JP2023511686A - 腎疾患の治療に使用するための抗αｖβ８インテグリン抗体 - Google Patents

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Abstract

慢性腎疾患（ＣＫＤ）などの腎疾患を治療するための方法及び組成物が提供され、この方法及び組成物は、ヒトαｖβ８インテグリンに特異的且つ選択的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含み、これは、記載されているように、腎細胞及び腎組織、特に、罹患又は線維性腎組織上で高度に発現されることがわかった。開示される抗αｖβ８インテグリン抗体は、腎臓におけるヒトαｖβ８インテグリンに結合し、腎組織におけるＴＧＦ－βのその潜在型からの活性化を遮断する。開示される方法においては、抗αｖβ８抗体が、腎組織におけるαｖβ８インテグリン及びＴＧＦ－βの活性に関連する腎線維症を低減、減弱化、又は抑止する。開示される抗体及び方法は、それを必要とする個体の腎疾患、特に、ＣＫＤなどの腎疾患に関連する線維症を効果的に治療する。

Description

腎疾患は一般に、個体の腎臓が損傷を受け、血液からの老廃物や過剰な水分を濾過する働き、又は血圧の制御を助ける働きを適切に行うことができない病態を指す。腎臓には、血圧を調節し、ビタミンＤを産生し、赤血球の産生を制御するホルモンを放出する機能がある。腎臓の損傷は、体内に老廃物を蓄積させる可能性があり、また、個体における心疾患、心臓発作、又は脳卒中などの他の健康問題のリスクを惹起又は増加させる可能性がある。腎疾患の主なリスク因子には、糖尿病、高血圧及び腎不全の家族歴が含まれる。腎疾患には、突然の、時には一時的な腎機能の喪失を伴う急性腎障害（ＡＫＩ）、及び、長期間にわたって腎機能の低下を引き起こす病態を指す慢性腎疾患（ＣＫＤ）が含まれ得る。ＣＫＤは、長年にわたって進行し、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）をもたらし得る。
アメリカ腎臓基金（Ａｍｅｒｉｃａｎ ｋｉｄｎｅｙ Ｆｕｎｄ）の２０１５腎疾患統計によると、腎疾患は米国における死因の第９位である。米国の一般成人人口の約１０％～１４％がＣＫＤを有しており、これは女性においてより一般的である。しかしながら、ＣＫＤの男性は、女性よりも、ＣＫＤの病態が腎不全又はＥＳＲＤに進行する可能性が５０％高い。さらに、特定の人種及び民族集団は、他の集団よりも腎不全のリスクが高い。例えば、ＥＳＲＤの有病率は、白人と比較して、アフリカ系アメリカ人で約３．７倍、先住アメリカ人で約１．４倍、アジア系アメリカ人で約１．５倍高い。非ヒスパニック系アメリカ人と比較して、ヒスパニック系アメリカ人のＥＳＲＤを有する可能性はほぼ１．５倍である。
腎疾患の進行は、多くの場合、腎臓の機能組織の完全な破壊をもたらし、最終的に、罹患した個体は、生涯にわたる透析が必要となるか、又は腎臓の同種移植を受けることになり得る。腎疾患の進行は線維症を特徴とし、これは糸球体の破壊（糸球体硬化症）及び尿細管の破壊（尿細管間質性線維症）の一因となる。腎線維症の進行における重要な因子は、サイトカインＴＧＦ－β、その相互作用分子及び受容体、並びにその下流の細胞シグナル伝達カスケードであり、これらは腎線維症及び腎機能低下をもたらす病態生理学的細胞機構を活性化する。腎臓におけるＴＧＦ－βの発現及びＴＧＦ－βの排出は、糸球体濾過量（ＧＦＲ）低下及びタンパク質漏出（タンパク尿）と相関する。腎疾患の進行は、多くの場合、腎臓の機能組織の完全な破壊をもたらし、罹患した個体は、生涯にわたる透析が必要となるか、又は腎臓の同種移植を受けることになる。分子レベルでは、腫瘍性疾患及び炎症を含む多くの病態に関与するＴＧＦ－βと、その受容体及びシグナル伝達機構間の結合及び相互作用は依然としてよくわかっていない。
腎疾患の治療のために、望ましくないオフターゲット効果をもたらさず、且つ正常な細胞機能に対するこのサイトカインの他の生理学的寄与に悪影響を及ぼさない、ＴＧＦ－β活性の組織及び疾患特異的モジュレーターが非常に必要とされている。本明細書に記載される方法及び試薬は、腎疾患に対する有利且つ有益な治療、並びに腎細胞及び腎組織の病態において、また腎疾患の機序において重要な役割を果たすことが発見されている重要なインテグリン標的を直接遮断し、中和し、調節し、且つ／又は阻害する効果を有する治療成分として、特異的標的抗体を、提供する。
以下に記載するように、本開示は、αｖβ８インテグリンに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片、すなわち抗αｖβ８インテグリン抗体を用いて、腎疾患、特に慢性腎疾患（ＣＫＤ）及び／又はその症状を有する対象、特に哺乳動物対象、より特にヒト対象を治療する治療方法を特徴とする。本明細書に記載の知見に基づくと、腎細胞及び腎組織、特に、腎疾患、例えばＣＫＤを有する対象におけるような罹患腎細胞及び腎組織上のαｖβ８インテグリンの高レベルの発現は、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片が、ＣＫＤなどの腎疾患に罹患した対象の罹患腎組織に発現するαｖβ８インテグリンを特異的に標的とすることを可能にする。記載の抗αｖβ８インテグリン抗体は、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、又はαｖβ６などの他のインテグリン受容体アイソフォームと交差反応しない。実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体は、単離され、且つ精製された抗体である。特定の実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体は、ヒト化抗体である。別の特定の実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体は、特異性、親和性及び／又は安定性など、良好な構造特性、結合特性及び／又は機能特性を有するように、ヒト化され、親和性が最適化される。
本明細書に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体及び方法は、腎細胞及び腎組織、特に腎臓の上皮組織が、ＴＧＦ－βサイトカイン（ＬＡＰ－ＴＧＦ－β）の潜在型の受容体である高レベルのαｖβ８インテグリンを発現するという発見に基づいて開発された。特に、腎臓上皮に発現するαｖβ８インテグリンのレベルの上昇は、本明細書に記載の実験的実施形態によって証明されるように、腎疾患を有するヒト対象及び動物モデルにおける腎組織の線維症並びに／又は線維症及び線維性疾患の重症度とよく相関することが発見された。特に、正常な腎細胞及び腎組織と比較して、糖尿病性腎症（ＤＮ）などの腎疾患を有する個体由来の腎臓の上皮組織中の糸球体及び尿細管の細胞は、本明細書に例示されるように、特に罹患腎臓の足細胞及び尿細管（近位及び遠位皮質尿細管など）において、高レベルのαｖβ８インテグリン発現を示した。糖尿病性腎症に加えて、腎組織の線維症が腎臓の活動及び機能を低下させる損傷や機能不全をもたらす他の非限定的な腎臓疾患としては、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、急性腎疾患、高血圧関連腎疾患、高血糖関連腎疾患、腎線維症、炎症関連腎疾患、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、自己免疫関連腎線維症（例えば、ループス腎炎）及び腎臓移植後の線維症などが挙げられる。
腎疾患及びＣＫＤの治療のために、潜在型のＴＧＦ－βに結合するαｖβ８インテグリンは、本明細書に記載の抗体試薬を含む方法の実施によって、ＣＫＤなどの腎疾患の特徴である線維症及び組織損傷を低減及び減弱化させるために非常に有効且つ有用な標的であることが示されている。本明細書に記載され例示されているように、αｖβ８インテグリンは、腎細胞及び腎組織、特に腎臓の上皮細胞及び上皮組織、例えば、腎臓の糸球体足細胞及び尿細管細胞におけるαｖβ８インテグリンの高レベルの発現、並びに腎疾患を有する対象の腎組織の線維症に関与し、その損傷効果を増大させるＴＧＦ－βの活性の調節を考慮すると、腎線維症にこれまでに認識されていない直接的で且つ大きな役割を果たす。本明細書に記載の方法で使用される抗αｖβ８インテグリン抗体は、腎細胞及び腎組織におけるαｖβ８インテグリンとそのＴＧＦ－βリガンドの両方の活性を特異的且つ選択的に調節することができ、それにより、αｖβ８インテグリンのそのリガンドである潜在的ＴＧＦ－βへの結合によって引き起こされる腎組織における線維症の低減、抑止、減弱化、減少、及び／又は阻止をもたらし、次に、活性ＴＧＦ－βの活性化／放出を可能にし、腎組織の線維症を引き起こす際の活性ＴＧＦ－βの有害な効果を解放する。
ＴＧＦ－βが腎組織において活性化され得る１つの方法は、潜在型関連ペプチド（ＬＡＰ）ＴＧＦ－βとして、腎細胞の膜に発現するαｖβ８インテグリンと結合することによるものである。本明細書に示すように、腎疾患を有し腎線維症を伴う対象の腎組織では、αｖβ８インテグリンの発現が著しく上昇することがわかった。腎臓においてＴＧＦ－βの活性化が長期に亘って持続すると、腎組織の線維症を発症する。本明細書に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体によるαｖβ８インテグリンの標的化、特に高レベルのαｖβ８インテグリンを発現する腎組織におけるαｖβ８インテグリンの標的化は、腎疾患、例えばＣＫＤに対する有効な治療法である一方、身体の他の非腎臓組織における無差別的なＴＧＦ－βの標的化し抑制する多くの潜在的な全身効果は回避されることが決定された。ＵＵＯモデルは線維症のモデルであり、本明細書に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体によって示されるように、線維症及びＴＧＦ－β活性化の阻害は、ＣＫＤ進行の低減及び／又は阻止をもたらす。本明細書に記載されるように、罹患及び／又は線維性腎組織に多く発現するαｖβ８インテグリンに特異的に結合する高親和性抗αｖβ８インテグリン抗体はまた、腎細胞及び腎組織の膜におけるαｖβ８インテグリンと潜在型ＴＧＦ－βとの相互作用を選択的に低減、抑止、減弱化、減少、中和及び／又は阻害し、或いは防止する。αｖβ８インテグリンを発現しない他の組織及び臓器は影響を受けない。腎臓細胞発現αｖβ８インテグリンに対する抗αｖβ８抗体の特異的結合はそれによって、ＣＫＤなどの腎疾患、及び関連する線維症を治療するように、罹患及び／又は線維性腎臓におけるＴＧＦ－βの活性化を遮断し、非腎臓細胞及び組織におけるＴＧＦ－βの活性に対する重大な有害作用は最小限であるか、又は全く生じない。
有利には、抗αｖβ８インテグリン抗体は、腎組織の線維症及び腎疾患の発症及び進行に対するαｖβ８インテグリンと潜在的ＴＧＦ－βとの相互作用の効果を特異的に軽減する一方、正常な細胞機能に対するＴＧＦ－β活性の寄与の多くを回避する。実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＣＫＤ及び他の腎疾患、例えば糖尿病性腎症（ＤＮ）関連腎疾患、急性腎疾患、高血圧関連腎疾患、高血糖関連腎疾患、腎線維症、炎症関連腎疾患、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、自己免疫関連腎線維症（例えば、ループス腎炎）及び腎移植後の線維症などの、線維症が関与する腎疾患を有する個体の機能性腎上皮を保護するための治療的利益をさらに提供する。
一態様では、腎疾患を有する対象における腎線維症を治療する方法であって、対象に有効量の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む方法が提供される。
別の態様では、腎疾患を有する対象における腎線維症を低減又は減弱化させる方法であって、それを必要とする対象に有効量の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を投与し、それによって腎臓における線維症を低減又は減弱化させることを含む方法が提供される。
別の態様では、腎線維症に関連するαｖβ８インテグリンの活性を抑止する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を投与することを含み、潜在型ＴＧＦ－βへのαｖβ８インテグリンの結合を遮断し、それによって腎線維症に関連するαｖβ８インテグリンの活性を抑止する方法が提供される。本方法の一実施形態では、対象は腎疾患を有する。
さらに別の態様では、腎細胞及び腎組織におけるＴＧＦ－βのその潜在型からの活性化を遮断することによって腎線維症を治療する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を投与することを含み、αｖβ８インテグリンがＴＧＦ－βの潜在型に結合して活性ＴＧＦ－βを産生するのを遮断し、それによって腎線維症を治療することを含む方法が提供される。本方法の一実施形態では、対象は腎疾患を有する。
血漿クレアチニン及び／又は尿中タンパク質排泄レベルの増加を特徴とする腎傷害を治療する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を投与し、ここで、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片の投与は対象における血漿クレアチニン及び／又は尿中タンパク質排泄レベルを抑止し、それによって腎傷害を治療することを含む方法が提供される。
一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、対象の腎組織におけるαｖβ８媒介ＴＧＦ－β活性化を減少させる。
本明細書に記載される上記方法のいずれかの態様の実施形態では、腎疾患は、糖尿病性腎症（ＤＮ）、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、急性腎疾患、高血圧関連腎疾患、高血糖関連腎疾患、腎線維症、炎症関連腎疾患、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、自己免疫関連腎線維症（例えば、ループス腎炎）及び腎移植後の線維症などから選択される。特定の実施形態では、腎疾患はＣＫＤである。特定の実施形態では、腎疾患は糖尿病性腎症である。
本明細書に記載される上記方法のいずれかの態様の一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体）又はその抗原結合断片は、腎細胞及び／又は腎組織に発現するαｖβ８インテグリンに結合し、ＴＧＦ－βのその潜在型からの活性化を遮断する。
本明細書に記載の別の態様として、腎組織における腎線維症を検出する方法であって、腎組織を有効量の検出可能に標識された抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片と接触させ、腎組織におけるαｖβ８インテグリンへの抗αｖβ８インテグリン抗体の結合を検出することを含む方法が提供される。
本明細書に記載される上記方法のいずれかの態様の一実施形態では、αｖβ８インテグリンに特異的に結合する抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、
（ａ）アミノ酸配列
ＲＹＷＭＳ（配列番号１）
を含む重鎖可変領域相補性決定領域１（ＣＤＲ１）；
（ｂ）アミノ酸配列
ＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬ（配列番号２）
を含む重鎖可変領域相補性決定領域２（ＣＤＲ２）；及び
（ｃ）アミノ酸配列
ＬＩＴＴＥＤＹ（配列番号３）
を含む重鎖可変領域相補性決定領域３（ＣＤＲ３）ＣＤＲ３；並びに
（ｄ）アミノ酸配列
ＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（配列番号４）
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｅ）アミノ酸配列
ＹＡＮＲＬＶＤ（配列番号５）
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
（ｆ）アミノ酸配列
ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（配列番号６）
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
本明細書に記載される上記方法のいずれかの態様の別の実施形態では、αｖβ８インテグリンに特異的に結合する抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＶＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＩＬＩＴＴＥＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７）；及び
軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＹＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＥＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８）
を含む。
本明細書に記載される上記方法のいずれかの態様の一実施形態では、αｖβ８インテグリンに特異的に結合する抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、
（ａ）アミノ酸配列
ＲＳＷＩＳ（配列番号９）
を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｂ）アミノ酸配列
ＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬ（配列番号２）
を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
（ｃ）アミノ酸配列
ＬＩＴＴＥＤＹ（配列番号３）
を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；並びに
（ｄ）アミノ酸配列
ＫＡＳＱＤＩＮＫＹＬＳ（配列番号１０）
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｅ）アミノ酸配列
ＹＡＮＲＬＶＤ（配列番号５）
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
（ｆ）アミノ酸配列
ＬＱＹＤＶＦＰＹＴ（配列番号１１）
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
本明細書に記載される上記方法のいずれかの態様の別の実施形態では、αｖβ８インテグリンに特異的に結合する抗αｖβ８インテグリン抗体（本明細書では「Ｂ５－１５」と称する）、又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＶＦＳＲＳＷＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＩＬＩＴＴＥＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１２）；及び
軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＫＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＹＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＶＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１３）
を含む。
本明細書に記載される上記治療方法のいずれかの態様の実施形態では、αｖβ８インテグリンに特異的に結合する抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、腎疾患の補助治療薬又は治療と組み合わせて対象に投与される。実施形態では、αｖβ８インテグリンに特異的に結合する抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、補助治療薬又は治療の施行の前、施行と同時に、又は施行後に対象に投与される。
本明細書に記載される上記治療方法のいずれかの態様の一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、発現が増加した線維性腎細胞及び腎組織のαｖβ８インテグリンに結合し、ＣＫＤなどの腎疾患を有する対象の腎組織の足細胞及び間質尿細管細胞におけるαｖβ８インテグリンの発現の増加と関連する線維症を減弱化又は抑止する。
本明細書に記載される別の態様では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片であって、
（ａ）アミノ酸配列
ＲＹＷＭＳ（配列番号１）
を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１：
（ｂ）アミノ酸配列
ＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬ（配列番号２）
を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
（ｃ）アミノ酸配列
ＬＩＴＴＥＤＹ（配列番号３）
を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；並びに
（ｄ）アミノ酸配列
ＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（配列番号４）
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｅ）アミノ酸配列
ＹＡＮＲＬＶＤ（配列番号５）
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
（ｆ）アミノ酸配列
ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（配列番号６）
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む抗体又はその抗原結合断片が提供される。
本明細書に記載される別の態様では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片であって、
重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＶＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＩＬＩＴＴＥＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７）；及び
軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＹＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＥＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８）
を含む抗体又はその抗原結合断片が提供される。
一実施形態では、上記抗体又はその抗原結合断片は、ＣＫＤなどの腎疾患を有する対象の線維性腎細胞及び腎組織で発現が増加したαｖβ８インテグリンに結合する。一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、線維性腎細胞及び腎組織で発現が増加したαｖβ８インテグリンに特異的に結合し、αｖβ８インテグリンの潜在型ＴＧＦ－βへの結合を遮断し、それによって、腎線維症に関連するαｖβ８インテグリンの活性を抑止する。一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、腎疾患を有する対象の腎組織の足細胞及び間質尿細管細胞におけるαｖβ８インテグリンの発現の増加に関連する線維症を減弱化又は抑止する。
本明細書に記載される別の態様では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片であって、
（ａ）アミノ酸配列
ＲＳＷＩＳ（配列番号９）
を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｂ）アミノ酸配列
ＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬ（配列番号２）
を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
（ｃ）アミノ酸配列
ＬＩＴＴＥＤＹ（配列番号３）
を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；並びに
（ｄ）アミノ酸配列
ＫＡＳＱＤＩＮＫＹＬＳ（配列番号１０）
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
（ｅ）アミノ酸配列
ＹＡＮＲＬＶＤ（配列番号５）
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
（ｆ）アミノ酸配列
ＬＱＹＤＶＦＰＹＴ（配列番号１１）
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む抗体又はその抗原結合断片が提供される。
本明細書に記載される別の態様では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片であって、重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＶＦＳＲＳＷＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＩＬＩＴＴＥＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１２）及び
軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＫＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＹＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＶＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１３）
を含む抗体又はその抗原結合断片が提供される。
一実施形態では、上記抗体又はその抗原結合断片は、ＣＫＤなどの腎疾患を有する対象の線維性腎細胞及び腎組織で発現が増加したαｖβ８インテグリンに結合する。一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、線維性腎細胞及び腎組織で発現が増加したαｖβ８インテグリンに特異的に結合し、αｖβ８インテグリンの潜在型ＴＧＦ－βへの結合を遮断し、それによって、腎線維症に関連するαｖβ８インテグリンの活性を抑止する。一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、腎疾患を有する対象の腎組織の足細胞及び間質尿細管細胞におけるαｖβ８インテグリンの発現の増加に関連する線維症を減弱化又は抑止する。
上記態様のいずれかの一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧクラスのものである。特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
別の態様では、αｖβ８インテグリンへの結合について、上記の態様に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体のいずれかの抗体又はその抗原結合断片と競合する抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片が提供される。一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ抗体である。一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１抗体である。
別の態様では、本明細書に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドが提供される。一実施形態では、抗体のＶＨ領域をコードするポリヌクレオチド配列は、以下の核酸配列
Figure 2023511686000002
 を含み、
抗体のＶＬ領域をコードするポリヌクレオチド配列は、以下の核酸配列
Figure 2023511686000003
 を含む。
別の態様では、上記のポリヌクレオチドを含む発現ベクターが提供される。実施形態では、発現ベクターは、原核生物、真核生物、又は哺乳動物の発現ベクターである。
別の態様では、上記の発現ベクターを含む細胞が提供される。実施形態では、細胞は、原核生物、真核生物、又は哺乳動物の宿主細胞である。
別の態様では、上記の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤とを含む医薬組成物が提供される。
