TW202140554A - 用於治療腎臟疾病之抗αｖβ８整聯蛋白抗體 - Google Patents

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Abstract

提供了用於治療腎臟疾病、如慢性腎臟疾病（CKD）之方法和組成物，其中該等方法和組成物包含與人αvβ8整聯蛋白特異性和選擇性結合的抗體或其抗原結合片段，發現該人αvβ8整聯蛋白如所描述的在腎臟細胞和組織、以及特別地在患病的或纖維化的腎臟組織中高表現。揭露的抗αvβ8整聯蛋白抗體與腎臟中的人αvβ8整聯蛋白結合並且阻斷腎臟組織中TGF-β從其潛伏形式激活。揭露之方法中的抗αvβ8抗體降低、減弱、或消除腎臟纖維化，該腎臟纖維化與腎臟組織中αvβ8整聯蛋白和TGF-β的活性相關。揭露的抗體和方法在有需要的個體中有效地治療腎臟疾病，特別是與腎臟疾病如CKD相關的纖維化。

Description

用於治療腎臟疾病之抗αvβ8整聯蛋白抗體
腎臟疾病通常是指個體腎臟受損並且不能正常地從血液過濾廢產物及過量水或幫助控制血壓之病症。腎臟的功能係釋放調節血壓、產生維生素D並且控制紅血球產生的激素。腎臟損害可能引起廢物在體內累積並且還會引起或增加個體其他健康問題（如心臟疾病、心臟病發作、或中風）之風險。腎臟疾病的主要風險因素包括糖尿病、高血壓、和腎衰竭家族史。腎臟疾病可以包括急性腎臟損傷（AKI）（涉及突然的腎臟功能喪失以及有時係暫時的腎臟功能喪失）和慢性腎臟疾病（CKD）（係指導致長時間腎臟功能降低的任何病症）。CKD可能會多年持續發展並且可能導致終末期腎臟（腎）疾病（ESRD）。
根據美國腎臟基金會（American Kidney Fund）2015年腎臟疾病統計數據，腎臟疾病係美國第九大死亡原因。在美國，約10%至14%的一般成年人群患有CKD，並且在女性中更普遍。然而，患有CKD的男性中CKD發展成腎衰竭或ESRD的可能性比女性高50%。此外，某些種族和族群比其他種族和族群患腎衰竭的風險更大。例如，與高加索人相比，非裔美國人的ESRD患病率高約3.7倍，美洲印第安人的高約1.4倍，並且亞裔美國人的高約1.5倍。西班牙裔患ESRD的可能性係非西班牙裔的將近1.5倍。
腎疾病進展通常導致功能性腎臟組織的完全破壞，這最終可能使受影響的個體需要終生透析或進行腎同種異體移植。腎疾病進展的特徵在於纖維化，其使腎小球（腎小球硬化症）和腎小管（腎小管間質纖維化）遭到破壞。腎纖維化進展的關鍵因素係細胞介素TGF-β、其相互作用的分子和受體、以及其下游細胞傳訊級聯，該等下游細胞傳訊級聯激活導致腎纖維化和腎功能下降的病理生理細胞機制。腎臟中TGF-β表現和TGF-β排泄與腎小球濾過率（GFR）下降和蛋白質滲漏（蛋白尿）相關。腎疾病進展通常導致功能性腎臟組織的完全破壞，這使受影響的個體需要終生透析或進行腎同種異體移植。在分子水平上，涉及許多病理學（包括腫瘤性疾病和炎症）及其受體和傳訊機制的TGF-β之間的連接和相互作用仍不清楚。
腎臟疾病的治療迫切需要如下TGF-β活性的組織和疾病特異性調節劑，該等調節劑不會導致不期望的脫靶作用並且不會不利地影響此細胞介素對正常細胞功能的其他生理貢獻。如本文所述之方法和試劑提供針對腎臟疾病的有利和有益的治療，以及作為治療組分的特異性靶向抗體，該等特異性靶向抗體對阻斷、中和、調節和/或抑制關鍵整聯蛋白靶標有直接作用，已發現該關鍵整聯蛋白靶標在腎臟細胞和組織病理學以及腎臟疾病的機制中起重要作用。
如下所述，本揭露的特徵在於用特異性結合αvβ8整聯蛋白的抗體或其抗原結合片段（即抗αvβ8整聯蛋白抗體）治療患有腎臟疾病、特別是慢性腎臟疾病（CKD）和/或其症狀的受試者（特別是哺乳動物受試者，以及更特別是人受試者）的治療方法。基於本文所述之發現，在腎臟細胞和組織、並且尤其是患病的腎臟細胞和組織（例如在患有腎臟疾病如CKD的受試者中）的αvβ8整聯蛋白的高水平表現允許抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段特異性靶向在罹患腎臟疾病（如CKD）的受試者的患病腎臟組織中表現的αvβ8整聯蛋白。所描述的抗αvβ8整聯蛋白抗體不與其他整聯蛋白受體同種型（如αvβ1、αvβ3、αvβ5、或αvβ6）交叉反應。在實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體係分離的和純化的抗體。在特定實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體係人源化抗體。在另一特定實施方式中，將抗αvβ8整聯蛋白抗體人源化並親和力優化以具有改善的結構、結合和/或功能特性，如改善的特異性、親和力和/或穩定性。
基於腎臟細胞和組織、特別是腎臟的上皮組織表現高水平的αvβ8整聯蛋白（TGF-β細胞介素潛伏形式（LAP-TGF-β）的受體）這一發現，開發了本文所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體和方法。特別地，如藉由本文所述之實驗實施方式證明的，發現在腎臟上皮表現的αvβ8整聯蛋白的水平升高與纖維化和/或患有腎臟疾病的人受試者和動物模型的腎臟組織中的纖維化和纖維化疾病的嚴重程度高度相關。特別地，如本文例示的，與正常腎臟細胞和組織相比，患有腎臟疾病（如糖尿病性腎病（DN））的個體的腎臟上皮組織中的腎小球和腎小管細胞、特別是患病腎臟的足細胞和腎小管（例如近端和遠端皮質小管）中顯示高水平的αvβ8整聯蛋白表現。除了糖尿病性腎病，腎臟組織纖維化在腎活性和功能中產生使人衰弱的損害和功能障礙的其他非限制性腎臟疾病類型包括慢性腎臟疾病（CKD）、急性腎臟疾病、高血壓相關的腎臟疾病、高血糖相關的腎臟疾病、腎纖維化、炎症相關的腎臟疾病、終末期腎病（ESRD）、自體免疫相關的腎臟纖維化（例如，狼瘡性腎炎）和腎移植後的纖維化等。
對於腎臟疾病和CKD的治療，涉及本文所述之抗體試劑之方法的實踐已表明，αvβ8整聯蛋白（其與處於潛伏形式的TGF-β結合）係用於降低和減弱纖維化和組織損害（腎臟疾病（如CKD）的標誌）的高效和有用的靶標。如本文所述和例示的，αvβ8整聯蛋白在腎臟纖維化（由於αvβ8整聯蛋白在腎臟細胞和組織、特別是腎臟上皮細胞和組織、例如在腎臟的腎小球足細胞和腎小管細胞中高水平表現）以及TGF-β（參與患有腎臟疾病的受試者的腎臟組織纖維化並且加重了其損害作用）的活性調節中起直接的、顯著的、先前未認識到的作用。在所描述方法中使用的抗αvβ8整聯蛋白抗體允許特異性和選擇性調節腎臟細胞和組織中αvβ8整聯蛋白及其TGF-β配位基兩者的活性，從而降低、消除、減弱、減少和/或抑制由以下引起的腎臟組織中的纖維化：αvβ8整聯蛋白與其配位基（潛伏TGF-β）結合，然後能夠激活/釋放活性TGF-β並且使活性TGF-β發揮有害作用而造成腎臟組織纖維化。
在腎臟組織中激活TGF-β的一種方式可以是藉由其（作為潛伏相關肽（LAP）TGF-β）與腎臟細胞膜中表現的αvβ8整聯蛋白結合。如本文示出的，發現αvβ8整聯蛋白的表現在患有腎臟疾病並伴隨腎臟纖維化的受試者的腎臟組織中高度升高。腎臟中持續或延長的TGF-β激活導致腎臟組織纖維化。藉由本文所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體來靶向αvβ8整聯蛋白（特別是在表現高水平的αvβ8整聯蛋白的腎臟組織中）被確定為係用於腎臟疾病（例如CKD）的有效治療性治療，其同時避免了不加選擇的TGF-β靶向和抑制在體內其他非腎臟組織中的許多潛在的全身作用。UUO模型係纖維化模型，並且如藉由本文所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體所證明的，纖維化和TGF-β激活的抑制將導致CKD進展的降低和/或抑制。如本文所述之，與在患病的和/或纖維化的腎臟組織中高表現的αvβ8整聯蛋白特異性結合的高親和力抗αvβ8整聯蛋白抗體還選擇性地降低、消除、減弱、減少、中和、和/或抑制或另外阻止腎臟細胞和組織的膜上αvβ8整聯蛋白和潛伏TGF-β的相互作用。不表現αvβ8整聯蛋白的其他組織和器官將不受影響。因此，抗αvβ8抗體與表現腎臟細胞的αvβ8整聯蛋白的特異性結合阻斷患病的和/或纖維化的腎臟中TGF-β的激活，以便治療腎臟疾病（如CKD）和相關的纖維化，並且對非腎臟細胞和組織中TGF-β活性具有最小至無顯著的有害作用。
有利地，抗αvβ8整聯蛋白抗體特異性減輕αvβ8整聯蛋白和潛伏TGF-β相互作用對腎臟組織和腎臟疾病中纖維化的發展和進展的影響，同時保留了TGF-β活性對正常細胞功能的大部分貢獻。在實施方式中，本文所述之方法進一步為患有涉及纖維化的腎臟疾病（如CKD）和其他腎臟疾病例（如糖尿病性腎病（DN）相關的腎臟疾病、急性腎臟疾病、高血壓相關的腎臟疾病、高血糖相關的腎臟疾病、腎纖維化、炎症相關的腎臟疾病、終末期腎病（ESRD）、自體免疫相關的腎臟纖維化（例如，狼瘡性腎炎）和腎移植後的纖維化等）的個體提供治療性治療益處以保護功能性腎上皮。
在一方面，提供了在患有腎臟疾病的受試者中治療腎臟纖維化之方法，其中該方法包括向該受試者投與有效量的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段。
在另一方面，提供了在患有腎臟疾病的受試者中降低或減弱腎臟纖維化之方法，其中該方法包括向有需要的受試者投與有效量的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，從而降低或減弱腎臟中的纖維化。
在另一方面，提供了消除與腎臟纖維化相關的αvβ8整聯蛋白的活性之方法，其中該方法包括向有需要的受試者投與有效量的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，並且阻斷αvβ8整聯蛋白與潛伏TGF-β的結合，從而消除與腎臟纖維化相關的αvβ8整聯蛋白的活性。在該方法的實施方式中，該受試者患有腎臟疾病。
在又另一個方面中，提供了藉由阻斷腎臟細胞和組織中TGF-β從其潛伏形式激活來治療腎臟纖維化之方法，其中該方法包括向有需要的受試者投與有效量的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，以及阻斷αvβ8整聯蛋白與TGF-β的潛伏形式結合以產生活性TGF-β，從而治療該腎臟纖維化。在該方法的實施方式中，該受試者患有腎臟疾病。
提供了治療腎損害之方法，該腎損害的特徵在於血漿肌酐和/或尿蛋白排泄水平的增加，其中該方法包括向有需要的受試者投與有效量的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，其中該抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段的投與消除了受試者中的血漿肌酐和/或尿蛋白排泄水平，從而治療腎損傷。
在實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段減少受試者腎臟組織中αvβ8介導的TGF-β激活。
在本文描述的以上方法的任何方面的實施方式中，腎臟疾病選自糖尿病性腎病（DN）、慢性腎臟疾病（CKD）、急性腎臟疾病、高血壓相關的腎臟疾病、高血糖相關的腎臟疾病、腎纖維化、炎症相關的腎臟疾病、終末期腎病（ESRD）、自體免疫相關的腎臟纖維化（例如，狼瘡性腎炎）和腎移植後的纖維化等。在特定實施方式中，腎臟疾病係CKD。在特定實施方式中，腎臟疾病係糖尿病性腎病。
在本文描述的以上方法的任何方面的實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段與腎臟細胞和/或組織中表現的αvβ8整聯蛋白結合並且阻斷TGF-β從其潛伏形式激活。
如本文所述之其他方面提供的是檢測腎臟組織中腎臟纖維化之方法，其中該方法包括使腎臟組織與有效量的經可檢測地標記的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段接觸，檢測該抗αvβ8整聯蛋白抗體與腎臟組織中αvβ8整聯蛋白的結合。
在本文描述的以上方法的任何方面的實施方式中，與αvβ8整聯蛋白特異性結合的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段包含： (a) 重鏈可變區互補決定區1（CDR1），其包含胺基酸序列： RYWMS（SEQ ID NO: 1）； (b) 重鏈可變區互補決定區2（CDR2），其包含胺基酸序列： EINPDSSTINYTSSL（SEQ ID NO: 2）；和 (c) 重鏈可變區互補決定區3（CDR3），CDR3包含胺基酸序列： LITTEDY（SEQ ID NO: 3）；和 (d) 輕鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： KASQDINSYLS（SEQ ID NO: 4）； (e) 輕鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： YANRLVD（SEQ ID NO: 5）；和 (f) 輕鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LQYDEFPYT（SEQ ID NO: 6）。
在本文描述的以上方法的任何方面的另一個實施方式中，與αvβ8整聯蛋白特異性結合的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區（VH ）胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFVFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTSSLKDRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAILITTEDYWGQGTTVTVSS（SEQ ID NO: 7）；和 輕鏈可變區（VL ）胺基酸序列： DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINSYLSWFQQKPGKAPKSLIYYANRLVDGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDEFPYTFGGGTKVEIK（SEQ ID NO: 8）。 在本文描述的以上方法的任何方面的另一個實施方式中，與αvβ8整聯蛋白特異性結合的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段包含： (a) 重鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： RSWIS（SEQ ID NO: 9）； (b) 重鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： EINPDSSTINYTSSL（SEQ ID NO: 2）；和 (c) 重鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LITTEDY（SEQ ID NO: 3）；和 (d) 輕鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： KASQDINKYLS（SEQ ID NO: 10）； (e) 輕鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： YANRLVD（SEQ ID NO: 5）；和 (f) 輕鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LQYDVFPYT（SEQ ID NO: 11）。 在本文描述的以上方法的任何方面的另一個實施方式中，與αvβ8整聯蛋白特異性結合的抗αvβ8整聯蛋白抗體（本文稱為「B5-15」）或其抗原結合片段包含重鏈可變區（VH ）胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFVFSRSWISWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTSSLKDRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAILITTEDYWGQGTTVTVSS（SEQ ID NO: 12），以及 輕鏈可變區（VL ）胺基酸序列： DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINKYLSWFQQKPGKAPKSLIYYANRLVDGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDVFPYTFGGGTKVEIK（SEQ ID NO: 13）。
在本文描述的以上治療方法的任何方面的實施方式中，將與αvβ8整聯蛋白特異性結合的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段與用於腎臟疾病的輔助治療劑或治療組合投與至受試者。在實施方式中，將與αvβ8整聯蛋白特異性結合的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段在投與輔助治療劑或治療之前、同時或之後投與至受試者。
在本文描述的以上治療方法的任何方面的實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段與纖維化腎臟細胞和組織中表現增加的αvβ8整聯蛋白結合，並且減弱或消除與患有腎臟疾病（如CKD）的受試者的腎臟組織中足細胞和間質小管細胞中αvβ8整聯蛋白的表現增加相關的纖維化。
如本文所述之另一個方面提供的是抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (a) 重鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： RYWMS（SEQ ID NO: 1）； (b) 重鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： EINPDSSTINYTSSL（SEQ ID NO: 2）；和 (c) 重鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LITTEDY（SEQ ID NO: 3）；和 (d) 輕鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： KASQDINSYLS（SEQ ID NO: 4）； (e) 輕鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： YANRLVD（SEQ ID NO: 5）；和 (f) 輕鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LQYDEFPYT（SEQ ID NO: 6）。
如本文所述之另一個方面提供的是抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： 重鏈可變區（VH ）胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFVFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTSSLKDRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAILITTEDYWGQGTTVTVSS（SEQ ID NO: 7）；和 輕鏈可變區（VL ）胺基酸序列： DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINSYLSWFQQKPGKAPKSLIYYANRLVDGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDEFPYTFGGGTKVEIK（SEQ ID NO: 8）。
在實施方式中，以上抗體或其抗原結合片段與患有腎臟疾病（如CKD）的受試者的纖維化腎臟細胞和組織中表現增加的αvβ8整聯蛋白結合。在實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段與纖維化腎臟細胞和組織中表現增加的αvβ8整聯蛋白特異性結合，並且阻斷αvβ8整聯蛋白與潛伏TGF-β的結合，從而消除與腎臟纖維化相關的αvβ8整聯蛋白的活性。在實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段減弱或消除與患有腎臟疾病的受試者的腎臟組織中足細胞和間質小管細胞中αvβ8整聯蛋白的表現增加相關的纖維化。
如本文所述之另一個方面提供的是抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： (a) 重鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： RSWIS（SEQ ID NO: 9）； (b) 重鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： EINPDSSTINYTSSL（SEQ ID NO: 2）；和 (c) 重鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LITTEDY（SEQ ID NO: 3）；和 (d) 輕鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： KASQDINKYLS（SEQ ID NO: 10）； (e) 輕鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： YANRLVD（SEQ ID NO: 5）；和 (f) 輕鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LQYDVFPYT（SEQ ID NO: 11）。
如本文所述之另一個方面提供的是抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區（VH ）胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFVFSRSWISWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTSSLKDRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAILITTEDYWGQGTTVTVSS（SEQ ID NO: 12），以及 輕鏈可變區（VL ）胺基酸序列： DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINKYLSWFQQKPGKAPKSLIYYANRLVDGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDVFPYTFGGGTKVEIK（SEQ ID NO: 13）。
在實施方式中，以上抗體或其抗原結合片段與患有腎臟疾病（如CKD）的受試者的纖維化腎臟細胞和組織中表現增加的αvβ8整聯蛋白結合。在實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段與纖維化腎臟細胞和組織中表現增加的αvβ8整聯蛋白特異性結合，並且阻斷αvβ8整聯蛋白與潛伏TGF-β的結合，從而消除與腎臟纖維化相關的αvβ8整聯蛋白的活性。在實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段減弱或消除與患有腎臟疾病的受試者的腎臟組織中足細胞和間質小管細胞中αvβ8整聯蛋白的表現增加相關的纖維化。
在以上方面中任一項所述之實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段屬於IgG類。在特定實施方式中，抗體或其抗原結合片段屬於IgG1同種型。
在另一方面，提供了抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，其與如以上方面所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體中任一項的抗體或其抗原結合片段競爭結合αvβ8整聯蛋白。在實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段係IgG抗體。在實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段係IgG1抗體。 在另一方面，提供了如本文所述之編碼抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段的多核苷酸。在實施方式中，編碼抗體的VH 區的多核苷酸序列包含以下核酸序列： gaggtgcagctggtggaaagcggcggaggactggtgcagcctggcggcagcctgagactgagctgcgccgtgtccggcttcgtgttcagccggagctggatcagctgggtccgccaggccccagggaagggcctggaatggatcggcgagatcaaccccgacagcagcaccatcaactacaccagcagcctgaaggaccggttcaccatcagccgggacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaacagcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactactgcgccatcctcatcaccaccgaggactactggggccagggcaccaccgtgaccgtgtcctct（SEQ ID NO: 14）； 並且編碼抗體的VL 區的多核苷酸序列包含以下核酸序列： gacatccagctgacccagagccccagcagcctgagcgccagcgtgggcgacagagtgaccatcacatgcaaggccagccaggacatcaacaagtacctgagctggttccagcagaagcccggcaaggcccccaagagcctgatctactacgccaaccggctggtggacggcgtgcccagcagattttctggcagcggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcagcagcctgcagcccgaggacttcgccacctactactgcctgcagtacgacgtgttcccctacaccttcggcggaggcaccaaggtggaaatcaag（SEQ ID NO: 15）。
在另一方面，提供了包含如本文所述之多核苷酸的表現載體。在實施方式中，表現載體係原核、真核或哺乳動物表現載體。
在另一方面，提供了包含如上所述之表現載體的細胞。在實施方式中，細胞係原核、真核或哺乳動物宿主細胞。
