JP2023159370A - 活性化のための線維芽細胞と免疫細胞との相互作用及びそれらの使用 - Google Patents

Abstract

【課題】本開示は、線維芽細胞と１つ以上のタイプの免疫細胞との機能的な相互作用が、その線維芽細胞、１つ以上のタイプの免疫細胞又はその両方に対して改変をもたらすような、その相互作用のためのシステム、方法及び組成物を提供する。【解決手段】いくつかの実施形態において、１つ以上のある特定の作用物質が、その相互作用中に、又はそれらのタイプのうちの１つの細胞の代わりに、利用される。具体的な実施形態において、細胞移植療法において使用される細胞は、低い免疫原性を有するように改変される。【選択図】図１

Description

［関連出願の相互参照］
本願は、２０１７年１１月２９日出願の米国仮特許出願第６２／５９１，８５８号に対
する優先権を主張する。この仮特許出願は、その全体が本明細書中で参照により援用され
る。

本開示の実施形態は、少なくとも、細胞生物学、分子生物学、免疫学及び医学の分野に
関する。

細胞療法の移植、特に同種移植では、「ユニバーサルドナー」アプローチを利用するこ
とが可能である。細胞を同種移植できれば、治療活動に対して最適化された細胞の利用が
可能になる。例えば、自家骨髄療法の場合、血管新生作用又は栄養作用を有する細胞画分
は、年齢とともに減少し、糖尿病又は末梢動脈疾患などの患者の共存症によってさらに複
雑になる。同種異系細胞が利用できれば、効率を最適化した細胞製品の投与が可能になる
。

同種異系の細胞製品には、宿主の免疫系による拒絶反応という問題がある。起こると知
られている拒絶反応のプロセスにはタイプが２つある。ＣＤ４＋Ｔ細胞によって古典的に
媒介されるように、レシピエントのＴ細胞受容体とドナーのＭＨＣ ＩＩ分子との会合に
よって、直接的な拒絶反応が刺激される。レシピエントの抗原提示細胞が、ドナー細胞を
貪食し、それらをＭＨＣ Ｉ上に提示すると、間接的な拒絶反応が起きるので、ＣＤ８＋
Ｔ細胞が刺激される。同種異系細胞の拒絶反応では、抗原提示の直接的な経路と間接的な
経路との両方が、免疫媒介性の破壊に関わることが知られている。細胞性拒絶を阻害する
現行の手段としては、カルシニューリン阻害剤（例えば、シクロスポリン）又はｍＴＯＲ
の阻害剤（例えば、ラパマイシン及びエベロリムス）の使用が挙げられる。

種々の同種異系細胞を用いて細胞療法の治験が行われてきたが、種々の治験が、継続的
な免疫抑制の使用を要求した。胎児由来の幹細胞、膵島、胚由来の組織を問わず、継続的
な免疫抑制の使用が行われている。残念なことに、継続的な免疫抑制は、当該個体に対し
て感染症、新形成及び臓器不全のリスク、特に、カルシニューリン阻害剤を含むレジメン
の場合における腎不全のリスクを増大させる可能性がある。

したがって、治療目的で利用される細胞の免疫原性を低下させる必要性が当該分野にあ
る。さらに、種々の病状に対する細胞療法の改善が、当該分野において必要とされている
。

本開示の実施形態は、細胞の改変及び細胞療法のための組成物、方法及びシステムを包
含する。特定の実施形態において、本開示は、第１のタイプの細胞と第２のタイプの細胞
及び／又はある特定の作用物質との相互作用に関し、その相互作用の結果としての第１及
び／又は第２のタイプの細胞に対する改変を含む。具体的な実施形態において、本開示は
、ある特定の細胞及び／又はある特定の作用物質に曝露された際に線維芽細胞が改変され
る組成物、方法及び系を含む。具体的な実施形態において、本開示は、線維芽細胞及び／
又は線維芽細胞から産生されたある特定の作用物質に曝露された際にある特定の細胞が改
変される組成物、方法及びシステムに関する。特定の実施形態において、線維芽細胞と他
の１つ以上のタイプの細胞との相互作用（及び必要に応じてその相互作用は１つ以上のあ
る特定の作用物質も含む）は、線維芽細胞及び／又はそれらの他のタイプの細胞の改変を
もたらす。具体的な実施形態において、それらの他のタイプの細胞は、少なくとも免疫細
胞を含む。

ある特定の実施形態において、１つ以上のタイプの免疫細胞への線維芽細胞の曝露は、
線維芽細胞及び／又は免疫細胞に対して改変をもたらす。ある特定の態様において、線維
芽細胞及び／若しくはそれらから産生された作用物質の曝露は、１つ以上のタイプの免疫
細胞に対して改変をもたらし、かつ／又は１つ以上のタイプの免疫細胞及び／若しくはそ
れらから産生された作用物質の曝露は、線維芽細胞に対して改変をもたらす。具体的な実
施形態において、１つ以上の作用物質も、その曝露に含められ、それらの作用物質は、外
から提供されてもよいし、それらが環境及び／又は細胞及び／又は組織にとって内因性で
ある他の場合のように外から提供されなくてもよい。

具体的な実施形態において、本開示の方法は、エクスビボにおいて、例えば、培養物に
おいて行われる。特定の場合において、それらの方法は、人間の手によって行われ、身体
内での通常の又は無作為の実施を包含しない。本開示の方法は、特定の態様において非天
然の方法である。具体的な実施形態において、１つのタイプの細胞を別のタイプの細胞に
曝露する方法において使用される細胞の濃度は、自然界には存在せず、自然界で無作為に
生じない。具体的な実施形態において、１つ以上の作用物質を１つ以上のタイプの細胞に
曝露する方法において使用される１つ以上の作用物質の濃度は、自然界には存在せず、自
然界で無作為に生じない。エクスビボ又はインビトロで行われる、本開示によって包含さ
れる任意のタイプの細胞の改変は、同じようにインビボで自然には生じない。

本開示は、線維芽細胞、免疫細胞及びそれらの混合物を含む細胞の治療的な使用を包含
する。少なくともいくつかの場合において、線維芽細胞は、免疫細胞（例えば、活性化さ
れた免疫細胞）への曝露の前に改変されているか、又は通常は身体内で見られない条件に
曝露されており、他の場合においては、免疫細胞又はそれらの誘導体が、線維芽細胞への
曝露の前に改変されている（例えば、活性化されている細胞）。

いくつかの実施形態において、本開示は、細胞移植療法において使用されるように細胞
の免疫原性を低下させるための系、方法及び組成物に関する。一般的な実施形態において
、細胞集団が、１つ以上のタイプの培地及び／又は細胞集団の免疫原性を低下させること
ができる１つ以上の作用物質を含む１つ以上の組成物に曝される。本開示の特定の実施形
態において、方法は、細胞集団に関し、ここで、それらの細胞は、任意のタイプであり得
る少なくとも線維芽細胞を含む。

ある特定の実施形態において、本開示は、線維芽細胞の免疫原性を低下させるために、
例えば、少なくとも、線維芽細胞の、拒絶反応を起こさない同種移植（又は異種移植若し
くは同系移植）を含む移植を可能にするために、１つ以上の作用物質を使用することに関
する。少なくともいくつかの場合において、それらの作用物質は、線維芽細胞において１
つ以上の免疫原性分子の発現をダウンレギュレートすることができる。

本開示の実施形態は、線維芽細胞の免疫原性を低下させるために、培養条件を改変する
ことによって、線維芽細胞を同種異系（又は異種若しくは同系）の治療用細胞として利用
する手段を提供する。本開示の１つの実施形態において、線維芽細胞は、免疫原性がより
低い起源（例えば、胎盤線維芽細胞、大網組織由来の線維芽細胞、臍帯血由来の線維芽細
胞など）から抽出される。別の実施形態において、任意のレベルの免疫原性の線維芽細胞
が、例えばエクスビボでの培養において、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－ガンマ）に
曝される。これは、機構に限定されることなく免疫原性を低下させると本発明者らによっ
て実証された。免疫原性の低下は、具体的な実施形態において、線維芽細胞がアロ反応性
のＴ細胞応答を惹起する能力を阻害することによって例証される。本開示の具体的な実施
形態において、これらの改変された線維芽細胞は、「ユニバーサルドナー」線維芽細胞と
称され、これは、それらが任意の個体に投与され得ること（レシピエント個体において有
害な免疫応答を惹起しない様式での投与を含む）を意味する。いくつかの場合において、
免疫原性がより低い起源から抽出された線維芽細胞も、十分量のＩＦＮ－ガンマに曝され
て、免疫原性がさらに低下する。

本開示の１つの実施形態において、線維芽細胞は、線維芽細胞の生存能及び増殖能を保
つためにエクスビボで培養される。本開示は、レシピエントの免疫系による線維芽細胞の
認識を低下させるような公知の培養手法の改変を提供する。１つの実施形態において、線
維芽細胞は、異種の成分を欠く条件（例えば、異種成分不含培地）において培養される；
いくつかの場合において、その培地は、例えばウシ胎仔血清を含まない。具体的な実施形
態において、本開示は、他の１つ以上の作用物質（例えば、線維芽細胞の免疫原性の低下
を促進する作用物質、例えば、ヒト多血小板血漿、血小板溶解物、臍帯血血清、自己血清
、並びに／又は１つ以上の規定のサイトカイン、例えば、線維芽細胞成長因子１～１８、
上皮成長因子、白血病抑制因子、インスリン様成長因子、アンジオポエチン及び血管内皮
成長因子）によるウシ胎仔血清の置換を包含する。

本開示の１つの実施形態において、本開示によって包含される方法において調製された
有効量の線維芽細胞が、１つ以上の病状の治療又は予防のために個体に投与される。具体
的な実施形態において、それらの線維芽細胞は、血管新生と呼ばれるプロセスである新し
い血管の形成を刺激するために投与される。他の状況においては、投与される線維芽細胞
は、血管の欠陥を修復するために利用される。例示的な欠陥としては、内皮の応答性の喪
失、弾性の低下及び／又は血栓形成促進性（ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）の
低下が挙げられる。線維芽細胞は、新しい血管の形成を直接又は間接的に刺激し得るが、
いくつかの実施形態では、血管新生の刺激は、線維芽細胞によって放出される１つ以上の
成長因子及び／又はレシピエント個体における線維芽細胞と１つ以上のタイプの細胞との
相互作用によって達成される。

本開示の具体的な実施形態は、血管新生療法のための方法を提供する。当該分野におい
て、血管新生療法は、これまで幹細胞に限定されてきた。しかしながら、本開示の実施形
態は、線維芽細胞を用いて行われる血管新生療法の方法を提供する。当該分野において、
血管新生療法は、「生物学的バイパス」として説明されてきており、その根底にある概念
は、側枝形成を誘導することができる作用物質の投与によるものであり、より天然のタイ
プの「バイパス」を達成できる。当該分野において、虚血性の筋肉が、低酸素に応答して
血管新生因子を分泌すること、及び天然の血管新生が、重症虚血肢（ＣＬＩ）の動物モデ
ル及びヒトにおいてある程度生じることが観察されている（Ｍｉｌｋｉｅｗｉｃｚ ｅｔ
ａｌ．，２００４；ｖａｎ Ｗｅｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００７）。本開示の１つの実
施形態において、有効量のユニバーサルドナー線維芽細胞が、例えば注射、例えば筋肉内
注射によって、被験体の低酸素の領域、又は新しい血管の形成若しくは修復を必要とする
任意の領域に投与される。

本開示の実施形態は、ユニバーサルドナー線維芽細胞を、血管新生を刺激する１つ以上
の作用物質とともに同時投与するための方法を提供する。本開示の具体的な実施形態にお
いて、ユニバーサルドナー線維芽細胞を、一例としてＶＥＧＦとともに同時投与するため
の方法が提供される。本開示の１つの実施形態において、免疫原性を低下させる条件下に
おいて処置された線維芽細胞に由来するユニバーサルドナー線維芽細胞が、個体の内在性
細胞からのＶＥＧＦ産生を刺激するために利用される。

本開示の具体的な実施形態において、ユニバーサルドナー線維芽細胞を、例えばＦＧＦ
－１とともに同時投与するための方法が提供される。当該分野において、サイトカインで
あるＦＧＦ－１は、ＶＥＧＦの「上流」にあることが知られているので、より成熟した血
管を作り出すように数多くの血管新生プロセスを刺激すると考えられる（ＭｃＤｏｎｎｅ
ｌｌ ｅｔ ａｌ．，２００５）。ＨＩＦ－１アルファも同様に、ある特定の実施形態に
おいて、ＦＧＦ－１及び／若しくはＶＥＧＦの代替物として、又はそれらに加えて、線維
芽細胞とともに個体に同時投与され得る。

本開示の特定の実施形態において、１つ以上の血管新生剤が、真核細胞において作動可
能な１つ以上の組換え発現ベクターを介してユニバーサルドナー線維芽細胞において発現
され、その血管新生剤の発現は、例えば、構成的プロモーター又は誘導性プロモーター又
は組織特異的プロモーターによって、制御され得る。具体的な実施形態において、そのベ
クターは、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイル
ス、アデノ随伴ウイルス又は単純ヘルペスウイルス）であるか、又はそのベクターは、非
ウイルスベクター（例えば、裸のＤＮＡ又はプラスミドＤＮＡ又はミニサークルＤＮＡな
ど）である。

本開示の実施形態は、特定のタイプの線維芽細胞の免疫原性を低下させる方法を提供す
る。線維芽細胞は、生検によって（適宜）又は剖検の際に得ることができる、様々な組織
又は器官（例えば、皮膚、心臓、血管、骨髄、骨格筋、肝臓、膵臓、脳、包皮）に由来し
得る。いくつかの態様において、それらの細胞は、胎児、新生児、成体起源由来であり得
る線維芽細胞又はそれらの組み合わせを含む。

本開示の任意の方法において使用するための線維芽細胞は、具体的な実施形態において
、ある特定の培地成分に曝露され得る。例えば、線維芽細胞は、（ａ）免疫原性を低下さ
せる１つ以上の作用物質、（２）血清、及び／又は（３）血清代替物が補充された培地中
のエクスビボ培養物に再懸濁され得る。血清は、ウシ胎仔血清、ヒト血清又は血清代替物
を含む任意の起源の血清であり得る。いくつかの実施形態において、血清代替物とは、サ
イトカイン／成長因子を含む培地のことを指し、その場合において、それらのサイトカイ
ン／成長因子は、血清で見られる濃度と類似の濃度で提供されるので、血清ベースの培地
によって提供されるものと類似の様式で細胞の増殖及び活性を可能にすることができる。
血清代替物培地の例は、以下の米国特許に記載されており、これらは参照により援用され
る：９，６３７，７２１号；９，５８０，６８７号；６，１６２，６４３号；６，１０３
，５２９号；６，０４８，７２８号；７，７０９，２２９号；４，５６０，６５５号；及
び５，３２４，６６６号。いくつかの実施形態では、包皮フィーダー細胞などの細胞に対
して異種成分不含環境を提供するために、ヒト血清又は血清代替物が利用される。具体的
な実施形態において、培養の後、本開示のヒト包皮フィーダー細胞は、組織培養プレート
などの固相に接着すると、単層を形成することができる［Ｄｕｇｄａｌｅ ａｎｄ Ｓｉ
ｄｄａｌｌ（１９６９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｌａｂ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２６：３１－５］。特定
の実施形態において、本開示のヒト包皮フィーダー細胞のこの特徴は、それらの細胞が、
免疫原性の低下の割には高い複製能力及びＩＦＮ－ガンマでの処置に対する応答性を有す
ることが理由で、それらの細胞を好適なユニバーサルドナーとする。１つの実施形態にお
いて、線維芽細胞は、ある特定の濃度のインターフェロンガンマで処置される。当業者は
、異なる起源由来の線維芽細胞が、インターフェロンガンマの異なる濃度において異なる
レベルの免疫原性低下を有し得ることを認識するだろう。具体的な実施形態において、本
開示は、行われる免疫原性評価のための方法、例えば、混合リンパ球反応を調節する能力
を定量するための方法を提供する。そのような混合リンパ球反応による免疫原性の評価は
、そのようなある特定の線維芽細胞集団を使用するか否かを判定する際に考慮され得る。

インターフェロンガンマで処置された線維芽細胞を同種異系リンパ球とともに共培養す
ることによって、混合リンパ球反応が行われ得る。通常、同種異系リンパ球の増殖係数を
取得して、刺激物質である線維芽細胞の免疫原性の程度が表現される。本開示のいくつか
の実施形態において、リンパ球との培養の前に、線維芽細胞が有糸分裂的に不活性化され
る。有糸分裂の不活性化は、マイトマイシンＣ、又は生存能を低下させることなく増殖を
阻止する他の作用物質による処置によって行われ得る。有糸分裂の不活性化に化学剤が利
用されるとき、その化学剤は、応答リンパ球の阻害を防ぐために細胞から洗浄除去され得
る。

本開示のいくつかの実施形態において、応答リンパ球によるサイトカイン産生の評価が
行われ得る。評価され得るサイトカインとしては、炎症プロセス及びマクロファージの刺
激に関わるインターロイキン（ＩＬ）－１；Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性化に関連するＩＬ
２；マクロファージを活性化し、並びにＴｈ１極性化を助ける、インターフェロンガンマ
；並びにＮＫ細胞を活性化し、細胞傷害性応答の発生に関連する、ＩＬ－１２及びＩＬ－
１８が挙げられる。本開示の方法の実施のための具体的な実施形態において、混合リンパ
球反応において応答リンパ球が、より少ない炎症性サイトカインを生成することが有用で
ある。逆に、免疫抑制性サイトカイン又は抗炎症性サイトカインの評価も、本開示の状況
において行われ得る。サイトカインの例としては、Ｔｈ２細胞を刺激するＩＬ－４、とり
わけ制御性Ｔ細胞を活性化するＩＬ１０、及び炎症を阻害するＴＧＦ－Ｂが挙げられる。

本開示のいくつかの実施形態において、線維芽細胞の免疫原性を低下させるために、線
維芽細胞の遺伝子改変が利用される。１つの方法は、免疫原性が低い細胞（例えば、未熟
樹状細胞）による、細胞質移行を含む遺伝子改変を提供する。別の実施形態において、炎
症惹起遺伝子（例えば、ＨＬＡ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＣＤ５、ＴＮＦ－アル
ファ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－１７、ＩＬ－
２１、ＩＬ－２３及び／又はＩＬ－２７）を選択的に切り取るように、遺伝子編集が利用
される。

本開示の特定の実施形態において、１つ以上の免疫調節剤は、例えば真核細胞において
作動可能な組換え発現ベクターを介して、ユニバーサルドナー線維芽細胞において発現さ
れ、その免疫調節剤の発現は、構成的プロモーター又は誘導性プロモーター又は組織特異
的プロモーターによって制御され得る。具体的な実施形態において、そのベクターは、ウ
イルスベクター（例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随
伴ウイルス又は単純ヘルペスウイルス）であるか、又はそのベクターは、非ウイルスベク
ター（例えば、裸のＤＮＡ又はプラスミドＤＮＡ又はミニサークルＤＮＡ）である。トラ
ンスフェクションのための免疫調節剤としては、少なくとも以下が例として挙げられる：
Ｆａｓリガンド、ＴＧＦ－ベータ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＨＬＡ－Ｇ、インドールアミ
ン２，３デオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ガレクチンファミリーメンバー、ガレクチン３、
アルギナーゼ及び／又はＩＬ－２０。

本開示の実施形態は、ストレスを受けた線維芽細胞に未熟樹状細胞を曝露することによ
って、樹状細胞の成熟を誘導する方法を含み、いくつかの場合において、それらの線維芽
細胞は、高熱及び／又は血清枯渇によってストレスを受ける。

いくつかの実施形態において、血管新生性マクロファージを作製する方法が存在し、そ
の方法は、ａ）単球及び／又は単球前駆細胞を得る工程；並びにｂ）その単球及び／又は
単球前駆細胞に血管新生を刺激する能力を付与する条件下で、その単球及び／又は単球前
駆細胞を線維芽細胞と接触させる工程を含み得る。

ある特定の実施形態において、１つ以上のストレス誘導刺激で予め調節された有効量の
線維芽細胞集団を個体に投与することによってその個体におけるウイルス誘導肝不全を処
置する方法が提供される。

本開示の専門家が上記細胞を臨床において投与するための様々な品質管理の手段が、当
該分野で公知である。細胞の適格性に対する基準の例としては、フローサイトメトリーな
どの手段を用いたマーカー識別、生存能、エンドトキシン含有量、並びに微生物汚染及び
マイコプラズマ汚染に対する評価が挙げられる。

前述では、以下に続く発明の詳細な説明をよりよく理解できるように、本発明の特長及
び技術的利点をやや広く概説した。本発明の請求項の主題を成す本発明のさらなる特長及
び利点を本明細書の以後で説明する。開示される概念及び具体的な実施形態は、本発明の
同じ目的を果たすために、他の構造を改変又は設計するための基礎として容易に利用され
得ることが当業者に認識されるだろう。そのような等価な構成は、添付の請求項に示され
ているような本発明の趣旨及び範囲から逸脱しないことも、当業者に容易に理解されるだ
ろう。さらなる目的及び利点とともに、本発明の構成と実施方法の両方に関して本発明に
特有であると考えられる新規の特長は、添付の図面に関連して考慮するとき、以下の説明
からよりよく理解されるだろう。しかしながら、それらの各図面は、例証目的及び説明目
的で提供されるだけであり、本発明の限度の定義として意図されていないことが明確に理
解されるべきである。

本発明の理解をより完全なものにするために、添付の図面と併せて解釈される以下の説
明について言及する。

図１は、線維芽細胞及び／又はそれらから産生される１つ以上の作用物質と、１つ以上のタイプの免疫細胞及び／又はそれらから産生される１つ以上の作用物質との相互作用の具体例を図示している。

図２は、インターフェロンガンマによる前処置が、線維芽細胞の同種刺激活性を低下させることを示している。

図３は、インターフェロンガンマで処置された線維芽細胞が、同種異系リンパ球からのインターフェロンガンマ産生を阻害することを実証している。

図４は、インターフェロンガンマで処置された線維芽細胞が、同種異系リンパ球からのインターロイキン－４産生を刺激することを実証している。

図５は、インターフェロンガンマで処置された線維芽細胞が、同種異系リンパ球からのＴＮＦ－アルファ産生を阻害することを示している。

図６は、多血小板血漿による前処置が、線維芽細胞の同種刺激活性を低下させることを示している。

図７は、線維芽細胞によるコラーゲン誘発関節炎の処置を、ＩＦＮ－ガンマで前処置された線維芽細胞による処置と対比して示している。

図８は、線維芽細胞、及びＰＲＰで前処置された線維芽細胞によるコラーゲン誘発関節炎の処置を図示している。

図９は、包皮線維芽細胞の添加が、エクスビボ培養において制御性Ｔ細胞（「Ｔｒｅｇ」）の拡大を加速させることを実証している。臍帯血細胞を加える前に、包皮線維芽細胞を５０％培養密度で予めプレーティングしておいた。「Ｘ」の記号は、線維芽細胞とカクテルとの共培養におけるＴｒｅｇの成長を示す。正方形の記号は、線維芽細胞のみとの共培養におけるＴｒｅｇの成長を示す。三角形の記号は、カクテルのみとの培養におけるＴｒｅｇの成長を示す。培養の開始時に、５０，０００個のＴｒｅｇを加えた。Ｔｒｅｇの計数は、フローサイトメトリーによって行った。

図１０Ａは、リンパ球によって活性化された線維芽細胞が、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ；図１０Ａ）のレベルを有意に低下させたことを示している。 図１０Ｂは、リンパ球によって活性化された線維芽細胞が、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ；図１０Ｂ）のレベルを有意に低下させたことを示している。

図１１Ａは、ＣＣＬ４及び活性化線維芽細胞と比べた、ＣＣＬ４で処置されたマウスにおける肝臓（図１１Ａ）の病理学的な変化を示している。 図１１Ｂは、ＣＣＬ４及び活性化線維芽細胞と比べた、ＣＣＬ４で処置されたマウスにおける肝臓の組織切片（図１１Ｂ）の病理学的な変化を示している。

図１２は、線維芽細胞で処置された単球、線維芽細胞のみ、又は単球のみへの曝露後のＨＵＶＥＣ培養物からのＶＥＧＦ産生を示している。

図１３は、線維芽細胞で処置された単球、線維芽細胞のみ、又は単球のみへの曝露後のＨＵＶＥＣ培養物からのＩＬ－３３産生を示している。

図１４は、線維芽細胞で処置された単球、線維芽細胞のみ、又は単球のみへの曝露後のＨＵＶＥＣ細胞の増殖を示している。

図１５は、線維芽細胞で処置されたＰＢＭＣ、ＰＢＭＣのみ又は線維芽細胞のみへの曝露後のＨＵＶＥＣ細胞の増殖を示している。

図１６は、コントロール線維芽細胞と比べて、ストレスを受けた線維芽細胞とともに培養したとき、ＣＤ８０の高発現が観察されたことを実証している。

図１７は、コントロール線維芽細胞と比べて、ストレスを受けた線維芽細胞とともに培養したとき、ＣＤ８６の高発現が観察されたこと示している。

図１８は、高熱又は血清枯渇線維芽細胞における培養によるＣＤ８増殖の増加を示している。

図１９は、培養細胞を用いた心筋梗塞マウスモデルの処置を示している。菱形は、単球を反映しており、四角形は、線維芽細胞であり、三角形は、食塩水であり、「ｘ」は、単球と線維芽細胞との組み合わせである。

図２０Ａ－Ｃは、ＧＶＨＤを有する個体を有効量の線維芽細胞に曝露した後のＣ反応性タンパク質の減少を示している。

図２１Ａ－Ｃは、ＧＶＨＤを有する個体を有効量の線維芽細胞に曝露した後のＴＮＦアルファの減少を示している。

図２２Ａ－Ｃは、ＧＶＨＤを有する個体を有効量の線維芽細胞に曝露した後のＩＬ－６の減少を示している。

図２３Ａ－Ｃは、ＧＶＨＤを有する個体を有効量の線維芽細胞に曝露した後のＩＦＮγ産生の増加を示している。

図２４Ａ－Ｃは、ＧＶＨＤを有する個体を有効量の線維芽細胞に曝露した後のナチュラルキラー（ＮＫ）活性の増加を示している。

Ｉ．定義の例
長年の特許法の慣習に沿って、語「ａ」及び「ａｎ」は、語「～を含む」と合わせて本
明細書（請求項を含む）において使用されるとき、「１つ以上の」を表す。本開示のいく
つかの実施形態は、本開示の１つ以上のエレメント、方法工程及び／又は方法からなり得
るか、又は本質的になり得る。本明細書中に記載される任意の方法又は組成物が、本明細
書中に記載される他の任意の方法又は組成物に対して実行され得ることが企図される。

本明細書中で使用されるとき、用語「約」又は「およそ」とは、参照の量、レベル、値
、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量又は長さに対して３０、２５、２
０、２５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２又は１％ほども変動する、量、レベル
、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量又は長さのことを指す。特定
の実施形態において、用語「約」又は「およそ」は、数値の前につくとき、その値プラス
又はマイナス１５％、１０％、５％又は１％の範囲を示す。生体系又は生物学的プロセス
に関して、その用語は、ある値の１桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以
内を意味し得る。別段述べられない限り、用語「約」は、特定の値に対する許容され得る
誤差範囲内を意味する。

本明細書中で使用されるとき、用語「活性化線維芽細胞」とは、その細胞において１つ
以上の変更：代謝的な変更、免疫学的な変更、成長因子分泌の変更、表面マーカー発現の
変更及び／又はマイクロベシクル産生の変更を誘導できる１つ以上の刺激で処置された線
維芽細胞のことを指す。

本明細書中で使用されるとき、用語「活性化免疫細胞」とは、その細胞において１つ以
上の変更：代謝的な変更、免疫学的な変更、成長因子分泌の変更、表面マーカー発現の変
更及びマイクロベシカル産生の変更を誘導できる１つ以上の刺激で処置された免疫細胞の
ことを指す。

用語「投与される」又は「投与する」は、本明細書中で使用されるとき、組成物が患者
に対して意図した効果を及ぼすように、その組成物を個体に提供する任意の方法のことを
指す。例えば、投与方法の１つは、医療デバイス（例えば、カテーテル、アプリケーター
ガン、シリンジなどであるがこれらに限定されない）を用いた間接的な機構による方法で
ある。第２の例示的な投与方法は、局所組織投与、経口摂取、経皮パッチ、局所適用、吸
入、坐剤などのような直接的な機構による方法である。

本明細書中で使用されるとき、「同種異系」とは、同じ種の１つ以上の個体からではあ
るが、天然の状況においては免疫学的に不適合であるか又は免疫学的に不適合である能力
がある、別の身体由来の組織又は細胞のことを指す。

本明細書中で使用されるとき、用語「同種移植」とは、ドナーからレシピエントへの器
官、組織及び／又は細胞の移植のことを指し、ここで、そのドナーとレシピエントは、異
なる個体であるが、同じ種である。そのような手順によって移植された組織は、同種移植
片（ａｌｌｏｇｒａｆｔ）又は同種移植片（ａｌｌｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）と称される
。

本明細書中で使用されるとき、用語「同種刺激性」及び「アロ反応性」とは、同種異系
抗原、すなわち「同種抗原」、又は非類似のＨＬＡハプロタイプを発現する細胞に応答し
た免疫系の刺激及び反応のことを指す。

本明細書中で使用されるとき、用語「血管新生」とは、既存の血管からの新しい血管の
成長を含む生理学的プロセスのことを指し、血管新生の開始、既存の血管から開始するこ
とによる新しい血管の形成、及び分割型血管新生（重積：既存の血管を分割することによ
る新しい血管の形成）を含む。

本明細書中で使用されるとき、用語「自己免疫」とは、自身の健康な細胞及び組織に対
する生物の免疫応答の系のことを指す。

本明細書中で使用されるとき、「自家」とは、同じ個体の身体に由来する又は同じ個体
の身体から移される組織又は細胞を指す（すなわち、自己血輸血；自家骨髄移植）。

本明細書中で使用されるとき、用語「自家移植」とは、ある個体の身体のある部分から
同じ個体の別の部分への器官、組織及び／又は細胞の移植のことを指し、すなわち、ドナ
ーとレシピエントは、同じ個体である。そのような「自家」手技によって移植された組織
は、自家移植片（ａｕｔｏｇｒａｆｔ）又は自家移植片（ａｕｔｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ
）と称される。

用語「生物学的に活性な」とは、構造的、制御的又は生化学的な機能を有する任意の分
子のことを指す。例えば、生物学的活性は、例えば、タンパク質活性を欠く細胞の野生型
成長の回復によって決定され得る。タンパク質活性を欠く細胞は、多くの方法（すなわち
、例えば、点変異及びフレームシフト変異）によって作製され得る。相補性は、タンパク
質活性を欠く細胞に、当該タンパク質、その誘導体又はそれらの一部を発現する発現ベク
ターをトランスフェクトすることによって達成される。他の場合では、遺伝子産物（例え
ば、タンパク質）のフラグメントは、その完全長の遺伝子産物の活性を保持するが、低下
しているが検出可能なレベルの完全長の遺伝子産物の活性であり得る場合、生物学的に活
性であると見なされ得る（又は機能的に活性と称されることがある）。

「細胞培養」は、静止状態であるか、老化しているか、（活発に）分裂しているかを問
わず、生細胞を含む人工的なインビトロ系である。細胞培養において、細胞は、適切な温
度、典型的には３７℃の温度並びに典型的には酸素及びＣＯ_２を含む雰囲気下において生
育、維持される。培養条件は、細胞型ごとに大きく異なり得るが、特定の細胞型に対する
条件が異なると、異なる表現型が発現される可能性がある。培養系において最もよく変動
する因子は、成長培地である。成長培地は、栄養分、成長因子の濃度及び他の成分の存在
が異なり得る。培地に補充するために使用される成長因子は、動物血液由来であることが
多く、例えば、子ウシ血清である。

「慢性創傷」とは、不完全な治癒に関連する状態、疾患又は治療を有する患者における
、創傷の発生から１２週間で完全に閉じていない創傷を意味する。不十分な治癒に関連す
る状態、疾患又は治療としては、例えば、糖尿病、動脈不全、静脈不全、ステロイドの慢
性使用、癌化学療法、放射線療法、放射線被曝及び栄養失調が挙げられる。慢性創傷には
、過剰な炎症（例えば、ＩＬ－６、腫瘍壊死因子－アルファ（ＴＮＦ－アルファ）及びＭ
ＭＰの過剰産生）、適切な治癒に必要な重要な成長因子の欠乏、細菌の異常増殖及び線維
芽細胞の老化をもたらす欠陥が含まれる。慢性創傷は、創傷の表面全体を覆うことができ
ない上皮層を有し、細菌がコロニー形成しやすい。

本明細書中で使用されるとき、用語「側枝形成」とは、終末器官又は血管床に十分に提
供できない別の血管と同じ終末器官又は血管床を提供する、１つの血管又はいくつかの血
管の成長のことを指す。

本明細書全体にわたって、文脈が他のことを要求しない限り、語「～を含む（ｃｏｍｐ
ｒｉｓｅ」、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎ
ｇ）」は、記載の工程若しくはエレメント又は工程群若しくはエレメント群を包含するが
、他の任意の工程若しくはエレメント又は工程群若しくはエレメント群を排除しないこと
を暗に示すと理解される。「～からなる」は、句「～からなる」の前に何が置かれたとし
ても、「～を含み、それらに限定される」ことを意味する。したがって、句「～からなる
」は、列挙されたエレメントが、不可欠又は必須であること、及び他のエレメントが存在
しない可能性があることを示唆する。「～から本質的になる」は、この句の前に列挙され
る任意のエレメントであって、列挙されたエレメントに対する本開示に明示される活性又
は作用を干渉しない又はそれらに寄与しない他のエレメントに限定されるエレメントを含
むことを意味する。したがって、句「～から本質的になる」は、列挙されたエレメントが
、不可欠又は必須であるが、他のエレメントは自由選択ではなく、それらが列挙されたエ
レメントの活性又は作用に影響するか否かに応じて、存在してもよいか、又は存在しては
ならないことを示唆する。

用語「薬物」、「作用物質」又は「化合物」は、本明細書中で使用されるとき、所望の
効果を達成する、投与されることが可能な任意の薬理学的に活性な物質のことを指す。薬
物又は化合物は、合成のもの又は天然に存在するもの、非ペプチド、タンパク質若しくは
ペプチド、オリゴヌクレオチド若しくはヌクレオチド（ＤＮＡ及び／又はＲＮＡ）、多糖
又は糖であり得る。

「成長因子」は、細胞増殖及び／又は細胞分化及び／又は細胞遊走を刺激することがで
きる、天然に存在するタンパク質、内因性タンパク質若しくは外来性タンパク質又は組換
えタンパク質であり得る。

用語「個体」は、本明細書中で使用されるとき、医療施設に収容されていてもよいし収
容されていなくてもよく、医療施設の外来患者として処置されてもよい、ヒト又は動物の
ことを指す。個体は、インターネットを介して１つ以上の医学的組成物を受け取っていて
もよい。個体には、任意の齢のヒト又は非ヒト動物が含まれ得るので、個体は、成体及び
若年者（すなわち、小児）及び乳児を含む。用語「個体」は、医学的処置の必要性を暗示
すると意図されないので、個体は、臨床的であるか基礎科学研究の支援であるかを問わず
、自発的又は非自発的に実験の一部となる場合がある。用語「被験体」又は「個体」は、
交換可能に使用されてよく、それらは、方法又は材料の対象である任意の生物又は動物被
験体のことを指し、それらとしては、哺乳動物、例えば、ヒト、実験動物（例えば、霊長
類、ラット、マウス、ウサギ）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、シチメンチ
ョウ及びニワトリ）、家庭のペット（例えば、イヌ、ネコ及びげっ歯類）、ウマ及びトラ
ンスジェニック非ヒト動物が挙げられる。

本明細書中で使用されるとき、用語「虚血」又は「虚血状態」とは、身体の器官又は部
分への血液の供給が不十分であることを指す。そのような状態には、心虚血、虚血性大腸
炎、腸間膜虚血、虚血性脳卒中、脳虚血、腎虚血及び肢虚血が含まれ得る。

「間葉系幹細胞」又は「ＭＳＣ」とは、（１）プラスチックに接着性である、（２）Ｃ
Ｄ１４、ＣＤ３４、ＣＤ４５及びＨＬＡ－ＤＲ陰性でありつつ、ＣＤ７３、ＣＤ９０及び
ＣＤ１０５抗原を発現する、並びに（３）例えば骨形成系列、軟骨形成系列及び脂肪生成
系列に分化する能力を有する、細胞のことを指す。具体的な実施形態において、間葉系幹
細胞は、実質的な（例えば、ベースラインと比べて５０％を超える）レベルのＨＬＡ－Ｄ
Ｒ、ＣＤ１１７、ＣＤ４５又はそれらの組み合わせを発現しない。本明細書中で使用され
るとき、「間葉系間質細胞」（「間葉系幹細胞」とも称されることがある）又は「ＭＳＣ
」は、骨髄、脂肪組織、羊水、子宮内膜、トロホブラスト由来組織、臍帯血、ワルトン膠
様質、胎盤、多能性幹細胞に由来する羊膜組織及び歯を含むがこれらに限定されない任意
の組織に由来し得る。本明細書中で使用されるとき、「間葉系間質細胞」又は「ＭＳＣ」
は、組織から初めて単離された際にはＣＤ３４陽性の細胞であるが、表現型的及び機能的
に記載された細胞に類似の細胞を含む。本明細書中で使用されるとき、「ＭＳＣ」は、Ｎ
ＧＦ－Ｒ、ＰＤＧＦ－Ｒ、ＥＧＦ－Ｒ、ＩＧＦ－Ｒ、ＣＤ２９、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５６、
ＣＤ６３、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１４６、ＣＤ２７１
、ＭＳＣＡ－１、ＳＳＥＡ４、ＳＴＲＯ－１及びＳＴＲＯ－３を含むリストから選択され
る細胞表面マーカー又はそれらの任意の組み合わせを用いて組織から単離された細胞であ
って、拡大の前又は後にＩＳＣＴ基準を満たす細胞を含む。本明細書中で使用されるとき
、「間葉系間質細胞」又は「ＭＳＣ」には、骨髄間質幹細胞（ＢＭＳＳＣ）、骨髄から単
離された成体多能性誘導性細胞（ＭＩＡＭＩ）細胞、多能性成体前駆細胞（ＭＡＰＣ）、
間葉系成体幹細胞（ＭＡＳＣＳ）、ＭｕｌｔｉＳｔｅｍ（登録商標）、Ｐｒｏｃｈｙｍａ
ｌ（登録商標）、レメステムセル（ｒｅｍｅｓｔｅｍｃｅｌ）－Ｌ、間葉系前駆細胞（Ｍ
ＰＣ）、歯髄幹細胞（ＤＰＳＣ）、ＰＬＸ細胞、ＰＬＸ－ＰＡＤ、ＡｌｌｏＳｔｅｍ（登
録商標）、Ａｓｔｒｏｓｔｅｍ（登録商標）、Ｉｘｍｙｅｌｏｃｅｌ－Ｔ、ＭＳＣ－ＮＴ
Ｆ、ＮｕｒＯｗｎ^ＴＭ、Ｓｔｅｍｅｄｙｎｅ^ＴＭ－ＭＳＣ、Ｓｔｅｍｐｅｕｃｅｌ（登録
商標）、ＳｔｅｍｐｅｕｃｅｌＣＬＩ、ＳｔｅｍｐｅｕｃｅｌＯＡ、ＨｉＱＣｅｌｌ、Ｈ
ｅａｒｔｉｃｅｌｌｇｒａｍ－ＡＭＩ、Ｒｅｖａｓｃｏｒ（登録商標）、Ｃａｒｄｉｏｒ
ｅｌ（登録商標）、Ｃａｒｔｉｓｔｅｍ（登録商標）、Ｐｎｅｕｍｏｓｔｅｍ（登録商標
）、Ｐｒｏｍｏｓｔｅｍ（登録商標）、Ｈｏｍｅｏ－ＧＨ、ＡＣ６０７、ＰＤＡ００１、
ＳＢ６２３、ＣＸ６０１、ＡＣ６０７、子宮内膜再生細胞（ＥＲＣ）、脂肪由来再生幹細
胞（ＡＤＲＣ）として文献に記載されている細胞が含まれる。

本明細書全体にわたる「１つの実施形態」、「ある実施形態」、「特定の実施形態」、
「関連する実施形態」、「ある特定の実施形態」、「追加の実施形態」又は「さらなる実
施形態」又はそれらの組み合わせに対する言及は、その実施形態に関連して記載される特
定の特長、構造又は特徴が、本開示の少なくとも１つの実施形態に含められることを意味
する。したがって、本明細書全体にわたる様々な箇所における前述の句の出現は、必ずし
もすべてが同じ実施形態について言及しているわけではない。さらに、特定の特長、構造
又は特徴が、１つ以上の実施形態において任意の好適な様式で組み合わされ得る。

用語「薬学的に」又は「薬理学的に許容され得る」は、本明細書中で使用されるとき、
動物又はヒトに投与されたとき、副作用、アレルギー反応又は他の有害反応をもたらさな
い分子実体及び組成物のことを指す。

用語「薬学的に許容され得るキャリア」は、本明細書中で使用されるとき、水、エタノ
ール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレン
グリコールなど）、それらの好適な混合物、並びに植物油、コーティング、等張剤及び吸
収遅延剤、リポソーム、商業的に入手可能な洗剤などを含むがこれらに限定されない任意
のあらゆる溶媒又は分散媒を含む。補足的な生理活性成分も、そのようなキャリアに組み
込まれ得る。

用語「低減する」、「阻害する」、「減少する」、「抑制する」、「低下させる」、「
予防する」及び文法上の等価物（「より低い」、「より小さい」などを含む）は、処置さ
れた被験体と比べた無処置の被験体における任意の症状の表現に関して、処置された被験
体における症状の量及び／又は規模が、無処置の被験体よりも、医学の訓練を受けた任意
の人材によって臨床的に妥当であると認識される任意の量だけ少ない／小さいことを意味
する。１つの実施形態において、処置された被験体における症状の量及び／又は規模は、
無処置の被験体における症状の量及び／又は規模よりも少なくとも１０％少ない／小さい
、少なくとも２５％少ない／小さい、少なくとも５０％少ない／小さい、少なくとも７５
％少ない／小さい、かつ／又は少なくとも９０％少ない／小さい。

「治療薬」は、血管新生及び／又は創傷治癒の調節において「治療効果」を有すること
を意味し、その治療薬の量は、その量の治療薬の投与が、血管新生の調節を必要としてい
る被験体（例えば、動物モデル又はヒト患者）に投与されたとき、血管新生活性の有意な
調節（すなわち、増加又は減少）を引き起こすのに十分である場合、「血管新生調節量」
であると言われる。

本明細書中で使用されるとき、用語「治療有効量」は、「有効量」と同義であり、「治
療的に有効な用量」及び／又は「有効な用量」とは、専門家が求める生物学的、美容的又
は臨床的応答の誘発を必要とする個体において、そのような生物学的、美容的又は臨床的
応答を誘発する化合物の量のことを指す。一例として、有効量は、細胞群の免疫原性を低
下させるのに十分な量である。非限定的な例として、有効量は、移植された組織を支援す
るのに十分な血液供給の形成を促進するのに十分な量である。別の非限定的な例として、
有効量は、新しい血管及び付随する脈管構造の形成（血管新生）を促進するのに十分な量
並びに／又は既存の血管及び付随する脈管構造の修復若しくはリモデリングを促進するの
に十分な量である。本開示の方法の特定の用途のために投与される適切な有効量は、本明
細書中に提供されるガイダンスを用いて当業者が決定し得る。例えば、有効量は、本明細
書に記載されるようなインビトロ及びインビボアッセイから外挿され得る。当業者は、個
体の状態が、治療過程全体にわたってモニターされ得ること、及び投与される本明細書中
に開示される化合物又は組成物の有効量が、しかるべく調整され得ることを認識するだろ
う。

本明細書中で使用されるとき、用語「移植」とは、生組織又は生細胞を取得し、それを
身体の別の部分又は別の身体に植え込むプロセスのことを指す。

「処置」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」又は「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、疾
患又は状態の影響を低減する方法を意味する。処置とは、単に症状ではなく疾患自体又は
状態自体を低減する方法のことも指し得る。処置は、処置前のレベルからの任意の低減で
あり得、疾患、状態、又はその疾患若しくは状態の症状の完全な消失であり得るが、それ
に限定されない。ゆえに、本開示の方法において、処置とは、確立した疾患の重症度又は
疾患進行の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％
又は１００％の低減（疾患の少なくとも１つの症状の重症度の低下を含む）のことを指し
得る。例えば、同じ被験体における処置前のレベル又はコントロール被験体と比べて細胞
の免疫原性の検出可能な低減が存在する場合、細胞の免疫原性を低下させるための本開示
の方法は、処置であると見なされる。したがって、低減は、天然のレベル又はコントロー
ルレベルと比べて１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００％又
はその中間の任意の量の低減であり得る。「処置」は、必ずしも疾患又は状態の治癒のこ
とを指さず、疾患又は状態の見通しの改善のことを指すことが理解され、本明細書中で企
図される。具体的な実施形態において、処置とは、少なくとも１つの症状の重症度又は程
度の低下のことを指し、代替的又は追加的に、少なくとも１つの症状の発生の遅延のこと
を指し得る。

ＩＩ．線維芽細胞と免疫細胞との機能的相互作用
本開示の特定の実施形態では、非同一タイプの第１の細胞と第２の細胞との間に、生物
学的な機能的クロストークがあり、その相互作用（ｉｎｔｅｒａｔｉｏｎ）によって、（
直接又は間接的に）それらの２つのタイプの細胞のうちの少なくとも１つが、特定の治療
目的のために利用され得るような１つ以上の改変を有するようになる。いくつかの場合で
は、第１のタイプの細胞と第２のタイプの細胞との間に、生物学的な機能的クロストーク
があり、その相互作用によって、両方のタイプの細胞がそれぞれの治療目的のために利用
され得るような１つ以上の改変を各タイプの細胞が有するようになる。いくつかの実施形
態において、免疫細胞（単球、単球前駆細胞、ＰＢＭＣ、ＭＳＣなどを含む）又は他の細
胞への線維芽細胞の曝露によって、それぞれの線維芽細胞、及び免疫細胞又は他の細胞が
、その曝露の非存在下ではそれぞれの細胞が発現できなかった及び／又は有することがで
きなかった１つ以上の作用物質を発現できる及び／又は１つ以上の活性を有することがで
きるようになる。特定の実施形態において、線維芽細胞及び免疫細胞又は他の細胞は、互
いに対して同種異系であるが、他の実施形態では、それらは互いに対して自家である。

特定の実施形態において、本開示は、活性化線維芽細胞又は活性化免疫細胞又は活性化
免疫細胞誘導体を作製するインビトロ方法に関し、その方法は、免疫細胞由来の１つ以上
の作用物質が、線維芽細胞を活性化して活性化線維芽細胞にするような条件下において、
線維芽細胞を免疫細胞に曝露する工程を含む。具体的な実施形態では、このことに加えて
、線維芽細胞由来の１つ以上の抗原が、免疫細胞からの１つ以上のサイトカインの産生を
誘発して、活性化免疫細胞を産生する。ある特定の実施形態において、１つ以上の成長因
子及び／又は１つ以上のサイトカインが線維芽細胞を活性化して活性化線維芽細胞にする
ような条件下において、１つ以上の成長因子及び／又は１つ以上のサイトカインに線維芽
細胞を曝露することによって、活性化線維芽細胞又は活性化免疫細胞又は活性化免疫細胞
誘導体を作製するインビトロ方法が存在する。

このスキームの実施形態を図１に図示する。簡潔にするために、図１の例において、以
後、用語「単球」は、単に、免疫リンパ球などの末梢血単核球又は例えばＭＳＣを含む他
の細胞の代表例となるだけであり、樹状細胞を利用してもよい。図１のエレメント１では
、線維芽細胞（任意の起源由来）と単球とを、例えば、細胞生存度を維持できる及び分子
と細胞外ベシクルとの相互作用を可能にできる液体培地中で、互いに曝露する及び／又は
互いに接触させる。その結果、線維芽細胞抗原が、単球からのサイトカイン産生の引き金
を引く。いくつかの場合では、単球への線維芽細胞の曝露の代わりに又はその曝露に加え
て、溶液中のサイトカイン及び／又は成長因子を線維芽細胞に曝露する。単球又は遊離サ
イトカインは、線維芽細胞において免疫応答を活性化し、それにより、「治癒／傷害応答
」に向けて線維芽細胞を活性化し、少なくともいくつかの場合では、線維芽細胞の免疫原
性を低下させる（エレメント２）。少なくともいくつかの場合では、この免疫原性の低下
により、本来その線維芽細胞の起源でなかった個体においてその線維芽細胞の使用が容易
になる。

次に、得られた活性化線維芽細胞は、１つ以上のある特定の活性化マーカーを発現し得
、かつ／又は１つ以上の成長因子及び／若しくは１つ以上のサイトカイン（例えば、ＶＥ
ＧＦ、ＥＧＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０など）を産生し得（エレメント３）、その結果、こ
れらの因子は、特定の実施形態（エレメント４ａ）において数多くの治療的介入（例えば
、血管新生、炎症反応の低減など）に有用になる。エレメント４ａでは、数々の病気に罹
患している個体が、それらの症状、例えば、内因性の自己免疫活性、慢性炎症、Ｔ細胞機
能亢進又は肝臓再生のうちの１つ以上を軽減するために活性化線維芽細胞療法を受けるこ
とができる。

追加的又は代替的に、線維芽細胞への曝露の後に共培養された単核細胞（又はそれらか
ら産生された細胞）は、例えば、創傷治癒の促進及び／又は自己免疫を阻害する制御性Ｔ
細胞の作製のために、例えば、Ｍ１からＭ２に活性化されたマクロファージを使用した他
の１つ以上の病気の処置のために使用することができる（エレメント４ｂ）。

本開示の１つの実施形態では、ユニバーサルドナー線維芽細胞を個体に投与して、血管
新生と呼ばれるプロセスである新しい血管の形成を刺激する。いくつかの実施形態におい
て、血管新生の刺激は、線維芽細胞によって放出される１つ以上の成長因子、及び／又は
線維芽細胞とレシピエントの細胞との相互作用によって達成される。特定の実施形態にお
いて、そのような線維芽細胞は、少なくともＩＦＮ－ガンマに曝露された細胞である。

本開示の具体的な実施形態は、血管新生療法のための方法を提供する。本開示の実施形
態は、線維芽細胞を用いて行われる血管新生療法の方法を提供する。本開示のある特定の
実施形態において、治療有効量のユニバーサルドナー線維芽細胞が、血管新生を刺激する
目的で被験体に投与される。いくつかの場合では、その線維芽細胞は、血管新生を刺激す
る意図された目的なしに個体に提供されるが、それでもその線維芽細胞は、血管新生を刺
激する。本開示の実施形態は、ユニバーサルドナー線維芽細胞と、１つ以上の作用物質（
血管新生を刺激する１つ以上の作用物質を含む）とを同時投与するための方法を提供する
。

本開示の具体的な実施形態において、ユニバーサルドナー線維芽細胞と、治療有効量の
１つ以上の成長因子（例えば、精製されたＶＥＧＦを含むＶＥＧＦ）とを同時投与するた
めの方法が提供される。他の成長因子としては、以下が挙げられる：ＨＧＦ、ＦＧＦ－１
、ＦＧＦ－２、ＦＧＦ－５、ＥＧＦ、ＢＤＮＦ、ＰＤＧＦ及び／又はアンジオポエチン。
本開示の１つの実施形態において、ユニバーサルドナー線維芽細胞は、個体の細胞からの
成長因子（例えば、ＶＥＧＦ）の産生を刺激するために利用される。本開示の具体的な実
施形態において、ユニバーサルドナー線維芽細胞と、治療有効量のＦＧＦ－１（例えば、
一例として、精製されたＦＧＦ－１）とを同時投与するための方法が提供される。

本開示の特定の実施形態において、１つ以上の血管新生剤が、真核細胞において作動可
能な組換え発現ベクターを介して、本開示のユニバーサルドナー線維芽細胞において発現
され、その血管新生剤の発現は、構成的プロモーター又は誘導性プロモーター又は組織特
異的プロモーターによって制御され得る。具体的な実施形態において、そのベクターは、
ウイルスベクター（例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ
随伴ウイルス又は単純ヘルペスウイルス）であるか、又はそのベクターは、非ウイルスベ
クター（例えば、裸のＤＮＡ又はプラスミドＤＮＡ又はミニサークルＤＮＡ）である。具
体的な場合において、組換え発現される血管新生剤は、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ－１、ＦＧＦ－
２、ＦＧＦ－５、ＥＧＦ、アンジオポエチン、ＨＩＦ－１－アルファ、ＰＤＧＦ、ＨＧＦ
又はそれらの組み合わせを含み得る。

具体的な実施形態では、２つのタイプの細胞及び／又はそれらの１つ以上の作用物質の
間にクロストークが存在するが、いくつかの場合において、第２のタイプの細胞が、第１
のタイプの細胞によって同時に改変されないとき、第１のタイプの細胞が、第２のタイプ
の細胞によって改変される。

以下の例は、互いに対する同時曝露（及び／又はある特定の作用物質への曝露）後の線
維芽細胞及び／又は免疫細胞のある特定の使用用途、及びその後のそれぞれの細胞型の改
変を説明する。

Ａ．エクスビボで培養された細胞の細胞免疫原性の低下
本開示のいくつかの実施形態において、細胞集団の免疫原性を低下させる方法が存在し
、ここで、その集団は、ＩＦＮ－ガンマ並びに必要に応じて１つ以上のさらなる作用物質
及び／又は条件を含む組成物に曝される。

一般的な実施形態において、１つ以上の特定の培地及び／又は１つ以上の作用物質を含
む１つ以上の組成物が細胞集団の免疫原性を低下させることができるようにその細胞集団
がその組成物に曝される。本開示の特定の実施形態において、方法は、細胞集団に関し、
ここで、その細胞は、任意のタイプの線維芽細胞であり、その線維芽細胞は、低下した免
疫原性を有し、治療的な容量において利用され得るように、改変されるようになる。ある
特定の実施形態において、その線維芽細胞は、例えば、胎盤線維芽細胞又は包皮線維芽細
胞をはじめとした、任意の種類であり得る。他の実施形態では、線維芽細胞以外の細胞が
、その方法の非存在下と比べて低下した免疫原性を有するように改変され、それらの細胞
は、膵ベータ細胞、膵島、肝細胞、ニューロン、軟骨細胞、多能性幹細胞又はそれらの誘
導体であり得、そのような細胞は、１つ以上のタイプの線維芽細胞との混合物中に存在し
てもよいし、存在しなくてもよい。それらの細胞が多能性幹細胞である実施形態において
、その幹細胞は、例えば、誘導性多能性幹細胞、ストレス誘発性（ｓｔｒｅｓｓ ｉｎｄ
ｕｃｅｄ）幹細胞、単為生殖由来幹細胞、胚性幹細胞、体細胞核移植由来幹細胞又はそれ
らの誘導体を含み得る。ある特定の場合において、本開示の方法は、自家細胞に関する。
他の場合において、本開示の方法は、同種異系細胞、異種細胞又は同系細胞に関する。

本開示の実施形態は、線維芽細胞（又は上で述べたような他のタイプの細胞）の免疫原
性を低下させるために、培養条件の改変によって、その線維芽細胞を同種異系の治療用細
胞として利用する手段を提供する。本開示の１つの実施形態において、線維芽細胞は、免
疫原性がより低い起源（例えば、胎盤線維芽細胞など）から抽出される。別の実施形態に
おいて、線維芽細胞は、エクスビボで培養され、機構に限定されることなく免疫原性を低
下させると本発明者らによって実証されたインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－ガンマ）に
曝される。免疫原性の低下は、線維芽細胞がアロ反応性のＴ細胞応答を誘発する能力の阻
害によって例証され得る。

具体的な実施形態において、本開示は、行われる免疫原性を評価するための方法、例え
ば、混合リンパ球反応を調節する能力を定量するための方法を提供する。混合リンパ球反
応は、当該分野で周知である。典型的には、混合リンパ球反応は、線維芽細胞（この場合
、インターフェロンガンマで処置された線維芽細胞）を同種異系リンパ球とともに共培養
することによって行われる。ある特定の実施形態において、免疫原性の調節を示す混合リ
ンパ球反応のパラメータとしては、Ｔ細胞増殖、サイトカイン分泌及び細胞傷害性が挙げ
られる。Ｔ細胞増殖、サイトカイン分泌及び細胞傷害性を定量するための方法は、当該分
野で周知である。ある特定の実施形態において、免疫原性の調節は、ＴＮＦ－アルファ、
インターフェロンガンマ、インターロイキン（ＩＬ）－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－
７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－３３又はそれらの組み合わ
せを含む１つ以上のサイトカインの分泌を定量することによって測定され得る。

具体的な実施形態において、本開示は、免疫原性が低下した細胞の投与を必要とする個
体への、免疫原性が低下した細胞の投与に関する方法を提供する。免疫原性が低下した細
胞集団は、所望のとおり投与され得る。所望の応答、投与様式、細胞の寿命及び／又は存
在する細胞の数に応じて、様々なプロトコルが使用され得る。

Ｂ．免疫調節のための細胞移植療法
自己免疫疾患は、内在性組織に対する免疫系の過剰な反応を特徴とする。免疫系は、内
在性組織を戦うべき異物として誤って認識する。これにより、重篤な炎症反応が生じ、そ
れらに影響される器官が損傷する。内因性構造と外因性構造を区別する上で重要な部分は
、Ｔリンパ球またはＴ細胞によって行われる。Ｔリンパ球またはＴ細胞は、胸腺で「トレ
ーニング」されて、内因性細胞表面分子、いわゆるＭＨＣ分子にのみドッキングし、内因
性構造を許容する。

自己免疫疾患では、Ｔ細胞群が異常にふるまう。それらは、外来性の分子及び生物から
の今までどおり機能している防御に加えて、内在性の構造も攻撃する。器官又は組織は、
外来性として認知される。様々な結果が生じ得る。生命維持に必要な構造が影響を受ける
と、自己免疫疾患は、致命的な経過をたどる。免疫系は、これらの構造に対する防御を指
示し、細胞性及びまた体液性の防御反応が発動され、自己抗体が形成され、その結果、影
響を受けた器官は、時間とともに機能するのをやめる。最も一般的には、免疫系が弱り、
身体があらゆる種類の疾患に罹りやすくなる。いくつかの状況下では、外来性の認識も妨
害され、その結果、（例えば）変性した癌細胞の拡散を効果的に防ぐことができなくなり
、影響を受けた者は感染症にかかりやすくなる。疾患の過程において、免疫系の細胞が、
内在性の構造を破壊するが、身体の修復機構は、損傷した器官の部分を可能な限り再生し
ようとする。概して、処置がなければ、防御系のこの誤った攻撃は、生涯を通じて、又は
標的構造が完全に破壊されるまで続く。

