JP2023153417A - 高弾性ヒアルロナン組成物およびその使用の方法 - Google Patents

Abstract

【課題】眼乾燥状態を有効に処置し、注射用補強デバイスを使用して皮膚の欠点を最小にし、創傷治癒を促進する一方でこれらの状態に関連する疼痛を緩和する方法を提供する。【解決手段】本発明は、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感の緩和を必要とする被験体において、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感を緩和する方法を提供する。本方法は、被験体の眼にヒアルロナンを含む組成物（例えば、薬学的組成物）を投与することを含み、ここで、ヒアルロナンが、組成物中に約３０ｍｇ／ｍＬを超える濃度で存在し；ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず、それにより、被験体における疼痛および不快感が緩和される。【選択図】なし

Description

関連出願
本出願は、２０１５年９月２４日に出願された米国仮出願番号第６２／２３２，３６４号の利益を主張しており、この仮出願の全体の内容は、参考として本明細書中に援用される。

発明の背景
ヒアルロナンまたはヒアルロン酸（ＨＡ）は、平均分子量が高い線状ポリサッカリドであり、結合組織、上皮組織、および神経組織の至る所に広く分布している。ＨＡは、主に細胞外基質および細胞周囲マトリックスに見出されるが、細胞内に存在することも示されている。ＨＡの生物学的機能には、液体状の結合組織（関節内の滑液および眼のガラス体など）の弾粘性の維持、組織の水和および水輸送の調節、細胞外基質内のプロテオグリカンの超分子集合、ならびに細胞の分離、有糸分裂、遊走、および腫瘍成長における多数の受容体に媒介される役割が含まれる。

ＨＡのいくつかの公知の用途には、眼乾燥状態の処置、スキンケアにおける皮膚充填剤、および創傷治癒の促進が含まれる。しばしば、眼乾燥状態、スキンケア／皮膚科学的手技、ならびに創傷治癒は、疼痛および不快感に関連し、この疼痛および不快感には、典型的には、鎮痛薬を個別に適用する必要がある。上記の状態を処置するために現時点で使用されているＨＡ処方物は、局所疼痛の処置で有効ではない。したがって、眼乾燥状態を有効に処置し、注射用補強デバイス（ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｄｅｖｉｃｅ）を使用して皮膚の欠点を最小にし、創傷治癒を促進する一方でこれらの状態に関連する疼痛を緩和する方法が当該分野で必要とされている。

発明の概要
本発明者らは、高濃度のＨＡを含む組成物（例えば、ＨＡ濃度が約３０ｍｇ／ｍＬ（約３％重量／体積）またはそれを超える組成物）を、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感の緩和、皮膚科学的手技、および創傷治癒のために有効に使用することができることを発見した。特定の理論に拘束されることを望まないが、疼痛および不快感処置のための高濃度のＨＡを含む本発明のＨＡ組成物の有効性が、高値の弾性係数Ｇ’によって証明されるその弾性の高さによって決定されると考えられる。特定の理論に拘束されることを望まないが、本発明のＨＡ組成物の有効性が、ＨＡ分子の疼痛変換チャネル（ＴＲＰＶ１など）との相互作用の確率が比較的高く、それにより、侵害受容器興奮性が軽減されることによって決定されるとも考えられる。

したがって、本発明は、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感の緩和を必要とする被験体において、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感を緩和する方法を提供する。本方法は、被験体の眼にヒアルロナンを含む組成物（例えば、薬学的組成物）を投与することを含み、ここで、ヒアルロナンが、組成物中に約３０ｍｇ／ｍＬを超える濃度（例えば、約３５ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度、約４０ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度、約４５ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度、約５０ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度、約５５ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度、約６０ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度、約６５ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度、約７０ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度、約７５ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度、約８０ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度、約８５ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度、約９０ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度、約９５ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度、または約１００ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度）で存在し；ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず、それにより、被験体における疼痛および不快感が緩和される。

別の態様では、ヒアルロナンは、組成物中に約４０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

いくつかの実施形態では、本発明はまた、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感の緩和を必要とする被験体において、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感を緩和する方法であって、被験体の眼にヒアルロナンを含む組成物（例えば、薬学的組成物）を投与することを含み、ここで、ヒアルロナンが組成物中に少なくとも約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し；ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず、それにより、被験体における疼痛および不快感が緩和される、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、組成物は他の薬学的に活性な物質を実質的に含まない。

一定の態様では、組成物はポリグリコールを含まない。

いくつかの実施形態では、組成物は、緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））をさらに含む。

いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約２００パスカル；周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約１，０００パスカル；周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約２，０００パスカル；または周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約４，０００パスカルである。

いくつかの実施形態では、組成物は、ゲル、軟膏、塗布剤、ローション、またはクリームの形態である。

いくつかの態様では、組成物を、被験体の眼表面（眼瞼下（例えば、上眼瞼下または下眼瞼下）または角膜－眼瞼境界など）に投与する。

特定の実施形態では、組成物を、被験体に休憩または就寝の直前に投与する。

いくつかの態様では、組成物を、注射を用いずに被験体の眼内に投与する。

いくつかの態様では、組成物を、容器（例えば、軟プラスチックボトル、チューブ、エアレスチューブ、アイカップ、ドロッパー、またはカートリッジなどの単回投与用容器）を使用して投与する。

いくつかの実施形態では、眼乾燥状態は、眼球の乾燥；涙の産生、体積、および流れの減少；涙組成の異常；涙容量オスモル濃度の増加；角膜炎；結膜および角膜の着色；発赤；視界不良（ｂｌｕｒｒｙ ｖｉｓｉｏｎ）；涙液層破壊時間の減少；結膜発赤の増加；涙液層内のデブリの過剰、眼に砂が入ったような感じ（ｏｃｕｌａｒ ｇｒｉｔｔｉｎｅｓｓ）；眼の灼熱感（ｏｃｕｌａｒ ｂｕｒｎｉｎｇ）；眼内の異物感；涙の分泌過剰；羞明；眼の刺激感（ｏｃｕｌａｒ ｓｔｉｎｇｉｎｇ）；屈折機能障害（ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ）；眼過敏症（ｏｃｕｌａｒ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）；および眼球刺激（ｏｃｕｌａｒ ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ）からなる群から選択される１つまたはそれを超える症状に関連する。他の実施形態では、眼乾燥状態は、自己免疫障害；眼科手術；薬物摂取；乾燥した環境条件；長時間のコンピュータの使用；眼球疲労；長時間のコンタクトレンズ装着による角膜過敏症；部分的閉瞼；表面のむら；眼瞼のむら；および角膜損傷に関連する角膜侵害受容性疼痛に関連する状態または神経因性疼痛に関連する状態からなる群から選択される状態に関連する。１つのさらなる実施形態では、眼乾燥状態は、眼科手術に関連し、眼科手術は、光屈折手術（光学的屈折矯正角膜切除術（ＰＲＫ）など）、白内障手術、網膜剥離手術、レーザー角膜内切削形成術（ＬＡＳＩＫ）、および角膜感覚神経損傷に関与する任意の角膜手術手技からなる群から選択される。さらなる実施形態では、眼乾燥状態は、神経因性疼痛に関連する状態（例えば、白内障もしくは網膜剥離または白内障もしくは網膜剥離を処置するためにデザインされた手術）に関連する。

いくつかの態様では、組成物を、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、４週間、または１０週間にわたって毎日投与する。他の態様では、被験体において疼痛および不快感が長期間（例えば、８時間、１２時間、２４時間、１日間、３日間、５日間、７日間、１４日間、または２８日間）緩和される。

いくつかの実施形態では、被験体は、哺乳動物（例えば、ヒト）である。

さらに別の態様では、本発明はまた、疼痛および不快感を緩和する一方で少なくとも１つの皮膚の欠点の最小化を必要とする被験体において、疼痛および不快感を緩和する一方で少なくとも１つの皮膚の欠点を最小化する方法を提供する。本方法は、被験体にヒアルロナンを含む組成物を投与することを含み、ここで、ヒアルロナンが、組成物中に約３０ｍｇ／ｍＬを超える濃度で存在し；ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず；組成物が他の薬学的に活性な物質を実質的に含まず、それにより、疼痛を緩和し、且つ少なくとも１つの皮膚の欠点を最小にする。

いくつかの実施形態では、ヒアルロナンは、約４０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

１つのさらなる態様では、本発明はまた、疼痛および不快感を緩和する一方で少なくとも１つの皮膚の欠点の最小化を必要とする被験体において、疼痛および不快感を緩和する一方で少なくとも１つの皮膚の欠点を最小化する方法であって、被験体にヒアルロナンを含む組成物を投与することを含み、ここで、ヒアルロナンが組成物中に少なくとも約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し；ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず；組成物が他の薬学的に活性な物質を実質的に含まず、それにより、疼痛を緩和し、且つ少なくとも１つの皮膚の欠点を最小にする、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、他の薬学的に活性な物質は、局所麻酔薬（例えば、リドカインまたはブピバカイン）である。

一定の態様では、組成物はまた、緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））を含む。

いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約２００パスカル；周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約１，０００パスカル；周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約２，０００パスカル；または周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約４，０００パスカルである。

いくつかの態様では、組成物は無菌である。

特定の実施形態では、組成物を、被験体への皮内注射によって投与する。さらなる実施形態では、組成物を、被験体の顔面に注射する。例えば、組成物を、鼻唇領域、上唇領域、前頭部、眼領域、および頬領域からなる群から選択される領域内に注射する。

いくつかの態様では、組成物を、充填済みシリンジ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍＬの充填済みシリンジ）を使用した注射によって投与する。１つのさらなる態様では、充填済みシリンジは滅菌されている。

別の態様では、本発明はまた、疼痛および不快感を緩和する一方で創傷治癒の促進を必要とする被験体において、疼痛および不快感を緩和する一方で創傷治癒を促成する方法を提供する。本方法は、被験体にヒアルロナンを含む組成物（例えば、薬学的組成物）を投与することを含み、ここで、ヒアルロナンが、組成物中に約３０ｍｇ／ｍＬを超える濃度で存在し；ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず、それにより、疼痛が緩和され、且つ創傷治癒が促進される。

１つのさらなる実施形態では、ヒアルロナンは、約４０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

さらなる態様では、本発明はまた、疼痛および不快感を緩和する一方で創傷治癒の促進を必要とする被験体において、疼痛および不快感を緩和する一方で創傷治癒を促成する方法であって、被験体にヒアルロナンを含む組成物（例えば、薬学的組成物）を投与することを含み、ここで、ヒアルロナンが組成物中に少なくとも約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し；ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず、それにより、疼痛が緩和され、且つ創傷治癒が促進される、方法を提供する。

いくつかの態様では、組成物は、他の薬学的に活性な物質（局所麻酔薬（例えば、リドカインまたはブピバカイン）など）を実質的に含まない。

いくつかの実施形態では、組成物は、緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））をさらに含む。

いくつかの態様では、組成物の弾性は、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約２００パスカル；周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約１，０００パスカル；周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約２，０００パスカル；または周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約４，０００パスカルである。

