KR20230051616A - Siglec-3/cd33을 결합시키기 위한 물질 및 방법 - Google Patents

Siglec-3/cd33을 결합시키기 위한 물질 및 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20230051616A
KR20230051616A KR1020237011668A KR20237011668A KR20230051616A KR 20230051616 A KR20230051616 A KR 20230051616A KR 1020237011668 A KR1020237011668 A KR 1020237011668A KR 20237011668 A KR20237011668 A KR 20237011668A KR 20230051616 A KR20230051616 A KR 20230051616A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
hcdr3
hcdr2
hcdr1
nos
Prior art date
Application number
KR1020237011668A
Other languages
English (en)
Inventor
패트릭 존 두난
라즈쿠마르 가네산
메하바우 게타훈 데베
사티아데비 벤카타라마니
산자야 싱
이크발 에스. 그루얼
칼라 알 위하겐
Original Assignee
얀센 바이오테크 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 얀센 바이오테크 인코포레이티드 filed Critical 얀센 바이오테크 인코포레이티드
Publication of KR20230051616A publication Critical patent/KR20230051616A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001111—Immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/464412—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464424—CD20
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
    • A61K51/1096—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies radioimmunotoxins, i.e. conjugates being structurally as defined in A61K51/1093, and including a radioactive nucleus for use in radiotherapeutic applications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2815—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Seal Device For Vehicle (AREA)
  • Package Frames And Binding Bands (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 골수 세포 표면 항원 CD33 단백질에 결합하는 항원 결합 도메인, 이를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포, 이들의 생성 및 사용 방법을 제공한다.

