JP2023545075A - ＣＤ１ａ抗体およびその使用 - Google Patents

ＣＤ１ａ抗体およびその使用 Download PDF

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Abstract

分化抗原群１ａ（ＣＤ１ａ）に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性断片が提供される。実施形態は、抗体およびその抗原結合性断片の使用、および関連の使用方法を含む。

Description

関連出願との相互参照
本出願は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、２０２０年１０月９日出願の米国仮特許出願第６３／０９０，０５５号の優先権の利益を主張するものである。
共同研究の当事者に関する記載
現在特許請求されている発明は、以下に列挙する共同研究契約の当事者によって、または当事者を代表してなされたものである。共同研究契約は、特許請求された発明がなされた日またはそれ以前に発効し、特許請求された発明は、共同研究契約の範囲内で行われる活動の結果としてなされた。共同研究契約の当事者は、ＣＨＩＬＤＲＥＮ’Ｓ ＭＥＤＩＣＡＬ ＣＥＮＴＥＲ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮおよびＰＦＩＺＥＲ ＩＮＣである。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる配列表を含有する。２０２１年９月２９日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、ＰＦＺＲ＿Ｐ０００２ＷＯ＿１００１１８２１５３＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは１４１，６５８バイトである。
発明の分野
本発明は、分化抗原群１ａ（ＣＤ１ａ）に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性断片、ならびにアトピー性皮膚炎（ＡＤ）および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の処置および予防を含めた炎症性疾患および状態を処置するための本開示の抗体の使用を含む、組成物、方法およびその使用に関する。
アトピー性皮膚炎（ＡＤとしても公知）は、米国（ＵＳ）だけで１，８００万人を超える人に影響を及ぼしている、最も一般的な型の湿疹である（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｃｚｅｍａ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）。ＡＤは、重度のそう痒、乾燥皮膚および湿疹性病変を特徴とする、慢性、再発性、炎症性の状態である。ＡＤは、食物アレルギー、喘息、およびアレルギー性鼻炎に関連する。重症疾患は、うつ病および不安障害、著しい不眠、および生活の質が損なわれることを含めた大きな心理学的問題に起因して極度に消耗性のものになり得る。
ＡＤは、その病態生理は完全には理解されていないが、多因子性疾患である。遺伝因子および環境因子（例えば、低湿度、低温の気候など）によってＡＤが誘発されるまたは悪化することが分かっている。この疾患には、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）媒介性過敏化、関門機能障害、細胞媒介性免疫応答の変更、および環境因子の複雑な相互作用が関与する。フィラグリンの機能喪失変異が、潜在的な経表皮水分蒸散量の増加、ｐＨ変更、および脱水に起因して、重症アトピー性皮膚炎に関係づけられている。主要な皮膚の異常は、ＩｇＥ媒介性感作を引き起こす免疫学的撹乱であり得、遺伝子変異および局所的炎症の両方の結果である上皮関門機能障害が伴う。
ＡＤに対する典型的な処置には、局部ローション剤および保湿剤、コルチコステロイド、抗ヒスタミン薬および抗生物質が含まれる。しかし、コルチコステロイドの長期にわたる使いすぎには、皮膚線条、点状出血、毛細血管拡張症、皮膚薄化、萎縮、および、ざ瘡の悪化を含む局所的なおよび全身性の有害作用が伴う（Ｃｈａｒｍａｎ ＣＲ、Ｍｏｒｒｉｓ ＡＤ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＨＣ．Ｔｏｐｉｃａｌ ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ ｐｈｏｂｉａ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｔｏｐｉｃ ｅｃｚｅｍａ．Ｂｒ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０００；１４２：９３１～６）。コルチコステロイドに付随する副作用の最も懸念すべきものは、全身性有害作用（主に視床下部・下垂体・副腎軸抑制、小児における直線的成長の低下、および成人における骨密度の変化）である。ＡＤに対して、健康に関連する生活の質に主な影響を及ぼす重要な症状であるそう痒を低減するために、Ｈ１－抗ヒスタミン薬、特に鎮静型のものが長時間にわたって処方されている。しかし、経口Ｈ１－抗ヒスタミン薬とプラセボまたは対照を比較したランダム化試験は行われていない。さらに、大多数の処置選択肢では、一時的な、不完全な症状の軽減しかもたらされず、中等症から重度のＡＤを有する多くの患者が処置に対して抵抗性をもつようになる。したがって、ＡＤを処置および／または予防するため、特に、基礎をなす病態生理に対処するための新規の標的化療法が当該分野において大いに必要とされている。
概要
本発明は、ＣＤ１ａに特異的に結合する抗体およびその抗原結合性断片、ならびに使用、および関連の方法を提供する。当業者は、慣用的に過ぎない実験を使用して、本明細書に記載される発明の具体的な実施形態に対する多くの等価物を認識する、またはそれを確認することができる。かかる等価物は、以下の実施形態（Ｅ）によって包含される意図である。
Ｅ１．分化抗原群１ａ（ＣＤ１ａ；例えば、ヒト、カニクイザル、イヌおよび／またはウサギＣＤ１ａ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２．エピトープが、配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ８２および／またはＨｉｓ１７０を含む、分化抗原群１ａ（ＣＤ１ａ）上のエピトープに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３．エピトープが、配列番号１の番号付けに従って、Ｉｌｅ９２および／またはＡｒｇ９３をさらに含む、Ｅ２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４．重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１７、４９、および５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、Ｅ１からＥ３のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５．重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１７または４９のアミノ酸配列を含む、Ｅ１からＥ３のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６．重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１７のアミノ酸配列を含む、Ｅ５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７．
（ｉ）配列番号１５、３０、４０、６２、および６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）；
（ｉｉ）配列番号１６、３１、４１、４８、５９、６３および７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；および／または
（ｉｉｉ）配列番号１７、４９および５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３
を含む、Ｅ１からＥ６のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ８．配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）を含み、１つまたは２つのアミノ酸が、異なるアミノ酸で置換されていてもよい、Ｅ１からＥ７のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ９．１つまたは２つのアミノ酸置換が、（ｉ）７位のＳｅｒの、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、またはＴｒｐによる置換および（ｉｉ）８位のＡｓｎの、Ｐｈｅ、Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、ＴｒｐまたはＴｙｒによる置換からなる群から選択される、Ｅ８に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１０．
（ｉ）配列番号８および２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、
（ｉｉ）配列番号９、２６、３７、４４、および７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および／または
（ｉｉｉ）配列番号１０、２７、３４、および４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、Ｅ１からＥ９のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１１．
（ｉ）配列番号１５、３０、４０、６２、および６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｉｉ）配列番号１６、３１、４１、４８、５９、６３および７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、
（ｉｉｉ）配列番号１７、４９および５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、
（ｉｖ）配列番号８および２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、
（ｖ）配列番号９、２６、３７、４４、および７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および／または
（ｖｉ）配列番号１０、２７、３４、および４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、Ｅ１からＥ１０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１２．
（ｉ）配列番号１５、３０および４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｉｉ）配列番号１６、４１および６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、
（ｉｉｉ）配列番号１７および４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、
（ｉｖ）配列番号８および２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、
（ｖ）配列番号９および２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに／または
（ｖｉ）配列番号１０および２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、Ｅ１からＥ１１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１３．
（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、
（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、
（ｉｖ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、
（ｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および
（ｖｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、Ｅ１からＥ１２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１４．
（ｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、
（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、
（ｉｖ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、
（ｖ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および
（ｖｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、Ｅ１からＥ５２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１５．
（ｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、
（ｉｉｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、
（ｉｖ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、
（ｖ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および
（ｖｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、Ｅ１からＥ１２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１６．ＩＧＨＶ１－２＊０２、ＩＧＨＶ１－３＊０１、ＩＧＨＶ１－４６＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０２、ＩＧＨＶ１－８＊０１、ＩＧＨＶ３－７＊０１、ＩＧＨＶ３－１３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０４、ＩＧＨＶ３－３０＊０１、ＩＧＨＶ３－３０＊１８、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０１、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０４、およびＩＧＨＶ５－５１＊０１からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＨ配列に由来する重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ１５のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１７．重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク配列が、ＩＧＨＶ３－７＊０１のヒト生殖系列ＶＨ配列に由来する、Ｅ１６に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１８．ＩＧＫＶ１－１２＊０１、ＩＧＫＶ１－１３＊０２、ＩＧＫＶ１－３３＊０１、ＩＧＫＶ１－３９＊０１、ＩＧＫＶ１－５＊０１、ＩＧＫＶ３－１１＊０１、ＩＧＫＶ３－１５＊０１、ＩＧＫＶ３－２０＊０１、ＩＧＫＶ３Ｄ－２０＊０２、およびＩＧＫＶ４－１＊０１からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＬ配列に由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ１７のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１９．軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク配列が、ＩＧＫＶ１－３９＊０１のヒト生殖系列ＶＬ配列に由来する、Ｅ１８に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２０．
（ｉ）配列番号２２、３２、４２、５０、５３、５５、５７、６０、６４、６７、６９、７４および７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
（ｉｉ）配列番号１２、２８、３５、３８、４６、７２および７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む、Ｅ１からＥ１９のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２１．
（ｉ）配列番号２２、３２、４２、５０、５３、５５、５７、６０、６４、６７、６９、７４または７７に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＨ；および
（ｉｉ）配列番号１２、２８、３５、３８、４６、７２または７９に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＬ
を含む、Ｅ１からＥ２０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２２．
（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｉ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉｖ）配列番号２２に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１２に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｖ）配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２８に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｖｉ）配列番号７４に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２８に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＬ
を含む、Ｅ１からＥ２１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２３．
（ｉ）配列番号２２に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに配列番号１２に示されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列、
（ｉｉ）配列番号５５に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに配列番号２８に示されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列、または
（ｉｉｉ）配列番号７４に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに配列番号２８に示されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列
を含む抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２４．ヒトＶκまたはＶλ軽鎖定常ドメインを含む、Ｅ１からＥ２３のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２５．ヒトＶκ軽鎖定常ドメインを含む、Ｅ２４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２６．重鎖定常ドメインを含む、Ｅ１からＥ２５のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２７．重鎖定常ドメインが、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）を含む、Ｅ２６に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２８．重鎖定常ドメインが、ＩｇＧを含む、Ｅ２７に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２９．ＩｇＧが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４からなる群から選択される、Ｅ２８に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３０．ＩｇＧが、ＩｇＧ１である、Ｅ２９に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３１．Ｆｃドメインを含む、Ｅ１からＥ３０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３２．Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１重鎖ＣＨ２ドメインおよびＩｇＧ重鎖ＣＨ３ドメインを含む、Ｅ３１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３３．
（ｉ）配列番号１４、２９、３９、４７、５１、５４、５６、５８、６１、６５、６８、７３、および７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）；ならびに
（ｉｉ）配列番号７、２４、３３、３６、４３、７０および７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）
を含む、Ｅ１からＥ３２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３４．
（ｉ）配列番号１４、２９、３９、４７、５１、５４、５６、５８、６１、６５、６８、７３、および７５に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むＨＣ；および
（ｉｉ）配列番号７、２４、３３、３６、４３、７０および７８に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むＬＣ
を含む、Ｅ１からＥ３３のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３５．
（ｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号７のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣ；
（ｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣ；
（ｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣ；
（ｉｖ）配列番号１４に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号７に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣ；
（ｖ）配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣ；または
（ｖｉ）配列番号７３に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＨＣおよび配列番号２４に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＬＣ
を含む、Ｅ１からＥ３４のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３６．配列番号５４のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＬＣを含む抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３７．配列番号７３のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＬＣを含む抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３８．ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミドの挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含む、Ｅ１からＥ３７のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３９．ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミドの挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含む、Ｅ１からＥ３８のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４０．ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含み、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４１．Ｆｃ融合タンパク質、モノボディ（ｍｏｎｏｂｏｄｙ）、マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）、二機能性抗体、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、またはペプチボディである、Ｅ１からＥ４０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４２．エピトープが、以下のアミノ酸残基のうち少なくとも１つ：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ａｓｐ１７３、およびＡｓｎ１７７をさらに含む、Ｅ２からＥ４１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４３．エピトープが、配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｇｌｕ８２、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、およびＡｓｎ１７７を含む、Ｅ４２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４４．（ｉ）接触表面積（ＡＳＡ）の＞８０Å２がＣＤ１ａとの相互作用によって埋没する、（ｉｉ）遊離状態にあるＡＳＡの＞９０％が界面によって埋没し、かつＡＳＡの＞３０Å２がＣＤ１ａとの相互作用によって埋没する、および／または、（ｉｉｉ）少なくとも１つのエピトープアミノ酸残基が、３．８Å以内の抗体またはその抗原結合性断片と、塩橋もしくは水素結合のいずれかによって相互作用し、かつ少なくとも６つの交差界面非水素原子対が３．８Å以内にある、Ｅ２からＥ４３のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４５．エピトープが、以下の残基：配列番号１の番号付けに従って、Ｌｅｕ８６、Ａｓｎ１４６、Ａｓｎ１６８、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｐ１８１、およびＡｒｇ１８５のうち少なくとも１つをさらに含む、Ｅ２からＥ４４のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４６．エピトープが、以下の残基：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｌｅｕ８６、Ｇｌｕ８２、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ａｓｎ１４６、Ａｓｎ１６８、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｎ１７７、Ａｓｐ１８１、およびＡｒｇ１８５を含む、Ｅ４５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４７．（ｉ）接触表面積（ＡＳＡ）の＞４０Å２がＣＤ１ａとの相互作用によって埋没する、（ｉｉ）遊離状態にあるＡＳＡの＞５０％がＣＤ１ａとの相互作用によって埋没する、（ｉｉｉ）少なくとも１つのエピトープアミノ酸残基が３．８Å以内の抗体もしくはその抗原結合性断片と相互作用し、かつ少なくとも４つの交差界面非水素原子対が３．８Å以内にある、（ｉｖ）少なくとも１つのエピトープアミノ酸残基が、抗体もしくはその抗原結合性断片と塩橋によって相互作用する、および／または（ｖ）少なくとも１つのエピトープアミノ酸残基が、抗体もしくはその抗原結合性断片と水素結合によって相互作用する、Ｅ４５からＥ４６のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４８．エピトープが、以下の残基：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７９、Ｌｅｕ８３、Ｇｌｕ８４、Ａｒｇ８８、Ｉｌｅ９２、Ｇｌｎ１６７、Ｇｌｎ１６９、Ｌｅｕ１７８、Ｓｅｒ１８０、およびＴｈｒ１８２のうち少なくとも１つをさらに含む、Ｅ２からＥ４３、Ｅ４５～Ｅ４６のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４９．エピトープが、以下の残基：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｇｌｕ７９、Ｌｙｓ８１、Ｇｌｕ８２、Ｌｅｕ８３、Ｇｌｕ８４、Ｔｈｒ８５、Ｌｅｕ８６、Ａｒｇ８８、Ｉｌｅ８９、Ｉｌｅ９２、Ａｒｇ９３、Ａｓｎ１４６、Ｇｌｎ１６７、Ａｓｎ１６８、Ｇｌｎ１６９、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｎ１７７、Ｌｅｕ１７８、Ｓｅｒ１８０、Ａｓｐ１８１、Ｔｈｒ１８２およびＡｒｇ１８５を含む、Ｅ４８に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５０．エピトープが、配列番号１の番号付けに従って、Ａｓｎ１４６および／またはＡｓｎ１６８を含まない、Ｅ４９に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５１．（ｉ）接触表面積（ＡＳＡ）の＞２０Å２がＣＤ１ａとの相互作用によって埋没し、それと交換的に、ＣＤ１ａエピトープの接触表面積（ＡＳＡ）の＞１０Å２が埋没する、（ｉｉ）少なくとも１つのエピトープアミノ酸残基が３．８Å以内の抗体もしくはその抗原結合性断片と相互作用する、（ｉｉｉ）少なくとも１つのエピトープアミノ酸残基が抗体もしくはその抗原結合性断片と塩橋によって相互作用する、（ｉｖ）少なくとも１つのエピトープアミノ酸残基が抗体もしくはその抗原結合性断片と水を介した水素結合によって相互作用する、および／または（ｖ）少なくとも１つのエピトープアミノ酸残基が抗体もしくはその抗原結合性断片と水素結合によって相互作用する、Ｅ４８からＥ４９のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５２．ＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、Ａｂ１３８、Ａｂ４９１、Ａｂ４９２、Ａｂ５０４、Ａｂ５１４、Ａｂ５５５、Ａｂ５５６、Ａｂ５５９、Ａｂ５６０、Ａｂ５７１、Ａｂ５７２、Ａｂ５７９、Ａｂ５８５、Ａｂ５９９、Ａｂ６０９、Ａｂ６１０、Ａｂ６１６、Ａｂ６２３、Ａｂ６２４、Ａｂ６５６、Ａｂ６５７、Ａｂ６６０、Ａｂ６７３、Ａｂ６８１、およびＡｂ６８９（例えば、表１４に開示される）からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５３．Ｅ１からＥ５２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片と、ＣＤ１ａへの結合について競合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５４．Ａｂ１３８、Ａｂ５７１、およびＡｂ６７３からなる群から選択される抗体またはその抗原結合性断片と、ＣＤ１ａへの結合について競合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５５．抗体Ａｂ５７１の抗体またはその抗原結合性断片と、ＣＤ１ａへの結合について競合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５６．ＣＤ１ａに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、Ｅ１からＥ５２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片と実質的に同じエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５７．ＣＤ１ａに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、Ａｂ１３８、Ａｂ４９１、Ａｂ４９２、Ａｂ５０４、Ａｂ５１４、Ａｂ５５５、Ａｂ５５６、Ａｂ５５９、Ａｂ５６０、Ａｂ５７１、Ａｂ５７２、Ａｂ５７９、Ａｂ５８５、Ａｂ５９９、Ａｂ６０９、Ａｂ６１０、Ａｂ６１６、Ａｂ６２３、Ａｂ６２４、Ａｂ６５６、Ａｂ６５７、Ａｂ６６０、Ａｂ６７３、Ａｂ６８１、およびＡｂ６８９（例えば、表１４に開示される）からなる群から選択される抗体またはその抗原結合性断片と実質的に同じエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５８．ＣＤ１ａに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、Ａｂ１３８、Ａｂ５７１、およびＡｂ６７３からなる群から選択される抗体またはその抗原結合性断片と実質的に同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５９．ＣＤ１ａに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体Ａｂ５７１と実質的に同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６０．Ｅ１からＥ５９のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片であって、約５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１７５ｎＭ、１５０ｎＭ、１２５ｎＭ、１００ｎＭ、９０ｎＭ、８０ｎＭ、７０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２００ｐＭ、１８０ｐＭ、１６０ｐＭ、１４０ｐＭ、１２０ｐＭ、１００ｐＭ、８０ｐＭ、６０ｐＭ、４０ｐＭ、２０ｐＭおよび１０ｐＭからなる群から選択されるおよその値のＫＤまたはその値未満のＫＤで、ＣＤ１ａに結合する、抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６１．５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２００ｐＭ、１９０ｐＭ、１８０ｐＭ、１８１ｐＭ、１７０ｐＭ、１６０ｐＭ、１５０ｐＭ、１４０ｐＭ、１３０ｐＭ、１２０ｐＭ、１１０ｐＭ、１００ｐＭ、９０ｐＭ、８０ｐＭ、７０ｐＭ、６０ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２０ｐＭまたは１０ｐＭのＫＤ値またはそれ未満のＫＤ値で、ＣＤ１ａに結合する、Ｅ１からＥ６０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６２．ＣＤ１ａが、ヒトＣＤ１ａ、カニクイザルＣＤ１ａ、イヌＣＤ１ａおよび／またはウサギＣＤ１ａである、Ｅ１からＥ６１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６３．約２５０ｐＭ～約１００ｐＭ、約２００ｐＭ～約１５０ｐＭまたは約１９０ｐＭ～約１７０ｐＭのＫＤ値でヒトＣＤ１ａに結合する、Ｅ１からＥ６２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６４．約１８１．３９＋／－１１．９２ｐＭまたは約０．１７ｎＭのＫＤ値でヒトＣＤ１ａに結合する、Ｅ６３に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６５．約１００ｐＭ～約３０ｐＭ、約８０ｐＭ～約４０ｐＭ、または約７０ｐＭ～約５０ｐＭのＫＤ値でカニクイザルＣＤ１ａに結合する、Ｅ１からＥ６４のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６６．約６０．３５＋／－１１．０４ｐＭのＫＤ値でカニクイザルＣＤ１ａに結合する、Ｅ６５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６７．配列番号１７、４９、および５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む、Ｅ６０からＥ６６のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６８．配列番号１７および４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む、Ｅ６０からＥ６７のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６９．ＫＤ値が、任意選択によりＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００またはＢｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用し、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される、Ｅ６０からＥ６８のいずれか１つに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７０．ＫＤ値が、任意選択によりＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ機器を使用し、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定される、Ｅ６０からＥ６８のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７１．抗薬物抗体を誘導しない、Ｅ１からＥ７０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７２．Ｔレジトープ（Ｔｒｅｇｉｔｏｐｅ）（Ｔ－ｒｅｇ）調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力が、約－３５以下である、Ｅ１からＥ７１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７３．Ｔ－ｒｅｇ調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力が、約－５２以下である、Ｅ１からＥ７１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７４．Ｔ－ｒｅｇ調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力が、約－６９以下である、Ｅ１からＥ７１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７５．Ｔ－ｒｅｇ調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力が、約－３５以下であり、８以下の非生殖系列Ｔ細胞エピトープが存在する、Ｅ１からＥ７２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７６．Ｔ－ｒｅｇ調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力が、約－５２以下であり、３以下の非生殖系列Ｔ細胞エピトープが存在する、Ｅ１からＥ７３のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７７．Ｔレジトープ（Ｔ－ｒｅｇ）調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力が、約－６９以下であり、１以下の非生殖系列Ｔ細胞エピトープが存在する、Ｅ１からＥ７４のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７８．例えばＡＣ－ＳＩＮＳアッセイ、ＤＮＡ結合アッセイおよび／またはインスリン結合アッセイによって測定した場合に、多反応性のリスクが低い、Ｅ１からＥ７７のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７９．カニクイザルもしくはヒトＣＤ１ｂに対して、カニクイザルもしくはヒトＣＤ１ｃに対して、および／またはカニクイザル、ラット、マウスもしくはヒトＣＤ１ｄに対して、弱い結合を有するまたは結合を有さない、Ｅ１からＥ７８のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。「弱い」結合とは、表面プラズモン共鳴によって、またはバイオレイヤー干渉法によって測定した場合に、ＫＤが５００ｎＭ以上であることを意味する。
Ｅ８０．約５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性分化抗原群６９（ＣＤ６９）発現を阻害する、Ｅ１からＥ７９のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ８１．約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１．９７ｎＭ以下、約１．９ｎＭ以下、約１．８ｎＭ以下、約１．７ｎＭ以下、約１．６ｎＭ以下、約１．５ｎＭ以下、約１．４ｎＭ以下、約１．３ｎＭ以下、約１．２ｎＭ以下、約１．１ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、約０．９ｎＭ以下、約０．８ｎＭ以下、約０．７ｎＭ以下、約０．６ｎＭ以下、約０．５ｎＭ以下、約０．４ｎＭ以下、約０．３ｎＭ以下、約０．２ｎＭ以下、または約０．１ｎＭ以下のＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現を阻害する、Ｅ１からＥ８０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ８２．約２０００ｐＭ以下、約１９７０ｐＭ以下、約１５００ｐＭ以下、約１１１０ｐＭ以下、約１０００ｐＭ以下、約５００ｐＭ以下、約４００ｐＭ以下、約３００ｐＭ以下、約２００ｐＭ以下、約１００ｐＭ以下、約９０ｐＭ以下、約８０ｐＭ以下、約７０ｐＭ以下、約６０ｐＭ以下、約５０ｐＭ以下、約４０ｐＭ以下、約３０ｐＭ以下、約２０ｐＭ以下、約１０ｐＭ以下、約９ｐＭ以下、約８ｐＭ以下、約７ｐＭ以下、約６ｐＭ以下、約５ｐＭ以下、約４ｐＭ以下、約３ｐＭ以下、約２ｐＭ以下、または約１ｐＭ以下のＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現を阻害する、Ｅ１からＥ８１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ８３．約１．１１ｎＭまたは０．８９４ｎＭのＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現を阻害する、Ｅ１からＥ８２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ８４．約１．９７ｎＭのＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現を阻害する、Ｅ１からＥ８２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ８５．約０．３ｎＭのＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現を阻害する、Ｅ１からＥ８２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ８６．５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１．９ｎＭ以下、１．８ｎＭ以下、１．７ｎＭ以下、１．６ｎＭ以下、１．５ｎＭ以下、１．４ｎＭ以下、１．３ｎＭ以下、１．２ｎＭ以下、１．１ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２２ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、０．１８ｎＭ以下、または０．１ｎＭ以下のＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性インターロイキン２（ＩＬ－２）産生を阻害する、Ｅ１からＥ８５のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ８７．約５００ｐＭ以下、約４００ｐＭ以下、約３００ｐＭ以下、約２２０ｐＭ以下、約２００ｐＭ以下、約１００ｐＭ以下、約９０ｐＭ以下、約８０ｐＭ以下、約７０ｐＭ以下、約６０ｐＭ以下、約５０ｐＭ以下、約４０ｐＭ以下、約３０ｐＭ以下、約２０ｐＭ以下、約１０ｐＭ以下、約９ｐＭ以下、約８ｐＭ以下、約７ｐＭ以下、約６ｐＭ以下、約５ｐＭ以下、約４ｐＭ以下、約３ｐＭ以下、約２ｐＭ、または１ｐＭのＩＣ５０値でＣＤ１ａ依存性ＩＬ－２産生を阻害する、Ｅ１からＥ８６のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ８８．約０．２６８ｎＭまたは０．１８ｎＭのＩＣ５０値でＣＤ１ａ依存性ＩＬ－２産生を阻害する、Ｅ１からＥ８７のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ８９．ＩＣ５０値が、ＣＤ１ａ制限Ｔ細胞受容体ＢＫ６を発現するＪｕｒｋａｔ ７６（Ｊ７６）細胞を使用して決定される、Ｅ８０からＥ８８のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ９０．アトピー性皮膚炎を有する患者における皮膚炎スコアを、無処置の患者における皮膚炎スコアと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる、Ｅ１からＥ８９のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ９１．アトピー性皮膚炎を有する患者における皮膚炎スコアを、無処置の患者における皮膚炎スコアと比較して７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる、Ｅ９０に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ９２．ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおける皮膚炎スコアを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照における皮膚炎スコアと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる、Ｅ１からＥ９１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ９３．ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおける皮膚炎スコアを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照における皮膚炎スコアと比較して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる、Ｅ９２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ９４．ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおける血清ＩｇＥレベルを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照における血清ＩｇＥレベルと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる、Ｅ１からＥ９３のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ９５．ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおける血清ＩｇＥレベルを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照における血清ＩｇＥレベルと比較して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる、Ｅ９４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ９６．ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイトＨＤＭ誘導性皮膚炎マウスモデルにおけるＨＤＭ特異的ＩｇＥ抗体価を、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照における血清ＩｇＥレベルと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる、Ｅ１からＥ９５のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ９７．ヒトＣＤ１ａトランスジェニックＨＤＭ誘導性皮膚炎マウスモデルにおけるＨＤＭ特異的ＩｇＥ抗体価を、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照におけるＨＤＭ特異的ＩｇＥ抗体価と比較して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる、Ｅ９６に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ９８．ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおけるアトピー性皮膚炎関連遺伝子の発現レベルを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照におけるアトピー性皮膚炎関連遺伝子の発現レベルと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる、Ｅ１からＥ９７のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ９９．ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおけるアトピー性皮膚炎関連遺伝子の発現レベルを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照におけるアトピー性皮膚炎関連遺伝子の発現レベルと比較して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる、Ｅ９８に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１００．アトピー性皮膚炎関連遺伝子が、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、フィラグリン（ＦＬＧ）、インターロイキン－３３（ＩＬ－３３）、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド２６（ＣＣＬ－２６）、ＩＬ－２３ｐ４０、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカインリガンド１（ＣＸＣＬ－１）およびＣＣＬ－２０を含む、Ｅ９８からＥ９９のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１０１．Ｅ１からＥ１００のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ１０２．Ｅ１からＥ１０１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする少なくとも１つの核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ１０３．ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子であって、
（ｉ）配列番号８０の核酸配列、
（ｉｉ）配列番号８１の核酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号８２の核酸配列、
（ｉｖ）配列番号８３の核酸配列、
（ｖ）配列番号８４の核酸配列、
（ｖｉ）配列番号８５の核酸配列、
（ｖｉｉ）ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０の下でＡｂ５７１－ＶＨとして寄託されたベクターの挿入物の核酸配列、およびＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１の下でＡｂ５７１－ＶＬとして寄託されたベクターの挿入物の核酸配列
からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、核酸分子。
Ｅ１０４．番号８０の核酸配列、配列番号８１の核酸配列、またはそれら両方を含むまたはそれからなる、単離された核酸分子。
Ｅ１０５．番号８２の核酸配列、配列番号８３の核酸配列、またはそれら両方を含むまたはそれからなる、単離された核酸分子。
Ｅ１０６．ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子であって、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ１０７．ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子であって、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ１０８．ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子であって、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、およびＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ１０９．ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ１１０．ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ１１１．ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、およびＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ１１２．ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片のＶＨをコードする単離された核酸分子であって、配列番号８０または配列番号８４の核酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一な核酸を含む、単離された核酸分子。
Ｅ１１３．ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片のＶＬをコードする単離された核酸分子であって、配列番号８１の核酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一な核酸を含む、単離された核酸分子。
Ｅ１１４．ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片のＨＣをコードする単離された核酸分子であって、配列番号８２または配列番号８５の核酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一な核酸を含む、単離された核酸分子。
Ｅ１１５．ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片のＬＣをコードする単離された核酸分子であって、配列番号８３の核酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一な核酸を含む、単離された核酸分子。
Ｅ１１６．Ｅ１０１からＥ１１５のいずれか１つに記載の核酸分子を含む、ベクター。
Ｅ１１７．Ｅ１０１からＥ１１５のいずれか１つに記載の核酸分子またはＥ１１６に記載のベクターを含む、宿主細胞。
Ｅ１１８．配列番号８０の核酸配列および／または配列番号８１の核酸配列を含む核酸分子を含む宿主細胞。
Ｅ１１９．配列番号８２の核酸配列および／または配列番号８３の核酸配列を含む核酸分子を含む宿主細胞。
Ｅ１２０．哺乳動物細胞または昆虫細胞である、Ｅ１１７からＥ１１９のいずれか１つに記載の宿主細胞。
Ｅ１２１．ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ－２９３細胞、ＮＳ０細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞、またはＳｐ２．０細胞からなる群から選択される哺乳動物細胞である、Ｅ１２０に記載の宿主細胞。
Ｅ１２２．抗体またはその抗原結合性断片を作製する方法であって、Ｅ１１７からＥ１２１のいずれか１つに記載の宿主細胞を、前記抗体または抗原結合性断片が宿主細胞によって発現される条件下で培養するステップを含む、方法。
Ｅ１２３．抗体またはその抗原結合性断片を単離するステップをさらに含む、Ｅ１２２に記載の方法。
Ｅ１２４．Ｅ１からＥ１００のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片、ならびに薬学的に許容できる担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
Ｅ１２５．１．１２ｍｇ／ｍＬ Ｌ－ヒスチジン、２．６７ｍｇ／ｍＬ Ｌ－ヒスチジン塩酸塩一水和物、８５ｍｇ／ｍＬスクロース、０．０５ｍｇ／ｍＬ ＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物、０．２ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０ ｐＨ５．８を含む、Ｅ１２４に記載の医薬組成物。
Ｅ１２６．２０ｍＭヒスチジン、８．５％スクロース、および０．０２％ポリソルベート８０、０．００５％ＥＤＴＡ ｐＨ５．８を含む、Ｅ１２４またはＥ１２５に記載の医薬組成物。
Ｅ１２７．約２ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍｌの抗体またはその抗原結合性断片を含む、Ｅ１２４からＥ１２６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｅ１２８．約１００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合性断片を含む、Ｅ１２７に記載の医薬組成物。
Ｅ１２９．用量が、１ｍＬ用量である、Ｅ１２４からＥ１２８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｅ１３０．皮下（ＳＣ）および／または静脈内（ＩＶ）投与に適切である、Ｅ１２４からＥ１２９に記載の医薬組成物。