いくつかの実施形態では、組成物は無菌である。

特定の実施形態では、組成物を、局所に（例えば、皮膚上の創傷または瘢痕の表面上に）投与する。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感の緩和を必要とする被験体において、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感を緩和する方法であって、前記被験体の眼にヒアルロナンを含む組成物を投与することを含み、ここで、
前記ヒアルロナンが、前記組成物中に約３０ｍｇ／ｍＬを超える濃度で存在し；
前記ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；
前記ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず、それにより、前記被験体における前記疼痛および不快感が緩和される、方法。
（項目２）
ヒアルロナンが、組成物中に約４０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、項目１に記載の方法。
（項目３）
眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感の緩和を必要とする被験体において、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感を緩和する方法であって、前記被験体の眼にヒアルロナンを含む組成物を投与することを含み、ここで、
前記ヒアルロナンが前記組成物中に少なくとも約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し；
前記ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；
前記ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず、それにより、前記被験体における前記疼痛および不快感が緩和される、方法。
（項目４）
前記組成物が他の薬学的に活性な物質を実質的に含まない、項目１または３に記載の方法。
（項目５）
前記組成物がポリグリコールを含まない、項目１または３に記載の方法。
（項目６）
前記組成物が緩衝液をさらに含む、項目１または３に記載の方法。
（項目７）
前記緩衝液がリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である、項目１または３に記載の方法。（項目８）
前記組成物の弾性が、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約２００パスカルである、項目１または３に記載の方法。
（項目９）
前記組成物の弾性が、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約１，０００パスカルである、項目１または３に記載の方法。
（項目１０）
前記組成物の弾性が、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約２，０００パスカルである、項目１または３に記載の方法。
（項目１１）
前記組成物の弾性が、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約４，０００パスカルである、項目１または３に記載の方法。
（項目１２）
前記組成物が無菌である、項目１または３に記載の方法。
（項目１３）
前記組成物がゲル、軟膏、塗布剤、ローション、またはクリームの形態である、項目１または３に記載の方法。
（項目１４）
前記組成物を眼表面に投与する、項目１または３に記載の方法。
（項目１５）
前記組成物を前記被験体の眼瞼下に投与する、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記組成物を角膜－眼瞼境界に投与する、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
前記組成物を、前記被験体に休憩または就寝の直前に投与する、項目１４に記載の方法。
（項目１８）
前記組成物を、注射を用いずに前記被験体の眼内に投与する、項目１または３に記載の方法。
（項目１９）
前記組成物を、単回投与用容器、軟プラスチックボトル、チューブ、エアレスチューブ、アイカップ、ドロッパー、およびカートリッジからなる群から選択される容器を使用して投与する、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記眼乾燥状態が、眼球の乾燥；涙の産生、体積、および流れの減少；涙組成の異常；涙容量オスモル濃度の増加；角膜炎；結膜および角膜の着色；発赤；視界不良；涙液層破壊時間の減少；結膜発赤の増加；涙液層内のデブリの過剰、眼に砂が入ったような感じ；眼の灼熱感；眼内の異物感；涙の分泌過剰；羞明；眼の刺激感；屈折機能障害；眼過敏症；眼球刺激、および長時間のコンタクトレンズ装着に起因する不快感からなる群から選択される１つまたはそれを超える症状に関連する、項目１または３に記載の方法。
（項目２１）
前記眼乾燥状態が、自己免疫障害；眼科手術；薬物摂取；乾燥した環境条件；長時間のコンピュータの使用；眼球疲労；コンタクトレンズ装着による角膜過敏症；部分的閉瞼；表面のむら；眼瞼のむら；および神経因性疼痛に関連する状態からなる群から選択される状態に関連する、項目１または３に記載の方法。
（項目２２）
前記眼乾燥状態が眼科手術に関連し、前記眼科手術が、光屈折手術、白内障手術、網膜剥離手術、レーザー角膜内切削形成術（ＬＡＳＩＫ）、および角膜感覚神経損傷に関与する任意の角膜手術手技からなる群から選択される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記眼乾燥状態が神経因性疼痛に関連する状態に関連し、前記状態が白内障または網膜剥離後の手術である、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記組成物を、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、４週間、または１０週間にわたって毎日投与する、項目１４に記載の方法。
（項目２５）
前記被験体において疼痛および不快感が長期間緩和される、項目１または３に記載の方法。
（項目２６）
前記長期間が、８時間、１２時間、２４時間、１日間、３日間、５日間、７日間、１４日間、または２８日間である、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記被験体が哺乳動物である、項目１または３に記載の方法。
（項目２８）
前記被験体がヒトである、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
疼痛および不快感を緩和する一方で少なくとも１つの皮膚の欠点の最小化を必要とする被験体において、疼痛および不快感を緩和する一方で少なくとも１つの皮膚の欠点を最小化する方法であって、前記被験体にヒアルロナンを含む組成物を投与することを含み、ここで、
前記ヒアルロナンが、前記組成物中に約３０ｍｇ／ｍＬを超える濃度で存在し；
前記ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；
前記ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず；
前記組成物が他の薬学的に活性な物質を実質的に含まず、それにより、前記疼痛を緩和し、且つ前記少なくとも１つの皮膚の欠点を最小にする、方法。
（項目３０）
ヒアルロナンが約４０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
疼痛および不快感を緩和する一方で少なくとも１つの皮膚の欠点の最小化を必要とする被験体において、疼痛および不快感を緩和する一方で少なくとも１つの皮膚の欠点を最小化する方法であって、前記被験体にヒアルロナンを含む組成物を投与することを含み、ここで、
前記ヒアルロナンが前記組成物中に約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し；
前記ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；
前記ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず；
前記組成物が他の薬学的に活性な物質を実質的に含まず、それにより、前記疼痛を緩和し、且つ前記少なくとも１つの皮膚の欠点を最小にする、方法。
（項目３２）
前記他の薬学的に活性な物質が局所麻酔薬である、項目２９または３１に記載の方法。（項目３３）
前記局所麻酔薬がリドカインまたはブピバカインである、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記組成物が緩衝液をさらに含む、項目２９または３１に記載の方法。
（項目３５）
前記緩衝液がリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記組成物の弾性が、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約２００パスカルである、項目２９または３１に記載の方法。
（項目３７）
前記組成物の弾性が、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約１，０００パスカルである、項目２９または３１に記載の方法。
（項目３８）
前記組成物の弾性が、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約２，０００パスカルである、項目２９または３１に記載の方法。
（項目３９）
前記組成物の弾性が、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約４，０００パスカルである、項目２９または３１に記載の方法。
（項目４０）
前記組成物が無菌である、項目２９または３１に記載の方法。
（項目４１）
前記組成物を、前記被験体への皮内注射によって投与する、項目２９または３１に記載の方法。
（項目４２）
前記組成物を、前記被験体の顔面、頸部、腕、脚、胴、および胸部からなる群から選択される前記被験体の領域内に注射する、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記組成物を、鼻唇領域、上唇領域、前頭部、眼領域、および頬領域からなる群から選択される領域内に注射する、項目４１に記載の方法。
（項目４４）
前記組成物を、充填済みシリンジを使用した注射によって投与する、項目４１に記載の方法。
（項目４５）
前記充填済みシリンジが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍＬの充填済みシリンジである、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記充填済みシリンジが滅菌されている、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
疼痛および不快感を緩和する一方で創傷治癒の促進を必要とする被験体において、疼痛および不快感を緩和する一方で創傷治癒を促成する方法であって、前記被験体にヒアルロナンを含む組成物を投与することを含み、ここで、
前記ヒアルロナンが、前記組成物中に約３０ｍｇ／ｍＬを超える濃度で存在し；
前記ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；
前記ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず、それにより、前記疼痛が緩和され、且つ前記創傷治癒が促進される、方法。
（項目４８）
ヒアルロナンが約４０ｍｇ／ｍＬ～約６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
疼痛および不快感を緩和する一方で創傷治癒の促進を必要とする被験体において、疼痛および不快感を緩和する一方で創傷治癒を促成する方法であって、前記被験体にヒアルロナンを含む組成物を投与することを含み、ここで、
前記ヒアルロナンが前記組成物中に約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し；
前記ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；
前記ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず、それにより、前記疼痛が緩和され、且つ前記創傷治癒が促進される、方法。
（項目５０）
前記組成物が他の薬学的に活性な物質を実質的に含まない、項目４７または４９に記載の方法。
（項目５１）
前記組成物が緩衝液をさらに含む、項目４７または４９に記載の方法。
（項目５２）
前記緩衝液がリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記組成物の弾性が、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約２００パスカルである、項目４７または４９に記載の方法。
（項目５４）
前記組成物の弾性が、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約１，０００パスカルである、項目４７または４９に記載の方法。
（項目５５）
前記組成物の弾性が、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約２，０００パスカルである、項目４７または４９に記載の方法。
（項目５６）
前記組成物の弾性が、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも約４，０００パスカルである、項目４７または４９に記載の方法。
（項目５７）
前記組成物が無菌である、項目４７または４９に記載の方法。
（項目５８）
前記組成物を局所投与する、項目４７または４９に記載の方法。
（項目５９）
前記組成物を、前記皮膚上の創傷または瘢痕の表面上に局所投与する、項目５８に記載の方法。

図１は、異なるサイズの針から４％ＨＡ溶液を排出するのに必要な圧力を示すグラフである。

発明の詳細な説明
本発明は、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感の緩和；スキンケア／皮膚科学的処置、および創傷治癒の方法を提供する。本特許請求の範囲に記載の方法は、高濃度のヒアルロナン（ＨＡ）（例えば、約３０ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える）を含むＨＡ組成物を投与することを含む。かかる組成物は、周波数０．１～１０Ｈｚで測定した場合に高い弾性（例えば、高い弾性係数Ｇ’）を有すると判断された。高弾性によって特徴付けられたＨＡ組成物（例えば、高濃度のＨＡを含む組成物）は、驚いたことに、眼乾燥状態に起因する疼痛および不快感の緩和；美容上の処置；または創傷治癒に有効である。特定の理論に拘束されることを望まないが、疼痛および不快感の処置における高濃度のＨＡを含む本発明のＨＡ組成物の有効性が、高値の弾性係数Ｇ’によって証明されるその高弾性によって決定されると考えられる。特定の理論に拘束されることを望まないが、本発明のＨＡ組成物の有効性が、ＨＡ分子の疼痛変換チャネル（ＴＲＰＶ１など）との相互作用の確率が比較的高く、それにより、侵害受容器興奮性が軽減されることによって決定されるとも考えられる。本発明の方法で使用したＨＡの平均分子量は、２００万またはそれ未満（例えば、約１００万～２００万）であり得る。

Ｉ．本発明の方法で用いるヒアルロナン組成物
本発明は、ヒアルロナン（ＨＡ）を含む組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、組成物はヒアルロナンを含み、ヒアルロナンが、組成物中に約３０ｍｇ／ｍＬを超える（すなわち約３％重量／体積を超える）濃度で存在し；ヒアルロナンの平均分子量は約１００万と約２００万との間であり；ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まない。

例えば、組成物中のヒアルロナン濃度は、約３０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約３％ｗ／ｖ）、約３５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約３．５％ｗ／ｖ）、約４０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約４％ｗ／ｖ）、約４５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約４．５％ｗ／ｖ）、約５０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約５％ｗ／ｖ）、約５５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約５．５％ｗ／ｖ）、約６０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約６％ｗ／ｖ）、約６５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約６．５％ｗ／ｖ）、約７０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約７％ｗ／ｖ）、約７５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約７．５％ｗ／ｖ）、約８０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約８％ｗ／ｖ）、約８５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約８．５％ｗ／ｖ）、約９０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約９％ｗ／ｖ）、約９５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約９．５％ｗ／ｖ）、約１００ｍｇ／ｍＬ（すなわち約１０％ｗ／ｖ）、約１０５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約１０．５％ｗ／ｖ）、約１１０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約１１％ｗ／ｖ）約１１５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約１１．５％ｗ／ｖ）、約１２０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約１２％ｗ／ｖ）、約１２５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約１２．５％ｗ／ｖ）、約１３０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約１３％ｗ／ｖ）、約１３５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約１３．５％ｗ／ｖ）、約１４０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約１４％ｗ／ｖ）、約１４５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約１４．５％ｗ／ｖ）、または約１５０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約１５％ｗ／ｖ）であり得る。１つの特定の実施形態では、ＨＡは、組成物中に、約４０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約４％ｗ／ｖ）の濃度で存在する。他の特定の実施形態では、ＨＡは、本発明の組成物中に、約４１ｍｇ／ｍＬ（すなわち約４．１％ｗ／ｖ）、約４２ｍｇ／ｍＬ（すなわち約４．２％ｗ／ｖ）、約４３ｍｇ／ｍＬ（すなわち約４．３％ｗ／ｖ）、約４４ｍｇ／ｍＬ（すなわち約４．４％ｗ／ｖ）、約４５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約４．５％ｗ／ｖ）、約４６ｍｇ／ｍＬ（すなわち約４．６％ｗ／ｖ）、約４７ｍｇ／ｍＬ（すなわち約４．７％ｗ／ｖ）、約４８ｍｇ／ｍＬ（すなわち約４．８％ｗ／ｖ）、約４９ｍｇ／ｍＬ（すなわち約４．９％ｗ／ｖ）、約５０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約５．０％ｗ／ｖ）、約５１ｍｇ／ｍＬ（すなわち約５．１％ｗ／ｖ）、約５２ｍｇ／ｍＬ（すなわち約５．２％ｗ／ｖ）、約５３ｍｇ／ｍＬ（すなわち約５．３％ｗ／ｖ）、約５４ｍｇ／ｍＬ（すなわち約５．４％ｗ／ｖ）、約５５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約５．５％ｗ／ｖ）、約５６ｍｇ／ｍＬ（すなわち約５．６％ｗ／ｖ）、約５７ｍｇ／ｍＬ（すなわち約５．７％ｗ／ｖ）、約５８ｍｇ／ｍＬ（すなわち約５．８％ｗ／ｖ）、５９ｍｇ／ｍＬ（すなわち約５．９％ｗ／ｖ）、または約６０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約６％ｗ／ｖ）の濃度で存在する。

