TW202313675A - 治療糖尿病性腎病及腎絲球疾病的方法 - Google Patents

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保羅 費奧瑞納
法蘭西絲卡 迪亞狄歐
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保羅 費奧瑞納
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Abstract

本發明提供延遲患有1型糖尿病或2型糖尿病或腎絲球疾病之受試者中腎損害之發作或進展或治療腎病之方法。該等方法包括向患有1型或2型糖尿病或腎絲球疾病之受試者投與有效量之能夠抑制NBL1活性且尤其能夠抑制NBL1介導之人類足細胞毒性的藥劑。在一些實施例中，該藥劑係能夠結合至人類NBL1之抗體。

Description

治療糖尿病性腎病及腎絲球疾病的方法
1型糖尿病(T1D)及2型糖尿病(T2D)共同影響全球至少347百萬人，且盛行率日益增加。糖尿病之特徵在於高血糖症及大大影響患者之生活品質及壽命之併發症，從而給社會帶來重大經濟負擔。美國糖尿病協會(American Diabetes Association)實施之研究證實，2017年美國糖尿病之國家經濟負擔為3270億美元。此代表自2012年最後一次調查成本時之2450億之26%增加。
當前並無用於T1D或T2D之對策。大部分療法幫助患者在一定程度上管控症狀，但糖尿病患者仍遭遇多種長期健康併發症。該等併發症尤其係腎損害，其可進展至晚期腎臟病(ESRD)。在2011年，糖尿病係44%之所有新病例中之腎衰竭之主要病因。考慮到與糖尿病有關之併發症、尤其腎病及其進展之盛行率及嚴重程度，需要延遲糖尿病中腎病之發作及進展之治療劑。
腎損害亦具有其他病因。需要延遲由除糖尿病外之病症引起之腎病之發作及進展的治療劑。尤其需要治療腎絲球病症之治療劑。
如本發明中之實驗實例中所詳述，已發現，蛋白質神經母細胞瘤致瘤抑制因子1 (NBL1)直接對腎細胞(包含足細胞及腎小管細胞)具有毒性。毒性效應並非經由腎BMP蛋白之抑制所介導；已證實，BMP不表現於腎細胞中且不由該等細胞分泌。此外，已發現，NBL1亦不表現於腎細胞中，但表現於循環免疫細胞中。使用拮抗劑(sBMP2或抗NBL1單株抗體)中和NBL1可防止活體外毒性。最後，已證實，NBL1在1型糖尿病及2型糖尿病中有所升高。抑制NBL1由此係預防尤其1型或2型糖尿病患者中由循環NBL1引起之腎損害之發作及進展之新治療方式。NBL1抑制亦將有效治療由NBL1介導損害之非糖尿病性腎絲球疾病。
因此，在第一態樣中，提供延遲患有1型糖尿病或2型糖尿病或腎絲球疾病之受試者中腎損害之發作或進展之方法。該方法包括向受試者投與有效量之能夠抑制NBL1活性、尤其能夠抑制對人類足細胞之NBL1毒性之藥劑。在一些實施例中，該方法會預防腎功能下降之發作或減緩腎功能下降。
在另一態樣中，提供減緩患有1型或2型糖尿病或腎絲球疾病之受試者之腎功能下降之方法。該方法包括向受試者投與有效量之能夠抑制NBL1活性、尤其能夠抑制對人類足細胞之NBL1毒性之藥劑。
在又一態樣中，提供治療患有1型或2型糖尿病或腎絲球疾病之受試者之糖尿病性腎病(DKD)之方法。該方法包括向受試者投與有效量之能夠抑制NBL1活性、尤其能夠抑制對人類足細胞之NBL1毒性之藥劑。
在該等方法之一些實施例中，藥劑能夠結合至NBL1。在一些實施例中，藥劑能夠結合至人類NBL1。
在一些實施例中，藥劑係能夠結合至人類NBL1之抗體或抗體之抗原結合片段。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR， 該等CDR具有選自以下之序列： a) SEQ ID NO: 3、8及13以及SEQ ID NO: 18、23及28 (抗體E05)； b)     SEQ ID NO: 33、38及43以及SEQ ID NO: 48、53及58 (抗體H08)； c) SEQ ID NO: 63、68及73以及SEQ ID NO: 78、83及88 (抗體F06)； d) SEQ ID NO: 93、98及103以及SEQ ID NO: 108、113及118 (抗體A12)； e) SEQ ID NO: 123、128及133以及SEQ ID NO: 138、143及148 (抗體G01)； f) SEQ ID NO: 153、158及163以及SEQ ID NO: 168、173及178 (抗體E11)； g) SEQ ID NO: 183、188及193以及SEQ ID NO: 198、203及208 (抗體B06)； h) SEQ ID NO: 213、218及223以及SEQ ID NO: 228、233及238 (抗體D12)； i) SEQ ID NO: 243、248及253以及SEQ ID NO: 258、263及268 (抗體H01)； j) SEQ ID NO: 273、278及283以及SEQ ID NO: 288、293及298 (抗體C11)； k) SEQ ID NO: 303、308及313以及SEQ ID NO: 318、323及328 (抗體E05)； l) SEQ ID NO: 333、338及343以及SEQ ID NO: 348、353及358 (抗體F10)； m)    SEQ ID NO: 363、368及373以及SEQ ID NO: 378、383及388 (抗體G10)； n) SEQ ID NO: 393、398及403以及SEQ ID NO: 408、413及418 (抗體E04)； o) SEQ ID NO: 423、428及433以及SEQ ID NO: 438、443及448 (抗體E07)； p) SEQ ID NO: 453、458及463以及SEQ ID NO: 468、473及478 (抗體E12)； q) SEQ ID NO: 483、488及493以及SEQ ID NO: 498及503及508 (抗體D08)； r) SEQ ID NO: 513、518及523以及SEQ ID NO: 528、533及538 (抗體E10)； s) SEQ ID NO: 543、548及553以及SEQ ID NO: 558、563及568 (抗體D06)；及 t) SEQ ID NO: 573、578及583以及SEQ ID NO: 588、593及598 (抗體E01)， 或具有與所選擇CDR序列組(a) - (t)之不同之處在於每一CDR中之至多兩個保守胺基酸變化之序列。
在一些方法實施例中，抗體或抗原結合片段包括具有與所選CDR一致之序列之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。在一些實施例中，三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR具有選自以下之序列： b)     SEQ ID NO: 33、38及43以及SEQ ID NO: 48、53及58 (抗體H08)； d) SEQ ID NO: 93、98及103以及SEQ ID NO: 108、113及118 (抗體A12)； g) SEQ ID NO: 183、188及193以及SEQ ID NO: 198、203及208 (抗體B06)； n) SEQ ID NO: 393、398及403以及SEQ ID NO: 408、413及418 (抗體E04)； s) SEQ ID NO: 543、548及553以及SEQ ID NO: 558、563及568 (抗體D06)；及 t) SEQ ID NO: 573、578及583以及SEQ ID NO: 588、593及598 (抗體E01)， 或具有與所選CDR序列組b)、d)、g)、n)、s)及t)之不同之處在於每一CDR中之至多兩個保守胺基酸變化之序列。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括具有與所選CDR一致之序列之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，抗體框架區係人類抗體框架區。
在一些實施例中，抗體係全長二價單特異性單株抗體。在一些實施例中，抗體包括人類IgG1、IgG2或IgG4重鏈恆定區。在一些實施例中，抗體包括人類IgG1恆定區。在一些實施例中，抗體Fc區具有減小抗體與至少一類Fc受體之結合及/或減小補體固定之經改造突變。在一些實施例中，抗體係Fab，視情況其中Fab經聚乙二醇化。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步能夠結合至食蟹猴NBL1。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步能夠結合至小鼠NBL1。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於100 nM之結合親和力(K D)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於10 nM之結合親和力(K D)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於5 nM之結合親和力(K D)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於1 nM之結合親和力(K D)。
在一些實施例中，藥劑包括骨成形性蛋白質(BMP)或其可溶性片段。在一些實施例中，藥劑包括人類BMP-2之可溶性片段。在一些特定實施例中，藥劑進一步包括延長血清半衰期之部分。在一些實施例中，半衰期延長部分係抗體Fc結構域。在一些實施例中，半衰期延長部分係至少一種共價連接之聚乙二醇(PEG)部分。
在一些實施例中，藥劑能夠抑制NBL1之二聚合。
在一些實施例中，藥劑能夠抑制NBL1表現。
在一些實施例中，非經腸投與藥劑。在一些實施例中，經靜脈內投與藥劑。在一些實施例中，經皮下投與藥劑。在一些實施例中，投與藥劑至少3個月。在一些實施例中，投與藥劑至少6個月。在一些實施例中，投與藥劑至少12個月。
在一些實施例中，受試者具有升高之治療前NBL1血漿含量。在一些實施例中，受試者患有1型糖尿病。在一些實施例中，受試者患有2型糖尿病。在一些實施例中，受試者患有腎絲球疾病。在一些實施例中，患有腎絲球疾病之受試者不患有1型糖尿病或2型糖尿病。在一些實施例中，腎絲球疾病係選自由以下組成之群：局灶節段性腎絲球硬化(FSGS)、慢性腎絲球病變、遺傳性腎炎及微小改變疾病。
在另一態樣中，提供能夠結合至NBL1並抑制NBL1誘導之人類足細胞毒性之抗體或抗原結合片段。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括具有選自以下之序列之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR： a) SEQ ID NO: 3、8及13以及SEQ ID NO: 18、23及28 (抗體E05)； b)     SEQ ID NO: 33、38及43以及SEQ ID NO: 48、53及58 (抗體H08)； c) SEQ ID NO: 63、68及73以及SEQ ID NO: 78、83及88 (抗體F06)； d) SEQ ID NO: 93、98及103以及SEQ ID NO: 108、113及118 (抗體A12)； e) SEQ ID NO: 123、128及133以及SEQ ID NO: 138、143及148 (抗體G01)； f) SEQ ID NO: 153、158及163以及SEQ ID NO: 168、173及178 (抗體E11)； g) SEQ ID NO: 183、188及193以及SEQ ID NO: 198、203及208 (抗體B06)； h) SEQ ID NO: 213、218及223以及SEQ ID NO: 228、233及238 (抗體D12)； i) SEQ ID NO: 243、248及253以及SEQ ID NO: 258、263及268 (抗體H01)； j) SEQ ID NO: 273、278及283以及SEQ ID NO: 288、293及298 (抗體C11)； k) SEQ ID NO: 303、308及313以及SEQ ID NO: 318、323及328 (抗體E05)； l) SEQ ID NO: 333、338及343以及SEQ ID NO: 348、353及358 (抗體F10)； m)    SEQ ID NO: 363、368及373以及SEQ ID NO: 378、383及388 (抗體G10)； n) SEQ ID NO: 393、398及403以及SEQ ID NO: 408、413及418 (抗體E04)； o) SEQ ID NO: 423、428及433以及SEQ ID NO: 438、443及448 (抗體E07)； p) SEQ ID NO: 453、458及463以及SEQ ID NO: 468、473及478 (抗體E12)； q) SEQ ID NO: 483、488及493以及SEQ ID NO: 498及503及508 (抗體D08)； r) SEQ ID NO: 513、518及523以及SEQ ID NO: 528、533及538 (抗體E10)； s) SEQ ID NO: 543、548及553以及SEQ ID NO: 558、563及568 (抗體D06)；及 t) SEQ ID NO: 573、578及583以及SEQ ID NO: 588、593及598 (抗體E01)， 或具有與選自(a) - (t)之CDR序列之不同之處在於每一CDR中之至多兩個保守胺基酸取代之序列。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括具有與所選CDR組(a)-(t)中之一者一致之序列之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR具有選自以下之序列： b)     SEQ ID NO: 33、38及43以及SEQ ID NO: 48、53及58 (抗體H08)； d) SEQ ID NO: 93、98及103以及SEQ ID NO: 108、113及118 (抗體A12)； g) SEQ ID NO: 183、188及193以及SEQ ID NO: 198、203及208 (抗體B06)； n) SEQ ID NO: 393、398及403以及SEQ ID NO: 408、413及418 (抗體E04)； s) SEQ ID NO: 543、548及553以及SEQ ID NO: 558、563及568 (抗體D06)；及 t) SEQ ID NO: 573、578及583以及SEQ ID NO: 588、593及598 (抗體E01)， 或具有與所選CDR序列b)、d)、g)、n)、s)及t)之不同之處在於每一CDR中之至多兩個保守胺基酸取代之序列。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括具有與所選CDR b)、d)、g)、n)、s)或t)一致之序列之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段框架區係人類抗體框架區。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段係全長二價單特異性單株抗體。在一些實施例中，抗體包括人類IgG1、IgG2或IgG4重鏈恆定區。在一些實施例中，抗體包括人類IgG1恆定區。在一些實施例中，抗體Fc區具有減小抗體與FcRγ之結合及/或減小補體固定之經改造突變。
在一些實施例中，抗原結合片段係Fab，視情況其中Fab經聚乙二醇化。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步能夠結合至食蟹猴NBL1。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步能夠結合至小鼠NBL1。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於100 nM、10 nM、5 nM或1 nM之結合親和力(K D)。
在另一態樣中，提供醫藥組合物。該等組合物包括抗NBL1抗體或抗原結合片段及醫藥上可接受之載劑。在一些實施例中，組合物經調配用於非經腸投與。在一些實施例中，組合物經調配用於靜脈內投與。在一些實施例中，組合物經調配用於皮下投與。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2021年7月27日提出申請之美國臨時申請案第63/226,125號及2022年1月24日提出申請之63/302,460之權益及優先權，該等申請案之全部內容出於所有目的以引用方式併入本文中。 5.1. 定義
除非另有定義，否則本文所使用之所有技術及科學術語皆具有與熟習本發明所屬技術領域者通常所理解相同之含義。
術語「 個體」及「 受試者」可互換使用且係指擬治療動物，包含(但不限於)人類；非人類靈長類動物；齧齒類動物，包含大鼠及小鼠；牛類；馬類；羊類；貓類；及犬類。
術語「 患者」係指人類受試者。
術語「 治療 (treating 、 treatment)」及其語法變體係以臨床技術中所理解之最廣泛意義來使用。因此，該等術語並不指示治癒或完全緩解疾病且涵蓋獲得任何臨床期望之藥理學及/或生理學效應。如本文中所使用，「治療糖尿病性腎病(DKD)」明確涵蓋延遲腎損害之發作，延遲腎損害之進展，及減緩1型或2型糖尿病或腎絲球病症患者之腎功能下降。
片語「 治療有效量」係指化合物在投與哺乳動物或其他受試者以治療疾病、病狀或病症時足以實現疾病、病狀或病症之治療(如本文所定義之治療)之量。業內熟知「治療有效量」之測定。