自己免疫疾患は、影響を受ける器官に応じて処置される。これにおいて、原因療法の基
本原理は、免疫抑制剤、例えば、コルチゾンの投与によって免疫系の活性を抑制すること
である。これらの物質は、複数の全身性の副作用及び相互作用によって特徴付けられ、こ
れに基づいて、疾患イベントに関わる機構に特に影響する新薬を開発する試みが行われて
いる。

本開示の１つの実施形態では、自己免疫障害又は炎症性障害を処置するために、改変さ
れた線維芽細胞を個体に投与する。本開示のいくつかの実施形態では、線維芽細胞をエク
スビボで培養し、それらの免疫原性を低下させる条件に供し、次いで、それらの線維芽細
胞を利用して、抗炎症特性及び／又は免疫調節特性を刺激する。追加の実施形態は、自己
免疫状態及び／又は炎症状態を処置する目的で、細胞の投与を必要とする個体に細胞を投
与する方法に関する。

本開示は、細胞移植療法において使用される細胞の免疫原性を低下させるためのシステ
ム、方法及び組成物に関する。一般的な実施形態では、細胞集団の免疫原性を低下させる
ことができる１つ以上のタイプの培地及び／又は１つ以上の作用物質を含む１つ以上の組
成物に細胞集団を曝す。本開示の特定の実施形態において、方法は、細胞集団に関し、こ
こで、その細胞は、少なくとも線維芽細胞を含む。

本開示の実施形態は、線維芽細胞の免疫原性を低下させるために、培養条件の改変によ
って、治療用の同種異系細胞として線維芽細胞を利用する手段を提供する。本開示の１つ
の実施形態において、線維芽細胞は、免疫原性がより低い起源（例えば、胎盤線維芽細胞
など）から抽出される。別の実施形態において、線維芽細胞は、機構に限定されることな
く免疫原性を低下させると本発明者らによって実証されたインターフェロンガンマ（ＩＦ
Ｎ－ガンマ）に、例えばエクスビボでの培養において、曝される。免疫原性の低下は、具
体的な実施形態において、線維芽細胞がアロ反応性のＴ細胞応答を惹起する能力を阻害す
ることによって例証される。本開示の具体的な実施形態において、これらの改変された線
維芽細胞は、ユニバーサルドナー線維芽細胞である。

本開示のある特定の方法は、一例として包皮線維芽細胞を含む任意の種類の線維芽細胞
の免疫原性を低下させることに関する。ある特定の実施形態では、線維芽細胞を、培地（
例えば、血清又は血清代替物が補充された培地）中のエクスビボ培養物に再懸濁する。血
清は、ウシ胎仔血清、ヒト血清又は血清代替物をはじめとした任意の起源の血清であり得
る。ある特定の実施形態において、ヒト血清又は血清代替物は、線維芽細胞（例えば、包
皮フィーダー細胞）に異種成分不含環境を提供するために利用される。１つの実施形態に
おいて、線維芽細胞は、１つ以上のある特定の濃度のＩＦＮ－γで処置される。

本開示の実施形態は、炎症状態及び自己免疫状態を処置するために、自家又は同種異系
の線維芽細胞を使用するためのシステム及び方法に関する。本開示の方法及び組成物は、
炎症状態及び自己免疫状態を処置するための、ある特定の操作された細胞を包含する。特
に、それらの細胞には、少なくとも任意の種類の線維芽細胞が含まれる。線維芽細胞の操
作手段、並びに炎症性及び／又は自己免疫性のプロセスを積極的に阻害する種々の組織起
源の線維芽細胞が、開示される。本開示の１つの実施形態において、線維芽細胞は、免疫
応答を阻害する能力に利用され、自己免疫状態の予防及び／又は処置のための細胞療法と
しても利用される。１つの実施形態において、線維芽細胞が作製又は操作され、免疫活性
化を抑制する能力を評価する混合リンパ球反応において利用される。具体的な実施形態で
は、炎症性及び／又は自己免疫性のプロセスを直接又は間接的に処置できる１つ以上の特
定の作用物質及び／又は条件で線維芽細胞を処置する。特定の実施形態において、その作
用物質は、インターフェロンガンマ及び／又は多血小板血漿を含み、いくつかの場合にお
いて、少なくともインターフェロンガンマ及び／又は多血小板血漿（及び／又は多血小板
溶解産物）は、線維芽細胞に、免疫応答を直接又は間接的に積極的に抑制する能力を付与
し得る。これらの条件下において培養された線維芽細胞が、自己免疫性障害若しくは炎症
性障害に罹患している又はそれらのリスクがある個体に投与される。投与経路、投与量及
び投与頻度は、疾患プロセス並びに疾患のステージに応じて決定され、医学における日常
的な習慣に従って最適化され得る。

１つの実施形態において、同種異系（又は異種又は同系）の線維芽細胞が、操作されな
い様式で（例えば、インターフェロンガンマなどの１つ以上の特定の作用物質への事前の
曝露なしに）個体に投与されるが、天然で免疫調節活性によって特徴づけられる起源（例
えば、胎盤線維芽細胞又は脂肪組織に関連する線維芽細胞など）から選択される。本開示
の他の実施形態では、任意の線維芽細胞が、線維芽細胞に未熟な表現型を付与するために
逆分化を誘導することができる条件下において培養され、ここで、その未熟な表現型は、
増強された抗炎症性及び／又は免疫調節の潜在能力と相関する。例えば、線維芽細胞は、
バルプロ酸などの１つ以上のヒストン脱アセチル化酵素阻害剤の存在下において培養され
得る（Ｍｏｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。Ｈ
ＤＡＣ阻害剤に加えて、線維芽細胞の脱分化を誘導する他の手段も、本開示の状況におい
て利用され得る（例えば、８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１１）；
Ｍ－ＣＳＦ処置（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１６）；レベレシンへの曝露（Ｌｉ ｅｔ
ａｌ．，２０１６）；及び／又は幹細胞抽出物への曝露（Ｘｉｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２
０１４））。線維芽細胞の脱分化の特徴付けは、細胞外マーカー（例えば、ＣＸＣＲ４、
ＶＥＧＦＲ－２、ＣＤ３４及び／又はＣＤ１３３）並びに細胞内マーカー（例えば、ＳＯ
Ｘ－２、ＮＡＮＯＧ及び／又はＯＣＴ－４）の評価によって行うことができる。

本開示のいくつかの実施形態では、脱分化した線維芽細胞が、免疫調節のために利用さ
れ得、テロメラーゼ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ２、ベータ－ＩＩＩ－チューブリン、ＮＦ－Ｍ
、ＭＡＰ２、ＡＰＰ、ＧＬＵＴ、ＮＣＡＭ、ＮｅｕｒｏＤ、Ｎｕｒｒ１、ＧＦＡＰ、ＮＧ
２、Ｏｌｉｇ１、アルカリホスファターゼ、ビメンチン、オステオネクチン、オステオプ
ロテグリン、オステリックス、アディプシン、エリスロポエチン、ＳＭ２２－アルファ、
ＨＧＦ、ｃ－ＭＥＴ、アルファ－１－アントリプトリプシン（Ａｎｔｒｉｐｔｒｙｐｓｉ
ｎ）、セルロプラスミン、ＡＦＰ、ＰＥＰＣＫ１、ＢＤＮＦ、ＮＴ－４／５、ＴｒｋＡ、
ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＰＤＧＦ、ＰＧＦ、ＴＧＦアルファ、ＴＧＦ
ベータ、ＶＥＧＦ及びそれらの組み合わせからなる群より選択される１つ以上のマーカー
を発現する。

本開示の１つの実施形態において、線維芽細胞は、免疫調節特性を有する１つ以上の作
用物質とともに投与される。そのような作用物質としては、以下の例が挙げられる：１）
ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）７／９アンタゴニストとして部分的に作用するがゆえに自然
免疫活性化を低減する、ヒドロキシクロロキン（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２００７）；２
）ピリミジン合成及びタンパク質チロシンキナーゼ活性を阻害し（Ｃｈｏｎｇ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９９）、その結果、Ｔ細胞応答を抑制し（Ｄｉｍｉｔｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．
，２００２）、樹状細胞（ＤＣ）の活性化を阻害するとも実証された（Ｋｉｒｓｃｈ ｅ
ｔ ａｌ．，２００５）、代謝拮抗物質であるレフルノミド；３）直接又はジシアノ金（
ｉ）などの代謝産物を介して、Ｔ細胞及び抗原提示細胞の活性化を阻害する（Ｔｅｐｐｅ
ｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９；Ｈａｎ ｅｔ ａｌ．，２００８）、並びにＴｈ２
偏向を引き起こす（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，２００１）と実証された、注射可能な金化合
物（例えば、オーラノフィン）；４）１９５０年以後使用されており、主にシクロオキシ
ゲナーゼ及びリポキシゲナーゼの阻害を通じて作用する（Ｔａｇｇａｒｔ ｅｔ ａｌ．
，１９８７）、スルファサラジン；及び５）Ｔ細胞の活性化及び増殖を阻害し、ＲＡに対
するゴールデンスタンダードの１つである（Ｂａｎｓａｒｄ ｅｔ ａｌ．，２００９）
、葉酸代謝拮抗薬であるメトトレキサート。典型的には、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭ
ＡＲＤ）と糖質コルチコイドとの併用が使用されるか、あるいは炎症の全般的な阻害をも
たらすために、１パルス以上の高用量の糖質コルチコイドが投与される（Ｂｉｊｌｓｍａ
ｅｔ ａｌ．，２００６）。使用される線維芽細胞の濃度は、疾患のステージ並びに患
者の履歴及び以前の治療に対する応答性に左右される。

本開示の１つの実施形態において、免疫調節に使用される線維芽細胞は、例えば、ａ）
１つ以上の自己抗原；及び／又はｂ）１つ以上の免疫調節タンパク質を発現するように遺
伝的に操作される。その後、操作された細胞は、免疫寛容の誘導に使用される。個体及び
疾患の特徴は、どの遺伝子が、少なくともいくつかの場合において線維芽細胞の操作に使
用されるべきかを決定づけることがある。例えば、１型糖尿病の場合、数多くの自己抗原
、例えば、ＩＧＲＰ（Ｆｕｃｈｓ ｅｔ ａｌ．，２０１７）、ＩＡ－２（Ｇｕｅｒｒａ
ｅｔ ａｌ．，２０１６）、プロインスリン－２（Ｂａｂｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１
６）及びＧＡＤ６５（Ｐｈｅｌｐｓ ｅｔ ａｌ．，２０１６）が、当該分野において知
られている。これらの場合、その自己抗原を、ポリヌクレオチドの形態で線維芽細胞にト
ランスフェクトし得、その線維芽細胞を、免疫調節を可能にするために培養するか、又は
免疫調節を可能にする遺伝子でトランスフェクトする。免疫調節を誘導するためのトラン
スフェクション用の特定の目的の遺伝子としては、少なくとも以下が挙げられる：Ｆａｓ
リガンド、ＴＧＦ－ベータ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＨＬＡ－Ｇ、インドールアミン２，
３デオキシゲナーゼ、ガレクチンファミリーメンバー、ガレクチン３、アルギナーゼ及び
／又はＩＬ－２０（ｄｅ Ｊｅｓｕｓ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ
．，２０１１；Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｍｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００１；
Ｃａｎｃｅｄｄａ ｅｔ ａｌ．，２００１）。本明細書中に記載される遺伝子のいずれ
か又はその活性な部分が、線維芽細胞において発現を可能にするＣＭＶプロモーターなど
のプロモーター配列を含む哺乳動物発現構築物にクローニングされ得る［Ａｒｔｕｃ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９５，４：３１７－２１］。好適な構築物
の例としては、ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／－）、ｐＧＬ３、ＰｚｅｏＳＶ２
（＋／－）、ｐＤｉｓｐｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ｃｙｔ
ｏ（これらの各々が、例えばＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから商業的に入手可能である）又は制
御されたポリヌクレオチド発現をヒト包皮細胞において可能にするｐＳＨ発現ベクター［
Ｖｅｎｔｕｒａ ａｎｄ Ｖｉｌｌａ，１９９３，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃ
ｏｍｍｕｎ．１９２：８６７－９］が挙げられるが、これらに限定されない。レトロウイ
ルスベクター及びパッケージングシステムの例は、マルチクローニングサイトへのクロー
ニングを可能にするＲｅｔｒｏ－ＸベクターであるｐＬＮＣＸ及びｐＬＸＳＮをはじめと
した、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡから商業的に入手
可能なものであり、導入遺伝子は、ＣＭＶプロモーターから転写される。導入遺伝子が５
’ＬＴＲプロモーターから転写されるｐＢａｂｅなどのＭｏ－ＭｕＬＶに由来するベクタ
ーも挙げられる。プラスミドのトランスフェクションが完了した後、線維芽細胞は、組織
培養プレートからの剥離を可能にする手段、例えば、トリプシン処理によって、回収され
、増殖に向けて６ウェル（Ｎｕｎｃ，Ｄｅｎｍａｒｋ）又は２４ウェルのプレート（Ｎｕ
ｎｃ）に移される。トランスフェクションのおよそ３日後に、細胞培地を、改変された線
維芽細胞の増殖及び拡大に適した培地に交換する。一例は、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ－Ａ（
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１％Ｄ－グルコース（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）、１％ペ
ニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、２％Ｂ２７サプ
リメント及びレチノイン酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、０．２％ＥＧＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅ
ｃｈ，ＵＳＡ）、０．０８％ＦＧＦ－２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、０．２％ヘパリン（Ｓ
ｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）、並びに１μＭの濃度までのバルプロ酸（Ｓｉｇｍ
ａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を含むＮｅｕｒｏｂａｓａｌ Ａ（ＮＢＡ）増殖培地である。その
後、その培地を、例えば週３回、交換し、細胞を定期的に再度プレーティングして（例え
ば、最大週１回の再プレーティング、２～８回、コロニーが発生し始めたら、より定期的
に行う）、広範なコロニー形成が達成されるまで、再プログラムされていない細胞を除去
する。本開示の専門家が上記細胞を臨床において投与するための様々な品質管理の手段が
当該分野で公知である。細胞の適格性に対する基準の例としては、フローサイトメトリー
などの手段を用いたマーカー識別、生存能、エンドトキシン含有量、並びに微生物汚染及
びマイコプラズマ汚染に対する評価が挙げられる。

本開示の１つの実施形態では、線維芽細胞の生存能及び増殖能を保つための当該分野で
公知の手段を用いて、線維芽細胞をエクスビボで培養する。本開示は、レシピエントの免
疫系による線維芽細胞の認識を低下させるための公知の培養手法の改変を提供する。１つ
の実施形態では、ウシ胎仔血清などの異種成分を欠く条件において、線維芽細胞を培養す
る。異種成分は、抗体反応及びＴ細胞反応の誘発をはじめとした免疫学的反応の引き金を
引くと知られている（Ｓｅｌｖａｇｇｉ ｅｔ ａｌ．，１９９７；Ｍａｃｋｅｎｓｅｎ
ｅｔ ａｌ．，２０００；Ｋａｄｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００７；Ｆｏｒｎｉ ｅｔ
ａｌ．，１９７６；Ｌａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８３）。多くの個体において、ウシ
胎仔血清関連成分に対するＩｇＭアイソタイプの天然抗体が存在しており（Ｉｒｉｅ ｅ
ｔ ａｌ．，１９７４）、ウシ胎仔血清の存在下において生育された細胞の投与後に拒絶
、炎症又はアナフィラキシーが引き起こされる（Ｍａｃｙ ｅｔ ａｌ．，１９８９）。
具体的な実施形態において、本開示は、ヒト多血小板血漿、血小板溶解物、臍帯血血清、
自己血清及び／又は規定のサイトカインミックスによるウシ胎仔血清の置換を、線維芽細
胞の免疫原性を低下させるためのさらなる特長として包含する。他の細胞型に対する異種
成分不含培地中で組織を培養する手段は、当該分野で公知であり、参照により援用される
（Ｒｉｏｒｄａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。

本開示の実施形態は、特定のタイプの線維芽細胞の免疫原性を低下させる方法を提供す
る。線維芽細胞は、生検によって（適宜）又は剖検の際に入手できる様々な組織又は器官
（例えば、皮膚、心臓、血管、骨髄、骨格筋、肝臓、膵臓、脳及び／又は包皮）に由来し
得る。いくつかの態様において、それらの細胞は、胎児、新生児、成体起源由来であり得
る線維芽細胞又はそれらの組み合わせを含む。

包皮線維芽細胞は、免疫原性を低下させる１つ以上の作用物質、血清及び／又は血清代
替物が補充された培地中のエクスビボ培養物に再懸濁され得る。血清は、ウシ胎仔血清、
ヒト血清又は血清代替物（例えば、ヒト血小板溶解物による代替物（Ｒｉｏｒｄａｎ ｅ
ｔ ａｌ．，２００７；Ｓｃｈａｌｌｍｏｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００７；Ｃａｐｅｌ
ｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００７；Ｃａｒｒａｎｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｓａｌ
ｖａｄｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｂｉｅｂａｃｋ ｅｔ ａｌ．，２００９）））を
含む任意の起源の血清であり得る。いくつかの実施形態では、包皮フィーダー細胞に対し
て異種成分不含環境を提供するために、ヒト血清又は血清代替物が利用される。培養の後
、本開示のヒト包皮フィーダー細胞は、組織培養プレートなどの固相に接着すると、単層
を形成することができる［Ｄｕｇｄａｌｅ ａｎｄ Ｓｉｄｄａｌｌ（１９６９）Ｊ．Ｍ
ｅｄ．Ｌａｂ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２６：３１－５］。本開示のヒト包皮フィーダー細胞の
この特徴は、それらの細胞が、免疫原性の低下の割には高い複製能力及びＩＦＮ－ガンマ
での処置に対する応答性を有することが理由で、これらの細胞を好適なユニバーサルドナ
ーとする。当業者は、異なる起源由来の線維芽細胞が、インターフェロンガンマの異なる
濃度において異なる免疫原性低下を有し得ることを認識するだろう。具体的な実施形態に
おいて、本開示は、行われる免疫原性評価のための方法、例えば、混合リンパ球反応を調
節する能力を定量するための方法を提供する。

典型的には、線維芽細胞の免疫原性を計測するために、インターフェロンガンマで処置
された線維芽細胞を同種異系リンパ球とともに共培養することによって、混合リンパ球反
応が行われる。通常、同種異系リンパ球の増殖係数を取得して、刺激物質である線維芽細
胞の免疫原性の程度が表現される。本開示のいくつかの実施形態において、リンパ球との
培養の前に、線維芽細胞が有糸分裂的に不活性化される。有糸分裂の不活性化は、１つ以
上の作用物質（例えば、マイトマイシンＣ、又は生存能を低下させることなく増殖を阻止
する他の作用物質）による処置によって行われ得る。有糸分裂の不活性化に化学剤が利用
されるとき、その化学剤は、応答リンパ球の阻害を防ぐために細胞から洗浄除去される。

本開示の他の実施形態において、処置された線維芽細胞は、リンパ球への応答によるサ
イトカイン産生の評価など、免疫原性のレベルについて特徴付けられる。注目すべきサイ
トカインの例としては、炎症プロセス及びマクロファージの刺激に関わるＩＬ－１；Ｔ細
胞及びＮＫ細胞の活性化に関連するＩＬ－２；マクロファージを活性化し、Ｔｈ１極性化
を助ける、インターフェロンガンマ；並びに／又はＮＫ細胞を活性化し、細胞傷害性応答
の発生に関連する、ＩＬ－１２及び／若しくはＩＬ－１８が挙げられる。本開示の実施の
ために、混合リンパ球反応において応答リンパ球が、より少ない炎症性サイトカインを生
成することが望ましい。したがって、特定の実施形態において、線維芽細胞が、応答リン
パ球においてＩＬ－２、ＩＦＮ－ガンマ、ＩＬ－１２及び／又はＩＬ－１８の産生を誘発
する場合の使用のために線維芽細胞が選択される。逆に、免疫抑制性サイトカイン又は抗
炎症性サイトカインの評価も、本開示の状況において行われ得る。サイトカインには、Ｔ
ｈ２細胞を刺激するインターロイキン４；とりわけ制御性Ｔ細胞を刺激するインターロイ
キン１０；及び炎症を阻害するＴＧＦ－Ｂが含まれる。

本開示のいくつかの実施形態において、線維芽細胞の免疫原性を低下させるために、線
維芽細胞の遺伝子改変が行われる。１つの方法は、免疫原性が低い細胞（例えば、未熟樹
状細胞）による細胞質移行を含む遺伝子改変を提供する。別の実施形態において、炎症惹
起遺伝子（例えば、ＨＬＡ又は共刺激分子、例えば、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｔ
ＮＦ－アルファ、ＨＭＧＢ－１、ＩＦＮ－ガンマ、ＩＬ－１ベータ、ＩＬ－１７、ＦＡＰ
、ＩＬ－１８、ＩＬ－３３又はそれらの組み合わせ）を選択的に切り取るために、遺伝子
編集が利用される。

本開示の特定の実施形態において、１つ以上の免疫調節剤が、真核細胞において作動可
能な組換え発現ベクターを介してユニバーサルドナー線維芽細胞において発現され、その
免疫調節剤の発現は、構成的プロモーター又は誘導性プロモーター又は組織特異的プロモ
ーターによって制御され得る。具体的な実施形態において、そのベクターは、ウイルスベ
クター（例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイル
ス又は単純ヘルペスウイルス）であるか、又はそのベクターは、非ウイルスベクター（例
えば、裸のＤＮＡ又はプラスミドＤＮＡ又はミニサークルＤＮＡ）である。線維芽細胞へ
のトランスフェクション用の特定の目的のポリヌクレオチドとしては、少なくとも以下が
挙げられる：Ｆａｓリガンド、ＴＧＦ－ベータ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＨＬＡ－Ｇ、イ
ンドールアミン２，３デオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ガレクチンファミリーメンバー、ガ
レクチン３、アルギナーゼ、ＩＬ－２０、ＨＧＦ、ＰＤＧＦ－ＢＢ、ＥＧＦ、ＩＧＦ、Ｇ
ＤＦ－５、ＧＤＦ－１１、アンジオポエチン、ＦＧＦ－１、ＦＧＦ－２、ＦＧＦ－５、Ｆ
ＧＦ－１５又はそれらの組み合わせ。具体的な場合において、組換え発現される血管新生
剤としては、ＦＡＳリガンド、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－３
５、ＨＬＡ－Ｇ、Ｉ－３０９、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＣＤ２００、ガレクチン３、アルギナ
ーゼ、ＰＧＥ－２、ＴＧＦ－ベータ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＦＮ－ガンマ又はそ
れらの組み合わせが挙げられ得る。

本開示の専門家が上記細胞を臨床において投与するための様々な品質管理の手段が当該
分野で公知である。細胞の適格性に対する基準の例としては、フローサイトメトリーなど
の手段を用いたマーカー識別、生存能及び／又はエンドトキシン含有量、並びに微生物汚
染及びマイコプラズマ汚染に対する評価が挙げられる。

本開示の１つの実施形態では、自己免疫障害又は炎症性障害を処置するために、ユニバ
ーサルドナー線維芽細胞を個体に投与する。本開示のいくつかの実施形態では、細胞をエ
クスビボで培養し、免疫原性を低下させ、かつ抗炎症特性及び／又は免疫調節特性を刺激
する条件に供する。追加の実施形態は、それらの細胞の投与を必要とする個体に、自己免
疫状態及び／又は炎症状態を処置する目的でそれらの細胞を投与する方法に関する。

本開示の特定の実施形態は、１つ以上の自己免疫状態又は炎症状態（例えば、急性散在
性脳脊髄炎、急性壊死性出血性白質脳炎、アジソン病、癒着性関節包炎、無ガンマグロブ
リン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ腎炎、抗リン脂質抗
体症候群（ＡＰＳ）、抗ＴＢＭ腎炎、関節線維症（ａｒｔｈｏｆｉｂｒｏｓｉｓ）、心房
線維症、自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自律神経障害、
自己免疫性肝炎、自己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全、自己免疫性内耳疾患（ＡＩ
ＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性膵
炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、自己免疫性甲状腺疾
患、自己免疫性じんま疹（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｕｒｔｉｃａｒｉａｌ）、軸索型及び
神経型ニューロパシー、バロー病、ベーチェット病、良性粘膜類天疱瘡、水疱性類天疱瘡
、心筋症、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性疲労症候群、慢性炎症
性脱髄性多発ニューロパシー（ＣＩＤＰ）、慢性ライム病、慢性再発性多発性骨髄炎（Ｃ
ｈｒｏｎｉｃ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ ｏｓｔｏｍｙｅｌｉｔｉｓ
）（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡（ｃｉｃａｔｒｉｃｉａ
ｌ ｐｅｍｐｈｉｇｏｌｄ）、肝硬変、コーガン症候群、寒冷凝集素病、先天性心ブロッ
ク、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ病、クローン病、嚢胞性線維症、インターロイキン
－１受容体アンタゴニスト欠損症、脱髄性ニューロパシー、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎（ｄ
ｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｓ）、デビック病（視神経脊髄炎）、円板状狼瘡、ドレスラー症
候群、デュピュイトラン拘縮、子宮内膜症、心内膜心筋線維症、好酸球性食道炎、好酸球
性筋膜炎（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ ｆａｃｓｃｉｉｔｉｓ）、結節性紅斑、本態性混
合型クリオグロブリン血症、エヴァンズ症候群、実験的アレルギー性脳脊髄炎、家族性地
中海熱、線維筋痛症 線維化肺胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞心筋炎、糸
球体腎炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、多発血
管炎性肉芽腫症（ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓｕｓ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙａｎｇｉｔｉｓ）
、グレーヴズ病、ギランバレー症候群、橋本脳炎、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホ
シェーンライン紫斑病、肝炎、妊娠性疱疹、低ガンマグロブリン血症、特発性肺線維症、
特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫調節
性リポタンパク質、封入体筋炎、炎症性腸障害、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若年性糖
尿病（１型糖尿病）、若年性筋炎、川崎症候群、ケロイド、ランバート・イートン症候群
、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬（ｌｉｃｈｅｎ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、
木質性結膜炎、線状ＩｇＡ病、狼瘡（ＳＬＥ）、ライム病、縦隔線維症、メニエール病、
顕微鏡的多発血管炎（ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｐｏｌｙａｎｇｉｔｉｓ）、混合結合組
織病（ＭＣＴＤ）、モーレン潰瘍、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症（ＭＳ）、重
症筋無力症、骨髄線維症、筋炎、ナルコレプシー、新生児期発症多臓器性炎症性疾患、腎
性全身性線維症、視神経脊髄炎（デビック病）、好中球減少症、非アルコール性脂肪性肝
疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、眼瘢痕性類天疱瘡（ｏｃｕｌａｒ－ｃｉ
ｃａｔｒｉｃｉａｌ ｐｅｍｐｈｉｇｏｌｄ）、視神経炎、回帰性リウマチ、傍腫瘍性小
脳変性症、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルグ症候群、扁平部炎（周
辺性ブドウ膜炎）、パーソネージ・ターナー症候群、連鎖球菌関連小児自己免疫神経精神
疾患（ＰＡＮＤＡＳ）、天疱瘡、末梢神経障害、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血、ペーロニ
ー病、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発性動脈炎、リウマチ性多発性筋痛（ｐｏｌｙｍｙａ
ｌｇｉａ ｒｈｅｍａｔｉｃａ）、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、
原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、進行性塊状線維症、
乾癬、乾癬性関節炎、赤芽球癆、壊疽性膿皮症、レイノー現象、反応性関節炎（ｒｅａｃ
ｔｉｃ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、反射性交感神経性ジストロフィ、ライター症候群、再発
性多発性軟骨炎、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サル
コイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子自己免疫
及び精巣自己免疫、スティッフパーソン症候群、亜急性細菌性心内膜炎、スザック症候群
、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、高安動脈炎、側頭動脈炎、血小板減
少性紫斑病（ＴＴＰ）、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、腫瘍壊死因子受容体関連
周期性症候群、１型糖尿病、Ｉ型多腺性自己免疫症候群、ＩＩ型多腺性自己免疫症候群、
ＩＩＩ型多腺性自己免疫症候群、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織病、ブドウ膜炎、脈管炎
、小水疱水疱性皮膚病、白斑及びヴェゲナー肉芽腫症（現在は多発血管炎性肉芽腫症（Ｇ
ＰＡ）と呼ばれる））を処置するための方法を提供する。

本開示のある特定の方法は、少なくとも包皮線維芽細胞を含む線維芽細胞の免疫原性を
低下させることに関する。ある特定の実施形態では、線維芽細胞を、血清又は血清代替物
が補充された培地におけるエクスビボ培養物に再懸濁する。血清は、ウシ胎仔血清、ヒト
血清及び／又は血清代替物をはじめとした任意の起源の血清であり得る。ある特定の実施
形態において、ヒト血清又は血清代替物は、包皮フィーダー細胞に異種成分不含環境を提
供するために利用される。１つの実施形態において、包皮線維芽細胞は、０．１～５００
単位／ミリリットル（ＩＵ／ｍｌ）の範囲の濃度（本明細書中の他の箇所に記載される濃
度範囲を含む）のＩＦＮ－ガンマで処置される。

ある特定の実施形態において、治療有効量の改変された細胞が、１つ以上の免疫調節剤
とともに個体に同時投与される。例示的な免疫調節剤としては、ＦＡＳリガンド、ＩＬ－
２Ｒ、ＩＬ－１Ｒａ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－
３５、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、Ｉ－３０９、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＣＤ２００、ガレクチ
ン３、ｓＣＲ１、アルギナーゼ、ＰＧＥ－２、アスピリン、アトルバスタチン、フルバス
タチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタ
チン、ｎ－アセチルシステイン、ラパマイシン、ＩＶＩＧ、ナルトレキソン、ＴＧＦ－ベ
ータ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＣＴＬＡ－４、抗ＣＤ４５ＲＢ抗体、ヒドロキシクロロキン
、レフルノミド、オーラノフィン、ジシアノ金、スルファサラジン、メトトレキサート、
糖質コルチコイド、エタネルセプト、アダリムマブ、アバタセプト、アナキンラ、セルト
リズマブ、エタネルセプト－ｓｚｚｓ、ゴリムマブ、インフリキシマブ、リツキシマブ、
トシリズマブ、シクロスポリン、ＩＦＮ－ガンマ、エベロリムス、ラパマイシン又はそれ
らの組み合わせが挙げられ得る。

本開示の特定の実施形態は、急性散在性脳脊髄炎、急性壊死性出血性白質脳炎、アジソ
ン病、癒着性関節包炎、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直
性脊椎炎、抗ＧＢＭ腎炎、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、抗ＴＢＭ腎炎、関節線維症
、心房線維症、自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自律神経
障害、自己免疫性肝炎、自己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全、自己免疫性内耳疾患
（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性卵巣炎、自己免
疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、自己免疫性甲
状腺疾患、自己免疫性じんま疹、軸索型及び神経型ニューロパシー、バロー病、ベーチェ
ット病、良性粘膜類天疱瘡、水疱性類天疱瘡、心筋症、キャッスルマン病、セリアック病
、シャーガス病、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー（ＣＩＤＰ）、
慢性ライム病、慢性再発性多発性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候群、瘢
痕性類天疱瘡、肝硬変、コーガン症候群、寒冷凝集素病、先天性心ブロック、コクサッキ
ー心筋炎、ＣＲＥＳＴ病、クローン病、嚢胞性線維症、インターロイキン－１受容体アン
タゴニスト欠損症、脱髄性ニューロパシー、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神
経脊髄炎）、円板状狼瘡、ドレスラー症候群、デュピュイトラン拘縮、子宮内膜症、心内
膜心筋線維症、好酸球性食道炎、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本態性混合型クリオグロ
ブリン血症、エヴァンズ症候群、実験的アレルギー性脳脊髄炎、家族性地中海熱、線維筋
痛症 線維化肺胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞心筋炎、糸球体腎炎、糸球
体腎炎、グッドパスチャー症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、多発血管炎性肉芽腫症
、グレーヴズ病、ギランバレー症候群、橋本脳炎、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホ
シェーンライン紫斑病、肝炎、妊娠性疱疹、低ガンマグロブリン血症、特発性肺線維症、
特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫調節
性リポタンパク質、封入体筋炎、炎症性腸障害、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若年性糖
尿病（１型糖尿病）、若年性筋炎、川崎症候群、ケロイド、ランバート・イートン症候群
、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、線状ＩｇＡ病、狼瘡（Ｓ
ＬＥ）、ライム病、縦隔線維症、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、混合結合組織病（
ＭＣＴＤ）、モーレン潰瘍、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無
力症、骨髄線維症、筋炎、ナルコレプシー、新生児期発症多臓器性炎症性疾患、腎性全身
性線維症、視神経脊髄炎（デビック病）、好中球減少症、非アルコール性脂肪性肝疾患、
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、眼瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ
、傍腫瘍性小脳変性症、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルグ症候群、
扁平部炎（周辺性ブドウ膜炎）、パーソネージ・ターナー症候群、連鎖球菌関連小児自己
免疫神経精神疾患（ＰＡＮＤＡＳ）、天疱瘡、末梢神経障害、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧
血、ペーロニー病、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発性動脈炎、リウマチ性多発性筋痛、多
発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆
管炎、プロゲステロン皮膚炎、進行性塊状線維症、乾癬、乾癬性関節炎、赤芽球癆、壊疽
性膿皮症、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィ、ライター症候
群、再発性多発性軟骨炎、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマ
チ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子
自己免疫及び精巣自己免疫、スティッフパーソン症候群、亜急性細菌性心内膜炎、スザッ
ク症候群、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、高安動脈炎、側頭動脈炎、
血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、腫瘍壊死因子受
容体関連周期性症候群、１型糖尿病、Ｉ型多腺性自己免疫症候群、ＩＩ型多腺性自己免疫
症候群、ＩＩＩ型多腺性自己免疫症候群、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織病、ブドウ膜炎
、脈管炎、小水疱水疱性皮膚病、白斑及び多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）を含む１つ以
上の自己免疫状態又は炎症状態を処置又は予防するための方法を提供する。

免疫調節のための線維芽細胞の生育は、例えば、種々の組織培養培地において行われ得
る。本開示の１つの実施形態において、それらの細胞を培養するための培地の１つとして
は、ＤＭＥＭ－低グルコース（ＤＭＥＭ－ＬＧ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂ
ａｄ，ＣＡ）を含むダルベッコ変法基本培地（ＤＭＥＭ）が挙げられる。ＤＭＥＭ－ＬＧ
には、ウシ胎仔血清及び／又はヒト血清などの血清が補充され得る。典型的には、１５％
（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清（例えば、規定のウシ胎仔血清，Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ
Ｕｔａｈ）が、抗生物質／抗真菌薬（（好ましくは、１００単位／ミリリットルのペニシ
リン、１００ミリグラム／ミリリットルのストレプトマイシン及び０．２５マイクログラ
ム／ミリリットルのアンホテリシンＢ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａ
ｌｉｆ．））及び０．００１％（ｖ／ｖ）の２－メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ，Ｓ
ｔ．Ｌｏｕｉｓ ＭＯ）とともに加えられる。いくつかの場合では、種々の成長培地が使
用されるか、又は種々の補充が行われ、これらは、通常、成長培地への補充として本文中
に示される。ある特定の既知組成培地では、細胞は、血清が全く存在しない状態で生育さ
れ得る。そのような場合、細胞は、ある特定の成長因子を必要とすることがあり、その成
長因子は、その細胞を支援及び維持するために培地に加えられ得る。無血清培地における
生育のために加えられるべきある特定の因子としては、いくつかの場合において、ｂＦＧ
Ｆ、ＥＧＦ、ＩＧＦ－Ｉ及びＰＤＧＦのうちの１つ以上が挙げられる。いくつかの実施形
態において、これらの因子のうちの２つ、３つ又は４つすべてが、無血清培地又は既知組
成培地に加えられる。他の実施形態では、細胞の生育を支援又は改善するために、ＬＩＦ
が無血清培地に加えられる。

Ｃ．エクスビボ培養における制御性Ｔ細胞の拡大
本例は、特定のＴ細胞の拡大に対する当該分野における長年にわたる必要性に対して解
決策を提供する。

制御性Ｔ細胞は、自己免疫攻撃から身体を守る免疫系の必須の成分である。これは、新
生仔期に胸腺摘除されたマウスが全身性自己免疫に罹患する初期の研究によって説明され
ており、そのマウスは、ＣＤ４細胞の移入によってレスキューされた（Ｈｏｒｉ ｅｔ
ａｌ．，２００３）。その後の研究から、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）表現型がＩＬ－２受容体
ＣＤ２５を有すると特定されたが、この受容体が活性化Ｔ細胞上でも見られることを考え
ると、このことはいくらか問題である。末梢血は、制御性Ｔ表現型（「Ｔｒｅｇ」）を発
現する、すなわち、ＣＤ４抗原とＣＤ２５抗原の両方が陽性であるＴ細胞リンパ球の小さ
な集団を含む。Ｔｒｅｇ細胞には、サブセットがいくつかある。制御性細胞のサブセット
の１つは、胸腺において発達する。胸腺由来のＴｒｅｇ細胞は、細胞間接触を必要とする
、サイトカインと無関係な機構によって機能する。それらは、自己寛容の誘導及び維持、
並びに自己免疫の予防に必須である（Ｓｈｅｖａｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０００）。これ
らの制御性細胞は、胸腺での除去を免れた又は胸腺外の抗原を認識する自己反応性Ｔ細胞
の活性化及び増殖を妨げるので、制御性細胞は、ホメオスタシス及び免疫制御、並びに自
己免疫の発生からの宿主の防御にとって極めて重要である。したがって、免疫制御性ＣＤ
４^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞は、「プロフェッショナルサプレッサー細胞」と称されることが多
い。Ｔｒｅｇ細胞による免疫の抑制は、いくつかの機構を通じて生じる。１つは、活性化
Ｔ細胞の直接的な溶解であり（Ｏｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｇｏｎｄｅｋ
ｅｔ ａｌ．，２００５）、もう１つは、樹状細胞成熟の阻害（Ｍｉｙａｒａ ｅｔ ａ
ｌ．，２００７）、ゆえに、免疫系の抗原提示細胞群がＴ細胞応答を惹起する又は永続化
させる能力の阻害である。

内因性のＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇ細胞（ｎＴｒｅｇ）は、胸腺において高親和性リ
ガンドに対してポジティブ選択された細胞の独特の細胞集団であり、自己抗原に対する免
疫寛容の確立及び維持において重要な役割を果たすと示された（Ｓａｋａｇｕｃｈｉ ｅ
ｔ ａｌ．，２００９）。これらの細胞の発達及び／又は機能の欠如は、ヒトにおいて及
び先天性又は誘導性の自己免疫の様々な動物モデルにおいて重大な自己免疫に関連する。

Ｔｒｅｇ細胞は、細胞間接触を介して直接的に、又は可溶性因子を介して間接的に、免
疫寛容誘発の効果を発揮する。これらの細胞の抑制性の機構は、まだ完全に解明されてい
ないが、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）におけるＩＬ－２発現の阻止、Ｔｅｆｆ細胞の
物理的除去、ＣＴＬＡ－４／Ｂ７軸を介した免疫寛容原性樹状細胞（ＤＣ）の誘導、並び
にＴＧＦ－ベータ及びＩＬ－１０を介したＴｅｆｆ細胞の阻害が、現在までに関係してい
ると見なされている機構の一部である。また、ＣＴＬＡ－４／ＣＤ８０を介したＴｅｆｆ
細胞への逆シグナル伝達が、Ｔｒｅｇ細胞によるそれらの阻害において重要な役割を果た
すことも示されている。同様に、Ｔｒｅｇ細胞上のＣＴＬＡ－４とＤＣ上のＣＤ８０との
相互作用が、逆シグナル伝達、及びトリプトファン代謝の制御を介した寛容に関わるイン
ドールアミンジオキシゲナーゼ酵素のアップレギュレーションをもたらし得る。

本開示の実施形態は、細胞療法を必要とする個体に細胞療法を提供するための、又は細
胞療法を改善するための、組成物及び方法を提供する。実施形態は、細胞療法を必要とす
る個体（例えば、１つ以上の自己免疫疾患又は他の疾患を有する個体）に対する治療と、
その治療をもたらす方法の両方を包含する。

特定の実施形態において、ｎＴｒｅｇを含むＴｒｅｇが個体への治療に使用できるよう
に、Ｔｒｅｇを拡大するための方法及び組成物が存在する。具体的な実施形態において、
Ｔｒｅｇは、後にその細胞が望まれないタイプに復帰すること（例えば、ｎＴｒｅｇから
Ｔエフェクター細胞への復帰）なく拡大される。したがって、そのような拡大の方法は、
免疫調節特性（例えば、免疫抑制特性）の刺激に有用な細胞バンクの確立を可能にする。

本開示の１つの態様において、ｎＴｒｅｇの拡大は、所望の細胞起源からｎＴｒｅｇを
単離し、その後、それらの細胞を、線維芽細胞（又は線維芽細胞と他の作用物質との組み
合わせ）において見られる一次シグナル及び共刺激シグナルの存在下の培養において拡大
することによって、行われ得る。Ｔｒｅｇに対する一次シグナル及び共刺激シグナルの刺
激に有用な作用物質は、本明細書中に記載されるように、可溶型で使用され得、線維芽細
胞の表面に接着され得、かつ／又は表面に固定化され得る。

１つの実施形態において、主要な作用物質と共刺激の作用物質の両方が、表面上に、例
えば、基材（例えば、ビーズ）上又は操作された細胞上に同時に固定化される。１つの実
施形態において、一次活性化シグナル（例えば、ＣＤ３リガンド（例えば、架橋抗体又は
レクチン））及び共刺激分子（例えば、ＣＤ２８リガンド）を提供する分子が、同じ基材
、例えば、粒子、ビーズ又は操作された細胞に結合されるか、又はロードされる。それら
の細胞は、拡大されたら、自己免疫疾患を処置するために、単独で投与され得るか、又は
１つ以上の他の免疫制御性細胞とともに投与され得る。

別の実施形態において、本開示は、ｎＴｒｅｇなどのＴｒｅｇを、反復刺激手順を用い
てかなりの数まで拡大する方法を提供する。一例として、ＣＤ４細胞などの同種異系ナイ
ーブ細胞を、インターフェロンガンマ及び／又は多血小板血漿で培養された線維芽細胞と
ともに培養する。１つの実施形態において、ｎＴｒｅｇを拡大する方法は、例えば細胞サ
イズに基づいて、ｎＴｒｅｇを繰り返し刺激する工程を含む。具体的な場合において、細
胞サイズが休止ｎＴｒｅｇのサイズとほぼ同じｎＴｒｅｇが、反復刺激のために選択され
る。いくつかの場合において、休止ｎＴｒｅｇのサイズは、約８．５μｍである。つまり
、本発明は、細胞のサイズが、ｎＴｒｅｇの表現型及びサプレッサー活性を失うことなく
ｎＴｒｅｇの拡大の成功に寄与するパラメータであるという発見を包含する。別の実施形
態において、ｎＴｒｅｇを拡大する方法は、特定の作用物質（例えば、ラパマイシン若し
くはエベロリムス、又は哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）の他の任意の阻
害剤）の存在下においてｎＴｒｅｇを繰り返し刺激する工程を含む。ある特定の場合にお
いて、末梢血から単離されたｎＴｒｅｇは、ラパマイシンの存在下において再度刺激され
る。つまり、本発明は、線維芽細胞が共培養物に加えられる場合に、ラパマイシンがｎＴ
ｒｅｇの表現型及びサプレッサー活性を失わずに末梢血から単離されたｎＴｒｅｇの拡大
の成功に寄与する実施形態を包含する。特定の実施形態において、本開示の方法によって
作製され、拡大された細胞は、ｎＴｒｅｇを示唆するＦｏｘｐ３プロファイルを維持する
。１つの実施形態において、拡大されたｎＴｒｅｇの集団は、特異的な天然のＴｒｅｇマ
ーカー（例えば、Ｆｏｘｐ３及び潜在関連ペプチド（ＬＡＰ））を発現し、Ｆｏｘｐ３遺
伝子においてＴｒｅｇ特異的脱メチル化を示し、ＩＬ－２、ＩＦＮ－ガンマ、ＩＬ－１７
を分泌する細胞をほとんど含まない。本開示の拡大された細胞は、例示的なコラーゲン誘
発関節炎モデルにおいて観察されるように、自己免疫を抑制することもできる。他の実施
形態において、活性な細胞集団の少なくとも一部が、後の移植／注入のために保存され得
る。その集団は、ｎＴｒｅｇ集団の一部が後に利用するために保持され、一部が直ちに患
者に適用されるように、２つ以上のアリコート又は単位に分割され得る。それらの細胞の
全部又は一部の、細胞バンクにおける中期から長期にわたる保存も、本開示の範囲内であ
る。本開示では、Ｔｒｅｇ及びｎＴｒｅｇが、本方法の状況において利用され得る。

本開示の１つの実施形態では、インビトロ又はインビボにおいて生成されたＴｒｅｇ細
胞は、宿主マイクロバイオームの調節によって、活性がさらに増強される。マイクロバイ
オームの調節は、プロバイオティクス及び／又はプレバイオティクスの投与によって行わ
れ得る。腸管微生物叢が、Ｔｒｅｇ、Ｔｈ１及びＴｈ２細胞の分化及び拡大を制御するこ
とによって宿主の免疫ホメオスタシスを駆動することは当該分野で公知である。Ｆｏｘｐ
３^＋Ｔｒｅｇ細胞の欠乏によって、腸内菌共生バランス失調及び自己免疫が生じることが
実証されている。マイクロバイオームをリモデリングする手段としては、自己免疫の動物
モデルにおいて生存期間の延長及び多臓器炎症の低減と関連するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌ
ｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉの投与が挙げられる。本開示の１つの実施形態において、Ｔｒｅｇ
細胞の欠乏によって乱されたメタボロームプロファイルを変化させるために、及び／又は
プリン代謝産物であるイノシンのレベルを回復させるために、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉが投与
される。したがって、本開示の１つの実施形態において、Ｔｒｅｇ細胞の生成とともにイ
ノシンを投与することが、高い抑制活性を刺激するために利用され、それにより自己免疫
が処置される。イノシンを投与する手段及びＴｒｅｇ細胞を増強するためのマイクロバイ
オームの調節は、以下の論文（参照により援用される）に記載されている：Ｈｅ ｅｔ
ａｌ．，２０１７；Ｈｒｄｙ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｔｈａｋｕｒ ｅｔ ａｌ．，
２０１６；Ｈａｉｌｅｓｅｌａｓｓｉｅ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ
．，２０１４；Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｎａｒｕｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，
２０１４；Ｍｅｒｃａｄａｎｔｅ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｙｏｓｈｉｄａ ｅｔ ａ
ｌ．，２０１３；Ｂａｒｌｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｓｍｅｌｔ ｅｔ ａｌ
．，２０１３；Ａｔａｒａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｓｍｅｌｔ ｅｔ ａｌ．
，２０１３；Ｑｉｕ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｚｈ
ａｏ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｊｅｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｊａｎｇ ｅｔ
ａｌ．，２０１２；Ｌｏｐｅｚ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｌｏｐｅｚ ｅｔ ａｌ．，
２０１２；Ｆｉｎｋ ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｌａｖａｓａｎｉ ｅｔ ａｌ．，２０
１０；Ｌｙｏｎｓ ｅｔ ａｌ．，２０１０；ｄｅ Ｒｏｏｋｓ ｅｔ ａｌ．，２０１
０；Ｋａｒｉｍｉ ｅｔ ａｌ．，２００９；及びＦｅｌｅｓｚｋｏ ｅｔ ａｌ．，２
００７。

１つの実施形態において、Ｔｒｅｇ細胞は、線維芽細胞の存在下における、成熟した末
梢ＣＤ４^＋Ｔ細胞の活性化によって生成される。いくつかの実施形態では、免疫調節に関
連する条件下で線維芽細胞を培養する。研究から、末梢由来のＴｒｅｇ細胞は、トランス
フォーミング成長因子－ベータ（ＴＧＦ－ベータ）及びＩＬ－１０などの免疫抑制性サイ
トカインを産生することによって、それらのＴｒｅｇ細胞の阻害活性を媒介することが示
唆されている。したがって、１つの実施形態において、線維芽細胞とＴ細胞との共培養が
、様々な濃度及びレベルのＴＦＧ－ベータ及びＩＬ－１０において行われ、最適なＴｒｅ
ｇ生成条件を選択するためのマーカーとして評価される。ＩＬ－１０及びＴＧＦ－ベータ
の産生に基づく免疫寛容誘発活性の評価は、以下の論文に記載されており、参照により援
用される：Ｋｉｎｇｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：
１０８０；Ｎａｋａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，２００１ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９４：
６２９－６４４）。いずれにしても、本開示の実施形態は、線維芽細胞及び／又はＴ細胞
をＴＧＦ－ベータ及び／又はＩＬ－１０に曝露して、Ｔｒｅｇを効果的に生成する方法を
含む。

本開示の１つの実施形態において、インビトロでＴｒｅｇ細胞を拡大する既存の方法は
、線維芽細胞をフィーダー細胞層として利用するという適合を行って利用される。本開示
の実施に有用な線維芽細胞の濃度は、典型的には、１個のＴ細胞に対する１個の線維芽細
胞から、１個の線維芽細胞に対する１００個のＴ細胞（又はそれらの近似値）にまで及ぶ
。さらに特定の実施形態では、線維芽細胞とＴ細胞との比は、１個のＴ細胞に対しておよ
そ１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個又はそれを超える線維芽細胞である。い
くつかの実施形態において、ＩＬ－２などの１つ以上の成長因子の添加が、拡大される線
維芽細胞及び／又はＴ細胞の曝露のために加えられる。線維芽細胞の非存在下でＴｒｅｇ
細胞を培養する手段は、Ｔｒｅｎａｄｏらによって提供されており、彼らは、エクスビボ
で活性化及び拡大されたＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性細胞のインビボ疾患マウスモデルにお
ける治療効果の評価を初めて報告した（Ｔｒｅｎａｄｏ ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｊ．
Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２（１１）：１６８８－１６９６）。

本開示の１つの実施形態において、処置された線維芽細胞が、Ｔｒｅｇ細胞のインビト
ロ又はインビボでの拡大のために間葉系幹細胞に取って代わるために用いられるが、いく
つかの場合では、その両方が利用される。間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を用いたインビトロで
のＴｒｅｇの作製を誘導する手段は、本開示によると、間葉系幹細胞を線維芽細胞で置き
換えることによって適応できる手法に取って代わられる（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０
１７（参照により本明細書中に援用される）を参照のこと）。以前の研究では、間葉系幹
細胞は、細胞増殖に関連する成長因子（例えば、ＦＧＦ（Ｌａｉ ｅｔ ａｌ．，２０１
１；Ｃｏｕｔｕ ｅｔ ａｌ．，２０１１）、ＶＥＧＦ（Ｋｉｎｎａｉｒｄ ｅｔ ａｌ
．，２００４；Ｋｉｎｎａｒｉｄ ｅｔ ａｌ．，２００４；Ｋｗｏｎ ｅｔ ａｌ．，
２０１４）、ＩＧＦ－１（Ｍｏｎｔｅｓ ｅｔ ａｌ．，２００９）及びＨＧＦ（Ｓｈｅ
ｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５））を産生できることが実証された。実際に、ＭＳＣフィー
ダー細胞層は、これまで、造血性幹細胞（Ｗａｌｅｎｄａ ｅｔ ａｌ．，２０１１；Ｆ
ｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１２）及び多能性幹細胞（Ｚｏｕ ｅｔ ａｌ．，２０１６
；Ｓｉｌｖａ ｅｔ ａｌ．，２０１４）を未分化な状態で維持しつつ、これらの細胞を
拡大するために使用されてきた。さらに、ＭＳＣは、インビトロ（Ｃａｈｉｌｌ ｅｔ
ａｌ．，２０１５；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｋｗｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０
１４；Ｌｕｚ－Ｃｒａｗｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｅｒｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ
．，２０１３；Ｅｎｇｅｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１３）及びインビボ（Ｂａｉ ｅｔ
ａｌ．，２０１２；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｔｒｅａｃｙ ｅｔ ａｌ．，２
０１４）でのＴｒｅｇ細胞の作製を促進すると実証されている。本開示の１つの実施形態
において、線維芽細胞は、ＭＳＣの代替物として利用される。

本開示の一般的な実施形態は、１つ以上の作用物質への曝露後及び／又は改変された線
維芽細胞を含む線維芽細胞への曝露後の免疫細胞の拡大に関する改善された方法、システ
ム及び組成物を提供する。具体的な実施形態では、ＩＦＮ－ガンマ、多血小板血漿（ヒト
を含む）又はそれらの組み合わせに曝露された線維芽細胞に曝露するときに、例えばエク
スビボ培養において、制御性Ｔ細胞の集団を拡大する方法が、本明細書中に提供される。

ある特定の実施形態において、本開示の治療方法又は予防方法において利用される、制
御性Ｔ細胞などのＴ細胞は、それらを含む組織（例えば、胸腺、末梢血、月経血、脂肪組
織、骨髄、胎盤、臍帯血、脳脊髄液又はそれらの組み合わせ）から単離され、具体的な場
合において、それらのＴ細胞は、本開示の方法を用いて拡大されるときには、それらのＴ
細胞を投与されることになっている個体から単離される。具体的な場合では、それらのＴ
細胞は、１つの個体の組織から得られ、それらの細胞は、本開示の方法を用いて拡大され
、次いで、異なる個体に提供される。他の場合では、線維芽細胞に曝されるＴ細胞は、別
の方法で、例えば、商業的に、入手され得る。

具体的な実施形態において、Ｔ細胞の集団は、線維芽細胞（改変された線維芽細胞を含
む）並びに必要に応じて１つ以上のさらなる作用物質及び／又は条件を含む１つ以上の組
成物に１回以上曝される。具体的な実施形態において、改変された線維芽細胞は、少なく
ともＩＦＮ－ガンマに曝露された線維芽細胞である。線維芽細胞の曝露は、それらの線維
芽細胞及び／又はＩＦＮ－ガンマが、外から個体に提供されるのであれば（身体内におい
て、改変されていない天然の状況でＩＦＮ－ガンマに曝露される線維芽細胞とは対照的に
）、エクスビボで行われてもよいし、インビボで行われてもよい。特定の実施形態におい
て、線維芽細胞は、上記方法の少なくとも１つの工程において、人間の手で操作される。

ある特定の実施形態において、線維芽細胞は、皮膚、心臓、血管、骨髄、骨格筋、肝臓
、膵臓、脳及び／又は包皮を含む組織に由来し得る。具体的な実施形態において、線維芽
細胞は、胎盤、胎児、新生児若しくは成体の線維芽細胞又はそれらの混合物である。追加
の実施形態において、培養物における線維芽細胞とＴ細胞との比は、１：１、１：２、１
：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２
０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６
０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１
００、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、
１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、
５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、
９５：１、１００：１、２００：１、３００：１などの比を含む。特定の実施形態におい
て、共培養物における線維芽細胞とＴ細胞との比は、２：１である。代替の実施形態にお
いて、培養物におけるＴ細胞と線維芽細胞との比は、１：１、１：２、１：３、１：４、
１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、
１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、
１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００、２：１、
３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０
：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０
：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１、１０
０：１、２００：１、３００：１などの比を含む。

特定の実施形態において、Ｔ細胞及び改変された線維芽細胞（並びに／又は１つ以上の
さらなる作用物質及び／若しくは条件）の組成物を含む共培養物は、ＣＤ３リガンド（例
えば、架橋抗体又はレクチン）、ＣＤ２８リガンド（例えば、ＣＤ８０又はＣＤ８６又は
架橋抗体）、ラパマイシン、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－ベータ、ＩＬ－２、ｈＣＧ、ＰＧＥ－
２、エストロゲン、プロゲステロン、サリチル酸、エベロリムス又はそれらの組み合わせ
を含む１つ以上のさらなる作用物質を含み得る。具体的な実施形態において、１つ以上の
さらなる作用物質は、線維芽細胞とともに溶液中に存在し、線維芽細胞の表面に接着され
ており、ビーズに固定化されており、操作された細胞（例えば、１つ以上の共刺激分子及
び／又は１つ以上の架橋抗体及び／又は１つ以上の（ｍｏｒｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）操作さ
れた受容体（例えば、キメラ抗原受容体又はＴ細胞受容体）を発現するように操作された
、線維芽細胞又はＣＨＯ細胞）の表面に固定化されており、かつ／又は線維芽細胞内で発
現されている。

具体的な実施形態において、制御性Ｔ細胞は、同種異系ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ
８細胞、ガンマデルタＴ細胞又はそれらの混合物に由来する。

追加の実施形態において、線維芽細胞が曝露される組成物は、その組成物の体積の少な
くとも又はせいぜい１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１
４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７
、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、
４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５０％の濃度でヒト多血小
板血漿を含む。

具体的な実施形態において、制御性Ｔ細胞の集団は、約７～１２、７～１１、７～１０
、７～９、７～８、８～１２、８～１１、８～１０、８～９、９～１２、９～１１、９～
１０、１０～１２、１０～１１又は１１～１２μｍの直径を有するように選択される。直
径は、７、８、９、１０、１１又は１２μｍであり得る。特定の場合において、制御性Ｔ
細胞の集団の大部分は、約８．５μｍの直径を有する。他の場合において、その集団中の
少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれを超える細胞が、約７～
１２μｍの直径を有する。

改変された線維芽細胞に曝露したときのＴｒｅｇ細胞の拡大後、作製された制御性Ｔ細
胞集団は、利用されてもよいし、後の使用のために保存されてもよい。追加の実施形態は
、少なくとも１つのアリコートが、後の使用のために貯蔵され、少なくとも１つのアリコ
ートが、自己免疫状態又は炎症状態を処置するために個体に投与されるように、細胞集団
を２つ以上のアリコートに分割するための手段を提供する。

追加の実施形態は、制御性Ｔ細胞が少なくとも１つの自己免疫状態又は炎症状態を処置
するために個体に投与される方法に関する。いくつかの場合では、調製されたＴ細胞集団
の一部が、１つの状態を処置するために１つの個体に提供される一方で、調製されたＴ細
胞集団の別の一部が、同じ又は異なる自己免疫状態又は炎症状態を処置するために別の個
体に提供される。