いくつかの例では、組成物中のヒアルロナン濃度は、約３０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約３％ｗ／ｖ）超（例えば、約３１ｍｇ／ｍＬ（すなわち約３．１％）超、約３２ｍｇ／ｍＬ（すなわち約３．２％）超、約３３ｍｇ／ｍＬ（すなわち約３．３％）超、約３４ｍｇ／ｍＬ（すなわち約３．４％）超、約３５ｍｇ／ｍＬ（すなわち約３．５％）超、約３６ｍｇ／ｍＬ（すなわち約３．６％）超、約３７ｍｇ／ｍＬ（すなわち約３．７％）超、約３８ｍｇ／ｍＬ（すなわち約３．８％）超、または約３９ｍｇ／ｍＬ（すなわち約３．９％）超であり得る。

いくつかの例では、組成物中のヒアルロナン濃度は、平均分子量が、約１００万と約２００万との間（例えば、約１１０万と約２００万との間、約１２０万と約２００万との間、約１３０万と約２００万との間、約１４０万と約２００万との間、約１５０万と約２００万との間、または約１６０万と約２００万との間）であり得る。

特定の実施形態では、組成物中で使用されるヒアルロナンは、架橋しておらず、そして／または化学修飾を含まない。例えば、組成物中で使用されるヒアルロナンは、例えば、欧州特許第１０９５０６４Ｂ１号に記載のＨＡのカルボキシル基と誘導体化剤のアミン基との間の反応によって形成され得るアミド化を含まない。組成物中で使用されるヒアルロナンはまた、例えば、米国特許第８，３２３，６１７号に記載のヒアルロナンのカルボジイミド（モノカルボジイミドまたはビスカルボジイミドなど）との反応に起因し得る化学修飾および／または架橋を含まなくてよい。いくつかの場合、組成物中で使用されるヒアルロナンはまた、米国特許出願公開第２０１０／００４８７５５号に記載のアクリレート（例えば、メタクリレート）；例えば、米国特許出願公開第２０１３／０２０９５３１号に記載のスルフェート；および、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０１４８３１０号に記載の重水素を含まなくてよい。

いくつかの実施形態では、本発明のＨＡ組成物は、他の薬学的に活性な物質を含まない。本明細書中で使用される場合、「薬学的に活性な物質」は、被験体（例えば、ヒトまたは動物の被験体）に生物学的効果を発揮することができる物質である。用語「薬学的に活性な物質」はまた、ＨＡ組成物の生物学的効果を、この組成物を被験体に投与した場合に調整すること（例えば、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感の緩和；スキンケア／皮膚科学的処置、または創傷治癒）が可能な物質を含む。特定の実施形態では、薬学的に活性な物質は、タンパク質（例えば、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）（ｒｈＧＤＦ－５など））である。特定の実施形態では、薬学的に活性な物質は、ＨＡと異なるグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）（例えば、コンドロイチン）である。いくつかの実施形態では、薬学的に活性な物質は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースである。他の実施形態では、薬学的に活性な物質は、局所麻酔薬（リドカインまたはブピバカインなど）である。いくつかの場合、薬学的に活性な物質は、プリン受容体アゴニスト（例えば、Ｐ２Ｙ_２受容体アゴニスト）である。

特定の実施形態では、本発明のＨＡ組成物は、フリーラジカルを捕捉することができる分子（ポリオール（例えば、ソルビトール、マルチトール、キシリトール、またはイソマルト）など）を含まない。他の実施形態では、本発明の方法で使用されるＨＡ組成物は、ＨＡの弾性を減少させる分子（例えば、デキストランまたはスクロース）を含まない。

いくつかの場合、本発明の方法で使用されるＨＡ組成物は、ポリグリコール（例えば、ポリエチレングリコール）を含まない。

ＨＡ組成物は、生理学的緩衝液（例えば、リン酸緩衝液または重炭酸塩緩衝液）中に約３０ｍｇ／ｍＬ（約３％ｗ／ｖ）、または約４０ｍｇ／ｍＬ（約４％ｗ／ｖ）を超える濃度で存在し、平均分子量が約１００万と約２００万との間であるＨＡから本質的になり得る。例えば、本発明の方法で使用されるＨＡ組成物は、約４０ｍｇ／ｍＬ（すなわち約４％ｗ／ｖ）の濃度で存在し、平均分子量が約１００万と約２００万との間であるＨＡから本質的になる。

本発明の方法で使用される組成物におけるヒアルロナンは、弾性が周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも１００パスカル、または弾性が周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも４００パスカル、または弾性が周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも１，０００パスカル、または弾性が周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも２，０００パスカル、または弾性が周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも４，０００パスカル、または弾性が周波数０．５Ｈｚで測定した場合に４００パスカルと５，０００パスカルとの間であり得る。

種々の方法がバイオポリマー（ヒアルロナンなど）の弾性の測定に利用可能であると認識すべきである。１つの実施形態では、ヒアルロナンを含む組成物の弾性を、特定の周波数（ヘルツで示す）での圧力（パスカルで示す）として測定する。例えば、本明細書中に提供したヒアルロナン組成物の弾性を評価するために使用することができる周波数を、０．５Ｈｚ、２．５Ｈｚ、または５．０Ｈｚで測定することができる。

弾性を任意の関連する周波数で示すことができるとさらに認識すべきである。したがって、例えば、１つの実施形態では、周波数２．５Ｈｚに基づいて弾性を示し、高弾性ヒアルロナンを含む組成物は、弾性が周波数２．５Ｈｚで少なくとも２００Ｐａの組成物である。同様に、１つの実施形態では、周波数５．０Ｈｚに基づいて弾性を示し、高弾性ヒアルロナンを含む組成物は、弾性が周波数５．０Ｈｚで少なくとも４００Ｐａである組成物である。

１つの実施形態では、本特許請求の範囲に記載の方法で用いるヒアルロナンを含む組成物の弾性は、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも１００パスカルである。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数２．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも３００パスカルである。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数５．０Ｈｚで測定した場合に少なくとも３５０パスカルである。

１つのさらなる実施形態では、ヒアルロナンを含む組成物の弾性は、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも４００パスカルである。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数２．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも７５０パスカルである。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数５．０Ｈｚで測定した場合に少なくとも９００パスカルである。

別の実施形態では、ヒアルロナンを含む組成物の弾性は、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも１０００パスカルである。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数２．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも１６００パスカルである。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数５．０Ｈｚで測定した場合に少なくとも２０００パスカルである。

さらに別の実施形態では、ヒアルロナンを含む組成物の弾性は、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも２６００パスカルである。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数２．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも４０００パスカルである。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数５．０Ｈｚで測定した場合に少なくとも４５００パスカルである。

１つの実施形態では、ヒアルロナンを含む組成物の弾性は、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも４０００パスカルである。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数２．５Ｈｚで測定した場合に少なくとも５０００パスカルである。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数５．０Ｈｚで測定した場合に少なくとも６０００パスカルである。

いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に１００パスカルと１０，０００パスカルとの間である。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に４００パスカルと５，０００パスカルとの間である。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数０．５Ｈｚで測定した場合に１，０００パスカルと２，０００パスカルとの間である。

いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数２．５Ｈｚで測定した場合に３００パスカルと１０，０００パスカルとの間である。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数２．５Ｈｚで測定した場合に７５０パスカルと６，０００パスカルとの間である。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数２．５Ｈｚで測定した場合に１，５００パスカルと４，０００パスカルとの間である。

いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数５．０Ｈｚで測定した場合に３００パスカルと１０，０００パスカルとの間である。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数５．０Ｈｚで測定した場合に９００パスカルと７，０００パスカルとの間である。いくつかの実施形態では、組成物の弾性は、周波数５．０Ｈｚで測定した場合に２，０００パスカルと５，０００パスカルとの間である。

いくつかの実施形態では、弾性を、適切なデバイス（例えば、レオメーター）を使用して測定することができる。例えば、弾性を、Ｓｔｒｅｓｓｔｅｃｈ Ｈｉｇｈ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈのレオメーター（Ｒｅｏｌｏｇｉｃａ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＡＢ）を使用して測定することができる。典型的には、弾性を周囲温度および周囲圧力で決定するが；弾性を非周囲温度および／または非周囲圧力で測定することもできると認識すべきである。当業者が種々の温度および圧力で決定した弾性の規模を周囲温度および周囲圧力での弾性の規模に変換する方法を承知しているとさらに認識すべきである。

ヒアルロナンの高弾性組成物を、組成物中のヒアルロナン濃度を増加させることによって調製することができる。したがって、１つの態様では、本特許請求の範囲に記載の方法は、ヒアルロナン比率が高い高弾性を有する組成物を利用する。例えば、組成物は、少なくとも３．０％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも３．５％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも４．０％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも４．５％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも５．０％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも５．５％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも６．０％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも６．５％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも７．０％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも７．５％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも８．０％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも８．５％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも８．９％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも９．０％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも１０．０％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも１１．０％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも１２．０％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも１３．０％のヒアルロナン（重量／体積）、少なくとも１４．０％のヒアルロナン（重量／体積）、または少なくとも１５．０％、またはそれを超えるヒアルロナン（重量／体積）を含み得る。

引用した値の中間の範囲も、本発明の方法で用いる組成物中に含まれることが意図される。例えば、組成物中のヒアルロナン含有量は、約３％と約１５％（重量／体積）との間、約３％と約１０％（重量／体積）との間、約３．５％と約９％（重量／体積）との間、約４％と約８％（重量／体積）との間、または約５％と約７％（重量／体積）との間であり得る。

特定の体積中のヒアルロナンの量を代替手段（例えば、グラム／リットルまたはモル／リットル）で示すこともできることをさらに認識すべきである。当業者は、特定の体積中のヒアルロナン量を示す種々の手段を変換する方法を承知している。

平均分子量が約１～２００万の高濃度のヒアルロナンを有するヒアルロナンの組成物は、疼痛（例えば、眼乾燥状態、美容上の処置、または創傷治癒に関連する疼痛）の処置において特に有効である。したがって、本明細書中に記載のＨＡ組成物中に含まれるヒアルロナンの平均分子量は、１００万と２００万との間の範囲内に含まれ得、２００万未満、１９０万未満、１８０万未満、１７０万未満、１６０万未満、１５０万未満、１４０万未満、１３０万未満、１２０万未満、１１０万未満、１００万未満、９０万未満、８０万未満、７０万未満、６０万未満、または５０万未満でもある。他の場合、本明細書中に記載のＨＡ組成物中に含まれるヒアルロナンの平均分子量は、１００万と２００万との間の範囲内に含まれ得、１０万超、２０万超、３０万超、４０万超、５０万超、６０万超、７０万超、８０万超、９０万超、１００万超、１１０万超、１２０万超、１３０万超、１４０万超、１５０万超、１６０万超、１７０万超、１８０万超、または１９０万超でもある。

引用した値の中間の範囲も本発明の一部であることが意図される。例えば、本明細書中に提供したヒアルロナンの組成物では、ヒアルロナンの平均分子量は、１００万と２００万との間、１００万と１５０万との間、５０万と１００万との間、５０万と２００万との間、または９０万と１４０万との間である。

本明細書中に記載のヒアルロナンの組成物のいくつかの実施形態では、組成物中に存在する大部分のヒアルロナンの平均分子量は、本明細書中に記載の範囲内に含まれる。したがって、例えば、平均分子量が２０万と２００万との間のヒアルロナンを有する組成物では、組成物中に存在する少なくとも９５％のヒアルロナンが、２０万と２００万との間の範囲内に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書中に提供した組成物中に存在する少なくとも５０％のヒアルロナンの平均分子量は、引用した範囲内に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書中に提供した組成物中に存在する少なくとも６０％のヒアルロナンの平均分子量は、引用した範囲内に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書中に提供した組成物中に存在する少なくとも７０％のヒアルロナンの平均分子量は、引用した範囲内に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書中に提供した組成物中に存在する少なくとも８０％のヒアルロナンの平均分子量は、引用した範囲内に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書中に提供した組成物中に存在する少なくとも９０％のヒアルロナンの平均分子量は、引用した範囲内に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書中に提供した組成物中に存在する少なくとも９５％のヒアルロナンの平均分子量は、引用した範囲内に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書中に提供した組成物中に存在する少なくとも９８％のヒアルロナンの平均分子量は、引用した範囲内に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書中に提供した組成物中に存在する少なくとも９９％のヒアルロナンの平均分子量は、引用した範囲内に含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書中に提供した組成物中に存在する少なくとも９９．９％のヒアルロナンの平均分子量は、引用した範囲内に含まれる。