神經母細胞瘤致瘤抑制因子1 ( NBL1)係DAN (神經母細胞瘤中差異篩選選擇之異常基因)基因家族之基礎成員。DAN基因家族之成員表現於發育期間且用作骨成形性蛋白質(BMP)拮抗劑；DAN蛋白結合至BMP且防止其與BMP受體相互作用。藉由NCBI基因號：4681來鑑別神經母細胞瘤致瘤抑制因子1 (NBL1) (亦稱為D1S1733E、DAN、DAND1、NB及NO3)。NCBI基因號：4681之蛋白質序列以引用方式併入本文中。
骨成形性蛋白質( BMP)係一組生長因子，其最初係根據其能夠誘導形成骨及軟骨而鑑別，且現可視為構成一組協調整個身體之組織架構之關鍵形態演發信號。藉由NCBI基因號：650來鑑別人類 BMP-2(亦稱為BDA2、BMP2A、SSFSC及SSFSC1)。NCBI基因號：650之蛋白質序列以引用方式併入本文中。藉由NCBI基因號：652來鑑別人類 BMP-4(亦稱為BMP2B、BMP2B1、MCOPS6、OFC11及ZYME)。NCBI基因號：652之蛋白質序列以引用方式併入本文中。藉由NCBI基因號：655來鑑別人類 BMP-7(亦稱為OP-1)。NCBI基因號：655之蛋白質序列以引用方式併入本文中。
如本文中所使用，術語「 抗體」具有其最廣泛之業內公認含義，且由此包含所有已知形式。該術語具體地包含(但不限於)多株抗體、單株抗體、單特異性抗體、多特異性抗體(包含雙特異性抗體)、嵌合抗體、人類化及全人類抗體。包含重鏈恆定區結構域之抗體可屬任何種類，包含IgG、IgE、IgM、IgD及IgA以及任何子類(包含IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。抗體之「 抗原結合片段」係保留衍生抗體之結合特性(例如特異性、單價親和力或二價親合力)之抗體片段(及/或包括抗體片段之多肽)，且具有其最廣泛之業內公認含義。該術語包含(但不限於) Fab、Fab’、F(ab’) 2、Fv、scFv、(scFv) 2、單結構域抗體(包含駱駝科VHH及鯊魚VNAR形式)及自抗體片段形成之多特異性抗體(包含(但不限於) F(ab)2及二價抗體)。
如本文中所使用，「 慢性腎病」 ( CKD)具有National Kidney Foundation KDOQI導則中所賦予之含義，且CKD階段之定義係如NKF KDOQI導則中所提供。「 晚期腎病」 ( ESKD)及「 晚期腎臟病」 ( ESRD)可在本文中互換使用且具有National Kidney foundation KDOQI導則中所賦予之含義。
在本發明中，「 包括 (comprises)」、「 包括 (comprising)」、「 含有 (containing)」、「 具有( having)」、「包含( includes)」、「包含( including)」及其語言變體具有美國專利法賦予其之含義，從而允許在明確引述者外亦存在其他組分。
除非具體陳述或自上下文可明瞭，否則本文所用之術語「或」應理解為具有包涵性。
除非具體陳述或自上下文可明瞭，否則本文所用之術語「一( a 、 an)」及「該」理解為單數或複數。
如本文中所使用，「 保守胺基酸取代」係其中原始及經取代胺基酸具有類似生物化學性質或其生物化學效應類似地維持於各取代中之彼等取代，如表45中所陳述。 5.2. 實驗結果之匯總
如本發明中之實驗實例中所詳述，已發現，NBL1直接對腎細胞(包含足細胞及腎小管細胞)具有毒性。毒性效應並非經由腎BMP蛋白之抑制所介導；已證實，BMP不表現於腎細胞中且不由該等細胞分泌。此外，已發現，NBL1亦不表現於腎細胞中，但表現於循環免疫細胞中。使用拮抗劑中和NBL1可防止毒性。最後，已證實，NBL1在1型糖尿病及2型糖尿病中有所升高。 5.3. 延遲腎損害之發作或進展之方法
因此，在第一態樣中，呈現延遲受試者中腎損害之發作或進展之方法，該受試者患有1型糖尿病或2型糖尿病或處於該等糖尿病之風險下或者患有腎絲球疾病或處於發生腎絲球疾病之風險下。該方法包括向受試者投與有效量之能夠抑制NBL1活性且尤其抑制NBL1介導之人類足細胞毒性之藥劑。
在各個實施例中，該方法延遲了對腎血管、足細胞、腎小管細胞或腎絲球或腎小管基底膜中之一或多者之損害之發作或進展。在一些實施例中，該方法延遲了腎絲球及腎小管基底膜增厚、系膜基質增加、基-威二氏結節(Kimmelstiel-Wilson nodule)、微動脈瘤、滲出性或透明變性病灶、囊滴或輸入及輸出小動脈透明變性之發作或進展。
在一些實施例中，受試者患有1型糖尿病。在一些實施例中，受試者患有2型糖尿病。在一些實施例中，受試者處於糖尿病前。在一些實施例中，受試者並不處於糖尿病前(如藉由血紅素A1c含量或血糖含量所量測)，但處於1型糖尿病或2型糖尿病之風險下且具有升高之NBL1血漿含量。
在一些實施例中，受試者患有腎絲球疾病。在某些實施例中，患有腎絲球疾病之受試者不患有1型糖尿病或2型糖尿病。在某些實施例中，腎絲球疾病係選自由以下組成之群：局灶節段性腎絲球硬化(FSGS)、慢性腎絲球病變、遺傳性腎炎及微小改變疾病。
在一些實施例中，受試者之治療前血漿NBL1含量高於不患有1型或2型糖尿病或前驅糖尿病之正常受試者至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%。在一些實施例中，擬治療受試者之NBL1血漿含量係不患有1型或2型糖尿病或前驅糖尿病之正常受試者之至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
在一些實施例中，該方法有效減小了受試者中循環游離NBL1之可用性，該受試者患有1型或2型糖尿病，或處於糖尿病前，或處於1型糖尿病或2型糖尿病之風險下，且與不患有1型或2型糖尿病或前驅糖尿病之正常受試者相比具有升高之NBL1血漿含量。在一些實施例中，該方法有效減小了患有腎絲球疾病之受試者中循環游離NBL1之可用性。在某些實施例中，該方法有效減小了患有選自由以下組成之群之腎絲球疾病之受試者中循環游離NBL1之可用性：局灶節段性腎絲球硬化(FSGS)、慢性腎絲球病變、遺傳性腎炎及微小改變疾病。
在一些實施例中，能夠抑制NBL1活性之藥劑能夠結合至NBL1。在一些實施例中，結合發生於NBL1之N末端中。在一些實施例中，結合發生於NBL1之功能性DAN結構域中。在一些實施例中，結合發生於NBL1之C末端中。在一些實施例中，結合係非共價的。在一些實施例中，結合係共價的。在某些共價實施例中，抑制劑經由DAN結構域內之二硫鍵結合至NBL1。
在一些實施例中，能夠抑制NBL1活性之藥劑能夠抑制NBL1之二聚合。
在一些實施例中，能夠抑制NBL1活性之藥劑係防止在兩個NBL1單體之間形成穩定氫鍵之二聚合抑制劑。在一些實施例中，二聚合抑制劑會破壞在每一單體內形成稱為半胱胺酸結基序之環樣結構之三個二硫鍵中之至少一者；或破壞連接F1與F2之二硫鍵，其中F1及F2分別係來自N末端之第一環 手指 1及來自N末端之第三環 手指 2。 5.3.1. 可溶性 BMP 抑制劑
在一些實施例中，能夠抑制NBL1活性之藥劑包括骨成形性蛋白質(BMP)或其可溶性NBL1結合片段。在一些實施例中，BMP係BMP-2或其可溶性NBL1結合片段。在一些實施例中，BMP係BMP-4或其可溶性NBL1結合片段。在一些實施例中，BMP係BMP-7或其可溶性NBL1結合片段。在當前較佳之實施例中，BMP係人類BMP或其可溶性NBL1結合片段。
在一些實施例中，能夠抑制NBL1之藥劑進一步包括延長血清半衰期之部分。
在一些實施例中，經由共價化學修飾來提供延長血清半衰期之部分。在一些實施例中，延長血清半衰期之部分係至少一個聚乙二醇(PEG)部分。在一些實施例中，PEG部分係永久性地附接至藥劑。在一些實施例中，PEG部分係經由共價化學修飾提供之可釋放載劑。在某些實施例中，該藥劑包括聚乙二醇化BMP或其可溶性NBL1結合片段。
在一些實施例中，延長血清半衰期之部分係抗體Fc結構域。在一些實施例中，改造Fc結構域以最佳化pH依賴性IgG Fc-FcRn相互作用。在某些實施例中，改造Fc結構域以具有YTE三重突變(M252Y/S254T/T256E)。在某些實施例中，改造Fc結構域以具有M428L/N434S突變。在某些實施例中，將Fc結構域以同框方式融合至BMP或其可溶性NBL1結合片段。
在一些實施例中，延長血清半衰期之部分係血清白蛋白分子。在某些實施例中，半衰期延長部分係以同框方式融合至BMP或其可溶性NBL1結合片段之人類血清白蛋白分子。
在一些實施例中，延長血清半衰期之部分係共價附接至藥劑之XTEN蛋白聚合物，如Podust等人， Protein Eng. Des. Sel.26(11):743-53 (2013)中所闡述，該文獻之揭示內容之全部內容以引用方式併入本文中。 5.3.2. 抗體及其抗原結合片段
在一些實施例中，能夠抑制NBL1活性之藥劑係能夠結合NBL1並抑制NBL1活性且尤其抑制NBL1介導之人類足細胞毒性之抗體或其NBL1結合片段。在較佳實施例中，抗體或抗原結合抗體片段能夠結合人類NBL1。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至NBL1之N末端結構域內之表位。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至NBL1之DAN結構域內之表位。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至NBL1之C末端結構域內之表位。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包括選自下表23 - 44之重鏈及輕鏈CDR或與其相比具有不超過10個胺基酸缺失、插入或保守胺基酸取代(如表45中所定義)之選自下表23-44之重鏈及輕鏈CDR。
表 45 保守胺基酸取代
種類 胺基酸
脂肪族 甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸
含有羥基或硫/硒 絲胺酸、半胱胺酸、硒半胱胺酸、蘇胺酸、甲硫胺酸
環狀 脯胺酸
芳香族 苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸
鹼性 組胺酸、離胺酸、精胺酸
酸性及其醯胺 天門冬胺酸鹽、麩胺酸鹽、天門冬醯胺酸、麩醯胺酸
在一些實施例中，胺基酸缺失、插入或保守取代不超過8個。在一些實施例中，胺基酸缺失、插入或保守取代不超過6個。在一些實施例中，胺基酸缺失、插入或保守取代不超過4個。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包括選自下表1 - 22之重鏈V區及輕鏈V區。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包括選自表23 - 44且與其相比具有不超過10個胺基酸缺失、插入或保守胺基酸取代(如表45中所定義)之重鏈及輕鏈CDR。在一些實施例中，胺基酸缺失、插入或保守取代不超過8個。在一些實施例中，胺基酸缺失、插入或保守取代不超過6個。在一些實施例中，胺基酸缺失、插入或保守取代不超過4個。
表1 抗體YU1018-E05
VH EVQLLESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARTNSRITMIADWGQGTLVTVSS
VL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAGVFGGGTQLTVL
表23 抗體Y1018-E05 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GGSISSGGY (SEQ ID NO: 1) GGSISSGGYYWS (SEQ ID NO: 2) SGGYYWS (SEQ ID NO: 3) SSGGYYWS (SEQ ID NO: 4) GGSISSGGYY (SEQ ID NO: 5)
重鏈CDR2 YYSGS (SEQ ID NO: 6) YIYYSGSTY (SEQ ID NO: 7) YIYYSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 8) WIGYIYYSGSTY (SEQ ID NO: 9) IYYSGST (SEQ ID NO: 10)
重鏈CDR3 TNSRITMIAD (SEQ ID NO: 11) TNSRITMIAD (SEQ ID NO: 12) TNSRITMIAD (SEQ ID NO: 13) ARTNSRITMIA (SEQ ID NO: 14) ARTNSRITMIAD (SEQ ID NO: 15)
輕鏈CDR1 SGSSSNIGNNYVS (SEQ ID NO: 16) SGSSSNIGNNYVS (SEQ ID NO: 17) SGSSSNIGNNYVS (SEQ ID NO: 18) IGNNYVSWY (SEQ ID NO: 19) SSNIGNNY (SEQ ID NO: 20)
輕鏈CDR2 DNNKRPS (SEQ ID NO: 21) DNNKRPS (SEQ ID NO: 22) DNNKRPS (SEQ ID NO: 23) LLIYDNNKRP (SEQ ID NO: 24) DN (SEQ ID NO: 25)
輕鏈CDR3 GTWDSSLSAGV (SEQ ID NO: 26) GTWDSSLSAGV (SEQ ID NO: 27) GTWDSSLSAGV (SEQ ID NO: 28) GTWDSSLSAG (SEQ ID NO: 29) GTWDSSLSAGV (SEQ ID NO: 30)
表2 抗體YU1018-H08
VH EVQLLESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARTNSRITMIADWGQGTLVTVSS
VL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLTYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAGHVFGGGTKVTVL
表24 抗體Y1018-H08 CDR  
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT  
重鏈CDR1 GGSISSGGY (SEQ ID NO: 31) GGSISSGGYYWS (SEQ ID NO: 32) SGGYYWS (SEQ ID NO: 33) SSGGYYWS (SEQ ID NO: 34) GGSISSGGYY 3(SEQ ID NO: 35)  
重鏈CDR2 YYSGS (SEQ ID NO: 36) YIYYSGSTY (SEQ ID NO: 37) YIYYSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO:38) WIGYIYYSGSTY (SEQ ID NO: 39) IYYSGST (SEQ ID NO: 40)  
重鏈CDR3 TNSRITMIAD (SEQ ID NO: 41) TNSRITMIAD (SEQ ID NO: 42) TNSRITMIAD (SEQ ID NO: 43) ARTNSRITMIA (SEQ ID NO: 44) ARTNSRITMIAD (SEQ ID NO: 45)  
輕鏈CDR1 SGSSSNIGNNYVS (SEQ ID NO: 46) SGSSSNIGNNYVS (SEQ ID NO: 47) SGSSSNIGNNYVS (SEQ ID NO: 48) IGNNYVSWY (SEQ ID NO: 49) SSNIGNNY (SEQ ID NO: 50)  
輕鏈CDR2 DNNKRPS (SEQ ID NO: 51) DNNKRPS (SEQ ID NO: 52) DNNKRPS (SEQ ID NO: 53) LLTYDNNKRP (SEQ ID NO: 54) DN (SEQ ID NO: 55)  
輕鏈CDR3 GTWDSSLSAGHV (SEQ ID NO: 56) GTWDSSLSAGHV (SEQ ID NO: 57) GTWDSSLSAGHV (SEQ ID NO: 58) GTWDSSLSAGH (SEQ ID NO: 59) GTWDSSLSAGHV (SEQ ID NO: 60)  
表3 抗體YU1018-F06
VH QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGSPYYYDSSGYYPLDYWGQGTLVTVSS
VL DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRAPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGPGTKLEIK
表25 抗體Y1018-F06 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GFTFSSY (SEQ ID NO: 61) GFTFSSYAMS (SEQ ID NO: 62) SYAMS (SEQ ID NO: 63) SSYAMS (SEQ ID NO: 64) GFTFSSYA (SEQ ID NO: 65)
重鏈CDR2 SGSGGS (SEQ ID NO: 66) AISGSGGSTY (SEQ ID NO: 67) AISGSGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO: 68) WVSAISGSGGSTY (SEQ ID NO: 69) ISGSGGST (SEQ ID NO: 70)