特定の実施形態において、調製されたＴ細胞集団は、自己免疫状態又は炎症状態（例え
ば、急性散在性脳脊髄炎、急性壊死性出血性白質脳炎、アジソン病、癒着性関節包炎、無
ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ腎炎、
抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、抗ＴＢＭ腎炎、関節線維症、心房線維症、自己免疫性
血管性浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性肝炎、自
己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性
心筋炎、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜
症、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性じん
ま疹、軸索型及び神経型ニューロパシー、バロー病、ベーチェット病、良性粘膜類天疱瘡
、水疱性類天疱瘡、心筋症、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性疲労
症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー（ＣＩＤＰ）、慢性ライム病、慢性再発性
多発性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、肝硬変、コ
ーガン症候群、寒冷凝集素病、先天性心ブロック、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ病、
クローン病、嚢胞性線維症、インターロイキン－１受容体アンタゴニスト欠損症、脱髄性
ニューロパシー、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神経脊髄炎）、円板状狼瘡、
ドレスラー症候群、デュピュイトラン拘縮、子宮内膜症、心内膜心筋線維症、好酸球性食
道炎、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本態性混合型クリオグロブリン血症、エヴァンズ症
候群、実験的アレルギー性脳脊髄炎、家族性地中海熱、線維筋痛症 線維化肺胞炎、巨細
胞性動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞心筋炎、糸球体腎炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー
症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、多発血管炎性肉芽腫症、グレーヴズ病、ギランバ
レー症候群、橋本脳炎、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホシェーンライン紫斑病、肝
炎、妊娠性疱疹、低ガンマグロブリン血症、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病
（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫調節性リポタンパク質、封入体
筋炎、炎症性腸障害、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若年性糖尿病（１型糖尿病）、若年
性筋炎、川崎症候群、ケロイド、ランバート・イートン症候群、白血球破砕性血管炎、扁
平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、線状ＩｇＡ病、狼瘡（ＳＬＥ）、ライム病、縦隔線
維症、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、混合結合組織病（ＭＣＴＤ）、モーレン潰瘍
、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症、骨髄線維症、筋炎、
ナルコレプシー、新生児期発症多臓器性炎症性疾患、腎性全身性線維症、視神経脊髄炎（
デビック病）、好中球減少症、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎
（ＮＡＳＨ）、眼瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ、傍腫瘍性小脳変性症、発
作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルグ症候群、扁平部炎（周辺性ブドウ膜
炎）、パーソネージ・ターナー症候群、連鎖球菌関連小児自己免疫神経精神疾患（ＰＡＮ
ＤＡＳ）、天疱瘡、末梢神経障害、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血、ペーロニー病、ＰＯＥ
ＭＳ症候群、結節性多発性動脈炎、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎、心筋梗塞後症候
群、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン皮膚
炎、進行性塊状線維症、乾癬、乾癬性関節炎、赤芽球癆、壊疽性膿皮症、レイノー現象、
反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィ、ライター症候群、再発性多発性軟骨炎、
下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シ
ュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子自己免疫及び精巣自己免疫
、スティッフパーソン症候群、亜急性細菌性心内膜炎、スザック症候群、交感性眼炎、全
身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、高安動脈炎、側頭動脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴ
Ｐ）、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、腫瘍壊死因子受容体関連周期性症候群、１
型糖尿病、Ｉ型多腺性自己免疫症候群、ＩＩ型多腺性自己免疫症候群、ＩＩＩ型多腺性自
己免疫症候群、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織病、ブドウ膜炎、脈管炎、小水疱水疱性皮
膚病、白斑又はヴェゲナー肉芽腫症（現在は多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）と呼ばれる
）など）を有する個体に提供される。

特定の実施形態において、制御性Ｔ細胞は、１つ以上のさらなる免疫制御性細胞（例え
ば、未熟樹状細胞、ＮＫＴ細胞、ＴＲ１細胞、ガンマデルタＴ細胞、ＣＤ５Ｂ細胞又はそ
れらの混合物）とともに個体に投与される。

追加の実施形態において、制御性Ｔ細胞は、個体に１つ以上の免疫調節剤（例えば、イ
ノシン、ＦＡＳリガンド、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－１Ｒａ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－８、
ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－３５、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、Ｉ－３０９、ＩＤＯ、
ｉＮＯＳ、ＣＤ２００、ガレクチン３、ｓＣＲ１、アルギナーゼ、ＰＧＥ－２、アスピリ
ン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチ
ン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ｎ－アセチルシステイン、ラパマイシン、ＩＶＩ
Ｇ、ナルトレキソン、ＴＧＦ－ベータ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＣＴＬＡ－４、抗ＣＤ４５
ＲＢ抗体、ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、オーラノフィン、ジシアノ金、スルフ
ァサラジン、メトトレキサート、糖質コルチコイド、エタネルセプト、アダリムマブ、ア
バタセプト、アナキンラ、セルトリズマブ、エタネルセプト－ｓｚｚｓ、ゴリムマブ、イ
ンフリキシマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、シクロスポリン、ＩＦＮ－ガンマ、エベ
ロリムス、ラパマイシン又はそれらの組み合わせ）と同時投与され得る。

本開示の具体的な実施形態は、細胞が提供される個体（「宿主」）のマイクロバイオー
ムの調節によって、投与される制御性Ｔ細胞（いくつかの場合では、改変された線維芽細
胞に加えて）を改変することを含む。特定の実施形態において、宿主のマイクロバイオー
ムは、１つ以上のプレバイオティクス及び／又は１つ以上のプロバイオティクスを含む組
成物によって調節される。宿主のマイクロバイオームは、拡大されたＴ細胞の送達前、送
達中及び／又は送達後に線維芽細胞によって改変され得、宿主におけるマイクロバイオー
ムの改変は、１つ以上の微生物の経口消費、直腸への移植及び／又は糞便移植などによっ
て行われ得る。具体的な実施形態において、宿主のマイクロバイオームは、１つ以上の細
菌を宿主に加えることによって改変される。

特定の実施形態において、１つ以上のプロバイオティクスを含む組成物が宿主に提供さ
れ、ここで、そのプロバイオティクスは、Ａｃｅｔａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａ
ｃｅｔｉｖｉｂｒｉｏ、Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ａｌｋａｌｉｐｈｉｌｕｓ
、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ、Ａｎａｅｒｏｓｐｏｒｏｂａｃｔｅｒ、Ａｎａｅｒｏｓｔ
ｉｐｅｓ、Ａｎａｅｒｏｔｒｕｎｃｕｓ、Ａｎｏｘｙｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｂｌａｕｔｉａ、Ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａ、Ｂｒｅｖｉｂ
ａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｒｙａｎｔｅｌｌａ、Ｂｕｌｌｅｉｄｉａ、Ｂｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃ
ｃｕｓ、Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ、Ｃａｔｅｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｈｌａｍｙｄ
ｉａｌｅｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｃｅａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ、Ｃｌｏｓｔ
ｒｉｄｉｕｍ、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ、Ｃｏｐｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｃｏｐｒｏｃｏ
ｃｃｕｓ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ、Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ、Ｄｅｓｕｌｆｉｔｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｄｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ、Ｄｏｒｅａ、Ｅｇｇｅｒｔｈｅ
ｌｌａ、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ、Ｅ
ｔｈａｎｏｌｉｇｅｎｅｎｓ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ、Ｆｉｌｉｆａｃｔｏｒ、Ｆｌａｖｏｎｉｆｒａｃｔｏｒ、Ｆｌｅｘｉｓｔｉｐｅｓ
、Ｆｕｌｖｉｍｏｎａｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｇｅｍｍｉｇｅｒ、Ｇｅｏｂａ
ｃｉｌｌｕｓ、Ｇｌｏｅｏｂａｃｔｅｒ、Ｈｏｌｄｅｍａｎｉａ、Ｈｙｄｒｏｇｅｎｏａ
ｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｋｏｃｕｒｉａ、Ｌａｃｈｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌ
ａｃｈｎｏｓｐｉｒａ、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ
、Ｌａｃｔｏｎｉｆａｃｔｏｒ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ、Ｌｕｔｉｓｐｏｒａ、Ｌｙｓｉ
ｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｍｏｌｌｉｃｕｔｅｓ、Ｍｏｏｒｅｌｌａ、Ｎｏｃａｒｄｉａ、
Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ、Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ、Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ
、Ｐａｐｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ、Ｐｓｅｕｄｏｆｌａｖｏｎｉｆｒａｃｔｏｒ、Ｒｏｂｉ
ｎｓｏｎｉｅｌｌａ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ、Ｒｕｍｉ
ｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ、Ｓａｒｃｉｎａ、Ｓｏｌｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｐｏｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｓｐｏｒｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、Ｓｕｂｄｏｌｉｇｒａｎｕｌｕｍ、Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ、
Ｓｙｎｔｒｏｐｈｏｃｏｃｃｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｔｈｅｒｍ
ｏｂｉｆｉｄａ、Ｔｕｒｉｃｉｂａｃｔｅｒ、Ａｃｅｔｏｎｅｍａ、Ａｍｐｈｉｂａｃｉ
ｌｌｕｓ、Ａｍｍｏｎｉｆｅｘ、Ａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｃａｌｄｉｃｅｌｌｕｌｏ
ｓｉｒｕｐｔｏｒ、Ｃａｌｏｒａｍａｔｏｒ、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ、Ｃａｒｂｏｘｙｄ
ｉｂｒａｃｈｉｕｍ、Ｃａｒｂｏｘｙｄｏｔｈｅｒｍｕｓ、Ｃｏｈｎｅｌｌａ、Ｄｅｎｄ
ｒｏｓｐｏｒｏｂａｃｔｅｒ Ｄｅｓｕｌｆｉｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｄｅｓｕｌｆｏ
ｓｐｏｒｏｓｉｎｕｓ、Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ、Ｈｅｌｉｏｐｈｉｌｕｍ、Ｈｅｌｉｏｒｅｓｔｉｓ、Ｌａｃｈｎｏａｎａｅｒｏｂａ
ｃｕｌｕｍ、Ｏｃｅａｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｏｒｅｎｉａ（Ｓ．）、Ｏｘａｌｏｐｈａ
ｇｕｓ、Ｏｘｏｂａｃｔｅｒ、Ｐｅｌｏｓｐｏｒａ、Ｐｅｌｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ、Ｐｒ
ｏｐｉｏｎｉｓｐｏｒａ、Ｓｐｏｒｏｈａｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ、Ｓｐ
ｏｒｏｓａｒｃｉｎａ、Ｓｐｏｒｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ、Ｓｙｍｂｉｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ、Ｓｙｎｔｒｏｐｈｏｂｏｔｕｌｕｓ、Ｓｙｎｔｒｏｐｈｏｓｐｏｒａ、Ｔｅｒｒｉｂ
ａｃｉｌｌｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏｓｉｎｕｓ又はそれらの組み合わせを含むか、それらから
なるか、又はそれらから本質的になる。特定の実施形態において、プロバイオティクスの
組成物は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉを含む。

ある特定の実施形態において、プロバイオティクス組成物は、せいぜい１、せいぜい２
、せいぜい３、せいぜい４、せいぜい５、せいぜい６、せいぜい７、せいぜい８、せいぜ
い９、せいぜい１０、せいぜい１１、せいぜい１２、せいぜい１３、せいぜい１４、せい
ぜい１５、せいぜい１６、せいぜい１７、せいぜい１８、せいぜい１９、せいぜい２０、
せいぜい５０又はせいぜい１００のプロバイオティクスを含み得るか、それらからなり得
るか、又はそれらから本質的になり得る。ある特定の実施形態において、プロバイオティ
クス組成物は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも
５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少な
くとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少な
くとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少な
くとも５０又は少なくとも１００のプロバイオティクスを含み得るか、それらからなり得
るか、又はそれらから本質的になり得る。

特定の実施形態において、上記組成物は、１～１００；１～５０；１～２０；１～１０
；２～１０；３～１０；４～１０；５～１０；６～１０；７～１０；８～１０；９～１０
；１～９；２～９；３～９；４～９；５～９；６～９；７～９；８～９；１～８；２～８
；３～８；４～８；５～８；６～８；７～８；１～７；２～７；３～７；４～７；５～７
；６～７；１～６；２～６；３～６；４～６；５～６；１～５；２～５；３～５；４～５
；１～４；２～４；３～４；１～３；２～３；又は１～２タイプのプロバイオティクスを
含み得るか、それらからなり得るか、又はそれらから本質的になり得るか；又はただ１つ
のタイプのプロバイオティクスだけが存在する。

いくつかの実施形態において、プロバイオティクス組成物は、宿主に送達される組成物
中に存在する他の任意のタイプのプロバイオティクスよりも少なくとも又はせいぜい２倍
、５倍、１０倍、２５倍、５０倍、７５倍、１００倍又は１００倍超多い量で存在する１
つのタイプのプロバイオティクスを含むか、それからなるか、又はそれから本質的になる
。

特定の実施形態において、プロバイオティクス組成物中のプロバイオティクスの大部分
が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉである。選ばれた実施形態において、
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉは、プロバイオティクス組成物中の少なく
とも又はせいぜい２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５
、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９％又は９９％超のプロバイオティク
スを構成する。

ある特定の実施形態において、組成物中のプロバイオティクスの相対的存在は、１：１
又は１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１
：１５、１：２０、１：２５；１：５０；１：７５、１：１００、１：２００、１：５０
０、１：１０００、１：１０，０００、１：１００，０００の比又は１：１００，０００
を超える比を含むか、それらからなるか、又はそれらから本質的になる、第１のタイプの
プロバイオティクスと第２のタイプのプロバイオティクスとの比として表現される。

特定の実施形態において、１つ以上のプレバイオティクスが、線維芽細胞で拡大された
Ｔ細胞を投与される個体に与えられる。プレバイオティクス組成物のプレバイオティクス
は、アラビノキシラン、キシロース、可溶性繊維デキストラン、可溶性トウモロコシ繊維
、ポリデキストロース、ラクトース、Ｎ－アセチル－ラクトサミン、グルコース、ガラク
トース、フルクトース、ラムノース、マンノース、ウロン酸、３’－フコシルラクトース
、３’シアリラクトース、６’－シアリルラクトース、ラクト－Ｎ－ネオテトラオース、
２’－２’－フコシルラクトース、アラビノース、フルクトース、フコース、ラクトース
、ガラクトース、グルコース、マンノース、Ｄ－キシロース、キシリトール、リボース、
キシロビオース、スクロース、マルトース、ラクトース、ラクツロース、トレハロース、
セロビオース及びそれらの組み合わせからなる群より選択されるモノマー又はポリマーを
含み得るか、それらからなり得るか、又はそれらから本質的になり得る。

ある特定の実施形態において、上記組成物は、せいぜい１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、
３０又は３５のタイプのプレバイオティクスを含み得るか、それらからなり得るか、又は
それらから本質的になり得る。ある特定の実施形態において、上記組成物は、少なくとも
１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なく
とも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１
２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１
７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３
０又は少なくとも３５のタイプのプレバイオティクスを含み得るか、それらからなり得る
か、又はそれらから本質的になり得る。

追加の実施形態において、プレバイオティクス組成物は、１～３５；１～３０；１～２
５；１～２０；１～１０；２～１０；３～１０；４～１０；５～１０；６～１０；７～１
０；８～１０；９～１０；１～９；２～９；３～９；４～９；５～９；６～９；７～９；
８～９；１～８；２～８；３～８；４～８；５～８；６～８；７～８；１～７；２～７；
３～７；４～７；５～７；６～７；１～６；２～６；３～６；４～６；５～６；１～５；
２～５；３～５；４～５；１～４；２～４；３～４；１～３、２～３；又は１～２のタイ
プのプレバイオティクスを含み得るか、それらからなり得るか、又はそれらから本質的に
なり得るか；又は１つのタイプのプレバイオティクスが存在する。

特定の実施形態において、プレバイオティクス組成物は、その組成物中に存在する他の
任意のタイプのプレバイオティクスよりも少なくとも又はせいぜい２倍、５倍、１０倍、
２５倍、５０倍、７５倍、１００倍又は１００倍超多い量で存在する少なくとも１つのタ
イプのプレバイオティクスを含み得るか、それからなり得るか、又はそれから本質的にな
り得る。

いくつかの実施形態において、上記組成物中の１つ以上のプレバイオティクスは、少な
くとも１μＭ又は少なくとも２μＭ又は少なくとも３μＭ又は少なくとも４μＭ又は少な
くとも５μＭ又は少なくとも６μＭ又は少なくとも７μＭ又は少なくとも８μＭ又は少な
くとも９μＭ又は少なくとも１０μＭ又は少なくとも２０μＭ又は少なくとも３０μＭ又
は少なくとも４０μＭ又は少なくとも５０μＭ又は少なくとも６０μＭ又は少なくとも７
０μＭ又は少なくとも８０μＭ又は少なくとも９０μＭ又は少なくとも１００μＭ又は少
なくとも１５０μＭ又は少なくとも２００μＭ又は少なくとも２５０μＭ又は少なくとも
３００μＭ又は少なくとも３５０μＭ又は少なくとも４００μＭ又は少なくとも４５０μ
Ｍ又は少なくとも５００μＭ又は少なくとも５５０μＭ又は少なくとも６００μＭ又は少
なくとも６５０μＭ又は少なくとも７００μＭ又は少なくとも７５０μＭ又は少なくとも
８００μＭ又は少なくとも８５０μＭ又は少なくとも９００μＭ又は少なくとも９５０μ
Ｍ又は少なくとも１ｍＭ又は少なくとも２ｍＭ又は少なくとも３ｍＭ又は少なくとも４ｍ
Ｍ又は少なくとも５ｍＭ又は少なくとも６ｍＭ又は少なくとも７ｍＭ又は少なくとも８ｍ
Ｍ又は少なくとも９ｍＭ又は少なくとも１０ｍＭの濃度で存在する。

Ｄ．肝臓の病状の処置
本開示の実施形態は、肝不全などの肝臓の病状の処置又は予防を必要とする個体におい
て肝臓再生プロセスを増強するためのものを含む、肝臓の病状の処置又は予防の分野に関
する。より詳細には、本開示は、少なくともいくつかの場合では同時に肝線維症を低減し
つつ、肝臓再生を刺激する免疫調節特性を付与された線維芽細胞の利用に関する。

肝不全は、医療制度に対する大きな負担であり、先進工業国における死因の第７位であ
る。現在までのところ、肝不全に対する唯一の治療法は移植であるが、移植は、ドナー不
足及び慢性免疫抑制の有害作用によって非常に限られたものになっている。現在、幹細胞
療法が、肝不全の処置のために開発中であるが、これらには、数多くの欠点がある。胚性
幹細胞及びｉＰＳ由来幹細胞はすべて、大量に生育することが困難であり、発癌又は奇形
腫形成の可能性がある。さらに、肝臓の微小環境における異所性の組織分化が、壊滅的な
結果をもたらす可能性がある。成体幹細胞は、いくらかの臨床的有用性を誘導する可能性
をもたらすが、しかしながら、現在のところ、反応は顕著でない。これは一部には、成体
幹細胞が完全に肝臓組織に取って代わることができないことが理由である。本開示は、成
体幹細胞によるかそれとも免疫細胞によるかを問わず、例えば、肝不全を阻害して疾患の
後退を誘導する手段としての免疫調節を包含する。

いくつかの実施形態において、有効量の、免疫細胞に曝露された線維芽細胞集団；間葉
系幹細胞、ＣＤ３４＋細胞；極小胚様幹細胞；セルトリ細胞；又はそれらの混合物を個体
に提供することによって、その個体における肝不全を処置する方法が存在する。

本開示の１つの態様において、高い肝原性活性（ｈｅｐａｔｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖ
ｉｔｙ）で予備刺激された線維芽細胞が、正常な肝臓再生のプロセスを加速する又は正常
な肝臓再生のプロセスを線維症から守るなどのために、肝臓の病状を有するか又は有する
リスクがある個体に提供される。肝臓は最大７０％切除しても、完全な再生がもたらされ
ることが実証されている（Ｆａｕｓｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００６；Ｍｉｃｈａｌｏｐｏ
ｕｌｏｓ，２０１１）。しかしながら、これは、肝細胞の増殖の阻害が存在しない場合で
ある。これらの場合では、肝臓は、オーバル細胞の増殖に依存する。

本開示の１つの態様では、個体が、生体ドナー移植、２段階肝切除術及び／又は分割肝
移植（これらは、様々な肝臓病理又は線維症を有するある特定の個体に対しては不可能で
あり得る）などの手技を受けられるようにするために、予備刺激された線維芽細胞が投与
される。

本開示に従って予め活性化された又は「予備刺激された」線維芽細胞を使用することに
よって介入を行うことができる肝臓再生には３段階あり、その３段階は、以下である：ａ
）予備刺激；ｂ）増殖；及びｃ）終結（Ｆａｕｓｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００６）。肝細
胞は、最終分化細胞ではなく、増殖休止の状態で存在する細胞であることに注意すること
が重要である。詳細には、肝細胞は、それらが通常、細胞周期のＧ０期にあるという点に
おいて、造血幹細胞などの他の再生細胞と特長を共有する。これは、肝臓再生中に変化す
る。古典的な肝臓再生は、肝不全などのある特定の状況では肝細胞によって媒介されるが
（Ｆａｕｓｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００６；Ｍｉｙａｏｋａ ａｎｄ Ｍｉｙａｊｉｍａ
，２０１３）、肝細胞が再生を媒介する能力は限られており、肝臓前駆細胞（ＬＰＣ）が
このプロセスを行わなければならない。

肝臓外の細胞起源が再生に寄与し得る可能性とともに、肝臓の強力な再生性の性質を考
慮して、肝不全を処置するために細胞療法を利用する試みが数多く行われてきた。当初の
肝臓の細胞療法は、同種異系肝細胞の投与を必要とし、これは、３０年以上前に動物モデ
ルにおいて試みられ、実験的に臨床で用いられている。残念なことに、この手順を日常的
に使用できないようにする大きな障害がある。本開示の具体的な実施形態において、ＬＰ
Ｃの刺激は、これらの細胞に対して成長因子の支援を提供する免疫細胞の投与によって行
われ得る。特定の実施形態において、これは、ＨＧＦ及び他の肝原性の成長因子が増加す
るように培養された臍帯血単核細胞又は単球の投与を含む。

ＭＳＣは、肝不全に対していくらかの活性を有することができることが当該分野で知ら
れているが、しかしながら、これらは臨床現場で適切に利用されていない。本開示の実施
形態では、肝不全の処置に対して最適化された治療効果を誘導するように、ＭＳＣを免疫
学的に操作する。クリニカルトランスレーション（ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒａｎｓｌａｔ
ｉｏｎ）の点からは、骨髄ＭＳＣが最先端であるが、特定の条件に有用であり得る様々な
特性を有する他のいくつかのＭＳＣ起源が知られている。骨髄は、肝臓再生にも使用され
ている造血幹細胞（ＨＳＣ）の起源でもある。同様に、ヒト胎盤は、容易に入手可能な大
量のＭＳＣの起源であり、それらのＭＳＣは、インビトロにおいて分化し得る。最後に、
組織再生能を有するＭＳＣは、脂肪組織からも単離され得、多数が肝細胞に誘導され得る
。

脂肪組織は、以下の理由：ａ）脂肪由来細胞の抽出は、骨髄抽出よりもかなり低侵襲性
の簡便な手順である；ｂ）脂肪組織は、骨髄と比べて間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の含有量が
多く、ゆえに、インビトロでの拡大に必要な時間がより短い；及びｃ）脂肪組織由来のＭ
ＳＣは、加齢に伴って数が減少しない（Ｓｔｒｉｏｇａ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｙｉ
ａｎｄ Ｓｏｎｇ，２０１２；Ｍｏｓｎａ ｅｔ ａｌ．，２０１０）ということから
、変性状態全般及び詳細には肝不全を処置するための幹細胞の起源として、魅力的な骨髄
代替物である（Ｉｓｈｉｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｐｕｇｌｉｓｉ ｅｔ ａ
ｌ，．２０１１）。

本開示の方法において利用されるＭＳＣは、脂肪組織、肝臓組織、胎盤由来組織、臍帯
由来組織、月経血由来組織、末梢血由来組織、胎盤（ｐａｃｅｎｔａｌ）由来組織などを
はじめとした任意の組織を起源とし得る。本発明の１つの実施形態において、ＭＳＣは、
肝臓再生のプロセスを加速させるため、及び／又は線維性組織の後退を誘導するために、
内皮細胞及び／又は内皮前駆細胞とともに利用される。

実際に、免疫調節に脂肪組織ＭＳＣ（ＡＴ－ＭＳＣ）を使用するためにそれらに免疫調
節遺伝子をトランスフェクトすることは、本開示の状況の範囲内である。本開示の方法の
実施にとって有用な選択された遺伝子は、調節が求められる肝臓再生の段階に依存する。
例えば、強い予備刺激が求められる場合、ＩＬ－６、補体成分であるＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ
１ｓ、Ｃ３ａ及び／若しくはＣ３ｂ、又はＴＬＲ活性化物質（例えば、ＢＣＧ、イミキモ
ド（ｉｍｉｑｉｍｏｄ）、ベータ－グルカン、ｈｓｐ６５、ｈｓｐ９０、ＨＭＧＢ－１、
リポ多糖、Ｐａｍ３ＣＳＫ４、ポリＩ：ポリＣ、フラジェリン、ＭＡＬＰ－２、イミダゾ
キノリン レシキモド、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、ザイモザン、ペプチドグリカン、リ
ポテイコ酸、グラム陽性菌由来のリポタンパク質、マイコバクテリア由来のリポアラビノ
マンナン、ポリアデニル酸－ポリウリジル酸、モノホスホリルリピドＡ、一本鎖ＲＮＡ、
二本鎖ＲＮＡ、８５２Ａ、リンタトリモド（ｒｉｎｔａｔｏｌｉｍｏｄ）、ガーディキモ
ド及びリポ多糖ペプチド）をＭＳＣにトランスフェクトし得る。増殖期の増強が求められ
る場合、成長因子（例えば、ＨＧＦ、ＶＥＧＦ又はＰＤＧＦ）をＭＳＣにトランスフェク
トし得る。抗線維化機構の刺激が求められる場合、様々なＭＭＰ（例えば、ＭＭＰ－１、
ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－９）を細胞にトランスフェクトし得る。

具体的な実施形態において、使用される骨髄単核細胞（ＢＭＭＣ）は、本開示によって
包含される方法において利用される。特定の実施形態において、ＢＭＭＣは、ＣＤ１３３
陽性及び／又はＣＤ３４陽性である。ＭＭＰは、局所環境を変化させるために線維性組織
を切断することができるだけでなく、肝臓再生にとって重要な血管新生において役割を果
たすので、肝臓再生に重要である（Ｂｅｌｌａｙｒ ｅｔ ａｌ．，２００９；Ｍａｌｅ
ｍｕｄ，２００６；Ｋａｗａｉ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。したがって、ＭＭＰ発現を
刺激する作用物質とこの実施形態の状況におけるＭＳＣとの組み合わせは、治療的な混合
物となる。

間葉系幹細胞の様々な集団が、本開示の実施形態を実施するために使用され得る。骨髄
、脂肪又は臍帯に由来する間葉系幹細胞に加えて、羊膜間葉系幹細胞が、免疫調節細胞と
して利用され得る。１つの具体的な実施形態では、羊膜の８×８ｃｍ^２切片を入手する。
その切片を、３００ＩＵ／ｍｌペニシリン及び３００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｇ
ｉｂｃｏ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ，ＵＳＡ）を含む１．０Ｍリン酸緩衝食塩水
（ＰＢＳ；ｐＨ７．２）で洗浄し、直ちに、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；Ｇｉｂｃｏ）
、３００ＩＩＵ／ｍｌペニシリン及び３００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンが補充された
ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）－高グルコース（Ｇｉｂｃｏ）に浸漬する。す
べてのサンプルを、回収後１２～１５時間以内に処理する。羊膜を、１．０Ｍ ＰＢＳ（
ｐＨ７．２）中の０．１％コラゲナーゼＩ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ Ｌｏｕ
ｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）で処置し、３７℃で２０分間インキュベートする。各羊膜を、低グ
ルコースＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）で３回洗浄し、その羊膜を静かにマッサージした後、剥
離した細胞を回収する。その細胞を３７℃、３００ｇで１０分間遠心し、その後、１０％
ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地に再懸濁し、次いで、２５ｃｍ^２フラスコにおいて１
×１０^６細胞／ｍｌの密度で生育する。２４時間のインキュベーション後、非接着細胞を
除去する。培養培地は、３日ごとに交換する。８０～９０％コンフルエンスに達するまで
、接着細胞を培養する。その後、細胞を、純度（例えば、＞９０％ＣＤ９０及びＣＤ１０
５陽性）、無菌性（例えば、エンドトキシン及びマイコプラズマ／細菌汚染が無いこと）
及び効力（例えば、ＩＦＮ－ガンマなどの炎症性サイトカインの産生を抑制することによ
ってインビトロにおいて免疫調節する能力）を含む品質管理手順に基づいて選択する。そ
の後、細胞は、外リンパ投与又はリンパ管内投与のために利用され得る。本開示は、胎盤
／臍帯、骨髄、皮膚又は歯髄組織に由来する天然に存在するＭＳＣ集団の回収及び送達を
企図する。本開示によると、ＭＳＣは一般に、フローサイトメトリーによって検出される
とき、マーカーＣＤ９０及びＣＤ１０５を発現し（＞９０％）、ＣＤ３４及びＣＤ４５及
びＭＨＣクラスＩＩを発現しない（＜５％）、接着細胞集団であり得るが、本明細書中に
記載される他のマーカーも利用され得る。

上述した組織のいずれかを起源とする細胞に対する細胞拡大は、細胞療法用の製造を目
的として構築され、ＧＭＰのクリーンルーム等級を満たす、クリーンルーム施設において
行われ得る。クラス１０，０００のクリーン製造室（ｃｌｅａｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｓｕｉｔｅ）に配置された滅菌されたクラスＩＩ生物学的安全キャビネットにおいて、
細胞を、制御された条件下で解凍し、１５ｍＬコニカルチューブ内において、１００ＥＵ
／ｍＬ以下のエンドトキシンレベル（慣例的には１０ＥＵ／ｍＬ以下のレベル）及び３０
ｍｇ／ｄｌ以下のヘモグロビンレベル（慣例的には２５ｍｇ／ｄｌ以下のレベル）を有す
ると明示された、ＢＳＥ％ウシ胎仔血清を有しないことが確認された乳牛由来の２０％ウ
シ胎仔血清（Ａｔｌａｓ）が補充された１０ＭＬのＤＭＥＭ－低グルコース完全培地（ｃ
ＤＭＥＭ）（ＧｉｂｃｏＢＲＬ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，Ｎ．Ｙ．）で洗浄した。使
用した血清ロットを取っておき、すべての実験に対して１つのロットを使用した。その後
、細胞を、４５ｍＬのｃＤＭＥＭを含むＴ－２２５フラスコに入れ、十分加湿された雰囲
気において、３７℃、５％ＣＯ_２において２４時間培養する。これにより、ＭＳＣは接着
が可能になった。ｃＤＭＥＭを用いてフラスコを軽くすすぐことによって、非接着性細胞
を洗浄除去した。これにより、開始Ｔ－２２５フラスコ１つあたりおよそ６００万個の細
胞が得られた。次いで、第１のフラスコの細胞を４つのフラスコに分割した。細胞を４日
間生育した後、フラスコ１つあたりおよそ６００万細胞（合計で２４００万細胞）が得ら
れた。このスキームを繰り返したが、細胞は、継代が１０回を超えて拡大することはなく
、次いで、送達用の密封バイアルに６００万個の細胞を入れたアリコートとして預けた。
作製、拡大及び製品製造におけるすべてのプロセスを、現行のＧｏｏｄ Ｍａｎｕｆａｃ
ｔｕｒｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｓｓ及び適切な管理、並びに１９９８年にＦＤＡが発行したガ
イダンスであるＧｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ：Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏ
ｒ Ｈｕｍａｎ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｇｅｎｅ Ｔｈ
ｅｒａｐｙ；ｔｈｅ ２００８ Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ ＦＤＡ Ｒｅｖｉｅｗｅｒ
ｓ ａｎｄ Ｓｐｏｎｓｏｒｓ Ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ，Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ（ＣＭＣ）Ｉｎｆ
ｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ
Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（ＩＮ
Ｄｓ）に準拠した条件下及び試験において行った。記載されている細胞生成物の作製につ
いては、マスター細胞バンクに関する１９９３年のＦＤＡの留意事項書類にすべて従った
。ドナー細胞を滅菌条件において回収し、契約製造施設に発送し、混入が無いことについ
て評価し、拡大する。拡大した細胞を、クライオバイアルにおいて、およそ６００万細胞
／バイアルで保存する（１ドナーあたりおよそ１００本のバイアル）。拡大の各工程にお
いて、混入又は異常な細胞増殖が無いことを保証するために、品質管理手順を配置した。

具体的な実施形態において、間葉系幹細胞は、高い免疫調節特性を有するように最適化
される。１つの実施形態において、これは、間葉系幹細胞を低酸素条件に曝露することに
よって行われ得る。詳細には、低酸素条件は、１０％より低い酸素レベルを含み得る。い
くつかの実施形態において、低酸素条件は、約７％までの酸素を含む。例えば、低酸素条
件は、最大約７％、最大約６％、最大約５％、最大約４％、最大約３％、最大約２％の酸
素又は最大約１％の酸素を含み得る。別の例として、低酸素条件は、最大７％、最大６％
、最大５％、最大４％、最大３％、最大２％又は最大１％の酸素を含み得る。いくつかの
実施形態において、低酸素条件は、約１％の酸素から約７％までの酸素を含む。例えば、
低酸素条件は、約１％の酸素から約７％までの酸素；約２％の酸素から約７％までの酸素
；約３％の酸素から約７％までの酸素；約４％の酸素から約７％までの酸素；約５％の酸
素から約７％までの酸素；又は約６％の酸素から約７％までの酸素を含み得る。別の例と
して、低酸素条件は、１％の酸素から７％までの酸素；２％の酸素から７％までの酸素；
３％の酸素から７％までの酸素；４％の酸素から７％までの酸素；５％の酸素から７％ま
での酸素；又は６％の酸素から７％までの酸素を含み得る。別の例として、低酸素条件は
、約１％の酸素から約７％までの酸素；約１％の酸素から約６％までの酸素；約１％の酸
素から約５％までの酸素；約１％の酸素から約４％までの酸素；約１％の酸素から約３％
までの酸素；又は約１％の酸素から約２％までの酸素を含み得る。別の例として、低酸素
条件は、１％の酸素から７％までの酸素；１％の酸素から６％までの酸素；１％の酸素か
ら５％までの酸素；１％の酸素から４％までの酸素；１％の酸素から３％までの酸素；又
は１％の酸素から２％までの酸素を含み得る。別の例として、低酸素条件は、約１％の酸
素から約７％までの酸素；約２％の酸素から約６％までの酸素；又は約３％の酸素から約
５％までの酸素を含み得る。別の例として、低酸素条件は、１％の酸素から７％までの酸
素；２％の酸素から６％までの酸素；又は３％の酸素から５％までの酸素を含み得る。い
くつかの実施形態において、低酸素条件は、約２％以下の酸素を含み得る。例えば、低酸
素条件は、２％以下の酸素を含み得る。具体的な場合では、低酸素条件には、＜５％、＜
４％、＜３％、＜２％、＜１％又は０％が含まれる。

Ｅ．線維芽細胞を用いたＭ２表現型へのマクロファージのインビトロ及びインビボでの
再プログラミング
本開示のある特定の実施形態は、炎症の阻害及び／又は血管新生の刺激を必要とする個
体において炎症の阻害及び／又は血管新生の刺激に有用な細胞調製物を包含する。具体的
な実施形態において、本開示の方法によって作製された細胞は、炎症の阻害及び／又は血
管新生の刺激を必要とする個体において、炎症の阻害及び／又は血管新生の刺激のために
利用される。１つの実施形態において、線維芽細胞（及び／又は１つ以上の作用物質）と
単球及び／又は単球前駆細胞との培養によって、炎症の阻害及び／又は血管新生の刺激に
有用な免疫細胞がもたらされる。１つの実施形態において、Ｍ２マクロファージが、ある
特定の細胞を線維芽細胞とともに培養することによって生成され、それは、血管新生を刺
激するため及び炎症を阻害するための治療用細胞として利用され、特徴付けられる。ある
特定の実施形態において、それらの治療用細胞は、アルギナーゼを発現すること及び／又
は一酸化窒素（ＮＯ）を産生する能力が低下していることによって表される。いくつかの
場合では、その方法によって作製された細胞は、個体に送達する前に、アルギナーゼの発
現及び／又はＮＯ産生能力の低下について試験されるが、他の場合では、試験されない。

ある特定の実施形態は、血管新生刺激の事項に関し、具体的な実施形態において、本開
示は、単球及び／又は単球前駆細胞と、ある特定の線維芽細胞を含む線維芽細胞集団との
培養物から生成されるマクロファージを用いた血管新生の発生に関する。

１つの実施形態において、線維芽細胞を単球及び／又は単球前駆体（単球前駆細胞とも
称されることがある）と共培養するとき、その線維芽細胞は、Ｍ２マクロファージの生成
を増加させるために使用され、その後、それらの単球及び／又は単球（ｍｏｎｏｃｙｃｔ
ｉｃ）前駆体から生成されたＭ２マクロファージは、種々の状況において治療的に有用と
なる。例えば、Ｍ２マクロファージは、梗塞後の心筋傷害の低減のために利用されること
があり、そのようなＭ２マクロファージは、炎症を抑制し得、血管新生を刺激し得、かつ
／又はＭ１マクロファージの形成を阻害し得る（Ｍ１マクロファージは、病的な心臓リモ
デリング及び心不全への進行に関連する（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｈｅ ｅｔ
ａｌ．，２０１５）。したがって、本開示の１つの態様において、Ｍ２マクロファージ
が、インビトロで生成され、心筋梗塞に罹患している又はそのリスクがある個体に全身的
又は局所的に投与される。

本開示のいくつかの実施形態において、線維芽細胞によって培養されたＭ２細胞が、心
臓の修復を必要とする個体のある領域に、１つ以上の血管新生成長因子（例えば、ＴＰＯ
、ＳＣＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１１、ｆｌｔ－３Ｌ、Ｇ－
ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｅｐｏ、ＦＧＦ－１、ＦＧＦ－２、ＦＧＦ－４、ＦＧＦ－２０、
ＩＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＬＩＦ、ＰＤＧＦ、ＢＭＰ、アクチビン－Ａ、ＶＥＧＦ又はそ
れらの組み合わせ）とともに投与される。

本開示のいくつかの実施形態において、線維芽細胞が、少なくともＰＧＥ－２の存在下
において、任意の種類の免疫細胞（単球、単球前駆細胞、ＰＢＭＣ、ＭＳＣなどを含む）
と共培養される。さらなる実施形態において、それらの細胞に曝露されるＰＧＥ－２の濃
度は、およそ１～１０，０００ｎｇ／ｍＬ、７５００ｎｇ／ｍＬ、１～５０００ｎｇ／ｍ
Ｌ、１～２５００ｎｇ／ｍＬ、１，０００ｎｇ／ｍＬ、１～７５０ｎｇ／ｍＬ、１～５０
０ｎｇ／ｍＬ、２５０～１００００ｎｇ／ｍＬ、２５０～７５００ｎｇ／ｍＬ、２５０～
５０００ｎｇ／ｍＬ、５００～１００００ｎｇ／ｍＬ、５００～５０００ｎｇ／ｍＬ、５
００～２５００ｎｇ／ｍＬ、１０００～１００００ｎｇ／ｍＬ、１０００～７５００ｎｇ
／ｍＬ、１０００～５０００ｎｇ／ｍＬ、５０００～１００００ｎｇ／ｍＬ、５０００～
７５００ｎｇ／ｍＬなどである。いくつかの実施形態において、ＰＧＥ－２の濃度は、お
よそ１ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、
５０ｎｇ／ｍＬ、７５ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１２５ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／
ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ、１
，０００ｎｇ／ｍＬ、２，０００ｎｇ／ｍＬ、２，５００ｎｇ／ｍＬ、５，０００ｎｇ／
ｍＬ、７，５００ｎｇ／ｍＬ又は１０，０００ｎｇ／ｍＬである。具体的な実施形態にお
いて、線維芽細胞は、例えば、少なくとも又はせいぜい１～７２、１～５０、１～２５、
２５～７２、２５～５０若しくは５０～７２時間にわたって、又は１～７２、１～５０、
１～２５、２５～７２、２５～５０若しくは５０～７２時間もの時間にわたって、ＰＧＥ
－２の存在下において免疫細胞と共培養される。いくつかの実施形態において、線維芽細
胞は、およそ１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時
間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時
間、２６時間、２８時間、３０時間、３２時間、３４時間、３６時間、３８時間、４０時
間、４２時間、４４時間、４６時間、４８時間、５０時間、５２時間、５４時間、５６時
間、５８時間、６０時間、６２時間、６４時間、６６時間、６８時間、７０時間又は７２
時間にわたって、ＰＧＥ－２の存在下において免疫細胞と共培養される。ある特定の実施
形態において、ＰＧＥ－２を伴う線維芽細胞と免疫細胞との共培養は、その組み合わされ
た培養物に、少なくともいくつかの態様において心筋再生にとって有益な、相乗的な量の
ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ－ＢＢ及び／又はＥＧＦを産生する能力を付与する。別の実施形態に
おいて、ＰＧＥ－２の存在下における線維芽細胞と免疫細胞との共培養によって、線維芽
細胞と協力して心筋再生を誘導するＭ２マクロファージの治療用集団が作製される。ある
特定の実施形態において、培養された線維芽細胞と免疫細胞との組み合わせは、患者が心
筋梗塞に罹患した少なくとも又はせいぜい３日後～１５日後に、患者に投与される。ある
特定の実施形態において、培養された線維芽細胞と免疫細胞との組み合わせは、患者が心
筋梗塞に罹患したおよそ３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１
０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後又は１５日後に患者に投与される。

ある特定の実施形態は、心筋梗塞（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｃｔ）の後の患者
を処置する方法を提供し、その方法は、必要に応じて線維芽細胞を得る工程；心臓修復（
ｃａｒｄｉａｃ－ｒｅｐａｉｒａｔｉｖｅ）特性を獲得するために線維芽細胞を免疫細胞
とともに培養する工程；及び梗塞に罹患している又は梗塞を有していたと疑われる又は梗
塞を有していると疑われる又は梗塞を有することになる患者に、その線維芽細胞と免疫細
胞との組み合わせを投与する工程を含む。それらの細胞は、個体に関して自家起源又は同
種異系起源に由来し得る。それらの線維芽細胞は、脂肪、皮膚、臍帯、包皮、胎盤、大網
及びそれらの組み合わせからなる群より選択される組織に由来し得る。いくつかの実施形
態において、線維芽細胞と免疫細胞との組み合わせを培養する工程は、少なくともＰＧＥ
－２の存在下において培養する工程を含む。さらなる実施形態において、それらの細胞に
供給されるＰＧＥ－２の濃度は、およそ１～１０，０００ｎｇ／ｍＬである。さらなる実
施形態において、ＰＧＥ－２の濃度は、１～１，０００ｎｇ／ｍＬである。いくつかの実
施形態において、ＰＧＥ－２の濃度は、およそ１ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／
ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、７５ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ
／ｍＬ、１２５ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、
５００ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ、１，０００ｎｇ／ｍＬ、２，０００ｎｇ／ｍＬ、
２，５００ｎｇ／ｍＬ、５，０００ｎｇ／ｍＬ、７，５００ｎｇ／ｍＬ又は１０，０００
ｎｇ／ｍＬである。具体的な実施形態において、線維芽細胞は、少なくとも又はせいぜい
１時間～７２時間にわたって、ＰＧＥ－２の存在下において免疫細胞と共培養される。い
くつかの実施形態において、線維芽細胞は、およそ１時間、２時間、３時間、４時間、５
時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１
８時間、２０時間、２２時間、２４時間、２６時間、２８時間、３０時間、３２時間、３
４時間、３６時間、３８時間、４０時間、４２時間、４４時間、４６時間、４８時間、５
０時間、５２時間、５４時間、５６時間、５８時間、６０時間、６２時間、６４時間、６
６時間、６８時間、７０時間又は７２時間にわたって、ＰＧＥ－２の存在下において免疫
細胞と共培養される。ある特定の実施形態において、ＰＧＥ－２を伴う線維芽細胞と免疫
細胞との共培養は、その組み合わされた培養物に、心筋再生にとって有益な、相乗的な量
のＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ－ＢＢ及びＥＧＦを産生する能力を付与する。別の実施形態におい
て、ＰＧＥ－２の存在下における線維芽細胞と免疫細胞との共培養によって、線維芽細胞
と協力して心筋再生を誘導するＭ２マクロファージの治療用集団が生成される。ある特定
の実施形態において、培養された線維芽細胞と免疫細胞との組み合わせは、患者が心筋梗
塞に罹患した少なくとも又はせいぜい３日後及び１５日後に、患者に投与される。ある特
定の実施形態において、培養された線維芽細胞と免疫細胞との組み合わせは、患者が心筋
梗塞に罹患したおよそ３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０
日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後又は１５日後に患者に投与される。

本開示は、Ｍ２マクロファージ細胞の生成を可能にする、線維芽細胞と免疫細胞との共
培養を包含するが、しかしながら、最適な生成は、少なくともいくつかの場合では、少な
くともＰＧＥ－２の存在下における培養の後に明らかになることがある。線維芽細胞と共
培養された免疫細胞の使用は、Ｍ２細胞が適用された領域に適用され得る。例えば、機構
的に、Ｍ２マクロファージは、血管新生の刺激による梗塞後の心筋傷害の低減と関連する
ことが示されており（Ｄａｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１）、これは、参照により援用
される。Ｍ２刺激性サイトカインであるインターロイキン１３が遺伝的に欠損したマウス
における洗練された研究は、Ｍ２マクロファージが欠損したマウスでは、梗塞のサイズが
大きいこと及び梗塞後の治癒が低減することを示した。これらの結果は、ＣＳＦ－１受容
体のシグナル伝達経路の欠損によってＭ２マクロファージの枯渇が達成された別の研究で
も再現された。梗塞後の心不全を増悪する処置は、Ｍ２マクロファージの蓄積を減少させ
る。さらに、治癒及び血管新生の加速を誘導する治療は、Ｍ２マクロファージの生成を刺
激すると多くの状況において示された。例えば、間葉系幹細胞の投与は、Ｍ１マクロファ
ージの減少及びＭ２マクロファージの増加を誘導すると示され、これは、血管新生の刺激
による梗塞後の回復の改善と相関する。機構的に、Ｍ２マクロファージは、炎症を抑制す
る並びに血管新生を刺激すると知られており、これは、梗塞後の治癒の重要な態様である
。さらに、Ｍ２マクロファージは、Ｍ１マクロファージの形成を阻害する。Ｍ１マクロフ
ァージは、病的な心臓リモデリング及び心不全への進行に関連するので、このことは、重
要である。したがって、本発明の１つの態様において、Ｍ２マクロファージがインビトロ
で生成され、心筋梗塞に罹患している患者に全身的又は局所的に投与される。

本開示の実施形態は、心筋梗塞の処置又は予防又はその発症及び／若しくは重症度の遅
延を必要とする個体に対して、心筋梗塞を処置するか又は予防するか又はその発症及び／
若しくは重症度を遅延させる方法を包含する。方法は、治療有効量の線維芽細胞をその個
体に送達する工程（心臓への局所送達を含む）を含み得る。いくつかの場合では、その線
維芽細胞は、改変されている。具体的な実施形態では、線維芽細胞を、その線維芽細胞及
び／又は免疫細胞である単球に、心臓修復特性を付与する条件下において十分量の免疫細
胞（例えば、単球（例えば、自家又は同種異系））に曝露し；具体的な場合では、その線
維芽細胞及び／又は免疫細胞は、それを必要とする個体に提供される。その個体は、心筋
梗塞を有していた必要があり得るか、心筋梗塞を現在有している必要があり得るか、又は
心筋梗塞を有していたことを含む心疾患の個人歴若しくは家族歴があるために心筋梗塞を
有するリスクがある必要があり得る。個体がすでに心筋梗塞を起こしていた場合、１回目
の心筋梗塞における損傷原因から心臓を修復するため、及び／又は２回目若しくはそれ以
降の心筋梗塞を予防するため若しくはその重症度を低下させるため（又はその発症を遅延
させるため）に線維芽細胞及び／又は免疫細胞が提供され得る。

線維芽細胞及び／又は免疫細胞（それらが、本明細書中に記載されるような培養におい
て互いに曝露されたか否かを問わない）が、心臓の状態のために個体に提供される場合、
それらは、心筋内に投与され得るか、梗塞に関連する動脈にバルーンカテーテルによって
投与され得るか、又は例えば冠状静脈洞に、バルーン談合を用いて逆行性投与され得る。

特定の実施形態において、培養のための免疫細胞は、プラスチックへの接着によって得
られるか、マーカーＣＤ１４に対するフローサイトメトリー精製によって得られるか、又
はマーカーＣＤ１４に対する磁気活性化選別（ＭＡＣＳ）精製によって得られる、単球で
あり得る。線維芽細胞及び単球は、およそ１対１の比で培養され得る。単球は、線維芽細
胞との組織培養後にアルギナーゼ活性を発現し得る。

本開示のある特定の実施形態は、身体における任意の種類の炎症を処置するための方法
及び組成物（治療的組成物を含む）を提供する。特定の実施形態は、マクロファージのＭ
２極性化を誘導することによって、心筋梗塞を処置するため、及び／又は梗塞後の治癒プ
ロセスを加速させるための方法及び治療的組成物を提供する。方法は、線維芽細胞及び／
又はマクロファージを含む組成物を１つ以上の炎症部位に投与する工程を含む方法を含み
、その組成物は、インターロイキン－４、インターロイキン－１０、ＩＬ－１Ｒａ、ＴＧ
Ｆ－ベータ、ｓＴＮＦ－ＲＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ、ＥＧＦ、ＨＧＦ、ＰＤＧＦ－ＡＢ、ＰＤＧ
Ｆ－ＢＢ、ＶＥＧＦ及びｓＩＬ－１ＲＩＩ及びそれらの組み合わせからなる群より選択さ
れる１つ以上のタンパク質をさらに含み得る。具体的な実施形態において、その組成物中
の各タンパク質の濃度は、線維芽細胞の存在とともに、正常な血液中の当該タンパク質の
濃度より高い。具体的な実施形態において、その組成物中のそのタンパク質の濃度は、正
常な血液中のそのタンパク質の濃度より高く、特定の態様において、そのタンパク質は、
線維芽細胞の存在下において投与される。それらの組成物は、白血球、血小板、濃縮血漿
、骨髄穿刺液、脂肪組織、それらの一部分及びそれらの組み合わせも含み得る。具体的な
実施形態において、タンパク質溶液は、処置を必要とする被験体からサイトカイン細胞懸
濁液を得て、そのサイトカイン細胞懸濁液を分画することにより、ＩＬ－４、ＩＬ－１０
、ＩＬ－１Ｒａ及び／又はＴＧＦ－ベータを含む自家タンパク質溶液を得ることによって
生成され、そのタンパク質溶液は、線維芽細胞とともに投与される。線維芽細胞は、レシ
ピエント個体に対して同種異系であってもよいし、その個体に対して自家であってもよい
。次いで、その組成物は、ヒト又は他の動物被験体の炎症部位に投与され得る。具体的な
場合において、分画は、血液を２つ以上の画分に分離するように使用できるセパレーター
を含む容器に血液を入れること；及びそのセパレーターを遠心分離して、多血小板血漿画
分を得ることを含む。その多血小板血漿は、固体抽出材料と接触され得る。

Ｆ．線維芽細胞によって再プログラムされた自家Ｔ細胞による血管新生の刺激及び／又
は創傷治癒の加速
血管新生の刺激及び／又は創傷治癒の加速を必要とする個体にある特定の細胞を投与す
ることによって、血管新生を刺激する及び／又は創傷治癒を加速させる方法が開示される
。特定の実施形態において、その個体は、自家Ｔ細胞にＴｈ１サイトカインプロファイル
の阻害及びＴｈ２／Ｔｈ３プロファイルの増強を付与することができる条件下、並びにＴ
細胞において遺伝的プログラムを誘導して、応答するＴ細胞が血管新生促進遺伝子プログ
ラムの発現を惹起できるようにすることができる条件下において線維芽細胞（例えば、同
種異系のものを含む）によって再プログラムされた有効量の自家Ｔ細胞を投与され、ここ
で、その血管新生促進遺伝子プログラムは、いくつかの場合において、ＨＩＦ－１アルフ
ァの核移行を少なくともいくつかの場合において含む。１つの実施形態において、身体に
おける１つ以上の虚血状態を処置する新規の手段が提供される。

特定の実施形態において、血管新生の領域を問わず、本開示は、Ｔ細胞と線維芽細胞（
例えば、同種異系細胞）との事前の共培養によって、血管新生を刺激する能力を免疫系の
Ｔ細胞に付与することを含む、免疫細胞を用いた血管新生の刺激に関する。そのようなＴ
細胞は、活性化Ｔ細胞と称されることがある。

本開示の実施形態は、共培養系を用いて血管新生促進表現型をＴ細胞に付与するための
、同種異系線維芽細胞の使用を包含する。いくつかの実施形態において、共培養物は、線
維芽細胞（接着性線維芽細胞を含む）とともに、Ｔ細胞を含む非接着性細胞集団、又は精
製されたＴ細胞を含む。本開示の１つの実施形態において、線維芽細胞は、ウシ胎仔血清
及び／又は血小板溶解物及び／又は多血小板血漿をおよそ１０体積％の濃度で含む、公知
の培地（例えば、ロズウェルパーク記念研究所（ＲＰＭＩ－１６４０）、ダルベッコ変法
基本培地（ＤＭＥＭ）、イーグル変法基本培地（ＥＭＥＭ）、Ｏｐｔｉｍｅｍ、イスコー
ブ培地又はそれらの組み合わせ）から選択され得る好適な組織培養培地中で培養される。
いくつかの場合では、線維芽細胞を、基材（天然に存在し得る基材）に接着させ、その後
、Ｔ細胞が加えられる。１つの特定の実施形態において、Ｔ細胞は、末梢血単核球の集団
の一部である。線維芽細胞及びＴ細胞は、特定の時間にわたって、例えば、１時間～２週
間にわたって、共に培養される。具体的な実施形態において、それらは、少なくとも又は
せいぜい約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５
、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３若しくは２４時間又は１、２、３、
４、５、６、７日間又は１若しくは２週間にわたって、共に培養される。具体的な実施形
態において、線維芽細胞とＴ細胞は、約４８時間にわたって共に培養される。続いて、非
接着性Ｔ細胞、及びＴ細胞を含む細胞集団が抽出され、血管新生を刺激するための投与に
利用される。機構に拘束されるものではないが、線維芽細胞との組織培養によって生成さ
れたＴ細胞は、マイトジェンとして内皮細胞に対して直接作用することによって血管新生
を刺激し得、かつ／又は身体の細胞、例えば、血液の細胞において血管新生促進サイトカ
インの産生を誘導することによって血管新生を刺激し得る。

いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、非接着性細胞の除去によって、かつさらなる
処理の非存在下において、線維芽細胞との共培養物から抽出され、いくつかの場合、Ｔ細
胞は、１つ以上のアッセイによってさらに精製される。いくつかの場合では、非接着性細
胞は、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）を使用して、さらに精製される。ＭＡＣＳを使用
する場合、１つ以上のＴ細胞マーカーに対する選択が行われる。１つの実施形態では、Ｔ
細胞マーカーＣＤ２５を使用して活性化Ｔ細胞を選択し、その後、病状（例えば、虚血性
疾患、創傷など）の処置を必要とする個体におけるそのような処置のために、ＣＤ２５＋
Ｔ細胞を投与する。特定の実施形態において、虚血性疾患の処置は、Ｔ細胞を線維芽細胞
とともに培養した後のＴ細胞の筋肉内投与によって行われる。虚血性疾患としては、少な
くとも重症虚血肢、心虚血、腰部虚血及び腸管虚血が挙げられる。他の実施形態において
、Ｔ細胞は、創傷（例えば、熱傷、切り傷、擦過傷、裂傷、穿刺、剥離又はそれらの組み
合わせ）を有する個体において創傷治癒を加速させるために投与される。

いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、線維芽細胞への曝露の後、生分解性インプラ
ントの一部として個体に投与されるが、代替の実施形態では、そのインプラントは、生分
解性でないか、又はＴ細胞は、インプラントの非存在下において投与される。具体的な実
施形態において、インプラントは、Ｔ細胞、及びそのＴ細胞によって放出される１つ以上
の血管新生因子を含む（インプラントの移植後を含む）。このタイプの実施形態では、イ
ンプラントは、長期間にわたって植え込み部位内に残存するように、及びそのインプラン
トに含まれるＴ細胞から周囲の環境に血管新生因子をゆっくり放出するように選択され得
るキャリアを含み得る。この送達様式によって、血管新生因子をその部位内に長期間にわ
たって治療有効量で残存させることができる。血管新生因子をキャリア内に提供すること
によって、血管新生因子を標的領域に直接放出するという利点が実現する。いくつかの実
施形態において、インプラント用のキャリアは、注射可能な形態で提供される。注射可能
性は、侵襲性が最小の方法でキャリアが送達されることを可能にし、その送達は、例えば
、経皮的、筋肉内、皮下、大網内、心室内及び／又は髄腔内であり得る。いくつかの実施
形態において、注射可能なキャリアは、ゲルである。他では、注射可能なキャリアとして
は、ヒアルロン酸（ＨＡ）が一例として挙げられる。