ＩＩ．ヒアルロナンの供給源
本明細書中に記載の組成物および方法で使用されるヒアルロナンを、任意の供給源から得ることができる。一般に、ヒアルロナンは、その供給源（例えば、ニワトリまたは雄鶏の鶏冠、ヒト組織、または細菌細胞壁）と無関係に同一の化学構造を有する。ヒアルロナンを、例えば、ニワトリまたは雄鶏の鶏冠、細菌細胞壁、およびヒト組織（臍帯、硝子体、関節由来の滑液など）から得ることができる。いくつかの実施形態では、ヒアルロナンを、ニワトリの鶏冠から単離する。いくつかの実施形態では、ヒアルロナンを、ヒト組織（例えば、臍帯、硝子体、関節由来の滑液）から単離する。いくつかの実施形態では、ヒアルロナンを、細胞培養物から単離する。いくつかの実施形態では、ヒアルロナンを細菌細胞壁から単離する。種々の供給源からのヒアルロナンの単離は、当業者に公知である。例えば、雄鶏の鶏冠からのヒアルロナンの採取および精製は米国特許第４，１４１，９７３号に記載されており、一方、細菌供給源からのヒアルロナンの採取および精製は米国特許第４，５１７．２９５号に記載されている。いくつかの実施形態では、ヒアルロナンを、ｐＨ６～８の０．１５Ｍ ＮａＣｌ溶液において精製および採取する。一般に、種々の供給源から得たヒアルロナンは、ヒアルロナン以外のタンパク質やグリコサミノグリカンを含まない。

いくつかの実施形態では、単離したヒアルロナンをさらに精製して、所望の平均分子量範囲を有するヒアルロナンを得る（例えば、カラムクロマトグラフィによる）。所望の平均分子量範囲を有するヒアルロナンの精製方法は、当業者に公知である。

１つの態様では、本明細書中に開示の高弾性ヒアルロナンは、未修飾ヒアルロナンである。しかし、いくつかの実施形態では、ヒアルロナンを化学修飾することができると認識すべきである。例えば、ヒアルロナンを化学修飾して、ヒアルロナンの弾性を増大させることができる。

ＩＩＩ．ヒアルロナン組成物の滅菌
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載され、本発明の方法で使用されるＨＡ組成物は無菌である。「無菌組成物」は、本明細書中で使用される場合、被験体（例えば、ヒト被験体）に安全に投与される組成物をいう。したがって、無菌組成物は、望ましくない副作用（望ましくない組織応答、免疫応答、炎症、または感染など）を引き起こし得る薬剤を最小数しか含まない。

ヒアルロナン組成物の滅菌方法は、当該分野で公知であり、例えば、加熱滅菌または蒸気滅菌（例えば、高圧蒸気殺菌による）が含まれる。いくつかの実施形態では、本発明のＨＡ組成物を、組成物の加熱によって滅菌する。いくつかの実施形態では、本発明のＨＡ組成物を、シリンジ内にＨＡ組成物を含め、ＨＡを含むシリンジを１３１℃で２分間または１２１℃で１５分間高圧蒸気殺菌し、その直後に冷却することによって滅菌する。

ＩＶ．ヒアルロナン組成物のためのさらなる構成要素
本明細書中に記載のＨＡ組成物は、ヒアルロナンを安定化し、そして／または組成物を被験体への投与により適切にすることができるさらなる構成要素を含み得る。いくつかの実施形態では、本発明のＨＡ組成物は緩衝液を含み得る。緩衝液を、ｐＨを安定にするために添加する。本発明での使用に適切な緩衝液には、リン酸緩衝液および重炭酸塩緩衝液が含まれる。いくつかの実施形態では、緩衝液はトリス－リン酸緩衝液である。いくつかの実施形態では、緩衝液は、１ｍＭと１００ｍＭとの間、２ｍＭと５０ｍＭとの間、または５ｍＭと２０ｍＭとの間の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、緩衝液濃度は１ｍＭ未満である。いくつかの実施形態では、緩衝液濃度は１００ｍＭを超える。いくつかの実施形態では、緩衝液濃度は１０ｍＭである。緩衝液濃度が使用される緩衝液の性質に依存すると認識すべきである。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは、ｐＨ７とｐＨ９との間またはｐＨ７．５とｐＨ８．５との間である。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは８．０である。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは７．５である。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは８．５である。必要に応じて、酸（ＨＣＬなど）または塩基（ＮａＯＨなど）を組成物に添加して所望のｐＨを得ることができる。

例えば、ＨＡ組成物は、緩衝液（例えば、生理学的に適合する緩衝液）を含み得るが、いかなるさらなる構成要素も含まない。

ＨＡ組成物はまた、安定化賦形剤（カルボン酸またはその塩など）を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、モノカルボン酸および／またはその塩を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、グルコン酸および／またはグルコン酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ジカルボン酸および／またはその塩を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、クエン酸、コハク酸、マロン酸、マレイン酸、酒石酸、および／またはその塩を含む。いくつかの実施形態では、カルボン酸はクエン酸ナトリウムである。いくつかの実施形態では、組成物は、トリカルボン酸（ｔｒｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ
ａｉｄ）（ＴＣＡ）および／またはその塩を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ニトリロ三酢酸および／またはニトリロ三酢酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、テトラカルボン酸および／またはその塩を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、エチレンジアミン四酢酸（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）（ＥＤＴＡ）および／またはＥＤＴＡナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ペンタカルボン酸および／またはその塩を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）および／またはＤＴＰＡナトリウムを含む。適切なカルボン酸には、クエン酸塩化合物（クエン酸ナトリウムなど）；酒石酸塩化合物、コハク酸塩化合物、およびＥＤＴＡが含まれるが、これらに限定されない。Ｋａｕｓｈｉｌら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９９ ８：２２２－２３３およびＢｕｓｂｙら、ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｖｏｌｕｍｅ ２５６、Ｎｕｍｂｅｒ ２３ ｐｐ １２１４０－１２１０－１２１４７は、カルボン酸およびその使用を記載している。いくつかの実施形態では、安定化賦形剤の濃度は、５０～６００ｍＭ、２５０～５００ｍＭ、または２５０～３５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、安定化賦形剤の濃度は３００ｍＭである。いくつかの実施形態では、安定化賦形剤の濃度は１００ｍＭ未満である。いくつかの実施形態では、安定化賦形剤の濃度は６００ｍＭを超える。

本明細書中に記載のＨＡ組成物はまた、糖（例えば、二糖）を含み得る。組成物に添加することができる二糖には、スクロース、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、セロビオース、デキストロース、およびデキストランが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの場合、糖は０．５～５％（ｗｔ／体積）存在し得る。いくつかの場合、糖は１～２％（ｗｔ／体積）存在し得る。１つの実施形態では、糖は１％存在し得る。いくつかの実施形態では、糖は、１％（ｗｔ／体積）未満存在し得る。いくつかの実施形態では、糖は５％（ｗｔ／体積）を超えて存在し得る。１つの実施形態では、糖はスクロースまたはトレハロースであり得、１％（ｗｔ／体積）存在する。

いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のＨＡ組成物は塩を含み得る。組成物中で使用することができる塩には、塩化ナトリウムおよび他の生理学的に適合し得る塩が含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のＨＡ組成物中に存在する塩の濃度は、約１０ｍＭと約２５０ｍＭとの間、約２５ｍＭと約１００ｍＭとの間、約３０ｍＭと約７０ｍＭとの間、約４５ｍＭと約１５０ｍＭとの間、約１２５ｍＭと約２００ｍＭとの間、約１５０ｍＭと約２５０ｍＭとの間、または約１９０ｍＭと約２５０ｍＭとの間である。いくつかの実施形態では、塩濃度は５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、塩濃度は１０ｍＭ未満である。いくつかの実施形態では、塩濃度は２５０ｍＭを超える。１つの特定の実施形態では、塩濃度は、約５０ｍＭと約２００ｍＭとの間である。

いくつかの実施形態では、本発明のＨＡ組成物の容量オスモル濃度は、通常（例えば、約３１０ｍＯｓｍ／Ｌ）であり得る。他の実施形態では、本発明のＨＡ組成物の容量オスモル濃度は、通常の容量オスモル濃度未満（例えば、３１０ｍＯｓｍ／Ｌ未満）であり得る。例えば、本発明のＨＡ組成物の容量オスモル濃度は、約２０ｍＯｓｍ／Ｌと約５００ｍＯｓｍ／Ｌとの間（例えば、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌと約３１０ｍＯｓｍ／Ｌとの間、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌと約２００ｍＯｓｍ／Ｌとの間、約１６０ｍＯｓｍ／Ｌと約２２０ｍＯｓｍ／Ｌとの間、約１８０ｍＯｓｍ／Ｌと約２５０ｍＯｓｍ／Ｌとの間、約２００ｍＯｓｍ／Ｌと約３００ｍＯｓｍ／Ｌとの間、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌと約３１０ｍＯｓｍ／Ｌとの間、約２９０ｍＯｓｍ／Ｌと約３１０ｍＯｓｍ／Ｌとの間、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌと約２９０ｍＯｓｍ／Ｌとの間、または約２７０ｍＯｓｍ／Ｌと約３００ｍＯｓｍ／Ｌとの間）であり得る。いくつかの実施形態では、本発明のＨＡ組成物の容量オスモル濃度は、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５５ｍＯｓｍ／Ｌ、約１６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７５ｍＯｓｍ／Ｌ、約１８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約１９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２０５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約３０５ｍＯｓｍ／Ｌ、または約３１０ｍＯｓｍ／Ｌであり得る。１つの特定の実施形態では、本発明のＨＡ組成物の容量オスモル濃度は、約１００ｍＯｓｍ／Ｌと約４００ｍＯｓｍ／Ｌとの間、例えば、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ、約１１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１２０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１３０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１４０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約１５０ｍＯｓｍ／Ｌである。

いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のＨＡ組成物は、１つまたはそれを超える抗酸化剤を含む。抗酸化剤は、溶液からフリーラジカルを除去することによって酸化を阻害することができる物質である。抗酸化剤は当業者に周知であり、アスコルビン酸、アスコルビン誘導体（例えば、パルミチン酸アスコルビル、ステアリン酸アスコルビル、アスコルビン酸ナトリウムまたはアスコルビン酸カルシウム）、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化（ｂｕｙｌａｔｅｄ）ヒドロキシトルエン、アルキルガラート、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、亜ジチオン酸ナトリウム、チオグリコール酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、トコフェロールおよびその誘導体、（ｄ－αトコフェロール、ｄ－α酢酸トコフェロール、ｄ－αコハク酸トコフェロール、βトコフェロール、δトコフェロール、γトコフェロール、およびｄ－αトコフェロールポリオキシエチレングリコール１０００スクシナート）モノチオグリセロール、および亜硫酸ナトリウムなどの物質が含まれる。かかる物質を、典型的には、０．０１～２．０％の範囲で添加する。

いくつかの実施形態では、ＨＡ組成物は、１つまたはそれを超える等張剤を含み得る。この用語を、当該分野で、等浸透圧剤と互換的に使用し、浸透圧（ヒト細胞外液（血漿など）と等浸透圧の０．９％塩化ナトリウム溶液の浸透圧など）を増大させるために組成物に添加することができる化合物として公知である。ＨＡ組成物中で使用することができる好ましい等張剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、デキストロース、およびグリセロールである／が挙げられる。

いくつかの実施形態では、本発明のＨＡ組成物は、１つまたはそれを超える防腐剤を含み得る。適切な防腐剤には、クロロブタノール（０．３～０．９％ｗ／ｖ）、パラベン（０．０１～５．０％）、チメロサール（０．００４～０．２％）、ベンジルアルコール（０．５～５％）、およびフェノール（０．１～１．０％）などが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＨＡ組成物は、眼科使用に適切な構成要素を含み得る。