Ｅ１３１．抗体またはその抗原結合性断片が、ｉ）配列番号５５に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列および配列番号２８のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列；ｉｉ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；またはｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１２４からＥ１３０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｅ１３２．さらなる治療的に活性な化合物をさらに含む、Ｅ１２４からＥ１３１のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｅ１３３．さらなる治療的に活性な化合物が、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－３１、ＩＬ３６、ＩＦＮα、ＩＦＮγのうち１つまたは複数に対するアンタゴニスト、もしくはそれらのそれぞれの受容体に対するアンタゴニスト、抗炎症剤、組換えインターフェロンガンマ、ＮＳＡＩＤ、ステロイド、カルシニューリン阻害剤、および／またはコルチコステロイドを含む、Ｅ１３２に記載の医薬組成物。
Ｅ１３４．さらなる治療的に活性な化合物が、デュピルマブを含む、Ｅ１３２に記載の医薬組成物。
Ｅ１３５．ＣＤ１ａ活性を低減させるまたは阻害する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１からＥ１００のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１２４からＥ１３４のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１３６．投与前のＣＤ１ａの活性を抗体の投与後のＣＤ１ａ活性のレベルと比較するステップをさらに含む、Ｅ３５に記載の方法。
Ｅ１３７．ＣＤ１ａ活性を低減させるまたは阻害することにより、ＣＤ１ａ活性の除去、阻害または低減によって改善、寛解、阻害または予防される疾患、障害、または状態を処置する、Ｅ１３５からＥ１３６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３８．ＣＤ１ａの活性が、
（ａ）ＣＤ１ａのＴ細胞受容体への結合；
（ｂ）ＣＤ１ａにより媒介されるＴ細胞への脂質提示および引き続くＴ細胞活性化；
（ｃ）ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現；
（ｄ）ＣＤ１ａ依存性ＩＬ－２産生；
（ｅ）ＣＤ１ａ依存性血清ＩｇＥレベル増加；
（ｆ）ＣＤ１ａ依存性抗原特異的ＩｇＥ抗体増加；ならびに
（ｇ）ＣＤ１ａ依存性アトピー性皮膚炎関連遺伝子（例えば、これらに限定されないが、ＴＳＬＰ、ＦＬＧ、ＩＬ－３３、ＣＣＬ－２６、ＩＬ－２３ｐ４０、ＣＣＬ－２０、および／またはＣＣＬ－２０）発現レベル増加
からなる群から選択される、Ｅ１３５からＥ１３７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３９．それを必要とする対象において、ＣＤ１ａのレベルを低減させる方法であって、対象に、治療有効量のＥ１からＥ１００のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１２４からＥ１３４のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１４０．それを必要とする対象において、ＣＤ１ａのＴ細胞受容体への結合を低減させるまたは阻害する方法であって、対象に、治療有効量のＥ１からＥ１００のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１２４からＥ１３４のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１４１．ＣＤ１ａの発現および／もしくはＣＤ１ａのリガンドへの結合と関連するまたはそれによって媒介される疾患、障害および／もしくは状態を処置および／または予防する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１からＥ１００のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１２４からＥ１３４のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１４２．疾患、障害、および／または状態が、炎症性腸疾患、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季カタル、季節性アレルギー、ペットアレルギー、喘息、食物アレルギー、ピーナッツアレルギー、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、アレルギー性鼻炎、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、呼吸器疾患のウイルス性増悪、小児および成体におけるウイルス感染症、（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、インフルエンザ）、蕁麻疹、好酸球性食道炎、慢性線維症、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、慢性腎疾患、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、強皮症、全身性硬化症、急性腎傷害、敗血症、膵炎、１型糖尿病、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、組織移植、アルツハイマー病、関節リウマチ、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、乾癬、小児脂肪便症およびレイノー病または現象からなる群から選択される、Ｅ４１に記載の方法。
Ｅ１４３．炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１からＥ１００のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１２４からＥ１３４のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１４４．アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１からＥ１００のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１２４からＥ１３４のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１４５．炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１からＥ１００のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１２４からＥ１３４のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１４６．処置が、予防的処置である、Ｅ１３５からＥ１４５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４７．対象が、ヒトである、Ｅ１３５からＥ１４６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４８．対象が、炎症性疾患（例えば、これに限定されないが、アトピー性皮膚炎またはＩＢＤ）を有する患者である、Ｅ１３５からＥ１４７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４９．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、皮下投与される、Ｅ１３５からＥ１４８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５０．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、静脈内投与される、Ｅ１３５からＥ１４９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５１．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約１週間に２回、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、５週間毎に１回、６週間毎に１回、７週間毎に１回、８週間毎に１回、９週間毎に１回、１０週間毎に１回、１カ月に２回、１カ月に１回、２カ月毎に１回、３カ月毎に１回、４カ月毎に１回、５カ月毎に１回、６カ月毎に１回、７カ月毎に１回、８カ月毎に１回、９カ月毎に１回、１０カ月毎に１回、１１カ月毎に１回または１２カ月毎に１回投与される、Ｅ１３５からＥ１５０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５２．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、１カ月に１回または４週間毎に１回投与される、Ｅ１３５からＥ１５１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５３．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、１週間に１回投与される、Ｅ１３５からＥ１５２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５４．治療有効量が、約１ｍｇ～約１０００ｍｇの抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片の用量を含む、Ｅ１３５からＥ１５３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５５．用量が、初期固定用量である、Ｅ１５４に記載の方法。
Ｅ１５６．用量が、約１ｍｇ～約１０ｍｇ、約１０ｍｇ～約２０ｍｇ、約２０ｍｇ～約３０ｍｇ、約３０ｍｇ～約４０ｍｇ、約４０ｍｇ～約５０ｍｇ、約５０ｍｇ～約６０ｍｇ、約６０ｍｇ～約７０ｍｇ、約７０ｍｇ～約８０ｍｇ、約８０ｍｇ～約９０ｍｇ、約９０ｍｇ～約１００ｍｇ、約１００ｍｇ～約１５０ｍｇ、約１５０ｍｇ～約２００ｍｇ、約２００ｍｇ～約３００ｍｇ、約３００ｍｇ～約４００ｍｇ、約４００ｍｇ～約５００ｍｇ、約５００ｍｇ～約６００ｍｇ、約６００ｍｇ～約７００ｍｇ、約７００ｍｇ～約８００ｍｇ、約８００～約９００ｍｇ、または約９００～約１０００ｍｇの抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片である、Ｅ１５４からＥ１５５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５７．用量が、約１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、５００ｍｇまたは６００ｍｇの抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片である、Ｅ１５４からＥ１５６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５８．用量が、約３０ｍｇの抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片である、Ｅ１５４からＥ１５７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５９．Ｅ１５４からＥ１５８のいずれか１つに記載の方法であって、用量を、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、１カ月に１回、２カ月毎に１回、またはこれらの組み合わせで投与するステップを含む、方法。
Ｅ１６０．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約３０ｍｇの用量で４週間毎に１回投与され、抗体が、抗体Ａｂ５７１またはＡｂ６７３である、Ｅ１５４からＥ１５９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６１．投与が、皮下または静脈内投与である、Ｅ１５４からＥ１６０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６２．ｉ）配列番号５５に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列ならびに配列番号２８に示されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列；ｉｉ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；またはｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むＬＣを含む抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む、Ｅ１５４からＥ１６１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６３．ｉ）配列番号７４に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列ならびに配列番号２８に示されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列；ｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；またはｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むＬＣを含む抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む、Ｅ１５４からＥ１６１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６４．対象が、アトピー性皮膚炎を有する、Ｅ１５４からＥ１６３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６５．アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、ｉ）配列番号５５に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列ならびに配列番号２８に示されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列；ｉｉ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；またはｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むＬＣを含む抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片、および薬学的に許容できる担体または賦形剤を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１６６．アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、ｉ）配列番号７４に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列ならびに配列番号２８に示されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列；ｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；またはｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むＬＣを含む抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片、ならびに薬学的に許容できる担体または賦形剤を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１６７．抗体またはその抗原結合性断片が、治療有効量の、アトピー性皮膚炎の少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防において有効である、１つ以上のさらなる治療的に活性な化合物または処置モダリティと組み合わせて投与される、Ｅ１３５からＥ１６６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６８．抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片の量、ならびにアトピー性皮膚炎の少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防において有効である治療的に活性な化合物または処置モダリティの量が、一緒になって、アトピー性皮膚炎の少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防において相乗的効果を達成する量で投与される、Ｅ１６７に記載の方法。
Ｅ１６９．抗ＣＤ１ａ抗体もしくはその抗原結合性断片の量、ならびに／またはアトピー性皮膚炎の少なくとも１つの徴候および／もしくは症状の処置および／もしくは予防において有効である治療的に活性な化合物もしくは処置モダリティの量が、各々、組み合わせない場合に投与される投薬量よりも少ない投薬量で投与される、Ｅ１６７に記載の方法。
Ｅ１７０．さらなる治療的に活性な化合物が、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－３１、ＩＬ３６、ＩＦＮα、ＩＦＮγのうち１つまたは複数に対するアンタゴニスト、もしくはそれらのそれぞれの受容体のアンタゴニスト、抗炎症剤、組換えインターフェロンガンマ、ＮＳＡＩＤ、ステロイド、カルシニューリン阻害剤、および／またはコルチコステロイドを含む、Ｅ１６７からＥ１６９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１７１．さらなる治療的に活性な化合物が、デュピルマブを含む、Ｅ１６７からＥ１６９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１７２．抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片と、アトピー性皮膚炎の少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防において有効である治療的に活性な化合物または処置モダリティが、同時投与される、Ｅ１６７からＥ１７１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１７３．組み合わせ治療が、同じ投薬レジメンに従って投与される（例えば、両方の治療が毎日投与される）または異なる投薬レジメンに従って投与される（例えば、１つの治療が毎日投与され、他の治療が毎週投与される）、Ｅ１６７からＥ１７２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１７４．組み合わせ治療が、対象に同じまたは異なる経路の投与によって投与される、Ｅ１６７からＥ１７３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１７５．ＣＤ１ａの発現、活性および／またはＣＤ１ａのＴ細胞受容体への結合と関連するまたはそれによって媒介される疾患、障害または状態を処置するための医薬の製造における、Ｅ１２４から１３４のいずれか１つに記載の医薬組成物の使用。
Ｅ１７６．ＣＤ１ａの発現、活性および／またはＣＤ１ａのＴ細胞受容体への結合と関連するまたはそれによって媒介される疾患、障害または状態を処置および／または予防するための医薬の製造における、Ｅ１からＥ１００のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片の使用。
Ｅ１７７．医薬としての使用のための、Ｅ１からＥ１００のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１２４からＥ１３４に記載の医薬組成物。
Ｅ１７８．炎症性疾患（例えば、これらに限定されないが、アトピー性皮膚炎）の少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防における使用のための、Ｅ１からＥ１００のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１２４からＥ１３４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｅ１７９．
（ａ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；または
（ｆ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１８０．
（ａ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および
（ｆ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１８１．
（ａ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；および／または
（ｆ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、Ｅ１からＥ１００のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１８２．Ｅ１８１を含む任意の抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物。
Ｅ１８３．
（ａ）ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号９６のアミノ酸配列を含む；
（ｂ）ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号９７のアミノ酸配列を含む；
（ｃ）ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号９８のアミノ酸配列を含む；
（ｄ）ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号９９のアミノ酸配列を含む；
（ｅ）ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号１００のアミノ酸配列を含む；および／または
（ｆ）ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む、
Ｅ１３５からＥ１７４に記載の任意の方法またはＥ１からＥ１００のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片の任意の使用、またはＥ１２４からＥ１３４に記載の任意の医薬組成物。
図１Ａは、Ｔ細胞活性化アッセイにおけるキメラ抗ＣＤ１ａ抗体のＣＤ６９発現に対する効果を示す。ＯＫＴ６は、市販のＣＤ１ａ遮断抗体である。ＯＫＴ６配列を、ＡＴＣＣから入手したハイブリドーマからクローニングし、キメラヒトＩｇＧ１として作製した。 図１Ｂは、Ｔ細胞活性化アッセイにおけるキメラ抗ＣＤ１ａ抗体のＩＬ－２分泌に対する効果を示す。 図２は、キメラ抗体Ａｂ４０のＡｂ１３８、Ａｂ１３９およびＡｂ１４０－ヒト化抗体バリアントを用いた競合ＥＬＩＳＡを示す。このアッセイでは、ヒト化クローンＡｂ１３８（丸）およびＡｂ１４０（上向きの三角形）は親キメラＡｂ４０と非常に類似した活性を示し、それらの結合親和性が良好に保持されていることが示唆される。 図３Ａは、ＣＤ１ａ／Ａｂ１３８界面の図を示す。抗体重鎖および軽鎖が明示されている。骨格トレース図がリボンとして示されている。３つの高度に埋没した界面残基（Ａｂ１３８－重鎖－Ｉ９９、ＣＤ１ａ－Ｅ８２、ＣＤ１ａ－Ｈ１７０）が明示され、側鎖が強調表示されている（太線）。交差界面での塩橋を作っている残基側鎖も示されており（細線）、塩橋の接触が破線で示されている。ＣＤ１ａが最前面に黒色で示されており（明確にするためにベータシートおよび界面から遠位のドメインは除かれている）、一方、Ａｂ１３８が背後に陰影付きの白色で示されている。 図３Ｂは、ＣＤ１ａ／Ａｂ１３８界面の図を示す。抗体重鎖および軽鎖が明示されている。骨格トレース図がリボンとして示されている。３つの高度に埋没した界面残基（Ａｂ１３８－重鎖－Ｉ９９、ＣＤ１ａ－Ｅ８２、ＣＤ１ａ－Ｈ１７０）が明示され、側鎖が強調表示されている（太線）。交差界面での塩橋を作っている残基側鎖も示されており（細線）、塩橋の接触が破線で示されている。ＣＤ１ａが上部に黒色で示されており、一方、Ａｂ１３８が下部に白色で示されている。 図４は、ＣＤ１ａエピトープの表面図を示す。抗ＣＤ１ａ Ａｂ１３８および／またはＢＫ６ ＴＣＲと接触する残基が示されている。ＢＫ６独占的残基（Ｅ１７１、Ｄ１８１、Ｔ１８２）は薄い灰色であり、Ａｂ１３８独占的残基（Ｅ７８、Ｋ８１、Ｌ８３、Ｅ８４、Ｒ８８、Ｎ１４６、Ｑ１６７、Ｑ１６９、Ｓ１８０）は黒色であり、両方と接触する残基（Ｅ７９、Ｅ８２、Ｔ８５、Ｌ８６、Ｉ８９、Ｒ９３、Ｎ１６８、Ｈ１７０、Ｄ１７３、Ｉ１７４、Ｈ１７６、Ｎ１７７、Ｒ１８５）は濃い灰色であり、接触しない残基は陰影付きの白色である。図は、図３Ａと同様の方向付けで表されているが、垂直方向のページ軸に関して１８０度回転させたものである。 図５は、最適化ライブラリーからの初代ｓｃＦｖクローンのＨＴＲＦアッセイスクリーニングを示す。ＨＴＲＦシグナルがより低いことはヒトＣＤ１ａに対する結合親和性がより高いことと相関する。親Ａｂ１３８よりも良好に結合するクローンに関して任意のカットオフ閾値を選択した。陰性対照ｍＡｂはヒトＣＤ１ａに結合しない。 図６Ａは、ヒトおよびカニクイザルＣＤ１ａへのＡｂ５７１結合についての１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ Ｆｉｔを用いた、代表的な動態データＳＰＲセンサーグラムを示す。灰色の線は、各注入について生成された生Ｂｉａｃｏｒｅデータである。重なるセンサーグラム黒色のフィットする線は、Ｂｉａｃｏｒｅ解析ソフトウェアによって生成された。会合を９０秒間モニタリングし、解離を５５０秒間モニタリングし、秒単位で経時的に（ｘ軸）レゾナンスユニット（ｙ軸）に関して測定した。ヒトＣＤ１ａに関しては６つの濃度について、およびカニクイザルＣＤ１ａに関しては８つの濃度についてのデータが示されている。相対的応答はＲＵ＝レゾナンスユニット；ｓ＝秒間で測定される。 図６Ｂは、ヒトおよびカニクイザルＣＤ１ａへのＡｂ５７１結合についての１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ Ｆｉｔを用いた、代表的な動態データＳＰＲセンサーグラムを示す。灰色の線は、各注入について生成された生Ｂｉａｃｏｒｅデータである。重なるセンサーグラム黒色のフィットする線は、Ｂｉａｃｏｒｅ解析ソフトウェアによって生成された。会合を９０秒間モニタリングし、解離を５５０秒間モニタリングし、秒単位で経時的に（ｘ軸）レゾナンスユニット（ｙ軸）に関して測定した。ヒトＣＤ１ａに関しては６つの濃度について、およびカニクイザルＣＤ１ａに関しては８つの濃度についてのデータが示されている。相対的応答はＲＵ＝レゾナンスユニット；ｓ＝秒間で測定される。 図７は、Ａｂ５７１における変異およびそれらのＣＤ１ａ相互作用に対する影響を示す。Ａｂ５７１変異Ｎ（Ｌ３１）Ｆ、Ｓ（Ｌ３０）Ｙ、Ｋ（Ｌ９３）ＳおよびＮ（Ｈ５３）Ｇが図３に示されているＡｂ１３８結晶構造に基づいてモデリングされる。Ａｂ１３８／Ａｂ５７１のこれらの位置と相互作用するＣＤ１ａ残基Ｉ９２、Ｒ９３、Ｎ１６８およびＮ１４６が図３Ｂに示されているＣＤ１ａ結晶構造において例示される。 図８Ａは、センサー先端に最初にＯＫＴ６をカップリングさせた場合の、ＣＤ１ａ結合、その後の抗体結合のＯｃｔｅｔセンサーグラムを示す。カップリングステップは示されていない。 図８Ｂは、センサー先端に最初にＡｂ５７１をカップリングさせた場合の、ＣＤ１ａ結合、その後の抗体結合のＯｃｔｅｔセンサーグラムを示す。カップリングステップは示されていない。 図９は、ｉｎ ｖｉｖｏ抗体投与により、ＨＤＭ抗原誘導性皮膚炎の抑制が導かれることを示す。マウスに抗体を投与し、翌日、ハウスダストマイト（ＨＤＭ）抗原を用いて感作を行った。抗体注射を２日に１回、合計１０日間にわたって継続し、ＨＤＭ抗原を用いた感作を４日毎に合計１６日間にわたって行った。皮膚炎スコアを抗原感作の前および研究完了時点（１８日目）で評価した。アイソタイプ対照抗体を与えられた感作されたマウス（丸）では皮膚炎症の増加が観察されたが、一方、Ａｂ５７１を与えられた感作されたマウス（三角形）およびＡｂ６７３を与えられた感作されたマウス（ひし形）では、皮膚炎が有意に抑制された。＊＊＊は＜０．００５のＰ値を表す。 図１０は、ｉｎ ｖｉｖｏ抗体投与により、ＨＤＭ抗原を用いた感作後の血清ＩｇＥレベルの低減が導かれることを示す。アイソタイプ対照またはＣＤ１ａ中和抗体の存在下でＨＤＭ抗原を用いて感作されたマウスから単離された血清中の総ＩｇＥのレベルを決定した。中和抗体の投与により、総血清ＩｇＥレベルの有意な低減が導かれた。＊＊＊＊は＜０．０００１のｐ値を表す。 図１１は、ｉｎ ｖｉｖｏ抗体投与により、ＨＤＭ抗原を用いた感作後のＨＤＭ特異的ＩｇＥ力価の低減が導かれることを示す。アイソタイプ対照またはＣＤ１ａ中和抗体の存在下でＨＤＭ抗原を用いて感作されたマウスから単離された血清中のＨＤＭ特異的ＩｇＥのレベルを決定した。中和抗体の投与により、抗ＨＤＭ ＩｇＥ力価の有意な低減が導かれた。＊＊＊＊は＜０．０００１のｐ値を表す。 図１２は、ｉｎ ｖｉｖｏ抗体投与により、アトピー性皮膚炎遺伝子シグネチャーの抑制が導かれることを示す。抗体による処置後、感作された皮膚からＲＮＡを単離し、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）遺伝子シグネチャーに関連する遺伝子の発現について評価した。ＣＤ１ａ中和抗体、Ａｂ５７１およびＡｂ６７３の投与により、アイソタイプ対照で処置した動物と比較してＡＤ遺伝子シグネチャーの有意な抑制がもたらされた。
本開示は、分化抗原群１ａ（ＣＤ１ａ）に特異的に結合し、これに限定されないが、Ｔ細胞受容体に結合し、引き続いてそれらを活性化するＣＤ１ａの能力を含む、ＣＤ１ａ活性を低減させるまたは阻害する抗体およびその抗原結合性断片を提供する。本開示は、抗ＣＤ１ａ抗体を作製、調製、または産生するためのプロセスも提供する。本開示の抗体は、炎症性障害および状態、例えば、炎症性腸疾患、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季カタル、季節性アレルギー、ペットアレルギー、喘息、食物アレルギー、ピーナッツアレルギー、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、アレルギー性鼻炎、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、呼吸器疾患のウイルス性増悪、小児および成体におけるウイルス感染症、（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、インフルエンザ）、蕁麻疹、好酸球性食道炎、慢性線維症、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、慢性腎疾患、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、強皮症、全身性硬化症、急性腎傷害、敗血症、膵炎、１型糖尿病、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、組織移植、アルツハイマー病、関節リウマチ、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、乾癬、小児脂肪便症およびレイノー病または現象など（これらに限定されない）が含まれるがこれらに限定されない、ＣＤ１ａ活性（例えば、Ｔ細胞受容体への結合および引き続くそれらの活性化）によって媒介される、またはそれと関連する障害または状態の診断、予防、および／または処置において有用である。本開示は、抗体の発現、ならびに本開示の抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物、例えば、抗体の使用のための医薬の調製および製造をさらに包含する。抗体重鎖もしくは軽鎖、またはそれら両方をコードするポリヌクレオチドが含まれるがこれらに限定されない、ＣＤ１ａに結合する抗体またはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドが提供される。抗ＣＤ１ａ抗体を発現する宿主細胞もまた提供される。
ＭＨＣクラスＩ様分子であるＣＤ１ａは、ランゲルハンス細胞において主に発現され、皮膚由来脂質抗原を発現し、この皮膚由来脂質抗原が抗原特異的Ｔ細胞によって認識され得、それにより、引き続くＴ細胞活性化が導かれる。いずれの特定の理論に束縛されることも望まないが、ヒトＣＤ１ａトランスジェニックマウスを使用した最近の研究により、ＣＤ１ａが、接触皮膚炎、乾癬、およびＡＤなどの炎症性皮膚疾患の重要な駆動因子である可能性があることが示唆された（Ｋｉｍ ＪＨ、Ｙｏｎｇｑｉｎｇ Ｔ、Ｋｉｍ Ｊら、ＣＤ１ａ ｏｎ Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ ｃｅｌｌｓ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｋｉｎ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１６；１７（１０）：１１５９～６６）。ＭＨＣクラスＩ様分子であるＣＤ１ａは、皮膚における特殊化された型の樹状細胞であるランゲルハンス細胞において主に発現される（Ｉｇｙａｒｔｏ ＢＺ、Ｋａｐｌａｎ ＤＨ．ＡｎｔＩｇＥｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｙ Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ ｃｅｌｌｓ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１３；２５（１）：１１５～９；Ｍｅｒａｄ Ｍ、Ｇｉｎｈｏｕｘ Ｆ、Ｃｏｌｌｉｎ Ｍ．Ｏｒｉｇｉｎ、ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｌａｎｇｅｒｉｎ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００８；８（１２）：９３５～４７）。ＣＤ１ａは、皮膚において見い出される脂質抗原を提示し、この脂質抗原が抗原特異的Ｔ細胞によって認識され、それにより、引き続くＴ細胞活性化が導かれる（ｄｅ Ｊｏｎｇ Ａ、Ｃｈｅｎｇ ＴＹ、Ｈｕａｎｇ Ｓら、ＣＤ１ａ－ａｕｔｏｒｅａｃｔｉｖｅ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ ｎａｔｕｒａｌ ｓｋｉｎ ｏｉｌｓ ｔｈａｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｓ ｈｅａｄｌｅｓｓ ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１４；１５（２）：１７７～８５）。したがって、ＣＤ１ａは、炎症性皮膚疾患を駆動する重要な役割を有する可能性があり、ＣＤ１ａに結合し、引き続くＴ細胞活性化を阻害する抗体およびその抗原結合性断片がＡＤに付随する皮膚炎症を低減させるという仮説が立てられる。本明細書の実施例に開示されるように、本開示の抗体およびその抗原結合性断片は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）対立遺伝子ＢＫ６を発現するＪｕｒｋａｔ ７６（Ｊ７６）細胞におけるＣＤ１ａ依存性分化抗原群６９（ＣＤ６９）発現およびインターロイキン－２（ＩＬ－２）産生の強力な阻害によって実証された通り、ＣＤ１ａ依存性Ｔ細胞活性化を低減させる。さらに、抗ＣＤ１ａ抗体をヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）マウスモデルに投与することにより、皮膚炎スコア、総血清ＩｇＥレベルおよびＨＤＭ特異的ＩｇＥ抗体価の低減がもたらされ、それにより、これらのＣＤ１ａ中和抗体の、ＡＤ疾患活動性を著しく抑制する能力が実証される。
ヒト化抗体を含めた抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、炎症性障害および状態、例えば、炎症性腸疾患、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季カタル、季節性アレルギー、ペットアレルギー、喘息、食物アレルギー、ピーナッツアレルギー、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、アレルギー性鼻炎、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、呼吸器疾患のウイルス性増悪、小児および成体におけるウイルス感染症、（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、インフルエンザ）、蕁麻疹、好酸球性食道炎、慢性線維症、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、慢性腎疾患、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、強皮症、全身性硬化症、急性腎傷害、敗血症、膵炎、１型糖尿病、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、組織移植、アルツハイマー病、関節リウマチ、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、乾癬、小児脂肪便症およびレイノー病またはレイノー現象など（これらに限定されない）の少なくとも１つの徴候および／または症状の予防、処置、および／または寛解において、単独でまたは第２の治療と組み合わせて使用され得る。
本明細書で使用されるセクション見出しは、構成のみを目的としており、記載される主題を限定すると解釈すべきではない。
特許出願、特許公開、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢアクセッション番号を含む、本明細書で引用される全ての参考文献は、各個々の参考文献がその全体が参照によって組み込まれると具体的かつ個々に示されるかのように、本明細書で参照によって組み込まれる。
本明細書に記載されるまたは本明細書で言及される技術および手順は、一般に、十分に理解され、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ 第３版（２００１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ． ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編（２００３））；シリーズＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：ＰＣＲ ２：Ａ ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ ＡＰＰＲＯＡＣＨ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ、Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＧ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ編（１９９５））、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ編（１９８８）ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，ａｎｄ ＡＮＩＭＡＬ ＣＥＬＬ ＣＵＬＴＵＲＥ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編（１９８７））；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ）編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．ＧｒｉｆｆｉｔｈｓおよびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３－８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９））；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）；ならびにそれらの最新版に記載される広く利用される方法論などの、当業者による従来の方法論を使用して、一般に使用される。
本開示は、本発明の例示的な実施形態およびその中に含まれる実施例に関する以下の詳細な説明を参照することによってより容易に理解され得る。
本発明の態様または実施形態がマルクーシュ群または他の代替の群分けに関して記載されている場合、本発明は、全体として、しかし群の各メンバーが個別に、および主要群の全ての可能性のある亜群が列挙されている群全体を包含するだけでなく、群のメンバーのうち１つ以上が存在しない主要群もまた包含する。本発明では、特許請求された発明における群のメンバーのいずれか１つ以上の明確な除外も想定される。
定義
他に定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されているものと同じ意味を有する。矛盾する場合は、定義を含めた本明細書が支配する。
さらに、文脈が他を要求しない限りまたは明白に示されない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数を含むものとする。
広範囲の本発明を記載する数値範囲および数値パラメーターは概数であるにもかかわらず、特定の実施例において記載されている数値はできる限り正確に報告される。しかし、あらゆる数値は、それらのそれぞれの試験測定値に見出される標準偏差から必ず生じるある特定の誤差を本質的に含有する。さらに、本明細書に開示される範囲は全て、その中に包含されるありとあらゆる部分範囲を包含すると理解されるべきである。例えば、「１～１０」と述べられた範囲は、最小値である１と最大値である１０の間（両端を含む）のありとあらゆる部分範囲；即ち、最小値である１以上から始まる部分範囲、例えば、１～６．１、および最大値である１０以下で終わる部分範囲、例えば、５．５～１０の全てを含むものとみなされるべきである。
本明細書で使用する場合、単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」および「その（the）」には、他が示されない限り、複数の参照対象が含まれる。
本明細書で使用する場合、用語「および／または」は、付随する列挙された項目のうち１つ以上のありとあらゆる可能性のある組み合わせ、ならびに、選択肢「または（ｏｒ）」として解釈される場合には組み合わせの欠如を指し、包含する。
本明細書で使用する場合、用語「約」または「およそ」は、例えば、生物学的活性の量、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の長さ、ＧおよびＣヌクレオチドの含量、コドン適応指標、ＣｐＧジヌクレオチドの数、用量、時間、温度などの測定可能な値を指し、他の指定のない限り、文脈から他が明らかでない限り、またはかかる数が可能性のある値の１００％を超える場合を除き、特定された量のいずれかの方向（より大きいまたはより小さい）に２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％またはさらには０．１％の変動を包含することを意味する。
本明細書で使用する場合、用語「寛解させる」は、対象の疾患、障害もしくは状態（例えば、アトピー性皮膚炎）またはその症状（例えば、重度のそう痒）、または基礎をなす細胞応答（例えば、ＣＤ１ａ依存性Ｔ細胞活性化）の検出可能なまたは測定可能な改善を意味する。検出可能なまたは測定可能な改善には、疾患、障害もしくは状態の発生、頻度、重症度、進行もしくは持続時間の主観的もしくは客観的な減少、低減、阻害、抑制、限定もしくは制御、疾患、障害もしくは状態によって引き起こされるまたはそれと関連する合併症の発生、頻度、重症度、進行もしくは持続時間の主観的もしくは客観的な減少、低減、阻害、抑制、限定もしくは制御、疾患、障害もしくは状態の症状の改善、または、疾患、障害もしくは状態の逆転が含まれる。
本明細書で使用する場合、「別の」は、少なくとも第２のものまたはそれ以上を意味し得る。本明細書で他に定義されない限り、本発明と併せて使用される科学用語および技術用語は、当業者が一般に理解する意味を有するものとする。さらに、文脈が他を要求しない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。
本明細書で使用する場合、用語「と関連する」は、存在する場合、互いに、一方のレベルおよび／または形態が他方のレベルおよび／または形態と相関することを指す。例えば、特定の実体（例えば、ポリペプチド、遺伝子シグネチャー、代謝産物、微生物など）は、その存在、レベルおよび／または形態が特定の疾患、障害、または状態の発生率および／またはそれに対する易罹患性と相関する場合、その疾患、障害、または状態と関連するとみなされる（例えば、関連性のある集団にわたって）。一部の実施形態では、２つ以上の実体が直接または間接的に相互作用し、その結果、それらの実体が互いに物理的近傍にあるおよび／または物理的近傍のままである場合、それらの実体は互いに物理的に「関連する」。一部の実施形態では、互いに物理的に関連する２つ以上の実体は、互いに共有結合により連結している；一部の実施形態では、互いに物理的に関連する２つ以上の実体は、互いに共有結合による連結はしていないが、例えば、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、磁性、およびこれらの組み合わせによって非共有結合により関連している。
本明細書で使用する場合、用語「コード配列」は、特定のタンパク質をコードする配列を指す、または、「コード核酸」は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおいて、適切な調節配列の制御下に置かれた（それに作動可能に連結された）場合に、転写され（ＤＮＡの場合）、ポリペプチドに翻訳される（ｍＲＮＡの場合）核酸配列を意味する。コード配列の境界は、５’（アミノ）末端の開始コドンおよび３’（カルボキシ）末端の翻訳終止コドンによって決定される。コード配列には、原核生物または真核生物ｍＲＮＡに由来するｃＤＮＡ、原核生物または真核生物ＤＮＡに由来するゲノムＤＮＡ配列、およびさらには合成ＤＮＡ配列が含まれ得るがこれらに限定されない。
本明細書および特許請求の範囲全体を通して、単語「含む（comprise）」または「含む（comprises）」もしくは「含む（comprising）」などの変形および単語「有する（having）／含む（including）」は、述べられた整数または整数の群の包含を意味するが、任意の他の整数または整数の群の除外を意味するものではないと理解されたい。文脈が他を要求しない限り、単数形の用語は複数を含むものとし、複数形の用語は単数を含むものとする。用語「例えば（e.g.）」または「例えば（for example）」の後ろに続く任意の例は、網羅するものでも限定するものでもない。本明細書において実施形態が語「含む（comprising）」と共に記載されている場合はいつでも、「からなる（consisting
of）」および／または「から本質的になる（consisting essentially of）の点で記載される他の類似の実施形態も提供されることが理解される。
本明細書で使用する場合、用語「保存的置換」は、１つのアミノ酸の、生物学的、化学的または構造的に類似した残基による置き換えを指す。生物学的に類似したとは、置換により生物学的活性が破壊されないことを意味する。構造的に類似したとは、アミノ酸が、例えば、アラニン、グリシンおよびセリンなど、類似の長さの側鎖を有する、または類似のサイズを有することを意味する。化学的類似性は、残基が同じ電荷を有するまたはどちらも親水性であるもしくは疎水性であることを意味する。特定の例には、イソロイシン、バリン、ロイシンもしくはメチオニンなどの疎水性残基の別の疎水性残基での置換、または１つの極性残基の別の極性残基での置換、例えば、アルギニンでのリジンの置換、グルタミン酸でのアスパラギン酸の置換、またはグルタミンでのアスパラギンの置換、セリンでのトレオニンなの置換などが含まれる。保存的置換の特定の例には、イソロイシン、バリン、ロイシンまたはメチオニンなどの疎水性残基での互いの置換、極性残基での別の極性残基の置換、例えば、アルギニンでのリジンの置換、グルタミン酸でのアスパラギン酸の置換、またはグルタミンでのアスパラギンの置換などが含まれる。典型的には、保存的アミノ酸置換には、例えば、以下の群内での置換が含まれる：グリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。「保存的置換」には、非置換親アミノ酸の代わりに置換アミノ酸を使用することも含まれる。
本明細書で使用する場合、用語「発現制御配列」は、核酸の転写を方向付ける核酸配列を意味する。発現制御配列は、構成的もしくは誘導性プロモーターなどのプロモーター、またはエンハンサーであり得る。発現制御配列は、転写される核酸配列に作動可能に連結される。
本明細書で使用する場合、薬物、化合物、または医薬組成物の「有効投薬量」または「有効量」という用語は、任意の１つ以上の有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量である。より具体的な態様では、有効量は、疾患、例えばＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状を予防する、軽減する、および／または寛解させる量である。予防的使用について、有益なまたは所望の結果には、リスクを排除もしくは低減させること、重症度を低下させること、または疾患、その合併症、および疾患の発達の間に存在する中間の病理学的表現型の生化学的、組織学的および／もしくは行動学的症状を含む、疾患の開始を遅延させることが含まれる。治療的使用について、有益なまたは所望の結果には、臨床結果、例えば、ＣＤ１ａに媒介される疾患、障害または状態の少なくとも１つの徴候および／または症状を低減させること、疾患を処置するために要求される他の薬物療法の用量を減少させること、別の薬物療法の効果を増強すること、および／または患者の疾患の進行を遅延させることが含まれる。有効投薬量は、１つ以上の投与で投与され得る。本発明の目的のために、薬物、化合物または医薬組成物の有効投薬量は、予防的処置または治療的処置を直接的または間接的に達成するのに十分な量である。臨床状況において理解されるように、薬物、化合物または医薬組成物の有効投薬量は、別の薬物、化合物または医薬組成物と併せて達成されてもされなくてもよい。したがって、「有効投薬量」は、１つ以上の治療剤を投与する観点から検討され得、単一の薬剤は、１つ以上の他の薬剤と併せて、望ましい結果が達成され得るまたは達成される場合に、有効量で与えられたとみなされ得る。
本明細書で使用する場合、用語「機能的」は、生体分子が、それを特徴付ける特性および／または活性を示す形態にあることを指す。生体分子は、２つの機能を有し得る（即ち、二機能性）または多くの機能を有し得る（即ち、多機能性）。
本明細書で使用する場合、用語「相同な」または「相同性」は、所与の領域または断片にわたって少なくとも部分的な同一性を共有する、２つ以上の参照実体（例えば、ヌクレオチドまたはポリペプチド配列）を指す。例えば、２つのペプチド内のあるアミノ酸位置が同一なアミノ酸によって占有されている場合、これらのペプチドはその位置において相同である。とりわけ、相同なペプチドは、改変されていないまたは参照ペプチドと関連する活性または機能を保持し、改変されたペプチドは、一般に、改変されていない配列のアミノ酸配列と「実質的に相同な」アミノ酸配列を有する。ポリペプチド、核酸またはその断片について言及する場合、「実質的な相同性」または「実質的な類似性」は、別のポリペプチド、核酸（またはその相補鎖）またはその断片と適切な挿入または欠失を伴って最適にアラインメントした場合に、配列の少なくとも約９５％～９９％に配列同一性が存在することを意味する。２つの配列間の相同性（同一性）の程度は、コンピュータープログラムまたは数理アルゴリズムを使用して確認され得る。パーセント配列相同性（または同一性）を計算するかかるアルゴリズムでは、一般に、比較領域またはエリアにわたって配列ギャップおよびミスマッチを説明する。例示的なプログラムおよびアルゴリズムを以下に提示する。
本明細書で使用する場合、用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」、および「宿主細胞培養物」は互換的に使用され、ポリヌクレオチド挿入物の取り込みのためのベクターのレシピエントであり得るまたはレシピエントであった個々の細胞または細胞培養物を意味する。宿主細胞には、「形質転換体」、「形質転換された細胞」、および「形質導入された細胞」が含まれ、これらには、初代の形質転換または形質導入された細胞、および継代の数に関係なく、それに由来する子孫が含まれる。宿主細胞の子孫は、天然の、偶然のまたは意図的な変異に起因して（形態学的に、またはゲノムＤＮＡ相補性において）元の親細胞とは必ずしも完全に同一でなくてもよい。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチド（例えば、抗ＣＤ１ａ抗体のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド）でｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトおよび／または形質転換された細胞が含まれる。
本明細書で使用する場合、用語「同一性」または「に対して同一」は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子および／もしくはＲＮＡ分子）間ならびに／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。「同一性」は、特定の数理モデルのコンピュータープログラム（即ち、「アルゴリズム」）によって扱われるギャップアラインメントを用いて、２つ以上の配列間の同一な一致のパーセントを測定する。
一部の実施形態では、ポリマー分子は、それらの配列が、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一である場合、互いに「実質的に同一」であるとみなされる。
２つの核酸またはポリペプチド配列のパーセント同一性の計算は、例えば、２つの配列を最適に比較するためにアラインメントすることによって実施され得る（例えば、最適なアラインメントのために第１と第２の配列の一方または両方にギャップを導入することができ、比較のために、同一でない配列を無視することができる）。ある特定の実施形態では、比較のためにアラインメントされた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。次いで、対応する位置のヌクレオチドを比較する。第１の配列内のある位置が第２の配列内の対応する位置と同じ残基（例えば、ヌクレオチドまたはアミノ酸）に占有されている場合、その結果これらの分子は、その位置において同一である。２つの配列間のパーセント同一性は、２つの配列を最適にアラインメントするために導入する必要があるギャップの数、および各ギャップの長さを考慮に入れた、それらの配列が共有する同一な位置の数の関数である。配列の比較および２つの配列間のパーセント同一性の決定は、数理アルゴリズムを使用して達成され得る。
パーセント同一性を決定するために、配列のアラインメントを、ワールドワイドウェブｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／を通じて入手可能なＢＬＡＳＴを含めた方法およびコンピュータープログラムを使用して行うことができる。他のアラインメントプログラムには、Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ（登録商標）ｓｕｉｔｅ ｏｆ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ内のＭｅｇＡｌｉｇｎ（登録商標）プログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ（登録商標），Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）が含まれる。別のアラインメントアルゴリズムは、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．、ＵＳＡのＧｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）パッケージとして入手可能なＦＡＳＴＡである。アラインメントのための他の技術は、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２６６巻：Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ（１９９６）、Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃに記載されている。配列内のギャップが許容されるアラインメントプログラムが特に興味深い。Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎは、配列アラインメント内にギャップが許容されるアルゴリズムの型の１つである。Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．７０： １７３～１８７（１９９７）を参照のこと。また、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈのアラインメント法を使用するＧＡＰプログラムを使用して配列をアラインメントすることもできる。Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８： ４４３～４５３（１９７０）を参照のこと。
また、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ２： ４８２～４８９）の局所相同性アルゴリズムを使用して配列同一性を決定するＢｅｓｔＦｉｔプログラムも興味深い。ギャップ生成ペナルティは、一般に１～５まで、通常は２～４までにわたり、一部の実施形態では３になる。ギャップ伸長ペナルティは、一般に約０．０１から０．２０までにわたり、一部の場合では０．１０になる。このプログラムは、比較のためにインプットされる配列によって決定されるデフォルトパラメーターを有する。プログラムによって決定されたデフォルトパラメーターを使用して配列同一性を決定することが好ましい。このプログラムは、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、ＵＳＡのＧｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）パッケージでも入手可能である。
興味深い別のプログラムはＦａｓｔＤＢアルゴリズムである。ＦａｓｔＤＢは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、１２７～１４９頁、１９８８、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃに記載されている。パーセント配列同一性はＦａｓｔＤＢによって以下のパラメーターに基づいて計算される：ミスマッチペナルティ：１．００；ギャップペナルティ（Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ）：１．００；ギャップサイズペナルティ（Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ）：０．３３；およびジョイニングペナルティ（Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ）：３０．０。
用語「類似性」は、関連する概念であるが、「同一性」とは対照的に、同一の一致および保存的置換一致の両方を含む類似性の尺度を指す。保存的置換は、ポリペプチドには当てはまり、核酸分子には当てはまらないので、類似性は、ポリペプチド配列比較のみに当てはまる。２つのポリペプチド配列が、例えば、２０個のうち１０個の同一なアミノ酸を有し、残りが全て非保存的置換である場合、パーセント同一性および類似性は、共に５０％である。同じ例において、保存的置換が存在する５つのさらなる位置が存在する場合、パーセント同一性は、５０％のままであるが、パーセント類似性は、７５％（２０個のうち１５個）である。したがって、保存的置換が存在する場合、２つのポリペプチド配列間の類似性の程度は、その２つの配列間のパーセント同一性よりも高い。
