JP2023150100A - β-グルコシダーゼ活性向上剤、アグリコン含有組成物の製造方法、アグリコン吸収促進剤、及び飲食品 - Google Patents
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Abstract
Description
乳酸菌としては、ラクトバチラス属やラクチプランチバチラス属、リモシラクトバチラス属、ラクチカゼイバチルス属、レビラクトバチラス属、フルクチラクトバチラス属、アピラクトバチラス属、エンテロコッカス属、ラクトコッカス属、ペディオコッカス属、ロイコノストック属、ストレプトコッカス属に属する有用細菌であれば特に制限はなく、例えばラクトバチラス・ガセリ、ラクトバチラス・カゼイ、ロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシズ・メセンテロイデスが挙げられる。なお、乳酸菌は、腸内細菌に限られず、β-グルコシダーゼ活性を有するものであれば、いずれも使用できる。
・ノンアルコール飲料(果汁含有飲料、果汁ジュース、野菜ジュース、プラントベースミルク飲料、炭酸飲料、アイソトニック飲料、アミノ酸飲料、スポーツ飲料、コーヒー、カフェオレ、ココア飲料、茶系飲料、乳酸菌飲料、乳飲料、栄養ドリンク、ノンアルコールビール、ノンアルコールチューハイ、ノンアルコールカクテル、ニアウォーター、フレーバーウォーターなど)、アルコール飲料(ビール、発泡酒、リキュール、チューハイ、清酒、ワイン、果実酒、カクテル、蒸留酒など)などの飲料類
・アイスクリーム、アイスキャンディー、シャーベット、かき氷、フラッペ、フローズンヨーグルト、ゼリー、プリン、ババロア、水羊羹などの冷菓類
・水飴、果実のシロップ漬、氷みつ、チョコレートシロップ、カラメルシロップなどのシロップ類
・フラワーペースト、ピーナッツペースト、フルーツペースト、バタークリーム、カスタードクリームなどのペースト類
・マーマレード、フルーツソース、ブルーベリージャム、苺ジャムなどのジャム類
・食パン、ロールパン、ブリオッシュ、蒸しパン、あんパン、クリームパンなどのパン類
・ビスケット、クラッカー、クッキー、ワッフル、マフィン、スポンジケーキ、パイなどの焼菓子類
・シュークリーム、ドーナツ、チョコレート、チューインガム、キャラメル、ヌガー、キャンディなどの洋菓子類
・せんべい、あられ、おこし、求肥、餅類、まんじゅう、大福、ういろう、餡類、錦玉、カステラ、飴玉などの和菓子類
・醤油、魚醤、味噌、ひしお、マヨネーズ、ドレッシング、三杯酢、天つゆ、麺つゆ、ウスターソース、オイスターソース、ケチャップ、焼き鳥のタレ、焼き肉のタレ、漬け込みタレ、甘味料、粉飴、食酢、すし酢、カレールウ、中華の素、シチューの素、スープの素、ダシの素、複合調味料、みりん、新みりん、テーブルソルト、テーブルシュガーなどの各種調味料類
・パスタソース、ミートソース、トマトソース、ホワイトソース、デミグラスソース、カレーソース、ハヤシソース、グレービーソース、ハンバーグソース、サルサソース、ステーキソースなどのソース類
・糠漬け、粕漬け、味噌漬け、福神漬け、べったら漬、奈良漬け、千枚漬、梅干しなどの漬物類
・たくわん漬の素、白菜漬の素、キムチの素などの漬物の素
・ハム、ベーコン、ソーセージ、ハンバーグ、ミートボールなどの畜肉製品類
・魚肉ハム、魚肉ソーセージ、カマボコ、チクワ、干物などの魚肉製品類
・塩ウニ、カラスミ、塩辛、なれずし、酢コンブ、さきするめ、田麩などの各種珍味類
・海苔、山菜、するめ、小魚、貝などで製造される佃煮類
・煮豆、煮魚、ポテトサラダ、コンブ巻などの惣菜食品
・乳製品、魚肉、畜肉、果実、野菜などの瓶詰類や缶詰類
・天ぷら、トンカツ、フリッター、唐揚げ、竜田揚げなどの揚げ物用衣類
・うどん、そば、中華麺、パスタ、春雨、ビーフン、餃子の皮、シューマイの皮などの麺類
・プリンミックス、ホットケーキミックス、即席ジュース、即席コーヒー、即席汁粉、即席スープなどの即席食品類