いくつかの実施形態では、ＨＡ組成物は、組成物の注射中に望ましくない副作用を最小にする１つまたはそれを超える構成要素を含み得る。

Ｖ．眼科使用のためのヒアルロナン組成物
本発明は、被験体の眼にＨＡを含む組成物を投与することによって眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感を緩和する方法を提供する。

種々のキャリアのうちのいずれかを、眼科使用のためにＨＡ組成物中で使用することができ、キャリアには、水、水と水混和性溶媒（Ｃ１～Ｃ７－アルカノールなど）との混合物、０．５～５％非毒性水溶性ポリマーを含む植物油または鉱油、天然物（ゼラチン、アルギナート、ペクチン、トラガカント、カラヤゴム、キサンタンガム、カラゲニン、寒天およびアカシア、デンプン誘導体（酢酸デンプンおよびヒドロキシプロピルデンプンなど）など）、また、他の合成生成物（ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリエチレンオキシド、好ましくは、架橋ポリアクリル酸（中性カルボポールなど）など）、またはこれらのポリマーの混合物が含まれる。キャリアの濃度は、典型的には、有効成分の濃度の１～１００，０００倍である。

眼科使用のためにＨＡ組成物中に含めることができるさらなる成分には、張度増強薬、防腐剤、可溶化剤、非毒性の賦形剤、緩和薬、金属イオン封鎖剤、ｐＨ調整剤、共溶媒、および増粘剤が含まれる。

ｐＨ、好ましくは生理学的ｐＨに調整するために、緩衝液が特に有用であり得る。眼投与に適切なヒアルロナン組成物のｐＨを、ｐＨ４．０～８．０、より好ましくは約ｐＨ４．０～６．０、より好ましくは約ｐＨ６．５～７．８の範囲内に維持すべきである。適切な緩衝液（ホウ酸、ホウ酸ナトリウム、クエン酸カリウム、クエン酸、重炭酸ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、および種々の混合リン酸緩衝液（Ｎａ_２ＨＰＯ_４、ＮａＨ_２ＰＯ_４、およびＫＨ_２ＰＯ_４の組み合わせが含まれる）、およびその混合物など）を添加することができる。一般に、緩衝液を、約０．０５～２．５パーセント／重量、好ましくは、０．１～１．５パーセントの範囲の量で使用する。

張度を、必要に応じて、典型的には張度増強剤によって調整する。かかる薬剤は、例えば、イオンタイプおよび／または非イオンタイプであり得る。イオン性張度増強薬の例には、アルカリ金属ハライドまたはアルカリ土類金属ハライド（例えば、ＣａＣｌ_２、ＫＢｒ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＮａＩ、ＮａＢｒもしくはＮａＣｌ、Ｎａ_２ＳＯ_４、またはホウ酸など）が含まれる。非イオン性張度増強剤には、例えば、尿素、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、プロピレングリコール、またはデキストロースが含まれる。本発明の方法で使用されるヒアルロナン組成物の容量オスモル濃度を、張度剤を使用して、およそ通常の涙液の浸透圧（０．９％塩化ナトリウム溶液または２．５％グリセロール溶液に等しい）に調整することができる。いくつかの例では、約１００ｍＯｓｍ／Ｌと約１５０ｍＯｓｍ／Ｌとの間（例えば、１００ｍＯｓｍ／Ｌ、１１０ｍＯｓｍ／Ｌ、１２０ｍＯｓｍ／Ｌ、１２０ｍＯｓｍ／Ｌ、１３０ｍＯｓｍ／Ｌ、１４０ｍＯｓｍ／Ｌ、または１５０ｍＯｓｍ／Ｌ）の容量オスモル濃度が好ましい。他の例では、約２２５と４００ｍＯｓｍ／Ｌとの間（例えば、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌと約３２０ｍＯｓｍ／Ｌとの間、または約２９７ｍＯｓｍ／Ｌと約３１８ｍＯｓｍ／Ｌとの間）の重量オスモル濃度が好ましい。いくつかの場合、平均容量オスモル濃度は、約３０３．７ｍＯｓｍ／Ｌと約３０６．７ｍＯｓｍ／Ｌとの間で変動し得る。

特定の実施形態では、眼科使用のためのＨＡ組成物は、さらに、防腐剤を含み得る。防腐剤を、典型的には、第四級アンモニウム化合物（塩化ベンザルコニウム（Ｎ－ベンジル－Ｎ－（Ｃ８～Ｃ１８アルキル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル塩化アンモニウム）、またはベンゾキソニウムクロリドなど）から選択することができる。他の適切な防腐剤の例には、チオサリチル酸のアルキル水銀塩（例えば、チメロサール（ｔｈｉｏｍｅｒｓａｌ））；硝酸フェニル水銀（ＩＩ）、酢酸フェニル水銀、またはホウ酸フェニル水銀；過ホウ酸ナトリウム；亜塩素酸ナトリウム；パラベン（例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベンなど）；アルコール（例えば、クロロブタノール、ベンジルアルコール、またはフェニルエタノールなど）；グアニジン誘導体（例えば、クロロヘキシジンまたはポリヘキサメチレンビグアニドなど）；イミダゾリジニル尿素（ジェルマール（商標））、またはソルビン酸が含まれる。好ましい防腐剤は、第四級アンモニウム化合物、特に、塩化ベンザルコニウムまたはその誘導体（Ｐｏｌｙｑｕａｄ（米国特許第４，４０７，７９１号を参照のこと）など）、アルキル水銀塩、およびパラベンである。適切な場合には、細菌および真菌に原因する使用中の二次汚染から確実に防御するのに十分な量の防腐剤を眼科組成物に添加する。

別の実施形態では、眼科使用のためのＨＡ組成物は防腐剤を含まない。かかる組成物は、コンタクトレンズを装着している患者、または、防腐剤への曝露を制限することがより好ましい可能性がある、いくつかの局所点眼薬を使用している患者および／もしくは眼表面に既に障害を有する（例えば、眼乾燥症の）患者に有用である。

眼科使用のためのＨＡ組成物は、特に、活性成分または不活性成分が懸濁液または乳濁液を形成する傾向がある場合、可溶化剤がさらに必要であり得る。本発明の方法で使用されるヒアルロナン組成物に適切な可溶化剤には、例えば、チロキサポール、脂肪酸グリセロールポリエチレングリコールエステル、脂肪酸ポリエチレングリコールエステル、ポリエチレングリコール、グリセロールエーテル、シクロデキストリン（例えば、α－、β－、もしくはγ－シクロデキストリン（例えば、アルキル化誘導体、ヒドロキシアルキル化誘導体、カルボキシアルキル化誘導体、またはアルキルオキシカルボニル－アルキル化誘導体）、またはモノ－もしくはジグリコシル－α－、β－、もしくはγ－シクロデキストリン、モノ－もしくはジマルトシル－α－、β－、もしくはγ－シクロデキストリン、またはパノシル－シクロデキストリン）、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、またはこれらの化合物の混合物が含まれる。好ましい可溶化剤は、ヒマシ油とエチレンオキシドとの反応生成物（例えば、市販品であるクレモフォールＥＬ（登録商標）またはクレモフォールＲＨ４０（登録商標））であり得る。ヒマシ油とエチレンオキシドとの反応生成物は、眼による忍容性が極めて良好な特に優れた可溶化剤であることが証明されている。別の好ましい可溶化剤は、チロキサポールまたはシクロデキストリンであり得る。使用濃度は、特に、組成物中のヒアルロナン濃度に依存する。添加量は、典型的には、組成物中のヒアルロナンを可溶化するのに十分な量である。例えば、可溶化剤濃度は、組成物中のヒアルロナン濃度の０．１～５０００倍である。

眼科使用のためのＨＡ組成物はまた、例えば、乳化剤、湿潤薬、または充填剤（例えば、２００、３００、４００、および６００と命名されたポリエチレングリコール、または１０００、１５００、４０００、６０００、および１００００と命名されたカルボワックスなど）などの非毒性賦形剤をさらに含み得る。賦形剤の添加量およびタイプは、特定の要件に従い、一般に、およそ０．０００１～およそ９０重量％の範囲である。

他の化合物を、キャリアの粘度を増大させるために本発明の処方物に添加することもできる。粘度増強剤の例には、ポリサッカリド（コンドロイチン硫酸およびその塩、デキストラン、セルロースファミリーの種々のポリマーなど）；ビニルポリマー；およびアクリル酸ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。

１つの実施形態では、眼科使用を意図したヒアルロナン組成物は、ＨＡに加えて、眼科組成物で典型的に見出されるさらなる成分を含み得る。かかる構成要素の例には、他の有効成分（血管収縮薬、抗アレルギー剤、抗感染症薬、ステロイド、麻酔薬、抗炎症薬、鎮痛薬、眼乾燥症剤（例えば、分泌促進物質、粘液模倣物、ポリマー、脂質、抗酸化剤）が含まれるが、これらに限定されない）が含まれ得るか、他の有効成分（血管収縮薬、抗アレルギー剤、抗感染症薬、ステロイド、麻酔薬、抗炎症薬、鎮痛薬、または眼乾燥症剤（例えば、分泌促進物質、粘液模倣物、ポリマー、脂質、抗酸化剤）が含まれるが、これらに限定されない）を含む組成物と併せて（同時または連続的に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、本発明のヒアルロナン組成物を、被験体の眼表面（被験体の眼瞼下（例えば、上眼瞼下または下眼瞼下）または被験体の角膜－眼瞼境界など）に投与する。いくつかの実施形態では、本発明のヒアルロナン組成物は、眼手術（ｏｐｈａｌｍｉｃ ｓｕｒｇｅｒｙ）中の粘性手術ツールまたはデバイスとしての使用に適切でないか、使用されない（または眼科手術中の眼内注射に適切でないか、注射されない）。

１つの例では、本発明のヒアルロナン組成物を、被験体に、休憩または就寝の直前に投与する。

ＶＩ．スキンケア／皮膚科学的使用のためのヒアルロナン組成物
本発明はまた、ＨＡを含む組成物の投与による、疼痛および不快感を緩和する一方で少なくとも１つの皮膚の欠点の最小化を必要とする被験体において、疼痛および不快感を緩和する一方で少なくとも１つの皮膚の欠点を最小化する方法を提供する。スキンケア／皮膚科学的使用を意図するかかるＨＡ組成物は、ＨＡに加えて、かかる組成物（例えば、皮膚充填剤として使用される組成物）で典型的に見出されるさらなる成分を含み得る。かかる成分には、例えば、コラーゲン、カルニチン、ビタミンＥ、ビタミンＡ、およびコンドロイチン硫酸が含まれ得る。

いくつかの実施形態では、スキンケア／皮膚科学的使用のためのＨＡ組成物を皮膚に注射する。したがって、ＨＡ組成物を、この組成物を充填した容器（例えば、充填済みシリンジ）の形態に処方することができる。当業者に公知の任意の充填済みシリンジを、本発明の組成物と組み合わせて使用することができる。使用することができる充填済みシリンジは、例えば、ＰＣＴ国際公開第０５０３２６２７号、同第０８０９４９８４号、同第９９４５９８５号、同第０３０７７９７６号、米国特許第６７９２７４３号、同第５６０７４００号、同第５８９３８４２号、同第７０８１１０７号、同第７０４１０８７号、同第５９８９２２７号、同第６８０７７９７号、同第６１４２９７６号、同第５８９９８８９号、米国特許出願公開第２００７０１６１９６１Ａ１号、同第２００５００７５６１１Ａ１号、同第２００７００９２４８７Ａ１号、同第２００４０２６７１９４Ａ１号、または同第２００６０１２９１０８Ａ１号に記載されている。充填済みシリンジを、種々の材料から作製することができる。１つの実施形態では、充填済みシリンジはガラスシリンジである。別の実施形態では、充填済みシリンジはプラスチックシリンジである。当業者は、シリンジの製造のために使用される材料の性質および／または品質がシリンジ内に保存されるＨＡ組成物の安定性に影響を及ぼし得ることを理解している。１つの実施形態では、充填済みシリンジは、シリコーン系潤滑剤を含む。１つの実施形態では、充填済みシリンジは、焼成シリコーン（ｂａｋｅｄ－ｏｎ ｓｉｌｉｃｏｎｅ）を含む。別の実施形態では、充填済みシリンジはシリコーン系潤滑剤を含まない。当業者はまた、シリンジ外筒、シリンジチップキャップ、プランジャ、またはストッパから処方物に進出した少量の夾雑要素も組成物の安定性に影響し得ることを理解している。例えば、製造プロセスで取り込まれたタングステンが処方物の安定性に悪影響を及ぼし得ることが理解される。１つの実施形態では、充填済みシリンジは、５００ｐｐｂを超えるレベルのタングステンを含み得る。別の実施形態では、充填済みシリンジは、低タングステンシリンジである。別の実施形態では、充填済みシリンジは、タングステンを、約５００ｐｐｂと約１０ｐｐｂとの間、約４００ｐｐｂと約１０ｐｐｂとの間、約３００ｐｐｂと約１０ｐｐｂとの間、約２００ｐｐｂと約１０ｐｐｂとの間、約１００ｐｐｂと約１０ｐｐｂとの間、約５０ｐｐｂと約１０ｐｐｂとの間、約２５ｐｐｂと約１０ｐｐｂとの間のレベルで含み得る。

