JP2023536631A - 多重特異性結合性作用剤およびその使用 - Google Patents

多重特異性結合性作用剤およびその使用 Download PDF

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Abstract

本開示は、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＰＤ－Ｌ１などのＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的に結合する１つまたは複数の追加的な結合性ドメインを有する多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）、ならびにそれらの使用を提供する。本開示は、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤を含む組成物も提供する。本開示は、このような組成物を用いる、免疫細胞機能不全疾患、障害または状態の１つまたは複数の症状を含めた免疫細胞機能不全疾患、障害または状態（例えば、食細胞機能不全疾患、障害もしくは状態、またはＴ細胞機能不全疾患、障害もしくは状態）を処置、予防または緩和する方法も提供する。

Description

関連出願への相互参照
本出願は、開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０２０年８月４日出願の米国仮出願第６３／０６１，１１２号の利益を主張するものである。
配列表
本出願には、２０２１年７月３０日に作成され、サイズが１７２，４３１バイトである１４５２９－００８－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔという表題のテキストファイルとして本出願と共に提出される配列表が参照により組み込まれる。
分野
本開示は、一般に、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＰＤ－Ｌ１などのＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的に結合する１つまたは複数の追加的な結合性ドメインを有する多重特異性結合性作用剤、例えば、二重特異性抗体、ならびにそれらの使用の方法に関する。
背景
腫瘍細胞は、抗腫瘍免疫応答を回避するために自然チェックポイントおよび適応チェックポイントの両方を利用することが示されている。ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１は、腫瘍細胞の細胞表面で広く発現される２つの標的であり、これらは、免疫制御を回避するために、それぞれ、自然センシングおよび適応センシングを協調的に抑制し得る。
背景
ＣＤ４７は、自然免疫系の細胞によって媒介されるファゴサイトーシスの調節因子として機能する細胞表面糖タンパク質である。ＣＤ４７は、インテグリン、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）、シグナル調節タンパク質ガンマ（ＳＩＲＰγ）およびトロンボスポンジンなどの多数のリガンドと相互作用する。ＣＤ４７は、マクロファージおよび樹状細胞の表面上のＳＩＲＰαと相互作用し、「私を食べないで（ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ）」シグナルを誘発することにより、ファゴサイトーシスを阻害する。
ＣＤ４７の発現により、腫瘍細胞がファゴサイトーシスを回避し、自然免疫監視からエスケープすることが可能になる。したがって、ＣＤ４７は、可能性のある治療薬の標的とされている。しかし、ＣＤ４７は、造血細胞、赤血球（ＲＢＣ）および血小板などの正常な細胞において広範に発現される。健康な細胞によるＣＤ４７の広範な発現は、中和抗体を用いてＣＤ４７を標的とすることにより健康な細胞が影響を受ける恐れがあり、場合によって毒作用につながることから、安全性および有効性問題を提起するものである。さらに、ＣＤ４７の広範な発現により、ＣＤ４７結合性作用剤の迅速な排除につながり、それにより不十分な薬物動態および有効性低下に至る恐れもある。
さらに、ＣＤ４７の活性化または喪失により、細胞型依存的に増殖の増強がもたらされ得る。例えば、ＣＤ４７およびＴＳＰ－１の活性化後に星状細胞腫細胞の増殖が増大することが示されているが、一方、正常な星状膠細胞では増殖の増大は示されていない。ＣＤ４７により、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路を通じてがん細胞の増殖が促進され得ることも提唱されている。
報告されている抗ＣＤ４７抗体の多くは、ＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合の遮断時にＲＢＣの凝集を引き起こすことが公知であり、それにより、そのような抗体の治療効果が著しく低下する。
プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）は、重要な免疫チェックポイント受容体であるプログラム死受容体１（ＰＤ－１）に特異的に結合する細胞表面糖タンパク質リガンドである。ＰＤ－１は、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞および単球上でアップレギュレーションされ、免疫抑制を媒介する。他方のＰＤ－１リガンドであるＰＤ－Ｌ２は、活性化抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に主に発現されるが、ＰＤ－Ｌ１は、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、樹状細胞およびマクロファージなどの造血系列の細胞、ならびに心臓、骨格筋、胎盤、肺、腎臓および肝臓の組織などの末梢組織を含む部位で広範に発現される。
ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１への結合は、Ｔ細胞におけるＰＤ－１受容体の下流シグナル伝達を活性化することができる負のチェックポイントであり、このようにして、Ｔ細胞の増殖、サイトカインの生成および放出、ならびに細胞毒性を阻害する。Ｔ細胞活性化およびエフェクターサイトカインの分泌のこの阻害は、自己免疫および慢性感染症を予防することができる。
しかしながら、多くの腫瘍細胞は、この機構を使用して、免疫攻撃からそれら自身を保護し、腫瘍免疫回避をもたらす。多くのがんは、ＰＤ－Ｌ１を過剰発現し、その過剰発現は、多くの場合、予後不良に関連する。がんでは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用は、下流シグナルを刺激して、Ｔ細胞活性化を抑制し、腫瘍細胞の生存をもたらす。
そのリガンドとのＰＤ－１相互作用の遮断は、腫瘍細胞に対するＴ細胞免疫応答を増強する免疫療法の方法として提案されている。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に基づく免疫療法の現在の戦略は、一部の進行性癌の処置において有効性を示しているが、多くの固形腫瘍およびある特定のＰＤ－Ｌ１機能に対する効果は限定的である。したがって、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用を遮断または防止することができる作用剤についての当技術分野における緊急の必要性が残されている。
したがって、ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１を発現する腫瘍細胞が関与するものを含めた免疫細胞機能不全疾患、障害、または状態を処置、予防または緩和するために、これらの懸念を克服し、ＣＤ４７および他の標的、例えば、ＰＤ－Ｌ１を標的とする作用剤に対する必要性が残されている。本明細書で提供される多重特異性結合性作用剤、組成物および方法は、この必要性を満たし、関連する利点を提供する。
要旨
本開示は、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する１つまたは複数の追加的な結合性ドメインを有する多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）を提供する。そのような作用剤としては、ＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の追加的な標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体などの抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する１つまたは複数の追加的な結合性ドメインを有する多重特異性抗体が挙げられる。一部の実施形態では、そのような作用剤としては、ＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の追加的な標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する１つまたは複数の追加的な結合性ドメインを有し、本明細書に記載の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有する抗体（例えば、表１～３）と、ヒトＣＤ４７の結合について競合する、多重特異性抗体が挙げられる。
本開示は、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤を含む組成物も提供する。一部の実施形態では、そのような組成物としては、ＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の追加的な標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体などの抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する１つまたは複数の追加的な結合性ドメインを有する多重特異性抗体が挙げられる。一部の実施形態では、そのような組成物としては、ＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の追加的な標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体などの抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する１つまたは複数の追加的な結合性ドメインを有し、本明細書に記載の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有する抗体（例えば、表１～３）と、ヒトＣＤ４７の結合について競合する、多重特異性抗体が挙げられる。
本開示は、本明細書に記載の、二重特異性抗体もしくは二重特異性抗体を含む組成物を含めた多重特異性結合性作用剤または多重特異性結合性作用剤を含む組成物を用いる、免疫細胞機能不全疾患、障害または状態の１つまたは複数の症状を含めた免疫細胞機能不全疾患、障害または状態（例えば、食細胞機能不全疾患、障害もしくは状態、またはＴ細胞機能不全疾患、障害もしくは状態）を処置、予防または緩和する方法も提供する。そのような組成物としては、ＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の追加的な標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体などの抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する１つまたは複数の追加的な結合性ドメインを有する多重特異性抗体が挙げられる。一部の実施形態では、そのような組成物としては、ＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の追加的な標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体などの抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する１つまたは複数の追加的な結合性ドメインを有し、本明細書に記載の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有する抗体（例えば、表１～３）と、ヒトＣＤ４７の結合について競合する、多重特異性抗体が挙げられる。
図１Ａ～１Ｄは、実施例３にさらに記載される、細胞結合アッセイからの例示的な結果を示す。 同上。 同上。 同上。
図２Ａ～２Ｅは、実施例３にさらに記載される、追加の細胞結合アッセイからの例示的な結果を示す。 同上。 同上。 同上。 同上。
図３は、実施例４にさらに記載される、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα阻害アッセイからの例示的な結果を示す。
図４は、実施例４にさらに記載される、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１阻害アッセイからの例示的な結果を示す。
図５Ａ～５Ｇは、実施例５にさらに記載される、ファゴサイトーシスアッセイからの例示的な結果を示す。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。
図６Ａ～６Ｇは、実施例５にさらに記載される、追加のファゴサイトーシスアッセイからの例示的な結果を示す。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。
図７は、実施例７にさらに記載される、腫瘍体積に関するｉｎ ｖｉｖｏ動物研究からの例示的な結果を示す。
図８は、実施例７にさらに記載される、体重に関するｉｎ ｖｉｖｏ動物研究からの例示的な結果を示す。
図９Ａ～９Ｅは、実施例７にさらに記載される、血液パラメーターに関するｉｎ ｖｉｖｏ動物研究からの例示的な結果を示す。 同上。 同上。
図１０Ａ～１０Ｇは、実施例７にさらに記載される、追加の血液パラメーターに関するｉｎ ｖｉｖｏ動物研究からの例示的な結果を示す。 同上。 同上。 同上。
図１１は、実施例７にさらに記載される、血液中の抗体濃度に関するｉｎ ｖｉｖｏ動物研究からの例示的な結果を示す。
図１２Ａ～１２Ｅは、実施例７にさらに記載される、腫瘍体積および体重に関する追加のｉｎ ｖｉｖｏ動物研究からの例示的な結果を示す。 同上。 同上。 同上。 同上。
図１３Ａ～１３Ｄは、実施例７にさらに記載される、腫瘍浸潤性白血球に関する追加のｉｎ ｖｉｖｏ動物研究からの例示的な結果を示す。 同上。
図１４は、実施例７にさらに記載される、血液中の抗体濃度に関する追加のｉｎ ｖｉｖｏ動物研究からの例示的な結果を示す。
図１５Ａ～１５Ｈは、実施例７にさらに記載される、腫瘍体積および体重に関する追加のｉｎ ｖｉｖｏ動物研究からの例示的な結果を示す。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。
図１６Ａ～１６Ｂは、実施例７にさらに記載される、腫瘍体積および体重に関する追加のｉｎ ｖｉｖｏ動物研究からの例示的な結果を示す。 同上。
図１７は、実施例７にさらに記載される、腫瘍中へのマクロファージ浸潤に関する追加のｉｎ ｖｉｖｏ動物研究からの例示的な結果を示す。
図１８Ａ～１８Ｂは、実施例７にさらに記載される、腫瘍体積および体重に関する追加のｉｎ ｖｉｖｏ動物研究からの例示的な結果を示す。 同上。
図１９Ａ～１９Ｃは、実施例８にさらに記載される、ＳＥＣクロマトグラフィーからの例示的な結果を示す。 同上。 同上。
図２０Ａ～２０Ｄは、実施例８にさらに記載される、ＨＩＣクロマトグラフィーからの例示的な結果を示す。 同上。 同上。 同上。
図２１Ａ～２１Ｄは、実施例８にさらに記載される、ＳＭＡＣクロマトグラフィーからの例示的な結果を示す。 同上。 同上。 同上。
図２２Ａ～２２Ｂは、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３のコンセンサス配列を含む、Ｃ４０、Ｃ５６、およびＣ５９の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の配列アラインメントを示す。ＣＤＲの境界は、Ｋａｂａｔ、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴおよびＡＨｏｎ番号付けによって示される。 同上。
図２３Ａ～２３Ｂは、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３のコンセンサス配列を含む、Ｐ２２、Ｐ２４、およびＰ３１．２の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の配列アラインメントを示す。ＣＤＲの境界は、Ｋａｂａｔ、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、およびＩＭＧＴ番号付けによって示される。 同上。
詳細な説明
本開示は、ＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の追加の標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）を提供する。かかる多重特異性結合性作用剤には、ヒトＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の追加の標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する抗体を含めた、ＣＤ４７に結合する抗体（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）が含まれる。かかる多重特異性結合性作用剤は、その疾患、障害、または状態の１つまたは複数の症状を含めた免疫細胞機能不全疾患、障害または状態（例えば、食細胞機能不全疾患、障害、もしくは状態またはＴ細胞機能不全疾患、障害、もしくは状態）を処置、予防、または緩和する組成物および方法において有用である。食細胞機能不全疾患、障害、および状態には、腫瘍細胞がＣＤ４７を発現または過剰発現する任意のがんが含まれるがこれに限定されない、腫瘍免疫および関連するがんが含まれる。Ｔ細胞機能不全疾患、障害、および状態には、腫瘍細胞がＰＤ－Ｌ１を発現または過剰発現する任意のがんが含まれるがこれに限定されない、腫瘍免疫および関連するがんが含まれる。かかるＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１発現性腫瘍細胞は、免疫監視およびクリアランスを腫瘍細胞が逃れること（例えば、腫瘍免疫）を助け得る。さらに、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤、例えば、ＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の追加の標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性抗体（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ＳＩＲＰαシグナル伝達および／またはＰＤ－１シグナル伝達を阻害するため、食細胞機能および／または免疫監視を増強するため、ならびに腫瘍細胞の除去を増強するために有用である。本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）、例えば、多重特異性結合抗体（例えば、二重特異性抗体）は、細胞媒介性免疫応答の上方調節を含めた、食細胞機能およびＴ細胞機能を増強するための組成物および方法において有用である。
「ＣＤ４７」、「表面抗原分類４７」または「ＣＤ４７ポリペプチド」という用語および同様の用語は、別段の指定のない限り、ポリペプチド（「ポリペプチド」と「タンパク質」は本明細書では互換的に使用される）または霊長類（例えば、ヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ））、イヌ、および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含めた任意の脊椎動物供給源由来の任意のネイティブなＣＤ４７を指す。ＣＤ４７は、当技術分野ではインテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）としても公知であり、細胞外Ｎ末端ＩｇＶドメイン、５回膜貫通ドメイン、および短いＣ末端細胞内尾部を有する。ＣＤ４７という用語は、「全長」のプロセシングされていないＣＤ４７、および細胞内尾部の長さが異なる４種の公知のＣＤ４７の選択的スプライシングを受けたアイソフォームを含めた、細胞でのプロセシングの結果生じた任意の形態のＣＤ４７またはその任意の断片を包含する。ＣＤ４７という用語は、ＣＤ４７の天然に存在するバリアント、例えば、ＳＮＰバリアント、スプライスバリアントおよび対立遺伝子バリアントなども包含する。ＣＤ４７は、ＳＩＲＰαと相互作用することが当技術分野で公知であり、この相互作用により、とりわけ、マクロファージによるファゴサイトーシスの阻害を含む、細胞シグナル伝達につながる。ヒトＣＤ４７の全長アミノ酸配列を以下に提示する（例示的な細胞外ドメイン＝下線が引かれた文字）：
Figure 2023536631000002
ＣＤ４７という用語によってこれもまた包含される他の関連のＣＤ４７ポリペプチドには、ＣＤ４７活性を保持するおよび／または抗ＣＤ４７免疫応答を生じるのに十分な、断片、誘導体（例えば、置換、欠失、短縮、および挿入バリアント）、融合ポリペプチド、および種間ホモログが含まれる。当業者が理解するように、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ＣＤ４７ポリペプチド、ＣＤ４７ポリペプチド断片、ＣＤ４７抗原、および／またはＣＤ４７エピトープに結合し得る。エピトープは、順に、より大きいＣＤ４７ポリペプチドの一部であり得るより大きいＣＤ４７ポリペプチド断片の一部であり得るより大きいＣＤ４７抗原の一部であり得る。ＣＤ４７は、ネイティブ形態または変性形態で存在し得る。本明細書に記載されるＣＤ４７ポリペプチドは、種々の供給源から、例えば、ヒト組織型もしくは別の供給源から単離され得、または組換えもしくは合成方法によって調製され得る。ＣＤ４７ポリペプチドは、自然界に由来する対応するＣＤ４７ポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み得る。ＣＤ４７ポリペプチドに対するオルソログもまた、当該分野で周知である。
「ＳＩＲＰα」、「シグナル調節タンパク質アルファ」または「シグナル調節タンパク質α」という用語および同様の用語は、別段の指定のない限り、ポリペプチド（「ポリペプチド」と「タンパク質」は本明細書では互換的に使用される）または霊長類（例えば、ヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ））、イヌ、および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含めた任意の脊椎動物供給源由来の任意のネイティブなＳＩＲＰαを指す。ＳＩＲＰαは、３つの免疫グロブリンスーパーファミリードメイン － 単一のＶセットおよび２つのＣ１セットＩｇＳＦドメインを含む細胞外領域、膜貫通ドメイン、ならびに免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する細胞質内領域を有する。ＳＩＲＰαという用語は、ＳＩＲＰαの天然に存在するバリアント、例えば、ＳＮＰバリアント、スプライスバリアントおよび対立遺伝子バリアントなども包含する。ＳＩＲＰαは、ＣＤ４７と相互作用し、それにより、ＩＴＩＭのリン酸化につながり、それにより、ホスファターゼＳＨ２ドメイン含有タンパク質チロシンホスファターゼ２（ＳＨＰ２）との会合が媒介されることが、当技術分野で公知である。ヒトＳＩＲＰαの全長アミノ酸配列を以下に提示する：
Figure 2023536631000003
用語「プログラム細胞死リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）」、「プログラム死リガンド－１」、「ＰＤ－１リガンド１」または類似の用語は、他に示さない限り、哺乳動物、例えば、霊長類（例えば、ヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ））、イヌ、およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）を含めた任意の脊椎動物供給源由来のポリペプチド（「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書で相互交換可能に使用される）または任意のネイティブＰＤ－Ｌ１を指す。表面抗原分類２７４（ＣＤ２７４）またはＢ７ホモログ１（Ｂ７－Ｈ１）としても公知のＰＤ－Ｌ１は、ＣＤ２７４遺伝子によってコードされる、ヒトにおけるタンパク質である。ＰＤ－Ｌ１は、ＰＤ－１に対する２つの天然に存在する細胞表面糖タンパク質リガンドのうちの１つである（他方はＰＤ－Ｌ２である）。ＰＤ－１と同様、ＰＤ－Ｌ１は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、２つの細胞外Ｉｇドメイン、Ｎ末端ＶドメインおよびＣ末端定常ドメインからなる。ＰＤ－Ｌ１は、ＰＤ－１への結合の際に、Ｔ細胞活性化およびサイトカイン分泌を下方調節することが当該分野で公知である。ＰＤ－Ｌ１という用語は、「全長」ＰＤ－Ｌ１、ならびに細胞におけるプロセシングから生じる任意の形態のＰＤ－Ｌ１またはそれらの任意の断片を包含する。ＰＤ－Ｌ１という用語は、ＰＤ－Ｌ１の天然に存在するバリアント、例えば、ＳＮＰバリアント、スプライスバリアントおよび対立遺伝子バリアントもまた包含する。ヒトＰＤ－Ｌ１の全長アミノ酸配列は、以下に提供される（例示的な細胞外ドメイン＝下線文字列）：
Figure 2023536631000004
Figure 2023536631000005
ＰＤ－Ｌ１という用語によってこれもまた包含される他の関連のＰＤ－Ｌ１ポリペプチドには、ＰＤ－Ｌ１活性を保持するおよび／または抗ＰＤ－Ｌ１免疫応答を生じるのに十分な、断片、誘導体（例えば、置換、欠失、短縮、および挿入バリアント）、融合ポリペプチド、および種間ホモログが含まれる。当業者が理解するように、本明細書に記載されるＰＤ－Ｌ１結合性作用剤（例えば、抗体）は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド断片、ＰＤ－Ｌ１抗原、および／またはＰＤ－Ｌ１エピトープに結合し得る。エピトープは、順に、より大きいＰＤ－Ｌ１ポリペプチドの一部であり得るより大きいＰＤ－Ｌ１ポリペプチド断片の一部であり得るより大きいＰＤ－Ｌ１抗原の一部であり得る。ＰＤ－Ｌ１は、ネイティブ形態または変性形態で存在し得る。本明細書に記載されるＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、種々の供給源から、例えば、ヒト組織型もしくは別の供給源から単離され得、または組換えもしくは合成方法によって調製され得る。ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、自然界に由来する対応するＰＤ－Ｌ１ポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み得る。ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドに対するオルソログもまた、当該分野で周知である。
用語「プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）」、「プログラム死－１」、「ＰＤ－１受容体」または類似の用語は、他に示さない限り、哺乳動物、例えば、霊長類（例えば、ヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ））、イヌ、およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）を含めた任意の脊椎動物供給源由来のポリペプチド（「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書で相互交換可能に使用される）または任意のネイティブＰＤ－１を指す。ＣＤ２７９（表面抗原分類２７９）としても公知のＰＤ－１は、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫阻害性受容体である。ＰＤ－１は、予め活性化されたＴ細胞上でｉｎ ｖｉｖｏで優勢に発現され、２つのリガンドＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２に結合する。ＰＤ－１は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、２つの細胞外Ｉｇドメイン、Ｎ末端ＶドメインおよびＣ末端定常ドメインからなる。ＰＤ－１は、２つの細胞質チロシン依存性シグナル伝達モチーフ：免疫受容体抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）および免疫受容体チロシン依存性スイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を含有する。ＰＤ－１という用語は、「全長」ＰＤ－１、ならびに細胞におけるプロセシングから生じる任意の形態のＰＤ－１またはそれらの任意の断片を包含する。ＰＤ－１という用語は、ＰＤ－１の天然に存在するバリアント、例えば、ＳＮＰバリアント、スプライスバリアントおよび対立遺伝子バリアントもまた包含する。Ｔ細胞刺激の後、ＰＤ－１は、チロシンホスファターゼＳＨＰ－２をその細胞質尾部内のＩＴＳＭモチーフに動員し、とりわけ、ＣＤ３ Ｔ細胞シグナル伝達カスケードに関与するエフェクター分子、例えば、ＣＤ３ゼータ、ＰＫＣシータおよびＺＡＰ７０の脱リン酸化をもたらすことが、当該分野で公知である（Carter et al. (2002) Eur J Immunol 32:634-43）。ヒトＰＤ－１の全長アミノ酸配列は、以下に提供される：
Figure 2023536631000006
本明細書で使用される場合、用語「結合性作用剤」またはその文法的等価物は、抗原に結合する１つまたは複数の抗原結合部位を有する分子（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）を指す。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤は、ＣＤ４７、例えばヒトＣＤ４７に結合する抗体、抗体断片、または他のペプチドベースの分子である。
「抗体」、「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」という用語は、本明細書では互換的に使用され、かつ最も広範な意味で使用され、具体的には、例えば、全長重鎖および／または軽鎖を有するポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニスト、中和抗体、全長モノクローナル抗体を含む）、多エピトープ特異性または単一エピトープ特異性を有する抗体組成物、組換えによって産生された抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、合成抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒトバージョンの抗体を網羅する。本開示はまた、ＣＤ４７に結合する特徴を保持する抗体断片（および／または抗体断片を含むポリペプチド）も含む。抗体断片の非限定的な例としては、抗体の抗原結合性領域および／またはエフェクター領域、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、単鎖抗体分子、二重可変領域抗体、単一可変領域抗体、線状抗体、Ｖ領域、抗体断片から形成された多重特異性抗体、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｄ、Ｆｃ、ジアボディ（diabody）、ジ－ジアボディ（di-diabody）、ジスルフィド連結したＦｖ（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（例えば、ナノボディ）または他の断片（例えば、非共有結合によりカップリングした重鎖可変領域と軽鎖可変領域からなる断片）が挙げられる。一般に述べると、可変（Ｖ）領域ドメインは、任意の適切な配置の免疫グロブリン重鎖（ＶＨ）および／または軽鎖（ＶＬ）可変ドメインであり得る。例えば、本開示は、２つの重鎖分子および２つの軽鎖分子、抗体軽鎖単量体、ならびに抗体重鎖単量体を含む四量体抗体も含む。したがって、例えば、Ｖ領域ドメインは、二量体であってもよく、ＣＤ４７に結合するＶＨ－ＶＨ、ＶＨ－ＶＬ、またはＶＬ－ＶＬ二量体を含有する。所望であれば、ＶＨ鎖とＶＬ鎖は、直接かまたはリンカーを通じて共有結合によりカップリングして、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を形成していてもよい。参照しやすさのために、ｓｃＦｖタンパク質は、本明細書では、「抗体断片」のカテゴリーに含めて言及される。抗体断片の別の形態は、抗体の１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むペプチドである。ＣＤＲ（「最小認識単位」または「超可変領域」とも称される）は、目的のＣＤＲをコードするポリヌクレオチドを構築することによって得ることができる。そのようなポリヌクレオチドは、例えば、抗体産生細胞のｍＲＮＡを鋳型として使用し、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して可変領域を合成することによって調製される（例えば、Larrick et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology, 2: 106 (1991)；Courtenay-Luck, "Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies," in Monoclonal Antibodies Production, Engineering and Clinical Application, Ritter et al. (eds.), page 166, Cambridge University Press (1995)；およびWard et al., "Genetic Manipulation and Expression of Antibodies," in Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Birch et al., (eds.), page 137, Wiley-Liss, Inc. (1995)を参照されたい）。抗体断片を単一ドメイン抗体、マキシボディ（maxibody）、ミニボディ（minibody）、細胞内抗体、ジアボディ、トリアボディ（triabody）、テトラボディ（tetrabody）、新抗原受容体の可変ドメイン（ｖ－ＮＡＲ）、およびビス－単鎖Ｆｖ領域に組み入れることができる（例えば、Hollinger and Hudson, Nature Biotechnology, 23(9): 1126-1136, 2005を参照されたい）。結合性作用剤は、一部の実施形態では、軽鎖および／または重鎖定常領域、例えば、１つまたは複数のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３および／またはＩｇＧ４定常領域を含む１つまたは複数の定常領域を含有する。一部の実施形態では、抗体は、上記のいずれかのエピトープ結合性断片を含み得る。本明細書に記載の抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＡ）または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）であり得る。抗体は、アゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体であり得る。
「単一特異性」という用語は、本明細書で使用される場合、結合性作用剤（例えば、抗体）に関して使用される場合、それぞれが同じ抗原の同じエピトープに結合する１つまたは複数の結合性部位を有する結合性作用剤を指す。
用語「多重特異性」は、結合性作用剤（例えば、抗体）に関して使用される場合、その結合性作用剤が、少なくとも２つの異なる抗原または同じ抗原上の少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有することを意味する（例えば、ＣＤ４７の第１のエピトープに対する第１の結合部位およびＣＤ４７の第２のエピトープに対する第２の結合部位を有する、ＣＤ４７に対する二重特異性抗体）。
「二重特異性」という用語は、結合性作用剤（例えば、抗体）に関して使用される場合、結合性作用剤が、２つの別個の抗原性決定因子に特異的に結合することができるものであること、例えば、それぞれ抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の対によって形成される、異なる抗原または同じ抗原上の異なるエピトープに結合する２つの結合性部位を意味する。そのような二重特異性結合性作用剤は、１＋１フォーマットを有し得る。他の二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）フォーマットは、２＋１もしくは１＋２フォーマット（第１の抗原またはエピトープに対する結合性部位を２つと第２の抗原またはエピトープに対する結合性部位を１つ含む）または２＋２フォーマット（第１の抗原またはエピトープに対する結合性部位を２つと第２の抗原またはエピトープに対する結合性部位を２つ含む）であり得る。二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）が抗原結合性部位を２つ含む場合、それぞれが、異なる抗原性決定因子に結合し得る。そのような二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）は、同じ抗原上の２つの異なるエピトープ（例えば、ＣＤ４７上のエピトープ）に結合し得る。
「同一」またはパーセント「同一性」という用語は、２つまたはそれよりも多くの核酸またはポリペプチドの文脈においては、いかなる保存的アミノ酸置換も配列同一性の一部として考えずに、対応が最大になるように比較およびアラインメント（必要であればギャップを導入する）した場合に、同じであるか、または同じヌクレオチドもしくはアミノ酸残基を特定のパーセンテージで有する、２つまたはそれよりも多くの配列または部分配列（subsequence）を指す。パーセント同一性は、配列比較ソフトウェアもしくはアルゴリズムを使用することにより、または目視検査により、測定することができる。アミノ酸配列またはヌクレオチド配列のアラインメントを得るために使用することができる種々のアルゴリズムおよびソフトウェアは、当技術分野で周知である。それらとしては、これだけに限定されないが、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ、ＢｅｓｔＦｉｔ、ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ、およびその変形形態が挙げられる。一部の実施形態では、２つの核酸またはポリペプチドは実質的に同一であり、これは、対応が最大になるように比較およびアラインメントした場合に、配列比較アルゴリズムを使用することでまたは目視検査により測定して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、および一部の実施形態では、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のヌクレオチドまたはアミノ酸残基同一性を有することを意味する。一部の実施形態では、同一性は、少なくとも約１０残基、少なくとも約２０残基、少なくとも約４０～６０残基、少なくとも約６０～８０残基またはその間の任意の整数値の長さであるアミノ酸配列の領域にわたって存在する。一部の実施形態では、同一性は、６０～８０残基よりも長い領域、例えば、少なくとも約８０～１００残基などにわたって存在し、一部の実施形態では、配列は、比較される配列、例えば標的タンパク質または抗体のコード領域などの全長にわたって実質的に同一である。一部の実施形態では、同一性は、少なくとも約１０塩基、少なくとも約２０塩基、少なくとも約４０～６０塩基、少なくとも約６０～８０塩基またはその間の任意の整数値の長さであるヌクレオチド配列の領域にわたって存在する。一部の実施形態では、同一性は、６０～８０塩基よりも長い領域、例えば、少なくとも約８０～１０００塩基またはそれよりも長い領域にわたって存在し、一部の実施形態では、配列は、比較される配列、例えば目的のタンパク質をコードするヌクレオチド配列などの全長にわたって実質的に同一である。
「保存的アミノ酸置換」は、１つのアミノ酸残基が、同様の化学的特徴を有する側鎖を有する別のアミノ酸残基で置き換えられたものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において一般に定義されており、それらには、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。例えば、フェニルアラニンでのチロシンの置換は保存的置換である。一般に、本開示のポリペプチド、可溶性タンパク質、および／または抗体の配列内の保存的置換は、そのアミノ酸配列を含有するポリペプチド、可溶性タンパク質、または抗体の標的結合性部位への結合を抑止するものではない。結合を排除しないアミノ酸の保存的置換を同定する方法は、当技術分野で周知である。
「ポリペプチド」という用語は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは直鎖であっても分枝であってもよく、修飾されたアミノ酸を含んでもよく、また、非アミノ酸を含んでもよい（例えば、非アミノ酸で中断されていてもよい）。この用語は、天然にまたは介入によって修飾；例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質付加、アセチル化、リン酸化、または任意の他のマニピュレーションもしくは修飾、例えば、標識用構成成分などの部分との連結もしくはコンジュゲーション（直接的または間接的）がなされたアミノ酸ポリマーも包含する。例えば、アミノ酸の１つまたは複数の類似体（例えば、非天然アミノ酸を含む）、および当技術分野で公知の他の修飾を含有するポリペプチドも、この定義に含まれる。本開示のポリペプチドは抗体または免疫グロブリンスーパーファミリーの他のメンバーに基づき得るので、一部の実施形態では、ポリペプチドは単鎖として存在し得ることが理解される。
本明細書で使用される場合、「抗原」は、結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）が結合できるエピトープを含有する部分または分子である。したがって、抗原は、抗体によって結合され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）が結合する抗原は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）、またはその断片である。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、当技術分野における用語であり、抗体が結合し得る、抗原の局所的な領域を指す。エピトープは、線状エピトープまたは構造的、非線形、もしくは不連続エピトープであり得る。ポリペプチド抗原の場合では、例えば、エピトープは、ポリペプチドの連続したアミノ酸であり得る（「線状」エピトープ）か、または、エピトープは、ポリペプチド、例えば、ヒトＣＤ４７の２つもしくはそれよりも多くの連続していない領域からのアミノ酸を含み得る（「構造的」、「非線形」または「不連続」エピトープ）。一般に、線状エピトープは、二次構造、三次構造、または四次構造に依存する場合もあり、依存しない場合もあることが、当業者には理解されよう。例えば、一部の実施形態では、抗体は、天然の三次元タンパク質構造にフォールディングされているかどうかにかかわらず、アミノ酸の群に結合する。他の実施形態では、抗体がエピトープを認識し、それに結合するためには、アミノ酸残基が、特定のコンフォメーション（例えば、折曲がり、ねじれ、ターンまたはフォールド）を示すようにエピトープを構成することが必要である。
抗体は、「エピトープ」に結合する、または参照抗体と「本質的に同じエピトープ」もしくは「同じエピトープ」に結合し、これは、２つの抗体が、３次元空間において同一であるか、重複しているか、または近接しているエピトープを認識する場合である。２つの抗体が、３次元空間において同一であるか、重複しているか、または近接しているエピトープに結合するかどうかを決定するための、最も広く使用され、かつ迅速な方法は、競合アッセイであり、これは、例えば、標識された抗原または標識された抗体のいずれかを使用することでいくつかの異なるフォーマットに構成することができる。一部のアッセイでは、抗原を９６ウェルプレートに固定化するかまたは細胞表面上に発現させ、標識されていない抗体の、標識された抗体の結合を遮断する能力を、放射標識、蛍光標識または酵素標識を使用して測定する。
「エピトープビニング」は、抗体を、それらが認識するエピトープに基づいて群分けするプロセスである。より詳細には、エピトープビニングは、競合アッセイと、抗体をそれらのエピトープ認識特性に基づいてクラスタリングし、別個の結合特異性を有する抗体を同定するためコンピュータによるプロセスとを組み合わせて、使用して異なる抗体のエピトープ認識特性を区別するための方法およびシステムを含む。
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」、「特異的に認識する」、「免疫特異的に結合する」、「選択的に結合する」、「免疫特異的に認識する」および「免疫特異的」という用語は、抗体の文脈において類似の用語であり、抗原（例えば、エピトープ）に結合する分子を指し、そのような結合は当業者には理解される。一部の実施形態では、「特異的に結合する」とは、例えば、ポリペプチドまたは分子が、エピトープ、タンパク質、または標的分子と、関連するタンパク質および無関連のタンパク質を含めた代替物質よりも頻繁に、それよりも急速に、それよりも長い持続時間で、それよりも高い親和性で、または上記のいくつかの組合せで相互作用することを意味する。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、他のペプチドまたはポリペプチドには、一般に、例えば、イムノアッセイ、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）、ＫｉｎＥｘＡ ３０００機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂｏｉｓｅ、ＩＤ）、または当技術分野で公知の他のアッセイによって決定して、より低い親和性で結合し得る。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性ドメインは、抗原に、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）などの実験技法を使用して決定して、任意の交差反応性抗原よりも高い親和性で結合する場合、抗原に結合するまたは特異的に結合する。典型的には、特異的または選択的反応は、バックグラウンドシグナルまたはノイズの少なくとも２倍になり、バックグラウンドの１０倍を超える場合もある。結合特異性に関する考察については、例えば、Fundamental Immunology 332-36 (Paul ed., 2d ed. 1989）を参照されたい。一部の実施形態では、例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析またはＲＩＡによって決定して、抗体または抗原結合性ドメインの「非標的」タンパク質への結合の程度は、抗体または抗原結合性ドメインのその特定の標的抗原への結合の約１０％未満である。一部の実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、その抗原に、その分子が別の抗原に結合する場合のＫａの少なくとも２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、４ｌｏｇまたはそれよりも大きいＫａで結合する。一部の実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、他のタンパク質と交差反応しない。別の特定の実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、他の非ＣＤ４７タンパク質と交差反応しない。一部の実施形態では、「特異的に結合する」とは、例えば、ポリペプチドまたは分子が、タンパク質または標的に、約０．１ｍＭまたはそれ未満であるが、通常は約１μＭ未満のＫＤで結合することを意味する。一部の実施形態では、「特異的に結合する」とは、ポリペプチドまたは分子が、標的に、少なくとも約０．１μＭもしくはそれ未満、少なくとも約０．０１μＭもしくはそれ未満、または少なくとも約１ｎＭもしくはそれ未満のＫＤで結合することを意味する。異なる種における相同タンパク質間の配列同一性に起因して、特異的結合には、１つよりも多くの種におけるタンパク質または標的を認識するポリペプチドまたは分子が含まれ得る。同様に、異なるタンパク質のポリペプチド配列のある特定の領域内での相同性に起因して、特異的結合には、１種よりも多くのタンパク質または標的を認識するポリペプチドまたは分子が含まれ得る。一部の実施形態では、第１の標的に特異的に結合するポリペプチドまたは分子が、第２の標的にも特異的に結合する場合もあり、第２の標的には特異的に結合しない場合もあることが理解される。したがって、「特異的結合」は、必ずしも、排他的結合、例えば、単一の標的への結合を要求するものではない（しかし、それを含み得る）。したがって、ポリペプチドまたは分子は、一部の実施形態では、１つよりも多くの標的に特異的に結合し得る。一部の実施形態では、複数の標的に、ポリペプチドまたは分子の同じ抗原結合性部位が結合し得る。例えば、抗体は、ある特定の場合には、２つの同一の抗原結合性部位を含み、そのそれぞれが、２種またはそれよりも多くのタンパク質の同じエピトープに特異的に結合する。ある特定の代替的な実施形態では、抗体は、二重特異性であってもよく、異なる特異性を有する少なくとも２つの抗原結合性部位を含む。必ずではないが一般に、「結合」への言及は、「特異的結合」を意味する。
「結合親和性」は、一般に、分子（例えば、結合タンパク質、例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合的相互作用の総計の強度を指す。他に示さない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー間（例えば、抗体と抗原との間）での１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。結合分子Ｘの、その結合パートナーＹに対する親和性は、解離定数（ＫＤ）によって一般に示され得る。親和性は、本明細書に記載されるものを含めた、当該分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は、一般に、抗原に緩徐と結合し、敏速に解離する傾向があるが、高親和性抗体は、一般に、抗原により速く結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合親和性を測定する種々の方法が当該分野で公知であり、そのいずれかが、本開示の目的のために使用され得る。一実施形態では、「ＫＤ」または「ＫＤ値」は、当該分野で公知のアッセイによって、例えば、結合アッセイによって測定され得る。本明細書で報告されるＫＤ値は、例えば、ＯｃｔｅｔＱＫ３８４システム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ）を使用するバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって決定した。あるいは、ＫＤは、例えば、目的の抗体のＦａｂバージョンおよびその抗原を用いて実施される放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）においても（Chen, et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881）、または例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－２０００もしくはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用するＢｉａｃｏｒｅによる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを使用しても、測定され得る。「オンレート（ｏｎ－ｒａｔｅ）」または「会合の速度」または「会合速度」または「ｋｏｎ」ならびに「オフレート（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）」または「解離の速度」または「解離速度」または「ｋｏｆｆ」は、例えば、それぞれ、ＯｃｔｅｔＱＫ３８４システム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ）またはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－２０００もしくはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して、上記同じＳＰＲまたはＢＬＩ技法を用いても決定することができる。
用語「競合する」は、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）の文脈で使用される場合、標的上の同じエピトープまたは結合部位について競合する結合性作用剤を意味し、これには、研究中の結合性作用剤が共通の抗原（例えば、ＣＤ４７）への参照分子（例えば、参照リガンド、または参照抗原結合タンパク質、例えば、参照抗体）の特異的結合を防止または阻害するアッセイによって決定した場合の、かかる結合性作用剤間の競合が含まれる。試験結合性作用剤が、参照分子と、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）への結合について競合するかどうかを決定するために、多数の型の競合的結合アッセイが使用され得る。使用され得るアッセイの例には、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Stahli et al., (1983) Methods in Enzymology 9:242-253を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Kirkland et al., (1986) J. Immunol. 137:3614-3619を参照されたい）、固相直接標識化アッセイ、固相直接標識化サンドイッチアッセイ（例えば、Harlow and Lane, (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Pressを参照されたい）；Ｉ－１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Morel et al., (1988) Molec. Immunol. 25:7-15を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Cheung, et al., (1990) Virology 176:546-552を参照されたい）；および直接標識化ＲＩＡ（Moldenhauer et al., (1990) Scand. J. Immunol. 32:77-82）が含まれる。典型的には、かかるアッセイには、未標識の試験抗原結合タンパク質（例えば、試験ＣＤ４７抗体）または標識された参照抗原結合タンパク質（例えば、参照ＣＤ４７抗体）のいずれかを保有する固体表面または細胞に結合した精製された抗原（例えば、ＣＤ４７、例えば、ヒトＣＤ４７）の使用が関与する。競合的阻害は、試験抗原結合タンパク質の存在下での固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することによって、測定され得る。通常、試験抗原結合タンパク質は、過剰量で存在する。競合アッセイによって同定された抗体（競合抗体）には、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、および／または抗体に関する参照が結合するエピトープに対して、立体障害が生じるのに十分に近位な隣接エピトープ（例えば、類似のエピトープまたは重複するエピトープ）に結合する抗体が含まれる。通常、競合抗体が過剰量で存在する場合、これは、共通の抗原への参照抗体の特異的結合を、少なくとも２０％、例えば、少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％または７５％阻害する。一部の場合には、結合は、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％もしくは９７％、９８％、９９％またはそれよりも大きく阻害される。
本明細書で使用される場合、「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は、周知の抗体専門用語であり、抗体の一部分、例えば、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの種々のエフェクター機能を示し得る、軽鎖および／または重鎖のカルボキシル末端部分を指す。この用語は、一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比べてより保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の一部を含む。
抗体「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域（例えば、ネイティブな配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に起因するその生物活性を指し、抗体のアイソタイプに応じて変動する。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性傷害（ＡＤＣＣ）；ファゴサイトーシス；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
「Ｆｃ領域」という用語は、本明細書では、例えば、ネイティブな配列のＦｃ領域、組換えＦｃ領域、およびバリアントＦｃ領域を含めた、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、多くの場合、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から（ＥＵ番号付け方式に従って）、またはＰｒｏ２３０から（ＥＵ番号付け方式に従って）、そのカルボキシル末端までのひと続きと定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リシン（ＥＵ番号付け方式に従って、残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換えによって操作することにより、除去され得る。例示的なＦｃ領域配列を以下に提示する（ＣＨ２ドメイン＝太字；ＣＨ３ドメイン＝下線が引かれた文字）：
Figure 2023536631000007
「機能的なＦｃ領域」は、ネイティブな配列のＦｃ領域の「エフェクター機能」を保有する。例示的な「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性傷害（ＡＤＣＣ）；ファゴサイトーシス；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）のダウンレギュレーションなどが挙げられる。そのようなエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ領域が結合性領域または結合性ドメイン（例えば、抗体可変領域またはドメイン）と組み合わされることを必要とするものであり、開示されている様々なアッセイを使用して評定することができる。
「ネイティブな配列のＦｃ領域」は、天然に見いだされるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、ヒトによるマニピュレーション、改変、および／または変化（例えば、単離、精製、選択、可変領域配列などの他の配列に含めることまたはそれと組み合わせること）がなされていない。ネイティブな配列のヒトＦｃ領域としては、ネイティブな配列のヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非ＡアロタイプおよびＡアロタイプ）；ネイティブな配列のヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；ネイティブな配列のヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域；およびネイティブな配列のヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびに天然に存在するそのバリアントが挙げられる。
「バリアントＦｃ領域」は、ネイティブな配列のＦｃ領域のアミノ酸配列と、少なくとも１つのアミノ酸の改変（例えば、置換、付加、または欠失）、好ましくは１つまたは複数のアミノ酸置換によって異なるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、ネイティブな配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、ネイティブな配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域内に約１～約１０のアミノ酸置換、好ましくは約１～約５のアミノ酸置換を有する。本明細書に記載のバリアントＦｃ領域は、ネイティブな配列のＦｃ領域および／もしくは親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、またはそれらと少なくとも約９０％の相同性、例えば、それらと少なくとも約９５％の相同性を保有し得る。本明細書に記載のバリアントＦｃ領域は、エフェクター機能が喪失したものであり得る（例えば、サイレントＦｃ）。例示的なバリアントＦｃ領域（「サイレントＦｃ」）配列を以下に提示する（ＣＨ２ドメイン＝太字、アミノ酸の変化に下線が引かれている；ＣＨ３ドメイン＝下線が引かれた文字）：
Figure 2023536631000008
 本明細書に記載される多重特異性（例えば、二重特異性）結合性作用剤のために有用な例示的なバリアントＣＨ２ドメイン（例えば、サイレントＣＨ２）配列は、以下に提供される（アミノ酸変化は下線である）：
Figure 2023536631000009
本明細書で使用される場合、「重鎖」という用語は、抗体に関して使用される場合は、約５０～７０ｋＤａのポリペプチド鎖を指し、ここで、アミノ末端部分は約１２０～１３０またはそれよりも多くのアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分は１つまたは複数の定常領域を含む。「重鎖」は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、別個の型のいずれか、例えば、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む）およびＩｇＭクラスの抗体を生じる、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）およびミュー（μ）を指し得る。
本明細書で使用される場合、「軽鎖」という用語は、抗体に関して使用される場合、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖を指し得、ここで、アミノ末端部分は約１００～約１１０またはそれよりも多くのアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分は定常領域を含む。軽鎖のおおよその長さは２１１～２１７アミノ酸である。定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの別個の型、例えば、カッパ（κ）またはラムダ（λ）が存在する。軽鎖アミノ酸配列は当技術分野で周知である。
「抗原結合性断片」、「抗原結合性ドメイン」、「抗原結合性領域」という用語および同様の用語は、抗原と相互作用し、結合性断片、ドメイン、または領域に、抗原に対する特異性および親和性を付与するアミノ酸残基（例えば、ＣＤＲ）を含む、抗体の部分を指す。「抗原結合性断片」は、本明細書で使用される場合、抗体の抗原結合性領域または可変領域などの１つまたは複数のＣＤＲを含む抗体の一部を含む「抗体断片」を含む。
本明細書に記載の抗体は、これだけに限定されないが、合成抗体、モノクローナル抗体、組換えによって産生された抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、細胞内抗体、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異性、二重特異性などを含む）、ラクダ化抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド連結したＦｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、および上記のいずれかのエピトープ結合性断片を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体には、ＣＤ４７抗原に結合する１つまたは複数の抗原結合ドメインおよびＣＤ４７以外の１つまたは複数の標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する１つまたは複数の抗原結合ドメインを含有する分子を含めた、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分が含まれる。
抗体は、任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ２ｂ）の免疫グロブリン分子であり得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ抗体（例えば、ヒトＩｇＧ）、またはそのクラス（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）またはそのサブクラスである。
一部の実施形態では、抗体は、２つの重（Ｈ）鎖／軽（Ｌ）鎖対を含む４鎖抗体単位であり、ここで、Ｈ鎖のアミノ酸配列は同一であり、Ｌ鎖のアミノ酸配列は同一である。一部の実施形態では、Ｈ鎖およびＬ鎖は、定常領域、例えば、ヒト定常領域を含む。一部の実施形態では、そのような抗体のＬ鎖定常領域は、カッパまたはラムダ軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ軽鎖定常領域である。一部の実施形態では、そのような抗体のＨ鎖定常領域は、ガンマ重鎖定常領域、例えば、ヒトガンマ重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、そのような抗体は、ＩｇＧ定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ定常領域（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、および／またはＩｇＧ４定常領域）を含む。