本発明において、β-GFを日常的に食する飲食品に配合する場合には、β-GFの飲食品における含有量(固形分換算)は、例えば、その下限値(以上又は超える)は0.5質量%、1質量%、1.5質量%とすることができ、その上限値(以下又は未満)は35質量%、30質量%、25質量%とすることができる。これらの下限値および上限値はそれぞれ任意に組み合わせることができ、日常的に食する食品におけるβ-GFの含有量(固形分換算)の範囲は、例えば、0.5~35質量%、1~30質量%、1.5~25質量%とすることができる。
本発明が適用される配糖体としては、β-グルコシダーゼにより糖が脱離し、アグリコンが遊離するものであれば特に制限はないが、ファイトケミカルが結合した配糖体が好ましく採用される。本発明において、ファイトケミカルとは、ヒトの健康に良い影響を与える植物由来化合物を意味し、例えば、ポリフェノール、フラボノイドなどが挙げられる。
ポリフェノールとはベンゼン環に複数の水酸基を持つ化合物を指し、タンニン(加水分解タンニンとしてガロタンニン、エラジタンニン、縮合型タンニンとしてカテキンやエピカテキンの縮合体)、カテキン(カテキン、エピカテキン)、フラボノイド(フラボン、フラボノール、フラバノン、フラバノノール、イソフラボン、カルコン、オーロン、ロイコアントシアニン、カテキン)、リグナン(セサミノール、ピノレジノール)、リグニン、クマリン、シンプルフェノール(プロトカテチュ酸、没食子酸、シリンガ酸)などが挙げられ、抗酸化作用を有することが知られている。本発明のβ-GFを摂取することにより、配糖体の形で存在しているポリフェノールにおけるアグリコンとしてのポリフェノール成分の消化吸収を促進することができる。
(1)β-D-グルコピラノシル-(1→1)-D-フラクトースを含む、グルコースとフラクトースとがβ結合した二糖の製造例
D-グルコース(製品名:無水結晶ブドウ糖、日本食品化工株式会社製)(以下、「グルコース」ともいう。)とD-フルクトース(ナカライテスク株式会社製)(以下、「フルクトース」ともいう。)を1対9比で混合したものをそれぞれ60w/w%となるように超純水に溶解した。0.1Mの水酸化ナトリウムを用いてpH6.6に調整した。60℃下でβ-グルコシダーゼ(東洋紡株式会社製)を1mg/g-ds添加し、24時間保持し、反応させた。
ヒト由来ビフィズス菌12株及び市販ヨーグルト由来ビフィズス菌2株、乳酸菌4株を用いてβ-グルコシダーゼ活性の向上について検討した。本試験で用いたビフィズス菌及び乳酸菌は以下の通りであるが、これらの菌株は、理研BRC、市販ヨーグルト、市販乳酸飲料より入手、分離した。
・ヒト腸内ビフィズス菌(12株)
ビフィドバクテリウム カシワノヘンス(Bifidobacterium kashiwanohense) JCM15439、ビフィドバクテリウム ビフィダム(Bifidobacterium bifidum) JCM1255、ビフィドバクテリウム アングラタム(Bifidobacterium angulatum) JCM7096、ビフィドバクテリウム ロンガム サブスピーシズ インファンティス(Bifidobacterium longum subsp. infantis)JCM1222、ビフィドバクテリウム アニマリス サブスピーシズ ラクティス(Bifidobacterium animalis subsp. lactis) JCM10602、ビフィドバクテリウム シュードカテニュラタム(Bifidobacterium pseudocatenulatum)JCM1200、ビフィドバクテリウム デンチウム(Bifidobacterium dentium)JCM1195、ビフィドバクテリウム ファエケェル(Bifidobacterium faecale) JCM19861、ビフィドバクテリウム ブレーベ(Bifidobacterium breve)JCM1192、ビフィドバクテリウム アドレセンチス(Bifidobacterium adolescentis )JCM1275、ビフィドバクテリウム カテニュラタム サブスピーシズ カテニュラタム(Bifidobacterium catenulatum subsp. catenulatum)JCM1194、ビフィドバクテリウム ロンガム サブスピーシズ ロンガム(Bifidobacterium longum subsp. longum) JCM1217