本明細書で使用する場合、用語「増加させる」、「改善する」、「減少させる」または「低減させる」は、ベースライン測定値、例えば、本明細書に記載される処置を開始する前の同じ個体における測定値、または本明細書に記載される処置の非存在下での対照個体（もしくは複数の対照個体）における測定値などと比較した値を示す。一部の実施形態では、「対照個体」は、処置される個体と同じ形態の疾患または傷害を患っている個体である。一部の実施形態では、「対照個体」は、処置される個体と同じ形態の疾患または傷害を患っていない個体である。
本明細書で使用する場合、用語「単離された分子」（分子が、例えば、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、または抗体もしくはその抗原結合性断片の場合）は、それが引き出された起源または供給源に基づいて、（１）そのネイティブ状態では付随する天然に関連する構成要素と関連していない、（２）同じ種に由来する他の分子を実質的に含まない、（３）異なる種に由来する細胞によって発現される、または（４）天然に存在しない、分子を意味する。したがって、化学的に合成される、またはそれが天然に起源とする細胞とは異なる細胞の系で発現される分子は、その天然には関連する構成要素から「単離された」ものになる。分子を、当該分野で周知の精製技術を使用して単離することにより、天然には関連する構成要素を実質的に含まないものにすることもできる。分子の純度または均一性は、当該分野で周知の多数の手段によってアッセイされ得る。例えば、ポリペプチドサンプルの純度は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、および当該分野で周知の技術を使用してゲルを染色してポリペプチドを可視化することを使用してアッセイされ得る。ある特定の目的に関しては、ＨＰＬＣまたは精製のための当該分野で周知の他の手段を使用することによって、より高い分解能が提供され得る。
本明細書で使用する場合、用語「リーダーペプチド」または「リーダー配列」または「リーダーシグナル配列」または「シグナル配列」（本明細書では互換的に使用される）は、核酸分子の５’末端および／またはポリペプチドのＮ末端もしくはその付近に存在し得、存在する場合には、細胞からのポリペプチドの分泌が含まれるがこれらに限定されない、ポリペプチドの目的地の細胞小器官への輸送を媒介し得る、任意の核酸配列、またはそれによってコードされるアミノ酸配列を意味する。かかるリーダー配列には、配列番号１のヌクレオチド１～１６を含む核酸配列が含まれるがこれらに限定されない。実施形態は、ポリペプチドの、所望の細胞小器官、例えば小胞体への輸送、および／または細胞からの分泌をもたらし得る、これらのおよび当該分野で公知のまたは同定される任意の他のリーダーシグナル（核酸およびアミノ酸配列）を包含する。一般に、シグナルペプチドは成熟ポリペプチドから除去され、および／または成熟ポリペプチドには存在しない。
本明細書で使用する場合、用語「残基」は、タンパク質内の位置およびそれの関連するアミノ酸同一性を意味する。例えば、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７とも呼ばれ、Ｎ２９７とも呼ばれる）は、ヒト抗体ＩｇＧ１内の残基である。
本明細書で使用する場合、用語「対象」は、哺乳動物、より好ましくは、ヒトを意味する。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリなど）、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットもまた含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、対象は患者である。一部の実施形態では、対象は、ＣＤ１ａのＴ細胞受容体への結合および引き続く活性化によって媒介されるまたはそれと関連する疾患、障害または状態のリスクがある。一部の実施形態では、対象は、本明細書に記載される疾患、障害または状態、例えば炎症性障害または状態を有する患者である。一部の実施形態では、対象（例えば、患者）は、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、炎症性腸疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、慢性腎疾患、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、および乾癬を有する。
本明細書で使用する場合、用語「実質的に純粋」は、目的の種が、存在する優勢な種である（即ち、モル濃度に基づいて、組成物中の任意の他の個々の種よりも豊富である）こと、および、好ましくは、実質的に精製された画分が、存在する全ての高分子種の少なくとも約５０パーセント（モル濃度に基づいて）を目的の種（例えば、抗体または受容体を含めた糖タンパク質）が構成する組成物であることを意味する。一般に、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在する全ての高分子種を約８０パーセントよりも多く、より好ましくは約８５％よりも多く、約９０％よりも多く、約９５％よりも多く、および約９９％よりも多く構成する。最も好ましくは、目的の種は必須の均一性まで精製され（従来の検出方法によって組成物中に夾雑種を検出することができない）、組成物は単一の高分子種から本質的になる。ある特定の実施形態では、実質的に純粋な材料は、少なくとも５０％純粋である（即ち、夾雑物を含まない）、より好ましくは、少なくとも９０％純粋である、より好ましくは、少なくとも９５％純粋である、さらにより好ましくは、少なくとも９８％純粋である、および最も好ましくは、少なくとも９９％純粋である。
本発明によるポリペプチドまたは抗体「断片」または「部分」は、短縮によって、例えば、ポリペプチドのＮおよび／またはＣ末端から１つ以上のアミノ酸を除去することによって作製され得る。１個、２個、３個、４個、５個、最大で１０個、最大で２０個、最大で３０個、最大で４０個またはそれよりも多くのアミノ酸を、このようにＮおよび／またはＣ末端から除去することができる。断片は、１つ以上の内部の欠失によっても生成され得る。
本明細書で使用する場合、用語「核酸配列」および「ヌクレオチド配列」は、互換的に、モノマー性ヌクレオチドで構成されるまたはモノマー性ヌクレオチドを含む任意の分子を指す。核酸は、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであり得る。ヌクレオチド配列は、ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡなど）であり得る。ヌクレオチド配列は、化学修飾されたものまたは人工的なものであり得る。ヌクレオチド配列には、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、モルフォリノおよびロックド核酸（ＬＮＡ）、ならびにグリコール核酸（ＧＮＡ）およびトレオース核酸（ＴＮＡ）が含まれる。これらの配列は各々、分子の骨格に対する変化により、天然に存在するＤＮＡまたはＲＮＡから識別される。また、ホスホロチオエートヌクレオチドが使用され得る。他のデオキシヌクレオチド類似体には、本開示のヌクレオチド配列に使用され得るメチルホスホネート、ホスホラミデート、ホスホロジチオエート、Ｎ３’－Ｐ５’－ホスホラミデート、およびオリゴリボヌクレオチド
ホスホロチオエートおよびそれらの２’－０－アリル類似体および２’－０－メチルリボヌクレオチドメチルホスホネートが含まれる。
本明細書で使用する場合、用語「核酸構築物」は、組換えＤＮＡ技術の使用の結果生じた天然に存在しない核酸分子（例えば、組換え核酸）を指す。核酸構築物は、核酸配列のセグメントを含有するように改変されており、天然に見出されない様式で組み合わされ、配置される、一本鎖または二本鎖のいずれかの核酸分子である。核酸構築物は、「ベクター」（例えば、プラスミド）、即ち、外因的に創出されたＤＮＡを宿主細胞内に送達するように設計された核酸分子である。
本明細書で使用する場合、用語「作動可能に連結された」は、ポリヌクレオチド（またはポリペプチド）エレメントの機能的関連性での連結を指す。核酸が別の核酸配列との機能的関連性に置かれている場合、その核酸は作動可能に連結されている。例えば、プロモーターまたは他の転写調節配列（例えば、エンハンサー）は、それがコード配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結されている。一部の実施形態では、作動可能に連結されたとは、連結された核酸配列が連続していることを意味する。一部の実施形態では、作動可能に連結されたとは、核酸配列が連続して連結されていることを意味するのではなく、連結されているそれらの核酸配列の間に介在配列が存在することを意味する。
本明細書で使用する場合、用語「ポリヌクレオチド」（本明細書では「核酸分子」とも呼ばれる）は、リン酸ジエステル連結によって接続されたヌクレオチドの配列を指す。ポリヌクレオチドは、本明細書では、５’から３’への方向で示されている。本開示のポリヌクレオチドは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）分子またはリボ核酸（ＲＮＡ）分子であり得、二本鎖分子、一本鎖分子、低分子（small or short）ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、低分子（small
or short）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、トランス－スプライシングＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡなどの、核酸の全形態を指す。ポリヌクレオチドがＤＮＡ分子である場合、その分子は、遺伝子、ｃＤＮＡ、アンチセンス分子または前述の分子のいずれかの断片であり得る。ヌクレオチド塩基は、本明細書では１文字コード：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、イノシン（Ｉ）およびウラシル（Ｕ）で示される。本開示のポリヌクレオチドは、当業者に周知の標準の技術を使用して調製され得る。
本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチド（核酸配列またはヌクレオチド配列）によってコードされる「ポリペプチド」、「タンパク質」および「ペプチド」という用語は、天然に存在するタンパク質と同様に全長のネイティブ配列、ならびに、部分配列、改変形態またはバリアントがネイティブ全長タンパク質の機能性をある程度保持する限りは、機能的な部分配列、改変形態または配列バリアントを指す。本開示の方法および使用では、ポリヌクレオチド配列によってコードされるかかるポリペプチド、タンパク質およびペプチドは、遺伝子治療を用いた処置を受ける対象において欠陥があるまたはその発現が不十分である、または欠損している内因性タンパク質に対して同一であり得るが、そうである必要はない。
本明細書で使用する場合、用語「予防する」または「予防」は、特定の疾患、障害または状態（例えば、ＡＤ）の少なくとも１つの徴候および／または症状（例えば、重度の掻痒症）の発症の遅延、ならびに／または頻度および／もしくは重症度の低減を指す。一部の実施形態では、予防は集団に基づいて評価され、したがって、疾患、障害または状態にかかりやすい集団において、疾患、障害または状態の１つ以上の症状の発達、頻度および／または強度の統計的に有意な減少が観察された場合、薬剤は、特定の疾患、障害または状態を「予防する」とみなされる。予防は、疾患、障害または状態の発症が予め定義された期間にわたって遅延した場合、完了したとみなされ得る。
本明細書で使用する場合、用語「組換え」は、クローニング、制限またはライゲーションステップ（例えば、その中に含まれるポリヌクレオチドまたはポリペプチドに関する）、および／または天然に見出される産物とは別個の構築物を生じさせる他の手順の、種々の組み合わせの産物であるベクター、ポリヌクレオチド、ポリペプチドまたは細胞を指す。
本明細書で使用する場合、用語「処置する」または「処置」は、特定の疾患、障害および／または状態（例えば、ＡＤ）の１つ以上の症状、特色および原因を部分的にもしくは完全に軽減する、寛解させる、緩和する、阻害する、その発症を遅延させる、その重症度を低減させる、および／またはその発生率を低減させる、治療を投与することを意味する。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果には、以下のうち１つ以上が含まれるがこれらに限定されない：湿疹面積・重症度指標（Ｅｃｚｅｍａ Ａｒｅａ ａｎｄ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ）（ＥＡＳＩ）の改善、そう痒数値評価尺度（ｐｒｕｒｉｔｕｓ ｎｕｍｅｒｉｃａｌ ｒａｔｉｎｇ ｓｃａｌｅ）（ＮＲＳ）の改善、罹患体表面積（ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｏｄｙ ｓｕｒｆａｃｅ ａｒｅａ）（ＢＳＡ）の低減、患者向け湿疹評価（Ｐａｔｉｅｎｔ－Ｏｒｉｅｎｔｅｄ Ｅｃｚｅｍａ Ｍｅａｓｕｒｅ）（ＰＯＥＭ）の改善、皮膚科学の生活の質指標（Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ Ｌｉｆｅ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ）（ＤＬＱＩ）の改善、研究者による全般評価（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ’ｓ Ｇｌｏｂａｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）（ＩＧＡ）の改善、医師による全般評価（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｇｌｏｂａｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）（ＰＧＡ）の改善、６領域６兆候アトピー性皮膚炎スコア（Ｓｉｘ Ａｒｅａ Ｓｉｘ Ｓｉｇｎ Ａｔｏｐｉｃ Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）（ＳＡＳＳＡＤ）の改善、アトピー性皮膚炎評価尺度（Ｓｃｏｒｉｎｇ Ａｔｏｐｉｃ Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）（ＳＣＯＲＡＤ）の改善、ビジュアルアナログスケール（Ｖｉｓｕａｌ Ａｎａｌｏｇｕｅ Ｓｃａｌｅ）（ＶＡＳ）の改善、皮膚炎スコア（例えば、以下の２つ以上のスコアの合計として計算され得るがこれらに限定されない：紅斑、瘢痕／乾燥状態、浮腫および皮膚びらん）の低減、総血清ＩｇＥレベルの低減、抗原特異的ＩｇＥ力価の低減、および遺伝子シグネチャーに関連するアトピー性皮膚炎の抑制の減少。一部の実施形態では、有益なまたは所望の臨床結果には、疾患による損傷の程度の減少、疾患の持続時間の減少、および／または疾患に関連する症状の数、程度、もしくは持続時間の低減が含まれる。一部の実施形態では、この用語には、疾患の症状、合併症、もしくは生化学的徴候の発症を予防するもしくは遅延させる、症状を軽減する、または疾患、状態もしくは障害のさらなる発達を停止もしくは阻害するために、本発明の化合物または薬剤を投与することが包含される。処置は、予防的なもの（疾患の発症を予防するもしくは遅延させるためまたはその臨床的もしくは無症候性の症状の顕在化を防止するため）または疾患が顕在化した後の症状の治療的抑制もしくは軽減であり得る。一部の実施形態では、この用語には、予防的投与は包含されない（即ち、この用語には、疾患の発症を予防するもしくは遅延させる、または臨床的もしくは無症候性の症状の顕在化を防止することは包含されない）。一部の実施形態では、疾患、状態または障害は、ＡＤである。
抗体
「抗体」または「Ａｂ」は、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、特異的標的または抗原（Ａｇ）、例えば、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどを認識しそれに結合することが可能な免疫グロブリン分子である。本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、所与の抗原（例えば、ＣＤ１ａ）に特異的に結合する能力を保持する、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、インタクトな抗体の抗原結合性断片（または部分）および任意の他の改変された立体配置の、抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子が含まれるがこれらに限定されない、任意の型の抗体を包含し得る。
抗体にはＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＭなどの任意のクラス（またはそのサブクラス）の抗体が含まれ、抗体は任意の特定のクラスのものである必要はない。免疫グロブリンは、その重鎖（ＨＣ）の定常領域の抗体アミノ酸配列に応じて異なるクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンには５つの主要なクラスが存在する：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ、およびこれらのうちいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分類される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常領域は、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および３次元立体配置は周知である。
抗体は、ヒト、サル、ブタ、ウマ、ウサギ、イヌ、ネコ、マウス、ラット（例えば、スプラーグドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）ラット）などが含まれるがこれらに限定されない任意の哺乳動物、または他の動物、例えば、鳥類（例えば、ニワトリ）、魚類（例えば、サメ）およびラクダ科の動物（例えば、ラマ）などに由来し得る。
用語「抗原」は、抗原を認識する抗体を産生するため、または発現ライブラリー（例えば、とりわけ、ファージ、酵母またはリボソームディスプレイライブラリー）をスクリーニングするために、免疫適格性脊椎動物の免疫化のために使用される分子実体を指す。本明細書で、抗原は、より広い用語であり、抗体によって特異的に認識される標的分子を含むこと、したがって、抗体を生じさせるための免疫化プロセスにおいて、または抗体を選択するためのライブラリースクリーニングにおいて使用される分子の断片または模倣物を含むことを一般に意図する。したがって、ＣＤ１ａに結合する本発明の抗体について、そのモノマーおよびマルチマー、例えば、ダイマー、トリマーなどを含む、哺乳動物種（例えば、ヒト、サル（カニクイザルを含む）、イヌおよびウサギ）由来の全長ＣＤ１ａ、ＣＤ１ａの短縮型および他のバリアント（例えば、細胞外ドメイン）、ならびに可溶性ＣＤ１ａおよび細胞表面に発現されるＣＤ１ａが、本明細書において抗原と呼ばれる。
抗体の「抗原結合性断片」は、抗原に（好ましくは、実質的に同じ結合親和性で）特異的に結合する能力を保持する、全長の抗体の１つ以上の断片を指す。全長の抗体の断片によって、抗体の抗原結合機能が発揮され得ることが示されている。抗体の「抗原結合性断片」という用語の範囲内に包含される結合性断片の例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）１つのＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ １９８９；３４１：５４４～５４６）；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ジスルフィド連結されたＦｖｓ（ｄｓＦｖ）、ならびに抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体および細胞内抗体が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、これらは、組換え方法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域が対になって一価分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）としても公知）を形成している単一のタンパク質鎖としてそれらが作製されるのを可能にする合成リンカーによって、接合され得る；例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８；２４２：４２３～４２６およびＨｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９８８ ＵＳＡ ８５：５８７９～５８８３を参照のこと。他の形態の単鎖抗体、例えば、ダイアボディ（diabody）もまた包含される。かかる単鎖抗体もまた抗体の「抗原結合性断片」という用語の範囲内に包含されることが意図される。ダイアボディは、ＶＨおよびＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上で発現されるが、同じ鎖上の２つのドメイン間での対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用し、それによって、これらのドメインをもう一方の鎖の相補的ドメインと対形成させ、２つの抗原結合部位を創出する、二価の二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９３；９０：６４４４～６４４８；Ｐｏｌｊａｋら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ １９９４；２：１１２１～１１２３を参照のこと）。
抗体「可変ドメイン」は、単独のまたは組み合わせた、抗体軽鎖の可変領域（ＶＬ）または抗体重鎖の可変領域（ＶＨ）を指す。当該分野で公知のように、重鎖および軽鎖の可変領域は各々、３つの「相補性決定領域」（ＣＤＲ）によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。対象可変領域のバリアント、特に、ＣＤＲ領域の外側（即ち、フレームワーク領域内）のアミノ酸残基に置換を有するものが望まれる場合、適切なアミノ酸置換、好ましくは、保存的アミノ酸置換は、対象可変領域を、対象可変領域と同じカノニカルなクラス内のＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列を含有する他の抗体の可変領域と比較することによって同定され得る（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９８７；１９６（４）：９０１～９１７）。
可変ドメイン内の残基は、典型的には、抗体のコンパイルの重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用される番号付け体系を提供するＫａｂａｔに従って番号付けされる。Ｋａｂａｔら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤを参照のこと。この番号付け体系を使用すると、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＣＤＲを短くすること、または可変ドメインのＦＲまたはＣＤＲへの挿入に対応して、より少ないまたはさらなるアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入物（Ｋａｂａｔに従って残基５２ａ）、ならびに重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔに従って残基８２ａ、８２ｂ、および８２ｃ）を含み得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、所与の抗体について、抗体の配列の相同性領域を「標準の」Ｋａｂａｔにより番号付けされた配列とアラインメントすることによって決定され得る。Ｋａｂａｔ番号付けを割り当てるための種々のアルゴリズムが入手可能である。例えば、Ａｂｙｓｉｓ（ｗｗｗ．ａｂｙｓｉｓ．ｏｒｇ）のバージョン２．３．３リリースでインプリメントされるアルゴリズムを使用して、Ｋａｂａｔ番号付けを可変領域ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３に割り当てることができ、次いで、ＡｂＭ定義をＣＤＲ－Ｈ１に対して使用することができる。
ある特定の実施形態では、ＣＤＲの最終的な線引きおよび抗体の結合性部位を含む残基の同定は、抗体の構造を解明することおよび／または抗体－リガンド複合体の構造を解明することによって実現される。ある特定の実施形態では、これは、Ｘ線結晶構造解析などの当業者に公知の様々な技術のいずれかによって実現され得る。ある特定の実施形態では、様々な解析方法を使用してＣＤＲ領域を同定または推定することができる。かかる方法の例には、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、接触定義、およびコンフォメーション定義が含まれるがこれらに限定されない。
「相補性決定領域」（ＣＤＲ）は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方の集積、ＡｂＭ、接触、Ｎｏｒｔｈおよび／もしくはコンフォメーション定義または当該分野で周知のＣＤＲ決定の任意の方法の定義に従って同定され得る。例えば、Ｋａｂａｔら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版（超可変領域）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ １９８９；３４２：８７７～８８３（構造的ループ構造）を参照のこと。特定の抗体中のＣＤＲを構成するアミノ酸残基の同一性は、当該分野で周知の方法を使用して決定され得る。ＣＤＲのＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの間の妥協であり、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ａｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標））を使用する。
ＣＤＲの「接触」定義は、ＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９６；２６２：７３２～７４５に示される、観察された抗原接触に基づく。ＣＤＲの「コンフォメーション」定義は、抗原結合にエンタルピー的に寄与する残基に基づく（例えば、Ｍａｋａｂｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２００８；２８３：１１５６～１１６６を参照のこと）。Ｎｏｒｔｈは、異なる好ましいセットのＣＤＲ定義を使用して、カノニカルなＣＤＲコンフォメーションを同定している（Ｎｏｒｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１１；４０６：２２８～２５６）。ＣＤＲの「コンフォメーション定義」と本明細書で呼ばれる別のアプローチでは、ＣＤＲの位置は、抗原結合にエンタルピー的に寄与する残基として同定され得る（Ｍａｋａｂｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００８、２８３：１１５６～１１６６）。なお他のＣＤＲ境界定義は、上記アプローチのうちの１つに厳密に従わなくてもよいが、それにもかかわらず、Ｋａｂａｔ ＣＤＲの少なくとも一部分と重複するが、これらは、特定の残基もしくは残基の群またはさらにはＣＤＲ全体であっても抗原結合に顕著には影響しないという予測または実験的知見に照らして、短縮または延長され得る。本明細書で使用する場合、ＣＤＲは、アプローチの組み合わせを含む、当該分野で公知の任意のアプローチによって定義されるＣＤＲを指し得る。本明細書で使用される方法は、これらのアプローチのいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用し得る。１つよりも多くのＣＤＲを含む任意の所与の実施形態について、ＣＤＲ（または抗体の他の残基）は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｎｏｒｔｈ、拡張型（extended）、ＡｂＭ、接触および／またはコンフォメーション定義のいずれかに従って定義され得る。
「接触残基」は、抗体またはそれが特異的に結合する抗原に関して本明細書で使用する場合、同族抗体／抗原上に存在するアミノ酸残基の重原子に対して４Å以下（例えば、３．８Å）である、少なくとも１つの重原子（即ち、水素ではない）を含む抗体／抗原上に存在するアミノ酸残基を指す。
「フレームワーク」（ＦＲ）残基は、ＣＤＲ残基以外の抗体可変ドメイン残基である。ＶＨまたはＶＬドメインフレームワークは、以下の構造：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４でＣＤＲが散在する４つのフレームワークサブ領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４を含む。
当該分野で公知のように、抗体の「定常領域」は、単独のまたは組み合わせた、抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖の定常領域を指す。
用語「Ｉｇ Ｆｃ領域」、「Ｆｃ領域」、「Ｆｃドメイン」および「Ｆｃ」は、本明細書で相互交換可能に使用される場合、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子のパパイン消化によって得られる結晶化可能な断片と相関する、Ｉｇ分子の部分を指す。本明細書で使用する場合、これらの用語は、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除外する抗体の定常領域に関し、その領域の部分にさらに関する。したがって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにこれらのドメインに対してＮ末端側の可動性ヒンジ、またはそれらの部分を指す。ＩｇＡおよびＩｇＭについて、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆｃドメインを含む。Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）に由来し得る。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、Ａｂ５７１またはＡｂ６７３）は、ＩｇＧ１抗体である。
ＩｇＧについて、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣγ２およびＣγ３（Ｃガンマ２およびＣガンマ３）ならびにＣγ１（Ｃガンマ１）とＣγ２（Ｃガンマ２）との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、残基Ｃ２２６またはＰ２３０からそのカルボキシル末端までを含むと定義され、この番号付けは、Ｅｄｅｌｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９６９；６３（１）：７８～８５のＥＵインデックスに従い、Ｋａｂａｔら、１９９１に記載される通りである。典型的には、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインのアミノ酸残基約２３６～約４４７を含む。例示的なヒト野生型ＩｇＧ１ Ｆｃドメインアミノ酸配列は、配列番号８６に示される（任意選択の末端リジン（Ｋ）残基およびエフェクター変異を含む）。Ｆｃポリペプチドは、単離状態にあるこの領域、または抗体もしくはその抗原結合性断片、またはＦｃ融合タンパク質と関連したこの領域を指し得る。
重鎖定常ドメインは、Ｆｃ領域を含み、ＩｇＧ重鎖のＣＨ１ドメインおよびヒンジならびにＣＨ２およびＣＨ３（ならびに、任意選択により、ＩｇＡおよびＩｇＥのＣＨ４）ドメインをさらに含む。
本明細書で使用する場合、「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載する。一部の実施形態では、ＦｃγＲは、ネイティブヒトＦｃＲである。一部の実施形態では、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体が含まれ、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的スプライシングを受けた形態が含まれるものである。ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）が含まれ、これらは、主にその細胞質ドメインが異なる、類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン内に免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメイン内に免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（例えば、Ｄａｅｒｏｎ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９７；１５：２０３～２３４を参照のこと）。ＦｃＲは、例えば、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９１；９：４５７～９２；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ １９９４；４：２５～３４；およびｄｅ Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１９９５；１２６：３３０～４１に総説されている。今後同定されるものを含めた他のＦｃＲも本明細書の用語「ＦｃＲ」に包含される。
用語「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」にはまた、母系ＩｇＧの胎児への移行（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９７６；１１７：５８７およびＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４；２４：２４９）および免疫グロブリンの恒常性の調節を担う胎児性受容体ＦｃＲｎも含まれる。ＦｃＲｎへの結合を測定する方法は公知である（例えば、ＧｈｅｔｉｅおよびＷａｒｄ．、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １９９７；１８（１２）：５９２～５９８；Ｇｈｅｔｉｅら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１９９７；１５（７）：６３７～６４０；Ｈｉｎｔｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００４；２７９（８）：６２１３～６２１６；ＷＯ２００４／９２２１９を参照のこと）。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体が重鎖ポリペプチド上にＣ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を含む（例えば、ヒトＩｇＧ１重鎖は末端リジンを含む）場合、リジン残基を切り取り、それにより、Ｃ末端リジン残基を欠く重鎖を有する抗体を生じさせることができることが、当業者によって理解される。さらに、抗体重鎖は、リジンをコードしない核酸を使用して作出され得る。したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体は、そうでなければ存在する末端リジンが存在しない重鎖を含む。したがって、本開示は、Ｃ末端リジン残基を欠く重鎖を有する抗ＣＤ１ａ抗体を含む組成物を包含する。一部の実施形態では、本開示は、Ｃ末端リジン残基を有する重鎖を有する抗ＣＤ１ａ抗体およびＣ末端リジン残基を欠く重鎖を有する抗ＣＤ１ａ抗体を含む組成物を包含する。一部の実施形態では、本開示は、Ｃ末端リジン残基を欠く抗ＣＤ１ａ抗体を含む組成物を包含する。
「Ｆｃ融合」タンパク質は、１つ以上のポリペプチドがＦｃポリペプチドに作動可能に連結されたタンパク質である。Ｆｃ融合は、免疫グロブリンのＦｃ領域を融合パートナーと組み合わせる。
「ネイティブ配列Ｆｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列に対して同一なアミノ酸配列を含む。「バリアントＦｃ領域」は、ネイティブ配列Ｆｃ領域のものと少なくとも１つのアミノ酸の改変によって異なるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域のエフェクター機能を少なくとも１つ保持する。一部の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域のいかなるエフェクター機能も保持しない。好ましくは、バリアントＦｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸の置換、例えば、ネイティブ配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域における約１個から約１０個までのアミノ酸の置換、好ましくは、約１個から約５個までのアミノ酸の置換を有する。本明細書のバリアントＦｃ領域は、好ましくはネイティブ配列Ｆｃ領域および／または親ポリペプチドのＦｃ領域に対して少なくとも約８０％の配列同一性、最も好ましくは、それらに対して少なくとも約９０％の配列同一性、より好ましくは、それらに対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の配列同一性を有することになる。
「エピトープ」は、当該分野で周知の任意の方法によって、例えば、従来のイムノアッセイによってまたは本開示の実施例４に記載されるように決定される、抗体が特異的に結合する抗原のエリアまたは領域、例えば、抗体と相互作用する残基を含むエリアまたは領域を指す。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９の第１１章に記載されるように、抗体－抗原複合体の結晶構造の解明、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ、および合成ペプチドに基づくアッセイが含まれる、タンパク質上のエピトープの位置をマッピングするためおよび特徴付けるための当該分野で公知の方法が多く存在する。さらなる例では、エピトープマッピングを使用して、抗ＣＤ１ａ抗体が結合する配列を決定することができる。エピトープマッピングは種々の供給源、例えば、Ｐｅｐｓｃａｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｅｄｅｌｈｅｒｔｗｅｇ １５、８２１９ ＰＨ Ｌｅｌｙｓｔａｄ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から市販されている。あるいは、発見プロセスの間に、抗体の生成および特徴付けにより、望ましいエピトープに関する情報を解明することができる。次いで、この情報から、抗体を同じエピトープへの結合について競合的にスクリーニングすることができる。これを達成するための手法は、競合および交差競合試験を行って、ＣＤ１ａへの結合について互いに競合するまたは交差競合する抗体、例えば、抗原への結合について競合する抗体を見つけることである。
さらに、抗ＣＤ１ａ抗体が結合するエピトープは、系統的なスクリーニングにおいて、ＣＤ１ａ（例えば、ヒトＣＤ１ａ配列）に由来する重複するペプチドを使用し、抗体の結合を決定することによって決定され得る。遺伝子断片発現アッセイに従って、ＣＤ１ａをコードするオープンリーディングフレームを無作為にまたは特定の遺伝子構築物によって断片化することができ、ＣＤ１ａの発現された断片の試験される抗体との反応性を決定する。遺伝子断片を、例えばＰＣＲによって作出し、次いで、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、放射性アミノ酸の存在下で転写し、タンパク質に翻訳することができる。次いで、抗体の、放射標識したＣＤ１ａ断片への結合を免疫沈降およびゲル電気泳動によって決定する。
また、ある特定のエピトープを、ファージ粒子（ファージライブラリー）または酵母（酵母ディスプレイ）の表面上にディスプレイされた無作為なペプチド配列の大きなライブラリーを使用して同定することもできる。あるいは、重複するペプチド断片の定義されたライブラリーを試験抗体への結合について単純な結合アッセイで試験することができる。さらなる例では、抗原の変異誘発、ドメインスワッピング実験およびアラニンスキャニング変異誘発を実施して、エピトープ結合のために要求される、十分である、および／または必要である残基を同定することができる。
その最も詳細なレベルでは、抗原と抗体との間の相互作用のためのエピトープは、抗原－抗体相互作用中に存在する原子接触を定義する空間座標、ならびに結合熱力学へのそれらの相対的寄与についての情報によって、定義され得る。あまり詳細でないレベルでは、エピトープは、抗原と抗体との間の原子接触を定義する空間座標によって特徴付けられ得る。さらにあまり詳細でないレベルでは、エピトープは、具体的な基準によって、例えば、抗体および抗原中の原子（例えば、重原子、即ち、非水素原子）間の距離によって定義される、それが含むアミノ酸残基によって特徴付けられ得る。さらにあまり詳細でないレベルでは、エピトープは、機能を介して、例えば、他の抗体との競合結合によって、特徴付けられ得る。エピトープはまた、別のアミノ酸による置換（例えば、アラニンスキャニングを使用する）が抗体と抗原との間の相互作用の特徴を変更するアミノ酸残基を含むものとして、より一般に定義され得る。
使用されるエピトープマッピング法に依存するエピトープの説明および定義が、異なるレベルの詳細さで得られるという事実から、同じ抗原上の、異なる抗体に対するエピトープの比較は、異なるレベルの詳細さで同様に実施することができるということになる。
アミノ酸レベルで記載される、例えば、Ｘ線結晶構造解析、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、水素／重水素交換質量分析（Ｈ／Ｄ－ＭＳ）によって決定されるエピトープは、それらが同じアミノ酸残基のセットを含有する場合、同一であると言える。エピトープは、少なくとも１つのアミノ酸がそれらのエピトープによって共有される場合、重複すると言われる。エピトープは、アミノ酸残基がそれらのエピトープによって共有されない場合、別々（独自）であると言われる。
抗ＣＤ１ａ抗体を特徴付けるために使用することができるさらに別の方法は、同じ抗原に結合することが分かっている他の抗体を用いた競合アッセイ（例えば、本開示の実施例１２に記載されるように）を使用して、抗ＣＤ１ａ抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定することである。競合アッセイは当業者には周知である。競合結合によって特徴付けられるエピトープは、対応する抗体の結合が相互に排他的である場合、即ち、１つの抗体の結合が、他の抗体の同時のまたは連続的な結合を排除する場合、重複していると言われる。エピトープは、抗原が、両方の対応する抗体の結合を同時に受け入れることが可能である場合、別々（独自）であると言われる。
エピトープは、線状またはコンフォメーションであり得る。線状エピトープでは、タンパク質と、相互作用する分子（例えば、抗体など）との間の相互作用点は全て、タンパク質の一次アミノ酸配列に沿って線状に存在する。「非線状エピトープ」または「コンフォメーションエピトープ」は、エピトープに特異的な抗体が結合する抗原性タンパク質内の連続していないポリペプチド（またはアミノ酸）を含む。
抗体の結合親和性は、特定の抗原－抗体相互作用の解離速度を指すＫＤ値として表され得る。ＫＤは、「オフレート（ｋｏｆｆ）」とも呼ばれる解離の速度の、会合速度または「オンレート（ｋｏｎ）」に対する比である。したがって、ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎと等しく、モル濃度（Ｍ）として表され、ＫＤが小さいほど、結合の親和性はより強い。抗体についてのＫＤ値は、当該分野で十分に確立された方法を使用して決定され得る。ＫＤを測定するための１つの例示的な方法は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを典型的には使用する、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。ＢＩＡｃｏｒｅ動態分析は、それらの表面上に固定化された分子（例えば、エピトープ結合ドメインを含む分子）を有するチップからの、抗原の結合および解離を分析することを含む。抗体のＫＤを決定するための別の方法は、Ｂｉｏ－Ｌａｙｅｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙを使用すること、典型的には、ＯＣＴＥＴテクノロジー（Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ ｓｙｓｔｅｍ、ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用することによる。あるいは、またはさらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ、ＩＤ）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ）アッセイもまた使用され得る。
エピトープに「優先的に結合する」または「特異的に結合する」（本明細書で相互交換可能に使用される）抗体は、当該分野で十分に理解された用語であり、かかる特異的または優先的結合を決定するための方法もまた、当該分野で周知である。分子（例えば、タンパク質、核酸、抗体など）は、それが代替的な細胞または物質と反応または会合するよりも、特定の細胞または物質と、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／またはより高い親和性で反応または会合する場合、「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言われる。抗体が他の物質に結合する場合よりも、より高い親和性、結合力で、より容易に、および／またはより長い持続時間で結合する場合、抗体は、標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば、ＣＤ１ａエピトープに特異的にまたは優先的に結合する抗体は、それがＣＤ１ｂおよび／またはＣＤ１ｃエピトープを含む他のＣＤ１ａエピトープまたは非ＣＤ１ａエピトープに結合する場合よりも、より高い親和性、結合力で、より容易に、および／またはより長い持続時間で特定のＣＤ１ａエピトープに結合する抗体である。したがって、指定されたアッセイ条件下で、特定された結合部分（例えば、抗体もしくはその抗原結合性断片または受容体もしくはそのリガンド結合性断片）は、特定の標的分子に優先的に結合し、試験サンプル中に存在する他の構成要素には、顕著な量では結合しない。一般に、必ずではないが、結合に対する言及は、優先的結合を意味する。
種々のアッセイフォーマットが、目的の分子に特異的に結合する抗体またはペプチドを選択するために使用され得る。抗原と特異的に反応する抗体、または、同族リガンドもしくは結合パートナーに特異的に結合する受容体もしくはそのリガンド結合性断片を同定するために使用され得る多くのアッセイの中では、例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイ（競合結合ＥＬＩＡが含まれる）、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）イムノアッセイ（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）、免疫沈降、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、Ｏｃｔｅｔ（商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ）およびウエスタンブロット分析である。典型的には、特異的または選択的反応は、背景シグナルまたはノイズの少なくとも２倍であり、より典型的には、背景の１０倍を超える、背景の５０を超える、背景の１０００倍を超える、またはそれを超える。抗体は、平衡解離定数（ＫＤ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭまたは≦１００ｐＭである場合、抗原に「特異的に結合する」と言われる。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体は、＜２５０ｐＭ（例えば、１８１．３８＋／－１１．９２ｐＭ）のＫＤでＣＤ１ａ（例えば、ヒトＣＤ１ａ）に結合する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体は、＜１００ｐＭ（例えば、６０．３５＋／－１１．０４ｐＭ）のＫＤでＣＤ１ａ（例えば、カニクイザルＣＤ１ａ）に結合する。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体は、約２５０ｐＭ、２４５ｐＭ、２４０ｐＭ、２３５ｐＭ、２３０ｐＭ、２２５ｐＭ、２２０ｐＭ、２１５ｐＭ、２１０ｐＭ、２０５ｐＭ、２００ｐＭ、１９５ｐＭ、１９０ｐＭ、１８５ｐＭ、１８０ｐＭ、１７５ｐＭ、１７０ｐＭ、１６５ｐＭ、１６０ｐＭ、１５５ｐＭ、１５０ｐＭ、１４０ｐＭ、１３０ｐＭ、１２０ｐＭ、１１０ｐＭおよび１００ｐＭからなる群から選択されるＫＤでヒトＣＤ１ａに結合する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体は、約３．８７ｎＭ、０．６２ｎＭ、０．７７ｎＭ、０．５３ｎＭ、０．２８ｎＭ、０．２７ｎＭ、０．１７ｎＭおよび０．１ｎＭからなる群から選択されるＫＤでヒトＣＤ１ａに結合する。
用語「競合する」は、抗体に関して本明細書で使用する場合、抗原への第１の抗体またはその抗原結合性断片の結合が、第２の抗体またはその抗原結合性断片による同じ抗原の引き続く結合を低減させることを意味する。代替的に、抗原への第２の抗体の結合もまた第１の抗体の存在下で検出可能に減少する場合もあり得るが、そうである必要はない。即ち、第１の抗体は抗原への第２の抗体の結合を阻害し得、その第２の抗体によるそのそれぞれのエピトープへの第１の抗体の結合の阻害は伴わない。しかし、各抗体が他の抗体とその同族エピトープまたはリガンドとの結合を、程度が同じであるかより大きいかより小さいかにかかわらず検出可能に阻害する場合、抗体は、それらのそれぞれのエピトープの結合について互いに「交差競合する」と言える。競合および交差競合抗体のどちらも本発明に包含される。かかる競合または交差競合が起こる機構（例えば、立体障害、コンフォメーション変化、または共通のエピトープもしくはその断片への結合）にかかわらず、本明細書で提供される教示に基づいて、かかる競合および／または交差競合抗体が本明細書に開示される方法に包含され、有用であり得ることが、当業者によって理解される。
標準的な競合アッセイが、２つの抗体が互いに競合するかどうかを決定するために使用され得る。抗体競合についての１つの適切なアッセイには、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）テクノロジーを使用して、典型的には、バイオセンサーシステム（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥシステム）を使用して相互作用の程度を測定することができる、Ｂｉａｃｏｒｅテクノロジーの使用が関与する。例えば、ＳＰＲは、第２の抗体の結合を阻害する１つの抗体の能力を決定するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏ競合的結合阻害アッセイにおいて使用され得る。抗体競合を測定するための別のアッセイは、ＥＬＩＳＡベースのアプローチを使用する。
さらに、それらの競合に基づいて抗体を「ビニング」するためのハイスループットプロセスが、国際特許出願公開ＷＯ２００３／４８７３１に記載されている。競合は、１つの抗体（または断片）がＣＤ１ａへの別の抗体（または断片）の結合を低減させる場合に存在する。例えば、逐次的な結合競合アッセイが使用され得、異なる抗体は逐次的に添加される。第１の抗体は、飽和に近い結合に到達するまで添加され得る。次いで、第２の抗体が添加される。ＣＤ１ａへの第２の抗体の結合が検出されない場合、または第１の抗体の非存在下での並行アッセイ（その値が１００％と設定され得る）と比較して、顕著に低減される（例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％または少なくとも約９０％の低減）場合、これら２つの抗体は、互いに競合するとみなされる。
用語「パラトープ」の定義は、上記の「エピトープ」の定義から視点を逆転させることによって引き出される。したがって、用語「パラトープ」は、抗原に特異的に結合する、抗体のエリアまたは領域、即ち、抗原（ＣＤ１ａまたはその断片）と接触する抗体のアミノ酸残基を指し、「接触」は本明細書の他の場所で定義されている通りである。所与の抗体／抗原対のパラトープは、常套的な方法によって同定され得る。例えば、抗体と標的分子を組み合わせることができ、抗体／抗原複合体を結晶化することができる。複合体の結晶構造を決定し、抗体とその標的との間の相互作用の特定の部位を同定するために使用することができる。
一部の実施形態では、抗体は、「バリアント抗体」である。バリアント抗体は、本明細書、特に表９に開示される特定の配列および断片からの、１、２、３、４、５、最大で１０、最大で２０、最大で３０またはそれよりも多くのアミノ酸置換および／または欠失および／または挿入を含み得る。「欠失」バリアントは、個々のアミノ酸の欠失、アミノ酸の小さい群、例えば、１、２、３、４もしくは５アミノ酸の欠失、またはより大きいアミノ酸領域の欠失、例えば、特定のアミノ酸ドメインもしくは他の特色の欠失を含み得る。「挿入」バリアントは、個々のアミノ酸の挿入、アミノ酸の小さい群、例えば、１、２、３、４もしくは５アミノ酸の挿入、またはより大きいアミノ酸領域の挿入、例えば、特定のアミノ酸ドメインもしくは他の特色の挿入を含み得る。「置換」バリアントには、好ましくは、１つ以上のアミノ酸の、同じ数のアミノ酸による置き換え、および保存的アミノ酸置換を行うことが関与する。例えば、アミノ酸は、類似の特性を有する代替的アミノ酸、例えば、別の塩基性アミノ酸、別の酸性アミノ酸、別の中性アミノ酸、別の荷電アミノ酸、別の親水性アミノ酸、別の疎水性アミノ酸、別の極性アミノ酸、別の芳香族アミノ酸または別の脂肪族アミノ酸で置換され得る。
置換バリアントは、抗体分子中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、その場所に異なる残基が挿入されている。置換変異誘発のために最も目的とされる部位には、超可変領域が含まれるが、フレームワーク変更もまた企図される。保存的置換は、表１６中に示される。かかる置換が生物学的活性における変化を生じる場合、以下に示される「例示的な置換」と称される、またはアミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載される、より実質的な変化が導入され得、産物がスクリーニングされ得る。
Figure 2023545075000001
抗体の生物学的特性における実質的な改変は、（ａ）例えば、ベータ－シートもしくはらせんコンフォメーションとしての、置換のエリアにおけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩、を維持することに対するそれらの効果が顕著に異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて、以下の群へと分けられる：
非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
電荷なし極性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
酸性（負に荷電）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
塩基性（正に荷電）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ。
非保存的置換は、これらのクラスのうち１つのメンバーを、別のクラスと交換することによって行われる。
例えば、行われ得る１つの型の置換は、抗体中の化学的に反応性であり得る１つ以上のシステインを、別の残基、例えば、限定なしに、アラニンまたはセリンに変化させることである。例えば、非カノニカルなシステインの置換が存在し得る。置換は、抗体の可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域中、または定常領域中で行われ得る。一部の実施形態では、システインは、カノニカルである。抗体の適切なコンフォメーションを維持することに関与しない任意のシステイン残基もまた、分子の酸化安定性を改善するためおよび異常な架橋結合を防止するために、一般にはセリンで置換され得る。逆に、システイン結合は、特に、抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合、その安定性を改善するために抗体に付加され得る。
「生殖系列化（germlining）」として公知のプロセスでは、ＶＨおよびＶＬ配列中の特定のアミノ酸が、生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列中に天然に見出されるアミノ酸と一致するように変異され得る。特に、ＶＨおよびＶＬ配列中のフレームワーク領域のアミノ酸配列は、抗体が投与された場合の免疫原性のリスクを低減させるために、生殖系列配列と一致するように変異され得る。本明細書で使用する場合、用語「生殖系列」は、それらが生殖細胞を介して親から子孫に受け継がれるときの、抗体遺伝子および遺伝子セグメントのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を指す。この生殖系列配列は、Ｂ細胞成熟化の過程の間の組換えおよび超変異事象によって変更された、成熟Ｂ細胞中の抗体をコードするヌクレオチド配列から識別される。特定の生殖系列を「利用する」抗体は、その生殖系列ヌクレオチド配列またはそれが特定するアミノ酸配列と最も密接にアラインするヌクレオチドまたはアミノ酸配列を有する。かかる抗体は、生殖系列配列と比較して、頻繁に変異される。ヒトＶＨおよびＶＬ遺伝子についての生殖系列ＤＮＡ配列は、当該分野で公知である（例えば、「Ｖｂａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベースを参照のこと；Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９２；２２７：７７６～７９８；およびＣｏｘら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４；２４：８２７～８３６もまた参照のこと）。
ＣＤ１ａに対する抗体
一部の実施形態では、本開示は、分化抗原群１ａ（ＣＤ１ａ）に結合する抗体およびその抗原結合性断片を提供する。このタンパク質は、主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）タンパク質に構造的に関連し、ベータ２－ミクログロブリンとヘテロ二量体を形成する膜貫通糖タンパク質のＣＤ１ファミリーのメンバーである。ＣＤ１タンパク質は、主に自己または微生物起源の脂質および糖脂質抗原のＴ細胞への提示を媒介する。ヒトゲノムは、１番染色体上のクラスターに組織化される５種のＣＤ１ファミリー遺伝子を含有する。ＣＤ１ファミリーメンバーは、細胞局在および特定の脂質リガンドに対する特異性が異なると考えられている。ＣＤ１ａ遺伝子によってコードされるタンパク質は、原形質膜および初期エンドサトーシス系の再利用されている小胞に局在化する。
本明細書で使用する場合、用語「ＣＤ１ａ」には、ヒトＣＤ１ａのバリアント、アイソフォーム、ホモログ、オルソログおよびパラログが含まれる。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト以外の種からのＣＤ１ａ、例えば、カニクイザルのＣＤ１ａ、ならびに異なる形態のＣＤ１ａと交差反応する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａに対して完全に特異的であり得、種交差反応性を示さなくてもよく（例えば、サルＣＤ１ａには結合しない）、他の型の交差反応性を示さなくてもよい（例えば、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃおよび／もしくはＣＤ１ｄには結合しない）。本明細書で使用する場合、用語ＣＤ１ａは、文脈上他のように定められない限り、天然に存在するヒトＣＤ１ａを指す。したがって、「ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片」、「抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片」または他の類似の指定は、ＣＤ１ａ、そのアイソフォーム、断片または誘導体と特異的におよび／または優先的に会合、結合または反応する任意の抗体またはその抗原結合性断片（本明細書で定義される）を意味する。ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０６１２６（アミノ酸１７～３２７）によって示される全長成熟形態のヒトＣＤ１ａは、本明細書で配列番号１として提供される。