在另一方面，提供了包含如以上描述的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段以及藥學上可接受的載劑、賦形劑或稀釋劑的藥物組成物。
在另一方面，提供了包含如以上描述的多核苷酸以及藥學上可接受的載劑、賦形劑或稀釋劑的藥物組成物。
在另一方面，提供了包含如本文所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段、或包含抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段的藥物組成物的套組（kit）。
本揭露的其他特徵和優點將根據具體實施方式和請求項變得明顯。定義
除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語具有本發明所屬領域的技術人員通常理解的含義。以下的參考文獻為技術人員提供了本揭露所用的多個術語的通用定義：Singleton等人, Dictionary of Microbiology and Molecular Biology [微生物學和分子生物學詞典]（第2版 1994）；The Cambridge Dictionary of Science and Technology [劍橋科技詞典]（Walker編著，1988）；The Glossary of Genetics [遺傳學詞彙], 第5版, R. Rieger等人（編輯）, Springer Verlag [斯普林格出版社] (1991)；以及Hale和Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology [哈珀科林斯生物學詞典] (1991)。除非另有指明，否則如本文所用的以下術語具有以下賦予它們的含義。
術語「藥劑」係指蛋白質、多肽、肽（或其片段或部分）、核酸分子、小化合物、藥物或藥品。藥劑可以是拮抗的並且阻斷或抑制另外的分子如同源配位基的活性。
如在本揭露中所用的，術語「抗體」係指免疫球蛋白或其片段、部分或衍生物，並且涵蓋包含抗原結合位點的任何多肽，無論它係在體外或在體內產生的。該術語包括但不限於：多株、單株、單特異性、多特異性、非特異性、人源化、單鏈、嵌合、合成、重組、雜交、突變、以及接枝抗體。除非用術語「完整」另行修改，如在「完整抗體」中，出於本揭露的目的，術語「抗體」還包括抗體片段（或部分）如Fab、F(ab′)2、Fv、scFv、Fd、dAb，和其他保留抗原結合功能或表位結合功能（即特異性結合多肽的能力）的抗體片段（或部分）。通常，此類片段（或部分）包含抗原結合結構域。
舉例來說，免疫球蛋白（抗體）包含四聚體結構單元。每個四聚體含有兩對相同的多肽鏈，每對具有一條「輕」（L）鏈（約25 kD）和一條「重」（H）鏈（約50-70 kD）。每條多肽鏈的胺基（N）-末端定義了具有主要負責抗原識別和結合的約100至110個或更多個胺基酸的可變（V）區。術語可變輕鏈區（VL ）和可變重鏈區（VH ）分別指免疫球蛋白分子（抗體）的輕鏈和重鏈的可變區。可變區或「V區」指包含組分片段（即框架1（F1）、CDR1、框架2（F2）、CDR2、框架3（F3）、CDR3和框架4（F4），這係由於在B細胞分化期間重鏈和輕鏈V區基因的遺傳重排）的抗體可變區結構域。
免疫球蛋白（抗體）分子的VH 和VL 區包含三個互補決定區（CDR），其係位於VH 和VL 框架區內的三個高變區。CDR主要負責結合抗原的表位。抗體VH 和VL 區的CDR通常稱為CDR1、CDR2、和CDR3，從可變區片段的N-末端開始順序編號。不同的重和輕抗體鏈的框架區的胺基酸序列在物種內係相對保守的。抗體的組成重鏈和輕鏈V區的框架區（FW1-FW4）提供三維空間中CDR的結構定位和比對。可以確定抗體分子中CDR和框架區的胺基酸序列的表徵（和編號），如報導於例如Kabat, Chothia, International ImMunoGeneTics database (IMGT) [國際免疫遺傳學數據庫（IMGT）]，以及AbM（例如，Chothia和Lesk, 1987,J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌], 196:901-917；Chothia等人, 1989,Nature [自然], 342:877-883；Chothia等人, 1992,J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌], 227:799-817；Al-Lazikani等人, 1997,J. Mol. Biol . [分子生物學雜誌], 273(4):927-948）。抗原結合位點的定義報導於Ruiz等人, 2000,Nucleic Acids Res. [核酸研究], 28:219-221和Lefranc, 2001,Nucleic Acids Res. [核酸研究], 29(1):207-209；MacCallum等人, 1996,J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌], 262:732-745；Martin等人, 1989,Proc. Natl Acad. Sci. USA [美國國家科學院院刊], 86:9268-9272；Martin,等人, 1991,Methods Enzymol. [酶學方法], 203:121-153；Pedersen等人, 1992,Immunomethods [免疫方法], 1:126-136；和Rees等人, 1996,  Sternberg M. J. E. (編輯), Protein Structure Prediction [蛋白質結構預測]。Oxford University Press [牛津大學出版社], 英格蘭牛津, 第141-172頁。
「嵌合抗體」係抗體分子，其中恒定區或其片段被改變、替換或交換，使得抗原結合位點（可變區、CDR、或其片段）與不同的或改變的類別和/或物種的抗體分子的恒定區連接，或與賦予該嵌合抗體新特性或效應子功能的完全不同的分子（例如，酶、毒素、激素、生長因子、藥物等）連接。可替代地，嵌合抗體可包含可變區或其片段，其被具有不同的或改變的抗原特異性的可變區（例如，來自不同物種的一個或多個CDR和框架區）改變、替換或交換的。
術語「抗原結合部分」、「抗原結合結構域」、「抗原結合片段」、「結合片段」或「結合部分」係指抗體分子的包含負責抗體和抗原之間特異性結合的胺基酸的一部分。例如，在抗原很大的情況下，抗原結合結構域可只結合抗原的一部分。負責與抗原結合結構域特異性相互作用的抗原分子的一部分被稱為「結合位點」、「表位」或「抗原決定簇」。在特定實施方式中，抗原結合結構域包含抗體輕鏈可變區（VL ）和抗體重鏈可變區（VH ）；但是，它不一定必須包含兩者。例如，所謂的Fd抗體片段僅由VH 結構域組成，但是仍然保留完整抗體的一定抗原結合功能。可以使用本領域已知之方法來確定針對給定抗原產生的抗體的結合位點或表位。例如，可以使用具有已知表位的抗體進行競爭測定（例如，競爭酶聯免疫吸附測定（ELISA））。如果測試抗體競爭與給定抗原的結合，那麼該抗體可能共用至少部分相同的表位。還可以使用抗原的結構域交換或選擇性誘變來定位表位。也就是說，抗原的每個區域或每個胺基酸可以被「交換」出來，或用已知不與測試抗體相互作用的胺基酸或組分取代。如果給定區域或胺基酸的取代使測試抗體與經取代抗原的結合與非經取代抗原相比降低，則該區域或胺基酸可能是表位、可能在表位之內、或可能是表位的至少一部分。
藉由重組DNA技術或藉由完整抗體的酶促或化學切割來產生抗體的結合片段（或部分）。結合片段或部分包括Fab、Fab'、F(ab')2 、Fv以及單鏈抗體。除了「雙特異性」或「雙功能」抗體以外，抗體應理解為其每個結合位點係相同的。用酶（木瓜蛋白酶）消化抗體產生兩個同一的抗原結合片段，又稱為「Fab」片段和「Fc」片段，它們不具有抗原結合活性但具有結晶的能力。用酶（胃蛋白酶）消化抗體產生F(ab')2 片段，其中該抗體分子的兩個臂保持連接並且包含兩個抗原結合位點。F(ab')2 片段具有交聯抗原的能力。當本文使用時，「Fv」係指保留了抗原識別和抗原結合位點兩者的抗體的最小片段。當本文使用時，「Fab」係指抗體的包含輕鏈的恒定結構域和重鏈的CHI結構域的片段。
術語「mAb」係指單株抗體。本文揭露的抗體包含但不限於全天然抗體、雙特異性抗體；嵌合抗體；Fab、Fab'、單鏈V區片段（scFv）、融合多肽以及非常規抗體。
術語「人源化抗體」係指源自非人（例如鼠、大鼠或兔）免疫球蛋白的抗體，其被工程化成含有最小的非人（例如鼠、大鼠或兔）序列。通常，人源化抗體係人免疫球蛋白，其中來自高變互補決定區（CDR）的殘基被來自非人物種（例如，小鼠、大鼠、兔或倉鼠）的CDR的具有感興趣的特異性、親和力和/或能力的殘基替代（Jone等人, 1986,Nature [自然], 321:522-525；Riechmann等人, 1988,Nature [自然], 332:323-327；Verhoeyen等人, 1988,Science [科學], 239:1534-1536）。因此，人源化抗體的框架區基本上係人免疫球蛋白的框架區。在一些情況下，人免疫球蛋白的Fv框架區（FW）殘基被來自非人物種的具有感興趣的特異性、親和力和/或能力的抗體中相應殘基替代。
人源化抗體可以藉由在Fv框架區和/或替代的非人殘基內的另外殘基的取代來進一步修飾，以改善和優化抗體特異性、親和力和/或能力。通常，人源化抗體將包含基本上所有至少一個（並且通常是兩個或三個）可變結構域，該可變結構域含有對應於非人免疫球蛋白的所有或基本上所有CDR區，而所有或基本上所有FR區係人免疫球蛋白共有序列的FR區。人源化抗體還可以包含免疫球蛋白恒定區或結構域（Fc）的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定區或結構域。用於產生人源化抗體之方法的實例描述於例如美國專利號5,225,539或5,639,641中。
「片段」意指多肽或核酸分子的一部分。「片段」或「部分」較佳的是含有參比核酸分子或多肽的全長的至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。在特定實施方式中，多肽的片段或部分可以含有5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200或300個胺基酸。在實施方式中，片段或部分保留整個多肽或核酸分子的全部或至少部分活性和/或功能。
「檢測」係指鑒定待檢測的分析物的存在、不存在或量。在各種實施方式中，該分析物係多肽或核酸生物標誌。
與抗體相關的「競爭」通常意指第一抗體或其抗原結合片段與第二抗體或其抗原結合片段競爭結合，其中與第二抗體不存在下的第一抗體的結合相比，在第二抗體存在下的第一抗體（與其同源抗原結合位點或表位（例如在整聯蛋白αvβ8上））的結合可檢測地降低。如可替代地可能情況下，在第一抗體的存在下，第二抗體與其同源抗原結合位點或表位的結合也可檢測地降低；然而，情況並非總是如此。因此，第一抗體可以抑制第二抗體與其同源抗原結合位點或表位的結合，同時第二抗體不抑制第一抗體與其在抗原上各自的結合位點或表位的結合。然而，在每個抗體可檢測地抑制其他抗體與其同源表位或配位基的結合的情況下，無論是相同的、或更大或更小程度，抗體被稱為彼此「交叉競爭」結合其各自的結合位點或表位。本文考慮競爭抗體和交叉競爭抗體兩者。儘管存在發生抗體競爭或交叉競爭（如藉由位阻、構象變化或與共同結合位點、表位或其片段結合等）的機制，但競爭和/或交叉競爭抗體均涵蓋於本文並且可用於揭露之方法中。
與本文所述之治療相關的術語「改善」指減少、降低、減小、阻抑、減弱、消除、遏制、抑制、阻斷、中和或穩定疾病或病症如腎臟細胞和/或組織的纖維化（腎臟纖維化）的發展或進展。
如本文所指，「整聯蛋白」係細胞表面糖蛋白，其係哺乳動物細胞結合細胞外基質以及介導細胞-細胞和細胞-細胞外基質相互作用的主要受體。它們係異二聚體（具有彼此非共價結合的α和β亞基）並且作為細胞外基質與細胞的肌動蛋白細胞骨架之間的跨膜連接子（linker）起作用。整聯蛋白不作為被動膠（passive glue）起作用，而是充當介導資訊跨細胞膜雙向轉運的動態分子。整聯蛋白介導的黏附可響應於信號、藉由在整聯蛋白胞質尾區（當被配位基結合激活時充當訊息傳導劑以激活各種細胞內傳訊途徑）觸發的聚集和構象改變來調節。此外，整聯蛋白傳訊控制細胞存活、細胞週期進展和分化。整聯蛋白介導的黏附結構的調節對於許多形式的細胞遷移至關重要。整聯蛋白還有助於各種不同的獲得性或先天性疾病的發病機理。
蛋白質的整聯蛋白家族有幾個成員，其中一些具有廣泛的組織分佈。脊椎動物中存在約二十四種不同的整聯蛋白；單個細胞可以在其表面表現多個不同類型的整聯蛋白受體。藉由ITGB8 基因編碼的人整聯蛋白β8亞基具有包括纖網蛋白以及TGF-β1和TGF-β2同種型在內的配位基。與MT1基質金屬蛋白酶（MMP）組合的αvβ8整聯蛋白（一種包含與如下文進一步所述之β8（β8）亞基相關的α-V（αv）亞基的異二聚體）在細胞表面表現並且與細胞基質中的潛伏TGF-β相互作用並介導其的激活。MT1蛋白酶切割潛伏TGF-β以釋放成熟的活性TGF-β多肽。活性氧類、其他蛋白酶、炎症和pH變化也被證明係活性TGFβ釋放的原因。
「αvβ8」意指與NCBI參比序列NM_002214.2提供的人αvβ8整聯蛋白胺基酸序列具有至少約85%或更高的胺基酸序列同一性並且具有如下所示的αvβ8活性和/或功能的「αvβ8整聯蛋白受體」、「αvβ8整聯蛋白」、或「整聯蛋白αvβ8」多肽或其片段。如其他整聯蛋白β（beta）亞基，人αvβ8含有N-末端訊息肽、包括4個富含半胱胺酸重複的大細胞外結構域、跨膜結構域和短的C-末端胞質結構域。αvβ8具有約95 kD的分子量，與大量糖基化的預測的81 kD β8基因產物一致（M. Moyle等人, 1991, J. Biol. Chem. [生物化學雜誌], 266:19650-19658）。RNA印跡分析揭示了人αvβ8在骨肉瘤細胞系中表現為約8.5千鹼基（kb）的mRNA。當在哺乳動物細胞中表現時，β8整聯蛋白亞基與α-V（αV）亞基關聯以形成細胞表面αvβ8整聯蛋白錯合物。在特定實施方式中，多肽係人αvβ8整聯蛋白。如本文所用的術語「αvβ8」與「αvβ8整聯蛋白受體」、「αvβ8整聯蛋白」和「整聯蛋白αvβ8」同義。「itgb8 」的名稱通常是指β8亞基的人基因序列。
人β8整聯蛋白（與術語ITGB8、整聯蛋白β-8、整聯蛋白β8、β8和類似術語互換使用）蛋白序列可見於Uniprot登錄號P26012或NCBI參比序列：NM_002214.2，如下： MCGSALAFFTAAFVCLQNDRRGPASFLWAAWVFSLVLGLGQGEDNRCASSNAASCARCL ALGPECGWCVQEDFISGGSRSERCDIVSNLISKGCSVDSIEYPSVHVIIPTENEINTQV TPGEVSIQLRPGAEANFMLKVHPLKKYPVDLYYLVDVSASMHNNIEKLNSVGNDLSRKM AFFSRDFRLGFGSYVDKTVSPYISIHPERIHNQCSDYNLDCMPPHGYIHVLSLTENITE FEKAVHRQKISGNIDTPEGGFDAMLQAAVCESHIGWRKEAKRLLLVMTDQTSHLALDSK LAGIVVPNDGNCHLKNNVYVKSTTMEHPSLGQLSEKLIDNNINVIFAVQGKQFHWYKDL LPLLPGTIAGEIESKAANLNNLVVEAYQKLISEVKVQVENQVQGIYFNITAICPDGSRK PGMEGCRNVTSNDEVLFNVTVTMKKCDVTGGKNYAIIKPIGFNETAKIHIHRNCSCQCE DNRGPKGKCVDETFLDSKCFQCDENKCHFDEDQFSSESCKSHKDQPVCSGRGVCVCGKC SCHKIKLGKVYGKYCEKDDFSCPYHHGNLCAGHGECEAGRCQCFSGWEGDRCQCPSAAA QHCVNSKGQVCSGRGTCVCGRCECTDPRSIGRFCEHCPTCYTACKENWNCMQCLHPHNL SQAILDQCKTSCALMEQQHYVDQTSECFSSPSYLRIFFIIFIVTFLIGLLKVLIIRQVI LQWNSNKIKSSSDYRVSASKKDKLILQSVCTRAVTYRREKPEEIKMDISKLNAHETFRC NF（SEQ ID NO: 16）。
人β8整聯蛋白的itgb8 多核苷酸編碼序列如下所示（8787 bp的itgb8 mRNA核酸序列）。人β8整聯蛋白的多核苷酸序列可見於登錄號：NCBI參比序列：NM_002214.2。本揭露涵蓋與編碼人β8整聯蛋白多肽的itgb8 多核苷酸序列具有至少約85%或更高的核苷酸序列同一性的多核苷酸或其片段。 1 ggcgggtgct tctagggcgc tcccagagcc gcctccccct gttgctggca tcccgagctt 61 cctcccttgc cagccaggac gctgccgact tgtctttgcc cgctgctccg cagacggggc 121 tgcaaagctg caactaatgg tgttggcctc cctgcccacc tgtggaagca actgcgctga 181 ttgatgcgcc acagactttt ttcccctcga cctcgccggc gtcccctccc acagatccag 241 catcacccag tgaatgtaca ttagggtggt ttccccccca gcttcgggct ttgtttgggt 301 ttgattgtgt ttggctcttc gctaagctga tttatgcagc agaagcccca ccggctggag 361 agaaacaaaa gctcttttct ttgtcccgga gcaggctgcg gagcccttgc agagccctct 421 ctccagtcgc cgccggggcc cttggccgtc gaaggaggtg cttctcgcgg agaccgcggg 481 acccgccgtg ccgagccggg agggccgcag gggccctgag atgccgagcg gtgcccgggc 541 ccgcttacct gcaccgcttg ctccgagccg cggggtccgc ctgctaggcc tgcggaaaac 601 gtcctagcga cactcggccc gcgggccccg aggtgcgccc gggaggcgcg agcccgcgtc 661 cggaaggcag tcaggcggcg ggcgcggggc gggctgtttt gcattatgtg cggctcggcc 721 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caggcagatg ccaatgcttc agtggctggg aaggtgatcg atgccagtgc 2461 ccttcagcag cagcccagca ctgtgtcaat tcaaagggcc aagtgtgcag tggaagaggc 2521 acgtgtgtgt gtggaaggtg tgagtgcacc gatcccagga gcatcggccg cttctgtgaa 2581 cactgcccca cctgttatac agcctgcaag gaaaactgga attgtatgca atgccttcac 2641 cctcacaatt tgtctcaggc tatacttgat cagtgcaaaa cctcatgtgc tctcatggaa 2701 caacagcatt atgtcgacca aacttcagaa tgtttctcca gcccaagcta cttgagaata 2761 tttttcatca ttttcatagt tacattcttg attgggttgc ttaaagtcct gatcattaga 2821 caggtgatac tacaatggaa tagtaataaa attaagtcct catcagatta cagagtgtca 2881 gcctcaaaaa aggataagtt gattctgcaa agtgtttgca caagagcagt cacctaccga 2941 cgtgagaagc ctgaagaaat aaaaatggat atcagcaaat taaatgctca tgaaactttc 3001 aggtgcaact tctaaaaaaa gatttttaaa cacttaatgg gaaactggaa ttgttaataa 3061 ttgctcctaa agattataat tttaaaagtc acaggaggag acaaattgct cacggtcatg 3121 ccagttgctg gttgtacact cgaacgaaga ctgacaagta tcctcatcat gatgtgactc 3181 acatagctgc tgactttttc agagaaaaat gtgtcttact actgtttgag actagtgtcg 3241 ttgtagcact ttactgtaat atataactta tttagatcag catagaatgt agatcctctg 3301 aagagcactg attacacttt acaggtacct gttatcccta cgcttcccag agagaacaat 3361 gctgtgagag agtttagcat tgtgtcacta caagggtaca gtaatccctg cactggacat 3421 gtgaggaaaa aaataatctg gcaagtatat tctaaggttg ccaaacactt caacagttgg 3481 tggttgaata gacaagaaca gctagatgaa taaatgattc gtgtttcact ctttcaagag 3541 gtgaacagat acaaccttaa tcttaaaaga ttattgcttt ttaaagtgtg tagttttatg 3601 catgtgtgtt tatggtttgc ttatttttgc aagatggata ctaattccag cattctctcc 3661 tctttgcctt tatgttttgt tttctttttt acaggataag tttatgtatg tcacagatga 3721 ctggattaat taagtgctaa gttactactg ccataaaaaa ctaataatac aatgtcactt 3781 tatcagaata ctagttttaa aagctgaatg ttaatagggg acactgtaaa gtatcatcaa 3841 aacctgaata gcttcattgt gcacaagtgt ggagttttgt atcctcttac ctggtaaact 3901 gaagggattg tttggccatt tcatttatct tatcattaat tcacaagata gttagaaatt 3961 ctgcctcaag caaagtacca cattttgaat gttttcttag attttgattg caagtagata 4021 tcagcatttt ttaaatgaaa agctatatta tcttctccct tcaaggcagc ctaaggatgt 4081 tctttcccag aatcactcca acccttcttg ccagaattca taaaagtaca aaattggaga 4141 atagatgata tcttagaaat aagctttttt tttttttttt tttttttttg agacggagtt 4201 tcactcttgt cacccaggct gaagtgcaat ggcgcaatta gggttcactg caacctctgc 4261 ctcccgggtt caagcagttc tcctgcctca gcctcctgag tagctgggat tacaggcatc 4321 caccaccgtg cccagctaat ttttgtattt ttagtagaga cggggttttg ccatgttgga 4381 caggttgatc tcaaactcct gacctcaggt gatctaccct cctcggcctc ccagagtgtt 4441 gggattacag gcatgagcca ccatgccagg ctgctaattc tcctttttag tgagttaggg 4501 aactgagcct cagaaaactt aaacgatttc tcagaaaaca ctcaagtgat aaagtggcca 4561 cattggaaag gagtttttat cttctcattg tcaggccagt gttcattgca caatatcatg 4621 ctacctcttg aatctttaaa atattcaatt ggcaaatgtt tttcaatgtg atttactcat 4681 gtcttaagtg tatgaggaaa gttcaaagca aaatagaaag gaataattca aactgaattg 4741 tccataatca gcttccagtc tttcatgcta atcagcttct taagagactg aagtatggca 4801 tacctacagg ggaattcctt cgcaccatag cctgtatgaa cagtgttccc tggagttctc 4861 cagtgctcag cttgagacct tgatacacgg gccatgagcc ctgtcttccc caatggaaat 4921 ttatttacac ttaccttatc cctatggact tagtctgatt ttattggcta ggagtctaac 4981 agtcctgtgt ggatatacag ttttgcccat gacaacaaag gaatctatcc gaaatatctt 5041 tttttttata ataaacttcc aagatttgct gtcttccagc acttgagtta aagtactaga 5101 tactgcattt tgatgaagac taaccccatc tcatattcta ccctaaagag aactgaaaaa 5161 cctataataa gttgttctgg agccaataaa cacagcagct ctgttagatg tcctctacag 5221 ccaagcactt tcaatgctaa cttgaactgc atttccttcc tcaaatgaga gattgacata 5281 attcagtact gtgagtcact tgtataagaa acctttgatc actaaaaata atgtaaaaat 5341 tgggtttagt agcctaatac acataacgtt cttcttaaaa aggaaaatgg atggatgcct 5401 gacaaccctc caaaagaaaa aagtgtaaga tagccattaa gatgatgaca atttttgaaa 5461 tgaacattat gatatttatg aacaataaac aaatttccgt atggaatgaa ttatccaaaa 5521 agagtataac aaaatgaaat ccttaaaaat ccagagttta tatttttttt ataccctcac 5581 ttgtttgcac