抗体またはその断片は、ＣＤ４７、例えば、ヒトＣＤ４７に優先的に結合し得、これは、その抗体またはその断片が、無関係の対照タンパク質に結合するときよりも高い親和性でＣＤ４７に結合すること、および／または無関係の対照タンパク質に結合するときよりも高い親和性でヒトＣＤ４７に結合することを意味する。例えば、抗体またはその断片は、ＣＤ４７またはその一部分を特異的に認識しそれに結合し得る。「特異的結合」は、抗体またはその断片が、無関係の対照タンパク質（例えば、ニワトリ卵白リゾチーム）に対する親和性よりも少なくとも５、１０、１５、２０、２５、５０、１００、２５０、５００、１０００、または１０，０００倍高い親和性でＣＤ４７に結合することを意味する。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、ＣＤ４７に実質的に排他的に結合し得る（例えば、例えば、結合親和性における測定可能な差異によって、ＣＤ４７を他の公知のポリペプチドから識別することができる）。一部の実施形態では、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ヒトＣＤ４７配列以外のＣＤ４７配列（例えば、カニクイザルＣＤ４７配列）と反応し得る。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、一般に、軽鎖または重鎖のアミノ末端に位置し、重鎖の長さが約１２０～１３０アミノ酸であり、軽鎖の長さが約１００～１１０アミノ酸であり、特定の抗体それぞれのその特定の抗原に対する結合および特異性に使用される、抗体の軽鎖または重鎖の一部分を指す。重鎖の可変領域は「ＶＨ」と称され得る。軽鎖の可変領域は「ＶＬ」と称され得る。「可変」という用語は、可変領域のある特定のセグメントの配列が抗体の間で広範囲にわたって異なるという事実を指す。Ｖ領域により、抗原への結合が媒介され、特定の抗体のその特定の抗原に対する特異性が規定される。しかし、変動性は、可変領域の１１０アミノ酸の長さにわたって均等には分布していない。その代わりに、Ｖ領域は、変動性がより高い（例えば、極度の変動性）、「超可変領域」と称される、あるいは「相補性決定領域」と称される短い領域によって分離された、可変性がより低い（例えば、比較的インバリアントである）、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される約１５～３０アミノ酸のストレッチからなる。重鎖および軽鎖の可変領域は、それぞれ、４つのＦＲ（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含み、これらは、βシートの立体配置を主にとり、βシート構造を接続し、一部の場合ではその一部を形成するループを形成した３つの超可変領域によって接続されている。各鎖内の超可変領域は、ＦＲによって極めて近傍に一緒に保持され、他の鎖由来の超可変領域が抗体の抗原結合性部位の形成に寄与する（例えば、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991を参照されたい）。定常領域は、抗体の抗原への結合に直接は関与しないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）への抗体の関与などの種々のエフェクター機能を示す。可変領域の配列は、異なる抗体間で広範囲にわたって異なる。配列の変動性はＣＤＲに集中しており、一方、可変領域内の可変性が低い部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。軽鎖および重鎖のＣＤＲは、抗体の抗原との相互作用を主に担う。特定の実施形態では、可変領域はヒト可変領域である。
「超可変領域」、「ＨＶＲ」、「ＨＶ」、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、配列が超可変であり、かつ／または構造的に規定されるループを形成する、抗体可変領域の領域を指す。一般に、抗体は、６つの超可変領域；ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、およびＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。いくつかの超可変領域の描写が使用されており、本発明に包含される。Ｋａｂａｔ ＣＤＲは、配列変動性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（例えば、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)を参照されたい）。Ｃｈｏｔｈｉａは、その代わりに、構造的ループの場所を参照するものである（例えば、Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987)を参照されたい）。Ｋａｂａｔ番号付け慣用法を使用して番号付けした場合、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２からＨ３４の間で変動する（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームではＨ３５ＡおよびＨ３５Ｂに挿入がなされているからである；３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終わる；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終わる；３５Ａと３５Ｂがどちらも存在する場合、ループは３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループとの折衷法であり、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ＡｂＭ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ｓｏｆｔｗａｒｅで使用されている（例えば、Martin, in Antibody Engineering, Vol. 2, Chapter 3, Springer Verlagを参照されたい）。「接触（contact）」超可変領域は、入手可能な複雑な結晶構造の解析に基づくものである。これらの超可変領域またはＣＤＲのそれぞれからの残基を以下に記載する。
普遍的な番号付け方式、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27(1): 55-77 (2003)）が開発され、広範に採用されている。ＩＭＧＴは、ヒトおよび他の脊椎動物の免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＲ）および主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）を専門とする統合情報システムである。本明細書では、ＣＤＲは、アミノ酸配列および軽鎖または重鎖内の場所の両方の点から言及される。免疫グロブリン可変ドメインの構造内のＣＤＲの「場所」は、種間で保存されており、可変ドメイン配列を構造的特色、ＣＤＲおよびフレームワーク残基に従ってアラインメントする番号付け方式を使用することにより、ループと称される構造で示され、容易に同定することができる。この情報を、１つの種の免疫グロブリンから、典型的にはヒト抗体由来のアクセプターフレームワークへの、ＣＤＲ残基のグラフト化および置換えに使用することができる。追加的な番号付け方式（ＡＨｏｎ）が、Honegger and Pluckthun, J. Mol. Biol. 309: 657-670 (2001)により開発されている。例えば、Ｋａｂａｔ番号付けおよびＩＭＧＴ一意的番号付け方式を含めた番号付け方式間の対応は当業者には周知であり（例えば、Kabat、上記；Chothia and Lesk、上記；Martin、上記；Lefranc et al., 上記を参照されたい）、また、以下にも例示されている。本明細書に示されている例示的な方式は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａを組み合わせたものである。
超可変領域は、以下の通り「超可変領域延長部」を含み得る：ＶＬにおける２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）および８９～９７または８９～９６（Ｌ３）ならびにＶＨにおける２６～３５または２６～３５Ａ（Ｈ１）、５０～６５または４９～６５（Ｈ２）および９３～１０２、９４～１０２、または９５～１０２（Ｈ３）。本明細書で使用される場合、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、「ＨＶ」、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、互換的に使用される。
「ベクター」という用語は、例えば、核酸配列を宿主細胞に導入する目的のものを含め、核酸配列を運搬させるまたは含めるために使用される物質を指す。使用のために適用可能なベクターとしては、例えば、発現ベクター、プラスミド、ファージベクター、ウイルスベクター、エピソームおよび人工染色体が挙げられ、これには、宿主細胞の染色体への安定な組込みのために作動可能な選択配列またはマーカーを含めることができる。さらに、ベクターに１つまたは複数の選択マーカー遺伝子および適当な発現制御配列を含めることができる。含めることができる選択マーカー遺伝子は、例えば、抗生物質もしくは毒素に対する耐性をもたらすもの、栄養要求性欠損を補完するもの、または培養培地中に存在しない極めて重要な栄養分を供給するものである。発現制御配列には、当技術分野で周知の構成的プロモーターおよび誘導性プロモーター、転写エンハンサー、転写ターミネーターなどが含まれ得る。２つまたはそれよりも多くの核酸分子を同時発現させる場合（例えば、抗体重鎖および軽鎖の両方または抗体ＶＨおよびＶＬ）、両方の核酸分子を、例えば、単一の発現ベクターに挿入することもでき、または別々の発現ベクターに挿入することもできる。単一のベクターによる発現に関しては、コードする核酸を１つの共通する発現制御配列に作動可能に（operationally）連結することもでき、または異なる発現制御配列、例えば、１つの誘導性プロモーターおよび１つの構成的プロモーターに連結することもできる。核酸分子の宿主細胞への導入は、当技術分野で周知の方法を使用して確認することができる。そのような方法としては、例えば、ｍＲＮＡのノーザンブロットもしくはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅などの核酸解析、または遺伝子産物の発現についての免疫ブロッティング、または導入された核酸配列の発現もしくはその対応する遺伝子産物を試験するための他の適切な解析方法が挙げられる。核酸分子は所望の産物（例えば、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤）の産生に十分な量で発現されることが当業者には理解され、さらに、十分な発現が得られるように、当技術分野で周知の方法を使用して発現レベルを最適化することができることが理解される。
「免疫細胞機能不全疾患」および「免疫細胞機能不全障害」および「免疫細胞機能不全状態」は、相互交換可能に使用され、免疫細胞への不適切なシグナル伝達によって完全にもしくは部分的に引き起こされるまたは免疫細胞への不適切なシグナル伝達の結果である任意の疾患、障害または状態、および／またはその代わりに免疫細胞受容体（例えば、ＳＩＲＰαまたはＰＤ－１）とそのリガンド（例えば、ＣＤ４７またはＰＤ－Ｌ１）との相互作用のｉｎ ｖｉｖｏ効果を阻害することが望ましい任意の疾患、障害、または状態を指す。免疫細胞機能不全疾患には、食細胞機能不全疾患およびＴ細胞機能不全疾患が含まれる。
「食細胞機能不全疾患」および「食細胞機能不全障害」および「食細胞機能不全状態」は、相互交換可能に使用され、ＣＤ４７もしくはＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用によって完全にもしくは部分的に引き起こされるまたはＣＤ４７もしくはＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用の結果である任意の疾患、障害または状態、および／またはその代わりにＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のｉｎ ｖｉｖｏ効果を阻害することが望ましい任意の疾患、障害、または状態を指す。食細胞機能不全疾患には、食作用性免疫細胞（例えば、好中球、マクロファージ、樹状細胞、Ｂリンパ球）の活性低下を特徴とするまたはそれに関連する疾患、障害または状態が含まれる。一部の実施形態では、食細胞機能不全疾患は、ＳＩＲＰαを通じたシグナル伝達の不適切な増大に特異的に関連する疾患、障害または状態である。一部の実施形態では、食細胞機能不全疾患は、食細胞（例えば、マクロファージ）の、他の細胞（例えば、腫瘍細胞）または粒子を取り込むまたは飲み込む能力が低下したものである。一部の実施形態では、他の細胞または粒子を取り込むまたは飲み込む能力が低下した結果、これだけに限定されないが、ＣＤ４７を発現する腫瘍を含めた病原体または腫瘍の制御が無効になる。食細胞機能不全を特徴とする食細胞機能不全疾患の例としては、消散しない急性感染、慢性感染および腫瘍免疫（例えば、これだけに限定されないが、ＣＤ４７を発現または過剰発現するがんを含めた任意のがん）が挙げられる。
「Ｔ細胞機能不全疾患」および「Ｔ細胞機能不全障害」および「Ｔ細胞機能不全状態」は、相互交換可能に使用され、抗原刺激に対する応答性の減少によって特徴付けられるＴ細胞の任意の疾患、障害または状態を指す。Ｔ細胞機能不全疾患には、ＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との相互作用によって完全にもしくは部分的に引き起こされるまたはＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との相互作用の結果である疾患、障害または状態、および／またはその代わりにＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との相互作用のｉｎ ｖｉｖｏ効果を阻害することが望ましい任意の疾患、障害、または状態が含まれる。一部の実施形態では、Ｔ細胞機能不全疾患は、ＰＤ－１を介したシグナル伝達の不適切な増加に特異的に付随する疾患、障害または状態である。一部の実施形態では、Ｔ細胞機能不全疾患は、Ｔ細胞が、アネルギー性であるか、またはサイトカインを分泌する能力、増殖する能力、もしくは細胞溶解活性を遂行する能力の減少を有する、疾患である。一部の実施形態では、応答性の減少は、病原体、またはＰＤ－Ｌ１を発現する腫瘍が含まれるがこれに限定されない腫瘍の効果のない制御を生じる。Ｔ細胞機能不全によって特徴付けられるＴ細胞機能不全疾患の例には、未解決の急性感染症、慢性感染症および腫瘍免疫（例えば、ＰＤ－Ｌ１を発現または過剰発現するがんが含まれるがこれに限定されない任意のがんからの）が含まれる。
「腫瘍免疫」は、腫瘍が免疫認識およびクリアランスを回避するプロセスを指す。したがって、治療概念として、腫瘍免疫は、かかる回避が弱められ、腫瘍が免疫系によって認識および攻撃される場合に、「処置される」。腫瘍認識の例には、腫瘍結合、腫瘍収縮および腫瘍クリアランスが含まれる。
「Ｔ細胞機能を増強する」は、持続性のもしくは増加した生物機能を有するようにＴ細胞を誘導すること、Ｔ細胞に持続性のもしくは増加した生物機能を有させること、または持続性のもしくは増加した生物機能を有するようにＴ細胞を刺激すること、あるいは消耗したまたは不活性なＴ細胞を再生させることまたは再活性化することを意味する。Ｔ細胞機能を増強することの例には、以下が含まれる：介入前のそのようなレベルと比較した、ＣＤ８＋Ｔ細胞からのサイトカイン（例えば、ＴＮＦα、ＩＦＮγ）の分泌の増加、増殖の増加、増加した抗原応答性（例えば、腫瘍細胞除去）。一部の実施形態では、増強のレベルは、少なくとも５０％、あるいは６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％である。この増強を測定する様式は、当業者に公知である。
「有効量」は、一般に、疾患、障害、または状態に起因するまたはそれに関連する症状の重症度および／もしくは頻度を低減させる、症状および／もしくは根本原因を排除する、症状および／もしくはそれらの根本原因の出現を防止する、ならびに／または損傷を改善するもしくは矯正するために十分な量である。一部の実施形態では、有効量は、治療有効量または予防有効量である。
「治療有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、所与の疾患、障害もしくは状態、および／またはそれに関する症状の重症度および／または持続時間を低減させるおよび／または好転させるために十分な、作用剤（例えば、本明細書に記載の抗体または本明細書に記載の任意の他の作用剤）の量を指す。治療剤を含めた作用剤の治療有効量は、（ｉ）所与の疾患、障害、もしくは状態の進行もしくは増悪を低減もしくは好転させるため、（ｉｉ）所与の疾患、障害もしくは状態の再発（recurrence）、発生もしくは発症を低減もしくは好転させるため、および／または、（ｉｉｉ）別の治療法（例えば、本明細書に記載の抗体の投与以外の治療法）の予防効果もしくは治療効果を改善もしくは増強するために必要な量であり得る。本開示の物質／分子／作用剤（例えば、ＣＤ４７抗体）の「治療有効量」は、個体の病態、年齢、性別、および体重、ならびに、物質／分子／作用剤の、個体において所望の応答を引き出す能力などの因子に応じて変動し得る。治療有効量は、物質／分子／作用剤のあらゆる毒性影響または有害な影響よりも治療的に有益な影響が上回る量を包含する。ある特定の実施形態では、「治療有効量」という用語は、対象または哺乳動物における疾患、障害、または状態を「処置する」のに有効な、抗体または他の作用剤（例えば、または薬物）の量を指す。
「予防有効量」は、対象に投与された場合に、意図された予防効果を有する、例えば、疾患、障害もしくは状態の発症（または再発（reoccurrence））を防止するもしくは遅延させる、あるいは疾患、障害、もしくは状態または関連する症状（複数可）の発症（または再発（reoccurrence））の可能性を低減させる、医薬組成物の量である。完全な治療効果または予防効果は、必ずしも１用量の投与によって生じるものではなく、一連の用量の投与後に初めて生じる場合もある。したがって、治療有効量または予防有効量は、１回または複数回の投与で投与され得る。
「薬学的に許容される」という用語は、本明細書で使用される場合、動物、より詳細にはヒトにおける使用について、連邦または州政府の規制当局による承認を受けていること、または米国薬局方、欧州薬局方または他の一般に認められている薬局方に収載されていることを意味する。
「担体」は、本明細書で使用される場合、用いられる投薬量および濃度で、それに曝露される細胞または哺乳動物に対して非毒性である担体、賦形剤、または安定剤を含む。多くの場合、担体は、水性ｐＨ緩衝液である。担体の例としては、緩衝剤、例えば、リン酸、クエン酸、および他の有機酸；アスコルビン酸を含めた抗酸化剤；低分子量（例えば、約１０アミノ酸残基未満）のポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなど；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドンなど；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンもしくはリシンなど；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡなど；糖アルコール、例えば、マンニトールもしくはソルビトールなど；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウムなど、ならびに／または非イオン界面活性物質、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）などが挙げられる。「担体」という用語は、治療薬が共に投与される、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全または不完全））、賦形剤、またはビヒクルも指し得る。そのような担体は、滅菌された液体、例えば、水、および、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などの、石油、動物、野菜または合成起源の油などであり得る。水は、組成物（例えば、医薬組成物）を静脈内投与する場合の代表的な担体である。生理食塩溶液ならびに水性ブドウ糖およびグリセロール溶液も、液体担体として、特に注射液として用いることができる。適切な賦形剤（例えば、医薬賦形剤）としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、イネ、穀粉、白亜、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物は、所望であれば、微量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含有してもよい。組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、ピル、カプセル剤、散剤、持続放出製剤などの形態をとり得る。製剤を含む経口用組成物は、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準の担体を含み得る。適切な担体の例は、Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PAに記載されている。医薬化合物を含む組成物は、対象（例えば、患者）への適切な投与のための形態を提供するように、適切な量の担体と一緒に、例えば、単離または精製された形態で、予防有効量または治療有効量の多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）を含有し得る。製剤は、投与の様式に適しているべきである。
一部の実施形態では、本開示は、治療剤として本明細書で使用され得る多重特異性結合性作用剤を提供する。かかる作用剤には、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合ドメインと、ＣＤ４７ではない１つまたは複数の追加の標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する第２の結合ドメインとを含む、多重特異性抗体（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）が含まれる。例示的な抗体には、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、およびヘテロコンジュゲート抗体、ならびに増加または減少した親和性または他の特性を有するそれらのバリアントが含まれる。
一部の実施形態では、ＣＤ４７ポリペプチド、ＣＤ４７ポリペプチド断片、ＣＤ４７ペプチドまたはＣＤ４７エピトープを含めたＣＤ４７に結合する第１の結合ドメインを含む多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、多重特異性結合性作用剤は、ＣＤ４７ポリペプチド、ＣＤ４７ポリペプチド断片、ＣＤ４７ペプチドまたはＣＤ２７エピトープを含めたＣＤ４７に結合する第１の結合ドメインを含むヒト抗体またはヒト化抗体（例えば、ヒト定常領域を含む）である。一部の実施形態では、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ＣＤ４７発現性腫瘍細胞を含めた哺乳動物（例えば、ヒト）細胞の表面上で発現されるＣＤ４７に結合し得る。一部の実施形態では、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、腫瘍細胞などの細胞上に曝露されたＣＤ４７細胞外エピトープ（例えば、ＣＤ４７エピトープ）に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ４７、例えば、ヒトＣＤ４７またはその部分に結合する多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、ＣＤ４７は、ヒトＣＤ４７である。一部の実施形態では、多重特異性結合性作用剤は、ＣＤ４７に結合する多重特異性結合性作用剤（例えば、ヒトＣＤ４７に結合する抗体）である。ヒトＣＤ４７の例示的なアミノ酸配列は、本明細書に記載される。
一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド断片、ＰＤ－Ｌ１ペプチドまたはＰＤ－Ｌ１エピトープを含めたＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合ドメインを含む多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、多重特異性結合性作用剤は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド断片、ＰＤ－Ｌ１ペプチドまたはＰＤ－Ｌ１エピトープを含めたＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合ドメインを含むヒト化抗体（例えば、ヒト定常領域を含む）である。一部の実施形態では、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ＰＤ－Ｌ１発現性の抗原提示細胞および腫瘍細胞を含めた哺乳動物（例えば、ヒト）細胞の表面上で発現されるＰＤ－Ｌ１に結合し得る。一部の実施形態では、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、腫瘍細胞などの細胞上に曝露されたＰＤ－Ｌ１細胞外エピトープ（例えば、ＣＤ４７エピトープ）に結合する。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１、例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１またはその部分に結合する第２の結合ドメインを含む多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１は、ヒトＰＤ－Ｌ１である。一部の実施形態では、多重特異性結合性作用剤は、ヒトＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体）である。ヒトＰＤ－Ｌ１の例示的なアミノ酸配列は、本明細書に記載される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ＣＤ４７、例えば、ヒトＣＤ４７への結合について、本明細書に記載される抗体のうちいずれか１つのＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３、例えば、表１～３に示されるＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）と競合する。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ＣＤ４７、例えば、ヒトＣＤ４７への結合について、表１～３に示される（ａ）Ｃ４０と称される抗体；（ｂ）Ｃ５６と称される抗体；または（ｃ）Ｃ５９と称される抗体からの１つ、２つ、および／もしくは３つのＶＨ ＣＤＲならびに／または１つ、２つ、および／もしくは３つのＶＬ ＣＤＲを含む結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）と競合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ＣＤ４７、例えば、ヒトＣＤ４７への結合について、表１～３に示される（ａ）Ｃ４０と称される抗体；（ｂ）Ｃ５６と称される抗体；または（ｃ）Ｃ５９と称される抗体からの１つ、２つ、および／または３つのＶＨ ＣＤＲならびに１つ、２つ、および／または３つのＶＬ ＣＤＲを含む結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）と競合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ＣＤ４７、例えば、ヒトＣＤ４７への結合について、表１～３に示される（ａ）Ｃ４０と称される抗体；（ｂ）Ｃ５６と称される抗体；または（ｃ）Ｃ５９と称される抗体からのＶＨ領域およびＶＬ領域を含む結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）と競合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ＣＤ４７、例えば、ヒトＣＤ４７への結合について、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨ領域および配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬ領域；（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨ領域および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＬ領域；または（ｃ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＶＨ領域および配列番号７８のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）と競合する。
一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、本明細書に記載される抗体のうちいずれか１つのＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３、例えば、表１～６に示されるＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、表１～３に示される（ａ）Ｃ４０と称される抗体；（ｂ）Ｃ５６と称される抗体；または（ｃ）Ｃ５９と称される抗体からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに／または１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第１の結合ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、表４～６に示される（ａ）Ｐ２２と称される抗体；（ｂ）Ｐ２４と称される抗体；または（ｃ）Ｐ３１．２と称される抗体からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに／または１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第２の結合ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、表１～３に示される（ａ）Ｃ４０と称される抗体；（ｂ）Ｃ５６と称される抗体；または（ｃ）Ｃ５９と称される抗体からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに／または１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第１の結合ドメインと、表４～６に示される（ａ）Ｐ２２と称される抗体；（ｂ）Ｐ２４と称される抗体；または（ｃ）Ｐ３１．２と称される抗体からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに／または１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第２の結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、表１～３に示される（ａ）Ｃ４０と称される抗体；（ｂ）Ｃ５６と称される抗体；または（ｃ）Ｃ５９と称される抗体からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第１の結合ドメインと、表４～６に示される（ａ）Ｐ２２と称される抗体；（ｂ）Ｐ２４と称される抗体；または（ｃ）Ｐ３１．２と称される抗体からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第２の結合ドメインとを含む。
一部の実施形態では、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ＣＤ４７に結合し、表１、表２、および表３に記載される結合性作用剤のうちいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、および／またはＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む第１の結合ドメインと、ＰＤ－Ｌ１に結合し、表４、表５および表６に記載される結合性作用剤のうちいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、および／またはＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む第２の結合ドメインとを含む。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、表１からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに／または１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第１の結合ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤は、表２からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに／または１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第１の結合ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、表３からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに／または１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第１の結合ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、表４からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに／または１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第２の結合ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、表５からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに／または１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第２の結合ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、表６からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに／または１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第２の結合ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、二重特異性であり、表１、表２、または表３からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに／または１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第１の結合ドメインと、ＣＤ４７ではない第２の標的抗原に結合する結合性作用剤からの１つ、２つ、および／もしくは３つの重鎖ＣＤＲならびに／または１つ、２つ、および／もしくは３つの軽鎖ＣＤＲを含む第２の結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、二重特異性であり、表１、表２、または表３からの１つ、２つ、および／または３つの重鎖ＣＤＲならびに１つ、２つ、および／または３つの軽鎖ＣＤＲを含む第１の結合ドメインと、表４、表５、または表６からの１つ、２つ、および／または３つの重鎖ＣＤＲならびに１つ、２つ、および／または３つの軽鎖ＣＤＲを含む第２の結合ドメインとを含む。
Ｃ４０と称される抗体は、配列番号２５であるＶＨ配列および配列番号２６であるＶＬ配列を含む。
Ｃ５６と称される抗体は、配列番号５１であるＶＨ配列および配列番号５２であるＶＬ配列を含む。
Ｃ５９と称される抗体は、配列番号７７であるＶＨ配列および配列番号７８であるＶＬ配列を含む。
Ｐ２２と称される抗体は、配列番号１０３であるＶＨ配列および配列番号１０４であるＶＬ配列を含む。
Ｐ２４と称される抗体は、配列番号１２９であるＶＨ配列および配列番号１３０であるＶＬ配列を含む。
Ｐ３１．２と称される抗体は、配列番号１５５であるＶＨ配列および配列番号１５６であるＶＬ配列を含む。
一部の実施形態では、ＣＤ４７に結合する多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）は、（ｉ）配列番号２６（Ｃ４０ ＶＨ）、配列番号５１（Ｃ５６ ＶＨ）、または配列番号７７（Ｃ５９ ＶＨ）であるＶＨ配列を含むＶＨドメインと、（ｉｉ）配列番号２６（Ｃ４０ ＶＬ）、配列番号５２（Ｃ５６ ＶＬ）、または配列番号７８（Ｃ５９ ＶＬ）であるＶＬ配列を含むＶＬドメインとを含む。一部の実施形態では、かかるＶＨドメインおよびＶＬドメインを使用して、ＣＤ４７に結合する第１の結合ドメインを各々が有する二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）を構築したが、ここでは、第１の結合ドメインが、（ｉ）Ｃ４０ ＶＨドメインおよびＣ４０ ＶＬドメイン、（ｉｉ）Ｃ５６ ＶＨドメインおよびＣ５６ ＶＬドメイン、または（ｉｉｉ）Ｃ５９ ＶＨドメインおよびＣ５９ ＶＬドメインを含む場合が含まれる。
一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）は、（ｉ）配列番号１０３（Ｐ２２ ＶＨ）、配列番号１２９（Ｐ２４ ＶＨ）、または配列番号１５５（Ｐ３１．２ ＶＨ）であるＶＨ配列を含むＶＨドメインと、（ｉｉ）配列番号１０４（Ｐ２２ ＶＬ）、配列番号１３０（Ｐ２４ ＶＬ）、または配列番号１５６（Ｐ３１．２ ＶＬ）であるＶＬ配列を含むＶＬドメインとを含む。一部の実施形態では、かかるＶＨドメインおよびＶＬドメインを使用して、ＰＤ－Ｌ１に結合する第１の結合ドメインを各々が有する二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）を構築したが、ここでは、第１の結合ドメインが、（ｉ）Ｐ２２ ＶＨドメインおよびＰ２２ ＶＬドメイン、（ｉｉ）Ｐ２４ ＶＨドメインおよびＰ２４ ＶＬドメイン、または（ｉｉｉ）Ｐ３１．２ ＶＨドメインおよびＰ３１．２ ＶＬドメインを含む場合が含まれる。
一部の実施形態では、かかるＶＨドメインおよびＶＬドメインを使用して、４つのポリペプチド鎖を含む二重特異性抗体を構築したが、（ｉ）ポリペプチド鎖１は、ＶＬドメイン（例えば、Ｃ４０ ＶＬ、Ｃ５６ ＶＬ、またはＣ５９ ＶＬ）を含み、ポリペプチド鎖２は、ＶＨドメイン（例えば、Ｃ４０ ＶＨ、Ｃ５６ ＶＨ、またはＣ５９ ＶＨ）を含み、ＶＬドメインとＶＨドメインとは、ＣＤ４７に結合する第１の結合ドメインを形成する、かつ（ｉｉ）ポリペプチド鎖３は、ＶＬドメイン（例えば、Ｐ２２ ＶＬ、Ｐ２４ ＶＬ、またはＰ３１．２ ＶＬ）を含み、ポリペプチド鎖４は、ＶＨドメイン（例えば、Ｐ２２ ＶＨ、Ｐ２４ ＶＨ、またはＰ３１．２ ＶＨ）を含み、ＶＬドメインとＶＨドメインとは、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合ドメインを形成する。
第１の一連の実施形態では、ＣＤ４７×ＰＤ－Ｌ１結合性作用剤（例えば、抗体）は、第１、第２、第３、および第４のポリペプチド鎖を有し、（ａ）第１のポリペプチド鎖は、ドメインＡ、ドメインＢ、ドメインＤ、およびドメインＥを含み、これらのドメインは、Ｎ末端からＣ末端に、Ａ－Ｂ－Ｄ－Ｅ配向で整列され、ドメインＡは、第１のＶＬアミノ酸配列（例えば、Ｃ４０ ＶＬについて配列番号２６、Ｃ５６ ＶＬについて配列番号５２、Ｃ５９ ＶＬについて配列番号７８）を有し、ドメインＢは、Ｔ３６６Ｋ突然変異とＩｇＧ１ヒンジ領域のＤＫＴＨＴモチーフが後に続くＫＳＣトリペプチド配列を取り込むＣ末端伸長とを有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ３アミノ酸配列を有し、ドメインＤは、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２アミノ酸配列を有し、ドメインＥは、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗ突然変異を有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ３アミノ酸を有する；（ｂ）第２のポリペプチド鎖は、ドメインＦおよびドメインＧを有し、これらのドメインは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｆ－Ｇ配向で整列され、ドメインＦは、第１のＶＨアミノ酸配列（例えば、Ｃ４０ ＶＨについて配列番号２５、Ｃ５６ ＶＨについて配列番号５１、Ｃ５９ ＶＨについて配列番号７７）を有し、ドメインＧは、Ｌ３５１Ｄ突然変異とＧＥＣアミノ酸ジスルフィドモチーフを取り込むＣ末端伸長とを有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ３アミノ酸配列を有する；（ｃ）第３のポリペプチド鎖は、ドメインＨ、ドメインＩ、ドメインＪ、およびドメインＫを有し、これらのドメインは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｈ－Ｉ－Ｊ－Ｋ配向で整列され、ドメインＨは、第２のＶＬアミノ酸配列（例えば、Ｐ２２ ＶＬについて配列番号１０４、Ｐ２４ ＶＬについて配列番号１３０、Ｐ３１．２ ＶＬについて配列番号１５６）を有し、ドメインＩは、ヒトＣＬカッパアミノ酸配列を有し、ドメインＪは、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２アミノ酸配列を有し、Ｋは、Ｙ３４９Ｃ、Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖ突然変異を有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ３アミノ酸配列を有する；（ｄ）第４のポリペプチド鎖は、ドメインＬおよびドメインＭを有し、これらのドメインは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｌ－Ｍ配向で整列され、ドメインＬは、第２のＶＨアミノ酸配列（例えば、Ｐ２２ ＶＨについて配列番号１０３、Ｐ２４ ＶＨについて配列番号１２９、Ｐ３１．２ ＶＨについて配列番号１５５）を有し、ドメインＭは、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１アミノ酸配列を有する；（ｅ）第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとは、ＡドメインとＦドメインとの間の相互作用およびＢドメインとＧドメインとの間の相互作用を介して会合する；（ｆ）第３のポリペプチドと第４のポリペプチドとは、ＨドメインとＬドメインとの間の相互作用およびＩドメインとＭドメインとの間の相互作用を介して会合する；（ｇ）第１のポリペプチドと第３のポリペプチドとは、ＤドメインとＪドメインとの間の相互作用およびＥドメインとＫドメインとの間の相互作用を介して会合して、二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）を形成する；（ｈ）ドメインＡとドメインＦとは、ＣＤ４７に結合する第１の結合ドメインを形成する；ならびに（ｉ）ドメインＨとドメインＬとは、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合ドメインを形成する。
かかる４ポリペプチド鎖形式は、ＢＣ１ Ｂ－Ｂｏｄｙ形式と称される：
第１のポリペプチド鎖：
ドメインＡ＝標的１（例えば、ＣＤ４７）ＶＬ
ドメインＢ＝ＣＨ３（Ｔ３６６Ｋ；４４５Ｋ、４４６Ｓ、４４７Ｃトリペプチド挿入）
ドメインＤ＝ＣＨ２
ドメインＥ＝ＣＨ３（Ｔ３６６Ｗ、Ｓ３５４Ｃ）
第２のポリペプチド鎖：
ドメインＦ＝標的１（例えば、ＣＤ４７）ＶＨ
ドメインＧ＝ＣＨ３（Ｌ３５１Ｄ；４４５Ｇ、４４６Ｅ、４４７Ｃトリペプチド挿入）
第３のポリペプチド鎖：
ドメインＨ＝標的２（例えば、ＰＤ－Ｌ１）ＶＬ
ドメインＩ＝ＣＬ
ドメインＪ＝ＣＨ２
ドメインＫ＝ＣＨ３（Ｙ３４９Ｃ、Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ）
第４のポリペプチド鎖：
ドメインＬ＝標的２（例えば、ＰＤ－Ｌ１）ＶＨ
ドメインＭ＝ＣＨ１
＞ＢＣ１鎖１
ドメイン整列：
Ａ－Ｂ－ヒンジ－Ｄ－Ｅ
ＶＬ－ＣＨ３－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（ノブ）
第１のＣＨ３（ドメインＢ）中の突然変異：
Ｔ３６６Ｋ；４４５Ｋ、４４６Ｓ、４４７Ｃ挿入
第２のＣＨ３（ドメインＥ）中の突然変異：
Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ
＞ＢＣ１鎖２
ドメイン整列：
Ｆ－Ｇ
ＶＨ－ＣＨ３
ＣＨ３（ドメインＧ）中の突然変異：
Ｌ３５１Ｄ；４４５Ｇ、４４６Ｅ、４４７Ｃ挿入
＞ＢＣ１鎖３
ドメイン整列：
Ｈ－Ｉ－ヒンジ－Ｊ－Ｋ
ＶＬ－ＣＬ－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（ホール）
ＣＨ３（ドメインＫ）中の突然変異：
Ｙ３４９Ｃ、Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ
＞ＢＣ１鎖４
ドメイン整列：
Ｌ－Ｍ
ＶＨ－ＣＨ１
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５７の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５８の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５９の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６０の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６９の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７０の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５７の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５８の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６１の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６２の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６９の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７１の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５７の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５８の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６３の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６４の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６９の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７２の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６５の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６６の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５９の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６０の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７３の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７０の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６５の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６６の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６１の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６２の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７３の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７１の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６５の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６６の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６３の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６４の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７３の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７２の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６７の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６８の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５９の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６０の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７４の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７０の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６７の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６８の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６１の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６２の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７４の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７１の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６７の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６８の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６３の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６４の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７４の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７２の配列を有する。
第２の一連の実施形態では、ＣＤ４７×ＰＤ－Ｌ１結合性作用剤（例えば、抗体）は、第１、第２、第３、および第４のポリペプチド鎖を有し、（ａ）第１のポリペプチド鎖が、ドメインＡ、ドメインＢ、ドメインＤ、およびドメインＥを含み、ドメインが、Ｎ末端からＣ末端に、Ａ－Ｂ－Ｄ－Ｅの方向で配置され、ドメインＡが、第１のＶＬアミノ酸配列（例えば、Ｃ４０ ＶＬについて配列番号２６、Ｃ５６ ＶＬについて配列番号５２、Ｃ５９ ＶＬについて配列番号７８）を有し、ドメインＢが、Ｙ３４９Ｃ突然変異、Ｐ３４３Ｖ突然変異、およびＩｇＧ１ヒンジ領域のＤＫＴＨＴモチーフが続くＰＧＫトリペプチド配列を組み込むＣ末端伸長を有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ３アミノ酸配列を有し、ドメインＤが、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２アミノ酸配列を有し、ドメインＥが、Ｓ３５４Ｃ突然変異およびＴ３６６Ｗ突然変異を有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ３アミノ酸を有し；（ｂ）第２のポリペプチド鎖が、ドメインＦおよびドメインＧを有し、ドメインが、Ｎ末端からＣ末端に、Ｆ－Ｇの方向で配置され、ドメインＦが、第１のＶＨアミノ酸配列（例えば、Ｃ４０ ＶＨについて配列番号２５、Ｃ５６ ＶＨについて配列番号５１、Ｃ５９ ＶＨについて配列番号７７）を有し、ドメインＧが、Ｓ３５４Ｃ突然変異およびＰＧＫトリペプチド配列を組み込むＣ末端伸長を有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ３アミノ酸配列を有し；（ｃ）第３のポリペプチド鎖が、ドメインＨ、ドメインＩ、ドメインＪ、およびドメインＫを有し、ドメインが、Ｎ末端からＣ末端に、Ｈ－Ｉ－Ｊ－Ｋの方向で配置され、ドメインＨが、第２のＶＬアミノ酸配列（例えば、Ｐ２２ ＶＬについて配列番号１０４、Ｐ２４ ＶＬについて配列番号１３０、Ｐ３１．２ ＶＬについて配列番号１５６）を有し、ドメインＩが、ヒトＣＬカッパアミノ酸配列を有し、ドメインＪが、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ２アミノ酸配列を有し、Ｋが、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖを有するヒトＩｇＧ１ ＣＨ３アミノ酸配列を有し；（ｄ）第４のポリペプチド鎖が、ドメインＬおよびドメインＭを有し、ドメインが、Ｎ末端からＣ末端に、Ｌ－Ｍの方向で配置され、ドメインＬが、第２のＶＨアミノ酸配列（例えば、Ｐ２２ ＶＨについて配列番号１０３、Ｐ２４ ＶＨについて配列番号１２９、Ｐ３１．２ ＶＨについて配列番号１５５）を有し、ドメインＭが、ヒトＩｇＧ１アミノ酸配列を有し；（ｅ）第１および第２のポリペプチドが、ＡおよびＦドメインの間の相互作用、ならびにＢおよびＧドメインの間の相互作用を通して会合し；（ｆ）第３および第４のポリペプチドが、ＨおよびＬドメインの間の相互作用、ならびにＩおよびＭドメインの間の相互作用を通して会合し；（ｇ）第１および第３のポリペプチドが、ＤおよびＪドメインの間の相互作用、ならびにＥおよびＫドメインの間の相互作用を通して会合して、二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）を形成し；（ｈ）ドメインＡおよびドメインＦが、ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを形成し；（ｉ）ドメインＨおよびドメインＬが、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを形成する。
そのような４つのポリペプチド鎖フォーマットは、ＢＣ４４ Ｂボディフォーマットと称される。
第１のポリペプチド鎖
ドメインＡ＝標的１（例えば、ＣＤ４７）ＶＬ
ドメインＢ＝ＣＨ３（Ｐ３４３Ｖ；Ｙ３４９Ｃ；４４５Ｐ、４４６Ｇ、４４７Ｋ挿入）
ドメインＤ＝ＣＨ２
ドメインＥ＝ＣＨ３（Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ）
第２のポリペプチド鎖
ドメインＦ＝標的１（例えば、ＣＤ４７）ＶＨ
ドメインＧ＝ＣＨ３（Ｓ３５４Ｃ；４４５Ｐ、４４６Ｇ、４４７Ｋ挿入）
第３のポリペプチド鎖
ドメインＨ＝標的２（例えば、ＰＤ－Ｌ１）ＶＬ
ドメインＩ＝ＣＬ（カッパ）
ドメインＪ＝ＣＨ２
ドメインＫ＝ＣＨ３（Ｙ３４９Ｃ、Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ）
第４のポリペプチド鎖
ドメインＬ＝標的２（例えば、ＰＤ－Ｌ１）ＶＨ
ドメインＭ＝ＣＨ１。
＞ＢＣ４４鎖１
ドメイン配置：
Ａ－Ｂ－ヒンジ－Ｄ－Ｅ
ＶＬ－ＣＨ３－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（ノブ）
第１のＣＨ３（ドメインＢ）における突然変異：
Ｐ３４３Ｖ；Ｙ３４９Ｃ；４４５Ｐ、４４６Ｇ、４４７Ｋ挿入
第２のＣＨ３（ドメインＥ）における突然変異：
Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ
＞ＢＣ４４鎖２
ドメイン配置：
Ｆ－Ｇ
ＶＨ－ＣＨ３
ＣＨ３（ドメインＧ）における突然変異：
Ｓ３５４Ｃ；４４５Ｐ、４４６Ｇ、４４７Ｋ挿入
＞ＢＣ４４鎖３
ドメイン配置：
Ｈ－Ｉ－ヒンジ－Ｊ－Ｋ
ＶＬ－ＣＬ－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（ホール）
ＣＨ３（ドメインＫ）における突然変異：
Ｙ３４９Ｃ、Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ
＞ＢＣ４４鎖４
ドメイン配置：
Ｌ－Ｍ
ＶＨ－ＣＨ１
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７５の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７６の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５９の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６０の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８１の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７０の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７５の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７６の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６１の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６２の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８１の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７１の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７５の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７６の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６３の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６４の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８１の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７２の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７７の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７８の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５９の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６０の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８２の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７０の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７７の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７８の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６１の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６２の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８２の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７１の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７７の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７８の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６３の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６４の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８２の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７２の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７９の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８０の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５９の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６０の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８３の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７０の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７９の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８０の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６１の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６２の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８３の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７１の配列を有する。
二重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の例示的な実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７９の配列を有し、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８０の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６３の配列を有し、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６４の配列を有する。あるいは、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８３の配列を有し、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７２の配列を有する。
表1:抗体C40
表2:抗体C56
表3:抗体C59
表4:抗体P22
表5:抗体P24
表6:抗体P31.2
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する第２の結合性ドメインを含み、第１の結合性ドメインおよび／または第２の結合性ドメインは、ＶＨ領域またはＶＨドメインを含む。他の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する第２の結合性ドメインを含み、第１の結合性ドメインおよび／または第２の結合性ドメインは、ＶＬ領域またはＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する第２の結合性ドメインを含み、第１の結合性ドメインおよび／または第２の結合性ドメインは、（ｉ）ＶＨドメインもしくはＶＨ領域、および／または（ｉｉ）ＶＬドメインもしくはＶＬ領域を有する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、（ｉ）ＶＨドメインまたはＶＨ領域と、（ｉｉ）ＶＬドメインまたはＶＬ領域との組合せを有する。例えば、例示的な二重特異性ＩｇＧ抗体は、（ｉ）本明細書に記載のＶＨドメインまたはＶＨ領域と、１つまたは複数の重鎖定常ドメインまたは定常領域（例えば、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３）との組合せを有する重鎖、および（ｉｉ）本明細書に記載のＶＬドメインまたはＶＬ領域と、軽鎖定常ドメインまたは定常領域（ＣＬ）との組合せを有する軽鎖を含む。例示的なＩｇＧ重鎖は、本明細書に記載の任意のＶＨドメイン、ならびに以下のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３アミノ酸配列：
