２５５、２５８及び２６１
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む。
別の態様では、本開示は、ＣＤ３３に結合する単離タンパク質を提供し、この単離タンパク質は、
ａ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
ｂ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
ｃ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
ｄ）それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９；
ｅ）それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０；又は
ｆ）それぞれ配列番号２５５、２５８及び２６１
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、
ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８１の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８４のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｋ）配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｌ）配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３
を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｋ）それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９；
ｌ）それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６；又は
ｍ）それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、Ｆａｂである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ＶＨＨである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端で、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３、２６４、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２又は３８２のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２、２７３、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７又は３９８のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ；
ｎ）配列番号２９１のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｏ）配列番号２９２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｐ）配列番号２９３のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｑ）配列番号２９４のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｒ）配列番号２９５のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｓ）配列番号２９６のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｔ）配列番号２９７のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｕ）配列番号２９８のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｖ）配列番号２９９のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｗ）配列番号３００のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｘ）配列番号３０１のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｙ）配列番号３０２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｚ）配列番号３０３のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａａ）配列番号３０４のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｂ）配列番号３０５のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｃ）配列番号３０６のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｄ）配列番号３０７のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｅ）配列番号３０８のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｆ）配列番号３０９のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｇ）配列番号３１０のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｈ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１１のＶＬ；
ａｉ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１２のＶＬ；
ａｊ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１３のＶＬ；
ａｋ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１４のＶＬ；
ａｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１５のＶＬ；
ａｍ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１６のＶＬ；
ａｎ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１７のＶＬ；
ａｏ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１８のＶＬ；
ａｐ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１９のＶＬ；
ａｑ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２０のＶＬ；
ａｒ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２１のＶＬ；
ａｓ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２２のＶＬ；
ａｔ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２３のＶＬ；
ａｕ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２４のＶＬ；
ａｖ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２５のＶＬ；
ａｗ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２６のＶＬ；
ａｘ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２７のＶＬ；
ａｙ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２８のＶＬ；
ａｚ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２９のＶＬ；
ｂａ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３０のＶＬ；
ｂｂ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３１のＶＬ；
ｂｃ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３２のＶＬ；
ｂｄ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３３のＶＬ；
ｂｅ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３４のＶＬ；
ｂｆ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３５のＶＬ；
ｂｇ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３６のＶＬ；
ｂｈ）配列番号３３７のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｉ）配列番号３３８のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｊ）配列番号３３９のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｋ）配列番号３４０のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｌ）配列番号３４１のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｍ）配列番号３４２のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｎ）配列番号３４３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｏ）配列番号３４４のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｐ）配列番号３４５のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｑ）配列番号３４６のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｒ）配列番号３４７のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｓ）配列番号３４８のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｔ）配列番号３４９のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｕ）配列番号３５０のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｖ）配列番号３５１のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｗ）配列番号３５２のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｘ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５３のＶＬ；
ｂｙ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５４のＶＬ；
ｂｚ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５５のＶＬ；
ｃａ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５６のＶＬ；
ｃｂ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５７のＶＬ；
ｃｃ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５８のＶＬ；
ｃｄ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５９のＶＬ；
ｃｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６０のＶＬ；
ｃｆ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６１のＶＬ；
ｃｇ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６２のＶＬ；
ｃｈ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６３のＶＬ；
ｃｉ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６４のＶＬ；
ｃｊ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６５のＶＬ；
ｃｋ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６６のＶＬ；
ｃｌ）配列番号３６７のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｍ）配列番号３６８のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｎ）配列番号３６９のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｏ）配列番号３７０のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｐ）配列番号３７１のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｑ）配列番号３７２のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｒ）配列番号３７３のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｓ）配列番号３７４のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｔ）配列番号３７５のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｕ）配列番号３７６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｖ）配列番号３７７のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｗ）配列番号３７８のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｘ）配列番号３７９のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｙ）配列番号３８０のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｚ）配列番号３８１のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｄａ）配列番号３８２のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｄｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８３のＶＬ；
ｄｃ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８４のＶＬ；
ｄｄ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８５のＶＬ；
ｄｅ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８６のＶＬ；
ｄｆ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８７のＶＬ；
ｄｇ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８８のＶＬ；
ｄｈ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８９のＶＬ；
ｄｅ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９０のＶＬ；
ｄｆ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９１のＶＬ；
ｄｇ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９２のＶＬ；
ｄｈ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９３のＶＬ；
ｄｉ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９４のＶＬ；
ｄｊ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９５のＶＬ；
ｄｋ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９６のＶＬ；
ｄｌ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９７のＶＬ；又は
ｄｍ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９８のＶＬ
を含む。
別の態様では、本開示は、ＣＤ３３に結合する単離タンパク質を提供し、この単離タンパク質は、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ；
ｎ）配列番号２９１のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｏ）配列番号２９２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｐ）配列番号２９３のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｑ）配列番号２９４のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｒ）配列番号２９５のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｓ）配列番号２９６のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｔ）配列番号２９７のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｕ）配列番号２９８のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｖ）配列番号２９９のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｗ）配列番号３００のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｘ）配列番号３０１のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｙ）配列番号３０２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｚ）配列番号３０３のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａａ）配列番号３０４のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｂ）配列番号３０５のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｃ）配列番号３０６のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｄ）配列番号３０７のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｅ）配列番号３０８のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｆ）配列番号３０９のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｇ）配列番号３１０のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａｈ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１１のＶＬ；
ａｉ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１２のＶＬ；
ａｊ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１３のＶＬ；
ａｋ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１４のＶＬ；
ａｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１５のＶＬ；
ａｍ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１６のＶＬ；
ａｎ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１７のＶＬ；
ａｏ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１８のＶＬ；
ａｐ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１９のＶＬ；
ａｑ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２０のＶＬ；
ａｒ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２１のＶＬ；
ａｓ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２２のＶＬ；
ａｔ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２３のＶＬ；
ａｕ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２４のＶＬ；
ａｖ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２５のＶＬ；
ａｗ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２６のＶＬ；
ａｘ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２７のＶＬ；
ａｙ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２８のＶＬ；
ａｚ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２９のＶＬ；
ｂａ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３０のＶＬ；
ｂｂ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３１のＶＬ；
ｂｃ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３２のＶＬ；
ｂｄ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３３のＶＬ；
ｂｅ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３４のＶＬ；
ｂｆ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３５のＶＬ；
ｂｇ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３６のＶＬ；
ｂｈ）配列番号３３７のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｉ）配列番号３３８のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｊ）配列番号３３９のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｋ）配列番号３４０のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｌ）配列番号３４１のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｍ）配列番号３４２のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｎ）配列番号３４３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｏ）配列番号３４４のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｐ）配列番号３４５のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｑ）配列番号３４６のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｒ）配列番号３４７のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｓ）配列番号３４８のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｔ）配列番号３４９のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｕ）配列番号３５０のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｖ）配列番号３５１のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｗ）配列番号３５２のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｘ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５３のＶＬ；
ｂｙ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５４のＶＬ；
ｂｚ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５５のＶＬ；
ｃａ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５６のＶＬ；
ｃｂ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５７のＶＬ；
ｃｃ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５８のＶＬ；
ｃｄ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５９のＶＬ；
ｃｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６０のＶＬ；
ｃｆ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６１のＶＬ；
ｃｇ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６２のＶＬ；
ｃｈ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６３のＶＬ；
ｃｉ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６４のＶＬ；
ｃｊ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６５のＶＬ；
ｃｋ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６６のＶＬ；
ｃｌ）配列番号３６７のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｍ）配列番号３６８のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｎ）配列番号３６９のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｏ）配列番号３７０のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｐ）配列番号３７１のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｑ）配列番号３７２のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｒ）配列番号３７３のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｓ）配列番号３７４のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｔ）配列番号３７５のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｕ）配列番号３７６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｖ）配列番号３７７のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｗ）配列番号３７８のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｘ）配列番号３７９のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｙ）配列番号３８０のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｚ）配列番号３８１のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｄａ）配列番号３８２のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｄｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８３のＶＬ；
ｄｃ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８４のＶＬ；
ｄｄ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８５のＶＬ；
ｄｅ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８６のＶＬ；
ｄｆ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８７のＶＬ；
ｄｇ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８８のＶＬ；
ｄｈ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８９のＶＬ；
ｄｅ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９０のＶＬ；
ｄｆ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９１のＶＬ；
ｄｇ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９２のＶＬ；
ｄｈ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９３のＶＬ；
ｄｉ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９４のＶＬ；
ｄｊ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９５のＶＬ；
ｄｋ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９６のＶＬ；
ｄｌ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９７のＶＬ；又は
ｄｍ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９８のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、Ｆａｂである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ＶＨＨである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、配列番号２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２７４、２７５又は２７６の何れか１つのアミノ酸配列を含む。特に、配列番号２１３、２１６、２１９、２７４、２７５又は２７６のアミノ酸配列である。
別の態様では、本開示は、骨髄ＣＤ３３に結合する単離タンパク質を提供し、この単離タンパク質は、
ａ）配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｉ）配列番号１９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、
ａ）それぞれ配列番号８９、９０及び９２；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０及び９３；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１及び９４、
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８及び１６９；
ｅ）それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４；
ｆ）それぞれ配列番号１７６、１７７及び１７８；
ｇ）それぞれ配列番号８９、９０及び１８０；又は
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０及び９３
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
別の態様では、本開示は、請求項３２又は３３に記載の単離タンパク質を提供し、この単離タンパク質は、
ａ）配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０５の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｆ）配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｇ）配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２００のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２０２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３
を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、
ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、Ｆａｂである。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ＶＨＨである。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む。
別の態様では、本開示は、ＣＤ３３に結合する単離タンパク質を提供し、単離タンパク質は、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、Ｆａｂである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ＶＨＨである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。
本開示は、上記の何れかの単離タンパク質を提供し、このタンパク質は、半減期延長部分に複合化される。いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、Ｉｇの断片、Ｉｇ定常領域、Ｉｇ定常領域の断片、Ｆｃ領域、トランスフェリン、アルブミン、アルブミン結合ドメイン又はポリエチレングリコールである。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、単一特異性タンパク質である。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、多特異性タンパク質である。いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、二特異性タンパク質である。いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、三特異性タンパク質である。いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又はそのＩｇ定常領域の断片をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＮ末端に複合化される。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＣ末端に複合化される。いくつかの実施形態では、単離タンパク質は、第２のリンカー（Ｌ２）を介してＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片に複合化される。いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、リンパ球上の抗原に結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、リンパ球は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、ＴＲＧＶ９又はＮＫＧ２Ｃに結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号１４１の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４２のＨＣＤＲ２、配列番号１４３のＨＣＤＲ３、配列番号１４４の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１４５のＬＣＤＲ２及び配列番号１４６のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１４７のＶＨ及び配列番号１４８のＶＬ；
ｃ）配列番号１４９のＨＣＤＲ１、配列番号１５０のＨＣＤＲ２、配列番号１５１のＨＣＤＲ３、配列番号１５２のＬＣＤＲ１、配列番号１５３のＬＣＤＲ２及び配列番号１５４のＬＣＤＲ３；又は
ｄ）配列番号１５５のＶＨ及び配列番号１５６のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２３８のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４２のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４３のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４４のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２４５のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｆ）配列番号２４６のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｇ）配列番号２４７のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
ｈ）配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプである。いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）への本タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲへの本タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＦｃγＲへの本タンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲへの本タンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ又はそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片のＩｇ定常領域は、本タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異を含む。いくつかの実施形態では、本タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、本タンパク質は、Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおいて少なくとも１つの突然変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。
本開示は、上記の何れかの単離タンパク質を提供し、このタンパク質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、
ａ）上記の単離タンパク質の何れかを含む細胞外ドメイン；
ｂ）膜貫通ドメイン；及び
ｃ）任意選択的に少なくとも１つの同時刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、
ａ）膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含み；及び
ｂ）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分を含む同時刺激ドメインと、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分を含む一次シグナル伝達ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、
ａ）ＣＤ８ａヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；
ｂ）膜貫通ドメインは、配列番号１６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；及び／又は
ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する同時刺激ドメインと、配列番号１６４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）構成成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー構成成分又はそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド構成成分を含む。
別の態様では、本開示は、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインと、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む単離された多特異性タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、Ｔ細胞抗原である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞抗原は、ＣＤ８＋Ｔ細胞抗原である。いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＮＫ細胞抗原である。いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、ＴＲＧＶ９又はＮＫＧ２Ｃである。特定の実施形態では、リンパ球抗原は、ＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１、２、３、４又は５の何れか１つのＨＣＤＲ１、配列番号６、７、８、９、１０又は１１の何れか１つのＨＣＤＲ２及び配列番号１２、１３、１４、１５、１６又は１７の何れか１つのＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号１、６及び１２；
ｂ）それぞれ配列番号２、７及び１３；
ｃ）それぞれ配列番号１、８及び１４；
ｄ）それぞれ配列番号３、９及び１３；
ｅ）それぞれ配列番号４、１０及び１５；
ｆ）それぞれ配列番号５、１１及び１６；又は
ｇ）それぞれ配列番号５、１１及び１７
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５のＨＣＤＲ１、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３又は４４のＨＣＤＲ２、配列番号４５、４６、４７、４８、４９、５０又は５１のＨＣＤＲ３、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７又は６８のＬＣＤＲ１、配列番号６９、７０、７１、７２、７３又は７４のＬＣＤＲ２及び配列番号７５、７６、７７、７８、７９又は８０のＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｋ）それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９；
ｌ）それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６；又は
ｍ）それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３のＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３３、８９、１６７、１７２又は１７６のＨＣＤＲ１、配列番号９０、９１、１６８、１７３又は１７７のＨＣＤＲ２、配列番号９２、９３、９４、１６９、１７４、１７８又は１８０のＨＣＤＲ３、配列番号９８、９９、１００、１８２、１８６、１８９、１９３、１９７又は２０１のＬＣＤＲ１、配列番号１０１、１０２、１０３、１８３、１８７、１９０、１９４又は１９８のＬＣＤＲ２及び配列番号１０４、１８４、１９１、１９５又は１９９のＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；又は
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号１４１のＨＣＤＲ１、配列番号１４２のＨＣＤＲ２、配列番号１４３のＨＣＤＲ３、配列番号１４４のＬＣＤＲ１、配列番号１４５のＬＣＤＲ２及び配列番号１４６のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１４７のＶＨ及び配列番号１４８のＶＬ；
ｃ）配列番号１４９のＨＣＤＲ１、配列番号１５０のＨＣＤＲ２、配列番号１５１のＨＣＤＲ３、配列番号１５２のＬＣＤＲ１、配列番号１５３のＬＣＤＲ２及び配列番号１５４のＬＣＤＲ３；又は
ｄ）配列番号１５５のＶＨ及び配列番号１５６のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２３８のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４２のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４３のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４４のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２４５のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｆ）配列番号２４６のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｇ）配列番号２４７のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
ｈ）配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片に複合化され、及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、第２の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片に複合化される。特定の実施形態では、多特異性タンパク質は、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインと、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片との間及びリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと、第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片との間に第２のリンカー（Ｌ２）をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプである。いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）への本多特異性タンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲへの本多特異性タンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ又はそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、本多特異性タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異を含む。いくつかの実施形態では、本多特異性タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、単離された多特異性タンパク質は、第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異を含む。いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、以下の突然変異を含む：
ａ）第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ及び第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ；又は
ｂ）第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ及び第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ。
本開示は、治療剤又は造影剤に複合化される上記単離タンパク質の何れかを含む免疫複合体を提供する。本開示は、上記単離タンパク質の何れかと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。本開示は、上記単離タンパク質の何れかをコードするポリヌクレオチドを提供する。本開示は、上記単離タンパク質の何れかをコードするポリヌクレオチドを含むベクターも提供する。本開示は、上記単離タンパク質の何れかをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む宿主細胞も提供する。
別の態様では、本開示は、上記単離タンパク質の何れかを産生する方法を提供し、この方法は、このタンパク質が発現される条件で宿主細胞を培養することと、宿主細胞によって産生されるタンパク質を回収することとを含む。別の態様では、本開示は、治療剤又は造影剤に複合化される上記単離された多特異性タンパク質の何れかを含む免疫複合体を提供する。
別の態様では、本開示は、上記単離された多特異性タンパク質の何れかを産生する方法を提供し、この方法は、この多特異性タンパク質が発現される条件で上記何れかの宿主細胞を培養することと、宿主細胞によって産生される多特異性タンパク質を回収することとを含む。
別の態様では、本開示は、対象においてＣＤ３３を発現する癌を処置する方法を提供し、この方法は、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の上記単離タンパク質の何れか、上記単離された多特異性タンパク質の何れか、上記免疫複合体の何れか又は上記医薬組成物の何れかを投与することを含む。
別の態様では、本開示は、対象においてＣＤ３３発現細胞の量を減少させる方法を提供し、この方法は、ＣＤ３３発現細胞の量を減少させるために十分な時間にわたり、対象に上記単離タンパク質の何れか、上記単離された多特異性タンパク質の何れか、上記免疫複合体の何れか又は上記医薬組成物の何れかを投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現細胞は、癌性細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現細胞は、癌性細胞ではない。
別の態様では、本開示は、対象においてＣＤ３３発現癌の確立を予防する方法を提供し、この方法は、対象においてＣＤ３３発現癌の確立を予防するために、上記単離タンパク質の何れか、上記単離された多特異性タンパク質の何れか、上記免疫複合体の何れか又は上記医薬組成物の何れかを対象に投与することを含む。
別の態様では、本開示は、ＣＤ３３発現癌を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置する方法を提供し、この方法は、非癌性状態を処置するために、上記単離タンパク質の何れか、上記単離された多特異性タンパク質の何れか、上記免疫複合体の何れか又は上記医薬組成物の何れかを対象に投与することを含む。
上記３つの態様のいくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、血液癌である。いくつかの実施形態では、血液癌は、白血病、リンパ腫又は多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である。いくつかの実施形態では、単離タンパク質又は単離された多特異性タンパク質は、第２の治療剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、手術、化学療法若しくは放射線又はそれらの任意の組み合わせである。本開示は、対象において血液癌の存在を検出する方法も提供し、この方法は、血液癌を有することが疑われる対象に上記免疫複合体の何れかを投与し、免疫複合体が結合される生物学的構造を可視化し、それにより血液癌の存在を検出することを含む。
本開示は、上記単離タンパク質の何れか、上記単離された多特異性タンパク質の何れか、上記免疫複合体の何れか又は上記医薬組成物の何れかを含むキットも提供する。
本開示は、上記単離タンパク質の何れかに結合する抗イディオタイプ抗体も提供する。
本開示は、
ａ）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン；
ｂ）膜貫通ドメイン；及び
ｃ）任意選択的に少なくとも１つの同時刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供する。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域をさらに含む。
ａ）いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含み；及び
ｂ）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分を含む同時刺激ドメインと、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分を含む一次シグナル伝達ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、
ａ）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；
ｂ）膜貫通ドメインは、配列番号１６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；及び／又は
ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する同時刺激ドメインと、配列番号１６４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１、２、３、４又は５の何れか１つのＨＣＤＲ１、配列番号６、７、８、９、１０又は１１の何れか１つのＨＣＤＲ２及び配列番号１２、１３、１４、１５、１６又は１７の何れか１つのＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号１、６及び１２；
ｂ）それぞれ配列番号２、７及び１３；
ｃ）それぞれ配列番号１、８及び１４；
ｄ）それぞれ配列番号３、９及び１３；
ｅ）それぞれ配列番号４、１０及び１５；
ｆ）それぞれ配列番号５、１１及び１６；又は
ｇ）それぞれ配列番号５、１１及び１７
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、２５３、２５４又は２５５のＨＣＤＲ１、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、２５６、２５７又は２５８のＨＣＤＲ２、配列番号４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、２５９、２６０又は２６１のＨＣＤＲ３、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、２６５又は２６６のＬＣＤＲ１、配列番号６９、７０、７１、７２、７３、７４、２６７又は２６８のＬＣＤＲ２及び配列番号７５、７６、７７、７８、７９、８０、２６９又は２７０のＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｋ）それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９；
ｌ）それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６；又は
ｍ）それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２、２７３のＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ、
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号３３、８９、１６７、１７２又は１７６のＨＣＤＲ１、配列番号９０、９１、１６８、１７３又は１７７のＨＣＤＲ２、配列番号９２、９３、９４、１６９、１７４、１７８又は１８０のＨＣＤＲ３、配列番号９８、９９、１００、１８２、１８６、１８９、１９３、１９７又は２０１のＬＣＤＲ１、配列番号１０１、１０２、１０３、１８３、１８７、１９０、１９４又は１９８のＬＣＤＲ２及び配列番号１０４、１８４、１９１、１９５又は１９９のＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；又は
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ＶＨＨである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＬとＶＨとの間に第１のリンカー（Ｌ１）を含む。
特定の実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲの細胞外ドメインは、シグナルポリペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）構成成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー構成成分及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド構成成分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７構成成分は、配列番号１６３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ｚ構成成分は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドは、配列番号１６２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、多特異性タンパク質である。いくつかの実施形態では、本多特異性タンパク質は、二特異性タンパク質である。いくつかの実施形態では、本多特異性タンパク質は、三特異性タンパク質である。いくつかの実施形態では、本多特異性タンパク質は、リンパ球上の抗原に結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、リンパ球は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。いくつかの実施形態では、本多特異性タンパク質は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、ＴＲＧＶ９又はＮＫＧ２Ｃに結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本多特異性タンパク質は、ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号１４１の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４２のＨＣＤＲ２、配列番号１４３のＨＣＤＲ３、配列番号１４４の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１４５のＬＣＤＲ２及び配列番号１４６のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１４７のＶＨ及び配列番号１４８のＶＬ；
ｃ）配列番号１４９のＨＣＤＲ１、配列番号１５０のＨＣＤＲ２、配列番号１５１のＨＣＤＲ３、配列番号１５２のＬＣＤＲ１、配列番号１５３のＬＣＤＲ２及び配列番号１５４のＬＣＤＲ３；又は
ｄ）配列番号１５５のＶＨ及び配列番号１５６のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２３８のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４２のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４３のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４４のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２４５のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｆ）配列番号２４６のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｇ）配列番号２４７のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
ｈ）配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ
を含む。
別の態様では、本開示は、上記のＣＡＲの何れかを発現する単離されたリンパ球を提供する。いくつかの実施形態では、リンパ球は、Ｔリンパ球である。いくつかの実施形態では、リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。別の態様では、本開示は、上記ＣＡＲの何れかをコードする単離ポリヌクレオチドを提供する。本開示は、上記ＣＡＲの何れかをコードする単離ポリヌクレオチドを含むベクターも提供する。本開示は、単離されたポリヌクレオチド又はベクターを含む宿主細胞を提供する。本開示は、上記リンパ球の何れかと、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物も提供する。
別の態様では、本開示は、ＣＤ３３発現癌を有する対象を処置する方法を提供し、この方法は、それを必要とする対象に治療的有効量の上記リンパ球の何れかを投与することを含み、それにより、リンパ球は、対象においてＣＤ３３発現癌の死滅を媒介する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、血液癌である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、白血病、リンパ腫又は多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である。
別の態様では、癌細胞の標的化された死滅の方法が提供され、この方法は、癌細胞を上記リンパ球の何れかと接触させることを含み、それにより、リンパ球は、癌細胞の標的化された死滅を誘導する。いくつかの実施形態では、癌細胞は、血液癌である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、白血病、リンパ腫又は多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である。
別の態様では、対象において癌の存在を検出する方法が提供され、この方法は、
ａ）対象から得られた細胞試料を上記ＣＡＲの何れかと接触させ、それによりＣＡＲ－細胞複合体を形成することと、
ｂ）ＣＡＲ－細胞複合体を検出することであって、ＣＡＲ－細胞複合体の検出は、対象における癌の存在を示す、検出することと
を含む。
いくつかの実施形態では、癌細胞は、血液癌である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、白血病、リンパ腫又は多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である。
別の態様では、放射活性剤に複合化される上記単離タンパク質の何れかを含む免疫複合体が提供される。いくつかの実施形態では、放射活性剤は、放射性金属イオンを含む。いくつかの実施形態では、放射性金属イオンは、３２Ｐ、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、７７Ａｓ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１３１Ｉ、１５３Ｓｍ、１５９Ｇｄ、１６５Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、２５５Ｆｍ、２２７Ｔｈ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ又は１１１Ｉｎである。特定の実施形態では、放射性金属イオンは、２２５Ａｃ、１１１Ｉｎ又は８９Ｚｒである。特定の実施形態では、放射性金属イオンは、２２５Ａｃである。いくつかの実施形態では、免疫複合体の放射性金属イオンは、キレート部分に複合化される。いくつかの実施形態では、キレート部分は、式（Ｉ）：
Figure 2023517660000001
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のそれぞれは、独立に、ＣＨＱＣＯ２Ｘであり、
Ｑは、独立に、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は（Ｃ１～Ｃ２アルキル）フェニルであり、及び
Ｘは、独立に、水素、ベンジル、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；及び
Ｚは、（ＣＨ２）ｎＹであり、
ｎは、１～１０であり、及び
Ｙは、第２のクリック反応パートナーに共有結合される求電子部分又は求核部分であり；
代わりに、Ｚは、水素であり；及び
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のそれぞれは、独立に、ＣＨＱＣＯ２Ｘであり、
Ｑは、独立に、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は（Ｃ１～Ｃ２アルキル）フェニルであり、及び
Ｘは、独立に、水素、ベンジル、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は第２のクリック反応パートナーに共有結合される求電子部分若しくは求核部分である）
の構造を有する大環状分子を含み；
代わりに、キレート剤は、開鎖リガンドを含む。
いくつかの実施形態では、キレート部分は、式（ＩＩ）：
Figure 2023517660000002
の構造又は式（ＩＩＩ）
Figure 2023517660000003
の構造を有する大環状分子を含む。
本開示は、式（ＩＶ）
Figure 2023517660000004
（式中、タンパク質は、上記の単離タンパク質の何れかである）
の免疫複合体も提供する。
本開示は、式（Ｖ）
Figure 2023517660000005
（式中、タンパク質は、上記単離タンパク質の何れかである）
の免疫複合体も提供する。
本開示は、対象においてＣＤ３３発現癌を処置するための手段を含む医薬組成物を提供する。
本開示は、対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させるための手段を含む医薬組成物を提供する。
本開示は、対象においてＣＤ３３発現癌の確立を予防するための手段を含む医薬組成物を提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現癌を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置するための手段を含む医薬組成物を提供する。
本開示は、対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法を提供し、この方法は、対象においてＣＤ３３発現癌細胞に治療剤を標的化するための手段を対象に投与することを含む。
本開示は、対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させる方法を提供し、この方法は、対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の１つ以上に治療剤を標的化するための手段を対象に投与することを含む。
本開示は、対象においてＣＤ３３発現癌の確立を予防するための手段を含む医薬組成物を提供し、この方法は、対象においてＣＤ３３発現細胞に治療剤を標的化するための手段を対象に投与することを含む。
本開示は、ＣＤ３３発現癌を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置するための手段を含む医薬組成物を提供し、この方法は、対象においてＣＤ３３発現細胞に治療剤を標的化するための手段を対象に投与することを含む。
本特許出願ファイルは、色彩を付して作成された少なくとも１つの図面を含む。カラー図面を伴う本特許出願の写しは、請求及び必要な手数料の納付により、特許庁により提供されるであろう。
ｈｕＣＤ３３抗原（ＦＬ ＥＣＤ及びＩｇＣ２ドメイン）に対する抗ＣＤ３３ｖＨＨ相互作用の代表的なＢＩＡｃｏｒｅ ８Ｋセンソグラムを示す。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） 図２Ａ及び２Ｂは、標的細胞株に対するＣＤ３３抗体の結合を示す。グラフは、４℃での抗ヒトＣＤ３３抗体の非線形回帰プロファイルを示す。中央値蛍光強度（ＭＦＩ）対抗体のｌｏｇ濃度をプロットする。４℃でこの抗体の連続希釈物とともに細胞を温置することによって結合を行い、続いてＰＥ結合ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体で検出した。各細胞株に対する上位ヒットは、赤色で示され、リンツズマブ結合は、青色の曲線で示される。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） 標的細胞株への異なるＣＤ３３抗体の時間及び温度依存性の結合を示す。グラフは、３７℃及び４℃での抗ヒトＣＤ３３抗体の結合の非線形回帰プロファイルを示す。中央値蛍光強度（ＭＦＩ）対抗体のｌｏｇ濃度をプロットする。３７℃及び４℃で直接複合化抗体の連続希釈物とともに細胞を温置することによって結合を実施した。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） 図４Ａ～４Ｄは、高発現、中程度発現及び低発現標的細胞株におけるＣＤ３３抗体の内部移行を示す。９６時間にわたりプロテインＡ－ＭＭＡＦと一緒にＣＤ３３抗体の連続希釈物とともに細胞を培養した。９６時間後、ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ試薬を細胞に添加し、細胞生存能を測定した。プロテインＡ－ＭＭＡＦのみが入ったウェルを１００％生存可能とみなした。発現細胞株なしとしてＨＤＬＭ－２細胞を使用した。細胞生存能の低下は、抗体の内部移行を示す。グラフは、抗体のｌｏｇ濃度に対する細胞生存能に対する非線形回帰分析を示す。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） ＣＤ３３抗体内部移行の動態を示す。ＣＤ３３抗体をｐＨＡｂ色素で標識し、３７℃で指定の時間にわたり１００ｎＭの濃度で細胞とともに温置し、その後、細胞を洗浄し、フローサイトメーター上で捕捉した。グラフは、指定される時間点でのＭＦＩ値を示す。 （上記の通り。） （上記の通り。） 標的細胞株上でのＣＤ３３発現を示す。Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄからの抗ヒトＣＤ３３抗体を使用して、高、中及び低ＣＤ３３発現細胞株を同定した。抗体（オレンジ色のヒストグラム）又はマウスＩｇＧアイソタイプ対照（青色のヒストグラム）でＭＯＬＭ－１３、Ｋａｓｕｍｉ－１、ＯＣＩ－ＡＭＬ－３及びＨＤＬＭ２細胞を染色し、各細胞株に対するアイソタイプに対する倍率変化を計算した。 （上記の通り。） （上記の通り。） ｐＨＡｂ色素との抱合反応後の抗体の完全性及びＤＡＲ値を示す。ｐＨＡｂ色素で抗体を標識し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上で分析した。２８０及び５３０ｎｍでのＯＤを測定し、２８０ｎｍでの色素吸収に対して補正することにより、薬物対抗体比（ＤＡＲ）を計算した。 （上記の通り。） 図８Ａ及び８Ｂは、ｐＨＡｂが介在する抗体内部移行の動態決定の特異性を示す。図８Ａにおいて、ｐＨＡｂ色素でＣＤ３３抗体を標識し、指定の時間点にわたり４℃において１００ｎＭの濃度でＫａｓｕｍｉ－１又はＯＣＩ－ＡＭＬ－３細胞とともに温置し、その後、細胞を洗浄し、フローサイトメーター上で捕捉した。グラフは、指定される時間点でのＭＦＩ値を示す。４Ｃでは、内部移行は、観察されなかった。図８Ｂにおいて、３７℃でＨＤＬＭ－２細胞とも抗体を温置した。ＭＦＩの上昇は、観察されなかった。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） 高（ＭＯＬＭ－１３）、中（Ｋａｓｕｍｉ－１）及び低（ＯＣＩ－ＡＭＬ－３）細胞株に対するＣＤ３３抗体の結合ＥＣ５０値のまとめを示す。本抗体の連続希釈物を用いて４℃で結合を遂行した。 様々な標的細胞株におけるＣＤ３３抗体内部移行のまとめを示す。ＭＯＬＭ－１３及びＯＣＩ－ＡＭＬ－３に対してＥＣ５０値を示す。Ｋａｓｕｍｉ－１に対する、１００ｎＭ濃度での％生存能。 ＣＤ３３＋である癌細胞にγδＴ細胞を動員するため及び癌細胞死を誘導するための、抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ３３二特異性抗体の結合を示す概略図を示す。 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（非還元）ゲルによるＶＧ４二特異性抗体の完全性のアッセイの結果を示す。 腫瘍細胞株のパネルに対する抗ＣＤ３３抗体（クローンＣ３３Ｂ９０４）の結合のアッセイの結果がＦＡＣＳによって測定されたことを示す。ＭＯＬＭ－１３（高い受容体密度）に対するＥＣ５０は、１３４．３ｎＭであった。 腫瘍細胞株のパネルに対する抗ＣＤ３３抗体（クローンＣ３３Ｂ９０４）の結合のアッセイの結果がＦＡＣＳによって測定されたことを示す。Ｋａｓｕｍｉ－１（中程度の密度）に対するＥＣ５０は、８２．２ｎＭであった。 腫瘍細胞株のパネルに対する抗ＣＤ３３抗体（クローンＣ３３Ｂ９０４）の結合のアッセイの結果がＦＡＣＳによって測定されたことを示す。ＯＣＩ－ＡＭＬ－３（低い表面密度）に対するＥＣ５０は、１６．４ｎＭであった。 抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ３３二特異性抗体がインビトロでＣＤ３３発現Ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対するγδＴ細胞の細胞傷害性に介在することを示す実験の結果を示す。この実験において、１２日間にわたりゾレドロン酸＋ＩＬ－２＋ＩＬ－１５で培養されたＰＢＭＣから単離された濃縮γδＴ細胞（エフェクター）をＣＦＳＥ標識されたＫａｓｕｍｉ－３細胞（標的）と１：１のＥ：Ｔ比で様々な濃度の二特異性抗体の存在下において２４時間にわたり同時培養した。用量反応曲線は、ＣＤ３３発現ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対する、１：１ Ｅ：Ｔ比での用量依存的な、抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ３３及び抗ＴＲＧＶ９／抗ＮＵＬＬ二特異性抗体が介在するγδＴ細胞の細胞傷害性を示す。ここで与えられる細胞傷害性値から、二特異性抗体非存在下で観察された基底細胞傷害性値を差し引いた。方法に記載されるようにＥＣ５０値を計算した。ここで示される代表的なデータは、単一の実験からのものである。 抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ３３二特異性抗体がインビトロでＣＤ３３発現Ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対するγδＴ細胞の細胞傷害性に介在することを示す実験の結果を示す。この実験において、１２日間にわたりゾレドロン酸＋ＩＬ－２＋ＩＬ－１５で培養されたＰＢＭＣから単離された濃縮γδＴ細胞（エフェクター）をＣＦＳＥ標識されたＫａｓｕｍｉ－３細胞（標的）と５：１のＥ：Ｔ比で様々な濃度の二特異性抗体の存在下において２４時間にわたり同時培養した。用量反応曲線は、ＣＤ３３発現ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対する、５：１ Ｅ：Ｔ比での用量依存的な、抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ３３及び抗ＴＲＧＶ９／抗ＮＵＬＬ二特異性抗体が介在するγδＴ細胞の細胞傷害性を示す。ここで与えられる細胞傷害性値から、二特異性抗体非存在下で観察された基底細胞傷害性値を差し引いた。方法に記載されるようにＥＣ５０値を計算した。ここで示される代表的なデータは、単一の実験からのものである。 抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ３３二特異性抗体が、インビトロでＣＤ３３発現Ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対するγδＴ細胞の細胞傷害性に介在することを示す実験の結果を示す。１２日間にわたりゾレドロン酸＋ＩＬ－２＋ＩＬ－１５で培養した健康なドナー由来のＰＢＭＣ（エフェクター）を１：１のＥ：Ｔ比でＣＦＳＥ標識したＫａｓｕｍｉ－３細胞（標的）とともに様々な濃度の二特異性抗体の存在下で２４時間にわたり同時培養した。 潜在的な翻訳後修飾（ＰＴＭ）リスクのインシリコ分析を示す。いくつかの潜在的なＰＴＭリスクモチーフ（ＤＧ、ＮＧ、ＤＰ）を強調する。 Ｃ３３Ｂ１４７５（配列番号２７４）に基づくＮＮＫライブラリから作製されたｓｃＦｖの熱安定性を評価するためのアッセイの結果を示す。熱安定性を評価するために各変異体においてＥＬＩＳＡを行った。Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）上清を５５Ｃ、６０Ｃ、６５Ｃで熱処理し、同じクローンの未処理室温に対して発光シグナルを正規化した。 Ｃ３３Ｂ１５１６（配列番号２７５）に基づくＮＮＫライブラリから作製されたｓｃＦｖの熱安定性を評価するためのアッセイの結果を示す。熱安定性を評価するために各変異体においてＥＬＩＳＡを行った。Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）上清を５５Ｃ、６０Ｃ、６５Ｃで熱処理し、同じクローンの未処理の室温に対して発光シグナルを正規化した。 Ｃ３３Ｂ１５１７（配列番号２１６）に基づくＮＮＫライブラリから作製されたｓｃＦｖの熱安定性を評価するためのアッセイの結果を示す。熱安定性を評価するために各変異体においてＥＬＩＳＡを行った。Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）上清を５５Ｃ、６０Ｃ、６５Ｃで熱処理し、同じクローンの未処理室温に対して発光シグナルを正規化した。 Ｃ３３Ｂ１５２２（配列番号２１３）に基づくＮＮＫライブラリから作製されたｓｃＦｖの熱安定性を評価するためのアッセイの結果を示す。熱安定性を評価するために各変異体においてＥＬＩＳＡを行った。Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）上清を５５Ｃ、６０Ｃ、６５Ｃで熱処理し、同じクローンの未処理室温に対して発光シグナルを正規化した。 ＮＮＫライブラリのライブラリスクリーニング中に同定された変異体ＶＨ及びＶＬ配列を列挙する表である。 （上記の通り。）
本開示の方法は、本開示の一部を形成する、添付の図面に関連して解釈される以下の詳細な説明を参照することによってより容易に理解され得る。開示される方法が、本明細書中に記載され及び／又は示された特定の方法に限定されないこと、及び本明細書中で使用される用語は、単に例として特定の実施形態を記載する目的のものであり、特許請求の範囲に記載の方法を限定するものではないことが理解されるべきである。
本明細書で引用されている全ての特許、公開済みの特許出願及び刊行物は、本明細書に完全に記載されているかのように、参照により組み込まれる。
リストが提示されている場合、別段の記載がない限り、そのリストの個々の各要素、及びそのリストの全ての組み合わせが、別々の実施形態であることが理解されることになる。例えば、「Ａ、Ｂ又はＣ」として示される実施形態のリストは、実施形態「Ａ」、「Ｂ」、「Ｃ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ又はＣ」、「Ｂ又はＣ」又は「Ａ、Ｂ又はＣ」を含むものとして解釈されることになる。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その」は、文脈上、明らかにそうではないことが示されていない限り、複数の指示対象を含む。従って、例えば「細胞」に対する言及は、２つ以上の細胞の組み合わせなどを含む。
接続句「含む」、「から本質的になる」及び「からなる」は、特許用語においてそれらの一般的に受け入れられる意味を含むことが意図され；即ち、（ｉ）「包含する」、「含有する」又は「特徴とする」と同義である「含む」は、包括的又はオープンエンドであり、追加の列挙されていない要素又は方法段階を排除せず；（ｉｉ）「からなる」は、特許請求の範囲において特定されていない任意の要素、段階又は成分を排除し；（ｉｉｉ）「から本質的になる」は、特許請求される本発明の特定された材料又は段階「及び基本的な及び新規の特徴に実質的に影響を及ぼさないもの」に特許請求の範囲を限定する。語句「含む」（又はその均等物）という用語において記載される実施形態は、実施形態として、「からなる」及び「から本質的になる」という用語において独立して記載されるものも提供する。
「約」は、当業者により決定される場合、特定の値に対する許容可能なエラーの範囲内を意味し、これは値がどのように測定又は決定されるか、即ち測定系の限界、に一部依存する。特定のアッセイ、結果又は実施形態に関連して本明細書中の実施例又は他の部分内で別段明らかに述べられない限り、「約」は、当技術分野における実践を通して１標準偏差内又は最大５％の範囲のより大きい方を意味する。
「活性化」又は「刺激」又は「活性化される」又は「刺激される」は、活性化マーカーの発現、サイトカイン産生、増殖又は標的細胞の細胞傷害性の媒介を生じさせる細胞の生物学的状態における変化の誘導を指す。細胞は、一次刺激シグナルにより活性化され得る。同時刺激シグナルは、一次シグナルの大きさを増幅し、一次刺激後の細胞死を抑制し得、その結果、活性化状態がより耐久性になり、従って細胞傷害能がより高くなる。「同時刺激シグナル」は、ＴＣＲ／ＣＤ３連結など、一次シグナルと組み合わせて、Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞増殖及び／又はキー分子の上方制御又は下方制御につながるシグナルを指す。
「代替的な骨格」は、高い立体構造耐性の可変ドメインと関連する構造化されたコアを含有する単鎖タンパク質フレームワークを指す。可変ドメインは、骨格の完全性を損なわずに導入しようとする変動を許容し、故に可変ドメインが特異的な抗原への結合のために改変され、選択され得る。
「抗体依存性細胞傷害性」、「抗体依存性細胞介在性細胞傷害性」又は「ＡＤＣＣ」は、エフェクター細胞上で発現されるＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）を介した、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、単球、マクロファージ及び好中球などの溶解活性を保持するエフェクター細胞との、抗体に被覆された標的細胞の相互作用に依存する細胞死を誘導する機序を指す。
「抗体依存性細胞食作用」又は「ＡＤＣＰ」は、マクロファージ又は樹状細胞などの貪食細胞による内部移行による、抗体に被覆された標的細胞の排除の機序を指す。
「抗原」は、免疫反応に介在可能である抗原結合ドメイン又はＴ細胞受容体が結合可能な何れかの分子（例えばタンパク質、ペプチド、多糖類、糖タンパク質、糖脂質、核酸、それらの一部又はそれらの組み合わせ）を指す。代表的な免疫反応としては、抗体産生及びＴ細胞、Ｂ細胞又はＮＫ細胞などの免疫細胞の活性化が挙げられる。抗原は、遺伝子により発現されるか、合成されるか、又は他の生体構成成分、生物、タンパク質／抗原のサブユニット、死んだ若しくは不活性化された全細胞又は溶解液を伴う、組織試料、腫瘍試料、細胞又は体液などの生体試料から精製され得る。
「抗原結合断片」又は「抗原結合ドメイン」は、抗原に結合するタンパク質の一部を指す。抗原結合断片は、合成、酵素的に入手可能又は遺伝子操作されたポリペプチドであり得、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ及びＦｖ断片など、抗原に結合する免疫グロブリンの部分を含み、ドメイン抗体（ｄＡｂ）は、１つのＶＨドメイン又は１つのＶＬドメイン、サメ可変ＩｇＮＡＲドメイン、ラクダ化ＶＨドメイン、ＶＨＨドメイン、抗体のＣＤＲを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位、例えばＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４部分など、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／又はＨＣＤＲ３及びＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３、抗原に結合する代替的な骨格及び抗原結合断片を含む多特異性タンパク質からなる。合成リンカーを介して抗原結合断片（ＶＨ及びＶＬなど）を一緒に連結して、様々なタイプの単一抗体設計を形成し得、ここで、ＶＨ／ＶＬドメインは、分子内又は別々の１本鎖によりＶＨ及びＶＬドメインが発現される場合には分子間で対合して、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はダイアボディなど、一価抗原結合ドメインを形成し得る。抗原結合断片は、二特異性及び多特異性タンパク質を操作するために、単一特異性又は多特異性であり得る、他の抗体、タンパク質、抗原結合断片又は代替的な骨格にも複合化され得る。
「抗体」は、広義の意味を有し、マウス、ヒト、ヒト化及びキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体を含む免疫グロブリン分子、抗原結合断片、多特異性抗体、例えば二特異性、三特異性、四特異性など、二量体、四量体又は多量体抗体、単鎖抗体、ドメイン抗体及び、必要とされる特異性の抗原結合部位を含む免疫グロブリン分子の何らかの他の修飾された立体配置を含む。「全長抗体」は、ジスルフィド結合により鎖間連結される２本の重鎖（ＨＣ）及び２本の軽鎖（ＬＣ）並びにその多量体から構成される（例えばＩｇＭ）。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域から構成される（ドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３から構成される）。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分類され得る。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲセグメントから構成され、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へ配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインアミノ酸配列に依存して、５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４にさらに細分類される。何れの脊椎動物種の抗体軽鎖も、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、２つの明確に異なるタイプ、即ち、カッパ（κ）及びラムダ（λ）の一方に割り当てられ得る。
「二特異性」は、２つの個別の抗原又は同じ抗原内の２つの個別のエピトープと特異的に結合する分子（抗体など）を指す。二特異性分子は、他の関連抗原と、例えば他の種、例えばヒト若しくはサル、例えばマカカ・シノモルグス（Ｍａｃａｃａ ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）（カニクイザル、ｃｙｎｏ）若しくはパン・トログロディテス（Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）由来の同じ抗原（相同体）と交差反応性を有し得るか、又は２つ以上の個別の抗原の間で共通するエピトープに結合し得る。
「癌」は、身体における異常細胞の無制御増殖を特徴とする様々な疾患の広い群を指す。無制御細胞分裂及び増殖の結果、隣接組織に侵入し、リンパ系又は血流を通して身体の遠隔部分にも転移し得る悪性腫瘍が形成される。「癌」又は「癌組織」は腫瘍を含み得る。
「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）は、本明細書中で使用される場合、全て天然では単一タンパク質上で一緒には見られない組み合わせで、細胞外標的結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞表面受容体として定義される。これは、細胞外ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインが単一受容体タンパク質上で天然では一緒に見られない受容体を含む。ＣＡＲは、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球との使用のために主に意図される。
「補体依存性細胞傷害性」又は「ＣＤＣ」は、標的結合タンパク質のＦｃエフェクタードメインが補体構成成分Ｃ１ｑに結合し、活性化し、これが順に標的細胞死につながる補体カスケードを活性化する、細胞死を誘導する機序を指す。補体の活性化の結果、また、白血球上での補体受容体（例えばＣＲ３）に結合することによりＣＤＣを促進する標的細胞表面上での補体構成成分の沈着も起こり得る。
「相補性決定領域」（ＣＤＲ）は、抗原に結合する抗体領域である。ＶＨにおいて３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）があり、ＶＬにおいて３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）がある。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．（１９７０）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １３２：２１１－５０；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－１７）、ＩＭＧＴ（Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：５５－７７）、ＡｂＭ（Ｍａｒｔｉｎ ａｎｄ Ｔｈｏｒｎｔｏｎ Ｊ Ｂｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６３：８００－１５，１９９６）及び利用可能な複合結晶構造の解析に基づくＣｏｎｔａｃｔ（ＭａｃＣａｌｌｕｍ，Ｒ．Ｍ．，Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．Ｃ．Ｒ．ａｎｄ Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，Ｊ．Ｔ．“Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｃｏｎｔａｃｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５）などの様々な説明を使用して定められ得る。様々な説明と可変領域付番との間の対応が記載される（例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：５５－７７；Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ（２００１）３０９：６５７－７０；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース；Ｗｅｂソース、ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇを参照されたい）。ＵＣＬ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ ＰＬＣによるａｂＹｓｉｓなどの利用可能なプログラムを使用して、ＣＤＲを描写し得る。「ＣＤＲ」、「ＨＣＤＲ１」、「ＨＣＤＲ２」、「ＨＣＤＲ３」、「ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」及び「ＬＣＤＲ３」という用語は、本明細書中で使用される場合、本明細書中で明確に述べられない限り、上記の、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、ＡｂＭ又はＣｏｎｔａｃｔで記載される方法の何れかにより定められるＣＤＲを含む。配列番号１～１７、２８～５１、６２～８０、８９～９４、９８～１０４、１４１～１４６、１４９～１５４、１６７～１６９、１７２～１７４、１７６～１７８、１８０、１８２～１８４、１８６、１８７、１８９～１９１、１９３～１９５、１９７～１９９、２０１、２３６～２４４、２５３～２６１及び２６５～２７０を有する配列のＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定められる。配列番号３９９～４３４の配列のＣＤＲは、ＡｂＭに従って定められる。配列番号４３５～４７０の配列のＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａに従って定められる。配列番号４７１～５０６の配列のＣＤＲは、ＩＭＧＴに従って定められる。配列番号５０７～５４２の配列のＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔに従って定められる。
「減少させる」、「下げる」、「低下させる」、「低減させる」又は「軽減する」は、一般に、対照又はビヒクルが介在する反応と比較した場合に反応低下（即ち、下流効果）に介在する試験分子の能力を指す。代表的な反応は、Ｔ細胞拡大増殖、Ｔ細胞活性化又はＴ細胞介在性の腫瘍細胞死滅又はその抗原若しくは受容体に対するタンパク質の結合、Ｆｃγへの結合促進又はＡＤＣＣ、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＰ促進などのＦｃエフェクター機能促進である。低下は、試験分子と対照（又はビヒクル）との間の反応測定値の統計学的に有意な結果又は約１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０若しくは３０倍又はそれを超える、例えば５００、６００、７００、８００、９００若しくは１０００倍又はそれを超える（全ての整数及びその間の小数点及び１を上回る、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８などを含む）低下などの反応測定値の低下であり得る。
「分化」は、細胞の効力又は増殖を低下させるか又はより発生学的に制限された状態へ細胞を移動させる方法を指す。
「コードする」又は「コードすること」は、ヌクレオチド（例えば、ｒＲＮＡ、ＴＲＮＡ及びｍＲＮＡ）の定められる配列又はアミノ酸の定められる配列及びそれからの結果の生物学的特性の何れかを有する生物学的過程における他のポリマー及び巨大分子の合成のための鋳型として働くための、遺伝子、ｃＤＮＡ又はｍＲＮＡなどのポリヌクレオチドにおけるヌクレオチドの特異的な配列の固有の特性を指す。従って、遺伝子、ｃＤＮＡ又はＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳が細胞又は他の生体系におけるタンパク質を生成させる場合、タンパク質をコードする。ｍＲＮＡ配列と同一であるヌクレオチド配列であるコード鎖及び、遺伝子又はｃＤＮＡの転写のための鋳型として使用される非コード鎖の両方が、その遺伝子又はｃＤＮＡのタンパク質又は他の生成物をコードするものと呼ばれ得る。
「増強する」、「促進する」、「上昇させる」、「拡大する」又は「改善する」は、一般に、対照又はビヒクルにより媒介される反応と比較した場合、試験分子がより大きい反応（即ち下流効果）を媒介する能力を指す。代表的な反応は、Ｔ細胞拡大増殖、Ｔ細胞活性化又はＴ細胞介在性腫瘍細胞死滅又はその抗原若しくは受容体へのタンパク質の結合、Ｆｃγへの結合増強又はＦｃエフェクター機能の増強、例えばＡＤＣＣ、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＰの増強などである。増強は、試験分子と対照（又はビヒクル）との間での測定された反応の統計学的に有意な差、又は約１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０若しくは３０倍又はそれを超える、例えば５００、６００、７００、８００、９００若しくは１０００倍又はそれを超える（全ての整数及びその間にあり１を上回る小数点、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８などを含む）上昇などの測定された反応の上昇である。
「拡大増殖」は細胞分裂及び細胞死の結果を指す。
「発現する」及び「発現」は、細胞で又はインビトロで起こる周知の転写及び翻訳を指す。発現産物、例えば本タンパク質は、このように細胞により又はインビトロで発現され、細胞内、細胞外又は膜貫通タンパク質であり得る。
「発現ベクター」は、発現ベクター中に存在するポリヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチドの翻訳を指示するために、生体系において又は再構成された生体系において利用され得るベクターを指す。
「ｄＡｂ」又は「ｄＡｂ断片」は、ＶＨドメインから構成される抗体断片を指す（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４ ５４６（１９８９））。
「Ｆａｂ」又は「Ｆａｂ断片」は、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ及びＣＬドメインから構成される抗体断片を指す。
「Ｆ（ａｂ’）２」又は「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋により連結される２つのＦａｂ断片を含有する抗体断片を指す。
「Ｆｄ」又は「Ｆｄ断片」は、ＶＨ及びＣＨ１ドメインから構成される抗体断片を指す。
「Ｆｖ」又は「Ｆｖ断片」は、抗体の単一アームからのＶＨ及びＶＬドメインから構成される抗体断片を指す。
「全長抗体」は、ジスルフィド結合により鎖間連結される２本の重鎖（ＨＣ）及び２本の軽鎖（ＬＣ）並びにその多量体（例えばＩｇＭ）から構成される。各重鎖は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び重鎖定常ドメインから構成され、重鎖定常ドメインはサブドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）から構成される。ＶＨ及びＶＬは、フレームワーク領域（ＦＲ）が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分類され得る。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲセグメントから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４で配置される。
「遺伝子修飾」は、「外来」（即ち外因性又は細胞外）遺伝子、ＤＮＡ又はＲＮＡ配列の宿主細胞への導入を指し、宿主細胞が、所望の物質、一般的には導入された遺伝子又は配列によりコードされるタンパク質又は酵素を産生させるための導入された遺伝子又は配列を発現するようになる。導入された遺伝子又は配列は、「クローン化される」又は「外来の」遺伝子又は配列とも呼ばれ得、細胞の遺伝学的機構により使用される、開始、終止、プロモーター、シグナル、分泌又は他の配列などのキメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドに操作可能に連結される制御又は調節配列を含み得る。遺伝子又は配列は、非機能性配列又は機能が未知の配列を含み得る。導入されたＤＮＡ又はＲＮＡを受容し、発現する宿主細胞は、「遺伝子改変」されている。宿主細胞に導入されたＤＮＡ又はＲＮＡは、宿主細胞と同じ属若しくは種の又は異なる属若しくは種由来の細胞を含め、あらゆる供給源由来であり得る。
「異種」は、天然で互いに対して同じ関係にあることが見出されない２つ以上のポリヌクレオチド又は２つ以上のポリペプチドを指す。
「異種ポリヌクレオチド」は、本明細書中に記載のような２つ以上のネオアンチゲンをコードする非天然ポリヌクレオチドを指す。
「異種ポリペプチド」は、本明細書中に記載のような２つ以上のネオアンチゲンポリペプチドを含む非天然ポリペプチドを指す。
「宿主細胞」は、異種核酸を含有する何れかの細胞を指す。代表的な異種核酸はベクター（例えば発現ベクター）である。
「ヒト抗体」は、ヒト対象に投与されたときに最小限の免疫反応を有するように最適化される抗体を指す。ヒト抗体の可変領域は、ヒト免疫グロブリン配列由来である。ヒト抗体が定常領域又は定常領域の一部を含有する場合、定常領域もヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト抗体の可変領域がヒト生殖細胞系列免疫グロブリン又は再編成免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られる場合、ヒト起源の配列「由来」である重鎖及び軽鎖可変領域を含む。このような代表的な系は、ファージ及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するマウス又はラットなどのトランスジェニック非ヒト動物上で提示されるヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリである。「ヒト抗体」は、一般的に、ヒト抗体を得るために使用される系とヒト免疫グロブリン遺伝子座との間の相違、体細胞突然変異の導入又はフレームワーク若しくはＣＤＲ若しくはその両方への置換の意図的な導入のため、ヒトで発現される免疫グロブリンと比較した場合、アミノ酸の相違を含有する。一般的には、「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン又は再編成免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列に対して、アミノ酸配列において少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である。いくつかの場合、「ヒト抗体」は、例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６に記載されるような、ヒトフレームワーク配列分析由来のコンセンサスフレームワーク配列又は例えばＳｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５－９６及び国際公開第２００９／０８５４６２号パンフレットに記載のようなファージ上で提示されるヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれる合成ＨＣＤＲ３を含有し得る。少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種由来である抗体は、「ヒト抗体」の定義には含まれない。
「ヒト化抗体」は、少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種由来であり、少なくとも１つのフレームワークがヒト免疫グロブリン配列由来である抗体を指す。ヒト化抗体は、フレームワークにおいて置換を含み得、フレームワークが、発現されるヒト免疫グロブリン又はヒト免疫グロブリン生殖細胞系列遺伝子配列の正確なコピーではあり得なくなる。
「～との組み合わせ」は、２つ以上の治療剤が、混合物中で一緒に、単一の薬剤として同時に、又は単一の薬剤としてあらゆる順序で連続的に、対象に投与されることを意味する。
「細胞内シグナル伝達ドメイン」又は「細胞質シグナル伝達ドメイン」は、分子の細胞内の部分を指す。これは、第２のメッセンジャーを生成させるか又はこのようなメッセンジャーに反応することによってエフェクターとして機能することにより、定められたシグナル伝達経路を介して細胞活性を制御するために細胞内で情報を伝達することにより作用するタンパク質の機能性部分である。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞、例えばＣＡＲ－Ｔ細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生じさせる。
「単離される」とは、組み換え細胞並びに少なくとも１つの精製又は単離段階に供されているタンパク質など、分子が産生される系の他の構成成分から実質的に分離及び／又は精製されている分子（合成ポリヌクレオチド又はポリペプチドなど）の均一集団を指す。「単離される」は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない分子を指し、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％純度など、より高い純度まで単離されている分子を包含する。
「調整する」は、対照又はビヒクルが介在する反応と比較した場合、反応増強又は反応低下（即ち下流効果）を媒介する試験分子の能力を増強するか又は低下させるかの何れかを指す。
「モノクローナル抗体」は、抗体分子の実質的に均一な集団から得られる抗体を指し、即ちその集団を含む個々の抗体は、抗体重鎖からのＣ末端リジンの除去などの可能な周知の変更又は翻訳後修飾、例えばアミノ酸異性化又は脱アミド化、メチオニン酸化又はアスパラギン若しくはグルタミン脱アミド化を除き、同一である。モノクローナル抗体は、一般的に、１つの抗原性エピトープに結合する。二特異性モノクローナル抗体は、２つの別個の抗原性エピトープに結合する。モノクローナル抗体は、抗体集団内の不均一なグリコシル化を有し得る。モノクローナル抗体は、単特異性又は多特異性、例えば二特異性、一価、二価又は多価などであり得る。
「多特異性」とは、２つ以上の別個の抗原又は同じ抗原内の２つ以上の別個のエピトープに特異的に結合する抗体などの分子を指す。多特異性分子は、他の関連抗原と、例えばヒト又はサル、例えばマカカ・ファスシキュラリス（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）（カニクイザル、ｃｙｎｏ）若しくはパン・トログロディテス（Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）などの他の種由来の同じ抗原（相同体）と交差反応性を有し得るか、又は２つ以上の別個の抗原の間で共通するエピトープに結合し得る。
「ナチュラルキラー細胞」及び「ＮＫ細胞」は、本明細書中で交換可能に及び同義で使用される。ＮＫ細胞は、ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋及び／又はＣＤ５７＋ＴＣＲ－表現型を有する分化したリンパ球を指す。ＮＫ細胞は、特異的な細胞溶解酵素の活性化により「自己」ＭＨＣ／ＨＬＡ抗原を発現できない細胞に結合し、死滅させるそれらの能力、ＮＫを活性化する受容体に対するリガンドを発現する腫瘍細胞又は他の疾患細胞を死滅させる能力及び免疫反応を刺激又は阻害するサイトカインと呼ばれるタンパク質分子を放出する能力を特徴とする。
「操作的に連結される」及び同様の句は、核酸又はアミノ酸を参照して使用される場合、互いと機能的関連において配置される、それぞれ核酸配列又はアミノ酸配列の操作的連結を指す。例えば、操作的に連結されるプロモーター、エンハンサーエレメント、オープンリーディングフレーム、５’及び３’ＵＴＲ及びターミネーター配列の結果、核酸分子（例えばＲＮＡ）の的確な産生が起こり、一部の例においてポリペプチドの産生（即ちオープンリーディングフレームの発現）に至る。操作的に連結されるペプチドは、ペプチドの機能的ドメインが、各ドメインの意図される機能を付与するために互いからの適切な距離で配置されるペプチドを指す。
「医薬の組み合わせ」は、一緒に又は個別に、の何れかで投与される２つ以上の有効成分の組み合わせを指す。
「医薬組成物」は、有効成分と薬学的に許容可能な担体とを組み合わせる結果から得られる組成物を指す。
「薬学的に許容可能な担体」又は「賦形剤」は、対象にとって無毒性である、有効成分以外の医薬組成物中の成分を指す。代表的な薬学的に許容可能な担体は、緩衝液、安定化剤又は保存剤である。
「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は、糖リン酸骨格又は他の均等な共有結合化学により共有結合されるヌクレオチドの鎖を含む合成分子を指す。ｃＤＮＡは、ポリヌクレオチドの典型例である。ポリヌクレオチドはＤＮＡ又はＲＮＡ分子であり得る。
疾患又は障害「を予防する」、「を予防すること」、「の予防」又は「の予防法」は、対象において障害が起こることを防ぐことを意味する。
「増殖」は、細胞の対称又は非対称分裂の何れかの細胞分裂における増加を指す。
「プロモーター」は、転写を開始させるために必要とされる最小配列を指す。プロモーターには、それぞれ転写を増強又は抑制する、エンハンサー又はリプレッサーエレメントも含まれ得る。
「タンパク質」又は「ポリペプチド」は本明細書中で交換可能に使用され、ペプチド結合により連結される少なくとも２つのアミノ酸残基からそれぞれ構成される１つ以上のポリペプチドを含む分子を指す。タンパク質は、単量体であり得るか又は２つ以上のサブユニットのタンパク質複合体であり得、このサブユニットは、同一であるか又は別個のものである。５０アミノ酸未満の小さいポリペプチドは、「ペプチド」と呼ばれ得る。タンパク質は、異種融合タンパク質、糖タンパク質又はリン酸化、アセチル化、ミリストイル化、パルミトイル化、グリコシル化、酸化、ホルミル化、アミド化、シトルリン化、ポリグルタミル化、ＡＤＰ－リボシル化、ペグ化又はビオチン化などの翻訳後修飾により修飾されたタンパク質であり得る。タンパク質は、組み換え発現され得る。
「組み換え体」は、組み換え手段によって調製、発現、作製又は単離されるポリヌクレオチド、ポリペプチド、ベクター、ウイルス及び他の巨大分子を指す。
「調節エレメント」は、核酸配列の発現のいくつかの態様を調節する何らかのシス又はトランス作用遺伝子エレメントを指す。
「再発する」は、治療剤での以前の処置後の改善期間後、疾患若しくは疾患の徴候及び症状が戻ることを指す。
「難治性」は、処置に反応しない疾患を指す。難治性疾患は、処置前又は処置の開始時に処置に抵抗性であり得るか、又は難治性疾患は、処置中に抵抗性になり得る。
「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」は、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む少なくとも１つの抗体断片及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含む少なくとも１つの抗体断片を含む融合タンパク質を指し、ここで、ＶＬ及びＶＨは、ポリペプチドリンカーを介して近接して連結され、単鎖ポリペプチドとして発現されることが可能である。特定されない限り、本明細書中で使用される場合、ｓｃＦｖは、例えばポリペプチドのＮ末端及びＣ末端に関して、何れかの順序でＶＬ及びＶＨ可変領域を有し得、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含み得るか、又はＶＨ－リンカー－ＶＬを含み得る。
「特異的に結合する」「特異的な結合」、「特異的に結合」又は「結合する」は、他の抗原に対する親和性よりも高い親和性を有する、抗原又は抗原内のエピトープに対するタンパク質性分子結合を指す。一般的には、このタンパク質性分子は、約１×１０－７Ｍ以下、例えば約５×１０－８Ｍ以下、約１×１０－８Ｍ以下、約１×１０－９Ｍ以下、約１×１０－１０Ｍ以下、約１×１０－１１Ｍ以下又は約１×１０－１２Ｍ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で、一般的には非特異的な抗原（例えばＢＳＡ、カゼイン）への結合の場合のそのＫＤよりも少なくとも１００倍低いＫＤで、抗原又は抗原内のエピトープに結合する。
「対象」は何れかのヒト又は非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物及び非哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などを含む。「対象」及び「患者」という用語は、本明細書中で交換可能に使用され得る。
「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」は、交換可能であり、本明細書中において同義で使用される。Ｔ細胞は、胸腺細胞、ナイーブＴリンパ球、記憶Ｔ細胞、未熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、休止Ｔリンパ球又は活性化Ｔリンパ球を含む。Ｔ細胞は、Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞、例えばＴヘルパー１（Ｔｈ１）又はＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞であり得る。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ；ＣＤ４＋Ｔ細胞）ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）、腫瘍浸潤細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＩＬ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞又はＴ細胞の何れかの他のサブセットであり得る。セミインバリアントなαβＴ細胞受容体を発現するが、ＮＫ１．１などの一般的にＮＫ細胞と関連がある様々な分子マーカーも発現するＴ細胞の特殊化集団を指す「ＮＫＴ細胞」も含まれる。ＮＫＴ細胞には、ＮＫ１．１＋及びＮＫ１．１－並びにＣＤ４＋、ＣＤ４－、ＣＤ８＋及びＣＤ８－細胞が含まれる。ＮＫＴ細胞上のＴＣＲは、ＭＨＣ Ｉ様分子ＣＤ Ｉｄにより提示される糖脂質抗原を認識することにおいてユニークである。ＮＫＴ細胞は、炎症又は免疫寛容の何れかを促進するサイトカインを産生するそれらの能力のために保護的又は有害な効果の何れかを有し得る。それらの表面上の別個のＴＣＲを保持するＴ細胞の小さいサブセットに対して、ＴＣＲがα－及びβ－ＴＣＲ鎖と呼ばれる２本の糖タンパク質鎖から構成されるＴ細胞の大部分と異なり、γδＴ細胞におけるＴＣＲがγ鎖及びδ鎖から構成される、特殊化集団を指す「ガンマ－デルタＴ細胞（γδＴ細胞）」も含まれる。γδＴ細胞は、免疫監視及び免疫調節に寄与し得、ＩＬ－１７の重要な供給源であり、ロバストなＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞反応を誘導することが分かった。異常又は過剰な免疫反応を抑制し、免疫寛容に寄与するＴ細胞を指す「制御性Ｔ細胞」又は「Ｔｒｅｇ」も含まれる。Ｔｒｅｇは、一般的には転写因子Ｆｏｘｐ３－陽性のＣＤ４＋Ｔ細胞であり、ＩＬ－１０産生ＣＤ４＋Ｔ細胞である、転写因子Ｆｏｘｐ３陰性の制御性Ｔ細胞も含み得る。
本明細書中で交換可能に使用される「治療的有効量」又は「有効量」は、所望の治療結果を達成するために必要な投与量で、必要な時間にわたり有効な量を指す。治療的有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別及び体重及び個体において所望の反応を惹起するための治療剤又は治療剤の組み合わせの能力などの要因に従い変動し得る。例えば患者の福祉の改善、腫瘍量の低下、腫瘍増殖の停止又は緩徐化及び／又は身体の他の場所への癌細胞の転移がないことを含む、有効な治療剤又は治療剤の組み合わせの例となる指示因子。
「形質導入」は、ウイルスベクターを使用した細胞への外来核酸の導入を指す。
癌などの疾患又は障害「処置する」、「処置すること」又は「処置」は、以下の１つ以上を完遂することを指す：重症度の低下及び／又は障害の持続時間の短縮、処置されている障害の特徴となる症状の悪化の阻害、以前障害を有していた対象における障害の再発の制限若しくは予防又は障害に対する以前症候性であった対象における症状再発の制限若しくは予防。
「腫瘍細胞」又は「癌細胞」は、自然発生又は誘導性の表現型変化を有する、インビボ、エクスビボ又は組織培養の何れかにおける、癌性、前癌性又は形質転換された細胞を指す。これらの変化は、必ずしも新しい遺伝物質の取り込みを含まない。形質転換は、形質転換させるウイルスによる感染及び新しいゲノム核酸の組み込みから生じ得るものの、外来核酸又はそれの取り込みは、自然発生的に又はそれにより内在遺伝子を変異させる発癌物質への曝露後にも起こり得る。形質転換／癌は、インビトロ、インビボ及びエクスビボでの、形態学的変化、細胞の不死化、異常増殖調節、病巣形成、増殖、悪性度、腫瘍特異的なマーカーレベルの調整、侵襲性、ヌードマウスなどの適切な動物宿主における腫瘍増殖などにより例示される。