Ｔ細胞移植片、すなわちＴ細胞インプラントに対するいくつかの実施形態において、キ
ャリアは、少なくとも２５マイクロメートルという平均孔サイズを有する多孔性マトリッ
クスを含む。ある特定の実施形態において、多孔性マトリックスは、２５マイクロメート
ル～１１０マイクロメートルの平均孔サイズを有する。平均孔サイズがこの範囲内である
とき、具体的な実施形態では、多孔性マトリックスは、標的領域において血管新生を刺激
する細胞になることができる細胞（例えば、単球、内皮前駆細胞、骨髄前駆細胞及び／又
は間葉系幹細胞）を内殖するためのスキャフォールドとしても作用する。多孔性マトリッ
クスを形成するために使用され得る有機材料の数多くの例は、当業者に公知であり、それ
らとしては、コラーゲン、ポリアミノ酸又はゼラチンが挙げられるが、これらに限定され
ない。コラーゲンの起源は、人工的なもの（すなわち、組換え）であってもよいし、イン
プラントを受け入れる哺乳動物に対して自家のものであってもよいし、同種異系のもので
あってもよいし、異種のものであってもよい。コラーゲンは、アテロペプチド又はテロペ
プチドのコラーゲンの形態でもあり得る。さらに、高レベルの血管新生に関連する起源由
来のコラーゲン（例えば、胎盤由来のコラーゲン）が使用され得る。マトリックスを形成
するために使用され得る合成ポリマーの例としては、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、又は
ポリ乳酸／ポリグリコール酸の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。マト
リックス材は、１つ以上の吸収性ポリマー及び／又は１つ以上の非吸収性ポリマーを含み
得る。当業者は、多孔性又は半多孔性という用語が、マトリックスにおける孔密度が様々
であることを指すことを認識するだろう。スキャフォールドの構造は、いくつかの実施形
態において、インプラントと解剖学的構造（そのような解剖学的構造は、例えば、骨、軟
骨、神経、腱及び／又は靭帯であり得る）との接着をつなぎ留めるか又は高めるか又は実
質的に引き起こすために使用され得る。いくつかの実施形態において、インプラントを解
剖学的構造に接着させる手段は、ゲルであり得る。ゲルはインプラントとともに、移植部
位に、いくつかの実施形態では、関節鏡下の流動性の条件下において、注入され得る。ゲ
ルは、少なくともいくつかの場合では身体環境において時宜を得た形式で再吸収する能力
を有する生体吸収型又は生体吸収性の材料から形成される生物学的なゲル又は合成ゲルで
あり得る。好適なスキャフォールド物質も当業者に公知であり、それらとしては、ヒアル
ロン酸、フィブリン糊、フィブリン塊、コラーゲンゲル、アルギン酸ゲル、ゼラチン－レ
ゾルシン－ホルマリン接着剤、イガイ系（ｍｕｓｓｅｌ－ｂａｓｅｄ）接着剤、ジヒドロ
キシフェニルアラニンベースの接着剤、キトサン、トランスグルタミナーゼ、ポリ（アミ
ノ酸）系接着剤、セルロース系接着剤、多糖系接着剤、合成アクリレート系接着剤、多血
小板血漿（ＰＲＰ）ゲル、乏血小板血漿（ＰＰＰ）ゲル、ＰＲＰクロット、ＰＰＰクロッ
ト、マトリゲル、モノステアロイルグリセロールｃｏ－スクシネート（ＭＧＳＡ）、モノ
ステアロイルグリセロールｃｏ－スクシネート／ポリエチレングリコール（ＭＧＳＡ／Ｐ
ＥＧ）共重合体、ラミニン、エラスチン、プロテオグリカン、ポリ（Ｎ－イソプロピルア
クリルアミド）、ポリ（オキシアルキレン）、ポリ（エチレンオキシド）－ポリ（プロピ
レンオキシド）の共重合体、ポリ（ビニルアルコール）及びそれらの組み合わせが挙げら
れ得る。

いくつかの実施形態において、スキャフォールドが植え込みの標的部位の寸法に適応で
きるようにするために、しなやかなスキャフォールドが利用される。例えば、スキャフォ
ールドは、ゲル様材料又は接着剤、並びに発泡体又はメッシュの構造を含み得る。ある特
定の実施形態において、スキャフォールドは、生体吸収性材料である。スキャフォールド
は、連続気泡孔構造を有する孔を有する高分子発泡体成分から形成され得る。孔サイズは
、様々であり得るが、特定の場合では、孔は、組織又は血管新生の内殖を可能にするサイ
ズである。いくつかの実施形態において、孔サイズは、約４０～９００マイクロメートル
の範囲内である。高分子発泡体成分は、必要に応じて、例えば、織物構造、編物構造、縦
編物構造（すなわち、レース様）、不織布構造及び／又は編組構造などの補強成分を含み
得る。いくつかの実施形態において、高分子発泡体成分が補強成分を含む場合、その発泡
体構成要素の孔が、補強成分のメッシュを貫通し、補強成分とからみ合うように、発泡体
成分は、補強成分と統合され得る。いくつかの実施形態において、１つ以上の血管新生成
長因子は、主に、持続性の送達デバイスを介した（例えば、ポリマーを介した）拡散によ
って持続性の送達デバイスから放出される。他では、血管新生因子は、主に、持続性の送
達デバイスの生分解（例えば、ポリマーの生分解）によって持続性の送達デバイスから放
出される。いくつかの実施形態において、インプラントは、徐々に侵食されることにより
血管新生因子を徐々に放出させる生体吸収型材料を含む。いくつかの実施形態において、
インプラントは、生体吸収型ポリマーを含む。特定の実施形態において、生体吸収型ポリ
マーは、少なくとも１ヶ月という半減期を有する。したがって、いくつかの実施形態にお
いて、インプラントは、１つ以上の血管新生因子と混ぜられた共重合体ポリ－ＤＬ－ラク
チド－ｃｏ－グリコリド（ＰＬＧ）を含む。

いくつかの実施形態において、インプラントは、ヒドロゲル（ヒドロゲルからなるか又
はヒドロゲルから本質的になるものを含む）を含む。ヒドロゲルは、持続放出の様式で、
１つ以上の低灌流領域に１つ以上の血管新生因子を送達するためにも使用され得る。「ヒ
ドロゲル」は、本明細書中で定義されるとき、有機ポリマー（天然のもの又は合成のもの
）が固化又は凝固して、水又は他の溶液の分子を捕捉してゲルを形成する３次元の開放格
子構造を形成するときに形成される物質である。その凝固は、例えば、凝集、凝結、疎水
性相互作用又は架橋によって生じ得る。ヒドロゲルは、急速に凝固して、血管新生因子を
、低灌流の原因となる血管又は低灌流に関連する領域に近接して維持し得る。いくつかの
実施形態において、ヒドロゲルは、微細な粉状の合成ヒドロゲルである。好適なヒドロゲ
ルは、最適なマトリックスポリマーとの適合性、及び生体適合性のような特性の最適な組
み合わせを示す。ヒドロゲルには、以下のうちの１つ以上が含まれ得る：多糖、タンパク
質、ポリホスファゼン、ポリ（オキシエチレン）－ポリ（オキシプロピレン）ブロックポ
リマー、エチレンジアミンのポリ（オキシエチレン）－ポリ（オキシプロピレン）ブロッ
クポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、アクリル酸とメタクリル酸と
の共重合体、ポリ（酢酸ビニル）、及び／又はスルホン化ポリマー。

特定の実施形態において、本開示は、１つ以上の血管新生成長因子を産生できるＴ細胞
を含む。ある特定の実施形態において、それらのＴ細胞（ＣＤ４、ＣＤ８、ガンマデルタ
、ＮＫＴ細胞又はそれらの混合物を含む）は、ａ）線維芽細胞集団（例えば、胎盤、胎児
、新生児若しくは成体の線維芽細胞集団又はそれらの混合物）を提供する工程；ｂ）その
線維芽細胞集団を同種異系細胞集団と接触させる工程であって、その集団は、Ｔ細胞を含
む、工程；及びｃ）それらのＴ細胞に１つ以上の血管新生特徴（例えば、事前に線維芽細
胞に曝露されていなかったＴ細胞では欠いている能力を含む、１つ以上の血管新生成長因
子を産生する能力）を付与するのに十分な時間にわたってかつ付与するのに十分な条件下
で、同種異系線維芽細胞を、Ｔ細胞を含む同種異系細胞集団とともに培養する工程を含む
工程によって生成され得る。血管新生成長因子の例としては、少なくとも、（ａ）ＰＤＧ
Ｆ－ＢＢ；（ｂ）アンジオポエチン；（ｃ）ＶＥＧＦ；（ｄ）ＥＧＦ；（ｅ）ＦＧＦ－１
；（ｆ）ＦＧＦ－２；（ｇ）ＦＧＦ－５；（ｈ）ＭＭＰ３；（ｉ）ＭＭＰ９；及び／又は
（ｊ）ストロメライシンが挙げられる。

いくつかの場合では、線維芽細胞とＴ細胞との共培養物は、他の１つ以上の作用物質、
例えば、１つ以上の免疫調節剤を含む。具体的な実施形態において、免疫調節剤としては
、ＦＡＳリガンド、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－１Ｒａ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－８、ＩＬ－
１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－３５、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、Ｉ－３０９、ＩＤＯ、ｉＮＯ
Ｓ、ＣＤ２００、ガレクチン３、ｓＣＲ１、アルギナーゼ、ＰＧＥ－２、アスピリン、ア
トルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シ
ンバスタチン、ピタバスタチン、ｎ－アセチルシステイン、ラパマイシン、ＩＶＩＧ、ナ
ルトレキソン、ＴＧＦ－ベータ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＣＴＬＡ－４、抗ＣＤ４５ＲＢ抗
体、ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、オーラノフィン、ジシアノ金、スルファサラ
ジン、メトトレキサート、糖質コルチコイド、エタネルセプト、アダリムマブ、アバタセ
プト、アナキンラ、セルトリズマブ、エタネルセプト－ｓｚｚｓ、ゴリムマブ、インフリ
キシマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、シクロスポリン、ＩＦＮ－ガンマ、エベロリム
ス、ラパマイシン又はそれらの組み合わせが挙げられる。

具体的な実施形態において、線維芽細胞、及びＴ細胞を含む集団は、液体培地（例えば
、ロズウェルパーク記念研究所（ＲＰＭＩ－１６４０）、ダルベッコ変法基本培地（ＤＭ
ＥＭ）、イーグル変法基本培地（ＥＭＥＭ）、Ｏｐｔｉｍｅｍ、イスコーブ培地又はそれ
らの組み合わせ）中で培養される。具体的な場合では、１つ以上のさらなる作用物質（例
えば、ヒト多血小板血漿、血小板溶解物、臍帯血血清、自己血清、ヒト血清、血清代替物
又はそれらの組み合わせ）が、培地に加えられる。いくつかの場合では、血清代替物が、
培地組成物の体積の少なくとも又はせいぜい１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０
、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、
２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３
７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５
０％を構成する。具体的な実施形態において、ヒト多血小板血漿は、培地組成物の体積の
少なくとも又はせいぜい１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３
、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、
２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４
０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５０％を構成する。い
くつかの場合では、血小板溶解物は、培地組成物の体積の少なくとも又はせいぜい１、２
、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１
８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１
、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、
４５、４６、４７、４８、４９又は５０％を構成する。いくつかの場合では、臍帯血血清
は、培地組成物の体積の少なくとも又はせいぜい１、２、３、４、５、６、７、８、９、
１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２
３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６
、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又
は５０％を構成する。ある特定の場合では、自己血清は、培地組成物の体積の少なくとも
又はせいぜい１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１
５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８
、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、
４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５０％を構成する。特定の場合に
おいて、ヒト血清は、培地組成物の体積の少なくとも又はせいぜい１、２、３、４、５、
６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０
、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、
３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４
７、４８、４９又は５０％を構成する。

特定の実施形態において、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－７及び／又はＩＬ－１５が、線
維芽細胞、及びＴ細胞増殖を高めるＴ細胞を含む細胞集団（例えば、ＰＢＭＣ）との組織
培養物に含まれており、具体的な場合では、ＩＬ－２が、１０ピコグラム／ｍｌ組織培養
培地から約１マイクログラム／ｍｌ組織培養培地に及ぶ濃度で加えられ得る。

いくつかの場合では、Ｔ細胞において１つ以上の特定の遺伝子産物の発現を誘導するた
めに、１つ以上のある特定の作用物質が組織培養物に曝露される。例えば、いくつかの場
合では、Ｔ細胞においてＣＤ２５の発現を誘導するために、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２
８抗体がＴ細胞に曝露される。具体的な場合では、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体が
、例えばビーズ及び／又は組織培養フラスコなどの固体表面に固定化され、ＣＤ２５、Ｃ
Ｄ６９及び／又はＣＴＬＡ４のＴ細胞発現を誘導するのに十分な濃度及び時間で組織培養
培地に曝露される。

Ｇ．ストレスを受けた線維芽細胞を用いた樹状細胞成熟の最適化
いくつかの実施形態において、本開示は、免疫療法の分野に関し、より詳細には、本開
示は、特定の抗原に対して免疫を誘導するための抗原提示細胞の使用に関し、より詳細に
は、本開示は、樹状細胞の免疫原性を増強するための、ストレスを受けた線維芽細胞の使
用（ストレスを受けたとは、生理的ではない任意の状態である）に関する。本開示の具体
的な実施形態は、ストレスを受けた線維芽細胞の特性を利用して、樹状細胞の成熟を誘導
する。

樹状細胞の抗原提示能力を高める方法が提供され、ここで、ある特定の細胞が、すでに
ストレスを受けた線維芽細胞とともに培養される（が、それらの線維芽細胞は、樹状細胞
の存在下においてストレスを受けてもよい）。本開示の１つの実施形態において、単球が
、樹状細胞の分化に適した条件下において培養され、続いて、ストレスを受けた線維芽細
胞とともに培養されることにより、例えば、その単球から生成された樹状細胞の成熟及び
抗原提示活性の最適化が誘導される。１つの実施形態において、樹状細胞は、線維芽細胞
に対して同種異系である。別の実施形態において、樹状細胞は、線維芽細胞に対して自家
であるが、具体的な場合においては同種異系であってもよい。

本実施形態は、樹状細胞成熟を刺激するための、ストレスを受けた線維芽細胞の使用を
提供する。樹状細胞成熟の刺激には、樹状細胞における共刺激分子（例えば、ＣＤ４０、
ＣＤ８０及びＣＤ８６）の発現の増強、並びに少なくともいくつかの場合では、Ｔ細胞の
活性化を高める能力の増強が含まれる。１つの実施形態において、本開示は、１つ以上の
熱ショックタンパク質の発現を誘導する及び／又は線維芽細胞の成長因子の産生活性を変
化させるのに十分な持続時間にわたる非生理学的条件への線維芽細胞の曝露を包含し、例
示的な成長因子としては、ＥＧＦ、ＦＧＦ－１、ＦＧＦ－２、ＦＧＦ－５、ＶＥＧＦ、Ｐ
ＤＧＦ、ＰＤＧＦ－ＢＢ、アンジオポエチン、ＩＧＦ－１及び／又はＨＧＦが挙げられる
。１つの実施形態において、線維芽細胞は、樹状細胞に対して同種異系であり、別の実施
形態において、線維芽細胞は、樹状細胞に対して自家である。

線維芽細胞に対するストレスへの曝露は、当該分野で公知の様々な手段を用いて行われ
得る。１つの実施形態において、線維芽細胞は、高熱に曝露され、その高熱は、少なくと
も又はせいぜい１～８時間にわたる温度の上昇を含み得、いくつかの場合において、その
温度の上昇は、少なくとも又はせいぜい３９、４０、４１又は４２℃であり得る。具体的
な場合において、細胞は、およそ４０℃の温度において約４時間にわたって高熱に曝露さ
れる。いくつかの実施形態において、樹状細胞は、個体の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から
生成され、ＣＤ８細胞は、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）を用いてＰＢＭＣ（例えば）
から精製される。他の実施形態において、ＣＤ８Ｔ細胞は、腫瘍浸潤リンパ球から抽出さ
れる。

本開示の１つの態様において、樹状細胞は、従来のプロトコルに従って単離され、スト
レスを受けた線維芽細胞に曝露される。具体的な実施形態において、樹状細胞活性化の刺
激の背後にある機構は、組織傷害又は発病の脅威に関連するｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）
アゴニストなどの、「危険」信号と記載される、自然免疫系を活性化するシグナルを模倣
するように線維芽細胞を生成するものである。樹状細胞は、マクロファージ又はＢ細胞な
どの他の抗原提示細胞とは対照的に、抗原特異的な系とポリクローナル実験（例えば、混
合リンパ球反応）の両方においてＴ細胞応答を刺激する高い能力を示すので（Ｂａｎｃｈ
ｅｒｅａｕ ａｎｄ Ｓｔｅｉｎｍａｎ，１９９８）、本実施形態は、樹状細胞の活性化
に焦点を合わせている。ＤＣは、末梢組織（リンパ節の外側）において、食作用及び受容
体媒介性エンドサイトーシスを含むいくつかの相補的な機構によって抗原を捕捉すること
が知られている。未熟ＤＣは、高い食作用活性及び低レベルの抗原提示活性を有すると知
られている。正常には、末梢組織におけるＤＣは、未熟である。これらの未熟ＤＣは、抗
原を効率的に捕捉する能力を有し、それらは、その後期エンドソーム－リソソームコンパ
ートメント内にＭＨＣクラスＩＩ分子を蓄積でき、低レベルの共刺激分子を発現でき、リ
ンパ系組織への遊走を可能にするユニークなセットのケモカイン受容体（例えば、ＣＣＲ
７）を発現でき、サイトカインを分泌する能力は限定的である（Ｔｒｏｍｂｅｔｔｅ ａ
ｎｄ Ｍｅｌｌｍａｎ，２００５）。本開示は、インビボで生じるＤＣ活性化の天然のプ
ロセスを模倣する手段を包含するが、本開示は、エクスビボでのこの誘導を包含する。

本開示は、ストレスを受けた線維芽細胞上に発現される１つ以上の刺激シグナル（例え
ば、ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト（熱ショックタンパク質、例えば、ｈｓｐ９０及び／又
はｈｓｐ７０を含む））への曝露によるものなどの、活性化ＤＣを生成する手段を提供す
る。ストレスを受けた線維芽細胞への曝露は、ＤＣの食作用活性を低下させ、次いでＤＣ
が、少なくともいくつかの場合において、輸入リンパ管を通じて流入領域リンパ節に遊走
するのを可能にする。輸送プロセスの間、ＤＣは、摂取したタンパク質を分解して、ＭＨ
ＣクラスＩ分子とＭＨＣクラスＩＩ分子の両方に結合するペプチドにする。これにより、
ＤＣは、ａ）それが外来性抗原を摂取するが、ＭＨＣ Ｉ経路においてペプチドを提示す
るという点において交差提示を行うこと；及びｂ）ＣＤ８（ＭＨＣ Ｉを介して）とＣＤ
４（ＭＨＣ ＩＩを介して）の両方を活性化することが可能になる。興味深いことに、脂
質抗原は、異なる経路を介して処理され、ＣＤ１ファミリーの非古典的なＭＨＣ分子上に
ロードされる（Ｉｔａｎｏ ａｎｄ Ｊｅｎｋｉｎｓ，２００３）。

本開示は、ＤＣの成熟を誘導する手段を包含し、いくつかの場合において、その成熟は
、抗原捕捉活性のダウンレギュレーション、表面ＭＨＣクラスＩＩ分子及び共刺激分子の
高発現、サイトカインを分泌する能力、並びに流入領域リンパ節へのＤＣの遊走を可能に
するＣＣＲ７の獲得に関連する。共刺激受容体ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５としても知られ
る）の連結は、未熟ＤＣから、Ｔ細胞媒介性の適応免疫を開始できる完全に成熟したＤＣ
への分化にとって必須のシグナルである（Ｃａｕｘ ｅｔ ａｌ．，１９９４）。しかし
ながら、ＤＣの成熟だけでは、ユニークなＤＣ表現型をもたらさない。その代わりに、直
接又は周囲の免疫細胞を介して種々の微生物又はウイルスによって提供される種々のシグ
ナルが、最終的に種々の免疫応答に寄与する独特の表現型をＤＣが獲得するように誘導す
る。実際には、微生物が、パターン認識受容体（ＰＰＲ）と呼ばれる独特のＤＣ分子セン
サーの引き金を引く種々の病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を発現するので、ＤＣの
成熟は、種々の微生物によって異なる。著しいことに、ほとんどの微生物がＤＣを活性化
するが、いくつかは、様々な経路によってＤＣの成熟を阻止できる（Ｐｕｌｅｎｄｒａｎ
ｅｔ ａｌ．，２００１）。組織局在型ＤＣは、傷害に応答する周囲の免疫細胞から放
出される生成物によって独特の表現型に極性化され得る。例えば、γｄ－Ｔ細胞及びＮＫ
細胞は、インターフェロン－γ（ＩＦＮγ）を放出し、マスト細胞は、予め形成されたＩ
Ｌ－４及びＴＮＦを放出し、ｐＤＣは、ＩＦＮａを分泌し、間質細胞は、ＩＬ－１５及び
胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）を分泌する。したがって、本開示の１つの態様
において、ストレスを受けた線維芽細胞／未熟樹状細胞前駆細胞は、インビボでの免疫応
答を模倣するために、さらなる細胞及び／又は細胞産生因子（例えば、ＩＦＮ－ガンマ、
ＩＬ－４ ＴＮＦ、ＩＦＮ－アルファ、ＩＬ－１５及び／又はＴＳＬＰ）の存在下におい
て培養される。

これらのサイトカインは、前駆細胞又は単球などの前駆体細胞から、ユニークなタイプ
のＴ細胞をもたらす独特の炎症性ＤＣへの分化を誘導する。ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞とＤ
Ｃとが相互作用すると、その後、これらの細胞は、種々の機能を有する抗原特異的エフェ
クターＴ細胞に分化し得る。ＣＤ４Ｔ細胞は、Ｂ細胞が抗体分泌細胞に分化するのを助け
る、Ｔヘルパー１（ＴＨ１）細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ１７細胞、又は濾胞性ヘルパーＴ（
Ｔ）細胞、並びにＴｒｅｇ細胞になることができる。ナイーブＣＤ８ Ｔ細胞は、エフェ
クター細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を生じ得る。ＤＣの興味深い活性は、ナイーブＴ
細胞の活性化を介した免疫応答の刺激に加えて、ＤＣが阻害性細胞としても作用できるこ
とである。これは、直接、Ｔ細胞活性化の阻害及び／又はＴ細胞アネルギーの誘導を介し
て（Ｌｕｔｚ ｅｔ ａｌ．，２０００）、並びに制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の刺激を介
して間接的に（Ｔｕｒｎｑｕｉｓｔ ａｎｄ Ｔｈｏｍｓｏｎ，２０９０８；Ｐｌｅｔｉ
ｎｃｋｘ ｅｔ ａｌ，２０１１）行われる。興味深いのは、Ｔｒｅｇ細胞だけでなく、
アネルギーＴ細胞も、ＤＣの活性化を阻害できることであり（Ｆｒａｓｃａ ｅｔ ａｌ
．，２００２；Ｖｅｎｄｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，２０００；Ｖｅｌｄｈｏｅｎ ｅｔ
ａｌ．，２００６）、ゆえに、自己で維持する免疫制御性フィードバックループを刺激す
る可能性がある。実際に、Ｔｒｅｇが未熟ＤＣを刺激し、その未熟ＤＣが新しいＴｒｅｇ
細胞の産生を刺激するというようなシナリオが、これまでに報告されている（Ｇｕｉｌｌ
ｏｔ ｅｔ ａｌ．，２００３；Ｒｏｅｌｏｆｓ－Ｈａａｒｈｕｉｓ ｅｔ ａｌ．，２
００３）。

ＤＣの活性化を増大させるために、ストレスを受けた線維芽細胞に曝露すると、数多く
のタイプのＤＣベースの治療法が生成され得る。そのような治療法としては、アンドロゲ
ン抵抗性前立腺癌の処置に対してＦＤＡが承認していて、ＧＭ－ＣＳＦと前立腺特異的抗
原である前立腺酸性ホスファターゼとを含むキメラタンパク質を用いて生育された自家末
梢血単核球（ＰＢＭＣ）由来樹状細胞に由来する細胞製品である、Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（シ
プロイセル－Ｔ）（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｇｏｍｅｌａ ｅｔ
ａｌ．，２０１４）；特定のペプチド（例えば、ＰＳＭ－Ｐ１又はＰ２）をパルスされ
たＤＣ；ＧＭ－ＣＳＦ－ＰＡＰ融合タンパク質をパルスされたＤＣ；ＰＳＡタンパク質を
パルスされたＤＣ（Ｂａｒｒｏｕ ｅｔ ａｌ．，２００４）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳ
ＣＡ（１４－２２））、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ（２９９－３０７））、前立
腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ（４－１２））及び／又は前立腺特異的抗原（ＰＳＡ（１５４
－１６３））に由来する抗原ペプチドをロードされたＤＣ（Ｗａｅｃｋｅｒｌｅ－Ｍｅｎ
ｅｔ ａｌ．，２００６）などが挙げられる。

本開示の１つの実施形態において、樹状細胞の成熟（成熟樹状細胞、例えば、骨髄樹状
細胞又はリンパ系樹状細胞）を誘導する方法が存在し、その方法は、（ａ）未熟な状態の
樹状細胞（骨髄樹状細胞又はリンパ系樹状細胞）を得る工程；及び（ｂ）その未熟樹状細
胞を、ストレスを受けた線維芽細胞集団の存在下において培養する工程（その線維芽細胞
は、少なくとも真皮、陰茎包皮、脂肪組織、胎盤組織などを含む任意の組織から入手され
得る）を含む。具体的な実施形態において、未熟な状態の骨髄樹状細胞は、高レベルのＣ
Ｄ８３及び／若しくはＩＬ－１０を発現し、かつ／又は低レベルのＩＬ－１２、ＣＤ４０
、ＣＤ８０及び／若しくはＣＤ８６を発現する。具体的な実施形態において、未熟骨髄樹
状細胞は、高レベル（例えば、赤血球と比べて５０％超）のＣＤ８３、ＩＬ－１０又はそ
の両方を発現する。具体的な実施形態において、未熟樹状細胞は、混合リンパ球反応の不
十分な刺激物質及び／又はＴ細胞活性化の不十分な刺激物質である。具体的な実施形態に
おいて、ＣＤ８Ｔ細胞は、樹状細胞及び／又は線維芽細胞に対して自家又は同種異系であ
る。具体的な場合において、未熟樹状細胞には、単球又は骨髄前駆細胞が含まれる。

線維芽細胞は、１つ以上のストレッサーに曝露されて、ストレスを受けた線維芽細胞に
なることがあり、任意の好適なストレッサーを利用してよい。具体的な実施形態において
、ストレッサーは、高熱であり、いくつかの場合において、高熱には、熱ショックタンパ
ク質９０の発現を誘導できる持続時間にわたる高温への曝露が含まれる。その高熱は、少
なくとも又はせいぜい約１、２、３、４、５、６、７又は８時間にわたる４０℃の温度へ
の曝露において誘発され得る。いくつかの場合において、高熱及び別のストレッサー（例
えば、血清枯渇）が利用されるが、いくつかの場合では、血清枯渇が高熱なしで用いられ
る。具体的な実施形態において、ストレッサーには、少なくとも又はせいぜい約１２、１
３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６
、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、
４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７又は４８時間にわたる血清枯渇への曝
露が含まれる。具体的な場合では、ストレッサーは、２４時間にわたる血清枯渇への曝露
又は１２～４８時間にわたる血清枯渇への曝露である。

Ｈ．同種異系線維芽細胞フィーダー細胞を用いてＣＤ８Ｔ細胞を拡大する方法
Ｔ細胞は、元々は胸腺に由来し、免疫系が機能する際に決定的な役割を果たすことが示
されている。大まかには、Ｔ細胞は、マーカーＣＤ４を発現するＴヘルパー細胞と、マー
カーＣＤ８を発現する傷害性Ｔ細胞とに分けられる。癌免疫療法の分野において、研究か
ら、腫瘍へのＣＤ８ Ｔ細胞の浸潤が、生存時間の延長と相関することが示された。残念
なことに、腫瘍は、免疫抑制因子の分泌によって、免疫が媒介する破壊から自身を守る（
Ｗｉｌｅ ｅｔ ａｌ．，１９８４；Ｍｅｄｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９８６；Ｓｔｒａ
ｔｔｏｎ ａｎｄ ＤｉＳａｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８２；Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ ｅｔ
ａｌ．，１９９３；Ｓｐｅｌｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６；Ａｖｒａｄｏｐｏｕｌ
ｏｓ ｅｔ ａｌ．，１９９７；Ｙｏｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９７；Ｐｏｐｅ，１９
８５；Ｐｏｐｅ，１９８５ｂ，Ｐｉｌｌａｙ ｅｔ ａｌ．，１９８６；Ｋｐｐｉ ａｎ
ｄ Ｈａｌｌｉｄａｙ，１９８３）。エクスビボで（身体外で）免疫細胞を刺激すること
は、インビボよりもかなり容易である。なぜなら、前者において、免疫細胞は、腫瘍が分
泌する免疫抑制因子の非存在下で維持されるので、活性化が容易になるからである。一部
の研究者は、患者を免疫調節物質「漬けにする」ことによって、インビボにおいて宿主の
免疫細胞を活性化しようと試みた。しかしながら、適切な活性化を達成するために必要な
大量のサイトカインは、毒性を誘導し得るので、これらのプロトコルには問題があった。
周知の例は、免疫活性化を達成するために必要な投与量が、多くの患者が毒性のために治
療を中止しなければならないほど多かった、インターロイキン－２（ＩＬ－２）試験であ
る（Ａｔｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９；Ｒｕｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８９；Ｒ
ｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，１９８７；Ｌｏｔｚｅ ｅｔ ａｌ．，１９８６；Ｒ
ｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，１９８６；Ｂｒｕｔｏｎ ａｎｄ Ｋｏｉｅｌｌｅｒ
，１９９４；Ｒｉｃｈａｒｄｓ ｅｅｔ ａｌ．，１９８８；Ｄｕ Ｂｏｉｓ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９５；Ｓｈｕｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６）。いくつかのグループは現
在も、デキサメタゾン（Ｍｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０）、ペントキシフィリン（Ｅ
ｄｗａｒｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９１）、インドメタシン（Ｍｅｒｔｅｎｓ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９３）及びメラトニン（Ｌｉｓｓｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９６）をはじめ
とした様々な作用物質とＩＬ－２を同時投与することによって、ＩＬ－２の毒性を低下さ
せようと試みている。エクスビボでの免疫細胞の刺激は、使用する免疫賦活薬の量がより
少ないので、全身の免疫調節よりも毒性が低く、また、安価である。

エクスビボでの刺激アプローチは、腫瘍に対する免疫を、脾細胞を移植することによっ
て抵抗性マウスからコントロールマウスに移すことができたというマウスの研究から始ま
った（Ｔａｋｅｉｃｈｉ ａｎｄ Ｂｏｏｎｅ，１９７５；Ｔｉｎｇ，１９７６；Ｔｉｎ
ｇ，１９７８；Ｉｇａｒａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，１９７９；Ｔｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，
１９７９；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ ａｎｄ Ｔｉｎｇ，１９８１；Ｍｕｌｅ ｅｔ ａｌ．
，１９７９；Ｗｈｉｔｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９７５）。さらなる解析によって、防御
の最適な移行のためには、ＣＤ４Ｔ細胞とＣＤ８ Ｔ細胞を一緒に移さなければならない
ことが明らかになった（Ｐｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９７；Ｐｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，
２０００；Ｋｊａｅｒｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，２００１；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９
９４）。しかしながら、これらのマウス研究は、リンパ球の刺激がマウスの内部で行われ
たので、真の意味でのエクスビボ実験ではなかった。疑問は、「免疫細胞をエクスビボで
非特異的に活性化できるのか」、又はさらには「癌に特異的なＴ細胞をエクスビボで活性
化できるか」ということであった。後者のアプローチは、非特異的なエクスビボ活性化が
自己免疫の引き金を引き得る自己反応性免疫細胞の再活性化をもたらす可能性があるため
、前者よりも優れている。初期の試みは、白血球を取り出し、ポリクローナルＴ細胞マイ
トジェンＰＨＡをエクスビボで加え、次いで、活性化された細胞を宿主に再注入して戻す
ことによって、実際に患者の細胞を非特異的に活性化していた。この治療の成功は、化学
療法又は放射線照射などの従来の処置よりも優れていなかったので、断念された（Ｃｈｅ
ｅｍａ ｎｄ ｈｅｒｓｈ，１９７２；Ｇａｒｏｖｏｙ ｅｔ ａｌ．，１９７３）。

他のエクスビボ刺激アプローチは、より高い成功率を有した。このアプローチは、末梢
血単核球（すなわち、リンパ球）を精製し、それらを免疫賦活薬のインターロイキン２で
活性化し、活性化されたリンパ球を自家患者に再注入して戻すことを含んだ。Ｔ細胞を非
特異的に活性化することを目的とした第１のアプローチとは対照的に、このアプローチは
、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及びリンパ球活性化キラー（ＬＡＫ）細胞と呼ばれる
ＮＫ様の能力を有するＴ細胞のサブセットを活性化した（Ｌｉｎｄｅｍａｎｎ ｅｔ ａ
ｌ．，１９８９；Ｇｌａｓｓｍａｎ，１９８９；Ｇｒｉｍｍ，１９８６）。これらの細胞
は、異常なレベルのＭＨＣを発現する腫瘍細胞（Ｔｉｍｏｎｅｎ ａｎｄ ｈｅｌａｎｄ
ｅｒ，１９９７）及び空のＭＨＣクラス１を発現しない標的細胞（ＲＧ Ｍｉｌｌｅｒ，
私信）を殺滅する能力を有する。

エクスビボで免疫細胞を活性化させる別の免疫療法アプローチは、固形腫瘍に対する腫
瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の使用を必要とする。ＴＩＬは、種々の腫瘍において認められ
ており、肝臓癌腫（Ｋａａｔａ ｅｔ ａｌ．，１９９２）、メラノーマ（Ｍｉｗａ，１
９８４；Ｌｉｐｐｏｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２）、膀胱癌（Ｌｉｐｐｏｎｅｎ ｅ
ｔ ａｌ．，１９９２）、直腸結腸癌（Ｒｏｐｐｏｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７）及
び卵巣癌（Ｍａ ａｎｄ Ｇｕ，１９９１；Ｔｏｍｓｏｖａ ｅｔ ａｌ．，２００８）
をはじめとしたある特定の癌において好ましい予後と相関する。多くの腫瘍免疫学者は、
ＴＩＬが腫瘍に浸潤してその根絶を誘導すると考えているが、しかしながら、腫瘍が分泌
する免疫抑制因子が免疫活性化を阻害するので、インビボではこのようなことは起こらな
い。ＴＩＬ治療は、外科的に腫瘤を摘出し、密度勾配で腫瘍細胞からＴＩＬを分離し、イ
ンビトロの免疫賦活性条件下でリンパ球を拡大し、活性化されたキラー細胞を患者に再注
入して戻すことを必要とする（Ｆｉｌｇｕｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，１９９３；Ｔｏｐａ
ｌｉａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８）。ＴＩＬ療法とＬＡＫ療法の抗腫瘍の有効性を対比
させたマウスモデルでは、ＴＩＬ療法が、およそ１００倍高い殺腫瘍効果を有すると示さ
れた（Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，１９８７；Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９０。Ｔ
ＩＬが腫瘍根絶効果を増強した理由として考えられるのは、この治療が腫瘍を認識し、そ
れに反応しているリンパ球だけを活性化させるということである。これは、多数の細胞を
活性化するＬＡＫ療法とは対照的であり、それらの細胞のうち、腫瘍に特異的な細胞はご
く一部である。臨床では、ＴＩＬを用いた結果は、メラノーマ患者のおよそ２０％におい
て再現性のある反応が得られており、適正であった（Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅ，１９９１）。
ＴＩＬの有効性を増強する手段は、ＴＮＦに対するｃＤＮＡをＴＩＬにトランスフェクト
することによって殺滅能力を高めることである（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，１
９９３）。

養子Ｔ細胞療法の最も強力で臨床的に成功した例の１つは、おそらく、キメラ抗原受容
体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の使用である。その一例は、卵巣癌関連抗原であるアルファ－葉酸受
容体（ＦＲ）に対する反応性を有するＴ細胞を、Ｆｃ受容体ガンマ鎖のシグナル伝達ドメ
インに連結された抗ＦＲ一本鎖抗体を組み込んだキメラ遺伝子で自家Ｔ細胞を遺伝子改変
することによって作製したという最近の発表である。その研究では、患者を２つのコホー
トのうちの１つに割り当てた。コホート１の８人の患者には、用量漸増のＴ細胞を高用量
のインターロイキン－２と併用して投与し、コホート２の６人の患者には、二重特異性Ｔ
細胞（ＦＲと同種異系細胞の両方に反応性）の投与に続いて同種異系末梢血単核球による
免疫化を行った。コホート１の５人の患者が、おそらくインターロイキン－２投与に起因
するグレード３～４の処置関連毒性を経験したが、これは、標準的な措置によって管理す
ることができた。コホート２の患者は、グレード１～２の症状の比較的軽度の副作用を経
験した。いずれの患者においても、腫瘍量の減少は見られなかった。コホート１における
追跡用の１１１Ｉｎで標識された養子移植されたＴ細胞は、腹膜沈着物においていくらか
のシグナルが検出された１人の患者を除いて、腫瘍へのＴ細胞の特異的な局在化がなかっ
たことを明らかにした。ＰＣＲ解析は、遺伝子を改変されたＴ細胞が、移植後の最初の２
日間は循環中に大量に存在したが、これらはすぐに、１ヶ月後にはほとんどの患者におい
てほとんど検出できない程度に減少したことを示した（Ｋｅｒｓｈａｗ ｅｔ ａｌ．，
２００６）。同様のＣＡＲ－Ｔ臨床研究が、神経芽細胞腫（Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，２
００７；Ｌｏｕｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１１）、Ｂ細胞悪性腫瘍（Ｐａｒｋ ａｎｄ
Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ，２０１０；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１０；
Ｐｏｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１１；Ｋａｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，２０１１；Ｂｒｅ
ｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，２０１１；Ｋｅｂｒｉａｅｉ ｅｔ ａｌ．，２０１２；
Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｔｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，２０１
２；Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ａｎｄ
Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，２０１３；Ｄａｖｉｌａ ａｎｄ Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ，２０１
３；Ｃｒｕｚ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０
１３）メラノーマ（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，２０１２）、卵巣癌（Ｋａｎｄａｌａｆｔ ｅ
ｔ ａｌ．，２０１２）、腎癌（Ｌａｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，２０１３）、中皮腫（Ｓ
ｃｈｕｂｅｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１３）及び頭頸部癌（ｖａｎ Ｓｃｈａｌｗｙｋ
ｅｔ ａｌ．，２０１３）に対して報告されている。

本開示の実施形態は、当該分野の欠陥に対処し、エクスビボ培養によってＣＤ８ Ｔ細
胞の活性を高める方法を含む。本開示の実施形態は、ＣＤ８系列のＴ細胞を拡大する分野
、及びそれらのＴ細胞に１つ以上の能力（例えば、サイトカインを産生する能力、増殖す
る能力及び／又は細胞傷害性を引き起こす能力）を付与する分野に関する。特定の実施形
態において、ＣＤ８Ｔ細胞は、非内在性受容体（非内在性ＣＡＲ、Ｔ細胞受容体、αβ受
容体などを含む）を発現するように操作される。

本開示の特定の実施形態において、線維芽細胞は、１つ以上のストレッサーに曝露され
、その後、それらは、ＣＤ８系列のＴ細胞とともに培養される。次いで、そのストレスを
受けた線維芽細胞は、強力に増殖を拡大することができ、サイトカイン産生を増加させる
ことができ、ＣＤ８Ｔ細胞の細胞傷害活性を増加させることができる。１つの実施形態に
おいて、線維芽細胞は、およそ２４時間、１つ以上のストレッサー（例えば、血清枯渇）
に曝露される。別の実施形態において、線維芽細胞は、高熱を含む１つ以上のストレッサ
ーに曝露され、例えば、４時間、およそ４０℃の高熱に曝露される。

本開示は、ＣＤ８ Ｔ細胞を刺激するために、「ストレスを受けた」線維芽細胞をフィ
ーダー細胞として使用することを提供する。ＣＤ８ Ｔ細胞の刺激には、増殖能の増強、
サイトカイン分泌の増強、細胞傷害活性の増大及び／又は共刺激の所要量の減少が挙げら
れる。本開示の１つの実施形態において、熱ショックタンパク質の発現を誘導するのに十
分な及び線維芽細胞の成長因子産生活性を変化させるのに十分な持続時間にわたる、非生
理学的条件への線維芽細胞の曝露が存在する。線維芽細胞がストレスを受けるのと同時に
、又は線維芽細胞がストレスを受けた後、その線維芽細胞は、ＣＤ８ Ｔ細胞に曝される
。１つの実施形態において、線維芽細胞は、ＣＤ８ Ｔ細胞と同種異系であり、別の実施
形態において、線維芽細胞は、ＣＤ８ Ｔ細胞と自家である。

線維芽細胞に対するストレスへの曝露は、当該分野で公知の様々な手段を用いて行われ
得る。１つの実施形態において、線維芽細胞は、高熱に曝露され、その高熱は、１～８時
間にわたる温度の上昇を含み得、その温度の上昇は、３９～４２℃であり得る。具体的な
場合において、細胞は、およそ４０℃において４時間にわたって高熱に曝露される。いく
つかの実施形態において、Ｔ細胞は、患者の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から単離され、Ｃ
Ｄ８細胞は、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）を用いて精製される。他の実施形態におい
て、ＣＤ８Ｔ細胞は、腫瘍浸潤リンパ球から抽出される。腫瘍浸潤リンパ球を単離する方
法は、当該分野で公知であり、参照により援用される（Ｉｇａｒａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．
，２００２）。

１つの実施形態において、ＣＤ８ Ｔ細胞の集団は、被験体由来の血液サンプルから得
られ、例えば、アフェレーシスによって得られる。１つの実施形態において、アフェレー
シスによって回収された免疫エフェクター細胞は、血漿画分を除去するために洗浄され、
必要に応じて、それらの細胞は、その後の処理工程のために適切な緩衝液又は培地中に提
供される。１つの実施形態において、それらの細胞は、緩衝液、例えば、リン酸緩衝食塩
水（ＰＢＳ）で洗浄される。ある実施形態において、それらの細胞は、１つ以上の二価カ
チオン（例えば、カルシウム及び／又はマグネシウム）を欠く洗浄液で洗浄される。１つ
の実施形態において、それらの免疫エフェクター細胞は、二価カチオンを実質的に有しな
い緩衝液で洗浄される。

１つの実施形態において、上記方法は、免疫エフェクター細胞の集団から、外来性ｓｉ
ＲＮＡを一過性に発現する、ｓｉＲＮＡによって操作されたＴ細胞の集団を作製する工程
を含む。上記方法は、線維芽細胞への曝露の前又は後に、インビトロで転写されたｓｉＲ
ＮＡ又は合成ｓｉＲＮＡを免疫細胞に導入する工程を含む。そのｓｉＲＮＡトランスフェ
クションは、免疫細胞からのＣＤ８ Ｔ細胞の抽出の前又は後に行われ得る。具体的な場
合において、そのｓｉＲＮＡは、免疫学的チェックポイントなどの免疫阻害性分子を標的
化する。数多くの免疫学的チェックポイントが当該分野で公知であり、それらとしては、
例えば、ＣＴＬＡ－４、ＳＴＡＴ６、ＩＬ－１０及び／又はＰＤ－１が挙げられる。１つ
の実施形態において、そのｓｉＲＮＡは、エレクトロポレーションによって免疫エフェク
ター細胞に導入される。１つの実施形態において、その免疫エフェクター細胞の少なくと
も少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２
％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％が、そのｓ
ｉＲＮＡを発現する。１つの実施形態において、その免疫エフェクター細胞は、その免疫
エフェクター細胞を、リガンド、例えば、同族抗原分子又は抗イディオタイプ抗体の存在
下において培養することによって、拡大及び／又は活性化される。１つの実施形態におい
て、その免疫エフェクター細胞は、ｓｉＲＮＡがその免疫エフェクター細胞に導入された
少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１
６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２８、３２、３６、３６又は４
８時間後に、同族抗原分子又は抗イディオタイプ抗体と接触される。１つの実施形態にお
いて、その免疫エフェクター細胞は、ＲＮＡがその免疫エフェクター細胞に導入された２
４、１５、１２、１０又は８時間未満後に、同族抗原分子又は抗イディオタイプ抗体と接
触される。具体的な実施形態において、免疫エフェクター細胞は、ｓｉＲＮＡが免疫エフ
ェクター細胞に導入されてから少なくともある特定の長さの時間の後に、同族抗原分子又
は抗イディオタイプ抗体と接触され、その場合、ＣＤ８細胞は、まだ抽出されておらず、
その免疫エフェクターは、活性化され；その後、ＣＤ８細胞が抽出される。

本開示のいくつかの実施形態において、Ｔ細胞増殖を刺激することができる抗原が、ス
トレスを受けた線維芽細胞／Ｔ細胞培養物に加えられる。抗原は、その培養物に、タンパ
ク質、ペプチド及び／又は変更されたペプチドリガンドとして加えられ得るか、又はそれ
らのうちの任意のものが、線維芽細胞に遺伝的に操作され得る。腫瘍免疫療法において使
用するためのＣＤ８細胞の拡大の状況において、腫瘍抗原が利用され得る。例示的な腫瘍
抗原としては、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ
－１、ＣＬＬ－１（ＣＬＥＣＬ１）、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ
ＣＭＡ、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４
ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－
１１Ｒ．アルファ．、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４
、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈ
ｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、Ｐｒｏｓｔａｓｅ、ＰＡＰ、ＥＬＦ
２Ｍ、エフリンＢ２、ＦＡＰ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂ
ｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５
、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、Ｔ
ＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣＳＤ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７
９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、
ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲ
Ｐ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ Ａ１、Ｅ
ＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡ
Ｄ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン（ｐｒｏｓｔｅ
ｉｎ）、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／Ｍ
ＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点（ｓａｒｃｏｍａ ｔｒａｎｓｌ
ｏｃａｔｉｏｎ ｂｒｅａｋｐｏｉｎｔｓ）、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２
ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹ
ＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ
－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写
酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、レグマイン（ｌｅｇｕｍａｉｎ）、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、腸カル
ボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、
ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、Ｅ
ＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５及び／又はＩＧＬＬ１が挙げられる。

１つの実施形態において、抗原を伴う又は伴わない線維芽細胞とＣＤ８Ｔ細胞との培養
物は、増殖及び／又は生存能を高めるための１つ以上の因子（例えば、以下：インターロ
イキン－２（ＩＬ－２）、インスリン、ＩＦＮ－ガンマ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－Ｃ
ＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＴＧＦ－ベータ及びＴＮＦ－
アルファ又は細胞増殖のための他の任意の添加物のうちの１、２、３、４、５つ又はそれ
以上を含む血清（例えば、ウシ胎仔血清又はヒト血清）を含む）をさらに含む。１つの実
施形態において、反応混合物は、ＩＬ－１５及び／又はＩＬ－７をさらに含む。１つの実
施形態において、それらの細胞は、ＩＬ－２の存在下において拡大される。

１つの実施形態において、ストレスを受けた線維芽細胞は、抗原提示細胞として作用し
、他の実施形態では、抗原提示細胞が、培養物に加えられる。

本開示の実施形態は、ＣＤ８ Ｔ細胞の活性を高める方法を含み、その方法は、ａ）線
維芽細胞の集団を１つ以上のストレッサーに曝露する工程；ｂ）それらの線維芽細胞をＣ
Ｄ８系列のＴ細胞と組み合わせて培養する工程；ｃ）その培養物からＣＤ８Ｔ細胞を抽出
する工程を含む。具体的な実施形態において、ストレッサーは、高熱、例えば、熱ショッ
クタンパク質９０の発現を誘導できる持続時間にわたる高温への曝露である。その高熱は
、１、２、３、４、５、６、７若しくは８時間又はそれらの間の任意の範囲にわたる４０
℃の温度への曝露であり得る。ストレッサーは、１２、１３、１４、１５、１６、１、７
、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、
３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４
４、４５、４６、４７若しくは４８時間又はそれらの間の任意の範囲（１２～４８時間を
含む）にわたる血清枯渇への曝露を含み得る。

特定の実施形態において、ストレスを受けた線維芽細胞へのＣＤ８Ｔ細胞の曝露の後、
ＣＤ８ Ｔ細胞の１つ以上の活性は、ストレスを受けた線維芽細胞への曝露の非存在下に
おけるＣＤ８ Ｔ細胞の活性と比べて変化する。そのような活性は、ａ）増殖；ｂ）サイ
トカイン産生；ｃ）細胞傷害性；及びｄ）それらの組み合わせからなる群より選択される
活性を少なくとも含む。サイトカイン産生は、ＩＬ－２、ＩＬ－７及び／又はＩＬ－１５
の分泌の増加を含み得る。具体的な実施形態において、増殖は、サイトカイン投与に応答
して増加し、そのようなサイトカインは、ａ）ＩＬ－２；ｂ）ＩＬ－７；ｃ）ＩＬ－１５
；及びｄ）それらの組み合わせからなる群より選択され得る。ＣＤ８ Ｔ細胞に対するあ
る特定の場合において、ストレスを受けた線維芽細胞へのＣＤ８ Ｔ細胞の曝露の後、そ
れらの増殖は、Ｔ細胞受容体の連結（例えば、抗原又はマイトジェンによって達成される
）に応答するなどして、増加する。特定の実施形態において、ストレスを受けた線維芽細
胞へのＣＤ８ Ｔ細胞の曝露の後、ＣＤ８ Ｔ細胞は、高い細胞傷害性（標的細胞を殺滅
する能力、高いパーフォリン産生；及び／又は高いグランザイム産生を含む）を有する。

本開示の実施形態は、ストレスを受けた線維芽細胞へのＣＤ８ Ｔ細胞の曝露後の活性
の増大を含み、その活性には、ＣＤ８ Ｔ細胞が、ａ）増殖する能力；ｂ）サイトカイン
を産生する能力；及び／又はｃ）ストレッサーに曝露された線維芽細胞の存在下で培養さ
れてないＣＤ８ Ｔ細胞と比べて少ない所要量の共刺激分子で細胞傷害性を誘導する能力
が含まれる。そのような共刺激分子としては、ＣＤ８０；ＣＤ８６；ＣＤ４０；ＣＤ２８
の連結；ＩＬ－２；及び／又はＩＬ－１２が挙げられる。

Ｉ．線維芽細胞及びその集団による移植片対宿主病の処置
特定の実施形態において、本開示は、細胞療法、より詳細には、移植片対宿主病を刺激
する可能性を有する細胞要素を運ぶことができる、器官及び／又は細胞移植片の移植に関
する。具体的な実施形態において、本開示は、移植片対宿主病を予防するため、抑制する
ため、及び逆転させるための細胞療法の利用に関する。具体的な実施形態では、個体にお
ける移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を抑制するために、線維芽細胞を利用する。

本実施形態は、ＧＶＨＤを刺激する移植片におけるドナー細胞に対処する。特定の場合
において、これらのドナー細胞は、ドナーの細胞又は組織（例えば、幹細胞接種材料）に
存在するドナーＴリンパ球であって、効果的な免疫応答を開始するのに必要なドナーＴリ
ンパ球である。機能的な免疫系は、外来性のドナー由来のＴ細胞を拒絶することができる
が、レシピエントの免疫系が、様々な免疫除去剤の使用（化学療法及び／又は放射線療法
）によって損なわれているとき、そのレシピエントは、移植された細胞を拒絶できない。
特定の実施形態において、ドナーとレシピエントで異なる組織抗原は、主要及びマイナー
ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）であり、細胞表面上でのそれらの発現は、同種異系のＴ細胞の
活性化及び疾患の開始に不可欠である。

１つの実施形態において、線維芽細胞系列の細胞が、移植片対宿主反応の予防及び／又
は処置を必要とする個体に対する、移植片対宿主反応の予防及び／又は処置に利用される
。本開示の１つの実施形態において、線維芽細胞が、移植片（例えば、同種異系細胞移植
片、組織移植片又は器官移植片）のレシピエントに適した条件下において投与される。具
体的な場合において、そのような線維芽細胞は、ドナーのリンパ球がレシピエントの組織
に対する免疫学的反応を誘発するのを防ぐ。具体的な実施形態では、ドナーのリンパ球が
レシピエントの組織に対する免疫学的反応を誘発するのを防ぐために、同種異系皮膚線維
芽細胞が、同種異系細胞移植片のレシピエントに投与される。

１つの具体的な実施形態において、ＴＬＲ４アゴニスト（例えば、リポ多糖又はＨＭＢ
Ｇ－１）によって刺激された単球からのＴＮＦ－アルファの産生を抑制する能力について
線維芽細胞が選択される。それらの線維芽細胞は、樹状細胞の成熟を阻害する能力に関連
する１つ以上のマーカーの発現（例としてＩＬ－１０、ヒト絨毛性ゴナドトロピン及び／
又はＩＬ－２０の分泌が挙げられる）に基づいて単離され得る。

本発明は、同種異系線維芽細胞が、全身の免疫抑制を誘導することなく、慢性状態にお
いて炎症性サイトカインを減少させるというこれまで予期されなかった能力を教示する。
詳細には、本発明は、腫瘍に伴う悪液質などの炎症状態において、同種異系起源の線維芽
細胞の導入が、炎症の低減及び免疫学的パラメータの回復をもたらすことを教示する。

１つの具体的な実施形態において、同種異系線維芽細胞の投与は、造血幹細胞移植の状
況におけるＧＶＨＤを低減するために利用される。他の実施形態において、レシピエント
及び／又はドナーの線維芽細胞が、細胞移植片（例えば、骨髄、膵島、又は他の単一細胞
若しくは複合性の細胞移植片）の導入の前及び／又は後に投与される。

線維芽細胞は、種々の組織に由来し得る。１つの実施形態において、単離された細胞は
、ＳＳＥＡ－１マーカーをほとんど又はまったく発現しない。本発明の有用な細胞は、正
常にはヒト間葉系幹細胞上に見られるが正常にはヒト幹細胞上には見られない細胞表面抗
原も高レベルで発現し、それらは、ＣＤ５６（９９．６％）、アミノペプチダーゼＮ、Ｃ
Ｄ４４（９９．７％）ヒアルロン酸結合受容体、ＣＤ４９ｂ（９９．８％）コラーゲン／
ラミニン結合インテグリンアルファ２、及びＣＤ１０５（９７％）エンドグリンを含む。
線維芽細胞培養物に胚性幹細胞マーカーと固有マーカーの両方が存在することは、本明細
書中に記載されるように生育され、増やされた線維芽細胞が、新規クラスの再生細胞であ
ることを示唆する。

本開示のいくつかの実施形態において、培養物中の細胞の少なくとも約９０％、９１％
、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％が、
ＣＤ５６を発現する。追加の実施形態において、培養物中の細胞の少なくとも約９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００
％が、ＣＤ３７を発現する。本発明のいくつかの実施形態において、培養物中の細胞の少
なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％
、９９％又は１００％の範囲が、ＣＤ１２７を発現する。本発明のさらなる実施形態にお
いて、培養物中の細胞の少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％
、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の範囲が、ＣＤ１２７を発現する。

本開示の１つの特定の実施形態において、再生細胞は、連続培養において未分化な状態
で無期限に増やされ得る線維芽細胞である。用語「未分化な」とは、特殊化した細胞型に
なっていない細胞のことを指す。「栄養培地」は、増殖を促進する栄養分を含む、細胞を
培養するための培地である。栄養培地は、以下のうちのいずれかを適切な組み合わせで含
み得る：等張食塩水、緩衝剤、アミノ酸、抗生物質、血清又は血清代替物、及び外から加
えられる因子。羊水線維芽細胞は、所望のとおりの期間にわたって未分化な状態で生育さ
れ得（及び必要に応じて、上に記載されたように保存され得）、次いで、分化した状態に
進むのを可能にするある特定の条件下で培養され得る。いったん十分な細胞塊が得られた
ら、細胞は、インビトロ及びインビボにおいて、内胚葉、中胚葉及び外胚葉に由来する組
織に分化できることが知られている。この未分化細胞から特定の細胞型又は組織型への計
画された特殊な分化は、「有向分化」と呼ばれる。抗炎症性の表現型への有向分化を用い
て再生細胞から調製され得る例示的な細胞型としては、脂肪細胞、心筋細胞、上皮細胞、
肝臓細胞、脳細胞、血液細胞、ニューロン、グリア細胞、膵臓細胞などを含む群から選択
される細胞と関連するＣＤ１０５を有する細胞の誘導が挙げられるがこれに限定されない
。

ある特定の実施形態において、ＧＶＨＤの処置又は予防を必要とする個体に治療有効量
の線維芽細胞を送達することによって、ＧＶＨＤを処置又は予防する方法が存在する。そ
の方法は、いくつかの場合において、線維芽細胞集団を得る工程；及びその線維芽細胞集
団をエクスビボで拡大する工程も含み得る。その個体は、有害な免疫反応を誘発し得る治
療（例えば、免疫療法）を受けてきた、受けている、及び／又は受けることになっている
ので、ＧＶＨＤの処置又は予防を必要とし得る。線維芽細胞の投与は、ＧＶＨＤの発症を
遅延させ得、かつ／又はその重症度を低下させ得る。

Ｊ．線維芽細胞単球混合物の投与による梗塞後リモデリングの処置
いくつかの実施形態において、線維芽細胞の存在下において培養された自家単球の投与
による、梗塞後の心臓損傷の修復に有用な組成物、処置及びプロトコルが存在する。１つ
の実施形態において、プロスタグランジン－Ｅ２の存在下における線維芽細胞と単球との
共培養は、心筋再生を誘導でき、病的な梗塞後リモデリングを抑制できる、細胞組成物を
生成する。

本開示は、例えばＰＧＥ－２の存在下において、線維芽細胞を単球とともに培養するこ
とによって得られる、成長因子産生と抗炎症効果との予想外の相乗作用を包含する。この
培養によって付与される特性は、動物モデルにおいて心筋再生を誘導し、梗塞後の心臓容
積を保つ。

本開示の１つの実施形態では、様々な濃度のＰＧＥ－２によって、単球と線維芽細胞と
の共同培養物に、心筋再生に有益な相乗的な量のＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ－ＢＢ及びＥＧＦを
産生する能力が付与される。別の実施形態において、本開示は、線維芽細胞と相乗作用を
示し、その線維芽細胞に心筋再生を誘導する能力を付与する、Ｍ２細胞の治療的集団を作
製する手段を提供する。