別の態様では、上記のポリヌクレオチドと、薬学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤とを含む医薬組成物が提供される。
別の態様では、本明細書に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を含むキット、或いは抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物が提供される。
本開示のその他の特徴及び利点は、詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
定義
特に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解する意味を有する。以下の参考文献は、本開示で使用される用語の多くの一般的な定義を当業者に提供するものである：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ ｅｄ．１９９４）；Ｔｈｅ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｋｅｒ ｅｄ．，１９８８）；Ｔｈｅ Ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）；及びＨａｌｅ ＆ Ｍａｒｈａｍ，Ｔｈｅ Ｈａｒｐｅｒ Ｃｏｌｌｉｎｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）。本明細書で使用される場合、以下の用語は、別段の指定がない限り、下のそれらに帰属する意味を有する。
「薬剤」という用語は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド（又はその断片若しくは部分）、核酸分子、小化合物、薬物、又は医薬品を指す。薬剤は、アンタゴニストであり得、同族リガンドなどの別の分子の活性を遮断又は阻害し得る。
「抗体」という用語は、本開示で使用される場合、免疫グロブリン又はその断片、部分若しくは誘導体を指し、インビトロで産生されるかインビボで産生されるかにかかわらず、抗原結合部位を含む任意のポリペプチドを包含する。この用語には、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異的、多特異的、非特異的、ヒト化、単鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、変異型、及びグラフト化抗体が含まれるが、これらに限定されない。「インタクト抗体」のように「インタクトな」という用語で特に修飾されていない限り、本開示の目的上、「抗体」という用語には、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂなどの抗体断片（又は部分）、及び抗原結合機能又はエピトープ結合機能、すなわちポリペプチドに特異的に結合する能力を保持する、その他の抗体断片（又は部分）もまた含まれる。典型的には、そのような断片（又は部分）は、抗原結合ドメインを含む。
例として、免疫グロブリン（抗体）は、四量体構造単位を含む。各四量体はポリペプチド鎖の２つの同一対を含み、各対は１つの「軽」（Ｌ）鎖（約２５ｋＤ）及び１つの「重」（Ｈ）鎖（約５０～７０ｋＤ）を有する。各ポリペプチド鎖のアミノ（Ｎ）末端は、主に抗原認識及び結合に関与する約１００～１１０又はそれ以上のアミノ酸の可変（Ｖ）領域を規定する。可変軽鎖領域（ＶＬ）及び可変重鎖領域（ＶＨ）という用語は、それぞれ免疫グロブリン分子（抗体）の軽鎖及び重鎖の可変領域を指す。可変領域又は「Ｖ領域」は、Ｂ細胞分化期間の重鎖及び軽鎖Ｖ領域遺伝子の遺伝子再編成に起因する成分セグメント、すなわち、フレームワーク１（Ｆ１）、ＣＤＲ１、フレームワーク２（Ｆ２）、ＣＤＲ２、フレームワーク３（Ｆ３）、ＣＤＲ３、及びフレームワーク４（Ｆ４）を含む抗体可変領域を指す。
免疫グロブリン（抗体）分子のＶＨ及びＶＬ領域は、ＶＨ及びＶＬフレームワーク領域内に位置する３つの超可変領域である３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ＣＤＲは、主に抗原のエピトープへの結合に関与する。抗体のＶＨ及びＶＬ領域のＣＤＲは、典型的には、可変領域セグメントのＮ末端から始まって連続して番号付けされ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と呼ばれる。異なる重及び軽抗体鎖のフレームワーク領域のアミノ酸配列は、種内で比較的保存されている。抗体の構成要素の重鎖及び軽鎖のＶ領域のフレームワーク領域（ＦＷ１～ＦＷ４）は、三次元空間におけるＣＤＲの構造的配置及びアラインメントを提供する。抗体分子中のＣＤＲ及びフレームワーク領域のアミノ酸配列の特徴付け（及び番号付け）は、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅ Ｔｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）、及びＡｂＭ（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ＆Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７－８８３；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：７９９－８１７；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３（４）：９２７－９４８）により報告されているように決定することができる。抗原結合部位の定義は、Ｒｕｉｚ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２８：２１９－２２１及びＬｅｆｒａｎｃ，２００１，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２９（１）：２０７－２０９；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２－７４５；Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：９２６８－９２７２；Ｍａｒｔｉｎ，ｅｔ ａｌ，１９９１，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２０３：１２１－１５３；Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ，１９９２，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，１：１２６－１３６；及びＲｅｅｓ ｅｔ ａｌ，１９９６，Ｉｎ：Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ Ｍ．Ｊ．Ｅ．（ｅｄ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ，ｐｐ．１４１－１７２に報告されている。
「キメラ抗体」は、抗原結合部位（可変領域、ＣＤＲ、又はその断片）が異なる又は変化したクラス及び／又は種の抗体分子の定常領域に、又はキメラ抗体に新しい特性又はエフェクター機能を付与する完全に異なる分子（例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物など）に連結されるように、定常領域又はその断片が変更、置換又は交換されている抗体分子である。或いは、キメラ抗体は、異なる又は変化した抗原特異性を有する可変領域（例えば、異なる種由来の１つ又は複数のＣＤＲ及びフレームワーク領域）で改変、置換、又は交換された可変領域又はその断片を含み得る。
「抗原結合部分」、「抗原結合ドメイン」、「抗原結合断片」、「結合断片」又は「結合部分」という用語は、抗体と抗原の特異的結合に関与するアミノ酸を含む抗体分子の部分を指す。抗原が大きい場合、抗原結合ドメインは、抗原の一部にのみ結合し得る。抗原結合ドメインとの特異的相互作用を担う抗原分子の部分は、「結合部位」、「エピトープ」又は「抗原決定基」と称される。特定の実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）及び抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むが、必ずしも双方を含む必要はない。例えば、いわゆるＦｄ抗体断片は、ＶＨドメインのみからなるが、依然としてインタクトな抗体の抗原結合機能の幾分かを保持している。所与の抗原に対して産生される抗体の結合部位、すなわちエピトープは、当該技術分野で知られた方法を用いて決定され得る。例えば、競合アッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ））は、既知のエピトープを有する抗体を用いて実施され得る。所与の抗原への結合に対し、試験抗体が競合する場合、その抗体は、同じエピトープの少なくとも一部を共有する可能性が高い。エピトープはまた、抗原のドメイン交換又は選択的変異誘発を用いて局在化され得る。すなわち、抗原の各領域又は各アミノ酸は、試験抗体と相互作用しないことが知られているアミノ酸又は成分で「交換」又は置換され得る。所与の領域又はアミノ酸の置換により、試験抗体の置換抗原への結合が、非置換抗原への結合と比べて低下する場合、その領域又はアミノ酸は、エピトープであるか、エピトープ内にあるか、又はエピトープの少なくとも一部である可能性が高い。
抗体の結合断片（又は、部分）は、組換えＤＮＡ技術によって、又はインタクト抗体の酵素的若しくは化学的開裂によって生成される。結合断片又は部分としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及び一本鎖抗体が挙げられる。「二重特異的」又は「二機能性」抗体以外の抗体は、その結合部位はそれぞれ同一であると理解される。酵素パパインによる抗体の消化により、「Ｆａｂ」断片としても知られる２つの同一の抗原結合断片、及び、抗原結合活性はないが結晶化する能力を有する「Ｆｃ」断片が生じる。酵素ペプシンによる抗体の消化により、抗体分子の２つのアームが連結されたままで、２つの抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２断片が生じる。Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗原を架橋する能力を有する。「Ｆｖ」は、本明細書で用いられる場合、抗原認識部位及び抗原結合部位の双方を保持する抗体の最小断片を指す。「Ｆａｂ」は、本明細書で使用される場合、軽鎖の定常ドメインと、重鎖のＣＨＩドメインとを含む抗体の断片を指す。
「ｍＡｂ」という用語は、モノクローナル抗体を指す。本明細書に開示される抗体は、限定はされないが、全天然抗体、二重特異性抗体；キメラ抗体；Ｆａｂ、Ｆａｂ’、単鎖Ｖ領域断片（ｓｃＦｖ）、融合ポリペプチド、及び非従来型抗体を含む。
「ヒト化抗体」という用語は、最小の非ヒト（例えば、マウス、ラット又はウサギ）配列を含有するように操作されている、非ヒト（例えば、マウス、ラット又はウサギ）免疫グロブリンに由来する抗体を指す。典型的には、ヒト化抗体は、超可変相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、目的の特異性、親和性、及び／又は能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、又はハムスター）のＣＤＲからの残基によって置き換えられている、ヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－１５３６）。したがって、ヒト化抗体のフレームワーク領域は、実質的にヒト免疫グロブリンのものである。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＷ）残基は、目的の特異性、親和性、及び／又は能力を有する、非ヒト種由来の抗体中の対応する残基で置換される。
ヒト化抗体は、抗体特異性、親和性、及び／又は能力を洗練し、最適化するために、Ｆｖフレームワーク領域中及び／又は置換された非ヒト残基中の追加的残基の置換によってさらに改変され得る。一般に、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに相当するＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てを含有する可変ドメインの少なくとも１つ、典型的には２つ又は３つを実質的に全て含むこととなるが、ＦＲ領域の全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体はまた、典型的にヒト免疫グロブリンのものである、免疫グロブリン定常領域又はドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部を含み得る。ヒト化抗体を作製するのに使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号明細書又は同第５，６３９，６４１号明細書に記載されている。
「断片」は、ポリペプチド又は核酸分子の部分を意味する。この「断片」又は「部分」は、好ましくは、参照核酸分子又はポリペプチド全長の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％を含有する。特定の実施形態では、ポリペプチドの断片又は部分は、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、又は３００個のアミノ酸を含有し得る。実施形態では、断片又は部分は、ポリペプチド又は核酸分子全体の完全な又は少なくとも部分的な活性及び／又は機能を保持する。
「検出」は、検出すべき分析物の存在、非存在又は量を特定することを指す。様々な実施形態において、分析物は、ポリペプチド又は核酸バイオマーカーである。
抗体に関連して「競合する」とは、一般に、第１の抗体又はその抗原結合断片が、第２の抗体又はその抗原結合断片と結合を競い合うことを意味し、この場合、第２の抗体の存在下での、第１の抗体の（その同族抗原結合部位又はエピトープ（例えば、インテグリンαｖβ８上の）への）結合は、第２の抗体の非存在下での第１の抗体の結合と比較して、検出可能なほどに減少する。或いは場合によっては、第２の抗体のその同族抗原結合部位又はエピトープへの結合もまた、第１の抗体の存在下で検出可能なほどに減少する。しかし、これは常にそうであるとは限らない。したがって、第１の抗体は、第２の抗体が抗原のそのそれぞれの結合部位又はエピトープへの第１の抗体の結合を阻害することなく、その同族抗原結合部位又はエピトープへの第２の抗体の結合を阻害することができる。しかし、各抗体が他の抗体のその同族のエピトープ又はリガンドとの結合を、同程度か、より大きい程度か、又はより小さい程度に、検出可能なほどに阻害する場合、抗体は、それら各々の結合部位又はエピトープへの結合に対して相互に「交差競合する」と言われる。本明細書においては、競合抗体及び交差競合抗体の両方が企図される。立体障害、立体構造変化、又は共通の結合部位、エピトープ、若しくはその断片などへの結合など、抗体競合又は交差競合が起こる機構にかかわらず、競合抗体及び／又は交差競合抗体の両方が本明細書に包含され、開示される方法において有用であり得る。
本明細書に記載の治療に関連して用語「改善する」は、腎細胞及び／又は腎組織における線維症（腎線維症）などの疾患又は病態の発生又は進行を減少、低減、軽減、抑制、減弱化、抑止、停止、阻止、遮断、中和、又は安定化することを指す。
「インテグリン」は、本明細書で言及される場合、細胞外マトリックスに結合し、細胞－細胞及び細胞－細胞外マトリックス相互作用を媒介するために、哺乳動物細胞によって使用される主要な受容体である細胞表面糖タンパク質である。それらは、ヘテロ二量体（互いに非共有結合的に結合したα及びβサブユニットを有する）であり、細胞外マトリックスと細胞のアクチン細胞骨格との間の膜貫通リンカーとして機能する。インテグリンタンパク質は、受動的接着剤として機能せず、むしろ、両方向に細胞膜を横切る情報の伝達を媒介する動的分子である。インテグリン媒介性接着は、インテグリンの細胞質尾部で誘発されるクラスター形成及び立体構造変化によってシグナルに応答して調節され得、それはリガンド結合によって活性化されると、様々な細胞内シグナル伝達経路を活性化するシグナル伝達物質として機能する。さらに、インテグリンシグナル伝達は、細胞生存、細胞周期進行、及び分化を制御する。インテグリン媒介性接着構造の調節は、多くの形態の細胞遊走にとって重要である。インテグリンはまた、多様な後天性及び遺伝性疾患の発症の一因となる。
タンパク質のインテグリンファミリーにはいくつかのメンバーがあり、そのうちのいくつかは広範な組織分布を有する。脊椎動物には約２４種類のインテグリンが存在し、１つの細胞がその表面に複数の異なるタイプのインテグリン受容体を発現することがある。ＩＴＧＢ８遺伝子によってコードされるヒトインテグリンβ８サブユニットは、フィブロネクチン並びにＴＧＦ－β１及びＴＧＦ－β２アイソフォームを含むリガンドを有する。αＶβ８インテグリン（以下にさらに記載されるようなベータ８（β８）サブユニットと結合したアルファＶ（αＶ）サブユニットを含むヘテロ二量体）は、ＭＴ１マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）と組み合わされて、細胞表面上に発現し、細胞マトリックス中の潜在型ＴＧＦ－βと相互作用し、その活性化を媒介する。ＭＴ１プロテアーゼは、潜在型ＴＧＦ－βを切断して、成熟した活性ＴＧＦ－βポリペプチドを放出する。活性酸素種、他のプロテアーゼ、炎症及びｐＨ変化も、活性ＴＧＦβの放出に関与していることが実証されている。
「αｖβ８」は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００２２１４．２で提供されるヒトαｖβ８インテグリンアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％以上のアミノ酸配列同一性を有し、以下に記載のαｖβ８活性及び／又は機能を有する「αｖβ８インテグリン受容体」、「αｖβ８インテグリン」若しくは「インテグリンαｖβ８」ポリペプチド、又はその断片を意味する。他のインテグリンベータ（β）サブユニットと同様に、ヒトαｖβ８は、Ｎ末端シグナルペプチド、４つのシステインリッチリピートを含む大きな細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び短いＣ末端細胞質ドメインを含有する。αｖβ８は約９５ｋＤの分子量を有し、予測される８１ｋＤのβ８遺伝子産物の実質的なグリコシル化と一致する。（Ｍ．Ｍｏｙｌｅ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６：１９６５０－１９６５８）。ノーザンブロット分析は、ヒトαｖβ８が骨肉腫細胞株において約８．５キロ塩基（ｋｂ）のｍＲＮＡとして発現されることを明らかにした。哺乳動物細胞において発現する場合、β８インテグリンサブユニットは、アルファＶ（αＶ）サブユニットと結合して、細胞表面αＶβ８インテグリン複合体を形成する。特定の実施形態では、ポリペプチドは、ヒトαｖβ８インテグリンである。本明細書で使用される「αｖβ８」という用語は、「αｖβ８インテグリン受容体」、「αｖβ８インテグリン」、及び「インテグリンαｖβ８」と同義である。「ｉｔｇｂ８」という名称は、典型的には、β８サブユニットのヒト遺伝子配列を指す。
ヒトβ８インテグリン（ＩＴＧＢ８、インテグリンベータ８、インテグリンβ８、β８、及び類似の用語と互換的に使用される）タンパク質配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ２６０１２又はＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００２２１４．２で見出すことができ、以下の通りである：
Figure 2023511686000004
ヒトβ８インテグリンのｉｔｇｂ８ポリヌクレオチドコード配列を以下に示す（８７８７ｂｐのｉｔｇｂ８ ｍＲＮＡ核酸配列）。ヒトβ８インテグリンのポリヌクレオチド配列は、アクセッション番号：ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００２２１４．２に見出すことができる。ヒトβ８インテグリンポリペプチドをコードするｉｔｇｂ８ポリヌクレオチド配列に対して少なくとも約８５％以上のヌクレオチド配列同一性を有するポリヌクレオチド又はその断片は、本開示に包含される。
Figure 2023511686000005
Figure 2023511686000006
Figure 2023511686000007
Figure 2023511686000008
アルファＶインテグリン（α－Ｖ、ＩＴＧＡＶ）サブユニット（アルファＶ及びαｖとも呼ばれる）は、β－１（ＩＴＧＢ１）、β－３（ＩＴＧＢ３）、β－５（ＩＴＧＢ５）、β－６（ＩＴＧＢ６）及びβ－８（ＩＴＧＢ８）サブユニットのいずれかと結合し、アルファ（αＶ）及びベータ（β１－８）サブユニットのヘテロ二量体を形成する。アルファサブユニットは、ジスルフィド結合によって連結された重鎖（インテグリンα－Ｖ重鎖）及び軽鎖（インテグリンα－Ｖ軽鎖）から構成される。特定の実施形態では、αｖインテグリンサブユニットはβ８インテグリンサブユニットと結合し、αｖβ８インテグリンを形成する。上記のようにβ－８（ＩＴＧＢ８）と結合することができるヒトα－Ｖ（ＩＴＡＶ）は、１０４０個のアミノ酸を含み、以下の通り、Ｕｎｉｐｒｏｔ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ）アクセッション番号Ｐ０６７５６に見出すことができる：
Figure 2023511686000009
Figure 2023511686000010
Figure 2023511686000011
ヒトアルファＶ（ＩＴＧＡＶ）をコードするポリヌクレオチドコード配列を以下に示す（３１４７ヌクレオチドｂｐ）。ヒトαｖインテグリンのポリヌクレオチド配列（ＣＣＤＳ ２２９２．１）は、アクセッション番号：ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００２２１０．４に見出すことができる。ヒトＩＴＧＡＶインテグリンポリペプチドをコードするαｖ（ＩＴＧＡＶ）インテグリンポリヌクレオチド配列に対して少なくとも約８５％以上のヌクレオチド配列同一性を有するポリヌクレオチド又はその断片は、本開示に包含される。
Figure 2023511686000012
Figure 2023511686000013
本明細書において「ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５」と称されるヒト化抗αｖβ８インテグリン抗体は、本開示の組成物及び方法において有用である。ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体は、以下に示す重鎖及び軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する。この抗体は、腎細胞及び腎組織で発現する、より特には、慢性腎疾患（ＣＫＤ）などの腎疾患を有する対象の線維性腎組織などの罹患腎細胞及び腎組織で非常に多く発現するαｖβ８インテグリンタンパク質に特異的且つ選択的に結合する。一実施形態では、以下に示すＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５ αｖβ８インテグリン抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）、（１１６個のアミノ酸残基）、及び軽鎖可変領域（ＶＬ）、（１０７個のアミノ酸残基）のアミノ酸配列と少なくとも約８５％以上又は少なくとも８５％以上のアミノ酸配列同一性を有する、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、本開示に包含される。
ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体のＶＨアミノ酸配列：
Figure 2023511686000014
 ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体のＶＬアミノ酸配列：
Figure 2023511686000015
ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体の上記ＶＨ及びＶＬ配列において、３つのＣＤＲ領域（Ｋａｂａｔによる定義）に下線を引く。より具体的には、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）の３つのＣＤＲのアミノ酸配列は以下の通りである：
ＶＨＣＤＲ１：ＲＹＷＭＳ（配列番号１）
ＶＨＣＤＲ２：ＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬ（配列番号２）
ＶＨＣＤＲ３：ＬＩＴＴＥＤＹ（配列番号３）
ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）の３つのＣＤＲのアミノ酸配列は以下の通りである：
ＶＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（配列番号４）
ＶＬＣＤＲ２：ＹＡＮＲＬＶＤ（配列番号５）
ＶＬＣＤＲ３：ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（配列番号６）
上記で同定されたＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片のＶＨ及びＶＬ領域をコードするポリヌクレオチド配列もまた、本開示に包含される。一実施形態では、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５ヌクレオチド配列と少なくとも約８５％以上又は少なくとも８５％以上のヌクレオチド配列同一性を有する、上記のＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片のＶＨ及びＶＬ領域をコードするポリヌクレオチド配列もまた、本開示に包含される。
本明細書において「Ｂ５－１５」と呼ばれる別の抗αｖβ８インテグリン抗体は、本開示の組成物及び方法において特に有用である。Ｂ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体は、αｖβ８インテグリンに特異的に結合し、以下に示す重鎖及び軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する、（ＩｇＧ１アイソタイプの）ヒト化及び親和性最適化抗体である。ヒト化Ｂ５－１５抗体は、本明細書に記載のＢ５－１５抗体の「親」である上述のＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体から誘導され、親和性が最適化された。このＢ５－１５抗体は、αｖβ８インテグリンに、特に、腎細胞及び腎組織で発現するαｖβ８インテグリンに、より特には、慢性腎疾患（ＣＫＤ）などの腎疾患を有する対象の線維性腎組織などの罹患腎細胞及び腎組織で非常に多く発現するαｖβ８インテグリンタンパク質に極めて特異的且つ選択的に結合する。一実施形態では、以下に示すＢ５－１５ αｖβ８インテグリン抗体の重鎖可変領域（ＶＬ）、（１１６個のアミノ酸残基）、及び軽鎖可変領域（ＶＬ）、（１０７個のアミノ酸残基）のアミノ酸配列と少なくとも約８５％以上、又は少なくとも８５％以上のアミノ酸配列同一性を有する、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、本開示に包含される。
ヒト化及び最適化Ｂ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体のＶＨアミノ酸配列：
Figure 2023511686000016
 ヒト化及び最適化Ｂ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体のＶＬアミノ酸配列：
Figure 2023511686000017
Ｂ５－１５ヒト化及び親和性最適化抗体の上記ＶＨ及びＶＬ配列において、３つのＣＤＲ領域（Ｋａｂａｔによって定義）のアミノ酸配列に下線を引く。より具体的には、Ｂ５－１５抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）の３つのＣＤＲのアミノ酸配列は以下の通りである：
ＶＨＣＤＲ１：ＲＳＷＩＳ（配列番号９）
ＶＨＣＤＲ２：ＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬ（配列番号２）
ＶＨＣＤＲ３：ＬＩＴＴＥＤＹ（配列番号３）
Ｂ５－１５ヒト化及び親和性最適化抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）の３つのＣＤＲのアミノ酸配列は、以下の通りである：
ＶＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＤＩＮＫＹＬＳ（配列番号１０）
ＶＬＣＤＲ２：ＹＡＮＲＬＶＤ（配列番号５）
ＶＬＣＤＲ３：ＬＱＹＤＶＦＰＹＴ（配列番号１１）