・市販ヨーグルトから分離したビフィズス菌(2株)
ビフィドバクテリウム ロンガム(Bifidobacterium longum SBT2928(雪印メグミルク社「ナチュレ恵」から単離))、ビフィドバクテリウム アニマリス サブスピーシズ ラクティス(Bifidobacterium animalis subsp. lactis GCL2505(江崎グリコ社「BifiX」から単離))
・市販ヨーグルトから分離した乳酸菌(4株)
ラクトバチルス ラムノーサス(Lactobacillus rhamnosus GG(タカナシ乳業社「おなかへGG!」から単離))、ラクトバチルス デルブリッキ サブスピーシズ デルブリッキ(Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii TUA4408L(マルサンアイ社「豆乳グルト」から単離))、ラクチカゼイバチルス パラカゼイ(Lacticaseibacillus paracasei shirota(ヤクルト社「ヤクルト1000」から単離))、ラクトバチルス デルブリッキ サブスピーシズ ブルガリカス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus 2038(明治乳業「ブルガリアヨーグルト」から単離))
まず、ビフィズス菌の前培養培地調製のため、所定量のGAMブイヨン(日水製薬)を10mL試験管に3mLずつ分注し、121℃、20分間オートクレーブ処理した。冷却後、予めGAM寒天培地で培養していた上記ビフィズス菌のコロニーをイノキュレーティングループ(サーモフィッシャーサイエンス)を用いて植菌した。
下記表3にビフィズス菌の結果、表4に乳酸菌の結果を示す。表3、4からビフィズス菌及び乳酸菌の多くはβ-D-グルコピラノシル-(1→1)-D-フラクトースを含むβ-GFを添加した培地で生育するとβ-グルコシダーゼ活性が向上することが明らかになった。特に、Bifidobacterium animalis subsp. lactis JCM10602やBifidobacterium faecale JCM19861の活性向上率は3000以上であり、非常に高い活性向上率を示した。活性向上したビフィズス菌や乳酸菌については、ゲノム上β-グルコシダーゼがアノテーションされていることも判明したため、β-D-グルコピラノシル-(1→1)-D-フラクトースを含むβ-GFは、β-グルコシダーゼ活性を保有するビフィズス菌及び市販ヨーグルトから分離した乳酸菌に対し、β-グルコシダーゼ活性を向上させることができることが示唆された。
ビフィドバクテリウム アニマリス サブスピーシズ ラクティス(Bifidobacterium animalis subsp. lactis) JCM10602、ビフィドバクテリウム ファエケェル(Bifidobacterium faecale) JCM19861、ビフィドバクテリウム アングラタム(Bifidobacterium angulatum) JCM7096を供試菌株とし、実施例1の(2)のビフィズス菌の培養上清液の調製方法と同様の方法を用いて、炭素源としてβ-D-グルコピラノシル-(1→1)-D-フラクトースを含むβ-GF(最終濃度が1.0%(v/v))を用いた培養上清液(β-GF区)と対照区として炭素源を加えない培養上清液(無添加区)を調製した。