重鏈CDR3 GSPYYYDSSGYYPLDY (SEQ ID NO: 71) GSPYYYDSSGYYPLDY (SEQ ID NO: 72) GSPYYYDSSGYYPLDY (SEQ ID NO: 73) AKGSPYYYDSSGYYPLD (SEQ ID NO: 74) AKGSPYYYDSSGYYPLDY (SEQ ID NO: 75)
輕鏈CDR1 RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:76) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 77) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:78) LHSNGYNYLDWY (SEQ ID NO: 79) QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO: 80)
輕鏈CDR2 LGSNRAP (SEQ ID NO: 81) LGSNRAP (SEQ ID NO: 82) LGSNRAP (SEQ ID NO: 83) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 84) LG (SEQ ID NO: 85)
輕鏈CDR3 MQALQTPLT (SEQ ID NO: 86) MQALQTPLT (SEQ ID NO: 87) MQALQTPLT (SEQ ID NO: 88) MQALQTPL (SEQ ID NO: 89) MQALQTPLT (SEQ ID NO: 90)
表4 抗體YU1019-A12  
VH EVQLLESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGDYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGRRLLLFHWGQGTTVTVSS  
VL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSGSSIGNNYVSWYQQVPGTPPKLLIYDNNKRASGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDNSLSAVVFGGGTKLTVL  
表26 抗體YU1019-A12 CDR  
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT  
重鏈CDR1 GGSISSGDY (SEQ ID NO: 91) GGSISSGDYYWS (SEQ ID NO: 92) SGDYYWS (SEQ ID NO: 93) SSGDYYWS (SEQ ID NO: 94) GGSISSGDYY (SEQ ID NO: 95)  
重鏈CDR2 YYSGS (SEQ ID NO: 96) YIYYSGSTY (SEQ ID NO: 97) YIYYSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO:98) WIGYIYYSGSTY (SEQ ID NO: 99) IYYSGST (SEQ ID NO: 100)  
重鏈CDR3 GRRLLLFH (SEQ ID NO: 101) GRRLLLFH (SEQ ID NO: 102) GRRLLLFH (SEQ ID NO: 103) ARGRRLLLF (SEQ ID NO: 104) ARGRRLLLFH (SEQ ID NO: 105)  
輕鏈CDR1 SGSGSSIGNNYVS (SEQ ID NO: 106) SGSGSSIGNNYVS (SEQ ID NO: 107) SGSGSSIGNNYVS (SEQ ID NO: 108) IGNNYVSWY (SEQ ID NO: 109) GSSIGNNY (SEQ ID NO: 110)  
輕鏈CDR2 DNNKRAS (SEQ ID NO: 111) DNNKRAS SEQ ID NO: 112) DNNKRAS (SEQ ID NO: 113) LLIYDNNKRA (SEQ ID NO: 114) DN (SEQ ID NO: 115)  
輕鏈CDR3 GTWDNSLSAVV (SEQ ID NO: 116) GTWDNSLSAVV (SEQ ID NO: 117) GTWDNSLSAVV (SEQ ID NO: 118) GTWDNSLSAV (SEQ ID NO: 119) GTWDNSLSAVV (SEQ ID NO: 120)  
表5 抗體YU1018-G01
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAMHWVRQAPGQRLEWMGWINAGNGNTKYSQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRELLTFDYWGQGTLVTVSS
VL DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIK
表27 抗體YU1018-G01 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GYTFTSY (SEQ ID NO: 121) GYTFTSYAMH (SEQ ID NO: 122) SYAMH (SEQ ID NO: 123) TSYAMH (SEQ ID NO: 124) GYTFTSYA (SEQ ID NO: 125)
重鏈CDR2 NAGNGN (SEQ ID NO: 126) WINAGNGNTK (SEQ ID NO: 127) WINAGNGNTKYSQKFQG (SEQ ID NO:128) WMGWINAGNGNTK (SEQ ID NO:129) INAGNGNT (SEQ ID NO: 130)
重鏈CDR3 GRELLTFDY (SEQ ID NO: 131) GRELLTFDY (SEQ ID NO: 132) GRELLTFDY (SEQ ID NO: 133) ARGRELLTFD (SEQ ID NO: 134) ARGRELLTFDY (SEQ ID NO: 135)
輕鏈CDR1 RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 136) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 137) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 138) LHSNGYNYLDWY (SEQ ID NO: 139) QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO: 140)
輕鏈CDR2 LGSNRAS (SEQ ID NO: 141) LGSNRAS (SEQ ID NO: 142) LGSNRAS (SEQ ID NO: 143) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 144) LG (SEQ ID NO: 145)
輕鏈CDR3 MQALQTPLT (SEQ ID NO: 146) MQALQTPLT (SEQ ID NO: 147) MQALQTPLT (SEQ ID NO: 148) MQALQTPL (SEQ ID NO: 149) MQALQTPLT (SEQ ID NO: 150)
表6 抗體YU1019-E11
VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDAPLRIGAFDIWGQGTMVTVSS
VL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITRLQTGDEADYYCGTWDSSLSAGVFGGGTKLTVL
表28 抗體YU1019-E11 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GGSISSGGY (SEQ ID NO: 151) GGSISSGGYYWS (SEQ ID NO: 152) SGGYYWS (SEQ ID NO: 153) SSGGYYWS (SEQ ID NO: 154) GGSISSGGYY (SEQ ID NO: 155)
重鏈CDR2 YYSGS (SEQ ID NO: 156) YIYYSGSTY (SEQ ID NO: 157) YIYYSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO:158) WIGYIYYSGSTY (SEQ ID NO: 159) IYYSGST (SEQ ID NO: 160)
重鏈CDR3 DAPLRIGAFDI (SEQ ID NO: 161) DAPLRIGAFDI (SEQ ID NO: 162) DAPLRIGAFDI (SEQ ID NO: 163) ARDAPLRIGAFD (SEQ ID NO: 164) ARDAPLRIGAFDI (SEQ ID NO: 165)
輕鏈CDR1 SGSSSNIGNNYVS (SEQ ID NO: 166) SGSSSNIGNNYVS (SEQ ID NO: 167) SGSSSNIGNNYVS (SEQ ID NO: 168) IGNNYVSWY (SEQ ID NO: 169) SSNIGNNY (SEQ ID NO: 170)
輕鏈CDR2 DNNKRPS (SEQ ID NO: 171) DNNKRPS (SEQ ID NO: 172) DNNKRPS (SEQ ID NO: 173) LLIYDNNKRP (SEQ ID NO: 174) DN (SEQ ID NO: 175)
輕鏈CDR3 GTWDSSLSAGV (SEQ ID NO: 176) GTWDSSLSAGV (SEQ ID NO: 177) GTWDSSLSAGV (SEQ ID NO: 178) GTWDSSLSAG (SEQ ID NO: 179) GTWDSSLSAGV (SEQ ID NO: 180)
表7 抗體YU1019-B06
VH EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPVLRYFDWLPNYWGQGTLVTVSS
VL DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPPAFGPGTKVDIK
表29 抗體YU1019-B06 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GFTFSSY (SEQ ID NO: 181) GFTFSSYAMH (SEQ ID NO: 182) SYAMH (SEQ ID NO: 183) SSYAMH (SEQ ID NO: 184) GFTFSSYA (SEQ ID NO: 185)
重鏈CDR2 SYDGSN (SEQ ID NO: 186) VISYDGSNKY (SEQ ID NO: 187) VISYDGSNKYYADSVKG (SEQ ID NO:188) WVAVISYDGSNKY (SEQ ID NO:189) ISYDGSNK (SEQ ID NO: 190)
重鏈CDR3 PVLRYFDWLPNY (SEQ ID NO: 191) PVLRYFDWLPNY (SEQ ID NO: 192) PVLRYFDWLPNY (SEQ ID NO: 193) ASPVLRYFDWLPN (SEQ ID NO:194) ASPVLRYFDWLPNY (SEQ ID NO: 195)
輕鏈CDR1 RSSQSLVYSDGNTYLN (SEQ ID NO:196) RSSQSLVYSDGNTYLN (SEQ ID NO: 197) RSSQSLVYSDGNTYLN (SEQ ID NO:198) VYSDGNTYLNWF (SEQ ID NO: 199) QSLVYSDGNTY (SEQ ID NO: 200)
輕鏈CDR2 KVSNRDS (SEQ ID NO: 201) KVSNRDS (SEQ ID NO: 202) KVSNRDS (SEQ ID NO: 203) RLIYKVSNRD (SEQ ID NO: 204) KV (SEQ ID NO: 205)
輕鏈CDR3 MQGTHWPPA (SEQ ID NO: 206) MQGTHWPPA (SEQ ID NO: 207) MQGTHWPPA (SEQ ID NO: 208) MQGTHWPP (SEQ ID NO: 209) MQGTHWPPA (SEQ ID NO: 210)
表8 抗體YU1018-D12
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDVGYSYGIFDYWGQGTLVTVSS
VL DVVMTQSPLSLPATPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPYTFGQGTKVEIK
表30 抗體YU1018-D12 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GYTFTSY (SEQ ID NO: 211) GYTFTSYGIS (SEQ ID NO: 212) SYGIS (SEQ ID NO: 213) TSYGIS (SEQ ID NO: 214) GYTFTSYG (SEQ ID NO: 215)
重鏈CDR2 SAYNGN (SEQ ID NO: 216) WISAYNGNTN (SEQ ID NO: 217) WISAYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO: 218) WMGWISAYNGNTN (SEQ ID NO:219) ISAYNGNT (SEQ ID NO: 220)
重鏈CDR3 DVGYSYGIFDY (SEQ ID NO: 221) DVGYSYGIFDY (SEQ ID NO: 222) DVGYSYGIFDY (SEQ ID NO: 223) ARDVGYSYGIFD (SEQ ID NO: 224) ARDVGYSYGIFDY (SEQ ID NO: 225)
輕鏈CDR1 RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 226) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 227) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:228) LHSNGYNYLDWY (SEQ ID NO: 229) QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO: 230)
輕鏈CDR2 LGSNRAS (SEQ ID NO: 231) LGSNRAS (SEQ ID NO: 232) LGSNRAS (SEQ ID NO: 233) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 234) LG (SEQ ID NO: 235)
輕鏈CDR3 MQALQTPYT (SEQ ID NO: 236) MQALQTPYT (SEQ ID NO: 237) MQALQTPYT (SEQ ID NO: 238) MQALQTPY (SEQ ID NO: 239) MQALQTPYT (SEQ ID NO: 240)
表9 抗體YU1019-H01
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARAPGKFPLDYWGQGTLVTVSS
VL DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPRTFGGGTKVEIK
表31 抗體YU1019-H01 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GYTFTSY (SEQ ID NO: 241) GYTFTSYYMH (SEQ ID NO: 242) SYYMH (SEQ ID NO: 243) TSYYMH (SEQ ID NO: 244) GYTFTSYY (SEQ ID NO: 245)
重鏈CDR2 NPSGGS (SEQ ID NO: 246) IINPSGGSTS (SEQ ID NO: 247) IINPSGGSTSYAQKFQG (SEQ ID NO:248) WMGIINPSGGSTS (SEQ ID NO:249) INPSGGST (SEQ ID NO: 250)
重鏈CDR3 APGKFPLDY (SEQ ID NO: 251) APGKFPLDY (SEQ ID NO: 252) APGKFPLDY (SEQ ID NO: 253) ARAPGKFPLD (SEQ ID NO: 254) ARAPGKFPLDY (SEQ ID NO: 255)
輕鏈CDR1 RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 256) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 257) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 258) LHSNGYNYLDWY (SEQ ID NO: 259) QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO: 260)
