JP2023134561A

JP2023134561A - 調節卵巣刺激のための組成物

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Publication number: JP2023134561A
Application number: JP2023110411A
Authority: JP
Inventors: アルク，ジョーン－カールズ; Arce Joan-Carles
Original assignee: Ferring BV
Current assignee: Ferring BV
Priority date: 2011-08-08
Filing date: 2023-07-05
Publication date: 2023-09-27
Also published as: HRP20230607T1; EP2741763B1; IL300380A; IL230696A0; RU2014102924A; EP4306174A2; EP3566712A1; CY1117214T1; KR20190100449A; KR102111514B1; HUE040058T2; JP2017141253A; CN103732243A; RU2613324C3; JP6161609B2; PL3395357T3; TW201309322A; PL3646881T3; ZA201400952B; HUE062640T2

Abstract

【課題】不妊症治療における使用のためのＦＳＨ、例えば組換えＦＳＨを含む調製物を提供する。【解決手段】患者（例えば、０．０５ｐｍｏｌ／Ｌ以上の血清ＡＭＨレベルを有する患者）の不妊症治療における使用のためのＦＳＨを含む製品であって、２～２４μｇ、例えば２から１５μｇのヒト由来組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の用量または等量を含む製品とする。【選択図】図８

Description

本発明は、不妊症治療のための組成物および医薬品に関する。

体外受精（ＩＶＦ）などの補助生殖医療（ＡＲＴ）技術は、十分周知である。これらの
ＡＲＴ技術は、調節卵巣刺激（ＣＯＳ）のステップを一般に必要とし、卵胞コホートは、
完全に成熟するまで刺激される。標準的なＣＯＳレジメンは、通常早発性ＬＨサージを防
ぐために刺激前および／または刺激中でのＧｎＲＨ類似物の投与を伴って卵胞発育を刺激
するために、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）単独で、または黄体ホルモン（ＬＨ）活性との
組合せでなどのゴナドトロフィンの投与を含む。一般にＣＯＳに用いられる医薬組成物は
、組換え卵胞刺激ホルモン（ｒＦＳＨ）、尿由来ＦＳＨ、組換えＦＳＨ＋ＬＨ調製物、尿
由来メノトロフィン［ヒト閉経期ゴナドトロフィン（ｈＭＧ）］および高精製ヒト閉経期
ゴナドトロフィン（ＨＰ－ｈＭＧ）を含む。ＩＶＦは、重症例では生命を脅かす可能性も
ある卵巣過剰刺激症候群（ＯＨＳＳ）の危険性を伴う場合がある。

調節卵巣刺激（ＣＯＳ）への女性の応答可能性を予測する能力は、個別化されたＣＯＳ
プロトコールの開発を可能にする。これは、例えば刺激に対する過剰な応答を有すると予
測される女性においてＯＨＳＳの危険性を低減するおよび／または応答に乏しいと分類さ
れた女性における妊娠結果を改善する。抗ミュラー管ホルモン（ＡＭＨ）の血清濃度は、
卵巣予備能の信頼できるマーカーとして現在確立されている。ＡＭＨのレベルの低下は、
ＣＯＳ中のゴナドトロフィンへの卵巣応答の低下と関連している。さらに、高レベルのＡ
ＭＨは、過剰卵巣応答の良好な予測因子であり、ＯＨＳＳの危険性の指標である。

ＡＲＴを受けている３５歳未満の女性での予備研究では、ＣＯＮＳＯＲＴ投与アルゴリ
ズム（基礎ＦＳＨ、ＢＭＩ、年齢およびＡＦＣを組み込む）がＯＨＳＳを発症する危険性
がある女性におけるＣＯＳのための最適なＦＳＨ開始用量を予測するために用いられた（
Ｏｌｉｖｅｎｎｅｓら、２００９）。投与の個別化は、十分な卵母細胞収量および良好な
妊娠率をもたらした。しかし、低用量群（７５ＩＵＦＳＨ）では、不十分な応答による
高い率での中止があり、かなりの割合の患者においてＯＨＳＳが生じた。

したがって、刺激に対する十分な応答および／またはＯＨＳＳの危険性の低下を提供す
る個別化されたＣＯＳプロトコールにおける使用のための組成物が必要である。

上記のとおり、標準的ＣＯＳプロトコールは、ＦＳＨの投与を含みうる。ＦＳＨは、天
然では脳下垂体前葉から分泌され、卵胞発育および排卵を維持するように機能する。ＦＳ
Ｈは、他の糖タンパク質ホルモンＬＨおよびＣＧにも共通する９２アミノ酸アルファサブ
ユニット、ならびにホルモンの生物学的特異性を付与するＦＳＨに特有の１１１アミノ酸
ベータサブユニットを含む（ＰｉｅｒｃｅおよびＰａｒｓｏｎｓ、１９８１）。各サブユ
ニットは、複合炭水化物残基の付加によって翻訳後修飾される。両サブユニットは、アル
ファサブユニットのアミノ酸５２および７８ならびにベータサブユニットのアミノ酸残基
７および２４に２箇所のＮ－結合グリカン付着を保有する（ＲａｔｈｎａｍおよびＳａｘ
ｅｎａ、１９７５、ＳａｘｅｎａおよびＲａｔｈｎａｍ、１９７６）。したがってＦＳＨ
は、質量で約３０％グリコシル化されている（ＤｉａｓおよびＶａｎＲｏｅｙ．２００
１．Ｆｏｘら、２００１）。

閉経後のヒト尿から精製されるＦＳＨは、不妊症治療：自然生殖においては排卵を促進
するため、および生殖補助医療では卵母細胞を提供するための両方で、長年用いられてき
た。卵巣刺激のための現在認可されている組換えＦＳＨ（ｒＦＳＨ）生成物、フォリトロ
ピンアルファ（ＧＯＮＡＬ－Ｆ、ＭｅｒｃｋＳｅｒｏｎｏ／ＥＭＤＳｅｒｏｎｏ）お
よびフォリトロピンベータ（ＰＵＲＥＧＯＮ／ＦＯＬＬＩＳＴＩＭ、ＭＳＤ／Ｓｃｈｅｒ
ｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ）などは、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株由来であ
る。現在、商業的に入手可能であるヒト細胞株からのｒＦＳＨ生成物はない。

種々のアイソフォームの存在量における差異に関するＦＳＨ調製物に関連する相当な不
均一性がある。個々のＦＳＨアイソフォームは、同一のアミノ酸配列を示すが、翻訳後修
飾された程度が異なる：具体的なアイソフォームは炭水化物分枝構造の不均一性およびシ
アル酸（末端糖）組み込み量の差異によって特徴付けられ、両者が特定のアイソフォーム
生物活性に影響を与えると考えられる。

天然ＦＳＨのグリコシル化は、高度に複雑である。天然に由来する下垂体ＦＳＨ中のグ
リカンは、モノ－、バイ－、トリ－およびテトラ－アンテナグリカンの組合せを含む場合
がある、広範な構造を含有する場合がある（ＰｉｅｒｃｅｏおよびＰａｒｓｏｎｓ、１９
８１．Ｒｙａｎら、１９８７．ＢａｅｎｚｉｇｅｒおよびＧｒｅｅｎ、１９８８）。グリ
カンはさらなる修飾も保有できる：コアフコシル化（ｃｏｒｅｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏ
ｎ）、バイセクティンググルコサミン（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ）
、アセチルラクトサミンでの鎖伸長、部分的なまたは完全なシアリル化、α２，３および
α２，６結合でのシアリル化ならびに硫酸化ガラクトサミンでのガラクトースの置換（Ｄ
ａｌｐａｔｈａｄｏら、２００６）。さらに、個々のグリコシル化部位でグリカン構造の
分布間に差異がある。個体の血清由来のＦＳＨと閉経後女性の尿由来のＦＳＨとにおいて
同レベルのグリカン複雑性が見出されている（Ｗｉｄｅら、２００７）。

組換えＦＳＨ生成物のグリコシル化は、宿主細胞株に存在するグリコシルトランスフェ
ラーゼの範囲を反映する。商業的に入手可能なｒＦＳＨ生成物は、工学的に操作されたチ
ャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）由来である。ＣＨＯ細胞由来ｒＦＳＨにお
けるグリカン修飾の範囲は、天然生成物において見出されるものよりも限定されている。
ＣＨＯ細胞由来ｒＦＳＨにおいて見出される還元グリカン不均一性の例は、バイセクティ
ンググルコサミンの欠失ならびに、コアフコシル化およびアセチルラクトサミン伸長の含
有量の低減を含む（Ｈａｒｄら、１９９０）。追加的にＣＨＯ細胞は、α２，３結合を用
いてシアル酸を付加できるだけである（Ｋａｇａｗａら、１９８８、Ｔａｋｅｕｃｈｉら
、１９８８、Ｓｖｅｎｓｓｏｎら、１９９０）；ＣＨＯ細胞由来ｒＦＳＨは、α２，３－
結合シアル酸だけを含み、α２，６－結合シアル酸を含まない。

したがってＣＨＯ細胞由来ＦＳＨは、α２，３およびα２，６－結合シアル酸の混合物
を前者が優位で含むグリカンを含有する天然で生成されるＦＳＨ（例えば、ヒト下垂体／
血清／尿ＦＳＨ）とは異なる。

さらに、商業的に入手可能な組換えＦＳＨ調製物は、下垂体、血清または閉経後尿のＦ
ＳＨと比較して４未満（酸性アイソフォームと考えられる）の等電点（ｐＩ）を有するＦ
ＳＨの量において異なることも実証されている。（Ｕｌｌｏａ－Ａｇｕｉｒｒｅら、１９
９５）。尿調製物中の酸性アイソフォームの量は、ＣＨＯ細胞由来組換え生成物、Ｇｏｎ
ａｌ－ｆ（ＭｅｒｃｋＳｅｒｏｎｏ）およびＰｕｒｅｇｏｎ（ＳｃｈｅｒｉｎｇＰｌ
ｏｕｇｈ）と比較してより多かった（Ａｎｄｅｒｓｅｎら、２００４）。これは、硫酸で
修飾された陰性に荷電したグリカン含有量が組換えＦＳＨにおいて少ないことから、組換
えＦＳＨにおけるシアル酸の低モル含有量を反映しているはずである。天然ＦＳＨと比較
して低いシアル酸含有量は、両方の商業的に入手可能な組換えＦＳＨ生成物の特質であり
、製造工程における制限を反映している可能性がある。

ＦＳＨの循環寿命は、種々の供給源由来の材料について記録されてきた。これらの材料
のいくつかは、それらのｐＩによって特徴付けられる（より多い酸はより高い陰性電荷と
等しい）分子全体の電荷に基づいて分画されている。既に述べたとおり、分子全体の電荷
への主な寄与要因は、各ＦＳＨ分子の総シアル酸含有量である。例えばｒＦＳＨ（Ｏｒｇ
ａｎｏｎ）は約８ｍｏｌ／ｍｏｌのシアル酸含有量を有する一方で、尿由来ＦＳＨはより
高いシアル酸含有量を有する（ｄｅＬｅｅｕｗら、１９９６）。ラットでの対応する血
漿クリアランス率は、０．３４および０．１４ｍｌ／分である（Ｕｌｌｏａ－Ａｇｕｉｒ
ｒｅら、２００３）。組換えＦＳＨの試料が高ｐＩおよび低ｐＩ画分に分けられた別の例
では、高ｐＩ（低シアル酸含有量）画分のｉｎｖｉｖｏ効力は低下しており、より短い
血漿半減期を有した（Ｄ’Ａｎｔｏｎｉｏら、１９９９）。排卵周期の後期により塩基性
のＦＳＨが循環することは、エストラジオールのレベルの上昇によって生じる下垂体前葉
におけるα２，３シアリルトランスフェラーゼの下方制御のためであることも報告されて
いる（Ｄａｍｉａｎ－Ｍａｔｓｕｍａｒａら、１９９９、Ｕｌｌｏａ－Ａｇｕｉｒｒｅら
、２００１）。α２，６シアリルトランスフェラーゼについての結果は、報告されていな
い。

したがって上に記載のとおり、ＣＨＯ系を用いて発現された組換えタンパク質は、末端
シアル酸結合の種類においてそれらの天然対応物とは異なる。炭水化物成分が分子の薬学
的特質に寄与する場合があることから、これは医薬用使用のための生物製剤の生成におけ
る重要な検討事項である。

本出願人らは、国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ２００９／０００９７８号、ＷＯ２００９
／１２７８２６Ａとして公開の対象であるヒト由来組換えＦＳＨを開発した。α２，３お
よびα２，６－結合シアル酸の両方の混合物を含む組換えＦＳＨは、ヒト細胞株をｒＦＳ
Ｈおよびα２，３シアリルトランスフェラーゼの両方を発現するように工学的に操作する
ことによって作られた。発現された生成物は、高度に酸性であり、α２，３－およびα２
，６－結合シアル酸の両方の混合物を保有し、後者は内在性シアリルトランスフェラーゼ
活性によって提供される。シアル酸結合の種類、α２，３－またはα２，６－は、ＦＳＨ
の生物学的クリアランスに劇的な影響を有する場合があることが見出された。α２，３お
よびα２，６－結合シアル酸の両方の混合物を含む組換えＦＳＨは、従来のＣＨＯ細胞に
おいて発現されたｒＦＳＨを超える２つの有利点を有する：１つは、２種のシアリルトラ
ンスフェラーゼの活性組合せにより、材料がより高度にシアリル化されることであり；２
つめは材料が天然ＦＳＨにより類似することである。α２，３結合シアル酸だけを生成す
るＣＨＯ細胞由来組換え生成物と比較してより生物学的に適切になる可能性があり（Ｋａ
ｇａｗａら、１９８８、Ｔａｋｅｕｃｈｉら、１９８８、Ｓｖｅｎｓｓｏｎら、１９９０
）、低下したシアル酸含有量を有する（Ｕｌｌｏａ－Ａｇｕｉｒｒｅら、１９９５、Ａｎ
ｄｅｒｓｅｎら、２００４）。

国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ２００９／０００９７８号に開示のｒＦＳＨ産物は、分枝
グリカン成分を含有する。ＦＳＨは、（ＦＳＨ糖タンパク質に付着した）グリカンを含み
これらのグリカンは多種多様な構造を含有する場合がある。当技術分野において十分周知
のとおり（グリカンの）分枝は、グリカンが１、２、３、４以上の末端糖残基または「ア
ンテナ」を有しうる結果で生じる場合があり、１、２、３もしくは４個の末端糖残基また
は「アンテナ」を有するグリカンはそれぞれモノ－アンテナ、ジ－アンテナ、トリ－アン
テナまたはテトラ－アンテナ構造と称される。グリカンは、モノ－アンテナおよび／また
はジ－アンテナおよび／またはトリ－アンテナおよび／またはテトラ－アンテナ構造にシ
アリル化の存在を有しうる。国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ２００９／０００９７８号に開
示のｒＦＳＨ例は、モノ－シアリル化、ジ－シアリル化、トリ－シアリル化およびテトラ
－シアリル化グリカン構造を以下の相対量：９～１５％モノ－シアリル化；２７～３０％
ジ－シアリル化；３０～３６％トリ－シアリル化および２５～２９％テトラ－シアリル化
で含む。十分周知のとおり、モノ－シアリル化グリカン構造はシアル酸残基１個を保有す
る：ジ－シアリル化グリカン構造はシアル酸残基２個を保有する；トリ－シアリル化グリ
カン構造はシアル酸残基３個を保有する；テトラ－シアリル化グリカン構造はシアル酸残
基４個を保有する。本明細書において、用語「Ｘ％モノ－シアリル化」、「Ｘ％ジ－シア
リル化」、「Ｘ％トリ－シアリル化」または「Ｘ％テトラ－シアリル化」などは（それぞ
れ）モノ－、ジ、トリまたはテトラシアリル化されたＦＳＨ上のグリカン構造の数を意味
し、任意の方法でシアリル化される（シアル酸を保有する）ＦＳＨ上のグリカン構造の総
数の百分率（Ｘ％）として表される。したがって、句「３０～３６％トリ－シアリル化グ
リカン構造」は、シアル酸残基を保有する（すなわち、シアリル化された）ＦＳＨ上のグ
リカン構造の総数のうち、これらのグリカン構造の３０～３６％がトリシアリル化されて
いる（シアル酸残基３個を保有する）ことを意味する。本出願人らは、特定の量のテトラ
－シアリル化グリカン構造（上に記載の第ＰＣＴ／ＧＢ２００９／０００９７８号に開示
のｒＦＳＨ生成物例のものとは異なる）を有するＦＳＨが現在市販されている組換えＦＳ
Ｈ生成物よりも著しく有効であることを驚くべきことに発見した。本出願人らの生成物の
アミノ酸配列は天然配列であり、天然ヒトＦＳＨおよび既存のＣＨＯ－由来ｒＦＳＨ生成
物と同一である。しかし本出願人らは、α２，３およびα２，６－結合シアル酸の両方の
混合物および／またはテトラ－シアリル化グリカン構造の特定の量を有する、ヒト由来組
換えＦＳＨ生成物（すなわち、ヒト細胞株において生成または発現された、例えばヒト細
胞株を工学的に操作することによって作られた組換えＦＳＨ）が、（例えば、個別化され
た）ＣＯＳプロトコールにおいて利用される場合に特に有効である場合があることを見出
した。