Figure 2023536631000017
 を含む。
別の例示的なＩｇＧ重鎖は、本明細書に記載の任意のＶＨドメイン、ならびに以下のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３アミノ酸配列：
Figure 2023536631000018
 を含む。
例示的な軽鎖（例えば、ＩｇＧ重鎖と対形成するための）は、本明細書に記載の任意のＶＬドメイン、および以下のＣＬアミノ酸配列：
Figure 2023536631000019
 を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する第２の結合性ドメインを含み、第１の結合性ドメインは、６つのＣＤＲ、例えば、表１において識別されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する第２の結合性ドメインを含み、第１の結合性ドメインは、６つのＣＤＲ、例えば、表２において識別されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する第２の結合性ドメインを含み、第１の結合性ドメインは、６つのＣＤＲ、例えば、表３において識別されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する第２の結合性ドメインを含み、第１の結合性ドメインは、６つのＣＤＲ、例えば、表１、表２および／または表３において識別されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＶＨ ＣＤＲ、例えば、表１に列挙されているＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第１の結合性ドメインを含む。他の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＣＤＲ、例えば、表１に列挙されているＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第１の結合性ドメインを含む。さらに他の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＶＨ ＣＤＲ、例えば、表１に列挙されているＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲ、ならびに３つのＶＬ ＣＤＲ、例えば、表１に列挙されているＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第１の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＶＨ ＣＤＲ、例えば、表２に列挙されているＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第１の結合性ドメインを含む。他の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＣＤＲ、例えば、表２に列挙されているＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第１の結合性ドメインを含む。さらに他の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＶＨ ＣＤＲ、例えば、表２に列挙されているＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲ、ならびに３つのＶＬ ＣＤＲ、例えば、表２に列挙されているＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第１の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＶＨ ＣＤＲ、例えば、表３に列挙されているＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第１の結合性ドメインを含む。他の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＣＤＲ、例えば、表３に列挙されているＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第１の結合性ドメインを含む。さらに他の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＶＨ ＣＤＲ、例えば、表３に列挙されているＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲ、ならびに３つのＶＬ ＣＤＲ、例えば、表３に列挙されているＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第１の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＶＨ ＣＤＲ、例えば、表４に列挙されているＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第２の結合性ドメインを含む。他の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＣＤＲ、例えば、表４に列挙されているＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第２の結合性ドメインを含む。さらに他の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＶＨ ＣＤＲ、例えば、表４に列挙されているＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲ、ならびに３つのＶＬ ＣＤＲ、例えば、表４に列挙されているＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第２の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＶＨ ＣＤＲ、例えば、表５に列挙されているＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第２の結合性ドメインを含む。他の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＣＤＲ、例えば、表５に列挙されているＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第２の結合性ドメインを含む。さらに他の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＶＨ ＣＤＲ、例えば、表５に列挙されているＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲ、ならびに３つのＶＬ ＣＤＲ、例えば、表５に列挙されているＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第２の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＶＨ ＣＤＲ、例えば、表６に列挙されているＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第２の結合性ドメインを含む。他の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＣＤＲ、例えば、表６に列挙されているＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第２の結合性ドメインを含む。さらに他の実施形態では、本明細書に記載の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、３つのＶＨ ＣＤＲ、例えば、表６に列挙されているＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲ、ならびに３つのＶＬ ＣＤＲ、例えば、表６に列挙されているＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含めた、１つまたは複数のＣＤＲを含む第２の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、配列番号１～２４、２７～５０、および５３～７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、第１の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、配列番号１～２４、２７～５０、および５３～７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む２つまたはそれよりも多くの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、第１の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、配列番号１～２４、２７～５０、および５３～７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む３つまたはそれよりも多くの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、第１の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、配列番号７９～１０２、１０５～１２８、および１３１～１５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、配列番号７９～１０２、１０５～１２８、および１３１～１５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む２つまたはそれよりも多くの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、配列番号７９～１０２、１０５～１２８、および１３１～１５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む３つまたはそれよりも多くの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、第２の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、表１～３に列挙されている１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＶＨ ＣＤＲを有するＶＨを含む、第１の結合性ドメインを含む。他の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、表１～３に列挙されている１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＶＬ ＣＤＲを有するＶＬを含む、第１の結合性ドメインを含む。さらに他の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、表１～３に列挙されている１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＶＨ ＣＤＲ、および表１～３に列挙されている１つまたは複数のＶＬ ＣＤＲを含む、第１の結合性ドメインを含む。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１を含む、第１の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２を含む、第１の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む、第１の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、表１～３に示されるアミノ酸配列のいずれか１つで示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３から独立して選択されるＶＨ ＣＤＲ１および／またはＶＨ ＣＤＲ２および／またはＶＨ ＣＤＲ３を含む、第１の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１を含む、第１の結合性ドメインを含む。別の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２を含む、第１の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む、第１の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、表１～３に示されるアミノ酸配列のいずれか１つで示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３から独立して選択されるＶＬ ＣＤＲ１および／またはＶＬ ＣＤＲ２および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含む、第１の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、表４～６に列挙されている１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＶＨ ＣＤＲを有するＶＨを含む、第２の結合性ドメインを含む。他の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、表４～６に列挙されている１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＶＬ ＣＤＲを有するＶＬを含む、第２の結合性ドメインを含む。さらに他の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、表４～６に列挙されている１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＶＨ ＣＤＲ、および表４～６に列挙されている１つまたは複数のＶＬ ＣＤＲを含む、第２の結合性ドメインを含む。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、および１４８のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１を含む、第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、４４、１４９、および１５４のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２を含む、第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、および１５０のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む、第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、表４～６に示されるアミノ酸配列のいずれか１つで示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３から独立して選択されるＶＨ ＣＤＲ１および／またはＶＨ ＣＤＲ２および／またはＶＨ ＣＤＲ３を含む、第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、および１５１のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１を含む、第２の結合性ドメインを含む。別の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、および１５２のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２を含む、第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、および１５３のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む、第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、表４～６に示されるアミノ酸配列のいずれか１つで示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３から独立して選択されるＶＬ ＣＤＲ１および／またはＶＬ ＣＤＲ２および／またはＶＬ ＣＤＲ３を含む、第２の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、（１）（ｉ）配列番号１、２７、もしくは５３、（ｉｉ）配列番号７、３３、もしくは５９、（ｉｉｉ）配列番号１２、３８、もしくは６４、（ｉｖ）配列番号１３、３９、もしくは６５、および（ｖ）配列番号１８、４４、もしくは７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号２、２８、もしくは５４、（ｉｉ）配列番号８、３４、もしくは６０、（ｉｉｉ）配列番号１４、４０、もしくは６６、（ｉｖ）配列番号１９、４５、もしくは７１、および（ｖ）配列番号２４、５０、もしくは７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；ならびに（３）（ｉ）配列番号３、２９、もしくは５５、（ｉｉ）配列番号９、３５、もしくは６１、（ｉｉｉ）配列番号１５、４１、もしくは６７、および（ｉｖ）配列番号２０、４６、もしくは７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、かつ／または（１）（ｉ）配列番号４、３０、もしくは５６、（ｉｉ）配列番号１０、３６、もしくは６２、（ｉｉｉ）配列番号１６、４２、もしくは６８、および（ｉｖ）配列番号２１、４７、もしくは７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号５、３１、もしくは５７、（ｉｉ）配列番号１１、３７、もしくは６３、および（ｉｉｉ）配列番号２２、４８、もしくは７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに（３）（ｉ）配列番号６、３２、もしくは５８、（ｉｉ）配列番号１７、４３、もしくは６９、および（ｉｉｉ）配列番号２３、４９、もしくは７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む、第１の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、（１）（ｉ）配列番号１、２７、または５３、（ｉｉ）配列番号７、３３、または５９、（ｉｉｉ）配列番号１２、３８、または６４、（ｉｖ）配列番号１３、３９、または６５、および（ｖ）配列番号１８、４４、または７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号２、２８、または５４、（ｉｉ）配列番号８、３４、または６０、（ｉｉｉ）配列番号１４、４０、または６６、（ｉｖ）配列番号１９、４５、または７１、および（ｖ）配列番号２４、５０、または７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；ならびに（３）（ｉ）配列番号３、２９、または５５、（ｉｉ）配列番号９、３５、または６１、（ｉｉｉ）配列番号１５、４１、または６７、および（ｉｖ）配列番号２０、４６、または７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、第１の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、（１）（ｉ）配列番号４、３０、または５６、（ｉｉ）配列番号１０、３６、または６２、（ｉｉｉ）配列番号１６、４２、または６８、および（ｉｖ）配列番号２１、４７、または７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号５、３１、または５７、（ｉｉ）配列番号１１、３７、または６３、および（ｉｉｉ）配列番号２２、４８、または７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに（３）（ｉ）配列番号６、３２、または５８、（ｉｉ）配列番号１７、４３、または６９、および（ｉｉｉ）配列番号２３、４９、または７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、第１の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、（ａ）（１）（ｉ）配列番号７９、１０５、もしくは１３１、（ｉｉ）配列番号８５、１１１、もしくは１３７、（ｉｉｉ）配列番号９０、１１６、もしくは１４２、（ｉｖ）配列番号９１、１１７、もしくは１４３、（ｖ）配列番号９６、１２２、もしくは１４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号８０、１０６、もしくは１３２、（ｉｉ）配列番号８６、１１２、もしくは１３８、（ｉｉｉ）配列番号９２、１１８、もしくは１４４、（ｉｖ）配列番号９７、１２３、もしくは１４９、（ｖ）配列番号１０２、１２８、もしくは１５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；および（３）（ｉ）配列番号８１、１０７、もしくは１３３、（ｉｉ）配列番号８７、１１３、もしくは１３９、（ｉｉｉ）配列番号９３、１１９、もしくは１４５、（ｉｖ）配列番号９８、１２４、もしくは１５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、かつ／または（ｂ）（１）（ｉ）配列番号８２、１０８、もしくは１３４、（ｉｉ）配列番号８８、１１４、もしくは１４０、（ｉｉｉ）配列番号９４、１２０、もしくは１４６、（ｉｖ）配列番号９９、１２５、もしくは１５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号８３、１０９、もしくは１３５、（ｉｉ）配列番号８９、１１５、もしくは１４１、（ｉｉｉ）配列番号１００、１２６、もしくは１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；（３）（ｉ）配列番号８４、１１０、もしくは１３６、（ｉｉ）配列番号９５、１２１、もしくは１４７、（ｉｉｉ）配列番号１０１、１２７、もしくは１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む、第２の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、（１）（ｉ）配列番号７９、１０５、または１３１、（ｉｉ）配列番号８５、１１、１、または１３７、（ｉｉｉ）配列番号９０、１１６、または１４２、（ｉｖ）配列番号９１、１１７、または１４３、（ｖ）配列番号９６、１２２、または１４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号８０、１０６、または１３２、（ｉｉ）配列番号８６、１１２、または１３８、（ｉｉｉ）配列番号９２、１１８、または１４４、（ｉｖ）配列番号９７、１２３、または１４９、（ｖ）配列番号１０２、１２８、または１５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；および（３）（ｉ）配列番号８１、１０７、または１３３、（ｉｉ）配列番号８７、１１３、または１３９、（ｉｉｉ）配列番号９３、１１９、または１４５、（ｉｖ）配列番号９８、１２４、または１５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、第２の結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、（１）（ｉ）配列番号８２、１０８、または１３４、（ｉｉ）配列番号８８、１１４、または１４０、（ｉｉｉ）配列番号９４、１２０、または１４６、（ｉｖ）配列番号９９、１２５、または１５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号８３、１０９、または１３５、（ｉｉ）配列番号８９、１１５、または１４１、（ｉｉｉ）配列番号１００、１２６、または１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；（３）（ｉ）配列番号８４、１１０、または１３６、（ｉｉ）配列番号９５、１２１、または１４７、（ｉｉｉ）配列番号１０１、１２７、または１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、第２の結合性ドメインを含む。
ＣＤ４７に結合し、表１～３に列挙されている１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＶＨ ＣＤＲおよび１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＶＬ ＣＤＲを含む、第１の結合性ドメインを含む多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）も本明細書に記載されている。特に、以下を含む多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体などの抗体）が本明細書に記載されている：ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）およびＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）およびＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）およびＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）；ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）；ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）およびＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）およびＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）；ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）およびＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、

１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）、およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、および７０）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）、およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、および７６）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、および７３）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、および７４）、およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）；または表１～３に列挙されているＶＨ ＣＤＲ（配列番号１、７、１２、１３、１８、２７、３３、３８、３９、４４、５３、５９、６４、６５、７０、２、８、１４、１９、２４、２８、３４、４０、４５、５０、５４、６０、６６、７１、７６、３、９、１５、２０、２９、３５、４１、４６、５５、６１、６７、および７２）およびＶＬ ＣＤＲ（配列番号４、１０、１６、２１、３０、３６、４２、４７、５６、６２、６８、７３、５、１１、２２、３１、３７、４８、５７、６３、７４、６、１７、２３、３２、４３、４９、５８、６９、および７５）のそれらの任意の組合せ。
ＰＤ－Ｌ１に結合し、表４～６に列挙されている１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＶＨ ＣＤＲおよび１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、または３つ）のＶＬ ＣＤＲを含む、第２の結合性ドメインを含む多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）も本明細書に記載されている。特に、以下を含む多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）が本明細書に記載されている：ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）およびＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）およびＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）およびＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）；ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）；ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）およびＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）およびＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）；ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）およびＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ Ｃ

ＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）、およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ１（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、または１４８）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）、およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；ＶＨ ＣＤＲ２（配列番号８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、または１５４）、ＶＨ ＣＤＲ３（配列番号８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）、ＶＬ ＣＤＲ１（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、または１５１）、ＶＬ ＣＤＲ２（配列番号８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、または１５２）、およびＶＬ ＣＤＲ３（配列番号８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）；または表４～６に列挙されているＶＨ ＣＤＲ（配列番号７９、８５、９０、９１、９６、１０５、１１、１１６、１１７、１２２、１３１、１３７、１４２、１４３、１４８、８０、８６、９２、９７、１０２、１０６、１１２、１１８、１２３、１２８、１３２、１３８、１４４、１４９、１５４、８１、８７、９３、９８、１０７、１１３、１１９、１２４、１３３、１３９、１４５、または１５０）およびＶＬ ＣＤＲ（配列番号８２、８８、９４、９９、１０８、１１４、１２０、１２５、１３４、１４０、１４６、１５１、８３、８９、１００、１０９、１１５、１２６、１３５、１４１、１５２、８４、９５、１０１、１１０、１２１、１２７、１３６、１４７、または１５３）のそれらの任意の組合せ。
一部の実施形態では、ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、第１の結合性ドメインが、（ａ）（１）（ｉ）配列番号１、２７、または５３、（ｉｉ）配列番号７、３３、または５９、（ｉｉｉ）配列番号１２、３８、または６４、（ｉｖ）配列番号１３、３９、または６５、および（ｖ）配列番号１８、４４、または７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号２、２８、または５４、（ｉｉ）配列番号８、３４、または６０、（ｉｉｉ）配列番号１４、４０、または６６、（ｉｖ）配列番号１９、４５、または７１、および（ｖ）配列番号２４、５０、または７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；ならびに（３）（ｉ）配列番号３、２９、または５５、（ｉｉ）配列番号９、３５、または６１、（ｉｉｉ）配列番号１５、４１、または６７、および（ｉｖ）配列番号２０、４６、または７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）（ｉ）配列番号４、３０、または５６、（ｉｉ）配列番号１０、３６、または６２、（ｉｉｉ）配列番号１６、４２、または６８、および（ｉｖ）配列番号２１、４７、または７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号５、３１、または５７、（ｉｉ）配列番号１１、３７、または６３、および（ｉｉｉ）配列番号２２、４８、または７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに（３）（ｉ）配列番号６、３２、または５８、（ｉｉ）配列番号１７、４３、または６９、および（ｉｉｉ）配列番号２３、４９、または７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む、多重特異性抗体またはその断片が本明細書に記載されている。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体または断片は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）（ｉ）配列番号７９、１０５、または１３１、（ｉｉ）配列番号８５、１１１、または１３７、（ｉｉｉ）配列番号９０、１１６、または１４２、（ｉｖ）配列番号９１、１１７、または１４３、および（ｖ）配列番号９６、１２２、または１４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号８０、１０６、または１３２、（ｉｉ）配列番号８６、１１２、または１３８、（ｉｉｉ）配列番号９２、１１８、または１４４、（ｉｖ）配列番号９７、１２３、または１４９、および（ｖ）配列番号１０２、１２８、または１５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；ならびに（３）（ｉ）配列番号８１、１０７、または１３３、（ｉｉ）配列番号８７、１１３、または１３９、（ｉｉｉ）配列番号９３、１１９、または１４５、（ｉｖ）配列番号９８、１２４、または１５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）（ｉ）配列番号８２、１０８、または１３４、（ｉｉ）配列番号８８、１１４、または１４０、（ｉｉｉ）配列番号９４、１２０、または１４６、および（ｉｖ）配列番号９９、１２５、または１５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号８３、１０９、または１３５、（ｉｉ）配列番号８９、１１５、または１４１、および（ｉｉｉ）配列番号１００、１２６、または１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに（３）（ｉ）配列番号８４、１１０、または１３６、（ｉｉ）配列番号９５、１２１、または１４７、（ｉｉｉ）配列番号１０１、１２７、または１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、第１の結合性ドメインが、（１）（ｉ）配列番号１、２７、または５３、（ｉｉ）配列番号７、３３、または５９、（ｉｉｉ）配列番号１２、３８、または６４、（ｉｖ）配列番号１３、３９、または６５、および（ｖ）配列番号１８、４４、または７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号２、２８、または５４、（ｉｉ）配列番号８、３４、または６０、（ｉｉｉ）配列番号１４、４０、または６６、（ｉｖ）配列番号１９、４５、または７１、および（ｖ）配列番号２４、５０、または７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；ならびに（３）（ｉ）配列番号３、２９、または５５、（ｉｉ）配列番号９、３５、または６１、（ｉｉｉ）配列番号１５、４１、または６７、および（ｉｖ）配列番号２０、４６、または７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、多重特異性抗体またはその断片が本明細書に記載されている。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体またはその断片は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）（ｉ）配列番号７９、１０５、または１３１、（ｉｉ）配列番号８５、１１１、または１３７、（ｉｉｉ）配列番号９０、１１６、または１４２、（ｉｖ）配列番号９１、１１７、または１４３、および（ｖ）配列番号９６、１２２、または１４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号８０、１０６、または１３２、（ｉｉ）配列番号８６、１１２、または１３８、（ｉｉｉ）配列番号９２、１１８、または１４４、（ｉｖ）配列番号９７、１２３、または１４９、および（ｖ）配列番号１０２、１２８、または１５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；ならびに（３）（ｉ）配列番号８１、１０７、または１３３、（ｉｉ）配列番号８７、１１３、または１３９、（ｉｉｉ）配列番号９３、１１９、または１４５、および（ｉｖ）配列番号９８、１２４、または１５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。
一部の実施形態では、ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、第１の結合性ドメインが、（１）（ｉ）配列番号４、３０、または５６、（ｉｉ）配列番号１０、３６、または６２、（ｉｉｉ）配列番号１６、４２、または６８、および（ｉｖ）配列番号２１、４７、または７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号５、３１、または５７、（ｉｉ）配列番号１１、３７、または６３、および（ｉｉｉ）配列番号２２、４８、または７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；（３）（ｉ）配列番号６、３２、または５８、（ｉｉ）配列番号１７、４３、または６９、および（ｉｉｉ）配列番号２３、４９、または７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、多重特異性抗体またはその断片が本明細書に記載されている。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体またはその断片は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）（ｉ）配列番号８２、１０８、または１３４、（ｉｉ）配列番号８８、１１４、または１４０、（ｉｉｉ）配列番号９４、１２０、または１４６、および（ｉｖ）配列番号９９、１２５、または１５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；（２）（ｉ）配列番号８３、１０９、または１３５、（ｉｉ）配列番号８９、１１５、または１４１、および（ｉｉｉ）配列番号１００、１２６、または１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに（３）（ｉ）配列番号８４、１１０、または１３６、（ｉｉ）配列番号９５、１２１、または１４７、（ｉｉｉ）配列番号１０１、１２７、または１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
一部の実施形態では、ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、第１の結合性ドメインが、配列番号２５であるＶＨ配列および配列番号２６であるＶＬ配列を含む、Ｃ４０と称される抗体からの；配列番号５１であるＶＨ配列および配列番号５２であるＶＬ配列を含む、Ｃ５６と称される抗体からの；または配列番号７７であるＶＨ配列および配列番号７８であるＶＬ配列を含む、Ｃ５９と称される抗体からの３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）全てまたは３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、多重特異性抗体またはその断片が本明細書に記載されている。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、配列番号１０３であるＶＨ配列および配列番号１０４であるＶＬ配列を含む、Ｐ２２と称される抗体からの；配列番号１２９であるＶＨ配列および配列番号１３０であるＶＬ配列を含む、Ｐ２４と称される抗体からの；または配列番号１５５であるＶＨ配列および配列番号１５６であるＶＬ配列を含む、Ｐ３１．２と称される抗体からの３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）全てまたは３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む。
一部の実施形態では、ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、第１の結合性ドメインが、Ｃ４０と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび／または３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、多重特異性抗体またはその断片が本明細書に記載されている。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体またはその断片は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、Ｐ２２と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、Ｐ２４と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、Ｐ３１．２と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む。
一部の実施形態では、ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、第１の結合性ドメインが、Ｃ５６と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全てまたは３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、多重特異性抗体またはその断片が本明細書に記載されている。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体またはその断片は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、Ｐ２２と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、Ｐ２４と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、Ｐ３１．２と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む。
一部の実施形態では、ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、第１の結合性ドメインが、Ｃ５９と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全てまたは３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、多重特異性抗体またはその断片が本明細書に記載されている。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体またはその断片は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、Ｐ２２と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、Ｐ２４と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、Ｐ３１．２と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む。
一部の実施形態では、ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、第１の結合性ドメインが、（ａ）表１～３に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、または（ｂ）表１～３に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、多重特異性抗体またはその断片が本明細書に記載されている。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）表１～３に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、ならびに（ｂ）表１～３に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体またはその断片は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）表４～６に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、ならびに／または（ｂ）表４～６に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、表１～３に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体またはその断片は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、表４～６に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、表１～３に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、多重特異性抗体またはその断片は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、表４～６に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
一部の実施形態では、ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、第１の結合性ドメインが、（ａ）（１）配列番号１、７、１２、１３、および１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号２、８、１４、１９、および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、ならびに（３）配列番号３、９、１５、および２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号４、１０、１６、および２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号５、１１、および２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、ならびに（３）配列番号６、１７、および２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む、多重特異性抗体またはその断片が本明細書に記載されている。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１１１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１１４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１４０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１１６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１４２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号９２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号９５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１１７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１２０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１２８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１４３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１４５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１４６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可

変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号９８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号９９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１００のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１２２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１２３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１２６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１２７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１４８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１４９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１５１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１５２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１５３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１２８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１５４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、上記の多重特異性抗体またはその断片は、二重特異性抗体である。
一部の実施形態では、ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、第１の結合性ドメインが、（ａ）（１）配列番号２７、３３、３８、３９、および４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号２８、３４、４０、４５、および５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、ならびに（３）配列番号２９、３５、４１、および４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号３０、３６、４２、および４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号３１、３７、および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、ならびに（３）配列番号３２、４３、および４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む、多重特異性抗体またはその断片が本明細書に記載されている。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号４３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号４６のアミノ酸配

列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、上記の多重特異性抗体またはその断片は、二重特異性抗体である。
一部の実施形態では、ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、第１の結合性ドメインが、（ａ）（１）配列番号５３、５９、６４、６５、および７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号５４、６０、６６、７１、および７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、ならびに（３）配列番号５５、６１、６７、および７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号５６、６２、６８、および７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号５７、６３、および７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、ならびに（３）配列番号５８、６９、および７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む、多重特異性抗体またはその断片が本明細書に記載されている。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号７２のアミノ酸配

列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含み、一部の実施形態では、第１の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、第２の結合性ドメインは、（ａ）（１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、（ｂ）（１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、（２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および（３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む。一部の実施形態では、上記の多重特異性抗体またはその断片は、二重特異性抗体である。
一部の実施形態では、ヒトフレームワーク配列をさらに含む本明細書に記載のＶＨ領域および／またはＶＬ領域を含む多重特異性抗体が本明細書に記載されている。一部の実施形態では、ＶＨ領域および／またはＶＬ領域は、フレームワーク１（ＦＲ１）、フレームワーク２（ＦＲ２）、フレームワーク３（ＦＲ３）、および／またはフレームワーク４（ＦＲ４）配列をさらに含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性抗体は、モノクローナル抗体である。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはキメラ抗体である。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、単鎖抗体分子、二重可変領域抗体、単一可変領域抗体、線状抗体、Ｖ領域、または抗体断片から形成された多重特異性抗体である。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性抗体は、組換え抗体であり、これは、必要に応じて、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはキメラ抗体である。
一部の実施形態では、ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインについて本明細書に開示されるＣＤＲは、関連する抗体（例えば、表１～３を参照されたい）の群に由来するコンセンサス配列を含む。本明細書に記載の通り、「コンセンサス配列」は、いくつかの配列の間で共通する保存されたアミノ酸とよび所与のアミノ酸配列内で変動する可変アミノ酸とを有するアミノ酸配列を指す。提供されるＣＤＲコンセンサス配列は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２および／またはＣＤＲＬ３に対応するＣＤＲを含む。ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインに対する多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）のＣＤＲのコンセンサス配列を、図１６Ａおよび１６Ｂに示す。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＣＤ４７に結合し、（ａ）（１）アミノ酸配列ＧＦＴＦＸ１Ｘ２ＹＹＩＨ（配列番号１９４）（配列中、Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、天然に存在するアミノ酸である）を有するＶＨ ＣＤＲ１；（２）Ｘ１ＩＤＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＴＸ７ＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１９５）のアミノ酸配列（配列中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３ Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、およびＸ７は、それぞれ独立して、天然に存在するアミノ酸である）を有するＶＨ ＣＤＲ２；および（３）ＧＧＸ１Ｘ２ＡＸ３ＤＹ（配列番号１９６）のアミノ酸（配列中、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、それぞれ独立して、天然に存在するアミノ酸である）を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、かつ／または（ｂ）（１）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＡＶＡ（配列番号１９７）を有するＶＬ ＣＤＲ１；（２）アミノ酸配列ＳＡＳＳＬＹＳ（配列番号１９８）を有するＶＬ ＣＤＲ２；および（３）アミノ酸配列ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＬＸ５Ｔ（配列番号１９９）（配列中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５は、それぞれ独立して、天然に存在するアミノ酸である）を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む、第１の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤のＶＨ ＣＤＲ１は、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２ＹＹＩＨ（配列番号２１６）のアミノ酸配列（配列中、Ｘ１は、ＳまたはＴであり、Ｘ２は、ＹまたはＳである）を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤のＶＨ ＣＤＲ２は、Ｘ１ＩＤＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＴＸ７ＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２０６）のアミノ酸配列（配列中、Ｘ１は、Ｗ、ＦまたはＹであり、Ｘ２は、ＰまたはＳであり、Ｘ３は、ＹまたはＫであり、Ｘ４は、Ｇ、ＳまたはＨであり、Ｘ５は、ＨまたはＧであり、Ｘ６は、ＳまたはＴであり、Ｘ７は、Ｔ、ＥまたはＱである）を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤のＶＨ ＣＤＲ３は、ＧＧＸ１Ｘ２ＡＸ３ＤＹ（配列番号２０７）のアミノ酸配列（配列中、Ｘ１は、ＲまたはＬであり、Ｘ２は、Ｇ、ＹまたはＳであり、Ｘ３は、ＭまたはＬである）を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤のＶＬ ＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＡＶＡ（配列番号１９７）のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤のＶＬ ＣＤＲ２は、ＳＡＳＳＬＹＳ（配列番号１９８）のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤のＶＬ ＣＤＲ３は、ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＬＸ５Ｔ（配列番号２０８）のアミノ酸配列（配列中、Ｘ１は、ＲまたはＧであり、Ｘ２は、Ｙ、ＲまたはＴであり、Ｘ３は、ＳまたはＴであり、Ｘ４は、ＳまたはＤであり、Ｘ５は、ＬまたはＲである）を有する。
一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインについての多重特異性（multispecifc）結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）のＣＤＲのコンセンサス配列を、図１７Ａおよび１７Ｂに示す。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、二重特異性抗体などの抗体）は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、（ａ）（１）アミノ酸配列ＧＦＴＦＸ１Ｘ２ＹＹＩＨ（配列番号２００）（配列中、Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、天然に存在するアミノ酸である）を有するＶＨ ＣＤＲ１；（２）Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４ＧＸ５Ｘ６ＴＸ７ＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２０１）のアミノ酸配列（配列中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、およびＸ７は、それぞれ独立して、天然に存在するアミノ酸である）を有するＶＨ ＣＤＲ２；および（３）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＬＤＹ（配列番号２０２）のアミノ酸（配列中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、およびＸ８は、それぞれ独立して、天然に存在するアミノ酸である）を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、かつ／または（ｂ）（１）アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＡＶＡ（配列番号１９７）を有するＶＬ ＣＤＲ１；（２）アミノ酸配列ＳＡＳＳＬＹＳ（配列番号１９８）を有するＶＬ ＣＤＲ２；および（３）アミノ酸配列ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＸ５Ｔ（配列番号２０３）（配列中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５は、それぞれ独立して、天然に存在するアミノ酸である）を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む、第２の結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤のＶＨ ＣＤＲ１は、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２ＹＹＩＨ（配列番号２１７）のアミノ酸配列（配列中、Ｘ１は、ＤまたはＳであり、Ｘ２は、ＱまたはＳである）を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤のＶＨ ＣＤＲ２は、Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４ＧＸ５Ｘ６ＴＸ７ＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２０９）のアミノ酸配列（配列中、Ｘ１は、Ｅ、Ｗ、またはＴであり、Ｘ２は、Ｙ、Ｔ、またはＳであり、Ｘ３は、ＰまたはＳであり、Ｘ４は、Ａ、Ｈ、またはＧであり、Ｘ５は、Ｓ、Ｙ、またはＧであり、Ｘ６は、Ｙ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ７は、ＹまたはＫである）を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤のＶＨ ＣＤＲ３は、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＬＤＹ（配列番号２１０）のアミノ酸配列（配列中、Ｘ１は、ＧまたはＤであり、Ｘ２は、Ｐ、Ｓ、またはＹであり、Ｘ３は、Ｙ、Ｖ、またはＴであり、Ｘ４は、Ｓ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ５は、Ｖ、Ｙ、またはＴであり、Ｘ６は、Ｒ、ＧまたはＰであり、Ｘ７は、ＹまたはＶであり（または存在しない）、Ｘ８は、Ａである（または存在しない））を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤のＶＬ ＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＡＶＡ（配列番号１９７）のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤のＶＬ ＣＤＲ２は、ＳＡＳＳＬＹＳ（配列番号１９８）のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤のＶＬ ＣＤＲ３は、ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＸ５Ｔ（配列番号２１１）のアミノ酸配列（配列中、Ｘ１は、Ｖ、Ｙ、またはＦであり、Ｘ２は、Ｓ、Ｙ、またはＧであり、Ｘ３は、Ｙ、Ｔ、またはＡであり、Ｘ４は、ＳまたはＥであり、Ｘ５は、ＹまたはＩである）を有する。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちいずれか１つの抗体またはその断片と本質的に同じエピトープに結合する結合性作用剤が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、ヒトＰＤ－Ｌ１への結合について、本明細書に記載されるいずれか１つの抗体またはその断片と競合する結合性作用剤が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、結合性作用剤は、抗体またはその断片である。