輕鏈CDR2 LGSNRAS (SEQ ID NO: 261) LGSNRAS (SEQ ID NO: 262) LGSNRAS (SEQ ID NO: 263) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 264) LG (SEQ ID NO: 265)
輕鏈CDR3 MQALQTPRT (SEQ ID NO: 266) MQALQTPRT (SEQ ID NO: 267) MQALQTPRT (SEQ ID NO: 268) MQALQTPR (SEQ ID NO: 269) MQALQTPRT (SEQ ID NO: 270)
表10 抗體YU1018-C11
VH QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGFWGSYRYWSAAFDIWGQGTMVTVSS
VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPPTFGGGTKVEIK
表32 抗體YU1018-C11 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GFTFSSY (SEQ ID NO: 271) GFTFSSYAMS (SEQ ID NO: 272) SYAMS (SEQ ID NO: 273) SSYAMS (SEQ ID NO: 274) GFTFSSYA (SEQ ID NO: 275)
重鏈CDR2 SGSGGS (SEQ ID NO: 276) AISGSGGSTY (SEQ ID NO: 277) AISGSGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO: 278) WVSAISGSGGSTY (SEQ ID NO:279) ISGSGGST (SEQ ID NO: 280)
重鏈CDR3 GGFWGSYRYWSAAFDI (SEQ ID NO:281) GGFWGSYRYWSAAFDI (SEQ ID NO: 282) GGFWGSYRYWSAAFDI (SEQ ID NO:283) ARGGFWGSYRYWSAAFD (SEQ ID NO:284) ARGGFWGSYRYWSAAFDI (SEQ ID NO:285)
輕鏈CDR1 RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 286) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 287) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 288) LHSNGYNYLDWY (SEQ ID NO: 289) QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO: 290)
輕鏈CDR2 LGSNRAS (SEQ ID NO: 291) LGSNRAS (SEQ ID NO: 292) LGSNRAS (SEQ ID NO: 293) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 294) LG (SEQ ID NO: 295)
輕鏈CDR3 MQALQTPPT (SEQ ID NO: 296) MQALQTPPT (SEQ ID NO: 297) MQALQTPPT (SEQ ID NO: 298) MQALQTPP (SEQ ID NO: 299) MQALQTPPT (SEQ ID NO: 300)
表11 抗體YU1019-E05
VH EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGITWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARHHPTGGSATIVFDYWGQGTLVTVSS
VL DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFRGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPGFGQGTKVEIK
表33 抗體YU1019-E05 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GYTFTSY (SEQ ID NO: 301) GYTFTSYGIT (SEQ ID NO: 302) SYGIT (SEQ ID NO: 303) TSYGIT (SEQ ID NO: 304) GYTFTSYG (SEQ ID NO: 305)
重鏈CDR2 SAYNGN (SEQ ID NO: 306) WISAYNGNTN (SEQ ID NO: 307) WISAYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO: 308) WMGWISAYNGNTN (SEQ ID NO:309) ISAYNGNT (SEQ ID NO: 310)
重鏈CDR3 HHPTGGSATIVFDY (SEQ ID NO:311) HHPTGGSATIVFDY (SEQ ID NO: 312) HHPTGGSATIVFDY (SEQ ID NO:313) ARHHPTGGSATIVFD (SEQ ID NO:314) ARHHPTGGSATIVFDY (SEQ ID NO:315)
輕鏈CDR1 RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:316) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 317) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:318) LHSNGYNYLDWY (SEQ ID NO: 319) QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO: 320)
輕鏈CDR2 LGSNRAS (SEQ ID NO: 321) LGSNRAS (SEQ ID NO: 322) LGSNRAS (SEQ ID NO: 323) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 324) LG (SEQ ID NO: 325)
輕鏈CDR3 MQALQTPLT (SEQ ID NO: 326) MQALQTPLT (SEQ ID NO:327) MQALQTPLT (SEQ ID NO:328) MQALQTPL (SEQ ID NO:329) MQALQTPLT (SEQ ID NO:330)
表12 抗體YU1019-F10
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARAPGKFPLDYWGQGTLVTVSS
VL DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFRGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPGFGQGTKVEIK
表34 抗體YU1019-F10 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GYTFTSY (SEQ ID NO: 331) GYTFTSYYMH (SEQ ID NO: 332) SYYMH (SEQ ID NO: 333) TSYYMH (SEQ ID NO: 334) GYTFTSYY (SEQ ID NO: 335)
重鏈CDR2 NPSGGS (SEQ ID NO: 336) IINPSGGSTS (SEQ ID NO: 337) IINPSGGSTSYAQKFQG (SEQ ID NO:338) WMGIINPSGGSTS (SEQ ID NO:339) INPSGGST (SEQ ID NO: 340)
重鏈CDR3 APGKFPLDY (SEQ ID NO: 341) APGKFPLDY (SEQ ID NO: 342) APGKFPLDY (SEQ ID NO: 343) ARAPGKFPLD (SEQ ID NO: 344) ARAPGKFPLDY (SEQ ID NO: 345)
輕鏈CDR1 RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:346) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 347) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:348) LHSNGYNYLDWY (SEQ ID NO: 349) QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO: 350)
輕鏈CDR2 LGSNRAS (SEQ ID NO: 351) LGSNRAS (SEQ ID NO: 352) LGSNRAS (SEQ ID NO: 353) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 354) LG (SEQ ID NO: 355)
輕鏈CDR3 MQALQTPG (SEQ ID NO: 356) MQALQTPG (SEQ ID NO: 357) MQALQTPG (SEQ ID NO: 358) MQALQTP (SEQ ID NO: 359) MQALQTPG (SEQ ID NO: 360)
表13 抗體YU1018-G10
VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARAPGKFPLDYWGQGTLVTVSS
VL DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKLEIK
表35 抗體YU1018-G10 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GYTFTSY (SEQ ID NO: 361) GYTFTSYYMH (SEQ ID NO: 362) SYYMH (SEQ ID NO: 363) TSYYMH (SEQ ID NO: 364) GYTFTSYY (SEQ ID NO: 365)
重鏈CDR2 NPSGGS (SEQ ID NO: 366) IINPSGGSTS (SEQ ID NO: 367) IINPSGGSTSYAQKFQG (SEQ ID NO:368) WMGIINPSGGSTS (SEQ ID NO:369) INPSGGST (SEQ ID NO: 370)
重鏈CDR3 APGKFPLDY (SEQ ID NO: 371) APGKFPLDY (SEQ ID NO: 372) APGKFPLDY (SEQ ID NO: 373) ARAPGKFPLD (SEQ ID NO: 374) ARAPGKFPLDY (SEQ ID NO: 375)
輕鏈CDR1 RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:376) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 377) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:378) LHSNGYNYLDWY (SEQ ID NO: 379) QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO: 380)
輕鏈CDR2 LGSNRAS (SEQ ID NO: 381) LGSNRAS (SEQ ID NO: 382) LGSNRAS (SEQ ID NO: 383) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 384) LG (SEQ ID NO: 385)
輕鏈CDR3 MQALQTPWT (SEQ ID NO: 386) MQALQTPWT (SEQ ID NO: 387) MQALQTPWT (SEQ ID NO: 388) MQALQTPW (SEQ ID NO: 389) MQALQTPWT (SEQ ID NO: 390)
表14 抗體YU1018-E04
VH QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARAIVGATSGYWFDPWGQGTLVTVSS
VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIK
表36 抗體YU1018-E04 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GYSFTSY (SEQ ID NO: 391) GYSFTSYWIG (SEQ ID NO: 392) SYWIG (SEQ ID NO: 393) TSYWIG (SEQ ID NO: 394) GYSFTSYW (SEQ ID NO: 395)
重鏈CDR2 YPGDSD (SEQ ID NO: 396) IIYPGDSDTR (SEQ ID NO: 397) IIYPGDSDTRYSPSFQG (SEQ ID NO:398) WMGIIYPGDSDTR (SEQ ID NO: 399) IYPGDSDT (SEQ ID NO: 400)
重鏈CDR3 AIVGATSGYWFDP (SEQ ID NO:401) AIVGATSGYWFDP (SEQ ID NO: 402) AIVGATSGYWFDP (SEQ ID NO: 403) ARAIVGATSGYWFD (SEQ ID NO: 404) ARAIVGATSGYWFDP (SEQ ID NO:405)
輕鏈CDR1 RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:406) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 407) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:408) LHSNGYNYLDWY (SEQ ID NO: 409) QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO: 410)
輕鏈CDR2 LGSNRAS (SEQ ID NO: 411) LGSNRAS (SEQ ID NO: 412) LGSNRAS (SEQ ID NO: 413) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 414) LG (SEQ ID NO: 415)
輕鏈CDR3 MQALQTPLT (SEQ ID NO: 416) MQALQTPLT (SEQ ID NO: 417) MQALQTPLT (SEQ ID NO: 418) MQALQTPL (SEQ ID NO: 419) MQALQTPLT (SEQ ID NO: 420)
表15 抗體YU1018-E07
VH EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPVLRYFDWLPNYWGQGTTVTVSS
VL DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPYSFGQGTKVEIK
表37 抗體YU1018-E07 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GFTFSSY (SEQ ID NO: 421) GFTFSSYAMH (SEQ ID NO: 422) SYAMH (SEQ ID NO: 423) SSYAMH (SEQ ID NO: 424) GFTFSSYA (SEQ ID NO: 425)
重鏈CDR2 SYDGSN (SEQ ID NO: 426) VISYDGSNKY (SEQ ID NO: 427) VISYDGSNKYYADSVKG (SEQ ID NO:428) WVAVISYDGSNKY (SEQ ID NO:429) ISYDGSNK (SEQ ID NO: 430)
重鏈CDR3 PVLRYFDWLPNY (SEQ ID NO: 431) PVLRYFDWLPNY (SEQ ID NO: 432) PVLRYFDWLPNY (SEQ ID NO: 433) ASPVLRYFDWLPN (SEQ ID NO:434) ASPVLRYFDWLPNY (SEQ ID NO: 435)
輕鏈CDR1 RSSQSLVYSDGNTYLN (SEQ ID NO:436) RSSQSLVYSDGNTYLN (SEQ ID NO: 437) RSSQSLVYSDGNTYLN (SEQ ID NO:438) VYSDGNTYLNWF (SEQ ID NO: 439) QSLVYSDGNTY (SEQ ID NO: 440)
輕鏈CDR2 KVSNRDS (SEQ ID NO: 441) KVSNRDS (SEQ ID NO: 442) KVSNRDS (SEQ ID NO: 443) RLIYKVSNRD (SEQ ID NO: 444) KV (SEQ ID NO: 445)