本開示は、Ｍ２細胞が生成されるのを可能にする、単球と線維芽細胞との共培養物の投
与を包含するが、しかしながら、いくつかの場合では、ＰＧＥ２が、最適な生成のために
利用される。線維芽細胞と単球との共培養された細胞の使用は、Ｍ２細胞が適用されてい
る領域に適用され得る。例えば、機構的に、Ｍ２マクロファージは、血管新生の刺激によ
る梗塞後の心筋傷害の低減と関連することが示されており、これは、参照により援用され
る（Ｄａｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。Ｍ２刺激性サイトカインであるインターロ
イキン１３が遺伝的に欠損したマウスにおける洗練された研究は、Ｍ２マクロファージが
欠損したマウスでは、梗塞のサイズが大きいこと及び梗塞後の治癒が低減することを示し
た（Ｈｏｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。これらの結果は、ＣＳＦ－１受容体の
シグナル伝達経路の欠損によってＭ２マクロファージの枯渇が達成された別の研究でも再
現された（Ｌｅｂｌｏｎｄ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。梗塞後の心不全を増悪する処置
は、Ｍ２マクロファージの蓄積を減少させる（Ｗａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。さら
に、治癒及び血管新生の加速を誘導する治療は、Ｍ２マクロファージの生成を刺激すると
多くの状況において示された（Ｂｅｎ－Ｍｏｒｄｅｃｈａｉ ｅｔ ａｌ．，２０１３；
Ｈａｌｌ ａｎｄ Ｗｅｉ，２０１４；Ｃｏｕｒｔｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｗ
ｅｉｒａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｒａｆａｔｉａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１
４；Ｄｉ Ｆｉｌｉｐｐｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，２０１
５；Ｓｉｎｇｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｙａｂｌｕｃｈａｎｓｋｉｙ ｅｔ ａｌ
．，２０１６；Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｇｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．，２０１
６）。例えば、間葉系幹細胞の投与は、Ｍ１マクロファージの減少及びＭ２マクロファー
ジの増加を誘導すると示され、これは、血管新生の刺激による梗塞後の回復の改善と相関
する（Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。機構
的に、Ｍ２マクロファージは、炎症を抑制し、血管新生を刺激すると知られており（Ｂａ
ｒｂａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１５）、これは、梗塞後の治癒の重要な態様である。さら
に、Ｍ２マクロファージは、Ｍ１マクロファージの形成を阻害する。Ｍ１マクロファージ
は、病的な心臓リモデリング及び心不全への進行に関連するので、このことは、重要であ
る（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｈｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。したがって、
本開示の１つの態様において、Ｍ２マクロファージがインビトロで生成され、心筋梗塞に
罹患している患者に全身的又は局所的に投与される。

いくつかの実施形態において、心筋梗塞症の後の個体を処置する方法が存在し、その方
法は、ａ）線維芽細胞集団を得る工程；ｂ）その線維芽細胞集団を単球（処置される個体
に対して、自家、同種異系又は異種）とともに、それらの線維芽細胞及び／又は単球に心
臓修復特性を付与するのに十分な期間にわたって及び付与するのに十分な濃度で培養し、
それにより、心臓修復特性を有する線維芽細胞及び／又は単球の集団を作製する工程；及
びｃ）その集団をその個体に投与する工程を含む。それらの線維芽細胞は、自家起源、同
種異系起源又は異種起源から入手され得る。それらの線維芽細胞は、任意の種類であって
よく、それらとしては、ａ）脂肪線維芽細胞；ｂ）皮膚線維芽細胞；ｃ）臍帯線維芽細胞
；ｄ）包皮線維芽細胞；ｅ）胎盤線維芽細胞；ｆ）大網線維芽細胞；及びｇ）それらの組
み合わせからなる群より選択される組織に由来する線維芽細胞が挙げられる。

そのような方法において、単球は、プラスチックへの接着によって入手され得る。それ
らの単球は、フローサイトメトリー精製（マーカーＣＤ１４に対するものを含む）によっ
て入手され得る。具体的な実施形態において、それらの単球は、マーカーＣＤ１４に対す
る磁気活性化選別（ＭＡＣＳ）精製によって入手される。

線維芽細胞と単球とが共培養されるとき、それらは、任意の好適な条件及び任意の好適
な比で共培養され得る。具体的な実施形態において、それらの線維芽細胞及び単球は、お
よそ１：１、２：１、５：１、１０：１、５０：１、１００：１、１：２、１：５、１：
１０、１：５０、１：１００などの比で培養される。線維芽細胞及び単球は、ＰＧＥ２の
存在下において、およそ１～７２、１～６０、１～５０、１～４８、１～３６、１～２４
、１～１９、１～１８、１～１７、１～１６、１～１５、１～１４、１～１３、１～１２
、１～１１、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１
～２、２～７２、２～６０、２～５０、２～４８、２～３６、２～２４、２～１９、２～
１８、２～１７、２～１６、２～１５、２～１４、２～１３、２～１２、２～１１、２～
１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、２～３、６～７２、６～６０
、６～５０、６～４８、６～３６、６～２４、６～１８、６～１２、６～１０、１０～７
２、１０～６０、１０～５０、１０～４８、１０～３６、１０～２４、１０～１８、１０
～１２、１８～７２、１８～６０、１８～５０、１８～４８、１８～３６、１８～２４、
１８～２０、２０～７２、２０～６０、２０～５０、２０～４０、２０～３０、２４～７
２、２４～４８、２４～３６、２４～２８、３０～７２、３０～６０、３０～４８、３０
～３６、４８～７２、４８～６０、４８～５０、５０～７２、５０～６０又は６０～７２
時間にわたって培養され得る。線維芽細胞及び単球は、ＰＧＥ２の存在下において、およ
そ１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、
１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３
０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３
、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、
５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７
０、７１、７２時間又はそれ以上にわたって培養され得る。

培養物中のプロスタグランジンＥ２の量は、およそ１～１００００、１～７５００、１
～５０００、１～１０００、１～５００、１～２５０、１～１００、１～５０、５０～１
００００、５０～７５００、５０～５０００、５０～１０００、５０～５００、５０～１
００、１００～１００００、１００～７５００、１００～５０００、１００～２５００、
１００～１０００、１００～５００、５００～１００００、５００～７５００、５００～
５０００、５００～２５００、５００～１０００、５００～７５０、７５０～１００００
、７５０～７５００、７５０～５０００、７５０～２５００、７５０～２０００、７５０
～１０００、１０００～１００００、１０００～７５００、１０００～５０００、１００
０～２５００、２５００～１００００、２５００～５０００、５０００～１００００又は
７５００～１００００ナノグラム／ｍｌであり得る。培養物中のプロスタグランジンＥ２
の量は、およそ１、５０、７５、１００、２５０、５００、１０００、１２５０、１５０
０、１７５０、２０００、２５００、２７５０、３０００、３２５０、３５００、３７５
０、４０００、４２５０、４５００、４７５０、５０００、５２５０、５５００、５７５
０、６０００、６２５０、６５００、６７５０、７０００、７２５０、７５００、７７５
０、８０００、８２５０、８５００、８７５０、９０００、９２５０、９５０、９７５０
又は１００００ナノグラム／ｍｌ又はそれ以上であり得る。

具体的な実施形態において、単球は、線維芽細胞との組織培養後にアルギナーゼ活性を
発現する。

単球と線維芽細胞との共培養後に、それらは、梗塞の約３～１５、３～１４、３～１３
、３～１２、３～１１、３～１０、３～９、３～８、３～７、３～６、３～５、３～４、
４～１５、４～１４、４～１３、４～１２、４～１１、４～１０、４～９、４～８、４～
７、４～６、４～５、５～１５、５～１４、５～１３、５～１２、５～１１、５～１０、
５～９、５～８、５～７、５～６、６～１５、６～１４、６～１３、６～１２、６～１１
、６～１０、６～９、６～８、６～９、７～１５、７～１４、７～１３、７～１２、７～
１１、７～１０、７～９、７～８、８～１５、８～１４、８～１３、８～１２、８～１１
、８～１０、８～９、９～１５、９～１４、９～１３、９～１２、９～１１、９～１０、
１０～１５、１０～１４、１０～１３、１０～１２、１０～１１、１１～１５、１１～１
４、１１～１３、１１～１２、１２～１５、１２～１４、１２～１３、１３～１５、１３
～１４又は１４～１５日後の個体に投与され得る。いくつかの場合では、単球と線維芽細
胞との共培養物は、梗塞後３日未満に、例えば、１～２日後に、送達される。

共培養された単球と線維芽細胞との組み合わせが、心筋内を含む任意の好適な経路によ
って投与され得る。それは、梗塞に関係のある動脈に、例えばバルーンカテーテルによっ
て投与され得る。具体的な場合において、培養された単球と線維芽細胞との組み合わせは
、冠状静脈洞へのバルーン談合を用いて逆行性に投与される。

Ｋ．線維芽細胞の投与による多発性硬化症の処置
この実施形態において、個体において多発性硬化症の発症を阻害できる免疫学的プロセ
スを刺激する手段が存在する。本開示の１つの特定の実施形態において、多発性硬化症を
阻害するための線維芽細胞の投与（静脈内投与を含む）、及び／又は多発性硬化症におけ
る再生の刺激が存在する。他の特定の処置方法は、ミエリン塩基性タンパク質及びその抗
原性フラグメントに特異的な制御性Ｔ細胞を増強するために、線維芽細胞に続く低用量で
のインターロイキン－２の投与を含む。

本開示の実施形態は、多発性硬化症を処置する方法を含み、その方法は、それを必要と
する個体に線維芽細胞を投与する工程を含む。その投与は、例えば静脈内であってもよい
し、そうでなくてもよい。具体的な実施形態において、線維芽細胞は、ａ）大網；ｂ）皮
膚；ｃ）臍帯血；ｄ）胎盤；ｅ）ワルトン膠様質；ｆ）末梢血；又はｇ）脂肪組織に由来
する。具体的な場合において、線維芽細胞は、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ９０及びそれ
らの組み合わせからなる群より選択されるマーカーを発現する。線維芽細胞は、ＣＤ１４
、ＣＤ３４、ＣＤ４５及びそれらの組み合わせからなる群より選択される１つ以上のマー
カーの発現を欠き得る。線維芽細胞は、プラスチックに接着性であり得る。線維芽細胞は
、個体に対して自家、同種異系又は異種であり得る。線維芽細胞は、進行中の混合リンパ
球反応に加えられると、混合リンパ球反応を＞５０％阻害する能力を有し得る。上記方法
の具体的な実施形態において、応答リンパ球の増殖が評価される。応答リンパ球からのイ
ンターフェロンガンマの産生が評価され得る。

特定の実施形態において、線維芽細胞は、１用量あたり（例えば、１注入あたり）約１
０，０００～２，０００，０００／ｋｇの濃度で投与される。その用量は、例えば、１用
量あたり１０，０００～２，０００，０００；１０，０００～１，０００，０００；１０
，０００～５００，０００；１０，０００～２５０，０００；１０，０００～１００，０
００；１００，０００～２，０００，０００；１００，０００～１，０００，０００；１
００，０００～５００，０００；１００，０００～２５０，０００；２５０，０００～２
，０００，０００；２５０，０００～１，０００，０００；２５０，０００～５００，０
００；５００，０００～２，０００，０００；又は５００，０００～１，０００，０００
／ｋｇであり得る。線維芽細胞は、１用量あたり１０，０００／ｋｇ；１用量あたり５０
，０００／ｋｇ；１用量あたり１００，０００／ｋｇ；１用量あたり５００，０００／ｋ
ｇ；１用量あたり１，０００，０００／ｋｇ；又は１用量あたり２，０００，０００／ｋ
ｇの濃度で投与され得る。

具体的な実施形態において、制御性Ｔ細胞（例えば、１用量あたり１０，０００～２，
０００，０００；１０，０００～１，０００，０００；１０，０００～５００，０００；
１０，０００～２５０，０００；１０，０００～１００，０００；１００，０００～２，
０００，０００；１００，０００～１，０００，０００；１００，０００～５００，００
０；１００，０００～２５０，０００；２５０，０００～２，０００，０００；２５０，
０００～１，０００，０００；２５０，０００～５００，０００；５００，０００～２，
０００，０００；又は５００，０００～１，０００，０００／ｋｇ）が、線維芽細胞とと
もに投与される。具体的な場合において、線維芽細胞は、例えば、９６ウェルプレートに
おいて１ウェルあたり１００，０００細胞の濃度で培養されたとき、少なくとも１０、２
０、５０、１００ｐｇ／ｍｌ又はそれ以上のＴＧＦ－ベータを産生することができる。

多発性硬化症は、神経系組織に対するＴ細胞の攻撃に関連する場合もあるし、関連しな
い場合もある。いくつかの場合では、例えば線維芽細胞が同種異系又は異種であるとき、
寛容の発生を高めるために、ラパマイシンが線維芽細胞とともに投与される。ある特定の
実施形態では、例えば線維芽細胞が同種異系又は異種であるとき、寛容の発生を高めるた
めに、抗ＣＤ３抗体が線維芽細胞とともに投与される。ある特定の実施形態では、例えば
線維芽細胞が同種異系又は異種であるとき、寛容の発生を高めるために、抗ＣＤ５２抗体
が線維芽細胞とともに投与される。

本開示の１つの実施形態において、多発性硬化症の病理に関与する又は少なくとも関係
する自己反応性Ｔ細胞のレベル及び／又は活性を低下させる手段としての線維芽細胞の投
与が存在する。

本開示は、制御性Ｔ細胞数の増加をインビボで刺激することによって自己反応性Ｔ細胞
を減少させることができる線維芽細胞の様々な集団を提供する。これらの細胞は、自己免
疫攻撃から身体を防御する免疫系の必須の構成要素である。これは、新生仔期に胸腺摘除
されたマウスが全身性自己免疫に罹患し、そのマウスがＣＤ４細胞の移入によってレスキ
ューされたという初期の研究によって説明される。本発明の１つの実施形態によると、制
御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）の表現型は、ＩＬ－２受容体であるＣＤ２５を有すると記載される。
末梢血は、制御性Ｔの表現型（「Ｔｒｅｇ」）を発現する、すなわち、ＣＤ４抗原とＣＤ
２５抗原の両方が陽性である、Ｔ細胞リンパ球の小さい集団を含む。本開示の方法の実施
において、Ｔｒｅｇ細胞のいくつかのサブセットが定義される。制御性細胞の１つのサブ
セットは、胸腺において発生する。胸腺由来のＴｒｅｇ細胞は、細胞間接触を必要とする
、サイトカインと無関係な機構によって機能する。それらは、自己寛容の誘導及び維持並
びに自己免疫の予防に必須である。これらの制御性細胞は、胸腺での除去を免れた自己反
応性Ｔ細胞の活性化及び増殖を防ぐか、又は胸腺外の抗原を認識するので、それらは、ホ
メオスタシス及び免疫制御、並びに自己免疫の発生からの宿主の防御にとって重要である
。したがって、免疫制御性ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞は、「プロフェッショナルサプレッ
サー細胞」と称されることが多い。

本発明の１つの実施形態において、内因性のＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔｒｅｇ細胞の産生の
刺激は、線維芽細胞を静脈内に投与することによって達成される。天然に存在するＴｒｅ
ｇは、胸腺において高親和性リガンドに対してポジティブ選択され、自己抗原に対する免
疫寛容の確立及び維持において重要な役割を果たすと示された、細胞の独特の細胞集団で
あることが知られている。これらの細胞の発生及び／又は機能の欠陥は、ヒト及び先天性
の又は誘導された自己免疫の様々な動物モデルにおいて重篤な自己免疫に関連した。

本開示の１つの実施形態において、線維芽細胞の静脈内投与の結果として生じる、免疫
寛容誘発サイトカインの増強によって生成されたＴｒｅｇ細胞は、細胞間接触によって直
接的に、又は可溶性因子を介して間接的に、免疫寛容誘発効果を示す。理論に拘束される
ことを望むものではないが、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）におけるＩＬ－２発現の阻
止、Ｔｅｆｆ細胞の物理的排除、ＣＴＬＡ－４／Ｂ７軸による免疫寛容原性樹状細胞（Ｄ
Ｃ）の誘導、並びにＴＧＦ－ベータ及びＩＬ－１０を介したＴｅｆｆ細胞の阻害が、現在
までに関係していると見なされている機構の一部である。また、ＣＴＬＡ－４／ＣＤ８０
を介したＴｅｆｆ細胞への逆シグナル伝達が、Ｔｒｅｇ細胞によるそれらの阻害において
重要な役割を果たすことも示されている。同様に、Ｔｒｅｇ細胞上のＣＴＬＡ－４とＤＣ
上のＣＤ８０との相互作用が、逆シグナル伝達、及びトリプトファン代謝の制御を介した
寛容に関わるインドールアミンジオキシゲナーゼ酵素のアップレギュレーションをもたら
し得る。

本発明の様々な実施形態に従って使用されるのに適切な線維芽細胞の用量は、数多くの
因子に依存する。それは、種々の状況に対してかなり異なり得る。一次療法及び補助的療
法のために投与される線維芽細胞の最適な用量を決定するパラメータは、通常、以下のう
ちのいくつか又はすべてを含む：処置される疾患及びそのステージ；被験体の種、健康状
態、性別、齢、体重及び代謝速度；被験体の免疫能；施される他の治療；及び被験体の履
歴又は遺伝子型から予想される潜在的な合併症。それらのパラメータには、線維芽細胞が
、同系であるのか、自家であるのか、同種異系であるのか、異種であるのか；それらの効
力（比活性）；線維芽細胞が有効になるために標的化されなければならない部位及び／又
は分布；並びにそのような部位の特徴（例えば、線維芽細胞への到達性及び／又は線維芽
細胞の生着）も含まれ得る。さらなるパラメータとしては、線維芽細胞と他の因子（例え
ば、成長因子及びサイトカイン）との同時投与が挙げられる。所与の状況における最適な
用量は、細胞が製剤化される方法、それらが投与される方法、及び投与後に細胞が標的部
位に局在する程度も考慮に入れる。最後に、最適な投与の決定は、必然的に、有益な最大
効果の閾値よりも低くなく、線維芽細胞の用量に関連する悪影響が用量増加の利点を上回
る閾値よりも高くない、有効量を提供する。

いくつかの実施形態に対する線維芽細胞の最適な用量は、同種異系間葉系幹細胞に対し
て用いられる用量の範囲内である。線維芽細胞のかなり純粋な調製物の場合、様々な実施
形態における最適な用量は、１投与あたり１０^４～１０^８線維芽細胞／ｋｇレシピエント
質量という範囲である。いくつかの実施形態において、１投与あたりの最適な用量は、１
０^５～１０^７線維芽細胞／ｋｇである。多くの実施形態において、１投与あたりの最適な
用量は、５×１０^５～５×１０^６線維芽細胞／ｋｇである。参考として、前述におけるよ
り高い用量は、同種異系間葉系幹細胞の移植において用いられる有核細胞の用量に類似し
ている。単回用量は、一度にすべて送達され得るか、分割して送達され得るか、又はある
時間にわたって持続的に送達され得ることが認識されるべきである。全用量が、単一の箇
所に送達されてもよいし、分割していくつかの箇所に広げられてもよい。ヒト被験体は、
一般に実験動物よりも長く処置されることに注意されたいが、処置は一般に、疾患の経過
及び処置の有効性に比例した長さを有する。当業者は、ヒトにとって適切な用量を決定す
るためにヒト及び／又は動物（例えば、ラット、マウス、非ヒト霊長類など）において行
われた他の手順の結果を用いてこのことを考慮に入れる。これらの考慮すべき事柄に基づ
き、本開示及び従来技術によって提供されるガイダンスを考慮に入れて、そのような決定
によって、当業者が過度の実験を行うことなくそれを行うことが可能となる。最初の投与
及びさらなる投与又は連続投与に対する好適なレジメンは、すべて同じであってもよいし
、定まっていなくてもよい。適切なレジメンは、本開示、本明細書に引用された書類及び
当該分野の知識から、当業者が確かめることができる。

本開示の１つの実施形態において、線維芽細胞は、多発性硬化症に罹患している患者の
静脈内に、同じ人物（自家）又は異なる人物（同種異系）から得られた制御性Ｔ細胞とと
もに投与される。Ｔｒｅｇ細胞は、様々な研究室において公知であって日常的に用いられ
ている手段によって生成され得る。任意の細胞単離方法が、本教示に従って用いられ得る
。末梢血から制御性細胞を単離する１つの例示的な方法は、勾配（例えば、Ｐｅｒｃｏｌ
ｌ勾配）あり又はなしでの遠心分離を含む。この手法では、密度に基づいて細胞を分離す
る。使用され得る別の例示的な方法としては、例えば、細胞表面上の分子（例えば、ＣＤ
４、ＣＤ８、ＣＤ２０など）を認識し、結合する抗体として、表面又は磁気ビーズに固定
化された分子をそれぞれ用いる、パニング及び免疫磁気単離が挙げられる。表面に固定化
された又は磁気ビーズに結合体化された分子は、特定の細胞型の細胞特異的表面マーカー
の１つ以上を認識し、結合する。１つ以上の細胞表面マーカーを有する細胞は、固定化さ
れた分子によって結合されるか、又はビーズに結合体化された細胞を磁場に曝露すること
によって結合され、他の任意の細胞が洗浄除去される。ポジティブ選択手順では、目的の
細胞型が保持され、ネガティブ選択手順では、目的の細胞型が除かれる。本教示に従って
使用され得る別の単離手順としては、蛍光励起細胞分取（ＦＡＣＳ）が挙げられる。蛍光
タグを有する抗体が、目的の細胞に結合するために使用され得る。それらの抗体は、細胞
表面分子（例えば、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０など）に結合し、次いで、ＦＡＣＳ選別機
が、観察される蛍光に基づいて細胞を選別し、回収し得る。次いで、ある特定の蛍光を示
す細胞が、単離され得る。免疫制御性細胞の単離の後、それらの細胞は、さらに培養され
得、拡大され得、かつ／又は刺激され得る。単離された免疫制御性細胞のエクスビボでの
拡大には、例えば、制御性Ｔ細胞のプロトコルが含まれる：細胞が、ＩＬ－２の高濃度、
ＩＬ－１０、及び樹状細胞による刺激／教育の存在下において、ＣＤ３／ＣＤ２８刺激（
例えば、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体）を用いて培養される。本明細書中に記載され
るような（すなわち、抗原提示細胞を用いた）エクスビボでの細胞の拡大はまた、抗原特
異的な免疫制御性細胞を選択的に濃縮し得る。それらの免疫制御性細胞は、単離及びエク
スビボ操作の前にこれらの細胞の数を増加させるためにインビボにおいても拡大され得る
ことが認識されるだろう。

Ｌ．線維芽細胞によって媒介される自己免疫処置
この実施形態は、誘導性の様式又は恒常的な様式で目的の抗原を発現するように線維芽
細胞を遺伝的に改変することによって抗原特異的寛容を誘導する手段に関する。当該分野
の以前の研究は、非免疫原性の経路（例えば、経口的、鼻腔内、又は未熟樹状細胞を用い
た送達）における自己抗原の投与を含み、これらは、臨床的有効性のいくつかの徴候を示
した。しかしながら、その効果は、ヒトにおいて治療の成功を可能にするほど十分強くな
かった。本実施形態では、自己免疫などに対する処置としてユニバーサルドナー抗原特異
的免疫寛容誘発ワクチンを作製するための、制御された様式で自己抗原の過剰発現を誘導
する線維芽細胞の遺伝子改変が存在する。線維芽細胞は、これまで知られていなかった、
線維芽細胞のａ）制御性Ｔ細胞を誘導する能力；ｂ）ヘルパーＴ細胞、傷害性Ｔ細胞及び
ＮＫ細胞（例えば）を抑制する能力；及びｃ）抗原提示細胞が抗原提示のプロセスを行う
能力を低下させる阻害性プロセスを刺激する能力の発見に基づいて、抗原特異的寛容の誘
導の基礎として利用される。本開示の１つの実施形態において、線維芽細胞が同種異系の
様式で利用されることを考えると、寛容の誘導は、主に抗原提示の間接的経路によって生
じ得、これは、免疫調節因子の状況において免疫寛容誘発（ｔｏｌｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ
）の影響を受けやすい。

免疫寛容は、免疫系の重要な特長であり、それは、身体に属する抗原を選択的に無視し
つつ、病理学的脅威の認識及び排除を可能にする。免疫寛容の機構を理解すること、及び
このプロセスを誘導する能力を有することは、米国の人口のおよそ８％が罹患する自己免
疫状態に大きな影響を及ぼし得る。

主要な自己免疫疾患としては、関節リウマチ、多発性硬化症、１型糖尿病、全身性エリ
テマトーデス及び炎症性腸疾患が挙げられる。従来から、自己免疫状態は、炎症の非特異
的阻害剤（例えば、ステロイド）、並びに免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、５－ア
ザトリオプリン及びメトトレキサート）で処置される。これらのアプローチは、免疫機能
を包括的に抑制し、数多くの望ましくない副作用を有する。残念なことに、自己免疫を有
する患者において観察された生活の質の実質的な低下を考えると、自己免疫の症状の軽減
の可能性は、日和見感染及び新形成への素因の増加などの副作用を上回る。抗ＴＮＦ－ア
ルファ抗体などの「生物学的治療」の導入は、予後をいくらか改善したが、その介入の非
特異的性質に起因して、なおも副作用が存在する。にもかかわらず、ＴＮＦ－アルファ阻
害剤の販売は、かなり成功している：Ｈｕｍｉｒａ（＄９．２Ｂ；２０１２）、Ｅｎｂｒ
ｅｌ（＄７．８Ｂ；２０１１）、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（＄６．７Ｂ；２０１１）。これらの
アプローチは、自己免疫を「治癒」させず、単に総合的症状を軽減するだけである。

自己免疫を「治癒」させるためには、選択的な様式で、自己抗原を認識するＴ細胞クロ
ーンを除去／不活性化することが不可欠である。これは、寛容誘導の天然のプロセスを再
現することに似ているかもしれない。胸腺の除去は、自己反応性Ｔ細胞の選択的な削除に
関与すると特定された元のプロセスであったが、新生児期に限定されない数多くの冗長な
機構が存在することが明らかになった。詳細には、「鏡像」免疫系が、従来の免疫系と共
存すると実証された。従来のＴ細胞は、自己抗原によって活性化されて胸腺で死に、活性
化されていない従来のＴ細胞は生存シグナルを受け取る（Ｒａｍｓｄｅｌｌ ａｎｄ Ｆ
ｏｗｌｋｅｓ，１９９０）。「鏡像」である制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞は、実際には、自
己抗原との遭遇によって生きるように選択され、自己抗原に結合しないＴｒｅｇ細胞が、
除去される（Ａｐｏｓｔｏｌｏｕ ｅｔ ａｌ．，２００２；Ａｓｃｈｅｎｂｒｅｎｎｅ
ｒ ｅｔ ａｌ．，２００７）。したがって、免疫系による自己－非自己の識別は、Ｔｒ
ｅｇ細胞の生成を促進しつつ、自己反応性Ｔ細胞を枯渇させる自己抗原に部分的に基づい
て生じる。抗原特異的免疫寛容誘発ワクチンの開発にとって重要な点は、成体の生涯にわ
たって末梢において、自己反応性Ｔ細胞は、危険信号の非存在下での自己抗原の提示によ
って「アネルギー化」され、自己反応性Ｔｒｅｇが自己抗原に応答して生成されるという
ことである。胸腺におけるＴ細胞除去のプロセスは、Ｔ細胞アネルギーの誘導と異なり、
胸腺におけるＴｒｅｇの生成は、末梢で誘導されたＴｒｅｇと比べて異なるタイプのＴｒ
ｅｇを生じるが、多くの態様において、成体の免疫寛容誘発の最終結果は、新生児期に生
じるものと似ている。本開示の１つの実施形態では、線維芽細胞に自己抗原をトランスフ
ェクトし、前記トランスフェクトされた線維芽細胞を、そのような抗原に対して免疫寛容
を生じる様式で投与する。線維芽細胞の投与は、制御性Ｔ細胞の生成を誘導するため、及
び自己反応性Ｔ細胞の活性化を阻害するために行われる。これは、特に、自己抗原が十分
に定義された自己免疫性の状態において妥当である。

本開示は、自己抗原をトランスフェクトされた線維芽細胞の投与によって、免疫寛容誘
発の天然のプロセスを再現しようとするものである。例えば、妊娠、癌及び経口寛容など
の状況では成体においても免疫寛容誘発が生じることが知られている。本発明は、線維芽
細胞を免疫寛容誘発メディエーターとして改変するために、これらの状況において生じる
分子、細胞及びプロセスの利用を教示する。

妊娠の状況では、胎児抗原を認識する母体のＴ細胞クローンの選択的な不活性化が、種
々の機構（胎児細胞上及び胎盤細胞上でのＦａｓＬの発現（Ｖａｃｃｈｉｏ ａｎｄ Ｈ
ｏｄｅｓ，２００５）、ＰＤ１－Ｌの状況における抗原提示（Ｄ’Ａｄｄｉｏ ｅｔ ａ
ｌ．，２０１１）及びＩＬＴ４などの免疫阻害性受容体とのＨＬＡ－Ｇの相互作用（Ｋｕ
ｒｏｋｉ ａｎｄ Ｍａｅｎａｋａ，２００７）を含む）を介して生じることが研究によ
って実証された。したがって、本発明は、ＦａｓＬなどの死誘導分子、ＰＤ－Ｌ１などの
共阻害性分子及びＩＬＴ４などの免疫調節分子と組み合わせた自己抗原による線維芽細胞
のコトランスフェクションを教示する。

妊娠中、「免疫寛容誘発の抗原提示」は、抗原提示の間接的な経路によってのみ生じる
（Ｅｒｌｅｂａｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００７）。妊娠中の選択的な免疫寛容誘発の
他の経路としては、妊娠の成功に必須であると実証されたＴｒｅｇ細胞の刺激が挙げられ
る（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。本開示は、１つの実施形態において、線維芽
細胞から抗原提示細胞を作製するために、ＭＨＣ又はＭＨＣ様分子をトランスフェクトす
ることによる線維芽細胞の改変に関し、ここで、前記抗原提示細胞は、治療的に十分な濃
度及び頻度で宿主に投与されたとき、抗原特異的寛容を誘導できる。

癌の状況では、他の抗原に対する特異性を有するＴ細胞を温存しつつ、腫瘍特異的Ｔ細
胞を枯渇させることが、腫瘍自体又は腫瘍関連細胞によって実証された（Ｈａｒｉｍｏｔ
ｏ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，２００９；Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ
ａｌ．，２００８；Ｂａｉ ｅｔ ａｌ．，２００８）。これは、宿主が広く免疫適格性
になることを可能にしつつ、癌が「レパートリーの穴」を選択的に誘導できる機構である
。さらに、Ｔｒｅｇ細胞は、おそらく腫瘍免疫回避の「バックアップ」機構として、抗腫
瘍Ｔ細胞を積極的に抑制すると実証された（Ｊａｃｏｂｓ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｐ
ｅｄｒｏｚａ－Ｇｏｎｚａｌｅｚ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｄｏｎｋｏｒ ｅｔ ａｌ
．，２０１１）。臨床レベルでは、腫瘍が末梢Ｔ細胞の活性を阻害できることが、数多く
の研究において予後不良と関連した（Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅ，２００４；Ｗｈｉｔｅｓｉｄ
ｅ，１９９９；Ｒｅｉｃｈｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，２００２）。したがって、本発明の１
つの実施形態において、Ｔｒｅｇの生成を刺激する分子の利用、並びに生成されたＴｒｅ
ｇを拡大する分子の投与が、利用される。１つの実施形態において、Ｔｒｅｇの生成を増
加させるために、線維芽細胞にインターロイキン－２とともに自己抗原をトランスフェク
トする。他の実施形態において、インビボでのＴｒｅｇの増殖を増加させるために、イン
ターロイキン２が全身投与される。

線維芽細胞を改変するためのテンプレートとして本発明が利用する寛容の別の天然の例
は、経口寛容である。経口寛容は、経口摂取された抗原が、抗原特異的ＴＧＦ－ベータ産
生細胞（一部で「Ｔｈ３」と呼ばれる）（Ｆａｒｉａ ａｎｄ Ｗｅｉｎｅｒ，２００５
；Ｗｅｉｎｅｒ，２００１；Ｆｕｋａｕｒａ ｅｔ ａｌ．，１９９６）、並びにＴｒｅ
ｇ細胞（Ｐａｌａｍａｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｙａｍａｓｈｉｔａ ｅｔ ａ
ｌ．，２０１２）の産生を誘導するプロセスである。自己抗原コラーゲンＩＩ（Ｐａｒｋ
ｅｔ ａｌ．，２００９）を含む抗原の経口摂取は、特定の様式でＴ細胞応答とＢ細胞
応答の両方の阻害を誘導すると示された（Ｗｏｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｆａｒ
ｉａ ａｎｄ Ｗｅｉｎｅｒ，２００６）。制御性細胞の誘導並びにエフェクター細胞の
欠失／アネルギーは、免疫寛容誘発様式での抗原提示に関連するとみられる（Ｐａｒｋ
ｅｔ ａｌ．，２０１２）。自己抗原の経口投与による、ＲＡ（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ
ａｌ．，１９９３、多発性硬化症（Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００４）及びＩ型糖尿
病（Ｈａｎｎｉｎｅｎ ａｎｄ Ｈａｒｒｉｓｏｎ，２００４）の動物モデルにおける疾
患の緩解が報告された。さらに、臨床試験は、自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ（ｅ
ｉ ｅｔ ａｌ．，２００９）、自己免疫性ブドウ膜炎（Ｔｈｕｒａｕ ｅｔ ａｌ．，
１９９７）及び多発性硬化症（Ｗｅｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３））における経口
寛容の有効性のシグナルを示した。これらの天然の寛容条件のすべてにおいて、共通の分
子及び機構が作動しているようである。したがって、寛容を誘導する天然の手段は、寛容
誘導の生理学的条件に見られる分子に類似の分子を生成する免疫寛容誘発の潜在能力を有
する「ユニバーサルドナー」細胞の投与であり得る。いくつかの実施形態において、経口
寛容が、本発明の、自己抗原をトランスフェクトされた線維芽細胞とともに利用される。
例えば、１型糖尿病を有する患者を処置する場合、その患者には、ＧＡＤ６５などの糖尿
病特異的自己抗原をトランスフェクトされた線維芽細胞が投与され得る。さらに、その線
維芽細胞は、ＩＬ－１０などの免疫寛容誘発分子をトランスフェクトされてもよく、その
線維芽細胞が投与されるとき、免疫寛容誘発プロセスを増強するために、経口的に送達さ
れるＧＡＤ６５が利用され得る。別の実施形態において、本開示は、ＴＧＦ－ベータなど
の経口免疫寛容誘発に関連する分子と組み合わせた、自己抗原による線維芽細胞のトラン
スフェクションに関する。

いくつかの実施形態において、間葉系幹細胞の免疫調節活性に似せるために、線維芽細
胞は、生物学的に有効な分子をトランスフェクトされる。例えば、これらの細胞は、ＩＬ
－２受容体アルファ（ＣＤ２５）の阻害を通じてＴ細胞の活性化を抑制することが知られ
ている（Ｌｅ Ｂｌａｎｃ ｅｔ ａｌ．，２００４）。したがって、１つの実施形態に
おいて、Ｔ細胞が活性化されないようにＩＬ－２を「吸い上げる」ために、線維芽細胞は
、１つ以上の自己抗原並びにＩＬ－２受容体をトランスフェクトされる。他の実施形態に
おいて、分裂停止の誘導（Ｇｌｅｎｎｉｅ ｅｔ ａｌ．，２００５；Ｋｉｍ ｅｔ ａ
ｌ．，２００７）、直接的な（Ｚａｐｐｉａ ｅｔ ａｌ．，２００５）又は未熟ＤＣを
介した（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００８）Ｔ細胞アネルギーの誘導、活性化Ｔ細胞の
アポトーシスの刺激（ｌｕｍａｓ ｅｔ ａｌ．，２００５；Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．，２
０１０）、ＩＬ－２シグナル伝達の遮断及びＰＧＥ２産生の誘導（Ｒａｓｍｕｓｓｏｎ
ｅｔ ａｌ．，２００５；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，２００７；Ｅｎｇｌｉｓｈ ｅｔ ａｌ
．，２００９；Ｓｐａｇｇｉａｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００９；Ｙａｎｅｚ ｅｔ ａｌ
．，２０１０；Ｚａｆｒａｎｓｋａｙａ ｅｔ ａｌ．，２０１３）、ＴＧＦ－ベータの
誘導（Ｎａｓｅｆ ｅｔ ａｌ．，２００７）、ＨＬＡ－Ｇの産生（Ｍａｇａｔｔｉ ｅ
ｔ ａｏ．，２００８）、セリンプロテアーゼ阻害剤６の発現（Ｅｌ Ｈａｄｄａｄ ｔ
ａｌ．，２０１１）、一酸化窒素放出の刺激（Ｓａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００７；Ｏ
ｈ ｅｔ ａｌ．，２００７；Ｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００８）、インドールアミン２
，３デオキシゲナーゼの刺激（ＤｅｌａＲｏｓａ ｅｔ ａｌ．，２００９；Ｔｉｐｎｉ
ｓ ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｇｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｆｒａｎｃｏｉｓ ｅｔ
ａｌ．，２０１２）、アデノシンを生成するエクト酵素（例えば、ＣＤ３９及びＣＤ７
３）の発現（Ｓａｔｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１１；Ｓａｌｄｈａｎａ－Ａｒａｕｊ
ｏ ｅｔ ａｌ．，２０１１；Ｂａｒｒｙ ｅｔ ａｌ．，２００１）、ガレクチンの発
現（Ｘｕｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｇｉｅｓｅｋｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０）、ヘ
モキシゲナーゼ１の誘導（Ｃｈａｂａｎｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，２００７；Ｍｏｕｇｉａ
ｋａｋｏｓ ｅｔ ａｌ．，２０１１）、ＰＤ１経路の活性化（Ｘｕｅ ｅｔ ａｌ．，
２０１０；Ａｕｇｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，２００５；Ｓｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０
０８；Ｌｕｚ－Ｃｒａｗｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，２０１２）、Ｆａｓリガンドの発現（
Ａｋｉｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｇｕ ｅｔ ａｌ．，２０１３）、ＣＤ２０
０の発現（Ｎａｊａｒ ｅｔ ａｌ．，２０１２）、Ｔｈ２偏向（Ｂａｔｔｅｎ ｅｔ
ａｌ．，２００６；Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，２００９；Ｚａｎｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，２０
１０）、Ｔｈ１７分化の阻害（Ｋｏ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｒａｆｅｉ ｅｔ ａｌ
．，２００９；Ｔａｔａｒａ ｅｔ ａｌ．，２０１１；Ｄｕｆｆｙ ｅｔ ａｌ．，２
０１１；Ｌｕｚ－Ｃｒａｗｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，２０１３）、ＴＳＧ－６の発現（Ｋ
ｏｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３）、ＮＯＴＣＨ－１の発現（Ｄｅｌ Ｐａｐ ｅ ａｌ
．，２０１３），Ｔｒｅｇ細胞生成の刺激（Ｍａｃｃａｒｉｏ ｅｔ ａｌ．，２００５
；Ｐｒｅｖｏｓｔｏ ｅｔ ａｌ，２００７；Ｄｉ Ｉａｎｎｉ ｅｔ ａｌ．，２００
８；Ｃａｓｉｒａｇｈｉ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｂｏｕｍａｚａ ｅｔ ａｌ．，２
００９；Ｙｅ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｍａｄｅｃ ｅｔ ａｌ．，２００９；Ｍｅｌ
ｉｅｆ ｅｔ ａｌ．，２０１３）といった特性を線維芽細胞に付与するために、前記線
維芽細胞は、間葉系幹細胞の培養に使用される条件下で培養される。Ｔｒｅｇ生成の機構
は、直接的であり得るか、又はＤＣの調節を介し得る。本発明者らなどが、共刺激シグナ
ルの非存在下でのＴ細胞の活性化は、免疫抑制性のＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ（Ｔｒｅ
ｇ）細胞を生成すると報告している（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｉｃｈｉｍ
ｅｔ ａｌ．，２００３）。したがって、リンパ節における免疫の局所的な活性化は、
理論的には、ＭＳＣ投与後のＤＣにおける共刺激分子の低発現（これによりＴｒｅｇ生成
に傾き得る）に関連し得る。逆に、Ｔｒｅｇは、ＤＣをＤＣ２表現型で維持することに関
わっていることが知られている（Ｔｉｅｍｅｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００７）。実際
に、数多くの研究によって、ＭＳＣがＴｒｅｇ細胞を誘導する能力が実証された（Ｄｉ
Ｉａｎｎｉ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｃａｓｉｒａｇｈｉ ｅｔ ａｌ．，２００８；
Ｙｅ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｇｏｎｚａｌｅｚ－Ｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，２００９）
。

本開示の実施形態は、個体における自己免疫の処置方法に関し、その方法は、治療を必
要とする個体に、改変された線維芽細胞を投与する工程を含む。いくつかの場合において
、その方法は、ａ）線維芽細胞集団を得る工程；ｂ）改変された線維芽細胞を生成するた
めに、前記線維芽細胞集団に、目的の１つ以上の自己抗原（正常に身体に属する免疫系に
よって認識される分子実体）をトランスフェクトする工程；及びｃ）治療を必要とする個
体に前記改変された線維芽細胞を投与する工程を含む。具体的な場合において、その線維
芽細胞は、脂肪組織由来の接着細胞であり、それらの細胞には、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、
ＣＤ９０及びそれらの組み合わせからなる群より選択される１つ以上のマーカーを発現す
る細胞が含まれる。具体的な場合において、その線維芽細胞は、ＣＤ１４、ＣＤ３４、Ｃ
Ｄ４５及びそれらの組み合わせからなる群より選択される１つ以上のマーカーの発現を欠
く。少なくともいくつかの実施形態において、自己抗原は、ミエリン乏突起膠細胞タンパ
ク質；ｂ）ミエリン塩基性タンパク質；ｃ）コラーゲンＩＩ；ｄ）筋原線維タンパク質；
及びｅ）それらの組み合わせからなる群より選択される。トランスフェクトされる任意の
細胞が、プラスミドＤＮＡ又はウイルスベクター（例えば、レンチウイルス、レトロウイ
ルス又はアデノウイルス）を用いてトランスフェクトされ得る。具体的な実施形態におい
て、線維芽細胞は、ａ）脂肪；ｂ）大網；ｃ）骨髄；ｄ）胎盤；ｅ）臍帯；ｆ）皮膚；ｇ
）ワルトン膠様質；及びｈ）それらの組み合わせからなる組織起源の群から選択される。

１型糖尿病を処置する実施形態において、自己抗原は、インスリン、プロインスリン、
ＧＡＤ６５（グルタミン酸デカルボキシラーゼ）、ＩＡ－２（膵島抗原２；チロシンホス
ファターゼ）及びＺｎＴ８トランスポーター（インスリン分泌顆粒の膜上に局在するｚｉ
ｎｋトランスポーター８）からなる群より選択され得る。任意の自己抗原に由来する機能
的フラグメント、並びに免疫調節性ペプチドＤｉａＰｅｐ２７７（ｈｓｐ６０タンパク質
に由来）が利用され得、他のＨＳＰ６０由来ペプチドも、自己抗原として使用され得る。

多発性硬化症を処置する実施形態において、自己抗原は、ミエリン塩基性タンパク質（
ＭＢＰ）、ミエリン乏突起膠細胞タンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質（Ｐ
ＬＰ）及びそれらの組み合わせからなる群より選択され得る。自己抗原のフラグメントは
、トランスフェクションの目的で自己抗原として使用され得る。フラグメントの例として
は、ＢＰ_{１３－３２}、ＭＢＰ_{８３－９９}、ＭＢＰ_{１１１－１２９}、ＭＢＰ_{１４６－１７０}
、ＭＯＧ_１－２０、ＭＯＧ_{３５－５５}及びＰＬＰ_{１３９－１５４}が挙げられる。

ＩＩＩ．一般的な実施形態
免疫細胞への線維芽細胞（及び／又はある特定の作用物質）の曝露を含む方法は、いく
つかの場合において、共通のパラメータを共有し得る。そのようなパラメータの例は、下
記で述べられるが、実際には、１つ以上が適宜変更され得る。

個体に投与するための任意のタイプの細胞の量は、処置される疾患のタイプ、その疾患
の重症度及びステージ、並びに／又は処置のために注射される細胞のタイプに依存し得る
。それらの細胞は、薬学的に許容され得るキャリア、例えば、滅菌された等張性食塩水溶
液での投与のために調製され得る。いくつかの実施形態において、薬学的に許容され得る
キャリアは、１つ以上のさらなる作用物質（例えば、ＦＡＳリガンド、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ
－１Ｒａ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－３５、ＨＬ
Ａ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、Ｉ－３０９、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＣＤ２００、ガレクチン３、ｓＣ
Ｒ１、アルギナーゼ、ＰＧＥ－２、アスピリン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロ
バスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ｎ－
アセチルシステイン、ラパマイシン、ＩＶＩＧ、ナルトレキソン、ＴＧＦ－ベータ、ＶＥ
ＧＦ、ＰＤＧＦ、ＣＴＬＡ－４、抗ＣＤ４５ＲＢ抗体、ヒドロキシクロロキン、レフルノ
ミド、オーラノフィン、ジシアノ金、スルファサラジン、メトトレキサート、糖質コルチ
コイド、エタネルセプト、アダリムマブ、アバタセプト、アナキンラ、セルトリズマブ、
エタネルセプト－ｓｚｚｓ、ゴリムマブ、インフリキシマブ、リツキシマブ、トシリズマ
ブ、シクロスポリン、ＩＦＮ－ガンマ、エベロリムス、ラパマイシン、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ
－１、ＦＧＦ－２、アンジオポエチン、ＨＩＦ－１－アルファ又はそれらの組み合わせ）
を含み得る。

本開示の１つの実施形態において、線維芽細胞が、低酸素領域などにおける注射（例え
ば、筋肉内注射）を含む任意の好適な経路によって被験体に投与される。好適な経路とし
ては、静脈内、皮下、髄腔内、経口、直腸内、髄腔内、大網内（ｉｎｔｒａ－ｏｍｅｎｔ
ｒａｌ）、心室内、肝臓内及び腎臓内が挙げられる。

ある特定の実施形態において、線維芽細胞は、皮膚、心臓、血管、骨髄、骨格筋、肝臓
、膵臓、脳、脂肪組織、包皮、胎盤及び／又は臍帯を含む組織に由来し得る。具体的な実
施形態において、線維芽細胞は、胎盤、胎児、新生児若しくは成体の線維芽細胞又はそれ
らの混合物である。

個体への細胞の投与回数は、本明細書中に記載される因子に少なくとも部分的に依存し
、当該分野の通例の方法を用いて最適化され得る。具体的な実施形態では、単回投与が必
要とされる。他の実施形態では、細胞の複数回投与が必要とされる。上記のシステムは、
時間及び状況、細胞の喪失又は個々の細胞の活性の喪失の結果としての細胞活性の喪失速
度などに応じて変化し得る変数（例えば、個体の特定のニーズ）の影響を受けやすいこと
が認識されるべきである。ゆえに、各個体は、適切な投与量についてモニターされ得るこ
とが予想されるが、そのような個体のモニタリングの実施は、当該分野において通例であ
る。

ある特定の実施形態において、ＩＦＮ－ガンマが利用され、組成物中のＩＦＮ－ガンマ
の濃度は、０．１～５００単位／ミリリットル（ＩＵ／ｍｌ）、０．５～５００ＩＵ／ｍ
Ｌ、１～５００ＩＵ／ｍＬ、５～５００ＩＵ／ｍＬ、１０～５００ＩＵ／ｍＬ、１５～５
００ＩＵ／ｍＬ、２０～５００ＩＵ／ｍＬ、２５～５００ＩＵ／ｍＬ、３０～５００ＩＵ
／ｍＬ、３５～５００ＩＵ／ｍＬ、４０～５００ＩＵ／ｍＬ、４５～５００ＩＵ／ｍＬ、
５０～５００ＩＵ／ｍＬ、６０～５００ＩＵ／ｍＬ、７０～５００ＩＵ／ｍＬ、８０～５
００ＩＵ／ｍＬ、９０～５００ＩＵ／ｍＬ、１００～５００ＩＵ／ｍＬ、１５０～５００
ＩＵ／ｍＬ、２００～５００ＩＵ／ｍＬ、２５０～５００ＩＵ／ｍＬ、３００～５００Ｉ
Ｕ／ｍＬ、３５０～５００ＩＵ／ｍＬ、４００～５００ＩＵ／ｍＬ、４５０～５００ＩＵ
／ｍＬ；又は０．１～４５０ＩＵ／ｍＬ、０．５～４５０ＩＵ／ｍＬ、１～４５０ＩＵ／
ｍＬ、５～４５０ＩＵ／ｍＬ、１０～４５０ＩＵ／ｍＬ、１５～４５０ＩＵ／ｍＬ、２０
～４５０ＩＵ／ｍＬ、２５～４５０ＩＵ／ｍＬ、３０～４５０ＩＵ／ｍＬ、３５～４５０
ＩＵ／ｍＬ、４０～４５０ＩＵ／ｍＬ、４５～４５０ＩＵ／ｍＬ、５０～４５０ＩＵ／ｍ
Ｌ、６０～４５０ＩＵ／ｍＬ、７０～４５０ＩＵ／ｍＬ、８０～４５０ＩＵ／ｍＬ、９０
～４５０ＩＵ／ｍＬ、１００～４５０ＩＵ／ｍＬ、１５０～４５０ＩＵ／ｍＬ、２００～
４５０ＩＵ／ｍＬ、２５０～４５０ＩＵ／ｍＬ、３００～４５０ＩＵ／ｍＬ、３５０～４
５０ＩＵ／ｍＬ、４００～４５０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～４００ＩＵ／ｍＬ、０．５～
４００ＩＵ／ｍＬ、１～４００ＩＵ／ｍＬ、５～４００ＩＵ／ｍＬ、１０～４００ＩＵ／
ｍＬ、１５～４００ＩＵ／ｍＬ、２０～４００ＩＵ／ｍＬ、２５～４００ＩＵ／ｍＬ、３
０～４００ＩＵ／ｍＬ、３５～４００ＩＵ／ｍＬ、４０～４００ＩＵ／ｍＬ、４５～４０
０ＩＵ／ｍＬ、５０～４００ＩＵ／ｍＬ、６０～４００ＩＵ／ｍＬ、７０～４００ＩＵ／
ｍＬ、８０～４００ＩＵ／ｍＬ、９０～４００ＩＵ／ｍＬ、１００～４００ＩＵ／ｍＬ、
１５０～４００ＩＵ／ｍＬ、２００～４００ＩＵ／ｍＬ、２５０～４００ＩＵ／ｍＬ、３
００～４００ＩＵ／ｍＬ、３５０～４００ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～３５０ＩＵ／ｍＬ、
０．５～３５０ＩＵ／ｍＬ、１～３５０ＩＵ／ｍＬ、５～３５０ＩＵ／ｍＬ、１０～３５
０ＩＵ／ｍＬ、１５～３５０ＩＵ／ｍＬ、２０～３５０ＩＵ／ｍＬ、２５～３５０ＩＵ／
ｍＬ、３０～３５０ＩＵ／ｍＬ、３５～３５０ＩＵ／ｍＬ、４０～３５０ＩＵ／ｍＬ、４
５～３５０ＩＵ／ｍＬ、５０～３５０ＩＵ／ｍＬ、６０～３５０ＩＵ／ｍＬ、７０～３５
０ＩＵ／ｍＬ、８０～３５０ＩＵ／ｍＬ、９０～３５０ＩＵ／ｍＬ、１００～３５０ＩＵ
／ｍＬ、１５０～３５０ＩＵ／ｍＬ、２００～３５０ＩＵ／ｍＬ、２５０～３５０ＩＵ／
ｍＬ、３００～３５０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～３００ＩＵ／ｍＬ、０．５～３００ＩＵ
／ｍＬ、１～３００ＩＵ／ｍＬ、５～３００ＩＵ／ｍＬ、１０～３００ＩＵ／ｍＬ、１５
～３００ＩＵ／ｍＬ、２０～３００ＩＵ／ｍＬ、２５～３００ＩＵ／ｍＬ、３０～３００
ＩＵ／ｍＬ、３５～３００ＩＵ／ｍＬ、４０～３００ＩＵ／ｍＬ、４５～３００ＩＵ／ｍ
Ｌ、５０～３００ＩＵ／ｍＬ、６０～３００ＩＵ／ｍＬ、７０～３００ＩＵ／ｍＬ、８０
～３００ＩＵ／ｍＬ、９０～３００ＩＵ／ｍＬ、１００～３００ＩＵ／ｍＬ、１５０～３
００ＩＵ／ｍＬ、２００～３００ＩＵ／ｍＬ、２５０～３００ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～
２５０ＩＵ／ｍＬ、０．５～２５０ＩＵ／ｍＬ、１～２５０ＩＵ／ｍＬ、５～２５０ＩＵ
／ｍＬ、１０～２５０ＩＵ／ｍＬ、１５～２５０ＩＵ／ｍＬ、２０～２５０ＩＵ／ｍＬ、
２５～２５０ＩＵ／ｍＬ、３０～２５０ＩＵ／ｍＬ、３５～２５０ＩＵ／ｍＬ、４０～２
５０ＩＵ／ｍＬ、４５～２５０ＩＵ／ｍＬ、５０～２５０ＩＵ／ｍＬ、６０～２５０ＩＵ
／ｍＬ、７０～２５０ＩＵ／ｍＬ、８０～２５０ＩＵ／ｍＬ、９０～２５０ＩＵ／ｍＬ、
１００～２５０ＩＵ／ｍＬ、１５０～２５０ＩＵ／ｍＬ、２００～２５０ＩＵ／ｍＬ；又
は０．１～２００ＩＵ／ｍＬ、０．５～２００ＩＵ／ｍＬ、１～２００ＩＵ／ｍＬ、５～
２００ＩＵ／ｍＬ、１０～２００ＩＵ／ｍＬ、１５～２００ＩＵ／ｍＬ、２０～２００Ｉ
Ｕ／ｍＬ、２５～２００ＩＵ／ｍＬ、３０～２００ＩＵ／ｍＬ、３５～２００ＩＵ／ｍＬ
、４０～２００ＩＵ／ｍＬ、４５～２００ＩＵ／ｍＬ、５０～２００ＩＵ／ｍＬ、６０～
２００ＩＵ／ｍＬ、７０～２００ＩＵ／ｍＬ、８０～２００ＩＵ／ｍＬ、９０～２００Ｉ
Ｕ／ｍＬ、１００～２００ＩＵ／ｍＬ、１５０～２００ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～１５０
ＩＵ／ｍＬ、０．５～１５０ＩＵ／ｍＬ、１～１５０ＩＵ／ｍＬ、５～１５０ＩＵ／ｍＬ
、１０～１５０ＩＵ／ｍＬ、１５～１５０ＩＵ／ｍＬ、２０～１５０ＩＵ／ｍＬ、２５～
１５０ＩＵ／ｍＬ、３０～１５０ＩＵ／ｍＬ、３５～１５０ＩＵ／ｍＬ、４０～１５０Ｉ
Ｕ／ｍＬ、４５～１５０ＩＵ／ｍＬ、５０～１５０ＩＵ／ｍＬ、６０～１５０ＩＵ／ｍＬ
、７０～１５０ＩＵ／ｍＬ、８０～１５０ＩＵ／ｍＬ、９０～１５０ＩＵ／ｍＬ、１００
～１５０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～１００ＩＵ／ｍＬ、０．５～１００ＩＵ／ｍＬ、１～
１００ＩＵ／ｍＬ、５～１００ＩＵ／ｍＬ、１０～１００ＩＵ／ｍＬ、１５～１００ＩＵ
／ｍＬ、２０～１００ＩＵ／ｍＬ、２５～１００ＩＵ／ｍＬ、３０～１００ＩＵ／ｍＬ、
３５～１００ＩＵ／ｍＬ、４０～１００ＩＵ／ｍＬ、４５～１００ＩＵ／ｍＬ、５０～１
００ＩＵ／ｍＬ、６０～１００ＩＵ／ｍＬ、７０～１００ＩＵ／ｍＬ、８０～１００ＩＵ
／ｍＬ、９０～１００ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～９０ＩＵ／ｍＬ、０．５～９０ＩＵ／ｍ
Ｌ、１～９０ＩＵ／ｍＬ、５～９０ＩＵ／ｍＬ、１０～９０ＩＵ／ｍＬ、１５～９０ＩＵ
／ｍＬ、２０～９０ＩＵ／ｍＬ、２５～９０ＩＵ／ｍＬ、３０～９０ＩＵ／ｍＬ、３５～
９０ＩＵ／ｍＬ、４０～９０ＩＵ／ｍＬ、４５～９０ＩＵ／ｍＬ、５０～９０ＩＵ／ｍＬ
、６０～９０ＩＵ／ｍＬ、７０～９０ＩＵ／ｍＬ、８０～９０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～
８０ＩＵ／ｍＬ、０．５～８０ＩＵ／ｍＬ、１～８０ＩＵ／ｍＬ、５～８０ＩＵ／ｍＬ、
１０～８０ＩＵ／ｍＬ、１５～８０ＩＵ／ｍＬ、２０～８０ＩＵ／ｍＬ、２５～８０ＩＵ
／ｍＬ、３０～８０ＩＵ／ｍＬ、３５～８０ＩＵ／ｍＬ、４０～８０ＩＵ／ｍＬ、４５～
８０ＩＵ／ｍＬ、５０～８０ＩＵ／ｍＬ、６０～８０ＩＵ／ｍＬ、７０～８０ＩＵ／ｍＬ
；又は０．１～７０ＩＵ／ｍＬ、０．５～７０ＩＵ／ｍＬ、１～７０ＩＵ／ｍＬ、５～７
０ＩＵ／ｍＬ、１０～７０ＩＵ／ｍＬ、１５～７０ＩＵ／ｍＬ、２０～７０ＩＵ／ｍＬ、
２５～７０ＩＵ／ｍＬ、３０～７０ＩＵ／ｍＬ、３５～７０ＩＵ／ｍＬ、４０～７０ＩＵ
／ｍＬ、４５～７０ＩＵ／ｍＬ、５０～７０ＩＵ／ｍＬ、６０～７０ＩＵ／ｍＬ；又は０
．１～６０ＩＵ／ｍＬ、０．５～６０ＩＵ／ｍＬ、１～６０ＩＵ／ｍＬ、５～６０ＩＵ／
ｍＬ、１０～６０ＩＵ／ｍＬ、１５～６０ＩＵ／ｍＬ、２０～６０ＩＵ／ｍＬ、２５～６
０ＩＵ／ｍＬ、３０～６０ＩＵ／ｍＬ、３５～６０ＩＵ／ｍＬ、４０～６０ＩＵ／ｍＬ、
４５～６０ＩＵ／ｍＬ、５０～６０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～５０ＩＵ／ｍＬ、０．５～
５０ＩＵ／ｍＬ、１～５０ＩＵ／ｍＬ、５～５０ＩＵ／ｍＬ、１０～５０ＩＵ／ｍＬ、１
５～５０ＩＵ／ｍＬ、２０～５０ＩＵ／ｍＬ、２５～５０ＩＵ／ｍＬ、３０～５０ＩＵ／
ｍＬ、３５～５０ＩＵ／ｍＬ、４０～５０ＩＵ／ｍＬ、４５～５０ＩＵ／ｍＬ；又は０．
１～４５ＩＵ／ｍＬ、０．５～４５ＩＵ／ｍＬ、１～４５ＩＵ／ｍＬ、５～４５ＩＵ／ｍ
Ｌ、１０～４５ＩＵ／ｍＬ、１５～４５ＩＵ／ｍＬ、２０～４５ＩＵ／ｍＬ、２５～４５
ＩＵ／ｍＬ、３０～４５ＩＵ／ｍＬ、３５～４５ＩＵ／ｍＬ、４０～４５ＩＵ／ｍＬ；又
は０．１～４０ＩＵ／ｍＬ、０．５～４０ＩＵ／ｍＬ、１～４０ＩＵ／ｍＬ、５～４０Ｉ
Ｕ／ｍＬ、１０～４０ＩＵ／ｍＬ、１５～４０ＩＵ／ｍＬ、２０～４０ＩＵ／ｍＬ、２５
～４０ＩＵ／ｍＬ、３０～４０ＩＵ／ｍＬ、３５～４０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～３５Ｉ
Ｕ／ｍＬ、０．５～３５ＩＵ／ｍＬ、１～３５ＩＵ／ｍＬ、５～３５ＩＵ／ｍＬ、１０～
３５ＩＵ／ｍＬ、１５～３５ＩＵ／ｍＬ、２０～３５ＩＵ／ｍＬ、２５～３５ＩＵ／ｍＬ
、３０～３５ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～３０ＩＵ／ｍＬ、０．５～３０ＩＵ／ｍＬ、１～
３０ＩＵ／ｍＬ、５～３０ＩＵ／ｍＬ、１０～３０ＩＵ／ｍＬ、１５～３０ＩＵ／ｍＬ、
２０～３０ＩＵ／ｍＬ、２５～３０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～２５ＩＵ／ｍＬ、０．５～
２５ＩＵ／ｍＬ、１～２５ＩＵ／ｍＬ、５～２５ＩＵ／ｍＬ、１０～２５ＩＵ／ｍＬ、１
５～２５ＩＵ／ｍＬ、２０～２５ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～２０ＩＵ／ｍＬ、０．５～２
０ＩＵ／ｍＬ、１～２０ＩＵ／ｍＬ、５～２０ＩＵ／ｍＬ、１０～２０ＩＵ／ｍＬ、１５
～２０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～１５ＩＵ／ｍＬ、０．５～１５ＩＵ／ｍＬ、１～１５Ｉ
Ｕ／ｍＬ、５～１５ＩＵ／ｍＬ、１０～１５ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～１０ＩＵ／ｍＬ、
０．５～１０ＩＵ／ｍＬ、１～１０ＩＵ／ｍＬ、５～１０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～５Ｉ
Ｕ／ｍＬ、０．５～５ＩＵ／ｍＬ、１～５ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～１ＩＵ／ｍＬ、０．
５～１ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～０．５ＩＵ／ｍＬを含むか、それからなるか、又はそれ
から本質的になる。