Description

SIGLEC-3/CD33을 결합시키기 위한 물질 및 방법{MATERIALS AND METHODS FOR BINDING SIGLEC-3/CD33}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 3월 13일자로 출원된 미국 가출원 62/989093호, 2020년 3월 13일자로 출원된 미국 가출원 62/989071호, 2020년 3월 13일자로 출원된 미국 가출원 62/989120호, 2020년 3월 13일자로 출원된 미국 가출원 62/989187호, 및 2020년 3월 13일자로 출원된 미국 가출원 62/989230호에 대한 우선권을 주장한다.
기술분야
본 발명은 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 골수 세포 표면 항원 CD33 단백질에 결합하는 항원 결합 도메인, 이를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포, 이들의 생성 및 사용 방법을 제공한다.
시알산 결합 면역글로불린 유사 렉틴 3(Siglec-3)으로도 알려진 골수 세포 표면 항원 CD33은 시알산 결합 단백질 패밀리의 구성원이다. CD33은 세포외 도메인(ECD) 및 세포내 면역수용체 티로신 기반 억제제 모티프(ITIM) 모티프(Uniprot.org)에 N-말단 시알산 결합 도메인이 있는 I형 단일 패스 막관통 단백질이다[4].
정상 세포에서 CD33은 면역 세포 유지 및 세포 간 상호작용에 관여한다[5]. CD33 단백질은 적어도 골수, 폐, 피부, 맹장, 비장, 림프절, 및 편도선에서 발현된다. CD33 mRNA의 발현은 골수, 뇌, 눈, 폐, 내분비 조직, 침샘, 식도, 위, 결장, 직장, 간, 담낭, 췌장, 신장, 방광, 남성과 여성의 생식 조직, 전립선, 유방, 심장, 평활근, 골격의 근육, 지방조직, 피부, 흉선, 맹장, 비장, 림프절, 편도선, 과립구, 및 혈액(예를 들어, PBMC, 수지상 세포, 및 림프구)을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다양한 조직 및 기관에서 발견된다. 예를 들어, www.proteinatlas.org/ENSG00000105383-CD33/tissue 참조.
CD33은 AML 환자의 90%에서 발현되며[6], AML 면역요법에 대해 가장 널리 연구되는 표면 항원 중 하나이다. 항체-약물/항체-독소 접합체, 키메라 항원 수용체(CAR), 및 T-세포 리디렉터 이중특이적 항체를 포함하여 CD33을 표적화하기 위한 여러 접근법이 연구되어왔다[7]. 치료 및 진단 목적을 위한 추가적인 CD33 결합 도메인이 필요하다.
급성 골수성 백혈병(AML)은 급속한 발병과 진행을 특징으로 하는 골수 세포 계통의 백혈병 유형이다[1]. AML은 다양한 임상 결과와 함께 분자 변화가 광범위하게 일어나는 이질적 질환이다. 또한, AML은 AML 모세포 또는 백혈병 세포가 자가 재생하고, 지속적으로 증식하고 면역계를 벗어나서 작은 클론으로부터 질환을 재발시키는 능력을 특징으로 한다[2]. 따라서 AML은 역사적으로 장기 생존율이 가장 낮은 질환 중 하나로 간주되어 왔으며 성인 AML의 전체 5년 생존율은 약 27%이다. 생존율은 연령과 강한 반비례 관계를 가지고 있다[3]. 역사적으로 AML 치료 전략은 주로 줄기 세포 이식과 함께 화학 요법을 포함한다. 그러나 최근 몇 년 동안 핵심 표면 항원을 연구하여 AML에 대한 면역 요법을 개발하려는 적극적인 노력이 있어 왔다. AML 세포에서 고도로 발현되는 표면 항원 중 하나는 CD33이다.
일 양태에서, 본 개시는 CD33에 결합하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, 단리된 단백질은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 18의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR)1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 19의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 20의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 21의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 22의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 23의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 24의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 25의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 26의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
j) 서열번호 27의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3,
또는 이의 CD33 결합 단편.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 1, 6, 및 12;
b) 각각 서열번호 2, 7, 및 13;
c) 각각 서열번호 1, 8, 및 14;
d) 각각 서열번호 3, 9, 및 13;
e) 각각 서열번호 4, 10, 및 15;
f) 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는
g) 각각 서열번호 5, 11, 및 17.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 VHH이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 Fab이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 scFv이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시는 CD33에 결합하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, 단리된 단백질은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VHH를 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시는 CD33에 결합하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, 단리된 단백질은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
k) 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
l) 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
m) 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 및 45;
b) 각각 서열번호 29, 37, 및 46;
c) 각각 서열번호 30, 38, 및 47;
d) 각각 서열번호 31, 39, 및 48;
e) 각각 서열번호 32, 40, 및 49;
f) 각각 서열번호 33, 41, 및 50;
g) 각각 서열번호 34, 42, 및 51;
h) 각각 서열번호 34, 43, 및 51;
i) 각각 서열번호 34, 44, 및 51;
j) 각각 서열번호 35, 42, 및 51;
k) 각각 서열번호 253, 256, 및 259;
l) 각각 서열번호 254, 257, 및 260; 또는
m) 각각 서열번호 255, 258, 및 261.
다른 양태에서, 본 개시는 CD33에 결합하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, 단리된 단백질은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 29, 37, 및 46;
b) 각각 서열번호 32, 40, 및 49;
c) 각각 서열번호 34, 43, 및 51;
d) 각각 서열번호 253, 256, 및 259;
e) 각각 서열번호 254, 257, 및 260; 또는
f) 각각 서열번호 255, 258, 및 261.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 83의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 84의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 86의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 88의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
k) 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
l) 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는
m) 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80;
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80;
k) 각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269;
l) 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76; 또는
m) 각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 Fab이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 VHH이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 scFv이다. 일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 다음을 포함한다:
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산;
일부 구현예에서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 서열번호 59, 60, 61, 262, 263, 264, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 또는 382의 VH 및 서열번호 82, 85, 87, 88, 271, 272,273, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 또는 398의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL;
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL;
n) 서열번호 291의 VH 및 서열번호 271의 VL;
o) 서열번호 292의 VH 및 서열번호 271의 VL;
p) 서열번호 293의 VH 및 서열번호 271의 VL;
q) 서열번호 294의 VH 및 서열번호 271의 VL;
r) 서열번호 295의 VH 및 서열번호 271의 VL;
s) 서열번호 296의 VH 및 서열번호 271의 VL;
t) 서열번호 297의 VH 및 서열번호 271의 VL;
u) 서열번호 298의 VH 및 서열번호 271의 VL;
v) 서열번호 299의 VH 및 서열번호 271의 VL;
w) 서열번호 300의 VH 및 서열번호 271의 VL;
x) 서열번호 301의 VH 및 서열번호 271의 VL;
y) 서열번호 302의 VH 및 서열번호 271의 VL;
z) 서열번호 303의 VH 및 서열번호 271의 VL;
aa) 서열번호 304의 VH 및 서열번호 271의 VL;
ab) 서열번호 305의 VH 및 서열번호 271의 VL;
ac) 서열번호 306의 VH 및 서열번호 271의 VL;
ad) 서열번호 307의 VH 및 서열번호 271의 VL;
ae) 서열번호 308의 VH 및 서열번호 271의 VL;
af) 서열번호 309의 VH 및 서열번호 271의 VL;
ag) 서열번호 310의 VH 및 서열번호 271의 VL;
ah) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 311의 VL;
ai) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 312의 VL;
aj) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 313의 VL;
ak) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 314의 VL;
al) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 315의 VL;
am) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 316의 VL;
an) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 317의 VL;
ao) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 318의 VL;
ap) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 319의 VL;
aq) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 320의 VL;
ar) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 321의 VL;
as) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 322의 VL;
at) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 323의 VL;
au) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 324의 VL;
av) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 325의 VL;
aw) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 326의 VL;
ax) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 327의 VL;
ay) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 328의 VL;
az) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 329의 VL;
ba) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 330의 VL;
bb) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 331의 VL;
bc) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 332의 VL;
bd) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 333의 VL;
be) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 334의 VL;
bf) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 335의 VL;
bg) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 336의 VL;
bh) 서열번호 337의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bi) 서열번호 338의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bj) 서열번호 339의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bk) 서열번호 340의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bl) 서열번호 341의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bm) 서열번호 342의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bn) 서열번호 343의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bo) 서열번호 344의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bp) 서열번호 345의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bq) 서열번호 346의 VH 및 서열번호 272의 VL;
br) 서열번호 347의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bs) 서열번호 348의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bt) 서열번호 349의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bu) 서열번호 350의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bv) 서열번호 351의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bw) 서열번호 352의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bx) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 353의 VL;
by) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 354의 VL;
bz) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 355의 VL;
ca) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 356의 VL;
cb) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 357의 VL;
cc) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 358의 VL;
cd) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 359의 VL;
ce) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 360의 VL;
cf) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 361의 VL;
cg) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 362의 VL;
ch) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 363의 VL;
ci) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 364의 VL;
cj) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 365의 VL;
ck) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 366의 VL;
cl) 서열번호 367의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cm) 서열번호 368의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cn) 서열번호 369의 VH 및 서열번호 85의 VL;
co) 서열번호 370의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cp) 서열번호 371의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cq) 서열번호 372의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cr) 서열번호 373의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cs) 서열번호 374의 VH 및 서열번호 85의 VL;
ct) 서열번호 375의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cu) 서열번호 376의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cv) 서열번호 377의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cw) 서열번호 378의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cx) 서열번호 379의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cy) 서열번호 380의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cz) 서열번호 381의 VH 및 서열번호 85의 VL;
da) 서열번호 382의 VH 및 서열번호 85의 VL;
db) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 383의 VL;
dc) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 384의 VL;
dd) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 385의 VL;
de) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 386의 VL;
df) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 387의 VL;
dg) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 388의 VL;
dh) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 389의 VL;
de) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 390의 VL;
df) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 391의 VL;
dg) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 392의 VL;
dh) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 393의 VL;
di) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 394의 VL;
dj) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 395의 VL;
dk) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 396의 VL;
dl) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 397의 VL; 또는
dm) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 398의 VL.
다른 양태에서, 본 개시는 CD33에 결합하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, 단리된 단백질은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL;
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL;
n) 서열번호 291의 VH 및 서열번호 271의 VL;
o) 서열번호 292의 VH 및 서열번호 271의 VL;
p) 서열번호 293의 VH 및 서열번호 271의 VL;
q) 서열번호 294의 VH 및 서열번호 271의 VL;
r) 서열번호 295의 VH 및 서열번호 271의 VL;
s) 서열번호 296의 VH 및 서열번호 271의 VL;
t) 서열번호 297의 VH 및 서열번호 271의 VL;
u) 서열번호 298의 VH 및 서열번호 271의 VL;
v) 서열번호 299의 VH 및 서열번호 271의 VL;
w) 서열번호 300의 VH 및 서열번호 271의 VL;
x) 서열번호 301의 VH 및 서열번호 271의 VL;
y) 서열번호 302의 VH 및 서열번호 271의 VL;
z) 서열번호 303의 VH 및 서열번호 271의 VL;
aa) 서열번호 304의 VH 및 서열번호 271의 VL;
ab) 서열번호 305의 VH 및 서열번호 271의 VL;
ac) 서열번호 306의 VH 및 서열번호 271의 VL;
ad) 서열번호 307의 VH 및 서열번호 271의 VL;
ae) 서열번호 308의 VH 및 서열번호 271의 VL;
af) 서열번호 309의 VH 및 서열번호 271의 VL;
ag) 서열번호 310의 VH 및 서열번호 271의 VL;
ah) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 311의 VL;
ai) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 312의 VL;
aj) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 313의 VL;
ak) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 314의 VL;
al) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 315의 VL;
am) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 316의 VL;
an) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 317의 VL;
ao) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 318의 VL;
ap) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 319의 VL;
aq) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 320의 VL;
ar) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 321의 VL;
as) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 322의 VL;
at) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 323의 VL;
au) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 324의 VL;
av) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 325의 VL;
aw) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 326의 VL;
ax) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 327의 VL;
ay) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 328의 VL;
az) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 329의 VL;
ba) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 330의 VL;
bb) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 331의 VL;
bc) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 332의 VL;
bd) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 333의 VL;
be) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 334의 VL;
bf) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 335의 VL;
bg) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 336의 VL;
bh) 서열번호 337의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bi) 서열번호 338의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bj) 서열번호 339의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bk) 서열번호 340의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bl) 서열번호 341의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bm) 서열번호 342의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bn) 서열번호 343의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bo) 서열번호 344의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bp) 서열번호 345의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bq) 서열번호 346의 VH 및 서열번호 272의 VL;
br) 서열번호 347의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bs) 서열번호 348의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bt) 서열번호 349의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bu) 서열번호 350의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bv) 서열번호 351의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bw) 서열번호 352의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bx) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 353의 VL;
by) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 354의 VL;
bz) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 355의 VL;
ca) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 356의 VL;
cb) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 357의 VL;
cc) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 358의 VL;
cd) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 359의 VL;
ce) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 360의 VL;
cf) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 361의 VL;
cg) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 362의 VL;
ch) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 363의 VL;
ci) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 364의 VL;
cj) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 365의 VL;
ck) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 366의 VL;
cl) 서열번호 367의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cm) 서열번호 368의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cn) 서열번호 369의 VH 및 서열번호 85의 VL;
co) 서열번호 370의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cp) 서열번호 371의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cq) 서열번호 372의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cr) 서열번호 373의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cs) 서열번호 374의 VH 및 서열번호 85의 VL;
ct) 서열번호 375의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cu) 서열번호 376의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cv) 서열번호 377의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cw) 서열번호 378의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cx) 서열번호 379의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cy) 서열번호 380의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cz) 서열번호 381의 VH 및 서열번호 85의 VL;
da) 서열번호 382의 VH 및 서열번호 85의 VL;
db) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 383의 VL;
dc) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 384의 VL;
dd) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 385의 VL;
de) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 386의 VL;
df) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 387의 VL;
dg) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 388의 VL;
dh) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 389의 VL;
de) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 390의 VL;
df) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 391의 VL;
dg) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 392의 VL;
dh) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 393의 VL;
di) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 394의 VL;
dj) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 395의 VL;
dk) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 396의 VL;
dl) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 397의 VL; 또는
dm) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 398의 VL.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 Fab이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 VHH이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 scFv이다. 일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 다음을 포함한다:
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산;
일부 구현예에서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 서열번호 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221 274, 275, 또는 276 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 특히, 서열번호 213, 216, 219, 274, 275, 또는 276의 아미노산 서열이다.
다른 양태에서, 본 개시는 골수성 CD33에 결합하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, 단리된 단백질은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR)1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
i) 서열번호 196의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 89, 90, 및 92;
b) 각각 서열번호 89, 90, 및 93;
c) 각각 서열번호 33, 91, 및 94;
d) 각각 서열번호 167, 168, 및 169;
e) 각각 서열번호 172, 173, 및 174;
f) 각각 서열번호 176, 177, 및 178;
g) 각각 서열번호 89, 90, 및 180; 또는
h) 각각 서열번호 89, 90, 및 93.
다른 양태에서, 본 개시는 제32항 또는 제33항의 단리된 단백질을 제공하는 것으로, 단리된 단백질은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 105의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3;
b) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 106의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
c) 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 107의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
d) 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 185의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
e) 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 188의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
f) 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 192의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
g) 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 196의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
h) 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 200의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는
i) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 202의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199;
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH이다.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 Fab이다.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 VHH이다.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 scFv이다.
일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 다음을 포함한다:
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산;
일부 구현예에서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH 및 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL.
다른 양태에서, 본 개시는 CD33에 결합하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, 단리된 단백질은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL.
일부 구현예에서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 Fab이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 VHH이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 scFv이다. 일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 다음을 포함한다:
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 단백질이 반감기 연장 모이어티에 접합된 상기에 기술된 임의의 단리된 단백질을 제공한다. 일부 구현예에서, 반감기 연장 모이어티는 면역글로불린(Ig), Ig의 단편, Ig 불변 영역, Ig 불변 영역의 단편, Fc 영역, 트랜스페린, 알부민, 알부민 결합 도메인, 또는 폴리에틸렌 글리콜이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 단일특이적 단백질이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 다중특이적 단백질이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 이중특이적 단백질이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 삼중특이적 단백질이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 이의 Ig 불변 영역의 단편을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 CH3 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지의 적어도 일부, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 N-말단에 접합된다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 C-말단에 접합된다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질은 제2 링커(L2)를 통해 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된다. 일부 구현예에서, L2는 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 림프구 상의 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 림프구는 T 세포이다. 일부 구현예에서, T 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 림프구는 자연 살해(NK) 세포이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, TRGV9, 또는 NKG2C에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 141의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 142의 HCDR2, 서열번호 143의 HCDR3, 서열번호 144의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 145의 LCDR2, 및 서열번호 146의 LCDR3;
b) 서열번호 147의 VH 및 서열번호 148의 VL;
c) 서열번호 149의 HCDR1, 서열번호 150의 HCDR2, 서열번호 151의 HCDR3, 서열번호 152의 LCDR1, 서열번호 153의 LCDR2, 및 서열번호 154의 LCDR3; 또는
d) 서열번호 155의 VH 및 서열번호 156의 VL.
일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 238의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
b) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 242의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
c) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 243의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
d) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 244의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
e) 서열번호 245의 VH 및 서열번호 249의 VL;
f) 서열번호 246의 VH 및 서열번호 249의 VL;
g) 서열번호 247의 VH 및 서열번호 249의 VL; 또는
h) 서열번호 248의 VH 및 서열번호 249의 VL.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 이소형이다. 일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, FcγR에 대한 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이는 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/ L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S, 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택된다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름). 일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 FcγR에 대한 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, FcγR에 대한 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택된다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름). 일부 구현예에서, FcγR은 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이는 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택된다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름). 일부 구현예에서, 단백질은 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이는 T350V, L351Y, F405A, Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V, 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택된다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름).
본 개시는 단백질이 키메라 항원 수용체(CAR)인 상기에 기술된 임의의 단리된 단백질을 제공한다. 일부 구현예에서, CAR는 다음을 포함한다:
a) 상기에 기술된 임의의 단리된 단백질을 포함하는 세포외 도메인;
b) 막관통 도메인; 및
c) 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 임의로 포함하는 세포내 신호전달 도메인.
일부 구현예에서, CAR은 CD8a-힌지 영역을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서,
a) 막관통 도메인은 CD8a 막관통 영역(CD8a-TM) 폴리펩티드를 포함하고;
b) 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분을 포함하는 공동 자극 도메인 및 T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서,
a) CD8a-힌지 영역은 서열번호 157의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
b) 막관통 도메인은 서열번호 162의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
c) 세포내 신호전달 도메인은 서열번호 163의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 공동 자극 도메인 및 서열번호 164의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분, T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분, 분화 클러스터(CD27) 성분, 분화 클러스터 수퍼패밀리 구성원 성분, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드 성분을 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시는 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공한다. 일부 구현예에서, 림프구 항원은 T 세포 항원이다. 일부 구현예에서, T 세포 항원은 CD8+ T 세포 항원이다. 일부 구현예에서, 림프구 항원은 NK 세포 항원이다. 일부 구현예에서, 림프구 항원은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, TRGV9, 또는 NKG2C이다. 특정 구현예에서, 림프구 항원은 CD3ε이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH를 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fab를 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH를 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 다음을 포함한다:
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산;
일부 구현예에서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 1, 2, 3, 4, 또는 5 중 어느 하나의 HCDR1, 서열번호 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11 중 어느 하나의 HCDR2, 및 서열번호 12, 13, 14, 15, 16, 또는 17 중 어느 하나의 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 1, 6, 및 12;
b) 각각 서열번호 2, 7, 및 13;
c) 각각 서열번호 1, 8, 및 14;
d) 각각 서열번호 3, 9, 및 13;
e) 각각 서열번호 4, 10, 및 15;
f) 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는
g) 각각 서열번호 5, 11, 및 17.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 또는 35의 HCDR1, 서열번호 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 또는 44의 HCDR2, 서열번호 45, 46, 47, 48, 49, 50, 또는 51의 HCDR3, 서열번호 62, 63, 64, 65, 66, 67, 또는 68의 LCDR1, 서열번호 69, 70, 71, 72, 73, 또는 74의 LCDR2, 및 서열번호 75, 76, 77, 78, 79, 또는 80의 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80;
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80;
k) 각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269;
l) 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76; 또는
m) 각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 33, 89, 167, 172, 또는 176의 HCDR1, 서열번호 90, 91, 168, 173, 또는 177의 HCDR2, 서열번호 92, 93, 94, 169, 174, 178, 또는 180의 HCDR3, 서열번호 98, 99, 100, 182, 186, 189, 193, 197, 또는 201의 LCDR1, 서열번호 101, 102, 103, 183, 187, 190, 194, 또는 198의 LCDR2, 및 서열번호 104, 184, 191, 195, 또는 199의 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199; 또는
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH 및 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL.
일부 구현예에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 141의 HCDR1, 서열번호 142의 HCDR2, 서열번호 143의 HCDR3, 서열번호 144의 LCDR1, 서열번호 145의 LCDR2, 및 서열번호 146의 LCDR3;
b) 서열번호 147의 VH 및 서열번호 148의 VL;
c) 서열번호 149의 HCDR1, 서열번호 150의 HCDR2, 서열번호 151의 HCDR3, 서열번호 152의 LCDR1, 서열번호 153의 LCDR2, 및 서열번호 154의 LCDR3; 또는
d) 서열번호 155의 VH 및 서열번호 156의 VL.
일부 구현예에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 238의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
b) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 242의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
c) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 243의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
d) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 244의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
e) 서열번호 245의 VH 및 서열번호 249의 VL;
f) 서열번호 246의 VH 및 서열번호 249의 VL;
g) 서열번호 247의 VH 및 서열번호 249의 VL; 또는
h) 서열번호 248의 VH 및 서열번호 249의 VL.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 제1 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편에 접합되고/되거나, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 제2 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편에 접합된다. 특정 구현예에서, 다중특이적 단백질은 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인과 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 사이, 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인과 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편 사이에 제2 링커(L2)를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2, 및 IgG3 또는 IgG4 이소형이다. 일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이는 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/ L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S, 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택된다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름).
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택된다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름). 일부 구현예에서, FcγR은 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이는 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택된다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름). 일부 구현예에서, 단리된 다중특이적 단백질은 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이는 T350V, L351Y, F405A, Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V, 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택된다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름). 일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 다음의 돌연변이를 포함한다:
a) 제1 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V 및 제2 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W; 또는
b) 제1 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W 및 제2 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V.
본 개시는 치료제 또는 조영제에 접합된 임의의 상기 단리된 단백질을 포함하는 면역접합체를 제공한다. 본 개시는 임의의 상기 단리된 단백질 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 개시는 임의의 상기 단리된 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 개시는 또한 임의의 상기 단리된 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다. 본 개시는 또한 임의의 상기 단리된 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
다른 양태에서, 본 개시는 임의의 상기 단리된 단백질을 생성하는 방법을 제공하는 것으로, 해당 방법은 단백질이 발현되는 조건에서 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 숙주 세포에 의해 생성된 단백질을 회수하는 단계를 포함한다. 다른 양태에서, 본 개시는 치료제 또는 조영제에 접합된 임의의 상기 단리된 다중특이적 단백질을 포함하는 면역접합체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 개시는 임의의 상기 단리된 다중특이적 단백질을 생성하는 방법을 제공하는 것으로, 해당 방법은 다중특이적 단백질이 발현되는 조건에서 상기에 기술된 임의의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 숙주 세포에 의해 생성된 다중 특이적 단백질을 회수하는 단계를 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법을 제공하는 것으로, 해당 방법은 CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 임의의 상기 단리된 단백질, 임의의 상기 단리된 다중특이적 단백질, 임의의 상기 면역접합체, 또는 임의의 상기 약학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 CD33 발현 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공하는 것으로, 해당 방법은 CD33 발현 세포의 양을 감소시키기에 충분한 기간 동안 임의의 상기 단리된 단백질, 임의의 상기 단리된 다중특이적 단백질, 임의의 상기 면역접합체, 또는 임의의 상기 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, CD33 발현 세포는 암성 세포이다. 일부 구현예에서, CD33 발현 세포는 암성 세포가 아니다.
다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 CD33 발현 암의 확립을 예방하는 방법을 제공하는 것으로, 해당 방법은 대상체에서 CD33 발현 암의 확립을 예방하기 위해 임의의 상기 단리된 단백질, 임의의 상기 단리된 다중특이적 단백질, 임의의 상기 면역접합체, 또는 임의의 상기 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시는 CD33 발현 암이 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공하는 것으로, 해당 방법은 비암성 병태를 치료하기 위해 임의의 상기 단리된 단백질, 임의의 상기 단리된 다중특이적 단백질, 임의의 상기 면역접합체, 또는 임의의 상기 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
상기 세 가지 양태의 일부 구현예에서, CD33 발현 암은 혈액암이다. 일부 구현예에서, 혈액암은 백혈병, 림프종, 또는 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, 혈액암은 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 만성 골수성 백혈병(CML), 또는 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물(DPDCN)이다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질 또는 단리된 다중특이적 단백질은 제2 치료제와 조합되어 투여된다. 일부 구현예에서, 제2 치료제는 수술, 화학요법, 또는 방사선, 또는 이들의 임의의 조합이다. 본 개시는 대상체에서 혈액암의 존재를 검출하는 방법을 제공하는 것으로, 해당 방법은 혈액암이 의심되는 대상체에게 임의의 상기 면역접합체를 투여하고 면역접합체가 결합된 생물학적 구조를 가시화하여 혈액암의 존재를 검출하는 단계를 포함한다.
본 개시는 또한 임의의 상기 단리된 단백질, 임의의 상기 단리된 다중특이적 단백질, 임의의 상기 면역접합체, 또는 임의의 상기 약학적 조성물을 포함하는 키트를 제공한다.
본 개시는 또한 임의의 상기 단리된 단백질에 결합하는 항이디오타입 항체를 제공한다.
본 개시는 또한 다음을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공한다:
a) CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인;
b) 막관통 도메인; 및
c) 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 임의로 포함하는 세포내 신호전달 도메인.
일부 구현예에서, CAR은 CD8a-힌지 영역을 추가로 포함한다.
a) 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 CD8a 막관통 영역(CD8a-TM) 폴리펩티드를 포함하고;
b) 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분을 포함하는 공동 자극 도메인 및 T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서,
a) CD8a-힌지 영역은 서열번호 157의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
b) 막관통 도메인은 서열번호 162의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
c) 세포내 신호전달 도메인은 서열번호 163의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 공동 자극 도메인 및 서열번호 164의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 1, 2, 3, 4, 또는 5 중 어느 하나의 HCDR1, 서열번호 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11 중 어느 하나의 HCDR2, 및 서열번호 12, 13, 14, 15, 16, 또는 17 중 어느 하나의 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 1, 6, 및 12;
b) 각각 서열번호 2, 7, 및 13;
c) 각각 서열번호 1, 8, 및 14;
d) 각각 서열번호 3, 9, 및 13;
e) 각각 서열번호 4, 10, 및 15;
f) 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는
g) 각각 서열번호 5, 11, 및 17.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 253, 254, 또는 255의 HCDR1, 서열번호 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 256, 257, 또는 258의 HCDR2, 서열번호 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 259, 260, 또는 261의 HCDR3, 서열번호 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 265, 또는 266의 LCDR1, 서열번호 69, 70, 71, 72, 73, 74, 267, 또는 268의 LCDR2, 및 서열번호 75, 76, 77, 78, 79, 80, 269, 또는 270의 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80;
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80;
k) 각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269;
l) 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76; 또는
m) 각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 273의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 33, 89, 167, 172, 또는 176의 HCDR1, 서열번호 90, 91, 168, 173, 또는 177의 HCDR2, 서열번호 92, 93, 94, 169, 174, 178, 또는 180의 HCDR3, 서열번호 98, 99, 100, 182, 186, 189, 193, 197, 또는 201의 LCDR1, 서열번호 101, 102, 103, 183, 187, 190, 194, 또는 198의 LCDR2, 및 서열번호 104, 184, 191, 195, 또는 199의 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199; 또는
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH 및 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 VHH이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다.
일부 구현예에서, scFv는 VL과 VH 사이에 제1 링커(L1)를 포함한다.
특정 구현예에서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 세포외 도메인은 신호 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분, T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분, 분화 클러스터(CD27) 성분, 분화 클러스터 수퍼패밀리 구성원 성분, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, CD137 성분은 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD3z 성분은 서열번호 164의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD8a-TM 폴리펩티드는 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD8a-힌지 영역은 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 다중특이적 단백질이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 이중특이적 단백질이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 삼중특이적 단백질이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 림프구 상의 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 림프구는 T 세포이다. 일부 구현예에서, T 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 림프구는 자연 살해(NK) 세포이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, TRGV9, 또는 NKG2C에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 141의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 142의 HCDR2, 서열번호 143의 HCDR3, 서열번호 144의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 145의 LCDR2, 및 서열번호 146의 LCDR3;
b) 서열번호 147의 VH 및 서열번호 148의 VL;
c) 서열번호 149의 HCDR1, 서열번호 150의 HCDR2, 서열번호 151의 HCDR3, 서열번호 152의 LCDR1, 서열번호 153의 LCDR2, 및 서열번호 154의 LCDR3; 또는
d) 서열번호 155의 VH 및 서열번호 156의 VL.
일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 238의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
b) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 242의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
c) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 243의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
d) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 244의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
e) 서열번호 245의 VH 및 서열번호 249의 VL;
f) 서열번호 246의 VH 및 서열번호 249의 VL;
g) 서열번호 247의 VH 및 서열번호 249의 VL; 또는
h) 서열번호 248의 VH 및 서열번호 249의 VL.
다른 양태에서, 본 개시는 임의의 상기 CAR을 발현하는 단리된 림프구를 제공한다. 일부 구현예에서, 림프구는 T 림프구이다. 일부 구현예에서, 림프구는 자연 살해(NK) 세포이다. 다른 양태에서, 본 개시는 임의의 상기 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 개시는 또한 임의의 상기 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다. 본 개시는 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 본 개시는 또한 임의의 상기 림프구 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
다른 양태에서, CD33 발현 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하는 것으로, 해당 방법은 다음을 포함한다: 림프구가 대상체에서 CD33 발현 암의 사멸을 매개하도록, 임의의 상기 림프구의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계. 일부 구현예에서, CD33 발현 암은 혈액암이다. 일부 구현예에서, CD33 발현 암은 백혈병, 림프종, 또는 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, CD33 발현 암은 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 만성 골수성 백혈병(CML), 또는 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물(DPDCN)이다.
다른 양태에서, 암 세포를 표적화하여 사멸시키는 방법을 제공하는 것으로, 해당 방법은 다음의 단계를 포함한다: 림프구가 암 세포의 표적화 사멸을 유도하도록, 암 세포를 임의의 상기 림프구와 접촉시키는 단계. 일부 구현예에서, 암 세포는 혈액암이다 일부 구현예에서, CD33 발현 암은 백혈병, 림프종, 또는 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, CD33 발현 암은 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 만성 골수성 백혈병(CML), 또는 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물(DPDCN)이다.
다른 양태에서, 대상체에서 암의 존재를 검출하는 방법으로서, 해당 방법은 다음의 단계를 포함한다:
a) 대상체로부터 수득한 세포 샘플을 임의의 상기 CAR과 접촉시켜 CAR-세포 복합체를 형성하는 단계, 및
b) CAR-세포 복합체를 검출하는 단계(CAR-세포 복합체의 검출은 대상체에서 암의 존재를 나타냄).
일부 구현예에서, 암 세포는 혈액암이다 일부 구현예에서, CD33 발현 암은 백혈병, 림프종, 또는 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, CD33 발현 암은 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 만성 골수성 백혈병(CML), 또는 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물(DPDCN)이다.
다른 양태에서, 방사성 제제에 접합된 임의의 상기 단리된 단백질을 포함하는 면역접합체를 제공한다. 일부 구현예에서, 방사성 제제는 방사성 금속 이온을 포함한다. 일부 구현예에서, 방사성 금속 이온은 32P, 47Sc, 67Cu, 77As, 89Sr, 90Y, 99Tc, 105Rh, 109Pd, 111Ag, 131I, 153Sm, 159Gd, 165Dy, 166Ho, 169Er, 177Lu, 186Re, 188Re, 194Ir, 198Au, 199Au, 211At, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 255Fm, 227Th, 62Cu, 64Cu, 67Ga, 68Ga, 86Y, 89Zr, 또는 111In이다. 특정 구현예에서, 방사성 금속 이온은 225Ac, 111In, 또는 89Zr이다. 특정 구현예에서, 방사성 금속 이온은 225Ac이다. 일부 구현예에서, 면역접합체의 방사성금속 이온은 킬레이트화 모이어티에 접합된다. 일부 구현예에서, 킬레이트화 모이어티는 화학식 I의 구조:
[화학식 I]
Figure pat00001
(상기 식에서, 각각의 R1, R2, R3, 및 R4는 독립적으로 CHQCO2X
(Q는 독립적으로 수소, C1-C4 알킬, 또는 (C1-C2 알킬)페닐이고,
X는 독립적으로 수소, 벤질, C1-C4 알킬임)이고;
Z는 (CH2)nY
(n은 1~10이고,
Y는 제2 클릭 반응 파트너에 공유 연결된 친전자성 또는 친핵성 모이어티임)이고;
대안적으로, Z는 수소이고;
각각의 R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 CHQCO2X
(Q는 독립적으로 수소, C1-C4 알킬, 또는 (C1-C2 알킬)페닐이고,
X는 독립적으로 수소, 벤질, C1-C4 알킬이거나, 또는 제2 클릭 반응 파트너에 공유 연결된 친전자성 또는 친핵성 모이어티임)이고;
대안적으로, 킬레이트제는 개방 사슬 리간드를 포함함)를 갖는 거대고리를 포함한다.
일부 구현예에서, 킬레이트화 모이어티는 화학식 II의 구조:
[화학식 II]
Figure pat00002
또는 화학식 III의 구조:
[화학식 III]
Figure pat00003
를 갖는 거대고리를 포함한다.
본 개시는 또한 화학식 IV의 면역접합체를 제공하는 것으로,
[화학식 IV]
Figure pat00004
단백질은 임의의 상기 단리된 단백질이다.
본 개시는 또한 화학식 V의 면역접합체를 제공하는 것으로,
[화학식 V]
Figure pat00005
단백질은 임의의 상기 단리된 단백질이다.
본 개시는 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 개시는 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 개시는 대상체에서 CD33 발현 암의 확립을 예방하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 개시는 CD33 발현 암이 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 개시는, 대상체에서 치료제로 CD33 발현 암 세포를 표적화하기 위한 수단을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시는, 대상체에서 치료제로 하나 이상의 CD33 발현 종양 세포를 표적화하기 위한 수단을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 개시는, 대상체에서 CD33 발현 암의 확립을 예방하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다(방법은 대상체에서 치료제로 CD33 발현 세포를 표적화하기 위한 수단을 대상체에게 투여하는 단계를 포함함).
본 개시는, CD33 발현 암이 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다(방법은 대상체에서 치료제로 CD33 발현 세포를 표적화하기 위한 수단을 대상체에게 투여하는 단계를 포함함).
본 특허 출원 파일은 컬러로 작성된 하나 이상의 도면을 포함한다. 컬러 도면(들)을 포함하는 본 특허 출원의 사본은 요청 및 필요한 수수료의 납부시에 관청에 의해 제공될 것이다.
도 1은 hu CD33 항원(FL ECD 및 IgC2 도메인)에 대한 항-CD33 vHH 상호작용의 대표적인 BIAcore 8K 센서그램을 나타낸 것이다.
도 2a 및 2b는 표적 세포주에 대한 CD33 항체의 결합을 나타낸 것이다. 그래프는 4℃에서 항인간 CD33 항체의 비선형 회귀 프로파일을 나타낸 것이다. 중앙 형광 강도(MFI) 대 항체의 로그 농도를 플롯팅하였다. 결합은 4℃에서 항체의 연속 희석액으로 세포를 인큐베이션한 후에 PE 접합된 염소 F(ab')2 항-인간 IgG-Fc 항체로 검출하여 수행하였다. 각 세포주에 대한 최고 히트는 적색으로 표시하고 린투주맙 결합은 청색 곡선으로 표시하였다.
도 3a 내지 3o는 표적 세포주에 대한 상이한 CD33 항체의 시간 및 온도 의존적 결합을 나타낸 것이다. 그래프는 37℃ 및 4℃에서 항인간 CD33 항체 결합의 비선형 회귀 프로파일을 나타낸 것이다. 중앙 형광 강도(MFI) 대 항체의 로그 농도를 플롯팅하였다. 37℃ 및 4℃에서 직접 접합된 항체의 연속 희석액으로 세포를 인큐베이션하여 결합을 수행하였다.
도 4a 내지 4d는 고발현, 중발현, 및 저발현 표적 세포주에 대한 CD33 항체의 내재화를 나타낸 것이다. 96시간 동안 단백질 A-MMAF와 함께 CD33 항체의 연속 희석액으로 세포를 인큐베이션하였다. 96시간 후, CellTitre-Glo 시약을 세포에 첨가하여 세포 생존력을 측정하였다. 단백질 A-MMAF만 있는 웰은 100% 생존 가능한 것으로 간주되었다. HDLM-2 세포를 무발현 세포주로서 사용하였다. 세포 생존력의 감소는 항체 내재화를 나타낸다. 그래프는 항체의 로그 농도에 대한 세포 생존력의 비선형 회귀 분석을 나타낸 것이다.
도 5는 CD33 항체 내재화의 동역학을 나타낸 것이다. CD33 항체를 pHAb 염료로 표지하고 지정된 시점 동안 37℃에서 100 nM 농도로 세포와 함께 인큐베이션한 후 세포를 세척하고 유세포 분석기 상에서 수득하였다. 그래프는 지정된 시점의 MFI 값을 나타낸 것이다.
도 6은 표적 세포주에 대한 CD33 발현을 나타낸 것이다. 고, 중, 및 저 CD33 발현 세포주는 Biolegend의 항인간 CD33 항체를 사용하여 식별하였다. MOLM-13, Kasumi-1, OCI-AML-3, 및 HDLM2 세포를 항체(주황색 히스토그램) 또는 마우스 IgG 이소형 대조군(청색 히스토그램)으로 염색하고, 각 세포주에 대한 이소형의 배수 변화를 계산하였다.
도 7은 pHAb 염료와의 접합 후 항체 온전성 및 DAR 값을 나타낸 것이다. 항체는 pHAb 염료로 표지하고 SDS-PAGE 상에서 분석하였다. 약물 대 항체 비율(DAR)은 280 및 530 nm에서 OD를 측정하고 280 nm에서 염료 흡광도를 보정하여 계산하였다.
도 8a 및 8b는 pHAb 매개 항체 내재화 동역학 결정의 특이성을 나타낸 것이다. 도 8a에서, CD33 항체를 pHAb 염료로 표지하고 지정된 시점 동안 4℃에서 100 nM 농도로 Kasumi-1 또는 OCI-AML-3 세포와 함께 인큐베이션한 후 세포를 세척하고 유세포 분석기 상에서 수득하였다. 그래프는 지정된 시점의 MFI 값을 나타낸 것이다. 4C에서 내재화가 관찰되지 않았다. 도 8b에서. 항체는 또한 37℃에서 HDLM-2 세포와 함께 인큐베이션하였다. MFI의 증가는 관찰되지 않았다.
도 9는 고(MOLM-13), 중(Kasumi-1), 및 저(OCI-AML-3) 세포주에 대한 CD33 항체의 결합 EC50 값을 요약하여 나타낸 것이다. 항체의 연속 희석액으로 4℃에서 결합을 수행하였다.
도 10은 다양한 표적 세포주에 대한 CD33 항체 내재화를 요약하여 나타낸 것이다. MOLM-13 및 OCI-AML-3의 경우에 대한 EC50 값을 나타내었다. Kasumi-1의 경우, 100 nM 농도에서 생존율(%).
도 11은 CD33+인 암 세포에 γδ T-세포를 보충하고 암 세포 사멸을 유도하기 위한 항-TRGV9/항-CD33 이중특이적 항체의 결합을 입증하는 개략도를 나타낸 것이다.
도 12는 SDS-PAGE(비환원) 겔에 의한 VG4 이중특이적 항체의 온전성을 검정한 결과를 나타낸 것이다.
도 13 내지 15는 FACS에 의해 측정된 종양 세포주의 패널에 대한 항-CD33 항체(클론 C33B904)의 결합을 검정한 결과를 나타낸 것이다. MOLM-13(높은 수용체 밀도)에 대한 EC50은 134.3 nM, Kasumi-1(중간 밀도)은 82.2 nM, 및 OCI-AML-3(낮은 표면 밀도)은 16.4 nM이었다.
도 16 및 17은 시험관내에서 항-TRGV9/항-CD33 이중특이적 항체가 Kasumi-3 세포를 발현하는 CD33에 대한 γδ T 세포 세포독성을 매개함을 입증하는 실험의 결과를 나타낸 것이다. 해당 실험에서, 졸레드론산 + IL-2 + IL-15로 12일 동안 배양된 PBMC로부터 단리된 농축 γδ T 세포(이펙터)를 24시간 동안 다양한 농도의 이중특이적 항체의 존재 하에 1:1 및 5:1 E:T 비율로 CFSE 표지된 Kasumi-3 세포(표적)와 공동 배양하였다. 용량 반응 곡선은 1:1 및 5:1 E:T 비율에서 용량 의존적 방식으로 CD33 발현 kasumi-3 세포에 대한 항-TRGV9/항-CD33 및 항-TRGV9/항-NULL 이중특이적 항체 매개된 γδ T 세포 세포독성을 나타낸 것이다. 여기에 표시된 세포독성 값은 이중특이적 항체의 비존재 하에 관찰된 기본 세포독성 값에서 차감한 것이다. EC50 값은 방법에 기술된 바에 따라 계산하였다. 여기에 표시되는 대표적인 데이터는 단일 실험으로부터 도출된 것이다.
도 18은 시험관내에서 항-TRGV9/항-CD33 이중특이적 항체가 Kasumi-3 세포를 발현하는 CD33에 대한 γδ T 세포 세포독성을 매개함을 입증하는 실험의 결과를 나타낸 것이다. 해당 실험에서, 졸레드론산 + IL-2 + IL-15로 12일 동안 배양된 건강한 기증자 유래 PBMC(이펙터)를 24시간 동안 다양한 농도의 이중특이적 항체의 존재 하에 및 1:1 E:T 비율로 CFSE 표지된 Kasumi-3 세포(표적)와 공동 배양하였다.
도 19는 잠재적인 번역 후 변형(PTM) 위험에 대한 실리코 분석을 나타낸 것이다. 일부 잠재적인 PTM 위험 모티프(DG, NG, DP)를 강조 표시하였다.
도 20은 C33B1475(서열번호 274)를 기반으로 NNK 라이브러리로부터 생성된 scFv의 열안정성을 평가하기 위한 검정의 결과를 나타낸 것이다. 열안정성을 평가하기 위해 각 변이체에 대해 ELISA를 수행하였다. 대장균 상청액을 55℃, 60℃, 65℃에서 열처리하고 발광 신호를 동일한 클론의 처리되지 않은 실온으로 정규화하였다.
도 21은 C33B1516(서열번호 275)을 기반으로 NNK 라이브러리로부터 생성된 scFv의 열안정성을 평가하기 위한 검정의 결과를 나타낸 것이다. 열안정성을 평가하기 위해 각 변이체에 대해 ELISA를 수행하였다. 대장균 상청액을 55℃, 60℃, 65℃에서 열처리하고 발광 신호를 동일한 클론의 처리되지 않은 실온으로 정규화하였다.
도 22는 C33B1517(서열번호 216)을 기반으로 NNK 라이브러리로부터 생성된 scFv의 열안정성을 평가하기 위한 검정의 결과를 나타낸 것이다. 열안정성을 평가하기 위해 각 변이체에 대해 ELISA를 수행하였다. 대장균 상청액을 55℃, 60℃, 65℃에서 열처리하고 발광 신호를 동일한 클론의 처리되지 않은 실온으로 정규화하였다.
도 23은 C33B1522(서열번호 213)를 기반으로 NNK 라이브러리로부터 생성된 scFv의 열안정성을 평가하기 위한 검정의 결과를 나타낸 것이다. 열안정성을 평가하기 위해 각 변이체에 대해 ELISA를 수행하였다. 대장균 상청액을 55℃, 60℃, 65℃에서 열처리하고 발광 신호를 동일한 클론의 처리되지 않은 실온으로 정규화하였다.
도 24는 NNK 라이브러리의 라이브러리 스크린 동안 식별된 변이체 VH 및 VL 서열을 나열한 표이다.
개시된 방법은 본 개시의 일부를 형성하는 첨부된 도면과 함께 다음의 구체적인 설명을 참조하면 보다 용이하게 이해될 수 있다. 개시된 방법은 본원에 기술되고/되거나 예시된 특정한 방법에 한정되지 않으며, 본원에서 사용되는 용어는 단지 예로서 특정 구현예를 설명하려는 목적을 위한 것으로서, 청구된 발명을 한정하고자 하는 것이 아님이 이해되어야 한다.
본원에서 인용되는 모든 특허, 공개된 특허 출원, 및 공보는 본원에 전체가 제시된 것과 마찬가지로 참고로 포함된다.
달리 언급되지 않는 한, 목록이 제시되는 경우, 해당 목록의 각 개별 요소, 및 해당 목록의 하나하나의 모든 조합은 별개의 구현예임이 이해되어야 한다. 예를 들어, "A, B, 또는 C"로 표현된 구현예의 목록은 구현예 "A", "B", "C", "A 또는 B", "A 또는 C", "B 또는 C", 또는 "A, B, 또는 C"를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
본 명세서 및 첨부된 청구항에서 사용되는 단수형("a", "an", 및 "the")은, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않는 한, 복수의 지시 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어 "세포"에 대한 언급은 2개 이상의 세포의 조합 등을 포함한다.
이행 용어 "포함하는", "~로 본질적으로 이루어진", 및 "~로 이루어진"은 특허 용어에서 이들의 일반적으로 허용되는 의미를 내포하는 것으로 보며; 즉, (i) "비롯한", "함유하는" 또는 "특징으로 하는"과 동의어인 "포함하는"은 포괄적 또는 개방형(open-ended)이고, 추가의 언급되지 않은 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않으며; (ii) "~로 이루어진"은 청구범위에서 구체화되지 않는 임의의 요소, 단계 또는 성분을 제외하며; (iii) "~로 본질적으로 이루어진"은 명시된 재료 또는 단계, 및 청구된 발명의 "기본적이고 신규한 특성(들)에 실질적으로 영향을 주지 않는 것들"로 청구범위의 범주를 제한한다. 어구 "포함하는"(또는 이의 등가물)의 관점에서 기술된 구현예는 또한 "~로 이루어진" 및 "~로 본질적으로 이루어진"의 관점에서 독립적으로 기술되는 것을 구현예로서 제공한다.
"약(about)"은 당업자에 의해 결정된 바와 같은 특정 값이 허용되는 오차 범위 내에 있음을 의미하며, 이는 값이 측정되거나 결정되는 방법, 즉, 측정 시스템의 제한에 따라 부분적으로 달라질 것이다. 특정 검정, 결과, 또는 구현예와 관련하여 실시예 또는 본원의 어딘가 다른 곳에서 달리 명시적으로 언급되지 않는 한, "약"은 당업계의 관행에 따라 1 표준 편차, 또는 최대 5%의 범위 중 더 큰 값 내에 있음을 의미한다.
"활성화" 또는 "자극" 또는 "활성화된" 또는 "자극된"은 활성화 마커의 발현, 사이토카인 생성, 증식, 또는 표적 세포의 세포독성 매개를 야기하는 세포의 생물학적 상태 변화의 유도를 지칭한다. 세포는 1차 자극 신호에 의해 활성화될 수 있다. 공동 자극 신호는 1차 신호의 크기를 증폭하고 초기 자극 후 세포 사멸을 억제하여 더 지속적인 활성화 상태 및 이에 따른 더 높은 세포독성 능력을 가져올 수 있다. "공동 자극 신호"는 TCR/CD3 결찰과 같은 1차 신호와 조합하여 T 세포 및/또는 NK 세포 증식 및/또는 주요 분자의 상향조절 또는 하향조절을 유도하는 신호를 지칭한다.
"대안적인 스캐폴드"는 높은 입체형태 공차(conformational tolerance)의 가변 도메인과 관련된 구조화된 코어를 함유하는 단일 사슬 단백질 프레임워크를 지칭한다. 가변 도메인은 스캐폴드 온전성(integrity)을 손상시키지 않고서 도입되는 변이에 견디므로, 가변 도메인은 특이적 항원에 결합하도록 조작 및 선택될 수 있다
"항체-의존성 세포성 세포독성", "항체-의존성 세포-매개 세포독성" 또는 "ADCC"는, 이펙터 세포 상에서 발현되는 Fc 감마 수용체(FcγR)를 통한, 항체-코팅된 표적 세포와 용해 활성을 갖는 이펙터 세포, 예컨대 자연 살해 세포(NK), 단핵구, 대식세포, 및 호중구의 상호작용에 의존하는 세포 사멸을 유도하는 메커니즘을 지칭한다.
"항체-의존성 세포 식세포작용" 또는 "ADCP"는 식세포, 예컨대 대식세포 또는 수지상 세포에 의한 내재화에 의한 항체-코팅된 표적 세포의 제거의 기전을 지칭한다.
"항원"은 면역 반응을 매개할 수 있는 항원 결합 도메인 또는 T 세포 수용체에 의해 결합될 수 있는 임의의 분자(예를 들어, 단백질, 펩티드, 다당류, 당단백질, 당지질, 핵산, 이들의 부분, 또는 이들의 조합)를 지칭한다. 예시적인 면역 반응은 T 세포, B 세포, 또는 NK 세포와 같은 면역 세포의 활성화 및 항체 생성을 포함한다 항원은 다른 생물학적 성분, 유기체, 단백질/항원의 서브유닛, 사멸되거나 비활성화된 전체 세포 또는 용해물이 있는 조직 샘플, 종양 샘플, 세포, 또는 유체와 같은 생물학적 샘플로부터 유전자에 의해 발현되거나 합성되거나 정제될 수 있다.
"항원 결합 단편" 또는 "항원 결합 도메인"은 항원에 결합하는 단백질의 일부를 지칭한다. 항원 결합 단편은 합성 폴리펩티드이거나, 효소적으로 수득가능한 폴리펩티드이거나 유전적으로 조작된 폴리펩티드일 수 있으며, 항원에 결합하는 면역글로불린의 일부, 예컨대 VH, VL, VH 및 VL, Fab, Fab', F(ab')2, Fd, 및 Fv 단편, 1개의 VH 도메인 또는 1개의 VL 도메인으로 이루어진 도메인 항체(dAb), 상어 가변 IgNAR 도메인, 낙타화(camelized) VH 도메인, VHH 도메인, 항체의 CDR을 모방하는 아미노산 잔기로 이루어진 최소 인식 단위, 예컨대 FR3-CDR3-FR4 부분, HCDR1, HCDR2, 및/또는 HCDR3 및 LCDR1, LCDR2, 및/또는 LCDR3, 항원에 결합하는 대안적인 스캐폴드, 및 항원 결합 단편을 포함하는 다중특이적 단백질을 포함한다. 항원 결합 단편(예컨대, VH 및 VL)은 합성 링커를 통해 함께 연결되어 다양한 유형의 단일 항체 설계를 형성할 수 있으며, 이 경우 VH/VL 도메인은 분자내에서 쌍을 이루거나, VH 및 VL 도메인이 별개의 단일 사슬에 의해 발현되는 경우에는 분자간에 쌍을 이루어서, 1가 항원 결합 도메인, 예컨대 단일 사슬 Fv(scFv) 또는 디아바디(diabody)를 형성한다. 항원 결합 단편은 또한 이중특이적 및 다중특이적 단백질을 조작하기 위해 단일특이적 또는 다중특이적일 수 있는 다른 항체, 단백질, 항원 결합 단편, 또는 대안적인 스캐폴드에 접합될 수 있다.
"항체"는 광의의 의미를 가지며, 뮤린, 인간, 인간화 및 키메라 단일클론 항체를 포함한 단일클론 항체, 항원 결합 단편, 다중특이적 항체(예컨대, 이중특이적, 삼중특이적, 사중특이적 등), 이량체성, 사량체성, 또는 다량체성 항체, 단일 사슬 항체, 도메인 항체를 포함하는 면역글로불린 분자, 및 필요한 특이성의 항원 결합 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 구성을 포함한다. "전장 항체"는 이황화 결합에 의해 상호연결된 2개의 중쇄(HC) 및 2개의 경쇄(LC)뿐만 아니라 이의 다량체(예를 들어, IgM)로 구성된다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH) 및 중쇄 불변 영역(도메인 CH1, 힌지, CH2, 및 CH3으로 구성됨)으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(VL) 및 경쇄 불변 영역(CL)으로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR) 영역이 개재된 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변성 영역으로 추가로 세분화될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR 세그먼트로 구성되며, 아미노 말단에서 카복시 말단으로 다음의 순서로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4. 면역글로불린은 중쇄 불변 도메인 아미노산 서열에 따라, 5개의 주요 클래스, IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM으로 정해질 수 있다. IgA 및 IgG는 이소형 IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로 추가로 하위 분류된다. 임의의 척추동물 종의 항체 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반하여, 명확하게 별개인 2개의 유형, 즉 카파(κ) 및 람다(λ) 중 하나로 정해질 수 있다.
"이중특이적"은 2개의 별개의 항원 또는 동일한 항원 내의 2개의 별개의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분자(예컨대, 항체)를 지칭한다. 이중특이적 분자는 다른 관련 항원들에 대한, 예를 들어 다른 종, 예컨대 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 사이노몰거스(Macaca cynomolgus)(사이노몰거스, 사이노), 또는 판 트로글로디테스(Pan troglodytes)로부터의 동일한 항원(상동체)에 대한 교차-반응성을 가질 수 있거나, 2개 이상의 별개의 항원 사이에 공유되는 에피토프에 결합할 수 있다.
"암"은 체내 비정상 세포의 비제어된 성장을 특징으로 하는 다양한 질환의 광범위한 군을 지칭한다. 조절되지 않은 세포 분열 및 성장은 이웃하는 조직을 침범하고, 또한 림프계 또는 혈류를 통해 신체의 먼 부분으로 전이될 수 있는 악성 종양의 형성을 야기한다. "암" 또는 "암 조직"은 종양을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 "키메라 항원 수용체"(CAR)는 단일 단백질 상에서 자연적으로 함께 발견되지 않는 조합으로 세포외 표적 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 모두 포함하는 세포 표면 수용체로 정의된다. 이는 세포외 도메인과 세포내 신호전달 도메인이 단일 수용체 단백질에서 자연적으로 함께 발견되지 않는 수용체를 포함한다. CAR은 주로 T 세포 및 자연 살해(NK) 세포와 같은 림프구와 함께 사용하기 위한 것이다.
"보체-의존성 세포독성" 또는 "CDC"는, 표적-결합된 단백질의 Fc 이펙터 도메인이 보체 성분 C1q에 결합하여 이를 활성화하고, 이는 다시 보체 캐스케이드를 활성화하여 표적 세포 사멸을 초래하는 세포 사멸 유도 매커니즘을 지칭한다. 보체의 활성화는 또한 표적 세포 표면 상에의 보체 성분의 침착을 가져올 수 있는데, 이는 백혈구 상의 보체 수용체(예를 들어, CR3)에 결합함으로써 CDC를 용이하게 한다.
"상보성 결정 영역(CDR)"은 항원에 결합하는 항체 영역이다. VH에 3개의 CDR(HCDR1, HCDR2, HCDR3)이 존재하고, VL에 3개의 CDR(LCDR1, LCDR2, LCDR3)이 존재한다. CDR은 Kabat(문헌[(Wu et al. (1970) J Exp Med 132: 211-50]; 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991]), Chothia(문헌[Chothia et al. (1987) J Mol Biol 196: 901-17]), IMGT(문헌[Lefranc et al. (2003) Dev Comp Immunol 27: 55-77]), AbM(문헌[Martin and Thornton J Bmol Biol 263: 800-15, 1996]), 및 사용 가능한 복잡한 결정 구조의 분석을 기반으로 하는 Contact(문헌[MacCallum, R. M., Martin, A. C. R. and Thornton, J. T. “Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography” J. Mol. Biol. 262:732-745])과 같은 다양한 도해를 사용하여 정의될 수 있다. 다양한 도해와 가변 영역 넘버링 사이의 관련성이 기재되어 있다(예를 들어, 문헌[Lefranc et al. (2003) Dev Comp Immunol 27: 55-77]; 문헌[Honegger and Pluckthun, J Mol Biol (2001) 309:657-70]; IMGT(International ImMunoGeneTics) 데이터베이스; 웹 리소스, www.imgt.org 참조). UCL Business PLC의 abYsis와 같은 이용가능한 프로그램을 사용하여 CDR을 상세하게 설명할 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "CDR", "HCDR1", "HCDR2", "HCDR3", "LCDR1", "LCDR2", 및 "LCDR3"는 본 명세서에서 달리 명시적으로 기재되어 있지 않는 한, 상기 기재된 Kabat, Chothia, IMGT, AbM, 또는 Contact 중 어느 하나의 방법에 의해 정의된 CDR을 포함한다. 서열번호 1~17, 28~51, 62~80, 89~94, 98~104, 141~146, 149~154, 167~169, 172~174, 176~178, 180, 182~184, 189~191, 193~195, 197~199, 201, 236~244, 253~261, 및 265~270을 갖는 서열의 CDR은 Kabat에 따라 정의된다. 서열번호 399~434를 갖는 서열의 CDR은 AbM에 따라 정의된다. 서열번호 435~470을 갖는 서열의 CDR은 Chothia에 따라 정의된다. 서열번호 471~506을 갖는 서열의 CDR은 IMGT에 따라 정의된다. 서열번호 507~542를 갖는 서열의 CDR은 Contact에 따라 정의된다.
"감소시키다", "낮추다", "약화하다", "줄이다" 또는 "약화시키다"는 일반적으로 대조군 또는 비히클에 의해 매개된 반응과 비교할 때 감소된 반응(즉, 다운스트림 효과)을 매개하는 시험 분자의 능력을 지칭한다. 예시적인 반응은 T 세포 확장, T 세포 활성화, 또는 T 세포 매개된 종양 세포 사멸, 또는 항원 또는 수용체에 대한 단백질의 결합, Fcγ에 대한 향상된 결합, 또는 향상된 Fc 이펙터 기능, 예컨대 향상된 ADCC, CDC, 및/또는 ADCP이다. 감소는 시험 분자와 대조군(또는 비히클) 사이의 측정된 반응에서 통계적으로 유의한 차이, 또는 측정된 반응의 감소, 예컨대 약 1.1, 1.2, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 또는 30배 또는 그 이상, 예컨대 500, 600, 700, 800, 900, 또는 1000배 또는 그 이상(1 사이 및 그 이상의 모든 정수 및 소수점 포함, 예를 들어, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8 등)의 감소일 수 있다.
"분화"는 세포의 효능 또는 증식을 감소시키거나 세포를 보다 발달적으로 제한된 상태로 이동시키는 방법을 지칭한다.
"암호화하다" 또는 "암호화하는"은 뉴클레오티드(예를 들어 rRNA, tRNA, 및 mRNA)의 정의된 서열 또는 아미노산의 정의된 서열 및 그로부터 초래된 생물학적 특성을 갖는, 생물학적 과정에서 다른 중합체 및 거대분자의 합성을 위한 주형으로서의 역할을 하는 폴리뉴클레오티드, 예컨대 유전자, cDNA, 또는 mRNA 내의 뉴클레오티드의 특정 서열의 고유한 특성을 지칭한다. 따라서, 유전자, cDNA ,또는 RNA는 그러한 유전자에 상응하는 mRNA의 전사 및 번역이 세포 또는 다른 생물계에서 단백질을 생성하는 경우에 단백질을 암호화한다. 유전자 또는 cDNA의 전사를 위한 주형으로서 사용되는, mRNA 서열과 동일한 뉴클레오티드 서열을 갖는 암호화 가닥, 및 비암호화 가닥 둘 모두는 이러한 유전자 또는 cDNA의 단백질 또는 다른 생성물을 암호화하는 것으로 지칭될 수 있다.
"향상하다", "촉진하다", "증가하다", "확장하다", 또는 "개선하다"는 일반적으로 대조군 또는 비히클에 의해 매개된 반응과 비교할 때 더 큰 반응(즉, 다운스트림 효과)을 매개하는 시험 분자의 능력을 지칭한다. 예시적인 반응은 T 세포 확장, T 세포 활성화, 또는 T 세포 매개된 종양 세포 사멸, 또는 항원 또는 수용체에 대한 단백질의 결합, Fcγ에 대한 향상된 결합, 또는 향상된 Fc 이펙터 기능, 예컨대 향상된 ADCC, CDC, 및/또는 ADCP이다. 향상은 시험 분자와 대조군(또는 비히클) 사이의 측정된 반응에서 통계적으로 유의한 차이, 또는 측정된 반응의 증가, 예컨대 약 1.1, 1.2, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 또는 30배 또는 그 이상, 예컨대 500, 600, 700, 800, 900, 또는 1000배 또는 그 이상(1 사이 및 그 이상의 모든 정수 및 소수점 포함, 예를 들어, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8 등)의 증가일 수 있다.
"확장"은 세포 분열 및 세포 사멸의 결과를 지칭한다.
"발현하다" 및 "발현"은 세포 또는 시험관내에서 발생하는 잘 알려진 전사 및 번역을 지칭한다. 따라서, 발현 생성물, 예를 들어 단백질은 세포에 의해 또는 시험관내에서 발현되고 세포내, 세포외, 또는 막관통 단백질일 수 있다.
"발현 벡터"는 발현 벡터에 존재하는 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩티드의 번역을 유도하기 위해 생물계 또는 재구성된 생물계에서 이용될 수 있는 벡터를 지칭한다.
"dAb" 또는 "dAb 단편"은 VH 도메인으로 구성된 항체 단편을 지칭한다(문헌[Ward et al., Nature 341:544 546 (1989)]).
"Fab" 또는 "Fab 단편"은 VH, CH1, VL ,및 CL 도메인으로 구성된 항체 단편을 지칭한다.
"F(ab') 2 " 또는 "F(ab') 2 단편"은 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 항체 단편을 지칭한다.
"Fd" 또는 "Fd 단편"은 VH 및 CH1 도메인으로 구성된 항체 단편을 지칭한다.
"Fv" 또는 "Fv 단편"은 항체의 단일 아암으로부터의 VH 및 VL 도메인으로 구성된 항체 단편을 지칭한다.
"전장 항체"는 이황화 결합에 의해 상호 연결된 2개의 중쇄(HC) 및 2개의 경쇄(LC)뿐만 아니라 이의 다량체(예를 들어, IgM)로 구성된다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 중쇄 불변 도메인으로 구성되며, 중쇄 불변 도메인은 서브도메인 CH1, 힌지, CH2, 및 CH3로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 도메인(VL) 및 경쇄 불변 도메인(CL)으로 구성된다. VH 및 VL은 프레임워크 영역(FR) 영역이 개재된 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변성 영역으로 추가로 세분화될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR 세그먼트로 구성되며, 아미노 말단에서 카복시 말단으로 다음의 순서로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4.
"유전적 변형"은 "외부"(즉, 외부 또는 세포외) 유전자, DNA, 또는 RNA 서열을 숙주 세포에 도입하여 숙주 세포가 목적하는 물질, 일반적으로 도입된 유전자 또는 서열에 의해 암호화되는 단백질 또는 효소를 생성하기 위해 도입된 유전자 또는 서열을 발현하도록 하는 것을 지칭한다. 도입된 유전자 또는 서열은 또한 "클로닝된" 또는 "외부" 유전자 또는 서열로 지칭될 수 있으며, 개시, 정지, 프로모터, 신호, 분비, 또는 세포의 유전 기구에 의해 사용되는 기타 서열과 같은 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 조절 또는 제어 서열을 포함할 수 있다. 유전자 또는 서열은 비기능적 서열 또는 알려진 기능이 없는 서열을 포함할 수 있다. 도입된 DNA 또는 RNA를 수용하고 발현하는 숙주 세포는 "유전적으로 조작"된 것이다. 숙주 세포에 도입된 DNA 또는 RNA는 숙주 세포와 동일한 속 또는 종 또는 상이한 속 또는 종의 세포를 포함하는 임의의 공급원으로부터 유래할 수 있다.
"이종"은 자연계에서 서로 동일한 관계에서 발견되지 않는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드 또는 2개 이상의 폴리펩티드를 지칭한다.
"이종 폴리뉴클레오티드"는 본원에 기재된 바와 같은 2개 이상의 신생항원을 암호화하는 비자연적 발생 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.
"이종 폴리펩티드"는 본원에 기재된 바와 같은 2개 이상의 신생항원 폴리펩티드를 포함하는 비자연적 발생 폴리펩티드를 지칭한다.
"숙주 세포"는 이종 핵산을 함유하는 임의의 세포를 지칭한다. 예시적인 이종 핵산은 벡터(예를 들어, 발현 벡터)이다.
"인간 항체"는 인간 대상체에게 투여되는 경우 최소 면역 반응을 갖도록 최적화된 항체를 지칭한다. 인간 항체의 가변 영역은 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 인간 항체가 불변 영역 또는 불변 영역의 일부를 포함하는 경우, 불변 영역은 또한 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 인간 항체는, 인간 항체의 가변 영역이 인간 생식세포계열(germline) 면역글로불린 또는 재배열된 면역글로불린 유전자를 사용하는 시스템으로부터 수득되는 경우, 인간 기원의 서열"로부터 유래되는" 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 이러한 예시적인 시스템은, 파지 상에 디스플레이된 인간 면역글로불린 유전자 라이브러리, 및 인간 면역글로불린 유전자좌를 담지하는 유전자도입 비인간 동물, 예컨대 마우스 또는 래트를 포함한다. "인간 항체"는 전형적으로, 인간 항체 및 인간 면역글로불린 유전자좌를 수득하는 데 사용되는 시스템 간의 차이, 체세포 돌연변이의 도입, 또는 프레임워크 또는 CDR 내로의 치환의 의도적인 도입, 또는 둘 모두로 인해 인간에서 발현된 면역글로불린과 비교하여 아미노산 차이를 포함한다. 전형적으로, "인간 항체"는 인간 생식세포계열 면역글로불린 또는 재배열된 면역글로불린 유전자에 의해 암호화된 아미노산 서열과 아미노산 서열이 약 80% 이상, 81% 이상, 82% 이상, 83% 이상, 84% 이상, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일하다. 일부 경우에, "인간 항체"는, 예를 들어 문헌[Knappik et al., (2000) J Mol Biol 296:57-86]에 기재된 바와 같이 인간 프레임워크 서열 분석으로부터 유래되는 컨센서스 프레임워크 서열을 함유하거나, 예를 들어 문헌[Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96] 및 국제 특허 출원 공개 WO2009/085462호에 기재된 바와 같이 파지 상에 디스플레이된 인간 면역글로불린 유전자 라이브러리 내로 혼입된 합성 HCDR3을 포함할 수 있다. 적어도 하나의 CDR이 비인간 종으로부터 유래되는 항체는 "인간 항체"의 정의에 포함되지 않는다.
"인간화 항체"는, 하나 이상의 CDR이 비인간 종으로부터 유래되고, 적어도 하나의 프레임워크가 인간 면역글로불린 서열로부터 유래되는 항체를 지칭한다. 인간화 항체는 프레임워크 내에 치환을 포함할 수 있으므로, 프레임워크는 발현된 인간 면역글로불린 또는 인간 면역글로불린 생식세포계열 유전자 서열의 정확한 카피가 아닐 수 있다.
"와 조합으로"는 둘 이상의 치료제가 대상체에게 혼합물 상태로 함께 투여되거나, 단제(single agent)로서 동시에 투여되거나, 단제로서 임의의 순서로 순차적으로 투여됨을 의미한다.
"세포내 신호전달 도메인" 또는 "세포질 신호전달 도메인"은 분자의 세포내 부분을 지칭한다. 이는 제2 메신저를 생성하거나 이러한 메신저에 반응하여 이펙터로서 기능함으로써 규정된 신호전달 경로를 통해 세포 활성을 조절하기 위하여 정보를 세포내에서 전달하는 것에 의해 작용하는 단백질의 기능적 부분이다. 세포내 신호전달 도메인은 CAR 함유 세포, 예를 들어 CAR-T 세포의 면역 이펙터 기능을 촉진하는 신호를 생성한다.
"단리된"은 분자가 생성되는 시스템, 예컨대 재조합 세포의 다른 성분으로부터 실질적으로 분리되고/분리되거나 정제된 분자(예컨대, 합성 폴리뉴클레오티드 또는 합성 폴리펩티드)의 상동 집단뿐만 아니라, 적어도 하나의 정제 또는 단리 단계를 거친 단백질을 지칭한다. "단리된"은 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없는 분자를 지칭하며, 더 높은 순도로, 예컨대 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 순도로 단리된 분자를 포함한다.
"조절"은 대조군 또는 비히클에 의해 매개되는 반응과 비교할 때 향상되거나 감소된 반응(즉, 다운스트림 효과)을 매개하는 시험 분자의 능력이 향상되거나 감소됨을 지칭한다.
"단일클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체 분자 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하는데, 즉, 집단을 구성하는 개별 항체는 항체 중쇄로부터 C-말단 라이신의 제거와 같은 가능성 있는 잘 알려진 변경, 또는 아미노산 이성질화 또는 탈아미드화, 메티오닌 산화, 또는 아스파라긴 또는 글루타민 탈아미드화와 같은 번역 후 변형을 제외하고는 동일하다. 단일클론 항체는 전형적으로 1개의 항원 에피토프에 결합한다. 이중특이적 단일클론 항체는 2개의 별개의 항원 에피토프에 결합한다. 단일클론 항체는 항체 집단 내에 불균질한 글리코실화를 가질 수 있다. 단일클론 항체는 단일특이적 또는 다중특이적, 예컨대 이중특이적 1가, 2가, 또는 다가일 수 있다.
"다중특이적"은 2개 이상의 별개의 항원 또는 동일한 항원 내의 2개 이상의 별개의 에피토프와 특이적으로 결합하는 항체와 같은 분자를 지칭한다. 다중특이적 분자는 다른 관련 항원에 대한, 예를 들어 다른 종, 예컨대 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 파시쿨라리스(사이노몰구스, 사이노) 또는 판 트로글로디테스로부터의 동일한 항원(상동체)에 대한 교차-반응성을 가질 수 있거나, 2개 이상의 별개의 항원 사이에 공유되는 에피토프에 결합할 수 있다.
"자연 살해 세포" 및 "NK 세포"는 본원에서 상호교환적으로 및 동의어로 사용된다. NK 세포는 CD16+ CD56+ 및/또는 CD57+ TCR- 표현형을 갖는 분화된 림프구를 지칭한다. NK 세포는 특정 세포용해 효소의 활성화에 의해 "자가" MHC/HLA 항원을 발현하지 못하는 세포에 결합하여 이를 사멸시키는 이의 능력, NK 활성화 수용체에 대한 리간드를 발현하는 종양 세포 또는 다른 이상 세포(diseased cell)를 사멸시키는 능력 및 면역반응을 자극하거나 억제하는 사이토카인이라고 불리는 단백질 분자를 방출하는 능력을 특징으로 한다.
핵산 또는 아미노산과 관련하여 사용될 때 "작동가능하게 연결된" 및 유사한 어구는 서로 기능적 관계에 있는 핵산 서열 또는 아미노산 서열의 작동적 연결을 각각 지칭한다. 예를 들어, 작동가능하게 연결된 프로모터, 인핸서 요소, 오픈 리딩 프레임, 5' 및 3' UTR, 및 종결자 서열은 핵산 분자(예를 들어, RNA)의 정확한 생성을 야기하고 일부 경우에는 폴리펩티드의 생성을 야기한다(즉, 오픈 리딩 프레임의 발현). 작동가능하게 연결된 펩티드는 펩티드의 기능적 도메인이 각 도메인의 의도된 기능을 부여하기 위해 서로 적절한 거리를 두고 배치된 펩티드를 지칭한다.
"약학적 조합물"은 함께 또는 개별적으로 투여되는 둘 이상의 활성 성분의 조합물을 지칭한다.
"약학적 조성물"은 활성 성분 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 조합하여 수득되는 조성물을 지칭한다.
"약학적으로 허용 가능한 담체" 또는 "부형제"는 활성 성분 이외의, 대상체에게 비독성인 약학적 조성물 내의 성분을 지칭한다. 예시적인 약학적으로 허용 가능한 담체는 완충제, 안정화제, 또는 보존제이다.
"폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 당-포스페이트 골격 또는 다른 동등한 공유결합적 화학 특성에 의해 공유결합된 뉴클레오티드의 사슬을 포함하는 합성 분자를 지칭한다. cDNA는 폴리뉴클레오티드의 전형적인 예이다. 폴리뉴클레오티드는 DNA 또는 RNA 분자일 수 있다.
질환 또는 장애와 관련하여 "예방하다", "예방하는", "예방", 또는 "예방법"은 장애가 대상체에서 발생하는 것을 예방하는 것을 의미한다.
"증식"은 대칭 또는 비대칭 세포 분열인 세포 분열의 증가를 지칭한다.
"프로모터"는 전사를 개시하는 데 필요한 최소 서열을 지칭한다. 프로모터는 또한 전사를 향상시키거나 억제하는 인핸서 또는 리프레서 요소 각각을 포함할 수 있다.
"단백질" 또는 "폴리펩티드"는 본원에서 상호교환적으로 사용되고 펩티드 결합에 의해 연결된 적어도 2개의 아미노산 잔기로 각각 구성된 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는 분자를 지칭한다. 단백질은 단량체일 수 있거나 2개 이상의 서브유닛의 단백질 복합체일 수 있으며, 서브유닛은 동일하거나 구별된다. 50개 미만의 아미노산의 작은 폴리펩티드는 "펩티드"로 지칭될 수 있다. 단백질은 이종 융합 단백질, 당단백질, 또는 번역 후 변형, 예컨대 인산화, 아세틸화, 미리스토일화, 팔미토일화, 글리코실화, 산화, 포르밀화, 아미드화, 시트룰린화, 폴리글루타밀화, ADP-리보실화, 페길화, 또는 비오틴화에 의해 변형된 단백질일 수 있다. 단백질은 재조합적으로 발현될 수 있다.
"재조합"은 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성, 또는 단리된 폴리뉴클레오티드, 폴리펩티드, 벡터, 바이러스, 및 기타 거대분자를 지칭한다.
"조절 요소"는 핵산 서열의 발현의 일부 측면을 제어하는 임의의 시스- 또는 트랜스 작용 유전 요소를 지칭한다.
"재발성(relapsed)"은 치료제에 의한 이전 치료 후의 개선 기간 후에 질환 또는 질환의 징후 및 증상의 복귀를 지칭한다.
"불응성(refractory)"은 치료에 반응하지 않는 질환을 지칭한다. 불응성 질환은 치료 전 또는 치료 시작 시점에서 치료에 대해 저항성일 수 있거나, 또는 불응성 질환은 치료 동안 저항성이 될 수 있다.
"단일 사슬 Fv" 또는 "scFv"는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 하나 이상의 항체 단편 및 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 하나 이상의 항체 단편을 포함하는 융합 단백질을 지칭하고, VL 및 VH는 폴리펩티드 링커를 통해 연속적으로 연결되고, 단일 사슬 폴리펩티드로서 발현될 수 있다. 명시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 바와 같이, scFv는 예를 들어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단에 대해, 임의의 순서로 VL 및 VH 가변 영역을 가질 수 있으며, scFv는 VL-링커-VH를 포함하거나 VH-링커-VL을 포함할 수 있다.
"특이적으로 결합하다", "특이적 결합", "특이적으로 결합하는" 또는 "결합하다"는 항원 또는 항원 내의 에피토프에 대해 다른 항원에 대한 친화성보다 더 큰 친화성으로 결합하는 단백질성 분자를 지칭한다. 전형적으로, 단백질성 분자는 약 1x10-7 M 이하, 예를 들어 약 5x10-8 M 이하, 약 1x10-8 M 이하, 약 1x10-9 M 이하, 약 1x10-10 M 이하, 약 1x10-11 M 이하, 또는 약 1x10-12 M 이하의 평형 해리 상수(KD)로 항원 또는 항원 내의 에피토프에 결합하며, 일반적으로 KD는 비특이적 항원(예를 들어, BSA, 카제인)에 결합하기 위한 KD보다 100배 이상 낮다.
"대상체"는 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. "비인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유류 및 비포유류, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 고양이, 말, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다. 용어 "대상체" 또는 "환자"는 본원에서 상호교환적으로 사용될 수 있다.
"T 세포" 및 "T 림프구"는 상호 교환가능하며, 본원에서 동의어로 사용된다. T 세포는 흉선세포, 나이브 T 림프구, 기억 T 세포, 미성숙 T 림프구, 성숙 T 림프구, 휴지지 T 림프구, 또는 활성화 T 림프구를 포함한다. T 세포는 T 헬퍼(Th) 세포, 예를 들어 T 헬퍼 1(Th1), 또는 T 헬퍼 2(Th2) 세포일 수 있다. T 세포는 헬퍼 T 세포(HTL; CD4+ T 세포), CD4+ T 세포, 세포독성 T 세포(CTL; CD8+ T 세포), 종양 침윤 세포독성 T 세포(TIL; CD8+ T 세포), CD4+CD8+ T 세포, 또는 T 세포의 다른 하위세트일 수 있다. 반불변(semi-invariant) αβ T 세포 수용체를 발현하지만, NK1.1과 같은 NK 세포와 전형적으로 관련된 다양한 분자 마커도 발현하는 특수화된 T 세포 집단을 지칭하는 "NKT 세포"도 포함된다. NKT 세포에는 CD4+, CD4-, CD8+, 및 CD8- 세포뿐만 아니라, NK1.1+ 및 NK1.1-도 포함된다. NKT 세포 상의 TCR은, 그것이 MHC I-유사 분자 CD Id에 의해 제시되는 당지질 항원을 인식한다는 점에서 독특하다. NKT 세포는 염증 또는 면역 관용을 촉진하는 사이토카인을 생성하는 이의 능력에 기인하여 보호 효과 또는 해로운 효과를 가질 수 있다. 또한, "감마-델타 T 세포(γδ T 세포)"가 포함되며, 이는 표면에 별개의 TCR을 갖는 T 세포의 작은 서브세트에 대한 특수화된 집단을 말하며, TCR이 α- 및 β-TCR 사슬로 지정된 2개의 당단백질 사슬로 구성되는 대부분의 T 세포와는 달리, γδ T 세포의 TCR은 γ 사슬 및 δ 사슬로 구성된다. γδ T 세포는 면역 감시 및 면역 조절에서 역할을 할 수 있고 IL-17의 중요한 공급원으로 밝혀졌으며 강력한 CD8+ 세포독성 T 세포 반응을 유도하는 것으로 밝혀졌다. "조절성 T 세포" 또는 "Treg"가 또한 포함되는데, 이는 비정상적이거나 과도한 면역 반응을 억제하고 면역 관용에서 역할을 하는 T 세포를 지칭한다. Treg는 전형적으로 전사 인자 Foxp3 양성 CD4+ T 세포이며, 또한 IL-10 생성 CD4+ T 세포인 전사 인자 Foxp3 음성 조절성 T 세포를 포함할 수 있다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 "치료적 유효량" 또는 "유효량"은 목적하는 치료 결과를 필요한 기간 동안 및 투여량으로 달성하는 데 효과적인 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중과 같은 인자, 및 개체에서 목적하는 반응을 유발하는 치료제 또는 치료제 조합의 능력에 따라 변동될 수 있다. 효과적인 치료제 또는 치료제들의 조합의 예시적인 지표는, 예를 들어, 환자의 개선된 웰빙(well-being), 종양 부하(tumor burden)의 감소, 정지되거나 지연된 종양의 성장, 및/또는 체내의 다른 위치로의 암 세포 전이의 부재를 포함한다.
"형질도입"은 바이러스 벡터를 사용하여 세포에 외부 핵산을 도입하는 것을 지칭한다.
암과 같은 질환 또는 장애와 관련하여 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 다음 중 하나 이상을 달성하는 것을 지칭한다: 장애의 중증도 및/또는 지속기간을 감소시킴, 치료되는 장애에 특징적인 증상의 악화를 억제함, 이전에 장애를 가졌던 대상체에서 그러한 장애의 재발을 제한하거나 예방함, 또는 장애에 대해 이전에 증상을 나타낸 대상체에서 증상의 재발을 제한하거나 예방함.
"종양 세포" 또는 "암 세포"는 생체내, 생체외, 또는 조직 배양에서의 암성, 전암성, 또는 형질전환 세포를 지칭하며, 이는 자발적이거나 유도된 표현형 변화를 갖는다. 이러한 변화가 반드시 새로운 유전 물질의 흡수를 수반하지는 않는다. 형질전환이 형질전환 바이러스에 의한 감염 및 새로운 게놈 핵산의 혼입, 또는 외인성 핵산의 흡수로부터 일어날 수 있기는 하지만, 이는 또한 자발적으로 또는 발암물질에 대한 노출 후에 일어날 수 있으며, 이를 통해 내인성 유전자를 돌연변이화할 수 있다. 형질전환/암은 시험관내에서, 생체내에서, 및 생체외에서 누드 마우스 등과 같은 적합한 동물 숙주에서의 형태학적 변화, 세포의 불멸화, 비정상 성장 제어, 병소 형성, 증식, 악성종양, 종양 특이적 마커 수준의 조절, 침습성, 종양 성장에 의해 예시된다.
"변이체", "돌연변이" 또는 "변경된"은 하나 이상의 변형, 예를 들어 하나 이상의 치환, 삽입, 또는 결실에 의해 참조 폴리펩티드 또는 참조 폴리뉴클레오티드와 상이한 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.
달리 명백하게 언급되지 않는 한, 본 명세서 전체에 걸쳐 항체 불변 영역 내의 아미노산 잔기의 넘버링은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따른다.
Ig 불변 영역에서의 돌연변이는 다음과 같이 지칭된다: L351Y_F405A_Y407V는 하나의 면역글로불린 불변 영역에서의 L351Y, F405A, 및 Y407V 돌연변이를 지칭한다. L351Y_F405A_Y407V/T394W는 하나의 다량체 단백질에 존재하는 제1 Ig 불변 영역에서의 L351Y, F405A, 및 Y407V 돌연변이 및 제2 Ig 불변 영역에서의 T394W 돌연변이를 지칭한다.
물질의 조성
CD33에 결합하는 항원 결합 도메인
본 개시는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단일특이적 및 다중특이적 단백질, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR), 전술된 것을 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포, 및 전술한 것의 생성 및 사용 방법을 제공한다. 본원에서 식별된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 향상된 열안정성 면에서 향상된 특성을 입증하였다.
본 개시는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 18의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR)1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 19의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 20의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 21의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 22의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 23의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 24의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 25의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 26의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 서열번호 27의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
CDR(예를 들어, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 식별하는 방법 및 기법은 당업계에 알려져 있으며, 본원에 기술된 임의의 중쇄 가변 영역 및/또는 임의의 경쇄 가변 영역 내의 CDR을 식별하기 위해 사용될 수 있다. CDR의 경계를 식별하는 데 사용할 수 있는 규칙에는 Kabat 정의, Chothia 정의, AbM 정의, IMGT 정의, 및 Contact 정의가 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 이론에 구애됨이 없이, Kabat 정의는 서열 가변성에 기반하고, Chothia 정의는 구조적 루프 영역의 위치에 기반하고, AbM 정의는 Chothia와 Kabat 접근법 사이의 절충안이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 dAb이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 각각 서열번호 1, 6, 및 12; 각각 서열번호 2, 7, 및 13; 각각 서열번호 1, 8, 및 14; 각각 서열번호 3, 9, 및 13; 각각 서열번호 4, 10, 및 15; 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는 각각 서열번호 5, 11, 및 17의 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는 단리된 단백질을 제공한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 dAb이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 골수 세포 표면 항원 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
k) 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
l) 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
m) 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
예시적인 HCDR 서열은 표 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 및 4f에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH를 포함한다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH를 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273의 VL을 포함한다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 82의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 85의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 87의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 271의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 272의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 273의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273의 VL을 포함한다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 dAb이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 단리된 단백질을 제공한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 및 45;
b) 각각 서열번호 29, 37, 및 46;
c) 각각 서열번호 30, 38, 및 47;
d) 각각 서열번호 31, 39, 및 48;
e) 각각 서열번호 32, 40, 및 49;
f) 각각 서열번호 33, 41, 및 50;
g) 각각 서열번호 34, 42, 및 51;
h) 각각 서열번호 34, 43, 및 51;
i) 각각 서열번호 34, 44, 및 51; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 및 51;
k) 각각 서열번호 253, 256, 및 259;
l) 각각 서열번호 254, 257, 및 260; 또는
m) 각각 서열번호 255, 258, 및 261.
특정 구현예에서, 단리된 단백질은 각각 서열번호 29, 37, 및 46의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, 단리된 단백질은 각각 서열번호 32, 40, 및 49의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, 단리된 단백질은 각각 서열번호 34, 43, 및 51의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, 단리된 단백질은 각각 서열번호 253, 256, 및 259의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, 단리된 단백질은 각각 서열번호 254, 257, 및 260의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, 단리된 단백질은 각각 서열번호 255, 258, 및 361의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH를 포함한다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH를 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273의 VL을 포함한다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 82의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 85의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 87의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 271의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 272의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 273의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273의 VL을 포함한다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 dAb이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 골수 세포 표면 항원 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR)1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 83의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 84의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 86의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 88의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
예시적인 HCDR 및 LCDR 서열은 표 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 및 4f에 기재되어 있다.
특정 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 dAb이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 골수 세포 표면 항원 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80;
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80;
k) 각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269;
l) 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76;
m) 각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 dAb이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 골수 세포 표면 항원 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
특정 구현예에서, 단리된 단백질은 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, 단리된 단백질은 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, 단리된 단백질은 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, 단리된 단백질은 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, 단리된 단백질은 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, 단리된 단백질은 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 dAb이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 골수 세포 표면 항원 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 dAb이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 골수 세포 표면 항원 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 89, 90, 및 92의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 33, 91, 및 94의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 167, 168, 및 169의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 172, 173, 및 174의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 176, 177, 및 178의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 89, 90, 및 180의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 dAb이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 골수 세포 표면 항원 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 a) 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 105의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3; b) 서열번호 96의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 106의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; c) 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 107의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; d) 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 185의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; e) 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 188의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; f) 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 192의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; g) 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 196의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; h) 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 200의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는 i) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 202의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 dAb이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 골수 세포 표면 항원 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199;
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 dAb이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 골수 세포 표면 항원 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH 및 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL; 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL; 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL; 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL; 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL; 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL; 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL; 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 dAb이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 골수 세포 표면 항원 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL; 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL; 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL; 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL; 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL; 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL; 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL; 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 dAb이다. 일부 구현예에서, CD33 항원 결합 도메인은 VHH이다.
CD33 결합 scFv
CD33에 결합하는 본원에서 식별된 임의의 VH 및 VL 도메인은 VH-링커-VL 또는 VL-링커-VH 배향에서 scFv 형식으로 조작될 수 있다. 본원에서 식별된 임의의 VH 및 VL 도메인은 또한 sc(Fv)2 구조, 예컨대 VH-링커-VL-링커VL-링커-VH, VH-링커-VL-링커-VH-링커-VL. VH-링커-VH-링커-VL-링커-VL. VL-링커-VH-링커-VH-링커-VL. VL링커-VH-링커-VL-링커-VH, 또는 VL-링커-VL-링커-VH-링커-VH를 생성하는 데 사용될 수 있다.
본원에서 식별된 VH 및 VL 도메인은 scFv 포맷으로 혼입될 수 있고 생성된 scFv의 CD33에 대한 결합 및 열안정성은 알려진 방법을 사용하여 평가될 수 있다. 결합은 ProteOn XPR36, BIAcore 3000, 또는 KinExA 기기, ELISA, 또는 당업자에게 알려진 경쟁적 결합 분석을 사용하여 평가될 수 있다. 결합은 정제된 scFv 또는 대장균 상청액 또는 발현된 scFv를 함유하는 용해된 세포를 사용하여 평가될 수 있다. CD33에 대한 시험 scFv의 측정된 친화성은 상이한 조건(예를 들어, 삼투압 농도, pH)에서 측정되는 경우 달라질 수 있다. 따라서, 친화성 및 기타 결합 파라미터(예를 들어, KD, Kon, Koff)의 측정은 전형적으로 표준화된 조건 및 표준화된 완충액으로 수행된다. 열안정성은 시험 scFv를 50℃, 55℃, 또는 60℃와 같은 승온에서 5분, 10분, 15분, 20분, 25분, 또는 30분과 같은 일정 시간 동안 가열하고 CD33에 대한 시험 scFv의 결합을 측정하여 평가될 수 있다. 가열되지 않은 scFv 샘플과 비교할 때 CD33에 대한 비슷한 결합을 유지하는 scFv를 열안정한 것으로 지칭한다.
재조합 발현 시스템에서, 링커는 펩티드 링커이고, 임의의 자연 발생 아미노산을 포함할 수 있다. 링커 내로 포함될 수 있는 예시적인 아미노산은 Gly, Ser Pro, Thr, Glu, Lys, Arg, Ile, Leu, His, 및 The이다. 링커는 VH와 VL을, 이들이 서로에 대해 올바른 입체구조를 형성하여 CD33에 대한 결합과 같은 목적하는 활성을 유지하도록 하는 방식으로 연결하기에 충분한 길이를 가져야 한다.
링커는 약 5~50개의 아미노산 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 약 10~40개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 10~35개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 10~30개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 10~25개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 10~20개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 15~20개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 6개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 7개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 8개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 9개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 10개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 11개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 12개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 13개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 14개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 15개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 16개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 17개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 18개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 19개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 20개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 21개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 22개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 23개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 24개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 25개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 26개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 27개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 28개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 29개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 30개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 31개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 32개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 33개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 34개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 35개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 36개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 37개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 38개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 39개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 40개의 아미노산 길이이다. 사용될 수 있는 예시적인 링커는 Gly 풍부 링커, Gly 및 Ser 함유 링커, Gly 및 Ala 함유 링커, Ala 및 Ser 함유 링커, 및 기타 가요성 링커이다.
다른 링커 서열은 임의의 면역글로불린 중쇄 또는 경쇄 이소형으로부터 유래되는 면역글로불린 힌지 영역, CL, 또는 CH1의 일부를 포함할 수 있다. 대안적으로, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시알킬렌, 또는 폴리에틸렌 글리콜과 폴리프로필렌 글리콜의 공중합체를 포함하는 다양한 비단백질성 중합체가 링커로서 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 링커는 표 1에 기재되어 있다. 추가 링커는 예를 들어 국제 특허 공개 WO2019/060695호에 기술되어 있으며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL)을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 119의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 136의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함한다.
[표 1]
Figure pat00006
Figure pat00007
특정 구현예에서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함한다(예를 들어, 서열번호 108의 아미노산 서열로 구성됨).
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 18의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR)1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 19의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 20의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 21의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 22의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 23의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 24의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 25의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 26의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 서열번호 27의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 1, 6, 및 12; 각각 서열번호 2, 7, 및 13; 각각 서열번호 1, 8, 및 14; 각각 서열번호 3, 9, 및 13; 각각 서열번호 4, 10, 및 15; 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는 각각 서열번호 5, 11, 및 17의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
k) 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
l) 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
m) 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3.
특정 구현예에서, scFv는 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
예시적인 HCDR 서열은 표 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 및 4f에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH를 포함한다.
특정 구현예에서, scFv는 서열번호 53의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 56의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 59의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 262의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 263의 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 264의 VH를 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273의 VL을 포함한다.
특정 구현예에서, scFv는 서열번호 82의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 85의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 87의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 271의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 272의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 273의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 및 45;
b) 각각 서열번호 29, 37, 및 46;
c) 각각 서열번호 30, 38, 및 47;
d) 각각 서열번호 31, 39, 및 48;
e) 각각 서열번호 32, 40, 및 49;
f) 각각 서열번호 33, 41, 및 50;
g) 각각 서열번호 34, 42, 및 51;
h) 각각 서열번호 34, 43, 및 51;
i) 각각 서열번호 34, 44, 및 51;
j) 각각 서열번호 35, 42, 및 51;
k) 각각 서열번호 253, 256, 및 259;
l) 각각 서열번호 254, 257, 및 260; 또는
m) 각각 서열번호 255, 258, 및 261.
특정 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 29, 37, 및 46의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 32, 40, 및 49의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 34, 43, 및 51의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 253, 256, 및 259의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 254, 257, 및 260의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 255, 258, 및 261의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 83의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 84의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 86의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 88의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, scFv는 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
예시적인 HCDR 및 LCDR 서열은 표 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 및 4f에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, scFv는 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80;
k) 각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269;
l) 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76;
m) 각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270.
특정 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
특정 구현예에서, scFv는 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, scFv는 서열번호 108의 아미노산 서열의 링커 서열을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 서열번호 53의 VH, 서열번호 108의 제1 링커(L1), 및 서열번호 82의 VL(VH-L1-VL)을 포함한다. 다른 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 서열번호 82의 VL, 서열번호 108의 제1 링커(L1), 및 서열번호 53의 VL(VL-L1-VH)을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, scFv는 서열번호 108의 아미노산 서열의 링커 서열을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 서열번호 56의 VH, 서열번호 108의 제1 링커(L1), 및 서열번호 85의 VL(VH-L1-VL)을 포함한다. 다른 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 서열번호 56의 VL, 서열번호 108의 제1 링커, 및 서열번호 85의 VL(VL-L1-VH)을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, scFv는 서열번호 108의 아미노산 서열의 링커 서열을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 서열번호 59의 VH, 서열번호 108의 제1 링커(L1), 및 서열번호 87의 VL(VH-L1-VL)을 포함한다. 다른 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 서열번호 59의 VL, 서열번호 108의 제1 링커, 및 서열번호 87의 VL(VL-L1-VH)을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, scFv는 서열번호 108의 아미노산 서열의 링커 서열을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 서열번호 262의 VH, 서열번호 108의 제1 링커(L1), 및 서열번호 271의 VL(VH-L1-VL)을 포함한다. 다른 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 서열번호 271의 VL, 서열번호 108의 제1 링커, 및 서열번호 262의 VL(VL-L1-VH)을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, scFv는 서열번호 108의 아미노산 서열의 링커 서열을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 서열번호 263의 VH, 서열번호 108의 제1 링커(L1), 및 서열번호 272의 VL(VH-L1-VL)을 포함한다. 다른 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 서열번호 272의 VL, 서열번호 108의 제1 링커, 및 서열번호 263의 VL(VL-L1-VH)을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, scFv는 서열번호 108의 아미노산 서열의 링커 서열을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 서열번호 264의 VH, 서열번호 108의 제1 링커(L1), 및 서열번호 273의 VL(VH-L1-VL)을 포함한다. 다른 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 서열번호 273의 VL, 서열번호 108의 제1 링커, 및 서열번호 264의 VL(VL-L1-VH)을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 각각 서열번호 89, 90, 및 92의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 33, 91, 및 94의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 167, 168, 및 169의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 172, 173, 및 174의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 176, 177, 및 178의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 89, 90, 및 180의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 105의 경쇄 가변 영역(VL)의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 106의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 107의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 185의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 188의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 192의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 196의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 200의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 202의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199;
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH 및 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL; 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL; 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL; 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL; 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL; 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL; 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL; 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 213의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 214의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 215의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 217의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 218의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 219의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 221의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 274의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 275의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 276의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, scFv는 서열번호 213의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 219의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 274의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 275의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, scFv는 서열번호 276의 아미노산 서열을 포함한다.
CD33에 결합하는 다른 항원 결합 도메인
CD33에 결합하는 본원에서 식별된 임의의 VH 및 VL 도메인은 또한 Fab, F(ab')2, Fd, 또는 Fv 포맷으로 조작될 수 있고, CD33에 대한 이들의 결합 및 열안정성은 본원에 기술된 검정을 사용하여 평가될 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에서 식별된 VH 및 VL 도메인은 Fab로 조작된다.
일부 구현예에서, Fab는 서열번호 18의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 19의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 20의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 21의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 22의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 23의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 24의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 25의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 26의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 서열번호 27의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함한다.
일부 구현예에서, Fab는 각각 서열번호 1, 6, 및 12; 각각 서열번호 2, 7, 및 13; 각각 서열번호 1, 8, 및 14; 각각 서열번호 3, 9, 및 13; 각각 서열번호 4, 10, 및 15; 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는 각각 서열번호 5, 11, 및 17의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fab는 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
k) 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
l) 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
m) 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3.
특정 구현예에서, Fab는 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fab는 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fab는 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fab는 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fab는 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fab는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
예시적인 HCDR 서열은 표 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 및 4f에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, Fab는 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, Fab는 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, Fab는 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 또는 88, 271, 272, 또는 273의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, Fab는 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 및 45;
b) 각각 서열번호 29, 37, 및 46;
c) 각각 서열번호 30, 38, 및 47;
d) 각각 서열번호 31, 39, 및 48;
e) 각각 서열번호 32, 40, 및 49;
f) 각각 서열번호 33, 41, 및 50;
g) 각각 서열번호 34, 42, 및 51;
h) 각각 서열번호 34, 43, 및 51;
i) 각각 서열번호 34, 44, 및 51; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 및 51; 또는
l) 각각 서열번호 253, 256, 및 259;
m) 각각 서열번호 254, 257, 및 260;
n) 각각 서열번호 255, 258, 및 261.
일부 구현예에서, Fab는 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 83의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 84의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 86의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 88의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
예시적인 HCDR 및 LCDR 서열은 표 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 및 4f에 기재되어 있다.
특정 구현예에서, Fab는 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fab는 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fab는 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fab는 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fab는 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fab는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fab는 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80;
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80;
k) 각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269;
l) 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76; 또는
m) 각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270.
일부 구현예에서, Fab는 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
일부 구현예에서, Fab는 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fab는 각각 서열번호 89, 90, 및 92의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 33, 91, 및 94의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 167, 168, 및 169의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 172, 173, 및 174의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 176, 177, 및 178의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 89, 90, 및 180의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fab는 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 105의 경쇄 가변 영역(VL)의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 106의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 107의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 185의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 188의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 192의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 196의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 200의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 202의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fab는 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199;
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104.
일부 구현예에서, Fab는 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH 및 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, Fab는 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL; 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL; 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL; 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL; 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL; 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL; 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL; 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, 본원에서 식별된 VH 및 VL 도메인은 F(ab')2로 조작된다.
일부 구현예에서, F(ab')2는 서열번호 18의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 19의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 20의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 21의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 22의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 23의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 24의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 25의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 26의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 서열번호 27의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함한다.
일부 구현예에서, F(ab')2는 각각 서열번호 1, 6, 및 12; 각각 서열번호 2, 7, 및 13; 각각 서열번호 1, 8, 및 14; 각각 서열번호 3, 9, 및 13; 각각 서열번호 4, 10, 및 15; 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는 각각 서열번호 5, 11, 및 17의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, F(ab')2는 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
k) 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
l) 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
m) 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3.
일부 구현예에서, F(ab')2는 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, F(ab')2는 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, F(ab')2는 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, F(ab')2는 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 및 45;
b) 각각 서열번호 29, 37, 및 46;
c) 각각 서열번호 30, 38, 및 47;
d) 각각 서열번호 31, 39, 및 48;
e) 각각 서열번호 32, 40, 및 49;
f) 각각 서열번호 33, 41, 및 50;
g) 각각 서열번호 34, 42, 및 51;
h) 각각 서열번호 34, 43, 및 51;
i) 각각 서열번호 34, 44, 및 51;
j) 각각 서열번호 35, 42, 및 51;
k) 각각 서열번호 253, 256, 및 259;
l) 각각 서열번호 254, 257, 및 260;
m) 각각 서열번호 255, 258, 및 261.
일부 구현예에서, F(ab')2는 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 83의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 84의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 86의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 88의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, F(ab')2는 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80;
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80;
k) 각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269;
l) 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76; 또는
m) 각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270.
일부 구현예에서, F(ab')2는 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
일부 구현예에서, F(ab')2는 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, F(ab')2는 각각 서열번호 89, 90, 및 92의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 33, 91, 및 94의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 167, 168, 및 169의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 172, 173, 및 174의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 176, 177, 및 178의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 89, 90, 및 180의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, F(ab')2는 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 105의 경쇄 가변 영역(VL)의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 106의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 107의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 185의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 188의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 192의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 196의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 200의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 202의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, F(ab')2는 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199;
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104.
일부 구현예에서, F(ab')2는 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 196의 VH 및 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, F(ab')2는 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL; 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL; 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL; 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL; 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL; 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL; 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL; 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에서 식별된 VH 및 VL 도메인은 Fv로 조작된다.
일부 구현예에서, Fv는 서열번호 18의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR)1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 19의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 20의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 21의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 22의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 23의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 24의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 25의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 26의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 서열번호 27의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함한다.
일부 구현예에서, Fv는 각각 서열번호 1, 6, 및 12; 각각 서열번호 2, 7, 및 13; 각각 서열번호 1, 8, 및 14; 각각 서열번호 3, 9, 및 13; 각각 서열번호 4, 10, 및 15; 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는 각각 서열번호 5, 11, 및 17의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fv는 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
k) 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
l) 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
m) 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3.
특정 구현예에서, Fv는 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fv는 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fv는 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fv는 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fv는 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fv는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fv는 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, Fv는 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, Fv는 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 273의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, Fv는 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 및 45;
b) 각각 서열번호 29, 37, 및 46;
c) 각각 서열번호 30, 38, 및 47;
d) 각각 서열번호 31, 39, 및 48;
e) 각각 서열번호 32, 40, 및 49;
f) 각각 서열번호 33, 41, 및 50;
g) 각각 서열번호 34, 42, 및 51;
h) 각각 서열번호 34, 43, 및 51;
i) 각각 서열번호 34, 44, 및 51;
j) 각각 서열번호 35, 42, 및 51;
k) 각각 서열번호 253, 256, 및 259;
l) 각각 서열번호 254, 257, 및 260;
m) 각각 서열번호 255, 258, 및 261.
일부 구현예에서, Fv는 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 83의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 84의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 86의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 88의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, Fv는 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fv는 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fv는 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fv는 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fv는 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fv는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fv는 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80.
일부 구현예에서, Fv는 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
일부 구현예에서, Fv는 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fv는 각각 서열번호 89, 90, 및 92의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 33, 91, 및 94의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 167, 168, 및 169의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 172, 173, 및 174의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 176, 177, 및 178의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 89, 90, 및 180의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fv는 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 105의 경쇄 가변 영역(VL)의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 106의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 107의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 185의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 188의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 192의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 196의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 200의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 202의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에서 식별된 VH 및 VL 도메인은 Fd로 조작된다.
일부 구현예에서, Fd는 서열번호 18의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 19의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 20의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 21의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 22의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 23의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 24의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 25의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 26의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 서열번호 27의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함한다.
일부 구현예에서, Fd는 각각 서열번호 1, 6, 및 12; 각각 서열번호 2, 7, 및 13; 각각 서열번호 1, 8, 및 14; 각각 서열번호 3, 9, 및 13; 각각 서열번호 4, 10, 및 15; 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는 각각 서열번호 5, 11, 및 17의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fd는 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
k) 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
l) 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
m) 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3.
특정 구현예에서, Fd는 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fd는 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fd는 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fd는 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fd는 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fd는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fd는 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH를 포함한다.
일부 구현예에서, Fd는 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호 28, 36, 및 45;
b) 각각 서열번호 29, 37, 및 46;
c) 각각 서열번호 30, 38, 및 47;
d) 각각 서열번호 31, 39, 및 48;
e) 각각 서열번호 32, 40, 및 49;
f) 각각 서열번호 33, 41, 및 50;
g) 각각 서열번호 34, 42, 및 51;
h) 각각 서열번호 34, 43, 및 51;
i) 각각 서열번호 34, 44, 및 51;
j) 각각 서열번호 35, 42, 및 51;
k) 각각 서열번호 253, 256, 및 259;
l) 각각 서열번호 254, 257, 및 260;
m) 각각 서열번호 255, 258, 및 261.
일부 구현예에서, Fd는 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, Fd는 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fd는 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fd는 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fd는 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fd는 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
다른 구현예에서, Fd는 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fd는 다음을 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH;
b) 서열번호 53의 VH;
c) 서열번호 54의 VH;
d) 서열번호 55의 VH;
e) 서열번호 56의 VH;
f) 서열번호 57의 VH;
g) 서열번호 58의 VH;
h) 서열번호 59의 VH;
i) 서열번호 60의 VH;
j) 서열번호 61의 VH;
k) 서열번호 262의 VH;
l) 서열번호 263의 VH; 또는
m) 서열번호 264의 VH.
일부 구현예에서, Fd는 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, Fd는 각각 서열번호 89, 90, 및 92의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 33, 91, 및 94의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 167, 168, 및 169의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 172, 173, 및 174의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 176, 177, 및 178의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 각각 서열번호 89, 90, 및 180의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
보존적 치환을 갖는 상동 항원 결합 도메인 및 항원 결합 도메인
CD33에 결합하는 항원 결합 도메인의 변이체는 본 개시의 범위 내에 있다. 예를 들어, 변이체는 모 항원 결합 도메인과 비교할 때 개선된 기능적 특성을 유지하거나 보유하는 한 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29개의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 변이체 항원 결합 도메인은 동일한 검정에서 모 항원 결합 도메인과 비교할 때 개선된 열안정성을 갖는다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 변이체 항원 결합 도메인은 모 결합 도메인과 비교할 때 번역 후 변형의 가능성이 감소된다. NG, DG, 또는 DP와 같은 모티브의 치환으로 인해 번역 후 변형의 가능성이 감소할 수 있다. 일부 구현예에서, 서열 동일성은 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 대해 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%일 수 있다. 일부 구현예에서, 프레임워크 영역에 변이가 발생한다. 일부 구현예에서, 변이체는 보존적 치환에 의해 생성된다.
예를 들어, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 VH의 잔기 위치 P41, I49, M70, 및 A88(서열번호 5의 hu11B6_VH에 따른 잔기 넘버링) 및 VL의 S80, L82, A88, 및 Y91(서열번호 2의 hu11B6_VL에 따른 잔기 넘버링)에 치환을 포함할 수 있다. 보존적 치환은 임의의 표시된 위치에서 이루어질 수 있고 생성된 CD33에 결합하는 변이체 항원 결합 도메인은 본원에 기재된 검정에서 목적하는 특성에 대해 시험된다.
또한 다음 서열번호의 VH와 80% 이상 동일한 VH를 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인이 제공된다:
서열번호 18의 VH;
서열번호 19의 VH;
서열번호 20의 VH;
서열번호 21의 VH;
서열번호 22의 VH;
서열번호 23의 VH;
서열번호 24의 VH;
서열번호 25의 VH;
서열번호 26의 VH;
서열번호 27의 VH;
서열번호 52의 VH;
서열번호 53의 VH;
서열번호 54의 VH;
서열번호 55의 VH;
서열번호 56의 VH;
서열번호 57의 VH;
서열번호 58의 VH;
서열번호 59의 VH;
서열번호 60의 VH;
서열번호 61의 VH;
서열번호 95의 VH;
서열번호 96의 VH;
서열번호 97의 VH;
서열번호 170의 VH;
서열번호 171의 VH;
서열번호 175의 VH;
서열번호 179의 VH;
서열번호 181의 VH;
서열번호 96의 VH;
서열번호 262의 VH;
서열번호 263의 VH; 또는
서열번호 264의 VH.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH를 포함한다.
일부 구현예에서, 동일성은 85%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 90%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 91%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 91%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 92%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 93%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 94%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 94%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 95%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 96%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 97%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 98%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 99%이다.
또한 다음 서열번호의 VH 및 VL과 80% 이상 동일한 VH 및 VL을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인이 제공된다:
서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL;
서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL;
서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH 및 VL을 포함한다. 예를 들어, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH, 및 서열번호 82의 VL과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VL을 포함한다. 예를 들어, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 82의 VL, 및 서열번호 53의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH, 및 서열번호 85의 VL을 포함한다. 예를 들어, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH, 및 서열번호 85의 VL과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VL을 포함한다. 예를 들어, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 85의 VL, 및 서열번호 56의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH, 및 서열번호 87의 VL을 포함한다. 예를 들어, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH, 및 서열번호 87의 VL과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VL을 포함한다. 예를 들어, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 87의 VL, 및 서열번호 59의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH, 및 서열번호 271의 VL을 포함한다. 예를 들어, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH, 및 서열번호 271의 VL과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VL을 포함한다. 예를 들어, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 271의 VL, 및 서열번호 262의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH, 및 서열번호 272의 VL을 포함한다. 예를 들어, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH, 및 서열번호 272의 VL과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VL을 포함한다. 예를 들어, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 272의 VL, 및 서열번호 263의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH, 및 서열번호 273의 VL을 포함한다. 예를 들어, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH, 및 서열번호 273의 VL과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VL을 포함한다. 예를 들어, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 273의 VL, 및 서열번호 264의 VH와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 VH를 포함한다.
본 발명자들은 VH 및/또는 VL 도메인 내의 위치가 번역 후 변형되기 쉬운 모티프를 제거하도록 돌연변이될 수 있음을 발견하였다. 번역 후 변형은 예를 들어 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인의 탈아미드화, 이성질화, 및/또는 단편화의 가능성을 증가시킬 수 있다. 이러한 돌연변이는 또한 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인의 열안정성을 향상시킬 수 있다.
번역 후 변형이 일어나기 쉬운 서열 모티프의 예(예를 들어, NG, DG, 및 DP).
따라서, 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 하나 이상의 NG 모티프에서 하나 또는 두 개의 아미노산 치환을 포함하는 VH 및/또는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, NG 모티프의 N 잔기는 치환된다. 다른 구현예에서, NG 모티프의 G 잔기는 치환된다. 일부 구현예에서 NG 모티프의 N 및 G 잔기는 치환된다. 이러한 특정 구현예에서, 하나 이상의 NG 모티프에서 하나 또는 두 개의 아미노산 치환은 VH 및/또는 VL 도메인 내의 유일한 치환이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 1개 이상의 DG 모티프에서 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 포함하는 VH 및/또는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, DG 모티프의 D 잔기는 치환된다. 다른 구현예에서, DG 모티프의 G 잔기는 치환된다. 일부 구현예에서 DG 모티프의 D 및 G 잔기는 치환된다. 이러한 특정 구현예에서, 하나 이상의 DG 모티프에서 하나 또는 두 개의 아미노산 치환은 VH 및/또는 VL 도메인 내의 유일한 치환이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 하나 이상의 DP 모티프에서 하나 또는 두 개의 아미노산 치환을 포함하는 VH 및/또는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, DP 모티프의 D 잔기는 치환된다. 다른 구현예에서, DP 모티프의 P 잔기는 치환된다. 일부 구현예에서 DP 모티프의 D 및 P 잔기는 치환된다. 이러한 특정 구현예에서, 하나 이상의 DP 모티프에서 하나 또는 두 개의 아미노산 치환은 VH 및/또는 VL 도메인 내의 유일한 치환이다.
본 발명의 CD33에 결합하는 예시적인 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 포함하는 단백질(예를 들어, scFv)이다. 본 발명자들은 서열번호 262의 VH 내의 DG 모티프를 돌연변이시키면 CD33 결합 특성을 유지하면서 번역 후 변형 가능성을 감소시킬 수 있음을 발견하였다. 이러한 돌연변이는 또한 열안정성을 향상시킬 수 있다.
서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 갖는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 DG 모티프를 제거하기 위해 돌연변이될 수 있다. 서열번호 262의 VH는 위치 54~55의 DG 모티프를 갖는다(EU 인덱스에 따른 잔기 넘버링 사용).
따라서, 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 54의 D 잔기가 치환된(예를 들어, D54G, D54A, D54Y, D54P, D54N, D54S, D54R, D54L, D54V, D54T, D54F, 또는 D54W) 서열번호 262의 VH를 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 55의 G 잔기가 치환된(예를 들어, G55V, G55P, G55R, G55A, G55L, G55Q, G55T, 또는 G55H) 서열번호 262의 VH를 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 54의 D 잔기가 치환되고(예를 들어, D54G, D54A, D54Y, D54P, D54N, D54S, D54R, D54L, D54V, D54T, D54F, 또는 D54W) 위치 55의 G 잔기가 치환된(예를 들어, G55V, G55P, G55R, G55A, G55L, G55Q, G55T, 또는 G55H) 서열번호 262의 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 또는 310의 VH를 포함한다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 다음을 포함한다:서열번호 291의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 292의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 293의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 294의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 295의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 296의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 297의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 298의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 299의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 300의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 301의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 302의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 303의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 304의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 305의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 306의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 307의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 308의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 309의 VH 및 서열번호 271의 VL; 또는
서열번호 310의 VH 및 서열번호 271의 VL.
본 발명의 CD33에 결합하는 다른 예시적인 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함하는 단백질(예를 들어, scFv)이다. 본 발명자들은 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL 내의 하나 이상의 NG 모티프를 돌연변이시키면 CD33 결합 특성을 유지하면서 번역 후 변형 가능성을 감소시킬 수 있음을 발견하였다. 이러한 돌연변이는 또한 열안정성을 향상시킬 수 있다.
서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 갖는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 NG 모티프를 제거하기 위해 돌연변이될 수 있다. 서열번호 263의 VH는 위치 99~100(EU 인덱스에 따른 잔기 넘버링 사용)의 NG 모티프를 갖고, 서열번호 272의 VL은 위치 97~98(EU 인덱스에 따른 잔기 넘버링 사용)의 NG 모티프를 갖는다.
따라서, 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 99의 N 잔기가 치환된(예를 들어, N99V, N99S, N99E, N99H, N99A, N99G, N99K, N99T, N99F, N99V, N99R, N99L, N99H, 또는 N99I) 서열번호 263의 VH를 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 100의 G 잔기가 치환된(예를 들어, G100S, G100A) 서열번호 263의 VH를 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 99의 N 잔기가 치환되고(예를 들어, N99V, N99S, N99E, N99H, N99A, N99G, N99K, N99T, N99F, N99V, N99R, N99L, N99H, 또는 N99I) 위치 100의 G 잔기가 치환된(예를 들어, G100S, G100A) 서열번호 263의 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 또는 352의 VH를 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 97의 N 잔기가 치환된(예를 들어, N97V, N97R, N97P, N97T, N97G, N97Q, N97S, N97A, N97L, N97Y, N97E, N97F, N97D, N97I, 또는 N97H) 서열번호 272의 VL을 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 98의 G 잔기가 치환된(예를 들어, G98V, G98P, G98R, G98D, G98E, G98W, G98Y, G98A, G98N, G98K, G98L) 서열번호 272의 VL을 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 97의 N 잔기가 치환되고 위치 98의 G 잔기가 치환된 서열번호 272의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 311, 312 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 또는 336의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 다음을 포함한다:
서열번호 263의 VH 및 서열번호 311의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 312의 VL.