ＣＤ１糖タンパク質は、主に、脂質アンカリングが異なる３つの群に分類することができる：群１のＣＤ１分子にはＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂおよびＣＤ１ｃが含まれ、これらは、抗原提示のために特殊化された細胞において発現される。群２のＣＤ１分子にはＣＤ１ｄが含まれ、これは、より広範な種類の細胞において発現される。群３のＣＤ１にはＣＤ１ｅが含まれる（Ｚａｊｏｎｃ ＤＭ、Ｗｉｌｓｏｎ ＩＡ（２００７）．「Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ ｏｆ ＣＤ１ ｐｒｏｔｅｉｎｓ」．Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．３１４：２７～５０；Ｓｋｏｌｄ Ｍ、Ｂｅｈａｒ ＳＭ（２００５）。「Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｇｒｏｕｐ １およびｇｒｏｕｐ ２ ＣＤ１－ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ」．Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．７（３）：５４４～５１）。群１のＣＤ１分子は、主に、脂質抗原を、広範囲の微生物脂質抗原に対する適応免疫を媒介するクローン的に多様なＴ細胞に対して提示する。対照的に、ＣＤ１ｄ（群２）分子は、脂質抗原をナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞に提示する。ＮＫＴ細胞のサブセットであるインバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）細胞は、インバリアントＴ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖を発現し、抗原認識後に迅速に一斉に応答し、自然免疫の強力なエフェクターである。
ＣＤ１タンパク質は、β２－ミクログロブリン（β２ｍ）と非共有結合により関連している３つの細胞外ドメインを有する重鎖で構成される。ＭＨＣクラスＩ分子と同様に、ＣＤ１重鎖は、β－プリーツシートの上に位置する２つの逆平行α－らせん構造内に含有される抗原結合性領域を形成するα１ドメインとα２ドメインとからなる。α１およびα２抗原結合性領域は、膜貫通セグメントによって膜に付着しており、短い細胞質尾部が続く免疫グロブリン様α３ドメインに連結されている。群１のＣＤ１アイソフォームは、構造的に多様な抗原結合溝を有し、それにより、全く異なる脂質クラスに結合することが可能である。
ＣＤ１ａ分子は、皮膚に存在する樹状細胞、またはランゲルハンス細胞において高度に発現される（Ｗｏｌｌｅｎｂｅｒｇ Ａ、Ｋｒａｆｔ Ｓ、Ｈａｎａｕ Ｄ，Ｂｉｅｂｅｒ Ｔ．Ｉｍｍｕｎｏｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ａ ｎｏｖｅｌ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｃｅｌｌ（ＩＤＥＣ）ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｌｅｓｉｏｎａｌ ｓｋｉｎ ｏｆ ａｔｏｐｉｃ ｅｃｚｅｍａ．Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ（１９９６）１０６（３）：４４６～５３）。ＣＤ１ｂは、遊走リンパ液樹状細胞および骨髄系由来樹状細胞のサブセットにおいて最も高度に発現される（Ｏｌｉｖｉｅｒ Ｍ、Ｆｏｒｅｔ Ｂ、Ｌｅ Ｖｅｒｎ Ｙ、Ｋｅｒｂｏｅｕｆ Ｄ、Ｇｕｉｌｌｏｔｅａｕ ＬＡ．Ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ｏｆ ｍｉｇｒａｔｉｎｇ ＣＤ１ｂ＋ ａｎｄ ＣＤ１ｂ－ ｌｙｍｐｈ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈ１，Ｔｈ２ ａｎｄ Ｔｈ１７ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ａｎｄ ｈｅｌｍｉｎｔｈ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ（２０１３）８（１１）：ｅ７９５３７）。ＣＤ１ｃは、最も遍在的に発現される群１のＣＤ１分子であり、定常状態下の単球由来ＤＣ、Ｂ細胞、およびランゲルハンス細胞において見い出される（Ｓｕｇｉｔａ Ｍ、ｖａｎ Ｄｅｒ Ｗｅｌ Ｎ、Ｒｏｇｅｒｓ ＲＡ、Ｐｅｔｅｒｓ ＰＪ、Ｂｒｅｎｎｅｒ ＭＢ．ＣＤ１ｃ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｂｒｏａｄｌｙ ｓｕｒｖｅｙ ｔｈｅ ｅｎｄｏｃｙｔｉｃ ｓｙｓｔｅｍ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ（２０００）９７（１５）：８４４５～５０；Ｍｉｌｎｅ Ｐ、Ｂｉｇｌｅｙ Ｖ、Ｇｕｎａｗａｎ Ｍ、Ｈａｎｉｆｆａ Ｍ、Ｃｏｌｌｉｎ Ｍ．ＣＤ１ｃ＋ ｂｌｏｏｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｈａｖｅ Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ ｃｅｌｌ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ｂｌｏｏｄ（２０１５）１２５（３）：４７０～３）。ＣＤ１ｅは、ＡＰＣの表面上に発現されない唯一のＣＤ１アイソフォームである（Ａｎｇｅｎｉｅｕｘ Ｃ、Ｓａｌａｍｅｒｏ Ｊ、Ｆｒｉｃｋｅｒ Ｄ、Ｃａｚｅｎａｖｅ ＪＰ、Ｇｏｕｄ Ｂ、Ｈａｎａｕ Ｄら、Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ１ｅ、ｔｈｉｒｄ ｔｙｐｅ ｏｆ ＣＤ１ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ（２０００）２７５（４８）：３７７５７～６４）。
好ましくは、本開示の抗体およびその抗原結合性断片は、ＣＤ１ａに結合するが、他のＣＤ１分子（例えば、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１３および／もしくはＣＤ１ｅ）には結合しない、またはより低い親和性で結合する。一部の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤ１ａに特異的に結合し、より好ましくは、ヒトおよび／またはカニクイザルＣＤ１ａに特異的に結合する。本開示は、かかる抗体およびその抗原結合性断片を含む組成物、ならびに、治療的および医薬としての使用を含む、かかる抗体の使用もまた提供する。
本開示の抗体およびその抗原結合性断片は、ＣＤ１ａに特異的に結合し、ＣＤ１ａの、これに限定されないがＢＫ６などのＴ細胞受容体への結合、およびそれらの引き続く活性化を阻害する潜在力を有する。いずれの特定の理論に束縛されることも望まないが、ヒトＣＤ１ａトランスジェニックマウスを使用した最近の研究により、ＣＤ１ａが、接触皮膚炎、乾癬、およびＡＤなどの炎症性皮膚疾患の重要な駆動因子である可能性があることが示唆された（Ｋｉｍ ＪＨ、Ｙｏｎｇｑｉｎｇ Ｔ、Ｋｉｍ Ｊら、ＣＤ１ａ Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ ｃｅｌｌｓ ｃｏｎｔｒｏｌｌｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｋｉｎ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１６；１７（１０）：１１５９～６６）。ＣＤ１ａに結合し、引き続くＴ細胞活性化を阻害する抗体およびその抗原結合性断片は、ＡＤ、接触皮膚炎および乾癬などの疾患に付随する皮膚炎症を低減させるという仮説が立てられる。
したがって、一部の実施形態では、ＣＤ１ａに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１ａは、ヒト、カニクイザル、イヌおよび／またはウサギＣＤ１ａである。一部の実施形態では、ＣＤ１ａ上のエピトープに結合する抗体またはその抗原結合性断片が提供される。エピトープは、配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ８２および／またはＨｉｓ１７０を含む。一部の実施形態では、エピトープは、配列番号１の番号付けに従って、Ｉｌｅ９２および／またはＡｒｇ９３をさらに含む。一部の実施形態では、エピトープは、以下の残基のうち少なくとも１つまたは複数を含む：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ８２、Ｈｉｓ１７０、Ａｒｇ９３、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ａｓｐ１７３、およびＡｓｎ１７７。一部の実施形態では、エピトープは、以下の残基のうち少なくとも１つまたは複数を含む：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ８２、Ｈｉｓ１７０、Ａｒｇ９３、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ａｓｐ１７３、Ａｓｎ１７７、Ｌｅｕ８６、Ａｓｎ１４６、Ａｓｎ１６８、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｐ１８１、およびＡｒｇ１８５。一部の実施形態では、エピトープは、以下の残基のうち少なくとも１つまたは複数を含む：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｇｌｕ７９、Ｌｙｓ８１、Ｇｌｕ８２、Ｌｅｕ８３、Ｇｌｕ８４、Ｔｈｒ８５、Ｌｅｕ８６、Ａｒｇ８８、Ｉｌｅ８９、Ｉｌｅ９２、Ａｒｇ９３、Ａｓｎ１４６、Ｇｌｎ１６７、Ａｓｎ１６８、Ｇｌｎ１６９、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｎ１７７、Ｌｅｕ１７８、Ｓｅｒ１８０、Ａｓｐ１８１、Ｔｈｒ１８２およびＡｒｇ１８５。一部の実施形態では、エピトープは、配列番号１の番号付けに従って、Ａｓｎ１４６および／またはＡｓｎ１６８を含まない。
「中和」または「遮断」抗体は、Ｅ－セレクチンへのその結合が、（ｉ）ＣＤ１ａもしくはＣＤ１ａ断片とＴ細胞受容体、例えばＢＫ６との間の相互作用を妨害、制限もしくは阻害する；および／または（ｉｉ）ＣＤ１ａの少なくとも１つの生物学的機能の低下または阻害を生じる、抗体を指す。本開示の抗体による中和を決定するためのアッセイは、本明細書の他の場所に記載されおり、当該分野で周知である。
ＣＤ１ａの「生物学的機能」または「生物学的活性」は、（ａ）ＣＤ１ａのＴ細胞受容体への結合；（ｂ）ＣＤ１ａにより媒介されるＴ細胞への脂質提示および引き続くＴ細胞の活性化；（ｃ）ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現；（ｄ）ＣＤ１ａ依存性ＩＬ－２産生；（ｅ）ＣＤ１ａ依存性血清ＩｇＥレベル増加；（ｆ）ＣＤ１ａ依存性抗原特異的ＩｇＥ抗体増加；（ｇ）ＣＤ１ａ依存性アトピー性皮膚炎関連遺伝子（例えば、これらに限定されないが、ＴＳＬＰ、ＦＬＧ、ＩＬ－３３、ＣＣＬ－２６、ＩＬ－２３ｐ４０、ＣＣＬ－２０、および／またはＣＣＬ－２０）発現レベル増加を含む意味である。
したがって、本開示は、中和または遮断抗体またはその抗原結合性断片を含む。即ち、実施形態は、（ｉ）ＣＤ１ａに特異的に結合し、ＣＤ１ａもしくはＣＤ１ａ断片とＢＫ６などのＴ細胞受容体の相互作用に干渉する、それを限定する、もしくは阻害する；および／または（ｉｉ）例えば、これらに限定されないが、（ａ）ＣＤ１ａのＴ細胞受容体への結合；（ｂ）ＣＤ１ａにより媒介されるＴ細胞への脂質提示および引き続くＴ細胞の活性化；（ｃ）ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現；（ｄ）ＣＤ１ａ依存性ＩＬ－２産生；（ｅ）ＣＤ１ａ依存性血清ＩｇＥレベル増加；（ｆ）ＣＤ１ａ依存性ＣＤ１ａ依存性抗原特異的ＩｇＥ抗体増加；（ｇ）ＣＤ１ａ依存性アトピー性皮膚炎関連遺伝子（例えば、これらに限定されないが、ＴＳＬＰ、ＦＬＧ、ＩＬ－３３、ＣＣＬ－２６、ＩＬ－２３ｐ４０、ＣＣＬ－２０、および／またはＣＣＬ－２０）発現レベル増加などの、ＣＤ１ａの少なくとも１つの生物学的機能の低減もしくは阻害をもたらす、単離された抗体またはその抗原結合性断片を含む。
ＣＤ１ａの生物学的活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞活性化アッセイにおいて、ＣＤ１ａまたはＣＤ１ａを発現する細胞およびＴ細胞受容体（例えば、Ｔ細胞受容体対立遺伝子ＢＫ６を発現するＪｕｒｋａｔ ７６細胞）を使用して評価され得る。ＣＤ１ａの結合はまた、可溶性または細胞表面に発現されるタンパク質を使用し、当該分野で公知であり、本開示の実施例の節に示される生理的流動アッセイで評価され得る。ＣＤ１ａ結合を防止する中和抗体の能力は、漸増濃度の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片の非存在下または存在下で、ＣＤ１ａ（例えば、ヒト、カニクイザル）を発現する細胞を細胞表面に発現されるＴ細胞受容体（例えば、ＢＫ６を発現するＪ７６細胞上）と共にインキュベートすることによっても評価され得る。
本開示の抗ＣＤ１ａ抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体断片（例えば、ドメイン抗体）を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、ならびに、抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、および共有結合により改変された抗体を含む、任意の他の改変された立体配置の、要求される特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子を包含し得る。抗体は、マウス、ラット、ヒト、または任意の他の起源もの（キメラまたはヒト化抗体を含む）であり得る。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体はモノクローナル抗体である。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体はヒトまたはヒト化抗体である。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体はキメラ抗体である。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、これらの領域について表１４および１５に示される配列のいずれかが含まれるがこれらに限定されない、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ１－ＣＨ２ ヒンジ、ＣＨ３、ＣＬ、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ ＦＷ４、および／またはＶＬ ＦＷ４、またはこれらの任意の組み合わせを含むまたはそれからなる。
一部の実施形態では、本開示は、表１５に記載されるキメラおよびヒト化抗ＣＤ１ａ抗体を含む。一般に、具体的に示されない限り、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体は、１つ以上のＣＤＲの任意の組み合わせを含み得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体は、表１５に示される１つ以上のＶＨおよび／またはＶＬ配列と表１４の配列番号によって定義される特定の抗体の任意の組み合わせを含み得る。抗ＣＤ１ａＶＨおよびＶＬのＣＤＲを、拡張型Ｈ１を伴うＫａｂａｔ定義を使用して定義した。ＣＤＲ－Ｈ１については、最後の残基は、Ｈ３６位の前の任意の挿入物（即ち、Ｈ３５ａ、Ｈ３５ｂ、Ｈ３５ｃなど）を含む。ＣＤＲを以下と定義した：ＣＤＲ－Ｈ１（Ｈ２６～Ｈ３５ｃ）、ＣＤＲ－Ｈ２（Ｈ５０～Ｈ６５）、ＣＤＲ－Ｈ３（Ｈ９５～Ｈ１０２）、ＣＤＲ－Ｌ１（Ｌ２４～Ｌ３４）、ＣＤＲ－Ｌ２（Ｌ５０～Ｌ５６）、およびＣＤＲ－Ｌ３（Ｌ８９～Ｌ８７）（表４および５も参照されたい）。
一部の実施形態では、本開示は、重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１７、４９、および５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤＲ－Ｈ３を含み、ここで、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号１７または４９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤＲ－Ｈ３を含み、ここで、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号１５、３０、４０、６２、および６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）；（ｉｉ）配列番号１６、３１、４１、４８、５９、６３および７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；ならびに／または（ｉｉｉ）配列番号１７、４９および５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む。
一部の実施形態では、本開示は、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）を含む抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片であって、１つ以上のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されていてよい、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、配列番号８の１つまたは２つのアミノ酸残基が置換されている。１つ以上のアミノ酸置換は、本明細書に開示される保存的または非保存的アミノ酸置換を伴い得る。一部の実施形態では、１つ以上の（例えば、１つまたは２つ）アミノ酸置換は、（ｉ）７位のＳｅｒ（Ｋａｂａｔに従って、Ｌ３０に対応する）のＴｙｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、またはＴｒｐによる置換、および（ｉｉ）８位のＡｓｎ（Ｋａｂａｔに従って、Ｌ３１に対応する）のＰｈｅ、Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、ＴｒｐまたはＴｙｒによる置換からなる群から選択される。
一部の実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号８および２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、（ｉｉ）配列番号９、２６、３７、４４、および７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに／または（ｉｉｉ）配列番号１０、２７、３４、および４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む。
一部の実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号１５、３０、４０、６２、および６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１６、３１、４１、４８、５９、６３および７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１７、４９および５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｉｖ）配列番号８および２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｖ）配列番号９、２６、３７、４４、および７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および／または（ｖｉ）配列番号１０、２７、３４、および４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む。
一部の実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号１５、３０および４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１６、４１および６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１７および４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｉｖ）配列番号８および２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｖ）配列番号９および２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに／または（ｖｉ）配列番号１０および２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む。
一部の実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、
（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｉｖ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｖｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む。
一部の実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｉｖ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｖ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｖｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む。
一部の実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｉｖ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｖ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および（ｖｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む。
一部の実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｉｖ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｖ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、および／または（ｖｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む。
ＣＤＲ－Ｈ１または配列番号１５、３０、４０、６２、もしくは６６のいずれかに関する任意の実施形態は、配列番号９６を用いて実施され得る。配列番号９６における任意の代替的アミノ酸がある実施形態では除外され得ることが具体的に意図されている。ＣＤＲ－Ｈ２または配列番号１６、３１、４１、４８、５９、６３、もしくは７６のいずれかに関する任意の実施形態は、配列番号９７を用いて実施され得る。配列番号９７における任意の代替的アミノ酸がある実施形態では除外され得ることが具体的に意図されている。ＣＤＲ－Ｈ３または配列番号１７、４９、もしくは５２のいずれかに関する任意の実施形態は、配列番号９８を用いて実施され得る。配列番号９８における任意の代替的アミノ酸がある実施形態では除外され得ることが具体的に意図されている。ＣＤＲ－Ｌ１または配列番号８もしくは２５のいずれかに関する任意の実施形態は、配列番号９９を用いて実施され得る。配列番号９９における任意の代替的アミノ酸がある実施形態では除外され得ることが具体的に意図されている。ＣＤＲ－Ｌ２または配列番号９、２６、３７、４４もしくは７１のいずれかに関する任意の実施形態は、配列番号１００を用いて実施され得る。配列番号１００における任意の代替的アミノ酸がある実施形態では除外され得ることが具体的に意図されている。ＣＤＲ－Ｌ３または配列番号１０、２７、３４、もしくは４５のいずれかに関する任意の実施形態は、配列番号１０１を用いて実施され得る。配列番号１０１における任意の代替的アミノ酸がある実施形態では除外され得ることが具体的に意図されている。かかる実施形態は、ＣＨ１、ＣＨ１＿ＣＨ２ヒンジ、ＣＨ２、および／もしくはＣＨ３をさらに含む、または本明細書に記載されるＶＨもしくはＶＬ領域に具体化される抗体またはその抗原結合性断片を含む。
生殖系列置換
多種多様なアクセプターヒト生殖系列配列が入手可能であり、ヒトにおける使用のために非ヒト種抗体を「ヒト化」するプロセスは当該分野で周知であり、本明細書の他の場所でも議論されている。したがって、マウス、ラットなどからの上記のＣＤＲ配列をヒト可変ドメインアミノ酸配列の状況に置くことができることが、当業者によって理解される。そうすることで、元の親（即ち、ドナー）抗体の抗体結合および他の望ましい特徴を保存するためにアクセプターヒト生殖系列配列の変化を一般に行うことができる。ＣＤＲおよびフレームワーク領域（ＦＷ）の両方を以下の通り操作することができる。
ある特定の実施形態では、置換は、（ドナー）ＣＤＲ残基が、例えば、どちらも全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１７／００７３３９５号およびＴｏｗｎｓｅｎｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ２０１５；１１２（５０）：１５３５４～１５３５９に記載されるように、ヒトアミノ酸含量を増加させ、抗体の免疫原性を潜在的に低減させるように、対応するヒト生殖系列（アクセプター）残基で置き換えられる、ヒト生殖系列置換である。
抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列を含むＶＨフレームワークを含み得る。一部の態様では、以下の生殖系列からのＶＨフレームワークが使用され得る：ＩＧＨＶ１－２＊０２、ＩＧＨＶ１－３＊０１、ＩＧＨＶ１－４６＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０２、ＩＧＨＶ１－８＊０１、ＩＧＨＶ３－７＊０１、ＩＧＨＶ３－１３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０４、ＩＧＨＶ３－３０＊０１、ＩＧＨＶ３－３０＊１８、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０１、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０４またはＩＧＨＶ５－５１＊０１（生殖系列の名称は、ＩＭＧＴ生殖系列定義に基づく）。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片には、生殖系列ＩＧＨＶ３－７＊０１からのＶＨフレームワークが使用される。
好ましいヒト生殖系列軽鎖フレームワークは、ＶκまたはＶλ生殖系列に由来するフレームワークである。一部の態様では、以下の生殖系列からのＶＬフレームワークが使用され得る：ＩＧＫＶ１－１２＊０１、ＩＧＫＶ１－１３＊０２、ＩＧＫＶ１－３３＊０１、ＩＧＫＶ１－３９＊０１、ＩＧＫＶ１－５＊０１、ＩＧＫＶ３－１１＊０１、ＩＧＫＶ３－１５＊０１、ＩＧＫＶ３－２０＊０１、ＩＧＫＶ３Ｄ－２０＊０２およびＩＧＫＶ４－１＊０１（生殖系列の名称は、ＩＭＧＴ生殖系列定義に基づく）。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片には、生殖系列ＩＧＨＶ１－３９＊０１からのＶＬフレームワークが使用される。
あるいは、またはさらに、フレームワーク配列は、ヒト生殖系列コンセンサスフレームワーク配列、例えば、ヒトＶλ１コンセンサス配列、Ｖκ１コンセンサス配列、Ｖκ２コンセンサス配列、Ｖκ３コンセンサス配列、ＶＨ３生殖系列コンセンサス配列、ＶＨ１生殖系列コンセンサス配列、ＶＨ５生殖系列コンセンサス配列、またはＶＨ４生殖系列コンセンサス配列のフレームワークであり得る。ヒト生殖系列フレームワークの配列は、種々の公的データベース、例えば、Ｖ－ｂａｓｅ、ＩＭＧＴ、ＮＣＢＩまたはＡｂｙｓｉｓから入手可能である。
抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＬフレームワーク配列を含むＶＬフレームワークを含み得る。ＶＬフレームワークは、それが由来した生殖系列との機能的および構造的類似性をなおも保持しつつ、１つ以上のアミノ酸置換、付加または欠失を含み得る。一部の態様では、ＶＬフレームワークは、ヒト生殖系列ＶＬフレームワーク配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＬフレームワーク配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸置換、付加または欠失を含むＶＬフレームワークを含む。一部の実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加または欠失は、フレームワーク領域中のみにある。一部の実施形態では、パーセント同一性は、本明細書でＣＤＲと定義される部分を除いたＶＬドメインとの類似性に基づく。
本開示のポリペプチドの領域または断片は、配列番号７～７９、８６、および９６～１０２のいずれかに対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個のアミノ酸置換、連続するアミノ酸付加、または連続するアミノ酸欠失を有する、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個のアミノ酸置換、連続するアミノ酸付加、または連続するアミノ酸欠失を有する、または多くても１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個のアミノ酸置換、連続するアミノ酸付加、または連続するアミノ酸欠失を有するアミノ酸配列を有し得ることが意図されている。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７～７９、８６、および９６～１０２のいずれかに対して、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％（もしくはその中で導き出せる任意の範囲）同一な、少なくとも５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％（もしくはその中で導き出せる任意の範囲）同一な、または多くても５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％（もしくはその中で導き出せる任意の範囲）同一なアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。さらに、一部の実施形態では、領域または断片は、配列番号７～７９、８６、および９６～１０２のいずれか（１位はその配列番号のＮ末端にある）の１位、２位、３位、４位、５位、６位、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９、４８０、４８１、４８２、４８３、４８４、４８５、４８６、４８７、４８８、４８９、４９０、４９１、４９２位、４９３位、４９４位、４９５位、４９６位、４９７位、４９８位、４９９位、５００位から出発して、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９、４８０、４８１、４８２、４８３、４８４、４８５、４８６、４８７、４８８、４８９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９４、４９５、４９６、４９７、４９８、４９９、５００またはそれよりも多くの連続するアミノ酸のアミノ酸領域を含む。本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０またはそれよりも多くのバリアントアミノ酸またはアミノ酸置換を含み得る。一部の実施形態では、バリアントまたはアミノ酸置換は、配列番号７～７９、８６、および９６～１０２のいずれかの１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、
２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９、４８０、４８１、４８２、４８３、４８４、４８５、４８６、４８７、４８８、４８９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９４、４９５、４９６位、４９７位、４９８位、４９９位、および／または５００位にあり（１位はその配列番号のＮ末端にある）、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７～７９、８６、および９６～１０２のいずれかの、少なくともまたは多くても３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、３００、４００、５００、５５０、６００、またはそれよりも多くの連続するアミノ酸、またはその中で導き出せる任意の範囲に対して、少なくとも６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一または相同であり得る。具体的には、配列番号７～７９、８６、または９６～１０２のうち任意の１つ以上が本明細書に開示される実施形態から除外され得ることが意図されている。
ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、例えば、ＩＧＫＶ１－３９＊０１のフレームワークであり得る。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、例えば、ＩＧＫＶ１－３３＊０１のフレームワークであり得る。ヒト生殖系列ＶＬフレームワークは、Ｖλ、Ｖλ１、Ｖλ３、Ｖκ、Ｖκ１、Ｖκ２またはＶκ３を含むヒトコンセンサス配列のうちいずれか１つのフレームワークであり得る。
一部の実施形態では、ＶＬフレームワークは、ＩＧＫ－３９＊０１＿ＩＧＫＪ１＊０１である。他の類似のフレームワーク領域もまた、配列番号８～１０、２５～２７、３４、３７、４４、４５、７１のＣＤＲ；ならびに、それぞれ、ＩＧＫＶ１－１２＊０１、ＩＧＫＶ１－１３＊０２、ＩＧＫＶ１－３３＊０１、ＩＧＫＶ１－３９＊０１、ＩＧＫＶ１－５＊０１、ＩＧＫＶ３－１１＊０１、ＩＧＫＶ３－１５＊０１、ＩＧＫＶ３－２０＊０１、ＩＧＫＶ３Ｄ－２０＊０２、およびＩＧＫＶ４～１＊０１のうちいずれか１つのフレームワーク領域に対して９９％、９７％、９７％、９６％、８０％、７６％、７４％および６６％の同一性を含み得る、以下のＶＬアミノ酸配列によって特定されるＣＤＲ：配列番号１２、２８、３５、３８、４６、７２および７９を含む有利な抗体を送達することが予測される。一部の実施形態では、パーセント同一性は、本明細書においてＣＤＲとして定義されている部分を除いたＶＬとの類似性に基づく。
抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列を含むＶＨフレームワークを含み得る。ＶＨフレームワークは、それが由来した生殖系列との機能的および構造的類似性をなおも保持しつつ、１つ以上のアミノ酸置換、付加または欠失を含み得る。一部の態様では、ＶＨフレームワークは、ヒト生殖系列ＶＨフレ０ムワーク配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１０％同一である。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸置換、付加または欠失を含むＶＨフレームワークを含む。一部の実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加または欠失は、フレームワーク領域中のみにある。一部の実施形態では、パーセント同一性は、本明細書でＣＤＲと定義される部分を除いたＶＨドメインとの類似性に基づく。
ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、例えば、ＩＧＨＶ３－７＊０１のフレームワークであり得る。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、例えば、ＩＧＨＶ１－４６＊０１のフレームワークであり得る。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、例えば、ＩＧＨＶ１－６９＊０１であり得る。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ヒトＶＨ生殖系列コンセンサス配列のフレームワークであり得る。ヒト生殖系列ＶＨフレームワークは、ＶＨ３、ＶＨ５、ＶＨ１またはＶＨ４を含むヒト生殖系列コンセンサス配列のフレームワークであり得る。
一部の実施形態では、ＶＨフレームワークは、ＩＧＨＶ３－７＊０１である。他の類似のフレームワーク領域もまた、配列番号１５～１７、３０、３１、４０、４１、４８、４９、５２、５９、６２、６３、６６、７６のＣＤＲ、および以下：それぞれ、ＤＰ－５４のＦＷ領域に対して９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％同一性および共通の構造的特色に１つまたは少数のアミノ酸差異を含み得る（Ｋａｂａｔ番号付け）、ＩＧＨＶ１－２＊０２、ＩＧＨＶ１－３＊０１、ＩＧＨＶ１－４６＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０２、ＩＧＨＶ１－８＊０１、ＩＧＨＶ３－７＊０１、ＩＧＨＶ３－１３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０４、ＩＧＨＶ３－３０＊０１、ＩＧＨＶ３－３０＊１８、ＩＧＨＶ５～１０－１＊０１、ＩＧＨＶ５～１０－１＊０４、またはＩＧＨＶ５～５１＊０１を含む、配列番号２２、３２、４２、５０、５３、５５、５７、６０、６４、６７、６９、７４および７７のＶＨアミノ酸配列のいずれかによって特定されるＣＤＲを含む有利な抗体を送達することが予測される。一部の態様では、パーセント同一性は、本明細書においてＣＤＲとして定義されている部分を除いたＶＨドメインとの類似性に基づく。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号２２、３２、４２、５０、５３、５５、５７、６０、６４、６７、６９、７４および７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；および／または（ｉｉ）配列番号１２、２８、３５、３８、４６、７２および７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。これらのＶＬおよびＶＨ配列の任意の組み合わせも種々の実施形態に包含される。
一部の実施形態では、（ｉ）ＶＨは、配列番号２２、３２、４２、５０、５３、５５、５７、６０、６４、６７、６９、７４もしくは７７に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含む；および／または（ｉｉ）ＶＬは、配列番号１２、２８、３５、３８、４６、７２もしくは７９に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含む。これらのＶＬおよびＶＨ配列の任意の組み合わせも種々の実施形態に包含される。
一部の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｉｉ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｉｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｉｖ）配列番号２２に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１２に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＬ；（ｖ）配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２８に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＬ；または（ｖｉ）配列番号７４に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２８に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号２２に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに配列番号１２に示されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列、（ｉｉ）配列番号５５に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに配列番号２８に示されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列、または（ｉｉｉ）配列番号７４に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに配列番号２８に示されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む。
本開示の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトカッパ（Ｖκ）またはラムダ（Ｖλ）軽鎖定常ドメインを含み得る。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＶκ軽鎖定常ドメインを含む。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１２、２８、３５、３８、４６、７２および７９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む軽鎖を含み、カッパ定常ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２８のアミノ酸配列からなるＶＬドメインを含む軽鎖を含み、カッパ定常ドメインをさらに含む。
本開示の抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖定常ドメインを含む。重鎖定常ドメインは、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１もしくはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４）を含む。一部の実施形態では、重鎖定常ドメインは、ＩｇＧを含む。一部の実施形態では、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＩｇＧは、ＩｇＧ１である。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２２、３２、４２、５０、５３、５５、５７、６０、６４、６７、６９、７４および７７のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含み、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む、重鎖を含み得る。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含み、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む、重鎖を含み得る。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含み、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む、重鎖を含み得る。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片の定常領域を変更、例えば、変異させて、抗体の特性を改変すること（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、および／または補体機能のうち１つ以上を増加または減少させること）ができる。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、エフェクター機能を欠く（即ち、エフェクター欠損である）。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆｃドメインを含む。Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１重鎖ＣＨ２ドメインおよびＩｇＧ重鎖ＣＨ３ドメインを含み得る。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号１４、２９、３９、４７、５１、５４、５６、５８、６１、６５、６８、７３、および７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）；ならびに（ｉｉ）配列番号７、２４、３３、３６、４３、７０および７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号１４、２９、３９、４７、５１、５４、５６、５８、６１、６５、６８、７３、および７５に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むＨＣ；および（ｉｉ）配列番号７、２４、３３、３６、４３、７０および７８に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むＬＣを含む。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号７のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣ；（ｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣ；（ｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣ；（ｉｖ）配列番号１４に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号７に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣ；（ｖ）配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣ；または（ｖｉ）配列番号７３に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号２４に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣを含む。
一部の実施形態では、本開示は、配列番号５４のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＬＣを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一部の実施形態では、本開示は、配列番号７３のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＬＣを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミドの挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミドの挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本開示は、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含み、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
一部の態様では、抗体または抗原結合性断片、バリアントは、全長重鎖（例えば、配列番号５４もしくは７３のアミノ酸配列のＨＣ）および／または全長軽鎖（例えば、配列番号２４のアミノ酸配列のＬＣ）に対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５の保存的もしくは非保存的置換、および／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５の付加および／または欠失を含む。さらなる態様では、バリアント抗体は、全長重鎖（例えば、配列番号５４または７３のアミノ酸配列のＨＣ）に対して、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を共有し、ここで、前記抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ１ａに特異的に結合する。さらなる態様では、バリアント抗体は、全長軽鎖（例えば、配列番号２４のアミノ酸配列のＬＣ）に対して、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を共有し、ここで、前記抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ１ａに特異的に結合する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆｃ融合タンパク質、モノボディ、マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）、二機能性抗体、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）である。
抗ＣＤ１Ａ抗体の特性
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａの少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、少なくとも２３個、少なくとも２４個、少なくとも２５個、またはそれよりも多くのアミノ酸残基に結合する。ヒトＣＤ１ａアミノ酸残基は、配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｇｌｕ７９、Ｌｙｓ８１、Ｇｌｕ８２、Ｌｅｕ８３、Ｇｌｕ８４、Ｔｈｒ８５、Ｌｅｕ８６、Ａｒｇ８８、Ｉｌｅ８９、Ｉｌｅ９２、Ａｒｇ９３、Ａｓｎ１４６、Ｇｌｎ１６７、Ａｓｎ１６８、Ｇｌｎ１６９、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｎ１７７、Ｌｅｕ１７８、Ｓｅｒ１８０、Ａｓｐ１８１、Ｔｈｒ１８２およびＡｒｇ１８５からなる群から選択することができる。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のヒトＣＤ１ａアミノ酸残基のうち少なくとも１つと相互作用する：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ａｓｐ１７３、およびＡｓｎ１７７。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａアミノ酸残基：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ａｓｐ１７３、およびＡｓｎ１７７と相互作用する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａアミノ酸残基：（ｉ）接触表面積（ＡＳＡ）の＞８０Å２がＣＤ１ａとの相互作用によって埋没する、および／または（ｉｉ）遊離状態にあるＡＳＡの＞９０％が界面によって埋没し、かつＡＳＡの＞３０Å２がＣＤ１ａとの相互作用によって埋没する、配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ａｓｐ１７３、およびＡｓｎ１７７と相互作用する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａアミノ酸残基：３．８Å以内の、配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ａｓｐ１７３、およびＡｓｎ１７７と、塩橋または水素結合のいずれかによって相互作用する。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のヒトＣＤ１ａアミノ酸残基のうち少なくとも１つと相互作用する：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｌｅｕ８６、Ｇｌｕ８２、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ａｓｎ１４６、Ａｓｎ１６８、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｎ１７７、Ａｓｐ１８１、およびＡｒｇ１８５。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のヒトＣＤ１ａアミノ酸残基：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｌｅｕ８６、Ｇｌｕ８２、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ａｓｎ１４６、Ａｓｎ１６８、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｎ１７７、Ａｓｐ１８１、およびＡｒｇ１８５と相互作用する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のヒトＣＤ１ａアミノ酸残基：（ｉ）接触表面積（ＡＳＡ）の＞４０Å２がＣＤ１ａとの相互作用によって埋没する、および／または（ｉｉ）遊離状態にあるＡＳＡの＞５０％がＣＤ１ａとの相互作用によって埋没する、配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｌｅｕ８６、Ｇｌｕ８２、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ａｓｎ１４６、Ａｓｎ１６８、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｎ１７７、Ａｓｐ１８１、およびＡｒｇ１８５と相互作用する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のヒトＣＤ１ａアミノ酸残基：３．８Å以内の、配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｌｅｕ８６、Ｇｌｕ８２、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ａｓｎ１４６、Ａｓｎ１６８、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｎ１７７、Ａｓｐ１８１、およびＡｒｇ１８５と、塩橋によって、および／または水素結合によって相互作用する。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のヒトＣＤ１ａアミノ酸残基のうち少なくとも１つと相互作用する：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｇｌｕ７９、Ｌｙｓ８１、Ｇｌｕ８２、Ｌｅｕ８３、Ｇｌｕ８４、Ｔｈｒ８５、Ｌｅｕ８６、Ａｒｇ８８、Ｉｌｅ８９、Ｉｌｅ９２、Ａｒｇ９３、Ａｓｎ１４６、Ｇｌｎ１６７、Ａｓｎ１６８、Ｇｌｎ１６９、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｎ１７７、Ｌｅｕ１７８、Ｓｅｒ１８０、Ａｓｐ１８１、Ｔｈｒ１８２およびＡｒｇ１８５。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のヒトＣＤ１ａアミノ酸残基：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｇｌｕ７９、Ｌｙｓ８１、Ｇｌｕ８２、Ｌｅｕ８３、Ｇｌｕ８４、Ｔｈｒ８５、Ｌｅｕ８６、Ａｒｇ８８、Ｉｌｅ８９、Ｉｌｅ９２、Ａｒｇ９３、Ａｓｎ１４６、Ｇｌｎ１６７、Ａｓｎ１６８、Ｇｌｎ１６９、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｎ１７７、Ｌｅｕ１７８、Ｓｅｒ１８０、Ａｓｐ１８１、Ｔｈｒ１８２およびＡｒｇ１８５と相互作用する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のヒトＣＤ１ａアミノ酸残基：（ｉ）接触表面積（ＡＳＡ）の＞２０Å２がＣＤ１ａとの相互作用によって埋没し、かつ、それと交換的に、ＣＤ１ａエピトープの接触表面積（ＡＳＡ）の＞１０Å２が埋没する、配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｇｌｕ７９、Ｌｙｓ８１、Ｇｌｕ８２、Ｌｅｕ８３、Ｇｌｕ８４、Ｔｈｒ８５、Ｌｅｕ８６、Ａｒｇ８８、Ｉｌｅ８９、Ｉｌｅ９２、Ａｒｇ９３、Ａｓｎ１４６、Ｇｌｎ１６７、Ａｓｎ１６８、Ｇｌｎ１６９、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｎ１７７、Ｌｅｕ１７８、Ｓｅｒ１８０、Ａｓｐ１８１、Ｔｈｒ１８２およびＡｒｇ１８５と相互作用する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のヒトＣＤ１ａアミノ酸残基：３．８Å以内の、配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｇｌｕ７９、Ｌｙｓ８１、Ｇｌｕ８２、Ｌｅｕ８３、Ｇｌｕ８４、Ｔｈｒ８５、Ｌｅｕ８６、Ａｒｇ８８、Ｉｌｅ８９、Ｉｌｅ９２、Ａｒｇ９３、Ａｓｎ１４６、Ｇｌｎ１６７、Ａｓｎ１６８、Ｇｌｎ１６９、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｎ１７７、Ｌｅｕ１７８、Ｓｅｒ１８０、Ａｓｐ１８１、Ｔｈｒ１８２およびＡｒｇ１８５と、塩橋によって、水を介した水素結合によって、および／または水素結合によって相互作用する。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａアミノ酸残基、配列番号１の番号付けに従って、Ａｓｎ１４６および／またはＡｓｎ１６８とは相互作用しない。
一部の実施形態では、本開示は、ＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、Ａｂ１３８、Ａｂ４９１、Ａｂ４９２、Ａｂ５０４、Ａｂ５１４、Ａｂ５５５、Ａｂ５５６、Ａｂ５５９、Ａｂ５６０、Ａｂ５７１、Ａｂ５７２、Ａｂ５７９、Ａｂ５８５、Ａｂ５９９、Ａｂ６０９、Ａｂ６１０、Ａｂ６１６、Ａｂ６２３、Ａｂ６２４、Ａｂ６５６、Ａｂ６５７、Ａｂ６６０、Ａｂ６７３、Ａｂ６８１、およびＡｂ６８９（例えば、表１４に開示される）からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体は、本明細書に記載される抗体または抗原結合性断片と、ヒトＣＤ１ａへの結合について競合する、および／またはそれと実質的に同じエピトープに結合する抗体を包含する。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体は、Ａｂ１３８、Ａｂ５７１、およびＡｂ６７３（例えば、表１４に開示される）と、ヒトＣＤ１ａへの結合について競合する、および／またはそれと実質的に同じエピトープに結合する抗体を包含する。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体は、Ａｂ５７１（例えば、表１４に開示される）と、ヒトＣＤ１ａへの結合について競合する、および／またはそれと同じエピトープに結合する抗体を包含する。