「変異体」、「突然変異体」又は「変化した」は、１つ以上の修飾、例えば１つ以上の置換、挿入又は欠失により、参照ポリペプチド又は参照ポリヌクレオチドと異なるポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。
本明細書全体を通した抗体定常領域におけるアミノ酸残基の付番は、別段の指示がない限り、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）に記載のように、ＥＵインデックスに従う。
Ｉｇ定常領域における突然変異は、以下のように示される：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖは、１つの免疫グロブリン定常領域におけるＬ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ及びＹ４０７Ｖ突然変異を指す。Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗは、第１のＩｇ定常領域におけるＬ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ及びＹ４０７Ｖ突然変異及び第２のＩｇ定常領域におけるＴ３９４Ｗ突然変異を指し、これらは１つの多量体タンパク質に存在する。
物質の組成
ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン
本開示は、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む単一特異性及び多特異性タンパク質、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、前述のものをコードするポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞及び前述のものを作製及び使用する方法を提供する。本明細書中で同定されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、熱安定性の改善に関して改善された特性を示す。
本開示は、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質を提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１８の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は配列番号２７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
ＣＤＲ（例えばＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を同定するための方法及び技術は、当技術分野で公知であり、本明細書中で開示される重鎖可変領域の何れか及び／又は軽鎖可変領域の何れか内でＣＤＲを同定するために使用され得る。ＣＤＲの境界を同定するために使用され得る慣習には、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、ＩＭＧＴ定義及びＣｏｎｔａｃｔ定義が含まれるが、限定されない。理論により縛られることを望むものではないが、Ｋａｂａｔ定義は配列の可変性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は構造ループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義はＣｈｏｔｈｉａアプローチとＫａｂａｔアプローチとの間での妥協策である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは（ｓｃＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｄである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはＶＨＨである。
本開示は、単離タンパク質も提供し、この単離タンパク質は、それぞれ配列番号１、６及び１２；それぞれ配列番号２、７及び１３；それぞれ配列番号１、８及び１４；それぞれ配列番号３、９及び１３；それぞれ配列番号４、１０及び１５；それぞれ配列番号５、１１及び１６；又はそれぞれ配列番号５、１１及び１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは（ｓｃＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｄである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはＶＨＨである。
本開示は、骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質も提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｋ）配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｌ）配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
代表的なＨＣＤＲ配列は、表４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄ、４ｅ及び４ｆに記載される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨを含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３のＶＬを含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号８２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号８５のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号８７のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２７１のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２７２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２７３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３のＶＬとを含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは（ｓｃＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｄである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはＶＨＨである。
本開示は、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６及び４５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８及び４７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９及び４８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１及び５０；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２及び５１；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４及び５１；又は
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２及び５１；
ｋ）それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９；
ｌ）それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０；又は
ｍ）それぞれ配列番号２５５、２５８及び２６１
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む単離タンパク質も提供する。
特定の実施形態では、単離タンパク質は、それぞれ配列番号２９、３７及び４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、単離タンパク質は、それぞれ配列番号３２、４０及び４９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、単離タンパク質は、それぞれ配列番号３４、４３及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、単離タンパク質は、それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、単離タンパク質は、それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、単離タンパク質は、それぞれ配列番号２５５、２５８及び３６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨを含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３のＶＬを含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号８２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号８５のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号８７のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２７１のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２７２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２７３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３のＶＬとを含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは（ｓｃＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｄである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはＶＨＨである。
本開示は、骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインも提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号８１の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８４のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
代表的なＨＣＤＲ及びＬＣＤＲ配列は、表４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄ、４ｅ及び４ｆに記載されている。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは（ｓｃＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｄである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはＶＨＨである。
本開示は、骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインも提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｋ）それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９；
ｌ）それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６；
ｍ）それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは（ｓｃＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｄである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはＶＨＨである。
本開示は、骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質も提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含む。
特定の実施形態では、単離タンパク質は、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを含む。
他の実施形態では、単離タンパク質は、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを含む。
他の実施形態では、単離タンパク質は、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含む。
他の実施形態では、単離タンパク質は、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを含む。
他の実施形態では、単離タンパク質は、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを含む。
他の実施形態では、単離タンパク質は、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは（ｓｃＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｄである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインは、ＶＨＨである。
本開示は、骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質も提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは（ｓｃＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｄである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインは、ＶＨＨである。
本開示は、骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質も提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号８９、９０及び９２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号８９、９０及び９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号３３、９１及び９４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１６７、１６８及び１６９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１７６、１７７及び１７８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号８９、９０及び１８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又はそれぞれ配列番号８９、９０及び９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは（ｓｃＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｄである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはＶＨＨである。
本開示は、骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質も提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ａ）配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０５の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；ｂ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；ｃ）配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；ｄ）配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；ｅ）配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；ｆ）配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；ｇ）配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；ｈ）配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２００のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又はｉ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２０２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは（ｓｃＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｄである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはＶＨＨである。
本開示は、骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質も提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは（ｓｃＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｄである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはＶＨＨである。
本開示は、骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質も提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは（ｓｃＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｄである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはＶＨＨである。
本開示は、骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質も提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは（ｓｃＦｖ）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦ（ａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはＦｄである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはｄＡｂである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３抗原結合ドメインはＶＨＨである。
ＣＤ３３結合ｓｃＦｖ
ＣＤ３３に結合する本明細書中で同定されたＶＨ及びＶＬドメインの何れも、ＶＨ－リンカー－ＶＬ又はＶＬ－リンカー－ＶＨ方向の何れかでｓｃＦｖ方式に改変され得る。本明細書中で特定されるＶＨ及びＶＬドメインの何れも、また、ｓｃ（Ｆｖ）２構造、例えばＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ、ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬなどを作製するためにも使用され得る。ＶＨ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＬ。ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬ。ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ又はＶＬ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＨ。
本明細書中で同定されたＶＨ及びＶＬドメインは、ｓｃＦｖ方式に組み込まれ得、ＣＤ３３への得られたｓｃＦｖの結合及び熱安定性は公知の方法を使用して評価され得る。結合は、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６、Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００又はＫｉｎＥｘＡ機器、ＥＬＩＳＡ又は当業者にとって公知の競合的結合アッセイを使用して評価され得る。結合は、精製ｓｃＦｖ又はＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）上清又は発現されたｓｃＦｖを含有する溶解細胞を使用して評価され得る。ＣＤ３３に対する試験ｓｃＦｖの測定された親和性は、異なる条件（例えば浸透圧、ｐＨ）下で測定された場合、変動し得る。従って、親和性及び他の結合パラメーター（例えばＫＤ、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ）の測定は、一般的には、標準化された条件及び標準化された緩衝液を使用して行われる。熱安定性は、５分（ｍｉｎ）、１０分、１５分、２０分、２５分又は３０分などの時間にわたり５０℃、５５℃又は６０℃などの高温で試験ｓｃＦｖを加熱し、ＣＤ３３への試験ｓｃＦｖの結合を測定することによって評価され得る。非加熱ｓｃＦｖ試料と比較した場合にＣＤ３３への同等の結合を保持するｓｃＦｖは、熱安定性であると言われる。
組み換え発現系において、リンカーは、ペプチドリンカーであり、何らかの天然アミノ酸を含み得る。リンカーに含まれ得る代表的なアミノ酸は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ及びＴｈｅである。リンカーは、ＣＤ３３への結合など、所望の活性を保持するように、互いと比較して正確な高次構造を形成するようにＶＨ及びＶＬを連結させるのに適正である長さを有するべきである。
リンカーは、約５～５０アミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～４０アミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～３５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～３０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～２５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～２０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１５～２０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、６アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、７アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、８アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、９アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１１アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１２アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１３アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１４アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１６アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１７アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１８アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１９アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２１アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２２アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２３アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２４アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２６アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２７アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２８アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、２９アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３１アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３２アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３３アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３４アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３６アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３７アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３８アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３９アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、４０アミノ酸長である。使用され得る代表的なリンカーは、Ｇｌｙに富むリンカー、Ｇｌｙ及びＳｅｒ含有リンカー、Ｇｌｙ及びＡｌａ含有リンカー、Ａｌａ及びＳｅｒ含有リンカー及び他のフレキシブルリンカーである。
他のリンカー配列は、何れかの免疫グロブリン重鎖又は軽鎖アイソタイプ由来の免疫グロブリンヒンジ領域の一部、ＣＬ又はＣＨ１を含み得る。代わりに、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン又はポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコールのコポリマーを含む様々な非タンパク質性ポリマーがリンカーとして有用であり得る。使用され得る代表的なリンカーは、表１で示す。さらなるリンカーは、その全体において参照により本明細書中に組み込まれる、例えば国際公開第２０１９／０６０６９５号パンフレットに記載されている。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ－末端に、ＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む。
Figure 2023517660000006
Figure 2023517660000007
特定の実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む（例えば配列番号１０８のアミノ酸配列からなる）。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１８の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は配列番号２７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号１、６及び１２；それぞれ配列番号２、７及び１３；それぞれ配列番号１、８及び１４；それぞれ配列番号３、９及び１３；それぞれ配列番号４、１０及び１５；それぞれ配列番号５、１１及び１６；又はそれぞれ配列番号５、１１及び１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、
ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｋ）配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｌ）配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む。
特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
代表的なＨＣＤＲ配列は、表４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄ、４ｅ及び４ｆに記載されている。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨを含む。
特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５３のＶＨを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５６のＶＨを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５９のＶＨを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２６２のＶＨを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２６３のＶＨを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２６４のＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３のＶＬを含む。
特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号８２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号８５のＶＬを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号８７のＶＬを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２７１のＶＬを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２７２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２７３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３のＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６及び４５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８及び４７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９及び４８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１及び５０；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２及び５１；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４及び５１；
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２及び５１；
ｋ）それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９；
ｌ）それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０；又は
ｍ）それぞれ配列番号２５５、２５８及び２６１
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２９、３７及び４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号３２、４０及び４９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号３４、４３及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２５５、２５８及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８１の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８４のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
代表的なＨＣＤＲ及びＬＣＤＲ配列は、表４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄ、４ｅ及び４ｆに記載されている。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｋ）それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９；
ｌ）それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６；
ｍ）それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含む。
特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを含む。特定のこのような実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０８のアミノ酸配列のリンカー配列を含む。従って、いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、配列番号５３のＶＨ、配列番号１０８の第１のリンカー（Ｌ１）及び配列番号８２のＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）を含む。他の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、配列番号８２のＶＬ、配列番号１０８の第１のリンカー及び配列番号５３のＶＬ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを含む。特定のこのような実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０８のアミノ酸配列のリンカー配列を含む。従って、いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、配列番号５６のＶＨ、配列番号１０８の第１のリンカー（Ｌ１）及び配列番号８５のＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）を含む。他の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、配列番号５６のＶＬ、配列番号１０８の第１のリンカー及び配列番号８５のＶＬ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含む。特定のこのような実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０８のアミノ酸配列のリンカー配列を含む。従って、いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、配列番号５９のＶＨ、配列番号１０８の第１のリンカー（Ｌ１）及び配列番号８７のＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）を含む。他の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、配列番号５９のＶＬ、配列番号１０８の第１のリンカー及び配列番号８７のＶＬ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを含む。特定のこのような実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０８のアミノ酸配列のリンカー配列を含む。従って、いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、配列番号２６２のＶＨ、配列番号１０８の第１のリンカー（Ｌ１）及び配列番号２７１のＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）を含む。他の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、配列番号２７１のＶＬ、配列番号１０８の第１のリンカー及び配列番号２６２のＶＬ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを含む。特定のこのような実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０８のアミノ酸配列のリンカー配列を含む。従って、いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、配列番号２６３のＶＨ、配列番号１０８の第１のリンカー（Ｌ１）及び配列番号２７２のＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）を含む。他の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、配列番号２７２のＶＬ、配列番号１０８の第１のリンカー及び配列番号２６３のＶＬ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬを含む。特定のこのような実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０８のアミノ酸配列のリンカー配列を含む。従って、いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、配列番号２６４のＶＨ、配列番号１０８の第１のリンカー（Ｌ１）及び配列番号２７３のＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）を含む。他の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、配列番号２７３のＶＬ、配列番号１０８の第１のリンカー及び配列番号２６４のＶＬ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号８９、９０及び９２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号８９、９０及び９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号３３、９１及び９４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１６７、１６８及び１６９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１７６、１７７及び１７８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号８９、９０及び１８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又はそれぞれ配列番号８９、９０及び９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０５の軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２００のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２０２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、
ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２２１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２７４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２７５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２７６のアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１３のアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２７４のアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２７５のアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２７６のアミノ酸配列を含む。
ＣＤ３３に結合する他の抗原結合ドメイン
ＣＤ３３に結合する本明細書中で特定されるＶＨ及びＶＬドメインの何れかは、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ又はＦｖ方式にも改変され得、それらのＣＤ３３への結合及び熱安定性は、本明細書中に記載のアッセイを使用して評価され得る。特定の実施形態では、本明細書中で特定されるＶＨ及びＶＬドメインは、Ｆａｂに改変される。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１８の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は配列番号２７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号１、６及び１２；それぞれ配列番号２、７及び１３；それぞれ配列番号１、８及び１４；それぞれ配列番号３、９及び１３；それぞれ配列番号４、１０及び１５；それぞれ配列番号５、１１及び１６；又はそれぞれ配列番号５、１１及び１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、
ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｋ）配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｌ）配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む。
特定の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
代表的なＨＣＤＲ配列は、表４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄ、４ｅ及び４ｆに記載されている。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨを含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７又は８８、２７１、２７２又は２７３のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６及び４５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８及び４７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９及び４８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１及び５０；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２及び５１；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４及び５１；又は
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２及び５１；又は
ｌ）それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９；
ｍ）それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０；
ｎ）それぞれ配列番号２５５、２５８及び２６１
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８１の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８４のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
代表的なＨＣＤＲ及びＬＣＤＲ配列は、表４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄ、４ｅ及び４ｆに記載されている。
特定の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｋ）それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９；
ｌ）それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６；又は
ｍ）それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号８９、９０及び９２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号８９、９０及び９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号３３、９１及び９４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１６７、１６８及び１６９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１７６、１７７及び１７８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号８９、９０及び１８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又はそれぞれ配列番号８９、９０及び９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０５の軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２００のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２０２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、
ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬを含む。
他の実施形態では、本明細書中で特定されるＶＨ及びＶＬドメインはＦ（ａｂ’）２に改変される。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１８の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は配列番号２７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号１、６及び１２；それぞれ配列番号２、７及び１３；それぞれ配列番号１、８及び１４；それぞれ配列番号３、９及び１３；それぞれ配列番号４、１０及び１５；それぞれ配列番号５、１１及び１６；又はそれぞれ配列番号５、１１及び１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、
ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｋ）配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｌ）配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨを含む。いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６及び４５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８及び４７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９及び４８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１及び５０；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２及び５１；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４及び５１；
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２及び５１；
ｋ）それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９、
ｌ）それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０、
ｍ）それぞれ配列番号２５５、２５８及び２６１
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８１の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８４のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｋ）それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９；
ｌ）それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６；又は
ｍ）それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号８９、９０及び９２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号８９、９０及び９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号３３、９１及び９４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１６７、１６８及び１６９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１７６、１７７及び１７８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号８９、９０及び１８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又はそれぞれ配列番号８９、９０及び９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０５の軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２００のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２０２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、
ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は１９６のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む。いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬを含む。
特定の実施形態では、本明細書中で特定されるＶＨ及びＶＬドメインはＦｖに改変される。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１８の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は配列番号２７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号１、６及び１２；それぞれ配列番号２、７及び１３；それぞれ配列番号１、８及び１４；それぞれ配列番号３、９及び１３；それぞれ配列番号４、１０及び１５；それぞれ配列番号５、１１及び１６；又はそれぞれ配列番号５、１１及び１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、
ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｋ）配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｌ）配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む。
特定の実施形態では、Ｆｖは、配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆｖは、配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆｖは、配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆｖは、配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆｖは、配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆｖは、配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、ｒ６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２、２７３のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６及び４５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８及び４７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９及び４８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１及び５０；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２及び５１；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４及び５１；
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２及び５１；
ｋ）それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９、
ｌ）それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０、
ｍ）それぞれ配列番号２５５、２５８及び２６１
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８１の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８４のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、Ｆｖは、配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆｖは、配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆｖは、配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆｖは、配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆｖは、配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆｖは、配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；又は
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号８９、９０及び９２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号８９、９０及び９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号３３、９１及び９４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１６７、１６８及び１６９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１７６、１７７及び１７８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号８９、９０及び１８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又はそれぞれ配列番号８９、９０及び９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０５の軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２００のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２０２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、本明細書中で同定されるＶＨ及びＶＬドメインは、Ｆｄに改変される。
いくつかの実施形態では、Ｆｄは、配列番号１８の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は配列番号２７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｄは、それぞれ配列番号１、６及び１２；それぞれ配列番号２、７及び１３；それぞれ配列番号１、８及び１４；それぞれ配列番号３、９及び１３；それぞれ配列番号４、１０及び１５；それぞれ配列番号５、１１及び１６；又はそれぞれ配列番号５、１１及び１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｄは、
ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｋ）配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｌ）配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む。
特定の実施形態では、Ｆｄは、配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆｄは、配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆｄは、配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆｄは、配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆｄは、配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
他の実施形態では、Ｆｄは、配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｄは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｄは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６及び４５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８及び４７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９及び４８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１及び５０；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２及び５１；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４及び５１；
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２及び５１；
ｋ）それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９、
ｌ）それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０、
ｍ）それぞれ配列番号２５５、２５８及び２６１
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｄは、配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、Ｆｄは、配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆｄは、配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆｄは、配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆｄは、配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆｄは、配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
他の実施形態では、Ｆｄは、配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｄは、
ａ）配列番号５２のＶＨ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨ
を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｄは、配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｄは、それぞれ配列番号８９、９０及び９２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号８９、９０及び９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号３３、９１及び９４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１６７、１６８及び１６９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号１７６、１７７及び１７８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；それぞれ配列番号８９、９０及び１８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又はそれぞれ配列番号８９、９０及び９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
相同抗原結合ドメイン及び保存的置換がある抗原結合ドメイン
ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインの変異体は本開示の範囲内である。例えば、変異体は、親抗原結合ドメインと比較した場合、改善した機能特性を保持するか又は有する限り、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインにおいて１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８又は２９個のアミノ酸置換を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する変異抗原結合ドメインは、同じアッセイにおいて親抗原結合ドメインと比較した場合、熱安定性が改善している。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する変異抗原結合ドメインは、親結合ドメインと比較した場合、翻訳後修飾の可能性が低下している。翻訳後修飾の可能性の低下は、ＮＧ、ＤＧ又はＤＰなどのモチーフの置換により生じ得る。いくつかの実施形態では、配列同一性は、本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに対して、約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％であり得る。いくつかの実施形態では、変異はフレームワーク領域にある。いくつかの実施形態では、変異体は保存的置換により生成される。
例えば、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ＶＨ中の残基位置Ｐ４１、Ｉ４９、Ｍ７０及びＡ８８（残基は配列番号５のｈｕ１１Ｂ６＿ＶＨに従い付番）及びＶＬ中のＳ８０、Ｌ８２、Ａ８８及びＹ９１（残基は配列番号２のｈｕ１１Ｂ６＿ＶＬに従い付番）において置換を含み得る。保存的置換は何れかの指定の位置でなされ得、得られたＣＤ３３に結合する変異抗原結合ドメインは、本明細書中に記載のアッセイにおいてそれらの所望の特徴について試験される。
以下のものと少なくとも８０％同一であるＶＨを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインも提供される：
配列番号１８のＶＨ；
配列番号１９のＶＨ；
配列番号２０のＶＨ；
配列番号２１のＶＨ；
配列番号２２のＶＨ；
配列番号２３のＶＨ；
配列番号２４のＶＨ；
配列番号２５のＶＨ；
配列番号２６のＶＨ；
配列番号２７のＶＨ；
配列番号５２のＶＨ；
配列番号５３のＶＨ；
配列番号５４のＶＨ；
配列番号５５のＶＨ；
配列番号５６のＶＨ；
配列番号５７のＶＨ；
配列番号５８のＶＨ；
配列番号５９のＶＨ；
配列番号６０のＶＨ；
配列番号６１のＶＨ；
配列番号９５のＶＨ；
配列番号９６のＶＨ；
配列番号９７のＶＨ；
配列番号１７０のＶＨ；
配列番号１７１のＶＨ；
配列番号１７５のＶＨ；
配列番号１７９のＶＨ；
配列番号１８１のＶＨ；
配列番号９６のＶＨ、
配列番号２６２のＶＨ；
配列番号２６３のＶＨ；又は
配列番号２６４のＶＨ。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、同一性は８５％である。いくつかの実施形態では、同一性は９０％である。いくつかの実施形態では、同一性は９１％である。いくつかの実施形態では、同一性は９１％である。いくつかの実施形態では、同一性は９２％である。いくつかの実施形態では、同一性は９３％である。いくつかの実施形態では、同一性は９４％である。いくつかの実施形態では、同一性は９４％である。いくつかの実施形態では、同一性は９５％である。いくつかの実施形態では、同一性は９６％である。いくつかの実施形態では、同一性は９７％である。いくつかの実施形態では、同一性は９８％である。いくつかの実施形態では、同一性は９９％である。
以下のものと少なくとも８０％同一であるＶＨ及びＶＬを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインも提供される：
配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；
配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ；
配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬを含む。例えば、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨと、配列番号８２のＶＬと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＬとを含む。例えば、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号８２のＶＬと、配列番号５３のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨとを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨと、配列番号８５のＶＬとを含む。例えば、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨと、配列番号８５のＶＬと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＬとを含む。例えば、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号８５のＶＬと、配列番号５６のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨとを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨと、配列番号８７のＶＬとを含む。例えば、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨと、配列番号８７のＶＬと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＬとを含む。例えば、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号８７のＶＬと、配列番号５９のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨとを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨと、配列番号２７１のＶＬとを含む。例えば、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨと、配列番号２７１のＶＬと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＬとを含む。例えば、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２７１のＶＬと、配列番号２６２のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨとを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨと、配列番号２７２のＶＬとを含む。例えば、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨと、配列番号２７２のＶＬと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＬとを含む。例えば、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２７２のＶＬと、配列番号２６３のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨとを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨと、配列番号２７３のＶＬとを含む。例えば、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨと、配列番号２７３のＶＬと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＬとを含む。例えば、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２７３のＶＬと、配列番号２６４のＶＨと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＶＨとを含む。
本発明者らは、翻訳後修飾が起こり易いモチーフを除去するためにＶＨ及び／又はＶＬドメイン中の位置が突然変異され得ることを見出した。翻訳後修飾は、例えばＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインの脱アミド化、異性化及び／又は断片化の可能性を向上させ得る。これらの突然変異は、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインの熱安定性も促進し得る。
翻訳後修飾が起こり易い配列モチーフの例は、例えばＮＧ、ＤＧ及びＤＰである。
従って、いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、１つ以上のＮＧモチーフにおいて１又は２個のアミノ酸置換を含むＶＨ及び／又はＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＮＧモチーフのＮ残基が置換される。他の実施形態では、ＮＧモチーフのＧ残基が置換される。いくつかの実施形態では、ＮＧモチーフのＮ及びＧ残基が置換される。特定のこのような実施形態では、１つ以上のＮＧモチーフにおける１又は２個のアミノ酸置換は、ＶＨ及び／又はＶＬドメイン内の唯一の置換である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、１つ以上のＤＧモチーフにおいて１又は２個のアミノ酸置換を含むＶＨ及び／又はＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＤＧモチーフのＤ残基が置換される。他の実施形態では、ＤＧモチーフのＧ残基が置換される。いくつかの実施形態では、ＤＧモチーフのＤ及びＧ残基が置換される。特定のこのような実施形態では、１つ以上のＤＧモチーフにおける１又は２個のアミノ酸置換は、ＶＨ及び／又はＶＬドメイン内の唯一の置換である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、１つ以上のＤＰモチーフにおいて１又は２個のアミノ酸置換を含むＶＨ及び／又はＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＤＰモチーフのＤ残基が置換される。他の実施形態では、ＤＰモチーフのＰ残基が置換される。いくつかの実施形態では、ＤＰモチーフのＤ及びＰ残基が置換される。特定のこのような実施形態では、１つ以上のＤＰモチーフにおける１又は２個のアミノ酸置換は、ＶＨ及び／又はＶＬドメイン内の唯一の置換である。
本発明の代表的なＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを含むタンパク質（例えばｓｃＦｖ）である。本発明者らは、配列番号２６２のＶＨ内でＤＧモチーフを突然変異させることにより、ＣＤ３３結合特性を維持しながら翻訳後修飾の可能性を低下させ得ることを見出した。これらの突然変異も熱安定性を促進し得る。
配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを有するＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ＤＧモチーフを除去するために突然変異させられ得る。配列番号２６２のＶＨは、位置５４～５５にＤＧモチーフを有する（ＥＵインデックスに従う残基の付番を使用）。
従って、いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置５４のＤ残基が置換される（例えばＤ５４Ｇ、Ｄ５４Ａ、Ｄ５４Ｙ、Ｄ５４Ｐ、Ｄ５４Ｎ、Ｄ５４Ｓ、Ｄ５４Ｒ、Ｄ５４Ｌ、Ｄ５４Ｖ、Ｄ５４Ｔ、Ｄ５４Ｆ又はＤ５４Ｗ）配列番号２６２のＶＨを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置５５のＧ残基が置換される（例えばＧ５５Ｖ、Ｇ５５Ｐ、Ｇ５５Ｒ、Ｇ５５Ａ、Ｇ５５Ｌ、Ｇ５５Ｑ、Ｇ５５Ｔ又はＧ５５Ｈ）配列番号２６２のＶＨを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置５４のＤ残基（例えばＤ５４Ｇ、Ｄ５４Ａ、Ｄ５４Ｙ、Ｄ５４Ｐ、Ｄ５４Ｎ、Ｄ５４Ｓ、Ｄ５４Ｒ、Ｄ５４Ｌ、Ｄ５４Ｖ、Ｄ５４Ｔ、Ｄ５４Ｆ又はＤ５４Ｗ）が置換され、位置５５のＧ残基が置換される（例えばＧ５５Ｖ、Ｇ５５Ｐ、Ｇ５５Ｒ、Ｇ５５Ａ、Ｇ５５Ｌ、Ｇ５５Ｑ、Ｇ５５Ｔ又はＧ５５Ｈ）配列番号２６２のＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、配列番号２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９又は３１０のＶＨを含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、配列番号２９１のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号２９２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号２９３のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号２９４のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号２９５のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号２９６のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号２９７のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号２９８のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号２９９のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号３００のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号３０１のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号３０２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号３０３のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号３０４のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号３０５のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号３０６のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号３０７のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号３０８のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号３０９のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；又は
配列番号３１０のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ
を含む。
本発明の別の代表的なＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを含むタンパク質（例えばｓｃＦｖ）である。本発明者らは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ内の１つ以上のＮＧモチーフを突然変異させることにより、ＣＤ３３結合を維持しながら翻訳後修飾の可能性を低下させ得ることを見出した。これらの突然変異は熱安定性も促進させ得る。
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを有するＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ＮＧモチーフを除去するために突然変異させられ得る。配列番号２６３のＶＨは、位置９９～１００（ＥＵインデックスに従う残基の付番を使用）にＮＧモチーフを有し、配列番号２７２のＶＬは、位置９７～９８（ＥＵインデックスに従う残基の付番を使用）にＮＧモチーフを有する。
従って、いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置９９のＮ残基が置換される（例えばＮ９９Ｖ、Ｎ９９Ｓ、Ｎ９９Ｅ、Ｎ９９Ｈ、Ｎ９９Ａ、Ｎ９９Ｇ、Ｎ９９Ｋ、Ｎ９９Ｔ、Ｎ９９Ｆ、Ｎ９９Ｖ、Ｎ９９Ｒ、Ｎ９９Ｌ、Ｎ９９Ｈ又はＮ９９Ｉ）配列番号２６３のＶＨを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置１００のＧ残基が置換される（例えばＧ１００Ｓ、Ｇ１００Ａ）配列番号２６３のＶＨを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置９９のＮ残基が置換され（例えば、Ｎ９９Ｖ、Ｎ９９Ｓ、Ｎ９９Ｅ、Ｎ９９Ｈ、Ｎ９９Ａ、Ｎ９９Ｇ、Ｎ９９Ｋ、Ｎ９９Ｔ、Ｎ９９Ｆ、Ｎ９９Ｖ、Ｎ９９Ｒ、Ｎ９９Ｌ、Ｎ９９Ｈ又はＮ９９Ｉ）、位置１００のＧ残基が置換される（例えばＧ１００Ｓ、Ｇ１００Ａ）配列番号２６３のＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１又は３５２のＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置９７のＮ残基が置換される（例えばＮ９７Ｖ、Ｎ９７Ｒ、Ｎ９７Ｐ、Ｎ９７Ｔ、Ｎ９７Ｇ、Ｎ９７Ｑ、Ｎ９７Ｓ、Ｎ９７Ａ、Ｎ９７Ｌ、Ｎ９７Ｙ、Ｎ９７Ｅ、Ｎ９７Ｆ、Ｎ９７Ｄ、Ｎ９７Ｉ又はＮ９７Ｈ）配列番号２７２のＶＬを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置９８のＧ残基が置換される（例えばＧ９８Ｖ、Ｇ９８Ｐ、Ｇ９８Ｒ、Ｇ９８Ｄ、Ｇ９８Ｅ、Ｇ９８Ｗ、Ｇ９８Ｙ、Ｇ９８Ａ、Ｇ９８Ｎ、Ｇ９８Ｋ、Ｇ９８Ｌ）配列番号２７２のＶＬを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置９７のＮ残基が置換され、位置９８のＧ残基が置換される配列番号２７２のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、配列番号３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５又は３３６のＶＬを含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１１のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１２のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１３のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１４のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１５のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１６のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１７のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１８のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１９のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２０のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２１のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２２のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２３のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２４のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２５のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２６のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２７のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２８のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２９のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３０のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３１のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３２のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３３のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３４のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３５のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３６のＶＬ；
配列番号３３７のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３３８のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３３９のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３４０のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３４１のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３４２のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３４３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３４４のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３４５のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３４６のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３４７のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３４８のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３４９のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３５０のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
配列番号３５１のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
配列番号３５２のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ
を含む。
本発明の別の代表的なＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを含むタンパク質（例えばｓｃＦｖ）である。本発明者らは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ内の１つ以上のＮＧモチーフを突然変異させることにより、ＣＤ３３結合特性を維持しながら翻訳後修飾の可能性を低下させ得ることを見出した。これらの突然変異は熱安定性も促進させ得る。
ＮＧモチーフを除去するために、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを有するＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインが突然変異させられ得る。配列番号５６のＶＨは、位置９９～１００（ＥＵインデックスに従う残基の付番を使用）にＮＧモチーフを有し、配列番号８５のＶＬは位置９７～９８（ＥＵインデックスに従う残基の付番を使用）にＮＧモチーフを有する。
従って、いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置９９のＮ残基が置換される（例えば、Ｎ９９Ｒ、Ｎ９９Ｐ、Ｎ９９Ｇ、Ｎ９９Ｖ、Ｎ９９Ｌ、Ｎ９９Ｄ、Ｎ９９Ｅ、Ｎ９９Ａ、Ｎ９９Ｑ又はＮ９９Ｔ）配列番号５６のＶＨを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置１００のＧ残基が置換される（例えば、Ｇ１００Ｓ、Ｇ１００Ａ、Ｇ１００Ｌ、Ｇ１００Ｐ、Ｇ１００Ｔ又はＧ１００Ｑ）配列番号５６のＶＨを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置９９のＮ残基が置換され（例えば、Ｎ９９Ｒ、Ｎ９９Ｐ、Ｎ９９Ｇ、Ｎ９９Ｖ、Ｎ９９Ｌ、Ｎ９９Ｄ、Ｎ９９Ｅ、Ｎ９９Ａ、Ｎ９９Ｑ又はＮ９９Ｔ）、位置１００のＧ残基が置換される（例えば、Ｇ１００Ｓ、Ｇ１００Ａ、Ｇ１００Ｌ、Ｇ１００Ｐ、Ｇ１００Ｔ又はＧ１００Ｑ）配列番号５６のＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、配列番号３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１又は３８２のＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置９７のＮ残基が置換される（例えば、Ｎ９７Ｇ、Ｎ９７Ｄ、Ｎ９７Ｐ、Ｎ９７Ｋ、Ｎ９７Ｅ、Ｎ９７Ａ、Ｎ９７Ｒ、Ｎ９７Ｑ、Ｎ９７Ｉ、Ｎ９７Ｖ、Ｎ９７Ｈ、Ｎ９７Ｋ、Ｎ９７Ｗ又はＮ９７Ｓ）配列番号８５のＶＬを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置９８のＧ残基が置換される配列番号８５のＶＬを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置９７のＮ残基が置換され（例えば、Ｎ９７Ｇ、Ｎ９７Ｄ、Ｎ９７Ｐ、Ｎ９７Ｋ、Ｎ９７Ｅ、Ｎ９７Ａ、Ｎ９７Ｒ、Ｎ９７Ｑ、Ｎ９７Ｉ、Ｎ９７Ｖ、Ｎ９７Ｈ、Ｎ９７Ｋ、Ｎ９７Ｗ又はＮ９７Ｓ）、位置９８のＧ残基が置換される配列番号８５のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、配列番号３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５又は３６６のＶＬを含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５３のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５４のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５５のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５６のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５７のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５８のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５９のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６０のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６１のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６２のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６３のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６４のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６５のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６６のＶＬ；
配列番号３６７のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３６８のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３６９のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３７０のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３７１のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３７２のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３７３のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３７４のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３７５のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３７６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３７７のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３７８のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３７９のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３８０のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号３８１のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；又は
配列番号３８２のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ
を含む。
本発明の別の代表的なＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを含むタンパク質（例えばｓｃＦｖ）である。本発明者らは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ内でＮＧモチーフを突然変異させることにより、ＣＤ３３結合特性を維持しながら翻訳後修飾の可能性を低下させ得ることを見出した。これらの突然変異は熱安定性も促進し得る。
配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを有するＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ＮＧモチーフに対して突然変異させ得る。配列番号８２のＶＬは、位置９７～９８（ＥＵインデックスに従う残基の付番を使用）でＮＧモチーフを有する。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置９７のＮ残基が置換される（例えば、Ｎ９７Ｓ、Ｎ９７Ｑ、Ｎ９７Ｖ、Ｎ９７Ｇ、Ｎ９７Ｗ、Ｎ９７Ｔ、Ｎ９７Ｉ、Ｎ９７Ｅ、Ｎ９７Ａ、Ｎ９７Ｒ又はＮ９７Ｌ）配列番号８２のＶＬを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置９８のＧ残基が置換される（例えば、Ｇ９８Ｖ、Ｇ９８Ａ、Ｇ９８Ｐ、Ｇ９８Ｌ又はＧ９８Ｔ）配列番号２７２のＶＬを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、位置９７のＮ残基が置換され（例えば、Ｎ９７Ｓ、Ｎ９７Ｑ、Ｎ９７Ｖ、Ｎ９７Ｇ、Ｎ９７Ｗ、Ｎ９７Ｔ、Ｎ９７Ｉ、Ｎ９７Ｅ、Ｎ９７Ａ、Ｎ９７Ｒ又はＮ９７Ｌ）、位置９８のＧ残基が置換される（例えば、Ｇ９８Ｖ、Ｇ９８Ａ、Ｇ９８Ｐ、Ｇ９８Ｌ又はＧ９８Ｔ）配列番号８２のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、配列番号３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７又は３９８のＶＬを含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８３のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８４のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８５のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８６のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８７のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８８のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８９のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９０のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９１のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９２のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９３のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９４のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９５のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９６のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９７のＶＬ；又は
配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９８のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、配列番号２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２又は３８２のＶＨドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、配列番号３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７又は３９８のＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、配列番号２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２又は３８２のＶＨドメインと、配列番号３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７又は３９８のＶＬドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、同一性は８５％である。いくつかの実施形態では、同一性は９０％である。いくつかの実施形態では、同一性は９１％である。いくつかの実施形態では、同一性は９１％である。いくつかの実施形態では、同一性は９２％である。いくつかの実施形態では、同一性は９３％である。いくつかの実施形態では、同一性は９４％である。いくつかの実施形態では、同一性は９４％である。いくつかの実施形態では、同一性は９５％である。いくつかの実施形態では、同一性は９６％である。いくつかの実施形態では、同一性は９７％である。いくつかの実施形態では、同一性は９８％である。いくつかの実施形態では、同一性は９９％である。
２つの配列の間のパーセント同一性は、それらの配列により共有される同一である位置の数の関数であり（即ち、％同一性＝同一である位置の数／位置の総数ｘ１００）、この２つの配列の最適アライメントのために導入される必要があるギャップ数及び各ギャップの長さを考慮する。
２つのアミノ酸配列の間のパーセント同一性は、ＰＡＭ１２０重み残基表、１２のギャップ長ペナルティ及び４のギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１－１７（１９８８））のアルゴリズムを使用して決定され得る。さらに、２つの配列の間のパーセント同一性は、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリクス又はＰＡＭ２５０マトリクスの何れか及び１６、１４、１２、１０、８、６又は４のギャップ重み及び１、２、３、４、５又は６の長さ重みを使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ＿ｇｃｇ＿ｃｏｍで入手可能）においてＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４－４５３（１９７０））アルゴリズムを使用して決定され得る。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する変異抗原結合ドメインは、ＣＤ３３と結合する親抗原結合断片の所望の機能特性を保持しながら、ＣＤＲ領域の何れかにおいて１又は２個の保存的置換を含む。
「保存的修飾」は、アミノ酸修飾を含有する抗体の結合の特徴に顕著に影響しないか又はそれを変化させないアミノ酸修飾を指す。保存的修飾には、アミノ酸置換、付加及び欠失が含まれる。保存的アミノ酸置換は、同様の側鎖を有するアミノ酸残基でアミノ酸が置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、よく定められており、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン、トリプトファン）、芳香族側鎖（例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン、チロシン）、脂肪族側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン）、アミド（例えば、アスパラギン、グルタミン）、ベータ－分岐状側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び硫黄含有側鎖（システイン、メチオニン）を有するアミノ酸を含む。さらに、アラニンスキャニング突然変異誘発に対して以前に記載されているように、ポリペプチド中の何れかのネイティブ残基もアラニンで置換され得る（ＭａｃＬｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｓｃａｎｄ Ｓｕｐｐｌ ６４３：５５－６７；Ｓａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ａｄｖ Ｂｉｏｐｈｙｓ ３５：１－２４）。本発明の抗体に対するアミノ酸置換は、例えば、ＰＣＲ突然変異誘発（米国特許第４，６８３，１９５号明細書）によって公知の方法により行われ得る。代わりに、変異体のライブラリは、例えば、１１アミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）をコードするランダム（ＮＮＫ）又は非ランダムコドン、例えばＤＶＫコドンを使用して作製され得る。得られる変異体は、本明細書中に記載のアッセイを使用してそれらの特徴について試験され得る。
ＣＤ３３に結合する抗原結合断片を作製する方法
本開示で提供されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、様々な技術を使用して作製され得る。例えば、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎのハイブリドーマ法は、ＣＤ３３に結合するＶＨ／ＶＬ対を同定するために使用され得る。ハイブリドーマ法において、マウス又は他の宿主動物、例えばハムスター、ラット又はニワトリなどに対して、ヒト及び／又はｃｙｎｏ ＣＤ３３で免疫付与を行い、続いてハイブリドーマ細胞を形成するための標準的な方法を使用して、免疫付与した動物からの脾臓細胞と骨髄腫細胞との融合を行う。単一不死化ハイブリドーマ細胞から生じたコロニーは、所望の特性、例えば結合特異性、交差反応性又はその欠如、抗原に対する親和性及び何らかの所望の機能を有するＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含有する抗体の産生についてスクリーニングされ得る。
非ヒト動物に免疫付与することによって作製されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインはヒト化され得る。ヒトアクセプターフレームワークの選択を含む代表的なヒト化技術としては、ＣＤＲ移植法（米国特許第５，２２５，５３９号明細書）、ＳＤＲ移植法（米国特許第６，８１８，７４９号明細書）、リサーフェイシング（Ｐａｄｌａｎ，（１９９１）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８：４８９－４９９）、特異性決定残基リサーフェイシング（米国特許出願公開第２０１０／０２６１６２０号明細書）、ヒトフレームワーク適合化（米国特許第８，７４８，３５６号明細書）又は超ヒト化（米国特許第７，７０９，２２６号明細書）が挙げられる。これらの方法において、親抗体のＣＤＲ又はＣＤＲ残基のサブセットは、ＣＤＲの長さ又はカノニカル構造同一性又はそれらの組み合わせにおける類似性に基づいて、親フレームワークに対するそれらの全体的な相同性に基づき選択され得るヒトフレームワーク上に移される。
ヒト化抗原結合ドメインは、国際公開第１９９０／００７８６１号パンフレット及び同第１９９２／２２６５３号パンフレットに記載のものなどの技術により、又は例えば抗原結合ドメインの親和性を向上させるためにＣＤＲの何れかで変動性を導入することにより、結合親和性を保存するための変更されたフレームワーク支持体残基を組み込むことによって（戻し突然変異）、所望の抗原に対するそれらの選択性又は親和性を改善するためにさらに最適化され得る。
ＣＤ３３に結合する抗原結合断片を作製するために、そのゲノムにおいてヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座を保有する、マウス、ラット又はニワトリなどのトランスジェニック動物が使用され得、例えば米国特許第６，１５０，５８４号明細書、国際公開第１９９９／４５９６２号パンフレット、同第２００２／０６６６３０号パンフレット、同第２００２／４３４７８号パンフレット、同第２００２／０４３４７８号パンフレット及び同第１９９０／０４０３６号パンフレットに記載されている。このような動物における内在性の免疫グロブリン遺伝子座が破壊又は欠失させられ得、相同又は非相同組み換えを使用して、トランス染色体を使用して、又はミニ遺伝子を使用して、少なくとも１つの完全又は部分的ヒト免疫グロブリン遺伝子座が動物のゲノムに挿入され得る。上記のような技術を使用して、選択された抗原に対するヒト抗体を提供するために、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ（ｗｗｗ＿ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ＿ｃｏｍ）、Ｈａｒｂｏｕｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（ｗｗｗ＿ｈａｒｂｏｕｒａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ＿ｃｏｍ）、Ｏｐｅｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（ＯＭＴ）（ｗｗｗ＿ｏｍｔｉｎｃ＿ｎｅｔ）、ＫｙＭａｂ（ｗｗｗ＿ｋｙｍａｂ＿ｃｏｍ）、Ｔｒｉａｎｎｉ（ｗｗｗ．ｔｒｉａｎｎｉ＿ｃｏｍ）及びＡｂｌｅｘｉｓ（ｗｗｗ＿ａｂｌｅｘｉｓ＿ｃｏｍ）などの会社と契約し得る。
ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ファージディスプレイライブラリから選択され得、このファージは、ヒト免疫グロブリン又はＦａｂなどのそれらの一部、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）又は非対合若しくは対合抗体可変領域を発現するように改変される。ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、例えば、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５－９６及び国際公開第０９／０８５４６２号パンフレット）に記載のようなバクテリオファージｐＩＸコートタンパク質との融合タンパク質として抗体重鎖及び軽鎖可変領域を発現するファージディスプレイライブラリから単離され得る。ライブラリは、ヒト及び／又はｃｙｎｏ ＣＤ３３に対するファージ結合についてスクリーニングされ得、得られた陽性クローンがさらに特徴評価され得、Ｆａｂがクローン溶解物から単離され、ｓｃＦｖ又は抗原結合断片の他の立体配置に変換される。
本開示の免疫原性抗原の調製及び抗原結合ドメインの発現及び産生は、組み換えタンパク質産生などの何らかの適切な技術を使用して実施され得る。免疫原性抗原は、全細胞又は細胞又は組織抽出部を含む精製タンパク質又はタンパク質混合物の形態で動物に投与され得るか、この抗原は、前記抗原又はその一部をコードする核酸から動物の体内においてデノボで形成され得る。
半減期延長部分への複合化
本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを半減期延長部分に複合化し得る。代表的な半減期延長部分は、アルブミン、アルブミン変異体、アルブミン結合タンパク質及び／又はドメイン、トランスフェリン及びその断片及び類似体、免疫グロブリン（Ｉｇ）又はその断片、例えばＦｃ領域などである。上述の半減期伸長部分のアミノ酸配列は公知である。Ｉｇ又はその断片は、全てのアイソタイプ、即ちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む。
本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに複合化され得るさらなる半減期延長部分は、所望の特性に対して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子、例えばＰＥＧ５０００又はＰＥＧ２０，０００、異なる鎖長の脂肪酸及び脂肪酸エステル、例えばラウラート、ミリステート、ステアラート、アラキダート、ベヘナート、オレアート、アラキドナート、オクタン二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸など、ポリリジン、オクタン、炭水化物（デキストラン、セルロース、オリゴ糖又は多糖）を含む。これらの部分は、本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインとの直接融合であり得、標準的なクローニング及び発現技術によって作製され得る。代わりに、組み換え産生された本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインにその部分を連結させるために周知の化学カップリング法が使用され得る。
ペグ部分は、例えば、システイン残基を本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインのＣ－末端に組み込むか又はＣＤ３３結合部位から離れて面する残基位置にシステインを操作し、周知の方法を使用してシステインにペグ化基を付着させることにより、本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに複合化され得る。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合断片は、半減期延長部分に複合化される。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、Ｉｇの断片、Ｉｇ定常領域、Ｉｇ定常領域の断片、Ｆｃ領域、トランスフェリン、アルブミン、アルブミン結合ドメイン又はポリエチレングリコールである。いくつかの実施形態では、半減期延長部分はＩｇ定常領域である。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分はＩｇである。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分はＩｇの断片である。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分はＩｇ定常領域である。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分はＩｇ定常領域の断片である。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分はＦｃ領域である。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分はアルブミンである。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分はアルブミン結合ドメインである。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分はトランスフェリンである。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分はポリエチレングリコールである。
半減期延長部分に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、既知のインビボモデルを利用して、それらの薬物動態学的特性について評価され得る。
免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又はＩｇ定常領域の断片に対する複合化
本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、Ｆｃエフェクター機能Ｃ１ｑ結合、補体依存的細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存的細胞介在性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用又は細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御を含め、抗体様特性を付与するためにＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片に複合化され得る。Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、本明細書中で論じられるような半減期延長部分としても機能する。本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、標準的な方法を使用して従来の全長抗体に改変され得る。ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む全長抗体は、本明細書中に記載のようにさらに改変され得る。
免疫グロブリン重鎖定常領域は、サブドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３から構成される。ＣＨ１ドメインは、重鎖上において、残基Ａ１１８～Ｖ２１５、ＣＨ２ドメイン残基Ａ２３１～Ｋ３４０及びＣＨ３ドメイン残基Ｇ３４１－Ｋ４４７にわたり、残基はＥＵインデックスに従い付番される。一部の例において、Ｇ３４１はＣＨ２ドメイン残基と呼ばれる。「ヒンジ」は、一般に、ヒトＩｇＧ１のＥ２１６を含み、Ｐ２３０で終わるものとして定義される。Ｉｇ Ｆｃ領域は、Ｉｇ定常領域の少なくともＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含み、従って少なくともＩｇ重鎖定常領域のおよそＡ２３１～Ｋ４４７の領域を含む。
本発明は、免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインも提供する。特定のこのような実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片はＩｇＧ１に由来する。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域は重鎖定常領域である。特定のこのような実施形態では、Ｉｇ定常領域はＩｇＧ１重鎖定常領域である。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域は軽鎖定常領域である。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、Ｆｃ領域を含む。特定のこのような実施形態では、Ｉｇ定常領域は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメインを含む。特定のこのような実施形態では、Ｉｇ定常領域は、ＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ３ドメインを含む。特定のこのような実施形態では、Ｉｇ定常領域は、ＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。特定のこのような実施形態では、Ｉｇ定常領域は、ＩｇＧ１ ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。特定のこのような実施形態では、ＩｇＧ１からのヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインである。ヒンジの一部とは、Ｉｇヒンジの１つ以上のアミノ酸残基を指す。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。特定のこのような実施形態では、ＩｇＧ１からの、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインである。