taactttata gtggaccaag gctgttacca taggaaggga caaacttcct 5641 tgtaggcaac tcagtgttag acgatgattg tggttatgct tgcaaagtct tgtgcttatc 5701 ttttttgttt ttacttaaaa agctaatttt taaagattgt agggcttgta ttttacttga 5761 ataattgata tcttcctgtg taatgatttg tgagatgaga attaatattt gactagttag 5821 aattaattaa atggtaaggg aacacagggt actcttaggt taaataatgt atgcaaatag 5881 agtctatttt caactaatat ggccacagga gccttttgag attcattgat attaaacaca 5941 attaatgaaa ttttaaattg ttaacagaat tgagaacttg aacaacactt ttagtactgc 6001 agcatttttg tgccctaaag tatgtaatga tttataaatg tgccatacat acactacaac 6061 ataacatttg ctttgttatg cattttattt ctctggggac accattgcac tgcagtgcac 6121 acgtatttat aaacatttgt tatatttttg gaaacttgct aatatttatt aagtcataga 6181 cttttctgga ggacttaaaa attcactaaa aatctgatta tgtcttaaat gttcagttta 6241 tctttggttt attaaaataa aaaaaaaatc taagattaaa cacagtagat atctctggag 6301 gcaattttcc aaaactcaac attaaaattt gtggatgcat gagatgcaat ccttcaaaga 6361 atgaatctga aatatatttt taatatttac ttaatatcca ctgaagatat ctttatgcaa 6421 gacaagagtc agccatcaga cactgaaata tattatgata gattatgaag aattttctct 6481 gtagaattat attcttcctg gaacctggta gagtagatta gactcaaagg ctttttcttc 6541 cttttcttac tcctgttttt tccactcact cttcccaaga gatttcctaa agcttcaagc 6601 ttaataagcc taatagtgaa aaataactga atttaatggt ataatgaagt tcttcatttc 6661 cagacatctt taattgatct taaagctcat ttgagtcttt gcccctgaac aaagacagac 6721 ccattaaaat ctaagaattc taaattttca caactgtttg agcttctttt cattttgaag 6781 gatttggaat atatatgttt tcataaaagt atcaagtgaa atatagttac atgggagctc 6841 aatcatgtgc agattgcatt ctgttatgtt gactcaatat ttaatttaca actatcctta 6901 tttatattga cctcaagaac tccattttat gcaatgcaga ccactgagat atagctaaca 6961 ttctttcaaa taattttcct tttcttttat aattcctcta tagcaaattt ttatgtataa 7021 ctgattatac atatccatat ttatatttca ttgattccaa gacatcactt tttcaattta 7081 acatctctga aattgtgaca tttcttgcaa ctgttggcac ttcagatgca gtgtttaaaa 7141 ttatgcttga ataaatatta cactaatcca actttaccta aatgtttatg catctaggca 7201 aattttgttt tcttataaag atttgagagc ccatttatga caaaatatga aggcgaaatt 7261 taaggacaac tgagtcacgc acaactcaac atggagccta actgattatc agctcagatc 7321 ccgcatatct tgagtttaca aaagctcttt caggtcccca tttatacttt acgtgagtgc 7381 gaatgatttc agcaaaccct aacttaacta acaagaatgg gtaggtatgt ctacgtttca 7441 ttaacaaatt tttattattt ttattctatt atatgagatc cttttatatt atcatctcac 7501 ttttaaacaa aattaactgg aaaaatatta catggaactg tcatagttag gttttgcagc 7561 atcttacatg tcttgtatca atggcaggag aaaaatatga taaaaacaat cagtgctgtg 7621 aaaaacaact ttcttctaga gtcctcttac tttttattct tctttatcat ttgtgggttt 7681 ttcccccttg gctctgatca ctttaacttc aagcttatgt aacgactgtt ataaaactgc 7741 atatttaaat tatttgaatt atatgaaata attgttcagc tatctgggca gctgttaatg 7801 taaacctgag agtaataaca ctactctttt atctacctgg aatacttttc tgcataaaat 7861 ttatctttgt aagctaactc tattaatcag gtttcttcta gcctctgcaa cctacttcag 7921 ttagaattgt ctaatactgc tctattaatc aggtttctag cctctacaac ctacttcagt 7981 taaaattgtc taatacagca atatttaaaa aaaaaacact gcaattgtca aggatggaaa 8041 atgtgtgatt tgtgtaaaca atttttacca actttacatt ttcctacaga taaatgtgaa 8101 attttgataa gaagtctacg caatgacaag tatggtacat aaattttatt aagaatattg 8161 agtataaagt actttaattc taaattataa gaaaatatac atttgcacat attaatatag 8221 aaattcattt tgtgtatatt taacatagct tttaaactat tttacattag ctacttcatt 8281 atggtttctt gaacttctga aaaaaattag aaatgtatta aacttatcag taacataaaa 8341 acttattttg tttcacctaa cgaatactgc gtttgtaaaa ataaatttaa tatagaatat 8401 atttttaaat taaatatttg aatataaaat agctctaaga aagaagcaaa ttatcactga 8461 acatatttct tattatttct ggctttgaat tatacgtaac ttaaattgtc ttaaatgata 8521 cagaatattg gagaatatga tactttcaca taatatacta tgaacctgtt catataactc 8581 tgattgacta ctaacttctg ttttatgtat ttattaaaga gctgacactg tagtttgtgg 8641 tgagatgttt atttttctaa cagagcttat aacagttagg acaaggcatt taattaatgc 8701 atcattctgt ttagtagtag gtgttaatca atatgaaatt ctctgtttta aaataaaaat 8761 gtaaaaatct aagaataaaa aaaaaaa（SEQ ID NO: 17）
α-V整聯蛋白（α-V，ITGAV）亞基（也稱為α-V和αv）與β-1（ITGB1）、β-3（ITGB3）、β-5（ITGB5）、β-6（ITGB6）或β-8（ITGB8）亞基關聯，形成α（αv）和β（β1-8）亞基的異二聚體。α亞基由藉由二硫鍵連接的重鏈（整聯蛋白α-V重鏈）和輕鏈（整聯蛋白α-V輕鏈）組成。在特定實施方式中，αv整聯蛋白亞基與β8整聯蛋白亞基關聯，形成αvβ8整聯蛋白。可以與如上所示的β-8（ITGB8）關聯的人α-V（ITAV）包含1040個胺基酸並且可見於Uniprot（UniProtKB）登錄號P06756，如下： 10         20         30         40         50 MAFPPRRRLR LGPRGLPLLL SGLLLPLCRA FNLDVDSPAE YSGPEGSYFG 60         70         80         90        100 FAVDFFVPSA SSRMFLLVGA PKANTTQPGI VEGGQVLKCD WSSTRRCQPI 110        120        130        140        150 EFDATGNRDY AKDDPLEFKS HQWFGASVRS KQDKILACAP LYHWRTEMKQ 160        170        180        190        200 EREPVGTCFL QDGTKTVEYA PCRSQDIDAD GQGFCQGGFS IDFTKADRVL 210        220        230        240        250 LGGPGSFYWQ GQLISDQVAE IVSKYDPNVY SIKYNNQLAT RTAQAIFDDS 260        270        280        290        300 YLGYSVAVGD FNGDGIDDFV SGVPRAARTL GMVYIYDGKN MSSLYNFTGE 310        320        330        340        350 QMAAYFGFSV AATDINGDDY ADVFIGAPLF MDRGSDGKLQ EVGQVSVSLQ 360        370        380        390        400 RASGDFQTTK LNGFEVFARF GSAIAPLGDL DQDGFNDIAI AAPYGGEDKK 410        420        430        440        450 GIVYIFNGRS TGLNAVPSQI LEGQWAARSM PPSFGYSMKG ATDIDKNGYP 460        470        480        490        500 DLIVGAFGVD RAILYRARPV ITVNAGLEVY PSILNQDNKT CSLPGTALKV 510        520        530        540        550 SCFNVRFCLK ADGKGVLPRK LNFQVELLLD KLKQKGAIRR ALFLYSRSPS 560        570        580        590        600 HSKNMTISRG GLMQCEELIA YLRDESEFRD KLTPITIFME YRLDYRTAAD 610        620        630        640        650 TTGLQPILNQ FTPANISRQA HILLDCGEDN VCKPKLEVSV DSDQKKIYIG 660        670        680        690        700 DDNPLTLIVK AQNQGEGAYE AELIVSIPLQ ADFIGVVRNN EALARLSCAF 710        720        730        740        750 KTENQTRQVV CDLGNPMKAG TQLLAGLRFS VHQQSEMDTS VKFDLQIQSS 760        770        780        790        800 NLFDKVSPVV SHKVDLAVLA AVEIRGVSSP DHVFLPIPNW EHKENPETEE 810        820        830        840        850 DVGPVVQHIY ELRNNGPSSF SKAMLHLQWP YKYNNNTLLY ILHYDIDGPM 860        870        880        890        900 NCTSDMEINP LRIKISSLQT TEKNDTVAGQ GERDHLITKR DLALSEGDIH 910        920        930        940        950 TLGCGVAQCL KIVCQVGRLD RGKSAILYVK SLLWTETFMN KENQNHSYSL 960        970        980        990       1000 KSSASFNVIE FPYKNLPIED ITNSTLVTTN VTWGIQPAPM PVPVWVIILA 1010       1020       1030       1040 VLAGLLLLAV LVFVMYRMGF FKRVRPPQEE QEREQLQPHE NGEGNSET (SEQ ID NO: 18)
編碼人α-V（ITGAV）的多核苷酸編碼序列如下所示（3147核苷酸bp）。人αv整聯蛋白（CCDS 2292.1）的多核苷酸序列可見於登錄號：NCBI參比序列：NM_002210.4。本揭露涵蓋與編碼人ITGAV整聯蛋白的αv（ITGAV）整聯蛋白多核苷酸序列具有至少約85%或更高的核苷酸序列同一性的多核苷酸或其片段。 atggcttttccgccgcggcgacggctgcgcctcggtccccgcggcctcccgcttcttctctcgggactcc tgctacctctgtgccgcgccttcaacctagacgtggacagtcctgccgagtactctggccccgagggaag ttacttcggcttcgccgtggatttcttcgtgcccagcgcgtcttcccggatgtttcttctcgtgggagct cccaaagcaaacaccacccagcctgggattgtggaaggagggcaggtcctcaaatgtgactggtcttcta cccgccggtgccagccaattgaatttgatgcaacaggcaatagagattatgccaaggatgatccattgga atttaagtcccatcagtggtttggagcatctgtgaggtcgaaacaggataaaattttggcctgtgcccca ttgtaccattggagaactgagatgaaacaggagcgagagcctgttggaacatgctttcttcaagatggaa caaagactgttgagtatgctccatgtagatcacaagatattgatgctgatggacagggattttgtcaagg aggattcagcattgattttactaaagctgacagagtacttcttggtggtcctggtagcttttattggcaa ggtcagcttatttcggatcaagtggcagaaatcgtatctaaatacgaccccaatgtttacagcatcaagt ataataaccaattagcaactcggactgcacaagctatttttgatgacagctatttgggttattctgtggc tgtcggagatttcaatggtgatggcatagatgactttgtttcaggagttccaagagcagcaaggactttg ggaatggtttatatttatgatgggaagaacatgtcctccttatacaattttactggcgagcagatggctg catatttcggattttctgtagctgccactgacattaatggagatgattatgcagatgtgtttattggagc acctctcttcatggatcgtggctctgatggcaaactccaagaggtggggcaggtctcagtgtctctacag agagcttcaggagacttccagacgacaaagctgaatggatttgaggtctttgcacggtttggcagtgcca tagctcctttgggagatctggaccaggatggtttcaatgatattgcaattgctgctccatatgggggtga agataaaaaaggaattgtttatatcttcaatggaagatcaacaggcttgaacgcagtcccatctcaaatc cttgaagggcagtgggctgctcgaagcatgccaccaagctttggctattcaatgaaaggagccacagata tagacaaaaatggatatccagacttaattgtaggagcttttggtgtagatcgagctatcttatacagggc cagaccagttatcactgtaaatgctggtcttgaagtgtaccctagcattttaaatcaagacaataaaacc tgctcactgcctggaacagctctcaaagtttcctgttttaatgttaggttctgcttaaaggcagatggca aaggagtacttcccaggaaacttaatttccaggtggaacttcttttggataaactcaagcaaaagggagc aattcgacgagcactgtttctctacagcaggtccccaagtcactccaagaacatgactatttcaaggggg ggactgatgcagtgtgaggaattgatagcgtatctgcgggatgaatctgaatttagagacaaactcactc caattactatttttatggaatatcggttggattatagaacagctgctgatacaacaggcttgcaacccat tcttaaccagttcacgcctgctaacattagtcgacaggctcacattctacttgactgtggtgaagacaat gtctgtaaacccaagctggaagtttctgtagatagtgatcaaaagaagatctatattggggatgacaacc ctctgacattgattgttaaggctcagaatcaaggagaaggtgcctacgaagctgagctcatcgtttccat tccactgcaggctgatttcatcggggttgtccgaaacaatgaagccttagcaagactttcctgtgcattt aagacagaaaaccaaactcgccaggtggtatgtgaccttggaaacccaatgaaggctggaactcaactct tagctggtcttcgtttcagtgtgcaccagcagtcagagatggatacttctgtgaaatttgacttacaaat ccaaagctcaaatctatttgacaaagtaagcccagttgtatctcacaaagttgatcttgctgttttagct gcagttgagataagaggagtctcgagtcctgatcatgtctttcttccgattccaaactgggagcacaagg agaaccctgagactgaagaagatgttgggccagttgttcagcacatctatgagctgagaaacaatggtcc aagttcattcagcaaggcaatgctccatcttcagtggccttacaaatataataataacactctgttgtat atccttcattatgatattgatggaccaatgaactgcacttcagatatggagatcaaccctttgagaatta agatctcatctttgcaaacaactgaaaagaatgacacggttgccgggcaaggtgagcgggaccatctcat cactaagcgggatcttgccctcagtgaaggagatattcacactttgggttgtggagttgctcagtgcttg aagattgtctgccaagttgggagattagacagaggaaagagtgcaatcttgtacgtaaagtcattactgt ggactgagacttttatgaataaagaaaatcagaatcattcctattctctgaagtcgtctgcttcatttaa tgtcatagagtttccttataagaatcttccaattgaggatatcaccaactccacattggttaccactaat gtcacctggggcattcagccagcgcccatgcctgtgcctgtgtgggtgatcattttagcagttctagcag gattgttgctactggctgttttggtatttgtaatgtacaggatgggcttttttaaacgggtccggccacc tcaagaagaacaagaaagggagcagcttcaacctcatgaaaatggtgaaggaaactcagaaacttaa（SEQ ID NO: 19）。
人源化抗αvβ8整聯蛋白抗體（本文稱為「MEDI-hu37E1B5」）可用於本揭露的組成物和方法中。MEDI-hu37E1B5抗體具有以下所示的重鏈和輕鏈可變區胺基酸序列。此抗體與αvβ8整聯蛋白特異性和選擇性地結合，該整聯蛋白在腎臟細胞和組織上表現，並且更特別地在患有腎臟疾病（如慢性腎臟疾病（CKD））的受試者的患病腎臟細胞和組織（如纖維化的腎臟組織）上高表現。在實施方式中，本揭露涵蓋與MEDI-hu37E1B5 αvβ8整聯蛋白抗體的重鏈可變區（VH ）（116個胺基酸殘基）和輕鏈可變區（VL ）（107個胺基酸殘基）的胺基酸序列（如下所示）具有至少約或至少85%或更高的胺基酸序列同一性的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段。MEDI-hu37E1B5 抗 αvβ8 整聯蛋白抗體的 VH 胺基酸序列 ：
Figure 02_image001
MEDI-hu37E1B5 抗 αvβ8 整聯蛋白抗體的 VL 胺基酸序列 ：
Figure 02_image003
在以上MEDI-hu37E1B5抗體的VH 和VL 序列中，將三個CDR區（如藉由Kabat定義的）加底線。更特別地，MEDI-hu37E1B5抗體的重鏈可變區（VH ）的三個CDR的胺基酸序列如下： VH CDR1：RYWMS（SEQ ID NO: 1） VH CDR2：EINPDSSTINYTSSL（SEQ ID NO: 2） VH CDR3：LITTEDY（SEQ ID NO: 3）
MEDI-hu37E1B5抗體的輕鏈可變區（VL ）的三個CDR的胺基酸序列如下： VL CDR1：KASQDINSYLS（SEQ ID NO: 4） VL CDR2：YANRLVD（SEQ ID NO: 5） VL CDR3：LQYDEFPYT（SEQ ID NO: 6）
本揭露還涵蓋了編碼以上鑒定的MEDI-hu37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段的VH 和VL 區的多核苷酸序列。在實施方式中，本揭露還涵蓋了編碼與MEDI-hu37E1B5核苷酸序列具有至少約或至少85%或更高的核苷酸序列同一性的以上所述之MEDI-hu37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段的VH 和VL 區的多核苷酸序列。
另一種抗αvβ8整聯蛋白抗體（本文稱為「B5-15」）在本文揭露的組成物和方法中特別有用。B5-15抗αvβ8整聯蛋白抗體係與αvβ8整聯蛋白特異性結合的人源化和親和力優化的抗體（IgG1同種型的抗體）並且具有以下所示的重鏈和輕鏈可變區胺基酸序列。如本文所述之，人源化B5-15抗體源自和親和力優化自以上所述之MEDI-hu37E1B5抗體（其係B5-15抗體的「親本」）。B5-15抗體高特異性和選擇性地結合αvβ8整聯蛋白，特別地在腎臟細胞和組織上表現的αvβ8整聯蛋白，並且更特別地在患有腎臟疾病如慢性腎臟疾病（CKD）的受試者的患病腎臟細胞和組織（如纖維化的腎臟組織）上高表現的αvβ8整聯蛋白。在實施方式中，本揭露涵蓋與B5-15 αvβ8整聯蛋白抗體的重鏈可變區（VH ）（116個胺基酸殘基）和輕鏈可變區（VL ）（107個胺基酸殘基）的胺基酸序列（如下所示）具有至少約或至少85%或更高的胺基酸序列同一性的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段。人源化和優化的 B5-15 抗 αvβ8 整聯蛋白抗體的 VH 胺基酸序列 ：
Figure 02_image005
人源化和優化的 B5-15 抗 αvβ8 整聯蛋白抗體的 VL 胺基酸序列：
Figure 02_image007
在以上B5-15人源化和親和力優化的抗體的VH 和VL 序列中，將三個CDR區的胺基酸序列（如藉由Kabat定義的）加底線。更特別地，B5-15抗體的重鏈可變區（VH ）的三個CDR的胺基酸序列如下： VH CDR1：RSWIS（SEQ ID NO: 9） VH CDR2：EINPDSSTINYTSSL（SEQ ID NO: 2） VH CDR3：LITTEDY（SEQ ID NO: 3）
B5-15人源化和親和力優化的抗體的輕鏈可變區（VL ）的三個CDR的胺基酸序列如下： VL CDR1：KASQDINKYLS（SEQ ID NO: 10） VL CDR2：YANRLVD（SEQ ID NO: 5） VL CDR3：LQYDVFPYT（SEQ ID NO: 11）
本揭露還涵蓋了編碼以上所述之B5-15抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段的VH 和VL 區的多核苷酸序列。以下提供了編碼優化的B5-15抗αvβ8整聯蛋白抗體的VH 區的多核苷酸序列： gaggtgcagctggtggaaagcggcggaggactggtgcagcctggcggcagcctgagactgagctgcgccgtgtccggcttcgtgttcagccggagctggatcagctgggtccgccaggccccagggaagggcctggaatggatcggcgagatcaaccccgacagcagcaccatcaactacaccagcagcctgaaggaccggttcaccatcagccgggacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaacagcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactactgcgccatcctcatcaccaccgaggactactggggccagggcaccaccgtgaccgtgtcctct（SEQ ID NO: 14）。