第一の態様における本発明によれば、１～２４μｇ、例えば２～２４μｇ、例えば２か
ら１５μｇのヒト由来組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の用量または等量を含む、患者
（例えば、０．０５ｐｍｏｌ／Ｌ以上、例えば０．５ｐｍｏｌ／Ｌ以上の血清ＡＭＨレベ
ルを有する患者）における不妊症治療での使用のためのＦＳＨを含む生成物（例えば医薬
組成物）が提供される。好ましくは、生成物は４．５から１２．５μｇ、例えば５から１
２．５μｇ、例えば６から１２．５μｇ、例えば６．３から１０．５μｇのヒト由来組換
えＦＳＨの用量または等量を含む。

本発明によれば、９～１４μｇ、例えば１１～１３μｇ、例えば１２μｇのヒト由来組
換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の（例えば、一日）用量または等量を含む、＜１５ｐｍ
ｏｌ／Ｌ（例えば、０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）の血清ＡＭＨレベ
ルを有する患者における不妊症治療での使用のためのＦＳＨを含む生成物（例えば医薬組
成物）が提供される。好ましくは、ＦＳＨは、組換えＦＳＨ（「ｒＦＳＨ」または「ｒｅ
ｃＦＳＨ」）である。好ましくは、ＦＳＨは、ヒト細胞株由来組換えＦＳＨである。用量
は、ＯＨＳＳの危険性を最小化しながら有効な応答を提供する。好ましくは、不妊症治療
は、患者の血清ＡＭＨレベルを判定するステップ（例えば、測定するステップ）、および
＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば、０．０５ｐｍｏｌ／Ｌ～１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）の血清Ａ
ＭＨレベルを有する患者に用量を投与するステップを含む。

さらなる態様における本発明によれば、５から１２．５μｇ、例えば６から１０．５μ
ｇのヒト由来組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の（例えば、一日）用量または等量を含
む、≧１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者における不妊症治療での使用の
ためのＦＳＨを含む生成物（例えば、医薬組成物）が提供される。好ましくは、ＦＳＨは
、組換えＦＳＨ（「ｒＦＳＨ」または「ｒｅｃＦＳＨ」）である。好ましくは、ＦＳＨは
、ヒト細胞株由来組換えＦＳＨである。用量はＯＨＳＳの危険性を最小化しながら有効な
応答を提供する。好ましくは、不妊症治療は、患者の血清ＡＭＨレベルを判定するステッ
プ（例えば、測定するステップ）、および≧１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有す
る患者に用量を投与するステップを含む。一実施形態では、生成物は、１５から２４．９
ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者における不妊症治療での使用のためであり
、生成物は５から１２μｇ、例えば７から１２μｇ、例えば８．７から１０μｇのヒト由
来組換えＦＳＨ（好ましくは９から１０μｇのヒト由来組換えＦＳＨ）の（例えば、一日
）用量または等量での投与用である。本実施形態では、不妊症治療は、患者の血清ＡＭＨ
レベルを判定するステップ（例えば、測定するステップ）、および１５～２４．９ｐｍｏ
ｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者に用量を投与するステップを含みうる。別の実施
形態では、生成物は、２５から３４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者に
おける不妊症治療での使用のためであり、生成物は５から１２μｇ、例えば６から９μｇ
、例えば７から８μｇのヒト由来組換えＦＳＨ（好ましくは７．３から８μｇのヒト由来
組換えＦＳＨ）の（例えば、一日）用量または等量での投与用である。本実施形態では、
不妊症治療は、患者の血清ＡＭＨレベルを判定するステップ（例えば、測定するステップ
）、および２５から３４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者に用量を投与
するステップを含みうる。別の実施形態では、生成物は、≧３５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭ
Ｈレベルを有する患者における不妊症治療での使用のためであり、生成物は５から１１μ
ｇ、例えば６．３から７μｇのヒト由来組換えＦＳＨ（好ましくは６から７μｇのヒト由
来組換えＦＳＨ）の（例えば、一日）用量または等量での投与用である。本実施形態では
、不妊症治療は、患者の血清ＡＭＨレベルを判定するステップ（例えば、測定するステッ
プ）、および≧３５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者に用量を投与するステ
ップを含みうる。

上記の用量は、患者の（対象の）初回刺激プロトコールでの不妊症治療のためでありう
る。さらなる刺激サイクルについて、初回サイクルでの実際の卵巣応答に応じて用量が調
整されうることは理解される。

本出願人らは、移植のための高品質卵母細胞２個の選択を可能にするために、９個の卵
母細胞領域の採取が一般に必要であることを見出した。

本出願人らは、低ＡＭＨ（１ＬあたりＡＭＨ＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ）を有する対象につい
て、これを達成するために適度に高い用量の組換えＦＳＨが必要である（例えば、１２μ
ｇ）ことを見出した。この用量では、８から１４個の卵母細胞が低ＡＭＨを有する対象の
６０％から採取される。これは、１５０ＩＵＧｏｎａｌ－ｆで治療される低ＡＭＨを有
する対象の治療（対象の３３％だけから８から１４個の卵母細胞が採取される）における
予測外で顕著な改善である。本出願人らは、患者の体重に応じてこの用量を調整する必要
がないことを見出した。

しかし集団の６０％（および不妊症を治療する３０歳未満の女性の８０％）は、高ＡＭ
Ｈ（すなわち、ＡＭＨ≧１５ｐｍｏｌ／Ｌ）を有する。これらの対象について、平均９か
ら１１個の卵母細胞を採取することは一般にかなり簡単であり；刺激プロトコールに伴う
問題はＯＨＳＳの危険性である。本出願人らは、低用量のヒト組換えＦＳＨを投与される
患者において、採取される卵母細胞と対象の体重との間に関連があることを見出した。こ
れは、ＦＳＨの一定用量（当技術分野において通例である）での治療に関連する危険性が
ある可能性を意味する。本出願人らは、周知の治療プロトコールと比較して受容可能であ
るまたは改善された卵母細胞の採取を伴う、改善された安全性プロファイル（ＯＨＳＳの
リスクの低下）を提供するＦＳＨの用量とＡＭＨレベルと対象の体重との間の関係を確立
した（実施例１０を参照されたい）。

さらなる態様における本発明によれば、患者の体重１ｋｇあたり０．０９から０．１９
μｇ（例えば、０．０９から０．１７μｇ）のヒト由来組換えＦＳＨの（例えば、一日）
用量または等量での投与用である、≧１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者
における不妊症治療での使用のための卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）を含む生成物（例えば
、医薬組成物）が提供される。好ましくは、不妊症治療は、患者の血清ＡＭＨレベルを判
定するステップ（例えば、測定するステップ）、および≧１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨ
レベルを有する患者に用量を投与するステップを含む。一実施形態では、生成物は、１５
から２４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者における不妊症治療での使用
のためであり、生成物は、患者の体重１ｋｇあたり０．１４から０．１９μｇのヒト由来
組換えＦＳＨ（好ましくは０．１５から０．１６μｇのヒト由来組換えＦＳＨ）の（例え
ば、一日）用量または等量での投与用である。本実施形態では、不妊症治療は、患者の血
清ＡＭＨレベルを判定するステップ（例えば、測定するステップ）、および１５から２４
．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者に用量を投与するステップを含みうる
。別の実施形態では、生成物は、２５から３４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有
する患者における不妊症治療での使用のためであり、生成物は、患者の体重１ｋｇあたり
０．１１から０．１４μｇのヒト由来組換えＦＳＨ（好ましくは０．１２から０．１３μ
ｇのヒト由来組換えＦＳＨ）の（例えば、一日）用量または等量での投与用である。本実
施形態では、不妊症治療は、患者の血清ＡＭＨレベルを判定するステップ（例えば、測定
するステップ）、および２５から３４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者
に用量を投与するステップを含みうる。さらなる実施形態では、生成物は、≧３５ｐｍｏ
ｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者における不妊症治療での使用のためであり、生成
物は患者の体重１ｋｇあたり０．１０～０．１１μｇのヒト由来組換えＦＳＨの（例えば
、一日）用量または等量での投与用である。本実施形態では、不妊症治療は、患者の血清
ＡＭＨレベルを判定するステップ（例えば、測定するステップ）、および≧３５ｐｍｏｌ
／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者に用量を投与するステップを含みうる。好ましくは
、ＦＳＨは、組換えＦＳＨ（「ｒＦＳＨ」または「ｒｅｃＦＳＨ」）である。好ましくは
、ＦＳＨは、ヒト細胞株由来組換えＦＳＨである。用量は、ＯＨＳＳの危険性を最小化し
ながら有効な応答を提供する。

上記用量は、初回刺激プロトコールでの患者の（対象の）不妊症治療のためであってよ
い。さらなる刺激サイクルについて、初回サイクルでの実際の卵巣応答に応じて用量が調
整されうることは理解される。

さらなる態様における本発明によれば、患者の体重１ｋｇあたり０．１５から０．２１
μｇ（例えば、０．１９から０．２１μｇ）のヒト由来組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ
）の（例えば、一日）用量または等量での投与用である、＜１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭ
Ｈレベルを有する患者における不妊症治療での使用のためのＦＳＨを含む生成物（例えば
、医薬組成物）が提供される。好ましくは、不妊症治療は、患者の血清ＡＭＨレベルを判
定するステップ（例えば、測定するステップ）、および＜１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨ
レベルを有する患者に用量を投与するステップを含む。しかし、＜１５ｐｍｏｌ／Ｌの血
清ＡＭＨレベルを有する患者が体重によって投与される必要はない。これらの用量が、当
技術分野において十分周知の換算を用いて患者を彼らのＢＭＩに応じた用量で治療するた
めに容易に換算されることは理解される。

生成物（例えば医薬組成物）は、５．０～１４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨを有する
患者における不妊症治療での使用のためであってよく、生成物は６から１８μｇ、例えば
８から１１μｇ、例えば８．５から１０．２μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量または等
量を含む。生成物は、１５．０～２９．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨを有する患者におけ
る不妊症治療での使用のためであってよく、生成物は４．８から１５μｇ、例えば６から
９μｇ、例えば６．８から８．５μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量を含む。
生成物は、３０～４４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨを有する患者における不妊症治療で
の使用のためであってよく、生成物は３．６から１２μｇ、例えば４から７μｇ、例えば
５．１から６．８μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量を含む。生成物は、４５
ｐｍｏｌ／Ｌ以上の血清ＡＭＨを有する患者における不妊症治療での使用のためであって
よく、生成物は２から９μｇ、例えば２．４から９μｇ（例えば、３．４から５．１μｇ
）または２から５μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量を含む。生成物は、５ｐ
ｍｏｌ／Ｌ以下の血清ＡＭＨを有する患者における不妊症治療での使用のための卵胞刺激
ホルモン（ＦＳＨ）を含むことができ、生成物は７．２から２４μｇ、例えば１０から１
５μｇ、例えば１０．２から１３．６μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量を含
む。生成物は、患者における不妊症治療での使用のためであってよく、生成物は４．８か
ら１８μｇ、例えば６から１１μｇ、例えば６．８から１０．２μｇのヒト由来組換えＦ
ＳＨの用量または等量を含む。好ましくは、ＦＳＨは、組換えＦＳＨ（「ｒＦＳＨ」また
は「ｒｅｃＦＳＨ」）である。好ましくは、ＦＳＨはヒト細胞株由来組換えＦＳＨである
。

好ましくは、ｒＦＳＨ（例えばヒト細胞株由来組換えＦＳＨ）は、α２，３－およびα
２，６－シアリル化を含む。本発明による使用のためのＦＳＨ（ｒＦＳＨ）は、総シアリ
ル化の１％から９９％がα２，３－シアリル化であってよい。本発明によるＦＳＨ（ｒＦ
ＳＨ）は、総シアリル化の１％から９９％がα２，６－シアリル化であってよい。好まし
くは、総シアリル化の５０から７０％、例えば６０から６９％、例えば約６５％がα２，
３－シアリル化である。好ましくは、総シアリル化の２５から５０％、例えば３０から５
０％、例えば３１から３８％、例えば約３５％がα２，６－シアリル化である。

好ましくは、ｒＦＳＨ（例えば、ヒト細胞株由来組換えＦＳＨ）は、モノ－、ジ－、ト
リ－およびテトラ－シアリル化グリカン構造を含み、シアリル化グリカン構造の１５～２
４％、例えば１７～２３％はテトラシアリル化グリカン構造である（例えば、下の実施例
に記載の電荷グリカンのＷＡＸ分析によって示されるとおり）。ＦＳＨは（ＦＳＨ糖タン
パク質に付着した）グリカンを含む。ＦＳＨ中のグリカンが多種多様な構造を含有する場
合があることは十分周知である。これらは、モノ、バイ、トリおよびテトラ－アンテナグ
リカンの組合せを含む場合がある。本明細書において用語「シアリル化グリカン構造のＸ
％がテトラシアリル化グリカン構造である」などは、テトラシアリル化された、すなわち
シアル酸残基４個を保有するＦＳＨ上のグリカン構造の数を意味し、任意の方法でシアリ
ル化されている（シアル酸を保有する）ＦＳＨ上のグリカン構造の総数の百分率（Ｘ％）
として表される。したがって句「シアリル化グリカン構造の１５～２４％がテトラシアリ
ル化グリカン構造である」は、シアル酸残基を保有する（すなわち、シアリル化されてい
る）ＦＳＨ上のグリカン構造の総数のうち、これらのグリカン構造の１５から２４％がテ
トラシアリル化されている（シアル酸残基４個を保有する）ことを意味する。

ｒＦＳＨは、単一のアイソフォームとしてまたはアイソフォームの混合物として存在す
る場合がある。

本出願人らは、特定の特徴を有する組換えＦＳＨの特定の用量が、それらの特定のＡＭ
Ｈレベルに基づいて患者を治療するために用いられ、それにより、（例えば、低応答可能
性を有する患者において）刺激に対する十分な応答の見込みが増大し、かつ／または（例
えば、高いもしくは過剰な応答者として分類された患者において）ＯＨＳＳの危険性が低
下する「個別化された」ＣＯＳプロトコールを考案した。

ＡＭＨの血清レベルは、当技術分野において周知の任意の方法によって判定されうる（
例えば、測定されうる）。好ましくは、血清ＡＭＨレベルは、ＡＭＨＧｅｎ－ＩＩｅ
ｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ、ａｋｉｔ（Ｂ
ｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｗｅｂｓｔｅｒ，Ｔｅｘａｓ）を用いて測定
される。このアッセイは、１．１ｐｍｏｌ／Ｌの定量下限を有して０．５７ｐｍｏｌ／Ｌ
を超えるＡＭＨ濃度を検出できる。他のアッセイも用いられうる。

本明細書において、血清ＡＭＨ値は、一般にｐｍｏｌ／Ｌを単位として列挙される。こ
れは、換算式１ｎｇ／ｍｌＡＭＨ＝７．１ｐｍｏｌ／ＬＡＭＨを用いてｎｇ／ｍＬに
換算されうる。

本明細書において、用語「患者」および「対象」は互換的に用いられる。

生成物（例えば、医薬組成物）は、上に、本明細書中におよび特許請求の範囲において
定義されるヒト由来ｒＦＳＨの量の一日用量または一日等量を好ましくは含む。（一日）
用量は、初回量であってよい（すなわち、治療の際に低減、増加または維持されうる）。

生成物（例えば、医薬組成物）は、治療の１日目に開始され、７から１３日間、例えば
９から１３日間、例えば１０から１３日間、例えば１０から１１日間継続されるＦＳＨの
（一日）投与用であってよい。生成物（例えば、医薬組成物）は、ＧｎＲＨアゴニスト（
例えば、Ｓｙｎａｒｅｌ、Ｌｕｐｒｏｎ、Ｄｅｃａｐｅｐｔｙｌ）の投与後（例えば、投
与の開始後、例えば毎日投与の開始後）の１２から１６、例えば１３から１５、例えば１
４日間の投与用であってよい。生成物（例えば、医薬組成物）は、ＧｎＲＨアゴニストを
伴う投与用であってよい。生成物（例えば、医薬組成物）は、ＧｎＲＨアンタゴニスト（
例えば、ｇａｎｉｒｅｌｉｘ、ｃｅｔｒｏｒｅｌｉｘ）の投与前の投与用、例えばＧｎＲ
Ｈアンタゴニストの投与の５または６日前の投与用であってよい。生成物（例えば、医薬
組成物）は、ＧｎＲＨアンタゴニストを伴う投与用であってよい。好ましくは、生成物（
例えば、医薬組成物）は、最終卵胞成熟を誘導するためのｈＣＧの高（排卵性）用量（例
えば、４，０００から１１，０００ＩＵｈＣＧ、例えば５，０００ＩＵｈＣＧ、１０
，０００ＩＵｈＣＧなど；または１５０から３５０マイクログラム組換えｈＣＧ、例え
ば２５０マイクログラム組換えｈＣＧ）の投与前の投与用である。