上記のＢ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片のＶＨ及びＶＬ領域をコードするポリヌクレオチド配列もまた、本開示に包含される。最適化Ｂ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体のＶＨ領域をコードするポリヌクレオチド配列を以下に提示する：
Figure 2023511686000018
最適化Ｂ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体のＶＬ（カッパ）領域をコードするポリヌクレオチド配列を以下に提示する：
Figure 2023511686000019
一実施形態では、Ｂ５－１５ヌクレオチド配列と少なくとも約８５％以上又は少なくとも８５％以上のヌクレオチド配列同一性を有する、上記のＢ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片のＶＨ及びＶＬ領域をコードするポリヌクレオチド配列もまた、本開示に包含される。
サイトカインの形質転換成長因子ベータ（β）（ＴＧＦ－β）は、種々の細胞型の細胞増殖、分化、アポトーシス、接着及び遊走を調節する多機能性調節因子である。ＴＧＦ－βは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質、及びほとんど全ての細胞型、例えば、活性化Ｔ及びＢ細胞、造血細胞、マクロファージ、樹状細胞の産生を誘導し、それらはＴＧＦ－βを産生し、且つ／又はその効果に感受性がある。（Ｓ．Ｄｅｎｎｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．，７１：７３１－７４０）。ＴＧＦ－βは、哺乳動物において３０を超える関連メンバー、すなわち、３つのＴＧＦ－βアイソフォーム、４つのアクチビン、及び２０を超える骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を含む多様なスーパーファミリーのメンバーである。ＴＧＦ－βの３つの哺乳動物アイソフォーム（ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２及びＴＧＦ－β３）は、アミノ酸レベルで７０～８２％の相同性を共有し、異なる系において定性的に類似の活性を有する。ＴＧＦ－βの活性型は、疎水性相互作用によって安定化された二量体であり、ほとんどの場合、サブユニット間ジスルフィド架橋によってさらに強化されている。ＴＧＦ－β１アイソフォームは、腎細胞に最も豊富に存在するアイソフォームである。
ＴＧＦ－βが細胞膜で細胞内シグナル伝達を開始する機構は、一般によく理解されている。例えば、Ｉ．Ｌｏｅｆｆｌｅｒ ａｎｄ Ｇ．Ｗｏｌｆ，２０１３，Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，２９：ｉ３７－ｉ４５を参照されたい）。ＴＧＦ－βシグナル伝達の細胞内媒介物はＳｍａｄと呼ばれ、１型ＴＧＦ－β受容体（ＴβＲ－１）の下流で作用し、３つのクラスに分類される。受容体調節Ｓｍａｄ（Ｒ－Ｓｍａｄ）、例えば、Ｓｍａｄ１、Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ５及びＳｍａｄ８は直接リン酸化され、ＴβＲ－１（これは、膜貫通受容体セリン／トレオニンキナーゼである）によって活性化され、第２のクラスのＳｍａｄである一般的な媒介物Ｓｍａｄ（Ｃｏ－Ｓｍａｄ）、例えば、Ｓｍａｄ４とヘテロオリゴマー複合体を形成する。これらのＳｍａｄ複合体は核に移行し、そこで部位特異的ＤＮＡ転写因子と相互作用し、標的遺伝子の調節に関与する。Ｓｍａｄ２及びＳｍａｄ３は、ＴＧＦ－βサブファミリーによるシグナル伝達に応答する。Ｓｍａｄの第３の同定されたクラスには、阻害性Ｓｍａｄ、Ｓｍａｄ６及びＳｍａｄ７が含まれ、これらは活性化されたＴβＲ－１受容体と物理的に相互作用することによって受容体調節Ｓｍａｄの活性に拮抗し、Ｒ－Ｓｍａｄのドッキング及びリン酸化を防止することができる。（同上）。ＴＧＦ－βはまた、その多面的効果により、ＴＧＦ－βはまた、Ｓｍａｄ媒介転写に加えて、Ｒａｓ、Ｒａｆ、Ｅｒｋ、ＪＮＫ及びｐ３８などのＭＡＰＫ経路を含む他のシグナル伝達カスケードも直接活性化することができる。さらに、ＴＧＦ－βは、そのエフェクターＡｋｔ、並びにＲｈｏＡ、Ｒａｃ及びｃｄｃ４２を含むＲｈｏ様ＧＴＰアーゼのリン酸化によって、ホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ（ＰＩ－３Ｋ）カスケードを活性化することができる。（同上）。
ＴＧＦ－βは、多くの腎細胞型によって合成され、上記のシグナル伝達経路を介してその生物学的（及び病態生理学的）効果を発揮する。ＴＧＦ－βは腎疾患において上方制御され、腎細胞を誘導して細胞外マトリックスタンパク質を産生し、糸球体硬化症及び尿細管間質（ＴＩ）線維症をもたらし、これは、腎実質上の進行性の有害な結合組織沈着として特徴付けられ、腎機能の悪化をもたらす損傷プロセスである。種々のタイプの腎細胞は、ＴＧＦ－βの活性によって誘導される種々の病態生理学的変化を受け、アポトーシス、組織肥大及び足細胞の足突起異常をもたらし、最終的に腎機能障害を引き起こす。（同上）。
本明細書で使用される場合、「決定する」、「評価する（ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ）」、「評価する（ａｓｓｅｓｓｉｎｇ）」「アッセイする」、「測定する」及び「検出する」、並びに「同定する」という用語は、定量的及び定性的決定の両方を指し、したがって、「決定する」という用語は、本明細書では「アッセイする」、「測定する」などと同義的に使用される。定量的決定が意図される場合、分析物、物質、タンパク質などの「量、レベル又は濃度を決定する」という語句が使用される。定性的及び／又は定量的決定が意図される場合、分析物の「レベルを決定する」又は分析物を「検出する」という語句が使用される。
「疾患」とは、細胞、組織又は臓器の正常な機能を損傷するか、妨害するか、又は調節不全にするあらゆる病態又は障害を意味する。本明細書において言及される腎臓の疾患及び腎臓に関連する疾患には、非限定的な例として、糖尿病性腎症（ＤＮ）、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、急性腎疾患、高血圧関連腎疾患、高血糖関連腎疾患、腎線維症、炎症関連腎疾患、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、自己免疫関連腎線維症（例えば、ループス腎炎）及び腎臓移植後の線維症などが含まれる。このような疾患、病態、病変及び／又は腎臓に関連したその症状は、対象において急性であっても慢性であってもよく、限定することは意図されない。
一般的に言えば、「線維症」は、反応性（例えば、傷害に対する応答；疾患）又は修復プロセスの結果として生じ得る、臓器又は組織における過剰な結合組織の形成である。線維症は、反応性、良性、又は病理学的状態で起こり得る。損傷に対する応答では、線維症は瘢痕化と呼ばれ得る。腎瘢痕化は進行性の腎機能の喪失をもたらし、最終的に末期腎不全、及び透析又は腎移植の必要性につながる。
腎線維症は、実質的にあらゆるタイプの慢性腎臓疾患において生じる細胞外マトリックスの過剰な蓄積の不可避の結果である。腎線維症の病因は、最終的に末期腎疾患／腎不全、透析又は腎移植を必要とする壊滅的な障害をもたらす進行性プロセスである。一般に、腎線維症は、慢性的な持続的傷害又は損傷後の腎組織の創傷治癒プロセスの失敗を表す。メサンギウム細胞及び線維芽細胞の活性化、並びに尿細管上皮間葉転換（ＥＭＴ）を含むいくつかの細胞経路が、マトリックス産生細胞が疾患状態で産生される主要な方法として確認されている。（例えば、Ｙ．Ｌｉｕ，２００６，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．，６９（２）：２１３－２１７を参照されたい）。
腎線維化プロセスを調節する多くの線維形成因子の中で、ＴＧＦ－βは中心的な役割を果たす。欠陥のあるマトリックス分解は組織瘢痕化の一因であり得るが、損傷した腎臓におけるマトリックス分解酵素の正確な作用及び機構は複雑であり、よくわかっていない。内因性抗線維化因子の活性を介在させることは、ＴＧＦ－β／Ｓｍａｄシグナル伝達経路の線維形成作用に拮抗するための戦略を提供し得る。
「足細胞」は、糸球体の毛細血管に巻き付く腎臓のボーマン嚢における高度に分化した上皮細胞である。毛細血管の周りを包み、血液及び血液成分が濾過される濾過スリット（又はスリット膜）を生成するのは、足突起又は足細胞の突起である。ボーマン嚢は血液を濾過し、より大きな分子（例えば、タンパク質）を保持し、一方、尿の形成における第１の工程として、より小さな分子（例えば、水、塩、糖）を濾過する。糸球体毛細血管ループ及び糸球体基底膜の内皮細胞と共に、足細胞は濾過バリアを形成する。腎臓の足細胞及びメサンギウム細胞は、糸球体の構造及び機能を支持する。
腎臓における「糸球体」は、係締と呼ばれる毛細血管のネットワーク又はクラスターであり、各腎尿細管（ネフロン）の末端に位置するカップ様嚢（糸球体嚢）の内部に位置し、血液の濾過に関与する。糸球体毛細血管壁の組成は、糸球体嚢に濾過されるものとその量を決定する。毛細血管壁は溶質、血漿タンパク質及び流体が通過できるが、血液細胞は通過できない比較的大きな孔を有する内皮層、内皮層に融合され、血漿タンパク質が血液から濾過されるのを防ぐ基底膜層、及び足突起によって基底膜に付着する足細胞からなる上皮層から構成される。流体は、足細胞によって形成された濾過スリットを通過する。スリット間の薄い隔膜は、流体が糸球体空間に入る前の最終的な濾過バリアとして機能する。
「単離された」、「精製された」又は「生物学的に純粋な」という用語は、天然状態で見られる通常はそれに付随する成分を様々な程度に含まない物質を指す。「単離する」は、元の供給源又は環境からのある程度の分離を示す。「精製する」は、単離よりも高い分離度を示す。「精製された」又は「生物学的に純粋な」タンパク質は、いかなる不純物もタンパク質の生物学的特性に実質的に影響を及ぼしたり、その他の有害な帰結を引き起こしたりしないように、その他の材料を十分に含まない。すなわち、核酸又はペプチドは、本明細書で使用される場合、組換えＤＮＡ技術によって生成されるときは、細胞材料、ウイルス汚染物質又は培養培地を実質的に含まず、また化学合成されるときは、化学物質前駆体又はその他の化学物質を実質的に含まない場合に、精製されている。純度及び均一性は、典型的には、分析化学技術、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、質量分析などを用いて決定される。「精製された」という用語は、核酸又はタンパク質が電気泳動ゲル中で実質的に１つのバンドを生じることを意味し得る。例えば、リン酸化又はグリコシル化などの修飾を受け得るタンパク質については、異なる修飾は、別々に精製され得る、異なる単離されたタンパク質を生じさせてもよい。
「単離されたポリヌクレオチド」は、核酸分子が由来する生物の天然に存在するゲノム中でその遺伝子に隣接する遺伝子を含まない、核酸（例えば、ＤＮＡ）を意味する。したがって、この用語には、例えば、発現ベクターなどのベクターに組み込まれた組換えＤＮＡ、自律的に複製するプラスミド若しくはウイルスに組み込まれた組換えＤＮＡ、又は原核生物若しくは真核生物のゲノムＤＮＡに組み込まれた組換えＤＮＡ、又はその他の配列とは独立した別個の分子（例えば、ＰＣＲ又は制限エンドヌクレアーゼ消化によって生成されたｃＤＮＡ又はゲノム若しくはｃＤＮＡ断片）として存在する組換えＤＮＡが含まれる。さらに、この用語には、ＤＮＡ分子から転写されたＲＮＡ分子、並びに１つ又は複数の追加的なポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の一部である組換えＤＮＡを含む。
「単離されたポリペプチド」は、それが天然に付随する成分から分離された、又は単離又は精製処理中に存在する成分から分離された、単離された抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片などの本開示のポリペプチド又は分子を意味する。そのようなポリペプチド又は分子は、その自然環境中に存在する他の要素を実質的に含まない。例えば、単離されたタンパク質は、それが由来する細胞又は組織源からの細胞物質又はその他のタンパク質を実質的に含まない。典型的には、ポリペプチド又は分子は、それが自然に結合している、タンパク質及び天然に存在する有機分子を少なくとも６０重量％含まない場合に、単離されている。好ましくは、調製物は、その少なくとも７５重量％、より好ましくは少なくとも９０重量％、最も好ましくは少なくとも９９重量％が、本開示のポリペプチドである。本開示の単離されたポリペプチドは、例えば、天然源からの抽出によって、このようなポリペプチドをコードする組換え核酸の発現によって、又はタンパク質を化学的に合成することによって得られ得る。「単離された」という用語はまた、単離されたタンパク質が医薬組成物として投与されるのに十分に純粋であるか、又は少なくとも７０～８０％（ｗ／ｗ）純粋な、より好ましくは、少なくとも８０～９０％（ｗ／ｗ）純粋な、より一層好ましくは、９０～９５％純粋な；最も好ましくは、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％（ｗ／ｗ）純粋である調製物を指す。純度は、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、ＨＰＬＣ分析、及び／又は質量分析などの任意の適切な方法によって測定することができる。
「用量」という用語は、例えば、治療又は治療法の利益などのために薬剤を必要とする対象又は患者に（投与経路を限定することなく）投与される、小分子又は生物学的のような、薬物、医薬品、化合物などの治療薬の測定された分量、量、又は濃度を指す。
「増加する」は、例えば、少なくとも１０％、２５％、５０％、７５％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、１０００％、又はそれ以上の増加など、正の変化を意味する。
「減少させる」は、例えば、少なくとも１０％、２５％、５０％、７５％、又は１００％の減少など、負の変化を意味する。
「参照」又は「対照」は、限定はされないがプラセボなどの比較の基準を意味する。一実施形態では、参照レベルは、非罹患組織から得られた生体試料中のバイオマーカーのレベル、発現、又は活性である。
「参照配列」は、配列比較の基礎として使用される定義された配列である。参照配列は、例えば、完全長のｃＤＮＡ若しくは遺伝子配列のセグメント、又は完全なｃＤＮＡ若しくは遺伝子配列などの規定の配列のサブセット又は全体であってもよい。ポリペプチドでは、参照ポリペプチド配列の長さは、一般に少なくとも約１６アミノ酸、好ましくは少なくとも約２０アミノ酸、より好ましくは少なくとも約２５アミノ酸、より一層好ましくは約３５アミノ酸、約５０アミノ酸、又は約１００アミノ酸である。核酸分子では、参照核酸配列の長さは、一般に少なくとも約５０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約６０ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約７５ヌクレオチド、より一層好ましくは約１００ヌクレオチド若しくは約３００ヌクレオチド、又はそれらの前後若しくはそれらの間の任意の整数である。
治療に関連して「応答性の」は、治療の影響を受け易いことを意味する。
「特異的に結合する」又は「選択的に結合する」は、分子（例えば、ポリペプチド、抗原、リガンド）を認識して結合するが、例えば生体試料などの試料中のその他の分子は実質的に認識も結合もしない作用物質（例えば、抗体）を意味する。例えば、互いに特異的に結合する２つの分子（例えば、抗体及びそのリガンド）は、生理学的条件下で比較的安定な複合体を形成する。特異的結合は、高い親和性及び低から中程度のキャパシティを特徴とし、通常、低い親和性を有し、中程度から高いキャパシティを持つ非特異的結合と区別される。
「生体試料」又は「試料」は、対象から得られた任意の液体、細胞又は組織を意味する。いくつかの実施形態では、生体試料は、血液、血清、血漿、脳脊髄液、気管支肺胞洗浄液、痰、涙、唾液、尿、精液、糞便などである。腎臓試料などの細胞又は組織試料は、細胞及び組織の細胞内成分が提供されるホモジネート又は懸濁液を生成するために、好適な緩衝液中でさらに処理され得る。
「対象」は、以下に限定されないが、ヒト患者、ヒト対象、ヒト個体などのヒト、非ヒト霊長類、又はウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ若しくはネコ科動物などの非ヒト哺乳類を含む哺乳類を意味する。一実施形態では、対象はヒトである。一実施形態では、対象は、ＣＫＤなどの腎臓の病態若しくは疾患及び／又はその症状のリスクを有する、又はそれらを有し、その治療を受けている、ヒト患者である。「対象」、「個体」及び「患者」という用語は、本明細書では同義的に使用され得る。
本明細書で提供される範囲は、最初に記載される値と最後に記載される値を含む、範囲内の全ての値の省略表現であると理解される。例えば、１～５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、又はサブ範囲を含むと理解される。
「医薬組成物」又は「製剤」は、ヒトを含む動物又は哺乳類などの対象における医薬的使用に好適な組成物（生理学的に許容される組成物）を指す。医薬組成物は、本明細書に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片の治療的又は予防的有効量と、薬学的に許容される賦形剤、担体、ビヒクル又は希釈剤とを含む。一実施形態では、医薬組成物は、活性成分（抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合部分若しくは断片）、及び担体を構成する不活性成分、並びに任意の２つ以上の成分の組み合わせ、複合体若しくは凝集から、又は成分の１つ又は複数の分離から、又は成分の１つ又は複数のその他の各種反応又は相互作用から、直接的又は間接的に生じる任意の生成物を含む組成物を包含する。一実施形態では、医薬組成物は、任意選択的に、別の生物学的活性剤、化合物、薬物、又は医薬を含む。したがって、本開示の医薬組成物は、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合部分若しくは断片と、薬学的に許容される賦形剤、担体、ビヒクル、又は希釈剤とを混合することによって作製される任意の組成物を包含する。
「薬学的に許容される担体」は、リン酸塩緩衝食塩水、任意選択的に別の生物学的活性剤、デキストロースの水性（例えば、５％）溶液、及びエマルション（例えば、油／水又は水／油エマルション）などの標準的な医薬担体、緩衝剤などのいずれかを指す。賦形剤の非限定的な例としては、アジュバント、結合剤、充填剤、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、湿潤剤、潤滑剤、滑剤、甘味剤、香味剤、及び着色剤が挙げられる。好適な医薬担体、賦形剤、ビヒクル及び希釈剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ Ｅｄ．（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，１９９５（又はこの参照文献の更新版））に見出し得る。組成物又は製剤に含めるのに好適な医薬担体は、典型的には活性剤、例えば、本明細書に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合部分若しくは断片の意図する投与方法に依存する。例示的な投与方法としては、経腸（例えば、経口）又は非経口（例えば、皮下、筋肉内、静脈内又は腹腔内注射、静脈内輸液、又は局所、経皮、若しくは経粘膜投与）が挙げられる。
「薬学的に許容される塩」は、以下に限定されないが、金属塩（例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなど）、及びアンモニア又は有機リン酸の塩を含む、医薬的使用のための化合物に製剤化され得る塩を指す。
「薬学的に許容される」、生理学的に許容される」、又は「薬理学的に許容される」は、生物学的、生理学的、又は別の様式で有害でない物質を指し、すなわち、物質は、いかなる望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、又は、有害な様式で、それがその中に含まれる組成物の成分のいずれかと、又は個体の身体上若しくは身体内に存在するいかなる成分と相互作用することなく、個体に投与され得る。
「生理学的状態」は、ヒトなどの動物又は哺乳類の体内の状態を指す。生理学的状態としては、体温と、生理学的イオン強度、ｐＨ、及び酵素などの水性環境とが挙げられるが、これらに限定されない。生理学的状態はまた、正常なヒト体温（約３７℃）又は正常なヒト血液ｐＨ（約７．４）など、大部分の対象に存在する「正常」な状態と異なる、特定の対象の体内の状態も包含する。
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、「治療」などの用語は、障害及び／又はそれに関連した症状を、低減、軽減、減少、緩和、抑止、中和、又は改善することを指す。除外するものではないが、障害又は病態を治療することは、障害、病態又はそれに関連した症状を完全に除去又は緩和することを必要としないことは理解されるであろう。「治療」は、予防的治療又は治療的治療又は診断的治療を指してもよい。特定の実施形態では、「治療」は、治療目的、予防目的、又は診断目的のために、化合物又は組成物を対象に投与することを指す。
記載される方法に従って、治療すること又は治療は、本明細書に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体を投与することを含む。一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体は、必要とする対象に対し、非経口的に、例えば静脈内又は皮下に投与される。当該技術分野の当業者によって理解されるように、静脈内投与は、一般に、抗αｖβ８インテグリン抗体などの活性成分、治療薬、物質、薬剤、薬物、又は抗体を、対象の静脈又は血管に提供又は送達し、活性成分を対象の体循環に送達することを指す。静脈内投与は、例えば、シリンジ及び針又はカテーテルの手段による、静脈又は血管への静脈内注射又は静脈内輸液を含み得る。静脈内注射又は輸液は、活性成分が、チューブを通じて輸液バッグ内に送達され、次に対象の体内に配置されたカテーテル及び／又はポートを通じて、医師によって慣例的及び実際的に決定される流量で、輸液バッグから対象内に送達されるように、プラスチックチューブ及び輸液バッグ（例えば、輸液セット）の使用を伴い得る。静脈内注射又は輸液は、ポンプの使用によって又は点滴を介して行われてもよい。
「予防的治療」（予防的又は保護的治療など）は、疾患、病変、又は病態を発症するリスク、又は疾患、病変、又は病態のより重篤な又は重症の形態を発症するリスクを低減し、減少させ、緩和し、又は除去する目的で、疾患の徴候を示さない、又は疾患の初期徴候のみを示す、又は疾患を有するリスクがある対象に施される治療である。本明細書に記載される抗αｖβ８インテグリン抗体若しくはその抗原結合断片、又はその組成物を、対象が腎疾患、病変、若しくは病態を発症する可能性を低減するために、又は対象に腎疾患、病変又は病態が発症した場合にその重症度を最小化するために、予防的又は保護的治療として投与され得ることが想定される。
「治療的」治療は、徴候又は症状を低減し、軽減し、緩和し、又は除去する目的で、疾患又は病変の徴候又は症状を示す対象に施される治療である。疾患又は病変の徴候又は症状は、限定はされないが、生化学的、行動的、細胞性、表現型、遺伝子型、組織学的、機能的、身体的、主観的、又は客観的であってよい。一実施形態では、本開示の抗αｖβ８インテグリン抗体は、治療的治療として与えられ／投与され得る。
本明細書で使用される場合、障害又は病態を「予防する」治療薬は、統計的なサンプルにおいて、未治療の対照又は参照サンプルと比較して、治療済みサンプル中の障害又は病態の発生を低減させる、又は未治療の参照又は対照サンプルと比較して、障害又は病態の１つ又は複数の症状の発症を遅延させる、若しくは重症度を低減させる、生物製剤、化合物又は医薬物質を指す。一実施形態では、本開示の抗αｖβ８インテグリン抗体は、本明細書に記載の方法における予防的治療薬である。
「有効量」という用語は、対象の健康状態、病変、又は疾患に関連して、又は診断目的のために、所望の結果（例えば、症状の低減、軽減、除去、又は改善）を生じるのに十分な投与量を指す。所望の結果は、用量又は投与量が投与される対象における、主観的又は客観的改善を含み得る。「治療的有効量」は、健康に対し、意図した有益な効果を生じるのに有効な薬剤の量を指す。特定の患者に対する特定の投与レベル及び頻度は、用いられる特定の化合物の活性；その化合物の生物学的利用能、代謝安定性、排泄速度及び作用の長さ；その化合物の投与方法及び時間；患者の年齢、体重、総体的な健康、性別、及び食生活；並びに患者の特定の病態の重症度を含む、様々な要因に依存し得ることは理解されるであろう。
「タンパク質」、「ペプチド」、及び「ポリペプチド」という用語は、長さ又は翻訳後修飾（例えば、グリコシル化又はリン酸化）に関係なく、アミノ酸鎖を指す。したがって、本明細書では、これらの用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために同義的に使用され得る。これらの用語はまた、１つ又は複数のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工的な化学模倣薬であるアミノ酸ポリマーにも適用される。したがって、「ポリペプチド」という用語には、完全長の天然に存在するタンパク質；並びに完全長の天然に存在するタンパク質に対応する、又は天然に存在するタンパク質の特定のドメイン若しくは部分に対応する、組換え又は合成によって製造されたポリペプチドが含まれる。この用語にはまた、原核細胞における発現を促進するために、アミノ末端メチオニンが付加された成熟タンパク質も包含される。ポリペプチドは、化学的に合成され得、また組換えＤＮＡ法によって合成され得、また天然に発現している組織から標準的な生化学的精製方法に従って精製され得る。「機能的ポリペプチド」は、例えば、抗αｖβ８インテグリン抗体などの所与のタンパク質又はポリペプチドの１つ又は複数の生物学的機能又は活性を有する。機能的ポリペプチドは、抗αｖβ８インテグリン抗体の標準配列であると考えられるものから改変された、一次アミノ酸配列を含有してもよい。好ましくは、このような改変は、タンパク質の正常な機能又は活性を変化も実質的な変化もさせない、保存的アミノ酸置換である。ポリペプチド断片、部分、又はセグメントは、特定の配列からの少なくとも約６個の連続したアミノ酸、より典型的には少なくとも約１０～１２個の連続したアミノ酸の一続きのアミノ酸残基を指す。
本開示の抗αｖβ８インテグリン抗体などのポリペプチドをコードする核酸分子（ポリヌクレオチド）には、本開示のポリペプチド、例えば、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸分子が含まれる。このような核酸分子は、内因性核酸配列と１００％同一である必要はないが、典型的には実質的な同一性を示すであろう。内因性配列に対し「実質的同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的には、二本鎖核酸分子の少なくとも１本の鎖とハイブリダイズすることができる。内因性配列に対し「実質的同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的には、二本鎖核酸分子の少なくとも１本の鎖とハイブリダイズすることができる。「ハイブリダイズする」は、様々なストリンジェンシー条件下で、相補的ポリヌクレオチド配列（例えば、遺伝子）又はその一部の間で対合して、二本鎖分子を形成することを意味する。（例えば、Ｗａｈｌ，Ｇ．Ｍ．ａｎｄ Ｓ．Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ，１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１５２：３９９；Ｋｉｍｍｅｌ，Ａ．Ｒ．，１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１５２：５０７を参照されたい）。