本開示の方法は、規定の時間にわたって細胞集団をＩＦＮ－ガンマに曝す工程を包含し
得る。ある特定の実施形態において、細胞は、約１時間～約１４日間の範囲の時間にわた
ってＩＦＮ－ガンマに曝される。ある特定の実施形態において、細胞は、少なくとも又は
せいぜい約１時間～１４日間、２時間～１４日間、３時間～１４日間、４時間～１４日間
、５時間～１４日間、６時間～１４日間、７時間～１４日間、８時間～１４日間、９時間
～１４日間、１０時間～１４日間、１１時間～１４日間、１２時間～１４日間、１８時間
～１４日間、１日間～１４日間、２日間～１４日間、３日間～１４日間、４日間～１４日
間、５日間～１４日間、６日間～１４日間、７日間～１４日間、８日間～１４日間、９日
間～１４日間、１０日間～１４日間、１１日間～１４日間、１２日間～１４日間、１３日
間～１４日間；又は１時間～１３日間、２時間～１３日間、３時間～１３日間、４時間～
１３日間、５時間～１３日間、６時間～１３日間、７時間～１３日間、８時間～１３日間
、９時間～１３日間、１０時間～１３日間、１１時間～１３日間、１２時間～１３日間、
１日間～１３日間、２日間～１３日間、３日間～１３日間、４日間～１３日間、５日間～
１３日間、６日間～１３日間、７日間～１３日間、８日間～１３日間、９日間～１３日間
、１０日間～１３日間、１１日間～１３日間、１２日間～１３日間；又は１時間～１２日
間、２時間～１２日間、３時間～１２日間、４時間～１２日間、５時間～１２日間、６時
間～１２日間、７時間～１２日間、８時間～１２日間、９時間～１２日間、１０時間～１
２日間、１１時間～１２日間、１２時間～１２日間、１日間～１２日間、２日間～１２日
間、３日間～１２日間、４日間～１２日間、５日間～１２日間、６日間～１２日間、７日
間～１２日間、８日間～１２日間、９日間～１２日間、１０日間～１２日間、１１日間～
１２日間；又は１時間～１１日間、２時間～１１日間、３時間～１１日間、４時間～１１
日間、５時間～１１日間、６時間～１１日間、７時間～１１日間、８時間～１１日間、９
時間～１１日間、１０時間～１１日間、１１時間～１１日間、１２時間～１１日間、１日
間～１１日間、２日間～１１日間、３日間～１１日間、４日間～１１日間、５日間～１１
日間、６日間～１１日間、７日間～１１日間、８日間～１１日間、９日間～１１日間、１
０日間～１１日間１１日間；又は１時間～１０日間、２時間～１０日間、３時間～１０日
間、４時間～１０日間、５時間～１０日間、６時間～１０日間、７時間～１０日間、８時
間～１０日間、９時間～１０日間、１０時間～１０日間、１１時間～１０日間、１２時間
～１０日間、１日間～１０日間、２日間～１０日間、３日間～１０日間、４日間～１０日
間、５日間～１０日間、６日間～１０日間、７日間～１０日間、８日間～１０日間、９日
間～１０日間１０日間；又は１時間～９日間、２時間～９日間、３時間～９日間、４時間
～９日間、５時間～９日間、６時間～９日間、７時間～９日間、８時間～９日間、９時間
～９日間、１０時間～９日間、１１時間～９日間、１２時間～９日間、１日間～９日間、
２日間～９日間、３日間～９日間、４日間～９日間、５日間～９日間、６日間～９日間、
７日間～９日間、８日間～９日間９日間；又は１時間～８日間、２時間～８日間、３時間
～８日間、４時間～８日間、５時間～８日間、６時間～８日間、７時間～８日間、８時間
～８日間、９時間～８日間、１０時間～８日間、１１時間～８日間、１２時間～８日間、
１日間～８日間、２日間～８日間、３日間～８日間、４日間～８日間、５日間～８日間、
６日間～８日間、７日間～８日間；又は１時間～７日間、２時間～７日間、３時間～７日
間、４時間～７日間、５時間～７日間、６時間～７日間、７時間～７日間、８時間～７日
間、９時間～７日間、１０時間～７日間、１１時間～７日間、１２時間～７日間、１日間
～７日間、２日間～７日間、３日間～７日間、４日間～７日間、５日間～７日間、６日間
～７日間；又は１時間～６日間、２時間～６日間、３時間～６日間、４時間～６日間、５
時間～６日間、６時間～６日間、７時間～６日間、８時間～６日間、９時間～６日間、１
０時間～６日間、１１時間～６日間、１２時間～６日間、１日間～６日間、２日間～６日
間、３日間～６日間、４日間～６日間、５日間～６日間；又は１時間～５日間、２時間～
５日間、３時間～５日間、４時間～５日間、５時間～５日間、６時間～５日間、７時間～
５日間、８時間～５日間、９時間～５日間、１０時間～５日間、１１時間～５日間、１２
時間～５日間、１日間～５日間、２日間～５日間、３日間～５日間、４日間～５日間；又
は１時間～４日間、２時間～４日間、３時間～４日間、４時間～４日間、５時間～４日間
、６時間～４日間、７時間～４日間、８時間～４日間、９時間～４日間、１０時間～４日
間、１１時間～４日間、１２時間～４日間、１日間～４日間、２日間～４日間、３日間～
４日間；又は１時間～３日間、２時間～３日間、３時間～３日間、４時間～３日間、５時
間～３日間、６時間～３日間、７時間～３日間、８時間～３日間、９時間～３日間、１０
時間～３日間、１１時間～３日間、１２時間～３日間、１日間～３日間、２日間～３日間
；又は１時間～２日間、２時間～２日間、３時間～２日間、４時間～２日間、５時間～２
日間、６時間～２日間、７時間～２日間、８時間～２日間、９時間～２日間、１０時間～
２日間、１１時間～２日間、１２時間～２日間、１日間～２日間；又は１時間～１日間、
２時間～１日間、３時間～１日間、４時間～１日間、５時間～１日間、６時間～１日間、
７時間～１日間、８時間～１日間、９時間～１日間、１０時間～１日間、１１時間～１日
間、１２時間～１日間；又は１時間～１２時間、２時間～１２時間、３時間～１２時間、
４時間～１２時間、５時間～１２時間、６時間～１２時間、７時間～１２時間、８時間～
１２時間、９時間～１２時間、１０時間～１２時間、１１時間～１２時間；又は１時間～
１１時間、２時間～１１時間、３時間～１１時間、４時間～１１時間、５時間～１１時間
、６時間～１１時間、７時間～１１時間、８時間～１１時間、９時間～１１時間、１０時
間～１１時間；又は１時間～１０時間、２時間～１０時間、３時間～１０時間、４時間～
１０時間、５時間～１０時間、６時間～１０時間、７時間～１０時間、８時間～１０時間
、９時間～１０時間；又は１時間～９時間、２時間～９時間、３時間～９時間、４時間～
９時間、５時間～９時間、６時間～９時間、７時間～９時間、８時間～９時間；又は１時
間～８時間、２時間～８時間、３時間～８時間、４時間～８時間、５時間～８時間、６時
間～８時間、７時間～８時間；又は１時間～７時間、２時間～７時間、３時間～７時間、
４時間～７時間、５時間～７時間、６時間～７時間；又は１時間～６時間、２時間～６時
間、３時間～６時間、４時間～６時間、５時間～６時間；又は１時間～５時間、２時間～
５時間、３時間～５時間、４時間～５時間；又は１時間～４時間、２時間～４時間、３時
間～４時間；又は１時間～３時間、２時間～３時間又は１時間～２時間の範囲の時間にわ
たってＩＦＮ－ガンマに曝される。

いくつかの実施形態において、細胞は、ロズウェルパーク記念研究所（ＲＰＭＩ－１６
４０）、ダルベッコ変法基本培地（ＤＭＥＭ）、イーグル変法基本培地（ＥＭＥＭ）、Ｏ
ｐｔｉｍｅｍ、イスコーブ培地又はそれらの組み合わせを含むか、それからなるか、又は
それから本質的になる１つ以上の培地組成物に曝される。

本開示の１つの実施形態において、細胞（例えば、線維芽細胞）は、それらの細胞の生
存能及び増殖能を保つための当該分野で公知の手段を用いてエクスビボで培養される。線
維芽細胞の場合の具体的な実施形態において、細胞に対して１つ以上の所望の効果を達成
するため、例えば、レシピエントの免疫系に対する線維芽細胞の視認性を低下させるため
の公知の培養手法の改変が存在し得る。１つの実施形態において、細胞（例えば、線維芽
細胞）は、１つ以上の異種成分（例えば、ウシ胎仔血清）を欠く条件において培養される
。具体的な実施形態において、本開示は、例えば、細胞（例えば、線維芽細胞）の免疫原
性を低下させるための、ヒト多血小板血漿、血小板溶解物、臍帯血血清、自己血清及び／
又は既定のサイトカインミックスによるウシ胎仔血清の置換をさらなる特長として包含す
る。

ある特定の実施形態において、上記細胞は、ヒト多血小板血漿、血小板溶解物、臍帯血
血清、自己血清、ヒト血清、血清代替物又はそれらの組み合わせを含むか、それからなる
か、又はそれから本質的になる１つ以上の組成物に曝される。具体的な実施形態において
、そのようなエレメントを有する組成物は、培地組成物である。１つの実施形態において
、血清代替物は、組成物の体積の少なくとも又はせいぜい１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、
２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３
５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８
、４９又は５０％を構成する。別の実施形態において、ヒト多血小板血漿は、組成物の体
積の少なくとも又はせいぜい１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、
１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２
６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９
、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５０％を構成する
。なおも別の実施形態において、血小板溶解物は、組成物の体積の少なくとも又はせいぜ
い１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、
１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３
０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３
、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５０％を構成する。１つの実施形態において
、臍帯血血清は、組成物の体積の少なくとも又はせいぜい１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、
２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３
５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８
、４９又は５０％を構成する。１つの実施形態において、自己血清は、組成物の体積の少
なくとも又はせいぜい１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、
１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２
７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０
、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５０％を構成する。別の
実施形態において、ヒト血清は、組成物の体積の少なくとも又はせいぜい１、２、３、４
、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９
、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、
３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４
６、４７、４８、４９又は５０％を構成する。

組換え技術が用いられる場合、目的の遺伝子産物をコードする発現ベクターを有するよ
うに、１つ以上のタイプの細胞が操作される。組換え発現ベクターは、そのベクターを含
む宿主細胞の選択を可能にする少なくとも１つのマーカーが存在し得る１つ以上のＤＮＡ
分子又は構築物として導入され得る。そのベクターは、従来の方法で調製することができ
、ここで、遺伝子及び制御性領域が、単離され、適宜ライゲートされ、適切なクローニン
グ宿主にクローニングされ、配列決定又は他の好都合な手段によって解析され得る。特に
、ＰＣＲを用いて、機能単位の全部又は一部を含む個々のフラグメントが単離され得、い
くつかの場合では、１つ以上の変異が、適宜、「プライマー修復」、ライゲーション、イ
ンビトロ突然変異誘発などを用いて、導入され得る。それらのベクターは、いったん完成
し、適切な配列を有すると実証されたら、任意の好都合な手段によって宿主細胞に導入さ
れ得る。それらの構築物は、細胞への感染又は導入のために、レンチウイルス、アデノウ
イルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）など（レトロ
ウイルスベクターを含む）のような複製しない欠陥ウイルスゲノムにインテグレートされ
、パッケージングされ得る。それらのベクターは、所望であれば、トランスフェクション
のためのウイルス配列を含み得る。あるいは、その構築物は、融合、エレクトロポレーシ
ョン、微粒子銃、トランスフェクション、リポフェクションなどによって導入され得る。
宿主細胞は、ベクターの導入の前に培養において生育され、拡大され得、その後、ベクタ
ーの導入及びベクターのインテグレーションのために適切に処置され得る。次いで、それ
らの細胞は、拡大され、その構築物に存在するマーカーによってスクリーニングされる。
首尾よく使用され得る様々なマーカーとしては、ｈｐｒｔ、ネオマイシン耐性、チミジン
キナーゼ、ハイグロマイシン耐性などが挙げられる。

本明細書中に記載される遺伝子若しくは遺伝子産物の任意のもの又はその活性な部分が
、細胞での発現を可能にするＣＭＶプロモーターなどの１つ以上のプロモーター配列を含
む哺乳動物発現構築物にクローニングされ得る［Ａｒｔｕｃ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｄ
ｅｒｍａｔｏｌ．１９９５，４：３１７－２１］。好適な構築物の例としては、ｐｃＤＮ
Ａ３、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／－）、ｐＧＬ３、ＰｚｅｏＳＶ２（＋／－）、ｐＤｉｓｐ
ｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ（これらの各々が、Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏ．（ｗｗｗ．ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ．ｃｏｍ）から商業的に入
手可能である）又は制御されたポリヌクレオチド発現をヒト包皮細胞において可能にする
ｐＳＨ発現ベクター［Ｖｅｎｔｕｒａ ａｎｄ Ｖｉｌｌａ，１９９３，Ｂｉｏｃｈｅｍ
．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９２：８６７－９］が挙げられるが、これらに限定
されない。レトロウイルスベクター及びパッケージングシステムの例は、マルチクローニ
ングサイトへのクローニングを可能にするＲｅｔｒｏ－ＸベクターであるｐＬＮＣＸ及び
ｐＬＸＳＮをはじめとした、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，Ｕ
ＳＡが販売しているものであり、導入遺伝子は、ＣＭＶプロモーターから転写される。導
入遺伝子が５’ＬＴＲプロモーターから転写されるｐＢａｂｅなどのＭｏ－ＭｕＬＶに由
来するベクターも挙げられる。プラスミドのトランスフェクションが完了した後、線維芽
細胞は、組織培養プレートからの剥離を可能にする手段、例えばトリプシン処理によって
、収集され、増殖に向けて６ウェル（Ｎｕｎｃ，Ｄｅｎｍａｒｋ）又は２４ウェルプレー
ト（Ｎｕｎｃ）に移される。トランスフェクションのおよそ３日後に、細胞培地を、改変
された線維芽細胞の増殖及び拡大を可能にする培地に交換する。一例は、Ｎｅｕｒｏｂａ
ｓａｌ－Ａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１％Ｄ－グルコース（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃ
ｈ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、２
％Ｂ２７サプリメント及びレチノイン酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、０．２％ＥＧＦ（Ｐ
ｅｐｒｏｔｅｃｈ，ＵＳＡ）、０．０８％ＦＧＦ－２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、０．２％
ヘパリン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）、及び１μＭの濃度までのバルプロ酸
（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を含むＮｅｕｒｏｂａｓａｌ Ａ（ＮＢＡ）増殖培地で
ある。その後、その培地を、週３回交換し、細胞を定期的に再度プレーティングして（例
えば、最大週１回の再プレーティング、２～８回、コロニーが発生し始めたら、より定期
的に行う）、広範なコロニー形成が達成されるまで、再プログラムされていない細胞を除
去する。

いくつかの場合では、１つ以上の作用物質（例えば、血管新生剤又はその機能的フラグ
メント）が、一過性の発現のためのＲＮＡ分子として細胞に導入され得る。ＲＮＡは、例
えばマイクロインジェクション、エレクトロポレーション及び脂質媒介性トランスフェク
ションをはじめとした様々な手段によって、本開示の任意の細胞（任意の改変された細胞
を含む）に送達され得る。特定の態様において、細胞へのベクターの導入は、トランスポ
ゾンを介して行われ得る。使用するための合成トランスポゾンの例は、血管新生剤遺伝子
を含む発現カセットを含むＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンである。ある
いは、相同組換えのための標的部位を有し得、ここで、相同組換えについて当該分野で公
知であるような材料及び方法を用いてベクターを特定の遺伝子座にインテグレートするこ
とが望ましい。相同組換えの場合、ＯＭＥＧＡ又はＯ－ベクターを使用し得る。例えば、
Ｔｈｏｍａｓ ａｎｄ Ｃａｐｅｃｃｈｉ，１９８７；Ｍａｎｓｏｕｒ，ｅｔ ａｌ．，
１９８８；及びＪｏｙｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，１９８９を参照のこと。

上記ベクターは、少なくとも１つの作用物質（１つ以上の血管新生剤又はそれらの機能
的フラグメントを含む）及び必要に応じて別のポリヌクレオチド（例えば、遺伝子）をコ
ードする単一のＤＮＡ分子、又は１つ以上のポリヌクレオチド（例えば、遺伝子）を有す
る異なるＤＮＡ分子として導入され得る。上記ベクターは、同時に又は連続的に導入され
得、それぞれが同じ又は異なるマーカーを有する。例証的な例では、１つのベクターが、
特定の制御配列の支配下に１つ以上の作用物質（例えば、血管新生剤）を含み得る。

ベクターＤＮＡのストックを調製するため及びトランスフェクションを行うために使用
され得る、細菌又は酵母の複製開始点、選択可能及び／又は増幅可能なマーカー、原核生
物又は真核生物における発現のためのプロモーター／エンハンサーエレメントなどの有用
なエレメントを含むベクターが当該分野で周知であり、多くが商業的に入手可能である。

ある特定の実施形態において、ＲＮＡ又はタンパク質配列は、同じ宿主細胞において他
の選択されたＲＮＡ又はタンパク質配列と同時発現され得ることが企図される。同時発現
は、宿主細胞に２つ以上の異なる組換えベクターをコトランスフェクトすることによって
達成され得る。あるいは、単一の組換えベクターが、ＲＮＡに対する複数の異なるコード
領域を含むように構築され得、その後、それらの異なるコード領域は、その単一のベクタ
ーでトランスフェクトされた宿主細胞において発現され得る。

いくつかの状況では、改変された細胞を殺滅することが望ましいことがある（例えば、
目的が処置を終了させることであるとき、細胞が腫瘍性になったとき、当該細胞が存在し
た後にその細胞が存在しなくなることに着目している研究において、及び／又は別の事象
において）。この目的のために、ある特定の遺伝子産物の発現が提供され得、ここで、改
変された細胞は、自殺遺伝子などの制御された条件下において、殺滅され得る。自殺遺伝
子は当該分野で公知であり、例えば、改変型のカスパーゼ９が、小分子、例えば、ＡＰ１
９０３と二量体化できる、ｉＣａｓｐａｓｅ９システムである。例えば、Ｓｔｒａａｔｈ
ｏｆ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０５：４２４７－４２５４（２００５）を参照のこ
と。

Ｖ．本開示のキット
本明細書中に記載される細胞性及び／若しくは非細胞性組成物の任意のもの、又はそれ
に類似のものが、キットに含められ得る。非限定的な例では、細胞療法を調製するための
方法において使用するための１つ以上の試薬が、キットに含められ得る。そのような試薬
としては、細胞、ＩＦＮ－ガンマ、多血小板血漿、血小板溶解物、１つ以上の血管新生因
子、１つ以上の成長因子、ベクター、１つ以上の共刺激因子、培地、酵素、緩衝液、ヌク
レオチド、塩、プライマーなどが挙げられ得る。キットは、本開示に列挙される任意のタ
ンパク質を含み得る。キットの構成要素は、好適な容器手段の中に提供される。

キットのいくつかの構成要素は、水性媒質中に又は凍結乾燥された形態で、包装され得
る。キットの容器手段としては、一般に、ある構成要素が入れられ得る、好ましくは、適
切に等分され得る、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジ又
は他の容器手段が挙げられる。２つ以上の構成要素がキットに存在する場合、そのキット
は、通常、追加の構成要素が別々に入れられ得る、第２、第３又は他のさらなる容器も含
み得る。しかしながら、構成要素の様々な組み合わせが、バイアルに含められてもよい。
本開示のキットはまた、典型的には、商業的販売のために厳重に閉じ込められた構成要素
を含めるための手段も含む。そのような容器には、所望のバイアルを保持する、射出成形
又はブロー成形されたプラスチック容器が含まれ得る。

上記キットの構成要素が、１つ及び／又はそれ以上の液体溶液として提供されるとき、
その液体溶液は、水溶液であり、滅菌された水溶液が特に有用である。いくつかの場合に
おいて、容器手段は、それ自体が、シリンジ、ピペット及び／若しくは他のこのような装
置であってもよいし、所望の反応のために複数のコンパートメントを有する基材であって
もよい。

キットのいくつかの構成要素は、乾燥粉末として提供され得る。試薬及び／又は構成要
素が、乾燥粉末として提供されるとき、その粉末は、好適な溶媒を加えることによって再
構成され得る。その溶媒も別の容器手段内に提供され得ることが構想される。キットは、
滅菌された許容され得る緩衝液及び／又は他の希釈剤を含めるための第２の容器手段も含
み得る。

具体的な実施形態において、試薬及び材料には、所望の配列を増幅するためのプライマ
ー、ヌクレオチド、好適な緩衝液又は緩衝試薬、塩などが含まれ、いくつかの場合におい
て、それらの試薬には、特定の所望の細胞を単離するための装置又は試薬が含まれる。

特定の実施形態において、個体から１つ以上のサンプルを抽出するのに適した１つ以上
の装置がキット内に存在する。その装置は、シリンジ、細針、メスなどであり得る。

以下の実施例は、本発明の特定の実施形態を実証するために含められる。以下の実施例
に開示される手法は、本開示の方法の実施において十分に機能すると本発明者らによって
発見された手法であるので、それを実施するのに好ましい形式を構成すると見なすことが
できることが、当業者によって認識されるだろう。しかしながら、当業者は、本開示に照
らして、開示される具体的な実施形態において多くの変更を行うことができ、本開示の趣
旨及び範囲から逸脱することなく同様又は類似の結果をなおも得ることができることを認
識するだろう。

実施例１
インターフェロンガンマによる前処置は線維芽細胞の同種刺激活性を低下させる
本実施例では、線維芽細胞のタイプの一例として包皮線維芽細胞の同種刺激活性を低下
させるための、ＩＦＮ－ガンマの使用を特徴付ける。

包皮線維芽細胞を、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ ＶＡ）から購入し、記載の濃度のイ
ンターフェロンガンマ（２５及び５０ユニット）で２４時間、５％二酸化炭素の十分に加
湿された雰囲気において前処置した（図２）。細胞に曝露し、それを混合リンパ球反応（
ＭＬＲ）の刺激物質として利用した。このＭＬＲにおける応答細胞は、５ｍｌの血液から
フィコール密度勾配（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）によって単離された末梢血単核球（
ＰＢＭＣ）であった。細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄し、丸底９６ウェル
プレート（Ｎｕｎｃ）にプレーティングした。各ウェルにおいて、１０，０００、２０，
０００又は１００，０００個のＰＢＭＣを、１０％ウシ胎仔血清（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｉｅｓ）を含むＲＰＭＩ培地中に総体積が２００ｕＬになるまで加えた。細胞を
４８時間培養し、培養の最後の８時間において１マイクロキュリーのトリチウムチミジン
によるローディングの後のチミジン取り込みによって、増殖を評価した（図２）。

そこに示されているように、ＩＦＮ－ガンマを線維芽細胞に曝露すると、線維芽細胞に
対する同種刺激活性が低下する。

実施例２
インターフェロンガンマで処置された線維芽細胞は同種異系リンパ球からのインターフ
ェロンガンマ産生を阻害する
包皮線維芽細胞を、実施例１に記載されたように２つの濃度のインターフェロンガンマ
で処置し、それを利用して混合リンパ球反応を刺激した。４８時間培養した後、培養上清
に対してＥＬＩＳＡアッセイを行うことによって、インターフェロンガンマの分泌を評価
した（図３）。そこに示されているように、処置された線維芽細胞は、リンパ球からのＩ
ＦＮ－ガンマの産生を阻害した。

実施例３
インターフェロンガンマで処置された線維芽細胞は同種異系リンパ球からのインターロ
イキン－４産生を刺激する
包皮線維芽細胞を、実施例１に記載されたようにインターフェロンガンマで処置し、そ
れを利用して混合リンパ球反応を刺激した。４８時間培養した後、培養上清に対してＥＬ
ＩＳＡアッセイを行うことによって、インターロイキン－４の分泌を評価した（図４）。

ＩＬ－４の産生は、コントロールと比べて、ＩＦＮ－ガンマで処置された線維芽細胞を
用いたとき増加した。

実施例４
インターフェロンガンマで処置された線維芽細胞は同種異系リンパ球からのＴＮＦ－ア
ルファ産生を阻害する
包皮線維芽細胞を、実施例１に記載されたようにインターフェロンガンマで処置し、そ
れを利用して混合リンパ球反応を刺激した。４８時間培養した後、培養上清に対してＥＬ
ＩＳＡアッセイを行うことによって、ＴＮＦ－アルファの分泌を評価したところ（図５）
、ＩＦＮ－ガンマで処置された線維芽細胞ではＴＮＦ－アルファの分泌が減少することが
示された。

実施例５
多血小板血漿による前処置は線維芽細胞の同種刺激活性を低下させる
包皮線維芽細胞を、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ ＶＡ）から購入し、記載の濃度の多
血小板血漿（５％及び１０％容積／容積）で２４時間、５％二酸化炭素の十分に加湿され
た雰囲気において前処置した（図６）。細胞に曝露し、それを混合リンパ球反応（ＭＬＲ
）の刺激物質として利用した。このＭＬＲにおける応答細胞は、５ｍｌの血液からフィコ
ール密度勾配（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）によって単離された末梢血単核球（ＰＢＭ
Ｃ）であった。細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄し、丸底９６ウェルプレー
ト（Ｎｕｎｃ）にプレーティングした。各ウェルにおいて、１０，０００、２０，０００
又は１００，０００個のＰＢＭＣを、１０％ウシ胎仔血清（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｉｅｓ）を含むＲＰＭＩ培地中に総体積が２００ｕＬになるまで加えた。細胞を４８時
間培養し、培養の最後の８時間において１マイクロキュリーのトリチウムチミジンによる
ローディングの後のチミジン取り込みによって、増殖を評価した（図６）。

多血小板血漿による前処置は、処置された線維芽細胞の同種刺激活性を低下させる。

実施例６
免疫調節のための細胞移植療法
本実施例は、細胞療法の免疫調節を必要とする個体に対する、細胞療法の免疫調節のた
めの方法に関する。

線維芽細胞及びＩＦＮ－ガンマで前処置された線維芽細胞によるコラーゲン誘発関節炎
の処置
包皮線維芽細胞を、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ ＶＡ）から購入し、記載の濃度のイ
ンターフェロンガンマ（２５単位）で２４時間、５％二酸化炭素の十分に加湿された雰囲
気において前処置した。下記に記載されるように作製されたコラーゲン誘発関節炎マウス
に、１回目のコラーゲンＩＩ免疫化の後、７日目及び１４日目に２回、５００万個の線維
芽細胞を静脈内注射した。それらの動物を、関節炎発症後（２回目のＣＩＩ免疫化の７日
後）、４週間観察した。各肢を０～４のスケールで採点し、患部の足１本あたりの平均臨
床スコアを計算した。

コラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）の誘導を、７週齢のＤＢＡ／１ ＬａｃＪマウスにお
いて通知し、２００μｇのウシＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃ
ｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を１００μｌの０．０５Ｍ酢酸に溶解し、等体積のＣＦＡ
（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）と混合したものを、尾の基部のいくつかの部位の皮内に
免疫した（０日目）。ＣＩＩは、４℃で一晩撹拌することによって２ｍｇ／ｍｌの濃度で
溶解した。初回刺激の後の２１日目に、等体積（１００μｌ）のＰＢＳ中の２００μｇの
ＣＩＩを腹腔内注射してマウスの追加免疫を行った。マウスを１週間に３回、末梢関節へ
の関節炎の出現について視覚的に調べ、疾患の重症度に対する関節炎スコア指標を以下の
とおり与えた：０、紅斑及び腫脹のエビデンスなし；１、紅斑及び軽度の腫脹が中足部（
ｍｉｄｆｏｏｔ）（足根）又は足首関節に限定される；２、紅斑及び軽度の腫脹が足首か
ら中足部に広がっている；３、紅斑及び中等度の腫脹が足首から中足関節に広がっている
；４、紅斑及び重度の腫脹が足首、足及び指を包囲している。スコアリングは、２人の独
立した観察者が、実験群及びコントロール群に関して知らない状態で行った。図７は、静
脈内の線維芽細胞又はＩＦＮ－ガンマで処置された線維芽細胞による関節炎スコアの低下
を示している。

線維芽細胞及びＰＲＰで前処置された線維芽細胞によるコラーゲン誘発関節炎の処置
包皮線維芽細胞を、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ ＶＡ）から購入し、記載の濃度のＰ
ＲＰ（５％ｖ／ｖ）で２４時間、５％二酸化炭素の十分に加湿された雰囲気において前処
置した。下記に記載されるように作製されたコラーゲン誘発関節炎マウスに、１回目のコ
ラーゲンＩＩ免疫化の後、７日目及び１４日目に２回、５００万個の線維芽細胞を静脈内
注射した。それらの動物を、関節炎発症後（２回目のＣＩＩ免疫化の７日後）、４週間観
察した。各肢を０～４のスケールで採点し、患部の足１本あたりの平均臨床スコアを計算
した。

コラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）の誘導を、７週齢のＤＢＡ／１ ＬａｃＪマウスにお
いて通知し、２００μｇのウシＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃ
ｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を１００μｌの０．０５Ｍ酢酸に溶解し、等体積のＣＦＡ
（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）と混合したものを、尾の基部のいくつかの部位の皮内に
免疫した（０日目）。ＣＩＩは、４℃で一晩撹拌することによって２ｍｇ／ｍｌの濃度で
溶解した。初回刺激の後の２１日目に、等体積（１００μｌ）のＰＢＳ中の２００μｇの
ＣＩＩを腹腔内注射してマウスの追加免疫を行った。マウスを１週間に３回、末梢関節へ
の関節炎の出現について視覚的に調べ、疾患の重症度に対する関節炎スコア指標を以下の
とおり与えた：０、紅斑及び腫脹のエビデンスなし；１、紅斑及び軽度の腫脹が中足部（
足根）又は足首関節に限定される；２、紅斑及び軽度の腫脹が足首から中足部に広がって
いる；３、紅斑及び中等度の腫脹が足首から中足関節に広がっている；４、紅斑及び重度
の腫脹が足首、足及び指を包囲している。スコアリングは、２人の独立した観察者が、実
験群及びコントロール群に関して知らない状態で行った。図８は、静脈内の線維芽細胞又
はＰＲＰで処置された線維芽細胞による関節炎スコアの低下を図示している。

したがって、本実施例は、個体における１つ以上の自己免疫状態又は炎症状態の処置に
関する。特定の実施形態では、細胞集団をＩＦＮ－ガンマ（並びに必要に応じて１つ以上
のさらなる作用物質及び／又は条件）に曝して、組成物を生成する。追加の実施形態では
、有効量のその組成物を個体に投与して、自己免疫状態又は炎症状態を処置する。

実施例７
制御性Ｔ細胞の培養及び拡大
本実施例は、インビトロ及びインビボにおいて線維芽細胞を用いた、自己免疫を阻害で
きる制御性Ｔ細胞の生成に関する。

本開示の実施形態は、改変された線維芽細胞に曝露された及び／又は曝露されているあ
る特定の制御性Ｔ細胞を調製するため及び臨床で使用するための方法及び組成物を含む。
特定のケースにおいて、それらの線維芽細胞は、少なくともＩＦＮ－ガンマへの曝露によ
って改変された。追加の実施形態は、１つ以上の作用物質（例えば、ＣＤ３リガンド、Ｃ
Ｄ２８リガンド、ラパマイシン、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－ベータ、ＩＬ－２又はそれらの組
み合わせ）への線維芽細胞の曝露を含む。具体的な実施形態は、以下の研究において実証
される：

凍結保存された臍帯血バッグ（１単位バッグ）を解凍し、単核細胞を精製するために、
０．５％ＨＳＡ（Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｗｅｓｔｌａｋｅ Ｖｉｌｌａ
ｇｅ，ＣＡ）を含むＣｌｉｎｉＭＡＣＳ緩衝液（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｂｅ
ｒｇｉｓｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で洗浄した。続いて、細胞ＣＤ２５^＋
細胞濃縮を、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）を製造者の指示書（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂ
ｉｏｔｅｃ，Ｂｅｒｇｉｓｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に従って使用するポ
ジティブ選択によって行った。細胞を生存能についてチェックし、続いてＣＤ３／２８共
発現Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）（ＣｌｉｎＥｘＶｉｖｏ^ＴＭ ＣＤ３／ＣＤ２８、
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｄｙｎａｌ ＡＳ、Ｏｓｌｏ、Ｎｏｒｗａｙ）と、１細胞：３ビ
ーズの比で（Ｔｈａｋｕｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６）共培養することによって刺激し、
１０％ヒトＡＢ血清（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏ－Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ
，ＣＡ）、２ｍＭ Ｌ－グルタミン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、１％ペニ
シリン－ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌ
ａｎｄ，ＮＹ）］及び２００ＩＵ／ｍｌインターロイキン（ＩＬ）－２（ＣＨＩＲＯＮ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ）が補充されたＸ－ＶＩＶＯ１５
培地（Ｃａｍｂｒｅｘ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）中に
１×１０^６細胞／ｍｌで再懸濁した。ＣＤ２５^＋細胞とビーズとのエクスビボ共培養を、
３７℃、５％ＣＯ_２を含む雰囲気における組織培養フラスコ内で行った。このＣＢ由来の
ＣＤ２５^＋濃縮Ｔ細胞を、４８～７２時間ごとに新鮮培地及びＩＬ－２（２００ＩＵ／ｍ
ｌを維持）を加えることによって、１×１０^６細胞／ｍｌで維持した。いくつかの培養物
では、包皮線維芽細胞を加えた。具体的な実施形態では、上に記載されたように、臍帯血
細胞を加える前に包皮線維芽細胞を５０％培養密度で予めプレーティングした。図９は、
制御性Ｔ細胞の培養及び拡大を図示しており、ここで、「Ｘ」は、線維芽細胞及びカクテ
ルの培養を示している。正方形は、線維芽細胞のみを表し、三角形は、カクテルのみを表
す。培養の開始時に、５０，０００個のＴｒｅｇ細胞を加えた。フローサイトメトリーに
よってＴｒｅｇのカウントを行った。

実施例８
同種異系リンパ球によって活性化された線維芽細胞による肝不全の処置
本実施例は、同種異系末梢血単核球で前処置された線維芽細胞の利用による肝不全の処
置及び肝臓再生の増強の手段に関する。１つの実施形態では、肝細胞成長因子の産生を増
強するために同種異系末梢血単核球とともに予め培養された線維芽細胞によって肝不全を
処置する。

ＢＡＬＢ／ｃ起源のマウス線維芽細胞を、１０％ウシ胎仔血清を含むＤＭＥＭ培地中で
培養し、細胞を継代した後、２４時間にわたる等量の同種異系Ｃ５７ＢＬ／６脾細胞への
曝露によって「予備刺激」した。その後、その線維芽細胞を洗浄して脾細胞を除去し、実
験に利用した。

体重が１８～２０ｇで６～８週齢の健康なオスのＣ５７ＢＬ／６マウスを、Ａｎｉｍａ
ｌ Ｃａｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙにおいて１２時間明暗期サイクルの従来の実験環境下に
収容した。それらのマウスは、標準的な市販のマウス食餌及び水を自由に摂取できた。す
べての実験を、承認されたプロトコルに従って行った。動物モデルの準備は、先に記載さ
れたように行った（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。手短に言えば、１８匹のマウスを
、以下の３群にランダムに割り当てた（ｎ＝６）。（１）正常なコントロール群。まずマ
ウスにコーン油の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射を行い、次いで、３０分後に２００ｕｌのＰＢ
Ｓを静脈内に注射した。（２）無処置群。まずマウスに、急性肝臓傷害を誘導するために
単回用量のＣＣｌ_４（Ｓｉｇｍａ－ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，Ｕｎｉｔｅｄ
Ｓｔａｔｅｓ）のｉ．ｐ．注射を行い、３０分後に２００μｌのＰＢＳを静脈内に注射し
た（Ｆａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５）。（３）活性化線維芽細胞処置群。まずマウスに
ＣＣｌ_４のｉ．ｐ．注射を行い、３０分後に、２００μｌのＰＢＳに再懸濁した継代数４
の１×１０^６個の活性化線維芽細胞を静脈内に注射した（Ｓｐｉｅｗａｋ－Ｒｉｎａｕｄ
ｏ ａｎｄ Ｔｈｏｒｇｅｉｒｓｓｏｎ，１９９７）。ＣＣｌ_４の注射の２４時間後にマ
ウスを屠殺し、血液を回収した。次いで、肝臓及び脾臓を、後の解析のために迅速に取り
出すか又は８０℃で凍結保存した。血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及
びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）活性を、それぞれＣｈｅｍｉＬａ
ｂ ＡＬＴ及びＡＳＴアッセイキット（ＩＶＤＬａｂ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｋｏｒｅａ）
を用いる標準的な分光光度的手順によって計測した。酵素活性は、１リットルあたりの国
際単位（ＩＵ／Ｌ）で示した。肝臓スライスを左葉の一部から作製し、１０％中性緩衝ホ
ルマリンで固定し、パラフィンに包埋し、５μｍ切片に切断した。検体を脱脂し、水和さ
せ、通常の様式において標準的なヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色して、形
態を調べた。

図１０Ａ及び１０Ｂでは、正常なコントロールマウス、四塩化炭素で処置されたマウス
、及び四塩化炭素と１０^６個のリンパ球活性化線維芽細胞とを静脈内注射されたマウスか
ら血清サンプルを回収した。リンパ球活性化線維芽細胞は、無処置のＡＬＩ群と比較して
、（図１０Ａ）ＡＬＴ及び（図１０Ｂ）ＡＳＴの血清レベルを有意に低下させた。棒グラ
フは、３つの別個の実験の平均値±ＳＥＭを表している。１元配置分散分析によってＰ値
を求めた。データは、行われた３つの別個の実験の代表である（正常なコントロール群に
対して＃＃ｐ＜０．０１、無処置群に対して^＊ｐ＜０．０５及び^＊＊ｐ＜０．０１、ｎ＝
６）。

マウスをＣＣｌ４（１ｍｌ／ｋｇ体重、トウモロコシで１：３希釈したもの）で処置し
て、急性肝臓傷害を誘導し、次いで、ＣＣｌ_４注射の３０分後に一度だけ、リンパ球活性
化線維芽細胞（１×１０６／０．２ｍｌ／マウス、ＰＢＳに懸濁したもの）を２４時間、
静脈内投与した。ＣＣｌ４注射の２４時間後に、肝臓の写真を撮影した。図１１Ａは、肝
臓の肉眼的な病理学的変化を示している。図１１Ｂは、肝臓の組織学的切片の代表的な顕
微鏡写真を示している（２００×、ヘモトキシリン及びエオシン染色）。無処置群の肝臓
は、正常なコントロール群の肝臓よりも膨らんだ肝細胞、アポトーシス及びネクローシス
を示し、それらは、ｐｐＭＳＣ処置によって有意に軽減された（ｎ＝６）。

実施例９
線維芽細胞によって再プログラムされた単球によるＨＵＶＥＣ培養物からのＶＥＧＦ産
生の刺激
マクロファージは、炎症の制御並びに組織リモデリングなどの生理学的プロセスにおい
て主要な役割を果たす自然免疫系の重要な構成要素である（ｖａｎ Ｆｕｒｔｈ ａｎｄ
Ｃｏｈｎ，１９６８；Ｗｙｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。このマクロファージの多
様な役割は、創傷治癒（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１７；Ｖａｎｎｅｌｌａ ａｎ
ｄ Ｗｙｎｎ，２０１７；Ｂｏｄｄｕｐａｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｓｎｙｄｅ
ｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６）から心筋梗塞（Ｇｏｍｂｏｚｈａｐｏｖａ ｅｔ ａｌ．
，２０１７；Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，２０１１；Ｍａ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｌｅｅ
ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｖｅ
ｌａｓｃｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４）、腎不全（Ｇｕｉｔｅｒａｓ ｅｔ ａｌ．，２
０１６；Ｍｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１
５；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１５）及び肝不全（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０１７）に
至る状態において見られる。

分化したマクロファージ及びそれらの前駆体は、それらの表現型及び機能を変化させる
ことによって微小環境シグナルに適応できる万能な細胞である（Ｇｒａｔｃｈｅｖ ｅｔ
ａｌ．，２００６）。それらは、長年にわたって研究されてきたが、これらの細胞は、
古典的なＭ１及び代替のＭ２として知られる異なる亜集団を含むことが最近示されただけ
である（Ｍｉｌｌｓ，２０１２）。Ｔｈ１細胞の命名法をまねて、Ｍ１マクロファージは
、ＩＦＮ－ガンマ及びＬＰＳによって誘導されるマクロファージの炎症促進性のサブタイ
プと説明される。それらは、エフェクター分子（例えば、活性酸素種）及び炎症促進性サ
イトカイン（例えば、ＩＬ－１２、ＴＮＦ－アルファ及びＩＬ－６）を産生し、Ｔｈ１極
性化応答を引き起こす（Ｍｉｌｌｓ ａｎｄ Ｌｅｙ，２０１４）。Ｍ２マクロファージ
は、さらにＭ２ａ（ＩＬ－４又はＩＬ－１３への曝露後）、Ｍ２ｂ（免疫複合体及びＴｏ
ｌｌ様受容体又はＩＬ－１ｂリガンド）及びＭ２ｃ（ＩＬ－１０、ＴＧＦ－ベータ及び糖
質コルチコイドによって誘導される）に細分される。３つすべてのサブタイプが、ＩＬ－
１０．ｓｕｐ．ｈｉｇｈ（特に、Ｍ２ｂ＋Ｍ２ｃ）、ＲＥＬＭ－アルファ^ｈｉｇｈ（マウ
スのみ）、ＣＤ２０６^ｈｉｇｈ及びＩＬ－１２^ｌｏｗ（Ｍ２ａ）を特徴とする抗炎症性の
表現型を有する（Ｍａｎｔｏｖａｎｉ ｅｔ ａｌ．，２００４）。

正常な炎症において、マクロファージは、これらの極性化状態の間でダイナミックな切
り替えを起こす。Ｍ１マクロファージは、初期の段階においてより豊富に存在し、クリア
ランス及び他のエフェクター細胞の動員を媒介するのに対し、Ｍ２マクロファージは、炎
症の終わりに向かって優勢となり、血管新生及び新しい組織形成を促進する（Ｆｅｒｒａ
ｎｔｅ ａｎｄ Ｌｅｉｂｏｖｉｃｈ，２０１２）。炎症の経過は、この適切にバランス
がとれたＭ１／Ｍ２マクロファージの比に強く依存する。Ｍ１からＭ２への優勢の切り替
えに失敗すると、慢性炎症における炎症促進性の環境の永続化及び強化に至ることがある
。ゆえに、Ｍ１での停止は、炎症の消散を妨げ得る（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。

Ｍ１／Ｍ２比の乱れは、いくつかの自己免疫疾患及び慢性炎症性疾患、並びに代謝関連
疾患（例えば、糖尿病及び代謝症候群）において観察された（Ｍａ ｅｔ ａｌ，．２０
１３）。肥満個体由来の脂肪組織マクロファージ（ＡＴＭ）は、Ｍ２（ＣＤ２０６^＋、Ｃ
Ｄ３０１^＋、Ａｒｇ１^＋）からＭ１（ＮＯＳ２^＋、ＣＤ１１ｃ^＋）への表現型のシフトを
起こすと示され、炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＴＮＦ－アルファ及びＩ
Ｌ－１ベータ）を産生し（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１３）、ゆえにレプチン及びアデ
ィポネクチンの効果をアンタゴナイズした（Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。同様の
Ｍ１関連病理が、アテローム性動脈硬化症などの循環器疾患（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｖｅ
ｌａｓｃｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４）、及び自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ（ｄ
ｅ Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１５）、多発性硬化症（Ｇｕｉｔｅｒａｓ ｅｔ
ａｌ．，２０１６）、全身性エリテマトーデス（Ｍｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５）及
びクローン病（Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１５））と関連した。

初期の炎症反応中のＭ１マクロファージの残留も、いくつかの慢性皮膚疾患において炎
症の消散を妨げ得る。糖尿病に伴う皮膚潰瘍において炎症促進性Ｍ１マクロファージの数
を減少させると、創傷の炎症が弱まり、創傷閉鎖が促進し得る。慢性静脈性潰瘍を有する
ヒト患者では、Ｍ１マクロファージの残留によって、活性酸素種の生成が誘導され、それ
がＤＮＡ損傷を引き起こし、不完全な組織修復に至る。活性化（おそらくＭ１）マクロフ
ァージは、別の慢性皮膚疾患であるアトピー性皮膚炎とも関連し、アトピー性皮膚炎は、
先進国の小児の１０～２０％及び成人の１～３％が罹患しており、経済的影響が数十億ド
ルに達し、有病率が上昇している。

Ｍ１及びＭ２マクロファージの重要性を考えると、Ｍ２マクロファージを生成する手段
及び方法を得ることは、当該分野において有用である。本開示は、このニーズに応える。

インビトロにおいて血管新生プロセスを再現するために、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵ
ＶＥＣ）の培養を９６ウェルプレートにおいて行う。ＨＵＶＥＣ細胞を、１ウェルあたり
２０，０００細胞の濃度でプレーティングする。様々な濃度の単球、線維芽細胞、又は予
め線維芽細胞とともにインキュベートしておいた単球を、ＨＵＶＥＣ細胞に加える。

単球を、末梢血単核球のプラスチックへの接着性によって得て、ＣＤ１４磁気活性化分
離（ＭＡＣＳ）によって精製する。線維芽細胞をＡＴＣＣから購入する。単球を線維芽細
胞とともにインキュベーションするために、１対１の比の単球と線維芽細胞とを、１０％
ウシ胎仔血清を含むＲＭＰＩ培地中、３７℃にて、５％二酸化炭素を含む十分に加湿され
た雰囲気において４８時間、培養する。培養の後、細胞をトリプシン処理し、ＭＡＣＳを
用いてＣＤ１４選択によって単球を精製する。その後、細胞を１ウェルあたり合計２００
ｕＬの培地においてＨＵＶＥＣ細胞と記載の比でインキュベートする。４８時間培養した
後、条件培地を抽出し、ＥＬＩＳＡによってＶＥＧＦ産生を解析する（図１２）。

実施例１０
線維芽細胞によって再プログラムされた単球によるＨＵＶＥＣ培養物からのＩＬ－３３
産生の刺激
インビトロにおいて血管新生プロセスを再現するために、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵ
ＶＥＣ）の培養を９６ウェルプレートにおいて行う。ＨＵＶＥＣ細胞を、１ウェルあたり
２０，０００細胞の濃度でプレーティングする。様々な濃度の単球、線維芽細胞、又は予
め線維芽細胞とともにインキュベートしておいた単球を、ＨＵＶＥＣ細胞に加える。単球
を、末梢血単核球のプラスチックへの接着性によって得て、ＣＤ１４磁気活性化分離（Ｍ
ＡＣＳ）によって精製する。線維芽細胞をＡＴＣＣから購入する。単球を線維芽細胞とと
もにインキュベーションするために、１対１の比の単球と線維芽細胞とを、１０％ウシ胎
仔血清を含むＲＭＰＩ培地中、３７℃にて、５％二酸化炭素を含む十分に加湿された雰囲
気において４８時間、培養する。培養の後、細胞をトリプシン処理し、ＭＡＣＳを用いて
ＣＤ１４選択によって単球を精製する。その後、細胞を１ウェルあたり合計２００ｕＬの
培地においてＨＵＶＥＣ細胞と記載の比でインキュベートする。４８時間培養した後、条
件培地を抽出し、ＥＬＩＳＡによってＩＬ－３３産生を解析する（図１３）。

実施例１１
線維芽細胞によって再プログラムされた単球によるＨＵＶＥＣ増殖の刺激
インビトロにおいて血管新生プロセスを再現するために、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵ
ＶＥＣ）の培養を９６ウェルプレートにおいて行う。ＨＵＶＥＣ細胞を、１ウェルあたり
２０，０００細胞の濃度でプレーティングする。様々な濃度の単球、線維芽細胞、又は予
め線維芽細胞とともにインキュベートしておいた単球を、ＨＵＶＥＣ細胞に加える。単球
を、末梢血単核球のプラスチックへの接着性によって得て、ＣＤ１４磁気活性化分離（Ｍ
ＡＣＳ）によって精製する。線維芽細胞をＡＴＣＣから購入する。単球を線維芽細胞とと
もにインキュベーションするために、１対１の比の単球と線維芽細胞とを、１０％ウシ胎
仔血清を含むＲＭＰＩ培地中、３７℃にて、５％二酸化炭素を含む十分に加湿された雰囲
気において４８時間、培養する。培養の後、細胞をトリプシン処理し、ＭＡＣＳを用いて
ＣＤ１４選択によって単球を精製する。

加えた細胞を、マイトマイシンＣとともにインキュベーションすることによって（５ｕ
ｇ／ｍｌ、１２時間）、有糸分裂的に不活性化する。続いて、細胞を、１ウェルあたり合
計２００ｕＬの培地において、７２時間、記載の比でＨＵＶＥＣ細胞とともにインキュベ
ートする。１ｕＣｕｒｉｅ／ｍｌのトリチウムチミジンを、培養の最後の１２時間で加え
、シンチレーション測定法によって増殖を定量する。増殖は、毎分カウント数として表現
する（図１４）。

実施例１２
線維芽細胞によって再プログラムされた自家Ｔ細胞を用いた血管新生の刺激／創傷治癒
の加速
虚血性疾患は、今日の社会の著しい罹患率及び死亡率の原因である。手術又は血管内イ
ンターベンションなどの現在用いられている介入の成功は限定的であり、再狭窄及び炎症
反応に部分的に起因して、再介入が必要になることが多い。虚血性疾患を処置する有望な
手段の１つは、血管新生療法の使用によるものである。しかしながら、例えば重症虚血肢
を有する患者への血管新生因子の投与は、初期の試験ではいくらかの利点を誘導するが、
無作為化試験のデータは、現在までに広範な使用を裏付けるものではない。ＨＩＦ－１ア
ルファなどの上流転写因子のトランスフェクションは、トランスフェクション後に複数の
成長因子が誘導されるという点において天然の血管新生を模倣するので、有望なアプロー
チである。しかしながら、臨床結果は、確固たる結論に達するには早すぎるものであった
。本開示は、線維芽細胞によって再プログラムされたＰＢＭＣを用いてＴ細胞を再プログ
ラムすることによって、血管新生療法の使用の限界を克服する。

実施例１３
線維芽細胞によって再プログラムされた末梢血単核球によるＨＵＶＥＣ増殖の刺激
インビトロにおいて血管新生プロセスを再現するために、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵ
ＶＥＣ）の培養を９６ウェルプレートにおいて行う。ＨＵＶＥＣ細胞を、１ウェルあたり
２０，０００細胞の濃度でプレーティングする。様々な濃度のＰＢＭＣ、線維芽細胞、又
は予め線維芽細胞とともにインキュベートしておいたＰＢＭＣを、ＨＵＶＥＣ細胞に加え
る。

末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をフィコール密度勾配によって得る。線維芽細胞をＡＴＣＣ
から購入する。

ＰＢＭＣを線維芽細胞とともにインキュベーションするために、１対１の比のＰＢＭＣ
と線維芽細胞とを、１０％ウシ胎仔血清を含むＲＭＰＩ培地中、３７℃にて、５％二酸化
炭素を含む十分に加湿された雰囲気において４８時間、培養する。培養の後、非接着性細
胞をピペッティングによって回収する。細胞をリン酸緩衝食塩水で洗浄し、ＲＰＭＩ培地
に再懸濁し、続いて、１ウェルあたり合計２００ｕＬの培地において、記載の比でＨＵＶ
ＥＣ細胞とインキュベートする。４８時間後に、トリチウムチミジン取り込みによって、
増殖を評価した（図１５）。

実施例１４
ストレスを受けた線維芽細胞による樹状細胞ＣＤ８０の刺激
末梢血単核球をフィコール法によって末梢血から単離した。簡潔には、血液を、ヘパリ
ンＥＤＴＡを用いて抽出し、５０ｍｌコニカルチューブ内のＦｉｃｏｌｌ Ｈｉｓｔｏｐ
ａｑｕｅに重層した。細胞を１２００ｇで３０分間遠心し、単核細胞を単離した。前記単
核細胞をリン酸緩衝食塩水で２回洗浄し、１０％ウシ胎仔血清を含むＲＰＭＡ培地に再懸
濁した。細胞を６ウェルフラスコにプレーティングし、２時間、接着させた。接着細胞を
単球の起源として使用した。単球を、コントロール線維芽細胞並びにストレスを受けた線
維芽細胞の存在下、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４及び１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦ中で７
日間培養した。

コントロール線維芽細胞及びストレスを受けた線維芽細胞を作製するために、包皮線維
芽細胞をＡＴＣＣから購入し、製造者の指示書（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ）のとお
り１０％ウシ胎仔血清及び抗生物質／抗真菌剤混合物が補充されたＭｅｄｉａ１０６（Ｔ
ｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）中で培養した。７５％培養密度に達するまで、細胞を、３７
℃、５％ＣＯ_２の十分に加湿された雰囲気において、Ｔ－１７５フラスコ内で培養した。
細胞を４０℃のウォーターバス内で４時間加熱することによって、高熱を適用した。コン
トロール細胞は、３７℃のウォーターバスに入れた。血清枯渇の場合は、包皮線維芽細胞
を、上に記載されたように培養し、ウシ胎仔血清を含まないＭｅｄｉａ１０６に２４時間
曝露した。

組織培養の７日後に、樹状細胞を成熟マーカーＣＤ８０についてフローサイトメトリー
で評価した。図１６に見られるように、コントロール線維芽細胞と比べて、ストレスを受
けた線維芽細胞とともに培養したとき、ＣＤ８０の高発現が観察された。

実施例１５
ストレスを受けた線維芽細胞による樹状細胞ＣＤ８６の刺激
末梢血単核球をフィコール法によって末梢血から単離した。簡潔には、血液を、ヘパリ
ンＥＤＴＡを用いて抽出し、５０ｍｌコニカルチューブ内のＦｉｃｏｌｌ Ｈｉｓｔｏｐ
ａｑｕｅに重層した。細胞を１２００ｇで３０分間遠心し、単核細胞を単離した。前記単
核細胞をリン酸緩衝食塩水で２回洗浄し、１０％ウシ胎仔血清を含むＲＰＭＡ培地に再懸
濁した。細胞を６ウェルフラスコにプレーティングし、２時間、接着させた。接着細胞を
単球の起源として使用した。単球を、コントロール線維芽細胞並びにストレスを受けた線
維芽細胞の存在下、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４及び１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦ中で７
日間培養した。

コントロール線維芽細胞及びストレスを受けた線維芽細胞を作製するために、包皮線維
芽細胞をＡＴＣＣから購入し、製造者の指示書（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ）のとお
り１０％ウシ胎仔血清及び抗生物質／抗真菌剤混合物が補充されたＭｅｄｉａ１０６（Ｔ
ｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）中で培養した。７５％培養密度に達するまで、細胞を、３７
℃、５％ＣＯ_２の十分に加湿された雰囲気において、Ｔ－１７５フラスコ内で培養した。
細胞を４０℃のウォーターバス内で４時間加熱することによって、高熱を適用した。コン
トロール細胞は、３７℃のウォーターバスに入れた。血清枯渇の場合は、包皮線維芽細胞
を、上に記載されたように培養し、ウシ胎仔血清を含まないＭｅｄｉａ１０６に２４時間
曝露した。

組織培養の７日後に、樹状細胞を成熟マーカーＣＤ８６についてフローサイトメトリー
で評価した。図１７に見られるように、コントロール線維芽細胞と比べて、ストレスを受
けた線維芽細胞とともに培養したとき、ＣＤ８６の高発現が観察された。

実施例１６
高熱又は血清枯渇線維芽細胞における培養によるＣＤ８増殖の増加
包皮線維芽細胞をＡＴＣＣから購入し、製造者の指示書（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅ
ｒ）のとおり１０％ウシ胎仔血清及び抗生物質／抗真菌剤混合物が補充されたＭｅｄｉａ
１０６（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）中で培養した。７５％培養密度に達するまで、細
胞を、３７℃、５％ＣＯ_２の十分に加湿された雰囲気において、Ｔ－１７５フラスコ内で
培養した。細胞を４０℃のウォーターバス内で４時間加熱することによって、高熱を適用
した。コントロール細胞は、３７℃のウォーターバスに入れた。