서열번호 263의 VH 및 서열번호 313의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 314의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 315의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 316의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 317의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 318의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 319의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 320의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 321의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 322의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 323의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 324의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 325의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 326의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 327의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 328의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 329의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 330의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 331의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 332의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 333의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 334의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 335의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 336의 VL;
서열번호 337의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 338의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 339의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 340의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 341의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 342의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 343의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 344의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 345의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 346의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 347의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 348의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 349의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 350의 VH 및 서열번호 272의 VL;
서열번호 351의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
서열번호 352의 VH 및 서열번호 272의 VL.
본 발명의 CD33에 결합하는 다른 예시적인 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 포함하는 단백질(예를 들어, scFv)이다. 본 발명자들은 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL 내의 하나 이상의 NG 모티프를 돌연변이시키면 CD33 결합 특성을 유지하면서 번역 후 변형 가능성을 감소시킬 수 있음을 발견하였다. 이러한 돌연변이는 또한 열안정성을 향상시킬 수 있다.
서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 갖는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 NG 모티프를 제거하기 위해 돌연변이될 수 있다. 서열번호 56의 VH는 위치 99~100(EU 인덱스에 따른 잔기 넘버링 사용)의 NG 모티프를 갖고, 서열번호 85의 VL은 위치 97~98(EU 인덱스에 따른 잔기 넘버링 사용)의 NG 모티프를 갖는다.
따라서, 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 99의 N 잔기가 치환된(예를 들어, N99R, N99P, N99G, N99V, N99L, N99D, N99E, N99A, N99Q, 또는 N99T) 서열번호 56의 VH를 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 100의 G 잔기가 치환된(예를 들어, G100S, G100A, G100L, G100P, G100T, 또는 G100Q) 서열번호 56의 VH를 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 99의 N 잔기가 치환되고(예를 들어, N99R, N99P, N99G, N99V, N99L, N99D, N99E, N99A, N99Q, 또는 N99T) 위치 100의 G 잔기가 치환된(예를 들어, G100S, G100A, G100L, G100P, G100T, 또는 G100Q) 서열번호 56의 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 또는 382의 VH를 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 97의 N 잔기가 치환된(예를 들어, N97G, N97D, N97P, N97K, N97E, N97A, N97R, N97Q, N97I, N97V, N97H, N97K, N97W, 또는 N97S) 서열번호 85의 VL을 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 98의 G 잔기가 치환된 서열번호 85의 VL을 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 97의 N 잔기가 치환되고(예를 들어, N97G, N97D, N97P, N97K, N97E, N97A, N97R, N97Q, N97I, N97V, N97H, N97K, N97W, 또는 N97S) 위치 98의 G 잔기가 치환된 서열번호 85의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 또는 366의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 다음을 포함한다:
서열번호 56의 VH 및 서열번호 353의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 354의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 355의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 356의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 357의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 358의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 359의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 360의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 361의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 362의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 363의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 364의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 365의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 366의 VL;
서열번호 367의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 368의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 369의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 370의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 371의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 372의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 373의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 374의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 375의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 376의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 377의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 378의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 379의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 380의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 381의 VH 및 서열번호 85의 VL; 또는
서열번호 382의 VH 및 서열번호 85의 VL.
본 발명의 CD33에 결합하는 다른 예시적인 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 포함하는 단백질(예를 들어, scFv)이다. 본 발명자들은 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL 내의 NG 모티프를 돌연변이시키면 CD33 결합 특성을 유지하면서 번역 후 변형 가능성을 감소시킬 수 있음을 발견하였다. 이러한 돌연변이는 또한 열안정성을 향상시킬 수 있다.
서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 갖는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 NG 모티프로 돌연변이될 수 있다. 서열번호 82의 VL은 위치 97~98의 NG 모티프를 갖는다(EU 인덱스에 따른 잔기 넘버링 사용).
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 97의 N 잔기가 치환된(예를 들어, N97S, N97Q, N97V, N97G, N97W, N97T, N97I, N97E, N97A, N97R, 또는 N97L) 서열번호 82의 VL을 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 98의 G 잔기가 치환된(예를 들어, G98V, G98A, G98P, G98L, 또는 G98T) 서열번호 272의 VL을 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 위치 97의 N 잔기가 치환되고(예를 들어, N97S, N97Q, N97V, N97G, N97W, N97T, N97I, N97E, N97A, N97R, 또는 N97L) 위치 98의 G 잔기가 치환된(예를 들어, G98V, G98A, G98P, G98L, 또는 G98T) 서열번호 82의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 또는 398의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 다음을 포함한다:
서열번호 53의 VH 및 서열번호 383의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 384의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 385의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 386의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 387의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 388의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 389의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 390의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 391의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 392의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 393의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 394의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 395의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 396의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 397의 VL; 또는
서열번호 53의 VH 및 서열번호 398의 VL.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 또는 382의 VH 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 또는 398의 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 또는 382의 VH 도메인 및 서열번호 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 또는 398의 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 동일성은 85%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 90%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 91%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 91%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 92%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 93%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 94%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 94%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 95%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 96%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 97%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 98%이다. 일부 구현예에서, 동일성은 99%이다.
두 서열 간의 동일성 백분율은 서열들에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수(즉, 동일성 % = 동일한 위치의 수/위치의 총수 × 100)이며, 이때 두 서열의 최적의 정렬을 위해 도입되어야 할 필요가 있는 갭(gap)의 수, 및 각각의 갭의 길이를 고려한다.
두 아미노산 서열 사이의 동일성 백분율은 PAM120 가중치 잔기 표, 갭 길이 페널티 12, 및 갭 페널티 4를 사용하는, ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합된 E. Meyers 및 W. Miller의 알고리즘(문헌[(Comput. Appl. Biosci. 4:11-17 (1988)])을 사용하여 측정될 수 있다. 또한, 두 아미노산 또는 핵산 서열 사이의 동일성 백분율은, 블로섬(Blossum) 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6, 또는 4의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 길이 가중치를 사용하여, (www_gcg_com에서 입수가능한) GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램에 통합된 Needleman 및 Wunsch의 알고리즘(문헌[J. Mol. Biol. 48:444-453 (1970))을 사용하여 측정될 수 있다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 변이체 항원 결합 도메인은 CD33에 결합하는 모 항원 결합 단편의 목적하는 기능적 특성을 유지하면서 임의의 CDR 영역에 1개 또는 2개의 보존적 치환을 포함한다.
"보존적 변형"은 아미노산 변형을 함유하는 항체의 결합 특징에 대한 영향이나 변경이 크지 않은 아미노산 변형을 지칭한다. 보존적 변형은 아미노산 치환, 부가, 및 결실을 포함한다 보존적 아미노산 치환은 아미노산이 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것들이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기들의 패밀리는 잘 정의되어 있고, 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 비하전된 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌, 티로신, 트립토판), 방향족 측쇄(예를 들어, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘, 티로신), 지방족 측쇄(예를 들어, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 세린, 트레오닌), 아미드(예를 들어, 아스파라긴, 글루타민), 베타-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 아이소류신), 및 황-함유 측쇄(시스테인, 메티오닌)를 갖는 아미노산을 포함한다. 뿐만 아니라, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발에 대해 이전에 기재된 바와 같이, 폴리펩티드의 임의의 나이브 잔기도 알라닌으로 치환될 수 있다(문헌[MacLennan et al., (1988) Acta Physiol Scand Suppl 643:55-67; Sasaki et al., (1988) Adv Biophys 35:1-24]). 본 발명의 항체에 대한 아미노산 치환은 알려진 방법, 예를 들어 PCR 돌연변이생성(미국 특허 4,683,195호)에 의해 수행될 수 있다. 대안적으로, 변이체의 라이브러리를 생성할 수 있는데, 예를 들어 무작위(NNK) 또는 비무작위 코돈, 예를 들어 DVK 코돈(이는 11개의 아미노산(Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Asn, Arg, Ser, Tyr, Trp)을 암호화함)을 사용하여 생성할 수 있다. 생성된 변이체는 본원에 기재된 검정을 사용하여 그 특성에 대해 시험될 수 있다.
CD33에 결합하는 항원 결합 단편을 생성하는 방법
본 개시에서 제공된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다양한 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, Kohler 및 Milstein의 하이브리도마 방법을 사용하여 CD33에 결합하는 VH/VL 쌍을 식별할 수 있다. 하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 숙주 동물, 예컨대 햄스터, 래트, 또는 닭을 인간 및/또는 사이노(cyno) CD33으로 면역화한 후, 면역화된 동물로부터의 비장 세포를 표준 방법을 사용하여 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성한다. 단일의 불멸화(immortalized) 하이브리도마 세포로부터 발생되는 콜로니(colony)를 목적하는 특성, 예컨대 결합 특이성, 교차 반응성, 또는 이의 결핍, 항원에 대한 친화성, 및 임의의 목적하는 기능성을 갖는, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 함유하는 항체의 생성에 대해 스크리닝할 수 있다.
비인간 동물을 면역화함으로써 생성된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 인간화될 수 있다. 인간 수용체 프레임워크의 선택을 포함하는 예시적인 인간화 기술은 CDR 그래프팅(미국 특허 5,225,539호), SDR 그래프팅(미국 특허 6,818,749호), 재표면화(Resurfacing)(문헌[Padlan, (1991) Mol Immunol 28:489-499]), 특이성 결정 잔기 재표면화(미국 특허 출원 공개 2010/0261620호), 인간 프레임워크 적응화(미국 특허 8,748,356호), 또는 초인간화(superhumanization)(미국 특허 7,709,226호)를 포함한다. 이러한 방법에서는, 모 항체의 CDR 또는 CDR 잔기의 서브세트를 인간 프레임워크에 전달하며, 이는 모 프레임워크에 대한 이들의 전체 상동성에 기반하여, CDR 길이의 유사성, 정준 구조 동일성, 또는 이들의 조합에 기반하여 선택될 수 있다.
인간화 항원 결합 도메인은, 국제 특허 출원 공개 WO1090/007861호 및 WO1992/22653호에 기재된 것들과 같은 기술로 결합 친화성을 보존하기 위해 변형된 프레임워크 지지 잔기를 혼입시키거나(복귀 돌연변이), 예를 들어 항원 결합 도메인의 친화성을 개선하기 위해 변이를 임의의 CDR에 도입시켜 목적하는 항원에 대한 이들의 선택성 또는 친화성을 개선하도록 추가로 최적화될 수 있다.
인간 면역글로불린(Ig) 유전자좌를 이의 게놈 내에 담지하는 마우스, 래트, 또는 닭과 같은 형질전환 동물을 사용하여 CD33에 결합하는 항원 결합 단편을 생성할 수 있으며, 이는 예를 들어 미국 특허 6,150,584호, 국제 특허 출원 공개 WO1999/45962호, 국제 특허 출원 공개 WO2002/066630호, WO2002/43478호, WO2002/043478호, 및 WO1990/04036호에 기재되어 있다. 이러한 동물의 내인성 면역글로불린 유전자좌는 파괴되거나 결실될 수 있고, 상동적 또는 비상동적 재조합을 사용하거나, 도입염색체(transchromosome)를 사용하거나, 미니유전자(minigene)를 사용하여, 하나 이상의 완전하거나 부분적인 인간 면역글로불린 유전자좌를 동물의 게놈으로 삽입할 수 있다. 레제네론(Regeneron)(www_regeneron_com), 하버 안티바디스(Harbour Antibodies)(www_harbourantibodies_com), 오픈 모노클로날 테크놀로지, 인코포레이티드(Open Monoclonal Technology, Inc.)(OMT)(www_omtinc_net), 키맙(KyMab)(www_kymab_com), 트리아니(Trianni)(www.trianni_com), 및 아블렉시스(Ablexis)(www_ablexis_com)와 같은 회사들이 상기 기재된 바와 같은 기술을 사용하여 선택된 항원에 대해 지향된 인간 항체를 제공하는 데에 관여할 수 있다.
CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택될 수 있으며, 여기서 파지는 인간 면역글로불린 또는 이의 일부, 예컨대 Fab, 단일쇄 항체(scFv), 또는 쌍을 이루지 않거나 쌍을 이루는 항체 가변 영역을 발현하도록 조작된다. CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은, 문헌[Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96] 및 국제 특허 출원 공개 WO09/085462호에 기재된 바와 같이, 예를 들어 박테리오파지 pIX 외피 단백질과의 융합 단백질로서 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 발현시키는 파지 디스플레이 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 이러한 라이브러리는 인간 및/또는 사이노 CD33에 결합하는 파지에 대해 스크리닝될 수 있고, 획득된 양성 클론은 추가로 특성화될 수 있으며, Fab는 클론 용해물로부터 단리되어 scFv 또는 다른 구성의 항원 결합 단편으로 전환될 수 있다.
면역원성 항원의 제조, 및 본 개시의 항원 결합 도메인의 발현 및 생성은 임의의 적절한 기법, 예컨대 재조합 단백질 생성을 사용하여 수행될 수 있다. 면역원성 항원을 정제된 단백질, 또는 전세포, 세포 또는 조직 추출물을 포함하는 단백질 혼합물의 형태로 동물에게 투여할 수 있거나, 항원은 상기 항원 또는 이의 부분을 암호화하는 핵산으로부터 동물의 체내에서 드 노보(de novo)로 형성될 수 있다.
반감기 연장 모이어티에 대한 접합
본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 반감기 연장 모이어티에 접합될 수 있다. 예시적인 반감기 연장 모이어티는 알부민, 알부민 변이체, 알부민-결합 단백질 및/또는 도메인, 트랜스페린 및 이의 단편 및 유사체, 면역글로불린(Ig) 또는 이의 단편, 예컨대 Fc 영역이다. 전술한 반감기 연장 모이어티의 아미노산 서열은 알려져 있다. Ig 또는 이의 단편은 모든 이소형, 즉, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA, 및 IgE를 포함한다.
목적하는 특성을 위해 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 접합될 수 있는 추가의 반감기 연장 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 분자, 예컨대 PEG5000 또는 PEG20,000, 상이한 사슬 길이의 지방산 및 지방산 에스테르, 예를 들어 라우레이트, 미리스테이트, 스테아레이트, 아라키데이트, 베헤네이트, 올레에이트, 아라키도네이트, 옥탄디오산, 테트라데칸디오산, 옥타데칸디오산, 도코산디오산 등, 폴리라이신, 옥탄, 탄수화물(덱스트란, 셀룰로스, 올리고당, 또는 다당류)을 포함한다. 이들 모이어티는 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인과의 직접적인 융합일 수 있고 표준 클로닝 및 발현 기법에 의해 생성될 수 있다. 대안적으로, 잘 알려진 화학적 커플링 방법을 사용하여 모이어티를 본 개시의 CD33에 결합하는 재조합적으로 생성된 항원 결합 도메인에 부착할 수 있다.
페길 모이어티는 예를 들어 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인의 C-말단에 시스테인 잔기를 혼입함으로써 또는 시스테인을 CD33 결합 부위에서 멀어지는 잔기 위치로 조작하고 잘 알려진 방법을 사용하여 페길기를 시스테인에 부착함으로써 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 접합될 수 있다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 단편은 반감기 연장 모이어티에 접합된다.
일부 구현예에서, 반감기 연장 모이어티는 면역글로불린(Ig), Ig의 단편, Ig 불변 영역, Ig 불변 영역의 단편, Fc 영역, 트랜스페린, 알부민, 알부민 결합 도메인, 또는 폴리에틸렌 글리콜이다. 일부 구현예에서, 반감기 연장 모이어티는 Ig 불변 영역이다.
일부 구현예에서, 반감기 연장 모이어티는 Ig이다.
일부 구현예에서, 반감기 연장 모이어티는 Ig의 단편이다.
일부 구현예에서, 반감기 연장 모이어티는 Ig 불변 영역이다.
일부 구현예에서, 반감기 연장 모이어티는 Ig 불변 영역의 단편이다.
일부 구현예에서, 반감기 연장 모이어티는 Fc 영역이다.
일부 구현예에서, 반감기 연장 모이어티는 알부민이다.
일부 구현예에서, 반감기 연장 모이어티는 알부민 결합 도메인이다.
일부 구현예에서, 반감기 연장 모이어티는 트랜스페린이다.
일부 구현예에서, 반감기 연장 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜이다.
반감기 연장 모이어티에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 알려진 생체내 모델을 사용하여 이의 약동학적 특성에 대해 평가할 수 있다.
면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 대한 접합
본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fc 이펙터 기능 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), Fc 수용체 결합, 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC), 식세포작용, 또는 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절을 포함하는 항체-유사 특성을 부여하기 위해 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합될 수 있다. Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 또한 본원에서 논의된 바와 같이 반감기 연장 모이어티로서 기능한다. 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 표준 방법을 사용하여 통상적인 전장항체로 조작될 수 있다. CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 전장 항체는 본원에 기재된 바와 같이 추가로 조작될 수 있다.
면역글로불린 중쇄 불변 영역은 서브도메인 CH1, 힌지, CH2, 및 CH3으로 구성된다. CH1 도메인은 EU 인덱스에 따라 잔기 넘버링된 중쇄 상의 잔기 A118-V215, CH2 도메인 잔기 A231-K340, 및 CH3 도메인 잔기 G341-K447에 걸쳐 있다. 일부 경우에, G341은 CH2 도메인 잔기로 지칭된다. "힌지"는 일반적으로 E216을 포함하고 인간 IgG1의 P230에서 끝나는 것으로 정의된다. Ig Fc 영역은 Ig 불변 영역의 적어도 CH2 및 CH3 도메인을 포함하고, 따라서 Ig 중쇄 불변 영역의 약 A231 내지 K447 영역을 적어도 포함한다.
본 발명은 또한 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 제공한다. 이러한 특정 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1로부터 유래된다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역은 중쇄 불변 영역이다. 이러한 특정 구현예에서, Ig 불변 영역은 IgG1 중쇄 불변 영역이다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역은 경쇄 불변 영역이다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 Fc 영역을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, Ig 불변 영역은 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, Ig 불변 영역은 IgG1 CH2 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 CH3 도메인을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, Ig 불변 영역은 IgG1 CH3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, Ig 불변 영역은 IgG1 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지의 적어도 일부, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, IgG1로부터 힌지의 적어도 일부, CH2 도메인, 및 CH3 도메인. 힌지의 일부는 Ig 힌지의 하나 이상의 아미노산 잔기를 지칭한다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, IgG1로부터 힌지, CH2 도메인, 및 CH3 도메인.
특정 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 서열번호 278의 아미노산 서열을 포함한다.
중쇄의 위치 220의 시스테인 잔기는 불변 영역과 경쇄 사이의 시스테인 브릿지의 형성을 방지하기 위해 돌연변이될 수 있다. 따라서, 특정 구현예에서, Ig 불변 영역은 위치 220의 시스테인이 아닌 잔기를 포함한다. 일 구현예에서, Ig 불변 영역은 위치 220의 세린을 포함한다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 서열번호 279의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 N-말단에 접합된다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 C-말단에 접합된다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 제2 링커(L2)를 통해 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된다.
일부 구현예에서, L2는 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140의 아미노산 서열을 포함한다.
Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 몇몇 알려진 검정을 사용하여 이들의 기능에 대해 평가될 수 있다. CD33에 대한 결합은 본원에 기재된 방법을 사용하여 평가될 수 있다. Ig 불변 도메인 또는 Ig 불변 영역의 단편, 예컨대 Fc 영역에 의해 부여된 변경된 특성은 예를 들어 ADCC, CDC, 또는 ADCP를 측정하는 세포 기반 검정을 사용하여 또는 FcγRI, FcγRII, FcγRIII, 또는 FcRn 수용체와 같은 수용체의 가용성 형태를 사용하여 Fc 수용체 결합 검정에서 분석될 수 있다.
ADCC는 표적 세포로서 CD33 발현 세포 및 이펙터 세포로서 NK 세포를 사용하는 시험관내 검정을 사용하여 평가될 수 있다. 세포용해는 용해된 세포로부터 표지(예를 들어, 방사성 기질, 형광 염료, 또는 자연 세포내 단백질)의 방출에 의해 검출될 수 있다. 예시적인 검정에서, 표적 세포는 1개의 표적 세포 대 4개의 이펙터 세포의 비로 사용된다. 표적 세포는 BATDA로 미리 표지되고, 이펙터 세포 및 시험 항체와 조합된다. 샘플을 2시간 동안 인큐베이션하고, 상청액 내로 방출된 BATDA를 측정함으로써 세포 용해를 측정한다. 0.67% Triton X-100(Sigma Aldrich)에 의한 최대 세포독성, 및 임의의 항체의 부재 하에서의 표적 세포로부터의 BATDA의 자발적인 방출에 의해 결정된 최소 대조군에 대해 데이터를 정규화한다.
ADCP는 이펙터 세포로서 단핵구 유래 대식세포를 사용하고 GFP 또는 다른 표지된 분자를 발현하도록 조작된 표적 세포로서 임의의 CD33 발현 세포를 사용하여 평가될 수 있다. 예시적인 검정에서, 이펙터:표적 세포 비는 예를 들어 4:1일 수 있다. 이펙터 세포는 본 발명의 항체와 함께 또는 항체 없이 4시간 동안 표적 세포와 인큐베이션될 수 있다. 배양 후, 세포는 아큐타제를 사용하여 탈착될 수 있다. 대식세포는 형광 표지에 커플링된 항-CD11b 및 항-CD14 항체로 식별될 수 있으며, 식세포작용 백분율은 표준 방법을 사용하여 CD11+CD14+ 대식세포에서 GFP 형광 %를 기반으로 결정될 수 있다.
세포의 CDC는 예를 들어 RPMI-B(1% BSA가 보충된 RPMI) 중에서 1×105개 세포/웰(50 μL/웰)로 다우디(Daudi) 세포를 플레이팅하고, 0 내지 100 μg/mL의 최종 농도로 웰에 50 μL의 시험 단백질을 첨가하고, 실온에서 15분 동안 반응물을 인큐베이션하고, 11 μL의 풀링된(pooled) 인간 혈청을 웰에 첨가하고, 37℃에서 45분 동안 반응물을 인큐베이션함으로써 측정될 수 있다. 용해된 세포의 백분율(%)은 표준 방법을 사용하여 FACS 검정에서 % 프로피듐 아이오다이드 염색된 세포로서 검출될 수 있다.
본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질
본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 표준 방법을 사용하여 다양한 설계의 단일특이적 또는 다중특이적 단백질로 조작될 수 있다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단일특이적 단백질을 제공한다.
일부 구현예에서, 단일특이적 단백질은 항체이다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질을 제공한다.
일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 이중특이적이다.
일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 삼중특이적이다.
일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 사중특이적이다.
일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 CD33에 대한 결합에 대해 1가이다.
일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 CD33에 대한 결합에 대해 2가이다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공한다.
일부 구현예에서, 림프구 항원은 T 세포 항원이다.
일부 구현예에서, T 세포 항원은 CD8+ T 세포 항원이다.
일부 구현예에서, 림프구 항원은 NK 세포 항원이다.
일부 구현예에서, 림프구 항원은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, TRGV9, 또는 NKG2C이다.
특정 구현예에서, 다중특이적 단백질은 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 TRGV9에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 이중특이적 단백질이다. TRGV9는 또한 Vγ9로도 알려져 있고, γδT 세포 상에서 발현된다. 본원에서 사용되는 용어 "TRGV9"는 γδ T 세포의 표면 상에 발현될 때 T 세포 수용체를 형성할 수 있는 폴리펩티드를 지칭한다. TRGV9-발현 γδ T 세포는 인간 태아에서 발생하는 최초의 T 세포 중 하나이며 건강한 성인 말초 혈액 세포에서 우세한 γδ T 세포 하위세트이다. 용어 "TRGV9"는 세포(T 세포 포함)에 의해 자연적으로 발현되거나 폴리펩티드를 암호화하는 유전자 또는 cDNA로 형질감염된 세포 상에서 발현될 수 있는 임의의 TRGV9 변이체, 이소형, 및 종 상동체를 포함한다. 달리 표시되지 않는 한, 바람직하게는 TRGV9는 인간 TRGV9이다. 인간 TRGV9 아미노산 서열은 GenBank 수탁번호 NG_001336.2에 의해 제공된다. 인간에서 주요 γ/δ T 세포 하위세트인 Vγ9Vδ2 T 림프구는 인산항원, 특정 종양 세포, 및 아미노비스포스포네이트로 처리된 세포를 인식할 수 있다. Vγ9Vδ2 T 림프구는 다양한 종양 세포에 대해 세포용해 활성을 나타낼 수 있다. 당업자는 γ/δ TCR이 항원 인식에 관여하는 공유 결합된 γ 및 δ 사슬 및 비공유 결합된 단일형 단백질 CD3δ, γ, ε, 및 ζ 사슬로 구성된 이종이량체 TCR 복합체임을 이해한다. Vγ9 TCR은 γ/δ T 세포의 하위세트 상에서 발현되는 TCR γ 사슬의 변이체이다.
이론에 구애됨이 없이, TRGV9 항원 및 CD33 항원 모두를 발현하는 이중특이적 항체는 CD33을 발현하는 암성 세포에 γδT 세포를 보충할 수 있다. 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체)는 이펙터 세포(예를 들어, γδ T 세포)와 표적 세포를 함께 연결하여 암 세포를 사멸시킬 수 있다. γδ T 세포는 선천성 면역을 가질 수 있다. 이론에 구애됨이 없이, γδ T 세포는 말초 CD3+ T 세포의 적은 비율(약 1%~5%)만을 나타내지만, 상피 조직에서 T 세포의 주요 하위세트(약 20%~50%)를 구성한다. 순환하는 γδ T 세포는 주로 Vγ9(TRGV9) 및 Vδ2(TRVD2) 사슬의 이종이량체를 발현하는 반면, 조직 γδ T 세포는 다른 Vγ 사슬과 관련된 Vδ1 사슬을 우선적으로 발현한다.
인간에서 γδ T 세포는 강력한 항암 기능(높은 세포독성 및 인터페론 γ 분비)을 부여받는다. 또한, γδ T 세포는 이전에는 선천성 골수 계통 세포에 독점적인 기능인 식균 작용이 가능하고, αβ T-세포에 대한 효율적인 항원 제시 세포로서 작용하여 적응 면역 반응을 유도한다. γδ T 세포는 암성 조직, 종양, 및 암성 세포에 침투할 수 있다. TRGV9 항원 및 CD33 항원 모두를 발현하는 이중특이적 항체는 유의미한 T 세포 재지시가 적거나 나타나지 않을 수 있고, T 세포의 팬 활성화가 덜할 수 있으며, γδ T 세포의 선택적 보충을 통해 강력한 암 용해 유도가 증가할 수 있다. 따라서 TRGV9 항원 및 CD33 항원 모두를 발현하는 이중특이적 항체는 사이토카인 폭풍 유도에 의해 발생할 수 있는 심각한 부작용을 일으키지 않을 수 있다.
일부 구현예에서, 림프구 항원은 CD3ε이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원(예를 들어, TRGV9)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH를 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원(예를 들어, TRGV9)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fab를 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원(예를 들어, TRGV9)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 F(ab')2를 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원(예를 들어, TRGV9)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH를 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원(예를 들어, TRGV9)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fv를 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원(예를 들어, TRGV9)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fd를 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원(예를 들어, TRGV9)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하고 림프구 항원(예를 들어, TRGV9)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH를 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 약 5~50개의 아미노산을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 약 5~40개의 아미노산을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 약 10~30개의 아미노산을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 약 10~20개의 아미노산을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 119의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 136의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 89, 167, 172, 176, 253, 254, 또는 255의 HCDR1, 서열번호 6, 7, 8, 9, 10, 11, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 90, 91, 168, 173, 177, 256, 257, 또는 258의 HCDR2, 서열번호 12, 13, 14, 15, 16, 17, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 92, 93, 94, 169, 174, 178, 180, 259, 260, 또는 261의 HCDR3, 서열번호 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 98, 99, 100, 182, 186, 189, 193, 197, 201, 265, 또는 266의 LCDR1, 서열번호 69, 70, 71, 72, 73, 74, 101, 102, 103, 183, 187, 190, 194, 198, 267, 또는 268의 LCDR2, 및 서열번호 75, 76, 77, 78, 79, 80, 104, 184, 191, 195, 199, 269, 또는 270의 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 다음 서열번호의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다:
각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80;
각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80;
각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199;
각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104;
각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269;
각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76;
각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 포함한다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다. 특정 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH 및 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 170의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 171의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 175의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 179의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 181의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 81의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 86의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 87의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 271의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 272의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 273의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 87의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 271의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 272의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 273의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인은 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 185의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 188의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 192의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 196의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 200의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 202의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220 221, 274, 275, 또는 276의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 213의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 214의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 215의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 217의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 218의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 219의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 221의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 274의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 275의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 276의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 213의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 219의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 274의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 275의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 276의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 213의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 219의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 274의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 275의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임).
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 276의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이고, 제2 항원 결합 도메인은 TRGV9에 결합한다(예를 들어, 이 경우 제2 결합 도메인은 VHH임). 일부 구현예에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
서열번호 141의 HCDR1, 서열번호 142의 HCDR2, 서열번호 143의 HCDR3, 서열번호 144의 LCDR1, 서열번호 145의 LCDR2, 및 서열번호 146의 LCDR3;
서열번호 147의 VH 및 서열번호 148의 VL;
서열번호 149의 HCDR1, 서열번호 150의 HCDR2, 서열번호 151의 HCDR3, 서열번호 152의 LCDR1, 서열번호 153의 LCDR2, 및 서열번호 154의 LCDR3; 또는
서열번호 155의 VH 및 서열번호 156의 VL.
일부 구현예에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 238의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 242의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 243의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 244의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
서열번호 245의 VH 및 서열번호 249의 VL;
서열번호 246의 VH 및 서열번호 249의 VL;
서열번호 247의 VH 및 서열번호 249의 VL; 또는
서열번호 248의 VH 및 서열번호 249의 VL.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 제1 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편에 접합되고/되거나, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 제2 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편에 접합된다.
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역의 단편 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역의 단편 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역의 단편 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 CH3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역의 단편 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역의 단편 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 힌지의 적어도 일부, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인과 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 사이, 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인과 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편 사이에 제2 링커(L2)를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, L2는 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2, 및 IgG3 또는 IgG4 이소형이다.
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1 이소형이다.
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG2 이소형이다.
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG3 이소형이다.
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG4 이소형이다.
제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 본원에 기술된 바와 같이 추가로 조작될 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1 이소형이다.
일부 구현예에서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이는 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/ L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S, 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택된다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름).
특정 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 L234A/L235A/D265S 돌연변이를 포함한다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름). 특정 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1 이소형이다. 일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, M252Y/S254T/T256E, 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택된다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름).
특정 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 M252Y/S254T/T256E 돌연변이를 포함한다(잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따름). 이러한 특정 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 L234A/L235A/D265S 및 M252Y/S254T/T256E 돌연변이를 포함한다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름). 특정 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2, 및 IgG3 또는 IgG4 이소형이다. 일부 구현예에서, FcγR은 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의의 조합이다.
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이는 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택된다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름).
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 단백질 A에 대한 결합을 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 이러한 변형은 항체 생성 중 정제 목적에 이점이 있을 수 있다.
특정 구현예에서, 단백질 A에 대한 결합을 조절하는 적어도 하나의 돌연변이는 H435/Y436F이다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름). 이러한 특정 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 L234A/L235A/D265S, M252Y/S254T/T256E, 및 H435/Y436F 돌연변이를 포함한다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름). 특정 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1 이소형이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 단백질은 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이는 T350V, L351Y, F405A, Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V, 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택된다(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름).
일부 구현예에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 다음의 돌연변이를 포함한다:
제1 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V 및 제2 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W; 또는
제1 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W 및 제2 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V.
CD33에 결합하는 항원 결합 단편을 포함하는 다중특이적 단백질의 생성
본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 단편은 또한 본 발명의 범위 내에 포함되는 다중특이적 항체로 조작될 수 있다.
CD33에 결합하는 항원 결합 단편은은 Fab 아암 교환을 사용하여 생성되는 전장 다중특이적 항체로 조작될 수 있으며, 이 경우 치환은 시험관내에서 Fab 아암 교환을 촉진하는 Ig 불변 영역 CH3 도메인 내의 2개의 단일특이적 2가 항체에 도입된다. 해당 방법에서, 2개의 단일특이적 2가 항체는 이종이량체 안정성을 촉진하는 CH3 도메인에서의 특정 치환을 갖도록 조작되며; 항체는 힌지 영역의 시스테인이 이황화 결합 이성질화를 거치기에 충분한 환원 조건 하에서 함께 인큐베이션되어; Fab 아암 교환에 의해 이중특이적 항체를 생성한다. 인큐베이션 조건은 비환원성 상태로 최적으로 회복될 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 환원제는 2-머캅토에틸아민(2-MEA), 디티오트레이톨(DTT), 디티오에리트리톨(DTE), 글루타티온, 트리스(2-카복시에틸)포스핀(TCEP), L-시스테인, 및 베타-머캅토에탄올이며, 바람직하게는 환원제는 2-머캅토에틸아민, 디티오트레이톨, 및 트리스(2-카복시에틸)포스핀으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예를 들어, pH 5 내지 8에서, 예를 들어 pH 7.0에서 또는 pH 7.4에서 적어도 25 mM 2-MEA의 존재 하에서 또는 적어도 0.5 mM 디티오트레이톨의 존재 하에서 20℃ 이상의 온도에서 90분 이상 동안의 인큐베이션이 사용될 수 있다.
사용될 수 있는 CH3 돌연변이는 노브-인-홀(Knob-in-Hole) 돌연변이(Genentech), 정전기적으로 매칭된 돌연변이(Chugai, Amgen, NovoNordisk, Oncomed), SEEDbody(Strand Exchange Engineered Domain body)(EMD Serono), Duobody® 돌연변이(Genmab), 및 다른 비대칭 돌연변이(예를 들어, Zymeworks)와 같은 기술을 포함한다.
노브-인-홀 돌연변이는 예를 들어 WO1996/027011에 개시되어 있으며, CH3 영역의 계면 상의 돌연변이를 포함하는데, 이 경우 작은 측쇄(홀)를 갖는 아미노산이 제1 CH3 영역 내로 도입되고 큰 측쇄(노브)를 갖는 아미노산이 제2 CH3 영역 내로 도입되어, 제1 CH3 영역과 제2 CH3 영역 사이의 우선적인 상호작용을 가져온다. 노브와 홀을 형성하는 예시적인 CH3 영역 돌연변이는 T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S, 및 T366W/T366S_L368A_Y407V이다.
중쇄 이종이량체 형성은 US2010/0015133, US2009/0182127, US2010/028637, 또는 US2011/0123532에 기재된 바와 같이 제1 CH3 영역 상에 양으로 하전된 잔기를 및 제2 CH3 영역 상에 음으로 하전된 잔기를 치환함으로써 정전기 상호작용을 사용하여 촉진될 수 있다.
중쇄 이종이량체화를 촉진하기 위해 사용될 수 있는 다른 비대칭 돌연변이는 US2012/0149876 또는 US2013/0195849에 기재된 바와 같은 L351Y_F405A_Y407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V_K409F, Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W(Zymeworks)이다.
SEEDbody 돌연변이는 US20070287170에 기재된 바와 같이, 선택된 IgG 잔기를 IgA 잔기로 치환하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것을 수반한다.
사용될 수 있는 다른 예시적인 돌연변이는 WO 2011/143545, WO 2013157954, WO 2013096291, 및 US2018/0118849에 기재된 바와 같은 R409D_K370E/D399K_E357K, S354C_T366W/Y349C_ T366S_L368A_Y407V, Y349C_T366W/S354C_T366S_L368A_Y407V, T366K/L351D, L351K/Y349E, L351K/Y349D, L351K/L368E, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V_K409F, K392D/D399K, K392D/ E356K, K253E_D282K_K322D/D239K_E240K_K292D, K392D_K409D/D356K_D399K이다.
Duobody® 돌연변이(Genmab)는, 예를 들어 US9150663 및 US2014/0303356에 개시되어 있으며, 돌연변이 F405L/K409R, 야생형/F405L_R409K, T350I_K370T_F405L/K409R, K370W/K409R, D399AFGHILMNRSTVWY/K409R, T366ADEFGHILMQVY/K409R, L368ADEGHNRSTVQ/K409AGRH, D399FHKRQ/K409AGRH, F405IKLSTVW/K409AGRH, 및 Y407LWQ/K409AGRH를 포함한다.
CD33에 결합하는 항원 결합 도메인이 혼입될 수 있는 추가의 이중특이적 또는 다중특이적 구조는 이중 가변 도메인 면역글로불린(DVD)(국제 특허 공개 WO2009/134776호; DVD는 VH1-링커-VH2-CH 구조를 갖는 중쇄 및 VL1-링커-VL2-CL 구조를 갖는 경쇄를 포함하는 전장 항체(링커는 임의적임)), 류신 지퍼, 또는 콜라겐 이량체화 도메인과 같은, 상이한 특이성을 갖는 2개의 항체 아암을 연결하는 다양한 이량체화 도메인을 포함하는 구조(국제 특허 공개 WO2012/022811호, 미국 특허 5,932,448호; 미국 특허 6,833,441호), 함께 접합된 2개 이상의 도메인 항체(dAb), 디아바디, 중쇄 단독 항체, 예컨대 낙타과 항체 및 조작된 낙타과 항체, 이중 표적화(DT)-Ig(GSK/Domantis), 투-인-원 항체(Two-in-one Antibody)(Genentech), 가교결합된 Mab(Karmanos Cancer Center), mAb2(F-Star) 및 CovX-body(CovX/Pfizer), IgG 유사 이중특이적(InnClone/Eli Lilly), Ts2Ab(MedImmune/AZ) 및 BsAb(Zymogenetics), HERCULES(Biogen Idec) 및 TvAb(Roche), ScFv/Fc 융합체(Academic Institution), SCORPION(Emergent BioSolutions/Trubion, Zymogenetics/BMS), 이중 친화성 재표적화 기술(Dual Affinity Retargeting Technology)(Fc-DART)(MacroGenics) 및 이중(Dual)(ScFv)2-Fab(National Research Center for Antibody Medicine--China), 이중 작용(Dual-Action) 또는 Bis-Fab(Genentech), 독-앤드-록(Dock-and-Lock)(DNL)(ImmunoMedics), 2가 이중특이적(Biotecnol) 및 Fab-Fv(UCB-Celltech)를 포함한다. ScFv-, 디아바디-기반, 및 도메인 항체는 이중특이적 T 세포 인게이저(BiTE)(Micromet), 탠덤 디아바디(Tandab)(Affimed), 이중 친화성 재표적화 기술(DART)(MacroGenics), 단일 사슬 디아바디(Academic), TCR-유사 항체(AIT, ReceptorLogics), 인간 혈청 알부민 ScFv 융합체(Merrimack) 및 COMBODY(Epigen Biotech), 이중 표적화 나노바디(Ablynx), 이중 표적화 중쇄 단독 도메인 항체를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 또한 3개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 다중특이적 단백질로 조작될 수 있다. 이러한 설계에서, 적어도 하나의 항원 결합 도메인은 scFv의 형태이다. 예시적인 설계는 다음을 포함한다(이 경우, "1"은 제1 항원 결합 도메인을 나타내고, "2"는 제2 항원 결합 도메인을 나타내고, "3"은 제3 항원 결합 도메인을 나타낸다):
설계 1: 사슬 A) scFv1-CH2-CH3; 사슬 B) VL2-CL; 사슬 C) VH2-CH1-힌지-CH2-CH3
설계 2: 사슬 A) scFv1-힌지-CH2-CH3; 사슬 B) VL2-CL; 사슬 C) VH2-CH1-힌지-CH2-CH3
설계 3: 사슬 A) scFv1-CH1-힌지-CH2-CH3; 사슬 B) VL2-CL; 사슬 C) VH2-CH1-힌지-CH2-CH3
설계 4: 사슬 A) CH2-CH3-scFv1; 사슬 B) VL2-CL; 사슬 C) VH2-CH1-힌지-CH2-CH3
CH3 조작은 설계 1~4, 예컨대 돌연변이 L351Y_F405A_Y407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V_K409F, Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W(US2012/0149876 또는 US2013/0195849에 기재되어 있는 바와 같음)(Zymeworks)에 혼입될 수 있다.
이소형, 동종이인자형, 및 Fc 조작
본 개시의 단백질에 존재하는 Fc 영역과 같은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 임의의 동종이인자형 또는 이소형일 수 있다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1 이소형이다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG2 이소형이다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG3 이소형이다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG4 이소형이다.
Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 임의의 동종이인자형일 수 있다. 동종이인자형은 결합 또는 Fc 매개 이펙터 기능과 같은 Ig 불변 영역의 특성에 영향을 미치지 않을 것으로 예상된다. Ig 불변 영역 또는 이의 단편을 포함하는 치료 단백질의 면역원성은 주입 반응의 위험성 증가 및 치료 반응의 지속 기간 감소와 관련이 있다(문헌[Baert et al., (2003) N Engl J Med 348:602-08]). Ig 불변 영역 또는 이의 단편을 포함하는 치료 단백질이 숙주에서 면역 반응을 유도하는 정도는 Ig 불변 영역의 동종이인자형에 의해 부분적으로 결정될 수 있다(문헌[Stickler et al., (2011) Genes and Immunity 12:213-21]). Ig 불변 영역 동종이인자형은 항체의 불변 영역 서열의 특정 위치에서의 아미노산 서열 변이와 관련이 있다. 표 2는 선택된 IgG1, IgG2, 및 IgG4 동종이인자형을 나타낸다.
[표 2]
Figure pat00008
C-말단 라이신(CTL)을 혈류 내의 내인성 순환 카복시펩티다제에 의해 Ig 불변 영역으로부터 제거할 수 있다(문헌[Cai et al., (2011) Biotechnol Bioeng 108:404-412]). 미국 특허 출원 공개 20140273092호에 기재된 바와 같이, 세포외 Zn2+, EDTA, 또는 EDTA-Fe3+의 농도를 제어하여 제조 시에 CTL 제거를 최대 수준 미만으로 제어할 수 있다. 단백질의 CTL 함량은 알려진 방법을 사용하여 측정할 수 있다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 단편은 C-말단 라이신 함량이 약 10% 내지 약 90%이다. 일부 구현예에서, C-말단 라이신 함량은 약 20% 내지 약 80%이다. 일부 구현예에서, C-말단 라이신 함량은 약 40% 내지 약 70%이다. 일부 구현예에서, C-말단 라이신 함량은 약 55% 내지 약 70%이다. 일부 구현예에서, C-말단 라이신 함량은 약 60%이다.
Fc 영역 돌연변이는 ADCC, ADCP, 및/또는 ADCP와 같은 이펙터 기능 및/또는 약동학적 특성을 조절하기 위해, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 대하여 이루어질 수 있다. 이는 활성화 FcγRs(FcγRI, FcγRIIa, FcγRIII), 억제성 FcγRIIb 및/또는 FcRn에 대한 돌연변이된 Fc의 결합을 조절하는 Fc에 돌연변이(들)를 도입함으로써 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 돌연변이는 Fc 영역에 있다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fc 영역에 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개의 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 FcRn에 대한 항체의 결합을 조절하는 Fc 영역에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
반감기를 조절하기 위해 돌연변이될 수 있는 Fc 위치(예를 들어, FcRn에 대한 결합)는 위치 250, 252, 253, 254, 256, 257, 307, 376, 380, 428, 434, 및 435를 포함한다. 단독으로 또는 조합하여 이루어질 수 있는 예시적인 돌연변이는 돌연변이 T250Q, M252Y, I253A, S254T, T256E, P257I, T307A, D376V, E380A, M428L, H433K, N434S, N434A, N434H, N434F, H435A, 및 H435R이다. 반감기를 증가시키기 위해 이루어질 수 있는 예시적인 단독 또는 조합 돌연변이는 돌연변이 M428L/N434S, M252Y/S254T/T256E, T250Q/M428L, N434A, 및 T307A/E380A/N434A이다. 반감기를 감소시키기 위해 이루어질 수 있는 예시적인 단독 또는 조합 돌연변이는 돌연변이 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R이다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 M252Y/S254T/T256E 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 활성화 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 단백질의 결합을 감소시키고/시키거나 Fc 이펙터 기능, 예컨대 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC), 또는 식세포작용(ADCP)을 감소시키는 Fc 영역에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
돌연변이되어 활성화 FcγR에 대한 단백질의 결합을 감소시키고 이어서 이펙터 기능을 감소시킬 수 있는 Fc 위치는 위치 214, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 265, 267, 268, 270, 295, 297, 309, 327, 328, 329, 330, 331, 및 365를 포함한다. 단독으로 또는 조합하여 이루어질 수 있는 예시적인 돌연변이는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4에서의 K214T, E233P, L234V, L234A, G236의 결실, V234A, F234A, L235A, G237A, P238A, P238S, D265A, S267E, H268A, H268Q, Q268A, N297A, A327Q, P329A, D270A, Q295A, V309L, A327S, L328F, A330S, 및 P331S 돌연변이이다. ADCC가 감소된 단백질을 생성하는 예시적인 조합 돌연변이는 IgG1 상의 L234A/L235A, IgG1 상의 L234A/L235A/D265S, IgG2 상의 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, IgG4 상의 F234A/L235A, IgG4 상의 S228P/F234A/ L235A, 모든 Ig 이소형 상의 N297A, IgG2 상의 V234A/G237A, IgG1 상의 K214T/E233P/L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, IgG2 상의 H268Q/V309L/A330S/P331S, IgG1 상의 S267E/L328F, IgG1 상의 L234F/L235E/D265A, IgG1 상의 L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, IgG4 상의 S228P/F234A/L235A/G237A/P238S, 및 IgG4 상의 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S 돌연변이이다. IgG2의 잔기 117~260 및 IgG4의 잔기 261~447을 갖는 Fc와 같은 하이브리드 IgG2/4 Fc 도메인이 또한 사용될 수 있다.
CDC가 감소된 단백질을 생성하는 예시적인 돌연변이는 K322A 돌연변이이다.
잘 알려진 S228P 돌연변이가 IgG4 안정성을 향상시키도록 IgG4에서 이루어질 수 있다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 K214T, E233P, L234V, L234A, G236의 결실, V234A, F234A, L235A, G237A, P238A, P238S, D265A, S267E, H268A, H268Q, Q268A, N297A, A327Q, P329A, D270A, Q295A, V309L, A327S, L328F, K322, A330S, 및 P331S로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 L234A/L235A/D265S 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 L234A/L235A 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 단백질의 결합을 향상시키고/시키거나 Fc 이펙터 기능, 예컨대 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC), 또는 식세포작용(ADCP)을 향상시키는 Fc 영역에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
돌연변이되어 단백질의 활성화 FcγR에 대한 결합을 향상시키고/시키거나 Fc 이펙터 기능을 향상시킬 수 있는 Fc 위치는 위치 236, 239, 243, 256,290,292, 298, 300, 305, 312, 326, 330, 332, 333, 334, 345, 360, 339, 378, 396, 또는 430(EU 인덱스에 따른 잔기 넘버링)을 포함한다. 단독으로 또는 조합하여 이루어질 수 있는 예시적인 돌연변이는 G236A, S239D, F243L, T256A, K290A, R292P, S298A, Y300L, V305L, K326A, A330K, I332E, E333A, K334A, A339T, 및 P396L이다. ADCC 또는 ADCP가 증가된 단백질을 생성하는 예시적인 조합 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, 및 G236A/S239D/I332E이다.
돌연변이되어 CDC를 향상시킬 수 있는 Fc 위치는 위치 267, 268, 324, 326, 333, 345, 및 430을 포함한다. 단독으로 또는 조합하여 이루어질 수 있는 예시적인 돌연변이는 S267E, F1268F, S324T, K326A, K326W, E333A, E345K, E345Q, E345R, E345Y, E430S, E430F, 및 E430T이다. CDC가 증가된 단백질을 생성하는 예시적인 조합 돌연변이는 K326A/E333A, K326W/E333A, H268F/S324T, S267E/H268F, S267E/S324T, 및 S267E/H268F/S324T이다.
본원에 기재된 특정 돌연변이는 각각 서열번호 130, 131, 및 132의 IgG1, IgG2, 및 IgG4 야생형 아미노산 서열과 비교할 때 돌연변이이다.
서열번호 222, 야생형 IgG1
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 223, 야생형 IgG2
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 224, 야생형 IgG4
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
FcγR 또는 FcRn에 대한 항체의 결합은 유세포 측정을 사용하여 각각의 수용체를 발현하도록 조작된 세포에서 평가될 수 있다. 예시적인 결합 검정에서, 웰당 2x105개의 세포를 96웰 플레이트에 시딩하고, BSA 염색 완충액(BD Biosciences, San Jose, USA) 중에서 4℃에서 30분 동안 차단시킨다. 세포를 시험 항체와 함께 얼음 상에서 1.5시간 동안 4℃에서 인큐베이션한다. BSA 염색 완충액으로 2회 세척한 후, 세포를 R-PE 표지된 항-인간 IgG 2차 항체(Jackson Immunoresearch Laboratories)와 함께 4℃에서 45분 동안 인큐베이션한다. 세포를 염색 완충액 중에서 2회 세척한 후, 1:200 희석된 DRAQ7 생/사(live/dead) 염색제(Cell Signaling Technology, Danvers, USA)를 함유하는 150 μL의 염색 완충액 중에 재현탁한다. 각각, B2 및 B4 채널을 사용하여 Miltenyi MACSQuant 유세포 분석기(Miltenyi Biotec, Auburn, USA)에 의해, 염색된 세포의 PE 및 DRAQ7 신호를 검출한다. 생존 세포를 DRAQ7 배제에 대해 게이팅하고, 수집된 적어도 10,000개의 생 사건(live event)에 대해 기하 평균 형광 신호를 결정한다. FlowJo 소프트웨어(Tree Star)를 분석에 사용한다. 데이터는 항체 농도 대 평균 형광 신호의 로그로서 플롯화된다. 비선형 회귀 분석을 수행한다.
글리코조작
Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인의 ADCC를 매개하는 능력은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 올리고당 성분을 조작함으로써 향상될 수 있다. 인간 IgG1 또는 IgG3 은 잘 알려진 바이안테너리(biantennary) G0, G0F, G1, G1F, G2, 또는 G2F 형태의 글리칸의 대부분에 의해 Asn297에서 N-글리코실화된다. 비조작된 CHO 세포에 의해 생성될 수 있는 단백질을 함유하는 Ig 불변 영역은 전형적으로 적어도 약 85%의 글리칸 푸코스 함량을 갖는다. Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 부착된 바이안테너리 복합형 올리고당으로부터 코어 푸코스의 제거는, 항원 결합 또는 CDC 활성을 변경시키지 않고서, 개선된 FcγRIIIa 결합을 통해 단백질의 ADCC를 향상시킨다. 이러한 단백질은 바이안테너리 복합체 유형의 Fc 올리고당을 함유하는 비교적 높은 탈푸코실화 면역글로불린의 성공적인 발현을 유도하는 것으로 보고된 상이한 방법, 예컨대 배양 삼투압 조절(문헌[Konno et al., Cytotechnology 64(:249-65, 2012]), 숙주 세포주로서의 변이체 CHO주 Lec13의 적용(문헌[Shields et al., J Biol Chem 277:26733-26740, 2002]), 숙주 세포주로서의 변이체 CHO주 EB66의 적용(문헌[Olivier et al., MAbs;2(4): 405-415, 2010; PMID:20562582), 숙주 세포주로서의 래트 하이브리도마 세포주 YB2/0의 적용(문헌[Shinkawa et al., J Biol Chem 278:3466-3473, 2003]), 1,6-푸코실트랜스퍼라제(FUT8) 유전자에 특이적으로 작은 간섭 RNA 도입(문헌[Mori et al., Biotechnol Bioeng 88:901-908, 2004]), 또는 β-1,4-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III 및 골지 α-만노시다제 II 또는 강력한 알파-만노시다제 I 억제제, 키푸넨신의 동시 발현(문헌[Ferrara et al., J Biol Chem 281:5032-5036, 2006, Ferrara et al., Biotechnol Bioeng 93:851-861, 2006; Xhou et al., Biotechnol Bioeng 99:652-65, 2008])을 사용하여 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시의 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 약 1% 내지 약 15%, 예를 들어 약 15%, 14%, 13%, 12%, 11% 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1%의 푸코스 함량을 갖는 바이안테너리 글리칸 구조를 갖는다. 일부 구현예에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 약 50%, 40%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 또는 20%의 푸코스 함량을 갖는 글리칸 구조를 갖는다.
"푸코스 함량"은 Asn297에서의 당 사슬 내의 푸코스 단당류의 양을 의미한다. 푸코스의 상대량은 모든 당구조(glycostructure)에 대한 푸코스 함유 구조의 백분율이다. 이들은 예를 들어 다음과 같은 다수의 방법에 의해 특성화 및 정량화될 수 있다: 1) 국제 공개 WO2008/077546 2호에 기재된 바와 같이 N-글리코시다제 F 처리된 샘플(예를 들어, 복합, 혼성, 및 올리고- 및 고-만노스 구조)의 MALDI-TOF를 사용하는 방법; 2) Asn297 글리칸의 효소적 방출을 행하고, 후속으로, 유도체화하고, 형광 검출을 사용하는 HPLC(UPLC) 및/또는 HPLC-MS(UPLC-MS)에 의해 검출/정량화하는 방법; 3) 엔도(Endo) S, 또는 제1 GlcNAc 단당과 제2 GlcNAc 단당 사이를 절단하여 푸코스가 제1 GlcNAc에 부착된 상태로 남겨 두는 다른 효소로 Asn297 글리칸을 처리하거나 처리하지 않고서, 천연 또는 환원된 mAb의 온전한 단백질을 분석하는 방법; 4) 효소 분해(예를 들어, 트립신 또는 엔도펩티다제 LysC)에 의해 mAb를 구성 펩티드로 분해하고, 이어서 HPLC-MS(UPLC-MS)에 의해 분리, 검출, 및 정량화하는 방법; 5) Asn297에서의 PNGase F에 의한 특이적인 효소적 탈글리코실화에 의해 mAb 단백질로부터 mAb 올리고당을 분리하는 방법. 방출된 올리고당은 형광단으로 표지되고, 실험 질량과 이론 질량의 비교에 의한 매트릭스-보조 레이저 탈착 이온화(MALDI: matrix-assisted laser desorption ionization) 질량 분석법에 의한 글리칸 구조의 미세 특성화, 이온 교환 HPLC(GlycoSep C)에 의한 시알릴화도(degree of sialylation)의 결정, 순상 HPLC(GlycoSep N)에 의한 친수성 기준에 따른 올리고당 형태의 분리 및 정량화, 및 고성능 모세관 전기영동-레이저 유도 형광(HPCE-LIF: high performance capillary electrophoresis-laser induced fluorescence)에 의한 올리고당의 분리 및 정량화를 가능하게 하는 다양한 보완적 기술에 의해 분리 및 확인될 수 있다.
본원에서 사용되는 "낮은 푸코스" 또는 "낮은 푸코스 함량"은 약 1% 내지 15%의 푸코스 함량으로 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 지칭한다.
본원에서 사용되는 "정상 푸코스" 또는 "정상 푸코스 함량"은 약 50% 초과, 일반적으로 약 80% 초과 또는 85% 초과의 푸코스 함량으로 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 지칭한다.
항이디오타입 항체
항이디오타입 항체는 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 항체이다.
본 발명은 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 항이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 다음 서열번호의 VH 및 VL을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 항이디오타입 항체를 제공한다:
서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL;
서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL;
서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 항이디오타입 항체는 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 항이디오타입 항체는 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 항이디오타입 항체는 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 항이디오타입 항체는 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 항이디오타입 항체는 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 항이디오타입 항체는 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 포함한다.
항이디오타입 (Id) 항체는 항체의 항원 결정기(예를 들어, 파라토프 또는 CDR)를 인식하는 항체이다. Id 항체는 항원-차단성 또는 비차단성일 수 있다. 항원-차단성 Id는 샘플에서 유리 항원 결합 도메인(예를 들어, 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인)을 검출하기 위해 사용될 수 있다. 비차단성 Id는 샘플 내의 총 항체(유리 항체, 항원에 부분 결합된 항체, 또는 항원에 완전 결합된 항체)를 검출하는 데 사용될 수 있다. Id 항체는 항-Id가 준비되어 있는 항체로 동물을 면역화함으로써 제조될 수 있다.
항-Id 항체는 또한 면역원으로서 사용되어 또 다른 동물에서 면역 반응을 유도하여, 이른바 항-항-Id 항체를 생성할 수 있다. 항-항-Id는 항-Id를 유도한 원래의 항원 결합 도메인과 에피토프적으로 동일할 수 있다. 따라서, 항원 결합 도메인의 이디오타입 결정기에 대한 항체를 사용함으로써, 동일한 특이성의 항원 결합 도메인을 발현하는 다른 클론을 확인하는 것이 가능하다. 항-Id 항체는 본원의 어딘가 다른 곳에 기재된 것과 같은 임의의 적합한 기법에 의해 변이되고/되거나(그에 의해, 항-Id 항체 변이체를 생성함) 유도체화될 수 있다.
면역접합체
본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질, 또는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질(본원에서 집합적으로 CD33 결합 단백질로 지칭됨)은 이종 분자에 접합될 수 있다. CD33 결합 단백질은 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함한다.
일부 구현예에서, 이종 분자는 검출가능한 표지 또는 세포독성제이다.
본 발명은 또한 검출가능한 표지에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 제공한다.
본 발명은 또한 검출가능한 표지에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질을 제공한다.
본 발명은 또한 검출가능한 표지에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질을 제공한다.
본 발명은 또한 검출가능한 표지에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 발명은 또한 세포독성제에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 제공한다.
본 발명은 또한 세포독성제에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질을 제공한다.
본 발명은 또한 세포독성제에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질을 제공한다.
본 발명은 또한 세포독성제에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시의 CD33 결합 단백질은 치료제를 CD33 발현 세포, 예컨대 골수 계통의 세포에 지시하는데 사용될 수 있다. 대안적으로, CD33 발현 세포는 일단 내재화되면 세포 기능을 변형시키도록 의도된 치료제에 커플링된 본 개시의 CD33 결합 단백질로 표적화될 수 있다.
일부 구현예에서, 검출가능한 표지는 또한 세포독성제이다.
검출가능한 표지에 접합된 본 개시의 CD33 결합 단백질은 다양한 샘플에서 CD33의 발현을 평가하기 위해 사용될 수 있다.
검출가능한 표지는 본 개시의 CD33 결합 단백질에 접합될 때 분광학적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 또는 화학적 수단을 통해 후자를 검출가능하게 만드는 조성물을 포함한다.
예시적인 검출가능한 표지에는 방사성 동위원소, 자성 비드, 금속 비드, 콜로이드 입자, 형광 염료, 고 전자밀도 시약(electron-dense reagent), 효소(예를 들어, ELISA에서 통상적으로 사용되는 것), 비오틴, 디곡시게닌, 합텐, 발광 분자, 화학발광 분자, 형광색소, 형광단, 형광 켄칭제(fluorescent quenching agent), 착색된 분자, 방사성 동위원소, 신틸레이트(scintillate), 아비딘, 스트렙타비딘, 단백질 A, 단백질 G, 항체 또는 이의 단편, 폴리히스티딘, Ni2+, Flag 태그, myc 태그, 중금속, 효소, 알칼리 포스파타제, 퍼옥시다제, 루시페라제, 전자 공여체/수용체, 아크리디늄 에스테르, 및 발색 기질이 포함된다.
본원에 참조로 포함된 국제 특허 공개 WO2019/125982호에 개시된 임의의 라벨이 사용될 수 있다.
검출가능한 표지는, 예컨대, 검출가능한 표지가 방사성 동위원소인 경우, 신호를 자발적으로 방출할 수 있다. 다른 경우에, 검출가능한 표지는 외부장(external field)에 의해 자극된 결과로서 신호를 방출한다.
예시적인 방사성 동위원소는 γ-방출, 오거(Auger)-방출, β-방출, 알파-방출, 또는 양전자-방출 방사성 동위원소일 수 있다. 예시적인 방사성 동위원소는 3H, 11C, 13C, 15N, 18F, 19F, 55Co, 57Co, 60Co, 61Cu, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 68Ga, 72As, 75Br, 86Y, 89Zr, 90Sr, 94mTc, 99mTc, 115In, 1231, 1241, 125I, 1311, 211At, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 226Ra, 225Ac, 및 227Ac를 포함한다.
일부 구현예에서, 방사성 동위원소는 세포 사멸을 향상시키는 것과 같은 치료적 목적을 위해 사용된다. 세포 사멸 증진을 위해 사용되는 방사성 동위원소는 32P, 47Sc, 67Cu, 77As, 89Sr, 90Y, 99Tc, 105Rh, 109Pd, 111Ag, 131I, 153Sm, 159Gd, 165Dy, 166Ho, 169Er, 186Re, 188Re, 194Ir, 198Au, 199Au, 211At, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 255Fm, 및 227Th를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 이론에 구애됨이 없이, 치료적 목적으로 사용되는 방사성 동위원소를 포함하는 CD33 결합 단백질은 표적 세포에 의해 내재화되고 표적 세포에 의해 사멸될 수 있다.
방사성 동위원소와 접합된 CD33 결합 단백질을 사용하는 방사선면역요법은 국소성 또는 미만성 종양의 치료에 유익할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 종양 관련 항원 또는 종양 미세환경에 대해 특이적으로 지시되는 방사성 표지된 단일클론 항체의 투여에 의해 치료된다. 방사성 표지(예를 들어, Ac225) 요법은 CD33을 발현하는 세포로 혈액 악성 종양을 치료하는 맥락에서와 같이 세포 사멸을 위해 낮은 용량을 필요로 하여 매우 효과적일 수 있다.
일부 구현예에서, 방사성 동위원소는 CD33 결합 단백질이 관심 조직에 표적화되고 있는지 여부를 나타내는 시험과 같이 영상화를 향상시키기 위해 사용된다. 이미징 증진을 위해 사용되는 예시적인 동위원소는 62Cu, 64Cu, 67Ga, 68Ga, 86Y, 89Zr, 및 111In을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
예시적인 금속 원자는 원자번호가 20보다 큰 금속, 예컨대 칼슘 원자, 스칸듐 원자, 티타늄 원자, 바나듐 원자, 크롬 원자, 망간 원자, 철 원자, 코발트 원자, 니켈 원자, 구리 원자, 아연 원자, 갈륨 원자, 게르마늄 원자, 비소 원자, 셀레늄 원자, 브롬 원자, 크립톤 원자, 루비듐 원자, 스트론튬 원자, 이트륨 원자, 지르코늄 원자, 니오븀 원자, 몰리브덴 원자, 테크네튬 원자, 루테늄 원자, 로듐 원자, 팔라듐 원자, 은 원자, 카드뮴 원자, 인듐 원자, 주석 원자, 안티몬 원자, 텔루륨 원자, 요오드 원자, 제논 원자, 세슘 원자, 바륨 원자, 란타늄 원자, 하프늄 원자, 탄탈룸 원자, 텅스텐 원자, 레늄 원자, 오스뮴 원자, 이리듐 원자, 백금 원자, 금 원자, 수은 원자, 탈륨 원자, 납 원자, 비스무트 원자, 프란슘 원자, 라듐 원자, 악티늄 원자, 세륨 원자, 프라세오디뮴 원자, 네오디뮴 원자, 프로메튬 원자, 사마륨 원자, 유로퓸 원자, 가돌리늄 원자, 테르븀 원자, 디스프로슘 원자, 홀뮴 원자, 에르븀 원자, 툴륨 원자, 이터븀 원자, 루테튬 원자, 토륨 원자, 프로트악티늄 원자, 우라늄 원자, 넵투늄 원자, 플루토늄 원자, 아메리슘 원자, 퀴륨 원자, 버클륨 원자, 캘리포늄 원자, 아인슈타이늄 원자, 페르뮴 원자, 멘델레븀 원자, 노벨륨 원자, 또는 로렌슘 원자이다.
일부 구현예에서, 금속 원자는 원자번호가 20보다 큰 알칼리 토금속일 수 있다.
일부 구현예에서, 금속 원자는 란탄족 원소일 수 있다.
일부 구현예에서, 금속 원자는 악티늄족 원소일 수 있다.
일부 구현예에서, 금속 원자는 전이 금속일 수 있다.
일부 구현예에서, 금속 원자는 전이후 금속(poor metal)일 수 있다.
일부 구현예에서, 금속 원자는 금 원자, 비스무트 원자, 탄탈룸 원자, 및 가돌리늄 원자일 수 있다.
일부 구현예에서, 금속 원자는 원자번호가 53(즉, 요오드) 내지 83(즉, 비스무트)인 금속일 수 있다.
일부 구현예에서, 금속 원자는 자기 공명 영상에 적합한 원자일 수 있다.
금속 원자는 +1, +2, 또는 +3 산화 상태의 형태의 금속 이온, 예컨대 Ba2+, Bi3+, Cs+, Ca2+, Cr2+, Cr3+, Cr6+, Co2+, Co3+, Cu+, Cu2+, Cu3+, Ga3+, Gd3+, Au+, Au3+, Fe2+, Fe3+, F3+, Pb2+, Mn2+, Mn3+, Mn4+, Mn7+, Hg2+, Ni2+, Ni3+, Ag+, Sr2+, Sn2+, Sn4+, 및 Zn2+일 수 있다. 금속 원자는 금속 산화물, 예컨대 산화철, 산화망간, 또는 산화가돌리늄을 포함할 수 있다.
적절한 염료는, 예를 들어 5(6)-카복시플루오레세인, IRDye 680RD 말레이미드, 또는 IRDye 800CW, 루테늄 폴리피리딜 염료 등과 같은 임의의 시판 염료를 포함한다.
적합한 형광단은 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC), 플루오레세인 티오세미카바지드, 로다민, 텍사스 레드, CyDyes(예를 들어, Cy3, Cy5, Cy5.5), Alexa Fluors(예를 들어, Alexa488, Alexa555, Alexa594; Alexa647), 근적외선(NIR)(700~900 nm) 형광 염료, 및 카보시아닌 및 아미노스티릴 염료이다.
검출가능한 표지에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 조영제로 사용될 수 있다.
검출가능한 표지에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질은 조영제로 사용될 수 있다.
검출가능한 표지에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질은 조영제로 사용될 수 있다.
검출가능한 표지에 접합된 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR은 조영제로 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포독성제는 화학요법제, 약물, 성장 억제제, 독소(예를 들어, 세균, 진균, 식물, 또는 동물 유래의 효소적으로 활성인 독소 또는 이의 단편) 또는 방사성 동위원소(즉, 방사성 접합체(radioconjugate))이다.
일부 구현예에서, 세포독성제는 다우노마이신, 독소루비신, 메토트렉세이트, 빈데신, 세균 독소, 예컨대 디프테리아 독소, 라이신, 겔다나마이신, 메이탄시노이드, 또는 칼리키아미신이다. 세포독성제는 튜불린 결합, DNA 결합, 또는 토포아이소머라제 억제를 포함하는 메커니즘에 의해 이들의 세포독성 및 세포증식억제(cytostatic) 효과를 끌어낼 수 있다.
일부 구현예에서, 세포독성제는 효소적으로 활성인 독소, 예컨대 디프테리아 A 사슬, 디프테리아 독소의 비결합성 활성 단편, 외독소 A 사슬(슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 유래), 라이신 A 사슬, 아브린 A 사슬, 모데신 A 사슬, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피톨라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(Momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오프피시날리스(Sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 및 트리코테센이다.
일부 구현예에서, 세포독성제는 방사성 핵종, 예컨대 212Bi, 131I, 131In, 90Y, 및 186Re이다.
일부 구현예에서, 세포독성제는 돌라스타틴 또는 돌로스타틴 펩티드 유사체 및 유도체, 오리스타틴 또는 모노메틸 오리스타틴 페닐알라닌이다. 예시적인 분자가 미국 특허 5,635,483호 및 5,780,588호에 개시되어 있다. 돌라스타틴 및 오리스타틴은 미세소관 동역학, GTP 가수분해, 및 핵 및 세포 분열을 방해하고(문헌[Woyke et al (2001) Antimicrob Agents and Chemother. 45(12):3580-3584]), 항암 및 항진균 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 돌라스타틴 또는 오리스타틴 약물 모이어티는 펩티드 약물 모이어티의 N(아미노) 말단 또는 C(카복실) 말단을 통해(WO02/088172), 또는 항체 내로 조작된 임의의 시스테인을 통해 본 발명의 항체에 부착될 수 있다.
본 개시의 CD33 결합 단백질은 알려진 방법을 사용하여 검출가능한 표지에 접합될 수 있다.
일부 구현예에서, 검출가능한 표지는 킬레이트제와 복합체를 형성한다.
일부 구현예에서, 검출가능한 표지는 링커를 통해 본 개시의 CD33 결합 단백질에 접합된다.
검출가능한 표지 또는 세포독성 모이어티는 알려진 방법을 사용하여 본 개시의 CD33 결합 단백질에 직접적으로 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 적합한 링커는 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어, 보결분자족 (prosthetic group), 비페놀계 링커(N-숙신이미딜-벤조에이트의 유도체; 도데카보레이트), 거대고리 및 무고리 킬레이트제 둘 모두의 킬레이트 모이어티, 예컨대 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산(DOTA)의 유도체, 디에틸렌트라이아민펜타아세트산(DTPA)의 유도체, S-2-(4-아이소티오시아네이토벤질)-1,4,7-트라이아자시클로노난-1,4,7-트라이아세트산(NOTA)의 유도체, 및 1,4,8,11-테트라아자시클로도데칸-1,4,8,11-테트라아세트산(TETA)의 유도체, N-숙신이미딜-3-(2-피리딜다이티올) 프로피오네이트(SPDP), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 2작용성 유도체(예컨대 디메틸 아디피미데이트 HCl), 활성 에스테르(예컨대 디숙신이미딜 수베레이트), 알데하이드(예컨대 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물(예컨대 비스(p-아지도벤조일)헥산다이아민), 비스-디아조늄 유도체(예컨대 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디아이소시아네이트(예컨대 톨루엔 2,6-디아이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물(예컨대 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠), 및 기타 킬레이트 모이어티를 포함한다. 적합한 펩티드 링커는 잘 알려져 있다.
일부 구현예에서, 본 개시의 CD33 결합 단백질은 신장 청소를 통해 혈액으로부터 제거된다.
키트
본 발명은 또한 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명은 또한 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질을 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명은 또한 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 본원에 기재된 임의의 다중특이적 단백질을 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명은 또한 CD33에 결합하는 본원에 기재된 임의의 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 포함하는 키트를 제공한다.
키트는 치료 용도 및 진단 키트로 사용될 수 있다.
키트는 샘플에서 CD33의 존재를 검출하는 데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 키트는 본 개시의 CD33 결합 단백질 및 CD33 결합 단백질을 검출하기 위한 시약을 포함한다. 키트는 다음을 포함하는 하나 이상의 다른 요소를 포함할 수 있다: 사용 설명서; 다른 시약, 예를 들어 표지, 치료제, 또는 킬레이트화 또는 다른 커플링에 유용한 작용제, 표지 또는 치료제에 대한 항체, 또는 방사선보호 조성물; 투여용 항체를 제조하기 위한 장치 또는 다른 물질; 약학적으로 허용 가능한 담체; 및 대상체에게 투여하기 위한 장치 또는 다른 물질.
일부 구현예에서, 키트는 용기 내의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인 및 키트 사용 설명서를 포함한다.
일부 구현예에서, 키트는 용기 내의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질 및 키트 사용 설명서를 포함한다.
일부 구현예에서, 키트는 용기 내의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질 및 키트 사용 설명서를 포함한다.
일부 구현예에서, 키트 내의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 표지된다.
일부 구현예에서, 키트 내의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질은 표지된다.
일부 구현예에서, 키트 내의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질은 표지된다.
일부 구현예에서, 키트는 다음 서열번호의 VH 및 VL을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)을 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
특정 구현예에서, 키트는 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)을 포함한다.
다른 구현예에서, 키트는 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)을 포함한다.
다른 구현예에서, 키트는 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)을 포함한다.
다른 구현예에서, 키트는 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)을 포함한다.
다른 구현예에서, 키트는 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)을 포함한다.
다른 구현예에서, 키트는 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)을 포함한다.
일부 구현예에서, 키트는 다음 서열번호의 VH 및 VL을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다:
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL.
일부 구현예에서, 키트는 다음 서열번호의 VH 및 VL을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다:
a) 서열번호 18의 VH;
b) 서열번호 19의 VH;
c) 서열번호 20의 VH;
d) 서열번호 21의 VH;
e) 서열번호 22의 VH;
f) 서열번호 23의 VH;
g) 서열번호 24의 VH;
h) 서열번호 25의 VH; 또는
i) 서열번호 26의 VH; 또는
j) 서열번호 27의 VH.
일부 구현예에서, 키트는 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 또는 264를 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 또는 273을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202를 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 키트는 서열번호 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220 221, 274, 275, 또는 276을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 키트는 서열번호 213을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 키트는 서열번호 216을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 키트는 서열번호 219를 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 키트는 서열번호 274를 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 키트는 서열번호 275를 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 키트는 서열번호 276을 포함하는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
CD33 검출 방법
본 발명은 또한 샘플을 수득하고, 샘플을 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인과 접촉시키고, 샘플에서 결합된 CD33를 검출하는 단계를 포함하는, 샘플에서 CD33를 검출하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 샘플은 소변, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 복수, 순환 세포, 활액, 조직과 회합되지 않은 세포(즉, 유리 세포), 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 조직, 생검(미세 바늘 흡인 포함)), 조직학적 조제물 등으로부터 유래될 수 있다.
본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 알려진 방법을 사용하여 검출될 수 있다. 예시적인 방법은 형광 또는 화학발광 표지, 또는 방사성 표지를 사용한 항체의 직접 표지화, 또는 용이하게 검출가능한 모이어티, 예컨대 비오틴, 효소, 또는 에피토프 태그의 본 발명의 항체에 대한 부착을 포함한다. 예시적인 표지 및 모이어티는 루테늄, 111In-DOTA, 111In-디에틸렌트리아민펜타아세트산(DTPA), 홀스래디쉬 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제 및 베타-갈락토시다제, 폴리-히스티딘(HIS 태그), 아크리딘 염료, 시아닌 염료, 플로오론 염료, 옥사진 염료, 페난트리딘 염료, 로다민 염료, 및 Alexafluor® 염료이다.
항체는 본원에 참조로 포함된 국제 특허 공개 WO2019/125982호에 개시된 임의의 방사성 표지 및 방사성 제제로 직접 표지될 수 있다.
본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 샘플에서 CD33를 검출하기 위해 다양한 검정에서 사용될 수 있다. 예시적인 검정은 웨스턴 블롯 분석, 방사면역검정, 표면 플라즈몬 공명, 면역침전, 평형 투석, 면역확산, 전기화학발광(ECL) 면역검정, 면역조직화학, 형광-활성화 세포 분류(FACS), 또는 ELISA 검정이다.
본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)
본원에서 확인된 CD33에 결합하는 임의의 항원 결합 도메인은 키메라 항원 수용체(CAR)로 조작되어 CD33에 결합하는 CAR을 제공할 수 있다. 본 개시는 CD33를 표적으로 하는 CAR, 이러한 CAR을 포함하는 세포, 및 본원에 기재된 CAR을 사용하여 CD33 생성 암, 예컨대 혈액암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 CAR은 CD33에 대한 항원 특이성을 갖는다. 본원에서 사용되는 어구 "항원 특이성을 갖는다" 및 "항원-특이적 반응을 이끌어낸다"는 CAR이 항원에 특이적으로 결합하여 항원을 면역학적으로 인식할 수 있으며, 이에 따라 CD33 항원에 대한 CAR의 결합이 면역 반응을 이끌어내는 것을 의미한다. 항원 특이성에 대한 CAR의 시험 방법 및 표적 세포를 인식하는 능력에 대한 CAR의 시험 방법은 당업계에 알려져 있다.
본 개시는 목적하는 키메라 항원 수용체를 안정적으로 발현하도록 유전적으로 조작된 T 세포의 용도에 관한 것이다. 키메라 항원 수용체(CAR)는 T 세포 신호전달 도메인에 연결된 항체(예컨대 scFv)의 항원 결합 도메인을 함유하는 인공적으로 구성된 이종 단백질 또는 폴리펩티드이다. CAR의 특성은, MHC-비제한적 방식으로, 선택된 표적에 대한 T 세포 특이성 및 반응성을 재지시하여, 단일클론 항체의 항원 결합 특성을 이용하는 능력을 포함한다. MHC-비제한적 항원 인식은 CAR을 발현하는 T 세포에 항원 처리와 무관하게 항원을 인식할 수 있는 능력을 부여하여, 종양 회피의 주요 메커니즘을 우회하게 한다. 또한, T 세포에서 발현될 때, CAR은 유리하게는 내인성 T 세포 수용체(TCR) 알파 및 베타 사슬과 이량체화하지 않는다.
본원에 기술된 CAR은 적어도 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 본원에 기재된 바와 같은 자극 분자로부터 유래된 기능적 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인(본원에서 "세포질 신호전달 도메인"으로도 지칭됨)을 포함하는 재조합 폴리펩티드 구성체를 제공한다. CAR을 발현하는 T 세포는 본원에서 CAR T 세포, CAR-T 세포, 또는 CAR 변형된 T 세포로 지칭되며, 이들 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 이러한 세포는 이의 표면 상에 항체 결합 도메인을 안정하게 발현하도록 유전적으로 변형되어, MHC 독립적인 신규한 항원 특이성을 부여할 수 있다.
일부 경우에, T 세포는 항체의 항원 인식 도메인을 CD3-제타 사슬 또는 FcγRI 단백질의 세포내 도메인과 조합하여 단일 키메라 단백질을 형성하는 CAR을 안정하게 발현하도록 유전적으로 변형된다. 일 구현예에서, 자극 분자는 T 세포 수용체 복합체와 회합된 제타 사슬이다.
"세포내 신호전달 도메인"은 분자의 세포내 부분을 지칭한다. 이는 세포 내의 정보를 전달하여, 2차 메신저를 생성하거나 이러한 메신저에 반응하여 이펙터로서 기능함으로써 규정된 신호전달 경로를 통해 세포 활성을 조절함에 의해 작용하는 단백질의 기능성 부분이다. 세포내 신호전달 도메인은 CAR 함유 세포, 예를 들어 CAR-T 세포의 면역 이펙터 기능을 촉진하는 신호를 생성한다. 예를 들어 CAR-T 세포에서의 면역 이펙터 기능의 예는 사이토카인의 분비를 비롯하여 세포용해 활성 및 헬퍼 활성을 포함한다.
일 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 1차 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 예시적인 1차 세포내 신호전달 도메인은 1차 자극 또는 항원 의존적 자극을 담당하는 분자로부터 유래되는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 공동 자극 세포내 도메인을 포함한다. 예시적인 공동 자극 세포내 신호전달 도메인은 공동 자극 신호 또는 항원 독립적 자극을 담당하는 분자로부터 유래되는 것을 포함한다. 예를 들어, CAR-T의 경우에, 1차 세포내 신호전달 도메인은 T 세포 수용체의 세포질 서열을 포함하고, 공동 자극성 세포내 신호전달 도메인은 공동 수용체 또는 공동 자극 분자로부터의 세포질 서열을 포함한다.
1차 세포내 신호전달 도메인은 면역수용체 티로신계 활성화 모티프 또는 ITAM으로 알려진 신호전달 모티프를 포함한다. 예시적인 1차 세포질 신호전달 서열을 함유하는 ITAM은 CD3-제타, FcRγ, FcR 베타, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD66d, DAP10, 및 DAP12로부터 유래되는 것을 포함한다.
용어 "제타" 또는 대안적으로 "제타 사슬", "CD3-제타" 또는 "TCR-제타"는 GenBank 수탁번호 BAG36664.1로서 제공되는 단백질, 또는 비인간 종, 예를 들어 뮤린, 토끼, 영장류, 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 등으로부터의 동등한 잔기로서 정의되고, "제타 자극 도메인" 또는 대안적으로 "CD3-제타 자극 도메인" 또는 "TCR-제타 자극 도메인"은 T 세포 활성화에 필요한 초기 신호를 기능적으로 전달하기에 충분한 제타 사슬의 세포질 도메인으로부터의 아미노산 잔기로서 정의된다. 일 양태에서, 제타의 세포질 도메인은 GenBank 수탁번호 BAG36664.1의 잔기 52 내지 164, 또는 이의 기능적 오르소로그(ortholog)인, 비인간 종, 예를 들어 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 등으로부터의 동등한 잔기를 포함한다. 일 양태에서, "제타 자극 도메인" 또는 "CD3-제타 자극 도메인"은 서열번호 28로서 제공되는 서열, 또는 서열번호 28과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열이다.
서열번호 164 CD3-제타 자극 도메인
RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
용어 "공동 자극 분자"는 공동 자극 리간드와 특이적으로 결합하여, T 세포에 의한 공동 자극 반응, 예컨대 증식(그러나 이에 한정되지 않음)을 매개하는 T 세포 상의 동족 결합 파트너를 지칭한다. 공동 자극 분자는 효율적인 면역 반응을 위해 요구되는, 항원 수용체 또는 이의 리간드 이외의 세포 표면 분자이다. 공동 자극 분자는 MHC 클래스 1 분자, BTLA 및 Toll 리간드 수용체, 뿐만 아니라 OX40, CD2, CD27, CD28, CDS, ICAM-1, LFA-1(CD11a/CD18), 및 4-1BB(CD137)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
공동 자극 세포내 신호전달 도메인은 공동 자극 분자의 세포내 부분일 수 있다. 공동 자극 분자는 다음의 단백질 패밀리로 나타낼 수 있다: TNF 수용체 단백질, 면역글로불린-유사 단백질, 사이토카인 수용체, 인테그린, 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), 및 활성화 NK 세포 수용체. 예시적인 이러한 분자는 CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40, GITR, CD30, MyD88, CD40, ICOS, BAFFR, HVEM, 림프구 기능-관련 항원-1(LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, 및 CD83과 특이적으로 결합하는 리간드 등을 포함한다.
세포내 신호전달 도메인은 유래가 되는 분자의, 전체 세포내 부분, 또는 전체 나이브 세포내 신호전달 도메인, 또는 이의 기능적 단편을 포함할 수 있다.
용어 "4-1BB" 또는 대안적으로 "CD137"는 GenBank 수탁번호 AAA62478.2로서 제공되는 아미노산 서열, 또는 비인간 종, 예를 들어 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 등으로부터의 동등한 잔기를 갖는 TNFR 수퍼패밀리의 구성원을 지칭하며; "4-1BB 공동 자극 도메인"은 GenBank 수탁번호 AAA62478.2의 아미노산 잔기 214 내지 255, 또는 비인간 종, 예를 들어 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 등으로부터의 동등한 잔기로서 정의된다. 일 양태에서, "4-1BB 공동 자극 도메인" 또는 "CD137 공동 자극 도메인"은 서열번호 163(KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL; 서열번호163) 또는 비인간 종, 예를 들어, 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 등의 등가 잔기 또는 서열번호 163과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열로서 제공된 서열이다.
일 구현예에서, CAR의 다른 도메인 중 하나와 자연적으로 연결된 막관통 도메인이 사용된다. 다른 구현예에서, 막관통 도메인은 이러한 도메인이 동일한 또는 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 결합하지 못하도록 하여 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화하도록 선택되거나 아미노산 치환에 의해 변형될 수 있다. 일 구현예에서, 막관통 도메인은 CD8α 힌지 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포질 신호전달 도메인은 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 공동 자극 분자로부터 유래된 하나 이상의 기능적 신호전달 도메인을 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 공동 자극 분자는 4-1BB(즉, CD137), CD27, CD3-제타, 및/또는 CD28로부터 선택된다. CD28은 T 세포 공동 자극에서 중요한 T 세포 마커이다. CD27은 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원이며, 공동 자극 면역 체크포인트 분자로서 작용한다. 4-1BB는 강력한 공동 자극 신호를 T 세포에 전달하여, T 림프구의 분화를 촉진하고 장기간 생존을 향상시킨다. CD3-제타는 TCR과 회합하여 신호를 생성하고, 면역수용체 티로신계 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 다른 구현예에서, 공동 자극 분자는 MyD88 또는 CD40이다.
일 구현예에서, CAR은 CD8을 포함하는 세포내 힌지 도메인 및 CD28, 4-1BB, 및 CD3-제타를 포함하는 세포내 T 세포 수용체 신호전달 도메인을 포함한다. 다른 구현예에서, CAR은 세포내 힌지 도메인 및 CD28, 4-1BB, 및 CD3-제타를 포함하는 세포내 T 세포 수용체 신호전달 도메인을 포함하며, 힌지 도메인은 CD8, CD4, 또는 CD28의 세포외 영역의 전체 또는 일부; 항체 불변 영역의 전체 또는 일부; FcγRIIIA 수용체, IgG 힌지, IgM 힌지, IgA 힌지, IgD 힌지, IgE 힌지, 또는 Ig 힌지의 전체 또는 일부를 포함한다. IgG 힌지는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM1, IgM2, IgA1, IgA2, IgD, IgE, 또는 이들의 키메라로부터 유래될 수 있다.
본원에 기술된 CAR은 적어도 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 예를 들어 하기에서 정의되는 자극 분자로부터 유래된 기능적 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인(본원에서 "세포질 신호전달 도메인"으로도 지칭됨)을 포함하는 재조합 폴리펩티드 구성체를 제공한다.
일 구현예에서, CAR은 세포외 항원 인식 도메인, 막관통 도메인, 및 자극 분자로부터 유래된 기능적 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 융합 단백질을 포함한다. 일 구현예에서, CAR은 세포외 항원 인식 도메인, 막관통 도메인, 및 공동 자극 분자로부터 유래된 기능적 신호전달 도메인 및 자극 분자로부터 유래된 기능적 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 융합 단백질을 포함한다. 일 구현예에서, CAR은 세포외 항원 인식 도메인, 막관통 도메인, 및 하나 이상의 공동 자극 분자(들)로부터 유래된 적어도 2개의 기능적 신호전달 도메인 및 자극 분자로부터 유래된 기능적 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 융합 단백질을 포함한다.
본 개시의 CAR은 CD28 및/또는 4-1BB 신호전달 도메인을 단독으로 포함하거나 본 발명의 CAR과 관련하여 유용한 임의의 다른 목적하는 세포질 도메인(들)과 조합되도록 설계될 수 있다. 일 구현예에서, CAR의 세포질 도메인은 CD3-제타의 신호전달 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, CAR의 세포질 도메인은 CD3-제타, 4-1BB, 및 CD28 신호전달 모듈 및 이들의 조합을 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다. 따라서, 본 발명은 CAR T 세포, 및 입양 요법을 위한 이의 사용 방법을 제공한다.
본 개시는 CAR의 변이체, 예를 들어 기능적 변이체를 추가로 제공한다. 본원에 사용되는 용어 "기능적 변이체"는 모 CAR과 실질적이거나 유의한 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 CAR을 지칭하며, 이러한 기능적 변이체는 이러한 변이체의 유래가 되는 CAR의 생물학적 활성을 유지한다. 기능적 변이체는 예를 들어 모 CAR과 유사한 정도로, 동일한 정도로, 또는 더 높은 정도로 표적 세포를 인식하는 능력을 유지하는 CAR의 변이체를 포함한다. 모 CAR과 관련하여, 기능적 변이체는 예를 들어 아미노산 서열에 있어서 모 CAR과 적어도 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 그 이상 동일할 수 있다.
기능적 변이체는 예를 들어 적어도 하나의 보존적 아미노산 치환을 갖는 모 CAR의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 기능적 변이체는 적어도 하나의 비보존적 아미노산 치환을 갖는 모 CAR의 아미노산 서열을 포함한다. 이 경우에, 비보존적 아미노산 치환은 기능적 변이체의 생물학적 활성을 방해하지 않거나 억제하지 않을 수 있다. 비보존적 아미노산 치환은 기능적 변이체의 생물학적 활성이 모 CAR에 비하여 증가되도록 기능적 변이체의 생물학적 활성을 향상시킬 수 있다.
보존적 아미노산 치환은 당업계에 알려져 있고 본원에 기재되어 있다.
본 개시의 CAR은 본원에 기재된 명시된 아미노산 서열 또는 서열들로 본질적으로 이루어질 수 있으며, 이에 따라 다른 성분, 예를 들어 다른 아미노산은 기능적 변이체의 생물학적 활성을 실질적으로 변화시키지 않는다.
본 개시의 CAR(기능적 부분 및 기능적 변이체 포함)은 임의의 길이일 수 있으며, 즉, CAR(또는 이의 기능적 부분 또는 기능적 변이체)이 생물학적 활성, 예를 들어, 항원에 특이적으로 결합하는 능력, 숙주에서 질환에 걸린 세포(예를 들어, 암 세포)를 검출하는 능력, 또는 숙주에서 질환을 치료하거나 예방하는 능력 등을 유지한다면 임의의 수의 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들어, CAR은 약 50 내지 약 5000개의 아미노산 길이, 예컨대 약 50, 약 70, 약 75, 약 100, 약 125, 약 150, 약 175, 약 200, 약 225, 약 250, 약 275, 약 300, 약 325, 약 350, 약 375, 약 400, 약 425, 약 450, 약 475, 약 500, 약 525, 약 550, 약 575, 약 600, 약 625, 약 650, 약 675, 약 700, 약 725, 약 750, 약 775, 약 800, 약 825, 약 850, 약 875, 약 900, 약 925, 약 950, 약 975, 약 1000개, 또는 그 이상의 아미노산 길이이다.
본 개시의 CAR(본 발명의 기능적 부분 및 기능적 변이체를 포함함)은 하나 이상의 자연 발생 아미노산 대신에 합성 아미노산을 포함할 수 있다. 이러한 합성 아미노산은 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어 아미노시클로헥산 카복실산, 노르류신, α-아미노 n-데칸산, 호모세린, S-아세틸아미노메틸-시스테인, 트랜스-3- 및 트랜스-4-하이드록시프롤린, 4-아미노페닐알라닌, 4-니트로페닐알라닌, α-(2-아미노-2-노르보르난)-카복실산, α,γ-디아미노부티르산, α,β-디아미노프로피온산, 호모페닐알라닌, 4-클로로페닐알라닌, 4-카복시페닐알라닌, β-페닐세린 β-하이드록시페닐알라닌, 페닐글리신, α-나프틸알라닌, 시클로헥실알라닌, 시클로헥실글리신, N'-벤질-N'-메틸-라이신, N',N'-디벤질-라이신, 6-하이드록시라이신, 오르니틴, α-아미노시클로펜탄 카복실산, α-아미노시클로헥산 카복실산, α-아미노시클로헵탄 카복실산, 인돌린-2-카복실산, 1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린-3-카복실산, 아미노말론산, 아미노말론산 모노아미드, 및 α-tert-부틸글리신을 포함한다.
본 개시의 CAR(기능적 부분 및 기능적 변이체를 포함함)은 번역 후 변형될 수 있다. 이들은 글리코실화, 에스테르화, N-아실화, 아미드화, 카복실화, 포스포릴화, 에스테르화, 환화(예를 들어, 이황화 가교를 통해)되거나, 또는 산 부가 염으로 전환될 수 있다. 일부 구현예에서, 이들은 이량체화되거나, 중합되거나, 또는 접합된다.
본 개시의 CAR(이의 기능적 부분 및 기능적 변이체 포함)은 당업계에 알려진 방법에 의해 수득될 수 있다. 폴리펩티드 및 단백질을 드 노보 합성하는 적합한 방법은 문헌[Chan et al., Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis, Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2000]; 문헌[Peptide and Protein Drug Analysis, ed. Reid, R., Marcel Dekker, Inc.,2000; 및 문헌[Epitope Mapping, ed. Westwood et al., Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2001]과 같은 참고문헌에 기재되어 있다. 또한, CAR은 표준 재조합 방법을 사용하여 본원에 기재된 핵산을 사용하여 재조합적으로 생성될 수 있다. 또한, CAR(이의 기능적 부분 및 기능적 변이체 포함) 중 일부는 식물, 세균, 곤충, 포유동물 등과 같은 공급원으로부터 단리 및/또는 정제될 수 있다. 단리 및 정제 방법은 당업계에 알려져 있다. 대안적으로, 본 개시의 CAR(이의 기능성 부분 및 기능적 변이체 포함)은 상업적으로 합성될 수 있다. 이러한 점에 있어서, CAR, 폴리펩티드, 및 단백질은 합성, 재조합, 단리, 및/또는 정제될 수 있다.
본 개시는 또한 본 개시의 CAR의 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CAR의 기능적 부분에 대해 임의의 수준의 친화성 또는 결합성을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 다양한 친화성(KD)으로 CD33에 결합될 수 있다. 일 구현예에서, 항체는 당업자에 의해 실시되는 바와 같이 표면 플라즈몬 공명 또는 키넥사(Kinexa) 방법에 의해 측정 시 약 10-7 M 이하, 예컨대 비제한적으로, 1 내지 9.9(또는 그 내의 임의의 범위 또는 값, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9)×10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 10-12 M, 10-13 M, 10-14 M, 10-15 M, 또는 그 내의 임의의 범위 또는 값의 KD로 CD33에 결합한다. 하나의 예시적인 친화성은 1×10-8 M 이하이다. 다른 예시적인 친화성은 1×10-9 M 이하이다.
본 개시의 CAR의 임의의 기능적 부분에 결합하는 능력에 대하여 항체를 시험하는 방법은 당업계에 알려져 있으며, 임의의 항체-항원 결합 검정, 예컨대 방사면역검정(RIA), 웨스턴 블롯, 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 면역침전, 및 경쟁적 억제 검정을 포함한다.
항체 또는 이의 항체 단편을 포함하는 CAR의 일부는 항원 결합 도메인이 인접한 폴리펩티드 사슬의 일부로서 발현되는 다양한 형태로 존재할 수 있으며, 이에는, 예를 들어 단일 도메인 항체 단편(sdAb), scFv 및 인간 키메라 또는 인간화 항체가 포함된다(문헌[Harlow et al., 1999, In: Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y.; Harlow et al., 1989, In: Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, N.Y.; Houston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; Bird et al., 1988, Science 242:423-426]). 일 양태에서, 본 개시의 CAR의 항원 결합 도메인은 항체 단편을 포함한다. 일 구현예에서, 본 개시의 CAR은 scFv를 포함하는 항체 단편을 포함한다.
본 개시는 또한 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, 세포외 항원 결합 도메인은 CD33에 결합한다.
본 개시는 또한 다음을 포함하는 CAR을 제공한다.
CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인;
막관통 도메인; 및
적어도 하나의 공동 자극 도메인을 임의로 포함하는 세포내 신호전달 도메인.
일부 구현예에서, CAR은 CD8a-힌지 영역을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 CD8a 막관통 영역(CD8a-TM) 폴리펩티드, 및 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분을 포함하는 공동 자극 도메인 및 T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR는 다음을 포함한다:
서열번호 157과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CD8a-힌지 영역;
서열번호 162와 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인; 및/또는
서열번호 163과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 공동 자극 도메인 및 서열번호 164와 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인.
본 개시는 또한 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, 세포외 항원 결합 도메인은 CD33에 결합하고 다음을 포함한다:
서열번호 81의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 52의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 83의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 84의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 86의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 88의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 105의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 95의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 106의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 107의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 185의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 188의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 192의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 196의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 200의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 202의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3.
특정 구현예에서, CAR은 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하고, 세포외 항원 결합 도메인은 CD33에 결합하고 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, CAR은 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하고, 세포외 항원 결합 도메인은 CD33에 결합하고 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, CAR은 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하고, 세포외 항원 결합 도메인은 CD33에 결합하고 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, CAR은 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하고, 세포외 항원 결합 도메인은 CD33에 결합하고 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, CAR은 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하고, 세포외 항원 결합 도메인은 CD33에 결합하고 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, CAR은 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하고, 세포외 항원 결합 도메인은 CD33에 결합하고 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 및 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
예시적인 HCDR 및 LCDR 서열은 표 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 및 4f에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, CDR은 Kabat에 따라 정의된다.
일부 구현예에서, CDR은 Chothia에 따라 정의된다.
일부 구현예에서, CDR은 IMGT에 따라 정의된다.
일부 구현예에서, CDR은 AbM에 따라 정의된다.
일부 구현예에서, CDR은 Contact에 따라 정의된다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 253, 254, 또는 255의 HCDR1, 서열번호 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 256, 257, 또는 258의 HCDR2, 서열번호 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 259, 260, 또는 261의 HCDR3, 서열번호 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 265, 또는 266의 LCDR1, 서열번호 69, 70, 71, 72, 73, 74, 267, 또는 268의 LCDR2, 및 서열번호 75, 76, 77, 78, 79, 80, 269, 또는 270의 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 33, 89, 167, 172, 또는 176의 HCDR1, 서열번호 90, 91, 168, 173, 또는 177의 HCDR2, 서열번호 92, 93, 94, 169, 174, 178, 또는 180의 HCDR3, 서열번호 98, 99, 100, 182, 186, 189, 193, 197, 또는 201의 LCDR1, 서열번호 101, 102, 103, 183, 187, 190, 194, 또는 198의 LCDR2, 및 서열번호 104, 184, 191, 195, 또는 199의 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 253, 254, 또는 255의 HCDR1 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 33, 89, 167, 172, 또는 176의 HCDR1 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 256, 257, 또는 258의 HCDR2 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 90, 91, 168, 173, 또는 177의 HCDR2 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 259, 260, 또는 261의 HCDR3 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 92, 93, 94, 169, 174, 178, 또는 180의 HCDR3 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 265, 또는 266의 LCDR1 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 98, 99, 100, 182, 186, 189, 193, 197, 또는 201의 LCDR1 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 69, 70, 71, 72, 73, 74, 267, 또는 268의 LCDR2 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 101, 102, 103, 183, 187, 190, 194, 또는 198의 LCDR2 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 71 또는 146의 LCDR3 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 75, 76, 77, 78, 79, 80, 269, 또는 270의 LCDR3 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 104, 184, 191, 195, 또는 199의 LCDR3 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD34에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 33, 44, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD89에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD172에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD89에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD89에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD254에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시는 또한 CD255에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 또는 88의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 다음 서열번호의 VH 및 VL을 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL;
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 다음 서열번호의 VH 및 VL을 포함한다:
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL.
세포외 항원 결합 도메인은 또한 다른 곳에 기재된 바와 같은 CD33 결합 도메인의 변이체일 수 있다(예를 들어, 실시예 19 및 20에 기재된 바와 같은 변이체 도메인).
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 52의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 81의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 82의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 54의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 83의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 55의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 84의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 85의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 57의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 86의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 58의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 87의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 87의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 60의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 87의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 61의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 88의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 95의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 105의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 96의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 106의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 97의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 107의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 170의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 185의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 171의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 188의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 175의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 192의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 179의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 196의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 181의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 200의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 96의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 202의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 271의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 272의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 273의 폴리펩티드와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다 일부 구현예에서, scFv는 VL과 VH 사이의 링커 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커 폴리펩티드는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 폴리펩티드는 서열번호 108과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 링커 폴리펩티드는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함한다(예를 들어, 링커 폴리펩티드는 서열번호 108의 아미노산 서열로 구성됨).
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 274, 275, 및 276으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 213의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 214의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 215의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 217의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 219의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 221의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 274의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 275의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 276의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 213의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 219의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 274의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 275의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
다른 구현예에서, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 276의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 203의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 204의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 205의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 206의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 207의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 208의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 209의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 210의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 211의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 212의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 213의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 214의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 215의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 216의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 217의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 218의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 219의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 220의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 221의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 274의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 275의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 276의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 274, 275, 또는 276으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, CAR은 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하고, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 213, 216, 219, 274, 275, 또는 276으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 18의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 19의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 20의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 21의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 22의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 23의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 24의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 25의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 26의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 27의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 203의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 204의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 205의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 206의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 207의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 208의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 209의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 210의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 211의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 212의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 213의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 213의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 214의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 214의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 215의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 215의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 216의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 217의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 217의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 218의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 218의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 219의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 219의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 220의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 221의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 221의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 274의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 274의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 275의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 275의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시는 서열번호 276의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 서열번호 276의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분, T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분, 분화 클러스터(CD27) 성분, 분화 클러스터 수퍼패밀리 구성원 성분(예컨대, 예를 들어 CD28 또는 유도성 T-세포 공동 자극제(ICOS) 성분), 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드 성분을 포함한다.
일부 구현예에서, CD137 성분은 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD137 성분은 서열번호 163의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD3z 성분은 서열번호 164의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD3z 성분은 서열번호 164의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 서열번호 165의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
서열번호 165
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 CD8a 막관통 영역(CD8a-TM) 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, CD8a-TM 폴리펩티드는 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함한다. (IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC; 서열번호 162).
일부 구현예에서, CD8a-TM 폴리펩티드는 서열번호 26의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 T-세포 수용체, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD40, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154의 α, β, 또는 ζ 사슬의 막관통 영역(들)을 적어도 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 ζ, η, 또는 FcεR1γ 및 -β, MB1(Igα.), B29 또는 CD3-γ, ζ, 또는 η의 막관통 도메인을 적어도 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 합성 막관통 도메인으로서, 예를 들어 소수성 잔기, 예컨대 류신 및 발린, 페닐알라닌의 삼중체, 또는 트립토판을 주로 포함하는 막관통 도메인이다.
일부 구현예에서, CAR은 막관통 도메인을 CD33에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인에 연결하는 힌지 영역을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 CD8a-힌지 영역이다. 일부 구현예에서, CD8a-힌지 영역은 서열번호 157(TSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD; 서열번호 157)의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD8a-힌지 영역은 서열번호 157의 아미노산 서열과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 아미노산 서열 EPKSCDKTHTCPPCP(서열번호 158)를 포함하거나, EPKSCDKTHTCPPCP(서열번호 158)와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 서열 ERKCCVECPPCP(서열번호 159)를 포함하거나, ERKCCVECPPCP(서열번호 159)와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 서열 ELKTPLGDTTHTCPRCP(EPKSCDTPPPCPRCP)3(서열번호 160)을 포함하거나 ELKTPLGDTTHTCPRCP(EPKSCDTPPPCPRCP)3(서열번호 160)과 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 서열 ESKYGPPCPSCP(서열번호 161)를 포함하거나 ESKYGPPCPSCP(서열번호 161)와 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
CAR을 발현하는 CAR 구성체 및 면역반응성 세포
본 개시는 또한 본원에 기재된 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
달리 명시되지 않는 한, "아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오티드"는 서로 축퇴성 버전이고 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 모든 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 어구 단백질 또는 RNA를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 또한 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 일부 변이체에서 발현된 단백질에 스플라이싱되는 인트론(들)을 함유할 수 있는 정도까지 인트론을 포함할 수 있다.
본 개시는 또한 본 개시의 CAR을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
용어 "발현 벡터"는 발현시킬 뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결된 발현 제어 서열을 포함하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 지칭한다. 발현 벡터는 발현에 충분한 시스-작용 요소를 포함하고; 발현을 위한 다른 요소는 숙주 세포에 의해 또는 시험관내 발현 시스템에서 공급될 수 있다. 발현 벡터는 재조합 폴리뉴클레오티드를 혼입시킨, 코스미드, 플라스미드(예를 들어, 네이키드(naked) 또는 리포솜 내에 포함됨) 및 바이러스(예를 들어, 렌티바이러스, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 및 아데노 관련 바이러스)를 포함하여, 당업계에 알려진 모든 것을 포함한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CAR을 포함하는 단리된 면역반응성 세포를 제공한다. 일부 구현예에서, 단리된 면역반응성 세포는 CAR로 형질도입되며, 예를 들어 CAR은 면역반응성 세포의 표면 상에서 구성적으로 발현된다. 특정 구현예에서, 단리된 면역반응성 세포는 적어도 하나의 공동 자극 리간드로 추가로 형질도입되며, 이에 따라 면역반응성 세포는 적어도 하나의 공동 자극 리간드를 발현하게 된다. 특정 구현예에서, 상기 적어도 하나의 공동 자극 리간드는 4-1BBL, CD48, CD70, CD80, CD86, OX40L, TNFRSF14, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 단리된 면역반응성 세포는 적어도 하나의 사이토카인으로 추가로 형질도입되며, 이에 따라 면역반응성 세포는 적어도 하나의 사이토카인을 분비하게 된다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 사이토카인은 IL-2, IL-3, IL-6, IL-7, IL-11, IL-12, IL-15, IL-17, IL-21, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 단리된 면역반응성 세포는 T 림프구(T 세포), 자연 살해(NK) 세포, 세포독성 T 림프구(CTL), 조절 T 세포(Treg), 인간 배아 줄기 세포, 림프성 선조 세포, T 세포-전구 세포, 및 림프성 세포가 분화될 수 있는 만능성 줄기 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 단리된 면역반응성 세포는 T 세포이다.
본원의 목적상, T 세포는 임의의 T 세포일 수 있으며, 예컨대, 배양된 T 세포, 예를 들어 1차 T 세포, 또는 배양된 T 세포주, 예를 들어 Jurkat, SupT1 등으로부터의 T 세포, 또는 포유동물로부터 수득된 T 세포일 수 있다. 포유동물로부터 수득되는 경우, T 세포는 골수, 혈액, 림프절, 흉선, 또는 다른 조직 또는 체액을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다수의 공급원으로부터 수득될 수 있다. T 세포는 또한 농축되거나 정제될 수 있다. T 세포는 인간 T 세포일 수 있다. T 세포는 인간으로부터 단리된 T 세포일 수 있다. T 세포는 임의의 유형의 T 세포일 수 있으며, CD4+/CD8+ 이중 양성 T 세포, CD8+ T 세포(예를 들어, 세포독성 T 세포), CD4+ 헬퍼 T 세포, 예를 들어 Th1 및 Th2 세포, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 말초 혈액 백혈구(PBL), 종양 침윤 세포, 기억 T 세포, 나이브 T 세포 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는 임의의 발달 단계의 것일 수 있다. T 세포는 CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포일 수 있다.
일부 구현예에서, 단리된 면역반응성 세포는 NK 세포이다.
일부 구현예에서, 단리된 면역반응성 세포는 CTL이다.
일부 구현예에서, 단리된 면역반응성 세포는 Treg이다.
일부 구현예에서, 단리된 면역반응성 세포는 인간 배아 줄기 세포이다.
일부 구현예에서, 단리된 면역반응성 세포는 림프성 선조 세포이다.
일부 구현예에서, 단리된 면역반응성 세포는 만능 줄기 세포이다.
일 구현예에서, 본 개시의 CAR T 세포는 목적하는 CAR, 예를 들어 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인, CD8α 힌지 및 막관통 도메인, 및 인간 4-1BB 및 CD3-제타 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 포함하는 렌티바이러스 벡터를 세포 내로 도입시킴으로써 생성될 수 있다. 본 개시의 CAR T 세포는 생체내에서 복제하여 장기간 지속성을 가져올 수 있으며, 이는 지속적인 종양 제어로 이어질 수 있다.
본 발명의 구현예는 본원에 기재된 재조합 발현 벡터들 중 임의의 것을 포함하는 숙주 세포를 추가로 제공한다. 본원에서 사용되는 용어 "숙주 세포"는 재조합 발현 벡터를 수용할 수 있는 임의의 유형의 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 진핵 세포, 예를 들어 식물, 동물, 또는 조류, 진균일 수 있거나, 원핵 세포, 예를 들어 세균 또는 원생동물일 수 있다. 숙주 세포는 배양된 세포이거나 또는 1차 세포, 즉, 유기체, 예를 들어 인간으로부터 직접 단리된 세포일 수 있다. 숙주 세포는 부착성 세포이거나 또는 현탁된 세포, 즉 현탁액에서 성장하는 세포일 수 있다. 적합한 숙주 세포는 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어 DH5α 대장균 세포, 중국 햄스터 난소 세포, 원숭이 VERO 세포, COS 세포, HEK293 세포 등을 포함한다. 재조합 발현 벡터를 증폭 또는 복제할 목적상, 숙주 세포는 원핵 세포, 예를 들어 DH5α 세포일 수 있다. 재조합 CAR, 폴리펩티드, 또는 단백질을 생성할 목적상, 숙주 세포는 포유동물 세포일 수 있다. 숙주 세포는 인간 세포일 수 있다. 숙주 세포는 임의의 세포 유형의 것일 수 있고, 임의의 유형의 조직으로부터 기원될 수 있고, 임의의 발달 단계의 것일 수 있지만, 숙주 세포는 말초 혈액 림프구(PBL)일 수 있다. 숙주 세포는 T 세포일 수 있다.
또한, 본원에 기재된 적어도 하나의 숙주 세포를 포함하는 세포 집단이 제공된다. 세포 집단은, 적어도 하나의 다른 세포, 예를 들어 숙주 세포(예를 들어, T 세포)에 더하여, 기재된 재조합 발현 벡터들 중 임의의 것을 포함하는 숙주 세포를 포함하는 이종 집단일 수 있으며, 이때 적어도 하나의 다른 세포는 재조합 발현 벡터들 중 어떠한 것도 포함하지 않거나, T 세포 이외의 세포, 예를 들어 B 세포, 대식세포, 적혈구, 호중구, 간세포, 내피 세포, 상피 세포, 근육 세포, 뇌세포 등을 포함하지 않는다. 대안적으로, 세포 집단은 실질적으로 균질한 집단일 수 있으며, 집단은 주로 재조합 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포(예를 들어, 본질적으로 이루어짐)를 포함한다. 집단은 또한 세포의 클론 집단일 수 있으며, 집단의 모든 세포는 재조합 발현 벡터를 포함하는 단일 숙주 세포의 클론이며, 이에 따라 집단의 모든 세포는 재조합 발현 벡터를 포함하게 된다. 일 구현예에서, 세포 집단은 본원에 기재된 바와 같은 재조합 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 포함하는 클론 집단이다.
폴리뉴클레오티드, 숙주 세포, 및 벡터
본 개시는 또한 본 개시의 임의의 CD33 결합 단백질을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다. CD33 결합 단백질은 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질, 및 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함한다.
본 발명은 또한 임의의 CD33 결합 단백질 또는 이의 단편을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 264, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 또는 382의 VH를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
특정 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 53의 VH를 암호화한다.
다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 56의 VH를 암호화한다.
다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 59의 VH를 암호화한다.
다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 262의 VH를 암호화한다.
다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 263의 VH를 암호화한다.
다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 264의 VH를 암호화한다.
본 발명은 또한 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87,88, 271, 272, 273, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 또는 398의 VL을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
특정 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 82의 VL을 암호화한다.
다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 85의 VL을 암호화한다.
다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 87의 VL을 암호화한다.
다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 271의 VL을 암호화한다.
다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 272의 VL을 암호화한다.
다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 273의 VL을 암호화한다.본 발명은 또한 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27의 VH를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 264, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 또는 382의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 273, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 또는 398의 VL을 암호화한다.
본 발명은 또한 다음 서열번호의 VH 및 VL을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
특정 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 암호화한다. 다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 암호화한다. 다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 암호화한다. 다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 암호화한다. 다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 암호화한다. 다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 암호화한다.
본 발명은 또한 다음 서열번호의 VH 및 VL을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다:
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL.
본 발명은 또한 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220 221, 274, 275, 또는 276의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 발명은 또한 서열번호 18의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 19의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 20의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 21의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 22의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 23의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 24의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 25의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 26의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 27의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 203의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 204의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 205의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 206의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 207의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 208의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 209의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 210의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 211의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 212의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 213의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 214의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 215의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 216의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 217의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 218의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 219의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 220의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 221의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 274의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 275의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 276의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
특정 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 213의 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 216의 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 219의 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 274의 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 275의 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 276의 폴리펩티드를 암호화한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CAR, 또는 이의 기능적 부분 또는 기능적 변이체 중 임의의 것을 암호화하는 단리되거나 정제된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 274, 275, 또는 276의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 213의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 214의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 215의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 217의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 219의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 221의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 274의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 275의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열번호 276의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 개시의 일부 구현예는 또한 본 개시의 CD33 결합 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 또는 엄격한 조건 하에 본 개시의 CD33 결합 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 혼성화하는 폴리뉴클레오티드에 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단리되거나 정제된 핵산을 제공한다.
엄격한 조건 하에서 혼성화하는 폴리뉴클레오티드는 높은 엄격성 조건 하에서 혼성화할 수 있다. "높은 엄격성 조건"이란, 폴리뉴클레오티드가 비특이적 혼성화보다 검출가능하게 더 강한 양으로 표적 서열(본원에 기재된 핵산들 중 임의의 것의 뉴클레오티드 서열)에 특이적으로 혼성화함을 의미한다. 높은 엄격성 조건은 정확한 상보성 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 구별하게 될 조건, 또는 몇몇 작은 영역(예를 들어, 3 내지 12개의 염기)이 뉴클레오티드 서열과 우연히 매칭된 랜덤 서열로부터 단지 몇몇 산포된 불일치를 함유하는 조건을 포함한다. 이러한 작은 상보성 영역은 14 내지 17개 또는 그 이상의 염기의 전장 보체(full-length complement)보다 더 용이하게 융해되고, 높은 엄격성 혼성화는 이들을 용이하게 구별가능하도록 한다. 비교적 높은 엄격성 조건은, 예를 들어 약 50 내지 70℃의 온도에서 약 0.02 내지 0.1 M NaCl 또는 등가물에 의해 제공되는 것과 같은 저염 및/또는 고온 조건을 포함할 것이다. 이러한 높은 엄격성 조건은 뉴클레오티드 서열과 주형 또는 표적 가닥 사이에 불일치가 만약 있다 하더라도 거의 허용하지 않으며, 본원에 기재된 CAR 중 임의의 것의 발현을 검출하기에 특히 적합하다. 일반적으로, 첨가하는 포름아미드의 양을 증가시켜 조건이 보다 엄격하게 될 수 있음이 이해된다.
본 개시의 폴리뉴클레오티드 서열은 의도된 숙주 세포에서 뉴클레오티드 서열의 발현을 가능하게 하는 하나 이상의 조절 요소, 예컨대 프로모터 또는 인핸서에 작동가능하게 연결될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 cDNA일 수 있다. 프로모터는 강한, 약한, 조직 특이적, 유도성, 또는 발달 특이적 프로모터일 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 프로모터는 하이포크산틴 포스포리보실 트랜스퍼라제(HPRT), 아데노신 데아미나제, 피루베이트 키나제, 베타-액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 등이다. 또한, 많은 바이러스 프로모터가 진핵 세포에서 구성적으로 기능하고, 기재된 구현예와 함께 사용하기에 적합하다. 이러한 바이러스 프로모터는 거대세포바이러스(CMV) 극초기 프로모터, SV40의 초기 및 후기 프로모터, 마우스 유선 종양 바이러스 (MMTV) 프로모터, 말로니(Maloney) 백혈병 바이러스의 긴 말단 반복부(LTR), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 엡스타인 바 바이러스(Epstein Barr Virus, EBV), 라우스 육종 바이러스(Rous Sarcoma Virus, RSV), 및 다른 레트로바이러스, 및 단순 헤르페스 바이러스의 티미딘 키나제 프로모터를 포함한다. 유도성 프로모터, 예컨대 메탈로티오네인 프로모터, 테트라시클린-유도성 프로모터, 독시시클린-유도성 프로모터, 하나 이상의 인터페론-자극 반응 요소(ISRE), 예컨대 단백질 키나제 R 2',5'-올리고아데닐레이트 합성효소, Mx 유전자, ADAR1을 포함하는 프로모터 등이 사용될 수도 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다. 본 개시는 또한 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 이러한 벡터는 플라스미드 벡터, 바이러스 벡터, 배큘로바이러스 발현용 벡터, 트랜스포존 기반 벡터, 또는 임의의 수단에 의한 소정의 유기체 또는 유전적 백그라운드 내로 본 발명의 합성 폴리뉴클레오티드를 도입시키기에 적합한 임의의 다른 벡터일 수 있다. 본 개시의 CD33 결합 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 CD33 결합 단백질의 발현을 보장하는 발현 벡터(들)의 제어 서열에 작동가능하게 연결될 수 있다. 이러한 조절 요소는 전사 프로모터, 적합한 mRNA 리보솜 결합 부위를 암호화하는 서열, 및 전사 및 번역의 종결을 제어하는 서열을 포함할 수 있다. 발현 벡터는 또한 하나 이상의 비전사 요소, 예컨대 복제 기점, 발현시키고자 하는 유전자에 연결된 적합한 프로모터 및 인핸서, 다른 5' 또는 3' 플랭킹(flanking) 비전사 서열, 5' 또는 3' 비번역 서열(예컨대, 필요한 리보솜 결합 부위), 폴리아데닐화 부위, 스플라이스 공여체 및 수용제 부위, 또는 전사 종결 서열을 포함할 수 있다. 숙주에서 복제하는 능력을 부여하는 복제 기점이 또한 포함될 수 있다.
발현 벡터는 자연 발생 또는 비자연 발생 뉴클레오티드간 연결, 또는 두 연결 유형 모두를 포함할 수 있다. 비자연 발생 또는 변경된 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드간 연결은 벡터의 전사 또는 복제를 방해하지 않는다.
벡터가 적절한 숙주 내로 혼입되면, 숙주는 혼입된 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된 본 개시의 CD33 결합 단백질의 고수준 발현에 적합한 조건 하에서 유지된다. 척추동물 세포를 형질전환시키는 데 사용되는 발현 벡터에서의 전사 및 번역 제어 서열은 바이러스 공급원에 의해 제공될 수 있다. 예시적인 벡터는 문헌[Okayama and Berg, 3 Mol. Cell. Biol. 280 (1983)]에 의해 기재된 바와 같이 구성될 수 있다.
본 개시의 벡터는 또한 하나 이상의 내부 리보솜 진입 부위(들)(IRES)를 함유할 수 있다. 융합 벡터 내로의 IRES 서열의 포함은 일부 단백질의 발현을 향상시키는 데 유익할 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터 시스템은 하나 이상의 폴리아데닐화 부위(예를 들어, SV40)를 포함할 것이며, 이는 상기 언급된 핵산 서열들 중 임의의 것의 업스트림 또는 다운스트림에 있을 수 있다. 벡터 성분은(즉, ORF 사이에 "스페이서" 뉴클레오티드를 도입하여) 유전자 산물을 발현시키기 위한 최적의 간격을 제공하는 방식으로 인접하게 연결 또는 배열될 수 있거나, 또는 다른 방식으로 위치될 수 있다. 조절 요소, 예컨대 IRES 모티프는 또한 발현을 위한 최적의 간격을 제공하도록 배열될 수 있다.
본 개시의 벡터는 원형 또는 선형일 수 있다. 이들은 원핵생물 또는 진핵생물 숙주 세포에서 기능하는 복제계를 포함하도록 제조될 수 있다. 복제계는 예를 들어, ColE1, SV40, 2μ 플라스미드, λ, 소 유두종 바이러스 등으로부터 유래될 수 있다.
재조합 발현 벡터는 일시적 발현 또는 안정한 발현을 위해, 또는 둘 모두를 위해 설계될 수 있다. 또한, 재조합 발현 벡터는 구성적 발현 또는 유도성 발현을 위해 제조될 수 있다.
또한, 재조합 발현 벡터는 자살 유전자를 포함하도록 제조될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "자살 유전자"는 자살 유전자를 발현하는 세포를 죽게 하는 유전자를 지칭한다. 자살 유전자는, 유전자가 발현되는 세포 상에서 작용제, 예를 들어 약물에 대한 감수성을 부여하고, 세포가 작용제와 접촉되거나 이에 노출될 때 세포를 죽게 하는 유전자일 수 있다. 자살 유전자는 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어 단순 헤르페스 바이러스(HSV), 티미딘 키나제(TK) 유전자, 시토신 데아미나제, 푸린 뉴클레오시드 포스포릴라제, 및 니트로환원효소를 포함한다.
벡터는 또한 당업계에 잘 알려진 선택 마커를 포함할 수 있다. 선택 마커는 양성 및 음성 선택 마커를 포함한다. 마커 유전자는 살생제 내성, 예를 들어 항생제, 중금속 등에 대한 내성, 영양요구성 숙주에서 원생영양을 제공하기 위한 상보성 등을 포함한다. 예시적인 마커 유전자는 항생물질 내성 유전자(예를 들어, 네오마이신 내성 유전자, 하이그로마이신 내성 유전자, 카나마이신 내성 유전자, 테트라시클린 내성 유전자, 페니실린 내성 유전자, 히스티디놀 내성 유전자, 히스티디놀 x 내성 유전자), 글루타민 합성효소 유전자, HSV-TK, 간시클로비르 선택을 위한 HSV-TK 유도체, 또는 6-메틸푸린 선택을 위한 세균성 푸린 뉴클레오시드 포스포릴라제 유전자를 포함한다(문헌[Gadi et al., 7 Gene Ther. 1738-1743 (2000)]). 선택 마커 또는 클로닝 부위를 암호화하는 핵산 서열은 관심 폴리펩티드 또는 클로닝 부위를 암호화하는 핵산 서열의 업스트림 또는 다운스트림에 있을 수 있다.
사용할 수 있는 예시적인 벡터는 세균 벡터: pBs, 파지스크립트(phagescript), PsiX174, pBluescript SK, pBs KS, pNH8a, pNH16a, pNH18a, pNH46a(Stratagene, La Jolla, Calif., USA); pTrc99A, pKK223-3, pKK233-3, pDR540, 및 pRIT5(Pharmacia, Uppsala, 스웨덴). 진핵세포 벡터: pWLneo, pSV2cat, pOG44, PXR1, pSG(Stratagene) pSVK3, pBPV, pMSG, 및 pSVL(Pharmacia), pEE6.4(Lonza), 및 pEE12.4(Lonza)이다. 추가적인 벡터는 pUC 시리즈(Fermentas Life Sciences, Glen Burnie, Md.), pBluescript 시리즈(Stratagene, LaJolla, Calif.), pET 시리즈(Novagen, Madison, Wis.), pGEX 시리즈(Pharmacia Biotech, Uppsala, 스웨덴), 및 pEX 시리즈(Clontech, Palo Alto, Calif.)를 포함한다. 박테리오파지 벡터, 예컨대 λGT10, λGT11, λEMBL4, 및 λNM1149, λZapII(Stratagene)이 사용될 수 있다. 예시적인 식물 발현 벡터는 pBI01, pBI01.2, pBI121, pBI101.3, 및 pBIN19(Clontech)를 포함한다. 예시적인 동물 발현 벡터는 pEUK-Cl, pMAM, 및 pMAMneo(Clontech)를 포함한다. 발현 벡터는 바이러스 벡터, 예를 들어 레트로바이러스 벡터, 예를 들어 감마 레트로바이러스 벡터일 수 있다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 264, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 또는 382의 VH를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
특정 구현예에서, 벡터는 서열번호 53의 VH를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 56의 VH를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 59의 VH를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 262의 VH를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 263의 VH를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 264의 VH를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 273, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 또는 398의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
특정 구현예에서, 벡터는 서열번호 82의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 85의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 87의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 271의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 272의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 273의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27의 VH를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 262, 263, 264, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 또는 382의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 271, 272, 273, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 또는 398의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 다음 서열번호의 VH 및 VL을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다:
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
k) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL;
m) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
특정 구현예에서, 벡터는 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 벡터는 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 다음 서열번호의 VH 및 VL을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다:
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 274, 275, 또는 276의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 18의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 19의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 20의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 21의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 22의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 23의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 24의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 25의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 26의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 27의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 203의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 204의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 205의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 206의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 207의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 208의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 209의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 210의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 211의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 212의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 213의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 214의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 215의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 216의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 217의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 218의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 219의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 220의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 221의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 274의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 275의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 276의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 본 개시의 임의의 CAR, 또는 이의 기능적 부분 또는 기능적 변이체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 8, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 274, 275, 또는 276의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 213의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 214의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 215의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 217의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 219의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 221의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 274의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 275의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 서열번호 276의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명의 하나 이상의 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. "숙주 세포"는 벡터가 도입된 세포를 지칭한다. 용어 숙주 세포는 특정 대상 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손, 및 특정 대상 세포로부터 생성된 안정한 세포주 또한 지칭하고자 함이 이해된다. 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 후세대에서 특정 변형이 발생할 수 있기 때문에, 이러한 후손이 모세포와 동일하지 않을 수 있지만, 이러한 세포는 본원에서 사용되는 용어 "숙주 세포"의 범위 내에 여전히 포함된다. 이러한 숙주 세포는 진핵 세포, 원핵 세포, 식물 세포, 또는 고세균(archeal) 세포일 수 있다. 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 간균강(bacilli), 예컨대 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 및 다른 장내세균과(enterobacteriaceae), 예컨대 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia), 및 다양한 슈도모나스(Pseudomonas) 종은 원핵 숙주 세포의 예이다. 다른 미생물, 예컨대 효모는 또한 발현에 유용하다. 사카로미세스(Saccharomyces)(예를 들어, S. 세레비시아이(S. cerevisiae)) 및 피키아(Pichia)는 적절한 효모 숙주 세포의 예이다. 예시적인 진핵 세포는 포유동물, 곤충, 조류, 또는 다른 동물 기원의 것일 수 있다. 포유류 진핵 세포는 불멸화 세포주, 예컨대 하이브리도마 또는 골수종 세포주, 예컨대 SP2/0(American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA, CRL-1581), NS0(European Collection of Cell Cultures (ECACC), Salisbury, Wiltshire, UK, ECACC No. 85110503), FO(ATCC CRL1646), 및 Ag653(ATCC CRL-1580) 뮤린 세포주를 포함한다. 예시적인 인간 골수종 세포주는 U266(ATTC CRL-TIB196)이다. 다른 유용한 세포주는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 예컨대 CHO-K1SV(Lonza Biologics, Walkersville, MD), CHO-K1(ATCC CRL-61), 또는 DG44로부터 유래된 것을 포함한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33 결합 단백질의 생성 방법으로서, 본 개시의 숙주 세포를 K2 결합단백질이 발현되는 조건에서 배양하고, 숙주 세포에 의해 생성된 CD33 결합 단백질을 회수하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 단백질 생성 방법 및 이의 정제 방법은 알려져 있다. (화학적으로 또는 재조합적으로) 합성되면, CD33 결합 단백질은 황산암모늄 침전, 친화성 컬럼, 컬럼 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 정제, 겔 전기영동 등을 포함한 표준 절차에 따라 정제될 수 있다(일반적으로 문헌[Scopes, Protein Purification (Springer- Verlag, N.Y., (1982))] 참조). 대상 단백질은 실질적으로 순수할 수 있으며, 예를 들어 적어도 약 80% 내지 85% 순수하거나, 적어도 약 85% 내지 90% 순수하거나, 적어도 약 90% 내지 95% 순수하거나, 또는 적어도 약 98% 내지 99%, 또는 그 이상으로 순수할 수 있는데, 예를 들어 대상 단백질 이외의 세포 잔해, 거대분자 등과 같은 오염물이 없다.
본 개시의 CD33 결합 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 표준 분자 생물학 방법을 사용하여 벡터 내로 혼입될 수 있다. 숙주 세포 형질전환, 배양, 항체 발현, 및 정제는 잘 알려진 방법을 사용하여 행해진다.
따라서, 본 발명은 본 발명의 폴리펩티드를 암호화하는 본 발명의 뉴클레오티드를 발현시키는 단계를 포함하는, 폴리펩티드의 생성 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 암호화한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 암호화한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 암호화한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 262의 VH 및 서열번호 82의 VL을 암호화한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 암호화한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 암호화한다.
본 방법의 특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 53의 VH를 포함하는 폴리펩티드 및 서열번호 82의 VL을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 56의 VH를 포함하는 폴리펩티드 및 서열번호 85의 VL을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 59의 VH를 포함하는 폴리펩티드 및 서열번호 87의 VL을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 262의 VH를 포함하는 폴리펩티드 및 서열번호 271의 VL을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 263의 VH를 포함하는 폴리펩티드 및 서열번호 272의 VL을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 264의 VH를 포함하는 폴리펩티드 및 서열번호 273의 VL을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다.
폴리펩티드가 상이한 핵산에 의해 암호화되는 별개의 사슬로 형성되는 경우, 본 발명은 본 발명의 폴리펩티드를 암호화하는 본 발명의 뉴클레오티드를 발현시키는 단계를 포함하는, 폴리펩티드 생산 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 53의 VH를 포함하는 폴리펩티드를 암호화하고, 본 발명의 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 82의 VL을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 본 발명의 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 56의 VH를 포함하는 폴리펩티드를 암호화하고, 본 발명의 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 85의 VL을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 본 발명의 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 59의 VH를 포함하는 폴리펩티드를 암호화하고, 본 발명의 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 87의 VL을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 본 발명의 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 262의 VH를 포함하는 폴리펩티드를 암호화하고, 본 발명의 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 271의 VL을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 본 발명의 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 263의 VH를 포함하는 폴리펩티드를 암호화하고, 본 발명의 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 272의 VL을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 다른 구현예에서, 본 발명의 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 264의 VH를 포함하는 폴리펩티드를 암호화하고, 본 발명의 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 273의 VL을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다.
변형된 뉴클레오티드를 사용하여 본 개시의 폴리뉴클레오티드를 생성할 수 있다. 예시적인 변형된 뉴클레오티드는 5-플루오로우라실, 5-브로모우라실, 5-클로로우라실, 5-요오도우라실, 하이포크산틴, 크산틴, 4-아세틸시토신, 5-(카복시하이드록시메틸) 우라실, 카복시메틸아미노메틸-2-티오우리딘, 5-카복시메틸아미노메틸우라실, 디하이드로우라실, N6-치환된 아데닌, 7-메틸구아닌, 5-메틸아미노메틸우라실, 5-메톡시아미노메틸2-티오우라실, 베타-D-만노실퀘오신, 5″-메톡시카복시메틸우라실, 5-메톡시우라실, 2-메틸티오-N6-아이소펜테닐아데닌, 우라실-5-옥시아세트산(v), 위부톡소신, 슈도우라실, 퀘오신, 베타-D-갈락토실퀘오신, 이노신, N6-아이소펜테닐아데닌, 1-메틸구아닌, 1-메틸이노신, 2,2-디메틸구아닌, 2-메틸아데닌, 2-메틸구아닌, 3-메틸시토신, 5-메틸시토신, 2-티오시토신, 5-메틸-2-티오우라실, 2-티오우라실, 4-티오우라실, 5-메틸우라실, 우라실5-옥시아세트산 메틸에스테르, 3-(3-아미노-3-N-2-카복시프로필) 우라실, 및 2,6-디아미노퓨린이다.
약학적 조성물/투여
본 개시는 또한 본 개시의 CD33 결합 단백질 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
치료적 용도를 위하여, 본 개시의 CD33 결합 단백질은 약학적으로 허용 가능한 담체 중에 활성 성분으로서 항체의 유효량을 함유하는 약학적 조성물로서 제조될 수 있다. "담체"는 본 발명의 항체와 함께 투여되는 희석제, 보강제, 부형제, 또는 비히클을 지칭한다. 이러한 비히클은 액체, 예컨대 물 및 석유, 동물, 야채 또는 합성 기원의 오일을 포함하는 오일, 예컨대 땅콩유, 대두유, 미네랄 오일, 참기름 등일 수 있다. 예를 들어, 0.4% 염수 및 0.3% 글리신이 사용될 수 있다. 이들 용액은 살균 용액이며, 일반적으로 미립자 물질이 없다. 이들은 통상적인, 잘 알려진 멸균 기법(예를 들어, 여과)에 의해 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조절제 및 완충제, 안정화제, 증점제, 윤활제, 및 착색제 등과 같은 생리학적 조건을 근사화하는 데 필요한 약학적으로 허용 가능한 보조 물질을 함유할 수 있다. 이러한 약학적 제형에서 본 발명의 항체의 농도는 약 0.5 중량% 미만부터, 통상 적어도 약 1 중량%부터 많게는 15 또는 20 중량%까지 변동될 수 있으며, 선택된 투여 방식에 따라, 주로 필요 용량, 유체 부피, 점도 등에 기초하여 선택될 수 있다. 다른 인간 단백질, 예를 들어 인간 혈청 알부민을 포함하는 적합한 비히클 및 제형은, 예를 들어 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Troy, D.B. ed., Lipincott Williams and Wilkins, Philadelphia, PA 2006, Part 5, Pharmaceutical Manufacturing pp 691-1092, 특히 pp. 958-989 참조]에 기재되어 있다.
본 개시의 CD33 결합 단백질의 투여 방식은 비경구 투여, 예를 들어 진피내, 근육내, 복막내, 정맥내, 또는 피하, 경점막(구강, 비강내, 질내, 직장) 또는 당업자에 의해 이해되는 다른 수단과 같은 임의의 적합한 경로일 수 있으며, 이는 당업계에 잘 알려진 바와 같다.