ある特定の態様では、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）のＣＤＲは、Ｋａｂａｔシステムに従って決定され得る（Kabat et al. (1971) Ann. NY Acad. Sci. 190:382-391およびKabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242）。
ある特定の態様では、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）のＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａシステムに従って決定され得、本明細書で「Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ」と呼ばれる（例えば、Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol., 196:901-917；Al-Lazikani et al., 1997, J. Mol. Biol., 273:927-948；Chothia et al., 1992, J. Mol. Biol., 227:799-817；Tramontano A et al., 1990, J. Mol. Biol. 215(1):175-82；および米国特許第７，７０９，２２６号を参照されたい）。
ある特定の態様では、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）のＣＤＲは、例えば、Lefranc, M.-P., 1999, The Immunologist, 7:132-136およびLefranc, M.-P. et al., 1999, Nucleic Acids Res., 27:209-212に記載されるＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）システムに従って決定され得る（「ＩＭＧＴ ＣＤＲ」）。
ある特定の態様では、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）のＣＤＲは、例えば、MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 262:732-745に記載されるＡｂＭシステムに従って決定され得、本明細書で「ＡｂＭ ＣＤＲ」と呼ばれる。例えば、Martin, A., "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains," in Antibody Engineering, Kontermann and Dubel, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001)もまた参照されたい。
ある特定の態様では、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）のＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔシステムに従って決定され得、本明細書で「Ｃｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ」と呼ばれる（例えば、MacCallum RM et al., 1996, J Mol Biol 5: 732-745を参照されたい）。Ｃｏｎｔａｃｔ ＣＤＲは、利用可能な複雑な結晶構造の解析に基づく。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）の第１の結合ドメインのＶＨ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）および／またはＶＬ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）領域に沿った１つまたは複数のＣＤＲの位置は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのアミノ酸位置分変動し得る。例えば、一部の実施形態では、表１、２または３のうちいずれかのＣＤＲを規定する位置は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、ＣＤＲのＮ末端および／またはＣ末端境界を、現行のＣＤＲ位置と比較して１、２、３、４、５、または６アミノ酸シフトさせることによって変動し得る。他の実施形態では、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）の第１の結合ドメインのＶＨ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）および／またはＶＬ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）領域に沿った１つまたは複数のＣＤＲの長さは、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、１、２、３、４、５アミノ酸、またはそれよりも多くのアミノ酸分変動し得る（例えば、より短いまたはより長い）。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載されるＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、配列番号１～２４、２７～５０、または５３～７６によって記載されるＣＤＲのうち１つまたは複数よりも、１、２、３、４、５アミノ酸またはそれよりも多くのアミノ酸分短くてもよい。他の実施形態では、本明細書に記載されるＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、配列番号１～２４、２７～５０、または５３～７６によって記載されるＣＤＲのうち１つまたは複数よりも、１、２、３、４、５アミノ酸またはそれよりも多くのアミノ酸分長くてもよい。他の実施形態では、本明細書に記載される第１の結合ドメインのＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のアミノ末端は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、配列番号１～２４、２７～５０、または５３～７６によって記載されるＣＤＲのうち１つまたは複数と比較して、１、２、３、４、５アミノ酸またはそれよりも多くのアミノ酸分伸長され得る。他の実施形態では、本明細書に記載される第１の結合ドメインのＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のカルボキシ末端は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、配列番号１～２４、２７～５０、または５３～７６によって記載されるＣＤＲのうち１つまたは複数と比較して、１、２、３、４、５アミノ酸またはそれよりも多くのアミノ酸分伸長され得る。他の実施形態では、本明細書に記載される第１の結合ドメインのＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のアミノ末端は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、配列番号１～２４、２７～５０、または５３～７６によって記載されるＣＤＲのうち１つまたは複数と比較して、１、２、３、４、５アミノ酸またはそれよりも多くのアミノ酸分短縮され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される第１の結合ドメインのＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のカルボキシ末端は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、配列番号１～２４、２７～５０、または５３～７６によって記載されるＣＤＲのうち１つまたは複数と比較して、１、２、３、４、５アミノ酸またはそれよりも多くのアミノ酸分短縮され得る。当該分野で公知の任意の方法、例えば、本明細書に記載される「実施例」のセクションに記載される結合アッセイおよび条件が、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）への結合が維持されているかどうかを確定するために使用され得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）の第２の結合ドメインのＶＨ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）および／またはＶＬ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）領域に沿った１つまたは複数のＣＤＲの位置は、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのアミノ酸位置分変動し得る。例えば、一部の実施形態では、表４、５または６のうちいずれかのＣＤＲを規定する位置は、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、ＣＤＲのＮ末端および／またはＣ末端境界を、現行のＣＤＲ位置と比較して１、２、３、４、５、または６アミノ酸シフトさせることによって変動し得る。他の実施形態では、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）の第２の結合ドメインのＶＨ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）および／またはＶＬ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）領域に沿った１つまたは複数のＣＤＲの長さは、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、１、２、３、４、５アミノ酸、またはそれよりも多くのアミノ酸分変動し得る（例えば、より短いまたはより長い）。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載されるＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３は、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、配列番号７９～１０２、１０５～１２８、または１３１～１５４によって記載されるＣＤＲのうち１つまたは複数よりも、１、２、３、４、５アミノ酸またはそれよりも多くのアミノ酸分短くてもよい。他の実施形態では、本明細書に記載されるＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３は、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、配列番号７９～１０２、１０５～１２８、または１３１～１５４によって記載されるＣＤＲのうち１つまたは複数よりも、１、２、３、４、５アミノ酸またはそれよりも多くのアミノ酸分長くてもよい。他の実施形態では、本明細書に記載される第２の結合ドメインのＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のアミノ末端は、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、配列番号７９～１０２、１０５～１２８、または１３１～１５４によって記載されるＣＤＲのうち１つまたは複数と比較して、１、２、３、４、５アミノ酸またはそれよりも多くのアミノ酸分伸長され得る。他の実施形態では、本明細書に記載される第２の結合ドメインのＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のカルボキシ末端は、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、配列番号７９～１０２、１０５～１２８、または１３１～１５４によって記載されるＣＤＲのうち１つまたは複数と比較して、１、２、３、４、５アミノ酸またはそれよりも多くのアミノ酸分伸長され得る。他の実施形態では、本明細書に記載される第２の結合ドメインのＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のアミノ末端は、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、配列番号７９～１０２、１０５～１２８、または１３１～１５４によって記載されるＣＤＲのうち１つまたは複数と比較して、１、２、３、４、５アミノ酸またはそれよりも多くのアミノ酸分短縮され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される第２の結合ドメインのＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のカルボキシ末端は、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）への結合が維持される（例えば、実質的に維持される、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である）限り、配列番号７９～１０２、１０５～１２８、または１３１～１５４によって記載されるＣＤＲのうち１つまたは複数と比較して、１、２、３、４、５アミノ酸またはそれよりも多くのアミノ酸分短縮され得る。当該分野で公知の任意の方法、例えば、本明細書に記載される「実施例」のセクションに記載される結合アッセイおよび条件が、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）への結合が維持されているかどうかを確定するために使用され得る。
他の実施形態では、本明細書で提示される、ＣＤ４７に結合する、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、保存的配列改変を含む。多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤であるポリペプチドに関して、保存的配列改変には、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられた置換を含めた保存的アミノ酸置換が含まれる。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ－分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。したがって、一部の実施形態では、ＣＤ４７またはＰＤ－Ｌ１中の予測された非必須のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換えられる。抗原結合を除外しないヌクレオチドおよびアミノ酸の保存的置換を同定する方法は、当該分野で周知である（例えば、Brummell et al., Biochem. 32:1180-1187 (1993)；Kobayashi et al. Protein Eng. 12(10):879-884 (1999)；およびBurks et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997)を参照されたい）。一部の実施形態では、本明細書に記載される保存的配列改変は、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）のアミノ酸配列を、５０％、または５５％、または６０％、または６５％、または７０％、または７５％、または８０％、または８５％、または９０％、または９５％、または９８％、または９９％、改変する。一部の実施形態では、ヌクレオチドおよびアミノ酸の配列改変は、表１、表２、表３、表４、表５、または表６に記載されるＣＤＲに対する、多くても１、２、３、４、５、または６アミノ酸の置換を指す。したがって、例えば、各かかるＣＤＲは、最大で５つの保存的アミノ酸置換、例えば、最大で４つ（４つ以下）の保存的アミノ酸置換、例えば、最大で３つ（３つ以下）の保存的アミノ酸置換、例えば、最大で２つ（２つ以下）の保存的アミノ酸置換、または１つ以下の保存的アミノ酸置換を含有し得る。
本開示は、マスキング部分および／または切断可能な部分を有する、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）を提供し、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）のＣＤ４７および／または他の標的結合ドメインのうち１つまたは複数は、（例えば、マスキング部分を介して）マスキングされ、および／または（例えば、切断可能な部分を介して）活性化可能である。多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）のマスキングのための技術は、ＳＡＦＥ ｂｏｄｙマスキング技術（例えば、米国特許出願公開第２０１９／０２４１８８６号を参照されたい）およびＰｒｏｂｏｄｙマスキング技術（例えば、米国特許出願公開第２０１５／００７９０８８号を参照されたい）を含め、当該分野で周知である。かかる技術は、マスキングされたおよび／または活性化可能な多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）を生成するために使用され得る。ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた、かかるマスキングされたおよび／または活性化可能な多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、本開示の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤、例えば、ヒトＣＤ４７結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）のいずれか１つを含み、薬物などの直接的または間接的に連結された別の作用剤を含む、イムノコンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、マスキングされたＡＤＣおよび活性化可能な抗体－薬物コンジュゲート（ＡＡＤＣ）を含めたコンジュゲートの調製のために有用である。例えば、本開示の、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤、例えば、ヒトＣＤ４７結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、薬物などの１つまたは複数の作用剤に、合成リンカーによって共有結合され得る。
所望により、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、エフェクター機能、例えば、細胞傷害活性を有する部分（例えば、化学療法部分または放射性同位体）または免疫動員活性を有する部分と、（直接的または間接的に）連結またはコンジュゲートされる。（直接的または間接的に）連結またはコンジュゲートされる部分には、マスキングされたコンジュゲートの形態中の、細胞傷害性である薬物（例えば、毒素、例えば、アウリスタチン（aurostatin））または非細胞傷害性である薬物（例えば、シグナル伝達モジュレーター、例えば、キナーゼ、または多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）の１つもしくは複数の結合ドメインをマスキングするマスキング部分、または腫瘍微小環境中での多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）の１つもしくは複数の結合ドメインをアンマスキングするための切断可能な部分の切断によって多重特異性結合性作用剤を活性化させる切断可能な部分）が含まれる。免疫動員を促進する部分には、他の抗原結合性作用剤、例えば、自然免疫系の細胞に選択的に結合するウイルスタンパク質が含まれ得る。あるいはまたはさらに、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、必要に応じて、混合物からの単離を容易にする部分（例えば、タグ）、またはレポーター活性を有する部分（例えば、検出標識またはレポータータンパク質）と、（直接的または間接的に）連結またはコンジュゲートされる。本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）の特色が、結合性作用剤断片を含むポリペプチドにも拡張されることが理解される。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ポリペプチドと（直接的または間接的に）連結またはコンジュゲートされ得、これは、活性化可能な抗体の生成を生じ得る。一部の実施形態では、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、作用剤と（直接的または間接的に）連結またはコンジュゲートされる。一部の実施形態では、作用剤は、ＡＤＣの抗体がマスキング部分および切断可能な部分を含む場合、ＡＤＣまたはＡＡＤＣを生じる薬物である。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、治療剤（例えば、細胞傷害剤）または診断剤もしくは検出剤と、（直接的または間接的に）コンジュゲートされるまたは組換えによって連結される。マスキングされたまたは活性化可能なコンジュゲートを含めた、コンジュゲートされたまたは組換えによって連結された抗体は、例えば、疾患または障害、例えば、免疫細胞機能不全疾患、障害または状態を処置または予防するために有用であり得る。マスキングされたまたは活性化可能なコンジュゲートを含めた、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた、コンジュゲートされたまたは組換えによって連結された多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、例えば、免疫細胞機能不全疾患の開始、発達、進行、および／または重症度をモニタリングまたは予後判定するために有用であり得る。
かかる診断および検出は、例えば、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）を、例えば、以下が含まれる検出可能な物質にカップリングさせることによって達成され得る：西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが含まれるがこれらに限定されない酵素；ストレプトアビジン／ビオチンまたはアビジン／ビオチンが含まれるがこれらに限定されない補欠分子族；ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（isothiocynate）、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｒｉａｚｉｎｙｌａｍｉｎｅ）フルオレセイン、塩化ダンシル、またはフィコエリトリンが含まれるがこれらに限定されない蛍光材料；ルミノールが含まれるがこれに限定されない発光材料；ルシフェラーゼ、ルシフェリン、またはエクオリンが含まれるがこれらに限定されない生物発光材料；アクリジニウムベースの化合物またはＨＡＬＯＴＡＧが含まれるがこれらに限定されない化学発光材料；ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、および１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、および１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａおよび６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、または１１７Ｓｎが含まれるがこれらに限定されない放射性材料；種々の陽電子放出断層撮影を使用する陽電子放出金属；ならびに非放射性常磁性金属イオン。
融合タンパク質を生成するために異種タンパク質もしくはポリペプチドまたはそれらの断片と、例えば、（例えば、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、または約１００アミノ酸の）ポリペプチドと、組換えによって連結またはコンジュゲートされた（共有結合的または非共有結合的なコンジュゲーション、直接的または間接的）多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）、ならびにその使用もまた、本明細書に記載される。特に、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）の抗原結合性断片（例えば、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３を含む）と、異種タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドとを含む融合タンパク質が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）が連結される異種タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドは、多重特異性結合性作用剤を特定の細胞（例えば、腫瘍細胞を含めた、ＣＤ４７発現性細胞および／またはＰＤ－Ｌ１発現性細胞）に標的化するために有用である。
さらに、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、精製を容易にするために、マーカーまたは「タグ」配列、例えば、ペプチドと、（直接的または間接的に）連結され得る。一部の実施形態では、マーカーまたはタグのアミノ酸配列は、とりわけ、ヘキサ－ヒスチジンペプチド、例えば、ｐＱＥベクター中で提供されるタグ（例えば、ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．を参照されたい）であり、その多くは市販されている。例えば、Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-24に記載されるように、ヘキサ－ヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製を提供する。精製のために有用な他のペプチドタグには、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに対応するヘマグルチニン（「ＨＡ」）タグ（Wilson et al., 1984, Cell 37:767-78）、および「ＦＬＡＧ」タグが含まれるがこれらに限定されない。
部分（ポリペプチドを含む）を抗体と（直接的または間接的に）連結またはコンジュゲートするための方法は、当該分野で周知であり、そのうちいずれか１つが、本明細書に記載される抗体－薬物コンジュゲートまたは融合タンパク質を作製するために使用され得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）は、融合タンパク質である。用語「融合タンパク質」は、本明細書で使用される場合、結合性作用剤（例えば、抗体）のアミノ酸配列と異種ポリペプチドまたはタンパク質（例えば、通常はその抗体の一部ではないポリペプチドまたはタンパク質（例えば、非ＣＤ４７結合抗体または非ＰＤ－Ｌ１結合抗体））のアミノ酸配列とを含むポリペプチドを指す。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、多重特異性結合性作用剤の生物活性を保持する。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、ＣＤ４７抗体のＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ（１つ、２つまたは３つのＶＨ ＣＤＲ）、および／またはＶＬ ＣＤＲ（１つ、２つまたは３つのＶＬ ＣＤＲ）を含む第１の結合ドメインを含み、融合タンパク質は、ＣＤ４７エピトープ、ＣＤ４７断片および／またはＣＤ４７ポリペプチドに結合する。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１抗体のＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ ＣＤＲ（１つ、２つまたは３つのＶＨ ＣＤＲ）、および／またはＶＬ ＣＤＲ（１つ、２つまたは３つのＶＬ ＣＤＲ）を含む第２の結合ドメインを含み、融合タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１エピトープ、ＰＤ－Ｌ１断片および／またはＰＤ－Ｌ１ポリペプチドに結合する。
融合タンパク質は、例えば、遺伝子－シャッフリング、モチーフ－シャッフリング、エクソン－シャッフリング、および／またはコドン－シャッフリングの技法（「ＤＮＡシャッフリング」と集合的に呼ばれる）を介して生成され得る。ＤＮＡシャッフリングは、例えば、より高い親和性およびより低い解離速度を有する多重特異性結合性作用剤を含めた、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）の活性を変更するために使用され得る（例えば、米国特許第５，６０５，７９３号；同第５，８１１，２３８号；同第５，８３０，７２１号；同第５，８３４，２５２号；および同第５，８３７，４５８号；Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33；Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82；Hansson et al., 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76；およびLorenzo and Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308-13を参照されたい）。一部の実施形態では、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤は、組換えの前に、エラー－プローンＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入、または他の方法によるランダム突然変異誘発に供されることによって変更され得る。本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤をコードするポリヌクレオチドは、１つまたは複数の異種分子の１つまたは複数の構成要素、モチーフ、区域、部分、ドメイン、断片などと組換えられ得る。
本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）はまた、標的抗原のイムノアッセイまたは精製のために有用な固体支持体に結合され得る。かかる固体支持体には、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、またはポリプロピレンが含まれるがこれらに限定されない。
本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）はまた、抗体ヘテロコンジュゲートを形成するために、第２の抗体と（直接的または間接的に）連結またはコンジュゲートされ得る。
リンカーは、連結またはコンジュゲートした作用剤の細胞内での放出を容易にする「切断可能部分」であり得るが、切断不可能なリンカーも本明細書において意図されている。本開示のコンジュゲート（例えば、抗体－薬物コンジュゲート）に使用するためのリンカーとしては、限定することなく、酸に不安定なリンカー（例えば、ヒドラゾンリンカー）、ジスルフィド含有リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー（例えば、シトルリン－バリンまたはフェニルアラニン－リシンなどの、アミノ酸、例えばバリンおよび／またはシトルリンを含むペプチドリンカー）、感光性リンカー、ジメチルリンカー、チオエーテルリンカー、または多剤輸送体に媒介される抵抗性を回避するように設計された親水性リンカーが挙げられる。
作用剤がＡＤＣまたはＡＡＤＣを調製するための薬物である場合を含めた、抗体と作用剤のコンジュゲートを、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、スルホ－ＳＭＰＢ、およびＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）安息香酸）などの種々の二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作出することができる。本開示では、作用剤がＡＤＣまたはＡＡＤＣを調製するための薬物である場合を含めた、抗体と作用剤のコンジュゲートを、当技術分野において開示されている任意の適切な方法を使用して調製することができることがさらに意図されている（例えば、Bioconjugate Techniques（Hermanson ed., 2d ed. 2008）を参照されたい）。
作用剤がＡＤＣまたはＡＡＤＣを調製するための薬物である場合を含めた、抗体と作用剤のコンジュゲーション戦略は、従来、Ｌｙｓ残基のε－アミノ基またはＣｙｓ残基のチオール基が関与する、異種コンジュゲートをもたらすランダムなコンジュゲーション化学に基づくものである。最近開発された技法では、抗体との部位特異的コンジュゲーションが可能になり、それにより、均一な負荷がもたらされ、抗原結合性または薬物動態が変更されたコンジュゲート亜集団が回避される。これらの技法は、反応性チオール基をもたらし、免疫グロブリンのフォールディングおよびアセンブリを乱すことも抗原への結合を変更することもない重鎖および軽鎖上の位置にシステイン置換を含む「チオｍａｂ」の操作を含む（例えば、Junutula et al., 2008, J. Immunol. Meth. 332: 41-52；およびJunutula et al., 2008, Nature Biotechnol. 26: 925-32を参照されたい）。別の方法では、セレノシステインを抗体配列に同時翻訳されるように挿入し、これは、終止コドンＵＧＡを終結からセレノシステイン挿入へと再コーディングし、他の天然アミノ酸の存在下でのセレノシステインの求核性セレノール基における部位特異的共有結合性コンジュゲーションを可能にすることによって行う（例えば、Hofer et al., 2008, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105: 12451-56；およびHofer et al., 2009, Biochemistry 48(50): 12047-57を参照されたい）。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、細胞傷害剤とコンジュゲートされる。一部の実施形態では、本明細書で開示されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ＡＤＣまたはＡＡＤＣを生成するために、本明細書で開示されるまたは当該分野で公知の１つまたは複数の細胞傷害剤（複数可）と、必要に応じてコンジュゲートされ得る。一部の実施形態では、細胞傷害性作用剤は、これだけに限定されないが、メトトレキセート、アドリアマイシン、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤を含めた化学療法剤である。一部の実施形態では、細胞傷害性作用剤は、これだけに限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ－Ｓ）、Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、Ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンを含めた、細菌、真菌、植物、または動物起源の酵素的に活性な毒素またはその断片である。一部の実施形態では、細胞傷害性作用剤は、放射性コンジュゲートまたは放射性コンジュゲートした作用剤を作製するための放射性同位元素である。これだけに限定されないが、９０Ｙ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１２３Ｉ、１１１Ｉｎ、１３１Ｉｎ、１０５Ｒｈ、１５３Ｓｍ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、および２１２Ｂｉを含めた種々の放射性核種が、放射性コンジュゲートした作用剤を作製するために利用可能である。ポリペプチドまたは分子と１つまたは複数の小分子毒素、例えば、カリチアマイシン、メイタンシノイド、トリコテセン（trichothene）、およびＣＣ１０６５、ならびにこれらの毒素の毒素活性を有する誘導体のコンジュゲートも使用することができる。ポリペプチドまたは分子と細胞傷害性作用剤のコンジュゲートは、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール（pyridyidithiol））プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣＬなど）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジサクシンイミジルなど）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒドなど）、ビス－アジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアン酸（例えば、トルエン２，６－ジイソシアン酸など）、およびビス－活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）などの種々の二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作出される。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、シグナル伝達モジュレーター、アポトーシス促進剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、免疫調節剤、遺伝子治療のための核酸、アルキル化剤、抗血管新生剤、代謝拮抗薬、ホウ素含有作用剤、化学保護剤、ホルモン剤、抗ホルモン剤、コルチコステロイド、光活性治療剤、オリゴヌクレオチド、放射性核種作用剤、放射線増感剤、トポイソメラーゼ阻害剤、およびチロシンキナーゼ阻害剤などの薬物とコンジュゲートされる。一部の実施形態では、有糸分裂阻害剤は、ドラスタチン、アウリスタチン、マイタンシノイド、および植物アルカロイドである。一部の実施形態では、薬物は、ドラスタチン、アウリスタチン、マイタンシノイド、および植物アルカロイドである。アウリスタチンの例は、モノメチルアウリスタチン（monomethylaurisatin）Ｆ（ＭＭＡＦ）またはモノメチルアウリスタチン（monomethyauristatin）Ｅ（ＭＭＡＥ）である。マイタンシノイドの例には、ＤＭ１、ＤＭ２、ＤＭ３、およびＤＭ４が含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、抗腫瘍抗生物質は、アクチノマイシン（actinomycine）、アントラサイクリン、カリケアマイシン、およびデュオカルマイシンからなる群から選択される。一部の実施形態では、アクチノマイシンは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）である。
本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、単一特異性、二重特異性、三重特異性、またはそれよりも大きい多重特異性のものであり得る。かかる作用剤には、抗体が含まれ得る。多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる標的（例えば、抗原）または同じ標的上の２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有するモノクローナル抗体（例えば、ＣＤ４７の第１のエピトープに対する第１の結合ドメインと、ＣＤ４７の第２のエピトープに対する第２の結合ドメインとを有する、ＣＤ４７に対する二重特異性抗体）である。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体の第１の結合ドメインは、本明細書に記載される抗体の配列、例えば、表１、表２、および表３に列挙されたＣＤＲ配列に基づいて構築され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体の第２の結合ドメインは、本明細書に記載される抗体の配列、例えば、表４、表５、および表６に列挙されたＣＤＲ配列に基づいて構築され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である。一部の実施形態では、多重特異性抗体の結合特異性のうち一方は、ＣＤ４７に対するものであり、他方は、任意の他の標的（例えば、抗原）に対するものである。一部の実施形態では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、１つよりも多くの標的結合ドメインを含み得、異なるドメインは、異なる標的に特異的である（例えば、ＣＤ４７に結合する第１の結合ドメインおよび別の標的（例えば、抗原）、例えば、免疫チェックポイント調節因子（例えば、負のチェックポイント調節因子）に結合する第２の結合ドメイン）。一部の実施形態では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、同じ標的（例えば、抗原）上の１つよりも多くの（例えば、２つまたはそれよりも多くの）エピトープに結合し得る。一部の実施形態では、結合特異性のうち一方は、ＣＤ４７に対するものであり、他方は、任意の他の標的（例えば、抗原）に対するものである。一部の実施形態では、結合特異性のうちの１つは、ＣＤ４７であり、他は、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ－４）、ＣＤ８０、ＣＤ８６、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、プログラム細胞死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ－３；ＣＤ２２３としても公知）、ガレクチン－３、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）、ガレクチン－９（ＧＡＬ９）、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ／Ｖｓｔｍ３／ＷＵＣＡＭ／ＶＳＩＧ９）、Ｔ細胞活性化のＶ－ドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体関連（ＧＩＴＲ）タンパク質、ヘルペスウイルス進入メディエーター（ＨＶＥＭ）、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７．ＣＧＥＮ－１５００１Ｔ、ＣＧＥＮ－１５０２２、ＣＧＥＮ－１５０２７、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＧＥＮ－１５０５２、およびＣＧＥＮ－１５０９２のうちの１つまたは複数に対するものである。
多重特異性抗体を作出するための方法は、例えば、２つの重鎖が異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対を同時発現させることによるものなど、当技術分野で公知である（例えば、Milstein and Cuello, 1983, Nature 305: 537-40を参照されたい）。多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）の生成のさらなる詳細については、例えば、Bispecific Antibodies（Kontermann ed., 2011）を参照されたい。
多重特異性抗体の例示的な構造は、当技術分野で公知であり、Weidle et al., 2013, Cancer Genomics & Proteomics 10: 1-18；Brinkman et al., 2017, MABS, 9:2, 182-212；Godar et al., 2018, Expert Opinion on Therapeutic Patents, 28:3, 251-276；およびSpiess et al., 2015, Mol. Immunol. 67 95-106にさらに記載されている。
例えば、二重特異性抗体分子は、異なる構造群に分類することができる：（ｉ）二重特異性免疫グロブリンＧ（ＢｓＩｇＧ）、（ｉｉ）追加的な抗原結合性部分が付加されたＩｇＧ、（ｉｉｉ）二重特異性抗体断片、（ｉｖ）二重特異性融合タンパク質、および（ｖ）二重特異性抗体コンジュゲート。非限定的な例として、ＢｓＩｇＧフォーマットには、ｃｒｏｓｓＭａｂ、ＤＡＦ（ツーインワン（ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ））、ＤＡＦ（フォーインワン（ｆｏｕｒ－ｉｎ－ｏｎｅ）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ－ＩｇＧ、ノブインホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎ－ｈｏｌｅｓ）共通ＬＣ、ノブインホールアセンブリ、電荷対、Ｆａｂ－アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、トリオマブ、ＬＵＺ－Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ－ボディ（κλ－ｂｏｄｙ）、直交性Ｆａｂが含まれ得る。
一部の実施形態では、ＢｓｌｇＧは、ヘテロ二量体形成のために操作された重鎖を含む。例えば、重鎖を、ヘテロ二量体形成のために、「ノブイントゥホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）」戦略、ＳＥＥＤプラットフォーム、共通重鎖（例えば、κλ－ボディにおけるもの）、およびヘテロ二量体Ｆｃ領域の使用を使用することにより操作することができる。ノブイントゥホール、デュオボディ（duobody）、アジメトリック（azymetric）、電荷対、ＨＡ－ＴＦ、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、および示差的プロテインＡ親和性を含めた、ＢｓＩｇＧにおけるホモ二量体の重鎖対形成を回避するための戦略が当技術分野で公知である。
別の二重特異性抗体フォーマットは、追加的な抗原結合性部分が付加されたＩｇＧである。例えば、追加的な抗原結合性単位を単一特異性ＩｇＧに、例えば、重鎖または軽鎖のいずれかのＮ末端またはＣ末端に付加することにより、単一特異性ＩｇＧを、二重特異性を有するように操作することができる。例示的な追加的な抗原結合性単位としては、単一ドメイン抗体（例えば、可変重鎖または可変軽鎖）、操作されたタンパク質足場、および対形成した抗体可変ドメイン（例えば、単鎖可変性断片または可変性断片）が挙げられる。付加ＩｇＧフォーマットの非限定的な例としては、二重可変ドメインＩｇＧ（ＤＶＤ－Ｉｇ）、ＩｇＧ（Ｈ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）－Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）－Ｖ、Ｖ（Ｈ）－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－Ｖ、Ｖ（Ｌ）－ＩｇＧ、ＫＩＨ ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、ＩｇＧ－２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、ｚｙｂｏｄｙ、およびＤＶＩ－ＩｇＧ（フォーインワン）が挙げられる。Spiess et al. Mol. Immunol. 67 (2015): 95-106を参照されたい。一部の実施形態では、例示的な抗体フォーマットは、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０７５６９２号および米国特許出願公開第２０１８／０１１８８１１号に記載されている単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性抗体）のためのＢ－Ｂｏｄｙフォーマットである。
二重特異性抗体断片（ＢｓＡｂ）は、抗体定常ドメインの一部または全部を欠く二重特異性抗体分子のフォーマットである。例えば、一部のＢｓＡｂは、Ｆｃ領域を欠く。複数の実施形態では、二重特異性抗体断片は、ペプチドリンカーによって接続された重鎖領域と軽鎖領域を含み、それにより、単一の宿主細胞におけるＢｓＡｂの効率的な発現が可能になる。二重特異性抗体断片の非限定的な例としては、これだけに限定されないが、ナノボディ、ナノボディ－ＨＡＳ、ＢｉＴＥ、Ｄｉａｂｏｄｙ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ－ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ－ＣＨ３、トリプルボディ（triple body）、ミニ抗体（miniantibody）、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ－ＣＨ３ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）２－ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、四価ＨＣＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ－Ｆｃ、Ｄｉａｂｏｄｙ－Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ－Ｆｃ、および細胞内抗体が挙げられる。
二重特異性融合タンパク質には、他のタンパク質と連結した抗体断片が含まれる。例えば、二重特異性融合タンパク質を他のタンパク質と連結して、追加的な特異性および／または機能性を付加することができる。一部の実施形態では、ドックアンドロック（ｄｏｃｋ－ａｎｄ－ｌｏｃｋ）（ＤＮＬ）法を使用して、結合価が高い二重特異性抗体分子を生成することができる。例えば、二重特異性抗体をアルブミン結合性タンパク質またはヒト血清アルブミンと融合することにより、抗体断片の血清中半減期を延長することができる。複数の実施形態では、化学的コンジュゲーション、例えば、抗体および／または抗体断片の化学的コンジュゲーションを使用して、ＢｓＡｂ分子を創出することができる。例示的な二重特異性抗体コンジュゲートとしては、ＣｏｖＸ－ｂｏｄｙフォーマットが挙げられ、これは、各Ｆａｂアームまたは抗体またはその断片内の単一の反応性リシンに低分子量薬物を部位特異的にコンジュゲートしたものである。複数の実施形態では、コンジュゲーションにより、血清中半減期が改善される。
二重特異性抗体を含めた多重特異性抗体の作製方法は、当技術分野で公知である。例えば、構成成分である抗体を異なる宿主細胞において別々に発現させ、その後、精製／アセンブリすることによって、または、構成成分である抗体を単一の宿主細胞において発現させることによって、二重特異性抗体を含めた多重特異性抗体を作製することができる。多重特異性（例えば、二重特異性）抗体分子の精製は、アフィニティークロマトグラフィーを含めた当技術分野で公知の様々な方法によって実施することができる。
一部の実施形態では、本明細書で開示されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、本明細書で開示されるまたは当該分野で公知の任意の抗体形式で提供され得る。非限定的な例として、一部の実施形態では、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、Ｆａｂ－イン－タンデム－Ｉｇ（ＦＩＴ－Ｉｇ）；ＤＶＤ－Ｉｇ；ハイブリッドハイブリドーマ（クアドローマまたはテトラドーマ（ｔｅｔｒａｄｏｍａ））；アンチカリンプラットフォーム（Ｐｉｅｒｉｓ）；ディアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）；単鎖ディアボディ；タンデム単鎖Ｆｖ断片；ＴａｎｄＡｂ、三重特異性Ａｂ（Ａｆｆｉｍｅｄ）；Ｄａｒｔｓ二重親和性再標的化（Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ）；二重特異性ＸｍＡｂ（Ｘｅｎｃｏｒ）；二重特異性Ｔ細胞係合子（Ｂｉｔｅｓ；Ａｍｇｅｎ；５５ｋＤａ）；トリプルボディ（Ｔｒｉｐｌｅｂｏｄｙ）；トリボディ（Ｔｒｉｂｏｄｙ）＝Ｆａｂ－ｓｃＦｖ融合タンパク質多重機能的組換え抗体誘導体（ＣｒｅａｔｉｖｅＢｉｏｌａｂｓ）；デュオボディ（Ｄｕｏｂｏｄｙ）プラットフォーム（Ｇｅｎｍａｂ）；ドックアンドロック（ｄｏｃｋ ａｎｄ ｌｏｃｋ）プラットフォーム；ノブ－イントゥ－ホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）（ＫＩＨ）プラットフォーム；ヒト化二重特異性ＩｇＧ抗体（ＲＥＧＮ１９７９）（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）；Ｍａｂ２二重特異性抗体（Ｆ－Ｓｔａｒ）；ＤＶＤ－Ｉｇ＝二重可変ドメイン免疫グロブリン（Ａｂｂｏｔｔ）；カッパ－ラムダボディ（ｋａｐｐａ－ｌａｍｂｄａ ｂｏｄｙ）；ＴＢＴＩ＝四価二重特異性タンデムＩｇ；ならびにＣｒｏｓｓＭａｂ（Ｒｏｃｈｅ）から選択され得る。
一部の実施形態では、本明細書に開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、ＣＤ４７結合性ドメイン、およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的に結合する１つまたは複数の追加的な結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表１のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表２のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表３のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合性ドメインを含む。
一部の実施形態では、表１に記載のＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含むＣＤ４７に結合する結合性ドメインを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗体が本明細書に記載される。一部の実施形態では、表２に記載のＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含むＣＤ４７に結合する結合性ドメインを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗体が本明細書に記載される。一部の実施形態では、表３に記載のＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含むＣＤ４７に結合する結合性ドメインを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗体が本明細書に記載される。
一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、ＣＤ４７結合ドメインとＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表１のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表４のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表１のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表５のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表１のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表６のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表２のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表４のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表２のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表５のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表２のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表６のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表３のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表４のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表３のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表５のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表３のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表６のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。
一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表１のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表４のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表１のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表５のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表１のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表６のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表２のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表４のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表２のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表５のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表２のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表６のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表３のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表４のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表３のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表５のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、表３のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＣＤ４７結合ドメインと、表６のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインとを含む。
ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体は、任意の適切な方法、例えば（それらに限定されないが）、ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１を含む腫瘍全体細胞による免疫化、ならびに抗体の収集、組換え技法、あるいはＣＤ４７細胞外ドメインエピトープまたはＰＤ－Ｌ１細胞外ドメインエピトープを使用した抗体または抗体断片のライブラリーのスクリーニングによって得られ得る。モノクローナル抗体は、種々の公知の技法を使用して生成することができる（例えば、Coligan et al. (eds.), Current Protocols in Immunology, 1: 2.5.12.6.7 (John Wiley & Sons 1991)；Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Plenum Press, Kennett, McKearn, and Bechtol (eds.) (1980)；Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press (1988)；およびPicksley et al., "Production of monoclonal antibodies against proteins expressed in E. coli," in DNA Cloning 2: Expression Systems, 2nd Edition, Glover et al. (eds.), page 93 (Oxford University Press 1995)を参照されたい）。モノクローナル抗体を生成するための例示的な技法の１つは、ヒトＣＤ４７抗原を用いて動物を免疫化し、その動物から取得した脾臓細胞からハイブリドーマを生成することを含む。ハイブリドーマに、ＣＤ４７に結合するモノクローナル抗体または抗体断片を産生させることができる。モノクローナル抗体を生成するための１つの例示的な技法は、動物をヒトＰＤ－Ｌ１抗原で免疫化し、動物から採取された脾臓細胞からハイブリドーマを生成することを含む。ハイブリドーマは、ＰＤ－Ｌ１に結合するモノクローナル抗体または抗体断片を産生し得る。
さらなる実施形態では、例えば、Antibody Phage Display: Methods and Protocols, P.M. O'Brien and R. Aitken, eds, Humana Press, Totawa N.J., 2002.に記載されている技法を使用して生成した抗体ファージライブラリーから、モノクローナル抗体または抗体断片を単離することができる。原理上は、ファージコートタンパク質と融合した抗体可変領域（Ｆｖ）の種々の断片をディスプレイするファージを含有するファージライブラリーをスクリーニングすることによって、合成抗体クローンを選択する。そのようなファージライブラリーを、所望の抗原に対してスクリーニングする。所望の抗原に結合することが可能なＦｖ断片を発現するクローンは抗原に吸着し、したがって、ライブラリー中の非結合性クローンから分離される。次いで、結合性クローンを抗原から溶出させ、追加的なサイクルの抗原吸着／溶出によってさらに富化することができる。
例えば、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)に記載されている通り、可変ドメインをファージ上に、ＶＨとＶＬが短い柔軟なペプチドによって共有結合により連結した単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、または、ＶＨとＶＬがそれぞれ定常ドメインと融合しており、非共有結合により相互作用するＦａｂ断片としてのいずれかで、機能的にディスプレイさせることができる。