ＶＩＩ．創傷治癒のためのヒアルロナン組成物
本発明はまた、疼痛および不快感を緩和する一方で創傷治癒の促進を必要とする被験体において、疼痛および不快感を緩和する一方で創傷治癒を促進する方法を提供する。局所使用を意図するかかるＨＡ組成物は、ＨＡに加えて、かかる組成物で典型的に見出されるさらなる成分を含み得る。かかる成分には、例えば、１，３－ブチレングリコール、グリセリン、キサンタンガム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、エタノール、メチルｐ－ヒドロキシベンゾアート、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレン、デシルテトラデシルエーテル、クエン酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、ならびにビタミン（例えば、ビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、およびビタミンＫ）が含まれ得る。かかる成分はまた、さらなる薬学的に活性な物質を含み得る。いくつかの場合、これらのさらなる薬学的に活性な物質は、疼痛処置のための鎮痛薬を含まない。他の場合、これらの薬学的に活性な物質は、抗生物質（例えば、典型的には皮膚感染を処置するために使用され、局所使用を意図する抗生物質）を含む。

本明細書中に開示の方法で用いるＨＡ組成物はまた、完成し、包装され、ラベリングされた医薬製品を包含する。この製品は、適切な単位投薬形態が適切な器または容器（ガラスバイアル、充填済みシリンジ、または密閉された他の容器など）に納められている。１つの実施形態では、単位投薬形態を、非経口投与（例えば、被験体（例えば、被験体の顔面、頸部、腕、脚、または背中）への皮内または皮下投与）に適切な無菌無粒子ＨＡ組成物として提供する。

任意の医薬製品と同様に、包装材料および容器を、保存および運搬中の製品の安定性を保護するようにデザインする。さらに、本発明の製品は、対象となる疾患または障害を適切に防止または処置する方法ならびにＨＡ組成物の投与方法および投与頻度を医師、技師、または患者に助言する使用説明書または他の情報資料を含む。換言すれば、製造品は、投与レジメン（実際の用量、モニタリング手順、および他のモニタリング情報が含まれるが、これらに限定されない）を示すか提案する指示手段を含む。

ＶＩＩＩ．眼乾燥症に関連する疼痛および不快感を緩和する方法
眼乾燥疾患は、人口のおよそ１０～２０％が罹患する眼疾患である。この疾患は、病的状態（白内障または自己免疫障害など）に関連する可能性があるか、病的状態が存在しない場合、眼表面が乾燥する長時間の眼を使う作業、コンピュータを使用した仕事、乾燥環境下、コンタクトレンズの使用、または薬物への曝露などの一定の環境下で生じ得る。

眼乾燥症を罹患した個体では、まばたきするための反射および対症的な涙物質の分泌が損なわれている。眼乾燥症の徴候および症状には、眼球の乾燥；涙の産生、体積、および流れの減少；涙組成の異常；涙容量オスモル濃度の増加；角膜炎、結膜および角膜の着色；発赤；視界不良；涙液層破壊時間の減少；結膜発赤の増加；涙液層内のデブリの過剰；眼に砂が入ったような感じ；眼の灼熱感；眼内の異物感；涙の分泌過剰；羞明；眼の刺激感；屈折機能障害；眼過敏症；眼球刺激、および長時間のコンタクトレンズ装着に起因する不快感が含まれる。涙の分泌過剰応答は反直感的と思われることがあるが、眼乾燥症に原因する刺激および異物感に対する自然な反射応答である。個体によっては眼アレルギーと眼乾燥症状との組み合わせに起因する眼のかゆみも経験し得る。

個体の眼乾燥症の症状（血中ホルモンレベル、種々の自己免疫疾患（例えば、シェーグレン症候群（Ｓｊｏｒｇｒｅｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）および全身性エリテマトーデス）、眼科手術（ＰＲＫまたはＬＡＳＩＫが含まれる）、多数の薬物適用、環境条件、看視作業（コンピュータの使用など）、眼球疲労、コンタクトレンズの装着、および機械的影響（角膜知覚、部分的閉瞼、表面のむら（例えば、翼状片）、および眼瞼異常（例えば、下垂、内反／外反、瞼裂斑）など）が含まれる）にも影響を及ぼし得る多数の変動要因が存在し得る。低湿度環境（例えば、脱水を引き起こす環境）（デフロスター動作中の航空機内または自動車内での着席または乾燥気候地帯での生活など）は、眼乾燥症状を悪化させるか引き起こし得る。さらに、看視作業も症状を悪化させ得る。症状に非常に影響を及ぼし得る作業には、瞬きの数が減少する長時間のＴＶの視聴またはコンピュータの使用が含まれる。

ＨＡを含む組成物は、眼乾燥状態の処置のためにこれまで使用されてきた。ＨＡ含有点眼薬は市販されており、典型的には、１％未満の濃度でＨＡを含む。例示的な市販のＨＡ含有点眼薬には、Ｏｐｔｉｃａｌｍ点眼薬（０．２％ＨＡ）；Ａｑｕｉｆｙ ｃｏｍｆｏｒｔ ｄｒｏｐｓ（０．１％ＨＡ）；Ｂｌｉｎｋ（０．１５％ＨＡ）；Ｈｙａｌ－ｄｒｏｐ（０．２％ＨＡ）；Ｈｙｃｏｓａｎ（０．１％ＨＡ）；Ｏｘｙａｌ（０．１５％ＨＡ）；およびＶｉｓｍｅｄ（０．１８％および０．８％ＨＡ）が含まれる。

出願人は、驚いたことに、約３０ｍｇ／ｍＬ（すなわち３％ＨＡ）を超える濃度のＨＡ（例えば、４０ｍｇ／ｍＬの濃度のＨＡ（すなわち４％ＨＡ））を含む高濃縮ＨＡ組成物が眼乾燥状態の処置のために被験体の眼に投与することが有効であり得ることを発見した。かかる高濃縮ＨＡ組成物は、これらの組成物が眼に有効に投与するには粘度が高すぎると考えられていたので、これまで眼乾燥症処置のために使用されていなかった。

出願人はまた、驚いたことに、濃縮ＨＡ組成物は、一旦眼に投与すると、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感の処置で驚くほど有効であることを発見した。特定の理論に拘束されることを望まないが、眼乾燥状態に関連する疼痛を侵害受容器のＴＲＰＶ１チャネルによって調整することができ、高濃縮ＨＡ組成物中のＨＡ分子が眼の感覚神経および角膜細胞上に存在するＴＲＰＶ１チャネルと相互作用し、それにより、侵害性刺激に対する侵害受容器の応答性が低下すると考えられる。したがって、いくつかの実施形態では、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感は、受容体電位バニロイドサブタイプ１（ＴＲＰＶ１）チャネルによって調整される。さらに、濃縮ＨＡの特徴的な粘弾性が、眼表面に適用された溶液の通常の流涙および瞬きによる除去量を低下させ、それにより、ＨＡ溶液の保護効果を延長する。

本発明は、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感の緩和を必要とする被験体において、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感を緩和する方法であって、被験体の眼にヒアルロナンを含む組成物を投与することを含み、ここで、ヒアルロナンが、組成物中に約３０ｍｇ／ｍＬを超える濃度で存在し；ヒアルロナンの平均分子量が約１００万と約２００万との間であり；ヒアルロナンが架橋しておらず、そして／または化学修飾を実質的に含まず、それにより、被験体における疼痛および不快感が緩和される、方法を提供する。

いくつかの場合、眼科用を意図するＨＡ組成物は、ゲル、軟膏、塗布剤、ローション、またはクリームの形態である。一定の態様では、このＨＡ組成物は、レンズまたはミクロスフィアの形態ではない。

眼科使用を意図するＨＡ組成物を、眼表面（眼瞼下（例えば、上眼瞼下または下眼瞼下）または角膜－眼瞼境界など）に投与することができる。１つの態様では、ＨＡ組成物を、被験体の眼内に注射しない。その高粘性によってＨＡ組成物の投与直後に被験体の見る能力が明確に損なわれ得るので、これらの組成物を、休憩または就寝直前に被験体の眼に投与することができる。

当業者は、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感を緩和するための本明細書中に記載の眼科ＨＡ組成物の適切な投与スケジュールを確認することができる。例えば、ＨＡ組成物を、約３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月間、２ヶ月間など、または、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感が緩和されるまで任意の期間毎日投与することができる。いくつかの実施形態では、かかる疼痛および不快感を、長期間緩和することができる（例えば、約１２時間、約２４時間、約１日間、約３日間、約５日間、約７日間、約１４日間、または約２８日間継続することができる）。

用語「眼乾燥状態」には、眼球の乾燥；涙液層破壊時間の減少；涙の産生、体積、および流れの減少；涙組成の異常；涙容量オスモル濃度の増加；角膜炎；結膜および角膜の着色；発赤；視界不良；結膜発赤の増加；涙液層内のデブリの過剰、眼に砂が入ったような感じ；眼の灼熱感；眼内の異物感；涙の分泌過剰；羞明；眼の刺激感；屈折機能障害；眼過敏症；眼球刺激、および長時間のコンタクトレンズ装着に起因する不快感からなる群から選択される１つまたはそれを超える症状に関連する眼乾燥状態が含まれるが、これらに限定されない。

眼乾燥状態はまた、自己免疫障害；眼科手術；薬物摂取；乾燥した環境条件；長時間のコンピュータの使用；眼球疲労；コンタクトレンズ装着による角膜過敏症；部分的閉瞼；表面のむら；眼瞼のむら；および神経因性疼痛に関連する状態（白内障または網膜剥離など）からなる群から選択される状態に関連し得る。１つの例では、眼乾燥状態は、眼科手術（光屈折手術（例えば、光学的屈折矯正角膜切除術（ＰＲＫ））、白内障手術、網膜剥離手術、レーザー角膜内切削形成術（ＬＡＳＩＫ）、または角膜感覚神経損傷に関与する任意の角膜手術手技など）に関連し得る。

ＩＸ．疼痛および不快感を緩和する一方で皮膚の欠点を最小にする方法
ＨＡは、細胞外基質（ＥＣＭ）の主な構成要素であり、皮膚などの軟結合組織中に特に大量に存在する。正常な皮膚では、ＨＡは、皮膚線維芽細胞および上皮角化細胞によって主に合成される。その残渣が負電荷を帯びるので、ＨＡは皮膚の水和および弾性を維持するための水ポンプとして機能する。ＨＡは、結合組織の食物、ホルモン、ビタミン、および無機塩の分布の調節および炎症反応を含み得る代謝廃棄物の浄化において主な役割を果たす。加齢に伴って、ＨＡの量およびその重合度は減少し、それにより、結合組織中の保水量が減少する。次いで、皮膚は老化過程を受け、それにより、線維症が増大し、弾性線維の質が低下する。

ＨＡは、局所適用のためのクリームまたはゲルの形態でのＨＡ組成物の使用および皮膚充填剤としての皮膚への注射のためのＨＡ組成物の使用の両方を含む化粧用途のために広範に使用されている。後者の使用は、被験体の皮膚の最上層（例えば、被験体の顔面、頸部、腕、脚、胴、または胸部）へのＨＡ組成物の注射を含む。この使用により、皺に起因する皮膚のたるみの機械的充填効果ならびに皮膚の加齢ならびに皮膚の弾性および堅さの機械的性質を維持するに不可欠なＥＣＭの分解に対する防止効果によって皺を減少させる。

軟部組織を増強するための皮膚充填剤の注射は皮膚科学的手技としては侵襲性が最小であるにもかかわらず、患者は、しばしば、かかる手技に関連する疼痛に懸念を示す。これらの手技中の疼痛を緩和するために局所麻酔用クリームがしばしば使用され、注射用ＨＡ組成物中には麻酔薬も含まれる。