一部の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤ１ａに、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１７５ｎＭ、１５０ｎＭ、１２５ｎＭ、１００ｎＭ、９０ｎＭ、８０ｎＭ、７０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２００ｐＭ、１８０ｐＭ、１６０ｐＭ、１４０ｐＭ、１２０ｐＭ、１００ｐＭ、８０ｐＭ、６０ｐＭ、４０ｐＭ、２０ｐＭおよび１０ｐＭからなる群から選択されるおよその値のまたはその値未満の、ＫＤとして表される結合親和性で結合する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤ１ａに、５００ｐＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１９０ｐＭ以下、１８０ｐＭ以下、１８１ｐＭ以下、１７０ｐＭ以下、１６０ｐＭ以下、１５０ｐＭ以下、１４０ｐＭ以下、１３０ｐＭ以下、１２０ｐＭ以下、１１０ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、９０ｐＭ以下、８０ｐＭ以下、７０ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、２０ｐＭ以下または１０ｐＭのＫＤ値で結合する。ＣＤ１ａは、ヒトＣＤ１ａ、カニクイザルＣＤ１ａ、イヌＣＤ１ａおよび／またはウサギＣＤ１ａであり得る。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片、約２５０ｐＭ～約１００ｐＭ、約２００ｐＭ～約１５０ｐＭ、または約１９０ｐＭ～約１７０ｐＭのＫＤ値でヒトＣＤ１ａに結合する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片（例えば、Ａｂ５７１）は、約１８１．３９＋／－１１．９２ｐＭのＫＤ値でヒトＣＤ１ａに結合する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約１００ｐＭ～約３０ｐＭ、約８０ｐＭ～約４０ｐＭ、または約７０ｐＭ～約５０ｐＭのＫＤ値でカニクイザルＣＤ１ａに結合する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片（例えば、Ａｂ５７１）は、約６０．３５＋／－１１．０４ｐＭのＫＤ値でカニクイザルＣＤ１ａに結合する。
一部の実施形態では、本開示は、約２～４ｎＭ、約２５０ｐＭ～約１００ｐＭ、約２００ｐＭ～約１５０ｐＭまたは約１９０ｐＭ～約１７０ｐＭのＫＤ値でヒトＣＤ１ａに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号１７および４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一部の実施形態では、本開示は、約２５０ｐＭ～約１５０ｐＭのＫＤ値でヒトＣＤ１ａに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号１７および４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一部の実施形態では、本開示は、約１９０ｐＭ～約１７０ｐＭのＫＤ値でヒトＣＤ１ａに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
本明細書に記載されるように、ＫＤ値は、任意選択により、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００またはＢｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用し、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定され得る。一部の実施形態では、ＫＤ値は、任意選択によりＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ機器を使用し、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定され得る。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片、カニクイザルまたはヒトＣＤ１ｂ、カニクイザルまたはヒトＣＤ１ｃに対して、および／またはカニクイザル、ラット、マウスまたはヒトＣＤ１ｄに対して、弱い結合を有するまたは結合を有さない。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、実施例１および９に記載されているようにＴ細胞活性化アッセイを使用して測定した場合に、約５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性分化抗原群６９（ＣＤ６９）発現を阻害する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１．９７ｎＭ以下、約１．９ｎＭ以下、約１．８ｎＭ以下、約１．７ｎＭ以下、約１．６ｎＭ以下、約１．５ｎＭ以下、約１．４ｎＭ以下、約１．３ｎＭ以下、約１．２ｎＭ以下、約１．１ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、約０．９ｎＭ以下、約０．８ｎＭ以下、約０．７ｎＭ以下、約０．６ｎＭ以下、約０．５ｎＭ以下、約０．４ｎＭ以下、約０．３ｎＭ以下、約０．２ｎＭ以下、または約０．１ｎＭ以下のＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現を阻害する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片、約２０００ｐＭ以下、約１９７０ｐＭ以下、約１５００ｐＭ以下、約１１１０ｐＭ以下、約１０００ｐＭ以下、約５００ｐＭ以下、約４００ｐＭ以下、約３００ｐＭ以下、約２００ｐＭ以下、約１００ｐＭ以下、約９０ｐＭ以下、約８０ｐＭ以下、約７０ｐＭ以下、約６０ｐＭ以下、約５０ｐＭ以下、約４０ｐＭ以下、約３０ｐＭ以下、約２０ｐＭ以下、約１０ｐＭ以下、約９ｐＭ以下、約８ｐＭ以下、約７ｐＭ以下、約６ｐＭ以下、約５ｐＭ以下、約４ｐＭ以下、約３ｐＭ以下、約２ｐＭ、または１ｐＭのＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現を阻害する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、Ａｂ５７１）は、約１．１１ｎＭのＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現を阻害する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、Ａｂ６７３）は、約０．３ｎＭのＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現を阻害する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、Ａｂ１３８）は、約１．９７ｎＭのＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現を阻害する。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、実施例１および９に記載されているようにＴ細胞活性化アッセイを使用して測定した場合に、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１．９ｎＭ以下、１．８ｎＭ以下、１．７ｎＭ以下、１．６ｎＭ以下、１．５ｎＭ以下、１．４ｎＭ以下、１．３ｎＭ以下、１．２ｎＭ以下、１．１ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２２ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、０．１８ｎＭ以下、または０．１ｎＭ以下のＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性インターロイキン２（ＩＬ－２）産生を阻害する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、約５００ｐＭ以下、以下４００ｐＭ以下、以下３００ｐＭ以下、以下２２０ｐＭ以下、以下２００ｐＭ以下、以下１００ｐＭ以下、以下９０ｐＭ以下、以下８０ｐＭ以下、以下７０ｐＭ以下、以下６０ｐＭ以下、以下５０ｐＭ以下、以下４０ｐＭ以下、以下３０ｐＭ以下、以下２０ｐＭ以下、以下１０ｐＭ以下、以下９ｐＭ以下、以下８ｐＭ以下、以下７ｐＭ以下、以下６ｐＭ以下、以下５ｐＭ以下、以下４ｐＭ以下、以下３ｐＭ以下、以下２ｐＭ以下、または約１ｐＭ以下のＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性ＩＬ－２産生を阻害する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、約０．１８ｎＭのＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性ＩＬ－２産生を阻害する。
例えば、実施例１に記載されるように、ＩＣ５０値は、ＣＤ１ａ制限Ｔ細胞受容体ＢＫ６を発現するＪｕｒｋａｔ ７６（Ｊ７６）細胞を使用して決定され得る。
免疫原性
免疫原性は、抗体およびＦｃ融合タンパク質が含まれるタンパク質治療薬の開発および利用に対する主な障壁である。タンパク質配列、投与の経路および頻度、ならびに患者集団が含まれるがこれらに限定されないいくつかの因子が、タンパク質免疫原性に寄与し得る。免疫応答は、典型的には、マウス抗体などの非ヒトタンパク質に対して最も激しいが、主にまたは完全にヒト配列内容を有する治療薬であっても、免疫原性であり得る。免疫原性は、外来として把握される物質に対する複雑な一連の応答であり、これには、中和および非中和抗体の産生、免疫複合体の形成、補体活性化、肥満細胞活性化、炎症ならびにアナフィラキシーが含まれ得る。望まれない免疫応答は、抗原認識を直接妨害すること、エフェクター分子との相互作用を変更すること、または治療薬の血清半減期もしくは組織分布を乱すことによって、抗体およびＦｃ融合タンパク質治療薬の効力を低減させ得る。
タンパク質治療薬は、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ、Ｒ．Ｉ．のＥｐｉｖａｘ，Ｉｎｃ．によって提供されるような市販のサービスを使用して、潜在的な免疫原性エピトープの存在を予測するために分析され得る。潜在的な免疫原性エピトープはまた、ＩＥＤＢコンセンサス法などの方法を使用しても予測され得る。一部の実施形態では、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏアルゴリズムが、クラスＩＩ ＭＨＣ分子に結合するエピトープを予測できる。かかるアルゴリズムを用いたポリペプチドのデータセットの分析は、予測されたエピトープを提供する。予測されたエピトープは、自動ペプチド合成または組換えＤＮＡ技術の標準的な方法によって調製されるペプチドを作製するために使用される。Ｅｐｉｖａｘから提供されたスコアリング情報は、集団中に認識された予測されたエピトープがどのように広がっているかの指標を提供し得る。より低いスコアは、より低い免疫原性潜在力を予測する。
本明細書で使用する場合、「Ｔレジトープ」は、天然の調節性Ｔ細胞を活性化し、望まれない免疫応答を低減させることが潜在的にできる、モノクローナル抗体フレームワーク領域内のアミノ酸配列である。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、８、７、６、５、４、３、２、１または０の非生殖系列Ｔ細胞エピトープを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、免疫原性リスクが低く、例えば、－１５以下、－２０以下、－３０以下、－３５以下、－４０以下、－４５以下、－５０以下、－５５以下、－６０以下、－６５以下、－７０以下、－７５以下、－８０以下、－８５以下、－９０以下、－９５以下、または－１００以下のＴ－ｒｅｇ調整済スコアを有する。一部の実施形態では、Ｔレジトープ（Ｔ－ｒｅｇ）調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力またはその抗原結合性断片は、約－３５以下である。一部の実施形態では、Ｔレジトープ（Ｔ－ｒｅｇ）調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力またはその抗原結合性断片は、約－５２以下である。一部の実施形態では、Ｔレジトープ（Ｔ－ｒｅｇ）調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力またはその抗原結合性断片は、約－６９以下である。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、Ａｂ１３８）は、約－３５以下のＴ－ｒｅｇ調整済スコアおよび８以下の非生殖系列Ｔ細胞エピトープを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、Ａｂ１３８）は、約－３５以下（例えば、－３７．９４）のＴ－ｒｅｇ調整済スコアおよび８以下の非生殖系列Ｔ細胞エピトープを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、Ａｂ５７１）は、約－５２以下（例えば、－５７．３７）のＴ－ｒｅｇ調整済スコアおよび３以下の非生殖系列Ｔ細胞エピトープを有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、Ａｂ６７３）は、約－６９以下（例えば、－７２．８９）のＴ－ｒｅｇ調整済スコアおよび１以下の非生殖系列Ｔ細胞エピトープを有する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、例えばＡＣ－ＳＩＮＳアッセイ、ＤＮＡ結合アッセイおよび／またはインスリン結合アッセイによって測定した場合に、多反応性のリスクが低い。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、抗薬物抗体を誘導しない。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ中和抗体またはその抗原結合性断片を用いた処置により、これに限定されないがＡＤなどの炎症性疾患に関連するパラメーターの１つ以上が改善される。例えば、一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ中和抗体またはその抗原結合性断片を用いた処置により、これらに限定されないが、湿疹面積・重症度指標（Ｅｃｚｅｍａ Ａｒｅａ ａｎｄ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ）（ＥＡＳＩ）、そう痒数値評価尺度（ｐｒｕｒｉｔｕｓ ｎｕｍｅｒｉｃａｌ ｒａｔｉｎｇ ｓｃａｌｅ）（ＮＲＳ）、罹患体表面積（ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｏｄｙ ｓｕｒｆａｃｅ ａｒｅａ）（ＢＳＡ）、患者向け湿疹評価（Ｐａｔｉｅｎｔ－Ｏｒｉｅｎｔｅｄ Ｅｃｚｅｍａ Ｍｅａｓｕｒｅ）（ＰＯＥＭ）、皮膚の状態に関するアンケート（Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ Ｌｉｆｅ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ）（ＤＬＱＩ）、研究者による全般評価（ＩｎｖｅｓｔＩｇＡｔｏｒ’ｓ Ｇｌｏｂａｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）（ＩＧＡ）、医師による全般評価（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｇｌｏｂａｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）（ＰＧＡ）、６領域６兆候アトピー性皮膚炎スコア（Ｓｉｘ Ａｒｅａ Ｓｉｘ Ｓｉｇｎ Ａｔｏｐｉｃ Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）（ＳＡＳＳＡＤ）、アトピー性皮膚炎評価尺度（Ｓｃｏｒｉｎｇ Ａｔｏｐｉｃ Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）（ＳＣＯＲＡＤ）、ビジュアルアナログスケール（Ｖｉｓｕａｌ Ａｎａｌｏｇｕｅ Ｓｃａｌｅ）（ＶＡＳ）、皮膚炎スコア（例えば、以下の２つ以上のスコアの合計として計算され得るがこれらに限定されない：紅斑、瘢痕／乾燥状態、浮腫および皮膚びらん）、総血清ＩｇＥレベル、抗原特異的ＩｇＥ力価、および遺伝子シグネチャーに関連するアトピー性皮膚炎などの、ＡＤ関連パラメーターの１つ以上が改善される（例えば、低減する）。抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を用いた処置により、これらのパラメーターのうち１つ以上が、無処置の患者におけるこれらのパラメーターと比較して５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％改善され得る（例えば、低減し得る）。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、アトピー性皮膚炎を有する患者における皮膚炎スコアを、無処置の患者における皮膚炎スコアと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、アトピー性皮膚炎を有する患者における皮膚炎スコアを、無処置の患者における皮膚炎スコアと比較して７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおける皮膚炎スコアを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照における皮膚炎スコアと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおける皮膚炎スコアを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照における皮膚炎スコアと比較して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおける血清ＩｇＥレベルを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照における血清ＩｇＥレベルと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおける血清ＩｇＥレベルを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照における血清ＩｇＥレベルと比較して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイトＨＤＭ誘導性皮膚炎マウスモデルにおけるＨＤＭ特異的ＩｇＥ抗体価を、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照における血清ＩｇＥレベルと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａトランスジェニックＨＤＭ誘導性皮膚炎マウスモデルにおけるＨＤＭ特異的ＩｇＥ抗体価を、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照におけるＨＤＭ特異的ＩｇＥ抗体価と比較して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、１つ以上のアトピー性皮膚炎関連遺伝子の発現レベルを低減させる。アトピー性皮膚炎関連遺伝子の例には、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、フィラグリン（ＦＬＧ）、インターロイキン－３３（ＩＬ－３３）、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド２６（ＣＣＬ－２６）、ＩＬ－２３ｐ４０、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカインリガンド１（ＣＸＣＬ－１）およびＣＣＬ－２０が含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上または７つ以上のアトピー性皮膚炎関連遺伝子の発現レベルを低減させる。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおける１つ以上の（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上）アトピー性皮膚炎関連遺伝子の発現レベルを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照におけるアトピー性皮膚炎関連遺伝子の発現レベルと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおける１つ以上の（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上の）アトピー性皮膚炎関連遺伝子の発現レベルを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照におけるアトピー性皮膚炎関連遺伝子の発現レベルと比較して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させる。
抗ＣＤ１ａ抗体をコードする核酸
本開示は、本明細書に記載される抗体部分および改変抗体を含む本発明の抗体のいずれかをコードするポリヌクレオチドもまた提供する。本発明は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドのいずれかを作製する方法もまた提供する。当該分野で公知の手順によって、ポリヌクレオチドは作製され得、タンパク質は発現され得る。
所望の抗体またはその抗原結合性断片およびかかる抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸の配列は、標準的な配列決定技術を使用して決定され得る。所望の抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子は、組換え産生および特徴付けのために、種々のベクター（例えば、クローニングおよび発現ベクター）中に挿入され得る。重鎖または重鎖の抗原結合性断片をコードする核酸分子、および軽鎖または軽鎖の抗原結合性断片をコードする核酸分子は、同じベクターまたは異なるベクター中にクローニングされ得る。
一部の実施形態では、本開示は、以下の抗ＣＤ１ａ抗体およびその抗原結合性断片のいずれかのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを提供する：Ａｂ１３８、Ａｂ４９１、Ａｂ４９２、Ａｂ５０４、Ａｂ５１４、Ａｂ５５５、Ａｂ５５６、Ａｂ５５９、Ａｂ５６０、Ａｂ５７１、Ａｂ５７２、Ａｂ５７９、Ａｂ５８５、Ａｂ５９９、Ａｂ６０９、Ａｂ６１０、Ａｂ６１６、Ａｂ６２３、Ａｂ６２４、Ａｂ６５６、Ａｂ６５７、Ａｂ６６０、Ａｂ６７３、Ａｂ６８１、およびＡｂ６８９（例えば、表１４に開示される）。一実施形態では、以下の抗ＣＤ１ａ抗体およびその抗原結合性断片：Ａｂ１３８、Ａｂ５７１およびＡｂ６７３のいずれかのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドが存在する。一部の実施形態では、本開示は、Ａｂ５７１のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む。
一部の実施形態では、本開示は、配列番号１４、２９、３９、４７、５１、５４、５６、５８、６１、６５、６８、７３および７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗ＣＤ１ａ抗体ＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。一部の実施形態では、本開示は、配列番号５４または配列番号７３のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる抗ＣＤ１ａ抗体ＨＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。
一部の実施形態では、本開示は、配列番号７、２４、３３、３６、４３、７０および７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗ＣＤ１Ａ抗体ＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。一部の実施形態では、本開示は、配列番号２４のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる抗ＣＤ１Ａ抗体ＬＣポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。
一部の実施形態では、本開示は、配列番号２２、３２、４２、５０、５３、５５、５７、６０、６４、６７、６９、７４および７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗ＣＤ１Ａ抗体ＶＨドメインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。一部の実施形態では、本開示は、配列番号５５または配列番号７４のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる抗ＣＤ１Ａ抗体ＶＨドメインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。
一部の実施形態では、本開示は、配列番号１２、２８、３５、３８、４６、７２および７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上の抗ＣＤ１Ａ抗体ＶＬドメインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。一部の実施形態では、本開示は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる抗ＣＤ１Ａ抗体ＶＬドメインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。
一部の実施形態では、本開示は、ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子であって、（ｉ）配列番号８０の核酸配列、（ｉｉ）配列番号８１の核酸配列、（ｉｉｉ）配列番号８２の核酸配列、（ｉｖ）配列番号８３の核酸配列、（ｖ）配列番号８４の核酸配列、（ｖｉ）配列番号８５の核酸配列、（ｖｉｉ）ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０の下でＡｂ５７１－ＶＨとして寄託されたベクターの挿入物の核酸配列、およびＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１の下でＡｂ５７１－ＶＬとして寄託されたベクターの挿入物の核酸配列からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、核酸分子を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、番号８０の核酸配列、配列番号８１の核酸配列、またはそれら両方を含むまたはそれからなる、単離された核酸分子配列を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、番号８２の核酸配列、配列番号８３の核酸配列、またはそれら両方を含むまたはそれからなる、単離された核酸分子配列を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子であって、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、核酸分子を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子であって、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、核酸分子を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子であって、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、およびＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、核酸を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、およびＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、Ａｂ５７１のＶＨドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミドのＤＮＡ挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。本開示は、Ａｂ５７１のＶＬドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミドの挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドをさらに提供する。
一部の実施形態では、本開示は、Ａｂ５７１のＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３をコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、ならびにＡｂ５７１のＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２およびＬＣＤＲ－３をコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、を含むポリヌクレオチドもまた提供する。
一部の実施形態では、本開示は、Ａｂ５７１のＶＨドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、および、Ａｂ５７１のＶＬドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含むポリヌクレオチドもまた提供する。
一部の実施形態では、本開示は、配列番号８０または配列番号８４の核酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一な核酸を含む、ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片のＶＨをコードする、単離された核酸分子を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、配列番号８１の核酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一な核酸を含む、ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片のＶＬをコードする、単離された核酸分子を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、配列番号８２または配列番号８５の核酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一な核酸を含む、ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片のＨＣをコードする、単離された核酸分子を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、配列番号８３の核酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一な核酸を含む、ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片のＬＣをコードする、単離された核酸分子を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、抗ＣＤ１ａ抗体をコードするポリヌクレオチドおよびそのバリアントを提供し、かかるバリアントポリヌクレオチドは、表１４に開示される核酸配列のいずれかに対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の核酸配列同一性を共有する。これらの量は限定を意味せず、列挙されたパーセンテージ間の増分は、本開示の一部として具体的に想定される。
一実施形態では、ＶＨおよびＶＬドメインもしくはその抗原結合性断片、または全長ＨＣもしくはＬＣは、別々のポリヌクレオチドによってコードされる。あるいは、ＶＨおよびＶＬもしくはその抗原結合性断片、またはＨＣおよびＬＣは共に、単一のポリヌクレオチドによってコードされる。
任意のかかる配列に対して相補的なポリヌクレオチドもまた、本開示によって包含される。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コーディングまたはアンチセンス）または二本鎖であり得、ＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡまたは合成）またはＲＮＡ分子であり得る。ＲＮＡ分子には、イントロンを含み、一対一の様式でＤＮＡ分子に対応するＨｎＲＮＡ分子、およびイントロンを含まないｍＲＮＡ分子が含まれる。さらなるコードまたは非コード配列が、本開示のポリヌクレオチド内に存在してもよいがその必要はなく、ポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持体材料に連結されてもよいがその必要はない。
ポリヌクレオチドは、抗体もしくはその断片をコードする核酸配列を含み得、またはかかる配列のバリアントを含み得る。ポリヌクレオチドバリアントは、コードされたポリペプチドの結合特徴がネイティブ抗体分子と比較して減弱されるような、１つ以上の置換、付加、欠失および／または挿入を含む。バリアント核酸配列によってコードされるポリペプチドの結合特徴に対する影響は、一般に、本明細書に記載されるように評価され得る。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、いずれの置換、付加、欠失および／もしくは挿入も含まない元の（親）抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチド配列に対して、少なくとも約７０％の同一性、少なくとも約８０％の同一性、少なくとも約９０％の同一性、少なくとも約９５％の同一性、少なくとも９８％の同一性または少なくとも９９％の同一性を示す。これらのパーセント同一性は限定を意味せず、列挙されたパーセンテージ間の増分は、本開示の一部として具体的に想定される。
２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、２つの配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が、本明細書に記載されるように、最大の対応を求めてアラインした場合に同じである場合、「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、典型的には、配列類似性の局所的領域を同定および比較するために、比較ウインドウにわたって配列を比較することによって実施される。「比較ウインドウ」は、本明細書で使用する場合、少なくとも約２０、通常は３０～約７５または４０～約５０連続する位置のセグメントを指し、ここで、配列は、２つの配列を最適にアラインした後に、同じ数の連続する位置の参照配列と比較され得る。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、本明細書に開示されるポリヌクレオチドに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％同一である。
ポリヌクレオチドバリアントはまた、またはあるいは、遺伝子、またはその断片もしくは相補体に対して実質的に相同であり得る。かかるポリヌクレオチドバリアントは、抗体をコードする天然に存在するＤＮＡ配列（または相補的配列）に、中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることが可能である。
適切な「中程度にストリンジェントな条件」は、５×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ、１．０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中で事前洗浄すること；約５０℃～６５℃、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）で一晩ハイブリダイズさせること；その後、０．１％ＳＤＳを含む２×、０．５×および０．２×ＳＳＣの各々で、６５℃で２０分間２回洗浄すること、を含む。
本明細書で使用する場合、「高度にストリンジェントな条件」または「高ストリンジェンシー条件」は、以下の条件である：（１）洗浄のために、低いイオン強度および高い温度、例えば、５０℃で、０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを使用する；（２）ハイブリダイゼーションの間に、変性剤、例えば、ホルムアミド、例えば、５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを、７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを含む０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．５と共に、４２℃で使用する；または（３）５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処理したサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍＬ）、０．１％ＳＤＳおよび１０％硫酸デキストランを４２℃で使用し、０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中で４２℃および５０％ホルムアミド中で５５℃での洗浄、その後の、ＥＤＴＡを含む０．１×ＳＳＣからなる５５℃での高ストリンジェンシー洗浄を使用する。当業者は、例えば、プローブ長さなどの因子に適応するために、必要に応じて、温度、イオン強度などを調整する方法を認識する。
遺伝コードの縮重の結果として、本明細書に記載されるポリペプチドのアミノ酸配列をコードする多くのヌクレオチド配列が存在することが、当業者によって理解される。これらのポリヌクレオチドの一部は、任意のネイティブ遺伝子のヌクレオチド配列に対する最小限の相同性を保有する。即ち、２０種の天然アミノ酸をコードする６４種の異なるコドンが存在し、一部のアミノ酸はそれをコードするコドンを多数有する（例えば、６種の異なるコドンがロイシンをコードする）。したがって、多数の核酸配列が同じタンパク質配列をコードし得、したがって、同じポリペプチドアミノ酸配列をコードする２つの核酸は、非常に低い核酸配列同一性を共有し得る。したがって、コドン使用の差異に起因して変動するポリヌクレオチドは、本開示によって具体的に企図される。
さらに、本明細書で提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子は、本開示の範囲内である。対立遺伝子は、ヌクレオチドの１つ以上の変異、例えば、欠失、付加および／または置換の結果として変更された内因性遺伝子である。得られたｍＲＮＡおよびタンパク質は、変更された構造または機能を有し得るが、その必要はない。対立遺伝子は、標準的な技術（例えば、ハイブリダイゼーション、増幅および／またはデータベース配列比較）を使用して同定され得る。
本開示のポリヌクレオチドは、化学的合成、組換え法またはＰＣＲを使用して得ることができる。化学的ポリヌクレオチド合成の方法は、当該分野で周知であり、本明細書で詳細に記載する必要はない。当業者は、所望のＤＮＡ配列を産生するために、本明細書で提供される配列および市販のＤＮＡ合成機を使用することができる。
組換え法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、所望の配列を含むポリヌクレオチドが、適切なベクター中に挿入され得、このベクターは、次に、本明細書でさらに議論されるように、複製および増幅に適切な宿主細胞中に導入され得る。ポリヌクレオチドは、当該分野で公知の任意の手段によって、宿主細胞中に挿入され得る。細胞は、直接的取り込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ交配（F-mating）またはエレクトロポレーションによって外因性ポリヌクレオチドを導入することによって形質転換される。いったん導入されると、外因性ポリヌクレオチドは、非組み込みベクター（例えば、プラスミド）として細胞内で維持され得、または宿主細胞ゲノム中に組み込まれ得る。そうして増幅されたポリヌクレオチドは、当該分野で周知の方法によって、宿主細胞から単離され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９を参照のこと。
あるいは、ＰＣＲは、ＤＮＡ配列の再生産を可能にする。ＰＣＲテクノロジーは、当該分野で周知であり、米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，８００，１５９号、同第４，７５４，０６５号および同第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｍｕｌｌｉｓら編、Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、１９９４に記載されている。
ＲＮＡは、適切なベクター中の単離されたＤＮＡを使用し、それを適切な宿主細胞中に挿入することによって得ることができる。細胞が複製し、ＤＮＡがＲＮＡへと転写される場合、ＲＮＡは、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９に示される、当業者に周知の方法を使用して単離され得る。
本明細書で使用する場合、用語「ベクター」は、目的の１つ以上の遺伝子または配列（例えば、抗ＣＤ１ａ抗体のＨＣ、ＬＣ、ＶＨ、ＶＬおよび／またはその断片をコードする核酸）を宿主細胞中に送達すること、好ましくは、それを宿主細胞において発現させることが可能な、構築物を意味する。ベクターの例には、ウイルスベクター（例えば、ＡＡＶ）、ネイキッドＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドもしくはファージベクター、カチオン性縮合剤と関連したＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中に封入されたＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、および特定の真核生物細胞、例えば、産生細胞が含まれるがこれらに限定されない。
適切なクローニングおよび発現ベクターは、種々の構成要素、例えば、プロモーター、エンハンサーおよび他の転写調節配列を含み得る。ベクターはまた、異なるベクター中への抗体可変ドメインの引き続くクローニングを可能にするように構築され得る。適切なクローニングベクターは、標準的な技術に従って構築され得、または当該分野で入手可能な多数のクローニングベクターから選択され得る。選択されるクローニングベクターは、使用が意図される宿主細胞に従って変動し得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を保有し得、および／またはベクターを含むクローンを選択する際に使用され得るマーカーの遺伝子を保有し得る。適切な例には、プラスミドおよび細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにシャトルベクター、例えば、ｐＳＡ３およびｐＡＴ２８が含まれる。これらおよび多くの他のクローニングベクターが、供給業者、例えば、ＢｉｏＲａｄ、ＳｔｒａｔａｇｅｎｅおよびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能である。
発現ベクターがさらに提供される。発現ベクターは、一般に、本開示に従うポリヌクレオチドを含む複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの不可欠な一部として、宿主細胞中で複製可能でなければならないことが暗示される。適切な発現ベクターには、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスが含まれるウイルスベクター、コスミド、およびＰＣＴ公開番号ＷＯ８７／０４４６２に開示される発現ベクターが含まれるがこれらに限定されない。ベクター構成要素には、一般に、以下のうち１つ以上が含まれ得るがこれらに限定されない：シグナル配列；複製起点；１つ以上のマーカー遺伝子；適切な転写制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサーおよびターミネーター）。発現（即ち、翻訳）のために、リボソーム結合部位、翻訳開始部位および停止コドンなどの、１つ以上の翻訳制御エレメントもまた通常は必要とされる。
一部の実施形態では、細胞（例えば、単離されたものまたは生物体内にあるもの）に、異種ポリヌクレオチド（例えば、抗ＣＤ１ａ抗体のＨＣ、ＬＣ、ＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはその抗原結合性断片）をコードする組換え核酸およびＡＡＶカプシドを含む組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）を形質導入する。組換え核酸は、形質導入された細胞内で異種ポリヌクレオチドを発現させるための調節エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、イントロン、エクソン、ポリＡ）をさらに含み得る。組換え核酸は、ウイルス逆位タンデムリピート（ＩＴＲ）配列をさらに含み得る。一部の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、当該分野で公知のＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、または任意の他の野生型または組換えＡＡＶカプシドである。ＩＴＲ配列は、当該分野で公知のＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、または任意の他の野生型または組換えＩＴＲ配列（例えば、ＡＡＶ２）であり得る。一部の実施形態では、ｒＡＡＶは、抗ＣＤ１ａ抗体のＨＣ、ＬＣ、ＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはその抗原結合性断片をコードする組換え核酸、プロモーター、ＡＡＶ ＩＴＲおよびウイルスカプシドを含む。かかるｒＡＡＶは、対象（例えば、患者）におけるＣＤ１ａによって媒介される疾患、障害または状態（例えば、ＡＤ）を処置または予防するために、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を細胞において発現させるために適している。
目的のポリヌクレオチドを含有するベクターおよび／またはポリヌクレオチド自体は、エレクトロポレーション、塩化カルシウムもしくはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ－デキストラン、または他の物質を使用するトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；および感染（例えば、ベクターが、ワクシニアウイルスなどの感染性因子である場合）が含まれるいくつかの適切な手段のいずれかによって、宿主細胞中に導入され得る。ベクターまたはポリヌクレオチドを導入する選択は、宿主細胞の特色に依存する場合が多い。
一部の実施形態では、ベクターは、配列番号８０、８１、８２、８３、８４および８５からなる群から選択される核酸配列を含むポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号８０、８１、８２、８３、８４および８５からなる群から選択される核酸配列に対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一な核酸配列を含むポリヌクレオチドを含む。
一部の実施形態では、ベクターは、ｉ）配列番号８０の核酸配列；ｉｉ）配列番号８１の核酸；またはｉｉｉ）それら両方を含むポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ベクターは、ｉ）配列番号８２の核酸配列；ｉｉ）配列番号８３の核酸；またはｉｉｉ）それら両方を含むポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ベクターは、ｉ）配列番号８４の核酸配列；ｉｉ）配列番号８１の核酸；またはｉｉｉ）それら両方を含むポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ベクターは、ｉ）配列番号８５の核酸配列；ｉｉ）配列番号８３の核酸；またはｉｉｉ）それら両方を含むポリヌクレオチドを含む。
本明細書で使用する場合、用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」、および「宿主細胞培養物」は互換的に使用され、ポリヌクレオチドおよび／またはポリヌクレオチド挿入物の取り込みのためのベクターのレシピエントであり得るまたはレシピエントであった個々の細胞または細胞培養物を意味する。宿主細胞には、「形質転換体」、「形質転換された細胞」、および「形質導入された細胞」が含まれ、これらには、初代の形質転換または形質導入された細胞および継代の数に関係なく、それに由来する子孫が含まれる。宿主細胞の子孫は、天然の、偶然の、または意図的な変異に起因して、（形態学的に、またはゲノムＤＮＡ相補性において）元の親細胞とは必ずしも完全に同一でなくてもよい。宿主細胞には、本開示のポリヌクレオチド（例えば、抗ＣＤ１ａ抗体のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド）またはそれを含むベクターでｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトおよび／または形質転換された細胞が含まれる。
宿主細胞は、原核細胞または真核細胞であり得る。例示的な真核細胞には、霊長類または非霊長類動物細胞などの哺乳動物細胞；酵母などの真菌細胞；植物細胞；および昆虫細胞が含まれる。
抗体またはその抗原結合性断片は、適切な宿主細胞を使用して、組換え作製され得る。本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸は、発現ベクター中にクローニングされ得、これは次いで、組換え宿主細胞における抗体の合成を得るために、さもなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞中に導入され得る。細胞培養、およびタンパク質またはポリペプチドの発現を行いやすい任意の宿主細胞が本開示に従って利用され得る。ある特定の実施形態では、宿主細胞は哺乳動物である。発現のための宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は当該分野で周知であり、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株が含まれる。非限定的な例示的な哺乳動物細胞には、ＮＳ０細胞、ＨＥＫ２９３およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにそれらの誘導体、例えば、２９３－６ＥおよびＣＨＯ ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ ＤＸＢ１１、およびＰｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞（ＢｉｏＷａ／Ｌｏｎｚａ、Ａｌｌｅｎｄａｌｅ、ＮＪ）が含まれるがこれらに限定されない。哺乳動物宿主細胞には、ヒト子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、およびヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）もまた含まれるがこれらに限定されない。本開示に従って使用され得る哺乳動物細胞の他の非限定的な例には、ヒト網膜芽細胞（ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）；ＣｒｕＣｅｌｌ、Ｌｅｉｄｅｎ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；浮遊培養下で成長させるためにサブクローニングされたヒト胎児由来腎臓株２９３（ＨＥＫ ２９３）または２９３細胞（Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．１９９７；３６：５９）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．１９８０；２３：２４３～２５１）；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１ ５８７）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲ１細胞（Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９８２；３８３：４４～６８）；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；ヒトヘパトーマ株（Ｈｅｐ Ｇ２）；ならびに、ＢＡＬＢ／ｃマウス骨髄腫株（ＮＳ０／１、ＥＣＡＣＣ Ｎｏ：８５１１０５０３）、ＮＳ０細胞およびＳｐ２／０細胞が含まれるがこれらに限定されない、多数の骨髄腫細胞株が含まれる。
さらに、ポリペプチドまたはタンパク質を発現する、任意の数の市販のおよび非商業的に入手可能な細胞株が本開示に従って利用され得る。最適な成長およびポリペプチドまたはタンパク質の発現のために、異なる細胞株は異なる栄養要件を有し得る、および／または異なる培養条件を要求し得、必要に応じて条件を改変することができることが、当業者によって理解されることになる。
処置の方法
一部の実施形態では、本開示は、ＣＤ１ａ活性を低減させるまたは阻害するための治療方法であって、治療有効量の、抗ＣＤ１ａ抗体もしくはその抗原結合性断片または抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を含む、投与するステップを含む、方法を提供する。処置される障害は、ＣＤ１ａ活性（例えば、ＡＤ）の除去、阻害または低減によって改善、寛解、阻害または予防される任意の疾患または状態である。
ＣＤ１ａ活性の例には、（ａ）ＣＤ１ａのＴ細胞受容体への結合；（ｂ）ＣＤ１ａにより媒介されるＴ細胞への脂質提示および引き続くＴ細胞の活性化；（ｃ）ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現；（ｄ）ＣＤ１ａ依存性ＩＬ－２産生；（ｅ）ＣＤ１ａ依存性血清ＩｇＥレベル増加；（ｆ）ＣＤ１ａ依存性抗原特異的ＩｇＥ抗体増加；ならびに／または（ｇ）ＣＤ１ａ依存性アトピー性皮膚炎関連遺伝子（例えば、これらに限定されないが、ＴＳＬＰ、ＦＬＧ、ＩＬ－３３、ＣＣＬ－２６、ＩＬ－２３ｐ４０、ＣＣＬ－２０、および／もしくはＣＣＬ－２０）発現レベル増加が含まれるがこれらに限定されない。
一部の実施形態では、本開示は、抗体またはその抗原結合性断片の投与前のＣＤ１ａの活性を投与後のＣＤ１ａ活性のレベルと比較する、方法を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象において、ＣＤ１ａのレベルを低減させるための方法であって、対象に、治療有効量の抗体もしくはその抗原結合性断片または抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、ＣＤ１ａの発現および／またはＣＤ１ａのリガンドへの結合と関連するまたはそれによって媒介される疾患、障害および／または状態を処置および／または予防するための方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の抗体もしくはその抗原結合性断片または抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片によって処置する、予防する、改善する、寛解させる、または阻害することができる疾患、障害、および／または状態の例には、炎症性腸疾患、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季カタル、季節性アレルギー、ペットアレルギー、喘息、食物アレルギー、ピーナッツアレルギー、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、アレルギー性鼻炎、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、呼吸器疾患のウイルス性増悪、小児および成体におけるウイルス感染症、（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、インフルエンザ）、蕁麻疹、好酸球性食道炎、慢性線維症、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、慢性腎疾患、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、強皮症、全身性硬化症、急性腎傷害、敗血症、膵炎、１型糖尿病、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、組織移植、アルツハイマー病、関節リウマチ、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、乾癬、小児脂肪便症およびレイノー病またはレイノー現象が含まれるがこれらに限定されない。
一部の実施形態では、本開示は、炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の抗体もしくはその抗原結合性断片または抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の抗体もしくはその抗原結合性断片または抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の抗体もしくはその抗原結合性断片または抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を使用する処置方法は、予防的処置および／または治療的処置を含む。処置が状態の臨床所見の前に投与される場合、その処置は予防的とみなされる。例えば、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片の投与は、ＡＤに対する予防的処置（例えば、１つ以上の用量、ある期間にわたって）として利用される場合、重度の掻痒症を予防するために使用され得る。治療的処置には、例えば、疾患を寛解させるもしくは疾患の重症度を低減させる、または疾患の長さを短縮することが含まれる。例えば、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片の投与は、ＡＤを有する患者における重度のそう痒を、そう痒の持続時間、強度および／または重症度を減少させることによって処置するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、予防的なものではない。
一部の実施形態では、処置される対象は、哺乳動物、特にヒト患者、例えば、これらに限定されないが、ＡＤ、接触皮膚炎、乾癬、またはＩＢＤなどの炎症性疾患を有する患者であり得る。一部の実施形態では、抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物は、皮下投与される。一部の実施形態では、抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物は、静脈内投与される。
本開示は、医薬としての使用のための、本明細書で定義される抗ＣＤ１ａ抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物をさらに包含する。一部の実施形態では、本開示は、処置および／または予防の定義された方法における使用のための、本明細書で定義される抗ＣＤ１ａ抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物を包含する。一部の実施形態では、本開示は、炎症性疾患（例えば、これに限定されないが、アトピー性皮膚炎）の少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防の定義された方法における使用のための、本明細書で定義される抗ＣＤ１ａ抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物を包含する。