血清枯渇の場合は、包皮線維芽細胞を、上に記載されたように培養し、ウシ胎仔血清を
含まないＭｅｄｉａ１０６に２４時間曝露した。

続いて、細胞をトリプシン処理し、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）によって単離され
たＣＤ８細胞とともに５０％培養密度でＴ－１７５フラスコにプレーティングした。健康
ドナー由来の末梢血単核球を、単離用のＴ細胞の起源として使用した。ＣＤ８細胞及び線
維芽細胞の培養を、記載の比で確立した。

４８時間のインキュベーションの後、非接着性細胞を洗浄によって単離し、フィトヘマ
グルチニン（５ｕｇ／ｍｌ）で２４時間刺激した。１マイクロキュリー／ｍｌのトリチウ
ムチミジンを１２時間パルスすることによるトリチウムチミジン取り込みによって、増殖
を評価した。増殖は、シンチレーション測定法による毎分カウント数として表現した（図
１８）。

実施例１７
ＰＧＥ２中で培養された線維芽細胞及び単球の投与による拡張末期容量の保存
心筋梗塞を模倣するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを左冠動脈前下行枝の結紮に供した
。１日目に、マウスをヒト単球、ヒト線維芽細胞又はその組み合わせで処置した。ヒト単
球とヒト線維芽細胞との組み合わせの培養を、１００ｎｇ／ｍｌのＰＧＥ－２における３
６時間の培養によって行った。細胞をトリプシン処理によって解離し、洗浄し、静脈内投
与した。投与は、１００万個の細胞で行った。拡張末期容量を心エコー図によって計測し
た。１群あたり１０匹のマウスを使用した。組み合わせで処置された動物では、心室容量
の有意な保存が観察された（図１９）。菱形は単球であり、正方形は線維芽細胞であり、
三角形は食塩水であり、「ｘ」は、単球と線維芽細胞との組み合わせである。

実施例１８
線維芽細胞及びその集団による移植片対宿主病の処置
実施例Ａ：前臨床試験
８～１２週齢の雌Ｂ６マウスを、０日目に、１５０ｍｇ／ｋｇの５－ＦＵ（Ｓｉｇｍａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の腹腔内注射で処置して、
同種異系再構成を可能にできる造血傷害の状態を誘導した。

５－ＦＵを投与した後、１日目に、１処置あたり１０匹のマウスの群に、リン酸緩衝食
塩水（ＰＢＳ）コントロール、又はＢＡＬＢ／ｃマウス由来の１５，０００；３０，００
０；若しくは６０，０００個の骨髄単核細胞を投与した。

同時にマウスを、プラセボ（食塩水）及びレシピエント起源（Ｂ６）、ドナー起源（Ｂ
ＡＬＢ／ｃ）又は第三者のコントロール（Ｃ３Ｈ）の線維芽細胞で、マウス１匹あたり１
００，０００個の細胞の濃度において、尾静脈を介して静脈内処置した。

臨床病理学に基づくと、ＢＡＬＢ／ｃマウス由来の３０，０００；又は６０，０００個
の骨髄単核細胞を投与されたすべてのコントロールＢ６マウスにおいてＧＶＨＤが生じた
。同種異系、レシピエント又はドナー起源由来の線維芽細胞を投与されたマウスは、ＧＶ
ＨＤを起こさなかったか、又はコントロールと比べて顕著に低減した。

実施例Ｂ：炎症マーカーの臨床上の減少
Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）が正常よりも増加している、ＧＶＨＤに罹患している１
２人の患者に、＞８０％のＣＤ７３及び＞８０％のＣＤ１０５を発現している皮膚起源に
由来する２０００万個の線維芽細胞を静脈内投与する。ＣＲＰ（図２０Ａ～２０Ｃ）、Ｔ
ＮＦアルファ（図２１Ａ～２１Ｃ）及びＩＬ－６（図２２Ａ～２２Ｃ）のレベルを、細胞
投与前並びに１、２及び３週間後に計測した。

濃度は、ピコグラム／ｍｌを単位として表現する。重要なことに、線維芽細胞の投与は
、ＩＦＮ－ガンマ産生の増加（図２３Ａ～２３Ｃ）及びＮＫ活性の増加（図２４Ａ～２４
Ｃ）と関連したことから、炎症を低減しつつ、選択的な抗癌効果が示唆される。

実施例１９
多発性硬化症を有する患者における線維芽細胞の臨床試験
処置抵抗性の二次性進行型ＭＳを有する患者において静脈内投与された線維芽細胞の安
全性を明らかにするために、臨床試験を行う。安全性は、処置に関連する有害事象が無い
ことと定義される。有効性パラメータは、ａ）ＥＤＳＳ；ｂ）Ｓｃｒｉｐｐｓ神経評価尺
度（ＮＲＳ）；ｃ）定速聴覚的連続加算テスト（ＰＡＳＡＴ）；ｄ）９ホールペグ試験；
ｅ）２５歩歩行時間；ｆ）ショートフォーム３６（ＳＦ－３６）ＱｏＬ質問票；ｇ）ガド
リニウムＭＲＩの変化並びに；ｅ）ＣＤ４、ＣＤ２５及びＦｏｘＰ３発現によって定義さ
れる制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の変化というエンドポイントを含む。

０日目に、Ｉｓｏｌｙｔｅに懸濁した５０ｍｌの体積で２５００万個、５０００万個又
は１億個の線維芽細胞を静脈内投与するように、患者を無作為化する。多発性硬化症を有
する患者に線維芽細胞を投与する理由は、以前の研究が、多発性硬化症の動物モデルの抑
制においてこれらの細胞の有効性を示したから、並びに以前にＭＳ動物モデルにおいて臨
床で利用されていた骨髄間葉系幹細胞と比べて優れた免疫調節活性が実証されたからであ
る。詳細には、線維芽細胞は、ＴＮＦ－アルファ、ＩＦＮ－ガンマ、ＩＬ－１２及びＩＬ
－１７の発現を阻害しつつ、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、インドールアミン２，３デオキシゲ
ナーゼ（ＩＤＯ）及びＨＬＡ－Ｇの発現を増加させると実証された。

具体的な実施形態では、以下の来院スケジュールが利用され得る。

来院１回目：スクリーニングのための来院及びベースライン評価（注入の１週間前）
インフォームドコンセント
病歴
理学的検査
ＭｃＤｏｎａｌｄ及びＰｏｓｅｒ基準に従ったＭＳ診断
臨床検査－化学及びＣＢＣ
ＥＤＳＳ
Ｓｃｒｉｐｐｓ神経評価尺度（ＮＲＳ）
定速聴覚的連続加算テスト（ＰＡＳＡＴ）
９ホールペグ試験
２５歩歩行時間
ショートフォーム３６（ＳＦ－３６）ＱｏＬ質問票
ガドリニウムＭＲＩ
Ｔｒｅｇ評価

来院２回目：０日目、最初の注入（ＥＲＣ－１２４投与）
ＪＤ－００１静脈内注射
注射部位評価
ＥＫＧ

来院３回目：７日目、通話
・有害事象

来院４回目：３０日目、評価
・ＥＫＧ
・有害事象評価
・臨床検査－化学及びＣＢＣ
・ＥＤＳＳ
・Ｓｃｒｉｐｐｓ神経評価尺度（ＮＲＳ）
・定速聴覚的連続加算テスト（ＰＡＳＡＴ）
・９ホールペグ試験
・２５歩歩行時間
・ショートフォーム３６（ＳＦ－３６）ＱｏＬ質問票
・ガドリニウムＭＲＩ
・Ｔｒｅｇ評価

来院５回目：９０日目、評価
・臨床検査－化学及びＣＢＣ
・ＥＤＳＳ
・Ｓｃｒｉｐｐｓ神経評価尺度（ＮＲＳ）
・定速聴覚的連続加算テスト（ＰＡＳＡＴ）
・９ホールペグ試験
・２５歩歩行時間
・ショートフォーム３６（ＳＦ－３６）ＱｏＬ質問票
・Ｔｒｅｇ評価

来院６回目：１８０日目、評価
・臨床検査－化学及びＣＢＣ
・ＥＤＳＳ
・Ｓｃｒｉｐｐｓ神経評価尺度（ＮＲＳ）
・定速聴覚的連続加算テスト（ＰＡＳＡＴ）
・９ホールペグ試験
・２５歩歩行時間
・ショートフォーム３６（ＳＦ－３６）ＱｏＬ質問票
・ガドリニウムＭＲＩ
・Ｔｒｅｇ評価

被験体は、スクリーニングのための来院、及び細胞投与前の７日以内に行うベースライ
ン評価を受けなければならず、すべての選択規準及び除外規準を満たさなければならない
。すべての選択規準及び除外規準を満たしたことを保証するすべてのベースライン評価の
結果が、その被験体の登録前に試験責任医師又はその被指名人によって審査されなければ
ならない。当該試験のすべての態様について被験体に知らせなければならず、試験開始前
に被験体から書面によるインフォームドコンセントを得なければならない。

選択規準：
・ＭｃＤｏｎａｌｄ及びＰｏｓｅｒ基準に従って、臨床的に確定的な二次性進行型ＭＳを
有する１８～６５歳。
・総合障害度評価尺度（ＥＤＳＳ）スコアが２．０～６．５である。
・再発ではなく一定の進行が、前の２年間における障害の増大の主な原因でなければなら
ない。進行が、ＥＤＳＳの少なくとも１点の上昇又は患者メモにおける障害の増大の臨床
記述から明らかであり得る。
・ガドリニウムＭＲＩを受けることができる。

除外規準：
・出血性障害。
・治験参加前の６ヶ月以内にインターフェロンベータ又は酢酸グラチラマーを投与されて
いた。
・心臓血管の状態が不安定な患者。
・試験担当医師によって処置が必要であると判断されていない場合を除く、活動性感染を
有する患者。
・ＨＩＶ、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎への感染の血清学的エビデンスを有する患者。
・ａ）閉経後ではない、ｂ）外科的に生殖不能にされていない、又はｃ）許容され得る避
妊方法：経口避妊薬、ノルプラント、デポプロベラ、及び殺精子ゲルと併用するバリアデ
バイスを用いない、性的に活発な女性。
・悪性病変を有することが判明しているか又は以前に悪性病変を有していた患者。試験担
当医師の意見によれば、線維芽細胞による処置を受けることを危険にし得る任意の状態又
は任意の状況を有する患者。
・網膜症を有する患者。
・ウシの製品に対してアレルギーを有する患者。

線維芽細胞には、ＷＨＯの血液バンキング規制及び同種異系製品に対する２１ＣＦＲ１
２７１ Ｓｕｂｐａｒｔ Ｃのドナー規制に従って純度及び汚染物質の欠如を証明する各
バッチの分析証明書が提供される。Ｃｈａｒｔｅｒ ＣＦ－５０のバッグに、生成、試験
されたセルバンクからの細胞製品が充填される。それらのバッグの充填は、継代数９のワ
ーキングセルバンクから予め拡大された細胞を用いて、Ｇｅｎｅｒａｌ ＢｉｏＴｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙが行う。細胞を、１０％ＤＭＳＯを含む５０ｍＬのＩｓｏｌｙｔｅ Ｓ Ｍ
ｕｌｔｉ－Ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂ．Ｂｒａｕｎ Ｍｅｄｉｃａ
ｌ）に再懸濁する。各Ｃｈａｒｔｅｒ ＣＦ－５０バッグには、５０ｍｌの容積に２５０
０万個、５０００万個又は１億個の細胞が入れられている。１臨床用量あたりおよそ２５
００万個、５０００万個又は１億個の細胞が必要である。

線維芽細胞を投与される患者は、ＥＤＳＳスコアの用量依存的低下を示し、ガドリニウ
ムＭＲＩにおいてプラークの消散を示す。

本明細書において言及されたすべての特許及び刊行物が、本開示が関係する当業者のレ
ベルを示唆する。すべての特許及び刊行物は、各個別の刊行物が参照により援用されると
明確かつ個別に示されたのと同程度に、参照により本明細書中に援用される。
＜米国特許＞
U.S. Patent No. 9,637,721
U.S. Patent No. 9,580,687
U.S. Patent No. 7,709,229
U.S. Patent No. 6,162,643
U.S. Patent No. 6,103,529
U.S. Patent No. 6,048,728
U.S. Patent No. 5,324,666
U.S. Patent No. 4,560,655
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本開示及びその利点を詳細に記載してきたが、添付の請求項によって定義される本発明
の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更、置換及び改変が本明細書中で行われ
得ることが理解されるべきである。さらに、本願の範囲は、本明細書に記載されたプロセ
ス、機械、製造、組成物、手段、方法及び工程の特定の実施形態に限定されると意図され
ていない。当業者は、本明細書中に記載される対応する実施形態と実質的に同じ機能を果
たす又は実質的に同じ結果を達成する、すでに現在存在している又は後に開発される、プ
ロセス、機械、製造、組成物、手段、方法又は工程が本開示に従って利用され得ることを
本開示の開示からすぐに認識する。したがって、添付の請求項は、そのようなプロセス、
機械、製造、組成物、手段、方法又は工程の範囲内に含めるように意図されている。

Claims (243)