特定の実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、配列番号２７８のアミノ酸配列を含む。
重鎖の位置２２０のシステイン残基は、定常領域と軽鎖との間のシステイン架橋の形成を防ぐために突然変異させ得る。従って、特定の実施形態では、Ｉｇ定常領域は、位置２２０にシステインではない残基を含む。一実施形態では、Ｉｇ定常領域は、位置２２０にセリンを含む。
特定の実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、配列番号２７９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＮ末端に複合化される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＣ末端に複合化される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、第２のリンカー（Ｌ２）を介してＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片に複合化される。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０のアミノ酸配列を含む。
Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片に複合化される本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、いくつかの既知のアッセイを使用してそれらの機能性について評価され得る。ＣＤ３３への結合は、本明細書中に記載の方法を使用して評価され得る。Ｉｇ定常ドメイン又はＩｇ定常領域の断片、例えばＦｃ領域などにより付与される特性の変化は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ又はＦｃＲｎ受容体などの受容体の可溶性形態を使用するか又は例えばＡＤＣＣ、ＣＤＣ又はＡＤＣＰを測定する細胞に基づくアッセイを使用して、Ｆｃ受容体結合アッセイにおいてアッセイされ得る。
ＡＤＣＣは、標的細胞としてＣＤ３３発現細胞及びエフェクター細胞としてＮＫ細胞を用いるインビトロアッセイを使用して評価され得る。細胞溶解は、溶解された細胞からの標識（例えば放射性基質、蛍光色素又は天然細胞内タンパク質）の放出によって検出され得る。代表的なアッセイにおいて、標的細胞は１標的細胞対４エフェクター細胞の比で使用される。標的細胞は、ＢＡＴＤＡで予め標識され、エフェクター細胞及び試験抗体と合わせられる。試料を２時間温置し、上清への放出されたＢＡＴＤＡを測定することによって細胞溶解を測定する。データは、０．６７％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）での最大の細胞傷害性に対して正規化され、ミニマルコントロールは、抗体の非存在下での標的細胞からのＢＡＴＤＡの自然放出により決定される。
ＡＤＣＰは、エフェクター細胞として単球由来マクロファージ及びＧＦＰ又は他の標識された分子を発現するように改変されている標的細胞として何れかのＣＤ３３発現細胞を使用することによって評価され得る。代表的なアッセイにおいて、エフェクター：標的細胞比は、例えば４：１であり得る。本発明の抗体あり又はなしで４時間にわたり標的細胞とともにエフェクター細胞を温置し得る。温置後、アキュターゼを使用して細胞を剥離し得る。マクロファージは、蛍光標識にカップリングされた抗ＣＤ１１ｂ及び抗ＣＤ１４抗体で特定され得、パーセント食作用は、標準的方法を使用してＣＤ１１＋ＣＤ１４＋マクロファージにおいて％ＧＦＰ蛍光に基づいて決定され得る。
細胞のＣＤＣは、例えばＲＰＭＩ－Ｂ（１％ＢＳＡを添加したＲＰＭＩ）中で細胞１ｘ１０５個／ウェル（５０μＬ／ウェル）でＤａｕｄｉ細胞を播種し、０～１００μｇ／ｍＬの最終濃度でウェルに５０μＬの試験タンパク質を添加し、室温で１５分間反応物を温置し、１１μＬのプールヒト血清をウェルに添加し、３７℃で４５分間反応物を温置することによって測定され得る。パーセンテージ（％）溶解された細胞は、標準的な方法を使用したＦＡＣＳアッセイにおいて％ヨウ化プロピジウム染色された細胞として検出され得る。
本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質
本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、標準的な方法を使用した様々な設計の単一特異性又は多特異性タンパク質に改変され得る。
本開示は、本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む単一特異性タンパク質も提供する。
いくつかの実施形態では、単一特異性タンパク質は抗体である。
本開示は、本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質も提供する。
いくつかの実施形態では、本多特異性タンパク質は二特異性である。
いくつかの実施形態では、本多特異性タンパク質は三特異性である。
いくつかの実施形態では、本多特異性タンパク質は四特異性である。
いくつかの実施形態では、本多特異性タンパク質はＣＤ３３への結合に対して１価である。
いくつかの実施形態では、本多特異性タンパク質はＣＤ３３への結合に対して２価である。
本開示は、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインを含む単離された多特異性タンパク質も提供する。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、Ｔ細胞抗原である。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞抗原は、ＣＤ８＋Ｔ細胞抗原である。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＮＫ細胞抗原である。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、ＴＲＧＶ９又はＮＫＧ２Ｃである。
特定の実施形態では、多特異性タンパク質は、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインと、ＴＲＧＶ９に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む二特異性タンパク質である。ＴＲＧＶ９はＶγ９としても知られ、γδＴ細胞上で発現される。本明細書中で使用される場合、「ＴＲＧＶ９」という用語は、γδＴ細胞の表面上で発現される場合にＴ細胞受容体を形成可能なポリペプチドを指す。ＴＲＧＶ９発現γδＴ細胞は、とりわけヒト胎児において発生するための最初のＴ細胞であり、健康な成人末梢血細胞中での主なγδＴ細胞サブセットである。「ＴＲＧＶ９」という用語は、細胞（Ｔ細胞を含む）により天然に発現されるか又は本ポリペプチドをコードする遺伝子又はｃＤＮＡで形質移入された細胞上で発現され得る何らかのＴＲＧＶ９変異体、アイソフォーム及び相同種を含む。示されない限り、好ましくは、ＴＲＧＶ９は、ヒトＴＲＧＶ９である。ヒトＴＲＧＶ９アミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＧ＿００１３３６．２により提供される。ヒトにおける主要なγ／δＴ細胞サブセットであるＶγ９Ｖδ２Ｔリンパ球は、リン抗原、特定の腫瘍細胞及びアミノビスホスホネートで処理された細胞を認識し得る。Ｖγ９Ｖδ２Ｔリンパ球は、様々な腫瘍細胞に対する細胞傷害活性を示し得る。通常の技術を有する者は、γ／δＴＣＲが、抗原認識に関与する共有結合しているγ及びδ鎖及び非共有結合単系統的タンパク質ＣＤ３δ、γ、ε及びζ鎖から構成されるヘテロ二量体ＴＣＲ複合体であることを認識する。Ｖγ９ＴＣＲは、γ／δＴ細胞のサブセット上で発現されるＴＣＲγ鎖の変異体である。
理論により縛られることを望むものではないが、ＴＲＧＶ９抗原及びＣＤ３３抗原の両方を発現する二特異性抗体は、ＣＤ３３を発現する癌性細胞にγδＴ細胞を動員し得る。多特異性抗体（例えば二特異性抗体）は、癌細胞の死滅を引き起こすようにするために、エフェクター細胞（例えばγδＴ細胞）及び標的細胞を一緒に架橋し得る。γδＴ細胞は自然免疫を有し得る。理論により縛られることを望むものではないが、γδＴ細胞は、末梢ＣＤ３＋Ｔ細胞の少数集団（約１％～５％）のみに相当するが、上皮組織ではＴ細胞の主要なサブセット（約２０％～５０％）を構成する。循環γδＴ細胞は、Ｖγ９（ＴＲＧＶ９）及びＶδ２（ＴＲＶＤ２）鎖のヘテロ二量体を主に発現し、一方で組織γδＴ細胞は、異なるＶγ鎖に付随するＶδ１鎖を選択的に発現する。
ヒトにおいて、γδＴ細胞は、強力な抗癌機能が付与される（高い細胞傷害性及びインターフェロンγ分泌）。さらに、γδＴ細胞は、以前は自然骨髄系列細胞にのみ限定される機能であった食作用が可能であり、αβＴ細胞に対して効率的な抗原提示細胞として挙動し、適応免疫反応を誘導する。γδＴ細胞は癌性組織、腫瘍及び癌性細胞に浸潤し得る。ＴＲＧＶ９抗原及びＣＤ３３抗原の両方を発現する二特異性抗体は、Ｔ細胞のリダイレクションをあまり示し得ないか又は全く示し得ず、Ｔ細胞のパン活性化をあまり示し得ず、γδＴ細胞の選択的な動員を介した強力な癌溶解の誘導が向上している。従って、ＴＲＧＶ９抗原及びＣＤ３３抗原の両方を発現する二特異性抗体は、サイトカインストーム誘導により生じ得る重篤な副作用につながり得ない。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＣＤ３εである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原（例えばＴＲＧＶ９）に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原（例えばＴＲＧＶ９）に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原（例えばＴＲＧＶ９）に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ’）２を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原（例えばＴＲＧＶ９）に結合する第２の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原（例えばＴＲＧＶ９）に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆｖを含む
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原（例えばＴＲＧＶ９）に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆｄを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原（例えばＴＲＧＶ９）に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、リンパ球抗原（例えばＴＲＧＶ９）に結合する第２の結合ドメインは、ＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、約５～５０アミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、約５～４０アミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、約１０～３０アミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、約１０～２０アミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１、２、３、４、５、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、８９、１６７、１７２、１７６、２５３、２５４又は２５５のＨＣＤＲ１、配列番号６、７、８、９、１０、１１、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、９０、９１、１６８、１７３、１７７、２５６、２５７又は２５８のＨＣＤＲ２、配列番号１２、１３、１４、１５、１６、１７、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、９２、９３、９４、１６９、１７４、１７８、１８０、２５９、２６０又は２６１のＨＣＤＲ３、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、９８、９９、１００、１８２、１８６、１８９、１９３、１９７、２０１、２６５又は２６６のＬＣＤＲ１、配列番号６９、７０、７１、７２、７３、７４、１０１、１０２、１０３、１８３、１８７、１９０、１９４、１９８、２６７又は２６８のＬＣＤＲ２及び配列番号７５、７６、７７、７８、７９、８０、１０４、１８４、１９１、１９５、１９９、２６９又は２７０のＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７；
それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；
それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０；
それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；
それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４；
それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９；
それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６；
それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むｓｃＦｖであり、第２の抗原結合ドメインはＴＲＧＶ９に結合する（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むｓｃＦｖであり、第２の抗原結合ドメインはＴＲＧＶ９に結合する（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むｓｃＦｖであり、第２の抗原結合ドメインはＴＲＧＶ９に結合する（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むｓｃＦｖであり、第２の抗原結合ドメインはＴＲＧＶ９に結合する（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むｓｃＦｖであり、第２の抗原結合ドメインはＴＲＧＶ９に結合する（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、第２の抗原結合ドメインはＴＲＧＶ９に結合する（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬを含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬを含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを含むｓｃＦｖであり、第２の抗原結合ドメインは、ＴＲＧＶ９に結合する（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを含むｓｃＦｖであり、第２の抗原結合ドメインは、ＴＲＧＶ９に結合する（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含むｓｃＦｖであり、第２の抗原結合は、ＴＲＧＶ９に結合する（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを含むｓｃＦｖであり、第２の抗原結合ドメインは、ＴＲＧＶ９に結合する（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを含むｓｃＦｖであり、第２の抗原結合ドメインは、ＴＲＧＶ９に結合する（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬを含むｓｃＦｖであり、第２の抗原結合ドメインは、ＴＲＧＶ９に結合する（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号６０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号６１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６４のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５６のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５９のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２６４のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号９５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号９６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１７０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１７１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１７５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１７９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１８１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号９６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７３のアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８２のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８５のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８７のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７１のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７２のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７３のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１８５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１９２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１９６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２００のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２０２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２７４、２７５又は２７６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２０４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２０５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２０６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２０９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２２１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７６のアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１３のアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７４のアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７５のアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７６のアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１３のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖであり、ＴＲＧＶ９に結合する第２の抗原結合ドメイン（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）である。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１６のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖであり、ＴＲＧＶ９に結合する第２の抗原結合ドメイン（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）である。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖであり、ＴＲＧＶ９に結合する第２の抗原結合ドメイン（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）である。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７４のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖであり、ＴＲＧＶ９に結合する第２の抗原結合ドメイン（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）である。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７５のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖであり、ＴＲＧＶ９に結合する第２の抗原結合ドメイン（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）である。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２７６のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖであり、ＴＲＧＶ９に結合する第２の抗原結合ドメイン（例えば、ここで、第２の結合ドメインは、ＶＨＨである）である。いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、
配列番号１４１のＨＣＤＲ１、配列番号１４２のＨＣＤＲ２、配列番号１４３のＨＣＤＲ３、配列番号１４４のＬＣＤＲ１、配列番号１４５のＬＣＤＲ２及び配列番号１４６のＬＣＤＲ３；
配列番号１４７のＶＨ及び配列番号１４８のＶＬ；
配列番号１４９のＨＣＤＲ１、配列番号１５０のＨＣＤＲ２、配列番号１５１のＨＣＤＲ３、配列番号１５２のＬＣＤＲ１、配列番号１５３のＬＣＤＲ２及び配列番号１５４のＬＣＤＲ３；又は
配列番号１５５のＶＨ及び配列番号１５６のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、
配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２３８のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４２のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４３のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４４のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
配列番号２４５のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
配列番号２４６のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
配列番号２４７のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ
を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片に複合化され、及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、第２の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片に複合化される。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域の断片は、Ｆｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＣＨ３ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、多特異性タンパク質は、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインと、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片との間及びリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと、第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片との間に第２のリンカー（Ｌ２）をさらに含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ２アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ３アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ４アイソタイプである。
第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、本明細書中に記載のようにさらに改変され得る。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＦｃγＲへの本多特異性タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む。特定のこのような実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。
特定の実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ突然変異を含み、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。特定のこのような実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１アイソタイプである。いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）への本多特異性タンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む。
いくつかの実施形態では、ＦｃγＲへの本多特異性タンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。
特定の実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ突然変異を含み、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。特定のこのような実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ及びＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ突然変異を含み、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。特定の実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１アイソタイプである。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ又はそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、本多特異性タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異を含む。
いくつかの実施形態では、本多特異性タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、プロテインＡへの結合を調整する少なくとも１つの突然変異を含む。このような修飾は、抗体産生中の精製目的に有利であり得る。
特定の実施形態では、プロテインＡへの結合を調整する少なくとも１つの突然変異はＨ４３５／Ｙ４３６Ｆであり、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。特定のこのような実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ及びＨ４３５／Ｙ４３６Ｆ突然変異を含み、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。特定の実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１アイソタイプである。いくつかの実施形態では、本多特異性タンパク質は、第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインの断片における少なくとも１つの突然変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、以下の突然変異を含む：
第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ及び第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ；又は
第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ及び第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ。
ＣＤ３３に結合する抗原結合断片を含む多特異性タンパク質の作製
本開示のＣＤ３３を結合する抗原結合断片は、本発明の範囲内に包含される多特異性抗体にも改変され得る。
ＣＤ３３を結合する抗原結合断片は、Ｆａｂアーム交換を使用して作製される全長多特異性抗体に改変され得、ここで、インビトロでＦａｂアーム交換を促進するＩｇ定常領域ＣＨ３ドメイン内において２つの単一特異性二価抗体に置換が導入される。この方法において、２つの単一特異性二価抗体は、ヘテロ二量体安定性を促進するＣＨ３ドメインでの特定の置換を有するように改変され；この抗体は、ヒンジ領域のシステインがジスルフィド結合異性化を受けることを可能にするのに十分な還元条件下で一緒に温置され；それによりＦａｂアーム交換によって二特異性抗体を生成させる。温置条件は、最適には、非還元に回復され得る。使用され得る代表的な還元剤は、２－メルカプトエチルアミン（２－ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ－システイン及びベータ－メルカプトエタノール、好ましくは２－メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、ｐＨ５～８での、例えばｐＨ７．０での又はｐＨ７．４での少なくとも２５ｍＭ ２－ＭＥＡ存在下での又は少なくとも０．５ｍＭジチオスレイトールの存在下での、少なくとも２０℃の温度での少なくとも９０分にわたる温置が使用され得る。
使用され得るＣＨ３突然変異は、ノブ－イン－ホール（Ｋｎｏｂ－ｉｎ－Ｈｏｌｅ）突然変異（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、静電的に合致する突然変異（Ｃｈｕｇａｉ、Ａｍｇｅｎ、ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ、Ｏｎｃｏｍｅｄ）、鎖交換改変ドメインボディ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｄｕｏｂｏｄｙ（登録商標）突然変異（Ｇｅｎｍａｂ）及び他の非対称突然変異（例えばＺｙｍｅｗｏｒｋｓ）などの技術を含む。
ノブ－イン－ホール突然変異は、例えば、国際公開第１９９６／０２７０１１号パンフレットで開示され、小さい側鎖があるアミノ酸（ホールが第１のＣＨ３領域に導入され、大きい側鎖があるアミノ酸（ノブ）が第２のＣＨ３領域に導入され、その結果、第１のＣＨ３領域と第２のＣＨ３領域との間で優先的な相互作用が起こる、ＣＨ３領域の界面での突然変異を含む。ノブ及びホールを形成する代表的なＣＨ３領域突然変異は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである。
重鎖ヘテロ二量体形成は、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号明細書、同第２００９／０１８２１２７号明細書、同第２０１０／０２８６３７号明細書又は同第２０１１／０１２３５３２号明細書に記載のように、第１のＣＨ３領域で正荷電残基及び第２のＣＨ３領域で負荷電残基を置換することにより静電気的相互作用を使用することによって促進され得る。
重鎖ヘテロ二量体化を促進するために使用され得る他の非対称突然変異は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号明細書又は同第２０１３／０１９５８４９号明細書（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）に記載のような、Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗである。
ＳＥＥＤｂｏｄｙ突然変異は、米国特許出願公開第２００７０２８７１７０号明細書に記載のように、重鎖ヘテロ二量体化を促進するためにＩｇＡ残基で選択ＩｇＧ残基を置換することを含む。
使用され得る他の代表的な突然変異は、国際公開第２００７／１４７９０１号パンフレット、同第２０１１／１４３５４５号パンフレット、同第２０１３１５７９５４号パンフレット、同第２０１３０９６２９１号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１８／０１１８８４９号明細書に記載のように、Ｒ４０９Ｄ＿Ｋ３７０Ｅ／Ｄ３９９Ｋ＿Ｅ３５７Ｋ、Ｓ３５４Ｃ＿Ｔ３６６Ｗ／Ｙ３４９Ｃ＿Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｙ３４９Ｃ＿Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃ＿Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｋ／Ｌ３５１Ｄ、Ｌ３５１Ｋ／Ｙ３４９Ｅ、Ｌ３５１Ｋ／Ｙ３４９Ｄ、Ｌ３５１Ｋ／Ｌ３６８Ｅ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｋ３９２Ｄ／Ｄ３９９Ｋ、Ｋ３９２Ｄ／Ｅ３５６Ｋ、Ｋ２５３Ｅ＿Ｄ２８２Ｋ＿Ｋ３２２Ｄ／Ｄ２３９Ｋ＿Ｅ２４０Ｋ＿Ｋ２９２Ｄ、Ｋ３９２Ｄ＿Ｋ４０９Ｄ／Ｄ３５６Ｋ＿Ｄ３９９Ｋである。
Ｄｕｏｂｏｄｙ（登録商標）突然変異（Ｇｅｎｍａｂ）は、例えば米国特許第９１５０６６３号明細書及び米国特許出願公開第２０１４／０３０３３５６号明細書で開示され、突然変異Ｆ４０５Ｌ／Ｋ４０９Ｒ、野生型／Ｆ４０５Ｌ＿Ｒ４０９Ｋ、Ｔ３５０Ｉ＿Ｋ３７０Ｔ＿Ｆ４０５Ｌ／Ｋ４０９Ｒ、Ｋ３７０Ｗ／Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９ＡＦＧＨＩＬＭＮＲＳＴＶＷＹ／Ｋ４０９Ｒ、Ｔ３６６ＡＤＥＦＧＨＩＬＭＱＶＹ／Ｋ４０９Ｒ、Ｌ３６８ＡＤＥＧＨＮＲＳＴＶＱ／Ｋ４０９ＡＧＲＨ、Ｄ３９９ＦＨＫＲＱ／Ｋ４０９ＡＧＲＨ、Ｆ４０５ＩＫＬＳＴＶＷ／Ｋ４０９ＡＧＲＨ及びＹ４０７ＬＷＱ／Ｋ４０９ＡＧＲＨを含む。
ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインが組み込まれ得るさらなる二特異性又は多特異性構造は、二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ）（国際公開第２００９／１３４７７６号パンフレット；ＤＶＤは、構造ＶＨ１－リンカー－ＶＨ２－ＣＨを有する重鎖及び構造ＶＬ１－リンカー－ＶＬ２－ＣＬを有する軽鎖を含む全長抗体であり；リンカーは任意選択的である）、ロイシンジッパー又はコラーゲン二量体化ドメインなど、異なる特異性を有する２つの抗体アームを連結するための様々な二量体化ドメインを含む構造（国際公開第２０１２／０２２８１１号パンフレット、米国特許第５，９３２，４４８号明細書；同第６，８３３，４４１号明細書）、一緒に複合化される２つ以上のドメイン抗体（ｄＡｂｓ）、ダイアボディ、ラクダ抗体及び改変ラクダ抗体などの重鎖のみの抗体、二重標的化（ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、ツーインワン抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、架橋されたＭａｂ（Ｋａｒｍａｎｏｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ）及びＣｏｖＸ－ｂｏｄｙ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）、ＩｇＧ様二特異性（ＩｎｎＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）及びＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）、ＳｃＦｖ／Ｆｃ融合物（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、二重親和性再標的化技術（Ｆｃ－ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）及び二重（ＳｃＦｖ）２－Ｆａｂ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ－－Ｃｈｉｎａ）、二重作用又はＢｉｓ－Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、二価二特異性（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）及びＦａｂ－Ｆｖ（ＵＣＢ－Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）を含む。ＳｃＦｖ－、ダイアボディに基づく及びドメイン抗体としては、二特異性Ｔ細胞Ｅｎｇａｇｅｒ（ＢｉＴＥ）（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、タンデムダイアボディ（Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、二重親和性再標的化技術（ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、単鎖ダイアボディ（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、ＴＣＲ様抗体（ＡＩＴ、受容体Ｌｏｇｉｃｓ）、ヒト血清アルブミンＳｃＦｖ融合（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）及びＣＯＭＢＯＤＹ（Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、二重標的化ナノボディ（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的化重鎖単独ドメイン抗体が挙げられるが、限定されない。
本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、３本のポリペプチド鎖を含む多特異性タンパク質にも改変され得る。このような設計において、少なくとも１つの抗原結合ドメインはｓｃＦｖの形態である。代表的な設計は、以下のものを含む（ここで、「１」は、第１の抗原結合ドメインを示し、「２」は、第２の抗原結合ドメインを示し、「３」は、第３の抗原結合ドメインを示す：
設計１：鎖Ａ）ｓｃＦｖ１－ＣＨ２－ＣＨ３；鎖Ｂ）ＶＬ２－ＣＬ；鎖Ｃ）ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３
設計２：鎖Ａ）ｓｃＦｖ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３；鎖Ｂ）ＶＬ２－ＣＬ；鎖Ｃ）ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３
設計３：鎖Ａ）ｓｃＦｖ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３；鎖Ｂ）ＶＬ２－ＣＬ；鎖Ｃ）ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３
設計４：鎖Ａ）ＣＨ２－ＣＨ３－ｓｃＦｖ１；鎖Ｂ）ＶＬ２－ＣＬ；鎖Ｃ）ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３。
ＣＨ３改変は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号明細書又は同第２０１３／０１９５８４９号明細書（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）に記載のように、突然変異Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗなど、設計１～４に組み込まれ得る。
アイソタイプ、アロタイプ及びＦｃ改変
Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片、例えば本開示のタンパク質に存在するＦｃ領域は、何れかのアロタイプ又はアイソタイプであり得る。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ２アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ３アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ４アイソタイプである。
Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は何れかのアロタイプであり得る。アロタイプは、結合又はＦｃ介在性エフェクター機能などのＩｇ定常領域の特性に対して影響がないことが予想される。その断片のＩｇ定常領域を含む治療用タンパク質の免疫原性は、急性輸液反応のリスク向上及び治療反応の持続時間の短縮と関連する（Ｂａｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３４８：６０２－０８）。その断片のＩｇ定常領域を含む治療用タンパク質が宿主において免疫反応を誘導する程度は、一部Ｉｇ定常領域のアロタイプにより決定され得る（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １２：２１３－２１）。Ｉｇ定常領域アロタイプは、本抗体の定常領域配列における特異的な位置でのアミノ酸配列のバリエーションに関連する。表２は、選択されるＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４アロタイプを示す。
Figure 2023517660000008
Ｃ末端リジン（ＣＴＬ）は、血流中の内因性循環カルボキシペプチダーゼによりＩｇ定常領域から除去され得る（Ｃａｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ １０８：４０４－４１２）。製造中、ＣＴＬ除去は、米国特許出願公開第２０１４０２７３０９２号明細書に記載のように、細胞外Ｚｎ２＋、ＥＤＴＡ又はＥＤＴＡ－Ｆｅ３＋の濃度の調節により最大レベル未満まで調節され得る。タンパク質のＣＴＬ含量は既知の方法を使用して測定され得る。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合断片のＣ末端リジン含量は約１０％～約９０％である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端リジン含量は約２０％～約８０％である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端リジン含量は約４０％～約７０％である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端リジン含量は約５５％～約７０％である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端リジン含量は約６０％である。
ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及び／又はＡＤＣＰ及び／又は薬物動態学的特性など、それらのエフェクター機能を調整するために、Ｉｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに対してＦｃ領域突然変異が行われ得る。これは、活性化するＦｃγＲ（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩ）、抑制性のＦｃγＲＩＩｂに及び／又はＦｃＲｎに対する突然変異Ｆｃの結合を調整する、Ｆｃへの突然変異を導入することによって達成され得る。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、Ｉｇ定常領域において又はＩｇ定常領域の断片において少なくとも１つの突然変異を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの突然変異はＦｃ領域にある。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、Ｆｃ領域において少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個の突然変異を含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ＦｃＲｎへの抗体の結合を調整するＦｃ領域における少なくとも１つの突然変異を含む。
半減期（例えばＦｃＲｎへの結合）を調整するために突然変異させ得るＦｃ位置としては、位置２５０、２５２、２５３、２５４、２５６、２５７、３０７、３７６、３８０、４２８、４３４及び４３５が挙げられる。単独で又は組み合わせて行われ得る代表的な突然変異は、突然変異Ｔ２５０Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｉ２５３Ａ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｐ２５７Ｉ、Ｔ３０７Ａ、Ｄ３７６Ｖ、Ｅ３８０Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｈ４３３Ｋ、Ｎ４３４Ｓ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、Ｈ４３５Ａ及びＨ４３５Ｒである。半減期を延長するために行われ得る代表的な単一又は組み合わせ突然変異は、突然変異Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及びＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａである。半減期を短縮させるため行われ得る代表的な単一又は組み合わせ突然変異は、突然変異Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ及びＨ４３５Ｒである。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ突然変異を含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、活性化するＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）へのタンパク質の結合を減少させ、且つ／又はＣ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は食作用（ＡＤＣＰ）などのＦｃエフェクター機能を低下させる、Ｆｃ領域における少なくとも１つの突然変異を含む。
活性化するＦｃγＲへのタンパク質の結合を減少させ、続いてエフェクター機能を低下させるために突然変異させ得るＦｃ位置としては、位置２１４、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２６５、２６７、２６８、２７０、２９５、２９７、３０９、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１及び３６５が挙げられる。単一で又は組み合わせてなされ得る代表的な突然変異は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４における、突然変異Ｋ２１４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｇ２３６の欠失、Ｖ２３４Ａ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｑ２６８Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ｐ３２９Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｑ２９５Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３２７Ｓ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓである。ＡＤＣＣが低下したタンパク質を生じさせる代表的な組み合わせ突然変異は、ＩｇＧ１における突然変異Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、ＩｇＧ１におけるＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、ＩｇＧ２におけるＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ４におけるＦ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、ＩｇＧ４におけるＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、全ＩｇアイソタイプにおけるＮ２９７Ａ、ＩｇＧ２におけるＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、ＩｇＧ１におけるＫ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、ＩｇＧ２におけるＨ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ１におけるＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、ＩｇＧ１におけるＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、ＩｇＧ１におけるＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ４におけるＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ及びＩｇＧ４におけるＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓである。ＩｇＧ２からの残基１１７～２６０及びＩｇＧ４からの残基２６１～４４７を有するＦｃなど、ハイブリッドＩｇＧ２／４Ｆｃドメインも使用され得る。
ＣＤＣが低下したタンパク質を生じさせる代表的な突然変異はＫ３２２Ａ突然変異である。
ＩｇＧ４安定性を促進するためにＩｇＧ４において周知のＳ２２８Ｐ突然変異がなされ得る。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、Ｋ２１４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｇ２３６の欠失、Ｖ２３４Ａ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｑ２６８Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ｐ３２９Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｑ２９５Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３２７Ｓ、Ｌ３２８Ｆ、Ｋ３２２、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓからなる群から選択される少なくとも１つの突然変異を含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ突然変異を含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ突然変異を含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）への本タンパク質の結合を増強し、且つ及び／又はＣ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び／又は食作用（ＡＤＣＰ）などのＦｃエフェクター機能を促進するＦｃ領域における少なくとも１つの突然変異を含む。
活性化するＦｃγＲへの本タンパク質の結合を増加させる及び／又はＦｃエフェクター機能を向上させるために突然変異させ得るＦｃ位置としては、位置２３６、２３９、２４３、２５６、２９０、２９２、２９８、３００、３０５、３１２、３２６、３３０、３３２、３３３、３３４、３４５、３６０、３３９、３７８、３９６又は４３０（残基はＥＵインデックスに従い付番）が挙げられる。単一で又は組み合わせて行われ得る代表的な突然変異は、Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ｆ２４３Ｌ、Ｔ２５６Ａ、Ｋ２９０Ａ、Ｒ２９２Ｐ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｌ、Ｋ３２６Ａ、Ａ３３０Ｋ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ａ３３９Ｔ及びＰ３９６Ｌである。ＡＤＣＣ又はＡＤＣＰが向上したタンパク質を生じさせる代表的な組み合わせ突然変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅである。
ＣＤＣを促進するために突然変異させられ得るＦｃ位置としては、位置２６７、２６８、３２４、３２６、３３３、３４５及び４３０が挙げられる。単一で又は組み合わせてなされ得る代表的な突然変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｆ１２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｋ３２６Ａ、Ｋ３２６Ｗ、Ｅ３３３Ａ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ及びＥ４３０Ｔである。ＣＤＣが向上したタンパク質を生じさせる代表的な組み合わせ突然変異は、Ｋ３２６Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ａ、Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ、Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ、Ｓ２６７Ｅ／Ｓ３２４Ｔ及びＳ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔである。
本明細書中に記載の具体的な突然変異は、それぞれ配列番号２２２、２２３及び２２４の、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４野生型アミノ酸配列と比較した場合の突然変異である。
配列番号２２２、野生型ＩｇＧ１
Figure 2023517660000009
配列番号２２３；野生型ＩｇＧ２
Figure 2023517660000010
配列番号２２４；野生型ＩｇＧ４
Figure 2023517660000011
ＦｃγＲ又はＦｃＲｎへの抗体の結合は、フローサイトメトリーを使用して、各受容体を発現するように改変された細胞においてアッセイされ得る。代表的な結合アッセイにおいて、２×１０５個の細胞／ウェルを９６ウェルプレートに播種し、４℃で３０分間、ＢＳＡ染色緩衝液（ＢＤ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅＳ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＵＳＡ）中でブロッキング処理する。４℃において１．５時間、氷上で試験抗体とともに細胞を温置する。ＢＳＡ染色緩衝液で２回洗浄後、４℃で４５分間、Ｒ－ＰＥ標識された抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）とともに細胞を温置する。染色緩衝液中で細胞を２回洗浄し、次いで１５０μＬの１：２００希釈ＤＲＡＱ７ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ染色（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＵＳＡ）を含有する染色緩衝液中で再懸濁する。染色された細胞のＰＥ及びＤＲＡＱ７シグナルは、それぞれＢ２及びＢ４チャネルを使用して、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳＱｕａｎｔフローサイトメーター（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，ＵＳＡ）によって検出する。生細胞をＤＲＡＱ７排除でゲーティングし、回収された少なくとも１０，０００回のライブ事象に対して幾何平均蛍光シグナルを決定する。ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を分析のために使用する。データは、抗体濃度の対数対平均蛍光シグナルとしてプロットする。非線形回帰分析を行う。
糖鎖工学
Ｉｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインがＡＤＣＣに介在する能力は、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域オリゴ糖構成成分の断片を改変することによって促進され得る。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３は、周知の二分岐Ｇ０、Ｇ０Ｆ、Ｇ１、Ｇ１Ｆ、Ｇ２又はＧ２Ｆ形態においてグリカンの多数によりＡｓｎ２９７でＮ－グリコシル化される。Ｉｇ定常領域を含有するタンパク質は、一般的には少なくとも約８５％のグリカンフコース含量を有する非改変ＣＨＯ細胞により作製され得る。Ｉｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに連結される二分岐複合型オリゴ糖からのコアフコースの除去により、抗原結合又はＣＤＣ活性を変化させることなく、ＦｃγＲＩＩＩａ結合の改善を介して、タンパク質のＡＤＣＣが増強される。このようなタンパク質は、培養浸透圧の調節（Ｋｏｎｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６４（：２４９－６５，２０１２）、宿主細胞株としての変異ＣＨＯ株Ｌｅｃ１３の適用（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ２７７：２６７３３－２６７４０，２００２）、宿主細胞株としての変異ＣＨＯ株ＥＢ６６の適用（Ｏｌｉｖｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ；２（４）：４０５－４１５，２０１０；ＰＭＩＤ：２０５６２５８２）、宿主細胞株としてのラットハイブリドーマ細胞株ＹＢ２／０の適用（Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：３４６６－３４７３，２００３）、特異的に１，６－フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子に対する低分子干渉ＲＮＡの導入（Ｍｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ８８：９０１－９０８，２００４）又はβ－１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ及びゴルジα－マンノシダーゼＩＩ又は強力なアルファ－マンノシダーゼＩ阻害剤、キフネンシンの同時発現（Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８１：５０３２－５０３６，２００６，Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ９３：８５１－８６１、２００６；Ｘｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ９９：６５２－６５，２００８）など、二分岐複合型のＦｃオリゴ糖を有する比較的高度に脱フコシル化された免疫グロブリンの良好な発現につながることが報告される様々な方法を使用して達成され得る。
いくつかの実施形態では、本開示のＩｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、フコース含量が約１％～約１５％、例えば約１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％又は１％である二分岐グリカン構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、フコース含量が約５０％、４０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％又は２０％であるグリカン構造を有する。
「フコース含量」は、Ａｓｎ２９７での糖鎖内でのフコース単糖の量を意味する。フコースの相対量は、全ての糖構造に関するフコース含有構造のパーセンテージである。これらは、複数の方法、例えば：１）国際公開第２００８／０７７５４６ ２）号明細書に記載のようなＮ－グリコシダーゼＦで処理した試料（例えば複合体、ハイブリッド及びオリゴ－及び高マンノース構造）のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦを使用して；２）続く誘導体化でのＡｓｎ２９７グリカンの酵素的放出及び蛍光検出及び／又はＨＰＬＣ－ＭＳ（ＵＰＬＣ－ＭＳ）を用いたＨＰＬＣ（ＵＰＬＣ）による検出／定量により；３）第１のＧｌｃＮＡｃに連結されるフコースを除去する、Ｅｎｄｏ Ｓ又は第１のＧｌｃＮＡｃ単糖と第２のＧｌｃＮＡｃ単糖との間で切断する他の酵素でのＡｓｎ２９７グリカンの処理あり又はなしのネイティブ又は還元ｍＡｂのインタクトなタンパク質分析；４）酵素性消化（例えばトリプシン又はエンドペプチダーゼＬｙｓ－Ｃ）による構成ペプチドへのｍＡｂの消化及びＨＰＬＣ－ＭＳ（ＵＰＬＣ－ＭＳ）によるその後の分離、検出及び定量；５）Ａｓｎ２９７におけるＰＮＧａｓｅ Ｆでの特異的な酵素性脱グリコシル化によるｍＡｂタンパク質からのｍＡｂオリゴ糖の分離によって特徴評価され、定量され得る。このように放出されたオリゴ糖は、フルオロフォアで標識され、分離され、実験的質量と理論的質量の比較によるマトリクス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）質量分析によるグリカン構造の精密な特徴評価、イオン交換ＨＰＬＣ（ＧｌｙｃｏＳｅｐ Ｃ）によるシアル酸付加の度合いの決定、順相ＨＰＬＣ（ＧｌｙｃｏＳｅｐ Ｎ）による親水性基準に従うオリゴ糖形態の分離及び定量及び高性能キャピラリー電気泳動－レーザー誘起蛍光（ＨＰＣＥ－ＬＩＦ）によるオリゴ糖の分離及び定量を可能にする様々な補完的技術によって同定され得る。
「低フコース」又は「低フコース含量」は、本明細書中で使用される場合、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインが、フコース含量が約１％～１５％であるＩｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されることを指す。
「正常なフコース」又は「正常なフコース含量」は、本明細書中で使用される場合、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインが、フコース含量が約５０％超、一般的には約８０％超又は８５％超であるＩｇ定常領域に又はＩｇ定常領域の断片に複合化されることを指す。
抗イディオタイプ抗体
抗イディオタイプ抗体は、本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに特異的に結合する抗体である。
本発明は、本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに特異的に結合する抗イディオタイプ抗体も提供する。
本発明は、
配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；
配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ；
配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに特異的に結合する抗イディオタイプ抗体も提供する。
特定の実施形態では、抗イディオタイプ抗体は、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに特異的に結合する。
他の実施形態では、抗イディオタイプ抗体は、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに特異的に結合する。
他の実施形態では、抗イディオタイプ抗体は、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに特異的に結合する。
他の実施形態では、抗イディオタイプ抗体は、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに特異的に結合する。
他の実施形態では、抗イディオタイプ抗体は、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに特異的に結合する。
他の実施形態では、抗イディオタイプ抗体は、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインに特異的に結合する。
抗イディオタイプ（Ｉｄ）抗体は、抗体の抗原決定基（例えばパラトープ又はＣＤＲ）を認識する抗体である。Ｉｄ抗体は、抗原遮断又は非遮断であり得る。抗原遮断Ｉｄは、試料中の遊離抗原結合ドメイン（例えば本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン）を検出するために使用され得る。非遮断Ｉｄは、試料中の全抗体（遊離、抗原に部分的に結合又は抗原に完全に結合）を検出するために使用され得る。Ｉｄ抗体は、抗Ｉｄが調製される抗体で動物に免疫付与することによって調製され得る。
抗Ｉｄ抗体は、所謂抗抗Ｉｄ抗体を産生する、また別の動物において免疫反応を誘導するために免疫原としても使用され得る。抗抗Ｉｄは、抗Ｉｄを誘導したオリジナルの抗原結合ドメインとエピトープ的に同一であり得る。従って、抗原結合ドメインのイディオタイプ決定基に対する抗体を使用することにより、同一である特異性の抗原結合ドメインを発現する他のクローンを同定することが可能である。抗Ｉｄ抗体は変動し得（それにより抗Ｉｄ抗体変異体を産生する）及び／又は何らかの適切な技術、例えば本明細書中の他の箇所に記載されるものなどにより誘導体化され得る。
免疫複合体
本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質又はＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質（まとめて本明細書中でＣＤ３３結合タンパク質と呼ぶ）は、異種分子に複合化され得る。ＣＤ３３結合タンパク質は、本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も含む。
いくつかの実施形態では、異種分子は、検出可能な標識又は細胞傷害剤である。
本発明は、検出可能な標識に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインも提供する。
本発明は、検出可能な標識に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質も提供する。
本発明は、検出可能な標識に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質も提供する。
本発明は、検出可能な標識に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲも提供する。
本発明は、細胞傷害剤に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインも提供する。
本発明は、細胞傷害剤に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質も提供する。
本発明は、細胞傷害剤に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質も提供する。
本発明は、細胞傷害剤に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲも提供する。
本開示のＣＤ３３結合タンパク質は、骨髄系列のものなど、ＣＤ３３発現細胞に対する治療剤を方向付けるために使用され得る。代わりに、ＣＤ３３発現細胞は、内部移行したら細胞機能を調整することが意図される治療剤にカップリングされる本開示のＣＤ３３結合タンパク質で標的化され得る。
いくつかの実施形態では、検出可能な標識は細胞傷害剤でもある。
検出可能な標識に複合化される本開示のＣＤ３３結合タンパク質は、様々な試料においてＣＤ３３の発現を評価するために使用され得る。
検出可能な標識は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的又は化学的手段を介して、本開示のＣＤ３３結合タンパク質に複合化された場合に後者を検出可能にする組成物を含む。
代表的な検出可能な標識としては、放射性同位体、磁気ビーズ、金属ビーズ、コロイド粒子、蛍光顔料、高電子密度試薬、酵素（例えばＥＬＩＳＡで一般に使用されるような）、ビオチン、ジゴキシンゲニン、ハプテン、発光分子、化学発光分子、蛍光色素、フルオロフォア、蛍光消光剤、着色分子、放射性同位体、シンチレート、アビジン、ストレプトアビジン、プロテインＡ、タンパク質Ｇ、抗体又はその断片、ポリヒスチジン、Ｎｉ２＋、Ｆｌａｇタグ、ｍｙｃタグ、重金属、酵素、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、電子供与体／受容体、アクリジニウムエステル及び比色基質が挙げられる。
参照により本明細書中に組み込まれる国際公開第２０１９／１２５９８２号パンフレットで開示される標識の何れかが使用され得る。
検出可能な標識は、検出可能な標識が放射性同位体である場合など、シグナルを自発的に放射し得る。他の場合、検出可能な標識は、外部場により刺激される結果としてシグナルを放射する。
代表的な放射性同位体は、γ－放射、Ａｕｇｅｒ－放射、β－放射、アルファ－放射又は陽電子－放射する、放射性同位体であり得る。代表的な放射性同位体としては、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、１９Ｆ、５５Ｃｏ、５７Ｃｏ、６０Ｃｏ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、７５Ｂｒ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９０Ｓｒ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、１１５Ｉｎ、１２３１、１２４１、１２５Ｉ、１３１１、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２６Ｒａ、２２５Ａｃ及び２２７Ａｃが挙げられる。
いくつかの実施形態では、放射性同位体は、例えば細胞死滅を促進することなどにより、治療目的のために使用される。細胞死滅を促進するために使用される放射性同位体としては、３２Ｐ、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、７７Ａｓ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１３１Ｉ、１５３Ｓｍ、１５９Ｇｄ、１６５Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２５５Ｆｍ及び２２７Ｔｈが挙げられるが、限定されない。理論により縛られることを望むものではないが、治療目的のために使用される放射性同位体を含むＣＤ３３結合タンパク質は、標的細胞により内部移行させられ、標的細胞により死滅させられ得る。
放射性同位体と複合化されたＣＤ３３結合タンパク質を使用した放射性免疫療法は、局所的又は散在性の腫瘍を処置するために有益であり得る。いくつかの実施形態では、対象は、腫瘍関連抗原に対して又は腫瘍微小環境に対して特異的に向けられる放射性標識モノクローナル抗体の投与によって処置される。放射性標識（例えばＡｃ２２５）治療は、ＣＤ３３を発現する細胞での血液悪性腫瘍の処置に関する場合など、細胞死滅のために低用量を必要とし、非常に有効であり得る。
いくつかの実施形態では、放射性同位体は、ＣＤ３３結合タンパク質が関心対象の組織に標的化されているか否かを示すための試験のためなど、イメージングを促進するために使用される。イメージングを促進するために使用される代表的な同位体としては、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ及び１１１Ｉｎが挙げられるが、限定されない。
代表的な金属原子は、２０より大きい原子番号の金属であり、例えばカルシウム原子、スカンジウム原子、チタン原子、バナジウム原子、クロム原子、マンガン原子、鉄原子、コバルト原子、ニッケル原子、銅原子、亜鉛原子、ガリウム原子、ゲルマニウム原子、ヒ素原子、セレン原子、臭素原子、クリプトン原子、ルビジウム原子、ストロンチウム原子、イットリウム原子、ジルコニウム原子、ニオビウム原子、モリブデン原子、テクネチウム原子、ルテニウム原子、ロージウム原子、パラジウム原子、銀原子、カドミウム原子、インジウム原子、スズ原子、アンチモニー原子、テルリウム原子、ヨウ素原子、キセノン原子、セシウム原子、バリウム原子、ランタン原子、ハフニウム原子、タンタルム原子、タングステン原子、レニウム原子、オスミウム原子、イリジウム原子、白金原子、金原子、水銀原子、タリウム原子、鉛原子、ビスマス原子、フランシウム原子、ラジウム原子、アクチニウム原子、セリウム原子、プラセオジム原子、ネオジミウム原子、プロメチウム原子、サマリウム原子、ユーロピウム原子、ガドリニウム原子、テルビウム原子、ジスプロシウム原子、ホルミウム原子、エルビウム原子、タリウム原子、イッテルビウム原子、ルテチウム原子、トリウム原子、プロタクチニウム原子、ウラニウム原子、ネプツニウム原子、プルトニウム原子、アメリシウム原子、キュリウム原子、ベルケリウム原子、カリホルニウム原子、アインスタイニウム原子、フェルミウム原子、メンデレビウム原子、ノベリウム原子又はローレンシウム原子などである。
いくつかの実施形態では、金属原子は、１２より大きい原子数のアルカリ土類金属であり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、ランタニドであり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、アクチニドであり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、遷移金属であり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、卑金属であり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、金原子、ビスマス原子、タンタル原子及びガドリニウム原子であり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、原子番号が５３（即ちヨウ素）～８３（即ちビスマス）の金属であり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、磁気共鳴画像法に適切な原子であり得る。
金属原子は、＋１、＋２又は＋３酸化状態の形態の金属イオンであり得、例えばＢａ２＋、Ｂｉ３＋、Ｃｓ＋、Ｃａ２＋、Ｃｒ２＋、Ｃｒ３＋、Ｃｒ６＋、Ｃｏ２＋、Ｃｏ３＋、Ｃｕ＋、Ｃｕ２＋、Ｃｕ３＋、Ｇａ３＋、Ｇｄ３＋、Ａｕ＋、Ａｕ３＋、Ｆｅ２＋、Ｆｅ３＋、Ｆ３＋、Ｐｂ２＋、Ｍｎ２＋、Ｍｎ３＋、Ｍｎ４＋、Ｍｎ７＋、Ｈｇ２＋、Ｎｉ２＋，、Ｎｉ３＋、Ａｇ＋、Ｓｒ２＋、Ｓｎ２＋、Ｓｎ４＋及びＺｎ２＋などである。金属原子は、金属酸化物、例えば酸化鉄、酸化マンガン又は酸化ガドリニウムなどを含み得る。
適切な色素としては、何れかの市販の色素、例えば、５（６）－カルボキシフルオレセイン、ＩＲＤｙｅ ６８０ＲＤマレイミド又はＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ、ルテニウムポリピリジル色素などである。
適切なフルオロフォアは、フルオレセインイソチイオシアネート（ＦＩＴＣ）、フルオレセインチオセミカルバジド、ローダミン、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ＣｙＤｙｅｓ（例えばＣｙ３、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５）、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒｓ（例えば、Ａｌｅｘａ４８８、Ａｌｅｘａ５５５、Ａｌｅｘａ５９４；Ａｌｅｘａ６４７）、近赤外（ＮＩＲ）（７００～９００ｎｍ）蛍光色素及びカルボシアニン及びアミノスチリル色素である。
検出可能な標識に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、造影剤として使用され得る。
検出可能な標識に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質は、造影剤として使用され得る。
検出可能な標識に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質は、造影剤として使用され得る。
検出可能な標識に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲは、造影剤として使用され得る。
いくつかの実施形態では、細胞傷害剤は、化学療法薬、薬物、成長抑制剤、毒素（例えば、細菌性、真菌性、植物又は動物起源の酵素的に活性の毒素若しくはそれらの断片）又は放射性同位体（即ち放射性複合物）である。
いくつかの実施形態では、細胞傷害剤は、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、ビンデシン、ジフテリア毒素などの細菌性毒素、リシン、ゲルダナマイシン、マイタンシノイド又はカリケアマイシンである。細胞傷害剤は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合又はトポイソメラーゼ阻害を含む機序により、それらの細胞傷害性及び細胞増殖抑制性の効果を発揮し得る。
いくつかの実施形態では、細胞傷害剤は、酵素的に活性のある毒素であり、例えばジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（シュードモナス・エアルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、アレウリテス・フォルディイ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、フィトラカ・アメリカナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ－Ｓ）、モモルディカ・チャランティア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ジェロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコテセンなどである。
いくつかの実施形態では、細胞傷害剤は、放射性核種、例えば２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ及び１８６Ｒｅなどである。
いくつかの実施形態では、細胞傷害剤は、ドラスタチン又はドロスタチンペプチド性類似物及び誘導体、オーリスタチン又はモノメチルオーリスタチンフェニルアラニンである。代表的な分子は、米国特許出願公開第５，６３５，４８３号明細書及び同第５，７８０，５８８号明細書で開示される。ドラスタチン及びオーリスタチンは、微小管ダイナミクス、ＧＴＰ加水分解並びに核分裂及び細胞分裂を妨害することが示されており（Ｗｏｙｋｅ ｅｔ ａｌ（２００１）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４５（１２）：３５８０－３５８４）、抗癌活性及び抗真菌活性を有する。ドラスタチン又はオーリスタチン薬部分は、ペプチド薬部分のＮ（アミノ）末端又はＣ（カルボキシル）末端を通して（国際公開第０２／０８８１７２号パンフレット）又は抗体に操作された何れかのシステインを介して本発明の抗体に連結され得る。
本開示のＣＤ３３結合タンパク質は、既知の方法を使用して検出可能な標識に複合化され得る。
いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、キレート剤と複合化される。
いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、リンカーを介して本開示のＣＤ３３結合タンパク質に複合化される。
検出可能な標識又は細胞傷害性部分は、既知の方法を使用して、本開示のＣＤ３３結合タンパク質に直接又は間接的に連結され得る。適切なリンカーは、当技術分野で公知であり、例えば、補欠分子族、非フェノールリンカー（Ｎ－スクシミジル－ベンゾアートの誘導体；ドデカボラート）、大環状及び非環式キレート剤の両方のキレート部分、例えば１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０，四酢酸（ＤＯＴＡ）の誘導体、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）の誘導体、Ｓ－２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸（ＮＯＴＡ）の誘導体及び１，４，８，１１－テトラアザシクロドセダン－１，４，８，１１－四酢酸（ＴＥＴＡ）の誘導体、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビスジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６－ジイソシアネートなど）及びビス活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）及び他のキレート部分が挙げられる。適切なペプチドリンカーは周知である。
いくつかの実施形態では、本開示のＣＤ３３結合タンパク質は、腎臓クリアランスを介して血液から除去される。
キット
本発明は、本明細書中に記載のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインの何れかを含むキットも提供する。
本発明は、本明細書中に記載のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインの何れかを含むタンパク質を含むキットも提供する。
本発明は、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む本明細書中に記載の多特異性タンパク質の何れかを含むキットも提供する。
本発明は、ＣＤ３３に結合する本明細書中に記載の抗原結合ドメインの何れかを含むＣＡＲを含むキットも提供する。
本キットは、治療的使用のために及び診断キットとして使用され得る。
本キットは、試料中でのＣＤ３３の存在を検出するために使用され得る。
いくつかの実施形態では、本キットは、本開示のＣＤ３３結合タンパク質及びＣＤ３３結合タンパク質を検出するための試薬を含む。本キットは、以下のものを含む１つ以上の他の要素を含み得る：使用説明書；他の試薬、例えば、標識、治療剤又はキレート又はそうでなければカップリングに有用な薬剤、標識又は治療剤に対する抗体又は放射線防護組成物；投与のための抗体を調製するための器具又は他の材料；薬学的に許容可能な担体；及び対象への投与のための器具及び他の材料。
いくつかの実施形態では、本キットは、容器中のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン及びキットの使用説明書を含む。
いくつかの実施形態では、本キットは、容器中のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質及びキットの使用説明書を含む。
いくつかの実施形態では、本キットは、容器中のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質及びキットの使用説明書を含む。
いくつかの実施形態では、キット中のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインが標識される。
いくつかの実施形態では、本キット中のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質が標識される。
いくつかの実施形態では、本キット中のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質が標識される。
いくつかの実施形態では、本キットは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含む、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）を含む。
特定の実施形態では、本キットは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）を含む。
他の実施形態では、本キットは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）を含む。
他の実施形態では、本キットは、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）を含む。
他の実施形態では、本キットは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）を含む。
他の実施形態では、本キットは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）を含む。
他の実施形態では、本キットは、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬを含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）を含む。
いくつかの実施形態では、本キットは、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本キットは、
ａ）配列番号１８のＶＨ；
ｂ）配列番号１９のＶＨ；
ｃ）配列番号２０のＶＨ；
ｄ）配列番号２１のＶＨ；
ｅ）配列番号２２のＶＨ；
ｆ）配列番号２３のＶＨ；
ｇ）配列番号２４のＶＨ；
ｈ）配列番号２５のＶＨ；又は
ｉ）配列番号２６のＶＨ；又は
ｊ）配列番号２７のＶＨ
を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本キットは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本キットは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３又は２６４を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本キットは、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２又は２７３を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本キットは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本キットは、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本キットは、配列番号２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２７４、２７５又は２７６を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。
特定の実施形態では、本キットは、配列番号２１３を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。
他の実施形態では、本キットは、配列番号２１６を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。
他の実施形態では、本キットは、配列番号２１９を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。
他の実施形態では、本キットは、配列番号２７４を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。
他の実施形態では、本キットは、配列番号２７５を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。
他の実施形態では、本キットは、配列番号２７６を含むＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む。
ＣＤ３３を検出する方法
本発明は、試料を入手し、本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインと試料を接触させ、試料中の結合したＣＤ３３を検出することを含む、試料中でＣＤ３３を検出する方法も提供する。
いくつかの実施形態では、試料は、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環する細胞、滑液、循環する細胞、組織に付随しない細胞（即ち遊離細胞）、組織（例えば、手術により切除された組織、細針吸引を含む生検）、組織学的標本など由来であり得る。
本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、既知の方法を使用して検出され得る。代表的な方法は、蛍光若しくは化学発光標識又は放射活性標識を使用した抗体の直接標識又は例えばビオチン、酵素若しくはエピトープタグなどの容易に検出可能な部分の本発明の抗体への連結を含む。代表的な標識及び部分は、ルテニウム、１１１Ｉｎ－ＤＯＴＡ、１１１Ｉｎ－ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びベータ－ガラクトシダーゼ、ポリヒスチジン（ＨＩＳタグ）、アクリジン色素、シアニン色素、フルオロン色素、オキサジン色素、フェナントリジン色素、ローダミン色素及びＡｌｅｘａｆｌｕｏｒ（登録商標）色素である。
本抗体は、放射性標識の何れかで直接標識され得、参照により本明細書中に組み込まれる国際公開第２０１９／１２５９８２号パンフレットで開示される放射活性剤が使用され得る。
本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、試料中でＣＤ３３を検出するための様々なアッセイにおいて使用され得る。代表的なアッセイは、ウエスタンブロット分析、放射免疫アッセイ、表面プラズモン共鳴、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散法、電気化学発光（ＥＣＬ）免疫アッセイ、免疫組織化学、蛍光励起細胞選別（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセイである。
本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本明細書中で同定されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインの何れかは、ＣＤ３３に結合するＣＡＲを提供するために、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に改変され得る。本開示は、ＣＤ３３を標的とするＣＡＲ、このようなＣＡＲを含む細胞及び本明細書中に記載のＣＡＲを使用したＣＤ３３産生癌、例えば血液癌などを処置する方法を提供する。
本発明のＣＡＲは、ＣＤ３３に対する抗原特異性を有する。「抗原特異性を有する」及び「抗原特異的な反応を誘発する」という句は、本明細書中で使用される場合、ＣＡＲが特異的に抗原に結合し、免疫学的に認識し得、ＣＤ３３抗原へのＣＡＲの結合が免疫反応を誘発するようになることを意味する。抗原特異性について及び標的細胞を認識する能力についてＣＡＲを試験する方法は当技術分野で公知である。
本開示は、所望のキメラ抗原受容体を安定に発現するように遺伝子修飾されているＴ細胞の使用に関する。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに連結された抗体の抗原結合ドメイン（ｓｃＦｖなど）を含有する人工的に構築された異種タンパク質又はポリペプチドである。ＣＡＲの特徴には、非ＭＨＣ制限的に選択された標的に向けてＴ細胞特異性及び反応性をリダイレクトするためのそれらの能力、モノクローナル抗体の抗原結合特性の利用が含まれる。非ＭＨＣ制限抗原認識は、ＣＡＲを発現するＴ細胞に、抗原プロセシングと独立した抗原認識能力を与え、従って腫瘍回避の主要な機序を迂回する。さらに、Ｔ細胞で発現される場合、ＣＡＲは、有利には、内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ鎖及びベータ鎖と二量体形成しない。
本明細書中に記載のＣＡＲは、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び本明細書中に記載のような刺激分子由来の機能シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン（本明細書中で細胞質シグナル伝達ドメインとも呼ぶ）を含む組み換えポリペプチドコンストラクトを提供する。ＣＡＲを発現するＴ細胞は、本明細書中では、ＣＡＲ Ｔ細胞、ＣＡＲ－Ｔ細胞又はＣＡＲ修飾Ｔ細胞と呼ばれ、これらの用語は、本明細書中で交換可能に使用される。細胞は、その表面上で抗体結合ドメインを安定に発現するために遺伝子修飾され得、これは、ＭＨＣ非依存的である新規抗原特異性を付与する。
一部の例において、Ｔ細胞は、単一キメラタンパク質になるように抗体の抗原認識ドメインをＣＤ３－ゼータ鎖の細胞内ドメイン又はＦｃγＲＩタンパク質と組み合わせるＣＡＲを安定に発現するように遺伝子修飾される。一実施形態では、刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体と連結されるゼータ鎖である。
「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、分子の細胞内部分を指す。これは、第２のメッセンジャーを生成させることにより定められたシグナル伝達経路を介して細胞活性を制御するために細胞内で情報を伝達するか、又はこのようなメッセンジャーに応答することによりエフェクターとして機能することによって作用するタンパク質の機能的部分である。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞、例えばＣＡＲ－Ｔ細胞、の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えばＣＡＲ－Ｔ細胞における、免疫エフェクター機能の例には、サイトカイン分泌を含む、細胞溶解活性及びヘルパー活性が含まれる。
一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。代表的な一次細胞内シグナル伝達ドメインとしては、一次刺激又は抗原依存性刺激に関与する分子に由来するものが挙げられる。一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、同時刺激細胞内ドメインを含む。代表的な同時刺激細胞内シグナル伝達ドメインとしては、同時刺激シグナル又は抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが挙げられる。例えば、ＣＡＲ－Ｔの場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体の細胞質配列を含み、同時刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共受容体又は同時刺激分子からの細胞質配列を含む。
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含む。代表的なＩＴＡＭ含有一次細胞質シグナル伝達配列は、ＣＤ３－ゼータ、ＦｃＲγ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２に由来するものが含まれる。
「ゼータ」又は代わりに「ゼータ鎖」、「ＣＤ３－ゼータ」若しくは「ＴＣＲ－ゼータ」という用語は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＢＡＧ３６６６４．１として提供されるタンパク質として、又は非ヒト種、例えばマウス、ウサギ、霊長類、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など由来の均等な残基として定められ、「ゼータ刺激ドメイン」又は代わりに「ＣＤ３－ゼータ刺激ドメイン」若しくは「ＴＣＲ－ゼータ刺激ドメイン」は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するのに十分であるゼータ鎖の細胞質ドメイン由来のアミノ酸残基として定められる。一態様では、ゼータの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２～１６４又はその機能的なオルソログである非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿など由来の均等な残基を含む。一態様では、「ゼータ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３－ゼータ刺激ドメイン」は、配列番号２８として提供される配列又は配列番号１６４と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列である。
配列番号１６４ ＣＤ３－ゼータ刺激ドメイン
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
「同時刺激分子」という用語は、同時刺激リガンドと特異的に結合し、それにより増殖などであるが、限定されないＴ細胞による同時刺激応答に介在するＴ細胞における同族の結合パートナーを指す。同時刺激分子は、有効な免疫反応に必要とされる抗原受容体又はそれらのリガンド以外の細胞表面分子である。同時刺激分子としては、ＭＨＣクラス１分子、ＢＴＬＡ及びＴｏｌｌリガンド受容体並びにＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）が挙げられるが、限定されない。
同時刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、同時刺激分子の細胞内部分であり得る。同時刺激分子は、以下のタンパク質ファミリーにおいて代表され得る：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）及び活性化ＮＫ細胞受容体。代表的なこのような分子としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＭｙＤ８８、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。
細胞内シグナル伝達ドメインは、それが由来する分子の、細胞内部分全体又はネイティブ細胞内シグナル伝達ドメイン全体又はそれらの機能的断片を含み得る。
「４－１ＢＢ」又は代わりに「ＣＤ１３７」という用語は、アミノ酸配列がＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＡ６２４７８．２として与えられるＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバー又は非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基を指し；「４－１ＢＢ同時刺激ドメイン」は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＡ６２４７８．２のアミノ酸残基２１４～２５５又は非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基として定義される。一態様では、「４－１ＢＢ同時刺激ドメイン」又は「ＣＤ１３７同時刺激ドメイン」は、配列番号１６３（ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ；配列番号１６３）として提供される配列又は非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基又は配列番号１６３と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列である。
一実施形態では、ＣＡＲにおける他のドメインの１つと天然で付随する膜貫通ドメインが使用される。別の実施形態では、膜貫通ドメインは、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するため、同じか又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのこのようなドメインの結合を回避するために選択され得るか又はアミノ酸置換により修飾され得る。一実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８αヒンジドメインを含む。
いくつかの実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、本明細書中で定義されるような少なくとも１つの同時刺激分子由来の１つ以上の機能シグナル伝達ドメインをさらに含む。一実施形態では、同時刺激分子は、４－１ＢＢ（即ちＣＤ１３７）、ＣＤ２７、ＣＤ３－ゼータ及び／又はＣＤ２８から選択される。ＣＤ２８は、Ｔ細胞同時刺激において重要なＴ細胞マーカーである。ＣＤ２７は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーであり、同時刺激免疫チェックポイント分子として作用する。４－１ＢＢは、強力な同時刺激シグナルをＴ細胞に伝達し、分化を促進し、Ｔリンパ球の長期生存を促進する。ＣＤ３－ゼータは、シグナルを生成させるためにＴＣＲと会合し、免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。別の実施形態では、同時刺激分子はＭｙＤ８８又はＣＤ４０である。
一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８を含む細胞内ヒンジドメイン及びＣＤ２８、４－１ＢＢ及びＣＤ３－ゼータを含む細胞内Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインを含む。別の実施形態では、ＣＡＲは、細胞内ヒンジドメイン及びＣＤ２８、４－１ＢＢ及びＣＤ３－ゼータを含む細胞内Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインを含み、このヒンジドメインは、ＣＤ８、ＣＤ４若しくはＣＤ２８の細胞外領域の全て若しくは一部；抗体定常領域の全て若しくは一部；ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体、ＩｇＧヒンジ、ＩｇＭヒンジ、ＩｇＡヒンジ、ＩｇＤヒンジ、ＩｇＥヒンジ又はＩｇヒンジの全て若しくは一部を含む。ＩｇＧヒンジは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ１、ＩｇＭ２、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ又はそのキメラ由来であり得る。
本明細書中に記載のＣＡＲは、少なくとも細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、例えば以下で定められるような刺激分子由来の機能シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン（本明細書中で「細胞質シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）とを含む組み換えポリペプチドコンストラクトを提供する。
一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、刺激分子に由来する機能シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、同時刺激分子由来の機能シグナル伝達ドメイン及び刺激分子由来の機能シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の同時刺激分子由来の少なくとも２つの機能シグナル伝達ドメイン及び刺激分子由来の機能シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。
本開示のＣＡＲは、単独で又は本発明のＣＡＲに関連して有用な何れかの他の所望の細胞質ドメインと組みわせてＣＤ２８及び／又は４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含むように設計され得る。一実施形態では、ＣＡＲの細胞質ドメインは、ＣＤ３－ゼータのシグナル伝達ドメインをさらに含み得る。例えば、ＣＡＲの細胞質ドメインは、ＣＤ３－ゼータ、４－１ＢＢ及びＣＤ２８シグナル伝達モジュール及びそれらの組み合わせを含み得るが、限定されない。従って、本発明は、ＣＡＲ Ｔ細胞及び養子療法のためのそれらの使用の方法を提供する。
本開示は、ＣＡＲの変異体、例えば機能的変異体をさらに提供する。「機能的変異体」という用語は、本明細書中で使用される場合、親ＣＡＲに対して実質的な又は顕著な配列同一性又は類似性を有するＣＡＲを指し、機能的変異体は、その変異体の由来であるＣＡＲの生物学的活性を保持する。機能的変異体は、例えば、親ＣＡＲと、同様の程度、同じ程度又はより高い程度まで標的細胞を認識する能力を保持するＣＡＲの変異体を包含する。親ＣＡＲを参照して、機能変異体は、親ＣＡＲに対して、アミノ酸配列において例えば少なくとも約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又はそれを超えて同一であり得る。
機能的変異体は、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換とともに、親ＣＡＲのアミノ酸配列を含み得る。一実施形態では、機能的変異体は、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換がある親ＣＡＲのアミノ酸配列を含む。この場合、この非保存的アミノ酸置換は、機能的変異体の生物学的活性を妨害又は阻害し得ない。この非保存的アミノ酸置換は、機能的変異体の生物学的活性が親ＣＡＲと比較した場合に上昇しているように、機能的変異体の生物学的活性を促進し得る。
保存的アミノ酸置換は、当技術分野で公知であり、本明細書中に記載されている。
本開示のＣＡＲは、基本的に、他の構成成分、例えば他のアミノ酸が機能的変異体の生物学的活性を実質的に変化させないように、本明細書中に記載の指定されるアミノ酸配列又は複数の配列からなり得る。
本開示のＣＡＲ（機能的部分及び機能的変異体を含む）は、あらゆる長さであり得、即ちあらゆる数のアミノ酸を含み得るが、ただし、ＣＡＲ（又は機能的部分若しくはその機能的変異体）は、それらの生物学的活性、例えば、宿主において抗原に特異的に結合し、疾患細胞（例えば癌細胞）を検出するか、又は宿主において疾患を処置若しくは予防する能力などを保持するものとする。例えば、ＣＡＲは、約５０～約５０００アミノ酸長、例えば約５０、約７０、約７５、約１００、約１２５、約１５０、約１７５、約２００、約２２５、約２５０、約２７５、約３００、約３２５、約３５０、約３７５、約４００、約４２５、約４５０、約４７５、約５００、約５２５、約５５０、約５７５、約６００、約６２５、約６５０、約６７５、約７００、約７２５、約７５０、約７７５、約８００、約８２５、約８５０、約８７５、約９００、約９２５、約９５０、約９７５、約１０００又はそれより長いアミノ酸長であり得る。
本開示のＣＡＲ（本発明の機能的部分及び機能的変異体を含む）は、１つ以上の天然アミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含み得る。このような合成アミノ酸は、当技術分野で公知であり、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン、トランス－３－及びトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、α，γ－ジアミノ酪酸、α，β－ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、β－フェニルセリンβ－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リジン、Ｎ’，Ｎ’－ジベンジル－リジン、６－ヒドロキシリジン、オルニチン、α－アミノシクロペンタンカルボン酸、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸、α－アミノシクロヘプタンカルボン酸、インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド及びα－ｔｅｒｔ－ブチルグリシンが挙げられる。
本開示のＣＡＲ（機能的部分及び機能的変異体を含む）は、翻訳後修飾の対象であり得る。これらは、例えばジスルフィド架橋を介して、グリコシル化、エステル化、Ｎ－アシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、環化され得るか、又は酸付加塩に変換され得る。いくつかの実施形態では、これらは、二量体化又は多量体化又は複合化される。
本開示のＣＡＲ（機能的部分及びその機能的変異体を含む）は、当技術分野で公知である方法により得られ得る。ポリペプチド及びタンパク質をデノボ合成する適切な方法は、Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｆｍｏｃ Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ，２０００；Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ａｎａｌｙｓｉｓ，ｅｄ．Ｒｅｉｄ，Ｒ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２０００；及びＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ，ｅｄ．Ｗｅｓｔｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ，２００１などの参考文献に記載されている。また、ＣＡＲは、標準的な組み換え方法を用いて、本明細書中に記載の核酸を使用して、組み換えにより作製され得る。さらに、ＣＡＲ（機能的部分及びその機能的変異体を含む）のいくつかは、植物、細菌、昆虫、哺乳動物などの供給源から単離及び／又は精製され得る。単離及び精製の方法は当技術分野で公知である。代わりに、本開示のＣＡＲ（機能的部分及びその機能的変異体を含む）は、商業的に合成され得る。これに関して、ＣＡＲ、ポリペプチド及びタンパク質は、合成、組み換え、単離及び／又は精製され得る。
本開示は、本開示のＣＡＲのエピトープに結合する抗体又はそれらの抗原結合断片も提供する。本抗体又はそれらの抗原結合断片は、ＣＡＲの機能的部分に対してあらゆるレベルの親和性又は結合活性を有し得る。いくつかの実施形態では、本抗体又は抗原結合断片は、一連の親和性（ＫＤ）でＣＤ３３に結合し得る。一実施形態では、本抗体は、当業者によって実施されるように、表面プラズモン共鳴又はＫｉｎｅｘａ法により決定した場合、約１０－７Ｍと等しいか又はそれ未満、例えば１～９．９（又は１、２、３、４、５、６、７、８又は９などのその中にあるあらゆる範囲若しくは値）ｘ１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ、１０－１３Ｍ、１０－１４Ｍ、１０－１５Ｍ又はその中の何れかの範囲若しくは値などであるが、限定されないＫＤでＣＤ３３に結合する。１つの代表的な親和性は、１ｘ１０－８Ｍと等しいか又はそれ未満である。別の代表的な親和性は、１ｘ１０－９Ｍと等しいか又はそれ未満である。
本開示のＣＡＲの何れかの機能的部分に結合する抗体の能力について抗体を試験する方法は当技術分野で公知であり、何れかの抗体－抗原結合アッセイ、例えば、放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）、ウエスタンブロット、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降及び競合的阻害アッセイを含む。
抗体又はその抗体断片を含むＣＡＲの部分は、例えば単一ドメイン抗体断片（ｓｄＡｂ）、ｓｃＦｖ及びヒトキメラ又はヒト化抗体を含む近接しているポリペプチド鎖の一部として抗原結合ドメインが発現される、様々な形態で存在し得る（Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｉｎ：Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．；Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｈｏｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６）。一態様では、本開示のＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗体断片を含む。一実施形態では、本開示のＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体断片を含む。
本開示は、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含むＣＡＲも提供し、ここで、細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３に結合する。
本開示は、
ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと；
膜貫通ドメインと；
任意選択的に少なくとも１つの同時刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと
を含むＣＡＲも提供する。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域をさらに含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドと、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分を含む同時刺激ドメイン及びＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分を含む一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、
配列番号１５７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ８ａ－ヒンジ領域；
配列番号１６２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む膜貫通ドメイン；及び／又は
配列番号１６３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する同時刺激ドメインと、配列番号１６４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインとを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む。
本開示は、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含むＣＡＲも提供し、ここで、細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３に結合し、
配列番号８１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号５２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号８３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号８４のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号８６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号１０５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号９５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号１０６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号１０７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号１８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号１８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号１９２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号１９６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号２００のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号２０２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、