非限定的な例として、ストリンジェントな塩濃度は、通常、ＮａＣｌ約７５０ｍＭ未満及びクエン酸三ナトリウム約７５ｍＭ未満、好ましくはＮａＣｌ約５００ｍＭ未満及びクエン酸三ナトリウム約５０ｍＭ未満、より好ましくはＮａＣｌ約２５０ｍＭ未満及びクエン酸三ナトリウム約２５ｍＭ未満である。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、例えば、ホルムアミドなどの有機溶媒の非存在下で得られ得る一方で、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％のホルムアミド、より好ましくは少なくとも約５０％のホルムアミドの存在下で得られ得る。ストリンジェントな温度条件は、通常、少なくとも約３０℃、より好ましくは少なくとも約３７℃、最も好ましくは少なくとも約４２℃の温度を含む。ハイブリダイゼーション時間、界面活性剤、例えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度、及び担体ＤＮＡの包含又は除外などの様々な追加のパラメータは、当業者にはよく知られている。様々なレベルのストリンジェンシーは、これらの様々な条件を必要に応じて組み合わせることで達成される。特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、及び１％のＳＤＳ中、３０℃で行われる。別の特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、３５％のホルムアミド、及び１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ中、３７℃で行われる。別の特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、２５０ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、５０％ホルムアミド、及び２００μｇ／ｍｌのサケ精子ＤＮＡ中、４２℃で行われる。これらの条件の有用なバリエーションは、当業者には容易に明らかであろう。
ほとんどの用途では、ハイブリダイゼーションに続く洗浄工程もまた、ストリンジェンシーによって変わる。洗浄ストリンジェンシー条件は、塩濃度及び温度によって定義され得る。上記のように、塩濃度を下げるか、又は温度を上げることによって、洗浄ストリンジェンシーを高め得る。例えば、洗浄工程のストリンジェントな塩濃度は、ＮａＣｌ約３０ｍＭ未満及びクエン酸三ナトリウム約３ｍＭ未満であり、特に、ＮａＣｌ約１５ｍＭ未満及びクエン酸三ナトリウム約１．５ｍＭ未満であろう。洗浄工程のストリンジェントな温度条件は、通常、少なくとも約２５℃、又は少なくとも約４２℃、又は少なくとも約６８℃の温度を含む。特定の実施形態では、洗浄工程は、３０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、及び０．１％のＳＤＳ中、２５℃で行われる。別の特定の実施形態では、洗浄工程は、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、及び０．１％ＳＤＳ中、４２℃で行われる。別の特定の実施形態では、洗浄工程は、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、及び０．１％ＳＤＳ中、６８℃で行われる。これらの条件の追加的なバリエーションは、当業者には容易に明らかであろう。ハイブリダイゼーション技術は当業者によく知られており、例えば、Ｂｅｎｔｏｎ ａｎｄ Ｄａｖｉｓ（Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９６：１８０、１９７７）；Ｇｒｕｎｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｈｏｇｎｅｓｓ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，７２：３９６１，１９７５）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００１）；Ｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｋｉｍｍｅｌ（Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；及びＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載されている。
２つ以上の核酸又はポリペプチドの文脈における用語「同一の」又は「同一性」パーセントは、保存的アミノ酸置換を配列同一性の一部と見なさずに、最大の一致のために比較し整列した場合（必要に応じてギャップを導入する）、同一であるか、又は規定の割合の同一ヌクレオチド又はアミノ酸残基を有する、２つ以上の配列又は部分配列を指す。同一性パーセントは、配列比較ソフトウェア又はアルゴリズムを使用して、又は目視検査によって測定され得る。アミノ酸配列又はヌクレオチド配列のアラインメントを得るために用い得る様々なアルゴリズム及びソフトウェアが当該技術分野において知られている（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８７：２２６４－２２６８（Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９０：５８７３－５８７７において変更され、ＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９－３４０２）に導入されている）を参照されたい）。特定の実施形態では、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２に記載のとおり使用することができる。ＢＬＡＳＴ－２、ＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：４６０－４８０）、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）。
「実質的に同一」は、参照アミノ酸配列又は核酸配列と、少なくとも５０％の同一性を示すポリペプチド又は核酸分子を意味する。このような配列は、比較のために使用される配列と、アミノ酸レベル又は核酸で、少なくとも６０％、又は少なくとも８０％若しくは８５％、又は少なくとも９０％、９５％、又は９９％の同一性を有し得る。
配列同一性は、典型的には、配列解析ソフトウェアを使用して測定される（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ，１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰ、又はＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）。このようなソフトウェアは、様々な置換、欠失、及び／又はその他の変更について、相同性の程度を割り当てることによって、同一又は類似の配列を適合させる。保存的置換は、典型的には、以下のアミノ酸基内の置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リシン、アルギニン；及びフェニルアラニン、チロシン。同一性の程度を決定する例示的な方法では、ＢＬＡＳＴプログラムが使用され得、ｅ－３～ｅ－１００の間の確率スコアは、密接に関連した配列を示唆する。
哺乳動物の抗αｖβ８インテグリン抗体（特に、抗ヒトαｖβ８インテグリン抗体）、又はその免疫学的に機能的な対立遺伝子バリアント若しくはアイソフォームは、抗αｖβ８インテグリン抗体の結合及び遮断活性を有する抗体の断片を含む他の変異体又はアイソフォームと同様に、記載される方法において有用であり得る。ポリヌクレオチド又は遺伝子の文脈における「対立遺伝子変異」は、集団において２つ以上の形態で存在する遺伝子の代替形態（対立遺伝子）である。ポリペプチドレベルでは、「対立遺伝子バリアント」は、一般に、１つだけ、又は最大で数個のアミノ酸置換だけ互いに異なる。ポリヌクレオチド又はポリペプチドの「種変異」は、異なる生物種間で、多様性が天然に存在するものである。
本開示において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する」、及び「有する」などは、米国特許法においてそれらに帰するとされる意味を有し得、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味し得、「実質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」又は「実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」は、同様に米国特許法において帰するとされる意味を有し、用語は開放型であり、列挙されたものの基本的又は新規な特性が、列挙されたものを超える存在によって変更されない限り、列挙されたものを超える存在を許容するが、先行技術の実施形態は除外される。
特に明記されていない限り又はその文脈から明らかでない限り、「又は」という用語は、本明細書で使用される場合、包括的であると理解される。特に明記されていない限り又は文脈から明らかでない限り、「１つの（ａ）」、「（１つの）ａｎ」、及び「その（ｔｈｅ）」という用語は、本明細書で使用される場合、単数形又は複数形であると理解される。
特に明記されていない限り又は文脈から明らかでない限り、本明細書で使用される場合、「約」という用語は、当該技術分野における通常の許容範囲内、例えば平均値の２標準偏差内と理解される。「約」という用語は、記載値の５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％又は０．０１％以内を指すと理解される。文脈から明確でない限り、本明細書に提供される全数値は、用語約により修飾される。
本明細書で提供される組成物又は方法はいずれも、本明細書で提供されるその他の組成物及び方法のいずれかの１つ又は複数と組み合わされ得る。
図１Ａ及び１Ｂは、本明細書に開示されるαｖβ８インテグリンタンパク質に対する特異的抗αｖβ８インテグリン抗体の結合を示すグラフ及び表を提示する。より具体的には、図１Ａは、国際公開第２０１３／０２６００４号パンフレットに開示されている配列を用いて生成されたＩｇＧ抗αｖβ８インテグリン抗体「ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５」、及び本明細書の実施例１に記載のキメラＩｇＧ抗αｖβ８インテグリン抗体「Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５」間の結合親和性の比較を示すグラフを示す。図１Ａに示す結合結果から観察されるように、ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体は、Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体と比較して、非常に低い結合親和性を有する。図１Ｂは、αｖβ８インテグリンタンパク質への結合についての、異なるＩｇＧ抗αｖβ８インテグリン抗体（図１Ａで論じたような「ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５」及び「Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５」と、「ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５」と呼ばれるＣＤＲグラフト抗体）の親和性の比較を示すグラフ、並びにＢｉａｃｏｒｅアッセイによって評価した、これらの抗体のＫｄ測定の表を提示する。ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体は、抗αｖβ８インテグリン抗体Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５からのＣＤＲグラフトによって生成され、Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体と同様のαｖβ８インテグリン結合プロファイルを示した（図１Ｂ）。 図２Ａ－２Ｄは、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５ヒト化抗αｖβ８インテグリン抗体Ｃ９４ＩのＣＤＲ位置における飽和点変異の生成からの代表的な抗αｖβ８インテグリン抗体クローナルヒットの結果及びアミノ酸配列を、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５ Ｃ９４Ｉ抗αｖβ８インテグリン抗体と、代表的な抗αｖβ８インテグリンＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ３及びＶＬヒット（飽和点変異実験によって生成され、実施例１に記載のスクリーニング分析において同定された「Ｐ１」又は「Ｐ２」と呼ばれる）の結合親和性分析を示すグラフとともに示す。図２Ａは、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５親抗体と比較して改善されたαｖβ８インテグリンに対するＶＨＣＤＲ１ヒットの結合親和性を示す。図２Ｂは、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５親抗体と比較して改善されたαｖβ８インテグリンに対するＶＨＣＤＲ３ヒットの結合親和性を示す。図２Ｃは、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５親抗体と比較して改善されたαｖβ８インテグリンに対するＶＬヒットの結合親和性を示す。図２Ｄは、親和性成熟抗αｖβ８インテグリン抗体クローンのスクリーニングから得られた、「Ｐ２－２３」、「Ｐ２－３３」、「Ｐ２－２５」、「Ｐ１－２１」、「Ｐ１－３５」、「Ｐ１－４２」、「Ｐ２－１６」、「Ｐ２－１９」、「Ｐ２－３６」、及び「Ｐ２－１４」と命名された代表的な一次クローン抗αｖβ８インテグリン抗体ヒットのＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列のアラインメントを示す。クローンのＶＨ及びＶＬ領域におけるフレームワーク（ＦＷ１～ＦＷ４）領域及びＣＤＲ（ＣＤＲ１～ＣＤＲ３）は、配列の上に指定する。ＣＤＲ領域におけるアミノ酸残基の相異箇所は、二重下線で示す。 図３Ａ及び３Ｂは、実施例１に記載されるヒト化及び親和性最適化抗αｖβ８抗体を生成するために使用される組み合わせライブラリースクリーニングからのαｖβ８インテグリン結合データを提示する。図３Ａ及び図３Ｂに示すように、１０個の有益な点変異は全て、コンビナトリアル手法で組み合わされた。４６０８個のクローンをスクリーニングし、確認のために８８個のクローンを選択した。最良の一次ヒットＰ２－２３よりもさらなる結合改善を示した６つのコンボヒットを同定した。 図４は、ヒト化ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５、親和性最適化Ｂ５－１５及びＢ５－１５ Ｎ５９Ｑ抗αｖβ８インテグリン抗体の異なる濃度をαｖβ８インテグリンタンパク質への結合について比較した酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）の結果を示す。ＥＬＩＳＡアッセイのために、組換え技術により生成したαｖβ８インテグリンタンパク質を組織培養プレートのウェル上にコーティングした。抗体結合を、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ヤギ抗ヒトＦｃ抗体を用いて検出した。親和性最適化Ｂ５－１５及びＢ５－１５ Ｎ５９Ｑ抗αｖβ８インテグリン抗体の結合は、親ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体と比較して改善されたことが、抗体濃度の全範囲にわたって観察された。Ｂ５－１５ Ｎ５９Ｑは、Ｂ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体の非グリコシル化バージョンである。抗αｖβ８インテグリン抗体の（ＨＣＤＲ２配列中）のグリコシル化は阻害活性に重要であることが示されているが、αｖβ８インテグリンへの結合には影響しない（国際公開第２０１５／１９５８３５号パンフレットを参照されたい）。 図５は、ＴＧＦ－β活性化に対する抗αｖβ８インテグリン抗体の阻害を測定するためのＴＭＬＣルシフェラーゼバイオアッセイの結果を示すグラフ及び表を提示する。図５のグラフは、抗αｖβ８インテグリン抗体（ＩｇＧアイソタイプ）と対比したＴＧＦ－β活性の最大応答パーセントを示す。アッセイで評価した抗αｖβ８インテグリン抗体は、親（Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５、図において「Ｃｈｉ－Ｂ５」として示す）及び親和性最適化（Ｂ５－１５）抗αｖβ８インテグリン抗体であった。２つの抗体についてのＫｄ（ｐＭ）値及びＩＣ５０（ｎＭ）値を、グラフの下の表に示す。グラフから観察されるように、アッセイにおける抗αｖβ８インテグリン抗体の濃度の増加により、ＴＧＦ－βの活性化が減少しており、Ｂ５－１５がＣｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５よりも高いインビトロ効力を示した。 図６は、４つの抗αｖβ８インテグリン抗体、「Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５」（ＵＣＳＦから導入したキメラ抗αｖβ８インテグリン抗体）、「ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５」（国際公開第２０１３／０２６００４号パンフレットからのＵＣＳＦヒト化３７Ｅ１Ｂ５抗体）、「ＭｅｄＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５」（ＭｅｄＩヒト化抗αｖβ８インテグリン抗体）及び「Ｂ５－１５」（ヒト化及び親和性最適化Ｂ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体）のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列のアラインメントを示す。「Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５」とのアミノ酸配列の相違箇所を太字で強調している。ＶＨ及びＶＬのＣＤＲの各可変領域配列に下線を引いている。図６に示すように、Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体のＶＨ領域のアミノ酸配列は以下の通りである：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＮＬＳＣＡＶＳＧＦＶＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬＫＤＫＦＩＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＫＶＲＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＣＬＩＴＴＥＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号２０）。Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５抗体のＶＨ領域のヌクレオチド配列は以下の通りである：
Figure 2023511686000020
 Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体のＶＬ（カッパ）領域のアミノ酸配列は以下の通りである：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＳＭＹＡＳＬＧＥＲＶＴＩＰＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＹＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＳＬＴＩＳＳＬＥＹＥＤＭＧＩＹＹＣＬＱＹＤＥＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２２）。
Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５抗体のＶＬ（カッパ）領域のヌクレオチド配列は以下の通りである：
Figure 2023511686000021
 また、図６において、ＵＣＳＦ ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体のＶＨ領域のアミノ酸配列は以下の通りである：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＶＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＬＩＴＴＥＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２４）。
ＵＣＳＦ ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体のＶＬ（カッパ）領域のアミノ酸配列は以下の通りである：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＬＳＰＧＥＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＡＮＲＬＶＤＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＬＱＹＤＥＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２５）。
図７Ａ～７Ｃは、抗αｖβ８インテグリン抗体を用いた免疫組織化学（ＩＨＣ）によって染色されたヒト腎組織の顕微鏡写真画像を示す。図７Ａに示されるように、ヒト腎組織は、神経組織を除いて、評価された他の健康なヒト組織と比較して、特に足細胞において、αｖβ８インテグリンが高密度に存在していることがわかった。図７Ｂは、αｖβ８インテグリンが、αｖβ８インテグリン抗体による染色のパターンに基づいて、糖尿病性腎症（ＤＮ）及び慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有する個体から得られた腎組織試料に豊富に存在することを示す。特に、ＤＮ及びＣＫＤ患者から得られた腎組織試料においては、αｖβ８インテグリン染色は実質的に尿細管に見出された。ＤＮ患者の腎臓の糸球体は、αｖβ８インテグリン染色の減少を示しており、おそらく腎組織の線維化及び損傷による足細胞の喪失の結果としてであろう。図７Ｃは、正常個体由来の腎組織（「正常腎臓」）及び異なるステージの糖尿病性腎症（「ＤＮ」）を有する患者由来の腎組織の抗αｖβ８インテグリン抗体によるＩＨＣ染色の結果を示す。結果は、αｖβ８染色が生存可能な機能的ネフロンにおいて上昇していることを示す。ＤＮを有する患者から得られた腎組織試料では、染色されていない領域は機能的ネフロンから置き換わった線維性マトリックスであり、アスタリスク（＊）で示されている。 図８Ａ～８Ｅは、糖尿病性腎症（ＤＮ）腎疾患を有する患者から得られた腎組織試料を使用して実施されたトランスクリプトームのプロライフ解析の結果を、生体ドナーから得られた腎組織試料と比較して示す、棒グラフ、ドットプロットグラフ及びボックスプロットグラフを提示する。図８Ａは、ＣＫＤを有するヒト被験体から得られた腎組織における、異なるＡＶ関連インテグリン、ＩＴＧＢ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ５及びＩＴＧＢ６の相対ｍＲＮＡ発現レベル（ｈｐｒｔ１発現に対する）を示す。ＩＴＧＢ８は、ＣＫＤ患者の腎臓に最も豊富なβ８サブユニットである。図８Ｂは、ＮＰＨＳ１（ネフリン、足細胞特異的遺伝子）ｍＲＮＡに対して正規化されたＩＴＧＢ８ ｍＲＮＡ発現が、健常対照としての生体ドナーにおけるその発現と比較して、ＤＮ患者腎臓試料の糸球体においてより高かったことを示すボックスプロットグラフを示す。図８Ｃは、ＮＨＰＳ１ ｍＲＮＡに対して正規化されたＩＴＧＢ８ ｍＲＮＡ発現が、健常対照としての生体ドナーにおけるその発現と比較して、ＤＮ患者腎臓試料の尿細管間質においてより高かったことを示すボックスプロットグラフを示す。図８Ｄは、ＩＴＧＢ８ ｍＲＮＡ発現が、ＣＫＤ患者の尿細管間質におけるＣＫＤ全体のＴＧＦ－β活性化スコア（ＴＧＦ－β経路における下流遺伝子の複合体）と強く相関することを示すドットプロットグラフを示す。図８Ｅは、ＲＮＡｓｅｑを用いた全ゲノム転写プロファイリング後の、健常ドナー腎糸球体（糸球体－ＬＤ）、ＤＮを有する患者由来の腎糸球体（糸球体－ＤＮ）、健常ドナー由来の腎尿細管間質（Ｔｕｂ－ＬＤ）、及びＤＮを有する患者由来の腎尿細管間質（Ｔｕｂ－ＤＮ）における、種々のインテグリン遺伝子（ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ４、ＩＴＧＢ５、ＩＴＧＢ６、ＩＴＧＢ７、及びＩＴＧＢ８）のｍＲＮＡ発現レベル（正規化されたカウント）を示すボックスプロットグラフを示す。尿細管間質におけるＩＴＧＢ８ ｍＲＮＡの発現が、生体ドナー（ＬＤ、ｎ＝１９）に比べ、ＤＮ患者（ｎ＝２０）で増加していることが認められた（ｐ＜０．０１）。 図９Ａ～９Ｊは、本明細書に記載されるような抗αｖβ８インテグリン抗体を用いたＩＨＣ染色の結果を示す顕微鏡写真（図９Ａ～９Ｄ）、並びに片側尿管結紮（ＵＵＯ）処置を受けたヒト化αｖβ８トランスジェニックマウス（腎線維症のマウスモデル）におけるｍＲＮＡ発現（図９Ｅ～９Ｉ）及び線維症の指標としてのヒドロキシプロリン含量（図９Ｊ）のインビボ分析の結果を示す棒グラフを示す。図９Ａ及び９Ｂに示すＩＨＣ染色顕微鏡写真は、ヒト化αｖβ８トランスジェニックマウスが健康なヒト腎臓において典型的に観察されるものと同様に、主に腎臓の糸球体にαｖβ８を発現することを示している。ＣＫＤを有するヒトの腎臓において典型的に観察されるものと同様に、ＵＵＯ処置による線維症の誘導が腎尿細管におけるαｖβ８発現を増加させることが示された（図９Ｃ及び９Ｄ）。図９Ｅに示されるように、抗αｖβ８インテグリン抗体Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５（親Ａｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）及びＢ５－１５（リードＡｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）は、ＵＵＯ対照と比較して、ＵＵＯ施術後８日目で、コラーゲン１ａ１ ｍＲＮＡ発現のＵＵＯ誘導による増加を減弱化させた。各抗体は１０ｍｇ／ｋｇ投与された。図９Ｆに示されるように、抗αｖβ８インテグリン抗体Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５（親Ａｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）及びＢ５－１５（リードＡｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）は、ＵＵＯ対照と比較して、ＵＵＯ施術後８日目で、コラーゲン３ａ１ ｍＲＮＡ発現のＵＵＯ誘導による増加を減弱化させた。各抗体は１０ｍｇ／ｋｇ投与された。図９Ｇに示されるように、ＵＵＯは、ＵＵＯ施術後８日目に、閉塞された腎皮質フィブロネクチン１（Ｆｎ１）ｍＲＮＡ発現を、シャム対照と比較して増加させた。抗体Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５（親Ａｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）及び抗体Ｂ５－１５（リードＡｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）は、ＵＵＯ対照と比較して、８日間の損傷期間でのＦｎ１発現のＵＵＯ誘導による増加を減弱化させた。各抗体は１０ｍｇ／ｋｇ投与された。図９Ｈに示すように、抗αｖβ８インテグリン抗体Ｂ５－１５（リードＡｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）は、ＵＵＯ対照と比較して、ＵＵＯ施術後８日目で、α－平滑筋アクチン（α－ＳＭＡ）発現のＵＵＯ誘導による増加を減弱化させた。Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５（親Ａｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）は、α－ＳＭＡのＵＵＯ誘導による増加を減少させなかった。各抗体は１０ｍｇ／ｋｇ投与された。図９Ｉに示されるように、抗αｖβ８インテグリン抗体Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５（親Ａｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）及びＢ５－１５（リードＡｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）は、ＵＵＯ対照と比較して、ＵＵＯ施術後８日目に、結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）ｍＲＮＡ発現のＵＵＯ誘導による増加を減弱化させた。各抗体は１０ｍｇ／ｋｇ投与された。図９Ｊに示されるように、ＵＵＯは、ＵＵＯ手術後８日目で、閉塞された腎皮質ヒドロキシプロリン（ＯＨ－Ｐ）％を増加させた。Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５（親Ａｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）抗体及びＢ５－１５（リードＡｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）抗体は、対照と比較して、８日間の損傷期間でのＯＨ－Ｐ％のＵＵＯ誘導性増加を減弱化させた。各抗体は１０ｍｇ／ｋｇ投与された。腎皮質ヒドロキシプロリンの読み取りは、組織の実際の線維化含量／線維症の測定として役立つ。 図１０Ａ及び１０Ｂは、アイソタイプ対照抗体（ＮＩＰ２２８）又は抗αｖβ８インテグリン抗体（Ｂ５－１５）による治療後のＵＵＯ施術がされたヒト化αｖβ８トランスジェニック動物におけるＴＧＦ－βシグナル伝達の下流の効果に関するグラフを示す。図１０Ａは、ヒト化αｖβ８トランスジェニックマウスにおけるＵＵＯ施術が、シャム治療群に対して５．７倍のＴＧＦ－β依存性ＳＭＡＤ２／３リン酸化の増加をもたらしたことを示す。抗αｖβ８インテグリン抗体（Ｂ５－１５）による治療は、アイソタイプ対照による治療と比較して、ＳＭＡＤ２／３活性化を１．６倍有意に減少させた。ＳＭＡＤ２／３の総レベルは、全てのＵＵＯ群で、シャム治療動物と比較して増加した（図１０Ｂ）。 図１１は、Ｂ５－１５（抗αｖβ８インテグリン抗体）又はＮＩＰ２２８（アイソタイプ対照）による腎臓初代三培養細胞系の治療効果を示すグラフを示す。この三培養細胞系は、糸球体内皮細胞、足細胞、及びメサンギウム細胞が血管ネットワークを形成するヒト糸球体硬化症のモデルである（Ｗａｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，２４３（３）：３９０－４００）。ＴＧＦ－β又はＣＴＧＦによる治療は、線維症の指標である小結節の形成を誘導する。抗αｖβ８インテグリン抗体による治療は、アイソタイプ対照による治療と比較して、小結節数を有意に減少させる。