1. 活性化線維芽細胞又は活性化免疫細胞又は活性化免疫細胞誘導体を作製するインビトロ
   方法であって、該方法は、
   （ａ）免疫細胞由来の１つ以上の作用物質が、線維芽細胞を活性化して活性化線維芽細胞
   にするような条件下、及び線維芽細胞由来の１つ以上の抗原が、該免疫細胞からの１つ以
   上のサイトカインの産生を誘発して活性化免疫細胞を産生するような条件下において、該
   線維芽細胞を該免疫細胞に曝露する工程；及び／又は
   （ｂ）１つ以上の成長因子及び／又は１つ以上のサイトカインが、線維芽細胞を活性化し
   て活性化線維芽細胞にするような条件下において、該１つ以上の成長因子及び／又は該１
   つ以上のサイトカインに該線維芽細胞を曝露する工程
   を含む、方法。
2. 治療有効量の前記活性化線維芽細胞及び／又は前記活性化免疫細胞が、それを必要とす
   る個体に提供される、請求項１に記載の方法。
3. 前記免疫細胞が、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、単球、単球前駆細胞、リンパ球、マクロ
   ファージ又はそれらの混合物である、請求項１又は２に記載の方法。
4. 工程（ａ）において、前記線維芽細胞を活性化して活性化線維芽細胞にする前記免疫細
   胞由来の前記１つ以上の作用物質が、サイトカイン、成長因子又はそれらの混合物である
   、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記サイトカインが、ＩＦＮ－ガンマ、ＴＮＦ－アルファ、インターロイキン（ＩＬ）
   －１、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－３
   ３及びそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４に記載の方法。
6. 前記成長因子が、ＦＧＦ－１、ＶＥＧＦ及びそれらの組み合わせからなる群より選択さ
   れる、請求項４又は５に記載の方法。
7. 工程（ａ）において、前記免疫細胞からの１つ以上のサイトカインの産生を誘発する前
   記線維芽細胞由来の１つ以上の抗原が、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－ベータ、ＩＬ－３２、ＩＬ
   －３５、ＩＬ－１２ｐ４０ホモ二量体、ＩＬＡ－Ｇ、ＩＬＴ－３、インドールアミン２，
   ３デオキシゲナーゼ又はそれらの組み合わせである、請求項１～６のいずれか一項に記載
   の方法。
8. 工程（ｂ）において、前記線維芽細胞を活性化して活性化線維芽細胞にする前記１つ以
   上のサイトカインが、ＩＦＮ－ガンマ、ＴＮＦ－アルファ、インターロイキン（ＩＬ）－
   １、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－３３
   又はそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載
   の方法。
9. 工程（ｂ）において、前記線維芽細胞を活性化して活性化線維芽細胞にする前記１つ以
   上の成長因子が、ＩＦＮ－ガンマ、ＴＮＦ－アルファ、インターロイキン（ＩＬ）－１、
   ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－３３又は
   それらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方
   法。
10. 工程（ａ）と工程（ｂ）とが同時に起きる、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法
    。
11. 工程（ａ）と工程（ｂ）とが異なる時点において起きる、請求項１～９のいずれか一項
    に記載の方法。
12. 前記線維芽細胞が、１つ以上のさらなる作用物質及び／又は条件に曝露される、請求項
    １～１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記免疫細胞が、１つ以上のさらなる作用物質及び／又は条件に曝露される、請求項１
    ～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記さらなる条件が、培地への曝露を含む、請求項１２又は１３に記載の方法。
15. 前記培地が、ロズウェルパーク記念研究所（ＲＰＭＩ－１６４０）、ダルベッコ変法基
    本培地（ＤＭＥＭ）、イーグル変法基本培地（ＥＭＥＭ）、Ｏｐｔｉｍｅｍ、イスコーブ
    培地又はそれらの組み合わせを含む、請求項１４に記載の方法。
16. 前記さらなる作用物質が、ヒト多血小板血漿、血小板溶解物、臍帯血血清、自己血清、
    ヒト血清、血清代替物又はそれらの組み合わせを含む、請求項１２～１５のいずれか一項
    に記載の方法。
17. 前記免疫細胞が、ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞である、請求項１～１６のいずれか一項に記
    載の方法。
18. 前記ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞が、同種異系ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞に由来する、請求項
    １７に記載の方法。
19. 前記ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞が、胸腺、末梢血、臍帯血、Ｇ－ＣＳＦ動員末梢血、脂肪
    組織及び胎盤又はそれらの組み合わせから単離される、請求項１７又は１８に記載の方法
    。
20. 前記制御性Ｔ細胞の集団が、選択下での培養において維持される、請求項１７～１９の
    いずれか一項に記載の方法。
21. 前記培養中の制御性Ｔ細胞が、約７～１２μｍの直径を有するように選択される、請求
    項２０に記載の方法。
22. 前記線維芽細胞が、有効量のＰＢＭＣに曝露されて、前記線維芽細胞からの肝細胞成長
    因子の産生を増大させる、かつ／又はオーバル細胞増殖を増大させることができる活性を
    前記線維芽細胞に付与する、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記免疫細胞が、単球、単球前駆細胞又はそれらの混合物である、請求項１～２２のい
    ずれか一項に記載の方法。
24. 前記単球及び／又は単球前駆細胞が、以下の特徴：（ａ）末梢血単核球に由来すること
    ；（ｂ）ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１１ｂ；ＣＤ１４、ＣＤ１６のうちの１つ以上を発現
    すること、（ｃ）プラスチック接着性であること；（ｄ）骨髄前駆細胞であること；（ｅ
    ）骨髄に由来すること；及び／又は（ｆ）動員末梢血に由来することのうちの１つ以上を
    有する、請求項２３に記載の方法。
25. 前記動員末梢血が、Ｇ－ＣＳＦ、ｆｌｔ－３リガンド及び／又はプレリキサホルのうち
    の１つ以上で個体を前処置することによって生成される、請求項２４に記載の方法。
26. 前記線維芽細胞が、線維芽細胞の増殖に適した培地中で培養される、請求項１～２５の
    いずれか一項に記載の方法。
27. 線維芽細胞の増殖を可能にする前記培地が、１つ以上の分裂促進因子を含む、請求項２
    ６に記載の方法。
28. 前記曝露工程が、エクスビボ培養又はインビボにおいて行われる、請求項１～２７のい
    ずれか一項に記載の方法。
29. 前記免疫細胞が、未熟樹状細胞であり、前記線維芽細胞が、ストレスを受けた線維芽細
    胞である、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
30. ＣＤ８Ｔ細胞が、前記免疫細胞から得られ、前記線維芽細胞が、ストレスを受けた線維
    芽細胞である、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
31. 細胞集団の免疫原性を低下させる方法であって、該集団は、ＩＦＮ－ガンマを含む組成
    物並びに必要に応じて１つ以上のさらなる作用物質及び／又は条件に曝される、方法。
32. 前記細胞集団が、線維芽細胞、膵ベータ細胞、膵島、肝細胞、ニューロン、軟骨細胞、
    多能性幹細胞又はそれらの誘導体若しくは混合物の集団である、請求項３１に記載の方法
    。
33. 前記多能性幹細胞が、誘導性多能性幹細胞、ストレス誘発性幹細胞、単為生殖由来幹細
    胞、胚性幹細胞、体細胞核移植由来幹細胞又はそれらの誘導体若しくは混合物を含む、請
    求項３２に記載の方法。
34. 前記さらなる条件が、ロズウェルパーク記念研究所（ＲＰＭＩ－１６４０）、ダルベッ
    コ変法基本培地（ＤＭＥＭ）、イーグル変法基本培地（ＥＭＥＭ）、Ｏｐｔｉｍｅｍ、イ
    スコーブ培地又はそれらの組み合わせを含む、請求項３１～３３のいずれか一項に記載の
    方法。
35. 前記さらなる作用物質が、ヒト多血小板血漿、血小板溶解物、臍帯血血清、自己血清、
    ヒト血清、血清代替物又はそれらの組み合わせを含む、請求項３１～３４のいずれか一項
    に記載の方法。
36. 前記さらなる作用物質が、１つ以上の免疫調節剤を含む、請求項３１～３５のいずれか
    一項に記載の方法。
37. 前記免疫調節剤が、ＦＡＳリガンド、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－１Ｒａ、ＩＬ－２、ＩＬ－４
    、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－３５、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、Ｉ－３０
    ９、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＣＤ２００、ガレクチン３、ｓＣＲ１、アルギナーゼ、ＰＧＥ－
    ２、アスピリン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、
    ロスバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ｎ－アセチルシステイン、ラパマイ
    シン、ＩＶＩＧ、ナルトレキソン、ＴＧＦ－ベータ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＣＴＬＡ－４
    、抗ＣＤ４５ＲＢ抗体、ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、オーラノフィン、ジシア
    ノ金、スルファサラジン、メトトレキサート、糖質コルチコイド、エタネルセプト、アダ
    リムマブ、アバタセプト、アナキンラ、セルトリズマブ、エタネルセプト－ｓｚｚｓ、ゴ
    リムマブ、インフリキシマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、シクロスポリン、ＩＦＮ－
    ガンマ、エベロリムス、ラパマイシン又はそれらの組み合わせを含む、請求項３６に記載
    の方法。
38. 前記細胞が、１つ以上の免疫調節剤を組換え発現するように改変される、請求項３１～
    ３７のいずれか一項に記載の方法。
39. 前記免疫調節剤が、ＦＡＳリガンド、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、
    ＩＬ－３５、ＨＬＡ－Ｇ、Ｉ－３０９、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＣＤ２００、ガレクチン３、
    アルギナーゼ、ＰＧＥ－２、ＴＧＦ－ベータ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＦＮ－ガン
    マ又はそれらの組み合わせである、請求項３８に記載の方法。
40. 前記１つ以上の免疫調節剤の発現が、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、組織
    特異的プロモーター又はそれらの組み合わせによって制御される、請求項３８～３９のい
    ずれか一項に記載の方法。
41. 治療有効量の前記細胞が、細胞移植療法を必要とする個体に投与される、請求項３１～
    ４０のいずれか一項に記載の方法。
42. 治療有効量の前記細胞が、血管新生療法を必要とする個体に投与される、請求項３１～
    ４１のいずれか一項に記載の方法。
43. 治療有効量の前記細胞が、個体に血管新生剤と同時投与される、請求項４２に記載の方
    法。
44. 前記細胞が、１つ以上の血管新生剤を組換え発現するように改変される、請求項３１～
    ４３のいずれか一項に記載の方法。
45. 前記１つ以上の血管新生剤の発現が、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、組織
    特異的プロモーター又はそれらの組み合わせによって制御される、請求項４４に記載の方
    法。
46. 前記血管新生剤が、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ－１、ＦＧＦ－２、アンジオポエチン、ＨＩＦ－
    １－アルファ又はそれらの組み合わせである、請求項４３～４５のいずれか一項に記載の
    方法。
47. 治療有効量の前記細胞が、免疫調節療法を必要とする個体に投与される、請求項３１～
    ４６のいずれか一項に記載の方法。
48. 前記個体が、急性散在性脳脊髄炎、急性壊死性出血性白質脳炎、アジソン病、癒着性関
    節包炎、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗Ｇ
    ＢＭ腎炎、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、抗ＴＢＭ腎炎、関節線維症、心房線維症、
    自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自律神経障害、自己免疫
    性肝炎、自己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、
    自己免疫性心筋炎、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性膵炎、自己
    免疫性網膜症、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、自己免疫性甲状腺疾患、自己
    免疫性じんま疹、軸索型及び神経型ニューロパシー、バロー病、ベーチェット病、良性粘
    膜類天疱瘡、水疱性類天疱瘡、心筋症、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病
    、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー（ＣＩＤＰ）、慢性ライム病、
    慢性再発性多発性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、
    肝硬変、コーガン症候群、寒冷凝集素病、先天性心ブロック、コクサッキー心筋炎、ＣＲ
    ＥＳＴ病、クローン病、嚢胞性線維症、インターロイキン－１受容体アンタゴニスト欠損
    症、脱髄性ニューロパシー、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神経脊髄炎）、円
    板状狼瘡、ドレスラー症候群、デュピュイトラン拘縮、子宮内膜症、心内膜心筋線維症、
    好酸球性食道炎、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本態性混合型クリオグロブリン血症、エ
    ヴァンズ症候群、実験的アレルギー性脳脊髄炎、家族性地中海熱、線維筋痛症 線維化肺
    胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞心筋炎、糸球体腎炎、糸球体腎炎、グッド
    パスチャー症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、多発血管炎性肉芽腫症、グレーヴズ病
    、ギランバレー症候群、橋本脳炎、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホシェーンライン
    紫斑病、肝炎、妊娠性疱疹、低ガンマグロブリン血症、特発性肺線維症、特発性血小板減
    少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫調節性リポタンパク
    質、封入体筋炎、炎症性腸障害、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若年性糖尿病（１型糖尿
    病）、若年性筋炎、川崎症候群、ケロイド、ランバート・イートン症候群、白血球破砕性
    血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、線状ＩｇＡ病、狼瘡（ＳＬＥ）、ライム
    病、縦隔線維症、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、混合結合組織病（ＭＣＴＤ）、モ
    ーレン潰瘍、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症、骨髄線維
    症、筋炎、ナルコレプシー、新生児期発症多臓器性炎症性疾患、腎性全身性線維症、視神
    経脊髄炎（デビック病）、好中球減少症、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性
    脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、眼瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ、傍腫瘍性小脳
    変性症、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルグ症候群、扁平部炎（周辺
    性ブドウ膜炎）、パーソネージ・ターナー症候群、連鎖球菌関連小児自己免疫神経精神疾
    患（ＰＡＮＤＡＳ）、天疱瘡、末梢神経障害、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血、ペーロニー
    病、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発性動脈炎、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎、心筋
    梗塞後症候群、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲス
    テロン皮膚炎、進行性塊状線維症、乾癬、乾癬性関節炎、赤芽球癆、壊疽性膿皮症、レイ
    ノー現象、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィ、ライター症候群、再発性多発
    性軟骨炎、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイド
    ーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子自己免疫及び精
    巣自己免疫、スティッフパーソン症候群、亜急性細菌性心内膜炎、スザック症候群、交感
    性眼炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、高安動脈炎、側頭動脈炎、血小板減少性紫
    斑病（ＴＴＰ）、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、腫瘍壊死因子受容体関連周期性
    症候群、１型糖尿病、Ｉ型多腺性自己免疫症候群、ＩＩ型多腺性自己免疫症候群、ＩＩＩ
    型多腺性自己免疫症候群、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織病、ブドウ膜炎、脈管炎、小水
    疱水疱性皮膚病、白斑、ヴェゲナー肉芽腫症（現在は多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）と
    呼ばれる）を有するか又は有するリスクがある、請求項４７に記載の方法。
49. 個体における自己免疫状態又は炎症状態を処置する方法であって、ＩＦＮ－ガンマ並び
    に必要に応じて１つ以上のさらなる作用物質及び／又は条件に曝された治療有効量の細胞
    を含む組成物を該個体に投与する工程を含む、方法。
50. 前記細胞が、線維芽細胞、膵ベータ細胞、膵島、肝細胞、ニューロン、軟骨細胞、多能
    性幹細胞又はそれらの誘導体である、請求項４９に記載の方法。
51. 前記多能性幹細胞が、誘導性多能性幹細胞、ストレス誘発性幹細胞、単為生殖由来幹細
    胞、胚性幹細胞、体細胞核移植由来幹細胞又はそれらの誘導体である、請求項５０に記載
    の方法。
52. 前記さらなる条件が、特定の細胞培養培地を含む、請求項４９～５１のいずれか一項に
    記載の方法。
53. 前記培地が、ロズウェルパーク記念研究所（ＲＰＭＩ－１６４０）、ダルベッコ変法基
    本培地（ＤＭＥＭ）、ダルベッコ変法基本培地－低グルコース（ＤＭＥＭ－ＬＧ）、イー
    グル変法基本培地（ＥＭＥＭ）、Ｏｐｔｉｍｅｍ、イスコーブ培地又はそれらの組み合わ
    せを含む、請求項５２に記載の方法。
54. 前記さらなる作用物質が、ヒト多血小板血漿、血小板溶解物、臍帯血血清、自己血清、
    ヒト血清、血清代替物又はそれらの組み合わせを含む、請求項４９～５３のいずれか一項
    に記載の方法。
55. 前記さらなる作用物質が、１つ以上の免疫調節剤を含む、請求項４９～５４のいずれか
    一項に記載の方法。
56. 前記免疫調節剤が、ＦＡＳリガンド、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－１Ｒａ、ＩＬ－２、ＩＬ－４
    、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－３５、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、Ｉ－３０
    ９、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＣＤ２００、ガレクチン３、ｓＣＲ１、アルギナーゼ、ＰＧＥ－
    ２、アスピリン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、
    ロスバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ｎ－アセチルシステイン、ラパマイ
    シン、ＩＶＩＧ、ナルトレキソン、ＴＧＦ－ベータ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＣＴＬＡ－４
    、抗ＣＤ４５ＲＢ抗体、ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、オーラノフィン、ジシア
    ノ金、スルファサラジン、メトトレキサート、糖質コルチコイド、エタネルセプト、アダ
    リムマブ、アバタセプト、アナキンラ、セルトリズマブ、エタネルセプト－ｓｚｚｓ、ゴ
    リムマブ、インフリキシマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、シクロスポリン、ＩＦＮ－
    ガンマ、エベロリムス、ラパマイシン又はそれらの組み合わせを含む、請求項５５に記載
    の方法。
57. 前記細胞が、１つ以上の免疫調節剤を組換え発現するように改変される、請求項４９～
    ５６のいずれか一項に記載の方法。
58. 前記免疫調節剤が、ＦＡＳリガンド、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、
    ＩＬ－３５、ＨＬＡ－Ｇ、Ｉ－３０９、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＣＤ２００、ガレクチン３、
    アルギナーゼ、ＰＧＥ－２、ＴＧＦ－ベータ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＦＮ－ガン
    マ又はそれらの組み合わせである、請求項５７に記載の方法。
59. 前記１つ以上の免疫調節剤の発現が、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、組織
    特異的プロモーター又はそれらの組み合わせによって制御される、請求項５７～５８のい
    ずれか一項に記載の方法。
60. 前記自己免疫状態又は炎症状態が、急性散在性脳脊髄炎、急性壊死性出血性白質脳炎、
    アジソン病、癒着性関節包炎、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス
    、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ腎炎、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、抗ＴＢＭ腎炎、関節
    線維症、心房線維症、自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自
    律神経障害、自己免疫性肝炎、自己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全、自己免疫性内
    耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性卵巣炎、
    自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、自己免
    疫性甲状腺疾患、自己免疫性じんま疹、軸索型及び神経型ニューロパシー、バロー病、ベ
    ーチェット病、良性粘膜類天疱瘡、水疱性類天疱瘡、心筋症、キャッスルマン病、セリア
    ック病、シャーガス病、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー（ＣＩＤ
    Ｐ）、慢性ライム病、慢性再発性多発性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候
    群、瘢痕性類天疱瘡、肝硬変、コーガン症候群、寒冷凝集素病、先天性心ブロック、コク
    サッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ病、クローン病、嚢胞性線維症、インターロイキン－１受容
    体アンタゴニスト欠損症、脱髄性ニューロパシー、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病
    （視神経脊髄炎）、円板状狼瘡、ドレスラー症候群、デュピュイトラン拘縮、子宮内膜症
    、心内膜心筋線維症、好酸球性食道炎、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本態性混合型クリ
    オグロブリン血症、エヴァンズ症候群、実験的アレルギー性脳脊髄炎、家族性地中海熱、
    線維筋痛症 線維化肺胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞心筋炎、糸球体腎炎
    、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、多発血管炎性肉
    芽腫症、グレーヴズ病、ギランバレー症候群、橋本脳炎、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘ
    ノッホシェーンライン紫斑病、肝炎、妊娠性疱疹、低ガンマグロブリン血症、特発性肺線
    維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免
    疫調節性リポタンパク質、封入体筋炎、炎症性腸障害、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若
    年性糖尿病（１型糖尿病）、若年性筋炎、川崎症候群、ケロイド、ランバート・イートン
    症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、線状ＩｇＡ病、狼
    瘡（ＳＬＥ）、ライム病、縦隔線維症、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、混合結合組
    織病（ＭＣＴＤ）、モーレン潰瘍、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症（ＭＳ）、重
    症筋無力症、骨髄線維症、筋炎、ナルコレプシー、新生児期発症多臓器性炎症性疾患、腎
    性全身性線維症、視神経脊髄炎（デビック病）、好中球減少症、非アルコール性脂肪性肝
    疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、眼瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リ
    ウマチ、傍腫瘍性小脳変性症、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルグ症
    候群、扁平部炎（周辺性ブドウ膜炎）、パーソネージ・ターナー症候群、連鎖球菌関連小
    児自己免疫神経精神疾患（ＰＡＮＤＡＳ）、天疱瘡、末梢神経障害、静脈周囲脳脊髄炎、
    悪性貧血、ペーロニー病、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発性動脈炎、リウマチ性多発性筋
    痛、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬
    化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、進行性塊状線維症、乾癬、乾癬性関節炎、赤芽球癆
    、壊疽性膿皮症、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィ、ライタ
    ー症候群、再発性多発性軟骨炎、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節
    リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群
    、精子自己免疫及び精巣自己免疫、スティッフパーソン症候群、亜急性細菌性心内膜炎、
    スザック症候群、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、高安動脈炎、側頭動
    脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、腫瘍壊死
    因子受容体関連周期性症候群、１型糖尿病、Ｉ型多腺性自己免疫症候群、ＩＩ型多腺性自
    己免疫症候群、ＩＩＩ型多腺性自己免疫症候群、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織病、ブド
    ウ膜炎、脈管炎、小水疱水疱性皮膚病、白斑、ヴェゲナー肉芽腫症（現在は多発血管炎性
    肉芽腫症（ＧＰＡ）と呼ばれる）を含む、請求項４９～５９のいずれか一項に記載の方法
    。
61. 前記さらなる作用物質が、ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＩＧＦ－Ｉ、ＰＤＧＦ又はそれらの組み
    合わせを含む、請求項４９～６０のいずれか一項に記載の方法。
62. 前記自己免疫状態又は炎症状態が、関節炎である、請求項４９～６１のいずれか一項に
    記載の方法。
63. 細胞療法用の制御性Ｔ細胞の集団を作製するための方法であって、活性化線維芽細胞及
    び必要に応じて１つ以上のさらなる作用物質を含む組成物をＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞に曝
    露する工程を含む、方法。
64. 前記活性化線維芽細胞が、ＩＦＮ－ガンマに曝露された細胞である、請求項６３に記載
    の方法。
65. 前記曝露工程が、エクスビボ培養又はインビボにおいて行われる、請求項６３又は６４
    に記載の方法。
66. 前記ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞が、胸腺、末梢血、臍帯血、Ｇ－ＣＳＦ動員末梢血、脂肪
    組織及び胎盤又はそれらの組み合わせから単離される、請求項６３～６５のいずれか一項
    に記載の方法。
67. 前記培養物中の線維芽細胞とＴ細胞との比が、１：１、１：２、１：３、１：４、１：
    ５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：
    ３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：
    ７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００、２：１、３：
    １、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１
    、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１
    、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１又は１００
    ：１を含む、請求項６３～６６のいずれか一項に記載の方法。
68. 前記さらなる作用物質が、ＣＤ３リガンド、ＣＤ２８リガンド、ラパマイシン、ＩＬ－
    １０、ＴＧＦ－ベータ、ＩＬ－２又はそれらの組み合わせを含む、請求項６３～６７のい
    ずれか一項に記載の方法。
69. 前記１つ以上のさらなる作用物質が、前記組成物に可溶性である、請求項６３～６８の
    いずれか一項に記載の方法。
70. 前記組成物において、１つ以上のさらなる作用物質が、前記線維芽細胞の表面に付着さ
    れている、請求項６３～６８のいずれか一項に記載の方法。
71. 前記組成物において、１つ以上のさらなる作用物質が、ビーズ上に固定化されている、
    請求項６３～６８のいずれか一項に記載の方法。
72. 前記組成物において、１つ以上のさらなる作用物質が、操作された細胞の表面上に固定
    化されていてもよい、請求項６３～６８のいずれか一項に記載の方法。
73. 前記組成物において、１つ以上のさらなる作用物質が、前記線維芽細胞によって発現さ
    れる、請求項６３～７２のいずれか一項に記載の方法。
74. 前記１つ以上のさらなる作用物質が、ＩＬ－２及び／又はＩＬ－１２を含む、請求項７
    ３に記載の方法。
75. 前記ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞が、同種異系ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞に由来する、請求項
    ６３～７４のいずれか一項に記載の方法。
76. 前記さらなる作用物質が、ヒト多血小板血漿を含む、請求項６３～７５のいずれか一項
    に記載の方法。
77. 前記制御性Ｔ細胞の集団が、選択下での培養において維持される、請求項６３～７６の
    いずれか一項に記載の方法。
78. 前記培養中の制御性Ｔ細胞が、約７～１２μｍの直径を有するように選択される、請求
    項７７に記載の方法。
79. 前記さらなる作用物質が、ラパマイシン、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－ベータ又は
    それらの組み合わせを含む、請求項６３～７８のいずれか一項に記載の方法。
80. 前記制御性Ｔ細胞集団の少なくとも一部が、好適な条件下で保存される、請求項６３～
    ７９のいずれか一項に記載の方法。
81. 有効量の前記制御性Ｔ細胞を個体に投与して自己免疫状態又は炎症状態を処置する、請
    求項６３～８０のいずれか一項に記載の方法。
82. 前記自己免疫状態又は炎症状態が、急性散在性脳脊髄炎、急性壊死性出血性白質脳炎、
    アジソン病、癒着性関節包炎、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス
    、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ腎炎、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、抗ＴＢＭ腎炎、関節
    線維症、心房線維症、自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自
    律神経障害、自己免疫性肝炎、自己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全、自己免疫性内
    耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性卵巣炎、
    自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、自己免
    疫性甲状腺疾患、自己免疫性じんま疹、軸索型及び神経型ニューロパシー、バロー病、ベ
    ーチェット病、良性粘膜類天疱瘡、水疱性類天疱瘡、心筋症、キャッスルマン病、セリア
    ック病、シャーガス病、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー（ＣＩＤ
    Ｐ）、慢性ライム病、慢性再発性多発性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候
    群、瘢痕性類天疱瘡、肝硬変、コーガン症候群、寒冷凝集素病、先天性心ブロック、コク
    サッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ病、クローン病、嚢胞性線維症、インターロイキン－１受容
    体アンタゴニスト欠損症、脱髄性ニューロパシー、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病
    （視神経脊髄炎）、円板状狼瘡、ドレスラー症候群、デュピュイトラン拘縮、子宮内膜症
    、心内膜心筋線維症、好酸球性食道炎、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本態性混合型クリ
    オグロブリン血症、エヴァンズ症候群、実験的アレルギー性脳脊髄炎、家族性地中海熱、
    線維筋痛症 線維化肺胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞心筋炎、糸球体腎炎
    、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、多発血管炎性肉
    芽腫症、グレーヴズ病、ギランバレー症候群、橋本脳炎、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘ
    ノッホシェーンライン紫斑病、肝炎、妊娠性疱疹、低ガンマグロブリン血症、特発性肺線
    維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免
    疫調節性リポタンパク質、封入体筋炎、炎症性腸障害、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若
    年性糖尿病（１型糖尿病）、若年性筋炎、川崎症候群、ケロイド、ランバート・イートン
    症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、線状ＩｇＡ病、狼
    瘡（ＳＬＥ）、ライム病、縦隔線維症、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、混合結合組
    織病（ＭＣＴＤ）、モーレン潰瘍、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症（ＭＳ）、重
    症筋無力症、骨髄線維症、筋炎、ナルコレプシー、新生児期発症多臓器性炎症性疾患、腎
    性全身性線維症、視神経脊髄炎（デビック病）、好中球減少症、非アルコール性脂肪性肝
    疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、眼瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リ
    ウマチ、傍腫瘍性小脳変性症、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルグ症
    候群、扁平部炎（周辺性ブドウ膜炎）、パーソネージ・ターナー症候群、連鎖球菌関連小
    児自己免疫神経精神疾患（ＰＡＮＤＡＳ）、天疱瘡、末梢神経障害、静脈周囲脳脊髄炎、
    悪性貧血、ペーロニー病、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発性動脈炎、リウマチ性多発性筋
    痛、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬
    化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、進行性塊状線維症、乾癬、乾癬性関節炎、赤芽球癆
    、壊疽性膿皮症、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィ、ライタ
    ー症候群、再発性多発性軟骨炎、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節
    リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群
    、精子自己免疫及び精巣自己免疫、スティッフパーソン症候群、亜急性細菌性心内膜炎、
    スザック症候群、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、高安動脈炎、側頭動
    脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、腫瘍壊死
    因子受容体関連周期性症候群、１型糖尿病、Ｉ型多腺性自己免疫症候群、ＩＩ型多腺性自
    己免疫症候群、ＩＩＩ型多腺性自己免疫症候群、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織病、ブド
    ウ膜炎、脈管炎、小水疱水疱性皮膚病、白斑、ヴェゲナー肉芽腫症（現在は多発血管炎性
    肉芽腫症（ＧＰＡ）と呼ばれる）を含む、請求項８１に記載の方法。
83. 前記制御性Ｔ細胞が、有効量の１つ以上のさらなる免疫制御性細胞とともに個体に投与
    される、請求項６３～８２のいずれか一項に記載の方法。
84. 前記制御性Ｔ細胞が、１つ以上の免疫調節剤とともに個体に投与される、請求項６３～
    ８３のいずれか一項に記載の方法。
85. 前記１つ以上の免疫調節剤が、イノシン、ＦＡＳリガンド、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－１Ｒａ
    、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－３５、ＨＬＡ－Ｇ、
    ＰＤ－Ｌ１、Ｉ－３０９、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＣＤ２００、ガレクチン３、ｓＣＲ１、ア
    ルギナーゼ、ＰＧＥ－２、アスピリン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチ
    ン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ｎ－アセチル
    システイン、ラパマイシン、ＩＶＩＧ、ナルトレキソン、ＴＧＦ－ベータ、ＶＥＧＦ、Ｐ
    ＤＧＦ、ＣＴＬＡ－４、抗ＣＤ４５ＲＢ抗体、ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、オ
    ーラノフィン、ジシアノ金、スルファサラジン、メトトレキサート、糖質コルチコイド、
    エタネルセプト、アダリムマブ、アバタセプト、アナキンラ、セルトリズマブ、エタネル
    セプト－ｓｚｚｓ、ゴリムマブ、インフリキシマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、シク
    ロスポリン、ＩＦＮ－ガンマ、エベロリムス、ラパマイシン又はそれらの組み合わせであ
    る、請求項８４に記載の方法。
86. 前記制御性Ｔ細胞を投与される前記個体が、該個体のマイクロバイオームの調節に曝さ
    れている、曝されてきた、かつ／又は曝されることになっている、請求項６３～８５のい
    ずれか一項に記載の方法。
87. 前記マイクロバイオームが、１つ以上のプレバイオティクス及び／又は１つ以上のプロ
    バイオティクスを含む組成物によって調節される、請求項８６に記載の方法。
88. 前記プレバイオティクスが、アラビノキシラン、キシロース、可溶性繊維デキストラン
    、可溶性トウモロコシ繊維、ポリデキストロース、ラクトース、Ｎ－アセチル－ラクトサ
    ミン、グルコース、ガラクトース、フルクトース、ラムノース、マンノース、ウロン酸、
    ３’－フコシルラクトース、３’シアリラクトース、６’－シアリルラクトース、ラクト
    －Ｎ－ネオテトラオース、２’－２’－フコシルラクトース、アラビノース、フルクトー
    ス、フコース、ラクトース、ガラクトース、グルコース、マンノース、Ｄ－キシロース、
    キシリトール、リボース、キシロビオース、スクロース、マルトース、ラクトース、ラク
    ツロース、トレハロース、セロビオース及びそれらの組み合わせからなる群より選択され
    るモノマー又はポリマーを含む、請求項８７に記載の方法。
89. 前記組成物が、１以下、２以下、３以下、４以下、５以下、６以下、７以下、８以下、
    ９以下、１０以下、１１以下、１２以下、１３以下、１４以下、１５以下、１６以下、１
    ７以下、１８以下、１９以下、２０以下、２５以下、３０以下又は３５以下のタイプのプ
    レバイオティクスを含む、請求項８７又は８８に記載の組成物。
90. 前記組成物が、１～３５、１～３０、１～２５、１～２０；１～１０、２～１０、３～
    １０、４～１０、５～１０、６～１０、７～１０、８～１０、９～１０；１～９、２～９
    、３～９、４～９、５～９、６～９、７～９、８～９；１～８、２～８、３～８、４～８
    、５～８、６～８、７～８；１～７、２～７、３～７、４～７、５～７、６～７；１～６
    、２～６、３～６、４～６、５～６；１～５、２～５、３～５、４～５；１～４、２～４
    、３～４；１～３、２～３；１～２；又は１タイプのプレバイオティクスを含む、請求項
    ８７又は８８に記載の組成物。
91. 前記組成物が、該組成物中に存在する他の任意のタイプのプレバイオティクスよりも少
    なくとも２、５、１０、５０、１００倍多い又は１００倍超多い量で存在する１タイプの
    プレバイオティクスを含む、請求項８７～９０のいずれか一項に記載の組成物。
92. 前記組成物中のプレバイオティクスが、少なくとも１μＭ又は少なくとも２μＭ又は少
    なくとも３μＭ又は少なくとも４μＭ又は少なくとも５μＭ又は少なくとも６μＭ又は少
    なくとも７μＭ又は少なくとも８μＭ又は少なくとも９μＭ又は少なくとも１０μＭ又は
    少なくとも２０μＭ又は少なくとも３０μＭ又は少なくとも４０μＭ又は少なくとも５０
    μＭ又は少なくとも６０μＭ又は少なくとも７０μＭ又は少なくとも８０μＭ又は少なく
    とも９０μＭ又は少なくとも１００μＭ又は少なくとも１５０μＭ又は少なくとも２００
    μＭ又は少なくとも２５０μＭ又は少なくとも３００μＭ又は少なくとも３５０μＭ又は
    少なくとも４００μＭ又は少なくとも４５０μＭ又は少なくとも５００μＭ又は少なくと
    も５５０μＭ又は少なくとも６００μＭ又は少なくとも６５０μＭ又は少なくとも７００
    μＭ又は少なくとも７５０μＭ又は少なくとも８００μＭ又は少なくとも８５０μＭ又は
    少なくとも９００μＭ又は少なくとも９５０μＭ又は少なくとも１ｍＭ又は少なくとも２
    ｍＭ又は少なくとも３ｍＭ又は少なくとも４ｍＭ又は少なくとも５ｍＭ又は少なくとも６
    ｍＭ又は少なくとも７ｍＭ又は少なくとも８ｍＭ又は少なくとも９ｍＭ又は少なくとも１
    ０ｍＭの濃度で存在する、請求項８７～９１のいずれか一項に記載の組成物。
93. 前記プロバイオティクスが、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉを含む、請
    求項８７～９２のいずれか一項に記載の方法。
94. 前記プロバイオティクスが、Ａｃｅｔａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｃｅｔｉｖ
    ｉｂｒｉｏ、Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ａｌｋａｌｉｐｈｉｌｕｓ、Ａｎａｅ
    ｒｏｆｕｓｔｉｓ、Ａｎａｅｒｏｓｐｏｒｏｂａｃｔｅｒ、Ａｎａｅｒｏｓｔｉｐｅｓ、
    Ａｎａｅｒｏｔｒｕｎｃｕｓ、Ａｎｏｘｙｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂａｃ
    ｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｂｌａｕｔｉａ、Ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌ
    ｕｓ、Ｂｒｙａｎｔｅｌｌａ、Ｂｕｌｌｅｉｄｉａ、Ｂｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓ、Ｂ
    ｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ、Ｃａｔｅｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌｅｓ
    、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｃｅａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕ
    ｍ、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ、Ｃｏｐｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ、
    Ｃｏｘｉｅｌｌａ、Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ、Ｄｅｓｕｌｆｉｔｏｂａｃｔｅｒ
    ｉｕｍ、Ｄｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ、Ｄｏｒｅａ、Ｅｇｇｅｒｔｈｅｌｌａ、Ｅ
    ｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ、Ｅｔｈａｎｏ
    ｌｉｇｅｎｅｎｓ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｆｉ
    ｌｉｆａｃｔｏｒ、Ｆｌａｖｏｎｉｆｒａｃｔｏｒ、Ｆｌｅｘｉｓｔｉｐｅｓ、Ｆｕｌｖ
    ｉｍｏｎａｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｇｅｍｍｉｇｅｒ、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕ
    ｓ、Ｇｌｏｅｏｂａｃｔｅｒ、Ｈｏｌｄｅｍａｎｉａ、Ｈｙｄｒｏｇｅｎｏａｎａｅｒｏ
    ｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｋｏｃｕｒｉａ、Ｌａｃｈｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｈｎｏ
    ｓｐｉｒａ、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌａｃｔ
    ｏｎｉｆａｃｔｏｒ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ、Ｌｕｔｉｓｐｏｒａ、Ｌｙｓｉｎｉｂａｃ
    ｉｌｌｕｓ、Ｍｏｌｌｉｃｕｔｅｓ、Ｍｏｏｒｅｌｌａ、Ｎｏｃａｒｄｉａ、Ｏｓｃｉｌ
    ｌｉｂａｃｔｅｒ、Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａ、Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｐａｐｉ
    ｌｌｉｂａｃｔｅｒ、Ｐｓｅｕｄｏｆｌａｖｏｎｉｆｒａｃｔｏｒ、Ｒｏｂｉｎｓｏｎｉ
    ｅｌｌａ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃ
    ｃｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ、Ｓａｒｃｉｎａ、Ｓｏｌｏｂａｃｔｅｒ
    ｉｕｍ、Ｓｐｏｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｓｐｏｒｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐ
    ｔｏｍｙｃｅｓ、Ｓｕｂｄｏｌｉｇｒａｎｕｌｕｍ、Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ、Ｓｙｎｔｒ
    ｏｐｈｏｃｏｃｃｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｔｈｅｒｍｏｂｉｆｉ
    ｄａ、Ｔｕｒｉｃｉｂａｃｔｅｒ、Ａｃｅｔｏｎｅｍａ、Ａｍｐｈｉｂａｃｉｌｌｕｓ、
    Ａｍｍｏｎｉｆｅｘ、Ａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｃａｌｄｉｃｅｌｌｕｌｏｓｉｒｕｐ
    ｔｏｒ、Ｃａｌｏｒａｍａｔｏｒ、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ、Ｃａｒｂｏｘｙｄｉｂｒａｃ
    ｈｉｕｍ、Ｃａｒｂｏｘｙｄｏｔｈｅｒｍｕｓ、Ｃｏｈｎｅｌｌａ、Ｄｅｎｄｒｏｓｐｏ
    ｒｏｂａｃｔｅｒ Ｄｅｓｕｌｆｉｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｄｅｓｕｌｆｏｓｐｏｒｏ
    ｓｉｎｕｓ、Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｈｅｌ
    ｉｏｐｈｉｌｕｍ、Ｈｅｌｉｏｒｅｓｔｉｓ、Ｌａｃｈｎｏａｎａｅｒｏｂａｃｕｌｕｍ
    、Ｏｃｅａｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｏｒｅｎｉａ（Ｓ．）、Ｏｘａｌｏｐｈａｇｕｓ、Ｏ
    ｘｏｂａｃｔｅｒ、Ｐｅｌｏｓｐｏｒａ、Ｐｅｌｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ、Ｐｒｏｐｉｏｎ
    ｉｓｐｏｒａ、Ｓｐｏｒｏｈａｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ、Ｓｐｏｒｏｓａ
    ｒｃｉｎａ、Ｓｐｏｒｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ、Ｓｙｍｂｉｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｙｎ
    ｔｒｏｐｈｏｂｏｔｕｌｕｓ、Ｓｙｎｔｒｏｐｈｏｓｐｏｒａ、Ｔｅｒｒｉｂａｃｉｌｌ
    ｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏｓｉｎｕｓ又はそれらの組み合わせを含む、請求項８７～９３のいず
    れか一項に記載の方法。
95. 前記組成物が、１以下、２以下、３以下、４以下、５以下、６以下、７以下、８以下、
    ９以下、１０以下、１１以下、１２以下、１３以下、１４以下、１５以下、１６以下、１
    ７以下、１８以下、１９以下、２０以下、５０以下又は１００以下のタイプのプロバイオ
    ティクスを含み得るか、それらからなり得るか、又はそれらから本質的になり得る、請求
    項８７～９４のいずれか一項に記載の方法。
96. 前記組成物が、１～１００、１～５０若しくは１～２０；又は１～１０、２～１０、３
    ～１０、４～１０、５～１０、６～１０、７～１０、８～１０若しくは９～１０；又は１
    ～９、２～９、３～９、４～９、５～９、６～９、７～９若しくは８～９；又は１～８、
    ２～８、３～８、４～８、５～８、６～８若しくは７～８；又は１～７、２～７、３～７
    、４～７、５～７若しくは６～７；又は１～６、２～６、３～６、４～６若しくは５～６
    ；又は１～５、２～５、３～５若しくは４～５；又は１～４、２～４、３～４；１～３、
    ２～３；１～２；又は１タイプのプロバイオティクスを含み得るか、それらからなり得る
    か、又はそれらから本質的になり得る、請求項８７～９４のいずれか一項に記載の方法。
97. 前記組成物が、該組成物中に存在する他の任意のタイプのプロバイオティクスよりも少
    なくとも２、５、１０、５０、１００倍多い又は１００倍超多い量で存在する１タイプの
    プロバイオティクスを含むか、それからなるか、又はそれから本質的になる、請求項８７
    ～９６のいずれか一項に記載の方法。
98. 前記組成物において、前記プロバイオティクスの大部分が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕ
    ｓ ｒｅｕｔｅｒｉである、請求項８７～９７のいずれか一項に記載の方法。
99. 前記組成物において、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉが、該組成物中の
    前記プロバイオティクスの少なくとも２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０
    、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９％又は９９％超
    である、請求項８７～９８のいずれか一項に記載の方法。
100. 前記組成物中のプロバイオティクスの相対的存在が、１：１又は１：２、１：３、１：
     ４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２
     ５；１：５０；１：７５、１：１００、１：２００、１：５００、１：１０００、１：１
     ０，０００、１：１００，０００という比若しくは１：１００，０００を超える比を含む
     か、それらからなるか、又はそれらから本質的になる第１のタイプのプロバイオティクス
     と第２のタイプのプロバイオティクスとの比として表現される、請求項８７～９９のいず
     れか一項に記載の方法。
101. 所与のプロバイオティクスの濃度又は凝集組成物の濃度が、組成物１グラムあたり１×
     １０^３、１×１０^４、１×１０^５、１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、
     １×１０^１０、１×１０^１１、１×１０^１２、１×１０^１３、１×１０^１４、１×１０^{１
     ５}個又は１×１０^１５個を超える生存プロバイオティクスを含む、請求項８７～１００の
     いずれか一項に記載の方法。
102. 個体における肝不全を処置する方法であって、該方法は、有効量の細胞集団を該個体に
     投与する工程を含み、前記細胞集団は、免疫細胞に曝露された線維芽細胞集団；間葉系幹
     細胞、ＣＤ３４＋細胞；極小胚様幹細胞；セルトリ細胞；又はそれらの混合物である、方
     法。
103. 前記免疫細胞が、同種異系ＰＢＭＣ；制御性Ｔ細胞；２型単球；ＣＤ５陽性Ｂ細胞；２
     型ＮＫＴ細胞；免疫寛容原性樹状細胞；ガンマデルタＴ細胞；免疫制御特性を有するＴ細
     胞；又はそれらの混合物である、請求項１０２に記載の方法。
104. 前記細胞集団中の細胞では、１つ以上の肝臓再生因子の産生が高まっている、請求項１
     ０２又は１０３に記載の方法。
105. 前記肝臓再生因子が、肝細胞成長因子である、請求項１０４に記載の方法。
106. 前記細胞集団中の細胞は、肝臓におけるオーバル細胞の増殖を増強する高い能力を有す
     る、請求項１０２～１０５のいずれか一項に記載の方法。
107. 前記ＰＢＭＣが、臍帯血単核細胞である、請求項１０３に記載の方法。
108. 前記免疫細胞が、前記線維芽細胞集団に曝露される前に免疫調節物質で処置される、請
     求項１０２～１０７のいずれか一項に記載の方法。
109. 免疫調節物質による前記免疫細胞の前記処置が、該免疫細胞が活性化Ｔ細胞の増殖を阻
     害するのに十分な条件下での処置である、請求項１０８に記載の方法。
110. 免疫調節物質による前記免疫細胞の前記処置が、該免疫細胞が活性化Ｔ細胞のインター
     フェロンガンマ産生を阻害するのに十分な条件下での処置である、請求項１０８又は１０
     ９に記載の方法。
111. 前記免疫調節物質が、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＬ－２０、ＴＧＦ－ベー
     タ、ＣＸＣＬ１２、インヒビン、ＶＥＧＦ、ＰＧＥ－２及びそれらの組み合わせからなる
     群より選択される、請求項１０８～１１０のいずれか一項に記載の方法。
112. 前記間葉系幹細胞が、ａ）ワルトン膠様質；ｂ）骨髄；ｃ）末梢血；ｄ）動員末梢血；
     ｅ）子宮内膜；ｆ）毛嚢；ｇ）乳歯；ｈ）精巣；ｉ）脂肪組織；ｊ）皮膚；ｋ）羊水；ｌ
     ）臍帯血；ｍ）網；ｎ）筋肉；ｏ）羊膜；ｏ）脳室周囲液（ｐｅｒｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌ
     ａｒ ｆｌｕｉｄ）；ｐ）胎盤組織；及びｑ）それらの混合物からなる群より選択される
     組織に由来する、請求項１０２～１１１のいずれか一項に記載の方法。
113. 前記間葉系幹細胞が、ＳＴＲＯ－１、ＣＤ９０、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ５４、Ｃ
     Ｄ１０６、ＨＬＡ－Ｉマーカー、ビメンチン、ＡＳＭＡ、コラーゲン－１、フィブロネク
     チン、ＬＦＡ－３、ＩＣＡＭ－１、ＰＥＣＡＭ－１、Ｐ－セレクチン、Ｌ－セレクチン、
     ＣＤ４９ｂ／ＣＤ２９、ＣＤ４９ｃ／ＣＤ２９、ＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９、ＣＤ６１、ＣＤ
     １８、ＣＤ２９、トロンボモジュリン、テロメラーゼ、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＳＴＲＯ－
     ２、ＶＣＡＭ－１、ＣＤ１４６、ＴＨＹ－１及びそれらの組み合わせからなる群より選択
     される１つ以上のマーカーを発現する、請求項１０２～１１２のいずれか一項に記載の方
     法。
114. 前記間葉系幹細胞が、実質的なレベルのＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ１１７、ＣＤ４５又はそれ
     らの組み合わせを発現しない、請求項１０２～１１３のいずれか一項に記載の方法。
115. 前記間葉系幹細胞が、多能性幹細胞から発生する、請求項１０２～１１４のいずれか一
     項に記載の方法。
116. 前記多能性幹細胞が、ａ）胚性幹細胞；ｂ）誘導性多能性幹細胞；ｃ）単為生殖幹細胞
     ；ｄ）体細胞核移植由来幹細胞；及びそれらの混合物からなる群より選択される、請求項
     １１５に記載の方法。
117. 前記胚性幹細胞が、ステージ特異的胎児抗原（ＳＳＥＡ）３、ＳＳＥＡ４、Ｔｒａ－１
     －６０及びＴｒａ－１－８１、Ｏｃｔ－３／４、Ｃｒｉｐｔｏ、ガストリン放出ペプチド
     （ＧＲＰ）受容体、ポドカリキシン様タンパク質（ＰＯＤＸＬ）、Ｒｅｘ－１、ＧＣＴＭ
     －２、Ｎａｎｏｇ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）及びそれらの組み合わせ
     からなる群より選択される遺伝子を発現する、請求項１１６に記載の方法。
118. 前記誘導性多能性幹細胞が、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、Ｐ
     ＤＧＦｒ－アルファ、ＰＤ－Ｌ２及びＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃからなる群より選択されるマー
     カーを有し、前記誘導性多能性幹細胞が、継代の際に正常な核型を維持しつつ、培養中に
     少なくとも約４０回の倍加を起こす能力を有する、請求項１１６に記載の方法。
119. 前記単為生殖幹細胞が、カルシウム流動誘導剤（ｃａｌｃｉｕｍ ｆｌｕｘ ｉｎｄｕ
     ｃｉｎｇ ａｇｅｎｔ）を添加して卵母細胞を活性化した後、ＳＳＥＡ－４、ＴＲＡ１－
     ６０、ＴＲＡ１－８１及びそれらの組み合わせからなる群より選択されるマーカーを発現
     する細胞の濃縮によって作製される、請求項１１６に記載の方法。
120. 前記体細胞核移植由来幹細胞が、ａ）ＳＳＥＡ－１が陰性である表現型；ｂ）ＳＳＥＡ
     －３、ＳＳＥＡ－４、ＴＲＡ－１－６０、ＴＲＡ－１－８１及び／又はアルカリホスファ
     ターゼが陽性である表現型；又はｃ）その両方を含む、請求項１１６に記載の方法。
121. 前記間葉系幹細胞が、ＳＭＡＤ－２／３経路の１つ以上の阻害剤の存在下の培養によっ
     て多能性幹細胞源から分化される、請求項１０２～１２０のいずれか一項に記載の方法。
122. 前記阻害剤が、核酸である、請求項１２１に記載の方法。
123. 前記核酸阻害剤が、ａ）アンチセンスオリゴヌクレオチド；ｂ）ヘアピンループ低分子
     干渉ＲＮＡ；ｃ）化学的に合成された低分子干渉ＲＮＡ分子；ｄ）ハンマーヘッド型リボ
     ザイム；及びｅ）それらの組み合わせ又は混合物からなる群より選択される、請求項１２
     ２に記載の方法。
124. 前記ＳＭＡＤ－２／３経路の阻害剤が、小分子阻害剤である、請求項１２１に記載の方
     法。
125. 前記小分子阻害剤が、ＳＢ－４３１５４２である、請求項１２４に記載の方法。
126. 前記線維芽細胞集団に曝露された細胞を濃縮するために選択プロセスが使用される、請
     求項１０２～１２５のいずれか一項に記載の方法。
127. 前記線維芽細胞を間葉系幹細胞に曝露する前に、該間葉系幹細胞が、多能性幹細胞集団
     から分化した間葉系幹細胞を濃縮するための選択プロセスに供されている、請求項１２６
     に記載の方法。
128. 選択プロセスが、間葉系幹細胞に関連する１つ以上のマーカーを発現する細胞をポジテ
     ィブ選択する、請求項１２７に記載の方法。
129. 前記マーカーが、ＳＴＲＯ－１、ＣＤ９０、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ５４、ＣＤ１
     ０６、ＨＬＡ－Ｉマーカー、ビメンチン、ＡＳＭＡ、コラーゲン－１、フィブロネクチン
     、ＬＦＡ－３、ＩＣＡＭ－１、ＰＥＣＡＭ－１、Ｐ－セレクチン、Ｌ－セレクチン、ＣＤ
     ４９ｂ／ＣＤ２９、ＣＤ４９ｃ／ＣＤ２９、ＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９、ＣＤ６１、ＣＤ１８
     、ＣＤ２９、トロンボモジュリン、テロメラーゼ、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＳＴＲＯ－２、
     ＶＣＡＭ－１、ＣＤ１４６、ＴＨＹ－１及びそれらの組み合わせからなる群より選択され
     る、請求項１２８に記載の方法。
130. 前記線維芽細胞に曝露される細胞が、増強された免疫調節活性を示す間葉系幹細胞であ
     る、請求項１０２～１２９のいずれか一項に記載の方法。
131. 前記増強された免疫調節活性が、前記間葉系幹細胞においてストレス応答を誘導する１
     つ以上の作用物質への曝露によって誘導される、請求項１３０に記載の方法。
132. 前記免疫調節活性が、肝星細胞の活性化を阻害する能力；肝線維症を阻害する能力；肝
     臓の再生を刺激する能力；及び／又はオーバル細胞若しくは肝臓前駆細胞の活性を増強す
     る能力である、請求項１３０又は１３１に記載の方法。
133. 星細胞の活性の阻害が、肝線維症の低減に関連する、請求項１３２に記載の方法。
134. 前記肝臓の再生が、傷害後の肝臓組織成長の開始期又は増殖期の刺激を含む、請求項１
     ３２～１３３のいずれか一項に記載の方法。
135. 前記細胞集団中の細胞が、肝臓におけるオーバル細胞の増殖を増強する高い能力を有し
     、前記オーバル細胞又は肝臓前駆細胞が、傷害又は損傷に応答して肝細胞が増殖を停止す
     る条件下において新しい肝臓組織を生み出す、請求項１０２～１３４のいずれか一項に記
     載の方法。
136. ストレス応答を誘導することができる前記作用物質が、前記間葉系幹細胞において、ａ
     ）核因子カッパーＢ（ＮＦ－ｋＢ）；ｂ）低酸素誘導因子アルファ（ＨＩＦ－１アルファ
     ）、ｃ）ヘモキシゲナーゼ－１（ＨＯ－１）；ｄ）インドールアミン２，３デオキシゲナ
     ーゼ；ｅ）熱ショックタンパク質６５（ｈｓｐ－６５）；及びｆ）それらの組み合わせか
     らなる群より選択される１つ以上の因子のベースラインと比べて１５パーセント高い転写
     のアップレギュレーションを誘導することができることを特徴とする、請求項１３１に記
     載の方法。
137. ストレス応答を誘導することができる前記作用物質が、ａ）インターフェロンガンマ；
     ｂ）ＩＶＩＧ；ｃ）単球条件培地；ｄ）好中球細胞外トラップに曝露された末梢血単核球
     からの上清；ｅ）単球との共培養物；ｆ）ＩＶＩＧで前処置された単球との共培養物；ｇ
     ）Ｔ細胞との共培養物；ｈ）Ｔ細胞刺激に曝露されたＴ細胞との共培養物；ｉ）ＮＫ細胞
     との共培養物；ｊ）グラム陽性菌から単離されたペプチドグリカン；ｋ）グラム陽性菌か
     ら単離されたリポテイコ酸；ｌ）グラム陽性菌から単離されたリポタンパク質；ｍ）マイ
     コバクテリアから単離されたリポアラビノマンナン、ｎ）酵母細胞ウェルから単離された
     ザイモサン；ｏ）ポリアデニル酸－ポリウリジル酸；ｐ）ポリ（ＩＣ）；ｑ）リポ多糖；
     ｒ）モノホスホリルリピドＡ；ｓ）フラジェリン；ｔ）ガーディキモド；ｕ）イミキモド
     ；ｖ）Ｒ８４８；ｗ）ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオシド；ｘ）２３Ｓリボソーム
     ＲＮＡ；及びｙ）それらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１３１又は１３
     ６に記載の方法。
138. 前記間葉系幹細胞が、ａ）脂肪由来間葉系幹細胞；ｂ）骨髄間葉系幹細胞；ｃ）臍帯間
     葉系幹細胞；ｄ）ワルトン膠様質間葉系幹細胞；ｅ）歯間葉系幹細胞；ｆ）羊水間葉系幹
     細胞；ｇ）胎盤間葉系幹細胞；ｈ）循環血間葉系幹細胞；ｉ）毛包間葉系幹細胞；及びｊ
     ）それらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１０２～１３７のいずれか一項
     に記載の方法。
139. 前記脂肪由来間葉系幹細胞が、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ６３、ＣＤ７３、
     ＣＤ９０、ＣＤ１６６、アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）、ＡＢＣＧ２及びそれ
     らの組み合わせからなる群より選択される１つ以上のマーカーを発現する、請求項１３８
     に記載の方法。
140. 前記脂肪由来間葉系幹細胞が、約１ヶ月超にわたって培養中に増殖することができる脂
     肪組織から抽出され、精製された単核細胞の集団を含む、請求項１３８又は１３９に記載
     の方法。
141. 前記骨髄間葉系幹細胞が、骨髄単核細胞に由来する、請求項１３８に記載の方法。
142. 前記骨髄間葉系幹細胞が、分化刺激への曝露の後に以下の細胞型：骨；軟骨；又は脂肪
     組織のうちの１つ以上に分化する能力に基づいて選択される、請求項１３８又は１４１に
     記載の方法。
143. 前記骨髄間葉系幹細胞が、以下の抗原：ＣＤ９０、ｃ－ｋｉｔ、ｆｌｋ－１、Ｓｔｒｏ
     －１、ＣＤ１０５、ＣＤ７３、ＣＤ３１、ＣＤ１４６、血管内皮カドヘリン、ＣＤ１３３
     及び／又はＣＸＣＲ－４のうちの１つ以上の発現に基づいて選択される、請求項１３８、
     １４１又は１４２のいずれか一項に記載の方法。
144. 前記骨髄間葉系幹細胞が、ＣＤ９０及び／又はＣＤ７３の発現について濃縮される、請
     求項１３８、１４１、１４２又は１４３のいずれか一項に記載の方法。
145. 前記骨髄間葉系幹細胞が、ＣＤ３４の有意な発現を欠く、請求項１３８、１４１、１４
     ２、１４１、１４４又は１４５のいずれか一項に記載の方法。
146. 前記胎盤間葉系幹細胞が、Ｏｃｔ－４、Ｒｅｘ－１、ＣＤ９、ＣＤ１３、ＣＤ２９、Ｃ
     Ｄ４４、ＣＤ１６６、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＳＨ－３、ＳＨ－４、ＴＲＡ－１－６０、
     ＴＲＡ－１－８１、ＳＳＥＡ－４ Ｓｏｘ－２及びそれらの組み合わせからなる群より選
     択される１つ以上の抗原の発現に基づいて同定される、請求項１３８に記載の方法。
147. 前記羊水間葉系幹細胞が、超音波誘導下における羊膜腔への体液採取手段の挿入によっ
     て単離される、請求項１３８に記載の方法。
148. 前記羊水間葉系幹細胞が、以下の抗原：ＳＳＥＡ３、ＳＳＥＡ４、Ｔｒａ－１－６０、
     Ｔｒａ－１－８１、Ｔｒａ－２－５４、ＨＬＡクラスＩ、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ４９
     ｂ、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ－４、Ｒｅｘ－１、ＤＡＺＬ及び／又はＲｕｎｘ－１のうちの１
     つ以上の発現に基づいて選択される、請求項１３８又は１４７に記載の方法。
149. 前記羊水間葉系幹細胞が、以下の抗原：ＣＤ３４、ＣＤ４５及び／又はＨＬＡクラスＩ
     Ｉのうちの１つ以上の発現の欠如に基づいて選択される、請求項１３８、１４７又は１４
     ８のいずれか一項に記載の方法。
150. 前記循環血間葉系幹細胞が、１ヶ月超の期間にわたってインビトロにおいて増殖する能
     力を特徴とする、請求項１３８に記載の方法。
151. 前記循環血間葉系幹細胞が、ＣＤ３４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１１７、ＣＤ１１３及び／又
     はｃ－ｍｅｔの発現を特徴とする、請求項１３８又は１５０に記載の方法。
152. 前記循環血間葉系幹細胞が、１つ以上の分化関連マーカーの実質的な発現を欠く、請求
     項１３８、１５０又は１５１のいずれか一項に記載の方法。
153. 前記分化関連マーカーが、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１、ＣＤ１１ａ、Ｍａｃ－
     １、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２４、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４
     ５、ＣＤ５６、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ８６、ＣＤ６６ｂ、ＨＬＡ－ＤＲ及びそれらの
     組み合わせからなる群より選択される、請求項１５２に記載の方法。
154. 前記間葉系幹細胞が、以下のマーカー：ＳＴＲＯ－１、ＣＤ１０５、ＣＤ５４、ＣＤ１
     ０６、ＨＬＡ－Ｉマーカー、ビメンチン、ＡＳＭＡ、コラーゲン－１、フィブロネクチン
     、ＬＦＡ－３、ＩＣＡＭ－１、ＰＥＣＡＭ－１、Ｐ－セレクチン、Ｌ－セレクチン、ＣＤ
     ４９ｂ／ＣＤ２９、ＣＤ４９ｃ／ＣＤ２９、ＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９、ＣＤ６１、ＣＤ１８
     、ＣＤ２９、トロンボモジュリン、テロメラーゼ、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＳＴＲＯ－２、
     ＶＣＡＭ－１、ＣＤ１４６及び／又はＴＨＹ－１のうちの１つ以上を発現する、請求項１
     ０２～１５３のいずれか一項に記載の方法。
155. 前記間葉系幹細胞が、実質的なレベルのＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ１１７及び／又はＣＤ４５
     を発現しない、請求項１０２～１５４のいずれか一項に記載の方法。
156. 前記細胞が、約１時間～約１６０時間、約３時間～約７２時間又は約４８時間という時
     間にわたってインターフェロンガンマで処置されたワルトン膠様質由来間葉系幹細胞であ
     る、請求項１３８に記載の方法。
157. 前記細胞が、約２０～１０００ＩＵ／ｍｌ、約５０～５００ＩＵ／ｍｌ又は約１５０Ｉ
     Ｕ／ｍｌに及ぶ総濃度のインターフェロンガンマで処置されたワルトン膠様質由来間葉系
     幹細胞である、請求項１３８に記載の方法。
158. 個体におけるウイルス誘導肝不全を処置する方法であって、１つ以上のストレス誘導刺
     激で予め調節された有効量の線維芽細胞の集団を該個体に投与する工程を含む、方法。
159. 前記ストレス誘導刺激が、インターフェロンガンマを含む、請求項１５８に記載の方法
     。
160. 前記ストレス誘導刺激が、ａ）オゾン及び／又はオゾン処理された培地；ｂ）過酸化水
     素；ｃ）７、６、５、４、３又は２未満のｐＨ；並びにｄ）それらの組み合わせからなる
     群より選択される培養条件への曝露を含む、請求項１５８又は１５９に記載の方法。
161. 前記線維芽細胞が、免疫学的に活性な細胞に曝露された細胞である、請求項１５８～１
     ６０のいずれか一項に記載の方法。
162. 前記個体に、前記線維芽細胞と免疫学的に活性な細胞とを同時に投与する、請求項１６
     １に記載の方法。
163. 前記免疫学的に活性な細胞が、単球である、請求項１６１又は１６２に記載の方法。
164. 前記単球が、Ｍ２マクロファージに分化した、請求項１６３に記載の方法。
165. 前記Ｍ２マクロファージが、単球によるアルギナーゼの産生を、インターロイキン４で
     処置されていない単球が産生するベースラインの５０％を超えるまで増加させる条件下で
     該単球をインターロイキン４において培養することによって作製される、請求項１６４に
     記載の方法。
166. 血管新生性マクロファージを産生する方法であって、ａ）単球及び／又は単球前駆細胞
     を得る工程；及びｂ）前記単球及び／又は単球前駆細胞に血管新生を刺激する能力を付与
     する条件下で前記単球及び／又は単球前駆細胞を線維芽細胞と接触させる工程を含む、方
     法。
167. 前記単球及び／又は単球前駆細胞が、以下の特徴：（ａ）末梢血単核球に由来すること
     ；（ｂ）ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１１ｂ；ＣＤ１４、ＣＤ１６のうちの１つ以上を発現
     すること、（ｃ）プラスチック接着性であること；（ｄ）骨髄前駆細胞であること；（ｅ
     ）骨髄に由来すること；及び／又は（ｆ）動員末梢血に由来すること、のうちの１つ以上
     を有する、請求項１６６に記載の方法。
168. 前記動員末梢血が、Ｇ－ＣＳＦ、ｆｌｔ－３リガンド及び／又はプレリキサホルのうち
     の１つ以上による個体の前処置によって産生される、請求項１６７に記載の方法。
169. 前記線維芽細胞が、線維芽細胞の増殖に適した培地中で培養される、請求項１６６～１
     ６８のいずれか一項に記載の方法。
170. 前記培地が、１つ以上の分裂促進因子を含む、請求項１６９に記載の方法。
171. 前記分裂促進因子が、ａ）ＦＧＦ－１；ｂ）ＦＧＦ－２；ｃ）ＦＧＦ－５；ｄ）ＥＧＦ
     ；ｅ）ＣＮＴＦ；ｆ）ＫＧＦ－１；ｇ）ＰＤＧＦ；ｈ）多血小板血漿；ｉ）ＴＧＦ－アル
     ファ；ｊ）ＨＧＦ－１；及びｋ）それらの組み合わせからなる群より選択される、請求項
     １７０に記載の方法。
172. 前記線維芽細胞が、低酸素条件下で培養される、請求項１６６～１７１のいずれか一項
     に記載の方法。
173. 前記線維芽細胞が、１つ以上の炎症性刺激で処置される、請求項１６６～１７２のいず
     れか一項に記載の方法。
174. 前記炎症性刺激が、１つ以上の炎症性サイトカインを含む、請求項１７３に記載の方法
     。
175. 前記炎症性サイトカインが、ＴＮＦ－アルファ、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、Ｉ
     Ｌ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－３３及びそれらの組み合わせか
     らなる群より選択される、請求項１７４に記載の方法。
176. 前記炎症性サイトカインが、ＩＬ－６、ミオシン１、ＩＬ－３３、低酸素誘導因子－１
     、グアニル酸結合タンパク質アイソフォームＩ、アミノレブリン酸デルタシンターゼ２、
     ＡＭＰデアミナーゼ、ＩＬ－１７、ＤＮＡＪ様２タンパク質、カテプシンＬ、転写因子－
     ２０、Ｍ３１７２４、ピエニルアルキルアミン結合タンパク質；ＨＥＣ、ＧＡ１７、アリ
     ールスルファターゼＤ遺伝子、アリールアウルファターゼＥ遺伝子、サイクリンタンパク
     質遺伝子、血小板前駆細胞塩基性タンパク質遺伝子、ＰＤＧＦＲＡ、ヒトＳＴＳ ＷＩ－
     １２０００、マンノシダーゼ、ベータＡ、リソソームＭＡＮＢＡ遺伝子、ＵＢＥ２Ｄ３遺
     伝子、Ｉｇガンマ重鎖に対するヒトＤＮＡ、ＳＴＲＬ２２、ＢＨＭＴ、ｈｏｍｏ ｓａｐ
     ｉｅｎｓダウン症候群重要領域、ＺＮＦ遺伝子ファミリーメンバーを含むＦＩ５６１３、
     ＩＬ８、ＥＬＦＲ、二重特異性ホスファターゼＭＫＰ－５に対するｈｏｍｏ ｓａｐｉｅ
     ｎｓ ｍＲＮＡ、Ｇタンパク質シグナル伝達１０の完全ｍＲＮＡのｈｏｍｏ ｓａｐｉｅ
     ｎｓ制御因子、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ Ｗｎｔ－１３ Ｍｍａ、ｈｏｍｏ ｓａｐｉ
     ｅｎｓ Ｎ末端アセチルトランスフェラーゼ複合体ａｒｄ１サブユニット、リボソームタ
     ンパク質Ｌ１５ ｍＲＮＡ、ＰＣＮＡ ｍＲＮＡ、ＡＴＲＭ遺伝子エキソン２１、無毛タ
     ンパク質エキソン２に対するＨＲ遺伝子、Ｎ－末端アセチルトランスフェラーゼ複合体ａ
     ｒｄ１サブユニット、ＨＳＭ８０１４３１ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ｍＲＮＡ、ＣＤ
     ＮＡ ＤＫＦＺｐ４３４Ｎ２０７２、ＲＰＬ２６及び無毛タンパク質に対するＨＲ遺伝子
     、Ｇタンパク質シグナル伝達の制御因子からなる群より選択される遺伝子の発現を線維芽
     細胞において刺激することができる、請求項１７４又は１７５に記載の方法。
177. 前記単球及び／又は単球前駆細胞が、１個の単球及び／若しくは単球前駆細胞対１００
     個の線維芽細胞という比；１個の単球及び／若しくは単球前駆細胞対１０個の線維芽細胞
     という比；１個の単球及び／若しくは単球前駆細胞対１０個の線維芽細胞という比；又は
     １個の単球及び／若しくは単球前駆細胞対１個の線維芽細胞という比で前記線維芽細胞と
     ともに培養される、請求項１６６～１７６のいずれか一項に記載の方法。
178. 前記単球及び／又は単球前駆細胞が、１時間～７日間；１２時間～５日間；又は１～３
     日間という期間にわたって前記線維芽細胞とともに培養される、請求項１６６～１７７の
     いずれか一項に記載の方法。
179. 前記単球及び／又は単球前駆細胞が、ロズウェルパーク記念研究所（ＲＰＭＩ－１６４
     ０）、ダルベッコ変法基本培地（ＤＭＥＭ）、ダルベッコ変法基本培地－低グルコース（
     ＤＭＥＭ－ＬＧ）、イーグル変法基本培地（ＥＭＥＭ）、Ｏｐｔｉｍｅｍ、イスコーブ培
     地及びそれらの組み合わせからなる群より選択される培地中で前記線維芽細胞とともに培
     養される、請求項１６６～１７８のいずれか一項に記載の方法。
180. 前記培地に、ヒト多血小板血漿、血小板溶解物、臍帯血血清、自己血清、ヒト血清、血
     清代替物又はそれらの組み合わせからなる群より選択される１つ以上の成長因子が補充さ
     れている、請求項１７９に記載の方法。
181. 前記血管新生性マクロファージが、新しい血管の成長を刺激することができる、請求項
     １６６～１７９のいずれか一項に記載の方法。
182. 前記血管新生性マクロファージが、Ｍ２マクロファージである、請求項１６６～１８１
     のいずれか一項に記載の方法。
183. 前記マクロファージが、ＩＬ－３３を発現する、請求項１６６～１８２のいずれか一項
     に記載の方法。
184. 個体における虚血状態を処置する方法であって、ＩＦＮ－ガンマ又はＰＧＥ－２並びに
     必要に応じて１つ以上のさらなる作用物質及び／又は条件に曝された治療有効量の細胞を
     含む組成物を該個体に投与する工程を含む、方法。
185. 前記さらなる作用物質が、１つ以上の免疫調節剤を含む、請求項１８４に記載の方法。
186. 前記免疫調節剤が、ＦＡＳリガンド、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－１Ｒａ、ＩＬ－２、ＩＬ－４
     、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－３５、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、Ｉ－３０
     ９、ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＣＤ２００、ガレクチン３、ｓＣＲ１、アルギナーゼ、アスピリ
     ン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチ
     ン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ｎ－アセチルシステイン、ラパマイシン、ＩＶＩ
     Ｇ、ナルトレキソン、ＴＧＦ－ベータ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＣＴＬＡ－４、抗ＣＤ４５
     ＲＢ抗体、ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、オーラノフィン、ジシアノ金、スルフ
     ァサラジン、メトトレキサート、糖質コルチコイド、エタネルセプト、アダリムマブ、ア
     バタセプト、アナキンラ、セルトリズマブ、エタネルセプト－ｓｚｚｓ、ゴリムマブ、イ
     ンフリキシマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、シクロスポリン、ＩＦＮ－ガンマ、エベ
     ロリムス、ラパマイシン又はそれらの組み合わせを含む、請求項１８５に記載の方法。
187. 前記細胞が、１つ以上の免疫調節剤を組換え発現するように改変される、請求項１８４
     ～１８６のいずれか一項に記載の方法。
188. 免疫調節剤が、ＦＡＳリガンド、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－１Ｒａ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、Ｉ
     Ｌ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－３５、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、Ｉ－３０９、
     ＩＤＯ、ｉＮＯＳ、ＣＤ２００、ガレクチン３、ｓＣＲ１、アルギナーゼ、ＰＧＥ－２、
     アスピリン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ロス
     バスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ｎ－アセチルシステイン、ラパマイシン
     、ＩＶＩＧ、ナルトレキソン、ＴＧＦ－ベータ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＣＴＬＡ－４、抗
     ＣＤ４５ＲＢ抗体、ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、オーラノフィン、ジシアノ金
     、スルファサラジン、メトトレキサート、糖質コルチコイド、エタネルセプト、アダリム
     マブ、アバタセプト、アナキンラ、セルトリズマブ、エタネルセプト－ｓｚｚｓ、ゴリム
     マブ、インフリキシマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、シクロスポリン、ＩＦＮ－ガン
     マ、エベロリムス、ラパマイシン又はそれらの組み合わせを含む、請求項１８７に記載の
     方法。
189. 前記１つ以上の免疫調節剤の発現が、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、組織
     特異的プロモーター又はそれらの組み合わせによって制御される、請求項１８７又は１８
     ８に記載の方法。
190. 前記個体が、血管新生療法を必要とする、請求項１８４～１８９のいずれか一項に記載
     の方法。
191. 前記１つ以上のさらなる作用物質が、１つ以上の血管新生剤である、請求項１８４～１
     ９０のいずれか一項に記載の方法。
192. 前記細胞が、１つ以上の血管新生剤を組換え発現するように改変される、請求項１９１
     に記載の方法。
193. 前記１つ以上の血管新生剤の発現が、構成的プロモーター、誘導性プロモーター又は組
     織特異的プロモーターによって制御される、請求項１９２に記載の方法。
194. 前記血管新生剤が、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ－１、ＦＧＦ－２、アンジオポエチン、ＨＩＦ－
     １－アルファ又はそれらの組み合わせである、請求項１９１～１９３のいずれか一項に記
     載の方法。
195. 前記さらなる作用物質が、ヒト多血小板血漿、血小板溶解物、臍帯血血清、自己血清、
     ヒト血清、血清代替物又はそれらの組み合わせを含む、請求項１８４～１９４のいずれか
     一項に記載の方法。
196. 樹状細胞の成熟を誘導する方法であって、ストレスを受けた線維芽細胞に未熟樹状細胞
     を曝露する工程を含む、方法。
197. 前記ストレスを受けた線維芽細胞が、高熱、血清枯渇又はその両方に曝露された、請求
     項１９６に記載の方法。
198. 前記高熱曝露が、前記線維芽細胞において１つ以上の熱ショック因子の発現をもたらし
     た、請求項１９７に記載の方法。
199. 前記熱ショック因子が、熱ショックタンパク質９０である、請求項１９８に記載の方法
     。
200. 前記高熱が、３９～４２℃を含む、請求項１９７～１９９のいずれか一項に記載の方法
     。
201. 前記高熱が、１～８時間の持続時間を有する、請求項１９７～２００のいずれか一項に
     記載の方法。
202. 前記血清枯渇が、１２～４８時間の持続時間である、請求項１９７～２０１のいずれか
     一項に記載の方法。
203. 前記方法によって産生された成熟樹状細胞が、骨髄樹状細胞又はリンパ系樹状細胞であ
     る、請求項１９７～２０２のいずれか一項に記載の方法。
204. 前記未熟骨髄樹状細胞が、高レベルのＣＤ８３、ＩＬ－１０又はその両方を発現する、
     請求項２０３に記載の方法。
205. 前記未熟骨髄樹状細胞が、低レベルのＩＬ－１２、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６又は
     それらの組み合わせを発現する、請求項２０３又は２０４に記載の方法。
206. 前記未熟樹状細胞が、混合リンパ球反応の不十分な刺激物質、Ｔ細胞活性化の不十分な
     刺激物質（例えば、ＬＰＳによって活性化されたＤＣと比べて５０％未満）又はその両方
     である、請求項１９６～２０５のいずれか一項に記載の方法。
207. 前記未熟樹状細胞が、前記線維芽細胞と同種異系である、請求項１９６～２０５のいず
     れか一項に記載の方法。
208. 前記未熟樹状細胞が、前記線維芽細胞に対して自家である、請求項１９６～２０７のい
     ずれか一項に記載の方法。
209. 前記未熟樹状細胞が、単球を含む、請求項１９６～２０８のいずれか一項に記載の方法
     。
210. ＣＤ８Ｔ細胞の１つ以上の活性を高める方法であって、ストレスを受けた線維芽細胞を
     、免疫細胞又は該免疫細胞から産生された若しくは得られたＣＤ８Ｔ細胞に曝露する工程
     を含む、方法。
211. 前記ストレスを受けた線維芽細胞に曝露される又は曝露された前記免疫細胞からＣＤ８
     Ｔ細胞を抽出する工程を含む、請求項２１０に記載の方法。
212. 前記１つ以上の活性が、前記ストレスを受けた線維芽細胞への曝露の非存在下における
     ＣＤ８Ｔ細胞のそれぞれの活性と比べて、高い増殖、サイトカイン産生、細胞傷害性、及
     び／又は少ない共刺激分子の所要量を含む、請求項２１０又は２１１に記載の方法。
213. 前記サイトカイン産生が、ＩＬ－２、ＩＬ－７及び／又はＩＬ－１５の分泌を含む、請
     求項２１２に記載の方法。
214. 前記増殖が、前記ＣＤ８Ｔ細胞への１つ以上のサイトカインの投与に応答して増大する
     、請求項２１２又は２１３に記載の方法。
215. 前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－７及び／又はＩＬ－１５を含む、請求項２１４
     に記載の方法。
216. 前記増殖が、Ｔ細胞受容体連結に応答して増大する、請求項２１２又は２１３に記載の
     方法。
217. 前記Ｔ細胞受容体連結が、１つ以上の抗原及び／又は１つ以上のマイトジェンによって
     達成される、請求項２１６に記載の方法。
218. 前記細胞傷害性が、標的細胞を殺滅する能力、パーフォリン産生及び／又はグランザイ
     ム産生を含む、請求項２１２～２１７のいずれか一項に記載の方法。
219. 前記少ない共刺激分子の所要量が、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＩＬ－２、ＩＬ－
     ２１、及び／又はＣＤ２８の連結の少ない所要量を含む、請求項２１２に記載の方法。
220. 前記免疫細胞及び／又は前記ＣＤ８Ｔ細胞が、非内在性遺伝子産物を発現するように操
     作される、請求項２１０～２１９のいずれか一項に記載の方法。
221. 前記免疫細胞及び／又は前記ＣＤ８Ｔ細胞が、ｓｉＲＮＡ、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ
     ）又はＴ細胞受容体を発現するように操作される、請求項２２０に記載の方法。
222. 前記ｓｉＲＮＡが、免疫阻害性分子を標的化する、請求項２２１に記載の方法。
223. 前記免疫阻害剤分子が、ＣＴＬＡ－４、ＳＴＡＴ６、ＩＬ－１０又はＰＤ－１である、
     請求項２２２に記載の方法。
224. 前記ＣＡＲが、腫瘍抗原を標的化する、請求項２２１に記載の方法。
225. 前記曝露工程が、Ｔ細胞増殖を刺激することができる１つ以上の抗原を含む培地中で行
     われる、請求項２１０～２２４のいずれか一項に記載の方法。
226. 前記線維芽細胞が、１つ以上の非内在性遺伝子産物を発現する、請求項２１０～２２４
     のいずれか一項に記載の方法。
227. 前記線維芽細胞が、Ｔ細胞増殖を刺激することができる１つ以上の抗原を発現する、請
     求項２２６に記載の方法。
228. 前記曝露工程が、ウシ胎仔血清、ヒト血清、ＩＬ－２、インスリン、ＩＦＮ－ガンマ、
     ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１
     、ＴＧＦ－ベータ及び／又はＴＮＦ－アルファを含む培地中で行われる、請求項２１０～
     ２２７のいずれか一項に記載の方法。
229. 前記線維芽細胞が、皮膚、心臓、血管、骨髄、骨格筋、肝臓、膵臓、脳、脂肪組織、胎
     盤及び／又は包皮を含む組織に由来する、請求項１～２２８のいずれか一項に記載の方法
     。
230. 前記線維芽細胞が、胎盤、胎児、新生児若しくは成体の線維芽細胞又はそれらの混合物
     である、請求項１～２２９のいずれか一項に記載の方法。
231. 前記線維芽細胞が、生検材料に由来し、前記生検材料は、処置される個体、又は処置さ
     れる個体とは異なる個体に由来する、請求項１～２３０のいずれか一項に記載の方法。
232. 前記線維芽細胞と前記免疫細胞とが、同種異系細胞である、請求項１～２３１のいずれ
     か一項に記載の方法。
233. 前記線維芽細胞と前記免疫細胞とが、自家細胞である、請求項１～２３２のいずれか一
     項に記載の方法。
234. 前記ＩＦＮ－ガンマが、前記組成物中に１～５００ＩＵ／ｍＬ、５～５００ＩＵ／ｍＬ
     、１０～５００ＩＵ／ｍＬ、１５～５００ＩＵ／ｍＬ、２０～５００ＩＵ／ｍＬ、２５～
     ５００ＩＵ／ｍＬ、３０～５００ＩＵ／ｍＬ、３５～５００ＩＵ／ｍＬ、４０～５００Ｉ
     Ｕ／ｍＬ、４５～５００ＩＵ／ｍＬ、５０～５００ＩＵ／ｍＬ、６０～５００ＩＵ／ｍＬ
     、７０～５００ＩＵ／ｍＬ、８０～５００ＩＵ／ｍＬ、９０～５００ＩＵ／ｍＬ、１００
     ～５００ＩＵ／ｍＬ、１５０～５００ＩＵ／ｍＬ、２００～５００ＩＵ／ｍＬ、２５０～
     ５００ＩＵ／ｍＬ、３００～５００ＩＵ／ｍＬ、３５０～５００ＩＵ／ｍＬ、４００～５
     ００ＩＵ／ｍＬ、４５０～５００ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～４５０ＩＵ／ｍＬ、０．５～
     ４５０ＩＵ／ｍＬ、１～４５０ＩＵ／ｍＬ、５～４５０ＩＵ／ｍＬ、１０～４５０ＩＵ／
     ｍＬ、１５～４５０ＩＵ／ｍＬ、２０～４５０ＩＵ／ｍＬ、２５～４５０ＩＵ／ｍＬ、３
     ０～４５０ＩＵ／ｍＬ、３５～４５０ＩＵ／ｍＬ、４０～４５０ＩＵ／ｍＬ、４５～４５
     ０ＩＵ／ｍＬ、５０～４５０ＩＵ／ｍＬ、６０～４５０ＩＵ／ｍＬ、７０～４５０ＩＵ／
     ｍＬ、８０～４５０ＩＵ／ｍＬ、９０～４５０ＩＵ／ｍＬ、１００～４５０ＩＵ／ｍＬ、
     １５０～４５０ＩＵ／ｍＬ、２００～４５０ＩＵ／ｍＬ、２５０～４５０ＩＵ／ｍＬ、３
     ００～４５０ＩＵ／ｍＬ、３５０～４５０ＩＵ／ｍＬ、４００～４５０ＩＵ／ｍＬ；又は
     ０．１～４００ＩＵ／ｍＬ、０．５～４００ＩＵ／ｍＬ、１～４００ＩＵ／ｍＬ、５～４
     ００ＩＵ／ｍＬ、１０～４００ＩＵ／ｍＬ、１５～４００ＩＵ／ｍＬ、２０～４００ＩＵ
     ／ｍＬ、２５～４００ＩＵ／ｍＬ、３０～４００ＩＵ／ｍＬ、３５～４００ＩＵ／ｍＬ、
     ４０～４００ＩＵ／ｍＬ、４５～４００ＩＵ／ｍＬ、５０～４００ＩＵ／ｍＬ、６０～４
     ００ＩＵ／ｍＬ、７０～４００ＩＵ／ｍＬ、８０～４００ＩＵ／ｍＬ、９０～４００ＩＵ
     ／ｍＬ、１００～４００ＩＵ／ｍＬ、１５０～４００ＩＵ／ｍＬ、２００～４００ＩＵ／
     ｍＬ、２５０～４００ＩＵ／ｍＬ、３００～４００ＩＵ／ｍＬ、３５０～４００ＩＵ／ｍ
     Ｌ；又は０．１～３５０ＩＵ／ｍＬ、０．５～３５０ＩＵ／ｍＬ、１～３５０ＩＵ／ｍＬ
     、５～３５０ＩＵ／ｍＬ、１０～３５０ＩＵ／ｍＬ、１５～３５０ＩＵ／ｍＬ、２０～３
     ５０ＩＵ／ｍＬ、２５～３５０ＩＵ／ｍＬ、３０～３５０ＩＵ／ｍＬ、３５～３５０ＩＵ
     ／ｍＬ、４０～３５０ＩＵ／ｍＬ、４５～３５０ＩＵ／ｍＬ、５０～３５０ＩＵ／ｍＬ、
     ６０～３５０ＩＵ／ｍＬ、７０～３５０ＩＵ／ｍＬ、８０～３５０ＩＵ／ｍＬ、９０～３
     ５０ＩＵ／ｍＬ、１００～３５０ＩＵ／ｍＬ、１５０～３５０ＩＵ／ｍＬ、２００～３５
     ０ＩＵ／ｍＬ、２５０～３５０ＩＵ／ｍＬ、３００～３５０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～３
     ００ＩＵ／ｍＬ、０．５～３００ＩＵ／ｍＬ、１～３００ＩＵ／ｍＬ、５～３００ＩＵ／
     ｍＬ、１０～３００ＩＵ／ｍＬ、１５～３００ＩＵ／ｍＬ、２０～３００ＩＵ／ｍＬ、２
     ５～３００ＩＵ／ｍＬ、３０～３００ＩＵ／ｍＬ、３５～３００ＩＵ／ｍＬ、４０～３０
     ０ＩＵ／ｍＬ、４５～３００ＩＵ／ｍＬ、５０～３００ＩＵ／ｍＬ、６０～３００ＩＵ／
     ｍＬ、７０～３００ＩＵ／ｍＬ、８０～３００ＩＵ／ｍＬ、９０～３００ＩＵ／ｍＬ、１
     ００～３００ＩＵ／ｍＬ、１５０～３００ＩＵ／ｍＬ、２００～３００ＩＵ／ｍＬ、２５
     ０～３００ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～２５０ＩＵ／ｍＬ、０．５～２５０ＩＵ／ｍＬ、１
     ～２５０ＩＵ／ｍＬ、５～２５０ＩＵ／ｍＬ、１０～２５０ＩＵ／ｍＬ、１５～２５０Ｉ
     Ｕ／ｍＬ、２０～２５０ＩＵ／ｍＬ、２５～２５０ＩＵ／ｍＬ、３０～２５０ＩＵ／ｍＬ
     、３５～２５０ＩＵ／ｍＬ、４０～２５０ＩＵ／ｍＬ、４５～２５０ＩＵ／ｍＬ、５０～
     ２５０ＩＵ／ｍＬ、６０～２５０ＩＵ／ｍＬ、７０～２５０ＩＵ／ｍＬ、８０～２５０Ｉ
     Ｕ／ｍＬ、９０～２５０ＩＵ／ｍＬ、１００～２５０ＩＵ／ｍＬ、１５０～２５０ＩＵ／
     ｍＬ、２００～２５０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～２００ＩＵ／ｍＬ、０．５～２００ＩＵ
     ／ｍＬ、１～２００ＩＵ／ｍＬ、５～２００ＩＵ／ｍＬ、１０～２００ＩＵ／ｍＬ、１５
     ～２００ＩＵ／ｍＬ、２０～２００ＩＵ／ｍＬ、２５～２００ＩＵ／ｍＬ、３０～２００
     ＩＵ／ｍＬ、３５～２００ＩＵ／ｍＬ、４０～２００ＩＵ／ｍＬ、４５～２００ＩＵ／ｍ
     Ｌ、５０～２００ＩＵ／ｍＬ、６０～２００ＩＵ／ｍＬ、７０～２００ＩＵ／ｍＬ、８０
     ～２００ＩＵ／ｍＬ、９０～２００ＩＵ／ｍＬ、１００～２００ＩＵ／ｍＬ、１５０～２
     ００ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～１５０ＩＵ／ｍＬ、０．５～１５０ＩＵ／ｍＬ、１～１５
     ０ＩＵ／ｍＬ、５～１５０ＩＵ／ｍＬ、１０～１５０ＩＵ／ｍＬ、１５～１５０ＩＵ／ｍ
     Ｌ、２０～１５０ＩＵ／ｍＬ、２５～１５０ＩＵ／ｍＬ、３０～１５０ＩＵ／ｍＬ、３５
     ～１５０ＩＵ／ｍＬ、４０～１５０ＩＵ／ｍＬ、４５～１５０ＩＵ／ｍＬ、５０～１５０
     ＩＵ／ｍＬ、６０～１５０ＩＵ／ｍＬ、７０～１５０ＩＵ／ｍＬ、８０～１５０ＩＵ／ｍ
     Ｌ、９０～１５０ＩＵ／ｍＬ、１００～１５０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～１００ＩＵ／ｍ
     Ｌ、０．５～１００ＩＵ／ｍＬ、１～１００ＩＵ／ｍＬ、５～１００ＩＵ／ｍＬ、１０～
     １００ＩＵ／ｍＬ、１５～１００ＩＵ／ｍＬ、２０～１００ＩＵ／ｍＬ、２５～１００Ｉ
     Ｕ／ｍＬ、３０～１００ＩＵ／ｍＬ、３５～１００ＩＵ／ｍＬ、４０～１００ＩＵ／ｍＬ
     、４５～１００ＩＵ／ｍＬ、５０～１００ＩＵ／ｍＬ、６０～１００ＩＵ／ｍＬ、７０～
     １００ＩＵ／ｍＬ、８０～１００ＩＵ／ｍＬ、９０～１００ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～９
     ０ＩＵ／ｍＬ、０．５～９０ＩＵ／ｍＬ、１～９０ＩＵ／ｍＬ、５～９０ＩＵ／ｍＬ、１
     ０～９０ＩＵ／ｍＬ、１５～９０ＩＵ／ｍＬ、２０～９０ＩＵ／ｍＬ、２５～９０ＩＵ／
     ｍＬ、３０～９０ＩＵ／ｍＬ、３５～９０ＩＵ／ｍＬ、４０～９０ＩＵ／ｍＬ、４５～９
     ０ＩＵ／ｍＬ、５０～９０ＩＵ／ｍＬ、６０～９０ＩＵ／ｍＬ、７０～９０ＩＵ／ｍＬ、
     ８０～９０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～８０ＩＵ／ｍＬ、０．５～８０ＩＵ／ｍＬ、１～８
     ０ＩＵ／ｍＬ、５～８０ＩＵ／ｍＬ、１０～８０ＩＵ／ｍＬ、１５～８０ＩＵ／ｍＬ、２
     ０～８０ＩＵ／ｍＬ、２５～８０ＩＵ／ｍＬ、３０～８０ＩＵ／ｍＬ、３５～８０ＩＵ／
     ｍＬ、４０～８０ＩＵ／ｍＬ、４５～８０ＩＵ／ｍＬ、５０～８０ＩＵ／ｍＬ、６０～８
     ０ＩＵ／ｍＬ、７０～８０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～７０ＩＵ／ｍＬ、０．５～７０ＩＵ
     ／ｍＬ、１～７０ＩＵ／ｍＬ、５～７０ＩＵ／ｍＬ、１０～７０ＩＵ／ｍＬ、１５～７０
     ＩＵ／ｍＬ、２０～７０ＩＵ／ｍＬ、２５～７０ＩＵ／ｍＬ、３０～７０ＩＵ／ｍＬ、３
     ５～７０ＩＵ／ｍＬ、４０～７０ＩＵ／ｍＬ、４５～７０ＩＵ／ｍＬ、５０～７０ＩＵ／
     ｍＬ、６０～７０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～６０ＩＵ／ｍＬ、０．５～６０ＩＵ／ｍＬ、
     １～６０ＩＵ／ｍＬ、５～６０ＩＵ／ｍＬ、１０～６０ＩＵ／ｍＬ、１５～６０ＩＵ／ｍ
     Ｌ、２０～６０ＩＵ／ｍＬ、２５～６０ＩＵ／ｍＬ、３０～６０ＩＵ／ｍＬ、３５～６０
     ＩＵ／ｍＬ、４０～６０ＩＵ／ｍＬ、４５～６０ＩＵ／ｍＬ、５０～６０ＩＵ／ｍＬ；又
     は０．１～５０ＩＵ／ｍＬ、０．５～５０ＩＵ／ｍＬ、１～５０ＩＵ／ｍＬ、５～５０Ｉ
     Ｕ／ｍＬ、１０～５０ＩＵ／ｍＬ、１５～５０ＩＵ／ｍＬ、２０～５０ＩＵ／ｍＬ、２５
     ～５０ＩＵ／ｍＬ、３０～５０ＩＵ／ｍＬ、３５～５０ＩＵ／ｍＬ、４０～５０ＩＵ／ｍ
     Ｌ、４５～５０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～４５ＩＵ／ｍＬ、０．５～４５ＩＵ／ｍＬ、１
     ～４５ＩＵ／ｍＬ、５～４５ＩＵ／ｍＬ、１０～４５ＩＵ／ｍＬ、１５～４５ＩＵ／ｍＬ
     、２０～４５ＩＵ／ｍＬ、２５～４５ＩＵ／ｍＬ、３０～４５ＩＵ／ｍＬ、３５～４５Ｉ
     Ｕ／ｍＬ、４０～４５ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～４０ＩＵ／ｍＬ、０．５～４０ＩＵ／ｍ
     Ｌ、１～４０ＩＵ／ｍＬ、５～４０ＩＵ／ｍＬ、１０～４０ＩＵ／ｍＬ、１５～４０ＩＵ
     ／ｍＬ、２０～４０ＩＵ／ｍＬ、２５～４０ＩＵ／ｍＬ、３０～４０ＩＵ／ｍＬ、３５～
     ４０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～３５ＩＵ／ｍＬ、０．５～３５ＩＵ／ｍＬ、１～３５ＩＵ
     ／ｍＬ、５～３５ＩＵ／ｍＬ、１０～３５ＩＵ／ｍＬ、１５～３５ＩＵ／ｍＬ、２０～３
     ５ＩＵ／ｍＬ、２５～３５ＩＵ／ｍＬ、３０～３５ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～３０ＩＵ／
     ｍＬ、０．５～３０ＩＵ／ｍＬ、１～３０ＩＵ／ｍＬ、５～３０ＩＵ／ｍＬ、１０～３０
     ＩＵ／ｍＬ、１５～３０ＩＵ／ｍＬ、２０～３０ＩＵ／ｍＬ、２５～３０ＩＵ／ｍＬ；又
     は０．１～２５ＩＵ／ｍＬ、０．５～２５ＩＵ／ｍＬ、１～２５ＩＵ／ｍＬ、５～２５Ｉ
     Ｕ／ｍＬ、１０～２５ＩＵ／ｍＬ、１５～２５ＩＵ／ｍＬ、２０～２５ＩＵ／ｍＬ；又は
     ０．１～２０ＩＵ／ｍＬ、０．５～２０ＩＵ／ｍＬ、１～２０ＩＵ／ｍＬ、５～２０ＩＵ
     ／ｍＬ、１０～２０ＩＵ／ｍＬ、１５～２０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～１５ＩＵ／ｍＬ、
     ０．５～１５ＩＵ／ｍＬ、１～１５ＩＵ／ｍＬ、５～１５ＩＵ／ｍＬ、１０～１５ＩＵ／
     ｍＬ；又は０．１～１０ＩＵ／ｍＬ、０．５～１０ＩＵ／ｍＬ、１～１０ＩＵ／ｍＬ、５
     ～１０ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～５ＩＵ／ｍＬ、０．５～５ＩＵ／ｍＬ、１～５ＩＵ／ｍ
     Ｌ；又は０．１～１ＩＵ／ｍＬ、０．５～１ＩＵ／ｍＬ；又は０．１～０．５ＩＵ／ｍＬ
     で含まれる、請求項５、９、３１、３７、３９、４９、５６、５８、６４、８５、１８４
     、１８６、１８８又は２２８のいずれか一項に記載の方法。
235. 前記細胞が、１時間～１４日間、２時間～１４日間、３時間～１４日間、４時間～１４
     日間、５時間～１４日間、６時間～１４日間、７時間～１４日間、８時間～１４日間、９
     時間～１４日間、１０時間～１４日間、１１時間～１４日間、１２時間～１４日間、１８
     時間～１４日間、１日間～１４日間、２日間～１４日間、３日間～１４日間、４日間～１
     ４日間、５日間～１４日間、６日間～１４日間、７日間～１４日間、８日間～１４日間、
     ９日間～１４日間、１０日間～１４日間、１１日間～１４日間、１２日間～１４日間、１
     ３日間～１４日間；又は１時間～１３日間、２時間～１３日間、３時間～１３日間、４時
     間～１３日間、５時間～１３日間、６時間～１３日間、７時間～１３日間、８時間～１３
     日間、９時間～１３日間、１０時間～１３日間、１１時間～１３日間、１２時間～１３日
     間、１日間～１３日間、２日間～１３日間、３日間～１３日間、４日間～１３日間、５日
     間～１３日間、６日間～１３日間、７日間～１３日間、８日間～１３日間、９日間～１３
     日間、１０日間～１３日間、１１日間～１３日間、１２日間～１３日間；又は１時間～１
     ２日間、２時間～１２日間、３時間～１２日間、４時間～１２日間、５時間～１２日間、
     ６時間～１２日間、７時間～１２日間、８時間～１２日間、９時間～１２日間、１０時間
     ～１２日間、１１時間～１２日間、１２時間～１２日間、１日間～１２日間、２日間～１
     ２日間、３日間～１２日間、４日間～１２日間、５日間～１２日間、６日間～１２日間、
     ７日間～１２日間、８日間～１２日間、９日間～１２日間、１０日間～１２日間、１１日
     間～１２日間；又は１時間～１１日間、２時間～１１日間、３時間～１１日間、４時間～
     １１日間、５時間～１１日間、６時間～１１日間、７時間～１１日間、８時間～１１日間
     、９時間～１１日間、１０時間～１１日間、１１時間～１１日間、１２時間～１１日間、
     １日間～１１日間、２日間～１１日間、３日間～１１日間、４日間～１１日間、５日間～
     １１日間、６日間～１１日間、７日間～１１日間、８日間～１１日間、９日間～１１日間
     、１０日間～１１日間１１日間；又は１時間～１０日間、２時間～１０日間、３時間～１
     ０日間、４時間～１０日間、５時間～１０日間、６時間～１０日間、７時間～１０日間、
     ８時間～１０日間、９時間～１０日間、１０時間～１０日間、１１時間～１０日間、１２
     時間～１０日間、１日間～１０日間、２日間～１０日間、３日間～１０日間、４日間～１
     ０日間、５日間～１０日間、６日間～１０日間、７日間～１０日間、８日間～１０日間、
     ９日間～１０日間１０日間；又は１時間～９日間、２時間～９日間、３時間～９日間、４
     時間～９日間、５時間～９日間、６時間～９日間、７時間～９日間、８時間～９日間、９
     時間～９日間、１０時間～９日間、１１時間～９日間、１２時間～９日間、１日間～９日
     間、２日間～９日間、３日間～９日間、４日間～９日間、５日間～９日間、６日間～９日
     間、７日間～９日間、８日間～９日間９日間；又は１時間～８日間、２時間～８日間、３
     時間～８日間、４時間～８日間、５時間～８日間、６時間～８日間、７時間～８日間、８
     時間～８日間、９時間～８日間、１０時間～８日間、１１時間～８日間、１２時間～８日
     間、１日間～８日間、２日間～８日間、３日間～８日間、４日間～８日間、５日間～８日
     間、６日間～８日間、７日間～８日間；又は１時間～７日間、２時間～７日間、３時間～
     ７日間、４時間～７日間、５時間～７日間、６時間～７日間、７時間～７日間、８時間～
     ７日間、９時間～７日間、１０時間～７日間、１１時間～７日間、１２時間～７日間、１
     日間～７日間、２日間～７日間、３日間～７日間、４日間～７日間、５日間～７日間、６
     日間～７日間；又は１時間～６日間、２時間～６日間、３時間～６日間、４時間～６日間
     、５時間～６日間、６時間～６日間、７時間～６日間、８時間～６日間、９時間～６日間
     、１０時間～６日間、１１時間～６日間、１２時間～６日間、１日間～６日間、２日間～
     ６日間、３日間～６日間、４日間～６日間、５日間～６日間；又は１時間～５日間、２時
     間～５日間、３時間～５日間、４時間～５日間、５時間～５日間、６時間～５日間、７時
     間～５日間、８時間～５日間、９時間～５日間、１０時間～５日間、１１時間～５日間、
     １２時間～５日間、１日間～５日間、２日間～５日間、３日間～５日間、４日間～５日間
     ；又は１時間～４日間、２時間～４日間、３時間～４日間、４時間～４日間、５時間～４
     日間、６時間～４日間、７時間～４日間、８時間～４日間、９時間～４日間、１０時間～
     ４日間、１１時間～４日間、１２時間～４日間、１日間～４日間、２日間～４日間、３日
     間～４日間；又は１時間～３日間、２時間～３日間、３時間～３日間、４時間～３日間、
     ５時間～３日間、６時間～３日間、７時間～３日間、８時間～３日間、９時間～３日間、
     １０時間～３日間、１１時間～３日間、１２時間～３日間、１日間～３日間、２日間～３
     日間；又は１時間～２日間、２時間～２日間、３時間～２日間、４時間～２日間、５時間
     ～２日間、６時間～２日間、７時間～２日間、８時間～２日間、９時間～２日間、１０時
     間～２日間、１１時間～２日間、１２時間～２日間、１日間～２日間；又は１時間～１日
     間、２時間～１日間、３時間～１日間、４時間～１日間、５時間～１日間、６時間～１日
     間、７時間～１日間、８時間～１日間、９時間～１日間、１０時間～１日間、１１時間～
     １日間、１２時間～１日間；又は１時間～１２時間、２時間～１２時間、３時間～１２時
     間、４時間～１２時間、５時間～１２時間、６時間～１２時間、７時間～１２時間、８時
     間～１２時間、９時間～１２時間、１０時間～１２時間、１１時間～１２時間；又は１時
     間～１１時間、２時間～１１時間、３時間～１１時間、４時間～１１時間、５時間～１１
     時間、６時間～１１時間、７時間～１１時間、８時間～１１時間、９時間～１１時間、１
     ０時間～１１時間；又は１時間～１０時間、２時間～１０時間、３時間～１０時間、４時
     間～１０時間、５時間～１０時間、６時間～１０時間、７時間～１０時間、８時間～１０
     時間、９時間～１０時間；又は１時間～９時間、２時間～９時間、３時間～９時間、４時
     間～９時間、５時間～９時間、６時間～９時間、７時間～９時間、８時間～９時間；又は
     １時間～８時間、２時間～８時間、３時間～８時間、４時間～８時間、５時間～８時間、
     ６時間～８時間、７時間～８時間；又は１時間～７時間、２時間～７時間、３時間～７時
     間、４時間～７時間、５時間～７時間、６時間～７時間；又は１時間～６時間、２時間～
     ６時間、３時間～６時間、４時間～６時間、５時間～６時間；又は１時間～５時間、２時
     間～５時間、３時間～５時間、４時間～５時間；又は１時間～４時間、２時間～４時間、
     ３時間～４時間；又は１時間～３時間、２時間～３時間；又は１時間～２時間に及ぶ時間
     にわたってＩＦＮ－ガンマに曝される、請求項５５、９、３１、３７、３９、４９、５６
     、５８、６４、８５、１８４、１８６、１８８又は２２８のいずれか一項に記載の方法。
236. 個体における移植片対宿主病を処置する方法であって、該個体に有効量の線維芽細胞を
     、細胞移植片、組織移植片若しくは器官移植片とともに、及び／又は前記移植の間に若し
     くは前記移植の後に、該個体に提供する工程を含む、方法。
237. 前記線維芽細胞が、ＣＤ１０５陽性である、請求項２３６に記載の方法。
238. 前記線維芽細胞が、十分量のプロスタグランジンＥ２に曝露された、請求項２３６又は
     ２３７に記載の方法。
239. 心筋再生を必要とする個体における心筋再生の方法であって、有効量の、線維芽細胞と
     単球との共培養物を該個体に投与する工程を含む、方法。
240. 前記線維芽細胞及び単球が、好適な条件下において、プロスタグランジン－Ｅ２と共培
     養された、請求項２３９に記載の方法。
241. 前記単球が、ＣＤ１４陽性である、請求項２３９又は２４０に記載の方法。
242. 前記単球が、アルギナーゼ陽性である、請求項２３９～２４１のいずれか一項に記載の
     方法。
243. 前記単球及び／又は線維芽細胞が、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ－ＢＢ及び／又はＥＧＦを産生
     する、請求項２３９～２４２のいずれか一項に記載の方法。