を含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ここで、細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３に結合し、配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３とを含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ここで、細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３に結合し、配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３とを含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ここで、細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３に結合し、配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３とを含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ここで、細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３に結合し、配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３とを含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ここで、細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３に結合し、配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３とを含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ここで、細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３に結合し、配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３とを含む。
代表的なＨＣＤＲ及びＬＣＤＲ配列は、表４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄ、４ｅ及び４ｆに記載されている。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａに従って定義される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴに従って定義される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭに従って定義される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔに従って定義される。
本開示は、細胞外ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、２５３、２５４又は２５５のＨＣＤＲ１、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、２５６、２５７又は２５８のＨＣＤＲ２、配列番号４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、２５９、２６０又は２６１のＨＣＤＲ３、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、２６５又は２６６のＬＣＤＲ１、配列番号６９、７０、７１、７２、７３、７４、２６７又は２６８のＬＣＤＲ２及び配列番号７５、７６、７７、７８、７９、８０、２６９又は２７０のＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３３、８９、１６７、１７２又は１７６のＨＣＤＲ１、配列番号９０、９１、１６８、１７３又は１７７のＨＣＤＲ２、配列番号９２、９３、９４、１６９、１７４、１７８又は１８０のＨＣＤＲ３、配列番号９８、９９、１００、１８２、１８６、１８９、１９３、１９７又は２０１のＬＣＤＲ１、配列番号１０１、１０２、１０３、１８３、１８７、１９０、１９４又は１９８のＬＣＤＲ２及び配列番号１０４、１８４、１９１、１９５又は１９９のＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、２５３、２５４若しくは２５５のＨＣＤＲ１又はその保存的置換を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３３、８９、１６７、１７２若しくは１７６のＨＣＤＲ１又はその保存的置換を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、２５６、２５７若しくは２５８のＨＣＤＲ２又はその保存的置換を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９０、９１、１６８、１７３若しくは１７７のＨＣＤＲ２又はその保存的置換を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、２５９、２６０若しくは２６１のＨＣＤＲ３又はその保存的置換を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９２、９３、９４、１６９、１７４、１７８若しくは１８０のＨＣＤＲ３又はその保存的置換を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、２６５若しくは２６６のＬＣＤＲ１又はその保存的置換を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９８、９９、１００、１８２、１８６、１８９、１９３、１９７若しくは２０１のＬＣＤＲ１又はその保存的置換を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６９、７０、７１、７２、７３、７４、２６７若しくは２６８のＬＣＤＲ２又はその保存的置換を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０１、１０２、１０３、１８３、１８７、１９０、１９４若しくは１９８のＬＣＤＲ２又はその保存的置換を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７１若しくは１４６のＬＣＤＲ３又はその保存的置換を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７５、７６、７７、７８、７９、８０、２６９若しくは２７０のＬＣＤＲ３又はその保存的置換を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０４、１８４、１９１、１９５若しくは１９９のＬＣＤＲ３又はその保存的置換を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７又は８８のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを含む。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む。
細胞外抗原結合ドメインは、他の箇所に記載のようなＣＤ３３結合ドメインの変異体でもあり得る（例えば、実施例１９～２０に記載のような変異体ドメイン）。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５２のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号８１のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５３のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号８２のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５４のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号８３のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５５のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号８４のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５６のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号８５のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５７のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号８６のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５８のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号８７のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５９のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号８７のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６０のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号８７のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６１のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号８８のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９５のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１０５のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９６のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１０６のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９７のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１０７のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１７０のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１８５のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１７１のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１８８のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１７５のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１９２のポリペプチドの少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列とを含むＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１７９のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１９６のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１８１のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号２００のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９６のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号２０２のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２６２のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号２７１のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２６３のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号２７２のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２６４のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号２７３のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＬとＶＨとの間にリンカーポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号１０８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む（例えば、ここで、リンカーポリペプチドは、配列番号１０８のアミノ酸配列からなる）。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２７４、２７５及び２７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２０３を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２０４を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２０５を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２０６を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２０７を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２０８を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２０９を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２１０を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２１１を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２１２を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２１３を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２１４を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２１５を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２１６を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２１７を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２１８を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２１９を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２２０を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２２１を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２７４を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２７５を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２７６を含むｓｃＦｖである。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２１３を含むｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２１６を含むｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２１９を含むｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２７４を含むｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２７５を含むｓｃＦｖである。
他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２７６を含むｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０３のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０４のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０５のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０６のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０７のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０８のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０９のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１０のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１１のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１２のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１３のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１４のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１５のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１６のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１７のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１８のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１９のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２２０のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２２１のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２７４のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２７５のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２７６のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２７４、２７５又は２７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１３、２１６、２１９、２７４、２７５又は２７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２０３のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２０４のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０４のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２０５のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０５のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２０６のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０６のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２０７のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２０８のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０８のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２０９のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０９のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２１０のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１０のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２１１のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１１のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２１２のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１２のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２１３のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１３のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２１４のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１４のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２１５のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１５のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２１６のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２１７のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１７のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２１８のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２１９のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２２０のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２０のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２２１のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２１のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２７４のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２７４のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２７５のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２７５のアミノ酸配列を含む。
本開示は、配列番号２７６のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲを提供する。
本開示は、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲも提供し、ここで、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２７６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）構成成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー（例えば、ＣＤ２８又は誘導性Ｔ細胞同時刺激剤（ＩＣＯＳ）構成成分及びそれらの組み合わせなど）からなる群から選択されるポリペプチド構成成分を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７構成成分は、配列番号１６３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７構成成分は、配列番号１６３のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３ｚ構成成分は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ｚ構成成分は、配列番号１６４のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６５のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
配列番号１６５
Figure 2023517660000012
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドは、配列番号１６２のアミノ酸配列を含む。（ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ；配列番号１６２）。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、少なくとも、Ｔ細胞受容体のα、β又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の膜貫通領域を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、少なくともζ、η又はＦｃεＲ１γ及び－β、ＭＢ１（Ｉｇα．）、Ｂ２９又はＣＤ３－γ、ζ又はηの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ロイシン及びバリン、フェニルアラニンのトリプレット又はトリプトファンなど、主に疎水性残基を含む、合成物である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３３に結合する細胞外抗原結合ドメインに膜貫通ドメインを連結するヒンジ領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域はＣＤ８ａ－ヒンジ領域である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む（ＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ；配列番号１５７）。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１５８）を含むか、又はＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１５８）と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１５９）を含むか、又はＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号１５９）と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３、（配列番号１６０）を含むか、又はＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号１６０）と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号１６１）を含むか、又はＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号１６１）と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ＣＡＲコンストラクト及びＣＡＲを発現する免疫応答細胞
本開示は、本明細書中に記載のＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
別途指定されない限り、「アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド」は、相互の縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードする全てのポリヌクレオチド配列を含む。タンパク質又はＲＮＡをコードするポリヌクレオチドという句は、本タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、いくつかの変異体において、発現されるタンパク質にスプライシングされるイントロンを含有し得る限り、イントロンも含み得る。
本開示は、本開示のＣＡＲをコードする核酸分子を含む発現ベクターも提供する。
「発現ベクター」という用語は、発現させようとするヌクレオチド配列に操作可能に連結される発現調節配列を含む組み換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現のための十分なシス作用エレメントを含み；発現のための他のエレメントは、宿主細胞により又はインビトロ発現系で供給され得る。発現ベクターは、組み換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、裸の又はリポソームに含有される）及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）を含む、当技術分野で公知である全てのものを含む。
本開示は、本開示のＣＡＲを含む単離された免疫応答細胞も提供する。いくつかの実施形態では、単離された免疫応答細胞は、ＣＡＲで形質導入され、例えばＣＡＲは、免疫応答細胞の表面上で構成的に発現される。特定の実施形態では、単離された免疫応答細胞は、免疫応答細胞が少なくとも１つの同時刺激リガンドを発現するように、少なくとも１つの同時刺激リガンドでさらに形質導入される。特定の実施形態では、少なくとも１つの同時刺激リガンドは、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦＲＳＦ１４及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、単離された免疫応答細胞は、免疫応答細胞が少なくとも１つのサイトカインを分泌するように、少なくとも１つのサイトカインでさらに形質導入される。特定の実施形態では、少なくともサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－２１及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、単離された免疫応答細胞は、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、ヒト胚幹細胞、リンパ前駆細胞、Ｔ細胞－前駆細胞及びリンパ球系細胞に分化し得る多能性幹細胞からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、単離された免疫応答細胞はＴ細胞である。
本明細書中の目的に対して、Ｔ細胞は、何れかのＴ細胞、例えば培養Ｔ細胞、例えば初代Ｔ細胞又は培養Ｔ細胞株からのＴ細胞、例えば、Ｊｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１など又は哺乳動物から得られたＴ細胞などであり得る。哺乳動物から得られた場合、Ｔ細胞は、骨髄、血液、リンパ節、胸腺又は他の組織若しくは体液を含むが、限定されない多くの供給源から得られ得る。Ｔ細胞は、濃縮又は精製することもできる。Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞であり得る。Ｔ細胞は、ヒトから単離されるＴ細胞であり得る。Ｔ細胞は、Ｔ細胞の何れかのタイプであり得、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋二重陽性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、例えばＴｈ１及びＴｈ２細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、末梢血白血球（ＰＢＬ）、腫瘍浸潤細胞、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞などを含むが、限定されない何れかの発生段階のものであり得る。Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ４＋Ｔ細胞であり得る。
いくつかの実施形態では、単離された免疫応答細胞は、ＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、単離された免疫応答細胞は、ＣＴＬである。
いくつかの実施形態では、単離された免疫応答細胞は、Ｔｒｅｇである。
いくつかの実施形態では、単離された免疫応答細胞は、ヒト胚幹細胞である。
いくつかの実施形態では、単離された免疫応答細胞は、リンパ前駆細胞である。
いくつかの実施形態では、単離された免疫応答細胞は、多能性幹細胞である。
一実施形態では、本開示のＣＡＲ Ｔ細胞は、所望のＣＡＲ、例えばＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン、ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通ドメイン及びヒト４－１ＢＢ及びＣＤ３－ゼータシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを含むレンチウイルスベクターを細胞に導入することによって作製され得る。本開示のＣＡＲ Ｔ細胞は、インビボで複製可能であり、その結果、持続的な腫瘍調節につながり得る長期持続が起こる。
本発明の実施形態は、本明細書中に記載の組み換え発現ベクターの何れかを含む宿主細胞をさらに提供する。本明細書中で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、組み換え発現ベクターを含有し得る細胞の何れかのタイプを指す。宿主細胞は、真核細胞、例えば植物、動物又は藻類、真菌であり得るか、又は原核細胞、例えば細菌又は原生動物、であり得る。宿主細胞は、培養細胞又は初代細胞であり得、即ち生物、例えばヒトから直接単離され得る。宿主細胞は、接着細胞又は懸濁細胞、即ち懸濁液中で増殖する細胞であり得る。適切な宿主細胞は当技術分野で公知であり、例えば、ＤＨ５αＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、サルＶＥＲＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞などが挙げられる。組み換え発現ベクターを増幅するか又は複製する目的のために、宿主細胞は、原核細胞、例えばＤＨ５α細胞であり得る。組み換えＣＡＲ、ポリペプチド又はタンパク質を作製する目的のために、宿主細胞は哺乳動物細胞であり得る。宿主細胞はヒト細胞であり得る。宿主細胞が、何れかの細胞タイプであり得、あらゆるタイプの組織由来であり得、あらゆる発生段階であり得る一方で、宿主細胞は、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）であり得る。宿主細胞はＴ細胞であり得る。
本明細書中に記載の少なくとも１つの宿主細胞を含む細胞の集団も提供される。細胞の集団は、少なくとも１つの他の細胞、例えば組み換え発現ベクターの何れも含まない宿主細胞（例えばＴ細胞）、又はＴ細胞以外の細胞、例えばＢ細胞、マクロファージ、赤血球、好中球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋肉細胞、脳細胞などに加えて、記載の組み換え発現ベクターの何れかを含む宿主細胞を含む不均一集団であり得る。代わりに、細胞集団は、実質的に均一な集団であり得、ここで、この集団は、組み換え発現ベクターを含む宿主細胞を主に含む（例えば、基本的にそれらからなる）。この集団は、細胞のクローン集団でもあり得、ここで、この集団の全ての細胞は、組み換え発現ベクターを含む単一の宿主細胞のクローンであり、この集団の全ての細胞が組み換え発現ベクターを含むようになる。一実施形態では、細胞集団は、本明細書中に記載のような組み換え発現ベクターを含む宿主細胞を含むクローン集団である。
ポリヌクレオチド、宿主細胞及びベクター
本開示は、本開示のＣＤ３３結合タンパク質の何れかをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。ＣＤ３３結合タンパク質は、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメイン、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質及び本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体を含む。
本発明は、ＣＤ３３結合タンパク質又はその断片の何れかをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３、２６４、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２又は３８２のＶＨをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
特定の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号５３のＶＨをコードする。
他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号５６のＶＨをコードする。
他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号５９のＶＨをコードする。
他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２６２のＶＨをコードする。
他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２６３のＶＨをコードする。
他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２６４のＶＨをコードする。
本発明は、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２、２７３、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７又は３９８のＶＬをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
特定の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号８２のＶＬをコードする。
他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号８５のＶＬをコードする。
他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号８７のＶＬをコードする。
他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２７１のＶＬをコードする。
他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２７２のＶＬをコードする。
他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２７３のＶＬをコードする。本発明は、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７のＶＨをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
いくつかの実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３、２６４、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２又は３８２のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２、２７３、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７又は３９８のＶＬとをコードする。
本発明は、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ又は
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
をコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
特定の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬをコードする。他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬをコードする。他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬをコードする。他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬをコードする。他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬをコードする。他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬをコードする。
本発明は、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
をコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２７４、２７５又は２７６のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。本発明は、配列番号１８のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号１９のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２２のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２３のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２４のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２５のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２６のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２７のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０３のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０４のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０５のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０６のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０７のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０８のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０９のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１０のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１１のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１２のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１３のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１４のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１５のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１６のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１７のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１８のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１９のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２２０のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２２１のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２７４のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２７５のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２７６のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
特定の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２１３のポリペプチドをコードする。他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２１６のポリペプチドをコードする。他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２１９のポリペプチドをコードする。他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２７４のポリペプチドをコードする。他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２７５のポリペプチドをコードする。他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２７６のポリペプチドをコードする。
本開示は、本開示のＣＡＲ又は機能的部分又はそれらの機能的変異体の何れかをコードする単離又は精製されたポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２７４、２７５又は２７６のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２７４のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードする単離ポリヌクレオチドも提供する。
本開示のいくつかの実施形態は、本開示のＣＤ３３結合タンパク質をコードするポリヌクレオチド又は本開示のＣＤ３３結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリッド形成するポリヌクレオチドと相補的であるポリヌクレオチドを含む単離又は精製された核酸も提供する。
ストリンジェントな条件下でハイブリッド形成するポリヌクレオチドは、高ストリンジェンシーの条件下でハイブリッド形成し得る。「高ストリンジェンシー条件」は、ポリヌクレオチドが、非特異的なハイブリッド形成よりも、検出できるほどにより強い量で標的配列（本明細書中に記載の核酸の何れかのヌクレオチド配列）と特異的にハイブリッド形成することを意味する。高ストリンジェンシー条件は、正確な相補配列を有するポリヌクレオチド又は本ヌクレオチド配列と一致した数個の小さい領域（例えば、３～１２塩基）を偶然有したランダム配列からの散在するミスマッチを数個のみ含有するものを区別する条件を含む。相補性のこのような小さい領域は、１４～１７又はそれを超える塩基の全長コンプリメントよりも容易に溶融され、高ストリンジェンシーハイブリッド形成により、それらが容易に区別可能になる。比較的高いストリンジェンシー条件は、例えば、低塩及び／又は高温条件を含み、例えば約５０～７０℃の温度で約０．０２～０．１Ｍ ＮａＣｌ又は均等物により提供される。このような高ストリンジェンシー条件は、ヌクレオチド配列と鋳型又は標的鎖との間で、ミスマッチを、存在するとしてもわずかにのみ許容し、本明細書中に記載のＣＡＲの何れかの発現を検出するために特に適切である。一般に、ホルムアミドの漸増量の添加によって条件をよりストリンジェントにし得ることが認められている。
本開示のポリヌクレオチド配列は、目的の宿主細胞においてヌクレオチド配列の発現を可能にする１つ以上の調節エレメント、例えばプロモーター又はエンハンサーなどに操作可能に連結され得る。本ポリヌクレオチドはｃＤＮＡであり得る。本プロモーターは、強力、弱い、組織特異的な、誘導性又は発生特異的なプロモーターであり得る。使用され得る代表的なプロモーターは、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ベータ－アクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチンなどである。さらに、多くのウイルスプロモーターは真核細胞において構成的に機能し、記載の実施形態による使用に適切である。このようなウイルスプロモーターとしては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター、ＳＶ４０の初期及び後期プロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、モロニー白血病ウイルスの末端反復配列（ＬＴＲ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）及び他のレトロウイルス及び単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターが挙げられる。誘導性プロモーター、例えば、メタロチオネインプロモーター、テトラサイクリン誘導性プロモーター、ドキシサイクリン誘導性プロモーター、タンパク質キナーゼＲ２’，５’－オリゴアデニレートシンテターゼなどの１つ以上のインターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）を含有するプロモーター、Ｍｘ遺伝子、ＡＤＡＲ１なども使用され得る。
本発明は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターも提供する。本開示は、本発明のポリヌクレオチドを含む発現ベクターも提供する。このようなベクターは、プラスミドベクター、ウイルスベクター、バキュロウイルス発現のためのベクター、トランスポゾンに基づくベクター又は何らかの手段によるある生物又は遺伝学的背景への本発明の合成ポリヌクレオチドの導入に適切な何らかの他のベクターであり得る。本開示のＣＤ３３結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ＣＤ３３結合タンパク質の発現を確実にする発現ベクターにおいて調節配列に操作可能に連結され得る。このような調節エレメントは、転写プロモーター、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列及び転写及び翻訳の終結を調節する配列を含み得る。発現ベクターは、複製起点、発現させようとする遺伝子に連結される適切なプロモーター及びエンハンサー、他の５’又は３’隣接非転写配列、５’又は３’非翻訳配列（必要なリボソーム結合部位など）、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位又は転写終結配列などの１つ以上の非転写エレメントも含み得る。宿主において複製する能力を付与する複製起点も組み込まれ得る。
発現ベクターは、天然又は非天然ヌクレオチド間結合又は両方のタイプの結合を含み得る。非天然の又は改変されたヌクレオチド又はヌクレオチド間結合は、ベクターの転写又は複製を邪魔しない。
ベクターが適切な宿主に組み込まれたら、宿主は、組み込まれたポリヌクレオチドによりコードされる本開示のＣＤ３３結合タンパク質の高レベル発現に適切な条件下で維持される。脊椎動物細胞の形質転換において使用しようとする発現ベクターにおける転写及び翻訳調節配列は、ウイルス供給源により提供され得る。代表的なベクターは、Ｏｋａｙａｍａ ａｎｄ Ｂｅｒｇ，３Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２８０（１９８３）により記載されるように構築され得る。
本開示のベクターは、１つ以上の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）も含有し得る。融合ベクターへのＩＲＥＳ配列の封入は、いくつかのタンパク質の発現促進に有益であり得る。いくつかの実施形態では、本ベクター系は、１つ以上のポリアデニル化部位（例えばＳＶ４０）を含み、これは、前述の核酸配列の何れかの上流又は下流であり得る。ベクター構成成分は、遺伝子産物を発現するための最適なスペーシングを提供するように近接して連結若しくは配置され得るか（即ちＯＲＦ間の「スペーサー」ヌクレオチドの導入による）又は別の方法で置かれ得る。調節エレメント、例えばＩＲＥＳモチーフなども、発現に最適なスペーシングを提供するように配置される。
本開示のベクターは、環状又は直鎖状であり得る。これらは、原核又は真核宿主細胞において機能的である複製系を含有するように調製され得る。複製系は、例えばＣｏｌＥ１、ＳＶ４０、２μプラスミド、λ、ウシパピローマウイルスなど由来であり得る。
組み換え発現ベクターは、一過性発現、安定発現の何れか又はその両方のために設計され得る。また、組み換え発現ベクターは、構成的発現のために又は誘導性発現のためにおいて作製され得る。
さらに、本組み換え発現ベクターは、自殺遺伝子を含むように作製され得る。本明細書中で使用される場合、「自殺遺伝子」という用語は、自殺遺伝子を発現する細胞の死滅を引き起こす遺伝子を指す。自殺遺伝子は、細胞がある薬剤と接触するか又はそれに曝露された場合、自殺遺伝子が発現される細胞において薬剤、例えば薬物に対する感受性を付与し、その細胞の死滅を引き起こす遺伝子であり得る。自殺遺伝子は当技術分野で公知であり、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子、シトシンデアミナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ及びニトロレダクターゼが挙げられる。
ベクターは、当技術分野で周知である選択マーカーも含み得る。選択マーカーは陽性及び陰性選択マーカーを含む。マーカー遺伝子としては、殺生物剤耐性、例えば抗生物質に対する耐性、重金属など、原栄養性を提供するための栄養要求性宿主における補完などが挙げられる。代表的なマーカー遺伝子としては、抗生物質耐性遺伝子（例えば、ネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、ペニシリン耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、ヒスチジノールｘ耐性遺伝子）、グルタミンシンターゼ遺伝子、ＨＳＶ－ＴＫ、ガンシクロビル選択のためのＨＳＶ－ＴＫ誘導体又は６－メチルプリン選択のための細菌プリンヌクレオシドホスホリラーゼ遺伝子が挙げられる（Ｇａｄｉ ｅｔ ａｌ．，７ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１７３８－１７４３（２０００））。選択マーカー又はクローニング部位をコードする核酸配列は、関心対象のポリペプチドをコードする核酸配列又はクローニング部位の上流又は下流であり得る。
使用され得る代表的なベクターは、細菌性：ｐＢｓ、ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔ、ＰｓｉＸ１７４、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ、ｐＢｓ ＫＳ、ｐＮＨ８ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８ａ、ｐＮＨ４６ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）；ｐＴｒｃ９９Ａ、ｐＫＫ２２３－３、ｐＫＫ２３３－３、ｐＤＲ５４０及びｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）である。真核性：ｐＷＬｎｅｏ、ｐＳＶ２ｃａｔ、ｐＯＧ４４、ＰＸＲ１、ｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ及びｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｐＥＥ６．４（Ｌｏｎｚａ）及びｐＥＥ１２．４（Ｌｏｎｚａ）である。さらなるベクターとしては、ｐＵＣシリーズ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ Ｌｉｆｅ ＳｃｉｅｎｃｅＳ，Ｇｌｅｎ Ｂｕｒｎｉｅ，Ｍｄ．）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．）、ｐＥＴシリーズ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ｐＧＥＸシリーズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＵｐｐｓａｌＡ，Ｓｗｅｄｅｎ）及びｐＥＸシリーズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．）が挙げられる。バクテリオファージベクター、例えばλＧＴ１０、λＧＴ１１、λＥＭＢＬ４及びλＮＭ１１４９、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）などが使用され得る。代表的な植物発現ベクターとしては、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ０１．２、ｐＢＩ１２１、ｐＢＩ１０１．３及びｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。代表的な動物発現ベクターとしては、ｐＥＵＫ－Ｃｌ、ｐＭＡＭ及びｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。本発現ベクターは、ウイルスベクター、例えばレトロウイルスベクター、例えばガンマレトロウイルスベクターであり得る。
いくつかの実施形態では、本ベクターは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３、２６４、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２又は３８２のＶＨをコードするポリヌクレオチドを含む。
特定の実施形態では、ベクターは、配列番号５３のＶＨをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号５６のＶＨをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号５９のＶＨをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号２６２のＶＨをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号２６３のＶＨをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号２６４のＶＨをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２、２７３、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７又は３９８のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。
特定の実施形態では、ベクターは、配列番号８２のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号８５のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号８７のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号２７１のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号２７２のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号２７３のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７のＶＨをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、２６２、２６３、２６４、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２又は３８２のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、２７１、２７２、２７３、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７又は３９８のＶＬとをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、本ベクターは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
ｋ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｍ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
をコードする単離ポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
特定の実施形態では、ベクターは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ベクターは、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
をコードする単離ポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号：配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２７４、２７５又は２７６のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１８のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１９のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２３のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２４のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２５のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２６のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２７のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０３のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０４のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０５のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０６のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０７のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０８のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０９のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１０のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１１のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１３のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１４のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１５のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１６のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１７のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１８のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１９のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２２０のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２２１のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２７４のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２７５のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２７６のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、本開示のＣＡＲ又は機能的部分又はそれらの機能的変異体の何れかをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２７４、２７５又は２７６のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２７４のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
本発明は、１つ以上の本発明のベクターを含む宿主細胞も提供する。「宿主細胞」は、ベクターが導入されている細胞を指す。宿主細胞という用語は、特定の対象細胞のみを指すものではなく、このような細胞の子孫及びまた特定の対象細胞から作製された安定な細胞株も指すものであることが理解される。ある種の修飾は、突然変異又は環境の影響の何れかのため、その後の世代において起こり得ることから、このような子孫は、親細胞と同一ではないものであり得るが、本明細書中で使用される場合の「宿主細胞」という用語の範囲内に依然として含まれる。このような宿主細胞は、真核細胞、原核細胞、植物細胞又は古細菌の細胞であり得る。エスケリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、バチリ（ｂａｃｉｌｌｉ）、例えばバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及び他のエンテロバクテリアセア（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃａｅ）、例えばサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）及び様々なシュードモナス種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）は原核宿主細胞の例である。他の微生物、例えば酵母なども発現に有用である。サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）（例えばＳ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））及びピキア（Ｐｉｃｈｉａ）は、適切な酵母宿主細胞の例である。代表的な真核細胞は、哺乳動物、昆虫、鳥類又は他の動物起源のものであり得る。哺乳動物真核細胞には、ハイブリドーマなどの不死化細胞株又はＳＰ２／０（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），ＭａｎａｓｓａＳ，ＶＡ，ＣＲＬ－１５８１）、ＮＳ０（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ），Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ ＵＫ，ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．８５１１０５０３）、ＦＯ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６４６）及びＡｇ６５３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８０）マウス細胞株などの骨髄腫細胞株が含まれる。代表的なヒト骨髄腫細胞株は、Ｕ２６６（ＡＴＴＣ ＣＲＬ－ＴＩＢ－１９６）である。他の有用な細胞株としては、ＣＨＯ－Ｋ１ＳＶ（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、ＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－６１）又はＤＧ４４などのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞由来のものが挙げられる。
本開示は、本開示のＣＤ３３結合タンパク質を作製する方法であって、Ｋ２結合タンパク質が発現される条件で本開示の宿主細胞を培養することと、宿主細胞によって産生されるＣＤ３３結合タンパク質を回収することとを含む方法も提供する。タンパク質を作製し、それらを精製する方法は公知である。合成されたら（化学的又は組み換えの何れか）、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）精製、ゲル電気泳動など（一般にＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．，（１９８２）を参照されたい）を含む標準的な手順に従い、ＣＤ３３結合タンパク質が精製され得る。対象タンパク質は、実質的に純粋、例えば、少なくとも約８０％～８５％純粋、少なくとも約８５％～９０％純粋、少なくとも約９０％～９５％純粋又は少なくとも約９８％～９９％又はそれを超えて純粋、例えば、細胞残屑、対象タンパク質以外の巨大分子などの夾雑物不含であり得る。
本開示のＣＤ３３結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、標準的な分子生物学方法を使用してベクターに組み込まれ得る。宿主細胞形質転換、培養、抗体発現及び精製は、周知の方法を使用して行われる。
従って、本発明は、本発明のポリペプチドをコードする本発明のヌクレオチドを発現させることを含む、ポリペプチドを作製する方法を提供する。特定の実施形態では、本ポリヌクレオチドは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬをコードする。他の実施形態では、本ポリヌクレオチドは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬをコードする。他の実施形態では、本ポリヌクレオチドは、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬをコードする。他の実施形態では、本ポリヌクレオチドは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号８２のＶＬをコードする。他の実施形態では、本ポリヌクレオチドは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬをコードする。他の実施形態では、本ポリヌクレオチドは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬをコードする。
この方法の特定の実施形態では、本ポリヌクレオチドは、配列番号５３のＶＨを含むポリペプチド及び配列番号８２のＶＬを含むポリペプチドをコードする。他の実施形態では、本ポリヌクレオチドは、配列番号５６のＶＨを含むポリペプチド及び配列番号８５のＶＬを含むポリペプチドをコードする。他の実施形態では、本ポリヌクレオチドは、配列番号５９のＶＨを含むポリペプチド及び配列番号８７のＶＬを含むポリペプチドをコードする。他の実施形態では、本ポリヌクレオチドは、配列番号２６２のＶＨを含むポリペプチド及び配列番号２７１のＶＬを含むポリペプチドをコードする。他の実施形態では、本ポリヌクレオチドは、配列番号２６３のＶＨを含むポリペプチド及び配列番号２７２のＶＬを含むポリペプチドをコードする。他の実施形態では、本ポリヌクレオチドは、配列番号２６４のＶＨを含むポリペプチド及び配列番号２７３のＶＬを含むポリペプチドをコードする。
本ポリペプチドが、異なる核酸によりコードされる個別の鎖から形成される場合、本発明は、本発明のポリペプチドをコードする本発明のヌクレオチドを発現させることを含む、ポリペプチドを作製する方法を提供する。特定の実施形態では、本発明の第１のポリヌクレオチドは、配列番号５３のＶＨを含むポリペプチドをコードし、本発明の第２のポリヌクレオチドは、配列番号８２のＶＬを含むポリペプチドをコードする。他の実施形態では、本発明の第１のポリヌクレオチドは、配列番号５６のＶＨを含むポリペプチドをコードし、本発明の第２のポリヌクレオチドは、配列番号８５のＶＬを含むポリペプチドをコードする。他の実施形態では、本発明の第１のポリヌクレオチドは、配列番号５９のＶＨを含むポリペプチドをコードし、本発明の第２のポリヌクレオチドは、配列番号８７のＶＬを含むポリペプチドをコードする。他の実施形態では、本発明の第１のポリヌクレオチドは、配列番号２６２のＶＨを含むポリペプチドをコードし、本発明の第２のポリヌクレオチドは、配列番号２７１のＶＬを含むポリペプチドをコードする。他の実施形態では、本発明の第１のポリヌクレオチドは、配列番号２６３のＶＨを含むポリペプチドをコードし、本発明の第２のポリヌクレオチドは、配列番号２７２のＶＬを含むポリペプチドをコードする。他の実施形態では、本発明の第１のポリヌクレオチドは、配列番号２６４のＶＨを含むポリペプチドをコードし、本発明の第２のポリヌクレオチドは、配列番号２７３のＶＬを含むポリペプチドをコードする。
本開示のポリヌクレオチドを作製するために、修飾されたヌクレオチドが使用され得る。代表的な修飾されたヌクレオチドは、５－フルオロウラシル、５－ブロモウラシル、５－クロロウラシル、５－ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４－アセチルシトシン、５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン、５－カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、Ｎ６－置換アデニン、７－メチルグアニン、５－メチルアミノメチルウラシル、５－メトキシアミノメチル－２－チオウラシル、ベータ－Ｄ－マンノシルケオシン、５”－メトキシカルボキシメチルウラシル、５－メトキシウラシル、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデニン、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン、シュードウラシル、ケオシン、ベータ－Ｄ－ガラクトシルケオシン、イノシン、Ｎ６－イソペンテニルアデニン、１－メチルグアニン、１－メチルイノシン、２，２－ジメチルグアニン、２－メチルアデニン、２－メチルグアニン、３－メチルシトシン、５－メチルシトシン、２－チオシトシン、５－メチル－２－チオウラシル、２－チオウラシル、４－チオウラシル、５－メチルウラシル、ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、３－（３－アミノ－３－Ｎ－２－カルボキシプロピル）ウラシル及び２，６－ジアミノプリンである。
医薬組成物／投与
本開示は、本開示のＣＤ３３結合タンパク質と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物も提供する。
本開示は、本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物も提供する。
本開示は、本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物も提供する。
本開示は、本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物も提供する。
本開示は、本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物も提供する。治療用途のために、本開示のＣＤ３３結合タンパク質は、薬学的に許容可能な担体中に有効成分として有効量の本抗体を含有する医薬組成物として調製され得る。「担体」は、本発明の抗体が一緒に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤又はビヒクルを指す。このようなビヒクルは、液体、例えば水及び石油、動物、植物又は合成起源のもの、例えば落花生油、ダイズ油、鉱物油、ゴマ油などを含む油などであり得る。例えば、０．４％ブライン及び０．３％グリシンが使用され得る。これらの溶液は、無菌であり、一般的に粒状物質不含である。これらは、従来の周知の滅菌技術（例えばろ過）によって滅菌され得る。本組成物は、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、安定化剤、増粘剤、滑沢剤及び着色剤など、生理的状態に近似させるために必要に応じて、薬学的に許容可能な補助物質を含有し得る。このような製剤処方物中の本発明の抗体の濃度は、約０．５％未満から、通常は少なくとも約１％～１５又は２０重量％まで変動し得、選択される投与方式に従い、流体体積、粘性など、主に求められる用量に基づいて選択され得る。適切なビヒクル及び処方物は、他のヒトタンパク質、例えばヒト血清アルブミンを含め、例えば、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｒｏｙ，Ｄ．Ｂ．ｅｄ．，Ｌｉｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ ２００６，Ｐａｒｔ ５，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ ｐｐ ６９１－１０９２において記載されており、特にｐｐ．９５８－９８９を参照されたい。
本開示のＣＤ３３結合タンパク質の投与方式は、非経口投与などの何れかの適切な経路、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内又は皮下、経粘膜（経口、鼻腔内、膣内、直腸）又は当業者により認められ、当技術分野で周知であるような他の手段であり得る。
本発明の本開示のＣＤ３３結合タンパク質は、癌などの疾患を発症するリスクを低下させるために予防的にも投与され得る。
従って、筋肉内注射のための本発明の医薬組成物は、１ｍｌの滅菌緩衝水及び約１ｎｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約５０ｎｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ又はそれを超える、好ましくは約５ｍｇ～約２５ｍｇ／ｋｇの本発明の本開示のＣＤ３３結合タンパク質を含有するように調製され得る。
本開示の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲ発現細胞と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物、例えば適切な医薬組成物で提供され得る。一態様では、本開示は、有効量の記載されるＣＡＲの１つ以上を発現するリンパ球と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。本開示の医薬組成物は、１つ以上の薬学的又は生理学的に許容可能な担体、賦形剤又は希釈剤と組みわせて、本明細書中に記載のような、ＣＡＲ発現細胞、例えば複数のＣＡＲ発現細胞を含み得る。薬学的に許容可能な担体は、対象にとって無毒性である、有効成分以外の医薬組成物中の成分であり得る。
薬学的に許容可能な担体は、緩衝剤、賦形剤、安定化剤又は保存剤を含み得る。薬学的に許容可能な担体の例は、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤など、例えば、塩、緩衝剤、抗酸化剤、糖類、水性又は非水性担体、保存剤、湿潤剤、界面活性剤又は乳化剤又はそれらの組み合わせなど、生理学的に適合するものである。本医薬組成物中の薬学的に許容可能な担体の量は、担体の活性及び安定性及び／又は最小酸化など、処方物の所望の特徴に基づき実験的に決定され得る。
医薬組成物は、緩衝液、例えば酢酸、クエン酸、ギ酸、コハク酸、リン酸、炭酸、リンゴ酸、アスパラギン酸、ヒスチジン、ホウ酸、Ｔｒｉｓ緩衝液、ＨＥＰＰＳＯ、ＨＥＰＥＳ、中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水など；糖類、例えばグルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなど；タンパク質；ポリペプチド又はアミノ酸、例えばグリシンなど；抗酸化剤；キレート剤、例えばＥＤＴＡ又はグルタチオンなど；アジュバント（例えば水酸化アルミニウム）；抗菌及び抗真菌剤；及び保存剤を含み得る。
本開示の医薬組成物は、非経口又は非－非経口投与の様々な手段のために処方され得る。一実施形態では、本組成物は、点滴又は静脈内投与のために処方され得る。本明細書中で開示される医薬組成物は、例えば滅菌液体調製物、例えば等張水溶液、エマルション、懸濁液、分散液又は粘性組成物として提供され得、それは所望のｐＨまで緩衝され得る。経口投与に適切な処方物は、適切な液体及びエマルション中での、液体溶液、カプセル、サシェ、錠剤、薬用キャンディー及びトローチ、粉末懸濁液を含み得る。
「薬学的に許容可能な」という用語は、医薬組成物に関して、本明細書中で使用される場合、連邦政府若しくは州政府の規制官庁により承認されるか、又は動物及び／又はヒトにおける使用のための米国薬局方若しくは他の一般的に認識される薬局方で列挙されることを意味する。
処置及び使用の方法
本開示は、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、それを必要とする対象に、治療的有効量の本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質を投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質を投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法も提供する。
特定の実施形態では、本方法は、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の本開示のＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及びＴＲＧＶ９に結合する第２の抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質（例えば二特異性タンパク質）を投与することを含む。特定のこのような実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖであり、任意選択的に、ＴＲＧＶ９に結合する第２の結合ドメインはＶＨＨである。
いくつかの実施形態では、本方法は、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量のＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及びＴＲＧＶ９に結合する第２の抗原を含む多特異性タンパク質（例えば二特異性タンパク質）を投与することを含み、このＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含む。特定のこのような実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖであり、任意選択的に、ＴＲＧＶ９に結合する第２の結合ドメインはＶＨＨである。
いくつかの実施形態では、本方法は、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に、治療的有効量のＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及びＴＲＧＶ９に結合する第２の抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質（例えば二特異性タンパク質）を投与することを含み、このＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１３、２１６、２１９、２７４、２７５又は２７６のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、ＴＲＧＶ９に結合する第２の結合ドメインはＶＨＨである。
本開示は、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む免疫複合体を投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に、治療的有効量の本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む医薬組成物を投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法も提供する。特定のこのような実施形態では、本医薬組成物は、本開示のＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインと、ＴＲＧＶ９に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む多特異性タンパク質（例えば二特異性タンパク質）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖであり、任意選択的に、ＴＲＧＶ９に結合する第２の結合ドメインはＶＨＨである。
いくつかの実施形態では、本方法は、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象にＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及びＴＲＧＶ９に結合する第２の抗原を含む多特異性タンパク質（例えば二特異性タンパク質）を含む治療的有効量の医薬組成物を投与することを含み、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含む。特定のこのような実施形態では、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインはｓｃＦｖであり、任意選択的に、ＴＲＧＶ９に結合する第２の結合ドメインはＶＨＨである。
いくつかの実施形態では、本方法は、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に多特異性タンパク質（例えば二特異性タンパク質）を含む治療的有効量の医薬組成物を投与することを含み、この多特異性タンパク質は、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及びＴＲＧＶ９に結合する第２の抗原結合ドメインを含み、このＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１３、２１６、２１９、２７４、２７５又は２７６のアミノ酸配列を含む。特定のこのような実施形態では、ＴＲＧＶ９に結合する第２の結合ドメインはＶＨＨである。
本開示は、リンパ球注入を使用して、癌を有するか又は癌を有するリスクがある対象の処置のために、ＣＡＲを発現する遺伝子修飾されたＴ細胞を投与する方法も提供する。
少なくとも１つの実施形態では、処置において自己リンパ球注入が使用される。自家ＰＢＭＣは、処置を必要とする対象から回収され、Ｔ細胞が活性化され、本明細書中に記載され、当技術分野で公知である方法を使用して拡大増殖させ、次いで対象に注入し戻される。
一態様では、本開示は、一般に、癌を発症するリスクがある対象の処置に関する。本発明は、化学療法及び／又は免疫療法の結果、対象において顕著な免疫抑制が起こり、それにより癌を発症する対象のリスクが上昇する、悪性腫瘍又は自己免疫疾患を処置することも含む。
本開示は、非癌性状態を処置するために、対象に本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを投与することを含む、癌性状態を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置する方法も提供する。
本開示は、非癌性状態を処置するために対象に本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質を投与することを含む、癌性状態を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置する方法も提供する。
本開示は、非癌性状態を処置するために対象に本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質を投与することを含む、癌性状態を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置する方法も提供する。
本開示は、非癌性状態を処置するために対象に本開示の免疫複合体を投与することを含む、癌性状態を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置する方法も提供する。
本開示は、非癌性状態を処置するために対象に本開示の医薬組成物を投与することを含む、癌性状態を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置する方法も提供する。
本開示は、非癌性状態を処置するために本開示のＣＡＲを対象に投与することを含む、癌性状態を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置する方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現癌を予防するのに十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の本開示のＣＤ３３に結合する何れかの抗原結合ドメインを投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現癌を予防する方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現癌を予防するのに十分な時間にわたり、対象に、治療的有効量の本開示のＣＤ３３に結合する何れかの抗原結合ドメインを含むタンパク質を投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現癌を予防する方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現癌を予防するのに十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質を投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現癌を予防する方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現癌を予防するのに十分な時間にわたり、対象に、治療的有効量の本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現癌を予防する方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現癌を予防するのに十分な時間にわたり、対象に、治療的有効量の本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む免疫複合体を投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現癌を予防する方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現癌を予防するのに十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の本開示のＣＤ３３に結合する何れかの抗原結合ドメインを含む医薬組成物を投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現癌を予防する方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させるのに十分な時間にわたり、対象に本開示のＣＤ３３に結合する何れかの抗原結合ドメインを投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させる方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させるのに十分な時間にわたり、対象に本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質を投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させる方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させるのに十分な時間にわたり、対象に本開示のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質を投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させる方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させるのに十分な時間にわたり、対象に本開示のＣＤ３３に結合する何れかの抗原結合ドメインを含むＣＡＲを投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させる方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させるのに十分な時間にわたり、対象に本開示の免疫複合体を投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させる方法も提供する。
本開示は、ＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させるのに十分な時間にわたり、対象に本開示の医薬組成物を投与することを含む、対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させる方法も提供する。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、血液癌である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、白血病である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、リンパ腫である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、多発性骨髄腫である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である。
特定の実施形態では、ＣＤ３３発現癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
いくつかの実施形態では、癌は、再発、難治性、悪性又はそれらの何れかの組み合わせである。
本開示は、血液癌を処置するのに十分な時間にわたり、対象に治療的有効量のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質を投与することを含む、対象において血液癌（例えば、白血病（特にＡＭＬ）、リンパ腫又は多発性骨髄腫）を処置する方法も提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ；
配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；又は
配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ
を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを含む。他の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬを含む。
本開示は、血液癌を処置するのに十分な時間にわたり、対象に治療的有効量のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質を投与することを含む、対象において血液癌（例えば白血病（特にＡＭＬ）、リンパ腫又は多発性骨髄腫）を処置する方法も提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む。
本開示は、血液癌を処置するのに十分な時間にわたり、対象に治療的有効量のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質を投与することを含む、対象において血液癌（例えば白血病（特にＡＭＬ）、リンパ腫又は多発性骨髄腫）を処置する方法も提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
配列番号１８のＶＨ；
配列番号１９のＶＨ；
配列番号２０のＶＨ、
配列番号２１のＶＨ；
配列番号２２のＶＨ；
配列番号２３のＶＨ；
配列番号２４のＶＨ；
配列番号２５のＶＨ；
配列番号２６のＶＨ；又は
配列番号２７のＶＨ
を含む。
本開示は、血液癌を処置するのに十分な時間にわたり、対象に治療的有効量のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む多特異性タンパク質を投与することを含む、対象において血液癌（例えば白血病（特にＡＭＬ）、リンパ腫又は多発性骨髄腫）を処置する方法も提供し、このＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２７４、２７５又は２７６のアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２１３、２１６、２１９、２７４、２７５又は２７６のアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、癌を予防する方法を提供し、この方法は、それを必要とする対象に記載のＣＡＲの１つ以上を発現するリンパ球の量を投与することを含む。
一態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法を提供し、この方法は、それを必要とする対象に治療的有効量の記載のＣＡＲの１つ以上を発現するリンパ球を投与することを含み、それによりリンパ球は、対象において癌細胞の死滅を誘導するか又は調整する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象において腫瘍量を減少させる方法を提供し、この方法は、それを必要とする対象に治療的有効量の本明細書中に記載のＣＡＲの１つ以上を発現するリンパ球を投与することを含み、それによりリンパ球は、対象において血液癌細胞の死滅を誘導する。別の態様では、本開示は、癌を有する対象の生存を延長させる方法を提供し、この方法は、それを必要とする対象に治療的有効量の記載のＣＡＲの１つ以上を発現するリンパ球を投与することを含み、それにより対象の生存期間が長くなる。一般に、ＣＡＲを発現するリンパ球は、対象において血液癌細胞の死滅を誘導し、その結果、対象において血液腫瘍／癌細胞の減少又は根絶が起こる。標的とされ得る転移性病変を含む血液癌の非限定リストには、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫が含まれる。いくつかの実施形態では、血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である。
一態様では、処置を必要とする対象に、治療的有効量のＣＡＲを発現するリンパ球、ＣＤ３３抗原に結合する細胞外抗原結合ドメインを有するＣＡＲを投与することを含み、それによりリンパ球が対象において癌細胞の死滅を誘導する、癌を有する対象を処置する方法が提供される。
一態様では、癌細胞の標的化された死滅の方法が開示され、この方法は、記載されるＣＡＲの１つ以上を発現するリンパ球と癌細胞を接触させ、それによりリンパ球が癌細胞の死滅を誘導することを含む。標的とされ得る血液癌細胞を含む癌細胞の非限定リストには、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫が含まれる。いくつかの実施形態では、血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である。
治療的有効量が指定される場合、投与しようとする本開示のＣＡＲ又はＣＡＲ－Ｔの正確な量は、対象の、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染又は転移の程度及び状態における個々の差異を考慮して医師により決定され得る。本明細書中に記載のＴ細胞を含む医薬組成物が、細胞約１０４～約１０１０個／ｋｇ体重、一部の例において細胞約１０５～約１０６個／ｋｇ体重の投与量（これらの範囲内の全ての整数値を含む）で投与され得ることが一般に述べられ得る。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のＴ細胞を含む医薬組成物は、約１０６個の細胞／ｋｇ体重の投与量で投与され得る。Ｔ細胞組成物はまた、これらの投与量で複数回投与され得る。この細胞は、免疫療法において一般的に知られる注入技術を使用することによって投与され得る（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ Ｍｅｄ．３１９：１６７６－１９８８を参照されたい）。
本発明のＣＡＲ－Ｔに関連して有用な送達系は、Ｔ細胞組成物の送達が、処置しようとする部位の感受性を引き起こす前に及び引き起こすのに十分な時間を伴って起こるような、時間放出、遅延放出及び持続放出送達系を含み得る。本組成物は、他の治療剤又は治療と組み合わせて使用され得る。このような系は、本組成物の反復投与を回避し得、それによって対象及び医師にとってさらに好都合なものとなり、本発明の特定の組成物の実施形態に対して特に適切であり得る。
放出送達系の多くのタイプが利用可能であり、当業者にとって公知である。これらは、ポリ（ラクチド－グリコリド）、コポリオキサレート、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸及びポリ無水物などのポリマーベース系を含む。薬物を含有する前述のポリマーのマイクロカプセルは、例えば米国特許第５，０７５，１０９号明細書に記載されている。送達系は、コレステロールなどのステロール、コレステロールエステル及び脂肪酸又は中性脂肪、例えばモノ－ジ－及びトリ－グリセリドを含む脂質である非ポリマー系；シラスティック（ｓｙｌａｓｔｉｃ）系；ペプチドに基づく系；ヒドロゲル放出系；ワックスコーティング；従来の結合剤及び賦形剤を用いた圧縮錠剤；部分的に融合した埋め込み物なども含む。具体例としては、（ａ）活性組成物がマトリクス内の形態で含有される浸食系、例えば米国特許第４，４５２，７７５号明細書；同第４，６６７，０１４号明細書；同第４，７４８，０３４号明細書；及び同第５，２３９，６６０号明細書に記載のものなど、及び（ｂ）ポリマーから調節された速度で活性構成成分が浸透する拡散系、例えば米国特許第３，８５４，４８０号明細書及び同第３，８３２，２５３号明細書に記載されるものなどが挙げられるが、限定されない。さらに、ポンプに基づくハードウェア送達系が使用され得、その一部は、埋め込みに適応される。
特定の態様では、対象に活性化されたＴ細胞を投与し、その後、次に血液を再び引き出し（又はアフェレーシスが行われる）、本開示に従いＴ細胞を活性化し、これらの活性化され、拡大増殖されたＴ細胞を対象に再び注入することが所望され得る。この過程は、数週間ごとに複数回行われ得る。特定の態様では、Ｔ細胞は、１０ｃｃ～４００ｃｃの血液採取物から活性化され得る。特定の態様では、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ又は１００ｃｃの血液採取物から活性化される。
ＣＡＲ－Ｔ細胞及び組成物の投与は、例えば、エアロゾル吸入、注射、点滴、摂取、輸血、埋め込み又は移植によるものなどを含む、非経口又は非非経口投与により、何れかの方式で行われ得る。例えば、本明細書中に記載のＣＡＲ－Ｔ細胞及び組成物は、経動脈的、皮内、皮下、腫瘍内、髄内、節内、筋肉内、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により、又は腹腔内で患者に投与され得る。一態様では、本開示の組成物は、ｉ．ｖ．注射により投与される。一態様では、本開示の組成物は、皮内又は皮下注射によって対象に投与される。Ｔ細胞の組成物は、例えば、腫瘍、リンパ節、組織、臓器又は感染部位に直接注射され得る。
投与は、自己又は非自己であり得る。例えば、ＣＤ３３特異的なＣＡＲを発現する免疫応答細胞は、ある一人の対象から得られ、同じ対象又は異なる適合対象に投与され得る。本開示の末梢血由来Ｔ細胞又は拡大増殖されたＴ細胞（例えばインビボ、エクスビボ又はインビトロ由来）は、例えば、静脈内注射、局所化注射、全身注射、カテーテル投与又は非経口投与を介して投与され得る。
特定の実施形態では、対象は、白血球除去を受け得、ここで、白血球が回収され、例えばＴ細胞など関心対象の細胞を選択及び／又は単離するために、エクスビボで濃縮又は枯渇が行われる。これらのＴ細胞単離物は、当技術分野で公知の方法により拡大増殖され得、本開示の１つ以上のＣＡＲコンストラクトが導入され得るように処理され得、それによりＣＡＲ－Ｔ細胞を作製する。それを必要とする対象は、その後、高用量化学療法とそれに続く末梢血幹細胞移植での標準治療を受け得る。特定の態様では、移植後又はそれと同時に、対象は、拡大増殖させたＣＡＲ－Ｔ細胞の注入を受ける。一態様では、手術前又は手術後、拡大増殖された細胞が投与される。
悪性腫瘍を有する患者に投与される投与量は、処置されている疾患を緩和するか又は少なくとも部分的に抑止するのに十分である（「治療的有効量」）。対象に投与しようとする上記処置の投与量は、処置している状態及び処置のレシピエントの正確な性質で変動する。ヒト投与のための投与量の調整は、当技術分野で一般に受容される実施に従い行われ得る。
本発明のＣＡＲ Ｔ細胞は、インビボＴ細胞拡大増殖を受け得、血液及び骨髄中で延長された時間量にわたり高レベルで持続するＣＤ３３特異的なメモリー細胞を確立し得る。一部の例において、対象に注入される本発明のＣＡＲ Ｔ細胞は、進行した化学療法抵抗性の癌がある対象においてインビボで癌細胞、例えば、血液癌細胞を排除し得る。
一実施形態では、本開示のＣＡＲは、例えばインビトロ転写を使用してＴ細胞に導入され、対象（例えばヒト）は、本開示のＣＡＲ－Ｔ細胞の初回投与及び１回以上のＣＡＲ－Ｔ細胞の続く投与を受け、この１回以上の続く投与は、前回投与後、１５日未満、例えば、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３又は２日間投与される。一実施形態では、１週間あたりＣＡＲ－Ｔ細胞の複数回の投与が対象（例えばヒト）に施され、例えば１週間あたり２、３又は４回のＣＡＲ－Ｔ細胞の投与が施される。一実施形態では、対象は、１週間あたり複数回のＣＡＲ－Ｔ細胞の投与を受け（例えば１週間あたり２、３又は４回の投与）（本明細書中でサイクルとも呼ぶ）、続いてＣＡＲ－Ｔ細胞投与がない週があり、次いで１回以上のＣＡＲ－Ｔ細胞のさらなる投与（例えば１週間あたり複数回のＣＡＲ－Ｔ細胞の投与）が対象に施される。別の実施形態では、対象は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の複数回のサイクルを受け、各サイクル間の時間は１０、９、８、７、６、５、４又は３日未満である。一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、週に３回の投与のために１日おきに投与される。一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８週間又はそれを超える週数にわたり投与される。
一実施形態では、投与は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、５週間、６週間、７週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月又はそれより長い期間後に反復され得る。慢性投与のように、反復処置コースも可能である。反復投与は、同じ用量又は異なる用量のものであり得る。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、例えば、６ヶ月以上にわたり週１回など、維持療法によって本発明の方法で投与され得る。
一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、レンチウイルスのウイルスベクター、例えばレンチウイルスなどを使用して作製される。このようなウイルスベクターで作製されたＣＡＲ－Ｔ細胞は、一般に、安定なＣＡＲ発現を有する。
一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、形質導入後、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５日間、ＣＡＲベクターを一過性に発現する。ＣＡＲの一過性発現は、ＲＮＡ ＣＡＲベクター送達によって影響を受け得る。一実施形態では、ＣＡＲ ＲＮＡは、エレクトロポレーションによってＴ細胞に形質導入される。
一過性ＣＡＲ療法のコース中に患者が抗ＣＡＲ抗体応答を生じるリスクが高い場合（ＲＮＡ形質導入によって生成されるものなど）、ＣＡＲ－Ｔ注入の中断が１０～１４日を超えて続くべきではない。
組み合わせ療法
本開示のＣＤ３３結合タンパク質は、少なくとも１つのさらなる治療と組み合わせて投与され得る。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのさらなる治療は、手術、化学療法若しくは放射線又はそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの実施形態では、１つの処置の送達は、投与の期間において重複があるように、第２の送達が始まるときに依然として起こっている。これは、本明細書中では、「同時」又は「同時送達」と呼ばれることがある。他の実施形態では、一方の処置の送達が、他方の処置の送達が始まる前に終了する。何れかの場合のいくつかの実施形態では、この処置は、組み合わせ投与であるためにより有効である。例えば、第２の処置は、より有効であり、例えば第２の治療未満で同等の効果が見られるか、又は第２の処置は、第２の処置が第１の処置なく投与された場合に見られるものよりも大きい程度まで症状を軽減するか、又は第１の治療と類似の状況が見られる。いくつかの実施形態では、送達は、障害に関連する症状又は他のパラメーターの軽減が、一方の処置が、他方がなく送達された場合に観察されるものよりも大きくなるようなものである。この２回の処置の効果は、部分的に相加的、全体的に相加的又は相加的を超えるものであり得る。送達は、送達される第１の処置の効果が、第２の処置が送達されるときに依然として検出可能であるようなものであり得る。
一実施形態では、因子などの他の治療剤は、インターロイキン並びにコロニー刺激因子、例えばＧ－、Ｍ－及びＧＭ－ＣＳＦ及びインターフェロンを含むが、限定されない、ＣＡＲ－Ｔ細胞などのＣＤ３３結合タンパク質の前、その後又はそれと同じときに（それと同時に）投与され得る。
本明細書中に記載のＣＡＲ発現細胞などのＣＤ３３結合タンパク質及び少なくとも１つのさらなる治療剤が、同時に、同じか若しくは別個の組成物中において又は連続的に投与され得る。連続投与の場合、本明細書中に記載のＣＡＲなどのＣＤ３３結合タンパク質を発現する細胞が最初に投与され得、さらなる薬剤が２番目に投与され得るか又は投与の順序を逆にし得る。
さらなる実施形態では、本明細書中に記載のＣＡＲなどのＣＤ３３結合タンパク質を発現する細胞は、手術、放射線、化学療法、免疫抑制剤、抗体又は他のイムノアブレーション剤と組み合わせて治療レジメンにおいて使用され得る。一実施形態では、対象に、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤が投与され得る。例えば、一実施形態では、この薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る。
以下の実施例は、本明細書中で開示される実施形態のいくつかをさらに説明するために提供される。これらの実施例は、開示される実施形態に対する例示であり限定するものではない。
本発明は、以下の例によっても説明され、示される。しかし、これら及び他の実施例の使用は、本明細書中の何れの箇所でも単なる例示であり、本発明又はあらゆる例証される用語の範囲及び意味を限定するものではない。同様に、本発明は、本明細書中に記載の何らかの特定の好ましい実施形態に限定されない。実際に、本発明の多くの改変及び変形例が、本明細書を読んだ際に当業者にとって明らかとなり得、このような変形例は、精神又は範囲において本発明から逸脱することなくなされ得る。従って、本発明は、これらの特許請求の範囲が権利を与えられる均等物の全範囲とともに添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるものとする。
実施例１：抗原作製
６Ｘ Ｈｉｓ－タグ配列の何れかを伴うか又はＣ末端の６Ｘ Ｈｉｓ－タグ配列付きのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）のＣ３４Ｓ変異体に対する融合タンパク質として、骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３（Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｐ２０１３８）及びそのドメインアノテーションの配列に基づいて、ヒトＣＤ３３細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はそのサブドメインをコードする発現コンストラクトを設計した。マカカ・ファスシキュラリス（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）からのＣＤ３３（ＥＣＤ）又はそのサブドメインをコードする同様の発現コンストラクトは、ＮＣＢＩ受入番号ＸＰ＿００５５９０１３８．１に基づいて設計された。作製された抗原のアミノ酸配列を表３で示す。
製造者のプロトコールに従い、Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅを使用して、ヒト及びｃｙｎｏ ＣＤ３３全長ＥＣＤ又はサブドメイン発現コンストラクトをＨＥＫ２９３由来細胞、Ｅｘｐｉ２９３（Ｇｉｂｃｏ／Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に一過性に形質移入した。回収前にオービタル振盪器上で３７℃、８％ＣＯ２で５日間細胞を温置した。発現させられた細胞を遠心分離によって取り除き、Ｎｉセファロース６ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗレジン（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いた固定化金属アフィニティークロマトグラフィーを使用して、ｈｉｓタグ付きの可溶性ＣＤ３３タンパク質を培地から精製し、続いて、Ｚｅｂａ（商標）Ｓｐｉｎ Ｄｅｓａｌｔｉｎｇ Ｃｏｌｕｍｎｓ、７Ｋ ＭＷＣＯ、１０ｍＬ；ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号８９８９３を使用して、製造者の仕様に従い、カルシウム又はマグネシウムなしの１Ｘダルベッコリン酸食塩水緩衝液ｐＨ７．２に緩衝液交換を行った。
Figure 2023517660000013
Figure 2023517660000014
Figure 2023517660000015
実施例２．抗ＣＤ３３抗体の作製
以下のようにＯｐｅｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ＯＭＴ）又はＡｂｌｅｘｉｓ トランスジェニックマウス技術の何れかを使用して、抗体を作製した。ヒト／マウス免疫グロブリンを産生するようにＡｌｉｖａＭａｂ及びＯＭＴトランスジェニックマウスの両方を改変した。組み換えヒトＣＤ３３タンパク質（表１からの抗原の選択）を用いてＡｌｉｖａＭａｂ又はＯＭＴトランスジェニックマウスに免疫付与した。二次リンパ器官からリンパ球を抽出し、ハイブリドーマ作製のためにＦＯマウス骨髄腫細胞株と融合させるか、又はＦＡＣＳを介した単一細胞選別に供するかの何れかを行った。過剰発現ヒトＣＤ３３ＥＣＤ ＨＥＫ細胞への結合について、ＭＳＤ電気化学発光よってハイブリドーマ上清をスクリーニングした。親ＨＥＫ細胞（負のシグナル）と比較して、過剰発現ヒトＣＤ３３ＥＣＤ ＨＥＫ細胞（正のシグナル）への結合について、スクリーニングから同定された試料をＦＡＣＳでさらにアッセイした。ＥＬＩＳＡを使用して、確認された細胞結合物質を軽鎖アイソタイプで分けた。ＭＳＤ電気化学発光により、組み換えヒトＣＤ３３タンパク質への結合について単一細胞選別上清をスクリーニングした。所望の結合プロファイルを有するいくつかのヒットを選択し、シーケンシングを行った。