本発明は、これらの手技において麻酔薬を使用する必要がなくなる。具体的には、本発明は、被験体に高濃縮ＨＡ組成物を投与することによる、皮膚科学的手技に関連する疼痛および不快感を緩和する一方で少なくとも１つの皮膚の欠点の最小化を必要とする被験体において、皮膚科学的手技に関連する疼痛および不快感を緩和する一方で少なくとも１つの皮膚の欠点を最小化する方法を提供する。上記で説明するように、驚いたことに、本明細書中に記載の高濃縮ＨＡ組成物が、例えば、被験体の皮膚への注射を含み得る皮膚科学的手技に関連する疼痛および不快感の処置で驚異的に有効であることを発見した。特定の理論に拘束されることを望まないが、皮膚へのＨＡ組成物の注射に関連する疼痛を侵害受容器のＴＲＰＶ１チャネルによって調整することができ、そして、高濃縮ＨＡ組成物中のＨＡ分子が感覚神経ならびに皮膚および皮下組織の上皮および結合組織の細胞に存在するＴＲＰＶ１チャネルと相互作用し、それにより、侵害受容器の侵害刺激に対する応答性が低下すると考えられる。

いくつかの実施形態では、美容用途のためのＨＡ組成物を、注射デバイス（針、トロカール、カニューレ、または灌流デバイスなど）を使用して、注射（例えば、皮下または皮内注射）によって、それを必要とする被験体に投与することができる。本発明のＨＡ組成物の注射に適切な注射デバイスの呼び径は、２．１１ｍｍまたはそれを超え得る（１４Ｇ針または１４ゲージ超の針に相当する）。いくつかの実施形態では、本発明のＨＡ組成物は、より小さな針（例えば、呼び径が２．１１ｍｍ未満の針）を使用した投与には粘度が高すぎ得る。他の実施形態では、本発明のＨＡ組成物は、呼び径が２．１１ｍｍ未満のより小さな注射デバイスを使用して投与することが可能である。

例えば、本発明のＨＡ組成物の注射に適切なデバイス（シリンジなど）の呼び径は、約０．３１ｍｍ、０．３４ｍｍ、０．３６ｍｍ、０．４１ｍｍ、０．４７４ｍｍ、０．４６ｍｍ、０．４９ｍｍ、０．５１５ｍｍ、０．５１ｍｍ、０．５４ｍｍ、０．５７ｍｍ、０．５９ｍｍ、０．６４２ｍｍ、０．６４ｍｍ、０．６７ｍｍ、０．７１８ｍｍ、０．７２ｍｍ、０．７７ｍｍ、０．８２ｍｍ、０．８７ｍｍ、０．９１ｍｍ、約０．９９ｍｍ、約１．０７ｍｍ、約１．１７ｍｍ、約１．２７ｍｍ、約１．４２ｍｍ、約１．４７ｍｍ、約１．５７ｍｍ、約１．６５ｍｍ、約１．７３ｍｍ、約１．８３ｍｍ、約１．９８ｍｍ、約２．１１ｍｍ、約２．２６ｍｍ、約２．４１ｍｍ、約２．５４ｍｍ、または約２．７７ｍｍであり得、これらは、それぞれ、３０、２９、２８、２７、２６ｓ、２６、２５．５、２５ｓ、２５、２４．５、２４、２３．５、２３ｓ、２３、２２．５、２２ｓ、２２、２１．５、２１、２０．５、２０、１９．５、１９、１８．５、１８、１７．５、１７、１６．５、１６、１５．５、１５、１４．５、１４、１３．５、１３、１２．５、または１２ゲージ（すなわち３０Ｇ、２９Ｇ、２８Ｇ、２７Ｇ、２６ｓＧ、２６Ｇ、２５．５Ｇ、２５ｓＧ、２５Ｇ、２４．５Ｇ、２４Ｇ、２３．５Ｇ、２３ｓＧ、２３Ｇ、２２．５Ｇ、２２ｓＧ、２２Ｇ、２１．５Ｇ、２１Ｇ、２０．５Ｇ、２０Ｇ、１９．５Ｇ、１９Ｇ、１８．５Ｇ、１８Ｇ、１７．５Ｇ、１７Ｇ、１６．５Ｇ、１６Ｇ、１５．５Ｇ、１５Ｇ、１４．５Ｇ、１４Ｇ、１３．５Ｇ、１３Ｇ、１２．５Ｇ、または１２Ｇの針に相当する）。１つの実施形態では、本発明のＨＡ組成物を、呼び径が約１．２７ｍｍの１８Ｇシリンジ針を使用して投与することができる。いくつかの実施形態では、本発明のＨＡ組成物は、より小さな針（例えば、呼び径１．２７ｍｍ未満の針）を使用した投与には粘度が高すぎ得る。

いくつかの実施形態では、本発明の方法はまた、注射可能なインプラント（特に、皮膚インプラント）の形態の高濃縮ＨＡ組成物を被験体に投与することを含み得る。

本発明の組成物は、特に、再建手術もしくは形成手術または皺、小皺、皮膚のたるみ、および瘢痕への充填（脂肪異栄養症または脂肪組織萎縮に原因する皮膚のたるみへの充填が含まれる）のための美容皮膚科学におけるヒトまたは動物での使用を意図する。組成物は、上記定義のインプラントであり得る。

Ｘ．疼痛および不快感を緩和する一方で創傷治癒を促進する方法
皮膚は、外部環境に対する機械的バリアを提供し、感染性因子の移入を防止するように作用する。損傷した時点で、下の組織は感染に曝露され、それ故、迅速且つ有効な治癒はバリア機能の再構築において重大な意義を有する。成人における皮膚創傷治癒は複雑な過程であり、炎症、肉芽組織形成、再上皮化、および再造形などの複数の段階を含む。ＨＡは、これらの細胞およびマトリックスの事象の投薬において多面的な役割を果たす可能性が高い。これらの創傷に関連する疼痛を緩和するために、しばしば、局所麻酔薬を創傷に投与する。

本発明は、皮膚創傷を有効に処置すると同時に鎮痛して局所麻酔を使用する必要を排除する方法を提供する。具体的には、本発明は、高濃縮ＨＡ組成物を、それを必要とする被験体に投与することによって疼痛および不快感を緩和する一方で創傷治癒を促進する方法を提供する。上記で説明するように、驚いたことに、本明細書中に記載の高濃縮ＨＡ組成物が創傷治癒に関連する疼痛および不快感の処置で驚異的に有効であることが見出された。特定の理論に拘束されることを望まないが、皮膚へのＨＡ組成物の注射に関連する疼痛を侵害受容器のＴＲＰＶ１チャネルによって調整することができ、そして、高濃縮ＨＡ組成物中のＨＡ分子が創傷領域を神経支配する感覚神経中およびこの領域の結合組織細胞中に存在するＴＲＰＶ１チャネルと相互作用し、それにより、侵害受容器の侵害刺激に対する応答性が低下すると考えられる。

本発明の方法によれば、皮膚創傷への局所投与を意図する高濃縮ＨＡ組成物を、皮膚上の創傷または瘢痕の表面上に局所投与することができる。組成物は、増粘ポリマー（セルロース誘導体またはアクリルポリマーなど）を、慣習的に使用される他の賦形剤（防腐剤および香料など）と共に含む水性ゲルまたは多価アルコールの形態であり得る。

１つまたはそれを超える疾病状態または病的状態のパラメータ（例えば、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感、スキンケア／皮膚科学的手技、または創傷治癒）において統計的に有意な改善が認められた場合に、処置効果、防止効果、または緩和効果は明らかである。処置効果、緩和効果、または防止効果はまた、症状を悪化させないか予測されない症状を発生させないことによって明らかである。例として、疾患または状態（例えば、疼痛および不快感）の測定可能なパラメータの少なくとも１０％、好ましくは、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％またはそれを超える好ましい変化が、有効な処置を示し得る。用語「防止する」または「防止」、は、本明細書中で使用される場合、例えば、以前に疼痛を経験した被験体における疼痛および不快感の再発の防止を含む。

いくつかの実施形態では、被験体は、ヒト、哺乳動物（例えば、愛玩動物（ネコもしくはイヌなど）、家畜（ウシ、ヒツジ、ウマ、ロバなど）、またはげっ歯類（モルモット、マウス、もしくはラットなど））である。１つの特定の実施形態では、被験体はヒトである。別の特定の実施形態では、被験体はイヌである。

本明細書中で使用される場合、用語「少なくとも１つの症状の軽減」は、疼痛および不快感に関連する少なくとも１つの症状の減少、回復、または排除を含む。この用語はまた、本発明のＨＡ組成物の投与の際にニューロン中の疼痛伝達過程に関与するイオンチャネル（ＴＲＰＶ１チャネルなど）の活性化範囲を軽減することを含む。かかるチャネルの活性化を、例えば、侵害受容性インパルス後のニューロン中の細胞内Ｃａ^２＋の変化の測定または本発明のＨＡ組成物投与の際のニューロン中のホールセル電流の測定によって測定することができる。さらに、用語「少なくとも１つの症状の軽減」はまた、本発明のＨＡ組成物投与の際のニューロンの侵害受容性発火の減少を含む。

いくつかの実施形態では、眼乾燥状態に関連する疼痛および不快感を軽減する方法、スキンケア／皮膚科学的手技、または創傷治癒は、治療有効量の本発明の組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む。用語「治療有効量」は、本明細書中で使用される場合、それを必要とする被験体に投与した場合、疼痛および不快感を処置、防止、軽減、または緩和するのに十分な本発明のＨＡ組成物の量が含まれることを意図する。当業者、例えば、医師は、治療に有効であろうＨＡ組成物の量を容易に確認することができる。一般に、組成物の治療有効量は、約０．１～約５００ｍｇ（例えば、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、または約５００ｍｇ）である。

種々の処置レジメンが本明細書中に開示の方法に含まれる。例えば、被験体に、第１の用量の本明細書中に開示のＨＡ組成物を投与後、さらなる用量を投与することができる。いくつかの実施形態では、第１の用量を投与後、特定の間隔をおいて第２の用量を投与する。いくつかの実施形態では、第２の用量を、第１の用量の約３０日後、約６０日後、約９０日後、約１２０日後、約１５０日後、約１８０日後、約２１０日後、約２４０日後、約２７０日後、約３００日後、約３３０日後、または約３６０日後に投与する。被験体が経験する疼痛および不快感の軽減に基づいて用法を調整することができると認識すべきである。いくつかの実施形態では、被験体に、一定の用量を、１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、４ヶ月に１回、５ヶ月に１回、６ヶ月に１回、７ヶ月に１回、８ヶ月に１回、９ヶ月に１回、１０ヶ月に１回、１１ヶ月に１回、または１２ヶ月に１回投与する。

本発明を、以下の実施例によってさらに例示するが、この実施例は本発明をさらに制限すると決して解釈すべきではない。本出願を通して引用した全ての文献（参照文献、発行済み特許、公開特許出願、および同時継続特許出願が含まれる）の全ての内容は、本明細書中で参考として明確に援用される。

実施例
他の意味を提供しない限り、本明細書中に記載の組成物中で使用されるヒアルロナン（ＨＡ）を、動物、ヒト、または細菌の供給源から得る。他の意味を提供しない限り、本明細書中で使用される組成物は、生理学的緩衝液中に含まれる。

実施例１．角膜への４％ヒアルロナンナトリウムの局所適用による角膜感覚神経線維におけるインパルス活性の低下
侵害受容器の興奮は、痛覚生成の第１のステップである。急性疼痛について、痛覚の規模は、侵害受容性線維の発火頻度および刺激による線維の採用数と非常に相関する（Ａｃｏｓｔａら、２００１、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３４（２）、５１１－５２５）。また、末梢損傷後の痛みの持続は、侵害受容器の活動継続に関連している（Ｂｅｌｍｏｎｔｅら、２００４、Ｏｃｕｌａｒ Ｓｕｒｆａｃｅ、２、２４８－２５３）。