以下提供了編碼優化的B5-15抗αvβ8整聯蛋白抗體的VL （κ）區的多核苷酸序列： gacatccagctgacccagagccccagcagcctgagcgccagcgtgggcgacagagtgaccatcacatgcaaggccagccaggacatcaacaagtacctgagctggttccagcagaagcccggcaaggcccccaagagcctgatctactacgccaaccggctggtggacggcgtgcccagcagattttctggcagcggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcagcagcctgcagcccgaggacttcgccacctactactgcctgcagtacgacgtgttcccctacaccttcggcggaggcaccaaggtggaaatcaag（SEQ ID NO: 15）。
在實施方式中，本揭露還涵蓋了編碼與B5-15核苷酸序列具有至少約或至少85%或更高的核苷酸序列同一性的以上所述之B5-15抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段的VH 和VL 區的多核苷酸序列。
作為細胞介素的轉化生長因子-β（beta）（TGF-β）係調節各種細胞類型的細胞增殖、分化、細胞凋亡、黏附和遷移的多功能調節劑。TGF-β誘導細胞外基質（ECM）蛋白質的產生，並且幾乎所有細胞類型（例如激活的T和B細胞、造血細胞、巨噬細胞、樹突細胞）都產生TGF-β和/或對其作用敏感（S. Dennler等人, 2002,J. Leukoc. Biol . [白血球生物學雜誌], 71:731-740）。TGF-β係多樣超家族的成員，該多樣超家族包括哺乳動物中超過30個相關成員，即3種TGF-β亞型、4種活化素和超過20種骨成形性蛋白質（BMP）。TGF-β的3種哺乳動物同種型（TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3）在胺基酸水平上共用70%-82%同源性，並且在不同系統中具有定性相似的活性。TGF-β的活性形式係藉由疏水相互作用（在大多數情況下，藉由亞基間二硫橋進一步增強）穩定的二聚體。TGF-β1同種型係腎細胞中最豐富的同種型。
TGF-β在細胞膜上激活細胞內傳訊的機制通常是眾所周知的。參見，例如，I. Loeffler和G. Wolf, 2013,Nephrol. Dial. Transplant [腎臟病與透析腎移植], 29:i37-i45。TGF-β傳訊的細胞內介質稱為Smads，其在1型TGF-β受體TβR-1的下游起作用並且其被分為三類。直接被TβR-1（跨膜受體絲胺酸/蘇胺酸激酶）磷酸化並激活的受體調節的Smads（R-Smads）（例如Smad1、Smad2、Smad3、Smad5和Smad8）與第二類Smad（共同介質Smads（共Smads），例如Smad4）形成異源寡聚錯合物。該等Smad錯合物易位至核中，在核中該等錯合物與位點特異性DNA轉錄因子相互作用並且參與靶基因的調控。Smad2和Smad3藉由TGF-β亞家族響應於傳訊。鑒定的第三類Smad包括抑制性Smad、Smad6和Smad7，其藉由與激活的TβR-1受體物理地相互作用來拮抗受體調節的Smads的活性並且可以防止R-Smads的對接和磷酸化（同上）。由於其多效作用，TGF-β除了Smad介導的轉錄外還可以直接激活其他訊息傳遞級聯，包括MAPK途徑，如Ras、Raf、Erk、JNK和p38。此外，TGF-β可以藉由其效應子Akt以及Rho樣GTP酶（包括RhoA、Rac和cdc42）的磷酸化來激活磷脂醯肌醇-3-激酶（PI-3K）級聯（同上）。
TGF-β藉由多種腎細胞類型合成並且藉由上述傳訊途徑發揮其生物（和病理生理）作用。TGF-β在腎疾病中上調並且誘導腎細胞以產生細胞外基質蛋白質，導致腎小球硬化症和腎小管間質（TI）纖維化，其特徵係腎實質中進行性有害的結締組織沈積並且是導致腎功能惡化的損害過程。不同類型的腎細胞經歷由TGF-β活性誘導的不同病理生理變化，導致細胞凋亡、組織肥大和足細胞足突異常，並最終造成腎功能障礙（同上）。
如本文所用的，術語「確定」、「評價」、「評估」、「測定」、「測量」和「檢測」以及「鑒定」係指定量和定性確定兩者，並且因此，術語「確定」與「測定」、「測量」等在本文中可互換使用。在定量確定為目的的情況下，使用短語「確定分析物、物質、蛋白質等的量、水平或濃度」。在定性和/或定量確定為目的的情況下，使用短語「確定分析物的水平」或「檢測」分析物。
「疾病」意指損害、干擾或異常調節細胞、組織或器官的正常功能的任何病症或障礙。如本文所指的與腎臟相關的疾病包括（作為非限制性實例）糖尿病性腎病（DN）、慢性腎臟疾病（CKD）、急性腎臟疾病、高血壓相關的腎臟疾病、高血糖相關的腎臟疾病、腎纖維化、炎症相關的腎臟疾病、終末期腎病（ESRD）、自體免疫相關的腎臟纖維化（例如，狼瘡性腎炎）和腎移植後的纖維化等。與腎臟相關的此類疾病、病症、病理和/或其症狀在受試者中可以是急性或慢性的，並且不旨在限制。
通常，「纖維化」係器官或組織中過量結締組織的形成，其可能由反應性（例如，響應於損傷；疾病）或修復過程而導致。纖維化可以在反應性、良性或病理狀態下發生。響應於損傷的纖維化可以稱為瘢痕形成。腎瘢痕形成導致腎功能的進行性喪失，最終造成終末期腎衰竭，並且需要透析或腎移植。
腎纖維化係細胞外基質過度積聚的必然結果，而細胞外基質過度積聚在幾乎每種類型的慢性腎臟疾病中都發生。腎纖維化的發病機理係進行性過程，其最終導致終末期腎疾病/衰竭，這係需要透析或腎臟移植的嚴重危害性障礙。通常，腎纖維化代表慢性、持續性損傷或損害後腎臟組織失敗的傷口癒合過程。幾種細胞途徑（包括系膜和成纖維細胞激活以及腎小管上皮-間質轉化（EMT））已經被確定為係患病條件下生成產生基質的細胞的主要途徑（參見例如Y. Liu, 2006,Kidney Int. [國際腎臟期刊], 69(2):213-217）。
在調節腎纖維化過程的許多纖維化因子中，TGF-β起核心作用。儘管缺陷型基質降解可能會導致組織瘢痕形成，但是受損腎臟中基質降解酶的確切作用和機制係複雜的並且尚不完全清楚。干預內源性抗纖維化因子的活性可能為拮抗TGF-β/Smad傳訊途徑的纖維化作用而提供策略。
「足細胞」係腎臟鮑曼囊（Bowman’s capsule）中高度特化的上皮細胞，其包裹腎小球的毛細血管。足細胞的足突或突起包裹毛細血管並且產生過濾血液和血液組分的濾過裂隙（filtration slit）（或裂隙隔膜）。鮑曼囊過濾血液並且保留較大的分子（例如蛋白質），同時過濾較小的分子（例如水、鹽、糖），這係尿液形成的第一步。足細胞與腎小球毛細血管袢內皮細胞和腎小球基底膜一起形成濾過屏障。腎臟的足細胞和系膜細胞支持腎小球的結構和功能。
腎臟中的「腎小球」係毛細血管網或簇，稱為絲球叢（tuft），位於在每個腎小管（腎單位）末端的杯狀囊（腎小球囊）內部並且參與血液過濾。腎小球毛細血管壁的組成決定向腎小球囊中過濾的物質和量。毛細血管壁由以下組成：具有相對大的孔的內皮層（溶質、血漿蛋白和流體可以通過該等內皮層，但血細胞不能通過）、基底膜層（其與內皮層融合並且其防止血漿蛋白從血液中濾出）和上皮層（其由足細胞組成，該等足細胞藉由其足突附著在基底膜上）。流體穿過由足細胞形成的濾過裂隙。在流體進入腎小球空間之前，裂隙之間的薄隔膜起到最終濾過屏障的作用。
術語「分離的」、「純化的」或「生物學上純的」係指在不同程度上不含在其天然狀態下發現的通常伴隨其的組分的材料。「分離」表示與初始來源或環境的分開程度。「純化」表示高於分離的分開程度。「純化的」或「生物上純的」蛋白質充分不含其他材料，這樣使得任何雜質不實質上影響蛋白質的生物特性或導致其他不利後果。也就是說，如果核酸或肽當藉由重組DNA技術生產時基本上不含細胞材料、病毒污染物或培養基，或者當藉由化學合成時基本上不含化學先質或其他化學品，則如本文所用的核酸或該肽係純化的。通常使用分析化學技術來確定純度和均勻性，該等分析化學技術係例如聚丙烯醯胺凝膠電泳、柱層析法、高效液相層析法（HPLC）、質譜分析等。術語「純化的」可以表示核酸或蛋白質在電泳凝膠中基本上產生一條帶。對於可經受修飾（例如，磷酸化或糖基化）的蛋白質，不同修飾可以產生不同的分離蛋白質，該等蛋白質可以單獨純化。
所謂「分離的多核苷酸」係指不含以下基因的核酸（例如DNA），該等基因在來源於核酸分子的生物體的天然基因組中位於基因的側翼。因此，該術語包括，例如，重組DNA，該重組DNA摻入載體，如表現載體中；摻入自主複製的質體或病毒中；或摻入原核生物或真核生物的基因組DNA中；或作為獨立於其他序列的獨立分子（例如，藉由PCR或限制性核酸內切酶消化產生的cDNA或基因組或cDNA片段）存在。此外，該術語包括從DNA分子轉錄的RNA分子，以及作為編碼一個或多個另外的多肽序列的雜合基因的一部分的重組DNA。
「分離的多肽」係指本揭露的多肽或分子，例如分離的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，其已與天然伴隨的組分或在分離或純化期間存在的組分分離。此類多肽或分子係基本上不含存在於其天然環境中的其他元素的分子。例如，分離的蛋白質基本上不含來自於細胞或其衍生的組織源的細胞材料或其他蛋白質。通常，當多肽或分子中至少有60%（以重量計）不含與之天然結合的蛋白質和天然存在的有機分子時，將其分離。較佳的是，製劑係以重量計至少75%，更較佳的是至少90%，並且最較佳的是至少99%的本揭露的多肽。本揭露的分離的多肽可以例如藉由從天然來源提取、藉由表現編碼這樣一種多肽的重組核酸或藉由化學合成該蛋白而獲得。術語「分離的」也指製劑，其中分離的蛋白質或分子係足夠純的而作為藥物組成物投與，或係分離的蛋白質或分子的至少70%-80%（w/w）純的，更較佳的是至少80%-90%（w/w）純的，甚至更較佳的是90%-95%純的；並且最較佳的是至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%（w/w）純的。可以藉由任何適當之方法測量純度，例如，柱層析法、聚丙烯醯胺凝膠電泳、HPLC分析和/或藉由質譜分析。
術語「劑量」係指投與（不限於投與途徑）至需要藥劑的受試者或患者（如為了治療或療法利益）的治療劑（如藥物、藥品、化合物（例如小分子或生物製劑））的測量的量、數量或濃度。
「增加」係指正向改變，例如增加至少10%、25%、50%、75%、100%、200%、300%、400%、500%、1000%或更多。
「降低」係指負向改變，例如降低10%、25%、50%、75%或100%。
「參比」或「對照」係指比較標準，例如而不限於安慰劑。在實施方式中，參比水平係獲得自未受影響組織的生物樣本中生物標誌的水平、表現或活性。
「參比序列」係用作序列比較的基礎的、定義的序列。參比序列可以是指定序列的亞集或整體；例如，全長cDNA或基因序列的片段，或完整的cDNA或基因序列。對於多肽，參比多肽序列的長度一般將是至少約16個胺基酸，較佳的是至少約20個胺基酸，更較佳的是至少約25個胺基酸，並且甚至更較佳的是約35個胺基酸、約50個胺基酸、或約100個胺基酸。對於核酸分子，參比核酸序列的長度一般將是至少約50個核苷酸、較佳的是至少約60個核苷酸、更較佳的是至少約75個核苷酸、並且甚至更較佳的是約100核苷酸或約300個核苷酸或在那附近或其間的任何整數。
「反應」在療法的上下文中意指易受治療的影響。
「特異性結合」或「選擇性結合」意指藥劑（例如，抗體）識別並結合分子（例如，多肽、抗原、配位基），但是其基本上不識別或結合樣本（例如生物樣本）中的其他分子。例如，彼此特異性結合的兩個分子（例如，抗體和其配位基）形成在生理條件下相對穩定的錯合物。特異性結合的特徵在於區別於非特異性結合的高親和力和低等至中等容量，非特異性結合通常具有低親和力以及中等至高等容量。
「生物樣本」或「樣本」係指從受試者獲得的任何液體、細胞或組織。在一些實施方式中，生物樣本係血液、血清、血漿、腦脊液、支氣管肺泡灌洗術、痰、眼淚、唾液、尿液、精液、糞便等。細胞或組織樣本如腎臟樣本可以在合適的緩衝液進一步處理以產生勻漿或懸浮液，其中提供了細胞和組織的細胞內組分。
「受試者」意指哺乳動物，包括但不限於人（如人患者、人受試者、人個體）、非人靈長類動物、或非人哺乳動物（如牛、馬、犬、綿羊或貓科動物）。在實施方式中，受試者係人。在實施方式中，受試者係患有以下、處於以下風險或已經治療以下或正在治療以下的人患者：腎臟病症或疾病如CKD，和/或其症狀。術語「受試者」、「個體」和「患者」在本文中可互換使用。
本文提供的範圍被理解為該範圍內的所有值的速記，包括第一個和最後一個陳述的值。例如，1到50的範圍應當理解為包括來自下組的任何數字、數字的組合或子範圍，該組由以下組成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。
「藥物組成物」或「配製物」係指適合於在受試者（例如動物或哺乳動物，包括人）中用作藥學用途的組成物（生理學上可接受的組成物）。藥物組成物包含治療或預防有效量的如本文所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，和藥學上可接受的賦形劑、載劑、媒介物或稀釋劑。在實施方式中，藥物組成物涵蓋組成物，該組成物包含一種或多種活性成分（抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合部分或片段），和構成載劑的一種或多種惰性成分，以及由該等成分中的任何兩種或多種的組合、錯合或聚集或由該等成分中的一種或多種的分解或由該等成分中的一種或多種的其他類型的反應或相互作用而（直接或間接）產生的任何產物。在實施方式中，藥物組成物視需要包含另一種生物活性劑、化合物、藥物或藥品。因此，本揭露的藥物組成物包含藉由將抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合部分或片段與藥學上可接受的賦形劑、載劑、媒介物或稀釋劑混合製成的任何組成物。
「藥學上可接受的載劑」係指任何標準的藥物載劑、緩衝液等，例如磷酸鹽緩衝鹽水溶液，視需要的另一種生物活性劑、葡萄糖水溶液（例如5%）和乳液（例如油/水或水/油乳液）。賦形劑的非限制性實例包括佐劑、黏合劑、填充劑、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、潤濕劑、潤滑劑、助流劑、甜味劑、調味劑和著色劑。合適的藥物載劑、賦形劑、媒介物和稀釋劑可見於Remington's Pharmaceutical Sciences [雷明頓藥物科學], 第19版（Mack Publishing Co. [麥克出版公司] Easton [伊斯頓], 1995（或此參考文獻的更新版本））。適用於包含在組成物或配製物中的藥物載劑通常取決於活性劑（例如，如本文所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合部分或片段）的預期投與方式。說明性的投與方式包括腸內（例如，口服）或腸胃外（例如皮下、肌內、靜脈內或腹膜內注射；靜脈內輸注或局部、經皮或透黏膜投與）。
「藥學上可接受的鹽」係指可以配製成用於藥學用途的化合物的鹽，包括但不限於金屬鹽（例如，鈉、鉀、鎂、鈣等）和氨鹽或有機磷酸鹽。
「藥學上可接受的」，「生理學上可接受的」或「藥理學上可接受的」係指非生物學、生理學或其他方面不期望的物質，即該等物質可以投與給個體而不會引起任何不期望的生物效應，或者不會以有害的方式與包含該等物質的組成物中的任何組分或與個體的體上或體內存在的任何組分相互作用。
「生理條件」係指動物或哺乳動物（例如人）體內的條件。生理條件包括但不限於體溫和生理離子強度、pH和酶的水性環境。生理條件還涵蓋特定受試者體內與大多數受試者中存在的「正常」條件（例如正常人體溫度（約37°C）或正常人血液pH（約7.4））不同的條件。
如本文所用的，術語「治療」（treat、treating、treatment）等係指降低、減小、減輕、緩解、消除、中和或改善障礙和/或與其相關的症狀。將被理解的是，儘管不能排除，但是治療障礙或病症並不要求完全地消除或緩解該障礙、病症或與其相關的症狀。「治療」可以指預防性治療或治療性治療或診斷性治療。在某些實施方式中，「治療」係指出於治療、預防或診斷目的向受試者投與化合物或組成物。
根據所描述之方法，治療（treating或treatment）涉及如本文所描述的抗αvβ8整聯蛋白抗體的投與。在實施方式中，將抗αvβ8整聯蛋白抗體腸胃外投與（例如，靜脈內或皮下）給需要的受試者。如熟悉該項技術者將理解的，靜脈內投與通常是指將活性成分、治療劑、物質、藥品、藥物或抗體（如抗αvβ8整聯蛋白抗體）提供或遞送入受試者的靜脈或血管以將活性成分遞送至受試者的全身循環。靜脈內投與可包括例如藉由注射器和針頭或導管向靜脈或血管內靜脈內注射或靜脈內輸注。靜脈內注射或輸注可能涉及塑膠管和輸液袋（例如輸液器）的使用，以便將活性成分通過輸液管遞送到輸液袋中，然後從輸液袋遞送到受試者體內，例如通過導管和/或放置在受試者體內的端口，其流速由醫護人員依慣例和實際確定。可以使用泵或藉由滴注進行靜脈內注射或輸注。
「預防性治療」（例如預防性或保護性治療）係針對未表現出疾病徵兆或僅表現出疾病早期徵兆或有患疾病風險的受試者所投與的治療，從而達到降低、減少、緩解或消除疾病、病理或病症或疾病或病理或病症的更嚴重或危重形式的發展風險的目的。設想本文所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段或其組成物可以作為預防或保護性治療來給予，以降低受試者發展腎臟疾病、病理或病症的可能性，或最小化腎臟疾病、病理或病症在受試者中發展的嚴重程度。
「治療性」治療係投與給表現出疾病或病理學的體征或症狀的受試者以降低、減小、減輕或消除體征或症狀的治療。疾病或病理學的體征或症狀可以是但不限於生化、行為、細胞、表型、基因型、組織學、功能、物理、主觀的或客觀的。在實施方式中，本揭露的抗αvβ8整聯蛋白抗體可以作為治療性治療給予/投與。
如本文所用的，「預防」障礙或病症的治療劑係指生物、化合物或藥物材料，其在統計樣本中，相對於未治療的對照或參比樣本減少了治療的樣本中障礙或病症的發生，或相對於未治療的參比或對照樣本延遲了障礙或病症的一種或多種症狀的發作，或降低了其嚴重程度。在實施方式中，本揭露的抗αvβ8整聯蛋白抗體係本文所述之方法中的預防性治療劑。
術語「有效量」係指足以產生與受試者的健康狀況、病理學或疾病相關的或用於診斷目的的期望結果（例如，降低、減輕、消除或改善症狀）的劑量。期望結果可以包括在向其投與劑量或用量的受試者中的主觀或客觀的改善。「治療有效量」係指有效產生對健康的預期有益作用的藥劑的量。應當理解，對於任何特定患者而言，特定的劑量水平和用量頻率可以取決於多種因素，包括所使用的特定化合物的活性；化合物的生體可用率、代謝穩定性、排泄速率和作用時間長度；化合物的投與方式和時間；患者的年齡、體重、總體健康狀況、性別及飲食；以及患者特定病症的嚴重程度。
術語「蛋白質」、「肽」和「多肽」係指胺基酸鏈，無論長度或翻譯後修飾（例如，糖基化或磷酸化）如何。因此，該等術語在本文中可互換使用來指胺基酸殘基的聚合物。該等術語可以適用於胺基酸聚合物，其中一個或多個胺基酸殘基係相應的天然存在的胺基酸的人工化學模擬物。因此，術語「多肽」包括全長的天然存在的蛋白質，以及重組或合成產生的多肽，其對應於全長的天然存在的蛋白質或天然存在的蛋白質的特定結構域或片段。該術語還涵蓋具有添加的胺基末端甲硫胺酸以促進在原核細胞中表現的成熟蛋白質。多肽可以化學合成，也可以藉由重組DNA方法合成；或者，可以根據標準的生化純化方法從天然表現它們的組織中純化它們。「功能性多肽」具有給定蛋白質或多肽（例如抗αvβ8整聯蛋白抗體）的一種或多種生物學功能或活性。功能性多肽可以含有已經從被認為係抗αvβ8整聯蛋白抗體的標準序列的胺基酸序列經修飾的一級胺基酸序列。較佳的是，此類修飾係不改變或基本上不改變蛋白質的正常功能或活性的保守胺基酸取代。多肽片段、部分或區段係指來自特定序列的至少約6個連續胺基酸的胺基酸殘基段，更通常是至少約10-12個連續胺基酸。
編碼多肽例如本揭露的抗αvβ8整聯蛋白抗體的核酸分子（多核苷酸）包括編碼所揭露的多肽例如抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段的任何核酸分子。這樣的核酸分子不需要與內源核酸序列100%相同，但是通常展示出基本同一性。與內源性序列具有「基本同一性」的多核苷酸通常能夠與雙股核酸分子的至少一條股雜交。與內源性序列具有「基本同一性」的多核苷酸通常能夠與雙股核酸分子的至少一條股雜交。「雜交」係指在各種嚴格條件下配對以在互補多核苷酸序列（例如基因）或其片段之間形成雙股分子（參見，例如，Wahl, G. M.和S. L. Berger, 1987,Methods Enzymol. [酶學方法], 152:399；Kimmel, A. R., 1987,Methods Enzymol. [酶學方法], 152:507）。
藉由非限制性實例，嚴格的鹽濃度通常將是小於約750 mM NaCl和75 mM的檸檬酸三鈉、較佳的是係小於約500 mM NaCl和50 mM的檸檬酸三鈉、並且更較佳的是係小於約250 mM NaCl和25 mM的檸檬酸三鈉。在缺少有機溶劑（例如，甲醯胺）下可以獲得低嚴格雜交，而在至少約35%的甲醯胺、並且更較佳的是係至少約50%的甲醯胺存在下可以獲得高嚴格雜交。嚴格的溫度條件將通常包括至少約30°C、更較佳的是係至少約37°C、並且最較佳的是係至少約42°C的溫度。不同的另外的參數，如雜交時間、清潔劑（例如，十二烷基硫酸鈉（SDS））濃度、以及載體DNA的包含或排除，係熟悉該項技術者熟知的。根據需要藉由組合該等不同的條件實現不同的嚴格水平。在特定實施方式中，雜交在30°C，在750 mM的NaCl，75 mM的檸檬酸三鈉，以及1%的SDS中發生。在其他特定實施方式中，雜交在37°C，在500 mM的NaCl，50 mM的檸檬酸三鈉，1%的SDS，35%的甲醯胺，以及100 µg/ml的變性的鮭精DNA中發生。在其他特定實施方式中，雜交在42°C，在250 mM的NaCl，25 mM的檸檬酸三鈉，1%的SDS，50%的甲醯胺，以及200 µg/ml的鮭精DNA中發生。該等條件的有用的變化對於熟悉該項技術者將是顯而易見的。
對於大多數的應用，雜交之後的洗滌步驟也將會在嚴格度方面不同。藉由鹽濃度和溫度可以定義洗滌嚴格條件。如上所述，藉由降低鹽濃度或增加溫度可以增加洗滌嚴格度。例如，用於洗滌步驟的嚴格鹽濃度將為小於約30 mM的NaCl和3 mM的檸檬酸三鈉、並且特別是小於約15 mM的NaCl和1.5 mM的檸檬酸三鈉。用於洗滌步驟的嚴格的溫度條件將通常包括至少約25°C、或至少約42°C、或至少約68°C的溫度。在特定實施方式中，洗滌步驟將會在25°C、在30 mM的NaCl、3 mM的檸檬酸三鈉、以及0.1%的SDS中發生。在另一個特定實施方式中，洗滌步驟將會在42 C、在15 mM的NaCl、1.5 mM的檸檬酸三鈉、以及0.1%的SDS中發生。在另一個特定實施方式中，洗滌步驟將會在68°C、在15 mM的NaCl、1.5 mM的檸檬酸三鈉、以及0.1%的SDS中發生。該等條件的另外的變化對於熟悉該項技術者將是顯而易見的。雜交技術對於熟悉該項技術者係熟知的並且描述於例如Benton和Davis（Science [科學] 196:180, 1977）；Grunstein和Hogness（Proc. Natl. Acad. Sci. ， USA [美國國家科學院院刊] 72:3961, 1975）；Ausubel等人（Current Protocols in Molecular Biology [分子生物學實驗手冊], Wiley Interscience [威利國際科學], 紐約, 2001）；Berger和Kimmel（Guide to Molecular Cloning Techniques [分子選殖技術指南], 1987, Academic Press [學術出版社], 紐約）；以及Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選殖實驗指南], Cold Spring Harbor Laboratory Press [冷泉港實驗室出版社], 紐約中。
在兩個或更多個核酸或多肽的上下文中，術語「同一」或百分比「同一性」係指當比較和比對（如有必要，引入缺口）最大對應性（不考慮任何保守胺基酸取代作為序列同一性的一部分）時相同或具有指定百分比的相同的核苷酸或胺基酸殘基的兩個或更多個序列或子序列。百分比同一性可以使用序列比較軟體或演算法或者藉由目測測量。本領域中已知有可用於獲得胺基酸或核苷酸序列的比對的不同演算法和軟體（參見例如Karlin等人, 1990,Proc. Natl. Acad. Sci. [美國國家科學院院刊], 87:2264-2268，如在Karlin等人, 1993,Proc. Natl. Acad. Sci. [美國國家科學院院刊], 90:5873-5877中的改進，並且併入NBLAST和XBLAST程式（Altschul等人, 1991,Nucleic Acids Res. [核酸研究], 25:3389-3402）。在某些實施方式中，有缺口的BLAST可以如以下中所述之使用：Altschul等人, 1997,Nucleic Acids Res. [核酸研究] 25:3389-3402。BLAST-2、WU-BLAST-2（Altschul等人, 1996,Methods in Enzymology [酶學方法], 266:460-480）、ALIGN、ALIGN-2（Genentech [基因泰克公司], 南三藩市，加利福尼亞州）或Megalign（DNASTAR）。
「基本相同」係指與參比胺基酸序列或核酸序列具有至少50%同一性的多肽或核酸分子。這樣的序列在胺基酸水平或核酸水平上可以與用於比較的序列至少60%、或至少80%或85%、或至少90%、95%或甚至99%相同。
通常使用序列分析軟體（例如，威斯康辛州麥迪森53705、大學道（University Avenue）1710的威斯康辛大學生物技術中心（University of Wisconsin Biotechnology Center）的遺傳計算組（Genetics Computer Group）的序列分析套裝軟體，BLAST、BESTFIT、GAP、或PILEUP/PRETTYBOX程式）測量序列同一性。此類軟體藉由對各種取代、缺失和/或其他修飾分配同源性程度來匹配相同或類似序列。保守取代通常包括在以下胺基酸組內的取代：甘胺酸、丙胺酸；纈胺酸、異白胺酸、白胺酸；天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸；絲胺酸、蘇胺酸；離胺酸、精胺酸；和苯丙胺酸、酪胺酸。在確定一致性程度的示例性方法中，可以使用BLAST程式，其中在e-3 和e-100 之間的概率得分指示緊密相關的序列。