生成物が、一日一回より多い（または少ない）頻度での投与用であってよく、その場合
、関連用量は本明細書で規定の（一日）用量と等しいことは理解される。

本明細書において用語「不妊症治療」は、調節卵巣刺激（ＣＯＳ）によるまたは調節卵
巣刺激（ＣＯＳ）のステップもしくは段階を含む方法による不妊症治療、例えば子宮内人
工授精（ＩＵＩ）、体外受精（ＩＶＦ）または卵細胞質内精子注入法（ＩＣＳＩ）を含む
。用語「不妊症治療」は、排卵誘発（ＯＩ）によるまたは排卵誘発（ＯＩ）のステップも
しくは段階を含む方法による不妊症治療を含む。用語「不妊症治療」は、卵管のまたは原
因不明の不妊症を有する対象における不妊症治療を含み、子宮内膜症、例えばステージＩ
もしくはステージＩＩ子宮内膜症を有する対象、および／または無排卵性不妊症、例えば
ＷＨＯＩＩ型無排卵性不妊症を有する対象、および／または男性不妊症を有するパート
ナーを有する対象における不妊症治療を含む。生成物（または組成物）は、子宮内膜症を
有する対象、子宮内膜症の種々のステージについてのＴｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃ
ｉｅｔｙｆｏｒＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉｎｅ（ＡＳＲＭ）分類系［
ＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙｆｏｒＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉ
ｎｅ．ＲｅｖｉｓｅｄＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙｆｏｒＲｅｐｒｏｄｕｃ
ｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉｎｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｎｄｏｍｅｔｒ
ｉｏｓｉｓ：１９９６．ＦｅｒｔｉｌＳｔｅｒｉｌ１９９７；６７，８１７８２１
．］（ステージＩＶ最重度；ステージＩ最軽度）によって定義される、例えばステージＩ
またはステージＩＩ子宮内膜症を有する対象における不妊症治療（および／または調節卵
巣刺激）（における使用）用であってよい。

生成物（組成物）は、卵胞期前期における１から１６ＩＵ／Ｌ、例えば１から１２ＩＵ
／Ｌの正常血清ＦＳＨレベルを有する対象における不妊症治療（および／または調節卵巣
刺激のため）（における使用）用であってよい。

生成物（組成物）は、年齢１８から４２歳、例えば２５から３７歳の対象における不妊
症治療（および／または調節卵巣刺激のため）（における使用）用であってよい。生成物
は、ＢＭＩ＞１およびＢＭＩ＜３５ｋｇ／ｍ²を有する対象、例えばＢＭＩ＞１８および
ＢＭＩ＜２５ｋｇ／ｍ²を有する対象、例えばＢＭＩ＞２０およびＢＭＩ＜２５ｋｇ／ｍ²
を有する対象における不妊症治療（および／または調節卵巣刺激のため）（における使用
）用であってよい。

ｒＦＳＨは２７～３３％、例えば３０～３２％のトリシアリル化グリカン構造を好まし
くは含みうる。ｒＦＳＨは２４～３３％、例えば２６～３０％ジシアリル化グリカン構造
を好ましくは含みうる。ｒＦＳＨは１２～２１％、例えば１５～１７％モノシアリル化グ
リカン構造を好ましくは含み得る。ｒＦＳＨはモノシアリル化、ジシアリル化、トリシア
リル化およびテトラシアリル化グリカン構造を以下の相対量：１５から１７％モノシアリ
ル化；２６～３０％ジシアリル化；２７～３３％（例えば２９から３２％、例えば３０～
３２％、例えば３０から３１％）トリ－シアリル化および１７～２３％テトラシアリル化
で好ましくは含む（例えば、実施例において記載される電荷グリカンのＷＡＸ分析によっ
て示されるとおり）。ｒＦＳＨは、０から７％まで、例えば０．１から７％、例えば３か
ら６％、例えば５から６％中性シアリル化構造を含みうる。ＦＳＨは（ＦＳＨ糖タンパク
質に付着している）グリカンを含む。本明細書において、用語「Ｘ％モノ－シアリル化」
、「Ｘ％ジ－シアリル化」、「Ｘ％トリ－シアリル化」または「Ｘ％テトラ－シアリル化
」などは（それぞれ）モノ－、ジ、トリまたはテトラシアリル化されたＦＳＨ上のグリカ
ン構造の数を意味し、任意の方法でシアリル化された（シアル酸を保有する）ＦＳＨ上の
グリカン構造の総数の百分率（Ｘ％）として表される。したがって、句「２７～３３％ト
リ－シアリル化グリカン構造」は、シアル酸残基を保有する（すなわち、シアリル化され
た）ＦＳＨ上のグリカン構造の総数のうち、これらのグリカン構造の２７～３３％がトリ
シアリル化されている（シアル酸残基３個を保有する）ことを意味する。

ｒＦＳＨは、［タンパク質のモルに対するシアル酸のモルの比を単位として表される］
６ｍｏｌ／ｍｏｌ以上、例えば６ｍｏｌ／ｍｏｌから１５ｍｏｌ／ｍｏｌの間、例えば８
ｍｏｌ／ｍｏｌから１４ｍｏｌ／ｍｏｌの間、例えば１０ｍｏｌ／ｍｏｌから１４ｍｏｌ
／ｍｏｌの間、例えば１１ｍｏｌ／ｍｏｌから１４ｍｏｌ／ｍｏｌの間、例えば１２ｍｏ
ｌ／ｍｏｌから１４ｍｏｌ／ｍｏｌの間、例えば１２ｍｏｌ／ｍｏｌから１３ｍｏｌ／ｍ
ｏｌの間のシアル酸含有量を有する場合がある。ｒＦＳＨは、ヒト細胞株において生成ま
たは発現されうる。

本発明による使用のためのＦＳＨ（ｒＦＳＨ）は、総シアリル化の１％から９９％がα
２，３－シアリル化であってよい。ｒＦＳＨは、総シアリル化の１０％以上がα２，３－
シアリル化であってよい。例えば総シアリル化の２０、３０、４０、５０、６０、７０、
８０または９０％以上がα２，３－シアリル化であってよい。ｒＦＳＨは、総シアリル化
の５０から７０％まで、例えば総シアリル化の６０から６９％まで、例えば総シアリル化
の６３から６７％まで、例えば約６５％である量のα２，３－シアリル化を好ましくは含
みうる。本発明による使用のためのＦＳＨ（ｒＦＳＨ）は、総シアリル化の１％から９９
％がα２，６－シアリル化であってよい。本発明のｒＦＳＨ（またはｒＦＳＨ調製物）は
、総シアリル化の５％以上、例えば５％から９９％がα２，６－シアリル化であってよい
。ｒＦＳＨは、総シアリル化の５０％以下がα２，６－シアリル化であってよい。ｒＦＳ
Ｈは、総シアリル化の２５から５０％まで、例えば総シアリル化の３０から５０％まで、
例えば３１から３８％まで、例えば総シアリル化の約３５％の量のα２，６－シアリル化
を好ましくは含みうる。シアリル化は、ＦＳＨ炭水化物構造上に存在するシアル酸残基の
量を意味する。α２，３－シアリル化は、２，３位でのシアリル化を（当技術分野におい
て十分周知のとおり）およびα２，６シアリル化は２，６位で、を意味する（同様に当技
術分野において十分周知である）。したがって「総シアリル化の％がα２，３シアリル化
であってよい」は、２，３位でシアリル化されているＦＳＨに存在するシアル酸残基の総
数の％を意味する。用語「総シアリル化の％がα２，６－シアリル化である」は、２，６
位でシアリル化されているＦＳＨに存在するシアル酸残基の総数の％を意味する。

ｒＦＳＨは、質量で６％以上（例えば６％から１５％の間、例えば７％から１３％の間
、例えば８％から１２％の間、例えば１１％から１５％の間、例えば１２％から１４％の
間）の（タンパク質と炭水化物とをあわせた質量よりも、タンパク質の質量に基づく）シ
アル酸含有量（ＦＳＨ１分子あたりのシアリル化の量）を有しうる。

ｒＦＳＨは、グリカンの１６％以下（例えば、０．１から１６％）がバイセクティング
Ｎ－アセチルグルコサミン（バイセクティングＧｌｃＮＡｃまたはｂｉｓＧｌｃＮＡｃ）
を含む（例えば保有する）ｒＦＳＨまたはｒＦＳＨ調製物であってよい。好ましくは、ｒ
ＦＳＨ（またはｒＦＳＨ調製物）は、グリカンの８から１４．５％がバイセクティングＮ
－アセチルグルコサミン（バイセクティングＧｌｃＮＡｃまたはｂｉｓＧｌｃＮＡｃ）を
含む（例えば保有する）ｒＦＳＨまたはｒＦＳＨ調製物である。

ＦＳＨがＦＳＨ糖タンパク質に付着しているグリカンを含むことは理解される。グリカ
ンの１００％は、ＦＳＨ糖タンパク質に付着している全てのグリカンを称するまたは意味
することは理解される。したがって、本明細書において用語「グリカンの８から１４．５
％がバイセクティングＮ－アセチルグルコサミンを含む（保有する）」は、ＦＳＨ糖タン
パク質に付着しているグリカンの総数の８から１４．５％がバイセクティングＮ－アセチ
ルグルコサミンを含む／保有することを意味し；「グリカンの１６％以下がバイセクティ
ングＮ－アセチルグルコサミンを含む（保有する）」は、ＦＳＨ糖タンパク質に付着して
いるグリカンの総数の１６％以下がバイセクティングＮ－アセチルグルコサミンを含む／
保有する、などを意味する。

本出願人らは、ＦＳＨ糖タンパク質に含まれるグリカンの１６％以下（例えば８～１４
．５％）がバイセクティングＧｌｃＮａｃを保有する組換えＦＳＨ（ｒＦＳＨ調製物；ｒ
ＦＳＨ組成物）は、有利な薬物動態特性を有する場合があることを見出した。有利な特性
は、バイセクティングＧｌｃＮａｃを保有するグリカンの量がヒト尿由来生成物Ｂｒａｖ
ｅｌｌｅにおけるもの（ＷＯ２０１２／０１７０５８において開示のものなどの他の組換
えＦＳＨ調製物のものよりいくぶん少ない）と類似していることから生じうると考えられ
る。

ｒＦＳＨ（またはｒＦＳＨ調製物）は、グリカンの２０％以上がＮ－アセチルガラクト
サミン（ＧａｌＮＡｃ）を含む（例えば保有する）、例えばグリカンの２０％以上が末端
ＧａｌＮＡｃを含む（例えば保有する）ｒＦＳＨまたはｒＦＳＨ調製物であってよい。好
ましくは、ｒＦＳＨ（またはｒＦＳＨ調製物）は、グリカンの４０から５５％、例えば４
２％から５２％がＧａｌＮＡｃを含む（例えば保有する）ＦＳＨまたはＦＳＨ調製物であ
る。好ましくは、ｒＦＳＨ（またはｒＦＳＨ調製物）は、グリカンの４０から５５％、例
えば４２％から５２％が末端ＧａｌＮＡｃを含む（例えば保有する）ＦＳＨまたはＦＳＨ
調製物である。

ＦＳＨがＦＳＨ糖タンパク質に付着しているグリカンを含むことは理解される。グリカ
ンの１００％は、ＦＳＨ糖タンパク質に付着している全てのグリカンを称するまたは意味
することは理解される。したがって、本明細書において用語「グリカンの２０％以上がＧ
ａｌＮＡｃを含む（保有する）」は、ＦＳＨ糖タンパク質に付着しているグリカンの総数
の２０％以上がＮ－アセチルグルコサミン（ＧａｌＮＡｃ）を含む／保有することを意味
し；「グリカンの４０から５５％、例えば４２％から５２％が末端ＧａｌＮＡｃを含む（
例えば保有する）」は、ＦＳＨ糖タンパク質に付着しているグリカンの総数の４０から５
５％、例えば４２％から５２％が末端ＧａｌＮＡｃを含む／保有する、などを意味する。

α２，６－結合の利用能は、α２，３－結合利用能だけを有するＣＨＯ細胞由来生成物
と比較してテトラシアリル化構造の数を増加させると考えられる。本出願人らは、そのｒ
ＦＳＨが糖組成（特定の量のＧａｌＮＡｃを含む、または含みうる）のために他の認可さ
れた生成物と識別されることも見出した。これは、２，６－シアリル化がＧａｌＮＡｃと
関連することから、テトラシアリル化および効力と関連する可能性がある。換言すると、
本出願人らは、特定の特徴（２，６－リンカー部位、ＧａｌＮａｃ）を有し、高いシアリ
ル化の程度を有するｒＦＳＨを提供し、ｉｎｖｉｖｏで改善された効力をもたらすと考
えられるｒＦＳＨ生成物を開発した。

ｒＦＳＨ（またはｒＦＳＨ調製物）は、グリカンの１６から２４％が（例えば、末端）
１フコース－ルイス（ｆｕｃｏｓｅ－ｌｅｗｉｓ）を、例えばグリカンの１６．５から１
８％が（例えば、末端）１フコース－ルイスを含む場合がある。ｒＦＳＨ（またはＦＳＨ
調製物）は、グリカンの１．５から４．５％、例えば２から４％、例えば３．７％が（例
えば、末端）２フコース－ルイスを含む場合がある。フコース－ルイスの含有量は効力に
影響を有する場合がある。

ｒＦＳＨは、ヒト細胞株、例えばＰｅｒ．Ｃ６細胞株、ＨＥＫ２９３細胞株、ＨＴ１０
８０細胞株などにおいて生成または発現されうる。これは、シアリル化を保持するための
例えば細胞増殖培地の操作および調節が周知のプロセスよりも決定的でない可能性がある
ことから、生成方法を簡素化する（かつさらに効率的にする）ことができる。本方法は、
周知のｒＦＳＨ生成物の生成と比較してわずかに塩基性のｒＦＳＨが生成されることから
、より効率的でもあり；より酸性のｒＦＳＨが生成され、塩基性ＦＳＨの分離／除去が問
題となりにくい。ｒＦＳＨは、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商
標）由来細胞株または修飾ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞株において生成または発現され
うる。ヒト細胞株（例えば、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞株、ＨＥＫ２９３細胞株、Ｈ
Ｔ１０８０細胞株など）において生成および発現されるｒＦＳＨは、［細胞株の］内在性
シアリルトランスフェラーゼ活性によって提供されるいくつかのα２，６－結合シアル酸
（α２，６シアリル化）を含み、内在性シアリルトランスフェラーゼ活性によって提供さ
れるいくつかのα２，３－結合シアル酸（α２，３シアリル化）を含む。細胞株は、α２
，３－シアリルトランスフェラーゼを用いて修飾される場合がある。細胞株は、α２，６
－シアリルトランスフェラーゼを用いて修飾される場合もある。代替的にまたは追加的に
、ｒＦＳＨは、［細胞株の］内在性シアリルトランスフェラーゼ活性によって提供される
α２，６－結合シアル酸（α２，６シアリル化）を含みうる。本明細書において用語「ヒ
ト由来組換えＦＳＨ」は、ヒト細胞株（例えば、工学的に操作されたヒト細胞株によって
作られた組換えＦＳＨ）において生成または発現される組換えＦＳＨを意味する。

ｒＦＳＨは、α２，３－および／またはα２，６－シアリルトランスフェラーゼを用い
て生成されうる。一例では、ｒＦＳＨは、α２，３－シアリルトランスフェラーゼを用い
て生成される。ｒＦＳＨは、内在性シアリルトランスフェラーゼ活性によって提供される
α２，６－結合シアル酸（α２，６シアリル化）を含みうる。

生成物は、医薬組成物であってよい。医薬組成物は、不妊症治療用である。不妊症治療
は、補助生殖医療（ＡＲＴ）、排卵誘発または子宮内人工授精（ＩＵＩ）を含みうる。医
薬組成物は、例えば周知のＦＳＨ調製物が用いられる医学的適応において用いられうる。

生成物または組成物は、薬物投与の任意の経路、例えば、経口、直腸、非経口、経皮（
例えばパッチ技術）、静脈内、筋肉内、皮下、槽内（ｉｎｔｒａｓｕｓｔｅｒｎａｌ）、
膣内、腹腔内、局所（散剤、軟膏剤もしくは滴下剤）またはバッカルもしくは鼻内噴霧用
のための十分周知の組成物中に製剤されうる。典型的な組成物は、とりわけＲｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ第１５版（Ｍａｔｔ
ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ、１９７５）、１４０５から１４１２頁および１
４６１～８７頁、ならびにｔｈｅｎａｔｉｏｎａｌｆｏｒｍｕｌａｒｙＸＩＶ第
１４版（ＡｍｅｒｉｃａｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、
１９７５）に記載の水性溶液、塩および保存剤を含む非毒性賦形剤ならびに緩衝剤などの
薬学的に許容される担体を含む。