角膜神経における感覚神経のインパルス活性の増大は、眼の不快感および痛覚の生成の第１のステップである。眼表面では、侵害刺激は、角膜および結膜を神経支配する多様式侵害受容器および機械侵害受容器によって検出される（Ｂｅｌｍｏｎｔｅ ＆ Ｇｉｒａｌｄｅｚ、１９８１、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、４３７、７０９－７２５；Ｇａｌｌａｒら、１９９３、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、４６８、６０９－６２２）。炎症が起こるときに多様式侵害受容器が感作されるようになり、連続的に発火し、継続的な痛覚を惹起する。他方では、角膜冷温度受容器の活動は、眼表面の蒸発に関連しており、眼表面乾燥の意識的感覚にも寄与する可能性がある（Ｇａｌｌａｒら、１９９３、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、４６８、６０９－６２２；Ｐａｒｒａら、２０１０、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１６、１３９６－１３９９；Ｋｏｖａｃｓら、２０１６、Ｐａｉｎ、１５７、３９９－４１７）。

下記の実験の目的は、平均分子量が１００万～２００万で濃度４％のヒアルロナン（４％ＨＡ）が、モルモット角膜の刺激による感覚受容器線維（機械侵害受容器、多様式侵害受容器、冷温度受容器）における自発性および刺激誘発性の神経インパルス発射を調整する能力を試験することであった。

角膜多様式侵害受容器の化学的刺激の有効な生成手段は９８．５％ＣＯ_２の適用であり、この適用による刺激生成は、炭酸の局所形成によって惹起される酸性化に起因する（Ｃｈｅｎら、１９９５、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．７、１１５４－１１６３）。全ての例において類似のＣＯ_２パルスのヒト角膜への適用によって即時且つ鋭い痛覚が誘発されることが証明されている（Ｃｈｅｎら、１９９５、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．７、１１５４－１１６３；Ａｃｏｓｔａら、２００１、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３４（２）、５１１－５２５）。神経終末の周囲でプロトンが急速に形成されるので、Ｈ^＋の刺激効果は、おそらく直接的であり、神経が脱分極するプロトン開閉イオンチャネル、おそらく「カプサイシンチャネル」ＴＲＰＶ１および／またはＡＳＩＣチャネルの活性化によって生じる。さらに、ＣＯ_２刺激に供した角膜上皮細胞における細胞内ｐＨの減少によっても炎症メディエーター（例えば、プロスタグランジン）を形成および放出することができ、このメディエーターは角膜多様式侵害受容器を感作し得るので、バックグラウンド発射が生じ、直接的な酸性刺激に対するインパルス応答が増強される。

角膜冷温度受容器の場合、これらの線維は、バックグラウンド（３４℃の基礎角膜温度での通常のインパルス活性）を示し、非常に小さな温度低下（例えば、涙の蒸発時に起こる温度低下）に伴って発火頻度が増加する（Ｂｅｌｍｏｎｔｅら、２０１５、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｒｅｐ．３、１１１－１２１）。

方法
２００～３００ｇの両方の性別のダンキンハートレイモルモットを、実験で使用した。研究を、ＮＩＨ実験動物の管理と使用に関する指針、欧州連合指令（２０１０／６３／ＥＵ）、および実験動物保護に関するスペイン規制（Ｓｐａｎｉｓｈ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｉｍａｌｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ
ｒｅｓｅａｒｃｈ）に従って行い、ミゲル・ヘルナンデス大学の倫理委員会によって承認および監督されたプロトコールに従った。

電気生理学的記録
異なる機能タイプの末梢角膜受容器のインパルス活性を記録した。この目的のために、動物を、１００ｍｇ／ｋｇペントバルビトンナトリウム腹腔内注射を用いて安楽死させ、直ちに眼球結膜および眼瞼結膜ならびに視神経および毛様体神経と共に眼球を摘出し、冷生理食塩水（４℃）に入れた。

結合組織および外眼筋を摘出した眼球から慎重に除去して視神経周囲の毛様体神経を有する眼底を曝露させた。次いで、結膜を有する前眼部が後極および毛様体神経から離れたままになるように特別にデザインされた二室中に眼を入れた。室の前部に、結膜を、両区画を隔離するために分離壁にピン留めし、個別に灌流した。前部区画を加温（３４℃）生理食塩水で灌流し、上角強膜境界上に連続的に滴下した。加温鉱油を充填した室の後部区画中で、神経フィラメントを毛様体神経から引き裂き、従来の電気生理学的装置を使用した単一ユニットインパルス活性の単極記録のためのＡｇ－ＡｇＣｌ電極上に置いた。後部区画中のＡｇ／ＡｇＣｌペレットに関する電気信号を記録した。電気信号を、ＣＥＤインターフェースを有するＰＣに転送し、適切なソフトウェアを用いて解析した。選択したユニットの自発的活性を、任意の意図する刺激の１分前に記録した。その後に較正ｖｏｎ Ｆｒｅｙ ｈａｉｒ（範囲０．２５～４．００ｍＮ）を使用して機械的閾値を決定した。角膜求心性線維の受容野を、微細な絵筆を使用した機械的刺激を用いて限定し、その後に閾値上ｖｏｎ Ｆｒｅｙ ｈａｉｒを使用してマッピングした。化学的刺激について、９８．５％ＣＯ_２を含むガス噴射を角膜受容野に３０秒間適用した。熱刺激を、特注のペルチェデバイスによる灌流溶液の冷却（２０℃に低下）によって行った。

データ解析
多様式線維の単線維記録では、その刺激様式、振幅、および形状に従って区別される個別のユニットのインパルス発火を解析した。継続インパルス活性を、記録開始から３０秒間およびインパル間期に測定した平均インパルス頻度（インパルス／秒）として示した。ＣＯ_２に対する応答を、以下のパラメータを測定して定量化した：潜伏期：ＣＯ_２パルスの開始時とユニットによって与えられた第１のパルスとの間の時間遅延；平均発射率：ＣＯ_２パルスを通じた１秒あたりの平均インパルス数（ｉｍｐ／秒）；発射後：ＣＯ_２パルス直後３０秒間の平均発火頻度（ｉｍｐ／秒）。

冷神経線維記録では、以下のさらなる発火パターンパラメータを計算した：平均発火頻度：１秒あたりの平均インパルス記録数（インパルス／秒）；冷却閾値：基礎温度での平均神経インパルス頻度が２５％増加した冷却勾配中の温度；ピーク応答：冷却勾配中のインパルス頻度の最大インパルス／秒値；ピーク応答時温度：ピーク頻度に到達した時の温度値（℃）。

実験プロトコール
以下の実験順序にしたがった：
多様式侵害受容性線維の同定
角膜を刺激し、角膜表面に適用された湿った微細なブラシを使用した機械刺激に対して応答する線維を含むフィラメントを同定した。神経フィラメントの分割後、単一の角膜侵害受容性ユニットを、機械刺激によって位置確認した。それぞれの隔離した単一ユニットのさらなる特徴づけ（多様式性の決定）のために、以下の所定の作業を行った：
１．受容野境界のマッピングおよびｖｏｎ Ｆｒｅｙフィラメントを使用した機械的閾値の決定；
２．９８．５％ＣＯ_２の３０秒間パルスに対する応答の測定。応答が検出されなかった場合、新規の線維を調査した。

多様式侵害受容器に及ぼす４％ＨＡの影響
４％ＨＡ溶液を角膜表面上に適用した。湿度を維持するために、角膜に生理食塩水を定期的に滴下した。４％ＨＡの滴下後、３０秒ＣＯ_２パルスを角膜表面上に逐次適用した（４％ＨＡ適用から５、２０、３５、５０、６５、および８０分後）。次いで、角膜を生理食塩水で５分間継続的に洗浄し、洗浄から１５分後および２０分後にＣＯ_２に対する応答を測定した。プロトコールの終了時に電気的閾値を測定して、線維の応答性を確認した。完全な実験手順にわたる自発的活性の存在およびＣＯ_２刺激に対するインパルス応答の規模を測定した。

冷温度感受性線維の同定
角膜を神経支配する冷温度感受性線維を含むフィラメントを、角膜上に冷生理食塩水の液滴を適用することによって同定した。線維の分割後、単一の角膜冷ユニットを含むフィラメントを、氷冷金属棒（先端部直径１ｍｍ）を角膜上に適用することによって位置確認して受容野をマッピングした。

３４℃での単一の冷感神経終末によって示された継続インパルス活性を記録した。３４℃～１５℃の冷却勾配を、ペルチェデバイスを使用した受容野の温度変化によって行った。

冷温度受容器神経活動に及ぼす４％ＨＡの影響
４％ＨＡを室の前区画中に曝露した眼表面に適用し、３４℃での冷温度受容器の継続活動および冷却勾配に対する応答に及ぼす影響を、ＨＡ適用から５、２０、３５、５０、６５、および８０分後、ならびに角膜洗浄から１５分後および２０分後に調査した。

静止温度３４℃での平均継続活動、温度閾値、および冷却勾配中の神経インパルス活性の増加を決定した。

結果
インタクトな角膜では、多様式侵害受容器線維として同定された知覚求心性部分は、角膜受容野を示し、この角膜受容野は、通常は隣接する強膜内に１ｍｍまで及ぶ。多様式侵害受容器線維は、静止時にサイレントであり、機械刺激に応答し、９８．５％ＣＯ_２にも応答する。

継続活動およびＣＯ_２に対する発火応答に及ぼす４％ＨＡの影響を、２つの単一の多様式ユニットおよび２つの冷感ユニットにおいて測定した。ＣＯ_２の影響を、角膜表面上への４％ＨＡの適用前および適用後に分析した。以下の表１に示すように、多様式侵害受容器は、静止時にサイレントであり、２分間の記録期間中に継続活動は認められなかった。多様式侵害受容器は、約６インパルス／秒の平均インパルス発射頻度での３０秒ＣＯ_２パルスに対して約２．５秒間応答した。角膜上への４％ＨＡの適用から最初の３５分間に、ＣＯ_２に対する応答は、顕著に減少し、その後終了した。４％ＨＡ処置から８０分後の洗浄により、ＣＯ_２に対する応答が次第に回復した。

全角膜知覚求心性部分の約１０％を占める冷温度受容器線維におけるインパルス活性も記録した。本発明者らは、インタクトな眼における３４℃でのその規則的な継続インパルス活性および眼の冷温度受容器に特徴的な１５℃冷却パルスに原因する顕著な頻度の増加を確認した（Ｇａｌｌａｒら、１９９３、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、４６８、６０９－６２２；Ｐａｒｒａら、２０１０、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１６、１３９６－１３９９）。

表１に示すように、角膜の４％ＨＡへの４時間の曝露により、３４℃での冷温度受容器のバックグラウンドの継続活動が減少した。冷閾値に明確な変化は認められなかったが、表１にも示すように、冷勾配に対する応答が顕著に減少し、洗浄２０分後に部分的にしか回復せず、一方、冷勾配によって誘発されたピーク頻度値はこの間に正常値に戻った。

要するに、これらの値は、４％ＨＡが角膜の酸性刺激に起因する多様式侵害受容器線維における異常なインパルス活性を軽減することを示す。これは、おそらく、ＨＡ分子と感作された侵害受容性神経終末のＴＲＰＶ１チャネルとの相互作用の結果であり（Ｃａｉｒｅｓら、２０１５、Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．６、８０９５）、高濃度のＨＡがこの効果の惹起に非常に有効であることを証明している。また、冷温度受容器の活動が減少した。これはおそらく低濃度のＨＡ溶液よりも角膜表面の遮蔽に有効であることに起因していた。

実施例２．種々の針サイズによるＨＡ排出に必要な力
異なる直径（３０～１８Ｇ）の針を有する３ｍＬシリンジから４％ＨＡ組成物を排出するのに必要な圧力を測定し、図１に示す。シリンジのガスケット（ｅｍｂｏｌｕｓ）に対して垂直に作用するように二皿天秤の一方の皿に力をかけた。分銅を軽いものから反対側の皿に加えた。図１に示す結果によって証明されるように、本発明のＨＡ組成物を、直径３０～１８Ｇの針を使用して被験体に投与することができる。

均等論
前述の明細書は、当業者が本発明を実施することが可能であるのに十分であると考えられる。実施例は本発明の１つの態様の１つの例示であることを意図し、他の機能的に等価な実施形態が本発明の範囲内に含まれるので、本発明は、提供した実施例によってその範囲が制限されてはならない。本明細書中に示し、説明した実施形態に加えて、本発明の種々の修正形態が前述の説明から当業者に明らかとなり、この修正形態は添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。本発明の利点および目的は、本発明の各実施形態に必ずしも含まれているわけではない。

Claims (1)

1. 図面に記載の発明。