哺乳動物抗αvβ8整聯蛋白抗體（特別是抗人αvβ8整聯蛋白抗體）或其免疫功能等位基因變體或同種型可用於所描述之方法中，包括具有抗αvβ8整聯蛋白抗體的結合和阻斷活性的抗體的片段在內的其他變體或同種型也可用於所描述之方法中。在多核苷酸或基因的上下文中，「等位基因變異」係在群體中以一種以上形式存在的基因的替代形式（等位基因）。在多肽水平上，「等位基因變體」通常彼此之間的不同僅一個或至多幾個胺基酸取代。多核苷酸或多肽的「物種變異」係其中變異在生物的不同物種之間自然發生的變異。
在本揭露中，「包含（comprises、comprising）」、「含有（containing）」和「具有（having）」等可以具有美國專利法賦予它們的意義並且可以意指「包括（includes、including）」等；「基本上由……組成（consisting essentially of或consists essentially）」同樣具有美國專利法賦予的含義並且該術語係開放性的，允許超出所敘述的存在，只要所敘述的基本或新穎特徵不被超過敘述的存在改變，但是排除先前技術實施方式。
除非從其上下文中具體陳述或顯而易見，否則如本文所用的術語「或」被理解為包括在內。除非從上下文中具體陳述或顯而易見，否則如本文所用的術語「一種」、「一個」和「該」被理解為單數或複數。
除非明確聲明或從上下文顯而易見，否則如本文所用的術語「約（about）」被理解為在本領域的正常公差範圍內，例如，在平均數的2個標準差之內。術語「約」被理解為指所陳述的值的5%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.05%或0.01%。除非從上下文顯而易見，本文提供的所有數值被該術語約修飾。
可以將本文提供的任何組成物或方法與本文提供的任何其他組成物和方法中的一種或多種進行組合。
本揭露總體上地特徵在於用於在本文所述之有需要的個體中治療腎臟疾病的抗體、組成物和方法，該等腎臟疾病係例如糖尿病性腎病（DN）、慢性腎臟疾病（CKD）、急性腎臟疾病、高血壓相關的腎臟疾病、高血糖相關的腎臟疾病、腎纖維化、炎症相關的腎臟疾病、終末期腎病（ESRD）、自體免疫相關的腎臟纖維化（例如，狼瘡性腎炎）和腎移植後的纖維化等。特別地，抗體、組成物、和方法針對腎臟纖維化（與腎臟疾病如CKD相關）的治療。
本揭露針對用於改善、減弱、消除、降低、或緩解患有腎臟疾病如CKD的受試者腎臟組織中的纖維化的治療方法。通常，纖維化係指在器官如腎臟中形成過量纖維結締組織（瘢痕組織），其引起腎結締組織增厚和瘢痕形成。如上文所述，該等方法涉及投與抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，該整聯蛋白抗體或其抗原結合片段與發現在患病的腎臟細胞和腎臟組織（特別是患有腎臟疾病如CKD的受試者中的腎臟上皮細胞和組織）中高表現的αvβ8整聯蛋白特異性結合。抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段與纖維化腎臟細胞和組織上的αvβ8整聯蛋白選擇性結合，從而阻斷、中和、或抑制腎臟表現的αvβ8整聯蛋白與腎臟細胞表面TGF-β潛伏形式（LAP-TGF-β）的相互作用。抗αvβ8整聯蛋白抗體結合干擾與αvβ8整聯蛋白/LAP TGF-β的相互作用，繼而阻斷或防止腎臟細胞表面TGF-β的激活，從而不產生活性TGF-β並且因此其無法發揮與受試者（如人或非人受試者）的腎臟組織中腎臟纖維化相關的細胞作用。該等方法提供治療性益處，特別是在腎臟疾病的治療中，例如藉由降低、減弱、消除、或減少由腎臟疾病如CKD中活性TGF-β引起的纖維化損害。
不希望受特定理論的束縛，抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段降低其中αvβ8整聯蛋白高表現的腎臟細胞和組織中的局部TGF-β激活，例如藉由直接與LAP TGF-β αvβ8整聯蛋白受體結合。抗αvβ8整聯蛋白抗體與αvβ8整聯蛋白的結合阻斷TGF-β從其潛伏形式激活，也可以降低或防止蛋白酶的募集，該蛋白酶切割潛伏TGF-β並且釋放成熟的活性TGF-β肽。這可能藉由抗αvβ8整聯蛋白抗體抑制腎臟細胞表面上的αvβ8整聯蛋白與潛伏TGF-β（與細胞基質相關）結合，從而抑制如下文所述之隨後的TGF-β激活來發生。轉化生長因子 β （ Beta ）（ TGF-β ）及其與 αvβ8 整聯蛋白的相互作用
在細胞中，合成了TGF-β細胞介素並且將其作為無活性先質分泌到細胞外基質中，該先質與「潛伏相關肽（LAP）」和「潛伏TGFβ結合蛋白（LTBP）」錯合。TGF-β的潛伏形式必須被激活以與其受體（例如，αvβ8整聯蛋白）結合並且具有生物功能（J.J. Worthington等人, 2011a,Trends Biochem. Sci . [生物化學科學趨勢], 36:47-54）。將LAP從活性TGF-β切下並且以防止TGF-β與其受體結合的構象保持非共價附接。TGF-β的激活劑包括多種蛋白酶和細胞表面分子，其改變允許活性TGF-β與其受體結合的潛伏錯合物。推定的TGF-β激活劑包括但不限於降解LAP、血小板反應蛋白-1、活性氧類（ROS）和整聯蛋白的蛋白酶。因此，潛伏錯合物的激活對調節TGF-β功能係必需的，並且TGF-β激活劑係潛伏TGF-β轉化成活性TGF-β的限速步驟。舉例來說，在人CKD腎臟（n = 4）中，潛伏TGF-β的量比活性TGF-β的量高53倍。
纖維化係人患者中慢性腎臟疾病（CKD）進展的重要驅動並且與腎功能障礙和損害有關。TGF-β涉及CKD中腎纖維化的發展。相對於對照腎臟，腎TGF-β在人纖維化CKD中上調（D.S. Goumenos等人, 2002,Nephrol. Dial. Transplant . [腎臟病與透析腎移植], 17:2145-2152）。在2型糖尿病中，尿液TGF-β顯示與腎損害（蛋白尿）相關（Marwood等人, 2002,Exp. Biol. Med . [實驗生物學與醫學學會學報], 227(11):943-956）。
αv-整聯蛋白跨膜受體，例如αvβ8，在細胞外基質生理的調節和TGF-β的激活中起重要作用。簡言之，αv-整聯蛋白介導潛伏TGF-β的激活。特別地，αvβ8與結合TGF-β的潛伏相關肽（LAP）的RGD（精胺酸-甘胺酸-天冬胺酸）模體結合，從而調節組織中游離和活性TGF-β的水平（Mu, D.等人, 2002,J. Cell Biol . [細胞生物學雜誌], 157(3):493-507；Araya, J., 2006,Am. J. Pathol .[美國病理學雜誌], 169(2):405-415）。
與其他αvβ整聯蛋白的活性不同，αvβ8整聯蛋白具有組成性活性，並且LAP TGF-β的激活（藉由在LAP TGF-β與αvβ8整聯蛋白結合後，釋放活性TGF-β細胞介素）由MMP-14蛋白酶的切割而不是錨定到細胞質肌動蛋白（無牽引作用）來介導。如下文例示的，腎臟組織中富集αvβ8整聯蛋白表現，並且與其他組織（例如像胰腺、肝、膽囊、唾液腺、食道、胃、腸、肺、心臟或膀胱）相比，編碼αvβ8整聯蛋白的基因在腎臟組織中高表現。
如本文所述之，體外和體內的研究均證明腎臟上皮細胞上αvβ8整聯蛋白的高表現水平與由TGF-β的激活導致的高水平腎臟組織纖維化直接相關。高水平的TGF-β活性誘導並增加對腎（腎臟）細胞和組織的損害，導致纖維化並且因此嚴重加劇腎臟疾病，如CKD。本文所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體與腎臟細胞表現的αvβ8整聯蛋白特異性結合，並且藉由阻斷和/或降低αvβ8整聯蛋白與潛伏TGF-β（LAP TGF-β）的結合和抑制TGF-β活性形式的釋放來抑制TGF-β的破壞性活性和隨後的腎臟細胞和組織纖維化。特異性抗αvβ8整聯蛋白抗體的此作用充當針對TGF-β活性（例如，藉由抑制TGF-β的細胞內傳訊級聯）導致的腎臟細胞和組織破壞的治療。根據本文揭露和示例之方法，藉由提供特異性結合腎臟中αvβ8整聯蛋白的抗體來阻斷αvβ8整聯蛋白活性顯著降低了位於腎臟的TGF-β的激活並且從而特異性降低患病腎臟中腎臟細胞和組織損害，即腎臟纖維化。
如本文所述之，使用特異性靶向腎臟細胞中αvβ8整聯蛋白受體的抗αvβ8整聯蛋白抗體的原因在於以下發現，αvβ8整聯蛋白優先在正常受試者的腎臟中表現並且αvβ8整聯蛋白的表現顯著增加並且位於患有纖維化腎臟疾病的受試者（例如患有CKD的人患者）腎臟中的腎上皮細胞（例如足細胞和間質小管）。如上文所述，本揭露提供了出人意料地發現，即在患有CKD的人患者的腎臟中，αvβ8蛋白質高度上調。此外，腎臟中藉由αvβ8整聯蛋白與TGF-β的潛伏活性形式特異性結合來激活TGF-β纖維化係腎臟組織中破壞性纖維化的直接原因。本發現與αvβ8整聯蛋白主要存在於腎臟的系膜細胞中並且不表現系膜細胞αvβ8整聯蛋白的轉基因動物卻攜帶導致內皮細胞凋亡的活性TGF-β這一本領域先前發現相矛盾（S. Khan等人, 2011,Am. J. Pathology [美國病理學雜誌], 178(2):609-620）。相比之下並且如本文所述和示例的，本方法涉及抑制和阻斷αvβ8整聯蛋白與LAP-TGF-β的相互作用和結合，從而使活性TGF-β不在腎細胞膜上釋放並且不能在罹患腎臟疾病（如CKD）的受試者中引起腎臟細胞和組織的纖維化（和/或另外的損害）。特異性針對 αvβ8 整聯蛋白的抗體
本揭露涵蓋針對並且特異性靶向和結合αvβ8整聯蛋白（特別是在腎臟細胞和組織以及在纖維化腎臟細胞和組織中表現的αvβ8整聯蛋白）的抗體的發展和用途。該等抗體或其抗原結合片段在治療需要治療的受試者的腎臟疾病、特別是腎臟疾病如慢性腎臟疾病（CKD）的腎臟纖維化之方法中非常有益。在實施方式中，受試者可能具有與腎臟細胞和組織的損害或損傷相關的病症以及造成如本文所述之腎臟組織的纖維化的病症或急性、慢性或終末期腎臟疾病。使用本文所述之抗體、組成物和方法治療患有腎臟纖維化和涉及纖維化的腎臟疾病的受試者（無論病因如何）為需要的受試者（特別是罹患腎臟疾病如CKD或DN的患者）提供重要的藥物和臨床益處。在實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體係人源化抗體。
在一個實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體係人源化的抗體，如上文所述之稱為「MEDI-hu37E1B5」抗體，其特異性靶向和結合人αvβ8整聯蛋白。在特定實施方式中，MEDI-hu37E1B5抗體特異性靶向和結合在腎臟中表現並且在纖維化腎臟中高表現的人αvβ8整聯蛋白。在實施方式中，MEDI-hu37E1B5抗體不與針對其他整聯蛋白的抗體交叉反應。
在另一個實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體係人源化和親和力優化的抗體，如上文所述之稱為「B5-15」抗αvβ8整聯蛋白抗體，其特異性靶向人αvβ8整聯蛋白並且證明與其高親和力結合）。優化的B5-15抗體屬於IgG1亞型，表現出特異性和選擇性結合人αvβ8整聯蛋白，並且藉由阻斷或抑制人αvβ8整聯蛋白與TGF-β潛伏形式之間的結合相互作用或聯繫、從而釋放活性TGF-β（從其潛伏形式）以阻斷或抑制TGF-β的激活而展現了功能活性。如本文證明的（圖 4 ），與實例1中所述之CDR接枝MEDI-hu37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體相比，B5-15與αvβ8整聯蛋白的結合概況改善。
B5-15抗體阻斷αvβ8整聯蛋白與LAP-TGF-β的結合並且阻斷TGF-β的激活以及藉由TGF-β的細胞內傳訊，因此保護腎臟細胞和組織免受可誘導並加劇纖維化的活性TGF-β肽的損害作用。不希望受理論的束縛，B5-15抗體別構地修飾αvβ8整聯蛋白並且降低其對潛伏TGF-β（LAP）結合結構域的親和力，這防止TGF-β從其潛伏形式激活以釋放活性TGF-β肽。因此，抗體誘導αvβ8整聯蛋白的構象變化，以使αvβ8不再與潛伏TGF-β結合以促進其激活（WO 2015/195835）。在本揭露之前，腎（腎臟）纖維化中的抗αvβ8整聯蛋白抗體如B5-15抗體的結合特性和功能活性係未知的。
在實施方式中，本文揭露的抗αvβ8整聯蛋白抗體與在腎臟細胞和組織（特別是如在患有腎臟疾病如CKD或DN的個體中發現的患病的、受損的、和/或纖維化的腎臟組織）上具有升高表現的αvβ8整聯蛋白受體特異性結合。本揭露涵蓋包含該等抗體的組成物和其在治療腎臟疾病和腎病、特別是涉及纖維化的腎臟疾病之方法中的用途。所描述的抗體僅結合人αvβ8整聯蛋白並且不與任何其他整聯蛋白交叉反應。
所描述的抗體也是有利的，因為該等抗體選擇性靶向並且特異性結合針對潛伏TGF-β的αvβ8整聯蛋白受體，並且不直接靶向其細胞介素，因此提供了用於治療腎臟疾病、特別是涉及纖維化的腎臟疾病的安全的治療性方法。此外，TGF-β1同種型的活性的抑制、阻斷、或中和係特別有利的，因為通常認為此TGF-β同種型占TGF-β與疾病相關的絕大部分活性。腎臟中TGF-β1同種型的流行可能導致TGF-β1的活性形式參與腎臟纖維化和腎臟疾病。
雖然直接靶向TGF-β可以是抑制或防止TGF-β活性引起的病理的一種方法，但是考慮到TGF-β參與調節多種細胞功能和途徑，直接靶向細胞介素導致的TGF-β的正常中和和/或慢性抑制作用可能對治療的個體具有嚴重的副作用。因此，使用如本文提供的抗αvβ8整聯蛋白抗體以阻斷、抑制、中和以及因此有效地防止腎臟細胞和組織上αvβ8整聯蛋白/LAP TGF-β相互作用並且不損害其他細胞、組織和器官中體內TGF-β激活或者用於其他生理目的之方法提供了用於治療腎臟疾病和纖維化（如CKD或DN）的有價值的治療工具和方法。有利地，用於表現高水平αvβ8整聯蛋白的腎臟細胞和組織的本文所述之抗αvβ8抗體的特異性降低了有害作用，如自體免疫應答、速發性動脈粥樣硬化和癌發展。用泛TGF-β抑制觀察到了有害作用，因此特異性靶向αvβ8整聯蛋白以影響TGF-β激活可能會導致不良事件減少。
作為另一個優勢，本文所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體不穿過血腦屏障（BBB）並且因此不會導致與腦細胞和組織上表現的αvβ8整聯蛋白結合。
所描述的抗αvβ8抗體特異性阻斷表現αvβ8整聯蛋白的腎臟上皮細胞與TGF-β潛伏形式結合，並且因此阻斷由腎臟組織中活性TGF-β（已發現其在引起腎小球濾過屏障、腎小球硬化症和纖維化的改變，以及導致永久性腎功能障礙的腎小管退化的腎疾病的腎小球和腎小管間質病理中起核心作用）的釋放而導致的纖維化。因此，本方法涉及使用特異性抗αvβ8整聯蛋白抗體以藉由特異性結合靶受體，即在具有受損的腎臟和/或患有腎臟疾病的個體的腎臟細胞表面高表現的αvβ8整聯蛋白，而不靶向TGF-β本身，以治療腎臟疾病如慢性腎臟疾病或糖尿病性腎病，其特徵在於有害的腎臟組織纖維化。藉由本文提供的特異性抗αvβ8整聯蛋白抗體來靶向和結合αvβ8整聯蛋白消除並且有效防止了TGF-β細胞介素活性，其係造成腎臟疾病中腎臟組織纖維化和進一步損害腎臟組織的主要元兇。
本文所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體與αvβ8整聯蛋白受體蛋白質（含有抗原結合位點或表位）的一個或多個區特異性結合。在實施方式中，將藉由抗αvβ8整聯蛋白抗體（如MEDI-hu37E1B5抗體或B5-15抗體）結合的αvβ8整聯蛋白的表位定位在距αvβ8整聯蛋白和LAP-TGF-β結合位點約28A（埃）的區域（S. Minagawa等人, 2014,Sci. Transl. Med . [科學轉化醫學], 6(241): 241re79. Doi:10.1126/scitranslmed.3008074）。
在實施方式中，考慮了與具有以下可變區的抗體競爭結合αvβ8整聯蛋白結合的抗體：包含以下三個輕鏈CDR的輕鏈可變區：VL CDR1：KASQDINSYLS（SEQ ID NO: 4）；VL CDR2：YANRLVD（SEQ ID NO: 5）；和VL CDR3：LQYDEFPYT（SEQ ID NO: 6）；以及包含以下三個重鏈CDR的重鏈可變區：VH CDR1：RYWMS（SEQ ID NO: 1）；VH CDR2：EINPDSSTINYTSSL（SEQ ID NO: 2）；和VH CDR3：LITTEDY（SEQ ID NO: 3）。抗體可以是單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體等，並且可以是同種型IgG1、IgG2、IgG2a、IgG3或IgG4。在特定實施方式中，抗體係IgG1抗體。在一些實施方式中，抗體係人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
在另一個實施方式中，考慮了與具有以下可變區的抗體競爭結合αvβ8整聯蛋白結合的抗體：包含以下三個輕鏈CDR的輕鏈可變區：VL CDR1：KASQDINKYLS（SEQ ID NO: 10）；VL CDR2：YANRLVD（SEQ ID NO: 5）；和VL CDR3：LQYDVFPYT（SEQ ID NO: 11）；以及包含以下三個重鏈CDR的重鏈可變區：VH CDR1：RSWIS（SEQ ID NO: 9）；VH CDR2：EINPDSSTINYTSSL（SEQ ID NO: 2）；和VH CDR3：LITTEDY（SEQ ID NO: 3）。抗體可以是單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體等，並且可以是同種型IgG1、IgG2、IgG2a、IgG3或IgG4。在特定實施方式中，抗體係IgG1抗體。在一些實施方式中，抗體係人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
還提供了編碼所描述的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段的分離的多核苷酸；原核、真核或哺乳動物的一種或多種載體；和適用於編碼和表現所描述的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段的宿主細胞（原核、真核或哺乳動物）。
在另一方面，在所描述之方法和組成物中使用的抗體包括免疫球蛋白、單株抗體（包括全長單株抗體）、多株抗體、由至少兩個不同αvβ8整聯蛋白表位結合片段形成的多特異性抗體（例如，雙特異性抗體）、人抗體、人源化抗體、駱駝化抗體、嵌合抗體、單鏈Fvs（scFv）、單鏈抗體、單域抗體、域抗體、Fab片段、F(ab')2片段、展現出期望的生物活性的抗體片段（例如，抗原結合部分）、二硫鍵連接的Fvs（dsFv）、胞內抗體、和以上任一項的抗原或表位結合片段。特別地，合適的抗體包括免疫球蛋白分子以及免疫球蛋白分子的免疫和功能活性片段，例如含有至少一個抗原結合位點的分子。
抗αvβ8整聯蛋白抗體涵蓋單株的人的、人源化的或嵌合的抗αvβ8整聯蛋白抗體。在本文所述之組成物和方法中使用的抗αvβ8整聯蛋白抗體可以是裸抗體、免疫軛合物或融合蛋白。在某些實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體係IgG同種型，特別是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4人同種型或在人群體中發現的任何IgG1、IgG2、IgG3或IgG4等位基因的人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。人IgG類抗體具有多種有益的功能特徵，例如在血清中的長半衰期和介導不同的效應子功能的能力（Monoclonal Antibodies: Principles and Applications [單株抗體：原理與應用], Wiley-Liss, Inc.[威利-利斯公司], 第1章 (1995)）。人IgG類抗體被進一步分成以下亞類：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體屬於人IgG1亞類或同種型。人IgG1亞類在人中具有高的ADCC活性和CDC活性（Clark,Chemical Immunology [化學免疫學], 65, 88 (1997)）。在實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體係含有來自親本抗體如MEDI-hu37E1B5抗體的人框架區和CDR的人源化抗體。在另一個實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體包含優化的胺基酸序列以提高一種或多種抗體特性，包括對抗原的特異性、功能、穩定性、半衰期/壽命等。涉及投與抗 αvβ8 整聯蛋白抗體的治療方法
所描述之方法提供了腎臟疾病、尤其是纖維化腎臟疾病、並且特別是慢性腎臟疾病（CKD）（其中腎臟功能在一段時間內降低，並且通常發生腎臟組織的廣泛纖維化且隨時間加劇）的治療。通常，CKD的五個階段係：階段1，特徵在於具有正常腎臟功能（估算的腎小球濾過率（GFR）≥ 90 mL/min/1.73 m2 ）和持續性（≥ 3個月）蛋白尿的腎損害；階段2，特徵在於腎臟功能輕度喪失（估算的GFR 60-89 mL/min/1.73 m2 ）伴隨或不伴隨持續性（≥ 3個月）蛋白尿的腎損害；階段3，特徵在於腎臟功能輕度至重度喪失（估算的GFR 30-59 mL/min/1.73 m2 ）；階段4，特徵在於腎臟功能重度喪失（估算的GFR 15-29 mL/min/1.73 m2 ）；和階段5，特徵在於需要透析或移植才能生存的腎衰竭。階段5 CKD也被稱為ESRD（估算的GFR ＜ 15 mL/min/1.73 m2 ）。以毫升/分鐘（mL/min）測量的腎小球濾過率（GFR）係指腎臟從血液過濾廢物和多餘流體的速率。
所描述的涉及投與抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段之方法也可用於治療與腎臟細胞和組織損害或損傷相關的腎臟疾病和/或纖維化，其如藉由例如糖尿病性腎病（DN）、慢性腎臟疾病（CKD）、急性腎臟疾病、高血壓相關的腎臟疾病、高血糖相關的腎臟疾病、腎纖維化、炎症相關的腎臟疾病、終末期腎病（ESRD）、自體免疫相關的腎臟纖維化（例如，狼瘡性腎炎）和腎移植後的纖維化等造成。腎臟中的全部和局部組織炎症導致糖尿病性腎病的病理生理和進展。高血糖和高血壓病症（通常伴隨糖尿病性腎病）可能進一步導致腎臟細胞和組織中的腎小球高血壓和機械應力、足細胞損傷和脫離、腎小球炎症和腎小管炎症，所有該等均導致腎臟中、以及更特別地腎小球和腎小管中的纖維化（瘢痕形成）。組合治療
在另一個實施方式中，可以將一種或多種抗αvβ8整聯蛋白抗體與另一種藥物、藥品、或治療劑或化合物聯合投與，如提供給患有腎臟疾病或CKD的患者。通常，患有腎臟疾病或CKD的個體還患有高血壓。降低血壓的藥品和藥物促使血壓維持在目標範圍內並且延遲或阻止另外的腎損害。常見的血壓藥品包括但不限於乙醯膽鹼酯酶（ACE）抑制劑、血管張力素II受體阻斷劑（ARB）、β阻斷劑、鈣通道阻斷劑、直接腎素抑制劑、利尿劑和血管擴張藥。投與以治療CKD的症狀或併發症的藥品或藥物包括但不限於促紅血球生成素（EPO）（重組的人促紅血球生成素，rhEPO）、電解質失衡相關藥品、利尿劑、ACE抑制劑和ARB、以及鐵離子治療和維生素D。
在共同療法中，一種或多種抗αvβ8整聯蛋白抗體可視需要包含在與其他藥物或藥品相同的藥物組成物中。可替代地，抗αvβ8整聯蛋白抗體可以在分開的藥物組成物中，並且可以與一種或多種其他藥物或藥品同時或在不同時間投與。如本文所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體、或包含該抗αvβ8整聯蛋白抗體的藥物組成物適合於在另一種藥物或藥品或包含該藥物或藥品的藥物組合投與之前、同時或之後投與。在某些情況下，向受試者投與一種或多種抗αvβ8整聯蛋白抗體與分開提供或以分開的組成物提供的另一種或伴隨藥物或藥品的投與時間重疊。藥物組成物和配製物
本揭露涵蓋包含一種或多種所描述的抗αvβ8整聯蛋白抗體和一種或多種藥學上可接受的賦形劑、載劑和/或稀釋劑的藥物組成物和配製物的用途。在某些實施方式中，組成物可包含一種或多種其他生物活性劑（例如，蛋白酶抑制劑）。
賦形劑、載劑和稀釋劑的非限制性實例包括媒介物、液體、緩衝液、等滲劑、添加劑、穩定劑、防腐劑、增溶劑、表面活性劑、乳化劑、潤濕劑、佐劑等。組成物可以含有液體（例如，水、乙醇）；不同緩衝液內容物（例如Tris-HCl、磷酸鹽、醋酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液）、pH和離子強度的稀釋劑；洗滌劑和增溶劑（例如聚山梨酯20、聚山梨酯80）；抗氧化劑（例如甲硫胺酸、抗壞血酸、焦亞硫酸鈉）；防腐劑（例如硫菌醇、苯甲醇、間甲酚）；和膨脹物質（例如乳糖、甘露醇、蔗糖）。賦形劑、稀釋劑和載劑在藥物組成物配製中的用途在本領域係已知的，參見例如Remington's pharmaceutical Sciences [雷明頓藥物科學], 第18版, 第1435-1712頁, Mack Publishing Co.[麥克出版公司]（賓夕法尼亞州伊斯頓（1990）），其藉由引用以其全文併入本文。
作為非限制性實例，載劑可以包括稀釋劑、媒介物和佐劑、以及植入物載劑，以及惰性、無毒的固體或液體填料和不與一種或多種活性成分反應的包封材料。載劑的非限制性實例包括磷酸鹽緩衝鹽水、生理鹽水、水和乳劑（例如油/水乳劑）。載劑可以是含有例如乙醇、多元醇（例如甘油、丙二醇、液體聚乙二醇等）、植物油及其混合物的溶劑或分散介質。
包含用於腸胃外投與的一種或多種抗αvβ8整聯蛋白抗體的配製物可以製備為例如液體溶液或懸浮液，適合於在注射之前在液體介質中溶解或懸浮的固體形式，或乳劑。使用合適的稀釋劑、載劑、溶劑（例如緩衝水溶液、林格氏溶液、等滲氯化鈉溶液）、分散劑、潤濕劑、乳化劑、懸浮劑等，可根據本領域已知的技術配製無菌可注射溶液和懸浮液。也可以使用無菌固定油、脂肪酯、多元醇和/或其他非活性成分。此外，用於腸胃外投與的配製物可包括水性無菌可注射溶液（可含有抗氧化劑、緩衝液、抑菌劑和使配製物與預期受試者的血液等滲的溶質），以及水性和非水性無菌懸浮液（可含有懸浮劑和增稠劑）。注射溶液和懸浮液可以由無菌粉末、顆粒和片劑製備。
實施方式包括抗αvβ8整聯蛋白抗體（用作腎臟疾病的治療）的無菌藥物配製物。此類配製物將抑制配位基與αvβ8整聯蛋白的結合，從而有效地治療例如組織αvβ8整聯蛋白異常升高的病理病症。抗αvβ8整聯蛋白抗體可以具有足夠的親和力以有效抑制αvβ8整聯蛋白活性，並且可以具有足夠的作用持續時間以允許在人中低頻次給藥。延長的作用持續時間將允許藉由交替腸胃外途徑（如皮下或肌內注射）的低頻率且更方便的給藥方案。
可以例如在抗體的凍乾和重構之前或之後，通過無菌過濾膜過濾來產生無菌配製物。抗體通常以凍乾形式或溶液儲存。治療性抗體組成物一般係放置在具有無菌進入孔的容器中，例如具有允許配製物存取的適配器（如皮下注射針可刺穿的塞子）的靜脈內溶液袋或小瓶。