Winter et al.,上記に記載されている通り、ＶＨ遺伝子のレパートリーとＶＬ遺伝子のレパートリーを別々にポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってクローニングし、ファージライブラリーにおいてランダムに組み換えることができ、次いでそれを抗原結合性クローンについて検索することができる。免疫化した供給源からのライブラリーにより、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原に対する高親和性抗体がもたらされる。あるいは、Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)に記載されている通り、ナイーブなレパートリーをクローニングして、いかなる免疫化も伴わずに、広範囲の非自己抗原および同様に自己抗原に対するヒト抗体の単一の供給源をもたらすことができる。最後に、例えば、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)に記載されている通り、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードするため、およびｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて再構成を実現するために、幹細胞由来の再構成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングすること、およびランダムな配列を含有するＰＣＲプライマーを使用することによってナイーブなライブラリーを合成的に作出することもできる。
ライブラリーのスクリーニングは、当該分野で公知の種々の技法によって達成され得る。例えば、ＣＤ４７（例えば、ＣＤ４７ポリペプチド、断片またはエピトープ）またはＰＤ－Ｌ１（例えば、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド、断片またはエピトープ）が、吸着プレートのウェルをコーティングするために使用され得、吸着プレートに貼り付けられた宿主細胞上で発現され得、または細胞選別において使用され得、またはストレプトアビジンコーティングされたビーズを用いた捕捉のためにビオチンとコンジュゲートされ得、またはディスプレイライブラリーをパニングするための任意の他の方法において使用され得る。緩徐な解離速度論（例えば、良好な結合親和性）を有する抗体の選択は、Bass et al., Proteins, 8: 309-314 (1990)およびＷＯ９２／０９６９０に記載されるような長時間の洗浄および一価ファージディスプレイの使用によって、ならびにMarks et al., Biotechnol., 10: 779-783 (1992)に記載されるような抗原の低いコーティング密度の使用によって、促進され得る。
多重特異性結合性作用剤は、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3に記載されるように、目的のファージクローンについて選択するための適切な抗原スクリーニング手順を設計し、その後、目的のファージクローンからのＶＨおよび／もしくはＶＬ配列（例えば、Ｆｖ配列）、またはＶＨおよびＶＬ配列からの種々のＣＤＲ配列と、適切な定常領域（例えば、Ｆｃ）配列とを使用して、全長多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）クローンを構築することによって、得られ得る。
同様に、ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１に結合するヒト抗体を、これだけに限定されないが、ヒト末梢血液細胞（例えば、Ｂリンパ球を含有する）のエプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）形質転換、ヒトＢ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける免疫化、ヒト免疫グロブリン遺伝子が挿入された免疫化トランスジェニックマウス由来の脾臓細胞の融合、ヒト免疫グロブリンＶ領域ファージライブラリーからの単離、または当技術分野で公知のおよび本開示に基づく他の手順を含めたいくつかの技法のいずれかによって生成することができる。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法は、例えば、Bruggemann et al., Curr. Opin. Biotechnol., 8: 455 58, 1997；Jakobovits et al., Ann. N. Y. Acad. Sci., 764: 525 35, 1995；Green et al., Nature Genet., 7: 13-21, 1994；Lonberg et al., Nature、368: 856-859, 1994；Taylor et al., Int. Immun. 6: 579-591, 1994；および米国特許第５，８７７，３９７号にさらに記載されている。
例えば、ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１に結合するヒト抗体を、抗原による攻撃に応答して特異的なヒト抗体を産生するように操作されたトランスジェニック動物から得ることができる。例えば、国際特許公開第ＷＯ９８／２４８９３号には、ヒトＩｇ遺伝子座を有するトランスジェニック動物であって、内因性重鎖および軽鎖遺伝子座の不活化が原因で機能的な内因性免疫グロブリンを産生しない、トランスジェニック動物が開示されている。免疫原に対する免疫応答を開始することが可能なトランスジェニック非霊長類哺乳動物宿主であって、抗体が霊長類定常および／または可変領域を有し、また、遺伝子座をコードする内因性免疫グロブリンが置換または不活化されている、トランスジェニック非霊長類哺乳動物宿主も記載されている。国際特許公開第ＷＯ９６／３０４９８号には、哺乳動物における免疫グロブリン遺伝子座を改変するため、例えば、定常または可変領域の全部または一部を置き換えて、改変された抗体分子を形成するための、Ｃｒｅ／Ｌｏｘ系の使用が開示されている。国際特許公開第ＷＯ９４／０２６０２号には、不活化された内因性Ｉｇ遺伝子座および機能的なヒトＩｇ遺伝子座を有する非ヒト哺乳動物宿主が開示されている。米国特許第５，９３９，５９８号には、内因性重鎖を欠き、１つまたは複数の異種定常領域を発現する外因性免疫グロブリン遺伝子座を発現するトランスジェニックマウスを作出する方法が開示されている。本明細書に記載のトランスジェニック動物などのトランスジェニック動物を使用して、選択された抗原性分子に対する免疫応答を生じさせることができ、抗体産生細胞を動物から取り出し、それを使用して、ヒト由来のモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作製することができる。免疫化プロトコール、アジュバントなどは当技術分野で公知であり、例えば、国際特許公開第ＷＯ９６／３３７３５号に記載されている通り、トランスジェニックマウスの免疫化に使用されている。モノクローナル抗体を、対応するタンパク質の生物活性または生理作用を阻害または中和する能力について試験することができる。
本開示は、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合するヒト化抗体を提供する。本開示のヒト化抗体は、ＣＤ４７に結合する第１の結合ドメインを含み得、表１～３に示される１つまたは複数のＣＤＲを含む。本開示のヒト化抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合ドメインを含み得、表４～６に示される１つまたは複数のＣＤＲを含む。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が当技術分野で公知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源由来の１つまたは複数のアミノ酸残基が導入されたものであり得る。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、「移入」残基と称され、典型的には、「移入」可変ドメインから取得される。ＣＤ４７に結合するヒト化抗体は、当業者に公知の技法を使用して作製することができる（Zhang et al., Molecular Immunology, 42(12): 1445-1451, 2005；Hwang et al., Methods, 36(1): 35-42, 2005；Dall'Acqua et al., Methods, 36(1): 43-60, 2005；Clark, Immunology Today, 21(8): 397-402, 2000、ならびに米国特許第６，１８０，３７０号；同第６，０５４，９２７号；同第５，８６９，６１９号；同第５，８６１，１５５号；同第５，７１２，１２０号；および同第４，８１６，５６７号、全てがこれにより参照により本明細書に明白に組み込まれる）。
一部の場合では、ヒト化抗体は、親非ヒト抗体（例えば、齧歯類）の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列をヒト抗体フレームワークにグラフト化するＣＤＲグラフト化によって構築される。例えば、Padlan et al. (FASEB J. 9: 133-139, 1995)により、実際に抗原と接触するのはＣＤＲ内の残基の約３分の１のみであることが決定されており、これらは、「特異性決定残基」またはＳＤＲと称される。ＳＤＲグラフト化の技法では、ＳＤＲ残基のみをヒト抗体フレームワークにグラフト化する（例えば、Kashmiri et al., Methods 36: 25-34, 2005を参照されたい）。
ヒト化抗体の作出に使用される軽鎖および重鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低減させるために重要であり得る。例えば、いわゆる「最良適合」法に従って、非ヒト（例えば、齧歯類）抗体の可変ドメインの配列を、公知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングする。齧歯類の配列に最も近いヒト配列を、ヒト化抗体のためのヒトフレームワークとして選択することができる（Sims et al. (1993) J. Immunol. 151: 2296；Chothia et al. (1987) J. Mol. Biol. 196: 901）。別の方法では、軽鎖または重鎖が特定のサブグループのものである、全体がヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークが使用される。同じフレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体に使用することができる（Carter et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 4285；Presta et al. (1993) J. Immunol., 151: 2623）。一部の場合では、フレームワークは、最も豊富なヒトサブクラス、ＶＬ６サブグループＩ（ＶＬ６Ｉ）およびＶＨサブグループＩＩＩ（ＶＨＩＩＩ）のコンセンサス配列に由来するものである。別の方法では、ヒト生殖細胞系列遺伝子がフレームワーク領域の供給源で使用される。
超ヒト化（superhumanization）と称されるＣＤＲの比較に基づく代替パラダイムでは、ＦＲ相同性は無関連である。この方法は、非ヒト配列と機能的なヒト生殖細胞系列遺伝子レパートリーの比較からなる。次いで、マウス配列と同じまたは密接に関連するカノニカル構造をコードする遺伝子を選択する。次に、非ヒト抗体とカノニカル構造を共有する遺伝子の中で、ＣＤＲ内の相同性が最も高いものをＦＲドナーとして選択する。最後に、非ヒトＣＤＲをこれらのＦＲにグラフト化する（例えば、Tan et al., J. Immunol. 169: 1119-1125, 2002を参照されたい）。
さらに、抗体は、それらの抗原に対する親和性および他の好都合な生物学的特性を保持してヒト化されることが一般に望ましい。この目的を実現するために、１つの方法によると、ヒト化抗体を、親配列および種々の概念的なヒト化産物を親およびヒト化配列の３次元モデルを使用して解析するプロセスによって調製する。３次元免疫グロブリンモデルが一般に利用可能であり、当業者にはよく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の確度の高い３次元コンフォメーション構造を例示および表示するコンピュータプログラムが利用可能である。それらとしては、例えば、ＷＡＭ（Whitelegg and Rees, Protein Eng. 13: 819-824, 2000）、Ｍｏｄｅｌｌｅｒ（Sali and Blundell, J. Mol. Biol. 234: 779-815, 1993）、およびＳｗｉｓｓ ＰＤＢ Ｖｉｅｗｅｒ（Guex and Peitsch, Electrophoresis 18: 2714-2713, 1997）が挙げられる。これらの表示の検査により、候補免疫グロブリン配列の機能において役割を果たす可能性が高い残基の解析、例えば、候補免疫グロブリンのその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の解析が可能になる。このように、レシピエントおよび移入配列からＦＲ残基を選択し、組み合わせることができ、その結果、標的抗原（複数可）に対する親和性の増大などの所望の抗体特徴が実現される。一般に、抗原への結合に影響を及ぼすことに関して、超可変領域残基が直接かつ最も実質的に関与する。
抗体ヒト化のための別の方法は、ヒトストリングコンテント（Human String Content）（ＨＳＣ）と称される、抗体のヒト性に関する測定基準に基づく。この方法では、マウス配列とヒト生殖細胞系列遺伝子のレパートリーを比較し、差異をＨＳＣとしてスコア化する。次いで、標的配列を、多数の多様なヒト化バリアントを生成するための全体的な同一性評価基準を使用するのではなく、そのＨＳＣを最大にすることによってヒト化する（Lazar et al., Mol. Immunol. 44: 1986-1998, 2007）。
上記の方法に加えて、経験的な方法を使用して、ヒト化抗体を生成および選択することができる。これらの方法は、ヒト化バリアントの大きなライブラリーを生成すること、および富化技術またはハイスループットスクリーニング技法を使用して最良のクローンを選択することを含む。抗体バリアントを、ファージ、リボソームおよび酵母ディスプレイライブラリーから、ならびに細菌コロニースクリーニングによって、単離することができる（例えば、Hoogenboom, Nat. Biotechnol. 23: 1105-1116, 2005；Dufner et al., Trends Biotechnol. 24: 523-529, 2006；Feldhaus et al., Nat. Biotechnol. 21: 163-70, 2003；Schlapschy et al., Protein Eng. Des. Sel. 17: 847-60, 2004を参照されたい）。
ＦＲライブラリー手法では、残基バリアントの収集物をＦＲの特定の位置に導入し、その後、ライブラリーの選択を行って、グラフト化されたＣＤＲを最良に支持するＦＲを選択する。置換される残基は、ＣＤＲ構造に潜在的に寄与することが同定された（例えば、Foote and Winter, J. Mol. Biol. 224: 487-499, 1992を参照されたい）、またはBaca et al.（J. Biol. Chem. 272: 10678-10684, 1997）によって同定されたより限定された標的残基のセットからの「バーニア（Ｖｅｒｎｉｅｒ）」残基の一部または全部を含み得る。
ＦＲシャッフリングでは、選択された残基バリアントのコンビナトリアルライブラリーを創出する代わりに、ＦＲ全体を非ヒトＣＤＲと組み合わせる（例えば、Dall'Acqua et al., Methods 36: 43-60, 2005を参照されたい）。ライブラリーを、結合について二段階選択プロセスで、まずＶＬのヒト化、その後、ＶＨについてスクリーニングすることができる。あるいは、一段階ＦＲシャッフリングプロセスを使用することができる。そのようなプロセスは、得られる抗体が発現の増強、親和性および熱安定性の増大を含めた生化学的および物理化学的特性の改善を示すので、二段階スクリーニングよりも効率的であることが示されている（例えば、Damschroder et al., Mol. Immunol. 44: 3049-60, 2007を参照されたい）。
「ヒューマニアリング（humaneering）」法は、必須の最小特異性決定因子（ＭＳＤ）の実験的同定に基づき、非ヒト断片をヒトＦＲのライブラリーに逐次的に置き換え、結合を評定することに基づく。非ヒトＶＨおよびＶＬ鎖のＣＤＲ３の領域から開始し、非ヒト抗体のＶＨおよびＶＬの両方のＣＤＲ１およびＣＤＲ２を含めた他の領域をヒトＦＲに次第に置き換えていく。この方法体系により、典型的には、エピトープの保持および別個のヒトＶセグメントＣＤＲを有する複数のサブクラスからの抗体の同定がもたらされる。ヒューマニアリングにより、ヒト生殖細胞系列遺伝子抗体と９１～９６％相同である抗体を単離することが可能になる（例えば、Alfenito, Cambridge Healthtech Institute's Third Annual PEGS, The Protein Engineering Summit, 2007を参照されたい）。
「ヒューマンエンジニアリング」法は、マウスまたはキメラ抗体または抗体断片などの非ヒト抗体または抗体断片を、抗体のアミノ酸配列に特定の変化を加えることによって変更して、ヒトにおける免疫原性が低下しているにもかかわらず、元の非ヒト抗体の望ましい結合特性を保持する、改変された抗体を作製することを伴う。一般に、この技法は、非ヒト（例えば、マウス）抗体のアミノ酸残基を「低リスク」、「中リスク」、または「高リスク」残基に分類することを伴う。分類は、特定の置換を行うことの予測される利益（例えば、ヒトにおける免疫原性について）を、得られる抗体のフォールディングに置換が影響を及ぼす、および／またはヒト残基で置換されるリスクに対して評価する包括的なリスク／リワード算出を使用して実施される。非ヒト（例えば、マウス）抗体配列の所与の位置に置換される特定のヒトアミノ酸残基（例えば、低または中リスク）は、非ヒト抗体の可変領域からのアミノ酸配列を特定のまたはコンセンサスヒト抗体配列の対応する領域とアラインメントすることによって選択することができる。非ヒト配列内の低または中リスク位置のアミノ酸残基を、アラインメントに従ってヒト抗体配列内の対応する残基で置換することができる。ヒューマンエンジニアリングされたタンパク質を作出するための技法は、Studnicka et al., Protein Engineering、7: 805-814 (1994)、米国特許第５，７６６，８８６号、同第５，７７０，１９６号、同第５，８２１，１２３号、および同第５，８６９，６１９号、ならびにＰＣＴ出願公開第ＷＯ９３／１１７９４号に、より詳細に記載されている。
一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤は、非抗体タンパク質足場を含む。かかる非抗体タンパク質足場の非限定的な例には、フィブロネクチン足場、アンチカリン、アドネクチン、アフィボディ、ＤＡＲＰｉｎ、フィノマー、アフィチン、アフィリン、アビマー、システインリッチノッチンペプチド、または操作されたクニッツ型阻害剤が含まれる。かかる非抗体タンパク質足場を生成するための方法は、当該分野で周知であり、そのうちいずれか１つが、非抗体タンパク質足場を含む多重特異性結合性作用剤を生成するために使用され得る（例えば、Simeon and Chen, Protein Cell, 9(1):3-14 (2018)；Yang et al., Annu Rev Anal Chem (Palo Alto Calif). 10(1):293-320 (2017)を参照されたい）。
多重特異性結合性作用剤およびその断片を生成するための材料がさらに提供される。例えば、単離された細胞（例えば、ハイブリドーマ）は、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体または抗体断片）を産生し得る。これに関して、細胞（例えば、単離された細胞）は、それぞれＣ４０、Ｃ５６、またはＣ５９について表１、２、または３に示されるＶＨおよびＶＬを含む第１の結合ドメインを含む抗体またはその断片を産生し得る。あるいはまたはさらに、細胞（例えば、単離された細胞）は、それぞれＰ２２、Ｐ２４、またはＰ３１．２について表４、５、または６に示されるＶＨおよびＶＬを含む第２の結合ドメインを含む抗体またはその断片を産生し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体または抗体断片）をコードする１つまたは複数の核酸配列を含み得る。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、単離されたおよび／または組換えポリヌクレオチドである。種々の態様では、単離されたポリヌクレオチドは、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）および／または抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードするヌクレオチド配列を含み、ＶＨおよびＶＬは、表１に示されるＣＤＲ、表２に示されるＣＤＲ、または表３に示されるＣＤＲと同一な相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。種々の態様では、単離されたポリヌクレオチドは、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）および／または抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードするヌクレオチド配列を含み、ＶＨおよびＶＬは、表４に示されるＣＤＲ、表５に示されるＣＤＲ、または表６に示されるＣＤＲと同一な相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
一部の実施形態では、１つまたは複数のベクター（例えば、発現ベクター）は、１つまたは複数のポリヌクレオチドを適切な宿主細胞において発現させるための１つまたは複数のポリヌクレオチドを含み得る。そのようなベクターは、例えば、ポリヌクレオチドを宿主細胞において増幅させてその有用な分量を創出するのに、および、組換え技法を使用して抗体または抗体断片などの結合性作用剤を発現させるのに有用である。
一部の実施形態では、１つまたは複数のベクターは、発現ベクターであり、ここで、１つまたは複数のポリヌクレオチドは、発現制御配列を含む１つまたは複数のポリヌクレオチドに作動可能に（operatively）連結している。ＣＤ４７に結合する抗体配列をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを組み入れるプラスミドおよびウイルスＤＮＡベクターなどの自律複製性組換え発現構築物が特に意図されている。発現制御ＤＮＡ配列としては、プロモーター、エンハンサー、およびオペレーターが挙げられ、一般に、発現構築物が利用される発現系に基づいて選択される。プロモーターおよびエンハンサー配列は、一般に、遺伝子発現を増大させる能力のために選択され、一方、オペレーター配列は、一般に、遺伝子発現を調節する能力のために選択される。発現構築物はまた、構築物を担持する宿主細胞の同定を可能にする１つまたは複数の選択マーカーをコードする配列も含み得る。発現構築物はまた、宿主細胞における相同組換えを容易にする、好ましくは促進する配列も含み得る。一部の実施形態では、発現構築物はまた、宿主細胞における複製に必要な配列も含み得る。
例示的な発現制御配列としては、哺乳動物細胞における発現のための、プロモーター／エンハンサー配列、例えば、サイトメガロウイルスプロモーター／エンハンサー（Lehner et al., J. Clin. Microbiol., 29: 2494-2502, 1991；Boshart et al., Cell、41: 521-530, 1985）；ラウス肉腫ウイルスプロモーター（Davis et al., Hum. Gene Ther., 4: 151, 1993）；Ｔｉｅプロモーター（Korhonen et al., Blood, 86(5): 1828-1835, 1995）；シミアンウイルス４０プロモーター；ＤＲＡ（アデノーマにおいてダウンレギュレートされる；Alrefai et al., Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 293: G923-G934, 2007）；ＭＣＴ１（モノカルボン酸トランスポーター１；Cuff et al., Am. J. Physiol. Gastrointet. Liver Physiol., G977-G979. 2005）；およびＭａｔｈ１（マウスアトナルホモログ１；Shroyer et al., Gastroenterology, 132: 2477-2478, 2007）が挙げられ、プロモーターは、ポリペプチドコード配列の上流（例えば、５’）に作動可能に（operatively）連結している。別の変形形態では、プロモーターは、上皮特異的プロモーターまたは内皮特異的プロモーターである。ポリヌクレオチドはまた、ポリペプチドコード配列の下流（例えば、３’）に作動可能に（operably）連結した適切なポリアデニル化配列（例えば、ＳＶ４０またはヒト成長ホルモン遺伝子ポリアデニル化配列）も必要に応じて含み得る。
所望であれば、１つまたは複数のポリヌクレオチドはまた、ポリペプチド配列とインフレームで融合した分泌シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列も必要に応じて含む。分泌シグナルペプチドは、１つまたは複数のポリヌクレオチドを発現する細胞による抗体ポリペプチドの分泌を方向づけ、細胞により、分泌されたポリペプチドから切断される。１つまたは複数のポリヌクレオチドはまた、ベクターの大規模生産を容易にするためだけに機能することが意図された配列を必要に応じてさらに含み得る。遺伝子治療のためのポリヌクレオチドの製造および投与は、種々の導入遺伝子に関する文献に記載されている手順を使用して行うことができる。例えば、Isner et al., Circulation, 91: 2687-2692, 1995；およびIsner et al., Human Gene Therapy, 7: 989-1011, 1996を参照されたい。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、抗体またはその断片（および／または任意の他のペプチド）の宿主細胞による取り込みおよび発現を容易にするための追加的な配列をさらに含み得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片をコードする「ネイキッド」導入遺伝子（例えば、トランスフェクションを容易にするためのウイルス、リポソーム、または他のベクターを伴わない導入遺伝子）を用いる。
任意の適切なベクターを使用して、抗体またはその断片をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを宿主に導入することができる。記載されている例示的なベクターとしては、これだけに限定されないが、レンチウイルスベクターを含めた複製欠損性レトロウイルスベクター（Kim et al., J. Virol., 72(1): 811-816, 1998；Kingsman & Johnson, Scrip Magazine, October, 1998, pp. 43-46）；パルボウイルスベクター、例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（米国特許第５，４７４，９３５号；同第５，１３９，９４１号；同第５，６２２，８５６号；同第５，６５８，７７６号；同第５，７７３，２８９号；同第５，７８９，３９０号；同第５，８３４，４４１号；同第５，８６３，５４１号；同第５，８５１，５２１号；同第５，２５２，４７９号；Gnatenko et al., J. Invest. Med., 45: 87-98, 1997）；アデノウイルス（ＡＶ）ベクター（米国特許第５，７９２，４５３号；同第５，８２４，５４４号；同第５，７０７，６１８号；同第５，６９３，５０９号；同第５，６７０，４８８号；同第５，５８５，３６２号；Quantin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA、89: 2581-2584, 1992；Stratford Perricaudet et al., J. Clin. Invest., 90: 626-630, 1992；およびRosenfeld et al., Cell, 68: 143-155, 1992）；アデノウイルスアデノ随伴ウイルスキメラ（米国特許第５，８５６，１５２号）またはワクシニアウイルスもしくはヘルペスウイルスベクター（米国特許第５，８７９，９３４号；同第５，８４９，５７１号；同第５，８３０，７２７号；同第５，６６１，０３３号；同第５，３２８，６８８号）；リポフェクチン媒介性遺伝子移入（ＢＲＬ）；リポソームベクター（米国特許第５，６３１，２３７号）；およびこれらの組合せが挙げられる。これらの発現ベクターはいずれも、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning, a Laboratory Manual, 2d edition, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)、およびAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, New York, N.Y. (1994)に記載されている標準の組換えＤＮＡ技法を使用して調製することができる。必要に応じて、例えば、ウイルス複製に必要な選択遺伝子を欠失させるまたは乱すことによって、ウイルスベクターに複製欠損性を付与する。
他の意図されている非ウイルス性送達機構としては、リン酸カルシウム沈殿（Graham and Van Der Eb, Virology、52: 456-467, 1973；Chen and Okayama, Mol. Cell Biol., 7: 2745-2752, 1987；Rippe et al., Mol. Cell Biol., 10: 689-695, 1990） ＤＥＡＥ－デキストラン（Gopal, Mol. Cell Biol., 5: 1188-1190, 1985）、電気穿孔（Tur-Kaspa et al., Mol. Cell Biol., 6: 716-718, 1986；Potter et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA、81: 7161-7165, 1984）、直接マイクロインジェクション（Harland and Weintraub, J. Cell Biol., 101: 1094-1099, 1985）、ＤＮＡがローディングされたリポソーム(Nicolau and Sene, Biochim. Biophys. Acta, 721: 185-190, 1982；Fraley et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA、76: 3348-3352, 1979；Felgner, Sci Am., 276(6): 102-6, 1997；Felgner, Hum Gene Ther., 7(15): 1791-3, 1996）、細胞超音波処理（Fechheimer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84: 8463-8467, 1987）、高速微粒子銃を使用した遺伝子銃（Yang et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA、87: 9568-9572, 1990）、および受容体媒介性トランスフェクション（Wu and Wu, J. Biol. Chem., 262: 4429-4432, 1987；Wu and Wu, Biochemistry, 27: 887-892, 1988；Wu and Wu, Adv. Drug Delivery Rev., 12: 159-167, 1993）が挙げられる。
発現ベクター（または本明細書で考察される抗体もしくはその断片）をリポソームに閉じ込めることができる。例えば、Ghosh and Bachhawat, In: Liver diseases, targeted diagnosis and therapy using specific receptors and ligands, Wu G、Wu C ed., New York: Marcel Dekker, pp. 87-104(1991)；Radler et al., Science, 275 (5301): 810-814, 1997）を参照されたい。「リポフェクション」技術を伴う種々の商業的手法も意図されている。一部の実施形態では、リポソームをセンダイウイルス（ＨＶＪ）と複合体形成させる。これにより、細胞膜との融合が容易になり、リポソームに封入されたＤＮＡの細胞進入が促進されることが示されている（Kaneda et al., Science、243: 375-378, 1989）。一部の実施形態では、リポソームを核非ヒストン染色体タンパク質（ＨＭＧ－１）と複合体形成させるまたはそれと併せて用いる（Kato et al., J. Biol. Chem., 266: 3361-3364, 1991）。一部の実施形態では、リポソームをＨＶＪおよびＨＭＧ－１の両方と複合体形成させるまたはそれらと併せて用いる。そのような発現構築物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏにおける核酸の移入および発現に首尾よく用いられている。一部の実施形態では、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）は、リポソームを、その表面上にＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１を発現する細胞（例えば、腫瘍細胞）に標的化するために、リポソーム中に含められる。
細胞は、１つもしくは複数のポリヌクレオチドまたは１つもしくは複数のベクターを含み得、例えば、細胞は、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つもしくは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）をコードする１つもしくは複数のポリヌクレオチド、または１つもしくは複数のポリヌクレオチドを含む１つもしくは複数のベクターで、形質転換またはトランスフェクトされる。一部の実施形態では、細胞は、Ｃ４０のＣＤＲ（例えば、表１を参照されたい）と少なくとも７５％の同一性を有する、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤を発現する。一部の実施形態では、細胞は、Ｃ５６のＣＤＲ（例えば、表２を参照されたい）と少なくとも７５％の同一性を有する、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤を発現する。一部の実施形態では、細胞は、Ｃ５９のＣＤＲ（例えば、表３を参照されたい）と少なくとも７５％の同一性を有する、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤を発現する。一部の実施形態では、細胞は、Ｐ２２のＣＤＲ（例えば、表４を参照されたい）と少なくとも７５％の同一性を有する、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤を発現する。一部の実施形態では、細胞は、Ｐ２４のＣＤＲ（例えば、表５を参照されたい）と少なくとも７５％の同一性を有する、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤を発現する。一部の実施形態では、細胞は、Ｐ３１．２のＣＤＲ（例えば、表６を参照されたい）と少なくとも７５％の同一性を有する、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤を発現する。細胞は、原核細胞、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉなど（例えば、Pluckthun et al., Methods Enzymol., 178: 497-515, 1989を参照されたい）、または真核細胞、例えば、動物細胞（例えば、骨髄腫細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはハイブリドーマ細胞）、酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、または植物細胞（例えば、タバコ、トウモロコシ、ダイズ、またはイネ細胞）であり得る。哺乳動物宿主細胞を使用することにより、組換え発現産物に最適な生物活性を付与するために望ましい可能性がある翻訳修飾（例えば、グリコシル化、短縮、脂質付加、およびリン酸化）をもたらすことができる。同様に、ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体））は、グリコシル化もしくは非グリコシル化され得、および／または１つもしくは複数の水溶性ポリマーの結合、例えば、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、もしくはポリプロピレングリコールを含むように共有結合的に改変されている。
ＤＮＡまたはＲＮＡを宿主細胞に導入するための方法は周知であり、それらとして、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔、核注射、またはリポソーム、ミセル、ゴースト細胞、およびプロトプラストなどの担体との融合が挙げられる。そのような宿主細胞は、ポリヌクレオチドを増幅させるのに有用であり、また、ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを発現させるのにも有用である。この点について、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）を作製するためのプロセスは、宿主細胞を培養することおよび多重特異性結合性作用剤を単離することを含み得る。ネイキッドＤＮＡ発現構築物の細胞への移入は、粒子衝撃を使用して実現することができ、これは、ＤＮＡコーティングされた微粒子銃を高速度まで加速し、それらが細胞膜を貫通して、細胞を死滅させることなく細胞内に進入することを可能にする能力に依存するものである（Klein et al., Nature, 327: 70-73, 1987）。小粒子を加速させるためのいくつかのデバイスが開発されている。そのようなデバイスの１つは、高圧放電に依拠して電流を生じさせ、今度はそれにより原動力をもたらすものである（Yang et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA、87: 9568-9572, 1990）。使用される微粒子銃は、タングステンまたは金ビーズなどの生物学的に不活性な物質からなるものであった。宿主細胞を単離および／または精製することができる。宿主細胞はまた、ｉｎ ｖｉｖｏでポリペプチドの一過性のまたは恒久的な発現を引き起こすようにｉｎ ｖｉｖｏで形質転換された細胞であってもよい。宿主細胞はまた、ｅｘ ｖｉｖｏで形質転換され、例えば、治療目的でｉｎ ｖｉｖｏでポリペプチドを産生させるために形質転換後に導入された、単離された細胞であってもよい。トランスジェニックヒトは宿主細胞の定義から明確に除外される。
ポリヌクレオチドから抗体を作製するための種々の方法が一般に周知である。例えば、基本的な分子生物学の手順は、Maniatis et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual、2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1989（Maniatis et al, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 2001も参照されたい）に記載されている。さらに、多数の刊行物に、ＤＮＡのマニピュレーション、発現ベクターの創出、ならびに適当な細胞の形質転換および培養による抗体の調製に適した技法が記載されている（例えば、Mountain and Adair, Chapter 1 in Biotechnology and Genetic Engineering Reviews, Tombs ed., Intercept, Andover, UK, 1992；およびCurrent Protocols in Molecular Biology, Ausubel ed., Wiley Interscience, New York, 1999を参照されたい）。
ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）は、上記のものを含め、任意の適切な方法を使用して産生される、例えば、免疫化された動物から単離され、組換えによってもしくは合成によって生成され、または遺伝子操作される。抗体に由来する抗体断片は、例えば、抗体のタンパク質分解性加水分解によって得られる。例えば、抗体全体のパパインまたはペプシン消化は、それぞれＦ（ａｂ’）２と呼ばれる５Ｓ断片、または２つの一価Ｆａｂ断片と、Ｆｃ断片とを生じる。Ｆ（ａｂ）２は、３．５ＳのＦａｂ一価断片を産生するために、チオール還元剤を使用してさらに切断され得る。抗体断片を生成する方法は、例えば、Edelman et al., Methods in Enzymology, 1: 422 Academic Press (1967)；Nisonoff et al., Arch. Biochem. Biophys., 89: 230-244, 1960；Porter, Biochem. J., 73: 119-127, 1959；米国特許第４，３３１，６４７号；およびAndrews, S.M. and Titus, J.A. in Current Protocols in Immunology (Coligan et al., eds), John Wiley & Sons, New York (2003), pages 2.8.1 2.8.10 and 2.10A.1 2.10A.5にさらに記載されている。
ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）は、遺伝子操作され得る。例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）は、例えば、組換えＤＮＡ操作技法によって生成された可変領域ドメインを含む。この点について、上記を含め、目的の抗体を作製するために、抗体のアミノ酸配列における挿入、欠失、または変化によって可変領域を必要に応じて改変する。目的の相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードするポリヌクレオチドを、例えば、抗体産生細胞のｍＲＮＡを鋳型として使用し、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して可変領域を合成することによって調製する（例えば、Courtenay Luck, "Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies," in Monoclonal Antibodies: Production, Engineering and Clinical Application, Ritter et al. (eds.), page 166 （Cambridge University Press 1995）；Ward et al., "Genetic Manipulation and Expression of Antibodies," in Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Birch et al., (eds.), page 137 (Wiley Liss, Inc. 1995)；およびLarrick et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology, 2: 106-110, 1991を参照されたい）。現行の抗体マニピュレーション技法では、第１の抗体からの少なくとも１つのＣＤＲおよび必要に応じて１つまたは複数のフレームワークアミノ酸、ならびに第２の抗体からの残りの可変領域ドメインを含有する、操作された可変領域ドメインを構築することが可能である。そのような技法は、例えば、抗体をヒト化するため、または結合性標的に対する抗体の親和性を改善するために使用される。
「ヒト化抗体」は、非ヒト免疫グロブリンの重鎖可変および軽鎖可変のＣＤＲがヒト可変ドメインに移入された抗体である。定常領域は存在する必要はないが、存在する場合には、必要に応じて、ヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一である、例えば、一部の実施形態では、少なくとも約８５～９０％、約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれよりも大きく同一である。したがって、一部の場合では、おそらくＣＤＲ以外のヒト化免疫グロブリンの全ての部分が、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。例えば、ヒト化抗体は、宿主抗体の超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）由来の超可変領域残基によって置き換えられたヒト免疫グロブリン（例えば、宿主抗体）である。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）は、その疾患、障害、または状態の１つまたは複数の症状を含めた免疫細胞機能不全疾患、障害または状態（例えば、食細胞機能不全疾患、障害、もしくは状態またはＴ細胞機能不全疾患、障害もしくは状態）を処置、予防、または緩和する組成物および方法において有用である。食細胞機能不全疾患、障害、および状態には、腫瘍細胞がＣＤ４７を過剰発現する任意のがんが含まれるがこれに限定されない、腫瘍免疫および関連するがんが含まれる。Ｔ細胞機能不全疾患、障害、および状態には、腫瘍細胞がＰＤ－Ｌ１を発現または過剰発現する任意のがんが含まれるがこれに限定されない、腫瘍免疫および関連するがんが含まれる。かかるＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１発現性腫瘍細胞は、免疫監視およびクリアランスを腫瘍細胞が逃れること（例えば、腫瘍免疫）を助け得る。さらに、本明細書に記載される多重特異性結合性作用剤、例えば、ＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の追加の標的（例えば、ＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性抗体（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）は、ＳＩＲＰαシグナル伝達および／またはＰＤ－１シグナル伝達を阻害するため、食細胞機能および／または免疫監視を増強するため、ならびに腫瘍細胞の除去を増強するために有用である。
一部の実施形態では、対象における腫瘍免疫を処置するための方法であって、対象に、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つもしくは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）またはその断片、あるいは本明細書に記載される結合性作用剤（例えば、抗体）を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法が、本明細書に記載される。
一部の実施形態では、対象におけるがんまたは腫瘍を処置するための方法であって、対象に、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つもしくは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）またはその断片、あるいは本明細書に記載される結合性作用剤（例えば、抗体）を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法が、本明細書に記載される。
一部の実施形態では、対象におけるがんまたは腫瘍に付随する１つまたは複数の症状を緩和するための方法であって、対象に、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つもしくは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）またはその断片、あるいは本明細書に記載される結合性作用剤（例えば、抗体）を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法が、本明細書に記載される。
一部の実施形態では、腫瘍を有する対象における腫瘍サイズを縮小するための方法であって、対象に、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つもしくは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）またはその断片、あるいは本明細書に記載される結合性作用剤（例えば、抗体）を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法が、本明細書に記載される。
一部の実施形態では、腫瘍を有する対象における腫瘍細胞除去を増強するための方法であって、対象に、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つもしくは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）またはその断片、あるいは本明細書に記載される結合性作用剤（例えば、抗体）を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法が、本明細書に記載される。
一部の実施形態では、対象における食細胞機能不全疾患、障害または状態を処置するための方法であって、対象に、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つもしくは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）またはその断片、あるいは本明細書に記載される結合性作用剤（例えば、抗体）を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法が、本明細書に記載される。
一部の実施形態では、対象における免疫細胞によるファゴサイトーシスを増大させるための方法であって、対象に、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つもしくは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）またはその断片、あるいは本明細書に記載される結合性作用剤（例えば、抗体）を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、免疫細胞は、マクロファージ、好中球、樹状細胞、またはＢリンパ球である。一部の実施形態では、対象は、がんまたは腫瘍の診断を受けている。
一部の実施形態では、対象におけるＴ細胞機能不全疾患、障害または状態を処置するための方法であって、対象に、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つもしくは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）またはその断片、あるいは本明細書に記載される結合性作用剤（例えば、抗体）を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、Ｔ細胞機能不全疾患、障害または状態は、腫瘍免疫である。
一部の実施形態では、対象におけるＴ細胞機能を増強するための方法であって、対象に、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つもしくは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）またはその断片、あるいは本明細書に記載される結合性作用剤（例えば、抗体）を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、Ｔ細胞機能は、サイトカインの分泌である。一部の実施形態では、Ｔ細胞機能は、腫瘍細胞の除去である。一部の実施形態では、対象は、がんまたは腫瘍の診断を受けている。
上記方法の対象には、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つもしくは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）またはその断片、あるいは本明細書に記載される結合性作用剤（例えば、抗体）を含む医薬組成物と組み合わせた、本明細書に記載される１つまたは複数の治療剤が投与され得る。
一部の実施形態では、例えば、Kabat et al. (1991) Sequences of proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242に記載されている通り、抗体は、これだけに限定されないが、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来するものである可変領域を有する抗体を含めた、ヒト抗体である。抗体が定常領域を含有する場合、定常領域もヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来するものであることが好ましい。ヒト抗体は、例えば、抗体の活性を増強するために、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基を含み得るが、他の種に由来するＣＤＲ（例えば、ヒト可変フレームワーク領域内に位置付けられたマウスＣＤＲ）は含まない。
一部の実施形態では、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）は、細胞培養物中の細胞のファゴサイトーシスを増大させ、および／または食作用活性を増強する。例えば、かかる細胞培養物は、ＣＤ４７を発現または過剰発現する腫瘍細胞を含み得る。一部の実施形態では、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）は、細胞培養物中の細胞のＴ細胞機能を増大させる、および／または細胞溶解活性を増強する。かかる細胞培養物は、ＰＤ－Ｌ１を発現または過剰発現する腫瘍細胞を含み得る。一部の実施形態では、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１に結合する多重特異性結合性作用剤を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）は、細胞培養物中の細胞のファゴサイトーシスを増大させ、食作用活性を増強し、Ｔ細胞機能を増大させ、および／または細胞溶解活性を増強する。かかる細胞培養物は、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１を発現または過剰発現する腫瘍細胞を含み得る。腫瘍細胞には、乳房がん細胞、膀胱がん細胞、黒色腫細胞、前立腺がん細胞、中皮腫細胞、肺がん細胞、精巣がん細胞、甲状腺がん細胞、扁平上皮癌細胞、神経膠芽腫細胞、神経芽細胞腫細胞、子宮がん細胞、結腸直腸がん細胞、および膵がん細胞が含まれるがこれらに限定されない。
一部の実施形態では、対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法が、本明細書に記載される。例えば、この方法は、腫瘍細胞の増殖を阻害するのに有効な量の多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）、例えば、本明細書に記載されるヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を投与するステップを含む。一部の実施形態では、この方法は、ヒトＣＤ４７への結合について、抗体Ｃ４０、抗体Ｃ５６、および／または抗体Ｃ５９（例えば、表１、２および／または３のＣＤＲおよびＶＨ／ＶＬを参照されたい）と競合し、ならびに／あるいは抗体Ｃ４０、抗体Ｃ５６、および／または抗体Ｃ５９（例えば、表１、２および／または３のＣＤＲおよびＶＨ／ＶＬを参照されたい）によって認識されるＣＤ４７の領域に結合する多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）を投与するステップを含み、腫瘍細胞の除去の増強を生じる。一部の実施形態では、この方法は、ヒトＰＤ－Ｌ１への結合について、抗体Ｐ２２、抗体Ｐ２４、および／または抗体Ｐ３１．２（例えば、表４、５および／または６のＣＤＲおよびＶＨ／ＶＬを参照されたい）と競合し、ならびに／あるいは抗体Ｐ２２、抗体Ｐ２４、および／または抗体Ｐ３１．２（例えば、表４、５および／または６のＣＤＲおよびＶＨ／ＶＬを参照されたい）によって認識されるＰＤ－Ｌ１の領域に結合する多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）を投与するステップを含み、腫瘍細胞の除去の増強を生じる。一部の実施形態では、上記１つまたは複数のポリヌクレオチド、ベクター、および／または細胞は、腫瘍細胞の除去をｉｎ ｖｉｖｏで増強する方法において（例えば、対象におけるがんを処置する方法において）使用され得る。
対象における腫瘍成長をモジュレートする（例えば、阻害する、低減させる、防止する）方法も提供される。例えば、方法は、対象に、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）を含む組成物を、対象における腫瘍成長をモジュレートするために有効な量で投与するステップを含む。「腫瘍」は、悪性であるか良性であるかにかかわらず、あらゆる新生細胞の成長または増殖、ならびに全ての前がん性およびがん性細胞および組織を指す。「がん」および「がん性」という用語は、典型的には、調節されない細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理的状態を指すまたは記載する。がんの例としては、これだけに限定されないが、乳がん、結腸がん、腎がん、肺がん、扁平上皮細胞骨髄性白血病、血管腫、黒色腫、星状細胞腫、および神経膠芽腫、ならびに、これだけに限定されないが、以下を含めた他の細胞増殖性疾患状態：心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫および奇形腫；肺：気管支原性肺癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨腫性過誤腫、イネソテリオーマ（inesothelioma）；胃腸：食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（管状腺癌、インスリノーマ（insulinorna）、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、ＶＩＰ産生腫瘍）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、尿細管腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）；泌尿生殖器：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍（腎芽腫）、リンパ腫、白血病、腎細胞癌）、膀胱および尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺（前立腺の腺癌、肉腫、小細胞癌）、精巣（セミノーマ、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、脂肪腫）；肝臓：ヘパトーマ（肝細胞癌）、胆管細胞癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫；骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網肉腫）、悪性巨細胞腫脊索腫、オステイクロンフローマ（osteochronfroma）（骨軟骨性外骨腫）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫および巨細胞腫；神経系：頭蓋骨（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星状細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫（松果体腫）、多形神経膠芽腫、乏枝神経膠腫、シュワン細胞腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）；婦人科：子宮（子宮内膜癌）、子宮頸部（子宮頸癌、前腫瘍子宮頸部異形成）、卵巣（卵巣癌）漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、未分類癌、顆粒膜細胞腫瘍、セルトリ－ライディッヒ細胞腫、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰部（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫）、卵管（癌腫）；血液：血液（骨髄性白血病（急性および慢性）、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（悪性リンパ腫）；皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、黒子異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬；ならびに副腎：神経芽細胞腫、さらには甲状腺髄様がんを含めた甲状腺のがんが挙げられる。多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を、単独でまたは別の作用剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することによってがんを処置する方法もまた提供される。
腫瘍細胞除去を「増強すること」は、除去の１００％の増強を要求するものではない。除去率の任意の増強が意図されている。同様に、腫瘍成長を「モジュレートすること」は、腫瘍のサイズを縮小すること、腫瘍成長を緩徐化すること、または既存の腫瘍のサイズの増大を阻害することを指す。腫瘍の完全な消滅は要求されない；任意の腫瘍サイズの縮小または腫瘍成長の緩徐化が対象における有益な生物学的効果を構成する。この点について、腫瘍細胞除去は、例えば、方法の非存在下で（例えば、方法の作用剤に曝露されていない生物学的に釣り合わせた対照対象または検体において）観察される除去のレベルと比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％または少なくとも約２０％増強され得る。効果は、例えば、腫瘍サイズの縮小、腫瘍マーカーのレベルの低下もしくは維持、または腫瘍細胞集団の減少もしくは維持によって検出される。一部の実施形態では、腫瘍細胞の除去は、例えば、方法の多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の非存在下での腫瘍細胞の除去と比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、またはそれよりも大きく（約１００％）増強される。
さらに、多重特異性結合性作用剤（例えば、二特異性抗体などの抗体）を使用して、がんに付随する副作用、例えば、骨劣化、脊椎陥没、および麻痺などを緩和するまたは低減させることができる。一態様では、対象は、骨転移を被っているまたはそのリスクがあり、そこで、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）を周囲の骨の劣化が低減される量で投与する。したがって、一部の態様では、多重特異性結合性作用剤により、骨転移に起因する骨劣化が防止され、ここで、腫瘍細胞の増殖は、低減するかまたは低減しない。一部の態様では、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）により、骨転移に起因する骨劣化の防止と腫瘍細胞の増殖の低減の両方がなされる。一般に、腫瘍細胞の増殖に対する効果（例えば、増殖の阻害または増殖に対する効果がないこと）は、特定の転移の微小環境に依存する。例えば、相当量の１型コラーゲンを有する微小環境中に位置する転移の増殖は阻害され得る。対照的に、相当量の１型コラーゲンを欠く微小環境中に位置する転移の増殖は阻害されない可能性があるが、それにもかかわらず、転移の付近の骨劣化は低減するまたは防止される。
特定の対象に対する多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）の特定の投与レジメンは、一部において、使用される作用剤、投与される作用剤の量、投与経路、ならびにあらゆる副作用の原因および程度に依存する。対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与される作用剤（例えば、抗体）の量は、妥当な時間枠にわたって所望の応答をもたらすために十分なものであるべきである。したがって、一部の実施形態では、対象に投与される本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）または医薬組成物の量は、有効量である。一部の実施形態では、対象に投与される本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）または医薬組成物の量は、治療有効量である。一部の態様では、方法は、例えば、約０．１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで、またはそれよりも多くまでを投与するステップを含む。一部の実施形態では、投薬量は、約１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで；または約５μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで；または約１０μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまで；または約１ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇまで；または約２ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇまで；または約３ｍｇ／ｋｇから約２５ｍｇ／ｋｇまで；または約３ｍｇ／ｋｇから約２５ｍｇ／ｋｇまで；または約５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇまで；または約１０ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇまで；または約１０ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇまでにわたる。一部の状態または疾患状態は、複数回の投与（例えば、３日間、７日間、２週間、３週間、１か月間、３か月間、６か月間、９か月間、１２か月間、１５か月間、１８か月間、２１か月間、２年間、またはそれよりも長い処置期間にわたって、毎日、１週間に３回、１週間に１回、２週間毎に１回、または毎月１回）にわたって、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）を含めた多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体、例えば、二重特異性抗体）の用量を投与することを伴っても伴わなくてもよい、長期の処置を要求する。