好適な水性および非水性の医薬用担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例は、水、エタ
ノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコー
ルなど）、カルボキシメチルセルロースおよびこれらの好適な混合物、植物油（オリーブ
オイルなど）ならびにオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルを含む。本発明の組成
物は、これだけに限らないが、保存剤、湿潤剤、乳化剤、界面活性剤および分散剤などの
添加剤も含有できる。抗菌剤および抗真菌剤は、微生物の増殖を予防するために含まれて
よく、例えばｍ－クレゾール、ベンジルアルコール、パラベン、クロロブタノール、フェ
ノール、ソルビン酸などを含む。保存剤が含まれる場合、ベンジルアルコール、フェノー
ルおよび／またはｍ－クレゾールが好ましいが；保存剤は決してこれらの例に限定されな
い。さらに、糖および塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことが望ましい場合がある。生
成物または組成物は、Ｎａ⁺－もしくはＫ⁺－塩またはこれらの組合せからなる群から選択
される薬学的に許容されるアルカリ金属カチオンを含む塩をさらに含みうる。好ましくは
、塩は、Ｎａ⁺－塩、例えばＮａＣｌまたはＮａ₂ＳＯ₄である。

好ましくは生成物または組成物は、組換えＦＳＨならびに、ポリソルベート２０、Ｌ－
メチオニン、フェノール、硫酸二ナトリウムおよびリン酸ナトリウム緩衝剤の１つまたは
複数を含む。

いくつかの場合では、持続的作用を生じさせるために、皮下または筋肉内注射からのＦ
ＳＨ（および存在する場合は他の活性成分）の吸収を遅らせることは望ましい。これは、
難水溶性の結晶性または非結晶性材料の液体懸濁剤の使用によって達成されうる。このよ
うにＦＳＨの吸収速度は、溶解速度に依存し、同様に結晶サイズおよび結晶形態に依存す
る場合がある。代替的に、非経口投与されたＦＳＨ組合せ形態の遅延吸収は、ＦＳＨ組合
せを油ビヒクル中に溶解するステップまたは懸濁することによって達成される。注射用デ
ポー形態は、ＦＳＨ（および存在する場合は他の薬剤）のマイクロカプセル化マトリクス
をポリ乳酸－ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に形成することによって作ること
ができる。ＦＳＨのポリマーに対する比および使われる具体的なポリマーの性質に依存し
て、ＦＳＨの放出速度を調節することができる。他の生分解性ポリマーの例は、ポリビニ
ルピロリドン、ポリ（オルトエステル）、ポリ（酸無水物）などを含む。デポー注射用製
剤は、身体組織に適合性であるリポソームまたはマイクロエマルジョン中にＦＳＨを封入
することによっても調製されうる。

注射用製剤は、例えば細菌保持フィルターを通すろ過によって、または使用直前に滅菌
水または他の滅菌注射用媒体に溶解または分散されうる滅菌剤を滅菌固体組成物の形態で
組み込むことによって滅菌されうる。注射用製剤は、任意の好適な容器中、例えばバイア
ル、プレフィルシリンジ、注射カートリッジなどで供給されうる。

生成物または組成物は、単回使用または複数回使用（複数回用量）のために製剤されて
よい。生成物または組成物が複数回使用のために製剤される場合、保存剤が含まれること
が好ましい。保存剤が含まれる場合、ベンジルアルコール、フェノールおよび／またはｍ
－クレゾールが好ましいが；保存剤はこれらの例に決して限定されない。単回使用または
複数回使用に製剤された生成物または組成物は、Ｎａ⁺－もしくはＫ⁺－塩またはこれらの
組合せからなる群から選択される薬学的に許容されるアルカリ金属カチオンを含む塩をさ
らに含みうる。好ましくは、塩は、Ｎａ⁺－塩、例えばＮａＣｌまたはＮａ₂ＳＯ₄である
。

生成物または組成物は、バイアル、プレフィルカートリッジ（例えば単回投与もしくは
複数回使用のため）などの容器または「ペン」（例えば複数回用量の投与のため）などの
注射デバイスに含まれてよい。

生成物または組成物は、ＦＳＨ（場合によりｈＣＧ、ＬＨ、ＬＨ活性などと共に）を含
む製剤（例えば注射用製剤）であってよい。ＬＨ活性は、存在する場合は、ＬＨまたはヒ
ト絨毛性ゴナドトロピン、ｈＣＧからもたらされうる。１つより多い活性成分がある場合
（すなわちＦＳＨおよび、例えばｈＣＧまたはＬＨ）、これらは別々または一緒での投与
に好適でありうる。別々に投与される場合、投与は逐次的であってよい。生成物は、任意
の適切な包装で供給されてよい。例えば生成物は、ＦＳＨもしくはｈＣＧのいずれか、ま
たはＦＳＨおよびｈＣＧの両方の組合せを含有する多数の容器（例えばプレフィルシリン
ジまたはバイアル）を含みうる。ｈＣＧは、組換えｈＣＧまたは尿ｈＣＧであってよい。
生成物がＦＳＨを、例えば組換えＦＳＨを含有する多数の容器（例えばプレフィルシリン
ジまたはバイアル）を含む場合、各容器は同量のＦＳＨを含んでよい。１つまたは複数の
容器は、異なる量のＦＳＨを含んでよい。シリンジまたはバイアルは、ブリスター包装ま
たは滅菌性を維持するための他の手段で包装されうる。任意の生成物は、ＦＳＨ（および
、存在する場合は、例えばｈＣＧ）製剤を用いるための説明書を場合により含む場合があ
る。医薬組成物の種々の構成成分のｐＨおよび正確な濃度は、当技術分野における日常的
慣習に従って調整される。ＧＯＯＤＭＡＮａｎｄＧＩＬＭＡＮ’ｓＴＨＥＰＨＡ
ＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬＢＡＳＩＳＦＯＲＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＥＳ、第７版
を参照されたい。好ましい実施形態では本発明の組成物は、非経口投与のための組成物と
して供給される。非経口製剤の調製のための一般的方法は、当技術分野において周知であ
り、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ；ＴＨＥＳＣＩＥＮＣＥＡＮＤＰＲＡＣＴＩＣＥＯＦ
ＰＨＡＲＭＡＣＹ、上記、７８０～８２０頁に記載されている。非経口組成物は、液体製
剤でまたは、投与直前に滅菌注射用媒体と混合される固体として供給されうる。特に好ま
しい実施形態では、非経口組成物は、投与の簡易性および用量の均一性のために単位投与
形態で供給される。

さらなる態様における本発明によれば、（ａ）対象の血清ＡＭＨレベルを測定するステ
ップ；および（ｂ）１～２４μｇ、例えば２～２４μｇ、例えば２から１５μｇのヒト由
来組換えＦＳＨの用量または等量を対象に投与するステップを含む、不妊症の治療方法が
提供される。好ましくは、用量は４．５から１２．５μｇ、例えば５から１２．５μｇ、
例えば６から１２．５μｇ、例えば６．３から１２μｇのヒト由来組換えＦＳＨであるか
、または等しい。

さらなる態様における本発明によれば、（ａ）対象の血清ＡＭＨレベルを判定するステ
ップ（例えば、測るステップ）；および（ｂ）＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば０．０５ｐｍ
ｏｌ／Ｌから１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ）の血清ＡＭＨレベルを有する（その）対象に９から
１４μｇ、例えば１１から１３μｇ、例えば１２μｇのヒト由来組換え卵胞刺激ホルモン
（ＦＳＨ）の（例えば、一日）用量または等量を投与するステップを含む、不妊症の治療
方法が提供される。好ましくは、ＦＳＨは、組換えＦＳＨ（「ｒＦＳＨ」または「ｒｅｃ
ＦＳＨ」）である。好ましくは、ＦＳＨは、ヒト細胞株由来組換えＦＳＨである。用量は
、ＯＨＳＳの危険性を最小化しながら有効な応答を提供する。

さらなる態様における本発明によれば、（ａ）対象の血清ＡＭＨレベルを判定するステ
ップ（例えば、測定するステップ）；および（ｂ）≧１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベ
ルを有する（その）対象に５から１２．５μｇのヒト由来組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳ
Ｈ）の（例えば、一日）用量または等量を投与するステップを含む、不妊症の治療方法が
提供される。（例えば、一日）用量は６から１０μｇのヒト由来組換え卵胞刺激ホルモン
（ＦＳＨ）であってよい、または等しくてよい。好ましくは、ＦＳＨは、組換えＦＳＨ（
「ｒＦＳＨ」または「ｒｅｃＦＳＨ」）である。好ましくは、ＦＳＨは、ヒト細胞株由来
組換えＦＳＨである。用量は、ＯＨＳＳの危険性を最小化しながら有効な応答を提供する
。

一実施形態では、方法は、１５から２４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する
（その）対象に５から１２μｇ、例えば７から１２μｇ、例えば８．７から１０μｇ、ヒ
ト由来組換えＦＳＨ（好ましくは９から１０μｇのヒト由来組換えＦＳＨ）の（例えば、
一日）用量または等量を投与するステップを含む。別の実施形態では、方法は、２５から
３４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する（その）対象に５から１２μｇのヒト
由来組換えＦＳＨ（例えば７から１２μｇ、例えば６から９μｇ、例えば７から８μｇ、
例えば７．３μｇから８μｇのヒト由来組換えＦＳＨ）の（例えば、一日）用量または等
量を投与するステップを含む。別の実施形態では、方法は、≧３５ｐｍｏｌ／Ｌの血清Ａ
ＭＨレベルを有する（その）対象に５から１１μｇのヒト由来組換えＦＳＨ（例えば６か
ら７μｇ、例えば６．３から７μｇのヒト由来組換えＦＳＨ）の（例えば、一日）用量ま
たは等量を投与するステップを含む。

さらなる態様における本発明によれば、ａ）対象の血清ＡＭＨレベルを判定するステッ
プ（例えば、測定するステップ）；および（ｂ）対象の体重１ｋｇあたり０．０９から０
．１９μｇ（例えば０．０９から０．１７μｇ）のヒト由来組換えＦＳＨの（例えば、一
日）用量または等量を投与するステップを含み、対象が≧１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨ
レベルを有する、不妊症の治療方法が提供される。好ましくは、ＦＳＨは、組換えＦＳＨ
（「ｒＦＳＨ」または「ｒｅｃＦＳＨ」）である。好ましくは、ＦＳＨは、ヒト細胞株由
来組換えＦＳＨである。用量は、ＯＨＳＳの危険性を最小化しながら有効な応答を提供す
る。

一実施形態では、方法は、対象の体重１ｋｇあたり０．１４から０．１９μｇのヒト由
来組換えＦＳＨ（好ましくは、０．１５から０．１６μｇのヒト由来組換えＦＳＨ）の（
例えば、一日）用量または等量を投与するステップを含み、対象は１５から２４．９ｐｍ
ｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する。別の実施形態では、方法は、対象の体重１ｋｇあ
たり０．１１から０．１４μｇのヒト由来組換えＦＳＨ（好ましくは、０．１２から０．
１３μｇのヒト由来組換えＦＳＨ）の（例えば、一日）用量または等量を投与するステッ
プを含み、対象は２５から３４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する。別の実施
形態では、方法は、対象の体重１ｋｇあたり０．１０から０．１１μｇのヒト由来組換え
ＦＳＨの（例えば、一日）用量または等量を投与するステップを含み、対象は≧３５ｐｍ
ｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する。好ましくは、ＦＳＨは、組換えＦＳＨ（「ｒＦＳ
Ｈ」または「ｒｅｃＦＳＨ」）である。好ましくは、ＦＳＨは、ヒト細胞株由来組換えＦ
ＳＨである。これらの用量は、ＯＨＳＳの危険性を最小化しながら有効な応答を提供する
。

さらなる態様における本発明によれば、（ａ）対象の血清ＡＭＨレベルを判定するステ
ップ（例えば、測定するステップ）；および（ｂ）対象の体重１ｋｇあたり０．１５から
０．２１μｇ（例えば０．１９から０．２１μｇ）のヒト由来組換えＦＳＨの（例えば、
一日）用量または等量を投与するステップを含み、対象が＜１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭ
Ｈレベルを有する、不妊症の治療方法が提供される。

投与は、上におよび特許請求の範囲において定義されるＦＳＨの量の一日用量または一
日等量を好ましくは含む。（一日）用量は、初回量であってよい（治療の際に低減、増加
または維持されうる）。

方法は、患者の（対象の）初回刺激プロトコールにおける不妊症の治療方法であってよ
い。さらなる刺激サイクルのために、初回サイクルでの実際の卵巣応答に応じて用量が調
整されうることは理解される。

さらなる態様における本発明によれば、（ａ）対象の血清ＡＭＨレベルを判定するステ
ップ（例えば、測定するステップ）；
および（ｂ）対象が＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ（例えば、０．０５ｐｍｏｌ／Ｌから１４．９ｐ
ｍｏｌ／Ｌ）の血清ＡＭＨレベルを有する場合、対象に１０から１４μｇ、例えば１１か
ら１３μｇ、例えば１２μｇのヒト由来組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の用量もしく
は等量を投与するステップ；または
対象が１５から２４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する場合、対象の体重１ｋ
ｇあたり０．１４から０．１９μｇのヒト由来組換えＦＳＨ（好ましくは０．１５から０
．１６μｇのヒト由来組換えＦＳＨ）の用量もしくは等量を対象に投与するステップ；ま
たは
対象が２５から３４．９ｐｍｏｌ／Ｌｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する場合、対
象の体重１ｋｇあたり０．１１から０．１４μｇのヒト由来組換えＦＳＨ（好ましくは０
．１２から０．１３μｇのヒト由来組換えＦＳＨ）の用量もしくは等量を対象に投与する
ステップ；または
対象が≧３５ｐｍｏｌ／Ｌｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する場合、対象の体重１
ｋｇあたり０．１０から０．１１μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量もしくは等量を対象
に投与するステップを含む、不妊症の治療方法が提供される。

５．０～１４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨを有する患者（対象）について、６から１
８μｇ、例えば８から１１μｇ、例えば８．５から１０．２μｇのヒト由来組換えＦＳＨ
の用量または等量が投与されうる。１５．０～２９．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨを有す
る患者（対象）について４．８から１５μｇ、例えば６から９μｇ、例えば６．８から８
．５μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量が投与されうる。３０～４４．９ｐｍ
ｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨを有する患者（対象）について３．６から１２μｇ、例えば４から
７μｇ、例えば５．１から６．８μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量が投与さ
れうる。４５ｐｍｏｌ／Ｌ以上の血清ＡＭＨを有する患者（対象）について２から９μｇ
、例えば２．４から９μｇ（例えば３．４から５．１μｇ）または２から５μｇのヒト由
来組換えＦＳＨの用量または等量が投与されうる。５ｐｍｏｌ／Ｌ以下の血清ＡＭＨを有
する患者（対象）について７．２から２４μｇ、例えば１０から１５μｇ、例えば１０．
２から１３．６μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量が投与されうる。いくつか
の例では、４．８から１８μｇ、例えば６から１１μｇ、例えば６．８から１０．２μｇ
のヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量が投与される。好ましくは、ＦＳＨは、組換え
ＦＳＨ（「ｒＦＳＨ」または「ｒｅｃＦＳＨ」）である。好ましくは、ＦＳＨは、ヒト細
胞株由来組換えＦＳＨである。投与は、上におよび特許請求の範囲において定義されるＦ
ＳＨの量の一日用量または一日等量を好ましくは含む。（一日）用量は、初回量であって
よい（治療の際に低減、増加または維持されうる）。

本発明は、添付の図面を参照してここにより詳細に記載される。

ｐＦＳＨアルファ／ベータ発現ベクターのプラスミド地図を示す図である。 α２，３－シアリルトランスフェラーゼ（ＳＴ３ＧＡＬ４）発現ベクターを示す図である。 α２，６－シアリルトランスフェラーゼ（ＳＴ６ＧＡＬ１）発現ベクターを示す図である。 α２，３－シアリルトランスフェラーゼでの工学的操作後にＦＳＨを安定に発現するＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞によって生成された組換えＦＳＨの例のシアル酸分布の％存在度を示す図である。 α２，３－シアリルトランスフェラーゼでの工学的操作後にＦＳＨを安定に発現するＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞によって生成された組換えＦＳＨの例のグリカン電荷分布の％存在度を示す図である。２２５ＩＵのＧｏｎａｌｆ（下線、点線）および２２５ＩＵの本発明の例（上線、実線）の投与後のインヒビン－Ｂ濃度の比較を示す図である。低ＡＭＨ治療群において採取された卵母細胞への体重の影響を示す図である（実施例１０、１０Ａ）。高ＡＭＨ治療群において採取された卵母細胞への体重の影響を示す図である。