본 발명의 개시의 CD33 결합 단백질은 또한 암과 같은 질환의 발병 위험을 줄이기 위해 예방적으로 투여될 수 있다.
따라서, 근육내 주사를 위한 본 발명의 약학적 조성물은 1 ml의 살균 완충수 및 약 1 ng 내지 약 100 mg, 약 50 ng 내지 약 30 mg, 또는 약 5 mg 내지 약 25 mg의 본 발명의 개시의 CD33 결합 단백질을 함유하도록 제조될 수 있다.
본 개시의 구현예에서, CAR-발현 세포는 조성물, 예를 들어 CAR-발현 세포 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 적합한 약학적 조성물(들)로 제공될 수 있다. 일 양태에서, 본 개시는 기재된 CAR 중 하나 이상을 발현하는 림프구의 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 본 개시의 약학적 조성물은 하나 이상의 약학적으로 또는 생리학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 또는 희석제와 조합하여, 본원에 기재된 바와 같은 CAR-발현 세포, 예를 들어 복수의 CAR-발현 세포를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 활성 성분 이외의, 대상체에게 비독성인 약학적 조성물 내의 성분일 수 있다.
약학적으로 허용 가능한 담체는 완충제, 부형제, 안정제, 또는 보존제를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체의 예에는 생리학적으로 상용성인 용매, 분산 매질, 코팅, 항세균제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등, 예컨대 염, 완충제, 산화방지제, 당류, 수성 또는 비수성 담체, 보존제, 습윤제, 계면활성제, 또는 유화제, 또는 이들의 조합이 있다. 약학적 조성물 중 약학적으로 허용 가능한 담체(들)의 양은 담체(들)의 활성 및 목적하는 제형의 특성, 예컨대 안정성 및/또는 최소 산화에 기반하여 실험적으로 결정될 수 있다.
약학적 조성물은 완충제, 예컨대 아세트산, 시트르산, 포름산, 숙신산, 인산, 탄산, 말산, 아스파르트산, 히스티딘, 붕산, 트리스 완충제, HEPPSO, HEPES, 중성 완충 식염수, 인산 완충 식염수 등; 탄수화물, 예컨대 글루코스, 만노스, 수크로스 또는 덱스트란, 만니톨; 단백질; 폴리펩티드 또는 아미노산, 예컨대 글리신; 항산화제; 킬레이트제, 예컨대 EDTA 또는 글루타티온; 보조제(예를 들어, 수산화알루미늄); 항균제 및 항진균제; 및 방부제를 포함할 수 있다.
본 개시의 약학적 조성물은 비경구 또는 경구 투여의 다양한 수단을 위해 제형화될 수 있다. 일 구현예에서, 조성물은 주입 또는 정맥내 투여를 위해 제형화될 수 있다. 본원에 개시된 약학적 조성물은, 예를 들어 바람직한 pH로 완충될 수 있는 멸균 액체 조제물, 예를 들어 등장성 수용액, 에멀젼, 현탁액, 분산액, 또는 점성 조성물로서 제공될 수 있다. 경구 투여에 적합한 제형은 액체 용액, 캡슐, 사셰, 정제, 로젠지, 및 트로키, 적절한 액체 중의 분말 액체 현탁액, 및 에멀젼을 포함할 수 있다.
약학적 조성물과 관련하여 본원에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용 가능한"은 동물 및/또는 인간에서 사용하기 위해 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 미국 약전 또는 기타 일반적으로 인정되는 약전에 열거됨을 의미한다.
치료 방법 및 용도
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.
특정 구현예에서, 해당 방법은 본 개시의 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 TRGV9에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질(예를 들어, 이중특이적 단백질)의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv이고, 임의로, TRGV9에 결합하는 제2 결합 도메인은 VHH이다.
일부 구현예에서, 해당 방법은 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 TRGV9에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질(예를 들어, 이중특이적 단백질)의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하고, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
이러한 특정 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv이고, 임의로, TRGV9에 결합하는 제2 결합 도메인은 VHH이다.
일부 구현예에서, 해당 방법은 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 TRGV9에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질(예를 들어, 이중특이적 단백질)의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 213, 216, 219, 274, 275, 또는 276의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, TRGV9에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 면역접합체의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 특정 구현예에서, 약학적 조성물은 본 개시의 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 TRGV9에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질(예를 들어, 이중특이적 단백질)을 포함한다. 일부 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv이고, 임의로, TRGV9에 결합하는 제2 결합 도메인은 VHH이다.
일부 구현예에서, 해당 방법은 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 TRGV9에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질(예를 들어, 이중특이적 단백질)을 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하고, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
이러한 특정 구현예에서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv이고, 임의로, TRGV9에 결합하는 제2 결합 도메인은 VHH이다.
일부 구현예에서, 해당 방법은 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 TRGV9에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질(예를 들어, 이중특이적 단백질)을 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하고, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 213, 216, 219, 274, 275, 또는 276의 아미노산 서열을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, TRGV9에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH이다.
본 개시는 또한 림프구 주입을 사용하여 암이 있거나 암에 걸릴 위험이 있는 대상체의 치료를 위해 CAR을 발현하는 유전적으로 변형된 T 세포를 투여하는 방법을 제공한다.
적어도 하나의 구현예에서, 자가 림프구 주입이 치료에 사용된다. 자가 PBMC는 치료를 필요로 하는 대상체로부터 수집되고 T 세포는 본원에 기재되고 당업계에 알려진 방법을 사용하여 활성화 및 확장된 후, 대상체에 다시 주입된다.
일 양태에서, 본 개시는 일반적으로 암이 발병할 위험이 있는 대상체의 치료에 관한 것이다. 본 발명은 또한 화학요법 및/또는 면역요법이 대상체에서 유의한 면역억제를 야기하여, 대상체에서 암이 발병할 위험을 증가시키는 악성종양 또는 자가면역 질환을 치료하는 것을 포함한다.
본 개시는 또한 비암성 병태를 치료하기 위해 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 비암성 병태를 치료하기 위해 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 비암성 병태를 치료하기 위해 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 비암성 병태를 치료하기 위해 본 개시의 면역접합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 비암성 병태를 치료하기 위해 본 개시의 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 비암성 병태를 치료하기 위해 본 개시의 CAR을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 예방하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 임의의 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 예방하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 예방하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 예방하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 면역접합체의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 예방하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 임의의 항원 결합 도메인을 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 CD33 발현 암을 예방하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 임의의 항원 결합 도메인을 대상체에게 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질을 대상체에게 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질을 대상체에게 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 본 개시의 CD33에 결합하는 임의의 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 대상체에게 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키기에 충분한 기간 동안 본 개시의 면역접합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 개시는 또한 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키기에 충분한 기간 동안 본 개시의 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, CD33 발현 암은 혈액암이다.
일부 구현예에서, CD33 발현 암은 백혈병이다.
일부 구현예에서, CD33 발현 암은 림프종이다.
일부 구현예에서, CD33 발현 암은 다발성 골수종이다.
일부 구현예에서, CD33 발현 암은 급성 골수성 백혈병(AML)이다.
일부 구현예에서, CD33 발현 암은 골수이형성 증후군(MDS)이다.
일부 구현예에서, CD33 발현 암은 급성 림프구성 백혈병(ALL)이다.
일부 구현예에서, CD33 발현 암은 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)이다.
일부 구현예에서, CD33 발현 암은 만성 골수성 백혈병(CML)이다.
일부 구현예에서, CD33 발현 암은 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물(DPDCN)이다.
특정 구현예에서, CD33 발현 암은 급성 골수성 백혈병(AML)이다.
일부 구현예에서, 암은 재발성, 불응성, 악성, 또는 이들의 임의의 조합이다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 대상체에게 혈액암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 혈액암(예를 들어, 백혈병(특히, AML), 림프종, 또는 다발성 골수종)을 치료하는 방법을 제공하고, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL;
서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL;
서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL; 또는
서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함한다. 다른 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 포함한다.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 대상체에게 혈액암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 혈액암(예를 들어, 백혈병(특히, AML), 림프종, 또는 다발성 골수종)을 치료하는 방법을 제공하고, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 대상체에게 혈액암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 혈액암(예를 들어, 백혈병(특히, AML), 림프종, 또는 다발성 골수종)을 치료하는 방법을 제공하고, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
서열번호 18의 VH;
서열번호 19의 VH;
서열번호 20의 VH;
서열번호 21의 VH;
서열번호 22의 VH;
서열번호 23의 VH;
서열번호 24의 VH;
서열번호 25의 VH;
서열번호 26의 VH; 또는
서열번호 27의 VH.
본 개시는 또한 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 대상체에게 혈액암을 치료하기에 충분한 기간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 혈액암(예를 들어, 백혈병(특히, AML), 림프종, 또는 다발성 골수종)을 치료하는 방법을 제공하는 것으로, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 274, 275, 또는 276의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 213, 216, 219, 274, 275, 또는 276의 아미노산 서열을 포함한다.
일 양태에서, 본 개시는 기재된 CAR 중 하나 이상을 발현하는 림프구의 양을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암의 예방 방법을 제공한다.
일 양태에서, 본 개시는, 림프구가 대상체에서 암 세포의 사멸을 유도하거나 조절하도록, 기재된 CAR 중 하나 이상을 발현하는 림프구의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 개시는, 림프구가 대상체에서 혈액암의 사멸을 유도하도록, 본원에 기재된 CAR 중 하나 이상을 발현하는 림프구의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암이 있는 대상체에서 종양 부담을 감소시키는 방법을 제공한다. 다른 양태에서, 본 개시는, 대상체의 생존이 연장될 수 있도록, 기재된 CAR 중 하나 이상을 발현하는 림프구의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암이 있는 대상체의 생존을 증가시키는 방법을 제공한다. 일반적으로, CAR(들)을 발현하는 림프구는 대상체에서 혈액암 세포의 사멸을 유도하고, 대상체에서 혈액 종양/암 세포의 감소 또는 근절을 가져온다. 표적화될 수 있는 전이성 병변을 포함하여 혈액암의 비제한적 목록은 백혈병, 림프종, 다발성 골수종을 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액암은 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 만성 골수성 백혈병(CML), 또는 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물(DPDCN)이다.
일 양태에서, 림프구가 대상체에서 암 세포의 사멸을 유도하도록, CD33 항원에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 갖는 CAR을 발현하는 림프구의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암이 있는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.
일 양태에서, 림프구가 암 세포의 사멸을 유도하도록, 암 세포를 기재된 CAR 중 하나 이상을 발현하는 림프구와 접촉시키는 단계를 포함하는, 암 세포를 표적화하여 사멸하는 방법이 개시된다. 표적화될 수 있는 혈액암 세포를 포함하여 암 세포의 비제한적인 목록은 백혈병, 림프종, 다발성 골수종을 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액암은 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 만성 골수성 백혈병(CML), 또는 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물(DPDCN)이다.
치료적 유효량이 지시될 때, 투여되는 본 개시의 CAR 또는 CAR-T의 정확한 양은 대상체의 연령, 체중, 종양 크기, 감염 또는 전이의 정도, 및 병태의 개별적 차이를 고려하여 의사에 의해 결정될 수 있다. 일반적으로, 본원에 기재된 T 세포를 포함하는 약학적 조성물은 약 104 내지 약 1010개 세포/㎏(체중), 일부 경우에, 약 105 내지 약 106개 세포/㎏(체중)(이러한 범위 내의 모든 정수 값 포함)의 투여량으로 투여될 수 있음이 언급될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 T 세포를 포함하는 약학적 조성물은 약 106개 세포/㎏(체중)의 투여량으로 투여될 수 있다. T 세포 조성물은 또한 이러한 투여량으로 다회 투여될 수 있다. 세포는 면역요법에서 통상적으로 알려져 있는 주입 기법을 사용하여 투여될 수 있다(예를 들어, 문헌[Rosenberg et al., New Eng. J. of Med. 319:1676, 1988] 참조).
본 발명의 CAR-T와 관련하여 유용한 전달 시스템은, T 세포 조성물의 전달은 치료하고자 하는 부위의 감작화 전 및 이를 유발하기에 충분한 시간을 두고서 일어나도록, 시한 방출(time-released), 지연 방출, 및 지속 방출 전달 시스템을 포함할 수 있다. 조성물은 다른 치료제 또는 요법과 함께 사용될 수 있다. 이러한 시스템은 조성물의 반복 투여를 피할 수 있으며, 이에 따라 대상체 및 의사의 편의성을 증가시킬 수 있고, 본 발명의 특정 조성물 구현예에 특히 적합할 수 있다.
많은 유형의 방출 전달 시스템이 사용 가능하며 당업자에게 알려져 있다. 이러한 시스템은 폴리(락타이드-글리콜라이드), 코폴리옥살레이트, 폴리에스테르아미드, 폴리오르토에스테르, 폴리카프로락톤, 폴리하이드록시부티르산, 및 폴리무수물과 같은 중합체 기반 시스템을 포함한다. 약물을 함유하는 전술한 중합체의 마이크로캡슐은, 예를 들어, 미국 특허 5,075,109호에 기재되어 있다. 전달 시스템은 또한 스테롤, 예컨대 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르, 및 지방산 또는 중성 지방, 예컨대 모노-, 디-, 및 트리-글리세라이드를 포함하는 지질인 비-중합체 시스템; 실라스틱 시스템(sylastic system); 펩티드 기반 시스템; 하이드로겔 방출 시스템; 왁스 코팅; 통상적인 결합제 및 부형제를 사용하는 압축 정제; 부분 융합된 임플란트 등을 포함한다. 구체적인 예는 다음을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다: (a) 활성 조성물이 미국 특허 4,452,775호; 4,667,014호; 4,748,034호; 및 5,239,660호에 기재된 바와 같은 매트릭스 내에 형태로 함유되어 있는 침식 시스템 및 (b) 활성 성분이 미국 특허 3,854,480호 및 3,832,253호에 기재된 바와 같은 중합체로부터 제어된 속도로 침투하는 확산 시스템. 또한, 펌프-기반 하드웨어 전달 시스템이 사용될 수 있으며, 이 중 일부는 삽입을 위해 조정된다.
특정 양태에서, 활성화된 T 세포를 대상체에게 투여하고, 이어서 후속으로 혈액을 재채혈하고(또는 성분채집술이 수행됨), 본 개시에 따라 T 세포를 활성화하고, 이러한 활성화되고 확장된 T 세포를 대상체에게 재주입하는 것이 바람직할 수 있다. 이 과정은 매 수주마다 다회 수행될 수 있다. 특정 양태에서, T 세포는 10 cc 내지 400 cc의 채혈물로부터 활성화될 수 있다. 특정 양태에서, T 세포는 20 cc, 30 cc, 40 cc, 50 cc, 60 cc, 70 cc, 80 cc, 90 cc, 또는 100 cc의 채혈물로부터 활성화된다.
CAR-T 세포 및 조성물의 투여는 임의의 방식, 예를 들어 비경구 투여 또는 비경구 이외의 투여에 의해 수행될 수 있으며, 이에는 에어로졸 흡입, 주사, 주입, 섭취, 수혈, 삽입, 또는 이식에 의한 투여가 포함된다. 예를 들어, 본원에 기재된 CAR-T 세포 및 조성물은 환자에게 동맥 경유(trans-arterially), 피내, 피하, 종양내, 수내, 결절내, 근육내, 정맥내(i.v.) 주사에 의해, 또는 복강내 투여될 수 있다. 일 양태에서, 본 개시의 조성물은 i.v. 주사에 의해 투여된다. 일 양태에서, 본 발명의 조성물은 대상체에게 피내 또는 피하 주사에 의해 투여된다. T 세포의 조성물은, 예를 들어, 종양, 림프절, 조직, 기관, 또는 감염 부위 내로 직접 주사될 수 있다.
투여는 자가 또는 비자가일 수 있다. 예를 들어, CD33-특이적 CAR을 발현하는 면역반응성 세포가 하나의 대상체로부터 수득되고, 동일한 대상체 또는 상이한 적합 대상체에게 투여될 수 있다. 본 개시의 말초 혈액 유래 T 세포, 또는 확장된 T 세포(예를 들어, 생체내, 생체외, 또는 시험관내 유래)는, 예를 들어 정맥내 주사, 국부 주사, 전신 주사, 카테터 투여, 또는 비경구 투여를 통해 투여될 수 있다.
특정 구현예에서, 대상체는 백혈구성분채집술(leukapheresis)을 거칠 수 있고, 여기서 백혈구를 생체외에서 수집, 농축, 또는 고갈시켜 관심 세포, 예를 들어 T 세포를 선택하고/하거나 단리한다. 이들 T 세포 단리물은 당업계에 알려진 방법에 의해 확장되고, 본 개시의 하나 이상의 CAR 구성체가 도입되어 CAR-T 세포를 생성할 수 있도록 처리될 수 있다. 이를 필요로 하는 대상체는 후속적으로 고용량 화학요법에 이어 말초 혈액 줄기 세포 이식을 이용한 표준 치료를 받을 수 있다. 특정 양태에서, 이식 후에 또는 이식과 동시에, 대상체는 확장된 CAR-T 세포의 주입을 제공받는다. 일 양태에서, 확장된 세포는 수술 전 또는 수술 후에 투여된다.
악성종양이 있는 환자에게 투여되는 투여량은 치료되는 질환을 경감시키거나 적어도 부분적으로 저지시키기에 충분하다("치료적 유효량"). 대상체에게 투여되는 상기 치료제의 투여량은 치료되는 병태의 정확한 성질 및 치료제의 수용자에 따라 변동될 것이다. 인간 투여를 위한 투여량의 규모는 당업계에서 일반적으로 허용되는 관례에 따라 수행될 수 있다.
본 발명의 CAR T 세포는 생체내 T 세포 확장을 거칠 수 있고, 혈액 및 골수 중에서 연장된 기간 동안 고수준으로 지속되는 CD33-특이적 기억 세포를 확립할 수 있다. 일부 경우에, 대상체 내로 주입된 본 발명의 CAR T 세포는 진행성 화학요법-내성 암이 있는 대상체의 생체내에서 암 세포, 예를 들어 혈액암 세포를 제거할 수 있다.
일 구현예에서, 본 개시의 CAR은, 예를 들어 시험관내 전사를 사용하여 T 세포 내로 도입되고, 대상체(예를 들어, 인간)는 본 개시의 CAR-T 세포의 초기 투여, 및 CAR-T 세포의 1회 이상의 후속 투여를 제공받고, 1회 이상의 후속 투여는 이전 투여 후 15일, 예를 들어 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 또는 2일 미만에 투여된다. 일 구현예에서, CAR-T 세포의 주당 1회 초과의 투여가 대상체(예를 들어, 인간)에게 투여되며, 예를 들어 CAR-T 세포의 2, 3, 또는 4회 투여가 주당 투여된다. 일 구현예에서, 대상체는 CAR-T 세포의 주당 1회 초과의 투여(예를 들어, 주당 2, 3, 또는 4회 투여)(본원에서 주기로도 지칭됨)를 받은 후, 1주간 CAR-T 세포 투여가 없으며, 이어서 CAR-T 세포의 1회 이상의 추가 투여(예를 들어, CAR-T 세포의 주당 1회 초과의 투여)가 대상체에게 투여된다. 다른 구현예에서, 대상체는 한 주기 초과의 CAR-T 세포를 제공받고, 매 주기 사이의 기간은 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 또는 3일 미만이다. 일 구현예에서, CAR-T 세포는 주당 3회 투여를 위해 격일로 투여된다. 일 구현예에서, CAR-T 세포는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8주 또는 그 이상의 주 동안 투여된다.
일 구현예에서, 투여는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 2주, 3주, 1개월, 5주, 6주, 7주, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 또는 그 이상 후에 반복될 수 있다. 만성 투여인 바와 같이, 반복된 치료 과정이 또한 가능하다. 반복 투여는 동일한 용량으로 또는 상이한 용량으로 행해질 수 있다.
CAR-T 세포는 본 발명의 방법에서 유지 요법(maintenance therapy)에 의해, 예를 들어 6개월 또는 그 이상의 기간 동안 주 1회 투여될 수 있다.
일 구현예에서, CAR-T 세포는 렌티바이러스 바이러스 벡터, 예컨대 렌티바이러스를 사용하여 생성된다. 이러한 바이러스 벡터를 사용하여 생성된 CAR-T 세포는 일반적으로 안정한 CAR 발현을 가질 것이다.
일 구현예에서, CAR-T 세포는 형질도입 후 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15일 동안 CAR 벡터를 일시적으로 발현한다. CAR의 일시적 발현은 RNA CAR 벡터 전달에 의해 영향을 받을 수 있다. 일 구현예에서, CAR RNA는 전기천공에 의해 T 세포 내로 형질도입된다.
환자에게 일시적 CAR 요법 과정 동안 항-CAR 항체 반응이 발생될 위험이 높은 경우(예컨대, RNA 형질도입에 의해 생성된 것들), CAR-T 주입 중단은 10일 초과 내지 14일 동안 지속되어서는 안 된다.
조합 요법
본 개시의 CD33 결합 단백질은 적어도 하나의 추가 치료제와 조합으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 추가 치료제는 수술, 화학요법, 또는 방사선, 또는 이들의 임의의 조합이다.
일부 구현예에서, 하나의 치료의 전달은 제2 전달이 시작될 때 여전히 일어나고 있으며, 이로써 투여 면에서 중첩이 존재한다. 이는 때때로 본원에서 "동시" 또는 "병행 전달"로 지칭된다. 다른 구현예에서, 하나의 치료의 전달은 다른 치료의 전달이 시작되기 이전에 종료된다. 어느 경우든 일부 구현예에서, 치료는 조합 투여로 인해 더욱 효과적이다. 예를 들어 제2 치료가 보다 효과적이고, 예를 들어 더 적은 제2 치료에 의해 등가의 효과가 관찰되거나, 또는 제1 치료의 부재 하에 제2 치료가 투여된 경우에 관찰되는 것보다 더 큰 정도로 제2 치료가 증상을 감소시키거나, 또는 제1 치료에 의해 유사한 상황이 관찰된다. 일부 구현예에서, 전달은, 증상의 감소, 또는 장애와 관련된 다른 파라미터가 다른 것의 부재 하에 전달된 하나의 치료에 의해 관찰되는 것보다 더 크도록 하는 것이다. 2가지의 치료의 효과는 부분적으로 상가적이거나, 완전히 상가적이거나, 또는 상가적인 것보다 클 수 있다. 전달은, 전달된 제1 치료의 효과가 제2 치료가 전달될 때 여전히 검출 가능하도록 하는 것일 수 있다.
일 구현예에서, 인자와 같은 다른 치료제는 인터류킨, 뿐만 아니라 콜로니 자극 인자, 예컨대 G-, M-, 및 GMCSF, 및 인터페론을 포함하지만 이에 한정되지 않는 CAR-T 세포와 같은 CD33 결합 단백질 이전, 이후, 또는 이와 동일한 시간에(동시에) 투여될 수 있다.
본원에 기재된 CAR-발현 세포와 같은 CD33 결합 단백질 및 적어도 하나의 추가 치료제는 동시에, 동일하거나 별개의 조성물로, 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 순차적 투여의 경우, 본원에 기재된 CAR-발현 세포와 같은 CD33 결합 단백질이 먼저 투여될 수 있고, 추가 제제가 두 번째로 투여될 수 있거나, 투여 순서가 역전될 수 있다.
추가 구현예에서, 본원에 기재된 CAR-발현 세포와 같은 CD33 결합 단백질은 수술, 방사선, 화학요법, 면역억제제, 항체, 또는 기타 면역제거제(immunoablative agent)와 조합으로 치료 요법에서 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 대상체에는 CAR-발현 세포의 활성을 향상시키는 작용제가 투여될 수 있다. 예를 들어, 일 구현예에서, 제제는 억제성 분자를 억제하는 제제일 수 있다.
하기 실시예는 본원에 개시된 실시예의 일부를 추가로 설명하기 위해 제공된다. 실시예는 개시된 구현예를 한정하는 것이 아닌, 예시하기 위한 것이다.
실시예
본 발명은 또한 하기의 실시예에 의해 기술되고 입증된다. 그러나, 본 명세서의 어느 곳에서든 이러한 및 다른 실시예의 사용은 단지 예시이며, 본 발명 또는 임의의 예시된 용어의 범위 및 의미를 제한하고자 하는 것이 아니다. 마찬가지로, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 특정 바람직한 구현예에 제한되지 않는다. 사실, 본 명세서를 읽을 때, 본 발명의 다수의 변형 및 변경이 당업자에게 명백할 수 있으며, 본 발명의 사상 또는 범위를 벗어나지 않는 한 이러한 변형이 이루어질 수 있다. 따라서, 본 발명은 청구범위에 부여된 등가물의 전체 범위와 함께 첨부된 청구범위의 조건에 의해서만 제한되어야 한다.
실시예 1: 항원 생성
인간 CD33 세포외 도메인(ECD) 또는 이의 하위 도메인을 암호화하는 발현 구성체는 골수 세포 표면 항원 CD33(Uniprot 수탁번호 P20138)의 서열 및 6X His 태그 서열이 있는 도메인 주석 또는 C-말단에 6X His 태그 서열이 있는 인간 혈청 알부민(HSA)의 C34S 변이체에 대한 융합 단백질에 기반하여 설계되었다. CD33(ECD) 또는 시노몰구스 원숭이(마카크 원숭이, Macaca fascicularis)의 하위 도메인을 암호화하는 유사한 발현 구성체는 NCBI 수탁번호 XP_005590138.1을 기반으로 설계되었다. 생성된 항원의 아미노산 서열은 표 3에 나타나 있다.
인간 및 시노 CD33 전장 ECD 또는 하위 도메인 발현 구성체를 제조사 프로토콜에 따라 Expifectamine을 사용하여 HEK293 유래 세포, Expi293(Gibco/Thermo Fisher Scientific) 내로 일시적으로 형질감염시켰다. 세포를 채취하기 전에 오비탈 셰이커에서 8% CO2로 37℃에서 5일 동안 인큐베이션하였다. 발현된 세포를 원심분리로 제거하고 his 태그가 있는 가용성 CD33 단백질을 Ni Sepharose 6 Fast Flow 수지(GE Healthcare)를 사용하여 고정화 금속 친화성 크로마토그래피를 통해 배지에서 정제한 후, 제조업체 사양에 따라 Zeba™ Spin Desalting 컬럼(7K MWCO, 10 mL; ThermoScientific 카탈로그 번호: 89893)을 사용하여 칼슘 또는 마그네슘이 없는 1X Dubelcco의 Phosphate Saline 완충액(pH 7.2)으로 버퍼 교환하였다.
[표 3]
Figure pat00009
Figure pat00010
Figure pat00011
실시예 2. 항-CD33 항체의 생성
다음과 같이 OMT(Open Monoclonal Technologies) 또는 Alexis Transgenic 마우스 기술을 사용하여 항체를 생성하였다. AlivaMab 및 OMT 형질전환 마우스 모두 인간/마우스 면역글로불린을 생성하도록 조작하였다. 재조합 인간 CD33 단백질(표 1의 선별된 항원)로 AlivaMab 또는 OMT 형질전환 마우스를 면역화시켰다. 2차 림프 기관에서 림프구를 추출하고, 하이브리도마 생성을 위해 FO 마우스 골수종 세포주와 융합하거나 FACS를 통해 단일 세포 분류를 수행하였다. 과발현 인간 CD33 ECD HEK 세포에 대한 결합에 대해 하이브리도마 상청액을 MSD 전기화학발광으로 스크리닝하였다. 스크리닝으로부터 확인된 샘플을 모 HEK 세포(음성 신호)와 비교하여 과발현 인간 CD33 ECD HEK 세포(양성 신호)에 대한 결합에 대해 FACS로 추가 검정하였다. ELISA를 사용하여 확인된 세포 결합제를 경쇄 이소형화하였다. 재조합 인간 CD33 단백질에 대한 결합에 대해 단일 세포 분류 상청액을 MSD 전기화학발광으로 스크리닝하였다. 목적하는 결합 프로파일을 가진 여러 히트를 선택하고 시퀀싱하였다.
V 영역 클로닝은 다음과 같이 수행하였다. Qiagen® RNeasy Plus Mini Kit로 정제된 RNA와 B 세포 용해물 모두 Smarter cDNA 합성 키트(Clontech, Mount View, CA)를 사용하여 cDNA 합성을 수행하는 데 사용하였다. cDNA 합성을 촉진하기 위해, oligodT를 사용하여 모든 메신저 RNA의 역전사를 프라이밍한 후, Smarter IIA 올리고뉴클레오티드로 "5' 캡핑"을 수행하였다. Smarter IIA 캡을 표적으로 하는 5' 프라이머 및 CH1의 공통 영역을 표적으로 하는 3' 프라이머를 사용하는 2단계 PCR 증폭을 사용하여 VH 및 VL 단편의 후속 증폭을 수행하였다. 즉, 각 50 μl PCR 반응은 20 μM의 정방향 및 역방향 프라이머 믹스, 25 μl의 PrimeStar Max DNA 중합효소 프리믹스(Clontech), 2 μl의 비정제된 cDNA, 및 21 μl의 이중 증류 H2O로 구성된다. 사이클링 프로그램은 94℃에서 3분간 실행으로 시작하여 35사이클(94℃에서 30초, 55℃에서 1분, 68℃에서 1분)이 이어지며 72℃에서 7분간 실행으로 종료된다. 2차 PCR은 각각의 Lonza 모 벡터(VH 및 VL)에서 각 영역에 "중첩"하는 15 bp 상보적 확장을 포함하는 VL 및 VH 2차 프라이머를 사용하여 수행하였다. 2차 PCR은 다음과 같은 프로그램으로 수행하였다: 94℃에서 3분; 35사이클(94℃에서 30초, 55℃에서 1분, 68℃에서 1분), 및 72℃에서 7분간 실행으로 종료된다. VL 유전자를 Lonza huIgK 또는 Lambda 벡터에, VH 유전자를 Lonza hu IgG1 벡터에 방향성 클로닝하기 위해 In-Fusion® HD Cloning Kit(Clontech, U.S.A.)를 사용하였다. In-Fusion® HD Cloning을 촉진하기 위해 In-Fusion® HD Cloning 수행 전에 PCR 생성물을 Cloning Enhancer로 처리하였다. 제조사의 프로토콜(Clonetech, U.S.A.)에 따라 클로닝 및 형질전환을 수행하였다. Mini-prep DNA에 대해 완전한 V-유전자 단편이 수득되었는지 확인하기 위해 Sanger 시퀀싱을 수행하였다.
상기 방법을 통해 생성된 각 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열을 표 4에 나타내었다.
[표 4]
Figure pat00012
Figure pat00013
Figure pat00014
Figure pat00015
Figure pat00016
표 4a는 AbM, Kabat, Chothia, IMGT, 및 Contact 시스템에 따라 정의된 바와 같이 C33B1522 항체(서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL을 갖는 항체)의 CDR 서열의 아미노산 서열을 나타낸다.
[표 4a]
Figure pat00017
표 4b는 AbM, Kabat, Chothia, IMGT, 및 Contact 시스템에 따라 정의된 바와 같이 C33B1477 항체(서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL을 갖는 항체)의 CDR 서열의 아미노산 서열을 나타낸다.
[표 4b]
Figure pat00018
표 4c는 AbM, Kabat, Chothia, IMGT, 및 Contact 시스템에 따라 정의된 바와 같이 C33B1475 항체(서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL을 갖는 항체)의 CDR 서열의 아미노산 서열을 나타낸다.
[표 4c]
Figure pat00019
표 4d는 AbM, Kabat, Chothia, IMGT, 및 Contact 시스템에 따라 정의된 바와 같이 C33B1517 항체(서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL을 갖는 항체)의 CDR 서열의 아미노산 서열을 나타낸다.
[표 4d]
Figure pat00020
표 4e는 AbM, Kabat, Chothia, IMGT, 및 Contact 시스템에 따라 정의된 바와 같이 C33B1516 항체(서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 갖는 항체)의 CDR 서열의 아미노산 서열을 나타낸다.
[표 4e]
Figure pat00021
표 4f는 AbM, Kabat, Chothia, IMGT, 및 Contact 시스템에 따라 정의된 바와 같이 C33B1481 항체(서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL을 갖는 항체)의 CDR 서열의 아미노산 서열을 나타낸다.
[표 4f]
Figure pat00022
다음과 같이 라마에서 항체를 생성하였다. 3마리의 라마에게 3회의 주사(0일차, 14일차, 및 28일차) 시 표 3의 hCD33-IgC2 항원을 피하 주사했으며, 첫 번째 주사는 Complete Freund's Adjuvant이고 후속 주사는 Incomplete Freund's Adjuvant였다. 첫 번째 주사에 이어 표 3의 hCD33-FL ECD 항원을 3회 주사하였다(61일차, 76일차, 및 91일차). 단일 B 세포 분류를 위한 PBMC를 14차, 35차, 및 86일차에 획득하고 동결하였다. 동결된 PBMC를 해동하고 비오틴화되거나 Alexa Fluor 647과 접합된 재조합 항원 베이트로 염색하였다. 항원 베이트는 재조합 인간 CD33-ECD 및 재조합 인간 CD33-IgC 도메인이었다. PE-표지된 Streptavidin(SA)을 사용하여 비오틴화된 베이트를 검출하였다. 항원 특이적 세포(두 항원 베이트 모두에 대해 양성)를 BD FACSAria Fusion 분류기를 사용하여 RLT 용해 완충액(Qiagen)에 직접 대량 분류하였다. 세포 용해물을 -80℃에서 동결하고 추가 처리를 위해 Genewiz로 배송하였다.
라마 vHH V-영역 클로닝 및 모노-Fc 융합 구성체 설계를 다음과 같이 수행하였다. RealTime Ready Cell Lysis Buffer(Roche)에서 B-세포를 용해하였다. 이어서 RNA를 RNeasy Plus® Mini Kit(Qiagen 74134)로 정제하였다. SuperScript® cDNA 키트(Invitrogen 18091-050)를 사용하여 cDNA 합성에 새로운 RNA를 직접 사용하였다. cDNA 합성을 촉진하기 위해, oligodT를 사용하여 모든 메신저 RNA의 역전사를 프라이밍하였다. CH2의 공통 영역을 표적으로 하는 라마 SP 및 3' 프라이머를 사용하는 2단계 PCR 증폭을 사용하여 VHH 단편의 후속 증폭을 수행하였다. 즉, 각 50 μl PCR 반응은 20 μM의 정방향 및 역방향 프라이머 믹스, 25 μl의 PrimeStar Max DNA 중합효소 프리믹스(Clontech), 2 μl의 비정제된 cDNA, 및 21 μl의 이중 증류 H2O로 구성되었다. 사이클링 프로그램은 94℃에서 3분간 실행으로 시작하여 35사이클(94℃에서 30초, 55℃에서 1분, 68℃에서 1분)이 이어지며 72℃에서 7분간 실행으로 종료된다.
1차 PCR의 VHH DNA를 겔 정제하였다. 2차 PCR은 각각의 Lonza 모 벡터에서 각 영역에 "중첩"하는 15 bp 상보적 확장을 포함하는 2차 프라이머를 사용하여 수행하였다. 2차 PCR은 다음과 같은 프로그램으로 수행하였다: 94℃에서 3분; 35사이클(94℃에서 30초, 55℃에서 1분, 68℃에서 1분), 및 72℃에서 7분간 실행으로 종료된다. 모노-Fc가 있는 Lonza 벡터에 방향성 클로닝하기 위해 In-Fusion® HD Cloning Kit(Clontech, U.S.A.)를 사용하였다. In-Fusion® HD Cloning을 촉진하기 위해 In-Fusion HD Cloning 수행 전에 PCR 생성물을 Cloning Enhancer로 처리하였다. 제조사의 프로토콜(Clonetech, U.S.A.)에 따라 클로닝 및 형질전환을 수행하였다. Mini-prep DNA에 대해 완전한 V-유전자 단편이 수득되었는지 확인하기 위해 Sanger 시퀀싱을 수행하였다.
상기 방법을 통해 생성된 라마 항체의 중쇄의 아미노산 서열을 표 5에 나타내었다.
[표 5]
Figure pat00023
항-CD33 항체 및 vHH-모노Fc 융합 단백질은 제조사의 권고에 따라 단백질을 암호화하는 정제된 플라스미드 DNA로 일시적인 형질감염을 통해 ExpiCHO-S™ 세포(ThermoFisher Scientific; Waltham, MA, Cat # A29127)에서 발현되었다. 즉, ExpiCHO-S™ 세포를 37℃, 8% CO2, 및 125 RPM으로 설정된 궤도 진탕 인큐베이터의 ExpiCHO™ 발현 배지(ThermoFisher Scientific, Cat # A29100)에서 현탁액으로 유지하였다. 세포를 계대하고 99.0% 이상으로 세포 생존율을 유지하면서, ml당 6.0 x 106개 세포로 형질감염시키기 전에 희석하였다. ExpiFectamine™ CHO 형질감염 키트(ThermoFisher Scientific, Cat # A29131)를 사용하여 일시적 형질감염을 수행하였다. 형질감염될 희석된 세포의 각 ml에 대해, 0.5 마이크로그램의 scFv Fc 융합 암호화 DNA 및 0.5 마이크로그램의 pAdVAntage DNA(Promega, Cat# E1711)를 사용하고 OptiPRO™ SFM 복합 배지에 희석하였다. ExpiFectamine™ CHO 시약을 1:4 비율(v/v, DNA:시약)로 사용하고 OptiPRO™로 희석하였다. 희석된 DNA와 형질감염 시약을 1분 동안 결합하여 DNA/지질 복합체를 형성한 후 세포에 첨가하였다. 밤새 인큐베이션한 후 ExpiCHO™ 피드 및 ExpiFectamine™ CHO 인핸서를 제조사 표준 프로토콜에 따라 세포에 첨가하였다. 배양액을 채취하기 전에 7일 동안 37℃에서 궤도 진탕(125 rpm)으로 세포를 인큐베이션하였다. 일시적으로 형질감염된 ExpiCHO-S™ 세포의 배양 상청액을 원심분리(30분, 3000 rcf)에 이어 여과(0.2 μm PES 멤브레인, Corning; Corning, NY)로 정화하였다.
다음과 같이 단백질 정제를 수행하였다. AKTAXpress 크로마토그래피 시스템을 사용하여 사전 평형화된(1xDPBS, pH 7.2) MabSelect Sure Protein A 컬럼(GE Healthcare) 상에 여과된 세포 배양 상청액을 로딩하였다. 로딩 후, 컬럼을 10 컬럼 부피의 1xDPBS(pH 7.2)로 세척하였다. 단백질을 10 컬럼 부피의 0.1 M 나트륨(Na)-아세테이트(pH 3.5)로 용리하였다. 용출 분획 부피의 20%(v/v)에 2.5 M Tris HCl(pH 7.5)를 첨가하여 단백질 분획을 즉시 중화시켰다. 피크 분획을 모으고 여과하였다(0.2 μm). 분석적 크기 배제 HPLC(Agilent HPLC 시스템)로 정제된 단백질의 품질을 평가하였다.
실시예 3. 표면 플라스몬 공명(SPR; Biacore)에 의한 항-CD33 항체 및 라마 vHH의 특성화
항-CD33 항체 인간 CD33(전장 ECD 및 IgC2 도메인)의 상호작용에 대한 친화성(KD)을 SPR을 통해 수득하였다. 항-CD33 항체를 항-인간 Fc 항체를 사용하여 포획하고 항원을 용액에 주입하였다. 데이터를 아래의 표 6에 나타내었다.
[표 6]
Figure pat00024
Biacore 8K 기기를 사용하여 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 통해 재조합 인간 CD33(FL ECD 또는 IgC2 도메인)에 대한 항-CD33 항체 및 라마 vHH의 결합 친화성을 측정하였다. Fc 융합된 scFv 또는 모노-Fc 융합된 vHH를 염소 항-Fc 항체-변형된 GLC 칩을 사용하여 포획하고 40 nM~1.6 nM의 농도에 걸쳐 있는 CD33 항원의 5배 연속 희석액으로 적정하였다. 50 μL/분의 유속을 사용하여 결합 및 해리를 각각 2분 및 30분 동안 모니터링하였다. 원시 결합 데이터는 블랭크에서 분석물 결합 신호를 제하여 참조하고 Biacore 소프트웨어를 사용하는 1:1 Langmuir 결합 모델을 사용하여 분석하여 결합 친화성를 계산하는 데 사용된 동역학을 수득하였다.
항-CD33 라마 vHH와 인간 CD33(FL ECD 또는 IgC2 도메인)의 상호작용에 대한 친화성(KD). 모노-Fc 골격 상의 항-CD33 라마 vHH를 항-인간 Fc 항체를 사용하여 포획하고 항원을 용액에 주입하였다. 데이터를 아래의 표 7에 나타내었다. 또한, hu CD33 항원(FL ECD 및 IgC2 도메인)에 대한 항-CD33 vHH 상호작용의 대표적인 Biacore 8K 센서그램을 도 1에 나타내었다.
[표 7]
Figure pat00025
Prometheus® NT.Plex 기기(NanoTemper Technologies)에서 nanoDSF를 통해 항-CD33 scFv-Fc 융합 항체 및 라마 VHH의 열 안정성을 측정하였다. 384웰 샘플 플레이트로부터 표준 모세관(NanoTemper Technologies)에 샘플을 로딩하여 측정을 수행하였다. 중복 또는 삼중 실행을 수행하였다. 20℃에서 95℃까지 1.0℃/분 열 램프로 열 전개를 모니터링하였다. 열 변곡 온도(중간점 Tms) 및 응집 개시 온도(Tagg)은 PR에 의해 자동으로 측정되었다. ThermControl 소프트웨어(NanoTemper Technologies) 및 PR.Stability Analysis 소프트웨어(NanoTemper Technologies)를 사용하여 추가로 분석하였다. 데이터를 아래의 표 8에 나타내었다.
[표 8]
Figure pat00026
[표 8a]
Figure pat00027
실시예 4: CD33 scFv CAR의 구성 및 발현
다음의 scFv 서열을 포함하는 CD33 CAR 구성체가 구성된다:
Figure pat00028
Figure pat00029
Figure pat00030
Figure pat00031
Figure pat00032
Dynabeads 인간 T-Expander CD3/CD28 자극 T 세포를 전기천공한 후 OPTI-MEM(Invitrogen)으로 3회 세척하고 50E6개/ml의 최종 농도로 OPTI-MEM에 재현탁하였다. 이어서, 0.1 ml의 세포(5E6)를 RNA를 암호화하는 10 ug의 IVT CAR과 혼합하고, "펄스" 버튼을 한 번 눌러 BTX ECM830(Harvard Apparatus BTX, Holliston, MA, USA)을 사용하는 2 mm 간격 큐벳(Harvard Apparatus BTX, Holliston, MA, USA)에서.전기천공하였다. (설정: 500 볼트, 750 μsec 펄스 길이 및 단일(1) 펄스, 100 mSec 간격.) 전기천공 후, T 세포를 6웰 플레이트로 옮기고 즉시 37℃ 인큐베이터에 다시 넣었다. 1차 인간 T 세포를 mRNA 없이(MOCK) 또는 CD33 scFv CAR 또는 비관련 대조군 CAR을 발현하는 10 μg의 mRNA와 함께 전기천공하였다. 전기천공 24시간 후 CAR 표면 발현을 2 μg/ml 비오틴화된 L-단백질 및 스트렙타비딘-접합된 PE 또는 비오틴화된 CD33(1 μg/ml) 및 스트렙타비딘-접합된 PE로 염색한 후 유세포 분석에 의해 측정하였다.
전기천공 24시간 후, T 세포를 계수하였다. 각각에 대해 1E5개 T 세포를 수집하였다. 세포를 마이크로타이터 플레이트용 FACS 완충액 200 μL/웰을 사용하여 FACS 완충액으로 2회 세척하고 상청액을 버렸다. 모든 웰을 단백질 L(Genscript, Cat. No. M000971:500; 2 ug/ml)을 함유한 100 μl 염색 완충액으로 염색하고, 빛을 차단하면서 4℃에서 적어도 30분 동안 인큐베이션하였다. FACS 완충액이 있는 마이크로타이터 플레이트에 대해 150 μL/웰을 사용하여 FACS 완충액을 2회 첨가하여 세포를 세척하였다. 400 × g에서 원심분리를 실온에서 4분 동안 수행하였다. 이어서 상청액을 버렸다. 모든 웰을 100 μl 스트렙타비딘-R-피코에리트린(SA-PE; 1:250) 및 Live/dead Fixable Near-IR Dead Cell Stain 염료(1:1000)로 염색하고 빛을 차단하면서 4℃에서 적어도 30분 동안 인큐베이션하였다. 이어서 유세포 분석을 위해 세포가 준비되었다.
단백질 L 염색은 CD33 CAR에 대해 관찰되는 반면, mRNA 전기천공이 없는 T 세포인 대조군 T 세포에서는 배경 염색(약 5.5%)만 관찰되었다. 1차 인간 T 세포에 대한 CAR 발현은 또한 J&J 내부 비오틴 표지된 재조합 KLK2 단백질에 이어 SA-PE을 통해 검출될 수 있다. 도시된 바와 같이, T 세포는 유세포 분석에 의해 측정 시 CD33 CAR을 발현하였으며, 반면 mRNA 전기천공 또는 개시되지 않은 대조군 CAR(CD33 비특이적)이 없는 T 세포인 대조군 T 세포에서는 배경 염색만 관찰되었다.
실시예 5: CD33 CAR-T 세포에 의한 종양 세포 사멸
유세포 분석기를 사용한 CellTrace Violet(CTV, Thermo Fisher Scientific 카탈로그 번호: C34557) 기반 세포독성 검정에 대한 공동 배양을 다음과 같이 수행하였다.
다음과 같이 T 세포를 생성하였다. EP 24시간 후에, T 세포를 계수하고 가장 농축된/목적하는 E:T에 필요한 농도에서 재현탁하였다. T 세포를 검정의 100 μl/웰에 첨가하였다(2x106개 세포/ml; 100 μl를 10:1 E:T 비로 플레이팅, 즉 2E4개 표적 세포당 2E5개 T 세포). 완전한 T 세포 배지(Optimizer w/CTS, 5% 인간 혈청, 1% GlutaMax)를 사용하여 0.3125:1로 만든 2배 연속 희석액으로 10:1 E:T 농도의 스톡을 만들었다. T 세포를 96웰 둥근 바닥의 조직 배양 처리된 플레이트를 사용하여 삼중으로 플레이팅하였다(100 ul/웰).
다음과 같이 CTV 표지된 표적 세포를 생성하였다. 20 μL DMSO를 CTV 염색 용액의 바이알에 첨가하였다. 5 μM 염색 용액을 위해 이 스톡 용액을 20 mL의 PBS(37℃로 가온)에 희석하였다. 10E6개 종양 세포를 수집하고 PBS로 2회 세척하고 4E6개/ml(2.5 ml)에 재현탁하였다. 동일한 부피(2.5 ml)의 CTV 염색 용액을 첨가하였다. 세포를 37℃ 인큐베이터에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 결합되지 않은 염료를 흡수하기 위해 40 ml PRMI+20% FBS를 세포에 첨가하였다. 세포를 5분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 400 × g에서 5분 동안 원심분리하였다. 세포 펠렛을 사전 가온한 RPMI+10% FBS 배지에 재현탁하였다. 한편, T 세포를 상기에 기술한 목적하는 E/T 비로 시딩하였다. CD33+ 종양 세포주 및 CD33-종양 세포주를 재계수한 후, 세포를 2E5개/ml 및 100 ul에 이중으로 재현탁하였다. 평평한 바닥의 96웰 플레이트에서 표지된 종양 세포주와 세포를 공동 인큐베이션하였다.
유세포 분석기를 사용하여 다음과 같이 세포독성 검정을 수행하였다. 20시간의 공동 배양 후, 모든 세포를 U바닥의 96웰 플레이트로 옮기고 세척하였다. 20시간의 공동 배양 후 평평한 바닥의 96웰 플레이트에서 모든 세포를 수집하고 U바닥의 96웰 플레이트로 옮기고 세척하였다. 0.25% 트립신 30 μl를 모든 웰에 첨가하고 37℃ 인큐베이터에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 5분 후, 모든 종양 세포를 U바닥 96웰 플레이트에 수집하였다. 세포를 원심분리하고 400 × g에서 5분 동안 2회 세척하였다. 이어서 세포 펠렛을 희석된(1:1000) LIVE/DEAD™ Fixable Near-IR 염색 염료(100 μl)에 재현탁하였다. 세포를 4℃에서 30분 동안 배양하고 400 × g에서 5분 동안 세포를 원심분리하여 FACS 완충액으로 2회 세척하였다. 세척 후, 모든 세포를 100 μl의 BD Cytofix™ Fixation Buffer(50 ul FACS 완충액 + 50 ul Fixation Buffer)을 사용하여 10분 동안 고정하였다. 세포를 원심분리하고 400 × g에서 5분 동안 1회 세척하였다. 세포 펠렛을 FACS 완충액에 재현탁하였다. 인큐베이션 기간 종료 후 염색된 샘플을 다색 유세포 분석으로 분석하였다. 다음의 식을 사용하여 세포독성 활성의 백분율을 계산하였다:
% 비(specific)사멸 = % Near IR+CTV+(사멸) 세포 - % 자발적 Near IR +CTV+ / (100% - % 자발적 Near IR +CTV+ (사멸) 세포) × 100%.
일시적 형질감염 24시간 후, 표적 세포(CD33 양성 Vcap 및 CD33 음성 DU145 세포)를 Cell Trace Violet (CTV) 형광 염료로 표지한 후 CD33 CAR-T 세포와 공동 배양하였다. Mock T 세포는 음성 이펙터 대조군으로 사용하였다. 세포를 0.3125:1 내지 10:1 범위의 이펙터-대-표적 세포(E/T) 비로 20시간 동안 공동 배양하였다. 사멸 백분율은 CAR-T 세포 없이 배양된 살아있는 표적 세포의 수 대비 공동 배양물에 남아 있는 살아 있는(생존 염료 음성) 표적(CTV 양성) 세포의 절대 수의 비로 측정되었다. 도시된 바와 같이, CD33 CAR T 세포는 10:1 내지 0.3125:1의 E/T 비에서 CD33(+) 인간 암 세포주를 특이적이고 효율적으로 용해했지만 CD33(-) 세포는 용해하지 않았으며, 반면 Mock 또는 CD33 CAR인 T 세포에서는 배경 세포독성만 관찰되었다.
또한 표적 세포의 면역 세포 매개 세포용해에 대한 효능 검정으로서 실시간 세포 분석 시스템으로 xCELLigence를 사용하여 실시간 세포독성에 대해 CD33 CAR-T 세포는 시험하였다.
96웰 E-플레이트(ACEA Biosciences)의 각 웰에 50 μL의 표적 암 세포 배양 배지를 첨가하고 배경 임피던스를 측정하여 세포 지수로 표시하였다. 이어서, 부착 표적 세포 CD33(+) 및 CD33(-)를 해리하고 E-플레이트의 5E4개(VCap), 5E3개 세포/웰의 밀도로 100 μL의 부피로 시딩하고 전극 표면에 수동적으로 부착되도록 하였다. 시딩 후, E-플레이트를 층류 후드 내부의 주위 온도에서 30분 동안 유지한 다음 세포 배양 인큐베이터 내부의 RTCA MP 기기로 옮겼다. 데이터 기록은 실험의 전체 기간(96시간) 동안 15분 간격으로 즉시 시작되었다.
처리가 적용되었을 때(암 세포 시딩 24시간 후), 데이터 수집이 일시 중지되었고, 각 웰에서 50 μL의 배지를 제거하였으며, 이펙터 CAR-T 세포를 50 μL의 부피로 상이한 이펙터 대 표적(E:T) 비로 첨가하였다. CD33 CAR-T 및 개시되지 않은 대조군 CAR(CD33 비특이적) T 세포를 재현탁하였다. 이어서 96웰 플레이트에서 2배 희석을 2회 수행하였다(5:1 내지 0.156:1 E/T 비). 표적 + Mock 이펙터 대조군(RNA 전기천공 T 세포 없음)도 표적 세포에 첨가하였다.
표적 세포 CD33(+) 및 CD33(-)를 약 72시간 동안 서로 다른 E/T 비로 CD33(+) 및 CD33(-) CAR-T 세포에 전기천공된(형질감염 24시간 후) 10 μg mRNA, Mock과 함께 인큐베이션하였다. CD33(+) 및 CD33(-)에 대한 정규화된 세포 지수(CI) 플롯을 생성하였다. 단독으로 시딩했을 때 표적 세포가 플레이트에 부착되고 증식하여 CI 판독값이 증가한다.
실시예 6: CD33 CAR-T 세포에 의한 사이토카인 생성
세포독성 T 세포에 의해 생성된 IFN-γ는 종양의 면역 감시를 가능하게 하며, 이는 증식을 직접적으로 억제하고 생체내 및 시험관내에서 일부 악성 종양의 아폽토시스를 유도할 수 있다. CD33 CAR-T 세포가 CD33(+) 종양 세포를 인식하고 활성화할 수 있는지 여부를 확인하기 위해, 실시예 5에 기재된 바와 같이 xCELLigence 기반 사멸 검정으로부터 상청액을 수집하였다. 약 70시간의 공동 배양 후, 상청액을 수집하고 ELISA 키트(인간 IFN-γ ELISA MAX™ Deluxe, BioLegend, Cat#:430106)와 함께 제공된 지침에 따라 ELISA로 검정하였다.
항원-자극된 CAR-T 세포의 IFN-γ 생성이 발생된다. CD33 CAR 및 대조군 CAR-T 세포는 E:T 비 의존적 방식으로 CD33 발현 세포와의 공동 배양 동안 IFN-γ를 분비했지만, CD33-음성 세포와의 공동 배양 동안에는 그렇지 않았다. 개시되지 않은 대조군 CAR은 CD33보다 훨씬 더 높은 항원 발현 수준으로 인해 훨씬 더 많은 양의 IFN-γ를 분비하였다.
실시예 7: CD33 CAR-T 세포에 의한 종양 세포 사멸
scFv CAR-T 세포를 항원 의존적 세포독성에 대한 실시간 IncuCyte 종양 사멸 검정에서 평가하였다. CD33 CAR-T 세포를 1:1 또는 0.5:1의 이펙터:표적 비(이는 CAR 발현 데이터를 기반으로 계산되었음)로 88시간 동안 공동 배양하였다. 표적 세포는 실시간 방식으로 IncuCyte 이미징 시스템에 의해 측정된 적색 핵 염료를 안정적으로 발현하고 있다. 다음의 계산을 수행하였다: 종양 세포 성장 억제(%) = (초기 생존 표적 세포 수-현재 생존 표적 세포 수)/초기 생존 세포 수*100 (%).
실시예 8: CD33 CAR-T 세포에 의한 사이토카인 생성
1:1의 E/T 비로 CD33 CAR-T 세포를 세포와 밤새(대략 20시간) 공동 배양하여 상청액을 수집하였고, 13-플렉스 Milliplex Human High Sensitivity T 세포 키트(HSTCMAG28SPMX13)를 사용하여 분석하였다. CD33 CAR 변형된 T 세포는 CD33-발현 세포와 공동 배양하는 동안 사이토카인을 분비하였지만, 형질도입되지 않은 T 세포(UTD)에 대해서는 최소였다.
1:1의 E/T 비로 CD33 CAR-T 세포를 세포와 밤새(대략 20시간) 공동 배양하여 상청액을 수집하였다. CD33 CAR-T 세포는 CD33 발현 세포와의 공동 배양 동안 IFN-γ를 분비했지만, CD33 음성 세포와의 공동 배양 동안에는 분비하지 않았다. CD3/28 비드 자극 T 세포 및 T 세포 단독을 각각 양성 및 음성 대조군으로 사용하였다. CD33 CAR-T 세포에 의한 IFN-γ 방출. 2회 배양으로부터의 평균 IFN-γ 농도 ± SD(pg/ml)가 도시되어 있다. 다른 열적으로 안정화된 CAR-T 세포는 CD33(+) 세포와 공동 배양할 때 다른 양의 IFN-γ를 생성하였다.
실시예 9: CD33 CAR-T 세포의 증식
CD33 CAR-T 세포를 증식 검정에서 평가하였다. T 세포 증식은 생체내 면역 기능의 중요한 시험관내 파라미터이다. CD33 CAR-T 세포의 기능을 추가로 평가하기 위해, CD33 CAR-T 세포를 CTV로 표지하여 T 세포 증식을 평가하였다.
CD33 CAR-T 및 형질도입되지 않은(UTD) T 세포를 CellTrace Violet(CTV, 5 μM)으로 표지하고 CD33(+) 및 CD33(-) 세포와 공동 배양하였다. 공동 배양 5일 후, 세포를 채취하고 CD3, CD25, NearIR live/dead 염료, 및 CD33 CAR로 염색하였다. Flowjo 소프트웨어를 사용하여 Fortessa 유세포 분석기 상에서 유세포 분석을 수행하였다. 림프구는 살아있는 CD3에 의해 확인되었고, CTV 염료 희석 및 활성화 마커 CD25가 있는 CAR-T 세포의 빈도를 확인하였다. 도시된 바와 같이, CD33 CAR+ T 세포 상에 게이팅함으로써 CD33(-) 세포가 아닌 CD33(+) 세포가 모든 CAR 구성체를 촉진하였다. CD3/28 비드 자극 T 세포 및 T 세포 단독을 각각 양성 및 음성 대조군으로 사용하였다. 임의의 자극이 없는 T 세포 단독은 증식하지 않았고 CD3/28 비드 자극된 T 세포는 동등한 증식 패턴을 나타냈다. CD33 CAR-T 세포는 세포와의 공동 배양 5일 후 CD3/28 비드 양성 대조군보다 더 강력하게 증식하였다. 상이한 CAR 구성체 조작된 T 세포는 상이한 증식 활성을 갖고 상이한 CAR-T 세포 수를 나타냈다. CAR-T 세포 수는 3개의 기술 복제물로부터의 평균 절대 세포 수 +/- SEM을 기반으로 한다.
다음과 같이 프로토콜을 수행하였다. 종양 세포를 수집하고 PBS로 2회 세척하고 37℃ 인큐베이터에서 1.5시간 동안 100 ug/ml 미토마이신 C(MMC)가 함유된 PBS에 10E6개/ml로 재현탁하여 종양 세포 증식을 차단하였다. 20 μL의 DMSO를 CTV 염색 용액의 바이알에 첨가하였다. 5 μl의 용액을 5 mL(1:1000) PBS(37℃로 가온)에 희석하여 5 μM 염색 용액을 제공하였다. 2E6개 T 세포를 계수하고, 수집하고, PBS로 2회 세척하고, 4E6개/ml(0.5 ml)로 재현탁하였다. 동일한 부피(0.5 ml)의 CTV 염색 용액을 첨가하였다. 세포를 37℃에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 이어서 임의의 결합되지 않은 염료를 흡수하기 위해 4 ml PRMI+20% FBS를 세포에 첨가하였다. 세포를 5분 동안 배양하고 400 × g에서 5분 동안 원심분리하였다. 세포 펠렛을 사전 가온한 RPMI+10% FBS 배지에 재현탁하였다. T 세포를 계수하고, 1E5개 세포(100 ul)를 96웰 평평한 바닥의 플레이트에 시딩하였다.
한편, MMC 처리된 종양 세포를 수집하고 1.5시간 후에 계수한 다음 1E6개/ml로 재현탁하였다. 세포의 1E5개(100 μl)를 96웰 플레이트에서 T 세포와 공동 배양하였다. T 세포 단독 및 3:1 CD3/28 비드 대 세포 비를 첨가한 T 세포를 각각 음성 및 양성 대조군으로 사용하였다.
5일의 공동 배양 후, 모든 세포를 각 웰로부터 수집하였다. 세포를 원심분리하고 5분 동안 400 × g에서 2회 세척한 다음, 96웰 U바닥의 플레이트에서 CD33 CAR, CD3, CD8, 및 CD25, 생/사(Near-IR)로 염색하였다. 세척 후, 모든 세포를 100 μl BD Cytofix™ Fixation Buffer(50 ul FACS 완충액 + 50 ul Fixation Buffer)을 사용하여 10분 동안 고정하였다. 인큐베이션 기간 종료 후 염색된 샘플을 다색 유세포 분석으로 분석하였다.
다음과 같이 데이터 분석을 수행하였다. CTV 히스토그램을 준비하였다. CTV 희석되지 않은 게이트는 단독으로 배양된 T 세포의 맨 오른쪽 피크(CTV 브라이트)를 포함하도록 설정하고, CTV 희석된 게이트는 집단의 나머지를 캡처하도록 설정하였다. 모든 샘플에 이를 적용하였다.
실시예 10: CAR17, CAR18, CAR19, 또는 CAR20으로 형질도입된 CAR-T 세포의 특성화
생성된 CAR-T 세포를 항원-의존적 활성에 대해 JNL 리포터 검정에서 평가하였다. 즉, 신호 반응성 NFAT 프로모터에 의해 유도되는 루시퍼라제 유전자를 함유하는 Jurkat 세포(JNL 세포라고 함)를 CAR17(KL2B413_HL), CAR18(KL2B413_LH), CAR19(KL2B359_HL), 또는 CAR20(KL2B359_LH) 구성체로 형질도입시켰다. 각 CAR의 발현을 비오틴화된 CD33에 이어 스트렙타비딘-접합된 PE를 통해 확인하였다.
CD33 CAR 구성체와 이의 동족 세포 항원(표적 세포 상의 CD33) 사이의 결합은 JNL 세포에서 루시퍼라제 발현을 유발한다. 이를 위해, 시험 CAR 구성체로 형질도입된 JNL 세포 또는 형질도입되지 않은 JNL 세포(UTD)를 표적 종양 세포주와 공동 배양하였고 루시퍼라제 활성을 발광 강도로 측정하였다. 구성체는 발광 강도가 항원 발현 세포의 존재 하에 UTD 세포 수준의 1.5배를 초과할 때 활성인 것으로 간주하였다. 시험된 CAR 구성체에 대해 항원 의존적 활성화가 발견되지 않았다.
CAR-T 세포는 항원 의존적 방식으로 종양 세포 사멸을 매개한다
CAR17, CAR18, CAR19, 및 CAR20으로 형질도입된 CAR-T 세포를 1:1 또는 0.5:1의 이펙터 대 표적(ET) 비(이는 T 세포에 대한 CAR 발현을 기반으로 계산되었음)로 96시간 동안 CD33 양성 세포 및 CD33 음성 세포와 공동 배양했다. 표적 세포는 실시간 방식으로 IncuCyte 이미징 시스템에 의해 측정된 적색 핵 염료를 안정적으로 발현하고 있었다. 종양 세포 성장 억제(TGI)(%) = (초기 생존 표적 세포 수-현재 생존 표적 세포 수)/초기 생존 세포 수*100 (%). 시험된 CAR-T 세포는 대략 100% TGI를 달성한 반면 형질도입되지 않은 대조군은 TGI를 나타내지 않았다. CD33 음성 세포에서 시험된 CAR-T 세포에서는 TGI가 관찰되지 않았다.
CAR-T 세포는 항원 자극 시 사이토카인을 생성한다
세포독성 T 세포에 의해 생성된 IFN-γ는 종양의 면역 감시 수행에 중요하며, 이는 증식을 직접적으로 억제하고 생체내 및 시험관내에서 일부 악성 종양의 아폽토시스를 유도할 수 있다. CD33 CAR-변형된 인간 T 세포가 CD33 양성 종양 세포를 인식하고 활성화될 수 있는지 여부를 결정하기 위해, 지시된 CAR 클론으로 형질도입된 1차 T 세포 및 형질도입되지 않은 T 세포(UTD) 대조군을 표적 세포주와 공동 배양하고, IFN-γ 농도 측정을 위해 상청액을 수집하였다. CD33 CAR로 형질도입된 CAR-T 세포는 CD33 세포를 재조합적으로 발현하는 LNCaP 세포와의 공동 배양 동안 및 또한 매우 낮은 CD33 발현 세포와의 공동 배양 동안 IFN-γ를 분비했지만 CD33 음성 세포와의 공동 배양 동안에는 분비하지 않았다.
CAR-T 세포는 항원 의존적 방식으로 활성화되고 탈과립화 마커를 상향 조절한다
종양 세포는 표적 종양 세포를 사멸시키는, 주로 용해 과립의 면역 분비를 통해서 CD8+ T 림프구 및 자연 살해(NK) 세포와 같은 세포독성 림프구에 의해 인식되고 사멸될 수 있다. 이 과정은 면역 이펙터 세포의 세포질 막과 과립막의 융합을 수반하여 CD107a와 같은 용해성 과립을 둘러싼 지질 이중층에 일반적으로 존재하는 리소좀 관련 단백질의 표면 노출을 야기한다. 따라서, CD107a의 막 발현은 면역 세포 활성화 및 세포독성 탈과립화의 마커를 구성한다.
다음과 같이 탈과립화 분석을 수행하였다. 표적 세포(5 × 104)를 96웰 플레이트에 웰당 0.1 ml의 동일한 수의 이펙터 세포와 공동 배양하였다. 대조군 웰은 T 세포만 함유하였다. 1 μl/샘플의 모넨신(BD Biosciences) 이외에 항-CD107a(웰당 5 μl)를 첨가하고 37℃에서 4시간 동안 배양하였다. 세포를 PBS로 2회 세척하고, CD33 CAR, CD3, 및 CD8의 발현에 대해 염색하고 유세포 분석기 BD Fortessa 상에서 분석하였다.
CD33 CAR-T 세포는 항원 의존적 방식으로 증식한다
CAR-T 세포는 실시예 9에 기재된 T 세포 증식 검정 프로토콜을 사용하여 이의 증식에 대해 평가하였다. CD33 CAR-T 및 형질도입되지 않은(UTD) T 세포를 CellTrace Violet(CTV; 5 μM)로 표지하고 CD33 양성 및 CD33 음성 세포와 공동 배양하였다. 공동 배양 5일 후, 세포를 채취하고 CD3, CD25, NearIR live/dead 염료, 및 CD33 CAR로 염색하였다. Flowjo 소프트웨어를 사용하여 Fortessa 유세포 분석기 상에서 유세포 분석을 수행하였다. 림프구는 살아있는 CD3에 의해 확인되었고, CTV 염료 희석 및 활성화 마커 CD25가 있는 CAR-T 세포의 빈도를 확인하였다. CD3+ T 세포 상에 게이팅함으로써, CD33 음성 세포가 아닌 CD33 양성 세포가 각각의 시험된 CAR-T 세포주의 증식을 촉진했다. 임의의 자극이 없는 T 세포 단독은 증식하지 않았고 CD3/28 비드 자극된 T 세포는 동등한 증식 패턴을 나타냈다. CD33 CAR+T 세포는 세포와의 공동 배양 5일 후 CD3/28 비드 양성 대조군보다 더 강력하게 증식하였다. 상이한 시험된 CAR-T 세포는 상이한 증식 활성을 갖고 상이한 CAR-T 세포 수를 나타냈다. 증식하는 T 세포 및 CD25 발현 T 세포의 백분율은 복제물로부터의 평균 절대 세포 수 +/- SEM을 기반으로 하였다.
실시예 11: 이중특이적 CD33xCD3 항체의 생성
상기 실시예에서 생성된 항-CD33 항체의 VH/VL 영역 및 항-CD3 항체 CD3B219 및 CD3B376의 VH/VL 영역은 이중특이적 포맷으로 조작되고 IgG1으로서 발현된다. CD3B219 및 CD3B376은 Fab로서 조작되고 CD33 VH/VL 영역은 이중특이적 항체 내 양 배향으로 scFv로서 조작되어 scFv-힌지-CH2-CH3 포맷의 CD33 결합 아암 및 중쇄(VH-CH1-링커-CH2-CH3) 및 경쇄(VL-CL) 포맷의 CD3 결합 아암을 생성한다. 대안적으로, 항-CD3 항체의 VH/VL 영역은 scFv로서 조작되고 항-CD33 항체의 VH/VL 영역은 Fab로서 조작된다. scFv에 사용되는 링커는 서열번호 7의 링커이다. CD3B219는 미국 특허 9,850,310호에 기재되어 있다.
T350V_L351Y_F405A_Y407V CH3 돌연변이는 하나의 중쇄로 조작되고 T350V_T366L_K392L_T394W CH3 돌연변이는 다른 중쇄로 조작된다. 또한, CD33 및 CD3 결합 아암 둘 모두는 Fc 이펙터 침묵 돌연변이 L235A_L235A_D265S를 포함하도록 조작된다.
조작된 사슬이 발현되고 생성된 이중특이적 항체는 표준 방법을 사용하여 정제된다. 이중특이적 항체는 CD33 및 CD3에 대한 결합, 및 본원에 기재된 바와 같은 시험관내 및 생체내 세포독성을 특징으로 한다. 표 10은 항-CD3 항체 CD3B219 및 CD3B376의 아미노산 서열을 나타내었다.
[표 10]
Figure pat00033
실시예 12: 생성된 이중특이적 CD33xCD3 항체는 시험관내에서 세포독성이다
T-세포 매개 세포독성 검정은 Incucyte 플랫폼에서 실시간 경과 영상을 사용하여 시험관 내에서 생성된 이중특이적 항체의 세포독성 잠재성을 평가하는 데 사용된다. 3:1의 (이펙터:표적) 이펙터:표적 비(E:T 비)로 건강한 공여자로부터 단리된 범 인간 CD3+ T 세포의 존재하에 CD33 양성 세포주 세포에서 이중특이적 항체를 시험한다. 아폽토시스에 의한 세포 사멸은 표적 세포에 의해 안정적으로 발현되는 염료로부터의 형광 신호를 측정하여 모니터링한다. 이중특이적 항체는 시간이 지남에 따라 생존 세포의 용량 의존적 감소를 촉진하여 종양 세포의 T 세포 매개 사멸을 유도한다. 종양 세포 억제율 %= (초기 플레이팅된 종양 세포의 수 - 현재 생존 가능한 종양 세포의 수) / (초기 플레이팅된 종양 세포의 수) *100%
실시예 13: ADC의 생성 및 특성화
CD33에 결합하는 항체 또는 항원 결합 도메인은 In-111, Zr-89, Lu-177, 또는 Ac-225와 같은 다양한 방사성 금속으로 표지되고 생체내 종양 생체 분포 또는 종양 효능을 수컷 NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ(NSG, The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) 또는 Balb-c 또는 SHO 누드 마우스에서 LNCaP, VCaP, 또는 C4-2B를 포함하는 확립된 피하(SC) 인간 전립선 모델에서 평가한다. CD33 또는 이소형 대조군 항체에 결합하는 다양한 용량의 항체 또는 항원 결합 도메인은 상이한 양의 방사능(10-1000 nCi)으로 표지되고, 종양 흡수 또는 효능을 측정한다.
실시예 14: 내재화를 위한 약물과 접합된 항-CD33 항체 시험
항-CD33 항체의 내재화 정도를 특성화하고, 약물에 접합된 항-CD33 항체의 치료 효과를 확인하기 위해 다음의 시험을 수행하였다. 이론에 구애됨이 없이, 항-CD33 항체의 내재화는 방사성 동위원소, 예를 들어, In-111, Zr-89, Lu-177, 또는 Ac-225에 접합되는 경우 항-CD33 항체의 치료적 이점이 증가함을 시사한다.
물질 및 방법
다음과 같이 세포 배양을 수행하였다. MOLM-13, Kasumi-1, OCI-AML-3, 및 HDLM2 세포를 10% FBS(HiMedia)가 포함된 RPMI 1640(Gibco) 배지에서 배양하였다. 세포를 포화 농도에서 항-CD33 항체(클론 WM53, Biolegend)로 염색하여 각 세포주의 수용체 밀도를 측정하였다. 수용체 밀도는 BD Quantibrite PE 비드(BD Biosciences)를 사용하여 측정하였다.
MOLM-13, Kasumi-1, OCI-AML-3, 및 HDLM-2 세포를 제조사의 프로토콜에 따라 고정 가능한 보라색의 사멸 세포 염색(L34955, ThermoFisher)으로 생존력에 대해 염색하였다. 세포를 채취하고 PBS로 1회 세척한 후 실온에서 30분 동안 고정 가능한 생존 염료로 염색하였다. 인큐베이션 후, 세포를 FACS 완충액(PBS+2% FBS)으로 2회 세척하였다. 이어서 세포를 시험 항체와의 결합 검정에 사용하였다. 100,000개의 세포를 100 ul 염색 부피의 시험 항체로 염색하였다. 염색용 항체를 FACS 완충액에 희석하고 얼음 상에서 40분 동안 세포와 함께 인큐베이션한 후 FACS 완충액으로 2X 세척하였다. 이어서 얼음 상에서 40분 동안 PE 접합된 염소 F(ab')2 항-인간 IgG-Fc(ab98596; Abcam)를 사용하여 시험 항체를 검출하였다. 세척 후 Novocyte 유세포 분석기(ACEA) 상에서 데이터를 획득하였다. 세포를 FSC/SSC에 게이팅한 다음, 생존 세포 게이팅 및 이중 식별을 수행하였다. Flow Jo(BD)를 사용하여 데이터를 분석하였다.
중간 형광 강도 값을 사용하여 2차 단독 샘플의 MFI를 제한 후 4-파라미터 비선형 회귀 분석 곡선을 플로팅하였다.
37℃에서의 동역학 결합 연구에 대해, 테스트 항체로 염색하기 위해 세포를 위와 같이 처리하였다. 제조사의 프로토콜에 따라 AF647 라벨링 키트(A20186, ThermoFisher)를 사용하여 테스트 항체를 Alexa Fluor 647(AF647) 염료에 접합하였다. 항체 첨가 후, 세포를 지정된 시점 동안 써모믹서(Eppendorf)에서 37℃에 인큐베이션하였다. 이어서 샘플을 Cytofix(BD Biosciences)를 사용하여 고정하고 Novocyte(ACEA Biosciences) 상에서 획득하였다. 위와 같이 데이터를 분석하였다.
다음과 같이 항체 내재화 검정을 수행하였다:
다음과 같이 단백질 A-MMAF 검정을 수행하였다. 단백질 A-MMAF는 Levena Biopharma에서 구입하였다. MOLM-13, Kasumi-1, OCI-AML3, 및 HDLM2 세포를 50 ul 부피의 투명한 바닥(Corning)이 있는 96웰 평평한 바닥의 다크 웰 플레이트의 웰당 4000개 세포로 시딩하였다. 항체 스톡을 4X 농도(400 nM) 로 준비하고, 연속 희석하였다. 25 μl의 각 항체 희석액을 세포에 첨가하였다. 단백질 A-MMAF 스톡 용액을 또한 4X 농도(400 nM)로 준비하고, 각 웰에 25 25 μl를 첨가하였다. 세포와 단백질 A-MMAF가 있지만 항체가 없는 웰은 100% 생존 세포로 간주되었다. 세포를 항체 및 단백질 A-MMAF와 함께 96시간 동안 인큐베이션하였다. 100 ul의 CellTitre-Glo(Promega)를 인큐베이션 기간 종료 시 세포에 첨가하고 발광성을 Tecan 플레이트 판독기에서 판독하였다. % 생존율을 다음과 같이 계산하였고, Graph Pad Prism을 사용하여 4-파라미터 비선형 회귀 곡선을 플롯팅하는 데 사용하였다.
Figure pat00034
다음과 같이 pHAb 염료 기반 내재화 분석을 수행하였다. pHAb 아민 반응성 염료는 Promega에서 구입하였다. 400 ug의 각 테스트 항체를 pHAb 염료에 접합하였다. 10 mg/mL(11.3 mM)의 최종 농도를 위해 12.5 uL DMSO + 12.5 uL 물(총 부피 25 uL)에서 아민 반응성 pHAb 염료(Promega, #G9845)를 간략하게 재구성하였다. 10배 몰 과량의 염료에서 접합 반응을 실행하였다.
반응 혼합물에는 항체가 포함되었다(250 ul 부피 중 500 ug + pHAb 염료 3 ul + 0.5 M 붕산나트륨 완충액 30 ul + 최종 반응 부피를 300 ul로 만들기 위한 물). 반응물을 37℃에서 2시간 동안 교반하면서 인큐베이션한 후, 1 M Tris(pH 7.5)를 10 mM의 최종 농도로 첨가하여 켄칭하였다. 염료 표지된 샘플을 Zeba 컬럼(2 mL, 40 kDa 컷오프)(Thermo 87768)을 사용하여 PBS로 교환하였다. 다음과 같이 항체 농도 및 DAR 값을 계산하였다.
NanoDrop으로 측정된 농도
Figure pat00035
pHAb 농도(uM) = (흡광도 / (EC_pHAb * 경로 길이)) x 106, 해당 식에서:
o 흡광도 = A532
o EC_pHAb= 75,000
Figure pat00036
Ab 농도(uM) = (흡광도 / (EC-Ab * 경로 길이)) x 106, 해당 식에서:
o 흡광도 = A280-(0.256*A532)
Figure pat00037
0.256은 A280에서 잔류 pHAb 흡광도에 대한 보정 계수이다.
o EC_Ab= 210,000
Figure pat00038
염료:Ab = 농도 pHAb(uM)/ 농도 Ab(uM)
CD33 항체 표지된 pHAb 염료의 동역학을 분석하기 위해, MOLM-13, Kasumi-1, OCI-AML-3, 및 HDLM2 세포를 얼음 상에서 45분 동안 pHAb 접합 시험 항체 100 nM과 함께 인큐베이션하였다. 항체 희석액은 FACS 완충액에서 준비되었다. 표지 후, 세포를 냉각된 FACS 완충액으로 세척하고 지정된 시점 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 기간 종료 시 Novocyte 유세포 분석기 상에서 세포를 획득하였다. 배경 형광을 고려하기 위해 매번 염색되지 않은 샘플을 포함하였다.
결과
결합은 4℃에서 CD33 항체의 연속 희석액으로 세포를 인큐베이션한 후에 PE 접합된 염소 F(ab')2 항-인간 IgG-Fc 항체로 검출하여 수행하였다. 표적 세포주에 대한 CD33 항체의 결합을 나타내는 데이터는 4℃에서 항-인간 CD33 항체의 비선형 회귀 프로파일을 보여주는 그래프로 도 2a 및 2b에 나타나 있다. 중앙 형광 강도(MFI) 대 항체의 로그 농도를 플롯팅하였다. 각 세포주에 대한 최고 히트는 적색으로 표시하고 린투주맙 결합은 청색 곡선으로 표시하였다.
표적 세포주에 대한 CD33 항체의 시간 및 온도 의존적 결합을 검정하였다. 37℃ 및 4℃에서 직접 접합된 항체의 연속 희석액으로 세포를 인큐베이션하여 결합을 수행하였다. 데이터는 도 3a 내지 3o에 나타나 있다. 이러한 도면의 그래프는 37℃ 및 4℃에서 항인간 CD33 항체 결합의 비선형 회귀 프로파일을 나타낸 것이다. 중앙 형광 강도(MFI) 대 항체의 로그 농도를 플롯팅하였다.
고, 중, 및 저 발현 표적 세포주에 대한 CD33 항체의 내재화를 검정하였다. 96시간 동안 단백질 A-MMAF와 함께 CD33 항체의 연속 희석액으로 세포를 인큐베이션하였다. 96시간 후, CellTitre-Glo 시약을 세포에 첨가하여 세포 생존력을 측정하였다. 단백질 A-MMAF만 있는 웰은 100% 생존 가능한 것으로 간주되었다. HDLM-2 세포를 무발현 세포주로서 사용하였다. 그 결과를 도 4a 내지 4d에 나타내었다. 세포 생존력의 감소는 항체 내재화를 나타낸다. 그래프는 항체의 로그 농도에 대한 세포 생존력의 비선형 회귀 분석을 나타낸 것이다.
CD33 항체 내재화의 동역학을 평가하였다. CD33 항체를 pHAb 염료로 표지하고 지정된 시점 동안 37℃에서 100 nM 농도로 세포와 함께 인큐베이션한 후 세포를 세척하고 유세포 분석기 상에서 수득하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에서, 그래프는 표시된 시점에서의 MFI 값을 보여준다.
표적 세포주에 대한 CD33 발현을 분석하였다. 고, 중, 및 저 CD33 발현 세포주는 Biolegend의 항인간 CD33 항체를 사용하여 식별하였다. MOLM-13, Kasumi-1, OCI-AML-3, 및 HDLM2 세포를 항체(주황색 히스토그램) 또는 마우스 IgG 이소형 대조군(청색 히스토그램)으로 염색하고, 각 세포주에 대한 이소형의 배수 변화를 계산하였다. 데이터를 도 6에 나타내었다.
pHAb 염료와의 접합 후 항체 온전성 및 DAR 값을 평가하였다. 항체는 pHAb 염료로 표지하고 SDS-PAGE 상에서 분석하였다. 약물 대 항체 비율(DAR)은 280 및 530 nm에서 OD를 측정하고 280 nm에서 염료 흡광도를 보정하여 계산하였다. 데이터를 도 7에 나타내었다.
pHAb 매개 항체 내재화 동역학의 특이성을 확인하였다. CD33 항체를 pHAb 염료로 표지하고 지정된 시점 동안 4℃에서 100 nM 농도로 Kasumi-1 또는 OCI-AML-3 세포와 함께 인큐베이션한 후 세포를 세척하고 유세포 분석기 상에서 수득하였다. 데이터를 도 8a에 나타내었다. 그래프는 지정된 시점의 MFI 값을 나타낸 것이다. 4℃에서 내재화가 관찰되지 않았다. 항체를 또한 37℃에서 HDLM-2 세포와 함께 배양하였다. 데이터를 도 8b에 나타내었다. MFI의 증가는 관찰되지 않았다.
고(MOLM-13), 중(Kasumi-1), 및 저(OCI-AML-3) 세포주에 대한 CD33 항체의 결합 EC50 값을 검정하였다. 항체의 연속 희석액으로 4℃에서 결합을 수행하였다. 데이터를 도 9에 나타내었다.
다양한 표적 세포주에 대한 CD33 항체 내재화를 도 10에 나타낸 데이터로 검정하였다. MOLM-13 및 OCI-AML-3의 경우에 대한 EC50 값을 나타내었다. Kasumi-1의 경우, 100 nM 농도에서 생존율(%)이 표시된다.
실시예 15: CD33 세포 표면 수준에 대한 CD33 항체의 효과
단핵구, 대식세포, 수지상 세포, 호중구, T 세포, 및/또는 미세아교세포 상의 CD33의 세포 표면 수준에 대한 항-CD33 및 CD33 이중특이적 항체의 효과를 시험하기 위해 검정을 수행한다. 본 검정에서, 조직구 림프종 세포주 U937 뿐만 아니라 CD33-발현 CHO 세포, 인간 1차 단핵구, 말초 혈액 단핵구로부터 유래된 인간 1차 대식세포, 말초 혈액 단핵구로부터 유래된 인간 1차 수지상 세포, 말초 혈액 단핵구로부터 유래된 인간 미세아교세포, 및 인간 1차 T 세포 상의 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는 능력에 대해 항-CD33 항체를 평가한다.
인간 미세아교세포를 세포 배양으로 말초 혈액 단핵구로부터 제조한다. 말초 인간 혈액 샘플에서 단핵구를 단핵구 단리 항체를 사용하여 단리하고 수지상 세포로 분화하고 5일 동안 배양한다. 37℃, 5% CO2에서 10% 태아 송아지 스크럼을 포함하는 배지에 세포를 배양한다. 부착되지 않은 세포를 수집하여 식균 작용 실험에 사용한다. 인간 대식세포를 생성하기 위해 말초 인간 혈액 샘플에서 단핵구를 단리하고, 대식세포 또는 수지상 세포로 분화시킨다.
세포 샘플을 10% Hyclone FBS, 2 mM 글루타민, 페니실린, 스트렙토마이신, 및 비필수 아미노산이 보충된 RPMI 2 ml에서 ml당 200,000개 세포로 플레이팅한다. CD33 항체 또는 대조군 이소형을 1.0 μg/ml로 첨가하고, 5% CO2와 함께 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션한다.
수용체 역학을 평가하기 위해 항체를 1시간 동안 세포에 결합시킨 후 씻어낸다. CD33의 표면 수준을 적어도 24시간 후에 확인한다. FACS 분석으로 세포 표면 수용체 발현을 검출한다. 세포를 FITC 및 대조군 표면 마커와 접합된 항-CD33 항체와 함께 인큐베이션한다. 세포를 FACS 완충액(PBS+2% FBS, 2 mM EDTA)에서 2× 세척하고 유세포 분석을 수행한다. 분석을 위해 데이터는 각 형광단에 대한 WI 값을 사용하여 항체의 부재 하에서의 수용체 발현의 백분율로 계산한다.
실시예 16: 신호전달 분자 인산화의 유도 또는 억제를 위한 항-CD33 항체 및 CD33 이중특이적 항체의 검정
다양한 세포(예를 들어, J774, RAW 264.7, BMM 세포, 인간 1차 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, T 세포 미세아교세포 또는 파골세포)를 개별적으로 배양한다. 세포를 배양 접시에서 제거하고 계수한다. 이어서 세포를 (i) 항-CD33 항체, (ii) 항-CD33 이중특이적 항체, 또는 (iii) 이소형-일치된 대조군 항체와 함께 인큐베이션한다. 이어서 세포를 용해하고 원심분리하여 불용성 물질을 제거한다. DAP12, ERK, AKT, 단백질 A-아가로스, 및 단백질 G-아가로스 각각에 대한 하나 이상의 상이한 항체를 사용하여 각 상청액에 대해 면역침전 반응을 수행한다. 비드를 RIPA 완충액으로 두루 세척한다. 단백질을 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)으로 분리한 후 웨스턴 블로팅을 통해 니트로셀룰로스 막으로 옮긴다. 이어서 비드를 인산화된 티로신 또는 DAP12, ERK, Syk, LCK, FYN, C-Cbl, VAV, 또는 AKT의 인산화된 형태를 특이적으로 인식하는 항체와 함께 배양한다. DAP12, ERK, Syk, LCK, FYN, C-Cbl, VAV, 및 AKT의 인산화 정도를 정량화하기 위해 향상된 화학발광(ECL) 시스템으로 비드를 시각화한다.
실시예 17: CD33 항체 및/또는 이중특이적 항체의 항암 효과의 생체내 분석
일반 마우스 또는 인간 CD33 유전자를 과발현하는 마우스 중 8주(+/-2주)령의 10마리의 마우스군에 1.00 μl PBS에 현탁된 종양 세포(예를 들어, 1×105 ~ 1×106 MC38, Lewis Lung, 또는 B16 세포)로 피하 감염시킨다. 이식 전에 이소플루란으로 마우스를 마취한다. 2일차부터 마우스군을 3일마다 4회 용량으로 길항적 항-CD33 항체 각각 200 μg을 i.p.로 주사한다. 4일차에 시작하여 종양 성장을 측정하기 위해 격주로 캘리퍼스를 사용하여 종양 성장을 모니터링한다. 실험의 종점은 2000 mm3의 종양 부피 또는 60일이다. 종양 성장 및 생존율(%)은 결과 측정값이다. 항 CD33이 항암 효과가 있는 경우, 다음 중 하나 이상이 관찰된다: 종양 흡수 및 성장률 감소, 종양 침윤성 면역 억제제 대식세포의 수 감소, 및 종양으로의 이펙터 T 세포 유입 증가.
실시예 18: 항-TRGV9 및 항-CD33 이중특이적 항체
γ/δ T 세포 자극 및 확장을 수행하였다. Vγ9-Vδ2 T 세포의 확장은 14일 동안 rhIL-2(1000 IU/mL), rhIL-15(10 ng/mL), 및 졸레드론산(5 μM)을 포함하는 완전한 RPMI 배지에서 PBMC를 처리하여 수행하였다.
항-Vγ9 단일클론 항체의 드 노보 시퀀싱을 다음과 같이 수행하였다. 마우스 IgG1 항-인간 T 세포 수용체 항-TRGV9 클론 7A5를 Abcam(cat # ab171109)으로부터 입수하였다. Lake Pharma(San Carlos, CA)에서 샘플 준비 및 LC-MS/MS 분석을 수행하였다. 샘플을 환원 및 알킬화하고, 7개의 분취량으로 나누고, 트립신/LysC, 키모트립신, LysC, 펩신, 및 AspN, 엘라스타제, 및 프로테이나제 K 효소로 단백질분해로 분해하였다. 생성된 펩티드는 ZipTip C18 피펫 팁을 사용하여 탈염시켰고 역상 크로마토그래피를 사용하여 온라인으로 분리하였다. HCD 단편화를 사용하여 Thermo Q-Exactive 분광계에서 질량 분석을 수행하였다. MS 데이터 세트는 IMGT 기반 항체 서열 데이터베이스에 드 노보 서열 태그를 매칭하여 PEAKS 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 시퀀스의 간격은 드 노보 확인된 펩티드의 Contig 시퀀스 어셈블리를 사용하여 할당하였다. 모든 CDR 및 과돌연변이를 MS/MS 스펙트럼을 검사하여 확인하였다.
상기에 따라 생성된 4개의 단일클론 항체의 서열 및 이들의 CDR 서열을 하기 표 11~15에 나타내었다.
[표 11]
Figure pat00039
[표 12]
Figure pat00040
[표 13]
Figure pat00041
[표 14]
Figure pat00042
[표 15]
Figure pat00043
Vγ9 x CD33 이중특이적 항체의 제조를 다음과 같이 수행하였다. 7A5(항-TRGV9) 및 C33B904(항-CD33 항체)의 가변 영역 서열을 사용하여 급성 골수성 백혈병(AML) 세포의 T 세포 재지정 사멸에 대해 시험할 이중특이적 항체를 생성하였다. 이중특이적 항체 VG4(항-TRGV9 x CD33) 및 VG3(항-TRGV9 x Null)을 인간 IgG4와 같은 노브-인투-홀 포맷의 전장 항체로서 생성하였다. 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열은 표준 PCR 제한 효소 기반 표준 클로닝 기법을 사용하여 인간 IgG4 발현 카세트의 불변 영역을 포함하는 맞춤형 포유동물 발현 벡터로 서브클로닝되었고, 시퀀싱을 확인하였다. 이중특이적 항체를 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포주에서 일시적 형질감염에 의해 발현시켰다. CHO 세포에서 발현되는 이중특이적 항체의 서열을 하기 표 16에 나타내었다.
[표 16]
Figure pat00044
항체를 처음에 Mab Select SuRe Protein A 컬럼(GE Healthcare)으로 정제하였다. 컬럼을 PBS pH 7.2로 평형화하고 2 mL/분의 유속으로 발효 상청액을 로딩하였다. 로딩 후, 컬럼을 4 컬럼 부피의 PBS로 세척한 후 30 mM 아세트산나트륨(pH 3.5)에서 용리시켰다. 280 nm에서의 흡광도에 의해 모니터링된 바와 같이 단백질 피크를 함유하는 분획을 풀링하고 1% 3 M 아세트산나트륨(pH 9.0)을 첨가하여 pH 5.0으로 중화시켰다. PBS 완충액으로 평형화된 분취용 Superdex 200 10/300 GL(GE 헬스케어) 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 컬럼 상에서 이중특이적 mAb를 추가로 정제하였다. 샘플의 온전성은 환원 및 비환원 조건 하에서 내독소 측정 및 SDS-PAGE로 평가하였다. VG68에 대한 대표적인 겔을 도 12에 나타내었다. 최종 단백질 농도는 항-TRGV9/항-CD33의 경우 1.0 mg/ml이었고 ANTI-TRGV9/Null의 경우 1.0 mg/mL였다. 이를 기반으로 한 ANTI-TRGV9/항-CD33 및 ANTI-TRGV9/Null의 최종 EU 수준은 3.0 EU/mg 미만이었다.
표적 세포주에 대한 항-CD33 항체의 결합 활성을 평가하였다. 패널 CD33+ 세포주에 대한 항-CD33 클론 C33B904의 결합을 FACS로 측정하였다. EC50 및 EC90을 MOLM-13(도 13), Kasumi-1(도 14), 및 OCI-AML-3(도 16)에 대해 계산하였다.
Vγ9+(γδ) T 세포 및 Pan T 세포의 특성화를 다음과 같이 수행하였다. 졸레드론산을 사용하여 전체 PBMC에서 Vγ9+ γδ T 세포를 선택적으로 확장하였다. 제조사의 지침에 따라 EasySepTM Human γδ T 세포 단리 키트(Stem cell Technologies; Vancouver, CA)를 사용하여 전체 신선한 PBMC에서 PBMC를 단리하였다. 단리된 PBMC를 재조합 인간 IL-2(rhIL-2)를 1000 IU/mL의 최종 농도로, 재조합 인간 IL-15(rhIL-15)를 10 ng/mL의 최종 농도로, 및 졸레드론산을 5 μM의 최종 농도로 포함하는 RPMI-10(10% FBS, 1x Pen/Strep이 보충된 RPMI) 배지에서 14일 동안 배양하였다.
Kasumi-3 세포 및 인간 γδ T 세포를 사용한 항-TRGV9/항-CD33 이중특이적 항체의 결합 및 세포독성 특성의 평가를 다음과 같이 수행하였다. 졸레드론산 + IL-2 + IL-15로 12일 동안 배양된 PBMC로부터 단리된 농축 γδ T 세포(이펙터)를 24시간 동안 다양한 농도의 이중특이적 항체의 존재 하에 1:1 및 5:1 E:T 비율로 CFSE 표지된 Kasumi-3 세포(표적)와 공동 배양하였다. 용량 반응 곡선은 1:1(도 6) 및 5:1(도 7) E:T 비율에서 용량 의존적 방식으로 CD33 발현 kasumi-3 세포에 대한 항-TRGV9/항-CD33 및 항-TRGV9/항-NULL 이중특이적 매개된 γδ T 세포 세포독성을 나타낸 것이다. 여기에 표시된 세포독성 값은 이중특이적 항체의 비존재 하에 관찰된 기본 세포독성 값에서 차감한 것이다. EC50 값은 방법에 기술된 바에 따라 계산하였다. 단일 실험에서 나타난 대표적인 데이터는 도 16 및 도 17에 제공된다. 도 16 및 도 17은 항-TRGV9/항-CD33 이중특이적 항체가 시험관내에서 Kasumi-3 세포를 발현하는 CD33에 대한 γδ T 세포 세포독성을 매개함을 보여준다.
해당 실험에서, 졸레드론산 + IL-2 + IL-15로 12일 동안 배양된 건강한 기증자 유래 PBMC(이펙터)를 24시간 동안 다양한 농도의 이중특이적 항체의 존재 하에 및 1:1 E:T 비율로 CFSE 표지된 MOLM-13 세포(표적)와 공동 배양하였다. 도 18은 항-TRGV9/항-CD33 이중특이적 항체가 시험관내에서 MOLM-13 세포를 발현하는 CD33에 대한 γδ T 세포 세포독성(전체 PBMC로부터)을 매개함을 보여준다. 도 18의 용량 반응 곡선은 용량 의존적 방식으로 CD33 발현 kasumi-3 세포에 대한 항-TRGV9/항-CD33 및 항-TRGV9/항-NULL 이중특이적 항체 매개된 γδ T 세포 세포독성을 나타낸다. 표시된 세포독성 값은 이중특이적 항체의 비존재 하에 관찰된 기본 세포독성 값에서 차감한 것이다. EC50 값은 방법에 기술된 바에 따라 계산하였다. 여기에 표시되는 대표적인 데이터는 단일 실험으로부터 도출된 것이다.
실시예 19: 인실리코 분석 및 NKK 라이브러리 설계
본원에서 확인된 VH 및 VL 도메인의 인실리코 분석을 수행하여 이들 VH 및 VL 도메인이 번역 후 변형(PTM)을 거칠 잠재성을 평가하였다. NNK 라이브러리를 특정 PTM 부위에서 생성하고 잠재적인 PTM에서 아미노산 돌연변이의 영향을 확인하기 위해 스크리닝하였다.
잠재적인 PTM 위험은 NG, DG, 및 DP를 포함한 모티프 식별에 중점을 둔 내부 서열 분석 도구를 사용하여 식별하였다. NNK 포화 돌연변이 유발 라이브러리는 각 모티프의 첫 번째 및 두 번째 위치에 대해 설계하였다. NNK 라이브러리는 20개 아미노산 모두가 라이브러리에 표시되도록 코돈(N=A, G, C, T; K=G, T)을 사용하였다. 주입 클로닝에 의해 대장균 발현 플라스미드로 라이브러리를 클로닝하였다. 라이브러리를 플레이팅하고 콜로니를 단리하여 돌연변이된 PTM을 나타내었다. 도 19는 박스에서 NNK 라이브러리에 대해 선택된 PTM과 함께 PTM의 인실리코 분석을 나타낸 것이다.
실시예 20: NNK 라이브러리로부터 생성된 scFv 변이체의 열안정성 시험
실시예 19에서 생성된 모 및 돌연변이된 scFv 클론의 열안정성을 평가하였다. 모 클론 및 돌연변이유발 라이브러리의 배양물을 접종하고 밤새 성장시켰다. 발현을 유도하고 상청액을 ELISA로 분석하였다. CD33을 96웰 플레이트에 플레이팅하고 결합 ELISA를 수행하였다. 상층액을 가열을 위해 4개의 개별 플레이트로 나누었다. 검정은 열 안정성을 평가하기 위해, 처리되지 않은 RT, 55℃, 60℃, 65℃에서 수행하였다. 발광 신호를 동일한 클론의 처리되지 않은 실온으로 정규화하였다.
도 20은 C33B1475(서열번호 277)를 기반으로 NNK 라이브러리로부터 생성된 scFv의 열안정성을 나타낸 것이다. 도 21은 C33B1516(서열번호 278)를 기반으로 NNK 라이브러리로부터 생성된 scFv의 열안정성을 나타낸 것이다. 도 22 는 C33B1517SEQ(서열번호 216)를 기반으로 NNK 라이브러리로부터 생성된 scFv의 열안정성을 나타낸 것이다. 도 23 은 C33B1522(서열번호 213)를 기반으로 NNK 라이브러리로부터 생성된 scFv의 열안정성을 나타낸 것이다. 도 24는 NNK 라이브러리의 라이브러리 스크린 동안 식별된 바람직한 잔기에 대한 표이다.
이러한 도면은 돌연변이에 의한 잠재적인 PTM 부위의 제거가 CD33에 대한 결합을 손상시키지 않았거나 열안정성을 감소시키지 않았음을 보여준다. 여러 scFv 클론에서 예상치 못한 안정성의 개선을 보였다.
넘버링된 구현예
본 발명은 또한 다음과 같이 넘버링된 구현예를 제공한다:
넘버링된 구현예 목록(A)
1) CD33에 결합하는 단리된 단백질로서,
a) 서열번호 18의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 19의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 20의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 21의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 22의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 23의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 24의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 25의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 26의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
j) 서열번호 27의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3,
또는 이의 CD33 결합 단편을 포함하는 단리된 단백질.
2) 구현예 1에 있어서,
a) 각각 서열번호 1, 6, 및 12;
b) 각각 서열번호 2, 7, 및 13;
c) 각각 서열번호 1, 8, 및 14;
d) 각각 서열번호 3, 9, 및 13;
e) 각각 서열번호 4, 10, 및 15;
f) 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는
g) 각각 서열번호 5, 11, 및 17의 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
3) 구현예 1 또는 구현예 2에 있어서, scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인 단리된 단백질.
4) 구현예 3에 있어서, VHH인 단리된 단백질.
5) 구현예 3에 있어서, Fab인 단리된 단백질.
6) 구현예 3에 있어서, scFv인 단리된 단백질.
7) 구현예 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함하는 단리된 단백질.
8) CD33에 결합하는 단리된 단백질로서, 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VHH 또는 이의 CD33 결합 단편을 포함하는 단리된 단백질.
9) CD33에 결합하는 단리된 단백질로서,
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
10) 구현예 9에 있어서,
a) 각각 서열번호 28, 36, 및 45;
b) 각각 서열번호 29, 37, 및 46;
c) 각각 서열번호 30, 38, 및 47;
d) 각각 서열번호 31, 39, 및 48;
e) 각각 서열번호 32, 40, 및 49;
f) 각각 서열번호 33, 41, 및 50;
g) 각각 서열번호 34, 42, 및 51;
h) 각각 서열번호 34, 43, 및 51;
i) 각각 서열번호 34, 44, 및 51; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 및 51의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
11) 구현예 9 또는 구현예 10에 있어서,
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 83의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 84의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 86의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 88의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
12) 구현예 11에 있어서,
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
13) 구현예 9 내지 12 중 어느 하나에 있어서, scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인 단리된 단백질.
14) 구현예 13에 있어서, Fab인 단리된 단백질.
15) 구현예 13에 있어서, VHH인 단리된 단백질.
16) 구현예 13에 있어서, scFv인 단리된 단백질.
17) 구현예 16에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 단리된 단백질.
18) 구현예 17에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 단리된 단백질.
19) 구현예 18에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
20) 구현예 19에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
21) 구현예 9 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 또는 61의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 또는 88의 VL을 포함하는 단리된 단백질.
22) 구현예 21에 있어서,
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL; 또는
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL을 포함하는 단리된 단백질.
23) CD33에 결합하는 단리된 단백질로서,
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL; 또는
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL을 포함하는 단리된 단백질.
24) 구현예 23에 있어서, scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인 단리된 단백질.
25) 구현예 24에 있어서, Fab인 단리된 단백질.
26) 구현예 24에 있어서, VHH인 단리된 단백질.
27) 구현예 24에 있어서, scFv인 단리된 단백질.
28) 구현예 27에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 단리된 단백질.
29) 구현예 28에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 단리된 단백질.
30) 구현예 29에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
31) 구현예 30에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
32) CD33에 결합하는 단리된 단백질로서,
a) 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3.
33) 구현예 32에 있어서,
a) 각각 서열번호 89, 90, 및 92;
b) 각각 서열번호 89, 90, 및 93;
c) 각각 서열번호 33, 91, 및 94;
d) 각각 서열번호 167, 168, 및 169;
e) 각각 서열번호 172, 173, 및 174;
f) 각각 서열번호 176, 177, 및 178;
g) 각각 서열번호 89, 90, 및 180; 또는
h) 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
34) 구현예 32 또는 구현예 33에 있어서,
a) 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 105의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3;
b) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 106의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
c) 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 107의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
d) 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 185의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
e) 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 188의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
f) 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 192의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
g) 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 196의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
h) 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 200의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는
i) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 202의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
35) 구현예 34에 있어서,
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199;
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
36) 구현예 32 내지 35 중 어느 하나에 있어서, scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인 단리된 단백질.
37) 구현예 36에 있어서, Fab인 단리된 단백질.
38) 구현예 36에 있어서, VHH인 단리된 단백질.
39) 구현예 36에 있어서, scFv인 단리된 단백질.
40) 구현예 39에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 단리된 단백질.
41) 구현예 40에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 단리된 단백질.
42) 구현예 41에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
43) 구현예 42에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
44) 구현예 32 내지 43 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH 및 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함하는, 단리된 단백질.
45) 구현예 44에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함하는, 단리된 단백질.
46) CD33에 결합하는 단리된 단백질로서,
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함하는 단리된 단백질.
47) 구현예 46에 있어서, scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인 단리된 단백질.
48) 구현예 47에 있어서, Fab인 단리된 단백질.
49) 구현예 47에 있어서, VHH인 단리된 단백질.
50) 구현예 47에 있어서, scFv인 단리된 단백질.
51) 구현예 50에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 단리된 단백질.
52) 구현예 51에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 단리된 단백질.
53) 구현예 52에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
54) 구현예 53에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
55) 구현예 1 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 단백질은 반감기 연장 모이어티에 접합된, 단리된 단백질.
56) 구현예 55에 있어서, 반감기 연장 모이어티는 면역글로불린(Ig), Ig의 단편, Ig 불변 영역, Ig 불변 영역의 단편, Fc 영역, 트랜스페린, 알부민, 알부민 결합 도메인, 또는 폴리에틸렌 글리콜인, 단리된 단백질.
57) 구현예 1 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 단일특이적 단백질인 단리된 단백질.
58) 구현예 1 내지 57 중 어느 하나에 있어서, 다중특이적 단백질인 단리된 단백질.
59) 구현예 58에 있어서, 다중특이적 단백질은 이중특이적 단백질인, 단리된 단백질.
60) 구현예 59에 있어서, 다중특이적 단백질은 삼중특이적 단백질인, 단리된 단백질.
61) 구현예 1 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 이의 Ig 불변 영역의 단편을 추가로 포함하는 단리된 단백질.
62) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 Fc 영역을 포함하는, 단리된 단백질.
63) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
64) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
65) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
66) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지의 적어도 일부, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
67) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
68) 구현예 61 내지 67 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 N-말단에 접합되는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질.
69) 구현예 61 내지 67 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 C-말단에 접합되는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질.
70) 구현예 61 내지 69 중 어느 하나에 있어서, 제2 링커(L2)를 통해 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합되는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질.
71) 구현예 70에 있어서, L2는 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
72) 구현예 58 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 다중특이적 단백질은 림프구 상의 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
73) 구현예 72에 있어서, 림프구는 T 세포인, 단리된 단백질.
74) 구현예 72에 있어서, T 세포는 CD8+ T 세포인, 단리된 단백질.
75) 구현예 72에 있어서, 림프구는 자연 살해(NK) 세포인, 단리된 단백질.
76) 구현예 58 내지 75 중 어느 하나에 있어서, 다중특이적 단백질은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, TRGV9, 또는 NKG2C에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
77) 구현예 76에 있어서, 다중특이적 단백질은 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
78) 구현예 77에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 141의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 142의 HCDR2, 서열번호 143의 HCDR3, 서열번호 144의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 145의 LCDR2, 및 서열번호 146의 LCDR3;
b) 서열번호 147의 VH 및 서열번호 148의 VL;
c) 서열번호 149의 HCDR1, 서열번호 150의 HCDR2, 서열번호 151의 HCDR3, 서열번호 152의 LCDR1, 서열번호 153의 LCDR2, 및 서열번호 154의 LCDR3; 또는
d) 서열번호 155의 VH 및 서열번호 156의 VL을 포함하는, 단리된 단백질.
79) 구현예 76에 있어서, 다중특이적 단백질은 TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
80) 구현예 79에 있어서, TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 238의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
b) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 242의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
c) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 243의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
d) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 244의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
e) 서열번호 245의 VH 및 서열번호 249의 VL;
f) 서열번호 246의 VH 및 서열번호 249의 VL;
g) 서열번호 247의 VH 및 서열번호 249의 VL; 또는
h) 서열번호 248의 VH 및 서열번호 249의 VL을 포함하는, 단리된 단백질.
81) 구현예 61 내지 80 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 이소형인, 단리된 단백질.
82) 구현예 61 내지 81 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 단백질.
83) 구현예 82에 있어서, FcγR에 대한 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이는 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/ L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S, 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 단백질.
84) 구현예 61 내지 81 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 FcγR에 대한 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 단백질.
85) 구현예 84에 있어서, FcγR에 대한 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 단백질.
86) 구현예 82 내지 85 중 어느 하나에 있어서, FcγR은 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의의 조합인, 단리된 단백질.
87) 구현예 61 내지 86 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 단백질.
88) 구현예 87에 있어서, 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이는 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 단백질.
89) 구현예 61 내지 88 중 어느 하나에 있어서, 단백질은 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 단백질.
90) 구현예 89에 있어서, Ig 불변 영역의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이는 T350V, L351Y, F405A, Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V, 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 단백질.
91) 구현예 1 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 단백질은 키메라 항원 수용체(CAR)인, 단리된 단백질.
92) 구현예 91에 있어서, CAR은
a) 구현예 1 내지 54 중 어느 하나의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인;
b) 막관통 도메인; 및
c) 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 임의로 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
93) 구현예 91 또는 구현예 92에 있어서, CAR은 CD8a-힌지 영역을 추가로 포함하는, 단리된 단백질.
94) 구현예 91 내지 93 중 어느 하나에 있어서,
a) 막관통 도메인은 CD8a 막관통 영역(CD8a-TM) 폴리펩티드를 포함하고;
b) 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분을 포함하는 공동 자극 도메인 및 T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
95) 구현예 91 내지 93 중 어느 하나에 있어서,
a) CD8a-힌지 영역은 서열번호 157의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
b) 막관통 도메인은 서열번호 162의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
c) 세포내 신호전달 도메인은 서열번호 163의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 공동 자극 도메인 및 서열번호 164의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
96) 구현예 95에 있어서, 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분, T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분, 분화 클러스터(CD27) 성분, 분화 클러스터 수퍼패밀리 구성원 성분, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드 성분을 포함하는, 단리된 단백질.
97) 구현예 1 내지 96 중 어느 하나의 단리된 단백질 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
98) 구현예 1 내지 96 중 어느 하나의 단리된 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드.
99) 구현예 98의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
100) 구현예 99의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
101) 구현예 1 내지 96 중 어느 하나의 단리된 단백질을 생성하는 방법으로서, 단백질이 발현되는 조건에서 구현예 100의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 숙주 세포에 의해 생성된 단백질을 회수하는 단계를 포함하는 방법.
102) 구현예 1 내지 96 중 어느 하나의 단리된 단백질에 결합하는 항이디오타입 항체.
103) 구현예 1 내지 96 중 어느 하나의 단리된 단백질을 포함하는 키트.
104) 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
105) 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
106) 대상체에서 CD33 발현 암의 확립을 예방하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
107) CD33 발현 암이 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
넘버링된 구현예 목록(B)
1) CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질.
2) 구현예 1에 있어서, 림프구 항원은 T 세포 항원인, 단리된 다중특이적 단백질.
3) 구현예 1에 있어서, T 세포 항원은 CD8+ T 세포 항원인, 단리된 다중특이적 단백질.
4) 구현예 1에 있어서, 림프구 항원은 NK 세포 항원인, 단리된 다중특이적 단백질.
5) 구현예 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 림프구 항원은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, TRGV9, 또는 NKG2C인, 단리된 다중특이적 단백질.
6) 구현예 5에 있어서, 림프구 항원은 CD3ε인, 단리된 다중특이적 단백질.
7) 구현예 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
8) 구현예 7에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fab를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
9) 구현예 7에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
10) 구현예 7에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
11) 구현예 10에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
12) 구현예 11에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
13) 구현예 12에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
14) 구현예 13에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
15) 구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 1, 2, 3, 4, 또는 5 중 어느 하나의 HCDR1, 서열번호 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11 중 어느 하나의 HCDR2, 및 서열번호 12, 13, 14, 15, 16, 또는 17 중 어느 하나의 HCDR3을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
16) 구현예 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 각각 서열번호 1, 6, 및 12;
b) 각각 서열번호 2, 7, 및 13;
c) 각각 서열번호 1, 8, 및 14;
d) 각각 서열번호 3, 9, 및 13;
e) 각각 서열번호 4, 10, 및 15;
f) 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는
g) 각각 서열번호 5, 11, 및 17의 HCDR1, HCDR2, HCDR3,
h) 또는 이의 CD33 결합 단편을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
17) 구현예 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
18) 구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 또는 35의 HCDR1, 서열번호 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 또는 44의 HCDR2, 서열번호 45, 46, 47, 48, 49, 50, 또는 51의 HCDR3, 서열번호 62, 63, 64, 65, 66, 67, 또는 68의 LCDR1, 서열번호 69, 70, 71, 72, 73, 또는 74의 LCDR2, 및 서열번호 75, 76, 77, 78, 79, 또는 80의 LCDR3을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
19) 구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
20) 구현예 1 내지 14, 18, 및 19 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 또는 61의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 또는 88의 VL을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
21) 구현예 1 내지 14 및 18 내지 20 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL; 또는
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
22) 구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 33, 89, 167, 172, 또는 176의 HCDR1, 서열번호 90, 91, 168, 173, 또는 177의 HCDR2, 서열번호 92, 93, 94, 169, 174, 178, 또는 180의 HCDR3, 서열번호 98, 99, 100, 182, 186, 189, 193, 197, 또는 201의 LCDR1, 서열번호 101, 102, 103, 183, 187, 190, 194, 또는 198의 LCDR2, 및 서열번호 104, 184, 191, 195, 또는 199의 LCDR3을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
23) 구현예 1 내지 14 및 22 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199; 또는
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
24) 구현예 1 내지 14, 22, 및 23 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH 및 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
25) 구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
26) 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 141의 HCDR1, 서열번호 142의 HCDR2, 서열번호 143의 HCDR3, 서열번호 144의 LCDR1, 서열번호 145의 LCDR2, 및 서열번호 146의 LCDR3;
b) 서열번호 147의 VH 및 서열번호 148의 VL;
c) 서열번호 149의 HCDR1, 서열번호 150의 HCDR2, 서열번호 151의 HCDR3, 서열번호 152의 LCDR1, 서열번호 153의 LCDR2, 및 서열번호 154의 LCDR3; 또는
d) 서열번호 155의 VH 및 서열번호 156의 VL을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
27) 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 238의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
b) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 242의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
c) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 243의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
d) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 244의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
e) 서열번호 245의 VH 및 서열번호 249의 VL;
f) 서열번호 246의 VH 및 서열번호 249의 VL;
g) 서열번호 247의 VH 및 서열번호 249의 VL; 또는
h) 서열번호 248의 VH 및 서열번호 249의 VL을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
28) 구현예 1 내지 27 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 제1 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편에 접합되고/되거나, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 제2 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편에 접합되는, 단리된 다중특이적 단백질.
29) 구현예 28에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인과 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 사이, 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인과 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편 사이에 제2 링커(L2)를 추가로 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
30) 구현예 29에 있어서, L2는 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
31) 구현예 27 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2, 및 IgG3 또는 IgG4 이소형인, 단리된 다중특이적 단백질.
32) 구현예 28 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
33) 구현예 32에 있어서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이는 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/ L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S, 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 다중특이적 단백질.
34) 구현예 28 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
35) 구현예 34에 있어서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 다중특이적 단백질.
36) 구현예 32 내지 35 중 어느 하나에 있어서, FcγR은 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의의 조합인, 단리된 다중특이적 단백질.
37) 구현예 28 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
38) 구현예 37에 있어서, 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이는 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 다중특이적 단백질.
39) 구현예 28 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
40) 구현예 39에 있어서, 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이는 T350V, L351Y, F405A,Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V, 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 다중특이적 단백질.
41) 구현예 28 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은
a) 제1 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V 및 제2 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W 돌연변이; 또는
b) 제1 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W 및 제2 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V 돌연변이를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
41) 구현예 1 내지 41 중 어느 하나의 단리된 다중특이적 단백질을 포함하는 키트.
42) 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
43) 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
44) 대상체에서 CD33 발현 암의 확립을 예방하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
45) CD33 발현 암이 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
넘버링된 구현예 목록(C):
1) 제제에 접합된 단리된 단백질을 포함하는 면역접합체로서, 단리된 단백질은
a) 서열번호 18의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 19의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 20의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 21의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 22의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 23의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 24의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 25의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 26의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
j) 서열번호 27의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3,
또는 이의 CD33 결합 단편을 포함하는, 면역접합체.
2) 구현예 1에 있어서, 단리된 단백질은
a) 각각 서열번호 1, 6, 및 12;
b) 각각 서열번호 2, 7, 및 13;
c) 각각 서열번호 1, 8, 및 14;
d) 각각 서열번호 3, 9, 및 13;
e) 각각 서열번호 4, 10, 및 15;
f) 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는
g) 각각 서열번호 5, 11, 및 17의 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는, 면역접합체.
3) 구현예 1 또는 구현예 2에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인, 면역접합체.
4) 구현예 3에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 VHH인, 면역접합체.
5) 구현예 3에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab인, 면역접합체.
6) 구현예 3에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv인, 면역접합체.
7) 구현예 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함하는, 면역접합체.
8) 제제에 접합된 단리된 단백질을 포함하는 면역접합체로서, 단리된 단백질은 CD33에 결합하고, 단리된 단백질은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VHH를 포함하는, 면역접합체.
9) 제제에 접합된 단리된 단백질을 포함하는 면역접합체로서, 단리된 단백질은 CD33에 결합하고, 단리된 단백질은
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는, 면역접합체.
10) 구현예 9에 있어서, 단리된 단백질은
a) 각각 서열번호 28, 36, 및 45;
b) 각각 서열번호 29, 37, 및 46;
c) 각각 서열번호 30, 38, 및 47;
d) 각각 서열번호 31, 39, 및 48;
e) 각각 서열번호 32, 40, 및 49;
f) 각각 서열번호 33, 41, 및 50;
g) 각각 서열번호 34, 42, 및 51;
h) 각각 서열번호 34, 43, 및 51;
i) 각각 서열번호 34, 44, 및 51; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 및 51의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는, 면역접합체.
11) 구현예 9 또는 구현예 10에 있어서, 단리된 단백질은
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 83의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 84의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 86의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 88의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 면역접합체.
12) 구현예 11에 있어서, 단리된 단백질은
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 면역접합체.
13) 구현예 9 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인, 면역접합체.
14) 구현예 13에 있어서, 단리된 단백질은 Fab인, 면역접합체.
15) 구현예 13에 있어서, 단리된 단백질은 VHH인, 면역접합체.
16) 구현예 13에 있어서, 단리된 단백질은 scFv인, 면역접합체.
17) 구현예 16에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 면역접합체.
18) 구현예 17에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 면역접합체.
19) 구현예 18에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 면역접합체.
20) 구현예 19에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 면역접합체.
21) 구현예 9 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 또는 61의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 또는 88의 VL을 포함하는, 면역접합체.
22) 구현예 21에 있어서, 단리된 단백질은
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL; 또는
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL을 포함하는, 면역접합체.
23) 제제에 접합된 단리된 단백질을 포함하는 면역접합체로서, 단리된 단백질은 CD33에 결합하고, 단리된 단백질은
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL; 또는
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL을 포함하는, 면역접합체.
24) 구현예 23에 있어서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인, 면역접합체.
25) 구현예 24에 있어서, 단리된 단백질은 Fab인, 면역접합체.
26) 구현예 24에 있어서, 단리된 단백질은 VHH인, 면역접합체.
27) 구현예 24에 있어서, 단리된 단백질은 scFv인, 면역접합체.
28) 구현예 27에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 면역접합체.
29) 구현예 28에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 면역접합체.
30) 구현예 29에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 면역접합체.
31) 구현예 30에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 면역접합체.
32) 제제에 접합된 단리된 단백질을 포함하는 면역접합체로서, 단리된 단백질은 CD33에 결합하고, 단리된 단백질은
a) 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는, 면역접합체.
33) 구현예 32에 있어서,
a) 각각 서열번호 89, 90, 및 92;
b) 각각 서열번호 89, 90, 및 93;
c) 각각 서열번호 33, 91, 및 94;
d) 각각 서열번호 167, 168, 및 169;
e) 각각 서열번호 172, 173, 및 174;
f) 각각 서열번호 176, 177, 및 178;
g) 각각 서열번호 89, 90, 및 180; 또는
h) 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는, 면역접합체.
34) 구현예 32 또는 구현예 33에 있어서, 단리된 단백질은
a) 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 105의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3;
b) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 106의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
c) 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 107의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
d) 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 185의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
e) 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 188의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
f) 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 192의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
g) 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 196의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
h) 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 200의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는
i) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 202의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 면역접합체.
35) 구현예 34에 있어서,
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199;
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 면역접합체.
36) 구현예 32 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인, 면역접합체.
37) 구현예 36에 있어서, 단리된 단백질은 Fab인, 면역접합체.
38) 구현예 36에 있어서, 단리된 단백질은 VHH인, 면역접합체.
39) 구현예 36에 있어서, 단리된 단백질은 scFv인, 면역접합체.
40) 구현예 39에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 면역접합체.
41) 구현예 40에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 면역접합체.
42) 구현예 41에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 면역접합체.
43) 구현예 42에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 면역접합체.
44) 구현예 32 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH 및 서열번호 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함하는, 면역접합체.
45) 구현예 44에 있어서, 단리된 단백질은
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함하는, 면역접합체.
46) 제제에 접합된 단리된 단백질을 포함하는 면역접합체로서, 단리된 단백질은 CD33에 결합하고, 단리된 단백질은
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함하는, 면역접합체.
47) 구현예 46에 있어서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인, 면역접합체.
48) 구현예 47에 있어서, 단리된 단백질은 Fab인, 면역접합체.
49) 구현예 47에 있어서, 단리된 단백질은 VHH인, 면역접합체.
50) 구현예 47에 있어서, 단리된 단백질은 scFv인, 면역접합체.
51) 구현예 50에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 면역접합체.
52) 구현예 51에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 면역접합체.
53) 구현예 52에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 면역접합체.
54) 구현예 53에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 면역접합체.
55) 구현예 1 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 반감기 연장 모이어티에 접합된, 면역접합체.
56) 구현예 55에 있어서, 반감기 연장 모이어티는 면역글로불린(Ig), Ig의 단편, Ig 불변 영역, Ig 불변 영역의 단편, Fc 영역, 트랜스페린, 알부민, 알부민 결합 도메인, 또는 폴리에틸렌 글리콜인, 면역접합체.
57) 구현예 1 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 단일특이적 단백질인, 면역접합체.
58) 구현예 1 내지 57 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 다중특이적 단백질인, 면역접합체.
59) 구현예 58에 있어서, 다중특이적 단백질은 이중특이적 단백질인, 면역접합체.
60) 구현예 59에 있어서, 다중특이적 단백질은 삼중특이적 단백질인, 면역접합체.
61) 구현예 1 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 이의 Ig 불변 영역의 단편을 추가로 포함하는 면역접합체.
62) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 Fc 영역을 포함하는, 면역접합체.
63) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인을 포함하는, 면역접합체.
64) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 CH3 도메인을 포함하는, 면역접합체.
65) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는, 면역접합체.
66) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지의 적어도 일부, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는, 면역접합체.
67) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는, 면역접합체.
68) 구현예 61 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 N-말단에 접합되는, 면역접합체.
69) 구현예 61 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 C-말단에 접합되는, 면역접합체.
70) 구현예 61 내지 69 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 제2 링커(L2)를 통해 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합되는, 면역접합체.
71) 구현예 70에 있어서, L2는 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 면역접합체.
72) 구현예 58 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 다중특이적 단백질은 림프구 상의 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 면역접합체.
73) 구현예 72에 있어서, 림프구는 T 세포인, 면역접합체.
74) 구현예 72에 있어서, T 세포는 CD8+ T 세포인, 면역접합체.
75) 구현예 72에 있어서, 림프구는 자연 살해(NK) 세포인, 면역접합체.
76) 구현예 58 내지 75 중 어느 하나에 있어서, 다중특이적 단백질은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, TRGV9, 또는 NKG2C에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 면역접합체.
77) 구현예 76에 있어서, 다중특이적 단백질은 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 면역접합체.
78) 구현예 77에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 141의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 142의 HCDR2, 서열번호 143의 HCDR3, 서열번호 144의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 145의 LCDR2, 및 서열번호 146의 LCDR3;
b) 서열번호 147의 VH 및 서열번호 148의 VL;
c) 서열번호 149의 HCDR1, 서열번호 150의 HCDR2, 서열번호 151의 HCDR3, 서열번호 152의 LCDR1, 서열번호 153의 LCDR2, 및 서열번호 154의 LCDR3; 또는
d) 서열번호 155의 VH 및 서열번호 156의 VL을 포함하는, 면역접합체.
79) 구현예 76에 있어서, 다중특이적 단백질은 TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 면역접합체.
80) 구현예 77에 있어서, TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 238의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
b) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 242의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
c) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 243의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
d) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 244의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
e) 서열번호 245의 VH 및 서열번호 249의 VL;
f) 서열번호 246의 VH 및 서열번호 249의 VL;
g) 서열번호 247의 VH 및 서열번호 249의 VL; 또는
h) 서열번호 248의 VH 및 서열번호 249의 VL을 포함하는, 면역접합체.
81) 구현예 61 내지 80 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 이소형인, 면역접합체.
82) 구현예 61 내지 81 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 면역접합체.
83) 구현예 82에 있어서, FcγR에 대한 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이는 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/ L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S, 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 면역접합체.
84) 구현예 61 내지 81 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 FcγR에 대한 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 면역접합체.
85) 구현예 84에 있어서, FcγR에 대한 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 면역접합체.
86) 구현예 80 내지 85 중 어느 하나에 있어서, FcγR은 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의의 조합인, 면역접합체.
87) 구현예 61 내지 86 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 면역접합체.
88) 구현예 87에 있어서, 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이는 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 면역접합체.
89) 구현예 61 내지 88 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 면역접합체.
90) 구현예 89에 있어서, Ig 불변 영역의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이는 T350V, L351Y, F405A, Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V, 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 면역접합체.
91) 구현예 1 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 키메라 항원 수용체(CAR)인, 면역접합체.
92) 구현예 91에 있어서, CAR은
a) 구현예 1 내지 54 중 어느 하나에서 정의된 바와 같은 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인;
b) 막관통 도메인; 및
c) 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 임의로 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하는, 면역접합체.
93) 구현예 91 또는 구현예 92에 있어서, CAR은 CD8a-힌지 영역을 추가로 포함하는, 면역접합체.
94) 구현예 91 내지 93 중 어느 하나에 있어서,
a) 막관통 도메인은 CD8a 막관통 영역(CD8a-TM) 폴리펩티드를 포함하고;
b) 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분을 포함하는 공동 자극 도메인 및 T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는, 면역접합체.
95) 구현예 91 내지 93 중 어느 하나에 있어서,
a) CD8a-힌지 영역은 서열번호 157의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
b) 막관통 도메인은 서열번호 162의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
c) 세포내 신호전달 도메인은 서열번호 163의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 공동 자극 도메인 및 서열번호 164의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는, 면역접합체.
96) 구현예 95에 있어서, 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분, T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분, 분화 클러스터(CD27) 성분, 분화 클러스터 수퍼패밀리 구성원 성분, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드 성분을 포함하는, 면역접합체.
97) 구현예 1 내지 96 중 어느 하나에 있어서, 제제는 치료제 또는 조영제인, 면역접합체.
98) 구현예 1 내지 96 중 어느 하나의 면역접합체 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
99) 구현예 1 내지 96 중 어느 하나의 면역접합체의 단리된 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드.
100) 구현예 99의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
101) 구현예 100의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
102) 구현예 1 내지 96 중 어느 하나의 면역접합체를 생성하는 방법으로서, 단백질이 발현되는 조건에서 구현예 101의 숙주 세포를 배양하는 단계, 숙주 세포에 의해 생성된 단백질을 회수하는 단계, 및 숙주 세포에 의해 생성된 단백질을 제제와 접합시키는 단계를 포함하는 방법.
103) 제제에 접합된 단리된 다중특이적 단백질을 포함하는 면역접합체로서, 단리된 다중특이적 단백질은 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는, 면역접합체.
104) 구현예 103에 있어서, 림프구 항원은 T 세포 항원인, 면역접합체.
105) 구현예 103에 있어서, T 세포 항원은 CD8+ T 세포 항원인, 면역접합체.
106) 구현예 103에 있어서, 림프구 항원은 NK 세포 항원인, 면역접합체.
107) 구현예 103 내지 106 중 어느 하나에 있어서, 림프구 항원은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, TRGV9, 또는 NKG2C인, 면역접합체.
108) 구현예 107에 있어서, 림프구 항원은 CD3ε인, 면역접합체.
109) 구현예 103 내지 108 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH를 포함하는, 면역접합체.
110) 구현예 109에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fab를 포함하는, 면역접합체.
111) 구현예 109에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH를 포함하는, 면역접합체.
112) 구현예 110에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하는, 면역접합체.
113) 구현예 112에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 면역접합체.
114) 구현예 113에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 면역접합체.
115) 구현예 114에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 면역접합체.
116) 구현예 115에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 면역접합체.
117) 구현예 103 내지 116 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 1, 2, 3, 4, 또는 5 중 어느 하나의 HCDR1, 서열번호 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11 중 어느 하나의 HCDR2, 및 서열번호 12, 13, 14, 15, 16, 또는 17 중 어느 하나의 HCDR3을 포함하는, 면역접합체.
118) 구현예 103 내지 117 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 각각 서열번호 1, 6, 및 12;
b) 각각 서열번호 2, 7, 및 13;
c) 각각 서열번호 1, 8, 및 14;
d) 각각 서열번호 3, 9, 및 13;
e) 각각 서열번호 4, 10, 및 15;
f) 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는
g) 각각 서열번호 5, 11, 및 17의 HCDR1, HCDR1, HCDR3을 포함하는, 면역접합체.
119) 구현예 103 내지 118 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함하는, 면역접합체.
120) 구현예 103 내지 116 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 또는 35의 HCDR1, 서열번호 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 또는 44의 HCDR2, 서열번호 45, 46, 47, 48, 49, 50, 또는 51의 HCDR3, 서열번호 62, 63, 64, 65, 66, 67, 또는 68의 LCDR1, 서열번호 69, 70, 71, 72, 73, 또는 74의 LCDR2, 및 서열번호 75, 76, 77, 78, 79, 또는 80의 LCDR3을 포함하는, 면역접합체.
121) 구현예 103 내지 116 및 120 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 면역접합체.
122) 구현예 103 내지 116, 120, 및 121 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 또는 61의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 또는 88의 VL을 포함하는, 면역접합체.
123) 구현예 103 내지 116 및 120 내지 122 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL; 또는
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL을 포함하는, 면역접합체.
124) 구현예 103 내지 116 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 33, 89, 167, 172, 또는 176의 HCDR1, 서열번호 90, 91, 168, 173, 또는 177의 HCDR2, 서열번호 92, 93, 94, 169, 174, 178, 또는 180의 HCDR3, 서열번호 98, 99, 100, 182, 186, 189, 193, 197, 또는 201의 LCDR1, 서열번호 101, 102, 103, 183, 187, 190, 194, 또는 198의 LCDR2, 및 서열번호 104, 184, 191, 195, 또는 199의 LCDR3을 포함하는, 면역접합체.
125) 구현예 103 내지 116 및 124 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199; 또는
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 면역접합체.
126) 구현예 103 내지 116, 124, 및 125 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 또는 179의 VH 및 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함하는, 면역접합체.
127) 구현예 103 내지 116 및 124 내지 126 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함하는, 면역접합체.
128) 구현예 103 내지 127 중 어느 하나에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 141의 HCDR1, 서열번호 142의 HCDR2, 서열번호 143의 HCDR3, 서열번호 144의 LCDR1, 서열번호 145의 LCDR2, 및 서열번호 146의 LCDR3;
b) 서열번호 147의 VH 및 서열번호 148의 VL;
c) 서열번호 149의 HCDR1, 서열번호 150의 HCDR2, 서열번호 151의 HCDR3, 서열번호 152의 LCDR1, 서열번호 153의 LCDR2, 및 서열번호 154의 LCDR3; 또는
d) 서열번호 155의 VH 및 서열번호 156의 VL을 포함하는, 면역접합체.
129) 구현예 101 내지 128 중 어느 하나에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 238의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
b) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 242의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
c) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 243의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
d) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 244의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
e) 서열번호 245의 VH 및 서열번호 249의 VL;
f) 서열번호 246의 VH 및 서열번호 249의 VL;
g) 서열번호 247의 VH 및 서열번호 249의 VL; 또는
h) 서열번호 248의 VH 및 서열번호 249의 VL을 포함하는, 면역접합체.
130) 구현예 103 내지 129 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 제1 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편에 접합되고/되거나, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 제2 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편에 접합되는, 면역접합체.
131) 구현예 130에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인과 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 사이, 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인과 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편 사이에 제2 링커(L2)를 추가로 포함하는, 면역접합체.
132) 구현예 131에 있어서, L2는 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 면역접합체.
133) 구현예 130 내지 132 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2, 및 IgG3 또는 IgG4 이소형인, 면역접합체.
134) 구현예 130 내지 133 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 면역접합체.
135) 구현예 134에 있어서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이는 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/ L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S, 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 면역접합체.
136) 구현예 130 내지 133 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 면역접합체.
137) 구현예 136에 있어서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 면역접합체.
138) 구현예 134 내지 137 중 어느 하나에 있어서, FcγR은 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의의 조합인, 면역접합체.
139) 구현예 130 내지 138 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 면역접합체.
140) 구현예 139에 있어서, 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이는 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 면역접합체.
141) 구현예 130 내지 140 중 어느 하나에 있어서, 단백질은 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 면역접합체.
142) 구현예 141에 있어서, 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이는 T350V, L351Y, F405A,Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V, 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 면역접합체.
143) 구현예 130 내지 142 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은
a) 제1 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V 및 제2 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W 돌연변이; 또는
b) 제1 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W 및 제2 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V 돌연변이를 포함하는, 면역접합체.
144) 구현예 103 내지 143 중 어느 하나에 있어서, 제제는 치료제 또는 조영제인, 면역접합체.
145) 구현예 103 내지 143 중 어느 하나의 면역접합체 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
146) 구현예 103 내지 143 중 어느 하나의 면역접합체의 단리된 다중특이적 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드.
147) 구현예146의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
148) 구현예 147의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
149) 구현예 103 내지 143 중 어느 하나의 면역접합체를 생성하는 방법으로서, 다중특이적 단백질이 발현되는 조건에서 구현예 148의 숙주 세포를 배양하는 단계, 숙주 세포에 의해 생성된 다중특이적 단백질을 회수하는 단계, 및 다중특이적 단백질을 제제에 접합시키는 단계를 포함하는 방법.
150) 구현예 1 내지 96 및 103 내지 143 중 어느 하나에 있어서, 제제는 방사성 제제인, 면역접합체.
151) 구현예 150에 있어서, 방사성 제제는 방사성 금속 이온을 포함하는, 면역접합체.
152) 구현예 151에 있어서, 방사성 금속 이온은 32P, 47Sc, 67Cu, 77As, 89Sr, 90Y, 99Tc, 105Rh, 109Pd, 111Ag, 131I, 153Sm, 159Gd, 165Dy, 166Ho, 169Er, 177Lu, 186Re, 188Re, 194Ir, 198Au, 199Au, 211At, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 255Fm, 227Th, 62Cu, 64Cu, 67Ga, 68Ga, 86Y, 89Zr, 또는 111In인, 면역접합체.
153) 구현예 151에 있어서, 방사성 금속 이온은 225Ac, 111In, 또는 89Zr인, 면역접합체.
154) 구현예 151에 있어서, 방사성 금속 이온은 225Ac인, 면역접합체.
155) 구현예 151 내지 154 중 어느 하나에 있어서, 방사성 금속 이온은 킬레이트화 모이어티에 접합된, 면역접합체.
156) 구현예 155에 있어서, 킬레이트화 모이어티는 화학식 I의 구조:
[화학식 I]
Figure pat00045
(상기 식에서, 각각의 R1, R2, R3, 및 R4는 독립적으로 CHQCO2X
(Q는 독립적으로 수소, C1-C4 알킬, 또는 (C1-C2 알킬)페닐이고,
X는 독립적으로 수소, 벤질, C1-C4 알킬임)이고;
Z는 (CH2)nY
(n은 1~10이고,
Y는 제2 클릭 반응 파트너에 공유 연결된 친전자성 또는 친핵성 모이어티임)이고;
대안적으로, Z는 수소이고;
각각의 R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 CHQCO2X
(Q는 독립적으로 수소, C1-C4 알킬, 또는 (C1-C2 알킬)페닐이고,
X는 독립적으로 수소, 벤질, C1-C4 알킬이거나, 또는 제2 클릭 반응 파트너에 공유 연결된 친전자성 또는 친핵성 모이어티임)이고;
대안적으로, 킬레이트제는 개방 사슬 리간드를 포함함)를 갖는 거대고리를 포함하는, 면역접합체.
157) 구현예 155에 있어서, 킬레이트화 모이어티는 화학식 II의 구조:
[화학식 II]
Figure pat00046
또는 화학식 III의 구조:
[화학식 III]
Figure pat00047
를 갖는 거대고리를 포함하는, 면역접합체.
158) 화학식 IV의 면역접합체로서,
[화학식 IV]
Figure pat00048
단백질은 구현예 1 내지 96 중 어느 하나에서 정의된 바와 같은 단리된 단백질인, 면역접합체.
159) 화학식 V의 면역접합체로서,
[화학식 V]
Figure pat00049
단백질은 구현예 1 내지 96 중 어느 하나에서 정의된 바와 같은 단리된 단백질인, 면역접합체.
160) 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
161) 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
162) 대상체에서 CD33 발현 암의 확립을 예방하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
163) CD33 발현 암이 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
넘버링된 구현예 목록(D):
1) CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 치료적 유효량의 단리된 단백질을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법으로서, 단리된 단백질은 CD33에 결합하고, 단리된 단백질은
a) 서열번호 18의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 19의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 20의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 21의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 22의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 23의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 24의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 25의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 26의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
j) 서열번호 27의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3,
또는 이의 CD33 결합 단편을 포함하는, 방법.
2) 구현예 1에 있어서, 단리된 단백질은
a) 각각 서열번호 1, 6, 및 12;
b) 각각 서열번호 2, 7, 및 13;
c) 각각 서열번호 1, 8, 및 14;
d) 각각 서열번호 3, 9, 및 13;
e) 각각 서열번호 4, 10, 및 15;
f) 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는
g) 각각 서열번호 5, 11, 및 17의 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는, 방법.
3) 구현예 1 또는 구현예 2에 있어서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인, 방법.
4) 구현예 3에 있어서, 단리된 단백질은 VHH인, 방법.
5) 구현예 3에 있어서, 단리된 단백질은 Fab인, 방법.
6) 구현예 3에 있어서, 단리된 단백질은 scFv인, 방법.
7) 구현예 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함하는, 방법.
8) CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 치료적 유효량의 단리된 단백질을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법으로서, 단리된 단백질은 CD33에 결합하고, 단리된 단백질은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VHH를 포함하는, 방법.
9) CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 치료적 유효량의 단리된 단백질을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법으로서, 단리된 단백질은 CD33에 결합하고, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3,
또는 이의 CD33 결합 단편을 포함하는, 방법.
10) 구현예 9에 있어서, 단리된 단백질은
a) 각각 서열번호 28, 36, 및 45;
b) 각각 서열번호 29, 37, 및 46;
c) 각각 서열번호 30, 38, 및 47;
d) 각각 서열번호 31, 39, 및 48;
e) 각각 서열번호 32, 40, 및 49;
f) 각각 서열번호 33, 41, 및 50;
g) 각각 서열번호 34, 42, 및 51;
h) 각각 서열번호 34, 43, 및 51;
i) 각각 서열번호 34, 44, 및 51; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 및 51의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는, 방법.
11) 구현예 9 또는 구현예 10에 있어서, 단리된 단백질은
a) 서열번호 52의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3;
b) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
c) 서열번호 54의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 83의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
d) 서열번호 55의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 84의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
e) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
f) 서열번호 57의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 86의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
g) 서열번호 58의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
h) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
i) 서열번호 60의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는
j) 서열번호 61의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 88의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 방법.
12) 구현예 11에 있어서,
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 방법.
13) 구현예 9 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인, 방법.
14) 구현예 13에 있어서, 단리된 단백질은 Fab인, 방법.
15) 구현예 13에 있어서, 단리된 단백질은 VHH인, 방법.
16) 구현예 13에 있어서, 단리된 단백질은 scFv인, 방법.
17) 구현예 16에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 방법.
18) 구현예 17에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 방법.
19) 구현예 18에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
20) 구현예 19에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
21) 구현예 9 내지 20 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 또는 61의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 또는 88의 VL을 포함하는, 방법.
22) 구현예 21에 있어서, 단리된 단백질은
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL; 또는
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL을 포함하는, 방법.
23) CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 치료적 유효량의 단리된 단백질을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법으로서, 단리된 단백질은 CD33에 결합하고, 단리된 단백질은
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL; 또는
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL을 포함하는, 방법.
24) 구현예 23에 있어서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인, 방법.
25) 구현예 24에 있어서, 단리된 단백질은 Fab인, 방법.
26) 구현예 24에 있어서, 단리된 단백질은 VHH인, 방법.
27) 구현예 24에 있어서, 단리된 단백질은 scFv인, 방법.
28) 구현예 27에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 방법.
29) 구현예 28에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 방법.
30) 구현예 29에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
31) 구현예 30에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
32) CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 치료적 유효량의 단리된 단백질을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법으로서, 단리된 단백질은 CD33에 결합하고, 단리된 단백질은
a) 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
f) 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
g) 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
h) 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
i) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는, 방법.
33) 구현예 32에 있어서,
a) 각각 서열번호 89, 90, 및 92;
b) 각각 서열번호 89, 90, 및 93;
c) 각각 서열번호 33, 91, 및 94;
d) 각각 서열번호 167, 168, 및 169;
e) 각각 서열번호 172, 173, 및 174;
f) 각각 서열번호 176, 177, 및 178;
g) 각각 서열번호 89, 90, 및 180; 또는
h) 각각 서열번호 89, 90, 및 93의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는, 방법.
34) 구현예 32 또는 구현예 33에 있어서, 단리된 단백질은
a) 서열번호 95의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 105의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)1, LCDR2, 및 LCDR3;
b) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 106의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
c) 서열번호 97의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 107의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
d) 서열번호 170의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 185의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
e) 서열번호 171의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 188의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
f) 서열번호 175의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 192의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
g) 서열번호 179의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 196의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
h) 서열번호 181의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 200의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는
i) 서열번호 96의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 202의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 방법.
35) 구현예 34에 있어서, 단리된 단백질은
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199;
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 방법.
36) 구현예 32 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인, 방법.
37) 구현예 36에 있어서, 단리된 단백질은 Fab인, 방법.
38) 구현예 36에 있어서, 단리된 단백질은 VHH인, 방법.
39) 구현예 36에 있어서, 단리된 단백질은 scFv인, 방법.
40) 구현예 39에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 방법.
41) 구현예 40에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 방법.
42) 구현예 41에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
43) 구현예 42에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
44) 구현예 32 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH 및 서열번호 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함하는, 방법.
45) 구현예 44에 있어서, 단리된 단백질은
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함하는, 방법.
46) CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 치료적 유효량의 단리된 단백질을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법으로서, 단리된 단백질은 CD33에 결합하고, 단리된 단백질은
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함하는, 방법.
47) 구현예 46에 있어서, 단리된 단백질은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인, 방법.
48) 구현예 47에 있어서, 단리된 단백질은 Fab인, 방법.
49) 구현예 47에 있어서, 단리된 단백질은 VHH인, 방법.
50) 구현예 47에 있어서, 단리된 단백질은 scFv인, 방법.
51) 구현예 50에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 방법.
52) 구현예 51에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 방법.
53) 구현예 52에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
54) 구현예 53에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
55) 구현예 1 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 반감기 연장 모이어티에 접합된, 방법.
56) 구현예 55에 있어서, 반감기 연장 모이어티는 면역글로불린(Ig), Ig의 단편, Ig 불변 영역, Ig 불변 영역의 단편, Fc 영역, 트랜스페린, 알부민, 알부민 결합 도메인, 또는 폴리에틸렌 글리콜인, 방법.
57) 구현예 1 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 단일특이적 단백질인, 방법.
58) 구현예 1 내지 57 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 다중특이적 단백질인, 방법.
59) 구현예 58에 있어서, 다중특이적 단백질은 이중특이적 단백질인, 방법.
60) 구현예 59에 있어서, 다중특이적 단백질은 삼중특이적 단백질인, 방법.
61) 구현예 1 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 이의 Ig 불변 영역의 단편을 추가로 포함하는 방법.
62) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 Fc 영역을 포함하는, 방법.
63) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인을 포함하는, 방법.
64) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 CH3 도메인을 포함하는, 방법.
65) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는, 방법.
66) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지의 적어도 일부, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는, 방법.
67) 구현예 61에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는, 방법.
68) 구현예 61 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 N-말단에 접합되는, 방법.
69) 구현예 61 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 C-말단에 접합되는, 방법.
70) 구현예 61 내지 69 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 제2 링커(L2)를 통해 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합되는, 방법.
71) 구현예 70에 있어서, L2는 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
72) 구현예 58 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 다중특이적 단백질은 림프구 상의 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 방법.
73) 구현예 72에 있어서, 림프구는 T 세포인, 방법.
74) 구현예 72에 있어서, T 세포는 CD8+ T 세포인, 방법.
75) 구현예 72에 있어서, 림프구는 자연 살해(NK) 세포인, 방법.
76) 구현예 58 내지 75 중 어느 하나에 있어서, 다중특이적 단백질은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, TRGV9, 또는 NKG2C에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 방법.
77) 구현예 76에 있어서, 다중특이적 단백질은 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 방법.
78) 구현예 77에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 141의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 142의 HCDR2, 서열번호 143의 HCDR3, 서열번호 144의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 145의 LCDR2, 및 서열번호 146의 LCDR3;
b) 서열번호 147의 VH 및 서열번호 148의 VL;
c) 서열번호 149의 HCDR1, 서열번호 150의 HCDR2, 서열번호 151의 HCDR3, 서열번호 152의 LCDR1, 서열번호 153의 LCDR2, 및 서열번호 154의 LCDR3; 또는
d) 서열번호 155의 VH 및 서열번호 156의 VL을 포함하는, 방법.
79) 구현예 76에 있어서, 다중특이적 단백질은 TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
80) 구현예 79에 있어서, TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 238의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
b) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 242의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
c) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 243의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
d) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 244의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
e) 서열번호 245의 VH 및 서열번호 249의 VL;
f) 서열번호 246의 VH 및 서열번호 249의 VL;
g) 서열번호 247의 VH 및 서열번호 249의 VL; 또는
h) 서열번호 248의 VH 및 서열번호 249의 VL을 포함하는, 방법.
81) 구현예 61 내지 80 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 이소형인, 방법.
82) 구현예 61 내지 81 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 방법.
83) 구현예 82에 있어서, FcγR에 대한 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이는 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/ L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S, 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 방법.
84) 구현예 61 내지 81 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 FcγR에 대한 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 방법.
85) 구현예 84에 있어서, FcγR에 대한 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 방법.
86) 구현예 82 내지 85 중 어느 하나에 있어서, FcγR은 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
87) 구현예 61 내지 86 중 어느 하나에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 방법.
88) 구현예 87에 있어서, 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이는 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 방법.
89) 구현예 61 내지 88 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 방법.
90) 구현예 89에 있어서, Ig 불변 영역의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이는 T350V, L351Y, F405A, Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V, 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 방법.
91) 구현예 1 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질은 키메라 항원 수용체(CAR)인, 방법.
92) 구현예 91에 있어서, CAR은
a) 구현예 1 내지 54 중 어느 하나에서 정의된 바와 같은 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인;
b) 막관통 도메인; 및
c) 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 임의로 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하는, 방법.
93) 구현예 91 또는 구현예 92에 있어서, CAR은 CD8a-힌지 영역을 추가로 포함하는, 방법.
94) 구현예 91 내지 93 중 어느 하나에 있어서,
a) 막관통 도메인은 CD8a 막관통 영역(CD8a-TM) 폴리펩티드를 포함하고;
b) 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분을 포함하는 공동 자극 도메인 및 T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는, 방법.
95) 구현예 91 내지 93 중 어느 하나에 있어서,
a) CD8a-힌지 영역은 서열번호 157의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
b) 막관통 도메인은 서열번호 162의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
c) 세포내 신호전달 도메인은 서열번호 163의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 공동 자극 도메인 및 서열번호 164의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는, 방법.
96) 구현예 95에 있어서, 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분, T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분, 분화 클러스터(CD27) 성분, 분화 클러스터 수퍼패밀리 구성원 성분, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드 성분을 포함하는, 방법.
97) CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 치료적 유효량의 단리된 다중특이적 단백질을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법으로서, 단리된 다중특이적 단백질은 CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는, 방법.
98) 구현예 97에 있어서, 림프구 항원은 T 세포 항원인, 방법.
99) 구현예 97에 있어서, T 세포 항원은 CD8+ T 세포 항원인, 방법.
100) 구현예 97에 있어서, 림프구 항원은 NK 세포 항원인, 방법.
101) 구현예 97 내지 100 중 어느 하나에 있어서, 림프구 항원은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, TRGV9, 또는 NKG2C인, 방법.
102) 구현예 101에 있어서, 림프구 항원은 CD3ε인, 방법.
103) 구현예 97 내지 102 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH를 포함하는, 방법.
104) 구현예 103에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fab를 포함하는, 방법.
105) 구현예 103에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH를 포함하는, 방법.
106) 구현예 103에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하는, 방법.
107) 구현예 106에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 방법.
108) 구현예 107에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 방법.
109) 구현예 108에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
110) 구현예 109에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
111) 구현예 97 내지 110 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 1, 2, 3, 4, 또는 5 중 어느 하나의 HCDR1, 서열번호 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11 중 어느 하나의 HCDR2, 및 서열번호 12, 13, 14, 15, 16, 또는 17 중 어느 하나의 HCDR3을 포함하는, 방법.
112) 구현예 97 내지 117 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 각각 서열번호 1, 6, 및 12;
b) 각각 서열번호 2, 7, 및 13;
c) 각각 서열번호 1, 8, 및 14;
d) 각각 서열번호 3, 9, 및 13;
e) 각각 서열번호 4, 10, 및 15;
f) 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는
g) 각각 서열번호 5, 11, 및 17의 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는, 방법.
113) 구현예 97 내지 112 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함하는, 방법.
114) 구현예 97 내지 110 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 또는 35의 HCDR1, 서열번호 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 또는 44의 HCDR2, 서열번호 45, 46, 47, 48, 49, 50, 또는 51의 HCDR3, 서열번호 62, 63, 64, 65, 66, 67, 또는 68의 LCDR1, 서열번호 69, 70, 71, 72, 73, 또는 74의 LCDR2, 및 서열번호 75, 76, 77, 78, 79, 또는 80의 LCDR3을 포함하는, 방법.
115) 구현예 97 내지 110 및 114 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 방법.
116) 구현예 97 내지 110, 114, 및 115 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 또는 61의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 또는 88의 VL을 포함하는, 방법.
117) 구현예 97 내지 110 및 114 내지 116 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL; 또는
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL을 포함하는, 방법.
118) 구현예 97 내지 110 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 33, 89, 167, 172, 또는 176의 HCDR1, 서열번호 90, 91, 168, 173, 또는 177의 HCDR2, 서열번호 92, 93, 94, 169, 174, 178, 또는 180의 HCDR3, 서열번호 98, 99, 100, 182, 186, 189, 193, 197, 또는 201의 LCDR1, 서열번호 101, 102, 103, 183, 187, 190, 194, 또는 198의 LCDR2, 및 서열번호 104, 184, 191, 195, 또는 199의 LCDR3을 포함하는, 방법.
119) 구현예 97 내지 110 및 118 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199; 또는
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 방법.
120) 구현예 97 내지 110, 118, 및 119 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 181, 또는 96의 VH 및 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함하는, 방법.
121) 구현예 97 내지 110 및 118 내지 120 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함하는, 방법.
122) 구현예 97 내지 121 중 어느 하나에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 141의 HCDR1, 서열번호 142의 HCDR2, 서열번호 143의 HCDR3, 서열번호 144의 LCDR1, 서열번호 145의 LCDR2, 및 서열번호 146의 LCDR3;
b) 서열번호 147의 VH 및 서열번호 148의 VL;
c) 서열번호 149의 HCDR1, 서열번호 150의 HCDR2, 서열번호 151의 HCDR3, 서열번호 152의 LCDR1, 서열번호 153의 LCDR2, 및 서열번호 154의 LCDR3; 또는
d) 서열번호 155의 VH 및 서열번호 156의 VL을 포함하는, 방법.
123) 구현예 95 내지 119 중 어느 하나에 있어서, TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 238의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
b) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 242의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
c) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 243의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
d) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 244의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
e) 서열번호 245의 VH 및 서열번호 249의 VL;
f) 서열번호 246의 VH 및 서열번호 249의 VL;
g) 서열번호 247의 VH 및 서열번호 249의 VL; 또는
h) 서열번호 248의 VH 및 서열번호 249의 VL을 포함하는, 방법.
124) 구현예 97 내지 123 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 제1 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편에 접합되고/되거나, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 제2 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편에 접합되는, 방법.
125) 구현예 124에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인과 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 사이, 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인과 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편 사이에 제2 링커(L2)를 추가로 포함하는, 방법.
126) 구현예 125에 있어서, L2는 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
127) 구현예 124 내지 136 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2, 및 IgG3 또는 IgG4 이소형인, 방법.
128) 구현예 124 내지 127 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 방법.
129) 구현예 128에 있어서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이는 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/ L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S, 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 방법.
130) 구현예 124 내지 127 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 방법.
131) 구현예 130에 있어서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 방법.
132) 구현예 128 내지 131 중 어느 하나에 있어서, FcγR은 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
133) 구현예 124 내지 132 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 방법.
134) 구현예 133에 있어서, 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이는 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 방법.
135) 구현예 124 내지 134 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 방법.
136) 구현예 135에 있어서, 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이는 T350V, L351Y, F405A,Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V, 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 방법.
137) 구현예 124 내지 136 중 어느 하나에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은
a) 제1 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V 및 제2 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W 돌연변이; 또는
b) 제1 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W 및 제2 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V 돌연변이를 포함하는, 방법.
138) CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 치료적 유효량의 면역접합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법으로서, 면역접합체는 제제에 접합된 구현예 1 내지 137 중 어느 하나에서 정의된 바와 같은 단리된 단백질을 포함하는, 방법.
139) 구현예 138에 있어서, 제제는 방사성 제제인, 방법.
140) 구현예 139에 있어서, 방사성 제제는 방사성 금속 이온을 포함하는, 면역접합체.
141) 구현예 140에 있어서, 방사성 금속 이온은 32P, 47Sc, 67Cu, 77As, 89Sr, 90Y, 99Tc, 105Rh, 109Pd, 111Ag, 131I, 153Sm, 159Gd, 165Dy, 166Ho, 169Er, 177Lu, 186Re, 188Re, 194Ir, 198Au, 199Au, 211At, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 255Fm, 227Th, 62Cu, 64Cu, 67Ga, 68Ga, 86Y, 89Zr, 또는 111In인, 면역접합체.
142) 구현예 140에 있어서, 방사성 금속 이온은 225Ac, 111In, 또는 89Zr인, 면역접합체.
143) 구현예 140에 있어서, 방사성 금속 이온은 225Ac인, 면역접합체.
144) 구현예 140 내지 143 중 어느 하나에 있어서, 방사성 금속 이온은 킬레이트화 모이어티에 접합된, 면역접합체.
145) 구현예 144에 있어서, 킬레이트화 모이어티는 화학식 I의 구조:
[화학식 I]
Figure pat00050
(상기 식에서, 각각의 R1, R2, R3, 및 R4는 독립적으로 CHQCO2X
(Q는 독립적으로 수소, C1-C4 알킬, 또는 (C1-C2 알킬)페닐이고,
X는 독립적으로 수소, 벤질, C1-C4 알킬임)이고;
Z는 (CH2)nY
(n은 1~10이고,
Y는 제2 클릭 반응 파트너에 공유 연결된 친전자성 또는 친핵성 모이어티임)이고;
대안적으로, Z는 수소이고;
각각의 R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 CHQCO2X
(Q는 독립적으로 수소, C1-C4 알킬, 또는 (C1-C2 알킬)페닐이고,
X는 독립적으로 수소, 벤질, C1-C4 알킬이거나, 또는 제2 클릭 반응 파트너에 공유 연결된 친전자성 또는 친핵성 모이어티임)이고;
대안적으로, 킬레이트제는 개방 사슬 리간드를 포함함)를 갖는 거대고리를 포함하는, 면역접합체.
146) 구현예 144에 있어서, 킬레이트화 모이어티는 화학식 II의 구조:
[화학식 II]
Figure pat00051
또는 화학식 III의 구조:
[화학식 III]
Figure pat00052
를 갖는 거대고리를 포함하는, 면역접합체.
147) 화학식 IV의 면역접합체로서,