多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）を含む組成物を投与する適切な経路は、当該分野で周知である。１つよりも多くの経路が、作用剤（例えば、抗体）を投与するために使用され得るが、特定の経路が、別の経路よりも迅速かつ有効な反応を提供し得る。状況に依存して、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含む組成物は、体腔中に適用されもしくは植え付けられ、皮膚もしくは粘膜を介して吸収され、摂取され、吸入され、および／または循環中に導入される。例えば、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含む組成物を、静脈内、皮下、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内、病巣内、髄内、くも膜下腔内、心室内（ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、経腸、外用、舌下、尿道、膣、もしくは直腸手段による注射を介して、徐放システムによって、または移植デバイスによって送達することが望ましい場合がある。所望により、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤は、目的の領域に供給する動脈内または静脈内投与を介して、例えば、肝臓への送達のために肝動脈を介して、領域性に投与される。あるいは、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤は、結合性作用剤が吸収または封入されたメンブレン、スポンジ、または別の適切な材料の移植を介して局所的に投与される。移植デバイスが使用される場合、このデバイスは、一態様では、任意の適切な組織または臓器中に移植され、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤の送達は、例えば、拡散、持続放出（ｔｉｍｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅ）ボーラス、または継続的投与を介してである。他の態様では、多重特異性結合性作用剤は、腫瘍切除または他の外科的手順の間に、露出された組織に直接的に投与される。
本開示は、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤、および担体（例えば、薬学的に許容される担体）を含む組成物、例えば、医薬組成物を提供する。使用される特定の担体は、化学－物理的考慮事項、例えば、溶解度、および結合性作用剤または併用治療との反応性の欠如、ならびに投与経路に依存し得る。薬学的に許容される担体は、当該分野で周知であり、その例は、本明細書に記載される。注射可能な使用に適切な例示的な医薬品形態には、無菌水性溶液または分散物、および無菌の注射可能な溶液または分散物の即座の調製のための無菌粉末が含まれる。注射可能な製剤は、例えば、Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J. B. Lippincott Co., Philadelphia. Pa., Banker and Chalmers. eds., pages 238-250 (1982)、およびASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 4th ed., pages 622-630 (1986)にさらに記載されている。多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤を含む医薬組成物は、一態様では、かかる医薬組成物の使用に関する使用説明書を提供する包装材料と共に、容器内に配置される。一般に、かかる使用説明書は、試薬濃度、ならびに、一部の実施形態では、医薬組成物を再構成するために必要であり得る賦形剤成分または希釈剤（例えば、水、食塩水またはＰＢＳ）の相対的な量を記載する有形の表現を含む。
一部の態様では、本明細書に記載される方法は、組成物中に存在し得る、あるいは多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）、例えば、ヒトＣＤ４７を含めたＣＤ４７およびＣＤ４７ではない１つもしくは複数の標的（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１を含めたＰＤ－Ｌ１）に結合する多重特異性結合性作用剤と共に投与され得る、または同じもしくは異なる投与経路を使用して別々の組成物中で提供され得る、治療剤（例えば、併用療法）を含めた１つまたは複数の追加の作用剤を投与するステップをさらに含む。治療剤を含めた１つまたは複数の追加の作用剤は、多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）と一緒にまたは別々に（例えば、同時に、代替的に、順次）投与され得る。かかる追加の治療剤には、治療抗体、免疫療法、細胞傷害剤、化学療法剤、および阻害剤が含まれるがこれらに限定されない。
使用され得る治療抗体には、トラスツズマブ；アブシキシマブ；ダクリズマブ；ＢＥＣ２；ＩＭＣ－Ｃ２２；ビタキシン（ｖｉｔａｘｉｎ）；Ｃａｍｐａｔｈ １Ｈ／ＬＤＰ－０３；Ｓｍａｒｔ Ｍ１９５；エプラツズマブ；ベクツモマブ；ビジリズマブ；ＣＭ３、ヒト化抗ＩＣＡＭ３抗体；ＩＤＥＣ－ｌ １４；イブリツモマブチウキセタン；ＩＤＥＣ－１３１；ＩＤＥＣ－１５１；ＩＤＥＣ－１５２；ＳＭＡＲＴ抗ＣＤ３；エクリズマブ；アダリムマブ；セルトリズマブ；ＩＤＥＣ－ｌ ５１；ＭＤＸ－ＣＤ４；ＣＤ２０－ストレプトアビジン（sreptdavidin）；ＣＤＰ５７１；ＬＤＰ－０２；ＯｒｔｈｏＣｌｏｎｅ ＯＫＴ４Ａ；ルプリズマブ（ｒｕｐｌｉｚｕｍａｂ）；ナタリズマブ；およびレルデリムマブ（ｌｅｒｄｅｌｉｍｕｍａｂ）が含まれるがこれらに限定されない。
使用され得る免疫療法には、サイトカイン、例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）－ｌ－アルファ、インターロイキン（ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、およびＩＬ－２７が含まれる）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－アルファが含まれる）、およびインターフェロン（ＩＦＮ－アルファ、ＩＦＮ－ベータ、およびＩＦＮ－ガンマが含まれる）；水酸化アルミニウム（ａｌｕｍ）；カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）；キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）；フロイント不完全アジュバント（ＩＦ Ａ）；ＱＳ－２１；ＤＥＴＯＸ；レバミソール；およびジニトロフェニル（ＤＮＰ）、ならびにそれらの組合せ、例えば、インターロイキン、例えば、ＩＬ－２と、他のサイトカイン、例えば、ＩＦＮ－アルファとの組合せなどが含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、免疫療法には、免疫応答をモジュレートする免疫療法剤、例えば、チェックポイント阻害剤またはチェックポイントアゴニストが含まれる。一部の実施形態では、免疫療法剤は、当該分野で公知のものの中でも、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－ｌ、－３および／または－５）、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦベータ、ＯＸ４０、４１ＢＢ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、ＧＩＴＲ、ＴＧＦ－ベータ、ＴＩＭ－３、ＳＩＲＰ－アルファ、ＶＳＩＧ８、ＢＴＬＡ、ＳＩＧＬＥＣ７、ＳＩＧＬＥＣ９、ＩＣＯＳ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＦＡＳ、および／またはＢＴＮＬ２を標的化する抗体モジュレーターである。一部の実施形態では、免疫療法剤は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性を増大させる、免疫応答の抑制を阻害する、サプレッサー細胞もしくはサプレッサー細胞活性を阻害する、Ｔｒｅｇ活性を阻害する、または阻害性免疫チェックポイント受容体の活性を阻害する作用剤である。
一部の実施形態では、免疫療法剤には、共刺激分子のアゴニストまたは活性化因子から選択されるＴ細胞モジュレーターが含まれる。一実施形態では、共刺激分子のアゴニストは、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＳＬＡＭ（例えば、ＳＬＡＭＦ７）、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－ｌ、ＬＦＡ－ｌ（ＣＤ１ ｌａ／ＣＤｌ８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＣＤ７、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、またはＣＤ８３リガンドのアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、または可溶性融合物）から選択される。他の実施形態では、エフェクター細胞組合せは、二重特異性Ｔ細胞係合子（例えば、ＣＤ３および腫瘍抗原（例えば、とりわけ、ＥＧＦＲ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２）に結合する二重特異性抗体分子）を含む。
使用することができる細胞傷害性作用剤としては、細胞機能を阻害もしくは防止する、および／または細胞の死滅もしくは破壊を引き起こす物質が挙げられる。例示的な細胞傷害性作用剤としては、これだけに限定されないが、放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、１１３１、１１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２およびＬｕの放射性同位元素）；成長阻害剤；核酸分解酵素などの酵素およびその断片；ならびに、断片および／またはバリアントを含めた、細菌、真菌、植物または動物起源の小分子毒素または酵素的に活性な毒素などの毒素が挙げられる。他の例示的な細胞傷害性作用剤は、微小管阻害剤、白金配位錯体、アルキル化剤、抗生剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗薬、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモンおよびホルモン類似体、シグナルトランスダクション経路阻害剤、非受容体型チロシンキナーゼ血管新生阻害剤、免疫療法剤、アポトーシス促進剤、ＬＤＨ－Ａの阻害剤；脂肪酸生合成の阻害剤；細胞周期シグナル伝達阻害剤；ＨＤＡＣ阻害剤、プロテアソーム阻害剤；ならびにがん代謝の阻害剤から選択することができる。
使用することができる化学療法剤としては、がんの処置に有用な化学化合物が挙げられる。化学療法剤の例としては、これだけに限定されないが、エルロチニブ、ボルテゾミブ、ジスルフィラム、没食子酸エピガロカテキン、サリノスポラミドＡ、カーフィルゾミブ、ｌ７－ＡＡＧ（ゲルダナマイシン）、ラディシコール、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨ－Ａ）、フルベストラント、スニチニブ、レトロゾール、メシル酸イマチニブ、フマスネート（fmasunate）、オキサリプラチン、５－ＦＥＴ（５－フルオロウラシル）、ロイコボリン、ラパマイシン、ラパチニブ、ロナファミブ（ＳＣＨ６６３３６）、ソラフェニブ、Ｂａｙｅｒ Ｌａｂｓ、ゲフィチニブ、ＡＧ１４７８；チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）などのアルキル化剤；シクロホスファミド；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、およびウレドパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチロメラミンを含めたエチレンイミンおよびメチルアメラミン（methylamelamine）；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（トポテカンおよびイリノテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（cally statin）；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；副腎皮質ステロイド（プレドニゾンおよびプレドニゾロンを含む）；酢酸シプロテロン；フィナステリドおよびデュタステリドを含めた５アルファ－レダクターゼ；ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、モセチノスタットドラスタチン；アルデスロイキン、タルクデュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；クロラムブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチンなどのニトロソ尿素；エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特にカリチアマイシンガンマＩＩおよびカリチアマイシンオメガＩ（Angew Chem. Inti. Ed. Engl. 1994 33: 183-186）などの抗生物質；ジネミシンＡを含めたジネミシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラミシン、ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン（carabicin）、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキセートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗薬；デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フォリン酸（frolinic acid）などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルホミチン；エリプチニウム酢酸塩；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシンおよびアンサマイトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダムノール；ニトラクリン（nitraerine）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジン；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン（sizofuran）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン、特にＴ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド「Ａｒａ－Ｃ」；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（クレモフォール不使用）、パクリタキセルのアルブミンで操作されたナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌｌ．）、およびドセタキセル／ドキセタキセル；クロラムブシル；ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン；イバンドロネート；ＣＰＴ－ｌ ｌ；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；ならびに、上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸および誘導体が挙げられる。化学療法剤としては、（ｉ）腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えば、タモキシフェン（クエン酸タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびトレミフェンクエン酸塩；（ｉｉ）副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール、エキセメスタン、ホルメスタン、ファドロゾール、ボロゾール、レトロゾール、およびアナストロゾールなど；（ｉｉｉ）抗アンドロゲン薬、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドおよびゴセレリン；ブセレリン、トリプトレリン（tripterelin）、酢酸メドロキシプロゲステロン、ジエチルスチルベストロール、プレマリン、フルオキシメステロン、全トランス型レチノイン酸、フェンレチニド、ならびにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）など；（ｉｖ）プロテインキナーゼ阻害剤、（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤、（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関係づけられるシグナル伝達経路内の遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ－アルファ、ＲａｌｆおよびＨ－Ｒａｓなど、（ｖｉｉ）リボザイム、例えば、ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標））およびＨＥＲ２発現阻害剤など；（ｖｉｉｉ）ワクチン、例えば、遺伝子治療用ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）、ｒＩＬ－２；トポイソメラーゼ１阻害剤、例えば、ＬＥＩＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）など；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）、ならびに（ｉｘ）上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸および誘導体も挙げられる。
化学療法剤としては、上記の通り、アレムツズマブ、ベバシズマブ；セツキシマブ；パニツムマブ、リツキシマブ、ペルツズマブ、トシツモマブ、および抗体－薬物コンジュゲート、ゲムツズマブオゾガマイシンを含めた抗体も挙げられる。本明細書に記載の多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）と組み合わせる作用剤としての治療的潜在性を有する追加的なヒト化モノクローナル抗体としては、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネオズマブ、ビバツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、シドフシツズマブ、シドツズマブ、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノロビズマブ、ヌマビズマブ、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクツズマブ、パキセリズマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ、レスリビズマブ、レスリズマブ、レシビズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ、ソンツズマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ、ツコツズマブ セルモロイキン、ツクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、ビシリズマブ、および、インターロイキン－１２ｐ４０タンパク質を認識するように遺伝子改変された組換え型、排他的にヒト配列の全長ＩｇＧ１λ抗体である抗インターロイキン－ｌ２（ＡＢＴ－８７４４６９５、Ｗｙｅｔｈ ＲｅｓｅａｒｃｈおよびＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）が挙げられる。化学療法剤としては、デキサメタゾン、インターフェロン、コルヒチン、メトプリン、シクロスポリン、アンホテリシン、メトロニダゾール、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アミホスチン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、生ＢＣＧ、ベバクジマブ、ベキサロテン、クラドリビン、クロファラビン、ダルベポエチンアルファ、デニロイキン、デクスラゾキサン、エポエチンアルファ、エロチニブ、フィルグラスチム、酢酸ヒストレリン、イブリツモマブ、インターフェロンアルファ－２ａ、インターフェロンアルファ－２ｂ、レナリドマイド、レバミソール、メスナ、メトキサレン、ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ、オプレルベキン、パリフェルミン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペグアスパラガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセドナトリウム、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、キナクリン、ラスブリカーゼ、サルグラモスチム、テモゾロミド、ＶＭ－２６、６－ＴＧ、トレミフェン、トレチノイン、ＡＴＲＡ、バルルビシン、ゾレドロネート、およびゾレドロン酸、ならびに薬学的に許容されるその塩も挙げられる。
化学療法剤としては、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン酢酸エステル、コルチゾン酢酸エステル、チキソコルトールピバレート、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ベタメタゾン、ベタメタゾンリン酸エステルナトリウム、デキサメタゾン、デキサメタゾンリン酸エステルナトリウム、フルオコルトロン、ヒドロコルチゾンｌ７－酪酸エステル、ヒドロコルチゾン１７－吉草酸エステル、アルクロメタゾンプロピオン酸エステル、ベタメタゾン吉草酸エステル、ベタメタゾンジプロピオン酸エステル、プレドニカルベート、クロベタゾン－ｌ ７－酪酸エステル、クロベタゾール－ｌ ７－プロピオン酸エステル、フルオコルトロンカプロン酸エステル、フルオコルトロンピバル酸エステルおよびフルプレドニデン酢酸エステル；免疫選択的抗炎症性ペプチド（ＩｍＳＡＩＤ）、例えば、フェニルアラニン－グルタミン－グリシン（ＦＥＧ）およびそのＤ－異性体形態（ｆｅＧ）（ＩＭＵＬＡＮ ＢｉｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＬＬＣ）；抗リウマチ薬、例えば、アザチオプリン、シクロスポリン（シクロスポリンＡ）、Ｄ－ペニシラミン、金塩、ヒドロキシクロロキン、レフルノミドミノサイクリン、スルファサラジン、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦアルファ）遮断薬、例えば、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ）など、アナキンラなどのインターロイキン１（ＩＬ－ｌ）遮断薬、アバタセプトなどのＴ細胞共刺激遮断薬、トシリズマブなどのインターロイキン６（ＩＬ－６）遮断薬；インターロイキン１３（ＩＬ－ｌ３）遮断薬、例えば、レブリキズマブなど；インターフェロンアルファ（ＩＦＮ）遮断薬、例えば、ロンタリズマブなど；ベータ７インテグリン遮断薬、例えば、ｒｈｕＭＡｂ Ｂｅｔａ７など；ＩｇＥ経路遮断薬、例えば、Ａｎｔｉ－Ｍｌ ｐｒｉｍｅなど；分泌型ホモ三量体ＬＴａ３および膜結合型ヘテロ三量体ＬＴａｌ／ｌ３２遮断薬、例えば、抗リンホトキシンアルファ（ＬＴａ）など；様々な治験薬剤、例えば、チオプラチン、ＰＳ－３４１、フェニル酪酸、ＥＴ－Ｉ８－ＯＣＨ３、またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（Ｌ－７３９７４９、Ｌ－７４４８３２）；ポリフェノール、例えば、ケルセチン、レスベラトロール、ピセタノール、没食子酸エピガロカテキン、テアフラビン、フラバノール、プロシアニジン、ベツリン酸およびこれらの誘導体；オートファジー阻害剤、例えば、クロロキン；デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール）など；ベータ－ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；アセチルカンプトテシン、スコポレチン、および９－アミノカンプトテシン；ポドフィロトキシン；テガフール；ベキサロテン；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート、エチドロネート、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート、アレンドロネート、パミドロネート、チルドロネート、またはリセドロネートなど；および上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）；ワクチン、例えば、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチンなど；ペリホシン、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ＣＣＩ－７７９；チピファミブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；Ｂｃｌ－２阻害剤、例えば、オブリメルセンナトリウムピキサントロンなど；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、ロナファミブ（ＳＣＨ ６６３６）など；ならびに、上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体、ならびに上記のうちの２つまたはそれよりも多くの組合せ、例えば、ＣＨＯＰ、これはシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語である；およびＦＯＬＦＯＸ、これは、オキサリプラチンを５－ＦＵおよびロイコボリンと組み合わせて用いる処置レジメンの略語である、も挙げられる。化学療法剤としては、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤：オラパリブ、ルカパリブ（rucaprib）、ニラパリブ、タルゾパリブも挙げられる。
使用することができる阻害剤としては、これだけに限定されないが、イマチニブ、バリシチニブ ゲフィチニブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、ダサチニブ、スニチニブ、ラパチニブ、ニロチニブ、ピルフェニドン、パゾパニブ、クリゾチニブ、ベムラフェニブ、バンデタニブ、ルクソリチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、レゴラフェニブ、トファシチニブ、カボザンチニブ、ポナチニブ、トラメチニブ、ダブラフェニブ、アファチニブ、イブルチニブ、セリチニブ、イデラリシブ、ニンテダニブ、パルボシクリブ、レンバチニブ、コビメチニブ、アベマシクリブ、アカラブルチニブ、アレクチニブ、ビニメチニブ、ブリガチニブ、エンコラフェニブ、エルダフィチニブ、エベロリムス、ホスタマチニブ、ギルテル、ラロトレクチニブ、ロルラチニブ、ネタルスジル、オシメルチニブ、ペミガチニブ、ペキシダルチニブ、リボシクリブ、テムシロリムス、ＸＬ－０９２、ＸＬ－１４７、ＸＬ－７６５、ＸＬ－４９９、およびＸＬ－８８０などのキナーゼ阻害剤が挙げられる。一部の実施形態では、本明細書に記載の化合物を、がんなどの本明細書に開示される疾患を処置するための、ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、ＸＬ８８８）、肝臓Ｘ受容体（ＬＸＲ）モジュレーター、レチノイド関連オーファン受容体ガンマ（ＲＯＲｙ）モジュレーター、チェックポイント阻害剤、例えば、ＣＫ１阻害剤またはＣＫ１α阻害剤など、Ｗｎｔ経路阻害剤（例えば、ＳＳＴ－２１５）、またはミネラルコルチコイド受容体阻害剤（例えば、エサキセレノン）またはＸＬ－８８８と組み合わせて使用することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示される多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）を、がんを処置するための、以下のキナーゼのうちの１つまたは複数の阻害剤と組み合わせることができる：Ａｋｔ１、Ａｋｔ２、Ａｋｔ３、ＴＧＦ－βＲ、ＰＫＡ、ＰＫＧ、ＰＫＣ、ＣａＭ－キナーゼ、ホスホリラーゼキナーゼ、ＭＥＫＫ、ＥＲＫ、ＭＡＰＫ、ｍＴＯＲ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、１ＮＳ－Ｒ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＲ－Ｒ、ＰＤＧＦαＲ、ＰＤＧＦβ／Ｒ、ＣＳＦＩＲ、ＫＩＴ、ＦＬＫ－ＩＩ、ＫＤＲ／ＦＬＫ－１、ＦＬＫ－４、ｆｌｔ－１、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、Ｒｏｎ、Ｓｅａ、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＦＬＴ３、ＶＥＧＦＲ／Ｆｌｔ２、Ｆｌｔ４、ＥｐｈＡｌ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ４、Ｔｉｅ２、Ｓｒｃ、Ｆｙｎ、Ｌｃｋ、Ｆｇｒ、Ｂｔｋ、Ｆａｋ、ＳＹＲ、ＦＲＫ、ＪＡＫ（ＪＡＫ１およびまたはＪＡＫ２）、ＡＢＬ、ＡＬＫ、ＣＤＫ７、ＣＤＫ１２、ＫＲＡＳ、およびＢ－Ｒａｆ。
がんの処置のために本開示の多重特異性結合性作用剤（例えば、抗体）と組み合わされ得る阻害剤の追加の非限定的な例には、ＦＧＦＲ阻害剤（ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３またはＦＧＦＲ４、例えば、ペミガチニブ）、ＥＧＦＲ阻害剤（ＥｒＢ－１またはＨＥＲ－１としても公知；例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ、バンデタニブ、オシメルチニブ（orsimertinib）、セツキシマブ、ネシツムマブ、またはパニツムマブ）、ＶＥＧＦＲ阻害剤または経路遮断剤（例えば、ベバシズマブ、パゾパニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、レゴラフェニブ、ポナチニブ、バンデタニブ、ラムシルマブ、レンバチニブ、ｚｉｖ－アフリベルセプト）、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、オラパリブ、ルカパリブ、ベリパリブまたはニラパリブ）、ＪＡＫ阻害剤（例えば、ルキソリチニブ、バリシチニブ、イタシチニブ（ｉｔａｃｉｔｉｎｉｂ））、ＩＤＯ阻害剤（例えば、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９、またはＢＭＳ－９８６２０５、ＭＫ７１６２）、ＬＳＤ１阻害剤、ＴＤＯ阻害剤、ＰＩ３Ｋ－デルタ阻害剤（例えば、パルサクリシブ）、ＰＩ３Ｋ－ガンマ阻害剤、例えば、ＰＩ３Ｋ－ガンマ選択的阻害剤、Ｐｉｍ阻害剤、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＴＡＭ受容体チロシンキナーゼ（Ｔｙｒｏ－３、Ａｘｌ、およびＭｅｒ）、アデノシン受容体アンタゴニスト（例えば、Ａ２ａ／Ａ２ｂ受容体アンタゴニスト）、ＨＰＫ１阻害剤、ケモカイン受容体阻害剤（例えば、ＣＣＲ２またはＣＣＲ５阻害剤）、ＳＨＰ１／２ホスファターゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ）、例えば、ＨＤＡＣ８阻害剤、血管新生阻害剤、インターロイキン受容体阻害剤、ブロモおよびエクストラターミナル（ｂｒｏｍｏ ａｎｄ ｅｘｔｒａ ｔｅｒｍｉｎａｌ）ファミリーメンバー阻害剤（例えば、ブロモドメイン阻害剤またはＢＥＴ阻害剤）、あるいはそれらの組合せが含まれる。
一部の実施形態では、本明細書に開示される多重特異性結合性作用剤を、ＰＤ－１の阻害剤またはＰＤ－Ｌ１の阻害剤、例えば、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体または抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体、例えば、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ）、ペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ、ＭＫ－３４７５）、アテゾリズマブ、アベルマブ、セミプリマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、セトレリマブ、トリパリマブ、シンチリマブ、ＡＢ１２２、ＪＴＸ－４０１４、ＢＧＢ－１０８、ＢＣＤ－１００、ＢＡＴ１３０６、ＬＺＭ００９、ＡＫ１０５、ＨＬＸ１０、およびＴＳＲ－０４２、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、ＰＤＲ００１、デュルバルマブ、ピジリズマブ（Ｉｍｆｉｎｚｉ（登録商標）、ＣＴ－０１１）、ＣＫ－３０１、ＢＭＳ ９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、チスレリズマブ、ＢＭＳ－９３５５５９、ＭＥＤＩ４７３６、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５、ＣＳ１００１、ＣＢＴ－５０２、Ａ１６７、ＳＴＩ－Ａ１０１、ＢＧＢ－Ａ３３３、ＭＳＢ－２３１１、ＨＬＸ２０、ＡＵＮＰ１２、ＣＡ－１７０、ＢＭＳ－９８６１８９、ＬＹ３３０００５４、およびＭＳＢ００１０７１８Ｃと組み合わせて使用することができる。
一部の実施形態では、本明細書に開示される多重特異性結合性作用剤を、ＣＴＬＡ－４阻害剤、例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体、例えば、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ）、トレメリムマブおよびＡＧＥＮ１８８４と組み合わせて、または、ホスファチジルセリン阻害剤、例えば、バビツキシマブ（ＰＧＮ４０１）と組み合わせて、またはサイトカイン（ＩＬ－１０、ＴＧＦ－ｂなど）に対する抗体と組み合わせて、またはＰＤ－Ｌ１およびＣＴＬＡ－４に結合する二重特異性抗体（例えば、ＡＫ１０４）もしくはＰＤ－１およびＣＴＬＡ－４に結合する二重特異性抗体と組み合わせて、またはセミプリマブなどの他の抗がん剤と組み合わせて使用することができる。
追加的な作用剤は、上記のこれらの治療剤または他の作用剤のいずれかの薬学的に許容される塩、エステル、アミド、水和物、および／またはプロドラッグであり得る。
本明細書に記載の種々の実施形態の活性に実質的に影響を及ぼさない改変も、本明細書に記載の主題の定義の範囲内で提供されることが理解される。したがって、以下の実施例は、本開示を例示するものであり、限定するものではない。
（実施例１）
抗体生成
ファージディスプレイ
ヒトＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１に対する結合剤を得るために、抗体発見を、ヒトＦａｂライブラリーのファージディスプレイを標準プロトコールを使用して実施することによって実施した。ヒトＣＤ４７の細胞外ドメインは、Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから購入した（ビオチン化ヒトＣＤ４７ Ｈｉｓ－Ａｖｉｔａｇ Ａｃｒｏカタログ番号ＣＤ７－Ｈ８２Ｅ９およびヒトＣＤ４７ Ｈｉｓ－タグ Ａｃｒｏカタログ番号ＣＤ７－５２２７）。ヒトＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメインは、Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから購入した（ヒトＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓタグ Ａｃｒｏカタログ番号ＰＤ１Ｈ５２２９、ビオチン化ヒトＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ Ａｖｉｔａｇ Ａｃｒｏカタログ番号ＰＤＬ－Ｈ８２Ｅ４）。ＣＤ４７またはＰＤ－Ｌ１の非ビオチン化細胞外ドメインを、必要に応じて標準プロトコールを使用して、ＥＺ－Ｌｉｎｋ ＮＨＳ－ＰＥＧ１２－ビオチン（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号２１３１２）を使用してビオチン化した。ファージクローンを、標準プロトコールを使用するファージＥＬＩＳＡによって、ビオチン化ヒトＣＤ４７またはビオチン化ヒトＰＤ－Ｌ１に結合する能力についてスクリーニングした。簡単に述べると、ファージにおいて複製および発現することが可能な発現ベクター（ファージミドとも称される）を使用し、Ｆａｂフォーマット化ファージライブラリーを構築した。重鎖および軽鎖の両方を同じ発現ベクターにコードさせ、重鎖はファージコートタンパク質ｐＩＩＩの短縮バリアントと融合した。軽鎖および重鎖－ｐＩＩＩ融合物を別々のポリペプチドとして発現させ、細菌ペリプラズム中にアセンブリして、そこで、酸化還元電位によりジスルフィド結合が形成されて、候補抗体の抗原結合性ドメイン（Ｆａｂ）を形成することが可能になる。
特定のヒト重鎖可変ドメイン（ＶＨ３－２３）および特定のヒト軽鎖可変ドメイン（Ｖｋ－１）に由来する配列を使用してライブラリーを創出した。多様性をもたせて生成した、スクリーニングされるライブラリー内の軽鎖可変ドメインをＶＬ ＣＤＲ３（Ｌ３）に導入し、軽鎖ＶＬ ＣＤＲ１（Ｌ１）およびＣＤＲ２（Ｌ２）は、ヒト生殖細胞系列配列のままにした。スクリーニングされるライブラリーについて、ＶＨドメインの３つのＣＤＲ全てを、ヒト抗体レパートリーにおいて見いだされるＣＤＲの長さごとの位置的なアミノ酸頻度と一致するように多様化した。ライブラリーに使用したファージディスプレイ重鎖（配列番号２０４）および軽鎖（配列番号２０５）足場を以下に列挙するが、ここで、小文字の「ｘ」はライブラリーを創出するために変動させたＣＤＲアミノ酸を表し、太字のイタリック体は、一定にしたＣＤＲ配列を表す。
配列番号２０４の配列は、
Figure 2023536631000020
Figure 2023536631000021
 である。配列番号２０５の配列は、
Figure 2023536631000022
 である。
全体が参照により本明細書に組み込まれるKunkel, TA (PNAS January 1, 1985. 82(2) 488-492)においてより詳細に記載されている通り、天然の抗体レパートリーにおいて見いだされる多様性を模倣するために、縮重ＤＮＡオリゴヌクレオチドプライマーを使用した変異誘発を行って、ＶＬ ＣＤＲ３ならびにＶＨ ＣＤＲ１（Ｈ１）、ＣＤＲ２（Ｈ２）およびＣＤＲ３（Ｈ３）に多様性を導入することにより、多様性を創出した。簡単に述べると、単離されたファージから、標準の手順を使用して、ウラシルが組み入れられた一本鎖環状ＤＮＡを調製し、Ｋｕｎｋｅｌ変異誘発を行って、４つのＣＤＲに多様性を導入した。次いで、化学合成されたＤＮＡをＴＧ１細胞に電気穿孔により導入し、その後、回収した。回収した細胞を継代培養し、Ｍ１３Ｋ０７ヘルパーファージを感染させて、ファージライブラリーを作製した。
ファージパニングを標準の手順を使用して実施した。簡単に述べると、ストレプトアビジン磁気ビーズに固定化した標的を用いてファージパニングの第１ラウンドを実施し、ＰＢＳＴ－２％ＢＳＡ中１ｍＬの体積の、調製されたライブラリーからのおよそ１×１０１２のファージに供した。１時間のインキュベーション後、ビーズに結合したファージを、磁気スタンドを使用して上清から分離した。ビーズを３回洗浄して、非特異的に結合したファージを除去し、次いで、ＥＲ２７３８細胞（５ｍＬ）におよそ０．６のＯＤ６００で添加した。室温で２０分のインキュベーション後、感染細胞を２ｘＹＴ＋アンピシリンおよびＭ１３Ｋ０７ヘルパーファージ（最終濃度およそ１×１０１０ｐｆｕ／ｍｌ）２５ｍＬ中に継代培養し、３７℃で一晩、勢いよく振とうしながら成長させた。翌日、標準の手順を使用してＰＥＧ沈殿によってファージを調製した。ＳＡＶでコーティングしたビーズに特異的なファージの予備クリアランスを実施した後にパニングを行った。第２ラウンドのパニングを、標準手順を使用して、ビーズに固定化したＣＤ４７またはＰＤ－Ｌ１標的抗原を用いて、ＫｉｎｇＦｉｓｈｅｒ磁気ビーズハンドラーを使用して実施した（ラウンド３：１００ｎＭのＣＤ－４７および５０ｎＭのＰＤ－Ｌ１、ラウンド４：５０ｎＭのＣＤ－４７および２５ｎＭのＰＤ－Ｌ１）。合計で、３～４ラウンドのファージパニングを実施して、標的抗原に特異的なＦａｂをディスプレイするファージを富化した。標的特異的富化を、ポリクローナルＥＬＩＳＡを使用して確認し、個々のクローンを単離し、モノクローナルファージＥＬＩＳＡを実施することによってさらに検証した。ＤＮＡ配列決定を使用して、候補抗体を含有する単離されたＦａｂクローンのＣＤＲの配列を決定した。
ＣＤ４７またはＰＤ－Ｌ１結合剤発見キャンペーンにおいて結合親和性を測定するために、上記ファージスクリーニングにおいて同定されたＶＬおよびＶＨドメインを、二価単一特異性ネイティブヒト全長ＩｇＧ１アーキテクチャへと形式化し、実施例２に記載されるように、Ｏｃｔｅｔ（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ）バイオレイヤー干渉計上のバイオセンサーに固定化した。次いで、可溶性抗原（例えば、ＣＤ４７またはＰＤ－Ｌ１）をシステムに添加し、結合を測定した。
本明細書に記載されるＢ－Ｂｏｄｙ形式の二重特異性抗体を使用して実施される実験のために、個々のクローンのＶＬ可変領域を、本明細書に記載されるＢＣ１形式および／またはＢＣ４４形式の二価Ｂ－ＢｏｄｙのドメインＡおよび／またはＨへと形式化し、ＶＨ領域を、ドメインＦおよび／またはＬへと形式化した。
抗体を、バッチモード重力濾過によって、抗ＩｇＧ１０－ＣＨ１樹脂を使用して親和性精製した。５００ｍＬまたは１０００ｍＬのトランスフェクション体積から生成された清澄化された上清を、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＣＨ１－ＸＬＡｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｒｉｘバルク樹脂（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＰＮ １９４３４６２０１Ｌ）を使用して親和性精製した。１０００ｍＬのトランスフェクションからの上清を、５００ｍＬの部分へと分割し、全ての上清を、１Ｌの無菌振盪フラスコに移した。樹脂を、使い捨て１０ｍＬカラム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＰＮ ２９９２４）を使用する重力濾過によって、ダルベッコＰＢＳ（ｐＨ７．４、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋なし）を使用して洗浄して、貯蔵緩衝液を除去し、ＰＢＳ中に５０％スラリーとして再懸濁した。樹脂を、上清５００ｍＬ当たり６ｍＬの５０％樹脂スラリーのスケールで、振盪フラスコにアリコート化した。上清を、１７０ＲＰＭで作動させたフラスコ振盪器上で室温で１～２時間、樹脂と共にインキュベートした。樹脂を、リザーバーアタッチメント（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＰＮ １８－３２１６－０３）を備えた重力濾過カラム上で捕捉し、３０ｍＬのＤＰＢＳ（１０×沈降樹脂床体積）で洗浄した。樹脂床を、５００ｍＭのＮａＣｌを含有するＤＰＢＳで３０ｍＬでストリンジェントに洗浄した。追加の洗浄を、３０ｍＬのＤＰＢＳを使用して実施して、溶出前にＮａＣｌの濃度を低減させた。結合した抗体を、９ｍＬ ０．１Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）を使用して、重力カラムから、５０ｍＬの円錐管中に含有された２．２５ｍＬ中和緩衝液（２Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５；Ｓｉｇｍａ ＰＮ Ｔ２９４４）中に溶出させた。中和された溶出緩衝液中の試料を、３．５ｋＤａの分子量カットオフを有する透析カセット（Ｓｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＰＮ ６６１１０）を使用して、４℃で一晩、ＤＰＢＳ中に透析した。
Ｃ４０×Ｐ２４、Ｃ４０×Ｐ２４ｓ、およびＣ５６×Ｐ２２抗体について、２つの別々のロットからの親和性精製された抗体を、ポリッシュする前にプールした。Ｃ４０×Ｐ３１．２、Ｃ５９×Ｐ２２、およびＣ５９×Ｐ３１．２抗体は、ポリッシュのために単一のロットを利用した。各単一のまたはプールしたロットを、ＧＥ Ｕｎｉｃｏｒｎ ｖ７．２ソフトウェアを実行するＡＫＴＡ ｐｕｒｅ ｆａｓｔタンパク質液体クロマトグラフィー機器（ＦＰＬＣ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、強カチオン交換（ＳＣＸ）によってポリッシュした。無菌的技法を常に使用した。精製日の前に、流路全体（移動相リザーバー、試料ループ、カラム、および切り換え弁を含む）を、清浄化溶液を機器の隅々まで緩徐にポンピングすることによって（０．１ｍＬ／分で２時間）、２０％エタノール中５００ｍＭのＮａＯＨを使用して清浄化した。次いで、機器を、２０％エタノールで洗い流し、一晩貯蔵した。ポリッシュの直前に、試料を、２０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液［ｐＨ６．０、ＭＥＳ＝（２－（Ｎモルホリノ）エタンスルホン酸］へと緩衝液交換した。分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）フィルターを使用し、ポリッシュの１～２時間以内に緩衝液交換を実施し、ポリッシュを開始するまで室温で貯蔵する緩衝液交換法を使用した。ＤＰＢＳ中のおよそ３５ｍｇの抗体（約４ｍｇ／ｍＬ）を、１５ｍＬ、３０ｋＤａ ＭＷＣＯ遠心分離スピンフィルター（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ３０）に添加し、ＭＥＳ緩衝液を用いて体積を上げた。試料を、１５分間にわたって、または元の試料体積が達成されるまで、４ｋ ＲＰＭで遠心分離した。ＭＥＳ緩衝液を添加して、体積を１５ｍＬにし、試料を再度遠心分離した。このプロセスを、もう３回反復した。３．５ｍｇ／ｍＬで約３５ｍｇのタンパク質を示す１０ｍＬの低内毒素試料を、１２ｍＬの移動相Ａを使用して移動相Ａ（２０ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ６．０）中０．５ｍＬ／分で、ＭｏｎｏＳ ５／５０ ＧＬ ＳＣＸカラム（０．５ｃｍ×５ｃｍ、１ｍＬ、１０μｍ粒子直径；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＰＮ１７５１６８０１）上にロードした。追加の２ＣＶ（カラム体積）の移動相Ａを２．０ｍＬ／分の流速で使用して、未結合の試料を除去した。１．０ＣＶは、この特定のカラムについてＧＥ Ｕｎｉｃｏｒｎソフトウェアにおいて規定された通り、０．９８２ｍＬであった。試料を、０～３０％の移動相Ｂ（２０ｍＭ ＭＥＳ／１Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ６．０）の線形勾配を５０ＣＶにわたって使用して２．０ｍＬ／分で溶出させ、画分を、１ｍＬ間隔で収集した。このシステムを、７ＣＶの１００％Ｂで２．０ｍＬ／分で洗浄した。各主要ピークからの画分をプールし、非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価した。プールした試料を、上記手順に記載したように１×ＤＰＢＳへと緩衝液交換し、０．２μｍフィルターを介して無菌濾過し、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔのＴｏｘｉｎＳｅｎｓｏｒ発色ＬＡＬ内毒素アッセイキット（ＰＮ Ｌ００３５０）を使用して、内毒素について再度試験した。
ポリッシュされていない投入材料が使い尽くされるまで、このプロセスを数回反復した。マスタープールを、各注入から精製された材料から創出し、完全解析スクリーニングおよび凍結／解凍解析に供した。
（実施例２）
スクリーニングおよび選択
ＣＤ４７またはＰＤ－Ｌ１に対する抗体を、例えば、実施例１に記載されるように、ファージディスプレイによって生成した。例えば、定性的結合親和性を決定するために、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を使用して、実施例１で得られた候補抗体への抗原の特異的相互作用を確認した。
ストレプトアビジンバイオセンサー上に固定化したビオチン化ヒトＣＤ４７またはビオチン化ヒトＰＤ－Ｌ１（実施例１を参照されたい）への結合剤の二価相互作用を、Ｏｃｔｅｔ（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ）機器を使用してモニタリングした。一価相互作用をモニタリングするために、全長ＩｇＧ分子を、Ｆｃ捕捉バイオセンサーに固定化し、可溶性抗原とのその相互作用を、Ｏｃｔｅｔ機器を使用してモニタリングした。
簡潔に述べると、上位のＰＤ－Ｌ１抗体に対する親和性（例えば、ＫＤ値）の正確な測定値を、Ｏｃｔｅｔを使用して一価結合形式で得た。最初に、抗体を、Ｆｃ捕捉センサー上に固定化した。次の会合ステップにおいて、固定化されたＩｇＧへの抗原の結合相互作用を測定した。正確な速度定数を得るために、少なくとも７つの濃度の分析物（およそ１０～２０×ＫＤから０．１×ＫＤ値までの範囲、２倍希釈）を含む希釈シリーズを、会合ステップにおいて測定した。次の解離ステップにおいて、センサーを、分析物を含有しない緩衝溶液中に浸し、センサーの表面上の結合した分析物を解離させた。Ｏｃｔｅｔ速度論的解析ソフトウェアを使用して、会合曲線および解離曲線の速度から、速度定数および平衡結合定数を計算した。解析を、グローバル曲線フィットを使用して実施して、速度定数を、実験に含めた全ての分析物濃度から同時に導出した。
（実施例３）
追加のスクリーニングおよび選択
ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１への結合について選択された二重特異性抗体、例えば、実施例１および２に記載されたものを、ＴＣＡ ＣＨＯ細胞、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞、Ｒａｊｉ細胞、およびＪｅｋｏ１細胞を含めた、ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１を発現する種々の細胞型への結合について評価した。
例示的な二重特異性抗体Ｃ４０×Ｐ２４、Ｃ５６×Ｐ２２、Ｃ４０×Ｐ３１．２、Ｃ５９×Ｐ２２、およびＣ５９×Ｐ３１．２を、種々の表面コピー数でＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１を発現する細胞への結合について、フローサイトメトリーを使用して試験した。一部の解析では、Ｃ４０×Ｐ２４ｓもまた試験した。
アッセイ当日に細胞を７０～９０％集密で採取した。細胞を２００×ｇで５分間遠心分離することによって収集し、培地を除去した。細胞を、冷ＰＢＳ中に１ｍＬ当たり細胞２×１０６個で再懸濁させた。試験を行う抗体の予測される結合親和性を網羅するために、ＰＢＳ中、８点抗体希釈系列（２×濃度）を調製した。ウェル当たり５０μＬの抗体希釈物を９６ウェルＶ底プレート（Ｃｏｓｔａｒ ３８９７）にプレーティングした。ウェル当たり５０μＬの 細胞懸濁液を添加した。プレートを４℃で４５～６０分間置いた。
細胞を、４００×ｇで７分間遠心分離することによって収集し、一次抗体を除去した。ウェル当たり５０μＬのＡＦ４８８ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆａｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １０９－５４７－００３）を１：１００の希釈度で添加した。プレートを４℃で３０分間置いた。
細胞を、４００×ｇで７分間遠心分離することによって収集し、二次抗体を除去した。細胞をウェル当たり５０μＬのＰＢＳ中に再懸濁させ、フローサイトメトリーによって分析した。細胞におけるＦＩＴＣ 蛍光シグナルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を使用して結合曲線を算出した。
ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１発現性ＴＣＡ ＣＨＯ細胞（ＣＤ４７ ＰＤ－Ｌ１ ＴＣＡ ＣＨＯ細胞）を使用して、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１への結合について抗体をスクリーニングした。これらの細胞は、およそ６１２，０００のＣＤ４７表面タンパク質コピー数およびおよそ６７４，０００のＰＤ－Ｌ１表面タンパク質コピー数を有する。これらの実験のために、ＣＤ４７に対する第１の結合ドメインとＰＤ－Ｌ１に対する第２の結合ドメインとを各々が有する試験した二重特異性抗体は、ＢＣ１形式であった。ＣＤ４７またはＰＤ－Ｌ１に対する第１の結合ドメインと無関係の標的（「ダミー」結合ドメインまたは「Ｄ」と称される）に対する第２の結合ドメインとを各々が有する追加の単一特異性抗体構築物を調製した。細胞を収穫し、上記のように結合についてアッセイした。例示的な結合曲線は、図１Ａ～１Ｄに示される。アッセイした抗体に対する細胞結合の５０％効果濃度（ＥＣ５０）がまた、表７に要約される。ＣＤ４７（Ｃ４０×Ｄ）またはＰＤ－Ｌ１（Ｄ×Ｐ２４）を標的化することが可能な１つの結合ドメインだけを有する単一特異性抗体もまた、対照としてアッセイし、二次抗体のみの試料を、陰性対照として使用した。結果は、例示的な二重特異性抗体が、ＣＤ４７またはＰＤ－Ｌ１のみを標的化する抗体よりも、ＣＤ４７ ＰＤ－Ｌ１ ＴＣＡ ＣＨＯ細胞に対する結合についてより高い結合力を有したことを示している（図１Ａ～１Ｄ）。
表7. CD47 PD-L1 TCA CHO細胞への二重特異性抗体結合のEC50
二重特異性抗体結合を、およそ５００，０００のＣＤ４７表面タンパク質コピー数およびおよそ１，５００，０００のＰＤ－Ｌ１表面タンパク質コピー数を有する、ＰＤ－Ｌ１を発現するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（ＰＤ－Ｌ１ ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞）において試験した。これらの実験のために、ＣＤ４７に対する第１の結合ドメインとＰＤ－Ｌ１に対する第２の結合ドメインとを各々が有する試験した二重特異性抗体は、本明細書に記載されるＢＣ４４形式であった。細胞を収穫し、上記のように結合についてアッセイした。例示的な結合曲線は、図２Ａ～２Ｅに示される。示された抗体に対する細胞結合のＥＣ５０は、表８に列挙される。
表8. PD-L1 MDA-MB-231細胞への二重特異性抗体結合のEC50
二重特異性抗体結合を、ＰＤ－Ｌ１を発現するＪｅｋｏ１細胞（Ｊｅｋｏ－ＰＤ－Ｌ１細胞）において試験した。これらの細胞は、およそ２００，０００～５００，０００のＣＤ４７表面タンパク質コピー数およびおよそ１００，０００～３００，０００のＰＤ－Ｌ１表面タンパク質コピー数を有する。これらの実験のために、ＣＤ４７に対する第１の結合ドメインとＰＤ－Ｌ１に対する第２の結合ドメインとを各々が有する試験した例示的な二重特異性抗体は、本明細書に記載されるＢＣ４４形式であった。アッセイした抗体に対する細胞結合のＥＣ５０は、表９に列挙される。
表9. Jeko-PD-L1細胞への二重特異性抗体結合のEC50
（実施例４）
機能的アッセイ
ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１への結合について選択された二重特異性抗体、例えば、実施例１～３に記載されたものなどを、ＴＣＡ ＣＨＯ細胞、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞、Ｒａｊｉ細胞、およびＪｅｋｏ１細胞を含めた、ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１を発現する細胞型において、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαシグナル伝達およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達の阻害について評価した。
ＣＤ４７／ＳＩＲＰαシグナル伝達を阻害する二重特異性抗体の能力を試験するために、本明細書に記載されるＢＣ４４形式の二重特異性抗体を、製造業者のプロトコールを使用してＣＤ４７／ＳＩＲＰαシグナル伝達バイオアッセイキット（９３－１１３５Ｃ１９、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）を使用してアッセイした。アッセイを、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＰＤ－Ｌ１およびＪｅｋｏ－ＰＤ－Ｌ１標的細胞を使用して別々に実施した。
シグナル伝達アッセイを、ＰｒｏＬｉｎｋ（商標）（ＰＫ）でタグ付けされた免疫チェックポイント受容体および酵素アクセプター（ＥＡ）でタグ付けされたＳＨ２ドメインが同時発現されるように操作した。リガンドの結合により受容体の活性化およびリン酸化が導かれ、それにより、受容体へのＳＨ２－ＥＡの動員がもたらされ、２つのβ－ガラクトシダーゼ酵素断片（ＥＡおよびＰＫ）の相補性が要求される。得られた機能的な酵素により基質が加水分解されて、化学発光シグナルが生じる。リガンドの結合を遮断することにより、化学発光シグナルの降下が導かれる。
簡単に述べると、３０，０００個の標的細胞を、Ｗｈｉｔｅ Ｂｏｔｔｏｍ ９６－ｗｅｌｌ Ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３９１７）中Ｃｅｌｌ Ｐｌａｔｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ ４０μＬのウェルに添加した。細胞プレーティング試薬中の抗体希釈物を調製し、抗体希釈物２０μＬを細胞に添加した。次に、細胞プレーティング試薬（Ｃｅｌｌ Ｐｌａｔｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ）４０μＬ中の新しく解凍したＳＩＲＰαジャーカット細胞１０，０００個を各ウェルに添加した。プレートを３７℃で２４時間インキュベートした。インキュベーション後、ＢｉｏＡｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ１ １０μＬをウェルに添加し、プレートを暗闇中、室温で１５分間インキュベートした。次いで、ＢｉｏＡｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ２ ４０μＬをウェルに添加し、プレートを暗闇中、室温で１時間インキュベートした。プレートをＣｌａｒｉｏＳｔａｒ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ （ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）で読み取った。
ＣＤ４７／ＳＩＲＰαシグナル伝達アッセイの例示的な結果は、図３に示される。ＣＤ４７を標的化することが可能な１つの結合部位だけを有する抗体（Ｃ４０×Ｄ、Ｃ５６×Ｄ、およびＣ５９×Ｄ）を対照としてアッセイしたところ、最小限の阻害が示された。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＰＤ－Ｌ１におけるアッセイについてのＩＣ５０値は、表１０に示される。結果は、全ての試験した例示的な二重特異性抗体が、ＣＤ４７のみを標的化する抗体と比較して、化学発光シグナルにおける低減を示したことを示している。したがって、アッセイした二重特異性抗体は、ＳＩＲＰα受容体上でのＣＤ４７リガンドの係合を効率的に遮断して、シグナル伝達を阻害した。
表10. PD-L1 MDA-MB-231細胞におけるCD47/SIRPα阻害アッセイ
二重特異性抗体がＪｅｋｏ－ＰＤ－Ｌ１細胞においてＣＤ４７／ＳＩＲＰαシグナル伝達を阻害する能力もまた決定した。ＣＤ４７／ＳＩＲＰαシグナル伝達アッセイを、これらの細胞において上記のように実施した。Ｊｅｋｏ標的細胞におけるアッセイについてのＩＣ５０値は、表１１に示される。これらの結果は、アッセイした例示的な二重特異性抗体が、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαシグナル伝達を阻害し、Ｃ４０×Ｐ２４（サイレントＦｃ）二重特異性抗体が、これらのアッセイにおいて試験したいくつかの抗体のうちで、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαシグナル伝達の最も効率的な阻害を示したことを示している。
表11. Jeko細胞およびJeko-PD-L1細胞におけるCD47/SIRPα阻害アッセイ
s=サイレントFc
二重特異性抗体がＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達を遮断する能力を試験するために、二重特異性抗体を、製造業者のプロトコールを使用してＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達バイオアッセイキット（９３－１１０４Ｙ１９－００１１７、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）を使用してアッセイした。アッセイを、ＰＤ－Ｌ１ ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞、ＰＤ－Ｌ１ Ｊｅｋｏ細胞、およびＲａｊｉ－ＰＤ－Ｌ１細胞において実施した。
簡潔に述べると、４０μＬの標的細胞（４０μＬ当たり３０，０００細胞）を、細胞プレーティング試薬０（ＣＰ０）中で、白色９６ウェルプレートの各ウェルに添加した。プレートを、３７℃で一晩インキュベートした。９．６ｍＬの事前に温めた細胞プレーティング試薬（ＣＰ０）をＴ２５フラスコに添加し、ＰＤ－１ Ｊｕｒｋａｔ細胞の２つのクライオバイアル（ｃｒｙｏｖｉａｌ）を液体窒素から取り出し、１ｍＬの事前に温めたＣＰ０をＴ２５フラスコからクライオバイアルに即座に添加することによってペレットを解凍することによって、ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ ＰＤ－１ Ｊｕｒｋａｔ細胞を、解凍からの一晩回収のために解凍した。細胞を、数回穏やかにピペッティングして上下させることによって混合して、全ての塊をばらばらにした。細胞懸濁物を、残りのＣＰ０を含有するＴ２５フラスコに移し、クライオバイアル中に残った全ての培地／懸濁物を取り出して、バイアルからの全ての細胞の完全な回収を確実にした。細胞を、３７℃で一晩インキュベートした。
インキュベーションの後、２０μＬの二重特異性抗体を各ウェルに添加し、プレートを、３７℃で１時間インキュベートした。ＣＰ０中のＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ ＰＤ－１ Ｊｕｒｋａｔ細胞４０μＬを、９６ウェルプレートの各ウェルに添加し、プレートを、暗中で室温で１時間インキュベートした。次いで、１０μＬのＰａｔｈＨｕｎｔｅｒバイオアッセイ検出試薬１を各ウェルに添加し、プレートを、暗中で室温で１５分間インキュベートした。次に、４０μＬのＰａｔｈＨｕｎｔｅｒバイオアッセイ検出試薬２を、アッセイプレートの各ウェルに添加し、プレートを、暗中で室温で３時間インキュベートした。プレートを、ＣｌａｒｉｏＳｔａｒプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）上で解析した。
ＰＤ－Ｌ１ ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞におけるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１チェックポイントシグナル伝達アッセイの例示的な結果は、図４に示される。ＰＤ－Ｌ１ ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞およびＪｅｋｏ－ＰＤ－Ｌ１細胞におけるアッセイについてのＩＣ５０値は、表１２に示される。これらの結果は、ＪｅＫｏ－ＰＤ－Ｌ１細胞では、例示的な二重特異性抗体Ｃ４０×Ｐ３１．２、Ｃ５９×Ｐ２２、およびＣ５９×Ｐ３１．２が、他の試験した二重特異性抗体よりも低いＩＣ５０値を生じたことを示している。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＰＤ－Ｌ１細胞では、二重特異性抗体Ｃ４０×Ｐ２４（サイレントＦｃ）は、試験した他の二重特異性抗体よりも高いＩＣ５０を示した。
表12. MDA-MB-231 PD-L1細胞およびJeko-PD-L1細胞におけるPD-1/PD-L1阻害アッセイ

s=サイレントFc
二重特異性抗体がＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達を阻害する能力に対するＰＤ－Ｌ１コピー数の影響を決定するために、ＪｅＫｏ細胞とＪｅＫｏ－ＰＤ－Ｌ１細胞とを比較した。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１チェックポイントシグナル伝達アッセイを、これらの細胞において上記のように実施した。Ｊｅｋｏ－ＰＤ－Ｌ１標的細胞におけるアッセイについてのＩＣ５０値は、上記表１２に示される。Ｊｅｋｏ細胞におけるアッセイについてのＩＣ５０値は、測定閾値を下回り、これは、二重特異性抗体の阻害効果が、細胞上の利用可能なリガンドおよび受容体の総数によって影響され得ることを示している。