輕鏈CDR3 MQGTHWPYS (SEQ ID NO: 446) MQGTHWPYS (SEQ ID NO: 447) MQGTHWPYS (SEQ ID NO: 448) MQGTHWPY (SEQ ID NO: 449) MQGTHWPYS (SEQ ID NO: 450)
表16 抗體YU1018-E12
VH QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGHGATAFDIWGQGTMVTVSS
VL DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPPTFGPGTKLEIK
表38 抗體YU1018-E12 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GYSFTSY (SEQ ID NO: 451) GYSFTSYWIG (SEQ ID NO: 452) SYWIG (SEQ ID NO: 453) TSYWIG (SEQ ID NO: 454) GYSFTSYW (SEQ ID NO: 455)
重鏈CDR2 YPGDSD (SEQ ID NO: 456) IIYPGDSDTR (SEQ ID NO: 457) IIYPGDSDTRYSPSFQG (SEQ ID NO:458) WMGIIYPGDSDTR (SEQ ID NO:459) IYPGDSDT (SEQ ID NO: 460)
重鏈CDR3 GHGATAFDI (SEQ ID NO: 461) GHGATAFDI (SEQ ID NO: 462) GHGATAFDI (SEQ ID NO: 463) ARGHGATAFD (SEQ ID NO: 464) ARGHGATAFDI (SEQ ID NO: 465)
輕鏈CDR1 RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:466) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 467) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:468) LHSNGYNYLDWY (SEQ ID NO: 469) QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO: 470)
輕鏈CDR2 LGSNRAS (SEQ ID NO: 471) LGSNRAS (SEQ ID NO: 472) LGSNRAS (SEQ ID NO: 473) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 474) LG (SEQ ID NO: 475)
輕鏈CDR3 MQALQTPPT (SEQ ID NO: 476) MQALQTPPT (SEQ ID NO: 477) MQALQTPPT (SEQ ID NO: 478) MQALQTPP (SEQ ID NO: 479) MQALQTPPT (SEQ ID NO: 480)
表17 抗體YU1018-D08
VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDRYYDSSGYYLMDPWGQGTLVTVSS
VL DIVMTQSPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYKISNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQATQFPLTFGGGTRLEIK
表39 抗體YU1018-D08 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GGTFSSY (SEQ ID NO: 481) GGTFSSYAIS (SEQ ID NO: 482) SYAIS (SEQ ID NO: 483) SSYAIS (SEQ ID NO: 484) GGTFSSYA (SEQ ID NO: 485)
重鏈CDR2 IPIFGT (SEQ ID NO: 486) GIIPIFGTAN (SEQ ID NO: 487) GIIPIFGTANYAQKFQG (SEQ ID NO:488) WMGGIIPIFGTAN (SEQ ID NO:489) IIPIFGTA (SEQ ID NO: 490)
重鏈CDR3 DRYYDSSGYYLMDP (SEQ ID NO:491) DRYYDSSGYYLMDP (SEQ ID NO: 492) DRYYDSSGYYLMDP (SEQ ID NO:493) ARDRYYDSSGYYLMD (SEQ ID NO:494) ARDRYYDSSGYYLMDP (SEQ ID NO:495)
輕鏈CDR1 RSSQSLVHSDGNTYLS (SEQ ID NO:496) RSSQSLVHSDGNTYLS (SEQ ID NO:497) RSSQSLVHSDGNTYLS (SEQ ID NO:498) VHSDGNTYLSWL (SEQ ID NO: 499) QSLVHSDGNTY (SEQ ID NO: 500)
輕鏈CDR2 KISNRFS (SEQ ID NO: 501) KISNRFS (SEQ ID NO: 502) KISNRFS (SEQ ID NO: 503) LLIYKISNRF (SEQ ID NO: 504) KI (SEQ ID NO: 505)
輕鏈CDR3 MQATQFPLT (SEQ ID NO: 506) MQATQFPLT (SEQ ID NO: 507) MQATQFPLT (SEQ ID NO: 508) MQATQFPL (SEQ ID NO: 509) MQATQFPLT (SEQ ID NO: 510)
表18 抗體YU1018-E10
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARAPGKFPLDYWGQGTLVTVSS
VL DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLKSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFSLKIRRVEAEDVGVYYCMQTLQTPYTFGQGTKLEIK
表40 抗體YU1018-E10 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GYTFTSY (SEQ ID NO: 511) GYTFTSYYMH (SEQ ID NO: 512) SYYMH (SEQ ID NO: 513) TSYYMH (SEQ ID NO: 514) GYTFTSYY (SEQ ID NO: 515)
重鏈CDR2 NPSGGS (SEQ ID NO: 516) IINPSGGSTS (SEQ ID NO: 517) IINPSGGSTSYAQKFQG  (SEQ ID NO:518) WMGIINPSGGSTS  (SEQ ID NO:519) INPSGGST (SEQ ID NO: 520)
重鏈CDR3 APGKFPLDY (SEQ ID NO: 521) APGKFPLDY (SEQ ID NO: 522) APGKFPLDY (SEQ ID NO: 523) ARAPGKFPLD (SEQ ID NO: 524) ARAPGKFPLDY (SEQ ID NO: 525)
輕鏈CDR1 RSSQSLLKSNGYNYLD (SEQ ID NO:526) RSSQSLLKSNGYNYLD (SEQ ID NO: 527) RSSQSLLKSNGYNYLD (SEQ ID NO:528) LKSNGYNYLDWY (SEQ ID NO: 529) QSLLKSNGYNY (SEQ ID NO: 530)
輕鏈CDR2 LGSNRAS (SEQ ID NO: 531) LGSNRAS (SEQ ID NO: 532) LGSNRAS (SEQ ID NO: 533) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 534) LG (SEQ ID NO: 535)
輕鏈CDR3 MQTLQTPYT (SEQ ID NO: 536) MQTLQTPYT (SEQ ID NO: 537) MQTLQTPYT (SEQ ID NO: 538) MQTLQTPY (SEQ ID NO: 539) MQTLQTPYT (SEQ ID NO: 540)
表19 抗體YU1018-D06
VH QVQLVESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSGAAGIPWFDPWGQGTLVTVSS
VL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYENNERPSGIPDRLSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAVVFGGGTKLTVL
表41 抗體YU1018-D06 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GGSISSGGY (SEQ ID NO: 541) GGSISSGGYYWS (SEQ ID NO: 542) SGGYYWS (SEQ ID NO: 543) SSGGYYWS (SEQ ID NO: 544) GGSISSGGYY (SEQ ID NO: 545)
重鏈CDR2 YYSGS (SEQ ID NO: 546) YIYYSGSTY (SEQ ID NO: 547) YIYYSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO:548) WIGYIYYSGSTY (SEQ ID NO: 549) IYYSGST (SEQ ID NO: 550)
重鏈CDR3 SGAAGIPWFDP (SEQ ID NO: 551) SGAAGIPWFDP (SEQ ID NO: 552) SGAAGIPWFDP (SEQ ID NO: 553) ARSGAAGIPWFD (SEQ ID NO: 554) ARSGAAGIPWFDP (SEQ ID NO: 555)
輕鏈CDR1 SGSSSNIGNNYVS (SEQ ID NO:556) SGSSSNIGNNYVS (SEQ ID NO: 557) SGSSSNIGNNYVS (SEQ ID NO: 558) IGNNYVSWY (SEQ ID NO: 559) SSNIGNNY (SEQ ID NO: 560)
輕鏈CDR2 ENNERPS (SEQ ID NO: 561) ENNERPS (SEQ ID NO: 562) ENNERPS (SEQ ID NO: 563) LLIYENNERP (SEQ ID NO: 564) EN (SEQ ID NO: 565)
輕鏈CDR3 GTWDSSLSAVV (SEQ ID NO: 566) GTWDSSLSAVV (SEQ ID NO: 567) GTWDSSLSAVV (SEQ ID NO: 568) GTWDSSLSAV (SEQ ID NO: 569) GTWDSSLSAVV (SEQ ID NO: 570)
表20 抗體YU1018-E01
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGRGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGPRDGYNDYWGQGTLVTVSS
VL DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLNWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQPLQTPLTFGGGTKLEIK
表42 抗體YU1018-E01 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GYTFTSY (SEQ ID NO: 571) GYTFTSYGIS (SEQ ID NO: 572) SYGIS (SEQ ID NO: 573) TSYGIS (SEQ ID NO: 574) GYTFTSYG (SEQ ID NO: 575)
重鏈CDR2 SAYNGN (SEQ ID NO: 576) WISAYNGNTN (SEQ ID NO: 577) WISAYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:578) WMGWISAYNGNTN (SEQ ID NO:579) ISAYNGNT (SEQ ID NO: 580)
重鏈CDR3 GPRDGYNDY (SEQ ID NO: 581) GPRDGYNDY (SEQ ID NO: 582) GPRDGYNDY (SEQ ID NO: 583) ARGPRDGYND (SEQ ID NO: 584) ARGPRDGYNDY (SEQ ID NO: 585)
輕鏈CDR1 RSSQSLLHSNGYNYLN (SEQ ID NO: 586) RSSQSLLHSNGYNYLN (SEQ ID NO: 587) RSSQSLLHSNGYNYLN (SEQ ID NO:588) LHSNGYNYLNWY (SEQ ID NO: 589) QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO: 590)
輕鏈CDR2 LGSNRAS (SEQ ID NO: 591) LGSNRAS (SEQ ID NO: 592) LGSNRAS (SEQ ID NO: 593) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 594) LG (SEQ ID NO: 595)
輕鏈CDR3 MQPLQTPLT (SEQ ID NO: 596) MQPLQTPLT (SEQ ID NO: 597) MQPLQTPLT (SEQ ID NO: 598) MQPLQTPL (SEQ ID NO: 599) MQPLQTPLT (SEQ ID NO: 600)
表21 抗體YU1018-A04
VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARMAGWELIDPWGQGTLVTVSS
VL DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGKSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPYSFGQGTKVEIK
表43 抗體 YU1018-A04 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GYTFTSY (SEQ ID NO: 601) GYTFTSYGIS (SEQ ID NO: 602) SYGIS (SEQ ID NO: 603) TSYGIS (SEQ ID NO: 604) GYTFTSYG (SEQ ID NO: 605)
重鏈CDR2 SAYNGN (SEQ ID NO: 606) WISAYNGNTN (SEQ ID NO: 607) WISAYNGNTNYAQKLQG (SEQ ID NO:608) WMGWISAYNGNTN (SEQ ID NO: 609) ISAYNGNT (SEQ ID NO: 610)
重鏈CDR3 MAGWELIDP (SEQ ID NO: 611) MAGWELIDP (SEQ ID NO: 612) MAGWELIDP (SEQ ID NO: 613) ARMAGWELID (SEQ ID NO: 614) ARMAGWELIDP (SEQ ID NO: 615)
輕鏈CDR1 RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:616) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 617) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:618) LHSNGYNYLDWY (SEQ ID NO: 619) QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO: 620)
輕鏈CDR2 LGSNRAS (SEQ ID NO: 621) LGSNRAS (SEQ ID NO: 622) LGSNRAS (SEQ ID NO: 623) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 624) LG (SEQ ID NO: 625)
輕鏈CDR3 MQALQTPYS (SEQ ID NO: 626) MQALQTPYS (SEQ ID NO: 627) MQALQTPYS (SEQ ID NO: 628) MQALQTPY (SEQ ID NO: 629) MQALQTPYS (SEQ ID NO: 630)
表22 抗體YU1018-G09
VH EVQLLESGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGVGSVVFDYWGQGTLVTVSS
VL DVVMTQSPLPLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPPTFGQGTKVEIK
表44 抗體 YU1018-G09 CDR