本開示は、ＣＤ１ａの発現、活性および／またはＣＤ１ａのＴ細胞受容体への結合と関連するまたはそれによって媒介される疾患、障害または状態を処置するための医薬の製造における、本明細書で定義される抗ＣＤ１ａ抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物の使用もまた包含する。
組み合わせ治療
本開示の抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤ１ａの発現、活性および／またはＣＤ１ａのＴ細胞受容体への結合と関連するまたはそれによって媒介される疾患、障害または状態の少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または防止において有効である、１つ以上のさらなる治療的に活性な化合物または処置モダリティと組み合わせて投与され得る。一部の実施形態では、本明細書で定義される抗ＣＤ１ａ抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物は、炎症性疾患（例えば、これに限定されないが、アトピー性皮膚炎）の少なくとも１つの徴候および／または症状処置および／または防止において有効である、１つ以上のさらなる治療的に活性な化合物または処置モダリティと組み合わせて投与され得る。
実施形態は、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状を処置および／または予防する方法であって、それを必要とする患者に、一定量の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片、ならびに、一定量の、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防において有効である、治療的に活性な化合物または処置モダリティを投与するステップを含み、これらの量が一緒になって、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防において有効である、方法もまた包含する。
一部の実施形態では、本開示は、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状を処置および／または予防する方法であって、それを必要とする患者に、一定量の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片、および一定量の、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防において有効である、治療的に活性な化合物または処置モダリティを投与するステップを含み、これらの量が一緒になって、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防において相乗効果を達成する、即ち、組み合わせが「相乗的」である（即ち、組み合わせが、２つ以上の個々の治療の単なる相加効果よりも大きい効果を提供する）、方法を含む。かかる相乗的組み合わせ治療では、投与される治療剤をより少ない投薬量で有利に利用し、したがって、種々の単剤療法と関連する可能性のある毒性または合併症を回避することができる。
ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防に有用である、さらなる治療的に活性な化合物には、例えば、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－３１、ＩＬ３６、ＩＦＮα、ＩＦＮγのうち１つまたは複数に対するアンタゴニスト、もしくはそれらのそれぞれの受容体のアンタゴニスト、抗炎症剤、組換えインターフェロンガンマ、ＮＳＡＩＤ、ステロイド、カルシニューリン阻害剤、および／またはコルチコステロイドが含まれる。一部の実施形態では、さらなる治療的に活性な化合物は、デュピルマブを含む。
本開示は、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防における使用のための、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防において有効である治療的に活性な化合物または処置モダリティ、ならびに薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物を包含する。本開示は、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防における使用のための、相乗的治療有効量の抗ＣＤ１ａ抗体、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防において有効である相乗的治療有効量の治療的に活性な化合物または処置モダリティ、ならびに薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物を包含する。組成物は、例えば、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防において有効である少なくとも１つの他の治療的に活性な化合物または処置モダリティであるがこれらに限定されないさらなる治療剤をさらに含み得る。
当業者は、本明細書で提供される開示に基づいて、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状を処置および／または予防するために、少なくとも１つのさらなる治療剤で以前に処置されたまたはそれを現在受けている患者に、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状を処置および／または予防する方法が、相乗的治療有効量の抗ＣＤ１ａ抗体およびＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防において有効である相乗的治療有効量の治療的に活性な化合物または処置モダリティを投与することを包含することを理解する。
かかるさらなる治療剤は、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／または症状を処置および／または予防するための標準治療である薬剤を包含する。即ち、組み合わせ治療は、デュピルマブおよび当該分野で公知の任意の他の治療が含まれるがこれらに限定されない異なる治療をすでに受けているＡＤ患者の治療レジメンに追加され得る。
当業者は、公知の方法に従って、ＡＤを有する患者に投与するために本開示の組み合わせにおいて使用される、各化合物の適切な量、用量または投薬量を、年齢、体重、総体的な健康、投与される化合物、投与の経路、ＡＤの処置の性質および進行、ならびに他の薬物療法の存在などの因子を考慮に入れて、決定することができる。
抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む組み合わせ治療の予防剤または治療剤は、同じ医薬組成物中で対象に投与され得る（例えば、治療薬が共製剤化される）。あるいは、組み合わせ治療の予防剤または治療剤は、別々の医薬組成物中で対象に同時発生的に投与され得る（例えば、治療が同時投与される）。組み合わせ治療の予防剤または治療剤は、同じ投薬レジメンに従って（例えば、両方の治療が毎日投与される）または異なる投薬レジメンに従って（例えば、１つの治療が毎日投与され、他の治療が毎週投与される）投与され得る。予防剤または治療剤は、同じまたは異なる経路の投与によって、対象に投与され得る。
本開示は、処置および／または予防の定義された方法における使用のための、本明細書で定義される抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む、組み合わせ治療の予防剤または治療剤をさらに包含する。本明細書に記載される処置および／または予防の方法に言及する実施形態では、かかる実施形態はまた、その処置および／もしくは予防における使用のための、またはあるいは、ＡＤの少なくとも１つの徴候および／もしくは症状のその処置および／もしくは予防における使用のための医薬の製造のための、抗ＣＤ１ａ抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が含まれる、組み合わせ治療に関するさらなる実施形態もまた含む。
本開示は、単独での、または他の治療と組み合わせた、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を必要とする対象への、単独での、または他の治療と組み合わせた、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物の投与のためのプロトコールを提供する。本開示の組み合わせ治療の治療（例えば、予防剤または治療剤）は、対象に、付随的または逐次的に投与され得る。本開示の組み合わせ治療の治療（例えば、予防剤または治療剤）は、周期的にも投与され得る。周期的治療には、治療（例えば、薬剤）のうち１つの副作用を回避もしくは低減させるために治療（例えば、薬剤）のうち１つに対する抵抗性の発達を低減させるため、および／または治療の効力を改善するために、一定期間にわたる第１の治療（例えば、第１の予防剤または治療剤）の投与、その後の、一定期間にわたる第２の治療（例えば、第２の予防剤または治療剤）の投与、およびこの逐次的な投与、を反復すること、即ち、サイクルが関与する。
本開示の組み合わせ治療の治療（例えば、予防剤または治療剤）は、対象に同時発生的に投与され得る。用語「同時発生的に」は、治療（例えば、予防剤または治療剤）の投与が正確に同時であることに限定されないが、むしろ、それらが他の方法で投与された場合よりも増加した利益を提供するように他の治療と一緒に本開示の抗体またはそのコンジュゲートが作用できるような順番で、かつそのような時間間隔内に、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物が対象に投与されることを意味する。例えば、各治療は、対象に、同時に、または異なる時点において任意の順序で逐次的に投与され得る；しかし、同時に投与されない場合、これらは、所望の治療効果または予防効果を提供するために、時間的に十分に接近して投与すべきである。各治療は、任意の適切な形態で、任意の適切な経路によって、対象に別々に投与され得る。種々の実施形態では、治療（例えば、予防剤または治療剤）は、１５分未満、３０分未満、１時間未満離れて、約１時間離れて、約１時間～約２時間離れて、約２時間～約３時間離れて、約３時間～約４時間離れて、約４時間～約５時間離れて、約５時間～約６時間離れて、約６時間～約７時間離れて、約７時間～約８時間離れて、約８時間～約９時間離れて、約９時間～約１０時間離れて、約１０時間～約１１時間離れて、約１１時間～約１２時間離れて、２４時間離れて、４８時間離れて、７２時間離れて、または１週間離れて、対象に投与される。他の実施形態では、２つ以上の治療（例えば、予防剤または治療剤）は、同じ患者来院内に、投与される。
組み合わせ治療の予防剤または治療剤は、同じ医薬組成物中で対象に投与され得る。あるいは、組み合わせ治療の予防剤または治療剤は、別々の医薬組成物で、対象に同時発生的に投与され得る。予防剤または治療剤は、同じまたは異なる経路の投与によって、対象に投与され得る。
診断的使用
本明細書に記載の抗ＣＤ１ａ抗体、抗体組成物および方法は、イムノアッセイ、ならびにＥ－セレクチン媒介性障害の診断、および処置の評価のための使用を含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの有用性を有する。これらの方法は、ＣＤ１ａの存在と関連する障害を有するヒト患者を診断、評価および処置するために特に適切である。ＣＤ１ａの存在と関連するこの障害には、ＡＤ、接触皮膚炎、乾癬、およびＩＢＤなどの炎症性疾患が含まれるがこれらに限定されない。
一部の実施形態では、サンプル中のＣＤ１ａの存在を検出するための方法であって、ＣＤ１ａを含むと疑われるサンプルを、ＣＤ１ａに対して特異的な抗体と接触させるステップ、および抗体と結合したＣＤ１ａの存在を検出するステップを含み、それによって、サンプル中のＣＤ１ａを検出する、方法が存在する。ＣＤ１ａが固体支持体に結合され、サンプルがそれに添加されて、サンプル中のＣＤ１ａに抗体を結合させるアッセイが含まれるがこれに限定されない、抗体と結合したＣＤ１ａを検出するための方法が、当該分野で周知である。固体支持体に結合した抗体と同じまたはそれとは異なる第２のＣＤ１ａ抗体が添加され、直接的標識化（即ち、第２の抗体は、検出可能な標識にコンジュゲートされる）によって、または例えば、第２の抗体の定常ドメインと反応し、検出可能な標識を含む、別の種由来の第３の抗体を添加することによって、検出され得る。したがって、このアッセイは、サンプル中のＣＤ１ａの存在または非存在を検出するために使用され得る。
一部の実施形態では、サンプル中のＣＤ１ａの濃度を決定するための方法であって、検出可能な標識にカップリングされたＣＤ１ａを含む標識された競合相手を提供するステップ；ＣＤ１ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を提供するステップ；サンプル、抗体および標識された競合相手を組み合わせるステップであって、サンプル中のＣＤ１ａが、抗体への結合について、標識された競合相手と競合する、ステップ；ならびに標識の検出によって、抗体に結合していない標識された競合相手の量を測定することによって、このサンプル中のＣＤ１ａの濃度を決定するステップ、を含む方法が存在する。サンプルの非存在下で抗体に結合した標識された競合相手の量が、サンプルが添加された場合の抗体に結合した標識された競合相手の量と比較される。サンプルの存在下での結合した標識された競合相手の減少の量は、サンプル中に存在する標識されていないＣＤ１ａの量の指標であり、その結果、このアッセイは、サンプル中のＣＤ１ａの存在およびレベルを評価するために使用され得る。一部の実施形態では、ＣＤ１ａは、可溶性ＣＤ１ａである。一部の実施形態では、ＣＤ１ａは、膜結合型Ｅ ＣＤ１ａである。
一実施形態では、対象において、増加したレベルのＣＤ１ａと関連する疾患または障害に対する処置の有効性を評価するための方法であって、対象に処置を投与するステップ、および処置の前に対象から得られたサンプル中のＣＤ１ａのレベルを、処置の後に対象から得られた他の点では同一のサンプル中のＣＤ１ａのレベルと比較するステップ、を含み、サンプル中のＣＤ１ａのレベルが、ＣＤ１ａ特異的抗体を使用して評価され、さらに、処置の前に対象から収集されたサンプル中のＣＤ１ａのレベルと比較した、処置の後に対象から収集されたサンプル中のＣＤ１ａのより低いレベルが、処置の過程の有効性の指標である、方法が存在する。
ＣＤ１ａ特異的抗体または標識された競合相手に関して、「標識された」という用語は、検出可能な物質を抗体または標識された競合相手にカップリングする（即ち、物理的に連結する）ことによる直接的標識化、ならびにそれを直接標識される別の試薬にカップリングすることによる、抗体または標識された競合相手の間接的標識化を含む。間接的標識化の一例には、蛍光標識した二次抗体を使用した一次抗体の検出が含まれる。ポリペプチドの検出のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技術には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光が含まれる。
用語「サンプル」は、対象から単離された組織、細胞および生物学的流体（例えば、血液、ＣＳＦ、尿など）、ならびに対象内に存在する組織、細胞および流体を含む意図である。
本明細書に記載される抗体、標識された競合相手、および潜在的な治療的化合物は、様々な検出システムを用いたいくつかの他の均一および不均一イムノアッセイのいずれかとの使用のためにも適切である。
組成物
本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、医薬組成物として製剤化され得る。医薬組成物は、凍結乾燥された製剤または水溶液の形態の、薬学的に許容できる担体、賦形剤および／または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版、２００５、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ編）をさらに含み得る。本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容できる担体」または「薬学的に許容できる賦形剤」には、活性成分と組み合わされた場合に、成分が生物学的活性を保持することを可能にし、かつ、対象の免疫系とは非反応性である任意の材料が含まれる。
例には、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）、水、通常の生理食塩水（０．９％）、エマルション（例えば、油／水エマルション）および種々の型の湿潤剤などの標準の医薬担体のいずれかが含まれるがこれらに限定されない。エアロゾルまたは非経口投与のために好ましい希釈剤は、ＰＢＳおよび通常の生理食塩水である。
許容できる担体、賦形剤、または安定剤は、投薬量および濃度においてレシピエントにとって非毒性であり、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸、および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンが含まれる抗酸化剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン；グルコース、マンノース、もしくはデキストランが含まれる、単糖、二糖および他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性物質、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）、ポリソルベート６０（ＰＳ６０）、ポリソルベート２０（ＰＳ２０））もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含み得る。薬学的に許容できる賦形剤は本明細書にさらに記載される。
本開示の医薬化合物には、１つ以上の薬学的に許容できる塩が含まれ得る。かかる塩の例には、酸付加塩および塩基付加塩が含まれる。酸付加塩には、非毒性無機酸、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などに由来するもの、ならびに非毒性有機酸、例えば、脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換されたアルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族ならびに芳香族スルホン酸などに由来するものが含まれる。塩基付加塩には、アルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどに由来するもの、ならびに非毒性有機アミン、例えば、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどに由来するものが含まれる。
本開示の医薬組成物は、薬学的に許容できる抗酸化剤もまた含み得る。薬学的に許容できる抗酸化剤の例には、以下が含まれる：（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ－トコフェロールなど；および（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸など。
本開示の医薬組成物において使用され得る適切な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物、植物油、例えば、オリーブ油、ならびに注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが含まれる。適切な流動性は、例えば、コーティング材料、例えば、レシチンの使用によって、分散物の場合には要求される粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。
これらの組成物は、アジュバント、例えば、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤もまた含み得る。微生物の存在の防止は、無菌化手順、ならびに種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めること、の両方によって確実にされ得る。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを組成物中に含めることが望ましい場合もある。さらに、注射可能な医薬形態の延長された吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによってもたらされ得る。
医薬組成物は、典型的には、製造および貯蔵の条件下で無菌かつ安定でなければならない。組成物は、高い薬物濃度に適切な、溶液、マイクロエマルジョン、リポソームまたは他の秩序立った構造として製剤化され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、コーティング、例えば、レシチンの使用によって、分散物の場合には要求される粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含めることが適切である。注射可能な組成物の延長された吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることによってもたらされ得る。
無菌の注射可能な溶液は、上に列挙した成分のうち１つまたはその組み合わせと共に、適切な溶媒中に活性化合物を要求される量で取り込み、その後、必要に応じて、無菌化精密濾過することによって、調製され得る。
一般に、分散物は、基本分散媒および上に列挙したものからの要求される他の成分を含む無菌のビヒクル中に活性化合物を取り込むことによって調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌の粉末の場合、調製の好ましい方法は、その以前に無菌濾過された溶液から、活性成分プラス任意のさらなる所望の成分の粉末を得る、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
本開示の医薬組成物は、点眼投与に適切な製剤で、調製、包装または販売され得る。かかる製剤は、例えば、水性または油性液体担体中の活性成分の０．１％～１．０％（ｗ／ｗ）溶液または懸濁物を例えば含む点眼薬の形態であり得る。かかる点眼薬は、緩衝剤、塩、または本明細書に記載されるさらなる成分のうち１つ以上の他のものをさらに含み得る。有用な他の点眼投与可能な製剤には、微結晶形態で、またはリポソーム調製物中に、活性成分を含むものが含まれる。
本明細書で使用する場合、「さらなる成分」には、以下のうち１つ以上が含まれるがこれらに限定されない：賦形剤；表面活性剤；分散剤；不活性希釈剤；造粒および崩壊剤；結合剤；滑沢剤；甘味剤；香味剤；着色剤；防腐剤；生理学的に分解可能な組成物、例えば、ゼラチン；水性ビヒクルおよび溶媒；油性ビヒクルおよび溶媒；懸濁化剤；分散剤または湿潤剤；乳化剤、乳化破壊剤（demulcent）；緩衝液；塩；増粘剤；フィラー；乳化剤；抗酸化剤；抗生物質；抗真菌剤；安定化剤；および薬学的に許容できるポリマー性または疎水性材料。本開示の医薬組成物中に含められ得る他の「さらなる成分」は、当該分野で公知であり、例えば、本明細書で参照によって組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９８５）に記載されている。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、水性緩衝溶液１ｍＬ中１００ｍｇの抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、ＡＢ５７１）またはその抗原結合性断片を含有するバイアル中に製剤化される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、水性緩衝溶液１ｍＬ中１５０ｍｇの抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、ＡＢ５７１）またはその抗原結合性断片を含有するバイアル中に製剤化される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、任意選択により皮下投与のために、水性緩衝溶液１ｍＬ中１５ｍｇ、４０ｍｇ、１００ｍｇ、３００ｍｇ、または６００ｍｇの抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、ＡＢ５７１）またはその抗原結合性断片を含有するバイアル中に製剤化される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、任意選択により静脈内投与のために、水性緩衝溶液１ｍＬ中５００ｍｇの抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、ＡＢ５７１）またはその抗原結合性断片を含有するバイアル中に製剤化される。
一部の実施形態では、医薬組成物は、約２５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍｌの抗体またはその抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約１００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、ＳＣおよび／またはＩＶ投与に適した医薬組成物は、約１００ｍｇ／ｍＬの抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、ＡＢ５７１）またはその抗原結合性断片を含む。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号５４または配列番号７３のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む無菌の水溶液として、静脈内または皮下製剤で投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２４のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む無菌の水溶液として、静脈内または皮下製剤で投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号５４または配列番号７３のアミノ酸配列を含むポリペプチドおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む無菌の水溶液として、静脈内または皮下製剤で投与される。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、ＡＢ５７１）またはその抗原結合性断片は、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、約２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、または約１５０ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合性断片を含有する無菌の水溶液である静脈内または皮下製剤として投与される。一部の実施形態では、静脈内または皮下製剤は、約５～６の範囲のｐＨで酢酸ナトリウム、ポリソルベート８０、および塩化ナトリウムを含む無菌の水溶液である。一部の実施形態では、静脈内製剤は、ｐＨ５．５で、２０ｍＭ酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０および１４０ｍＭ塩化ナトリウムと共に、５または１０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、無菌の水溶液である。さらに、抗体またはその抗原結合性断片を含む溶液は、多くの他の化合物の中でも、グルタミン酸、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、トレハロース、グリシン、ポリ（エチレン）グリコール、ＥＤＴＡ、メチオニン、ポリソルベート８０およびそれらの任意の組み合わせ、ならびに当該分野で公知の多くの他の化合物を含み得る。
一実施形態では、本開示の医薬組成物は、以下の構成要素を含む：ｐＨ５．８で、５０ｍｇ／ｍＬまたは１００ｍｇ／ｍＬの本開示の抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、ＡＢ５７１）または抗原結合性断片、２０ｍＭヒスチジン、８．５％スクロースおよび０．０２％ポリソルベート８０、０．００５％ＥＤＴＡ。一実施形態では、医薬組成物は、以下の構成要素を含む：ｐＨ５．８で、１００ｍｇ／ｍＬの本開示の抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、ＡＢ５７１）または抗原結合性断片、１０ｍＭヒスチジン、５％スクロースおよび０．０１％ポリソルベート８０。
一部の実施形態では、医薬組成物は、１００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＡＢ５７１）、１．１２ｍｇ／ｍＬ Ｌ－ヒスチジン、２．６７ｍｇ／ｍＬ Ｌ－ヒスチジン塩酸塩一水和物、８５ｍｇ／ｍＬスクロース、０．０５ｍｇ／ｍＬエデト酸二ナトリウム二水和物および０．２ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０ ｐＨ５．８を公称充填体積１．０ｍＬで含む。かかる医薬組成物は、ＳＣまたはＩＶ投与に適したものである。
かかる医薬組成物は、液体製剤として、または凍結乾燥された粉末として、提供され得る。粉末が最大体積で再構成される場合、組成物は、同じ製剤を保持する。あるいは、粉末は、半分体積で再構成され得、その場合、組成物は、同じ構成要素を含むが、濃度が２倍である。
治療剤に関して、この薬剤が例えば組み合わせ治療において使用される小分子である場合、これは、当該分野で周知のように、例えば、生理的に許容できるカチオンまたはアニオンと組み合わせた、生理的に許容できるエステルまたは塩の形態で、医薬組成物中に存在し得る。
本明細書に記載される医薬組成物の製剤は、薬理学の分野で公知のまたは今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、かかる調製方法は、活性成分を、担体または１つ以上の他の補助成分と関連させるステップ、および次いで、必要な場合または望ましい場合、産物を所望の単回用量単位または複数用量単位へと成形または包装するステップを含む。
一部の実施形態では、本開示の組成物は、エンドトキシンおよび／または関連の発熱性物質を実質的に含まない、発熱物質を含まない製剤である。エンドトキシンには、微生物の内側に制限される毒素が含まれ、これは、微生物が破壊または死亡した場合に放出される。発熱性物質には、細菌および他の微生物の外膜からの、発熱誘導性の熱安定性物質（糖タンパク質）もまた含まれる。これらの物質は、ヒトに投与されると、発熱、低血圧およびショックを引き起こし得る。潜在的な有害作用に起因して、静脈内投与される医薬薬物溶液から、低い量のエンドトキシンでさえも除去することが有利である。食品医薬品局（「ＦＤＡ」）は、静脈内薬物適用のための、単一の１時間の期間における、体重１キログラム当たり１用量当たり、５エンドトキシン単位（ＥＵ）の上限を設定している（Ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ、Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｆｏｒｕｍ ２６（１）：２２３（２０００））。治療的タンパク質が、体重１キログラム当たり数百または数千ミリグラムの量で投与される場合、微量のエンドトキシンでさえも除去することが有利である。一実施形態では、組成物中のエンドトキシンおよび発熱物質のレベルは、１０ＥＵ／ｍｇ未満、または５ＥＵ／ｍｇ未満、または１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。別の実施形態では、組成物中のエンドトキシンおよび発熱物質のレベルは、約１０ＥＵ／ｍｇ未満、または約５ＥＵ／ｍｇ未満、または約１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。
投薬および投与
本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬または無菌の組成物を調製するために、抗体は、薬学的に許容できる担体または賦形剤（上記を参照のこと）と混合される。治療剤および診断剤の製剤は、例えば、凍結乾燥された粉末、スラリー、水溶液、ローションまたは懸濁物の形態の、生理学的に許容できる担体、賦形剤または安定剤と混合することによって調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．を参照のこと）。
治療薬のために投与レジメンを選択することは、実体の血清または組織ターンオーバー速度、症状のレベル、実体の免疫原性、および生物学的マトリックス中の標的細胞のアクセス可能性が含まれるいくつかの因子に依存する。ある特定の実施形態では、投与レジメンは、許容できるレベルの副作用と合致した、患者に送達される治療薬の量を最大化する。したがって、送達される生物製剤の量は、特定の実体、および処置されている状態の重症度に一部依存する。抗体、サイトカインおよび小分子の適切な用量を選択する際のガイダンスは、入手可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ、１９９６、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ、Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ、ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）、１９９１、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ｂａｃｈ（編）、１９９３、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ｂａｅｒｔら、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２００３；３４８：６０１～６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９９９；３４１：１９６６～１９７３；Ｓｌａｍｏｎら、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２００１；３４４：７８３～７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０００；３４２：６１３～６１９；Ｇｈｏｓｈら、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２００３；３４８：２４～３２；Ｌｉｐｓｋｙら、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０００；３４３：１５９４～１６０２を参照のこと）。
適切な用量の決定は、例えば、当該分野で公知の、または処置に影響を与えると疑われるもしくはは処置に影響を与えると予測される、パラメーターまたは因子を使用して、臨床医によってなされる。一般に、用量は、最適な用量よりもいくらか少ない量で開始し、任意の負の副作用と比較して所望のまたは最適な効果が達成されるまで、その後小さい増分ずつ増加される。特定の投薬プロトコールは、著しい望ましくない副作用を回避する最大用量または投薬頻度を伴うものであり得る。
一部の実施形態では、ＣＤ１ａ機能活性、例えば、（ａ）ＣＤ１ａのＴ細胞受容体への結合；（ｂ）ＣＤ１ａにより媒介されるＴ細胞への脂質提示および引き続くＴ細胞の活性化；（ｃ）ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現；（ｄ）ＣＤ１ａ依存性ＩＬ－２産生；（ｅ）ＣＤ１ａ依存性血清ＩｇＥレベル増加；（ｆ）ＣＤ１ａ依存性抗原特異的ＩｇＥ抗体増加；および（ｇ）ＣＤ１ａ依存性アトピー性皮膚炎関連遺伝子（例えば、これらに限定されないが、ＴＳＬＰ、ＦＬＧ、ＩＬ－３３、ＣＣＬ－２６、ＩＬ－２３ｐ４０、ＣＣＬ－２０、および／またはＣＣＬ－２０）発現レベル増加を低減させる、中和する、阻害するために、有効用量の抗ＣＤ１ａ抗体が投与される。
本明細書で使用する場合、薬物、化合物または医薬組成物の「有効投薬量」、「有効用量」、「有効量」または「治療有効量」は、任意の１つ以上の有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量である。予防的使用について、有益なまたは所望の結果には、リスクを排除もしくは低減させること、重症度を低下させること、または疾患、その合併症、および疾患の発達の間に存在する中間の病理学的表現型の生化学的、組織学的および／もしくは行動学的症状を含む、疾患の開始を遅延させることが含まれる。治療的使用について、有益なまたは所望の結果には、検出可能な臨床結果、例えば、体重減少の比率を低減もしくは減少させること、またはＣＤ１ａの発現から生じる１つ以上の症状を低減させること、疾患を処置するために要求される他の薬物療法の用量を減少させること、別の薬物療法の効果を増強すること、および／もしくは患者の疾患の進行を遅延させること、が含まれる。有効投薬量は、１つ以上の投与で投与され得る。本開示の目的のために、薬物、化合物、または医薬組成物の有効投薬量は、予防的処置または治療的処置を直接的または間接的に達成するのに十分な量である。臨床状況において理解されるように、薬物、化合物、または医薬組成物の有効投薬量は、別の薬物、化合物、または医薬組成物と併せて達成されてもされなくてもよい。したがって、「有効投薬量」は、１つ以上の治療剤を投与する観点から検討され得、単一の薬剤は、１つ以上の他の薬剤と併せて、望ましい結果が達成され得るまたは達成される場合に、有効量で与えられたとみなされ得る。
一部の実施形態では、有効用量の抗ＣＤ１ａ抗体は、これらに限定されないが、ＡＤ、接触皮膚炎、乾癬およびＩＢＤなどの炎症性疾患を有する患者に投与される。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、Ａｂ５７１）の有効用量は、これらに限定されないが、ＡＤ、接触皮膚炎、乾癬およびＩＢＤなどの炎症性疾患が含まれるがこれらに限定されない、ＣＤ１ａの発現および／またはＣＤ１ａ活性と関連するまたはそれによって媒介される疾患、障害および状態を処置および／または予防するために投与される。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、Ａｂ５７１）の有効用量は、ＡＤの徴候または症状の発生を予防するまたは低減させるために投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、Ａｂ５７１）の予防的投与は、１回投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、Ａｂ５７１）の予防的投与は、継続的に投与される（例えば、ある期間にわたって１回以上の投薬）。
一部の実施形態では、方法または使用は、約１ｍｇ～約１０００ｍｇの用量を投与することを含む。一部の実施形態では、方法または使用は、約１ｍｇ～１０００ｍｇの用量を初期固定用量として投与することを含む。一部の実施形態では、方法または使用は、約１ｍｇ～約２ｍｇ、約２ｍｇ～約５ｍｇ、約５ｍｇ～約１０ｍｇ、約１０ｍｇ～約２０ｍｇ、約２０ｍｇ～約３０ｍｇ、約３０ｍｇ～約４０ｍｇ、約４０ｍｇ～約５０ｍｇ、約５０ｍｇ～約６０ｍｇ、約６０ｍｇ～約７０ｍｇ、約７０ｍｇ～約８０ｍｇ、約８０ｍｇ～約９０ｍｇ、約９０ｍｇ～約１００ｍｇ、約１００ｍｇ～約１５０ｍｇ、約１５０ｍｇ～約２００ｍｇ、約２００ｍｇ～約３００ｍｇ、約３００ｍｇ～約４００ｍｇ、約４００ｍｇ～約５００ｍｇ、約５００ｍｇ～約６００ｍｇ、約６００ｍｇ～約７００ｍｇ、約７００ｍｇ～約８００ｍｇ、約８００ｍｇ～約９００ｍｇまたは約９００ｍｇ～約１０００ｍｇの用量を任意選択により初期固定用量として投与することを含む。一部の実施形態では、方法または使用は、抗ＣＤ１ａ抗体もしくはその抗原結合性断片またはその医薬組成物の約１５ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇまたは１０００ｍｇの用量を投与することを含む。一部の実施形態では、用量は、初期固定用量である。
一部の実施形態では、方法または使用は、本発明の抗ＣＤ１ａ抗体もしくはその抗原結合性断片またはその医薬組成物の約２ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇまたは１５０ｍｇの用量を投与することを含む。一部の実施形態では、方法または使用は、本発明の抗ＣＤ１ａ抗体もしくはその抗原結合性断片またはその医薬組成物の約２ｍｇ、１０ｍｇ、３０ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇまたは１５０ｍｇの用量を毎週投与することを含む。一部の実施形態では、方法または使用は、抗ＣＤ１ａ抗体（例えば、ＡＢ５７１）もしくはその抗原結合性断片またはその医薬組成物の約２ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇまたは１５０ｍｇの用量を、毎週、皮下投与することを含む。
一部の実施形態では、方法または使用は、抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約３００ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約２５０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ～約１５０ｍｇ／ｋｇまたは約７５ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇの用量を、任意選択により初期用量として投与することを含む。初期用量には、１つ以上の引き続く用量が後に続き得る。一部の実施形態では、１つ以上の引き続く用量は、毎週、１週間おき、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎または１２週間毎の少なくともいずれかで投与され得る。
初期用量には、１つ以上の引き続く用量が後に続き得る。一部の実施形態では、引き続く用量は、抗ＣＤ１ａ抗体の、初期用量と比較して同じ用量、より少ない用量またはより多い用量である。一部の実施形態では、１つ以上の引き続く用量は、毎週、１週間おき、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎または１２週間毎の少なくともいずれかで投与され得る。特定の投薬プロトコールは、著しい望ましくない副作用を回避する最大用量または投薬頻度を伴うものである。
本開示の医薬組成物は、当該分野で公知の種々の方法のうち１つ以上を使用して１つ以上の経路の投与によっても投与され得る。当業者には理解されるように、投与の経路および／または形式は所望の結果に応じて変動する。本開示の抗体のために選択される投与の経路には、例えば、注射または注入による、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄または他の非経口経路の投与が含まれる。非経口投与は、通常は注射による、経腸および局部投与以外の投与形式であり得、限定なしに、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入が含まれる。あるいは、本開示の組成物は、非経口でない経路、例えば、局部、表皮または粘膜投与経路によって、例えば、鼻腔内、経口、膣、直腸、舌下または局部に投与され得る。
一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は静脈内投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は皮下投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、局部に投与される。
一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、毎週、静脈内または皮下投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、約１５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約３００ｍｇ、または約６００ｍｇの単位用量で、毎週、皮下投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、約１５０ｍｇまたは約５００ｍｇの単位用量で、毎週、静脈内投与される。
一部の実施形態では、対象は、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を毎週投与され、疾患（例えば、ＡＤ）の少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防において有効である、治療的に活性な化合物または処置モダリティを毎日、毎週、隔週、毎月、または必要に応じて投与される。本開示は、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を単独で、または他の治療と組み合わせて、それを必要とする対象に投与するためのプロトコールを提供する。本開示の組み合わせ治療の治療（例えば、予防剤または治療剤）は、対象に、付随的または逐次的に投与され得る。本開示の組み合わせ治療の治療（例えば、予防剤または治療剤）は、周期的にも投与され得る。
一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体もしくはその抗原結合性断片またはそれを含む医薬組成物は、約１週間に２回、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、５週間毎に１回、６週間毎に１回、７週間毎に１回、８週間毎に１回、９週間毎に１回、１０週間毎に１回、１カ月に２回、１カ月に１回、２カ月毎に１回、３カ月毎に１回、４カ月毎に１回、５カ月毎に１回、６カ月毎に１回、７カ月毎に１回、８カ月毎に１回、９カ月毎に１回、１０カ月毎に１回、１１カ月毎に１回または１２カ月毎に１回、投与される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１ａ抗体もしくはその抗原結合性断片またはそれを含む医薬組成物は、約４週間毎に１回、投与される。
一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回または５週間毎に１回、静脈内または皮下投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、約１５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約３００ｍｇ、または約６００ｍｇの単位用量で、２週間毎に１回、３週間毎に１回または４週間毎に１回、皮下投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、約３０ｍｇの単位用量で、４週間毎に１回（Ｑ４Ｗ）、皮下投与される。
一部の実施形態では、用量の一部は、静脈内ボーラスによって投与され、用量の残りは、抗体製剤の注入によって投与される。例えば、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片の０．０１ｍｇ／ｋｇ静脈内注射は、ボーラスとして与えられ得、抗体用量の残りは、静脈内注射によって投与され得る。所定の用量の抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、１時間半～２時間～５時間の期間にわたって、投与され得る。
必要であれば、組成物は、可溶化剤、および、注射部位の疼痛を和らげるためのリドカインなどの局所麻酔薬もまた含み得る。さらに、例えば、吸入器またはネブライザー、およびエアロゾル化剤を伴う製剤の使用により、経肺投与もまた使用され得る。例えば、それぞれの全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第６，０１９，９６８号、同第５，９８５，３２０号、同第５，９８５，３０９号、同第５，９３４，２７２号、同第５，８７４，０６４号、同第５，８５５，９１３号、同第５，２９０，５４０号、および同第４，８８０，０７８号；およびＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１９２４４号、同第ＷＯ９７／３２５７２号、同第ＷＯ９７／４４０１３号、同第ＷＯ９８／３１３４６号、および同第ＷＯ９９／６６９０３号を参照のこと。
キット
本開示は、本明細書に記載される抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片のいずれかまたは全てを含むキットもまた提供する。本開示のキットは、本明細書に記載される抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片および本明細書に記載される本開示の方法のいずれかに従った使用に関する指示を含む１つ以上のコンテナを含む。一般に、これらの指示は、上記の治療的処置のための抗体の投与に関する記載を含む。一部の実施形態では、キットは、単回投薬の投与単位を生じさせるために提供される。ある特定の実施形態では、キットは、乾燥タンパク質を有する第１のコンテナおよび水性製剤を有する第２のコンテナの両方を含み得る。ある特定の実施形態では、アプリケーター、例えば、単一のおよび複数チャンバーの事前充填シリンジまたはデバイス（例えば、液体シリンジおよびリオシリンジ（lyosyringe））を含むキットが含まれる。
一部の実施形態では、キットは、抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片を含むアプリケーターを含み、ここで、アプリケーターは、患者（例えば、ＡＤを有する患者）による自己投与のために設計されたまたはそれが許容できるものである。一部の実施形態では、自己投与は皮下投与による。
抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片の使用に関する指示は、一般に、意図した処置のための投薬量、投薬スケジュール、および投与の経路（例えば、ＳＣまたはＩＶ）に関する情報を含む。コンテナは、単位用量、バルク包装（例えば、多用量包装）またはサブ単位用量であり得る。本開示のキット中に供給される指示は、典型的には、ラベルまたは添付文書（例えば、キット中に含まれる紙シート）上の書面による指示であるが、機械可読指示（例えば、磁気または光学保存ディスク上で運搬される指示）もまた許容できる。
本開示のキットは、適切な包装中にある。適切な包装には、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性包装（例えば、密封Ｍｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などが含まれるがこれらに限定されない。特定のデバイス、例えば、インヘラー、経鼻投与デバイス（例えば、アトマイザー）または注入デバイス、例えば、ミニポンプと組み合わせた使用のための包装もまた企図される。キットは、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、コンテナは、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。コンテナもまた、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、コンテナは、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性な薬剤は、本開示の抗ＣＤ１ａ抗体である。コンテナは、さらなる治療剤をさらに含み得る。
一実施形態では、これに限定されないがＡＤなどの炎症性疾患の症状の処置または予防において有効である第２の治療的に活性な化合物または処置モダリティをさらに含むキットが存在し、ここで、抗ＣＤ１ａ抗体および第２の化合物またはモダリティの量が一緒になって、炎症性疾患の症状の処置または予防において相乗効果を達成する、即ち、組み合わせが「相乗的」である（即ち、組み合わせが、２つ以上の個々の治療の単なる相加効果よりも大きい効果を提供する）。相乗的組み合わせ治療を含むかかるキットにより、投与される治療剤をより少ない投薬量で有利に利用し、したがって、種々の単剤療法と関連する可能性のある毒性または合併症を回避することができる。
一部の実施形態では、キットは、例えば、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－３１、ＩＬ３６、ＩＦＮα、ＩＦＮγのうち１つまたは複数に対するアンタゴニスト、もしくはそれらのそれぞれの受容体のアンタゴニスト、抗炎症剤、組換えインターフェロンガンマ、ＮＳＡＩＤ、ステロイド、カルシニューリン阻害剤、デュピルマブおよび／またはコルチコステロイドが含まれる、ＡＤの徴候および／または症状の処置または予防のために有用な少なくとも１つのさらなる治療的に活性な化合物をさらに含み得る。
キットは、任意選択により、さらなる構成要素、例えば、緩衝液および説明情報を提供し得る。通常、キットは、コンテナ、およびコンテナ上にあるまたはそれと関連したラベルまたは添付文書を含む。
本開示は、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかまたは全てを含む診断用キットもまた提供する。診断用キットは、例えば、サンプル中のＣＤ１ａの存在を検出するために有用である。一部の実施形態では、診断用キットは、個体をＣＤ１ａに媒介される疾患、障害または状態を発生するリスクにさらす可能性がある不顕性の疾患、障害または状態を有する個体を同定するために使用され得る。一部の実施形態では、診断用キットは、ＣＤ１ａに媒介される疾患、障害または状態を有する疑いがある個体におけるＣＤ１ａの存在および／またはレベルを検出するために使用され得る。
本開示の診断用キットは、本明細書に記載される抗ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片および本明細書に記載される本開示の方法のいずれかに従った使用に関する指示を含む１つ以上のコンテナを含む。一般に、指示は、ＣＤ１ａに媒介される疾患、障害または状態、例えばＡＤのリスクがあるまたはそれを有する疑いがある個体におけるＣＤ１ａの存在を検出するための、ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片の使用に関する記載を含む。一部の実施形態では、例示的な診断用キットは、例えば、ＣＤ１ａ抗体またはその抗原結合性断片、陰性対照サンプル、陽性対照サンプルなどの試薬、およびキットの使用に関する指図を含有するように構成され得る。
生物学的寄託
抗ＣＤ１ａ Ａｂ５７１の重鎖および軽鎖は、２０２０年７月２９日に、ブダペスト条約による条項に従ってＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．２０１１０～２２０９、ＵＳＡに寄託された。
Figure 2023545075000002
これらの寄託は、特許手続き上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条項およびその規則（ブダペスト条約）の規定の下で行われた。これは、寄託の日から３０年間にわたって寄託物の生存可能な培養物の維持を保証する。寄託物は、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．とＡＴＣＣとの間での同意を条件として、ブダペスト条約の条項の下でＡＴＣＣによって入手可能にされ、これは、関連する米国特許の発行の際、または任意の米国もしくは外国の特許出願の公衆への公開の際のいずれか早い方の時点における、公衆への寄託物の培養物の子孫の恒久的かつ無制限の入手可能性を保証し、米国特許商標庁長官が米国特許法１２２条およびそれに従う長官規則（特に８８６ ＯＧ ６３８に関連した米国特許規則１．１４を含む）に従って資格ありと決定した者への子孫の入手可能性を保証する。
本出願の譲受人は、寄託にかかる材料の培養物が、適切な条件下で培養した場合に万一死んだり失われたり破壊されたりしたときには、通知があり次第それらの材料が同一物の別のもので速やかに置き換えられることに同意している。寄託された材料の入手可能性は、その特許法に従って任意の政府の権限の下で与えられた権利に違反して本発明を実施することの許諾として解釈すべきではない。
一般技術
本発明は、当然変動し得る、それを作製する特定の合成方法に限定されないことを理解すべきである。本明細書で他に定義されない限り、本発明と併せて使用される科学用語および技術用語は、当業者が一般に理解する意味を有するものとする。さらに、文脈が他を要求しない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学、ならびにハイブリダイゼーションと併せて使用される術語体系、ならびにそれらの技術は、当該分野で周知かつ一般に使用されるものである。
本発明の実施は、他に示されない限り、当業者の技術範囲内にある分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来技術を使用する。かかる技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．ＧｒｉｆｆｉｔｈｓおよびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３～１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（２００１）；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ（２００２）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９９８）；Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ（２００３）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）などの文献中で完全に説明されている。
酵素反応および精製技術は、当該分野で一般に達成されるように、または本明細書に記載されるように、製造業者の仕様書に従って実施される。本明細書に記載される分析化学、生化学、免疫学、分子生物学、合成有機化学ならびに医薬品化学および薬化学と併せて使用される術語体系、ならびにそれらの実験室手順ならびに技術は、当該分野で周知かつ一般に使用されるものである。標準的な技術が、化学的合成、化学的分析、医薬の調製、製剤および送達、ならびに患者の処置のために使用される。
等価物
上述の説明および以下の実施例は、本開示のある特定の具体的な実施形態を詳述し、本発明者らによって企図される最良の形態を記載する。しかし、上述がテキスト中に出現し得ることがどんなに詳述されても、本開示が多くの方法で実施され得、本開示が添付の特許請求の範囲およびその任意の等価物に従って実施されるべきであることが、理解される。
開示された教示は、種々の適用、方法、キットおよび組成物に関して記載されてきたが、種々の変化および改変が、本明細書の教示および以下の特許請求される開示から逸脱することなしになされ得ることが理解される。以下の実施例は、開示された教示をよりよく説明するために提供されるのであって、本明細書に提示された教示の範囲を限定することを意図しない。本明細書の教示は、これらの例示的な実施形態に関して記載されてきたが、当業者は、これらの例示的な実施形態の多数のバリエーションおよび改変が過度の実験なしに可能であることを容易に理解する。全てのかかるバリエーションおよび改変は、本明細書の教示の範囲内である。
特許、特許出願、論文、教科書などを含む、本明細書で引用される全ての参考文献、ならびにまだ引用されていない範囲までその中で引用される参考文献は、それらの全体が本明細書で参照によって組み込まれる。組み込まれた文献および類似の資料のうち１つ以上が、定義された用語、用語の用法、記載された技術などが含まれるがこれらに限定されない本出願とは異なるまたはそれと矛盾する場合、本出願が支配する。
本発明がより良く理解され得るように、以下の実施例が示される。これらの実施例は、例示のみを目的としており、本発明の範囲をいかなる方法によっても限定しないと解釈すべきである。
（実施例１）
ラットハイブリドーマからの抗ＣＤ１ａ抗体の同定およびキメラＩｇＧの試験。
雌Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを、ヒト単鎖ＣＤ１ａ－β２Ｍ組換えタンパク質（配列番号２）をＲＩＢＩアジュバントと一緒に用い、週２回、４週間にわたって免疫化した。抗原－アジュバント混合物を動物に腹腔内注射によって与えた。投薬期間の最後に、試験出血液を、免疫化された動物から採取し、ヒトおよびカニクイザルＣＤ１ａ－β２Ｍ組換えタンパク質に対する力価をＥＬＩＳＡによって決定した。さらに、試験出血液の反応性を、ヒトまたはカニクイザルＣＤ１ａタンパク質を細胞表面上に安定に発現するＣＨＯ細胞、ならびにＣＤ１ａを発現しない親ＣＨＯに対してもフローサイトメトリーによって調査した。