（実施例５）
追加の機能的アッセイ
ＣＤ４７への結合について選択された二重特異性抗体、例えば、実施例１～３に記載されたものなどを、ＣＤ４７リガンドとＳＩＲＰα受容体との相互作用の遮断およびファゴサイトーシスの促進におけるそれらの影響について評価した。例えば、初代Ｍ２マクロファージファゴサイトーシスアッセイを実施して、ファゴサイトーシスに対する二重特異性抗体の影響を決定した。ＪｅＫｏ－ＰＤ－Ｌ１標的細胞を、製造業者のプロトコールに従って、フローサイトメトリー用ｐＨｒｏｄｏ赤色細胞標識キット（Ａ１００２６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で標識し、フローサイトメトリーによって解析した。この方法を使用すると、標識された標的細胞は、アポトーシス細胞がｐＨ７．４の細胞外環境中にとどまっている間は、蛍光をほとんどまたは全く示さない。ＣＤ４７受容体活性化の後、ファゴサイトーシスは、食細胞カップ（ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｃｕｐ）の形成によって開始される。ピンチオフ（ｐｉｎｃｈｉｎｇ ｏｆｆ）による標識された細胞の貪食の後、細胞は、ファゴソームの酸性環境（ｐＨ４．５～５．５）内にあり、これが蛍光の増加をもたらす。
標的細胞の標識化の後、細胞を、本明細書に記載されるＢＣ４４形式の二重特異性抗体と共にインキュベートして、細胞表面ＣＤ４７に結合させた。次いで、二重特異性抗体に結合した標識された細胞を、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ生細胞イメージングシステム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）においてＭ２マクロファージ細胞と共に共培養し、位相差および蛍光画像を、２４時間にわたって３０分毎に取得した。
Ｍ２マクロファージとの共培養の０時間後および５時間後の時点における標識されたＪｅＫｏ－ＰＤ－Ｌ１細胞の例示的な蛍光顕微鏡画像は、図５Ａおよび５Ｂに示される。５時間の共インキュベーション後の例示的な二重特異性抗体Ｃ４０×Ｐ２４（図５Ｃ）、Ｃ５６×Ｐ２２（図５Ｄ）、Ｃ４０×Ｐ３１．２（図５Ｅ）、Ｃ５９×Ｐ２２（図５Ｆ）、およびＣ５９×Ｐ３１．２（図５Ｇ）についての例示的な結果は、図５Ｃ～５Ｇに示される。結果は、５時間の共インキュベーション後に、抗体なしの対照と比較して、全ての試験した二重特異性抗体の存在下で、Ｍ２マクロファージによるＪｅＫｏ－ＰＤ－Ｌ１細胞のファゴサイトーシス（例えば、食作用活性または機能）における増大が存在することを示している。
ファゴサイトーシスに対する二重特異性抗体の影響を、およそ２００，０００のＣＤ４７表面コピー数およびおよそ２５，０００のＰＤ－Ｌ１表面コピー数を有するＡ３７５標的細胞を使用しても試験した。細胞を、上記のように、フローサイトメトリー用ｐＨｒｏｄｏ赤色細胞標識キットで標識し、フローサイトメトリーによって解析した。
Ｍ２マクロファージとの共培養の０時間後および４８時間後の時点における標識されたＡ３７５細胞の例示的な蛍光顕微鏡画像は、それぞれ図６Ａおよび６Ｂに示される。４８時間の共インキュベーション後の例示的な二重特異性抗体Ｃ４０×Ｐ２４（図６Ｃ）、Ｃ５６×Ｐ２２（図６Ｄ）、Ｃ４０×Ｐ３１．２（図６Ｅ）、Ｃ５９×Ｐ２２（図６Ｆ）、およびＣ５９×Ｐ３１．２（図６Ｇ）についての例示的な結果は、図６Ｃ～６Ｇに示される。結果は、４８時間の共インキュベーションの後に、抗体なしの対照と比較して、全ての試験した例示的な二重特異性抗体に応答した、Ｍ２マクロファージによるＡ３７５細胞のファゴサイトーシスにおける増大が存在することを示している。
（実施例６）
赤血球結合アッセイ
ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１への結合について選択された二重特異性抗体、例えば、実施例１～３に記載されたものなどを、赤血球への結合について評価した。抗ＣＤ４７抗体は、赤血球凝集を引き起こし得、これがその治療的適用を制限している。本明細書で開示される二重特異性抗体を、赤血球結合アッセイを使用して試験して、赤血球凝集に対する影響を決定した。
１００，０００個の新鮮なヒト赤血球細胞（ＳＥＲ－１０ＭＬＲＢＣ－ＳＤＳ、Ｚｅｎ－Ｂｉｏ）を、Ｖ底プレートの各ウェルに移した。プレートを、５００×ｇで室温で５分間遠心分離し、上清を廃棄した。本明細書に記載されるＢＣ４４形式の二重特異性抗体を、ＢＤ染色緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中に希釈し、１００μＬをプレートの各ウェルに移した。プレートを、４℃で４５分間インキュベートした。インキュベーションの後、１００μＬのＰＢＳを各ウェルに添加し、プレートを、５００×ｇで室温で５分間遠心分離し、上清を廃棄した。
次に、ＢＤ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ中に１：１００で希釈した抗ヒトＩｇＧ Ｆａｂ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １０９－５４７－００３）１００μＬを各ウェルに添加した。プレートを４℃で４５分間インキュベートし、室温、５００×ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。細胞を２００μＬ／ウェルのＰＢＳで１回洗浄し、５０μＬ／ウェルのＰＢＳ中に再懸濁させた。試料をＳａｒｔｏｒｉｕｓ ｉＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ Ｐｌｕｓ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ （Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）でフローサイトメトリーによって分析した。
全ての試験した例示的な二重特異性抗体は、陽性対照と比較して、赤血球結合を生じず、これは、赤血球とのｉｎ ｖｉｖｏでの相互作用がほとんど存在しないことを予測する。
（実施例７）
ｉｎ ｖｉｖｏ研究
ｉｎ ｖｉｖｏ治療有効性を評価するために、二重特異性抗体を、雌性Ｂ－ｈＰＤ－Ｌ１／ｈＳＩＲα／ｈＣＤ４７マウスにおけるシンジェニックＭＣ３８－ｈＰＤＬ１／ｈＣＤ４７マウス結腸癌モデルにおいて試験した。処置の有効性を、腫瘍体積（ＴＶ）変化に基づいて評価した。動物の健康全般もまた、体重（ＢＷ）に基づいて評価した。
マウスは、Ｃ５７ＢＬ／６背景のホモ接合性Ｂ－ｈＰＤ－Ｌ１／ｈＳＩＲＰａ／ｈＣＤ４７（ｈ／ｈ；ｈ／ｈ；ｈ／ｈ）マウスであった。株遺伝子型は、Ｃ５７ＢＬ／６－Ｃｄ２７４ｔｍ１（ＣＤ２７４）Ｓｉｒｐαｔｍ１（ＳＩＲＰＡ）Ｃｄ４７ｔｍ１（ＣＤ４７）／Ｂｃｇｅｎであった。これらのマウスは、３つの遺伝子操作されたマウス株Ｂ－ｈＰＤ－Ｌ１、Ｂ－ｈＳＩＲＰＡおよびＢ－ｈＣＤ４７マウスを、三重ホモ接合性になるように交雑させることによって生成された、三重ノックインマウスモデルである。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける内因性ＰＤ－Ｌ１（エクソン３）、Ｓｉｒｐα（エクソン２）およびＣＤ４７（エクソン２）の細胞外領域は、それぞれのヒト対応物で置き換えられている。
動物を、個々の換気ケージ中で特定の病原体なしのフェンス中に収容した。動物を、実験前に７日間順応させた。温度および湿度は、以下のように制御した：２０～２６℃、４０～７０％湿度、１２時間毎にライティング。ケージには、加圧滅菌したトウモロコシの穂軸の寝床材料があり、これを１週間に１回交換した。マウスは、研究期間全体の間、オートクレーブして滅菌した乾燥顆粒飼料および水への自由なアクセスを有した。飼料は、ＳＰＦグレードであり、水は、限外濾過によって精製した。
本明細書に記載されるＢＣ４４形式の二重特異性抗体を、１ｍｇ／ｍＬのストック濃度で維持し、－８０℃で貯蔵した。解凍を、使用の１日前に開始した。使用の当日に、抗体バイアルを、透明円錐底１．７ｍＬ微小遠心管に移し、最大速度（２１，１３０ｒｃｆ）で４℃で２分間遠心分離した。抗体希釈物を、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋なしのＰＢＳ（カタログ番号２００１２０２７、Ｇｉｂｃｏ）中で作製した。
処置の７～１０日前に、マウスに、マウス結腸癌細胞系ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１／ｈＣＤ４７細胞を移植した。各マウスに、右脇腹に、０．１ｍＬのＰＢＳ中のＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１／ｈＣＤ４７腫瘍細胞（５．０×１０５個）を皮下注射した。接種時の動物の齢は、７～１０週であり（マウスの出生日は、コホート内で±３日以内であった）、接種時の体重は、１８～２５グラムであった。平均腫瘍サイズがおよそ１２５ｍｍ３に達したときに、腫瘍保有動物を、研究群にランダムに登録した。各群は、８匹のマウスからなった。有効性コホートについての研究群、および１群当たりの動物の数は、表１３に示される。処置を、処置０日目に開始し、研究エンドポイントは、２８日までであった。ＴＶおよびＢＷを、１週間に２回モニタリングした。
表13. 有効性コホート群名称、用量レベル、および投薬スケジュール
s=サイレントFc
研究エンドポイントにおいて、血液を、有効性研究の各群中の４匹のマウスから、引き続く解析のために心穿刺（最終採血）によって収集した。
腫瘍サイズを、キャリパーを用いて１週間に少なくとも２回測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）を、式：ＴＶ＝ａ×ｂ２／２を使用して推定し、式中、「ａ」および「ｂ」はそれぞれ、腫瘍の長い直径および短い直径であった。ＴＶを、以下の式を使用する腫瘍成長阻害（ＴＧＩ、抗腫瘍有効性の指標）値および腫瘍退縮（ＴＲ）値の計算のために使用した：
ＴＧＩ（％）＝［１－（Ｔｔ－Ｔ０）／（Ｃｔ－Ｃ０）］×１００％
ＴＲ（％）＝［１－（Ｔｔ－Ｔ０）］×１００％
Ｔｔ＝時間ｔにおける処置マウスの平均ＴＶ、Ｔ０＝時間０における処置マウスの平均ＴＶ（ベースライン）、Ｃｔ＝時間ｔにおける対照の平均ＴＶ、Ｃ０＝時間０における対照の平均ＴＶ（ベースライン）。
腫瘍体積（ｍｍ３）についての例示的な結果は、図７に示される。
マウスの体重を、研究を通じて１週間に少なくとも２回測定した。％で表される体重（ＢＷ）変化を、以下の式を使用して計算した：
ＢＷ変化（％）＝（（ＢＷｔ－ＢＷ０）／ＢＷ０）×１００
「ＢＷｔ」および「ＢＷ０」は、それぞれ時間ｔおよび時間０（ベースライン）におけるＢＷであった。
体重（グラム）についての例示的な結果は、図８に示される。
毒性を評価するために、２４匹の腫瘍保有マウスの追加の毒性コホートを、表１４に記載されるように処置した。マウスを、完全血球計数（ＣＢＣ）解析のため（例えば、血小板および／または赤血球（ＲＢＣ）枯渇を評価するため）に、１回目の用量の２日後に屠殺した。ＣＢＣ結果を、研究の終了時に採取した試料からの上記有効性研究からの４匹のマウスと比較した。
血液を、表１４に記載される毒性コホートから、２日目に、引き続く解析のために心穿刺（最終採血）によって収集した。
表14. 毒性コホート群名称、用量レベル、および投薬スケジュール
s=サイレントFc
全血を、ＣＢＣおよび二重特異性抗体レベル解析のために、２つの時点：２日目（単一の用量の後）において、毒性コホート中のマウスから、および研究エンドポイントにおいて、有効性コホートの各群からの４匹のマウスから、心穿刺によって収集した。
ＣＢＣ解析のための血液の収集のために、２５０μＬの血液を、ヘパリンコーティングされた管中に収集し、反転させることで完全に混合した。混合した後、血液試料を、２～８℃で維持した。
血清収集のために、残りの全血（２５０μＬまたはそれよりも多く）を、血清収集管中に収集した。次いで、血液を、室温で３０分間静置することによって、凝血させた。血餅を、製造業者のプロトコールに従って、冷凍遠心分離機において１２，０００×ｇで９０秒間遠心分離することによって除去した。遠心分離の後、得られた上清（血清）を、きれいなラベルを付けたポリプロピレン管に中に即座に移し、２つのアリコート（約６０μＬ×２）へと分割し、ＥＬＩＳＡによる解析まで－８０℃で貯蔵した。血清試料を、取り扱いの間、２～８℃で維持した。
抗ＣＤ４７抗体は、赤血球凝集を引き起こし得、これがその治療的適用を制限している。本明細書で開示される二重特異性抗体を、赤血球結合アッセイを使用して試験して、赤血球凝集に対する影響を決定した。
ＲＢＣおよび血小板は、ＣＤ４７の高い発現を有することが報告されている。投薬の４８時間後、赤血球および血小板濃度を解析して、これらの細胞型が枯渇していたかどうかを決定した。
ＣＢＣを、記載されたように心穿刺を介して収集した血液を用いて、ＨＥＭＡＶＥＴ９５０（Ｄｒｅｗ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定した。ＲＢＣ、ＷＢＣ（サブタイプの計数を伴う）、血小板、ヘモグロビン、およびヘマトクリットについての血液学的パラメーターを、各試料について決定した（図９Ａ～９Ｅ）。赤血球分布幅（ＲＤＷ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）、網状赤血球計数の情報を決定した（図１０Ａ～１０Ｇ）。
白血球およびリンパ球の低減が、Ｃ５６×Ｐ２２（Ｇ５およびＧ６）、およびＣ４０×Ｐ２４ｓ（Ｇ７）で観察された（図９Ｃおよび９Ｄ）。
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、上記毒性コホート中のマウスから調製した血清中のヒトＩｇＧ１抗体の量を定量的に決定した。
このアッセイは、９６ウェルプレート上にコーティングされた、ヒトＩｇＧ抗体に特異的なａｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（カタログ番号１０９－００５－００３、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を使用した。標準、品質制御試料および試験検体を、ウェル中にピペッティングし、試料中のヒトＩｇＧを、固定化した抗体によってウェルに結合させる。ウェルを洗浄し、ペルオキシダーゼ－コンジュゲートされたａｆｆｉｎｉＰｕｒｅＦ（ａｂ’）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体を添加した（カタログ番号１０９－００３６－００３、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）。未結合のペルオキシダーゼ－コンジュゲートされた抗体を洗浄により除去した後、ＴＭＢ基質溶液をウェルに添加し、結合したヒトＩｇＧの量と比例する色を発色させた。停止溶液は、色を青から黄色に変化させ、色の強度を、４５０ｎｍおよび５７０ｎｍで測定した。ヒト抗体濃度を決定するためのサンドイッチ法の定量化下限（ＬＬＯＱ）は、およそ１．５６ｎｇ／ｍＬであった。
毒性コホートの研究群からのマウスの血液中の示されたヒト抗体の濃度は、図１１に示される。結果は、他の試験した二重特異性抗体よりも、Ｃ５６×Ｐ２２（Ｇ５）について僅かにより高い血液濃度を示している。
ｉｎ ｖｉｖｏ治療有効性をさらに評価するために、二重特異性抗体を、上の以前の研究に記載される雌性Ｂ－ｈＰＤ－Ｌ１／ｈＳＩＲα／ｈＣＤ４７マウスにおけるシンジェニックＭＣ３８－ｈＰＤＬ１／ｈＣＤ４７マウス結腸癌モデルを用いた追加の研究において試験した。処置の有効性を再度、腫瘍体積（ＴＶ）変化に基づいて評価した。動物の健康全般を再度、体重（ＢＷ）に基づいて評価した。
動物を、上の以前の研究に記載されたように収容および給餌し、本明細書に記載されるＢＣ４４形式の二重特異性抗体の抗体希釈物を、上記と同様にではあるが、２ｍｇ／ｍＬのストック濃度から調製した。
この追加の研究では、処置の７～１０日前に、マウスに、マウス結腸癌細胞系ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１／ｈＣＤ４７細胞を移植した。各マウスに、右前方脇腹に、０．１ｍＬのＰＢＳ中のＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１／ｈＣＤ４７腫瘍細胞（５．０×１０５個）を皮下注射した。接種時の動物の齢は、７～１０週であり（マウスの出生日は、コホート内で±３日以内であった）、接種時の体重は、１８～２５グラムであった。平均腫瘍サイズがおよそ１１７ｍｍ３に達したときに、腫瘍保有動物を、研究群にランダムに登録した。各群は、８匹のマウスからなった。有効性コホートについての研究群、および１群当たりの動物の数は、表１５に示される。処置を、処置０日目に開始し、研究エンドポイントは、２８日までであった。ＴＶおよびＢＷを、１週間に２回モニタリングした。
表15. 有効性コホート群名称、用量レベル、および投薬スケジュール
腫瘍サイズを、キャリパーを用いて１週間に少なくとも２回測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）を、上の以前の研究に記載されるように推定した。
例示的な二重特異性抗体を用いた、示された処置群中のマウスについての例示的な腫瘍体積（ｍｍ３）結果は、図１２Ａに示される。個々のマウスについての例示的な腫瘍体積結果は、図１２Ｂ～１２Ｄに示される。腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を、以前の研究について上記したように計算した。例えば、この研究の終了時（処置の開始の２８日後）に、例示的な結果は、Ｃ５６×Ｐ２２（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）が、５８．５％の％ＴＧＩでの腫瘍体積に対する影響によって示されるように、抗腫瘍活性を実証し（Ｐ＜０．０５）、Ｃ５９×Ｐ２２（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）が、３６．６％の％ＴＧＩで抗腫瘍活性を実証した（Ｐ＞０．０５）ことを示した。
マウスの体重を、研究を通じて１週間に少なくとも２回測定した。％で表される体重（ＢＷ）変化を、以下の式を使用して計算した：
ＢＷ変化（％）＝（（ＢＷｔ－ＢＷ０）／ＢＷ０）×１００
「ＢＷｔ」および「ＢＷ０」は、それぞれ時間ｔおよび時間０（ベースライン）におけるＢＷであった。
例示的な二重特異性抗体を用いた、示された処置群中のマウスについての例示的な平均体重（グラム）結果は、図１２Ｅに示される。
腫瘍浸潤性白血球（ＴＩＬ）を評価するために、研究エンドポイントにおいて、腫瘍の単一細胞懸濁物を調製して、ＦＡＣＳによって解析した。腫瘍を、２～４ｍｍの小さい小片へと切断し、酵素ミックス（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０－０９６－７３０）を含有する管に移し、３７℃で４０分間インキュベートした。次いで、腫瘍スライスを、１０ｍＬのＲＰＭＩ－１６４０中で無菌シリンジプランジャーを用いて４℃ですりつぶした。細胞懸濁物を、３００ｇで４℃で７分間遠心分離した。上清を完全に吸引し、細胞ペレットを、ＰＢＳ中に適切な体積で再懸濁し、血球計数チャンバーを使用して計数した。腫瘍細胞を、さらなるＦＡＣＳ解析のために要求される濃度になるように、ＰＢＳ中に再懸濁した。
ＦＡＣＳ解析のために、各腫瘍試料の細胞懸濁物を、抗マウスＣＤ１６／３２抗体、Ｆｃ受容体遮断のための固定可能生存度色素、および生／死染色薬と共に、室温で１０分間インキュベートした。次いで、試料を、マウス（ｍ）ＣＤ４５、ｍＣＤ１１ｂ、ｍＣＤ３、ｍＣＤ４、ｍＣＤ８およびｍＦ４／８０を含めた表面マーカーに対する蛍光コンジュゲートされた抗体で、４℃で３０分間染色した。染色後に、試料をＰＢＳで２回洗浄した。固定し、透過化した後で、試料を、蛍光コンジュゲートされた抗マウスＦｏｘｐ３抗体で、４℃で３０分間染色した。試料を、ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中に再懸濁し、フローサイトメトリー（Ａｔｔｕｎｅ ＮｘＴ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって解析した。
ＦＡＣＳ解析を使用して、全ての生細胞中のＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、およびマクロファージのパーセンテージを決定し、腫瘍１グラム当たりの細胞計数を各細胞型について計算した。ＣＤ４＋Ｔ細胞計数を、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８－についてゲートすることによって決定し、腫瘍１グラム当たりの細胞ＣＤ４＋Ｔ細胞についての例示的な結果は、図１３Ａに示される。ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＴＬ）計数を、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４－ＣＤ８＋をゲートすることによって決定し、腫瘍１グラム当たりのＣＤ８＋細胞についての例示的な結果は、図１３Ｂに示される。Ｔｒｅｇ計数を、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８－Ｆｏｘｐ３＋をゲートすることによって決定し、腫瘍１グラム当たりのＴｒｅｇ細胞についての例示的な結果は、図１３Ｃに示される。マクロファージ計数を、ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０＋をゲートすることによって決定し、腫瘍１グラム当たりのマクロファージ計数についての例示的な結果は、図１３Ｄに示される。ＴＩＬにおける増加が、図１３Ａ～１３Ｄに示されるように、ビヒクル単独対照群と比較して、Ｃ５６×Ｐ２２およびＣ５９×Ｐ２２で観察された。
ｉｎ ｖｉｖｏ治療有効性を、Ａ－３７５黒色腫腫瘍を保有するヒト化ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスモデルにおいても評価した。Ａ－３７５細胞は、およそ２００，０００のＣＤ４７表面コピー数およびおよそ２５，０００のＰＤ－Ｌ１表面コピー数を有する。
動物を、動物施設において、特定の病原体なしの条件で収容した。動物を、実験前に７日間順応させた。温度および湿度は、以下のように制御した：２０～２４℃、４５～６５％湿度、１２時間毎にライティング。上のフィルターケージは、再循環なしの１時間当たり最低１５回の空気交換を用いる、ＨＥＰＡ濾過した空気を含有した。ケージには、ポプラ材の寝床があり、動物に、照射食餌２５ｋＧｙおよび無菌濾過した（５、１、０．２μｍ）水道水を給餌した。
ＢＣ４４形式の二重特異性抗体を、１ｍｇ／ｍＬの濃度で提供し、－８０℃で貯蔵した。使用の前に、二重特異性抗体を解凍し、１０ｍｇ／ｋｇ用量のためにそのまま使用し、用量をｉｎ ｖｉｖｏ注射まで４℃で維持した。ビヒクルは、Ｃａ＋＋およびＭｇ＋＋なしのダルベッコＰＢＳ、ｐＨ７．４であった。
Ａ－３７５細胞系は、ヒト皮膚黒色腫（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、ＵＳＡ、カタログ番号ＣＲＬ１６１９）であり、Giard et al.によって黒色腫を有する５４歳の女性患者から単離されたものである（D. J. Giard et al., "In vitro cultivation of human tumors: establishment of cell lines derived from a series of solid tumors," J. Natl. Cancer Inst., vol. 51, no. 5, pp. 1417-1423, Nov. 1973.）。腫瘍細胞を、２ｇ／Ｌグルコース、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、２ｇ／Ｌ重炭酸ナトリウムを含有する、１０％胎仔ウシ血清を補充したＲＰＭＩ培養培地中で、加湿雰囲気（５％ＣＯ２、９５％空気）中で３７℃で単層として成長させた。腫瘍細胞は、プラスチックフラスコに接着性であった。実験的使用のために、培地を除去し、細胞を、Ｃａ＋＋およびＭｇ＋＋なしのダルベッコＰＢＳでリンスし、その後、トリプシン－ＥＤＴＡを添加し、培養フラスコを室温で５～１５分間インキュベートした。次いで、細胞を収集し、完全培地と混合し、その後、３００ｇで５分間遠心分離した。ペレット化した細胞を洗浄し、フェノールレッドなしのＲＰＭＩ中に再懸濁し、計数し、その生存度を、０．２５％トリパンブルー排除アッセイによって評価した。＞８０％の生存度を有する腫瘍細胞培養物を、ｉｎ－ｖｉｖｏ移植に使用した。
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、確立された手順を使用してバフィーコートから調製した。健康なボランティアドナーから、３つの新たに収集したバフィーコート試料を得た。ＰＢＭＣを、全血液収集後４８時間以内に、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（登録商標）ｐｌｕｓ手順に従う勾配遠心分離を使用して精製した。０．２５％トリパンブルー排除アッセイによって決定して、生存度が＞８０％であった場合にのみ、ＰＢＭＣをｉｎ ｖｉｖｏ注射に使用した。
受け取りの時点で５週齢の、５７匹の健康な雌性ＮＯＤ－ＳＣＩＤ（ＮＯＤ．ＣＢ１７－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＮＣｒＣｒｌ）マウスを、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得た。ＰＢＭＣを、腫瘍誘導の３日前である－３日目（Ｄ－３）に注射した。５７匹のマウスを、各々１９匹のマウスの３つの下位群へと分割し、各下位群を、１人のＰＢＭＣドナー（ドナーＡ、ＢおよびＣ）に割り当てた。３つの下位群は、ＰＢＭＣ接種の時点で、等価な平均体重を有した。各ドナーからのＰＢＭＣを、同じ日に、１９匹のマウスの下位群１つに注射した。各マウスに、フェノールレッドなしのＲＰＭＩ ２００μＬ中１×１０７個のＰＢＭＣの１回の単一の静脈内（ＩＶ）注射を与えた。
０日目（Ｄ０）に、腫瘍を、５７匹全てのＮＯＤ ＳＣＩＤ雌性マウスにおいて、フェノールレッドなしのＲＰＭＩ １６４０ ２００μＬ中１×１０７個のＡ－３７５細胞の、各動物の右脇腹への皮下注射によって誘導した。動物を、個々の体重によって、１日目（Ｄ１）にランダム化した。各下位群からの３匹のマウスを、Ｖｉｖｏ Ｍａｎａｇｅｒ（登録商標）ソフトウェアを使用して、個々の体重に従って６つの群へとランダム化した。この分配は、９匹のマウスの６つの群、１群当たり１人のドナー当たり３匹のマウスを生じた。統計的検定（分散分析、ＡＮＯＶＡ）を実施して、各ドナーについての群間の均一性について試験した。
最新の個々の体重に対して調整した、ｐＨ７．４のＩＰ製剤および１０ｍＬ／ｋｇの投与体積による処置を、腹腔（ＩＰ）中への注射によって、１日目（Ｄ１）に投与した。群名称、投薬量レベル、投与、および処置スケジュール（ＴＩＷ×３、３週間にわたって１週間に３回）は、表１６に記載される。
表16. A-375腫瘍を有するNOD-SCIDマウスモデル-群名称、用量レベル、および処置スケジュール
s=サイレントFc
腫瘍を、腫瘍成長の均一性に基づいて収集し、腫瘍が研究終結前に５００ｍｍ３に達するとき、１群当たり１人のドナー当たり１つの腫瘍を収集した。全ての他のマウスについて、マウスが人道的エンドポイントに達するとき、または研究エンドポイントの時点（腫瘍細胞注射の最大で８週間後）で、腫瘍を収集した。収集した腫瘍を、腫瘍全体の連続切片化を可能にすることを目的として、４ｍｍ厚のスライスへと切断し、４％中性緩衝ホルマリン中で２４～４８時間固定し、引き続いて、パラフィン（Ｈｉｓｔｏｗａｘ（登録商標）、Ｈｉｓｔｏｌａｂ、Ｓｗｅｄｅｎ）中に包埋した。腫瘍壊死のレベルを評価し、剖検報告に記した。
動物を、動物体重測定値、腫瘍体積、臨床記録および死亡率記録を含めたパラメーターについてモニタリングし、動物の生存度および行動を毎日観察した。体重を、１週間に最低２回測定した。腫瘍の長さ（Ｌ）および幅（Ｗ）を、キャリパーを用いて１週間に２回測定し、体積を式（Ｌ×Ｗ２）／２で計算した。マウスのモニタリングを、腫瘍誘導後最大で８週間にわたって実施し、全ての生存マウスを、５６日目（Ｄ５６）以前に安楽死させた。さらに、血液中の二重特異性抗体レベルを、ヒト治療的ＩｇＧ１ ＥＬＩＳＡ（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、キット品目番号５００９１０）によって解析した。例示的な結果は、図１４に示される。
例示的な二重特異性抗体を用いた、示された処置群中のマウスについての例示的な平均腫瘍体積（平均ＴＶ）および中央値腫瘍体積（中央値ＴＶ）結果は、それぞれ図１５Ａおよび図１５Ｂに示される。個々のマウスについての例示的な腫瘍体積結果は、図１５Ｃ～１５Ｇに示される。例示的な二重特異性抗体を用いた、示された処置群中のマウスについての例示的な平均体重結果は、図１５Ｈに示される。
二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ治療有効性を、追加の研究において、Ａ－３７５黒色腫腫瘍を保有するヒト化ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスモデルにおいてさらに評価した。
動物を、以前のＡ－３７５研究において上記されたように収容および給餌し、本明細書に記載されるＢＣ４４形式の二重特異性抗体を、上記のように調製した。
ｉｎ ｖｉｖｏ注射に使用したＰＢＭＣもまた、上の以前のＡ－３７５研究に記載されたように調製した。
受け取りの時点で７～８週齢の、５４匹の健康な雌性ＮＯＤ－ＳＣＩＤ（ＮＯＤ．ＣＢ１７－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＮＣｒＣｒｌ）マウスを、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得た。ＰＢＭＣを、腫瘍誘導の３日前である－３日目（Ｄ－３）に注射した。５４匹のマウスを、各々９匹のマウスの６つの下位群へと分割し、各下位群を、１人のＰＢＭＣドナー（ドナーＡ、ＢおよびＣ）に割り当てた。３つの下位群は、ＰＢＭＣ接種の時点で、等価な平均体重を有した。各ドナーからのＰＢＭＣを、同じ日に、９匹のマウスの下位群１つに注射した。各マウスに、フェノールレッドなしのＲＰＭＩ ２００μＬ中１×１０７個のＰＢＭＣの１回の単一の静脈内（ＩＶ）注射を与えた。
０日目（Ｄ０）に、腫瘍を、５４匹全てのＮＯＤ ＳＣＩＤ雌性マウスにおいて、フェノールレッドなしのＲＰＭＩ １６４０ ２００μＬ中１×１０７個のＡ－３７５細胞の、各動物の右脇腹への皮下注射によって誘導した。動物を、個々の体重によって、１日目（Ｄ１）にランダム化した。各下位群からの３匹のマウスを、Ｖｉｖｏ Ｍａｎａｇｅｒ（登録商標）ソフトウェアを使用して、個々の体重に従って６つの群へとランダム化した。この分配は、９匹のマウスの６つの群、１群当たり１人のドナー当たり３匹のマウスを生じた。統計的検定（分散分析、ＡＮＯＶＡ）を実施して、各ドナーについての群間の均一性について試験した。
最新の個々の体重に対して調整した、ｐＨ７．３～７．４のＩＰ製剤および１０ｍＬ／ｋｇの投与体積による処置を、腹腔（ＩＰ）中への注射によって、１日目（Ｄ１）に投与した。例示的な二重特異性抗体を用いた、群名称、投薬量レベル、投与、および処置スケジュール（ＴＩＷ×４、４週間にわたって１週間に３回）は、表１７に記載される。
表17. A-375腫瘍を有するNOD-SCIDマウスモデル-群名称、用量レベル、および処置スケジュール
腫瘍を、２９日目（Ｄ２９）の最終用量後に３１日目（Ｄ３１）に収集し、計量し、フローサイトメトリー解析によって腫瘍浸潤物を評価するために使用した。動物を、動物体重測定値、腫瘍体積、臨床記録および死亡率記録を含めたパラメーターについてモニタリングし、動物の生存度および行動を毎日観察した。体重を、１週間に最低２回測定した。腫瘍の長さ（Ｌ）および幅（Ｗ）を、キャリパーを用いて１週間に２回測定し、体積を式（Ｌ×Ｗ２）／２で計算した。マウスのモニタリングを、腫瘍誘導後最大で８週間にわたって実施し、全ての生存マウスを、５６日目（Ｄ５６）以前に安楽死させた。
例示的な二重特異性抗体を用いた、示された処置群中のマウスについての例示的な平均腫瘍体積（平均ＴＶ）結果は、図１６Ａに示される。例示的な二重特異性抗体を用いた、示された処置群中のマウスについての例示的な平均体重結果は、図１６Ｂに示される。
腫瘍中へのマクロファージ浸潤を、フローサイトメトリーによって解析した。腫瘍浸潤物の評価のために、摘出し計量した腫瘍を、メスを使用してより小さい断片へと解剖し、非酵素的細胞解離緩衝液中で単一細胞懸濁物へとさらに解離させ、３７℃で３０分間インキュベートし、７０μｍセルストレーナーを介して機械的に分離した。生存細胞を、ｆｉｃｏｌｌベースの勾配遠心分離を使用して富化した。全ての染色の前に、細胞懸濁物を数え上げ、１ウェル／管当たり百万個の細胞（可能な場合）を分配した。細胞を、１ウェル当たり１００μＬの最終染色体積で染色した。生存度色素による染色の第１のステップを実施して、解析時の死細胞排除を可能にした。非特異的結合を、ＦｃＲ遮断試薬（ヒトおよびマウス）を使用して最小化した。各抗体（または、それが規格化されたパネルであった場合、滴定した用量）について、供給業者によって記載された手順に従って、蛍光標識された表面標的抗体を添加した。混合物を、光から保護しながら４℃で３０分間インキュベートした。１回の洗浄後、細胞内染色を、製造業者の使用説明書に従ってＦｏｘＰ３染色緩衝液を使用して実施した。このステップは、細胞質内染色および核内染色を可能にする固定ステップおよび透過化ステップの両方を含んだ。供給業者によって記載された手順に従って、細胞内標的に対する蛍光標識された抗体を添加した。染色溶液を、光から保護しながら４℃で３０分間インキュベートし、透過化緩衝液で洗浄し、最後に、ＰＫＨ２６ビーズを含有するＰＢＳ １％ホルムアルデヒド２００μＬ中に再懸濁した。全ての試料を、＋４℃で貯蔵し、サイトメーター上での獲得まで光から保護した。
陽性および陰性集団の同定のために、蛍光マイナス１（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｎｕｓ ｏｎｅ）（「ＦＭＯ」）原理を使用して、背景抗体蛍光を説明した。ＦＭＯコントロールを、有効性研究のためのランダム化から排除された腫瘍を使用して実施した。コンペンセーションを、コンペンセーションビーズおよび／または単一の染色された細胞を使用して実施した。各ウェル（１５０μＬ）の獲得を、３つの励起レーザーを備えたＦｏｒｔｅｓｓａ Ｘ２０サイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で実施した。全ての事象を、獲得の間に保存した。フローサイトメトリーデータを、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して解析した。例示的な結果は、図１７に示される。
二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ 治療有効性を、Ｊｅｋｏ－ＰＤ－Ｌ１モデルにおいても評価した。この研究では、１００匹の雌性ＮＳＧ（ＮＯＤ．Ｃｇ－ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩＬ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ）マウスに、後部右脇腹に、マウス１匹当たり４百万個の細胞のＪｅｋｏ－ＰＤ－Ｌ１リンパ腫細胞系を皮下接種した。１００ｍｍ３の平均腫瘍体積の時点で、６４匹のマウスを、腫瘍体積に基づいて、各々ｎ＝８の８つの研究群へとランダム化し、ビヒクルまたは本明細書に記載されるＢＣ４４形式の二重特異性抗体のいずれかを、６回の用量にわたり１日おきに、腹腔内（ｉ．ｐ．）投薬した。研究を、０日目の投薬開始後の２１日目に終結させた。
有効性コホートについての研究群、および１群当たりの動物の数は、表１８に示される。
表18. Jeko-PD-L1腫瘍を有するNSGマウスモデル-群名称、用量レベル、および処置スケジュール
研究に登録した全ての動物を、０日目に、表１８に示される研究群へと、腫瘍体積によってランダム化し、ランダム化の時点の平均腫瘍体積は、群にわたって類似であった（およそ１００ｍｍ３）。
ランダム化（０日目）から１４日目または１７日目までの例示的なＪｅｋｏ－ＰＤ－Ｌ１腫瘍体積は、処置群毎に図１８Ａに示される（平均±ＳＥＭ）。ランダム化（０日目）から１４日目または１７日目までの例示的な体重もまた、処置群毎に図１８Ｂに示される（平均±ＳＥＭ）。図１８Ａおよび図１８Ｂに示されるように、ビヒクル群と比較して、全ての処置群が、投薬の開始の２週間後に有意な腫瘍阻害を示し、１０％を超える平均体重減少を有した処置群は存在しなかった。
パーセント腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）もまた、以下の式を使用して計算した：％ＴＧＩ＝（１－（Ｔｉ－Ｔ１）／（Ｖｉ－Ｖ１））×１００、式中、Ｔｉは、測定日における処置群の平均腫瘍体積であり、；Ｔ１は、０日目における処置群の平均腫瘍体積であり；Ｖｉは、測定日におけるビヒクル処置群の平均腫瘍体積であり；Ｖ１は、０日目におけるビヒクル処置群の腫瘍体積である。
表19. 14日目に収集したデータによるTGI
例示的な結果は、例示的な二重特異性抗体が、表１９に示される％ＴＧＩでの腫瘍体積に対する影響によって示されるように、抗腫瘍活性を有したことを示した。
（実施例８）
開発可能性アッセイ
ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１への結合について選択された二重特異性抗体、例えば、実施例１～３に記載されたものなどを、種々の開発可能性法において試験した。例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、およびスタンドアップモノレイヤー吸着クロマトグラフィー（ｓｔａｎｄｕｐ ｍｏｎｏｌａｙｅｒ ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）（ＳＭＡＣ）を含めた種々のクロマトグラフィー法を使用して、開発可能性因子、例えば、モノマーパーセンテージ、溶解度、および抗体の凝集または沈殿を評価した。
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）解析を、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣ上で７．８ｍｍ ＩＤ×３０ｃｍ ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷＸＬカラム（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＬＬＣ、ＰＮ ０８５４１）を使用して実施した。本明細書に記載されるＢＣ４４形式の二重特異性抗体を、ダルベッコＰＢＳ（ｐＨ７．４、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋なし）中１ｍｇ／ｍＬの濃度に対して正規化し、可溶性凝集体をまだ保持したまま、遠心分離を介してペレット粒状物へと清澄化した。移動相緩衝液は、ダルベッコＰＢＳ（ｐＨ７．４、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋なし）であった。各試料について、１０μＬをロードし、２０分間にわたって１．０ｍＬ／分でアイソクラチックに溶出させた。吸光度を、２８０ｎｍでモニタリングした。クロマトグラフィーピークを積分して、％均一性および保持時間を決定した。移動相の選択と連動したカラム固定相は、分子サイジングに加えた疎水性相互作用（ＳＭＡＣと比較してはるかに穏やかな疎水性相互作用）を支持する。データ解析を、Ａｇｉｌｅｎｔ ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ Ｂ．０４．０３を使用して実施した。
例示的なＳＥＣ結果は、図１９Ａ～１９Ｃに示される。結果は、低い二重特異性抗体凝集を示している。
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）解析を、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣ上で４．６ｍｍ ＩＤ×３．５ｃｍ ＴＳＫｇｅｌ Ｂｕｔｙｌ－ＮＰＲカラム（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＬＬＣ、ＰＮ １４９４７）を使用して実施した。本明細書に記載されるＢＣ４４形式の二重特異性抗体を、ｄＰＢＳ（ｐＨ７．４）中２ｍｇ／ｍＬの濃度に対して正規化し、次いで、等しい体積の移動相緩衝液Ｂで、１ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度になるように希釈した。カラムを、１ｍＬ／分の流速で、１００％移動相緩衝液Ｂ（２Ｍ硫酸アンモニウム／２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０）で平衡化した。各試料について、１０μＬをロードし、１５分間にわたって１．０ｍＬ／分で、１００％移動相緩衝液Ｂから１００％移動相緩衝液Ａ（２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０）までの勾配を使用して溶出させ、１００％Ａで３分間維持してカラムを洗浄し、平衡化のために２分間にわたって１００％Ｂに戻した。吸光度を、２８０ｎｍでモニタリングした。試料保持時間を計算し、標準対照のセットと比較して、増加した保持時間（増加した疎水性）を有する二重特異性抗体を同定した。
例示的なＨＩＣ結果は、図２０Ａ～２０Ｄに示される。抗体の疎水性は、抗体の凝集、溶解度および粘度に影響し得る。結果は、試験した抗体について類似の保持時間を示し、凝集および沈殿の傾向の低さを示している。試験した二重特異性抗体のＨＩＣ溶出プロファイル（例えば、溶出ピークの鋭さおよび均一な保持時間）は、これらの二重特異性抗体が凝集および／または沈殿する傾向の低さを示唆した。
全体で、開発可能性アッセイの結果は、試験した例示的な二重特異性抗体について開発可能性基準が満たされていることを示している。
スタンドアップモノレイヤー吸着クロマトグラフィー（ＳＭＡＣ）解析を、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣ上で４．６ｍｍ ＩＤ×３００ｍｍ Ｚｅｎｉｘ ＳＥＣ ３００カラム（Ｓｅｐａｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＰＮ ２１３３００Ｐ－４６３０）を使用して実施した。本明細書に記載されるＢＣ４４形式の二重特異性抗体を、ｄＰＢＳ（ｐＨ７．４）中１ｍｇ／ｍＬの濃度に対して正規化し、遠心分離を介してペレット粒状物へと清澄化した。移動相緩衝液は、ｄＰＢＳ（ｐＨ７．４、カルシウムおよびマグネシウムなし）であった。各試料について、１０μＬをロードし、３２分間にわたって０．２５ｍＬ／分でアイソクラチックに溶出させた。吸光度を、２８０ｎｍでモニタリングした。試料保持時間を計算し、標準対照のセットと比較して、増加した保持時間（凝集体を形成する増加した傾向）を有する二重特異性抗体を同定した。
例示的なＳＭＡＣ結果は、図２１Ａ～２１Ｄに示される。結果は、試験した例示的な二重特異性抗体が、コロイド安定性、および凝集する傾向の低さを示す、類似の短い保持時間を有したことを示している。
（実施例９）
競合的結合アッセイおよびエピトープビニング
競合結合アッセイを用いて、抗体がヒトＣＤ４７またはヒトＰＤ－Ｌ１の同じまたは同様の結合性領域について競合するかどうかを決定した。競合イムノアッセイを使用して、１つの抗体の抗原への結合により他の抗体の結合が妨げられる場合、これらの２つの抗体を、同じまたは同様の（例えば、重複する）エピトープに結合するものとみなし、同じエピトープビンに入るとみなした。抗体の結合により別の抗体の結合が干渉されない場合、これらの抗体をＣＤ４７またはＰＤ－Ｌ１の別個のエピトープに結合するものとみなし、異なるエピトープビンに入れる。
ｏｃｔｅｔに基づく「タンデムな」アッセイ形式を交差競合アッセイに使用して、競合結合データおよびエピトープビニングを確立した。これらのアッセイのために、１００ｎＭのビオチン化抗原を１０×カイネティクス緩衝剤（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）中、ストレプトアビジンセンサーに固定化した。抗体のＣＤ４７またはＰＤ－Ｌ１への結び付きを、２つの競合する（または競合しない）抗体を飽和濃度で含有するウェルにセンサーを連続的なステップで浸漬することによってモニタリングした。第１の抗体の飽和により結合が遮断されなかった場合（ＢＬＩシグナルがさらに増すことによって示される）、これらの抗体を別個のまたは重複しないエピトープに結合し、異なるビンに属するものとみなした。
結果は、Ｃ４０、Ｃ５６およびＣ５９が一緒にビニングされることを示している。結果は、Ｐ２２およびＰ３１．２が一緒にビニングされ（データ示さず）、Ｐ２４とは別々にビニングされることもまた示している。
配列
例示的な多重特異性結合性作用剤
ＢＣ１形式の例示的な二重特異性抗体の配列：
（１）Ｃ４０×Ｐ２２
Ｃ４０ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000038
 Ｃ４０ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ１）
Figure 2023536631000039
 Ｐ２２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000040
 Ｐ２２ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000041
 （２）Ｃ４０×Ｐ２４
Ｃ４０ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000042
 Ｃ４０ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ１）
Figure 2023536631000043
 Ｐ２４ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000044
Figure 2023536631000045
 Ｐ２４ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000046
 （３）Ｃ４０×Ｐ３１．２
Ｃ４０ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000047
 Ｃ４０ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ１）
Figure 2023536631000048
 Ｐ３１．２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000049
 Ｐ３１．２ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000050
 （４）Ｃ５６×Ｐ２２
Ｃ５６ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000051
 Ｃ５６ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ１）
Figure 2023536631000052
 Ｐ２２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000053
 Ｐ２２ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000054
 （５）Ｃ５６×Ｐ２４
Ｃ５６ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000055
Figure 2023536631000056
 Ｃ５６ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ１）
Figure 2023536631000057
 Ｐ２４ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000058
 Ｐ２４ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000059
 （６）Ｃ５６×Ｐ３１．２
Ｃ５６ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000060
 Ｃ５６ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ１）
Figure 2023536631000061
 Ｐ３１．２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000062
 Ｐ３１．２ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000063
 （７）Ｃ５９×Ｐ２２
Ｃ５９ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000064
 Ｃ５９ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ１）
Figure 2023536631000065
 Ｐ２２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000066
Figure 2023536631000067
 Ｐ２２ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000068
 （８）Ｃ５９×Ｐ２４
Ｃ５９ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000069
 Ｃ５９ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ１）
Figure 2023536631000070
 Ｐ２４ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000071
 Ｐ２４ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000072
 （９）Ｃ５９×Ｐ３１．２
Ｃ５９ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000073
 Ｃ５９ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ１）
Figure 2023536631000074
 Ｐ３１．２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000075
 Ｐ３１．２ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000076
 （１０）Ｃ４０×Ｐ２２（サイレントＦｃ）
Ｃ４０ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000077
Figure 2023536631000078
 Ｐ２２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000079
 （１１）Ｃ４０×Ｐ２４（サイレントＦｃ）
Ｃ４０ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000080
 Ｐ２４ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000081
Figure 2023536631000082
 （１２）Ｃ４０×Ｐ３１．２（ＢＣ１；サイレントＦｃ）
Ｃ４０ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000083
 Ｐ３１．２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000084
 （１３）Ｃ５６×Ｐ２２（サイレントＦｃ）
Ｃ５６ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000085
 Ｐ２２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000086
 （１４）Ｃ５６×Ｐ２４（サイレントＦｃ）
Ｃ５６ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000087
 Ｐ２４ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000088
 （１５）Ｃ５６×Ｐ３１．２（サイレントＦｃ）
Ｃ５６ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000089
 Ｐ３１．２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）ＢＣ１－３サイレントＦｃ
Figure 2023536631000090
 （１６）Ｃ５９×Ｐ２２（サイレントＦｃ）
Ｃ５９ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000091
 Ｐ２２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000092
 （１７）Ｃ５９×Ｐ２４（サイレントＦｃ）
Ｃ５９ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000093
Figure 2023536631000094
 Ｐ２４ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000095
 （１８）Ｃ５９×Ｐ３１．２（サイレントＦｃ）
Ｃ５９ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ１－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000096
 Ｐ３１．２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000097
Figure 2023536631000098
 ＢＣ４４形式の例示的な二重特異性抗体の配列：
（１）Ｃ４０×Ｐ２２
Ｃ４０ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000099
 Ｃ４０ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ４４）
Figure 2023536631000100
 Ｐ２２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000101
Figure 2023536631000102
 Ｐ２２ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000103
 （２）Ｃ４０×Ｐ２４
Ｃ４０ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000104
 Ｃ４０ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ４４）
Figure 2023536631000105
 Ｐ２４ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000106
 Ｐ２４ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000107
 （３）Ｃ４０×Ｐ３１．２
Ｃ４０ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000108
 Ｃ４０ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ４４）
Figure 2023536631000109
 Ｐ３１．２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000110
 Ｐ３１．２ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000111
 （４）Ｃ５６×Ｐ２２
Ｃ５６ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000112
Figure 2023536631000113
 Ｃ５６ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ４４）
Figure 2023536631000114
 Ｐ２２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000115
 Ｐ２２ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000116
 （５）Ｃ５６×Ｐ２４
Ｃ５６ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000117
 Ｃ５６ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ４４）
Figure 2023536631000118
 Ｐ２４ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000119
 Ｐ２４ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000120
 （６）Ｃ５６×Ｐ３１．２
Ｃ５６ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000121
 Ｃ５６ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ４４）
Figure 2023536631000122
 Ｐ３１．２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000123
Figure 2023536631000124
 Ｐ３１．２ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000125
 （７）Ｃ５９×Ｐ２２
Ｃ５９ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000126
 Ｃ５９ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ４４）
Figure 2023536631000127
 Ｐ２２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000128
 Ｐ２２ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000129
 （８）Ｃ５９×Ｐ２４
Ｃ５９ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000130
 Ｃ５９ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ４４）
Figure 2023536631000131
 Ｐ２４ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000132
 Ｐ２４ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000133
 （９）Ｃ５９×Ｐ３１．２
Ｃ５９ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）
Figure 2023536631000134
Figure 2023536631000135
 Ｃ５９ 第２のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＢＣ４４）
Figure 2023536631000136
 Ｐ３１．２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）
Figure 2023536631000137
 Ｐ３１．２ 第４のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）
Figure 2023536631000138
 （１０）Ｃ４０×Ｐ２２（サイレントＦｃ）
Ｃ４０ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000139
 Ｐ２２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000140
 （１１）Ｃ４０×Ｐ２４（サイレントＦｃ）
Ｃ４０ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000141
Figure 2023536631000142
 Ｐ２４ 第３のポリペプチド鎖（ＶＨ－ＣＨ１）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000143
 （１２）Ｃ４０×Ｐ３１．２（サイレントＦｃ）
Ｃ４０ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000144
 Ｐ３１．２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000145
Figure 2023536631000146
 （１３）Ｃ５６×Ｐ２２（サイレントＦｃ）
Ｃ５６ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000147
 Ｐ２２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）Ｆｃ
Figure 2023536631000148
 （１４）Ｃ５６×Ｐ２４（サイレントＦｃ）
Ｃ５６ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000149
 Ｐ２４ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000150
 （１５）Ｃ５６×Ｐ３１．２（サイレントＦｃ）
Ｃ５６ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000151
 Ｐ３１．２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000152
 （１６）Ｃ５９×Ｐ２２（サイレントＦｃ）
Ｃ５９ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000153
 Ｐ２２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000154
Figure 2023536631000155
 （１７）Ｃ５９×Ｐ２４（サイレントＦｃ）
Ｃ５９ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000156
 Ｐ２４ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000157
 （１８）Ｃ５９×Ｐ３１．２（サイレントＦｃ）
Ｃ５９ 第１のポリペプチド鎖（ＶＬ－ＢＣ４４－ＣＨ２－ＣＨ３ノブ）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000158
Figure 2023536631000159
 Ｐ３１．２ 第３のポリペプチド鎖（ＶＬ－Ｃｋ－ＣＨ２－ＣＨ３ホール）サイレントＦｃ
Figure 2023536631000160
本出願を通じて、種々の刊行物、特許、特許出願および他の文献が参照されてきた。これらの刊行物、特許、特許出願および他の文献の開示は、それらの全体で、本明細書で開示される主題が関する分野の技術水準をより完全に記述するためを含めた全ての目的のために、本出願においてこれにより参照により本明細書に組み込まれる。開示された主題は、上で提供された実施例を参照して記載されてきたが、開示された主題の精神から逸脱することなしに種々の改変がなされ得ることを理解すべきである。多くのバリエーションが、本明細書の検討の際に、当業者に明らかになる。

Claims (199)

  1. ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインおよびＣＤ４７ではない１つまたは複数の標的に結合する１つまたは複数の追加的な結合性ドメインを含む多重特異性抗体またはその断片であって、（ｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域；（ｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号５２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域；または（ｉｉｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号７８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体と、ヒトＣＤ４７への結合について競合する、多重特異性抗体またはその断片。
  2. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  3. 二重特異性抗体である、請求項１または２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  4. ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）
    （ｉ）配列番号１、２７、または５３、
    （ｉｉ）配列番号７、３３、または５９、
    （ｉｉｉ）配列番号１２、３８、または６４、
    （ｉｖ）配列番号１３、３９、または６５、および
    （ｖ）配列番号１８、４４、または７０
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；
    （２）
    （ｉ）配列番号２、２８、または５４、
    （ｉｉ）配列番号８、３４、または６０、
    （ｉｉｉ）配列番号１４、４０、または６６、
    （ｉｖ）配列番号１９、４５、または７１、および
    （ｖ）配列番号２４、５０、または７６
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；ならびに
    （３）
    （ｉ）配列番号３、２９、または５５、
    （ｉｉ）配列番号９、３５、または６１、
    （ｉｉｉ）配列番号１５、４１、または６７、および
    （ｉｖ）配列番号２０、４６、または７２
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）
    （ｉ）配列番号４、３０、または５６、
    （ｉｉ）配列番号１０、３６、または６２、
    （ｉｉｉ）配列番号１６、４２、または６８、および