   Chothia AbM Kabat 接觸 IMGT
重鏈CDR1 GYSFTSY (SEQ ID NO: 631) GYSFTSYWIG (SEQ ID NO: 632) SYWIG (SEQ ID NO: 633) TSYWIG (SEQ ID NO: 634) GYSFTSYW (SEQ ID NO: 635)
重鏈CDR2 YPGDSD (SEQ ID NO: 636) IIYPGDSDTR (SEQ ID NO: 637) IIYPGDSDTRYSPSFQG (SEQ ID NO:638) WMGIIYPGDSDTR (SEQ ID NO:639) IYPGDSDT (SEQ ID NO: 640)
重鏈CDR3 GVGSVVFDY (SEQ ID NO: 641) GVGSVVFDY (SEQ ID NO: 642) GVGSVVFDY (SEQ ID NO: 643) ARGVGSVVFD (SEQ ID NO: 644) ARGVGSVVFD (SEQ ID NO: 645)
輕鏈CDR1 RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:646) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO: 647) RSSQSLLHSNGYNYLD (SEQ ID NO:648) LHSNGYNYLDWY (SEQ ID NO: 649) QSLLHSNGYNY (SEQ ID NO: 650)
輕鏈CDR2 LGSNRAS (SEQ ID NO: 651) LGSNRAS (SEQ ID NO: 652) LGSNRAS (SEQ ID NO: 653) LLIYLGSNRA (SEQ ID NO: 654) LG (SEQ ID NO: 655)
輕鏈CDR3 MQALQTPPT (SEQ ID NO: 656) MQALQTPPT (SEQ ID NO: 657) MQALQTPPT (SEQ ID NO: 658) MQALQTPP (SEQ ID NO: 659) MQALQTPPT (SEQ ID NO: 660)
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括具有選自以下之序列之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR： a) SEQ ID NO: 3、8及13以及SEQ ID NO: 18、23及28 (抗體E05)； b)     SEQ ID NO: 33、38及43以及SEQ ID NO: 48、53及58 (抗體H08)； c) SEQ ID NO: 63、68及73以及SEQ ID NO: 78、83及88 (抗體F06)； d) SEQ ID NO: 93、98及103以及SEQ ID NO: 108、113及118 (抗體A12)； e) SEQ ID NO: 123、128及133以及SEQ ID NO: 138、143及148 (抗體G01)； f) SEQ ID NO: 153、158及163以及SEQ ID NO: 168、173及178 (抗體E11)； g) SEQ ID NO: 183、188及193以及SEQ ID NO: 198、203及208 (抗體B06)； h) SEQ ID NO: 213、218及223以及SEQ ID NO: 228、233及238 (抗體D12)； i) SEQ ID NO: 243、248及253以及SEQ ID NO: 258、263及268 (抗體H01)； j) SEQ ID NO: 273、278及283以及SEQ ID NO: 288、293及298 (抗體C11)； k) SEQ ID NO: 303、308及313以及SEQ ID NO: 318、323及328 (抗體E05)； l) SEQ ID NO: 333、338及343以及SEQ ID NO: 348、353及358 (抗體F10)； m)    SEQ ID NO: 363、368及373以及SEQ ID NO: 378、383及388 (抗體G10)； n) SEQ ID NO: 393、398及403以及SEQ ID NO: 408、413及418 (抗體E04)； o) SEQ ID NO: 423、428及433以及SEQ ID NO: 438、443及448 (抗體E07)； p) SEQ ID NO: 453、458及463以及SEQ ID NO: 468、473及478 (抗體E12)； q) SEQ ID NO: 483、488及493以及SEQ ID NO: 498及503及508 (抗體D08)； r) SEQ ID NO: 513、518及523以及SEQ ID NO: 528、533及538 (抗體E10)； s) SEQ ID NO: 543、548及553以及SEQ ID NO: 558、563及568 (抗體D06)；及 t) SEQ ID NO: 573、578及583以及SEQ ID NO: 588、593及598 (抗體E01)， 或具有與所選CDR序列(a) - (t)之不同之處在於每一CDR中之至多兩個保守胺基酸取代之序列。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括具有與所選CDR (a)-(t)一致之序列之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括序列與所選CDR序列(a) - (t)之不同之處在於每一CDR中之至多兩個保守胺基酸取代或在於每一CDR中之至多1個保守胺基酸取代的三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括序列與所選CDR序列(a) - (t)之不同之處在於以下各項之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR：所有6個CDR中之總共6個保守胺基酸變化、所有6個CDR中之總共5個保守胺基酸取代、所有6個CDR中之總共4個保守胺基酸取代、所有6個CDR中之總共3個保守胺基酸取代、所有6個CDR中之總共2個保守胺基酸取代或所有6個CDR中之總共1個保守胺基酸取代。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括具有選自以下之序列之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR： b)     SEQ ID NO: 33、38及43以及SEQ ID NO: 48、53及58 (抗體H08)； d) SEQ ID NO: 93、98及103以及SEQ ID NO: 108、113及118 (抗體A12)； g) SEQ ID NO: 183、188及193以及SEQ ID NO: 198、203及208 (抗體B06)； n) SEQ ID NO: 393、398及403以及SEQ ID NO: 408、413及418 (抗體E04)； s) SEQ ID NO: 543、548及553以及SEQ ID NO: 558、563及568 (抗體D06)；及 t) SEQ ID NO: 573、578及583以及SEQ ID NO: 588、593及598 (抗體E01)， 或具有與所選CDR序列b)、d)、g)、n)、s)及t)之不同之處在於每一CDR中之至多兩個保守胺基酸取代之序列。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括具有與所選CDR (b)、(d)、(g)、(n)、(s)或(t)一致之序列之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括序列與所選CDR序列(b)、(d)、(g)、(n)、(s)或(t)之不同之處在於每一CDR中之至多兩個保守胺基酸取代或在於每一CDR中之至多1個保守胺基酸取代的三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包括序列與所選CDR序列(b)、(d)、(g)、(n)、(s)或(t)之不同之處在於以下各項之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR：所有6個CDR中之總共6個保守胺基酸變化、所有6個CDR中之總共5個保守胺基酸取代、所有6個CDR中之總共4個保守胺基酸取代、所有6個CDR中之總共3個保守胺基酸取代、所有6個CDR中之總共2個保守胺基酸取代或所有6個CDR中之總共1個保守胺基酸取代。
在一些實施例中，抗體框架區係人類抗體框架區。在一些實施例中，抗體係全長二價單特異性單株抗體。在一些實施例中，抗體包括人類IgG1、IgG2或IgG4重鏈恆定區。在一些實施例中，抗體包括人類IgG1恆定區。在一些實施例中，抗體Fc區具有至少一種減小抗體與至少Fc γ受體之結合之經改造突變。在一些實施例中，突變係N297A。在一些實施例中，抗體Fc區具有至少一種減小補體固定之經改造突變。在一些實施例中，突變係K322A。
在一些實施例中，抗體係Fab，視情況其中Fab經聚乙二醇化。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步能夠結合至食蟹猴NBL1。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段進一步能夠結合至小鼠NBL1。
在一些實施例中，抗體係IgG單株抗體。在特定實施例中，抗體係IgG1或IgG4單株抗體。
在一些實施例中，抗體係人類單株抗體。在一些實施例中，抗體係人類化抗體。在一些實施例中，抗體係嵌合小鼠-人類抗體。在一些實施例中，藥劑包括選自Fab、Fab’、F(ab’) 2、Fv、scFv、Fd或二價抗體之結合NBL1之抗原結合片段。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於100 nM之結合親和力(K D)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於10 nM之結合親和力(K D)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於5 nM之結合親和力(K D)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於1 nM之結合親和力(K D)。 在某些實施例中，NBL1二聚合抑制劑係抗體。在一些該等實施例中，抗體係單株抗體。在一些該等實施例中，抗體係多株的。在一些實施例中，二聚合抑制劑結合至來自每一NBL1單體之同義β鏈中之至少一者。 5.3.3.       NBL1 表現抑制劑
在一些實施例中，該藥劑能夠抑制NBL1表現。
在某些實施例中，該藥劑抑制NBL1基因之轉錄。在某些實施例中，該藥劑引起NBL1 mRNA之降解。在某些實施例中，該藥劑抑制NBL1 mRNA之轉譯。在某些實施例中，該藥劑靶向NBL1蛋白以供降解。
在具體實施例中，藥劑係反義寡核苷酸。在具體實施例中，該藥劑介導RNA干擾。在特定RNA干擾實施例中，該藥劑係短髮夾RNA (shRNA)或短干擾RNA (siRNA)。在具體實施例中，該藥劑係微RNA (miRNA)。在具體實施例中，該藥劑係序列特異性mRNA干擾酶。 5.4. 減緩腎功能下降之方法
在另一態樣中，提供減緩受試者之腎功能下降之方法，該受試者患有1型或2型糖尿病或處於該等糖尿病之風險下或患有腎絲球疾病或處於發生腎絲球疾病之風險下。該方法包括向受試者投與有效量之能夠抑制NBL1活性之藥劑。在各個實施例中，能夠抑制NBL1活性之藥劑係如上文之章節5.3.1、5.3.2或5.3.3中所闡述之抑制劑。
在一些實施例中，該方法減緩了微量白蛋白尿之進展，減緩了大量白蛋白尿之進展，減緩了蛋白尿之進展，或減緩了腎絲球濾過率(GFR)之降低。
在一些實施例中，該方法會預防進展性腎功能下降(PKFD)之發作或減緩進展性腎功能下降。在一些實施例中，該藥劑抑制了至少一種或多種與PKFD有關之症狀之進展。在一些實施例中，與未治療對照組相比受試者之腎功能下降率減小10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。
在一些實施例中，該方法會預防晚期腎病(ESKD)之發作或減緩其進展。在一些實施例中，該方法抑制了至少一種或多種與ESKD有關之症狀之進展。在一些實施例中，該方法抑制了向需要透析之進展。
在一些實施例中，該方法減緩了慢性腎病(CKD)之階段1至階段2、階段2至階段3、階段3A至階段3B、階段3B至階段4、階段4至階段5之進展或自無透析階段5至具透析階段5之進展。
在一些實施例中，受試者患有1型糖尿病。在一些實施例中，受試者患有2型糖尿病。在一些實施例中，受試者處於糖尿病前。在一些實施例中，受試者並不處於糖尿病前(如藉由血紅素A1c含量或血糖含量所量測)，但處於1型糖尿病或2型糖尿病之風險下且具有升高之NBL1血漿含量。在一些實施例中，受試者患有腎絲球病症。在特定實施例中，受試者患有腎絲球病症且不患有1型或2型糖尿病。在特定實施例中，腎絲球病症係選自由以下組成之群：局灶節段性腎絲球硬化(FSGS)、慢性腎絲球病變、遺傳性腎炎及微小改變疾病。
在一些實施例中，該方法有效減小了受試者中循環游離NBL1之可用性，該受試者患有1型或2型糖尿病，或處於糖尿病前，或處於1型糖尿病或2型糖尿病之風險下，且與不患有1型或2型糖尿病或前驅糖尿病之正常受試者相比具有升高之NBL1血漿含量。在一些實施例中，該方法有效減小了患有腎絲球疾病之受試者中循環游離NBL1之可用性。在某些實施例中，該方法有效減小了患有選自由以下組成之群之腎絲球疾病之受試者中循環游離NBL1之可用性：局灶節段性腎絲球硬化(FSGS)、慢性腎絲球病變、遺傳性腎炎及微小改變疾病。
在各個實施例中，藥劑係上文之章節5.3.1、5.3.2或5.3.3中所闡述之藥劑，該章節以引用方式併入本文中。 5.5. 治療糖尿病性腎病或腎絲球疾病之方法
在另一態樣中，呈現治療患有1型或2型糖尿病或患有腎絲球疾病之受試者之糖尿病性腎病(DKD)之方法。該方法包括向受試者投與有效量之能夠抑制NBL1活性之藥劑。
在一些實施例中，受試者患有1型或2型糖尿病及腎絲球肥大、腎絲球硬化、腎小管間質性發炎、纖維化、腎絲球超濾、進展性白蛋白尿、GFR下降及ESKD中之一或多者。
在一些實施例中，受試者患有腎絲球疾病。在某些實施例中，受試者患有腎絲球疾病且不患有1型或2型糖尿病。在某些實施例中，腎絲球病症係選自由以下組成之群：局灶節段性腎絲球硬化(FSGS)、慢性腎絲球病變、遺傳性腎炎及微小改變疾病。
在各個實施例中，藥劑係上文之章節5.3.1、5.3.2或5.3.3中所闡述之藥劑，該章節以引用方式併入本文中。 5.6. 劑量方案
在本文所闡述方法之一些實施例中，非經腸投與藥劑。在特定實施例中，經靜脈內投與藥劑。在具體實施例中，受試者處於透析中且經靜脈內投與藥劑。在特定實施例中，經皮下投與藥劑。
在一些實施例中，投與藥劑一次。在一些實施例中，投與藥劑一次以上。在特定實施例中，投與藥劑至少3個月。在特定實施例中，投與藥劑至少6個月。在特定實施例中，投與藥劑至少12個月。 5.7. 抗體及其醫藥調配物
在另一態樣中，提供能夠結合至NBL1並抑制NBL1誘導之人類足細胞毒性之抗體或抗原結合片段。實施例包含上文之章節5.3.2中所闡述之所有抗體及抗原結合片段實施例，該章節以引用方式併入本文中。
在另一態樣中，提供醫藥組合物。醫藥組合物包括本文所闡述之抗體或抗原結合片段及醫藥上可接受之載劑。在一些實施例中，組合物經調配用於非經腸投與。在一些實施例中，組合物經調配用於靜脈內投與。在一些實施例中，組合物經調配用於皮下投與。 5.8. 其他實施例