[화학식 IV]
Figure pat00053
단백질은 구현예 1 내지 96 중 어느 하나에서 정의된 바와 같은 단리된 단백질인, 면역접합체.
148) 화학식 V의 면역접합체로서,
[화학식 V]
Figure pat00054
단백질은 구현예 1 내지 96 중 어느 하나에서 정의된 바와 같은 단리된 단백질인, 면역접합체.
149) 구현예 1 내지 148 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 CD33 발현 세포의 양을 감소시키는데 효과적인 방법(CD33 발현 세포는 암성 세포이거나 CD33 발현 세포는 비암성 세포임).
150) 구현예 1 내지 149 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 CD33 발현 암의 확립을 예방하는데 효과적인 방법.
151) 구현예 148 내지 150 중 어느 하나에 있어서, CD33 발현 암은 혈액암인, 방법.
152) 구현예 151에 있어서, 혈액암은 백혈병, 림프종, 또는 다발성 골수종인, 방법.
153) 구현예 151에 있어서, 혈액암은 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 만성 골수성 백혈병(CML), 또는 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물(DPDCN)인, 방법.
154) 구현예 148 내지 153 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질 또는 단리된 다중특이적 단백질은 제2 치료제와 조합되어 투여되는, 방법.
155) 구현예 154에 있어서, 제2 치료제는 수술, 화학요법, 안드로겐 차단 요법, 또는 방사선, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
156) 대상체에서 치료제로 CD33 발현 암 세포를 표적화하기 위한 수단을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법.
157) 대상체에서 치료제로 하나 이상의 CD33 발현 종양 세포를 표적화하기 위한 수단을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법.
158) 대상체에서 CD33 발현 암의 확립을 예방하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물(방법은 대상체에서 치료제로 CD33 발현 세포를 표적화하기 위한 수단을 대상체에게 투여하는 단계를 포함함).
159) CD33 발현 암이 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물(방법은 대상체에서 치료제로 CD33 발현 세포를 표적화하기 위한 수단을 대상체에게 투여하는 단계를 포함함).
넘버링된 구현예 목록(E):
1) 키메라 항원 수용체(CAR)로서,
a) CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인;
b) 막관통 도메인; 및
c) 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 임의로 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하는, 키메라 항원 수용체(CAR).
2) 구현예 1에 있어서, CD8a-힌지 영역을 추가로 포함하는 CAR.
3) 구현예 1 또는 구현예 2에 있어서,
a) 막관통 도메인은 CD8a 막관통 영역(CD8a-TM) 폴리펩티드를 포함하고;
b) 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분을 포함하는 공동 자극 도메인 및 T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는, CAR.
4) 구현예 2 또는 구현예 3에 있어서,
a) CD8a-힌지 영역은 서열번호 157의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
b) 막관통 도메인은 서열번호 162의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
c) 세포내 신호전달 도메인은 서열번호 163의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 공동 자극 도메인 및 서열번호 164의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는, CAR.
5) 구현예 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 1, 2, 3, 4, 또는 5 중 어느 하나의 HCDR1, 서열번호 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11 중 어느 하나의 HCDR2, 및 서열번호 12, 13, 14, 15, 16, 또는 17 중 어느 하나의 HCDR3을 포함하는, CAR.
6) 구현예 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 각각 서열번호 1, 6, 및 12;
b) 각각 서열번호 2, 7, 및 13;
c) 각각 서열번호 1, 8, 및 14;
d) 각각 서열번호 3, 9, 및 13;
e) 각각 서열번호 4, 10, 및 15;
f) 각각 서열번호 5, 11, 및 16; 또는
g) 각각 서열번호 5, 11, 및 17의 HCDR1, HCDR1, HCDR3을 포함하는, CAR.
7) 구현예 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 또는 27 중 어느 하나의 VH를 포함하는, CAR.
8) 구현예 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 또는 35의 HCDR1, 서열번호 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 또는 44의 HCDR2, 서열번호 45, 46, 47, 48, 49, 50, 또는 51의 HCDR3, 서열번호 62, 63, 64, 65, 66, 67, 또는 68의 LCDR1, 서열번호 69, 70, 71, 72, 73, 또는 74의 LCDR2, 및 서열번호 75, 76, 77, 78, 79, 또는 80의 LCDR3을 포함하는, CAR.
9) 구현예 1 내지 4 및 8 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 각각 서열번호 28, 36, 45, 62, 69, 및 75;
b) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 30, 38, 47, 64, 71, 및 77;
d) 각각 서열번호 31, 39, 48, 65, 72, 및 78;
e) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
f) 각각 서열번호 33, 41, 50, 67, 73, 및 79;
g) 각각 서열번호 34, 42, 51, 68, 74, 및 80;
h) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
i) 각각 서열번호 34, 44, 51, 68, 74, 및 80; 또는
j) 각각 서열번호 35, 42, 51, 68, 74, 및 80의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, CAR.
10) 구현예 1 내지 4, 8, 및 9 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 또는 61의 VH 및 서열번호 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 또는 88의 VL을 포함하는, CAR.
11) 구현예 1 내지 4 및 8 내지 10 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 52의 VH 및 서열번호 81의 VL;
b) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
c) 서열번호 54의 VH 및 서열번호 83의 VL;
d) 서열번호 55의 VH 및 서열번호 84의 VL;
e) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
f) 서열번호 57의 VH 및 서열번호 86의 VL;
g) 서열번호 58의 VH 및 서열번호 87의 VL;
h) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
i) 서열번호 60의 VH 및 서열번호 87의 VL; 또는
j) 서열번호 61의 VH 및 서열번호 88의 VL을 포함하는, CAR.
12) 구현예 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 33, 89, 167, 172, 또는 176의 HCDR1, 서열번호 90, 91, 168, 173, 또는 177의 HCDR2, 서열번호 92, 93, 94, 169, 174, 178, 또는 180의 HCDR3, 서열번호 98, 99, 100, 182, 186, 189, 193, 197의 LCDR1, 서열번호 101, 102, 103, 183, 187, 190, 194, 또는 198의 LCDR2, 및 서열번호 104, 184, 191, 195, 또는 199의 LCDR3을 포함하는, CAR.
13) 구현예 1 내지 4 및 12 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 각각 서열번호 89, 90, 92, 98, 101, 및 104;
b) 각각 서열번호 89, 90, 93, 99, 102, 및 104;
c) 각각 서열번호 33, 91, 94, 100, 103, 및 104;
d) 각각 서열번호 167, 168, 169, 182, 183, 및 184;
e) 각각 서열번호 33, 91, 94, 186, 187, 및 104;
f) 각각 서열번호 172, 173, 174, 189, 190, 및 191;
g) 각각 서열번호 176, 177, 178, 193, 194, 및 195;
h) 각각 서열번호 89, 90, 180, 197, 198, 및 199; 또는
i) 각각 서열번호 89, 90, 93, 201, 102, 및 104의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, CAR.
14) 구현예 1 내지 4, 12, 및 13 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 서열번호 95, 96, 97, 170, 171, 175, 179, 또는 181의 VH 및 서열번호 105, 106, 107, 185, 188, 192, 196, 200, 또는 202의 VL을 포함하는, CAR.
15) 구현예 1 내지 4 및 12 내지 14 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 95의 VH 및 서열번호 105의 VL;
b) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 106의 VL;
c) 서열번호 97의 VH 및 서열번호 107의 VL;
d) 서열번호 170의 VH 및 서열번호 185의 VL;
e) 서열번호 171의 VH 및 서열번호 188의 VL;
f) 서열번호 175의 VH 및 서열번호 192의 VL;
g) 서열번호 179의 VH 및 서열번호 196의 VL;
h) 서열번호 181의 VH 및 서열번호 200의 VL; 또는
i) 서열번호 96의 VH 및 서열번호 202의 VL을 포함하는, CAR.
16) 구현예 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 VHH인, CAR.
17) 구현예 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv인, CAR.
18) 구현예 17에 있어서, scFv는 VL과 VH 사이에 제1 링커(L1)를 포함하는, CAR.
19) 구현예 18에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
20) 구현예 19에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
21) 구현예 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인은 신호 폴리펩티드를 추가로 포함하는, CAR.
22) 구현예 21에 있어서, 신호 폴리펩티드는 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
23) 구현예 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분, T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분, 분화 클러스터(CD27) 성분, 분화 클러스터 수퍼패밀리 구성원 성분, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드 성분을 포함하는, CAR.
24) 구현예 3 내지 23 중 어느 하나에 있어서, CD137 성분은 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
25) 구현예 3 내지 24 중 어느 하나에 있어서, CD3z 성분은 서열번호 164의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
26) 구현예 3 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 세포내 신호전달 도메인은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
27) 구현예 3 내지 26 중 어느 하나에 있어서, CD8a-TM 폴리펩티드는 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
28) 구현예 3 내지 27 중 어느 하나에 있어서, CD8a-힌지 영역은 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
29) 구현예 1 내지 28 중 어느 하나에 있어서, 다중특이적 단백질인 CAR.
30) 구현예 29에 있어서, 다중특이적 단백질은 이중특이적 단백질인, CAR.
31) 구현예 30에 있어서, 다중특이적 단백질은 삼중특이적 단백질인, CAR.
32) 구현예 29 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 다중특이적 단백질은 림프구 상의 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, CAR.
33) 구현예 32에 있어서, 림프구는 T 세포인, CAR.
34) 구현예 32에 있어서, T 세포는 CD8+ T 세포인, CAR.
35) 구현예 32에 있어서, 림프구는 자연 살해(NK) 세포인, CAR.
36) 구현예 29 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 다중특이적 단백질은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, TRGV9, 또는 NKG2C에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, CAR.
37) 구현예 36에 있어서, 다중특이적 단백질은 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, CAR.
38) 구현예 37에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 141의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 142의 HCDR2, 서열번호 143의 HCDR3, 서열번호 144의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 145의 LCDR2, 및 서열번호 146의 LCDR3;
b) 서열번호 147의 VH 및 서열번호 148의 VL;
c) 서열번호 149의 HCDR1, 서열번호 150의 HCDR2, 서열번호 151의 HCDR3, 서열번호 152의 LCDR1, 서열번호 153의 LCDR2, 및 서열번호 154의 LCDR3; 또는
d) 서열번호 155의 VH 및 서열번호 156의 VL을 포함하는, CAR.
39) 구현예 36에 있어서, 다중특이적 단백질은 TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, CAR.
40) 구현예 39에 있어서, TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인은
a) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 238의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
b) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 242의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
c) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 243의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
d) 서열번호 236의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 237의 HCDR2, 서열번호 244의 HCDR3, 서열번호 239의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 240의 LCDR2, 및 서열번호 241의 LCDR3;
e) 서열번호 245의 VH 및 서열번호 249의 VL;
f) 서열번호 246의 VH 및 서열번호 249의 VL;
g) 서열번호 247의 VH 및 서열번호 249의 VL; 또는
h) 서열번호 248의 VH 및 서열번호 249의 VL을 포함하는, CAR.
41) 구현예 1 내지 40 중 어느 한 항의 CAR을 발현하는 단리된 림프구.
42) 구현예 41에 있어서, 림프구는 T 림프구인, 단리된 림프구.
43) 구현예 41에 있어서, 림프구는 자연 살해(NK) 세포인, 단리된 림프구.
44) 구현예 1 내지 40 중 어느 한 항의 CAR을 암호화하는 발현하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
45) 구현예 44의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
46) 구현예 44의 폴리뉴클레오티드 또는 구현예 45의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
47) 구현예 41 내지 43 중 어느 하나의 림프구 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
48) CD33 발현 암이 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 림프구가 대상체에서 CD33 발현 암의 사멸을 매개하도록, 구현예 41 내지 43의 림프구의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
49) 구현예 48에 있어서, CD33 발현 암은 혈액암인, 방법.
50) 구현예 49에 있어서, CD33 발현 암은 백혈병, 림프종, 또는 다발성 골수종인, 방법.
51) 구현예 50에 있어서, CD33 발현 암은 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 만성 골수성 백혈병(CML), 또는 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물(DPDCN)인, 방법.
52) 암 세포를 표적화하여 사멸시키는 방법으로서, 림프구가 암 세포의 표적화 사멸을 유도하도록, 암 세포를 구현예 41 내지 43 중 어느 하나의 림프구와 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
53) 구현예 52에 있어서, 암 세포는 혈액암인, 방법.
54) 구현예 53에 있어서, CD33 발현 암은 백혈병, 림프종, 또는 다발성 골수종인, 방법.
55) 구현예 54에 있어서, CD33 발현 암은 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 만성 골수성 백혈병(CML), 또는 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물(DPDCN)인, 방법.
56) 대상체에서 암의 존재를 검출하는 방법으로서,
a) 대상체로부터 수득한 세포 샘플을 구현예 1 내지 40 중 어느 하나의 CAR과 접촉시켜 CAR-세포 복합체를 형성하는 단계, 및
b) CAR-세포 복합체를 검출하는 단계(CAR-세포 복합체의 검출은 대상체에서 암의 존재를 나타냄)를 포함하는, 방법.
57) 구현예 56에 있어서, 암 세포는 혈액암인, 방법.
58) 구현예 57에 있어서, CD33 발현 암은 백혈병, 림프종, 또는 다발성 골수종인, 방법.
59) 구현예 58에 있어서, CD33 발현 암은 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 만성 골수성 백혈병(CML), 또는 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물(DPDCN)인, 방법.
60) 구현예 1 내지 40 중 어느 하나의 CAR을 포함하는 키트.
61) 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
62) 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
63) 대상체에서 CD33 발현 암의 확립을 예방하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
64) CD33 발현 암이 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물.
65) 대상체에서 치료제로 CD33 발현 암 세포를 표적화하기 위한 수단을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법.
66) 대상체에서 치료제로 하나 이상의 CD33 발현 종양 세포를 표적화하기 위한 수단을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD33 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법.
67) 대상체에서 CD33 발현 암의 확립을 예방하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물(방법은 대상체에서 치료제로 CD33 발현 세포를 표적화하기 위한 수단을 대상체에게 투여하는 단계를 포함함).
68) CD33 발현 암이 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하기 위한 수단을 포함하는 약학적 조성물(방법은 대상체에서 치료제로 CD33 발현 세포를 표적화하기 위한 수단을 대상체에게 투여하는 단계를 포함함).
넘버링된 구현예 목록(F):
1) CD33에 결합하는 단리된 단백질로서,
a) 서열번호 53의 중쇄 가변 영역(VH)의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
b) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
d) 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
e) 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
f) 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
2) 제1항에 있어서,
a) 각각 서열번호 29, 37, 및 46;
b) 각각 서열번호 32, 40, 및 49;
c) 각각 서열번호 34, 43, 및 51;
d) 각각 서열번호 253, 256, 및 259;
e) 각각 서열번호 254, 257, 및 260; 또는
f) 각각 서열번호 255, 258, 및 261의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
3) CD33에 결합하는 단리된 단백질로서,
a) 각각 서열번호 29, 37, 및 46;
b) 각각 서열번호 32, 40, 및 49;
c) 각각 서열번호 34, 43, 및 51;
d) 각각 서열번호 253, 256, 및 259;
e) 각각 서열번호 254, 257, 및 260; 또는
f) 각각 서열번호 255, 258, 및 261의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
4) 제1항 또는 제2항에 있어서,
a) 서열번호 53의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 82의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
b) 서열번호 56의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 85의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
c) 서열번호 59의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 87의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
d) 서열번호 262의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 271의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3;
e) 서열번호 263의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 272의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3; 또는
f) 서열번호 264의 VH의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열번호 273의 VL의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
5) 제3항 또는 제4항에 있어서,
a) 각각 서열번호 29, 37, 46, 63, 70, 및 76;
b) 각각 서열번호 32, 40, 49, 66, 70, 및 76;
c) 각각 서열번호 34, 43, 51, 68, 74, 및 80;
d) 각각 서열번호 253, 256, 259, 265, 74, 및 269;
e) 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267, 및 76; 또는
f) 각각 서열번호 255, 258, 261, 266, 268, 및 270의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
6) 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 53, 56, 59, 262, 263, 264, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 또는 382의 VH 및 서열번호 82, 85, 87, 271, 272, 273, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 또는 398의 VL을 포함하는 단리된 단백질.
7) 제6항에 있어서,
a) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
b) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
c) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
d) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
e) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL;
f) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL;
g) 서열번호 291의 VH 및 서열번호 271의 VL;
h) 서열번호 292의 VH 및 서열번호 271의 VL;
i) 서열번호 293의 VH 및 서열번호 271의 VL;
j) 서열번호 294의 VH 및 서열번호 271의 VL;
k) 서열번호 295의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 296의 VH 및 서열번호 271의 VL;
m) 서열번호 297의 VH 및 서열번호 271의 VL;
n) 서열번호 298의 VH 및 서열번호 271의 VL;
o) 서열번호 299의 VH 및 서열번호 271의 VL;
p) 서열번호 300의 VH 및 서열번호 271의 VL;
q) 서열번호 301의 VH 및 서열번호 271의 VL;
r) 서열번호 302의 VH 및 서열번호 271의 VL;
s) 서열번호 303의 VH 및 서열번호 271의 VL;
t) 서열번호 304의 VH 및 서열번호 271의 VL;
u) 서열번호 305의 VH 및 서열번호 271의 VL;
v) 서열번호 306의 VH 및 서열번호 271의 VL;
w) 서열번호 307의 VH 및 서열번호 271의 VL;
x) 서열번호 308의 VH 및 서열번호 271의 VL;
y) 서열번호 309의 VH 및 서열번호 271의 VL;
z) 서열번호 310의 VH 및 서열번호 271의 VL;
aa) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 311의 VL;
ab) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 312의 VL;
ac) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 313의 VL;
ad) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 314의 VL;
ae) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 315의 VL;
af) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 316의 VL;
ag) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 317의 VL;
ah) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 318의 VL;
ai) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 319의 VL;
aj) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 320의 VL;
ak) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 321의 VL;
al) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 322의 VL;
am) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 323의 VL;
an) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 324의 VL;
ao) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 325의 VL;
ap) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 326의 VL;
aq) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 327의 VL;
ar) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 328의 VL;
as) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 329의 VL;
at) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 330의 VL;
au) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 331의 VL;
av) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 332의 VL;
aw) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 333의 VL;
ax) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 334의 VL;
ay) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 335의 VL;
az) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 336의 VL;
ba) 서열번호 337의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bb) 서열번호 338의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bc) 서열번호 339의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bd) 서열번호 340의 VH 및 서열번호 272의 VL;
be) 서열번호 341의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bf) 서열번호 342의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bg) 서열번호 343의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bh) 서열번호 344의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bi) 서열번호 345의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bj) 서열번호 346의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bk) 서열번호 347의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bl) 서열번호 348의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bm) 서열번호 349의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bn) 서열번호 350의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bo) 서열번호 351의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bp) 서열번호 352의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bq) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 353의 VL;
br) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 354의 VL;
bs) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 355의 VL;
bt) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 356의 VL;
bu) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 357의 VL;
bv) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 358의 VL;
bw) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 359의 VL;
bx) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 360의 VL;
by) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 361의 VL;
bz) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 362의 VL;
ca) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 363의 VL;
cb) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 364의 VL;
cc) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 365의 VL;
cd) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 366의 VL;
ce) 서열번호 367의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cf) 서열번호 368의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cg) 서열번호 369의 VH 및 서열번호 85의 VL;
ch) 서열번호 370의 VH 및 서열번호 85의 VL;
ci) 서열번호 371의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cj) 서열번호 372의 VH 및 서열번호 85의 VL;
ck) 서열번호 373의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cl) 서열번호 374의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cm) 서열번호 375의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cn) 서열번호 376의 VH 및 서열번호 85의 VL;
co) 서열번호 377의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cp) 서열번호 378의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cq) 서열번호 379의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cr) 서열번호 380의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cs) 서열번호 381의 VH 및 서열번호 85의 VL;
ct) 서열번호 382의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cu) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 383의 VL;
cv) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 384의 VL;
cw) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 385의 VL;
cx) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 386의 VL;
cy) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 387의 VL;
cz) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 388의 VL;
da) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 389의 VL;
db) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 390의 VL;
dc) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 391의 VL;
dd) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 392의 VL;
de) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 393의 VL;
df) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 394의 VL;
dg) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 395의 VL;
dh) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 396의 VL;
di) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 397의 VL; 또는
dj) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 398의 VL을 포함하는 단리된 단백질.
8) CD33에 결합하는 단리된 단백질로서,
a) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 82의 VL;
b) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 85의 VL;
c) 서열번호 59의 VH 및 서열번호 87의 VL;
d) 서열번호 262의 VH 및 서열번호 271의 VL;
e) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL;
f) 서열번호 264의 VH 및 서열번호 273의 VL;
g) 서열번호 291의 VH 및 서열번호 271의 VL;
h) 서열번호 292의 VH 및 서열번호 271의 VL;
i) 서열번호 293의 VH 및 서열번호 271의 VL;
j) 서열번호 294의 VH 및 서열번호 271의 VL;
k) 서열번호 295의 VH 및 서열번호 271의 VL;
l) 서열번호 296의 VH 및 서열번호 271의 VL;
m) 서열번호 297의 VH 및 서열번호 271의 VL;
n) 서열번호 298의 VH 및 서열번호 271의 VL;
o) 서열번호 299의 VH 및 서열번호 271의 VL;
p) 서열번호 300의 VH 및 서열번호 271의 VL;
q) 서열번호 301의 VH 및 서열번호 271의 VL;
r) 서열번호 302의 VH 및 서열번호 271의 VL;
s) 서열번호 303의 VH 및 서열번호 271의 VL;
t) 서열번호 304의 VH 및 서열번호 271의 VL;
u) 서열번호 305의 VH 및 서열번호 271의 VL;
v) 서열번호 306의 VH 및 서열번호 271의 VL;
w) 서열번호 307의 VH 및 서열번호 271의 VL;
x) 서열번호 308의 VH 및 서열번호 271의 VL;
y) 서열번호 309의 VH 및 서열번호 271의 VL;
z) 서열번호 310의 VH 및 서열번호 271의 VL;
aa) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 311의 VL;
ab) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 312의 VL;
ac) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 313의 VL;
ad) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 314의 VL;
ae) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 315의 VL;
af) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 316의 VL;
ag) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 317의 VL;
ah) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 318의 VL;
ai) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 319의 VL;
aj) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 320의 VL;
ak) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 321의 VL;
al) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 322의 VL;
am) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 323의 VL;
an) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 324의 VL;
ao) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 325의 VL;
ap) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 326의 VL;
aq) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 327의 VL;
ar) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 328의 VL;
as) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 329의 VL;
at) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 330의 VL;
au) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 331의 VL;
av) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 332의 VL;
aw) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 333의 VL;
ax) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 334의 VL;
ay) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 335의 VL;
az) 서열번호 263의 VH 및 서열번호 336의 VL;
ba) 서열번호 337의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bb) 서열번호 338의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bc) 서열번호 339의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bd) 서열번호 340의 VH 및 서열번호 272의 VL;
be) 서열번호 341의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bf) 서열번호 342의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bg) 서열번호 343의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bh) 서열번호 344의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bi) 서열번호 345의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bj) 서열번호 346의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bk) 서열번호 347의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bl) 서열번호 348의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bm) 서열번호 349의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bn) 서열번호 350의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bo) 서열번호 351의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bp) 서열번호 352의 VH 및 서열번호 272의 VL;
bq) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 353의 VL;
br) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 354의 VL;
bs) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 355의 VL;
bt) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 356의 VL;
bu) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 357의 VL;
bv) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 358의 VL;
bw) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 359의 VL;
bx) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 360의 VL;
by) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 361의 VL;
bz) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 362의 VL;
ca) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 363의 VL;
cb) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 364의 VL;
cc) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 365의 VL;
cd) 서열번호 56의 VH 및 서열번호 366의 VL;
ce) 서열번호 367의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cf) 서열번호 368의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cg) 서열번호 369의 VH 및 서열번호 85의 VL;
ch) 서열번호 370의 VH 및 서열번호 85의 VL;
ci) 서열번호 371의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cj) 서열번호 372의 VH 및 서열번호 85의 VL;
ck) 서열번호 373의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cl) 서열번호 374의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cm) 서열번호 375의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cn) 서열번호 376의 VH 및 서열번호 85의 VL;
co) 서열번호 377의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cp) 서열번호 378의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cq) 서열번호 379의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cr) 서열번호 380의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cs) 서열번호 381의 VH 및 서열번호 85의 VL;
ct) 서열번호 382의 VH 및 서열번호 85의 VL;
cu) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 383의 VL;
cv) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 384의 VL;
cw) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 385의 VL;
cx) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 386의 VL;
cy) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 387의 VL;
cz) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 388의 VL;
da) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 389의 VL;
db) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 390의 VL;
dc) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 391의 VL;
dd) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 392의 VL;
de) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 393의 VL;
df) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 394의 VL;
dg) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 395의 VL;
dh) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 396의 VL;
di) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 397의 VL; 또는
dj) 서열번호 53의 VH 및 서열번호 398의 VL을 포함하는 단리된 단백질.
9) 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인 단리된 단백질.
10) 제9항에 있어서, Fab인 단리된 단백질.
11) 제9항에 있어서, scFv인 단리된 단백질.
12) 제11항에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 단리된 단백질.
13) 제12항에 있어서, L1은
a) 약 5~50개의 아미노산;
b) 약 5~40개의 아미노산;
c) 약 10~30개의 아미노산; 또는
d) 약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 단리된 단백질.
14) 제13항에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
15) 제14항에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
16) 제15항에 있어서, 서열번호 213, 216, 219, 274, 275, 또는 276의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 단백질.
17) 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질은 반감기 연장 모이어티에 접합된, 단리된 단백질.
18) 제17항에 있어서, 반감기 연장 모이어티는 면역글로불린(Ig), Ig의 단편, Ig 불변 영역, Ig 불변 영역의 단편, Fc 영역, 트랜스페린, 알부민, 알부민 결합 도메인, 또는 폴리에틸렌 글리콜인, 단리된 단백질.
19) 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 단일특이적 단백질인 단리된 단백질.
20) 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 다중특이적 단백질인 단리된 단백질.
21) 제20항에 있어서, 다중특이적 단백질은 이중특이적 단백질인, 단리된 단백질.
22) 제20항에 있어서, 다중특이적 단백질은 삼중특이적 단백질인, 단리된 단백질.
23) 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 이의 Ig 불변 영역의 단편을 추가로 포함하는 단리된 단백질.
24) 제23항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 Fc 영역을 포함하는, 단리된 단백질.
25) 제23항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
26) 제23항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
27) 제23항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
28) 제23항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지의 적어도 일부, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
29) 제23항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
30) 제23항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 N-말단에 접합되는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질.
31) 제23항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 C-말단에 접합되는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질.
32) 제23항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 링커(L2)를 통해 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합되는 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질.
33) 제32항에 있어서, L2는 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
34) 제20항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 다중특이적 단백질은 림프구 상의 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
35) 제34항에 있어서, 림프구는 T 세포인, 단리된 단백질.
36) 제35항에 있어서, T 세포는 CD8+ T 세포인, 단리된 단백질.
37) 제34항에 있어서, 림프구는 자연 살해(NK) 세포인, 단리된 단백질.
38) 제20항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 다중특이적 단백질은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, TRGV9, 또는 NKG2C에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
39) 제38항에 있어서, 다중특이적 단백질은 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
40) 제38항에 있어서, 다중특이적 단백질은 TRGV9에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
41) 제34항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH를 포함하는, 단리된 단백질.
42) 제41항에 있어서,
a) CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fab를 포함하거나;
b) CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH를 포함하거나;
c) CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하거나;
d) CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH를 포함하는, 단리된 단백질.
43) 제23항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 이소형이고, 임의로 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1인, 단리된 단백질.
44) 제43항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편은 서열번호 277 또는 278의 서열을 갖는, 단리된 단백질.
45) 제23항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 단백질.
46) 제45항에 있어서, FcγR에 대한 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이는 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/ L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S, 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 단백질.
47) 제23항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 FcγR에 대한 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 단백질.
48) 제47항에 있어서, FcγR에 대한 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 단백질.
49) 제45항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, FcγR은 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의의 조합인, 단리된 단백질.
50) 제23항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 단백질.
51) 제50항에 있어서, 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이는 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 단백질.
52) 제23항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질은 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 단백질.
53) 제52항에 있어서, Ig 불변 영역의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이는 T350V, L351Y, F405A, Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V, 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 단백질.
54) CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질로서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 결합 도메인을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
55) 제54항에 있어서, 림프구 항원은 T 세포 항원인, 단리된 다중특이적 단백질.
56) 제55항에 있어서, T 세포 항원은 CD8+ T 세포 항원인, 단리된 다중특이적 단백질.
57) 제54항에 있어서, 림프구 항원은 NK 세포 항원인, 단리된 다중특이적 단백질.
58) 제54항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 림프구 항원은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, TRGV9, 또는 NKG2C인, 단리된 다중특이적 단백질.
59) 제54항에 있어서, 림프구 항원은 CD3ε인, 단리된 다중특이적 단백질.
60) 제54항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
61) 제60항에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fab를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
62) 제60항에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
63) 제60항에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
64) 제60항 또는 제63항에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
65) 제64항에 있어서, L1은
약 5~50개의 아미노산;
약 5~40개의 아미노산;
약 10~30개의 아미노산; 또는
약 10~20개의 아미노산을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
66) 제65항에 있어서, L1은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
67) 제66항에 있어서, L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
68) 제54항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 제1 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편에 접합되고/되거나, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 제2 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편에 접합되는, 단리된 다중특이적 단백질.
69) 제68항에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인과 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 사이, 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인과 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편 사이에 제2 링커(L2)를 추가로 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
70) 제69항에 있어서, L2는 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
71) 제68항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2, 및 IgG3 또는 IgG4 이소형인, 단리된 이중특이적 단백질.
72) 제68항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
73) 제72항에 있어서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이는 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/ L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S, 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 다중특이적 단백질.
74) 제68항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
75) 제74항에 있어서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 결합을 향상시키는 적어도 하나의 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 다중특이적 단백질.
76) 제72항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, FcγR은 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의의 조합인, 단리된 다중특이적 단백질.
77) 제67항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
78) 제77항에 있어서, 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이는 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 다중특이적 단백질.
79) 제68항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
80) 제79항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인 내의 적어도 하나의 돌연변이는 T350V, L351Y, F405A,Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V, 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택되는(잔기 넘버링은 EU 인덱스를 따름), 단리된 다중특이적 단백질.
81) 제68항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은
제1 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V 및 제2 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W 돌연변이; 또는
제1 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W 및 제2 Ig 불변 영역의 L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V 돌연변이를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
82) 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질은 키메라 항원 수용체(CAR)인, 단리된 단백질.
83) 제82항에 있어서, CAR은
a) 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인;
b) 막관통 도메인; 및
c) 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 임의로 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
84) 제82항 또는 제83항에 있어서, CAR은 CD8a-힌지 영역을 추가로 포함하는, 단리된 단백질.
85) 제82항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서,
a) 막관통 도메인은 CD8a 막관통 영역(CD8a-TM) 폴리펩티드를 포함하고;
b) 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분을 포함하는 공동 자극 도메인 및 T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
86) 제82항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서,
a) CD8a-힌지 영역은 서열번호 157의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
b) 막관통 도메인은 서열번호 162의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
c) 세포내 신호전달 도메인은 서열번호 163의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 공동 자극 도메인 및 서열번호 164의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
87) 제826항에 있어서, 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분, T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분, 분화 클러스터(CD27) 성분, 분화 클러스터 수퍼패밀리 구성원 성분, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드 성분을 포함하는, 단리된 단백질.
88) 키메라 항원 수용체(CAR)로서,
a) CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인;
b) 막관통 도메인; 및
c) 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 임의로 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하고,
CD33에 결합하는 항원 결합 도메인은 제1항 내지 제16항, 제20항 내지 제22항 또는 제34항 내지 제40항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 결합 도메인을 포함하는, 키메라 항원 수용체(CAR).
89) 제88항에 있어서, CD8a-힌지 영역을 추가로 포함하는 CAR.
90) 제88항 또는 제89항에 있어서,
a) 막관통 도메인은 CD8a 막관통 영역(CD8a-TM) 폴리펩티드를 포함하고;
b) 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분을 포함하는 공동 자극 도메인 및 T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는, CAR.
91) 제89항 또는 제90항에 있어서,
d) CD8a-힌지 영역은 서열번호 157의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
e) 막관통 도메인은 서열번호 162의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
f) 세포내 신호전달 도메인은 서열번호 163의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 공동 자극 도메인 및 서열번호 164의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는, CAR.
92) 제88항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인은 신호 폴리펩티드를 추가로 포함하는, CAR.
93) 제92항에 있어서, 신호 폴리펩티드는 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
94) 제88항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분, T-세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분, 분화 클러스터(CD27) 성분, 분화 클러스터 수퍼패밀리 구성원 성분, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리펩티드 성분을 포함하는, CAR.
95) 제90항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, CD137 성분은 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
96) 제90항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, CD3z 성분은 서열번호 164의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
97) 제90항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 세포내 신호전달 도메인은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
98) 제90항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, CD8a-TM 폴리펩티드는 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
99) 제90항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, CD8a-힌지 영역은 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
100) 제90항 내지 제99항 중 어느 한 항의 CAR을 발현하는 단리된 림프구.
101) 제100항에 있어서, 림프구는 T 림프구인, 단리된 림프구.
102) 제100항에 있어서, 림프구는 자연 살해(NK) 세포인, 단리된 림프구.
103) 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항의 단리된 단백질 또는 제54항 내지 제81항 중 어느 한 항의 단리된 다중특이적 단백질을 포함하는 면역접합체.
104) 제103항에 있어서, 제제는 치료제 또는 조영제인, 면역접합체.
105) 제103항에 있어서, 제제는 방사성 제제인, 면역접합체.
106) 제105항에 있어서, 방사성 제제는 방사성 금속 이온을 포함하는, 면역접합체.
107) 제106항에 있어서, 방사성 금속 이온은 32P, 47Sc, 67Cu, 77As, 89Sr, 90Y, 99Tc, 105Rh, 109Pd, 111Ag, 131I, 153Sm, 159Gd, 165Dy, 166Ho, 169Er, 177Lu, 186Re, 188Re, 194Ir, 198Au, 199Au, 211At, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 255Fm, 227Th, 62Cu, 64Cu, 67Ga, 68Ga, 86Y, 89Zr, 또는 111In인, 면역접합체.
108) 제107항에 있어서, 방사성 금속 이온은 225Ac, 111In, 또는 89Zr인, 면역접합체.
109) 제107항에 있어서, 방사성 금속 이온은 225Ac인, 면역접합체.
110) 제106항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 방사성 금속 이온은 킬레이트화 모이어티에 접합된, 면역접합체.
111) 제110항에 있어서, 킬레이트화 모이어티는 화학식 I의 구조:
[화학식 I]
Figure pat00055
(상기 식에서, 각각의 R1, R2, R3, 및 R4는 독립적으로 CHQCO2X
(Q는 독립적으로 수소, C1-C4 알킬, 또는 (C1-C2 알킬)페닐이고,
X는 독립적으로 수소, 벤질, C1-C4 알킬임)이고;
Z는 (CH2)nY
(n은 1~10이고,
Y는 제2 클릭 반응 파트너에 공유 연결된 친전자성 또는 친핵성 모이어티임)이고;
대안적으로, Z는 수소이고;
각각의 R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 CHQCO2X
(Q는 독립적으로 수소, C1-C4 알킬, 또는 (C1-C2 알킬)페닐이고,
X는 독립적으로 수소, 벤질, C1-C4 알킬이거나, 또는 제2 클릭 반응 파트너에 공유 연결된 친전자성 또는 친핵성 모이어티임)이고;
대안적으로, 킬레이트제는 개방 사슬 리간드를 포함함)를 갖는 거대고리를 포함하는, 면역접합체.
112) 제110항에 있어서, 킬레이트화 모이어티는 화학식 II의 구조:
[화학식 II]
Figure pat00056
또는 화학식 III의 구조:
[화학식 III]
Figure pat00057
를 갖는 거대고리를 포함하는, 면역접합체.
113) 화학식 IV의 면역접합체로서,
[화학식 IV]
Figure pat00058
단백질은 제1항 내지 제53항, 제82항 내지 제87항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 단리된 단백질, 또는 제54항 내지 제81항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 단리된 다중특이적 단백질인, 면역접합체.
114) 화학식 V의 면역접합체로서,
[화학식 V]
Figure pat00059
단백질은 제1항 내지 제53항, 제82항 내지 제87항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 단리된 단백질, 또는 제54항 내지 제81항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 단리된 다중특이적 단백질인, 면역접합체.
115) 제1항 내지 제53항, 제82항 내지 제87항 중 어느 한 항의 단리된 단백질, 제54항 내지 제81항 중 어느 한 항의 단리된 다중특이적 단백질, 제88항 내지 제99항 중 어느 한 항의 CAR, 제100항 내지 제102항 중 어느 한 항의 림프구, 제103항 내지 제114항 중 어느 한 항의 면역접합체, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
116) 제1항 내지 제53항, 제82항 내지 제87항 중 어느 한 항의 단리된 단백질, 제54항 내지 제81항 중 어느 한 항의 단리된 다중특이적 단백질, 제88항 내지 제99항 중 어느 한 항의 CAR, 제103항 내지 제114항 중 어느 한 항의 면역접합체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드.
117) 제116항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
118) 제117항의 벡터 또는 제116항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포.
119) 제1항 내지 제53항, 제82항 내지 제87항 중 어느 한 항의 단리된 단백질 또는 제54항 내지 제81항 중 어느 한 항의 단리된 다중특이적 단백질을 생성하는 방법으로서, 단백질이 발현되는 조건에서 제118항의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 숙주 세포에 의해 생성된 단백질을 회수하는 단계를 포함하는 방법.
120) 제103항 내지 제114항 중 어느 한 항의 면역접합체를 생성하는 방법으로서, 단백질이 발현되는 조건에서 제118항의 숙주 세포를 배양하는 단계, 숙주 세포에 의해 생성된 단백질을 회수하는 단계, 및 숙주 세포에 의해 생성된 단백질을 제제와 접합시키는 단계를 포함하는 방법.
121) 제1항 내지 제53항, 또는 제82항 내지 제87항 중 어느 한 항의 단리된 단백질에 결합하는 항이디오타입 항체.
122) 제1항 내지 제53항, 제82항 내지 제87항 중 어느 한 항의 단리된 단백질, 제54항 내지 제81항 중 어느 한 항의 단리된 다중특이적 단백질, 또는 제88항 내지 제99항 중 어느 한 항의 CAR을 포함하는 키트.
123) 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법으로서, CD33 발현 암을 치료하기에 충분한 기간 동안 제1항 내지 제53항, 제82항 내지 제87항 중 어느 한 항의 단리된 단백질, 제54항 내지 제81항 중 어느 한 항의 단리된 다중특이적 단백질, 또는 제103항 내지 제114항 중 어느 한 항의 면역접합체의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
124) 제123항에 있어서, 대상체에서 CD33 발현 세포의 양을 감소시키는데 효과적인 방법(CD33 발현 세포는 암성 세포이거나 CD33 발현 세포는 비암성 세포임).
125) 제123항 또는 제124항에 있어서, 대상체에서 CD33 발현 암의 확립을 예방하는데 효과적인 방법.
126) CD33 발현 암이 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 림프구가 대상체에서 CD33 발현 암의 사멸을 매개하도록, 제100항 내지 제102항 중 어느 한 항의 림프구의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
127) 암 세포를 표적화하여 사멸시키는 방법으로서, 림프구가 암 세포의 표적화 사멸을 유도하도록, 암 세포를 제100항 내지 제102항 중 어느 한 항의 림프구와 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
128) 대상체에서 암의 존재를 검출하는 방법으로서,
a) 대상체로부터 수득한 세포 샘플을 제88항 내지 제99항 중 어느 한 항의 CAR과 접촉시켜 CAR-세포 복합체를 형성하는 단계, 및
b) CAR-세포 복합체를 검출하는 단계(CAR-세포 복합체의 검출은 대상체에서 암의 존재를 나타냄)를 포함하는 방법.
129) 제123항 내지 제128항에 있어서, CD33 발현 암은 혈액암인, 방법.
130) 제129항에 있어서, 혈액암은 백혈병, 림프종, 또는 다발성 골수종인, 방법.
131) 제130항에 있어서, 혈액암은 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 만성 골수성 백혈병(CML), 또는 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물(DPDCN)인, 방법.
132) 제131항에 있어서, 혈액암은 급성 골수성 백혈병(AML)인, 방법.
133) 제123항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, 단리된 단백질, 단리된 다중특이적 단백질, 또는 면역접합체는 제2 치료제와 조합되어 투여되는, 방법.
134) 제133항에 있어서, 제2 치료제는 수술, 화학요법, 안드로겐 차단 요법, 또는 방사선, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
서열
서열번호 1 CDR1(C33B1785; C33B1787; C33B1780; C33B1789; C33B1788)
DYAIG
서열번호 2 CDR1(C33B1784)
TYVMG
서열번호 3 CDR1(C33B1786)
FSTMD
서열번호 4 CDR1(C33B1781)
INAMG
서열번호 5 CDR1(C33B1783; C33B1782)
DYAVG
서열번호 6 CDR2(C33B1785; C33B1780; C33B1789; C33B1788)
CISESDGRTYLSDSVKS
서열번호 7 CDR2(C33B1784)
AIVSGRNPTYADSVKS
서열번호 8 CDR2(C33B1787)
CISSSDGSTYYVDSVKG
서열번호 9 CDR2(C33B1786)
CIRPRYSTTTHADSIKG
서열번호 10 CDR2(C33B1781)
RITGGGATDYVDSVKG
서열번호 11 CDR2(C33B1783; C33B1782)
CISSSDGATYYADSVKG
서열번호 12 CDR3(C33B1785; C33B1780; C33B1789; C33B1788)
VDQAISESSYHCEKGFGS
서열번호 13 CDR3(C33B1784; C33B1786)
YHYSSQY
서열번호 14 CDR3(C33B1787)
LIIMYGSGSERAAAACRYKYEY
서열번호 15 CDR3(C33B1781)
DLVTRVGSDLLYDDY
서열번호 16 CDR3(C33B1783)
IIVRGSGWERAAAACRYEYSY
서열번호 17 CDR3(C33B1782)
VIVRGTGWERAAAACRYEYAY
서열번호 18 VHH 서열(C33B1785)
QVQLVESGGGSVQPGGSLRLSCAVFGFSLSDYAIGWFRQAPGKEREKVSCISESDGRTYLSDSVKSRFTISRDNGKNTVYLQMNNLKPDDTGVYYCATVDQAISESSYHCEKGFGSWGQGTQVTVSS
서열번호 19 VHH 서열(C33B1784)
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSTYVMGWFRQAPGQERELVAAIVSGRNPTYADSVKSRFTISRDNAKNTIYLHMNSLQPEDTAVYYCHMYHYSSQYWGQGTQVTVSS
서열번호 20 VHH 서열(C33B1787)
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGFTFDDYAIGWFRQAPGKEREGVSCISSSDGSTYYVDSVKGRFTISSDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCTALIIMYGSGSERAAAACRYKYEYWGQGTQVTVSS
서열번호 21 VHH 서열(C33B1786)
EVQVVESGGGVVQSGGSLTLSCEASESILSFSTMDWFRQAPGKEREGVSCIRPRYSTTTHADSIKGRFKMYSDNAKNTIYLHMNSLQPEDTAVYYCHMYHYSSQYWGQGTQVTVSS
서열번호 22 VHH 서열(C33B1781)
EVQVVESGGGLVQGGGSLRLSCAASGSIFSINAMGWYHQAPGKQRELVARITGGGATDYVDSVKGRFTISLDSAKSTVYLQMNSLKPEDTAVYHCYADLVTRVGSDLLYDDYWGQGTQVTVSS
서열번호 23 VHH 서열(C33B1780)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVFGFSLSDYAIGWFRQAPGKEREKVSCISESDGRTYLSDSVKSRFTISRDNGKNTVYLQMNNLKPDDTGVYYCATVDQAISESSYHCEKGFGSWGQGTQVTVSS
서열번호 24 VHH 서열(C33B1783)
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGFTFDDYAVGWFRQVPGKEREGVSCISSSDGATYYADSVKGRFTISSDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCTAIIVRGSGWERAAAACRYEYSYWGQGTQVTVSS
서열번호 25 VHH 서열(C33B1782)
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGFTFDDYAVGWFRQAPGKEREGISCISSSDGATYYADSVKGRFTISTDNAKNTAFLQMNSLKPEDTAVYYCTAVIVRGTGWERAAAACRYEYAYWGQGTQVTVSS
서열번호 26 VHH 서열(C33B1789)
QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVFGFSLSDYAIGWFRQAPGKEREKVSCISESDGRTYLSDSVKSRFTISRDNGKNTVYLQMNNLKPDDTGVYYCATVDQAISESSYHCEKGFGSWGQGTQVTVSS
서열번호 27 VHH 서열(C33B1788)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVFGFSLSDYAIGWFRQAPGKEREKVSCISESDGRTYLSDSVKSRFTISRDNGKNTVYLQMNNLKPDDTGVYYCATVDQAISESSYHCEKGFGSWGQGTQVTVSS
서열번호 28 VH의 CDR1(C33B1474)
SFGMS
서열번호 29 VH의 CDR1(C33B1522)
SYYWG
서열번호 30 VH의 CDR1(C33B1607)
DYNIN
서열번호 31 VH의 CDR1(C33B1601)
NYAMS
서열번호 32 VH의 CDR1(C33B1517)
NYYWS
서열번호 33 VH의 CDR1(C33B1495; C33B931; C33B782)
SYWMS
서열번호 34 VH의 CDR1(C33B1478; C33B1477; C33B1476)
VSAIH
서열번호 35 VH의 CDR1(C33B1484)
VFAIH
서열번호 36 VH의 CDR2(C33B1474)
NIKRDGSEKYYVDSVKG
서열번호 37 VH의 CDR2(C33B1522)
YIYYSGSTNYNPSLKS
서열번호 38 VH의 CDR2(C33B1607)
TINPNNGVTFYNQRFKG
서열번호 39 VH의 CDR2(C33B1601)
GISNSGYSLYYPDTLKG
서열번호 40 VH의 CDR2(C33B1517)
HIYSTGNIHYNPSLKS
서열번호 41 VH의 CDR2(C33B1495)
NIKRDGSEKHYVDSVKG
서열번호 42 VH의 CDR2(C33B1478; C33B1484)
RIRSKGNSYATAYDVSVKG
서열번호 43 VH의 CDR2(C33B1477)
RIRSKGNSYATAYAASVKG
서열번호 44 VH의 CDR2(C33B1476)
RIRSKGNSYATAYNVSVKG
서열번호 45 VH의 CDR3(C33B1474)
DYGYFDF
서열번호 46 VH의 CDR3(C33B1522)
MWEILGFDP
서열번호 47 VH의 CDR3(C33B1607)
DGYDTYYAMDY
서열번호 48 VH의 CDR3(C33B1601)
DGGSYPYAMDY
서열번호 49 VH의 CDR3(C33B1517)
DNGAALFDY
서열번호 50 VH의 CDR3(C33B1495)
DYGYFDY
서열번호 51 VH의 CDR3(C33B1478; C33B1477; C33B1476; C33B1484)
HNDKWNYYGLDV
서열번호 52 VH 서열(C33B1474)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVANIKRDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMSSLRAEDTAVYYCVRDYGYFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 53 VH 서열(C33B1522)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWGWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMWEILGFDPWGQGTLVTVS
서열번호 54 VH 서열(C33B1607)
EVQLQQSGPELVKPGSSVKISCKASGYTFTDYNINWVKQSHGKNLEWIGTINPNNGVTFYNQRFKGQATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCSRDGYDTYYAMDYWGQGTTLTVSS
서열번호 55 VH 서열(C33B1607)
EVQLVESGGGLVRPGGSLKLSCAASGFTFSNYAMSWVRQTPEKRLEWVAGISNSGYSLYYPDTLKGRFTISRDNARNTLYLQMISLRSEDTAMYYCARDGGSYPYAMDYWGHGTSVTVSS
서열번호 56 VH 서열(C33B1517)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNGAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 57 VH 서열(C33B1495)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLDWVANIKRDGSEKHYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDSAVYYCTRDYGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 58 VH 서열(C33B1478)
EVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCEASGFTFSVSAIHWVRQASGKGLEWIGRIRSKGNSYATAYDVSVKGRFTISRDDSKNTAYLQMDSLKTEDTAVYYCTRHNDKWNYYGLDVWGQGTTVTVSS
서열번호 59 VH 서열(C33B1477)
EVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCEASGFTFSVSAIHWVRQASGKGLEWIGRIRSKGNSYATAYAASVKGRFTISRDDSKNTAYLQMDSLKTEDTAVYYCTRHNDKWNYYGLDVWGQGTTVTVSS
서열번호 60 VH 서열(C33B1476)
EVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCEASGFTFSVSAIHWVRQASGKGLEWIGRIRSKGNSYATAYNVSVKGRFTISRDDSKNTAYLQMDSLKTEDTAVYYCTRHNDKWNYYGLDVWGQGTTVTVSS
서열번호 61 VH 서열(C33B1484)
EVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCEASGFTFSVFAIHWVRQASGKGLEWIGRIRSKGNSYATAYDVSVKGRFTISRDDSKNTAYLQMDSLKTEDTAVYYCTRHNDKWNYYGLDVWGQGTTVTVSS
서열번호 62 VL의 CDR1(C33B1474)
QASQAISNYLN
서열번호 63 VL의 CDR1(C33B1522)
SGSSSNIGSNPVN
서열번호 64 VL의 CDR1(C33B1607)
KASQDVRTAEA
서열번호 65 VL의 CDR1(C33B1601)
KASQNVGTYVA
서열번호 66 VL의 CDR1(C33B1517; C33B1516)
SGSSSNIGSNIVN
서열번호 67 VL의 CDR1(C33B1495)
RASQGISSYLA
서열번호 68 VL의 CDR1(C33B1478; C33B1477; C33B1476; C33B1484)
KSSQSLLFSNGYKFLD
서열번호 69 VL의 CDR2(C33B1474)
DASNLET
서열번호 70 VL의 CDR2(C33B1522; C33B1517)
SNNQRPS
서열번호 71 VL의 CDR2(C33B1607)
SASNRYT
서열번호 72 VL의 CDR2(C33B1601)
SASYRYS
서열번호 73 VL의 CDR2(C33B1495)
AASTLQS
서열번호 74 VL의 CDR2(C33B1478; C33B1477; C33B1476; C33B1484; C33B1475)
LGSYRAS
서열번호 75 VL의 CDR3(C33B1474)
QHYDNLPYT
서열번호 76 VL의 CDR3(C33B1522; C33B1517; C33B1516)
AAWDDSLNGPV
서열번호 77 VL의 CDR3(C33B1607)
QQYYTTPRT
서열번호 78 VL의 CDR3(C33B1601)
QQYKSYPLT
서열번호 79 VL의 CDR3(C33B1495)
QQLNSYPVT
서열번호 80 VL의 CDR3(C33B1478; C33B1477; C33B1476; C33B1484)
MQALQTPPT
서열번호 81 VL 서열(C33B1474)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQAISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDFSTYFCQHYDNLPYTFGQGTKLEIK
서열번호 82 VL 서열(C33B1522)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVL
서열번호 83 VL 서열(C33B1607)
DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVRTAEAWYQQKPGQSPKLLIYSASNRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQYYTTPRTFGGGTKLEIK
서열번호 84 VL 서열(C33B1601)
DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTYVAWYQQKPGHSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYKSYPLTFGAGTKLELK
서열번호 85 VL 서열(C33B1517)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGPGTKVTVL
서열번호 86 VL 서열(C33B1495)
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKVLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYFCQQLNSYPVTFGGGTKVEIK
서열번호 87 VL 서열(C33B1478; C33B1477; C33B1476)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLFSNGYKFLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSYRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYYCMQALQTPPTFGGGTKVEIK
서열번호 88 VL 서열(C33B1484)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLFSNGYKFLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSYRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYYCMQALQTPPTFGQGTKVEIK
서열번호 89 VH의 CDR1(C33B933; C33B919; C33B937; C33B125)
SYGMH
서열번호 90 VH의 CDR2(C33B933; C33B919; C33B937; C33B125)
VISYDGSNKYYADSVKG
서열번호 91 VH의 CDR2(C33B931; C33B782)
NIKQHGSEKYYVDSVKG
서열번호 92 VH의 CDR3(C33B933)
DFRSLDWLPPDSTSYDGMDV
서열번호 93 VH의 CDR3(C33B933)
DFRSFDWLPPDSTSYYGMDV
서열번호 94 VH의 CDR3(C33B931)
DRDLGYFDY
서열번호 95 VH 서열(C33B933)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQSPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKSTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDFRSLDWLPPDSTSYDGMDVWGQGTTVTVSS
서열번호 96 VH 서열(C33B919; C33B125)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDFRSFDWLPPDSTSYYGMDVWGQGTTVTVSS
서열번호 97 VH 서열(C33B931)
EVQLVESGGGFVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQHGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDLGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 98 VL의 CDR1(C33B933)
SGHKLGDKYAS
서열번호 99 VL의 CDR1(C33B919)
SGDKLGDKYVS
서열번호 100 VL의 CDR1(C33B931)
SGDKLGSKFAS
서열번호 101 VL의 CDR2(C33B933)
KDSKRPS
서열번호 102 VL의 CDR2(C33B919; C33B125)
QDRKRPS
서열번호 103 VL의 CDR2(C33B931)
QDSKRPS
서열번호 104 VL의 CDR3(C33B933; C33B919; C33B931; C33B782; C33B125)
QAWDSSTVV
서열번호 105 VL 서열(C33B933)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGHKLGDKYASWYQQKPGQSPVVVIYKDSKRPSGIPERFSGSNFGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVL
서열번호 106 VL 서열(C33B919)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYVSWYQQKPGQSPVVVIHQDRKRPSGIPERFSGSNFGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVL
서열번호 107 VL 서열(C33B931)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGSKFASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVL
서열번호 108 링커 서열
GGSEGKSSGSGSESKSTGGS
서열번호 109 링커 서열
GGGSGGGS
서열번호 110 링커 서열
GGGSGGGSGGGS
서열번호 111 링커 서열
GGGSGGGSGGGSGGGS
서열번호 112 링커 서열
GGGSGGGSGGGSGGGSGGGS
서열번호 113 링커 서열
GGGGSGGGGSGGGGS
서열번호 114 링커 서열
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
서열번호 115 링커 서열
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
서열번호 116 링커 서열
GSTSGSGKPGSGEGSTKG
서열번호 117 링커 서열
IRPRAIGGSKPRVA
서열번호 118 링커 서열
GKGGSGKGGSGKGGS
서열번호 119 링커 서열
GGKGSGGKGSGGKGS
서열번호 120 링커 서열
GGGKSGGGKSGGGKS
서열번호 121 링커 서열
GKGKSGKGKSGKGKS
서열번호 122 링커 서열
GGGKSGGKGSGKGGS
서열번호 123 링커 서열
GKPGSGKPGSGKPGS
서열번호 124 링커 서열
GKPGSGKPGSGKPGSGKPGS
서열번호 125 링커 서열
GKGKSGKGKSGKGKSGKGKS
서열번호 126 링커 서열
STAGDTHLGGEDFD
서열번호 127 링커 서열
GEGGSGEGGSGEGGS
서열번호 128 링커 서열
GGEGSGGEGSGGEGS
서열번호 129 링커 서열
GEGESGEGESGEGES
서열번호 130 링커 서열
GGGESGGEGSGEGGS
서열번호 131 링커 서열
GEGESGEGESGEGESGEGES
서열번호 132 링커 서열
GSTSGSGKPGSGEGSTKG
서열번호 133 링커 서열
PRGASKSGSASQTGSAPGS
서열번호 134 링커 서열
GTAAAGAGAAGGAAAGAAG
서열번호 135 링커 서열
GTSGSSGSGSGGSGSGGGG
서열번호 136 링커 서열
GKPGSGKPGSGKPGSGKPGS
서열번호 137 링커 서열
GSGS
서열번호 138 링커 서열
APAPAPAPAP
서열번호 139 링커 서열
APAPAPAPAPAPAPAPAPAP
서열번호 140 링커 서열
AEAAAKEAAAKEAAAAKEAAAAKEAAAAKAAA
서열번호 141 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 HCDR1(CD3B219)
TYAMN
서열번호 142 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 HCDR2(CD3B219)
RIRSKYNNYATYYAASVKG
서열번호 143 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 HCDR3(CD3B219)
HGNFGNSYVSWFAY
서열번호 144 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 LCDR1(CD3B219)
RSSTGAVTTSNYAN
서열번호 145 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 LCDR2(CD3B219)
GTNKRAP
서열번호 146 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 LCDR3(CD3B219)
ALWYSNLWV
서열번호 147 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 VH(CD3B219)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCARHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
서열번호 148 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 VL(CD3B219)
QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVL
서열번호 149 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 HCDR1(CD3B376)
NNNAAWS
서열번호 150 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 HCDR2(CD3B376)
RTYYRSKWLYDYAVSVKS
서열번호 151 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 HCDR3(CD3B376)
GYSSSFDY
서열번호 152 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 LCDR1(CD3B376)
TGTSSNIGTYKFVS
서열번호 153 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 LCDR2(CD3B376)
EVSKRPS
서열번호 154 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 LCDR3(CD3B376)
VSYAGSGTLL
서열번호 155 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 VH(CD3B376)
QVQLQQSGPRLVRPSQTLSLTCAISGDSVFNNNAAWSWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWLYDYAVSVKSRITVNPDTSRNQFTLQLNSVTPEDTALYYCARGYSSSFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 156 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인의 VL(CD3B376)
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSNIGTYKFVSWYQQHPDKAPKVLLYEVSKRPSGVSSRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDQADYHCVSYAGSGTLLFGGGTKLTVL
서열번호 157 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 CD8a-힌지 영역
TSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD
서열번호 158 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 힌지 영역
EPKSCDKTHTCPPCP
서열번호 159 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 힌지 영역
ERKCCVECPPCP
서열번호 160 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 힌지 영역
ELKTPLGDTTHTCPRCP(EPKSCDTPPPCPRCP)3
서열번호 161 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 힌지 영역
ESKYGPPCPSCP
서열번호 162 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 CD8a 막관통 영역
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC
서열번호 163 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 CD137 공동 자극 도메인
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL
서열번호 164 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 CD137 공동 자극 도메인
RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
서열번호 165 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 세포내 신호전달 도메인
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
서열번호 166 CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 힌지 영역
ESKYGPPCPSCP
서열번호 167 VH의 CDR1(C33B836)
NYAMN
서열번호 168 VH의 CDR2(C33B836)
WINTNTGNPTYAQGFTG
서열번호 169 VH의 CDR3(C33B836)
DRDRGTDY
서열번호 170 VH 서열(C33B836)
QVQLVQSGSELRKPGASVKVSCKASGYTFTNYAMNWVRQAPGQGLEWMGWINTNTGNPTYAQGFTGRFVFSLDTSVSSAYLQISSLKAEDTAMYYCATDRDRGTDYWGQGTLVTVSS
서열번호 171 VH 서열(C33B782)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQHGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDLGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 172 VH의 CDR1(C33B806)
SSSYYWG
서열번호 173 VH의 CDR2(C33B806)
SINYSGSTYYNPSLKS
서열번호 174 VH의 CDR3(C33B806)
LDGYESPFDY
서열번호 175 VH 서열(C33B806)
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLDWIGSINYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKIQFSLKLRSVTAADTAVYYCARLDGYESPFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 176 VH의 CDR1(C33B904)
DYAMH
서열번호 177 VH의 CDR2(C33B904)
GIGWSGGSIVYADSVKG
서열번호 178 VH의 CDR3(C33B904)
DSPYGDFFDY
서열번호 179 VH 서열(C33B904)
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIGWSGGSIVYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDSPYGDFFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 180 VH의 CDR3(C33B937)
DFRSFDWLPPDSASYHGMDV
서열번호 181 VH 서열(C33B937)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEGTAVYYCAKDFRSFDWLPPDSASYHGMDVWGQGTTVTVSS
서열번호 182 VL의 CDR1(C33B836)
TGTSSDVGDYNYVS
서열번호 183 VL의 CDR2(C33B836)
DVSNRPS
서열번호 184 VL의 CDR3(C33B836)
SSYSSSSALEV
서열번호 185 VL 서열(C33B836)
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGDYNYVSWYQQHPGKVPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSMSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYSSSSALEVFGGGTKLTVL
서열번호 186 VL의 CDR1(C33B782)
SGNKLGAKFAS
서열번호 187 VL의 CDR2(C33B782)
QDNKRPS
서열번호 188 VL 서열(C33B782)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGNKLGAKFASWYQQKPGQSPVLVIYQDNKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAVDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVL
서열번호 189 VL의 CDR1(C33B806)
RASQGISSWLA
서열번호 190 VL의 CDR2(C33B806)
AASSLQS
서열번호 191 VL의 CDR3(C33B806)
QQANSFPFT
서열번호 192 VL 서열(C33B806)
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPFTFGPGTKVDIK
서열번호 193 VL의 CDR1(C33B904)
KSSQTVFYSSNNKNYLA
서열번호 194 VL의 CDR2(C33B904)
WASTRKS
서열번호 195 VL의 CDR3(C33B904)
QHYYSTPYT
서열번호 196 VL 서열(C33B904)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQTVFYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLISWASTRKSGVPDRFSGSGSGTDFTLTVSSLQAEDVAVYYCQHYYSTPYTFGQGTKLEIK
서열번호 197 VL의 CDR1(C33B937)
SGDKLGDKYAS
서열번호 198 VL의 CDR2(C33B937)
QDGKRPS
서열번호 199 VL의 CDR3(C33B937)
QAWDRNTVV
서열번호 200 VL 서열(C33B937)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDGKRPSGIPERFSGSNFGNKATLTISGTQAMDEADYYCQAWDRNTVVFGGGTKLTVL
서열번호 201 VL의 CDR1(C33B125)
SGDKLGDKYVC
서열번호 202 VL 서열(C33B125)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYVCWYQQKPGQSPVVVIHQDRKRPSGIPERFSGSNFGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVL
서열번호 203 scFv(C33B836)
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGDYNYVSWYQQHPGKVPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSMSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYSSSSALEVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVQSGSELRKPGASVKVSCKASGYTFTNYAMNWVRQAPGQGLEWMGWINTNTGNPTYAQGFTGRFVFSLDTSVSSAYLQISSLKAEDTAMYYCATDRDRGTDYWGQGTLVTVSS
서열번호 204 scFv(C33B782)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGNKLGAKFASWYQQKPGQSPVLVIYQDNKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAVDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQHGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDLGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 205 scFv(C33B806)
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPFTFGPGTKVDIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLDWIGSINYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKIQFSLKLRSVTAADTAVYYCARLDGYESPFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 206 scFv(C33B904)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQTVFYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLISWASTRKSGVPDRFSGSGSGTDFTLTVSSLQAEDVAVYYCQHYYSTPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIGWSGGSIVYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDSPYGDFFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 207 scFv(C33B933)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGHKLGDKYASWYQQKPGQSPVVVIYKDSKRPSGIPERFSGSNFGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQSPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKSTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDFRSLDWLPPDSTSYDGMDVWGQGTTVTVSS
서열번호 208 scFv(C33B937)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDGKRPSGIPERFSGSNFGNKATLTISGTQAMDEADYYCQAWDRNTVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEGTAVYYCAKDFRSFDWLPPDSASYHGMDVWGQGTTVTVSS
서열번호 209 scFv(C33B919)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYVSWYQQKPGQSPVVVIHQDRKRPSGIPERFSGSNFGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDFRSFDWLPPDSTSYYGMDVWGQGTTVTVSS
서열번호 210 scFv(C33B125)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYVCWYQQKPGQSPVVVIHQDRKRPSGIPERFSGSNFGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDFRSFDWLPPDSTSYYGMDVWGQGTTVTVSS
서열번호 211 scFv(C33B931)
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGSKFASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGFVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQHGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRDLGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 212 scFv(C33B1474)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQAISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDFSTYFCQHYDNLPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVANIKRDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMSSLRAEDTAVYYCVRDYGYFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 213 scFv(C33B1522)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWGWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMWEILGFDPWGQGTLVTVS
서열번호 214 scFv(C33B1607)
DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVRTAEAWYQQKPGQSPKLLIYSASNRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQYYTTPRTFGGGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLQQSGPELVKPGSSVKISCKASGYTFTDYNINWVKQSHGKNLEWIGTINPNNGVTFYNQRFKGQATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCSRDGYDTYYAMDYWGQGTTLTVSS
서열번호 215 scFv(C33B1601)
DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTYVAWYQQKPGHSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYKSYPLTFGAGTKLELKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVRPGGSLKLSCAASGFTFSNYAMSWVRQTPEKRLEWVAGISNSGYSLYYPDTLKGRFTISRDNARNTLYLQMISLRSEDTAMYYCARDGGSYPYAMDYWGHGTSVTVSS
서열번호 216 scFv(C33B1517)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGPGTKVTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNGAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 217 scFv(C33B1495)
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKVLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYFCQQLNSYPVTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLDWVANIKRDGSEKHYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDSAVYYCTRDYGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 218 scFv(C33B1478)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLFSNGYKFLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSYRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYYCMQALQTPPTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCEASGFTFSVSAIHWVRQASGKGLEWIGRIRSKGNSYATAYDVSVKGRFTISRDDSKNTAYLQMDSLKTEDTAVYYCTRHNDKWNYYGLDVWGQGTTVTVSS
서열번호 219 scFv(C33B1477)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLFSNGYKFLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSYRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYYCMQALQTPPTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCEASGFTFSVSAIHWVRQASGKGLEWIGRIRSKGNSYATAYAASVKGRFTISRDDSKNTAYLQMDSLKTEDTAVYYCTRHNDKWNYYGLDVWGQGTTVTVSS
서열번호 220 scFv(C33B1476)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLFSNGYKFLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSYRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYYCMQALQTPPTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCEASGFTFSVSAIHWVRQASGKGLEWIGRIRSKGNSYATAYNVSVKGRFTISRDDSKNTAYLQMDSLKTEDTAVYYCTRHNDKWNYYGLDVWGQGTTVTVSS
서열번호 221 scFv(C33B1484)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLFSNGYKFLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSYRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYYCMQALQTPPTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCEASGFTFSVFAIHWVRQASGKGLEWIGRIRSKGNSYATAYDVSVKGRFTISRDDSKNTAYLQMDSLKTEDTAVYYCTRHNDKWNYYGLDVWGQGTTVTVSS
서열번호 222 야생형 IgG1
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 223 야생형 IgG2
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 224 야생형 IgG4
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
서열번호 225 CD33 항원: HSA N-말단 융합; CynoCD33ECD-HSA(C34S)-6xHis
DPRVRLEVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPVPYHTRNSPVHGYWFREGAIVSLDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMEKGSTKYSYKSTQLSVHVTDLTHRPQILIPGALDPDHSKNLTCSVPWACEQGTPPIFSWMSAAPTSLGLRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFPGAGVTTERTIQLNVSYASQNPRTDIFLGDGSGKQGVVQGSGSGSENLYFQGVRSSSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGLGGGSHHHHHH
서열번호 226 CD33 항원: HSA N-말단 융합; 인간 CD33ECD-Tev-HSA(C34S)-6xHis
DPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYWFREGAIISRDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMERGSTKYSYKSPQLSVHVTDLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHGSGSGSENLYFQGVRSSSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGLGGGSHHHHHH
서열번호 227 CD33 항원: HSA N-말단 융합; C-말단의 HSA 및 6xHis 태그에 융합된 hCD33 Ig 유사 V형 도메인(Uniprot P20138, V136-H259)
DPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYWFREGAIISRDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMERGSTKYSYKSPQLSVHVTDLTHRDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGLHHHHHH
서열번호 228 CD33 항원: HSA N-말단 융합; C-말단의 HSA 및 6xHis 태그에 융합된 hCD33 Ig 유사 C2형 도메인(Uniprot P20138, V136-H259)
VHVTDLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGLHHHHHH
서열번호 229 CD33 항원: hCD33_Ig 유사 V형 도메인
DPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYWFREGAIISRDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMERGSTKYSYKSPQLSVHVTDLTHRGSHHHHHH
서열번호 230 CD33 항원: hCD33 Ig 유사 C2형 도메인
VHVTDLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHGSHHHHHH
서열번호 231 CD33 항원: MuIgV_Hu IgC2 키메라 CD33-6xHis_v1
QDLEFQLVAPESVTVEEGLCVHVPCSVFYPSIKLTLGPVTGSWLRKGVSLHEDSPVATSDPRQLVQKATQGRFQLLGDPQKHDCSLFIRDAQKNDTGMYFFRVVREPFVRYSYKKSQLSLHVTSLSRTPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHGSHHHHHH
서열번호 232 CD33 항원: MuIgV_cyno IgC2 키메라 CD33-6xHis_v1
QDLEFQLVAPESVTVEEGLCVHVPCSVFYPSIKLTLGPVTGSWLRKGVSLHEDSPVATSDPRQLVQKATQGRFQLLGDPQKHDCSLFIRDAQKNDTGMYFFRVVREPFVRYSYKKSQLSLHVTSLSRTPQILIPGALDPDHSKNLTCSVPWACEQGTPPIFSWMSAAPTSLGLRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFPGAGVTTERTIQLNVSYASQNPRTDIFLGDGSGRKARKQGVVQGSHHHHHH
서열번호 233 CD33 항원: C-말단 6xHis 태그가 있는 Uniprot P20138의 인간 CD33 ECD(D18-H259)
DPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYWFREGAIISRDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMERGSTKYSYKSPQLSVHVTDLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHGSHHHHHH
서열번호 234 CD33 항원: C-말단 6xHis 태그가 있는 XP_005590138.1의 Cyno CD33 ECD(D37-Q274)
DPRVRLEVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPVPYHTRNSPVHGYWFREGAIVSLDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMEKGSTKYSYKSTQLSVHVTDLTHRPQILIPGALDPDHSKNLTCSVPWACEQGTPPIFSWMSAAPTSLGLRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFPGAGVTTERTIQLNVSYASQNPRTDIFLGDGSGKQGVVQGSHHHHHH
서열번호 235 CD33 항원: 6xHis 태그가 있는 Uniprot P20138의 인간 CD33 ECD(D18-G241)
DPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYWFREGAIISRDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMERGSTKYSYKSPQLSVHVTDLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGHHHHHH
서열번호 236 항-TRGV9 mAb LP7A5_1, LP7A5_2, LP7A5_3, LP7A5_4의 HCDR1 서열
DHYIN
서열번호 237 항-TRGV9 mAb LP7A5_1, LP7A5_2, LP7A5_3, LP7A5_4의 HCDR2 서열
QIYPGDGNTYYNQKFKG
서열번호 238 항-TRGV9 mAb LP7A5_1의 HCDR3 서열
NYGDYTIDF
서열번호 239 항-TRGV9 mAb LP7A5_1, LP7A5_2, LP7A5_3, LP7A5_4의 LCDR1 서열
KSSQSLLYSSNQKNYLA
서열번호 240 항-TRGV9 mAb LP7A5_1, LP7A5_2, LP7A5_3, LP7A5_4의 LCDR2 서열
WASTRES
서열번호 241 항-TRGV9 mAb LP7A5_1, LP7A5_2, LP7A5_3, LP7A5_4의 LCDR3 서열
QQYYRYHT
서열번호 242 항-TRGV9 mAb LP7A5_2의 HCDR3 서열
NMGMYTIDF
서열번호 243 항-TRGV9 mAb LP7A5_3의 HCDR3 서열
NMGMYTLDF
서열번호 244 항-TRGV9 mAb LP7A5_4의 HCDR3 서열
NYGDYTLDF
서열번호 245 LP7A5_1의 중쇄 서열
EVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGFTFTDHYINWVKQRTGQGLEWIGQIYPGDGNTYYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCAPNYGDYTIDFWGQGTSVTVSS
서열번호 246 LP7A5_2의 중쇄 서열
EVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGFTFTDHYINWVKQRTGQGLEWIGQIYPGDGNTYYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCAPNMGMYTIDFWGQGTSVTVSS
서열번호 247 LP7A5_3의 중쇄 서열
EVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGFTFTDHYINWVKQRTGQGLEWIGQIYPGDGNTYYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCAPNMGMYTLDFWGQGTSVTVSS
서열번호 248 LP7A5_4의 중쇄 서열
EVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGFTFTDHYINWVKQRTGQGLEWIGQIYPGDGNTYYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCAPNMGMYTLDFWGQGTSVTVSS
서열번호 249 LP7A5_1의 경쇄 서열
DIVMSQSPSSLAVSVGEKVTMSCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYRYHTFGTGTKLEIK
서열번호 250 항-TRGV9 홀 아암 서열
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVMSQSPSSLAVSVGEKVTMSCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYRYHTFGTGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGSEGKSSGSGSESKSTEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGFTFTDHYINWVKQRTGQGLEWIGQIYPGDGNTYYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCAPNYGDYTIDFWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSLGK
서열번호 251 항-CD33 노브 아암 서열
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQTVFYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLISWASTRKSGVPDRFSGSGSGTDFTLTVSSLQAEDVAVYYCQHYYSTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGSEGKSSGSGSESKSTEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIGWSGGSIVYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDSPYGDFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
서열번호 252 항-RSV 노브 아암 서열
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQDYGFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGSEGKSSGSGSESKSTEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWISWVRQMPGKGLEWMGIIDPSDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGDGSTDLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
서열번호 253 VH의 CDR1(C33B1475)
SYWMT
서열번호 254 VH의 CDR1(C33B1516)
NYYWS
서열번호 255 VH의 CDR1(C33B1481)
NYWMS
서열번호 256 VH의 CDR2(C33B1475)
NIKQDGSERYYVDSVKG
서열번호 257 VH의 CDR2(C33B1516)
HIFSTGHINYDSSLKS
서열번호 258 VH의 CDR2(C33B1481)
SIKRDGSDKYYVDSVKG
서열번호 259 VH의 CDR3(C33B1475)
EVGYNWNQGGYFDY
서열번호 260 VH의 CDR3(C33B1516)
DNGAALFDF
서열번호 261 VH의 CDR3(C33B1481)
GEFDY
서열번호 262 VH 서열(C33B1475)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 263 VH 서열(C33B1516)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 264 VH 서열(C33B1481)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGITFSNYWMSWVRQAPGKGLEWVASIKRDGSDKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMHSLRAEDTAVYYCAKGEFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 265 VL의 CDR1(C33B1475)
RSSQSLLHSDGYNYLD
서열번호 266 VL의 CDR1(C33B1481)
RSSQSLVYSDGNTYLN
서열번호 267 VL의 CDR2(C33B1516)
SDNQRPS
서열번호 268 VL의 CDR2(C33B1481)
KVSTRDS
서열번호 269 VL의 CDR3(C33B1475)
MQVLQTPWT
서열번호 270 VL의 CDR3(C33B1481)
LQGTHWPWT
서열번호 271 VL 서열(C33B1475)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGYNYLDWYLQKSGQSPQLLIYLGSYRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCMQVLQTPWTFGQGTKVEIK
서열번호 272 VL 서열(C33B1516)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGTGTKVTVL
서열번호 273 VL 서열(C33B1481)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSTRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVAVYYCLQGTHWPWTFGQGTKVEIK
서열번호 274 scFv(C33B1475)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGYNYLDWYLQKSGQSPQLLIYLGSYRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCMQVLQTPWTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 275 scFv(C33B1516)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGTGTKVTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 276 scFv(C33B1481)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSTRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVAVYYCLQGTHWPWTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGITFSNYWMSWVRQAPGKGLEWVASIKRDGSDKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMHSLRAEDTAVYYCAKGEFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 277 huIgG1_G1m(17)-힌지-FC_C220S|IgG1|(C33B1475; C33B1516; C33B1481; C33B1477; C33B1517; C33B1522)
EPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 278 huIgG1_G1m(17)
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열번호 279 Fab HC(C33B1475)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGITFSNYWMSWVRQAPGKGLEWVASIKRDGSDKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMHSLRAEDTAVYYCAKGEFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
서열번호 280 Fab HC(C33B1516)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNGAALFDFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
서열번호 281 Fab HC(C33B1481)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGITFSNYWMSWVRQAPGKGLEWVASIKRDGSDKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMHSLRAEDTAVYYCAKGEFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
서열번호 282 Fab HC(C33B1477)
EVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCEASGFTFSVSAIHWVRQASGKGLEWIGRIRSKGNSYATAYAASVKGRFTISRDDSKNTAYLQMDSLKTEDTAVYYCTRHNDKWNYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
서열번호 283 Fab HC(C33B1517)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNGAALFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
서열번호 284 Fab HC(C33B1522)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWGWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMWEILGFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
서열번호 285 Fab LC(C33B1475)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGYNYLDWYLQKSGQSPQLLIYLGSYRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCMQVLQTPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열번호 286 Fab LC(C33B1516)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
서열번호 287 Fab LC(C33B1481)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSTRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVAVYYCLQGTHWPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열번호 288 Fab LC(C33B1477)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLFSNGYKFLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSYRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYYCMQALQTPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열번호 289 Fab LC(C33B1517)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGPGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
서열번호 290 Fab LC(C33B1522)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
서열번호 291(C33B1475VH1-2)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQGGSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 292(C33B1475VH1-3)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQAGSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 293(C33B1475VH1-5)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQYGSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 294(C33B1475VH1-12)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQPGSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 295(C33B1475VH1-14)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQNGSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 296(C33B1475VH1-22)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQSGSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 297(C33B1475VH1-27)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQRGSERYYVDS
VKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 298(C33B1475VH1-32)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQLGSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 299(C33B1475VH1-36)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQVGSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 300(C33B1475VH1-46)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQTGSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 301(C33B1475VH1-63)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQFGSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 302(C33B1475VH1-89)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQWGSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 303(C33B1475VH2-12)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDVSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 304(C33B1475VH2-16)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDPSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 305(C33B1475VH2-20)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDRSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 306(C33B1475VH2-22)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDASERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 307(C33B1475VH2-24)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDLSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 308(C33B1475VH2-35)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDQSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 309(C33B1475VH2-58)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDTSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 310(C33B1475VH2-86)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVVSGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDHSERYYVDSVKGRFTISRDSAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREVGYNWNQGGYFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 311(C33B1516 VL1-1)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLVGPVFGTGTKVTVL
서열번호 312(C33B1516 VL1-2)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLRGPVFGTGTKVTVL
서열번호 313(C33B1516 VL1-4)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLPGPVFGTGTKVTVL
서열번호 314(C33B1516 VL1-10)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLTGPVFGTGTKVTVL
서열번호 315(C33B1516 VL1-11)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLGGPVFGTGTKVTVL
서열번호 316(C33B1516 VL1-14)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLQGPVFGTGTKVTVL
서열번호 317(C33B1516 VL1-16)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLSGPVFGTGTKVTVL
서열번호 328(C33B1516 VL1-20)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLAGPVFGTGTKVTVL
서열번호 319(C33B1516 VL1-22)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLLGPVFGTGTKVTVL
서열번호 320(C33B1516 VL1-23)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLYGPVFGTGTKVTVL
서열번호 321(C33B1516 VL1-30)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLEGPVFGTGTKVTVL
서열번호 322(C33B1516VL1-39)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLFGPVFGTGTKVTVL
서열번호 323(C33B1516VL1-41)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLDGPVFGTGTKVTVL
서열번호 324(C33B1516VL1-63)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLIGPVFGTGTKVTVL
서열번호 325(C33B1516VL1-90)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLHGPVFGTGTKVTVL
서열번호 326(C33B1516 VL2-3)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNVPVFGTGTKVTVL
서열번호 327(C33B1516 VL2-4)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNPPVFGTGTKVTVL
서열번호 328(C33B1516 VL2-7)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNRPVFGTGTKVTVL
서열번호 329(C33B1516 VL2-8)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNDPVFGTGTKVTVL
서열번호 330(C33B1516 VL2-10)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNEPVFGTGTKVTVL
서열번호 331(C33B1516 VL2-11)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNWPVFGTGTKVTVL
서열번호 332(C33B1516 VL2-29)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNYPVFGTGTKVTVL
서열번호 333(C33B1516 VL2-35)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNAPVFGTGTKVTVL
서열번호 334(C33B1516VL2-37)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNNPVFGTGTKVTVL
서열번호 335(C33B1516VL2-38)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNKPVFGTGTKVTVL
서열번호 336(C33B1516VL2-90)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLLYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNLPVFGTGTKVTVL
서열번호 337(C33B1516VH1-1)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDVGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 338(C33B1516VH1-3)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDSGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 339(C33B1516VH1-4)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDEGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 340(C33B1516VH1-6)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDHGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 341(C33B1516VH1-7)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDAGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 342(C33B1516VH1-8)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDGGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 343(C33B1516VH1-10)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDKGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 344(C33B1516VH1-13)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDTGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 345(C33B1516VH1-17)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDFGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 346(C33B1516VH1-20)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDVGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 347(C33B1516VH1-21)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDRGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 348(C33B1516VH1-27)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDLGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 349(C33B1516VH1-38)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDHGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 350(C33B1516VH1-56)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDIGAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 351(C33B1516VH2-8)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNSAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 352(C33B1516VH2-9)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSIRNYYWSWIRQSAGKELEWFGHIFSTGHINYDSSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNAAALFDFWGQGTLVTVSS
서열번호 353(C33B1517VL1-1)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLGGPVFGPGTKVTVL
서열번호 354(C33B1517VL1-7)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLDGPVFGPGTKVTVL
서열번호 355(C33B1517VL1-8)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLPGPVFGPGTKVTVL
서열번호 356(C33B1517VL1-12)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLKGPVFGPGTKVTVL
서열번호 357(C33B1517VL1-13)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLEGPVFGPGTKVTVL
서열번호 358(C33B1517VL1-16)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLAGPVFGPGTKVTVL
서열번호 359(C33B1517VL1-22)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLRGPVFGPGTKVTVL
서열번호 360(C33B1517VL1-24)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLQGPVFGPGTKVTVL
서열번호 361(C33B1517VL1-27)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLIGPVFGPGTKVTVL
서열번호 362(C33B1517VL1-35)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLVGPVFGPGTKVTVL
서열번호 363(C33B1517VL1-49)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLHGPVFGPGTKVTVL
서열번호 364(C33B1517VL1-66)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLKGPVFGPGTKVTVL
서열번호 365(C33B1517VL1-69)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLWGPVFGPGTKVTVL
서열번호 366(C33B1517VL1-71)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNIVNWYQQFPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRVSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLSGPVFGPGTKVTVL
서열번호 367(C33B1517VH1-1)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDRGAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 368(C33B1517VH1-3)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDPGAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 369(C33B1517VH1-4)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDGGAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 370(C33B1517VH1-6)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDVGAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 371(C33B1517VH1-8)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDLGAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 372(C33B1517VH1-11)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDDGAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 373(C33B1517VH1-17)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDEGAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 374(C33B1517VH1-33)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDAGAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 375(C33B1517VH1-60)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDQGAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 376(C33B1517VH1-71)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDTGAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 377(C33B1517VH2-7)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNSAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 378(C33B1517VH2-30)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNAAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 379(C33B1517VH2-31)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNLAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 380(C33B1517VH2-60)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNPAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 381(C33B1517VH2-68)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNTAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 382(C33B1517VH2-76)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGASIRNYYWSWIRQTAGKGLEWLGHIYSTGNIHYNPSLKSRVTMSVDTSNNQFSLKLRSVTAADTAVYYCARDNQAALFDYWGQGTLVTVSS
서열번호 383(C33B1522VL1-2)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLSGPVFGGGTKLTVL
서열번호 384(C33B1522VL1-3)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLQGPVFGGGTKLTVL
서열번호 385(C33B1522VL1-4)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLVGPVFGGGTKLTVL
서열번호 386(C33B1522VL1-5)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLGGPVFGGGTKLTVL
서열번호 387(C33B1522VL1-7)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLWGPVFGGGTKLTVL
서열번호 388(C33B1522VL1-12)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLTGPVFGGGTKLTVL
서열번호 389(C33B1522VL1-15)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLIGPVFGGGTKLTVL
서열번호 390(C33B1522VL1-27)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLEGPVFGGGTKLTVL
서열번호 391(C33B1522VL1-29)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLAGPVFGGGTKLTVL
서열번호 392(C33B1522VL1-32)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLRGPVFGGGTKLTVL
서열번호 393(C33B1522VL1-47)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLLGPVFGGGTKLTVL
서열번호 394(C33B1522VL2-82)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLNVPVFGGGTKLTVL
서열번호 395(C33B1522VL2-1)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLNAPVFGGGTKLTVL
서열번호 396(C33B1522VL2-2)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLNPPVFGGGTKLTVL
서열번호 397(C33B1522VL2-8)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLNLPVFGGGTKLTVL
서열번호 398(C33B1522VL2-17)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNPVNWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYFCAAWDDSLNTPVFGGGTKLTVL
서열번호 399 HC AbM CDR1(C33B1522)
GGSISSYYWG
서열번호 400 HC AbM CDR1(C33B1477)
GFTFSVSAIH
서열번호 401 HC AbM CDR1(C33B1475)
GFTFSSYWMT
서열번호 402 HC AbM CDR1(C33B1517)
GASIRNYYWS
서열번호 403 HC AbM CDR1(C33B1516)
GGSIRNYYWS
서열번호 404 HC AbM CDR1(C33B1481)
GITFSNYWMS
서열번호 405 HC AbM CDR2(C33B1522)
YIYYSGSTN
서열번호 406 HC AbM CDR2(C33B1477)
RIRSKGNSYATA
서열번호 407 HC AbM CDR2(C33B1475)
NIKQDGSERY
서열번호 408 HC AbM CDR2(C33B1517)
HIYSTGNIH
서열번호 409 HC AbM CDR2(C33B1516)
HIFSTGHIN
서열번호 410 HC AbM CDR2(C33B1481)
SIKRDGSDKY
서열번호 411 HC AbM CDR3(C33B1522)
MWEILGFDP
서열번호 412 HC AbM CDR3(C33B1477)
HNDKWNYYGLDV
서열번호 413 HC AbM CDR3(C33B1475)
EVGYNWNQGGYFDY
서열번호 414 HC AbM CDR3(C33B1517)
DNGAALFDY
서열번호 415 HC AbM CDR3(C33B1516)
DNGAALFDF
서열번호 416 HC AbM CDR3(C33B1481)
GEFDY
서열번호 417 LC AbM CDR1(C33B1522)
SGSSSNIGSNPVN
서열번호 418 LC AbM CDR1(C33B1477)
KSSQSLLFSNGYKFLD
서열번호 419 LC AbM CDR1(C33B1475)
RSSQSLLHSDGYNYLD
서열번호 420 LC AbM CDR1(C33B1517)
SGSSSNIGSNIVN
서열번호 421 LC AbM CDR1(C33B1516)
SGSSSNIGSNIVN
서열번호 422 LC AbM CDR1(C33B1481)
RSSQSLVYSDGNTYLN
서열번호 423 LC AbM CDR2(C33B1522)
SNNQRPS
서열번호 424 LC AbM CDR2(C33B1477)
LGSYRAS
서열번호 425 LC AbM CDR2(C33B1475)
LGSYRAS
서열번호 426 LC AbM CDR2(C33B1517)
SNNQRPS
서열번호 427 LC AbM CDR2(C33B1516)
SDNQRPS
서열번호 428 LC AbM CDR2(C33B1481)
KVSTRDS
서열번호 429 LC AbM CDR3(C33B1522)
AAWDDSLNGPV
서열번호 430 LC AbM CDR3(C33B1477)
MQALQTPPT
서열번호 431 LC AbM CDR3(C33B1475)
MQVLQTPWT
서열번호 432 LC AbM CDR3(C33B1517)
AAWDDSLNGPV
서열번호 433 LC AbM CDR3(C33B1516)
AAWDDSLNGPV
서열번호 434 LC AbM CDR3(C33B1481)
LQGTHWPWT
서열번호 435 HC CHOTHIA CDR1(C33B1522)
GGSISSY
서열번호 436 HC CHOTHIA CDR1(C33B1477)
GFTFSVS
서열번호 437 HC CHOTHIA CDR1(C33B1475)
GFTFSSY
서열번호 438 HC CHOTHIA CDR1(C33B1517)
GASIRNY
서열번호 439 HC CHOTHIA CDR1(C33B1516)
GGSIRNY
서열번호 440 HC CHOTHIA CDR1(C33B1481)
GITFSNY
서열번호 441 HC CHOTHIA CDR2(C33B1522)
YYSGS
서열번호 442 HC CHOTHIA CDR2(C33B1477)
RSKGNSYA
서열번호 443 HC CHOTHIA CDR2(C33B1475)
KQDGSE
서열번호 444 HC CHOTHIA CDR2(C33B1517)
YSTGN
서열번호 445 HC CHOTHIA CDR2(C33B1516)
FSTGH
서열번호 446 HC CHOTHIA CDR2(C33B1481)
KRDGSD
서열번호 447 HC CHOTHIA CDR3(C33B1522)
MWEILGFD
서열번호 448 HC CHOTHIA CDR3(C33B1477)
HNDKWNYYGLD
서열번호 449 HC CHOTHIA CDR3(C33B1475)
EVGYNWNQGGYFD
서열번호 450 HC CHOTHIA CDR3(C33B1517)
DNGAALFD
서열번호 451 HC CHOTHIA CDR3(C33B1516)
DNGAALFD
서열번호 452 HC CHOTHIA CDR3(C33B1481)
GEFD
서열번호 453 LC CHOTHIA CDR1(C33B1522)
SSSNIGSNP
서열번호 454 LC CHOTHIA CDR1(C33B1477)
SQSLLFSNGYKF
서열번호 455 LC CHOTHIA CDR1(C33B1475)
SQSLLHSDGYNY
서열번호 456 LC CHOTHIA CDR1(C33B1517)
SSSNIGSNI
서열번호 457 LC CHOTHIA CDR1(C33B1516)
SSSNIGSNI
서열번호 458 LC CHOTHIA CDR1(C33B1481)
SQSLVYSDGNTY
서열번호 459 LC CHOTHIA CDR2(C33B1522)
SNN
서열번호 460 LC CHOTHIA CDR2(C33B1477)
LGS
서열번호 461 LC CHOTHIA CDR2(C33B1475)
LGS
서열번호 462 LC CHOTHIA CDR2(C33B1517)
SNN
서열번호 463 LC CHOTHIA CDR2(C33B1516)
SDN
서열번호 464 LC CHOTHIA CDR2(C33B1481)
KVS
서열번호 465 LC CHOTHIA CDR3(C33B1522)
WDDSLNGP
서열번호 466 LC CHOTHIA CDR3(C33B1477)
ALQTPP
서열번호 467 LC CHOTHIA CDR3(C33B1475)
VLQTPW
서열번호 468 LC CHOTHIA CDR3(C33B1517)
WDDSLNGP
서열번호 469 LC CHOTHIA CDR3(C33B1516)
WDDSLNGP
서열번호 470 LC CHOTHIA CDR3(C33B1481)
GTHWPW
서열번호 471 HC IMGT CDR1(C33B1522)
GGSISSYY
서열번호 472 HC IMGT CDR1(C33B1477)
GFTFSVSA
서열번호 473 HC IMGT CDR1(C33B1475)
GFTFSSYW
서열번호 474 HC IMGT CDR1(C33B1517)
GASIRNYY
서열번호 475 HC IMGT CDR1(C33B1516)
GGSIRNYY
서열번호 476 HC IMGT CDR1(C33B1481)
GITFSNYW
서열번호 477 HC IMGT CDR2(C33B1522)
IYYSGST
서열번호 478 HC IMGT CDR2(C33B1477)
IRSKGNSYAT
서열번호 479 HC IMGT CDR2(C33B1475)
IKQDGSER
서열번호 480 HC IMGT CDR2(C33B1517)
IYSTGNI
서열번호 481 HC IMGT CDR2(C33B1516)
IFSTGHI
서열번호 482 HC IMGT CDR2(C33B1481)
IKRDGSDK
서열번호 483 HC IMGT CDR3(C33B1522)
ARMWEILGFDP
서열번호 484 HC IMGT CDR3(C33B1477)
TRHNDKWNYYGLDV
서열번호 485 HC IMGT CDR3(C33B1475)
AREVGYNWNQGGYFDY
서열번호 486 HC IMGT CDR3(C33B1517)
ARDNGAALFDY
서열번호 487 HC IMGT CDR3(C33B1516)
ARDNGAALFDF
서열번호 488 HC IMGT CDR3(C33B1481)
AKGEFDY
서열번호 489 LC IMGT CDR1(C33B1522)
SSNIGSNP
서열번호 490 LC IMGT CDR1(C33B1477)
QSLLFSNGYKF
서열번호 491 LC IMGT CDR1(C33B1475)
QSLLHSDGYNY
서열번호 492 LC IMGT CDR1(C33B1517)
SSNIGSNI
서열번호 493 LC IMGT CDR1(C33B1516)
SSNIGSNI
서열번호 494 LC IMGT CDR1(C33B1481)
QSLVYSDGNTY
서열번호 495 LC IMGT CDR2(C33B1522)
SNN
서열번호 496 LC IMGT CDR2(C33B1477)
LGS
서열번호 497 LC IMGT CDR2(C33B1475)
LGS
서열번호 498 LC IMGT CDR2(C33B1517)
SNN
서열번호 499 LC IMGT CDR2(C33B1516)
SDN
서열번호 500 LC IMGT CDR2(C33B1481)
KVS
서열번호 501 LC IMGT CDR3(C33B1522)
AAWDDSLNGPV
서열번호 502 LC IMGT CDR3(C33B1477)
MQALQTPPT
서열번호 503 LC IMGT CDR3(C33B1475)
MQVLQTPWT
서열번호 504 LC IMGT CDR3(C33B1517)
AAWDDSLNGPV
서열번호 505 LC IMGT CDR3(C33B1516)
AAWDDSLNGPV
서열번호 506 LC IMGT CDR3(C33B1481)
LQGTHWPWT
서열번호 507 HC CONTACT CDR1(C33B1522)
SSYYWG
서열번호 508 HC CONTACT CDR1(C33B1477)
SVSAIH
서열번호 509 HC CONTACT CDR1(C33B1475)
SSYWMT
서열번호 510 HC CONTACT CDR1(C33B1517)
RNYYWS
서열번호 511 HC CONTACT CDR1(C33B1516)
RNYYWS
서열번호 512 HC CONTACT CDR1(C33B1481)
SNYWMS
서열번호 513 HC CONTACT CDR2(C33B1522)
WIGYIYYSGSTN
서열번호 514 HC CONTACT CDR2(C33B1477)
WIGRIRSKGNSYATA
서열번호 515 HC CONTACT CDR2(C33B1475)
WVANIKQDGSERY
서열번호 516 HC CONTACT CDR2(C33B1517)
WLGHIYSTGNIH
서열번호 517 HC CONTACT CDR2(C33B1516)
WFGHIFSTGHIN
서열번호 518 HC CONTACT CDR2(C33B1481)
WVASIKRDGSDKY
서열번호 519 HC CONTACT CDR3(C33B1522)
ARMWEILGFD
서열번호 520 HC CONTACT CDR3(C33B1477)
TRHNDKWNYYGLD
서열번호 521 HC CONTACT CDR3(C33B1475)
AREVGYNWNQGGYFD
서열번호 522 HC CONTACT CDR3(C33B1517)
ARDNGAALFD
서열번호 523 HC CONTACT CDR3(C33B1516)
ARDNGAALFD
서열번호 524 HC CONTACT CDR3(C33B1481)
AKGEFD
서열번호 525 LC CONTACT CDR1(C33B1522)
IGSNPVNWY
서열번호 526 LC CONTACT CDR1(C33B1477)
LFSNGYKFLDWY
서열번호 527 LC CONTACT CDR1(C33B1475)
LHSDGYNYLDWY
서열번호 528 LC CONTACT CDR1(C33B1517)
IGSNIVNWY
서열번호 529 LC CONTACT CDR1(C33B1516)
IGSNIVNWY
서열번호 530 LC CONTACT CDR1(C33B1481)
VYSDGNTYLNWF
서열번호 531 LC CONTACT CDR2(C33B1522)
LLIYSNNQRP
서열번호 532 LC CONTACT CDR2(C33B1477)
LLIYLGSYRA
서열번호 533 LC CONTACT CDR2(C33B1475)
LLIYLGSYRA
서열번호 534 LC CONTACT CDR2(C33B1517)
LLIYSNNQRP
서열번호 535 LC CONTACT CDR2(C33B1516)
LLLYSDNQRP
서열번호 536 LC CONTACT CDR2(C33B1481)
RLIYKVSTRD
서열번호 537 LC CONTACT CDR3(C33B1522)
AAWDDSLNGP
서열번호 538 LC CONTACT CDR3(C33B1477)
MQALQTPP
서열번호 539 LC CONTACT CDR3(C33B1475)
MQVLQTPW
서열번호 540 LC CONTACT CDR3(C33B1517)
AAWDDSLNGP
서열번호 541 LC CONTACT CDR3(C33B1516)
AAWDDSLNGP
서열번호 542 LC CONTACT CDR3(C33B1481)
LQGTHWPW
참고문헌
1. www_lls_org/sites/default/files/file_assets/PS32_AML_Booklet_2019_FINAL.pdf
2. D H Wiseman, B F Greystoke & T C P Somervaille, The variety of leukemic stem cells in myeloid malignancy, Oncogene volume 33, pages3091-3098(2014)
3. American Cancer Society: Cancer Facts and Figures 2014. Atlanta, Ga: American Cancer Society, 2014. Available onlineExit Disclaimer
4. www.uniprot.org/uniprot/P20138
5. Engagement of p75/AIRM1 or CD33 inhibits the proliferation of normal or leukemic myeloid cells, Vitale C., Romagnani C., Falco M., Ponte M., Vitale M., Moretta A., Bacigalupo A., Moretta L., Mingari M.C., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96:15091-15096(1999)
6. Ehninger A. Et al (2015) Blood Cancer Journal (2014) 4, e218
7. Felix S. Lichtenegger, et al., Recent developments in immunotherapy of acute myeloid leukemia, J Hematol Oncol. 2017; 10: 142
* * *
본 발명은 본원에 기술된 특정 구현예에 의해 범위가 제한되지 않는다. 실제로, 본원에 기술된 것 이외에도 본 발명의 다양한 변형은 전술한 설명 및 첨부 도면으로부터 당업자에게 명확해질 것이다. 이러한 변형은 첨부되는 청구범위 내에 속하는 것이다. 추가로, 모든 값은 대략적인 것이며, 설명을 위해 제공된 것임을 이해해야 한다.
특허, 특허 출원, 간행물, 생성물 설명, 및 프로토콜은 본 출원 전체에 인용되며, 그 개시는 모든 목적을 위해 전체가 본원에 참조로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> JANSSEN BIOTECH, INC. <120> MATERIALS AND METHODS FOR SIALIC ACID BINDING IG-LIKE LECTIN BINDING <141> 2021-03-12 <150> US 62/989,071 <151> 2020-03-13 <150> US 62/989,093 <151> 2020-03-13 <150> US 62/989,120 <151> 2020-03-13 <150> US 62/989,230 <151> 2020-03-13 <150> US 62/989,187 <151> 2020-03-13 <160> 542 <170> SeqWin2010, version 1.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 1 Asp Tyr Ala Ile Gly 1 5 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 2 Thr Tyr Val Met Gly 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 3 Phe Ser Thr Met Asp 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 4 Ile Asn Ala Met Gly 1 5 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 5 Asp Tyr Ala Val Gly 1 5 <210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 6 Cys Ile Ser Glu Ser Asp Gly Arg Thr Tyr Leu Ser Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Ser <210> 7 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 7 Ala Ile Val Ser Gly Arg Asn Pro Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ser 1 5 10 15 <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 8 Cys Ile Ser Ser Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 9 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 9 Cys Ile Arg Pro Arg Tyr Ser Thr Thr Thr His Ala Asp Ser Ile Lys 1 5 10 15 Gly <210> 10 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 10 Arg Ile Thr Gly Gly Gly Ala Thr Asp Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 11 Cys Ile Ser Ser Ser Asp Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 12 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 12 Val Asp Gln Ala Ile Ser Glu Ser Ser Tyr His Cys Glu Lys Gly Phe 1 5 10 15 Gly Ser <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 13 Tyr His Tyr Ser Ser Gln Tyr 1 5 <210> 14 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 14 Leu Ile Ile Met Tyr Gly Ser Gly Ser Glu Arg Ala Ala Ala Ala Cys 1 5 10 15 Arg Tyr Lys Tyr Glu Tyr 20 <210> 15 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 15 Asp Leu Val Thr Arg Val Gly Ser Asp Leu Leu Tyr Asp Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 16 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 16 Ile Ile Val Arg Gly Ser Gly Trp Glu Arg Ala Ala Ala Ala Cys Arg 1 5 10 15 Tyr Glu Tyr Ser Tyr 20 <210> 17 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 17 Val Ile Val Arg Gly Thr Gly Trp Glu Arg Ala Ala Ala Ala Cys Arg 1 5 10 15 Tyr Glu Tyr Ala Tyr 20 <210> 18 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 18 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Phe Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Lys Val 35 40 45 Ser Cys Ile Ser Glu Ser Asp Gly Arg Thr Tyr Leu Ser Asp Ser Val 50 55 60 Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Val Asp Gln Ala Ile Ser Glu Ser Ser Tyr His Cys Glu Lys 100 105 110 Gly Phe Gly Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 19 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 19 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Leu Val 35 40 45 Ala Ala Ile Val Ser Gly Arg Asn Pro Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Ile Tyr Leu 65 70 75 80 His Met Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys His 85 90 95 Met Tyr His Tyr Ser Ser Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 20 <211> 131 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 20 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val 35 40 45 Ser Cys Ile Ser Ser Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Ala Leu Ile Ile Met Tyr Gly Ser Gly Ser Glu Arg Ala Ala Ala 100 105 110 Ala Cys Arg Tyr Lys Tyr Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr 115 120 125 Val Ser Ser 130 <210> 21 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 21 Glu Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ser Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Thr Leu Ser Cys Glu Ala Ser Glu Ser Ile Leu Ser Phe Ser 20 25 30 Thr Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val 35 40 45 Ser Cys Ile Arg Pro Arg Tyr Ser Thr Thr Thr His Ala Asp Ser Ile 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Lys Met Tyr Ser Asp Asn Ala Lys Asn Thr Ile Tyr 65 70 75 80 Leu His Met Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 His Met Tyr His Tyr Ser Ser Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 22 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 22 Glu Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Gly Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile Asn 20 25 30 Ala Met Gly Trp Tyr His Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val 35 40 45 Ala Arg Ile Thr Gly Gly Gly Ala Thr Asp Tyr Val Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Leu Asp Ser Ala Lys Ser Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr His Cys Tyr 85 90 95 Ala Asp Leu Val Thr Arg Val Gly Ser Asp Leu Leu Tyr Asp Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 23 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 23 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Phe Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Lys Val 35 40 45 Ser Cys Ile Ser Glu Ser Asp Gly Arg Thr Tyr Leu Ser Asp Ser Val 50 55 60 Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Val Asp Gln Ala Ile Ser Glu Ser Ser Tyr His Cys Glu Lys 100 105 110 Gly Phe Gly Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 24 <211> 130 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 24 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Val Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val 35 40 45 Ser Cys Ile Ser Ser Ser Asp Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Ala Ile Ile Val Arg Gly Ser Gly Trp Glu Arg Ala Ala Ala Ala 100 105 110 Cys Arg Tyr Glu Tyr Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val 115 120 125 Ser Ser 130 <210> 25 <211> 130 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 25 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Ile 35 40 45 Ser Cys Ile Ser Ser Ser Asp Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Thr Asp Asn Ala Lys Asn Thr Ala Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Ala Val Ile Val Arg Gly Thr Gly Trp Glu Arg Ala Ala Ala Ala 100 105 110 Cys Arg Tyr Glu Tyr Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val 115 120 125 Ser Ser 130 <210> 26 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 26 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Phe Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Lys Val 35 40 45 Ser Cys Ile Ser Glu Ser Asp Gly Arg Thr Tyr Leu Ser Asp Ser Val 50 55 60 Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Val Asp Gln Ala Ile Ser Glu Ser Ser Tyr His Cys Glu Lys 100 105 110 Gly Phe Gly Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 27 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 27 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Phe Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Lys Val 35 40 45 Ser Cys Ile Ser Glu Ser Asp Gly Arg Thr Tyr Leu Ser Asp Ser Val 50 55 60 Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Val Asp Gln Ala Ile Ser Glu Ser Ser Tyr His Cys Glu Lys 100 105 110 Gly Phe Gly Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 28 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 28 Ser Phe Gly Met Ser 1 5 <210> 29 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 29 Ser Tyr Tyr Trp Gly 1 5 <210> 30 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 30 Asp Tyr Asn Ile Asn 1 5 <210> 31 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 31 Asn Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 32 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 32 Asn Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 33 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 33 Ser Tyr Trp Met Ser 1 5 <210> 34 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 34 Val Ser Ala Ile His 1 5 <210> 35 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 35 Val Phe Ala Ile His 1 5 <210> 36 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 36 Asn Ile Lys Arg Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 37 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 37 Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 38 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 38 Thr Ile Asn Pro Asn Asn Gly Val Thr Phe Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 39 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 39 Gly Ile Ser Asn Ser Gly Tyr Ser Leu Tyr Tyr Pro Asp Thr Leu Lys 1 5 10 15 Gly <210> 40 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 40 His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 41 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 41 Asn Ile Lys Arg Asp Gly Ser Glu Lys His Tyr Val Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 42 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 42 Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr Ala Tyr Asp Val Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 43 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 43 Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr Ala Tyr Ala Ala Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 44 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 44 Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr Ala Tyr Asn Val Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 45 Asp Tyr Gly Tyr Phe Asp Phe 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 46 Met Trp Glu Ile Leu Gly Phe Asp Pro 1 5 <210> 47 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 47 Asp Gly Tyr Asp Thr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 48 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 48 Asp Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 49 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 49 Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr 1 5 <210> 50 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 50 Asp Tyr Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 51 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 51 His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 1 5 10 <210> 52 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 52 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Arg Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Asp Tyr Gly Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 53 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 53 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Trp Glu Ile Leu Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser 115 <210> 54 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 54 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Ile Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Thr Ile Asn Pro Asn Asn Gly Val Thr Phe Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Asp Gly Tyr Asp Thr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 55 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 55 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Gly Ile Ser Asn Ser Gly Tyr Ser Leu Tyr Tyr Pro Asp Thr Leu 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ile Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly His 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 56 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 56 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 57 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 57 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Arg Asp Gly Ser Glu Lys His Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Tyr Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 58 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 58 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Val Ser 20 25 30 Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr Ala Tyr Asp Val 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Ala Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Arg His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 59 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 59 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Val Ser 20 25 30 Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr Ala Tyr Ala Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Ala Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Arg His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 60 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 60 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Val Ser 20 25 30 Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr Ala Tyr Asn Val 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Ala Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Arg His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 61 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 61 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Val Phe 20 25 30 Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr Ala Tyr Asp Val 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Ala Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Arg His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 62 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 62 Gln Ala Ser Gln Ala Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 63 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 63 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Pro Val Asn 1 5 10 <210> 64 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 64 Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Thr Ala Glu Ala 1 5 10 <210> 65 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 65 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Tyr Val Ala 1 5 10 <210> 66 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 66 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ile Val Asn 1 5 10 <210> 67 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 67 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 68 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 68 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Phe Ser Asn Gly Tyr Lys Phe Leu Asp 1 5 10 15 <210> 69 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 69 Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr 1 5 <210> 70 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 70 Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 71 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 71 Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 72 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 72 Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser 1 5 <210> 73 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 73 Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser 1 5 <210> 74 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 74 Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser 1 5 <210> 75 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 75 Gln His Tyr Asp Asn Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 76 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 76 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val 1 5 10 <210> 77 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 77 Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Arg Thr 1 5 <210> 78 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 78 Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 79 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 79 Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Val Thr 1 5 <210> 80 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 80 Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Pro Thr 1 5 <210> 81 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 81 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ala Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ser Thr Tyr Phe Cys Gln His Tyr Asp Asn Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 82 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 82 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 83 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 83 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Thr Ala 20 25 30 Glu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 84 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 84 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Tyr 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly His Ser Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 85 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 85 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 86 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 86 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Val 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 87 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 87 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Phe Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Lys Phe Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 88 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 88 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Phe Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Lys Phe Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 89 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 89 Ser Tyr Gly Met His 1 5 <210> 90 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 90 Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 91 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 