配列選択
ヒトＦＳＨ
ＦｉｄｄｅｓおよびＧｏｏｄｍａｎ．（１９８１）に従ってＦＳＨアルファポリペプチ
ドについての遺伝子のコード領域が用いられた。配列は、ＡＨ００７３３８として寄託さ
れ、構築時はこのタンパク質配列の他の変種はなかった。配列は本明細書において配列番
号１と称される。

Ｋｅｅｎｅら、（１９８９）に従ってＦＳＨベータポリペプチドについての遺伝子のコ
ード領域が用いられた。配列は、ＮＭ＿０００５１０として寄託され、構築時はこのタン
パク質配列の他の変種はなかった。配列は本明細書において配列番号２と称される。

シアリルトランスフェラーゼ
α２，３－シアリルトランスフェラーゼ－ＫｉｔａｇａｗａおよびＰａｕｌｓｏｎ（１
９９４）に従ってベータ－ガラクトシドアルファ－２，３－シアリルトランスフェラーゼ
４（α２，３－シアリルトランスフェラーゼ、ＳＴ３ＧＡＬ４）についての遺伝子のコー
ド領域が用いられた。配列はＬ２３７６７として寄託され、本明細書において配列番号３
と称される。

α２，６－シアリルトランスフェラーゼ－Ｇｒｕｎｄｍａｎｎら、（１９９０）に従っ
てベータ－ガラクトサミドアルファ－２，６－シアリルトランスフェラーゼ１（α２，６
－シアリルトランスフェラーゼ、ＳＴ６ＧＡＬ１）についての遺伝子のコード領域が用い
られた。配列はＮＭ＿００３０３２として寄託され、本明細書において配列番号４と称さ
れる。

［実施例１］
ＦＳＨ発現ベクターの構築
ＦＳＨアルファポリペプチド（ＡＨ００７３３８、配列番号１）およびＦＳＨベータポ
リペプチド（ＮＭ＿００３０３２、配列番号２）のコード配列をそれぞれＦＳＨａ－ｆｗ
およびＦＳＨａ－ｒｅｖならびにＦＳＨｂ－ｆｗおよびＦＳＨｂ－ｒｅｃのプライマー組
合せを用いてＰＣＲによって増幅した。
FSHa-fw 5'-CCAGGATCCGCCACCATGGATTACTACAGAAAAATATGC-3'（配列番号９）
FSHa-rev 5'-GGATGGCTAGCTTAAGATTTGTGATAATAAC-3'（配列番号１０）
FSHb-fw 5'-CCAGGCGCGCCACCATGAAGACACTCCAGTTTTTC-3'（配列番号１１）
FSHb-rev 5'-CCGGGTTAACTTATTATTCTTTCATTTCACCAAAGG-3'（配列番号１２）

得られた増幅ＦＳＨベータＤＮＡを制限酵素ＡｓｃＩおよびＨｐａＩで消化し、ネオマ
イシン選択マーカーを保有しているＣＭＶ推進哺乳動物発現ベクターのＡｓｃＩおよびＨ
ｐａＩ部位に挿入した。同様にＦＳＨアルファＤＮＡをＢａｍＨＩおよびＮｈｅＩで消化
し、ＦＳＨベータポリペプチドＤＮＡを既に含有している発現ベクター上のＢａｍＨＩお
よびＮｈｅＩ部位に挿入した。

ベクターＤＮＡを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のＤＨ５α株を形質転換するために用いた。
コロニーを増幅のために取った。ＦＳＨアルファおよびベータの両方を含有しているベク
ターを含有しているコロニーを配列決定のために選択し、全てが配列番号１および配列番
号２による正確な配列を含有していた。プラスミドｐＦＳＨＡ＋Ｂ＃１７を形質移入の
ために選択した（図１）。

［実施例２］
ＳＴ３発現ベクターの構築
ベータ－ガラクトシドアルファ－２，３－シアリルトランスフェラーゼ４（ＳＴ３、Ｌ
２３７６７、配列番号３）のコード配列を２，３ＳＴｆｗおよび２，３ＳＴｒｅｖのプラ
イマー組合せを用いてＰＣＲによって増幅した。
2,3STfw 5'-CCAGGATCCGCCACCATGTGTCCTGCAGGCTGGAAGC-3'（配列番号１３）
2,3STrev 5'-TTTTTTTCTTAAGTCAGAAGGACGTGAGGTTCTTG-3'（配列番号１４）

得られた増幅ＳＴ３ＤＮＡを制限酵素ＢａｍＨＩおよびＡｆｌＩＩで消化し、ハイグロ
マイシン耐性マーカーを保有しているＣＭＶ推進哺乳動物発現ベクター上のＢａｍＨＩお
よびＡｆｌＩＩ部位に挿入した。ベクターを既に記載のとおり増幅し、配列決定した。ク
ローンｐＳＴ３＃１（図２）は配列番号３による正確な配列を含有しており、形質移入の
ために選択した。

［実施例３］
ＳＴ６発現ベクターの構築
ベータ－ガラクトサミドアルファ－２，６－シアリルトランスフェラーゼ１（ＳＴ６、
ＮＭ＿００３０３２、配列番号４）のコード配列を２，６ＳＴｆｗおよび２，６ＳＴｒｅ
ｖのプライマー組合せを用いてＰＣＲによって増幅した。
2,6STfw 5'-CCAGGATCCGCCACCATGATTCACACCAACCTGAAG-3'（配列番号１５）
2,6STrev 5'-TTTTTTTCTTAAGTTAGCAGTGAATGGTCCGG-3'（配列番号１６）

得られた増幅ＳＴ６ＤＮＡを制限酵素ＢａｍＨＩおよびＡｆｌＩＩで消化し、ハイグロ
マイシン耐性マーカーを保有しているＣＭＶ推進哺乳動物発現ベクター上のＢａｍＨＩお
よびＡｆｌＩＩ部位に挿入した。ベクターを既に記載のとおり増幅し、配列決定した。ク
ローンｐＳＴ６＃１１（図３）は配列番号４による正確な配列を含有しており、形質移入
のために選択した。

［実施例４］
ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞内でのｐＦＳＨα＋βの安定発現。形質移入単離および
クローンのスクリーニング。
ＦＳＨを生成しているＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）クローンを、単一のプラスミドからＦ
ＳＨの両ポリペプチド鎖を発現させることによって作製した（実施例１を参照されたい）
。

安定クローンを得るためのｐＦＳＨα＋β構築物を含むリポソームに基づく形質移入剤
。安定クローンは、１０％ＦＣＳを補充し、Ｇ４１８を含有しているＶＰＲＯ中で選択し
た。形質移入の３週間後、Ｇ４１８耐性クローンが生じた。クローンを単離のために選択
した。単離したクローンを選択培地中で７０～８０％コンフルエントまで培養した。上清
を、ＦＳＨタンパク質含有量についてＦＳＨ選択的ＥＬＩＳＡを用いて、およびクローン
化細胞株中のＦＳＨ受容体での薬理学的活性についてｃＡＭＰ蓄積アッセイを用いてアッ
セイした。機能性タンパク質を発現しているクローンを培養増殖のために２４ウエル、６
ウエルおよびＴ８０フラスコに移した。

７個のクローン由来の材料の生産性および品質を判定するための研究を、十分な材料を
作製するためのＴ８０フラスコにおいて開始した。細胞を既に記載の補充培地で７日間培
養し、上清を回収した。生産性を、ＦＳＨ選択的ＥＬＩＳＡを用いて判定した。材料の等
電点プロファイルを当技術分野において周知の方法による等電点電気泳動法（ＩＥＦ）に
よって判定した。十分な生産性および品質を有するクローンを、シアリルトランスフェラ
ーゼを工学的に操作するために選択した。

［実施例５］
シアリル化のレベルは、α２，３－シアリルトランスフェラーゼを過剰発現する細胞に
おいて増加している。ＦＳＨ発現ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞でのｐＳＴ３の安定発現
；形質移入単離およびクローンのスクリーニング。
高度にシアリル化されたＦＳＨを生成しているＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）クローンを、
ＦＳＨの両ポリペプチド鎖を既に発現しているＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（実施例４
から）において別のプラスミド（実施例２）からα２，３シアリルトランスフェラーゼを
発現させることによって作製した。実施例４に記載のとおりＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細
胞から生成されたクローンを、生産性、良好な増殖プロファイル、機能性タンパク質の生
成、およびいくつかのシアリル化を有する生成ＦＳＨを含むそれらの特徴について選択し
た。安定クローンを実施例４に既に記載のとおり作製した。クローンを単離し、増殖させ
、アッセイした。α２，３－シアリルトランスフェラーゼクローンを無血清培地および懸
濁条件に適応させた。

前述のとおりクローンを、ＦＳＨ選択的ＥＬＩＳＡ、ＦＳＨ受容体細胞株での機能的応
答、ＩＥＦ、代謝クリアランス率およびＳｔｅｅｌｍａｎＰｏｈｌｅｙ分析を用いてア
ッセイした。結果を商業的に入手可能な組換えＦＳＨ（Ｇｏｎａｌ－ｆ、Ｓｅｒｏｎｏ）
および親ＦＳＨＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞株と比較した。大部分のクローンによっ
て生成されたＦＳＨは、α２，３－シアリルトランスフェラーゼを伴わずに発現されたＦ
ＳＨと比較して顕著に改善されたシアリル化を有した（すなわち、概して、多数のシアル
酸を有するより多くのＦＳＨアイソフォーム）。結論として、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）
細胞でのシアリルトランスフェラーゼを伴うＦＳＨの発現は、ＦＳＨだけを発現している
細胞と比較してシアリル化ＦＳＨレベルの増加をもたらす。

［実施例６］
生成および精製の概要
無血清培地中に懸濁で培養したＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞においてＦＳＨを生成す
るための手順を開発した。手順を下に記載し、いくつかのＦＳＨ－生成ＰＥＲ．Ｃ６（登
録商標）細胞株に適用する。

α２，３－クローン（実施例５）からＦＳＨをＬｏｗｒｙら、（１９７６）によって記
載された方法を改変して用いて調製した。

ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）－ＦＳＨの生成のために、細胞株を無血清培地、すなわちＥ
ｘｃｅｌｌ５２５（ＪＲＨＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に適応させた。細胞を最初にＴ
８０培養フラスコで７０％～９０％コンフルエント単層を形成するように培養した。継代
で、細胞を無血清培地、Ｅｘｃｅｌｌ５２５＋４ｍＭＬ－グルタミンに細胞密度、細
胞０．３×１０⁶個／ｍｌで再懸濁した。２５ｍｌ細胞懸濁液を２５０ｍｌ振盪フラスコ
に入れ、１００ｒｐｍ、３７℃、５％ＣＯ₂で振盪した。細胞密度＞細胞１ｘ１０⁶個／ｍ
ｌに達した後、細胞を細胞密度、細胞０．２または０．３×１０⁶個／ｍｌに継代培養し
、振盪フラスコ中、３７°Ｃ、５％ＣＯ₂および１００ｒｐｍでさらに培養した。

ＦＳＨの生成のために、無血清生成培地、すなわち、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞の
増殖を非常に高い細胞密度まで（通常、バッチ培養で細胞＞１０⁷個／ｍｌ）支持するＶ
ＰＲＯ（ＪＲＨＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に細胞を移植した。細胞をＥｘｃｅｌｌ５
２５中で最初に細胞＞１ｘ１０⁶個／ｍｌまで培養し、次いで５分間、１０００ｒｐｍで
遠沈し、次にＶＰＲＯ培地＋６ｍＭＬ－グルタミン中に密度、細胞１ｘ１０⁶個／ｍｌ
で懸濁した。次いで細胞を振盪フラスコで７～１０日間、３７℃、５％ＣＯ₂および１０
０ｒｐｍで培養した。この期間中、細胞を密度、細胞＞１０⁷個／ｍｌに増殖させた。培
養培地を細胞生存率が低下し始めた後に回収した。細胞を５分間、１０００ｒｐｍで遠沈
し、上清をＦＳＨの定量化および精製のために用いた。ＦＳＨの濃度を、ＥＬＩＳＡ（Ｄ
ＲＧＥＩＡ１２８８）を用いて判定した。

したがって、ＦＳＨの精製は、Ｌｏｗｒｙら、（１９７６）によって記載された方法を
改変して用いて実行した。電荷選択的クロマトグラフィーを用いる精製を当技術分野にお
いて十分周知の方法によって高度にシアリル化された形態を濃縮するために実行した。

全てのクロマトグラフィー手順の際に、本明細書において特許請求するＦＳＨのシアリ
ル化形態の濃縮は、ＲＩＡ（ＤＲＧＥＩＡ１２８８）および／またはＩＥＦによって
確認した。

［実施例７］
α２，３およびα２，６シアル酸の相対量の定量化
精製ｒＦＳＨ（実施例６）上のα２，３およびα２，６シアル酸の相対的百分率量を周
知の技術を用いて測定した。

ＰＮＧａｓｅＦを変性条件下で用いてＮ－グリカンを試料から遊離させ、次いで２－
アミノベンズアミドで標識した。次いで遊離グリカン形態を分離し、電荷分布の測定のた
めに弱アニオン交換（ＷＡＸ）カラムによって分析した。総シアル酸の測定のために２，
３，６，８シアリダーゼで、２，３シアル酸の測定のために２，３シアリダーゼで処理し
た標識グリカンを、ｗａｘカラムによってさらに分析した。

電荷グリカンの相対百分率を未消化および消化グリカンプールに存在する構造から算出
し、図４に示す（試料８個について）。これらがα２，３シアリル化については５０％～
７０％（例えば、約６０％または６５％）およびα２，６シアリル化については２８から
５０％、一般に３０から３５％（例えば、約３１％または３５％）の範囲にあることを見
出した。

［実施例８］
モノ、ジ、トリおよびテトラシアリル化グリカン構造相対量の定量化
精製ｒＦＳＨ（実施例６）から抽出したグリカン上のモノ、ジ、トリおよびテトラシア
リル化構造の相対百分率量を周知の技術を用いて測定した。

ＰＮＧａｓｅＦを変性条件下で用いてＮグリカンを試料から遊離させ、次いで２－ア
ミノベンズアミドで標識した。グリカンをＰＮＧａｓｅＦを用いて変性条件下で試料か
ら遊離させ、次いで２－アミノベンズアミドで標識した。遊離グリカン形態を次いで分離
し、シアリル化分布の測定のために弱アニオン交換（ＷＡＸ）カラムによって分析した。
中性、モノ－シアリル化、ジ－シアリル化、トリ－シアリル化およびテトラ－シアリル化
構造の相対量を図５に示す（試料８個については図４に示す）。

ｒＦＳＨは、中性、モノ－シアリル化、ジ－シアリル化、トリ－シアリル化およびテト
ラ－シアリル化グリカン構造を次の相対量：中性５～６％；１５～１７％モノ－シアリル
化；２６～３０％ジ－シアリル化；３０～３２％トリ－シアリル化および１７～２３％テ
トラ－シアリル化で含む。

［実施例８ａ］
精製ｒＦＳＨ（実施例６の方法によって生成された）の試料９個から抽出された精製ｒ
ＦＳＨ上のα２，６シアル酸の相対百分率量を周知の技術を用いて測定した。

ＰＮＧａｓｅＦを変性条件下で用いてＮ－グリカンを試料から遊離させ、次いで２－
アミノベンズアミドで標識した。遊離グリカン形態を次いで分離し、電荷分布の測定のた
めに弱アニオン交換（ＷＡＸ）カラムによって分析した。総シアル酸の測定のために２，
３，６，８シアリダーゼで、２，３シアル酸の測定のために２，３シアリダーゼで標識グ
リカンを処理し、ｗａｘカラムによってさらに分析した（実施例８を参照されたい）。分
析は、α２，６シアル酸の算出を可能にする。

電荷グリカンの相対百分率を未消化および消化グリカンプールに存在する構造から算出
し、次の表に示す。これらは、α２，６シアリル化については２５から５０％、一般に３
０から３５％の範囲にあることが見出された。

精製ｒＦＳＨ（実施例６の方法によって生成された）試料９個から抽出されたグリカン
上のバイセクティングＧｌｃＮａｃ、ＧａｌＮＡｃおよび１－フコースルイスの相対百分
率量を周知の技術を用いて測定した。ＰＮＧａｓｅＦを用いてＮ－グリカンを糖タンパ
ク質から遊離させ、２－アミノベンズアミド（２ＡＢ）で標識した。分析は、二次元（２
Ｄ）ＨＰＬＣ分析をグリカンの酵素分解と組み合わせて行った。検証のためにグリカンを
ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって分析した。アルファ２，６－シアル酸の相対量および末端残基
を次の表に、ＧｏｎａｌＦ（ＣＨＯ細胞由来組換えＦＳＨ）およびＢｒａｖｅｌｌｅ（
ヒト尿ＦＳＨ）についてのものと共に示す。