其他實施例陳述於下列編號條款中。 1. 一種延遲患有1型糖尿病或2型糖尿病或腎絲球疾病之受試者中腎損害之發作或進展之方法，該方法包括： 向該受試者投與有效量之能夠抑制NBL1活性之藥劑。 2. 如條款1之方法，其中該藥劑能夠結合至NBL1。 3. 如條款2之方法，其中該藥劑包括骨成形性蛋白質(BMP)或其可溶性片段。 4. 如條款3之方法，其中該藥劑包括人類BMP-2之可溶性片段。 5. 如條款3或4之方法，其中該藥劑進一步包括延長血清半衰期之部分。 6. 如條款5之方法，其中該半衰期延長部分係抗體Fc結構域。 7. 如條款5之方法，其中該半衰期延長部分係至少一種共價連接之聚乙二醇(PEG)部分。 8. 如條款2之方法，其中該藥劑包括抗體或其抗原結合片段。 9. 如條款2之方法，其中該藥劑能夠抑制NBL1之二聚合。 10.    如條款1之方法，其中該藥劑能夠抑制NBL1表現。 11.    如條款1至10中任一項之方法，其中該受試者患有1型糖尿病。 12.    如條款1至10中任一項之方法，其中該受試者患有2型糖尿病。 13.    如條款1至10中任一項之方法，其中該受試者患有腎絲球疾病。 14.    如條款13之方法，其中該患有腎絲球疾病之受試者不患有1型糖尿病或2型糖尿病。 15.    如條款13或14之方法，其中該腎絲球疾病係選自由以下組成之群：局灶節段性腎絲球硬化(FSGS)、慢性腎絲球病變、遺傳性腎炎及微小改變疾病。 16.    如條款15之方法，其中該腎絲球疾病係局灶節段性腎絲球硬化。 17.    如條款15之方法，其中該腎絲球疾病係慢性腎絲球病變。 18.    如條款15之方法，其中該腎絲球疾病係遺傳性腎炎。 19.    如條款15之方法，其中該腎絲球疾病係微小改變疾病。 20.    如條款1至19中任一項之方法，其中該方法會預防腎功能下降之發作或將其減緩。 21.    一種減緩患有1型或2型糖尿病或腎絲球疾病之受試者之腎功能下降之方法，該方法包括： 向該受試者投與有效量之能夠抑制NBL1活性之藥劑。 22.    如條款21之方法，其中該方法會預防進展性腎功能下降(PKFD)之發作或將其減緩。 23.    如條款21之方法，其中該方法會預防晚期腎病(ESKD)之發作或減緩其進展。 24.    如條款21至23中任一項之方法，其中該藥劑能夠結合至NBL1。 25.    如條款24之方法，其中該藥劑包括骨成形性蛋白質(BMP)或其可溶性片段。 26.    如條款25之方法，其中該藥劑包括人類BMP-2之可溶性片段。 27.    如條款25或26之方法，其中該藥劑進一步包括延長血清半衰期之部分。 28.    如條款27之方法，其中該半衰期延長部分係抗體Fc結構域。 29.    如條款27之方法，其中該半衰期延長部分係至少一種共價連接之聚乙二醇(PEG)部分。 30.    如條款24之方法，其中該藥劑包括抗體或其抗原結合片段。 31.    如條款24之方法，其中該藥劑能夠抑制NBL1之二聚合。 32.    如條款21至23中任一項之方法，其中該藥劑能夠抑制NBL1表現。 33.    如條款21至32中任一項之方法，其中該受試者患有1型糖尿病。 34.    如條款21至32中任一項之方法，其中該受試者患有2型糖尿病。 35.    如條款21至32中任一項之方法，其中該受試者患有腎絲球疾病。 36.    如條款35之方法，其中該患有腎絲球疾病之受試者不患有1型糖尿病或2型糖尿病。 37.    如條款35或36之方法，其中該腎絲球疾病係選自由以下組成之群：局灶節段性腎絲球硬化(FSGS)、慢性腎絲球病變、遺傳性腎炎、微小改變疾病。 38.    如條款37之方法，其中該腎絲球疾病係局灶節段性腎絲球硬化。 39.    如條款37之方法，其中該腎絲球疾病係慢性腎絲球病變。 40.    如條款37之方法，其中該腎絲球疾病係遺傳性腎炎。 41.    如條款37之方法，其中該腎絲球疾病係微小改變疾病。 42.    一種治療患有1型或2型糖尿病或腎絲球疾病之受試者之糖尿病性腎病(DKD)或腎絲球疾病之方法，該方法包括： 向該受試者投與有效量之能夠抑制NBL1活性之藥劑。 43.    如條款42之方法，其中該藥劑能夠結合至NBL1。 44.    如條款43之方法，其中該藥劑包括骨成形性蛋白質(BMP)或其可溶性片段。 45.    如條款44之方法，其中該藥劑包括人類BMP-2之可溶性片段。 46.    如條款44或45之方法，其中該藥劑進一步包括延長血清半衰期之部分。 47.    如條款46之方法，其中該半衰期延長部分係抗體Fc結構域。 48.    如條款46之方法，其中該半衰期延長部分係至少一種共價連接之聚乙二醇(PEG)部分。 49.    如條款43之方法，其中該藥劑包括抗體或其抗原結合片段。 50.    如條款43之方法，其中該藥劑能夠抑制NBL1之二聚合。 51.    如條款42之方法，其中該藥劑能夠抑制NBL1表現。 52.    如條款42至51中任一項之方法，其中該受試者患有1型糖尿病。 53.    如條款42至51中任一項之方法，其中該受試者患有2型糖尿病。 54.    如條款42至51中任一項之方法，其中該受試者患有腎絲球疾病。 55.    如條款54之方法，其中該患有腎絲球疾病之受試者不患有1型糖尿病或2型糖尿病。 56.    如條款54或55之方法，其中該腎絲球疾病係選自由以下組成之群：局灶節段性腎絲球硬化、慢性腎絲球病變、遺傳性腎炎、微小改變疾病。 57.    如條款56之方法，其中該腎絲球疾病係局灶節段性腎絲球硬化。 58.    如條款56之方法，其中該腎絲球疾病係慢性腎絲球病變。 59.    如條款56之方法，其中該腎絲球疾病係遺傳性腎炎。 60.    如條款56之方法，其中該腎絲球疾病係微小改變疾病。 61.    如條款1至60中任一項之方法，其中該藥劑係非經腸投與。 62.    如條款1至61中任一項之方法，其中投與該藥劑至少3個月。 63.    如條款62之方法，其中投與該藥劑至少6個月。 64.    如條款63之方法，其中投與該藥劑至少12個月。 6. 實例
下文係用於實施本發明之具體實施例之實例。提供實例僅係出於闡釋性目的，而不意欲以任何方式限制本發明範圍。已努力確保所用數值(例如量、溫度等)之準確性，但當然容許一些實驗誤差及偏差。
除非另外指示，否則本發明之實踐將採用蛋白質化學、生物化學、重組DNA技術及藥理學之習用方法。該等技術充分闡釋於文獻中。 6.1. 實例 1. NBL1 直接對足細胞及腎小管細胞具有毒性
DAN蛋白(Grem1、Grem2、Grem3、Cerberus、NBL1、SOST及USG1)含量增加與成人腎之嚴重疾病狀態有關。Wen等人， Biochimie160:113-121 (2019)。
為評價增加之DAN蛋白存在是否對腎損害具有因果效應，將人類足細胞(HuPodo)、人類系膜細胞(HuHMRC)及人類腎小管細胞(HuK2)在存在或不存在人類NBL1下於活體外培養48小時。使用人類臍靜脈內皮細胞(Huvec)作為對照。在以下遞增濃度之NBL1中培養足細胞：0.2 μg/ml、1.0 μg/ml及2.0 μg/ml。在2 μg/ml NBL1中培養系膜細胞及腎小管細胞。在遞增濃度(0.2 μg/ml、2 μg/ml及10 μg/ml)之NBL1中培養人類臍靜脈內皮細胞。
圖1A-1D係匯總細胞死亡分析數據之條形圖，該等數據為方便起見使用任意單位(AU)來量化。結果展示人類足細胞以及(在較小程度上)系膜及腎小管細胞之增加之細胞凋亡/死亡，該效應與向培養基中添加NBL1直接相關。在經NBL1培養之人類臍靜脈內皮細胞(Huvec)中檢測不到細胞死亡，即使在較高濃度下。
圖2A-2B展示在不予處理(圖2A)或與2 μg/ml NBL1一起培養(圖2B)之人類足細胞上實施之共焦分析之代表性影像，其中使用突觸足蛋白及細胞凋亡標籤進行染色。呈現合併圖片。該等顯微照片展示了人類足細胞之NBL1誘導之細胞凋亡之證據。箭頭突出顯示細胞凋亡標籤及突觸足蛋白(其係分別細胞凋亡及足細胞之標記物)之共存。影像著重顯示，大部分足細胞正發生細胞凋亡。圖2C係量化在存在/不存在NBL1下細胞凋亡標籤 +突觸足蛋白 +雙陽性人類足細胞之百分比之條形圖(n=3)。結果指示，在NBL1存在下凋亡分化之人類足細胞之含量有所增加。
圖3展示與2 μg/ml NBL1一起培養或不予處理之人類足細胞之細胞凋亡相關基因之轉錄組分析。數據展示，在活體外暴露於NBL-1時細胞凋亡相關基因之表現顯著增加。
總而言之，該等實驗展示，NBL1直接對足細胞及腎小管細胞具有毒性，且暴露於NBL1會引起人類足細胞及腎小管細胞之細胞凋亡。 6.2. 實例 2. BMP 蛋白在活體外不表現於腎細胞中且不由腎細胞分泌
如同其他DAN蛋白，已知NBL1與骨成形性蛋白質相互作用。Hung等人， Biol. of Reprod.(2012) 86(5): 158, 1-9。
為確定NBL1是否經由抑制腎內之BMP來施加其毒性，分析BMP2、BMP4及BMP7是否在人類足細胞中表現為mRNA。未檢測到任一BMP之任何mRNA表現。接下來，評價BMP2、BMP4或BMP7是否自足細胞分泌至上清液中以由此容許自分泌/旁分泌促存活效應。在人類足細胞上清液中未檢測到任一BMP，由此證實足細胞不能在活體外合成及分泌BMP (數據未展示)。
NBL1對足細胞之毒性效應由此與BMP之存在無關；NBL1之促細胞凋亡效應並非經由BMP抑制來介導。 6.3. 實例 3. NBL1 不表現於腎細胞中 ， 但表現於循環免疫細胞、腸及肌肉組織中。
在已確定NBL1直接對足細胞及腎小管細胞具有毒性之情形下，藉由使用RT-PCR量測NBL1在諸多人類細胞系(包含腎細胞系)中之mRNA表現來尋找其生理來源，其中將表現正規化β肌動蛋白表現。圖4展示，在腎源細胞中未檢測到NBL1。各種其他細胞系亦未檢測到NBL1。然而，其高度表現於免疫細胞(例如CD14 +單核球及CD4 +及CD8 +T細胞)中( 參見圖4)。
使用自健康志願者血樣分離之周邊血單核細胞(PBMC)之流式細胞術之其他分析證實，NBL1蛋白高度表現於骨髓樣(CD14 +)細胞及各種T細胞子組(CD3 +、CD4 +及CD8 +T細胞)中( 參見圖5A-5B)。自在Milan (Italy) ASST Sacco-FBF處藉由使用Lymphoprep (07801, Stem Cell Technologies, Cambridge, MA)自非糖尿病性受試者(n=5)收集之8 ml血樣來純化人類PBMC，且然後將細胞染色以使用來自Biolegend (San Diego, CA)及BD Biosciences (San Jose, CA)之抗人類CD3 (300330)、抗CD45 (560178)、抗CD4 (561030)、抗CD8 (560774)、抗CD14 (561707)實施流式細胞術分析，從而量化表面表現。使用兔多株抗NBL1 (Sigma, HPA007394)且隨後使用驢抗兔AlexaFluor488抗體(ThermoFisher Scientific)來針對NBL1進行染色。使用BD FACS Celesta (BD Biosciences)分析細胞。
為進一步探索NBL1之表現，實施NBL1人類組織表現之綜合性免疫染色研究。在此研究中，藉由免疫組織化學及流式細胞術在人類組織樣品上來檢測NBL1表現。基於每一所關注區域之總細胞中NBL1陽性細胞之百分比來對NBL1免疫反應性進行半定量評分。評分如下：＜ 10%, 1+；10-30%, 2+；30-50%, 3+；50-80%, 4+；及＞ 80%, 5+。使用來自Pathology Unit, University of Parma之非糖尿病性受試者之存檔福爾馬林(formalin)固定、石蠟包埋之組織試樣實施NBL1免疫染色(抗NBL1一級抗體第HPA007394號，Merck)。每一圖之進一步放大圖展示於右上角黑色方塊中之插圖中，其中黑色箭頭突出顯示陽性染色。原始放大率為20X，比例尺為100 um ( 參見圖5C)。
亦基於雙陽性細胞百分比之量化如下所述將半定量評分應用至檢測於T細胞(CD3 +NBL1 +)、B細胞(CD19 +NBL1 +)及單核球(CD14 +NBL1 +)中之NBL1表現( 參見圖5A)：＜ 15%, 1+；15-45%, 2+；45-75%, 3+；75-90%, 4+；及＞ 90%, 5+。
闡釋人類組織中之NBL1蛋白表現之半定量評分圖解說明於圖5D中所呈現之條形圖中。對於組織細胞化學而言，呈現在n=3個單獨切片中計算之評分之平均值。對於流式細胞術而言，呈現在n=5個分析試樣中獲得之代表T細胞、B細胞及單核球之評分之平均值。( 參見圖5D)。
研究結果證實，不表現於腎中之NBL1表現於各種腸組織及肌肉中之循環免疫細胞、尤其T細胞及單核球中，且較少表現於生殖組織、骨及骨髓中。 6.4. 實例 4. 使用拮抗劑中和 NBL1 可防止毒性
在已證實NBL1對足細胞及腎小管細胞具有毒性、此毒性係直接介導且NBL1並不局部性產生於腎細胞中但表現於循環免疫細胞及其他非腎組織中之情形下，測試NBL1是否可為用於直接治療干預以保護腎細胞免於損害之適當靶。
將人類足細胞在NBL1 (2 μg/ml)存在下且存在或不存在可溶性BMP2下以1:1比率(NBL1:sBMP2 = 1:1)培養48小時。藉由ELISA檢測細胞死亡。與可溶性BMP2一起培育可顯著減小在NBL1存在下培養之人類足細胞所經歷之細胞死亡效應，從而指示可溶性BMP2能夠在活體外部分地中和NBL1對人類足細胞之促細胞凋亡效應。上述實驗之結果展示於圖6中。一式兩份地運行三個獨立實驗。數據呈現為平均值±SEM。商業抗NBL1工具抗體(Sigma)展示較小效應(數據未展示)。 6.5. 實例 5. 人類抗 NBL1 抗體發現活動
淘選初始人類噬菌體顯示庫以尋找能夠結合人類NBL1 (UniProt ID P41271)之Fab，且進一步針對與小鼠NBL1 (UniProt ID Q61477)及/或食蟹猴(「cyno」) NBL1 (UniProt ID A0A2K5WIY3)之潛在物種間交叉反應性進行篩選。將排名居前之25 Fab選殖至表現載體中並表現為全長人類IgG1抗體。藉由ELISA測試IgG1格式化抗體之抗原結合且計算EC50值。二十(20)種IgG1抗體展示為結合至人類、小鼠及食蟹猴NBL1，其中ELISA中之EC50介於10 ng/mL與100 ng/mL之間(約0 pM至600 pM)。
呈現於上文章節5.3.2中之表格提供了20種IgG1抗體之VH及VL序列以及(單獨地) CDR序列。 6.6. 實例 6. 單株抗 NBL1 抗體在活體外挽救 NBL1 介導之人類足細胞之細胞凋亡 。
在已證實NBL1直接對足細胞及腎小管細胞具有毒性且可使用sBMP2 (其能夠特異性結合至NBL1)避免該毒性之情形下，評價單株抗NBL1抗體對在NBL1存在下培養之人類足細胞所經歷之細胞死亡效應之效應。在實例6中所生成之單株抗體中，測試16種抗體並評價其防止在活體內培養之人類足細胞中之細胞死亡及細胞凋亡之能力。
在補充有10% FBS及ITS (1X)之RPMI中培養人類足細胞。自Genscript (Piscataway, NJ)獲得人類NBL1重組蛋白。在20 μg/ml之濃度下測試藉由將NBL1結合噬菌體顯示之Fab選殖至人類IgG1形式(上述實例6)中所獲得之人類單株NBL1抗體。
將人類足細胞在存在/不存在人類NBL1 (2 μg/ml)下且在存在/不存在所生成抗NBL1 mAb (20 μg/ml)下以1:1 (mAb:NBL1)之比率培養48小時。在培養48小時時收集細胞溶解物，且藉由使用ELISA (Roche Diagnostics GmbH, 11544675001, Mannheim, Germany)來評價細胞死亡/細胞凋亡。將細胞死亡之量化正規化至未處理細胞。
據觀察，在該等新生成mAb存在下培育後，諸多mAb能夠防止/不同程度地減少NBL1誘導之細胞死亡(p＜0.0001)。最重要的是，16種mAb中之6種(YU1018-H08、YU1019-B06、YU1018-E01、YU1018-E04、YU1019-A12、YU1018-D06)能夠將在NBL1存在下培養之人類足細胞所經歷之細胞死亡效應減小至等於或低於陰性對照(最左側條，「培養基」)之程度，從而證實該等mAb能夠在活體外完全中和NBL1對人類足細胞之促細胞凋亡效應，此進一步指示，在所測試抗體中，該等抗體能夠最強效地減小具有升高含量之循環NBL1之受試者(包含患有T1D及T2D之人類受試者)中之腎絲球/腎臟病進展 。結果展示於圖8中。
在相同實驗中，測試可溶性BMP2 (1 μg/ml，以1:1 BMP2:NBL1比率)中和NBL1效應之能力。如圖8中所展示，與sBMP2相比，mAb H08、B06及E01顯著更穩定地減小人類足細胞之NBL1介導之細胞凋亡效應。此突出顯示了抗NBL1抗體保護足細胞免於NBL1介導之毒性及損害之有益有效性。 6.7. 實例 7. 1 型糖尿病及 2 型糖尿病中之 NBL1 有所升高
為確定NBL1是否有助於糖尿病中之腎損害，使用免疫靶向分析評價NBL1血清含量。量測長期1型糖尿病(T1D, n=150)患者中之NBL1血清含量並與在非糖尿病性受試者(n=15)之血清中觀察之NBL1血清含量進行比較。長期1型糖尿病患者中之NBL1血清含量顯示NBL1之顯著增加。2型糖尿病(T2D, n=70)患者中之NBL1血清含量與非糖尿病性受試者中之含量之平行對比亦顯示NBL1之顯著增加。結果展示於圖7A中。
隨後，選擇患有T1D或T2D且亦已接受糖尿病性腎病(DKD)診斷之患者且分析其NBL1血清含量。分析證實，階段2-3慢性腎病(CKD)患者(eGFR＜60 ml/min/m 2, n=60)與非糖尿病性受試者相比NBL1血清含量增加3倍，且與未患CKD之糖尿病性患者相比NBL1血清含量增加2倍( 參見圖7B)。
NBL1抑制由此係用於預防1型或2型糖尿病患者中腎損害之發作及進展之新治療方式。NBL1抑制亦將有效治療由NBL1介導損害之非糖尿病腎絲球疾病。 7. 等效內容及以引用方式之併入
儘管已特定地參照較佳實施例及各個替代實施例展示並闡述了本發明，但熟習相關技術者應理解，可在不背離本發明精神及範圍之情況下在其中作出形式及細節上之各種改變。
本說明書之正文內所引用之所有參考文獻、發行專利及專利申請案之全部內容出於所有目的皆以引用方式併入本文中。
參照下列說明及附圖，將更好地理解本發明之該等及其他特徵、態樣以及優點。
圖 1A-1D係匯總人類腎細胞中之細胞死亡分析之條形圖。圖1A展示來自與遞增劑量之重組人類NBL1 (自0.2 μg/ml至2 μg/ml)一起培養之人類足細胞(HuPodo)之數據。圖1B展示來自在2 μg/ml重組人類NBL1存在下培養之人類系膜細胞(HuMRC)之數據。圖1C展示來自在2 μg/ml重組人類NBL1存在下培養之人類腎小管細胞(HuK2)之數據。圖1D展示來自在2 μg/ml重組人類NBL1存在下培養之對照人類臍靜脈內皮細胞(Huvec)之數據。
圖 2 A -2 B繪示在與2 μg/ml NBL1一起培養(圖2A)或不予處理(圖2B)之人類足細胞上實施之共焦分析之代表性影像。使用細胞凋亡標籤(Apoptag) (細胞凋亡標記物)及突觸足蛋白(Synaptopodin) (足細胞標記物)對足細胞進行染色。 圖 2C係量化對於細胞凋亡標籤及突觸足蛋白呈雙陽性(Syn +Apo +)之人類足細胞之百分比之條形圖。實驗證實了經分化人類足細胞之NBL1誘導之細胞凋亡(圖2B中之箭頭，量化於圖2C中)。
圖 3繪示與未處理細胞相比與2 μg/ml NBL1一起培養之人類足細胞中之細胞凋亡相關轉錄物之含量變化。
圖 4係量化人類免疫細胞及細胞系中之NBL1 mRNA之表現之條形圖。將mRNA含量正規化至β肌動蛋白含量。