組換えおよび細胞表面ＣＤ１ａタンパク質の両方に対して強力な力価を有する動物をハイブリドーマ作出のために選択した。簡単に述べると、免疫化された動物から脾臓を回収し、単離された脾細胞をマウスＰ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ、ｃａｔ＃ＣＲＬ－１５８０）と融合した。得られた融合物を、ＨＡＴ（ヒポキサンチンナトリウム塩、アミノプテリンおよびチミジン）を含有する培地中で成長させることによって選択した。首尾よく融合したハイブリドーマを、まず、ヒトまたはカニクイザルＣＤ１ａ－β２Ｍ組換えタンパク質に対する反応性についてスクリーニングした。融合タンパク質のβ２Ｍ部分を特異的に認識するハイブリドーマを除外するために、ハイブリドーマを、β２Ｍポリペプチドを含有するヒトＦｃＲｎタンパク質に対してカウンタースクリーニングした。ヒトおよびカニクイザルＣＤ１ａ反応性ハイブリドーマを、細胞表面ＣＤ１ａを特異的に認識するハイブリドーマを同定するために、ＣＨＯ／ヒトＣＤ１ａおよびＣＨＯ／カニクイザルＣＤ１ａ細胞に対する反応性についてさらにスクリーニングした。さらに、他のＣＤ１ファミリーメンバーに対する交差反応性を示すハイブリドーマをさらに除外するために、ハイブリドーマを、ヒトＣＤ１ｂまたはＣＤ１ｃタンパク質を安定に発現するＣＨＯ細胞に対してもスクリーニングした。次いで、ＣＤ１ａ特異的モノクローナル抗体を産生したハイブリドーマの最終的なパネルを、下記のようにｉｎ ｖｉｔｒｏにおける操作されたＴ細胞株のＣＤ１ａ依存性活性化を阻害する能力について試験した。
Ｔ細胞活性化アッセイのために、ヒトＣＤ１ａをトランスフェクトしたＣ１Ｒ細胞（Ｃ１Ｒ－ｈｕＣＤ１ａ細胞）を、ＣＤ１ａを特異的に認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）対立遺伝子ＢＫ６を発現するＪｕｒｋａｔ ７６（Ｊ７６）細胞と共にインキュベートした（Ｂｉｒｋｉｎｓｈａｗら、Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１５ Ｍａｒ；１６（３）：２５８～６６）。ハイブリドーマ上清および対照抗体の非存在下または存在下でのＪ７６－ＢＫ６細胞の活性化を、下記のように、培養培地中へのインターロイキン２（ＩＬ－２）分泌をＭｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ、Ｋ１５１ＱＱＤ－４）アッセイによって測定すること、および細胞表面の分化抗原群６９（ＣＤ６９）発現（％ＣＤ６９＋細胞）をフローサイトメトリーによって測定することにより評価した。ＢＫ６ ＴＣＲへのＣＤ１ａ結合を遮断した抗体は、ＩＬ－２分泌およびＣＤ６９発現の両方の抑制を引き起こした。
Ｃ１Ｒ－ｈｕＣＤ１ａ細胞を、力価設定された量のハイブリドーマ上清または精製抗体と共にプレインキュベートし、次いで、Ｊ７６－ＢＫ６細胞と３７℃で一晩共培養した。翌日、アッセイプレートを遠心分離し、上清を取り出し、－２０℃で凍結させ、後でＩＬ－２の存在についてＭＳＤアッセイを使用して分析した。残りの細胞を緩衝液中に再懸濁し、ＣＤ３、ＣＤ１ａ、およびＣＤ６９の細胞表面発現について特異的抗体を使用した染色を行った（それぞれＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ３４４８１６、３００１１０および３１０９２０）。細胞を３０分間染色し、洗浄し、フローサイトメーターに流した。次いで、ＣＤ１ａ依存性Ｔ細胞活性化を阻害した（即ち、ＩＬ－２分泌およびＣＤ６９発現の両方を抑制した）ハイブリドーマからの可変重（ＶＨ）および可変軽（ＶＬ）鎖遺伝子を分子クローニングおよび引き続く分析のために選択した。
（実施例２）
ラット抗ＣＤ１ａ抗体重鎖および軽鎖可変領域のクローニング
抗ＣＤ１ａ抗体の重鎖および軽鎖可変領域を、ＳＭＡＲＴ（登録商標）ｃＤＮＡ合成システム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．）を使用してクローニングし、その後ＰＣＲ増幅した。ｃＤＮＡを、ＲＮＥａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ）およびＳＭＡＲＴ（登録商標）ＩＩＡオリゴ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．）をＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ（商標）ＩＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共に使用して、およそ５００，０００個のハイブリドーマ細胞から単離した１μｇの総ＲＮＡから合成した。次いで、ｃＤＮＡを、ＳＭＡＲＴ（登録商標）ＩＩＡオリゴ配列にアニールするプライマーおよびラット定常領域特異的プライマー（軽鎖についてはラットカッパ、重鎖についてはラットＩｇＧ１）をＱ５（登録商標）Ｈｉｇｈ－Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ２Ｘ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ．）と共に使用するＰＣＲによって増幅した。重鎖および軽鎖ＰＣＲ産物を、ｐＣＲ４－ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にサブクローニングし、核酸配列を決定した。次いで、可変重領域を、エフェクター機能が消滅するように変異させた（Ｌｅｕ２３４Ａｌａ、Ｌｅｕ２３５ＡｌａおよびＧｌｙ２３７Ａｌａ、ＥＵ番号付け；米国特許第５，６２４，８２１号）ヒトＩｇＧ１定常領域（配列番号８６）を含有するｐＴＴ５哺乳動物発現ベクターにクローニングし、それにより、キメラ重鎖を作出した。可変軽領域を、ヒトカッパの定常領域（配列番号１１）を含有するｐＴＴ５哺乳動物発現ベクターにクローニングして、キメラ軽鎖を作出した。
次いで、キメラ抗体を、標準の技術を使用してヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）細胞において発現させ、その細胞から精製し、精製されたキメラ抗体の活性を上記のＴ細胞活性化アッセイで再度試験した。Ｔ細胞活性化アッセイの代表的な結果が図１Ａ、１Ｂおよび表１に示される。キメラ抗ＣＤ１ａ抗体は、ＣＤ１ａ依存性ＣＤ６９発現の減少（図１Ａ）およびＢＫ６を発現するＪ７６細胞によるＩＬ－２産生の阻害（図１Ｂ）によって実証された通り、ＣＤ１ａ依存性Ｔ細胞活性化を強力に阻害した。図１Ａおよび１Ｂに示される、この実験によるＩＣ５０値が、表１に示される。ＯＫＴ６は、市販のＣＤ１ａ遮断抗体である。ＯＫＴ６配列は、ＡＴＣＣから入手したハイブリドーマ（ＣＲＬ８０２０（商標））からクローニングされ、キメラヒトＩｇＧ１として作製されたものであった。
Figure 2023545075000003
（実施例３）
ラット抗ＣＤ１ａ抗体のヒト化
４種のラット抗ＣＤ１ａ抗体（Ａｂ８、Ａｂ３６、Ａｂ４０およびＡｂ８０）の可変領域のヒト化を、当該分野で公知のＣＤＲグラフト戦略（例えば、Ｈｗａｎｇら、２００５；Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６、ｐ３５～４２）を使用して実施した。抗ＣＤ１ａ抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）をＫａｂａｔ定義に基づいて決定し（Ｋａｂａｔ ＥＡ、Ｗｕ ＴＴ、Ｐｅｒｒｙ ＨＭ、Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ ＫＳ、Ｆｏｅｌｌｅｒ Ｃ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１～３２４２、１９９１）、例外として、ＣＤＲ－Ｈ１については、ループを、出発点をＨ３１（Ｋａｂａｔ）からＨ２６にして延長した。親ラットＡｂのＣＤＲをヒトアクセプターフレームワーク配列、重鎖についてはＩＧＨＶ３－７＊０１および軽鎖についてはＩＧＫＶ１－３９＊０１に挿入（グラフト）し、それぞれヒトＩｇＧ１（エフェクター機能が消滅するように以下のように変異させたもの：Ｌｅｕ２３４Ａｌａ、Ｌｅｕ２３５ＡｌａおよびＧｌｙ２３７Ａｌａ、ＥＵ番号付け；米国特許第５，６２４，８２１号）またはヒトカッパ定常領域を含有するベクター中に合成した。ＶＨおよびＶＬドメインの両方のフレームワーク領域における親ラット配列への限定された復帰変異を構造モデリングに基づいて導入した。下記のように、ＡｂバリアントをＨＥＫ細胞において産生させ、それらの結合活性の保持を、親キメラ（ＣＤＲグラフトされていない）抗体に対する競合ＥＬＩＳＡを使用して測定した。
競合ＥＬＩＳＡのために、高結合性Ｃｏｓｔａｒ ＥＬＩＳＡプレートを、ウェル当たり０．１μｇ（１μｇ／ｍＬの１００μＬ）のＰＢＳ緩衝液中ＣＤ１ａタンパク質を用いて４℃で一晩コーティングした。次いで、プレートを洗浄し、ＰＢＳ＋３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いて室温で３時間にわたってブロッキングした。種々の濃度（典型的には３倍希釈度）の抗体バリアントを、固定濃度のビオチン化親（キメラ）抗体と予備混合し、混合物をブロッキングしたプレートのウェルに添加した。２時間のインキュベーション後、プレートを洗浄し、ストレプトアビジン－ＨＲＰ二次試薬と共に１時間インキュベートした。洗浄後、プレートを１構成要素ＨＲＰ基質と共にインキュベートし、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して４５０ｎｍにおける発色を測定した。
図２に示されるように、このアッセイでは、ヒト化クローンＡｂ１３８およびＡｂ１４０は親キメラ（ＣＤＲグラフトされていない）Ａｂ４０と非常に類似した活性を実証し、それらの結合親和性の良好な保持が示唆される。Ａｂ１３８を、他のクローンと比較した、その全体的な許容できるヒト／カニクイザルＣＤ１ａ親和性および等価性、合理的な数の予測されるＴ細胞エピトープおよび化学的に不都合な部位に基づき、さらなる最適化のために選択した。
（実施例４）
Ａｂ１３８ ＦａｂとヒトＣＤ１ａの共結晶構造の決定
抗ＣＤ１ａ抗体Ａｂ１３８のＦａｂ断片（Ｆａｂ１３８）を、全長ＩｇＧをパパインで切断し、プロテインＡ樹脂を使用してＦｃを除去することによって得た。ヒトβ２Ｍ－ＣＤ１ａ－Ｈｉｓ６タンパク質（配列番号９５）をＨＥＫ細胞において発現させ、標準の技術を使用して精製した。Ｘ線結晶構造解析を使用して、ヒトＣＤ１ａタンパク質と複合体を形成したＡｂ１３８のＦａｂドメインの構造を決定した。
結晶化試験のために、ヒトβ２Ｍ－ＣＤ１ａ－Ｈｉｓ６タンパク質をＦａｂ１３８と１：１．５のモル比で混合し、複合体をＴＢＳ緩衝液、ｐＨ７．５中１０ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。１００ｍＭのカコジル酸ナトリウム、ｐＨ６．５、１００ｍＭの酢酸マグネシウム、および１５％ＰＥＧ６０００を含有する条件下でハンギングドロップ蒸気拡散法によって結晶を得た。結晶は、単斜晶系空間群Ｐ２１と一致する対称性を有し、単位格子パラメーターはａ＝４２．２３Å；ｂ＝１７４．１３Å；ｃ＝１２０．１６Å、β＝９０．１°であり、結晶学的非対称単位内に２コピーのＣＤ１ａ－Ｆａｂ１３８複合体を有した。Ａｒｇｏｎｎｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙにおいてＩＭＣＡ ｂｅａｍｌｉｎｅ １７－ＩＤで２．１４Å分解能までのデータセットを単一の凍結結晶から収集した。
ａｕｔｏＰＲＯＣを使用してデータを処理し、スケーリングを行った。構造を、ＰＤＢ＝４ｘ６ｆからのＣＤ１ａモデルおよび発明者らの内部構造データベースからの最も近い相同的構造に基づいて構築されたＦａｂ１３８の相同性モデルから出発して、ＰＨＡＳＥＲを用いて分子置換によって解明した。２コピーのＣＤ１ａおよび２コピーのＦａｂ１３８を検索することによって解を得た。２コピーの複合体をモデルとして用いて計算した、得られた電子密度マップの品質は明確なものであった。いくつかの反復ラウンドのマニュアル調整およびＣＯＯＴを使用したモデル再構築およびａｕｔｏＢＵＳＴＥＲを使用した結晶学的精緻化により、ＣＤ１ａ－Ｆａｂ１３８の最終的なモデルを得、結晶学的Ｒｗｏｒｋは２１．１％であり、Ｒｆｒｅｅは２５．８％であり、ここで、Ｒｗｏｒｋ＝｜｜Ｆｏｂｓ｜－｜Ｆｃａｌｃ｜｜／｜Ｆｏｂｓ｜であり、Ｒｆｒｅｅは、Ｒｗｏｒｋと等価であるが、精緻化プロセスから省かれたランダムに選択された５％の反映について計算される。共結晶構造から、ＣＤ１ａとＡｂ１３８の相互作用が明らかになる（図３）。相互作用残基対を、残基対が以下の５つの基準を満たす場合、相互作用するものと同定した：１）３．８オングストローム以内での交差界面での重原子間（非水素）接触；２）交差界面での塩橋による接触；３）交差界面での水素結合による接触；４）界面にまたがる共有される水分子との３．８オングストローム以内での極性接触；５）遊離状態と結合状態の間での残基接触表面積（ＡＳＡ）の２０平方オングストロームを超える低減、かつ界面にわたる残基における遊離状態と結合状態の間でのＡＳＡの少なくとも１０平方オングストロームの低減の対応する誘導。５６のＣＤ１ａ／Ａｂ１３８残基対相互作用が同定され、これには、総アミノ酸残基５４：ＣＤ１ａ抗原において２６、Ａｂ１３８重鎖において１４、および抗体軽鎖において１４が含まれた。
相互作用残基を、界面へのそれらの寄与に基づいて３つの階層にさらに分けた。階層１残基（表２に列挙される）は、以下の３つの基準のうち少なくとも１つを満たした：１）ＡＳＡの＞８０平方オングストロームが界面によって埋没する；２）遊離状態にあるＡＳＡの＞９０％が界面によって埋没し、かつＡＳＡの＞３０平方オングストロームが界面によって埋没する；３）３．８オングストローム以内の交差界面での重原子間接触が＞６であり、かつ交差界面での塩橋または水素結合接触が＞１である。階層２残基は、階層１基準のいずれも満たさないが、以下の４つの緩い基準のうち少なくとも１つを満たす：１）ＡＳＡの＞４０平方オングストロームが界面によって埋没する；２）遊離状態にあるＡＳＡの＞５０％が界面によって埋没する；３）３．８オングストローム以内の交差界面での重原子間接触が＞４である；４）交差界面での塩橋または水素結合接触が＞１である。階層１基準も階層２基準も満たさない相互作用残基は階層３にカテゴリー化される。階層１の界面残基およびそれらの相互作用特性を界面全体の特性と共に表２に要約する。３つ全ての階層カテゴリーからの残基が表３の配列において強調表示されている。
Figure 2023545075000004
Figure 2023545075000005
ＣＤ１ａ上のエピトープ領域（Ａｂ１３８と相互作用する残基）は、タンパク質の第１および第３のヘリックス領域に大きく限局されており、これらの領域が一緒になって、相互作用残基２６個のうち２３個および階層１の相互作用残基９個全てを含む。抗体－抗原界面にある唯一の他のＣＤ１ａ残基は、第３のヘリックス領域のキャップ形成残基であるＱ１６７およびＮ１６８（配列番号１の番号付けに従って）、ならびに、第２のヘリックス領域の前の最終的なベータターン（Ｎ末端ドメインのベータシートにおける最後のターン）に存在するＮ１４６である。Ａｂ１３８の対応するパラトープ領域は、６つのＣＤＲ全てから、ならびにフレームワーク－Ｌ２残基Ｙ４９からの寄与残基を含む。Ｈ１およびＬ１以外の全てのＣＤＲが少なくとも５残基をパラトープに寄与し、Ｈ３（相互作用残基７個、階層１の相互作用残基４個）が最も大きく関与する。
階層１の相互作用残基の中で、３個の残基が界面相互作用に特に関与し、ＢＳＡが＞１００平方オングストロームであり、残基ＡＳＡの＞９０％が結合時に埋没する。抗体側では、重鎖のＩ９９が遊離状態では高度に露出し、結合状態では界面の中心付近で第１のＣＤ１ａへリックスと第３のＣＤ１ａへリックスの間に包埋される。抗原側では、Ｈ１７０がこの挙動を模倣する；Ｈ１７０も遊離状態では高度に露出し、結合状態ではＡｂ重鎖とＡｂ軽鎖の間に包埋され、３．８オングストローム以内で、全部で１８の交差鎖接触がなされ、そのうち２つは水素結合である。さらに、抗原側では、Ｅ８２が抗体Ｈ３ループによって囲まれ、ループ内の４つの残基と相互作用する；Ｅ８２はまた、抗体軽鎖からの残基１つとも相互作用する。
界面にわたって６つの塩橋が存在し、６つのうち５つは界面の外縁部に存在する；６番目のＡ－Ｒ９３／Ｌ－Ｄ３２はより中心部に存在する。塩橋と共在するものとは離れて、２０の水素結合によっても界面が架橋される；これらのうち５つは、共有される水分子によって媒介されるものである。全部で、ＣＤ１ａとＡｂ１３８の間の２３９７平方オングストロームの表面積が界面に埋没する。Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｓｅ結晶構造Ｘ６Ｃによって明らかになる通り、ＣＤ１ａ／Ａｂ１３８界面はＣＤ１ａ／ＢＫ６ ＴＣＲ界面と同様である（Ｂｉｒｋｉｎｓｈａｗら、Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６（３）、２５８～２６６、２０１５に記載されている）。Ａｂ１３８とＢＫ６のＣＤ１ａ上のエピトープの重複が図４に例示される。ＢＫ６アルファ鎖は、Ａｂ１３８の重鎖と同様のＣＤ１ａに対する相対的位置を占める；ＢＫ６ベータ鎖とＡｂ１３８の軽鎖は同様ではないが、特にＣＤＲ３内でいくらか重複する。ＢＫ６は１６個のＣＤ１ａ残基と３．８オングストローム接触をなす。これらのうち１３個はＡｂ１３８とも３．８オングストローム接触をなす；このセットの残りの３個のＣＤ１ａ残基のうち２個はＡｂ１３８から３．８オングストローム以内にないが、他の手段によって相互作用する；最後の残りの残基（Ｇｌｕ－１７１）はＡｂ１３８と相互作用しない。ＢＫ６アルファ鎖は、２つのＴＣＲ鎖のうち、より大きく関与し、３つのＣＤＲ全てにわたって９個の残基がＣＤ１ａと接触する。ＢＫ６ベータ鎖はＣＤ１ａと接触する残基を５個しか有さず、これらの残基は全てＣＤＲ３内にある。
（実施例５）
結晶構造に基づく合理的設計を使用したファージディスプレイによるＡｂ１３８の親和性成熟および配列最適化。
次に、下記のように、潜在的な免疫原性リスクを低減させるためにＡｂ１３８の配列最適化を実施した。
免疫原性リスク予測
ヒト化抗ＣＤ１ａ抗体Ａｂ１３８の免疫原性リスクを、ＭＨＣＩＩペプチド結合の予測のためのｉｎ ｓｉｌｉｃｏツールを使用して予測した。これらのツールを以下のために使用した：（１）配列中の各個々のペプチドについての潜在的ＭＨＣＩＩ結合のエピトープ同定、（２）潜在的ＭＨＣＩＩペプチド結合子のリスクを評価するためのエピトープ分類、および（３）ＭＨＣＩＩ結合関連の免疫原性リスクを有する配列全体の全体的リスクを予測するための全体的配列スコア。これらの方法は以下に記載される。
エピトープ同定
配列を２つのプロトコール（下記の「プロトコール１」および「プロトコール２」と表示される）を使用して分析して、エピトープを同定した。いずれかのプロトコールについて本明細書に記載される規則によってフラグ付けされた任意の配列を、エピトープとみなした。これらの同定方法は、主にアミノ酸９マーのレベルで配列を試験するものである。
プロトコール１：ＩＳＰＲＩ／ＥｐｉＭａｔｒｉｘ
配列を、ＩＳＰＲＩソフトウェアパッケージ（ＩＳＰＲＩ ｖ １．８．０、ＥｐｉＶａｘ Ｉｎｃ．、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ、ＲＩ（２０１７）．；Ｓｃｈａｆｅｒ ＪＲＡ、Ｊｅｓｄａｌｅ ＢＭ、Ｇｅｏｒｇｅ ＪＡ、Ｋｏｕｔｔａｂ ＮＭ、Ｄｅ Ｇｒｏｏｔ ＡＳ．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｗｅｌｌ－ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ＨＩＶ－１ ｌｉｇａｎｄｓ ｕｓｉｎｇ ａ ｍａｔｒｉｘ－ｂａｓｅｄ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ、ＥｐｉＭａｔｒｉｘ．Ｖａｃｃｉｎｅ １６（１９）、１８８０～８４（１９９８））でのＥｐｉＭａｔｒｉｘ分析に供した。生結果は、８つの異なるＨＬＡ型に対する各９マーアミノ酸断片の結合の可能性のランキングを提供した（標準化された尺度でのパーセンタイルとして）。したがって、各９マーについて、８つの予測（「観測」）が存在する。これらの９マーを、配列の各個々の直線的な番号付け位置で開始して生成する（したがって、同じ９マーが同じ配列中に１回よりも多く存在することが可能である）。任意の４つの観測が、９マーが結合子の上位５％にあることを示す場合（少なくとも４つのＨＬＡ型について、それが結合子の上位５％にあると予測されることを意味する）、その９マーを、予測されたエピトープ（「エピトープ」）とみなす。あるいは、８つの予測のうちいずれか１つが、９マーが結合子の上位１％にあることを示す場合、この９マーも、予測されたエピトープとみなす。
プロトコール２：ＩＥＤＢコンセンサス法
配列を、ＩＥＤＢ（Ｖｉｔａ Ｒ、Ｏｖｅｒｔｏｎ ＪＡ、Ｇｒｅｅｎｂａｕｍ ＪＡ、Ｐｏｎｏｍａｒｅｎｋｏ Ｊ、Ｃｌａｒｋ ＪＤ，Ｃａｎｔｒｅｌｌ ＪＲ、Ｗｈｅｅｌｅｒ ＤＫ、Ｇａｂｂａｒｄ ＪＬ、Ｈｉｘ Ｄ、Ｓｅｔｔｅ Ａ、Ｐｅｔｅｒｓ Ｂ．Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｅｐｉｔｏｐｅ ｄａｔａｂａｓｅ（ＩＥＤＢ）３．０．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｊａｎ ２８（４３）、Ｄ４０５～１２（２０１５）．；ＩＥＤＢ ＭＨＣ－ＩＩ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｓ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｅｄｂ．ｏｒｇ）においてＭＨＣ－ＩＩ ｂｉｎｄｉｎｇ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｍｅｔｈｏｄ（Ｗａｎｇ Ｐ、Ｓｉｄｎｅｙ Ｊ、Ｋｉｍ Ｙ、Ｓｅｔｔｅ Ａ、Ｌｕｎｄ Ｏ、Ｎｉｅｌｓｅｎ Ｍ、Ｐｅｔｅｒｓ Ｂ．Ｐｅｐｔｉｄｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＨＬＡ ＤＲ，ＤＰ ａｎｄ ＤＱ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １１、５６８（２０１０）；Ｗａｎｇ Ｐ、Ｓｉｄｎｅｙ Ｊ、Ｄｏｗ Ｃ、Ｍｏｔｈｅ Ｂ、Ｓｅｔｔｅ Ａ、Ｐｅｔｅｒｓ Ｂ．Ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ ＩＩ ｐｅｐｔｉｄｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ａｐｐｒｏａｃｈ．ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ Ｂｉｏｌ．４（４）、ｅ１００００４８（２００８）．）を使用する分析に供した。ソフトウェアのアウトプットは、結果を１５マーずつ配置した。コンセンサススコアおよびパーセンタイルランキングを、１５マーおよびＨＬＡ型の各組み合わせについて提供した。各１５マーのコンセンサスが由来した個々のスコアは、１５マー中に見出される特定の９マーのランキングであった：コンセンサスのために使用される各方法は、１５マー内の最も密接に予測されたＨＬＡ結合を有する９マーについてのパーセンタイルランクを報告した。１５マー全体についての値として取られたコンセンサスは、コンセンサスのために使用された全ての方法にわたる中央値スコアを有する９マーについての予測であった。９マーを、（ａ）それが１５マーを代表するコンセンサスとして選択された場合、および（ｂ）検討されているＨＬＡ型に対する結合子の上位１０％中にパーセンタイルランキングを有した場合、ならびに基準（ａ）および（ｂ）が、同じ９マーについて３つ以上の別個のＨＬＡ型（即ち、３つの観測）について生じた場合、エピトープとして分類した。検討したＨＬＡ型は、ＤＲＢ１＊０１、１＊０３、１＊０４、１＊０７、１＊０８、１＊１１、１＊１３および１＊１５であり、これらは、標準的なＩＳＰＲＩ／ＥｐｉＭａｔｒｉｘ報告では、同じＨＬＡ型である。このように、プロトコール１との比較の容易さのために、この方法の一次アウトプットは、１５マーのランキングであったが、データを再解釈して、予測された９マーエピトープのリストを得た。
エピトープ分類
各エピトープを、生殖系列または非生殖系列エピトープとして分類した。抗体について、本発明者らは、抗体内でのその位置（例えば、ＣＤＲまたは非ＣＤＲ）に基づいて、各エピトープをさらに分類した。
本発明者らは、ＩＭＧＴ（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）から得たヒトＶドメインの配列をフィルタリングして、偽遺伝子またはオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）としてアノテーションされた生殖系列を除去した。残りの配列中に見出される任意の予測された９マーエピトープを、生殖系列エピトープとみなした。ＪもしくはＣ領域（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む）またはこれらの領域間の接合部中に見出されるエピトープもまた、生殖系列エピトープとして分類した。さもなければ、エピトープは、非生殖系列エピトープとして分類する。可変ドメイン残基を、Ｋａｂａｔの番号付けシステム（Ｋａｂａｔ ＥＡ、Ｗｕ ＴＴ、Ｐｅｒｒｙ ＨＭ，Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ ＫＳ、Ｆｏｅｌｌｅｒ Ｃ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１～３２４２（１９９１）．）に基づいて番号付けした。番号付け後、ＣＤＲを、以下の残基を含むと定義する：ＣＤＲ－Ｈ１（例えばＨ３５Ａであるが、Ｈ３６未満の挿入を含むＨ２６～Ｈ３５）、ＣＤＲ－Ｈ２（Ｈ５０～Ｈ６５包含的）、ＣＤＲ－Ｈ３（Ｈ９５～Ｈ１０２包含的）、ＣＤＲ－Ｌ１（Ｌ２４～Ｌ３４包含的）、ＣＤＲ－Ｌ２（Ｌ５０～Ｌ５６包含的）、ＣＤＲ－Ｌ３（Ｌ８９～Ｌ９７、包含的）。予測された９マーエピトープは、そのアミノ酸のうちいずれか１つがＣＤＲ領域の一部である場合、ＣＤＲエピトープである。ＣＤＲ－Ｈ１についての本発明者らの選択した開始位置（Ｈ２６）は、Ｋａｂａｔのアノテーションを使用する一部の他の刊行物とは異なることに留意されたい。
全体的配列免疫原性スコア（Ｔレジトープ調整済スコア）
個々の鎖について、または抗体ＶＨおよびＶＬドメインの対形成について、全体的スコアを、構成成分９マーの各々を以下のように、合計することによって計算することができる：
９マーおよびＨＬＡ型の全ての個々の組み合わせ（「観測」）を、９マーがエピトープであったかどうかにかかわりなく試験した。特定の観測が、そのペプチドが所与のＨＬＡ型に対する結合子の上位５％にあることを示した場合、この観測についてのＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｚスコアを、タンパク質全体配列濾関連する中間合計に加算した。試験した観測の総数もまた記録した。唯一の例外は、ＩＳＰＲＩによって「Ｔレジトープ」（Ｔ－ｒｅｇ）として同定された９マーに関する全ての観測が、ゼロのＥｐｉＭａｔｒｉｘスコアを有すると仮定したことであった。
中間合計では、０．０５＊２．２２４８のベースラインスコアを、各観測（Ｔレジトープを含む）から減算した。最終スコアは、以下のように計算した：
Ｔ－ｒｅｇ調整済スコア＝（中間合計）＊１０００／（観測の数）
より低いスコアは、より低い予測される免疫原性潜在力を示す。スコアは、ＩＳＰＲＩ／ＥｐｉＭａｔｒｉｘからの予測のみを含み、ＩＥＤＢからの情報は含まないことに留意されたい。したがって、ＩＥＤＢによって予測されたがＩＳＰＲＩによっては予測されなかったいずれの強いＨＬＡ結合子も、スコアに寄与しない。理論上、配列は、多くのＩＥＤＢ予測されたＨＬＡ結合子を含み得、ＥｐｉＭａｔｒｉｘもまた同じ配列を結合子である可能性が高いと予測しない場合、好ましいＴ－ｒｅｇ調整済スコアをなおも有する。
免疫原性リスクの軽減
上記のプロトコールにより、抗ＣＤ１ａ抗体Ａｂ１３８配列において８つ－ＶＨにおいて４つ（残基Ｈ２９、Ｈ３２、Ｈ４７およびＨ５０から始まる）およびＶＬにおいて４つ（残基Ｌ４５、Ｌ４６、Ｌ４８およびＬ８６から始まる）の非生殖系列Ｔ細胞エピトープが同定された。これらの８つのエピトープの９マーアミノ酸配列は、以下の通りである：ＦＴＤＦＹＭＮＷＶ（配列番号８７）、ＦＹＭＮＷＶＲＱＡ（配列番号８８）、ＷＶＡＦＩＲＮＫＡ（配列番号８９）、ＦＩＲＮＫＡＮＧＹ（配列番号９０）、ＫＬＬＩＹＧＡＮＲ（配列番号９１）ＬＬＩＹＧＡＮＲＬ（配列番号９２）、ＩＹＧＡＮＲＬＫＤ（配列番号９３）およびＹＹＣＱＱＳＹＫＹ（配列番号９４）。さらに、全体的配列免疫原性（Ｅｐｉｖａｘ）スコアは－３７．９４であった。エピトープの数および全体的配列スコアの低減により、配列の全体的免疫原性リスクの減少が予測された。
免疫原性リスクを低減させるために、８つの同定された非生殖系列Ｔ細胞エピトープの一部に変異を導入し、したがって、変異した配列は、もはや本発明者らのｉｎ ｓｉｌｉｃｏプロトコールにおいてＴ細胞エピトープとして登録されない。非生殖系列Ｔ細胞エピトープを除去する変異セットは、１）合理的な構造に基づく設計によって、または２）合理的に設計されたファージディスプレイライブラリー（下記）によるセミランダム変異誘発のスクリーニングされたアウトプットのいずれかで引き出した。
合理的な構造に基づく設計
ＣＤ１ａ／抗ＣＤ１ａ抗体Ａｂ１３８の共結晶構造を使用して、結合相互作用を破壊せず、したがってＴ細胞エピトープをモジュレートすることができる変異を同定した。２つのコンピュータによるプロトコールを使用して、Ａｂ１３８ ＣＤＲ内の全ての可能性のある点変異のＣＤ１ａ／Ａｂ１３８結合（ΔΔＧ）に対する影響を予測した：１）Ｒｏｓｅｔｔａ ｄｄＧ（ｖ．３．５）を使用して、変異体複合体のＣＤ１ａ／Ａｂ１３８複合体と比較した安定性の変化を予測した；２）ｆｏｌｄＸを使用して、変異体複合体とＣＤ１ａ／Ａｂ１３８複合体の間の結合の自由エネルギーの変化を予測した。変異を、Ｒｏｓｅｔｔａ ｄｄＧで１ｋｃａｌ／ｍｏｌを下回る、またはｆｏｌｄＸで０．７５ｋｃａｌ／ｍｏｌを下回るΔΔＧ値を記録した場合、「許容される」ものと指定した；そうでなければ棄却した。次いで、許容される変異を入れ替えて、Ａｂ１３８配列からの変異を２つまで含有する各エピトープ領域の代替的配列を生成し、それらを本発明者らのｉｎ ｓｉｌｉｃｏ免疫原性プロトコールに対して試験した；目的のＴ細胞エピトープが除去されない配列を棄却した。
ファージディスプレイを使用した最適化戦略
下記のように、得られた構造的情報に基づき、合理的な設計およびファージに基づくライブラリー選択戦略を適用して、増加した親和性、さらなるヒト化ＣＤＲ領域、改善された生物物理学的特性および低減した配列責任を有する抗ＣＤ１ａ Ａｂ１３８のバリアントを単離した。
第１のファージライブラリーに基づく手法において、ヒト化Ａｂ１３８のＶＨおよびＶＬドメインのＤＮＡ配列を組み合わせて、ファージ発現ベクターにおいてＣ末端６×Ｈｉｓ（配列番号１０２）およびｍｙｃタグが付加された単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を作出した。Ａｂ１３８のＶＨおよびＶＬ ＣＤＲ内の構造的に重要な部位において、ソフトランダム化された変異および／または縮重コドンを設計した。これらの残基を選択的に変異させるためのオリゴヌクレオチドを合成し、次いで、それらを使用して、ｓｃＦｖ核酸鋳型で変異体配列ライブラリーを生成した。
第２の合理的設計手法において、Ａｂ１３８ ＣＤＲの定義された部位における点変異体を設計し、次いで、ハイスループット様式で、ｈＩｇＧ１フォーマットで発現させ、精製した。操作されたバリアントの結合親和性を、競合ＥＬＩＳＡおよび／またはＢｉａｃｏｒｅを使用して評価した。
ファージライブラリーに基づく手法において、ビオチン化ＣＤ１ａタンパク質を使用して選択を実施した。上記のファージプールのアリコートおよび磁性ストレプトアビジンビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｍ－２８０ストレプトアビジン）を別々に３％乳／ＰＢＳ中、回転式ミキサー（２０ｒｐｍ）において室温で１時間ブロッキングした。ブロッキングされたファージプールを４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を新しい管に移し、６％ブロッキング緩衝液と混合した。ブロッキングされたファージを、過剰モル濃度の選択解除試薬（例えば、ｄｓＤＮＡ、インスリンおよび／または膜抽出物）と共に回転式振とう機（２０ｒｐｍ）において室温で１時間インキュベートし、ブロッキングされたストレプトアビジン－磁気ビーズと混合し、１時間インキュベートした。選択解除処理したライブラリーを、磁気分離器を使用してビーズをペレット化することによって収集した。
Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ磁気精製機器（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用し、ビオチン化ヒトまたはカニクイザルＣＤ１ａを種々の濃度で、選択解除処理したファージライブラリーと共に９６ディープウェルプレート中、断続的に混合しながら室温で１時間インキュベートした。ビーズを、Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ機器で磁気分離器を使用して分離し、別の９６ディープウェルプレート中、ＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０で７回、およびＰＢＳで１１回洗浄した。結合したファージを、新しい９６ウェルプレート中、１００ｍＭのトリエチルアミン（ＴＥＡ）と共に８分間インキュベートし、その後、磁気ビーズから分離することによって溶出させた。溶出したファージを２ＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５で中和した。溶出したファージを、対数増殖中期（ＯＤ６００約０．５に対応する）まで成長させたＥ．ｃｏｌｉ ＥＲ２７３８（Ｌｕｃｉｇｅｎ、ｃａｔ＃ＮＣ０２９２３９２）培養物１０ｍＬへの感染に使用した。細菌に、３７℃、１５０ｒｐｍで振とうしながら１時間にわたってファージを感染させ、遠心分離ステップ後に濃縮し、２％グルコースおよび１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含有する２×ＹＴ寒天プレート（２×ＹＴＡＧ）にプレートした。インプットまたはアウトプットファージのいずれかを感染させた種々の希釈度のＥ．ｃｏｌｉ培養物も２×ＹＴＡＧ寒天にプレートして、ファージ力価を決定した。３０℃で一晩成長させた後、２×ＹＴＡＧ培地１０ｍＬを各バイオアッセイプレートに添加し、菌叢をこすることによって細胞を再懸濁した。この細胞懸濁液にグリセロールを添加して、最終濃度１７％を得、アリコートとして、さらなる使用まで－８０℃で貯蔵した。次のラウンドの選択のためのファージをレスキューするために、この細胞懸濁液１００ｍＬを使用して、２×ＹＴＡＧ培地２０ｍＬに接種し、それを３７℃（３００ｒｐｍ）でＯＤ６００が０．３～０．５になるまで成長させた。次いで、細胞にＭＫ１３Ｋ０７ヘルパーファージ３．３ｍＬを重感染させ、３７℃（１５０ｒｐｍ）で１時間インキュベートした。次いで、細胞を遠心分離し、ペレットをカナマイシン／非グルコース含有培地（５０ｍｇ／ｍＬのカナマイシンおよび１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを伴う２×ＹＴ）に再懸濁した。この培養物を３０℃（３００ｒｐｍ）で一晩成長させた。ファージを、遠心分離後に上清中に回収し、上記のように、次のラウンドの選択に使用する準備を整えた。
ファージパニング後、アウトプットファージクローンを、発現されたｓｃＦｖを使用して評価し、下記のように、ＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光）アッセイによってｐｅｒｉ－Ｐｒｅｐから抽出した。
（実施例６）
均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイ
ＨＴＲＦアッセイにおける使用のためのｐｅｒｉｐｒｅｐ材料の調製
ＳｃＦｖを、使用する成長条件に応じてファージ粒子の表面上または細菌細胞膜周辺腔内溶液中のいずれかで発現させることができる。ｓｃＦｖのペリプラズム中への放出を誘導するために、０．１％グルコース／１００ｍｇ／ｍＬのアンピシリンを伴う２×ＹＴ培地を含有する９６ディープウェルプレートに、ＱＰｉｘ Ｃｏｌｏｎｙ ｐｉｃｋｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、解凍したグリセロールストック（ウェル当たり１クローン）を接種し、３７℃（８５０ｒｐｍ）で約４時間成長させた。培養物に対して、イソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を０．１ｍＭの最終濃度で用いて誘導を行い、３０℃（８５０ｒｐｍ）で一晩成長させた。細菌ペリプラズムの内容物（即ち、ｐｅｒｉｐｒｅｐ）を浸透圧ショックによって放出させた。簡単に述べると、プレートを遠心分離し、ペレットをＨＥＰＥＳペリプラズム緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、２０％
スクロース、ｐＨ７．４）１５０ｍＬに再懸濁し、その後、１：５のＨＥＰＥＳ：水、１５０ｍＬを添加し、氷上で３０分間インキュベートした。プレートを４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、ｓｃＦｖを含有する上清を回収した。
ＨＴＲＦアッセイ
親和性改善されたクローンの同定を容易にするために、ハイスループット競合ＨＴＲＦアッセイを確立した。親抗体Ａｂ１３８を、標識キット（ＣｉｓＢｉｏ）を製造業者の指示に従って使用し、蛍光ドナーであるテルビウム（Ｔｂ）で標識した。ＣＤ１ａ抗原をビオチン化し、次いで、ストレプトアビジン－ｄ２を添加することにより、蛍光アクセプターであるｄ２で標識した。最終的なアッセイ混合物は、最大シグナル－ノイズ比を実現するために交差力価決定から導き出されたある特定の濃度比のビオチン化ヒトＣＤ１ａとＴｂ標識された親抗体からなった。この結合系に、目的のｓｃＦｖを含有するｐｅｒｉｐｒｅｐ抽出物を４つの異なる希釈度（最大１０倍）で、総反応体積を１×アッセイ緩衝液（５０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５、４００ｍＭのフッ化カリウム、０．１％ＢＳＡ）中２０μＬとして添加した。１時間のインキュベーション後、６６５ｎｍおよび６２０ｎｍにおける蛍光をＥｎｖｉｓｉｏｎマルチラベルプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定した。ＨＴＲＦ比を、６６５ｎｍにおける蛍光／６２０ｎｍにおける蛍光×１０，０００として計算した。最大シグナルをｓｃＦｖの非存在下でのＴｂ標識されたＡｂ１３８とｄ２標識されたＣＤ１ａのＨＴＲＦ比と定義し、最小最大シグナルをｄ２標識されたＣＤ１ａのみのＨＴＲＦ比と定義した。試験したｓｃＦｖが親Ａｂ１３８よりも低いシグナルをもたらす場合、この抗体が親Ａｂ１３８よりも高い親和性を有する可能性があることが示唆される。潜在的に親Ａｂ１３８よりも高い親和性を示す独特のｓｃＦｖクローンを同定し（図５）、全長ヒトＩｇＧに再フォーマットした。次いで、アッセイを、精製ＩｇＧを使用して上記のように繰り返し、得られたデータを親抗体のものと比較した。
Ａｂ１３８と強力に競合する選択された抗体を、以前に記載されているものと同様の手順を用い、競合ＥＬＩＳＡを使用してさらに確認した。
次のステップにおいて、いくつかの個々のクローンからの有利な変異を、ミックスアンドマッチ（ｍｉｘ－ａｎｄ－ｍａｔｃｈ）法を使用して組み合わせた。コンビナトリアルミックスアンドマッチ変異体をバッチで精製した；７バッチで合計３０５種の異なるクローンを作製し、競合ＥＬＩＳＡおよびＢｉａｃｏｒｅによって試験した。上記のプロトコールを使用し、予測されるＴ細胞エピトープの数および全体的なＥｐｉｖａｘスコアを計算することによってこれらのバリアントの潜在的な免疫原性を推定するためにｉｎ ｓｉｌｉｃｏ配列解析を実施した。さらに、翻訳後修飾（例えば、脱アミド、異性化、酸化）の潜在的部位などの配列責任を同定した。新しい抗体バリアントの物理化学特性をさらに特徴付けるために、さらなるアッセイを実施した。具体的には、ＤＮＡおよびインスリンに対する多反応性ＥＬＩＳＡ結合アッセイ、ならびに自己相互作用ＡＣ－ＳＩＮＳアッセイを行った（下記）。これらのアッセイにより、これらのＩｇＧ分子の、それらのｉｎ ｖｉｖｏ挙動（例えば、クリアランス速度）と相関すると予測される非特異的または自己相互作用の見込みを評価した。
（実施例７）
ＤＮＡおよびインスリン多反応性ＥＬＩＳＡアッセイ
３８４ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ）を、ＰＢＳ、ｐＨ７．５中、１０ｍｇ／ｍＬのサケ精巣由来ＤＮＡ（ＳＩｇＭａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｄ１６２６）または５ｍｇ／ｍＬのヒトインスリン（ＳＩｇＭａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｉ９２７８）を用いて４℃で一晩コーティングした。ＥＬＩＳＡをＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｊａｎｕｓ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ ｌｉｑｕｉｄ ｈａｎｄｌｉｎｇ ｒｏｂｏｔで実施した。ウェルを水で洗浄し、Ｐｏｌｙｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ＥＬＩＳＡ Ｂｕｆｆｅｒ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０、１ｍＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳ）５０μＬを用いて室温で１時間にわたってブロッキングし、水で３回すすいだ。２５μＬ中に段階希釈したｍＡｂを４連でウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを水で３回洗浄し、１０ｎｇ／ｍＬの、西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）２５μＬ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、１０９－０３５－００８）を各ウェルに添加した。プレートを室温で１時間インキュベートし、水８０μＬで３回洗浄し、ＴＭＢ基質（ＳＩｇＭａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｔ－０４４０）２５μＬを各ウェルに添加した。反応を、およそ７分後に、０．１８Ｍのオルトリン酸２５μＬを各ウェルに添加することによって停止させ、吸光度を４５０ｎｍで読み取った。ＤＮＡ結合スコアおよびインスリン結合スコア（表５に示される）を、１０ｍｇ／ｍＬの抗体のＥＬＩＳＡシグナルと一次抗体の代わりに緩衝液含有するウェルのシグナルの比として計算した。
表５に示されるように、Ａｂ１３８についてのＤＮＡおよびインスリンＥＬＩＳＡスコアはそれぞれ５および７であった。５以下のスコアが低／好都合とみなされる。Ａｂ５７１は、両方のスコアの改善を示した（それぞれ４および３）。さらに、この多反応性アッセイにおいて試験した全ての他の最適化されたＡｂ１３８のバリアントで＜５の好都合なスコアが実証された（表５）。
（実施例８）
親和性－捕捉自己相互作用ナノ粒子分光法（ＡＣ－ＳＩＮＳ）アッセイ
ＡＣ－ＳＩＮＳアッセイをＰｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ Ｊａｎｕｓ ｌｉｑｕｉｄ ｈａｎｄｌｉｎｇ ｒｏｂｏｔで３８４ウェルフォーマットに標準化した。２０ｎｍの金ナノ粒子（Ｔｅｄ Ｐｅｌｌａ、Ｉｎｃ．、１５７０５）を、８０％ヤギ抗ヒトＦｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．１０９－００５－０９８）と２０％非特異的ヤギポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．００５－０００－００３）の混合物でコーティングし、２０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ４．３に緩衝液を交換し、０．４ｍｇ／ｍＬまで希釈した。室温で１時間のインキュベーション後、金ナノ粒子上の占有されていない部位をチオール化ポリエチレングリコール（２ｋＤ）でブロッキングした。次いで、コーティングされたナノ粒子を、シリンジフィルターを使用して１０倍に濃縮し、１０μＬを、ＰＢＳ、ｐＨ７．２中０．０５ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ １００μＬに添加した。コーティングされたナノ粒子を、９６ウェルポリプロピレンプレート中、目的の抗体と共に２時間インキュベートし、次いで、３８４ウェルポリスチレンプレートに移し、Ｔｅｃａｎ Ｍ１０００分光光度計で読み取った。吸光度を４５０～６５０ｎｍにおいて２ｎｍきざみで読み取り、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ｍａｃｒｏを使用して最大吸光度を同定し、データを平滑化し、二次多項式を使用してデータをフィットさせた。平均ブランク（ＰＢＳ単独）の平滑化された最大吸光度を抗体サンプルの平滑化された最大吸光度からから減算して、抗体ＡＣ－ＳＩＮＳスコアを決定した（表５に示される）。
５未満のＡＣ－ＳＩＮＳスコアを好都合／低とみなした。Ａｂ１３８はＡＣ－ＳＩＮＳスコア－１を示し、一方、Ａｂ５７１のスコアは＋１であった。このアッセイにおいて試験した最適化抗体の全てが５以下のスコアを示した（表５）。
ＶＨおよびＶＬドメインにおける特定の変化の影響は、以下の通りである（Ｋａｂａｔに基づく番号付け）：ＶＨドメインでは、Ｆ３２ＨおよびＮ３５Ｈ／Ｔ変異により、潜在的なＴ細胞エピトープが除去され、ＣＤ１ａに対する結合親和性が改善される。変異Ｆ５０Ｈ、Ｉ５１ＴおよびＮ５２ａＤが一緒になって２つのＴ細胞エピトープが除去された。変異Ｎ５３Ｇにより脱アミド部位が除去され、Ｓ６２Ａによりグリコシル化部位が除去された。Ｇ９８Ｒ／Ｔ変異によりＣＤ１ａに対する抗体結合親和性が大きく改善された。
ＶＬドメインでは、Ｓ３０ＹおよびＮ３１Ｆ変異により脱アミド部位が除去され、ＣＤ１ａに対する結合親和性が改善された。変異Ａ５１Ｇ、Ｎ５２Ｄ／Ｓ、Ｌ５４ＰおよびＤ５６Ｅが一緒になって２つのＴ細胞エピトープ、１つの異性化部位が除去され、ＣＤ１ａ結合が改善された。Ｙ９２ＥおよびＫ９３Ｓにより１つのＴ細胞エピトープが除去された。最後に、抗体多反応性（例えば、ＤＮＡおよびインスリンＥＬＩＳＡアッセイにおいて）を低減させるために、ＶＨ変異Ｔ２８Ｄ、Ｔ３０Ｅ、Ｒ５２Ｓ、Ｋ５２ＢＳおよび軽鎖変異Ｒ５３Ｔ、Ｋ５５Ｑを設計した。
Figure 2023545075000006
Figure 2023545075000007
（実施例９）
ＣＤ１ａ依存性ＪｕｒｋａｔＴ細胞活性化の阻害における、最適化抗体の活性。
ＣＤ１ａを発現する細胞を、力価設定された量の抗体と共にプレインキュベートし、次いで、ＢＫ６ Ｔ細胞受容体を発現するＪｕｒｋａｔ（Ｊ７６－ＢＫ６）細胞と共培養した。一晩のインキュベーション後、細胞をＣＤ６９の発現および培養上清中のＩＬ－２の存在について実施例１において詳細に記載されているように評価した。最適化されたＡｂを用いて、ＣＤ６９発現およびＩＬ－２産生の強力な阻害が観察された。それらのＡｂの効力は親Ａｂ１３８と同等またはより良好であった（表６）。
Figure 2023545075000008
（実施例１０）
表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）によるＣＤ１ａに対する抗体Ａｂ５７１親和性の決定
ＳＰＲ動態アッセイを、１０Ｈｚの収集速度で３７℃でＢｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で実施した。抗体Ａｂ５７１を、ＣＭ５センサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、２９－１４９６－０３）に共有結合によりカップリングした抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ－１００８－３９）により、製造業者のプロトコールに従って捕捉した。Ａｂ５７１の最終的な捕捉レベルは３５レゾナンスユニット（ＲＵ）未満であった。ＨＢＳ－ＥＰ＋、ｐＨ７．４（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）をサンプルおよびランニング緩衝液として使用した。フローセル１を参照フローセルとして使用した。ヒトＣＤ１ａ（ｌｏｔ ＳＪ＿２０１８０４２０＿０１）およびカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＤ１ａ（ｌｏｔ ＳＪ＿２０１６０９０１＿００１）の２倍段階希釈物を、ヒトＣＤ１ａを５０ｎＭから１．５６ｎＭまでにわたる濃度で、およびカニクイザルＣＤ１ａについては２５ｎＭから０．２ｎＭまでにわたる濃度で用いて調製した。希釈物を、手動でおよびＪａｎｕｓ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用しての両方で、３連で調製した。希釈物を、毎分５０μＬの流速で９０秒にわたって全てのフローセル上に注入した。解離を９００秒間モニタリングし、３ＭのＭｇＣｌ２の３０秒間にわたる注入を３回行うことによって表面を再生させた。速度定数および親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン２．０．１５．１２９３３（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してＬａｎｇｍｕｉｒ １：１モデルに得られたセンサーグラムデータをフィットさせることによって決定した（図６および表７を参照されたい）。
Figure 2023545075000009
（実施例１１）
リード最適化抗体Ａｂ５７１と親Ａｂ１３８の比較。
Ａｂ１３８と比較したＡｂ５７１のいくつかのアミノ酸の変化（表４および５参照）の結果、Ａｂ５７１について、Ａｂ１３８と比較してＣＤ１ａに対する親和性増大がもたらされた。特に、分子モデリングに基づいて、：ａ）変異Ｓ（Ｌ３０）Ｙにより、ＣＤ１ａ Ａｒｇ９３との既存の接触が強化されること、およびｂ）変異Ｎ（Ｌ３１）Ｆにより、ＣＤ１ａ Ｉｌｅ９２との既存の接触が強化されることが決定された（抗体番号付けはＫａｂａｔに基づき、ＣＤ１ａの位置は配列番号１の番号付けに従う）。同時に、Ｋ（Ｌ９３）ＳおよびＮ（Ｈ５３）Ｇという変化により、それぞれＣＤ１ａ残基Ａｓｎ１６８およびＡｓｎ１４６との既存の接触が弱められるかまたは排除された。これらの変化が図７に例示される。
これらの研究に基づいて、ＶＬのＬ３０位およびＬ３１位における代替的変異によっても、変異Ｓ（Ｌ３０）ＹおよびＮ（Ｌ３１）Ｆと同様の親和性増大がもたらされることが予測された。具体的には、Ｌ３０位（配列番号８の７位に対応する）のＬｅｕ、Ａｒｇ、もしくはＴｒｐに対する変異、またはＬ３１位（配列番号８の８位に対応する）のＧｌｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、もしくはＴｙｒに対する変異により、Ａｂ５７１において観察されたものと同様の親和性への影響が創出されることが予想される。
（実施例１２）
Ｏｃｔｅｔアッセイを使用した、ヒトＣＤ１ａ上の抗体Ａｂ５７１、Ａｂ６７３およびＯＫＴ６に対するエピトープの比較
競合Ｏｃｔｅｔ結合アッセイを使用して、ヒトＣＤ１ａ上の抗体Ａｂ５７１、Ａｂ６７３およびＯＫＴ６に対する結合性エピトープを比較した。ＯＫＴ６は、米国特許第４３６４９３３号（Ｋｕｎｇ ＰＣ ａｎｄ Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ Ｇ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ ａ ｈｕｍａｎ ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｐｒｅｐａｒｉｎｇ ｓａｍｅ）に記載されているヒトＣＤ１ａに対するマウスモノクローナル抗体であり、ハイブリドーマ株ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－８０２０（商標）として入手可能である。
簡単に述べると、競合Ｏｃｔｅｔアッセイは、第１の抗体（Ａｂ１）をＯｃｔｅｔバイオセンサー先端に共有結合によりカップリングし、その後、抗原（ＣＤ１ａ）を添加し、次いで、第２の抗体（Ａｂ２）を添加することを伴う。Ａｂ１のエピトープとＡｂ２のエピトープが重複する（即ち、抗体がＣＤ１ａ結合について互いに競合する）場合、Ａｂ２は結合することができない。本明細書に記載される研究により、Ａｂ５７１およびＡｂ６７３が、ＯＫＴ６とは別個の／競合しない、ＣＤ１ａ上のエピトープを認識することが実証された。
この実験を実施するためにＯｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４機器を使用し、製造業者（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）によって提供された試薬を使用した。競合Ｏｃｔｅｔアッセイのために、第１の抗体を１００ｎＭのローディング緩衝液中に希釈し、次いで、アミン反応性ＡＲ２Ｇセンサー先端に共有結合により固定化（カップリング）した。先端をまず活性化溶液に３００秒間浸漬することによって活性化し、次いで、第１の抗体と４８０秒間反応させ、クエンチング緩衝液中、２４０秒間クエンチした。クエンチング後、ベースラインを、Ａｂをカップリングさせた先端を１×動態緩衝液に１２０秒間浸漬させることによって確立し、その後、ヒトＣＤ１ａの捕捉を２００ｎＭの動態緩衝液中で４８０秒間行った。簡単な３０秒間の解離を、センサー先端を動態緩衝液に浸漬することによって実施した。最後に、第２の抗体の結合を、センサー先端を１００ｎＭのＡｂに３００秒間浸漬し、その後、動態緩衝液中で１００秒間の最終的な解離を行うことによって測定した。全ての結合曲線を毎秒１０００の振とうスピードで作成した。並行実験において、Ａｂ５７１またはＯＫＴ６のいずれかを、ＡＲ２Ｇセンサー先端に固定化する第１の抗体として使用した。抗体Ａｂ５７１、Ａｂ６７３、ＯＫＴ６、またはアイソタイプ対照ＩｇＧを第２の抗体として使用した。
図８Ａに示されるように、ＣＤ１ａタンパク質にセンサーとカップリングしたＯＫＴ６が結合した後、ＣＤ１ａタンパク質にＡｂ５７１またはＡｂ６７３はさらに結合することができるが、ＯＫＴ６もアイソタイプ対照ＩｇＧも結合することができない。この結果は、Ａｂ５７１およびＡｂ６７３が、ＯＫＴ６とは別個の競合しないエピトープを認識することを実証している。
図８Ｂに示されるように、ＣＤ１ａタンパク質にセンサーとカップリングしたＡｂ５７１が結合した後、ＣＤ１ａタンパク質に、ＯＫＴ６はさらに結合することができるが、Ａｂ５７１自体、Ａｂ６７３、またはアイソタイプ対照ＩｇＧはいずれも結合することができない。この結果は、Ａｂ５７１とＡｂ６７３が、ＯＫＴ６とは別個のエピトープを認識するが、ＣＤ１ａ結合について互いに競合することを確認している。
（実施例１３）
ヒトＣＤ１ａ ＴＧマウスにおける、ハウスダストマイトＡＤモデルを使用したｉｎ ｖｉｖｏ有効性。
８週齢から１０週齢の間の、性別および年齢を釣り合わせたＣＤ１ａトランスジェニックマウス（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ、Ｃ．ら．ＧＭ－ＣＳＦ－ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ＣＤ１ａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ ｃｅｌｌｓ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ＣＤ１Ａ ｇｅｎｏｍｅ－ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ．Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３２、２４１～２４４（２０１２））を、ウスダストマイト（ＨＤＭ）抗原（Ｇｒｅｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＸＰＢ８１Ｄ３Ａ２．５）感作の４日前に剃毛した。感作の前日、マウスに、関連性のある抗体（抗ＣＤ１ａ抗体Ａｂ５７１もしくはＡｂ６７３、またはアイソタイプ対照）の注射を受けさせ、次いで、２日毎に全部で９日間にわたってさらなる投薬を行った。ＨＤＭ抗原感作のために、４％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）溶液を剃毛した皮膚に適用し、３時間後に粗製ＨＤＭ抗原を皮膚に適用した。ＨＤＭ抗原へのさらなる曝露を同じ手順に従って４日毎、１６日間の期間にわたって行った。マウスを、抗原感作の各ラウンドの前に病的逸脱についてモニタリングし、皮膚炎スコアを以下のスコアの合計として計算した：紅斑、瘢痕／乾燥状態、浮腫および皮膚びらん（図９）。
図９に示されるように、Ａｂ５７１またはＡｂ６７３の投与により、１８日間の実験の過程にわたって、アイソタイプ対照と比較して皮膚炎スコアの有意な低減がもたらされた。Ａｂ５７１での処置により、研究の過程にわたって、および研究の完了時点（１８日目）で炎症の減少および皮膚炎スコアの低減が導かれた；アイソタイプ対照で処置したマウスの平均皮膚炎スコアは８（ＳＤ±１）であったが、一方、Ａｂ５７１では有意な抑制が導かれ、皮膚炎スコアは２であった（ＳＤ±０．７１、ｐ値＝４×１０４）。
このｉｎ ｖｉｖｏ実験の最後に、マウス血清を収集して、総ＩｇＥのレベルおよび抗原特異的ＩｇＥ抗体をモニタリングした。血清サンプル中の総ＩｇＥレベルは、ＢＤ ＯｐｔＥＩＡ Ｍｏｕｓｅ ＩｇＥ ＥＬＩＳＡ ｓｅｔ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、５５５２４８）を使用し、製造業者の指示に従って定量化し（図１０）、一方、ＨＤＭ特異的ＩｇＥ抗体は、ＥＬＩＳＡプレートをＨＤＭ抽出物でコーティングすることにより定量化した（図１１）。プレートの洗浄およびブロッキング後、希釈した血清サンプルを添加した。インキュベーション後、結合した抗体の存在を、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートしたヤギ抗マウスＩｇＥ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、１１１０－０５）によって検出した。プレートを洗浄し、ＴＭＢ基質を添加することによって可視化した。硫酸を添加することによって反応を停止させた後、光学濃度を４５０ｎｍで読み取った。終点力価を、バックグラウンドの光学濃度の３×というカットオフを使用して計算した。中和抗体の投与（Ａｂ５７１およびＡｂ６７３）により、総血清ＩｇＥレベル（図１０）および抗ＨＤＭ ＩｇＥ力価（図１１）の有意な低減が導かれた。
総ＩｇＥレベルが有意に低減した；アイソタイプ対照抗体を用いて処置した、感作したＣＤ１ａＴｇマウスは、高レベルの総血清ＩｇＥを有し、平均１．１０×１０４ｎｇ／ｍＬ（ＳＤ±１．０８×１０３ｎｇ／ｍＬ）であったが、一方、Ａｂ５７１で処置したマウスは、有意に低いレベルの総ＩｇＥを有し、平均値が７１９ｎｇ／ｍＬ（ＳＤ±１０５ｎｇ／ｍＬ、ｐ値＜１×１０４）であった。総ＩｇＥレベルと同様に、ＨＤＭ特異的ＩｇＥ力価も、アイソタイプ対照で処置したマウスにおける平均力価が３．１８×１０５（ＳＤ±１．４５×１０５、ｐ値＜１×１０４）であったのと比較してＡｂ５７１で処置したマウスの平均力価が５５６（ＳＤ±８３２）であったように、有意に低下した。