91 Asn Ile Lys Gln His Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 92 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 92 Asp Phe Arg Ser Leu Asp Trp Leu Pro Pro Asp Ser Thr Ser Tyr Asp 1 5 10 15 Gly Met Asp Val 20 <210> 93 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 93 Asp Phe Arg Ser Phe Asp Trp Leu Pro Pro Asp Ser Thr Ser Tyr Tyr 1 5 10 15 Gly Met Asp Val 20 <210> 94 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 94 Asp Arg Asp Leu Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 95 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 95 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Phe Arg Ser Leu Asp Trp Leu Pro Pro Asp Ser Thr Ser 100 105 110 Tyr Asp Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 96 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 96 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Phe Arg Ser Phe Asp Trp Leu Pro Pro Asp Ser Thr Ser 100 105 110 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 97 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 97 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Phe Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln His Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Asp Leu Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 98 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 98 Ser Gly His Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser 1 5 10 <210> 99 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 99 Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 100 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 100 Ser Gly Asp Lys Leu Gly Ser Lys Phe Ala Ser 1 5 10 <210> 101 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 101 Lys Asp Ser Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 102 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 102 Gln Asp Arg Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 103 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 103 Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 104 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 104 Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val 1 5 <210> 105 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 105 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly His Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Val Val Ile Tyr 35 40 45 Lys Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Phe Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 106 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 106 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Val 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Val Val Ile His 35 40 45 Gln Asp Arg Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Phe Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 107 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 107 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Ser Lys Phe Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 108 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 108 Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser 1 5 10 15 Thr Gly Gly Ser 20 <210> 109 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 109 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 110 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 110 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 111 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 111 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 112 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 112 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser 20 <210> 113 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 113 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 114 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 114 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser 20 <210> 115 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 115 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 <210> 116 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 116 Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Lys Gly <210> 117 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 117 Ile Arg Pro Arg Ala Ile Gly Gly Ser Lys Pro Arg Val Ala 1 5 10 <210> 118 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 118 Gly Lys Gly Gly Ser Gly Lys Gly Gly Ser Gly Lys Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 119 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 119 Gly Gly Lys Gly Ser Gly Gly Lys Gly Ser Gly Gly Lys Gly Ser 1 5 10 15 <210> 120 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 120 Gly Gly Gly Lys Ser Gly Gly Gly Lys Ser Gly Gly Gly Lys Ser 1 5 10 15 <210> 121 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 121 Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser 1 5 10 15 <210> 122 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 122 Gly Gly Gly Lys Ser Gly Gly Lys Gly Ser Gly Lys Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 123 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 123 Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 <210> 124 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 124 Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly 1 5 10 15 Lys Pro Gly Ser 20 <210> 125 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 125 Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser Gly 1 5 10 15 Lys Gly Lys Ser 20 <210> 126 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 126 Ser Thr Ala Gly Asp Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp 1 5 10 <210> 127 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 127 Gly Glu Gly Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 128 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 128 Gly Gly Glu Gly Ser Gly Gly Glu Gly Ser Gly Gly Glu Gly Ser 1 5 10 15 <210> 129 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 129 Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser 1 5 10 15 <210> 130 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 130 Gly Gly Gly Glu Ser Gly Gly Glu Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 131 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 131 Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser Gly 1 5 10 15 Glu Gly Glu Ser 20 <210> 132 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 132 Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Lys Gly <210> 133 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 133 Pro Arg Gly Ala Ser Lys Ser Gly Ser Ala Ser Gln Thr Gly Ser Ala 1 5 10 15 Pro Gly Ser <210> 134 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 134 Gly Thr Ala Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Gly Gly Ala Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Ala Gly <210> 135 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 135 Gly Thr Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly <210> 136 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 136 Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly 1 5 10 15 Lys Pro Gly Ser 20 <210> 137 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 137 Gly Ser Gly Ser 1 <210> 138 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 138 Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro 1 5 10 <210> 139 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 139 Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro 1 5 10 15 Ala Pro Ala Pro 20 <210> 140 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 140 Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Ala 1 5 10 15 Lys Glu Ala Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala 20 25 30 <210> 141 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 141 Thr Tyr Ala Met Asn 1 5 <210> 142 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 142 Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 143 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 143 His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 144 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 144 Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn 1 5 10 <210> 145 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 145 Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro 1 5 <210> 146 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 146 Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val 1 5 <210> 147 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 147 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe 100 105 110 Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 148 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 148 Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 149 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 149 Asn Asn Asn Ala Ala Trp Ser 1 5 <210> 150 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 150 Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Leu Tyr Asp Tyr Ala Val Ser Val 1 5 10 15 Lys Ser <210> 151 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 151 Gly Tyr Ser Ser Ser Phe Asp Tyr 1 5 <210> 152 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 152 Thr Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Thr Tyr Lys Phe Val Ser 1 5 10 <210> 153 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 153 Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 154 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 154 Val Ser Tyr Ala Gly Ser Gly Thr Leu Leu 1 5 10 <210> 155 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 155 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Arg Leu Val Arg Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Phe Asn Asn 20 25 30 Asn Ala Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Leu Tyr Asp Tyr Ala 50 55 60 Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Val Asn Pro Asp Thr Ser Arg Asn 65 70 75 80 Gln Phe Thr Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Leu 85 90 95 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 156 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 156 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Thr Tyr 20 25 30 Lys Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Asp Lys Ala Pro Lys Val 35 40 45 Leu Leu Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Gln Ala Asp Tyr His Cys Val Ser Tyr Ala Gly Ser 85 90 95 Gly Thr Leu Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 157 <211> 45 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 157 Thr Ser Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala 1 5 10 15 Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly 20 25 30 Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 35 40 45 <210> 158 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 158 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 159 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 159 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 160 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 160 Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Arg Cys 1 5 10 15 Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 20 25 30 <210> 161 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 161 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro 1 5 10 <210> 162 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 162 Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 1 5 10 15 Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys 20 <210> 163 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 163 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 164 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 164 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 165 <211> 154 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 165 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 35 40 45 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 50 55 60 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 65 70 75 80 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 85 90 95 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 100 105 110 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 115 120 125 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 130 135 140 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 145 150 <210> 166 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 166 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro 1 5 10 <210> 167 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 167 Asn Tyr Ala Met Asn 1 5 <210> 168 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 168 Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr 1 5 10 15 Gly <210> 169 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 169 Asp Arg Asp Arg Gly Thr Asp Tyr 1 5 <210> 170 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 170 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Arg Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe 50 55 60 Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Asp Arg Asp Arg Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 171 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 171 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln His Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Asp Leu Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 172 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 172 Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly 1 5 <210> 173 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 173 Ser Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 174 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 174 Leu Asp Gly Tyr Glu Ser Pro Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 175 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 175 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Asp 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Ile Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Asp Gly Tyr Glu Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 176 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 176 Asp Tyr Ala Met His 1 5 <210> 177 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 177 Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Ser Ile Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 178 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 178 Asp Ser Pro Tyr Gly Asp Phe Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 179 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 179 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Ser Ile Val Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ser Pro Tyr Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 180 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 180 Asp Phe Arg Ser Phe Asp Trp Leu Pro Pro Asp Ser Ala Ser Tyr His 1 5 10 15 Gly Met Asp Val 20 <210> 181 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 181 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Gly Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Phe Arg Ser Phe Asp Trp Leu Pro Pro Asp Ser Ala Ser 100 105 110 Tyr His Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 182 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 182 Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Asp Tyr Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 183 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 183 Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 184 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 184 Ser Ser Tyr Ser Ser Ser Ser Ala Leu Glu Val 1 5 10 <210> 185 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 185 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Asp Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Met Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ser Ser Ser 85 90 95 Ser Ala Leu Glu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 186 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 186 Ser Gly Asn Lys Leu Gly Ala Lys Phe Ala Ser 1 5 10 <210> 187 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 187 Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 188 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 188 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asn Lys Leu Gly Ala Lys Phe Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Val 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 189 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 189 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 190 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 190 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 191 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 191 Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 192 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 192 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 193 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 193 Lys Ser Ser Gln Thr Val Phe Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 194 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 194 Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser 1 5 <210> 195 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 195 Gln His Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 196 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 196 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Val Phe Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Val Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His 85 90 95 Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 197 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 197 Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser 1 5 10 <210> 198 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 198 Gln Asp Gly Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 199 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 199 Gln Ala Trp Asp Arg Asn Thr Val Val 1 5 <210> 200 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 200 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gln Asp Gly Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Phe Gly Asn Lys Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Arg Asn Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 201 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 201 Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Val Cys 1 5 10 <210> 202 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 202 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Val 20 25 30 Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Val Val Ile His 35 40 45 Gln Asp Arg Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Phe Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 203 <211> 248 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 203 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Asp Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Met Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ser Ser Ser 85 90 95 Ser Ala Leu Glu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Arg Lys 130 135 140 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 145 150 155 160 Thr Asn Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 165 170 175 Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala 180 185 190 Gln Gly Phe Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser 195 200 205 Ser Ala Tyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Met 210 215 220 Tyr Tyr Cys Ala Thr Asp Arg Asp Arg Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln 225 230 235 240 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 204 <211> 244 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 204 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asn Lys Leu Gly Ala Lys Phe Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Val 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Glu Gly Lys 100 105 110 Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Val 115 120 125 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 130 135 140 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Met 145 150 155 160 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Asn 165 170 175 Ile Lys Gln His Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly 180 185 190 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln 195 200 205 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 210 215 220 Asp Arg Asp Leu Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 225 230 235 240 Thr Val Ser Ser <210> 205 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 205 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly 100 105 110 Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln 115 120 125 Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr 130 135 140 Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser 145 150 155 160 Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp 165 170 175 Ile Gly Ser Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 180 185 190 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Ile Gln Phe Ser 195 200 205 Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 210 215 220 Ala Arg Leu Asp Gly Tyr Glu Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 225 230 235 240 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 206 <211> 252 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 206 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Val Phe Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Val Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His 85 90 95 Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys 115 120 125 Ser Thr Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu 130 135 140 Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe 145 150 155 160 Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys 165 170 175 Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Ser Ile Val 180 185 190 Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala 195 200 205 Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr 210 215 220 Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Ser Pro Tyr Gly Asp Phe Phe Asp 225 230 235 240 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 207 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 207 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly His Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Val Val Ile Tyr 35 40 45 Lys Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Phe Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Glu Gly Lys 100 105 110 Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln Val 115 120 125 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 130 135 140 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met 145 150 155 160 His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val 165 170 175 Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 180 185 190 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Gln 195 200 205 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 210 215 220 Asp Phe Arg Ser Leu Asp Trp Leu Pro Pro Asp Ser Thr Ser Tyr Asp 225 230 235 240 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 208 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 208 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gln Asp Gly Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Phe Gly Asn Lys Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Arg Asn Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Glu Gly Lys 100 105 110 Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln Val 115 120 125 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 130 135 140 Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met 145 150 155 160 His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val 165 170 175 Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 180 185 190 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 195 200 205 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Gly Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 210 215 220 Asp Phe Arg Ser Phe Asp Trp Leu Pro Pro Asp Ser Ala Ser Tyr His 225 230 235 240 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 209 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 209 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Val 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Val Val Ile His 35 40 45 Gln Asp Arg Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Phe Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Glu Gly Lys 100 105 110 Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln Val 115 120 125 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 130 135 140 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met 145 150 155 160 His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val 165 170 175 Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 180 185 190 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 195 200 205 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 210 215 220 Asp Phe Arg Ser Phe Asp Trp Leu Pro Pro Asp Ser Thr Ser Tyr Tyr 225 230 235 240 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 210 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 210 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Val 20 25 30 Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Val Val Ile His 35 40 45 Gln Asp Arg Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Phe Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Glu Gly Lys 100 105 110 Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln Val 115 120 125 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 130 135 140 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met 145 150 155 160 His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val 165 170 175 Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 180 185 190 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 195 200 205 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 210 215 220 Asp Phe Arg Ser Phe Asp Trp Leu Pro Pro Asp Ser Thr Ser Tyr Tyr 225 230 235 240 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 211 <211> 244 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 211 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Ser Lys Phe Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Glu Gly Lys 100 105 110 Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Val 115 120 125 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Phe Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 130 135 140 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Met 145 150 155 160 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Asn 165 170 175 Ile Lys Gln His Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly 180 185 190 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln 195 200 205 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 210 215 220 Asp Arg Asp Leu Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 225 230 235 240 Thr Val Ser Ser <210> 212 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 212 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ala Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ser Thr Tyr Phe Cys Gln His Tyr Asp Asn Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly 100 105 110 Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln 115 120 125 Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser 130 135 140 Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly 145 150 155 160 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 165 170 175 Asn Ile Lys Arg Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys 180 185 190 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe Leu 195 200 205 Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 210 215 220 Arg Asp Tyr Gly Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 213 <211> 246 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 213 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly 100 105 110 Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser 145 150 155 160 Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 195 200 205 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Ala Arg Met Trp Glu Ile Leu Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly 225 230 235 240 Thr Leu Val Thr Val Ser 245 <210> 214 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 214 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Thr Ala 20 25 30 Glu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly 100 105 110 Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu 115 120 125 Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser Ser 130 135 140 Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn 145 150 155 160 Ile Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile Gly 165 170 175 Thr Ile Asn Pro Asn Asn Gly Val Thr Phe Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 180 185 190 Gly Gln Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met 195 200 205 Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser 210 215 220 Arg Asp Gly Tyr Asp Thr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 225 230 235 240 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 245 <210> 215 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 215 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Tyr 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly His Ser Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Gly Gly Ser Glu Gly 100 105 110 Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu 115 120 125 Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Gly Ser 130 135 140 Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala 145 150 155 160 Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala 165 170 175 Gly Ile Ser Asn Ser Gly Tyr Ser Leu Tyr Tyr Pro Asp Thr Leu Lys 180 185 190 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr Leu 195 200 205 Gln Met Ile Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 210 215 220 Arg Asp Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly His Gly 225 230 235 240 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 216 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 216 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly 100 105 110 Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg 145 150 155 160 Asn Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu 165 170 175 Trp Leu Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe 195 200 205 Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Ala Arg Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 225 230 235 240 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 217 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 217 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Val 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly 100 105 110 Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu 115 120 125 Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser 130 135 140 Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp 145 150 155 160 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val Ala 165 170 175 Asn Ile Lys Arg Asp Gly Ser Glu Lys His Tyr Val Asp Ser Val Lys 180 185 190 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 195 200 205 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr 210 215 220 Arg Asp Tyr Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 225 230 235 240 Val Ser Ser <210> 218 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 218 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Phe Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Lys Phe Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140 Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr 145 150 155 160 Phe Ser Val Ser Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr 180 185 190 Ala Tyr Asp Val Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp 195 200 205 Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Lys Thr Glu Asp 210 215 220 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr 225 230 235 240 Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 219 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 219 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Phe Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Lys Phe Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140 Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr 145 150 155 160 Phe Ser Val Ser Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr 180 185 190 Ala Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp 195 200 205 Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Lys Thr Glu Asp 210 215 220 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr 225 230 235 240 Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 220 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 220 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Phe Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Lys Phe Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140 Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr 145 150 155 160 Phe Ser Val Ser Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr 180 185 190 Ala Tyr Asn Val Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp 195 200 205 Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Lys Thr Glu Asp 210 215 220 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr 225 230 235 240 Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 221 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 221 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Phe Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Lys Phe Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140 Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr 145 150 155 160 Phe Ser Val Phe Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr 180 185 190 Ala Tyr Asp Val Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp 195 200 205 Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Lys Thr Glu Asp 210 215 220 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr 225 230 235 240 Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 222 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 222 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 223 <211> 326 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 223 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 224 <211> 327 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 224 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 225 <211> 851 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 225 Asp Pro Arg Val Arg Leu Glu Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln Glu 1 5 10 15 Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Val Pro Tyr 20 25 30 His Thr Arg Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly Ala 35 40 45 Ile Val Ser Leu Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln Glu 50 55 60 Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro Ser 65 70 75 80 Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp Asn 85 90 95 Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Lys Gly Ser Thr Lys Tyr Ser Tyr 100 105 110 Lys Ser Thr Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg Pro 115 120 125 Gln Ile Leu Ile Pro Gly Ala Leu Asp Pro Asp His Ser Lys Asn Leu 130 135 140 Thr Cys Ser Val Pro Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile Phe 145 150 155 160 Ser Trp Met Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Leu Arg Thr Thr His 165 170 175 Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr Asn 180 185 190 Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Pro Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu Arg 195 200 205 Thr Ile Gln Leu Asn Val Ser Tyr Ala Ser Gln Asn Pro Arg Thr Asp 210 215 220 Ile Phe Leu Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Gly Val Val Gln Gly Ser 225 230 235 240 Gly Ser Gly Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Val Arg Ser Ser Ser 245 250 255 Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu 260 265 270 Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln 275 280 285 Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu 290 295 300 Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys 305 310 315 320 Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu 325 330 335 Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro 340 345 350 Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu 355 360 365 Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His 370 375 380 Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg 385 390 395 400 Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg 405 410 415 Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala 420 425 430 Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser 435 440 445 Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu 450 455 460 Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro 465 470 475 480 Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys 485 490 495 Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp 500 505 510 Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser 515 520 525 Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His 530 535 540 Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser 545 550 555 560 Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala 565 570 575 Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg 580 585 590 Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr 595 600 605 Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu 610 615 620 Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro 625 630 635 640 Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu 645 650 655 Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro 660 665 670 Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys 675 680 685 Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys 690 695 700 Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His 705 710 715 720 Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser 725 730 735 Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr 740 745 750 Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp 755 760 765 Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala 770 775 780 Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu 785 790 795 800 Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys 805 810 815 Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val 820 825 830 Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Gly Gly Ser His His His 835 840 845 His His His 850 <210> 226 <211> 855 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 226 Asp Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln Glu 1 5 10 15 Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Ile Pro Tyr 20 25 30 Tyr Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly Ala 35 40 45 Ile Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln Glu 50 55 60 Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro Ser 65 70 75 80 Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp Asn 85 90 95 Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ser Tyr 100 105 110 Lys Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg Pro 115 120 125 Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys Asn Leu 130 135 140 Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile Phe 145 150 155 160 Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr His 165 170 175 Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr Asn 180 185 190 Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu Arg 195 200 205 Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr Gly 210 215 220 Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly Val 225 230 235 240 Val His Gly Ser Gly Ser Gly Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Val 245 250 255 Arg Ser Ser Ser Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys 260 265 270 Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala 275 280 285 Gln Tyr Leu Gln Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn 290 295 300 Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu 305 310 315 320 Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr 325 330 335 Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala 340 345 350 Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp 355 360 365 Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys 370 375 380 Thr Ala Phe His Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr 385 390 395 400 Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe 405 410 415 Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala 420 425 430 Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu 435 440 445 Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln 450 455 460 Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser 465 470 475 480 Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr 485 490 495 Asp Leu Thr Lys Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu 500 505 510 Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln 515 520 525 Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu 530 535 540 Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala 545 550 555 560 Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys 565 570 575 Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr 580 585 590 Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg 595 600 605 Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala 610 615 620 Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu 625 630 635 640 Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu 645 650 655 Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr 660 665 670 Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg 675 680 685 Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys 690 695 700 Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu 705 710 715 720 Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys 725 730 735 Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu 740 745 750 Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr 755 760 765 Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys 770 775 780 Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr 785 790 795 800 Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu 805 810 815 Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly 820 825 830 Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Gly Gly 835 840 845 Ser His His His His His His 850 855 <210> 227 <211> 718 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 227 Asp Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln Glu 1 5 10 15 Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Ile Pro Tyr 20 25 30 Tyr Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly Ala 35 40 45 Ile Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln Glu 50 55 60 Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro Ser 65 70 75 80 Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp Asn 85 90 95 Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ser Tyr 100 105 110 Lys Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg Asp 115 120 125 Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu 130 135 140 Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln 145 150 155 160 Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe 165 170 175 Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser 180 185 190 Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg 195 200 205 Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu 210 215 220 Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro 225 230 235 240 Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp 245 250 255 Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg 260 265 270 His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr 275 280 285 Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys 290 295 300 Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser 305 310 315 320 Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg 325 330 335 Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys 340 345 350 Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val 355 360 365 His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg 370 375 380 Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser 385 390 395 400 Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys 405 410 415 Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu 420 425 430 Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu 435 440 445 Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg 450 455 460 His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr 465 470 475 480 Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys 485 490 495 Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln 500 505 510 Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr 515 520 525 Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln 530 535 540 Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val 545 550 555 560 Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala 565 570 575 Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu 580 585 590 Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu 595 600 605 Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr 610 615 620 Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile 625 630 635 640 Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu 645 650 655 Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys 660 665 670 Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala 675 680 685 Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala 690 695 700 Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu His His His His His His 705 710 715 <210> 228 <211> 715 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 228 Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg Pro Lys Ile Leu Ile Pro Gly 1 5 10 15 Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys Asn Leu Thr Cys Ser Val Ser Trp 20 25 30 Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile Phe Ser Trp Leu Ser Ala Ala 35 40 45 Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr His Ser Ser Val Leu Ile Ile 50 55 60 Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys 65 70 75 80 Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val 85 90 95 Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr Gly Ile Phe Pro Gly Asp Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly Val Val His Asp Ala His Lys 115 120 125 Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys 130 135 140 Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Ser Pro Phe 145 150 155 160 Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr 165 170 175 Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr 180 185 190 Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr 195 200 205 Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu 210 215 220 Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val 225 230 235 240 Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu Glu 245 250 255 Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr 260 265 270 Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala Ala 275 280 285 Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro 290 295 300 Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys Gln 305 310 315 320 Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys 325 330 335 Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe 340 345 350 Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr Glu 355 360 365 Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu 370 375 380 Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys 385 390 395 400 Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu 405 410 415 Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp 420 425 430 Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp 435 440 445 Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp 450 455 460 Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr 465 470 475 480 Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys 485 490 495 Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile 500 505 510 Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln 515 520 525 Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr 530 535 540 Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys 545 550 555 560 Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr 565 570 575 Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro 580 585 590 Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg 595 600 605 Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys 610 615 620 Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu 625 630 635 640 Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu 645 650 655 Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met 660 665 670 Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys 675 680 685 Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser Gln 690 695 700 Ala Ala Leu Gly Leu His His His His His His 705 710 715 <210> 229 <211> 135 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 229 Asp Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln Glu 1 5 10 15 Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Ile Pro Tyr 20 25 30 Tyr Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly Ala 35 40 45 Ile Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln Glu 50 55 60 Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro Ser 65 70 75 80 Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp Asn 85 90 95 Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ser Tyr 100 105 110 Lys Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg Gly 115 120 125 Ser His His His His His His 130 135 <210> 230 <211> 132 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 230 Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg Pro Lys Ile Leu Ile Pro Gly 1 5 10 15 Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys Asn Leu Thr Cys Ser Val Ser Trp 20 25 30 Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile Phe Ser Trp Leu Ser Ala Ala 35 40 45 Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr His Ser Ser Val Leu Ile Ile 50 55 60 Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys 65 70 75 80 Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val 85 90 95 Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr Gly Ile Phe Pro Gly Asp Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly Val Val His Gly Ser His His 115 120 125 His His His His 130 <210> 231 <211> 251 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 231 Gln Asp Leu Glu Phe Gln Leu Val Ala Pro Glu Ser Val Thr Val Glu 1 5 10 15 Glu Gly Leu Cys Val His Val Pro Cys Ser Val Phe Tyr Pro Ser Ile 20 25 30 Lys Leu Thr Leu Gly Pro Val Thr Gly Ser Trp Leu Arg Lys Gly Val 35 40 45 Ser Leu His Glu Asp Ser Pro Val Ala Thr Ser Asp Pro Arg Gln Leu 50 55 60 Val Gln Lys Ala Thr Gln Gly Arg Phe Gln Leu Leu Gly Asp Pro Gln 65 70 75 80 Lys His Asp Cys Ser Leu Phe Ile Arg Asp Ala Gln Lys Asn Asp Thr 85 90 95 Gly Met Tyr Phe Phe Arg Val Val Arg Glu Pro Phe Val Arg Tyr Ser 100 105 110 Tyr Lys Lys Ser Gln Leu Ser Leu His Val Thr Ser Leu Ser Arg Thr 115 120 125 Pro Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys Asn 130 135 140 Leu Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile 145 150 155 160 Phe Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr 165 170 175 His Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr 180 185 190 Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu 195 200 205 Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr 210 215 220 Gly Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly 225 230 235 240 Val Val His Gly Ser His His His His His His 245 250 <210> 232 <211> 251 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 232 Gln Asp Leu Glu Phe Gln Leu Val Ala Pro Glu Ser Val Thr Val Glu 1 5 10 15 Glu Gly Leu Cys Val His Val Pro Cys Ser Val Phe Tyr Pro Ser Ile 20 25 30 Lys Leu Thr Leu Gly Pro Val Thr Gly Ser Trp Leu Arg Lys Gly Val 35 40 45 Ser Leu His Glu Asp Ser Pro Val Ala Thr Ser Asp Pro Arg Gln Leu 50 55 60 Val Gln Lys Ala Thr Gln Gly Arg Phe Gln Leu Leu Gly Asp Pro Gln 65 70 75 80 Lys His Asp Cys Ser Leu Phe Ile Arg Asp Ala Gln Lys Asn Asp Thr 85 90 95 Gly Met Tyr Phe Phe Arg Val Val Arg Glu Pro Phe Val Arg Tyr Ser 100 105 110 Tyr Lys Lys Ser Gln Leu Ser Leu His Val Thr Ser Leu Ser Arg Thr 115 120 125 Pro Gln Ile Leu Ile Pro Gly Ala Leu Asp Pro Asp His Ser Lys Asn 130 135 140 Leu Thr Cys Ser Val Pro Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile 145 150 155 160 Phe Ser Trp Met Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Leu Arg Thr Thr 165 170 175 His Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr 180 185 190 Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Pro Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu 195 200 205 Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Ser Tyr Ala Ser Gln Asn Pro Arg Thr 210 215 220 Asp Ile Phe Leu Gly Asp Gly Ser Gly Arg Lys Ala Arg Lys Gln Gly 225 230 235 240 Val Val Gln Gly Ser His His His His His His 245 250 <210> 233 <211> 250 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 233 Asp Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln Glu 1 5 10 15 Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Ile Pro Tyr 20 25 30 Tyr Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly Ala 35 40 45 Ile Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln Glu 50 55 60 Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro Ser 65 70 75 80 Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp Asn 85 90 95 Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ser Tyr 100 105 110 Lys Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg Pro 115 120 125 Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys Asn Leu 130 135 140 Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile Phe 145 150 155 160 Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr His 165 170 175 Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr Asn 180 185 190 Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu Arg 195 200 205 Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr Gly 210 215 220 Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly Val 225 230 235 240 Val His Gly Ser His His His His His His 245 250 <210> 234 <211> 246 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 234 Asp Pro Arg Val Arg Leu Glu Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln Glu 1 5 10 15 Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Val Pro Tyr 20 25 30 His Thr Arg Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly Ala 35 40 45 Ile Val Ser Leu Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln Glu 50 55 60 Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro Ser 65 70 75 80 Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp Asn 85 90 95 Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Lys Gly Ser Thr Lys Tyr Ser Tyr 100 105 110 Lys Ser Thr Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg Pro 115 120 125 Gln Ile Leu Ile Pro Gly Ala Leu Asp Pro Asp His Ser Lys Asn Leu 130 135 140 Thr Cys Ser Val Pro Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile Phe 145 150 155 160 Ser Trp Met Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Leu Arg Thr Thr His 165 170 175 Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr Asn 180 185 190 Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Pro Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu Arg 195 200 205 Thr Ile Gln Leu Asn Val Ser Tyr Ala Ser Gln Asn Pro Arg Thr Asp 210 215 220 Ile Phe Leu Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Gly Val Val Gln Gly Ser 225 230 235 240 His His His His His His 245 <210> 235 <211> 230 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 235 Asp Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln Glu 1 5 10 15 Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Ile Pro Tyr 20 25 30 Tyr Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly Ala 35 40 45 Ile Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln Glu 50 55 60 Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro Ser 65 70 75 80 Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp Asn 85 90 95 Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ser Tyr 100 105 110 Lys Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg Pro 115 120 125 Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys Asn Leu 130 135 140 Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile Phe 145 150 155 160 Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr His 165 170 175 Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr Asn 180 185 190 Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu Arg 195 200 205 Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr Gly 210 215 220 His His His His His His 225 230 <210> 236 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 236 Asp His Tyr Ile Asn 1 5 <210> 237 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 237 Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 238 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 238 Asn Tyr Gly Asp Tyr Thr Ile Asp Phe 1 5 <210> 239 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 239 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 240 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 240 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 241 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 241 Gln Gln Tyr Tyr Arg Tyr His Thr 1 5 <210> 242 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 242 Asn Met Gly Met Tyr Thr Ile Asp Phe 1 5 <210> 243 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 243 Asn Met Gly Met Tyr Thr Leu Asp Phe 1 5 <210> 244 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 244 Asn Tyr Gly Asp Tyr Thr Leu Asp Phe 1 5 <210> 245 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 245 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp His 20 25 30 Tyr Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Pro Asn Tyr Gly Asp Tyr Thr Ile Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 246 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 246 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp His 20 25 30 Tyr Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Pro Asn Met Gly Met Tyr Thr Ile Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 247 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 247 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp His 20 25 30 Tyr Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Pro Asn Met Gly Met Tyr Thr Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 248 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 248 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp His 20 25 30 Tyr Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Pro Asn Met Gly Met Tyr Thr Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 249 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 249 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Arg Tyr His Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 250 <211> 717 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 250 Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser 1 5 10 15 Ile Gln Ala Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val 20 25 30 Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 50 55 60 Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu 65 70 75 80 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr 100 105 110 Cys Gln Gln Tyr Tyr Arg Tyr His Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu 115 120 125 Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 130 135 140 Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu 145 150 155 160 Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn 165 170 175 Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser 180 185 190 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala 195 200 205 Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly 210 215 220 Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly 225 230 235 240 Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Glu 245 250 255 Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser 260 265 270 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 275 280 285 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp His 290 295 300 Tyr Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 305 310 315 320 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe 325 330 335 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 340 345 350 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 355 360 365 Ala Pro Asn Tyr Gly Asp Tyr Thr Ile Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 370 375 380 Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 385 390 395 400 Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 405 410 415 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 420 425 430 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 435 440 445 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 450 455 460 Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 465 470 475 480 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys 485 490 495 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 500 505 510 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 515 520 525 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln 530 535 540 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 545 550 555 560 Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 565 570 575 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 580 585 590 Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 595 600 605 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 610 615 620 Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys 625 630 635 640 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 645 650 655 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 660 665 670 Ser Phe Phe Leu Val Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 675 680 685 Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 690 695 700 Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 705 710 715 <210> 251 <211> 719 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 251 Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser 1 5 10 15 Ile Gln Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val 20 25 30 Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Val 35 40 45 Phe Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 50 55 60 Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Ser Thr Arg Lys 65 70 75 80 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Thr Val Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr 100 105 110 Cys Gln His Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys 115 120 125 Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 130 135 140 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 165 170 175 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 180 185 190 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 210 215 220 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly 225 230 235 240 Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr 245 250 255 Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly 260 265 270 Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 275 280 285 Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp 290 295 300 Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 305 310 315 320 Val Ser Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Ser Ile Val Tyr Ala Asp Ser 325 330 335 Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu 340 345 350 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr 355 360 365 Cys Ala Lys Asp Ser Pro Tyr Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 370 375 380 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 385 390 395 400 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 405 410 415 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 420 425 430 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 435 440 445 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 450 455 460 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 465 470 475 480 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 485 490 495 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val 500 505 510 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 515 520 525 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 530 535 540 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 545 550 555 560 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 565 570 575 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 580 585 590 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 595 600 605 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 610 615 620 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 625 630 635 640 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 645 650 655 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 660 665 670 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 675 680 685 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 690 695 700 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 705 710 715 <210> 252 <211> 713 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 252 Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser 1 5 10 15 Ile Gln Ala Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu 20 25 30 Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val 35 40 45 Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 50 55 60 Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr 100 105 110 Gly Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 115 120 125 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 130 135 140 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 165 170 175 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 195 200 205 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 210 215 220 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Ser Glu Gly Lys 225 230 235 240 Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Glu Gly Lys Ser Ser 245 250 255 Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu 260 265 270 Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile 275 280 285 Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Ser Trp 290 295 300 Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asp 305 310 315 320 Pro Ser Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln Gly Gln Val 325 330 335 Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser 340 345 350 Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Asp 355 360 365 Gly Ser Thr Asp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 370 375 380 Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys 385 390 395 400 Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 405 410 415 Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 420 425 430 Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu 435 440 445 Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 450 455 460 Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 465 470 475 480 Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 485 490 495 Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 500 505 510 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 515 520 525 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 530 535 540 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 545 550 555 560 Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 565 570 575 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 580 585 590 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 595 600 605 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met 610 615 620 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 625 630 635 640 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 645 650 655 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 660 665 670 Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val 675 680 685 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 690 695 700 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 705 710 <210> 253 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 253 Ser Tyr Trp Met Thr 1 5 <210> 254 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 254 Asn Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 255 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 255 Asn Tyr Trp Met Ser 1 5 <210> 256 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 256 Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 257 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 257 His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 258 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 258 Ser Ile Lys Arg Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 259 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 259 Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 260 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 260 Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe 1 5 <210> 261 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 261 Gly Glu Phe Asp Tyr 1 5 <210> 262 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 262 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 263 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 263 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 264 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 264 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Lys Arg Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Ser 65 70 75 80 Leu Gln Met His Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ser <210> 265 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 265 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 266 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 266 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn 1 5 10 15 <210> 267 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 267 Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 268 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 268 Lys Val Ser Thr Arg Asp Ser 1 5 <210> 269 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 269 Met Gln Val Leu Gln Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 270 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 270 Leu Gln Gly Thr His Trp Pro Trp Thr 1 5 <210> 271 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 271 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Val 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 272 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 272 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 273 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 273 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly 85 90 95 Thr His Trp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 274 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 274 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Val 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140 Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr 145 150 155 160 Phe Ser Ser Tyr Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Val Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr 180 185 190 Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys 195 200 205 Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala 210 215 220 Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly 225 230 235 240 Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 255 <210> 275 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 275 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly 100 105 110 Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly 115 120 125 Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 130 135 140 Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg 145 150 155 160 Asn Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu 165 170 175 Trp Phe Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser 180 185 190 Leu Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe 195 200 205 Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Ala Arg Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly 225 230 235 240 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 276 <211> 246 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 276 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly 85 90 95 Thr His Trp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140 Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr 145 150 155 160 Phe Ser Asn Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile Lys Arg Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr 180 185 190 Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys 195 200 205 Asn Ser Leu Ser Leu Gln Met His Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala 210 215 220 Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Gly Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 225 230 235 240 Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 277 <211> 232 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 277 Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 278 <211> 232 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 278 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 279 <211> 212 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 279 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Lys Arg Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Ser 65 70 75 80 Leu Gln Met His Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser 115 120 125 Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140 Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160 Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 180 185 190 Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 195 200 205 Asp Lys Lys Val 210 <210> 280 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 280 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val 210 215 <210> 281 <211> 212 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 281 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Lys Arg Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Ser 65 70 75 80 Leu Gln Met His Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser 115 120 125 Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140 Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160 Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 180 185 190 Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 195 200 205 Asp Lys Lys Val 210 <210> 282 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 282 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Val Ser 20 25 30 Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr Ala Tyr Ala Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Ala Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Arg His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val 210 215 220 <210> 283 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 283 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val 210 215 <210> 284 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 284 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Trp Glu Ile Leu Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val 210 215 <210> 285 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 285 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Val 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 286 <211> 216 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 286 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 287 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 287 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly 85 90 95 Thr His Trp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 288 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 288 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Phe Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Lys Phe Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 289 <211> 216 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 289 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 290 <211> 216 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 290 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 291 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 291 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Gly Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 292 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 292 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Ala Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 293 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 293 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Tyr Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 294 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 294 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Pro Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 295 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 295 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asn Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 296 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 296 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Ser Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 297 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 297 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Arg Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 298 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 298 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Leu Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 299 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 299 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Val Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 300 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 300 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Thr Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 301 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 301 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Phe Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 302 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 302 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Trp Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 303 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 303 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Val Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 304 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 304 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Pro Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 305 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 305 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Arg Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 306 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 306 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Ala Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 307 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 307 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Leu Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 308 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 308 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gln Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 309 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 309 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Thr Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 310 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 310 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp His Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 311 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 311 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Val Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 312 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 312 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Arg Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 313 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 313 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Pro Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 314 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 314 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Thr Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 315 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 315 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Gly Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 316 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 316 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Gln Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 317 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 317 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 318 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 318 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ala Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 319 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 319 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Leu Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 320 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 320 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Tyr Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 321 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 321 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Glu Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 322 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 322 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Phe Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 323 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 323 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asp Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 324 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 324 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ile Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 325 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 325 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 His Gly Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 326 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 326 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Val Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 327 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 327 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Pro Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 328 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 328 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Arg Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 329 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 329 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Asp Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 330 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 330 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Glu Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 331 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 331 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Trp Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 332 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 332 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Tyr Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 333 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 333 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Ala Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 334 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 334 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Asn Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 335 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 335 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Lys Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 336 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 336 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Leu Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 337 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 337 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Val Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 338 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 338 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Ser Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 339 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 339 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Glu Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 340 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 340 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp His Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 341 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 341 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Ala Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 342 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 342 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Gly Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 343 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 343 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Lys Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 344 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 344 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Thr Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 345 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 345 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Phe Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 346 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 346 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Val Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 347 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 347 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Arg Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 348 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 348 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Leu Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 349 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 349 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp His Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 350 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 350 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Ile Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 351 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 351 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asn Ser Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 352 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 352 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Leu Glu Trp Phe 35 40 45 Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn Tyr Asp Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asn Ala Ala Ala Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 353 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 353 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Gly Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 354 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 354 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asp Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 355 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 355 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Pro Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 356 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 356 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Lys Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 357 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 357 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Glu Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 358 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 358 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ala Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 359 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 359 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Arg Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 360 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 360 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Gln Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 361 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 361 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ile Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 362 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 362 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Val Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 363 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 363 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 His Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 364 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 364 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Lys Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 365 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 365 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Trp Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 366 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 366 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ile Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Val Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Pro Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 367 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 367 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Arg Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 368 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 368 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Pro Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 369 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 369 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Gly Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 370 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 370 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Val Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 371 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 371 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Leu Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 372 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 372 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asp Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 373 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 373 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Glu Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 374 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 374 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Ala Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 375 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 375 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Gln Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 376 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 376 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Thr Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 377 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 377 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asn Ser Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 378 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 378 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asn Ala Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 379 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 379 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asn Leu Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 380 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 380 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asn Pro Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 381 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 381 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asn Thr Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 382 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 382 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Thr Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Asn Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asn Gln Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 383 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 383 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 384 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 384 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Gln Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 385 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 385 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Val Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 386 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 386 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Gly Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 387 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 387 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Trp Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 388 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 388 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Thr Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 389 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 389 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ile Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 390 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 390 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Glu Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 391 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 391 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ala Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 392 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 392 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Arg Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 393 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 393 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Leu Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 394 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 394 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Val Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 395 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 395 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Ala Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 396 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 396 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Pro Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 397 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 397 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Leu Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 398 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 398 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Thr Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 399 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 399 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly 1 5 10 <210> 400 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 400 Gly Phe Thr Phe Ser Val Ser Ala Ile His 1 5 10 <210> 401 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 401 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Met Thr 1 5 10 <210> 402 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 402 Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr Tyr Trp Ser 1 5 10 <210> 403 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 403 Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr Tyr Trp Ser 1 5 10 <210> 404 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 404 Gly Ile Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Met Ser 1 5 10 <210> 405 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 405 Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn 1 5 <210> 406 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 406 Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr Ala 1 5 10 <210> 407 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 407 Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr 1 5 10 <210> 408 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 408 His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His 1 5 <210> 409 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 409 His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn 1 5 <210> 410 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 410 Ser Ile Lys Arg Asp Gly Ser Asp Lys Tyr 1 5 10 <210> 411 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 411 Met Trp Glu Ile Leu Gly Phe Asp Pro 1 5 <210> 412 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 412 His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 1 5 10 <210> 413 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 413 Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 414 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 414 Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr 1 5 <210> 415 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 415 Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe 1 5 <210> 416 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 416 Gly Glu Phe Asp Tyr 1 5 <210> 417 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 417 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Pro Val Asn 1 5 10 <210> 418 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 418 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Phe Ser Asn Gly Tyr Lys Phe Leu Asp 1 5 10 15 <210> 419 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 419 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 420 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 420 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ile Val Asn 1 5 10 <210> 421 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 421 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ile Val Asn 1 5 10 <210> 422 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 422 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn 1 5 10 15 <210> 423 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 423 Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 424 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 424 Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser 1 5 <210> 425 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 425 Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser 1 5 <210> 426 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 426 Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 427 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 427 Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 428 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 428 Lys Val Ser Thr Arg Asp Ser 1 5 <210> 429 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 429 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val 1 5 10 <210> 430 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 430 Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Pro Thr 1 5 <210> 431 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 431 Met Gln Val Leu Gln Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 432 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 432 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val 1 5 10 <210> 433 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 433 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val 1 5 10 <210> 434 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 434 Leu Gln Gly Thr His Trp Pro Trp Thr 1 5 <210> 435 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 435 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 1 5 <210> 436 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 436 Gly Phe Thr Phe Ser Val Ser 1 5 <210> 437 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 437 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 1 5 <210> 438 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 438 Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr 1 5 <210> 439 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 439 Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 1 5 <210> 440 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 440 Gly Ile Thr Phe Ser Asn Tyr 1 5 <210> 441 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 441 Tyr Tyr Ser Gly Ser 1 5 <210> 442 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 442 Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala 1 5 <210> 443 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 443 Lys Gln Asp Gly Ser Glu 1 5 <210> 444 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 444 Tyr Ser Thr Gly Asn 1 5 <210> 445 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 445 Phe Ser Thr Gly His 1 5 <210> 446 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 446 Lys Arg Asp Gly Ser Asp 1 5 <210> 447 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 447 Met Trp Glu Ile Leu Gly Phe Asp 1 5 <210> 448 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 448 His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr Gly Leu Asp 1 5 10 <210> 449 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 449 Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp 1 5 10 <210> 450 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 450 Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp 1 5 <210> 451 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 451 Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp 1 5 <210> 452 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 452 Gly Glu Phe Asp 1 <210> 453 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 453 Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Pro 1 5 <210> 454 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 454 Ser Gln Ser Leu Leu Phe Ser Asn Gly Tyr Lys Phe 1 5 10 <210> 455 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 455 Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Tyr Asn Tyr 1 5 10 <210> 456 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 456 Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ile 1 5 <210> 457 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 457 Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ile 1 5 <210> 458 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 458 Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 459 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 459 Ser Asn Asn 1 <210> 460 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 460 Leu Gly Ser 1 <210> 461 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 461 Leu Gly Ser 1 <210> 462 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 462 Ser Asn Asn 1 <210> 463 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 463 Ser Asp Asn 1 <210> 464 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 464 Lys Val Ser 1 <210> 465 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 465 Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro 1 5 <210> 466 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 466 Ala Leu Gln Thr Pro Pro 1 5 <210> 467 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 467 Val Leu Gln Thr Pro Trp 1 5 <210> 468 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 468 Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro 1 5 <210> 469 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 469 Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro 1 5 <210> 470 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 470 Gly Thr His Trp Pro Trp 1 5 <210> 471 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 471 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr 1 5 <210> 472 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 472 Gly Phe Thr Phe Ser Val Ser Ala 1 5 <210> 473 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 473 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp 1 5 <210> 474 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 474 Gly Ala Ser Ile Arg Asn Tyr Tyr 1 5 <210> 475 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 475 Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr Tyr 1 5 <210> 476 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 476 Gly Ile Thr Phe Ser Asn Tyr Trp 1 5 <210> 477 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 477 Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 478 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 478 Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr 1 5 10 <210> 479 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 479 Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg 1 5 <210> 480 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 480 Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile 1 5 <210> 481 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 481 Ile Phe Ser Thr Gly His Ile 1 5 <210> 482 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 482 Ile Lys Arg Asp Gly Ser Asp Lys 1 5 <210> 483 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 483 Ala Arg Met Trp Glu Ile Leu Gly Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 484 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 484 Thr Arg His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 1 5 10 <210> 485 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 485 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 486 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 486 Ala Arg Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 487 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 487 Ala Arg Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp Phe 1 5 10 <210> 488 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 488 Ala Lys Gly Glu Phe Asp Tyr 1 5 <210> 489 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 489 Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Pro 1 5 <210> 490 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 490 Gln Ser Leu Leu Phe Ser Asn Gly Tyr Lys Phe 1 5 10 <210> 491 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 491 Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Tyr Asn Tyr 1 5 10 <210> 492 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 492 Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ile 1 5 <210> 493 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 493 Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ile 1 5 <210> 494 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 494 Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 495 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 495 Ser Asn Asn 1 <210> 496 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 496 Leu Gly Ser 1 <210> 497 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 497 Leu Gly Ser 1 <210> 498 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 498 Ser Asn Asn 1 <210> 499 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 499 Ser Asp Asn 1 <210> 500 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 500 Lys Val Ser 1 <210> 501 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 501 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val 1 5 10 <210> 502 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 502 Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Pro Thr 1 5 <210> 503 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 503 Met Gln Val Leu Gln Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 504 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 504 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val 1 5 10 <210> 505 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 505 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val 1 5 10 <210> 506 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 506 Leu Gln Gly Thr His Trp Pro Trp Thr 1 5 <210> 507 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 507 Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly 1 5 <210> 508 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 508 Ser Val Ser Ala Ile His 1 5 <210> 509 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 509 Ser Ser Tyr Trp Met Thr 1 5 <210> 510 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 510 Arg Asn Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 511 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 511 Arg Asn Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 512 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 512 Ser Asn Tyr Trp Met Ser 1 5 <210> 513 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 513 Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn 1 5 10 <210> 514 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 514 Trp Ile Gly Arg Ile Arg Ser Lys Gly Asn Ser Tyr Ala Thr Ala 1 5 10 15 <210> 515 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 515 Trp Val Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr 1 5 10 <210> 516 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 516 Trp Leu Gly His Ile Tyr Ser Thr Gly Asn Ile His 1 5 10 <210> 517 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 517 Trp Phe Gly His Ile Phe Ser Thr Gly His Ile Asn 1 5 10 <210> 518 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 518 Trp Val Ala Ser Ile Lys Arg Asp Gly Ser Asp Lys Tyr 1 5 10 <210> 519 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 519 Ala Arg Met Trp Glu Ile Leu Gly Phe Asp 1 5 10 <210> 520 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 520 Thr Arg His Asn Asp Lys Trp Asn Tyr Tyr Gly Leu Asp 1 5 10 <210> 521 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 521 Ala Arg Glu Val Gly Tyr Asn Trp Asn Gln Gly Gly Tyr Phe Asp 1 5 10 15 <210> 522 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 522 Ala Arg Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp 1 5 10 <210> 523 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 523 Ala Arg Asp Asn Gly Ala Ala Leu Phe Asp 1 5 10 <210> 524 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 524 Ala Lys Gly Glu Phe Asp 1 5 <210> 525 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 525 Ile Gly Ser Asn Pro Val Asn Trp Tyr 1 5 <210> 526 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 526 Leu Phe Ser Asn Gly Tyr Lys Phe Leu Asp Trp Tyr 1 5 10 <210> 527 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 527 Leu His Ser Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr 1 5 10 <210> 528 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 528 Ile Gly Ser Asn Ile Val Asn Trp Tyr 1 5 <210> 529 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 529 Ile Gly Ser Asn Ile Val Asn Trp Tyr 1 5 <210> 530 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 530 Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe 1 5 10 <210> 531 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 531 Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro 1 5 10 <210> 532 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 532 Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala 1 5 10 <210> 533 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 533 Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala 1 5 10 <210> 534 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 534 Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro 1 5 10 <210> 535 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 535 Leu Leu Leu Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro 1 5 10 <210> 536 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 536 Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Thr Arg Asp 1 5 10 <210> 537 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 537 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro 1 5 10 <210> 538 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 538 Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Pro 1 5 <210> 539 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 539 Met Gln Val Leu Gln Thr Pro Trp 1 5 <210> 540 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 540 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro 1 5 10 <210> 541 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 541 Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro 1 5 10 <210> 542 <211> 8 <212> PRT <213> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 542 Leu Gln Gly Thr His Trp Pro Trp 1 5