本発明のＦＳＨにおけるＧａｌＮＡｃの量は、約４４．９から５１％の間で変化し、平
均約４７．１％であることが認められうる。

本発明のＦＳＨにおけるバイセクティングＧｌｃＮａｃの量は、８．７から１３．９％
の間で変化し、平均およそ１０．９％であることが認められうる。

本発明のＦＳＨにおける１フコースルイスの量は、１６．１から２３．３％の間で変化
し、平均およそ１９％であることが認められうる。

本発明のＦＳＨにおける２フコースルイスの量は、１．９から４．４％の間で変化し、
平均およそ３．７％であることが認められうる。

［実施例９］
ＦＥ９９９０４９の安全性、忍容性、薬物動態、薬力学および免疫原性をＧＯＮＡＬ－
Ｆと比較して調査する複数回投与研究
調査対象母集団
一日用量１４．６μｇのＦＥ９９９０４９（本発明による組成物、実施例６により生成
された）または１６．５μｇのＧｏｎａｌ－Ｆを７日間受けた合計４８名（各薬物につい
て２４名）の健康な女性。

安全性結果
ＦＥ９９９０４９およびＧＯＮＡＬ－Ｆの複数回投与は、安全であり、有害事象（ＡＥ
ｓ）、生命徴候、ＥＣＧ、臨床検査測定および理学的診察による評価のとおり一般に良好
に忍容された。重大な有害事象または死亡は、研究中に生じなかった。

薬物動態結果
７日間のＦＥ９９９０４９およびＧＯＮＡＬ－Ｆの投与後、次回の注射の直前に評価し
たＦＳＨ濃度値は増加しており、６～７日後に定常状態レベルに達したと考えられた。し
かしＦＥ９９９０４９の暴露（ＡＵＣおよびＣｍａｘ）は、Ｇｏｎａｌ－Ｆと比較して６
０％高かった。

薬力学的結果
インヒビン－Ｂ（図６を参照されたい）、エストラジオールおよびプロゲステロンの濃
度は、ＦＥ９９９０４９およびＧＯＮＡＬ－Ｆの投与後に全て増加したが、ＧＯＮＡＬ－
Ｆと比較してＦＥ９９９０４９の投与後により程度が大きかった。卵胞の数および大きさ
の分布の両方は、ＧＯＮＡＬ－Ｆと比較してＦＥ９９９０４９により大きな応答を示した
。

実施例９は、テトラ－シアリル化グリカン構造の特定の量（１７～２３％）、ならびに
例えばα２，３シアリル化およびα２，６シアリル化の特定の量を有するＦＳＨが、現在
市販されている組換えＦＳＨ生成物よりも著しく有効であることを実証する。

［実施例１０］
ＧＯＮＡＬ－Ｆと比較してＦＥ９９９０４９を調査する複数回投与研究
下に、体外受精（ＩＶＦ）／卵細胞質内精子注入法（ＩＣＳＩ）のための調節卵巣刺激
を受けている患者におけるＦＥ９９９０４９の用量－応答関係を評価する無作為対照評価
者盲検並行群多国籍多施設治験を記載する。患者集団は、ＩＶＦ患者２６５名、年齢１８
から３７歳、ＢＭＩ１８．５から３２．０ｋｇ／ｍ²であった。
治験は、主要評価項目としての採取された卵母細胞の数での用量－応答治験として設計さ
れた。副次的評価項目は、内分泌プロファイル、卵胞発育、卵母細胞受精、胚品質および
治療効率（すなわち総ゴナトロピン使用量および刺激期間）に関する様々な用量のＦＥ９
９９０４９の定性的および定量的影響を精査する。治験は、ＩＶＦ／ＩＣＳＩサイクルの
ための調節卵巣刺激において用いられる場合に妊娠を確立させるためのＦＥ９９９０４９
の有効性を評価するために設計する。

対象を、卵巣応答に関して治験対象集団の均一性を増加させ、治験で用いられるＦＥ９
９９０４９の用量およびＧＯＮＡＬ－Ｆの用量に対する潜在的低応答者および過剰応答者
の数を最小化するための抗ミュラー管ホルモン（ＡＭＨ）評価を含む対象選定基準および
除外基準を有する適応性について、無作為化の前の３カ月以内に評価した。ＡＭＨ評価は
、ＡＭＨＧｅｎ－ＩＩｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ
ａｓｓａｙｋｉｔ（ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｗｅｂｓｔｅｒ、Ｔ
ｅｘａｓ）を用いて測定した。このアッセイは、１．１ｐｍｏｌ／Ｌの定量下限を有して
０．５７ｐｍｏｌ／Ｌを超えるＡＭＨ濃度を検出できる。

月経周期の２～３日目に対象を９０ＩＵ、１２０ＩＵ、１５０ＩＵ、１８０ＩＵもしく
は２１０ＩＵＦＥ９９９０４９または１５０ＩＵＧＯＮＡＬ－Ｆのいずれかでの治療
のために１：１：１：１：１：１に無作為化し、卵巣刺激を開始した。無作為化は、スク
リーニングでのＡＭＨレベルによって層別化した［５．０～１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ（低Ａ
ＭＨ）および１５．０から４４．９ｐｍｏｌ／Ｌ（高ＡＭＨ））。

Ｇｏｎａｌ－Ｆは、ＦＤＡ要請で質量充填されている（ＦｂＭ）；したがってμｇ用量
に言及することが適切である。Ｇｏｎａｌ－Ｆラベルは、６００ＩＵ／４４μｇを示し、
１５０ＩＵが１１μｇであることを示す。しかしいくらかの変動があり、本治験でのバッ
チ検定は１１．３μｇＧｏｎａｌ－Ｆが１５０ＩＵと等しかったことを示した。ＦＥ９
９９０４９用量は、生物学的活性よりもタンパク質含有量（μｇ）によって表された。し
たがってＦＥ９９９０４９の用量は、５．２μｇ（９０ＩＵ）、６．９μｇ（１２０ＩＵ
）、８．６μｇ（１５０ＩＵ）、１０．３μｇ（１８０ＩＵ）または１２．１μｇ（２１
０ＩＵ）であった。

ＦＥ９９９０４９またはＧＯＮＡＬ－Ｆの一日用量レベルは、刺激期間全体を通じて固
定する。刺激の際に対象は、刺激１、４および６日目ならびにその後少なくとも隔日でモ
ニターする。≧１５ｍｍの卵胞３個が観察されると、来診は毎日実施する。対象は、ＦＥ
９９９０４９またはＧＯＮＡＬ－Ｆで最長１６日間治療する。

早発性ＬＨサージを防ぐために、ＧｎＲＨアンタゴニスト（酢酸ガニレリクス、ＯＲＧ
ＡＬＵＴＲＡＮ、ＭＳＤ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ）を刺激６日目に一日用量０
．２５ｍｇで開始する場合があり、刺激期間を通じて継続する。最終卵胞成熟の誘発は、
直径≧１７ｍｍを有する卵胞≧３個が観察された日に行う。直径≧１２ｍｍを有する卵胞
が＜２５個ある場合は、２５０μｇ組換えｈＣＧ（絨毛性ゴナドトロピンアルファ、ＯＶ
ＩＴＲＥＬＬＥ、ＭｅｒｃｋＳｅｒｏｎｏ／ＥＭＤＳｅｒｏｎｏ）を投与する。≧１
２ｍｍを有する卵胞２５～３５個ある場合は、０．２ｍｇＧｎＲＨアゴニスト（酢酸ト
リプトレリン、ＤＥＣＡＰＥＰＴＹＬ／ＧＯＮＡＰＥＰＴＹＬ、ＦｅｒｒｉｎｇＰｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を投与する。直径≧１２ｍｍを有する卵胞＞３５個と定義さ
れる過剰卵巣応答の場合は、治療は中止する。刺激１０日目に直径≧１０ｍｍを有する卵
胞＜３個が観察されると定義される卵巣応答が乏しい場合は、サイクルは中止される場合
がある。

卵母細胞採取は、最終卵胞成熟の誘発後３６ｈ（±２ｈ）で行い、卵母細胞はＩＶＦお
よび／またはＩＣＳＩによって受精させた。受精および胚発育は、卵母細胞採取から移植
日まで評価する。ｈＣＧでの最終卵胞成熟の誘発を受けた対象について、利用可能な最高
品質の胚盤胞の１個を卵母細胞採取の５日後に移植し、残りの胚盤胞は凍結する。ＧｎＲ
Ｈアゴニストでの最終卵胞成熟の誘発を受けた対象については、新たなサイクルでは胚移
植は行わず、代わりに胚盤胞を５日目に凍結する。Ｖａｇｉｎａｌｐｒｏｇｅｓｔｅｒ
ｏｎｅｔａｂｌｅｔｓ（ＬＵＴＩＮＵＳ、ＦｅｒｒｉｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃ
ａｌｓ）１００ｍｇ、１日３回を黄体期支持のために卵母細胞採取日後から臨床妊娠来診
日まで与える。βｈＣＧ検査を胚移植の１３～１５日後に実施し、臨床的妊娠を胚移植の
５～６週間後に経膣超音波（ＴＶＵ）によって確認する。

結果
採取した卵母細胞の数（主要評価項目）を下の表に示す。

主要目的は合致した：採取された卵母細胞の数に関してＦＥ９９９０４９についての顕
著な用量－応答関係が確立された。この発見は、治験対象集団全体についてだけでなく、
無作為化で用いられた２つのＡＭＨ層それぞれについても観察された。ＦＥ９９９０４９
についての顕著な用量－応答関係が、全ての重要目的である薬物動態パラメーター、例え
ばエストラジオール、インヒビンＢおよびインヒビンＡについて実証された。同様のマイ
クログラム用量レベルでは、ＦＥ９９９０４９の薬力学的応答はＧＯＮＡＬ－Ｆより大き
かった（これらの結果は未記載）。
ＦＥ９９９０４９への暴露後の血清ＦＳＨ濃度は、ＧＯＮＡＬ－Ｆについてよりも顕著に
高かった。結果は、ＦＥ９９９０４９のＰＫプロファイルがＧＯＮＡＬ－Ｆのものとは異
なることを確認する。
ＦＥ９９９０４９で治療したＩＶＦ／ＩＣＳＩ患者における受精率、胚盤胞発育および妊
娠率は、予測内であった。
ＦＥ９９９０４９の使用について安全への懸念はなかった。良好な局所忍容性が記録され
た。

さらなる分析
本出願人らは、採取される卵母細胞の数に関する以下の基準を満たすＦＥ９９９０４９
用量を同定するためにデータをさらに分析した：
・採取される卵母細胞が８～１４個の範囲
・＜８個の卵母細胞を有する患者の割合を最小化
・≧２０個の卵母細胞を有する患者の割合を最小化

本出願人らは、体重の影響も調査した。関連する場合、用量は平均的対象についてμｇ
／ｋｇに換算される。このμｇ／ｋｇおよび±０．０１μｇ／ｋｇの値を採取された卵母
細胞の分布および安全性プロファイルに関してモデルにおいて評価し、最適用量を同定す
る。

低ＡＭＨ層
表２に示すとおり、第一基準を満たすＦＥ９９９０４９の用量（採取される卵母細胞が
８～１４個の範囲）は、１２．１μｇであった（採取された卵母細胞平均９．４個）。卵
母細胞の分布を下の表３に示す。

囲みおよび矢印で示すとおり、１２．１μｇＦＥ９９９０４９の用量は、低ＡＭＨ群
において対象の６０％で最も望ましい数の採取された卵母細胞を提供する。これは、Ｇｏ
ｎａｌ－Ｆ（最も望ましい数の卵母細胞は、対象の３３％だけ）について顕著な改善であ
る。

下の表４は、低ＡＭＨ層における過剰応答の徴候の分析を示す（データは対象の数）。
中程度性または重度性の初期ＯＨＳＳの適応はなく、予防的処置が必要となる出現はなか
ったことが認められうる；低ＡＭＨを有する患者において１２．１μｇＦＥ９９９０４
９の用量に関連する懸案事項はない。

図７は、種々の用量について（低ＡＭＨ層に関して）採取される卵母細胞への体重の影
響を示す。矢印は、用量１２．１μｇで治療した体重４５ｋｇから９０ｋｇの間の対象か
ら採取された卵母細胞の数を示す。認められるとおり（テキストボックス）体重４５ｋｇ
の患者と体重９０ｋｇの患者との間の変化は、卵母細胞約０．５個未満である；換言する
と、この用量では体重については採取される卵母細胞に顕著な変化がないことから、ＦＥ
９９９０４９の用量が少なくとも１２μｇである場合には、低ＡＭＨを有する患者におい
て体重による投与は必要ではない。

したがって本出願人らは、６から１８μｇ、例えば９から１４μｇ、例えば１２μｇの
ヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量は、＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ、例えば０．０５～１４
．９ｐｍｏｌ／Ｌ、例えば５．０～１４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨを有する患者にお
ける不妊症治療での使用のために好適であることを見出した。用量は、ＯＨＳＳの危険性
を最小化しながら有効な応答を提供する。

高ＡＭＨ層
表２に示すとおり、ＦＥ９９９０４９の３種の用量が第一基準（採取される卵母細胞が
８～１４個の範囲）を満たした：６．９μｇ（採取される卵母細胞平均９．１個）、８．
６μｇ（採取される卵母細胞平均１０．６個）および１０．３μｇ（採取される卵母細胞
平均１３．６個）。

図８は、種々の用量について（高ＡＭＨ層に関して）採取される卵母細胞への体重の影
響を示す。矢印は、用量６．９μｇ、８．６μｇおよび１０．３μｇで治療された体重４
５ｋｇから９０ｋｇの間の対象から採取された卵母細胞の数を示す。認められるとおり（
テキストボックス）変化は顕著である：用量６．９μｇに関して９０ｋｇの患者と比較し
て４５ｋｇの患者からは６個の追加的卵母細胞が採取される；用量８．６μｇに関して９
０ｋｇの患者と比較して４５ｋｇの患者からは４個の追加的卵母細胞が採取される；用量
１０．１μｇに関して９０ｋｇの患者と比較して４５ｋｇの患者からは２．５個の追加的
卵母細胞が採取される。換言すると、体重による投与は、高ＡＭＨを有する患者でＦＥ９
９９０４９の用量が１２μｇ未満である場合に、これらの用量で採取される卵母細胞が体
重で顕著に変化することから、影響を有する。

下の表５ａは、採取された卵母細胞（表２から）のＡＭＨによるさらなる分解を示す。
これは、ＡＭＨの各サブ層について第一基準（採取される卵母細胞が８～１４個の範囲）
を満たす用量を示す（囲み）。

下の表５ｂは、これらのサブ群について、過剰応答またはアゴニスト誘発のいずれかに
より治療が中止された患者の分析を示す。例えば、２５～３４ｐｍｏｌ／ＬＡＭＨ層の
患者１名が用量１０．３μｇ後に過剰応答により中止され、２５～３４ｐｍｏｌ／ＬＡ
ＭＨ層の患者１名が用量１２．１μｇ後に過剰応答により中止され；３５～４５ｐｍｏｌ
／ＬＡＭＨ層の患者１名が用量１０．３μｇ後にアゴニスト誘発後に中止され；３５～
４５ｐｍｏｌ／ＬＡＭＨ層の患者１名が用量６．９μｇ後にアゴニスト誘発後に中止さ
れた。

したがって、体重による投与の調整（図８）およびＡＭＨレベルは、高ＡＭＨ層におい
て中止を最小化し、卵母細胞採取を最大化するために有用であることが認められうる。

本出願人らは下の用量がＯＨＳＳの危険性を最小化しながら有効な応答を提供すること
を見出した（ｋｇは、患者のｋｇ体重である）。

下は、体重による投与が求められない場合に適切である。

下は、ＡＭＨのより少ない分類が必要である場合に適切である。

下は、体重による投与が求められない場合に適切である。

したがって本出願人らは、９から１４μｇ、例えば１２μｇのヒト由来組換えＦＳＨの
用量または等量が＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ、例えば０．０５～１４．９ｐｍｏｌ／Ｌ、例えば
５．０～１４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨを有する患者における不妊症治療での使用の
ために好適であることを見出した。用量は、ＯＨＳＳの危険性を最小化しながら有効な応
答を提供する。

本出願人らは、５から１２．５μｇ、例えば６から１０．５μｇのヒト由来組換えＦＳ
Ｈの用量または等量が≧１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨを有する患者における不妊症治療
での使用のために好適であることを見出した。用量は、ＯＨＳＳの危険性を最小化しなが
ら有効な応答を提供する。