皮膚において分泌されるサイトカインを評価するために、マウス皮膚サンプルから得た単一細胞調製物をｃＲＰＭＩ培地中に懸濁し、２×１０６個の細胞を、ｃＲＰＭＩ中、５０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡ（ＳＩｇＭａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｐ８１３９）、１μＭのイオノマイシンおよび１０μｇ／ｍＬのブレフェルジンＡを用い、３７℃に設定したＣＯ２インキュベーター中で４時間にわたって刺激した。インキュベーション後、細胞を２回洗浄し、ｃＲＰＭＩ ２００μＬに再懸濁し、Ｖｉａｂｌｉｔｙ色素（ＰＢＳ中１：１０００希釈したもの）を用いて５分間、染色を行った。その後、細胞を５００×ｇで５分間遠心分離し、ＦＡＣＳ緩衝液（５％ＢＳＡを含有するＰＢＳ）１００μＬ中に再懸濁し、抗ＣＤ１６／３２抗体１μｇ（１μｇ／２×１０６個の細胞で使用）と共に４℃で１０分間インキュベートした。その後、抗ＣＤ４－Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ（最終希釈度１：１００）抗体を細胞に添加し、４℃で１５分間インキュベートした。次に、細胞をＦＡＣＳ緩衝液２００μＬで洗浄し、５００×ｇで５分間遠心分離し、細胞をｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍ緩衝液２００μＬ中に４℃で２０分間にわたって再懸濁することによって固定した。その後、細胞を、１×ｗａｓｈ／ｐｅｒｍ緩衝液（Ｈ２Ｏ中に１：１０希釈したもの）２００μＬで２回洗浄し、以前に記載されているように遠心分離した。細胞を１×ｗａｓｈ／ｐｅｒｍ緩衝液２００μＬ中に再懸濁し、次いで、２つの管に等しく分け、抗マウスＩＬ－４ ＰＥ－Ｃｙ７およびＩＬ－１３－ＰｅｒＣＰ－ｅＦｌｕｏｒ ７１０（第１の管）、またはＩＦＮγ－ＰＥおよびＧＭ－ＣＳＦ－ＰｅｒＣＰ抗体（第２の管）を用いて４℃で３０分間にわたって染色を行った。全ての抗体を最終希釈度１：１００で使用した。インキュベーション後、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液２００μＬを添加することによって２回洗浄し、上記のように遠心分離した。洗浄後、細胞を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーターで分析するために、ＦＡＣＳ緩衝液２００μＬ中に再懸濁した。別々の管における顆粒球のパーセンテージを数えるために、マウス皮膚サンプル由来の細胞２×１０６個を抗ＣＤ１６／３２抗体（１μｇ／細胞２×１０６個で使用）１μｇと共に４℃で１０分間インキュベートし、その後、上記のように、ＰＢＳ中、５分間にわたってｖｉａｂｉｌｉｔｙ色素染色を行った。その後、細胞の染色を以下の抗体のカクテルを最終希釈度１：１００で添加して４℃で２０分間行った：抗マウスＣＤ４５－ＰｅｒＣＰ、ＣＤ１１ｂ－ＦＩＴＣ、およびＧｒ－１－Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ。上記のようにＦＡＣＳ緩衝液を用いて細胞を２回洗浄し、データ取得のためにＦＡＣＳ緩衝液２００μＬ中に懸濁した。データを、まず、ＢＤ Ｃａｎｔｏフローサイトメーターで取得し、次いで、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを使用して解析した。
皮膚炎症は、常在免疫細胞の拡大または循環細胞の浸潤に起因し得る。皮膚サンプルを記載のように処理し、炎症性（ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ－１＋）細胞の存在についてフローサイトメトリーによって評価した。ＨＤＭによる感作後、アイソタイプ対照で処置した動物は、皮膚において、Ａｂ５７１で処置した動物（１３．７％±３．３４％）と比較して高い平均パーセンテージの炎症細胞を有した（２８．８％±４．３６％）。皮膚をまた、ＩＬ－１３＋細胞などの、アレルギー反応を駆動し、ＩｇＥの分泌を促進するサイトカイン分泌細胞の存在についても評価した。アイソタイプ対照で処置したマウスは、平均１２．２％±２．７０％のＩＬ－１３＋細胞を有したが、一方、Ａｂ５７１で処置した動物は、有意に低いパーセンテージのＩＬ－１３＋細胞を有し、平均は３．１９％±１．８６％であった。
同じｉｎ ｖｉｖｏ実験において、マウス皮膚由来の全ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ試薬を使用し、製造業者の指示に従って単離した。ＲＮＡを、ＮａｎｏＤｒｏｐ ２０００分光光度計を使用して定量化し、逆転写およびリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ分析のために製造業者の指示に従って処理した。反応をＡｂ７３００リアルタイムＰＣＲシステムにおいてＳＹＢＲ ｇｒｅｅｎマスターミックスを使用して実行した。β－アクチンを参照遺伝子として使用し、平均倍率変化を、２＾ΔΔＣＴ法を使用して計算した（Ｌｉｖａｋ ＫＪ、Ｓｃｈｍｉｔｔｇｅｎ ＴＤ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄａｔａ ｕｓｉｎｇ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ａｎｄ ｔｈｅ ２（－Ｄｅｌｔａ Ｄｅｌｔａ Ｃ（Ｔ））Ｍｅｔｈｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２００１；２５（４）：４０２～８）。ＴＳＬＰ、ＦＬＧ、ＩＬ－３３、ＣＣＬ－２６、ＣＣＬ－２０およびＣＸＣＬ－１が含まれる、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）シグネチャーを構成する遺伝子の発現を決定した（図１２）。アイソタイプ対照で処置した動物は、調査した全ての遺伝子の上昇を有し、最低でＣＣＬ－２６発現が８．６０±０．６０倍増加し、最高で、ＴＳＬＰ遺伝子発現が２８．０±７．５５倍増加した。ＣＤ１ａ中和抗体であるＡｂ５７１およびＡｂ６７３の投与により、アイソタイプ対照で処置した動物と比較してＡＤ遺伝子シグネチャーの有意な抑制がもたらされた。Ａｂ５７１で処置した動物における遺伝子発現は、評価したすべての遺伝子について有意に抑制された。例えば、ＣＣＬ－２６は１．６３±１．４０倍の増加のみを有し（ｐ値＝６×１０－４）、一方、ＴＳＬＰ発現は２．３０±１．６９倍の増加のみ有した（ｐ値＜１×１０－４）。これらのデータを合わせると、これらのＣＤ１ａ中和抗体の、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＣＤ１ａ依存性炎症およびＡＤ疾患活動性を著しく抑制する能力が実証される。
（実施例１４）
非臨床的薬理学
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける主要な薬力学的研究は、Ａｂ５７１が、ヒトＣＤ１ａおよびカニクイザルＣＤ１ａの両方に結合する、ＣＤ１ａに対する親和性が高い選択的なｍＡｂであることを示している。ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究は、組換えヒトまたはカニクイザルＣＤ１ａタンパク質への用量依存的結合を実証している；ＣＤ１ａをＣＨＯ細胞にトランスフェクトし、発現させた場合、および初代単球由来樹状細胞において内因性に発現された場合、Ａｂ５７１は、Ｔ細胞活性化のマーカーであるＣＤ６９のＣＤ１ａ依存性上方調節、およびＪｕｒｋａｔ－ＢＫ６ Ｔ細胞によるＩＬ－２分泌を用量依存的に阻害する。さらに、Ａｂ５７１は、カニクイザル、健康なボランティア、ＡＤ患者、または健康なボランティアヒト皮膚から単離された初代末梢血ＣＤ３＋細胞によるＣＤ１ａ依存性ＩＬ－１７分泌を抑制する。
ヒトＣＤ１ａトランスジェニックマウスを使用したＡＤのマウスモデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏ研究を使用して、ＨＤＭ誘導性炎症を抑制するための、Ａｂ５７１の有効性を評価した。Ａｂ５７１の予防的投与により、ＣＤ１ａ依存性ＨＤＭ誘導性炎症の統計的に有意な抑制が導かれた。
ＥＬＩＳＡによって決定される、Ａｂ５７１の組換えヒトＣＤ１ａに対する結合特異性
Ａｂ５７１の特異性を評価するために、ＥＬＩＳＡプレートを、組換え型のＣＤ１ａ、または３つの関連するファミリーメンバー、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃもしくはＣＤ１ｄのうち１つでコーティングした。非特異的結合を防止するためにプレートをブロッキングした後、コーティングされたプレートを、力価設定された量のＡｂ５７１と共にインキュベートした。結合した試験物品を、関連性のあるＨＲＰコンジュゲートした二次抗体と共にインキュベートすることによって検出した。結合した抗体を、ＴＭＢ基質を添加することによって可視化した。硫酸を添加することによって比色定量反応を停止させ、吸光度を４５０ｎｍで読み取った。ＥＣ５０を、データを変換し（Ａｂ濃度Ｘ＝ｌｏｇ［Ｘ］）、次いで、ＯＤ４５０ｎｍに対してｌｏｇ［Ａｂ］の４パラメーター可変勾配を使用して非線形回帰分析を実施することによって決定した。ヒトＣＤ１ａに対するＡｂ５７１のＥＣ５０は６．５２×１０－３ｎＭであることが決定された。プレートをＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃまたはＣＤ１ｄでコーティングした場合にはＡｂ５７１との結合は検出されず、それにより、Ａｂ５７１がＣＤ１ａに特異的に結合することが実証された。
ＣＨＯ細胞において過剰発現されるヒトまたはカニクイザルＣＤ１ａへのＡｂ５７１の結合
細胞表面に発現されたＣＤ１ａへのＡｂ５７１の結合を評価するために、ＣＨＯ細胞にヒトＣＤ１ａまたはカニクイザルＣＤ１ａのいずれかを安定にトランスフェクトし、力価設定された量のＡｂ５７１と共にインキュベートした。細胞をヤギ抗ヒトＩｇＧ－Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｒｅｄ－Ｘ二次抗体と共にインキュベートすることを使用して、結合した試験物品を検出した。染色された細胞をフローサイトメトリーによって分析し、幾何平均蛍光強度を決定した。Ａｂ５７１は、トランスフェクトされていない親ＣＨＯ細胞に対してはわずかな結合を有し、試験された範囲の抗体濃度でのｇＭＦＩは４．９８×１０２から５．６０×１０２までにわたった。Ａｂ５７１は、ヒトＣＤ１ａタンパク質またはカニクイザルＣＤ１ａタンパク質のいずれかを発現するＣＨＯ細胞への用量依存的結合を実証した。ヒトＣＤ１ａ ＣＨＯ細胞へのＡｂ５７１結合により、４．６７×１０５～１．９５×１０６にわたるｇＭＦＩ値が生じた。ＣＨＯ／ｃｙＣＤ１ａ細胞へのＡｂ５７１結合により、１．４５×１０５～２．５２×１０５にわたるｇＭＦＩ値がもたらされた。これらのデータを合わせると、Ａｂ５７１が細胞表面に発現されるＣＤ１ａに結合したことが実証される。
初代単球由来樹状細胞上のヒトＣＤ１ａへのＡｂ５７１の結合
細胞表面に発現される内因性ＣＤ１ａへのＡｂ５７１の結合を評価するために、健康なボランティアから全血を得、ＰＢＭＣを、密度勾配遠心分離によって単離した。次いで、単球を、ＰＢＭＣから、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｐａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｋｉｔを使用し、製造業者の指示に従って、正の選択によって精製した。樹状細胞分化を促進させるために、単球を、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４および２５ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦと共に５日間培養した。２日目に、新しいＩＬ－４およびＧＭＣＳＦを同じ最終濃度で培養物に添加した。５日目に、細胞を回収し、洗浄し、ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（登録商標）受容体ブロッキング溶液中に再懸濁した。次いで、樹状細胞を力価設定された量のＡＦ－６４７コンジュゲートしたヒトＩｇＧ１またはＡｂ５７１と共にインキュベートした。細胞をＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターで分析した。エクスポートされたデータを解析し、ＥＣ５０を、４－パラメーターロジスティック回帰曲線を使用したＡＦ－６４７シグナルのｇＭＦＩの曲線フィットによって決定した。平均ＥＣ５０は７．８３±６．７５ｎＭであり、値は３．６７ｎＭから１５．６ｎＭまでにわたった。これらから、Ａｂ５７１が、内因性に発現されるヒトＣＤ１ａに高い親和性で結合することが実証される。
初代単球由来樹状細胞上のカニクイザルＣＤ１ａへのＡｂ５７１の結合
細胞表面に発現される内因性ＣＤ１ａへのＡｂ５７１の結合を評価するために、カニクイザル全血を得、ＰＢＭＣを密度勾配遠心分離によって単離した。次いで、単球を、ＰＢＭＣから、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ抗ＣＤ１４ビーズを使用し、製造業者の指示に従って正の選択によって精製した。樹状細胞分化を促進するために、単球をｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて４０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４および２５ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦと共に７日間培養した。３日ごとに培養培地の１／３を取り出し、３×濃度のＩＬ－４およびＧＭ－ＣＳＦを含有する新鮮な培地と交換した。７日目に、細胞を回収し、洗浄し、力価設定された量のＦＩＴＣコンジュゲートしたヒトＩｇＧ１またはＡｂ５７１と共にインキュベートした。細胞をＮｏｖｏｃｙｔｅフローサイトメーターで分析した。ＦＩＴＣ－Ａｂ５７１結合の濃度応答の非線形回帰分析を行って、Ａｂ５７１についてのＥＣ５０値を計算した。平均ＥＣ５０は２．０６±１．５８ｎＭであった。これらから、Ａｂ５７１が、内因性に発現されるカニクイザルＣＤ１ａに高い親和性で結合することが実証される。
ＣＤ６９上方調節およびＩＬ－２分泌によって評価される、Ｊｕｒｋａｔ ＢＫ６細胞のＣＤ１ａ依存性活性化の阻害
Ｔ細胞活性化により、ＣＤ６９などのマーカーの表面発現、およびＩＬ－２などのサイトカインの分泌を含め、多くのタンパク質の上方調節がもたらされる。Ｊｕｒｋａｔ７６－ＢＫ６細胞は、ＣＤ１ａ制限Ｔ細胞受容体（ＢＫ６）を発現するＴ細胞株であり、ＣＤ１ａを発現するＣ１Ｒ細胞（Ｃ１Ｒ－ＣＤ１ａ）などのＣＤ１ａ＋抗原細胞の存在下で共培養すると、ＣＤ６９発現を上方調節し、また、ＩＬ－２を分泌する。
Ｔ細胞活性化を機能的に阻害するＡｂ５７１の能力を評価するために、Ｃ１ＲＣＤ１ａおよびＪｕｒｋａｔ７６ＢＫ６細胞を力価設定された量のＡｂ５７１の存在下で培養した。Ｔ細胞活性化を、表面ＣＤ６９発現をフローサイトメトリーによって測定し、ＩＬ－２分泌をＭＳＤアッセイによって測定することにより、評価した。Ｃ１ＲＣＤ１ａ細胞を力価設定された量のＡｂ５７１またはアイソタイプ対照抗体と共に室温で３０分間プレインキュベートした。インキュベーション後、Ｊｕｒｋａｔ７６ＢＫ６細胞を添加し、一晩共培養した。翌日、アッセイプレートを遠心分離して細胞をペレット化した。培養上清を回収し、ＩＬ－２についてＭＳＤによって製造業者の指示に従ってアッセイした。細胞を０．５％ＢＳＡ／ＤＰＢＳ中に再懸濁し、ＣＤ３に対する抗体、ＣＤ１ａに対する抗体、およびＣＤ６９に対する抗体を用いた染色を行った；染色完了後、細胞をＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ血球計算器を使用して分析した。エクスポートされたデータをＣＤ３＋ＣＤ１ａ－細胞におけるＣＤ６９発現について解析し、４パラメーターロジスティック回帰曲線分析をＩＣ５０決定のために使用した。
Ａｂ５７１の添加により、０．８９４の平均ＩＣ５０（ｎ＝２）でＣのＤ６９発現の用量依存的な低減、および０．２６８の平均ＩＣ５０（ｎ＝２）でのＩＬ－２分泌の用量依存的な低減がもたらされた。
ＥＬＩＳｐｏｔによって評価される、初代ヒトＣＤ３＋細胞によるＣＤ１ａ依存的ＩＬ－１７分泌の阻害
Ａｂ５７１が初代ヒトＴ細胞活性化を機能的に阻害し得ることを確認するために、ＣＤ３＋細胞によるＩＬ－１７ＡのＣＤ１ａ誘導性分泌を中和するＡｂ５７１の能力を、ヒトＣＤ１ａを発現するＫ５６２細胞および初代ＣＤ３＋細胞を使用してＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって評価した。ＣＤ３＋細胞は、製造業者の指示に従って正の選択によって精製したものであった。ＣＤ３＋細胞は、ＡＤ患者もしくは健康なボランティア由来、または健康な皮膚由来のいずれかのＰＢＭＣから単離したものであった。ヒトＣＤ１ａを発現するようにトランスフェクトされたＫ５６２細胞を、最終濃度５０μｇ／ｍＬのＡｂ５７１またはアイソタイプ対照抗体と共に室温で３０分間プレインキュベートした後、ＣＤ３＋細胞を添加した。ＣＤ３＋細胞をまた、トランスフェクトされていない細胞とも培養して、ＣＤ１ａ非依存性ＩＬ－１７Ａ分泌を測定し、測定されたＣＤ１ａ非依存性ＩＬ－１７Ａ分泌を引き続く分析において差し引くバックグラウンドとした。ＥＬＩＳｐｏｔプレートを一晩インキュベートし、翌日、製造業者の指示に従って発色させた。Ａｂ５７１は、健康なドナーから単離されたＣＤ３＋細胞およびＡＤ患者から単離されたＣＤ３＋細胞のどちらにおいても、ＣＤ１ａ誘導性スポット形成を３９％～８０％低減させた。
ＥＬＩＳｐｏｔによって評価される、初代カニクイザルＣＤ３＋細胞によるＣＤ１ａ依存性ＩＬ－１７分泌の阻害
薬理学的に関連性のある種としてカニクイザルを支持するために、初代カニクイザルＣＤ３＋細胞によるＩＬ－１７ＡのＣＤ１ａ誘導性分泌を中和するＡｂ５７１の能力を、カニクイザルＣＤ１ａを発現するＫ５６２細胞および初代ＣＤ３＋細胞を使用してＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって評価した。ＣＤ３＋細胞を健康なカニクイザルのＰＢＭＣから単離した。カニクイザルＣＤ１ａを安定に発現するＫ５６２細胞を、最終濃度５０μｇ／ｍＬのＡｂ５７１またはアイソタイプ対照抗体と共に室温で３０分間プレインキュベートした後、ＣＤ３＋細胞を添加した。ＣＤ３＋細胞をまた、トランスフェクトされていない細胞とも培養して、ＣＤ１ａ非依存性ＩＬ－１７Ａ分泌を測定し、測定されたＣＤ１ａ非依存性ＩＬ－１７Ａ分泌を引き続く分析において差し引くバックグラウンドとした。ＥＬＩＳｐｏｔプレートを一晩インキュベートし、翌日、製造業者の指示に従って発色させた。Ａｂ５７１は、カニクイザルから単離されたＣＤ３＋細胞におけるスポット形成を１９％～５３％低減させた（ｎ＝７）。Ａｂ５７１の重要な薬理的特性を表８に要約する。
Figure 2023545075000010
動物における薬物動態および産物代謝
Ａｂ５７１の非臨床ＰＫは、典型的なＩｇＧ ｍＡｂのＰＫプロファイルと一致した。カニクイザルにおける単回ＩＶ投薬後、ＴＭＤＤと一致して、非線形ＰＫが観察された。１３週間のＧｏｏｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（医薬品の安全性に関する非臨床試験の実施の基準）（ＧＬＰ）反復用量毒性研究において、反復ＳＣおよびＩＶ投薬後に、全身性曝露に明らかな性別に関連する差異は認められなかった（ＣｍａｘおよびＡＵＣによって評価して）。全身性曝露は、用量増加と共に増加し、反復ＳＣおよびＩＶ投薬後により高くなった。Ａｂ５７１に対するＡＤＡ誘導の発生率は、全ての用量群にわたって１８％であった。
ヒトにおけるＡｂ５７１のＰＫは、典型的な治療用ＩｇＧ ｍＡｂのＰＫと同じであると予想され、集団薬物動態モデリング手法を使用して引き出された公開ヒトＰＫパラメーター値を使用して予測されたものであった。作用部位ＰＫ／ＰＤモデル、ヒトＰＫ予測および標的化＞９５％ＣＤ１ａ受容体占有率に基づいて、ヒトにおけるＡｂ５７１の予測される効果的用量は、３０ｍｇ ＳＣ Ｑ４Ｗ（即ち、４週間毎）である。効果的用量レベルについての予測定常状態ヒトＡＵＣｔａｕは、１７３０μｇ・ｈ／ｍＬであり、予測ＣｍａｘおよびＣａｖ値はそれぞれ３．６７μｇ／ｍＬおよび２．５８μｇ／ｍＬである。
分析方法
カニクイザルにおける１３週間のＧＬＰ反復用量毒性研究におけるＡｂ５７１の定量化およびＡＤＡの検出を支持するために、検証されたリガンド結合アッセイ（ＬＢＡ）を使用した。
カニクイザルにおけるＡｂ５７１の定量化
Ｇｙｒｏｌａｂプラットフォームを使用したＬＢＡを、カニクイザル血清中のＡｂ５７１の定量化について検証した。このアッセイでは、Ａｂ５７１を、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏａｆｆｙ（商標）ＣＤ内のストレプトアビジンビーズカラムにコーティングされたβ２－ミクログロブリンと連結したヒト単鎖ＣＤ１ａからなるビオチン化組換えタンパク質によって捕捉した。結合したＡｂ５７１を、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７標識したヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｈ＋Ｌ、サル吸着抗体を使用して検出した。サンプル濃度を、５－パラメーターロジスティック回帰モデルを使用し、重み付け係数１／ｙ２を用いてフィットさせた較正曲線からの内挿によって決定した。１００％カニクイザル血清における定量化の範囲は０．０４０～５．１２μｇ／ｍＬであった。
カニクイザルにおける抗薬物抗体の検出
ＭＳＤアッセイプラットフォームを使用してカニクイザル血清中のＡＤＡの存在を検出するために、ＬＢＡを検証した。この方法では、ビオチン標識したＡｂ５７１およびルテニウム標識したＡｂ５７１を研究サンプルおよび対照と共インキュベートした。このアッセイでは、サンプル中に存在するＡｂ５７１に対する抗体は、Ａｂ５７１のビオチン標識されたバージョンとルテニウム標識されたバージョンの両方に結合しないと検出されない。ストレプトアビジンコーティングされたＭＳＤ Ｍｕｌｔｉ－Ａｒｒａｙ（登録商標）プレートに結合させたビオチン化Ａｂ５７１によってＡＤＡ複合体を捕捉した。最終的な検出を、ＭＳＤ機器内で使用されるＥＣＬシグナルを生じさせるためにルテニウム標識したＡｂ５７１およびＴＰＡを含有する読み取り緩衝液を使用して行った。研究サンプルを、段階的戦略を使用してＡＤＡについて試験し、投薬前と投薬後のサンプルについての結果の比較に基づいて、ＡＤＡの誘導に関する結論を下した。
薬物動態学
単回投薬薬物動態学
Ａｂ５７１についての単回投薬ＰＫをＴｇ３２マウスおよびカニクイザルにおいて評価した。ＰＫデータを表９に簡単に要約する。５ｍｇ／ｋｇでのマウス（ｎ＝４）への単回ＩＶ投薬後、Ａｂ５７１により示された平均全身ＣＬ、平均Ｖｓｓおよび平均ｔ１／２は、それぞれ、およそ０．００４Ｌ／日／ｋｇ、０．０８１Ｌ／ｋｇ、および１７日であった。カニクイザルにおける０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇでの単回ＩＶ投薬後（ｎ＝１／用量）、ＣＬ値は用量の増加とともにおよそ０．０１０Ｌ／日／ｋｇから０．００３Ｌ／日／ｋｇまで減少し、Ｖｓｓは用量にわたって０．０３１Ｌ／ｋｇから０．０５３Ｌ／ｋｇまでにわたった。ｔ１／２値は、この研究では非線形ＰＫおよび明らかなＴＭＤＤに起因して報告されなかった。
Figure 2023545075000011
反復用量の毒物動態
ＧＬＰ反復用量毒性研究の一部として、カニクイザルに、１３週間にわたり、Ａｂ５７１を１０ｍｇ／ｋｇ／週もしくは３０ｍｇ／ｋｇ／週で週１回ＳＣ投薬した後、またはＡｂ５７１を２００ｍｇ／ｋｇ／週で週１回ＩＶ投薬した後、毒物動態（ＴＫ）およびＡＤＡ評価を行った。用量群にわたって、全身性曝露（ＣｍａｘおよびＡＵＣ１６８によって評価して）に関して明らかな性別に関連する差異は認められなかった；したがって、雄および雌両方のカニクイザルからの合わせたデータを使用して群平均ＴＫパラメーターを考察し、提示する（表１０）。
ＳＣ投薬後、平均全身性曝露が用量の増加とともにほぼ用量に比例する様式で増加した。単回ＳＣ投薬後、バイオアベイラビリティはおよそ６０～７０％であった。全身性曝露は、反復用量後により高く、平均蓄積比（ＡＵＣ１６８、８５日目／１日目）は用量群にわたって２．９から３．９までにわたった。全体的なＡｂ５７１に対するＡＤＡ誘導の発生率は全ての用量群にわたって１８％（動物４／２２匹）であった。血清曝露は、ＡＤＡ陽性動物とＡＤＡ陰性動物を比較して概して同様であった。サンプル中のＡｂ５７１の循環レベルがＡＤＡの検出に干渉した可能性があることに留意するべきである。
Figure 2023545075000012
ヒト薬物動態の予測
非臨床種においてＡｂ５７１について観察された血清ＰＫパラメーター値に基づいて、ヒトにおける予測される２コンパートメントＰＫパラメーター値は、典型的な治療用ＩｇＧ ｍＡｂと同じであると予測される。これらの値は以前に報告されており（例えば、Ｄｉｒｋｓ，Ｎ．Ｌ．ａｎｄ Ｂ．Ｍｅｉｂｏｈｍ、Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ ２０１０；４９（１０）：６３３～５９；Ｂｅｔｔｓ，Ａら、Ｌｉｎｅａｒ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｆｏｒ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｒｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｗｉｔｈｉｎ ａ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ａｃｒｏｓｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｔａｒｇｅｔｓ：Ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｈｕｍａｎ，ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ ａｎｄ ｈＦｃＲｎ Ｔｇ３２ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｕｓｅ ｕｓｉｎｇ ａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ－ｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｐｐｒｏａｃｈ．ＭＡｂｓ ２０１８；１０（５）：７５１～７６４）、以下のようにＡｂ５７１ヒトＰＫ予測のために使用することができる：中心容積について３．２Ｌ、末梢容積について２．２Ｌ、中心ＣＬについて０．２５Ｌ／日、分布クリアランスについて０．４５Ｌ／日、ＳＣ吸収速度定数について０．２６Ｌ／日、およびＳＣバイオアベイラビリティについて６０％。予測される体積およびクリアランス値から、ｔ１／２１７日およびＶｓｓ５．４Ｌがもたらされた。
ＰＫ／ＰＤならびにヒト効果的用量および曝露の予測
Ａｂ５７１のＫＤおよび予測されるヒトＰＫパラメーター、皮膚におけるＣＤ１ａ濃度、ならびにＣＤ１ａ内部移行／ターンオーバー速度を使用してＡｂ５７１曝露とＣＤ１ａ受容体占有率を関連付けるために作用部位モデルを使用した。アトピー性皮膚炎における有効性のために必要なＣＤ１ａ標的モジュレーションのレベルは不明である；したがって、作用部位（皮膚）における定常状態トラフ濃度で＞９５％のＣＤ１ａ受容体占有率が実現される用量を効果的用量の推定値として使用した。この手法を使用すると、Ａｂ５７１の予測されるヒト効果的用量は、３０ｍｇ ＳＣ Ｑ４Ｗであると推定される。予測される効果的用量レベルに関連する推定ＡＵＣ、ＣａｖおよびＣｍａｘ値を以下の表１１に示す。
Figure 2023545075000013
毒性学
表１２に概説されている非臨床研究においてＡｂ５７１を評価した。用量をＳＣおよびＩＶ注射によって投与した。齧歯類はＣＤ１ａ遺伝子を発現せず、したがって、Ａｂ５７１の潜在的な毒性を評価するための関連性のあるモデルとはみなされなかった。カニクイザルを以下の理由で毒性種として選択した：Ａｂ５７１のカニクイザル単球由来樹状細胞への結合効力がヒト単球由来樹状細胞について観察されるものと同様であったこと（表８）；Ａｂ５７１が、ヒトおよびカニクイザルＣＤ３＋Ｔ細胞によるＣＤ１ａ依存性ＩＬ－１７Ａ産生を中和したこと。
Figure 2023545075000014
Ａｂ５７１をカニクイザルに週１回、１３週間にわたって投与した後、試験物品に関連する影響も標的臓器も同定されなかった。したがって、中心的な１３週間のサル研究におけるＮＯＡＥＬは試験した最高用量である２００ｍｇ／ｋｇ／週（ＩＶ）であった。Ａｂ５７１の血清濃度および付随する曝露マージンを表１３に示す。曝露マージンは、予測されるヒト効果的用量である３０ｍｇ（ＳＣ Ｑ４Ｗ）および予測される最大単回臨床用量である１０００ｍｇ（ＩＶ）における推定ＣｍａｘおよびＣａｖ値に基づいて計算される。
その他の研究からの所見には、ヒト下垂体におけるＡｂ７１を用いた神経内分泌細胞の染色（サル下垂体における染色は観察されなかった）およびヒトＰＢＭＣからのＡｂ５７１誘導性ＩＦＮγ放出が含まれた。
反復用量毒性
中心的な反復用量毒性研究において、Ａｂ５７１を、雄および雌カニクイザル（ｎ＝３／性別／用量）に、０ｍｇ／ｋｇ／週（ＳＣおよびＩＶ）、１０ｍｇ／ｋｇ／週（ＳＣ）、３０ｍｇ／ｋｇ／週（ＳＣ）、または２００ｍｇ／ｋｇ／週（ＩＶ）で週１回、１３週間にわたって投与した（合計１４回の投薬）。試験物品に関連する臨床徴候も、体重、摂食量、眼科所見、ＥＣＧパラメーター、血液学的検査値、凝固、臨床化学的検査値、尿検査値、器官の重量への影響、または肉眼で見えるまたは顕微鏡レベルの所見のいずれも認められなかった。ＮＯＡＥＬは２００ｍｇ／ｋｇ／週（ＩＶ）であった。ＡＤＡの発生率は、Ａｂ５７１用量群にわたって１８％であったが、曝露はＡＤＡ陽性とＡＤＡ陰性動物の間で概して同様であった。
局所的耐性
Ａｂ５７１を用いた局所的耐性研究は実施していない。しかし、カニクイザルにおける中心的な１３週間の反復用量毒性研究においてＳＣおよびＩＶ注射部位を肉眼的におよび顕微鏡レベルで評価し、Ａｂ５７１に関連する所見は観察されなかった。
抗原性
抗体応答を誘導するＡｂ５７１の潜在力をカニクイザルにおける中心的な１３週間の反復用量毒性研究において評価した。ＡＤＡ誘導の発生率は、１０ｍｇ／ｋｇ／週（ＳＣ）、３０ｍｇ／ｋｇ／週（ＳＣ）、および２００ｍｇ／ｋｇ／週（ＩＶ）用量群について、それぞれ１７％、１７％、および２０％であった。血清Ａｂ５７１曝露はＡＤＡ陽性とＡＤＡ陰性動物の間で概して同様であった。
免疫毒性
Ａｂ５７１をＣ１ｑおよびＦｃγＲ ｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイにおいて評価して、それぞれＣＤＣまたはＡＤＣＣ活性を引き出すその潜在力を決定した。Ａｂ５７１を用いてＣ１ｑ結合もＦｃγＲ結合も観察されず、これにより、ＣＤＣまたはＡＤＣＣ活性を引き出す潜在力が低いことが示唆される。
Ａｂ５７１を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ可溶性相（全血）および固相（ＰＢＭＣ）ヒトＣＲＡの両方において試験した。可溶性相ＣＲＡでは、Ａｂ５７１はＩＬ－６放出、ＴＮＦ放出、ＩＦＮγ放出を誘導しなかった。固相ＣＲＡでは、Ａｂ５７１は、８例のドナーのうち１例由来のＰＢＭＣサンプルにおいてＩＦＮγ放出を誘導した。
組織交差反応性
ヒトおよびカニクイザル組織サンプルを使用し、Ａｂ５７１を用いて組織交差反応性研究を実施した。ヒトおよびサル胸腺における単核細胞、ならびに同等の割合のヒトおよびサル組織の樹状細胞および上皮細胞の細胞質～膜陽性染色を、ＦＩＴＣ－Ａｂ５７１を用いて観察した。
下垂体の神経内分泌細胞の細胞質～膜陽性染色はヒトについてのみ観察された。
胸腺における単核細胞および多数の組織におけるランゲルハンス細胞を含めた樹状細胞の染色は、予測されるＣＤ１ａの発現のパターンと一致した。いくつかの組織における上皮細胞および下垂体の神経内分泌細胞の染色は、報告されたＣＤ１ａの発現に基づいては予測されなかった。
所見の薬物動態との関連性
カニクイザルにおける中心的な１３週間の反復用量毒性研究において決定されたＡｂ５７１の平均全身性曝露（ＣｍａｘおよびＡＵＣ１６８）は、用量の増加とともに増加し、２つのＳＣ用量でほぼ用量に比例するものであった。用量群にわたって、Ａｂ５７１全身性曝露に一貫した性別に関連する差異は認められなかった；したがって、雄および雌の曝露データをまとめて提示する。２００ｍｇ／ｋｇ／週（ＩＶ）用量群では、回復期の５１日目（最後のサンプルを収集した）まで、定量化可能な濃度のＡｂ５７１が観察された。１日目と８５日目の間の平均蓄積比（ＡＵＣ１６８に基づく）は用量群にわたって２．９×から３．９×にわたった。
Figure 2023545075000015
標的臓器毒性
中心的な１３週間の反復用量毒性研究において標的臓器は同定されなかった。その他の研究からの所見には、Ａｂ５７１を用いたヒト下垂体における神経内分泌細胞の染色およびヒトＰＢＭＣからのＡｂ５７１誘導性ＩＦＮγ放出が含まれた。
ヒト下垂体における神経内分泌細胞染色
組織交差反応性研究では、ＦＩＴＣ－Ａｂ５７１を用いた細胞型の陽性染色はヒト組織とサル組織の間で概して一致し、例外として、下垂体については、神経内分泌細胞の染色がヒトについてのみ観察された。ＧＴＥＸ ｐｏｒｔａｌ（Ｗｏｒｌｄ Ｗｉｄｅ Ｗｅｂ ｇｔｅｘｐｏｒｔａｌ．ｏｒｇ）およびＨｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｔｌａｓ（Ｗｏｒｌｄ Ｗｉｄｅ Ｗｅｂ ｐｒｏｔｅｉｎａｔｌａｓ．ｏｒｇ）から公的に入手可能なヒト遺伝子発現データに基づいて、ＣＤ１ａ、および他のＣＤ１ファミリータンパク質がヒト下垂体では発現されないことが予測された。
１３週間の反復用量サル毒性研究において、ＴＣＲ研究でＦＩＴＣ－Ａｂ５７１染色陽性を示した多数の組織（例えば、膀胱、腎臓、膵臓、前立腺、尿管、食道、十二指腸、回腸、結腸、肺、皮膚、子宮頸部）について毒性は観察されなかった。さらに、分子の設計特徴（例えば、エフェクター機能を低減させるためのＦｃ変異）、ならびにＡｂ５７１を用いて観察されたＣ１ｑおよびＦｃγＲ結合の欠如に基づいて、下垂体の神経内分泌細胞のＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣの潜在性は低い。集合的に、これらのデータは、ヒトにおける下垂体毒性のリスクが低いことを支持している。
ヒトＰＢＭＣからのサイトカイン放出
固相サイトカイン放出アッセイ（ＣＲＡ）において、８例のヒトドナーのうち１例由来のＰＢＭＣサンプルからのｉｎ ｖｉｔｒｏ Ａｂ５７１誘導性ＩＦＮγ放出が観察された。可溶性相（全血）ＣＲＡでは、ＩＬ－６、ＴＮＦ、ＩＦＮγ放出に対するＡｂ５７１の影響は観察されなかった。
ＩＦＮγ応答は８例のドナーのうち１例に限られ、また、この同じドナー由来のＰＢＭＣサンプルについてＩＬ－６またはＴＮＦに対する影響は観察されなかた。カニクイザル毒性研究ではサイトカインの測定は行わなかったが、急性サイトカイン放出が示唆された可能性のある動物において臨床徴候は観察されなかった。
これらの結果は、Ａｂ５７１誘導性サイトカイン放出の潜在性を同定している。しかし、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＣＲＡの所見の臨床的変換は確立されていない。サイトカイン放出症候群および血清サイトカインは診療所においてモニタリング可能である。
ファースト・イン・ヒューマン（ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ）研究において、静脈内に単回投薬を施行する一方で、静脈内および皮下投薬の両方を反復投薬で評価することができ、単回投薬および複数回投薬漸増の曝露限界をＣｍａｘおよびＡＵＣ１６８Ｈについてそれぞれ１０２０μｇ／ｍＬおよび１０６０００μｇ．ｈ／ｍＬに設定する。曝露限界は、１３週間のカニクイザル毒性研究においてＮＯＡＥＬで観察された平均曝露の１／１０として決定した。Ａｂ５７１に対する薬物有害反応（ＡＤＲ）は同定されなかった。
非臨床研究において投与された最高用量は２００ｍｇ／ｋｇ／週であった。この用量は忍容性が良好であり、標的臓器毒性は同定されなかった。臨床研究における計画された最高用量は１０００ｍｇ（ＩＶ）である。１３週間のＧＬＰ毒性研究において、対象の安全性に影響を及ぼすと思われる非臨床所見は同定されていない。ＮＯＡＥＬは、この研究で試験された最高用量の２００ｍｇ／ｋｇ／週（ＩＶ）であった。ＮＯＡＥＬでの曝露マージンは、予測される最高ヒト単回ｉｖ用量である１０００ｍｇにおいて予測される曝露（ＣｍａｘおよびＣａｖ）の＞３０倍である。標準の安全性モニタリング（例えば、注射／注入反応、臨床検査、心臓パラメーター、ならびにＡＤＡおよび中和抗体についての試験が含まれる、臨床的評価）をＦＩＨ研究に含める。
Ａｂ５７１を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ可溶性（全血）および固相（ＰＢＭＣ）ヒトＣＲＡの両方において試験した。Ａｂ５７１は、可溶性相ＣＲＡではＩＬ－６、ＴＮＦ、ＩＦＮγ放出を誘導しなかった。固相ＣＲＡでは、Ａｂ５７１は、８例のドナーのうち１例由来のＰＢＭＣサンプルにおいてＩＦＮγ放出を誘導した。これらのデータは、Ａｂ５７１を用いたヒト研究におけるサイトカイン放出の誘導の潜在性を示唆している一方で、応答が固相においてのみ、８例のドナーのうち１例のみであることは、Ａｂ５７１の作用機序が中和抗体でありアゴニストではないことと一緒になって、臨床的に重要なサイトカイン放出症候群の潜在的なリスクが低いことを示唆している。サイトカイン放出症候群のリスクを軽減するために、ファースト・イン・ヒューマン研究における開始用量は、安全域および予測される標的薬理学に関して低くし、単回用量漸増相の研究ではセンチネル投薬を使用する。サイトカイン放出症候群が観察されるまたは疑われる場合にはサイトカインの測定のためにサンプルを収集する。
ＦＩＴＣコンジュゲートしたＡｂ５７１を用い、選択されたヒトおよびカニクイザル組織を使用してＴＣＲ研究を実施した。ＦＩＴＣ－Ａｂ５７１染色パターンは種類内でならびにヒト組織と類似のサル組織とで重複したが、一方で、細胞質～膜陽性染色下垂体の神経内分泌細胞はヒトについてのみ観察された。したがって、カニクイザルにおける１３週間のＧＬＰ毒性研究を使用してヒト下垂体前葉に対する影響の潜在的なリスクを評価することはできない。他のＣＤ１ファミリータンパク質に対して実施した結合評価に基づいて、Ａｂ５７１はＣＤ１ａに対して高度に選択的であると思われる。ヒト遺伝子発現データは、ＣＤ１ａが、ヒト下垂体前葉においては発現されないと予測されること、ならびに、分子の設計特徴（例えば、エフェクター機能を低減させるためのＦｃ変異）およびＡｂ５７１を用いて観察されたＣ１ｑおよびＦｃγＲ結合の欠如に基づいて、下垂体の可能性のあるオフターゲット結合に起因する神経内分泌細胞のＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣの潜在性が低いことを実証している。これは、１３週間の反復用量サル毒性研究において、ＴＣＲ研究においてＦＩＴＣ－Ａｂ５７１染色陽性を示したヒトおよびサルにおける多数の組織（例えば、膀胱、腎臓、膵臓、前立腺、尿管、食道、十二指腸、回腸、結腸、肺、皮膚、子宮頸部）について観察された毒性の欠如によってさらに支持される。集合的に、これらのデータは、ヒトにおける下垂体毒性のリスクが低いことを支持している。初期臨床研究において下垂体ホルモンレベルおよびそれらによって調節されるホルモンをモニタリングして、ヒトにおけるあらゆる可能性のある影響を特徴付けることができる。結論として、最大１３週間の持続時間の臨床試験への進行を支持するために、Ａｂ５７１の非臨床安全性プロファイルがｉｎ ｖｉｔｒｏでおよびカニクイザルにおいてｉｎ ｖｉｖｏで十分に特徴付けられた。
Figure 2023545075000016
Figure 2023545075000017
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Figure 2023545075000028
Figure 2023545075000029
Figure 2023545075000030
上記の個々の節で参照される本発明の種々の特色および実施形態は、必要に応じて、他の節に必要な変更を加えて適用される。したがって、１つの節に明記されている特色を必要に応じて他の節に明記されている特色と組み合わせることができる。特許、特許出願、論文、教科書などを含む、本明細書で引用される全ての参考文献、および引用された配列アクセッション番号、ならびにそこで引用されている参考文献は、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。組み込まれた文献および類似の資料のうち１つ以上が、定義された用語、用語の用法、記載された技術などが含まれるがこれらに限定されない本出願と異なるまたはそれと矛盾する場合、本出願が支配する。

Claims (25)

  1. ヒト分化抗原群１ａ（ＣＤ１ａ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、前記ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１７、４９、または５２のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
  2. （ｉ）配列番号１５、３０、４０、６２、および６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、配列番号１６、３１、４１、４８、５９、６３および７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７、４９および５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号８および２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号９、２６、３７、４４、および７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに配列番号１０、２７、３４、および４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
    （ｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
    （ｉｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
    （ｉｖ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
    を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  3. 以下のうち少なくとも１つ：
    （ｉ）ＩＧＨＶ１－２＊０２、ＩＧＨＶ１－３＊０１、ＩＧＨＶ１－４６＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０２、ＩＧＨＶ１－８＊０１、ＩＧＨＶ３－７＊０１、ＩＧＨＶ３－１３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０４、ＩＧＨＶ３－３０＊０１、ＩＧＨＶ３－３０＊１８、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０１、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０４、およびＩＧＨＶ５－５１＊０１からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＨ配列に由来する重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク配列；
    （ｉｉ）ＩＧＫＶ１－１２＊０１、ＩＧＫＶ１－１３＊０２、ＩＧＫＶ１－３３＊０１、ＩＧＫＶ１－３９＊０１、ＩＧＫＶ１－５＊０１、ＩＧＫＶ３－１１＊０１、ＩＧＫＶ３－１５＊０１、ＩＧＫＶ３－２０＊０１、ＩＧＫＶ３Ｄ－２０＊０２、およびＩＧＫＶ４－１＊０１からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＬ配列に由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク配列；
    （ｉｉｉ）ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１もしくはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、もしくはＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４）を含む重鎖定常ドメイン；ならびに／または
    （ｉｖ）ヒトＶκもしくはＶλ軽鎖定常ドメイン
    を含む、請求項１から２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  4. （ｉ）配列番号２２、３２、４２、５０、５３、５５、５７、６０、６４、６７、６９、７４および７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号１２、２８、３５、３８、４６、７２および７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    （ｉｉ）配列番号２２、３２、４２、５０、５３、５５、５７、６０、６４、６７、６９、７４もしくは７７に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１２、２８、３５、３８、４６、７２もしくは７９に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むＶＬ；
    （ｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ；
    （ｉｖ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬ；
    （ｖ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬ；
    （ｖｉ）配列番号２２に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに配列番号１２に示されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列；
    （ｖｉｉ）配列番号５５に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに配列番号２８に示されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列；
    （ｖｉｉｉ）配列番号７４に示されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに配列番号２８に示されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列；
    （ｉｘ）配列番号１４、２９、３９、４７、５１、５４、５６、５８、６１、６５、６８、７３、および７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）、ならびに配列番号７、２４、３３、３６、４３、７０および７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）；
    （ｘ）配列番号１４、２９、３９、４７、５１、５４、５６、５８、６１、６５、６８、７３、および７５に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むＨＣ、ならびに配列番号７、２４、３３、３６、４３、７０および７８に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一なアミノ酸配列を含むＬＣ；
    （ｘｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号７のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣ；
    （ｘｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣ；
    （ｘｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＨＣおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるＬＣ；または
    （ｘｉｖ）ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列、およびＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列
    を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  5. （ｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
    （ｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
    （ｉｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、ならびに配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
    を含む、ヒトＣＤ１ａに特異的に結合する、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  6. 配列番号２８の配列を含むＶＬおよび配列番号５５の配列を含むＶＨを含む、請求項５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  7. 配列番号２８の配列を含むＶＬおよび配列番号７４の配列を含むＶＨを含む、請求項５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  8. 配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖および配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  9. 配列番号２８の配列を含むＶＬおよび配列番号７４の配列を含むＶＨ、または配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖および配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖のいずれかを含む、請求項５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  10. 分化抗原群１ａ（ＣＤ１ａ）上のエピトープに結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、前記エピトープが、配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ８２および／またはＨｉｓ１７０を含み、前記エピトープが、
    （ｉ）配列番号１の番号付けに従って、Ｉｌｅ９２および／またはＡｒｇ９３をさらに含んでもよく、
    （ｉｉ）以下のアミノ酸残基：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｌｙｓ８１、Ｔｈｒ８５、Ｉｌｅ８９、Ａｒｇ９３、Ａｓｐ１７３、およびＡｓｎ１７７のうち少なくとも１つを含んでもよく、
    （ｉｉｉ）以下の残基のうち少なくとも１つ：配列番号１の番号付けに従って、Ｌｅｕ８６、Ａｓｎ１４６、Ａｓｎ１６８、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｐ１８１、およびＡｒｇ１８５を含んでもよく、
    （ｉｖ）以下の残基：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７９、Ｌｅｕ８３、Ｇｌｕ８４、Ａｒｇ８８、Ｉｌｅ９２、Ｇｌｎ１６７、Ｇｌｎ１６９、Ｌｅｕ１７８、Ｓｅｒ１８０、およびＴｈｒ１８２のうち少なくとも１つを含んでもよく、
    （ｖ）配列番号１の番号付けに従って、Ａｓｎ１４６および／またはＡｓｎ１６８を含まなくてもよく、
    （ｖｉ）以下の残基：配列番号１の番号付けに従って、Ｇｌｕ７８、Ｇｌｕ７９、Ｌｙｓ８１、Ｇｌｕ８２、Ｌｅｕ８３、Ｇｌｕ８４、Ｔｈｒ８５、Ｌｅｕ８６、Ａｒｇ８８、Ｉｌｅ８９、Ｉｌｅ９２、Ａｒｇ９３、Ａｓｎ１４６、Ｇｌｎ１６７、Ａｓｎ１６８、Ｇｌｎ１６９、Ｈｉｓ１７０、Ａｓｐ１７３、Ｉｌｅ１７４、Ｈｉｓ１７６、Ａｓｎ１７７、Ｌｅｕ１７８、Ｓｅｒ１８０、Ａｓｐ１８１、Ｔｈｒ１８２およびＡｒｇ１８５を含んでもよい、
    抗体またはその抗原結合性断片。
  11. 請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片と、ＣＤ１ａへの結合について競合する、または請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片と実質的に同じエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合性断片。
  12. 以下の特徴のうち１つ以上を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片：
    （ｉ）約５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１７５ｎＭ、１５０ｎＭ、１２５ｎＭ、１００ｎＭ、９０ｎＭ、８０ｎＭ、７０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２００ｐＭ、１８０ｐＭ、１６０ｐＭ、１４０ｐＭ、１２０ｐＭ、１００ｐＭ、８０ｐＭ、６０ｐＭ、４０ｐＭ、２０ｐＭおよび１０ｐＭからなる群から選択されるおよその値のＫＤまたはその値未満のＫＤで、ＣＤ１ａに結合すること；
    （ｉｉ）約２５０ｐＭ～約１５０ｐＭまたは約１９０ｐＭ～約１７０ｐＭのＫＤ値でヒトＣＤ１ａに結合すること；
    （ｉｉｉ）約５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性分化抗原群６９（ＣＤ６９）発現を阻害すること；
    （ｉｖ）５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１．９ｎＭ以下、１．８ｎＭ以下、１．７ｎＭ以下、１．６ｎＭ以下、１．５ｎＭ以下、１．４ｎＭ以下、１．３ｎＭ以下、１．２ｎＭ以下、１．１ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２２ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、０．１８ｎＭ以下、または０．１ｎＭ以下のＩＣ５０値で、ＣＤ１ａ依存性インターロイキン２（ＩＬ－２）産生を阻害すること；
    （ｖ）ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおける皮膚炎スコアを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照における皮膚炎スコアと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させること；
    （ｖｉ）ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおける血清ＩｇＥレベルを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照における血清ＩｇＥレベルと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させること；
    （ｖｉｉ）ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおけるＨＤＭ特異的ＩｇＥ抗体価を、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照における血清ＩｇＥレベルと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させること；ならびに
    （ｖｉｉｉ）ヒトＣＤ１ａトランスジェニックハウスダストマイト（ＨＤＭ）誘導性皮膚炎マウスモデルにおけるアトピー性皮膚炎関連遺伝子の発現レベルを、無処置のまたはアイソタイプで処置した対照におけるアトピー性皮膚炎関連遺伝子の発現レベルと比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％低減させること。
  13. 請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸配列を含む、単離された核酸分子であって、任意選択により、
    （ｉ）配列番号８０の核酸配列、
    （ｉｉ）配列番号８１の核酸配列、
    （ｉｉｉ）配列番号８２の核酸配列、
    （ｉｖ）配列番号８３の核酸配列、
    （ｖ）配列番号８４の核酸配列、
    （ｖｉ）配列番号８５の核酸配列、
    （ｖｉｉ）ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１０の下でＡｂ５７１－ＶＨとして寄託されたベクターの挿入物の核酸配列、およびＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２６８１１の下でＡｂ５７１－ＶＬとして寄託されたベクターの挿入物の核酸配列
    からなる群から選択される１つ以上の核酸配列を含む、核酸分子。
  14. 請求項１３に記載の核酸分子を含むベクター。
  15. 請求項１３に記載の核酸分子または請求項１４に記載のベクターを含む宿主細胞。
  16. 抗体またはその抗原結合性断片を作製する方法であって、請求項１５に記載の宿主細胞を、前記抗体または抗原結合性断片が前記宿主細胞によって発現される条件下で培養するステップを含む、方法。
  17. 請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片、および薬学的に許容できる担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
  18. ＣＤ１ａの発現および／またはＣＤ１ａのリガンドへの結合と関連するまたはそれによって媒介される疾患、障害および／または状態を処置および／または予防する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項１７に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
  19. 前記疾患、障害、および／または状態が、炎症性腸疾患、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季カタル、季節性アレルギー、ペットアレルギー、喘息、食物アレルギー、ピーナッツアレルギー、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、鼻ポリープを伴う慢性副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）、アレルギー性鼻炎、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、呼吸器疾患のウイルス性増悪、小児および成体におけるウイルス感染症、（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、インフルエンザ）、蕁麻疹、好酸球性食道炎、慢性線維症、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、慢性腎疾患、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、強皮症、全身性硬化症、急性腎傷害、敗血症、膵炎、１型糖尿病、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、組織移植、アルツハイマー病、関節リウマチ、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、乾癬、小児脂肪便症およびレイノー病またはレイノー現象からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
  20. 炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項１７に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
  21. アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項１７に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
  22. 炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項１７に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
  23. ＣＤ１ａの発現、活性および／またはＣＤ１ａのＴ細胞受容体への結合と関連するまたはそれによって媒介される疾患、障害または状態を処置するための医薬の製造における、請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項１７に記載の医薬組成物の使用。
  24. 炎症性疾患の少なくとも１つの徴候および／または症状の処置および／または予防における使用のための、請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項１７に記載の医薬組成物。
  25. 治療有効量の請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含む、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）を処置するためのキット。
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