Claims (15)

  1. 각각 서열번호 254, 257, 260, 66, 267 및 76의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, CD33에 결합하는 단리된 단백질.
  2. 제1항에 있어서, 서열번호 263의 VH 및 서열번호 272의 VL을 포함하는 단리된 단백질.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, Fab, scFv, (scFv)2, Fv, F(ab')2, Fd, dAb, 또는 VHH인, 단리된 단백질.
  4. 제3항에 있어서, N-말단에서 C-말단으로 (i) VH, 제1 링커(L1), 및 VL(VH-L1-VL), 또는 (ii) VL, L1, 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는 scFv이고, 선택적으로 여기서 L1은
    a) 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열; 및/또는
    b) 약 5~50개의 아미노산; 약 5~40개의 아미노산; 약 10~30개의 아미노산; 또는 약 10~20개의 아미노산을 포함하는,
    단리된 단백질.
  5. 제4항에 있어서, 서열번호 275의 아미노산 서열을 포함하는 scFv인, 단리된 단백질.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질은 면역글로불린(Ig); Ig의 단편; Ig 불변 영역; Ig 불변 영역의 단편; Fc 영역; Fc 영역을 포함하는 Ig 불변 영역의 단편; CH2 도메인을 포함하는 Ig 불변 영역의 단편; CH3 도메인을 포함하는 Ig 불변 영역의 단편; CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 Ig 불변 영역의 단편; 힌지, CH2 도메인, 및 CH3 도메인의 적어도 일부를 포함하는 Ig 불변 영역의 단편; 힌지, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는 Ig 불변 영역의 단편; 트랜스페린; 알부민; 알부민 결합 도메인; 또는 폴리에틸렌 글리콜로부터 선택되는 반감기 연장 또는 반감기 조절 모이어티에 접합되는, 단리된 단백질.
  7. 제6항에 있어서, CD33에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하고,
    a) 상기 항원 결합 도메인은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 N-말단에 접합되거나;
    b) 상기 항원 결합 도메인은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 C-말단에 접합되거나;
    c) 상기 항원 결합 도메인은 서열번호 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 또는 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 제2 링커(L2)를 통해 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합되는,
    단리된 단백질.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 단일특이적 단백질, 다중특이적 단백질, 이중특이적 단백질, 또는 삼중특이적 단백질이고, 선택적으로 여기서 다중특이적 단백질, 이중특이적 단백질, 또는 삼중특이적 단백질은 각각 독립적으로, 림프구, T 세포, CD8+ T 세포, 또는 자연 살해(NK) 세포 상의 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하고, 선택적으로 다중특이적 단백질, 이중특이적 단백질, 또는 삼중특이적 단백질은 각각 독립적으로, TRGV9, CD3 엡실론(CD3ε), CD3, CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 또는 NKG2C에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
  9. 제8항에 있어서, CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fab, scFv, VHH, (scFv)2, Fv, F(ab')2, Fd, 또는 dAb를 포함하거나; CD33에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH를 포함하는, 단리된 단백질.
  10. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 이소형이고, 선택적으로 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1이고, 선택적으로 Ig 불변 영역의 단편은 서열번호 277 또는 278의 서열을 갖는, 단리된 단백질.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 단리된 단백질 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 단리된 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드.
  13. 제12항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  14. 제13항의 벡터 또는 제12항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포.
  15. 대상체에서 CD33 발현 암을 치료하는 방법에 사용하기 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 단리된 단백질로서, 여기서 CD33 발현 암은 백혈병, 림프종, 다발성 골수종, 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 만성 골수성 백혈병(CML), 또는 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물(DPDCN)로부터 선택되는 혈액암인, 단리된 단백질.
KR1020237011668A 2020-03-13 2021-03-15 Siglec-3/cd33을 결합시키기 위한 물질 및 방법 KR20230051616A (ko)