本出願人らは、患者の体重１ｋｇあたり０．０９から０．１９μｇのヒト由来組換えＦ
ＳＨの（例えば、一日）用量または等量が、≧１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有
する患者における不妊症治療での使用のために好適であることを見出した。本出願人らは
、患者の体重１ｋｇあたり０．１４から０．１９μｇのヒト由来組換えＦＳＨ（好ましく
は０．１５から０．１６μｇのヒト由来組換えＦＳＨ）の（例えば、一日）用量または等
量が、１５から２４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者における不妊症治
療での使用のために好適であることを見出した。本出願人らは、患者の体重１ｋｇあたり
０．１１から０．１４μｇのヒト由来組換えＦＳＨ（好ましくは０．１２から０．１３μ
ｇのヒト由来組換えＦＳＨ）の（例えば、一日）用量または等量が、２５から３４．９ｐ
ｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者における不妊症治療での使用のために好適で
あることを見出した。本出願人らは、患者の体重１ｋｇあたり０．１０から０．１１μｇ
のヒト由来組換えＦＳＨの（例えば、一日）用量または等量が、≧３５ｐｍｏｌ／Ｌの血
清ＡＭＨレベルを有する患者における不妊症治療での使用のために好適であることを見出
した。これらの用量は、ＯＨＳＳの危険性を最小化しながら有効な応答を提供する。

本出願人らは、例えばヒト由来組換えＦＳＨでの初回刺激サイクルについて、患者の体
重１ｋｇあたり０．１５から０．２１μｇ（例えば、０．１６μｇ）のヒト由来組換えＦ
ＳＨの（例えば、一日）用量または等量が、＜１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有
する患者における不妊症治療での使用のために好適であることを見出した。しかし、この
ＡＭＨレベルで患者が体重によって投与される必要はない。

［実施例１０Ａ］
個別化されたＣＯＳプロトコール（低ＡＭＨ）
選択された患者は、当技術分野において周知の方法による体外受精（ＩＶＦ）／卵細胞
質内精子注入法（ＩＣＳＩ）のためのＣＯＳを受けるところである。前処置プロトコール
は、ＡＭＨＧｅｎ－ＩＩｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ
ａｓｓａｙｋｉｔ（ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｗｅｂｓｔｅｒ、
Ｔｅｘａｓ）を用いる患者の血清ＡＭＨの評価／スクリーニングを含む。このアッセイは
、１．１ｐｍｏｌ／Ｌの定量下限を有して０．５７ｐｍｏｌ／Ｌを超えるＡＭＨ濃度を検
出できる。ＡＭＨは他のアッセイキット（例えば、Ｒｏｃｈｅから入手可能）を用いて測
定することができる。

スクリーニング時のＡＭＨレベルによるＦＥ９９９０４９の初回量の投与を除いてＣＯ
Ｓプロトコールは、通常のやり方で進行する。＜１４．９ｐｍｏｌ／ＬのＡＭＨレベルを
有する患者は、およそ１２μｇＦＥ９９９０４９（実施例６の方法により製造されたヒ
ト由来組換えＦＳＨ生成物）の初回一日投与量を投与される。１５から２４．９ｐｍｏｌ
／ＬのＡＭＨレベルを有する患者は、患者の体重１ｋｇあたり０．１５から０．１９μｇ
のヒト由来組換えＦＳＨの初回一日投与量を受ける。２５から３４．９ｐｍｏｌ／ＬのＡ
ＭＨレベルを有する患者は、患者の体重１ｋｇあたり０．１１から０．１３μｇのヒト由
来組換えＦＳＨの初回一日投与量を受ける。≧３５ｐｍｏｌ／ＬのＡＭＨレベルを有する
患者は、患者の体重１ｋｇあたり０．１０から０．１１μｇのヒト由来組換えＦＳＨの初
回一日投与量を受ける。

［実施例１１］
個別化されたＣＯＳプロトコール
このプロトコールにおける用量は、実施例１０Ａよりも好ましくは少ない。

選択された患者は、当技術分野において周知の方法による体外受精（ＩＶＦ）／卵細胞
質内精子注入法（ＩＣＳＩ）のためのＣＯＳを受けるところである。前処置プロトコール
は、ＡＭＨＧｅｎ－ＩＩｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ
ａｓｓａｙｋｉｔ（ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｗｅｂｓｔｅｒ、
Ｔｅｘａｓ）を用いる患者の血清ＡＭＨの評価／スクリーニングを含む。このアッセイは
、１．１ｐｍｏｌ／Ｌの定量下限を有して０．５７ｐｍｏｌ／Ｌを超えるＡＭＨ濃度を検
出できる。

ＣＯＳプロトコールは、下の表と合致するスクリーニング時でのＡＭＨレベルによるＦ
Ｅ９９９０４９の初回量の投与を除いて通常のやり方で進行する。したがって、５～１４
．８ｐｍｏｌ／ＬのＡＭＨレベルを有する患者には、１８０ＩＵＦＳＨをおよそ８～１
１μｇのＦＥ９９９０４９、実施例６の方法により製造されたヒト由来組換えＦＳＨ産物
の形態で投与する。３０～４４．９ｐｍｏｌ／ＬのＡＭＨレベルを有する患者には、１２
０ＩＵＦＳＨをおよそ４～７μｇのＦＥ９９９０４９、実施例６の方法により製造され
たヒト由来組換えＦＳＨ産物の形態で投与する。ＡＭＨレベルが利用可能ではない場合、
患者に１２０～１８０ＩＵＦＳＨをおよそ６～１１μｇのＦＥ９９９０４９、実施例６
の方法により製造されたヒト由来組換えＦＳＨ産物の形態で投与する。

参考文献
Andersen CY, Westergaard LG, and van Wely M. (2004). FSH isoform composition of
commercial gonadotrophin preparations: a neglected aspect? Reprod Biomed Online.
9(2), 231-236.
Arey BJ, Stevis PE, Deecher DC, Shen ES, Frail DE, Negro-Vilar A, and Lopez FJ.
(1997) Induction of promiscuous G protein coupling of the follicle-stimulating h
ormone (FSH) receptor: a novel mechanism for transducing pleiotropic actions of
FSH isoforms. Mol Endocrinol. 11(5), 517-526.
Baenziger JU and Green ED. (1988). Pituitary glycoprotein hormone oligosaccharid
es: structure, synthesis and function of the asparagine-linked oligosaccharides
on lutropin, follitropin and thyrotropin. Biochim Biophys Acta. 947(2), 287-306.
Bassett RM, and Driebergen R. (2005). Continued improvements in the quality and
consistency of follitropin alfa, recombinant human FSH. Reprod Biomed Online. 10
(2), 169-177.
Damian-Matsumura P, Zaga V, Maldonado A, Sanchez-Hernandez C, Timossi C, and Ull
oa-Aguirre A. (1999). Oestrogens regulate pituitary alpha2,3-sialyltransferase m
essenger ribonucleic acid levels in the female rat. J Mol Endocrinol. 23(2), 153
-165.
D'Antonio M., Borrelli F. , Datola A., Bucci R. , Mascia M. , Polletta P., Pisci
telli D., and Papoian R. (1999) Biological characterization of recombinant human
follicle stimulating hormone isoforms. Human Reproduction 14, 1160-1167
Dalpathado DS, Irungu J, Go EP, Butnev VY, Norton K, Bousfield GR, and Desaire H
. (2006). Comparative glycomics of the glycoprotein follicle stimulating hormone
: glycopeptide analysis of isolates from two mammalian species. Biochemistry. 45
(28), 8665-8673. No copy
Dias JA, Van Roey P. (2001). Structural biology of human follitropin and its rec
eptor. Arch Med Res. 32(6), 510-519
Fiddes, J. C. and Goodman, H. M. (1979) Isolation, cloning and sequence analysis
of the cDNA for the alpha-subunit of human chorionic gonadotropin. Nature, 281,
351-356.
Flack, M.R., Bennet, A.P., Froehlich, J. Anasti, JN and Nisula, B. (1994). Incre
ased biological activity due to basic isoforms in recombinant human follicle-sti
mulating hormone produced in a human cell line. J. Clin. Endocrinol. Metab., 79,
756-760
Fox KM, Dias JA, and Van Roey P. (2001). Three-dimensional structure of human fo
llicle-stimulating hormone. Mol Endocrinol. 15(3), 378-89
Grabenhorst E, Hoffmann A, Nimtz M, Zettlmeissl G, and Conradt HS. (1995). Const
ruction of stable BHK-21 cells coexpressing human secretory glycoproteins and hu
man Gal(beta 1-4)GlcNAc-R alpha 2,6-sialyltransferase alpha 2,6-linked NeuAc is
preferentially attached to the Gal(beta 1-4)GlcNAc(beta 1-2)Man(alpha 1-3)-branc
h of diantennary oligosaccharides from secreted recombinant beta-trace protein.
Eur J Biochem. 232(3), 718-25.
Green ED and Baenziger JU. (1988). Asparagine-linked oligosaccharides on lutropi
n, follitropin, and thyrotropin. II. Distributions of sulfated and sialylated ol
igosaccharides on bovine, ovine, and human pituitary glycoprotein hormones. J Bi
ol Chem. 263(1), 36-44.
Grundmann,U., Nerlich,C., Rein,T. and Zettlmeissl, G. (1990). Complete cDNA sequ
ence encoding human beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase. G Nucleic Acid
s Res. 18 (3), 667
Howles, C.M. (1996). Genetic engineering of human FSH (Gonal-F). Hum Reprod. Upd
ate, 2,172-191.
Kagawa Y, Takasaki S, Utsumi J, Hosoi K, Shimizu H, Kochibe N, and Kobata A. (19
88). Comparative study of the asparagine-linked sugar chains of natural human in
terferon-beta 1 and recombinant human interferon-beta 1 produced by three differ
ent mammalian cells. J Biol Chem. 263(33), 17508-17515.
Keene, J.L., Matzuk, M.M., Otani, T., Fauser, B,C,J,M., Galway, A.B., Hsueh, A.J
.W. and Boime, I. (1989). Expression of Biologically active Human Follitropin in
Chinese Hamster Ovary Cells. The Journal of Biological Chemistry, 264(9), 4769-
4775.
Kitagawa,H. and Paulson,J.C (1994) Cloning of a novel alpha 2,3-sialyltransferas
e that sialylates glycoprotein and glycolipid carbohydrate groups. J. Biol. Chem
. 269(2), 1394-1401.
Lee EU, Roth J, and Paulson JC (1989) Alteration of terminal glycosylation seque
nces on N-linked oligosaccharides of Chinese hamster ovary cells by expression o
f beta-galactoside alpha 2,6-sialyltransferase. J Biol Chem. 264(23), 13848-1385
5.
de Leeuw, R., Mulders, J., Voortman, G. Rombout, F. Damm, J. and Kloosterboer, L
. (1996) Structure-function relationship of recombinant follicle stimulating hor
mone (Puregon). Mol. Hum. Reprod., 2, 361-369.
Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. (1951) Protein measurement with th
e Folin phenol reagent. J Biol Chem. 193(1), 265-75.
Lowry, PJ, McLean, C, Jones RL and Satgunasingam N. (1976) Purification of anter
ior pituitary and hypothalamic hormones Clin Pathol Suppl (Assoc Clin Pathol). 7
, 16-21.
Olivennes F, Howles CM, Borini A, Germond M, Trew G, Wikland M, Zegers-Hochschil
d F, Saunders H (2009) Individualizing FSH dose for assisted reproduction using
a novel algorithm: the CONSORT study. Reprod Biomed Online. 2009 Feb;18(2):195
-204.
Pierce JG, and Parsons TF (1981) Glycoprotein hormones: structure and function A
nnu Rev Biochem. 50, 465-495.
Pricer WE Jr, and Ashwell G. (1971). The binding of desialylated glycoproteins b
y plasma membranes of rat liver. J Biol Chem. 246(15), 4825-33.
Rathnam P, and Saxena BB. (1975). Primary amino acid sequence of follicle-stimul
ating hormone from human pituitary glands. I. alpha subunit. J Biol Chem.;250(17
):6735-6746.
Regoeczi E, Debanne MT, Hatton MC, and Koj A. (1978) Elimination of asialofetuin
and asialoorosomucoid by the intact rat. Quantitative aspects of the hepatic cl
earance mechanism. Biochim Biophys Acta. 541(3), 372-84.

Royle L, Radcliffe CM, Dwek RA and Rudd PM (2006) Methods in Molecular Biology,
ed I Brockhausen-Schutzbach (Humana Press), 347: Glycobiology protocols, 125-144
.
Ryan RJ, Keutmann HT, Charlesworth MC, McCormick DJ, Milius RP, Calvo FO and Vut
yavanich T. (1987). Structure-function relationships of gonadotropins. Recent Pr
og Horm Res.;43,:383-429.
Saxena BB and Rathnam P. (1976) Amino acid sequence of the beta subunit of folli
cle-stimulating hormone from human pituitary glands. J Biol Chem. 251(4), 993-10
05
Steelman SL, and Pohley FM. (1953) Assay of the follicle stimulating hormone bas
ed on the augmentation with human chorionic gonadotropin. Endocrinology. 53(6),
604-616.
Steer CJ, and Ashwell G. (1980) Studies on a mammalian hepatic binding protein s
pecific for asialoglycoproteins. Evidence for receptor recycling in isolated rat
hepatocytes. J Biol Chem. 255(7), 3008-13.
Svensson EC, Soreghan B, and Paulson JC. (1990) Organization of the beta-galacto
side alpha 2,6-sialyltransferase gene. Evidence for the transcriptional regulati
on of terminal glycosylation. J Biol Chem. 265(34):20863-20868.
Takeuchi M, Takasaki S, Miyazaki H, Kato T, Hoshi S, Kochibe N, and Kobata A (19
88). Comparative study of the asparagine-linked sugar chains of human erythropoi
etins purified from urine and the culture medium of recombinant Chinese hamster
ovary cells. J Biol Chem. 263(8), 3657-3663.
Timossi CM, Barrios de Tomasi J, Zambrano E, Gonzalez R, Ulloa-Aguirre A. (1998)
. A naturally occurring basically charged human follicle-stimulating hormone (FS
H) variant inhibits FSH-induced androgen aromatization and tissue-type plasminog
en activator enzyme activity in vitro. Neuroendocrinology. 67(3), 153-163.
Timossi CM, Barrios-de-Tomasi J, Gonzalez-Suarez R, Arranz MC, Padmanabhan V, Co
nn PM, and Ulloa-Aguirre A. (2000). Differential effects of the charge variants
of human follicle-stimulating hormone. J Endocrinol. 165(2), 193-205.
Ulloa-Aguirre, A., Espinoza, R., Damian-Matsumura, P. and Chappel, S.C. (1988) I
mmunological and biological potencies of the different molecular species of gona
dotrophins. Hum. Reprod. 3, 491-501.
Ulloa-Aguirre, A., Cravioto, A., Damian-Matsumura, P. Jimenez, M, Zambrano, E an
d Diaz-Sanchez, V. (1992) Biological characterization of the naturally occurring
analogues of intrapituitary human follicle stimulating hormone. Hum. Reprod. 7,
23-30.
Ulloa-Aguirre A, Midgley AR Jr, Beitins IZ, and Padmanabhan V. (1995). Follicle-
stimulating isohormones: characterization and physiological relevance. Endocr Re
v.16(6), 765-787.
Ulloa-Aguirre A, Maldonado A, Damian-Matsumura P, and Timossi C (2001). Endocrin
e regulation of gonadotropin glycosylation. Arch Med Res. 32(6), 520-532.
Ulloa-Aguirre A, Timossi C, Barrios-de-Tomasi J, Maldonado A, and Nayudu P. (200
3). Impact of carbohydrate heterogeneity in function of follicle-stimulating hor
mone: studies derived from in vitro and in vivo models. Biol Reprod. 69(2), 379-
389.
Van Lenten L, and Ashwell G. (1972) The binding of desialylated glycoproteins by
plasma membranes of rat liver. Development of a quantitative inhibition assay.
J Biol Chem. 247(14), 4633-40.
Wide, L. and Albertsson-Wikland, K. (1990) Change in electrophoretic mobility of
human follicle-stimulating hormone in serum after administration of gonadotropi
n-releasing hormone. J. Clin. Endocrinol. Metab. 70, 271-276.
Wide, L. and Bakos, O. (1993). More basic forms of both human follicle-stimulati
ng hormone and luteinizing hormone in serum at midcycle compared with the follic
ular or luteal phase. J. Clin. Endocrinol. Metab., 76, 885-889.
Wide L, Naessen T, Sundstrom-Poromaa I, Eriksson K. (2007) Sulfonation and sialy
lation of gonadotropins in women during the menstrual cycle, after menopause, an
d with polycystic ovarian syndrome and in men. J Clin Endocrinol Metab.;92(11),
4410-4417.
Zambrano E, Zarinan T, Olivares A, Barrios-de-Tomasi J, and Ulloa-Aguirre A. (19
99). Receptor binding activity and in vitro biological activity of the human FSH
charge isoforms as disclosed by heterologous and homologous assay systems: impl
ications for the structure-function relationship of the FSH variants. Endocrine.
10(2), 113-121.
Zhang X, Lok SH, and Kon OL (1998) Stable expression of human alpha-2,6-sialyltr
ansferase in Chinese hamster ovary cells: functional consequences for human eryt
hropoietin expression and bioactivity. Biochim Biophys Acta. 1425(3), 441-452.