本開示は、一般に、本明細書に記載されるように、必要とする個体において、腎疾患、例えば、糖尿病性腎症（ＤＮ）、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、急性腎疾患、高血圧関連腎疾患、高血糖関連腎疾患、腎線維症、炎症関連腎疾患、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、自己免疫関連腎線維症（例えば、ループス腎炎）及び腎移植後の線維症などを治療するための抗体、組成物及び方法を特徴とする。特に、抗体、組成物及び方法は、ＣＫＤなどの腎疾患に関連する腎線維症を治療することを対象とする。
本開示は、ＣＫＤなどの腎疾患を有する対象における腎組織の線維症を改善、減弱化、抑止、低減、又は緩和するための治療方法を対象とする。一般に、線維症は、腎臓などの臓器における過剰な線維性結合組織（瘢痕組織）の形成を指し、これは、腎臓結合組織の肥厚及び瘢痕化を引き起こす。上記のように、本方法は、罹患腎臓細胞及び腎組織、特に、ＣＫＤなどの腎臓疾患を有する対象の腎上皮細胞及び腎上皮組織で高度に発現されることが見出されたαｖβ８インテグリンに特異的に結合する抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片の投与を含む。抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、線維性腎細胞及び腎組織上のαｖβ８インテグリンに選択的に結合し、それによって、腎細胞表面における潜在型ＴＧＦ－β（ＬＡＰ－ＴＧＦ－β）と腎臓発現αｖβ８インテグリンの相互作用を遮断、中和、又は阻害する。抗αｖβ８インテグリン抗体結合は、αｖβ８インテグリン／ＬＡＰ ＴＧＦ－β相互作用を妨害し、これは、次に、腎臓細胞表面でのＴＧＦ－βの活性化を遮断又は防止し、その結果、活性ＴＧＦ－βは産生されず、したがって、ヒト又は非ヒト対象などの対象の腎組織における腎線維症に関連するその細胞効果を発揮することができない。本方法は、例えば、腎疾患、例えばＣＫＤにおける活性ＴＧＦ－βによって誘発される有害な線維症を低減、減弱化、抑止、又は減少させることによって、特に腎疾患の治療において治療的利益を提供する。
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、ＬＡＰ ＴＧＦ－βのαｖβ８インテグリン受容体に直接結合することによって、αｖβ８インテグリンが高度に発現する腎細胞及び腎組織におけるＴＧＦ－βの局所的活性化を低減する。ＴＧＦ－βの活性化をその潜在型から遮断するαｖβ８インテグリンへの抗αｖβ８インテグリン抗体の結合はまた、潜在型ＴＧＦ－βを切断し、成熟した活性ＴＧＦ－βペプチドを放出するプロテアーゼの動員を低減又は防止し得る。これは、抗αｖβ８インテグリン抗体が、腎細胞表面のαｖβ８インテグリンの、細胞マトリックスに関連する潜在型ＴＧＦ－βへの結合を阻害し、それによって、以下に記載されるように、ＴＧＦ－βのその後の活性化を阻害することによって起こり得る。
形質転換成長因子ベータ（β）、（ＴＧＦ－β）及びそのαｖβ８インテグリンとの相互作用
細胞において、ＴＧＦ－βサイトカインは、合成され、「潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）」及び「潜在型ＴＧＦβ結合タンパク質（ＬＴＢＰ）」に複合体化される不活性前駆体として細胞外マトリックスに分泌される。ＴＧＦ－βの潜在型は、その受容体、例えばαｖβ８インテグリンに結合するために活性化されなければならず、生物学的機能を有していなければならない（Ｊ．Ｊ．Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１ａ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，３６，４７－５４）。ＬＡＰは活性ＴＧＦ－βから切断されるが、ＴＧＦ－βがその受容体と結合するのを妨げる構造で非共有結合的に付着したままである。ＴＧＦ－βの活性化因子には、活性ＴＧＦ－βがその受容体と結合するのを可能にする、潜在複合体を変化させる様々なプロテアーゼ及び細胞表面分子が含まれる。推定ＴＧＦ－β活性化因子としては、ＬＡＰを分解するプロテアーゼ、トロンボスポンジン１、活性酸素種（ＲＯＳ）及びインテグリンが挙げられるが、これらに限定されない。したがって、潜在型複合体の活性化はＴＧＦ－β機能の調節に必須であり、ＴＧＦ－β活性化因子は、潜在型ＴＧＦ－βの活性ＴＧＦ－βへの変換における律速段階である。例として、ヒトＣＫＤ腎臓（ｎ＝４）において、潜在型ＴＧＦ－βの量は、活性ＴＧＦ－βの５３倍以上である。
線維症は、ヒト患者における慢性腎疾患（ＣＫＤ）進行の重要な駆動因子であり、腎機能障害及び腎障害と相関する。ＴＧＦ－βは、ＣＫＤにおける腎線維症の発症に関与する。腎臓のＴＧＦ－βは、対照腎臓と比べて、ヒト線維性ＣＫＤにおいて上方制御される（Ｄ．Ｓ．Ｇｏｕｍｅｎｏｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．，１７：２１４５－２１５２）。尿中ＴＧＦ－βは、２型糖尿病における腎障害（アルブミン尿症）と相関することが示された。（Ｍａｒｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，２２７（１１）：９４３－９５６）。
αｖ－インテグリン膜貫通受容体、例えば、αｖβ８は、細胞外マトリックス生理学の調節及びＴＧＦ－βの活性化において重要な役割を果たしている。簡潔に記載すると、αｖ－インテグリンは、潜在型ＴＧＦ－βの活性化を媒介する。特に、αｖβ８は、ＴＧＦ－β結合潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）のＲＧＤ（アルギニン－グリシン－アスパラギン酸）モチーフに結合し、それによって組織中の遊離及び活性ＴＧＦ－βレベルを調節する（Ｍｕ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１５７（３）：４９３－５０７；Ａｒａｙａ，Ｊ．，２００６，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１６９（２）：４０５－４１５）。
他のαｖβインテグリンの活性とは異なり、αｖβ８インテグリンは構造的に活性であり、ＬＡＰ ＴＧＦ－βの活性化（ＬＡＰ ＴＧＦ－βのαｖβ８インテグリンへの結合後の活性ＴＧＦ－βサイトカインの放出による）を、細胞質アクチンへの固定（牽引効果なし）によってではなく、ＭＭＰ－１４プロテアーゼによる切断によって媒介する。αｖβ８インテグリン発現は腎組織に多く、αｖβ８インテグリンをコードする遺伝子は、以下に例示するように、例えば、膵臓、肝臓、胆嚢、唾液腺、食道、胃、腸、肺、心臓、又は膀胱などの他の組織と比較して、腎組織で高度に発現する。
本明細書に記載されるように、インビトロ及びインビボの両研究で、腎臓上皮細胞におけるαｖβ８インテグリンの高レベルの発現がＴＧＦ－βの活性化に起因する高レベルの腎組織線維症と直接相関していることが示されている。高レベルのＴＧＦ－β活性は、腎細胞及び腎組織に対する損傷を誘導及び増加させ、線維症を引き起こし、したがって、ＣＫＤなどの腎疾患の重篤度を高める。本明細書に記載される抗αｖβ８インテグリン抗体は、腎臓細胞に発現するαｖβ８インテグリンに特異的に結合し、潜在型ＴＧＦ－β（ＬＡＰ ＴＧＦ－β）へのαｖβ８インテグリンの結合を遮断及び／又は低減し、ＴＧＦ－βの活性型の放出を阻害することによって、腎細胞及び腎組織におけるＴＧＦ－βの破壊的活性及びその結果として生じる線維症を阻害する。この特異的抗αｖβ８インテグリン抗体の作用は、例えば、ＴＧＦ－βの細胞内シグナル伝達カスケードを阻害することによって、ＴＧＦ－β活性がもたらす腎細胞及び腎組織の破壊に対する治療として役立つ。本明細書に開示及び例示される方法によれば、腎臓においてαｖβ８インテグリンに特異的に結合する抗体を提供することによってαｖβ８インテグリン活性を遮断することにより、腎臓に局在するＴＧＦ－βの活性化が大きく低減され、それによって、罹患腎臓における腎細胞及び腎組織の損傷、すなわち腎線維症が特異的に低減される。
腎細胞上のαｖβ８インテグリン受容体を特異的に標的とする抗αｖβ８インテグリン抗体の使用は、本明細書に記載されるように、αｖβ８インテグリンが正常対象の腎臓において優先的に発現され、またαｖβ８インテグリンの発現が線維性腎疾患を有する対象、例えば、ＣＫＤを有するヒト患者の腎臓の腎上皮細胞（例えば、足細胞及び間質細管）において顕著に増加し局在化されるという発見から生じた。上記のように、本開示は、αｖβ８タンパク質がＣＫＤを有するヒト患者の腎臓において高度に上方制御されるという驚くべき知見を提供する。さらに、腎臓におけるＴＧＦ－βの潜在活性型へのαｖβ８インテグリンの特異的結合によるＴＧＦ－βの活性化は、腎組織における破壊的線維症の直接的原因である。これらの発見は、αｖβ８インテグリンが主に腎臓のメサンギウム細胞に存在し、それにもかかわらずメサンギウム細胞αｖβ８インテグリンを発現しないトランスジェニック動物は内皮細胞アポトーシスを引き起こす活性ＴＧＦ－βを保有していたという先行技術の発見と矛盾する（Ｓ．Ｋｈａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１７８（２）：６０９－６２０）。対照的に、本明細書に記載及び例示されるように、本方法は、活性ＴＧＦ－βが、腎臓細胞膜で放出されず、且つＣＫＤなどの腎疾患に罹患した対象の腎細胞及び腎組織に線維症（及び／又はさらなる損傷）を引き起こすことができないように、αｖβ８インテグリンのＬＡＰ－ＴＧＦ－βとの相互作用及びＬＡＰ－ＴＧＦ－βへの結合の阻害及び遮断することを含む。
αｖβ８インテグリンに対する特異的抗体
本開示は、αｖβ８インテグリン、特に、腎細胞及び腎組織に、並びに線維性腎細胞及び腎組織において発現しるαｖβ８インテグリンを指向し、特異的に標的とし、それに結合する抗体の開発及び使用を包含する。これらの抗体又はその抗原結合断片は、治療を必要とする対象の腎疾患、特に、慢性腎疾患（ＣＫＤ）などの腎疾患における腎線維症を治療する方法において非常に有益である。実施形態では、対象は、腎細胞及び腎組織への損傷又は傷害に関連し、本明細書に記載されるような腎組織の線維症、又は急性、慢性、若しくは末期の腎疾患を引き起こす病態を有し得る。病因にかかわらず腎線維症及び線維症を伴う腎疾患を有する対象を本明細書に記載される抗体、組成物及び方法を使用して行う治療は、必要とする対象、特にＣＫＤ又はＤＮなどの腎疾患に罹患している患者に、重要な医学的及び臨床的利益を提供する。一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体は、ヒト化抗体である。
一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体は、ヒトαｖβ８インテグリンを特異的に標的とし、それに結合する、上記の「ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５」抗体と呼ばれるヒト化抗体である。特定の実施形態では、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体は、腎臓で発現し、線維性腎臓で高度に発現するヒトαｖβ８インテグリンを特異的に標的とし、それに結合する。一実施形態では、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体は、他のインテグリンに対する抗体と交差反応しない。
別の実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体は、上記の「Ｂ５－１５」抗αｖβ８インテグリン抗体と呼ばれる、ヒト化及び親和性最適化抗体であり、これはヒトαｖβ８インテグリンを特異的に標的とし、ヒトαｖβ８インテグリンに対する高い親和性結合を示す。最適化されたＢ５－１５抗体は、ＩｇＧ１サブタイプのものであり、ヒトαｖβ８インテグリンに特異的且つ選択的に結合し、ヒトαｖβ８インテグリンとＴＧＦ－β潜在型との結合相互作用又は会合を遮断又は阻害することによって機能的活性を示し、したがって、その潜在型からの活性ＴＧＦ－βの放出によるＴＧＦ－βの活性化を遮断又は阻害する。本明細書に示されるように（図４）、Ｂ５－１５は、実施例１に記載されるＣＤＲグラフトＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体と比較して、αｖβ８インテグリンへの結合に関し、良好なプロファイルを有する。
Ｂ５－１５抗体は、αｖβ８インテグリンのＬＡＰ－ＴＧＦ－βへの結合を遮断し、ＴＧＦ－βの活性化及びＴＧＦ－βによる細胞内シグナル伝達を遮断し、その結果として、腎細胞及び腎組織を線維症を誘導し悪化させ得る活性ＴＧＦ－βペプチドの損傷効果から保護する。理論に拘束されることを望むものではないが、Ｂ５－１５抗体はαｖβ８インテグリンをアロステリックに修飾し、潜在性ＴＧＦ－β（ＬＡＰ）結合ドメインに対するその親和性を低下させ、これにより、ＴＧＦ－βの潜在性形態からの活性化が妨げられ、活性ＴＧＦ－βペプチドは放出されない。したがって、抗体はαｖβ８インテグリンの構造変化を誘導し、その結果、αｖβ８は潜在型ＴＧＦ－βにもはや結合することはできず、その活性化を促進することはできない（国際公開第２０１５／１９５８３５号パンフレット）。本開示まで、腎線維症における抗αｖβ８インテグリン抗体、例えばＢ５－１５抗体の結合特性及び機能的活性は不明であった。
実施形態では、本明細書に開示される抗αｖβ８インテグリン抗体は、腎細胞及び腎組織、特に、腎疾患、例えばＣＫＤ又はＤＮを有する個体において見出されるような、罹患した、損傷した、且つ／又は線維性の腎組織で発現が上昇しているαｖβ８インテグリン受容体に特異的に結合する。これらの抗体を含む組成物、並びに腎疾患及び腎症、特に線維症を伴う腎疾患を治療する方法におけるそれらの使用は、本開示に包含される。記載される抗体はヒトαｖβ８インテグリンにのみ結合し、その他のインテグリンとは交差反応しない。
記載される抗体はまた、潜在型ＴＧＦ－βのαｖβ８インテグリン受容体を選択的に標的とし、それに特異的に結合し、サイトカイン自体を直接標的とせず、したがって、腎疾患、特に線維症を伴う腎疾患を治療するより安全な治療法を提供するので、有利である。さらに、ＴＧＦ－β１アイソフォームの活性の阻害、遮断、又は中和は、このＴＧＦ－βアイソフォームがＴＧＦ－βの疾患関連活性の大部分を占めると一般に考えられるので、特に有利である。腎臓におけるＴＧＦ－β１アイソフォームの出現は、腎線維症及び腎臓疾患におけるＴＧＦ－β１の活性型の関与をもたらす可能性が高い。
ＴＧＦ－βを直接、標的とすることは、ＴＧＦ－β活性によって引き起こされる病変を阻害又は予防するための１つの方法であり得るが、サイトカインを直接標的とすることから生じるＴＧＦ－βの作用の一般的な中和及び／又は慢性的な阻害は、多様な細胞機能及び経路の調節におけるＴＧＦ－βの関与を考慮すると、治療された個体に重大な副作用をもたらし得る。したがって、他の細胞、組織及び臓器におけるインビボＴＧＦ－β活性化を損なうことなく、腎細胞及び腎組織におけるαｖβ８インテグリン／ＬＡＰ ＴＧＦ－β相互作用を遮断、阻害、中和、及びしたがって効果的に防ぐために、又は他の生理学的目的のために、本明細書において提供される抗αｖβ８インテグリン抗体を使用する方法は、ＣＫＤ又はＤＮなどの腎疾患及び線維症を治療するための有益な治療ツール及び治療方法を提供する。有利には、高レベルのαｖβ８インテグリンを発現する腎細胞及び腎組織に対する本明細書に記載の抗αｖβ８抗体の特異性は、自己免疫応答、急速に発症するアテローム性動脈硬化症、及び癌の発生などの有害作用を減少させる。有害作用はｐａｎ－ＴＧＦ－β阻害で見られ、したがって、ＴＧＦ－β活性化に影響するαｖβ８インテグリンを特異的に標的とすることにより、有害事象が低減される可能性が高い。
別の利点として、本明細書に記載される抗αｖβ８インテグリン抗体は、血液脳関門（ＢＢＢ）を横断せず、したがって、脳の細胞及び組織に発現するαｖβ８インテグリンに結合することはできない。
記載される抗αｖβ８抗体は、腎上皮細胞発現αｖβ８インテグリンのＴＧＦ－βの潜在型への結合を特異的に遮断し、したがって、活性ＴＧＦ－βの腎組織における放出によって引き起こされる線維症を遮断し、これは、糸球体濾過関門の変化、糸球体硬化症及び線維症、並びに永続的な腎機能障害をもたらす尿細管の変性を誘導する腎疾患の糸球体及び尿細管間質の病変に中心的役割を果たすことが見出されている。したがって、本方法は、ＴＧＦ－β自体を標的とするのではなく、損傷した腎臓及び／又は腎疾患を有する個体腎細胞の表面に高度に発現する標的受容体、すなわちαｖβ８インテグリンに特異的に結合することによって、腎疾患、例えば、有害な腎組織線維症を特徴とする慢性腎疾患又は糖尿病性腎症を治療する特異的抗αｖβ８インテグリン抗体の使用を含む。本明細書で提供される特異的抗αｖβ８インテグリン抗体によるαｖβ８インテグリンの標的化及び結合は、腎組織線維症を引き起こし、腎疾患における腎組織へのさらなる損傷を引き起こす主な原因であるＴＧＦ－βサイトカイン活性を無効にし、効果的に防止する。
本明細書に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体は、抗原結合部位又はエピトープを含有するαｖβ８インテグリン受容体タンパク質の１つ又は複数の領域に特異的に結合する。一実施形態では、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体又はＢ５－１５抗体などの抗αｖβ８インテグリン抗体によって結合されるαｖβ８インテグリンのエピトープは、αｖβ８インテグリン及びＬＡＰ－ＴＧＦ－β結合部位から約２８Ａ（オングストローム）離れた領域にマッピングされた。（Ｓ．Ｍｉｎａｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．，６（２４１）：２４１ｒｅ７９．Ｄｏｉ：１０．１１２６：ｓｃｉｔｒａｎｓｌｍｅｄ．３００８０７４）。
一実施形態では、αｖβ８インテグリンへの結合に対し、本明細書に記載されるように、以下の３つの軽鎖ＣＤＲ：ＶＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（配列番号４）、ＶＬＣＤＲ２：ＹＡＮＲＬＶＤ（配列番号５）、及びＶＬＣＤＲ３：ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（配列番号６）を含む軽鎖可変領域と、以下の３つの重鎖ＣＤＲ：ＶＨＣＤＲ１：ＲＹＷＭＳ（配列番号１）、ＶＨＣＤＲ２：ＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬ（配列番号２）、及びＶＨＣＤＲ３：ＬＩＴＴＥＤＹ（配列番号３）を含む重鎖可変領域とを有する抗体と競合する抗体が企図される。抗体は、モノクローナル、キメラ、ヒト化などであり得、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４であり得る。特定の実施形態では、抗体はＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体である。
別の実施形態では、αｖβ８インテグリンへの結合に対し、本明細書に記載されるように、以下の３つの軽鎖ＣＤＲ：ＶＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＤＩＮＫＹＬＳ（配列番号１０）、ＶＬＣＤＲ２：ＹＡＮＲＬＶＤ（配列番号５）、及びＶＬＣＤＲ３：ＬＱＹＤＶＦＰＹＴ（配列番号１１）を含む軽鎖可変領域と、以下の３つの重鎖ＣＤＲ：ＶＨＣＤＲ１：ＲＳＷＩＳ（配列番号９）、ＶＨＣＤＲ２：ＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬ（配列番号２）、及びＶＨＣＤＲ３：ＬＩＴＴＥＤＹ（配列番号３）を含む重鎖可変領域とを有する抗体と競合する抗体が企図される。抗体は、モノクローナル、キメラ、ヒト化などであり得、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４であり得る。特定の実施形態では、抗体はＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体である。
記載される抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチド、記載される抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片をコードし発現するのに適した、原核生物、真核生物、又は哺乳動物ベクター、及び宿主細胞（原核生物、真核生物、又は哺乳動物）もまた提供される。
他の態様では、記載される方法及び組成物に有用な抗体としては、免疫グロブリン、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの異なるαｖβ８インテグリンエピトープ結合断片から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、キメラ抗体、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、所望の生物学的活性を示す抗体断片（例えば、抗原結合部分）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、細胞内発現抗体、及び上記のいずれかの抗原又はエピトープ結合断片が挙げられる。特に、好適な抗体としては、免疫グロブリン分子と、例えば、少なくとも１つの抗原結合部位を含む分子などの免疫グロブリン分子の免疫学的に且つ機能的に活性な断片とが挙げられる。
抗αｖβ８インテグリン抗体は、モノクローナルヒト、ヒト化又はキメラ抗αｖβ８抗体を包含する。本明細書に記載の組成物及び方法で使用される抗αｖβ８抗体は、ネイキッド抗体、免疫複合体又は融合タンパク質であり得る。特定の実施形態では、抗αｖβ８抗体は、ＩｇＧアイソタイプ、特にＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４ヒトアイソタイプ、又はヒト集団で見られる任意のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４対立遺伝子の、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体である。ヒトＩｇＧクラスの抗体は、血清中の長い半減期や様々なエフェクター機能を媒介する能力などの有利な機能的特性を有する（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｐｔｅｒ １（１９９５））。ヒトＩｇＧクラス抗体は、さらに以下のサブクラスに分類される：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４。一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラス又はアイソタイプのものである。ヒトＩｇＧ１サブクラスは、ヒトにおいて高いＡＤＣＣ活性及びＣＤＣ活性を有する（Ｃｌａｒｋ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６５，８８（１９９７））。一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体は、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体などの親抗体由来のヒトフレームワーク領域及びＣＤＲを含有するヒト化抗体である。別の実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体は、抗原に対する特異性、機能、安定性、半減期／寿命などを含む、１つ以上の抗体特性を改善するために最適化されたアミノ酸配列を含む。
抗αｖβ８インテグリン抗体の投与を含む治療方法
記載される方法は、腎疾患、特に線維性腎疾患、特に、腎機能がある期間にわたって低下し、典型的には腎組織の広範な線維化が起こり、時間とともに悪化する慢性腎疾患（ＣＫＤ）の治療を提供する。一般に、ＣＫＤの５つのステージは、正常な腎機能（推算糸球体濾過量（ＧＦＲ）≧９０ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２）及び持続性（≧３か月）タンパク尿を伴う腎障害を特徴とするステージ１；持続性（≧３か月）タンパク尿の有無にかかわらず、軽度の腎機能喪失（推算ＧＦＲ ６０～８９ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２）を伴う腎障害を特徴とするステージ２；軽度から重度の腎機能喪失（推算ＧＦＲ ３０～５９ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２）を特徴とするステージ３；重度の腎機能喪失（推算ＧＦＲ１５～２９ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２）を特徴とするステージ４；及び生存のために透析又は移植を必要とする腎不全を特徴とするステージ５、である。ステージ５のＣＫＤは、ＥＳＲＤ（推算ＧＦＲ＜１５ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２）としても知られる。糸球体濾過量（ＧＦＲ）は、ミリリットル／分（ｍＬ／ｍｉｎ）で測定され、腎臓が血液から老廃物及び余分な流体を濾過する速度を指す。
抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片の投与を含む記載の方法はまた、例えば、糖尿病性腎症（ＤＮ）、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、急性腎疾患、高血圧関連腎疾患、高血糖関連腎疾患、腎線維症、炎症関連腎疾患、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、自己免疫関連腎線維症（例えば、ループス腎炎）及び腎移植後の線維症などによって引き起こされる腎細胞及び腎組織の損傷又は傷害に関連する腎疾患及び／又は腎線維症の治療に有用である。腎臓における一般的且つ局所的な組織炎症は、糖尿病性腎症の病態生理及び進行に作用する。典型的には糖尿病性腎症に付随する高血糖症及び高血圧症の病態はさらに、糸球体性高血圧、腎細胞及び腎組織に対する機械的ストレス、足細胞傷害及び脱離、糸球体の炎症、並びに腎尿細管の炎症をもたらし得、その全てが、腎臓、特に腎臓糸球体及び尿細管における線維化（瘢痕化）をもたらす。
組み合わせ治療
別の実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体の１つ又は複数が、腎疾患又はＣＫＤを有する患者に提供されるような別の薬物、医薬、又は治療薬若しくは治療化合物と併せて投与され得る。頻繁に見られるように、腎疾患又はＣＫＤを有する個体はまた、高血圧を有する。血圧を下げる医薬及び薬物は、血圧を目標範囲に維持し、さらなる腎臓の損傷を遅延又は止めるのに役立つ。一般的な血圧薬としては、アセチルコリンエステラーゼ（ＡＣＥ）阻害剤、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、ベータ遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、直接的レニン阻害剤、利尿剤及び血管拡張剤が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＫＤの症状及び合併症を治療するために投与される医薬及び薬物としては、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、（組換えヒトエリスロポエチン、ｒｈＥＰＯ）、電解質不均衡矯正薬、利尿剤、ＡＣＥ阻害剤及びＡＲＢ、並びに鉄療法及びビタミンＤが挙げられるが、これらに限定されない。