Applications Claiming Priority (12)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202062989120P 2020-03-13 2020-03-13
US202062989071P 2020-03-13 2020-03-13
US202062989187P 2020-03-13 2020-03-13
US202062989230P 2020-03-13 2020-03-13
US202062989093P 2020-03-13 2020-03-13
US62/989,230 2020-03-13
US62/989,093 2020-03-13
US62/989,071 2020-03-13
US62/989,120 2020-03-13
US62/989,187 2020-03-13
PCT/IB2021/052121 WO2021181366A1 (en) 2020-03-13 2021-03-15 Materials and methods for binding siglec-3/cd33
KR1020227035280A KR20220154728A (ko) 2020-03-13 2021-03-15 Siglec-3/cd33을 결합시키기 위한 물질 및 방법

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227035280A Division KR20220154728A (ko) 2020-03-13 2021-03-15 Siglec-3/cd33을 결합시키기 위한 물질 및 방법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230051616A true KR20230051616A (ko) 2023-04-18

Family

ID=75108687

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227035280A KR20220154728A (ko) 2020-03-13 2021-03-15 Siglec-3/cd33을 결합시키기 위한 물질 및 방법
KR1020237011667A KR20230051615A (ko) 2020-03-13 2021-03-15 Siglec-3/cd33을 결합시키기 위한 물질 및 방법
KR1020237011668A KR20230051616A (ko) 2020-03-13 2021-03-15 Siglec-3/cd33을 결합시키기 위한 물질 및 방법
KR1020237011669A KR20230051617A (ko) 2020-03-13 2021-03-15 Siglec-3/cd33을 결합시키기 위한 물질 및 방법

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227035280A KR20220154728A (ko) 2020-03-13 2021-03-15 Siglec-3/cd33을 결합시키기 위한 물질 및 방법
KR1020237011667A KR20230051615A (ko) 2020-03-13 2021-03-15 Siglec-3/cd33을 결합시키기 위한 물질 및 방법

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237011669A KR20230051617A (ko) 2020-03-13 2021-03-15 Siglec-3/cd33을 결합시키기 위한 물질 및 방법

Country Status (18)

Country Link
US (3) US20230365684A1 (ko)
EP (4) EP4233894A3 (ko)
JP (1) JP2023517660A (ko)
KR (4) KR20220154728A (ko)
CN (1) CN115768482A (ko)
AU (4) AU2021235564A1 (ko)
BR (1) BR112022018176A2 (ko)
CA (1) CA3171113A1 (ko)
CL (4) CL2022002488A1 (ko)
CO (1) CO2022013823A2 (ko)
EC (1) ECSP22071278A (ko)
IL (4) IL302349A (ko)
JO (1) JOP20220220A1 (ko)
MX (1) MX2022011320A (ko)
PE (4) PE20230001A1 (ko)
TW (1) TW202144418A (ko)
UY (1) UY39130A (ko)
WO (1) WO2021181366A1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023037333A1 (en) * 2021-09-13 2023-03-16 Janssen Biotech, Inc CD33 X Vδ2 MULTISPECIFIC ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF CANCER

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3854480A (en) 1969-04-01 1974-12-17 Alza Corp Drug-delivery system
US3832253A (en) 1973-03-21 1974-08-27 Baxter Laboratories Inc Method of making an inflatable balloon catheter
US4667014A (en) 1983-03-07 1987-05-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Nonapeptide and decapeptide analogs of LHRH, useful as LHRH antagonists
US4452775A (en) 1982-12-03 1984-06-05 Syntex (U.S.A.) Inc. Cholesterol matrix delivery system for sustained release of macromolecules
CA1200416A (en) 1983-05-13 1986-02-11 Societe Des Produits Nestle S.A. Food process
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5075109A (en) 1986-10-24 1991-12-24 Southern Research Institute Method of potentiating an immune response
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
JPH04167172A (ja) 1990-10-31 1992-06-15 Nec Corp ベクトルプロセッサ
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
US5932448A (en) 1991-11-29 1999-08-03 Protein Design Labs., Inc. Bispecific antibody heterodimers
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6818749B1 (en) 1998-10-31 2004-11-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Variants of humanized anti carcinoma monoclonal antibody cc49
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
ES2405944T3 (es) 2000-11-30 2013-06-04 Medarex, Inc. Ácidos nucleicos que codifican las secuencias de inmunoglobulina humana reorganizadas a partir de ratones transcromoscómicos transgénicos zadas
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
EP1539233B1 (en) 2001-07-12 2011-04-27 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
TWI671403B (zh) 2005-03-31 2019-09-11 中外製藥股份有限公司 控制組裝之多肽的製造方法
DE102005028778A1 (de) 2005-06-22 2006-12-28 SUNJÜT Deutschland GmbH Mehrlagige Folie mit einer Barriere- und einer antistatischen Lage
PT1999154E (pt) 2006-03-24 2013-01-24 Merck Patent Gmbh Domínios proteicos heterodiméricos modificados
WO2007147901A1 (en) 2006-06-22 2007-12-27 Novo Nordisk A/S Production of bispecific antibodies
PT2103608E (pt) 2006-12-18 2012-09-24 Arigen Pharmaceuticals Inc Agente de erradicação de helicobacter pylori possuindo uma actividade inibidora na secreção de ácido gástrico
US8748356B2 (en) 2007-10-19 2014-06-10 Janssen Biotech, Inc. Methods for use in human-adapting monoclonal antibodies
EP2231904B1 (en) 2007-12-19 2016-01-13 Janssen Biotech, Inc. Design and generation of human de novo pix phage display libraries via fusion to pix or pvii, vectors, antibodies and methods
KR20110014607A (ko) 2008-04-29 2011-02-11 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
EP2347038A4 (en) 2008-10-14 2013-06-12 Janssen Biotech Inc METHOD FOR HUMANIZATION AND AFFINITY TREATMENT OF ANTIBODIES
EP2424567B1 (en) 2009-04-27 2018-11-21 OncoMed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
MX353144B (es) 2010-04-20 2017-12-20 Genmab As Proteinas que contienen fc de anticuerpos heterodimericos y metodos para produccion de las mismas.
EP2569337A1 (en) 2010-05-14 2013-03-20 Rinat Neuroscience Corp. Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
EP2420253A1 (en) 2010-08-20 2012-02-22 Leadartis, S.L. Engineering multifunctional and multivalent molecules with collagen XV trimerization domain
CN103429620B (zh) 2010-11-05 2018-03-06 酵活有限公司 在Fc结构域中具有突变的稳定异源二聚的抗体设计
AU2012328322A1 (en) 2011-10-27 2014-06-12 Genmab A/S Production of heterodimeric proteins
PT2773671T (pt) 2011-11-04 2021-12-14 Zymeworks Inc Geração de anticorpo heterodimérico estável com mutações no domínio fc
EP2794905B1 (en) 2011-12-20 2020-04-01 MedImmune, LLC Modified polypeptides for bispecific antibody scaffolds
ES2743399T3 (es) 2012-04-20 2020-02-19 Merus Nv Métodos y medios para la producción de moléculas heterodiméricas similares a Ig
MX366910B (es) 2013-03-15 2019-07-30 Janssen Biotech Inc Metodos de fabricacion para controlar el contenido de lisina c-terminal, galactosa y acido sialico en proteinas recombinantes.
CA2959171C (en) 2014-09-05 2023-11-14 Janssen Pharmaceutica Nv Cd123 binding agents and uses thereof
WO2016201389A2 (en) * 2015-06-12 2016-12-15 Alector Llc Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
ES2897217T3 (es) 2016-09-30 2022-02-28 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos frente a p95HER2
WO2019060695A1 (en) 2017-09-22 2019-03-28 Kite Pharma, Inc. CHIMERIC POLYPEPTIDES AND USES THEREOF
AU2018388467A1 (en) 2017-12-18 2020-06-11 Janssen Biotech, Inc. Radiolabeling of polypeptides
JOP20190116A1 (ar) * 2018-05-24 2019-11-24 Janssen Biotech Inc الأجسام المضادة لتكتل التمايز 33 (cd33)، والأجسام المضادة ثنائية النوعية لتكتل التمايز 33 (cd33)/تكتل التمايز 3 (cd3) واستخداماتها

Also Published As

Publication number Publication date
CO2022013823A2 (es) 2022-10-11
EP4233894A3 (en) 2023-09-27
KR20220154728A (ko) 2022-11-22
IL302351A (en) 2023-06-01
PE20240020A1 (es) 2024-01-04
IL302347A (en) 2023-06-01
MX2022011320A (es) 2022-12-08
EP4233894A2 (en) 2023-08-30
JOP20220220A1 (ar) 2023-01-30
EP4233893A3 (en) 2023-09-27
JP2023517660A (ja) 2023-04-26
CN115768482A (zh) 2023-03-07
AU2023202520A9 (en) 2023-05-25
IL296263A (en) 2022-11-01
CA3171113A1 (en) 2021-09-16
UY39130A (es) 2021-09-30
EP4233895A2 (en) 2023-08-30
AU2023202536A1 (en) 2023-05-18
US20230250171A1 (en) 2023-08-10
PE20240019A1 (es) 2024-01-04
AU2023202538A1 (en) 2023-05-18
ECSP22071278A (es) 2022-10-31
CL2023000910A1 (es) 2023-09-29
KR20230051615A (ko) 2023-04-18
BR112022018176A2 (pt) 2022-12-06
PE20231517A1 (es) 2023-09-28
US20230365684A1 (en) 2023-11-16
US20230365683A1 (en) 2023-11-16
TW202144418A (zh) 2021-12-01
IL302349A (en) 2023-06-01
EP4233895A3 (en) 2023-09-27
CL2023000909A1 (es) 2023-09-29
AU2023202520A1 (en) 2023-05-11
CL2022002488A1 (es) 2023-03-03
EP4233893A2 (en) 2023-08-30
CL2023000911A1 (es) 2023-09-29
EP4117715A1 (en) 2023-01-18
WO2021181366A1 (en) 2021-09-16
PE20230001A1 (es) 2023-01-05
KR20230051617A (ko) 2023-04-18
AU2021235564A1 (en) 2022-11-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240124583A1 (en) Proteins Comprising Kallikrein Related Paptidase 2 Antigen Binding Domains And Their Uses
US11827708B2 (en) Proteins comprising HLA-G antigen binding domains and their uses
US20230250171A1 (en) Materials And Methods For Binding Siglec-3/CD33
US20230040715A1 (en) Proteins comprising cd3 antigen binding domains and uses thereof
US20220411504A1 (en) Proteins comprising cd3 antigen binding domains and uses thereof
US20240025992A1 (en) Proteins comprising delta-like ligand 3 (dll3) antigen binding domains and their uses
WO2023046322A1 (en) Proteins comprising cd20 binding domains, and uses thereof
WO2022192649A1 (en) Uses of cd79b antibodies for autoimmune therapeutic applications

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent
A201 Request for examination