以下のようにＶ領域クローニングを行った。Ｓｍａｒｔｅｒ ｃＤＮＡ合成キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍｏｕｎｔ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を使用して、ｃＤＮＡ合成を行うために、Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）ＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉキットにより精製したＲＮＡ及びＢ細胞溶解液の両方を使用した。ｃＤＮＡ合成を促進するために、オリゴｄＴを使用して全てのメッセンジャーＲＮＡの逆転写を刺激し、続いてＳｍａｒｔｅｒ ＩＩＡオリゴヌクレオチドでの「５’キャッピング」を行った。Ｓｍａｒｔｅｒ ＩＩＡ ｃａｐを標的とする５’プライマー及びＣＨ１におけるコンセンサス領域を標的とする３’プライマーを用いて、２段階ＰＣＲ増幅を使用して、ＶＨ及びＶＬ断片の続く増幅を行った。簡潔に述べると、各５０μｌ ＰＣＲ反応は、２０μＭのフォワード及びリバースプライマーミックス、２５μｌのＰｒｉｍｅＳｔａｒ Ｍａｘ ＤＮＡポリメラーゼプレミックス（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）、２μｌの未精製ｃＤＮＡ及び２１μｌの二重蒸留Ｈ２Ｏからなる。サイクリングプログラムは９４℃において３分で開始し、続いて３５サイクル（９４℃で３０秒、５５℃で１分間、６８で１分間）及び７２℃において７分で終了する。それらの個々のＬｏｎｚａマザーベクター（ＶＨ及びＶＬ）における個々の領域と「重複」する１５ｂｐの相補的伸長部を含有するＶＬ及びＶＨ第２ラウンドプライマーを使用して、ＰＣＲの第２ラウンドを行った。第２ラウンドＰＣＲは、以下のプログラムで実施した：９４℃で３分；３５サイクル（９４℃で３０秒、５５℃で１分、６８℃で１分）及び７２℃において７分で終了。Ｌｏｎｚａ ｈｕＩｇＫ又はＬａｍｂｄａベクターへのＶＬ遺伝子及びＬｏｎｚａ ｈｕＩｇＧ１ベクターへのＶＨ遺伝子の定方向クローニングのために、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ（登録商標）ＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇキット（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用した。Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ（登録商標）ＨＤクローニングを促進するために、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ（登録商標）ＨＤクローニングを行う前に、クローニングエンハンサーを用いてＰＣＲ産物を処理した。製造者のプロトコール（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）に従い、クローニング及び形質転換を行った。完全Ｖ－遺伝子断片が得られたことを確認するために、Ｍｉｎｉ－ｐｒｅｐ ＤＮＡをＳａｎｇｅｒシーケンシングに供した。
表４は、上記方法により作製される抗体のそれぞれの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を示す。
Figure 2023517660000016
Figure 2023517660000017
Figure 2023517660000018
Figure 2023517660000019
Figure 2023517660000020
Figure 2023517660000021
表４ａは、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ及びＣｏｎｔａｃｔ系に従って定められるような、Ｃ３３Ｂ１５２２抗体（配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬを有する抗体）のＣＤＲ配列のアミノ酸配列を示す。
Figure 2023517660000022
表４ｂは、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ及びＣｏｎｔａｃｔ系に従って定められるような、Ｃ３３Ｂ１４７７抗体（配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬを有する抗体）のＣＤＲ配列のアミノ酸配列を示す。
Figure 2023517660000023
表４ｃは、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ及びＣｏｎｔａｃｔ系に従って定められるような、Ｃ３３Ｂ１４７５抗体（配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬを有する抗体）のＣＤＲ配列のアミノ酸配列を示す。
Figure 2023517660000024
表４ｄは、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ及びＣｏｎｔａｃｔ系に従って定められるような、Ｃ３３Ｂ１５１７抗体（配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬを有する抗体）のＣＤＲ配列のアミノ酸配列を示す。
Figure 2023517660000025
表４ｅは、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ及びＣｏｎｔａｃｔ系に従って定められるような、Ｃ３３Ｂ１５１６抗体（配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬを有する抗体）のＣＤＲ配列のアミノ酸配列を示す。
Figure 2023517660000026
表４ｆは、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ及びＣｏｎｔａｃｔ系に従って定められるような、Ｃ３３Ｂ１４８１抗体（配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬを有する抗体）のＣＤＲ配列のアミノ酸配列を示す。
Figure 2023517660000027
抗体をラマにおいて以下のように作製した。完全フロイントアジュバント中の初回の注射及び不完全フロイントアジュバント中のその後の注射で、３回の注射（第０、１４及び２８日）に対して表３からのｈＣＤ３３－ＩｇＣ２抗原を３匹のラマに皮下注射した。初回の注射に続いて、表３からのｈＣＤ３３－ＦＬ ＥＣＤ抗原の３回の注射を行った（第６１、７６及び９１日）。第１４、３５及び８６日に単一Ｂ細胞選別のためのＰＢＭＣを得て、凍結した。凍結ＰＢＭＣを凍結融解し、ビオチン化又はＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７との複合化の何れかを行った組み換え抗原ベイトで染色した。抗原ベイトは、組み換えヒトＣＤ３３－ＥＣＤ及び組み換えヒトＣＤ３３－ＩｇＣドメインであった。ＰＥ標識ストレプトアビジン（ＳＡ）を使用してビオチン化ベイトを検出した。ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ Ｆｕｓｉｏｎソーターを使用して、抗原特異的な細胞（両方の抗原ベイトに対して陽性）をＲＬＴ溶解緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ）中に直接バルク選別した。この細胞溶解液を－８０℃で凍結し、さらなる処理のためにＧｅｎｅｗｉｚに輸送した。
ラマｖＨＨ Ｖ－領域クローニング及びモノＦｃ融合コンストラクト設計を以下のように行った。ＲｅａｌＴｉｍｅ Ｒｅａｄｙ Ｃｅｌｌ Ｌｙｓｉｓ緩衝液（Ｒｏｃｈｅ）中でＢ細胞を溶解させた。次いで、ＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ（登録商標）Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ ７４１３４）を使用してＲＮＡを精製した。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ｃＤＮＡキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ １８０９１－０５０）を用いたｃＤＮＡ合成のために新鮮なＲＮＡを直接使用した。ｃＤＮＡ合成を促進するために、オリゴｄＴを使用して、全てのメッセンジャーＲＮＡの逆転写を刺激した。ＣＨ２中のコンセンサス領域を標的とするラマＳＰ及び３’プライマーを用いて、２－段階ＰＣＲ増幅を使用して、ＶＨＨ断片のその後の増幅を行った。簡潔に述べると、各５０μｌのＰＣＲ反応物は、２０μＭのフォワード及びリバースプライマーミックス、２５μｌのＰｒｉｍｅＳｔａｒ Ｍａｘ ＤＮＡポリメラーゼプレミックス（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）、２μｌの未精製ｃＤＮＡ及び２１μｌの二重蒸留Ｈ２Ｏから構成された。サイクリングプログラムは９４℃において３分で開始し、続いて３５サイクル（９４℃で３０秒、５５℃で１分、６８℃で１分）を行い、７２℃において７分で終了した。
第１ラウンドＰＣＲからのＶＨＨ ＤＮＡをゲル精製した。それらの個々のＬｏｎｚａマザーベクターにおいて個々の領域と重複する１５ｂｐ相補伸長部を含有する第２ラウンドのプライマーを用いて第２ラウンドのＶＨＨ ＰＣＲを行った。以下のプログラムで第２ラウンドのＰＣＲを行った：９４℃で３分；３５サイクル（９４℃で３０秒、５５℃で１分、６８℃で１分）及び７２℃において７分で終了。モノ－Ｆｃを用いたＬｏｎｚａベクターへのＶＨＨ遺伝子の定方向クローニングのために、Ｉｎ－ｆｕｓｉｏｎ（登録商標）ＨＤクローニングキット（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用した。Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ（登録商標）ＨＤクローニングを促進するために、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤクローニングの前にＰＣＲ産物をクローニング促進剤で処理した。製造者のプロトコール（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）に従い、クローニング及び形質転換を行った。完全なＶ－遺伝子断片が得られたことを確認するために、Ｍｉｎｉ－ｐｒｅｐ ＤＮＡをサンガーシーケンシングに供した。表５は、上記の方法により作製されたラマ抗体の重鎖のアミノ酸配列を示す。
Figure 2023517660000028
Figure 2023517660000029
製造者の推奨に従い、本タンパク質をコードする精製プラスミドＤＮＡを用いた一過性形質移入により、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ（商標）細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，Ｃａｔ＃Ａ２９１２７）において抗ＣＤ３３抗体及びｖＨＨ－ｍｏｎｏＦｃ融合タンパク質を発現させた。簡潔に述べると、３７℃、８％ＣＯ２及び１２５ＲＰＭに設定したオービタル振盪インキュベーターにおいてＥｘｐｉＣＨＯ（商標）発現培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃Ａ２９１００）の懸濁液中でＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ（商標）細胞を維持した。この細胞を継代し、形質移入前に細胞６．０×１０６個／ｍｌに希釈し、細胞生存能を９９．０％以上に維持した。ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＣＨＯ形質移入キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃Ａ２９１３１）を使用して、一過性形質移入を行った。形質移入しようとする希釈された細胞の各ｍｌに対して、０．５マイクログラムのｓｃＦｖ Ｆｃ融合物をコードするＤＮＡ及び０．５マイクログラムのｐＡｄＶＡｎｔａｇｅ ＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｃａｔ＃Ｅ１７１１）を使用し、ＯｐｔｉＰＲＯ（商標）ＳＦＭ完全培地中に希釈した。１：４の比（ｖ／ｖ、ＤＮＡ：試薬）でＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＣＨＯ試薬を使用し、ＯｐｔｉＰＲＯ（商標）に希釈した。希釈したＤＮＡ及び形質移入試薬を１分間合わせ、ＤＮＡ／脂質複合体を形成させ、次いで細胞に添加した。一晩温置後、製造者の標準的プロトコールに従い、ＥｘｐｉＣＨＯ（商標）フィード及びＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＣＨＯエンハンサーを細胞に添加した。培養ブロスを回収する前に、オービタル振盪器（１２５ｒｐｍ）を用いて３７℃で７日間細胞を温置した。遠心分離（３０分、３０００ｒｃｆ）と続くろ過（０．２μｍ ＰＥＳ膜、Ｃｏｒｎｉｎｇ；Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）により、一過性形質移入ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ（商標）細胞からの培養上清を透明化した。
タンパク質精製を以下のように行った。ＡＫＴＡＸｐｒｅｓｓクロマトグラフィー系を使用して、予め平衡化した（１×ＤＰＢＳ、ｐＨ７．２）ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ プロテインＡカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にろ過した細胞培養上清を添加した。添加後、１０カラム体積の１×ＤＰＢＳ、ｐＨ７．２でカラムを洗浄した。１０カラム体積の０．１Ｍ酢酸ナトリウム（Ｎａ）、ｐＨ３．５でタンパク質を溶出させた。溶出分画体積の２０％（ｖ／ｖ）までの２．５Ｍ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、ｐＨ７．５の添加により、タンパク質分画を直ちに中和した。ピーク分画をプールし、ろ過した（０．２μｍ）。分析的サイズ排除ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣ系）によって精製タンパク質の質を評価した。
実施例３．表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；Ｂｉａｃｏｒｅ）による抗ＣＤ３３抗体及びラマｖＨＨの特徴評価
抗ＣＤ３３抗体ヒトＣＤ３３（全長ＥＣＤ及びＩｇＣ２ドメイン）の相互作用に対する親和性（ＫＤ）をＳＰＲにより得た。抗ヒトＦｃ抗体を使用して、抗ＣＤ３３抗体を捕捉し、溶液中で抗原を注射した。データを以下の表６で示す。
Figure 2023517660000030
Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により、組み換えヒトＣＤ３３（ＦＬ ＥＣＤ又はＩｇＣ２ドメイン）に対する抗ＣＤ３３抗体及びラマｖＨＨの結合親和性を決定した。ヤギ抗Ｆｃ抗体修飾ＧＬＣチップを使用してＦｃ融合ｓｃＦｖｓ又はモノ－Ｆｃ融合ｖＨＨを捕捉し、４０ｎＭ～１．６ｎＭの濃度に及ぶＣＤ３３抗原の５倍連続希釈液を用いて滴定した。５０μｌ／分の流速を使用して、それぞれ２分及び３０分、会合及び解離を監視した。検体結合シグナルをブランクから差し引くことにより生の結合データを参照し、結合親和性を計算するために使用する動態を得るためにＢｉａｃｏｒｅソフトウェアを用い、１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルを使用して分析した。
ヒトＣＤ３３（ＦＬ ＥＣＤ又はＩｇＣ２ドメイン）との抗ＣＤ３３ラマｖＨＨの相互作用に対する親和性（ＫＤ）。抗ヒトＦｃ抗体を使用してモノ－Ｆｃ骨格上の抗ＣＤ３３ラマｖＨＨを捕捉し、抗原を溶液中で注入した。データを以下の表７で示す。ｈｕＣＤ３３抗原（ＦＬ ＥＣＤ及びＩｇＣ２ドメイン）に対する抗ＣＤ３３ｖＨＨ相互作用の代表的なＢｉａｃｏｒｅ ８Ｋセンソグラムも図１で示す。
Figure 2023517660000031
Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ（登録商標）ＮＴ．Ｐｌｅｘ機器（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）上でナノＤＳＦによって抗ＣＤ３３ ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合抗体及びラマＶＨＨの熱安定性を決定した。試料を３８４ウェル試料プレートから標準キャピラリー（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に添加することによって測定を行った。２つ組又は３つ組の操作を行った。２０℃～９５℃において１．０℃／分の温度勾配で熱変性を監視した。熱屈曲温度（中間点Ｔｍ）及び凝集開始温度（Ｔａｇｇ）をＰＲ ＴｈｅｒｍＣｏｎｔｒｏｌソフトウェア（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって自動的に決定し、ＰＲ．安定性分析ソフトウェア（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してさらに分析した。データを以下の表８で示す。
Figure 2023517660000032
表８ａ：ナノＤＳＦ機器を使用して得られた場合の抗ＣＤ３３ ｓｃＦｖｓ及びｖＨＨ抗体に対する熱安定性データ。配列番号２７７のＩｇＧ１ Ｆｃ骨格を使用した。リンカー配列を使用せずにｓｃＦｖｓをこのＩｇＧ１骨格に直接連結した。
Figure 2023517660000033
実施例４：ＣＤ３３ ｓｃＦｖ ＣＡＲの構築及び発現
以下のｓｃＦｖ配列を含むＣＤ３３ ＣＡＲコンストラクトを構築する。
Figure 2023517660000034
Figure 2023517660000035
Figure 2023517660000036
Figure 2023517660000037
ＤｙｎａｂｅａｄｓヒトＴ－Ｅｘｐａｎｄｅｒ ＣＤ３／ＣＤ２８で刺激したＴ細胞をエレクトロポレーションに供し、次いでＯＰＴＩ－ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で３回洗浄し、５０Ｅ６／ｍｌの最終濃度でＯＰＴＩ－ＭＥＭ中で再懸濁した。続いて、０．１ｍｌの細胞（５Ｅ６）を１０μｇのＩＶＴ ＣＡＲをコードするＲＮＡと混合し、「パルス」ボタンを１回押すことによってＢＴＸ ＥＣＭ８３０（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ＢＴＸ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用して２－ｍｍ Ｇａｐキュベット（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ＢＴＸ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）中でエレクトロポレーションを行った。（設定：５００ボルト、７５０μｓｅｃパルス長及び単（１）パルス、１００ｍＳｅｃ間隔）。エレクトロポレーション後、細胞を６ウェルプレートに移し、３７℃のインキュベーターに直ちに戻した。初代ヒトＴ細胞に対して、ｍＲＮＡなし（ＭＯＣＫ）又は１０μｇのＣＤ３３ｓｃＦｖ ＣＡＲ又は無関係の対照ＣＡＲの何れかを発現するｍＲＮＡを用いてエレクトロポレーションを行った。エレクトロポレーションの２４時間後、２μｇ／ｍｌビオチン化Ｌ－タンパク質及びストレプトアビジン複合化ＰＥ又はビオチン化ＣＤ３３（１μｇ／ｍｌ）及びストレプトアビジン複合化ＰＥで染色した後にフローサイトメトリーによってＣＡＲ表面発現を測定する。
エレクトロポレーションの２４時間後、Ｔ細胞を数える。１Ｅ５ Ｔ細胞をそれぞれに対して回収する。マイクロタイタープレートに対して２００μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液を用いて、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、上清を廃棄する。プロテインＬを含有する１００μｌ染色緩衝液（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ，カタログ番号Ｍ０００９７１：５００；２ｕｇ／ｍｌ）で全ウェルを染色し、遮光しながら４℃で少なくとも３０分間温置する。ＦＡＣＳ緩衝液入りのマイクロタイタープレートに対して１５０μＬ／ウェルを使用して、ＦＡＣＳ緩衝液を２回添加することによって細胞を洗浄する。４００×ｇでの遠心分離を室温で４分間行う。次に、上清を廃棄する。１００μｌストレプトアビジン－Ｒ－フィコエリスリン（ＳＡ－ＰＥ；１：２５０）及びＬｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ色素（１：１０００）で全てのウェルを染色し、遮光しながら４℃で少なくとも３０分間、温置する。次に、フローサイトメトリー分析に対して細胞が準備される。
プロテインＬ染色の観察はＣＤ３３ ＣＡＲに対して観察され、一方で、ｍＲＮＡエレクトロポレーションなしのＴ細胞であった対照Ｔ細胞において、バックグラウンド染色のみ（～５．５％）が見られる。Ｊ＆Ｊ内部のビオチン－標識組み換えＫＬＫ２タンパク質、続いてＳＡ－ＰＥを介して、初代ヒトＴ細胞上でのＣＡＲ発現も検出され得る。示されるように、Ｔ細胞は、フローサイトメトリーにより測定される場合、ＣＤ３３ ＣＡＲを効率的に発現し、一方でｍＲＮＡエレクトロポレーションなしのＴ細胞である対照Ｔ細胞又は非開示対照ＣＡＲ（非ＣＤ３３特異的）で見られるのはバックグラウンド染色のみである。
実施例５：ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍細胞死滅
フローサイトメトリーを用いたＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号：Ｃ３４５５７）に基づく細胞傷害性アッセイのための同時培養を以下のように行う。
Ｔ細胞を以下のように調製する。ＥＰの２４時間後、Ｔ細胞をカウントし、最大濃縮／所望のＥ：Ｔのために必要とされる濃度で再懸濁する。Ｔ細胞を１００μｌ／アッセイのウェルで添加する（細胞２×１０６個／ｍｌ；１０：１ Ｅ：Ｔ比で１００μｌを播種、即ち２Ｅ５個のＴ細胞／２Ｅ４個の標的細胞）。１０：１のＥ：Ｔ濃縮の保存液を作製し、完全Ｔ細胞培地を用いて２倍連続希釈液を０．３１２５：１に調製する（Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ ｗ／ＣＴＳ、５％ヒト血清、１％ＧｌｕｔａＭａｘ）。９６ウェル丸底組織培養処理プレートを使用してＴ細胞を三つ組みで播種する（１００ｕｌ／ウェル）。
ＣＴＶ標識される標的細胞を以下のように調製する。２０μＬ ＤＭＳＯをＣＴＶ染色溶液のバイアルに添加する。この保存溶液を２０ｍｌのＰＢＳ（３７℃に温める）に入れて希釈し、５μＭ染色溶液とする。１０Ｅ６個の腫瘍細胞を回収し、ＰＢＳで２回洗浄し、４Ｅ６個／ｍｌ（２．５ｍｌ）で再懸濁する。等体積（２．５ｍｌ）のＣＴＶ染色溶液が添加される。３７℃インキュベーター中で細胞を２０分間温置する。４０ｍｌ ＰＲＭＩ＋２０％ＦＢＳを細胞に添加して、未結合色素を全て吸収させる。細胞を５分間温置する。４００×ｇで細胞を５分間再懸濁する。予め温めたＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ培地中で細胞ペレットを再懸濁する。合間に、上記の所望のＥ／Ｔ比でＴ細胞を播種する。ＣＤ３３＋腫瘍細胞株及びＣＤ３３腫瘍細胞株を再カウントし、次に、三つ組みで、この細胞を２Ｅ５／ｍｌ及び１００ｕｌ中で再懸濁する。平底９６ウェルプレートにおいて、この細胞を標識された腫瘍細胞株と同時温置する。
フローサイトメーターを使用して以下のように細胞傷害性アッセイを行う。同時培養の２０時間後、細胞全てをＵ底９６ウェルプレートに移し、洗浄する。同時培養の２０時間後、平底９６ウェルプレートから細胞全てを回収し、Ｕ底９６ウェルプレートに移し、次に洗浄する。３０μｌの０．２５％トリプシンを全ウェルに添加し、３７℃インキュベーター中で５分間温置する。５分後、腫瘍細胞全てをＵ底９６ウェルプレートに回収する。細胞を４００×ｇで５分間、２回、遠心分離し、洗浄する。次に、細胞ペレットを希釈した（１：１０００）ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ染色色素（１００μｌ）中で再懸濁する。細胞を４℃で３０分間温置し、細胞を４００×ｇで５分間遠心分離することによりＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄する。洗浄後、１００μｌのＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ（商標）固定緩衝液（５０ｕｌ ＦＡＣＳ緩衝液＋５０ｕｌ固定緩衝液）を使用して１０分間、細胞全てを固定する。細胞を遠心分離し、４００×ｇで５分間、１回洗浄する。ＦＡＣＳ緩衝液中で細胞ペレットを再懸濁する。温置時間終了後、多色フローサイトメトリーにより、染色した試料を分析する。以下の式を使用して、細胞傷害性活性のパーセンテージを計算する：
％特異的な死滅＝％ＮｅａｒＩＲ＋ＣＴＶ＋（死滅）細胞－％自然発生Ｎｅａｒ ＩＲ＋ＣＴＶ＋／（１００％－％自然発生ＮｅａｒＩＲ＋ＣＴＶ＋（死滅）細胞）×１００％。
一過性形質移入の２４時間後、標的細胞（ＣＤ３３陽性Ｖｃａｐ及びＣＤ３３陰性ＤＵ１４５細胞）をＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）蛍光色素で標識し、次いでＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞とともに同時培養する。モックＴ細胞は陰性のエフェクター対照とする。０．３１２５：１～１０：１の範囲のエフェクター対標的細胞（Ｅ／Ｔ）比で２０時間にわたり細胞を同時培養する。ＣＡＲ－Ｔ細胞なしで培養される生きている標的細胞の数と比較して、同時培養中に残っている生きている（生存性色素陰性）標的（ＣＴＶ陽性）細胞の絶対数の比としてパーセント死滅を測定する。示されるように、ＣＤ３３ＣＡＲ Ｔ細胞は、特異的に及び効率的にＣＤ３３（＋）ヒト癌細胞株を溶解させるが、１０：１～０．３１２５：１のＥ／Ｔ比でＣＤ３３（－）細胞は溶解させず、一方でモック又はＣＤ３３ ＣＡＲであったＴ細胞ではバックグラウンド細胞傷害性のみが見られる。
標的細胞の免疫細胞介在性細胞溶解に対する効力アッセイとして、リアルタイム細胞分析系としてｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅを使用して、リアルタイム細胞傷害性についてＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞も試験する。
５０μｌの標的癌細胞培養培地を９６ウェルＥ－プレート（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の各ウェルに添加し、バックグラウンドインピーダンスを測定し、細胞インデックスとして示す。次に、接着標的細胞ＣＤ３３（＋）及びＣＤ３３（－）を剥離し、１００μｌの体積で細胞５Ｅ４（ＶＣａｐ）、５Ｅ３個／Ｅ－Ｐｌａｔｅウェルの密度で播種し、電極表面上に受動的に接着させる。播種後、Ｅ－Ｐｌａｔｅは、３０分間、層流フードの内部で周囲温度において維持し、次に細胞培養インキュベーター内のＲＴＣＡ ＭＰ機器に移す。実験の全体の時間（９６時間）にわたり１５分間隔でデータ記録を直ちに開始する。
その時に、処理を適用し（癌細胞播種後２４時間）、データ獲得を休止し、５０μｌの培地を各ウェルから取り出し、５０μｌの体積中でＣＡＲ－Ｔ細胞を異なるエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比で添加する。ＣＤ３３（＋）ＣＡＲ－Ｔ及び非開示対照ＣＡＲ（非ＣＤ３３特異的）Ｔ細胞を再懸濁する。次に、９６ウェルプレートにおいて二つ組で２倍希釈を行う（５：１～０．１５６：１ Ｅ／Ｔ比）。標的＋モックエフェクター対照（ＲＮＡエレクトロポレーションがないＴ細胞）も標的細胞に添加する。
標的細胞ＣＤ３３（＋）及びＣＤ３３（－）を、およそ７２時間、異なるＥ／Ｔ比で、モック、ＣＤ３３（＋）及びＣＤ３３（－）ＣＡＲ－Ｔ細胞にエレクトロポレーションされる（形質移入から２４時間後）１０μｇ ｍＲＮＡとともに温置する。ＣＤ３３（＋）及びＣＤ３３（－）に対する正規化した細胞インデックス（ＣＩ）プロットを作成する。単独で播種する場合、標的細胞をプレートに接着させ、増殖させ、ＣＩ読み取りを増加させる。
実施例６：ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン産生
細胞傷害性Ｔ細胞により産生されるＩＦＮ－γは、腫瘍の免疫監視の発揮を可能にし、これは、インビボ及びインビトロで一部の悪性腫瘍の増殖を直接阻害し、アポトーシスを誘導し得る。ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞がＣＤ３３（＋）腫瘍細胞を認識し、これにより活性化され得るか否かを判定するために、実施例５に記載のように、上清をｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅに基づく死滅アッセイから回収した。約７０時間の同時培養後、上清を回収し、ＥＬＩＳＡキット（ヒトＩＦＮ－γＥＬＩＳＡ ＭＡＸ（商標）Ｄｅｌｕｘｅ，ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｃａｔ＃：４３０１０６）で提供される指示に従い、ＥＬＩＳＡによりアッセイした。
抗原刺激されたＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＦＮ－γ産生が起こる。ＣＤ３３ ＣＡＲ及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｅ：Ｔ比依存的にＣＤ３３発現細胞との同時培養中にＩＦＮ－γを分泌したが、ＣＤ３３陰性細胞との同時培養中には分泌しなかった。非開示対照ＣＡＲは、ＣＤ３３よりも抗原発現レベルがかなり高かったため、大幅により多くの量のＩＦＮ－γを分泌した。
実施例７：ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍細胞死滅
抗原依存性細胞傷害性について、リアルタイムＩｎｃｕＣｙｔｅ腫瘍死滅アッセイにおいてＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞を評価する。ＣＡＲ発現データに基づいて計算した１：１又は０．５：１のエフェクター：標的比で、ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞を標的細胞とともに８８時間、同時温置する。リアルタイム方式でＩｎｃｕＣｙｔｅイメージング系により測定した場合に赤い核色素を安定して発現する標的細胞を同定する。以下の計算を行う：腫瘍細胞増殖阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現在の生存標的細胞数）／初期生存細胞数＊１００（％）。
実施例８：ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン産生
１：１のＥ／Ｔ比での細胞とのＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞の一晩（およそ２０時間）同時培養物から上清を回収し、１３－ｐｌｅｘ Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘヒト高感度Ｔ細胞キット（ＨＳＴＣＭＡＧ２８ＳＰＭＸ１３）を使用して分析した。ＣＤ３３ ＣＡＲ修飾Ｔ細胞は、ＣＤ３３発現細胞との同時培養中にサイトカインを分泌したが、非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）については最小であった。
１：１のＥ／Ｔ比での細胞とのＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞の一晩（およそ２０時間）同時培養物から上清を回収した。ＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＤ３３発現細胞との同時培養中にＩＦＮ－γを分泌したが、ＣＤ３３陰性細胞との同時培養中には分泌しなかった。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみを陽性及び陰性対照としてそれぞれ使用した。ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ放出。二つ組培養物からの平均ＩＦＮ－γ濃度±ＳＤ（ｐｇ／ｍｌ）を示す。異なる熱安定化されたＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ３３（＋）細胞と同時培養した場合、異なる量のＩＦＮ－γを産生した。
実施例９：ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖
増殖アッセイにおいてＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞を評価する。Ｔ細胞増殖は、インビボ免疫機能の重要なインビトロパラメーターである。ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞の機能をさらに評価するために、ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞をＣＴＶで標識して、Ｔ細胞増殖を評価する。
ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ；５μＭ）でＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を標識し、ＣＤ３３（＋）及びＣＤ３３（－）細胞とともに同時培養する。同時培養の５日後、細胞を回収し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ色素及びＣＤ３３ＣＡＲで染色する。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを用いて、Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメトリー上でフローサイトメトリー分析を行う。生存ＣＤ３及びＣＴＶ色素希釈があるＣＡＲ－Ｔ細胞の頻度によってリンパ球を同定し、活性化マーカーＣＤ２５を調べる。示されるように、ＣＤ３３ ＣＡＲ＋Ｔ細胞においてゲーティングすることにより、ＣＤ３３（＋）細胞は、全てのＣＡＲコンストラクトを促進するが、ＣＤ３３（－）細胞を促進しない。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性及び陰性対照として使用する。刺激が全くないＴ細胞単独は増殖せず、ＣＤ３／２８ビーズで刺激されたＴ細胞は、均等な増殖パターンを示した。ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、細胞との同時培養の５日後、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖した。異なるＣＡＲコンストラクト改変Ｔ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ－Ｔ細胞数を示した。ＣＡＲ－Ｔ細胞数は、３回の技術的な反復からの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づく。
以下のようにプロトコールを実施する。腫瘍細胞を回収し、ＰＢＳで２回洗浄し、腫瘍細胞増殖を阻止するために、３７℃インキュベーターにおいて１．５時間、１００ｕｇ／ｍｌマイトマイシンＣ（ＭＭＣ）を含有するＰＢＳ中、１０Ｅ６／ｍｌで再懸濁する。２０μＬのＤＭＳＯをＣＴＶ染色溶液のバイアルに添加する。５μｌの溶液を５ｍＬ（１：１０００）ＰＢＳ（３７℃に温める）に入れて希釈して、５μＭの染色溶液を提供する。２Ｅ６ Ｔ細胞をカウントし、回収し、ＰＢＳで２回洗浄し、４Ｅ６／ｍｌ（０．５ｍｌ）で再懸濁する。等体積（０．５ｍｌ）のＣＴＶ染色溶液を添加する。細胞を３７℃で２０分間温置する。次に、未結合の色素を全て吸収させるために、４ｍｌ ＰＲＭＩ＋２０％ＦＢＳを細胞に添加する。細胞を５分間温置し、４００×ｇで５分間遠心分離する。予め温めたＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ中で細胞ペレットを再懸濁する。Ｔ細胞をカウントし、９６ウェル平底プレートにおいて１Ｅ５細胞（１００ｕｌ）を播種する。
合間に、ＭＭＣ処理した腫瘍細胞を回収し、１．５時間後にカウントし、次に１Ｅ６／ｍｌで再懸濁する。９６ウェルプレートにおいて１Ｅ５の細胞（１００μｌ）をＴ細胞とともに同時培養する。Ｔ細胞単独及び３：１のＣＤ３／２８ビーズ対細胞比が添加されたＴ細胞をそれぞれ陰性及び陽性対照として使用する。
同時培養５日後、全ての細胞を各ウェルから回収する。細胞を４００×ｇで５分間、２回、遠心分離して洗浄し、次いで、９６－ウェルＵ底プレートにおいてＣＤ３３ ＣＡＲ、ＣＤ３、ＣＤ８及びＣＤ２５、ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ（Ｎｅａｒ－ＩＲ）で染色する。洗浄後、１００μｌ ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ（商標）固定緩衝液（５０ｕｌ ＦＡＣＳ緩衝液＋５０ｕｌ固定緩衝液）を使用して全ての細胞を１０分間固定する。温置時間終了後、多色フローサイトメトリーにより、染色した試料を分析する。
データ分析を以下のように行う。ＣＴＶヒストグラムを準備する。単独培養したＴ細胞の一番右端のピーク（ＣＴＶ ｂｒｉｇｈｔ）を包含し、ＣＴＶ希釈ゲートが集団の残りを捕捉するようにＣＴＶ非希釈ゲートを設定する。これは、全ての試料に適用される。
実施例１０：ＣＡＲ１７、ＣＡＲ１８、ＣＡＲ１９又はＣＡＲ２０で形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞の特徴評価
抗原依存性活性に対するＪＮＬレポーターアッセイにおいて、作製されたＣＡＲ－Ｔ細胞を評価する。簡潔に述べると、シグナル伝達応答ＮＦＡＴプロモーターにより推進されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するＪｕｒｋａｔ細胞（ＪＮＬ細胞と呼ばれる）に対して、ＣＡＲ１７（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ）、ＣＡＲ１８（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ）、ＣＡＲ１９（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ）又はＣＡＲ２０（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＬＨ）コンストラクトを用いて形質導入を行った。ビオチン化ＣＤ３３、続いてストレプトアビジン複合化ＰＥにより、各ＣＡＲの発現を決定する。
ＣＤ３３ＣＡＲコンストラクトとその同族細胞抗原（標的細胞上のＣＤ３３）との間の結合は、ＪＮＬ細胞におけるルシフェラーゼ発現につながる。その目的で、試験ＣＡＲコンストラクトで形質導入したＪＮＬ細胞又は非形質導入ＪＮＬ細胞（ＵＴＤ）を標的腫瘍細胞株と同時培養し、発光強度としてルシフェラーゼ活性を測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でＵＴＤ細胞のレベルの１．５倍を超えた場合、コンストラクトを活性があるものとみなした。試験したＣＡＲコンストラクトに対して、抗原依存性活性化は見られなかった。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原依存性に腫瘍細胞死滅に介在する。
ＣＡＲ１７、ＣＡＲ１８、ＣＡＲ１９及びＣＡＲ２０を用いてＣＡＲ－Ｔ細胞に対して形質導入を行い、Ｔ細胞でのＣＡＲ発現に基づいて計算した１：１又は０．５：１のエフェクター対標的（ＥＴ）比で９６時間にわたりＣＤ３３陽性細胞及びＣＤ３３陰性細胞と同時温置する。標的細胞は、赤色の核色素を安定して発現しており、これは、リアルタイムでＩｎｃｕＣｙｔｅイメージング系によって測定された。腫瘍細胞増殖阻害（ＴＧＩ）（％）＝（初期生存標的細胞数－現在の生存標的細胞数）／初期生存細胞数＊１００（％）。試験したＣＡＲ－Ｔ細胞は、およそ１００％ＴＧＩを達成し、一方で、非形質導入対照は、ＴＧＩを示さなかった。ＣＤ３３陰性細胞において、試験したＣＡＲ－Ｔ細胞では、ＴＧＩは観察されなかった。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原刺激時にサイトカインを産生する。
細胞傷害性Ｔ細胞により産生されるＩＦＮ－γは、腫瘍の免疫監視を発揮するために必須であり、これは直接、インビボ及びインビトロで一部の悪性腫瘍の増殖を阻害し、アポトーシスを誘導し得る。ＣＤ３３ ＣＡＲ修飾ヒトＴ細胞が認識可能であるか又はＣＤ３３陽性腫瘍細胞により活性化されるようになることが可能であるか否かを判定するために、指定のＣＡＲクローンで形質導入された初代Ｔ細胞及び対照非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）を標的細胞株とともに同時培養し、ＩＦＮ－γ濃度測定のために上清を回収した。ＣＤ３３ ＣＡＲ細胞で形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ３３細胞を組み換え発現するＬＮＣａＰ細胞との同時培養中及び超低ＣＤ３３発現細胞との同時培養中にもＩＦＮ－γを分泌したが、ＣＤ３３陰性細胞の場合には分泌しなかった。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原依存的に活性化され、脱顆粒のマーカーを上方制御する。
腫瘍細胞は、主に標的腫瘍細胞を死滅させる溶解性顆粒の免疫分泌を通して、ＣＤ８＋Ｔリンパ球及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞など、細胞傷害性リンパ球により認識され、死滅させられ得る。この過程は、免疫エフェクター細胞の細胞質膜との顆粒膜の融合を含み、その結果、一般的にＣＤ１０７ａなどの溶解性顆粒を取り囲む脂質二重層上に存在するリソソーム結合タンパク質の表面曝露が起こる。従って、ＣＤ１０７ａの膜発現は、免疫細胞活性化及び細胞傷害性脱顆粒のマーカーを構成する。
以下に記載のように脱顆粒アッセイを行う。９６ウェルプレート中で０．１ｍｌ／ウェルにおいて、等しい数のエフェクター細胞とともに標的細胞（５ｘ１０４）を同時培養した。対照ウェルはＴ細胞のみを含有した。モネシンの１μｌ／試料（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に加えて、抗ＣＤ１０７ａ（５μｌ／ウェル）を添加し、３７℃で４時間温置する。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、ＣＤ３３ ＣＡＲ、ＣＤ３及びＣＤ８の発現について染色し、フローサイトメトリーＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａにおいて分析する。
ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原依存性に増殖する。
実施例９に記載のＴ－細胞増殖アッセイプロトコールを使用して、ＣＡＲ－Ｔ細胞をそれらの増殖について評価する。ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ；５μＭ）で標識し、ＣＤ３３陽性及びＣＤ３３陰性細胞とともに同時培養する。同時培養の５日後、細胞を回収し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ色素及びＣＤ３３ ＣＡＲで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアにより、Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター上でフローサイトメトリック分析を実施した。ライブ（ｌｉｖｅ）ＣＤ３によってリンパ球を同定し、ＣＴＶ色素希釈があるＣＡＲ－Ｔ細胞の頻度及び活性化マーカーＣＤ２５を調べた。ＣＤ３＋Ｔ細胞においてゲーティングすることにより、ＣＤ３３陽性細胞は、試験した各ＣＡＲ－Ｔ細胞株の増殖を促進したが、ＣＤ３３陰性細胞を促進しなかった。刺激がないＴ細胞単独は、増殖せず、ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞は、均等な増殖パターンを示した。ＣＤ３３ ＣＡＲ＋Ｔ細胞は、細胞との同時培養の５日後、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖した。異なる試験ＣＡＲ－Ｔ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ－Ｔ細胞数を示した。増殖するＴ細胞及びＣＤ２５発現Ｔ細胞のパーセンテージは、二つ組からの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づいた。
実施例１１：二特異性ＣＤ３３×ＣＤ３抗体の作製
上の実施例で作製される抗ＣＤ３３抗体のＶＨ／ＶＬ領域及び抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９及びＣＤ３Ｂ３７６のＶＨ／ＶＬ領域は、二特異性方式になるように改変され、ＩｇＧ１として発現される。ＣＤ３Ｂ２１９及びＣＤ３Ｂ３７６は、Ｆａｂとして改変され、ＣＤ３３ＶＨ／ＶＬ領域は、二特異性抗体になるように両方向でｓｃＦｖとして改変され、ｓｃＦｖ－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３の形式でＣＤ３３結合アームが得られ、重鎖：ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＣＨ２－ＣＨ３及び軽鎖：ＶＬ－ＣＬの方式でＣＤ３結合アームが得られる。代わりに、抗ＣＤ３抗体のＶＨ／ＶＬ領域は、ｓｃＦｖとして改変され、抗ＣＤ３３抗体のＶＨ／ＶＬ領域は、Ｆａｂとして改変される。ｓｃＦｖにおいて使用されるリンカーは、配列番号７のリンカーである。ＣＤ３Ｂ２１９は、米国特許第９，８５０，３１０号明細書に記載されている。
Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ ＣＨ３突然変異は、１本の重鎖に改変され、Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ ＣＨ３突然変異は、他の重鎖に改変される。さらに、ＣＤ３３及びＣＤ３結合アームの両方は、Ｆｃエフェクター抑制突然変異Ｌ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含有するように改変される。
改変された鎖が発現され、得られた二特異性抗体は標準的方法を使用して精製する。二特異性抗体は、本明細書中で記載のようにＣＤ３３及びＣＤ３に対するそれらの結合及びそれらのインビトロ及びインビボ細胞傷害性について特徴評価される。表１０は、抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９及びＣＤ３Ｂ３７６のアミノ酸配列を示す。
Figure 2023517660000038
実施例１２：作製された二特異性ＣＤ３３×ＣＤ３抗体はインビトロで細胞傷害性がある。
Ｉｎｃｕｃｙｔｅプラットフォーム上でライブタイムラプスイメージングを使用して、インビトロで作製された二特異性抗体の細胞傷害能を評価するためにＴ細胞介在性細胞傷害性アッセイが使用される。ＣＤ３３陽性細胞株細胞において、３：１の（エフェクター：標的）エフェクター：標的比（Ｅ：Ｔ比）において、健康なドナー由来の単離ｐａｎヒトＣＤ３＋Ｔ細胞の存在下で二特異性抗体を試験する。標的細胞により安定して発現される色素からの蛍光シグナルを測定することにより、アポトーシスによる細胞死を監視する。二特異性抗体は、時間延長とともに、用量依存的な生存細胞の減少を促進し、故に腫瘍細胞のＴ細胞介在性の死滅を誘導する。腫瘍細胞阻害のパーセント％＝（初期播種腫瘍細胞数－現在の生存腫瘍細胞数）／（初期播種腫瘍細胞数）＊１００％。
実施例１３：ＡＤＣの作製及び特徴評価
抗体又はＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、Ｉｎ－１１１、Ｚｒ－８９、Ｌｕ－１７７又はＡｃ－２２５などの様々な放射性金属で標識されるべきであり、インビボ腫瘍生体分布又は腫瘍効力は、雄ＮＯＤ．Ｃｇ－ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ，Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）又はＢａｌｂ－ｃ又はＳＨＯヌードマウスにおいて、ＬＮＣａＰ、ＶＣａＰ又はＣ４－２Ｂを含む確立された皮下（ＳＣ）ヒト前立腺モデルにおいて評価される。ＣＤ３３に結合する抗体若しくは抗原結合ドメイン又はアイソタイプ対照抗体の様々な用量を異なる量の放射性物質（１０～１０００ｎＣｉ）で標識し、腫瘍取り込み又は効力を測定する。
実施例１４：内部移行についての薬物と複合化された抗ＣＤ３３抗体の試験
色素抗ＣＤ３３抗体の内部移行度の特徴評価を行うために、及び薬物と複合化された抗ＣＤ３３抗体の治療効果を判定するために、以下の試験を行った。理論により縛られることを望むものではないが、抗ＣＤ３３抗体の内部移行は、放射性同位体、例えばＩｎ－１１１、Ｚｒ－８９、Ｌｕ－１７７又はＡｃ－２２５と複合化された場合、抗ＣＤ３３抗体の治療的有益性の向上を示唆する。
材料及び方法
色素細胞培養を以下のように行った。１０％ＦＢＳ（ＨｉＭｅｄｉａ）入りのＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ）培地中でＭＯＬＭ－１３、Ｋａｓｕｍｉ－１、ＯＣＩ－ＡＭＬ－３及びＨＤＬＭ２細胞を培養した。各細胞株上での受容体密度を決定するために、飽和濃度で抗ＣＤ３３抗体（クローンＷＭ５３，Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて細胞を染色した。ＢＤ Ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ ＰＥビーズ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、受容体密度を決定した。
製造者のプロトコールに従い、固定可能な紫色の死細胞染色（Ｌ３４９５５，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）により、生存能についてＭＯＬＭ－１３、Ｋａｓｕｍｉ－１、ＯＣＩ－ＡＭＬ－３及びＨＤＬＭ－２細胞を染色した。細胞を回収し、ＰＢＳで１回洗浄し、次いで、固定可能な生存能色素を用いて室温で３０分間染色した。温置後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）で２回洗浄した。次に、試験抗体を用いた結合アッセイのために細胞を使用した。１００ｕｌ染色体積において試験抗体で１００，０００個の細胞を染色した。染色のための抗体をＦＡＣＳ緩衝液中で希釈し、細胞とともに４０分間氷上で温置し、続いてＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。次に、ＰＥ複合化ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ（ａｂ９８５９６；Ａｂｃａｍ）を使用して氷上で４０分間、試験抗体を検出した。洗浄後、Ｎｏｖｏｃｙｔｅフローサイトメトリー（ＡＣＥＡ）上でデータを得た。ＦＳＣ／ＳＳＣで細胞をゲーティングし、続いて生存細胞をゲーティングし、ダブレット除去を行った。Ｆｌｏｗ Ｊｏ（ＢＤ）を使用してデータを分析した。
４－パラメーター非線形回帰分析曲線をプロットするために、二次単独試料のＭＦＩを差し引いた後、中央値蛍光強度値を使用した。
３７℃での動態結合試験のために、試験抗体で染色するために上記のように細胞を処理した。製造者のプロトコールを用い、ＡＦ６４７標識キット（Ａ２０１８６，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して試験抗体をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（ＡＦ６４７）色素と複合化させた。抗体添加後、指定された時間点に対して、ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）において細胞を３７℃で温置した。次に、Ｃｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して試料を固定し、Ｎｏｖｏｃｙｔｅ（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で捕捉した。データを上記ように分析した。
抗体内部移行アッセイを以下のように行った。
プロテインＡ－ＭＭＡＦアッセイを以下のように行った。プロテインＡ－ＭＭＡＦはＬｅｖｅｎａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａから購入した。５０μｌ体積で、底が透明の９６ウェル平底暗色ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）において、ＭＯＬＭ－１３、Ｋａｓｕｍｉ－１、ＯＣＩ－ＡＭＬ３及びＨＤＬＭ２細胞を細胞４０００個／ウェルとして播種した。４Ｘ濃縮液（４００ｎＭ）として抗体保存液を調製し、連続希釈した。２５μｌの各抗体希釈物を細胞に添加した。プロテインＡ－ＭＭＡＦ保管溶液も４Ｘ濃度（４００ｎＭ）で調製し、２５μｌを各ウェルに添加した。細胞及びプロテインＡ－ＭＭＡＦが入ているが抗体がないウェルを１００％生存細胞とみなした。抗体及びプロテインＡ－ＭＭＡＦとともに細胞を９６時間温置した。温置時間の終了時に１００ｕｌのＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を細胞に添加し、Ｔｅｃａｎプレートリーダーで発光を読み取った。％生存能を以下のように計算し、Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して４－パラメーター非線形回帰曲線をプロットするために使用した。
Figure 2023517660000039
ｐＨＡｂ色素に基づく内部移行アッセイを以下のように行った。ｐＨＡｂアミン反応性色素はＰｒｏｍｅｇａから購入した。４００ｕｇの各試験抗体をｐＨＡｂ色素と複合化した。簡潔に述べると、１０ｍｇ／ｍＬ（１１．３ｍＭ）の最終濃度になるように１２．５ｕＬ ＤＭＳＯ＋１２．５ｕＬ水（総体積２５ｕＬ）中でアミン反応性ｐＨＡｂ色素（Ｐｒｏｍｅｇａ，＃Ｇ９８４５）を再構成した。１０倍モル過剰量の色素において複合化反応を行った。
反応混合物は、抗体（２５０ｕｌ体積中５００ｕｇ＋３ｕｌのｐＨＡｂ色素＋３０ｕｌの０．５Ｍホウ酸ナトリウム緩衝液＋水を含有し、最終反応体積が３００ｕｌになるようにした。撹拌しながら３７℃で２時間、反応物を温置し、その後、１０ｍＭの最終濃度になるように１Ｍ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．５を添加することにより反応を停止させた。Ｚｅｂａカラム－２ｍＬ、４０ｋＤａカットオフ（Ｔｈｅｒｍｏ ８７７６８）で色素標識された試料をＰＢＳに交換した。抗体濃度及びＤＡＲ値を以下のように計算した。
ＮａｎｏＤｒｏｐによる測定濃度
・ｐＨＡｂ濃度（ｕＭ）＝（吸光度／（ＥＣ＿ｐＨＡｂ＊経路長））×１０６、ここで、
ｏ吸光度＝Ａ５３２
ｏＥＣ＿ｐＨＡｂ＝７５，０００
・Ａｂ濃度（ｕＭ）＝（吸光度／（ＥＣ－Ａｂ＊経路長））×１０６、ここで、
ｏ吸光度＝Ａ２８０－（０．２５６＊Ａ５３２）
・０．２５６は、Ａ２８０での残留ｐＨＡｂ吸光度に対する補正因子である。
ｏＥＣ＿Ａｂ＝２１０，０００
・色素：Ａｂ＝ｃｏｎｃ．ｐＨＡｂ（ｕＭ）／ｃｏｎｃ．Ａｂ（ｕＭ）
ｐＨＡｂ色素標識されたＣＤ３３抗体の動態を分析するために、１００ｎＭのｐＨＡｂ複合化試験抗体とともに氷上で４５分間、ＭＯＬＭ－１３、Ｋａｓｕｍｉ－１、ＯＣＩ－ＡＭＬ－３及びＨＤＬＭ２細胞を温置した。ＦＡＣＳ緩衝液中で抗体希釈液を調製した。標識後、冷却したＦＡＣＳ緩衝液で細胞を洗浄し、指定時間点にわたり３７℃で温置した。温置時間終了時に、Ｎｏｖｏｃｙｔｅフローサイトメトリー上で細胞を捕捉した。バックグラウンド蛍光を説明するために、全ての時間に対して非染色試料が含まれた。
結果
４℃でＣＤ３３抗体の連続希釈液と細胞を温置することによって結合を行い、続いてＰＥ複合化ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ抗体で検出した。標的細胞株へのＣＤ３３抗体の結合を示すデータは、４℃での抗ヒトＣＤ３３抗体の非線形回帰プロファイルを示すグラフとして図２Ａ及び２Ｂで示す。中央値蛍光強度（ＭＦＩ）対抗体のｌｏｇ濃度をプロットする。各細胞株に対するトップヒットは、赤色で示され、リンツズマブ結合は青色の曲線で示す。
標的細胞株に対するＣＤ３３抗体の時間及び温度依存的な結合をアッセイした。３７℃及び４℃で直接複合化した抗体の連続希釈液とともに細胞を温置することによって結合を行った。データを図３Ａ及び３Ｂで示す。これらの図面におけるグラフは、３７℃及び４℃での抗ヒトＣＤ３３抗体の結合の非線形回帰プロファイルを示す。中央値蛍光強度（ＭＦＩ）対抗体のｌｏｇ濃度をプロットする。
高、中及び低発現標的細胞株のＣＤ３３抗体での内部移行をアッセイした。プロテインＡ－ＭＭＡＦと一緒にＣＤ３３抗体の連続希釈液と細胞を９６時間培養した。９６時間後、ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ－Ｇｌｏ試薬を細胞に添加し、細胞生存能を測定した。プロテインＡ－ＭＭＡＦのみが入ったウェルを１００％生存とみなした。発現なし細胞株としてＨＤＬＭ－２細胞を使用した。この結果を図４Ａ～４Ｄで示す。細胞生存能の低下は、抗体内部移行を示す。グラフは、抗体のｌｏｇ濃度に対する細胞生存能についての非線形回帰分析を示す。
ＣＤ３３抗体内部移行の動態を評価した。ＣＤ３３抗体をｐＨＡｂ色素で標識し、１００ｎＭの濃度で細胞とともに３７℃で指定時間点にわたり温置し、その後、細胞を洗浄し、フローサイトメトリー上で捕捉した。この結果を図５で示し、ここで、グラフは、指定される時間点でのＭＦＩ値を示す。
標的細胞株上でのＣＤ３３発現をアッセイした。Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄからの抗ヒトＣＤ３３抗体を使用して、高、中及び低ＣＤ３３発現細胞株を同定した。抗体（橙色のヒストグラム）又はマウスＩｇＧアイソタイプ対照（青色のヒストグラム）でＭＯＬＭ－１３、Ｋａｓｕｍｉ－１、ＯＣＩ－ＡＭＬ－３及びＨＤＬＭ２細胞を染色し、各細胞株についてのアイソタイプに対する倍率変化を計算した。データを図６で示す。
ｐＨＡｂ色素との複合化後の抗体完全性及びＤＡＲ値を評価した。ｐＨＡｂ色素で抗体を標識し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上で分析した。２８０及び５３０ｎｍでＯＤを測定し、２８０ｎｍでの色素吸光度に対して補正することにより、薬物対抗体比（ＤＡＲ）を計算した。データを図７で示す。
ｐＨＡｂ介在性抗体内部移行動態の特異性を調べた。ＣＤ３３抗体をｐＨＡｂ色素で標識し、指定時間点にわたり４℃において１００ｎＭの濃度でＫａｓｕｍｉ－１又はＯＣＩ－ＡＭＬ－３細胞と温置し、その後、細胞を洗浄し、フローサイトメトリー上で捕捉した。データを図８Ａで示す。グラフは、指定される時間点でのＭＦＩ値を示す。４℃で内部移行は観察されなかった。抗体をＨＤＬＭ－２細胞とも３７℃で温置した。データを図８Ｂで示す。ＭＦＩの上昇は観察されなかった。
高（ＭＯＬＭ－１３）、中（Ｋａｓｕｍｉ－１）及び低（ＯＣＩ－ＡＭＬ－３）細胞株のＣＤ３３抗体の結合ＥＣ５０値をアッセイした。抗体の連続希釈液を用いて４℃で結合を行った。データを図９で示す。
様々な標的細胞株におけるＣＤ３３抗体内部移行をアッセイし、そのデータを図１０で示す。ＭＯＬＭ－１３及びＯＣＩ－ＡＭＬ－３に対して、ＥＣ５０値を示す。Ｋａｓｕｍｉ－１に対して、１００ｎＭ濃度での％生存能を示す。
実施例１５：ＣＤ３３細胞表面レベルでのＣＤ３３抗体の効果
単球、マクロファージ、樹状細胞、好中球、Ｔ細胞及び／又はミクログリアにおいて、ＣＤ３３の細胞表面レベルに対する抗ＣＤ３３及びＣＤ３３二特異性抗体の効果を試験するために、アッセイを行う。このアッセイにおいて、組織球性リンパ腫細胞株Ｕ９３７並びにＣＤ３３発現ＣＨＯ細胞、ヒト初代単球、末梢血単球由来のヒト初代マクロファージ、末梢血単球由来のヒト初代樹状細胞、末梢血単球由来のヒトミクログリア細胞及びヒト初代Ｔ細胞においてＣＤ３３の細胞表面レベルを低下させる能力について、抗ＣＤ３３抗体を評価する。
細胞培養により、末梢血単球からヒトミクログリア細胞を調製する。単球単離抗体を使用して末梢ヒト血液試料からの単球を単離し、樹状細胞に分化させ、５日間培養する。５％ＣＯ２中で３７℃において１０％ウシ胎児血清を含有する培地中で細胞を培養する。非接着細胞を回収し、食作用実験のために使用する。ヒトマクロファージを生成させるために、末梢ヒト血液試料からの単球を単離し、マクロファージに又は樹状細胞に分化させる。
１０％Ｈｙｃｌｏｎｅ ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、ペニシリン、ストレプトマイシン及び非必須アミノ酸を添加した２ｍｌのＲＰＭＩ中、細胞２００，０００個／ｍｌで細胞試料を播種する。ＣＤ３３抗体又は対照アイソタイプを１．０μｇ／ｍｌで添加し、５％ＣＯ２とともに３７℃で２４時間温置する。
受容体ダイナミクスを評価するために、１時間にわたり抗体を細胞と結合させ、次いで洗い流す。少なくとも２４時間後にＣＤ３３の表面レベルを決定する。ＦＡＣＳ分析により、細胞表面受容体発現を検出する。ＦＩＴＣと複合化された抗ＣＤ３３抗体と、及び対照表面マーカーとともに細胞を温置する。ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ、２ｍＭ ＥＤＴＡ）中で２回、この細胞を洗浄し、フローサイトメトリーを行う。分析に対して、個々のフルオロフォアに対するＷＩ値を使用して、抗体非存在下での受容体発現のパーセントとしてデータを計算する。
実施例１６：シグナル伝達分子リン酸化の誘導又は阻害に対する抗ＣＤ３３抗体及びＣＤ３３二特異性抗体のアッセイ
様々な細胞（例えば、Ｊ７７４、ＲＡＷ２６４．７、ＢＭＭ細胞、ヒト初代単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞ミクログリア又は破骨細胞）を個々に培養する。この細胞を培養皿から除去し、カウントする。次に、（ｉ）抗ＣＤ３３抗体、（ｉｉ）抗ＣＤ３３二特異性抗体又は（ｉｉｉ）アイソタイプ適合対照抗体とこの細胞を温置する。次に、この細胞を溶解し、遠心分離して不溶性物質を除去する。ＤＡＰ１２、ＥＲＫ、ＡＫＴ、プロテインＡ－アガロース及びタンパク質Ｇ－アガロースのそれぞれに対する１つ以上の異なる抗体を用いて、各上清において免疫沈降反応を行う。ビーズをＲＩＰＡ緩衝液で徹底的に洗浄する。ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）によってこのタンパク質を分離し、次いでウエスタンブロッティングによりニトロセルロース膜に転写する。次に、リン酸化チロシン又はＤＡＰ１２、ＥＲＫ、Ｓｙｋ、ＬＣＫ、ＦＹＮ、Ｃ－Ｃｂｌ、ＶＡＶ又はＡＫＴのリン酸化形態を特異的に認識する抗体とともにビーズを温置する。ＤＡＰ１２、ＥＲＫ、Ｓｙｋ、ＬＣＫ、ＦＹＮ、Ｃ－Ｃｂｌ、ＶＡＶ及びＡＫＴのリン酸化度を定量するために、高感度化学発光（ＥＣＬ）系でビーズを視覚化する。
実施例１７：ＣＤ３３抗体及び／又は二特異性抗体の抗癌効果のインビボ分析
８週齢（＋／－２週齢）の１０匹のマウスの群、通常のマウス又はヒトＣＤ３３遺伝子を過剰発現するマウスの何れかに１．００μｌ ＰＢＳ中で懸濁した腫瘍細胞（例えば１ｘ１０５～１ｘ１０６ＭＣ３８、Ｌｅｗｉｓ肺又はＢ１６細胞）を皮下注射で負荷する。移植前にイソフルランでマウスに麻酔をかける。第２日で開始して、２００μｇの各アンタゴニスト抗ＣＤ３３抗体で４回の投与にわたり３日ごとにマウスの群にｉ．ｐ．注射する。第４日で開始して、腫瘍成長を測定するために、隔週でノギスを用いて腫瘍成長を監視する。実験のエンドポイントは、２０００ｍｍ３又は６０日間の腫瘍体積である。腫瘍成長及び％生存率は転帰の目安である。抗ＣＤ３３が抗癌効果を有する場合、以下の１つ以上を観察する：腫瘍生着及び成長速度の低下、腫瘍浸潤免疫抑制マクロファージ数の減少及び腫瘍へのエフェクターＴ細胞流入の増加。
実施例１８：抗ＴＲＧＶ９及び抗ＣＤ３３二特異性抗体
γ／δＴ細胞刺激及び拡大増殖を行った。１４日間にわたりｒｈＩＬ－２（１０００ＩＵ／ｍＬ）、ｒｈＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍＬ）及びゾレドロン酸（５μＭ）を含有する完全ＲＰＭＩ培地中でＰＢＭＣを処理することにより、Ｖγ９－Ｖδ２Ｔ細胞の拡大増殖を行った。
抗Ｖγ９モノクローナル抗体のデノボシーケンシングを以下のように行った。ＡｂｃａｍからマウスＩｇＧ１抗ヒトＴ細胞受容体抗ＴＲＧＶ９クローン７Ａ５を得た（カタログ番号ａｂ１７１１０９）。Ｌａｋｅ Ｐｈａｒｍａ（Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡ）が試料調製及びＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行った。試料を還元し、アルキル化し、７つのアリコートに分け、トリプシン／ＬｙｓＣ、キモトリプシン、ＬｙｓＣ、ペプシン及びＡｓｐＮ、エラスターゼ及びプロテイナーゼＫ酵素でタンパク分解的に消化した。ＺｉｐＴｉｐ Ｃ１８ Ｐｉｐｅｔｔｅ Ｔｉｐｓを使用して、得られたペプチドを脱塩し、逆相クロマトグラフィーを使用してライン上で分離した。ＨＣＤ断片化を使用して、Ｔｈｅｒｍｏ Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ分光光度計上で質量分析を行った。ＩＭＧＴに基づく抗体配列データベースにデノボ配列タグを適合させることにより、ＰＥＡＫＳソフトウェアを使用してＭＳデータセットを分析した。デノボ同定ペプチドのコンティグ配列アセンブリーを使用して、配列中のギャップを割り当てた。ＭＳ／ＭＳスペクトルを調べることにより、全てのＣＤＲ及び超変異を確認した。
上記に従い作製される４つのモノクローナル抗体の配列並びにそれらのＣＤＲ配列を以下の表１１～１５で示す。
Figure 2023517660000040
Figure 2023517660000041
Figure 2023517660000042
Figure 2023517660000043
Figure 2023517660000044
Ｖγ９×ＣＤ３３二特異性抗体の調製を以下のように行った。７Ａ５（抗ＴＲＧＶ９）及びＣ３３Ｂ９０４（抗ＣＤ３３抗体）の可変領域配列を使用して、Ｔ細胞がリダイレクトされた急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞の死滅について試験しようとする二特異性抗体を作製した。二特異性抗体ＶＧ４（抗ＴＲＧＶ９×ＣＤ３３）及びＶＧ３（抗ＴＲＧＶ９×Ｎｕｌｌ）をヒトＩｇＧ４としてのノブ－イントゥ－ホール方式の全長抗体として作製した。標準的ＰＣＲ制限酵素に基づく標準的なクローニング技術を使用して、ヒトＩｇＧ４発現カセットの定常領域を含有するカスタム哺乳動物発現ベクターに、可変領域をコードする核酸配列をサブクローニングし、シーケンシングして検証した。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株において、一過性形質移入により、二特異性抗体を発現させた。ＣＨＯ細胞で発現される二特異性抗体の配列を以下の表１６で示す。
Figure 2023517660000045
本抗体は最初にＭａｂ Ｓｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって精製した。このカラムをＰＢＳ ｐＨ７．２で平衡化し、２ｍＬ／ｍｉｎの流速で発酵上清を負荷した。負荷後、このカラムを４カラム体積のＰＢＳで洗浄し、続いて３０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ３．５中で溶出した。２８０ｎｍの吸光度により監視される場合にタンパク質ピークを含有する分画をプールし、１％３Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ９．０を添加することによってｐＨ５．０に中和した。ＰＢＳ緩衝液で平衡化した分取Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ １０／３００ＧＬ（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）カラム上で二特異性ｍＡｂをさらに精製した。内毒素測定及び還元及び非還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥにより、試料の完全性を評価した。ＶＧ６８に対する代表的なゲルを図１２で示す。最終タンパク質濃度は、抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ３３に対して１．０ｍｇ／ｍｌであり、抗ＴＲＧＶ９／Ｎｕｌｌに対して１．０ｍｇ／ｍＬであった。これらに基づく抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ３３及び抗ＴＲＧＶ９／Ｎｕｌｌの最終ＥＵレベルは＜３．０ＥＵ／ｍｇであった。
標的細胞株に対する抗ＣＤ３３抗体の結合活性を評価した。パネルＣＤ３３＋細胞株に対する抗ＣＤ３３クローンＣ３３Ｂ９０４の結合をＦＡＣＳにより測定した。ＭＯＬＭ－１３（図１３）、Ｋａｓｕｍｉ－１（図１４）及びＯＣＩ－ＡＭＬ－３（図１６）に対してＥＣ５０及びＥＣ９０を計算した。
Ｖγ９＋（γδ）Ｔ細胞及びＰａｎ Ｔ－細胞の特徴評価を以下のように行った。ＰＢＭＣ全体からＶγ９＋γδＴ細胞を選択的に拡大増殖させるために、ゾレドロン酸を使用した。製造者の説明書に従い、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトγδＴ細胞単離キット（Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＣＡ）を使用して、ＰＢＭＣを新鮮ＰＢＭＣ全体から単離した。１０００ＩＵ／ｍＬの最終濃度までの組み換えヒトＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）、１０ｎｇ／ｍＬの最終濃度までの組み換えヒトＩＬ－１５（ｒｈＩＬ－１５）及び５μＭの最終濃度までのゾレドロン酸とともに、１４日間、ＲＰＭＩ－１０（１０％ＦＢＳ、１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを添加したＲＰＭＩ）培地中で単離ＰＢＭＣを培養した。
Ｋａｓｕｍｉ－３細胞及びヒトγδＴ細胞を使用した抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ３３二特異性抗体の結合及び細胞傷害特性の評価を以下のように行った。ゾレドロン酸＋ＩＬ－２＋ＩＬ－１５とともに１２日間培養した、ＰＢＭＣから単離した濃縮γδＴ細胞（エフェクター）を、ＣＦＳＥ標識したＫａｓｕｍｉ－３細胞（標的）とともに、１：１及び５：１のＥ：Ｔ比で、様々な濃度の二特異性抗体の存在下において２４時間にわたり、同時培養した。用量反応曲線は、１：１（図６）及び５：１（図７）Ｅ：Ｔ比での、用量依存的な、ＣＤ３３発現ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対する、抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ３３及び抗ＴＲＧＶ９／抗ＮＵＬＬ二特異性が介在するγδＴ細胞の細胞傷害性を示す。ここで示される細胞傷害値から二特異性抗体の非存在下で観察される基底細胞傷害値を差し引いた。方法に記載のように、ＥＣ５０値を計算した。単一の実験から示される代表的なデータを図１６～１７で提供し、これらは、抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ３３二特異性抗体が、インビトロでＣＤ３３発現Ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対するγδＴ細胞の細胞傷害性に介在することを示す。
ゾレドロン酸＋ＩＬ－２＋ＩＬ－１５とともに１２日間培養した健康なドナー由来のＰＢＭＣ（エフェクター）を、２４時間にわたり、様々な濃度の二特異性抗体存在下で１：１ Ｅ：Ｔ比でＣＦＳＥ標識ＭＯＬＭ－１３細胞（標的）とともに同時培養した。図１８は、抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ３３二特異性抗体が、インビトロでＣＤ３３発現ＭＯＬＭ－１３細胞に対するγδＴ細胞の細胞傷害性（全ＰＢＭＣから）に介在することを示す。図１８の用量反応曲線は、用量依存的な、ＣＤ３３発現ｋａｓｕｍｉ－３細胞に対する、抗ＴＲＧＶ９／抗ＣＤ３３及び抗ＴＲＧＶ９／抗ＮＵＬＬ二特異性介在性のγδＴ細胞の細胞傷害性を示す。そこで表される細胞傷害値から二特異性抗体の非存在下で観察される基底細胞傷害値を差し引いた。方法で記載のようにＥＣ５０値を計算した。ここで示される代表的データは、単一実験からのものである。
実施例１９：インシリコ分析及びＮＫＫライブラリ設計
これらのＶＨ及びＶＬドメインが翻訳後修飾（ＰＴＭ）を受ける可能性を評価するために、本明細書中で同定されるＶＨ及びＶＬドメインのインシリコ分析を行った。特定のＰＴＭ部位でＮＮＫライブラリを作製し、潜在的なＰＴＭにおけるアミノ酸の突然変異の効果を決定するためにスクリーニングを行った。
ＮＧ、ＤＧ及びＤＰを含むモチーフを同定することに焦点を合わせた内部配列分析ツールを使用して、潜在的なＰＴＭリスクを同定した。各モチーフの第１及び第２の位置に対してＮＮＫ飽和突然変異誘発ライブラリを設計した。ＮＮＫライブラリは、全ての２０アミノ酸がライブラリで表されるように、コドン（Ｎ＝Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ；Ｋ＝Ｇ、Ｔ）を利用した。インフュージョンクローニングにより、ライブラリをＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）発現プラスミドにクローニングした。ライブラリを播種し、変異したＰＴＭを表すためにコロニーを単離した。図１９は、ＰＴＭのインシリコ分析を示し、ＰＴＭがボックスにおいてＮＮＫライブラリに対して選択される。
実施例２０：ＮＮＫライブラリから作製されたｓｃＦｖ変異体の熱安定性の試験
親及び実施例１９で作製された突然変異ｓｃＦｖクローンの熱安定性を評価した。親クローン及び突然変異誘発ライブラリの培養物を接種し、一晩増殖させた。発現を誘導し、ＥＬＩＳＡによって上清を分析した。９６ウェルプレート上にＣＤ３３をプレーティングし、結合ＥＬＩＳＡを行った。加熱のために上清を４つの個別のプレートに分けた。熱安定性を評価するために、未処理ＲＴ、５５℃、６０℃、６５℃で、アッセイを行った。同じクローンの未処理室温に対して発光シグナルを正規化した。
図２０は、Ｃ３３Ｂ１４７５（配列番号２７７）に基づきＮＮＫライブラリから作製されたｓｃＦｖの熱安定性を示す。図２１は、Ｃ３３Ｂ１５１６（配列番号２７８）に基づきＮＮＫライブラリから作製されたｓｃＦｖの熱安定性を示す。図２２は、Ｃ３３Ｂ１５１７ＳＥＱ（配列番号２１６）に基づきＮＮＫライブラリから作製されたｓｃＦｖの熱安定性を示す。図２３は、Ｃ３３Ｂ１５２２（配列番号２１３）に基づきＮＮＫライブラリから作製されたｓｃＦｖの熱安定性を示す。図２４は、ＮＮＫライブラリのライブラリスクリーニング中に識別された好ましい残基がある表である。
これらの図面は、突然変異による潜在的なＰＴＭ部位の除去がＣＤ３３への結合を損なわなかったか又は熱安定性を低下させなかったことを例示する。いくつかのｓｃＦｖクローンにおいて安定性の予想外の改善が見られた。
番号付き実施形態
本発明は、以下の番号付きの実施形態も提供する。
番号付き実施形態のリスト（Ａ）
１）ＣＤ３３に結合する単離タンパク質であって、
ａ）配列番号１８の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号２３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号２４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号２５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号２６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｊ）配列番号２７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
又はそのＣＤ３３結合断片
を含む単離タンパク質。
２）ａ）それぞれ配列番号１、６及び１２；
ｂ）それぞれ配列番号２、７及び１３；
ｃ）それぞれ配列番号１、８及び１４；
ｄ）それぞれ配列番号３、９及び１３；
ｅ）それぞれ配列番号４、１０及び１５；
ｆ）それぞれ配列番号５、１１及び１６；又は
ｇ）それぞれ配列番号５、１１及び１７
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、実施形態１の単離タンパク質。
３）ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態１又は２の単離タンパク質。
４）ＶＨＨである、実施形態３の単離タンパク質。
５）Ｆａｂである、実施形態３の単離タンパク質。
６）ｓｃＦｖである、実施形態３の単離タンパク質。
７）配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む、実施形態１～６の何れかの単離タンパク質。
８）ＣＤ３３に結合する単離タンパク質であって、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨＨ又はそのＣＤ３３結合断片を含む単離タンパク質。
９）ＣＤ３３に結合する単離タンパク質であって、
ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む単離タンパク質。
１０）ａ）それぞれ配列番号２８、３６及び４５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８及び４７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９及び４８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１及び５０；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２及び５１；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４及び５１；又は
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２及び５１
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む、実施形態９の単離タンパク質。
１１）ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８１の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８４のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３
を含む、実施形態９又は１０の単離タンパク質。
１２）ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；又は
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０
の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１１の単離タンパク質。
１３）ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態９～１２の何れか１つの単離タンパク質。
１４）Ｆａｂである、実施形態１３の単離タンパク質。
１５）ＶＨＨである、実施形態１３の単離タンパク質。
１６）ｓｃＦｖである、実施形態１３の単離タンパク質。
１７）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態１６の単離タンパク質。
１８）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態１７の単離タンパク質。
１９）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１８の単離タンパク質。
２０）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態１９の単離タンパク質。
２１）配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０又は６１のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７又は８８のＶＬとを含む、実施形態９～２０の何れか１つの単離タンパク質。
２２）ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ
を含む、実施形態２１の単離タンパク質。
２３）ＣＤ３３に結合する単離タンパク質であって、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ
を含む単離タンパク質。
２４）ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態２３の単離タンパク質。
２５）Ｆａｂである、実施形態２４の単離タンパク質。
２６）ＶＨＨである、実施形態２４の単離タンパク質。
２７）ｓｃＦｖである、実施形態２４の単離タンパク質。
２８）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態２７の単離タンパク質。
２９）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態２８に記載の単離タンパク質。
３０）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態２９の単離タンパク質。
３１）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態３０の単離タンパク質。
３２）ＣＤ３３に結合する単離タンパク質であって、
ａ）配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む単離タンパク質。
３３）ａ）それぞれ配列番号８９、９０及び９２；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０及び９３；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１及び９４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８及び１６９；
ｅ）それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４；
ｆ）それぞれ配列番号１７６、１７７及び１７８；
ｇ）それぞれ配列番号８９、９０及び１８０；又は
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０及び９３
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む、実施形態３２の単離タンパク質。
３４）ａ）配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０５の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｆ）配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｇ）配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２００のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２０２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３
を含む、実施形態３２又は３３の単離タンパク質。
３５）ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態３４の単離タンパク質。
３６）ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態３２～３５の何れかの１つの単離タンパク質。
３７）Ｆａｂである、実施形態３６の単離タンパク質。
３８）ＶＨＨである、実施形態３６の単離タンパク質。
３９）ｓｃＦｖである、実施形態３６の単離タンパク質。
４０）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態３９の単離タンパク質。
４１）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態４０の単離タンパク質。
４２）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態４１の単離タンパク質。
４３）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態４２の単離タンパク質。
４４）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む、実施形態３２～４３の何れか１つの単離タンパク質。
４５）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む、実施形態４４の単離タンパク質。
４６）ＣＤ３３に結合する単離タンパク質であって、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む単離タンパク質。
４７）ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態４６の単離タンパク質。
４８）Ｆａｂである、実施形態４７の単離タンパク質。
４９）ＶＨＨである、実施形態４７の単離タンパク質。
５０）ｓｃＦｖである、実施形態４７の単離タンパク質。
５１）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態５０の単離タンパク質。
５２）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態５１の単離タンパク質。
５３）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態５２の単離タンパク質。
５４）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態５３の単離タンパク質。
５５）半減期延長部分に複合化される、実施形態１～５４の何れか１つの単離タンパク質。
５６）半減期延長部分は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、Ｉｇの断片、Ｉｇ定常領域、Ｉｇ定常領域の断片、Ｆｃ領域、トランスフェリン、アルブミン、アルブミン結合ドメイン又はポリエチレングリコールである、実施形態５５の単離タンパク質。
５７）単一特異性タンパク質である、実施形態１～５６の何れか１つの単離タンパク質。
５８）多特異性タンパク質である、実施形態１～５７の何れか１つの単離タンパク質。
５９）多特異性タンパク質は、二特異性タンパク質である、実施形態５８の単離タンパク質。
６０）多特異性タンパク質は、三特異性タンパク質である、実施形態５９の単離タンパク質。
６１）免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又はそのＩｇ定常領域の断片をさらに含む、実施形態１～６０の何れか１つの単離タンパク質。
６２）Ｉｇ定常領域の断片は、Ｆｃ領域を含む、実施形態６１の単離タンパク質。
６３）Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメインを含む、実施形態６１の単離タンパク質。
６４）Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ３ドメインを含む、実施形態６１の単離タンパク質。
６５）Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、実施形態６１の単離タンパク質。
６６）Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、実施形態６１の単離タンパク質。
６７）Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、実施形態６１の単離タンパク質。
６８）Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＮ末端に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態６１～６７の何れか１つの単離タンパク質。
６９）Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＣ末端に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態６１～６７の何れか１つの単離タンパク質。
７０）第２のリンカー（Ｌ２）を介してＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態６１～６９の何れか１つの単離タンパク質。
７１）Ｌ２は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態７０の単離タンパク質。
７２）多特異性タンパク質は、リンパ球上の抗原に結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態５８～７１の何れか１つの単離タンパク質。
７３）リンパ球は、Ｔ細胞である、実施形態７２の単離タンパク質。
７４）Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、実施形態７２の単離タンパク質。
７５）リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態７２の単離タンパク質。
７６）多特異性タンパク質は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、ＴＲＧＶ９又はＮＫＧ２Ｃに結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態５８～７５の何れか１つの単離タンパク質。
７７）多特異性タンパク質は、ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態７６の単離タンパク質。
７８）ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号１４１の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４２のＨＣＤＲ２、配列番号１４３のＨＣＤＲ３、配列番号１４４の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１４５のＬＣＤＲ２及び配列番号１４６のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１４７のＶＨ及び配列番号１４８のＶＬ；
ｃ）配列番号１４９のＨＣＤＲ１、配列番号１５０のＨＣＤＲ２、配列番号１５１のＨＣＤＲ３、配列番号１５２のＬＣＤＲ１、配列番号１５３のＬＣＤＲ２及び配列番号１５４のＬＣＤＲ３；又は
ｄ）配列番号１５５のＶＨ及び配列番号１５６のＶＬ
を含む、実施形態７７の単離タンパク質。
７９）多特異性タンパク質は、ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態７６の単離タンパク質。
８０）ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２３８のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４２のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４３のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４４のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２４５のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｆ）配列番号２４６のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｇ）配列番号２４７のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
ｈ）配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ
を含む、実施形態７９の単離タンパク質。
８１）Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態６１～８０の何れか１つの単離タンパク質。
８２）実施形態６１～８１の何れか１つの単離タンパク質であって、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）へのタンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む、単離タンパク質。
８３）ＦｃγＲへのタンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態８２の単離タンパク質。
８４）Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＦｃγＲへのタンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む、実施形態６１～８１の何れか１つの単離タンパク質。
８５）ＦｃγＲへのタンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態８４の単離タンパク質。
８６）ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態８２～８５の何れか１つの単離タンパク質。
８７）実施形態６１～８６の何れか１つの単離タンパク質であって、Ｉｇ定常領域の断片のＩｇ定常領域は、タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異を含む、単離タンパク質。
８８）タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態８７の単離タンパク質。
８９）Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおいて少なくとも１つの突然変異を含む、実施形態６１～８８の何れか１つの単離タンパク質。
９０）Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態８９の単離タンパク質。
９１）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態１～５４の何れか１つの単離タンパク質。
９２）ＣＡＲは、
ａ）実施形態１～５４の何れか１つのＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン；
ｂ）膜貫通ドメイン；及び
ｃ）任意選択的に少なくとも１つの同時刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、実施形態９１の単離タンパク質。
９３）ＣＡＲは、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域をさらに含む、実施形態９１又は９２の単離タンパク質。
９４）ａ）膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含み；及び
ｂ）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分を含む同時刺激ドメインと、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分を含む一次シグナル伝達ドメインとを含む、実施形態９１～９３の何れか１つの単離タンパク質。
９５）ａ）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；
ｂ）膜貫通ドメインは、配列番号１６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；及び／又は
ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する同時刺激ドメインと、配列番号１６４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインとを含む、実施形態９１～９３の何れか１つの単離タンパク質。
９６）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）構成成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー構成成分又はそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド構成成分を含む、実施形態９５の単離タンパク質。
９７）実施形態１～９６の何れか１つの単離タンパク質と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
９８）実施形態１～９６の何れか１つの単離タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
９９）実施形態９８のポリヌクレオチドを含むベクター。
１００）実施形態９９のベクターを含む宿主細胞。
１０１）実施形態１～９６の何れか１つの単離タンパク質を作製する方法であって、タンパク質が発現される条件で実施形態１００の宿主細胞を培養することと、宿主細胞によって産生されるタンパク質を回収することとを含む方法。
１０２）実施形態１～９６の何れか１つの単離タンパク質に結合する抗イディオタイプ抗体。
１０３）実施形態１～９６の何れか１つの単離タンパク質を含む、キット。
１０４）対象においてＣＤ３３発現癌を処置するための手段を含む、医薬組成物。
１０５）対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させるための手段を含む、医薬組成物。
１０６）対象においてＣＤ３３発現癌の確立を予防するための手段を含む、医薬組成物。
１０７）ＣＤ３３発現癌を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置するための手段を含む、医薬組成物。
番号付けされた実施形態のリスト（Ｂ）
１）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインと、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む、単離された多特異性タンパク質。
２）リンパ球抗原は、Ｔ細胞抗原である、実施形態１の単離された多特異性タンパク質。
３）Ｔ細胞抗原は、ＣＤ８＋Ｔ細胞抗原である、実施形態１の単離された多特異性タンパク質
４）リンパ球抗原は、ＮＫ細胞抗原である、実施形態１の単離された多特異性タンパク質。
５）リンパ球抗原は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、ＴＲＧＶ９又はＮＫＧ２Ｃである、実施形態１～４の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
６）リンパ球抗原は、ＣＤ３εである、実施形態５の単離された多特異性タンパク質。
７）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨを含む、実施形態１～６の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
８）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含む、実施形態７の単離された多特異性タンパク質。
９）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含む、実施形態７の単離された多特異性タンパク質。
１０）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む、実施形態７の単離された多特異性タンパク質。
１１）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態１０の単離された多特異性タンパク質。
１２）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態１１の単離された多特異性タンパク質
１３）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１２の単離された多特異性タンパク質。
１４）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態１３の単離された多特異性タンパク質。
１５）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１、２、３、４又は５の何れか１つのＨＣＤＲ１、配列番号６、７、８、９、１０又は１１の何れか１つのＨＣＤＲ２及び配列番号１２、１３、１４、１５、１６又は１７の何れか１つのＨＣＤＲ３を含む、実施形態１～１４の何れか１つの単離された多特異性。
１６）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号１、６及び１２；
ｂ）それぞれ配列番号２、７及び１３；
ｃ）それぞれ配列番号１、８及び１４；
ｄ）それぞれ配列番号３、９及び１３；
ｅ）それぞれ配列番号４、１０及び１５；
ｆ）それぞれ配列番号５、１１及び１６；又は
ｇ）それぞれ配列番号５、１１及び１７
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３
又はそれらのＣＤ３３結合断片
を含む、実施形態１～１５の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
１７）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む、実施形態１～１６の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
１８）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５のＨＣＤＲ１、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３又は４４のＨＣＤＲ２、配列番号４５、４６、４７、４８、４９、５０又は５１のＨＣＤＲ３、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７又は６８のＬＣＤＲ１、配列番号６９、７０、７１、７２、７３又は７４のＬＣＤＲ２及び配列番号７５、７６、７７、７８、７９又は８０のＬＣＤＲ３を含む、実施形態１～１４の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
１９）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７、
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；又は
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１～１４及び１８の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
２０）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０又は６１のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７又は８８のＶＬとを含む、実施形態１～１４、１８及び１９の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
２１）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ
を含む、実施形態１～１４及び１８～２０の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
２２）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３３、８９、１６７、１７２又は１７６のＨＣＤＲ１、配列番号９０、９１、１６８、１７３又は１７７のＨＣＤＲ２、配列番号９２、９３、９４、１６９、１７４、１７８又は１８０のＨＣＤＲ３、配列番号９８、９９、１００、１８２、１８６、１８９、１９３、１９７又は２０１のＬＣＤＲ１、配列番号１０１、１０２、１０３、１８３、１８７、１９０、１９４又は１９８のＬＣＤＲ２及び配列番号１０４、１８４、１９１、１９５又は１９９のＬＣＤＲ３を含む、実施形態１～１４の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
２３）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；又は
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１～１４及び２２の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
２４）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む、実施形態１～１４、２２及び２３の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
２５）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む、実施形態１～１４及び２２～２４の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
２６）リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号１４１のＨＣＤＲ１、配列番号１４２のＨＣＤＲ２、配列番号１４３のＨＣＤＲ３、配列番号１４４のＬＣＤＲ１、配列番号１４５のＬＣＤＲ２及び配列番号１４６のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１４７のＶＨ及び配列番号１４８のＶＬ；
ｃ）配列番号１４９のＨＣＤＲ１、配列番号１５０のＨＣＤＲ２、配列番号１５１のＨＣＤＲ３、配列番号１５２のＬＣＤＲ１、配列番号１５３のＬＣＤＲ２及び配列番号１５４のＬＣＤＲ３；又は
ｄ）配列番号１５５のＶＨ及び配列番号１５６のＶＬ
を含む、実施形態１～２５の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
２７）リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２３８のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４２のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４３のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４４のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２４５のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｆ）配列番号２４６のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｇ）配列番号２４７のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
ｈ）配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ
を含む、実施形態１～２５の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
２８）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片に複合化され、及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、第２の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片に複合化される、実施形態１～２７の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
２９）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインと、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片との間及びリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと、第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片との間に第２のリンカー（Ｌ２）をさらに含む、実施形態２８の単離された多特異性タンパク質。
３０）Ｌ２は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態２９の単離された多特異性タンパク質。
３１）第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態２７～２９の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
３２）実施形態２８～３１の単離された多特異性タンパク質であって、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む、多特異性タンパク質。
３３）ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態３２の単離された多特異性タンパク質。
３４）実施形態２８～３１の何れか１つの単離された多特異性タンパク質であって、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）への多特異性タンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む、単離された多特異性タンパク質。
３５）ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態３４の単離された多特異性タンパク質。
３６）ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態３２～３５の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
３７）実施形態２８～３６の何れか１つの単離された多特異性タンパク質であって、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、多特異性タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異を含む、単離された多特異性タンパク質。
３８）多特異性タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態３７の単離された多特異性タンパク質。
３９）第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異を含む、実施形態２８～３８の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
４０）第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態３９の単離された多特異性タンパク質。
４１）第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、以下の突然変異：
ａ）第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ及び第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ；又は
ｂ）第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ及びを第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ
を含む、実施形態２８～４０の何れか１つの単離された多特異性タンパク質。
４１）実施形態１～４１の何れか１つの単離された多特異性タンパク質を含む、キット。
４２）対象においてＣＤ３３発現癌を処置するための手段を含む、医薬組成物。
４３）対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させるための手段を含む、医薬組成物。
４４）対象においてＣＤ３３発現癌の確立を予防するための手段を含む、医薬組成物。
４５）ＣＤ３３発現癌を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置する手段を含む、医薬組成物。
番号付けされた実施形態のリスト（Ｃ）：
１）薬剤に複合化された単離タンパク質を含む免疫複合体であって、単離タンパク質は、ＣＤ３３に結合し、単離タンパク質は、
ａ）配列番号１８の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号２３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号２４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号２５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号２６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｊ）配列番号２７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
又はそれらのＣＤ３３結合断片
を含む、免疫複合体。
２）単離タンパク質は、
ａ）それぞれ配列番号１、６及び１２；
ｂ）それぞれ配列番号２、７及び１３；
ｃ）それぞれ配列番号１、８及び１４；
ｄ）それぞれ配列番号３、９及び１３；
ｅ）それぞれ配列番号４、１０及び１５；
ｆ）それぞれ配列番号５、１１及び１６；又は
ｇ）それぞれ配列番号５、１１及び１７
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、実施形態１の免疫複合体。
３）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態１又は２の免疫複合体。
４）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ＶＨＨである、実施形態３の免疫複合体。
５）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、Ｆａｂである、実施形態３の免疫複合体。
６）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである、実施形態３の免疫複合体。
７）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む、実施形態１～６の何れかの免疫複合体。
８）薬剤に複合化された単離タンパク質を含む免疫複合体であって、単離タンパク質は、ＣＤ３３に結合し、単離タンパク質は、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨＨを含む、免疫複合体。
９）薬剤に複合化された単離タンパク質を含む免疫複合体であって、単離タンパク質は、ＣＤ３３に結合し、単離タンパク質は、
ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む、免疫複合体。
１０）単離タンパク質は、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６及び４５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８及び４７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９及び４８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１及び５０；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２及び５１；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４及び５１；又は
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２及び５１
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む、実施形態９に記載の免疫複合体。
１１）単離タンパク質は、
ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８１の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８４のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３
を含む、実施形態９又は１０の免疫複合体。
１２）単離タンパク質は、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；又は
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１１の免疫複合体。
１３）単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態９～１２の何れか１つの免疫複合体。
１４）単離タンパク質は、Ｆａｂである、実施形態１３の免疫複合体。
１５）単離タンパク質は、ＶＨＨである、実施形態１３の免疫複合体。
１６）単離タンパク質は、ｓｃＦｖである、実施形態１３の免疫複合体。
１７）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態１６の免疫複合体。
１８）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態１７の免疫複合体。
１９）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１８の免疫複合体。
２０）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態１９の免疫複合体。
２１）単離タンパク質は、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０又は６１のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７又は８８のＶＬとを含む、実施形態９～２０の何れか１つの免疫複合体。