圖 5A-5B繪示使用流式細胞術分析測得之T細胞及各種T細胞子組(CD3 +、CD4 +及CD8 +T細胞)中及骨髓樣細胞(CD14 +)中NBL1蛋白之高表現。圖5A之左上圖繪示單核球(上門)及淋巴球(下門)之物理門控。在自健康志願者之血樣分離之周邊血單核細胞(PBMC)上實施所有分析。 圖 5C-5D繪示藉由免疫組織化學來研究各種人類組織中之NBL1表現之NBL1 Atlas研究之結果。圖5C展示經由免疫組織化學技術來闡釋NBL1存在之各種組織試樣之影像。圖5D係展示NBL1蛋白在腸及肌肉組織中之高表現之條形圖。
圖 6繪示可溶性BMP2對NBL1介導之細胞凋亡之中和效應。在NBL1 (2 μg/ml)存在下及在存在/不存在可溶性BMP2 (1 μg/ml)下將人類足細胞培養48小時。
圖 7A-7B繪示藉由ELISA量測之增加之NBL1血清含量，其中圖7A對患有長期1型糖尿病(T1D)、2型糖尿病(T2D)之患者及非糖尿病性受試者(CTRL)中之含量進行比較，且圖7B展示階段2-3糖尿病性腎病(DKD)患者與未患DKD者相比之NBL1血清含量。
圖 8係量化在NBL1 (2 μg/ml)存在下及在存在及不存在抗NBL1抗體(20 μg/ml)或可溶性BMP2 (1 μg/ml)下培養之人類足細胞中之細胞死亡之條形圖。最左條展示來自在單獨培養基中、在不存在NBL1下及在不使用抗體或sBMP處理下培育之細胞之數據。

Claims (61)

  1. 一種延遲患有1型糖尿病或2型糖尿病或腎絲球疾病之受試者中腎損害之發作或進展之方法，該方法包括： 向該受試者投與有效量之能夠抑制NBL1活性之藥劑。
  2. 如請求項1之方法，其中該藥劑能夠結合至NBL1。
  3. 如請求項2之方法，其中該藥劑能夠結合至人類NBL1。
  4. 如請求項3之方法，其中該藥劑係能夠結合至人類NBL1之抗體或抗體之抗原結合片段。
  5. 如請求項4之方法，其中該抗體或抗原結合片段包括三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR， 該等CDR具有選自以下之序列： a) SEQ ID NO: 3、8及13以及SEQ ID NO: 18、23及28 (抗體E05)； b)     SEQ ID NO: 33、38及43以及SEQ ID NO: 48、53及58 (抗體H08)； c) SEQ ID NO: 63、68及73以及SEQ ID NO: 78、83及88 (抗體F06)； d) SEQ ID NO: 93、98及103以及SEQ ID NO: 108、113及118 (抗體A12)； e) SEQ ID NO: 123、128及133以及SEQ ID NO: 138、143及148 (抗體G01)； f) SEQ ID NO: 153、158及163以及SEQ ID NO: 168、173及178 (抗體E11)； g) SEQ ID NO: 183、188及193以及SEQ ID NO: 198、203及208 (抗體B06)； h) SEQ ID NO: 213、218及223以及SEQ ID NO: 228、233及238 (抗體D12)； i) SEQ ID NO: 243、248及253以及SEQ ID NO: 258、263及268 (抗體H01)； j) SEQ ID NO: 273、278及283以及SEQ ID NO: 288、293及298 (抗體C11)； k) SEQ ID NO: 303、308及313以及SEQ ID NO: 318、323及328 (抗體E05)； l) SEQ ID NO: 333、338及343以及SEQ ID NO: 348、353及358 (抗體F10)； m)    SEQ ID NO: 363、368及373以及SEQ ID NO: 378、383及388 (抗體G10)； n) SEQ ID NO: 393、398及403以及SEQ ID NO: 408、413及418 (抗體E04)； o) SEQ ID NO: 423、428及433以及SEQ ID NO: 438、443及448 (抗體E07)； p) SEQ ID NO: 453、458及463以及SEQ ID NO: 468、473及478 (抗體E12)； q) SEQ ID NO: 483、488及493以及SEQ ID NO: 498及503及508 (抗體D08)； r) SEQ ID NO: 513、518及523以及SEQ ID NO: 528、533及538 (抗體E10)； s) SEQ ID NO: 543、548及553以及SEQ ID NO: 558、563及568 (抗體D06)；及 t) SEQ ID NO: 573、578及583以及SEQ ID NO: 588、593及598 (抗體E01)， 或具有與所選CDR序列(a)至(t)之不同處在於每一CDR中至多兩個保守胺基酸取代之序列。
  6. 如請求項5之方法，其中該抗體或抗原結合片段包括具有與該等所選CDR一致之序列之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。
  7. 如請求項5或6之方法，其中該三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR具有選自以下之序列： b)     SEQ ID NO: 33、38及43以及SEQ ID NO: 48、53及58 (抗體H08)； d) SEQ ID NO: 93、98及103以及SEQ ID NO: 108、113及118 (抗體A12)； g) SEQ ID NO: 183、188及193以及SEQ ID NO: 198、203及208 (抗體B06)； n) SEQ ID NO: 393、398及403以及SEQ ID NO: 408、413及418 (抗體E04)； s) SEQ ID NO: 543、548及553以及SEQ ID NO: 558、563及568 (抗體D06)；及 t) SEQ ID NO: 573、578及583以及SEQ ID NO: 588、593及598 (抗體E01)， 或具有與所選CDR序列b)、d)、g)、n)、s)及t)之不同處在於每一CDR中至多兩個保守胺基酸取代之序列。
  8. 如請求項7之方法，其中該抗體或抗原結合片段包括具有與該等所選CDR一致之序列之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。
  9. 如請求項4至8中任一項之方法，其中抗體框架區係人類抗體框架區。
  10. 如請求項4至9中任一項之方法，其中該抗體係全長二價單特異性單株抗體。
  11. 如請求項10之方法，其中該抗體包括人類IgG1、IgG2或IgG4重鏈恆定區。
  12. 如請求項11之方法，其中該抗體包括人類IgG1恆定區。
  13. 如請求項10至12中任一項之方法，其中該抗體Fc區具有降低抗體與至少一種類型Fc受體之結合及/或降低補體固定之經改造突變。
  14. 如請求項4至9中任一項之方法，其中該抗體係Fab，視情況其中該Fab經聚乙二醇化。
  15. 如請求項4至14中任一項之方法，其中該抗體或抗原結合片段進一步能夠結合至食蟹猴NBL1。
  16. 如請求項15之方法，其中該抗體或抗原結合片段進一步能夠結合至小鼠NBL1。
  17. 如請求項4至17中任一項之方法，其中該抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於100 nM之結合親和力(K D)。
  18. 如請求項17之方法，其中該抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於10 nM之結合親和力(K D)。
  19. 如請求項18之方法，其中該抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於5 nM之結合親和力(K D)。
  20. 如請求項1至3中任一項之方法，其中該藥劑包括骨成形性蛋白質(bone morphogenetic protein；BMP)或其可溶性片段。
  21. 如請求項20之方法，其中該藥劑包括人類BMP-2之可溶性片段。
  22. 如請求項20或21之方法，其中該藥劑進一步包括延長血清半衰期之部分。
  23. 如請求項22之方法，其中該半衰期延長部分係抗體Fc結構域。
  24. 如請求項22之方法，其中該半衰期延長部分係至少一種共價連接之聚乙二醇(polyethylene glycol；PEG)部分。
  25. 如請求項1至24中任一項之方法，其中該藥劑能夠抑制NBL1之二聚合。
  26. 如請求項1之方法，其中該藥劑能夠抑制NBL1表現。
  27. 如請求項1至26中任一項之方法，其中該藥劑係非經腸投與。
  28. 如請求項27之方法，其中該藥劑係經靜脈內投與。
  29. 如請求項27之方法，其中該藥劑係經皮下投與。
  30. 如請求項1至29中任一項之方法，其中該藥劑係經投與至少3個月。
  31. 如請求項30之方法，其中該藥劑係經投與至少6個月。
  32. 如請求項31之方法，其中該藥劑係經投與至少12個月。
  33. 如請求項1至32中任一項之方法，其中該受試者具有升高之NBL1治療前血漿含量。
  34. 如請求項1至33中任一項之方法，其中該受試者患有1型糖尿病。
  35. 如請求項1至33中任一項之方法，其中該受試者患有2型糖尿病。
  36. 如請求項1至35中任一項之方法，其中該受試者患有腎絲球疾病。
  37. 如請求項36之方法，其中該患有腎絲球疾病之受試者未患有1型糖尿病或2型糖尿病。
  38. 如請求項36或37之方法，其中該腎絲球疾病係選自由以下組成之群：局灶節段性腎絲球硬化(focal segmental glomerulosclerosis；FSGS)、慢性腎絲球病變、遺傳性腎炎及微小病變疾病。
  39. 如請求項1至38中任一項之方法，其中該方法預防腎功能下降之發作或減緩腎功能下降。
  40. 一種治療患有1型或2型糖尿病或腎絲球疾病之受試者中糖尿病性腎病(diabetic kidney disease；DKD)或腎絲球疾病之方法，該方法包括： 向該受試者投與有效量之能夠抑制NBL1活性之藥劑。
  41. 如請求項40之方法，其中該藥劑係能夠結合至人類NBL1之抗體或抗體之抗原結合片段。
  42. 一種抗體或抗原結合片段，其中該抗體能夠結合至NBL1並抑制NBL1誘導之人類足細胞毒性。
  43. 如請求項42之抗體，其中該抗體或抗原結合片段包括三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR， 該等CDR具有選自以下之序列： u) SEQ ID NO: 3、8及13以及SEQ ID NO: 18、23及28 (抗體E05)； v) SEQ ID NO: 33、38及43以及SEQ ID NO: 48、53及58 (抗體H08)； w)    SEQ ID NO: 63、68及73以及SEQ ID NO: 78、83及88 (抗體F06)； x) SEQ ID NO: 93、98及103以及SEQ ID NO: 108、113及118 (抗體A12)； y) SEQ ID NO: 123、128及133以及SEQ ID NO: 138、143及148 (抗體G01)； z) SEQ ID NO: 153、158及163以及SEQ ID NO: 168、173及178 (抗體E11)； aa)    SEQ ID NO: 183、188及193以及SEQ ID NO: 198、203及208 (抗體B06)； bb)   SEQ ID NO: 213、218及223以及SEQ ID NO: 228、233及238 (抗體D12)； cc)    SEQ ID NO: 243、248及253以及SEQ ID NO: 258、263及268 (抗體H01)； dd)   SEQ ID NO: 273、278及283以及SEQ ID NO: 288、293及298 (抗體C11)； ee)    SEQ ID NO: 303、308及313以及SEQ ID NO: 318、323及328 (抗體E05)； ff)    SEQ ID NO: 333、338及343以及SEQ ID NO: 348、353及358 (抗體F10)； gg)   SEQ ID NO: 363、368及373以及SEQ ID NO: 378、383及388 (抗體G10)； hh)   SEQ ID NO: 393、398及403以及SEQ ID NO: 408、413及418 (抗體E04)； ii)     SEQ ID NO: 423、428及433以及SEQ ID NO: 438、443及448 (抗體E07)； jj)     SEQ ID NO: 453、458及463以及SEQ ID NO: 468、473及478 (抗體E12)； kk)   SEQ ID NO: 483、488及493以及SEQ ID NO: 498及503及508 (抗體D08)； ll)     SEQ ID NO: 513、518及523以及SEQ ID NO: 528、533及538 (抗體E10)； mm)  SEQ ID NO: 543、548及553以及SEQ ID NO: 558、563及568 (抗體D06)；及 nn)   SEQ ID NO: 573、578及583以及SEQ ID NO: 588、593及598 (抗體E01)， 或具有與所選CDR序列(a)至(t)之不同處在於每一CDR中至多兩個保守胺基酸取代之序列。
  44. 如請求項43之抗體或或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包括具有與該等所選CDR一致之序列之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。
  45. 如請求項43或44之抗體或抗原結合片段，其中該三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR具有選自以下之序列： b)     SEQ ID NO: 33、38及43以及SEQ ID NO: 48、53及58 (抗體H08)； d) SEQ ID NO: 93、98及103以及SEQ ID NO: 108、113及118 (抗體A12)； g) SEQ ID NO: 183、188及193以及SEQ ID NO: 198、203及208 (抗體B06)； n) SEQ ID NO: 393、398及403以及SEQ ID NO: 408、413及418 (抗體E04)； s) SEQ ID NO: 543、548及553以及SEQ ID NO: 558、563及568 (抗體D06)；及 t) SEQ ID NO: 573、578及583以及SEQ ID NO: 588、593及598 (抗體E01)， 或具有與所選CDR序列b)、d)、g)、n)、s)及t)之不同處在於每一CDR中至多兩個保守胺基酸取代之序列。
  46. 如請求項45之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包括具有與該等所選CDR一致之序列之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。
  47. 如請求項43至46中任一項之抗體或抗原結合片段，其中抗體框架區係人類抗體框架區。
  48. 如請求項43至47中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體係全長二價單特異性單株抗體。
  49. 如請求項48之抗體或抗原結合片段，其中該抗體包括人類IgG1、IgG2或IgG4重鏈恆定區。
  50. 如請求項49之抗體或抗原結合片段，其中該抗體包括人類IgG1恆定區。
  51. 如請求項48至50中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體Fc區具有降低抗體與FcRγ之結合及/或降低補體固定之經改造突變。
  52. 如請求項43至47中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體係Fab，視情況其中該Fab經聚乙二醇化。
  53. 如請求項42至52中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段進一步能夠結合至食蟹猴NBL1。
  54. 如請求項53之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段進一步能夠結合至小鼠NBL1。
  55. 如請求項42至54中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於100 nM之結合親和力(K D)。
  56. 如請求項55之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於10 nM之結合親和力(K D)。
  57. 如請求項55之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段對人類NBL1具有小於5 nM之結合親和力(K D)。
  58. 一種醫藥組合物，其包括： 如請求項42至57中任一項之抗體或抗原結合片段，及 醫藥上可接受之載劑。
  59. 如請求項58之醫藥組合物，其中該組合物經調配用於非經腸投與。
  60. 如請求項59之醫藥組合物，其中該組合物經調配用於靜脈內投與。
  61. 如請求項59之醫藥組合物，其中該組合物經調配用於皮下投與。
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