對於治療用途，例如在腎臟疾病、尤其是腎臟纖維化的治療中，能以根據患者的需求、患者的身體健康和特徵、和所治療的病症的嚴重程度（例如CKD的階段）的劑量投與抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段。例如，考慮特定患者中診斷的腎臟疾病和/或纖維化的類型和階段，可以根據經驗確定劑量。在本組成物和方法的上下文中，投與給患者的劑量應當足以導致在給定時間段在患者中的有益治療響應。劑量大小還將由在特定患者中伴隨抗體劑量的投與和/或與另一種治療劑組合給藥的任何不良副作用的存在、性質和程度來確定。確定用於特定患者和情況的適當劑量在醫護人員的技術範圍內。通常，使用小於治療劑的最佳劑量的較小劑量開始治療。此後，劑量以小增量增加，直到實現有效性（如最佳有效性）為止。為方便和如果需要，可以將總日劑量分開並且在一天期間分批投與。用確定劑量或最佳劑量的治療可以持續較短的時間段（例如，數小時或數天）或較長的時間段（例如，數天，數週，數月，數年）。檢測方法
在一些實施方式中，將抗αvβ8整聯蛋白抗體用於檢測，例如，用於在體內、離體或體外成像或確定αvβ8整聯蛋白的存在。在此類實施方式中，將抗體用可檢測部分直接或間接地標記。因此，在一些實施方式中，提供了用於在獲得自受試者（體外、離體或體內）的生物樣本中確定αvβ8整聯蛋白存在之方法，該等方法涉及將該等生物樣本與經標記的如本文所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體接觸，以及檢測與αvβ8整聯蛋白結合的經標記的抗體的存在，從而確定樣本中αvβ8整聯蛋白的存在。此類方法可被用於診斷腎臟疾病或腎臟相關病症如腎臟纖維化、炎症或CKD。
在一個實施方式中，抗體與「效應子」部分或分子軛合，該部分或分子可以是但不限於標記部分如放射性標記或螢光標記，或治療性部分或分子。在實施方式中，效應子部分或分子可以包括但不限於抗腫瘤藥物、毒素、細胞毒性劑、放射性藥劑、細胞介素、第二抗體、或酶。在另一個實施方式中，治療性部分或分子的活性借助其與抗體軛合來調節。在另一個實施方式中，將抗體連接至將前驅藥轉化為細胞毒性劑的酶。
包含抗體或其抗原結合片段的免疫軛合物可用於將效應子部分或分子靶向表面表現αvβ8整聯蛋白的細胞，特別是患病的腎臟細胞和組織，例如CKD腎臟細胞和組織。可以作為效應子分子的細胞毒性劑的非限制性實例包括放射性同位素、蓖麻毒素、阿黴素、柔紅黴素、紫杉醇、溴化乙錠（ethiduim bromide）、絲裂黴素、依託泊苷、替尼泊苷（tenoposide）、長春新鹼、長春花鹼、秋水仙鹼、二羥基炭疽菌素二酮、放線菌素D、白喉毒素、假單胞菌外毒素（PE）A、PE40、相思豆毒素、類固醇、糖皮質激素和其他化學治療劑。可檢測標誌包括但不限於，放射性同位素、螢光化合物、生物發光或化學發光化合物、金屬螯合劑或酶。
在實施方式中，將抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段用作治療劑，以藉由其自身（未軛合）或軛合至可檢測標記或效應子部分（例如輔助治療性治療劑，如用於腎臟疾病或CKD的合適的治療或治療劑）來降低、消除、減弱、減少、阻斷、或抑制需要的個體的腎臟（特別是患病的腎臟或CKD腎臟）中的TGF-β激活。
「可檢測的標記或部分」可以是藉由物理或化學手段（例如光譜的、放射的、光化學的、生物化學的、免疫化學的手段等）可檢測的診斷劑或診斷組分。舉例來說，可檢測的標記包括放射性標記（例如，111 In、99 mTc、131 I、67 Ga）以及其他FDA批准的顯像劑。另外的標記可以包括32 P、螢光染料、電子緻密試劑、酶、生物素、長葉毛地黃配質或半抗原、以及可以藉由例如將放射性標記摻入靶向劑來使其可檢測的蛋白質或其他分子。可以使用本領域已知的用於將核酸或奈米載劑與標記軛合的任何方法，如藉由使用描述於Hermanson,Bioconiugate Techniques [生物共軛技術] 1996, Academic Press, Inc.[學術出版社公司], 聖地牙哥中之方法。
「標記的」或「標籤化的」抗體或藥劑係共價地藉由連接子或化學鍵，或非共價地藉由離子、凡得瓦力、靜電或氫鍵與標記結合的抗體或藥劑，該結合允許藉由檢測與該抗體或藥劑結合的標記來檢測抗體、其抗原結合片段、或藥劑的存在。用於將可檢測藥劑和治療劑與抗體軛合的技術係本領域人員已知和實踐的，例如，如以下所述之：Arnon等人, 「Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy [癌症治療中用於免疫靶向的單株抗體的藥物]」, Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy [單株抗體和癌症治療], Reisfeld等人 (編輯), 第243-56頁 (Alan R. Liss, Inc.[奧蘭R.利斯公司] 1985)；Hellstrom等人, "Antibodies For Drug Delivery [用於藥物傳遞的抗體]" Controlled Drug Delivery [藥物控制傳遞] (第2版), Robinson等人 (編輯), 第623-53頁 (Marcel Dekker, Inc. [馬塞爾·德克爾公司] 1987)；Thorpe, 「Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review [癌症治療中細胞毒性藥物的抗體載劑：綜述]」 Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications [單株抗體第84期：生物和臨床應用], Pinchera等人 (編輯), 第475-506頁 (1985)；和Thorpe等人, 「The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates [抗體-毒素軛合物的製備和細胞毒性特性]」,Immunol. Rev . [免疫學綜述], 62:119-58 (1982)。投與方式
除了本文所述之投與方案外，可以將抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段、或包含抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段的藥物組成物或配製物藉由適合於向受試者投與和/或遞送生物藥物（如蛋白質或抗體）的方式和途徑向受試者投與。通常，合適的生物遞送或投與方法包括腸胃外投與模式或途徑。這類遞送方法包括但不限於皮下（SC）遞送、皮下注射或輸注、靜脈內（IV）遞送，例如靜脈內輸注或注射或IV推注。其他遞送和投與模式或方案可包括但不限於關節內、動脈內、腹膜內、肌內、皮內、直腸、經皮或鞘內。在特定實施方式中，藉由靜脈內投與，例如IV輸注或推注IV注射，將抗αvβ8整聯蛋白抗體提供給受試者。在另一個特定實施方式中，藉由皮下注射，例如單次皮下注射，將抗αvβ8整聯蛋白抗體提供給受試者。
可以在慢性治療方案中投與抗αvβ8整聯蛋白抗體。可以在一段時間或預先確定的時間段內投與抗體，然後是不進行治療的時間段。也可以重複給藥方案或週期。在一些實施方式中，治療（例如，抗αvβ8整聯蛋白抗體的投與）涉及第一劑量的投與，然後是第二劑量和/或一個或多個隨後維持劑量的投與，例如持續包含多天的時間段。後續劑量或維持劑量可在初始劑量、第二劑量或隨後劑量之後以週期性間隔，例如週間隔（例如1週、2週、3週，或更長時間例如4週、5週、6週、7週、8週、9週、10週、11週、12週）或以月間隔或更長間隔（例如年）投與。
還可以設想，在可行的情況下，抗αvβ8整聯蛋白抗體可以藉由在疾病位點處或附近直接遞送（例如輸注或注射）來投與。在腎臟或腎臟組織中或附近注射可能是有用的。還可以設想，抗αvβ8整聯蛋白抗體可以藉由植入儲庫（depot）來投與，該儲庫在作用的靶位點處（如在腎臟組織中）釋放抗體。抗αvβ8整聯蛋白抗體的投與或遞送的替代方式可包括吸入（例如吸入劑或氣霧噴霧劑）、鼻內遞送或經皮遞送（例如借助皮膚貼片）。此外，可以藉由滲透泵（例如，Alzet泵）或微型泵（例如，Alzet微型滲透泵）來投與，使抗αvβ8整聯蛋白抗體或其藥物組成物在預先確定的時間段內受控的、連續的和/或緩釋的遞送。滲透泵或微型泵也可以在作為靶位點的腎臟或腎臟組織處或附近皮下植入。套組
還提供了用於治療腎臟疾病，例如涉及纖維化的腎臟疾病，如CKD或DN的套組。在實施方式中，套組包括含有有效量的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段的組成物，例如治療性組成物。在實施方式中，抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段以單位劑型存在。
在一些實施方式中，套組包含含有抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段（例如水或凍乾形式）的無菌容器。如果抗體係凍乾形式，則套組可能包括具有用於與乾燥的抗體混合的適當稀釋劑、賦形劑或媒介物的容器，以製備適用於投與例如靜脈內投與的含有抗體的溶液。容器可以是安瓿、瓶子、小瓶、管、袋、小袋、泡罩包裝或本領域已知的其他適合的容器形式。此類容器可由塑膠、玻璃、層壓紙、金屬箔、或適用於容納藥物（例如水或乾燥形式）的其他材料製成。容器可以放在盒中，以防止損害或破損。套組中可包括一個或多個用於抗體稀釋和/或投與的注射器。
套組可進一步提供用於將抗αvβ8整聯蛋白抗體或含有該抗體的組成物投與至患有腎臟疾病、纖維化腎臟疾病例如CKD或DN的受試者的說明書。說明書將通常包括關於使用抗體或組成物治療腎臟疾病、纖維化腎臟疾病例如CKD或DN的資訊。在其他實施方式中，說明書包括以下中的一個或多個：治療性抗體的描述；用於治療腎臟疾病、纖維化腎臟疾病如CKD或DN、或其症狀的劑量方案和投與；劑量資訊；預防措施；警告；適應症；禁忌症；超劑量資訊不良反應；動物藥理學；臨床研究；和/或參考文獻。說明書可以直接列印在容器（當存在時）上，標籤上（應用於容器），或在套組中提供的或與套組中的容器一起提供的單獨的頁、小冊子、卡片、或數據夾上。
除非另有指示，本揭露涵蓋很好地處在熟練的技術人員的見識範圍之內的分子生物學（包括任何重組技術）、微生物學、細胞生物學、生物化學和免疫學的常規技術。此類技術在文獻中有充分說明，例如，「Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選殖：實驗室手冊]」, 第二版 (Sambrook, 1989)；「Oligonucleotide Synthesis [寡核苷酸合成]」 (Gait, 1984)；「Animal Cell Culture [動物細胞培養]」 (Freshney, 1987)；「Methods in Enzymology [酶學方法]」、「Handbook of Experimental Immunology [實驗免疫學手冊]」 (Weir, 1996)；「Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells [用於哺乳動物細胞的基因轉移載體]」 (Miller and Calos, 1987)；「Current Protocols in Molecular Biology [[分子生物學現代方法]]」 (Ausubel, 1987)；「PCR: The Polymerase Chain Reaction [PCR：聚合酶鏈式反應]」, (Mullis, 1994)；「Current Protocols in Immunology [免疫學現代方法]」 (Coligan, 1991)。該等技術適用於產生如本文所述之編碼抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合部分或片段多核苷酸和/或抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合部分或片段多肽的多核苷酸，並且因此，可以被考慮用於製備和實踐本發明。
提出以下的實例係為了給熟悉該項技術者提供如何製備和使用本發明的治療性方法的一個完整的揭露和說明，而不是旨在限定諸位發明人認為係他們自己的發明的範圍。實例 實例 1 抗 αvβ8 整聯蛋白抗體
幾種抗αvβ8整聯蛋白抗體包含在本揭露中，並且根據本文所述之方法、組成物和產物使用，和/或作為參比或對照抗體使用。特別地，嵌合抗αvβ8整聯蛋白抗體，本文稱為「Chi-37E1B5」，係加利福尼亞大學（UCSF）董事會許可引進的。使用公開的國際PCT申請WO 2013/026004（UCSF）中報導的人源化序列，在英商梅迪繆思有限公司（MedImmune）生產第二抗αvβ8整聯蛋白抗體，本文稱為「hu37E1B5」。如圖 1A 所示，當在親和力結合研究中評估hu37E1B5抗體時，發現其對αvβ8整聯蛋白的結合親和力非常差。因此，使用本領域已知和實踐的CDR接枝技術生產第三人源化抗αvβ8整聯蛋白抗體，本文稱為「MEDI-hu37E1B5」。用於生產人源化MEDI-hu37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體的CDR獲得自以上所述之Chi-37E1B5抗體。如圖 1B 所示，MEDI-hu37E1B5抗體展現出與Chi-37E1B5抗體相似的對αvβ8整聯蛋白的結合親和力。圖 6 列出了MEDI-hu37E1B5抗體的VH 和VL 區胺基酸序列以及CDR。出人意料地，Chi-37E1B5抗體人源化後，結合親和力被保留。相反，UCSF人源化抗體（「hu37E1B5」）從Chi-37E1B5人源化後顯示出非常差的結合親和力。
此外，為了獲得對αvβ8整聯蛋白具有改善的結合親和力的抗αvβ8整聯蛋白抗體，使用本領域已知的和使用的親和力突變技術，從作為親本抗體的MEDI-hu37E1B5抗體產生第四優化的抗αvβ8整聯蛋白抗體，本文稱為「B5-15」。如圖 4 所示，與MEDI-hu37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體相比，所得的B5-15抗αvβ8整聯蛋白抗體（也稱為「優化的」或「親和力優化的」B5-15）展現出改善的αvβ8整聯蛋白結合概況。圖 6 還列出了優化的B5-15抗體的VH 和VL 區胺基酸序列以及CDR。藉由 CDR 接枝來人源化嵌合 Chi-37E1B5 抗體
用如本領域已知的和實踐的CDR接枝方法將小鼠/人嵌合37E1B5 （Chi-37E1B5）抗體人源化以及產生人源化的MEDI-hu37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體。對於人源化，選擇相同標準類別的最接近的個體人種系框架（FW）來模擬抗體折疊結構。鑒定用於回復突變的關鍵鼠FW殘基，進行基因合成，使用293細胞進行暫態轉染以轉化和產生IgG，並且針對與αvβ8整聯蛋白的結合篩選所得抗體。此過程產生了全長人源化輕鏈殖株和具有4個關鍵小鼠殘基的雜合人種系FW。經證明，從以上方法獲得的人源化MEDI-hu37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體出人意料地保留了初始嵌合37E1B5（Chi-37E1B5）抗體的全部結合活性（圖 1B ）。如圖 1B 中觀察到的，與hu37E1B5抗體（其序列如上文所述報導於WO 2013/026004中）相比，人源化MEDI-hu37E1B5抗體和Chi-37E1B5抗體均顯示出與αvβ8整聯蛋白的結合提高。導致產生親和力優化的人源化 B5-15 抗 αvβ8 整聯蛋白抗體的位點飽和誘變和親和力突變
此外，在人源化MEDI-hu37E1B5抗體上進行位點飽和誘變，藉由先將Cys 94殘基轉化為所有其他19個胺基酸以去除該殘基（該殘基已表明係抗體結構的不利因素，因為其與抗體骨架的潛在片段化/肽切割相關）。藉由ELISA分析，針對與αvβ8整聯蛋白的結合篩選所有所得的突變型抗體。取決於位置94處的殘基，結合親和力降低。從此程序獲得的最佳αvβ8整聯蛋白結合突變體被稱為MEDI-hu37E1B5-C94I和MEDI-hu37E1B5-C94G。MEDI-hu37E1B5-C94I突變型抗體的αvβ8結合親和力降低約3倍。選擇人源化MEDI-hu37E1B5-C94I抗體用於另外的分析和親和力優化。
使用簡約誘變（本領域認可之方法），進行具有N-糖基化位點的人源化MEDI-hu37E1B5-C94I的親和力成熟。簡言之，首先產生Medi-hu37E1B5-C94I的每個CDR位置的飽和點突變。該等突變覆蓋抗體VH 和VL 區的所有6個CDR。針對與αvβ8整聯蛋白的結合篩選共6528個單獨殖株（＞ 4x冗餘）。從該等中，鑒定了10個一級靶物（primary hit）：3個在VH -CDR1中；2個在VH -CDR3中；1個在VL -CDR1中；以及4個在VL -CDR3中。所有該等靶物在αvβ8整聯蛋白結合方面均顯示出2-5倍的改善。
圖 2A-2C 示出了如下圖，該等圖顯示篩選分析中鑒定的MEDI-hu37E1B5 C94I抗αvβ8整聯蛋白抗體和代表性抗αvβ8整聯蛋白抗體「靶物」（稱為「P1」或「P2」靶物）例如VH CDR1靶物（圖 2A ）、VH CDR3靶物（圖 2B ）和VL 靶物（圖 2C ）的結合親和力分析。舉例來說，為了指定抗體殖株靶物，「P」代表給定的多孔板，並且P後的數字代表板中的孔數。
圖 2D 示出了藉由親和力成熟的抗αvβ8整聯蛋白抗體選殖的篩選獲得的、指定為「P2-23」、「P2-33」、「P2-25」、「P1-21」「P1-35」、「P1-42」、「P2-16」、「P2-19」、「P2-36」和「P2-14」的代表性一級殖株αvβ8整聯蛋白抗體靶物的VH 和VL 區的胺基酸序列的比對。在序列上方指定了殖株的VH 和VL 區中的框架（FW1-FW4）區和CDR（CDR1-CDR3）。CDR區的胺基酸殘基差異用雙底線指示。
然後以組合方式創建了10個最有益的點突變組合文庫。針對與αvβ8整聯蛋白的結合篩選共4608個殖株。選擇了88個殖株進行確認。從組合評估中鑒定出6個靶物，如與最佳的一級靶物P2-23相比，在αvβ8整聯蛋白結合方面顯示出累加改善。圖 3A 和圖 3B 示出了從組合文庫篩選的αvβ8整聯蛋白結合數據。選擇在CHO（G22）細胞中表現的人源化和親和力優化的抗體，稱為B5-15（「優化的B5-15」或「親和力優化的B5-15」），作為最終的最佳抗體，這係基於其對αvβ8整聯蛋白的結合親和力比MEDI-hu37E1B5更高（圖 4 ）並且其在TMLC螢光素酶測定中的體外效力比Chi-37E1B5更高（圖 5 ）。TGF-β 激活生物測定
本領域使用TMLC螢光素酶生物測定來測量經由整聯蛋白如αvβ8整聯蛋白的TGF-β激活。該生物測定係基於貂肺細胞系TMLC，該細胞系被融合到螢光素酶的纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）啟動子穩定轉染，如例如以下所述之：M. Abe等人, 1994,Anal. Biochem . [分析生物化學] 216(2):276-284；L.A. Randall等人, 1993,J. Immunol. Methods [免疫學方法雜誌], 164(1):61-67；M.A. van Waarde等人, 1997,Anal. Biochem . [分析生物化學], 247(1):45-51）；和I. Tesseur等人, 2006, BMC Cell Biology [BMC細胞生物學], 7:15（https://doi.org/10.1186/1471-2121-7-15）。
使用轉化的貂肺上皮細胞（TMLC）測量TGF-β激活，該等貂肺上皮細胞（由Daniel Rifkin，紐約大學提供的細胞）用一部分纖溶酶原激活的抑制劑1（PAI-1）啟動子（與螢光素酶報告分子連接）穩定地轉染並且如先前所述培養（M. Abe等人, 1994,Anal. Biochem . [分析生物化學], 216(2):276-284）。將HeLa-B8細胞（1.5 x 104個細胞/孔）與TMLC（1.5 x 104個細胞/孔）在96孔板中在補充有10% FBS和10 U/ml青黴素G、10 μg/mL具有或不具有測試抗體的硫酸鏈黴素G的DMEM高葡萄糖（生命技術公司（Life Technologies）/賽默飛科技公司（Thermo Fisher））中共培養過夜。16小時後，去除上清液，並將細胞在100 µL細胞裂解緩衝液（普洛麥格公司（Promega））中裂解，並且藉由轉移80 µL裂解液且與80 µL底物在白壁透明底96孔板中混合，使用螢光素酶測定系統（普洛麥格公司）測定螢光素酶活性。立即在光度計上讀取樣本，並且顯示為相對螢光素酶單位（RLU）或最大響應百分比，其藉由在測定中單獨使用TMLC作為基線或0%對照並且將與HeLa-B8細胞共培養的TMLC作為最大或100%響應來確定。HeLa-B8 細胞系的產生
HeLa-B8細胞係HeLa細胞系（ECACC）的衍生物。簡言之，將匯合的HeLa細胞維持在補充有10% FBS、1%非必需胺基酸（生命技術公司/賽默飛科技公司（Thermo Fisher））和10 U/ml青黴素G（生命技術公司/賽默飛科技公司（Thermo Fisher））、10 μg/mL硫酸鏈黴素G的MEM（生命技術公司/賽默飛科技公司（Thermo Fisher））中，並且在使用前，將細胞使用accutase移出並且以1 x 106個細胞/mL懸浮在PBS中。將LIVE/DEAD可固定淺綠色死細胞染色（生命技術公司/賽默飛科技公司（Thermo Fisher），1 : 1000）添加至在冰上的細胞中持續20分鐘。將細胞在冷的流動式細胞測量術染色緩衝液（電子生物科學公司（eBioscience））中沈澱並洗滌。將重組的37E1B5-mIgG1或同種型-mIgG1（100 µg/ml的1 x 106個細胞/ml）添加至細胞並且在冰上孵育30分鐘。將細胞沈澱並洗滌，並且將第二抗小鼠-Alexa-647（傑克遜免疫研究公司（Jackson ImmunoResearch），1 : 200）添加至細胞中並且在冰上孵育30分鐘。將細胞沈澱並洗滌，並且在含有1%FBS的HeLa細胞培養基中以10 x 106個細胞/ml重懸。使用Chi-37E1B5抗體，將細胞在BD FACSAria III細胞分選儀（BD生物科學公司（BD Biosciences））上分選。然後將高αvβ8+分選的細胞在完全HeLa細胞培養基中培養、擴增並且貯藏以備將來使用。在至少1個月的培養內，細胞對高αvβ8表現保持陽性。人源化、親和力優化的 B5-15 抗 αvβ8 整聯蛋白抗體的特徵
人源化和優化的B5-15抗體多肽的輕鏈（L）可變區（VL ，κ）胺基酸（aa）序列具有如下的107個胺基酸殘基：B5-15 VL （ κ （ kappa ）） DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINKYLSWFQQKPGKAPKSLIYYANRLVDGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDVFPYTFGGGTKVEIK（107 aa）（SEQ ID NO: 13）
B5-15抗體多肽的重鏈（H）可變區（VH ）胺基酸序列具有如下的116個胺基酸殘基：B5-15 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFVFSRSWISWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTSSLKDRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAILITTEDYWGQGTTVTVSS（116 aa）（SEQ ID NO: 12）
特別地，B5-15抗體的輕鏈（L）可變區（VL ）包括具有如下胺基酸序列的三個CDR： VL CDR1：KASQDINKYLS（SEQ ID NO: 10） VL CDR2：YANRLVD（SEQ ID NO: 5） VL CDR3：LQYDVFPYT（SEQ ID NO: 11） B5-15抗體的重鏈（H）可變區（VH ）包括具有如下胺基酸序列的三個CDR： VH CDR1：RSWIS（SEQ ID NO: 9） VH CDR2：EINPDSSTINYTSSL（SEQ ID NO: 2） VH CDR3：LITTEDY（SEQ ID NO: 3）
圖 6 示出了Chi-37E1B5、hu37E1B5、MEDI-hu37E1B5和B5-15抗αvβ8整聯蛋白抗體的VH 和VL 區的胺基酸序列的比較。實例 2 使用抗 αvβ8 整聯蛋白抗體的在福馬林固定的石蠟包埋的（ FFPE ）人組織中用於 αvβ8 整聯蛋白表現的免疫組織化學（ IHC ）檢測方法 IHC 方法
為了製備福馬林固定的石蠟包埋的（FFPE）組織切片，從儲庫取出固定有人組織樣本的載玻片。將載玻片適當地標記並且載入到自動染色機XL架上。將染色的載玻片脫蠟並且在自來水中再水化。
將載玻片架轉移至含有Dako抗原修復溶液（Dako S1699）的高壓鍋。將熱介導的抗原修復（Heat Mediated Antigen Retrieval）在壓力（SP DDCP_5024）下進行2分鐘，以及進行以下改變：抗原修復後，允許高壓鍋冷卻並且減壓；將高壓鍋置於流動自來水中並且取掉蓋子；將高壓鍋冷卻5分鐘並且然後將其內容物用流動的自來水沖洗；將載玻片取出並且在流動的自來水中漂洗5分鐘。將載玻片用過氧化物酶（甲醇中3%的過氧化氫酶）封閉10分鐘。
如下進行免疫組織化學： •   PAP pen載玻片於適當位置（用於繪製組織上的疏水屏障）； •   將載玻片裝載入Dako自動染色機； •   在具有0.1%吐溫20（PBST）的標準杜爾貝科氏（Dulbecco’s）PBS中漂洗x1（一次）； •   在2.5%馬血清（來自ImmPRESS套組）中孵育載玻片20分鐘； •   吹氣步驟；在PBST中稀釋的1.0 ug/ml Calico抗體CAL16（純化的兔重組抗αvβ8整聯蛋白抗體）、1.0 ug/ml的Dako兔免疫球蛋白同種型對照、或以1 : 200稀釋的Vector Ki67（作為實驗對照）中孵育60分鐘； •   在PBST中漂洗 x1； •   在標記的聚合物，Vector ImmPRESS™ HRP，馬抗兔IgG（過氧化物酶）聚合物檢測套組（目錄號MP-7401）中孵育30分鐘； •   在PBST中漂洗 x1； •   在PBST中孵育5分鐘； •   在PBST中漂洗 x1；轉化為有害廢物x1； •   在DAB+底物/色原（chromagen）（Dako，K3468）中孵育5分鐘； •   在純水（藉由自動染色機自動完成）中漂洗x1； •   從Dako自動染色機卸載載玻片； •   用Gill I蘇木精複染，脫水並且蓋玻片覆蓋（使用程式9）；和 •   將載玻片從Leica CV5030 Coverslipper卸載並且允許乾燥/設置。 [表 1 ]
蛋白質編號： 9 複染和脫水
步驟 狀態 試劑 時間 [M:S] 準確
1 洗滌5 流動的自來水 3:00 否
2 11 蘇木精GILL I 0:25 是
3 洗滌4 流動的自來水 4:00 否
4 12 1%酸醇 0:02 是
5 洗滌2 流動的自來水 5:00 否
6 13 95% IMS 1:30 否
7 14 IMS 1:00 否
8 15 IMS 1:30 否
9 16 IMS 1:00 否
10 17 二甲苯 2:00 否
11 18 二甲苯 2:00 否
12 出口 二甲苯 /:/ /
可替代地，可以手動進行「程式編號：9」中的步驟。為此，可以在規定的時間內將載玻片放置進規定試劑中。可以使用自動程式或手動進行該等步驟。實例 3 αvβ8 整聯蛋白優先在腎臟中表現