２２）単離タンパク質は、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ
を含む、実施形態２１の免疫複合体。
２３）薬剤に複合化される単離タンパク質を含む免疫複合体であって、単離タンパク質は、ＣＤ３３に結合し、単離タンパク質は、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ
を含む、免疫複合体。
２４）単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態２３の免疫複合体。
２５）単離タンパク質は、Ｆａｂである、実施形態２４の免疫複合体。
２６）単離タンパク質は、ＶＨＨである、実施形態２４の免疫複合体。
２７）単離タンパク質は、ｓｃＦｖである、実施形態２４の免疫複合体。
２８）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態２７の免疫複合体。
２９）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態２８の免疫複合体。
３０）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態２９の免疫複合体。
３１）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態３０の免疫複合体。
３２）薬剤に複合化される単離タンパク質を含む免疫複合体であって、単離タンパク質は、ＣＤ３３に結合し、単離タンパク質は、
ａ）配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む、免疫複合体。
３３）ａ）それぞれ配列番号８９、９０及び９２；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０及び９３；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１及び９４、
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８及び１６９；
ｅ）それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４；
ｆ）それぞれ配列番号１７６、１７７及び１７８；
ｇ）それぞれ配列番号８９、９０及び１８０；又は
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０及び９３
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む、実施形態３２の免疫複合体。
３４）単離タンパク質は、
ａ）配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０５の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｆ）配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｇ）配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２００のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２０２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３
を含む、実施形態３２又は３３の免疫複合体。
３５）ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態３４の免疫複合体。
３６）単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態３２～３５の何れか１つの免疫複合体。
３７）単離タンパク質は、Ｆａｂである、実施形態３６の免疫複合体。
３８）単離タンパク質は、ＶＨＨである、実施形態３６の免疫複合体。
３９）単離タンパク質は、ｓｃＦｖである、実施形態３６の免疫複合体。
４０）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態３９の免疫複合体。
４１）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態４０の免疫複合体。
４２）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態４１の免疫複合体。
４３）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態４２の免疫複合体。
４４）単離タンパク質は、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む、実施形態３２～４３の何れか１つの免疫複合体。
４５）単離タンパク質は、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む、実施形態４４の免疫複合体。
４６）薬剤に複合化される単離タンパク質を含む免疫複合体であって、単離タンパク質は、ＣＤ３３に結合し、単離タンパク質は、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む、免疫複合体。
４７）単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態４６の免疫複合体。
４８）単離タンパク質は、Ｆａｂである。実施形態４７の免疫複合体。
４９）単離タンパク質は、ＶＨＨである、実施形態４７の免疫複合体。
５０）単離タンパク質は、ｓｃＦｖである、実施形態４７の免疫複合体。
５１）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態５０の免疫複合体。
５２）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態５１の免疫複合体。
５３）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態５２の免疫複合体。
５４）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態５３の免疫複合体。
５５）単離タンパク質は、半減期延長部分に複合化される、実施形態１～５４の何れか１つの免疫複合体。
５６）半減期延長部分は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、Ｉｇの断片、Ｉｇ定常領域、Ｉｇ定常領域の断片、Ｆｃ領域、トランスフェリン、アルブミン、アルブミン結合ドメイン又はポリエチレングリコールである、実施形態５５の免疫複合体。
５７）単離タンパク質は、単一特異性タンパク質である、実施形態１～５６の何れか１つの免疫複合体。
５８）単離タンパク質は、多特異性タンパク質である、実施形態１～５７の何れか１つの免疫複合体。
５９）多特異性タンパク質は、二特異性タンパク質である、実施形態５８の免疫複合体。
６０）多特異性タンパク質は、三特異性タンパク質である、実施形態５９の免疫複合体。
６１）免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又はそのＩｇ定常領域の断片をさらに含む、実施形態１～６０の何れか１つの免疫複合体。
６２）Ｉｇ定常領域の断片は、Ｆｃ領域を含む、実施形態６１の免疫複合体。
６３）Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメインを含む、実施形態６１の免疫複合体。
６４）Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ３ドメインを含む、実施形態６１の免疫複合体。
６５）Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、実施形態６１の免疫複合体。
６６）Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、実施形態６１の免疫複合体。
６７）Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、実施形態６１の免疫複合体。
６８）単離タンパク質は、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＮ末端に複合化される、実施形態６１～６７の何れか１つの免疫複合体。
６９）単離タンパク質は、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＣ末端に複合化される、実施形態６１～６７の何れか１つの免疫複合体。
７０）単離タンパク質は、第２のリンカー（Ｌ２）を介してＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片に複合化される、実施形態６１～６９の何れか１つの免疫複合体。
７１）Ｌ２は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態７０の免疫複合体。
７２）多特異性タンパク質は、リンパ球上の抗原に結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態５８～７１の何れか１つの免疫複合体。
７３）リンパ球は、Ｔ細胞である、実施形態７２の免疫複合体。
７４）Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、実施形態７２の免疫複合体。
７５）リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態７２の免疫複合体。
７６）多特異性タンパク質は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、ＴＲＧＶ９又はＮＫＧ２Ｃに結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態５８～７５の何れか１つの免疫複合体。
７７）多特異性タンパク質は、ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態７６の免疫複合体。
７８）ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号１４１の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４２のＨＣＤＲ２、配列番号１４３のＨＣＤＲ３、配列番号１４４の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１４５のＬＣＤＲ２及び配列番号１４６のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１４７のＶＨ及び配列番号１４８のＶＬ；
ｃ）配列番号１４９のＨＣＤＲ１、配列番号１５０のＨＣＤＲ２、配列番号１５１のＨＣＤＲ３、配列番号１５２のＬＣＤＲ１、配列番号１５３のＬＣＤＲ２及び配列番号１５４のＬＣＤＲ３；又は
ｄ）配列番号１５５のＶＨ及び配列番号１５６のＶＬ
を含む、実施形態７７の免疫複合体。
７９）多特異性タンパク質は、ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態７６の免疫複合体。
８０）ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２３８のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４２のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４３のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４４のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２４５のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｆ）配列番号２４６のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｇ）配列番号２４７のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
ｈ）配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ
を含む、実施形態７７の免疫複合体。
８１）Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態６１～８０の何れか１つの免疫複合体。
８２）実施形態６１～８１の何れか１つの免疫複合体であって、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）へのタンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む、免疫複合体。
８３）ＦｃγＲへのタンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態８２の免疫複合体。
８４）実施形態６１～８１の何れか１つの免疫複合体であって、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＦｃγＲへの増強された結合をもたらすタンパク質の少なくとも１つの突然変異を含む、免疫複合体。
８５）ＦｃγＲへのタンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態８４の免疫複合体。
８６）ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態８０～８５の何れか１つの免疫複合体。
８７）実施形態６１～８６の何れか１つの免疫複合体であって、Ｉｇ定常領域の断片のＩｇ定常領域は、タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異を含む、免疫複合体。
８８）タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態８７の免疫複合体。
８９）単離タンパク質は、Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおいて少なくとも１つの突然変異を含む、実施形態６１～８８の何れか１つの免疫複合体。
９０）Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態８９の免疫複合体。
９１）単離タンパク質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態１～５４の何れか１つの免疫複合体。
９２）ＣＡＲは、
ａ）実施形態１～５４の何れか１つで定められるようなＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン；
ｂ）膜貫通ドメイン；及び
ｃ）任意選択的に少なくとも１つの同時刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、実施形態９１の免疫複合体。
９３）ＣＡＲは、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域をさらに含む、実施形態９１又は９２の免疫複合体。
９４）ａ）膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含み；及び
ｂ）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分を含む同時刺激ドメインと、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分を含む一次シグナル伝達ドメインとを含む、実施形態９１～９３の何れか１つの免疫複合体。
９５）ａ）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；
ｂ）膜貫通ドメインは、配列番号１６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；及び／又は
ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する同時刺激ドメインと、配列番号１６４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインとを含む、実施形態９１～９３の何れか１つの免疫複合体。
９６）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）構成成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー構成成分又はそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド構成成分を含む、実施形態９５の免疫複合体。
９７）薬剤は、治療剤又は造影剤である、実施形態１～９６の何れか１つの免疫複合体。
９８）実施形態１～９６の何れか１つの免疫複合体と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
９９）実施形態１～９６の何れか１つの免疫複合体の単離タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
１００）実施形態９９のポリヌクレオチドを含むベクター。
１０１）実施形態１００のベクター含む宿主細胞。
１０２）実施形態１～９６の何れか１つの免疫複合体を作製する方法であって、タンパク質が発現される条件で実施形態１０１の宿主細胞を培養することと、宿主細胞によって産生されるタンパク質を回収することと、宿主細胞によって産生されるタンパク質を薬剤と複合化することとを含む方法。
１０３）薬剤と複合化される単離された多特異性タンパク質を含む免疫複合体であって、単離された多特異性タンパク質は、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインと、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む、免疫複合体。
１０４）リンパ球抗原は、Ｔ細胞抗原である、実施形態１０３の免疫複合体。
１０５）Ｔ細胞抗原は、ＣＤ８＋Ｔ細胞抗原である、実施形態１０３の免疫複合体タンパク質。
１０６）リンパ球抗原は、ＮＫ細胞抗原である、実施形態１０３の免疫複合体。
１０７）リンパ球抗原は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、ＴＲＧＶ９又はＮＫＧ２Ｃである、実施形態１０３～１０６の何れか１つの免疫複合体。
１０８）リンパ球抗原は、ＣＤ３εである、実施形態１０７の免疫複合体。
１０９）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨを含む、実施形態１０３～１０８の何れか１つの免疫複合体。
１１０）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含む、実施形態１０９の免疫複合体。
１１１）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含む、実施形態１０９の免疫複合体。
１１２）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む、実施形態１１０の免疫複合体。
１１３）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態１１２の免疫複合体。
１１４）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態１１３の免疫複合体。
１１５）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１１４の免疫複合体。
１１６）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態１１５の免疫複合体。
１１７）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１、２、３、４又は５の何れか１つのＨＣＤＲ１、配列番号６、７、８、９、１０又は１１の何れか１つのＨＣＤＲ２及び配列番号１２、１３、１４、１５、１６又は１７の何れか１つのＨＣＤＲ３を含む、実施形態１０３～１１６の何れか１つの免疫複合体。
１１８）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号１、６及び１２；
ｂ）それぞれ配列番号２、７及び１３；
ｃ）それぞれ配列番号１、８及び１４；
ｄ）それぞれ配列番号３、９及び１３；
ｅ）それぞれ配列番号４、１０及び１５；
ｆ）それぞれ配列番号５、１１及び１６；又は
ｇ）それぞれ配列番号５、１１及び１７
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３を含む、１０３～１１７の何れか１つの免疫複合体。
１１９）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む、実施形態１０３～１１８の何れか１つの免疫複合体。
１２０）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５のＨＣＤＲ１、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３又は４４のＨＣＤＲ２、配列番号４５、４６、４７、４８、４９、５０又は５１のＨＣＤＲ３、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７又は６８のＬＣＤＲ１、配列番号６９、７０、７１、７２、７３又は７４のＬＣＤＲ２及び配列番号７５、７６、７７、７８、７９又は８０のＬＣＤＲ３を含む、実施形態１０３～１１６の何れか１つの免疫複合体。
１２１）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；又は
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１０３～１１６及び１２０の何れか１つの免疫複合体。
１２２）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０又は６１のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７又は８８のＶＬとを含む、実施形態１０３～１１６、１２０及び１２１の何れか１つの免疫複合体。
１２３）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ
を含む、実施形態１０３～１１６及び１２０～１２２の何れか１つの免疫複合体。
１２４）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３３、８９、１６７、１７２又は１７６のＨＣＤＲ１、配列番号９０、９１、１６８、１７３又は１７７のＨＣＤＲ２、配列番号９２、９３、９４、１６９、１７４、１７８又は１８０のＨＣＤＲ３、配列番号９８、９９、１００、１８２、１８６、１８９、１９３、１９７又は２０１のＬＣＤＲ１、配列番号１０１、１０２、１０３、１８３、１８７、１９０、１９４又は１９８のＬＣＤＲ２及び配列番号１０４、１８４、１９１、１９５又は１９９のＬＣＤＲ３を含む、実施形態１０３～１１６の何れか１つの免疫複合体。
１２５）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；又は
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１０３～１１６及び１２４の何れか１つの免疫複合体。
１２６）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５又は１７９のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む、実施形態１０３～１１６、１２４及び１２５の何れか１つの免疫複合体。
１２７）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む、実施形態１０３～１１６及び１２４～１２６の何れか１つの免疫複合体。
１２８）リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号１４１のＨＣＤＲ１、配列番号１４２のＨＣＤＲ２、配列番号１４３のＨＣＤＲ３、配列番号１４４のＬＣＤＲ１、配列番号１４５のＬＣＤＲ２及び配列番号１４６のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１４７のＶＨ及び配列番号１４８のＶＬ；
ｃ）配列番号１４９のＨＣＤＲ１、配列番号１５０のＨＣＤＲ２、配列番号１５１のＨＣＤＲ３、配列番号１５２のＬＣＤＲ１、配列番号１５３のＬＣＤＲ２及び配列番号１５４のＬＣＤＲ３；又は
ｄ）配列番号１５５のＶＨ及び配列番号１５６のＶＬ
を含む、実施形態１０３～１２７の何れか１つの免疫複合体。
１２９）リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２３８のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４２のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４３のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４４のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２４５のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｆ）配列番号２４６のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｇ）配列番号２４７のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
ｈ）配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ
を含む、実施形態１０１～１２８の何れか１つの免疫複合体。
１３０）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片に複合化され、及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、第２の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片に複合化される、実施形態１０３～１２９の何れか１つの免疫複合体。
１３１）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインと、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片との間及びリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと、第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片との間に第２のリンカー（Ｌ２）をさらに含む、実施形態１３０の免疫複合体。
１３２）Ｌ２は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１３１の免疫複合体。
１３３）第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態１３０～１３２の何れか１つの免疫複合体。
１３４）実施形態１３０～１３３の何れか１つの免疫複合体であって、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む、免疫複合体。
１３５）ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態１３４の免疫複合体。
１３６）実施形態１３０～１３３の何れか１つの免疫複合体であって、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）への増強された結合をもたらす多特異性タンパク質の少なくとも１つの突然変異を含む、免疫複合体。
１３７）ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態１３６の免疫複合体。
１３８）ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態１３４～１３７の何れか１つの免疫複合体。
１３９）実施形態１３０～１３８の何れか１つの免疫複合体であって、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、多特異性タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異を含む、免疫複合体。
１４０）多特異性タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態１３９の免疫複合体。
１４１）タンパク質は、第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異を含む、実施形態１３０～１４０の何れか１つの免疫複合体。
１４２）第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態１４１の免疫複合体。
１４３）第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、以下の突然変異：
ａ）第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ及び第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ；又は
ｂ）第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ及びを第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ
を含む、実施形態１３０～１４２の何れか１つの免疫複合体。
１４４）薬剤は、治療剤又は造影剤である、実施形態１０３～１４３の何れか１つの免疫複合体。
１４５）実施形態１０３～１４３の何れか１つの免疫複合体と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
１４６）実施形態１０３～１４３の何れか１つの免疫複合体の単離された多特異性タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
１４７）実施形態１４６のポリヌクレオチドを含むベクター。
１４８）実施形態１４７のベクターを含む宿主細胞。
１４９）多特異性タンパク質が発現される条件で実施形態１４８の宿主細胞を培養することと、宿主細胞によって産生された多特異性タンパク質を回収することと、多特異性タンパク質を薬剤に複合化することとを含む、実施形態１０３～１４３の何れか１つの免疫複合体を作製する方法。
１５０）薬剤は、放射活性剤である、実施形態１～９６及び１０３～１４３の何れか１つの免疫複合体。
１５１）放射活性剤は、放射性金属イオンを含む、実施形態１５０の免疫複合体。
１５２）放射性金属イオンは、３２Ｐ、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、７７Ａｓ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１３１Ｉ、１５３Ｓｍ、１５９Ｇｄ、１６５Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、２５５Ｆｍ、２２７Ｔｈ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ又は１１１Ｉｎである、実施形態１５１の免疫複合体。
１５３）放射性金属イオンは、２２５Ａｃ、１１１Ｉｎ又は８９Ｚｒである、実施形態１５１の免疫複合体。
１５４）放射性金属イオンは、２２５Ａｃである、実施形態１５１の免疫複合体。
１５５）放射性金属イオンは、キレート部分に複合化される、実施形態１５１～１５４の何れか１つの免疫複合体。
１５６）キレート部分は、式（Ｉ）：
Figure 2023517660000046
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のそれぞれは、独立に、ＣＨＱＣＯ２Ｘであり、
Ｑは、独立に、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は（Ｃ１～Ｃ２アルキル）フェニルであり、及び
Ｘは、独立に、水素、ベンジル、Ｃ１－～４アルキルであり；
Ｚは、（ＣＨ２）ｎＹであり、
ｎは、１～１０であり、及び
Ｙは、第２のクリック反応パートナーに共有結合される求電子部分又は求核部分であり；
代わりに、Ｚは、水素であり；及び
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のそれぞれは、独立に、ＣＨＱＣＯ２Ｘであり、
Ｑは、独立に、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は（Ｃ１～Ｃ２アルキル）フェニルであり、及び
Ｘは、独立に、水素、ベンジル、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は第２のクリック反応パートナーに共有結合される求電子部分若しくは求核部分である）
の構造を有する大環状分子を含み；
代わりに、キレート剤は、開鎖リガンドを含む、実施形態１５５の免疫複合体。
１５７）キレート部分は、式（ＩＩ）：
Figure 2023517660000047
の構造又は式（ＩＩＩ）：
Figure 2023517660000048
の構造を有する大環状分子を含む、実施形態１５５の免疫複合体。
１５８）式（ＩＶ）
Figure 2023517660000049
（式中、タンパク質は、実施形態１～９６の何れか１つで定められるような単離タンパク質である）
の免疫複合体。
１５９）式（Ｖ）
Figure 2023517660000050
（式中、タンパク質は、実施形態１～９６の何れか１つで定められるような単離タンパク質である）
の免疫複合体。
１６０）対象においてＣＤ３３発現癌を処置するための手段を含む、医薬組成物。
１６１）対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させるための手段を含む、医薬組成物。
１６２）対象においてＣＤ３３発現癌の確立を予防するための手段を含む、医薬組成物。
１６３）ＣＤ３３発現癌を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置するための手段を含む、医薬組成物。
番号付き実施形態のリスト（Ｄ）：
１）対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法であって、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の単離タンパク質を投与することを含み、単離タンパク質は、ＣＤ３３に結合し、単離タンパク質は、
ａ）配列番号１８の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号２３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号２４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号２５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号２６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；若しくは
ｊ）配列番号２７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
又はそれらのＣＤ３３結合断片
を含む、方法。
２）単離タンパク質は、
ａ）それぞれ配列番号１、６及び１２；
ｂ）それぞれ配列番号２、７及び１３；
ｃ）それぞれ配列番号１、８及び１４；
ｄ）それぞれ配列番号３、９及び１３；
ｅ）それぞれ配列番号４、１０及び１５；
ｆ）それぞれ配列番号５、１１及び１６；又は
ｇ）それぞれ配列番号５、１１及び１７
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、実施形態１の方法。
３）単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態１又は２の方法。
４）単離タンパク質は、ＶＨＨである、実施形態３の方法。
５）単離タンパク質は、Ｆａｂである、実施形態３の方法。
６）単離タンパク質は、ｓｃＦｖである、実施形態３の方法。
７）単離タンパク質は、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む、実施形態１～６の何れかの方法。
８）対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法であって、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の単離タンパク質を投与することを含み、単離タンパク質は、ＣＤ３３と結合し、単離タンパク質は、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨＨを含む、方法。
９）対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法であって、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の単離タンパク質を投与することを含み、単離タンパク質は、ＣＤ３３と結合し、ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
又はそれらのＣＤ３３結合断片
を含む、方法。
１０）単離タンパク質は、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６及び４５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８及び４７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９及び４８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１及び５０；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２及び５１；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４及び５１；又は
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２及び５１
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む、実施形態９の方法。
１１）単離タンパク質は、
ａ）配列番号５２の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８１の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号５５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８４のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｆ）配列番号５７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｇ）配列番号５８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｈ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｉ）配列番号６０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３
を含む、実施形態９又は１０の方法。
１２）ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７、
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；又は
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１１の方法。
１３）単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態９～１２の何れか１つの方法。
１４）単離タンパク質は、Ｆａｂである、実施形態１３の方法。
１５）単離タンパク質は、ＶＨＨである、実施形態１３の方法。
１６）単離タンパク質は、ｓｃＦｖである、実施形態１３の方法。
１７）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態１６の方法。
１８）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態１７の方法。
１９）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１８の方法。
２０）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態１９の方法。
２１）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０又は６１のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７又は８８のＶＬとを含む、実施形態９～２０の何れか１つの方法。
２２）単離タンパク質は、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ
を含む、実施形態２１の方法。
２３）対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法であって、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の単離タンパク質を投与することを含み、単離タンパク質は、ＣＤ３３と結合し、単離タンパク質は、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ
を含む、方法。
２４）単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態２３の方法。
２５）単離タンパク質は、Ｆａｂである、実施形態２４の方法。
２６）単離タンパク質は、ＶＨＨである、実施形態２４の方法。
２７）単離タンパク質は、ｓｃＦｖである、実施形態２４の方法。
２８）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態２７の方法。
２９）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態２８の方法。
３０）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態２９の方法。
３１）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態３０の方法。
３２）対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法であって、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の単離タンパク質を投与することを含み、単離タンパク質は、ＣＤ３３と結合し、単離タンパク質は、
ａ）配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｆ）配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｇ）配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｉ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む、方法。
３３）ａ）それぞれ配列番号８９、９０及び９２；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０及び９３；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１及び９４、
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８及び１６９；
ｅ）それぞれ配列番号１７２、１７３及び１７４；
ｆ）それぞれ配列番号１７６、１７７及び１７８；
ｇ）それぞれ配列番号８９、９０及び１８０；又は
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０及び９３
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む、実施形態３２の方法。
３４）単離タンパク質は、
ａ）配列番号９５の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０５の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号９７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１０７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号１７０のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号１７１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１８８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｆ）配列番号１７５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｇ）配列番号１７９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号１９６のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１８１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２００のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２０２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３
を含む、実施形態３２又は３３の方法。
３５）単離タンパク質は、
ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態３４の方法。
３６）単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態３２～３５の何れか１つの方法。
３７）単離タンパク質は、Ｆａｂである、実施形態３６の方法。
３８）単離タンパク質は、ＶＨＨである、実施形態３６の方法。
３９）単離タンパク質は、ｓｃＦｖである、実施形態３６の方法。
４０）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態３９の方法。
４１）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態４０の方法。
４２）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態４１の方法。
４３）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態４２の方法。
４４）単離タンパク質は、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む、実施形態３２～４３の何れか１つの方法。
４５）単離タンパク質は、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む、実施形態４４の方法。
４６）対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法であって、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の単離タンパク質を投与することを含み、単離タンパク質は、ＣＤ３３と結合し、単離タンパク質は、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む、方法。
４７）単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、実施形態４６の方法。
４８）単離タンパク質は、Ｆａｂである、実施形態４７の方法。
４９）単離タンパク質は、ＶＨＨである、実施形態４７の方法。
５０）単離タンパク質は、ｓｃＦｖである、実施形態４７の方法。
５１）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態５０の方法。
５２）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態５１の方法。
５３）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態５２の方法。
５４）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態５３の方法。
５５）単離タンパク質は、半減期延長部分に複合化される、実施形態１～５４の何れか１つの方法。
５６）半減期延長部分は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、Ｉｇの断片、Ｉｇ定常領域、Ｉｇ定常領域の断片、Ｆｃ領域、トランスフェリン、アルブミン、アルブミン結合ドメイン又はポリエチレングリコールである、実施形態５５の方法。
５７）単離タンパク質は、単一特異性タンパク質である、実施形態１～５６の何れか１つの方法。
５８）単離タンパク質は、多特異性タンパク質である、実施形態１～５７の何れか１つの方法。
５９）多特異性タンパク質は、二特異性タンパク質である、実施形態５８の方法。
６０）多特異性タンパク質は、三特異性タンパク質である、実施形態５９の方法。
６１）免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又はそのＩｇ定常領域の断片をさらに含む、実施形態１～６０の何れか１つの方法。
６２）Ｉｇ定常領域の断片は、Ｆｃ領域を含む、実施形態６１の方法。
６３）Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメインを含む、実施形態６１の方法。
６４）Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ３ドメインを含む、実施形態６１の方法。
６５）Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、実施形態６１の方法。
６６）Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、実施形態６１の方法。
６７）Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、実施形態６１の方法。
６８）単離タンパク質は、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＮ末端に複合化される、実施形態６１～６７の何れか１つの方法。
６９）単離タンパク質は、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＣ末端に複合化される、実施形態６１～６７の何れか１つの方法。
７０）単離タンパク質は、第２のリンカー（Ｌ２）を介してＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片に複合化される、実施形態６１～６９の何れか１つの方法。
７１）Ｌ２は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態７０の方法。
７２）多特異性タンパク質は、リンパ球上の抗原に結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態５８～７１の何れか１つの方法。
７３）リンパ球は、Ｔ細胞である、実施形態７２の方法。
７４）Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、実施形態７２の方法。
７５）リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態７２の方法。
７６）多特異性タンパク質は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、ＴＲＧＶ９又はＮＫＧ２Ｃに結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態５８～７５の何れか１つの方法。
７７）多特異性タンパク質は、ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態７６の方法。
７８）ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号１４１の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４２のＨＣＤＲ２、配列番号１４３のＨＣＤＲ３、配列番号１４４の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１４５のＬＣＤＲ２及び配列番号１４６のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１４７のＶＨ及び配列番号１４８のＶＬ；
ｃ）配列番号１４９のＨＣＤＲ１、配列番号１５０のＨＣＤＲ２、配列番号１５１のＨＣＤＲ３、配列番号１５２のＬＣＤＲ１、配列番号１５３のＬＣＤＲ２及び配列番号１５４のＬＣＤＲ３；又は
ｄ）配列番号１５５のＶＨ及び配列番号１５６のＶＬ
を含む、実施形態７７の方法。
７９）多特異性タンパク質は、ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態７６の単離タンパク質。
８０）ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２３８のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４２のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４３のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４４のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２４５のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｆ）配列番号２４６のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｇ）配列番号２４７のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
ｈ）配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ
を含む、実施形態７９の単離タンパク質。
８１）Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態６１～８０の何れか１つの方法。
８２）Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）へのタンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む、実施形態６１～８１の何れか１つの方法。
８３）ＦｃγＲへのタンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態８２の方法。
８４）Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＦｃγＲへの増強された結合をもたらすタンパク質の少なくとも１つの突然変異を含む、実施形態６１～８１の何れか１つの方法。
８５）ＦｃγＲへのタンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態８４の方法。
８６）ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態８２～８５の何れか１つの方法。
８７）Ｉｇ定常領域の断片のＩｇ定常領域は、タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異を含む、実施形態６１～８６の何れか１つの方法。
８８）タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態８７の方法。
８９）単離タンパク質は、Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおいて少なくとも１つの突然変異を含む、実施形態６１～８８の何れか１つの方法。
９０）Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態８９の方法。
９１）単離タンパク質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態１～５４の何れか１つの方法。
９２）ＣＡＲは、
ａ）実施形態１～５４の何れか１つで定められるようなＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン；
ｂ）膜貫通ドメイン；及び
ｃ）任意選択的に少なくとも１つの同時刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、実施形態９１の方法。
９３）ＣＡＲは、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域をさらに含む、実施形態９１又は９２の方法。
９４）ａ）膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含み；及び
ｂ）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分を含む同時刺激ドメインと、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分を含む一次シグナル伝達ドメインとを含む、実施形態９１～９３の何れか１つの方法。
９５）ａ）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；
ｂ）膜貫通ドメインは、配列番号１６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；及び／又は
ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する同時刺激ドメインと、配列番号１６４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインとを含む、実施形態９１～９３の何れか１つの方法。
９６）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）構成成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー構成成分又はそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド構成成分を含む、実施形態９５の方法。
９７）対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法であって、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の単離された多特異性タンパク質を投与することを含み、単離された多特異性タンパク質は、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインを含む、方法。
９８）リンパ球抗原は、Ｔ細胞抗原である、実施形態９７の方法。
９９）Ｔ細胞抗原は、ＣＤ８＋Ｔ細胞抗原である、実施形態９７の方法。
１００）リンパ球抗原は、ＮＫ細胞抗原である、実施形態９７の方法。
１０１）リンパ球抗原は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、ＴＲＧＶ９又はＮＫＧ２Ｃである、実施形態９７～１００の何れか１つの方法。
１０２）リンパ球抗原は、ＣＤ３εである、実施形態１０１の方法。
１０３）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨを含む、実施形態９７～１０２の何れか１つの方法。
１０４）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含む、実施形態１０３の方法。
１０５）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含む、実施形態１０３の方法。
１０６）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む、実施形態１０３の方法。
１０７）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、実施形態１０６の方法。
１０８）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、実施形態１０７の方法。
１０９）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１０８の方法。
１１０）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態１０９の方法。
１１１）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１、２、３、４又は５の何れか１つのＨＣＤＲ１、配列番号６、７、８、９、１０又は１１の何れか１つのＨＣＤＲ２及び配列番号１２、１３、１４、１５、１６又は１７の何れか１つのＨＣＤＲ３を含む、実施形態９７～１１０の何れか１つの方法。
１１２）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号１、６及び１２；
ｂ）それぞれ配列番号２、７及び１３；
ｃ）それぞれ配列番号１、８及び１４；
ｄ）それぞれ配列番号３、９及び１３；
ｅ）それぞれ配列番号４、１０及び１５；
ｆ）それぞれ配列番号５、１１及び１６；又は
ｇ）それぞれ配列番号５、１１及び１７
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、９７～１１１の何れか１つの方法。
１１３）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む、実施形態９７～１１２の何れか１つの方法。
１１４）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５のＨＣＤＲ１、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３又は４４のＨＣＤＲ２、配列番号４５、４６、４７、４８、４９、５０又は５１のＨＣＤＲ３、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７又は６８のＬＣＤＲ１、配列番号６９、７０、７１、７２、７３又は７４のＬＣＤＲ２及び配列番号７５、７６、７７、７８、７９又は８０のＬＣＤＲ３を含む、実施形態９７～１１０の何れか１つの方法。
１１５）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７、
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；又は
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態９７～１１０及び１１４の何れか１つの方法。
１１６）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０又は６１のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７又は８８のＶＬとを含む、実施形態９７～１１０、１１４及び１１５の何れか１つの方法。
１１７）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ
を含む、実施形態９７～１１０及び１１４～１１６の何れか１つの方法。
１１８）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３３、８９、１６７、１７２又は１７６のＨＣＤＲ１、配列番号９０、９１、１６８、１７３又は１７７のＨＣＤＲ２、配列番号９２、９３、９４、１６９、１７４、１７８又は１８０のＨＣＤＲ３、配列番号９８、９９、１００、１８２、１８６、１８９、１９３、１９７又は２０１のＬＣＤＲ１、配列番号１０１、１０２、１０３、１８３、１８７、１９０、１９４又は１９８のＬＣＤＲ２及び配列番号１０４、１８４、１９１、１９５又は１９９のＬＣＤＲ３を含む、実施形態９７～１１０の何れか１つの方法。
１１９）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；又は
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態９７～１１０及び１１８の何れか１つの方法。
１２０）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９、１８１又は９６のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む、実施形態９７～１１０、１１８及び１１９の何れか１つの方法。
１２１）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む、実施形態９７～１１０及び１１８～１２０の何れか１つの方法。
１２２）リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号１４１のＨＣＤＲ１、配列番号１４２のＨＣＤＲ２、配列番号１４３のＨＣＤＲ３、配列番号１４４のＬＣＤＲ１、配列番号１４５のＬＣＤＲ２及び配列番号１４６のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１４７のＶＨ及び配列番号１４８のＶＬ；
ｃ）配列番号１４９のＨＣＤＲ１、配列番号１５０のＨＣＤＲ２、配列番号１５１のＨＣＤＲ３、配列番号１５２のＬＣＤＲ１、配列番号１５３のＬＣＤＲ２及び配列番号１５４のＬＣＤＲ３；又は
ｄ）配列番号１５５のＶＨ及び配列番号１５６のＶＬ
を含む、実施形態９７～１２１の何れか１つの方法。
１２３）ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２３８のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４２のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４３のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４４のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２４５のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｆ）配列番号２４６のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｇ）配列番号２４７のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
ｈ）配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ
を含む、実施形態９５～１１９の何れか１つの方法。
１２４）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片に複合化され、及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、第２の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片に複合化される、実施形態９７～１２３の何れか１つの方法。
１２５）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインと、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片との間及びリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと、第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片との間に第２のリンカー（Ｌ２）をさらに含む、実施形態１２４の方法。
１２６）Ｌ２は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１２５の方法。
１２７）第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態１２４～１３６の何れか１つの方法。
１２８）第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む、実施形態１２４～１２７の何れか１つの方法。
１２９）ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態１２８の方法。
１３０）第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）への増強された結合をもたらす多特異性タンパク質の少なくとも１つの突然変異を含む、実施形態１２４～１２７の何れか１つの方法。
１３１）ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態１３０の方法。
１３２）ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態１２８～１３１の何れか１つの方法。
１３３）第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、多特異性タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異を含む、実施形態１２４～１３２の何れか１つの方法。
１３４）多特異性タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態１３３の方法。
１３５）第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインの断片における少なくとも１つの突然変異を含む、実施形態１２４～１３４の何れか１つの方法。
１３６）第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ，Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態１３５の方法。
１３７）第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、以下の突然変異：
ａ）第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ及び第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ；又は
ｂ）第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ及びを第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ
を含む、実施形態１２４～１３６の何れか１つの方法。
１３８）対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法であって、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に治療的有効量の免疫複合体を投与することを含み、免疫複合体は、薬剤に複合化される実施形態１～１３７の何れか１つで定められるような単離タンパク質を含む、方法。
１３９）薬剤は、放射活性剤である、実施形態１３８の方法。
１４０）放射活性剤は、放射性金属イオンを含む、実施形態１３９の免疫複合体。
１４１）放射性金属イオンは、３２Ｐ、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、７７Ａｓ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１３１Ｉ、１５３Ｓｍ、１５９Ｇｄ、１６５Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、２５５Ｆｍ、２２７Ｔｈ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ又は１１１Ｉｎである、実施形態１４０の免疫複合体。
１４２）放射性金属イオンは、２２５Ａｃ、１１１Ｉｎ又は８９Ｚｒである、実施形態１４０の免疫複合体。
１４３）放射性金属イオンは、２２５Ａｃである、実施形態１４０の免疫複合体。
１４４）放射性金属イオンは、キレート部分に複合化される、実施形態１４０～１４３の何れか１つの免疫複合体。
１４５）キレート部分は、式（Ｉ）：
Figure 2023517660000051
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のそれぞれは、独立に、ＣＨＱＣＯ２Ｘであり、
Ｑは、独立に、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は（Ｃ１～Ｃ２アルキル）フェニルであり、及び
Ｘは、独立に、水素、ベンジル、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；及び
Ｚは、（ＣＨ２）ｎＹであり、
ｎは、１～１０であり、及び
Ｙは、第２のクリック反応パートナーに共有結合される求電子部分又は求核部分であり；
代わりに、Ｚは、水素であり；及び
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のそれぞれは、独立に、ＣＨＱＣＯ２Ｘであり、
Ｑは、独立に、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は（Ｃ１～Ｃ２アルキル）フェニルであり、及び
Ｘは、独立に、水素、ベンジル、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は第２のクリック反応パートナーに共有結合される求電子部分若しくは求核部分である）
の構造を有する大環状分子を含み；
代わりに、キレート剤は、開鎖リガンドを含む、実施形態１４４の免疫複合体。
１４６）キレート部分は、式（ＩＩ）：
Figure 2023517660000052
の構造又は式（ＩＩＩ）：
Figure 2023517660000053
の構造を有する大環状分子を含む、実施形態１４４の免疫複合体。
１４７）式（ＩＶ）
Figure 2023517660000054
（式中、タンパク質は、実施形態１～９６の何れか１つで定められるような単離タンパク質である）
の免疫複合体。
１４８）式（Ｖ）
Figure 2023517660000055
（式中、タンパク質は実施形態１～９６の何れか１つで定められるような単離タンパク質である）
の免疫複合体。
１４９）対象においてＣＤ３３発現細胞の量を減少させるために有効であり、ＣＤ３３発現細胞は、癌性細胞であるか、又はＣＤ３３発現細胞は、非癌性細胞である、実施形態１～１４８の何れか１つの方法。
１５０）対象においてＣＤ３３発現癌の確立を予防するために有効である、実施形態１～１４９の何れか１つの方法。
１５１）ＣＤ３３発現癌は、血液癌である、実施形態１４８～１５０の何れか１つの方法。
１５２）血液癌は、白血病、リンパ腫又は多発性骨髄腫である、実施形態１５１の方法。
１５３）血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である、実施形態１５１の方法。
１５４）単離タンパク質又は単離された多特異性タンパク質は、第２の治療剤と組み合わせて投与される、実施形態１４８～１５３の何れか１つの方法。
１５５）第２の治療剤は、手術、化学療法、アンドロゲン欠乏療法若しくは放射線又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態１５４の方法。
１５６）対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法であって、対象においてＣＤ３３発現癌細胞に治療剤を標的化するための手段を対象に投与することを含む、方法。
１５７）対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させる方法であって、対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の１つ以上に治療剤を標的化するための手段を対象に投与することを含む、方法。
１５８）対象においてＣＤ３３発現癌の確立を予防するための手段を含む医薬組成物であって、方法は、対象においてＣＤ３３発現細胞に治療剤を標的化するための手段を対象に投与することを含む、医薬組成物。
１５９）ＣＤ３３発現癌を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置するための手段を含む医薬組成物であって、方法は、対象においてＣＤ３３発現細胞に治療剤を標的化するための手段を対象に投与することを含む、医薬組成物。
番号付き実施形態のリスト（Ｅ）：
１）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
ａ）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン；
ｂ）膜貫通ドメイン；及び
ｃ）任意選択的に少なくとも１つの同時刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
２）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域をさらに含む、実施形態１のＣＡＲ。
３）ａ）膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含み；及び
ｂ）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分を含む同時刺激ドメインと、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分を含む一次シグナル伝達ドメインとを含む、実施形態１又は２のＣＡＲ。
４）ａ）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；
ｂ）膜貫通ドメインは、配列番号１６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；及び／又は
ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する同時刺激ドメインと、配列番号１６４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインとを含む、実施形態２又は３のＣＡＲ。
５）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１、２、３、４又は５の何れか１つのＨＣＤＲ１、配列番号６、７、８、９、１０又は１１の何れか１つのＨＣＤＲ２及び配列番号１２、１３、１４、１５、１６又は１７の何れか１つのＨＣＤＲ３を含む、実施形態１～４の何れか１つのＣＡＲ。
６）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号１、６及び１２；
ｂ）それぞれ配列番号２、７及び１３；
ｃ）それぞれ配列番号１、８及び１４；
ｄ）それぞれ配列番号３、９及び１３；
ｅ）それぞれ配列番号４、１０及び１５；
ｆ）それぞれ配列番号５、１１及び１６；又は
ｇ）それぞれ配列番号５、１１及び１７
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３を含む、実施形態１～５の何れか１つのＣＡＲ。
７）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７の何れか１つのＶＨを含む、実施形態１～６の何れか１つのＣＡＲ。
８）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５のＨＣＤＲ１、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３又は４４のＨＣＤＲ２、配列番号４５、４６、４７、４８、４９、５０又は５１のＨＣＤＲ３、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、６７又は６８のＬＣＤＲ１、配列番号６９、７０、７１、７２、７３又は７４のＬＣＤＲ２及び配列番号７５、７６、７７、７８、７９又は８０のＬＣＤＲ３を含む、実施形態１～４の何れか１つのＣＡＲ。
９）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号２８、３６、４５、６２、６９及び７５；
ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３０、３８、４７、６４、７１及び７７；
ｄ）それぞれ配列番号３１、３９、４８、６５、７２及び７８；
ｅ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｆ）それぞれ配列番号３３、４１、５０、６７、７３及び７９；
ｇ）それぞれ配列番号３４、４２、５１、６８、７４及び８０；
ｈ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｉ）それぞれ配列番号３４、４４、５１、６８、７４及び８０；又は
ｊ）それぞれ配列番号３５、４２、５１、６８、７４及び８０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１～４及び８の何れか１つのＣＡＲ。
１０）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０又は６１のＶＨと、配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７又は８８のＶＬとを含む、実施形態１～４、８及び９の何れか１つのＣＡＲ。
１１）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号５２のＶＨ及び配列番号８１のＶＬ；
ｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｃ）配列番号５４のＶＨ及び配列番号８３のＶＬ；
ｄ）配列番号５５のＶＨ及び配列番号８４のＶＬ；
ｅ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｆ）配列番号５７のＶＨ及び配列番号８６のＶＬ；
ｇ）配列番号５８のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｈ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｉ）配列番号６０のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；又は
ｊ）配列番号６１のＶＨ及び配列番号８８のＶＬ
を含む、実施形態１～４及び８～１０の何れか１つのＣＡＲ。
１２）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号３３、８９、１６７、１７２又は１７６のＨＣＤＲ１、配列番号９０、９１、１６８、１７３又は１７７のＨＣＤＲ２、配列番号９２、９３、９４、１６９、１７４、１７８又は１８０のＨＣＤＲ３、配列番号９８、９９、１００、１８２、１８６、１８９、１９３、１９７のＬＣＤＲ１、配列番号１０１、１０２、１０３、１８３、１８７、１９０、１９４又は１９８のＬＣＤＲ２及び配列番号１０４、１８４、１９１、１９５又は１９９のＬＣＤＲ３を含む、実施形態１～４の何れか１つのＣＡＲ。
１３）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）それぞれ配列番号８９、９０、９２、９８、１０１及び１０４；
ｂ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、９９、１０２及び１０４；
ｃ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１００、１０３及び１０４；
ｄ）それぞれ配列番号１６７、１６８、１６９、１８２、１８３及び１８４；
ｅ）それぞれ配列番号３３、９１、９４、１８６、１８７及び１０４；
ｆ）それぞれ配列番号１７２、１７３、１７４、１８９、１９０及び１９１；
ｇ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１９３、１９４及び１９５；
ｈ）それぞれ配列番号８９、９０、１８０、１９７、１９８及び１９９；又は
ｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９３、２０１、１０２及び１０４
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１～４及び１２の何れか１つのＣＡＲ。
１４）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、配列番号９５、９６、９７、１７０、１７１、１７５、１７９又は１８１のＶＨと、配列番号１０５、１０６、１０７、１８５、１８８、１９２、１９６、２００又は２０２のＶＬとを含む、実施形態１～４、１２及び１３の何れか１つのＣＡＲ。
１５）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号９５のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬ；
ｂ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号１０６のＶＬ；
ｃ）配列番号９７のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬ；
ｄ）配列番号１７０のＶＨ及び配列番号１８５のＶＬ；
ｅ）配列番号１７１のＶＨ及び配列番号１８８のＶＬ；
ｆ）配列番号１７５のＶＨ及び配列番号１９２のＶＬ；
ｇ）配列番号１７９のＶＨ及び配列番号１９６のＶＬ；
ｈ）配列番号１８１のＶＨ及び配列番号２００のＶＬ；又は
ｉ）配列番号９６のＶＨ及び配列番号２０２のＶＬ
を含む、実施形態１～４及び１２～１４の何れか１つのＣＡＲ。
１６）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ＶＨＨである、実施形態１～１５の何れか１つのＣＡＲ。
１７）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである、実施形態１～１６の何れか１つのＣＡＲ。
１８）ｓｃＦｖは、ＶＬとＶＨとの間に第１のリンカー（Ｌ１）を含む、実施形態１７のＣＡＲ。
１９）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１８のＣＡＲ。
２０）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、実施形態１９のＣＡＲ。
２１）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインは、シグナルポリペプチドをさらに含む、実施形態１～２０の何れかのＣＡＲ。
２２）シグナルポリペプチドは、配列番号１６６のアミノ酸配列を含む、実施形態２１のＣＡＲ。
２３）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）構成成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー構成成分及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド構成成分を含む、実施形態１～２２の何れか１つのＣＡＲ。
２４）ＣＤ１３７構成成分は、配列番号１６３のアミノ酸配列を含む、実施形態３～２３の何れか１つのＣＡＲ。
２５）ＣＤ３ｚ構成成分は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含む、実施形態３～２４の何れか１つのＣＡＲ。
２６）細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む、実施形態３～２５の何れか１つのＣＡＲ。
２７）ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドは、配列番号１６２のアミノ酸配列を含む、実施形態３～２６の何れか１つのＣＡＲ。
２８）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む、実施形態３～２７の何れか１つのＣＡＲ。
２９）ＣＡＲは多特異性タンパク質である、実施形態１～２８の何れか１つのＣＡＲ。
３０）多特異性タンパク質は、二特異性タンパク質である、実施形態２９のＣＡＲ。
３１）多特異性タンパク質は、三特異性タンパク質である、実施形態３０のＣＡＲ。
３２）多特異性タンパク質は、リンパ球上の抗原に結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態２９～３１の何れか１つのＣＡＲ。
３３）リンパ球は、Ｔ細胞である、実施形態３２のＣＡＲ。
３４）Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、実施形態３２のＣＡＲ。
３５）リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態３２のＣＡＲ。
３６）多特異性タンパク質は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、ＴＲＧＶ９又はＮＫＧ２Ｃに結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態２９～３５の何れか１つのＣＡＲ。
３７）多特異性タンパク質は、ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態３６のＣＡＲ。
３８）ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号１４１の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４２のＨＣＤＲ２、配列番号１４３のＨＣＤＲ３、配列番号１４４の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１４５のＬＣＤＲ２及び配列番号１４６のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号１４７のＶＨ及び配列番号１４８のＶＬ；
ｃ）配列番号１４９のＨＣＤＲ１、配列番号１５０のＨＣＤＲ２、配列番号１５１のＨＣＤＲ３、配列番号１５２のＬＣＤＲ１、配列番号１５３のＬＣＤＲ２及び配列番号１５４のＬＣＤＲ３；又は
ｄ）配列番号１５５のＶＨ及び配列番号１５６のＶＬ
を含む、実施形態３７のＣＡＲ。
３９）多特異性タンパク質は、ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態３６のＣＡＲ。
４０）ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインは、
ａ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２３８のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４２のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４３のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２３６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３７のＨＣＤＲ２、配列番号２４４のＨＣＤＲ３、配列番号２３９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４０のＬＣＤＲ２及び配列番号２４１のＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２４５のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｆ）配列番号２４６のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
ｇ）配列番号２４７のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
ｈ）配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ
を含む、実施形態３９のＣＡＲ。
４１）実施形態１～４０の何れか１つのＣＡＲを発現する、単離されたリンパ球。
４２）Ｔリンパ球である、実施形態４１の単離されたリンパ球。
４３）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態４１の単離されたリンパ球。
４４）実施形態１～４０の何れか１つのＣＡＲをコードする、単離されたポリヌクレオチド。
４５）実施形態４４のポリヌクレオチドを含むベクター。
４６）実施形態４４のポリヌクレオチド又は実施形態４５のベクターを含む宿主細胞。
４７）実施形態４１～４３の何れか１つのリンパ球と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
４８）ＣＤ３３発現癌を有する対象を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療的有効量の実施形態４１～４３の何れか１つのリンパ球を投与することを含み、それにより、リンパ球は、対象におけるＣＤ３３発現癌の死滅に介在する、方法。
４９）ＣＤ３３発現癌は、血液癌である、実施形態４８の方法。
５０）ＣＤ３３発現癌は、白血病、リンパ腫又は多発性骨髄腫である、実施形態４９の方法。
５１）ＣＤ３３発現癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である、実施形態５０の方法。
５２）癌細胞の標的化された死滅の方法であって、実施形態４１～４３の何れか１つのリンパ球と癌細胞を接触させることを含み、それにより、リンパ球は、癌細胞の標的化された死滅を誘導する、方法。
５３）癌細胞は、血液癌である、実施形態５２の方法。
５４）ＣＤ３３発現癌は、白血病、リンパ腫又は多発性骨髄腫である、実施形態５３の方法。
５５）ＣＤ３３発現癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である、実施形態５４の方法。
５６）対象において癌の存在を検出する方法であって、
ａ）対象から得られた細胞試料を実施形態１～４０の何れか１つのＣＡＲと接触させ、それによりＣＡＲ－細胞複合体を形成することと、
ｂ）ＣＡＲ－細胞複合体を検出することであって、ＣＡＲ－細胞複合体の検出は、対象における癌の存在を示す、検出することと
を含む方法。
５７）癌細胞は、血液癌である、実施形態５６の方法。
５８）ＣＤ３３発現癌は、白血病、リンパ腫又は多発性骨髄腫である、実施形態５７の方法。
５９）ＣＤ３３発現癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である、実施形態５８の方法。
６０）実施形態１～４０の何れか１つのＣＡＲを含むキット。
６１）対象においてＣＤ３３発現癌を処置するための手段を含む医薬組成物。
６２）対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させるための手段を含む医薬組成物。
６３）対象においてＣＤ３３発現癌の確立を予防するための手段を含む医薬組成物。
６４）ＣＤ３３発現癌を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置するための手段を含む医薬組成物。
６５）対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法であって、対象においてＣＤ３３発現癌細胞に治療剤を標的化するための手段を対象に投与することを含む、方法。
６６）対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の量を減少させる方法であって、対象においてＣＤ３３発現腫瘍細胞の１つ以上に治療剤を標的化するための手段を対象に投与することを含む、方法。
６７）対象においてＣＤ３３発現癌の確立を予防するための手段を含む医薬組成物であって、方法は、対象においてＣＤ３３発現細胞に治療剤を標的化するための手段を対象に投与することを含む、医薬組成物。
６８）ＣＤ３３発現癌を発症するリスクがある対象において非癌性状態を処置するための手段を含む医薬組成物であって、方法は、対象においてＣＤ３３発現細胞に治療剤を標的化するための手段を対象に投与することを含む、医薬組成物。
番号付き実施形態のリスト（Ｆ）：
１）ＣＤ３３に結合する単離タンパク質であって、
ａ）配列番号５３の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
ｆ）配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
を含む単離タンパク質。
２）ａ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
ｂ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
ｃ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
ｄ）それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９；
ｅ）それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０；又は
ｆ）それぞれ配列番号２５５、２５８及び２６１
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む、請求項１の単離タンパク質。
３）ＣＤ３３に結合する単離タンパク質であって、
ａ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
ｂ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
ｃ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
ｄ）それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９；
ｅ）それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０；又は
ｆ）それぞれ配列番号２５５、２５８及び２６１
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む単離タンパク質。
４）ａ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｃ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｄ）配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
ｅ）配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は
ｆ）配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、請求項１又は２の単離タンパク質。
５）ａ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
ｂ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
ｃ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
ｄ）それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９；
ｅ）それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６；又は
ｆ）それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、請求項３又は４の単離タンパク質。
６）単離タンパク質は、配列番号５３、５６、５９、２６２、２６３、２６４、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２又は３８２のＶＨと、配列番号８２、８５、８７、２７１、２７２、２７３、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７又は３９８のＶＬとを含む、請求項１～５の何れか一項に記載の単離タンパク質。
７）ａ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｂ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｄ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｅ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｆ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ；
ｇ）配列番号２９１のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｈ）配列番号２９２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｉ）配列番号２９３のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｊ）配列番号２９４のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｋ）配列番号２９５のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２９６のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｍ）配列番号２９７のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｎ）配列番号２９８のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｏ）配列番号２９９のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｐ）配列番号３００のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｑ）配列番号３０１のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｒ）配列番号３０２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｓ）配列番号３０３のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｔ）配列番号３０４のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｕ）配列番号３０５のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｖ）配列番号３０６のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｗ）配列番号３０７のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｘ）配列番号３０８のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｙ）配列番号３０９のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｚ）配列番号３１０のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａａ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１１のＶＬ；
ａｂ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１２のＶＬ；
ａｃ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１３のＶＬ；
ａｄ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１４のＶＬ；
ａｅ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１５のＶＬ；
ａｆ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１６のＶＬ；
ａｇ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１７のＶＬ；
ａｈ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１８のＶＬ；
ａｉ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１９のＶＬ；
ａｊ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２０のＶＬ；
ａｋ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２１のＶＬ；
ａｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２２のＶＬ；
ａｍ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２３のＶＬ；
ａｎ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２４のＶＬ；
ａｏ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２５のＶＬ；
ａｐ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２６のＶＬ；
ａｑ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２７のＶＬ；
ａｒ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２８のＶＬ；
ａｓ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２９のＶＬ；
ａｔ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３０のＶＬ；
ａｕ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３１のＶＬ；
ａｖ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３２のＶＬ；
ａｗ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３３のＶＬ；
ａｘ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３４のＶＬ；
ａｙ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３５のＶＬ；
ａｚ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３６のＶＬ；
ｂａ）配列番号３３７のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｂ）配列番号３３８のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｃ）配列番号３３９のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｄ）配列番号３４０のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｅ）配列番号３４１のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｆ）配列番号３４２のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｇ）配列番号３４３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｈ）配列番号３４４のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｉ）配列番号３４５のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｊ）配列番号３４６のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｋ）配列番号３４７のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｌ）配列番号３４８のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｍ）配列番号３４９のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｎ）配列番号３５０のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｏ）配列番号３５１のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｐ）配列番号３５２のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｑ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５３のＶＬ；
ｂｒ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５４のＶＬ；
ｂｓ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５５のＶＬ；
ｂｔ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５６のＶＬ；
ｂｕ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５７のＶＬ；
ｂｖ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５８のＶＬ；
ｂｗ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５９のＶＬ；
ｂｘ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６０のＶＬ；
ｂｙ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６１のＶＬ；
ｂｚ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６２のＶＬ；
ｃａ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６３のＶＬ；
ｃｂ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６４のＶＬ；
ｃｃ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６５のＶＬ；
ｃｄ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６６のＶＬ；
ｃｅ）配列番号３６７のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｆ）配列番号３６８のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｇ）配列番号３６９のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｈ）配列番号３７０のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｉ）配列番号３７１のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｊ）配列番号３７２のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｋ）配列番号３７３のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｌ）配列番号３７４のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｍ）配列番号３７５のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｎ）配列番号３７６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｏ）配列番号３７７のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｐ）配列番号３７８のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｑ）配列番号３７９のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｒ）配列番号３８０のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｓ）配列番号３８１のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｔ）配列番号３８２のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｕ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８３のＶＬ；
ｃｖ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８４のＶＬ；
ｃｗ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８５のＶＬ；
ｃｘ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８６のＶＬ；
ｃｙ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８７のＶＬ；
ｃｚ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８８のＶＬ；
ｄａ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８９のＶＬ；
ｄｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９０のＶＬ；
ｄｃ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９１のＶＬ；
ｄｄ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９２のＶＬ；
ｄｅ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９３のＶＬ；
ｄｆ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９４のＶＬ；
ｄｇ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９５のＶＬ；
ｄｈ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９６のＶＬ；
ｄｉ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９７のＶＬ；又は
ｄｊ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９８のＶＬ
を含む、請求項６に記載の単離タンパク質。
８）ＣＤ３３に結合する単離タンパク質であって、
ａ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
ｂ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
ｄ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｅ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｆ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ；
ｇ）配列番号２９１のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｈ）配列番号２９２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｉ）配列番号２９３のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｊ）配列番号２９４のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｋ）配列番号２９５のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｌ）配列番号２９６のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｍ）配列番号２９７のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｎ）配列番号２９８のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｏ）配列番号２９９のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｐ）配列番号３００のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｑ）配列番号３０１のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｒ）配列番号３０２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｓ）配列番号３０３のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｔ）配列番号３０４のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｕ）配列番号３０５のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｖ）配列番号３０６のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｗ）配列番号３０７のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｘ）配列番号３０８のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｙ）配列番号３０９のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ｚ）配列番号３１０のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
ａａ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１１のＶＬ；