SEQ ID NO: 1
Follicle stimulating hormone alpha polypeptide
Accession number AH007338
Nucleotide sequence of FSH alpha
1 ATGGATTACT ACAGAAAATA TGCAGCTATC TTTCTGGTCA CATTGTCGGT GTTTCTGCAT
61 GTTCTCCATT CCGCTCCTGA TGTGCAGGAT TGCCCAGAAT GCACGCTACA GGAAAACCCA
121 TTCTTCTCCC AGCCGGGTGC CCCAATACTT CAGTGCATGG GCTGCTGCTT CTCTAGAGCA
181 TATCCCACTC CACTAAGGTC CAAGAAGACG ATGTTGGTCC AAAAGAACGT CACCTCAGAG
241 TCCACTTGCT GTGTAGCTAA ATCATATAAC AGGGTCACAG TAATGGGGGG TTTCAAAGTG
301 GAGAACCACA CGGCGTGCCA CTGCAGTACT TGTTATTATC ACAAATCTTA A
Protein sequence of FSH alpha (SEQ ID NO: 5)
1 MDYYRKYAAI FLVTLSVFLH VLHSAPDVQD CPECTLQENP FFSQPGAPIL QCMGCCFSRA
61 YPTPLRSKKT MLVQKNVTSE STCCVAKSYN RVTVMGGFKV ENHTACHCST CYYHKS

SEQ ID NO: 2
Follicle stimulating hormone beta polypeptide
Accession number NM_000510
Nucleotide sequence of FSH beta
1 ATGAAGACAC TCCAGTTTTT CTTCCTTTTC TGTTGCTGGA AAGCAATCTG CTGCAATAGC
61 TGTGAGCTGA CCAACATCAC CATTGCAATA GAGAAAGAAG AATGTCGTTT CTGCATAAGC
121 ATCAACACCA CTTGGTGTGC TGGCTACTGC TACACCAGGG ATCTGGTGTA TAAGGACCCA
181 GCCAGGCCCA AAATCCAGAA AACATGTACC TTCAAGGAAC TGGTATATGA AACAGTGAGA
241 GTGCCCGGCT GTGCTCACCA TGCAGATTCC TTGTATACAT ACCCAGTGGC CACCCAGTGT
301 CACTGTGGCA AGTGTGACAG CGACAGCACT GATTGTACTG TGCGAGGCCT GGGGCCCAGC
361 TACTGCTCCT TTGGTGAAAT GAAAGAATAA
Protein sequence of FSH beta (SEQ ID NO: 6)
1 MKTLQFFFLF CCWKAICCNS CELTNITIAI EKEECRFCIS INTTWCAGYC YTRDLVYKDP
61 ARPKIQKTCT FKELVYETVR VPGCAHHADS LYTYPVATQC HCGKCDSDST DCTVRGLGPS
121 YCSFGEMKE

SEQ ID NO: 3
Beta-galactoside alpha-2,3-sialyltransferase 4
Accession Number L23767
Nucleotide sequence of ST3GAL4
1 ATGTGTCCTG CAGGCTGGAA GCTCCTGGCC ATGTTGGCTC TGGTCCTGGT CGTCATGGTG
61 TGGTATTCCA TCTCCCGGGA AGACAGGTAC ATCGAGCTTT TTTATTTTCC CATCCCAGAG
121 AAGAAGGAGC CGTGCCTCCA GGGTGAGGCA GAGAGCAAGG CCTCTAAGCT CTTTGGCAAC
181 TACTCCCGGG ATCAGCCCAT CTTCCTGCGG CTTGAGGATT ATTTCTGGGT CAAGACGCCA
241 TCTGCTTACG AGCTGCCCTA TGGGACCAAG GGGAGTGAGG ATCTGCTCCT CCGGGTGCTA
301 GCCATCACCA GCTCCTCCAT CCCCAAGAAC ATCCAGAGCC TCAGGTGCCG CCGCTGTGTG
361 GTCGTGGGGA ACGGGCACCG GCTGCGGAAC AGCTCACTGG GAGATGCCAT CAACAAGTAC
421 GATGTGGTCA TCAGATTGAA CAATGCCCCA GTGGCTGGCT ATGAGGGTGA CGTGGGCTCC
481 AAGACCACCA TGCGTCTCTT CTACCCTGAA TCTGCCCACT TCGACCCCAA AGTAGAAAAC
541 AACCCAGACA CACTCCTCGT CCTGGTAGCT TTCAAGGCAA TGGACTTCCA CTGGATTGAG
601 ACCATCCTGA GTGATAAGAA GCGGGTGCGA AAGGGTTTCT GGAAACAGCC TCCCCTCATC
661 TGGGATGTCA ATCCTAAACA GATTCGGATT CTCAACCCCT TCTTCATGGA GATTGCAGCT
721 GACAAACTGC TGAGCCTGCC AATGCAACAG CCACGGAAGA TTAAGCAGAA GCCCACCACG
781 GGCCTGTTGG CCATCACGCT GGCCCTCCAC CTCTGTGACT TGGTGCACAT TGCCGGCTTT
841 GGCTACCCAG ACGCCTACAA CAAGAAGCAG ACCATTCACT ACTATGAGCA GATCACGCTC
901 AAGTCCATGG CGGGGTCAGG CCATAATGTC TCCCAAGAGG CCCTGGCCAT TAAGCGGATG
961 CTGGAGATGG GAGCTATCAA GAACCTCACG TCCTTCTGA
Protein Sequence of ST3GAL4 (SEQ ID NO: 7)
1 MCPAGWKLLA MLALVLVVMV WYSISREDRY IELFYFPIPE KKEPCLQGEA ESKASKLFGN
61 YSRDQPIFLR LEDYFWVKTP SAYELPYGTK GSEDLLLRVL AITSSSIPKN IQSLRCRRCV
121 VVGNGHRLRN SSLGDAINKY DVVIRLNNAP VAGYEGDVGS KTTMRLFYPE SAHFDPKVEN
181 NPDTLLVLVA FKAMDFHWIE TILSDKKRVR KGFWKQPPLI WDVNPKQIRI LNPFFMEIAA
241 DKLLSLPMQQ PRKIKQKPTT GLLAITLALH LCDLVHIAGF GYPDAYNKKQ TIHYYEQITL
301 KSMAGSGHNV SQEALAIKRM LEMGAIKNLT SF

SEQ ID NO: 4
Beta-galactosamide alpha-2,6-sialyltransferase 1
Accession number NM_003032
Nucleotide sequence of ST6GAL1
1 ATGATTCACA CCAACCTGAA GAAAAAGTTC AGCTGCTGCG TCCTGGTCTT TCTTCTGTTT
61 GCAGTCATCT GTGTGTGGAA GGAAAAGAAG AAAGGGAGTT ACTATGATTC CTTTAAATTG
121 CAAACCAAGG AATTCCAGGT GTTAAAGAGT CTGGGGAAAT TGGCCATGGG GTCTGATTCC
181 CAGTCTGTAT CCTCAAGCAG CACCCAGGAC CCCCACAGGG GCCGCCAGAC CCTCGGCAGT
241 CTCAGAGGCC TAGCCAAGGC CAAACCAGAG GCCTCCTTCC AGGTGTGGAA CAAGGACAGC
301 TCTTCCAAAA ACCTTATCCC TAGGCTGCAA AAGATCTGGA AGAATTACCT AAGCATGAAC
361 AAGTACAAAG TGTCCTACAA GGGGCCAGGA CCAGGCATCA AGTTCAGTGC AGAGGCCCTG
421 CGCTGCCACC TCCGGGACCA TGTGAATGTA TCCATGGTAG AGGTCACAGA TTTTCCCTTC
481 AATACCTCTG AATGGGAGGG TTATCTGCCC AAGGAGAGCA TTAGGACCAA GGCTGGGCCT
541 TGGGGCAGGT GTGCTGTTGT GTCGTCAGCG GGATCTCTGA AGTCCTCCCA ACTAGGCAGA
601 GAAATCGATG ATCATGACGC AGTCCTGAGG TTTAATGGGG CACCCACAGC CAACTTCCAA
661 CAAGATGTGG GCACAAAAAC TACCATTCGC CTGATGAACT CTCAGTTGGT TACCACAGAG
721 AAGCGCTTCC TCAAAGACAG TTTGTACAAT GAAGGAATCC TAATTGTATG GGACCCATCT
781 GTATACCACT CAGATATCCC AAAGTGGTAC CAGAATCCGG ATTATAATTT CTTTAACAAC
841 TACAAGACTT ATCGTAAGCT GCACCCCAAT CAGCCCTTTT ACATCCTCAA GCCCCAGATG
901 CCTTGGGAGC TATGGGACAT TCTTCAAGAA ATCTCCCCAG AAGAGATTCA GCCAAACCCC
961 CCATCCTCTG GGATGCTTGG TATCATCATC ATGATGACGC TGTGTGACCA GGTGGATATT
1021 TATGAGTTCC TCCCATCCAA GCGCAAGACT GACGTGTGCT ACTACTACCA GAAGTTCTTC
1081 GATAGTGCCT GCACGATGGG TGCCTACCAC CCGCTGCTCT ATGAGAAGAA TTTGGTGAAG
1141 CATCTCAACC AGGGCACAGA TGAGGACATC TACCTGCTTG GAAAAGCCAC ACTGCCTGGC
1201 TTCCGGACCA TTCACTGCTA A
0p-
Protein Sequence of ST6GAL1 (SEQ ID NO: 8)
1 MIHTNLKKKF SCCVLVFLLF AVICVWKEKK KGSYYDSFKL QTKEFQVLKS LGKLAMGSDS
61 QSVSSSSTQD PHRGRQTLGS LRGLAKAKPE ASFQVWNKDS SSKNLIPRLQ KIWKNYLSMN
121 KYKVSYKGPG PGIKFSAEAL RCHLRDHVNV SMVEVTDFPF NTSEWEGYLP KESIRTKAGP
181 WGRCAVVSSA GSLKSSQLGR EIDDHDAVLR FNGAPTANFQ QDVGTKTTIR LMNSQLVTTE
241 KRFLKDSLYN EGILIVWDPS VYHSDIPKWY QNPDYNFFNN YKTYRKLHPN QPFYILKPQM
301 PWELWDILQE ISPEEIQPNP PSSGMLGIII MMTLCDQVDI YEFLPSKRKT DVCYYYQKFF
361 DSACTMGAYH PLLYEKNLVK HLNQGTDEDI YLLGKATLPG FRTIHC

図１、２および３：ｐＦＳＨアルファ／ベータ、ｐＳＴ３およびｐＳＴ６発現ベクター
のプラスミド地図。ＣＭＶ＝サイトメガロウイルスプロモーター、ＢＧＨｐ（Ａ）＝ウシ
成長ホルモンポリアデニル化配列、ｆｌｏｒｉ＝ｆｌ複製開始点、ＳＶ４０＝サルウイ
ルス４０プロモーター、Ｎｅｏ＝ネオマイシン耐性マーカー、Ｈｙｇ＝ハイグロマイシン
耐性マーカー、ＳＶ４０ｐ（Ａ）＝サルウイルス４０ポリアデニル化配列、ＦＳＨＡ＝
卵胞刺激ホルモンアルファポリペプチド、ＦＳＨＢ＝卵胞刺激ホルモンベータポリペプ
チド、ＳＴ３ＧＡＬ４＝α２，３－シアリルトランスフェラーゼ、ＳＴ６ＧＡＬ１＝α２
，６－シアリルトランスフェラーゼ、ＣｏｌＥｌ＝ＣｏｌＥｌ複製開始点、Ａｍｐ＝アン
ピシリン耐性マーカー。

Claims

患者（例えば、０．０５ｐｍｏｌ／Ｌ以上の血清ＡＭＨレベルを有する患者）の不妊症
治療における使用のためのＦＳＨを含む製品であって、２～２４μｇ、例えば２から１５
μｇのヒト由来組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の用量または等量を含む製品。
＜１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者の不妊症治療における使用のため
のＦＳＨを含む請求項１に記載の使用のための製品であって、９から１４μｇのヒト由来
組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の用量または等量を含む製品。
１２μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量を含む、請求項２に記載の使用のた
めの製品。
不妊症治療が、患者の血清ＡＭＨレベルを判定するステップ、および＜１５ｐｍｏｌ／
Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者に用量を投与するステップを含む、請求項２または請
求項３に記載の使用のための製品。
≧１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者の不妊症治療における使用のため
のＦＳＨを含む請求項１に記載の使用のための製品であって、５から１２．５μｇのヒト
由来組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の用量または等量を含む製品。
不妊症治療が、患者の血清ＡＭＨレベルを判定するステップ、および≧１５ｐｍｏｌ／
Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者に用量を投与するステップを含む、請求項５に記載の
使用のための製品。
≧１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者の不妊症治療における使用のため
のＦＳＨを含む請求項１に記載の使用のための製品であって、患者の体重１ｋｇあたり０
．０９から０．１９μｇのヒト由来組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の用量または等量
での投与用である製品。
１５から２４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者の治療における請求項
７に記載の使用のための製品であって、患者の体重１ｋｇあたり０．１４から０．１９μ
ｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量での投与用である製品。
２５から３４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者の治療での請求項７に
記載の使用のための製品であって、患者の体重１ｋｇあたり０．１１から０．１４μｇの
ヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量での投与用である製品。
≧３５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する患者の治療における請求項７に記載の
使用のための製品であって、患者の体重１ｋｇあたり０．１０から０．１１μｇのヒト由
来組換えＦＳＨの用量または等量での投与用である製品。
不妊症治療が、患者の血清ＡＭＨレベルを判定するステップ、および規定の血清ＡＭＨ
レベルを有する患者に用量を投与するステップを含む、請求項７から１０のいずれかに記
載の使用のための製品。
卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）がヒト由来組換えＦＳＨである、前記請求項のいずれかに
記載の製品。
ＦＳＨがα２，３－およびα２，６－シアリル化を含む、前記請求項のいずれかに記載
の製品。
総シアリル化の２５から５０％、例えば３０から５０％がα２，６－シアリル化である
、請求項１３に記載の製品。
総シアリル化の５０から７０％がα２，３－シアリル化である、請求項１３または請求
項１４に記載の製品。
ＦＳＨがモノ－、ジ－、トリ－およびテトラ－シアリル化グリカン構造を含み、シアリ
ル化グリカン構造の１５～２４％、例えば１７～２３％がテトラシアリル化グリカン構造
である、前記請求項のいずれかに記載の製品。
Ｎａ⁺－もしくはＫ⁺－塩またはこれらの組合せからなる群から選択される薬学的に許容
されるアルカリ金属カチオンを含む塩をさらに含む、前記請求項のいずれかに記載の不妊
症治療での使用のための卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）を含む製品。
（ａ）対象の血清ＡＭＨレベルを測定するステップ；および
（ｂ）２～２４μｇ、例えば２から１５μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量を
対象に投与するステップ
を含む、不妊症の治療方法。
（ａ）対象の血清ＡＭＨレベルを判定するステップ；および（ｂ）＜１５ｐｍｏｌ／Ｌ
の血清ＡＭＨレベルを有する対象に９から１４μｇのヒト由来組換え卵胞刺激ホルモン（
ＦＳＨ）の用量または等量を投与するステップを含む、不妊症の治療方法。
（ａ）対象の血清ＡＭＨレベルを判定するステップ；および（ｂ）≧１５ｐｍｏｌ／Ｌ
の血清ＡＭＨレベルを有する（前記）対象に５から１２．５μｇのヒト由来組換え卵胞刺
激ホルモン（ＦＳＨ）の用量または等量を投与するステップを含む、不妊症の治療方法。
（ａ）対象の血清ＡＭＨレベルを判定するステップ；および（ｂ）対象の体重１ｋｇあ
たり０．０９から０．１９μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量を投与するステ
ップを含み、対象が≧１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する、不妊症の治療方法
。
対象の体重１ｋｇあたり０．１４から０．１９μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量また
は等量を投与するステップを含み、対象が１５から２４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレ
ベルを有する、請求項２１に記載の方法。
対象の体重１ｋｇあたり０．１１から０．１４μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量また
は等量を投与するステップを含み、対象が２５から３４．９ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレ
ベルを有する、請求項２１に記載の方法。
対象の体重１ｋｇあたり０．１０から０．１１μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量また
は等量を投与するステップを含み、対象が≧３５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有す
る、請求項２１に記載の方法。
（ａ）対象の血清ＡＭＨレベルを判定するステップ；および（ｂ）対象の体重１ｋｇあ
たり０．１５から０．１７μｇのヒト由来組換えＦＳＨの用量または等量を投与するステ
ップを含み、対象が＜１５ｐｍｏｌ／Ｌの血清ＡＭＨレベルを有する、不妊症の治療方法
。
患者（例えば、０．０５ｐｍｏｌ／Ｌ以上の血清ＡＭＨレベルを有する患者）の不妊症
治療に使用される医薬の製造における使用のためのＦＳＨを含む製品であって、２～２４
μｇ、例えば２から１５μｇのヒト由来組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の用量または
等量を含む製品。