在許多組織樣本上進行如實例2中所述之IHC染色分析，以確定avβ8整聯蛋白在人組織中的表現和分佈。下表2示出了IHC分析的結果。 [表 2 ]
組織 N 表現 αvβ8 整聯蛋白的樣本編號 位置
心臟 3 0
肺 3 0
腎臟 3 3 腎小球和腎小管
脾 3 0
淋巴結 3 0
胸腺 3 2 哈索爾小體周圍的上皮細胞
扁桃體 3 2 小梁複層鱗狀上皮
肝 3 0
膽囊 3 1 弱細胞質染色的柱狀上皮
胰腺 3 1 小面積的基質陽性表現
腦小腦 3 1 弱的均勻實質
腦小腦 3 2 弱的均勻實質
甲狀腺 3 0
腎上腺 3 2 皮質細胞-罕見的間質av8β整聯蛋白染色檢測 毛細血管
腮腺 3 0
皮膚 3 0
骨骼肌 3 0
胃 3 0
回腸 3 2 外膜神經細胞
結腸 3 0
卵巢 3 1 ?神經細胞
輸卵管 3 1 罕見的弱柱狀上皮
子宮肌層 3 0
子宮內膜 3 1 子宮內膜腺上皮
宮頸內膜 3 1 弱的複層鱗狀
外宮頸 3 2 上皮膜 柱狀/複層鱗狀
乳房 3 0
胎盤 3 3 弱的稀疏的滋養層，罕見膜
前列腺 3 1 中等腺上皮
睾丸 3 2 弱的細胞質初級精母細胞
精囊 3 2 腺/囊上皮
膀胱 3 0
輸尿管 3 0
如表2中觀察到的，腎臟組織表現高水平的αvβ8整聯蛋白。此外，發現與33種其他的人組織類型即心臟、肺、脾、淋巴結、胸腺、扁桃體、肝、膽囊、胰腺、腦小腦和大腦、甲狀腺、腎上腺、腮腺、皮膚、骨骼肌、胃、回腸、結腸、卵巢、輸卵管、子宮肌層、子宮內膜、宮頸內膜、外宮頸、乳房、胎盤、前列腺、睾丸、精囊、膀胱和輸尿管相比，人腎臟組織中高度富集αvβ8整聯蛋白。在圖 7A （左側）中，在人腎臟組織、並且特別是腎臟組織的腎小管足細胞和上皮細胞中觀察到αvβ8整聯蛋白的強染色。相比之下，在檢查的其他組織類型中發現弱的、不一致的或不存在的染色。
對於圖 7A 中示出的IHC染色分析，使用了CAL16殖株抗αvβ8整聯蛋白兔單株抗體（來自Calico生物實驗室公司（Calico Biolabs Inc.）（普萊森頓，加利福尼亞州）的純化的兔重組抗αvβ8整聯蛋白抗體）。將可商購的此抗體優化並且驗證與在人組織和小鼠組織中均表現的αvβ8整聯蛋白的結合。實例 4 在患有慢性腎臟疾病（ CKD ）的患者的腎臟組織中 Avβ8 表現增加
在取自患有糖尿病性腎病（DN）的患者和具有正常腎臟組織的個體（作為「健康」對照）的人腎臟組織樣本中評估αvβ8整聯蛋白的表現。從阿登布魯克斯生物庫（Addenbrooke’s Biobank）和英商梅迪繆思有限公司（MedImmune）（蓋瑟斯堡）生物庫獲得DN腎臟組織樣本。從英商梅迪繆思有限公司（MedImmune）（蓋瑟斯堡）組織庫獲得正常腎臟樣本。更特別地，患有糖尿病性腎病慢性腎臟疾病DN-CKD的9個患者的樣本藉由穿刺活檢獲得。將來自4個健康‘正常’個體的樣本用作對照。在正常樣本中，一些輕度慢性炎症區域係明顯的，但並不影響研究設計或結果（圖 7A ，右側）。
如實例3中所述之，IHC染色實驗中使用的抗體係CAL16殖株抗αvβ8整聯蛋白兔單株抗體（來自Calico生物實驗室公司（Calico Biolabs Inc.）（普萊森頓，加利福尼亞州）的純化的兔重組抗體）。染色後，由經驗豐富的資深病理學家檢查載玻片。
此IHC染色分析的結果如下：在健康個體中，與同種型匹配的對照抗體染色相比，腎小球顯示抗αvβ8整聯蛋白抗體陽性染色；抗αvβ8整聯蛋白抗體染色通常是輕的（3/4樣本），但一個樣本（1/4）在足細胞（足細胞模式）中顯示強染色。在腎小管中，在皮質小管、膜、基底到頂部中觀察到輕多焦染色（圖 7A ，右側）。腎小管中的染色沒有出現在集合管中。與健康轉基因小鼠相似，健康人腎臟的總染色模式係主要在腎小球中，而CKD患者和UUO轉基因小鼠中的腎小管結構中均觀察到IHC對αvβ8整聯蛋白的染色。
在患有DN-CKD的患者中，在腎小球中αvβ8染色的程度不同並且與腎小球損害的程度有關。患病組織中足細胞的喪失與較少的染色有關。由於患病腎臟中足細胞的喪失，染色強度不同。DN-CKD腎臟組織中的腎小管染色從細胞質和膜的輕染色變化到強染色（主要在炎症/纖維化區域）。如抗αvβ8整聯蛋白抗體的染色模式證明的，在DN-CKD腎臟中觀察到αvβ8整聯蛋白總體增加的表現。過表現基本上發現於腎小管中（圖 7B ）。基於抗αvβ8整聯蛋白抗體染色，DN-CKD腎臟組織中αvβ8整聯蛋白的表現變化似乎足以接近顯示腎小管間質炎症和纖維化的小鼠模型腎臟中的αvβ8整聯蛋白表現。
圖 7C 示出了獲得自患有腎臟疾病的人患者的腎臟組織細胞的顯微照片。將腎臟組織細胞用抗αvβ8整聯蛋白抗體染色並且藉由IHC分析。IHC染色結果證明，與正常腎臟細胞和組織相比，αvβ8整聯蛋白在患有糖尿病性腎病（DN）的人患者的腎臟細胞和組織中上調（圖 7C ，頂行）。特別地，在從DN和CKD患者獲得的腎臟組織樣本中，αvβ8整聯蛋白的過表現基本上發現於腎小管中（圖 7C ，中間）。DN患者的腎臟腎小球顯示αvβ8整聯蛋白表現降低，這可能是由於腎臟組織纖維化和損害導致足細胞喪失的結果。來自患有階段2和階段3 DN的患者的腎臟組織樣本中的未染色區域係纖維化基質，其取代了功能性腎單位，如圖 7C 中的星號（*）所示。此結果強調了靶向αvβ8整聯蛋白以保護功能性上皮的重要性。對於圖 7C 中示出的IHC染色分析，使用了CAL16殖株抗αvβ8整聯蛋白兔單株抗體（來自Calico生物實驗室公司（Calico Biolabs Inc.）（普萊森頓，加利福尼亞州）的純化的兔重組抗αvβ8整聯蛋白抗體）。將可商購的此抗體優化並且驗證與在人組織和小鼠組織中均表現的αvβ8整聯蛋白的結合。實例 5 itgb8 基因在來自患有 CKD 的個體的腎臟中上調並且與其他 β 整聯蛋白相比具有升高的表現
轉錄組分析提供了與健康人受試者的腎臟相比，人CKD患者的腎臟具有更高的ITGB8 （編碼β8整聯蛋白）表現的證據。在該等分析中，在人CKD腎臟勻漿中測量相對的β整聯蛋白家族mRNA表現。簡言之，使用TissueLyserII將腎臟活檢的1沖頭（punch）（2 mm穿孔機）在RLT裂解緩衝液中均勻化。用RNAeasy Mini套組柱將來自裂解液的RNA分離。用Nanodrop測量RNA濃度，並且調節濃度以進行qPCR分析，其中使用TaqMan RNA至Ct 1-步驟套組和對所有整聯蛋白具有特異性的探針，包括hprt-1作為管家基因。圖 8A 示出了橫條圖，其顯示編碼來自患有CKD的人患者的腎臟中β整聯蛋白的不同同種型的mRNA相對表現水平。如圖 8A 所示，在CKD患者的腎臟中，β8整聯蛋白mRNA表現比其他β整聯蛋白（即β1、β3、β5和β6）的表現占主導。
在其他實驗中，分析了157名患有不同程度CKD的患者的轉錄組概況並且將其與活體供體（LD）的轉錄組概況進行比較。157名患者中有十二（12）名患有糖尿病神經病變（DN）。將腎小球和腎小管間質室分離，並如S. Martini等人（2014,J. Am. Soc. Nephrol. [美國腎臟病學會雜誌], 25(11):2559-2572）所述之進行全基因組基因表現分析。在此分析中，首先評估了與裂隙素（藉由NPHS1基因編碼）相關的腎小球室中itgb8 mRNA的表現。裂隙素係腎濾過屏障正常運行所必需的足細胞蛋白質，其由有孔的內皮細胞、腎小球基底膜和上皮細胞的足細胞組成。NPHS1中的突變與先天性腎病症候群相關。NPHS1表現係足細胞數目的指標。在CKD中，由於足細胞數目減少，NPHS1表現降低。圖 8B 顯示itgb8 mRNA表現與足細胞標誌基因NPHS1呈正相關，這支持了此基因在腎臟足細胞中的表現。為了更好的評估腎小球皮質中itgb8 表現（考慮了足細胞喪失），將itgb8 表現藉由NPHS1歸一化。因此，將數據針對裂隙素（由NPHS1基因編碼）表現歸一化，以理解在足細胞喪失的條件下（如在慢性腎臟疾病中）足細胞內的表現變化。圖 8C 示出了箱形圖，其顯示在DN患者腎臟樣本的腎小管間質（TI）中，itgb8 mRNA表現相對於其在作為健康對照的活體供體（LD）中的表現更高。圖 8D 示出了散點圖，其顯示在患有CKD的患者的TI中，CKD中itgb8 mRNA表現與TGF-β激活得分密切相關，這支持了CKD中αvβ8整聯蛋白對TGF-β激活的作用。
在單獨的群組中，藉由使用RNAseq的全基因組轉錄概況分析，表徵與獲得自19名LD患者的腎臟樣本的TI和腎小球相比的獲得自20名患有DN的人患者的腎小管間質（Tub）和腎小球（Glom）腎臟樣本。結果顯示，itgb8 mRNA表現在DN患者的腎小管間質（圖中稱為「Tub-DN」）比在活體供體（LD）中增加（圖 8E ）。患有腎臟疾病即糖尿病性腎病的患者的腎小管間質中高itgb8 mRNA水平的發現與在該等腎臟疾病患者中腎損害和纖維化的病症有關。
該等分析的關鍵發現如下：在對裂隙素（NPHS1）即足細胞標誌基因歸一化後，在來自DN患者樣本的腎小球中itgb8 mRNA表現升高。在DN患者的腎小管間質（TI）中，itgb8 mRNA表現升高。在TI中，itgb8 mRNA表現與推定的TGF-β激活得分呈正相關，這與提出的αvβ8整聯蛋白在纖維化疾病中控制TGF-β激活的作用一致。WT1（另一種足細胞標誌基因）的mRNA表現分析後，發現了相似的結果（未顯示數據）。該等結果支持了如下發現，即在人CKD腎臟中，αvβ8整聯蛋白表現與CKD中的纖維化有關，該纖維化與在造成和加劇腎臟纖維化中起重要作用的TGF-β的激活相關。實例 6 抗 αvβ8 整聯蛋白抗體的體內功效
纖維化誘導的小鼠模型被用於研究在腎臟中治療纖維化的抗αvβ8整聯蛋白抗體的體內功效。此模型涉及在動物上進行稱為單側輸尿管梗阻（UUO）（輸尿管單側結紮術）的程序。對於該模型，雄性人源化的αvβ8轉基因（Tg）小鼠經歷了假處理或UUO程序（涉及五（5）天和八（8）天的損傷持續時間）。藉由將其中敲除αvβ8基因的小鼠（αvβ8 Ko小鼠）與人αvβ8 BAC轉基因小鼠雜交，產生Tg小鼠。表現人ITGB8 基因的Tg小鼠的產生描述於，例如，Minagawa等人, 2014,Sci. Transl. Med . [科學轉譯醫學], 6(241):241ra79（doi: 10.1126/scitranslmed.3008074）中。人源化αvβ8轉基因小鼠主要在腎小球中表現人αvβ8整聯蛋白，其模式與在健康人中觀察到的相似。輸尿管結紮術（UUO）後纖維化的誘導增加了腎小管中αvβ8整聯蛋白表現，這與人CKD中觀察到的相似。
使用的測試藥劑係如上所述之B5-15，即IgG1人源化和序列優化的抗αvβ8整聯蛋白抗體。對照抗體係同種型匹配的IgG抗體。
UUO Tg小鼠模型研究的方案：
模型：91隻雄性人源化的αvβ8轉基因（Tg）小鼠經歷了假處理或輸尿管單側梗阻（UUO）程序；5天或8天的損傷持續時間。在第-1、1、3、5和7天，每隔一天（EOD），向各組動物給予相應的抗體處理。在第0、2、4和6天，對假處理的小鼠投與媒介物。
研究起始時的小鼠年齡：92-121天大。
測試藥劑/化合物：將抗αvβ8整聯蛋白抗體（Chi-37E1B5單株抗體）、B5-15序列優化的抗αvβ8整聯蛋白抗體、IgG同種型對照和/或媒介物（PBS）以下表3所示的劑量、頻率和組投與。 [表 3 ]
N/ 組 （動物 #s ） 品種 化合物和投與間隔 （天數（ D ）） 劑量和途徑 手術準備間隔 （天數（ D ）） 條件
n = 6 （3428 - 3433）    Tg IgG對照 D-1、D1、D3、D5、D7 媒介物 D0、D2、D4、D6 10 mg/kg i.p. N/A i.p. 在D0一次 假處理手術
n = 10 （3434 - 3443） Tg IgG對照 D-1、D1、D3 媒介物 D0、D2、D4、D6 10 mg/kg i.p. N/A i.p. 在D0一次 永久性UUO
n = 10 （3454 - 3463） Tg Chi-37E1B5 D-1、D1、D3、D5、D7 媒介物 D0、D2、D4、D6 10 mg/kg i.p. N/A i.p. 在D0一次 永久性UUO
n = 10 （3464 - 3473） Tg B5-15 D-1、D1、D3、D5、D7 媒介物 D0、D2、D4、D6 10 mg/kg i.p. N/A i.p. 在D0一次 永久性UUO
研究終點  形態學：身體（初始，最終，Δ）；腎臟重量（梗阻側與對側）和指數；和脛骨長度。
經由Luminex的腎皮質mRNA表現： •   結締組織生長因子（CTGF ） •   α-平滑肌肌動蛋白（ACTA2 ） •   纖網蛋白-1（FN1 ） •   膠原1a1（Col1a1 ） •   膠原3a1（Col3a1 ）
腎皮質羥脯胺酸含量
組織學讀數：天狼猩紅（PRS）和αvβ8染色。
圖 9A-9D 顯示了用抗αvβ8整聯蛋白抗體進行人源化αvβ8轉基因小鼠的腎臟組織IHC染色以確定腎臟纖維化及其程度的結果。如圖 9A 和 9B 所示的用抗αvβ8整聯蛋白抗體進行IHC染色的顯微照片證明了人源化αvβ8轉基因小鼠中αvβ8整聯蛋白主要在腎臟的腎小球中表現，類似於通常在健康人腎臟中觀察到的。經證明，用UUO程序誘導的纖維化增加了腎小管中的αvβ8整聯蛋白表現（圖 9C 和 9D ），類似於通常在患有CKD的人腎臟中觀察到的。圖 9E-9H 說明了如上所述之和如表3中概述的、使用UUO程序的體內研究中獲得的結果。
如圖 9E 所示，相對於UUO對照，抗αvβ8整聯蛋白抗體Chi-37E1B5（標記為親本Avb8 Ab）和B5-15（標記為先導Avb8 Ab）減弱了UUO手術後8天UUO誘導的Col1a1 mRNA表現的增加。如圖 9F 所示，相對於UUO對照，抗αvβ8整聯蛋白抗體Chi-37E1B5（標記為親本Avb8 Ab）和B5-15（標記為先導Avb8 Ab）減弱了UUO手術後8天UUO誘導的Col3a1表現的增加。如圖 9G 所示，相對於假處理對照，UUO增加了UUO手術後8天的梗阻腎臟皮質纖網蛋白1（FN-1）mRNA表現。與UUO對照相比，Chi-37E1B5（標記為親本Avb8 Ab）和B5-15（標記為先導Avb8 Ab）抗αvβ8整聯蛋白抗體減弱了損傷持續8天的UUO誘導的FN-1表現增加。如圖 9H 所示，相對於UUO對照，抗αvβ8整聯蛋白抗體B5-15（標記為先導Avb8 Ab）減弱了UUO手術後8天UUO誘導的α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）mRNA表現的增加。Chi-37E1B5（標記為親本Avb8 Ab）抗體不降低UUO誘導的α-SMA增加。α-SMA的降低很重要，因為α-SMA+細胞的存在對正常的腎臟功能有害。這係因為該等細胞係可收縮的（直接促進了纖維重塑），以及係高度合成的，產生促炎和促纖維化介質。如圖 9I 所示，相對於UUO對照，抗αvβ8整聯蛋白抗體Chi-37E1B5（標記為親本Avb8 Ab）和B5-15（標記為先導Avb8 Ab）減弱了UUO手術後8天UUO誘導的結締組織生長因子（CTGF）表現的增加。如圖9J所示，UUO增加了UUO手術後8天梗阻腎臟皮質羥脯胺酸（OH-P）%。與對照相比，Chi-37E1B5（標記為親本Avb8 Ab）和B5-15（標記為先導Avb8 Ab）抗體減弱了UUO損傷持續8天的UUO誘導的OH-P %的增加。腎皮質羥脯胺酸讀數用作組織的實際纖維化含量/纖維化的度量。
總之，在UUO手術後8天，Chi-37E1B5和B5-15減弱了UUO誘導的Col1a1、Col3a1、FN-1和CTGF mRNA表現和羥脯胺酸含量%的增加。此外，在UUO手術後8天，B5-15減弱了UUO誘導的α-SMA mRNA表現的增加。
在此實例中使用的兩個抗αvβ8整聯蛋白抗體，Chi-37E1B5和B5-15，以最大劑量投與給UUO模型中的小鼠。此研究的目的是證明針對αvβ8整聯蛋白的抗體是否能有效地降低由與αvβ8整聯蛋白締合導致的TGF-β誘導的纖維化。我們預期會看到在該等抗αvβ8整聯蛋白抗體中的任一種的較低劑量下（即EC50 ）TGF-β誘導的纖維化降低差異。也就是說，我們預期會看到在UUO模型中用B5-15的處理比用等效劑量的Chi-37E1B5處理更大的降低TGF-β誘導的纖維化。這主要是因為B5-15證明了對αvβ8整聯蛋白的結合親和力比Chi-37E1B5更大（參見圖 1B 和圖 4 ）以及因為B5-15的體外效價比Chi-37E1B5更大（參見圖 5 ）。用B5-15的處理相比於Chi-37E1B5更有利，因為這將實現更低的患者給藥頻率或向患者投與更低的劑量，導致更少的（如果有的話）不良事件和更好的患者依從性。
如上所討論的，αvβ8整聯蛋白靶受體在患病/纖維化的腎臟組織中優先且高度表現，並且與抗αvβ8整聯蛋白抗體在腎臟組織中結合，這干擾了αvβ8整聯蛋白與潛伏TGF-β的結合相互作用。如本文揭露的抗αvβ8整聯蛋白抗體對在患有腎臟疾病的受試者中治療纖維化腎臟疾病係特別有利和有益的，因為直接針對αvβ8整聯蛋白的抗體（結合潛伏TGF-β）的使用排除和避免了靶向全身性TGF-β，並且因此潛在地避免了可能伴隨接受治療的受試者的其他組織中TGF-β的全身性抑制的嚴重問題。實例 7 使用 B5-15 抗 αvβ8 整聯蛋白抗體的離體研究
為了評估抗αvβ8整聯蛋白抗體（B5-15）與TGF-β的靶標αvβ8整聯蛋白受體的結合和接合，藉由測量總的和磷酸化的腎臟SMAD2/3來在腎臟裂解液中評估下游TGF-β傳訊途徑的激活。簡言之，使用TissueLyser II，在特定的裂解緩衝液（在蒸餾水中稀釋1x + 10 μl/ml蛋白酶和磷酸酶抑制劑）中均勻化實例5中所述之研究中使用的動物的腎臟樣本；使用如熟悉該項技術者已知的和使用的二辛可寧酸（BCA）測定來測量蛋白質含量；並且對所有樣本的蛋白質濃度歸一化。遵循製造商的方案，藉由ELISA分析了SMAD2/3蛋白質的總的和磷酸化的形式（phospho-SMAD2（Ser465/467）/SMAD3（Ser423/425））。如上所述，訊息傳遞分子的Smad家族的成員係細胞內途徑的組分，該途徑將TGF-β信號從細胞表面傳輸至細胞核。
實驗的結果顯示，B5-15抗αvβ8整聯蛋白抗體降低了經歷了5天持續時間的輸尿管單側梗阻（UUO）、攜帶人αvβ8編碼基因的轉基因小鼠（「人源化αvβ8轉基因小鼠」）腎臟中的下游TGF-β傳訊途徑。在圖 10A 和圖 10B 中， * = ≤ 0.05並且**** = ≤ 0.0001。在圖 10A 和圖 10B 中，對於「假處理 + NIP228（IgG同種型對照）」，n = 6；對於「UUO + NIP228（IgG同種型對照）」，n = 8；並且對於「UUO + B5-15（抗αvβ8整聯蛋白抗體）」，n = 8。
如圖 10A 和 10B 中觀察到的，相對於假處理的組，人源化αvβ8小鼠中UUO手術導致TGF-β-依賴性SMAD2/3磷酸化增加5.7倍。有趣的是，相比於用同種型對照的處理，用抗αvβ8整聯蛋白抗體（B5-15）的處理將SMAD2/3激活顯著減弱1.6倍。相比於假處理的動物，在所有UUO組中，SMAD2/3的總水平均增加。實例 8 使用 B5-15( 抗 αvβ8 整聯蛋白抗體 ) 的三培養細胞系統的處理
為了評估B5-15（抗αvβ8整聯蛋白抗體）對人腎小球硬化症模型（描述於Waters等人, 2017,J Pathol [病理學雜誌], 243(3):390-400中）的作用，我們用10 ng/ml TGF-β或25 ng/ml CTGF處理三培養細胞系統（腎小球內皮細胞、足細胞和系膜細胞形成血管網路）以誘導纖維化。結節數目的增加反映了纖維化的進展。參見圖 11 ，與用15 µg/ml同種型對照（NIP228）的處理相比，用15 µg/ml B5-15的處理顯著降低結節數目。3D 三培養形成
在三培養人足細胞（Celprogen公司，加利福尼亞州，美國）中，將腎小球內皮細胞（GEC）和系膜細胞（MC）（GEC和MC均來自ScienCell研究實驗室（ScienCell Research Laboratories），加利福尼亞州，美國）在4°C下懸浮在大鼠尾1型膠原（1.5 mg/ml；康寧公司（Corning），麻塞諸塞州，美國）、人血漿纖網蛋白（90 µg/ml；默克密理博公司（Merck Millipore），麻塞諸塞州，美國）、1.5mg/ml NaHCO3、25 Mm HEPES和M199培養基（10x；西格瑪公司（Sigma），密蘇里州，美國）中。用0.1 M HCl（賽默飛科技公司（Fisher Scientific），英國）調節凝膠的pH至pH 7.4。將細胞/凝膠懸浮液分別以每孔320 µl的體積移液到48孔板（康寧公司（Corning Incorporated），紐約州，美國）中。以16 : 3 : 1（GEC : POD : MC）的330,000-340,000 GEC、50,000-70,000 POD和20,000-24,000 MC/320 µl的比率使用腎小球細胞。將細胞/凝膠懸浮液在37°C下聚合20分鐘，然後將500 µl培養基移液到凝膠頂部。三培養基由RMPI 1640（英國賽默飛科技公司（Thermo Fisher）的GibcoTM）、2% FBS、1%青黴素/鏈黴素、1%胰島素、脫鐵轉鐵蛋白（Apo-transferrin）、亞硒酸鈉（在ITS混合物中）和1%ECGS（所有補充劑均來自ScienCell研究實驗室（ScienCell Research Laboratories），加利福尼亞州，美國）組成。將培養維持24小時。實驗中使用p2-p6之間的細胞。用 TGF-β 、 NIP228 、抗 αvβ8 抗體和 CTGF 的刺激測定
為了刺激10 ng/ml TGF-β（R&D系統公司（R&D Systems）（生物技術公司（Bio-Techne Ltd）），明尼蘇達州，美國），將15 µg/ml NIP228、15 µg/ml抗αvβ8整聯蛋白抗體和25 ng/ml CTGF（英傑公司（Invitrogen），加利福尼亞州，美國）單獨或組合地添加至置於培養凝膠上的培養基中，孵育24小時。對照處理係僅培養基。
我們證明了用抗αvβ8整聯蛋白抗體處理可以抑制由TGF-β激活導致的纖維化的進展。其他實施方式
從前述說明中，將顯而易見的是，可以對本文所述之發明作出變更和修改以使其適應於各種用途和狀況。此類實施方式也在以下請求項的範圍內。
本文中在變數的任何定義中對要素清單的敘述包括將該變數定義為任何單個要素或所列要素的組合（或次組合）。本文的實施方式的敘述包括為任何單個實施方式的實施方式或與任何其他實施方式或其部分組合的實施方式。
本說明書中提及的全部專利和出版物藉由引用以相同的程度併入本文，如同每份單獨的專利和出版物具體地且個別地指出藉由引用併入。
無
[圖 1A 和 1B ]示出了圖和表，其顯示如本文揭露的特異性抗αvβ8整聯蛋白抗體與αvβ8整聯蛋白結合。更具體地，圖 1A 示出了描述使用WO 2013/026004中揭露的序列產生的IgG抗αvβ8整聯蛋白抗體「hu37E1B5」和如本文實例1中所述之嵌合IgG 抗αvβ8整聯蛋白抗體「Chi-37E1B5」之間的結合親和力比較的圖。如從圖 1A 所示的結合結果觀察到，與Chi-37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體相比，hu37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體具有非常差的結合親和力。圖 1B 示出了如藉由Biacore測定評估的，顯示不同IgG抗αvβ8整聯蛋白抗體（如圖 1A 中討論的「hu37E1B5」和「Chi-37E1B5」，和稱為「MEDI-hu37E1B5」的CDR接枝抗體）與αvβ8整聯蛋白結合的親和力比較圖，以及該等抗體的Kd 測量值的表。MEDI-hu37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體使用從抗αvβ8整聯蛋白抗體Chi-37E1B5接枝的CDR產生，並且顯示出與Chi-37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體相似的αvβ8整聯蛋白結合概況（圖 1B ）。
[圖 2A-2D ]示出了由MEDI-hu37E1B5人源化抗αvβ8整聯蛋白抗體C94I中CDR位置的飽和點突變產生的代表性抗αvβ8整聯蛋白抗體選殖靶物的結果和胺基酸序列，以及顯示實例1中所述之如藉由飽和點突變實驗產生的和篩選分析中鑒定的MEDI-hu37E1B5 C94I抗αvβ8整聯蛋白抗體和代表性抗αvβ8整聯蛋白VH CDR1、VH CDR3和VL 靶物（hit）（稱為「P1」或「P2」）的結合親和力分析的圖。圖 2A 顯示與MEDI-hu37E1B5親本抗體相比，VH CDR1靶物與αvβ8整聯蛋白的結合親和力改善。圖 2B 顯示與MEDI-hu37E1B5親本抗體相比，VH CDR3靶物與αvβ8整聯蛋白的結合親和力改善。圖 2C 顯示與MEDI-hu37E1B5親本抗體相比，VL 靶物與αvβ8整聯蛋白的結合親和力改善。圖 2D 示出了藉由親和力成熟的抗αvβ8整聯蛋白抗體選殖的篩選獲得的、指定為「P2-23」、「P2-33」、「P2-25」、「P1-21」「P1-35」、「P1-42」、「P2-16」、「P2-19」、「P2-36」和「P2-14」的代表性一級殖株αvβ8整聯蛋白抗體靶物的VH 和VL 區的胺基酸序列的比對。在序列上方指定了殖株的VH 和VL 區中的框架（FW1-FW4）區和CDR（CDR1-CDR3）。CDR區的胺基酸殘基差異用雙底線指示。
[圖 3A 和 3B ]示出了如實例1中所述之從用於產生人源化和親和力優化的抗αvβ8抗體的組合文庫篩選的αvβ8整聯蛋白的結合數據。如圖 3A 和 3B 中所示的，所有10個有益的點突變以組合方式結合。篩選了4608個殖株並且選擇88個殖株用於確認。鑒定了6個組合靶物，其與最佳的一級靶物P2-23相比，顯示出累加結合改善。
[圖 4 ]示出了酶聯免疫吸附測定（ELISA）的結果，其中將不同濃度的人源化MEDI-hu37E1B5、親和力優化的B5-15和B5-15 N59Q抗αvβ8整聯蛋白抗體針對與αvβ8整聯蛋白的結合進行了比較。對於ELISA測定，將重組產生的αvβ8整聯蛋白塗布在組織培養板的孔上。使用軛合有辣根過氧化物酶（HRP）的山羊抗人Fc抗體檢測抗體結合。在一定抗體濃度範圍內，觀察到與親本MEDI-hu37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體相比，親和力優化的B5-15和B5-15 N59Q抗αvβ8整聯蛋白抗體的結合改善。B5-15 N59Q係B5-15抗αvβ8整聯蛋白抗體的未糖基化（aglycosylated）形式。抗αvβ8整聯蛋白抗體（在HCDR2序列中）的糖基化已表明對抑制活性而言係重要的，但不影響與αvβ8整聯蛋白的結合（參見WO 2015/195835）。
[圖 5 ]示出了圖和表，其顯示TMLC螢光素酶生物測定以測量抗αvβ8整聯蛋白抗體對TGF-β激活的抑制的結果。圖 5 中的圖顯示TGF-β活性相對於抗αvβ8整聯蛋白抗體（IgG同種型）的最大響應百分比。在測定中評估的抗αvβ8整聯蛋白抗體係親本（Chi-37E1B5，圖中顯示為「Chi-B5」）和親和力優化的（B5-15）抗αvβ8整聯蛋白抗體。圖下的表中顯示了兩個抗體的Kd （pM）和IC50 （nM）值。如從圖中觀察到的，測定中抗αvβ8整聯蛋白抗體濃度的增加導致TGF-β激活降低，其中B5-15展現比Chi-37E1B5更高的體外效力。