次いで、96ウェルPCRプレートにグリシチン(富士フイルム和光純薬工業)7.0mg/100mLを50μL、50mM酢酸緩衝液(pH6.0)を100μL、培養上清液を50μL、プロクリン950(シグマ社)1.0mL/100mLを2μL混合し、40℃で48時間反応した。反応0時間、及び反応48時間の反応液を回収後、95℃で5分間加熱し、酵素失活を行った。続いて、回収した反応液中の遊離グルコース量をグルコースCII-テストワコー(富士フイルム和光純薬工業)を用いて定量し、反応48時間目の遊離グルコース量と反応0時間目の遊離グルコース量を差し引くことで反応48時間目で遊離した真のグルコース量を算出した。また、β-D-グルコピラノシル-(1→1)-D-フラクトースを含むβ-GFを加えた培養液の試験区と無添加の培養液の対照区の遊離グルコース量を比較することで、β-グルコシダーゼ活性が向上したビフィズス菌培養液による大豆イソフラボンの配糖体であるグリシチンからのグルコース加水分解との関係性を観察した。
下記図6に結果を示す。図6から供試菌株として用いたビフィドバクテリウム アニマリス サブスピーシズ ラクティス(Bifidobacterium animalis subsp. lactis)JCM10602、ビフィドバクテリウム ファエケェル(Bifidobacterium faecale) JCM19861、ビフィドバクテリウム アングラタム(Bifidobacterium angulatum) JCM7096の何れの菌株も、β-D-グルコピラノシル-(1→1)-D-フラクトースを含むβ-GFを添加し培養した培養上清液を用いた場合、無添加区と比較してグリシチンからの遊離グルコース量が多い結果となった。つまり、β-D-グルコピラノシル-(1→1)-D-フラクトースを含むβ-GFはビフィズス菌のβ-グルコシダーゼ活性を向上させ、配糖体からのグルコースを遊離、ひいてはアグリコンを遊離することが明らかとなった。
(1)腸内細菌によるβ-グルコシダーゼ活性向上確認試験方法
実施例1の(1)と同様にβ-D-グルコピラノシル-(1→1)-D-フラクトースを含むグルコースとフラクトースとがβ結合した二糖を調製した。
結果は、表7,8に示される通りであった。なお、表7,8において、β-D-グルコピラノシル-(1→1)-D-フラクトースを含むグルコースとフラクトースとがβ結合した二糖は「β-GF」と示す。
Claims (10)
- グルコースとフラクトースとがβ結合した二糖を有効成分として含有することを特徴とするβ-グルコシダーゼ活性を有する細菌のβ-グルコシダーゼ活性向上剤。
- 前記細菌は、ビフィズス菌、乳酸菌、及び腸内細菌に属する細菌から選ばれた少なくとも1種である、請求項1記載のβ-グルコシダーゼ活性向上剤。
- β-グルコシダーゼ活性を有する細菌に、グルコースとフラクトースとがβ結合した二糖を付与して、β-グルコシダーゼを生成させ、該β-グルコシダーゼを配糖体に作用させて、アグリコンを遊離させることを特徴とするアグリコン含有組成物の製造方法。
- 前記細菌は、ビフィズス菌、乳酸菌、及び腸内細菌に属する細菌から選ばれた少なくとも1種である、請求項3記載のアグリコン含有組成物の製造方法。
- 前記アグリコンがファイトケミカルである、請求項3又は4記載のアグリコン含有組成物の製造方法。
- グルコースとフラクトースとがβ結合した二糖を有効成分として含有することを特徴とする配糖体中のアグリコンの吸収促進剤。
- 前記アグリコンがファイトケミカルである、請求項6記載のアグリコンの吸収促進剤。
- グルコースとフラクトースとがβ結合した二糖と、β-グルコシダーゼ活性を有する細菌、及び配糖体の少なくとも1種とを含有することを特徴とする飲食品。
- 前記細菌は、ビフィズス菌、乳酸菌、及び腸内細菌に属する細菌から選ばれた少なくとも1種である、請求項8記載の飲食品。
- 前記配糖体が、アグリコンとしてファイトケミカルが結合したものである、請求項8又は9記載の飲食品。
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