併用療法では、１つ又は複数の抗αｖβ８インテグリン抗体は、任意選択的に、他の薬物又は医薬と同じ医薬組成物に含めてもよい。或いは、抗αｖβ８インテグリン抗体は、別個の医薬組成物であってもよく、１つ又は複数の他の薬物又は医薬と同時に又は異なる時点で投与してもよい。本明細書に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体、又は抗αｖβ８インテグリン抗体を含む医薬組成物は、他の薬物若しくは医薬、又はその薬物若しくは医薬を含む医薬組成物の投与の前、同時、又は後に投与するのに好適である。特定の例では、対象への１つ又は複数の抗αｖβ８インテグリン抗体の投与は、別個に又は別個の組成物で提供される、別の又はコンパニオン薬物又は医薬の投与時間と重なる。
医薬組成物及び製剤
本開示は、１つ又は複数の記載される抗αｖβ８インテグリン抗体、並びに１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤、担体及び／又は希釈剤を含む医薬組成物及び製剤の使用を包含する。特定の実施形態では、組成物は、１つ又は複数の他の生物学的に活性な薬剤（例えば、プロテアーゼ阻害剤）を含み得る。
賦形剤、担体及び希釈剤の非限定的な例としては、ビヒクル、液体、緩衝剤、等張剤、添加剤、安定剤、保存剤、可溶化剤、界面活性剤、乳化剤、湿潤剤、アジュバントなどが挙げられる。組成物は、液体（例えば、水、エタノール）；様々な緩衝剤成分の希釈液（例えば、トリスＨＣｌ、リン酸塩、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液）、ｐＨ及びイオン強度；界面活性剤及び可溶化剤（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０）；抗酸化剤（例えば、メチオニン、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）；保存剤（例えば、チメロソール（Ｔｈｉｍｅｒｏｓｏｌ）、ベンジルアルコール、ｍ－クレゾール）；並びに増量物質（例えば、ラクトース、マンニトール、スクロース）を含有することができる。医薬組成物の製剤中の賦形剤、希釈剤、及び担体の使用は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐａｇｅｓ １４３５－１７１２，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ（１９９０））を参照されたい。この文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
非限定的な例として、担体には、希釈剤、ビヒクル及びアジュバント、並びにインプラント担体、及び活性成分と反応しない不活性で且つ無毒の固体又は液体の充填剤とカプセル化材料が含まれ得る。担体の非限定的例としては、リン酸緩衝食塩水、生理学的食塩水、水、及びエマルション（例えば、油／水エマルション）が挙げられる。担体は、例えば、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、植物油、及びそれらの混合物を含有する、溶媒又は分散媒体であり得る。
非経口投与のための１つ又は複数の抗αｖβ８インテグリン抗体を含む製剤は、例えば、液体溶液又は懸濁液として、注射前に液体媒体中で可溶化又は懸濁するのに適した固体形態として、又はエマルションとして調製され得る。滅菌注射液及び懸濁液は、好適な希釈剤、担体、溶媒（例えば、緩衝水溶液、リンゲル液、等張性塩化ナトリウム溶液）、分散剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤などを使用して、当該技術分野で知られた技術に従って製剤化することができる。滅菌不揮発性油、脂肪エステル、ポリオール及び／又はその他の不活性成分もまた使用することができる。さらに、非経口投与のための製剤は、水性滅菌注射液を含むことができ、それは抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、製剤を意図される対象の血液と等張にする溶質、並びに懸濁剤及び増粘剤を含有し得る水性及び非水性滅菌懸濁液を含有し得る。注射液剤及び懸濁剤は、滅菌散剤、顆粒、及び錠剤から調製してもよい。
実施形態は、腎疾患の治療薬として有用な抗αｖβ８インテグリン抗体の無菌医薬製剤を含む。このような製剤は、αＶβ８インテグリンへのリガンドの結合を阻害し、これにより、例えば、組織αＶβ８が異常に増加した病態を効果的に治療するであろう。抗αｖβ８インテグリン抗体は、αＶβ８インテグリン活性を強力に阻害する適切な親和性を有し、且つヒトにおける低頻度の投与を可能にする適切な作用の持続時間を有し得る。長時間にわたる作用の持続は、皮下又は筋肉内注射などの代替的非経口経路による低頻度で、しかもより好都合な投与スケジュールを可能にする。
無菌製剤は、例えば、抗体の凍結乾燥及び再構成の前又は後に無菌濾過膜で濾過することによって作ることができる。抗体は、通常、凍結乾燥形態又は溶液で保存される。治療用抗体組成物は一般に、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって穿刺可能な栓などの、製剤の回収を可能にするアダプターを有する静脈内溶液バッグ又はバイアル中に入れられる。
治療的使用のために、例えば、腎疾患、特に、腎線維症の治療において、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、患者の要求、患者の身体の健康及び特徴、並びに治療される病態の重症度、例えば、ＣＫＤのステージに応じた用量で投与され得る。例えば、用量は、特定の患者において診断される腎疾患及び／又は線維症のタイプ及びステージを考慮して経験的に決定することができる。本組成物及び方法との関連で、患者に投与される用量は、所与の期間にわたって患者に有益な治療応答をもたらすのに十分なものであるべきである。用量のサイズはまた、特定の患者において別の治療剤と組み合わせた抗体用量及び／又は用量の投与に伴う有害な副作用の存在、性質、及び程度によって決定される。特定の患者及び状況に対する適切な用量の決定は、医師の技能の範囲内である。一般に、治療は治療薬の最適用量よりも少ない、より少ない用量を用いて開始される。その後、最適な有効性などの有効性が達成されるまで、用量を少しずつ増加させる。便宜のためや必要に応じて、１日総投与量はその日に小分けして投与してもよい。決定された又は最適な用量による治療は、短期間（例えば、数時間又は数日間）、又はより長い期間（例えば、数日間、数週間、数か月間、数年間）にわたって継続され得る。
検出方法
いくつかの実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体が検出のために、例えば、画像化のために、又はインビボ、エクスビボ、若しくはインビトロでのαｖβ８インテグリンの存在を決定するために使用される。このような実施形態では、抗体は、検出可能な部分で直接的又は間接的に標識される。したがって、いくつかの実施形態では、対象から得られた生体試料中のαｖβ８インテグリンの存在を決定するための方法（インビボ、エクスビボ、又はインビトロ）が提供され、この方法は、生体試料を標識された本明細書に記載の標識抗αｖβ８インテグリン抗体と接触させ、αｖβ８インテグリンに結合した標識抗体の存在を検出し、これにより試料中のαｖβ８インテグリンの存在を決定することを含む。このような方法は、腎疾患、又は腎線維症、炎症若しくはＣＫＤなどの腎関連病態を診断するために使用され得る。
一実施形態では、抗体は、「エフェクター」部分又は分子に結合し、この部分又は分子としては、限定はされないが、放射性標識若しくは蛍光標識などの標識部分、又は治療部分若しくは分子であり得る。一実施形態では、エフェクター部分又は分子として、抗癌剤、毒素、細胞傷害剤、放射性薬剤、サイトカイン、第２の抗体、又は酵素を挙げ得るが、これらに限定されない。別の実施形態では、治療部分又は分子の活性は、抗体に結合することによって調節される。別の実施形態では、抗体は、プロドラッグを細胞傷害性薬剤に変換する酵素に連結される。
抗体又はその抗原結合断片を含む免疫複合体を使用して、エフェクター部分又は分子を、その表面にαｖβ８インテグリンを発現する細胞、特に罹患している腎細胞及び腎組織、例えばＣＫＤ腎細胞及び腎組織に対し標的化することができる。エフェクター分子であり得る細胞傷害剤の非限定的な例としては、放射性同位体、リシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、タキソール、臭化エチジウム、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシンＤ、ジフテリア毒素、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、ステロイド、グルココルチコイド及び他の化学療法剤が挙げられる。検出可能なマーカーとしては、限定はされないが、放射性同位体、蛍光化合物、生物発光若しくは化学発光化合物、金属キレート剤、又は酵素が挙げられる。
一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、それ自体で（複合体化されていない）、又は検出可能な標識若しくはエフェクター部分、例えば腎疾患若しくはＣＫＤに対する好適な治療薬若しくは治療剤などの補助的治療薬と複合体化することにより、それを必要とする個体の腎臓、特に罹患した腎臓又はＣＫＤ腎臓におけるＴＧＦ－β活性化を低減、抑止、減弱化、減少、遮断又は阻害する治療剤として使用される。
「検出可能な標識又は部分」は、物理的又は化学的手段、例えば、分光学的、放射線学的、光化学的、生化学的、免疫化学的手段などによって検出可能な診断薬又は成分であり得る。例として、検出可能な標識には、放射性標識（例えば、１１１Ｉｎ、９９ｍＴｃ、１３１Ｉ、６７Ｇａ）、及びその他のＦＤＡが承認したイメージング剤が含まれる。さらなる標識としては、３２Ｐ、蛍光染料、高電子密度試薬、酵素、ビオチン、ジゴキシゲニン、又は例えば放射性標識を標的化剤に組み込むことによって検出可能にすることができるハプテン及びタンパク質若しくは他の分子を挙げることができる。例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｉｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９９６，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏに記載されている方法を使用することによって、当該技術分野で知られる核酸又はナノ担体を標識に結合させる方法を使用することができる。
「標識された」又は「タグ付けされた」抗体又は薬剤は、リンカー若しくは化学結合によって共有結合的に、又はイオン、ファンデルワールス、静電若しくは水素結合によって非共有結合的に、抗体、その抗原結合断片又は薬剤の存在の検出を、抗体又は薬剤に結合した標識を検出することによって可能にする標識に結合したものである。検出可能な治療剤を抗体に結合させるための技術は、例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３－５３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５－５０６（１９８５）；及びＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９－５８（１９８２）に記載されているように、当業者により知られており、また実施されている。
投与方法
本明細書に記載される投与レジメンに加えて、抗αｖβ８インテグリン抗体若しくはその抗原結合断片、又は抗αｖβ８インテグリン抗体若しくはその抗原結合断片を含む医薬組成物又は製剤は、タンパク質又は抗体などの生物学的薬物を対象に投与及び／又は送達するのに好適な方法及び経路で、対象に投与することができる。一般に、好適な生物学的送達又は投与方法は、非経口投与方法又は経路を包含する。このような送達方法としては、限定はされないが、皮下（ＳＣ）送達、皮下注射又は輸液、例えば静脈内輸液若しくは注射又は静注などの静脈内（ＩＶ）送達が挙げられる。その他の送達及び投与方法又はレジメンとしては、限定はされないが、関節内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、直腸内、経皮又はクモ膜下腔内が挙げることができる。特定の実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体は、例えば、ＩＶ輸液又はボーラスＩＶ注射などの静脈内投与によって、対象に提供される。別の特定の実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体は、単回皮下注射などの皮下注射によって、対象に提供される。
抗αｖβ８インテグリン抗体は、長期投与レジメンで投与することができる。抗体は、ある期間又は所定の期間投与された後、投与されない期間が続くことがある。投与レジメン又は投与サイクルはまた、繰り返され得る。いくつかの実施形態では、治療（例えば、抗αｖβ８インテグリン抗体の投与）には、第１の用量の投与、その後の、例えば複数日を含む期間の、第２の用量及び／又は１つ又は複数のその後の維持用量の投与を含む。後続用量又は維持用量は、最初の用量、第２の用量、又はその後の用量の後、定期的な間隔、例えば、１週、２週、３週、若しくはそれ以上、例えば４週、５週、６週、７週、８週、９週間、１０、１１週、１２週などの週間隔で、又は月間隔、若しくは年間隔などのより長い間隔で投与され得る。
実行可能であれば、抗αｖβ８インテグリン抗体は、疾患部位又はその近傍に例えば輸液又は注射などの直接送達によって投与し得ることもまた想定される。腎臓若しくは腎組織内への注射、又はその近傍への注射が有用であり得る。また、抗αｖβ８インテグリン抗体は、デポーの移植によって投与し得ることも想定され、デポーは腎組織などの作用の標的部位で抗体を放出する。抗αｖβ８インテグリン抗体の投与又は送達の代替方法としては、吸入（例えば、吸入器又はエアロゾルスプレー）、鼻腔内送達、又は経皮送達（例えば、皮膚上のパッチによる）を挙げることができる。さらに、投与は、浸透圧ポンプ（例えば、アルゼットポンプ）又はミニポンプ（例えば、アルゼットミニ浸透圧ポンプ）によって行うことができ、これによって、予め定められた期間にわたり、抗αｖβ８インテグリン抗体、又はその医薬組成物の制御された連続的及び／又は徐放性送達が可能になる。浸透圧ポンプ又はミニポンプはまた、標的部位として、腎臓若しくは腎組織に、又はその近傍に、皮下移植することができる。
キット
また、線維症を伴う腎疾患、例えばＣＫＤ又はＤＮなどの腎疾患の治療のためのキットが提供される。一実施形態では、キットには、有効量の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を含有する組成物、例えば治療用組成物が含まれる。一実施形態では、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は単位剤形とされる。
いくつかの実施形態では、キットは、抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を例えば水性又は凍結乾燥形態で含む滅菌容器を含む。抗体が凍結乾燥形態である場合、キットは、投与、例えば静脈内投与に好適な抗体を含有する溶液を調製するために、乾燥抗体と混合するための適切な希釈剤、賦形剤、又はビヒクルを含む容器を含み得る。そのような容器は、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、パウチ、ブリスターパック又は当技術分野において知られた他の好適な容器形態であってよい。そのような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔、又は、例えば水性若しくは乾燥形態で薬剤を保持するのに好適な他の材料から作製することができる。容器は、損傷又は破損から保護するための箱に入れることができる。抗体希釈用及び／又は投与用の１つ又は複数のシリンジをキットに含めることができる。
キットは、抗αｖβ８インテグリン抗体、又は抗体を含有する組成物を、腎疾患、線維性腎疾患、例えばＣＫＤ又はＤＮを有する対象に投与するための説明書をさらに提供し得る。説明書は一般に、腎疾患、線維性腎疾患、例えばＣＫＤ又はＤＮの治療のための抗体又は組成物の使用についての情報を含む。他の実施形態では、説明書は、以下の１つ以上を含む：治療抗体の説明；腎疾患、線維性腎疾患、例えばＣＫＤ若しくはＤＮ、又はそれらの症状の治療のための投薬スケジュール及び投与；投薬情報；注意；警告；適応症；禁忌；過剰接種情報；副作用；動物薬理学；臨床試験；及び／又は参考文献。説明は、容器（存在する場合）に直接印刷されても、容器に貼付されるラベルに印刷されても、又はキット内に若しくはキット内に容器と共に提供される別のシート、パンフレット、カード若しくはフォルダーに印刷されてもよい。
本開示は、別段の指示がない限り、分子生物学（任意の組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来技術を包含し、これらは十分に当業者の技量の範囲内である。このような技術は、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｇａｉｔ，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９８７）；“Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｗｅｉｒ，１９９６）；“Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ”（Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ，１９８７）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ａｕｓｕｂｅｌ，１９８７）；“ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ，１９９４）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｃｏｌｉｇａｎ，１９９１）などの文献に十分に説明されている。これらの技術は、本明細書に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合部分若しくは断片をコードするポリヌクレオチド（ポリヌクレオチド）、及び／又は抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合部分若しくは断片（ポリペプチド）の生産に適用可能であり、したがって、本発明を作製及び実施する際に考慮され得る。
以下の実施例は、本発明の治療方法をどのように作成して使用するかという、完全な開示及び説明を当業者に提供するために記載されたものであって、本発明者らが自らの発明と見なすものの範囲を限定することを意図したものではない。
実施例１
抗αｖβ８インテグリン抗体
いくつかの抗αｖβ８インテグリン抗体が本開示に包含され、本明細書に記載の方法、組成物及び生成物に従って、及び／又は参照抗体若しくは対照抗体として使用される。具体的には、本明細書において「Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５」と呼ばれるキメラ抗αｖβ８インテグリン抗体をＴｈｅ Ｒｅｇｅｎｔｓ ｏｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ（ＵＣＳＦ）から導入した。本明細書において「ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５」と呼ばれる第２の抗αｖβ８インテグリン抗体を、公開されたＰＣＴ国際出願の国際公開第２０１３／０２６００４号パンフレット（ＵＣＳＦ）において報告されたヒト化配列を用いて、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅにおいて生成した。ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体を親和性結合試験で評価したところ、図１Ａに示すように、αｖβ８インテグリンタンパク質に対する結合親和性が非常に低いことがわかった。したがって、本明細書において「ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５」と呼ばれる第３のヒト化抗αｖβ８インテグリン抗体を、当該技術分野知られ且つ実施されているＣＤＲグラフト技術を用いて生成した。ヒト化ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体を生成するために使用したＣＤＲは、上記のＣｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５抗体から得た。ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体は、図１Ｂに示すように、Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５抗体と同様のαｖβ８インテグリンタンパク質に対する結合親和性を示した。ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体のＶＨ及びＶＬ領域並びにＣＤＲのアミノ酸配列を図６に示す。驚くべきことに、結合親和性は、Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５抗体のヒト化の際に保持された。対照的に、ＵＣＳＦヒト化抗体（「ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５」）は、Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５からのヒト化では非常に低い結合親和性を示した。
加えて、αｖβ８インテグリンに対する結合親和性が改善された抗αｖβ８インテグリン抗体を得るために、本明細書において「Ｂ５－１５」と呼ばれる第４の最適化された抗αｖβ８インテグリン抗体を、当該技術分野において知られ且つ使用されている親和性成熟技術を使用して、親抗体としたＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体から作製した。得られたＢ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体（「最適化された」又は「親和性最適化された」Ｂ５－１５とも呼ばれる）は、図４に示すように、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体と比較して、αｖβ８インテグリンタンパク質に対する結合プロファイルの改善を示した。最適化Ｂ５－１５抗体のＶＨ及びＶＬ領域並びにＣＤＲのアミノ酸配列もまた図６に示す。
ＣＤＲグラフトによるキメラＣｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５抗体のヒト化
当該技術分野で知られ、実施されているＣＤＲグラフト法を用いて、マウス／ヒトキメラ３７Ｅ１Ｂ５（Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５）抗体をヒト化し、ヒト化ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体を生成した。ヒト化のために、同じ標準クラスを有する最も近い個々のヒト生殖細胞系フレームワーク（ＦＷ）を、抗体フォールディング構造を模倣するように選択した。復帰変異のために重要なマウスＦＷ残基を同定し、遺伝子を合成し、２９３細胞を用いた一過性トランスフェクションによってＩｇＧを変換及び生成し、得られた抗体をαｖβ８インテグリンへの結合についてスクリーニングした。このプロセスにより、完全にヒト化された軽鎖クローン、及び４つの重要なマウス残基を有するハイブリッドヒト生殖細胞系ＦＷが生成された。上記方法から得られたヒト化ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗αｖβ８インテグリン抗体は、驚くべきことに、元のキメラ３７Ｅ１Ｂ５（Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５）抗体の完全な結合活性を保持していることが示された（図１Ｂ）。図１Ｂで観察されるように、ヒト化ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体及びＣｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５抗体はいずれも、ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体（この配列は、上記のように国際公開第２０１３／０２６００４号パンフレットに報告されている）と比較して、αｖβ８インテグリンへの結合が増加した。
部位飽和変異誘発及び親和性成熟は、親和性最適化ヒト化Ｂ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体の産生をもたらす
さらに、部位飽和変異誘発をヒト化ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５抗体に対して行い、Ｃｙｓ９４残基（抗体骨格の潜在的な断片化／ペプチド切断に関連するため、抗体構造における欠陥であることが示されている）を、残基を他の１９個のアミノ酸の全てに最初に変換することによって、除去した。得られた変異抗体の全てを、ＥＬＩＳＡ分析により、αｖβ８インテグリンへの結合についてスクリーニングした。９４位の残基に応じて、結合親和性が低下した。この手順から得られた最良のαｖβ８インテグリン結合変異体を、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５－Ｃ９４Ｉ及びＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５－Ｃ９４Ｇと称した。ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５－Ｃ９４Ｉ変異体抗体は、αｖβ８結合親和性がおよそ３倍減少した。ヒト化ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５－Ｃ９４Ｉ抗体を、さらなる分析及び親和性最適化のために選択した。
Ｎ－グリコシル化部位を有するヒト化ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５－Ｃ９４Ｉの親和性成熟を、当該技術分野で認められている方法である節約的変異誘発を用いて行った。簡潔に記載すると、Ｍｅｄｉ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５－Ｃ９４Ｉの各ＣＤＲ位置に対する飽和点変異を最初に生成した。変異は、抗体のＶＨ及びＶＬ領域の６つのＣＤＲ全てをカバーした。合計６５２８個の個々のクローンを、αｖβ８インテグリンへの結合についてスクリーニングした（冗長性＞４×）。これらから、次の１０の一次ヒットが同定された：３つはＶＨ－ＣＤＲ１中にあり；２つはＶＨ－ＣＤＲ３中にあり；１つはＶＬ－ＣＤＲ１中にあり；４つはＶＬ－ＣＤＲ３中にあった。ヒットの全てが、αｖβ８インテグリンへの結合において２～５倍の改善を示した。
図２Ａ～２Ｃは、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５ Ｃ９４Ｉ抗αｖβ８インテグリン抗体、及びスクリーニング分析において同定された代表的な抗αｖβ８インテグリン抗体「ヒット」（「Ｐ１」又は「Ｐ２」ヒットと呼ぶ）、例えば、ＶＨＣＤＲ１ヒット（図２Ａ）、ＶＨＣＤＲ３ヒット（図２Ｂ）及びＶＬヒット（図２Ｃ）の結合親和性分析を示すグラフを示す。例えば、抗体クローンヒットを指定するために、「Ｐ」は所与のマルチウェルプレートを表し、Ｐに続く数字は、プレート中のウェル番号を表す。
図２Ｄは、親和性成熟抗αｖβ８インテグリン抗体クローンのスクリーニングから得られた、「Ｐ２－２３」、「Ｐ２－３３」、「Ｐ２－２５」、「Ｐ１－２１」、「Ｐ１－３５」、「Ｐ１－４２」、「Ｐ２－１６」、「Ｐ２－１９」、「Ｐ２－３６」、及び「Ｐ２－１４」と命名された代表的な一次クローン抗αｖβ８インテグリン抗体ヒットのＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列のアラインメントを示す。クローンのＶＨ及びＶＬ領域におけるフレームワーク（ＦＷ１～ＦＷ４）領域及びＣＤＲ（ＣＤＲ１～ＣＤＲ３）を、配列の上に指定する。ＣＤＲ領域におけるアミノ酸残基の相異箇所を、二重下線で示す。