    （ｉｖ）配列番号２１、４７、または７３
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；
    （２）
    （ｉ）配列番号５、３１、または５７、
    （ｉｉ）配列番号１１、３７、または６３、および
    （ｉｉｉ）配列番号２２、４８、または７４
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに
    （３）
    （ｉ）配列番号６、３２、または５８、
    （ｉｉ）配列番号１７、４３、または６９、および
    （ｉｉｉ）配列番号２３、４９、または７５
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、多重特異性抗体またはその断片。
  5. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  6. 二重特異性抗体である、請求項４または５に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  7. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）
    （ｉ）配列番号７９、１０５、または１３１、
    （ｉｉ）配列番号８５、１１１、または１３７、
    （ｉｉｉ）配列番号９０、１１６、または１４２、
    （ｉｖ）配列番号９１、１１７、または１４３、および
    （ｖ）配列番号９６、１２２、または１４８
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；
    （２）
    （ｉ）配列番号８０、１０６、または１３２、
    （ｉｉ）配列番号８６、１１２、または１３８、
    （ｉｉｉ）配列番号９２、１１８、または１４４、
    （ｉｖ）配列番号９７、１２３、または１４９、および
    （ｖ）配列番号１０２、１２８、または１５９
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；ならびに
    （３）
    （ｉ）配列番号８１、１０７、または１３３、
    （ｉｉ）配列番号８７、１１３、または１３９、
    （ｉｉｉ）配列番号９３、１１９、または１４５、
    （ｉｖ）配列番号９８、１２４、または１５０
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）
    （ｉ）配列番号８２、１０８、または１３４、
    （ｉｉ）配列番号８８、１１４、または１４０、
    （ｉｉｉ）配列番号９４、１２０、または１４６、および
    （ｉｖ）配列番号９９、１２５、または１５１
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；
    （２）
    （ｉ）配列番号８３、１０９、または１３５、
    （ｉｉ）配列番号８９、１１５、または１４１、および
    （ｉｉｉ）配列番号１００、１２６、または１５２
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに
    （３）
    （ｉ）配列番号８４、１１０、または１３６、
    （ｉｉ）配列番号９５、１２１、または１４７、
    （ｉｉｉ）配列番号１０１、１２７、または１５３
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項５または６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  8. ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、前記第１の結合性ドメインが、
    （１）
    （ｉ）配列番号１、２７、または５３、
    （ｉｉ）配列番号７、３３、または５９、
    （ｉｉｉ）配列番号１２、３８、または６４、
    （ｉｖ）配列番号１３、３９、または６５、および
    （ｖ）配列番号１８、４４、または７０
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；
    （２）
    （ｉ）配列番号２、２８、または５４、
    （ｉｉ）配列番号８、３４、または６０、
    （ｉｉｉ）配列番号１４、４０、または６６、
    （ｉｖ）配列番号１９、４５、または７１、および
    （ｖ）配列番号２４、５０、または７６
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；ならびに
    （３）
    （ｉ）配列番号３、２９、または５５、
    （ｉｉ）配列番号９、３５、または６１、
    （ｉｉｉ）配列番号１５、４１、または６７、および
    （ｉｖ）配列番号２０、４６、または７２
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、多重特異性抗体またはその断片。
  9. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  10. 二重特異性抗体である、請求項８または９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  11. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）
    （ｉ）配列番号７９、１０５、または１３１、
    （ｉｉ）配列番号８５、１１１、または１３７、
    （ｉｉｉ）配列番号９０、１１６、または１４２、
    （ｉｖ）配列番号９１、１１７、または１４３、および
    （ｖ）配列番号９６、１２２、または１４８
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１；
    （２）
    （ｉ）配列番号８０、１０６、または１３２、
    （ｉｉ）配列番号８６、１１２、または１３８、
    （ｉｉｉ）配列番号９２、１１８、または１４４、
    （ｉｖ）配列番号９７、１２３、または１４９、および
    （ｖ）配列番号１０２、１２８、または１５９
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；ならびに
    （３）
    （ｉ）配列番号８１、１０７、または１３３、
    （ｉｉ）配列番号８７、１１３、または１３９、
    （ｉｉｉ）配列番号９３、１１９、または１４５、および
    （ｉｖ）配列番号９８、１２４、または１５０
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、請求項９または１０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  12. ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、前記第１の結合性ドメインが、
    （１）
    （ｉ）配列番号４、３０、または５６、
    （ｉｉ）配列番号１０、３６、または６２、
    （ｉｉｉ）配列番号１６、４２、または６８、および
    （ｉｖ）配列番号２１、４７、または７３
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；
    （２）
    （ｉ）配列番号５、３１、または５７、
    （ｉｉ）配列番号１１、３７、または６３、および
    （ｉｉｉ）配列番号２２、４８、または７４
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；
    （３）
    （ｉ）配列番号６、３２、または５８、
    （ｉｉ）配列番号１７、４３、または６９、および
    （ｉｉｉ）配列番号２３、４９、または７５
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、多重特異性抗体またはその断片。
  13. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  14. 二重特異性抗体である、請求項１２または１３に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  15. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）
    （ｉ）配列番号８２、１０８、または１３４、
    （ｉｉ）配列番号８８、１１４、または１４０、
    （ｉｉｉ）配列番号９４、１２０、または１４６、および
    （ｉｖ）配列番号９９、１２５、または１５１
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１；
    （２）
    （ｉ）配列番号８３、１０９、または１３５、
    （ｉｉ）配列番号８９、１１５、または１４１、および
    （ｉｉｉ）配列番号１００、１２６、または１５２
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに
    （３）
    （ｉ）配列番号８４、１１０、または１３６、
    （ｉｉ）配列番号９５、１２１、または１４７、
    （ｉｉｉ）配列番号１０１、１２７、または１５３
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、請求項１３または１４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  16. ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、前記第１の結合性ドメインが、
    配列番号２５であるＶＨ配列および配列番号２６であるＶＬ配列を含む、Ｃ４０と称される抗体からの；
    配列番号５１であるＶＨ配列および配列番号５２であるＶＬ配列を含む、Ｃ５６と称される抗体からの；または
    配列番号７７であるＶＨ配列および配列番号７８であるＶＬ配列を含む、Ｃ５９と称される抗体からの
    ３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）全てまたは３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、多重特異性抗体またはその断片。
  17. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  18. 二重特異性抗体である、請求項１６または１７に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  19. 前記第２の結合性ドメインが、
    配列番号１０３であるＶＨ配列および配列番号１０４であるＶＬ配列を含む、Ｐ２２と称される抗体からの；
    配列番号１２９であるＶＨ配列および配列番号１３０であるＶＬ配列を含む、Ｐ２４と称される抗体からの；または
    配列番号１５５であるＶＨ配列および配列番号１５６であるＶＬ配列を含む、Ｐ３１．２と称される抗体
    ３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）全てまたは３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、請求項１７または１８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  20. 前記第１の結合性ドメインが、前記Ｃ４０と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび／または３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、請求項１６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  21. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項２０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  22. 二重特異性抗体である、請求項２０または２１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  23. 前記第２の結合性ドメインが、前記Ｐ２２と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、請求項２１または２２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  24. 前記第２の結合性ドメインが、前記Ｐ２４と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、請求項２１または２２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  25. 前記第２の結合性ドメインが、前記Ｐ３１．２と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、請求項２１または２２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  26. 前記第１の結合性ドメインが、前記Ｃ５６と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、請求項１６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  27. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項２６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  28. 二重特異性抗体である、請求項２６または２７に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  29. 前記第２の結合性ドメインが、前記Ｐ２２と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、請求項２７または２８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  30. 前記第２の結合性ドメインが、前記Ｐ２４と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、請求項２７または２８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  31. 前記第２の結合性ドメインが、前記Ｐ３１．２と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、請求項２７または２８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  32. 前記第１の結合性ドメインが、前記Ｃ５９と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、請求項１６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  33. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項３２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  34. 二重特異性抗体である、請求項３２または３３に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  35. 前記第２の結合性ドメインが、前記Ｐ２２と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、請求項３３または３４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  36. 前記第２の結合性ドメインが、前記Ｐ２４と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、請求項３３または３４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  37. 前記第２の結合性ドメインが、前記Ｐ３１．２と称される抗体からの３つの重鎖ＣＤＲ全ておよび３つの軽鎖ＣＤＲ全てを含む、請求項３３または３４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  38. ＣＤ４７に結合する第１の結合性ドメインを有する多重特異性抗体またはその断片であって、前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）表１～３に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、
    または
    （ｂ）表１～３に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域
    を含む、多重特異性抗体またはその断片。
  39. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）表１～３に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、
    ならびに
    （ｂ）表１～３に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域
    を含む、請求項３８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  40. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項３８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  41. 二重特異性抗体である、請求項３８から４０のいずれか一項に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  42. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）表４～６に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、
    ならびに／または
    （ｂ）表４～６に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域
    を含む、請求項４０または４１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  43. 前記第１の結合性ドメインが、表１～３に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、請求項３８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  44. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項４３に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  45. 二重特異性抗体である、請求項４３または４４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  46. 前記第２の結合性ドメインが、表４～６に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、請求項４４または４５に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  47. 前記第１の結合性ドメインが、表１～３に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、請求項３８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  48. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項４７に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  49. 二重特異性抗体である、請求項４７または４８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  50. 前記第２の結合性ドメインが、表４～６に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、請求項４８または４９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  51. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１、７、１２、１３、および１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号２、８、１４、１９、および２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、ならびに
    （３）配列番号３、９、１５、および２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号４、１０、１６、および２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号５、１１、および２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、ならびに
    （３）配列番号６、１７、および２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項３８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  52. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項５１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  53. 二重特異性抗体である、請求項５１または５２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  54. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項５１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  55. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項５４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  56. 二重特異性抗体である、請求項５４または５５に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  57. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項５５または５６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  58. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項５５または５６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  59. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項５５または５６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  60. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項５１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  61. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項６０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  62. 二重特異性抗体である、請求項６０または６１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  63. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項６１または６２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  64. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１１１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１１４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項６１または６２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  65. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１４０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項６１または６２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  66. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項５１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  67. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項６６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  68. 二重特異性抗体である、請求項６６または６７に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  69. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項６７または６８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  70. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１１６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項６７または６８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  71. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１４２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項６７または６８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  72. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項５１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  73. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項７２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  74. 二重特異性抗体である、請求項７２または７３に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  75. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号９２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号９５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項７３または７４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  76. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１１７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１２０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１１５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１２８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項７３または７４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  77. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１４３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１４５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１４６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１４１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項７３または７４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  78. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項５１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  79. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項７８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  80. 二重特異性抗体である、請求項７８または７９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  81. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号９８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号９９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１００のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項７９または８０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  82. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１２２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１２３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１２６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１２７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項７９または８０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  83. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１４８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１４９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１５１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１５２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１５３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項７９または８０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  84. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項５１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  85. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項８４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  86. 二重特異性抗体である、請求項８４または８５に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  87. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項８５または８６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  88. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１２８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項８５または８６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  89. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１５４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項８５または８６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  90. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号２７、３３、３８、３９、および４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号２８、３４、４０、４５、および５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、ならびに
    （３）配列番号２９、３５、４１、および４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号３０、３６、４２、および４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号３１、３７、および４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、ならびに
    （３）配列番号３２、４３、および４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項３８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  91. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項９０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  92. 二重特異性抗体である、請求項９０または９１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  93. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項９０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  94. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項９３に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  95. 二重特異性抗体である、請求項９３または９４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  96. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項９４または９５に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  97. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項９４または９５に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  98. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項９４または９５に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  99. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項９０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  100. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項９９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  101. 二重特異性抗体である、請求項９９または１００に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  102. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１００または１０１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  103. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１００または１０１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  104. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１００または１０１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  105. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項９０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  106. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１０５に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  107. 二重特異性抗体である、請求項１０５または１０６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  108. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１０６または１０７に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  109. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１０６または１０７に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  110. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１０６または１０７に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  111. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号４３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項９０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  112. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１１１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  113. 二重特異性抗体である、請求項１１１または１１２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  114. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１１２または１１３に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  115. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１１２または１１３に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  116. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１１２または１１３に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  117. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号４４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項９０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  118. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１１７に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  119. 二重特異性抗体である、請求項１１７または１１８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  120. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１１８または１１９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  121. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１１８または１１９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  122. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１１８または１１９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  123. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号５０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項９０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  124. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１２３に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  125. 二重特異性抗体である、請求項１２３または１２４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  126. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１２４または１２５に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  127. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１２４または１２５に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  128. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１２４または１２５に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  129. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号５３、５９、６４、６５、および７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号５４、６０、６６、７１、および７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、ならびに
    （３）配列番号５５、６１、６７、および７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号５６、６２、６８、および７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号５７、６３、および７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、ならびに
    （３）配列番号５８、６９、および７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項３８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  130. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１２９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  131. 二重特異性抗体である、請求項１２９または１３０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  132. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１２９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  133. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１３２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  134. 二重特異性抗体である、請求項１３２または１３３に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  135. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１３３または１３４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  136. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１３３または１３４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  137. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１３３または１３４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  138. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号６１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号６２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１２９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  139. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１３８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  140. 二重特異性抗体である、請求項１３８または１３９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  141. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１３９または１４０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  142. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１３９または１４０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  143. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１３９または１４０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  144. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号６４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１２９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  145. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１４４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  146. 二重特異性抗体である、請求項１４４または１４５に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  147. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１４５または１４６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  148. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１４６または１４７に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  149. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１４６または１４７に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  150. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号６５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号６６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号６７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号６８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号６９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１２９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  151. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１５０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  152. 二重特異性抗体である、請求項１５０または１５１に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  153. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１５１または１５２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  154. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１５１または１５２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  155. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１５１または１５２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  156. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号７１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号７２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号７３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号７４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号７５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１２９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  157. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１５６に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  158. 二重特異性抗体である、請求項１５６または１５７に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  159. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１５７または１５８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  160. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１５７または１５８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  161. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１５７または１５８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  162. 前記第１の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号７６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号５６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１２９に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  163. 多重特異性抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する第２の結合性ドメインを含む、請求項１６２に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  164. 二重特異性抗体である、請求項１６２または１６３に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  165. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１６３または１６４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  166. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１０９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１６３または１６４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  167. 前記第２の結合性ドメインが、
    （ａ）
    （１）配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３
    を含む重鎖可変（ＶＨ）領域と、
    （ｂ）
    （１）配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、
    （２）配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および
    （３）配列番号１３６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域と
    を含む、請求項１６３または１６４に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  168. 前記ＶＨ領域またはＶＬ領域が、ヒトフレームワーク配列をさらに含む、請求項３８から１６７のいずれか一項に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  169. 前記ＶＨ領域およびＶＬ領域が、ヒトフレームワーク配列をさらに含む、請求項１６８に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  170. 前記ＶＨ領域またはＶＬ領域が、フレームワーク１（ＦＲ１）、フレームワーク２（ＦＲ２）、フレームワーク３（ＦＲ３）、および／またはフレームワーク４（ＦＲ４）配列をさらに含む、請求項３８から１６７のいずれか一項に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  171. 前記ＶＨ領域およびＶＬ領域が、フレームワーク１（ＦＲ１）、フレームワーク２（ＦＲ２）、フレームワーク３（ＦＲ３）、および／またはフレームワーク４（ＦＲ４）配列をさらに含む、請求項１７０に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  172. 抗体が、組換え抗体である、請求項１から１７１のいずれか一項に記載の多重特異性抗体または断片。
  173. 前記組換え抗体が、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはキメラ抗体である、請求項１７２に記載の多重特異性抗体または断片。
  174. Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、単鎖抗体分子、二重可変領域抗体、単一可変領域抗体、線状抗体、Ｖ領域、または抗体断片から形成された多重特異性抗体である、請求項１から１７３のいずれか一項に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  175. 診断剤、検出剤または治療剤とコンジュゲートしている、または組換えによって融合している、請求項１から１７４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  176. 前記治療剤が、化学療法剤、細胞毒、または薬物である、請求項１７５に記載の多重特異性抗体またはその断片。
  177. 請求項１から１７６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体またはその断片と本質的に同じヒトＣＤ４７のエピトープに結合する結合性作用剤。
  178. 多重特異性抗体またはその断片である、請求項１７７に記載の結合性作用剤。
  179. 非抗体タンパク質足場を含む、請求項１７７に記載の結合性作用剤。
  180. 前記非抗体タンパク質足場が、フィブロネクチン足場、アンチカリン、アドネクチン、アフィボディ、ＤＡＲＰｉｎ、フィノマー、アフィチン、アフィリン、アビマー、システインリッチノッチンペプチド、または操作されたクニッツ型阻害剤を含む、請求項１７９に記載の結合性作用剤。
  181. 請求項１から１７６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体またはその断片と、ヒトＣＤ４７への結合について競合する結合性作用剤。
  182. 抗体またはその断片である、請求項１８１に記載の結合性作用剤。
  183. 請求項１から１７６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体またはその断片をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを含む１つまたは複数のベクター。
  184. 請求項１から１７６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体またはその断片、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  185. 対象におけるがんまたは腫瘍を処置するための方法であって、前記対象に請求項１から１７６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体もしくはその断片、または請求項１８４に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
  186. 対象におけるがんまたは腫瘍に付随する１つまたは複数の症状を緩和するための方法であって、前記対象に請求項１から１７６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体もしくはその断片、または請求項１８４に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
  187. 腫瘍を有する対象における腫瘍サイズを縮小するための方法であって、前記対象に請求項１から１７６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体もしくはその断片、または請求項１８４に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
  188. 腫瘍を有する対象における腫瘍細胞除去を増強するための方法であって、前記対象に請求項１から１７６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体もしくはその断片、または請求項１８４に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
  189. 対象における食細胞機能不全疾患、障害または状態を処置するための方法であって、前記対象に請求項１から１７６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体もしくはその断片、または請求項１８４に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
  190. 対象における免疫細胞によるファゴサイトーシスを増大させるための方法であって、前記対象に請求項１から１７６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体もしくはその断片、または請求項１８４に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
  191. 前記免疫細胞が、マクロファージ、好中球、樹状細胞、またはＢリンパ球である、請求項１９０に記載の方法。
  192. 前記対象が、がんまたは腫瘍の診断を受けている、請求項１９０または１９１に記載の方法。
  193. 対象におけるＴ細胞機能不全疾患、障害または状態を処置するための方法であって、前記対象に請求項１から１７６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体もしくはその断片、または請求項１８４に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
  194. 前記Ｔ細胞機能不全疾患、障害または状態が、腫瘍免疫である、請求項１９３に記載の方法。
  195. 対象におけるＴ細胞機能を増強するための方法であって、前記対象に請求項１から１７６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体もしくはその断片、または請求項１８４に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
  196. 前記Ｔ細胞機能が、サイトカインの分泌である、請求項１９５に記載の方法。
  197. 前記Ｔ細胞機能が、腫瘍細胞の除去である、請求項１９５に記載の方法。
  198. 前記対象が、がんまたは腫瘍の診断を受けている、請求項１９５から１９７のいずれか一項に記載の方法。
  199. 前記対象に、１つまたは複数の治療剤を、前記多重特異性抗体もしくはその断片または前記医薬組成物と組み合わせて投与する、請求項１８５から１９８のいずれか一項に記載の方法。
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