ａｂ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１２のＶＬ；
ａｃ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１３のＶＬ；
ａｄ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１４のＶＬ；
ａｅ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１５のＶＬ；
ａｆ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１６のＶＬ；
ａｇ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１７のＶＬ；
ａｈ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１８のＶＬ；
ａｉ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１９のＶＬ；
ａｊ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２０のＶＬ；
ａｋ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２１のＶＬ；
ａｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２２のＶＬ；
ａｍ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２３のＶＬ；
ａｎ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２４のＶＬ；
ａｏ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２５のＶＬ；
ａｐ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２６のＶＬ；
ａｑ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２７のＶＬ；
ａｒ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２８のＶＬ；
ａｓ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２９のＶＬ；
ａｔ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３０のＶＬ；
ａｕ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３１のＶＬ；
ａｖ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３２のＶＬ；
ａｗ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３３のＶＬ；
ａｘ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３４のＶＬ；
ａｙ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３５のＶＬ；
ａｚ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３６のＶＬ；
ｂａ）配列番号３３７のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｂ）配列番号３３８のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｃ）配列番号３３９のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｄ）配列番号３４０のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｅ）配列番号３４１のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｆ）配列番号３４２のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｇ）配列番号３４３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｈ）配列番号３４４のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｉ）配列番号３４５のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｊ）配列番号３４６のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｋ）配列番号３４７のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｌ）配列番号３４８のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｍ）配列番号３４９のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｎ）配列番号３５０のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｏ）配列番号３５１のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｐ）配列番号３５２のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
ｂｑ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５３のＶＬ；
ｂｒ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５４のＶＬ；
ｂｓ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５５のＶＬ；
ｂｔ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５６のＶＬ；
ｂｕ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５７のＶＬ；
ｂｖ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５８のＶＬ；
ｂｗ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５９のＶＬ；
ｂｘ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６０のＶＬ；
ｂｙ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６１のＶＬ；
ｂｚ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６２のＶＬ；
ｃａ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６３のＶＬ；
ｃｂ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６４のＶＬ；
ｃｃ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６５のＶＬ；
ｃｄ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６６のＶＬ；
ｃｅ）配列番号３６７のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｆ）配列番号３６８のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｇ）配列番号３６９のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｈ）配列番号３７０のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｉ）配列番号３７１のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｊ）配列番号３７２のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｋ）配列番号３７３のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｌ）配列番号３７４のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｍ）配列番号３７５のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｎ）配列番号３７６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｏ）配列番号３７７のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｐ）配列番号３７８のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｑ）配列番号３７９のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｒ）配列番号３８０のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｓ）配列番号３８１のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｔ）配列番号３８２のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
ｃｕ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８３のＶＬ；
ｃｖ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８４のＶＬ；
ｃｗ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８５のＶＬ；
ｃｘ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８６のＶＬ；
ｃｙ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８７のＶＬ；
ｃｚ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８８のＶＬ；
ｄａ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８９のＶＬ；
ｄｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９０のＶＬ；
ｄｃ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９１のＶＬ；
ｄｄ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９２のＶＬ；
ｄｅ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９３のＶＬ；
ｄｆ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９４のＶＬ；
ｄｇ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９５のＶＬ；
ｄｈ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９６のＶＬ；
ｄｉ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９７のＶＬ；又は
ｄｊ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９８のＶＬ
を含む単離タンパク質。
９）単離タンパク質は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、請求項１～８の何れか一項に記載の単離タンパク質。
１０）Ｆａｂである、請求項９に記載の単離タンパク質。
１１）ｓｃＦｖである、請求項９に記載の単離タンパク質。
１２）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、請求項１１に記載の単離タンパク質。
１３）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、請求項１２に記載の単離タンパク質。
１４）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の単離タンパク質。
１５）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の単離タンパク質。
１６）配列番号２１３、２１６、２１９、２７４、２７５又は２７６のアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の単離タンパク質。
１７）半減期延長部分に複合化される、請求項１～１６の何れか一項に記載の単離タンパク質。
１８）半減期延長部分は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、Ｉｇの断片、Ｉｇ定常領域、Ｉｇ定常領域の断片、Ｆｃ領域、トランスフェリン、アルブミン、アルブミン結合ドメイン又はポリエチレングリコールである、請求項１７に記載の単離タンパク質。
１９）単一特異性タンパク質である、請求項１～１８の何れか一項に記載の単離タンパク質。
２０）多特異性タンパク質である、請求項１～１９の何れか一項に記載の単離タンパク質。
２１）多特異性タンパク質は、二特異性タンパク質である、請求項２０に記載の単離タンパク質。
２２）多特異性タンパク質は、三特異性タンパク質である、請求項２０に記載の単離タンパク質。
２３）免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又はそのＩｇ定常領域の断片をさらに含む、請求項１～２２の何れか一項に記載の単離タンパク質。
２４）Ｉｇ定常領域の断片は、Ｆｃ領域を含む、請求項２３に記載の単離タンパク質。
２５）Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメインを含む、請求項２３に記載の単離タンパク質。
２６）Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ３ドメインを含む、請求項２３に記載の単離タンパク質。
２７）Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、請求項２３に記載の単離タンパク質。
２８）Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、請求項２３に記載の単離タンパク質。
２９）Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、請求項２３に記載の単離タンパク質。
３０）Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＮ末端に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む、請求項２３～２９の何れか一項に記載の単離タンパク質。
３１）Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＣ末端に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む、請求項２３～２９の何れか一項に記載の単離タンパク質。
３２）第２のリンカー（Ｌ２）を介してＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片に複合化されるＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む、請求項２３～３１の何れか一項に記載の単離タンパク質。
３３）Ｌ２は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の単離タンパク質。
３４）多特異性タンパク質は、リンパ球上の抗原に結合する抗原結合ドメインを含む、請求項２０～３３の何れか一項に記載の単離タンパク質。
３５）リンパ球は、Ｔ細胞である、請求項３４に記載の単離タンパク質。
３６）Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項３５に記載の単離タンパク質。
３７）リンパ球は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項３４に記載の単離タンパク質。
３８）多特異性タンパク質は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、ＴＲＧＶ９又はＮＫＧ２Ｃに結合する抗原結合ドメインを含む、請求項２０～３７の何れか一項に記載の単離タンパク質。
３９）多特異性タンパク質は、ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインを含む、請求項３８に記載の単離タンパク質。
４０）多特異性タンパク質は、ＴＲＧＶ９に結合する抗原結合ドメインを含む、請求項３８に記載の単離タンパク質。
４１）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨを含む、請求項３４～４０の何れか一項に記載の単離タンパク質。
４２）ａ）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含む；
ｂ）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含む；
ｃ）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む；又は
ｄ）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含む、請求項４１に記載の単離タンパク質。
４３）Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプであり、任意選択的にＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１である、請求項２３～４２の何れか一項に記載の単離タンパク質。
４４）Ｉｇ定常領域の断片は、配列番号２７７又は２７８の配列を有する、請求項４３に記載の単離タンパク質。
４５）請求項２３～４３の何れか一項に記載の単離タンパク質であって、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）へのタンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む、単離タンパク質。
４６）ＦｃγＲへのタンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項４５に記載の単離タンパク質。
４７）請求項２３～４３の何れか一項に記載の単離タンパク質であって、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＦｃγＲへの増強された結合をもたらすタンパク質の少なくとも１つの突然変異を含む、単離タンパク質。
４８）ＦｃγＲへのタンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項４７に記載の単離タンパク質。
４９）ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ又はそれらの任意の組み合わせである、請求項４５～４８の何れか一項に記載の単離タンパク質。
５０）請求項２３～４９の何れか一項に記載の単離タンパク質であって、Ｉｇ定常領域の断片のＩｇ定常領域は、タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異を含む、単離タンパク質。
５１）タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項５０に記載の単離タンパク質。
５２）Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおいて少なくとも１つの突然変異を含む、請求項２３～５１の何れか一項に記載の単離タンパク質。
５３）Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項５２に記載の単離タンパク質。
５４）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインを含む単離された多特異性タンパク質であって、ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、請求項１～１６の何れか一項で定められるような結合ドメインを含む、単離された多特異性タンパク質。
５５）リンパ球抗原は、Ｔ細胞抗原である、請求項５４の単離された多特異性タンパク質。
５６）Ｔ細胞抗原は、ＣＤ８＋Ｔ細胞抗原である、請求項５５に記載の単離された多特異性タンパク質。
５７）リンパ球抗原は、ＮＫ細胞抗原である、請求項５４に記載の単離された多特異性タンパク質。
５８）リンパ球抗原は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、ＴＲＧＶ９又はＮＫＧ２Ｃである、請求項５４～５７の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質。
５９）リンパ球抗原は、ＣＤ３εである、請求項５８に記載の単離された多特異性タンパク質。
６０）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨを含む、請求項５４～５９の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質。
６１）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含む、請求項６０に記載の単離された多特異性タンパク質。
６２）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含む、請求項６０に記載の単離された多特異性タンパク質。
６３）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む、請求項６０に記載の単離された多特異性タンパク質。
６４）ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又はＶＬ、Ｌ１及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、請求項６０又は６３に記載の単離された多特異性タンパク質。
６５）Ｌ１は、
ａ）約５～５０アミノ酸；
ｂ）約５～４０アミノ酸；
ｃ）約１０～３０アミノ酸；又は
ｄ）約１０～２０アミノ酸
を含む、請求項６４に記載の単離された多特異性タンパク質。
６６）Ｌ１は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、請求項６５に記載の単離された多特異性タンパク質。
６７）Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、請求項６６に記載の単離された多特異性タンパク質。
６８）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片に複合化され、及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、第２の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片に複合化される、請求項５４～６７の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質。
６９）ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメインと、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片との間及びリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと、第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片との間に第２のリンカー（Ｌ２）をさらに含む、請求項６８に記載の単離された多特異性タンパク質。
７０）Ｌ２は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、請求項６９に記載の単離された多特異性タンパク質。
７１）第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプである、請求項６８～７０の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質。
７２）請求項６８～７１に記載の単離された多特異性タンパク質であって、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含む、単離された多特異性タンパク質。
７３）ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項７２に記載の単離された多特異性タンパク質。
７４）請求項６８～７１の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質であって、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）への増強された結合をもたらす多特異性タンパク質の少なくとも１つの突然変異を含む、単離された多特異性タンパク質。
７５）ＦｃγＲへの多特異性タンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項７４に記載の単離された多特異性タンパク質。
７６）ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ又はそれらの任意の組み合わせである、請求項７２～７５の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質。
７７）請求項６７～７６の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質であって、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、多特異性タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異を含む、単離された多特異性タンパク質。
７８）多特異性タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項７７に記載の単離された多特異性タンパク質。
７９）第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異を含む、請求項６８～７８の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質。
８０）第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける又は第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ，Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項７９に記載の単離された多特異性タンパク質。
８１）第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、以下の突然変異：
第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ及び第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ；又は
第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ及びを第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ
を含む、請求項６８～８０の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質。
８２）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項１～１６の何れか一項に記載の単離タンパク質。
８３）ＣＡＲは、
ａ）請求項１～１６の何れか一項に記載のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン；
ｂ）膜貫通ドメイン；及び
ｃ）任意選択的に少なくとも１つの同時刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、請求項８２に記載の単離タンパク質。
８４）ＣＡＲは、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域をさらに含む、請求項８２又は８３に記載の単離タンパク質。
８５）ａ）膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含み；及び
ｂ）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分を含む同時刺激ドメインと、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分を含む一次シグナル伝達ドメインとを含む、請求項８２～８４の何れか一項に記載の単離タンパク質。
８６）ａ）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；
ｂ）膜貫通ドメインは、配列番号１６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；及び／又は
ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する同時刺激ドメインと、配列番号１６４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインとを含む、請求項８２～８４の何れか一項に記載の単離タンパク質。
８７）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）構成成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー構成成分又はそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド構成成分を含む、請求項８６に記載の単離タンパク質。
８８）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
ａ）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン；
ｂ）膜貫通ドメイン；及び
ｃ）任意選択的に少なくとも１つの同時刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインは、請求項１～１６、２０～２２又は３４～４０の何れか一項で定められるような結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
８９）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域をさらに含む、請求項８８に記載のＣＡＲ。
９０）ａ）膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含み；及び
ｂ）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分を含む同時刺激ドメインと、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分を含む一次シグナル伝達ドメインとを含む、請求項８８又は８９に記載のＣＡＲ。
９１）ｄ）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；
ｅ）膜貫通ドメインは、配列番号１６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；及び／又は
ｆ）細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する同時刺激ドメインと、配列番号１６４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインとを含む、請求項８９又は９０に記載のＣＡＲ。
９２）ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインは、シグナルポリペプチドをさらに含む、請求項８８～９１の何れか一項に記載のＣＡＲ。
９３）シグナルポリペプチドは、配列番号１６６のアミノ酸配列を含む、請求項９２に記載のＣＡＲ。
９４）細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）構成成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー構成成分及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド構成成分を含む、請求項８８～９３の何れか一項に記載のＣＡＲ。
９５）ＣＤ１３７構成成分は、配列番号１６３のアミノ酸配列を含む、請求項９０～９４の何れか一項に記載のＣＡＲ。
９６）ＣＤ３ｚ構成成分は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含む、請求項９０～９５の何れか一項に記載のＣＡＲ。
９７）細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む、請求項９０～９６の何れか一項に記載のＣＡＲ。
９８）ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドは、配列番号１６２のアミノ酸配列を含む、請求項９０～９７の何れか一項に記載のＣＡＲ。
９９）ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む、請求項９０～９８の何れか一項に記載のＣＡＲ。
１００）請求項９０～９９の何れか一項に記載のＣＡＲを発現する、単離されたリンパ球。
１０１）Ｔリンパ球である、請求項１００に記載の単離されたリンパ球。
１０２）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項１００に記載の単離されたリンパ球。
１０３）薬剤に複合化された、請求項１～５３の何れか一項に記載の単離タンパク質又は請求項５４～８１の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質を含む、免疫複合体。
１０４）薬剤は、治療剤又は造影剤である、請求項１０３に記載の免疫複合体。
１０５）薬剤は、放射活性剤である、請求項１０３に記載の免疫複合体。
１０６）放射活性剤は、放射性金属イオンを含む、請求項１０５に記載の免疫複合体。
１０７）放射性金属イオンは、３２Ｐ、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、７７Ａｓ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１３１Ｉ、１５３Ｓｍ、１５９Ｇｄ、１６５Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、２５５Ｆｍ、２２７Ｔｈ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ又は１１１Ｉｎである、請求項１０６に記載の免疫複合体。
１０８）放射性金属イオンは、２２５Ａｃ、１１１Ｉｎ又は８９Ｚｒである、請求項１０７に記載の免疫複合体。
１０９）放射性金属イオンは、２２５Ａｃである、請求項１０７に記載の免疫複合体。
１１０）放射性金属イオンは、キレート部分に複合化される、請求項１０６～１０９の何れか一項に記載の免疫複合体。
１１１）キレート部分は、式（Ｉ）：
Figure 2023517660000056
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のそれぞれは、独立に、ＣＨＱＣＯ２Ｘであり、
Ｑは、独立に、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は（Ｃ１～Ｃ２アルキル）フェニルであり、及び
Ｘは、独立に、水素、ベンジル、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；及び
Ｚは、（ＣＨ２）ｎＹであり、
ｎは、１～１０であり、及び
Ｙは、第２のクリック反応パートナーに共有結合される求電子部分又は求核部分であり；
代わりに、Ｚは、水素であり；及び
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のそれぞれは、独立に、ＣＨＱＣＯ２Ｘであり、
Ｑは、独立に、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は（Ｃ１～Ｃ２アルキル）フェニルであり、及び
Ｘは、独立に、水素、ベンジル、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は第２のクリック反応パートナーに共有結合される求電子部分若しくは求核部分である）
の構造を有する大環状分子を含み；
代わりに、キレート剤は、開鎖リガンドを含む、請求項１１０に記載の免疫複合体。
１１２）キレート部分は、式（ＩＩ）：
Figure 2023517660000057
の構造又は式（ＩＩＩ）：
Figure 2023517660000058
の構造を有する大環状分子を含む、請求項１１０に記載の免疫複合体。
１１３）式（ＩＶ）
Figure 2023517660000059
（式中、タンパク質は、請求項１～５３、８２～８７の何れか一項で定められるような単離タンパク質又は請求項５４～８１の何れか一項で定められるような単離された多特異性タンパク質である）
の免疫複合体。
１１４）式（Ｖ）
Figure 2023517660000060
（式中、タンパク質は、請求項１～５３、８２～８７の何れか一項で定められるような単離タンパク質又は請求項５４～８１の何れか一項で定められるような単離された多特異性タンパク質である）
の免疫複合体。
１１５）請求項１～５３、８２～８７の何れか一項に記載の単離タンパク質、請求項５４～８１の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質、請求項８８～９９の何れか一項に記載のＣＡＲ、請求項１００～１０２の何れか一項に記載のリンパ球又は請求項１０３～１１４の何れか一項に記載の免疫複合体と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
１１６）請求項１～５３、８２～８７の何れか一項に記載の単離タンパク質、請求項５４～８１の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質、請求項８８～９９の何れか一項に記載のＣＡＲ又は請求項１０３～１１４の何れか一項に記載の免疫複合体をコードするポリヌクレオチド。
１１７）請求項１１６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
１１８）請求項１１７に記載のベクター又は請求項１１６に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
１１９）請求項１～５３、８２～８７の何れか一項に記載の単離タンパク質又は請求項５４～８１の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質を作製する方法であって、タンパク質が発現される条件において、請求項１１８に記載の宿主細胞を培養することと、宿主細胞によって産生されるタンパク質を回収することとを含む方法。
１２０）請求項１０３～１１４の何れか一項に記載の免疫複合体を作製する方法であって、タンパク質が発現される条件において、請求項１１８に記載の宿主細胞を培養することと、宿主細胞によって産生されるタンパク質を回収することと、宿主細胞によって産生されるタンパク質を薬剤と複合化することとを含む方法。
１２１）請求項１～５３又は８２～８７の何れか一項に記載の単離タンパク質に結合する抗イディオタイプ抗体。
１２２）請求項１～５３、８２～８７の何れか一項に記載の単離タンパク質又は請求項５４～８１の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質又は請求項８８～９９の何れか一項に記載のＣＡＲを含むキット。
１２３）対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法であって、ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、対象に、治療的有効量の請求項１～５３、８２～８７の何れか一項に記載の単離タンパク質、請求項５４～８１の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質又は請求項１０３～１１４の何れか一項に記載の免疫複合体を投与することを含む方法。
１２４）対象においてＣＤ３３発現細胞の量を減少させるために有効であり、ＣＤ３３発現細胞は、癌性細胞であるか、又はＣＤ３３発現細胞は、非癌性細胞である、請求項１２３に記載の方法。
１２５）対象においてＣＤ３３発現癌の確立を予防するために有効である、請求項１２３又は１２４に記載の方法。
１２６）ＣＤ３３発現癌を有する対象を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療的有効量の請求項１００～１０２の何れか一項に記載のリンパ球を投与することを含み、それにより、リンパ球は、対象においてＣＤ３３発現癌の死滅に介在する、方法。
１２７）癌細胞の標的化された死滅の方法であって、癌細胞を請求項１００～１０２の何れか一項に記載のリンパ球と接触させることを含み、それにより、リンパ球は、癌細胞の標的化された死滅を誘導する、方法。
１２８）対象において癌の存在を検出する方法であって、
ａ）対象から得られた細胞試料を、請求項８８～９９の何れか一項に記載のＣＡＲと接触させ、それによりＣＡＲ－細胞複合体を形成することと、
ｂ）ＣＡＲ－細胞複合体を検出することであって、ＣＡＲ－細胞複合体の検出は、対象における癌の存在を示す、検出することと
を含む方法。
１２９）ＣＤ３３発現癌は、血液癌である、請求項１２３～１２８の何れか一項に記載の方法。
１３０）血液癌は、白血病、リンパ腫又は多発性骨髄腫である、請求項１２９に記載の方法。
１３１）血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である、請求項１３０に記載の方法。
１３２）血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項１３１に記載の方法。
１３３）単離タンパク質、単離された多特異性タンパク質又は免疫複合体は、第２の治療剤と組み合わせて投与される、請求項１２３～１３２の何れか一項に記載の方法。
１３４）第２の治療剤は、手術、化学療法、アンドロゲン欠乏療法若しくは放射線又はそれらの任意の組み合わせである、請求項１３３に記載の方法。
配列
配列番号１ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１７８５；Ｃ３３Ｂ１７８７；Ｃ３３Ｂ１７８０；Ｃ３３Ｂ１７８９；Ｃ３３Ｂ１７８８）
ＤＹＡＩＧ
配列番号２ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１７８４）
ＴＹＶＭＧ
配列番号３ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１７８６）
ＦＳＴＭＤ
配列番号４ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１７８１）
ＩＮＡＭＧ
配列番号５ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１７８３；Ｃ３３Ｂ１７８２）
ＤＹＡＶＧ
配列番号６ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１７８５；Ｃ３３Ｂ１７８０；Ｃ３３Ｂ１７８９；Ｃ３３Ｂ１７８８）
ＣＩＳＥＳＤＧＲＴＹＬＳＤＳＶＫＳ
配列番号７ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１７８４）
ＡＩＶＳＧＲＮＰＴＹＡＤＳＶＫＳ
配列番号８ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１７８７）
ＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＶＤＳＶＫＧ
配列番号９ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１７８６）
ＣＩＲＰＲＹＳＴＴＴＨＡＤＳＩＫＧ
配列番号１０ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１７８１）
ＲＩＴＧＧＧＡＴＤＹＶＤＳＶＫＧ
配列番号１１ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１７８３；Ｃ３３Ｂ１７８２）
ＣＩＳＳＳＤＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号１２ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１７８５；Ｃ３３Ｂ１７８０；Ｃ３３Ｂ１７８９；Ｃ３３Ｂ１７８８）
ＶＤＱＡＩＳＥＳＳＹＨＣＥＫＧＦＧＳ
配列番号１３ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１７８４；Ｃ３３Ｂ１７８６）
ＹＨＹＳＳＱＹ
配列番号１４ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１７８７）
ＬＩＩＭＹＧＳＧＳＥＲＡＡＡＡＣＲＹＫＹＥＹ
配列番号１５ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１７８１）
ＤＬＶＴＲＶＧＳＤＬＬＹＤＤＹ
配列番号１６ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１７８３）
ＩＩＶＲＧＳＧＷＥＲＡＡＡＡＣＲＹＥＹＳＹ
配列番号１７ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１７８２）
ＶＩＶＲＧＴＧＷＥＲＡＡＡＡＣＲＹＥＹＡＹ
配列番号１８ ＶＨＨ配列（Ｃ３３Ｂ１７８５）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＦＧＦＳＬＳＤＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＫＶＳＣＩＳＥＳＤＧＲＴＹＬＳＤＳＶＫＳＲＦＴＩＳＲＤＮＧＫＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＫＰＤＤＴＧＶＹＹＣＡＴＶＤＱＡＩＳＥＳＳＹＨＣＥＫＧＦＧＳＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号１９ ＶＨＨ配列（Ｃ３３Ｂ１７８４）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＴＹＶＭＧＷＦＲＱＡＰＧＱＥＲＥＬＶＡＡＩＶＳＧＲＮＰＴＹＡＤＳＶＫＳＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＩＹＬＨＭＮＳＬＱＰＥＤＴＡＶＹＹＣＨＭＹＨＹＳＳＱＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２０ ＶＨＨ配列（Ｃ３３Ｂ１７８７）
Figure 2023517660000061
配列番号２１ ＶＨＨ配列（Ｃ３３Ｂ１７８６）
ＥＶＱＶＶＥＳＧＧＧＶＶＱＳＧＧＳＬＴＬＳＣＥＡＳＥＳＩＬＳＦＳＴＭＤＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＲＰＲＹＳＴＴＴＨＡＤＳＩＫＧＲＦＫＭＹＳＤＮＡＫＮＴＩＹＬＨＭＮＳＬＱＰＥＤＴＡＶＹＹＣＨＭＹＨＹＳＳＱＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２２ ＶＨＨ配列（Ｃ３３Ｂ１７８１）
ＥＶＱＶＶＥＳＧＧＧＬＶＱＧＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＦＳＩＮＡＭＧＷＹＨＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＲＩＴＧＧＧＡＴＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＬＤＳＡＫＳＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＨＣＹＡＤＬＶＴＲＶＧＳＤＬＬＹＤＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２３ ＶＨＨ配列（Ｃ３３Ｂ１７８０）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＦＧＦＳＬＳＤＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＫＶＳＣＩＳＥＳＤＧＲＴＹＬＳＤＳＶＫＳＲＦＴＩＳＲＤＮＧＫＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＫＰＤＤＴＧＶＹＹＣＡＴＶＤＱＡＩＳＥＳＳＹＨＣＥＫＧＦＧＳＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２４ ＶＨＨ配列（Ｃ３３Ｂ１７８３）
Figure 2023517660000062
配列番号２５ ＶＨＨ配列（Ｃ３３Ｂ１７８２）
Figure 2023517660000063
配列番号２６ ＶＨＨ配列（Ｃ３３Ｂ１７８９）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＦＧＦＳＬＳＤＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＫＶＳＣＩＳＥＳＤＧＲＴＹＬＳＤＳＶＫＳＲＦＴＩＳＲＤＮＧＫＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＫＰＤＤＴＧＶＹＹＣＡＴＶＤＱＡＩＳＥＳＳＹＨＣＥＫＧＦＧＳＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２７ ＶＨＨ配列（Ｃ３３Ｂ１７８８）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＦＧＦＳＬＳＤＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＫＶＳＣＩＳＥＳＤＧＲＴＹＬＳＤＳＶＫＳＲＦＴＩＳＲＤＮＧＫＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＫＰＤＤＴＧＶＹＹＣＡＴＶＤＱＡＩＳＥＳＳＹＨＣＥＫＧＦＧＳＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２８ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７４）
ＳＦＧＭＳ
配列番号２９ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５２２）
ＳＹＹＷＧ
配列番号３０ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１６０７）
ＤＹＮＩＮ
配列番号３１ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１６０１）
ＮＹＡＭＳ
配列番号３２ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１７）
ＮＹＹＷＳ
配列番号３３ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４９５；Ｃ３３Ｂ９３１；Ｃ３３Ｂ７８２）
ＳＹＷＭＳ
配列番号３４ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７８；Ｃ３３Ｂ１４７７；Ｃ３３Ｂ１４７６）
ＶＳＡＩＨ
配列番号３５ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４８４）
ＶＦＡＩＨ
配列番号３６ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７４）
ＮＩＫＲＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ
配列番号３７ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５２２）
ＹＩＹＹＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ
配列番号３８ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１６０７）
ＴＩＮＰＮＮＧＶＴＦＹＮＱＲＦＫＧ
配列番号３９ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１６０１）
ＧＩＳＮＳＧＹＳＬＹＹＰＤＴＬＫＧ
配列番号４０ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１７）
ＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳ
配列番号４１ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４９５）
ＮＩＫＲＤＧＳＥＫＨＹＶＤＳＶＫＧ
配列番号４２ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７８；Ｃ３３Ｂ１４８４）
ＲＩＲＳＫＧＮＳＹＡＴＡＹＤＶＳＶＫＧ
配列番号４３ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７７）
ＲＩＲＳＫＧＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ
配列番号４４ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７６）
ＲＩＲＳＫＧＮＳＹＡＴＡＹＮＶＳＶＫＧ
配列番号４５ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７４）
ＤＹＧＹＦＤＦ
配列番号４６ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５２２）
ＭＷＥＩＬＧＦＤＰ
配列番号４７ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１６０７）
ＤＧＹＤＴＹＹＡＭＤＹ
配列番号４８ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１６０１）
ＤＧＧＳＹＰＹＡＭＤＹ
配列番号４９ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１７）
ＤＮＧＡＡＬＦＤＹ
配列番号５０ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４９５）
ＤＹＧＹＦＤＹ
配列番号５１ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７８；Ｃ３３Ｂ１４７７；Ｃ３３Ｂ１４７６；Ｃ３３Ｂ１４８４）
ＨＮＤＫＷＮＹＹＧＬＤＶ
配列番号５２ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ１４７４）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＦＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＲＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＦＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＤＹＧＹＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５３ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ１５２２）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＹＹＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＭＷＥＩＬＧＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ
配列番号５４ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ１６０７）
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＳＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＩＮＷＶＫＱＳＨＧＫＮＬＥＷＩＧＴＩＮＰＮＮＧＶＴＦＹＮＱＲＦＫＧＱＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＳＲＤＧＹＤＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号５５ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ１６０７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＲＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＡＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＧＩＳＮＳＧＹＳＬＹＹＰＤＴＬＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＮＴＬＹＬＱＭＩＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＧＧＳＹＰＹＡＭＤＹＷＧＨＧＴＳＶＴＶＳＳ
配列番号５６ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ１５１７）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＮＧＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５７ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ１４９５）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＤＷＶＡＮＩＫＲＤＧＳＥＫＨＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＤＹＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５８ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ１４７８）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＶＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳＶＳＡＩＨＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＲＳＫＧＮＳＹＡＴＡＹＤＶＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＤＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＨＮＤＫＷＮＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号５９ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ１４７７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＶＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳＶＳＡＩＨＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＲＳＫＧＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＤＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＨＮＤＫＷＮＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号６０ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ１４７６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＶＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳＶＳＡＩＨＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＲＳＫＧＮＳＹＡＴＡＹＮＶＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＤＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＨＮＤＫＷＮＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号６１ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ１４８４）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＶＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳＶＦＡＩＨＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＩＧＲＩＲＳＫＧＮＳＹＡＴＡＹＤＶＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＤＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＨＮＤＫＷＮＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号６２ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７４）
ＱＡＳＱＡＩＳＮＹＬＮ
配列番号６３ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５２２）
ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮ
配列番号６４ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１６０７）
ＫＡＳＱＤＶＲＴＡＥＡ
配列番号６５ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１６０１）
ＫＡＳＱＮＶＧＴＹＶＡ
配列番号６６ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１７；Ｃ３３Ｂ１５１６）
ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮ
配列番号６７ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４９５）
ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ
配列番号６８ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７８；Ｃ３３Ｂ１４７７；Ｃ３３Ｂ１４７６；Ｃ３３Ｂ１４８４）
ＫＳＳＱＳＬＬＦＳＮＧＹＫＦＬＤ
配列番号６９ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７４）
ＤＡＳＮＬＥＴ
配列番号７０ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５２２；Ｃ３３Ｂ１５１７）
ＳＮＮＱＲＰＳ
配列番号７１ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１６０７）
ＳＡＳＮＲＹＴ
配列番号７２ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１６０１）
ＳＡＳＹＲＹＳ
配列番号７３ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４９５）
ＡＡＳＴＬＱＳ
配列番号７４ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７８；Ｃ３３Ｂ１４７７；Ｃ３３Ｂ１４７６；Ｃ３３Ｂ１４８４；Ｃ３３Ｂ１４７５）
ＬＧＳＹＲＡＳ
配列番号７５ ＶＬのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７４）
ＱＨＹＤＮＬＰＹＴ
配列番号７６ ＶＬのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５２２；Ｃ３３Ｂ１５１７；Ｃ３３Ｂ１５１６）
ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＰＶ
配列番号７７ ＶＬのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１６０７）
ＱＱＹＹＴＴＰＲＴ
配列番号７８ ＶＬのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１６０１）
ＱＱＹＫＳＹＰＬＴ
配列番号７９ ＶＬのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４９５）
ＱＱＬＮＳＹＰＶＴ
配列番号８０ ＶＬのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７８；Ｃ３３Ｂ１４７７；Ｃ３３Ｂ１４７６；Ｃ３３Ｂ１４８４）
ＭＱＡＬＱＴＰＰＴ
配列番号８１ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ１４７４）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＡＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＳＴＹＦＣＱＨＹＤＮＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号８２ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ１５２２）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号８３ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ１６０７）
ＤＩＶＭＴＱＳＨＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＲＴＡＥＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＳＡＳＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＴＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号８４ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ１６０１）
ＤＩＶＭＴＱＳＱＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＶＴＣＫＡＳＱＮＶＧＴＹＶＡＷＹＱＱＫＰＧＨＳＰＫＡＬＩＹＳＡＳＹＲＹＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＫＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
配列番号８５ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ１５１７）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号８６ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ１４９５）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＬＮＳＹＰＶＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号８７ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ１４７８；Ｃ３３Ｂ１４７７；Ｃ３３Ｂ１４７６）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＦＳＮＧＹＫＦＬＤＷＹＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＹＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＬＹＹＣＭＱＡＬＱＴＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号８８ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ１４８４）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＦＳＮＧＹＫＦＬＤＷＹＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＹＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＬＹＹＣＭＱＡＬＱＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号８９ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ９３３；Ｃ３３Ｂ９１９；Ｃ３３Ｂ９３７；Ｃ３３Ｂ１２５）
ＳＹＧＭＨ
配列番号９０ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ９３３；Ｃ３３Ｂ９１９；Ｃ３３Ｂ９３７；Ｃ３３Ｂ１２５）
ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号９１ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ９３１；Ｃ３３Ｂ７８２）
ＮＩＫＱＨＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ
配列番号９２ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ９３３）
ＤＦＲＳＬＤＷＬＰＰＤＳＴＳＹＤＧＭＤＶ
配列番号９３ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ９３３）
ＤＦＲＳＦＤＷＬＰＰＤＳＴＳＹＹＧＭＤＶ
配列番号９４ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ９３１）
ＤＲＤＬＧＹＦＤＹ
配列番号９５ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ９３３）
Figure 2023517660000064
配列番号９６ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ９１９；Ｃ３３Ｂ１２５）
Figure 2023517660000065
配列番号９７ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ９３１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＦＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＨＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＤＬＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号９８ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ９３３）
ＳＧＨＫＬＧＤＫＹＡＳ
配列番号９９ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ９１９）
ＳＧＤＫＬＧＤＫＹＶＳ
配列番号１００ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ９３１）
ＳＧＤＫＬＧＳＫＦＡＳ
配列番号１０１ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ９３３）
ＫＤＳＫＲＰＳ
配列番号１０２ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ９１９；Ｃ３３Ｂ１２５）
ＱＤＲＫＲＰＳ
配列番号１０３ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ９３１）
ＱＤＳＫＲＰＳ
配列番号１０４ ＶＬのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ９３３；Ｃ３３Ｂ９１９；Ｃ３３Ｂ９３１；Ｃ３３Ｂ７８２；Ｃ３３Ｂ１２５）
ＱＡＷＤＳＳＴＶＶ
配列番号１０５ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ９３３）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＨＫＬＧＤＫＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＶＶＩＹＫＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＦＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＤＳＳＴＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号１０６ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ９１９）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＫＬＧＤＫＹＶＳＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＶＶＩＨＱＤＲＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＦＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＤＳＳＴＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号１０７ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ９３１）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＫＬＧＳＫＦＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＬＶＩＹＱＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＤＳＳＴＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号１０８ リンカー配列
ＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳ
配列番号１０９ リンカー配列
ＧＧＧＳＧＧＧＳ
配列番号１１０ リンカー配列
ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ
配列番号１１１ リンカー配列
ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ
配列番号１１２ リンカー配列
ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ
配列番号１１３ リンカー配列
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号１１４ リンカー配列
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号１１５ リンカー配列
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号１１６ リンカー配列
ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ
配列番号１１７ リンカー配列
ＩＲＰＲＡＩＧＧＳＫＰＲＶＡ
配列番号１１８ リンカー配列
ＧＫＧＧＳＧＫＧＧＳＧＫＧＧＳ
配列番号１１９ リンカー配列
ＧＧＫＧＳＧＧＫＧＳＧＧＫＧＳ
配列番号１２０ リンカー配列
ＧＧＧＫＳＧＧＧＫＳＧＧＧＫＳ
配列番号１２１ リンカー配列
ＧＫＧＫＳＧＫＧＫＳＧＫＧＫＳ
配列番号１２２ リンカー配列
ＧＧＧＫＳＧＧＫＧＳＧＫＧＧＳ
配列番号１２３ リンカー配列
ＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳ
配列番号１２４ リンカー配列
ＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳ
配列番号１２５ リンカー配列
ＧＫＧＫＳＧＫＧＫＳＧＫＧＫＳＧＫＧＫＳ
配列番号１２６ リンカー配列
ＳＴＡＧＤＴＨＬＧＧＥＤＦＤ
配列番号１２７ リンカー配列
ＧＥＧＧＳＧＥＧＧＳＧＥＧＧＳ
配列番号１２８ リンカー配列
ＧＧＥＧＳＧＧＥＧＳＧＧＥＧＳ
配列番号１２９ リンカー配列
ＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳ
配列番号１３０ リンカー配列
ＧＧＧＥＳＧＧＥＧＳＧＥＧＧＳ
配列番号１３１ リンカー配列
ＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳ
配列番号１３２ リンカー配列
ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ
配列番号１３３ リンカー配列
ＰＲＧＡＳＫＳＧＳＡＳＱＴＧＳＡＰＧＳ
配列番号１３４ リンカー配列
ＧＴＡＡＡＧＡＧＡＡＧＧＡＡＡＧＡＡＧ
配列番号１３５ リンカー配列
ＧＴＳＧＳＳＧＳＧＳＧＧＳＧＳＧＧＧＧ
配列番号１３６ リンカー配列
ＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳ
配列番号１３７ リンカー配列
ＧＳＧＳ
配列番号１３８ リンカー配列
ＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰ
配列番号１３９ リンカー配列
ＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰ
配列番号１４０ リンカー配列
ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＡＫＥＡＡＡＡＫＥＡＡＡＡＫＡＡＡ
配列番号１４１ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＨＣＤＲ１（ＣＤ３Ｂ２１９）
ＴＹＡＭＮ
配列番号１４２ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＨＣＤＲ２（ＣＤ３Ｂ２１９）
ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧ
配列番号１４３ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＨＣＤＲ３（ＣＤ３Ｂ２１９）
ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹ
配列番号１４４ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＬＣＤＲ１（ＣＤ３Ｂ２１９）
ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ
配列番号１４５ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＬＣＤＲ２（ＣＤ３Ｂ２１９）
ＧＴＮＫＲＡＰ
配列番号１４６ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＬＣＤＲ３（ＣＤ３Ｂ２１９）
ＡＬＷＹＳＮＬＷＶ
配列番号１４７ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＶＨ（ＣＤ３Ｂ２１９）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１４８ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＶＬ（ＣＤ３Ｂ２１９）
ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号１４９ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＨＣＤＲ１（ＣＤ３Ｂ３７６）
ＮＮＮＡＡＷＳ
配列番号１５０ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＨＣＤＲ２（ＣＤ３Ｂ３７６）
ＲＴＹＹＲＳＫＷＬＹＤＹＡＶＳＶＫＳ
配列番号１５１ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＨＣＤＲ３（ＣＤ３Ｂ３７６）
ＧＹＳＳＳＦＤＹ
配列番号１５２ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＬＣＤＲ１（ＣＤ３Ｂ３７６）
ＴＧＴＳＳＮＩＧＴＹＫＦＶＳ
配列番号１５３ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＬＣＤＲ２（ＣＤ３Ｂ３７６）
ＥＶＳＫＲＰＳ
配列番号１５４ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＬＣＤＲ３（ＣＤ３Ｂ３７６）
ＶＳＹＡＧＳＧＴＬＬ
配列番号１５５ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＶＨ（ＣＤ３Ｂ３７６）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＲＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＦＮＮＮＡＡＷＳＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＬＹＤＹＡＶＳＶＫＳＲＩＴＶＮＰＤＴＳＲＮＱＦＴＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＧＹＳＳＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１５６ ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインのＶＬ（ＣＤ３Ｂ３７６）
ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＮＩＧＴＹＫＦＶＳＷＹＱＱＨＰＤＫＡＰＫＶＬＬＹＥＶＳＫＲＰＳＧＶＳＳＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＱＡＤＹＨＣＶＳＹＡＧＳＧＴＬＬＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号１５７ ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲのＣＤ８ａ－ヒンジ領域
ＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ
配列番号１５８ ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲのヒンジ領域
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ
配列番号１５９ ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲのヒンジ領域
ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ
配列番号１６０ ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲのヒンジ領域
ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３
配列番号１６１ ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲのヒンジ領域
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ
配列番号１６２ ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲのＣＤ８ａ膜貫通領域
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ
配列番号１６３ ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲのＣＤ１３７同時刺激ドメイン
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ
配列番号１６４ ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲのＣＤ１３７同時刺激ドメイン
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号１６５ ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメイン
Figure 2023517660000066
配列番号１６６ ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲのヒンジ領域
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ
配列番号１６７ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ８３６）
ＮＹＡＭＮ
配列番号１６８ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ８３６）
ＷＩＮＴＮＴＧＮＰＴＹＡＱＧＦＴＧ
配列番号１６９ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ８３６）
ＤＲＤＲＧＴＤＹ
配列番号１７０ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ８３６）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＲＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＮＴＧＮＰＴＹＡＱＧＦＴＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＳＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＴＤＲＤＲＧＴＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１７１ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ７８２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＨＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＤＬＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１７２ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ８０６）
ＳＳＳＹＹＷＧ
配列番号１７３ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ８０６）
ＳＩＮＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳ
配列番号１７４ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ８０６）
ＬＤＧＹＥＳＰＦＤＹ
配列番号１７５ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ８０６）
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＤＷＩＧＳＩＮＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＩＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＤＧＹＥＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１７６ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ９０４）
ＤＹＡＭＨ
配列番号１７７ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ９０４）
ＧＩＧＷＳＧＧＳＩＶＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号１７８ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ９０４）
ＤＳＰＹＧＤＦＦＤＹ
配列番号１７９ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ９０４）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＧＷＳＧＧＳＩＶＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＤＳＰＹＧＤＦＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１８０ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ９３７）
ＤＦＲＳＦＤＷＬＰＰＤＳＡＳＹＨＧＭＤＶ
配列番号１８１ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ９３７）
Figure 2023517660000067
配列番号１８２ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ８３６）
ＴＧＴＳＳＤＶＧＤＹＮＹＶＳ
配列番号１８３ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ８３６）
ＤＶＳＮＲＰＳ
配列番号１８４ ＶＬのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ８３６）
ＳＳＹＳＳＳＳＡＬＥＶ
配列番号１８５ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ８３６）
ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＤＹＮＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＶＰＫＬＭＩＹＤＶＳＮＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＭＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＳＳＳＳＡＬＥＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号１８６ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ７８２）
ＳＧＮＫＬＧＡＫＦＡＳ
配列番号１８７ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ７８２）
ＱＤＮＫＲＰＳ
配列番号１８８ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ７８２）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＮＫＬＧＡＫＦＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＬＶＩＹＱＤＮＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＶＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＤＳＳＴＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号１８９ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ８０６）
ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ
配列番号１９０ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ８０６）
ＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号１９１ ＶＬのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ８０６）
ＱＱＡＮＳＦＰＦＴ
配列番号１９２ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ８０６）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＳＦＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫ
配列番号１９３ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ９０４）
ＫＳＳＱＴＶＦＹＳＳＮＮＫＮＹＬＡ
配列番号１９４ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ９０４）
ＷＡＳＴＲＫＳ
配列番号１９５ ＶＬのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ９０４）
ＱＨＹＹＳＴＰＹＴ
配列番号１９６ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ９０４）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＴＶＦＹＳＳＮＮＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＳＷＡＳＴＲＫＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＶＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＹＹＳＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１９７ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ９３７）
ＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＳ
配列番号１９８ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ９３７）
ＱＤＧＫＲＰＳ
配列番号１９９ ＶＬのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ９３７）
ＱＡＷＤＲＮＴＶＶ
配列番号２００ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ９３７）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＬＶＩＹＱＤＧＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＦＧＮＫＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＤＲＮＴＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号２０１ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１２５）
ＳＧＤＫＬＧＤＫＹＶＣ
配列番号２０２ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ１２５）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＫＬＧＤＫＹＶＣＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＶＶＩＨＱＤＲＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＦＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＤＳＳＴＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号２０３ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ８３６）
Figure 2023517660000068
配列番号２０４ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ７８２）
Figure 2023517660000069
配列番号２０５ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ８０６）
Figure 2023517660000070
配列番号２０６ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ９０４）
Figure 2023517660000071
配列番号２０７ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ９３３）
Figure 2023517660000072
配列番号２０８ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ９３７）
Figure 2023517660000073
配列番号２０９ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ９１９）
Figure 2023517660000074
配列番号２１０ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１２５）
Figure 2023517660000075
配列番号２１１ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ９３１）
Figure 2023517660000076
配列番号２１２ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１４７４）
Figure 2023517660000077
配列番号２１３ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000078
配列番号２１４ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１６０７）
Figure 2023517660000079
配列番号２１５ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１６０１）
Figure 2023517660000080
配列番号２１６ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000081
配列番号２１７ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１４９５）
Figure 2023517660000082
配列番号２１８ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１４７８）
Figure 2023517660000083
配列番号２１９ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000084
配列番号２２０ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１４７６）
Figure 2023517660000085
配列番号２２１ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１４８４）
Figure 2023517660000086
配列番号２２２ 野生型ＩｇＧ１
Figure 2023517660000087
配列番号２２３ 野生型ＩｇＧ２
Figure 2023517660000088
配列番号２２４ 野生型ＩｇＧ４
Figure 2023517660000089
配列番号２２５ ＣＤ３３抗原：ＨＳＡ Ｎ末端融合；ＣｙｎｏＣＤ３３ＥＣＤ－ＨＳＡ（Ｃ３４Ｓ）－６ｘＨｉｓ
Figure 2023517660000090
配列番号２２６ ＣＤ３３抗原：ＨＳＡ Ｎ末端融合；ヒトＣＤ３３ＥＣＤ－Ｔｅｖ－ＨＳＡ（Ｃ３４Ｓ）－６ｘＨｉｓ
Figure 2023517660000091
配列番号２２７ ＣＤ３３抗原：ＨＳＡ Ｎ末端融合；Ｃ－末端でＨＳＡ及び６ｘＨｉｓタグに融合されるｈＣＤ３３Ｉｇ様Ｖ型ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ２０１３８、Ｖ１３６－Ｈ２５９）
Figure 2023517660000092
配列番号２２８ ＣＤ３３抗原：ＨＳＡ Ｎ末端融合；Ｃ－末端でＨＳＡ及び６ｘＨｉｓタグに融合されるｈＣＤ３３Ｉｇ様Ｃ２型ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ２０１３８、Ｖ１３６－Ｈ２５９）
Figure 2023517660000093
配列番号２２９ ＣＤ３３抗原：ｈＣＤ３３＿Ｉｇ様Ｖ型ドメイン
Figure 2023517660000094
配列番号２３０ ＣＤ３３抗原：ｈＣＤ３３ Ｉｇ様Ｃ２型ドメイン
Figure 2023517660000095
配列番号２３１ ＣＤ３３抗原：ＭｕＩｇＶ＿Ｈｕ ＩｇＣ２キメラＣＤ３３－６ｘＨｉｓ＿ｖ１
Figure 2023517660000096
配列番号２３２ ＣＤ３３抗原：ＭｕＩｇＶ＿ｃｙｎｏ ＩｇＣ２キメラＣＤ３３－６ｘＨｉｓ＿ｖ１
Figure 2023517660000097
配列番号２３３ ＣＤ３３抗原：Ｃ末端６ｘＨｉｓタグ付きのＵｎｉｐｒｏｔ Ｐ２０１３８からのヒトＣＤ３３ ＥＣＤ（Ｄ１８－Ｈ２５９）
Figure 2023517660000098
配列番号２３４ ＣＤ３３抗原：Ｃ末端６ｘＨｉｓタグ付きのＸＰ＿００５５９０１３８．１からのＣｙｎｏ ＣＤ３３ ＥＣＤ（Ｄ３７－Ｑ２７４）
Figure 2023517660000099
配列番号２３５ ＣＤ３３抗原：６ｘＨｉｓタグ付きのＵｎｉｐｒｏｔ Ｐ２０１３８からのヒトＣＤ３３ ＥＣＤ（Ｄ１８－Ｇ２４１）
Figure 2023517660000100
配列番号２３６ 抗ＴＲＧＶ９ ｍＡｂ ＬＰ７Ａ５＿１、ＬＰ７Ａ５＿２、ＬＰ７Ａ５＿３、ＬＰ７Ａ５＿４のＨＣＤＲ１配列
ＤＨＹＩＮ
配列番号２３７ 抗ＴＲＧＶ９ｍＡｂ ＬＰ７Ａ５＿１、ＬＰ７Ａ５＿２、ＬＰ７Ａ５＿３、ＬＰ７Ａ５＿４のＨＣＤＲ２配列
ＱＩＹＰＧＤＧＮＴＹＹＮＱＫＦＫＧ
配列番号２３８ 抗ＴＲＧＶ９ｍＡｂ ＬＰ７Ａ５＿１のＨＣＤＲ３配列
ＮＹＧＤＹＴＩＤＦ
配列番号２３９ 抗ＴＲＧＶ９ｍＡｂ ＬＰ７Ａ５＿１、ＬＰ７Ａ５＿２、ＬＰ７Ａ５＿３、ＬＰ７Ａ５＿４のＬＣＤＲ１配列
ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＳＮＱＫＮＹＬＡ
配列番号２４０ 抗ＴＲＧＶ９ｍＡｂ ＬＰ７Ａ５＿１、ＬＰ７Ａ５＿２、ＬＰ７Ａ５＿３、ＬＰ７Ａ５＿４のＬＣＤＲ２配列
ＷＡＳＴＲＥＳ
配列番号２４１ 抗ＴＲＧＶ９ ｍＡｂ ＬＰ７Ａ５＿１、ＬＰ７Ａ５＿２、ＬＰ７Ａ５＿３、ＬＰ７Ａ５＿４のＬＣＤＲ３配列
ＱＱＹＹＲＹＨＴ
配列番号２４２ 抗ＴＲＧＶ９ｍＡｂ ＬＰ７Ａ５＿２のＨＣＤＲ３配列
ＮＭＧＭＹＴＩＤＦ
配列番号２４３ 抗ＴＲＧＶ９ ｍＡｂ ＬＰ７Ａ５＿３のＨＣＤＲ３配列
ＮＭＧＭＹＴＬＤＦ
配列番号２４４ 抗ＴＲＧＶ９ｍＡｂ ＬＰ７Ａ５＿４のＨＣＤＲ３配列
ＮＹＧＤＹＴＬＤＦ
配列番号２４５ ＬＰ７Ａ５＿１の重鎖配列
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＦＴＦＴＤＨＹＩＮＷＶＫＱＲＴＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＹＰＧＤＧＮＴＹＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＰＮＹＧＤＹＴＩＤＦＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
配列番号２４６ ＬＰ７Ａ５＿２の重鎖配列
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＦＴＦＴＤＨＹＩＮＷＶＫＱＲＴＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＹＰＧＤＧＮＴＹＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＰＮＭＧＭＹＴＩＤＦＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
配列番号２４７ ＬＰ７Ａ５＿３の重鎖配列
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＦＴＦＴＤＨＹＩＮＷＶＫＱＲＴＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＹＰＧＤＧＮＴＹＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＰＮＭＧＭＹＴＬＤＦＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
配列番号２４８ ＬＰ７Ａ５＿４の重鎖配列
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＦＴＦＴＤＨＹＩＮＷＶＫＱＲＴＧＱＧＬＥＷＩＧＱＩＹＰＧＤＧＮＴＹＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＰＮＭＧＭＹＴＬＤＦＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
配列番号２４９ ＬＰ７Ａ５＿１の軽鎖配列
ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＲＹＨＴＦＧＴＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２５０ 抗ＴＲＧＶ９ホールアーム配列
Figure 2023517660000101
配列番号２５１ 抗ＣＤ３３ノブアーム配列
Figure 2023517660000102
配列番号２５２ 抗ＲＳＶノブアーム配列
Figure 2023517660000103
配列番号２５３ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000104
配列番号２５４ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000105
配列番号２５５ ＶＨのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000106
配列番号２５６ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000107
配列番号２５７ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000108
配列番号２５８ ＶＨのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000109
配列番号２５９ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000110
配列番号２６０ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000111
配列番号２６１ ＶＨのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000112
配列番号２６２ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ１４７５）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２６３ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000113
配列番号２６４ ＶＨ配列（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000114
配列番号２６５ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000115
配列番号２６６ ＶＬのＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000116
配列番号２６７ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000117
配列番号２６８ ＶＬのＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000118
配列番号２６９ ＶＬのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000119
配列番号２７０ ＶＬのＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000120
配列番号２７１ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ１４７５）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＤＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＳＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＹＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＩＹＹＣＭＱＶＬＱＴＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２７２ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000121
配列番号２７３ ＶＬ配列（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000122
配列番号２７４ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000123
配列番号２７５ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000124
配列番号２７６ ｓｃＦｖ（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000125
配列番号２７７ ｈｕＩｇＧ１＿Ｇ１ｍ（１７）－ヒンジ－ＦＣ＿Ｃ２２０Ｓ｜ＩｇＧ１｜（Ｃ３３Ｂ１４７５；Ｃ３３Ｂ１５１６；Ｃ３３Ｂ１４８１；Ｃ３３Ｂ１４７７；Ｃ３３Ｂ１５１７；Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000126
配列番号２７８：ｈｕＩｇＧ１＿Ｇ１ｍ（１７）
Figure 2023517660000127
配列番号２７９ Ｆａｂ ＨＣ（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000128
配列番号２８０ Ｆａｂ ＨＣ（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000129
配列番号２８１ Ｆａｂ ＨＣ（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000130
配列番号２８２ Ｆａｂ ＨＣ（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000131
配列番号２８３ Ｆａｂ ＨＣ（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000132
配列番号２８４ Ｆａｂ ＨＣ（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000133
配列番号２８５ Ｆａｂ ＬＣ（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000134
配列番号２８６ Ｆａｂ ＬＣ（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000135
配列番号２８７ Ｆａｂ ＬＣ（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000136
配列番号２８８ Ｆａｂ ＬＣ（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000137
配列番号２８９ Ｆａｂ ＬＣ（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000138
配列番号２９０ Ｆａｂ ＬＣ（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000139
配列番号２９１（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ１－２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＧＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２９２（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ１－３）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＡＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２９３（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ１－５）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＹＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２９４（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ１－１２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＰＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２９５（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ１－１４）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＮＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２９６（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ１－２２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＳＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２９７（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ１－２７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＲＧＳＥＲＹＹＶＤＳ
ＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２９８（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ１－３２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＬＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２９９（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ１－３６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＶＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３００（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ１－４６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＴＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３０１（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ１－６３）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＦＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３０２（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ１－８９）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＷＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３０３（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ２－１２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＶＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３０４（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ２－１６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＰＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３０５（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ２－２０）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＲＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３０６（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ２－２２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＡＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３０７（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ２－２４）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＬＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３０８（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ２－３５）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＱＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３０９（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ２－５８）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＴＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３１０（Ｃ３３Ｂ１４７５ＶＨ２－８６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＨＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＳＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＧＹＮＷＮＱＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３１１（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ１－１）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＶＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３１２（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ１－２）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＲＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３１３（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ１－４）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＰＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３１４（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ１－１０）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＴＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３１５（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ１－１１）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＧＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３１６（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ１－１４）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＱＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３１７（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ１－１６）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＳＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３２８（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ１－２０）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＡＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３１９（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ１－２２）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＬＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３２０（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ１－２３）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＹＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３２１（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ１－３０）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＥＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３２２（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＬ１－３９）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＦＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３２３（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＬ１－４１）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＤＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３２４（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＬ１－６３）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＩＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３２５（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＬ１－９０）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＨＧＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３２６（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ２－３）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＶＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３２７（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ２－４）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＰＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３２８（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ２－７）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＲＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３２９（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ２－８）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＤＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３３０（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ２－１０）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＥＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３３１（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ２－１１）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＷＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３３２（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ２－２９）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＹＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３３３（Ｃ３３Ｂ１５１６ ＶＬ２－３５）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＡＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３３４（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＬ２－３７）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＮＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３３５（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＬ２－３８）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＫＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３３６（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＬ２－９０）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＬＹＳＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＬＰＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３３７（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－１）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＶＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３３８（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－３）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＳＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３３９（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－４）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＥＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３４０（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－６）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＨＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３４１（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－７）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＡＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３４２（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－８）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３４３（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－１０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＫＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３４４（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－１３）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＴＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３４５（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－１７）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＦＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３４６（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－２０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＶＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３４７（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－２１）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３４８（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－２７）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３４９（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－３８）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＨＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３５０（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ１－５６）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＩＧＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３５１（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ２－８）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＮＳＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３５２（Ｃ３３Ｂ１５１６ＶＨ２－９）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＧＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＳＡＧＫＥＬＥＷＦＧＨＩＦＳＴＧＨＩＮＹＤＳＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＮＡＡＡＬＦＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３５３（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－１）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＧＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３５４（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－７）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＤＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３５５（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－８）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＰＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３５６（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－１２）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＫＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３５７（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－１３）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＥＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３５８（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－１６）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＡＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３５９（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－２２）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＲＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３６０（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－２４）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＱＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３６１（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－２７）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＩＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３６２（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－３５）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＶＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３６３（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－４９）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＨＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３６４（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－６６）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＫＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３６５（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－６９）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＷＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３６６（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＬ１－７１）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＮＷＹＱＱＦＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＶＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＳＧＰＶＦＧＰＧＴＫＶＴＶＬ
配列番号３６７（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ１－１）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＧＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３６８（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ１－３）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＰＧＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３６９（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ１－４）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３７０（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ１－６）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＶＧＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３７１（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ１－８）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＧＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３７２（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ１－１１）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＧＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３７３（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ１－１７）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＥＧＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３７４（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ１－３３）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＡＧＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３７５（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ１－６０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＧＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３７６（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ１－７１）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＴＧＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３７７（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ２－７）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＮＳＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３７８（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ２－３０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＮＡＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３７９（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ２－３１）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＮＬＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３８０（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ２－６０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＮＰＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３８１（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ２－６８）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＮＴＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３８２（Ｃ３３Ｂ１５１７ＶＨ２－７６）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＡＳＩＲＮＹＹＷＳＷＩＲＱＴＡＧＫＧＬＥＷＬＧＨＩＹＳＴＧＮＩＨＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＮＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＮＱＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３８３（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ１－２）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＳＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３８４（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ１－３）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＱＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３８５（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ１－４）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＶＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３８６（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ１－５）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＧＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３８７（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ１－７）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＷＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３８８（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ１－１２）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＴＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３８９（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ１－１５）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＩＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３９０（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ１－２７）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＥＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３９１（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ１－２９）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＡＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３９２（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ１－３２）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＲＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３９３（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ１－４７）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＬＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３９４（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ２－８２）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＮＶＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３９５（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ２－１）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＮＡＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３９６（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ２－２）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＮＰＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３９７（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ２－８）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＮＬＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３９８（Ｃ３３Ｂ１５２２ＶＬ２－１７）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＦＣＡＡＷＤＤＳＬＮＴＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号３９９ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５２２）
ＧＧＳＩＳＳＹＹＷＧ
配列番号４００ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000140
配列番号４０１ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000141
配列番号４０２ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000142
配列番号４０３ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000143
配列番号４０４ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４８１）
ＧＩＴＦＳＮＹＷＭＳ
配列番号４０５ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000144
配列番号４０６ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000145
配列番号４０７ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000146
配列番号４０８ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000147
配列番号４０９ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000148
配列番号４１０ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４８１）
ＳＩＫＲＤＧＳＤＫＹ
配列番号４１１ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000149
配列番号４１２ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000150
配列番号４１３ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000151
配列番号４１４ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000152
配列番号４１５ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000153
配列番号４１６ ＨＣ ＡｂＭ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４８１）
ＧＥＦＤＹ
配列番号４１７ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000154
配列番号４１８ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000155
配列番号４１９ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000156
配列番号４２０ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000157
配列番号４２１ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000158
配列番号４２２ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000159
配列番号４２３ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000160
配列番号４２４ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000161
配列番号４２５ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000162
配列番号４２６ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000163
配列番号４２７ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000164
配列番号４２８ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000165
配列番号４２９ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000166
配列番号４３０ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000167
配列番号４３１ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000168
配列番号４３２ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000169
配列番号４３３ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000170
配列番号４３４ ＬＣ ＡｂＭ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000171
配列番号４３５ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000172
配列番号４３６ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000173
配列番号４３７ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000174
配列番号４３８ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000175
配列番号４３９ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000176
配列番号４４０ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000177
配列番号４４１ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000178
配列番号４４２ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000179
配列番号４４３ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000180
配列番号４４４ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000181
配列番号４４５ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000182
配列番号４４６ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000183
配列番号４４７ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000184
配列番号４４８ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000185
配列番号４４９ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000186
配列番号４５０ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000187
配列番号４５１ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000188
配列番号４５２ ＨＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000189
配列番号４５３ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000190
配列番号４５４ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000191
配列番号４５５ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000192
配列番号４５６ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000193
配列番号４５７ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000194
配列番号４５８ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000195
配列番号４５９ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000196
配列番号４６０ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000197
配列番号４６１ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000198
配列番号４６２ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000199
配列番号４６３ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000200
配列番号４６４ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000201
配列番号４６５ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000202
配列番号４６６ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000203
配列番号４６７ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000204
配列番号４６８ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000205
配列番号４６９ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000206
配列番号４７０ ＬＣ ＣＨＯＴＨＩＡ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000207
配列番号４７１ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000208
配列番号４７２ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000209
配列番号４７３ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000210
配列番号４７４ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000211
配列番号４７５ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000212
配列番号４７６ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000213
配列番号４７７ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000214
配列番号４７８ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000215
配列番号４７９ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000216
配列番号４８０ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000217
配列番号４８１ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000218
配列番号４８２ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000219
配列番号４８３ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000220
配列番号４８４ ＨＣＩＭＧＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000221
配列番号４８５ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000222
配列番号４８６ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000223
配列番号４８７ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000224
配列番号４８８ ＨＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000225
配列番号４８９ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000226
配列番号４９０ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000227
配列番号４９１ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000228
配列番号４９２ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000229
配列番号４９３ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000230
配列番号４９４ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000231
配列番号４９５ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000232
配列番号４９６ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000233
配列番号４９７ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000234
配列番号４９８ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000235
配列番号４９９ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000236
配列番号５００ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000237
配列番号５０１ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000238
配列番号５０２ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000239
配列番号５０３ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000240
配列番号５０４ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000241
配列番号５０５ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000242
配列番号５０６ ＬＣ ＩＭＧＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000243
配列番号５０７ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000244
配列番号５０８ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000245
配列番号５０９ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000246
配列番号５１０ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000247
配列番号５１１ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000248
配列番号５１２ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000249
配列番号５１３ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000250
配列番号５１４ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000251
配列番号５１５ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000252
配列番号５１６ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000253
配列番号５１７ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000254
配列番号５１８ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000255
配列番号５１９ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000256
配列番号５２０ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000257
配列番号５２１ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000258
配列番号５２２ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000259
配列番号５２３ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000260
配列番号５２４ ＨＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000261
配列番号５２５ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000262
配列番号５２６ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000263
配列番号５２７ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000264
配列番号５２８ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000265
配列番号５２９ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000266
配列番号５３０ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ１（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000267
配列番号５３１ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000268
配列番号５３２ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000269
配列番号５３３ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000270
配列番号５３４ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000271
配列番号５３５ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000272
配列番号５３６ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ２（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000273
配列番号５３７ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５２２）
Figure 2023517660000274
配列番号５３８ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７７）
Figure 2023517660000275
配列番号５３９ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４７５）
Figure 2023517660000276
配列番号５４０ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１７）
Figure 2023517660000277
配列番号５４１ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１５１６）
Figure 2023517660000278
配列番号５４２ ＬＣ ＣＯＮＴＡＣＴ ＣＤＲ３（Ｃ３３Ｂ１４８１）
Figure 2023517660000279
参考文献
１．ｗｗｗ＿ｌｌｓ＿ｏｒｇ／ｓｉｔｅｓ／ｄｅｆａｕｌｔ／ｆｉｌｅｓ／ｆｉｌｅ＿ａｓｓｅｔｓ／ＰＳ３２＿ＡＭＬ＿Ｂｏｏｋｌｅｔ＿２０１９＿ＦＩＮＡＬ．ｐｄｆ
２．Ｄ Ｈ Ｗｉｓｅｍａｎ，Ｂ Ｆ Ｇｒｅｙｓｔｏｋｅ＆Ｔ Ｃ Ｐ Ｓｏｍｅｒｖａｉｌｌｅ，Ｔｈｅ ｖａｒｉｅｔｙ ｏｆ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ，，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ｖｏｌｕｍｅ ３３，ｐａｇｅｓ３０９１－３０９８（２０１４）
３．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ：Ｃａｎｃｅｒ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｆｉｇｕｒｅｓ ２０１４．Ａｔｌａｎｔａ，Ｇａ：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ，２０１４．Ａｖａｉｌａｂｌｅ ｏｎｌｉｎｅＥｘｉｔ Ｄｉｓｃｌａｉｍｅｒ
４．ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ２０１３８
５．Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐ７５／ＡＩＲＭ１ ｏｒ ＣＤ３３ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｏｒ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ，Ｖｉｔａｌｅ Ｃ．，Ｒｏｍａｇｎａｎｉ Ｃ．，Ｆａｌｃｏ Ｍ．，Ｐｏｎｔｅ Ｍ．，Ｖｉｔａｌｅ Ｍ．，Ｍｏｒｅｔｔａ Ａ．，Ｂａｃｉｇａｌｕｐｏ Ａ．，Ｍｏｒｅｔｔａ Ｌ．，Ｍｉｎｇａｒｉ Ｍ．Ｃ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６：１５０９１－１５０９６（１９９９）
６．ｈｎｉｎｇｅｒ Ａ．Ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ（２０１４）４，ｅ２１８
７．Ｆｅｌｉｘ Ｓ．Ｌｉｃｈｔｅｎｅｇｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｃｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ，Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ．２０１７；１０：１４２
本発明は、本明細書中に記載の具体的な実施形態による範囲において限定されないものとする。実際に、本明細書中に記載のものに加えて本発明の様々な変更形態が前述の説明及び添付の図面から当業者に明らかになるであろう。そのような変更形態は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。全ての値は、近似であり、説明のために提供されることがさらに理解されるであろう。
本出願全体を通して、特許、特許出願、刊行物、製品説明及びプロトコールが引用され、これらの開示は、全ての目的のためにそれらの全体において参照により本明細書中に組み込まれる。

Claims (65)

  1. ＣＤ３３に結合する単離タンパク質であって、
    ａ）配列番号５３の重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
    ｂ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
    ｃ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
    ｄ）配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；
    ｅ）配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３；又は
    ｆ）配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３
    を含む単離タンパク質。
  2. ａ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
    ｂ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
    ｃ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
    ｄ）それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９；
    ｅ）それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０；又は
    ｆ）それぞれ配列番号２５５、２５８及び２６１
    のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の単離タンパク質。
  3. ＣＤ３３に結合する単離タンパク質であって、
    ａ）それぞれ配列番号２９、３７及び４６；
    ｂ）それぞれ配列番号３２、４０及び４９；
    ｃ）それぞれ配列番号３４、４３及び５１；
    ｄ）それぞれ配列番号２５３、２５６及び２５９；
    ｅ）それぞれ配列番号２５４、２５７及び２６０；又は
    ｆ）それぞれ配列番号２５５、２５８及び２６１
    のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む単離タンパク質。
  4. ａ）配列番号５３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
    ｂ）配列番号５６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
    ｃ）配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号８７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
    ｄ）配列番号２６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；
    ｅ）配列番号２６３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３；又は
    ｆ）配列番号２６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３並びに配列番号２７３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３
    を含む、請求項１又は２に記載の単離タンパク質。
  5. ａ）それぞれ配列番号２９、３７、４６、６３、７０及び７６；
    ｂ）それぞれ配列番号３２、４０、４９、６６、７０及び７６；
    ｃ）それぞれ配列番号３４、４３、５１、６８、７４及び８０；
    ｄ）それぞれ配列番号２５３、２５６、２５９、２６５、７４及び２６９；
    ｅ）それぞれ配列番号２５４、２５７、２６０、６６、２６７及び７６；又は
    ｆ）それぞれ配列番号２５５、２５８、２６１、２６６、２６８及び２７０
    のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、請求項３又は４に記載の単離タンパク質。
  6. 配列番号５３、５６、５９、２６２、２６３、２６４、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２又は３８２のＶＨと、配列番号８２、８５、８７、２７１、２７２、２７３、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７又は３９８のＶＬとを含む、請求項１～５の何れか一項に記載の単離タンパク質。
  7. ａ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号８２のＶＬ；
    ｂ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号８７のＶＬ；
    ｄ）配列番号２６２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｅ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｆ）配列番号２６４のＶＨ及び配列番号２７３のＶＬ；
    ｇ）配列番号２９１のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｈ）配列番号２９２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｉ）配列番号２９３のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｊ）配列番号２９４のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｋ）配列番号２９５のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｌ）配列番号２９６のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｍ）配列番号２９７のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｎ）配列番号２９８のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｏ）配列番号２９９のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｐ）配列番号３００のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｑ）配列番号３０１のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｒ）配列番号３０２のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｓ）配列番号３０３のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｔ）配列番号３０４のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｕ）配列番号３０５のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｖ）配列番号３０６のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｗ）配列番号３０７のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｘ）配列番号３０８のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｙ）配列番号３０９のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ｚ）配列番号３１０のＶＨ及び配列番号２７１のＶＬ；
    ａａ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１１のＶＬ；
    ａｂ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１２のＶＬ；
    ａｃ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１３のＶＬ；
    ａｄ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１４のＶＬ；
    ａｅ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１５のＶＬ；
    ａｆ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１６のＶＬ；
    ａｇ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１７のＶＬ；
    ａｈ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１８のＶＬ；
    ａｉ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３１９のＶＬ；
    ａｊ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２０のＶＬ；
    ａｋ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２１のＶＬ；
    ａｌ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２２のＶＬ；
    ａｍ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２３のＶＬ；
    ａｎ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２４のＶＬ；
    ａｏ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２５のＶＬ；
    ａｐ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２６のＶＬ；
    ａｑ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２７のＶＬ；
    ａｒ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２８のＶＬ；
    ａｓ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３２９のＶＬ；
    ａｔ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３０のＶＬ；
    ａｕ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３１のＶＬ；
    ａｖ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３２のＶＬ；
    ａｗ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３３のＶＬ；
    ａｘ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３４のＶＬ；
    ａｙ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３５のＶＬ；
    ａｚ）配列番号２６３のＶＨ及び配列番号３３６のＶＬ；
    ｂａ）配列番号３３７のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｂ）配列番号３３８のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｃ）配列番号３３９のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｄ）配列番号３４０のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｅ）配列番号３４１のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｆ）配列番号３４２のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｇ）配列番号３４３のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｈ）配列番号３４４のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｉ）配列番号３４５のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｊ）配列番号３４６のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｋ）配列番号３４７のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｌ）配列番号３４８のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｍ）配列番号３４９のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｎ）配列番号３５０のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｏ）配列番号３５１のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｐ）配列番号３５２のＶＨ及び配列番号２７２のＶＬ；
    ｂｑ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５３のＶＬ；
    ｂｒ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５４のＶＬ；
    ｂｓ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５５のＶＬ；
    ｂｔ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５６のＶＬ；
    ｂｕ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５７のＶＬ；
    ｂｖ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５８のＶＬ；
    ｂｗ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３５９のＶＬ；
    ｂｘ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６０のＶＬ；
    ｂｙ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６１のＶＬ；
    ｂｚ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６２のＶＬ；
    ｃａ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６３のＶＬ；
    ｃｂ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６４のＶＬ；
    ｃｃ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６５のＶＬ；
    ｃｄ）配列番号５６のＶＨ及び配列番号３６６のＶＬ；
    ｃｅ）配列番号３６７のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｆ）配列番号３６８のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｇ）配列番号３６９のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｈ）配列番号３７０のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｉ）配列番号３７１のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｊ）配列番号３７２のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｋ）配列番号３７３のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｌ）配列番号３７４のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｍ）配列番号３７５のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｎ）配列番号３７６のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｏ）配列番号３７７のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｐ）配列番号３７８のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｑ）配列番号３７９のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｒ）配列番号３８０のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｓ）配列番号３８１のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｔ）配列番号３８２のＶＨ及び配列番号８５のＶＬ；
    ｃｕ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８３のＶＬ；
    ｃｖ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８４のＶＬ；
    ｃｗ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８５のＶＬ；
    ｃｘ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８６のＶＬ；
    ｃｙ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８７のＶＬ；
    ｃｚ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８８のＶＬ；
    ｄａ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３８９のＶＬ；
    ｄｂ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９０のＶＬ；
    ｄｃ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９１のＶＬ；
    ｄｄ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９２のＶＬ；
    ｄｅ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９３のＶＬ；
    ｄｆ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９４のＶＬ；
    ｄｇ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９５のＶＬ；
    ｄｈ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９６のＶＬ；
    ｄｉ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９７のＶＬ；又は
    ｄｊ）配列番号５３のＶＨ及び配列番号３９８のＶＬ
    を含む、請求項６に記載の単離タンパク質。
  8. Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ又はＶＨＨである、請求項１～７の何れか一項に記載の単離タンパク質。
  9. 前記ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）又は前記ＶＬ、前記Ｌ１及び前記ＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、請求項８に記載の単離タンパク質。
  10. 前記Ｌ１は、
    ａ）配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列；
    ｂ）約５～５０アミノ酸；約５～４０アミノ酸；約１０～３０アミノ酸；又は約１０～２０アミノ酸
    を含む、請求項９に記載の単離タンパク質。
  11. 配列番号２１３、２１６、２１９、２７４、２７５又は２７６のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖである、請求項１０に記載の単離タンパク質。
  12. 免疫グロブリン（Ｉｇ）；前記Ｉｇの断片；Ｉｇ定常領域；前記Ｉｇ定常領域の断片；Ｆｃ領域；Ｆｃ領域を含む前記Ｉｇ定常領域の断片；ＣＨ２ドメインを含む前記Ｉｇ定常領域の断片；ＣＨ３ドメインを含む前記Ｉｇ定常領域の断片；ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む前記Ｉｇ定常領域の断片；ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む前記Ｉｇ定常領域の断片；ヒンジ、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む前記Ｉｇ定常領域の断片；トランスフェリン；アルブミン；アルブミン結合ドメイン；又はポリエチレングリコールから選択される半減期延長又は調整部分に複合化される、請求項１～１１の何れか一項に記載の単離タンパク質。
  13. ＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含み、
    ａ）前記抗原結合ドメインは、前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の前記断片のＮ末端に複合化されるか；
    ｂ）前記抗原結合ドメインは、前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の前記断片のＣ末端に複合化されるか；又は
    ｃ）前記抗原結合ドメインは、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む第２のリンカー（Ｌ２）を介して前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の前記断片に複合化される、請求項１２に記載の単離タンパク質。
  14. 単一特異性タンパク質、多特異性タンパク質、二特異性タンパク質又は三特異性タンパク質である、請求項１～１３の何れか一項に記載の単離タンパク質。
  15. 前記多特異性タンパク質、前記二特異性タンパク質又は前記三特異性タンパク質は、それぞれ独立に、リンパ球、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上の抗原に結合する抗原結合ドメインを含む、請求項１４に記載の単離タンパク質。
  16. 前記多特異性タンパク質、前記二特異性タンパク質又は前記三特異性タンパク質は、それぞれ独立に、ＴＲＧＶ９、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ３、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５又はＮＫＧ２Ｃに結合する抗原結合ドメインを含む、請求項１５に記載の単離タンパク質。
  17. ＣＤ３３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ＶＨＨ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ又はｄＡｂを含むか；又はＣＤ３３に結合する前記第１の抗原結合ドメインは、前記ｓｃＦｖを含み、及びリンパ球抗原に結合する前記第２の抗原結合ドメインは、前記ＶＨＨを含む、請求項１５又は１６に記載の単離タンパク質。
  18. 前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の前記断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプであり、任意選択的に、前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の前記断片は、ＩｇＧ１である、請求項１２～１７の何れか一項に記載の単離タンパク質。
  19. 前記Ｉｇ定常領域の前記断片は、配列番号２７７又は２７８の配列を有する、請求項１８に記載の単離タンパク質。
  20. 前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の前記断片は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）への前記タンパク質の減少した結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含み；前記ＦｃγＲへの前記タンパク質の減少した結合をもたらす前記少なくとも１つの突然変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項１２～１９の何れか一項に記載の単離タンパク質。
  21. 前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の前記断片は、ＦｃγＲへの前記タンパク質の増強された結合をもたらす少なくとも１つの突然変異を含み；前記ＦｃγＲへの前記タンパク質の増強された結合をもたらす前記少なくとも１つの突然変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項１２～１９の何れか一項に記載の単離タンパク質。
  22. 前記ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ又はそれらの任意の組み合わせである、請求項２０又は２１に記載の単離タンパク質。
  23. 前記Ｉｇ定常領域の前記断片の前記Ｉｇ定常領域は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ及びＨ４３５Ｒからなる群から選択される、前記タンパク質の半減期を調整する少なくとも１つの突然変異を含み、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項１２～２２の何れか一項に記載の単離タンパク質。
  24. Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択される、前記Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの突然変異を含み、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項１２～２３の何れか一項に記載の単離タンパク質。
  25. ＣＤ３３に結合する前記第１の抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は前記第１のＩｇ定常領域の断片に複合化され、及び／又はリンパ球抗原に結合する前記第２の抗原結合ドメインは、第２の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又は前記第２のＩｇ定常領域の断片に複合化される、それぞれ独立に請求項１４～２４の何れか一項に記載の単離された多特異性タンパク質、二特異性タンパク質又は三特異性タンパク質。
  26. ＣＤ３３に結合する前記第１の抗原結合ドメインと、前記第１のＩｇ定常領域又は前記第１のＩｇ定常領域の前記断片との間及びリンパ球抗原に結合する前記第２の抗原結合ドメインと、前記第２のＩｇ定常領域又は前記第２のＩｇ定常領域の前記断片との間に第２のリンカー（Ｌ２）をさらに含む、それぞれ独立に請求項２５に記載の単離された多特異性タンパク質、二特異性タンパク質又は三特異性タンパク質。
  27. 前記Ｌ２は、配列番号１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９又は１４０の何れか１つのアミノ酸配列を含む、それぞれ独立に請求項２６に記載の単離された多特異性タンパク質、二特異性タンパク質又は三特異性タンパク質。
  28. 前記第１のＩｇ定常領域又は前記第１のＩｇ定常領域の前記断片及び前記第２のＩｇ定常領域又は前記第２のＩｇ定常領域の前記断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプである、請求項２５～２７の何れか一項に記載の単離された二特異性タンパク質。
  29. 前記第１のＩｇ定常領域又は前記第１のＩｇ定常領域の前記断片及び前記第２のＩｇ定常領域又は前記第２のＩｇ定常領域の前記断片は、以下の突然変異：
    前記第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ及び前記第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ；又は
    前記第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ及び前記第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ
    を含む、請求項２５～２８の何れか一項に記載の単離された二特異性タンパク質。
  30. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
    ａ）請求項１～１１の何れか一項に記載のＣＤ３３に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン；
    ｂ）膜貫通ドメイン；及び
    ｃ）任意選択的に少なくとも１つの同時刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
    を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
  31. ＣＤ８ａ－ヒンジ領域をさらに含む、請求項３０に記載のＣＡＲ。
  32. ａ）前記膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含み；及び
    ｂ）前記細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）構成成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）構成成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）構成成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー構成成分及びそれらの組み合わせを含む同時刺激ドメインを含む、請求項３０又は３１に記載のＣＡＲ。
  33. ａ）前記ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；
    ｂ）前記膜貫通ドメインは、配列番号１６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；及び／又は
    ｃ）前記細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ１３７構成成分；配列番号１６４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ３ｚ構成成分；又は配列番号１６５のアミノ酸配列を有する同時刺激ドメインを含む、請求項３０～３２の何れか一項に記載のＣＡＲ。
  34. ＣＤ３３に結合する前記抗原結合ドメインを含む前記細胞外ドメインは、シグナルポリペプチドをさらに含む、請求項３０～３３の何れか一項に記載のＣＡＲ。
  35. 前記シグナルポリペプチドは、配列番号１６６のアミノ酸配列を含む、請求項３４に記載のＣＡＲ。
  36. 前記ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドは、配列番号１６２のアミノ酸配列を含む、請求項３０～３５の何れか一項に記載のＣＡＲ。
  37. 前記ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む、請求項３０～３６の何れか一項に記載のＣＡＲ。
  38. 請求項３０～３７の何れか一項に記載のＣＡＲを発現する、単離されたリンパ球。
  39. Ｔリンパ球又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項３８に記載の単離されたリンパ球。
  40. 治療剤、造影剤又は放射活性剤に複合化される、請求項１～２９の何れか一項に記載の単離タンパク質又は請求項３０～３７の何れか一項に記載のＣＡＲを含む免疫複合体。
  41. 前記放射活性剤は、２２５Ａｃ、１１１Ｉｎ、８９Ｚｒ、３２Ｐ、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、７７Ａｓ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１３１Ｉ、１５３Ｓｍ、１５９Ｇｄ、１６５Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２５５Ｆｍ、２２７Ｔｈ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ又は８６Ｙから選択される放射性金属イオンを含む、請求項４０に記載の免疫複合体。
  42. 前記放射性金属イオンは、キレート部分に複合化され、
    （ａ）前記キレート部分は、式（Ｉ）：
    Figure 2023517660000280
    （式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のそれぞれは、独立に、ＣＨＱＣＯ２Ｘであり、
    Ｑは、独立に、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は（Ｃ１～Ｃ２アルキル）フェニルであり、及び
    Ｘは、独立に、水素、ベンジル、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；及び
    Ｚは、（ＣＨ２）ｎＹであり、
    ｎは、１～１０であり、及び
    Ｙは、第２のクリック反応パートナーに共有結合される求電子部分又は求核部分であり；
    代わりに、Ｚは、水素であり；及び
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のそれぞれは、独立に、ＣＨＱＣＯ２Ｘであり、
    Ｑは、独立に、水素、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は（Ｃ１～Ｃ２アルキル）フェニルであり、及び
    Ｘは、独立に、水素、ベンジル、Ｃ１～Ｃ４アルキル又は第２のクリック反応パートナーに共有結合される求電子部分若しくは求核部分である）
    の構造を有する大環状分子を含み；
    代わりに、前記キレート剤は、開鎖リガンドを含むか；又は
    （ｂ）前記キレート部分は、式（ＩＩ）：
    Figure 2023517660000281
    の構造又は式（ＩＩＩ）：
    Figure 2023517660000282
    の構造を有する大環状分子を含む、請求項４１に記載の免疫複合体。
  43. 式（ＩＶ）
    Figure 2023517660000283
    （式中、前記タンパク質は、請求項１～２９の何れか一項に記載の単離タンパク質又は請求項３０～３７の何れか一項に記載のＣＡＲである）
    の免疫複合体。
  44. 式（Ｖ）
    Figure 2023517660000284
    （式中、前記タンパク質は、請求項１～２９の何れか一項に記載の単離タンパク質又は請求項３０～３７の何れか一項に記載のＣＡＲである）
    の免疫複合体。
  45. 請求項１～２９の何れか一項に記載の単離タンパク質、請求項３０～３７の何れか一項に記載のＣＡＲ、請求項３８若しくは３９に記載の単離されたリンパ球又は請求項４０～４４の何れか一項に記載の免疫複合体と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
  46. 請求項１～２９の何れか一項に記載の単離タンパク質、請求項３０～３７の何れか一項に記載のＣＡＲ又は請求項４０～４４の何れか一項に記載の免疫複合体をコードするポリヌクレオチド。
  47. 請求項４６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  48. 請求項４７に記載のベクター又は請求項４６に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
  49. 請求項１～２９の何れか一項に記載の単離タンパク質を作製する方法であって、前記タンパク質が発現される条件において、請求項４８に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿主細胞によって産生される前記タンパク質を回収することとを含む方法。
  50. 請求項４０～４４の何れか一項に記載の免疫複合体を作製する方法であって、前記タンパク質が発現される条件において、請求項４８に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿主細胞によって産生される前記タンパク質を回収することと、前記宿主細胞によって産生される前記タンパク質を前記薬剤と複合化することとを含む方法。
  51. 請求項１～２９の何れか一項に記載の単離タンパク質に結合する抗イディオタイプ抗体。
  52. 請求項１～２９の何れか一項に記載の単離タンパク質又は請求項３０～３７の何れか一項に記載のＣＡＲを含むキット。
  53. 対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法であって、前記ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、前記対象に、治療的有効量の、請求項１～２９の何れか一項に記載の単離タンパク質又は請求項４０～４４の何れか一項に記載の免疫複合体を投与することを含む方法。
  54. ＣＤ３３発現癌を有する対象を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療的有効量の、請求項３８又は３９に記載のリンパ球を投与することを含み、それにより、前記リンパ球は、前記対象において前記ＣＤ３３発現癌の死滅に介在する、方法。
  55. 前記ＣＤ３３発現癌は、血液癌である、請求項５３又は５４に記載の方法。
  56. 前記血液癌は、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記単離タンパク質又は前記免疫複合体は、第２の治療剤と組み合わせて投与される、請求項５３～５６の何れか一項に記載の方法。
  58. 前記第２の治療剤は、手術、化学療法、アンドロゲン欠乏療法若しくは放射線又はそれらの任意の組み合わせである、請求項５７に記載の方法。
  59. 対象においてＣＤ３３発現癌を処置する方法であって、前記ＣＤ３３発現癌を処置するために十分な時間にわたり、前記対象に治療的有効量の前記を投与することを含む方法での使用のための、請求項１～２９の何れか一項に記載の単離タンパク質又は請求項４０～４４の何れか一項に記載の免疫複合体。
  60. ＣＤ３３発現癌を有する対象を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療的有効量の、請求項３８又は３９に記載のリンパ球を投与することを含み、それにより、前記リンパ球は、前記対象において前記ＣＤ３３発現癌の死滅に介在する、方法での使用のための、請求項３８又は３９に記載のリンパ球。
  61. 前記ＣＤ３３発現癌は、血液癌である、請求項５９又は６０に記載の使用のための単離タンパク質、免疫複合体又はリンパ球。
  62. 前記血液癌は、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）である、請求項６１に記載の使用のための単離タンパク質、免疫複合体又はリンパ球。
  63. 前記単離タンパク質又は前記免疫複合体は、第２の治療剤と組み合わせて投与される、請求項５９～６２の何れか一項に記載の使用のための単離タンパク質、免疫複合体又はリンパ球。
  64. 前記第２の治療剤は、手術、化学療法、アンドロゲン欠乏療法若しくは放射線又はそれらの任意の組み合わせである、請求項６３に記載の使用のための単離タンパク質、免疫複合体又はリンパ球。
  65. 対象において癌の存在を検出する方法であって、
    ａ）前記対象から得られた細胞試料を、請求項３０～３７の何れか一項に記載のＣＡＲと接触させ、それによりＣＡＲ－細胞複合体を形成することと、
    ｂ）前記ＣＡＲ－細胞複合体を検出することであって、前記ＣＡＲ－細胞複合体の検出は、前記対象における前記癌の存在を示す、検出することと
    を含む方法。
JP2022554748A 2020-03-13 2021-03-15 シグレック３／ｃｄ３３に結合させるための材料及び方法 Pending JP2023517660A (ja)

Applications Claiming Priority (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202062989093P 2020-03-13 2020-03-13
US202062989187P 2020-03-13 2020-03-13
US202062989071P 2020-03-13 2020-03-13
US202062989230P 2020-03-13 2020-03-13
US202062989120P 2020-03-13 2020-03-13
US62/989,120 2020-03-13
US62/989,187 2020-03-13
US62/989,230 2020-03-13
US62/989,093 2020-03-13
US62/989,071 2020-03-13
PCT/IB2021/052121 WO2021181366A1 (en) 2020-03-13 2021-03-15 Materials and methods for binding siglec-3/cd33

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2023517660A true JP2023517660A (ja) 2023-04-26
JPWO2021181366A5 JPWO2021181366A5 (ja) 2024-03-19

Family

ID=75108687

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022554748A Pending JP2023517660A (ja) 2020-03-13 2021-03-15 シグレック３／ｃｄ３３に結合させるための材料及び方法

Country Status (18)

Country Link
US (3) US20230365684A1 (ja)
EP (4) EP4233895A3 (ja)
JP (1) JP2023517660A (ja)
KR (4) KR20230051615A (ja)
CN (1) CN115768482A (ja)
AU (4) AU2021235564A1 (ja)
BR (1) BR112022018176A2 (ja)
CA (1) CA3171113A1 (ja)
CL (4) CL2022002488A1 (ja)
CO (1) CO2022013823A2 (ja)
EC (1) ECSP22071278A (ja)
IL (4) IL302351A (ja)
JO (1) JOP20220220A1 (ja)
MX (1) MX2022011320A (ja)
PE (4) PE20230001A1 (ja)
TW (1) TW202144418A (ja)
UY (1) UY39130A (ja)
WO (1) WO2021181366A1 (ja)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2022344595A1 (en) * 2021-09-13 2024-05-02 Janssen Biotech, Inc CD33 X Vδ2 MULTISPECIFIC ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF CANCER

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3854480A (en) 1969-04-01 1974-12-17 Alza Corp Drug-delivery system
US3832253A (en) 1973-03-21 1974-08-27 Baxter Laboratories Inc Method of making an inflatable balloon catheter
US4667014A (en) 1983-03-07 1987-05-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Nonapeptide and decapeptide analogs of LHRH, useful as LHRH antagonists
US4452775A (en) 1982-12-03 1984-06-05 Syntex (U.S.A.) Inc. Cholesterol matrix delivery system for sustained release of macromolecules
CA1200416A (en) 1983-05-13 1986-02-11 Societe Des Produits Nestle S.A. Food process
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5075109A (en) 1986-10-24 1991-12-24 Southern Research Institute Method of potentiating an immune response
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
JPH04167172A (ja) 1990-10-31 1992-06-15 Nec Corp ベクトルプロセッサ
ATE255131T1 (de) 1991-06-14 2003-12-15 Genentech Inc Humanisierter heregulin antikörper
US5932448A (en) 1991-11-29 1999-08-03 Protein Design Labs., Inc. Bispecific antibody heterodimers
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6818749B1 (en) 1998-10-31 2004-11-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Variants of humanized anti carcinoma monoclonal antibody cc49
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7041870B2 (en) 2000-11-30 2006-05-09 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
MXPA05000511A (es) 2001-07-12 2005-09-30 Jefferson Foote Anticuepros super humanizados.
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
DK3050963T3 (da) 2005-03-31 2019-12-09 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fremgangsmåde til fremstilling af polypeptid ved regulering af arrangement
DE102005028778A1 (de) 2005-06-22 2006-12-28 SUNJÜT Deutschland GmbH Mehrlagige Folie mit einer Barriere- und einer antistatischen Lage
EP1999154B1 (en) 2006-03-24 2012-10-24 Merck Patent GmbH Engineered heterodimeric protein domains
JP2009541275A (ja) 2006-06-22 2009-11-26 ノボ・ノルデイスク・エー／エス 二重特異性抗体の生産
CA2671949C (en) 2006-12-18 2011-11-01 Arigen Pharmaceuticals, Inc. Helicobacter pylori eradicating agent having inhibitory activity on gastric acid secretion
US8748356B2 (en) 2007-10-19 2014-06-10 Janssen Biotech, Inc. Methods for use in human-adapting monoclonal antibodies
ES2564523T3 (es) 2007-12-19 2016-03-23 Janssen Biotech, Inc. Diseño y generación de bibliotecas de presentación en fago por pIX de novo humanas mediante fusión con pIX o pVII, vectores, anticuerpos y métodos
MX2010011955A (es) 2008-04-29 2011-01-21 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
EP2347038A4 (en) 2008-10-14 2013-06-12 Janssen Biotech Inc METHOD FOR HUMANIZATION AND AFFINITY TREATMENT OF ANTIBODIES
EP2424567B1 (en) 2009-04-27 2018-11-21 OncoMed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
SG10201800757TA (en) 2010-04-20 2018-02-27 Genmab As Heterodimeric antibody fc-containing proteins and methods for production thereof
CA2797981C (en) 2010-05-14 2019-04-23 Rinat Neuroscience Corporation Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
EP2420253A1 (en) 2010-08-20 2012-02-22 Leadartis, S.L. Engineering multifunctional and multivalent molecules with collagen XV trimerization domain
PL2635607T3 (pl) 2010-11-05 2020-05-18 Zymeworks Inc. Projekt stabilnego przeciwciała heterodimerowego z mutacjami w domenie FC
SG10201805291TA (en) 2011-10-27 2018-08-30 Genmab As Production of heterodimeric proteins
CA2854233C (en) 2011-11-04 2020-05-12 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain
DK2794905T3 (da) 2011-12-20 2020-07-06 Medimmune Llc Modificerede polypeptider til bispecifikke antistofgrundstrukturer
MX360109B (es) 2012-04-20 2018-10-23 Merus Nv Metodos y medios para la produccion de moleculas de tipo ig.
LT2970980T (lt) 2013-03-15 2018-10-25 Janssen Biotech, Inc. Gamybos būdas kontroliuoti c galinio lizino, galaktozės ir sialo rūgšties kiekį rekombinantiniuose baltymuose
SG11201701599UA (en) 2014-09-05 2017-03-30 Janssen Pharmaceutica Nv Cd123 binding agents and uses thereof
EP3307779A2 (en) * 2015-06-12 2018-04-18 Alector LLC Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
ES2897217T3 (es) 2016-09-30 2022-02-28 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos frente a p95HER2
SG11202002533QA (en) 2017-09-22 2020-04-29 Kite Pharma Inc Chimeric polypeptides and uses thereof
CN111491670A (zh) 2017-12-18 2020-08-04 詹森生物科技公司 多肽的放射性标记
JOP20190116A1 (ar) * 2018-05-24 2019-11-24 Janssen Biotech Inc الأجسام المضادة لتكتل التمايز 33 (cd33)، والأجسام المضادة ثنائية النوعية لتكتل التمايز 33 (cd33)/تكتل التمايز 3 (cd3) واستخداماتها

Also Published As

Publication number Publication date
TW202144418A (zh) 2021-12-01
KR20230051615A (ko) 2023-04-18
KR20220154728A (ko) 2022-11-22
AU2023202536A1 (en) 2023-05-18
EP4233895A3 (en) 2023-09-27
ECSP22071278A (es) 2022-10-31
IL302349A (en) 2023-06-01
IL296263A (en) 2022-11-01
MX2022011320A (es) 2022-12-08
IL302347A (en) 2023-06-01
PE20230001A1 (es) 2023-01-05
US20230365684A1 (en) 2023-11-16
CL2023000911A1 (es) 2023-09-29
EP4233894A3 (en) 2023-09-27
KR20230051617A (ko) 2023-04-18
US20230365683A1 (en) 2023-11-16
CO2022013823A2 (es) 2022-10-11
PE20240019A1 (es) 2024-01-04
WO2021181366A1 (en) 2021-09-16
EP4233894A2 (en) 2023-08-30
CL2023000909A1 (es) 2023-09-29
US20230250171A1 (en) 2023-08-10
AU2023202538A1 (en) 2023-05-18
CA3171113A1 (en) 2021-09-16
AU2023202520A1 (en) 2023-05-11
AU2021235564A1 (en) 2022-11-03
PE20240020A1 (es) 2024-01-04
CL2023000910A1 (es) 2023-09-29
EP4117715A1 (en) 2023-01-18
EP4233895A2 (en) 2023-08-30
UY39130A (es) 2021-09-30
PE20231517A1 (es) 2023-09-28
BR112022018176A2 (pt) 2022-12-06
KR20230051616A (ko) 2023-04-18
AU2023202520A9 (en) 2023-05-25
CL2022002488A1 (es) 2023-03-03
EP4233893A3 (en) 2023-09-27
JOP20220220A1 (ar) 2023-01-30
IL302351A (en) 2023-06-01
CN115768482A (zh) 2023-03-07
EP4233893A2 (en) 2023-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7506817B2 (ja) カリクレイン関連ペプチダーゼ２抗原結合ドメインを含むタンパク質及びその使用
US20220033505A1 (en) Proteins comprising hla-g antigen binding domains and their uses
US20230365683A1 (en) Materials And Methods For Binding Siglec-3/CD33
US20230040715A1 (en) Proteins comprising cd3 antigen binding domains and uses thereof
WO2021240388A1 (en) Proteins comprising cd3 antigen binding domains and uses thereof
WO2023046322A1 (en) Proteins comprising cd20 binding domains, and uses thereof
WO2022192649A1 (en) Uses of cd79b antibodies for autoimmune therapeutic applications

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240308

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20240308