次いで、１０個の最も有益な点変異の組み合わせライブラリーを、組み合わせ様式で作製した。αｖβ８インテグリンへの結合について、４６０８個のクローンをスクリーニングした。確認のために８８個のクローンを選択した。最良の一次ヒット、Ｐ２－２３と比較して、αｖβ８インテグリンへの結合にさらなる改善を示すものとして、コンビナトリアル評価から６つのヒットを同定した。組み合わせライブラリースクリーニングからのαｖβ８インテグリン結合データを図３Ａ及び図３Ｂに示す。ＣＨＯ（Ｇ２２）細胞において発現したＢ５－１５（「最適化Ｂ５－１５」又は「親和性最適化Ｂ５－１５」）と称するヒト化及び親和性最適化抗体を、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５よりも高いαｖβ８インテグリンに対するその結合親和性（図４）及びＣｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５よりも高いＴＭＬＣルシフェラーゼアッセイにおけるそのインビトロ効力（図５）に基づいて、最終的な最適抗体として選択した。
ＴＧＦ－β活性化バイオアッセイ
当該技術分野においては、ＴＭＬＣルシフェラーゼバイオアッセイが、αｖβ８インテグリンなどのインテグリンによるＴＧＦ－β活性化を測定するために使用される。このバイオアッセイは、例えば、Ｍ．Ａｂｅ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２１６（２）：２７６－２８４；Ｌ．Ａ．Ｒａｎｄａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１６４（１）：６１－６７；Ｍ．Ａ．ｖａｎ Ｗａａｒｄｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２４７（１）：４５－５１）；及びＩ．Ｔｅｓｓｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，２００６，ＢＭＣ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，７：１５（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８６／１４７１－２１２１－７－１５）に記載されているように、ルシフェラーゼに融合されたプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター－１（ＰＡＩ－１）プロモーターで安定にトランスフェクトされたミンク肺細胞株ＴＭＬＣに基づく。
ルシフェラーゼレポーターに連結されたプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター－１（ＰＡＩ－１）プロモーターの一部を安定にトランスフェクトし、以前に記載されているように培養した形質転換ミンク肺上皮細胞（ＴＭＬＣ）（Ｄａｎｉｅｌ Ｒｉｆｋｉｎ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙにより提供された細胞）を用いて、ＴＧＦ－β活性化を測定した（Ｍ．Ａｂｅ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２１６（２）：２７６－２８４）。９６ウェルプレート中、１０％のＦＢＳ及び１０Ｕ／ｍｌのペニシリンＧ、１０μｇ／ｍＬのストレプトマイシンＧ硫酸塩を添加したＤＭＥＭ高グルコース（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）（試験抗体を含むか又は含まない）で、ＨｅＬａ－Ｂ８細胞（１．５×１０４細胞／ウェル）をＴＭＬＣ（１．５×１０４細胞／ウェル）と一晩共培養した。１６時間後、上清を除去し、細胞を１００μＬの細胞溶解緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）中で溶解し、ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、白色壁透明ボトム９６ウェルプレートに８０μＬの溶解物を移し、８０μＬの基質と混合することにより、ルシフェラーゼ活性を測定した。試料を直ちに照度計で読み取り、相対ルシフェラーゼ単位（ＲＬＵ）又は最大応答パーセントとして示し、アッセイのベースライン又は０％対照としてＴＭＬＣ単独を、またＨｅＬａ－Ｂ８細胞と共培養したＴＭＬＣを最大又は１００％応答として使用して決定した。
ＨｅＬａ－Ｂ８細胞株の作製
ＨｅＬａ－Ｂ８細胞は、ＨｅＬａ細胞株（ＥＣＡＣＣ）の誘導株である。簡潔に記載すると、コンフルエントＨｅＬａ細胞を、１０％ＦＢＳ、１％非必須アミノ酸（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、及び１０Ｕ／ｍｌペニシリンＧ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、１０μｇ／ｍＬストレプトマイシンＧ硫酸塩を添加したＭＥＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）中で維持し、使用前、細胞をアキュターゼを用いて剥がし取り、ＰＢＳ中に１×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ固定水性死細胞染色（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１：１０００）を氷上の細胞に２０分間添加した。細胞をペレット化し、冷フローサイトメトリー染色緩衝液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中で洗浄した。組換え３７Ｅ１Ｂ５－ｍＩｇＧ１又はアイソタイプ－ｍＩｇＧ１（１００μｇ／ｍｌの１×１０６細胞／ｍｌ）を細胞に加え、氷上で３０分間インキュベートした。細胞をペレット化し、洗浄し、二次抗マウスＡｌｅｘａ－６４７（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、１：２００）を細胞に加え、氷上で３０分間インキュベートした。細胞をペレット化し、洗浄し、１％のＦＢＳを含有するＨｅＬａ細胞培地中に１０×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５抗体を用いて、ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩＩ細胞ソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で細胞を選別した。次いで、高αｖβ８＋選別細胞を完全ＨｅＬａ細胞培地で培養し、増殖させ、将来の使用のために保管した。細胞は、少なくとも１か月の培養の間、αｖβ８高発現についてポジティブのままであった。
ヒト化親和性最適化Ｂ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体の特徴
ヒト化及び最適化されたＢ５－１５抗体ポリペプチドの軽鎖（Ｌ）可変領域（ＶＬ、κ）アミノ酸（ａａ）配列は、以下のような１０７個のアミノ酸残基を有する：
Ｂ５－１５ＶＬ（カッパ（κ））
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＫＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＹＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＶＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（１０７ａａ）（配列番号１３）
Ｂ５－１５抗体ポリペプチドの重鎖（Ｈ）可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、以下のような１１６個のアミノ酸残基を有する：
Ｂ５－１５ ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＶＦＳＲＳＷＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＩＬＩＴＴＥＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（１１６ａａ）（配列番号１２）
特に、Ｂ５－１５抗体の軽鎖（Ｌ）可変領域（ＶＬ）は、以下のようなアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲを含む：
ＶＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＤＩＮＫＹＬＳ（配列番号１０）
ＶＬＣＤＲ２：ＹＡＮＲＬＶＤ（配列番号５）
ＶＬＣＤＲ３：ＬＱＹＤＶＦＰＹＴ（配列番号１１）
Ｂ５－１５抗体の重鎖（Ｌ）可変領域（ＶＨ）は、以下のようなアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲを含む：
ＶＨＣＤＲ１：ＲＳＷＩＳ（配列番号９）
ＶＨＣＤＲ２：ＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬ（配列番号２）
ＶＨＣＤＲ３：ＬＩＴＴＥＤＹ（配列番号３）
Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５、ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５、ＭＥＤＩ－ｈｕ３７Ｅ１Ｂ５及びＢ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列の比較を図６に示す。
実施例２
抗αｖβ８インテグリン抗体を用いたホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）ヒト組織におけるαｖβ８インテグリン発現の免疫組織染色（ＩＨＣ）検出法
ＩＨＣ法
ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織切片を調製するために、ヒト組織試料が固定されたスライドを保管場所から取り出した。スライドを適切に標識し、自動染色装置ＸＬラックにロードした。染色したスライドを脱ろうし、水道水で再水和した。
スライドラックを、Ｄａｋｏ抗原賦活液（Ｄａｋｏ Ｓ１６９９）を含む圧力釜に移した。熱媒介抗原賦活を加圧下（ＳＰ ＤＤＣＰ＿５０２４）で２分間、以下の変更を加えて実施した：抗原賦活後、圧力釜を冷却して減圧し、圧力釜を流水道水中に置き、蓋を取り外し、圧力釜を５分間冷却し、次いで、その内容物を流水道水で洗い流し、スライドを取り出し、流水で５分間濯いだ。スライドをペルオキシダーゼ（メタノール中、３％の過酸化水素）で１０分間ブロックした。
免疫組織染色を以下のように行った：
・スライドの適切な位置にパップペンを引く（組織上の疎水性障壁を引くため）；
・スライドをＤａｋｏ自動染色装置にロードする；
・０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含む標準ダルベッコＰＢＳ（ＰＢＳＴ）で×１（１回）洗浄する；
・スライドを２．５％ウマ血清（ＩｍｍＰＲＥＳＳキットから）中で２０分間インキュベートする；
・ブロー工程；Ｃａｌｉｃｏ抗体ＣＡＬ１６（精製ウサギ組換え抗αｖβ８インテグリン抗体）１．０ｕｇ／ｍｌ（ＰＢＳＴで希釈）、Ｄａｋｏウサギ免疫グロブリンアイソタイプ対照１．０ｕｇ／ｍｌ又はベクターＫｉ６７（実験対照として１：２００希釈）で６０分間インキュベートする；
・ＰＢＳＴで×１濯ぐ；
・標識したポリマー、ベクターＩｍｍＰＲＥＳＳ（商標）ＨＲＰ、ウマ抗ウサギＩｇＧ（ペルオキシダーゼ）ポリマー検出キット（カタログ番号 ＭＰ－７４０１）中で３０分間インキュベートする；
・ＰＢＳＴで×１濯ぐ；
・ＰＢＳＴで５分間インキュベートする；
・ＰＢＳＴで×１濯ぎ；有害廃棄物×１に切り替える；
・ＤＡＢ＋基質／クロマゲン（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）（Ｄａｋｏ、Ｋ３４６８）中で５分間インキュベートする；
・純水で×１濯ぐ（自動染色装置が自動で行う）；
・Ｄａｋｏ自動染色装置からスライドを取り出す；
・プログラム９を用いて、ギルヘマトキシリンＩで対比染色し、脱水し、スライドをカバースリップで覆う；及び
・Ｌｅｉｃａ ＣＶ５０３０カバースリッパ－からスライドを取り出し、乾燥／セットする。
Figure 2023511686000022
或いは、「プログラム番号９」の工程を手動で実行することができる。これを行うために、スライドを記載の試薬中に記載の時間置くことができる。自動プログラムを使用しても、手動で工程を実行してもよい。
実施例３
αｖβ８インテグリンは腎臓で優先的に発現される
実施例２に記載のＩＨＣ染色分析を多数の組織試料に対して実施して、ヒト組織におけるａｖβ８インテグリンの発現及び分布を決定した。以下の表２は、ＩＨＣ分析の結果を示す。
Figure 2023511686000023
表２で認められるように、腎組織は、高レベルのαｖβ８インテグリンを発現する。さらに、αｖβ８インテグリンは、３３の他のヒト組織型、すなわち、心臓、肺、脾臓、リンパ節、胸腺、扁桃腺、肝臓、胆嚢、膵臓、脳小脳及び大脳、甲状腺、副腎、耳下腺、皮膚、骨格筋、胃、回腸、結腸、卵巣、卵管、子宮筋層、子宮内膜、子宮頸部、子宮頚膣部、乳房、胎盤、前立腺、精巣、精嚢、膀胱及び尿管と比較して、ヒト腎組織において高密度に存在していることがわかった。図７Ａ（左側）では、αｖβ８インテグリンの強い染色がヒト腎組織、特に腎組織の尿細管の足細胞及び上皮細胞において観察された。対照的に、染色は、検査された他の組織型では、弱いか、一貫性がないか、又は存在しないことがわかった。
図７Ａに示すＩＨＣ染色分析では、ＣＡＬ１６クローン抗αｖβ８インテグリンウサギモノクローナル抗体（Ｃａｌｉｃｏ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ（Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ、ＣＡ）からの精製ウサギ組換え抗αｖβ８インテグリン抗体）を使用した。市販されているこの抗体を、ヒト及びマウス組織の両方で発現されるαｖβ８インテグリンへの結合のために最適化し検証した。
実施例４
Ａｖβ８発現は、慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有する患者の腎組織において増加する
αｖβ８インテグリンの発現を、糖尿病性腎症（ＤＮ）を有する患者と、「健常」対照として正常な腎組織を有する個体とから採取したヒト腎組織試料において評価した。ＤＮ腎組織試料は、Ａｄｄｅｎｂｒｏｏｋｅ’ｓ Ｂｉｏｂａｎｋ及びＭｅｄＩｍｍｕｎｅ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）Ｂｉｏｂａｎｋから得た。正常な腎臓試料は、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ）組織バンクから得た。より具体的には、糖尿病性腎症慢性腎疾患、ＤＮ－ＣＫＤを有する９人の患者からの試料を針生検によって得た。４人の健康な「正常」個体からの試料を対照として使用した。正常試料では、軽度の慢性炎症のいくつかの領域の存在が明白であったが、試験デザイン又は結果に影響を与えなかった（図７Ａ、右側）。
実施例３に記載のように、ＩＨＣ染色実験で使用した抗体は、Ｃａｌｉｃｏ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ（Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ、ＣＡ）からのＣＡＬ１６クローン抗αｖβ８インテグリンウサギモノクローナル抗体（精製ウサギ組換え抗体）であった。染色後、経験豊富な上級病理学者によってスライドをレビューした。
このＩＨＣ染色分析の結果は以下の通りであった：健康な個体において、糸球体はアイソタイプ一致対照抗体染色と比較して、抗αｖβ８インテグリン抗体で陽性染色を示した；抗αｖβ８インテグリン抗体染色は概して弱い（３／４試料）が１つの試料（１／４）は足細胞において強い染色を示した（足細胞パターン）。腎尿細管では、皮質尿細管、膜、基底から頂端に弱い多焦点染色が観察された。（図７Ａ、右側）。尿細管の染色は集合管には見られなかった。健康なヒト腎臓の全体的な染色パターンは、ほとんどが健康なトランスジェニックマウスと同様に糸球体にあったが、ＩＨＣによるαｖβ８インテグリンの染色は、ＣＫＤ患者及びＵＵＯトランスジェニックマウスのいずれも尿細管構造で観察された。
ＤＮ－ＣＫＤを有する患者では、糸球体におけるαｖβ８染色の程度は様々であり、糸球体損傷の程度と関連していた。罹患組織における足細胞の喪失が、少ない染色と相関した。罹患腎臓における足細胞の喪失のため、染色強度は変動した。ＤＮ－ＣＫＤ腎組織における尿細管の染色は、弱い染色から、主に炎症／線維症領域における細胞質及び膜の強い染色まで様々であった。抗αｖβ８インテグリン抗体の染色パターンによって明示されるように、αｖβ８インテグリンの全体的な発現増加がＤＮ－ＣＫＤ腎臓で観察された。過剰発現は実質的に腎尿細管で見られた。（図７Ｂ）。抗αｖβ８インテグリン抗体染色に基づいて、ＤＮ－ＣＫＤ腎組織におけるαｖβ８インテグリンの発現の変化は、尿細管間質炎症及び線維症を示すマウスモデルの腎臓におけるαｖβ８インテグリン発現に適切に近似するようであった。
図７Ｃは、腎疾患を有するヒト患者から得られた腎組織細胞の顕微鏡写真を示す。腎組織細胞を抗αｖβ８インテグリン抗体で染色し、ＩＨＣによって分析した。ＩＨＣ染色結果は、αｖβ８インテグリンタンパク質が、正常な腎細胞及び腎組織と比較して、糖尿病性腎症（ＤＮ）を有するヒト患者の腎細胞及び腎組織で上方制御されることを示した（図７Ｃ、上段）。特に、ＤＮ及びＣＫＤ患者から得られた腎組織試料においては、αｖβ８インテグリンの過剰発現は実質的に尿細管で認められた（図７Ｃ、下段）。ＤＮ患者の腎臓の糸球体は、αｖβ８インテグリン染色の減少を示しており、おそらく腎組織の線維化及び損傷による足細胞の喪失の結果としてであろう。ステージ２及びステージ３のＤＮを有する患者からの腎組織試料中の非染色領域は、図７Ｃにおいてアスタリスク（＊）によって示されるように、機能性ネフロンを置き換えた線維性マトリックスである。この結果は、機能的上皮を保護するためにαｖβ８インテグリンを標的とすることの重要性を強調するものである。図７Ｃに示すＩＨＣ染色分析では、ＣＡＬ１６クローン抗αｖβ８インテグリンウサギモノクローナル抗体（Ｃａｌｉｃｏ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ．（Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ、ＣＡ）からの精製ウサギ組換え抗αｖβ８インテグリン抗体）を使用した。市販されているこの抗体を、ヒト及びマウス組織の両方で発現されるαｖβ８インテグリンへの結合のために最適化し検証した。
実施例５
ｉｔｇｂ８遺伝子は、ＣＫＤを有する個体の腎臓において上方制御され、他のβインテグリンと比較して高い発現を示す
トランスクリプトミクス分析は、ヒトＣＫＤ患者の腎臓が健康なヒト対象の腎臓と比較して、ＩＴＧＢ８（β８インテグリンをコードする）をより高度に発現するという証拠を提供した。これらの分析では、相対的βインテグリンファミリーｍＲＮＡ発現をヒトＣＫＤ腎ホモジネートにおいて測定した。簡潔に記載すると、腎生検の１パンチ（２ｍｍパンチャー）を、ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒＩＩを用いてＲＬＴ溶解緩衝液中でホモジナイズした。溶解物からのＲＮＡをＲＮＡｅａｓｙ Ｍｉｎｉキットカラムで単離した。ＲＮＡ濃度をＮａｎｏｄｒｏｐで測定し、濃度を調整して、ＴａｑＭａｎ ＲＮＡ－ｔｏ－Ｃｔ １ステップキット及び全てのインテグリンに特異的なプローブ（ｈｐｒｔ－１をハウスキーピング遺伝子として含む）を使用してｑＰＣＲ分析を行った。図８Ａは、ＣＫＤを有するヒト患者からの腎臓におけるβインテグリンの異なるアイソフォームをコードするｍＲＮＡの相対発現レベルを示す棒グラフを示す。図８Ａに見られるように、β８インテグリンｍＲＮＡ発現はＣＫＤ患者の腎臓における他のβインテグリン（すなわち、β１、β３、β５及びβ６）の発現より優勢であった。
他の実験では、程度の異なるＣＫＤを有する１５７人の患者のトランスクリプトームプロファイルを分析し、生体ドナー（ＬＤ）のものと比較した。１５７例中１２例に糖尿病性神経障害（ＤＮ）が認められた。糸球体及び尿細管間質コンパートメントを分離し、Ｓ．Ｍａｒｔｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（２０１４，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．，２５（１１）：２５５９－２５７２）によって記載されているように、全ゲノム遺伝子の発現分析を行った。この分析では、まず、腎糸球体コンパートメントにおけるｉｔｇｂ８ ｍＲＮＡの発現を、ネフリン（ＮＰＨＳ１遺伝子によってコードされる）と関連させて評価した。ネフリンは、有窓内皮細胞、糸球体基底膜、及び上皮細胞の足細胞からなる、腎臓濾過バリアの適切な機能に必要な足細胞タンパク質である。ＮＰＨＳ１における変異は、先天性ネフローゼ症候群と関連する。ＮＰＨＳ１発現は、足細胞数の指標である。ＣＫＤでは、足細胞数が減少するので、ＮＰＨＳ１発現が減少する。図８Ｂは、ｉｔｇｂ８ ｍＲＮＡ発現が、足細胞マーカー遺伝子であるＮＰＨＳ１と正に相関することを示しており、腎足細胞におけるこの遺伝子の発現を支持する。糸球体皮質におけるｉｔｇｂ８発現を、足細胞の喪失を考慮してより良く評価するために、ｉｔｇｂ８発現をＮＰＨＳ１によって正規化した。したがって、慢性腎疾患におけるような足細胞喪失の条件下での足細胞内の発現変化を理解するため、データをネフリン（ＮＰＨＳ１遺伝子によってコードされる）の発現について正規化した。図８Ｃは、ｉｔｇｂ８ ｍＲＮＡ発現が、健常対照としての生体ドナー（ＬＤ）におけるその発現と比較して、ＤＮ患者腎臓試料の尿細管間質（ＴＩ）においてより高かったことを示すボックスプロットグラフを示す。図８Ｄは、ｉｔｇｂ８ ｍＲＮＡ発現が、ＣＫＤを有する患者のＴＩにおけるＣＫＤ全体のＴＧＦ－β活性化スコアと強く相関することを示すドットプロットグラフを示し、ＣＫＤにおけるＴＧＦ－β活性化のαｖβ８インテグリンの役割を支持する。
別のコホートにおいて、ＤＮを有する２０人のヒト患者から得られた腎臓試料の尿細管間質（Ｔｕｂ）及び糸球体（Ｇｌｏｍ）を、１９人のＬＤ患者から得られた腎臓試料のＴＩ及び糸球体と比較して、ＲＮＡｓｅｑを用いた全ゲノム転写プロファイリングによってプロファイリングした。結果は、生体ドナー（ＬＤ）と比較して、ＤＮ患者（グラフにおいて「Ｔｕｂ－ＤＮ」と表されている）の尿細管間質においてｉｔｇｂ８ ｍＲＮＡ発現が増加したことを示した（図８Ｅ）。腎疾患、すなわち糖尿病性腎症を有する患者の尿細管間質における高いｉｔｇｂ８ ｍＲＮＡレベルの所見は、これらの腎疾患患者における腎障害及び線維症の病態と相関する。
これらの分析の主要な所見は以下の通りであった：ｉｔｇｂ８ ｍＲＮＡ発現は、足細胞マーカー遺伝子であるネフリン（ＮＰＨＳ１）に対する正規化後、ＤＮ患者試料からの糸球体において上昇した。ｉｔｇｂ８ ｍＲＮＡ発現は、ＤＮ患者の尿細管間質（ＴＩ）において上昇した。ＴＩにおいて、ｉｔｇｂ８ ｍＲＮＡ発現は、推定ＴＧＦ－β活性化スコアと正に相関し、これは、線維性疾患におけるＴＧＦ－β活性化の制御におけるαｖβ８インテグリンの提示された役割と一致する。同様の結果が、別の足細胞マーカー遺伝子であるＷＴ１のｍＲＮＡ発現の分析によっても見出された（データは示さず）。これらの知見は、ヒトＣＫＤ腎臓において、αｖβ８インテグリン発現が、ＣＫＤにおける線維化と相関するという発見を支持するものであり、ＣＫＤにおける線維化は、腎線維症を引き起こし悪化させる際に重要な役割を果たしているＴＧＦ－βの活性化と関連している。
実施例６
抗αｖβ８インテグリン抗体のインビボにおける有効性
線維症誘導のマウスモデルを用いて、腎臓の線維症の治療における抗αｖβ８インテグリン抗体のインビボにおける有効性を試験した。このモデルは、動物に対して片側尿管閉塞（ＵＵＯ）（尿管の片側結紮）と呼ばれる処置を実施することを含んだ。このモデルでは、ヒト化αｖβ８トランスジェニック（Ｔｇ）雄マウスに、傷害の５日間及び８日間を含むシャム又はＵＵＯ処置を行った。Ｔｇマウスは、αｖβ８遺伝子をノックアウトしたマウス（αｖβ８ ＫＯマウス）をヒトαｖβ８ ＢＡＣトランスジェニックマウスと交配させることにより作製した。ヒトＩＴＧＢ８遺伝子を発現するＴｇマウスの作製は、例えば、Ｓ．Ｍｉｎａｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．，６（２４１）：２４１ｒａ７９（ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｔｒａｎｓｌｍｅｄ．３００８０７４）に記載されている。ヒト化αｖβ８トランスジェニックマウスは、健康なヒトで観察されたパターンと同様のパターンで、主に腎糸球体でヒトαｖβ８インテグリンを発現した。尿管結紮（ＵＵＯ）による線維症の誘導は、ヒトＣＫＤで観察されるものと同様に、腎尿細管におけるαｖβ８インテグリン発現を増加させた。
使用した試験薬剤は、上記したＩｇＧ１ヒト化及び配列最適化抗αｖβ８インテグリン抗体のＢ５－１５であった。対照抗体は、アイソタイプ一致ＩｇＧ抗体であった。
ＵＵＯ Ｔｇ マウスモデル試験のためのプロトコル：
モデル：９１匹のヒト化αｖβ８トランスジェニック（Ｔｇ）雄マウスにシャム又は片側尿管閉塞（ＵＵＯ）処置を施した；障害の５日間又は８日間。これらの群の動物に、隔日（ＥＯＤ）に、すなわち－１日目、１日目、３日目、５日目及び７日目に、それぞれの抗体を投与した。シャム処置した動物に、０日目、２日目、４日目及び６日目にビヒクルを投与した。
試験開始時のマウスの年齢：９２～１２１日齢。
試験薬剤／化合物：抗αｖβ８インテグリン抗体（Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５モノクローナル抗体）、Ｂ５－１５配列最適化抗αｖβ８インテグリン抗体）、ＩｇＧアイソタイプ対照及び／又はビヒクル（ＰＢＳ）を、以下の表３に示す用量、頻度で、群に対し投与した。
Figure 2023511686000024
試験エンドポイント：形態：体重（初期、最終、Δ）；腎重量（閉塞及び対側）及び指数；並びに脛骨長。
Ｌｕｍｉｎｅｘによる腎皮質ｍＲＮＡ発現：
・結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）
・α平滑筋アクチン（ＡＣＴＡ２）
・フィブロネクチン１（ＦＮ１）
・コラーゲン１ａ１（Ｃｏｌ１ａ１）
・コラーゲン３ａ１（Ｃｏｌ３ａ１）
腎皮質ヒドロキシプロリン含量
組織学的読み取り：ピクロシリウスレッド（ＰＲＳ）及びαｖβ８染色。
抗αｖβ８インテグリン抗体を用いてヒト化αｖβ８トランスジェニックマウスの腎組織をＩＨＣ染色して、腎線維症及びその程度を決定した結果を図９Ａ～９Ｄに示す。図９Ａ及び９Ｂに示される抗αｖβ８インテグリン抗体によるＩＨＣ染色の顕微鏡写真は、ヒト化αｖβ８トランスジェニックマウスが健康なヒト腎臓において典型的に観察されるものと同様に、主に腎臓の糸球体においてαｖβ８インテグリンを発現したことを示す。ＣＫＤを有するヒトの腎臓において典型的に観察されるものと同様に、ＵＵＯ処置による線維症の誘導が腎尿細管におけるαｖβ８発現を増加させることが示された（図９Ｃ及び９Ｄ）。図９Ｅ～９Ｈは、上記され、表３に概説したＵＵＯ処置によるインビボ試験から得られた結果を示す。