[圖 6 ]示出了以下四種抗αvβ8整聯蛋白抗體的VH 和VL 區胺基酸序列的比對：「Chi-37E1B5」（UCSF許可引進的嵌合抗αvβ8整聯蛋白抗體）、「hu37E1B5」（來自WO 2013/026004的UCSF人源化37E1B5抗體）、「MEDI-hu37E1B5」（MedI人源化抗αvβ8整聯蛋白抗體）和「B5-15」（人源化和親和力優化的B5-15抗αvβ8整聯蛋白抗體）。與「Chi-37E1B5」的胺基酸序列差異以粗體突出顯示。VH 和VL CDR在每個可變區序列中用底線表示。
如圖 6 所示，Chi-37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體的VH 區胺基酸序列如下： EVQLVESGGGLVQPGGSLNLSCAVSGFVFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTSSLKDKFIISRDNAKNTLYLQMNKVRSEDTALYYCACLITTEDYWGQGTSVTVSS（SEQ ID NO: 20）。
Chi-37E1B5抗體的VH 區的核苷酸序列如下： gaagtgcagctggtggagtctggaggtggcctggtgcagcctggaggatccctgaacctctcctgtgcagtctcaggattcgtttttagtagatactggatgagttgggtccggcaggctccagggaaagggctagaatggattggagaaattaatccagatagcagtacgataaactatacgtcatctctaaaggataaattcatcatctccagagacaacgccaaaaatacgttgtacctgcaaatgaacaaagtgagatctgaggacacagccctttattactgtgcatgtcttattactacggaggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctca（SEQ ID NO: 21）。
Chi-37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體的VL （κ）區的胺基酸序列如下： EIVLTQSPSSMYASLGERVTIPCKASQDINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYYANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPYTFGGGTKLEIK（SEQ ID NO: 22）。
Chi-37E1B5抗體的VL （κ）區的核苷酸序列如下： gaaattgtgctgactcagtctccatcttccatgtatgcatctctaggagagagagtcactatcccttgcaaggcgagtcaggacattaatagctatttaagctggttccagcagaaaccagggaaatctcctaagaccctgatctattatgcaaacagattggtagatggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggcaagattattctctcaccatcagcagcctggagtatgaagatatgggaatttattattgtctacagtatgatgagtttccgtacacgttcggaggaggcaccaagctggaaatcaaa（SEQ ID NO: 23）。
還如圖 6 ，UCSF hu37E1B5抗αvβ8整聯蛋白抗體的VH 區胺基酸序列如下： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFVFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTSSLKDRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASLITTEDYWGQGTTVTVSS（SEQ ID NO: 24）。
UCSF hu37E1B5抗體的VL （κ）區的胺基酸序列如下： EIVLTQSPSSLSLSPGERVTITCKASQDINSYLSWYQQKPGKAPKLLIYYANRLVDGVPARFSGSGSGQDYTLTISSLEPEDFAVYYCLQYDEFPYTFGGGTKLEIK（SEQ ID NO: 25）。
[圖 7A-7C ]示出了藉由用抗αvβ8整聯蛋白抗體進行免疫組織化學（IHC）染色的人腎臟組織的顯微照片圖像。如圖 7A 所示，發現與評估的其他健康人組織相比（除神經組織外），人腎臟組織中、尤其是足細胞中高度富集αvβ8整聯蛋白。圖 7B 顯示基於用αvβ8整聯蛋白抗體染色的模式，從患有糖尿病性腎病（DN）和慢性腎臟疾病（CKD）的個體獲得的腎臟組織樣本中有大量αvβ8整聯蛋白。特別地，在從DN和CKD患者獲得的腎臟組織樣本中，αvβ8整聯蛋白染色基本上發現於腎小管中。DN患者的腎臟腎小球顯示αvβ8整聯蛋白染色降低，這可能是由於腎臟組織纖維化和損害導致足細胞喪失的結果。圖 7C 顯示用抗αvβ8整聯蛋白抗體對來自正常個體的腎臟組織（「正常腎臟」）和來自患有不同階段糖尿病性腎病（「DN」）的患者的腎臟組織進行IHC染色的結果。結果顯示活的功能腎單位中αvβ8染色升高。在從患有DN的患者獲得的腎臟組織樣本中，未染色的區域係取代功能腎單位的纖維化基質並且以星號（* ）指示。
[圖 8A-8E ]示出了橫條圖、散點圖和箱形圖，其顯示與獲得自活體供體的腎臟組織樣本相比，使用獲得自患有糖尿病性腎病（DN）腎臟疾病的患者的腎臟組織樣本進行轉錄組概況分析的結果。圖 8A 顯示在從患有CKD的人受試者獲得的腎臟組織中，不同AV相關的整聯蛋白（ITGB8 、ITGB1 、ITGB3 、ITGB5 和ITGB6 ）的相對mRNA表現水平（相對於hprt1 表現）。ITGB8 係CKD患者的腎臟中最豐富的β8亞基。圖 8B 示出了箱形圖，其顯示DN患者腎臟樣本的腎小球中歸一化為NPHS1 （裂隙素（nephrin），足細胞特異性基因）mRNA的ITGB8 mRNA表現相對於作為健康對照的活體供體中的表現更高。圖 8C 示出了箱形圖，其顯示在DN患者腎臟樣本的腎小管間質中，歸一化為NHPS1 mRNA的ITGB8 mRNA表現相對於其在作為健康對照的活體供體中的表現更高。圖 8D 示出了散點圖，其顯示在患有CKD患者的腎小管間質中，CKD中ITGB8 mRNA表現與TGF-β激活得分（TGF-β途徑的下游基因的複合物）密切相關。圖 8E 示出了箱形圖，其顯示在使用RNAseq的全基因組轉錄概況分析（profiling）後，健康供體腎小球（腎小球-LD）、患有DN的患者的腎小球（腎小球-DN）、健康供體的腎小管間質（Tub-LD）、和患有DN的患者的腎小管間質（Tub-DN）中的不同整聯蛋白基因（ITGAV 、 ITGB2 、 ITGB4 、 ITGB5 、 ITGB6 、 ITGB7 和ITGB8 ）的mRNA表現水平（歸一化計數）。發現相對於活體供體（LD，n = 19），DN患者（n = 20）的腎小管間質中ITGB8 mRNA表現增加（p ＜ 0.01）。
[圖 9A-9J ]示出了顯示使用如本文所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體的IHC染色結果的顯微照片圖像（圖 9A-9D ），以及顯示在經歷了單側輸尿管梗阻（UUO）程序的人源化αvβ8轉基因小鼠（腎臟纖維化小鼠模型）中mRNA表現的體內分析結果（圖 9E-9I ）和羥脯胺酸含量百分比（作為纖維化的指標）（圖 9J ）的橫條圖。
圖 9A 和 9B 中示出的IHC染色顯微照片證明了人源化αvβ8轉基因小鼠主要在腎臟的腎小球中表現αvβ8，類似於通常在健康人腎臟中觀察到的。經證明，用UUO程序誘導的纖維化增加了腎小管中的αvβ8表現（圖 9C 和 9D ），類似於通常在患有CKD的人腎臟中觀察到的。
如圖 9E 所示，相對於UUO對照，抗αvβ8整聯蛋白抗體Chi-37E1B5（標記為親本Avb8 Ab）和B5-15（標記為先導（Lead）Avb8 Ab）減弱了UUO手術後8天UUO誘導的膠原1a1 mRNA表現的增加。每種抗體以10 mg/kg投與。
如圖 9F 所示，相對於UUO對照，抗αvβ8整聯蛋白抗體Chi-37E1B5（標記為親本Avb8 Ab）和B5-15（標記為先導Avb8 Ab）減弱了UUO手術後8天UUO誘導的膠原3a1 mRNA表現的增加。每種抗體以10 mg/kg投與。
如圖 9G 所示，相對於假處理對照，UUO增加了UUO手術後8天的梗阻腎臟皮質纖網蛋白1（Fn1 ）mRNA的表現。與UUO對照相比，抗體Chi-37E1B5（標記為親本Avb8 Ab）和B5-15（標記為先導Avb8 Ab）減弱了損傷持續8天的UUO誘導的Fn1 表現的增加。每種抗體以10 mg/kg投與。
如圖 9H 所示，相對於UUO對照，抗αvβ8整聯蛋白抗體B5-15（標記為先導Avb8 Ab）減弱了UUO手術後8天UUO誘導的α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）表現增加。Chi-37E1B5（標記為親本Avb8 Ab）不降低α-SMA中UUO誘導的增加。每種抗體以10 mg/kg投與。
如圖 9I 所示，相對於UUO對照，抗αvβ8整聯蛋白抗體Chi-37E1B5（標記為親本Avb8 Ab）和B5-15（標記為先導Avb8 Ab）減弱了UUO手術後8天UUO誘導的結締組織生長因子（CTGF）mRNA表現的增加。每種抗體以10 mg/kg投與。
如圖 9J 所示，UUO增加了UUO手術後8天梗阻腎臟皮質羥脯胺酸（OH-P）%。與對照相比，Chi-37E1B5（標記為親本Avb8 Ab）和B5-15（標記為先導Avb8 Ab）抗體減弱了UUO損傷持續8天的UUO誘導的OH-P %的增加。每種抗體以10 mg/kg投與。腎皮質羥脯胺酸讀數用作組織的實際纖維化含量/纖維化的度量。
[圖 10A 和 10B ]示出了如下圖，該等圖涉及在用同種型對照抗體（NIP228）或抗αvβ8整聯蛋白抗體（B5-15）治療後，在進行UUO手術的人源化αvβ8轉基因動物中，TGF-β傳訊下游的作用。圖 10A 顯示相對於假處理的組，人源化αvβ8轉基因小鼠中UUO手術導致TGF-β-依賴性SMAD2/3磷酸化增加5.7倍。相比於用同種型對照的處理，用抗αvβ8整聯蛋白抗體（B5-15）的處理將SMAD2/3激活顯著減弱1.6倍。相比於假處理的動物，所有UUO組中SMAD2/3總水平均增加（圖 10B ）。
[圖 11 ]示出了證明用B5-15（抗αvβ8整聯蛋白抗體）或NIP228（同種型對照）進行的腎原代三培養細胞系統（tri-culture cell system）處理的作用的圖。三培養細胞系統係人腎小球硬化症的模型，其中腎小球內皮細胞、足細胞和系膜細胞形成血管網路（Waters等人, 2017,J Pathol [病理學雜誌], 243(3):390-400）。用TGF-β或CTGF的處理誘導結節（纖維化的指標）的形成。相比於用同種型對照的處理，用抗αvβ8整聯蛋白抗體的處理顯著降低結節數。
無
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Claims (34)

  1. 一種在患有腎臟疾病的受試者中治療腎臟纖維化之方法，該方法包括向該受試者投與有效量的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，從而治療腎臟纖維化。
  2. 一種在患有腎臟疾病的受試者中降低或減弱腎臟纖維化之方法，該方法包括向有需要的受試者投與有效量的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，從而降低或減弱腎臟中的纖維化。
  3. 一種消除與腎臟纖維化相關的αvβ8整聯蛋白的活性之方法，該方法包括向有需要的受試者投與有效量的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，從而消除與腎臟纖維化相關的αvβ8整聯蛋白的活性。
  4. 一種藉由阻斷腎臟細胞和組織中TGF-β從其潛伏形式激活來治療腎臟纖維化之方法，該方法包括向有需要的受試者投與有效量的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，從而治療該腎臟纖維化。
  5. 一種治療腎損害之方法，該腎損害的特徵在於血漿肌酐和/或尿蛋白排泄水平的增加，該方法包括向有需要的受試者投與有效量的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，其中該抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段的所述投與消除了受試者中的血漿肌酐和/或尿蛋白排泄水平，從而治療腎損傷。
  6. 如請求項3-5中任一項所述之方法，其中該受試者患有腎臟疾病。
  7. 如請求項1-6中任一項所述之方法，其中該腎臟疾病選自糖尿病性腎病（DN）、慢性腎臟疾病（CKD）、急性腎臟疾病、高血壓相關的腎臟疾病、高血糖相關的腎臟疾病、腎纖維化、炎症相關的腎臟疾病、終末期腎病（ESRD）、自體免疫相關的腎臟纖維化（例如，狼瘡性腎炎）和腎移植後的纖維化。
  8. 如請求項7所述之方法，其中該腎臟疾病係CKD。
  9. 如請求項1-8中任一項所述之方法，其中該抗體或其抗原結合片段與在腎臟細胞和/或組織上表現的αvβ8整聯蛋白結合並且阻斷腎臟細胞和/或組織中TGF-β從其潛伏形式激活。
  10. 一種檢測腎臟組織中腎臟纖維化之方法，該方法包括使腎臟組織與有效量的經可檢測地標記的抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段接觸，從而檢測該抗αvβ8整聯蛋白抗體與腎臟組織中αvβ8整聯蛋白的結合。
  11. 如請求項1-10中任一項所述之方法，其中該抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段包含： (a)   重鏈可變區互補決定區1（CDR1），其包含胺基酸序列： RYWMS； (b)   重鏈可變區互補決定區2（CDR2），CDR2包含胺基酸序列： EINPDSSTINYTSSL；和 (c)   重鏈可變區互補決定區3（CDR3），CDR3包含胺基酸序列： LITTEDY；和 (d)   輕鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： KASQDINSYLS； (e)   輕鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： YANRLVD；和 (f)    輕鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LQYDEFPYT。
  12. 如請求項11所述之方法，其中該抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區（VH ）胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFVFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTSSLKDRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAILITTEDYWGQGTTVTVSS；和 輕鏈可變區（VL ）胺基酸序列： DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINSYLSWFQQKPGKAPKSLIYYANRLVDGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDEFPYTFGGGTKVEIK。
  13. 如請求項1-10中任一項所述之方法，其中該抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段包含： (a)   重鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： RSWIS； (b)   重鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： EINPDSSTINYTSSL；和 (c)   重鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LITTEDY；和 (d)   輕鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： KASQDINKYLS； (e)   輕鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： YANRLVD；和 (f)    輕鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LQYDVFPYT。
  14. 如請求項13所述之方法，其中該抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區（VH ）胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFVFSRSWISWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTSSLKDRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAILITTEDYWGQGTTVTVSS，以及 輕鏈可變區（VL ）胺基酸序列： DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINKYLSWFQQKPGKAPKSLIYYANRLVDGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDVFPYTFGGGTKVEIK。
  15. 如請求項1-14中任一項所述之方法，其中該抗體或其抗原結合片段減弱或消除與患有腎臟疾病的受試者的腎臟組織中足細胞和間質小管細胞中αvβ8整聯蛋白的表現增加相關的纖維化。
  16. 如請求項1-9或11-15中任一項所述之方法，其中將該抗體或其抗原結合片段與用於腎臟疾病的輔助治療劑或治療組合投與至該受試者。
  17. 如請求項16所述之方法，其中將該抗體或其抗原結合片段在投與該輔助治療劑或治療之前、同時或之後投與至該受試者。
  18. 一種抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，該抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段包含： (a)   重鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： RYWMS； (b)   重鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： EINPDSSTINYTSSL；和 (c)   重鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LITTEDY；和 (d)   輕鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： KASQDINSYLS； (e)   輕鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： YANRLVD；和 (f)    輕鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LQYDEFPYT。
  19. 如請求項18所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，該抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區（VH ）胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFVFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTSSLKDRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAILITTEDYWGQGTTVTVSS；和 輕鏈可變區（VL ）胺基酸序列： DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINSYLSWFQQKPGKAPKSLIYYANRLVDGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDEFPYTFGGGTKVEIK。
  20. 一種抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，該抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段包含： (a)   重鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： RSWIS； (b)   重鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： EINPDSSTINYTSSL； (c)   重鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LITTEDY；和 (d)   輕鏈可變區CDR1，其包含胺基酸序列： KASQDINKYLS； (e)   輕鏈可變區CDR2，其包含胺基酸序列： YANRLVD；和 (f)    輕鏈可變區CDR3，其包含胺基酸序列： LQYDVFPYT。
  21. 如請求項20所述之抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，該抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區（VH ）胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFVFSRSWISWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTSSLKDRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAILITTEDYWGQGTTVTVSS，以及 輕鏈可變區（VL ）胺基酸序列： DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINKYLSWFQQKPGKAPKSLIYYANRLVDGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDVFPYTFGGGTKVEIK。
  22. 一種抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段，該抗αvβ8整聯蛋白抗體或其抗原結合片段與如請求項18-21中任一項所述之抗體或其抗原結合片段競爭結合αvβ8整聯蛋白。
  23. 如請求項18-22中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，用於在治療腎臟纖維化之方法中使用，其中所述抗體或其抗原結合片段與αvβ8整聯蛋白特異性結合，從而治療腎臟纖維化。
  24. 如請求項23所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段與纖維化腎臟細胞和組織中表現的αvβ8整聯蛋白特異性結合，並且阻斷αvβ8整聯蛋白與潛伏TGF-β的結合，從而消除與腎臟纖維化相關的αvβ8整聯蛋白的活性以治療腎臟疾病。
  25. 一種編碼如請求項18或請求項19所述之抗體或其抗原結合片段的多核苷酸。
  26. 一種編碼如請求項20或請求項21所述之抗體或其抗原結合片段的多核苷酸。
  27. 如請求項26所述之多核苷酸，其中該VH 區編碼序列包含核酸序列： gaggtgcagctggtggaaagcggcggaggactggtgcagcctggcggcagcctgagactgagctgcgccgtgtccggcttcgtgttcagccggagctggatcagctgggtccgccaggccccagggaagggcctggaatggatcggcgagatcaaccccgacagcagcaccatcaactacaccagcagcctgaaggaccggttcaccatcagccgggacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaacagcctgcgggccgaggacaccgccgtgtactactgcgccatcctcatcaccaccgaggactactggggccagggcaccaccgtgaccgtgtcctct； 並且該VL 區編碼序列包含核酸序列： gacatccagctgacccagagccccagcagcctgagcgccagcgtgggcgacagagtgaccatcacatgcaaggccagccaggacatcaacaagtacctgagctggttccagcagaagcccggcaaggcccccaagagcctgatctactacgccaaccggctggtggacggcgtgcccagcagattttctggcagcggcagcggcaccgacttcaccctgaccatcagcagcctgcagcccgaggacttcgccacctactactgcctgcagtacgacgtgttcccctacaccttcggcggaggcaccaaggtggaaatcaag。
  28. 一種表現載體，該表現載體包含如請求項25-27中任一項所述之多核苷酸。
  29. 如請求項28所述之表現載體，該表現載體係原核、真核或哺乳動物表現載體。
  30. 一種細胞，該細胞包含如請求項28或請求項29所述之表現載體。
  31. 如請求項30所述之細胞，該細胞係原核、真核或哺乳動物宿主細胞。
  32. 一種藥物組成物，該藥物組成物包含如請求項18-24中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，以及藥學上可接受的載劑、賦形劑或稀釋劑。
  33. 一種藥物組成物，該藥物組成物包含如請求項25-27中任一項所述之多核苷酸，以及藥學上可接受的載劑、賦形劑或稀釋劑。
  34. 一種套組，該套組包含與如請求項18-24中任一項所述之αvβ8整聯蛋白特異性結合的抗體或其抗原結合片段，或含有該抗體或其抗原結合片段的藥物組成物。
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