図９Ｅに示すように、抗αｖβ８インテグリン抗体Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５（親Ａｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）及びＢ５－１５（リードＡｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）は、ＵＵＯ対照と比較して、ＵＵＯ施術後８日目で、コラーゲン１ａ１ ｍＲＮＡ発現のＵＵＯ誘導による増加を減弱化させた。図９Ｆに示すように、抗αｖβ８インテグリン抗体Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５（親Ａｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）及びＢ５－１５（リードＡｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）は、ＵＵＯ対照と比較して、ＵＵＯ施術後８日目で、Ｃｏｌ３ａ１発現のＵＵＯ誘導による増加を減弱化させた。図９Ｇに示すように、ＵＵＯは、ＵＵＯ施術後８日目で、閉塞された腎皮質フィブロネクチン１（Ｆｎ１）ｍＲＮＡ発現を、シャム対照と比較して増加させた。抗体Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５（親Ａｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）及び抗体Ｂ５－１５（リードＡｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）抗αｖβ８インテグリン抗体は、ＵＵＯ対照と比較して、８日間の損傷期間でのＦｎ－１発現のＵＵＯ誘導による増加を減弱化させた。図９Ｈに示すように、抗αｖβ８インテグリン抗体Ｂ５－１５（リードＡｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）は、ＵＵＯ対照と比較して、ＵＵＯ施術後８日目で、α－平滑筋アクチン（α－ＳＭＡ）ｍＲＮＡ発現のＵＵＯ誘導による増加を減弱化させた。Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５（親Ａｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）抗体は、α－ＳＭＡのＵＵＯ誘導による増加を減少させなかった。α－ＳＭＡ＋細胞の存在は正常な腎機能に有害であるので、α－ＳＭＡの減少は重要である。これは、これらの細胞が収縮性であり、線維性リモデリングに直接作用するだけでなく、高度に合成され、炎症性メディエーター及び線維性メディエーターを産生するためである。図９Ｉに示すように、抗αｖβ８インテグリン抗体Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５（親Ａｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）及びＢ５－１５（リードＡｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）は、ＵＵＯ対照と比較して、ＵＵＯ施術後８日目で、結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）ｍＲＮＡ発現のＵＵＯ誘導による増加を減弱化させた。図９Ｊに示すように、ＵＵＯは、ＵＵＯ手術後８日目で、閉塞された腎皮質ヒドロキシプロリン（ＯＨ－Ｐ）％を増加させた。Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５（親Ａｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）抗体及びＢ５－１５（リードＡｖｂ８ Ａｂのラベルが付されている）抗体は、対照と比較して、８日間の損傷期間で、ＯＨ－Ｐ％のＵＵＯ誘導による増加を減弱化させた。腎皮質ヒドロキシプロリンの読み取りは、組織の実際の線維化含量／線維症の測定として役立つ。
要約すると、ＵＵＯ施術後８日目で、Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５及びＢ５－１５は、Ｃｏｌ１ａ１、Ｃｏｌ３ａ１、ＦＮ－１及びＣＴＧＦ ｍＲＮＡ発現、並びにヒドロキシプロリン含有％のＵＵＯ誘導性増加を減弱させた。さらに、ＵＵＯ施術後８日目で、Ｂ５－１５は、α－ＳＭＡ ｍＲＮＡ発現のＵＵＯ誘導による増加を減弱化した。
この実施例で使用した２つの抗αｖβ８インテグリン抗体、Ｃｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５及びＢ５－１５を、ＵＵＯモデルのマウスに最大用量で投与した。この試験の目的は、αｖβ８インテグリンに対する抗体が、αｖβ８インテグリンと結合することによって引き起こされるＴＧＦ－β誘導線維症を効果的に低減できるかどうかを実証することであった。本発明者らは、これらの抗αｖβ８インテグリン抗体のいずれかのより低い用量（すなわち、ＥＣ５０）で、ＴＧＦ－β誘導線維症の低減に差が見られることを期待する。すなわち、本発明者らは、等価用量でＣｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５よりもＢ５－１５による治療からのＵＵＯモデルにおいて、ＴＧＦ－β誘導線維症のより大きな低減が見られることを期待する。これは、主に、Ｂ５－１５がＣｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５よりもαｖβ８インテグリンに対する結合親和性が高いこと（図１Ｂ及び図４を参照）、及びＢ５－１５がＣｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５よりもインビトロ効力が高いこと（図５を参照）による。Ｂ５－１５による治療はＣｈｉ－３７Ｅ１Ｂ５よりも有利であり、これは、患者へのより低い頻度の投与又はより低い用量の投与が達成され、有害事象があったとしてもわずかであり、より大きな患者コンプライアンスにつながるためである。
上で論じたように、αｖβ８インテグリン標的受容体は、罹患／線維性腎組織において優先的且つ高度に発現され、抗αｖβ８インテグリン抗体によって腎組織中で結合され、これがαｖβ８インテグリンの潜在型ＴＧＦ－βへの結合相互作用を妨害する。本明細書に開示される抗αｖβ８インテグリン抗体は、潜在的なＴＧＦ－βに結合するαｖβ８インテグリンに対する抗体の使用が全身性ＴＧＦ－βの標的化を未然に防ぎ且つ回避し、したがって、治療を受けている対象における他の組織におけるＴＧＦ－βの全身性阻害に付随し得る潜在的に重大な問題を回避するため、腎疾患を有する対象における線維性腎疾患の治療に特に有利であり且つ有益である。
実施例７
Ｂ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体を用いたエクスビボ試験
ＴＧＦ－βの標的αｖβ８インテグリン受容体との抗αｖβ８インテグリン抗体（Ｂ５－１５）の結合及び関与を評価するために、総リン酸化腎臓ＳＭＡＤ２／３を測定することによって、腎臓溶解物の下流ＴＧＦ－βシグナル伝達経路の活性化を評価した。簡潔に記載すると、実施例５に記載の試験で使用した動物からの腎臓試料を、ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ ＩＩを使用して特定の溶解緩衝液（蒸留水＋１０μｌ／ｍｌのプロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤で１×希釈）中でホモジナイズし、タンパク質含量を、当業者に知られ且つ使用されているビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイを使用して測定し、タンパク質濃度を全ての試料について正規化した。ＳＭＡＤ２／３タンパク質の総リン酸化形態（ホスホＳＭＡＤ２（Ｓｅｒ４６５／４６７）／ＳＭＡＤ３（Ｓｅｒ４２３／４２５））を、製造業者のプロトコルに従ってＥＬＩＳＡにより分析した。上記のように、シグナル伝達分子のＳｍａｄファミリーのメンバーは、ＴＧＦ－βシグナルを細胞表面から核に伝達する細胞内経路の成分である。
実験の結果は、Ｂ５－１５抗αｖβ８インテグリン抗体が５日間の片側尿管閉塞（ＵＵＯ）を受けたヒトαｖβ８コード遺伝子を有するトランスジェニックマウス（「ヒト化αｖβ８トランスジェニックマウス」）の腎臓における下流ＴＧＦ－βシグナル伝達経路を減少させることを示した。図１０（ａ）及び図１０（ｂ）において、＊＝≦０．０５、及び＊＊＊＊＝≦０．０００１である。図１０Ａ及び図１０Ｂにおいて、「シャム＋ＮＩＰ２２８（ＩｇＧアイソタイプ対照）、ｎ＝６；「ＵＵＯ＋ＮＩＰ２２８（ＩｇＧアイソタイプ対照）」、ｎ＝８；及び「ＵＵＯ＋Ｂ５－１５（抗αｖβ８インテグリン抗体）」、ｎ＝８。
図１０Ａ及び１０Ｂで認められるように、ヒト化αｖβ８マウスにおけるＵＵＯ施術は、Ｓｈａｍ処置群に対して５．７倍のＴＧＦ－β依存性ＳＭＡＤ２／３リン酸化の増加をもたらした。興味深いことに、抗αｖβ８インテグリン抗体（Ｂ５－１５）は、アイソタイプ対照による治療と比較して、ＳＭＡＤ２／３活性化を１．６倍有意に減少させた。ＳＭＡＤ２／３の総レベルは、シャム処置動物と比較して、全てのＵＵＯ群で増加した。
実施例８
抗αｖβ８インテグリン抗体であるＢ５－１５を用いたトリ培養細胞系の処理
ヒト糸球体硬化症のモデル（Ｗａｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，２４３（３）：３９０－４００に記載されている）に対するＢ５－１５（抗αｖβ８インテグリン抗体）の効果を評価するために、本発明者らは、線維症を誘導する１０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ－β又は２５ｎｇ／ｍｌのＣＴＧＦでトリ培養細胞系（糸球体内皮細胞、足細胞、及びメサンギウム細胞が血管ネットワークを形成する）を処理した。結節数の増加は、線維症の進行を反映する。１５μｇ／ｍｌのＢ５－１５での処理は、１５μｇ／ｍｌのアイソタイプ対照（ＮＩＰ２２８）での処理と比較して、結節数を有意に減少させた（図１１を参照）。
３Ｄトリ培養形成
トリ培養において、ヒト足細胞（Ｃｅｌｐｒｏｇｅｎ、ＣＡ、ＵＳＡ）、糸球体内皮細胞（ＧＥＣ）及びメサンギウム細胞（ＭＣ）（ＧＥＣ及びＭＣはいずれもＳｃｉｅｎＣｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡから）を、ラット尾１型コラーゲン（１．５ｍｇ／ｍｌ；Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＭＡ、ＵＳＡ）、ヒト血漿フィブロネクチン（９０μｇ／ｍｌ；Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＭＡ、ＵＳＡ）、１．５ｍｇ／ｍｌ ＮａＨＣＯ３、２５Ｍｍ ＨＥＰＥＳ及びＭ１９９培地（１０×；Ｓｉｇｍａ、ＭＯ、ＵＳＡ）内に４℃で懸濁させた。ゲルを０．１Ｍ ＨＣｌ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＫ）でｐＨ７．４にｐＨ調整した。この細胞／ゲル懸濁液をピペットを用いて４８ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、ＮＹ、ＵＳＡ）にそれぞれ１ウェル当たり３２０μｌの容量で注入した。腎糸球体細胞は、１６：３：１（ＧＥＣ：ＰＯＤ：ＭＣ）の比で、すなわち、３２０μｌ当たり、３３０，０００～３４０，０００個のＧＥＣ、５０，０００～７０，０００個のＰＯＤ、及び２０，０００～２４，０００個のＭＣを使用した。細胞／ゲル懸濁液を３７℃２０分間重合させ、その後、ゲル上に５００μｌの培地をピペットで注入した。トリ培養培地は、ＲＭＰＩ １６４０（ＧｉｂｃｏＴＭ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、ＵＫによる）、２％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、１％インスリン、アポトランスフェリン、亜セレン酸ナトリウム（ＩＴＳ混合物中）及び１％ＥＣＧＳ（補充成分は全て、ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡから）から構成された。培養物を２４時間維持した。細胞を、ｐ２～ｐ６の間の実験に使用した。
ＴＧＦ－β、ＮＩＰ２２８、抗αｖβ８抗体及びＣＴＧＦによる刺激アッセイ
刺激のために、１０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ－β（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｂｉｏ－Ｔｅｃｈｎｅ Ｌｔｄ）、ＭＮ、ＵＳＡ）、１５μｇ／ｍｌのＮＩＰ２２８、１５μｇ／ｍｌの抗αｖβ８インテグリン抗体、及び２５ｎｇ／ｍｌのＣＴＧＦ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ、ＵＳＡ）を、単独で、又は組み合わせて、２４時間のインキュベーションのために、培養ゲルの上に置かれた培地に加えた。対照処理は培地単独であった。
本発明者らは、抗αｖβ８インテグリン抗体による処理がＴＧＦ－β活性化によって引き起こされる線維症の進行を阻害することができることを実証する。
その他の実施形態
前述の説明から、本明細書に記載される本発明を様々な用途及び条件に適合させるために、本発明にバリエーション及び修正を加えてもよいことは明らかであろう。このような実施形態もまた、以下の特許請求の範囲内にある。
本明細書の変数の任意の定義における要素のリストの引用は、挙げられた要素の任意の単一の要素又は組み合わせ（又は下位の組み合わせ）としての変数の定義を含む。本明細書における実施形態の詳述は、任意の単一実施形態としての、又は任意のその他の実施形態又はその部分と組み合わされた、その実施形態を含む。
本明細書に記載されている特許及び刊行物は全て、それぞれ独立した特許及び刊行物が、参照により組み込まれるように明確に且つ個々に指示されているかのような場合と同程度まで、参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (34)

  1. 腎疾患を有する対象における腎線維症を治療する方法であって、前記対象に有効量の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を投与し、それによって腎線維症を治療することを含む方法。
  2. 腎疾患を有する対象における腎線維症を低減又は減弱化させる方法であって、それを必要とする対象に有効量の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を投与し、それによって腎臓における線維症を低減又は減弱化させることを含む方法。
  3. 腎線維症に関連するαｖβ８インテグリンの活性を抑止する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を投与し、それによって腎線維症に関連するαｖβ８インテグリンの活性を抑止する方法。
  4. 腎細胞及び腎組織におけるＴＧＦ－βのその潜在型からの活性化を遮断することによって腎線維症を治療する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を投与し、それによって前記腎線維症を治療することを含む方法。
  5. 血漿クレアチニン及び／又は尿中タンパク質排泄レベルの増加を特徴とする腎傷害を治療する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片を投与し、ここで、前記抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片の前記投与は前記対象における血漿クレアチニン及び／又は尿中タンパク質排泄レベルを抑止し、それによって腎傷害を治療することを含む方法。
  6. 前記対象は、腎疾患を有する、請求項３～５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 前記腎疾患は、糖尿病性腎症（ＤＮ）、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、急性腎疾患、高血圧関連腎疾患、高血糖関連腎疾患、腎線維症、炎症関連腎疾患、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、自己免疫関連腎線維症（例えば、ループス腎炎）及び腎移植後の線維症から選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記腎疾患はＣＫＤである、請求項７に記載の方法。
  9. 前記抗体又はその抗原結合断片は、腎細胞及び／又は腎組織に発現するαｖβ８インテグリンに結合し、前記腎細胞及び／又は腎組織において、ＴＧＦ－βのその潜在型からの活性化を遮断する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 腎組織における腎線維症を検出する方法であって、腎組織を有効量の検出可能に標識された抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片と接触させ、それによって前記腎組織におけるαｖβ８インテグリンへの前記抗αｖβ８インテグリン抗体の結合を検出することを含む方法。
  11. 前記抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、
    （ａ）アミノ酸配列
    ＲＹＷＭＳ
    を含む重鎖可変領域相補性決定領域１（ＣＤＲ１）；
    （ｂ）アミノ酸配列
    ＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬ
    を含む重鎖可変領域相補性決定領域２（ＣＤＲ２）ＣＤＲ２；及び
    （ｃ）アミノ酸配列
    ＬＩＴＴＥＤＹ
    を含む重鎖可変領域相補性決定領域３（ＣＤＲ３）ＣＤＲ３；並びに
    （ｄ）アミノ酸配列
    ＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ
    を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
    （ｅ）アミノ酸配列
    ＹＡＮＲＬＶＤ
    を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
    （ｆ）アミノ酸配列
    ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ
    を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
    を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＶＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＩＬＩＴＴＥＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；及び
    軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列
    ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＹＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＥＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
    を含む、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、
    （ａ）アミノ酸配列
    ＲＳＷＩＳ
    を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
    （ｂ）アミノ酸配列
    ＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬ
    を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
    （ｃ）アミノ酸配列
    ＬＩＴＴＥＤＹ
    を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；並びに
    （ｄ）アミノ酸配列
    ＫＡＳＱＤＩＮＫＹＬＳ
    を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
    （ｅ）アミノ酸配列
    ＹＡＮＲＬＶＤ
    を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
    （ｆ）アミノ酸配列
    ＬＱＹＤＶＦＰＹＴ
    を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
    を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＶＦＳＲＳＷＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＩＬＩＴＴＥＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ及び
    軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列
    ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＫＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＹＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＶＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
    を含む、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記抗体又はその抗原結合断片は、腎疾患を有する前記対象の腎組織の足細胞及び間質尿細管細胞におけるαｖβ８インテグリンの発現の増加に関連する線維症を減弱化又は抑止する、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
  16. 前記抗体又はその抗原結合断片は、腎疾患の補助治療薬又は治療と組み合わせて前記対象に投与される、請求項１～９又は１１～１５のいずれか一項に記載の方法。
  17. 前記抗体又はその抗原結合断片は、前記補助治療薬又は治療の施行の前、施行と同時に、又は施行後に前記対象に投与される、請求項１６に記載の方法。
  18. （ａ）アミノ酸配列
    ＲＹＷＭＳ
    を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１：
    （ｂ）アミノ酸配列
    ＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬ
    を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
    （ｃ）アミノ酸配列
    ＬＩＴＴＥＤＹ
    を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；並びに
    （ｄ）アミノ酸配列
    ＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ
    を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
    （ｅ）アミノ酸配列
    ＹＡＮＲＬＶＤ
    を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
    （ｆ）アミノ酸配列
    ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ
    を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
    を含む抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片。
  19. 重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＶＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＩＬＩＴＴＥＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ；及び
    軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列
    ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＹＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＥＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
    を含む、請求項１８に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片。
  20. （ａ）アミノ酸配列
    ＲＳＷＩＳ
    を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；
    （ｂ）アミノ酸配列
    ＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬ
    を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；
    （ｃ）アミノ酸配列
    ＬＩＴＴＥＤＹ
    を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；並びに
    （ｄ）アミノ酸配列
    ＫＡＳＱＤＩＮＫＹＬＳ
    を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；
    （ｅ）アミノ酸配列
    ＹＡＮＲＬＶＤ
    を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び
    （ｆ）アミノ酸配列
    ＬＱＹＤＶＦＰＹＴ
    を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
    を含む抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片。
  21. 重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＶＦＳＲＳＷＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＳＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＩＬＩＴＴＥＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ及び
    軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列
    ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＫＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＹＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＶＦＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
    を含む、請求項２０に記載の抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片。
  22. αｖβ８インテグリンへの結合について、請求項１８～２１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片と競合する抗αｖβ８インテグリン抗体又はその抗原結合断片。
  23. 腎線維症を治療する方法で使用するための、請求項１８～２２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片であって、αｖβ８インテグリンに特異的に結合し、それによって腎線維症を治療する抗体又はその抗原結合断片。
  24. 線維性腎細胞及び腎組織で発現したαｖβ８インテグリンに特異的に結合し、αｖβ８インテグリンの潜在型ＴＧＦ－βへの結合を遮断し、それによって腎線維症と関連するαｖβ８インテグリンの活性を抑止して腎疾患を治療する、請求項２３に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  25. 請求項１８又は請求項１９に記載の抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド。
  26. 請求項２０又は請求項２１に記載の抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド。
  27. 前記ＶＨ領域をコードする配列は、核酸配列
    Figure 2023511686000025
     を含み、前記ＶＬ領域をコードする配列は、核酸配列
    Figure 2023511686000026
     を含む、請求項２６に記載のポリヌクレオチド。
  28. 請求項２５～２７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
  29. 原核生物、真核生物、又は哺乳動物の発現ベクターである、請求項２８に記載の発現ベクター。
  30. 請求項２８又は２９に記載の発現ベクターを含む細胞。
  31. 原核生物、真核生物、又は哺乳動物の宿主細胞である、請求項３０に記載の細胞。
  32. 請求項１８～２４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤とを含む医薬組成物。
  33. 請求項２５～２７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドと、薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤とを含む、医薬組成物。
  34. 請求項１８～２４のいずれか一項に記載のαｖβ８インテグリンに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片、或いは前記抗体又は前記その抗原結合断片を含む医薬組成物を含むキット。
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